TWI325423B - Kinase inhibitors - Google Patents

Description

1325423 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於激酶抑制劑。 【先前技術】

p38激酶為一種屬於絲胺酸/蘇胺酸激酶超家族之有絲分 裂促進劑活化的蛋白（MAP)激酶。此激酶由諸如熱、UV光 及滲透應力之細胞外應力以及由諸如脂多醣之炎性刺激活 化。當活化時，p38激酶使調控前發炎性細胞激素腫瘤壞 死因子a (TNFa)及介白素- ip(IL-ip)生物合成的細胞内蛋 白受質磷酸化。此等細胞激素包含於數種慢性炎性失調症 之病理學中（Lee等人，Ann. N.Y. Acad. Sci·, 696, 149-170 (1993) ； Muller-Ladner, Curr. Opin. Rheumatol., 8, 210-220 (1996))，心血管及中樞神經系統失調症（Salituro等人， Current Medicinal Chemistry, 6，807-823 (1999))及自體免 疫失調症（Pargellis等人，Nature Structural Biology, 9(4)， 268-272 (2002))。另外，有絲***促進劑活化的蛋白激酶-蛋白激酶2之磷酸化形式（或pMAPKAPK2)亦為p38 MAPK 路徑之激酶且可由p3 8 MAPK直接活化。MAPKAPK2之小 鼠基因剔除研究顯示細胞激素產生降低，此暗示 MAPKAPK2可為炎性反應之關鍵調控劑且亦可為抗炎性治 療之可能靶標（WO 2005120509)。 數種脲化合物（例如WO 9923091、WO 01012188、WO 04004720、WO 04037789、WO 99/32111、US 2004/0058961、 EP 1609789、WO 03072569及 WO 0043384 中）已經識別為 114873.doc 1325423 P38激酶抑制劑或細胞激素抑制劑。生產 細胞激素㈣财為昂貴 彳劑或 -、』旲有限制活體内效庫及 治療用途之生物可用性b “ b 双應及 f及及收問喊。因此存在對新穎小分 子細胞激素抑止藥物亦P[J Afc ,、，^ 物7Γ即此以改良的效能及較大生物可用 性抑制p38激酶之化合物的需要。 本發明提供可用於A底 扣於〜療由過量細胞激素產生導致的病症 之ρ38激酶的新穎抑制劑。 【發明内容】 本發明提供式I化合物：

其中： Ζ係選自由以下物質組成之群：

X係選自由以下物質組成之群： V0

(0

114873.doc R為視情況經一至六個選自由鹵基及Cl_c4烷基鹵基組 成之群的取代基取代之C1-C7院基；視情況經一或兩個選 自由C!-C4烷基及三氟甲基組成之群的取代基取代之c3 (：6 環院基；或三甲基矽烷基； R為視情況經Ci-c：4烷基取代之苯基或視情況經^广匕烷 基取代之nt咬基； γ為氫、CVC4烷基、鹵基4Cl_c4烷基鹵基； R3為視情況經CrC6環烷基取代之Cl_C7烷基；Ci_C4烷氧 基，Ci-C4烷基鹵基；視情況經一至四個選自Ci_c4烷基及 二氟甲基之群的取代基取代之C3_Ce環烷基；或各視情況 經選自由i基、氰基、Cl_C4烷基、Ci_c4烷基画基及 烷氧基組成之群的第一取代基取代，且視情況另外經選自 由匸^匸4烷基及鹵基組成之群的第二取代基取代之吡啶 基、苯基或嗔吩基；且 R為氫或c^-c：4烧基；或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供一種在哺乳動物中抑制p38激酶之方法， 其包含向需要該治療之哺乳動物投與有效量式〗化合物或 其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供一種在哺乳動物中抑止腫瘤壞死因子α (TNFa)產生之方法’其包含向需要該治療之哺乳動物投與 有效量式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供-種在哺乳動物中抑止介白素_ip(iL ^) 產生之方法包含向需要該治療之哺乳動物投與有效量 式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 114873.doc 1325423 本發明另外k供一種在哺乳動物中 姦斗道沾认+― 0療由過$細胞激素 產生導致的病症之方法，其包含向 而要該/〇療之哺乳動物 杈與有效量式I化合物或其醫藥學上可接受之魄 本發明亦提供一種在哺乳動物中抑制易感：贅瘤生長之 方法，其包含向需要該治療之哺乳動物投與p38抑制量之 式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供—種在哺乳動物中抑制轉移之方法，其包

含向需要該治療之哺乳動物投與p38抑制量之式“匕合物或 其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供-種在哺乳動物中治療類風濕性關節炎之 方法，其包含向需要該治療之哺乳動物投與p38抑制量之 式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供一種與醫藥學上可接受的賦形劑、載劑或 稀釋劑組合包含式〗化合物或其醫藥學上可接受之鹽之醫 藥調配物。 本發明亦提供一種式Ϊ化合物或其醫藥學上可接受之鹽 之用途，其係用以製造抑制p38激酶之藥劑。另外，本發 明提供一種式ί化合物或其醫藥學上可接受之鹽以用於在 哺乳動物中抑制ρ38激酶。此外，本發明提供一種經調適 為抑制Ρ38激酶之醫藥組合物，其包含與一或多種其醫藥 學上可接受的賦形劑、載劑或稀釋劑組合之式〗化合物或 其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽 之用途，其係用以製造抑止腫瘤壞死因子a (TNFot)產生之 114873.doc -10- 1325423 藥$夕卜纟發明提供-種式1化合物或其醫藥學上可 接又之鹽用於在哺乳動物巾抑止腫瘤壞死因子a (TNF〇t)產 生。此外，本發明提供一種經調適為抑止腫瘤壞死因子以 (TNFoc)產生之醫藥組合物，《包含與_或多種醫藥學上可 接受的賦形劑、载劑或稀釋劑組合之式“匕合物或其醫藥 學上可接受之鹽。 本發明亦提供-種式ί化合物或其醫藥學上可接受之鹽 之用途’其係用以製造抑止介白素，(IL，)產生之藥 劑。另外，本發明提供一種式Γ化合物或其醫藥學上可接 受之鹽’以用於在哺乳動物t抑止介白素,化⑼產 生。此外，本發明提供一種經調適為抑止介白素 邛)產生之醫藥組合物，其包含與一或多種醫藥學上可接 受的賦形劑、載劑或稀釋劑組合之式Τ化合物或其醫藥學 上可接受之鹽。 干 本發明亦提供一種式丨化合物或其醫藥學上可接受之鹽 之用途，其係用以製造治療由過量細胞激素產生導致的病 症之藥劑。另外’本發明提供一種式!化合物或其醫藥學 上可接夂之鹽，用於在哺乳動物中治療由過量細胞激素產 生導致的病症。此外，本發明提供一種經調適為治療由過 量細胞激素產生導致的病症之醫藥組合物，其包含與一或 夕種醫藥學上可接受的賦形劑、載劑或稀釋劑組合之 化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之睡 之用途，其係用以製造抑制易感性贅瘤生長之藥劑。另 114873.doc 11 1325423 外，本發明提供一種式i化合物或其醫藥學上可接受之 鹽，用於在哺乳動物中抑制易感性贅瘤生長。此外，本發 明提供一種經調適為抑制易感性贅瘤生長之醫藥組合物， 其包含與-或多種醫藥學上可接受的賦形劑、載劑：稀釋 劑組合之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽 之用途，其係用以製造抑制轉移之藥劑。另外，本發明提 供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽用於在哺乳動 物中抑制轉移。此外，本發明提供一種經調適為抑制轉移 之醫藥組合物，其包含與一或多種醫藥學上可接受的賦形

劑、載劑或稀釋劑組合之式Ϊ化合物或其醫藥學上可接受 之鹽。 X 本發明亦提供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽 之用途，其係用以製造治療類風濕性關節炎之藥劑。另 外，本發明提供一種式ί化合物或其醫藥學上可接受之鹽 用於在哺乳動物中治療類風濕性關節炎。此外，本發明提 供一種經調適為治療類風濕性關節炎之醫藥組合物其包 含與-或多種醫藥學上可接受的賦形劑、載劑或稀釋劑： 合之式I化合物或其醫樂學上可接受之鹽。 【實施方式】 術語"ρ38激酶"意謂Ρ38α及/或Ρ38β激酶同功異型物。 術語”抑止TNFadL-Ιβ、細胞激素）產生"意謂在哺乳動 物中將TNFa、IL-Ιβ或另-細胞激素之過量活體内含量降 低至正常或低於正常含量。此可藉由抑制包括巨嗜細胞之 114873.doc •12· 1325423 所有細胞活體内釋放TNFa、IL-1 β或另一細胞激素；藉由 在哺乳動物中於基因水平將TNFoc、IL- 1 β或另一細胞激素 之過量活體内含量下調至正常或低於正常含量；藉由作為 轉譯後事件抑制TNFa、IL-Ιβ或另一細胞激素之合成；或 藉由於轉譯水平下調TNFa、IL-Ιβ或另一細胞激素達成。 熟練技術人員將瞭解，某些式I化合物含有至少一個掌 性中心。本發明涵蓋該等化合物之所有單獨對映異構體或 非對映體’以及對映異構體及非對映體之混合物，包括外 消旋體。較佳為式I化合物含有至少一個作為單獨對映異 構體或非對映體存在的掌性中心。該等單獨對映異構體或 非對映體可以掌性試劑起始或藉由立體選擇性或立體特異 性合成技術製備。或者，該等單獨對映異構體或非對映體 可藉由標準掌性層析或結晶技術自混合物中分離。 熟練的讀者將瞭解本發明化合物能形成酸加成鹽。在所 有狀況中，所有該等化合物之醫藥學上可接受之鹽包括於 其名稱中。本發明化合物為胺，且因此將與任何數種無機 及有機酸反應以形成醫藥學上可接受的酸加成鹽。如本文 所用之術語”醫藥學上可接受之鹽，，係指大體上對生物非毒 性的式I化合物之鹽。典型醫藥學上可接受之鹽包括藉由 使本發明化合物與醫藥學上可接受的有機或無機酸反應製 備的彼等鹽。該等鹽包括J〇Urnal 〇f ph_aceuticai

Science，66, 2-I9 (1977)中列出的醫藥學上可接受之鹽， 其為熟練技術人員已知的。式工化合物之甲磺酸鹽為最佳 的0 114873.doc 1325423 式1化合物為p38激酶之抑制劑。因&，本發明亦提供一 種在哺乳動物中抑制p38激酶之方法，其包含向需要心 療的哺乳動物投與p38激酶抑制量的式！化合物。較佳為該 待由投與式I化合物治療的哺乳動物為人類。 作為Ρ38激酶之抑制劑，本發明化合物可用於抑制前發 炎性細胞激素腫瘤壞死因子a(TNF〇〇及介白素_lp(iL ip)

之產生’且因此可用於治療由過量細胞激素產生而導致的 失調症。因此認為本發明可用於治療炎性失調症，包括濕 疹、異位性皮膚炎、類風濕性關節炎、骨關節炎、炎性腸 疾病及毒性休克徵候群。亦認為本發明化合物可用於治療 心血管失調症，例如急性心肌梗塞、慢性心臟衰竭、動脈 粥樣硬化、病毒性心肌炎、心臟同種異體移植排斥反應及 膿毒病相關的心臟功能障礙。此外，亦認為本發明化合物 可用於治療中樞神經系統失調症，例如流行性腦脊髓膜 炎、阿耳滋海默症、巴金森氏症及多發性硬化症。W〇

99/32111、WO 9923091、WO 04004720、WO 03072569。 大多數實體腫瘤經由惡性細胞及基質細胞（包括内皮細 胞）之增殖大量增加。對於一個腫瘤而言，為生長至直徑 大於2-3毫米，其必須形成一個維管結構，此過程已知為 血管生成。已報導藉由血管生長抑素及内皮生長抑素抑止 腫瘤誘導的血管生成導致抗腫瘤活性（O'Reilly等人，Cell, 88，277-285 (1997))。選擇性p38激酶抑制劑SB22025已顯 示抑制血管生成（J.R. Jackson 等人，J. Pharmacol. Exp.

Therapeutics，284，687 (1998))。因為血管生成為大多數實 114873.doc 14- 1325423 體腫瘤大規模擴展的關鍵組成，抑制此過程的新顆p 3 8激 酶抑制劑之發展代表一種抗腫瘤療法有希望的方法。抗腫 瘤療法之此方法可缺少毒性副作用或習知化學療法之藥物 抗性誘導性質（Judah Folkman，Endogenous Inhibitors of Angiogenesis, The Harvey Lectures，系列 92，第 65-82 頁，

Wiley-Liss Inc.，（1998))。 因此本發明化合物作為p38激酶抑制劑亦可用於抑制易 感性贅瘤生長。Schultz，R. M. Poiewi/a/ 〇/ 户35 kinase inhibitors in the treatment of cancer. In: E. Jucker (編輯），Progress in Drug Research，60，59-92, (2003)。易 感性贅瘤定義為一種存活、生長或轉移依賴於p38激酶之 贅瘤。易感性贅瘤包括腦、泌尿生殖道、淋巴系統、胃、 喉及肺之腫瘤（美國專利#5,71 7,100)。較佳地，如本申請 案中所用之術語"易感性贅瘤"包括人類癌症，其包括非小 細胞肺癌（A· Greenberg等人，Am. J. Respir. Cell Mol. Biol” 26，558 (2002))、乳腺癌（J. Chen等人，J. Bi〇i. Chem·，276，47901 (2001); B· Salh等人，Int. J. Cancer， 98，148 (2002);及 S. Xiong等人 ’ Cancer Res” 61，1727 (2001))、胃癌（y.d. Jung等人，Proc. Am. Assoc. Cancer Res_, 43，9 (2002))、結腸直腸癌（S. Xiong等人，Cancer Res” 61，1727 (2001))及惡性黑素瘤（C. Denkert等人， Clin. Exp. Metastasis, 19, 79 (2002)) ° 亦已教示藉由抑止TNF α抑制血管生成可用於抑制或預 防轉移（美國專利#6,414，150 ;美國專利#6,335,336)。此 114873.doc 1325423 外，指示抑止TNF α可用於治療及預防惡病質，亦即一種 約半數之所有癌症患者經歷的消痩徵候群（T. Yoneda等 人，J. Clin. Invest” 87, 977 (1991))。 此外抑制p38激酶可有效用於治療諸如流行性感冒（K.

Kujime等人，J. Immunology” 164，3222-3228 (2000))、鼻 病毒（S· Griego 等人，J. Immunology，165, 5211-5220 (2000))，及 HIV(L· Shapiro 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，95, 7422-7426,（1998))之某些病毒性病症。 如本文所用之術語"(：丨-(：7烷基"係指一至七個碳原子之直 鏈或支鏈單價飽和脂族鏈且包括（但不限於）甲基、乙基、 丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基、戊基、己基及 庚基。術S吾"Ci-C：7烧基"在其定義中包括術語"(^-(34烧基，1。 如本文所用之術語"C「C4烷氧基，，係指連接至氧原子的具 有一至四個碳原子之直鏈或支鏈烷基鏈。典型Ci_c4烷氧 基包括曱氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、第 二丁氧基及其類似物。 除非本文另外指定，否則如本文所用之術語“自基，，係 指氯、溴、碘或氟原子。 如本文所用之術語"Cl_C4烷基齒基"係指經高達五個卣素 原子取代之Cl-C4烷基。典型Cl-C：4烷基齒基包括甲基自 基、三氟曱基、乙基自基、雙氟曱基乙基、丙基齒基、異 丙基鹵基、丁基_基、第三丁基齒基及其類似物。 如本文所用之術語"c^c：6環烷基"意謂包含碳及氫原子之 完全飽和的環，且包括環丙基及環丁基。 114873.doc -16 - 鲥劑。以下段落描 某些種類式I化合物較佳為p38激酶抑 述該等教佳種類： a) Z為

b) X為

c) R4為氫； d) Y為甲基； e) 烷基； f) R1為第三丁基； g) R2為苯基或°比啶基，各視情況經甲基取代； h) R2為4-甲苯基； 1} r3為各視情況經選自由自基、氰基、CVC4烷基、 CrC4烷基齒基及Cl_C4烷氧基組成之群的第一取代基取 代，且視情況另外經選自由Cl_C4烷基及自基組成之群的 第一取代基取代的苯基或嗟吩基； j) R3為經選自由自基組成之群的第一取代基取代， 且另外經選自CrC4烷基及鹵基之群的第二取代基之苯 基； 114873.doc 17 1325423 k) 式1化合物為游離驗； l) 式I化合物為鹽； m) 式I化合物為甲磺酸鹽。 本發明之較佳實施例包括段落的所有組合。其他 較佳式I化合物為其中X係如段落b)中㈣述；Ri係如段落 e)中所描述；R2係如段落g)中所描述；且尺4係如段落幻中 所描述之彼等化合物。

同樣較佳2的為X係如段、落b)中所描述；Rl係如段以)中 所描述；R2係如段㈣中所描述；如段落。中所描 述；且R4係如段落c)中所描述。 尤其較佳的為X係如段^b)中所描述；r2為在4位置經 Cj-C：4院基取代之苯基。 最佳的為X係如段落b)中所描述。 以下化合物亦為尤其最佳的： 114873.doc

本發明化合物可藉由各種程序製備，其中一些以以下流 程說明。热習此項技術者將認識到，可改變以下流程中的 各個步驟以提供式][化合物。產生式〗化合物所需步驟之特 疋順序取決於正在合成的特定化合物、起始化合物及經取 -18- j〇423 代部分的相對不穩定性。出於清晰起見，在以下流程中已 消除-些取代基，且該等取代基並不意欲以任何方式限制 該等流程之教示。 式I化合物及其中間物可如以下流程中所說明製備其 中R1、R2及X係如先前定義： 流程1

a 式I 使胺（a)與諸如胺基甲酸。比嗤基_2,2，2-三氯乙酯之適當異 氰酸酯或胺基甲酸酯反應以產生式I化合物。舉例而言， 加熱在諸如乙腈或二曱亞颯（DMS〇)之適當溶劑中之該胺 (1當量）、胺基甲酸三氣乙酯（1當量）及諸如二異丙基乙基 胺（2當量）或碳酸鉀之適當鹼的溶液。接著可分離所要化合 物’若必須及需要，則使用諸如層析之此項技術中熟知技 術純化以產生式I化合物。 必需的胺係如以下流程2中所說明般製備，其中X係如先 前定義： 流程2

在標準還原條件下硝基部分（b)(例如）係在鈀催化劑存在 114S73.doc -19· 1325423 下以鼠或在六水合氣化錄（II)存在下以棚氫化納在諸如低 碳烷醇或乙酸乙酯之適當溶劑中還原，以產生對應的胺 (a)。該專還原步驟為此項技術中所為人熟知且瞭解的。參 見 Larock, R.，"Comprehensive Organic Transformations，1· 412, VCH Publishing, Inc.，New York，1989。 該等必需的頌基化合物係如以下流程3中所說明般製 備，其中Hal為C1或F且X·為C(0)R3或適當保護基pg: 流程3

使2-齒基-4-硝基-。比咬（e)在諸如THF之適當有機溶劑中 與適當4_羥基哌啶及氫化鈉或三苯基膦反應以產生對應的 經取代哌啶b(i)。或者’使2-自基-4-硝基-吼啶（e)與適當哌 嗪及諸如碳酸鉀、第三丁氧化鈉或三乙基胺之鹼在諸如乙 腈、N，N-二曱基甲醯胺（DMF)或丁醇之極性溶劑中反應， 以產生對應的經取代哌嗪b(ii)。 藉由使2-鹵基-4-硝基-吡啶（e)在諸如乙醇之適當溶劑中 114873.doc -20- 與適當胺基派啶在諸如碳酸鈉之適當鹼存在下反應以製備 式b(iii)之胺。 熟練技術人員將瞭解可利用上述程序形成本發明涵蓋之 吧啶基異構體》 所要之胺基曱酸吡唑酯可按照以下流程中所描述般製 備’其中R1及R2係如先前定義：

3-胺基。tb唾（m)係經由此項技術中熟知條件形成； Larock, R., "Comprehensive Organic Transformations " 7〇 VCH Publishing，Inc.，New York，1989。舉例而言，使〇^氰 基酮⑴及適當肼或肼鹽（k)在諸如乙醇之適當有機溶劑中 於高溫下反應。所得吡唑（m)可使用諸如在矽膠管柱上進 行層析之標準技術純化。 使氯甲Ss_2,2,2 -二氯乙g旨與經適當取代的3 -胺基。比嗅（m) 及例如碳酸鈉、碳酸鉀或吡啶之鹼在例如THF或水/乙酸乙 酯之適當溶劑中反應，以產生對應的胺基曱酸2,2,2_三氯 乙酯（〇)。熟練技術人員將瞭解可藉由使3_胺基吡唑與其他 活性碳酸酯反應製備對應的胺基甲酸酯。

式I(i)化合物可如以下流程5中所說明般製備，其中Rl、 R2、R3及PG係如先前定義，z為〇、N或一個鍵，且R5為C 114873.doc -21· 1325423 或Ν 〇 流程5

式（f)化合物可在此項技術中熟知的條件下去保護。舉例 而s ’當保護基為第三丁氧基羰基時，將式（f)化合物溶解 於諸如二氯甲烷之適當有機溶劑或溶劑混合物中，且以諸 如二°惡烧中的鹽酸或三氟乙酸之酸處理之。經N_受保護旅 淀取代的腺之去保護產生經取代ϋ底唆（g)，其在有機酸及有 機胺之標準偶合條件下在諸如二氯甲烷或乙腈之適當溶劑 中諸如鹽酸N-(3-二甲基胺基丙基）_Νι_乙基碳化二醯亞胺 (EDCI)或二環己基碳化二酿亞胺（dcc)之偶合劑，催化量 的4_ 一甲基胺基°比淀（DM AP)及1-經基苯幷三唾（hob t)或六 氟麟酸0-(7-氮雜苯幷三吐-i_基X w，四曱基錁 (HATU)或三乙基胺之存在下與經取代羧酸反應，以產生 式I(i)。熟練技術人員將瞭解式I(i)實例可藉由以包括諸如 曱醯基之不同N-保護基的其他經保護旅咬起始製備，其可 需要其他去保護程序以形成中間物（g)。 若必需或需要，則可利用諸如第三丁氧基羰基（B〇c)部 分之適當胺基保護基"Pg"。引入此等基團之技術係為熟練 技術人員所熟知的。熟練技術人員將瞭解可在本發明化合 物合成中於任何方便時點移除該等保護基。引入及移除氮 及氧保護基之方法為此項技術中熟知的；參見（例 114873.doc -22- 1325423 如)Greene 及 Wuts， Protective Groups in Organic Synthesis，第 3 版，John Wiley and Sons, . New York， (1999)。 熟練技術人員亦將瞭解不是所有式I化合物中之取代基 將耐受合成該等化合物所使用的某些反應條件。可於合成 中方便時點引入此等部分，或可如必需或需要時保護之， 然後去保護之。

在實例及檢定中所使用的該等縮寫、符號及術語具有以 下含義：”-BuOH=正丁醇，DCC=二環己基碳化二醯亞 胺，DIEA=N，N-二-異丙基乙基胺，DMSO=二曱亞砜、 DMF=N，N-二甲基甲醯胺，h=小時，HOBt=l-羥基苯幷三 唑、LDA=二異丙基醯胺鋰，EDCI=鹽酸1-(3-二甲基胺基 丙基）-3-乙基碳化二醯亞胺，EtOAc=乙酸乙酯，EtOH=乙 醇，Et2〇=***，MeOH=曱醇，NaBH(0Ac)3 =三乙醯氧基 硼氫化鈉，TBAF=氟化四丁基銨，Tf20=三氟曱磺酸酐， 及THF=四負i °夫σ南。 製備 製備1 2 -氯-4 -曱基-5 -硝基-0比咬

將4-曱基-5-硝基-二吡啶-2-基胺（3.0 mmol，0.5 g)溶解於 0.5 mL硫酸中。添加7.6 mL水且將該溶液冷卻至0°C。添 加亞硝酸鈉（4.5 mmol, 0.3 g)且將該混合物攪拌兩小時， 114873.doc -23- 1325423 使其達到室溫。以水稀釋且添加10 %氫氧化鈉水性溶液直 至鹼性pH。以乙酸乙酯萃取且以飽和氯化鈉水性溶液洗滌 經合倂有機層。經硫酸鈉乾燥、過濾且減壓濃縮以產生4_ 甲基-5-硝基-吡啶-2-醇。MS(ES): w/z = 155 [M+H] 〇 向4-甲基-5-硝基-吡啶-2-醇（1.9 mmol，0.3 g).中添加氧氣 化磷（0.6 mmol，0.05 mL)及五氣化磷（〇.6 mmol，0.12 g)。 於120°C授拌1.5小時。冷卻’添加冰水且以ch2c12萃取。 以飽和氯化鈉水性溶液洗滌經合倂有機層。經硫酸鈉乾 燥、過濾且減壓濃縮以產生2-氯-4-曱基-5-硝基-吡咬。 製備2 2,3 -•亂-5·确基比咬 將 5-硝基-吡啶-2-醇（20 g，143 mmol)置於濃 HC1(100 mL) 中。加熱至50°C接著逐滴添加溶解於水（100 mL)中的氣酸 鉀（6.13 g，50 mmol)。於50°C攪拌30 min。在冰浴中冷卻 該反應。濾出固體且以水洗滌。徹底乾燥以產生21.13 g(85°/〇)3-氯-5-硝基-吡啶-2-醇。MS(ES): m/z = 173 [M+H]。 將氧氣化填（11.28 mL, 121 mmol)置於一個圓底燒瓶中 且冷卻至0°C。逐份添加喹啉（7.15 mL，60.5 mmol)，接著 添加3-氣-5-琐基-«•比咬-2-醇（21.13 g, 121 mmol)。加熱反應 物至120°C達2小時。將反應物傾倒至冰上且以水濕磨。濾 出固體且以水洗滌。徹底乾燥以產生19.95 g(860/〇)標題化 合物：h NMR δΗ (400 MHz，DMSO) 9.20 (s，1H)，8.97 (s, 1H)。 114873.doc •24- 1325423 製備3 4-(5 -胺基-6-曱基比咬-2-基）-派》秦-1-曱酸第三丁 g旨

於50C在氮下將《-BuOH(250 mL)中6 -氯-2-甲基-3-硝基-0比啶（Asymchem，25.00 g，144.9 mmol)、1-哌嗪甲酸第三 丁醋（29_68 g，159.4 mmol)及三乙基胺（23.2 mL，167 mmol) 之混合物機械搜摔4小時’於6 5 °C下2小時，接著於室溫隔 夜。添加額外的1-哌嗪曱酸第三丁酯（1.5 g)，且於65將 反應加熱4小時。將所得漿料冷卻至3〇。(：接著添加己烷（75 mL)。經1小時將漿料冷卻至室溫，接著添加水（15〇 mL)。 使漿料靜置45 min接著過濾。以水（4xl〇〇 mL)接著己烷 (100 mL)洗滌濾餅且將其風乾隔夜以產生呈亮黃色結晶狀 的4-(6-甲基-5-石肖基-。比咬-2-基）-派。秦-1-甲酸第三丁酯 (46,30 g ’ 99%產率，MS(ES): w/z = 267 [M+H-C4H8])。 於室溫將THF(750 mL)中4-(6-甲基-5-硝基-吡啶-2-基）-口底嗪-1-曱酸第三丁酯（46.00 g，142.7 mmol)之漿料與 Pd/C(5% Aldrich，3_04 g, 1.43 mmol)混合，接著將其置於 氫氣氛下（巴爾（Parr)振盪器，40-45 psi)達6小時。添加 MeOH(250 mL)，且於室溫使漿料經受氫氣氛達4小時。添 加額外的催化劑（3.04 g)，接著將混合物置於氫下達7小 時。經由Celite 521®之墊過濾混合物，以THF及MeOH洗滌 接著減壓濃縮以產生呈淺粉色固體狀的標題化合物。 114873.doc -25- 1325423 (41.58 g，99%產率，MS(ES+): m/z = 293 [Μ十Η])。 以大體上類似於上述程序之方式製備以下化合物。 表 製備 化合物 MS(ES): m/z [M+Hl 製備4 4-(5-胺基比咬-2-基)-派嗓-1-甲酸第二丁S旨 293 製備5 4-(5-胺基-3-曱基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-曱酸第 三丁酯 293.2 製備6

4-(5-胺基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-甲酸第三丁酯 將2-氣-5-硝基-吡啶（1.0 g, 6.31 mmol)、哌嗪-1-曱酸第 三丁 S旨（1.76 g，9.45 mmol)及三乙基胺（1.76 mL，12.6 mmol)置於正丁醇（20 mL)中。加熱至120 °C達17小時。冷 卻至室溫且添加乙酸乙酯及水。分離有機層且以水及飽和 氣化鈉水性溶液洗滌。收集有機層，經Mg2S04乾燥、過 濾且減壓濃縮。使殘餘物進行矽膠層析以20% EtOAc:己烷 溶離之以產生1.14 g(58〇/〇)4-(5-硝基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-曱 酸第三 丁酯。MS(ES): w/z = 309 [M+H]。 將4-(5-硝基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-甲酸第三丁酯（1·14 g， 3.70 mmol)置於 1:1 EtOAc:MeOH(20 mL)中。使用 EtOAc(5 mL)添加10%碳上Pd。淨化反應接著添加氫。將淨化/填充 循環重複兩次且將反應置於氫氣球下且於室溫將其攪拌20 小時。經由Celite®之墊過濾反應且以EtOAc洗滌濾餅。收 集濾液且將其減壓濃縮以產生1.01 g(98%)標題化合物。 MS(ES): w/z = 279 [M+H]。 114873.doc -26- 丄 以大體上類似於上述程序之方式製備以下化合物

MS(ES): m/z Πνΐ+Hl 293.4 表 製備8 4-(5-胺基-3-氯比咬_2·基）-n底嗪_ι_甲酸第三丁醋 將2,3-二氣-5-硝基-吡啶（2 〇 g，1〇 36 mm〇1)、哌嗪小曱 酸第二丁酯（2.12 g，11_4〇 mm〇i)及碳酸鉀（172 g，1243 mmol)置於DMF(20 mL)中。加熱至80〇c達2 5天。冷卻至 室溫且添加乙酸乙酯及水。分離有機層且以水及飽和氣化 鈉水性溶液洗滌。收集有機層，經Mg2s〇4乾燥、過濾且 .減壓濃縮。使殘餘物進行矽膠層析以2〇% EtOAc:己烷溶離 之以產生3.29 g(93%)4-(3-氯-5-硝基-吡啶基）-哌嗪-l_甲 酸第三 丁酯。MS(ES): w/z = 341 [Μ+Η]。 將4-(3-氣-5-硝基-吡啶-2-基）-略嗪-1-甲酸第三丁酯（3.09 g，9.01 mmol)置於曱醇（50 mL)中。添加六水合氯化鎳 (11)(10.7 g，45.1 mmol)且將反應冷卻至0°C。逐份添加硼 氫化鈉（5.11 g，135.15 mmol)且於0°C攪拌2小時。添加 CHzCh且經由Celite®之墊過濾。以CHaCh洗滌濾餅且收集 渡液。將飽和碳酸氫納水性溶液添加至該遽液且分離有機 層。以CH2C12(2x30 mL)萃取水性層。合倂有機萃取物， 經MgaSO4乾燥、過濾且減壓濃縮。使殘餘物進行矽膠層 析以0-70% EtOAc:己烷溶離之以產生1.77 g(63%)標題化合 114873.doc •27· 物。MS(ES): m/z = 311.2 [M-Η]。 製備9 外消旋-[(反）-4-(5-胺基-3-甲基-吼咬_2_基）-2,5-二曱基-派°秦-1-基]-環丙基_甲_

將反-2,5-二甲基哌嗪（500 mg，4.37 mm〇l，1.0當量）溶解 於15 mL無水二氣曱烷中。添加溶解於$ mL二氯甲烷中的 二碳酸二-第三丁酯（953 mg，4.37 mmol，1.〇當量）。於室溫 檀拌20小時。過濾白色固體以產生430 mg N-BOC-反-2,5-二甲基哌嗪（50%產率）。4 NMR (甲醇-以）d ppm 4.11 (m， 1H); 3.55 (dd, J = 13.6, 1.7 Hz, 1H), 3.23 (dd, J = 13.6, 4.0 Hz, 1H), 3.12 (m, 1H), 3.00 (dd, J =12.7, 2.9 Hz, 1H), 2.49 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.24 (d, J = 7.6, 3H), 1.15 (d, J = 6.8 Hz，3H)。 將2 -氣-3-甲基-5-确基0比咬（310 mg，1.82 mmol, 1.0當量） 及 N-BOC-反-2,5-二甲基派嗓（397 mg，2.0 mmol，1.1 當量） 溶解於5 mL無水DMF中，添加碳酸斜（251 mg，1.82 mmol， 1·〇當量）且於80°C將混合物攪拌20小時。將該溶液傾倒入 EtOAc及冰水之1 : 1 v/v混合物中。以EtOAc(2x20 mL)萃 取水性相且以水（3x20 mL)及飽和氣化鈉水性溶液（30 mL) 洗滌經合倂有機層。經硫酸鈉乾燥有機溶液且將其減壓濃 114873.doc -28· 1325423 縮以獲得粗外消旋-(反）-2,5-二甲基-4-(3 -曱基-5-硝基-0比 咬-2-基）-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。ms(ES+): w/z = 251.2 (M+H)。 於室溫將二噁烷中HC1 4 M(4.2 mL)添加至外消旋-(反）-2,5-二曱基-4-(3-甲基-5-硝基-吡啶_2_基哌嗪甲酸第三 丁酯（0.15 g，〇.43 mmol)中且攪拌。一小時後減壓濃縮以 產生呈白色固體狀的0.138 g外消旋_(反）_2,5-二甲基-1-(3-曱基-5-硝基- η比啶-2-基）-哌嗪二-鹽酸鹽（定量）。MS(ES): m/z = 251.2 [M+H]。 於室溫在N2氣氛下將曱酸環丙酯（56 μΕ，〇·7 mmol)添加 至 CH2C12(5 mL)中 EDCI(0.147 g，0.77 mmol)、HOBt(0.10 g, 0.77 mmol)、外消旋-(反）_2,5-二曱基-1-(3-甲基-5-硝基- 0比咬-2-基）-〇底嘻一_鹽酸鹽（0.16 g，0.64 mmol)之溶液中， 接著添加DIEA(0.22 mL，1.28 mmol)。一小時後，濃縮以 產生殘餘物。使殘餘進行碎膠層析以己烧：Ac〇Et 50-70% 溶離之以產生0.114 8外消旋-環丙基_[(反）_2,5_二甲基_4_ (3-甲基-5-硝基-吡啶-2-基）-«»底嗪_ι_基]•曱酮（56〇/〇產率）。 MS(ES): m/z = 319.1 [M+H]» 在N2氣氣下將NH4COOH(0.23 g，3.5 mmol)添加至外消 旋-環丙基-[(反）-2,5-二曱基-4-(3-曱基-5-硝基-吡啶_2_基）_ 哌嗪-1-基]-甲酮（0.114 g，0.35 mm〇i)中接著添加Et〇H(5 mL)中Pd/C 10%(0.043 g) ’且將其加熱至8(rc。2小時後冷 卻反應混合物且經由Celite®過濾。減壓濃縮以產生〇^ ^標 題化合物（定量）。MS(ES): w/z = 289.3 [M+H]。 114873.doc -29- 1325423 製備ίο l-[4-(5-胺基-4-甲基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-基]-2,2-二甲基_ 丙-1 -酮 於80°C將在密封管中的2-氣-4-曱基-5-硝基-吡啶（0.85 mmol，_ 0.15 g)、鹽酸 2,2-二甲基-1-0底嗪-1_基-丙-1_酮（〇.94 mmol，〇_16 g)及三乙基胺（2.12 mmol，0.3 mL)之溶液搜拌 隔夜。將混合物冷卻至室溫，添加CH2C12且以飽和氯化鈉 水性溶液洗滌。經硫酸鈉乾燥、過濾且減壓濃縮以產生 2,2-二曱基-l-[4-(4-甲基-5-硝基-吡啶_2_基）-哌嗪-1-基]-丙· 1-酮。使殘餘物進行矽膠層析以處於梯度（3〇%至高達60%) 中之己烧/乙酸乙酯溶離之》MS(ES): w/z = 307 [M+H；] 〇 向2 mL乙醇中2,2-二甲基_l-[4-(4-曱基-5-硝基-吡啶_2_ 基）-哌嗪-1-基]-丙-1-酮（0.31 mmol，0.09 g)之溶液中添加甲 酸銨（1.55 mmol，0.1 g)及鈀（碳）10%(〇〇31mm〇1)。於 9〇t 將該溶液攪拌一小時。將其冷卻且經由Celite®之墊過遽且 減壓濃縮。可不經進一步純化使用殘餘物。MS(ES):讲/2 = 277 [M+H]。 以大體上類似於上述第二程序之方式製備以下化合物。 表 製備 化合物 MS(ES): nt/z fM+Hl 製備11 [M5-胺基-4-甲基-吡啶-2-基)-哌 。秦-1-基]-(1-曱基-環丙基)-曱_ 275 製備12 1-[4-(5-胺基-4-氯-吡啶_2_基）-哌。秦-1·基]_2,2二曱基 丙-1 -酿1 114873.doc • 30-

1325423 步驟A :於l〇〇°C在氮下將溶解於甲苯中的2,4_二氯_吡啶 (6.7 mmol，1 g)、N-Boc-0底嗓（8.1 mmol，1.5 g)、第三丁氧 化鈉（9.5〇11!1〇1，0.9§)、乙酸鈀（11)(0.7111111〇1，（)15§)及2_ (二-第三丁基膦基）聯苯（〇.7 mmol, 0.2 g)之溶液擾拌4小 時。冷卻至室溫且添加水。以乙酸乙酯萃取且以水及飽和 氯化鈉水性溶液洗滌有機層。將有機層經硫酸鈉乾燥、過 濾且減壓濃縮以產生呈殘餘物狀的4-(4-氣-吡啶-2·基）-哌 嗪-1-甲酸第三丁酯。使殘餘物進行矽膠層析以處於梯度 (10/ί»至50/^)中之己烧/乙酸乙醋溶離之。ms(ES): zw/z = 298 [M+H]。 步驟B ·以HC1( 一 D惡烧中4 N溶液’ 1 _5 mL，5 ·9 mmol)處 理CH2CL2(4 mL)中4-(4-氣-吡啶-2-基）-哌嗪-i_甲酸第三丁 酯（0.6 g，1.9 mmol)之室溫溶液產生輕微放熱。將混合物 擾拌3小時，添加額外的HC1(二。惡院中4 N溶液，1.5 mL， 5.9 mmol)且攪拌隔夜。減壓濃縮以產生鹽酸ι_(4_氣-吡啶· 2-基）-哌嗪，接著以Et2O(0.43 g)濕磨》LCMS ES+ (m/z) 198 [M+H]。 步驟C :於室溫將13 mL CH2C12及三曱基乙醯氯（2.2 mmol，0.3 mL)中之鹽酸 1-(4-氣-吡啶-2-基）-哌嗪（2.2 mmol， 0.4 g)、三乙基胺（7.6 mmol, 1.1 mL)攪拌隔夜。添加 CH2Cl2且以飽和氯化鈉水性溶液及水洗滌。經硫酸鈉乾 II4873.doc •31· 丄奶423 產生氯-咐啶-2-基）_哌嗪」 。MS(ES): w/z = 282 [M+H] 〇

物’使其隔夜達到室溫。以水稀釋混合物且添加1〇%氣氧 化納直至驗性pH。以乙酸乙g旨萃取。經硫酸納乾燥、過遽 且減壓濃縮以產生1-[4-(4-氯·5-硝基-吡啶-2-基）_哌嗪 基]-2,2-二甲基-丙-1-酮之殘餘物。使殘餘物進行矽膠層析 以己烷/乙酸乙酯混合物（3〇%至高達6〇%)溶離之。Ms(es): w/z = 327 [M+H]。

燥、過濾且減壓濃縮以 基]-2,2-二甲基-丙-1-嗣 步驟D :將H4-(4-氯·吼咬·2·基）痕嗓^基]_2,2二甲 基-丙小酮（1.6麵〇1，〇·4 g)溶解於硫酸（2.3 mL)中且將該 溶液冷卻至代。添加確酸鉀（1.6麵仏Q 2 g)補摔混^ 步驟E:向22 mL四氫呋喃與水之1:1混合物及4 m]L氨中 1-[4-(4-氣-5-硝基·吡啶-2-基）-哌嗪基]_2,2_二甲基_丙 酮（0.9 mm〇l，〇.3 g)中添加（4.5 mm〇1，〇·8 g)連二亞硫酸 納。於室溫將溶液攪拌2小時。減壓濃縮且以乙酸乙酯萃 取殘餘物。經硫酸鈉乾燥、過濾且減壓濃縮以產生殘餘 物’其不經進一步純化使用。 MS(ES): m/z = 297 [M+H]。 使用大體上類似於上述步驟C-E之程序製備以下化合 物。 表 製備 化合物 MS(ES): m/z ίΜ+Η1 製備13 1-[4-(5-胺基-3-三氟甲基-吡啶-2-基)-哌嗪-1-基]-2,2-二甲基-丙-1-酮 331 114873.doc -32- 製備14 [4-(5-胺基-6-甲基-D比咬-2-基）-旅嗪_ι_基]_(2,6_二氟-苯 基）-甲酮

將乙酸（5 L)饋入一個22 L燒瓶中。將反應置於冰水浴 中。逐份攪拌添加哌嗪（355.00 g，2.0當量；4.06莫耳），且 將溫度升高至~40°C。再添加5 L乙酸。攪拌直至混合物變 為溶液。將冷浴調整為〜13°C。經2小時時期逐滴添加2,6- 二氟苄醯氯（355.00 g，1.00 當量；2.01 莫耳；253.39 mL)， 同時將反應溫度維持於約13-15°C。攪拌隔夜。減壓濃縮 且將殘餘物溶解於2 L冰水中。在冰水浴中冷卻燒瓶。添 加5 N NaOH以將pH調整至7.5 ’同時維持反應溫度低於 3〇°C。於〜10°C過濾。以二氣曱烷（4x2 L)自濾液萃取產 物。減壓移除溶劑。於室溫將固體溶解於丨5 L曱醇中且過 遽。濃縮甲醇溶液，接著溶劑以2〇 L甲苯交換，產生純產 物。過濾以獲得（2,6-二氟苯基）_哌嗪_ι·基-甲酮濃縮濾 液且再次過濾以獲得額外的產品（總共4〇〇 g)。 將（2,6-二氟-苯基）-哌嗪-^基-甲酮（1〇7當量，155莫 耳 ’ 35〇.〇〇 g)、甲醇（37.06莫耳，1.50 L，1_19 kg)、三乙 基胺（1.79 莫耳，25〇 〇〇 mL，181 5〇 g)、6 氣 _2 曱基 _3 硝 基-吡啶（1.00當量，丨45莫耳，25〇 〇〇 饋入一個具有頂 114873.doc -33· 1325423 置式攪拌器之5 L燒瓶中。於室溫將反應混合物攪拌0.5小 時。緩慢加熱至60°C且於60°C繼續攪拌隔夜。逐滴添加水 (750 rnL)同時將溫度維持於60°c。使混合物冷卻至室溫。 過濾且以150 mL 2:1曱醇/水洗滌濾餅，接著以MTBE洗滌 兩次。於45°C減壓乾燥以獲得呈黃色固體狀的（2,6-二氟-本基）-[4-(6-甲基-5-硝基-啦咬_2_基）·〇底秦-1-基]-曱_(535 g)。 將（2,6-二氟-苯基）-[4-(6-曱基-5-硝基比咬_2_基）-D底°秦- 1- 基]-曱酮（1.00當量，1.44莫耳，520.00 g)、甲醇（197.66 莫耳’ 8.00 L，6.33 kg)及經THF濕潤的5%碳上鈀（75.00 g) 饋入一個三加侖高壓釜中。於5〇 psi於室溫氫化反應，同 時維持溫度低於30°C。0.5小時後，冷卻至26°C，且維持2 小時。過濾且減壓濃縮。過濾以獲得固體，以甲醇接著以 庚院洗務。再次過濾產生第二批[4-(5-胺基-6-甲基-°比咬- 2- 基）-哌嗪-1-基]-(2,6-二氟-苯基）_曱酮。於45。(：減壓乾燥 (445 g)。 製備15 [4-(5-胺基-3-甲基-吼啶-2-基）-哌嗪小基]_(2,6_二氟-苯 基）-曱_ 以 K2C03(34.55 g，0.250 mol)處理無水 DMF(270 mL)中 2-氯-3-甲基-5-硝基-吡啶（27.00 g，0.156 mol)及哌嗪-1-甲酸 第二丁醋（32.03 g，0.172 mol)之襞料，接著在〜下於8〇。〇 將反應混合物加熱隔夜。將所得反應混合物傾倒入ιη EtOAc/H20(3,000 mL)中’分層，接著 aEt〇Ac(1〇〇〇 mL) 114873.doc -34- 萃取水性層。以飽和氯化鈉水性溶液（各mL)洗滌 經合倂有機物，經MgSCU乾燥，過濾，接著減壓濃縮以產 生黃色固體。將該黃色固體在己烷/EtOAc中調成漿，接著 藉由真空過濾回收所得固體。以己烷洗滌且真空過濾以產 生呈黃色固體狀的（42.84 g)4-(3-曱基-5-硝基-吡啶-2-基）- 哌嗪-1 _曱酸第三丁酯。減壓濃縮濾液以產生黃色固體。將 該只色固體在己院中調成漿，接著藉由真空過濾回收所得 固體’以己烷洗滌且真空過濾乾燥以產生額外（5 38心呈 «色固體狀的4-(3 -甲基-5-硝基比咬-2-基）-。辰嗪_ι_甲酸第 二丁酯化合物（48.22 g，95.9%產率）。A NMR (400 ΜΗζ， CDC13) δ 8.96 (d, 1Η), 8.14 (d, 1H), 3.57 (m, 4H), 3.41 (m, 4H), 2.36 (s, 3H), 1.48 (s, 9H); TOF-MS [ES + , M+H] Obs. m/z 323.1723, Calc· m/z 323.1719 ;對於 Cl5H22N4〇4而言的 分析計算值：C 55.88 ; H 6.87 ; N 17.37。實驗值c 55.94 ; H 6.87 ; N 17.14。 將二噁烷（4當量）中的4 M HC1之溶液添加至dCM(73 mL)中4-(3-曱基-5-硝’基比咬-2-基）-。底嗓-1 -曱酸第三丁酿 (7.77 g，24.13 mmol)溶液中。於室溫將混合物授拌隔夜。 再添加2當量二°惡烧中HC1溶液。LCMS偵測不到起始材料 後，過濾固體且減壓乾燥以獲得呈微黃色固體狀的691 • 〇 鹽酸1-(3-甲基-5-确*基-比咬-2-基）-«j底嗪（97%產率）。 ES+(m/z): 259 [Μ+1]。 向DCM(120 mL)中1-(3 -曱基-5-硝基比咬_2_基）_略。秦； 鹽酸（6.91 g，24_ 13 mmol)之懸浮液中逐滴添加三乙基胺（3 -35- 114873.doc 1325423 當量t添加2,6-二氟节醯氣（1當量）。於室溫將混合物攪 拌隔夜再添加2,6-二氟苄醯氯（1.6 mL)及三乙基胺（丨5當 量）以使反應運行至完成。使反應靜置隔夜。以dcm稀釋 且以水萃取若干次。經Na2S2〇4乾燥有機層，過濾，且減 壓移除溶劑。以己烧洗滌固體若干次以獲得8 〇8 g (2 6_二 氟-苯基）-[4-(3-甲基-5-硝基比啶-2-基）-哌嗪-卜基]-甲酮 (93%產率）。ES+(m/z): 363 [M+1]。 將Na2S2〇4(l〇當量）及氨水（3 mL/mmol，32%)添加至 THF/H20(166 mL，1:1)中（2,6-二氟·苯基）_[4-(3-甲基-5-硝 基-0比啶-2-基）-哌嗪-1-基]-曱酮（3 g，829 mmol)之溶液 中。攪拌30 min ’接著分層。以DCM、EtOAc及異丙醇 /EtOAc萃取水性層。合倂有機層且使其經Na2s2〇4乾燥， 過濾且減壓移除溶劑。使粗產物經受VarianTM SCX柱且以 MeOH洗滌該柱，接著以MeOH中2 Μ NH3沖清產物以獲得 1.2 g [4-(5-胺基-3-甲基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-基]-(2,6-二氟_ 苯基）-曱酮（44%產率）。ES + (m/z): 333 [M+1]。 製備16 4-(5-胺基-6-甲基-吡啶-2-基氧基）-哌啶-1-甲酸第三丁酯

丫 γ 〇 1 於〇°C將偶氮基二甲酸二異丙酯（3.0 mL，15.5 mmol)逐滴 添加至THF(25 mL)中6-甲基-5-硝基-吡啶-2-醇（1.54 g，10 0 mmol)、4-羥基-旅咬-1-甲酸第三丁酯（2.05 g，10.0 mmol) 114873.doc -36- 及二苯基膦（4.02 g，15.3 mm〇1)之冷混合物_。添加完成 後，移除冷浴且於22。(：將反應混合物攪拌隔夜。減壓濃 縮。使殘餘物進行矽膠層析以己烷及乙酸乙酯溶離之以產 生呈無色油狀的4-(6·曱基-5-硝基-吡啶基氧基）-哌啶-1-甲酸第二丁酯（2.69 g，80%產率）。MS(ES): w/z = 338·2 [Μ+Η]。 於22 C在氫下將乙醇（6〇 mL)中4-(6-甲基-5-硝基-吡啶-2-基氧基）-哌啶-1-甲酸第三丁酯（2 69 g，8〇 mm〇1)及1〇% 碳上把（1 ·0 g)之混合物攪拌2小時。濾出鈀催化劑。濃縮 渡液以產生無色油。使殘餘物進行矽膠層析以己烷及乙酸 乙酯溶離之以產生標題化合物。（2丨9 g，89%產率）。 MS(ES): w/z = 308.2 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物β 表 製備 化合物 MS(ES): m/z [M+H-BOC1 製備17 4-(5-胺基-3-曱基-〇比咬_2_基氧基)-略咬-1-曱酸第三丁酯 208.2 製備18 4-(5-胺基-β比咬-2-基氧基）_派咬·ι_甲酸第三丁酯 將THF(2 mL)中預洗滌NaH(0.1 g，2.48 mmol，60%，分 散於礦物油中）之懸浮液添加至無水THF(3 mL)中4-羥基-0底咬-1-甲酸第三丁醋（〇.5 g, 2.48 mmol)之冰***液中。允 許將混合物攪拌20分鐘，接著逐份添加2-氯-5-硝基-吡啶 (0.36 g, 2.26 mmol)。添加完成後，移除冷浴且於22〇c將 反應混合物攪拌隔夜。以冰浴冷卻反應混合物且添加飽和 114873.doc -37- 1325423 碳酸氣納水性溶液（5 mL)。將反應混合物於乙酸乙酯（25 mL)與蒸德水（25 mL)之間分配。分離水性相且以乙酸乙酯 (3x35 mL)萃取。經硫酸鈉乾燥經合倂有機相且將其減壓 濃縮°使殘餘物進行石夕膠層析以己炫及乙酸乙酯溶離之以 產生呈白色固體狀的4-(5-硝基-吡啶-2-基氧基）_哌啶-1-甲 酸第三丁酯（0.55 g ’ 75%產率）。MS(ES): m/z = 324.2 [M+H]〇 於室溫在氫下將乙醇（100 mL)中4-(5-硝基比咬-2-基氧 基）-哌啶-1-曱酸第三丁酯（2.7 g，8.35 mmol)及10%碳上鈀 (〇. 5 g)之混合物檀拌4小時。過遽以移除把催化劑。濃縮 濾液且使所得無色油進行矽膠層析以己烷及乙酸乙酯溶離 之以產生呈白色固體狀的標題化合物（2.11 g，86% ES + (m/z) 194.2 [M+H-BOC])。 製備19 [4-(5-胺基-3-甲基比咬-2-基氧基）-〇底咬-1-基]-(2-氣-苯 基）-甲酮

將 THF(20 mL)中預洗滌NaH(1.27 g, 31.87 mmol，60%， 分散於礦物油中）之懸浮液添加至無水THF(80 mL)中4-經 基-n底咬-1-甲酸第三丁醋（6 _41 g，31.87 mmol)之冰***液 中。允許將混合物攪拌20分鐘’接著逐份添加2-氣-3-甲 基-5-硝基吡啶（5 g，28.97 mmol)。添加完成後，移除冷浴 114873.doc -38- 1325423 且於22°C將反應混合物攪拌隔夜。以冰浴冷卻反應混合物 且添加飽和碳酸氫鈉水性溶液（5〇 mL)。將反應混合物於 乙酸乙酯（350 mL)與蒸餾水（15〇 mL)之間分配。分離水性 相且以乙酸乙酯（1x100 mL)萃取。合倂有機層且以飽和氣 化鈉水性溶液（2x150 mL)洗滌。經硫酸鈉乾燥經合倂有機 相且將其濃縮。使殘餘物進行矽膠層析以己烷及乙酸乙酯 溶離之以產生呈白色固體狀的4_(3_曱基_5_硝基·吼啶_2基 氧基）-0底咬-1-曱酸第三丁酯（6.5 g，67〇/〇產率）。MS(ES): w/z = 360.3 [M+Na]。 將三氟乙酸（150 mL)添加至二氣曱烧（450 mL)中4-(3-甲 基-5-硝基-〇比咬-2-基氧基）-娘咬_1_曱酸第三丁酯（1〇12 g， 30 mmol)之***液中。於22°C將反應混合物攪拌60 min。 移除溶劑後，以1 N氫氧化納（1 5 〇 mL)處理殘餘物且以二 氣甲烷及乙酸乙酯萃取。經硫酸鈉乾燥經合倂有機相。移 除溶劑產生呈黃色固體狀的3 -曱基-5-硝基-2-(哌啶-4-基氧 基）-0比咬（6.9 g，97%產率）。MS(ES): m/z = 238,2 [M+H]。 將2-氟-苄醢氣（1.74 g，11.0 mmol)逐滴添加至二氯甲燒 (50 mL)及三乙基胺（1.21 g，12 mmol)中3-曱基-5-頌基_2一 (哌啶-4-基氧基）-吡啶之溶液中且在&下於室溫將其搜拌2 小時。以蒸德水（3x20 mL)接著飽和氣化納水溶液（1 X2〇 mL)洗滌反應混合物。經硫酸鈉乾燥有機相且濃縮以產生 呈黃色固體狀的（2-氣-本基）-[4-(3 -曱基-5-琐基-u比咬_2_基 氧基）-哌啶-1-基]-曱酮。 於22°C在氫下將乙醇（100 mL)中（2·氟-苯基）-[4-(3-曱基. 114873.doc -39- 1325423 5-石肖基-°比咬-2-基氧基）-娘咬_i-基]-曱酮（3.58 g，l〇 mm〇i) 及10%碳上纪（358 mg)之混合物攪拌隔夜。過濾以移除催 化劑。濃縮濾液以產生無色油。使油進行矽膠層析以己烧 及乙酸乙酯（1 : 1)接著70%乙酸乙酯/己烷溶離之以產生黃 色固體（2.27 g，50%產率）。MS(ES): w/z = 330.2 [M+H]。 製備20 4-(4·胺基比啶-2-基氧基）-哌啶-1-甲酸第三丁醋 將100 mL甲苯添加至2-氯-4-石肖基-。比咬（4.32 g，27.2 mmol)、4-羥基哌啶甲酸第三丁酯（11.0 g，54·5 mmol)、碳 酸铯（13.3 g，40.8 mmol)、乙酸把（122 mg，0.544 mmol)及 2-(二-第三丁基膦基）_i，i，_聯萘（271 mg, 0.68 mmol)之經氮 淨化混合物中。於室溫將所得混合物攪拌隔夜，接著分溶 在水與乙酸乙酯之間。另外以乙酸乙酯萃取水性層且經硫 酸鈉乾燥經合倂有機層且減壓濃縮。使殘餘物進行矽膠層 析以己烷中0至20%梯度乙酸乙酯溶離之以產生呈白色壤 樣固體狀的4-(4-硝基-吡啶-2-基氧基）-哌啶-1-甲酸第三丁 酯（5.37 g，61% ; LCMS ES+ (m/z) 268 [M-tBu]+)。 於周圍溫度使EtOAc(150 mL)中4-(4-硝基-吡啶-2-基氧 基）-哌啶-1-甲酸第三丁酯（3·0 g，9.28 mmol)及 5% Pd/C(151 mg)之漿料經受於60 psi(巴爾振盪器）之氫氣氛隔夜。經由 Celite®之墊過濾反應混合物且減壓濃縮以產生呈白色固體 狀的標題化合物（2.6 g，95%產率）。LCMS ES+ 〇/z) 294 [M+H] » 製備21 114873.doc 40· 1325423 [4-(4-胺基-α比啶-2-基氧基）·哌啶-1-基]-(2,6-二氟-苯基）- 曱酮 將 3 g(18.9 mmol)2-氣·4·石肖基 η比唉、7.6 g(37.8mmol)4-羥基-哌啶-1-甲酸第三丁酯、188 mg(0.47 mmol)[l，l']聯萘 基-2-基-二-第三丁基-填烧' 85 mg(0.38 mmol)乙酸纪及9.2 g(28.4 mmol)碳酸铯添加至一個500 mL燒瓶中且以N2淨化 10 min。接著添加無水甲苯（500 mL)且在N2氣氛下於室溫 攪拌隔夜。使反應分溶在水與EtOAc(各500 mL)之間。分 離有機層。經MgS〇4乾燥、過濾且蒸發溶劑。使殘餘物進 行矽膠層析以在10個柱體積中處於5至20% EtOAc梯度之 EtOAc:己烧混合物溶離之以獲得呈白色固體狀的12 g(34%產率）4-(4_確基比咬-2-基氧基）-派咬-1-甲酸第三丁 醋標題化合物（ES+(m/z) = 324 [M+H])。 將8 mL Et20中HC1之4 Μ溶液添加至1.2 g 4-(4-石肖基比 啶-2-基氧基）-哌啶-1 _曱酸第三丁酯中，且將該懸浮液授拌 4小時。蒸發溶劑且以EhO濕磨剩餘固體以產生呈淺黃色 固體狀的1.1 g二鹽酸4_硝基·2-(哌啶-4-基氧基）·吡啶（1〇〇% 產率）(ES + (m/z) = 224 [Μ+Η])。 將二乙基胺（2.57 mL，18.5 mmol)添加至無水二氣甲院 (50 mL)中 1.1 g(3.7 mmol)二鹽酸 4-硝基 _2_(哌啶 _4_ 基氧 基）_吡啶之懸浮液中。接著添加0.512 mL(4()7 mm()1)2斗 二氟苄醯氣。於室溫將混合物攪拌隔夜。添加水（5〇 mL) 且分離有機層。以MgS〇4乾燥且過濾。蒸發溶劑以獲得呈 黃色固體狀的1.22 g(91%產率）(2,6·二氟-笨基）_[4_(4硝基- I14873.doc •41- 吡啶-2-基氧基）-哌啶 _1_基]-甲酮（es+(aw/z) = 364 [M+H])。 將粉末狀鐵（419 mg，7.5 mmol)添加至冰乙酸（10 mL)中 之 1·1 g(3.0 mmol)(2,6-二氟-苯基）-[4-(4-硝基-吡啶-2-基氧 基）-哌啶-1-基]-甲酮之溶液中且於8(TC攪拌。15 min後， 使混合物達到室溫且經由Celite®過濾。以Et20及EtOAc洗 滌Celite®墊。以水、飽和NaHC03水性溶液及飽和氣化鈉 水性溶液洗滌所得有機層。分離有機層，經MgS04乾燥且 蒸發溶劑以產生呈白色固體狀的831 mg(83%產率）標題化 合物。（ES + O/z) = 334 [M+H]。 製備22 4-(5 -胺基比咬-2-基胺基）-派咬-1-曱酸第二丁西旨

將N-Boc-4-胺基派咬（0.9 g，4_8 mmol)溶解於無水乙醇中 且於〇°C添加固體碳酸鈉（0.8 g，7.9 mmol)，接著添加2-氣-5-硝基-吡啶（0.6 g，3.9 mmol)。於室溫將溶液攪拌隔夜， 接著於9°C加熱溶液達6小時。於室溫攪拌隔夜。減壓蒸發 溶劑且使粗混合物分溶在EtOH與水之間。以EtOAc萃取且 以飽和氣化鈉水性溶液洗滌有機層。合倂有機層且經 MgS04乾燥。過濾並蒸發溶劑以獲得4-(5_硝基·吡啶-2·基 胺基）-哌啶-1-曱酸第三丁酯。 將 SnCl2.H20(11.8 mmol, 2,7 g)添加至 20 mL 乙酸乙酯中 I14873.doc -42- 4-(5-硝基-吡啶-2-基胺基）-哌啶-1-曱酸第三丁酯（2.4 mmol， 0.8 g)之溶液中。於室溫將溶液攪拌隔夜。添加NaHC03水 性溶液直至溶液pH為鹼性且以乙酸乙酯萃取。經由Celite® 之塾過渡懸浮液。合倂有機層且以飽和氯化納水性溶液洗 滌，經硫酸鈉乾燥、過濾且減壓濃縮以產生標題化合物。 MS(ES): m/z = 293 [M+H]。 製備23 1-甲基環己烷曱酸曱酯 以三甲基矽烷基二偶氮基曱烷（2.0 M/己烷；26 mL，52 mmol)逐滴處理MeOH(10 mL)及Et2O(40 mL)中之1-曱基環 己烷甲酸（7.11 g, 50_0 mmol)之溶液。於室溫將反應混合 物攪拌隔夜，接著減壓濃縮以產生呈澄清、淺黃色油狀的 標題化合物（7.811 g，50 mmol ; 100%)。MS(ES): w/z = 156 [M+H]。 製備24 3-羥基-2,2-二曱基-丙酸苄酯

向 300 mLDMF中2,3-二羥基-2-甲基-丙酸（423.2 mmol， 50 g)之溶液中添加氫氧化卸（486.7 mmol, 32.1 g)於100°C 將溶液攪拌1小時，接著添加溴曱苯。將溶液攪拌隔夜。 冷卻混合物且以乙酸乙酯稀釋。以水洗滌有機層。以乙酸 乙酯洗滌水性層若干次。合倂有機層，且經硫酸鈉乾燥且 114873.doc -43- 1325423 過濾且減壓濃縮。 *H NMR (CDC13, 300 MHz): δ ppm : 7.36-7.32 (m, 5 Η), 5.1 (s, 2H)，3.5 (s，2H)，1.21 (s, 6H)。 製備25 1-氟甲基-環丙烷f酸乙酯。

將AgF(4.5當量，4.56 g)添加至乙腈（22 mL)及水（274 mL)中1-氟-環丁烧甲酸乙酯（1.6 g，8 mmol)之溶液中。在 一個密封管中於80°C將該混合物加熱20小時，同時劇烈攪 拌。使混合物冷卻且經由Celite®過遽。減壓移除溶劑以產 生呈油狀的標題化合物（0.81 g，61%產率），其不經任何進 一步純化直接使用。MS(ES): w/z = 147.1 [M+H]。 製備26 1-三氣甲基-環丙院曱酸甲醋 將己烷（14.2 mL，28.45 mmol)中2 Μ二偶氮基甲烷溶液添 加至曱醇-己院（2.5 mL-22.5 mL)中1·三氟甲基環丙院_丨_曱 酸（3.65 g，23.7 mmol)之溶液中。減壓濃縮且蒸餾殘餘物 以產生呈黃色油狀的標題化合物（2·93 g，73%產率）。 MS(ES): m/z = 169·1 [M+H] 〇 製備27 3-側氧基-3-(1-三氟甲基_環丙基）丙腈 將 THF(19.15 mL’ 38.3 mm〇lH2 M LDa溶液添加至 114873.doc -44 - 1325423 THF(3 0 mL)中1-三氟曱基-環丙烧_!_曱酸甲酯（2 93呂η mmol)及乙腈（1.43 g mL，34.8 mmol)之經乾冰_丙酮冷卻的 溶液中。於-70°C將反應混合物攪拌1 ·5小時接著使其溫至 22°C達2小時。濃縮、添加己烷且過濾以產生黃色固體。 以己院且以***（250 mL)接著2 N HC1(150 mL)洗務。以乙 醚（4x100 mL)萃取水性層。經硫酸鈉乾燥經合倂有機相。 移除溶劑產生3-側氧基-3-(1-三氟尹基_環丙基）_丙腈（299 g，97%產率）。MS(ES-): w/z = 176.1 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 ___ 表 製備 化合物 一~~ 製備28 4,4,5,5,5-五氟-3-側氧基-戊腈--— 製備29 L 5,5,5-二氟-4-甲基-3-側氧基斗-氤甲某· ^-- 5-(1-甲基-環丙基）-2-(6-甲基-吡啶_3_基）_2孖·吡唑_3_基胺 製備30

於90°C在一密封管中將乙醇（85 mL)* 3_側氧基_3·(1•三 氟甲基-環丙基）-丙腈（2.66 g，15.0 mmol)、#-二苯亞甲基_ N，-(6-甲基-吡啶 _3_基）_ 肼（TL，2〇〇2, "，21712173)(4 31 匕 15.0 mmol)及對甲苯基磺酸（14·29 g，75 〇 mm〇i)之混合物 加熱18小時。移除溶劑後，使殘餘物進行梦谬層析以二氯 114873.doc -45· 1325423 曱烷中0-5%曱醇溶離之以產生棕色固體（2.29 g，54%產 率）。MS(ES + ): w/z = 283.2 [M+H]。 製備31 5-五氟乙基-2-對甲苯基-27^-吡唑-3-基胺

在一密封管裝置中將乙醇（20 mL)中4,4,5,5,5-五氟-3-側 氧基-戊腈（4,0 g，21.4 mmol)及對甲苯基-肼（1〇 g，64.1 mmol)之混合物加熱至95 °C達15小時。冷卻至室溫後，減 壓移除溶膠以產生黃色固體。將固體在二氣甲烧（25〇 mL)、蒸館水（15〇 mL)及飽和碳酸氫鈉水性溶液（5〇 mL)之 間分配。分離水性相且以二氯曱烷（1〇〇 mL)萃取》經硫酸 納乾燥經合倂有機相且將其濃縮以產生暗金色油。使油進 行石夕膠層析以乙酸乙酯及己貌溶離之以產生淺栋色固體 (3.24 g，520/〇產率）。MS(ES+): m/z = 292.1 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 製備 化合物 MS(ES+)： nt/z fM+Hl 製備32 2-對甲苯基-5-(1-三氟甲基-環丙基一)- 282.3 2汉-吡唑-3-基胺 製備33 2-對甲苯基-5-(2,2,2-三氟-1-甲基小三 338.3 氟甲基-乙基)-2H-吡唑-3-基胺 製備34 甲基-環丙基）-2-(6-曱基-吡啶_3-基）-2H-。比唑-3- 114873.doc • 46 · 1325423 製備34 [5-(1-曱基-環丙基）-2-(6-曱基-吼啶-3-基）-2H-。比唑-3-基]-胺基甲酸2,2,2-三氯-乙酯 於-15°C將THF(10 mL)中2,2,2-三氣乙基氯甲酸酯（1.80 g，έ.5 mmol)之溶液逐滴添加至THF(30 mL)中5-(1-三敗甲 基-環丙基）-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基胺（2.29 g, 8.1 mmol) 及吡啶（0.9 mL，11 mmol)之冰鹽冷卻的溶液中。於-15°C攪 拌0.5小時接著於22°C攪拌1小時，接著使反應混合物於二 氯甲烷（50 mL)與飽和碳酸氫鈉水性溶液（50 ml)之間分 配。分離水性相且以二氯甲烷萃取兩次（各25 mL)。經硫 酸鈉乾燥經合倂有機相且將其濃縮。使殘餘物進行矽膠層 析以己烷及乙酸乙酯溶離之以產生白色固體（2.46 g，66% 產率）。MS(ES + ): m/z = 457.2 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 製備 化合物 MS(ES): m/z [M+HI 製備35 (5-五氟乙基-2-對曱苯基-2/f-吡唑-3-基)-胺基曱酸2,2,2-三氣-乙酯 466.1 [M+H] 製備36 [2-對曱苯基-5-(1-三氟曱基-環丙基)-2//· 吡唑-3-基]-胺基甲酸2,2,2-三氣-乙酯 458.2 [M+H] 製備37 [2-對甲苯基-5-(2,2,2-三氟-1-曱基-1-三 氟甲基-乙基)-2//-吡唑-3-基]-胺基曱酸 2,2,2-三氣-乙酯 512.2 [M+H] 製備38 5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基）-胺基曱酸2,2,2- 三氣-乙酯 114873.doc • 47· 1325423

將Na2C03(2.4 L)之截和浓沽派如：^

酯（406.77 g，Κ92 m〇l)且於(TC將該混合物攪拌2小時。以 乙酸乙酯（3x6.5 L)萃取反應混合物，使其經無水硫酸鎂乾 燥且很縮。將固體溶解於最小量乙酸乙醋中且添加過量己 烧以、/儿澱。藉由過遽收集固體且將其乾燥以獲得呈奶白色 固體狀的標題化合物（586 g，83%產率）。4 NMR (400 MHz, CDC13) δ 7.34 (d, 2H), 7.29 (d, 2H), 6.78 (bs, 1H), 6.41 (bs, 1H), 4.81 (s, 2H), 2.41 (s, 3H), 1.34 (s, 9H) 〇 MS(ES + ): w/z = 406.1[M+H]。 製備39 [5-(1-甲基-環丙基）-2-對曱苯基-2/f-咐•唑-3-基]-胺基甲 酸2,2,2-三氣乙酯

將二異丙基醯胺鋰（LDA，2.0 M/庚烷；Aldrich ; 2.2當 量，88 mmol, 44 mL)與 THF(1.5 mL/mmol ; 60 mL)合倂且 114873.doc .48- 冷卻至-78°C。在THF(10 mL)中合倂1-甲基環丙烷曱酸甲 S旨（TCI US ; 4.56 g，40 mmol)與 CH3CN(4.20 mL，80 mmol) 且緩慢攪拌添加。於-65至-78°C將混合物攪拌1小時，接著 移除浴且將混合物溫至室溫。將反應混合物減壓濃縮為一 漿料。添加己烷（150 mL)以自該漿料形成沉澱。藉由真空 過濾收集固體且以己烷（2x50 mL)洗滌。接著以乾淨燒瓶 替換捕集燒瓶，且將玻璃料上之固體溶解於50 mL 2.5 Μ HC1中且收集入燒瓶内。以20 mL 2_5 M HC1接著200 mL Et20沖洗。在濾液中分層且以Et2O(150 mL)萃取酸性相。 合倂Et20有機相，以MgS04乾燥，過濾且減壓濃縮以產生 呈澄清琥珀色油狀的3-(1-甲基-環丙基）-3-側氧基-丙腈 (3_58 g，29.1 mmol，73%)。不經純化於回流下用於與鹽酸 曱苯基肼（5.23 g，33.0 mmol)及乙醇（2 mL/mmol)反應達20 hr。使反應混合物冷卻至室溫且減壓濃縮。以乙酸乙酯 (2 5 0 mL)稀釋殘餘物且以水（2x60 mL)、飽和NaHC03水性 溶液（60 mL)及飽和氣化納水性溶液（60 mL)洗蘇。以 MgS04乾燥有機相，過濾且藉由旋轉式蒸發濃縮。使殘餘 物進行矽膠層析以乙酸乙酯及己烷之梯度溶離之以產生5-(1-甲基-環丙基）-2-對甲苯基-2/ί-吡唑-3-基胺（4.2238 g， 18.5 mmol, 46%)。LCMS (ES+): w/z = 228.2 [M+H]。 以氣曱酸2,2,2-三氣乙6旨（3.7 1111，27.5 111111〇1)處理1'11?(3 mL/mmol)中5-(1-甲基-環丙基）-2-對曱苯基-2开比唑-3-基 胺（5.68 g, 25 mmol)及 °比咬（2.2 mL，27.5 mmol)之經冷卻溶 液。將反應溫度維持於〇°C，且2小時後，添加小部分氯甲 114873.doc -49- 1325423 酸酯（0.3 mL)及。比咬（0.2 mL)。一小時後，以水（1 50 mL)稀 釋反應且以EtOAc(3x 100 mL)萃取。以水（100 mL)、飽和 NaHC03水性溶液（50 mL)及飽和氣化鈉水性溶液（50 mL)洗 滌經合倂有機相。自乙酸乙酯/己烷再結晶粗糖漿以產生 呈白色固體狀的標題化合物（8.18 g，20.3 mmol ; 81%)。 LCMS (ES + ): w/z = 402.2/404.2 [M+H]。 或者於0°C將氯曱酸2,2,2-三氣乙酯（3.0 mL，23 mmol)逐 滴添加至四氫呋喃（105 mL)及飽和碳酸鈉水性溶液（32 mL) 中5-(1-曱基-環丙基）-2-對甲苯基-2//-。比峻-3-基胺（4.75 g， 21 mmol)之溶液中《於將此攪拌2小時。將混合物傾倒入 水中且分相。以乙酸乙酯萃取水性相。 發展方法A :合倂有機層且以飽和氯化鈉水性溶液洗 滌，經硫酸鈉乾燥、過濾且減壓濃縮以產生黃色固體。將 固體溶解於最小量乙酸乙醋中且添加己院直至混濁，同時 攪拌。使標題化合物結晶且過濾，得到白色固體。 NMR (DMSO): 9.89 (br s, 1H), 7.31 (d} J = 8 Hz, 2H), 7.23 (d, y = 8 Hz, 2H), 6.12 (s3 1H), 4.82 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 0.89 (q, / = 4 Hz, 2H), 〇.7l (q, / = 4 Hz 2H)。 ’ 發展方法B :以異丙醇（儿％莫耳)交換乙酸乙酯。於 <〇°C將聚料攪拌2小時，過濾，以冷異丙醇（13 〇8莫耳）洗 務且於減壓乾燥隔夜以產生呈白色結晶固體狀的標題 化合物。 使用大體上類似於上述彼等程序 桎序製備以下化合 114873.doc -50- 1325423 物。 表 製備 化合物 MS(ES+): m/z fM+Hl) 製備40 [5-(1-甲基-環己基)-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-胺基甲酸2,2,2-三氣-乙酯 442.2/444.2 製備41 [5-(1-氟甲基-環丙基）·2-對曱苯基_2//_吡唑-3-基]-胺基 甲酸2,2,2-三氯-乙酯

於-78°C在Ν2下在12 mL THF中自二異丙基胺（i.7 mL, 2.2當量 ’ 12.1 mmol)及 n-BuLi(己烷中 1.6 Μ，7.5 mL，2.2 當量’ 12.1 mmol)達30 min製備LDA之溶液。添加7 mL THF中1-氟曱基·環丙烷曱酸乙酯（〇81 g，55 mm〇1)之溶 液。擾拌混合物且使其自-78t溫至室溫，且於室溫繼續 授拌5小時。添加10 mL飽和NH4Ci水性溶液。添加Ac〇Et 且分離有機層，以飽和氯化鈉水性溶液洗滌。經Na2S〇4乾 燥且移除溶劑以產生棕色油（〇 42 g，54%產率）。將油溶解 於10 mL EtOH且添加對甲苯基聯氨（〇 47 g，1當量，3 mmol)。在一密封管中於9〇〇c將混合物加熱隔夜。使混合 物冷卻且減壓移除溶劑以獲得殘餘物。使殘餘物進行矽膠 層析以己烷/AcOEt 15-80%之以產生呈油狀的〇 336 g 5 (1_ 氟甲基-環丙基）-2·對曱苯基·2/Λ吡唑_3_基胺。MS (Es+): w/z = 246.1 [M+H]。 於〇 C在氮下將C1C02CH2CC13(1.〇〇當量；7i7 49微莫 耳；152.01 mg)緩慢添加至4 mL THF中5_(1•氟甲基環丙 基）-2-對比唾_3_基胺（176 mg，〇 71毫莫耳）及吡 114873.doc •51 · 啶之溶液中。自〇°C至室溫將該混合物攪拌5小時。過濾不 溶物且自濾液減壓移除溶劑產生油。使油經受層析（己烷 /AcOEt 20-80%)以產生110 mg呈黃色油狀的標題化合物。 MS (ES + ): m/z = 420.0 [M+H]。 製備42 (2-對甲苯基-5-三甲基矽烷基-2//-吡唑-3-基）-胺基甲酸 2,2,2-三氯-乙酯 將三甲基矽烷基-二偶氮基甲烷（THF中2 M)(25 mL，50 mmol)置於THF(50 mL)中。將反應冷卻至-78°C且經30 min 添加二異丙基醯胺鋰（THF中2 M(25 mL，50 mmol)。添加 丙炔酸曱酯（4.45 mL，50 mmol)且於-78°C攪拌2小時。溫至 室溫且攪拌18小時’添加乙酸乙酯、水及1 ν HC1。分離 有機相且以乙酸乙酯（2x25 mL)萃取水相。合倂有機萃取 物’經MgeCU乾燥、過濾且減壓濃縮。使殘餘物進行矽 膠層析以0-60°/。EtOAc:己烷溶離之以產生3.59 g(36%)5-三 甲基石夕烧基-2//-"比嗅·3·甲酸曱g旨。 將5-三甲基矽烷基_2//_吡唑·3曱酸甲酯（16〇 g，8们 mmol)及4_曱基苯基a •硼酸（1 64 g， 12.1 mm〇0置於

MgiSO4乾燥、過濾且減壓濃縮。 溶液。分離有機相且以 。合倂有機萃取物，經 。使殘餘物進行石夕膠層析 I14873.doc -52- 以0-30% EtOAc:己烷溶離之以產生655 mg(29%)2-對甲苯 基-5-三曱基矽烷基-2//-吡唑-3-甲酸甲酯。MS(ES + ): w/z = 289.3 [M+H])。 將2-對甲苯基-5-三甲基矽烷基-2//-吡唑-3-甲酸甲酯（665 mg，2.30 mmol)置於曱醇（25 mL)中。添加 1 N NaOH(10 mL，10 mmol)且加熱至50°C達4小時。冷卻至室溫且減壓 濃縮。添加飽和碳酸氫鈉水性溶液及CH2C12。分離有機層 且以CH2C12(2x25 mL)萃取水性相。合倂有機萃取物，經 Mg2S04乾燥，過濾且減壓濃縮以產生620 mg(98%)2-對甲 苯基-5-三甲基矽烷基-2/ί-吡唑-3-甲酸。MS(ES+): w/z = 275.3 [M+H]。 將2-對甲苯基-5-三曱基矽烷基-2//-吡唑-3-曱酸（620 mg， 2.26 mmol)置於第三丁醇（5 mL)及曱苯（5 mL)中。添加三 乙基胺（0.378 mL，2·71 mmol)，接著二苯基磷醯基疊氮化 合物（0.5 86 mL, 2.71 mmol)且加熱至60°C達1小時。接著加 熱至100°C達19小時。減壓濃縮反應。使殘餘物進行矽膠 層析以0-30% EtOAc:己烷溶離之以產生504 mg(65%)(2-對 甲苯基-5-三曱基矽烷基-2//-吡唑-3-基）-胺基甲酸第三丁 酯。MS(ES + ): m/z = 346.4 [M+H]。 將（2-對甲苯基-5-三曱基矽烷基-2//-吡唑-3-基）-胺基甲 酸第三丁醋（504 mg，1.46 mmol)置於THF(10 mL)中。添加 二噁烷中4 M HC1(4 mL，16 mmol)且加熱至60°C達3小時。 使反應冷卻至室溫且將其載入Varian™ SCX柱。以MeOH 洗滌枉接著以MeOH中2 Μ NH3沖洗產物。收集濾液且減 114873.doc -53- 1325423 壓濃縮以產生175 mg(49%)2-對甲苯基-5-三甲基石夕院基_ 2//-°比唾-3-基胺。 將2-對曱苯基_5·三曱基石夕烧基-2//-0比唾_3-基胺（170 mg， 0.693 mmol)置於乙酸乙酯（1〇 mL)中。添加碳酸鉀（191 mg，1.3 8 mmol)及水（2 mL)。攪拌反應且添加氣甲酸三氯 乙酯（0.114 mL，0.831 mmol)。於室溫攪拌18小時。添加水 及乙酸乙醋。分離有機層且以飽和氯化納水性溶液洗務。 收集有機層，經Mg2S〇4乾燥、過渡且減麼濃縮。使殘餘 物進行矽膠層析以0-30% EtOAc:己烷溶離之以產生280 mg(96%)標題化合物。MS(ES + ): m/z = 420.2 [M+H]。 製備43 [5-(2-氟-1-氟甲基·ι_甲基-乙基）_2_對甲苯基-2//-吡唑-3-基]-胺基甲酸2,2,2-三氣-乙酯 BH2S04(4.5 g)添加至 MeOH(l L’HPLC 級溶劑）中 3-羥 基-2-經基甲基-2-甲基-丙酸（1〇〇 g)之懸浮液中且經週末於 室溫攪拌（約70 h)。移除溶劑且使殘餘物分溶在EtOAc( 1 L)與H2O(100 mL)之間。以EtOAc再萃取水性層且經MgS04 乾燥經合倂有機層。過濾且減壓濃縮以產生3_羥基_2_羥基 甲基-2-甲基-丙酸曱酯。NMR (CDC13, 300 ΜΗζ): δ ppm 3.9 (d, 2H, J=ll.l Hz), 3.76 (s, 3H), 3.71 (d, 2H, J=ll.l

Hz), 2.8 (bs，2H)，1.1 (s，3H)。 將 Tf2O(80 mL)逐滴添加至 CH2C12(400 mL)及2,6-二曱基 。比啶（80 mL)中3-羥基-2-羥基甲基-2-甲基-丙酸曱酯（32.5 g)之冷（-78°C)溶液中。使反應達到室溫且攪拌直至TLC分 114873.doc -54- 1325423 析僅偵測到產物點（約2 h)。以CH2C12(400 mL)稀釋且以 HCK3%水性溶液）洗滌。經MgS〇4乾燥有機層，過濾且濃 縮。使殘餘物進行矽膠層析以己烷/乙酸乙酯5%溶離之， 以產生呈無色油狀的2·甲基·2,3_雙_三氟甲烷磺醯基氧基_ 丙酸甲醋。 H NMR (CDC13, 300 MHz): δ ppm 4.7 (d, 2H, J=10.3 Hz), 4.5 (d, 2H, J=10.3 Hz), 3.8 (s, 3H), 1.4 (s, 3H) » 向冷卻至0°C的500 mL無水THF中2-甲基-2,3-雙-三氟甲 烷磺醯基氧基-丙酸甲酯（65.9mm〇1，26 3 g)之溶液中添加 TBAF 1 M(132 mmol，132 mL)。攪拌隔夜。減壓濃縮且添 加CHaCh。以飽和氯化鈉水性溶液洗滌有機層。合倂有機 層且經硫酸鈉乾燥、過濾且減壓濃縮以產生3氟_2_氟甲 基-2-曱基-丙酸曱酯。iH NMR (CDCl3, 3〇〇 ΜΗζ): δ 4.7-4.4 (m，4Η)，3·5 (s，3Η)，0.98 (t，3Η，J=1.7Hz)。 向冷卻至-78°C的100 mL無水THF中3·氟-2-氟甲基-2-甲 基-丙酸曱酯（28.2 mmol，4.3 g)之溶液中添加]lDA 2 〇 Μ(62·0 mmol，31 mL)，接著添加無水乙腈（56 4 mm〇1，29 mL)。於-78 C攪拌兩小時且使溶液隔夜溫至室溫。減壓濃 縮且添加ci^ci2»以飽和氯化鈉水性溶液及1〇% HC1水性 溶液洗滌有機層。合倂有機層且經硫酸鈉乾燥，過濾且減 壓濃縮以產生殘餘物。於9(TC將31 mL乙醇中鹽酸對甲笨 基肼（15.5 mmol，2.5 g)及所得殘餘物（15 5 mm〇1，2 5 g)攪 拌隔夜。濃縮，且將殘餘物溶解於水中。添加1〇%氫氧化 鈉溶液，且以乙酸乙醋萃取。合倂有機層且經硫酸鈉乾 114873.doc •55- 1325423 燥，過濾且減壓濃縮以產生5-(2_氟_1•氟甲基_丨“甲基·乙 基）-2·對甲苯基_2汉-吼唾-3基胺。使殘餘物進行矽穆層析 以己烷/乙酸乙酯（15%至50%)溶離之。MS(ES+):讲/2 = 266 [M+H]。 向37 mLTHF中5-(2-氟-1-氟曱基甲基·乙基）2·對曱苯 基-2//-吡唑-3_基胺（7·3 mm〇1，h9 g)之溶液中添加氯甲酸 2,2,2-二氣乙酯（8.1 mm〇i，n mL)及碳酸鈉水性溶液（48 mL)。攪拌24小時。將該溶液傾倒於水中且以乙酸乙酯萃 取。合倂有機層且以飽和氯化鈉水性溶液洗滌。經硫酸鈉 乾燥、過濾且減壓濃縮以產生標題化合物。MS(ES+): w/z =440 [M+H]。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 製備 化合物 MS(ES+): m/z ΓΜ+Η1) 製備44 [5-(2-氟-1，1-二甲基-乙基)-2-對甲笨 424 基-2//-吡唑-3-基]-胺基曱酸2,2,2-三 氣-乙酯 製備45 4-(5-{3·[5-(1-甲基-環丙基）-2-對甲苯基-2/f-吡唑·3·基]-脲基}-吡啶-2-基）-哌嗪-1-甲酸第三丁酯 114873.doc -56- 1325423

於 60°C 將 DMSO(0.25 M，8 mL)中將 4-(5-胺基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-甲酸第三丁酯（製備4，1.05當量，0.5845 g)、 [5-(1-甲基-環丙基）-2-對曱苯基-2//-啦唑-3-基]-胺基曱酸 2,2,2-三氣乙酯（製備39，1.0當量，0.8054 g)及二異丙基乙 基胺（2當量，0.7 mL)之溶液加熱6小時。將所得混合物冷 卻至周圍溫度，且添加水（20 mL)。以EtOAc(2x25 mL)萃 取，接著以水（10 mL)及飽和氣化納水性溶液（10 mL)洗務 經合倂有機相。經MgS04乾燥，接著使殘餘物進行矽膠層 析以二氯曱烷中梯度2 Μ氨-曱醇溶離之。LCMS(ES + ): m/z =532.3 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。

表 製備 化合物 MS(ES+): m/z [M+HD 製備46 4-(3-甲基-5-{3-[5-(l-曱基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-脲基}-吡啶-2-基)-哌嗪-1 -曱酸第三丁酯 546 製備47 4-(6-曱基-5-{3-[5-(1·甲基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-脲基}-吡啶-2-基)-哌嗪-1 -曱酸第三丁酯 546 製備48 4-(3-甲基-5-{3-[5-(l-曱基-環己基)-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-脲基}-吡啶-2-基)-哌嗪-1 -曱酸第三丁酯 588.3 114873.doc • 57· 製備49 4-{5-[3-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/ί-«比唑-3-基）-脲基；μ 6-甲基-吡啶-2-基}-哌嗪-1-曱酸第三丁酯 於 60-65°C 將 DMSO(5 00 mL)申 4-(5·胺基-6-甲基-吡啶 _2-基）-哌嗪-1-甲酸第三丁酯（製備3，41.20 g，140_9 mmol)、 (5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基）-胺基曱酸、2,2,2-三氣-乙酯（製備 38，57.03 g，140.9 mmol)及 DIEA(36.8 mL， 211.4 mmol)之溶液加熱2.5小時。最後30 min期間向濃稠 漿料添加額外的DMSO(100 mL)。將漿料冷卻至室溫且使 其靜置隔夜。添加***（600 mL)且於室溫將漿料授拌i小 時。過濾且以***（5x300 mL)洗滌接著風乾以產生白色固 體（68.70 g，89%產率，未經DMSO校正-含有約85莫耳％ DMSO)。LCMS(ES+): w/z = 548 [M+H]。 製備50 1-[5-(1-甲基-環丙基）-2-對曱苯基-2丑-吡唑-3-基]-3-(2-曱基-6-哌嗪-1-基-吡啶-3-基）-脲

使氣態鹽酸通入於1 : 1之乙酸乙酯：二氣甲烷（2〇〇 mL)中 4-(6-甲基-5-{3-[5-(l-曱基-環丙基）·2·對甲苯基比嗤-3- 114873.doc -58- 1325423 基]-脲基}-吡啶-2-基）-哌嗪·丨_曱酸第三丁酯（假設2 μ mmol)之溶液起泡達3 min以確保飽和。使混合物靜置邗 min接著減壓濃縮成白色固體。將該固體溶解KMe〇H中且 將其載至20 g Vadan SCX柱上’以額外2Me〇H沖洗。以 1 : 1的MeOH中2 Μ氨：二氣曱烷溶離游離鹼。減壓濃縮溶 液以產生白色固體（1·21 g，經兩步99%)。LCMS(ES + ): =446 [M+H]。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 製備 化合物 MS(ES+): m/z ίΜ+Hh 製備51 卜甲基-環丙基)_2_對甲苯基·2//-°比唑_3·基]-Η5-曱基-6-略嗪-1-基-吡 咬-3-基)-腺 446 製備52 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基_2//_吡唾-3-基）_3-(6-旅唤-1_ 基-Dtt咬-3-基）-脉 將4-(5-胺基比咬-2-基）-哌嗪_ι·甲酸第三丁酯（2〇〇 mg， 0.718 mmol)、二異丙基乙基胺（0.125 mL，0.718 mmol)及 (5 -第三丁基-2-對甲苯基吡唑-3-基）-胺基甲酸、2,2,2-三氣-乙酯（製備 38 ’ 291 mg，0.718 mmol)置於DMSO(5 mL) 中且加熱至75°C達17小時。冷卻至室溫且添加EtOAc及 水。分離有機層且以飽和氯化鈉水性溶液洗滌（2x20 mL)。收集有機層，經Mg2S04乾燥、過濾且減壓濃縮。使 殘餘物進行矽膠層析以0-70% EtOAc:己烷溶離之以產生 114873.doc -59- 1325423 328 mg(85%)4-{5-[3-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-。比唑-3-基）-脲基]-吡啶-2-基}-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。MS(ES+): m/z = 534.4 [M+H])。

將4-{5-[3-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基）-脲 基]-0比咬-2-基}-1 2 底嘻-1-甲酸第三丁酯（565 mg, 1.06 mmol) 置於THF(10 mL)中。添加二噁烷中 4 M HC1(2.65 mL，10.6 mmol)且加熱至60°C達3小時。使反應冷卻至室溫且將其載 入Varian™ SCX柱。以MeOH洗滌柱接著以MeOH中2 Μ ΝΗ3沖洗產物。收集濾液且將其減壓濃縮以產生411 mg(89%)標題化合物。MS(ES+): m/z = 434.2 [Μ+Η])。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 製備 化合物 MS(ES+): 々丨M+HD 製備53 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-(5-曱基-6-哌嗪-1-基比啶-3-基)-脲 448.5 製備54 鹽酸1 -(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-〇比吐-3-基)-3-(5-氯-6-派°秦-1-基比咬-3-基)-脲(未純化） 468.4 製備55 1-(6_娘嘻-1-基·σ比咬·3_基)-3-(2-對甲 苯基-5-三甲基矽烷基-2//·吡唑-3-基)-脉 450.4 製備56

114873.doc -60- 1 _(5_第三丁基-2-對曱苯基-2//-吼唑-3-基）-3-(2-曱基-6-旅°秦_ 1_基_ 比咬_ 3 -基）-腺 2 以 HC1(二。惡炫中 4 N 溶液，300 mL，1200 mmol)處理 MeOH(600 mL)中 4-{5-[3-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡 1325423 唑-3-基）-脲基]-6-曱基-吡啶-2-基}-哌嗪-1-甲酸第三丁酯 (製備49 ; 63.20 g，115.4 mmol)之22°C下之溶液。將該混 合物攪拌4小時接著減壓濃縮（室溫，約10托，3天）以產生 呈奶白色粉末狀的二鹽酸1-(5·第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡 唑-3-基）-3-(2-甲基-6-哌嗪-1-基比啶-3-基）-脲（62.2 g-含有 約 45莫耳 ％二鳴、烷）。LCMS(ES + ): m/z = 448 [M+H]。 將MeOH中二鹽酸1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吼唑-3-基）-3-(2-甲基-6-0辰0秦-1-基-β 比咬-3-基）-腺（10 g，19.2 mmol) 之溶液載入70 g Varian SCX柱上，以MeOH(約300 mL)沖 洗。以1:1 MeOH中2 ]V[氨：二氣曱烧（150 mL)溶離游離驗。 減壓濃縮以產生白色固體（6.24 g)。LCMS(ES+): m/z = 448 [M+H]。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物0 表 製備 化合物 MS(ES+): nt/z ίΜ+Η1) 製備57 1-[5-(1-甲基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-〇tb唾_3_基]-3·(6_略嗓-1-基-ο比咬-3-基) 脲 432.2 製備58 1-[5-(1-甲基-環己基)-2-對曱苯基-2/f-吡嗤-3-基]-3-(5-甲基-6-旅唤-1-基-口比 啶-3-基)-脲 488.5 製備59

1-(5-第三丁基-2-對曱笨基_2丑-吡唑-3-基）-3-[2-曱基-6-(哌啶-4-基氧基）·吼啶-3-基]-脲 114873.doc -61 -

1325423 使氮氣經由DMS0(3 mL)中卜5-第三丁基_2·對甲苯基_ 扯峻-3-基）-胺基甲酸2,2,2_三氯-乙酯（製備％，608 mg， 1.5 mmol)及4-(5-胺基-6-甲基比啶_2·基氧基）_哌啶-! •曱酸 第三丁酯（453 mg，1.5 mmol)之溶液起泡達5 min。接著添 加二異丙基乙基胺（5〇〇 pL，3_0 mmol)。於6〇°C授摔隔 夜，接著使反應混合物在乙酸乙酯（25 mL)與飽和碳酸氣 鈉水性溶液（50 mL)之間分配。分離水性相且以乙酸乙醋 萃取兩次（各25 mL)。經硫酸鈉乾燥經合倂有機相且將其 濃縮。使殘餘物進行矽膠層析以己烷及乙酸乙酯溶離之以 產生呈掠色固體狀的4-{5-[3-(5-篇三丁基-2-對甲苯基_ 0比唆-3-基）-腺基]-6-曱基比咬-2-基氧基}-派鳴-1-曱酸第三 丁酯（746 mg，88%產率）。MS(ES+): w/z = 563.3 [Μ+Η]。 添加三氟乙酸（10 mL)至二氯曱院（20 mL)中4-{5-[3·(5-第三丁基_2_對甲苯基-2if-吡唑-3-基）-脲基]-6-甲基-吡咬-2-基氧基}-哌啶-1-甲酸第三丁酯（746 mg，1.33 mmol)之冷 溶液中。於22°C將反應混合物擾拌2 5 min。移除溶劑後， 以1 N氫氧化鈉（20 mL)處理殘餘物且以二氣曱烷（各20 mL) 萃取三次❶經硫酸鈉乾燥經合倂有機相。移除溶劑產生白 色固體（605 mg，98% 產率）。MS(ES + ): = 463.2 [M+H]。 114873.doc ·62· 1325423

使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 製備 化合物 MS(ES+): m/z [M+HD 製備60 1 -(5-第三丁基-2-甲基-2//-吡唑-3-基)-3-[6-(派咬-4-基氧基)-°比咬-3-基]_ 脲 373.3 製備61 1-[5-第三丁基-2-(6-曱基-吼啶-3-基)-2//-吡唑-3-基]-3-(2-曱基-6-哌嗪-1- 基基)-腺 449.2 製備62 1-(2-曱基-6-哌嗪-1-基-吡啶-3-基)-3-[2-(6-甲基-»比啶-3-基)-5-(1-三氟曱基-環丙基)-2//-吡唑-3-基]-脲 501.3 製備63 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/ί-吡唑-3-基)-3-[6-(哌啶-4-基氧基)-»比啶-3-基]-脲 449.2 製備64 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3·[5-曱基-6-(派咬-4-基氧基)-0比 咬-3-基]-腺 463.2 製備65 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/ί-吡唑-3-基)-3·[5-氯-6-(派咬·4-基氧基)-0比 咬-3-基]•腺 483.3 製備66 1-(2-甲基-6-派°秦-1-基比咬-3-基)-3-(5-五氟乙基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-脲 510.4 製備67 1-(2-曱基-6-略嗜'-l-基比咬-3-基)-3-[2-對曱苯基-5-(1-三氟曱基-環丙基)-2//-吡唑-3-基]-脲 510.4 製備68 鹽酸1-[5-(2 -亂-1-鼠甲基-1 -甲基-乙基）-2-對曱苯基-2//-。比唑-3-基]-3-(2-曱基-6-哌嗪-1-基-α比啶-3-基）-脲 向4 mL DMSO中4-(5-胺基-6-甲基-吡啶-2-基）-哌嗪-1-甲 酸第三丁酯（2.9 mmol，0.9 g)之溶液中添加[5-(2-氟-1-氟曱 基-1-甲基-乙基）-2-對曱苯基-277-吡唑-3-基]-胺基甲酸 114873.doc -63- 1325423 2,2,2-三氣-乙酯（2.7 mmol，1.2 g)&DIEA(2 9 mm〇1，〇 5 mL)且於85°C攪拌隔夜。冷卻，添加水且以CH2Ci2萃取。 合倂有機層且以飽和氯化鈉水性溶液洗滌。經硫酸鈉乾 燥，過濾且減壓濃縮以產生4-(5-{3-[5-(2-氟-1-氟曱基_卜 曱基·乙基）-2-對甲苯基-2开比嗤-3_基]_脲基卜6·甲基吼 啶-2-基）-哌嗪-1-曱酸第三丁酯。使殘餘物進行矽膠層析以 梯度（10至50%)之己烧/乙酸乙醋溶離之。ms(es+)· = 584 [M+H])。 於至^〇>下將/谷解於5 1111^(1；112(212及二《>惡烧中4.〇^鹽酸 (7.35 mmol，1.8 mL)中的 4-(5-{3-[5·(2-氟-1_ 氟甲基 -甲 基-乙基）-2-對甲苯基-2/7-吡唑-3-基]-脲基卜6_曱基_0比啶_2_ 基）-哌嗪-1-甲酸第三丁酯（1.5 mmol, 〇.9 g)擾拌隔夜。濃 縮’接著以***濕磨所形成白色固體。MS(ES+): m/z = 484 [M+H])。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 製備 化合物 MS(ES+): m/z ΓΜ+Η1 製備69 鹽酸1-[5-(2-氟-1，1-二甲基-乙基)-2-對 曱苯基-2丑-0比嗤-3-基]-3-(2·曱基-6-旅 °秦-1 -基-β比咬-3-基)-腺 466 製備70 1-(5-篇三丁基-2-對曱苯基比唾-3-基）-3-[6-(旅咬-4- 基胺基）-n比咬-3-基]-腺 向乙腊（25 mL)中4-(5-胺基-0比咬-2-基胺基）_派咬·ι·曱酸 114873.doc -64- 第三丁酯（2·0 mm〇l，〇_6 g)及碳酸鉀（2.20 mm〇丨，〇 3 g)之溶 液中添加（5-第三丁基-2-對甲苯基-2扒吡唑基）_胺基^ 酸2,2,2-三氣-乙酯（製備38，2.0 mmol，〇·8 g) »於室溫下將 溶液攪拌12小時。添加水且以C^CI2萃取。合倂有機層且 以飽和氯化鈉水性溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥、過據且減壓 濃縮以產生殘餘物。使殘餘物進行矽膠層析以梯度（〇 5至 20%)的CH2Cl2:MeOH溶離之以產生4-{5-[3-(5-第三丁基·2_ 對甲苯基-2丑-吡唑-3-基）-脲基]-吡啶-2-基胺基}_哌啶_；!_甲 酸第三 丁酯。MS(ES+): w/z = 548 [Μ+Η])。 以 HC1(***中 2_0 Μ溶液，5 mL，1〇 mm〇l)處理Et2〇(5 mL)中4_{5-[3-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2F-。比唑-3-基 基]比咬-2-基胺基}-派咬-1-曱酸第三丁酯（1.1 mmol，0.6 g)之22°C溶液。於室溫將溶液攪拌隔夜。減壓濃縮以產生 殘餘物，接著使殘餘物經受以甲醇中2.0 N氨溶離的SCX濾 筒。獲得呈游離鹼的標題化合物》MS(ES): m/z = 488 [M+H]。 製備71 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/f_吡唑-3-基）-3-[2-(哌啶-4· 基氧基丨-吼咬-4 -基]-腺

114873.doc -65- 1325423 於60°C下將4-(4-胺基-吡啶-2-基氧基）-哌啶-1-甲酸第三 丁酯（製備20，1 g，3.41 mmol)、（5-第三丁基-2-對甲苯基-277-吡唑-3-基）-胺基甲酸2,2,2-三氣-乙酯（製備38，1.38 g， 3.41 mmol)及二異丙基乙基胺（1_2 mL，6.82 mmol)於 DMSO(15 mL)中之溶液加熱5天。將所得混合物冷卻至室 溫且使其分溶於水與乙酸乙酯之間，使用飽和氣化鈉水性 溶液協助相分離。以乙酸乙酯萃取水性層，以水將經合倂 有機層洗務兩次，經硫酸納乾燥且減壓濃縮。使殘餘物進 行矽膠層析並以乙酸乙酯於二氣曱烷中之梯度溶離之以產 生877 mg(43%產率）之4-{4-[3-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/f-吡唑-3-基）-脲基]-吡啶-2-基氧基}-哌啶-1-曱酸第三丁 酯。LCMS ES+ (ττί/ζ) 549 [M+H]。 以HCl(g)的起泡流處理4-{4-[3-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/7-吡唑-3-基）-脲基]-吡啶-2-基氧基}-哌啶-1-甲酸第三丁 酉旨（877 mg, 1.6 mmol)於1 : 1 EtOAc:DCM(100 mL)中之溶 液達3 min。使所得混合物靜置3 0 min，接著減壓濃縮。將 殘餘物溶解於MeOH中且將其載於20 g Varian SCX柱上， 以MeOH徹底沖洗。以1 : 1 DCM:MeOH中之2 Μ氨溶離游 離鹼。將溶液減壓濃縮以定量產率產生標題化合物。 LCMS ES+ (w/z) 449 [Μ+Η]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 製備 化合物 MS(ES+): m/z [M+Hl 製備72 1-[5-(1-甲基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-3-[2-(痕咬-4-基氧基)-σ比咬-4-基]-腺 447 114873.doc -66- 1325423

實例1 1-{6-[4-(2,2-二曱基-戊醯基）-哌嗪-1-基]-咐*啶-3-基}-3-[5·(1-甲基-環丙基）-2-對曱苯基-27/-。比唑-3-基]-脲

以鹽酸N-(3-二曱基胺基丙基）-N，-乙基碳化二醯亞胺 (EDC 1.15當量，0.0767 g)處理1-[5-(1-曱基-環丙基）-2-對 甲苯基-2//"-0比。坐-3-基]-3-(6-0底0秦-1-基-u比咬-3-基）-腺，（製 備5，1當量’ 0.1510 g)、2,2-二甲基戊酸（1.15當量， 0.0521 g)及催化DMAP(約0.1當量，0.049 g)於二氯甲烷（約

0.1 M，5 mL)中之溶液或漿料》於周圍溫度下將所得混合 物授動48小時’接者以飽和碳酸氫納水性溶液洗滌。經硫 酸納乾燥有機層且將其減壓濃縮。純化A :在;s夕膠上使用 二氯甲烷中之2 Μ氨-甲醇梯度、二氯甲烷或己烷中之乙酸 已酯梯度純化之。純化Β :使用乙腈中之1〇 酸氫銨 水性溶液之梯度在Xterra 30x75 mm 5微米之MS C18柱上 藉由反相純化可產生標題化合物。LCMS (Es+): = 544· [M+H]。 程序之程序製備以下化合 使用大體上類似於上述彼等 物。 114873.doc -67- 1325423 表 實例 化合物 MS(ES+): (m/z) ΓΜ+Η] 2 曱基-環己烷幾基)派嗓小-基]•吡啶-3-基} -3-[5-(l -曱基-環丙基)_2-對甲苯基-2/f-吡唑-3-基μ服 556 3 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)_ 哌嘹 _ι_ 基]_ °比咬-3-基}-3-[5-(1-甲基-環丙基)_2·對 甲苯基-2//-吡唑-3-基1-服 572 實例4 1-(5-第二丁基-2-對曱苯基_2β-吡唑-3-基）-3-{6-[4-(2,2-二 甲基-丙醯基）-哌嗪-1-基]_2_甲基_吡啶_3_基卜脲曱磺酸鹽 〇

以鹽酸N-(3-二甲基胺基丙基）_N，_乙基碳化二醯亞胺 (EDCI，101 mg，0.53 mmol)處理二氯甲烧（3.5 ml)中 1-(5-第二丁基·2_對曱笨基-2丑-吡唑-3-基）-3-(2-曱基-6-哌嗪-1-基-吡啶-3-基）-脲（製備56，157 mg，0.3 5 mmol)、三曱基乙 酸（54 mg，〇·53 mmol)及催化DMAP(4 mg)之混合物。於室 溫下將所得混合物攪拌隔夜接著以飽和碳酸氫鈉水性溶液 洗務。經硫酸納乾燥有機層且將其減壓濃縮。使殘餘物進 行石夕膠層析以二氯甲烷中2 Μ氨-曱醇之梯度溶離之以產生 呈游離驗的標題化合物。LCms(ES+): w/z = 5 32 [Μ+Η]。 以二氣甲烧（1當量；〇 155 mL)中2 Μ甲磺酸處理二氯曱 U4873.doc • 68 - 1325423 烷（5 mL)中游離胺之溶液或漿料。攪拌所得混合物，在氮 流下濃縮且減壓乾燥以產生鹽。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表

實例 化合物 LCMS (ES+): m/z fM+Hl 5 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-吡啶-3-基}•脲曱磺酸鹽 588 6 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2i/-〇比唑-3-基)-3-{2-曱基-6-[4-(l-甲基-環丙烧裁基)-略嘻-1-基]-σ比咬-3-基}-脲甲磺酸鹽 530 7 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-"比唑-3-基)-3-{6-[4-(2,5-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 588 8 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-。比唑-3-基)-3-{6-[4-(2,4-二氟醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 588 9 1-(5-第三丁基-2-對曱笨基-2//-。比0坐-3-基)-3-{6_ [4-(2,3-二氟-节醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-吡啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 588 10 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-»比唑-3-基)-3-{6-[4-(3,4-二氣-节酿基)-派嗓-1-基]-2-曱基·σ比咬-3· 基}-脲曱磺酸鹽 588 11 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-»比唑-3-基)-3-{6-[4-(3,5-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基比啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 588 12 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-。比唑-3-基)-3-{6-[4-(2,6-二曱基-节醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-吡啶· 3-基}-脲曱磺酸鹽 580 13 1 -(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-»比唑-3-基)-3-{6-[4-(2-氟-6-曱氧基-节酿基)-略嗓-1-基]-2-曱基-α比 啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 600 14 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2-氯-6-氣-午酿基)-略嘻-1-基]-2-甲基-σ比咬-3-基}-脲甲磺酸鹽 604 15 1_[6-(4-苄醯基-哌嗪-1-基)-2-甲基-吡啶-3-基]-3-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-脲曱績 酸鹽 552 114873.doc •69- 1325423

實例 化合物 LCMS (ES+): m/z [M+H1 16 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-。比唑-3-基)-3-{6-[4-(2-敦-节趨基)-派嘻-1-基]-2-甲基咬-3-基}-脲曱磺酸鹽 570 17 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-»比唑-3-基)-3-{6-[4-(2-曱基-卞酿基)-派嗓-1-基]-2-曱基比咬-3_ 基}-脲甲磺酸鹽 566 18 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-(6-[4-(2-氮基-节酿基)-派嘻-1-基]-2-曱基比咬-3-基}-脲曱磺酸鹽 577 19 1-(5-第二丁基-2-對甲苯基-之开-吼0坐-3-基)-3-{6-[4-(2-曱氧基-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-。比啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 582 20 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-(6-[4-(2-氯·卡酿基)-略0秦-1-基]-2-曱基-0比咬-3-基}-脲曱磺酸鹽 586 21 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-"比唑-3-基)-3-{6-[4-(2-三氣曱基-节酿基)-°底°秦-1-基]-2-甲基-σ比咬_ 3-基}-脲甲磺酸鹽 620 22 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(3-氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-吼啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 570 23 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(3-曱基-午酿基)-派嘻-1-基]-2-甲基-D比咬-3-基}-脲曱磺酸鹽 566 24 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-»比唑-3-基)-3-{6-[4-(3-氰基-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 577 25 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(3·曱氧基-节酿基)-派°秦-1-基]-2-甲基-D比咬-3_ 基}-脲曱磺酸鹽 582 26 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-«比唑-3-基)-3- {6-[4-(3-氣-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-〇比啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 586 27 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(3-三氟曱基-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 620 28 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2丑-吡‘-3-基)-3-{6-[4-(4-說酿基)-痕0秦-1-基]-2-曱基比咬-3-基}-脲曱磺酸鹽 570 29 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-。比唑-3-基)-3-{6-[4-(4-曱基-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 566 114873.doc ·70· 1325423

實例 化合物 LCMS (ES+): m/i fM+H] 30 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3·{6-[4-(4-曱氧基-节醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-。比啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 582 31 1-(5-第三丁基-2-對曱笨基-2/ί-吡唑-3-基)-3-{2-甲基·6-[4-(°^吩-3-幾基)-派。秦-1-基]-σ比咬-3-基}-脲甲磺酸鹽 558 32 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-°比唑-3-基)-3-{2-甲基-6-[4-(售吩-2-幾基)-派嗓-1-基]-α比咬-3-基}-脲曱磺酸鹽 558 33 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-。比唑-3-基)-3-{2-曱基-6-[4-(3-曱基-噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基卜脲曱磺酸鹽 572 34 1 -(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-°比唑-3-基)-3-{2-甲基-6-[4-(σ比咬-2-獄基)-派°秦-1-基]-吼咬-3_基}-脲曱磺酸鹽 553 35 1_{6-[4-(2-氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-。比啶-3-基}-3-[5-(1-曱基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-°比唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 568 36 1_{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-吡 啶-3-基}-3-[5-(卜曱基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-吡. 唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 586 37 1-[5-(1-曱基-環丙基)-2-對曱苯基-2丑-。比唑-3-基]-3-{2-曱基-6-[4·(3-甲基-隹吩-2-幾基)-派α秦-1-基]-0比咬-3-基}-腺甲續酸鹽 570 38 1-{6-[4-(2,2-二曱基·丙醯基)-哌嗪-1-基]-5-甲基-。比啶-3-基}-3-[5-(1-甲基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 530 39 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-5·甲基-吡 啶-3-基}-3-[5-(1-曱基-環丙基)-2-對曱笨基-2//-»比 唑-3-基]-脲甲磺酸鹽 586 40 1-{6-[4-(2-故-卡醒基)-痕°秦-1-基]-5-曱基-0比咬-3-基}-3-[5-(1-曱基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 568 41 1-[5-(1-甲基-環丙基)-2-對曱苯基-2//-°比嗤-3-基]-3·{5-曱基-6-[4_(1·甲基-環丙烧幾基)-旅°秦_1·基]-吡啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 528 42 1-[5-(1-曱基-環丙基)-2-對曱笨基比唾-3-基]-3-{5-甲基-6-[4-(3-曱基-0¾吩-2-幾基)-旅°秦-1-基]-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 570 43 1-{6-[4-(2,2-二曱基-丙醯基)-哌°秦-1-基]-5-曱基-吡啶-3-基}-3-[5-(1-甲基-環己基)-2-對曱苯基-2//· '比唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 572 114873.doc -71 - 1325423 實例 化合物 LCMS (ES+): m/z [M+Hl 44 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-5-曱基比 咬-3-基}-3-[5-(1-甲基-環己基)-2-對甲苯基-2//-。比 唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 628 45 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,6-二氣-苄醯基)-哌嗪-1 -基]-2-甲基比啶-3-基}-腺曱續酸鹽(rxn時間=5 d，HOBt(0.59 mmol) 代替DMAP) 620 實例46

1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2丑-唑吡唑-3-基）-3-{6-[4-(2,6-二氣-节酿基）-派嗓-1-基]-0比咬-3-基}•-腺 將1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2开-吡唑-3-基）-3-(6-哌嗪-1-基-α 比咬-3-基）-脲（48 mg，0.111 mmol)、2,6-二氟苯甲酸 (21 mg, 0.133 mmol)及 4-7V,iV-二曱基胺基吡啶（3 mg，0.022 mmol)置於乙腈（5 mL)中。添加六氟填酸(9-(7-氛雜苯幷三 唑-1-基四甲基錁（HATU)(50 mg，0.133 mmol) 且加熱至70°C達19小時。冷卻至室溫且添加CH2C12及水。 分離有機層且以CH2C12(2x25 mL)萃取水性層。合倂有機 層，經Mg2S〇4乾燥、過濾、且減壓濃縮。使殘餘物進行石夕 膠層析以0-60% EtOAc:己烷溶離之以產生標題化合物。 LCMS(ES): m/z = 574.2 [M+H]。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 實例 化合物 MS (ES+): m/z [M+Hl 47 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/i-。比唑-3-基)-3-{6-[4-(2,6-二氣-苄醯基)-哌嗪-1-基]-»比啶-3-基}-脲 608 48 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-"比唑-3-基)-3-[6-(4- 壞丙烧叛基-痕嘻-1-基)-°比咬-3-基]-腺 502.2 114873.doc -72- 1325423 實例 化合物 MS (ES+): w/z fM+H] 49 H5-第三丁基-2-對甲苯基-2/f-吡唑-3-基)-3_{6-[4-C3-甲基-售吩-2-幾基)-派《秦-1-基]-nfc咬-3-基}-服 558.3 實例50 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2汉-«比 4 -3-基）-3-{6-[4-(2，2_ 二甲基-丙醯基）-哌嗓-1-基]比啶-3-基}-腺 將1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基）-3-(6-哌嗪-1-基比咬-3-基）-脲（200 mg，0.46 1 mmol)、三乙基胺（0.071 mL，0_507 mmol)及 4-#，#-二甲基胺基吡啶（6 mg，0.051 mmol)置於CH2C12(10 mL)中。添加2,2-二甲基-丙醯氯 (0.062 mL，0.507 mmol)且於室溫攪拌17 h。使殘餘物進行 石夕膠層析以0-100% EtOAc:己烷溶離之以產生175 mg(73%) 標題化合物。MS(ES + ): m/z = 5 1 8.2 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 實例 化合物 MS (ES+)：/«/^ [M+H]_ 51 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,2_二甲基-丙醯基)-哌嗪小基]_5·甲基』比啶·3_基卜 脲 532.3 52 1-(5-第二丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{5-氣-6-[4_(2,2-'曱基-丙酿基)_旅嗓-1-基]-。比咬-3-基}-腺 552.2 實例53 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基）-3-{6-[4-(3-甲 基-戊醯基）-哌嗪-1-基]-η比啶_3_基}-脲 使1-(5-第二丁基-2 -對曱笨基-2 η比嗤_3_基）-3-(6-0底嗪_ 1-基-吡啶-3-基）-脲（0.20 g，0.46 mmol)與懸浮於混合物 CH2C12/DMF(18/1，mL)中之 3-甲基-戊酸（〇·〇59 g，0.51 114873.doc •73- 1325423 mmol)、水合1-經基苯幷三嗤（0.06 g，0.46 mmol)及聚合物 支撐的碳化二醯亞胺（0.83 g，1.0 mmol)反應。於室溫將混 合物攪拌隔夜接著過濾且以CH2C12洗滌樹脂。濃縮且以用 NH4OH/CH3〇H 2N溶離的SCX濾筒純化殘餘物以產生135 mg(5 5%)呈淺粉紅色固體狀的標題化合物。MS(ES + ): m/z =532 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表

實例 化合物 MS(ES+): m/z fM+Hl 54 1-(5-第二丁基-2-對曱苯基-2//-°比°坐-3-基)-3_ {6-[4-(2-壞戍基-乙酿基)-派0秦-1 基}-脲 544 55 1 -(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,2,3,3-四曱基-環丙烷羰基)-哌嗪-1-基]-fftb咬-3-基}-腺 558 56 1 -(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(1-曱基-環丙院幾基)-fl底嘻-1-基]比咬-3-基}-腺 516 57 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-[6-(4-環丁院幾基-派嘻-1-基)-°比咬~3·基]-腺 516 58 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(1-曱基-環己烷羰基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-脲 558 59 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2H-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,2-二曱基戍酿基)-略嘻-1-基]比咬-3_ 基}•脲 546 60 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2·甲基-環丙燒幾基)-娘。桊-1-基]-α比咬-3-基}-腺 516 實例61 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2付-吡唑-3-基）-3-{6-[4-(2,6-二氣-节臨基）-0底嗓-1_基]_ 5 -曱基-0比咬-3 -基}-腺 將1-(5-第三丁基-2-對曱笨基-2//-吡唑-3-基）-3-(5-甲基- 114873.doc -74- 1325423

6-口底°秦-1-基-°比°定-3-基）-脲（300 mg, 0.670 mmol)、鹽酸iV-(3-二曱基胺基丙基）-#·-乙基碳化二醯亞胺（154 mg，0.804 mmol)、2,6 -二氟苯甲酸（127 mg，0.804 mmol)及 4-_/V，iV·二 甲基胺基。比咬（15 mg，0· 1 34 mmol)置於乙腈（10 mL)中。加 熱反應至60°C達18小時。將反應冷卻至室溫且添加CH2C12 及水。分離有機層且以CH2C12(2x20 mL)萃取水性層。合 倂有機層，經Mg2S04乾燥、過濾且減壓濃縮。使殘餘物 進行矽膠層析以10-70% EtOAc:己烷溶離之以產生標題化 合物。MS(ES+): m/z = 588.3 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 實例 名稱 MS(ES+): wUM+Hl 62 1-(5·第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-[6-(4-環丙烧幾基-派嘻-1-基)-5-曱基咬-3-基脲 516.3 63 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{5-曱基-6-[4-(3-曱基-噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]比咬-3-基}-腺 572.3 64 1-(5-第三丁基_2_對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{5-氣-6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-吡 咬-3-基}-腺 608.0 65 1 -(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-[5-氣-6-(4-環丙烧幾基-旅唤-1-基)-°比咬-3-基]- 脲 536.2 66 1 -(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{5-氣-6-[4-(3-曱基-售吩-2-幾基)-派唤-1-基]-吡啶-3-基}-脲 592.0 67 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-3-(2-對甲苯基-5-三曱基矽烷基-2丑-吡唑-3-基)-脲 590.2

實例68 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/ί-η比唑-3-基）-3-{6-[4-(2,6-二 114873.doc -75- 氣-苄醯基）-哌嗪-1-基]-2-甲基-η比啶-3-基}-脲單甲磺酸鹽

將[4-(5-胺基-6-曱基比啶-2-基）-哌嗪-1_基]-(2,6-二氟-苯基）-曱酮（1.00 當量，601.77 mmol，200.00 g)、5-第三丁 基-2-對甲苯基_2丑_吡唑_3_基）_胺基甲酸、2,2,2_三氯-乙酯 (1.00 當量，602.88 mmol，244.00 g)、N，N-二曱基胺基吡 咬（60.47 mmol，7·50 g)、二異丙基乙基胺（229.36 mmol, 40·00 mL，29.64 g)、DMSO( 1.00 L)添加至兩個具有頂置式 攪拌之5 L三頸燒瓶中。緩慢加熱且維持於60〜65°C。添 加DMSO(25 0 mL)且於〜65°C繼續授拌1小時。添加MTBE 接著於〜60°C維持〇_5小時。冷卻至室溫。藉由過濾收集 固體且合倂。以MTBE沖洗濾餅且使其減壓乾燥隔夜。將 材料溶解於9 L曱醇中’接著以活性碳（65 g)於回流處理1 小時。經由Celite®過濾混合物。濃縮濾液，接著將溶劑交 換為乙酸乙g旨。過滤’以乙酸乙輯、庚烧沖洗，且於 減壓下乾燥以產生1-(5-第三丁基-2-對甲苯基_2扒吡嗤_3_ 基）·3-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基）-哌嗪-1-基]_2·甲基比啶_3_ 基}-腺（490 g)。 將1-(5 -第三丁基-2-對甲苯基-2仏〇比唾-3_基）_3_{6_[4_ (2,6-二氟-苄酿基）-旅嗓-1-基]-2 -甲基-D比咬基卜服（1 〇〇 H4873.doc • 76- 1325423

當量 ’ 600.67 mmol，3 53.00 g)及甲醇（3.50 L)饋入一個5 L 燒瓶中。將混合物加熱至50_60〇C。逐滴添加25〇 mL乙酸 乙醋中之甲續酸（1.00 當量 ’ 603.49 mmol, 39.56 mL，58.00 g)。將溶液於〜50°C授拌0.5小時，接著移除加熱源。攪拌5 小時，接著過濾。減壓下濃縮濾液。添加乙酸乙酯（3〇〇 mL)且減壓濃縮。添加額外3〇〇 mL乙酸乙酯且減壓濃縮。 添加2 L***接著攪拌15分鐘。使其靜置隔夜。攪拌3小時 接著過濾。以***及庚烷沖洗，接著於〜4(rc減壓乾燥以 產生標題化合物（391.4 g) » 實例69 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2好_吡唑_3_基）_3_[6 ((反）4-環丙烷羰基-2,5-二曱基-哌嗪_丨_基）_5_甲基_吡啶·3_基卜脲 將外消旋-[(反）-4-(5-胺基_3_曱基·0比啶_2_基）25二曱 基-哌嗪-1-基]-環丙基-甲酮化合物（製備9，〇丨〇 W mmol)及5-第三丁基-2_對甲苯基_2丑吡唑_3基）胺基甲 I 2,2’2-一氯-乙 8曰（〇.283g，0.7 mmol)溶解於 DMSO(3 mL)及mEMOM mL，0.7 mm〇1)中。在一密封管中於8〇〇c 加熱15小時。使其冷卻且將其傾倒人冰水中。以Ac〇e々 114873.doc •77· 1325423 取若干次。合併有機物且以飽和氣化鈉水性溶液洗蘇，經 NaaSO4乾燥以產生殘餘物。使殘餘物進行矽膠層析以己烧 中AcOEt 50-90%溶離之以產生〇.〇9 g呈固體狀的外消旋 (5_第三丁基-2-對甲苯基比峻_3_基）·3·[6_((反）_4_環丙 烧幾基-2，5-二甲基底嗓-1-基）-5 -甲基-〇比咬-3-基]-腺（4 7% 產率）。MS(ES+): w/z = 544.5 [M+H]。 使粗產物使用以己烷-DMEA 0.2%:EtOH 25%溶離之 Chirapack AS柱的掌性層析離析，t 3.78 min。MS(ES+): m/z = 544.5 [M+H]。 實例70 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基 _2//_ 吡唑-3-基）-3-{6-[4-(2,2_ 一曱基-丙酿基）〇辰嗜基]-4-甲基-η比咬_3_基}_脲 向乙腈（3 mL)中1-[4-(5-胺基-4-甲基- η比咬_2·基）_«!底唤 基]-2,2-二甲基-丙-1-酮（0.3 mmol，〇.〇8 g)及碳酸钟（03 mmol，0.05 g)之溶液中添加（5-第三丁基_2_對曱苯基好-吡 。坐-3-基）-胺基曱酸、2,2,2-三氯-乙酯（製備38，〇 32 mmd， 0· 1 r) ’且將該溶液於80 C擾拌4小時。添加水且以ch2C12 萃取。合倂有機層且以飽和氣化鈉水性溶液洗滌。經硫酸 納乾無、過慮且減壓 >辰縮以產生殘餘物。使殘餘物進行發 膠層析以梯度（20%至80%)之己烷/乙酸乙酯溶離之。 MS(ES+): w/z = 532 [Μ+Η]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 實例 化合物 MS(ES+): m/z fM+Hl --- - 114873.doc •78- 1325423 實例 化合物 MS(ES+): m/z fM+Hl 71 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{4-甲基-6-[4-(l-曱基-環丙烷羰基)-旅。秦-1-基"|-°比咬-3-基丨-腺 530 72 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2从吡唑-3-基)-3-{4-氣-6-[4-(2,2-二甲基-丙醯基)-痕嗪-1-基]比 啶-3-基}-腺 552 73 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,2-二甲基-丙醯基)-哌嗪小基]-5-三氟 甲基-吡啶-3-基}-服 586.4 實例74 1-(5-第三丁基-2·對甲苯基-2开-吡唑_3_基）_3_{5·氯_6_[4_ (1-甲基-環丙烷羰基）-哌嗪_1_基]-吡啶_3_基脲 向5 mL CH2C12中之鹽酸ι_(5-第三丁基.2-對曱苯基-2/ί-。比唑-3-基）-3-(5-氣-6-哌嗪-1-基-吡啶_3_基）_脲（1.6 mmol, 〇.7 g)之溶液中添加1-曱基-環丙烷曱酸（16 mmol，0.2 g)、 i-魏基-1开-苯幷***水合物〇 8 mmol，0.2 g)、鹽酸N-乙 基-N’-(3-二甲基胺基丙基）碳化二醯亞胺（1·8 mm〇1，〇3 g) 及二乙基胺（4.8 mmol，〇·7 mL)。於室溫下將溶液攪拌24小 時。添加水且以CHzCl2萃取》合倂有機層且以飽和氯化鈉 水性溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥、過濾且減壓濃縮以產生殘 餘物。使殘餘物進行矽膠層析以梯度（2〇%至8〇%)之己烷/ 乙酸乙酯溶離之。MS(ES+): = 550 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 實例 名稱 LCMS ES+ (m/z) fM+Hl 75 1-(5-第二丁基-2-對f苯基_2乐吡唑_3_基)·3_ {5-甲基各㈣·甲基·環丙烷羰基)哌嗓小 基]比0ί-3-其 UBS 530 114873.doc •79- 1325423 實例76 1-(5_第三丁基-2-對甲苯基_2丑-吡唑_3_基）_3-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基）-哌啶_4-基胺基]-°比啶-3-基卜脲

於室溫下將3 mL乙腈中ii_(5-第三丁基-2-對甲苯基-27/-0比嗤·3-基）·3-[6-(哌啶-4-基胺基）-吡啶·3·基 > 脲（0.22 mmol，0·1 g)、2,6-二氟-苄醯氯（〇·2 mm〇l，〇.〇3 mL)及三乙 基胺（0.2 mmol，0.03 mL)攪拌隔夜。添加CH2C12且以飽和 氯化鈉水性溶液及水洗滌。經硫酸鈉乾燥，過濾且減壓濃 縮。使殘餘物進行矽膠層析以梯度（05至10%)中之CH2C12: MeOH溶離之。MS(ES+): m/z = 588 [M+H]。 實例77 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基_2//-吡唑-3-基）-3-{2-曱基-6-[1-(1-曱基-環丙烷羰基哌啶_4_基氧基]·β比啶·3_基卜脲

於22°C將二氯曱烷（2 mL)中4-{5-[3-(5-第三丁基-2-對甲 苯基-277-。比唑-3-基）-脲基]_6_甲基-吡啶-2-基氧基}-哌啶 114873.doc -80 * 1325423 (93 mg，0·2 mmol)、1-甲基環丙基 1-甲酸（40 mg，0·4 mmol)、HOBt(30 mg，0.25 mmol)及 DCC(80 mg，0.4 mmol) 之反應混合物攪拌18小時。過濾，接著進行矽膠層析以己 烷及乙酸乙酯溶離之以產生白色固體（111 mg, 100%產 率）。MS(ES + ): m/z = 545.3[M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表

實例 化合物 MS(ES+): m/z [M+H1 78 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(2-氟-苄醯基)-哌啶-4-基氧基]-2-曱基-吡啶-3-基}-脲 585.3 79 卜(5_第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(2,6-二 氣-节酿基)-派咬-4-基氧基]-2-曱基-π比咬-3-基}-脈 603.3 80 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-。比唑-3-基)·3-{6-[1-(2,4-二 氣-节釀基)旅咬-4-基氧基]-2-曱基比咬-3-基}腺 603.3 81 1-[5-第三丁基-2-(6-甲基-吡啶-3-基)-2//-吡唑-3-基]-3-{2-甲基-6-[4-(3-曱基-噻吩-2-羰基)-哌嗪小基]-吡啶-3-基}- 脲 573.3 82 1-[5-第三丁基-2-(6-甲基-吡啶-3-基)-2Η-吡唑-3-基]-3-{6-[4-(2-氯·节酿基)-派嘻-1-基]-2-曱基比咬-3-基}-腺 587.3 83 1-[5-第三丁基-2-(6-甲基-吡啶-3-基)-2//-吡唑-3-基]-3-{6-[4-(2-氣-节酿基)-派°秦-1-基]-2-曱基-D比咬-3-基}-腺 571.2 84 1-{2-曱基-6-[4-(3-曱基塞吩-2-幾基)-痕°秦-1-基]比咬-3-基}-3-[2-(6-曱基比啶-3-基)-5-(1-三氟甲基-環丙基)-2if-吡唑-3-基]-脲 625.3 85 1-{6-[4-(2-氣-节酿基)-派。秦-1-基]-2-甲基-0比咬-3-基}-3· [2-(6-甲基·°比啶-3-基)-5-(1-三氟曱基-環丙基)-2//-吡唑-3- 基]-脲 639.3 86 1-{6-[4-(2-氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基->比啶-3-基}-3-[2-(6-曱基-吡啶-3-基)-5-(1-三氟甲基-環丙基)-2从吡唑-3- 基]-腺 623.3 87 1-{6-[4-(2,6-二苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-甲基-咣啶-3-基}-3-[2-(6-曱基-吡啶-3-基)-5-(1-三氟曱基-環丙基)-27/-吡唑- 3-基]-脲 641.3 88 1-(5·第三丁基-2-對甲苯基-2//-°比唑-3-基)-3-{6-[1-(2-氟-节酿基)-派咬-4-基氧基]-σ比咬-3-基}-腺 571.3 114873.doc • 81 · 1325423 實例 化合物 MS(ES+): tn/z ίΜ+Η1 89 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-"比唑-3-基)-3-{6-[1-(2,6-二 氣-苄醯基)-哌啶-4-基氧基]比啶-3-基}-脲 589.3 90 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(2,4-二 氟-¥醯基)-哌啶-4-基氧基]比啶-3-基}-脲 589.3 91 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(3-曱 基-嗟吩-2-幾基)-派咬-4-基氧基]比咬-3-基}-腺 573.3 92 1 -(5-第三丁棊-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3- {6-[ 1 -(5-氣-嗟吩-2-叛基)-派咬-4-基氧基]-Dtb咬-3-基}-腺 593.0 93 1 -(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-啦唑-3-基)-3-[6-(1 -環丙烷 幾基-派咬-4-基氧基)-5-甲基-α比咬-3-基]-腺 531.2 94 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/ί-吡唑-3·基)-3-{6-[1-(2,4-二 氟-节醯基)-哌啶-4-基氧基]-5-曱基-吡啶-3-基}-脲 603.3 95 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2F-吡唑-3-基)-3-{5-曱基-6-[1-(3-曱基-嗟吩-2-裁基)-旅咬-4-基氧基]-σ比咬-3-基}-腺 587.3 96 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2i/-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(5-氣-°§吩-2-幾基)-°底咬-4-基氧基]-5-甲基-π比咬-3-基}-腺 607.0 97 1 -(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3- {6-[1 -(2,5-二 氣-嗟吩-3-叛基)·旅咬-4-基氧基]-5-曱基-σ比咬-3-基}•腺 641.0 98 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,4-二 氣-节酿基)-派°秦-1-基]-σ比咬-3·基}-腺 574.0 實例99 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2好-吡唑-3-基）-3-{5-氯-6-[1-(2-氟-节醯基）-哌啶-4-基氧基]-吼啶-3-基}-脲曱磺酸鹽

使用大體上類似於上述程序之程序製備該游離鹼。藉由 以曱磺酸（1當量，17.66 mg 0.183 mL)處理二氯曱烷（1 mL) 及MeOH(5 mL)中游離胺之溶液或漿料轉化為甲磺酸鹽。 攪動所得混合物，濃縮且減壓乾燥以產生鹽。MS(ES+): m/z = 605·0 [M+H](作為游離鹼）。 114873.doc -82 - 1325423 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下曱磺酸鹽。 表

實例 名稱 MS(ES+)： m/z [M+H】 100 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{5-氯-6-[l-(3-甲基-嗟吩-2-幾基)-旅唆-4-基氧 基]比啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 607.0 101 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-[5-氯-6-(1-環丙烧叛基-派咬-4-基氧基)-°比咬_ 3-基]-脲甲磺酸鹽 551.2 102 1-{6-[4-(2,6-二1-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-吡啶-3-基}-3-(5-五氟乙基-2-對甲苯基-2//-吡 唑-3-基)-脲曱磺酸鹽 650.0 103 1-{6-[4-(2-氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基比 啶-3-基}-3-[2-對曱苯基-5-(1-三氟曱基-環丙 基)-2丑-吡唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 622.2 104 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-吼啶-3-基}-3-[2-對曱苯基-5-(1-三氟曱基-環 丙基)-2开-吡唑-3-基]-脲曱磺酸鹽 640.0 105 1-{6-[1-(2-氟-苄醯基)-哌啶-4-基氧基]-5-甲基_ '比啶-3-基}-3-[2-對曱苯基-5-(2,2,2-三氟-1-甲 基-1-三氟曱基-乙基)-2//-吡唑-3-基]-脲曱磺酸 鹽 693.0 106 1-[5-第三丁基-2-(6-曱基-吡啶-3-基)-2//-吡唑-3-基]-3-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 589.3 107 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(2·氣-节酿基)-派咬-4-基氧基]-2-甲基-吡啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 585.3 108 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(2,6-二氟-苄醯基)-哌啶-4-基氧基]-2-甲 基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 603.3 109 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[1-(2,4-二氟-节醯基)-哌啶-4-基氧基]-2-曱 基比啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 603.3 110 1-[5-第二丁基-2-(6-甲基比咬-3-基唾-3-基]-3-{2-曱基-6-[4·(3-甲基-噻吩-2-羰基)-哌 嘻-1-基]咬-3-基}-腺甲續酸鹽 573.3 111 1-[5-第三丁基-2-(6-甲基-吡啶-3-基)-2//-吡唑-3-基]-3-{6-[4-(2-氣-苄醯基)-哌嗪-1-基]-2-曱 基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 587.3 114873.doc -83 - 1325423 實例 名稱 MS(ES+): m/z [M+Hl 112 1-[5-第三丁基-2-(6-曱基-吡啶-3-基)-2//-吡唑-3·基]-3-{6-[4-(2-氣-节醯基)-哌唤-1-基]_2-甲 基-吡啶-3-基}-脲肀磺酸鹽 571.2 113 H2-曱基-6-[4-(3-甲基-噻吩-2-羰基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-3-[2-(6-甲基-他咬-3-基)-5-(1-三氟甲基-環丙基吡唑-3-基]-脲甲磺酸 _ 鹽 625.3 114 1-{6-[4-(2-氣-节醯基)-哌嗪小基]-2-曱基比 啶-3-基}-3-[2-(6-甲基-吡啶·3-基)-5-(1-三氟甲 基-環丙基)-2//-吡唑-3-基]-脲甲磺酸鹽 639.3 115 1-{6-[4-(2-故-节酿基)-派°秦，1-基]-2-曱基-〇比 啶-3-基}-3-[2-(6-甲基-吡咬-3-基)-5-(1-三氟曱 基-環丙基)-2//-吡唑-3-基]-脲甲磺酸鹽 623.3 116 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪小基]-2-甲基-吡啶-3-基}-3-[2-(6-曱基-吡啶-3-基)-5-(1-三氟 甲基-環丙基)-2//-吡唑-3-基]-腺甲磺酸鹽 641.3

實例117 1-{6-[1-(2-氟-苄醢基）-〇辰啶-4-基氧基]-5-曱基-吡啶-3-基}-3-[2-對甲苯基_5_(2,2,2_三氟-1 -甲基-1 -三氟甲基-乙 基）-2//-吡唑-3-基]-脲

F F

使氮氣通入DMS0(3 mL)中[2-對甲笨基-5-(2,2,2-三氟-1-甲基-1-三氟甲基-乙基）_2丑-吡唑-3-基]-胺基曱酸2,2,2-三 氯-乙酯（製備37，95 mg, 0.185 mmol)及[4-(5-胺基-3 -曱基-0比咬-2-基氧基）-略咬基]_(2 -氟-苯基）-甲鲷（製備19，61 mg，0.185 mmol)之溶液起泡5 min。接著添加从二異丙 114873.doc -84- 基乙基胺（0.08 mL，0.463 mmol)。於70°C攪拌隔夜，接著 傾倒入CH2Cl2(75 mL)中且經 10 g SCX MegaBond Elute柱 洗滌。以CH2C12(3x35 mL)、MeOH(2x50 mL)及 MeOH 中 2 M NH3(3x50mL)洗滌柱。合倂所要溶離份且濃縮。使殘餘 物進行矽膠層析以CH2C12及10% MeOH 90% CH2C12溶液溶 離之以產生呈白色固體狀的標題化合物（69 mg, 54%產 率）。MS(ES + ): m/z = 693.5 [M+H]。 實例11 8 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基）-哌嗪-1-基]-2_甲基-0比啶-3-基}-3-[5-(2-氟-1-氟曱基-1-甲基-乙基）-2·對甲苯基-2//-吡 唾-3 -基]-腺 於室溫將5 mL CH2C12中鹽酸1-[5-(2-氟-1-氟曱基-1-甲 基-乙基）-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基]-3-(2-曱基-6-哌嗪-1-基比咬-3-基）-脲（0.85 mmol, 0.5 g)、2,6-二氟节酼氯（0.85 mmol, 0.1 mL)及三乙基胺（2.6 mmol, 0.4 mL)授拌隔夜。 添加水且以CH2C12萃取。以飽和氯化鈉水性溶液洗滌有機 層。經無水硫酸納乾燥具減壓濃縮。使殘餘物進行碎膠層 析以使用己烷/乙酸乙酯（20%-70%)溶離之。MS(ES): m/z = 624 [M+H]。 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 實例 化合物 MS(ES+): m/z [M+Hl 119 1-[5-(2-氟-1-氟曱基-1-曱基-乙基)-2-對 甲苯基-2/f-吡唑-3-基]-3-{2-曱基-6-[4-(2-曱基-苄醯基)-哌嗪-1-基]啶-3-基}-脲 602 114873.doc -85- 1325423 實例 化合物 MS(ES+): m/z 【M+Hl 120 1- {6-[4-(2,6-二氟-苄醯基)-哌嗪-1-基]- 2- 甲基比咬-3-基}-3-[5-(2-氣·1，1-二甲 基-乙基)-2-對曱苯基-2//-°比吐-3-基]· 脲 606 實例121 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/ί-η比唑-3-基）-3_{6-[4-(2-環 戍基-乙酿·基）-0底嘻-1 -基]-咬-3 -基}-腺曱續酸鹽

將CH2Cl2/MeOH(95/5)中0.10 mL 1 N曱磺酸溶液添加至2 mL CH2Cl2/MeOH(95/5)中 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2^-吡唑-3-基）-3-{6-[4-(2-環戊基-乙醯基）-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-脲之經攪拌溶液中。於室溫將混合物攪拌20分鐘，接 著藉由N2沖洗蒸發溶劑。以Et20濕磨鹽、過濾且乾燥以產 生標題化合物。MS(ES + ): m/z = 544 [M+H] 0 使用大體上類似於上述程序之程序製備以下化合物。 表 實例 化合物 MS(ES+): /n/z [M+H] 122 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2/ί-吡唑-3-基)-3-[6-(4-環丁烷羰基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-脲曱磺酸 鹽 516 123 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-°比嗤-3-基)-3-{6-[4-(3-曱基-戊醯基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-脲甲 磺酸鹽 532 114873.doc • 86 - 1325423 實例 化合物 MS(ES+): nt/z [M+Hl 124 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(1-曱基-環己烧幾基)-旅。秦-1-基]比咬-3-基}-脲曱磺酸鹽 558 125 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,2-二甲基-戍酿基)-派0秦-1-基]-α比咬-3-基 脲甲磺酸鹽 546 126 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,2-二曱基-丙醯基)-哌嗪-1-基]-5-三氟曱基-吡啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 586 127 1-(5-第三丁基-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{6-[4-(2,2-二甲基-丙酿基)派σ秦-1-基]-4-甲基-σ比咬_ 3-基}-脲曱磺酸鹽 532 128 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2i/-吡唑-3-基)-3-{4-甲基-6-[4-(l-曱基-環丙烧幾基)-略D秦-1-基]-°比 啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 530 129 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/f-吡唑-3-基)-3-{4-氣-6·[4-(2,2-二曱基，丙酿基)-略嘻-1-基]-0比咬-3·* 基卜肠曱磺酸鹽 552 130 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2/ί-吡唑-3-基)-3-{5-氣·6-[4-(1-甲基-環丙烷羰基)-哌嗪-1-基]-吡啶-3-基}-脲甲磺酸鹽 550 131 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{5-曱基-6-[4-(l-甲基-環丙烷羰基)-哌嗪-1-基]-吼 啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 530 132 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基)-3-{5-甲基-6-[4-(l-曱基-環丙院幾_基)·派嘻-1-基]-°比 啶-3-基}-脲曱磺酸鹽 624 133 1-{6-[4-(2,6-二就-苄醢基)-哌嗪-1-基]-2-曱基比 啶-3-基}-3-[5-(2-氟-U-二甲基-乙基)-2-對曱苯 基唑-3-基]-脲 606

實例134 1-(5-第三丁基-2-對曱苯基-2//-吡唑-3-基）-3-{2-[ 1-(2,6-二氟-苄醯基）-哌啶-4-基氧基]-吼啶-4-基}-脲曱磺酸鹽 114873.doc 87-

以 EDCI(92 mg，0.48 _〇1)處理二氯曱烷（4 ml)中 i_(5_ 第 二丁基對曱苯基·2Η-°比唑-3-基）-3-[2-(哌啶-4-基氧基 吡啶-4-基]-脲（製備 71 ; 179 mg，4〇〇 mm〇1)、2,6 二氟苯甲 1(7 mg’ 〇·48 mmol)及催化DMAP(5 mg)之溶液。於周圍 溫度將所得混合物攪拌隔夜接著以飽和碳酸氫鈉水性溶液 洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層且在氮流下濃縮。以幾毫升 DCM濃磨$餘.物。超音波處理後，過滤自&固體且減壓乾 燥以產生162 mg呈游離鹼狀的標題化合物（69%產率）。 以二氯甲烷（1當量；（M 38 mL)中2 Μ甲磺酸處理3 :2 DCM:MeOH(5 mL)中游離胺之懸浮液。攪拌所得混合物直 至溶液澄清，接著在氮流下濃縮且減壓乾燥以產生標題 鹽。（LCMS ES+ 〇/z) 589 [M+H])。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 實例 化合物 MS(ES 十)·· nt/t ΓΜ+RI 135 1 -{2·[1 -(2,6-二氟-节酿基)-旅咬->4-基氧基]•吼 啶-4-基}-3-[5-(1-甲基-環丙基)-2-對甲苯基_2从 吡唑-3-基]-脲甲磺酸鹽 587 實例136 1-{2-[1-(2,6-二氟-苄醢基）-旅咬-4-基氧基]11比唆_4_基卜 114873.doc _ 88 · 1325423 3·[5-(2-氟-1-氟甲基·ι·曱基_乙基）_2_對曱苯基_2丑吡唑_3_ 基]-腺 於60。〇將4 mL DMSO中[4_(4_胺基-吡啶·2_基氧基）_哌啶_ 1-基]-(2,6-二氟-苯基）-曱酮（265 mg，0_80 mmol)、5-(1-氟 曱基-環丙基）-2-對甲苯基_2好-吡唑-3-基]-胺基甲酸2,2,2-二氯-乙醋（350 mg，0.80 mmol)及二異丙基乙基胺（7〇〇 mL) 之溶液加熱16小時。將所得混合物冷卻至周圍溫度且添加 水。過濾沉澱’以水接著以戊烷沖洗，且於6〇。〇真空烘箱 乾燥。使殘餘物進行矽膠層析以二氯曱烷中2 Μ氨-甲醇梯 度（0至2%)溶離之以產生85 mg產物。 使用大體上類似於上述彼等程序之程序製備以下化合 物。 表 實例 化合物 MS(ES+)： m/z fM+Hl 137 1-{2_[1-(2,6-二氟-节酿基)底咬-4-基氧基]-η比 啶-4-基}-3-[5-(2-氟-1，1_二甲基-乙基)-2-對曱苯 基-2//*吼啥-3 -基]-腺 607 138 1-{2_[1-(2,6_二氟-爷醯基)-略咬_4_基氧基]_〇比 咬-4-基}-3-[5-(1-氟曱基-環丙基)-2-對甲苯基_ 2//-吡唑-3-基]-脲 605 實例139 1-{2-[1-(2,6-二氟-爷醯基）-派咬-4 -基氧基]-β比咬_4 -基卜 3-[5-(2-氣-1-乳曱基-1-曱基·乙基）·2 -對曱苯基-2 //0比唾-3 _ 基]-脲曱磺酸鹽 將 0.114 mL(0.114 mmol)新鮮製備的 DCM/MeOH(95:5)中 之1 M MeS03H之新鮮製備的溶液添加至2 mL 95:5 DCM/MeOH混合物中 71 mg(0.114 mmol)l-{2-[l-(2,6-二氟- 114873.doc -89- 1325423 苄醯基）-哌啶-4-基氧基]_〇比啶_4_基 土} 氟-卜氣甲基_ 於 以 1-甲基-乙基）-2-對甲笨基m3基]•服之溶液中 室溫將該混合物攪拌20 min，接著在n2流下蒸發溶劑 Et2〇濕磨殘餘物以產生標題化合物（76邮，93% 純度）。ES + 〇/z) = 625 [M+H]。 使用大體上類似於上述彼等程序 桎序製備以下化合 物。

實例141 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基）_哌嗪_1_基]_5_曱基-吡啶_3 基}-3-[5-(2-氟-1，1-二甲基-乙基）_2•對甲苯基·2孖比唑·3

基]-脲甲磺酸鹽

將DIEA(2當量）添加至乙腈（丨2 mL)中[4-(5-胺基-3-甲基- 114873.doc -90· 1325423 0比咬-2 -基）-旅嘻_ι_基]_(2,6-二氟-苯基）_甲酮（400 mg， 1.205 mmol)及[5-(2-氟-1，卜二甲基-乙基）_2_對曱苯基_2好· 〇比吐-3 -基]-胺基甲酸2,2,2-二氯-乙醋（1當量）之溶液中。在 一密封管中於80°C攪拌混合物。4天後，移除溶劑。以 DCM稀釋粗產物’以水萃取且經Na2S04乾燥。過濾且減壓 移除溶劑。使固體進行矽膠層析以己烷/丙酮3 : 1溶離之 以獲得呈白色固體狀的352 mg 1-{6-[4-(2,6-二氟-苄醯基）-0底嗓-1-基]-5 -甲基_。比咬-3-基}-3-[5-(2-氟_1，1_二甲基-乙 基）-2-對甲苯基-2if-吡唑_3_基]-脲（48%產率）。ES+(w/z): 60 6 [M+1 ] 〇 將 50 mg(〇.〇83 mmol)游離鹼 l-{6-[4-(2,6-二氟-节醯基） 0底嘹-1-基]-:5 -甲基-。比咬_3_基}-3-[5-(2-氟_ι，ι_二甲基-乙 基）-2-對甲苯基-2//-吡唑-3-基]•腺溶解於DCM(0.5 mL)中。 將1當量三氟甲磺酸添加至DCM(1 N)中。30 min後，移除 溶劑以產生白色固體。以醚/DCM洗滌若干次後，減壓乾 燥固體以獲得55111§標題化合物（95%產率）。^8 + (所/2):606 [M+1 ] 〇 p38激酶之抑制作用 標準溶液製備 藉由合倂2.5 mL 1M Tris-HCl(pH 7.5)、0.1 mL 1 Μ二硫 蘇糖醇、1.0 mL· 1 Μ氣化鎂及300 μΐ^ 1% Triton Χ-100且以 水稀釋至100 mL製備激酶緩衝溶液。將84 mL此激酶緩衝 溶液與16 mL DMSO合倂以製備16% dMS0溶液。 藉由將 102.6 pL 10 mM ATP水性溶液、25 33p_ATp及 114873.doc -91- 1325423 163.5 pL 4 mM表皮生長因子肽 661-681(Epidermal Growth Factor Peptide 661-681)水性溶液（Biomol，Catalog #P-121) 添加至5 mL激酶缓衝溶液中製備200 μΜ ATP溶液。 藉由將9.5 pL濃縮酶溶液（250 ng p38酶/μΐ^激酶緩衝溶 液）溶解於1536 pL激酶緩衝溶液中製備ρ38激酶酶溶液。 樣品製備 藉由在Costar 96-孔微量谪定盤中將2 pL二甲亞砜中各 化合物之10 mM儲備溶液溶解於248 pL 16% DMSO溶液中 製備各測試化合物及對照化合物之80 μΜ溶液。將盤置於 Tecan Genesis自動液體處置機上用於1 : 3系列稀釋。 檢定 將1〇01>經86〇1〇11&11^11111^1116]<:96-孔自動液體處置機系列 稀釋的化合物置於檢定盤。以Titertek Multidrop 8-通道液 體處置機添加20 gL 200 μΜ ATP溶液。使用Multimek將1〇 μί p38激酶酶溶液轉移至檢定盤。使混合物於30°C反應4〇 分鐘接著藉由以Multidrop添加60 pL新鮮製備的5%冰 AcOH停止反應。使用Multimek將80 pL此溶液轉移至 "MAPH"盤。使該等盤於室溫放置30分鐘，接著在Titertek MAP萃取器上以新鮮製備的0.5%冰AcOH(lx300 μ、2x200 μΙ〇洗務/抽吸。該等盤經點墨，且以Multidrop添加100 μί MicroScint-20閃爍流體（Packard Bioscience)。使該等盤靜 置30 min且在PE/Wallac Microbeta Trilux閃爍計數器上計 數33P-同位素。 在實例5中例示的混合物最初測’試1 0個濃度（使用1:3系列 114873.doc -92- 1325423 稀釋之20 μΜ - 1 nM)。IC5〇值小於25 nM之化合物於2 μΜ 至0.1 ηΜ( 1:3系列稀釋）之起始濃度再次測試。使用非線性 回歸計算各化合物之ICsq值（IDBS ActivityBase軟體）。基 本上如上所述測試實例5且發現以22 nM之IC5〇抑制p38激 酶。 P-MAPKAPK2之活體外抑制作用 將RAW 264.7細胞（一種鼠科單核/巨嗜細胞系ATcc)以每 孔50,000個細胞之密度接種於具有RPMi_164〇培養基加 1〇0/❻胎牛血清（FBS)之96-孔盤中且使其沉澱且黏著至孔底 部達48小時。達到匯合後，以1〇個系列稀釋的不同化合物 處理細胞2小時。通常包括對照化合物。2小時後，添加菌 香黴素（anisomicin)(100 pg/ml)且於”它在亏％ c〇2氣氛下 將細胞培育30分鐘。接著固定細胞且以過氧化氫處理以移 除内因性過氧化物酶。最後，以FB S阻斷盤，洗滌且藉由 使用抗磷-MAPKAPK2(Thr 334, Cell Signalling，Cat # 3041)抗體及 ahP-Conjugated Secondary Antibody 執行 ELISA檢定。藉由使用FEMT〇(pierce)偵測此反應，其為 加強的化學冷光受質ahP，導致快速動力學光輸出及高訊 號密度。 所例示>ί匕合物基本上如上所述測言式，且I現具有低於或 等於 300 ηΜ之 1(：50值。在實例 ln、113、114、U5、u9 中 製備的化合物在100%幻青存在下基本如上所述測試且 發現具有小於或等於500说之％。值。基本上如上所述測 試以下化合物，且發現具有以下活性： 114873.doc •93- 實例 ICso(nM) 45 6.7 5 4.5 92 16 77 Ϊ76 ' 128 286 TNFa之活體外抑制作用 1325423 小鼠腹膜巨嗜細胞 將1 mL疏基乙酸鹽肉湯（於1·〇 L蒸館水中5.0 g酵母萃取 物、15.0 g騰化赂蛋白（casitone)或胰蛋白酶、5.0 g右旋 糖、2.5 g氣化鈉、0.75 g L-胱胺酸、〇.5 g巯基乙酸鈉、 1_0 mg刃天青及0.75 g瓊脂）注入Balb/C雌性小鼠的腹腔 中。注射後4或5天犧牲小鼠接著腹膜内注射4 mL RPMI-164〇培養基（BioWhittaker)且藉由注射器抽出腹腔巨嗜細 胞。 細胞激素產生 以jk球計計數小鼠腹膜巨嗜細胞且在96-孔盤中具有1 〇〇/〇 胎牛血清的RPMI-1 640培養基中調整為每孔5x丨〇5個細胞。 將每孔200 pL置於96-孔盤中且使細胞沉澱且黏附於孔底 部達至少3小時。於37。(：使用一系列8個濃度將測試化合物 或標準p38激酶抑制劑預處理i小時（每孔2〇 。該等細胞 以50 ng/mL脂多醣（LPS)及10 U/mL干擾素-γ之混合物於 37C處理18小時（每孔20 pL)。收集經調節培養基且使用 Luminex偵測程序檢定TNFa之產生。 TNFoc/Luminex偵測檢定（Bio_Rad Bi〇_Plex Kit _ Catal()g #171_G12221) 114873.doc •94· 1325423 將凍干預混合之TNFoc標準（1標準管/兩個96-孔盤）以50 gL無菌水復水（500,000 pg/mL) »將該等樣品渦旋5秒、冰 上培育30分鐘且在使用前渦旋5秒。一組十二個1.5 mL管 貼上標籤#1至#12，接著將以下所示之細胞培養基量添加 至適當管中（標準濃度如下：50,000、25,000、12,500、 6,250、3，125、1，562.5、781.3、390.6、195.3、97.7、48.8 及24.4 pg/mL)。將預混合經抗細胞激素結合的小珠劇烈渦 旋（25x)30秒。使用lxBio-Plex Assay Buffer將經抗細胞激 素結合的小珠稀釋為1X濃度。對於各盤而言，將240 pL預 混合小珠添加至5760 pL Bio-Plex Assay Buffer中。將 Millipore 96-孔過濾盤以每孔100 μΐ^阻斷緩衝液阻斷。阻 斷緩衝液使用Millipore過濾系統過濾接著擦乾。以每孔 100 μΐ Bio-Plex Assay Buffer在過濾盤上執行2次洗滌且擦 乾。將1X經抗細胞激素結合的小珠渦旋1 5秒且向各孔添加 50 pL。將此過濾且擦乾。以每孔1〇〇 μΐ Bio-Plex Wash Buffer在盤上進行2次洗滌。再次將此過濾且擦乾。向各樣 品孔添加50 μί樣品或標準。於室溫將此在遮光的振盪器 上於没置6培育60秒接著於設置3培育30 min接著置於冰箱 中隔夜。以Bio-Plex Wash Buffer執行3次洗滌。過遽且擦 乾。為各盤製備細胞激素偵測抗體（使用前〜丨0……將6〇 μ!^預混合細胞激素偵測抗體儲備溶液添加至594〇叫61〇-Plex Detection Antibody Diluent。 添加5 0 pL細胞激素偵測抗體且於室溫在遮光振盈器上 於設置6培育60秒接著於設置3培育30分鐘。以Bio-Plex 114873.doc -95- 1325423

Wash Buffer執行3次洗務。將此過遽且擦乾。為各盤製備 Strept-PE(使用前〜10分鐘）且添加 60 pL至 5940 pL Bio-Plex Assay Buffer。添加 50 pL Streptavidin-PE且於室溫在遮光 振盪器上於設置6培育60秒接著於設置3培育10分鐘。以 Bio-Plex Wash Buffer執行3次洗務。將此過遽。將小珠重 懸浮於每孔 1 00 pL Bio-Plex Assay Buffer 中。在 Luminex機 上將標準及樣品讀數。接著基於使用四參數對數回歸方法 以等分試樣產生的12點標準曲線將此等密度讀數轉化為皮 克 / 毫升單位（Bio-Plex Manager 2.0，Bio-Rad)，且計算 IC50。 基本上如上所述測試實例5中所例示化合物且以1 8 nM之 IC5G活體外抑止TNFa。 TNFoc之活體内抑制 將化合物經口服（p.〇.)(30、10、3及1 mg/kg)投與雌性 Balb/c小鼠（每劑量6隻小鼠）。以4個劑量（口服，於每隻小 鼠 0.1 mL之體積；載劑：水中 1% NaCMC/0.25% Tween-80) 投與化合物後1小時；以400 pg/kg給予小鼠LPS之IP注 射。LPS攻毒後1 ·5小時，以異氟烧（isoflurane)麻癖小鼠且 經由心臟穿刺取jk。使用來自R&D Systems的ELISA套組 測定血漿中TNFa含量且測定劑量反應ED50。 基本上如上所述測試實例5中所例示化合物且以2.24 mg/kg之TMED50活體内抑止TNFa。臨限最小有效劑量’ (TMED)5 0為於此達成大於或等於50%抑制之劑量且在統計 上不同於對照/安慰劑。 114873.doc -96- 口服曝露 在雄性Fischer 344大鼠中篩選用於口服曝露的化合物。 將動物禁食隔夜且投與製備為含有Tween 80(0.25% v/v)及 消泡劑（0.1% w/v)之羧甲基纖維素鈉中的懸浮液（1〇/〇 w/v) 之化合物。於1 mg/mL製備劑量懸浮液且藉由管飼法以1 mL/kg投與。劑量投與後〇.5 11與7 h之間取血樣且藉由離心 製備血漿。使用在線固相萃取及LC/MS/MS分析血聚樣 品。 基本上如上所述測試實例5中所例示化合物且Cmax為 9390 ng/mL ’ 其中 AUC(0-7h)為 36800 ng.h/mL。 對關節内LPS誘導的TNFot之效應 將LPS關節内注射入大鼠足踩誘導合成TNFa，其可在滑 膜灌洗流體中量測《在2小時内可偵測到高含量TNFa。因 為關節為關節炎發展的位點，此模型可快速確定口服投與 的化合物是否對滑膜内的炎症發應有作用。 將六個雌性Lewis大鼠（150-200 g)置於各治療組中。向 該等動物口服給予媒劑(1%羧曱基纖維素鈉-0.25% Tween 80)或測試化合物（1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg 及 30 mg/kg)。一小時後，將1〇 μΐ LPS(10 μβ)關節内投與各大鼠 之右足踩’而左足踩接收10 pL鹽水。兩小時後，各足踩 以100 pL鹽水灌洗。收集灌洗液且儲存於-80°C。 第 1組：媒劑（l%NaCMC-0.25%Tween 80, 1 mL，PO) 第2組：測試化合物（1 mg/kg，1 mL，PO) 第3組：測試化合物（3 mg/kg，1 mL，ΡΟ) 114873.doc -97· 第4組：測試化合物（10 mg/kg，1 mL，PO) 第5組：測試化合物（30 mg/kg, 1 mL，PO) 以市售ELISA套組（R&D，RTA00)量測TNFa。如滑膜灌 洗流體中所量測（其中TMED50 = 3_57 mg/kg)，以實例5中 例示的化合物處理產生TNFa合成之劑量反應抑制。 由流式細胞儀進行之大茴香黴素刺激的小鼠活體外磷_ MAPKAPK2抑制檢定 自Taconic Inc.購得8-10週齡雌性Balb/c小鼠，且於3〇、 1〇、3、1 mg/kg之濃度口服投與0.2 mL體積化合物。2小 時或其他指示時期後，自心臟穿刺獲得血液且收集於含 EDTA的管中。於37°C將1〇〇 pL血液培育10分鐘。接著將 全血與結合FITC的大鼠抗小鼠Ly-6G mAb(l : 250)與結合 APC的大鼠抗小鼠CDllb mAb(l:100)混合且以10 pg/mlA 茴香黴素刺激。兩者細胞表面抗原著色且大茴香黴素刺激 於37°C進行15 min且接著於室溫以Lyse/Fix緩衝液（Bd Biosciences，Cat# 558049)進行10 min»於室溫將溶解的血 樣於600xg旋轉8分鐘，其中以4 mL PBS額外洗滌一次。將 滲透培養基 B 中（Caltag，Cat# GAS002S-5)小鼠 BD Fc Bl〇ck(l : 100 稀釋）(BD Biosciences，553 141)及 200 pL 稀釋 抗磷-MAPKAPK-2(Thr334)抗體（1 : 100 稀釋）(Cell Signaling， Cat# 3041)添加至血細胞且於室溫培育30分鐘。培育後， 添加3 mL染色/洗滌缓衝液且如上所述旋轉細胞同時使用3 ml染色/洗滌緩衝液進行額外洗滌。接著使細胞經受使用 Beckman Coulter F500之流式細胞儀檢定。在閘控 114873.doc -98- 1325423 CDl lb+Ly6G-細胞上量測填_MapKap-K2染色之平均瑩光β 藉由JMP程式執行資料分析。以實例5中所例示化合物處 理產生Ρ-ΜΑΡΚΑΡΚ2合成之劑量反應抑制，其中tMED50 =2_28 mg/kg。 大鼠膠原蛋白誘導的關節炎功效模型 使用以用專體積佐劑（氫氧化紹）乳化之牛Η型膠原蛋白 (2 mg/mL)免疫的雌性Lewis 大鼠（三 190 g，Charles River

Labs)。該等大鼠以約0.3 mg乳液在接近尾基部之背部皮下 免疫。7天後所有動物根據相同實驗方法再次免疫。首次 免疫12至14天後該等大鼠開始發展關節炎（以一或兩個足 踝膨脹及發紅為特徵）。在關節炎最初徵兆時將該等大鼠 均等地分成五個治療組，且以各大鼠劑量投標為14天起始 治療。 治療組： 第1組.媒劑（1%羧曱基纖維素鈉+0.25% Tween 80)1 mL，口服 投標X14天 第2組.測試化合物，5 mg/kg，1 mL，口服，投標X 14 第3組.測試化合物，15 mg/kg，1 mL，口服，投標X 14 第4組.測試化合物，30 mg/kg, 1 mL，口服，投標X14 第 5 組·潑尼龍（Prednisolone)lO mg/kg，1 mL，口服， qdx 14 以測徑規一週五天量測足踝直徑且記錄。資料作為自複 合炎症分數產生的曲線下面積（AUC)表述且執行統計分 析。實例5中例示化合物展示組織學TMED 50 = 5 mg/kg投 114873：doc -99- 艮才又與本發明化合物為較佳。然而，口服投藥並非唯 -途徑乃至非唯一較佳途徑。舉例而言，對於健忘或不情 願口服藥物的患者而言，可非常需要經皮投藥，且出於便 利或為避免與口服投藥相關的可能倂發症靜脈内途徑可為 較佳的。在肖定狀況中’ <1/(匕合物亦可藉由經皮膚、肌 肉内、鼻内或直腸内途徑投與。在任何狀況下投藥途徑可 為多種多樣的’其由藥物物理性f、患者及護理者方便及 其他相關狀況限制（Remington，s Pharmaceutical Sciences， 第 18版 ’ Mack Publishing Co. (1990))。 醫藥組合物以醫藥技術中熟知的方式製備。载劑或賦形 劑為可用作活性成份之媒劑或介質的固體、半固體或液體 材料。適當載劑或賦形劑為此項技術中熟知的。該醫藥組 合物可經調適用於口服、吸入、非經腸或局部用途且可以 錠劑、膠囊劑、霧劑、吸入劑、栓劑、溶液、懸浮液或其 類似物形式投與患者。 可（例如）與惰性稀釋劑或膠囊劑或經壓縮為錠劑一起口 服投與本發明化合物。對於口服治療性投藥而言，該等化 合物可與賦形劑併用且可以錠劑、片劑、膠囊劑、酒劑、 懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑、口嚼錠及其類似物形式使 用°此等製劑應含有至少4%本發明化合物，亦即活性成 份’但可視特定形式情況變化且可便利地介於單位重量的 4%至約70%之間。組合物中存在的化合物之量為使得將獲 得適當劑量。本發明較佳組合物及製劑可由熟練技術人員 114873.doc •100- 1325423 熟知的方法確定。 ·· 該等錠劑、丸劑、膠囊劑、片劑及其類似物亦可含有以 . 了佐劑之-或多種：諸如聚乙烯吡咯酮、羥丙基纖維素、 微晶纖·㈣或明膠之黏合劑；諸如殿粉、乳糖、微晶纖維 素或磷酸氫二鈣之賦形劑或稀釋劑；諸如交聯羧甲纖維 素、交聯聚乙稀响略_、乙醇酸澱粉納、玉米搬粉及其類 ’以物之崩解劑；諸如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉或氫化植 參 &油之潤滑劑；諸如膠體二氧化石夕之助流劑；諸如十二烧 基硫酸鈉及聚山梨醇酯80之濕潤劑；及可添加諸如蔗糖、 阿斯巴甜糖或糖精之甜味劑；或諸如胡椒薄荷、水楊酸甲 酯或橙調味劑之調味劑。當該劑量單位形式為膠囊劑時， 除以上類型物質外，其可含有諸如聚乙二醇或脂肪油之液 體載劑。其他劑量單位形式可含有改變劑量單位實體形式 之其他各種材料，例如作為塗層。因此，旋劑或丸劑可以 糖、經丙基曱基纖維素、聚甲基丙烯酸醋或其他塗佈劑塗 φ 佈。除本發明化合物外，糖漿可含有作為甜味劑之蔗糖及 某些防腐劑、染料及著色劑及調味劑。在製備此等各種組 合物中所使用的物質應為醫藥上純的且所使用量為非毒性 的。藉由將1%羧甲基纖維素鈉_0 25% Tween添加至所要劑 量的式I化合物製備較佳調配物。 式I化合物通常在寬劑量範圍中有效。舉例而言每天 劑量通常落於每公斤體重約〇.〇〇〇1至約3〇毫克範圍内。在 一些實例中低於前述範圍下限之劑量程度可為相當充分 的，而在其他狀況中可使用更大劑量而不引起任何有害副 114873.doc • 101 1325423 作用，且因此上述劑量範圍並不意欲 。。 江1】万式限制本發 明範嘴。應瞭解實際投與的化合物之量將由内科醫生根據 包括待治療病症、所選投藥途徑、實際化合物或所投*化 合物、個別患者的年齡、體重及反應及患者症狀的嚴重度 之相關狀況決定。 114S73.doc 102-

Claims (1)

1325423

丨公告; 第095138670號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(98年12月） 十、申請專利範圍： 1. 一種式I化合物：

其中： z係選自由以下物質組成之群：

X係選自由以下物質组成之群：

(i) (ii) (iii)

R1為視情況經一至六個選自由鹵基及（^_C4烷基鹵基 組成之群的取代基取代之C1 - C7院基；視情況經一或兩 個選自由C1-C4炫基及三敗甲基組成之群的取代基取代 之c3-c6環烷基；或三甲基矽烷基； R2為視情況經C1 - C4院基取代之苯基或視情況經c i _ C4烷棊取代之吡啶基； Y為氫、C1-C4院基 '鹵基4C!-C4燒基鹵基； R3為視情況經CrC6環烷基取代之（^-(：7烷基； 烧乳基；C1-C4烧基自基；視情況經一至四個選自Cl_ 114873-981225.doc W基及三氟甲基之群的取代基取代之C3(^烧基； 或各視情況經選自由齒基 '氰基、C|_C4烷基、Ci_C4 烷基_基及Cl-C：4烷氧基組成之群的 視情況另外經選自由CVM基及鹵基組成之 取代基取代之吡啶基、苯基或噻吩基； R為氳或Ci-C4院基；或其醫藥學上可接受之鹽。 2. 如請求項1之化合物，其中X為：

R3 3.如請求項1之化合物，其中R4為氫。 4·如請求項1至2中任一項之化合物，其中R2為4_甲苯基。 5·如請求項1至3中任一項之化合物，其中尺|為CfC?烷基。 6 ·如請求項1至3中任一項之化合物，其中R1為第三丁基。 7.如請求項1至3中任一項之化合物，其中R3為2,6-二氟笨 基0 8.如請求項1之化合物：

卜(5-第三丁基-2·對甲苯基-2H-吡唑-3-基)-3-<6-[4-(2,6-二氟·辛醯-哌嗪-1 -基)-2-甲基-批啶-3-基]-服 或其醫藥學上可接受之鹽。 114873-981225.doc -2- 1325423 9. 一種醫藥組合物，其包含與醫藥學上可接受之賦形劑、 載劑或稀釋劑組合的如請求項1-8中任一項之化合物。

I14873-981225.doc J