TWI654998B - 雙官能性胞毒劑 - Google Patents

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澤成 陳
胡德 瑞斯利
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Abstract

包含以CBI為底質及/或以CPI為底質之次單元的胞毒二聚體，包含此二聚體之抗體藥物共軛體，及使用彼以治療癌症及其他病症之方法。

Description

雙官能性胞毒劑
本發明係關於可用於治療增生疾病之新穎雙官能性CBI及CPI二聚物。該二聚物可用作為獨立藥物、抗體藥物共軛體(ADC)中之酬載、及用於與此抗體藥物共軛體(ADC)之製造及投服有關之連接子-酬載化合物。本發明進一步關於包括上述二聚物、連接子-酬載及抗體藥物共軛體(ADC)之組成物，及使用這些二聚物、連接子-酬載及抗體藥物共軛體(ADC)以治療病理性狀況包括癌症之方法。
以CPI為底質之單體已為近來公開案之主題。例如，化合物(+)-CC-1065及倍癌黴素(duocarmycins)為由鏈黴菌屬(Streptomyces species)之培養液中分離出來的天然產物，其已顯現對培養之癌細胞及於實驗動物中發揮超效力活性。(+)-谷田黴素((+)-Yatakemycin)已由鏈黴菌屬(Streptomyces sp.)中分離出來且代表此類別天然產物之最有效成員。這些天然產物之生物活性咸信與富含AT的部位中之腺嘌呤N3藉由活化環丙烷之最少經取代的 碳進行特徵序列選擇性DNA烷基化作用有關。此小溝結合被認為可引發細胞事件之串聯，導致如倍癌黴素(duocarmycins)所觀察到之細胞凋亡(“Chemical and Biological Explorations of the Family of CC-1065 and the Duocarmycin Natural Products”,Current Topics in Medicinal Chemistry,2009,9,1494-1524)。這些及相關類似物之關鍵結構模體為CPI結構，其為將DNA烷基化之反應基：
CPI前藥形成於生物媒介中藉分子內環化反應轉化成活性藥物種。(術語“CPI”衍生自化學名：1,2,8,8a-四氫環丙[c]吡咯並[3,2-e]吲哚-4(5H)-酮)。故CPI前藥藉分子內環化反應轉化成活性藥物種。酚合成先質(前藥形式)與環丙烷衍生物本身(活性形式)相比具有不可區分之生物性質(DNA烷基化效率及選擇性、體外胞毒活性、體內抗腫瘤活性)(“Design,Synthesis,and Evaluation of Duocarmycin O-Amino Phenol Prodrugs Subject to Tunable Reductive Activation”,J.Med.Chem.2010,53,7731-7738)。換言之，CPI彈頭是否為其活性環丙烷化形式或其前藥形式並不在意。重要的是這些化合物中僅有一個CPI模體存在，因此這些化合物充作DNA單烷基化劑。該CPI結構之一 些其他合成類似物隨後發展出，亦即示於(“Chemical and Biological Explorations of the Family of CC-1065 and the Duocarmycin Natural Products”,Current Topics in Medicinal Chemistry,2009,9,1494-1524)中者。此參考資料中值得注意的是合成類似物CBI、CpzI、CFI、CI及CBQ。單烷基化之倍癌黴素(duocarmycin)類似物已廣泛地於臨床前及臨床研究中研究(“Chemical and Biological Explorations of the Family of CC-1065 and the Duocarmycin Natural Products,Current Topics in Medicinal Chemistry,2009,9,1494-1524)。
獨立但相關類別之化合物為含有兩個活性DNA烷基化模體(亦即CPI)之雙官能性類似物。這些化合物不同於慣用之倍癌黴素(duocarmycin)，其中彼等缺乏倍癌黴素(duocarmycin)內的部分，該部分作為DNA辨識模體。取而代之地，這些雙官能性化合物僅僅地含有兩個稠合一起的烷基化反應(亦即兩個CPI模體)。由於兩個反應性烷基化模體之存在，這些化合物為活性DNA交連劑，而僅有一個烷基化模體之化合物(所有倍癌黴素(duocarmycin))則僅為DNA單烷基化劑。
上示化合物為文獻中之代表性實例且經報告為有效之細胞毒素：A(“Glycosidic Prodrugs of Highly Potent Bifunctional Duocarmycin Derivatives for Selective Treatment of Cancer”,Angew.Chem.Int.Ed.2010,49,7336-7339；“Duocarmycin Analogues Target Aldehyde Dehydrogenase 1 in LungCancer Cells”,Angew.Chem.Int.Ed.2012,51,2874-2877；“Bifunctional prodrugs and drugs”,WO 2011/054837,DE 10 2009 051 799；“The Two Faces of Potent Antitumor Duocarmycin-Based Drugs：A Structural Dissection Reveals Disparate Motifs for DNA versus Aldehyde Dehydrogenase 1 Affinity”,Angew.Chem.Int.Ed.2013,52,1-6.B(“Interstrand DNA Cross-linking with Dimers of the Spirocyclopropyl Alkylating Moiety of CC-1065”,J.Am.Chem.SOC.1989,11 1,6428-6429；“CC-1065 analogs having two CPI subunits useful as antitumor agents and ultraviolet light absorbers”,Eur. Pat.Appl.(1990),EP 359454，亦用於化合物C及D；C(“Synthesis and DNA Cross-Linking by a Rigid CPI Dimer”,J.Am.Chem.SOC.1991,113,8994-8995；“Nucleotide Preferences for DNA Interstrand Cross-Linking Induced by the Cyclopropylpyrroloindole Analogue U-77,779”,Biochemistry 1993,32,2592-2600；“Determination of the Structural Role of the Internal Guanine-Cytosine Base Pair in Recognition of a Seven-Base-Pair Sequence Cross-Linked by Bizelesin”,Biochemistry 1995,34,11005-11016；“Analysis of the Monoalkylation and Cross-Linking Sequence Specificity of Bizelesin,a Bifunctional Alkylation AgentRelated to(+)-CC-1065”,J.Am.Chem.SOC.1993,115,5925-5933；“Mapping of DNA Alkylation Sites Induced by Adozelesin and Bizelesin in Human Cells by Ligation-Mediated Polymerase Chain Reaction”,Biochemistry 1994,33,6024-6030；“DNA Interstrand Cross-Links Induced by the Cyclopropylpyrroloindole Antitumor Agent Bizelesin Are Reversible upon Exposure to Alkali”,Biochemistry 1993,32,9108-9114；“Replacement of the Bizelesin Ureadiyl Linkage by a Guanidinium Moiety Retards Translocation from Monoalkylation to Cross-Linking Sites on DNA”,J.Am.Chem.Soc.1997,119,3434-3442；“DNA interstrand cross-linking,DNA sequence specificity,and induced conformational changes produced by a dimeric analog of(+)-CC-1065”,Anti-Cancer Drug Design(1991),6,427-452；“A phase I study of bizelesin,a highly potent and selective DNAinteractive agent,in patients with advanced solid malignancies”,Ann Oncol.2003 May；14(5)：775-782；“A Phase I study of bizelesin(NSC 615291)in patients with advanced solid tumors”,Clin Cancer Res.2002,3,712-717；“Solution conformation of a bizelesin A-tract duplex adduct：DNA-DNA cross-linking of an A-tract straightens out bent DNA”,J Mol Biol.1995,252,86-101；“Preclinical pharmacology of bizelesin,a potent bifunctional analog of the DNA-binding antibiotic CC-1065”,Cancer Chemother Pharmacol.1994,34,317-322。D(“CC-1065 analogs having two CPI subunits useful as antitumor agents and ultraviolet light absorbers”,Eur.Pat.Appl.(1990),EP 359454。活性DNA烷基化模體原則上可以其前藥形式存在，其於生物媒介中轉化成活性藥物，或者以其活性狀態存在，其不需進一步轉化。有關雙官能***連劑之前藥-活性藥物轉化係如下所示地以CBI二聚物為例：
相同之轉化發生在所有以其前藥狀態存在之雙官能***連劑。其他相關之雙官能***連劑已報告。(“Chemical and Biological Explorations of the Family of CC-1065 and the Duocarmycin Natural Products”,Current Topics in Medicinal Chemistry,2009,9,1494-1524；“DNA interstrand cross- linking agents and their chemotherapeutic potential”,Curr Med Chem.2012,19,364-385；“Design and Synthesis of a Novel DNA-DNA Interstrand Adenine-Guanine Cross-Linking Agent”,J.Am.Chem.Soc.2001,123,4865-4866；“Effect of base sequence on the DNA cross-linking properties of pyrrolobenzodiazepine(PBD) dimers”,Nucleic Acids Res.2011,39,5800-5812；“Sequence-selective recognition of duplex DNA through covalent interstrand cross-linking：kinetic and molecular modeling studies with pyrrolobenzodiazepine dimers”,Biochemistry.2003,42,8232-8239；“Bifunctional alkylating agents derived from duocarmycin SA：potent antitumor activity with altered sequence selectivity”,Bioorg Med Chem Lett.2000,10,495-498；“Design,Synthesis and Cytotoxicity Evaluation of 1-Chloromethyl-5-hydroxy-1,2-dihydro-3H-benz[e]indole(seco-CBI)Dimers”,Bioorganic & Medicinal Chemistry 2000,8,1607-1617。
有關含單體二級-CBI之細胞毒素的磷酸鹽前藥策略已述於Zhao et al.(“Synthesis and biological evaluation of antibody conjugates of phosphate prodrugs of cytotoxic DNA alkylators for the targeted treatment of cancer”,J.Med.Chem.2012,55,766-782)及Zhang et al.(“Immunoconjugates containing phosphate-prodrugged DNA minor groove binding agents,compositions containing them,and methods of making them and their use for treating cancer”,WO 2012/162482)中。
上述化合物，其具有兩個CBI及/或CPI核連接一起以形成二聚物種(所謂的CBI二聚物、CPI二聚物、或CBI/CPI二聚物)，沒有任何一者曾被考慮作為酬載地用於抗體藥物共軛體(ADC)中。
藥物抗體之共軛(直接地或經由連接子)包含各種因素之考量，包括用於藥物共軛之化學基之識別及位置、藥物釋出之機轉、提供藥物釋出之結構元件、及對所釋出自由態藥物之結構改良。此外，如果藥物係於抗體內化後釋出，則藥物釋出之機轉必需與共軛體之細胞內運輸一致。
雖然一些不同的藥物類別已嘗試用於藉由抗體遞送，但僅有一些藥物類別證實有效作為抗體藥物共軛體同時保持適當之毒性概況。一種此類別為奧里斯他汀(auristatin)，天然產物尾海兔素10(dolastatin 10)之衍生物。代表性奧里斯他汀(auristatin)包括(N-甲基纈胺酸-纈胺酸-尾海兔異白胺酸-尾海兔洛因-降麻黃鹼)及(N-甲基纈胺酸-纈胺酸-尾海兔異白胺酸-尾海兔洛因-苯基丙胺酸)。其他相關之微管蛋白結合劑包括美坦素(maytansine)(例如參見公開為WO 2005/037992之“Cell-binding agent-maytansinoid conjugates linked via a noncleavable linker,preparation methods,and methods using them for targeting specific cell populations”)。其他已用於與抗體連結之胞毒藥物包括DNA-結合藥物諸如卡其黴素(calicheamicin)，其導致序列特異性雙股DNA之裂解。其他類別之用於抗體藥物共軛體(ADC)中之DNA結合性胞毒藥物包括二聚吡咯並苯並二氮雜環庚 三烯(例如參見公開為WO2013/041606之“Preparation of unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines dimers for inclusion in targeted conjugates”)。其他已嘗試抗體遞送之此藥物類別為DNA結合性烷基化劑諸如倍癌黴素(duocarmycin)類似物CC-1065(參見公開為WO2010/062171之“Preparation of CC-1065 analogs and their conjugates for treatment of cancer”)及相關化合物(參見公開為WO 2007/038658之“Antibody-drug peptide conjugates for use as cytotoxins in cancer treatment”，及公開為WO2012/162482之“Immunoconjugates containing phosphate-prodrugged DNA minor groove binding agents,compositions containing them,and methods of making them and their use for treating cancer”)。然而，所有這些藥物均具有疾病適應症及治療概況之限制，故仍需要具有可經由抗體共軛遞送之改良性質的其他藥物。因此，本發明提供具有二聚物作為酬載之新穎抗體藥物共軛體(ADC)。
本發明說明新穎之結構二聚物類似物，其含有新穎之連接子元件。這些新穎之間隔模體導致化合物具有不同的生物性質，例如改善於腫瘤細胞增生分析法中之活性及血漿安定性。本發明亦說明用於相應CPI二聚物及CBI-CPI混合結構之新穎間隔元件。
又，本發明首先係揭示這些與抗體藥物共軛體(ADC)模態有關之化合物，且將這些化合物併入標的ADC中為 顯著的進步。
本發明係關於包含以CBI為底質及/或CPI為底質(包括本案詳述之CBI及/或CPI之二級形式)之亞單元的胞毒二聚物，包含此二聚物之抗體藥物共軛體，及使用彼以治療癌症之方法。CBI及CPI結構均可以其二級形式表示且可如本案所詳述地經取代及衍生化。
故，本發明係關於化合物及含彼等之醫藥組成物，彼等之製備，及化合物用於(主要地但非專有地)抗癌劑之用途。根據一方面，本發明係關於式I之“酬載”化合物，F 1 -L 1 -T-L 2 -F 2 (式I)
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑化物，其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、-C1-C5烷基、-苯基、-C(O)OR、-C(O)SR、-C(O)NHN(R)2或-C(O)N(R)2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸 根、硫異氰酸根、或；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C6烷基-RA、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下 所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基，且其中該-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵、羰基、或於醯基部分鍵結至F1或F2之羰基醯基，其中羰基醯基選自由以下所組成之群組： 及其中U1選自H、-CH3、-OH、-OCH3、-NO2、-NH2、-NHNHAc、-NHNHC(O)CH3、-NHC(O)苯基或-鹵基，U2為H、-OH或-OCH3，U3為H、-CH3或-C2H5，U4為H或CH3S-，U5及U6各自獨立地選自H、-鹵基、-C1-C4烷基、-C1-C3烷氧基、-C1-C6二烷胺基、-NO2、-NHC(O)C1-C10烷基、-OH、-NH2、-NHC(O)NH2、-NHC(O)CH3或-NHC(O)苯基，Q1為-O-、-S-、或-NH-，且Q2及Q3各自獨立地為-CH-或-N-；T選自： -NHC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-OC(I)-、-NRB-T1-NRC-，其中RB及RC各自獨立地為H或-C1-C8烷基，或者RB及RC連接一起以形成環且一起為(CH2)2-3，其中T1選自-C(O)-、-C(O)(CH2)nC(O)-(其中n為0至50之整數)、-C(O)PhC(O)-(其中Ph為1,3-或1,4-伸苯基)，-C(O)hetC(O)-，其中het為5至12員之單-、雙-、或三環雜芳基，含有一、二、或三個獨立地選自O、N、S、P及B之雜原子，其中het隨意地經1至8個各自獨立地選自由以下所組成之群組的取代基取代：-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-NH2、-NHRD及-NO2，且het上之該隨意取代基隨意地經RE取代，其中當T為-C(O)hetC(O)-時，F1及F2之至少一者選自由以下所組成之群組：環系統C及環系統D，其中RD各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C(O)-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，隨意地經RE取代，其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組： H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：R、-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自獨立地為鍵、-NRE-、-O-或-S-，其中A1及B1各自獨立地為=O或=S，其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為RE，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，或者R1、R2、R3及R4各自鍵結至D的不同碳，其中g及j各自獨立地為0至50之整數且m為1至50之整數，且其中D為鍵或選自由以下所組成之群組：-S-、-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基隨意地經-RE、-C(O)RE、-C(O)ORE、-N(RE)2、-N(R)C(O)RE或-N(R)C(O)ORE取代，且D額外地隨意地經1至2個R取代，前提是如果g為0、J為0且T2為 -C1-C8伸烷基-時，則F1及F2之一者選自由以下所組成之群組：環系統A及環系統B，且F1及F2之另一者選自由以下所組成之群組：環系統C及環系統D、及-G1-T2-G2-，其中G1及G2各自獨立地為S(O)X1-或-S(O)2X1-。
本發明之實施例中，變數n為0至50，較佳地0至25，較佳地0至10，且較佳地1至5。較佳地，變數n可為0、1、2、3、4或5。
本發明之其他實施例中，變數-Y-為C(O)N(RA)2或C(S)N(RA)2，其中一個RA為氫或-C1-C20烷基且另一RA為-C1-C20烷基-N(R)2，如此形成以下結構： 其中A為氧或硫。
如上所述，本發明包括其中R1、R2、R3及R4各自鍵結至D上之不同碳者。當D為6員碳環(粗體，下示)時，此實施例可採用立方烷形式：
其他形式之立方烷(例如如本案所概述之經取代形式)及非立方烷亦可行且包括在本發明內。
根據本發明之另一方面，提供式IIA之“連接子-酬載”化合物，L-P (式IIA)
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑化物，其中：P為：F 1 -L 1 -T-L 2 -F 2
其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔 基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、-C1-C5烷基、-苯基、-C(O)OR、-C(O)SR、-C(O)NHN(R)2或-C(O)N(R)2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸根、硫 異氰酸根、或；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自鍵、H、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-P(O)(ORA)2，其中RA各自獨立地選自H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C1-C20烷基N(R)2、-C1-C20伸烷基、-C1-C8伸雜烷基、-C6-C14伸芳 基、伸芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)-、及RF，其中該RA隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代，且其中一個Y為二價且鍵結至L，RF為-N(R6)QN(R5)C(O)-且於鄰近N(R5)之羰基鍵結至L，其中R5及R6各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，或者R5或R6與Q上之經取代碳連接形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環，或者R5及R6連接一起以形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環系統，且其中Q為-C1-C8伸烷基-、-C1-C8伸雜烷基-、-C6-C14伸芳基-、-伸芳烷基-、-C1-C10雜環基-或-C3-C8碳環基-，且其中Q、R5及R6各自獨立地隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基，且其中該-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵、羰基、或於醯基部分鍵結至F1或F2之羰基醯基，其中羰基醯基選自由以下 所組成之群組： 及其中U1選自H、-CH3、-OH、-OCH3、-NO2、-NH2、-NHNHAc、-NHNHC(O)CH3、-NHC(O)苯基或-鹵基，U2為H、-OH或-OCH3，U3為H、-CH3或-C2H5，U4為H或CH3S-，U5及U6各自獨立地選自H、-鹵基、-C1-C4烷基、-C1-C3烷氧基、-C1-C6二烷胺基、-NO2、-NHC(O)C1-C10烷基、-OH、-NH2、-NHC(O)NH2、-NHC(O)CH3或-NHC(O)苯基，Q1為-O-、-S-、或-NH-，且Q2及Q3各自獨立地為-CH-或-N-；T選自： -NHC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-OC(O)-、-NRB-T1-NRC-，其中RB及RC各自獨立地為H或-C1-C8烷基，或者RB及RC連接一起以形成環且一起為(CH2)2-3，其中T1選自-C(O)-、-C(O)(CH2)nC(O)-(其中n為0至50之整數)、-C(O)PhC(O)-(其中Ph為1,3-或1,4-伸苯基)，-C(O)hetC(O)-，其中het為5至12員之單-、雙-、或三環雜芳基，含有一、二、或三個獨立地選自O、N、S、P及B之雜原子，其中het隨意地經1至8個各自獨立地選自由以下所組成之群組的取代基取代：-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-NH2、-NHRD及-NO2，且het上之該隨意取代基隨意地經RE取代，其中當T為-C(O)hetC(O)-時，F1及F2之至少一者選自由以下所組成之群組：環系統C及環系統D，其中RD各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C(O)-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，隨意地經RE取代，其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10 雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：R、-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自獨立地為鍵、-NRE-、-O-或-S-，其中A1及B1各自獨立地為=O或=S，其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為RE，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，或者R1、R2、R3及R4各自鍵結至D的不同碳，其中g及j各自獨立地為0至50之整數且m為1至50之整數，且其中D為鍵或選自由以下所組成之群組：-S-、-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基隨意地經-RE、-C(O)RE、-C(O)ORE、-N(RE)2、-N(R)C(O)RE或-N(R)C(O)ORE取代，且D額外地隨意地經1至2個R取代，及-G1-T2-G2-，其中G1及G2各自獨立地為S(O)X1-或 -S(O)2X1-；L為LA-LB-(LC)1-3，其中LA選自由以下所組成之群組：-鹵基、-N(R)2、-CON(R)2、隨意地經-NO2或-CON(R)2取代之-S-芳基、隨意地經-NO2取代之-S-雜芳基、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、 LB為LB1-LB2-LB3，其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20，其中LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸或-(CR15)o-S-S-(CR15)p，其中o及p各自獨立地為 1至20之整數，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、 其中XA為CR或N，XB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N，XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在；XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR且 XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
本發明之其他實施例中，變數-Y-為C(O)N(RA)2或C(S)N(RA)2，其中一個RA為氫或-C1-C20烷基且另一個RA為-C1-C20烷基-N(R)-，如此形成以下結構： 其中A各自獨立地為為氧或硫。
根據本發明之又另一方面，提供式IIIA之抗體藥物共軛體化合物，AB-(L-P) 1-20 (式IIIA)或其醫藥上可接受之鹽或溶劑化物，其中：AB為抗體；P為：F 1 -L 1 -T-L 2 -F 2 其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C6烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S； 於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、-C1-C5烷基、-苯基、-C(O)OR、-C(O)SR、-C(O)NHN(R)2或-C(O)N(R)2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸 根、硫異氰酸根、或；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自鍵、H、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-P(O)(ORA)2，其中RA各自獨立地選自H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C1-C20烷基N(R)2、-C1-C20伸烷基、-C1-C8伸雜烷基、-C6-C14伸芳基、伸芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)-、及RF，其中該RA隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代，且其中一個Y為二價且鍵結至L，RF為-N(R6)QN(R5)C(O)-且於鄰近N(R5)之羰基鍵結至L，其中R5及R6各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，或者R5或R6與Q上之經取代碳連接形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環，或者R5及R6連接一起以形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環系統，且其中Q為-C1-C8伸烷基-、-C1-C8伸雜烷基-、-C6-C14 伸芳基-、-伸芳烷基-、-C1-C10雜環基-或-C3-C8碳環基-，且其中Q、R5及R6各自獨立地隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基，且其中該-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2-及-C(O)-鹵基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵、羰基、或於醯基部分鍵結至F1或F2之羰基醯基，其中羰基醯基選自由以下所組成之群組： 及其中U1選自H、-CH3、-OH、-OCH3、-NO2、-NH2、-NHNHAc、-NHNHC(O)CH3、-NHC(O)苯基或-鹵基，U2為H、-OH或-OCH3，U3為H、-CH3或-C2H5，U4為H或CH3S-，U5及U6各自獨立地選自H、-鹵基、-C1-C4烷基、-C1-C3烷氧基、-C1-C6二烷胺基、-NO2、-NHC(O)C1-C10烷基、-OH、-NH2、-NHC(O)NH2、-NHC(O)CH3或-NHC(O)苯基，Q1為-O-、-S-、或-NH-，且Q2及Q3各自獨立地為-CH-或-N-；T選自： -NHC(O)-、-C(O)NH-、-C(O)O-、-OC(O)-、-NRB-T1-NRC-，其中RB及RC各自獨立地為H或-C1-C8烷基，或者RB及RC連接一起以形成環且一起為(CH2)2-3，其中T1選自-C(O)-、-C(O)(CH2)nC(O)-(其中n為0至50之整數)、-C(O)PhC(O)-(其中Ph為1,3-或1,4-伸苯基)，-C(O)hetC(O)-，其中het為5至12員之單-、雙-、或三環雜芳基，含有一、二、或三個獨立地選自O、N、S、P及B之雜原子，其中het隨意地經1至8個各自獨立地選自由以下所組成之群組的取代基取代：-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-NH2、-NHRD及-NO2，且het上之該隨意取代基隨意地經RE取代，其中當T為-C(O)hetC(O)-時，F1及F2之至少一者選自由以下所組成之群組：環系統C及環系統D，其中RD各自獨立地選自由以下所組成之群組：H或-C1-C8烷基、-C(O)-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，隨意地經RE取代，其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組： H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：R、-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自獨立地為鍵、-NRE-、-O-或-S-，其中A1及B1各自獨立地為=O或=S，其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為RE，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，或者R1、R2、R3及R4各自鍵結至D的不同碳，其中g及j各自獨立地為0至50之整數且m為1至50之整數，且其中D為鍵或選自由以下所組成之群組：-S-、-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基隨意地經-RE、-C(O)RE、-C(O)ORE、-N(RE)2、-N(R)C(O)RE或-N(R)C(O)ORE取代，且D額外 地隨意地經1至2個R取代，及-G1-T2-G2-，其中G1及G2各自獨立地為S(O)X1-或-S(O)2X1-；L為LA-LB-(LC)1-3；LA選自：鍵結至AB的鍵、-NR-(鍵結至AB)、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、 LB為LB1-LB2-LB3
其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20；LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基 酸或-(CR15)o-S-S-(CR15)p，其中o及p各自獨立地為1至20之整數，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、 其中XA為CR或N，XB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N，XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在； XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR，且XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
根據本發明之另一方面，提供式IIB之“連接子-酬載”化合物，
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑化物，其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基， 其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、-C1-C5烷基、-苯基、-C(O)OR、-C(O)SR、-C(O)NHN(R)2或-C(O)N(R)2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸 根、硫異氰酸根、或；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C6烷基-RA、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20 烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基，且其中該-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵、羰基、或於醯基部分鍵結至F1或F2之羰基醯基，其中羰基醯基選自由以下所組成之群組： 及其中U1選自H、-CH3、-OH、-OCH3、-NO2、-NH2、-NHNHAc、-NHNHC(O)CH3、-NHC(O)苯基或-鹵基，U2為H、-OH或-OCH3，U3為H、-CH3或-C2H5，U4為H或CH3S-，U5及U6各自獨立地選自H、-鹵基、-C1-C4烷基、-C1-C3烷氧基、-C1-C6二烷胺基、-NO2、-NHC(O)C1-C10烷基、-OH、-NH2、-NHC(O)NH2、-NHC(O)CH3或-NHC(O)苯基，Q1為-O-、-S-、或-NH-，且Q2及Q3各自獨立地為-CH-或-N-；T選自：-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自獨立地為鍵、-NRE-、-O-或-S-，其中A1及B1各自獨立地為=O或=S，其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為RE，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，或者R1、R2、R3及R4各自鍵結至D的不同碳，其中g及j各自獨立地為0至50之整數且m為1至50之整數，且其中D選自由以下所組成之群組：-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基經一個選自以下群組之成員取代：N(RE)C(O)-(其中羰基鍵結至L)、及-C(O)-(其中羰基鍵結至L)，且D額外地隨意地經1至2個R取代，其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個 獨立地選自R之取代基取代；L為LA-LB-(LC)1-3；LA選自-鹵基、-N(R)2、-CON(R)2、隨意地經-NO2或-CONR2取代之-S-芳基、隨意地經-NO2取代之-S-雜芳基、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、 LB為LB1-LB2-LB3
其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20；LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸或-(CR15)o-S-S-(CR15)p，其中o及p各自獨立地為1至 20之整數，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、 其中XA為CR或N，XB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N；XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在； XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR，且XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
根據本發明之又另一方面，提供式IIIB之抗體藥物共軛體化合物，
或其醫藥上可接受之鹽或溶劑化物，其中：AB為抗體；F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下 所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、-C1-C5烷基、-苯基、-C(O)OR、-C(O)SR、-C(O)NHN(R)2或-C(O)N(R)2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸 根、硫異氰酸根、或；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C6烷基-RA、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、 -C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基，且其中該-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、-C(O)OH、-C(O)NHNH2及-C(O)-鹵基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵、羰基、或於醯基部分鍵結至F1或F2之羰基醯基，其中羰基醯基選自由以下所組成之群組： 及其中U1選自H、-CH3、-OH、-OCH3、-NO2、-NH2、-NHNHAc、-NHNHC(O)CH3、-NHC(O)苯基或-鹵基，U2為H、-OH或-OCH3，U3為H、-CH3或-C2H5，U4為H或CH3S-，U5及U6各自獨立地選自H、-鹵基、-C1-C4烷基、-C1-C3烷氧基、-C1-C6二烷胺基、-NO2、-NHC(O)C1-C10烷基、-OH、-NH2、-NHC(O)NH2、-NHC(O)CH3或-NHC(O)苯基，Q1為-O-、-S-、或-NH-，且Q2及Q3各自獨立地為-CH-或-N-；T選自：-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自獨立地為鍵、-NRE-、-O-或-S-，其中A1及B1各自獨立地為=O或=S，其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為RE，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4 形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，或者R1、R2、R3及R4各自鍵結至D的不同碳，其中g及j各自獨立地為0至50之整數且m為1至50之整數，且其中D選自由以下所組成之群組：-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C8伸雜烷基-、-伸芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基經一個選自以下群組之成員取代：N(RE)C(O)-(其中羰基鍵結至L)、及-C(O)-(其中羰基鍵結至L)，且D額外地隨意地經1至2個R取代；其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L為LA-LB-(LC)1-3；LA選自：鍵結至AB的鍵、-NR-(鍵結至AB)、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、 LB為LB1-LB2-LB3
其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20；LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸或-(CR15)o-S-S-(CR15)p，其中o及p各自獨立地為1至20之整數，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基 伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、 其中XA為CR或N，xB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N，XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在；XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR，且XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
本發明之其他方面包括化合物諸如本案所提及者，其中R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基及-NH2； 於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為O或N(R)；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O或N(R)；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地為H、-C1-C5烷基、-C(O)OR、或-C(O)NR2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為鹵基；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C(O)RA、-C(O)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵及羰基；且T選自：-NRB-T1-NRC-，其中RB及RC各自獨立地為H或-C1-C8烷基，-C(O)hetC(O)-，其中het為5至12員之單環雜芳基，含有一或二個獨立地選自O、N及S之雜原子，其中het隨意地經1至8個各自獨立地選自由以下所組成之群組的取代基取代：-C1-C8烷基、-NH2、及-NH2，且het上之該隨意取代基隨意地經-C1-C8烷基取代，其中當T為-C(O)hetC(O)-時，F1及F2之至少一者選自由以下 所組成之群組：環系統C及環系統D，及-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為H，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，且其中D為鍵或選自由以下所組成之群組：-S-、-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基隨意地-NH2、-N(R)C(O)H或-N(R)C(O)OH取代。
本發明之另一方面包括化合物諸如本案所提及者，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環。
本發明之另一方面包括化合物諸如本案所提及者，其中R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基及-NH2；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為O或 N(R)；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O或N(R)；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地為H、-C1-C5烷基、-C(O)OR、或-C(O)NR2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為鹵基；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自鍵、H、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-P(O)(ORA)2，其中RA各自獨立地選自H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C1-C20烷基N(R)2、-C1-C20伸烷基、-C1-C8伸雜烷基、-C6-C14伸芳基、伸芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)-、及RF，其中該RA隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代，且其中一個Y為二價且鍵結至L，RF為-N(R6)QN(R5)C(O)-且於鄰近N(R5)之羰基鍵結至L，其中R5及R6各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、及-C1-C8雜烷基，或者R5或R6與Q上之經取代碳連接形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環，或者R5及R6連接一起以形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環系統，且其中Q為-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、或-C3-C8碳環基-，且其中Q、R5及R6各自獨立地隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵及羰基；且 T選自：-NRB-T1-NRC-，其中RB及RC各自獨立地為H或-C1-C8烷基，-C(O)hetC(O)-，其中het為5至12員之單環雜芳基，含有一或二個獨立地選自O、N及S之雜原子，其中het隨意地經1至8個各自獨立地選自由以下所組成之群組的取代基取代：-C1-C8烷基、-NH2、及-NH2，且het上之該隨意取代基隨意地經-C1-C8烷基取代，其中當T為-C(O)hetC(O)-時，F1及F2之至少一者選自由以下所組成之群組：環系統C及環系統D，及-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為H，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，且其中D為鍵或選自由以下所組成之群組：-S-、-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基隨意地-NH2、 -N(R)C(O)H或-N(R)C(O)OH取代。
本發明之另一方面包括化合物諸如本案所提及者，其中R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基及-NH2；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為O或N(R)；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O或N(R)；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地為H、-C1-C5烷基、-C(O)OR、或-C(O)NR2；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為鹵基；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C(O)RA、-C(O)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵及羰基；且T為-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為： 其中X1各自為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O， 其中R1、R2、R3、及R4各自獨立地為H，或者R1及R2形成環系統，或者R3及R4形成環系統，或者R1及R2，以及R3及R4均各自獨立地形成環系統，或者R1及R3形成環系統，或者R2及R4形成環系統，或者R1及R3，以及R2及R4均各自獨立地形成環系統，其中該環系統獨立地選自-C1-C10雜環基或-C3-C8碳環基，且其中D為鍵或選自由以下所組成之群組：-S-、-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，其中該-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、-C6-C14伸雜芳基-、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基隨意地-NH2、-N(R)C(O)H或-N(R)C(O)OH取代。
本發明之其他方面包括化合物諸如本案所提及者，其中LA選自由以下所組成之群組：-鹵基、-N(R)2、-CON(R)2、隨意地經-NO2或-CON(R)2取代之-S-芳基、隨意地經-NO2取代之-S-雜芳基、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、及 LB為LB1-LB2-LB3，其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份二-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷 基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20，其中LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸或-(CR15)o-S-S-(CR15)p，其中o及p各自獨立地為1至20之整數，且LB3為-PABA-、-PABC-或不存在；且LC不存在。
本發明之其他方面包括抗體藥物共軛體，諸如本案中所提及者，其中LA選自：鍵結至AB的鍵、-NR-(鍵結至AB)、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、 LB為LB1-LB2-LB3，其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基 (OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20，其中LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸或-(CR15)o-S-S-(CR15)p，其中o及p各自獨立地為1至20之整數，且LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；且LC不存在。
本發明之其他方面包括化合物諸如本案中所述者，其中RF選自： 其中q為1-10，且b各自獨立地為CRD、N、NRD、O或S。
本發明之其他方面包括化合物諸如本案中所述者，其中一或多個W為C1-C3烷基。
本發明之附加方面包括化合物諸如本案中所述者，其中X為鹵基。
本發明之附加方面包括化合物諸如本案中所述者，其中一個Y為H或-C(O)C1-C10烷基。
本發明之附加方面包括化合物諸如本案中所述者，其 中一或多個Z為H。
本發明之附加方面包括化合物諸如本案中所述者，其中T選自醯胺、或式-NH-C(O)-NH-或-NH-C(O)-het-C(O)-NH-之胺基-繫-胺基。
本發明之附加方面包括化合物諸如本案中所述者，其中該醯胺為-C(O)NH-或-NHC(O)-。
本發明之附加方面包括化合物諸如本案中所述者，其中het為選自以下之雜芳基：吡咯-2,5-二基-、呋喃-2,5-二基-、吲哚-2,5-二基-、苯並呋喃-2,5-二基-、及3,6-二氫苯並[1,2-b：4,3-b]二吡咯-2,7-二基。
本發明之附加方面包括化合物諸如本案中所述者，其中L1及L2選自羰基、2-羰基吲哚-5-基、2-羰基-6-羥基-7-甲氧基吲哚-5-基、2-羰基-1,2,3,6-四氫苯並[1,2-b：4,3-b]二吡咯-7-基、2-羰基-4-羥基-5-甲氧基-1,2,3,6-四氫苯並[1,2-b：4,3-b’]二吡咯-7-基、及2-羰基-4-羥基-5-甲氧基-1,2,3,6-四氫苯並[1,2-b：4,3-b’]二吡咯-7-基。
本發明之附加方面為本案中所述之化合物，其中一或多個下列者適用：W為甲基；X為鹵素；Y為氫或-COR，其中R為C1-C10烷基；且Z為氫。
本發明亦包括本案所述之化合物，其中T選自醯胺(亦即-C(O)NH-或-NHC(O)-)；或式-NH-T’-NH之胺基-繫-胺基，其中T’為羰基或-C-(O)-het-C(O)-。當T為式NH-T’-NH之胺基-繫-胺基時，T’可為羰基(亦即-C-(O)-)或-C(O)-het-C(O)-，其中het為選自以下之雜芳基：吡咯- 2,5-二基-、呋喃-2,5-二基-、吲哚-2,5-二基-、苯並呋喃-2,5-二基-、或3,6-二氫苯並[1,2-b：4,3-b]二吡咯-2,7-二基。
亦包括於本發明實施例中者為本案所述之化合物，其中L1及L2選自2-羰基吲哚-5-基、2-羰基-6-羥基-7-甲氧基吲哚-5-基、2-羰基-1,2,3,6-四氫苯並[1,2-b：4,3-b]二吡咯-7-基、2-羰基-4-羥基-5-甲氧基-1,2,3,6-四氫苯並[1,2-b：4,3-b’]二吡咯-7-基、及2-羰基-4-羥基-5-甲氧基-1,2,3,6-四氫苯並[1,2-b：4,3-b’]二吡咯-7-基。
本發明之另一方面包括本案所述之化合物，其中LA 為。
本發明亦包括連接子-酬載或抗體藥物共軛體，其包含本案所述之酬載化合物之基團。
重要的是，本發明包括醫藥組成物，其包含本案所述之化合物及其任何醫藥上可接受之鹽及溶劑化物，其中該醫藥組成物包括醫藥上可接受之賦形劑。
本發明進一步關於治療癌症之方法，其包含將治療有效量之一或多種本案所述之化合物、或包含一或多種這些化合物之醫藥組成物或諸組成物投予有此需求之患者。
一些化合物，包括酬載、連接子-酬載及抗體藥物共軛體(ADC)以其特定之立體異構體形式顯現。然而，本發明意味著包括這些化合物之所有立體異構體形式。例如，具有兩個立體異構體中心的化合物可被描述成化合物之 R,S形式，但本發明表達所有之立體異構體形式，例如R,R；R,S；S,R及S,S。
本發明係關於胞毒雙官能性化合物、含該胞毒雙官能性化合物之抗體藥物共軛體(ADC)，及使用彼以治療癌症及其他病理性狀況之方法。本發明亦關於使用此化合物及/或共軛體於體外、就地、及體內偵檢、診斷或治療哺乳動物細胞、或相關病理性狀況之方法。
定義及縮寫
除非另有指定，否則本案中所用之下列術語及詞組意欲具有下列之定義。當使用商標名於本案中時，除非上下文另有指定，否則該商標名包括產品配方、學名藥、及商標名產品之活性醫藥成分。
本案中之術語“抗體”(或“Ab”)係最廣義地使用且尤其涵蓋完整單株抗體、多株抗體、單特異性抗體、多重特異性抗體(例如雙特異性抗體)、及顯現期望生物活性之抗體片段。完整抗體主要地具有兩個區域：可變區和恆定區。可變區結合至目標抗原且與其交互作用。可變區包括互補決定區(CDR)，其可辨識並結合至特定抗原上的特定結合位。恆定區可被免疫系統辨識且與其交互作用(例如參見Janeway et al.,2001,Immuno.Biology,5th Ed.,Garland Publishing,New York)。抗體可為任何型式或類別(例如 IgG、IgE、IgM、IgD、及IgA)或亞類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體可衍生自任何適當物種。一些實施例中，抗體為人類或鼠類來源。抗體可例如為人類、人源化或嵌合式。
術語“特異地結合”及“特異的結合”意指結合至預定抗原的抗體。典型地，抗體以約1×107M-1之親合力結合，且以至少兩倍地大於結合至非特異性抗原(非預定抗原或密切相關抗原，例如BSA、酪蛋白)之結合力結合至預定抗原。
本案所用之術語“單株抗體”意指得自實質地同質性抗體族群之抗體，亦即包含該族群之個別抗體是相同的，惟可能小量地存在天然發生的突變。單株抗體對單一抗原位具高度特異性，可直接對準單一之抗原位。修飾字“單株”意指抗體的特徵為其得自實質同質性抗體族群，而非解釋成需要藉任何特定方法以製造該抗體。
術語“單株抗體”尤其包括“嵌合”抗體，其中有一部分之重及/或輕鏈與衍生自特定物種或隸屬於特定抗體類別或亞類別的相應序列相同或具同質性，而其餘的鏈則與衍生自其他物種或隸屬於其他抗體類別或亞類別的相應序列相同或具同質性，以及此抗體的片段，只要其顯現期望之生物活性即可。
本案所用之“H(C)-”意指曲妥珠美(trastuzumab)(商標名HERCEPTIN®)，其為干擾HER2/neu受體之單株抗體，經由其一個胱胺酸結合至本發明化合物。本案所用之 “H(K)-”意指曲妥珠美(trastuzumab)，其為干擾HER2/neu受體之單株抗體，經由其一個離胺酸結合至本發明化合物。
“完整抗體”為依抗體類別而適當地包含抗原結合性可變區以及輕鏈恆定區(CL)及重鏈恆定區CH1、CH2、CH3及CH4者。恆定區可為原態序列恆定區(例如人類原態序列恆定區)或其胺基酸序列變體。
完整抗體可具有一或多個“效應功能”，其意指歸因於抗體Fc區(例如原態序列Fc區或胺基酸序列變體Fc區)的彼些生物活性。抗體效應功能的實例包括補體依賴性胞毒性、抗體依賴性細胞媒介型胞毒性(ADCC)及抗體依賴性細胞媒介型吞噬作用。
“抗體片段”包含完整抗體的一部分，較佳地包含其抗原結合或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、及Fv片段、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子、scFv、scFv-Fc、由抗體片段形成之多特異性抗體片段、由Fab表現基因庫所產生之片段、或任何上述者可免疫特異性地結合至目標抗原(例如癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)的抗原決定位結合片段。
抗體上下文中之術語：“可變”意指抗體可變區的某些部分，其序列廣泛地不同且用於每一特定抗體對其特定抗原之結合及特異性中。此可變性集中在輕鏈及重鏈可變區中稱之為“高度可變區”的三個片段。可變區之更高度保守 部分稱之為框架區(FR)。原態重及輕鏈之可變區各自包括四個藉由三個高度可變區連接的框架區(FR)。
術語“高度可變區”當用於本案中時，意指抗體之胺基酸殘基，其負責抗原結合。高度可變區通常包含來自“互補決定區”或“CDR”之胺基酸殘基(例如輕鏈可變區中之殘基24-34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)及重鏈可變區中之31-35(H1)，50-65(H2)及95-102(L3)；Kabat et al.(Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))及/或來自“高度可變環圈”之殘基(例如輕鏈可變區中之殘基26-32(L1)，50-52(L2)及91-96(L3)及重鏈可變區中之殘基26-32(H1)，53-55(142)及96-101(H3)；Chothia and Lesk,1987,J.Mol.Biol.196：901-917)。框架區(FR)殘基為除了本案所定義之高度可變區殘基以外之可變區殘基。
“單鏈Fv”或“scFv”抗體片段包含抗體之V.sub.H及V.sub.L區，其中這些區以單一之多肽鏈存在。典型地，Fv多肽進一步地包含介於V.sub.H及V.sub.L區之間的多肽連接子，其可使scFv形成期望之用於抗原結合之結構。有關scFv之回顧方面，參見Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。
術語“雙功能抗體”意指具有兩個抗原結合位之小抗體片段，該片段包含連接至相同多肽鏈中輕鏈可變區(VL)的 重鏈可變區(VH)。藉使用連接子(其太短以致於不能在相同鏈上的兩個區間產生配對)，區被迫與另一鏈之互補區配對而產生兩個抗原結合位。雙功能抗體更完整地述於(例如)EP 0 404 097；WO 93/11161；及Hollinger et al.,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448中。
非人類(例如囓齒類)抗體之“人源化”形式為嵌合抗體，其含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列。就絕大部分而言，人源化抗體為人類免疫球蛋白(受者抗體)，其中來自受者高度可變區的殘基被來自具有期望特異性、親合力、及容量之非人類物種(供者抗體)諸如鼷鼠、大鼠、兔或非人類靈長類之高度可變區的殘基所替代。一些情況下，人類球蛋白之框架區(FR)殘基被相應之非人類殘基所替代。此外，人源化抗體可包含受者抗體或供者抗體中未發現的殘基。這些修飾係用來進一步精煉抗體的效能。通常，人源化抗體將包含實質地所有之至少一種且典型地兩種可變區，其中所有或實質地所有高度可變環圈相當於非人類免疫球蛋白者且所有或實質地所有框架區(FR)為人類免疫球蛋白序列者。人源化抗體隨意地亦包含至少一部分的免疫球蛋白恆定區(Fc)，典型地為人類免疫球蛋白者。有關進一步之細節參見Jones et al.,1986,Nature 321：522-525；Riechmann et al.,1988,Nature 332：323-329；and Presta,1992,Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596。
本案所用之“分離出來”意指由(a)天然來源諸如植物或動物細胞或細胞培養物，或(b)合成有機化學反應混合物 之其他組份中分離。本案所用之“純化”意指當分離出來時，該分離物含有至少95重量%，且另一方面至少98重量%之化合物(例如共軛物)。
“分離出來”之抗體為已由其天然環境之組份中鑑定及分離及/或回收者。其天然環境之污染組份為會干擾抗體之診斷或醫療用途的材料，且可包括酵素、激素、及其他蛋白質或非蛋白質溶質。較佳實施例中，抗體將(1)藉勞里(Lowry)法測得被純化成大於95重量%抗體且最佳大於99重量%、(2)藉使用旋轉杯定序儀測得純化到足以得15個N端或內部胺基酸序列殘基的程度、(3)藉SDS-PAGE於還原或非還原條件下使用Coomassie藍或較佳地銀染測得純化成同質性。既然抗體之天然環境的至少一組份將不存在，故分離出來的抗體包括就地在重組細胞內的抗體。然而通常，分離出來的抗體將藉由至少一個純化步驟製得。
“誘導細胞凋亡”之抗體為藉由膜聯蛋白V(annexin V)之結合、DNA之片段化、細胞皺縮、內質網之擴張、細胞片段化、及/或膜囊(稱為細胞凋亡體)之形成而測知之誘導計畫性細胞死亡者。該細胞為腫瘤細胞例如***、卵巢、胃、子宮內膜、唾液腺、肺、腎、結腸、甲狀腺、胰臟、或膀胱細胞。各種方法可用於評估與細胞凋亡有關之細胞事件。例如，磷脂醯絲胺酸(PS)易位可藉膜聯蛋白(annexin)結合法測量；DNA片段化可經由DNA梯樣化評估；且核/染色質凝聚連同DNA片段化可藉於亞二倍體細 胞之任何增加來評估。
術語“治療有效量”意指有效以治療哺乳動物之疾病或失調的藥物量。至於癌症方面，藥物之治療有效量可降低癌症細胞數；降低腫瘤大小；抑制(亦即某種程度地減緩且較佳地停止)癌細胞浸潤至周邊器官；抑制(亦即某種程度地減緩且較佳地停止)腫瘤轉移；某種程度地抑制腫瘤生長；及/或某種程度地緩解與癌症有關之症狀。藥物到達可抑制現存癌細胞生長及/或殺死現存癌細胞之程度，其可為細胞抑制性及/或胞毒性。在癌症療法方面，效力可(例如)藉由評估疾病進展時間(TTP)及/或測量反應率(RR)。
術語“實質量”意指大多數，亦即大於50%之族群、混合物或樣品。
術語“細胞內代謝物”意指細胞內側對於抗體藥物共軛體(ADC)之代謝過程或反應所產生之化合物。代謝過程或反應可為酵素過程諸如抗體藥物共軛體(ADC)之肽連接子的蛋白分解裂解作用。細胞內代謝物包括(但不限定於)於進入、擴散、吸收或運送至細胞中之後經歷細胞內裂解作用之抗體及游離藥物。
術語“分子內裂解的”及“分子內裂解作用”意指細胞內側對於抗體藥物共軛體(ADC)等等之代謝過程或反應，藉此藥物部分與抗體間的共價連接(例如連接子)被破壞，導致游離藥物或共軛物之其他代謝物於細胞內側由抗體中解離出來。故抗體藥物共軛體(ADC)之裂解部分為分子內代 謝物。
術語“生物利用率”意指給全量之藥物投予患者後之全身性利用率(亦即血液/血漿濃度)。生物利用率為絕對術語，其意指藥物於投服劑型後達到一般循環的時間(速率)及總量(程度)。
術語“胞毒活性”意指抗體藥物共軛體(ADC)或該ADC之細胞內代謝物之殺細胞、抑制細胞或抗增生效應。胞毒活性可以IC50值表示，IC50值為一半細胞存活時之每單位體積之濃度(莫耳或質量)。
“失調”為以藥物或抗體藥物共軛體之治療而得利之任何病症。此包括慢性及急性失調或疾病包括哺乳動物易患的所論及失調之彼些病理性情況。本案待治療之失調之非限制實例包括良性及惡性癌症；白血病及淋巴系統惡性病、神經元、神經膠質、星狀膠質細胞、下視丘及其他腺體、巨噬細胞、上皮、基質及囊胚腔失調；及炎性、血管生成性及免疫性失調。
術語“癌症”及“癌性”意指或說明哺乳動物之生理病症或失調，其典型地以無秩序的細胞生長為特徵。“腫瘤”包含一或多種癌性細胞。
“患者”之實例包括(但不限定於)人類、大鼠、鼷鼠、天竺鼠、猴、豬、山羊、母牛、馬、狗、貓、鳥及家禽。例示實施例中，患者為人類。
除非上下文另有指定，否則術語“治療”意指醫療性治療及預防性測量以避免復發，其中該目標係抑制或減緩 (減輕)不期望之生理變化或失調，諸如癌症之發展或擴散。欲達本發明之目的，有利或期望之臨床結果包括(但不限定於)症狀之減輕、疾病程度之減小、疾病之安定化(亦即不惡化)狀態、疾病進展之延緩或減緩、疾病狀態之改善或緩和、及緩解(無論是部分或全部)，無論是可察覺到或不可察覺到的。“治療”亦可意指與未接受治療之預期存活率相比之下可延長存活率者。需要治療者包括已具有病症或失調者以及有病症或失調傾向者。
在癌症之上下文中，術語“治療”包括任何或所有之抑制腫瘤細胞、癌細胞、或腫瘤之生長；抑制腫瘤細胞或癌細胞之複製、整體腫瘤負荷之減輕或降低癌性細胞數目，及改善與疾病有關之一或多種症狀。
在自體免疫疾病之上下文中，術語“治療”包括任何或所有之抑制與自體免疫疾病狀態有關之細胞包括(但不限定於)可產生自體免疫抗體之細胞的複製、減輕自體免疫抗體負荷及改善一或多種自體免疫疾病的症狀。
在感染疾病之上下文中，術語“治療”包括任何或所有之：抑制可導致感染疾病之病原的生長、增殖或複製，及改善一或多種感染疾病的症狀。
術語“仿單”用於意指市售醫療產品包裝中包括的使用說明書，其含有有關於此醫療產品使用方面之適應症、用法、投服、禁忌症及/或警告訊息。
本案中所用之術語“細胞”、“細胞株”、及“細胞培養物”可互換使用且所有之此些稱呼包括後代。字語“轉型” 及“轉型細胞”包括初代目標細胞及培養物或由其所衍生的後代而無關於轉移數目。所有後代又由於蓄意或無意的突變而可能在DNA內容未必精確相同。具有與於原始轉型細胞中篩選出者相同功能或生物學活性的突變後代乃予包括。當想要有不同的稱號時，其可由文章清楚看出。
本案所用之CBI意指1,2,9,9a-四氫-4H-苯並[e]環丙[c]吲哚-4-酮，或其經取代或衍生化形式。CBI亦可意指CBI之二級形式或二級-CBI，其亦稱之為1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇，或其經取代或衍生化形式。
本案所用之CPI意指1,2,8,8a-四氫環丙[c]吡咯並[3,2-e]吲哚-4(5H)-酮或其經取代或衍生化形式。CPI亦可意指CPI之二級形式或二級-CPI，其亦稱之為8-(氯甲基)-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-醇，或其經取代或衍生化形式。
除非另有指定，否則術語“烷基”(本身或作為其他術語之一部分)意指具有指定碳原子數之直鏈或支鏈、飽和烴(例如“C1-C8”烷基意指具有1至8個碳原子之烷基)。烷基典型地包含1至20個碳原子，較佳地1至8個碳原子，且更佳地1至4個碳原子。當碳原子數未指定時，該烷基具有1至8個碳原子。代表性直鏈C1-C8烷基包括(但不限定於)甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基及正辛基；而支鏈C1-C8烷基包括(但不限定於)-異丙基、-二級丁基、-異丁基、-三級丁基、-異戊基、及-2-甲基丁基；不飽和C2-C8烷基包括(但不限定於) 乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、異丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基及3-甲基-1-丁炔基。本案提及之“烷基”意指如上所述之未經取代及經取代之部分。
除非另有指定，否則“伸烷基”(本身或作為其他術語之一部分)意指具有指定碳原子數，典型地1至18個碳原子，且具有兩個藉由移除來自母烷之相同或兩個不同碳原子之兩個氫原子而衍生之單價基團中心的飽和、支鏈或直鏈或環狀烴基。伸烷基典型地包含1至18個碳原子，較佳地1至10個碳原子，更佳地1至8個碳原子，且最佳地1至4個碳原子。典型之伸烷基包括(但不限定於)：伸甲基(-CH2-)、1,2-伸乙基-CH2CH2-)、1,3-伸丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-伸丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等等。“C1-C10”直鏈伸烷基為式-(CH2)1-10-之直鏈、飽和烴基。C1-C10伸烷基之實例包括伸甲基、伸乙基、伸丙基、伸丁基、伸戊基、伸己基、伸庚基、伸辛基、伸壬基及伸癸基。本案提及之“伸烷基”意指如上所述之未經取代或經取代之部分。
除非另有指定，否則術語“雜烷基”(本身或與其他術語組合地)意指安定之直或支鏈烴、或其組合，完全飽和或含1至3之不飽和度，由指定之碳原子數及一至三個選自由O、N、Si及S所組成之群組的雜原子所組成，且其 中氮及硫原子可隨意地氧化且氮雜原子可隨意地四級化。雜原子O、N及S可位於雜烷基之任何內部位置。雜原子Si可位於雜烷基之任何位置，包括其中烷基連接至分子剩餘部分的位置。最高為兩個之雜原子可為連續性。雜烷基典型地包含1至15個碳原子，較佳地1至12個碳原子，更佳地1至8個碳原子，且最佳地1至4個碳原子。本案提及之“雜烷基”意指如上所述之未經取代及經取代之部分。
除非另有指定，否則“伸雜烷基”(本身或作為其他術語之一部分)意指衍生自雜烷基(如上所討論)之二價基。伸雜烷基方面，雜原子亦可佔據鏈端之任一方或兩方皆佔據。本案所提及之“伸雜烷基”意指如上所述之未經取代及經取代之部分。
除非另有指定，否則“芳基”(本身或作為其他術語之一部分)意指藉由母芳族環系統之單一碳原子中移除一個氫原子所衍生之具5-20個，較佳地5-14個或6-14個碳原子之經取代或未經取代單價碳環芳族烴基。典型之芳基包括(但不限定於)衍生自苯、經取代苯、萘、蒽、聯苯等等之基團。經取代碳環芳族基(例如芳基)可經一或多個，較佳地1至5個下列基團取代：C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-C(O)R9、-OC(O)R9、-C(O)OR9、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、鹵素、-N3、-NH2、-NH(R9)、-N(R9)2及-CN；其中R9各自獨立地選自-H、C1-C8烷基及未經取代之芳基。一些實施 例中，經取代之碳環芳族基可進一步包括一或多個下列者：-NHC(=NH)NH2、-NHCONH2、-S(=O)2R9及-SR9。“伸芳基”為相應之二價部分。
“經取代烷基”(或“經取代伸烷基”、“經取代雜烷基”、或“經取代伸雜烷基”)意指如上所討論之相關含烷基基團，其中一或多個氫各自獨立地經取代基替代。典型之取代基包括(但不限定於)-X、-R10、-O-、-OR10、-SR10、-S-、-NR10 2、-NR10 3、=NR10、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N=C=O、-NCS、-NO、-NO2、=N2、-N3、-NR10C(=O)R10R10、-C(=O)NR10 2、-SO3 -、-SO3H、-S(=O)2R10、-OS(=O)2OR10、-S(=O)2NR10、-S(=O)R10、-OP(=O)(OR10)2、-P(=O)(OR10)2、-PO3 2-、PO3H2、-AsO2H2、-C(=O)R10、-C(=O)X、-C(=S)R10、-CO2R10、-CO2 -、-C(=S)OR10、-C(=O)SR10、-C(=S)SR10、-C(=O)NR10 2、-C(=S)NR10 2、或-C(=NR10)NR10 2，其中X各自獨立地為鹵素：-F、-Cl、-Br、或-I；且R10各自獨立地為-H、C1-C20烷基、C1-C20雜烷基、C6-C20芳基、C1-C10雜環基、保護基或前藥部分。如上所述之芳基、伸烷基及伸雜烷基亦可類似地經取代。
除非另有指定，否則“芳烷基”(本身或作為其他術語之一部分)意指如上所定義之烷基，經如上所定義之芳基取代。
除非另有指定，否則“C3-C10雜環基”(本身或作為其他術語之一部分)意指具有2至10個，2至14個，或2至20個碳原子，較佳地3至8個碳原子(亦稱之為環員)及一 至四個獨立地選自N、O、P或S之雜原子環員，且藉移除母環系統之環原子中的一個氫原子所衍生的單價經取代或未經取代芳族或非芳族單環、雙環或三環系統。雜環基中之一或多個N、C或S原子可予氧化。包括雜原子之環可為芳族或非芳族。芳族雜環在本案中有時稱之為雜芳基。除非另有註明，否則雜環基乃於任何雜原子或碳原子處連接至其側基而得到安定的結構。C2-C10雜環基之代表性實例包括(但不限定於)四氫呋喃基、氧雜環丁烷基、吡喃基、吡咯啶基、哌啶基、哌基、苯並呋喃基、苯並噻吩、苯並噻唑基、吲哚基、苯並吡唑基、吡咯基、噻吩基(噻吩)、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、***基、喹啉基包括諸如1,2,3,4-四氫-喹啉基等部分、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡基、嗒基、異噻唑基、異唑基、四唑基、環氧化物、氧雜環丁烷及BODIPY(經取代或未經取代)。C2-C10雜環基可經最多為七個之基團包括(但不限定於)C1-C8烷基、C1-C8雜烷基、-OR11、芳基、-C(O)R11、-OC(O)R11、-C(O)OR11、-C(O)NH2、-C(O)NHR11、-C(O)N(R11)2、-NHC(O)R11、-S(=O)2R11、-S(O)R11、鹵素、-N3、-NH2、-NH(R11)、-N(R11)2及-CN取代；其中R11各自獨立地選自-H、C1-C8烷基、C1-C8雜烷基及芳基。一些實施例中，經取代雜環基亦包括一或多個下列者：-NHC(=NH)NH2、-NHCONH2、-S(=O)2R11及-SR11。雜環基(heterocyclo)或C2-C10雜環基(C2-C10 heterocyclo)為相應之二價部分。二價芳族雜環在本案中有時稱之為伸雜芳基或C2-C10伸雜芳 基。
如上所述，芳族雜環有時稱雜芳基，且除了雜原子外，較佳地含有5-14個、6-14個、或6-20個碳原子。雜芳基可為單環、雙環或三環狀環系統。代表性雜芳基包括(但不限定於)***基、四唑基、二唑基、吡啶基、呋喃基、苯並呋喃基、噻吩基、苯並噻吩基、喹啉基、吡咯基、吲哚基、唑基、苯並唑基、咪唑基、苯並咪唑基、噻唑基、苯並噻唑基、異唑基、吡唑基、異噻唑基、嗒基、嘧啶基、吡基、三基、噌啉基、呔基、喹唑啉基、嘧啶基、氮雜環庚三烯基、氧雜環庚三烯基、及喹啉基。雜芳基隨意地經取代。典型之取代基包括(但不限定於)-X、-Rh、-O-、-ORh、-SRh、-S-、-NRh 2、-NRh 3、=NRh、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N=C=O、-NCS、-NO、-NO2、=N2、-N3、-NRhC(=O)Rh、-C(=O)NRh 2、-SO3 -、-SO3H、-S(=O)2Rh、-OS(=O)2ORh、-S(=O)2NRh、-S(=O)Rh、-OP(=O)(ORh)2、-P(=O)(ORh)2、-PO3 2-、PO3H2、-AsO2H2、-C(=O)Rh、-C(=O)X、-C(=S)Rh、-CO2Rh、-CO2 -、-C(=S)ORh、-C(=O)SRh、-C(=S)SRh、-C(=O)NRh 2、-C(=S)NRh 2、-C(=NR)NRh 2、C1-C20雜烷基、C6-C20芳基、C3-C8雜環基、保護基或前藥部分，其中X各自獨立地為鹵素：-F、-Cl、-Br、或-I；且Rh各自獨立地為-H或C1-C6烷基。二價芳族雜環在本案中有時稱之為伸雜芳基或C1-C10伸雜芳基。
除非另有指定，否則“雜芳烷基”(本身或作為其他術 語之一部分)意指如上所定義之烷基且經如上所定義之芳族雜環基取代。雜芳烷基(Heteroaralklo)為相應之二價部分。
除非另有指定，否則“C3-C8碳環基”(本身或作為其他術語之一部分)為藉由母環系統之環原子中移除一個碳原子所衍生之3-、4-、5-、6-、7-或8-員單價、經取代或未經取代、飽和或不飽和非芳族單環或雙環狀碳環。代表性C3-C8碳環基包括(但不限定於)環丙基、環丁基、環戊基、環戊二烯基、環己基、環己烯基、1,3-環己二烯基、1,4-環己二烯基、環庚基、1,3-環庚二烯基、1,3,5-環庚三烯基、環辛基、環辛二烯基、雙環(1.1.1.)戊烷、及雙環(2.2.2.)辛烷。C3-C8碳環基可未經取代或經最高為七個之包括(但不限定於)下列之基團取代：C1-C8烷基、C1-C8雜烷基、-OR11、芳基、-C(O)R11、-OC(O)R11、-C(O)OR11、-C(O)NH2、-C(O)NHR11、-C(O)N(R11)2、-NHC(O)R11、-S(=O)2R11、-S(=O)R11、-OH、鹵素、-N3、-NH2、-NH(R11)、-N(R11)2及-CN；其中R11各自獨立地選自-H、C1-C8烷基、C1-C8雜烷基及芳基。“C3-C8碳環基(C3-C8 carbocyclo)”為相應之二價部分。
本案所用之疊氮基取代基意指-N=N=N；氰酸根取代基意指-O-CN；硫氰酸根取代基意指-S-CN；異氰酸根取代基意指-N=C=O；且硫異氰酸根取代基意指-S-N=C=O。
術語“手性”意指分子，其具有與鏡像夥伴不可重疊的性質，而術語“非手性”意指分子，其可與其鏡像夥伴重 疊。
術語“立體異構物”意指化合物，彼等具有完全相同的化學組成，但有關於原子或基團在空間中的排列不同。
“非鏡像異構物”意指具有二或多個手性中心之立體異構物且彼等之分子彼此不為鏡像。非鏡像異構物具有不同的物理性質，例如熔點、沸點、光譜性質及反應性。非鏡像異構物之混合物可於高解析分析步驟下諸如電泳及層析法分離。
“糖基”意指下列結構： 或彼之經取代形式，例如包括參考結構經取代以形成諸如下列等結構：及及許多其他者。
本案所用之立體化學定義及慣例一般係遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms,McGraw-Hill Book Company,New York(1984)；及Eliel and Wilen,Stereochemistry of Organic Compounds,John Wiley & Sons,Inc.,New York(1994)。許多有機化合物以光學活性形式存在，亦即彼等具有將平面偏振光的平面旋 轉的能力。在說明光學活性化合物時，字首D及L、或R及S係用以意指分子關於其手性中心之絕對構型。字首d及l或(+)及(-)用以標示平面偏極光被化合物旋轉之現象，(-)或l意指化合物為左旋。以(+)或d為字首之化合物則為右旋。就給定之化學結構而言，這些立體異構物為完全相同的，惟彼此為鏡像除外。特異之立體異構物亦可稱之為鏡像異構物，而這些異構物之混合物通常稱之為鏡像異構物混合物。鏡像異構物之50：50混合物稱為消旋混合物或消旋物，其可發生在化學反應或過程當中沒有立體選擇或立體特異性之時。術語“消旋混合物”及“消旋物”意指兩種鏡像異構物種之等莫耳混合物，無光學活性。
本案所用之“-PABA-”或“PABA”意指對-胺基苯甲酸及由其衍生之部分，例如下列結構： 或其變體。
本案所用之“-PABC-”或“PABC”意指對-胺基苄氧羰基及由其衍生之部分，例如下列結構： 或其變體。
胺基酸“衍生物”包括具有藉母胺基酸之共價連接諸如藉烷基化、糖化、乙醯化、磷酸化等等而取代或修飾之胺基酸。“衍生物”之定義範圍內進一步包括(例如)具有經取 代連結、以及其他技術領域中已知之修飾的一或多種胺基酸類似物。
除非文章另有指定，否則“天然胺基酸”意指精胺酸、麩醯胺酸、苯基丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、離胺酸、甘胺酸、丙胺酸、組織胺酸、絲胺酸、脯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、蛋胺酸、白胺酸、天冬醯胺、異白胺酸、及纈胺酸。
“保護基”意指當連接至分子之反應基時，可遮蔽、降低或避免反應性的部分。保護基之實例可見於T.W.Greene and P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd edition,John Wiley & Sons,New York,1999，及Harrison and Harrison et al.,Compendium of Synthetic Organic Methods,Vols.1-8(John Wiley and Sons,1971-1996)中，彼等乃整體併入本案中以供參考。代表性羥基保護基包括醯基、苄基及三苯甲基醚、四氫吡喃基醚、三烷基矽基醚及烯丙基醚。代表性胺基保護基包括甲醯基、乙醯基、三氟乙醯基、苄基、苄氧羰基(CBZ)、三級丁氧羰基(Boc)、三甲基矽基(TMS)、2-三甲基矽基-乙磺醯基(SES)、三苯甲基及經取代三苯甲基、烯丙氧羰基、9-茀基甲氧羰基(FMOC)、硝基-藜蘆氧羰基(NVOC)等等。
“羥基保護基”包括(但不限定於)甲氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氫吡喃基醚、苄基醚、對-甲氧基苄基醚、三甲基矽基醚、三乙基矽基醚、三異丙基矽基醚、三級丁基二甲基矽基醚、三苯甲基矽基醚、乙酸酯、 經取代乙酸酯、三甲基乙酸酯、苯甲酸酯、甲磺酸酯及對-甲苯磺酸酯。
“脫離基”意指可被另一官能基取代之官能基。此脫離基已於技術領域中詳知，其實例包括(但不限定於)鹵化物(例如氯化物、溴化物、碘化物)、甲磺醯基、對-甲苯磺醯基、三氟甲磺酸基、及三氟甲磺酸酯。
本案所用之詞組“醫藥上可接受之鹽”意指化合物之醫藥上可接受之有機或無機鹽。化合物典型地含有至少一個胺基，因此酸加成鹽可以此胺基形成。例示之鹽類包括(但不限定於)硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、糖質酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、及巴莫酸鹽(亦即1,1’-伸甲基-雙-(2-羥基基-3-萘甲酸鹽))。醫藥上可接受之鹽可包括其他分子諸如乙酸鹽離子、琥珀酸鹽離子或其他抗衡離子之納入。抗衡離子可為任何有機或無機部分，其可使母化合物上的電荷安定化。此外，醫藥上可接受之鹽可在其結構中具有大於一個的荷電原子。在當多重荷電原子為醫藥上可接受之鹽的一部分之情況可具有多重抗衡離子。因此，醫藥上可接受之鹽可具有一或多個荷電原子及/或一或多個抗衡離子。
“醫藥上可接受之溶劑化物”或“溶劑化物”意指一或多種溶劑分子與本發明化合物或共軛物之締合。形成醫藥上可接受之溶劑化物的溶劑實例包括(但不限定於)水、異丙醇、乙醇、甲醇、二甲亞碸、乙酸乙酯、乙酸、及乙醇胺。
術語“負載力”或“藥物負載力”或“酬載負載力”表示或意指抗體藥物共軛體(ADC)分子中每份抗體之平均酬載(本案中“酬載”及“諸酬載”可與“藥物”及“諸藥物”互換使用)數。藥物負載力可在每份抗體1至20份藥物之範圍內。此偶爾稱之為DAR，或藥物抗體比。本案所述之ADC組成物典型地具有1-20之DAR，某些實施例中由1-8、由2-8、由2-6、由2-5及由2-4。典型之DAR值為2、4、6及8。每份抗體之藥物平均數(或DAR值)可以慣用之方法諸如紫外線/可見光光譜術、質譜術、ELISA分析法、及HPLC法特徵化。全量之DAR值亦可測定。一些情況下，具有特定DAR值之同質ADC之分離、純化及特徵化可藉諸如逆相HPLC或電泳等方法達成。DAR可被抗體上之連接部位數所限制。例如，當連接點為半胱胺酸硫醇時，則抗體僅可能僅具有一個或數個半胱胺酸硫醇基，或者可能僅具有一個或數個足夠反應之硫醇基以使連接子單元經由此連接。一些實施例中，半胱胺酸硫醇為半胱胺酸殘基的硫醇基，其形成鏈間的二硫鍵。一些實施例中，半胱胺酸硫醇為半胱胺酸殘基的硫醇基，並不形成鏈間的二硫鍵。典型地，少於理論最大值之藥物部分於共軛反應期間共軛 至抗體。抗體可含有(例如)許多並不與連接子或連接子中間體反應的離胺酸殘基。僅有最具反應性的離胺酸基可與反應性連接子試劑反應。
通常，抗體並不含有許多(如有的話)可經由連接子連接至藥物的游離及反應性半胱胺酸硫醇基。抗體中大多數的半胱胺酸硫醇殘基係以二硫橋形式存在且必需以還原劑諸如二硫蘇糖醇(DTT)還原。抗體可接受變性條件以顯露反應性親核基諸如離胺酸或半胱胺酸。ADC之負載力(藥物/抗體比)可以數種不同方式控制，包括：(i)限制藥物連接子相對於抗體之莫耳過量，(ii)限制共軛反應時間或溫度，及(iii)部分或限制供半胱胺酸硫醇修飾之還原條件。當大於一個親核基與藥物連接子反應時，則所得產物為每份抗體具有一或多個藥物部分分佈的抗體藥物共軛體(ADC)混合物。每份抗體的藥物平均數可藉(例如)雙重ELISA抗體分析法(對抗體具特異性及對藥物具特異性)由混合物中計算出。個別之抗體藥物共軛體(ADC)可藉質譜術於混合物中鑑定出，及藉HPLC例如疏水***互作用層析法分離。
下列者為本申請案中可能不另定義及說明的縮寫及定義列表：DMSO(意指二甲亞碸)，HRMS(意指高解析質譜術)，DAD(意指二極體陣列檢測)，TFA(意指2,2,2-三氟乙酸或三氟乙酸)，TFF(意指切向流過濾)，EtOH(意指乙醇)，MW(意指分子量)，HPLC(意指高效能液相層析)，prep HPLC(意指製備高效能液相層析)，etc.(意指等等)， trityl(意指1,1’,1”-乙-1,1,1-三基三苯)，THF(意指四氫呋喃)，NHS(意指1-羥基-2,5-吡咯啶二酮)，Cbz(意指羧苄基)，eq.(意指當量)，n-BuLi(意指正丁基鋰)，OAc(意指乙酸鹽)，MeOH(意指甲醇)，i-Pr(意指異丙基或丙-2-基)，NMM(意指4-甲基啉)，且“-”(於表中意指此時無數據可得)。
本案所用之二價部分及取代基意指該部分或取代基於任一方向或兩個方向均可結合或連接。例如，-C(O)NR-部分(於LB1之定義中，或於別處)意指傳達-C(O)NR-以及-NRC(O)-，-C(O)C1-C6烷基-部分意指傳達-C(O)C1-C6烷基-以及-C1-C6烷基C(O)-等等。更通常地，非對稱部分於其“左”及“右”側連接的說明意指傳達所呈現的部分(該部分之左側連接於所書寫之左側，該部分之右側連接於所書寫之右側)及所呈現的部分之反向(該部分之左側連接於所書寫之右側，該部分之右側連接於所書寫之左側)。
本案中所用之“鍵”及“不存在”均說明不包括原子或諸原子的變數。故，當二價變數“不存在”時，當然意指鄰近的部分彼此結合。例如，如果，LB2不存在，則LB1當然可結合至LB3；或者如果LB1及LB2均不存在，則LA當然可結合至LB3。類似地，如果二價變數定義為“鍵”，則其當然意指無原子存在且鄰近的部分係彼此結合。因此，例如，當變數“D”被定義為鍵時，應了解鄰近D的碳(於定義T2之結構中)乃彼此結合。不存在的單價變數當然為氫或為可進一步共價鍵結的電子對。
抗體單元(A、Ab或AB)
如上所述，本案之術語“抗體”(或“A”、“Ab”或“AB”)係最廣義使用且尤其涵蓋完整之單株抗體、多株抗體、單特異性抗體、多重特異性抗體(例如雙特異性抗體)及顯現期望生物學活性的抗體片段。此外，雖然本案中所述的某些方面意指抗體藥物共軛體，但可進一步設想共軛體中之抗體部分可被任何可特異地與受體、抗原或有關於給定目標細胞族群的其他反應部分結合或反應性地締合或複合的事物所替代。例如，取代含有抗體，本發明之共軛體可含有靶向分子，其可與受體、抗原或其他尋求醫療或其他生物修飾的細胞族群之反應性部分結合、複合、或反應。此些分子之實例包括較小分子量之蛋白質、多肽或肽類、凝集素、醣蛋白、非肽類、維生素、營養物運輸分子(諸如但不限定於運鐵蛋白)、或任何其他細胞結合分子或物質。某些方面，抗體或其他此靶向分子係用來將藥物遞送至可與該抗體或其他靶向分子交互作用的特定目標細胞族群。
另一方面，本發明係關於式IIIA或IIIB之抗體藥物共軛體，其中抗體AB選自：曲妥珠美(trastuzumab)、曲妥珠美突變體(例如本案中或國際專利申請案PCT/IB2012/056234中揭示的曲妥珠美突變體)、奧戈伏馬(oregovomab)、依決洛馬(edrecolomab)、西妥昔馬(cetuximab)、抗玻璃黏連蛋白受體(αvβ3)之人源化單株抗體、阿來組馬(alemtuzumab)、 用於治療非何杰金氏淋巴瘤之抗-HLA-DR抗體包括人源化抗-HLA-DR抗體、131I Lym-1、用於治療非何杰金氏淋巴瘤之抗-HLA-Dr10抗體包括鼠抗-HLA-Dr10抗體、抗-cd33抗體、用於治療何杰金氏淋巴瘤或非何杰金氏淋巴瘤之抗-cd22抗體包括人源化抗-CD22 mAb、拉貝珠馬(labetuzumab)、必化思馬(bevacizumab)、替伊莫(ibritumomab tiuxetan)、奧法木馬(ofatumumab)、帕尼馬(panitumumab)、利妥昔馬(rituximab)、托西莫馬(tositumomab)、易普利姆馬(ipilimumab)、及吉妥馬(gemtuzumab)。
可存在於抗體單元上的雜原子包括硫(於一實施例中，來自抗體的氫硫基)、氧(一實施例中，來自抗體的羰基、羧基或羥基)及氮(一實施例中，來自抗體的一級或二級胺基)。這些雜原子可存在於抗體天然狀態的抗體上，例如天然存在的抗體上，或者可經由化學修飾置入抗體中。
一實施例中，抗體單元具有氫硫基且抗體單元經由氫硫基的硫原子鍵結。
另一實施例中，抗體具有離胺酸殘基，其可與活化酯(此酯包括，但不限定於，N-羥基琥珀醯亞胺、五氟苯酯、及對-硝苯酯)反應，故形成由抗體單元之氮原子與羰基所組成之醯胺鍵。
又另一方面，抗體單元具有一或多個離胺酸殘基，其可經化學修飾以將一或多個氫硫基置入。可用於修飾離胺酸的試劑包括(但不限定於)N-琥珀醯亞胺基S-乙醯基硫代 乙酸酯(SATA)及2-亞胺基硫烷氫氯酸鹽(托特氏試劑(Traut’s Reagent))。
另一實施例中，抗體單元可具有一或多個碳水化合物基團，其可經化學修飾以具有一或多個氫硫基。
另一實施例中，抗體單元可具有一或多個碳水化合物基團，其可氧化以提供醛基(例如參見Laguzza,et al.,1989,J.Med.Chem.32(3)：548-55)。相應之醛可與反應位諸如肼及羥胺形成鍵。其他用於蛋白質修飾以供藥物連接或締合的方案乃述於Coligan et al.,Current Protocols in Protein Science,vol.2,John Wiley & Sons(2002)中(其乃併入本案以供參考)。
當共軛體包含非免疫反應性蛋白質、多肽或肽單元以取代抗體時，可用之非免疫反應性蛋白質、多肽、或肽單元包括(但不限定於)運鐵蛋白、表皮生長因子(“EGF”)、鈴蟾素、胃泌素、胃泌素釋放肽、血子板衍生性生長因子、IL-2、IL-6、轉化生長因子(“TOP”)，諸如TGF-α及TGF-β，牛痘生長因子(“VGF”)、胰島素及類胰島素生長因子I及II、體抑素、凝集素及源自低密度脂蛋白的脫輔基蛋白。
可用之多株抗體為由受免疫動物之血清中所衍出之異質性抗體族群。可用之單株抗體為針對特定抗原決定位(例如癌細胞抗原、病毒抗原、微生物抗原、蛋白質、肽、碳水化合物、化學物、核酸、或其片段)的同質性抗體族群。針對所論及抗原的單株抗體(mAb)可藉使用技術領域中已知之可提供藉培養物中連續細胞株以製造抗體分 子的技術製得。
可用之單株抗體包括(但不限定於)人類單株抗體、人源化單株抗體、抗體片段、或嵌合單株抗體。人類單株抗體可藉技術領域中已知之許多技術中的任一者製得(例如Teng et al.,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.80：7308-7312；Kozbor et al.,1983,Immunology Today 4：72-79；及Olsson et al.,1982,Meth.Enzymol.92：3-16)。
抗體亦可為雙特異性抗體。製造雙特異性抗體的方法為技術領域中已知且於下文討論。
抗體可為可免疫特異地結合至目標細胞(例如癌細胞抗原、病毒抗原、或微生物抗原)的抗體或其他結合至腫瘤細胞或基質的抗體之功能活性片段、衍生物或類似物。就此點而言，“功能活性”意指該片段、衍生物或類似物可引出抗-抗-個體基因型抗體，其認識與衍生該片段、衍生物或類似物的抗體所認識者相同的抗原。尤其，於例示實施例中，免疫球蛋白分子之個體基因型的抗原性可藉由刪除框架及CDR序列(其為特異地認識抗原的CDR序列之C端)而增強。欲測定那個CDR結合至抗原，可將含CDR序列之合成肽與抗原藉技術領域中已知之任何結合分析法(例如BIA核心分析法)用於結合分析法中(有關於CDR之定位方面，例如參見Kabat et al.,1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,National Institute of Health,Bethesda,Md.；Kabat E et al.,1980,J.Immunology 125(3)：961-969)。
其他可用之抗體包括抗體片段諸如(但不限定於)F(ab’)2片段、Fab片段、Fvs、單鏈抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、scFv、scFv-FV或具有與抗體相同特異性的任何其他分子。
此外，重組抗體，諸如嵌合及人源化單株抗體(包含人類及非人類部分，其可藉使用標準重組DNA技術製得)亦為有用的抗體。嵌合抗體為分子，其中不同的部分係由不同的動物物種中所衍出，例如具有由鼠單株所衍出之可變區及人類免疫球蛋白恆定區者(例如參見美國專利案號4,816,567；及美國專利案號4,816,397，其乃整體併入本文中以供參考)。人源化抗體為來自非人類物種的抗體分子，其具有一或多個來自非人類物種之互補決定區(CDR)及具有來自人類免疫球蛋白之框架區(例如參見美國專利案號5,585,089，其乃整體併入本文中以供參考)。此嵌合及人源化單株抗體可藉技術領域中已知之重組DNA技術，例如使用國際公開案號WO 87/02671；歐州專利公開案號0 184 187；歐州專利公開案號0 171 496；歐州專利公開案號0 173 494；國際公開案號WO 86/01533；U.S.Pat.No.4,816,567；歐州專利公開案號012 023；Berter et al.,1988,Science 240：1041-1043；Liu et al.,1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：3439-3443；Liu et al.,1987,J.Immunol.139：3521-3526；Sun et al.,1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：214-218；Nishimura et al.,1987,Cancer.Res.47：999-1005；Wood et al.,1985,Nature 314：446-449；及 Shaw et al.,1988,J.Natl.Cancer Inst.80：1553-1559；Morrison,1985,Science 229：1202-1207；Oi et al.,1986,BioTechniques 4：214；美國專利案號5,225,539；Jones et al.,1986,Nature 321：552-525；Verhoeyan et al.,1988,Science 239：1534；及Beidler et al.,1988,J.Immunol.141：4053-4060中所述之方法製得；這些方法之每一者均整體併入本案中以供參考。
完全人類之抗體特別令人期望且可使用不可表現內源性免疫球蛋白重及輕鏈基因但可表現人類重及輕鏈基因的基因轉殖鼠製得。基因轉殖鼠係以正常方式使用經選定之抗原，例如本發明之所有或一部分多肽進行免疫。對抗該抗原之單株抗體可使用慣用的融合瘤技術獲得。被基因轉殖鼠所攜帶的人類免疫球蛋白轉殖基因在B細胞分化期間重新排列，且繼而接受種類轉移及體細胞突變。因此，使用此技術，則可能製得醫療有用之IgG、IgA、IgM及IgE抗體。欲回顧此製造人類抗體的技術，請參見Lonberg and Huszar,1995,Int.Rev.Immunol.13：65-93。有關此製造人類抗體及人類單株抗體之技術及製造此抗體之方案的詳細討論，請參見例如美國專利案號5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；每一者均整體併入本案中以供參考。其他人類抗體可購自(例如)Abgenix,Inc.(now Amgen,Freemont,Calif.)及Medarex(Princeton,N.J.)。
認識所選定抗原決定位的完全人類抗體可使用稱之 為“導向選擇”之技術產生。此方法中，所選定之非人類單株抗體(例如鼷鼠抗體)係用以引導選擇認識相同表面決定位之完全人類抗體。(例如參見Jespers et al.,1994,Biotechnology 12：899-903)。人類抗體亦可使用技術領域中已知之各種技術包括噬菌體展示文庫製得(例如參見Hoogenboom and Winter,1991,J.Mol.Biol.227：381；Marks et al.,1991,J.Mol.Biol.222：581；Quan and Carter,2002,The rise of monoclonal antibodies as therapeutics,In Anti-IgE and Allergic Disease,Jardieu and Fick,eds.,Marcel Dekker,New York,N.Y.,Chapter 20,pp.427-469)。
其他實施例中，抗體為抗體之融合蛋白，或其功能活性片段，例如其中抗體於N端或C端經由共價鍵(例如肽鍵)融合至非來自抗體的另一蛋白質之胺基酸序列(或其部分，較佳地蛋白質之至少10、20或50胺基酸部分)。較佳地，抗體或其片段係於恆定區的N端共價連結至其他蛋白質。
抗體包括經過修飾之類似物及衍生物，亦即藉由分子之任何型式的共價連接，只要此共價連接允許抗體保留其抗原結合免疫特異性即可。例如(但非限制)，抗體之衍生物及類似物包括已進一步(例如)藉醣化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、以已知之保護基衍生化、蛋白溶解性裂解、連結至細胞抗體單元或其他蛋白質等等而修飾者。諸多中之任何化學修飾均可藉已知技術包括(但不限 定於)特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、於衣黴素(tunicamycin)存在下之代謝合成法等等進行。此外，類似物或衍生物可含有一或多種非天然胺基酸。
抗體可於可與Fc受體交互作用之胺基酸殘基中進行修飾(例如取代、刪除或增加)。尤其，抗體可於經鑑定涉及抗-Fc區與FcRn受體間交互作用之胺基酸殘基中進行修飾(例如參見國際公開案號WO 97/34631，其乃整體併入本案中以供參考)。
對癌細胞抗原具免疫特異性之抗體可商業獲得或可藉技術領域中已知之任何方法諸如化學合成法或重組表現技術製得。編碼對癌細胞抗原具免疫特異性之抗體的核苷酸序列可由(例如)GenBank資料庫或與其類似的資料庫、文獻公開、或藉常規選殖法及定序法獲得。
具體實施例中，可使用供治療癌症的已知抗體。對癌細胞抗原具免疫特異性之抗體可商業獲得或可藉熟諳此技術領域者已知之任何方法諸如重組表現技術獲得。編碼對癌細胞抗原具免疫特異性之抗體的核苷酸序列可由(例如)GenBank資料庫或與其類似的資料庫、文獻公開、或藉常規選殖法及定序法獲得。可利用於治療癌症之抗體實例包括(但不限定於)OVAREX，其為用於治療卵巢癌之鼠抗體；PANOREX(Glaxo Wellcome,NC)，其為用於治療大腸直腸癌之鼠IgG2a抗體；Cetuximab ERBITUX(Imclone Systems Inc.,NY)，其為用於治療表皮生長因子陽性癌症諸如頭頸部癌症之抗-EGFR IgG嵌合抗體；Vitaxin (MedImmune,Inc.,MD)，其為用於治療肉瘤之人源化抗體；CAMPATH I/H(Leukosite,MA)，其為用於治療慢性淋巴球性白血病(CLL)之人源化IgG1抗體；SMART ID10(Protein Design Labs,Inc.,CA)，其為用於治療非何杰金氏淋巴瘤之人源化抗-HLA-DR抗體；ONCOLYM(Techniclone,Inc.,CA)，其為用於治療非何杰金氏淋巴瘤之放射標記鼠抗-HLA-Dr10抗體；ALLOMUNE(BioTransplant,CA)，其為用於治療何杰金氏病或非何杰金氏淋巴瘤之人源化抗-CD2 mAb；及CEACIDE(Immunomedics,NJ)，其為用於治療大腸直腸癌之人源化抗-CEA抗體。
欲發現用於癌症診斷及醫療之有效細胞目標，研究者已尋求鑑別出跨膜或其他之腫瘤相關性多肽，與一或多種正常非癌性細胞相比之下，其可特異地於一或多種特定型式之癌細胞表面上表現。通常，與於非癌性細胞表面相比之下，此腫瘤相關性多肽更為豐富地於癌細胞表面上表現。此腫瘤相關性細胞表面抗原多肽之鑑別造就了可特異地靶向癌細胞以供經由以抗體為基準之療法進行破壞的能力。
連接子單元(L)
連接子(本案中偶爾稱之為“[連接子]”)為雙官能性化合物，其可用以連接藥物及抗體以形成抗體藥物共軛體(ADC)。此共軛體可用於(例如)形成對抗腫瘤相關性抗原之免疫共軛體。此共軛體得以令胞毒藥物選擇性遞送至腫 瘤細胞。
在抗體藥物共軛體(ADC)中，連接子的作用在將酬載連接至抗體。
一方面，連接子單元之第二區段乃置入，該第二區段具有第二反應位例如親電基，其可與抗體單元(例如抗體)上存在的親核基反應。抗體上可用之親核基包括(但不限定於)氫硫基、羥基及胺基。抗體親核基之雜原子與連接子單元上的親電基反應且形成鍵結至連接子單元的共價鍵。可用之親電基包括(但不限定於)馬來醯亞胺及鹵乙醯胺基。親電基提供供抗體連接的便利位置。
另一實施例中，連接子單元具有反應位，其具有親核基，此親核基可與抗體上存在的親電基反應。抗體上可用之親電基包括(但不限定於)醛及酮羰基。連接子親核基之雜原子可與抗體上之親電基反應且形成鍵結至抗體的共價鍵。連接子單元上可用之親核基包括(但不限定於)醯肼、肟、胺基、肼、胺苯硫脲、肼羧酸鹽、及芳醯肼。抗體上的親電基提供供連接子單元連接的便利位置。
胺基官能基亦為供連接子用之可用反應位，因為彼等可與化合物之羧酸、或活化酯反應以形成醯胺鍵之故。典型地，以肽為基底之本發明化合物可藉在二或多個胺基酸及/或肽片段之間形成肽鍵而製得。此肽鍵可(例如)根據肽化學領域中詳知之液相合成法(例如參見Schroder and Lubke,“The Peptides”,volume 1,pp 76-136,1965,Academic Press)製得。
本發明文章中，特別是(但不限定於)連接子組份諸如L1、L2(包括L2 A、L2 B及L2 C)及L3，語言“選自一或多個”或“一或多個”意指多重組份，其可相同或不同，為或可為接續排列。因此，例如，L3可為-C1-6烷基-、-NR-或其他個別列出之組份，但亦可為-C1-6烷基-NR-，或2或多個所列組份之任何其他組合。
另一實施例中，連接子單元具有反應位，該反應位可與抗體親核位諸如半胱胺酸反應。反應位係由經碸取代之雜環所組成。接著碸被抗體親核位(亦即半胱胺酸)替代，且抗體與雜環間新形成的鍵將抗體連接至連接子。參見WO 2014/144878。
化合物及其抗體藥物共軛體之合成
本發明之化合物及共軛體可使用以下於實例中所述之合成步驟製得。如同以下更詳細地說明，本發明之化合物及共軛體可使用具有供結合至化合物之反應位的連接子區段來製備。一方面，連接子單元之第二區段乃置入，該第二區段具有第二反應位例如親電基，其可與抗體單元(例如抗體)上存在的親核基反應。抗體上可用之親核基包括(但不限定於)氫硫基、羥基及胺基。抗體親核基之雜原子與連接子單元上的親電基反應且形成鍵結至連接子單元的共價鍵。可用之親電基包括(但不限定於)馬來醯亞胺及鹵乙醯胺基。親電基提供供抗體連接的便利位置。
另一實施例中，連接子單元具有反應位，其具有親核 基，此親核基可與抗體上存在的親電基反應。抗體上可用之親電基包括(但不限定於)醛及酮羰基。連接子親核基之雜原子可與抗體上之親電基反應且形成鍵結至抗體的共價鍵。連接子單元上可用之親核基包括(但不限定於)醯肼、肟、胺基、肼、胺苯硫脲、肼羧酸鹽、及芳醯肼。抗體上的親電基提供供連接子單元連接的便利位置。
胺基官能基亦為供連接子用之可用反應位，因為彼等可與化合物之羧酸、或活化酯反應以形成醯胺鍵之故。通常，以肽為基底之本發明化合物可藉在二或多個胺基酸及/或肽片段之間形成肽鍵而製得。此肽鍵可(例如)根據肽化學領域中詳知之液相合成法(例如參見Schroder and Lubke,“The Peptides”,volume 1,pp 76-136,1965,Academic Press)製得。
如以下更詳細地說明，共軛體可使用具有供結合至本發明化合物之反應位的連接子區段及置入具有供抗體用之反應位的連接子另一區段來製備。一方面，連接子單元具有反應位，其具有親電基，此親電基可與抗體單元(諸如抗體)上存在的親核基反應。親電基提供供抗體連接的便利位置。抗體上可用之親核基包括(但不限定於)氫硫基、羥基及胺基。抗體親核基之雜原子與連接子單元上的親電基反應且形成鍵結至連接子單元的共價鍵。可用之親電基包括(但不限定於)馬來醯亞胺及鹵乙醯胺基。
另一實施例中，連接子單元具有反應位，其具有親核基，此親核基可與抗體上存在的親電基反應。抗體上的親 電基提供供連接子單元連接的便利位置。抗體上可用之親電基包括(但不限定於)醛及酮羰基。連接子親核基之雜原子可與抗體上之親電基反應且形成鍵結至抗體的共價鍵。連接子單元上可用之親核基包括(但不限定於)醯肼、肟、胺基、肼、胺苯硫脲、肼羧酸鹽、及芳醯肼。
以麩醯胺酸轉胺酶進行之共軛
某些實施例中，本發明化合物可於麩醯胺酸轉胺酶之存在下共價交聯至經由以醯基給體含麩醯胺酸標籤(例如含Gln之多肽標籤或Q-標籤)所工程化之含Fc或含Fab多肽或藉多肽工程化(例如經由於多肽上之胺基酸刪除、***、取代、突變、或其任何組合)使具反應性之內源性麩醯胺酸(亦即於胺及麩醯胺酸轉胺酶之存在下作為醯基給體形成共價鍵的能力)上，前提是本發明化合物包含胺給體劑(例如包含或連接至反應胺的小分子)，因而形成與胺給體劑共軛之工程化含-Fc多肽的安定及同質族群，此胺給體劑係部位特異地經由醯基給體含麩醯胺酸標籤或暴露/易接近/具反應性之內源性麩醯胺酸共軛至含Fc或含Fab多肽上。例如，本發明化合物可如同國際專利申請案序號PCT/IB2011/054899所述地共軛，其整體內容均併入本案中以供參考。某些實施例中，欲促進本發明化合物於麩醯胺酸轉胺酶之存在下共軛至以醯基給體含麩醯胺酸標籤所工程化之含Fc或含Fab多肽或藉多肽工程化使具反應性之內源性麩醯胺酸上，則Z為NH2。
共軛至人類輕鏈κ區恆定區
某些實施例中，本發明化合物可共價連接至人類輕鏈κ區恆定區(CLκ)(根據Kabat之全輕鏈編號)之K188側鏈。例如，本發明化合物可如同於美國專利申請案序號13/180,204中所述地共軛，其整體內容均併入本案中以供參考。某些實施例中，欲促進共軛至K188 CLκ，則Z為 ；R7每次出現時獨立地選自由以下所組成之群組：F、Cl、I、Br、NO2、CN及CF3；且h為1、2、3、4或5。
某些實施例中，本發明提供組成物，其包含共價共軛至抗體(或其抗原結合部分)之本發明化合物，其中組成物中至少約50%、或至少約60%、或至少約70%、或至少約80%、或至少約90%之本發明化合物共軛至抗體或其抗原結合部分之K188 CLκ。
某些實施例中，本發明化合物可共軛至催化性抗體諸如醛縮酶抗體或其抗原結合部分之結合位。醛縮酶抗體含有結合位部分，其當不受防礙時(例如藉由共軛)，可催化脂族酮給體與醛受體間的醛醇加成反應。美國專利申請案公開案號US 2006/205670的內容乃併入本案中以供參考，尤其第78-118頁說明連接子，且段落[0153]-[0233]說明抗體、其可用之片段、變體及修飾、h38C2、結合位及互補決定區(CDR)、及相關抗體技術。術語“結合位”包 括互補決定區(CDR)及涉及抗原結合之鄰近框架殘基。
組成物及投服方法
其他實施例中，本發明另一方面係關於醫藥組成物，其包括有效量之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體及醫藥上可接受之載體或載劑。某些實施例中，組合物適於獸醫學或人類投服。
本醫藥組成物可為得以令組成物投予患者之任何形式。例如，組成物可為固體或液體形式。典型之投服路徑包括(非限制)非經腸部、眼部及腫瘤內。非經腸部投服包括皮下注射、靜脈內、肌內或胸骨內注射或輸注技術。一方面，組成物係非經腸部投服。具體實施例中，組成物係靜脈內投服。
醫藥組成物可予調配以令本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體在將組成物投予患者後具有生物利用性。組成物可採用具一或多種劑量單位之形式，其中例如，片劑可為單一劑量單位，而含有液態形式本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體之容器則可容納多個單位劑量。
用於製備醫藥組成物之材料在所用之量下可為無毒性。熟諳此藝者明顯已知，醫藥組成物中活性成分的最理想劑量將依各種因素而定。相關的因素包括(但非限制)動物型式(例如人類)、本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體之特定形式、投服方式、及所用組成物。
醫藥上可接受之載體或載劑可為固態或微粒，故組成 物為(例如)片劑或粉末形式。載體可為液態。此外，載體可為微粒。
組成物可為液態形式，例如溶液、乳膠或懸浮液。於藉注射法投服之組成物中，一或多種表面活性劑、防腐劑、濕化劑、分散劑、分散劑、懸浮劑、緩衝劑、安定劑及等張劑亦可包括。
液態組成物無論彼等是否為溶液、懸浮液或其他類似形式，亦可包括一或多種下列者：無菌稀釋劑諸如注射用水、鹽水溶液，較佳地生理食鹽水、林格氏溶液、等張氯化鈉、固定油諸如合成單及二酸甘油酯(其可充作溶劑或懸浮介質)、聚乙二醇、甘油、環糊精、丙二醇或其他溶劑；抗細菌劑諸如苄醇或對羥苯甲酸甲酯；抗氧化劑諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑諸如乙二胺四乙酸；緩衝劑諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽或胺基酸及用於調整張力之製劑諸如氯化鈉或右旋糖。非經腸部組成物可封在玻璃、塑膠或其他材質所製之安瓶、可丟棄式注射管或多重劑量管瓶中。生理食鹽水為例示之輔劑。注射用組成物較佳地為無菌。
有效以治療特定失調或病症之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體的量將依該失調或病症之特性而定，且可藉標準之臨床技術決定。此外，體外或體內分析法可隨意地使用以協助鑑定出最理想的劑量範圍。組成物中所用之精確劑量亦將依投服路徑、及疾病或失調之嚴重性而定，且應根據醫師的診斷及每個患者的情況來決定。
組成物包含有效量之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體因而將可得到適當的劑量。典型地，此量為佔組成物重量之至少約0.01%的本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體。例示實施例中，醫藥組成物係予製備以使得非經腸部單位劑量含有約0.01重量%至約2重量%之量的本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體。
供靜脈內投服方面，組成物可包含每公斤患者體重約0.01至約100毫克之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體。一方面，組成物可包括每公斤患者體重約1至約100毫克之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體。另一方面，投服量會在約0.1至約25毫克/公斤體重之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體的範圍內。
通常，投予患者之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體之劑量典型為約0.01毫克/公斤至約20毫克/公斤患者體重。一方面，投予患者之劑量介於約0.01毫克/公斤至約10毫克/公斤患者體重之間。另一方面，投予患者之劑量介於約0.1毫克/公斤至約10毫克/公斤患者體重之間。又另一方面，投予患者之劑量介於約0.1毫克/公斤至約5毫克/公斤患者體重之間。又另一方面，投服劑量介於約0.1毫克/公斤至約3毫克/公斤患者體重之間。又另一方面，投服劑量介於約1毫克/公斤至約3毫克/公斤患者體重之間。
本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體可藉任何便利的路徑投服，例如藉輸注或快速濃注。投服可為全身性或 局部。各種遞送系統係已知，例如封裝於微脂粒、微細微粒、微膠囊、膠囊等等中，且可用以投服本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體。某些實施例中，係將大於一種之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體投予患者。
具體實施例中，理想的情況是將一或多種本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體局部投予需要治療的區域。此可藉由(例如但非限制)手術期間之局部輸注；於手術後(例如)連同傷口敷料一起局部塗敷；藉注射法；藉由導管；或藉由植入物(該植入物為多孔性、無孔性、或凝膠狀材料包括膜，諸如矽橡膠膜、或纖維)達成。一實施例中，投服可藉於癌症、腫瘤或新生物或前新生物組織的部位(或較早部位)之直接注射。另一實施例中，投服可藉於自動免疫疾病表徵部位(或較早部位)之直接注射。
又另一實施例中，本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體可以控釋系統遞送，諸如(但不限定於)泵或各種聚合物材料可予使用。又另一實施例中，控釋系統可放在鄰近於本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體的目標，例如肝，故僅需要全身劑量的一小部分(例如參見Goodson,in Medical Applications of Controlled Release,supra,vol.2,pp.115-138(1984))。其他於Langer(Science 249：1527-1533(1990))之回顧中所討論的控釋系統可予使用。
術語“載體”意指可與化合物或其抗體藥物共軛體一起投服之稀釋劑、輔劑或賦形劑。此醫藥載體可為液體，諸如水及油類，包括石油醚、動物、植物或合成來源者。載 體可為鹽水等等。此外，輔助劑、安定劑及其他化學劑可予使用。一實施例中，當投予患者時，化合物或共軛體及醫藥上可接受之載體為無菌性。當化合物或共軛體由靜脈內投服時，則以水為例示之載體。鹽水溶液及水性右旋糖及甘油溶液亦可用作為液態載體，尤其用於注射溶液。如有需要，本組成物亦可含有較小量之濕化劑或乳化劑、或pH緩衝劑。
本發明可採用溶液、丸劑、粉末、緩釋型配方形式、或任何其他適於使用之形式。適當醫藥載體之其他實例乃述於E.W.Martin之“Remington’s Pharmaceutical Sciences”中。
一實施例中，本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體係根據常規步驟調配成適合於靜脈內投予動物、尤其人類之醫藥組成物。典型地，供靜脈內投服之載體或載劑為無菌等張水性緩衝溶液。當需要時，組成物亦可包括溶解劑。供靜脈內投服之組成物可隨意地包含局部麻醉劑諸如利多卡因(lignocaine)以減輕注射部位的疼痛。通常，諸成分係分別供應或一起混合於單位劑型中，例如為乾燥低壓凍乾粉末或不含水的濃縮物於指示活性劑之量的密封容器諸如安瓶或小袋中。當本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體欲藉輸注法投服時，其可(例如)使用含無菌醫藥級之水或鹽水之輸注瓶分配。當本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體欲藉注射法投服時，則可提供無菌注射用水或鹽水之安瓶以便於投服前可將諸成分混合。
組成物可包括各種可改善固態或液態劑量單位之物理 形式的材料。例如，組成物可包括可形成環繞活性成分之包衣殼的材料。形成包衣殼的材料典型地為惰性，且可選自(例如)糖、蟲膠、及其他腸溶性包衣劑。另外，活性成分可裝入明膠膠囊中。
無論是固體或液體形式，本組成物可包括用於治療癌症之藥理學劑。
化合物及其抗體藥物共軛體之醫療用途
本發明另一方面係關於使用本發明化合物及其抗體藥物共軛體以治療癌症之方法。
本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體可用於抑制腫瘤細胞或癌細胞之增殖，導致腫瘤或癌細胞之凋亡，或用於治療患者之癌症。因此本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體可用於供治療動物癌症之各種背景中。該共軛體可用以將本發明化合物遞送至腫瘤細胞或癌細胞。不被理論所束縛，一實施例中，共軛體中之抗體結合至或與癌細胞或腫瘤細胞相關性抗原共軛，且共軛體可經由受體媒介性細胞內吞作用或其他內化機轉而置入(內化)至腫瘤細胞或癌細胞內側。抗原可連接至腫瘤細胞或癌細胞或可為與腫瘤細胞或癌細胞相關的細胞外基質蛋白。某些實施例中，一旦進入細胞內側，一或多種特異性肽序列被一或多種腫瘤細胞或癌細胞相關性蛋白酶所酵素地或水解地裂解，導致本發明化合物由共軛體中釋出。所釋出之本發明化合物繼而自由地在細胞內遊移且誘導胞毒性或細胞抑制活性。 共軛體亦可被細胞內蛋白酶裂解而釋出本發明化合物。另一實施例中，本發明化合物在腫瘤細胞或癌細胞外側由共軛物中裂解，且本發明化合物繼而穿透細胞。
某些實施例中，共軛體提供共軛作用-特異性腫瘤或癌症藥物靶向，故降低本發明化合物之一般毒性。
另一實施例中，抗體單元結合至腫瘤細胞或癌細胞。
另一實施例中，抗體單元結合至腫瘤細胞或癌細胞抗原，該抗原位在腫瘤細胞或癌細胞之表面上。
另一實施例中，抗體單元結合至腫瘤細胞或癌細胞抗原，該抗原為與腫瘤細胞或癌細胞相關之細胞外基質蛋白。
抗體單元對特定腫瘤細胞或癌細胞之特異性具有重要性以決定彼些可最有效地予以治療之腫瘤或癌症。
可以本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體治療之特定型式之癌症包括(但不限定於)膀胱、***、子宮頸、結腸、子宮內膜、腎、肺、食道、卵巢、攝護腺、胰臟、皮膚、胃及睪丸的癌；以及血源性癌症包括(但不限定於)白血病及淋巴瘤。
癌症之多模式療法：癌症包括(但不限定於)腫瘤、轉移、或以不受控制之細胞生長為特徵的其他疾病或失調，可藉投服本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體而治療或抑制。
其他實施例中，係提供治療癌症之方法，其包括將有效量之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體及化療劑投 予有此需求之患者。一實施例中，化療劑為以其治療癌症尚未發現難治者。另一實施例中，化療劑為以其治療癌症已發現難治者。本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體可投予亦接受手術作為癌症治療的患者。
一些實施例中，患者亦接受另外的治療，諸如放射療法。具體實施例中，本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體係與化療劑或與放射療法同時投予。另一具體實施例中，化療劑或放射療法係在投服本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體之前或之後投予。
化療劑可在一系列治療期間投服。任一種或組合之化療劑諸如照護標準之化療劑可予投服。
另外，當化療或放射療法已證實或可證實太具毒性例如導致被治療的患者不可接受或不能忍受之副作用時，可提供以本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體治療癌症的方法作為化療或放射療法之替代法。被治療之患者可隨意地以其他癌症治療法諸如手術、放射療法或化療法治療，依此治療經發現為可接受性或可忍受性而定。
本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體亦可以體外或活體外之型式使用，諸如用於治療某些癌症包括(但不限定於)白血病及淋巴瘤，此治療涉及自體幹細胞移植。其可包含多步驟之過程，其包括採收動物之自體造血幹細胞，再將所有癌細胞清除，然後經由投服高劑量之本發明化合物及/或其抗體藥物共軛體(含或不含伴隨之高劑量放射療法)將動物餘留之骨髓細胞群根絕，再將幹細胞移植 物輸注回動物。然後提供支持性照護，而骨髓功能恢復且患者復原。
本發明於下列實例中進一步說明，該些實例不意在限制本發明之範圍。
酬載及連接子-酬載之範例
化合物2為商業已知之化合物，參見PCT Int.Appl.,2005112919,01 Dec 2005
(S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯(3)之製備：將鈀/碳(Pd-C，0.7克)於40℃加至(S)-5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯(4克，9毫莫耳)之四氫呋喃(THF，250毫升)溶液中。然後將水性甲酸銨(aqueous HCOONH4，9.5毫升，25%)於40℃分批加入，再將反應混合物於40℃攪拌1小時。將反應混合物過濾，再將濾液濃縮至乾。將所得殘留物溶於乙酸乙酯(250毫升)中，再以水(20毫升)清 洗，於硫酸鈉上乾燥，濃縮至乾以得灰色固狀之3(2.9克，90%)。
(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇(4)之製備：將4M氫氯酸(HCl)之二烷液(36毫升，140毫莫耳)加至含3(820毫克，2.46毫莫耳)之圓底燒瓶中。令反應於室溫攪拌。將反應減量，然後置於真空(皮帶泵)底下，即得灰色固狀之4(684毫克，100%)。
(S)-5-乙醯氧基-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯(5)之製備：於0℃將乙醯氯(0.1毫升，1.4毫莫耳)加至1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-羧酸(S)-三級丁酯[3](230毫克，0.7毫莫耳)之二氯甲烷(6毫升)溶液中，其後將吡啶(0.11毫升，1.4毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌2分鐘，然後於室溫攪拌1小時。將混合物濃縮，再將殘留物以乙酸乙酯及水處理，以乙酸乙酯萃取。將結合之有機相以水及鹽水清洗，於硫酸鎂上乾燥。將溶劑於真空下移出，以得淡黃色固狀之5(235毫克，91%)。LC-MS(方案B)：m/z 398.3[M+H]。
乙酸(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯(6)之製備：將10毫升4M氫氯酸之二烷液(40mM)加至含(S)-三級丁基-5-乙醯氧基-1-(氯甲基)-1H-苯並[e]吲哚- 3(2H)-羧酸酯(375毫克，0.998mM)之圓底燒瓶中。令反應於室溫攪拌，然後將溶劑於真空中移出，即得6(312毫克，100%)。
三級丁基-(1S)-1-(氯甲基)-5-羥基-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-羧酸酯(8)之製備。將10重量%鈀/碳(4克)加至於0℃之正攪拌之7(參見J.Am.Chem.Soc.1987,109,6837-6838)(12.2克，28.6毫莫耳)之200毫升四氫呋喃溶液中，其後將30毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌約90分鐘。將反應以***稀釋，其後將硫酸鈉加入。將反應通過薄賽力特矽藻土(celite)墊中過濾，然後將其以***清洗兩次。將有機相結合，然後減量，其後置於真空底下，即得淡灰色固狀之7(9.65克，全量)。LC-MS(方案B)：m/z 337.2[M+H]+，滯留時間=1.81分鐘。
(S)-8-(氯甲基)-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-醇之製備
步驟1：(1S)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-羧酸三級丁酯(188)之合成。將乙醯氯(0.462毫升，6.50毫莫耳)加至於0℃之正攪拌之43(1.99克，5.91毫莫耳)之30毫升二氯甲烷溶液中，其後將吡啶(0.714毫升，8.86毫莫耳)立即加入。令反應於0℃攪拌約10分鐘。將反應減量至矽石上。然後進行矽膠層析(梯度：0%-15%丙酮之庚烷液)。將適當試管濃縮及置於高真空底下以得淡棕色固狀之10(2.13克，95%)。LC-MS(方案B)：m/z 401.1[M+Na]+，滯留時間=1.93分鐘。
步驟2：乙酸(8S)-8-(氯甲基)-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-酯氫氯酸鹽(189)之合成。將4M氫氯酸之二烷液(24毫升，96毫莫耳)加至含10(606毫克，1.60毫莫耳)之圓底燒瓶中。令反應於室溫攪拌90分鐘。將反應減量，然後置於高真空底下，即得淡綠色固狀之11(589毫克，全量)。LC-MS(方案B)：m/z 279.1[M+H]+，滯留時間=0.72分鐘。
一般步驟A：將草醯氯(1-2.5當量)加至於0℃之正攪拌的一元或二元酸之四氫呋喃、二氯甲烷、或該二溶劑混合液之溶液中，其後將催化量之N,N-二甲基甲醯胺(DMF)加入。令反應於0℃攪拌數分鐘，其後令其加溫至室溫， 然後於室溫攪拌30分鐘至數小時。然後將反應於真空中濃縮。一些情況下，接著將原料與庚烷或其他相關溶劑或諸溶劑共沸一至數次。然後將原料於高真空上乾燥，其後用於下一步驟中。
一般步驟B：將醯基氯或二醯氯加至於0℃之正攪拌的胺(2-2.5當量)之四氫呋喃、二氯甲烷、或該二溶劑混合液(或者於一些情況下為其他關溶劑或諸溶劑)之溶液中，其後將吡啶(3-6當量)、三乙胺(3-6當量)、或其他相關的鹼(3-6當量)加入。令反應於0℃攪拌數秒至數分，其後令其加溫至室溫，接著於室溫攪拌10分鐘至數小時。然後將反應於真空中濃縮。一些情況下，接著將原料與庚烷或與其他相關溶劑或諸溶劑共沸一至數次。大部分情況下，接著將原料藉已述之方法諸如矽膠層析法或中壓逆相C18層析法予以純化。
(S)-呋喃-2,5-二基雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(13)之製備
將4溶於N,N-二甲基甲醯胺(0.75毫升)中，將吡啶(13微升)及12(8毫克)之N,N-二甲基甲醯胺(0.2毫升，0.168毫莫耳)溶液加入，再將所得溶液於室溫攪拌過夜。 將混合物以二氯甲烷稀釋，再以水及鹽水清洗，及於硫酸鎂上乾燥。將粗製物藉於矽膠中進行急驟層析(二氯甲烷/甲醇=0-10%)予以純化，即得綠色固狀之產物13(8毫克，30%)。LC-MS：m/z 587.4[M+H]，滯留時間=1.0分鐘。
1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.50(s)，8.14(d)，7.95(s)，7.88(d)，7.55(t)，7.50(s)，7.40(t)，4.78(m)，4.58(d)，4.25(s)，4.02(d)，3.92(m)。
(S)-((1R,3S)-環己烷-1,3-二基)雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(16)之製備
步驟1：將順-環己烷-1,3-二羧酸(14，10毫克，0.058毫莫耳)溶於四氫呋喃(2毫升)中，將草醯氯(2M之二氯甲烷液，0.09毫升，0.17毫莫耳)及N,N-二甲基甲醯胺(2滴)於0℃加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。於真空中濃縮，即得灰白色固狀之相應醯基氯15，其係用於下一步驟中而不必進一步純化。
步驟2：於0℃將上述化合物15溶於N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇氫氯酸鹽(4，25毫克，0.093毫莫耳)其後吡啶(0.029毫升，0.36毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌過 夜。將N,N-二甲基甲醯胺於減壓下移出，再將殘留物藉ISCO使用甲醇/二氯甲烷(0-20%)予以純化，即得暗藍色固狀之16(8.5毫克，31%)。LC-MS：m/z 603.4[M+H]，滯留時間=1.03分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.36(s)，8.09(d)，8.03(s)，7.80(t)，7.53(t)，7.33(t)，4.44(m)，4.33(d)，4.18(s)，4.02(m)，3.85(m)，2.88(m)，2.04-1.90(m)，1.74(q)，1.52-1.45(m)。
(S)-吡啶-2,6-二基雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(18)之製備
將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇(4)(13.5毫克，氫氯酸鹽，0.05毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，再將吡啶(8毫克，0.10毫莫耳)加入，其後將2,6-吡啶二羰基二氯(8，5毫克，0.025毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌2小時。將粗製物藉ISCO使用甲醇/二氯甲烷(0-10%)予以純化以得綠色固狀產物，將其以甲醇清洗，即得灰色固狀之產物18(10毫克，67%)。LC-MS：m/z 598.1[M+H]，滯留時間=1.0分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.51(s)，8.29(t)，8.13(d)，8.02(s)，7.82(d)，7.52(t)，7.38(t)，4.63(s)，4.19-4.10(m)，3.96(m)，3.84(m)。
(S)-1,3-伸苯基雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)[20]之製備
將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇(4)(27毫克，氫氯酸鹽，0.1毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，再將吡啶(0.024毫升，0.29毫莫耳)加入，其後將異酞醯氯(19，10毫克，0.05毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌過夜。將溶劑移出，再將殘留物藉ISCO使用甲醇/二氯甲烷(0-10%)予以純化，即得灰色固狀之產物20(20毫克，68%)。LC-MS(方案B)：m/z 597.2[M+H]，滯留時間=0.99分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.47(s)，8.13(d)，7.96(s)，7.84(d)，7.72(t)，7.52(t)，7.37(t)，4.44(s)，4.08(s)，3.97(s)，3.86(s)。
(S)-3,3’-硫基雙(1-((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基1)丙-1-酮)(23)之製備
步驟1：將3,3’-硫基二丙酸(21，8毫克，0.04毫莫耳)溶於四氫呋喃(2毫升)中，將草醯氯(2M之二氯甲烷液，0.4毫升，0.2毫莫耳)及N,N-二甲基甲醯胺(2滴)於0 ℃加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。於真空中濃縮，即得相應之醯基氯22，其係用於下一步驟中而不必進一步純化。
步驟2：於0℃將上述化合物22溶於N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇氫氯酸鹽(6)(25毫克，0.09毫莫耳)其後吡啶(0.22毫升，0.27毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌過夜。將N,N-二甲基甲醯胺於減壓下移出，再將殘留物藉ISCO使用甲醇/二氯甲烷(0-10%)予以純化，即得灰白色固狀之產物23(15毫克，50%)。LC-MS(方案B)：m/z 609.1[M+H]，滯留時間=1.0分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.36(s)，8.09(d)，7.99(s)，7.79(d)，7.50(t)，7.33(t)，4.37(m)，4.19(m)，3.99(d)，3.82(m)，2.90-2.82(m)。
(S)-吡啶-3,5-二基雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(26)之製備
步驟1：將2毫升二氯甲烷加至吡啶-3,5-二羧酸(24，7毫克，0.04毫莫耳)中，其後將2M草醯氯(0.2毫升，0.4毫莫耳)及N,N-二甲基甲醯胺(2滴)加入。將此清澈溶液於室溫攪拌2小時，再濃縮以得黃色固狀之相應醯基氯25。
步驟2：將上述固狀物25溶於N,N-二甲基甲醯胺(0.2毫升)中，再將此溶液加至(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇氫氯酸鹽(4)(25毫克，0.09毫莫耳)之N,N-二甲基甲醯胺(1毫升)溶液中，其後將吡啶(0.02毫升，0.25毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌過夜。將溶劑於真空中移出，再將殘留物藉使用ISCO(甲醇/二氯甲烷=0-10%)予以純化，即得灰色固狀之產物26(20毫克，80%)。LC-MS(方案B)：m/z 598.1[M+H]，滯留時間=0.95分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.55(s)，9.00(s)，8.2(s)，7.97(s)，7.84(d)，7.53(t)，7.36(t)，4.50(s)，4.10(s)，3.98(s)，3.86(s)。
(S)-噻吩-2,5-二基雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(29)及(S)-5-(1-(氯甲基)-5-羥基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羧酸(30)之製備
將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇[4](102毫克，氫氯酸鹽，0.38毫莫耳)溶於N,N-二甲基乙醯胺(DMA，2毫升)中，再將吡啶(0.061毫升，0.76毫莫耳)加入，其後將噻吩-2,5-二羰基二氯(27，40毫克，0.19毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌2小時。將粗製物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得兩種產物： 黃色固狀之(S)-噻吩-2,5-二基雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(29)(60毫克，52%)。LC-MS(方案B)：m/z 603.0[M+H]，滯留時間=1.99分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.48(s)，8.14(d)，7.86(m)，7.55(t)，7.40(t)，4.78(t)，4.44(d)，4.23(s)，4.03(d)，3.91(m)。
綠色固狀之(S)-5-(1-(氯甲基)-5-羥基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羧酸(30)(23毫克，31%)。LC-MS(方案B)：m/z 388.1[M+H]，滯留時間=0.82分鐘。1H NMR(400MHz，MeOD-d 4 )，δ 8.23(d)，7.82(m)，7.71(s)，7.55(t)，7.40(t)，4.64(m)，4.53(d)，4.15(t)，4.01(dd)，3.74(m)。
(S)-(1H-吡咯-2,5-二基)雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(32)之製備
將DIPEA(33毫克，0.25毫莫耳)加至1H-吡咯-2,5-二羧酸(31，10毫克，0.064毫莫耳)之N,N-二甲基甲醯胺(1.5毫升)溶液中，其後將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇[4](38毫克，氫氯酸鹽，0.14毫莫耳)及COMU(82毫克，0.19毫莫耳)加入，再將混合物於室溫攪 拌過夜。將粗製物藉Gilson HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀之產物32(5毫克，10%)。LC-MS(方案B)：m/z 586.3[M+H]，滯留時間=2.04分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 11.66(s)，10.44(s)，8.13(d)，7.92(s)，7.86(d)，7.55(t)，7.38(t)，5.76(s)，4.71(t)，4.44(d)，4.22(s)，4.03(d)，3.88(m)。
(S)-噻吩-2,4-二基雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(35)之製備
步驟1：將2,4-噻吩二羧酸(33，100毫克，0.58毫莫耳)溶於四氫呋喃(5毫升)中，以冰浴冷卻至0℃。將草醯氯(0.75毫升，2M之二氯甲烷液，1.5毫莫耳)加入，其後將2滴N,N-二甲基甲醯胺加入。令所得混合物加溫至室溫，再攪拌1小時。此期間可觀察到一些白色沈澱物。將混合物於真空中濃縮，即得灰白色固狀之噻吩-2,4-二羰基二氯(34)(122毫克，100%)。
步驟2：將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇[4](81毫克，氫氯酸鹽，0.3毫莫耳)溶於四氫呋喃(3毫升)中，再於0℃將三乙胺(0.125毫升，0.9毫莫耳)加入，其後將噻吩-2,4-二羰基二氯(24,31.4毫克，0.15毫 莫耳)之二氯甲烷(1毫升)溶液加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌2小時。將反應混合物減量，再將殘留物以甲醇處理，再將所得黃色固狀物藉過濾法收集以得粗製產物。將粗製物藉Gislon HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀之產物35(40毫克，44%)。LC-MS(方案B)：m/z 603.3[M+H]，滯留時間=1.96分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.46(d)，8.41(s)，8.13(d)，8.05(s)，7.87(t)，7.54(t)，7.39(m)，4.81(t)，4.61(s)，4.46(d)，4.21(m)，4.18(m)，4.00(m)，3.98-3.86(m)。
(S)-(1-甲基-1H-吡咯-2,5-二基)雙(((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)甲酮)(38)之製備
步驟1：將1-甲基-1H-吡咯-2,5-二羧酸(36，20毫克，0.12毫莫耳)溶於四氫呋喃(2毫升)中，於0℃將草醯氯(2M之二氯甲烷液，0.18毫升，0.35毫莫耳)及N,N-二甲基甲醯胺(2滴)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。於真空中濃縮以得灰白色固狀之相應醯基氯37，其係用於下一步驟中而不必進一步純化。
步驟2：於0℃將化合物37溶於四氫呋喃(2毫升) 中，將(S)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-醇氫氯酸鹽[4](65毫克，0.24毫莫耳)其後三乙胺(0.1毫升，0.71毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。將混合物於真空中濃縮，再將殘留物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得灰白色固狀之產物38(31毫克，44%)。LC-MS：m/z 600.5[M+H]，滯留時間=1.04分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.44(s)，8.13(d)，7.84(d)，7.75(s)，7.53(t)，7.38(t)，6.78(s)，4.60(t)，4.30(d)，4.08(s)，4.02(d)，3.9(s)，3.87(d)。
3-胺基-1,5-雙-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-戊-1,5-二酮(40)之製備.
步驟1：將草醯氯(5.22毫莫耳，0.469毫升)加至含有3-(9H-茀-9-基甲氧羰基胺基)-戊二酸(918毫克，2.48毫莫耳)之20毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶 中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮成粗製殘留物。將殘留物置回二氯甲烷(10毫升)中，再逐滴加至含(2)(1610毫克，4.97毫莫耳)之25毫升二氯甲烷液及三乙胺(2.08毫升)的圓底燒瓶中。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之(39)(2.103克，86%)。LC-MS(方案B)：m/z 982[M+H+]，滯留時間=2.81分鐘。
步驟2：將正攪拌之39、{3-((S)-5-苄氧基-1-氯甲基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-1-[2-((S)-5-苄氧基-1-氯甲基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-2-側氧基-乙基)-3-側氧基-丙基}-胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯(92毫克，0.104毫莫耳)之10毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(16毫克，0.15毫莫耳)加入，其後將1毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌5小時。然後將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。將粗製殘留物置於二氯甲烷中，再以水清洗。將二氯甲烷層濃縮，再將2毫升1M氫氯酸(水性)加入，再濃縮。將殘留物置於乙酸乙酯中，再將固狀物過濾，即得白色固狀之40(52毫克，51%)。LC-MS(方案B)：m/z 578[M+H+]，滯留時間=1.42分鐘。
3-(3-胺基-苯基)-1,5-雙-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-戊-1,5-二酮(44)之製備
步驟1：將草醯氯(2.6毫莫耳，0.24毫升)加至含有3-(3-硝基-苯基)-戊二酸(3，330毫克，1.30毫莫耳)之15毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮以得白色固狀之42(378毫克，1.30毫莫耳，全量)。
步驟2：將3-(3-硝基-苯基)-戊二醯二氯(42)(42毫克，0.172毫莫耳)加至含有2(124毫克，0.344毫莫耳)之15毫升二氯甲烷液的圓底燒瓶中。然後將三乙胺(0.08毫升)加入，再將系統於室溫攪拌1小時。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。將粗製固狀物置於10%甲醇之乙酸乙酯液中，再將白色固狀物過濾，即得期望產物43(120毫克， 0.172毫莫耳，80%)。LC-MS(方案B)：m/z 864[M+H+]，滯留時間=2.75分鐘。
步驟3：將正攪拌之43(85毫克，0.098毫莫耳)之10毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(16毫克，0.15毫莫耳)加入，其後將2毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌5小時。然後將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。將粗製殘留物置於二氯甲烷中，再以水清洗。將二氯甲烷層濃縮，再將2毫升1M氫氯酸(水性)加入，再濃縮。將殘留物置於乙酸乙酯中，再將固狀物過濾，即得白色固狀之(44)(35毫克，52%)。LC-MS：m/z 654[M+H+]，滯留時間=1.93分鐘。
3-(4-胺基-苯基)-1,5-bis-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-戊-1,5-二酮48之製備
步驟1：將草醯氯(0.911毫莫耳，0.082毫升)加至含有3-(4-硝基-苯基)-戊二酸(45，110毫克，0.434毫莫耳) 之5毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮以得白色固狀之(46)(125毫克，0.434毫莫耳，全量)。LCMS，置於甲醇中：m/z 282.0[M+H+，用於雙甲醇分解產物]。滯留時間=1.38分鐘。(7)(商業上已知且文獻上已知：Tetrahedron,63(39),9741-9745；2007。
步驟2：將3-(4-硝基-苯基)-戊二醯二氯(46)(50毫克，0.172毫莫耳)加至含有2(111毫克，0.344毫莫耳)之15毫升二氯甲烷液的圓底燒瓶中。然後將三乙胺(0.144毫升)加入，再將系統於室溫攪拌1小時。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。將粗製固狀物置於10%甲醇之乙酸乙酯液中，再將白色固狀物過濾，即得期望產物(47)(101毫克，0.115毫莫耳，68%)。LC-MS：m/z 864[M+H+]，滯留時間=2.72分鐘。
步驟3：(10).將正攪拌之(47)，3-(4-硝基-苯基)-1,5-雙-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-戊-1,5-二酮(90毫克，0.1毫莫耳)之10毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(17毫克，0.16毫莫耳)加入，其後將1毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌5小時。然後將反 應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。將粗製殘留物置於二氯甲烷中，再以水清洗。將二氯甲烷層濃縮，再將2毫升1M氫氯酸(水性)加入，再濃縮。將殘留物置於乙酸乙酯中，再將固狀物過濾，即得白色固狀之48(44毫克，61%)。LC-MS：m/z 654[M+H+]，滯留時間=1.73分鐘。
乙酸(S)-3-{2-[2-((S)-5-乙醯氧基-1-氯甲基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-2-側氧基-乙胺基]-乙醯基}-1-氯甲基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯(53)之製備.
步驟1：將草醯氯(1.94毫莫耳，0.175毫升)加至含有3[羧甲基-(9H-茀-9-基甲氧羰基)-胺基]-乙酸(49，300毫克，0.844毫莫耳)(49，300毫克，0.844毫莫耳)之5毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮以得白色固狀之(50)(330毫克，0.844毫莫耳，全量)。LCMS，置於甲醇中：m/z 384.0[M+H+， 用於雙甲醇分解產物]。滯留時間=1.91分鐘。
步驟2：將50(41毫克，0.105毫莫耳)加至含有2(76毫克，0.21毫莫耳)之5毫升二氯甲烷液的圓底燒瓶中。然後將三乙胺(0.088毫升)加入，再將系統於室溫攪拌1小時。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-75%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之(51)(91毫克，90%)。LC-MS：m/z 966[M+H+]，滯留時間=2.91分鐘。
步驟3：將正攪拌之51(40毫克，0.041毫莫耳)之10毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(10毫克，0.09毫莫耳)加入，其後將1毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌5小時。然後將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。將粗製殘留物置於二氯甲烷中，再將乙醯氯(1毫升)加入，然後將反應於真空中濃縮。將殘留物置回15毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得白色固狀之(52)(27毫克，76%)。LC-MS：m/z 870[M+H+]，滯留時間=2.51分鐘。
步驟4：將5毫升二氯甲烷及5毫升二乙胺加至含有52(25毫克，0.29毫莫耳)之備有攪拌棒的圓底燒瓶中。將溶液攪拌3小時。將反應混合物於真空中濃縮，再置於50%二氯甲烷及庚烷中，且再度地於真空中濃縮。將此步驟重覆3次。將粗製固狀物置於50%四氫呋喃及1M氫氯酸(水性)中。將白色固狀物置於***中，再過濾，即得白色固狀之(15)(14毫克，70%)。LC-MS：m/z 648[M+H+]，滯留時間=1.78分鐘。
3-(4-胺基-苯基)-N,N-雙-[2-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-2-側氧基-乙基]-丙醯胺(56)之製備
步驟1：將5毫升二氯甲烷及5毫升二乙胺加至含有51(300毫克，0.310毫莫耳)之備有攪拌棒的圓底燒瓶中。將溶液攪拌3小時。將反應混合物於真空中濃縮，再置於50%二氯甲烷及庚烷中，且再度地於真空中濃縮。將此步驟重覆3次，即得白色固狀之(54)(216毫克，93%)。LC- MS：m/z 744[M+H+]，滯留時間=2.26分鐘。
步驟2：將3-[4-(9H-茀-9-基甲氧羰基胺基)-苯基]-丙酸(52毫克，0.134毫莫耳)加至含有54(100毫克，0.134毫莫耳)之5毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將(二甲胺基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]***並[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲亞胺鎓六氟磷酸鹽(52毫克，0.134毫莫耳)及三乙胺(0.05毫升)加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮成粗製殘留物。將殘留物置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之(55)(130毫克，87%)。LC-MS：m/z 1113[M+H+]，滯留時間=2.771分鐘。
步驟3：將正攪拌之55(115毫克，0.103毫莫耳)之10毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(10毫克，0.1毫莫耳)加入，其後將1毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌5小時。然後將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。將粗製殘留物置於二氯甲烷中，再以水清洗。將二氯甲烷層濃縮，再將2毫升1M氫氯酸(水性)加入，再濃縮。將殘留物置於乙酸乙酯中，再將固狀物過濾，即得白色固狀之(56)(26毫克，34%)。LC-MS：m/z 711[M+H+]，滯留時間=1.6分鐘。
[(S)-1-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-羰基)-4-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-4-側氧基-丁基]-胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯60之製備
步驟1：將草醯氯(2.27毫莫耳，0.205毫升)加至含有(S)-2-(9H-茀-9-基甲氧羰基胺基)-戊二酸57(400毫克，1.08毫莫耳)之15毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮成粗製殘留物58。將殘留物置於二氯甲烷(10毫升)中，再逐滴加至含有2(700毫克，2.17毫莫耳)之10毫升二氯甲烷液及三乙胺(0.905毫升)的圓底燒瓶中。將粗製反應混合物置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀 之(59)(260毫克，24%)。LC-MS：m/z 980[M+H+]，滯留時間=2.84分鐘。
步驟2：將正攪拌之(59)(250毫克，0.255毫莫耳)之10毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(64毫克，12.8毫莫耳)加入，其後將2.1毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌30分鐘。然後將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。將粗製殘留物置於二氯甲烷中，再以水清洗。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之(60)(121毫克，59%)。LC-MS：m/z 800[M+H+]，滯留時間=2.25分鐘。
(S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-羧酸[3-((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-3-側氧基-丙基]-醯胺(31)之製備.正攪拌之(65)之溶液
步驟1：將3-異氰酸基-丙酸甲酯61(79毫克，0.555毫莫耳)及三乙胺(0.5毫升)逐滴加至含有(2)(200毫克，0.555毫莫耳)之二氯甲烷(10毫升)液的圓底燒瓶中。將反 應攪拌3小時。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之(62)(0.231毫克，89%)。LC-MS：m/z 467[M+H+]，滯留時間=2.11分鐘。有NMR。
步驟2：將5毫升1M氫氯酸(水性)之5毫升四氫呋喃液加至含有62(230毫克，0.493毫莫耳)之備有攪拌棒的圓底燒瓶中。將溶液於70℃攪拌3小時。將反應混合物於真空中濃縮，再置於50%二氯甲烷之庚烷液中，再於真空中濃縮。將此步驟重覆3次，濃縮後可得白色固狀之(63)(180毫克，83%)。LC-MS：m/z 439[M+H+]，滯留時間=1.83分鐘。
步驟3：將草醯氯(0.250毫莫耳，0.02毫升)加至含有(63)(110毫克，0.250毫莫耳)之5毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮成粗製殘留物。將殘留物置回二氯甲烷(10毫升)中，再逐滴加至含2(90毫克，250毫莫耳)之10毫升二氯甲烷液及三乙胺(0.5毫升)的圓底燒瓶中。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回15毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製 固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之(64)(80克，43%)。LC-MS：m/z 744[M+H+]，滯留時間=2.60分鐘。
步驟4：將64(75毫克，0.100毫莫耳)之10毫升四氫呋喃液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10%鈀/活性碳(25毫克，0.24毫莫耳)加入，其後將1毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌5小時。然後將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。將粗製殘留物置於二氯甲烷中，再以水清洗。將二氯甲烷層濃縮，再將2毫升1M氫氯酸(水性)加入，再濃縮。將殘留物置於乙酸乙酯中，再將固狀物過濾，即得白色固狀之(65)(15毫克，26%)。LC-MS：m/z 564[M+H+]，滯留時間=1.88分鐘。
二乙酸(1S,1’S)-3,3’-(1H-吡咯-2,5-二羰基)雙(1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5,3-二酯)[68]之製備
步驟1：於0℃將1H-吡咯-2,5-二羧酸(32，50毫克，0.3毫莫耳)溶於四氫呋喃(5毫升)中，將草醯氯(0.4毫升，2M之二氯甲烷液，0.8毫莫耳)加入，其後將2滴N,N-二甲基甲醯胺加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌2小時。於真空中濃縮以得黃色固狀之1H- 吡咯-2,5-二羰基二氯(33)，其係用於下一步驟中而不必進一步純化。
步驟2：於0℃將其溶於四氫呋喃(12毫升)中，將1H-吡咯-2,5-二羰基二氯(33，得自步驟2)加入，其後將三乙胺(0.28毫升)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌3小時。將混合物於真空中濃縮，再將殘留物以甲醇處理以得灰色固狀物。將固狀物藉過濾法收集以得灰色固狀之粗製產物。將粗製物藉Gilson HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)予以純化，即得灰白色固狀之純產物二乙酸(1S,1’S)-3,3’-(1H-吡咯-2,5-二羰基)雙(1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5,3-二酯)(34，60毫克，30%)。LC-MS：m/z 670.4[M+H]，滯留時間=2.20分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 11.77(s)，8.17(s)，8.06(d)，7.92(d)，7.65(t)，7.52(t)，4.80(t)，4.5(d)，4.41(s)，4.10(d)，4.02(m)，2.10(s)。
二乙酸(1S,1’S)-3,3’-(噻唑-2,5-二羰基)雙(1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5,3-二酯)[71]之製備
步驟1：將噻唑-2,5-二羧酸二乙酯(35，348毫克，15毫莫耳)溶於四氫呋喃(10毫升)中，於0℃將氫氧化鋰 單水合物(LiOH．H2O，383毫克，9.0毫莫耳)之水(5毫升)溶液加入。將混合物於0℃攪拌30分鐘，然後於室溫攪拌4小時。於真空中濃縮以移出四氫呋喃，再將殘留物藉加入1M氫氯酸水性溶液以酸化至pH約4-5。將所得固狀物藉過濾法收集以得白色固狀之噻唑-2,5-二羧酸(63毫克，24%)。將噻唑-2,5-二羧酸(20毫克，0.12毫莫耳溶於四氫呋喃(2毫升)中，於0℃將草醯氯(0.18毫升，2M之二氯甲烷液)加入，其後將2滴N,N-二甲基甲醯胺加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。於真空中濃縮以得白色固狀之相應醯基氯70。
步驟2：將黃色固狀物5懸浮於四氫呋喃(3毫升)中，將得自步驟2之醯基氯加入，其後於0℃將三乙胺(0.05毫升，0.4毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。將反應混合物於真空中濃縮，再將殘留物藉Gilson HPLC予以純化，即得黃色固狀之期望化合物71(3.6毫克，3.9%)。LC-MS：m/z 688.5[M+H]，滯留時間=2.27分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 8.81(s)，8.41(s)，8.27(s)，8.16(m)，8.04(m)，7.74(m)，7.64(m)，5.25(d)，4.94(q),4.53(m)，4.21-4.08(m)，2.63(s)。
乙酸(S)-3-[5-((S)-5-乙醯氧基-1-氯甲基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-羰基)-1-甲基-1H-吡唑-3-羰基]-1-氯甲基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯(74)之製備.
將草醯氯(0.248毫莫耳，0.022毫升)加至含有1-甲基-1H-吡唑-3,5-二羧酸38(20毫克，0.12毫莫耳)之5毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮成粗製殘留物73。將73置於二氯甲烷(10毫升)中，再逐滴加至含有乙酸(S)-1-氯甲基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯(5，73毫克，0.236毫莫耳)之5毫升二氯甲烷液及三乙胺(2.08毫升)的圓底燒瓶中。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之(74)(12毫克，15%)。LC-MS：m/z 6852[M+H+]，滯留時間=2.21分鐘。
二乙酸7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-1,4-二基雙[羰基(1S)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3,5-二酯]79之製備
步驟1：將7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-1,4,7-三羧酸7-苄酯1,4-二甲酯(3.20克，9.21毫莫耳)[依Chem.Eur.J.2012,18,1127-1141所述地製備]於鈀/碳(10%，1000毫克)之存在下、於氣球壓力、於室溫氫化約2小時。將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，再將濾塊以40毫升甲醇及40毫升二氯甲烷清洗。將有機相結合，再於真空中濃縮成淡黃色固狀物。於0℃將水性碳酸氫鈉(1M，65毫升，64.6毫莫耳)加至正攪拌之此粗製固狀物之40毫升丙酮溶液中，其後將Fmoc-Cl(3.34克，12.9毫莫耳)之40毫升丙酮溶液逐滴加入。將反應以100毫升水稀釋，再以乙酸乙酯(100毫升，3x)萃取。將結合之有機相以水、鹽水清洗，於硫酸鈉上乾燥，再於真空中濃縮。然後進行矽膠層析(梯度：12.5%至17%乙酸乙酯之石油醚液)。將適當之試管結合，再於真空中濃縮以得白色固狀物。然後將粗製材料懸浮於水性氫氯酸(3M，60毫升)及80毫升二烷中。將反應加熱至迴流，然後令其於迴流攪拌約16小時。接著將反應於真空中濃縮以移出大部分的二烷。然後將水性相以乙酸乙酯(100毫升，2x)萃取。將有機相結合，以 鹽水清洗，於硫酸鈉上乾燥，再於真空中濃縮，然後進行矽膠層析(梯度：8.3%至25%甲醇之二氯甲烷液)。將適當之試管結合，再於真空中濃縮，然後藉製備HPLC(方法M，30分鐘期間使用梯度50% B至80% B，然後5分鐘期間95%)再度純化，即得白色固狀之76(400毫克，12%，3步驟)。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 7.81-7.79(d，2H)，7.72-7.71(d，2H)，7.42-7.38(m，2H)，7.34-7.31(m，2H)，4.35-4.33-7.33(d，2H)，4.22-4.19(m，1H)，2.28-2.26(d，4H)，1.93-1.91(d，2H)。
步驟2：遵循一般步驟A，使用76(90毫克，0.40毫莫耳)、草醯氯(0.033毫升，0.39毫莫耳)、四氫呋喃(8毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺製備，即得灰白色固狀物77(79毫克，全量)。粗製物77係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟3：遵循一般步驟B，使用6(103毫克，0.331毫莫耳)、77(70毫克，0.16毫莫耳)、吡啶(0.051毫升，0.63毫莫耳)及四氫呋喃(12毫升)以製得粗製材料。將於真空中濃縮之反應溶於二甲亞碸中，再注於12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：30%至95%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化。將適當之試管使用genevac濃縮以得淡棕色固狀之78(23毫克，16%)。LC-MS(方案B)：m/z 922.0[M+H]+，滯留時間=2.59分鐘。
步驟4：將4-二甲胺基吡啶(DMAP，47.4毫克，0.388毫莫耳)加至正攪拌之78(17.9毫克，0.019毫莫耳)之1.0毫升N,N-二甲基甲醯胺溶液中。令反應於室溫攪拌約60分鐘。將粗製反應注至5克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：30%至95%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化。將適當之試管使用genevac濃縮，即得淡棕色固狀之79(6.1毫克，39%)。LC-MS(方案B)：m/z 700.1[M+H]+，滯留時間=1.47分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 10.26-10.17(m，2H)，8.28-8.24(m，2H)，8.11-8.06(d，2H)，8.00-7.95(d，2H)，7.71-7.64(t，2H)，7.60-7.53(t，2H)，4.56-4.37(m，6H)，4.18-4.05(m，4H)，2.83-2.59(m，8H)，2.49-2.37(m，6H)。
二乙酸(1S,4S)-雙環[2.1.1]己烷-1,4-二基雙[羰基(1S)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3,5-二酯]82之製備.
步驟1：遵循一般步驟A，使用雙環[2.1.1]己烷-1,4-二羧酸80(30毫克，0.18毫莫耳)、草醯氯(0.0303毫升，0.353毫莫耳)、四氫呋喃(4毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得灰白色固狀之81(39毫克，全量)。粗製物81 係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟2：遵循一般步驟B，使用6(106毫克，0.338毫莫耳)、81(35毫克，0.17毫莫耳)、吡啶(0.0545毫升，0.676毫莫耳)及四氫呋喃(8毫升)，再使用中壓逆相C18層析法(梯度：10%至75%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，即得白色固狀之82(52毫克，45%)。LC-MS(方案B)：m/z 685.2[M+H]+，滯留時間=2.16分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 8.23(s，2H)，8.03-7.99(d，2H)，7.92-7.87(d，2H)，7.63-7.57(t，2H)，7.51-7.44(t，2H)，4.47-4.25(m，6H)，4.13-3.98(m，4H)，2.47(s，6H)，2.27-2.07(m，8H)。
二乙酸雙環[2.2.2]辛烷-1,4-二基雙[羰基(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3,5(2H)-二酯]85之製備.
步驟1：遵循一般步驟A，使用雙環[2.2.2]辛烷-1,4-二羧酸83(16毫克，0.081毫莫耳)、草醯氯(0.015毫升，0.17毫莫耳)、四氫呋喃(5毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得灰白色固狀之84(19毫克，全量)。粗製物84係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟2：遵循一般步驟B，使用189(50.9毫克，0.145 毫莫耳)、84(17.0毫克，0.0723毫莫耳)、吡啶(0.0233毫升，0.289毫莫耳)及四氫呋喃(4毫升)，再使用中壓逆相C18層析法(梯度：10%至75%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，即得白色固狀之85(21.6毫克，32%)。LC-MS(方案B)：m/z 719.3[M+H]+，滯留時間=2.27分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 11.00(s，2H)，7.79(s，2H)，7.19(s，2H)，4.68-4.62(m，2H)，4.27-4.19(m，2H)，4.06-3.94(m，4H)，3.65-3.57(m，2H)，2.42-2.32(m，12H)，2.12-1.96(m，12H)。
二乙酸雙環[2.2.1]庚烷-1,4-二基雙[羰基(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3,5(2H)-二酯]88之製備.
步驟1：遵循一般步驟A，使用雙環[2.2.1]庚烷-1,4-二羧酸86(16毫克，0.087毫莫耳)、草醯氯(0.016毫升，0.18毫莫耳)、四氫呋喃(5毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得灰白色固狀之87(19毫克，99%)。粗製物87係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟2：遵循一般步驟B，使用189(54.1毫克，0.154毫莫耳)、87(17.0毫克，0.0769毫莫耳)、吡啶(0.0248毫升，0.308毫莫耳)及四氫呋喃(4毫升)，再使用中壓逆相 C18層析法(梯度：10%至75%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，即得淡棕色固狀之88(13.6毫克，19%)。LC-MS(方案B)：m/z 705.3[M+H]+，滯留時間=2.32分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 11.02(s，2H)，7.82(s，2H)，7.19(s，2H)，4.50-4.45(d，2H)，4.26-4.16(m，2H)，4.10-4.02(m，2H)，3.98-3.92(m，2H)，3.65-3.58(m，2H)，2.41-2.33(m，12H)，2.22-2.03(m，10H)。
二乙酸雙環[1.1.1]戊烷-1,3-二基雙[羰基(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3,5(2H)-二酯]91之製備.
步驟1：遵循一般步驟A，使用雙環[1.1.1]戊烷-1,3-二羧酸89(31毫克，0.20毫莫耳)、草醯氯(0.025毫升，0.40毫莫耳)、四氫呋喃(8毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得灰白色固狀之90(40毫克，全量)。粗製物90係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟2：遵循一般步驟B，使用189(142毫克，0.404毫莫耳)、90(39毫克，0.20毫莫耳)、吡啶(0.065毫升，0.81毫莫耳)及四氫呋喃(12毫升)，再使用中壓逆相C18層析法(梯度：10%至75%乙腈之水液，每一相中均含有 0.02%三氟乙酸)予以純化，即得淡灰色固狀之91(45.5毫克，30%)。LC-MS(方案B)：m/z 677.2[M+H]+，滯留時間=1.89分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 11.04(s，2H)，7.78(s，2H)，7.20(s，2H)，4.47-4.39(m，2H)，4.36-4.26(m，2H)，4.18-4.08(m，2H)，4.03-3.94(m，2H)，3.77-3.66(m，2H)，2.56(s，6H)，2.41-2.31(m，12H)。
乙酸(8S)-6-[(3-{[(1S)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)乙醯基]-8-(氯甲基)-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-酯97之製備.
步驟1：遵循一般步驟A，使用3-(2-三級丁氧基-2-側氧基乙基)雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸92[如同於Bioorg. Med.Chem.2009,17,242-250中所述地製備](90毫克，0.40毫莫耳)、草醯氯(0.041毫升，0.477毫莫耳)、四氫呋喃(8毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得灰白色固狀之93(103毫克，全量)。粗製物93係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟2：遵循一般步驟B，使用11(141毫克，0.40毫莫耳)、93(98毫克，0.40毫莫耳)、三乙胺(0.168毫升，1.20毫莫耳)及四氫呋喃(30毫升)，再使用矽膠層析法(梯度：0%至35%丙酮之庚烷液)予以純化，即得灰白色固狀之94(188毫克，96%)。LC-MS(方案B)：m/z 487.2[M+H]+，滯留時間=2.04分鐘。
步驟3：將三氟乙酸(4.0毫升，52毫莫耳)加至正攪拌之94(184毫克，0.378毫莫耳)之8毫升二氯甲烷溶液中。令反應於室溫攪拌約45分鐘。將反應於真空中濃縮，再置於高真空底下，即得淡灰色固狀之95(164毫克，80%)。LC-MS(方案B)：m/z 431.7[M+H]+，滯留時間=1.39分鐘。
步驟4：遵循一般步驟A，使用95(55毫克，0.101毫莫耳)、草醯氯(0.0104毫升，0.121毫莫耳)、四氫呋喃(3毫升)、二氯甲烷(1毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得灰白色固狀之96(46毫克，全量)。粗製物96係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟5：遵循一般步驟B，使用11(31.3毫克，0.089毫莫耳)、96(40毫克，0.089毫莫耳)、吡啶(0.0215毫 升，0.267毫莫耳)及四氫呋喃(8.0毫升)，再使用中壓逆相C18層析法(梯度：10%至70%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，即得淡灰色固狀之97(10.1毫克，12%)。LC-MS(方案B)：m/z 691.3[M+H]+，滯留時間=1.93分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 11.02(s，2H)，7.86-7.72(d，2H)，7.19(s，2H)，4.43-4.36(m，1H)，4.28-4.14(m，3H)，4.13-4.05(m，2H)，3.96-3.89(m，2H)，3.68-3.60(m，2H)，2.89-2.82(m，2H)，2.73-2.66(m，2H)，2.40-2.30(m，12H)，2.24-2.15(m，6H)。
(1S)-8-胺基-5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯99及(1R)-8-胺基-5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯98之製備.
將8-胺基-5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯98[使用於J.Med.Chem.2012,55,5878-5886中所述之化學製備]使用超臨界流體層析法(方法L1)分離。將峰1於真空中濃縮以得99(385毫克)，其經任意配置為(S)。LC-MS(方案B)：m/z 439.1[M+H]+，滯留時間=2.34分鐘。將峰2於真空中濃縮以得100(401 毫克)，其經任意配置為(R)。LC-MS(方案B)：m/z 439.1[M+H]+，滯留時間=2.34分鐘。
(1R)-8-(乙醯胺基)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯102之製備
步驟1：於0℃將乙醯氯(0.015毫升，0.206毫莫耳)加至正攪拌之99(60毫克，0.14毫莫耳)之6毫升二氯甲烷溶液中，其後將三乙胺(0.029毫升，0.206毫莫耳)加入。令反應於0℃攪拌約1分鐘，然後令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約25分鐘。將反應以二氯甲烷稀釋，然後轉移至分液漏斗。將有機層分離出，接著以1N氫氯酸然後水清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾，然後於真空中濃縮以得橙色固狀物。於0℃將10重量%鈀/碳(45毫克)加至正攪拌之粗製材料之4毫升四氫呋喃溶液中，其後將25%水性甲酸銨溶液(0.3毫升)加入。令反應於0℃攪拌約4小時。將反應以四氫呋喃及***稀釋。將硫酸鈉加入，再將反應通過薄賽力矽藻土墊中過濾。將有機相於真空中濃縮，再置於高真空底下以得淡棕色固狀物。於0℃將乙醯氯(0.015毫升，0.211毫莫耳)加至正攪拌之粗製材料之6毫升二氯甲烷溶液中，其後將吡啶(0.017毫升，0.211毫莫耳)加入。令反應於0℃攪拌1分鐘，然後令其 加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約25分鐘。將反應於真空中濃縮。然後進行矽膠層析(梯度：0%至45%丙酮之庚烷液)。將適當之試管結合，再於真空中濃縮，即得灰白色固狀之101(49毫克，80%，3步驟)。LC-MS(方案B)：m/z 455.9[M+Na]+23，滯留時間=2.05分鐘。
步驟2：將4M氫氯酸之二烷液(6.0毫升，24毫莫耳)加至含101(45毫克，0.10毫莫耳)之圓底燒瓶中。令反應於室溫攪拌約2小時。將反應於真空中濃縮，再置於高真空底下，即得暗棕色固狀之102(42毫克，全量)。LC-MS(方案B)：m/z 333.0[M+H]+，滯留時間=1.65分鐘。
(1S)-8-(乙醯胺基)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯103之製備
步驟1：於0℃將乙醯氯(0.016毫升，0.22毫莫耳)加至正攪拌之99(65毫克，0.15毫莫耳)之6毫升二氯甲烷溶液中，其後將三乙胺(0.031毫升，0.22毫莫耳)加入。令反應於0℃攪拌約1分鐘，然後令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約25分鐘。將反應以二氯甲烷稀釋，然後轉移至分液漏斗。將有機層分離出，接著以1N氫氯酸然後水清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾，然後於真空 中濃縮以得橙色固狀物。於0℃將10重量%鈀/碳(45毫克)加至正攪拌之粗製材料之4毫升四氫呋喃溶液中，其後將25%水性甲酸銨溶液(0.5毫升)加入。令反應於0℃攪拌約4小時。將反應以四氫呋喃及***稀釋。將硫酸鈉加入，再將反應通過薄賽力矽藻土墊中過濾。將有機相於真空中濃縮，再置於高真空底下以得淡棕色固狀物。於0℃將乙醯氯(0.015毫升，0.21毫莫耳)加至正攪拌之粗製材料之8毫升二氯甲烷溶液中，其後將吡啶(0.017毫升，0.21毫莫耳)加入。令反應於0℃攪拌1分鐘，然後令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約25分鐘。將反應於真空中濃縮。然後進行矽膠層析(梯度：0%至25%丙酮之庚烷液)。將適當之試管結合，再於真空中濃縮，即得白色固狀之103(39.1毫克，63%，3步驟)。LC-MS(方案B)：m/z 455.0[M+Na]+23，滯留時間=2.00分鐘。
步驟2：將4M氫氯酸之二烷液(4.0毫升，16毫莫耳)加至含103(37毫克，0.085毫莫耳)之圓底燒瓶中。令反應於室溫攪拌約2小時。將反應於真空中濃縮，再置於高真空底下，即得綠色固狀之104(34毫克，全量)。LC-MS(方案B)：m/z 333.0[M+H]+，滯留時間=1.41分鐘。
(1S)-3-{[3-(氯羰基)雙環[1.1.1]戊-1-基]羰基}-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基107之製備.
步驟1：遵循一般步驟A，使用3-(三級丁氧羰基)雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸105(212毫克，1.0毫莫耳)、草醯氯(0.094毫升，1.10毫莫耳)、四氫呋喃(3毫升)、二氯甲烷(6毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得灰白色固狀之105(235毫克，全量)。粗製物105係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟2：遵循一般步驟B，使用11(311毫克，0.997毫莫耳)、105(230毫克，0.997毫莫耳)、三乙胺(0.292毫升，2.09毫莫耳)及四氫呋喃(20毫升)，再使用矽膠層析法(梯度：10%至75%丙酮之庚烷液)予以純化。將適當之試管結合，再於真空中濃縮以得白色固狀物。將三氟乙酸(5.0毫升，65毫莫耳)加至正攪拌之粗製材料之10毫升二氯甲烷溶液中。令反應於室溫攪拌約90分鐘。將反應於真空中濃縮。再材料以二氯甲烷溶解，轉移至分液漏斗。然後以1N水性氫氯酸、鹽水、及水清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾，然後於真空中濃縮，其後置於高真空底下以得白色固狀物。使用粗製材料且遵循一般步驟A連同草醯氯(0.010毫升，0.121毫莫耳)、四氫呋喃(4毫升)、二氯甲烷(2毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得白色固狀之107(52毫克，49%，3步驟)。粗製物107係 原樣地立即用於下一步驟中。
乙酸(1R)-8-(乙醯胺基)-3-[(3-{[(1S)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-5-酯108之製備
遵循一般步驟B，使用107(21毫克，0.057毫莫耳)、102(24.6毫克，0.057毫莫耳)、三乙胺(0.024毫升，0.171毫莫耳)及四氫呋喃(6毫升)，再進行製備HPLC純化法(方法H1)，即製得灰白色固狀之108(5.8毫克，14%)。LC-MS(方案B)：m/z 728.1[M+H]+，滯留時間=2.12分鐘。
乙酸(1S)-3-[(3-{[(1S)-8-(乙醯胺基)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯109之製備.
遵循一般步驟B，使用107(29.4毫克，0.068毫莫 耳)、104(25毫克，0.068毫莫耳)、三乙胺(0.028毫升，0.028毫莫耳)及四氫呋喃(8毫升)，再使用中壓逆相C18層析法(梯度：10%至75%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，即製得白色固狀之109(11.8毫克，24%)。LC-MS(方案B)：m/z 728.0[M+H]+，滯留時間=2.13分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 10.25(s，1H)，8.27(s，1H)，8.20(s，1H)，8.06(s，1H)，8.04-7.98(m，1H)，7.92-7.80(m，2H)，7.63-7.55(m，2H)，7.50-7.45(m，1H)，4.56-4.33(m，5H)，4.29-4.17(m,1H)，4.16-3.94(m，4H)，2.62(s，6H)，2.48-2.43(m，6H)，2.11(s，3H)。
乙酸(S)-3-[5-((S)-5-胺基-1-氯甲基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-羰基)-噻吩-2-羰基]-1-氯甲基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯115之製備
步驟1：將草醯氯(0.66毫莫耳，0.066毫升)加至含有噻吩-2,5-二羧酸單三級丁酯(152毫克，0.66毫莫耳)之5毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮成粗製殘留物。然後將殘留物加至含110(200毫克，0.66毫莫耳)之15毫升無水二氯甲烷液的圓底燒瓶中。將反應攪拌2小時。將殘留物以15毫升二氯甲烷稀釋，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得黃色固狀之111(185毫克，58%)。LC-MS：m/z 473[M+H+]，滯留時間=2.25分鐘。
步驟2：將111加至10毫升25%三氟乙酸之二氯甲烷液中。將反應攪拌30分鐘。將粗製反應混合物於真空中濃縮，即得黃色固狀之112。LC-MS：m/z 416[M+H+]，滯留時間=1.65分鐘。
步驟3：將草醯氯(0.24毫莫耳，0.02毫升)加至含有112(100毫克，0.24毫莫耳)之5毫升無水二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中。將反應混合物攪拌3小時，再於真空中濃縮，即得黃色固狀之113(100毫克，0.24毫莫耳，全量)。LCMS，置於甲醇中：m/z 282.0[M+H+，為甲醇分解產物]。滯留時間=1.95分鐘。
步驟4：將113(40毫克，0.092毫莫耳)加至含有5(28毫克，0.092毫莫耳)之5毫升二氯甲烷液的圓底燒瓶中。然後將三乙胺(0.088毫升)加入，再將系統於室溫攪拌1小時。將粗製反應混合物於真空中濃縮，再置回25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得黃色固狀之114(40毫克，64%)。LC-MS：m/z 674[M+H+]，滯留時間=2.25分鐘。
步驟5：將氧化鉑(5毫克，0.02毫莫耳)加至含114(30毫克，.044毫莫耳)之15毫升無水四氫呋喃液的帕爾燒瓶(Parr flask)中。將系統蓋上橡膠隔片，氫化反應乃於氫下、於50Psi發生3小時。3小時後，將帕爾燒瓶以氮吹洗，再將粗製反應通過賽力特矽藻土中使用乙酸乙酯過濾。然後將含有期望粗製產物之濾液濃縮。接著進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得黃色固狀之115(15毫克，50%)。LC-MS：m/z 644[M+H+]，滯留時間=2.06分鐘。
((S)-1-氯甲基-5-羥基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-基)-[5-((S)-1-氯甲基-5-羥基-8-甲基-1,6-二氫-2H-吡咯並[3,2-e]吲哚-3-羰基)-噻吩-2-基]-甲酮117之製備.
將N,N-二甲基甲醯胺(5毫升)置於含有11(34毫克，0.1毫莫耳)之備有攪拌棒之圓底燒瓶內，再逐滴加至含有5-((S)-5-乙醯氧基-1-氯甲基-1,2-二氫-苯並[e]吲哚-3-羰基)-噻吩-2-羧酸(42，44毫克，0.1毫莫耳)、3-(乙基亞胺基伸甲基胺基)-N,N-二甲基丙-1-胺(59毫克，0.3毫莫耳)及碳酸氫鈉(36毫克，0.4毫莫耳)之5毫升N,N-二甲基甲醯胺液的圓底燒瓶中。將反應攪拌30分鐘。將3毫升1M水性氫氯酸加入，再將粗製反應混合物於真空中濃縮。然後進行逆相層析(梯度：0%-65%乙腈之水液)，即得淺白色固狀之117(15毫克，24%)。LC-MS：m/z 604[M-H+]，滯留時間=1.93分鐘。
甲基碳酸(S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯119之製備
於0℃將氯甲酸4-硝苯酯(11毫克，0.054毫莫耳)之四氫呋喃(1毫升)溶液加至29(27毫克，0.045毫莫耳)之四氫呋喃(3毫升)及N,N-二異丙基乙胺(DIPEA，0.032毫 升，0.18毫莫耳)溶液中。將混合物於0℃攪拌2小時，再於室溫攪拌過夜。LC-MS顯現相應之單-PNP碳酸酯118形成。將甲醇(1毫升)加至反應混合物中。攪拌5分鐘後，將其於真空中濃縮，再將殘留物藉Gilson HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)予以純化，即得灰白色固狀之119(5毫克，20%)。LC-MS：m/z 660.7[M+H]，滯留時間=1.06分鐘。1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ 8.53(d)，7.80(m)，7.72(d)，7.45(m)，7.34(m)，4.72(m)，4.62(d)，4.30(m)，4.11(t)，4.04(s)，3.86(d)，3.71(d)，3.47(t)，3.24(m)。
(2-(二甲胺基)乙基)胺基甲酸(S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯123之製備
步驟1：於0℃將氯甲酸4-硝苯酯(164毫克，0.78毫莫耳)之四氫呋喃(1毫升)溶液加至3(200毫克，0.60毫莫耳)之四氫呋喃(6毫升)及N,N-二異丙基乙胺(0.315毫升，18毫莫耳)溶液中，再將混合物於室溫攪拌2小時。濃 縮，再將殘留物以乙酸乙酯(EA)及水處理，以乙酸乙酯萃取，以水及鹽水清洗。於硫酸鎂上乾燥，將溶劑於真空中移出以得黃色泡沫狀之PNP碳酸酯120(300毫克，100%)。LC-MS：m/z 399.0[M+H]，滯留時間=2.37分鐘。
步驟2：將N,N-二甲基乙二胺(35毫克，0.4毫莫耳)加至上述PNP碳酸酯120(100毫克，0.2毫莫耳)之N,N-二甲基乙醯胺(DMA，3毫升)溶液中，其後將二甲基吡啶(0.07毫升，0.6毫莫耳)及HOAt(14毫克，0.1毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌4小時。將混合物藉Gilson HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)進行純化，即得黃色玻璃狀之1-(氯甲基)-5-(((2-(二甲胺基)乙基)胺基甲醯基)氧基)-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-羧酸胺基甲酸(S)-三級丁酯121(86毫克，77%)。LC-MS：m/z 448.1[M+H]，滯留時間=0.70分鐘。
步驟3：將上述化合物121(38毫克，0.067毫莫耳)以三氟乙酸(0.5毫升)及二氯甲烷(2毫升)處理2小時，然後於真空中濃縮以得相應之脫保護胺122，將其溶於N,N-二甲基乙醯胺(3毫升)中。將(S)-5-(1-(氯甲基)-5-羥基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羧酸[58](26毫克，0.067毫莫耳)加至此溶液中，其後將EDCI(27毫克，0.14毫莫耳)加入，再將混合物於室溫攪拌過夜。將粗製物藉Gilson HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)予以純化，即得123(4.5毫克，8%)。LC-MS：m/z 717.4[M+H]，滯留時間=1.38分鐘。1H NMR(400MHz，CDCl3)，δ 8.24(d)， 8.0(d)，7.75(d)，7.64(s)，7.55-7.34(m)，4.62(m)，4.13(t)，4.05(t)，3.94(t)，3.64(t)，3.57-3.45(m)，3.33(s)，3.25(s)，2.89(s)。
甲基(2-(甲胺基)乙基)胺基甲酸(S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-羥基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯126之製備
步驟1：將N,N,N-三甲基乙二胺(222毫克，0.28毫莫耳)加至上述120之溶液中，其後將二甲基吡啶(0.37毫升，3.2毫莫耳)及HOAt(29毫克，0.2毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌1小時。將混合物濃縮，再將殘留物以乙酸乙酯稀釋，以鹽水清洗，於硫酸鎂上乾燥。將粗製反應產物藉ISCO使用甲醇/二氯甲烷(0-20%)予以純化，即得白色泡沫狀之124(245毫克，50%)。LC-MS：m/z 462.2[M+H]，滯留時間=1.45分鐘。
步驟2：將上述化合物124(40毫克，0.087毫莫耳) 以預冷卻之三氟乙酸(1毫升)於0℃處理10分鐘。將三氟乙酸於真空下移出以得相應之脫保護胺125，將其溶於N,N-二甲基乙醯胺(3毫升)中。將(S)-5-(1-(氯甲基)-5-羥基-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羧酸[58](34毫克，0.087毫莫耳)加至此溶液中，其後將EDCI(35毫克，0.17毫莫耳)加入，再將混合物於室溫攪拌過夜。將粗製物藉Gilson HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)予以純化，即得灰白色固狀之126(25毫克，39%)。LC-MS：m/z 731.1[M+H]，滯留時間=1.71分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 10.49(s)，8.26(s)，8.14(d)，7.98(d)，7.88(d)，7.66(t)，7.77(t)，7.40(t)，4.89(t)，4.78(t)，4.55(d)，4.43(d)，4.23(s)，4.08-3.91(m)，3.73(s)，3.50(s)，3.40(s)，3.26(s)，2.89(m)。
雙環[1.1.1]戊烷-1,3-二基雙{[(1S)-5-胺基-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]甲酮}130之製備
步驟1：將5毫升無水二氯甲烷加至含茀基甲氧羰基 氯(560毫克，2.1毫莫耳)備有攪拌棒之圓底燒瓶中，再將系統以氮吹洗。將127(800毫克，2.1毫莫耳)其後三乙胺(0.3毫升，2.1毫莫耳)加入。讓系統攪拌5小時。將粗製反應混合物置於乙酸乙酯中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、碳酸氫鈉及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製殘留物。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至100%乙酸乙酯之庚烷液)予以純化，即得黃色固狀之128(1.096克，91%)。LC-MS(方案B)：m/z 455[M-Boc]+，滯留時間=2.58分鐘。
步驟2：將15毫升25%三氟乙酸之二氯甲烷液加至128(1000毫克，1.96毫莫耳)之備有攪拌棒之圓底燒瓶中。將溶液攪拌30分鐘。將反應混合物於真空下濃縮，再置於50%二氯甲烷及庚烷中，再於真空下濃縮。將此步驟重覆3次(以移出過量之三氟乙酸)，濃縮後得白色固狀物。將此白色固狀物加至正攪拌之雙環[1.1.1]戊烷-1,3-二羰基二氯90之10毫升無水二氯甲烷溶液中。將反應攪拌1小時，再濃縮成粗製玻璃狀物。將粗製反應混合物置於乙酸乙酯中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、碳酸氫鈉及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製殘留物。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至100%乙酸乙酯之庚烷液)予以純化，即得黃色固狀之129(250毫克，12%)。LC-MS(方案B)：m/z 1030.7[M-H]-，滯留時間=2.29分鐘。
步驟3：將10毫升1：1二氯甲烷之二乙胺液加至含有(雙環[1.1.1]戊烷-1,3-二基雙{羰基[(1S)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3,5-二基]})雙胺基甲酸雙(9H-茀-9-基甲酯)129(20毫克，0.19毫莫耳)之備有攪拌棒之圓底燒瓶中。將溶液攪拌3小時。將反應混合物於真空下濃縮，再置於50%二氯甲烷之庚烷液中，再於真空下濃縮。將此步驟重覆3次(以移出過量之二乙胺)，濃縮後得白色固狀物。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至10%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，即得黃色固狀之130(4毫克，30%)。LC-MS(方案B)：m/z 585.1[M+H]+，滯留時間=1.99分鐘。
乙酸(1S)-1-(氯甲基)-3-[(4-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[2.2.1]庚-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯134之製備.
步驟1：遵循一般步驟A，使用4-(甲氧羰基)雙環[2.2.1]庚烷-1-羧酸131(75毫克，0.38毫莫耳)、草醯氯 (0.032毫升，0.378毫莫耳)、四氫呋喃(1.5毫升)、二氯甲烷(1.5)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得白色油狀及固狀混合之132(85毫克，全量)。粗製物132係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟2：遵循一般步驟B，使用2(125毫克，0.346毫莫耳)、132(75毫克，0.35毫莫耳)、吡啶(0.112毫升，1.38毫莫耳)、二氯甲烷(2毫升)及四氫呋喃(6毫升)，再使用矽膠層析(梯度：0%至25%丙酮之庚烷液)予以純化，將適當之試管結合及於真空中濃縮以得白色固狀物。將氫氧化鋰(52.9毫克，2.21毫莫耳)之1.5毫升水溶液加至正攪拌之粗製材料之6毫升四氫呋喃溶液中。令反應於室溫攪拌約3.5小時。將反應濃縮成較小量，轉移至分液漏斗，再以二氯甲烷稀釋。將反應以1N氫氯酸清洗。將水性層以二氯甲烷清洗一次。將有機層結合，以鹽水清洗，於硫酸鈉上乾燥，過濾，然後於真空中濃縮，其後置於高真空底下。遵循遵循一般步驟A，使用粗製材料、草醯氯(0.024毫升，0.281毫莫耳)、四氫呋喃(4.0毫升)、二氯甲烷(4.0毫升)及1滴N,N-二甲基甲醯胺，即製得白色油狀及固狀混合之133(85毫克，全量)。粗製物133係原樣地立即用於下一步驟中。
步驟3：遵循一般步驟B，使用19a(79.9毫克，0.256毫莫耳)、133(130毫克，0.256毫莫耳)、吡啶(0.103毫升，1.28毫莫耳)、及四氫呋喃(6毫升)，將此反應於真空中濃縮後製得粗製淡粉紅色固狀物。於0℃將10重量%鈀 /碳(100毫克)加至正攪拌之粗製材料之3毫升N,N-二甲基甲醯胺及1毫升四氫呋喃溶液中，其後將25%水性甲酸銨溶液(0.4毫升)加入。令反應於0℃攪拌約90分鐘。將反應通過C18管塞中過濾，將該管塞以70%/30%乙腈及水之溶液(每一相中均含0.02%三氟乙酸)清洗。使用genevac將材料減量，即得淡灰色固狀之134(54毫克，32%，2步驟)。LC-MS(方案B)：m/z 657.1[M+H]+，滯留時間=2.10分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 10.32(s，1H)，8.24(s，1H)，8.11-8.07(s，1H)，8.02-7.96(m，2H)，7.91-7.86(d，1H)，7.83-7.78(d，1H)，7.63-7.57(m，1H)，7.52-7.45(m，2H)，7.36-7.30(m，1H)，4.54-4.38(m，3H)，4.35-4.27(m，2H)，4.16-4.05(m，2H)，4.02-3.90(m，2H)，3.80-3.73(m，1H)，2.47(s，3H)，2.26-2.03(m，10H)。
(3bR,4aS,3b’R,4a’S)-6,6’-(雙環[1.1.1]戊烷-1,3-二基二羰基)雙(3-甲基-4,4a,5,6-四氫環丙[c]吡咯並[3,2-e]吲哚-8(1H)-酮)之製備.
將三乙胺(0.40毫升，2.9毫莫耳)加至109(21毫克，0.026毫莫耳)之2毫升乙腈混合液中，其後將0.4毫升水 加入。令反應於室溫攪拌約40分鐘。將反應於真空中濃縮。然後進行矽膠層析(梯度：0%至10%甲醇之二氯甲烷液)。將適當之試管結合，再於真空中濃縮，即得淡棕色固狀之135(1.6毫克，12%)。LC-MS(方案B)：m/z 521.3[M+H]+，滯留時間=1.28分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 11.47(s，2H)，6.85(s，4H)，4.29-4.22(m，2H)，4.17-4.10(m，2H)，3.19-3.09(m，2H)，1.97(s，6H)，1.93-1.87(m，2H)，1.27-1.22(m，2H)。
(1aS,9bR,1a’S,9b’R)-3,3’-(噻吩-2,5-二基二羰基)雙(1,1a,2,3-四氫-5H-苯並[e]環丙[c]吲哚-5-酮)之製備.
將三乙胺(0.40毫升，2.9毫莫耳)加至57(44毫克，0.073毫莫耳)之3毫升乙腈混合液中，其後將0.4毫升水加入。令反應於室溫攪拌約40分鐘。將反應於真空中濃縮。然後進行矽膠層析(梯度：0%至5%甲醇之二氯甲烷液)。將適當之試管結合，再於真空中濃縮，即得淡棕色固狀之136(16.3毫克，39%)。LC-MS(方案B)：m/z 531.1[M+H]+，滯留時間=1.55分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 8.05-8.01(d，2H)，7.80(s，2H)，7.65-7.59(t，2H)，7.48-7.43(t，2H)，7.28-7.23(d，2H)，6.76(s， 2H)，4.57-4.51(m，2H)，4.34-4.26(m，2H)，1.85-1.76(m，4H)。
2,3,4-三-O-乙醯基-β-D-吡喃葡萄糖苷酸(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯甲酯141.
將140(464毫克，0.6毫莫耳)溶於二氯甲烷(4毫升)中，將三氟乙酸(2毫升)加入，再將混合物密封2小時。將混合物於真空中濃縮以得相應之酸LC-MS(方案B)：688.0[M+H]+，滯留時間0.98分鐘。將其溶於四氫呋喃(8毫升)中，冷卻至0℃，將草醯氯(0.9毫升，2M之二氯甲烷液)其後2滴N,N-二甲基甲醯胺加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌50分鐘。於真空中濃縮以得相應之醯基氯。
LC-MS：702.1(於Larry為1.05分鐘，相應甲酯之 峰)； 將4溶於四氫呋喃(10毫升)中，冷卻至0℃，將上述醯基氯其後三乙胺(0.5毫升，4.0毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌30分鐘。將混合物以乙酸乙酯稀釋，以水及鹽水清洗，於硫酸鎂上乾燥。將溶劑於減壓下移出，再將殘留物以甲醇處理。將所得固狀物藉過濾法收集，即得綠色固狀之141(414毫克，73.5%)。LC-MS(方案B)：903.2[M+H]+，滯留時間1.11分鐘。
表1之化合物名提供於下：
雙(2-((S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1H-苯並[e]吲哚-3(2H)-基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸4-((23S,26S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-23-異丙基-21,24-二側氧基-26-(3-脲基丙基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜-22,25-二氮雜二十七烷醯胺基)苄酯
(186)之製備
步驟1：將正攪拌之51(120毫克，0.124毫莫耳)之10毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(106毫克，0.298毫莫耳)加入，其後將1毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌5小時。然後將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，接著將濾液於真空中濃縮。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之182(35毫克，36%)。LC-MS：m/z 786[M+H+]，滯留時間=2.22分鐘。
步驟2：將亞磷酸二苄酯(0.9毫升，4.32毫莫耳)及4-二甲胺基吡啶(催化性)加至正攪拌之182(274毫克，0.348毫莫耳)之10毫升四氫呋喃及10毫升乙腈、四氯化碳(2.04毫升，21.0毫莫耳)及N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，1.12毫升，6.45毫莫耳)溶液中。令反應於室溫攪拌約20分鐘。將粗製反應混合物於真空中濃縮，然後進 行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之183(239毫克，52%)。LC-MS：m/z 1308[M+H+]，滯留時間=2.70分鐘。
步驟3：將5毫升二氯甲烷及5毫升二乙胺加至含183(200毫克，0.153毫莫耳)之備有攪拌棒之圓底燒瓶中。將溶液攪拌3小時。將反應混合物於真空中濃縮，再置於50%二氯甲烷及庚烷中，且再度於真空中濃縮。將此步驟重覆3次。將粗製殘留物置於10毫升25%三氟乙酸之二氯甲烷液中，其後將硫酚(1毫升)加入。將反應於室溫攪拌二天。將粗製反應混合物於真空中濃縮，然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%乙酸乙酯之庚烷液)，即得淺白色固狀之184(60毫克，47%)。LC-MS：m/z 724[M+H+]，滯留時間=1.02分鐘。
步驟4：將10毫升N,N-二甲基乙醯胺加至含184(75毫克，0.1毫莫耳)之圓底燒瓶中，再將系統以氮吹洗將185(99毫克，0.104毫莫耳)加至此正攪拌之溶液中，其後將HOAt(416毫克，0.104毫莫耳)及N,N-二異丙基乙胺(Hunigs base，1滴)加入。將系統於45℃攪拌3小時。將粗製反應混合物於真空中濃縮，然後進行逆相層析，即得白色固狀之186(34毫克，21%)。LC-MS：m/z 1546[M+H+]，滯留時間=1.23分鐘。
乙酸(S)-3-(5-(氯羰基)噻吩-2-羰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯191之製備
步驟1：於0℃將草醯氯(0.677毫升，7.88毫莫耳)加至正攪拌之5-(三級丁氧羰基)噻吩-2-羧酸(187)之20毫升四氫呋喃溶液中，其後將1滴N,N-二甲基甲醯胺加入。令反應於室溫於0℃攪拌約1分鐘，然後令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約90分鐘。將反應減量，再置於高真空底下，即得白色固狀之188(1.67克，全量)。然後將粗製材料立即用於下一步驟中。
步驟2：於0℃將三乙胺(1.38毫升，9.87毫莫耳)加至正攪拌之6(1.54克，4.93毫莫耳)之25毫升四氫呋喃溶液混合物中，其後立即地將188(1.46克，5.92毫莫耳)之25毫升四氫呋喃溶液加入。令反應於0℃攪拌約1分鐘，然後邊攪拌令其加溫至室溫。然後令反應於室溫攪拌約45分鐘。將反應減量至矽石上。然後進行矽膠層析(梯度：0%-100%丙酮之庚烷液)。將適當之試管濃縮，再置於高真空底下，即得棕色固狀之189(2.24克，94%)。LC-MS(方案B)：m/z 486.3[M+H]+，滯留時間=2.19分鐘。
步驟3：於0℃將189(144毫克，0.3毫莫耳)以預冷卻之三氟乙酸(3毫升)處理30分鐘，然後於真空中濃縮以 得相應之酸190。LC-MS：m/z 430.3[M+H]，滯留時間=1.59分鐘。將190溶於四氫呋喃(3毫升)中，於0℃將草醯氯(0.2毫升，2M之二氯甲烷液，0.4毫莫耳)加入，其後將2滴N,N-二甲基甲醯胺(催化量)加入，將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌2小時。於真空中濃縮，即得黃色固狀之191。
(1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)磷酸(S)-二苄酯(193)之製備
步驟1：將四氯化碳(3.61毫升，37.3毫莫耳)加至正攪拌之3(889毫克，2.66毫莫耳)之20毫升四氫呋喃及20毫升乙腈溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，2.0毫升，11.5毫莫耳)、膦酸二苄酯(3.65毫升，16.5毫莫耳)及4-二甲胺基吡啶(65.1毫克，0.533毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約20分鐘。將反應濃縮成較小量，以數毫升二甲亞碸稀釋，然後注至25克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至85%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得 清澈淡棕色油狀/固狀混合之192(839毫克，53%)。LC-MS(方案B)：m/z 595.3[M+2H]+，滯留時間=2.47分鐘。
步驟2：將三氟乙酸(16毫升，210毫莫耳)加至正攪拌之192(834毫克，1.40毫莫耳)之16毫升二氯甲烷溶液中。令反應於室溫攪拌1分鐘，然後立即減量，其後置於高真空底下，即得綠色油狀/固狀混合之193(701毫克，全量)。LC-MS(方案B)：m/z 494.2[M+H]+，滯留時間=2.17分鐘。
乙酸(1S)-3-(5-((1S)-5-(((苄氧基)(羥基)磷醯基)氧基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯[194]及乙酸(S)-3-(5-((S)-5-((雙(苄氧基)磷醯基)氧基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯[195]之製備
於0℃將193溶於四氫呋喃(3毫升)中，將三乙胺(0.165毫升，1.2毫莫耳)加入，其後將191之四氫呋喃(2毫升)溶液加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，再於室溫攪拌2小時。將反應混合物於真空中濃縮，再將殘留物藉Gilson HPLC(乙腈/水，0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃 色固狀之194(50毫克，21%)。LC-MS：m/z 815.4[M+H]，滯留時間=0.96分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 8.42(s)，8.16(s)，8.07(d)，8.02(d)，7.94(d)，7.90(s)，7.64(q)，7.54(q)，7.10-7.29(m)，5.14(d)，4.86(q)，4.52(t)，4.42(m)，4.11-4.00(m)及綠色固狀之195(50毫克，19%)。LC-MS：m/z 905.4[M+H]，滯留時間=2.43分鐘。
碳酸(1S)-1-(氯甲基)-3-[(5-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}噻吩-2-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯4-硝苯酯(196)之製備.
將4M氫氯酸之二烷液(8.0毫升，230毫莫耳)加至正攪拌之195(200毫克，0.221毫莫耳)之8毫升甲醇溶液中。令反應於室溫攪拌約20分鐘。將反應減量。將粗製株料置於8毫升四氫呋喃及8毫升二氯甲烷中。於0℃將氯甲酸4-硝苯酯(86.3毫克，0.428毫莫耳)加至此正攪拌之溶液中，其後將三乙胺(0.179毫升，1.28毫莫耳)加入。令反應於0℃攪拌約1分鐘，然後邊攪拌邊令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約20分鐘。將反應減量，然後置於高真空底下。將三氟乙酸(5毫升，70毫莫耳)加至正攪拌之粗製材料之10毫升二氯甲烷混合液中，其後將 硫酚(0.107毫升，1.04毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約6至7小時。將反應濃縮成較小量，以數毫升二甲亞碸稀釋，然後注至25克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至60%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得黃色固狀之196(71毫克，40%)。LC-MS(方案B)：m/z 848.3[M+H]+，滯留時間=1.78分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )δ 8.51(br s)，8.35-8.41(m)，8.09-8.15(m)，8.00，7.97-8.02(d)，7.87-7.93(m)，7.80-7.86(m)，7.67-7.73(m)，7.58-7.65(m)，7.50-7.55(m)，4.80-4.93(m)，4.42-4.58(m)，4.31-4.37(m)，3.96-4.15(m)。
(2-(((((S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基甲酸4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄酯[198]之製備
將196(15毫克，0.018毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯 胺(1毫升)，將197(17毫克，0.023毫莫耳)之N,N-二甲基甲醯胺(1毫升)溶液加入，其後將N,N-二異丙基乙胺(0.013毫升，0.072毫莫耳)及二甲基吡啶(0.008毫升，0.072毫莫耳)、HOAt(2.6毫克)加入。將混合物於室溫攪拌30分鐘。藉LC-MS觀察到反應於30分鐘內完成。將粗製物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得淡黃色固狀之產物198(13毫克，53%)。LC-MS：m/z 1346.8[M+H]，滯留時間=1.77分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 8.39(s)，8.15(d)，8.01(m)，7.89(m)，7.63(m)，7.53(m)，7.45-7.23(m)，6.73(d)，5.98(s)，5.07-4.95(m)，4.84(t)，4.51(m)，4.49-4.60(m)，4.08-3.95(m)，3.84-3.63(m)，3.00-2.89(m)，1.68-1.59(m)，0.85(m)。
(2-(((((S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基甲酸4-((26S,29S)-1-溴-26-異丙基1-2,24,27-三側氧基-29-(3-脲基丙基)-6,9,12,15,18,21-六氧雜-3,25,28-三氮雜三十烷醯胺基)苄酯[201]之製備
步驟1：將198(13毫克，0.01毫莫耳)以預冷卻之三氟乙酸(0℃，2毫升)處理2分鐘，再於真空中濃縮，即得黃色固狀之產物199(14毫克，三氟乙酸鹽，100%)。LC-MS：m/z 1247.9[M+H]，滯留時間=1.57分鐘。1H NMR(400MHz，DMF-d 7 )，δ 10.13(s)，8.65(d)，8.45(s)，8.17(d)，7.95-7.85(m)，7.65-7.22(m)，5.04-4.97(m)，4.81(dd)，4.56(s)，4.33(d)，4.07-3.94(m)，3.73-3.64(m)，3.50(s)，3.55-3.09(m)，2.95-2.85(m)，2.21(dd)，1.76(m)，1.62(m)，1.46(s)，0.99(m)。
步驟2：將199(5毫克，0.004毫莫耳)加至1-溴-2-側氧基-6,9,12,15,18,21-六氧雜-3-氮雜二十四烷-24-酸全氟苯酯200(3.8毫克，0.006毫莫耳)之N,N-二甲基甲醯胺(0.5毫升)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(0.003毫升，0.016毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌1小時。將粗製物藉Gilson HPLC使用乙腈/水(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀之產物201(3毫克，40%)。LC-MS：m/z 1704.0[M+H]，滯留時間=1.61分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 9.88(s)，8.30(s)，8.24(s)，8.06(m)，7.91(m)，7.81(m)，7.54(m)，7.47(m)，7.43-7.13(m)，5.91(s)，4.98-4.85(m)，4.76(m)，4.43(m)，4.30(s)，4.14(m)，4.00-3.90(m)，3.52(m)，3.16(m)，2.92-2.86(m)，2.31-2.25(m)，1.90(s)，1.52(s)，1.34(s)，1.32(m)，0.78(m)。
(2-(((((S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基甲酸4-((23S,26S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-23-異丙基-21,24-二側氧基-26-(3-脲基丙基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜-22,25-二氮雜二十七烷醯胺基)苄酯[206]之合成
步驟1：將202(227毫克，0.52毫莫耳)溶於二氯甲烷(2毫升)及N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，將PFP-O-TFA(0.19毫升，1.05毫莫耳)及N,N-二異丙基乙胺(0.275毫升，1.57毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌2小時。於真空中濃縮，再將殘留物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色油狀之相應PFP酯203(34毫克，11%)。LC-MS：m/z 623.4[M+Na]，滯留時間=0.92分鐘。
步驟2：將203(3毫克，0.005毫莫耳)加至199(7毫克，0.005毫莫耳)之N,N-二甲基甲醯胺(0.3毫升)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(0.005毫升，0.03毫莫耳) 加入。將混合物於室溫攪拌2小時。將反應混合物進行Gilson HPLC分離(0.02%三氟乙酸)，即得黃色固狀之產物204(4.6毫克，60%)。LC-MS：m/z 1664.1[M+H]，滯留時間=1.63分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 8.39(s)，8.14(m)，8.10-7.99(m)，7.63(m)，7.55-7.5(m)，7.48(s)，7.02(s)，6.52(s)，5.99(s)，5.07-4.95(m)，4.84(t)，4.52(t)，4.38(s)，4.24(t)，4.08-3.99(m)，3.61-3.48(m)，3.00-2.89(m)，2.68(s)，2.34(s)，0.86(dd)。
(2-(((((S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)氧基)羰基)(2-甲氧基乙基)胺基)乙基)(甲基)胺基甲酸4-((23S,26S)-1-胺基-23-異丙基-21,24-二側氧基-26-(3-脲基丙基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜-22,25-二氮雜二十七烷醯胺基)苄酯[208]之製備
步驟1：將205(43毫克，0.07毫莫耳)溶於N,N-二甲 基甲醯胺(2毫升)中，將PFP-O-TFA(0.026毫升，0.14毫莫耳)其後N,N-二異丙基乙胺(0.038毫升，0.21毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌2小時。將粗製物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得無色油狀之產物206(39毫克，72%)。LC-MS：m/z 742.2[M+H]，滯留時間=2.17分鐘。
步驟2：將199(7毫克，0.005毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(0.6毫升)中，將上述PFP酯206(3.7毫克，0.005毫莫耳)之二氯甲烷(0.1毫升)溶液加入，其後將N,N-二異丙基乙胺(0.005毫升，0.03毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌1小時。粗製產物207：LC-MS：m/z 1805.3[M+H]，滯留時間=1.97分鐘。
步驟3：將哌啶(0.02毫升，0.2毫莫耳)加至上述反應混合物207中，再將混合物於室溫攪拌30分鐘。於真空中濃縮，再將粗製物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀之產物208(4.2毫克，三氟乙酸鹽，50%)。LC-MS：m/z 1584.0[M+H]，滯留時間=1.54分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 9.98(s)，8.38(s)，8.14(m)，7.98(m)，7.88(m)，7.70(s)，7.62(m)，7.54(m)，7.47(m)，7.27(m)，6.01(s)，5.06-5.00(m)，4.84(m)，4.51(m)，4.37(m)，4.25(m)，4.08(m)，4.02(m)，3.59(m)，3.25(m)，2.98(m)，2.37(m)，1.97(s)，1.69(s)，1.59 9s)，1.39(m)，0.86(dd)。
乙酸(1S)-1-(氯甲基)-3-[(5-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}噻吩-2-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯(211)之製備.
步驟1：於氮下、於0℃將三乙胺(0.333毫升，2.39毫莫耳)加至正攪拌之2(425毫克，1.31毫莫耳)之5毫升四氫呋喃溶液中，其後將191(535毫克，1.19毫莫耳)之5毫升四氫呋喃溶液立即加入。令反應於0℃攪拌5分鐘，然後邊攪拌邊令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約30分鐘。將反應減量至矽石上。然後進行矽膠層析(梯度：5%-80%丙酮之庚烷液)予以純化。將適當之試管濃縮，再置於高真空底下，即得黃色固狀之產物209(530毫克，60%)。LC-MS(方案B)：m/z 735.1[M+H]+，滯留時間=2.48分鐘。
步驟6：將正攪拌之209(610毫克，0.829毫莫耳)之15毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(203毫克)加入，其後將2毫升25%甲 酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌12至24小時。將反應以***稀釋，其後將硫酸鈉加入。將反應通過賽力特矽藻土墊中過濾，再將賽力特矽藻土以***清洗兩次。將有機相結合，然後減量。將殘留物藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至80%乙腈之水液，每一相中均含0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當試管使用genevac濃縮，即得黃色固狀之210(206毫克，44%)。LC-MS(方案B)：m/z 645.0[M+H]+，滯留時間=2.08分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO)δ 10.49(br s)，8.13-8.18(d)，8.05-8.10(d)，7.93-7.97(d)，7.83-7.91(m)，7.63-7.69(t)，7.53-7.58(m)，7.38-7.43(m)，4.83-4.92(m)，4.74-4.82(m)，4.50-4.55(d)，4.39-4.47(m)，4.20-4.27(m)，4.01-4.15，3.88-3.96(m)，3.57-3.68(m)，1.74-1.80，1.36-1.39(m)。
步驟7：於0℃將氯甲酸4-硝苯酯(122毫克，0.604毫莫耳)加至正攪拌之210(195毫克，0.302毫莫耳)之12毫升二氯甲烷及8毫升四氫呋喃溶液中，其後將三乙胺(0.168毫升，1.21毫莫耳)加入。令反應於0℃攪拌5分鐘，然後邊攪拌邊令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約30分鐘。將反應減量。將殘留物藉藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至85%乙腈之水液，每一相中均含0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當試管使用genevac濃縮，即得黃色固狀之211(240毫克，98%)。LC-MS(方案B)：m/z 810.3[M+H]+，滯留時間=2.35分鐘。
N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-纈胺醯-N-[4-({[{2-[({[(1S)-3-[(5-{[(1S)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}噻吩-2-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]氧基}羰基)(甲基)胺基]乙基}(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]-N~5~-胺基甲醯基-L-鳥胺醯胺(215)之製備
步驟1：將2,6-二甲基吡啶(0.236毫升，2.03毫莫耳)加至正攪拌之212(750毫克，1.02毫莫耳)及213甲基[2-(甲胺基)乙基]胺基甲酸三級丁酯(192毫克，1.02毫莫耳)之6毫升N,N-二甲基乙醯胺溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.354毫升，2.03毫莫耳)及HOAT(69.1毫克，0.5毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約40分鐘。將反應注至25克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上，然後藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至45%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得白色固狀之214(663毫克， 83%)。LC-MS(方案B)：m/z 787.3[M+H]+，滯留時間=1.45分鐘。
步驟2：將三氟乙酸(1毫升，10毫莫耳)加至正攪拌之214(40.9毫克，0.052毫莫耳)之2毫升二氯甲烷溶液中。令反應於室溫攪拌約40分鐘。將反應減量，然後置於高真空底下。將粗製材料置於2毫升N,N-二甲基乙醯胺中，再將N,N-二異丙基乙胺(0.03毫升，0.17毫莫耳)加至此正攪拌之溶液中，其後將2,6-二甲基吡啶(0.02毫升，0.17毫莫耳)、HOAT(5.9毫克，0.043毫莫耳)，然後211(35毫克，0.043毫莫耳)之1毫升N,N-二甲基乙醯胺溶液加入。令反應於室溫攪拌約40分鐘。將反應注至5克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上，然後藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至60%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得黃色固狀之215(14.1毫克，24%)。LC-MS(方案B)：m/z 1359.3[M+3H]+，滯留時間=2.01分鐘。HR-MS：m/z 1359.4549[M+3H]+。
N-[1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-基]-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-{4-[({甲基[2-(甲胺基)乙基]胺基甲醯基}氧基)甲基]苯基}-L-鳥胺醯胺(215)之製備.
步驟1：將20毫升二氯甲烷、2毫升N,N-二甲基甲醯胺、HATU(501毫克，1.32毫莫耳)及N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.92毫升，5.3毫莫耳)加至含1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-酸216(628毫克，1.45毫莫耳)之圓底燒瓶中。令反應於室溫攪拌2分鐘，其後將L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-(羥甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺217(500毫克，1.32毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約90分鐘，其後經由加入三氟乙酸令反應中止。將反應濃縮成較小量，以數毫升二甲亞碸稀釋，然後注至25克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至40%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得清澈固狀之218 (514毫克，49%)。LC-MS(方案B)：m/z 795.5[M+H]+，滯留時間=1.01分鐘。
步驟2：將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.096毫升，0.554毫莫耳)加至正攪拌之218(210毫克，0.264毫莫耳)及碳酸雙(4-硝苯酯)(161毫克，0.528毫莫耳)之4毫升N,N-二甲基甲醯胺溶液中。令反應於室溫攪拌約2小時。將反應注至25克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至55%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得固狀之219(180毫克，71%)。LC-MS(方案B)：m/z 960.5[M+H]+，滯留時間=1.48分鐘。
步驟3：將2,6-二甲基吡啶(0.154毫升，1.33毫莫耳)加至正攪拌之219(640毫克，0.667毫莫耳)及213[依J.Med.Chem.1992,33,559-567中所述地製備](127毫克，0.674毫莫耳)之6毫升N,N-二甲基乙醯胺溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.232毫升，1.33毫莫耳)及HOAT(9.1毫克，0.67毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約15分鐘。將反應注至25克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至40%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得蠟樣白色固狀之 220(564毫克，84%)。LC-MS(方案B)：m/z 1009.7[M+H]+，滯留時間=1.43分鐘。
步驟4：將三氟乙酸(3.0毫升，40毫莫耳)加至正攪拌之220(470毫克，0.466毫莫耳)之6毫升二氯甲烷混合液中。令反應於室溫攪拌約10分鐘。將反應減量。將殘留物藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至30%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得白色油狀/固狀混合之221(326毫克，68%)。LC-MS(方案B)：m/z 909.8[M+H]+，滯留時間=0.91分鐘。
N-[1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-基-L-纈胺醯基-N-[4-({[{2-[({[(1S)-3-[(5-{[(1S)-5-(乙醯氧基)-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}噻吩-2-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]氧基}羰基)(甲基)胺基]乙基}(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]-N~5~-胺基甲醯基-L-鳥胺醯胺(222)之製備.
將N,N-二異丙基乙胺(0.03毫升，0.172毫莫耳)加至正攪拌之221(50.1毫克，0.05毫莫耳)之1毫升N,N-二甲基乙醯胺混合液及至此正攪拌之溶液中，其後將2,6-二甲基吡啶(0.02毫升，0.172毫莫耳)、HOAT(5.9毫克，0.043毫莫耳)、及211(35毫克，0.043毫莫耳)之1毫升N,N-二甲基乙醯胺溶液加入。令反應於室溫攪拌約40分鐘。將反應注至5克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至60%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得黃色/白色固狀之222(15.4毫克，23%)。LC-MS(方案B)：m/z 1580.4[M+2H]+，滯留時間=1.95分鐘。HRMS：m/z 790.7923[M+2H]+。
N-[1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-基]-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(1S)-1-(氯甲基)-3-[(5- {[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}噻吩-2-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺(223)之製備
步驟1：將221(17.3毫克，0.019毫莫耳)以溶於1.5毫升N,N-二甲基乙醯胺中之溶液形式加至正攪拌之196(29.8毫克，0.035毫莫耳)之0.5毫升N,N-二甲基乙醯胺溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.024毫升，0.14毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(0.016毫升，0.14毫莫耳)及HOAT(4.8毫克，0.035毫莫耳)加入。將反應於室溫攪拌約20分鐘。將反應注至5克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至75%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)其後製備HPLC純化法(方法B)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得黃色固狀之222(22.6毫克， 40%)。LC-MS(方案B)：m/z 1619.9[M+3H]+，滯留時間=1.62分鐘。HPLC(方案D)：滯留時間=9.339分鐘。
3-(氯羰基)雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(225)之製備.
於0℃將草醯氯(0.381毫升，4.44毫莫耳)加至正攪拌之224之12毫升四氫呋喃溶液中，其後將1滴N,N-二甲基甲醯胺加入。令反應於0℃攪拌約1分鐘，然後邊攪拌邊令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約30分鐘。將反應減量，然後置於高真空，即得白色固狀之225(701毫克，全量)。
4-硝苯基碳酸(8S)-8-(氯甲基)-6-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-酯三氟乙酸鹽230之製備.
步驟1：將四氯化碳(18.1毫升，187毫莫耳)加至正攪拌之8(4.5克，13.4毫莫耳)之80毫升四氫呋喃及80毫升乙腈溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，9.31毫升，53.4毫莫耳)、亞磷酸二苄酯(17.7毫升，80.2毫莫耳)、及4-二甲胺基吡啶(326毫克，2.67毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約10分鐘。將反應減量至矽石上。然後進行矽膠層析(梯度：0%-20%丙酮之庚烷液)。將適當之試管濃縮，再置於高真空底下，即得淡黃色固狀之226(6.04克，76%)。LC-MS(方案B)：m/z 614.3[M+NH4]+，滯留時間=2.38分鐘。
步驟2：將三氟乙酸(24毫升，310毫莫耳)加至正攪拌之226(2.15克，3.60毫莫耳)之24毫升二氯甲烷溶液中。令反應於室溫攪拌約60秒，立即減量，然後置於真空(皮帶泵)底下。於0℃將三乙胺(1.49毫升，10.7毫莫耳)加至正攪拌之粗製材料(2.59克，3.57毫莫耳)之15毫 升四氫呋喃溶液中，其後將225(674毫克，3.57毫莫耳)之15毫升四氫呋喃溶液立即加入。令反應於0℃攪拌約5分鐘，然後邊攪拌邊令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約20分鐘。將反應減量至矽石上。然後進行矽膠層析(梯度：0%-30%丙酮之庚烷液)。將適當之試管濃縮再置於高真空底下，即得白色固狀之227(920毫克，40%，2步驟)。LC-MS(方案B)：m/z 649.2[M+H]+，滯留時間=2.04分鐘。
步驟3：將溶於4毫升水之氫氧化鋰(330毫克，13.8毫莫耳)加至正攪拌之227(895毫克，1.38毫莫耳)之16毫升四氫呋喃溶液中。令反應於室溫攪拌約90分鐘。將二氯甲烷其後水性1N氫氯酸加入。將材料轉移至分液漏斗。將有機層分離出，再將水性層以二氯甲烷清洗兩次。將有機層結合，以鹽水、水清洗一次，於硫酸鈉上乾燥，過濾，然後減量，其後置於高真空底下。將粗製材料置於15毫升四氫呋喃及5毫升二氯甲烷中，然後冷卻至0℃。於0℃將草醯氯(0.140毫升，1.63毫莫耳)加至此正攪拌之溶液中，其後將1滴N,N-二甲基甲醯胺加入。令反應加溫至室溫，然後於室溫攪拌約60分鐘。將反應減量，然後置於高真空底下，即得淡棕色固狀之228(820毫克，91%，2步驟)。粗製材料係原樣地用於下一步驟中。
步驟4：於0℃將三乙胺(0.348毫升，2.50毫莫耳)加至正攪拌之11(527毫克，1.50毫莫耳)之12毫升四氫呋喃溶液中，其後將溶於12毫升四氫呋喃之228(816毫 克，1.25毫莫耳)立即加入。令反應於0℃攪拌約5分鐘，其後邊攪拌邊令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約30分鐘。將反應減量至矽石上。然後進行矽膠層析(梯度：0%-45%丙酮之庚烷液)。將適當之試管濃縮，再置於高真空底下，即得白色固狀之229(660毫克，59%)。LC-MS(方案B)：m/z 895.3[M+H]+，滯留時間=2.21分鐘。
步驟5：將4M氫氯酸之二烷液(20毫升，80毫莫耳)加至正攪拌之229(652毫克，0.728毫莫耳)之20毫升甲醇溶液中。令反應於室溫攪拌約24分鐘。將反應減量，然後置於高真空底下。於0℃將氯甲酸對硝苯酯(191毫克，0.946毫莫耳)加至正攪拌之粗製材料之16毫升二氯甲烷及16毫升四氫呋喃溶液中，其後將三乙胺(0.508毫升，3.64毫莫耳)立即加入。令反應於0℃攪拌約5分鐘，然後邊攪拌邊令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約10分鐘。將反應減量。將三氟乙酸(12毫升，160毫莫耳)之12毫升二氯甲烷溶液加至正攪拌之粗製材料之12毫升二氯甲烷溶液中，其後將硫酚(0.745毫升，7.28毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約6小時。將反應減量。將粗製材料以數毫升二甲亞碸稀釋，然後注至25克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：15%至60%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得淡黃色固狀之230(267毫克，34%，3步驟)。LC-MS(方案 B)：m/z 838.3[M+H]+，滯留時間=1.68分鐘。
N-[1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-21-側氧基-3,6,9,12,15,18-六氧雜二十一烷-21-基]-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(氯甲基)-6-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺三氟乙酸鹽(231)之製備.
步驟1：將3.0毫升N,N-二甲基乙醯胺加至含230(90毫克，0.11毫莫耳)及215(121毫克，0.118毫莫耳)之2打蘭管瓶中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.0748毫升，0.429毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(0.0497毫升，0.429毫莫耳)及HOAT(14.7毫克，0.108毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約15分鐘。將粗製反應注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至45%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，其後藉方法H進行第二純化， 且將適當之試管使用genevac濃縮，即得白色固狀之231(117毫克，60%)。LC-MS(方案B)：m/z 1607.8[M+H]+，滯留時間=1.60分鐘。
N~2~-乙醯基-N~6~-(三級丁氧羰基)-L-離胺醯基-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-{4-[({甲基[2-(甲胺基)乙基]胺基甲醯基}氧基)甲基]苯基}-L-鳥胺醯胺三氟乙酸鹽(236)之製備.
步驟1：於0℃將Fmoc-C1(22克，85.0毫莫耳)以溶於450毫升四氫呋喃之溶液形式逐滴加至正攪拌之化合物213(16.0克，85.0毫莫耳)及N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，23克，178毫莫耳)之450毫升四氫呋喃溶液中。將混合物於0℃攪拌10分鐘。令反應於室溫攪拌過夜。將反應以乙酸乙酯稀釋，然後以水性氯化銨及鹽水清洗。將有機層分離出，於硫酸鈉上乾燥再減量。將殘留物藉矽膠 層析(梯度：2.5%-50%乙酸乙酯之石油醚液)予以純化。將適當試管濃縮。將材料溶於150毫升乙酸乙酯中，其後將150毫升氫氯酸之乙酸乙酯液加入。令反應於室溫攪拌過夜。將反應濃縮，再將300毫升甲基三級丁基醚(MTBE)加入。將所得沈澱物藉過濾法收集，即得白色固狀之232(10.4克，42%，2步驟)。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 8.89(br，2H)，7.91(d，2H)，7.66(d，2H)7.42(m，2H)，7.36(m，2H)，4.34(m，3H)，3.51(m，1H)，3.04(m，1H)，2.85(s，3H)，2.72(m，1H)，2.32(m，1H)。
步驟2：將233(366毫克，1.27毫莫耳)、HATU(660毫克，1.65毫莫耳)及N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.302毫升，1.6毫莫耳)加至217(481毫克，1.27毫莫耳)之10毫升N,N-二甲基甲醯胺溶液中。令反應於室溫攪拌約30分鐘。將反應以乙酸乙酯稀釋，其導致固體粉碎。令此漿體攪拌約30分鐘。將固狀物藉過濾法收集，以新鮮乙酸乙酯潤洗，再於高真空下乾燥，即得棕色固狀之234(797毫克，97%)。LC-MS(方案B)：m/z 650.3[M+H]+，滯留時間=0.64分鐘。
步驟3：將碳酸雙(4-硝苯酯)(9.54克，31.4毫莫耳)加至化合物234(18.5克，28.5毫莫耳)之N,N-二甲基甲醯胺(500毫升)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，5.5克，42.8毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約12小時。將反應濃縮。將殘留物藉矽膠層析(梯度：1%-10%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，即得白色固狀之235(6.9 克，29.7%)。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )，δ 8.30(d，2H)，8.12(d，1H)，8.01(d，1H)，7.70(d，1H)，7.64(d，2H)，7.56(d，2H)，7.40(d，2H)，6.78(m，1H)，5.98(m，1H)，5.43(s，2H)，5.24(s，2H)，4.49(m，1H)，4.19(m，2H)，2.86(m，4H)，1.99(m，1H)，1.60(m，3H)，1.36(m，16H)，0.82(m，6H)。
步驟4：將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.316毫升，1.82毫莫耳)加至正攪拌之235(500毫克，0.605毫莫耳)及232(210毫克，0.605毫莫耳)之3.0毫升N,N-二甲基乙醯胺溶液中。令反應於室溫攪拌約30分鐘。然後將哌啶(0.598毫升，6.05毫莫耳)加至反應中。令反應於室溫攪拌另約15分鐘。將粗製反應注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至35%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化。將適當之試管使用genevac濃縮，即得清澈白色固狀之236(475毫克，89%，2步驟)。LC-MS(方案B)：m/z 764.4[M+H]+，滯留時間=1.03分鐘。
N~2~-乙醯基-L-離胺醯基-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(氯甲基)-6-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基1)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙 基)(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺三氟乙酸鹽(237)之製備.
將N,N-二甲基甲醯胺(2.0毫升)加至含230(100毫克，0.119毫莫耳)及236(115毫克，0.131毫莫耳)之2打蘭管瓶中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.0831毫升，0.477毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(0.0522毫升，0.477毫莫耳)及HOAT(16.2毫克，0.119毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約10分鐘。將反應減量。將二氯甲烷(2毫升)加至粗製樣品中。將三氟乙酸(1.0毫升，13毫莫耳)加至正攪拌之混合物中。令反應於室溫攪拌約30分鐘。將反應減量。將粗製材料溶於二甲亞碸中，再注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：10%至50%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，其後藉方法G進行第二純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即得白色固狀之237(55.8毫克，27%)。LC-MS(方案B)：m/z 1362.8[M+H]+，滯留時間=1.44分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 10.96-10.83(m)，10.06-9.97(m)，8.16-7.97(m)，7.87-7.66(m)，7.59-7.47(m)，7.37-6.97(m)，6.54(s)，6.05(s)，5.47(s)，5.12-4.96(m)，4.45-3.91(m)，3.74-2.83(m)，2.76-2.68(m)，2.59-2.52(m)，2.39-2.32(m)，2.02-1.93(m)，1.83(s)，1.71-1.21(m)，0.88-0.77(m)。
3-{[2-({[(2-{[({(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基1)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]二硫基}-N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-丙胺酸(244)之製備
步驟1：於0℃將乙酸(2.41克，40.1毫莫耳)加至正攪拌之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-半胱胺酸238(17.9克，52.1毫莫耳)之無水乙醇(360毫升)混合液中。然後於 0℃將[2-(吡啶-2-基二硫基)苯基]甲醇239(10克，40.104毫莫耳)之無水乙醇(200毫升)溶液加至反應混合物中。將混合物於室溫攪拌20分鐘。將反應混合物於真空中濃縮以得黃色油狀物。將此殘留物藉製備HPLC(方法M)予以純化以得黃色膠狀物(3.5克)。於0℃將碳酸雙(4-硝苯酯)(1.9克，6.23毫莫耳)加至正攪拌之此粗製材料(2.5克，5.191毫莫耳)之無水二氯甲烷(100毫升)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，805毫克，6.23毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌½小時，然後令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約23小時。將反應混合物加溫至30℃，再令其於30℃攪拌約18小時。將反應混合物加溫至40℃，再令其於40℃攪拌約6小時。將反應混合物以1M氫氯酸(20毫升x2)、鹽水清洗，於硫酸鈉上乾燥，再於真空中濃縮以得黃色油狀之殘留物(3.89克)。將殘留物藉矽膠層析(梯度：0%至4%甲醇之二氯甲烷液)予以純化以得黃色固狀物(2.48克)。於0℃將213(635毫克，3.37毫莫耳)加至正攪拌之此粗製材料之四氫呋喃(35毫升)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，793毫克，6.14毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(657毫克，6.14毫莫耳)及HOAT(41.8毫克，0.307毫莫耳)加入。令反應混合物加溫至室溫，然後於室溫攪拌40分鐘。將反應混合物以乙酸乙酯(200毫升)稀釋，以1M HCl(30毫升，x2)及鹽水清洗。將有機相於硫酸鈉上乾燥，再於真空中濃縮以得黃色油狀之粗製產物(3.6克)。將粗製產物藉矽膠層析 (梯度：0%至4%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，以得黃色膠狀之產物(2.35克)。然後將產物藉製備HPLC使用(方法M，30分鐘期間使用梯度50% B至80% B，然後5分鐘期間95%)予以純化。將混合物於真空中濃縮，再以乙酸乙酯(100毫升，x3)萃取。將有機層結合，以鹽水清洗，於鈉上乾燥，再於真空中濃縮，即得黃色膠狀之240(1.45克，7%，3步驟)。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 7.91-7.89(m，3H)，7.74-7.72(m，3H)，7.44-7.31(m，7H)，5.14(s，2H)，4.34-4.24(m，4H)，3.31-3.29(m，3H)，3.10-3.09(m，1H)，3.04-3.02(m，1H)，2.86-2.82(d，3H)，2.75-2.73(m，2H)，2.67-2.50(m，2H)，1.38-1.31(m，9H)。
步驟2：將三氟乙酸(2毫升，30毫莫耳)加至正攪拌之240(35毫克，0.050毫莫耳)之4毫升二氯甲烷溶液中。令反應於室溫攪拌約10分鐘。將反應於真空中濃縮，再置於高真空底下，即得白色固狀之241(40毫克，全量)。LC-MS(方案B)：m/z 596.5[M+H]+，滯留時間=1.38分鐘。
步驟3：將2.0毫升N,N-二甲基乙醯胺加至含241(29.8毫克，0.042毫莫耳)及242碳酸(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯4-硝苯酯[使用製備229中所述之化學製得](35.0毫克，0.042毫莫耳)之管瓶中，其後將N,N-二異 丙基乙胺(Hunig’s base，0.0293毫升，0.168毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(0.0195毫升，0.168毫莫耳)、及HOAT(5.72毫克，0.042毫莫耳)立即加入。令反應於室溫攪拌約10分鐘。然後將哌啶(0.30毫升，3毫莫耳)加至反應中，再令反應於室溫攪拌約10分鐘。將粗製反應注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至65%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即製得灰色固狀之243(30毫克，60%)。LC-MS(方案B)：m/z 838.3[M+2H]+，滯留時間=1.55分鐘。
步驟4：將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.0118毫升，0.0677毫莫耳)加至正攪拌之243(20毫克，0.017毫莫耳)及6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸五氟苯酯(7.03毫克，0.0186毫莫耳)之1.5毫升N,N-二甲基甲醯胺溶液中。令反應於室溫攪拌約15分鐘。將粗製反應注至5克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：20%至70%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)，其後製備HPLC純化法(方法I1)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即製得灰色固狀之244(0.8毫克，4%)。LC-MS(方案D)：m/z 630.8[1/2 M+1H]+，滯留時間=10.786分鐘。
3-{[4-({[(2-{[({(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]二硫基}-N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-丙胺酸250之製備
步驟1：於0℃將乙酸(1.93克，32.1毫莫耳)加至正攪拌之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-半胱胺酸238(11.6克，33.7毫莫耳)之無水乙醇(230毫升)混合液中。然後於0℃將[4-(吡啶-2-基二硫基)苯基]甲醇245(10克，40.104毫莫耳)之無水乙醇(160毫升)溶液加至反應混合物中。令混合物加溫至室溫，然後於室溫攪拌4小時。將反應混合物於真空中濃縮以得黃色油狀物。將此殘留物藉製備HPLC(方法M，30分鐘期間使用梯度45%B至75%B，然後5分鐘期間95%)予以純化以得黃色膠狀物(8.5克)。於0℃將碳酸雙(4-硝苯酯)(6.06克，19.9毫莫耳)加至正攪拌 之此粗製材料(8.0克，16.61毫莫耳)之無水二氯甲烷(320毫升)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，2.58克，19.9毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌10分鐘，然後令其加溫至室溫。令反應於室溫攪拌約15小時。然後將另外之碳酸雙(4-硝苯酯)(1.52克，4.98毫莫耳)及N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，644毫克，4.98毫莫耳，0.3當量)加至反應混合物中。令反應於室溫攪拌另2小時。將反應混合物以1M氫氯酸(50毫升x 2)、鹽水清洗，於硫酸鈉上乾燥，再於真空中濃縮以得黃色油狀之殘留物(17.1克)。將殘留物藉矽膠層析(梯度：0%至7%甲醇之二氯甲烷液)予以純化以得黃色油狀物。於0℃將171(1.89克，10.0毫莫耳)加至正攪拌之此粗製材料之四氫呋喃(103毫升)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，2.36克，18.2毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(1.96克，18.2毫莫耳)及HOAT(124毫克，0.912毫莫耳)加入。令反應混合物加溫至室溫，然後於室溫攪拌60分鐘。將反應混合物以乙酸乙酯(200毫升)稀釋，以1M氫氯酸(30毫升，x2)及鹽水清洗。將有機相於硫酸鈉上乾燥，再於真空中濃縮以得黃色油狀之粗製產物(7.5克)。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至4%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，以得黃色膠狀之產物(4.0克)。然後將產物藉製備(方法M，30分鐘期間使用梯度50% B至80% B，然後5分鐘期間95%)予以純化。將混合物於真空中濃縮，再以乙酸乙酯(100毫升，x3)萃取。將有機層結合， 以鹽水清洗，於鈉上乾燥，再於真空中濃縮，即得白色固狀之246(3.0克，13%，3步驟)。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6 )：δ 7.89-7.87(d，2H)，7.71-7.70(d，2H)，7.55-7.52(m，2H)，7.50-7.41(m，2H)，7.39-7.30(m，4H)，4.97(s，2H)，4.30-4.22(m，4H)，3.29(br，4H)，3.10-3.01(m，2H)，2.82-2.80(d，3H)，2.73(s，1H)，2.66(s，2H)，1.32-1.30(d，9H)。
步驟2：將哌啶(1.13毫升，11.5毫莫耳)加至正攪拌之246(499毫克，0.717毫莫耳)之4.0 N,N-二甲基甲醯胺溶液中。令反應於室溫攪拌約5分鐘。將粗製反應注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至50%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即製得灰色固狀之3-{[4-(4,7,10,10-四甲基-3,8-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基)苯基]二硫基}-L-丙胺酸247(320毫克，76%)。LC-MS(方案B)：m/z 474.5[M+H]+，滯留時間=1.19分鐘。
步驟3：將2毫升N,N-二甲基甲醯胺加至正攪拌之247(140毫克，0.238毫莫耳)及6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸五氟苯酯(98.9毫克，0.262毫莫耳)之溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.124毫升，0.715毫莫耳)立即加入。令反應於室溫攪拌約5分鐘。將粗製反應注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以 乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：10%至70%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即製得清澈固狀之N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-3-{[4-(4,7,10,10-四甲基-3,8-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基)苯基]二硫基}-L-丙胺酸248(56毫克，35%)。LC-MS(方案B)：m/z 667.3[M+H]+，滯留時間=1.71分鐘。
步驟4：將三氟乙酸(2毫升，30毫莫耳)加至正攪拌之248(35毫克，0.050毫莫耳)之4毫升二氯甲烷溶液中。令反應於室溫攪拌約10分鐘。將反應於真空中濃縮，再置於高真空底下，即製得白色固狀之249(40毫克，全量)。
步驟4：將1.6毫升N,N-二甲基乙醯胺加至含249(18.0毫克，0.0264毫莫耳)及242(22.0毫克，0.0264毫莫耳)之管瓶中，其後將N,N-二異丙基乙胺(hunig’s base，0.0184毫升，0.106毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(0.0123毫升，0.106毫莫耳)、及HOAT(3.60毫克，0.0264毫莫耳)立即加入。令反應於室溫攪拌約10分鐘。將粗製反應注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：10%至60%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)其後製備HPLC純化法(方法I2)予 以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即製得白色固狀之250(16.7毫克，50%)。LC-MS(方案B)：m/z 1261.4[M+3H]+，滯留時間=1.71分鐘。
N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(氯甲基)-6-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]成-1-基)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺255之製備.
步驟1：將N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基- N~5~-胺基甲醯基-N-[4-(羥甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺251(725毫克，1.2毫莫耳)溶於6毫升N,N-二甲基甲醯胺中，其後音波處理約10分鐘。然後將攪拌棒加入，再令此溶液於室溫攪拌。然後將碳酸雙(4-硝苯酯)(403毫克，1.33毫莫耳)加入，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.44毫升，2.5毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約5小時。將溶於1毫升N,N-二甲基甲醯胺之213(227毫克，1.2毫莫耳)加入。令反應於室溫攪拌約1分鐘。將粗製反應注至24克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至60%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即製得棕色固狀之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-(4,7,10,10-四甲基-3,8-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一烷-1-基)苯基]-L-鳥胺醯胺252(395毫克，40%，2步驟)。LC-MS(方案B)：m/z 816.7[M+H]+，滯留時間=1.88分鐘。
步驟2：將三氟乙酸(2毫升，30毫莫耳)加至正攪拌之252(197毫克，0.241毫莫耳)之6毫升二氯甲烷混合液中。令反應於室溫攪拌約20分鐘。將反應於真空中濃縮，再置於高真空底下，即製得白色及淡棕色固狀之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-(4,7,10,10-四甲基-3,8-二側氧基-2,9-二氧雜-4,7- 二氮雜十一烷-1-基)苯基]-L-鳥胺醯胺253(210毫克，全量)。LC-MS(方案B)：m/z 716.7[M+H]+，滯留時間=1.27分鐘。
步驟3：將2.0毫升N,N-二甲基乙醯胺加至含230(48毫克，0.053毫莫耳)及253(52.4毫克，0.063毫莫耳)之管瓶中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.036毫升，0.211毫莫耳)、2,6-二甲基吡啶(0.024毫升，0.211毫莫耳)、及HOAT(7.1毫克，0.0525毫莫耳)立即加入。令反應於室溫攪拌約10分鐘。然後將哌啶(0.30毫升，3毫莫耳)加入，再令反應於室溫攪拌約10分鐘。將粗製反應注至12克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：10%至50%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)予以純化，且將適當之試管使用genevac濃縮，即製得淡灰色固狀之254(68毫克，84%，2步驟)。LC-MS(方案B)：m/z 1193.5[M+2H]+，滯留時間=1.46分鐘。
步驟4：將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.0136毫升，0.0782毫莫耳)加至正攪拌之254(30毫克，0.020毫莫耳)及6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸五氟苯酯(8.11毫克，0.0215毫莫耳)之2.0毫升N,N-二甲基甲醯胺溶液中，令反應於室溫攪拌約10分鐘。將粗製反應注至5克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓 逆相C18層析法(梯度：5%至50%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)其後第二製備HPLC純化法(方法J1)予以純化。將適當之試管使用genevac濃縮，即製得淡棕色固狀之255(9.1毫克，29%)。LC-MS(方案B)：m/z 1386.9[M+2H]+，滯留時間=1.60分鐘。
N-(24-溴-23-側氧基-4,7,10,13,16,19-六氧雜-22-氮雜二十四烷-1-醯基)-L-纈胺醯基-N~5~-胺基甲醯基-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(氯甲基)-6-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-甲基-3,6,7,8-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚-4-基}氧基)羰基](甲基)胺基}乙基)(甲基)胺基甲醯基]氧基}甲基)苯基]-L-鳥胺醯胺257之製備.
將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，0.0136毫升，0.0782毫莫耳)加至正攪拌之254(30毫克，0.020毫莫耳)及1-溴-2-側氧基-6,9,12,15,18,21-六氧雜-3-氮雜二十四烷-24-酸五氟苯酯2556(13.8毫克，0.0215毫莫耳)[依 WO2014/068443中所述地製得]之2.0毫升N,N-二甲基甲醯胺溶液中。令反應於室溫攪拌約40分鐘。將粗製反應注至5克C18前置管柱(該管柱已事先以乙腈然後以水均衡，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)上。將材料藉中壓逆相C18層析法(梯度：5%至50%乙腈之水液，每一相中均含有0.02%三氟乙酸)，其後第二製備HPLC純化法(方法K1)予以純化。將適當之試管使用genevac濃縮，即製得白色固狀之257(10.8毫克，26%)。LC-MS(方案B)：m/z 1649.7[M+3H]+，滯留時間=1.53分鐘。
N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-[(1S)-3-[(3-羧基雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]-L-丙胺醯胺261之製備
步驟1：將正攪拌之3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-硝基-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸三級丁酯258(依類似於189之法製備)(980毫克，2.14毫莫耳)之7毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。 然後將10重量%鈀/活性碳(30毫克)加入，其後將2毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌3小時。完成後，將反應混合物通過賽力特矽藻土墊中過濾，再將濾液於真空下濃縮。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至10%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，即得黃色固狀之3-{[(1S)-5-胺基-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸三級丁酯259(905毫克，98%)。LC-MS(方案B)：m/z 427[M+H]+，滯留時間=1.92分鐘。
步驟2：將(S)-(1-氯-1-側氧基丙-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(695毫克，2.11毫莫耳)加至正攪拌之259(900，2.11毫莫耳)之5毫升無水二氯甲烷溶液中，其後將三乙胺(0.5毫升)逐滴加入。令反應攪拌2小時。完成後，將反應混合物於真空下濃縮。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至100%乙酸乙酯之庚烷液)予以純化，即得白色固狀之3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-({N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-丙胺醯基}胺基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸三級丁酯260(1.102克，73%)。LC-MS(方案B)：m/z 720[M+H]+，滯留時間=2.32分鐘。
步驟3：將15毫升1：1二氯甲烷之二乙胺液加至含260(1000毫克，1.388毫莫耳)之備有攪拌棒的圓底燒瓶中。將溶液攪拌3小時。將反應混合物於真空下濃縮，再置於50%二氯甲烷之庚烷液中，且再度於真空下濃縮。將 此步驟重覆3次(以移出過量的二乙胺)，濃縮後可得粗製白色固狀物。將此粗製白色固狀物加至含(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-L-纈胺酸(471毫克，1.38毫莫耳)、及HATU(350毫克，1.38毫莫耳)之10毫升無水二氯甲烷液的圓底燒瓶中。然後將三乙胺(0.5毫升)加入，再將反應於室溫攪拌3小時。完成後，將反應混合物於真空下濃縮。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至100%乙酸乙酯之庚烷液)予以純化，即得白色固狀之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-[(1S)-3-{[3-(三級丁氧羰基)雙環[1.1.1]戊-1-基]羰基}-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]-L-丙胺醯胺261(1.005克，88%)。LC-MS(方案B)：m/z 819[M+H]+，滯留時間=2.31分鐘。
步驟4：將10毫升25%三氟乙酸之二氯甲烷液加至含261(1000毫克，1.22毫莫耳)之圓底燒瓶中。將反應攪拌3小時。將溶液攪拌3小時。將反應混合物於真空下濃縮，再置於50%二氯甲烷及庚液中，再於真空下濃縮。將此步驟重覆3次(以移出過量之三氟乙酸)，濃縮後，即得白色固狀之262(920毫克，98%)。LC-MS(方案B)：m/z 763[M+H]+，滯留時間=1.88分鐘。
N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-纈胺醯基-N-{(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5- 基}-L-丙胺醯胺266之製備.
步驟1：將HATU(298毫克，0.76毫莫耳)加至含N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-[(1S)-3-[(3-羧基雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]-L-丙胺醯胺262(580毫克，0.76毫莫耳)之5毫升四氫呋喃液的圓底燒瓶中。將溶液混合物於室溫攪拌30分鐘。然後將(1S)-5-(苄氧基)-1-(氯甲基)-8-甲基-1,2,3,6-四氫吡咯並[3,2-e]吲哚7其後0.3毫升N,N-二異丙基乙胺(Hunigs base)加入。將反應攪拌1小時，再濃縮成粗製玻璃狀物。將粗製反應混合物藉矽膠層析(梯度：0%至10%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，即合成白色固狀之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-[(1S)-3-[(3-{[(1S)-5-{[雙(苄氧基)磷醯基]氧基}-1-(氯甲基)-8-甲基 -1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]-L-丙胺醯胺263(723毫克，98%)。LC-MS(方案B)：m/z 1071[M+H]+，滯留時間=2.45分鐘。
步驟2：將正攪拌之263(100毫克，0.932毫莫耳)之7毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(10毫克)加入，其後將0.5毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌1小時。完成後，將反應混合物通過賽力特矽藻土墊中過濾，再將濾液於真空下濃縮。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至10%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，即合成黃色固狀之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-{(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-羥基-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基}-L-丙胺醯胺264(821毫克，89%)。LC-MS(方案B)：m/z 981[M+H]+，滯留時間=2.16分鐘。
步驟3：將四氯化碳(2.04毫升，21.0毫莫耳)加至正攪拌之264(650毫克，0.66毫莫耳)之10毫升四氫呋喃及10毫升乙醯氰(AcCN)溶液中，其後將N,N-二異丙基乙胺(Hunig’s base，1.12毫升，6.45毫莫耳)、亞磷酸二苄酯(694毫克，2.65毫莫耳)及4-二甲胺基吡啶(催化量)加入。令反應於室溫攪拌20分鐘。將反應濃縮成粗製玻璃狀物。將粗製反應混合物藉矽膠層析(梯度：0%至10%甲 醇之二氯甲烷液)予以純化，即得白色玻璃狀之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-[(1S)-3-[(3-{[(1S)-5-{[雙(苄氧基)磷醯基]氧基}-1-(氯甲基)-8-甲基-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1.]戊-1-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]-L-丙胺醯胺265(502毫克，66%)。LC-MS(方案B)：m/z 1243[M+H]+，滯留時間=2.46分鐘。
步驟4：將正攪拌之264(100毫克，0.932毫莫耳)之7毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(10毫克)加入，其後將0.5毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌1小時。完成後，將反應混合物通過賽力特矽藻土墊中過濾，再將濾液於真空下濃縮。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%至10%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，即得黃色固狀之L-纈胺醯基-N-{(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-8-甲基-5-(膦醯氧基)-1,6-二氫吡咯並[3,2-e]吲哚-3(2H)-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基}-L-丙胺醯胺265(25毫克，18%)。LC-MS(方案B)：m/z 839[M+H]+，滯留時間=1.54分鐘。
步驟5：將5毫升無水二氯甲烷加至備有攪拌棒及6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸五氟苯酯(18毫克，0.046毫莫耳)之圓底燒瓶中，再將系統以氮吹洗。將265(40毫克，0.046毫莫耳)及三乙胺(0.05毫升)加至此溶液中。讓系統攪拌1小時。將反應於真空下濃縮，再純 化，即得267(20%9毫克方法N)，滯留時間=15.462分鐘。LC-MS(方案B)：m/z 1032[M+H]+，滯留時間=1.55分鐘。1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)δ 11.34(s，1H)，9.89(s，1H)，8.43(s，1H)，8.20(d，J=6.8Hz，2H)，7.91(dd，J=14.4，8.4Hz，3H)，7.85-7.74(m，2H)，7.49(t，J=7.7Hz，1H)，7.35(t，J=7.8Hz，1H)，6.96(d，J=25.4Hz，4H)，4.52(t，J=7.1Hz，1H)，4.37(dq，J=22.0，10.7Hz，4H)，4.18(dt，J=19.7，8.5Hz，2H)，4.07-3.85(m，4H)，3.58(t，J=9.8Hz，1H)，3.43-3.12(m，34H)，2.71(d，J=8.2Hz，1H)，2.62-2.37(m，49H)，2.28(s，3H)，2.09(qt，J=14.0，7.1Hz，3H)，1.98-1.86(m，1H)，1.39(dt，J=22.2，7.2Hz，11H)，1.22-1.05(m，6H)，0.78(dd，J=9.7，6.7Hz，10H)。
N-[6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基]-L-纈胺醯基-N-{(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基}-L-丙胺醯胺270之製備
步驟1：將226(214毫克，0.36毫莫耳)置於二氯甲烷(2毫升)中，再將三氟乙酸(0.5毫升)加入，脫保護完成後，將溶劑移出。將草醯氯(0.024毫升，0.26毫莫耳)加至含262(200毫克，0.26毫莫耳)之5毫升二氯甲烷液的已以氮吹洗之圓底燒瓶中。將1滴N,N-二甲基甲醯胺加至此溶液中，再將系統攪拌3小時。將反應藉真空濃縮。將殘留物置於二氯甲烷中，再加至含脫保護226之15毫升二氯甲烷液及三乙胺(0.144毫升)之圓底燒瓶中。將反應於室溫攪拌2小時。將粗製反應混合物藉真空濃縮，再置於25毫升二氯甲烷中，再轉移至分液漏斗。將有機層以1M氫氯酸(3x)、水(3x)、及鹽水(2x)清洗。將有機層於硫酸鈉上乾燥，過濾及將濾液濃縮成粗製固狀物。將粗製產物藉矽膠層析(梯度：0%-10%甲醇之二氯甲烷液)予以純化，即得黃色固狀之N-[(9H-茀-9-基甲氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-[(1S)-3-[(3-{[(1S)-5-{[雙(苄氧基)磷醯基]氧基}-1-(氯甲基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基]- L-丙胺醯胺268(75毫克，23%)。LC-MS(方案B)：m/z 1238[M+H]+，滯留時間=2.53分鐘。
步驟2：將正攪拌之268(75毫克，0.061毫莫耳)之5毫升四氫呋喃溶液於氮下使用冰浴冷卻至0℃。然後將10重量%鈀/活性碳(5毫克)加入，其後將0.5毫升25%甲酸銨之水液徐緩地逐滴加入。令反應於0℃攪拌3小時。完成後，將反應混合物通過賽力特矽藻土墊中過濾，再將濾液於真空下濃縮。將粗製產物置於乙酸乙酯中，再將固狀物過濾，即得淡黃色固狀之L-纈胺醯基-N-{(1S)-1-(氯甲基)-3-[(3-{[(1S)-1-(氯甲基)-5-(膦醯氧基)-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-基]羰基}雙環[1.1.1]戊-1-基)羰基]-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基}-L-丙胺醯胺269(20毫克，30%)。LC-MS(方案B)：m/z 838[M+H]+，滯留時間=1.27分鐘。
步驟3：將5毫升無水二氯甲烷加至備有攪拌棒及6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己酸五氟苯酯(9.0毫克，0.024毫莫耳)之圓底燒瓶中，再將系統以氮吹洗。將269(20毫克，0.024毫莫耳)及三乙胺(.05毫升)加至此溶液中。讓系統攪拌1小時。將反應於真空下濃縮，再藉HPLC方法N予以純化，即得270(5毫克，20%)滯留時間=10.734分鐘。LC-MS(方案B)：m/z 1031[M+H]+，滯留時間=1.54分鐘。
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(((S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-(((2-((((4-((23S,26S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯 -1-基)-23-異丙基-21,24-二側氧基-26-(3-脲基丙基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜-22,25-二氮雜二十七烷-27-醯胺基)苄基)氧基)羰基)(甲基)胺基)乙基)(甲基)胺基甲醯基)氧基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-羧酸278之製備.
步驟1：將(1S)-1-(氯甲基)-5-羥基-1,2-二氫-3H-苯並[e]吲哚-3-羧酸三級丁酯3(683毫克，2.05毫莫耳)溶於二氯甲烷(70毫升)中，將4埃分子篩(4Å MS，3.8克，粉末，<5微米，活化)加入，再將混合物於室溫攪拌30分鐘。將α-D-葡萄糖醛酸甲酯2,3,4-三乙酸鹽1-2,2,2-三氯乙亞胺酸鹽271(1178毫克，2.45毫莫耳)加至反應混合物中，再冷卻至-15℃。將三氟化硼．***(BF3．Et2O，0.13毫升，1.02毫莫耳)之二氯甲烷(10毫升)溶液徐緩加入， 再將反應混合物於低於-20℃攪拌1小時。將三氟化硼．***(BF3．Et2O，0.76毫升，6毫莫耳)之二氯甲烷(10毫升)溶液加至混合物中以移除Boc基，再令反應混合物加溫至室溫2小時。將混合物通過賽力特矽藻土墊中過濾，且將濾液濃縮以得綠色泡沫狀物(黏)。將4M氫氯酸(2毫升)加入，且再度濃縮，即得綠色泡沫狀之粗製產物272，1130毫克(94%)，其係用於下一步驟中而不必進一步純化。
步驟2：將噻吩二酸之單三級丁酯187(189毫克，0.83毫莫耳)溶於四氫呋喃(10毫升)中，冷卻至0℃，再將草醯氯(2M之二氯甲烷液，0.8毫升，1.6毫莫耳)其後N,N-二甲基甲醯胺(2滴)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。於真空中濃縮以得灰白色固狀之相應醯基氯。將上述固狀物與272(246毫克，0.42毫莫耳)混合，再與四氫呋喃(10毫升)於0℃處理，其後將三乙胺(0.29毫升，2毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，再於室溫攪拌30分鐘。將混合物濃縮，再將殘留物藉於矽膠中使用乙酸乙酯/庚烷(EA/Hep，50/50)進行管柱層析予以純化，即得黃色固狀物273(302毫克，90%)LC-MS：760.1。
步驟3：將273(790毫克，1.04毫莫耳)以三氟乙酸(2毫升)及二氯甲烷(4毫升)於室溫處理1小時。濃縮以得黃色固狀物。將此固狀物溶於四氫呋喃(10毫升)中，冷卻至0℃，將草醯氯(2M之二氯甲烷液，1毫升，2毫莫耳)其後N,N-二甲基甲醯胺(1滴)加入。將混合物於0℃攪拌5 分鐘，然後於室溫攪拌1小時。濃縮以得黃色固狀之醯基氯。將3(118毫克，1.56毫莫耳)以4M氫氯酸(4毫升)處理1小時。於真空中濃縮以得綠色固狀之脫Boc化合物。將其溶於四氫呋喃(10毫升)中，於0℃將上述醯基氯之四氫呋喃(10毫升)溶液加入，其後將三乙胺(0.58毫升，4.16毫莫耳)加入，再將混合物於室溫攪拌30分鐘。將混合物以乙酸乙酯稀釋，以水及鹽水清洗，於硫酸鎂上乾燥。將其於真空中濃縮，再將殘留物以甲醇處理，將所得固狀物藉過濾法收集，即得黃色固狀產物274(668毫克，70%)。LC-MS：919.1。
步驟4：將274(576毫克，0.63毫莫耳)溶於四氫呋喃(20毫升)中，冷卻至0℃，將氯甲酸對硝苯酯(263毫克，1.26毫莫耳)之二氯甲烷(2毫升)溶液其後三乙胺(0.52毫升，3.76毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌2小時。LC-MS顯示碳酸酯完全形成。將213(354毫克，1.88毫莫耳)之四氫呋喃(2毫升)液加至上述混合物中，再於室溫攪拌30分鐘。將混合物以乙酸乙酯稀釋，以水及鹽水清洗，再於硫酸鎂上乾燥。於真空中濃縮以得固狀殘留物，將其以甲醇處理以形成沈澱物。將所得固狀物藉過濾法收集，即得黃色固狀產物275(550毫克，77%)。
步驟5：將275(550毫克，0.48毫莫耳)溶於四氫呋喃/甲醇(1/1，10毫升)中，冷卻至0℃，將氫氧化鋰單水合物(LiOHH2O，206毫克，4.8毫莫耳)之水(3毫升)溶液加 入，再將混合物於0℃攪拌1小時。將乙酸(300毫克)加入以將上述溶液中和，於真空中濃縮。將殘留物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀產物276(243毫克，50%)。
步驟6：將276(50毫克，0.05毫莫耳)以預冷卻之三氟乙酸(2毫升)於0℃處理5分鐘，再於真空中濃縮以得黃色固狀之脫Boc化合物。將上述固狀物溶於N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，將277(48毫克，0.05毫莫耳)其後二甲基吡啶(0.035毫升，0.3毫莫耳)、N,N-二異丙基乙胺(0.052毫升，0.3毫莫耳)，及HOAt(7毫克，0.05毫莫耳)加入。將混合物於30℃攪拌7小時。將粗製物進行Gislon HPLC(0.02%三氟乙酸)，即得黃色固狀產物278(39毫克，45%)。LC-MS：1715.8/1737.8(於Larry為1.71分鐘)；1713.7(-)。
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(((S)-3-(5-((S)-5-(((2-((((4-((S)-2-((S)-2-((S)-2-乙醯胺基-6-胺基己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基)氧基)羰基)(甲基)胺基)乙基)(甲基)胺基甲醯基)氧基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-羧酸280之製備
將276以三氟乙酸(2毫升)於0℃處理1小時。將其於真空中濃縮。將其溶於N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，將279(59毫克，0.07毫莫耳)，其後二甲基吡啶(0.033毫升，0.29毫莫耳)、N,N-二異丙基乙胺(0.051毫升，0.29毫莫耳)及HOAt(7毫克，0.05毫莫耳)加入。將混合物於30℃攪拌4小時。濃縮，再將殘留物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化以得黃色固狀產物48毫克(62%)。將其以預冷卻之三氟乙酸(1.5毫升)處理5分鐘，然後於真空中濃縮以得粗製黃色固狀物。將粗製物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，凍乾後，即得黃色粉狀產物280(21毫克，43%)。LC-MS：1470.6。
(4-((23S,26S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-23-異丙基-21,24-二側氧基-26-(3-脲基丙基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜-22,25-二氮雜二十七烷-27-醯胺基)苄基)乙-1,2-二基雙(甲基胺基甲酸)(S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-(((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰 基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-酯之製備
步驟1：將3(775毫克，2.3毫莫耳)溶於二氯甲烷(80毫升)中，將4埃分子篩(4Å MS，6.2克，粉末，<5微米，活化)加入，再將混合物於室溫攪拌30分鐘。將α-D-半乳吡喃糖2,3,4,6-四乙酸鹽1-2,2,2-三氯乙亞胺酸鹽281(1260毫克，2.3毫莫耳)加至反應混合物中，再冷卻至-15℃。將三氟化硼．***(BF3．Et2O，0.144毫升，1.2毫莫耳)之二氯甲烷(10毫升)溶液徐緩加入，再將反應混合物於-15℃至-20℃攪拌1小時。將反應混合物通過賽力特矽藻土墊中過濾，且將濾液濃縮。將粗製物藉ISCO使用甲醇/二氯甲烷(0-20%)予以純化，即得綠色固狀產物282(1400毫克，91%)。
步驟2：將噻吩二酸之單三級丁酯187(300毫克，1.3毫莫耳)溶於四氫呋喃(10毫升)中，冷卻至0℃，再將草醯氯(2M之二氯甲烷液，1毫升，2毫莫耳)其後N,N-二甲基甲醯胺(2滴)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於 室溫攪拌1小時。於真空中濃縮以得白色固狀之相應醯基氯。將282(664毫克，1毫莫耳)以4M氫氯酸(4毫升)於室溫處理1小時。將其於真空中濃縮以得脫Boc胺綠色固狀物。將上述固狀物與四氫呋喃(10毫升)於0℃混合，將三乙胺(0.83毫升，6毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，再於室溫攪拌30分鐘。將混合物以乙酸乙酯稀釋，以水及鹽水清洗，於硫酸鎂上乾燥。於真空中濃縮，再將殘留物以甲醇處理，且再度濃縮以得固狀殘留物，將其由甲醇中予以再結晶。將所得黃色固狀物藉過濾法收集，即得黃色固狀產物283(500毫克，65%)。
步驟3：將283(200毫克，0.26毫莫耳)溶於四氫呋喃(6毫升)中，於0℃將草醯氯(0.64毫升，2M之二氯甲烷液)加入，其後N,N-二甲基甲醯胺(2滴)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌0.5小時。於真空中濃縮以得黃色固狀之相應醯基氯。將3(138毫克，0.41毫莫耳)以4M氫氯酸(1毫升之二烷液)處理2小時。於真空中濃縮以得綠色泡沫狀之脫Boc胺。將其溶於四氫呋喃(5毫升)中，於0℃將上述醯基氯之四氫呋喃(5毫升)液加入，其後將三乙胺(0.23毫升，1.55毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時。將混合物以乙酸乙酯稀釋，以水及鹽水清洗，於硫酸鎂上乾燥。於真空中濃縮以得固狀殘留物，再其以甲醇處理，再將所得固狀物藉過濾法收集及以***清洗，以得黃色固狀產物。將濾液濃縮，再藉Gilson HPLC分離法使用乙腈/水 (0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀產物284(200毫克，83%)。
步驟4：將284(68毫克，0.073毫莫耳)溶於四氫呋喃(3毫升)中，冷卻至0℃，將氯甲酸4-硝苯酯(46毫克，0.22毫莫耳)之二氯甲烷(0.6毫升)溶液加入，其後將三乙胺(0.061毫升，0.44毫莫耳)加入。將混合物於0℃攪拌5分鐘，然後於室溫攪拌1小時以得285。將N-Boc DMEDA(55毫克，0.29毫莫耳)加至上述反應混合物中，再於室溫攪拌另1小時。於真空中濃縮，再將殘留物藉Gilson HPLC予以純化，即得黃色固狀產物286(65毫克，78%)。
步驟5：於0℃將286(10毫克，0.009毫莫耳)溶於甲醇(1毫升)中，將甲醇鈉(MeONa，0.054毫升，0.5M之甲醇液，0.027毫莫耳)加入，再將混合物於0℃攪拌5分鐘。將混合物以乙酸(0.4毫升，0.1M之甲醇液)中和，再於真空中濃縮以得黃色固狀產物。將其以預冷卻之三氟乙酸(0.8毫升)處理2分鐘，再於真空中濃縮，即得黃色固狀之脫Boc化合物287(8.3毫克，90%)。
步驟6：將287(8.3毫克，0.008毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1毫升)中，將Malc-Peg6C2ValCitPABC(9.6毫克，0.01毫升)其後二甲基吡啶(0.004毫升)、N,N-二異丙基乙胺(0.006毫升)及HOAt(1.1毫克，0.008毫莫耳)加入。將混合物於室溫攪拌4小時。將粗製物藉Gilson HPLC(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀產物288(4毫克，30%)。1H NMR(400MHz，METHANOL-d4)δ= 8.42(d，J=8.2Hz，1H)，8.15(d，J=7.4Hz，1H)，7.95(d，J=8.2Hz，1H)，7.91(d，J=8.2Hz，1H)，7.84(d，J=8.6Hz，1H)，7.80-7.66(m，2H)，7.63-7.48(m，4H)，7.43(br.s.，3H)，7.23(d，J=7.8Hz，1H)，6.81(s，2H)，5.26-5.12(m，2H)，5.09(d，J=8.6Hz，1H)，4.71-4.54(m，4H)，4.49(br.s.，1H)，4.33-4.15(m，3H)，4.10-3.95(m，4H)，3.93-3.77(m，6H)，3.77-3.64(m，8H)，3.64-3.54(m，24H)，3.51(br.s.，1H)，3.23-3.03(m，5H)，3.03-2.95(m，2H)，2.60-2.51(m，2H)，2.13(d，J=7.0Hz，1H)，1.90(br.s.，1H)，1.72(br.s.，1H)，1.57(br.s.，2H)，0.99(t，J=6.4Hz，6H)。LC-MS：1702.3/829.9/748.7。
((S)-1-(氯甲基)-3-(5-((S)-1-(氯甲基)-5-(((2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-3-羰基)噻吩-2-羰基)-2,3-二氫-1H-苯並[e]吲哚-5-基)乙-1,2-二基雙(甲基胺基甲酸)4-((23S,26S)-1-胺基-23-異丙基-21,24-二側氧基-26-(3-脲基丙基)-3,6,9,12,15,18-六氧雜-22,25-二氮雜二十七烷-27-醯胺基)苄酯289之製備
步驟1：將BocValCitPABC 287(30.9毫克，0.048毫莫耳)加至286(32毫克，0.032毫莫耳)之N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)溶液中，其後將二甲基吡啶(0.015毫升)、N,N-二異丙基乙胺(0.022毫升)及HOAt(4.4毫克)加入。將混合物於室溫攪拌5小時。將粗製物接受Gilson HPLC分離(0.02%三氟乙酸)，即得黃色固狀產物288(32毫克，72%)。
步驟2：將288(16毫克，0.012毫莫耳)以預冷卻之三氟乙酸(1毫升)處理5分鐘，再於真空中濃縮以得黃色固狀之脫Boc化合物。將上述固狀物溶於N,N-二甲基甲醯胺(0.5毫升)中，將N,N-二異丙基乙胺(0.013毫升)加入，其後將206(12毫克，0.016毫莫耳)之二氯甲烷(0.1毫升)溶液加入。將混合物於室溫攪拌1小時。將哌啶(0.2毫升)加至上述溶液中，再攪拌30分鐘。於真空中濃縮，將殘留物藉Gilson HPLC使用乙腈/水(0.02%三氟乙酸)予以純化，即得黃色固狀之產物289(8毫克，40%)。1H NMR (400MHz，DMSO-d6)δ=9.89(br.s.，1H)，8.35-8.21(m，1H)，8.15-8.00(m，2H)，7.96(d，J=7.8Hz，1H)，7.91-7.84(m，1H)，7.84-7.72(m，4H)，7.63(br.s.，2H)，7.58-7.50(m，3H)，7.50-7.44(m，2H)，7.40(d，J=6.2Hz，2H)，7.18(br.s.，2H)，5.90(br.s.，1H)，5.06-4.90(m，2H)，4.87(d，J=7.4Hz，1H)，4.83-4.68(m，2H)，4.42(t，J=12.3Hz，2H)，4.32(br.s.，2H)，4.23(br.s.，1H)，4.19-4.11(m，1H)，4.10-3.95(m，3H)，3.95-3.80(m，2H)，3.77-3.62(m，3H)，3.60-3.46(m，15H)，3.15(br.s.，2H)，3.06(br.s.，1H)，2.89(d，J=5.1Hz，3H)，2.92(d，J=5.1Hz，3H)，2.86-2.74(m，3H)，2.35-2.21(m，1H)，1.96-1.82(m，1H)，1.61(br.s.，1H)，1.52(br.s.，1H)，1.43-1.21(m，2H)，0.76(d，J=6.6Hz，3H)，0.79(d，J=6.2Hz，3H)；1622.2[M+H]+。
本發明進一步提供表5A及5B中所述之化合物
用於分析之HPLC及LC-MS條件
方案A：管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3，2.1毫米x 50毫米，C18，1.7微米；流動相A：0.1%甲酸之水液(v/v)；流動相B：0.1%甲酸之乙腈液(v/v)；梯度：於0.1分鐘期間5% B，於0.9分鐘期間5%至95% B，於0.1分鐘期間95% B；流速：1.25毫升/分鐘。溫度：60℃；偵檢：200-450奈米；MS(+)範圍100-2000道耳頓；注入量：5微升；儀器：Waters Acquity。
方案B：管柱：Waters Acquity UPLC HSS T3，2.1毫米x 50毫米，C18，1.7微米；流動相A：0.1%甲酸之水液(v/v)；流動相B：0.1%甲酸之乙腈液(v/v)；梯度：於 0.1分鐘期間5% B，於2.5分鐘期間5%至95% B，於0.35分鐘期間95% B；流速：1.25毫升/分鐘。溫度：60℃；偵檢：200-450奈米；MS(+)範圍100-2000道耳頓；注入量：5微升；儀器：Waters Acquity。
方案C：管柱：Phenomenex Luna C18(2)，150 x 3.0毫米，5微米；流動相A：0.1%甲酸之水液(v/v)；流動相B：0.1%甲酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間50% B，於6.5分鐘期間50%至100% B，然後於3分鐘期間100% B；流速：0.75毫升/分鐘。溫度：45℃；偵檢：DAD 215奈米，254奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；注入量：10微升；儀器：Agilent 1200 LCMS。
方案D：管柱：Phenomenex Luna C18 PFP(2)，150 x 3.0毫米，5微米；流動相A：0.1%甲酸之水液(v/v)；流動相B：0.1%甲酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間0%至5% B，於8.5分鐘期間5%至100% B，然後於2分鐘期間100% B；流速：0.75毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 215奈米，254奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；注入量：10微升；儀器：Agilent 1200 LCMS。
方案E：管柱：Phenomenex Luna C18 PFP(2)，150 x 3.0毫米，5微米；流動相A：0.1%甲酸之水液(v/v)；流動相B：0.1%甲酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間5% B，於8.5分鐘期間5%至100% B，然後於2分鐘期間100% B；流速：0.75毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 215奈米，254奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓； 注入量：10微升；儀器：Agilent 1200 LCMS。
方案F：管柱：Xtimate C18，30 x 2.1毫米，3微米；流動相A：0.037%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.037%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於0.1分鐘期間10% B，於3分鐘期間10%至80% B，然後於0.1分鐘期間80%B；流速：1.5毫升/分鐘。溫度：40℃；偵檢：DAD 220奈米；MS(+)範圍100-1000道耳頓；注入量：3微升；儀器：Shimadzu。
方案G：管柱：Xtimate C18，30 x 2.1毫米，3微米；流動相A：0.037%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.037%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於0.1分鐘期間10% B，於3分鐘期間10%至80% B，然後於0.1分鐘期間80%B；流速：1.5毫升/分鐘。溫度：40℃；偵檢：DAD 220奈米；MS(+)範圍100-1000道耳頓；注入量：3微升；儀器：Shimadzu。
方案H：管柱：Xtimate C18，30 x 2.1毫米，3微米；流動相A：0.037%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.037%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於0.1分鐘期間0% B，於2分鐘期間0%至60% B，然後於0.1分鐘期間60% B；流速：1.5毫升/分鐘。溫度：40℃；偵檢：DAD 220奈米；MS(+)範圍100-1000道耳頓；注入量：2微升；儀器：Shimadzu。
用於純化之HPLC條件
方法A：管柱：Phenomenex Luna C18(2)，150 x 21.2毫米，5微米；流動相A：0.02%甲酸之水液；流動相B：0.02%甲酸之乙腈液；梯度：於1.5分鐘期間40% B，於8.5分鐘期間40%至100% B，於0.5分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘。偵檢：DAD 215奈米，254奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：Waters FractionLynx。
方法B：管柱：Phenomenex Luna PFP(2)，150 x 21.2毫米，5微米；流動相A：0.02%甲酸之水液；流動相B：0.02%甲酸之乙腈液；梯度：於1.5分鐘期間30% B，於8.5分鐘期間30%至60% B，於0.5分鐘期間60% B至100% B，於2分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘。偵檢：DAD 215奈米，254奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：Waters FractionLynx。
方法C：管柱：Phenomenex Synergi Polar RP，150 x 21.2毫米，4微米；流動相A：0.02%甲酸之水液；流動相B：0.02%甲酸之乙腈液；梯度：於1.5分鐘期間20% B，於8.5分鐘期間20%至50% B，於0.5分鐘期間50% B至100% B，於2分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘。偵檢：DAD 210-360奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：Waters FractionLynx。
方法D：管柱：Xtimate C18,30 x 2.1毫米，3微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間25% B，於 25分鐘期間25%至50% B，然後於5.0分鐘期間100% B；流速：90毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 220奈米；MS(+)範圍100-1000道耳頓；儀器：Shimadzu。
方法E：管柱：LUNA C18,250 x 50毫米，10微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間25% B，於25分鐘期間25%至55% B，然後於5.0分鐘期間100% B；流速：90毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 220奈米；MS(+)範圍100-1000道耳頓；儀器：Shimadzu。
方法F：管柱：Phenomenex Luna C18(2)，250 x 50毫米，10微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於30分鐘期間35%至65% B，然後於5.0分鐘期間100% B；流速：90毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 220奈米；MS(+)範圍100-1000道耳頓；儀器：Shimadzu。
方法G：管柱：Phenomenex Luna C18(2)，250 x 50毫米，10微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間10% B，於8.5分鐘期間10% B至55% B，於0.5分鐘期間55% B至100% B，然後保持於100% B1.5分鐘；流速：27毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 210-360奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：305 RP Waters Fractional Lynx LCMS。
方法H：管柱：Phenomenex Luna C18(2)，150 x 21.2 毫米，5微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間10% B，於8.5分鐘期間10% B至75% B，然後於2.0分鐘期間75% B至100% B；流速：27毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 210-360奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：305 RP Waters Fractional Lynx LCMS。
方法H1：管柱：Phenomenex Luna C18(2)，150 x 21.2毫米，5微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間1% B，於8.5分鐘期間1% B至100% B，然後於2.0分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘。溫度：未控制；偵檢：DAD 210-360奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：305 RP Waters Fractional Lynx LCMS。
方法I1：管柱：Phenomenex Luna PFP(2)，150 x 21.2毫米，5微米；流動相A：0.02%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.02%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間40% B，於8.5分鐘期間40% B至100% B，然後於2.0分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘；偵檢：DAD 215奈米，254奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：305 Waters FractionLynx LCMS。
方法I2：管柱：Phenomenex Luna PFP(2)，150 x 21.2毫米，5微米；流動相A：0.02%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.02%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間1% B，於8.5分鐘期間1% B至100% B，然後 於2.0分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘；偵檢：DAD 215奈米，254奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：305 Waters FractionLynx LCMS。
方法J1：管柱：Phenomenex Synergi Polar RP，150 x 21.2毫米，4微米；流動相A：0.02%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.02%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間10% B，於8.5分鐘期間10% B至75% B，於0.5分鐘期間75% B至100% B，然後於2分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘；偵檢：DAD 210-360奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：Waters FractionLynx。
方法K1：管柱：Phenomenex Luna C18(2),250 x 50毫米，10微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間1% B，於8.5分鐘期間1% B至75% B，於0.5分鐘期間75% B至100% B，然後保持於100% B1.5分鐘；流速：27毫升/分鐘；溫度：未控制；偵檢：DAD 210-360奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：305 RP Waters Fractional Lynx LCMS。
方法L1：管柱：ChiralTech AD-H,500 X 21.5毫米，5微米；流動相A：二氧化碳(v/v)；流動相B：甲醇(v/v)；梯度：等位(Iscocractic)條件60%二氧化碳，40%甲醇；流速：36毫升/分鐘二氧化碳，24毫升/分鐘甲醇。背壓100巴；偵檢：DAD 210；儀器：Thar 80(Waters)。
方法M：管柱：Phenomenex Synergi，250 x 50毫 米，10微米；流動相A：0.1%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.1%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於30分鐘期間40% B至70% B，然後於5.0分鐘期間95% B；流速：80毫升/分鐘；偵檢：DAD 220，254奈米；MS(+)範圍100-1000道耳頓；儀器：Shimadzu LC-20AP。
方法N：管柱：Phenomenex Luna Phenylhexyl 150 x 21.2毫米，5微米；流動相A：0.2%三氟乙酸之水液(v/v)；流動相B：0.2%三氟乙酸之乙腈液(v/v)；梯度：於1.5分鐘期間35% B，於18.5分鐘期間35% B至100% B，然後於2.0分鐘期間100% B；流速：27毫升/分鐘；溫度：未控制；偵檢：DAD 210-360奈米；MS(+)範圍150-2000道耳頓；儀器：305 RP Waters Fractional Lynx LCMS。
抗體藥物共軛體之範例
方案A：用於將抗體與連接子-酬載經由內部二硫共軛之一般步驟。
IL13Rα2-AB08-v1.0/1.0-人類IgG1抗體[Pfizer，12-13毫克/毫升於達貝爾克氏磷酸鹽緩衝鹽水(Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline,DPBS,Lonza,pH 7.4)]中之溶液或VEGFR-1121B-人類IgG1抗體[Pfizer，19.3毫克/毫升於達貝爾克氏磷酸鹽緩衝鹽水(Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline,DPBS,Lonza,pH 7.4)]中之溶液經由加入2.9-3當量參(2-羧乙基)膦氫氯酸鹽(TCEP，5mM之DPBS 溶液)還原。將反應於37℃培育1-1.25小時，然後令其冷卻至周圍溫度。共軛反應係藉加入7當量連接子-酬載[10mM之N,N-二甲基乙醯胺(DMA)溶液]進行。將另外之N,N-二甲基乙醯胺(DMA)加至反應混合物中以於最終反應混合物中達到10-15%(v/v)總有機溶劑組份。將反應於周圍溫度培育1小時。在抗體藥物共軛體1-5(ADC 1-5)方面，於周圍溫度1小時後，經由加入10當量半胱胺酸(20mM之DPBS溶液)將過量之連接子-酬載之反應中止。將中止反應之反應混合物於周圍溫度陳化15分鐘，然後於4℃貯存直至純化為止。在抗體藥物共軛體6-14(ADC 6-14)方面，於周圍溫度1小時後，經由GE Sephadex膠脫鹽管柱及DPBS(pH7.4)洗提液將反應混合物脫鹽，然後於4℃貯存直至純化為止。將粗製材料藉粒徑排阻層析法(SEC)使用含GE Superdex 200(10/300 GL)管柱及DPBS(pH7.4)洗提液之GE AKTA Explorer系統予以純化。
方案B：管柱：Agilent Poroshell 300SB-C8，75 x 2.1毫米，2.6微米；流動相A：0.1%甲酸之水液(v/v)；流動相B：0.1%甲酸之乙腈液(v/v)；梯度：起始條件：於4分鐘期間20% B至45% B；流速：1.0毫升/分鐘。溫度：60℃；偵檢：220奈米；MS(+)範圍400-2000道耳頓；注入量：10微升；儀器：Agilent 1100LC,Waters Micro質量ZQ MS。反摺積係使用MaxEnt1進行。
方案C：管柱：GE Superdex 200(5/150 GL)；流動相：含2%乙腈之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS，1X，pH 7.4)；等 位；流速：0.25毫升/分鐘。溫度：室溫；注入量：10微升；儀器：Agilent 1100 HPLC。
方案D：轉麩醯胺酸酶ADC’s之製備，以連接子酬載AcLys-vc-MMAD為例(“Location matters：site of conjugation modulates stability and pharmacokinetics of antibody drug conjugates”,Chem Biol.2013,20,161-7)。在C16-HC及C16-LC共軛至AcLys-vcMMAD方面，將抗體於含25mM Tris-HCl(pH 8.0)及150mM氯化鈉之緩衝液中調整至5毫克/毫升。將AcLys-vc-MMAD以超過抗體之5倍(C16-HC)或10倍(C16-LC)之莫耳過量加入，且酵素反應係藉加入1%(w/v)(C16-HC)或2%(w/v)(C16-LC)細菌轉麩醯胺酸酶(Ajinomoto Activa TI,Japan)開始。邊和緩搖動邊於22℃(C16-HC)或37℃(C16-LC)培育16小時後，將抗體藥物共軛體(ADC)使用MabSelect SuRe(GE Healthcare,Inc)使用標準步驟予以純化。
本發明進一步提供表6A及6B中所述之化合物。
上表中，“X及Y”意指抗體。例示之抗體藥物共軛體(ADC)共軛至以X表示之IL13抗體(IL13Rα2-AB08-v1.0/1.0-人類IgG1抗體)及以Y表示之VEGF抗體VEGFR-1121B-hG1。
上表中，“X及Y”意指抗體。例示之抗體藥物共軛體(ADC)共軛至以X表示之IL13抗體(IL13Rα2-AB08-v1.0/1.0-人類IgG1抗體)及以Y表示之VEGF抗體VEGFR-1121B-hG1。
例示抗體藥物共軛體(ADC)-分析數據
用於酬載及抗體藥物共軛體之生物評估的實驗步驟
細胞株
癌細胞株得自ATCC(Manassas,VA)。N87(衍生自轉移肝部位之人類胃癌瘤)、HL60(白血病)、A375(黑色素瘤)及HUVEC(人類臍靜脈內皮細胞)於RPMI 1640培養基中生長。所有培養基均補充10%胎牛血清、1%丙酮酸鈉、及1%L-麩醯胺酸(Invitrogen,Grand Island,NY)。人類臍靜脈內皮細胞(HUVEC)得自Lonza(Allendale,NJ)且保持於補充EGM-2 SingleQuots(Lonza # CC-4176)之EGM2培養基中。所有細胞均保持於加濕培育箱(37℃，5%二氧化碳)中。
用於酬載之細胞毒性分析步驟
將於100微升培養基中之細胞於96孔式盤中培養。將癌細胞株以指定之化合物藉將50微升3X儲液一式兩份地以10種濃度加入進行處理。將細胞與化合物培育培育四天，然後將30微升CellTiter® 96 AQueous One MTS溶液(Promega Cat # G3582)加至細胞中，於37℃培育1.5小時，然後於490nm於Victor讀盤儀(Victor plate reader, Perkin Elmer,Wa1tham,MA)上測量吸光度。相對細胞存活率係以佔未經處理對照孔之百分比測出。IC50值係使用四參數邏輯模型#203與XLfit v4.2(IDBS,Guildford,Surry,UK)計算出。
用於抗體藥物共軛體(ADC)之細胞毒性分析步驟
第0天：將於100微升完全培養基中之細胞接種於96孔式透明平底黑盤中，且培養過夜(O/N)。第1天：將50微升3X滴定之測試化合物加入使最終量達150微升，再於37℃、5%二氧化碳培養72小時。第4天：將50微升Cell TiterGlo加至所有孔中，渦動20-30分鐘，以Victor 3於冷光程式下讀數。數據分析：活存率%以100X(每一數據點讀數-背景平均值)僅細胞之對照組平均值-背景平均值計算出。
下表提供本發明選出之酬載之IC50。
下表提供本發明選出之抗體藥物共軛體(ADC)之IC50。
下列圖式以一個連接子型式為例，闡述抗體藥物共軛體(ADC)於投予患者後及連接子由ADC中裂解後，酬載如何地釋出。各種物類於連接子釋放後形成，其於生物媒介中交互轉化。所有形成之物類均請求為本發明之部分，且均有關於通式F1-L1-T-L2-F2。

Claims (32)

  1. 一種式(I)化合物，F 1 -L 1 -T-L 2 -F 2 (I)或其醫藥上可接受之鹽，其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
    Figure TWI654998B_C0001
    Figure TWI654998B_C0002
    Figure TWI654998B_C0003
    Figure TWI654998B_C0004
    於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸根、硫異氰酸根、或
    Figure TWI654998B_C0005
    ；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C6烷基-RA、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、及-C1-C8烷基且其中該-C1-C8烷基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地為直接鍵；T選自：其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：R，-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0006
    其中X1各自獨立地為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中R1及R2各自獨立地為RE，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基隨意地經-RE、-C(O)RE、-C(O)ORE、-N(RE)2、-N(R)C(O)RE或-N(R)C(O)ORE取代，且D額外地隨意地經1至2個R取代。
  2. 一種式(IIA)化合物，L-P (IIA)或其醫藥上可接受之鹽，其中：P為：F 1 -L 1 -T-L 2 -F 2 其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
    Figure TWI654998B_C0007
    Figure TWI654998B_C0008
    Figure TWI654998B_C0009
    Figure TWI654998B_C0010
    於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地選自-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸根、硫異氰酸根、或
    Figure TWI654998B_C0011
    ；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自鍵、H、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-P(O)(ORA)2，其中RA各自獨立地選自H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C1-C20烷基N(R)2、-C1-C20伸烷基、-C1-C8伸雜烷基、-C6-C14伸芳基、伸芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)-、及RF，其中該RA隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代，且其中一個Y為二價且鍵結至L，RF為-N(R6)QN(R5)C(O)-且於鄰近N(R5)之羰基鍵結至L，其中R5及R6各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，或者R5或R6與Q上之經取代碳連接形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環，或者R5及R6連接一起以形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環系統，且其中Q為-C1-C8伸烷基-、-C1-C8伸雜烷基-、-C6-C14伸芳基-、-伸芳烷基-、-C1-C10雜環基-或-C3-C8碳環基-，且其中Q、R5及R6各自獨立地隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、及-C1-C8烷基且其中該-C1-C8烷基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地為直接鍵；T選自：其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：R，-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0012
    其中X1各自獨立地為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中R1及R2各自獨立地為RE，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基隨意地經-RE、-C(O)RE、-C(O)ORE、-N(RE)2、-N(R)C(O)RE或-N(R)C(O)ORE取代，且D額外地隨意地經1至2個R取代；L為LA-LB-(LC)1-3，其中LA選自由以下所組成之群組：-鹵基、-N(R)2、-CON(R)2、隨意地經-NO2或-CON(R)2取代之-S-芳基、隨意地經-NO2取代之-S-雜芳基、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、
    Figure TWI654998B_C0013
    LB為LB1-LB2-LB3，其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20，其中LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、
    Figure TWI654998B_C0014
    其中XA為CR或N，XB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N，XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在；XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR且XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
  3. 一種式(IIIA)化合物，AB-(L-P) 1-20 (IIIA)或其醫藥上可接受之鹽，其中：AB為抗體；P為：F 1 -L 1 -T-L 2 -F 2 其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
    Figure TWI654998B_C0015
    Figure TWI654998B_C0016
    Figure TWI654998B_C0017
    Figure TWI654998B_C0018
    於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地選自-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸根、硫異氰酸根、或
    Figure TWI654998B_C0019
    ；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自鍵、H、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-P(O)(ORA)2，其中RA各自獨立地選自H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C1-C20烷基N(R)2、-C1-C20伸烷基、-C1-C8伸雜烷基、-C6-C14伸芳基、伸芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)-、及RF，其中該RA隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代，且其中一個Y為二價且鍵結至L，RF為-N(R6)QN(R5)C(O)-且於鄰近N(R5)之羰基鍵結至L，其中R5及R6各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基及-C3-C8碳環基，或者R5或R6與Q上之經取代碳連接形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環，或者R5及R6連接一起以形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環系統，且其中Q為-C1-C8伸烷基-、-C1-C8伸雜烷基-、-C6-C14伸芳基-、-伸芳烷基-、-C1-C10雜環基-或-C3-C8碳環基-，且其中Q、R5及R6各自獨立地隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、及-C1-C8烷基，各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地為直接鍵；T選自：其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：R，-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0020
    其中X1各自獨立地為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中R1及R2各自獨立地為RE，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基隨意地經-RE、-C(O)RE、-C(O)ORE、-N(RE)2、-N(R)C(O)RE或-N(R)C(O)ORE取代，且D額外地隨意地經1至2個R取代；L為LA-LB-(LC)1-3；LA選自：鍵結至AB的鍵、-NR-(鍵結至AB)、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、
    Figure TWI654998B_C0021
    LB為LB1-LB2-LB3其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20；LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、
    Figure TWI654998B_C0022
    其中XA為CR或N，XB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N，XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在；XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR，且XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
  4. 一種式(IIB)化合物，
    Figure TWI654998B_C0023
    或其醫藥上可接受之鹽，其中：F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
    Figure TWI654998B_C0024
    Figure TWI654998B_C0025
    Figure TWI654998B_C0026
    Figure TWI654998B_C0027
    於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸根、硫異氰酸根、或
    Figure TWI654998B_C0028
    ；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C6烷基-RA、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、及-C1-C8烷基，且其中該-C1-C8烷基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地為直接鍵；T選自：-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-、其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0029
    其中X1各自獨立地為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中R1及R2各自獨立地為RE，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基經一個選自以下群組之成員取代：N(RE)C(O)-(其中羰基鍵結至L)、及-C(O)-(其中羰基鍵結至L)，且D額外地隨意地經1至2個R取代，其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L為LA-LB-(LC)1-3；LA選自-鹵基、-N(R)2、-CON(R)2、隨意地經-NO2或-CONR2取代之-S-芳基、隨意地經-NO2取代之-S-雜芳基、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、
    Figure TWI654998B_C0030
    LB為LB1-LB2-LB3其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20；LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、
    Figure TWI654998B_C0031
    其中XA為CR或N，XB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N；XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在；XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR，且XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
  5. 一種式(IIIB)化合物，
    Figure TWI654998B_C0032
    或其醫藥上可接受之鹽，其中：AB為抗體；F1及F2各自獨立地選自環系統A、B、C及D：
    Figure TWI654998B_C0033
    Figure TWI654998B_C0034
    Figure TWI654998B_C0035
    Figure TWI654998B_C0036
    於R出現之每一環系統中，R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C2-C6烯基、-C2-C6炔基、鹵基、羥基、烷氧基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-NO2、-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基，其中二或多個R隨意地連接以形成一個環或多個環，且其中該-C6-C14芳基及-C6-C14雜芳基隨意地經1至5個獨立地選自以下之取代基取代：-C1-C10烷基、-C1-C10烷氧基、-鹵基、-C1-C10烷硫基、-三氟甲基、-NH2、-NH(C1-C8烷基)、-N(C1-C8烷基)2、-C1-C10烷基-N(C1-C8烷基)2、-C1-C3烷硫基、-NO2或-C1-C10雜環基；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為鍵、O、N(R)或S；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O、N(R)或S；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為-OH、-O-醯基、疊氮基、鹵基、氰酸根、硫氰酸根、異氰酸根、硫異氰酸根、或
    Figure TWI654998B_C0037
    ；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C6烷基-RA、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；於Z出現之每一環系統中，Z各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、及-C1-C8烷基，且其中該-C1-C8烷基各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地為直接鍵；T選自：-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0038
    其中X1各自獨立地為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中R1及R2各自獨立地為RE，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基經一個選自以下群組之成員取代：N(RE)C(O)-(其中羰基鍵結至L)、及-C(O)-(其中羰基鍵結至L)，且D額外地隨意地經1至2個R取代；其中RE各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、-C1-C8雜烷基、-芳基、-芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C(O)OC1-C8烷基、-C(O)N(C1-C8烷基)2、及-C(O)-鹵基，且其中RE各自隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L為LA-LB-(LC)1-3；LA選自：鍵結至AB的鍵、-NR-(鍵結至AB)、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、
    Figure TWI654998B_C0039
    LB為LB1-LB2-LB3其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-、-N=CR-苯基-O-C1-C6烷基-C(O)-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20；LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸，LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；LC不存在或獨立地選自由以下所組成之群組：-C1-C6伸烷基-、-NRC3-C8-雜環基NR-、-NRC3-C8-碳環基NR-、-NRC1-C6烷基NR-、-NRC1-C6伸烷基-、-S-、-NR-、-NRNR-、-O(CR2)1-4S-S(CR2)1-4N(R)-、-NRC1-C6-伸烷基伸苯基NR-、-NRC1-C6伸烷基伸苯基SO2NR-、-OC1-C6烷基S-SC1-C6烷基C(COOR)NR-、-NRC(COOR)C1-C6烷基S-SC1-C6烷基O-、
    Figure TWI654998B_C0040
    其中XA為CR或N，XB為CH、CR(C(R)2)1-3NR、CR(C(R)2)1-3O、CR(C(R)2)1-3C(O)NR、CR-(C(R)2)1-3C(O)NRNR、CR(C(R)2)1-3SO2NR、CR(C(R)2)1-3NRNR、CR(C(R)2)1-3NRC(O)或N，XC各自為R，XD各自為-(CH2)1-5-，或者不存在；XE為O、S、C(R)2、C(R)(C(R)2)1-3-NR2或NR，且XF各自為(C(R)2)1-3-NR或C(R)2-(C(R)2)1-3-O。
  6. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中：R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基及-NH2；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為O或N(R)；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O或N(R)；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地為H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為鹵基；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C(O)RA、-C(O)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地為直接鍵；且T選自：-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0041
    其中X1各自為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基隨意地-NH2、-N(R)C(O)H或-N(R)C(O)OH取代。
  7. 如申請專利範圍第2至3項中任一項之化合物，其中：R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基及-NH2；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為O或N(R)；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O或N(R)；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地為H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為鹵基；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自鍵、H、-C(O)RA、-C(S)RA、-C(O)ORA、-S(O)2ORA、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、糖基、-NO2及-P(O)(ORA)2，其中RA各自獨立地選自H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C6-C14芳基、芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基、-C1-C20烷基N(R)2、-C1-C20伸烷基、-C1-C8伸雜烷基、-C6-C14伸芳基、伸芳烷基、-C1-C10雜環基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)-、及RF，其中該RA隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代，且其中一個Y為二價且鍵結至L，RF為-N(R6)QN(R5)C(O)-且於鄰近N(R5)之羰基鍵結至L，其中R5及R6各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C8烷基、及-C1-C8雜烷基，或者R5或R6與Q上之經取代碳連接形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環，或者R5及R6連接一起以形成-C1-C10雜環或-C6-C14雜芳基環系統，且其中Q為-C1-C8伸烷基-、-C6-C14伸芳基-、或-C3-C8碳環基-，且其中Q、R5及R6各自獨立地隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地選自直接鍵；且T選自：-C(A1)X1-T2-X1C(B1)-，其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0042
    其中X1各自為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基隨意地-NH2、-N(R)C(O)H或-N(R)C(O)OH取代。
  8. 如申請專利範圍第4至5項中任一項之化合物，其中：R各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基及-NH2；於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為O或N(R)；於V2出現之每一環系統中，V2各自獨立地為O或N(R)；於W1及W2出現之每一環系統中，W1及W2各自獨立地為H、或-C1-C5烷基；於X出現之每一環系統中，X各自獨立地為鹵基；於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C(O)RA、-C(O)N(RA)2、糖基、-NO2及-PO(ORA)2，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2，其中該-C1-C20烷基、-C1-C8雜烷基、-C3-C8碳環基及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代；L1及L2各自獨立地為直接鍵；且T為-C(A1)C1-T2-C1C(B1)-，其中T2為：
    Figure TWI654998B_C0043
    其中C1各自為鍵，其中A1及B1各自獨立地為=O，其中g及j各自獨立地為0至1且m為1，且其中D為-C3-C8碳環基，其中該-C3-C8碳環基隨意地-NH2、-N(R)C(O)H或-N(R)C(O)OH取代。
  9. 如申請專利範圍第2及4項中任一項之化合物，其中：LA選自由以下所組成之群組：-鹵基、-N(R)2、-CON(R)2、隨意地經-NO2或-CON(R)2取代之-S-芳基、隨意地經-NO2取代之-S-雜芳基、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、及
    Figure TWI654998B_C0044
    LB為LB1-LB2-LB3，其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20，其中LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸，且LB3為-PABA-、-PABC-或不存在；且LC不存在。
  10. 如申請專利範圍第3及5項中任一項之化合物，其中：LA選自：鍵結至AB的鍵、-NR-(鍵結至AB)、烷基-SO2-雜芳基、芳基SO2-雜芳基-、
    Figure TWI654998B_C0045
    LB為LB1-LB2-LB3，其中LB1不存在或為一或多個選自由以下所組成之群組的組份：-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NR-、-C(O)C1-C6烷基-、-C(O)NRC1-C6烷基-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C(O)C1-C6烷基NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-C(O)-、-C1-C6烷基-S-S-C1-C6烷基NRC(O)CH2-、-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)CH2-、-C(O)C1-C6烷基-NRC(O)C1-6烷基-、-C(O)-C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6NRC(O)-、-C(O)C1-C6烷基-苯基(NR-C(O)C1-C6烷基)1-4-、-C(O)C1-C6烷基(OCH2CH2)1-6-NRC(O)C1-C6烷基-、-C1-C6烷基-、-S-、-C(O)-CH(NR-C(O)C1-C6烷基)-C1-C6烷基-及(-CH2-CH2-O-)1-20，其中LB2為AA0-12，其中AA為天然胺基酸、非天然胺基酸，且LB3為-PABA-、-PABC-或者不存在；且LC不存在。
  11. 根據申請專利範圍第2或3項之化合物，其中RF選自：
    Figure TWI654998B_C0046
    其中q為1-10，且b各自獨立地為CRD、N、NRD、O或S。
  12. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中於V1出現之每一環系統中，V1各自獨立地為O；且於Y出現之每一環系統中，Y各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C(O)N(RA)2、-C(S)N(RA)2、-PO(ORA)2或糖基，其中RA各自獨立地選自由以下所組成之群組：H、-C1-C20烷基、及-C1-C20烷基N(R)2且其中該-C1-C20烷基、及-C1-C20烷基N(R)2隨意地經1至3個獨立地選自R之取代基取代。
  13. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之化合物，其中一或多個W為C1-C3烷基。
  14. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之化合物，其中一或多個X為氯基。
  15. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之化合物，其中一個Y為H或-C(O)C1-C10烷基。
  16. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之化合物，其中一或多個Z為H。
  17. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0047
    Figure TWI654998B_C0048
    Figure TWI654998B_C0049
    Figure TWI654998B_C0050
  18. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0051
  19. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0052
    Figure TWI654998B_C0053
    Figure TWI654998B_C0054
    Figure TWI654998B_C0055
    Figure TWI654998B_C0056
    Figure TWI654998B_C0057
  20. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0058
    Figure TWI654998B_C0059
  21. 一種連接子-酬載或抗體-藥物-共軛體、或其醫藥上可接受之鹽，其包含申請專利範圍第17或18項之化合物的基團。
  22. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0060
    Figure TWI654998B_C0061
    Figure TWI654998B_C0062
    Figure TWI654998B_C0063
    Figure TWI654998B_C0064
    Figure TWI654998B_C0065
    Figure TWI654998B_C0066
    Figure TWI654998B_C0067
    Figure TWI654998B_C0068
    Figure TWI654998B_C0069
    Figure TWI654998B_C0070
    Figure TWI654998B_C0071
    Figure TWI654998B_C0072
    Figure TWI654998B_C0073
    Figure TWI654998B_C0074
    Figure TWI654998B_C0075
    Figure TWI654998B_C0076
    Figure TWI654998B_C0077
    及
    Figure TWI654998B_C0078
  23. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0079
    Figure TWI654998B_C0080
    Figure TWI654998B_C0081
    Figure TWI654998B_C0082
    Figure TWI654998B_C0083
    Figure TWI654998B_C0084
    Figure TWI654998B_C0085
    Figure TWI654998B_C0086
    Figure TWI654998B_C0087
    Figure TWI654998B_C0088
    Figure TWI654998B_C0089
    Figure TWI654998B_C0090
    Figure TWI654998B_C0091
    Figure TWI654998B_C0092
    Figure TWI654998B_C0093
    Figure TWI654998B_C0094
    Figure TWI654998B_C0095
    Figure TWI654998B_C0096
    及
    Figure TWI654998B_C0097
  24. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0098
    Figure TWI654998B_C0099
    Figure TWI654998B_C0100
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    Figure TWI654998B_C0104
    Figure TWI654998B_C0105
  25. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0106
    Figure TWI654998B_C0107
    Figure TWI654998B_C0108
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    Figure TWI654998B_C0112
    Figure TWI654998B_C0113
  26. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0114
    Figure TWI654998B_C0115
    Figure TWI654998B_C0116
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    Figure TWI654998B_C0119
    其中X為IL13抗體或者Y為VEGF抗體。
  27. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0120
    Figure TWI654998B_C0121
    Figure TWI654998B_C0122
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    Figure TWI654998B_C0125
    其中X為IL13抗體或者Y為VEGF抗體。
  28. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0126
    Figure TWI654998B_C0127
    Figure TWI654998B_C0128
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    Figure TWI654998B_C0130
    Figure TWI654998B_C0131
    Figure TWI654998B_C0132
    其中X為IL13抗體或者Y為VEGF抗體。
  29. 一種化合物、或其醫藥上可接受之鹽，選自：
    Figure TWI654998B_C0133
    Figure TWI654998B_C0134
    Figure TWI654998B_C0135
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    Figure TWI654998B_C0138
    Figure TWI654998B_C0139
    其中X為IL13抗體或者Y為VEGF抗體。
  30. 一種醫藥組成物，其包含申請專利範圍第1至29項中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，及醫藥上可接受之賦形劑。
  31. 如申請專利範圍第1至29項中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽或如申請專利範圍第30項之醫藥組成物，其係用於治療癌症。
  32. 如申請專利範圍第31項之化合物或其醫藥上可接受之鹽或醫藥組成物，其中該癌症為膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、子宮內膜癌、腎癌、肺癌、食道癌、卵巢癌、攝護腺癌、胰臟癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、白血病及淋巴瘤。
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