PT1943243E - Inibidores de cinase - Google Patents

Description

ΡΕ1943243 1 DESCRIÇÃO "INIBIDORES DE CINASE"

Antecedentes da Invenção A cinase p38 é uma proteína activada por mitogénio ÍMAP) da cinase que pertence á superfamilia da serina/treonina-oinase. Esta cinase é activada por stresses extracelulares tais como calor, luz UV e stresse osmótico, bem como por estímulos inflamatórios tais como lipopo-iissacárido. Quando activada, a cinase p33 losforiia substratos de proteína intracelular que regulam a biossíntese

inflamatórias 696 (1993) 149- 170; Mu li er-L. adner, Cum Opin. 8 (1996) 1 :10-22 Γ: ^ ! i desor· dens c a r d i .ova seu.lares e nerv 0 S 0 c :entra 1 / Salít: uro, et âl., Cvrrent Cherí ústry, 6 (1.9 9 9) 8C )7-81 ) 3) , < $ desordens (Par gellis , et ãl „ f Natu re S trueti irai Biology, 268- 272) , Em a< ditar tento, a forma fosforilada ( cina se-pro teina ci na se 3 C L 1. Vd-O.d. por mitogér pMAP ;KAPK2) é t; ambéí a uma cm ase no caminho de pode ser d ire ctamente acti .vada por p38 MAP

I OU necrose turnoral (X. (TNFoí) de citoci: nas pró- e interleucina-1 β (iii-iji) . Estas c mtocinas das na patoiogá -cl de numerosas o les ordens crónicas (Lee et ãl , , ΆΩΓι , N. Y , A Cã d. Sei., nocaute de rato de ΜΆΡΚΆΡΚ2 mostram urna redução na produção 2 ΡΕ1943243 de eitoeina sugerindo que ΜΆΡΚΑΡΚ2 pode ser um regulador--chave da resposta inflamatória e também, pode ser um alvo potencial para terapia anti-inflamatória (WO 2005120509) .

(por exemplo em Vv 0 WO 04037789, WO WC ) 03072569, WO 9S23091, WO 01012188, WO 04004720, 99/32111, IJS 2004/0058961, EP 160978 0043384, WO 9932110 e Regar ei al., Journal of Medicai Chemistry, 45(14) (2002) 2994-3008) foram identificados como inibidores de cinase p38 ou inibidores de eitoeina, Os inibido res de cinase P38 ser eu i S L O S O S de pre )duu biodisp o núbil: idade e . "íL· 31 vivo a : USO terapêui :ic( necessi da de c ;;e novas dr pequena moléc ula, isto é inibiçá o de cinase p d δ -O -L O1 di SpO 11 i 1; i i IU 3. \ λ 0' se P38 ou inibidores de eitoeina podem produzir e podem ter problemas de :çâo que limitam os efeitos in otência melhorada e maior de un; A presente invenção proporciona novos inibidores a p38 úteis para o tratamento de condições resultantes de produção excessiva de eitoeina

Breve Sumário da Invenção A presente invenção proporciona compostos de Fórmula I: 3 ΡΕ1943243

R1 é alquilo C1-C7 facuitativamente substituído com um a j ?eis subst i tu. mtes s eleccíonaáos do grupo constituído por h o. i, 0 ϋ rl cl .1.0 cl iqu ilo Ci- C7; cicioalqu ilo r-‘ ta 3 R-· 6 facuitativamen- Τ’ íti substitui do cora um ou dois sub sti tu inte s seieccionados do grupo co nstituido por alquilo Γ' 1 ~ C4 e t :rifiuorometilo; ou trimetils íií: lo;

Pc é fenilo facuitativamente substituído com alquilo C1-C4, ou piridinilo facultativamente substituído com alquilo Ci-Q; Y é hidrogénio, alquilo C1-C4, halo ou haloalquilo Ci- r, ^ a f RJ é alquilo C1-C7 facuitativamente substituído com 4 ΡΕ1943243 cicloalquilo Cb-Ce; alcoxi C1-C4; haloalquilo C1-C4; ciclo-alqijilo C3-C5 facultativamente substituído com um a quatro substituintes seleccionados do grupo constituído por alquilo Cr-Ct e trifluororaetilo; ou pírídílo, fenílo ou tienilo cada um facultativamente substituído com um primeiro substituinte seieccionado do grupo constituído por: halo, ciano, alquilo C1-C4, haloalquilo C1-C4 e alcoxi C1-C4, e facultativamente ainda substituído com um segundo substituinte seieccionado do grupo constituído por alquilo C1-C4 e halo; e R4 é hidrogénio ou alquilo Ct-Ct; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também proporciona um método de inibição de cínase p38 num mamífero compreendendo a administração a um mamifero com necessidade de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também proporciona um método de supressão da produção de factor de necrose tumoral α íTKFa) num mamífero compreendendo a administração a um mamifero com necessidade de tal tratamento de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável„ A presente invenção também proporciona um método de supressão ca produção de interleucina-ΐβ ÍIL-Ιβ) num mamífero compreendendo a administração a um mamífero com necessidade de tal tratamento de uma quantidade eficaz de 5 ΡΕ1943243 um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona além. disso um método de tratamento de condições resultantes de excessiva produção de citocina num mamífero compreendendo a administração a um mamífero com necessidade de tal tratamento de uma quantidade supressora de citocina de um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também proporciona um método de inibição do crescimento de um neoplasraa susceptível num mamifero compreendendo a administração a um mamífero com necessidade de tal tratamento de uma quantidade rnrbrdora de p38 de um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, A presente invenção também proporciona um método de inibição de metástases num mamífero compreendendo a administração a um mamífero com necessidade de tai tratamento de uma quantidade inibidora de p38 ae um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção também proporciona um método de trat amento d< í artrite re endendo a admin: L straçao a ui tal tra .tamento ; ile uma quant compost; u de Forn mula I ou de aceitáv; sl. 6 ΡΕ1943243 A presente invenção também proporciona uma formulação farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com ura excipiente, agente de suporte ou diluente farmaceuticamente aceitável,

Esta invenção também, proporciona o uso de um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para a mibiçao de cínase p38. Adicionalmente, esta invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso na inibição de cinase p38 em mamíferos.

Além disso, esta invenção proporciona uma composição farmacêutica adaptada para a inibição P’ c~ VA V-· cínase p38 compreendendo um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em combinação com um ou mais seus excipientes, agentes de suporte ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

Esta invenção também proporciona o uso de um

Gorap o Cf f- o de Forni ula I Ou . de um s eu ; T. 3 T. Tnaceu ftreamente acei G 3V el para o f abri G 0 de um me d. icam ento pa ra a supressão da produção de fact ror de neci rose tumor al q (TNFa). Adie ion almente, GS ta inv ençãe pre ;pori rion a a m co: oposto de Fórm ula I ou um S6U S 3. J. i. 3 rrua cg li ti ca .men Í“P aceit 3 v β1 para uso na supressão da pr odu çâo de fa· ctor de nec rose tumoral <x (TNFa) em mamíferos. Além disso, esta invenção proporciona uma composição farmacêutica adaptada para a supressão da 7 ΡΕ1943243 produção de factor endendo um composto ticamente aceitável entes, agentes de de necrose tr uraoral a (TNFa ) compre- de Fórmula I ou um seu sal farmaceu- em combinação com ui t ou mai s excipi- coorte ou dil uentes farmacei : ticamente V Θ1 li

Esta invenção também proporciona o uso de um composto de Fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para a supressão da produção de interleucina-ΐβ (IL-Ιβ). Adicionalmente, esta invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para uso na supressão da produção de interleucina-lβ (IL-Ιβ) em mamíferos. Além disso, esta invenção proporciona uma composição farmacêu tica adaptada para a supressão da produção de ínterleucina- 1β / τ T 7 p ' \ J_ Ç.' ; i comprei sndendo um composi ro de Fort rui a I, ou um ser sal õ 3 .GTLclC 0U. l j Icamente aceitável em comb. inação com um ou ma is excipien tes, agentes de suporte ou diluentes fai :ma c eu t i c ame n t e aceitáveis.

Esta invenção também proporciona o uso de um composto de Fórmula I ou de um seu sai farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento de condições resultantes de excessiva produção de citocina. Adicionaimente, esta invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente acei- tável para uso no tratamento de e; xoessíva produção c ie citocina esta invenção propor; ciona uma 2 condícões resultantes farmacêutica ΡΕ1943243 adaptada para o tratamento de condições resultantes de excessiva produção de citocina compreendendo um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaeeuticamente aceitável em combinação com um ou ma is excipientes, agentes de suporte ou diluentes farmaeeuticamente aceitáveis.

Esta invenção também proporciona o uso de um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaeeuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para a inibição do crescimento de um neoplasma susceptivel. Adicionalmente, esta invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaeeuticamente aceitável para uso na inibição do crescimento de um neoplasma susceptivel em mamíferos. Além disso, esta invenção proporciona uma composição farmacêutica adaptada para a inibição do crescimento de um neoplasma susceptivel compreendendo um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaeeuticamente aceitável em combinação com um ou mais excipientes, agentes de suporte ou diluentes farmaeeuticamente aceitáveis.

Esta invenção também proporciona o uso de um composto ee Fórmula I ou de um seu sal farmaeeuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para a inibição de metástases. Adicionalmente, esta invenção proporciona um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaeeuticamente aceitável para uso na inibição de metástases em mamíferos. Além disso, esta invenção proporciona uma composição farmacêutica adaptada para a inibição de metástases compreendendo um composto de Fórmula i ou um seu sai farma- 9 ΡΕ1943243 ceuticamente aceitável em combinação com um ou mais exei-pientes, agentes de suporte ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, rsta invenção també mi proporciona 0 i. uso de um composto de Fó rmula 1 ou ui m seu sal far: iTlcLCGU L J-. camente aceitável para o f a b r i eso o. ^ um medicamento pari 1 0 trata- mento de artr.it' e reumatoide. , ádicionalmente, esta 1 nvençao proporeio na um composto de Fórmula I ou um s eu sal farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de artrite reumatoide em mamíferos. Além disso, esta invenção proporciona uma composição farmacêutica adaptada para o tratamento de artrite reumatoide compreendendo um composto de Fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em combinação com um ou ma is excipientes, agentes de suporte ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis.

Descrição Detalhada da Invenção 0 termo "cinase p38" é utilizado para significar as isoformas de cinase p38a e/ou ρ38β. 0 termo "supressão da produção de TNFa (IL-Ιβ, citocina)" é utilizado para significar a diminuição de niveis excessivos in vivo de TNFa, IL-Ιβ ou uma outra citocina num mamífero para níveis normais ou subnormais. Isto pode ser conseguido por inibição da libertação ín vivo de TNFa, IL-Ιβ ou uma outra citocina por todas as células, incluindo macrófaços; por regulação em baixa, ao nível 10 ΡΕ1943243 genómico, de níveis excessivos in vive de TNra, iL-Ιβ ou uma outra citocina num mamífero para níveis normais ou subnormais; j )or inibição da síntese de TNFog I L — 1 [3 ou uma outra citoci; na como evento pós-tra: nslacional; ou por uma reaulação em i/fii-Xci de iNη (xf IL lo 01 u urna outra cirocina - ao nível translaciona ) perito na técnica apreciará que certos compostos de fórmula ] ' contêm p -elo menos u i ra c e n t r o qu i r a 1 A presente invenção contempla todos 03 enantiómeros o diastereómeros individuais, bem como misturas de enantió-meros e diastereómeros dos referidos compostos incluindo racematos. É preferido que os compostos de Fórmula I contendo pelo menos um centro quirai existam na forma de enantiómeros ou diastereómeros isolados, Os enantiómeros ou diastereómeros isolados podem ser preparados começando com reagentes quirais ou por técnicas de síntese estereosse-iectivas ou estereoespecíficas. Alternativamente, os enantiómeros ou diastereór oero s isolados podem ser isolados das misturas por técnicas pac. rão cromatogrãficas qu irais ou de cristalização. Será entendido t )eio leitor perito que os compos- tos da presente invenção r- -A d o capazes de formar Sã.is oe adição de ácido. Em todos 0 D casos, os sais farma ceutica- mente aceitáveis de todos os compostos estão inclu idos nos nomes deles. Os compostos da presente invenção são aminas, e em concordância reagirão com qualquer número de ácidos inorgânicos e orgânicos para formar sais de adição de ácido 11 ΡΕ1943243 farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo "sal farmaceutica-mente aceitável” conforme aqui usado, refere-se a saís dos compostos de Formula I, os quais são substancialmente não tóxicos para organismos vivos, Os sais farmaceuticamente aceitáveis tipicos incluem aqueles sais preparados por reacção dos compostos da presente invenção com um ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável. Tais sais incluem os sais farmaceuticamente aceitáveis listados em Journal of Pharmaceutical Science, 66 (1977) 2-19, os quais são conhecidos do perito na técnica. Os sais mesilato de compostos de Fórmula I são os mais preferidos.

Os compostos de Fórmula I são inibidores de cinase p38. Deste modo, a presente invenção também proporciona um método de inibição de cinase ρ38 num. mamífero que compreende a administração a um mamífero com necessidade do referido tratamento de uma quantidade inibidora de cinase p38 de um composto de Fórmula I. É preferido que o mamífero a ser tratado pela administração dos compostos c:e Fórmula I seja humano.

Como inibidores de cinase p38, os compostos da presente invenção são úteis para supressão da produção das citocínas pró-inflamatórias factor de necrose tumoral α (TNFcO e interleucina-1β (IL-1B) , e por conseguinte para o tratamento de desordens resultantes de excessiva produção de citocina. Os compostos presentes são por conseguinte acreditados como sendo úteis no tratamento de desordens inflamatórias, incluindo eczema, dermatite atópíca, artrite 12 ΡΕ1943243 reumatóide, osteoartrite, doença inflamatória intestinal e síndrome do choque tóxico. Os compostos da presente invenção são parabém acreditados como sendo úteis no tratamento de desordens cardiovasculares, tais como enfarte do miocár-dio agudo, insuficiência cardíaca crónica, aterosclerose, raiocardite virai, rejeição de aloenxerto cardíaco e disfunção cardíaca associada a sepsia. Além disso, os compostos da presente invenção são também acreditados como sendo úteis para o tratamento de desordens do sistema nervoso central, tais como meningite meningocócica, doença de Alzheimer, doença de Parkinson e esclerose múltipla. WO 99/32111, WO 9923091, WO 04004720, WO 03072569. A maioria dos tumores sólidos aumenta de massa através da proliferação de células malignas e células estromáticas, incluindo células endoteliais. De maneira a um tumor crescer mais do que 2-3 milímetros de diâmetro, ele deve formar uma vascuiatura, ura processo conhecido por angiogénese, A supressão de angiogénese induzida por tumor por angiostatina e endostatina tem sido relatada a resultar em actividade antitumoral (0'Reiliy, et ai., Celi, 88 (1997) 277-285). O inibidor selectivo de cinase p3S SB22025 foi mostrado a inibir a angiogénese (J. R. Jackson, et ai., J. Pharmacol, Exp. Therapeutics, 284 (1998) 687), Porque a angiogénese é uma componente critica da expansão da massa da maioria dos tumores sólidos, o desenvolvimento de novos inibidores de crnase p38 para a inibição deste processo representa uma aproximação prometedora para a terapia antitumoral. Esta aproximação à terapia antitumoral pode 13 ΡΕ1943243 não ter os efei 80 S S· ecundár ios tóxico: 8 O Li ci 8 propriedades de indução de .resis' tência da quimic ter.; apia con venciona.l (Ju dah Foikmarq "Endogenous Inhibitors of Angi O Oj Θ Π p cg cg " The Harvey Lect ures, Sérí e 92, páginas 65-82 , w iley-Liss Ine ,, (1993)) . Os ini bidorc as de c inase p38, composto s d a presen- te i 0 8 0 / Ρ'ΟΤ :: cons equints o são tamb ém úteis na inibição cre saimento de neop] .asmas susceptíve í s „ ΤΛ M. Schul.ts, "Po tential of p38 MAP kinase inhibitors in tne tre atment of ean cer", ia E. , Jucker í tr H ) nrogress -L li Drug Res earchf 60 (20 03) 59-92. Um neop -lasma susceptível é defin ido t>ara ser um neoplasma qia e depende da cinase p3 8 r ;a ra ; 3 8"! ua sobre- ência, cresci mento ou metástase. Os neoplasmas suscepiti- vei s incluem tu imo res do cé reb.ro., tra ct.o geni to- ui: inár io, 8 ~ 8 tema linratico, es 0 ΟΠΙΟ C] O f laringe e pulmão (Pa tente dos E. U .A. R° 5 717 100) . Preferivelmente, 0 4“ c.\ 4·' rp p. "n eoplasmas cg u 8 ceptíveis" c on forme usa< lo no pre se rd :.e pç :dido inclui can cros humanos m c. luínd.o carcinoma do pui mã.o de não pequena célula (A. G: reenber g et ãl., Ajr, r j. Pés. cír. Ce 11 Mol , 8ío 1,, 26 (2002) 558), carcinoma da ΓΠ,ΟΓΙΙΟ (J > Cnon al, , J, Biol. Ct lem. f ; 276 (20 01) 47901; u. Saih 8' c. ai,, Int, J. Câncer, 98 (: 2002) 148; e S, Xiong et a 1., Can cer Res,, 61 (2001) 1727) cinoma gástrico (Y. D, Jung et al,, Pro c, Ara, .Assoe :. Câi icer Re ís,, 43(9) (2' 002)), r> f V,· arcinomas C 0 _L orreetais (S. Xiort g et al ., Câncer Res. , 61 (20 01) 1727) Θ meianoma ma) lígno (C. Denkert c t ai,, Cl in, rxp, h-ÍQ +- ãstasiSf 19 ( ο η η o \ U V ώ / 79) . ΡΕ1943243 14 A inibição da angiogénese por supressão de TNFa tem também sido p< snssds como sendí d úti.1 na prevenção de metás· L Ò. b Θ b (Patente dos E.U.A. 1 Patente dos E.U.A. N° 6 335 336). A .iém disso, ).a inibição ou de TNFa é indicada para o tratamento e prevenção de caquexia, uma síndrome debilitante experimentada por cerca de metade de todos os pacientes de cancro (Tb Yoneda et al., Ji Clin. Invest., 87 (1991) 977).

Além disso, inibição de cinase p38 pode ser eficaz no tratamento de certas condições virais tais como gripe (K. Kujime et al., J. Immunology., 164 (2000) 3222-3228), rinovírus (S. Griego et al., J. Immunologyf 165 (2000) 5211-5220) e VIH (L. Shapiro et al., Proc. Natl. Ãcad, Sei. USA, 95 (1998) 7422-7426).

Conforme aqui usado, o termo "alquilo Ci-C?" refere-se a cadeia alifática saturada monovalente linear ou ramificada de um a sete átomos de carbono e inclui, mas sem constituir limitação, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutiio, terc-butilo, pentiio, hexilo e heptilo. O termo "alquilo Ci-CV' inclui dentro da sua definição os termos ” alquilo Cf-ty.

Conforme aqui usado, o termo "alcoxi Ci“C4" refere-se a uma cadeia alquilo linear ou ramificada tendo desde um a quatro átomos de carbono ligada a um átomo de oxigénio. Grupos aicoxr C1-C4 típicos incluem metoxi, etoxi ', propoxi, isopropoxi, butoxi, terc-butoxi e seme- 15 ΡΕ1943243

Ihantes, Conforme aqui usado, o termo "halo" refere-se a um átomo de cloro, bromo, iodo ou flúor, a menos que aqui especificado de maneira diferente.

Conforme aqui usado, o termo "haloalquilo C;-C4” refere-se a um alquilo C1-C4 substituído com até cinco átomos halo. Grupos haloalquilo C1-C4 típicos incluem h a 1 orne ΐ i 1 o, t r 1. f 1 υ o r orne t i 1 c, h a 1 o e t i 1 c, b í s f 1 u. c r c me t í 1 e t í -lo, halopropilo, haloisopropilo, halobutilo, halo-terc--butilo e semelhantes.

Conforme aqui usado, o termo " cicloalquilo C3-Cs" significa um anel completamente saturado compreendendo átomos de carbono e hidrogénio e inclui ciclopropilo e ciclobutilo. de fórmula I são parágrafos seguin-

Certas classes ce compostos inibidores de cinase p38 preferidos. Os tes descrevem tais classes preferidas:

16 ΡΕ1943243 c) Pt é hidrogénio; d) Y •r> meti lo; e) R1 é alquilo Cj -C7; f) P1 P terc-but.i.1 Lo; c) P2 Θ feníio oi .] píríd.ír i.í lo, cada um fa.< cul t- 3 "C i va- me nte iq. ub -1 o 111 v. ido com me tilo; b) R2 L· l-talilo; D R2 é feníio oi i tienilc ; cade a um facuit; a ti vame nte su O S L. it uí GO Cá om um prír neiro substituinte sei ecc d.or lado do gr upo co: nst aído por: halo, o. lano, alquilo C4- -r\ wh ? ha lo- al qu i lo C •1 e alcoxi r> /n P t cuIt at rva .mer Ί” C.\ ai nda su bst it ui do ct om um seg undo sub stitu inte sei< eco ionado do grupo on stitu ido por al quilo Ci- C4 e halo; j) ti3 é feníio substi tu ido com i jm P rimeiro su 'OSt it uinte seieccionad po co: nstituiao por 11 ei. 1 o P c 3.1 nda £ ÍUf ) s t i .tr ;ldo com ur α segundo subs tituinte 3Θ. ! p s cionado dO grupo con .st ítuído por alquilo C ] “ 14 e halo; k) o composto de Fórmula I é um 3. .03SC 11 .vrt i» i) 0 CG imposto de Fórmula I é um P -:· ! * m) R-> vj CO raposto de Formula I é o sai mesil ato. As .ncorooracc ies prefe ridas da ínve nçã.o rncl uem to das a s com ibi nações dos p d. .0 0 0" -C3.10 3 3 > -nt). Outros ! i pO mpostos de Fôrma la I preferidos são aqueles onde X é conforme descrito no parágrafo b); Ft é conforme descrito no parágrafo e); R" é conforme descrito no parágrafo g); e R4 é conforme descrito no parágrafo c). no E também preferido que X é conforme descria parágrafo b); R1 é conforme descrito no parágrafo f}; 17 ΡΕ1943243 conforme descrito no parágrafo h); R3 é conforme descrito no parágrafo i); e R" é conforme descrito no parágrafo c) . í particularmente preferido que X é conforme descrito no parágrafo b); R" é fenilo substituído na posição 4- com alquilo Ct-C». Q mais preferido é que X seja conforme descrito no parágrafo b). 0 seguinte composto é também o m.aís especialmente preferido:

Os compostos da presente invenção podem ser preparados por uma variedade de procedimentos, alguns dos quais são ilustrados nos Esquemas abaixo. Será reconhecido por um perito na técnica que os passos individuais nos esquemas seguintes podem ser variados para proporcionarem os compostos de Fórmula I. A ordem particular dos passos requeridos para produzir os compostos de Fórmula I está dependente do composto particular a ser sintetizado, do composto de partida e da labilidade relativa das porções substituídas. Alguns substituíntes foram eliminados nos esquemas seguintes a bem da clareza, e rsso náo tem seja de que modo for a intenção de limitar o ensinamento dos esquemas. 18 ΡΕ1943243

Os compostos de Fórmula I e seus intermediários podem ser preparados oonrorme j_rl;srr./.ecio no espuema seguinte em que R1, Ra e X sáo conforme previamente definidos:

Esquema 1

1 isc )cianat; D ou carbamat pi ra: zoli.I-2 ,2,2- tricloro . de Formule s I. Por exem - ) , carbam. ato d e tricio dequ a da ta i coi no diiso ::borm to de potá ssio, nu: riitr ilo ou dime ètiisulf ó etilo, para propcrcicnar compostoí pio, uma solução da amina (1 equi' roetilo (1 equiv.) e uma base i propiletilami na (2 equiv.) ou ca solvente adequado, tal como acetc xido (DMSO) é aquecida. 0 composto desejado pode em. seguida ser isolado e, se necessário e desejado, purificado usando técnicas bem conhecidas na técnica, tal como cromatografia, para proporcionar o composto de Fórmula I.

As aminas exigidas são preparadas conforme ilustrado abaixo no Esquema 2 em que X é conforme previamente definido:

Esquema 2 ji i

Av' ti 19 ΡΕ1943243 A porção nitro (b) é reduzida sob condições de redução padrão, por exemplo com hidrogénio na presença de um catalisador de paládio, ou tetra-hidretoborato de sódio na presença de hexa-hidrato do cloreto de níquel (II) num solvente adequado tal como alcanóis inferiores, ou acetato de etilo, para proporcionar a correspondente amina (a) . Tais passos de redução são bem conhecidos e apreciados na uecnioa. Ver

Larock, Comprehensive Organic Transforma- tions, 412, VCH Publishing, Inc., Nova Iorque, 1989.

Os compostos nitro exigidos são preparados conforme ilustrado no Esquema 3 abaixo, em que Hal é Cl ou F, e Xf é C(0)RJ ou um grupo de protecçao adequado PG:

Esquema 3

2-Halo-i-nitro-piridina (e) num solvente orgânico adequado, tal como THF reage com uma 4-hidroxipiperidina

como THF cora uraa 20 ΡΕ1943243 apropriada e hidreto de sócio ou irifeniifosfina para propor ciona: r a corresponde nte piperidir ia substituída b Aiternativai mente, 2-halo-4 -nitro-pind: mia íe) reage eo: piperazina apropriada e a base tal como carbonat potássio, terc-butóxido de sódio c iu trietiiamina solvente polar, tal como acetonitri lo, K, N-dimetilformarnída (DMF), ou butanol para proporcionar a correspondente piperazina substituída b(ii). A araína de fórmula b(iii) é preparada por reacçâo de uma 2~halo-4-nitro--piridina (e) num solvente adequado, tal como etanol, com uma aminopiperidina apropriada na presença de urna base adequada tal como carbonato de sódio. O perito na técnica apreciará que os procedi-mentos descritos acima podem ser utilizados na formação de isómeros piridilo contemplados na presente invenção.

Os carbamatos de pirazoiiio requeridos podem ser preparados conforme descrito no seguinte esquema, onde R1 e R-1 são conforme previamente definidos:

Esquema 4

H,N, 2 NH R

Q R lQy.» α

o j 3-Aminopirazoles (m) são formados através de H NHj ' 21 ΡΕ1943243 condições bem conhecidas na técnica; R. Larock, Comprehei sive G JSCfci. nic Trans. to mu itions “? A / .V ; VCf Rubi nc., N ova Iorque , 19 S 9 . Por exe iiliplc; f □ma a- •cianoceto na í; Ϊ) c uma hrdraz ina a de quada ou sal < j.& hr d ra zinio (k) num so.lv •·7> nte orgâni co adeq uado, t cL JL como etar; 1 ο I f L ti o. C tem c i uma temp ra- tura e lev a da . 0 pi: t:azo] c.\ ν'p o. U À. 13.Ώ ite (m) p 0 G Θ ser p- urifi r< a do usando té cnic, as pa drão , tal como cromatoí grafia nur ilci C 0 d una de gel de sil: i. ca„ Cloi :oforr nato de 2, 2,2-t rio loroe tiro (n) : reage com um 3-aminopirazole apropriadamente substituído (m) e uma base, por exemplo carbonato de sódio, carbonato de potássio ou piridina, num solvente adequado, e.g., THF ou água/ace-tato de etiiof para proporcionar o correspondente carbamato de 2,2,2-tricloroetilo (o), 0 perito na técnica apreciará que o correspondente carbamato pode ser preparado fazendo reagir o 3-aminopirazole com outros carbonatos activos.

Os compostos de fórmula 1 (i) podem ser preparados conforme demonstrado no Esquema 5 abaixo em que Rx, R% Pd, e PG são conforme previamente definidos, Z é 0, N, ou uma é G OU N°

Esquema 5 Ό -

Y o R! \ A /Υ%’γ h> 9 ΓΫΖ

κ li v-n rSA^vH

& P'·. ; Η H desproteger (g) 22 ΡΕ1943243 0 conipi osto de Fórmula (f) é de sprotegic lo sob n q -p dições ben \ cor ihecidas na t έοηί ca, í d Γ\ γ· 0XÍ ímpio, qu ando gru pO '.1θ pui U tecer ão é ter c-bir toxi; nilo, um compo O L-0 de Fór: mula (f) f ϊ dí £ 3solvi do num. solv ente Γ\ Y gân.i .c o adequ ado ou rnis o uiτ3. 'ó olven Lθ F tal eorr to di d 0 X omets mo t com um áci. do, tal como ácido olor íd.r.í co em dio xano ou áci do tri fluoroacét ;ico. A desprotec 1 p cl C j (1 o. u re ia substituii Ciei p ΟΓ piperidina p rote goda em N (f) propc >r c .1 G Π ã 3. p I. p G r idi :na sub seicuida (g!, a qual rea ge < tom i .:im ácí do carboxilico sub stitu ido Ξ ob c :ond.i ções de acop] Lam.en Y pclOU rãc para 3. C1.0 .03 org ânicos e amirr as orgânicas na prest mç a de um age: nte de acoplamento, tal como h: Ldroc d.ors itO c le N~ (. 3-dimet.i. 1. amín p, ... propil)-N *-etilcarbodiimida (EDCI) ou diciclo-hexilcarbo- dirmida (DCC), uma quantidade catalítica de •5-dimetilam.inc- piridina (DMAP \ / vd 1-hidroxibenzotriazoie ! HOBt) ou hexa- f 1 u o r o f o s f a t o de 0··· (7-azabenzotriazo 1 e··· 1 -il) -N, N,N»,N'- -tetrametilurór 1.10 (HATU) , ou triet 1.1 arruina num solvente adequado, tal como cloreto de metileno ot ;i acetonrrrilo, para proporcionar a Fórmula I (i). 0 perito na técnica apreciará que exemplos de Fórmula I(i) podem ser preparados começando com outras píperidinas protegidas, incluindo grupos de protecção de N diferentes, tal como formilo, o qual pode requerer outros procedimentos de desprotecçào para formar o intermediário (g).

Um grupo de protecção de amino adequado "Pg", tal como uma porção terc-butoxicarbonilo (BOC), pode ser utilizado se necessário ou desejado. As técnicas para a 23 ΡΕ1943243 conhecidas do perito na eciará que os grupos de ialquer ponto conveniente :e invenção. Métodos para introdução destes grupos são bem técnica. 0 perito na técnica apr< protecção podem ser removidos em qi na síntese dos compostos da present protecção de azoto e ca; ver, por exemplo, Orqanic Synthesls, 3a a introdução e remoção de grupos de oxigénio são bem conhecidos na técni Greene e Wuts, Protective Groups in

Ed f ohn Wiley and Sons, Nova Iorque 1999. 0 perito na técnica também apreciará que nem todos os substituintes nos compostos de Fórmula I tolerarão certas condições de reacção empregues para sintetizar os compostos. Estas porções podem ser introduzidas num ponto conveniente na síntese, ou podem ser protegidas e em seguida desprotegidas conforme necessário ou desejado. abreviaturas, símbolos e termos usados noí

msaios têm os seguintes significados: n-BuOH n-butanol, DCC - diciclo-hexilcarbodiimida, DIEA - N,N-di--isopropiletilamína, DMSO = dimetilsulfóxido, DMF = N,N-di-metilformamida, h :::: hora (s) , HOBt ::: 1-hidroxíbensotriazole, LDA = diisopropilamideto de lítio, EDCI = hidrocloreto de 1 - (3-dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiim.ida, EtOAc === acetato de etilo, EtOH = etanol, Et^O = éter dietílico, MeOH = metanol, NaBH (OAc) 3 ::: triacetoxi-hidretoborato de sódio, TBAF = fluoreto de tetrabutilamónio, Tf?0 = anidrido trifl.uorometanossulfónico, e THE ::: tetra-hidrofurano. ΡΕ1943243 24 PREPARAÇÕES Preparação 1 2-Cloro-4-metil-5-nitro-piridina

Cl

Dissolver 4-raetiI-5-riitro-piridin-2-iIamina (3,0 mmol, 0,5 g) em 0,5 mL de ácido sulfúrico. Adicionar 7,6 mL de água e arrereoer a solução ase u °C, Adrcronar nitriiG de sódio (4,5 mmol, 0,3 g) e agitar a mistura durante duas horas, deixando alcançar a temperatura ambiente. Diluir com quosa de hidr óxido de sódio 1 0% n acei ;ato de etrio e j_ cl V α T as s com solução cl· Cí U 0 S 3. 3c turada de bre s ilfato o Θ 3ÓCÍÍO f filtrar P uzida para dí ir 4-metil -5-n.i.t.i /-·... 155 MeH i . d cie fosforii . o (0,6 mr col, 0, 05 oro ( 0,6 rnnioi ? »,12 9} sobre 4 ~ (1,9 mmol, 0,3 g) . Agitar a

Aoreto de sódio r* ,-λ r- n o i iridin-2-ol. MS (aS) 12Q°C durante 1,5 horas. Arrefecer, adicionar gelo-água e extrair em CFhCle. Lavar as camadas orgânicas combinadas com solução aquosa saLuraoa de cior^L.o oe soo.io, Secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida para dar 2-cloro-4-metil-5-nitro-piridina. ΡΕ1943243 25

Preparação 2 2,3-Dicloro-5-nitro-piridina

Colocar 5-nitro-piridin-2-oi (20 g, 143 mmol} em HC i. ( ;Or 'icer itrado (100 mT.;) , ΐ vguecer s í- a 50 °C n s ecfu i o a adi cl on ar gota a gota clorat' o de pot ;áss io ; Ό ; 1 3 G, 50 mmol) dis C «-Λ Iv ido em água (1 00 mL). Agitar a 5 0 0 C GU rant e 30 min. Arr ef ec er a reacção num banho Π r\ C.1.C gel O . Seo ara r por fi 1 tr ^ ç< a 0 o sólido e lavar com ági ma. Qp q ar comp iet amente par a pi rodusir 21,13 ç í (85%) de 3-c :lor O “O ~ nit ro-p iri din-2- ol. M S ( ES) : m/z 173 [M+H] . Colocar doí :eto de iosforr io (11, 28 mh, 121 mmol) num D ão de fundo re dondo c 5 arrefe cer até Λ w °C. Adi cionar qui no lina (7,15 niL, 6 ( ),5 mmo 1) segui .do por 3-c :ΙθΓΟ ~5~ nitro- '"p.t ri di n - 2 -oi (21,13 g, 121 mmo.].) em por Ç· O G) s, 1 j.qu e :cer a rea ^ V cl 0 ai .é 120°C dur ante 2 horas. Vei :ter cl r a a c çao sobre gel ,·-λ e tri .turar com. á gua, Sc "parar p or fi.lt ração o S ò lido e | :::π ar lom água. Secai : compl etamente p; ira pro Q. Z1. r 1 9,95 g (86 % i - / io composto me sncionac io em t ítu lo: O- NMR (400 MHz, DMSO) δ, 3: < ), 2 U (s, 1H) p q 7 f ^ f - (s f 1H)

Preparação 3 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-6-metil-piridin-2--il)-piperazino-l-carboxílico

HjN

Agitar mecanicamente a mistura de 6-cIoro-2- 26 ΡΕ1943243 -metil-3-nitro-piridina (Asymchem, 25,00 g, 144,9 mmol) , 1- sod azoto auran ;0 de terc -butiio (2 Q ífi λ- : v^ tf 59,4 mmol), z mL, 167 mmoi) ert i K-BuOH (290 mL) a te 4 hora: 3, a ô 5 0 C durante 2 hoi :as, em ra ambient e durante a noite . Adj Lcionar .rh oxi lato de terc -butiio (Z5 g), e aquecer a reacçâo a 65°C durante 4 horas. Arrefecer a pasta resultante até 30°C em. seguida adicionar hexanos (75 mL) . Arrefecer a pasta até à temperatura ambiente ao longo de 1 hora, em seguida adicionar água (150 mL), Deixar a pasta em repouso durante 45 min em seguida filtrar. Lavar o bolo com água (4 x 100 mL) em seguida hexanos (100 mL) e secar ao ar durante a noite cara produzir éster de terc-butiio do ácido 4-(6-metil-5-nitro-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxllico na forma de cristais amarelos brilhantes (46,30 g, 99% de rendimento, MS(SS): m/z = 267 [MH-~H-~CLHs] ) .

Misturar uma pasta de éster de terc-butiio do ácido 4- (6-raetil-5-nitro-piridin-2-il)-piperazino-l-carbo-xílico (46,00 g, 142,7 mmol) em THE (750 mL) à temperatura ambiente com Pd/C (5% Aldrich, 3,04 g, 1,43 mmol) em seguida colocar sob uma atmosfera de hidrogénio (agitador Parr, 40-45 psi) durante 6 horas. Adicionar MeOH (250 mL), e submeter a pasta a uma atmosfera de hidrogénio durante 4 horas à temperatura ambiente. Adicionar mais catalisador (3,04 g), em seguida colocar a mistura sob hidrogénio durante 7 horas. Filtrar a mistura através de uma. almofada de Celite 521'“, lavando com THF e MeOH em seguida concentrar sob pressão reduzida para proporcionar o composto 27 ΡΕ1943243 cor-de-rosa pálido m/z ------ 293 [M+H] ) . mencionado em titulo um sólido (41,58 g, 99% de rendimento, MS(ES+)

Preparar noicilmente an os seguintes compostos áloga aos procedimentos de uma acima de maneira

Preparação Composto MS (ES) : m/z [Mt-H] Preparação 4 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxílico 293 Preparação 5 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-3-metil-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxílico 293,2

Preparação 6 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-piridin-2-il)--piperazino-l-carboxílico

Colocar 2 o i—i C) 3 ro-5-íii .rro-pi mmo 1 ) , és ,ter de t ei rc-bi 3tilo c io ácii xili co (1 , 7 6 g, 9 ,9 5 m;r loI) e trieti mmol ) em n-butano ]. (20 mi,) . A quecer hora s. 7\ rir. irefecer cie é á tempe ratura acet atí o d· e et ilo e '1 t tgua , Separ 5. T. 5. C com ág ;ua e o loreí de sódio aquoso cama da or gani ca, sei 3 cl· 1- sobre Ma-o o - soo pr Θ s s ao ’ seduz id, a, 1 οΛίΓίβ t-θ. r o re sobr e ge] _ de : j__[ :a e luindo com j mia (1,0 g, 6,31 jiperazino-l-oarbo- produzir 1,14 g (58%) de éster de terc-butilo do ácido 4- 28 ΡΕ1943243 MS í E S) (5-nitro-piridin-2-il)-piperasino-l-carboxilico m/z - 30 9 [M+Hl .

Colocar éster de terc-butilo do ácido 4-(5-nitro-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxílico (1,14 g, 3,70 mmol) em EtOAc:MeOH 1:1 (20 mL) . Adicionar Pd 10% sobre carbono usando EtOAc (5 mL) . Purgar a reacção e em seguida adiei- onar hidro génio. Rep< etir o cicio pur gar/encher O. l.i o. 8 V θ Z Θ S f e colocar 8 vt 3. C Ç ã O S O b U ]Tl b 8.1 â O de bidrogénic ) e agitar à tempera tur. a ambiente durante hor as. Filtra r a reacção através de uma almoiada de Celiteí r) ►'ti lavar o bo lo do filtro corri EtOAc. Kecoiher o tiltrado e c loneentrar sob oressão reduzida para produzir 1,01 g (98%) do composto mencionado em titulo. MS (ES) : m/z = 279 [M-fH] . maneira critos.

Preparar os seguintes compostos de urna substancialmente análoga aos procedimentos acima de

Preparação Composto MS (ES) : m/z [Mt-H] Preparação 7 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-3-metil-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxílico 293,4

Preparação 8 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-3-cloro-piridin-2--il)piperazino-l-carboxílico

Colocar 2,3-dicloro-5-nitro-piridina (2,0 g, 10,36 mol), éster de terc-butilo do ácido piperaz.ino-1- 29 ΡΕ1943243 c 3 ir L·' oxílico (2,12 gf ( li,40 mmol) , e carbon, ato d e potássio (1,7 2 g, JL 1,4 3 mmol) sol. ; IMF (20 mL) , Acs jecer até 80 °C dura Ι10Θ À p 0 dias, Arrefece r até à temperai lura ambiente e adi c ionar a cetato de í stilo 0- 3 Cj”U 3. „ S Gp31. 3 li 3 C 3 ma d a orgâ- nica Θ lOiVcl r com cl Q XX 3 0 C "Ϊ .oreto de sódio a iquoso saturado, Reco l.ber a camada org. ânica , secar sobre Mc T„ ο Γ) „ filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com EtOAc 20% :hexano para produzir 3,29 g (93%) de éster de terc-butilo do ácido 4- (3-eIoro-5-nitro-piridin-2-il)--piperazino-l-carboxílico, MS(ES): m/z = 341 [M+H].

Colocar éster de terc-butilo do ácido 4-(3-cloro nitro-pi: ridin-l 1-11)-piperazino-1- -carboxí.l ioo (3,09 g, 9,0 1 mmol) em metanol (50 mL). Adi .o. ionar 1 lexa-hidrato de cloreto de níquel (II) (10,7 g, 41 !,1 mmol) e arrefecer a rea C Ç 3 O 3’C0 : 0 C . . Adie ionar tetra- -hidretob orato de sódio (5, 11 g, 13 5,15 m: uol) e m porções e agitar ,? i 0°C durante 2 hor ionar CK2C12 e filtrar ; itravés de uma almofada de Cel ite*. Lavar O boi o do filtro com CH?C | C. y íX q Ί ]q c.\ γ q fli trado„ A tíicionar sol u c a o apuiosa 33 turacla de bicarbonato de sódio ac filtr; ido e : separar a camada orqâ nica. Extrair a cam ada aquo sa com CH2C1; ; (2 x 30 mL) . Combin ar os extraotos org ânicos, se car sobre ςρ(, f-j Ί ..trar e concentrar sob pre S S 3 Ο ΓΘΟΙ uzida. Subme ter o resídu o a crom atografia sobre gel de sili ca elu indo c om 0~70% EtC lie: hexani o para produzir Ί "7 ... r i 7 g (63% ) do c otnpost o mencionado em ti tu. j.o . MS (ES) : Ztt/z 311,2 [M-H]. 30 ΡΕ1943243

Preparação 9 rac-[(trans)-4-(5-Amino-3-metil-piridin-2-il)-2,5-dimetil--piperazin-l-il]-ciclopropil-metanona

Dissolver trans-2, 5-dimetilpiperazina (500 mg, 4,37 mmol, 1,0 eq) em 15 mL de diclorometano anidro. Adicionar dicarbonato de di-terc-butilo (953 mg, 4,37 mirto 1, 1,0 eq) dissolvido em 5 mL de diclorometano. Agitar à temperatura ambiente durante 20 horas. Filtrar o sólido branco para produzir 430 mg de N-BGC-tra.ns-2,5-dimetil-piperazina (50% de rendimento). 1H-NMR (metanol-d4) δ ppm: 4,11 (m, 1H); 3,55 (dd, J === 13,6, 1,7 Hz, 1H) , 3,23 (dd, J - 13,6, 4,0 Hz, 1H), 3,12 (m, 1H), 3,00 (dd, J -12,7, 2,3 Hz, 1H), 2,49 (m, 1H), 1,46 (s, 9fí}, 1,24 (d, J - 7,6, 3H), 1,15 (d, J - 6,8 Hz, 3H) , •5-nitropiridina (310 mg, 1,32 mmol, 1,0 eq) e N-BOC-trans-2,5-dimetilpiperazina (397 mg, 2,0 mmol, 1,1 eq) em 5 mL de DMF anidra, adicionar arbonat - r~\ de p J O "t- 3 ssi o (251 m g, a Q • ? mistu3 :a dura mte 20 horas a \ 8 0 0 .istura . ! V ,/V de Et.CA.c e ág- ua quosa ( ::orr i EtC )Ac (2 κ 20 mL) Γ\ At la- ombinac ÍB s corr 1 áq Li B (3 x 20 mL) Θ (30 mL). Secar a :i:n.ol, 1,0 eq) e agitar Verter a solução in a 31 ΡΕ1943243 SÓdíO e concer; .trar s sob pressão red Lds í ] oar; a se obi ter o ést er de uerc-butilo do ácido rac-(t Γ3 Γ t s) ... 0 Γ. ... d.im.eti.1 - 4- (3- meu il- 5-nitro-piridin -2-il)-piperazi no- 1- ca rbo xílico cru „ MS ( ES+ }: m/z - 251,2 (MHI) . Adiei onar H< 01 1 M em dioxa no (4 f 2 mL 5 ao ést er de t Θ T c-butilo do 3.C Α.ΰ.Ο rac-ítrans)-2, 5-d.ím et -L 1 4- (3-met 1.1. - 5 - -ni tro -piridin- -2-il) - piperazino-l-carboxí li CO 15 g, 0,4 3 m mol) à ti imperat .ura ambiente e agitar pós uma hora, cor; cen trar sob pressa o reduzida para ds ir o, 138 g de sa 1 di- -hi dro cloreto de ra o-(trans)-2,5-d ime ítl .1- i-( 3-metil- 5-ni - oro -piridin-2-i .1) -piperazina r;a forr na de í: ;m sólido b ranço (qu ant itativo). MS (ES ): m/z - 2 51,2 [Ma -H] Adiei onar i ácido cicloprop >11- Liboxilico (56 mL, r\ — W jf < mm .ol) a urrte a solução de EDCI (0,: 147 g ( f\ ·~ι -Ί ! / ram.o.1), HOBt (0, 10 g, 0,77 ; airriol) , sal dí-bidroc.' ior eto de rac-(tr -ans) - 5-dirnetíl-l- (3-met il-5-ηίtro-pírí dm :”2 -il) - piperazi n ·-· (0, 16 g, 0,64 ramol) era CH2Ci2 (5 mL) S Θ gu i .do por DIEA (0, 22 mL, 1,28 ramol) à temperatura ambíent IO ; sob atmo sfera de n2. Após uma hora, concentrar par lar 3 g-Ai S -i.d. UíO . b ubme- ter 0 resíduo a crom atografia soore gr il d;: 3 ilica eluindo cora Im sxano:AcO Et 50- 70% para dar 0, 1IL· í g da rac-c í cio- pro pil -[ (irans) -2,5-d imetil-4-(3-met ri- , li „ ni tro -piridin A "i \ pi.pe.razl.n- 1 - ί ]- í ™ etanona (56% d íti rer id.i Lmento). MS (ES) : m/z = 313,1 [M4 -Hj . Adiei onar N ! r'' 9’g n d '•JyJ i i \ f /.. u } ^ ϊ 5 i ramo.].) a rac-c íclo- pro pil — [ í crans) -2,5-d imetil-4- (3-raet il- li ni tro -piridin ss i 1 ) -piperazín·· metanona (0,11 4 c ] ! 0 Γ. mraol) e Pd *' D °- J_ \j ‘0 / Γ (0,043 g) em EtOH (5 mL) 8 Ob cl trn osf era de N2 e 32 ΡΕ1943243 aquecer a 80 °C. Após 2 hora arrefecer e filtrar através pressão reduzida para dar 0f título (quantitativo). MS(ES) de Ά -H sr a mi st ura reaccional de c elite®. ( íoncs entrar sob q dO composto men cionado em m/ r - = 289,3 [Me H] .

Preparação 10 1-[4-(5-Amino-4-metil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-2,2- -dimetil-propan-l-ona

Agitar uma solução de 2-cloro-4-metil-5-nitro--piridina (0,85 mmol, 0,15 g) , hídrocloreto de 2,2-dirnet.il--l-piperasin-l-il-propan-l-ona (0,94 mmol, 0,16 g) e tri- etilamina (2, 12 mmol, 0,3 mL) num tubo vedado a 80°C durante a noite. Ar rei Acer a r nistu: ra até à temperatura ambiente, adicionar CPl·. • C12 e la var com cloreto de sódio a qu o s o s a t u r a d o. S e c a r sobre su l.fato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida para dar a 2,2-dimetil-l- -[4-(4-metil-5-nitro-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-propan--1-ona, Submeter o resíduo a cromatoçrafia sobre gel de sílica eluindo com hezanos/acetato de etilo num gradiente (desde 30% até 60%). MS(ES): m/z ^ 307 [M+H].

Adicionar formato de amónio (1,55 mmol, 0,1 g) e paládio (carbono) 10% (0,031 mmol) sobre uma solução de 2,2-dimetil-l-[4-(4-raetil-5-nitro-piridin-2-il)-piperazin- “I -il]-propan-l-on; a (0,31 mmol, 0, 0 9 g) er a 2 mL de etanol. Ag itar a solução durante uma hora a 90 °C. Arrefecer e fi Itrar através de uma a ir nofada de Celite® e concentrar sob pressâo reduzida. O resíduo pode ser usado sem purificação adicional. MS(ES): m/z = 277 [M+H]. 33 ΡΕ1943243

Preparar o seguinte composto de uma maneira substancialmente análoga ao segundo procedimento acima des-c r i ΐ o .

Quadro

Preparação Composto MS (ES) : m/z [Mt-H] Preparação 11 [4-(5-Amino-4-metil-piridin-2-il)-piperazin-l-il] -(1-metil-ciclopropil)-metanona 275

Preparação 12 1-[4-(5-Amino-4-cloro-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-2,2- -dimetil-propan-l-ona

Passo A: Agitar uma solução de 2, 4-dicloro-•piridina (6,7 mmol, 1 g) , N-Boc-píperazina (8,1 mmol, 3 R n \ ç - y 3 M ' í 1 :erc-butóxido de sódio (9,5 r nmol, 0,9 g) f ti CO L0. LO de paládi o (11) (0,7 m: mol, 0,15 g) e 2 - (di-t-buti] .fosfino)- bifenilo (0,7 mmol, 0, 2 g) dissolvido em tolueno sob azoto a 10 0 0 C durante 4 r toras. Arrefece; até a temperatura ambiente e adicionar água. Extrair em. acetato de etilo lavando a camada orgânica com água e cloreto de sódio aquoso saturado. Secar a camada orgânica sobre sulfato de 34 ΡΕ1943243 sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida para dar o éster de terc-butilo do ácido 4- (4-cloro-piridiR-2-il)--piperazino-l-carboxílico na forma de um residuo. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com hexancs/acetato de etilo num gradiente (desde 10% até 50%). MS (ES) : m/z = 298 [M+fí] ,

Passo B: Tratar à ten :ipe: rata. ra ambiente UHi a so.Iu- Ç o. O de éster de te re-butil O GO 3. <J. ido 4- ( 4-cloro™ prr idin-2- íl)-F1! >erazino”â ..-Cd irboxi lie :o (í 3, 6 gf 1, 9 mmo 1.) em. CH2CLo (4 mL) com HCl (so lucôío 4 K em dioxa; 10, 1 R γϊίΤ. -1- f ^ Uí-^ t 11' 9 mmol) resulta .ndo numa (fTi qcr itermia I .igeí: ra. Agi tar • a mista ra d.urante 3 hora s, adiei ona r ma is HCl / ;·> \ oiuc v 3 O 4 N em i d . ‘'.J j/i d I 1 ‘'.J f 1,5 m.L, 5,9 mmol) e agitar durante a noite. Concentrar sob pressão reduzida para produzir hidrocloreto de 1- (4-eloro-piridin-2-il) -píperazina, era seguida triturar com Et20 (0,43 g) . LCMS ES+ {m/z) 198 [M-fH] ) .

Passo C: Agitar hidrocloreto de 1-(4-cloro--piridin-2-il)-píperazina (2,2 mmol, 0,4 g), trietilamina

Ch 6 m moí, 1 ,1 mL) em. 13 ml: de CH./C 1, e c loreto de plv alo ilo (2, 2 mmol, 0, 3 mL) dur ante a n oite à t empe sra tura amb ien te. A d; [.ozonar CH2C :i2 e la ivar com cio reto de s ódio aqu O S 0 sat ur< a do e água Secar sob ν'Λ sulfi d L, '-v de Sò dio, fil tra r e con centrar sob p £ Θ S S â O reclu zída ί p d. .1Γ a dar 1- " [ 4 - (4- -cl oro “piridi η-2-iI) -Pip* srazín-l- -il] - 2,2- dime til- prot )an -Ι- -on 8 MS (ES) : m/z - 282 [M+H] . 35 ΡΕ1943243

Passo D: Di ssol VO Γ l-i 4- O o o -pirid -pj ..per a zi.n-.l-.il] -2, 2 - di .meti .1 -p; tropan- l-ona (1, 6 rumo em ácido suifúrico (2,7 : mL) e c arrefe cer a sol Lução

Adicionar nitrato de potássio (1,6 mmoi, 0,2 g) e agitar a mistura deixando aioançar a temoeratura ambiente durante a noite. , Di ruir a mistura com água e adi cionar hidróx ido de sódio 10% até pR básico. Extrair em lato de etrro. Secar sobre sul ..fato de sódio, filtrar e con centrar sob p u:essão reduzida para dar um resíduo de 1- [4-í4-cj .oro-5- -nitro- piridin-2-il) -piperazin-l-il] -2,2-áiraetiI-propan-l-ona.. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com uma mistura hexanos/acetato de etílo na forma de (desde 30% até 60%). MS(ES): m/z = 327 [M+H].

Passo E: Adicionar (4,5 mmoi, 0,8 g) de ditio-nito de sódio sobre 1-f 4-(4-eioro-5-nitro-piridin-2-il)-piperasin-l-il]-2,2-dimetil-propan-l-ona (0,9 mmoi, 0,3 g) em 22 mL de mistura 1:1 de tetra-hidrofurano e água e 4 mL de amoníaco. Agitar a solução durante 2 horas à temperatura amb iente. Concentrar sob pr essão reduzida e extrair o res íduo e: m acetato de etilo. Sec rar sobre sulfato de sódio, fri trar c 5 concentrar sob pj res são reduzida pai :a dar um resíduo que é usado sem purificação adicional. MS(ES): m/z - 297 [M+H].

Preparar o seguinte composto usando procedimentos substancialmente análogos aos Passos C-E acima descritos. 36 ΡΕ1943243

Quadro

Preparação Composto MS (ES) : m/z [Mt-H] Preparação 13 1- [4- (5-Amino-3-trifluorcmetil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-2,2-dimetil-propan-l-ona 331

Preparação 14 [4-(5-Amino-6-metil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]—(2,6— -difluoro-fenil)-metanona

colocar a reac piperazína (355, ,'arregar ácido acético (5 L) num baião de 22 L. a reacçáo num banho de gelo-água. Adicionar piperazina (355,00 g, 2,0 eq; 4,06 mol) em porções com agitação e aumentar temperatura até -40 °C. Adicionar outros 5 L de ácido acético. Agitar até a mistura se tornar uma solução. Ajustar o banho de arrefecimento para -13 °C.

Adi ciona r cloreto de 2,6- difl uorober ízoí lo (355 , 00 g, -t f 0 eq; ò $ ™ Γί L o 1 f li s," )3,39 mL) got a a go ta ao longo de ura período de 2 horas, enquanto SG mantém cl t G mperati ira CG Γθα cçâo em aproxima! damente 13-1 r;. o r‘ Agitai : dura Π "C G cl noi te. Concentrar sob presa ão reduzid G disso! ver c res íduo em 2 L de gel; 0 d.hp.,13 v M rref ecer o bci.j- 30 num ba nbo de oel o-águ a. Adicionar KaOH 5 N p; ira aji istar o pH a / 3 ' r "j enquanto se mantém, a temperatu ra d íti γ ç.\ r< p âo ab; lixo de 30 o 0

Filtrar o. orodutc com a

Extrair o do filtrado 37 ΡΕ1943243 diclor orne ta no (4 x c Z L) , , Remo ver o : solvera ;.e sob pres sâo reduzi da . Dissolve r 0 sói ic lo em 1,5 L de metanol à tenvper atura ambient :.e e filtrar . Cone :entrar : a S O J_ U Ç 3 O de metano 1 e e m seguid 3. tro: car o so 1vente por 2 , o : L de tol.u eno produ z ÍU 0 produto pu ro, Fi.lt.; rcL.1 : para ohO ^ (2 , 6-d.i.f luo ro- fenil) -pipe razin-1- i-l -me' tanona • Conce ntrar •V filtrado Λ fiItra r out ;ra vez pa ra obter P roduto adiei O .0 3. 1 (total de 400 g) .

Carregar (2,β-difiuoro-fenil)-piperazin-l-il-me-tanona (1,07 eq, 1,55 mol, 350,00 g) , metanol (37,06 mol, 1,50 L, 1,19 kg), trietilamina (1,79 mol, 250,00 mL, 1,50 g), b “ C i Ο Γ O “ b “ metiI-3-nitro-piridina (1, 00 eq, 45 mol, 250 [ "i ^ θ' ΐ pa r a um balão de 5 L com agi t a. d o r a .beça. Agita: Γ cl Π1Ζ S turr r reaceional L à temperata .ra an rbiente rante 0,5 horas. L entamente aquecer até 60 o /·> ontinuar a agitar a 60°C durante a noite. Adicionar água (/50 mL) gota a gota enquanto se mantém a temperatura a 60 °C * Deixar a mistura arrefecer até à temperatura ambiente , Filtrar e lavar o boio com 150 mL de metanol/água 2:1, em s e cpj ida duas vezes com SMTBE, Sec 3. r s ο ο ρ r e s s â o reduzida a 4 50 C para obter (2,6-difluor o-fenil)-(4-(6- me t i1-o-n i t ro-ρ i r i di n-2 -i1)-p ipe r az iη-1-i1]-me t a η o n a na forma de um sólido amarelo (535 g).

Carregar (2,6-difluoro-fenil)-[4-(6-metil-5-ni- rbono molnaao em galões. Kidroaenai αΠΟΠα {1 f í. ' C', a -- 1 v *3 p j 1,44 O co 6, 3 3 kg) e THF (75,0; a uma a reacçáo a 5 0 psi à mantém a temoeratura tro -piridi η-2-i mol t t f! i , ,' J0 g) , 0 a í ádio 5· % em aut oclave de tr tem peratur a am. 38 ΡΕ1943243 ΆΟΆ ϊχο de 30 °C. Após 0,5 horas, arrefecer até 26cC e manter durante 2 horas. Filtrar e concentrar sob pressão reduzid a. Filtrar para obter sólidos í, lavar com metanol em seguida heptanos. Uma filtração adie. ional produz um segundo lote de [4- (5-amino-6-metil-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-- (2,β-difluoro-fenil)-metanona. Secar sob pressão reduzida a 45°C (445 g) .

Preparação 15 [4-(5-Amino-3-metil-piridin-2-il)piperazin-l-il]—(2,6— -difluoro-fenil)-metanona

Tratar uma pa; sta c ie 2· -dor· 0-3-meti] .-5- nitr 0“ "pi ridi na (27,00 g, 0,1 o 6 moi) e éí 3 ter de tare- but ilo d.0 áci do r dperazino- 1-carbox: 1—i—L G O (32,0 3 g, 0,172 mo ] \ em D MF an f dra (27 0 mL) c :om K2CO3 5 g, 0 j 25C ) mol), e m s ?egui da aqu ecer cl mistura reaccior ;al a O Γ1. O r-' w ' J d sob N 2 durante ; a noit Γ\ Pt c ver a ífi γ' 3. mistura y p p r< r- na.I result ante em EtOA C/H ,20 1 /1 / -"l UP 000 mL) , separ. ar as ca;i nadas, em s< eguid· a extrair : a cama da aqu c· cor n. EtOAc (1. ,000 mL) . Lavar as camadas orc fânic a s com bina das com cloreto ; de sódio aquoso c> :: itura do (3 x 1, n n W 'J V mJ..· C3.G3.) f secar s obre MgSO 4, filtrar e em seg □ida CG ncentra r sob pressão reduz ;ida para dar um sóli do ama rei o . Ϊ Lazer ui ma casta do s ;ól ide : ama relo em hexanos / ...

EtOAc, em seguida recuper, ar 0 sólido resultante por filtra çáo em vácuo. Xj d. V d. L· C V tm hexanos e filtrar em rácuo para d ar (42 ,84 g) c ie éster de terc-butiio do ácido ' 4- (3- -metil -5-niti i'O-piridin-2-il) - píperazino-l-carboxilico na forma de um sólido a rua rei c Concentrar 0 filtrado sob 39 ΡΕ1943243 pressão reduzida para dar um sólido amarelo. Fazer uma pasta d o sólido amarelo em hexanos, em seguida recuperar o sólido resultante por filtração em vácuo, i avando com hexano e socando sob filtração em vácuo ps u:a dar um adieion al (5,38 c) do composto ester ίΐθ ίθ-Γί. 7-butilo do ácido 4- (3~rrieti 1-5-nití ro-pi.ridin-2 - i.l) -piperazi no-1-08 000- xílico na forma de um sólido amarelo (48,22 g , 95,9% de Límento) . 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ • Q 0 f, ! r> 1 H), 8,14 1H), 3,57 (m, 41 ]· í ! 3, 41 (m, 4R), 2 , C b ( 3 , O· H) , 1,48 ís, TOF-MS [ES+, M+H] Qbs „ 271/2 323, 1723, CA :;lc° m/z 1719; Anál. Cal c3 pj i.Tci Cló;H22^24(.-J4 l C-55,88; K- 6,87; N- A, Encontrado C- 55, 94 . v-ι r Q 'l „ Vr '< / - % Xj $ 'J ! ? l·'. — 7,14. Adícionar uma solução de HCl 4 M em dioxano (4 eq) a uma solução de éster de terc-butilo do ácido 4-(3--metil-5~nitro-píridin”2-il)-piperazino-l-carboxílico (7,77 g, 24,13 mmol) em DCM (73 mL). Agitar mistura à temperatura ambiente durante a noite. Adicionar mais 2 eq da solução de dioxano em HCl. Depois de nenhum material de partida ser detectado por LCMS, filtrar o sólido e secar sob pressão reduzida para obter 6,91 g de hidrocloreto de i - (3-metil-5"-nitro-piridin-2-il)-piperazina na forma de um sólido amarelado (97% de rendimento). ES+(m/z): 259 [M+l].

Adicionar trietilamina gota a gota (3 eq) a uma suspensão de hidrocloreto de 1-(3-metil-5-nitro-piridin-2--il)-piperazina (6,91 g, 24,13 ramoi) em DCM (120 mL). Adicionar cloreto de 2, 6-difluorobenzoilo (1 eq.). Agitar a mistura à temperatura ambiente durante a noite. Adicionar mais cloreto de 2,6-difluorobenzoíio (1,6 mL) e 40 ΡΕ1943243 trietilamina (1, 5 eq.) para correr a reacçâo até estar completa. Deixar a reacção repousar durante a noite. Diluir com DCM e extrair várias vezes com água. Secar a camada orgânica sobre NS2S2O4, filtrar e remover o solvente sob pressão reduzida. Lavar o sólido várias vezes com hexano para se obterem 8,08 g de (2,6-drfluoro-feníl)-[4-(3-metil-5-nitro-piridin-2-il)-piperazin-l-il]-metanona (93% de rendimento), ES+ {m/z) : 363 [814-1],

Adicionar Ma> ;q.) e amoníaco aquoso (3 mL/mmol, 32%) a uma solução de (2, 6-dí fluoro-fenil.) - [4--(3~metil~5~nitro-piridin”2~il)-piperazin-l-il]-metanona . Agitar durante Extrair a camada ο/EtOAc. C :ornbinar filtrar e remover er 0 cru a uma ieOH e em seguida para se obterem '/H2G (166 mL, 1 30 m.in, € ítTt, S ΘΟΊΙ a. cio. s aquosa co: m DCM, EtOAc as camada oraânicas e 0 solvente sob pres: coluna Va rian™ SCX e esguichar 0 produto 1,2 g de: [4 - (5-amino-.' (2,6-difl uoro-fenil) (w/z): 333 [M+lj

Õ3. T. Ò. T. d. 3 Có.K'.ó.ô.d.S álcool isopropíl >car sobre Na2SO,; reduzida. Subi var a coluna cor 4 NH3 2 M em Me ietil-piridin-2-i anona (44% de rendimento) . ES+

Preparação 16 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-6-metil-piridin-2--iloxi)-piperidino-l-carboxílico

ΡΕ1943243 41 iicarbcu d. lato de diisopropilo (3,0 ml, gota a uma misti ira fria de 6 .-metil-5- (1,54 g, 1 r\ r, \J 1 imo.l) , éster ,;Í0 t-Qj'C'" -butilo do ácido 4-hidroxi-piperidino-l-carboxílico (2,05 g, 10,0 mmol), e trifenilfosfina (4,02 g, 15,3 mmol) em THF (25 mL) a 0 °C, Após a adição estar completa, remover o banho de arrefecimento e agitar a mistura reaccional a 22°C durante a noite. Concentrar sob pressão reduzida. Submeter o residuo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com hexanos e acetato de etilo para proporcionar o éster de terc-butilo do ácido 4 - (6-metil-5-nitro-piridin-2-iioxi)-piperidino-l-carboxílico na forma de um óleo incolor (2,69 g, 80% de rendimento). MS(ES): m/z ^ 338,2 [M+H], itar uma mistura de éster de terc-bu ttio ao (6-meti1" 5~n.it.ro~P' iridin-2-iloxi )-piper: Ldi.no-1- (2,69 g, 8,0 mmol) e paládio 10“ ; sobre carbono ácidí ei ç â o o catalisador cio poloclio, dar um óleo incolor . Submeter o obre gel de silica eluindo com 5 par a dar o compost o mencionado renci imenso) . MS (ES) : m/z = 308,2 (1,0 g) em etanol (60 mL) a 22°C sob hidrogénio durante 2 horas. Separar por filtração

Preparar o seguinte composto usando um procedimento substancialmente análooo aos acima descritos. 42 ΡΕ1943243

Quadro

Preparação Composto MS (ES) : m/z [Mt-H] Preparação 17 Ester de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-3-metil-piridin-2-iloxi)-piperidino-l-carboxílico 208,2

Preparação 18 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-piridin-2-iloxi)--piperidino-l-carboxílico

Adicionar uma susp‘ ensão de NaH pré-1 . cl V 3 Cl O (0,1 2b 2,48 mmol, dispersão 60% em óleo minerai .) em THF 2 mL) a uma solução arrefecida em. g< elo de éster de terc-b· utilo 0.0 ácido 4-hidroxi-piperidino-1 · -carboxiiieo (0,5 9% 2, 48 mmol) em THE' seco (3 mL) . Deixar a mistura em agitação durante 20 minutos, em secruida adicionar 2~cloro~o~n.itro~pirid.ina (u,00 y, 2,26 mmol) em porções. Depois da adição estar completa , remover o banho de arrefeeimente ; e ag. itar a mistura reaceionai a 22°C durante a noite. Arref ecer a mistura reaceionai com banho ae geio e ad.ic.ion; a r uma solução aquosa sat urada de bicarbonato de sódio (5 mL).

Distribuir a mistura reaceionai entre acetato de etílo (2 5 mL) e água destilada (25 ml) . Isolar a fase aquosa e extrair com acetato de etilo (3 x 35 mL) . Secar as fases oraânicas combinadas sobre sulfato de sódio e concentrar sob pressão reduzida. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com hexanos e acetato de etilo para dar o éster de terc-butilo do ácido 4- (5-nitro- 43 ΡΕ1943243 -piridin-2-iloxi)-piperidino-l-carboxilico na forma de um sólido branco (0,55 g, 75% de rendimento), MS (ES) : m/z :::: 324,2 [M+H].

Agitar uma mistura de éster de terc-butilo do ácido 4~ {5-nitro-piridin-2-iioxi)-piperidino-l-carboxilico (2,7 g, 8,35 rnmol) e paládio 10% sobre carbono (0,5 g) em etanol (100 mL) à temperatura ambiente sob hidrogénio durante 4 horas. Filtrar para remover o catalisador de paládio. Concentrar o filtrado e submeter o óleo incolor resultante a cromatoc írafia sobre gel. o.e sii.ica i Aluindo com hexanos e acetato de etilo para dar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (2,11 g, 86% (ES+ (m/z) 194,2 [M+K-BC-C] ) ,

Preparação 19 [4-(5-Amino-3-metil-piridin-2-iloxi)-piperidin-l-il]-(2--fluoro-fenil)-metanona

q *

Adio: ionar uma suspen são de NaH pré-la V3.0-C (1,27 g, 31,87 tnmol , dispersão 6C i% em ó.b so mineral) em THF (20 mL ) a uma soluç :áo arrefecida em gelo de éster de t erc- -butí1 o do ec.i .do 4-hidrox i-piperi d í no-1-c a rbo x í. 1 ico (6, 41 g, 31,87 mmoi ) em THF seco (80 mL) . Deixar a mis tura em ag: ítaçâo d urant e 20 minutos, em seguida adicionai o „ cloro- 3-metii- 5-nit ropiridina (5 Cr 9 ç< Q Ί mmol) em porç Ões. 44 ΡΕ1943243

De oois aa acíçâo estar completa, remover o banho de arrefecimento e agitar a mistura reaccional a 22°C durante a noite. Arrefecer a mistura reaccional com um banho de qeio e adicionar uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) . Distribuir a raistura reaccional entre acetato de etílo (350 mL) e água destilada (150 mL). Isolar a fase aquosa e extrair com acetato de etílo (1 x 100 mL). Combinar as camada orgânicas e lavar com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 150 mL) . Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio e concentrar. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica na forma de um sólido b MS (ES) : m/z - 360,3 [M-i-Na] eluindo com hexanos e acetato de etrio para dar o éster de rere-butilo de ácido 4~ (3-raetiI-5-nítro-píridÍn-2-iIox.í)--piperidino-l-carboxílico na (6,5 g, 67% de rendimento)

Adicionar ácido trifiuoroacético (150 mL) a uma solução fria de éster de terc-butilo do ácido 4-(3-met.íl-5--nitro-piridin-2-iloxi)-piperidino-l-carboxílico (10,12 g, 30 mmol) em oiclorometano (450 mL)„ Agitar a mistura reac-cional a 22°C durante 60 min. Após remoção de solvente, tratar o resíduo cora hidróxido de sódio 1 N (150 mL) e extrair com dieiorometano e acetato de etílo. Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio. A remoção do solvente proporciona 3-metil-5-nitro-2-(pipe-ridin-4-iloxi)-piridina na forma de um sólido amarelo (6,9 g, 97% de rendimento), MS(ES): m/z ^ 238,2 [M+H].

Adicionar cloreto de 2-flucrc-benzoíIo (1,74 g, 11,0 mmol) gota a gota a uma solução de 3-metil-5-nitrc-2- 45 ΡΕ1943243 - (p iperidin-4- iioxi)- píríc lina em diclc rometano (5C mL) e tri etílamina 1,21 g ; .1. mmoi) e agit ar sob N. a tempe- rat ura ambient e durar te 2 horas. L· a. V a Γ a mistura rea ccional com água de.st: .lada í 3 x ; :0 m.L) seguido por solu ção aquosa 0 ò. 0 □rada de c ioreto de sódio (1 x 20 mL) . Sec ar a rase org ânica sobre sulfa to de sódio e co:oc entrar pa ra. dar (2- fiu oro-fenil)- [4-(3-metil- -5-nitr o-piridin-2-iloxi)- piper idin-1 ··· i 1 ]-ruetar ona na forrr: a oe um. sólido an :are lo„ Agit ar uma mistura cie (2 ~ fluoro-fe: ·, ·· \ -[4-í3- -me til-5-nitro pirid: n - 2 - i.loxi) - piperid in-1-1.1] -rt eta tona (3, 58 g, 10 nur O 1) Θ palác ! ^ D o. sobre carbono ( 358 mg) em et a nol (IQO ml j ) a 2 0 c r: sob hi drogénr o durante a noite. Fil trar para t "emove r 0 c ata lisa dor„ Ce ncentrar 0 f t l.trado par a proporei onar u m ól eo incolor. Submeter 0 óleo a cro matografia sobre gel de Sli ica eir he> canos e Cl C w tctO ΟΘ w :ilo ( 1:1), seguido por acetato de etilo '/' í\ o. /hexanos ρ; m:a dau : um sólido amare Io (2,27 9h 50% de ren dimento). M S í E S) : m/z - = 330,2 [M-rH] .

Preparação 20 Éster de terc-butilo do ácido 4-(4-amino-piridin-2-iloxi)--piperidino-l-carboxílico

Adicionar 100 mL de tolueno a uma mistura purgada de azoto de 2“ ciou o-4-nítro-pi: f Λ -Ρ Ο _. r-, r Lrdina ípm g, i 7,2 mmoi), b.idroxipipe ri dina- -carboxilato de terc-butilo (11 , 0 g, 54 ,5 mmoi), c '&Σ bonai ..Ο ίΐθ ΟΘ0.1ϋ ' (13,3 g, 40,3 mmoi; 1 f & E eta to de paládio (1 22 ma. 0,54 4 mmoi) e 2-(dl-terc-buti." Lfosf ino) - -1 ,l'-binarti lo / o 71 mg, 0,63 mmoi) . Agitar í i mi st ura 46 ΡΕ1943243 resulta nte Q i_ ciii L-td a noite segu ida partir ent re água e camada aqui osa com um adicional 3 CcíITícLOicL ora ânica combinada concent rar so b pres são redu crornato gra t. í cl sobre < gel de si de 0 a 20c ; de acatai ,o de etij íti o -!- c.\ ]- ç· le t ^ Y' ,"< - butilo do ácido -piperi dini o-l - carboxi .líco na à temperatura ambiente, em acetato de etilo. Extrair a - de acetato de etilo, e secar sobre sulfato de sódio e zida. Submeter o resíduo a lica eluíndo cc ;m u m gradiente -0 em hexanos p ara produzir o 4 -- (4-nitro-pi.: íiidi η-2-i.loxi) - -L. o jCriici οθ LiíTi sói .ido ceroso bran O 0 (5, 3 7 ρ· 61% ; LCMS ES+ S ubmet ;pr uma p as ta ácid o 4- (4 -nit: ro-p iridin “2~ii (3,0 g, C) :8 rrun ol.) θ P cl 5%/C uma at mosf era de hidrogénio dura nte a i lo.íte á ternper atura. reac cio nal atra' '/é S ce ums i arme sob ? ressáo redv is.ída pcl ΙΓβ rnenc ion ado -,rf; ítulo na forma 95% de rendimento). LCMS ES+ ( (m/z) 268 [M-TBu] H") . de éster de terc-butilo do oxi)-piperidino-l-carboxílico (151 mg) em EtOAc (150 mL) a a 60 psi (agitador Parr) ambiente. Filtrar a mistura fada de Ceiite® e concentrar proporcionar o composto de um sólido branco (2,6 g, m/z) 294 [MH-]] <

Preparação 21 [4-(4-Amino-piridin-2-iloxi)-piperidin-l-il]-(2,6-difluoro- -fenil)-metanona

Adicionar 2-cloro-4-nitrop idrna, (3 g, 18, 9 mmol), éster de tei rc-butilo do ácido 4- -hídroxi-prperi d.ino- 1 -carboxí1ico, 7,6 g (37,8mmoi!, [1 , 1 1]binaftaienii- 2-il- di-terc-buti!-fosfano (188 mg, 0,4/ mmol), acetato de paládio (85 mg, 0,38 mmol) e carbonato de césio (9,2 g, 47 ΡΕ1943243 28 ,4 mmo 1) a um delril O pP 500 mL e purga r com n2 durante 10 m.in , Ibr: segui. .da adie iona: r tolueno seco (500 m L) e agitar 3 temper atr ura ambi ente sob , atmosfera de N? duran te a ÍIOi_ LC c E.e par tir a reac 03. o ent -ΓΘ c iaua e E t.0 Ac ( 500 ml i de cada). Se par ar a camac ia orgâr iJLCcL * Secar sobre MgSCg, i. d, J. L i. 31. θ ev aporar 0 s sol- vei ntes, Subr meter o resíduc . 3 C T omat ografia sobre ( nei de sílica a e buindo com ; ama n ais ti ara de Et OAc : be XcLJ nos m; im gradi ente desde 5 até 2( )% de EtOA o em 10 YO lum Θ8 de colui na p ti ΤΓ 3 obter 1,2 g / T; a Q. \ -í O ie ren· dime: nto) de és ter d·" L ' erc-bu lo do com; posto mer icionad o em t itul o ácido 4- (4- nít y*/'' · -pirio !in -2-il oxí) -píperioi ,ηο-1-c arboxi lico n 3 forma de a: a sóli do bran co (} 3S+ (m/z) - 324 [M+H]. j. tdício nar 8 m. L d. Θ uma sol' uçâo 4 M de HC1 em. E12 0 a 1, 2 g c ie és te: r de ter c-batilo do ácido 4- (4 -nitro- -p irí din „ 0 . -iioxi )- pipe ri di no-1-earbox11i co ta agi 03 T 3 s u spe Π S d- d · durant .0 4 hor c· 1 Svaporar o s o 1 y ente e tri turar o só li d y 'Θ 3 tante C( arn. Et: iG para prodi ; z i r ]-, 1 g d* a d i -hidro- cloreto de 4-nitro-2- (piperidin-4-iloxi)-piridina na forma de um sólido amarelo pálido (100% de rendimento) (ES+(m/z) = 224 [M+H].

Adie íonar tr ietílamina (; 2,57 ; uL, Ί 0 .1. w / 5 n amol) a uma suspensa o de 1,1 g ! [3,7 mmol) de di- -hid roc( Lor etc cie 4 -nitro-2 -(pipe ridin- iioxi)-pir id. ina e: m diclo ror: aetan 0 s e co (50 mL!- Em seguic 13 adicionar C boret . O c io 2,i 3-dif ruo ro- benzoílo (0,; 512 mL / 4,07 mmol ) . Ag.i . tar a mí sti ara à temperai ura a mibien' te Cl LI O 3 Π L.0 a noit ;0 Adiei .onar á gua (50 mL) e separar 3 camada or gâ.; nica. b& car C( cm M· gSO, 4 e filtrar, Evaporar os solventes ps ira obter 1, 22 g ( 91% de 48 ΡΕ1943243 rendimento) de (2,6-difluoro-fenil)-[4-(i-nitro-piridin-2--iloxí) -piperíd.in-l-il] -metanona na forma de um. sólido amarelo (ES+(m/z) = - 3 6 4 j ;m+h]. Adicionar lima) Lha de fer^ :o (419 mg, 7,5 mmoi) a uma solução de 1,1 g (3, C ) mmoi) de (2,6-difluoro-fenil)-[4- - M-nitro-piridin-2 :-i lo.x.i .) -piperí d .ir i -1-i1]-me t a ηo na, em o.Cl.d0 clCΘt. '1-CC; Cj 1 Ci C JL cl 1. (10 rnL) e agitar a 80 °C. Após 15 min, deixar a m: istura alcançar a temperatura ambiente e filtrar através de Celite * LciVcil? ci almofada de Ceiite® com ΕΐρΟ e EtOAc. Lavar a camada orgânioa resultante com água, uma solução aquosa saturada de NaHCCP e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Separar a camada orgânica, secar sobre MgSO$ e evaporar os solventes para produzir 831 mg (83% de rendimento) do composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco. (ES-;- (m/z) ^ 334 [M-f-H] .

Preparação 22 Éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino-piridin-2--ilamino)-piperidino-1-carboxílico

Dissolver N-Boc-4-aminop iperidina (0,9 g, 4,8 mmo 1.) em. etanol seco e adicionar ca irbonato de sódio sói ide (, d g , /,9 mmoi) a 0 °C, seguid o por 2-cloro-5-nitro- piridina \ 0, c g, j , 9 mmoi). Agitar a solução a temperatura ambiente durante a noite, era seguida aquecer a solução a 49 ΡΕ1943243 9°C durante 6 horas. Agitar à temperatura ambiente durante a noite. Evaporar o solvente sob pressão reduzida e repartir a mistura crua entre EtOH e água. Extrair cora EtOAc e lavar a camada orgânica com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Combinar as camada orgânicas e secar sobre MgSC’4. Filtrar e evaporar o solvente de maneira a obter éster de terc-butilo do ácido 4- (5-nitro-piridin-2-iiamino)-piperidino-l-carboxílico.

Adicionar EnCu. n.0 <11,8 mrao.J. , 2f / gt sobre uma solução de éster de Cerc-butilo do ácido 4-(5-nitro--piridin-2-ilamino)-piperidino-l-carboxilico (2,4 mmol, 0,8 g) era 20 raL de acetato de etiio. Agitar a solução à temperatura ambiente durante a noite. Adicionar solução aquosa de NaSCCn até o pH da solução ser básico e extrair com acetato de etiio. Filtrar a suspensão através de uma almofada de Ceiite®, Combinar a camada orgânicas e lavar com cloreto de sódio aquoso saturado, secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida para dar o composto mencionado em titulo, MS (ES) : rn/z - 293 [M-i-HJ ,

Preparação 23 1-Metilciclo-hexanocarboxilate de metilo

Tratar uma solução de ácido l-metiicicIo-hexano~ carboxílico (7,11 g, 50,0 mmol) em MeOH (10 rnL) e Et20 (40 mt) gota a gota com trimetilsílil-dlazometano (2,0 M/-hexanos; 26 mL, 52 mmol). Agitar a mistura reaccional à temperatura ambiente durante a noite, em seguida concentrar sob pressão reduzida para produzir o composto mencionado em 50 ΡΕ1943243 ulo na form. a de UiU oJ-ΘΟ cl 11 aarelo pálido límpido (7,811 gf mmo1; 100%) . MS C GS) : m/z :: = 156 ] .

Preparação 24 Éster de benzilo do ácido 3-hidroxi-2,2-dimetil-propiónico

Adicionar hidróxido de potássio (486,7 mmol, 32,1 g! a unia solução de ácido 2,3-di-hidroxi-2-metil- -propióni O o C-O ,2 mmol, 50 g) < 3tn 300 mL de DMF. Agitar solução ( iurante 1 hora a 100 ^ e ^ em seguida adieion brometo c :;e bens ;ílo. Agitar a solução durante a no.it Arrefecer a mi siz ura e diluir coa i ò. e e o ci L o de etilo. Lavar camada or CJ 3. Π a. C 3. · com água. Lavar a camada aquosa com aceta de etilo várias vezes. Combinar as camada orgânicas e secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. 1H-NMR (CDC13, 400 MHz) δ ppm: 7,36-7,32 (m, 5H) , 5,1 (s, 2H), 3,5 (s, 2H), 1,21 (s, 6H).

Preparação 25 Éster de etilo do ácido 1-fluorometil--ciclopropanocarboxilico

O 51 ΡΕ1943243

Adiei _o nar AgF (4,5 eq, 4,56 g) a ume ϊ S .oiuçâo de ést .er de eti 1 0 do áci do 1- fluoro-c icl.o butan ocarboxílico d, 6 g, 3 mraol ) em acef .onitr. iio (22 r ri) e ág; iíl (274 mL). A.qi; iecer a mi st UI .d. d w 1 3 num tubo vec ia do durai ate 20 horas enc luanto ; se ag: Lt a vigoro cirCl w 11 { Θ » DXcl r a mis tu ITcL arrefecer e filtrar através de Ceiite®. Remover o solvente sob pressão reduzida para dar o compost ;o menci onad ío ert i titulo na forma de um óleo (0,81 g, 61% de r encime; ato) que θ usado sem qua.l .quer purificação posterior . MS(ES \ * r n/z - 147,1 [M+H].

Preparação 26 Éster de metilo do ácido 1-trifluorometil--ciclopropanocarboxílico

Adicionar solução 2 M de diazometano em hexanos 14,2 mL f 28, 45 mmol) d um .a soiuç áo de ; ácido 1-trifluoro- etileio lopro par í o-]-ca r.t >oxí ií co (3,65 g, 2: 3,7 mmol) em etanol- hexan os (2,5 : mL “22 ,5 mL). Cone rentrar sob pressão eduzida Θ de stilar o resíduo par a dar o composto mencionado em titulo na forma de um óleo amarelo (2,93 g, 73% de rendimento). MS (ES) : m/z :::: 169,1 [M+H] .

Preparação 27 3-Oxo-3-(1-trifluorometil-ciclopropil)-propionitrilo

Adicionar solução 2 M de LDA em THF (19,15 mL, 38,3 mmol) a uma solução arrefecida em gelo-acetona de éster de metilo do ácido l-trifluorometil-ciclopropano-l--carboxilico (2,93 g, 17,4 mmol) e acetonitrilo (1,43 g mL, 52 ΡΕ1943243 34,8 mmol) em THF (3C i mL) . Agitar a ml -Stura re, aocionai ... líi» r 1 \J duran te 1,5 horí rs e e m segui da de ixar a que cer a 22° duran te 2 ] loras. Cone rentra '£ ? 3. CÍ JL C ronar hexar 10S e filtra para dar um. sólido am< areio. Lava r com h exanos P tratar cc: é t- θ r dietí. l.ico (250 mL) í rm se σι lida HC.l 2 : ]\] (150 mL) Extra ir a < ramada aque j S cl C C. )m éter diet iirco (4 x 100 mL) S e c a r ci S 18 ses orgânic :as cor nbinadas sobr e sulr ratc • de sódio A remoção do solvente proporciona 3-oxo-3-(l-trifluoro-metil-ciclopropil)-propionitrilo {2, 99 g, 97% de rendimento) . MS(ES-): m/z = 176,1 [M+H].

Preparar os seguintes compostos usando um procedimento substancialimente análogo ao acima descrito.

Quadro

Preparação Composto Preparação 28 4,4,5,5,5-Pentafluoro-3-oxo-pentanonitrilo Preparação 29 5,5,5-Trifluoro-4-metil-3-oxo-4-trifluorometil-pentanonitrilo

Preparação 30 5-(1-Metil-ciclopropil)-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H- pirazol-3-ilamina

53 ΡΕ1943243

Aquec Θ r uma mistura de 3-ox; 0-3- (1-· trifi uoromet il- -ciclo; prop.il) -r ).I opion itrilo (2,66 Qd 15,0 mmol), N- ben z 1. - drilids sno-N'- (6 “I netli- -piridin-3~il ) “hi( írazina / r:r: 43 (20 02) 2171-2 173) (4, 3: 1. g, 15,0 mmol), :Γί Íj eido p- -toli 1 sul. fónico (14,29 n 7 rí Pi MIO 1) em etanol (85 mL) a 90 °C num t ubo vedado durante 1 8 hor as. Após rem· oçâo do sol· rente :, subme ter Ο 1ΓΘ 3 u. duo a cr O; matou: rafia sobre oei de si li .ca e luindo com metanol 0-5% em diclorometano para dar um sólido castanhc (2,29 g, 54 % de rendimento) . MS (ES+) : m/z - 283, 2 [M+H] .

Preparação 31 5-Pentafluoroetil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-ilamina

Aquecer uma mistura de 4,4,5,5,5-pentafluoro-3--oxo-pentanonítrilo (4,0 g, 21,4 mmol) e p-tolil-hidrazina (10 g, 64,1 mmol) em etanol (20 mL) a 95°C num aparelho de tubo vedado durante 15 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, remover o solvente sob pressão reduzida para dar um sólido amarelo. Distribuir o sólido entre diclorometano (250 mL), água destilada (150 mL) e uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) . Isolar a fase aquosa e extrair com diclorometano (100 mL) . Secar as rases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio e concentrar para dar um óleo amarelo-ouro escuro. Submeter o óleo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com 54 ΡΕ1943243 acetato de etrio e hexanos para dar um sólido castanho claro (3,24 g, 52% de rendimento). MS (ES+) : m/z :::: 292,1 [M+H].

Preparar os seguintes compostos asando um procedimento substancialmente análogo ao acima descrito.

Preparação Composto MS (ES) : m/z [Mt-H] Preparação 32 2-p-Tolil-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-ilamina 282,3 Preparação 33 2-p-Tolil-5-(2,2,2-trifluoro-l-metil-1-trifluorometil-etil)-2H-pirazol-3-ilamina 338,3

Preparação 34 Éster de 2,2,2-tricloroetilo do ácido [5-(1-metil-ciclo-propil)-2-(5-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-carbâmico

Adicior ;ar u; ma solução d c.. ρ \ f) y f) f G rmato de * 2,2,2- -tric loroetiio ( 1,80 g, 3,5 mmoi) em THF (10 mL) gota a gota U TU cl· 3 G. J. U Ç â 0 an: e feeida em ge lo-sal de 5 - (1 -1 r: ifl.uo.ro- metil -ciclopropi] -) - 2 ç-tolil-ld-pi razoi-3-i( Lamina g, 8,1 m mol) e pin drna (0, S mL, 11 mmol) em rp V. p ' 0. C) mL) a - ]. 5 0 C , Agitar a - ]. 5 0 c durante 0,5 ' horas e era segui .da 22°C durante 1 hora, em seguida distribuir a mistura reaccional entre diclorometano (50 mL) e uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) , Isolar a fase aquosa e exoram ru a s v eze: ::om drcrorometano mL cada uma) , combinadas sobre ir as rases oraamca: sulfato de sódio 55 ar. Submeter o resíduo a cromatografra sobre gel eluindo com. hexanos e acetato de etilo para O.cl· Γ branco (2 , 4 6 g, 66% de rendimento). MS(ES+): m/z ΡΕ1943243 de ura ,2 [M+H] .

Preparar os seguintes compostos usando ura procedimento substanciaImente análogo ao acima descrito.

Quadro

Preparação Composto MS (ES) : m/z [Mt-H] Preparação 35 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido (5-pentafluoroetil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-carbâmico 466,1 [M+H] Preparação 36 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido [2—p— tolil-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-carbâmico 458,2 [M+H] Preparação 37 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido [2—p— tolil-5-(2,2,2-trifluoro-l-metil-1-trifluorometil-etil)-2H-pirazol-3-il]-carbâmico 512,2 [M+H]

Preparação 38 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido 5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-carbâmico

56 ΡΕ1943243

Adi . cíonar u .ma s 7 1 ' .· ... W· tão S 5. G U Γ 3. 0. 3. G 0 NadlC? (2, 4 uma SOii X C ci 0 CÍ8 5 -i ~erc mbu til-2-p-toIii- -2H-pi razo 1- .lamina (4C ) υ g, .1., 74 mc ll) em. THF (8L) e arre • 9 ^ C ^ r stura até 0 °C. Em seguida t adicionar gota a go oroforr nato H 9 9 b •Ja_. ; -- ) - :~tr i cio: roet iio (406,77 g d 1,9 2 mo 1 \ ... / 1. Γ.’ 3. T cl mis i r\ tura a u °C di :irar ;te 2 horas, Extr ' 3.9 L ci mis tu reac ci onal com acetato de ' et.1.1 o (3x6,5 L ) , secar sot su ir ci L. o de magr ésio anidro e cor :centrar, Dis solver o sól.í numa c [uant. idadí 2 mínima de aceta to de etiio e adicionar exce ss p ''j p hex anos para ρ recipi tar. Recolhe •r o sólido p fiiu ra ç ó. 0 e s ecar para obter o composto mencionado ti tu lo na form a de um sói ido e£ abra nauiçado (a 8 6 g, S 3 % rendimento). 1H-NMR (400 MHz, CDC13) δ: 7,34 (d, 2fí) , 7,

Preparação 39 Éster de 2,2,2-tricloroetilo do ácido [5-(l-metil--ciclopropil) -2-p-tolil-2H-pirazol-3-il] -carbâmico

4 4 mL t com TH? 57 ΡΕ1943243 (1,5 mL/mmol; 60 mL) e arrefecer até -78 °C. Combinar 1-met.í lciclop.ropanocarboxi.lato de me ti lo (TCI US; 4,56 g, 4 0 mmol) e CH3CK (4,20 mL, 80 mmol) em THF {10 mL) e adicionar lentamente com ag.it ação. Agitar a mistura a -65 ;,rí -78 °C OU U U Γ; L e 1 hoi :a, em segu ida remover o banho e aquecer a mistura até à temperatura ambient e. Concentrar a mistura r< aaccionai a té Uíílci OU S Lei. sob pressão reduzida.

Adicionar hexanos (150 mL) para formar um precipitado a partir da pasta. Recolher o sólido por filtração em vácuo e lavar com hexanos (2 x 50 mL) „ Substituir o baião de recolha por um lavado, e dissolver o sólido sobre a frita em 50 mL de HC1 2,5 M e recolher no balão. Lavar com 20 mL de HC1 2,5 M seguido por 200 mL de Et20. Separar as camadas no filtrado e extrair a fase acidica com Et20 (150 mL) .

Combinar as z ases orgânicas de Et20, secar com MgSCq, filtrar e L ti ncentrar sob pressão reduzida para produzir 3- (1-metil- O O lopropiI ) ··· 3 - οχ o - ρ r op ί o n i t r i 1 o na f orma de ura óleo âmb< ar límpido (3,58 g, 29,1 mmol, 73%) » η.· S ò. ΧΓ S β:Γί. purificação na reacçâo com hidrocioreto de tolil-hidrazina (5,23 g, 33,0 mmol) e etanol (2 mL/mmol) em refluxo durante 20 h, Arrefecer a mistura reaccional até a temperatura ambient e t A concent rar sob pressão reduzida. Dilu : ί .1 ! resíduo cc m acetato de etilo (250 rr ;L) e lavar com águ· (2 x 60 mL) 1 í NaHCOs aquoso saturado (60 mL) e c loreto d· sódio a ;quo so satura; lo (60 mL) . Secar a fase org ânica co; MgSCt, fí j Ltr ar e concentrar por evaporação rotativa

Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eiuindo com um gradiente de acetato de etilo e hexano para proporcionar 5- (1-metil-ciclopropil) -2-p-toiii-2lf-pirazol- 58 ΡΕ1943243 -3-il amina (4,22 38 g y 1 3 f 3 CCu moi, 46%) . LCi hs (ES+): m/z = 228,2 [M+H] T ratar uma SO-l Q Ç cl 3 i arrefecida (0 °C) da b “ (1 “ -meti 1-cic.l oprop. ί -p-toli 1. - 2 H- -pirazol -3- ilamina (5 , 68 g, 2 5 mm ol) e prrrd ma (2,2 mL, Ο Ί — 1 f 5 mmol) em TE ÍF (3 mL /mmol) com cloroformat o d' e 2,2,2- -tri cloroetilo ( 3,7 mL, f 3 mmol) . Mant ;pr a tem]: de reacção em o ^3f θ após 2 horas , adie :í onar píMQP uenas porçôe s de cl oro for mato (0 , 3 mL) e pir idina (0,2 mL) . Uma hora ma is tard' dii u irar a a c ç a o com a .gua C 150 ml .<) e extrair com. EtOAc (3 x 1 00 mL). .[..a vTa.3 o. 3 L ó ases orgânicas combina d, as com ágt ! t] (10 0 mL) , NaHCO;;. aquoso saturado (50 rnL) cioreio ae soaio aquoso saturaao (50 mL) , Recristalizar o xarope cru em acetato de etilo/ hexanos para proporcionar o composto mencionado em titulo na forma de um sólido branco (8,18 g, 20,3 mmol; 81%), LCMS (Eu + ) m/z ~ 4^2,2/4^4,2 [M+H] , formato solução -riamina carbona.t

Alternativamente, adicionar gota a gota cloro-de 2,2, 2-tricloroetilo (3,0 mL, 23 mmol) a uma de 5- (1-metil-ciclopropil) -2-p-toiii-2i!'-pirazol-3-(4,75 g, 21 mmol) em tetra-hidrofurano (105 mL) e * de sódio aquoso saturado (32 mL) a 0 °C. Agitar a esta temperatura durante 2 horas. Verter a mistura em água e separar as fases. Extrair a aquosa com acetato de etilo.

Manipulação A: Combinar as camadas orgânicas e lavar com cloreto de sódio aquoso, secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida para dar um sólido amarelo. Dissolver o sólido na quantidade mínima de acetato de etilo e adicionar hexanos até turvação 59 ΡΕ1943243 enquaiv to se agít :a. Crist alisa r o compost 0 IT iene: Lon; ido em título e filtra.; / na for ma d· s um sólido branc 0 t ;lH- -N ;MR. (DMSO) ; 9,89 (br s, 1H), 7,31 (d, J = SHz, 2k; i Ί ’ F 1 ,23 (c j ... 0 t; ΓΤ w :: ; 2 H) , 6,12 (s, 1H), 4,82 (s, 2H), 2, s j [ã, 3H) , :: Ί . (s, 3H ! , 0,89 (q, J = 4Hz, 2H) , f) '1 8 ^ f 1 ~ (q f o = 4Hz, 2 H) • ManipuI ação B: T roçar o a c et ato d. c. ‘. P - tilo so ! Λ.Τ'- sn t P por ál C 0 01 ieOp'-£( >píiioo ( 91, 56 mol) , Agita: y" '0 ::l e ta a < íO 0 r~* durante e 2 horas, f iltrar ; la’' /ar c :om álcool isc ipro píl Li CG frio (13,08 moi; e seca Γ β 4 0°C sob p >res li cXO re du: 2Í da durante a noite para produzir o composto mencionado em título, na forma de um sólido cristalino branco.

Preparar o seguinte composto usando procedimentos substancialmente análoaos aos acima descritos.

Quadro

Preparação Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] Preparação 40 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido [5— (1— metil-ciclo-hexil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-carbâmico 442,2/444,2

Preparação 41 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido [5-(1-fluorometil--ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-carbâmico

Preparar uma solução de LDA a partir SOp ropilamina (1,7 mn, 2,2 eq, 12,1 ir imoi) Θ li B ϋ L1 6 M em hexanos, 7,5 ml, 2,2 eq, L2,1 mmc /1) , er a 12 mL de 60 ΡΕ1943243 THF a -78':,C durante 30 min sob N2. Adie. ionar uma solução de éster de etilo do ácido 1 flúor· ometí 1. -c.i clopropano- carboxílico (0,61 g, 5,5 mmol) ei r 7 m: L de THF. Agitar a mistura e deixar aquecer desde ... Ί O O /N 1 W até à temperatura ambiente, e continuar a agitação à temperatura ambiente durante 5 horas. Adicionar 10 mL de uma solução aquosa saturada de NEUCi. Adicionar AcOEt e separar a camada orgânica, lavar com solução aquosa saturada de cloreto de sodío, secar sobre Na NiA e remover os soJ.ventes oara dar um óleo castanho (0,42 g, 54% de rendimento). Dissolver óleo em 10 mL de EtOH e adicionar p-tolil-hidrazina (0,47 g, 1 eq, 3 mmol) . Aquecer a mistura num tubo vedado a 90°C durante a noite. Deixar a mistura arrefecer e remover o solvente sob pressão reduzida para obter a resíduo. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com hexano/AcOEt 15-80 % para dar 0,336 g de 5-(1-fiuorometil-ciclopropil) -2-p-toli 1-2íi-pirazo 1-3-ilamina na forma de um óleo. MS (ES+): m/z = 246,1 [M+H].

Lentamente adicionar CICO2CH2CCI3 (1,00 eq; 717,49 μιτίοΐ; 152,01 mg) a uma solução de 5- (1-fiuorometil--ciclopropil)-2-p-toirl-2S-pírazoi-3-ilamína (176 mg, 0,71 mmol) e piridina em 4 mL de THF sob azoto a 0 °C. Agitar a mistura desde 0°C até à temperatura ambiente durante 5 horas. Filtrar o insolúvel e remover o solvente do filtrado sob pressão reduzida para dar um óleo. Submeter o óleo a cromatografia (hex/AcOEt 20-80%) para dar 110 mg do composto mencionado em titulo na forma de um óleo amarelo. MS (ES+); m/z - 420,0 [M+H]. 61 ΡΕ1943243

Preparação 42 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido (2-p-tolil-5--trimetilsilanil-2H-pirazol-3-il)-carbâmico

Colocar trimetilsilil-diazometano (2 M em THF) (25 mL, 50 mmol) em THF (50 mL). Arrefecer a reacção até - adicionar diisopropilamideto de li tio (2 M em THF) (25 mL, 50 mmol) ao longo de 30 min, Adiciona: r prop.io.lato de metilo (4,45 mL, 50 mmol) e agitar a -73° C durante 2 horas. Aqui ecer até à temperatura ambiente e ag itar durante 18 horas. Adicionar ci o e L-ci l, 0 de etilo, â g ua, e KC1 1 N.

Separar a camada orgânica e extrair a aquosa com acetato de etilo (2 x 25 mL) . Combinar os extractos orgânicos, secar sobre hhqSCt, filtrar e concentrar sob pressão reduzida, ouomerer o res.rdao a croma c.ograr is sobre ger d.e sílica eluindo com EtOAc 0-60%:hexano para produzir 3,59 g (36%) de éster de meti lo do ácido 5”trimetilsilanil-2AT-pirazole~ -3-carboxilíco.

Colocar éster de meti lo do ácido 5~tri.tri.eti.l~ silanil-2H-pirazole-3-carboxílico (1,60 g, 8,07 mmol) e ácido 4-ntetilfenii-l-borónico (1,63 g, 12,1 mmol) em CH2CI2 (30 mL). Adicionar per íeiros mo iSi culares de 4 i i (1,50 g) seguido por acetato de cobre (I ΐ ) (1, 61 g, 8,88 mmol), Em seguida adicionar trie- tilamina (8 mL) e agitar à tempera- tura ambiente durante Z./5 Q133. F iltrar a reacç áo através de uma almofada de Cel .ite® e Ic tr com CH2CI2. R.0COI Γ1Θ.£' O filtrado e adicionar cloreto d .0 amónio aguoso saturado,

Seoarar a camada amaaa aauosa orgânica e extrair com 62 ΡΕ1943243 CH2CI2 (2 χ 20 mL) . Combinar os extractos orgânicos, secar sobre Mg2S04, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com EtOAc 0-30%:hexano para produzir 655 mg (29%) de éster de metiio do ácido 2-p-tolil-5-trimetilsilanil-2H-pirazole-3-carboxí irco. MSÍES+): m/z ------ 289,3 [M-f-H] ) .

Colocar éster de metiio do ácido 2-p-tolil-5-tri-metilsílaníl--2.M-pirazole--3--carboxii.ico (665 mg, 2,30 mmol) (10 mL, 10 mmol) e

em metanol (25 mL), Adicionar NaOK aquecer até 50cC durante 4 horas. Arrefecer até à temperatura ambiente e concentrar sob pressão reduzida. Adicionar solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e 1,% C-. teparar a tramada organica e extra.zr a camada aquosa ;om CH?C1? (2 x 25 mL) . Combinar xur; orgânico secar sobre Mg^SCL, filtrar e concentrar sob pressão reduzida para produzir 620 mg (98%) de ácido 2-p-tolil-5-trimetilsilanii-if-pi razole-3-carboxí lico , MS (ES+) : ra/z ------ 275,3 [M+H].

Colocar áCldO 2 '-p-tol.il.·· -5-trimetilsil “Ό razole- -3-c. arbox: llico í 620 mg, 2,26 mmol! em terc (5 mL) e tolu eno ( 5 mL) . Adi cionar tr rietilamina (0 3.n 1.1 -2H- -butanol ,378 mL, horas. Concentrar a reduzida. Submeter cromatografia sobre gel de 30%:hexano para produzir 504 mg (65%) de éster de terc--bu tilo do ácido (2-p-1 o 1 i 1 - 5 -1 r 1 met i ]. s í 1 a ηí 1 - 2 H-pi r a z o 1 - 3 -il)-carbâmico. MS(ES+): m/z = 316,4 [M+H]. o resíduo a 5 sílica eluindo com EtOAc 0- 2,71 mmol), seguido por szoteto de difenilfosforilo (0,586 mL, 2,71 mmol) e aquecer até 6Q°C durante 1 hora, Em seguida aquecer até 100°C durante 19 reacçâo soo pressão 63 ΡΕ1943243

Colocar éster de terc-butilo do ácido (2-p-tolil--5-trímetí l.silanil -Síf-pirazol-S-il) -carbâmico (504 mg, 1, 4 β mmol) em THF (10 mL) . Adicionar HCi 4 M era dioxano (4 mL, 16 mmol) e aquecer até 60°C durante 3 heras. Arrefecer a reacção até à temperatura ambiente e carregar numa coluna Varian™ SCX. Lavar a coluna com MeOH e em seguida esguichar o produto com NH3 2 M em MeOH. Recolher o filtrado e concentrar sob pressão reduzida para produzir 175 mg (49%) de 2 -o-tolil -5-tr: imeti Isí) Laní 1-2L r-prrazol.-3-i 1 3.ÍU.Í..f)3 * co: locar 2-p- tol: 5 "tri .m.etilsí laní 1- 2F pi rase d.-3 -ila mina (17 vj ITlG ç 0, 6: )3 m moí) em acetato de e tilo (10 mL) Adie ionar ca rbona to d; 2 pc tássio (181 mg, 1,38 mmol) e águ (2 m A) , Agit. d. !ΪΓ 3 reae ÇâO e adíc: .onar ciorofo: anato de tri olor oetilo (0,114 mL, 0, 8 31 mrno. I) , Agitar 2 tempere itur ambiente durante 18 horas. Adicionar água e acetato de etilo, Separar a camada orgânica e lavar com cloreto de sódio aquoso saturado. Recolher a camada orgânica, secar sobre MopSCq, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com StOAc 0-30%:hexano para produzir 280 mg (86%) do composto mencionado em título. MS (ES + ) : m/z -- 420,2 [M+H].

Preparação 43 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido [5-(2-fluoro-l-fluo-rometil-l-metil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-carbâmico

Adicionar H2SO4 (4,5 g) a uma suspensão de ácido 3-hidroxi-2-hidroximetil-2-metil-propiónico (100 g) em MeOH 64 ΡΕ1943243 (1 L, sol .vente g: rau HPLC) e agita r à tempera atura ambiente ao longo do fim-c ie - s emana (ca. 70 h) . Remover 0 solvente e rep artir 0 resi GUO entre EtOAc (1 L) e H20 (100 mL). Ree xtrair 3 Ο3Γ0.3ΰ.3 aquosa com Et :OAc e seca ir as camadas oro ânicas combina idas sobre Mg304. Eill arar e c. ioncentrar sob1 pre ssão r eduzida par a produzir ést μΟ y ; je metil 0 do ácido 3- -hi droxi- 2-hidrox :ime' til-2-metil-pr< spiónico, ] H-NMR (CDCI3, '3 A ;·>, ·.·' W MHz) : δ ppm: 3,9 (d, 2H j=== 11,: i. Hz v ct r ) ! 0 / / c (s, 3H), 3,71 (d, 2H, J ~11!1 Kz ), 2,8 íbs , 2H), : J. f J. (s, 3H) . Adicion ar Tf;G (8 0 mL) g< ota a gota a uma solução fria (“78 °C) de éster de metilo do ácido 3~hi.drox.i~2--hidroximetil-2-metii-propiónico (32,5 g) era CH2CI2 (400 mL) e 2,6-lutidina (80 mL) . Deixar a reacção alcançar a temperatura ambiente e agitar até só ser detectada a mancha do produto por análise de TLC (ca. 2 h). Diluir com CH2CI2 (4cU mL) e lavar corn 11....1 (solução aquosa oto . tecar a camada orgânica sobre MgS04, filtrar e concentrar. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo com hexanos/acetato de etilo 5%, para dar o éster de metilo do ác.i .do 2 -meti1-2 3- -bis-tr if 1 uorometanossulfoniioxi-propio- nit ao na forma d e um 61 -60 incolor. 1H-NMR (CDCI3, 30 C } MHz): δ ppm: ^ f / (d, 2 hf J=10,3 Hz), 4,5 (d, 2H, J=10,3 Hz) , 3,8 ' S 1 1 il) f '4 (s, 3R) • Adicion ar TEAE Ί M (1.32 mmol, 132 mL) a uma solução de éster de metilo do ácido 2-metil-2,3-bis-tri-fiuorometanossulfoniioxi-propiónico (65,9mmol, 26,3 g) em 500 mL de THE anidro arrefecido até 0 °C. Agitar durante a noite. Concentrar sob pressão reduzida e adicionar CH2CI2. Lavar a camada orgânica com cloreto de sódio aquoso 65 ΡΕ1943243 saturado. Combinar as camada orgânicas e secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida para dar o éster de metido do ácido 3-fIuoro-2-fiuorometil--2-metil-p.ropión.ico. 1H-NMR (CDCI3, 300 MHz) : δ ppm: 4,7-4,4 (m, 4H), 3,5 ts, 3H), 0,98 (t, dH, J —i,7Hz),

Adicionar LDA 2,0 M (62,0 mmol, 31 mL) seguido por acetonitrilo anidro (56,4 mmol, 2,9 mL) a uma solução de éster de metilo do ácido 3-fluoro-2-fluorometii-2-metil- co (28,2 mmo 1, 4,3 ç .'\ ·( /·. _'ΊΟ. ® ρ • G dlC / >J G g Agitar solução aquec er até a qltar durante duas horas a -78 noite. Concentrar sob oressão reduzida e adicion; 1j5. V d.. r a camad a or ga.ni ca com cloreto de sódio aquoso 0 Θ KCi aqc ", r\ 0. J. U "o w Combinar as cama das orgânicas e •obre sul fato GO sódio, ff Itrar e concentrar sob pressão reduzida para dar um resíduo. Agitar hidrocloreto de p-tolil-hidrazrna (15,5 mmol, 2,5 g) e o resíduo obtido (15 , 5 rn moi, 2, 5 g) em 3 1 noi te. Concent rar e dissoi sol ução ]. 0 % em . h.rdrc ?xido c eti lo, Combina r as camada de SÓ d i .0, fili :rar c i conca dar β 5 -(2-flu oro-1- f luoro pir azol. - 3 -1.1 ara ÊD Clo ubmete ΰθΐ de siiica eluin do com 15% ·- a 50%) . i LVJS (rSe ) : m/z de etanoi a 80 °C durante a ioxver o resíduo em água. Adicionar sódio, e extrair em acetato de :gânicas e secar sobre sulfato rar sob pressão reduzida para :il-l-metil-etil) -2-p-tolil-2i7-) residuo a cromatografia sobre exanos/acetato de etilo (desde 266 jM-Hij.

Lr 101 o r o e silo

Aoxcxonar cxororormat

ilO (8,1 mmol, 1,1 raL) e solução aq3 de carbonato (4,8 ml.) a uma solução de 5- (2-fiuoro-l-fluororaetii-l-me- 66 ΡΕ1943243 til-etil) -2-p-tolil-2#-pirazol-3-ilainina (7,3 ntmol, 1,9 g) em. 37 m.L de THF. Agitar durante 24 horas. Verter a solução sobre áaua e extrair em acetato de etilo. Combinar as camada oraânicas e lavar com solução aqi josa saturada de cloreto de sódio. όθϋόϋΓ" bOiObtt b \a J, £ cl L 0 sódio, filtrar e concentrar sob pressão redu: zida para 031. 0 C0rQp0S17.0 mencionado em tít uio . MS (ES +,) ; ^V —Γ II l+H] .

Preparar o seguinte composto usando procedimentos substancialmente anáioaos aos acima descritos.

Quadro

Preparação Composto MS(ES+) :m/z [MfH] Preparação 44 Éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido [5—(2— fluoro-1,1-dimetil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-carbâmico 424

Preparação 45

Ester de terc-butilo do ácido 4-(5—{3—[5-(1-metil--ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureido}-piridin-2--il)-piperazino-l-carboxílico

&

O Λ

67 ΡΕ1943243 7\ ^ riv.' ier uma solução de éster de terc-í UU L.-LlO do ác ido r, (5- -ami ..no-pi r.id.in-2-i I) -piperazinc rbox.í 1 .ico (p repar ação /) -1 / 1 ,05 ec ς U 1 Í3 d 4 0 í V r éster de 2 f 2 f 2~ ;ri- ... ri loroe tilo do ác ido [ 5- (1-metil- cicl.opropil ) -2 p- to li 1. - -2 H- pi razol -3~.il . ] -c iarba.mi.co (Preparaçã o 39, 1,0 e 'Q? V f 8053 c J) e di isopr· opílt !ti] .ami .na (2 r\ r* ^ / 'Ύΐ T ; V / / dlL 1 em DMSC (0,25 M, 8 mL) 5. 6G°C durai ite 6 . horas. Arrefecer a mistura resul tante até ci tempe ratu: ta amb Lente, e adicion ar água (2 0 mL) . Extr :aír com EtOAc Í2 x 25 mL), em seguida lavar as fases orgânicas combinadas com água (10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) . Secar sobre MgSCL, em. seguida submeter o resíduo a eromatograila sobre gel de sílica eluindo com um gradiente de amoníaco 2 M-metanol em diclorometano. LCMS(ES-i-): m/z - 532,3 [M+H] .

Preparar os seguintes compostos usando um procedimento substancialmente análogo ao acima descrito.

Quadro

Preparação Composto MS (ES+) :m/z [Mt-H] Preparação 46 Éster de terc-butilo do ácido 4-(3-metil-5-{3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureido}-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxilico 546 Preparação 47 Éster de terc-butilo do ácido 4-(6-metil-5-{3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureido}-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxilico 546 Preparação 48 Éster de terc-butilo do ácido 4-(3-metil-5-{3-[5-(1-metil-ciclo-hexil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureido}-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxílico 588,3 68 ΡΕ1943243

Preparação 49 Éster de terc-butilo do ácido 4-{5-[3-(5-terc-BuM-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-ureido]-6-metil-piridin-2-il}--piperazino-l-carboxílico

Aquecer urna solução de éster de terc-butilo do ácido 4 - (5 - a mi η o - 6 - me t i 1 - p i r i d i n - 2 - i 1) - p í p e r a z í η o -1 - c: a r b o -xiiioo {Preparação 3, 41,20 g, 140,9 mirtol) , éster de 2,2,2-tricloro···etilo do ácido (5-terc-buti 1 ···2~p~tοIiI···2H-pirazol··· -3-il>-carbâmico (Preparação 38, 37,03 g, 140,9 mmol) e

DIEA (36,8 rnL, 211,4 mmol) em DMSO (500 mL) a 60-65°C du rante 2, S horas. Acli cionar ma: Ú1 timos 30 ir rin à i na st a espie ssa temperatur 3 ambierv t-3 e deixar Ad icionar ét er diet riir co (600 m] : hora â te impera tr j ra ambiente. dr (5 x 300 mL) em seguid ura sol ido br anco (í : o - w ; / 0 g, 89% : Ό ::i. ra DMSO _ contém í Cói. . 85 mol% 548 [M+H]. a. Arrefecer a pasta .avar com. éter m/:

Preparação 50 1-[5-(1-Metil-ciclopropil)-2p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-(2--metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia

69 ΡΕ1943243

Borbulhar ácido clorídrico gasoso através de uma solução de éster de ie.rc-butiio do ácido 4-(6-metii-5-{3--[5-í1-metil-ciciopropilϊ-2-p-toiii-2d-pirazol-3-ii j-urei-do} -pir i.din-2-íi) -piperazino··· 1-earboxiirco (assumir 2,74 mrnol! em acetato de etilo:diclorometano 1:1 (200 mL) durante 3 min para assegurar a saturação. Deixar a mistura repousar durante 30 min em seguida concentrar sob pressão reduzida até um sólido branco. Dissolver o sólido em MeOH e i.l una de 20 g Variar; scx f í a v a η o o com :-i. e: luir a base livre con n amor ríaco 2 M 0 1 : 1. Con centrar a sol. uçao sob : ores : um sólido : branco (1, 21 g , 99% ao i- ongo 1 O ._L. \ « J kl ' } « m/z - 44S [M-t-H] . Y Q seguint' e composto usa ndo ρ roced rmen anái ocos ao ui clC jlIlIcI QG b C1Γ _L tos,

Preparação Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] Preparação 51 1-[5-(1-Metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3—il]-3-(5-metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia 446

Preparação 52 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(6-piperazin- l-il-piridin-3-il)-ureia

Colocar éster de terc-butilo do ácido 4-(5-amino- 70 ΡΕ1943243 -piridin-2 -il)-p. iperazino-1- •carboxílico (2Q0 mg, 0,718 mmol), diz soprop il e til arai na (0,125 mL, 0,718 mmol) e éster de 2,2,2-t riclor o- etilo do ácido (5-terc-butil-2- •p-tolil- 2H-pirazol -Vh). -carbâmico (Preparação 38, 291 mg, 0/718 mmol) em DMSO (5 mL) e aquecer até 75°C durante 17 horas. Arrefecer até à temperatura ambiente e adicionar EtOAc e água. Separar a camada orgânica e lavar com cloreto de sódio aquoso saturado (2 x 20 mL) . Recolher a camada orgânica, secar sobre MgoSC/ filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Submeter o resíduo a cromatoarafia sobre

ge de sílíc O Luindo com EtC )Ao 0-70 %:hexano tara produz ir 32 g mg (85%) de o ter de ter c-butilc ) do ácido 4- {5-[3-; 5- ” t m r e-butí1- O „ P~ tor ir- lã-pira zol-3-i1 )-ureido]-pir idin-2- -i ' 1 -J- J -piperaz in o~ 1-c arb oxílico . MS(ESe ): m/z - 534, 4 [M+fí] \ / . /- O io ca T & C f- cu r de t e. rc-butí1 o do ácido 4- i 5-[3- ( '3 " “ t 01' c-butil- 2- p- tol il- 2h-pira V Q “ Ί Ί )-ureido]-pir idin-2- -i 1} -piperaz η rj Q- Ί -r- .arb oxílico (565 m g, 1,06 mmo1) em T HF (10 mL). Adicionar HC1 4 M em dioxano (2,65 mL, 10,6 mmol) e aquecer até 60°C durante 3 horas. Arrefecer a reacção ate à temperatura ambiente e carregar numa coluna Varian™ SCX, Lavar a coluna com MeOH e em seguida esguichar para fora o produto com NH3 2 M em MeOH. Recolher o filtrado e concentrar sob pressão reduzida para produzir 411 mg (89%) do composto mencionado em titulo. MS(ES+): m/z = 434,2 [M-H-l] )

Preparar os seguintes compostos usando procedi" mentos substancialmente análogos aos acima descritos. 71 ΡΕ1943243

Quadro

Preparação Composto MS (ES+) :m/z [MfH] Preparação 53 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(5-metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia 448,5 Preparação 54 Hidrocloreto de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(5-cloro-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia (sem purificação) 468,4 Preparação 55 1-(6-Piperazin-l-il-piridin-3-il)-3-(2-p-tolil-5-trimetilsilanil-2H-pirazol-3-il)-ureia 450,4

Preparação 56 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(2-metil-6- -piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia 4 mmoi) er r MeOH ( 000 mL) com 300 mi, 1 20G mmoi ), Agitar a íguida con centrar sob pressão

Tratar uma solução a 22°C de éster de terc-butilo do ácido 4-(5-[3-(5-terc-butii-2-p-tolil-2H-pirazoi-3-il)-ureido j -6-rnet.il-p.iri.di.n-2-.il} -piperazrno-l-oarboxí lico (i? r epa r a 0 a O lá □ ò3, 20 Q, 1. reduzida (temperatura ambiente, ca. 10 torr, 3 dias) para produzir di-hidrocloreto de 1-(5-terc-batiI-2-p-tolil-2fí-pirazol-3-il) -3- (2-m.eti.l-6-piperazin-l-i.l-pi.rid.in-3-.il) -ureia na forma de um pó esbranquiçado (62,2 g - contém ca. 45 :n.ol% de dioxano. LCMSÍES+); m/z - 448 [M+H] .

Carregar uma soiuçáo de di-hidrocloreto de 1- (5 ΡΕ1943243 72 -terc-butiI-2 zin-1 --· il -pi ri coluna de 70 EIuir a base -p-tolil-2i?-pirazol-3-il) -3- (2-metil -6-pipera-din-3-il)-ureia (10 g, 19,2 mmol) em MeOH numa g Variar; SCX, lavando com MeOH (ca. 300 ml) . livre com amoníaco 2 M em MeOH:diclorometano 1:1 (150 ml). sólido branco

Concentrar sob pressão reduzida para dar um (6,2 4 a). LCMSÍES+): m/z - d d 8 [M4-H] .

Preparar os seguintes compostos usando procedimentos substanciaimente análogos aos acima descritos.

Preparação Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] Preparação 57 1-[5-(1-Metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3—il]-3- (6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia 432,2 Preparação 58 1-[5-(1-Metil-ciclo-hexil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3—il]-3-(5-metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia 488,5

Preparação 59 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[2-metil-6--(piperidin-4-iloxi)-piridin-3-il]-ureia

73 ΡΕ1943243 roO Z Sj Q ihar gás azoto a través de urtia SOÍUÇc io de ést er de 2,2,2- tr i c 1 ,Λ .. -etilo do ácido l-í5-ter -c-buti I ... s ... p... tol il-2H- pirazo 1-3- .! "! \ _ . larbámico (Prep araçâo 38, 60 8 mg, Ί I mmo 1) e és ter de te.ro-but i lo do ácido 4 ··· (5-ami no --6-- -me til-pi ridin- SS J ·’ oxi! - -piperidi: lo J- c&r.ooxi. 11 c o (4 5 3 mg, 1,5 mmol) rp f TjV ISO i (3 mL ) durante 0 min , A segu ir adie io nar siduo a cromat ografia sobre ge 1 de os e acetato de etilo para 0.8 T. ácido 4-{5-[ 3- ! 5-terc-butil- Ά N, N-diisopropiietiiamina {500 μΐ, 3,0 ramo 1) . Agitar a 60°C durante a noite, em seguida distribuir a mistura reaccionai entre acetato de etilo (25 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL). Isolar a fase aquosa e extrair duas vezes com acetato de etilo (25 mL cada)- Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio e concentrar. Submeter o tolil-2íí”pirazol”3”iI) -u rei do] -6-metil-piridin--2--iloxi} ··· piperidino-l-carboxíiico na forma de um sólido castanho (746 mg, 88% de rendimento). MS(ES+): m/z - 563,3 [M+H].

Adicionar ácido trifluoroacético {10 mL) a uma solução fria de éster de terc-butilo do ácido d {5 — [ 3 — (5--terc-butil-2-p-tolil-2i?-pirazol-3-il)-ureido]-6-metil-pi-ridín-2-d.loxi} piperidino-l-carboxíiico (746 mg, 1,33 mmol) em diclorometano (20 mL) . Agitar a mistura reaccionai a 22°C durante 25 min. Após remoção de solvente, tratar o resíduo com. hidróxido de sódio 1 S (20 mL) e extrair três vezes com diclorometano (20 mL cada), Secar as fases orgânicas combinadas sobre sulfato de sódio. A remoção do 74 ΡΕ1943243 solvente proporciona um sólido branco {605 mg, 98? rendimento) . MS (E8+) : m/z · 463,2 [M+H] . mer;

Preparar os seguintes 3S substanciaimente análogos compostos usando procedi-aos acima descritos.

Preparação Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] Preparação 60 1-(5-tert-Butil-2-metil-2H-pirazol-3-il)—3—[6— (piperidin-4-iloxi)-piridin-3-il]-ureia 373,3 Preparação 61 1-[5-tert-Butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-3-(2-metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia 449,2 Preparação 62 1- (2-Metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 501,3 Preparação 63 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6-(piperidin-4-iloxi)-piridin-3-il]-ureia 449,2 Preparação 64 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[5-metil-6-(piperidin-4-iloxi)-piridin-3-il]-ureia 463,2 Preparação 65 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[5-cloro-6-(piperidin-4-iloxi)-piridin-3-il]-ureia 483,3 Preparação 66 1-(2-Metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-3-(5-pentafluoroetil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-ureia 510,4 Preparação 67 1-(2-Metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-3-[2—p— tolil-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 510,4 ΡΕ1943243 75

Preparação 68

Hidrocloreto de 1-[5-(2-fluoro-l-fluorometil-l-metil-etil)--2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-(2-metil-6-piperazin-l-il- -piridin-3-il)-ureia

Adicionar éster de 2,2,2-tricIoro-etilo do ácido [5- (2-fluoro-l-fluoromefcil-l-metil-etil) -2p-tol.il.-2.n-pira-zol-3-il]-carbâmico (2,7 mraol, 1,2 g) e DIEA (2, S mmol, 0,5 mL) a uma solução de éster de terc-butilc do ácido 4- -(5-amino-6-metii-piridin-2-il)-piperazino-l-carboxíiico (2,9 mmol, 0,9 g) em 4 mL de : DMSC e agitar a 85°C durante a noite. Arrefecer, < adicionar água e extrair cc >m CH2C12. Combinar as camadas orgânica s o lavar com soluç âo aquosa saturada de cloreto de sódio. Secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar r sob pres sâo reduzida para da r o éster de terc-butilo do ac ido 4-(5- i3-;5- {2-f\υοτο-Ί-fJ v iorometil- -metil-etil) ‘ 2 p colai Zii- -pircicor 3 ii ]-ureido}- 6-metii- ir.íd.ín-2-i.l) -p.iperazi.no-1- -carboxilico. Submeter o resíduo cromatograf ia sobre gel de sílica e duíndo coí m hexanos/ acetato de etilo num gradiente (desde 10 a 50%), MS(ES+): ra/z ^584 [M+H]).

Agitar éster de terc-butilo do ácido 4-(5-{3- [5- / r) fluoro- -1- fiuoromei ;il-l~ -rnetil- etil .) -2-p-t olil-2 η ” ρ r r 3. ™ zol - 3-íl]-i irt rido} - 6-ΓίΙί 5 ti 1 -j lírídi n — 2 — .1 . i } O i pG' razl.no -1-carbo- xiii co (1, 3 ΠΙΙΤίΟ -L f U f 9 g! disso! .ver em 5 r TiL de CH2Ci2 e olor c.\ -1- r--. (-S c.. V_· Aa\_. idrogénio 4,0 M em d ioxa no (7,3 5 mmol. , 1,8 mL) à temperatura ambiente durante a noite. Concentrar, em seauida triturar o sólido branco formado com éter dietí- ES+) 484 [M+H] 76 ΡΕ1943243

Preparar o seguinte composto usando procedimentos substancialmente análoaos aos acima descritos.

Preparação Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] Preparação 69 Hidrocloreto de l-[5-(2-fluoro-l,l-dimetil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-(2-metil-6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia 466

Preparação 70 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6-(piperidin--4-ilamino)-piridin-3-il]-ureia

Adicionar éster de 2,2,2-tricloro-etilo do ácido (5-terc-butil-2-p-tGlil-2#-pira2ol-3-il)-carbâmico (Preparação 38, 2,0 mmol, 0,8 g) sobre uma solução de éster de tero-butilo do ácido 4-(5-amino-piridin-2-ilamino)-piperi- din "Λ ... 3 cl· Ύ. Ocoxili co (2,0 mmol, 0, 6 g) c.'. S1G ;2, 20 ramol, r\ '3 ? 3 g) em aceti mirril; sor UÇ ao di irante 12 hora s á tempí srati :·. ra águ di e exi rrair ( corri CH2C lv. Cornbi nar cí b i.av ar r :orn ciore to de : sódio aqr lOSO S3. sui ra L-O de i SÓdio , f iltr; er e cone entr ar par 3. 0.3 .r um residi .] o„ : Submeter o r esí sob re a 0.1 de si ! -j r-> a ei uindo con n CK ,Cb

Aaitar

b d. T. b O ^bre (desde 0,5 a 20%) para produzir éster de terc-butilo dc 77 ΡΕ1943243 ao ido |J>-· í 1 ;3- 5 terc butri -2-p-tolil-2#-pirazoi-3-il ureido] pi ri dl n- 2 — .1 lamino}-pipe ridlno-1-carboxílico . MS(ES+) ; m/z = m 4 S [MeH]).

Tratar uma solução a 22°C cie éster de terc-butilo do ácido 4-(5- [3- (5-terc-butil-2-p-tolil-2fí-pira2ol-3-il) -ureido]-pi ridin~2~oIand.no}-piperidino-l-carboxílicc (1,1 mmol, 0,6 g) em Et2G (5 mL) com HC1 (2,0 M solução em éter dietílico, 5 mL, 10 mmol). Agitar a solução durante a noite à temperatura ambiente. Concentrar sob pressão reduzida para dar um resíduo, em seguida submeter o resíduo a cartucho SCX eluindo com amoníaco 2,0 N em metanol. Obter o composto mencionado em titulo na forma de uma base livre. MS(ES): m/z = 488 [M+E],

Preparação 71 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[2-(piperidin--4-iloxi)-piridin-4-il]-ureia

Τ' /VI 1 ri O kJ. ct cer uma : solução de éster de terc-butilo do ácido 4- (4-am d. no-p ir id in-2-iioxi) -piper d.dir ίο-l-carboxí 1. ico (Preparação 2t ), 1 g, 3,41 mmol), éster de 2,i, 1- tncioro- ácido (b -1 erc-bu t i 1 - 2 -p- toli .1 - 2 H~ pi r a zol - 3 - i 1) etilo do 78 ΡΕ1943243 :arbámico (Preparação 38, 1,38 g, 3,41 irtraol), e diisopro- piletilamina (1,2 mu, 6,82 mmol) era DMSO (15 ml b a 60 °C durante 5 d. Arrerecer a mistura resultante até â te mpe- ratura ambie: nte e repartir entre água e acetato de e tilo usando soiuç 3. O cX Cf l X O 'ó 3. saturada c le cloreto de sódio para ajudar a sep •aração de fases. Ext Υ.'3..λ -C 3 CclIflSCiS 3 Cí U. O tg ci com acetato de etiio, lavar as camadas orgânicas combinadas duas vezes com. água, secar sobre sulfato de sódio e concentrar sob pressão reduzida. Submeter o residuo a cromatografia sobre gel de sílica eluindo cora ura gradiente de acetato de etiio em diciorometano para dar 877 mg (43 % de rendimento) de éster de terc-butilo do ácido -l--{4-[3-(5--rerc-butil-i-p-toIil-ib-pirazoI-S-ii}-ureido]-piridin-2--iloxi}-piperidino-i-carboxílico. LCMS ES+ (m/z) 548 [M+Hj .

Tratar uma solução de éster de terc-butilo do ácido 4-{4- [3- (5-te.rc-butil“2-p-tolil-2d-pirazol--3--.il) --ureido]-piridin-2-iioxi}-piperidino-l-carboxilico (877 mg, 1,6 rnraol) era EtOAc: DCM 1:1 (100 raL) cora uma corrente borbu-Ihante de HC1 (g) durante 3 min. Deixar a mistura resultante repousar durante 30 min, em seguida concentrar sob pressão reduzida. Dissolver o residuo em MeOH e carregar numa coluna de 20 g Varian SCX, lavando bem com MeOfí. Eluir a base livre com DCM:amoníaco 2 M em MeOH 1:1. Concentrar a solução sob pressão reduzida para dar o composto mencionado era título com rendimento quantitativo, LCMS ES+ (m/z) 449 [M+H]. 79 ΡΕ1943243

Preparar o seguinte composto asando um proce d ira ento substanciaimei ate análogo ao acim a descrito.

Quadro

Preparação Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] Preparação 72 1-[5-(1-Metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-[2-(piperidin-4-iloxi)-piridin-4-il]-ureia 447

Exemplo 1 1-{6- [4- (2,2-Dimetil-pentanoil)-piperazin-l-il]-piridin-3--il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]- -ureia

Tratar uma solução ou pasta da 1-[5-(1-metil--ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3”il]-3-(6-piperazin-l--il-pvridin-3-il)-ureia (Preparação 5, 1 eq., 0,1510 g),

ácido 2,2-dimetil-pentanóíco (1,15 eq., 0, 0521 g) e OMAP catalítica (ca. 0,1 eq., 0,049 g) em diclorometano (ca. 0,1 M, 5 m.L} com hidrocloreto de N- (3-dimetilaminopropil)~ -N' -etilcarbodiimida (EDC 1,15 eq., 0, 0767 g) . Agitar a 80 ΡΕ1943243 mistura resultante à temperatura ambiente durante 48 horas e em seguida lava O o m solução aquosa saturada ΟΘ bicarbonato de sódio. Seca r a camada orgânica sobre sulf ato de sódio e concentra; : sob pressão reduzida. I Ί y” i i q ç·, j\ * Purificar sobre gel de sílica usando um gradiente de amoníaco 2 M-metanol em. diclorometano, ura gradiente ΟΘ acetato de etilo em diclorometano ou hexanos. Purificação B: Purificar por inversão de fases numa coluna MS Cl 8 Xterra 30 x 75 mm 5 mrcrómetros usando um gradiente de bicarbonato de amónio aquoso 10 rnM em acetonitrilo produz o composto mencionado em título. LCMS (ES+): m/z - 544 [M+H].

Preparar os seguintes compostos usando procedi-mentos substancialmente análogos aos acima descritos.

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 2 1—{6—[4—(1-Metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 556 3 1—{6—[4-(2,β-Difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 572

Exemplo 4

Metanossulfonato de 1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3--il)-3-{6-[4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il]-2 --metil-piridin-3-il}-ureia 81 ΡΕ1943243

Tratar uma mistura de 1-(5”fcerc-butiI-2-p--tolil-- 2 H-- p i r a z o 1 - 3 - i I) - 3 - (2 - me t i 1 - 6 - p i p e r a z i η -1 - i 1 - p i r i d i R - 3 --il)-ureia (Preparação 56, 157 rag, 0,35 mmol), ácido trime-tiiacético (54 mg, 0,53 mmol) e DMA? catalitica (4 mg) em diclorometano (3,5 mL) com hidrocloreto de N-(3-dimetil--aminopropil)-N*-etilcarbodiimida (EDCI; 101 mg, 0,53 mmol). Agitar a mistura resultante à temperatura ambiente duran te a noite, em segui da lavar com 53 0) cação aquosa satur a da d e bicarbc snato de sódio. Seca r a catr iada orqâ nica sobre sulfa to de sódio e coi icentrar sc )b press ão re duzida. Subme ter o residao a croma tografia s obre ae d. de si 1 d. ca elu in do com um grad lente de amoníaco 2 M~metan ol em di Glc- rome t ci 110 p d. ra prodi izir o con iposto menc ionado em ti tal· d na forma de urre a base 1 ivre, LCMê ; (ES-í-) ; iri/z .... Z ο "Ί l ~ Jji [ )M+H) „ 1L :atar a solução o u p;asta da amina livre em di~ cloro: metano (5 mL) com ácido metanossul fónico 7 ? M em ί. di cio- rome t ano (i eq.; 0 ,155 mL). Agitar a mistura resu ita nte, conoe ntra.r sob unia corrente de azoto e secar sob pre S S 3.0 reduz ida pd.- ca produ: zir o sa. 1 * mentos

Preparar os seguintes substanciaimente análogos compostos usando proc aos acima descritos. di- ΡΕ1943243 82

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 5 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 588 6 Metanossulfonato de 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{2-metil-6-[4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 530 7 Metanossulfonato de 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2,5-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 588 8 Metanossulfonato de 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4-(2,4-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 588 9 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2,3-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 588 10 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(3,4-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 588 11 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(3,5-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 588 12 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2,6-dimetil-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 580 13 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4- (2-fluoro-6-metoxi-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 600 ΡΕ1943243 83 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [MtH] 14 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2-cloro-6-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 604 15 Metanossulfonato de 1-[6-(4-benzoil-piperazin-l-il)-2-metil-piridin-3-il]-3-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-ureia 552 16 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 570 17 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2-metil-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 566 18 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2-cyano-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 577 19 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2-metoxi-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 582 20 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2-cloro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 586 21 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2-trifluorometil-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 620 22 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(3-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 570 23 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(3-metil-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 566 ΡΕ1943243 84 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 24 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(3-cyano-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 577 25 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(3-metoxi-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 582 26 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(3-cloro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 586 27 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4-(3-trifluorometil-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 620 28 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4- (4-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 570 29 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(4-metil-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 566 30 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(4-metoxi-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 582 31 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{2-metil-6-[4-(tiofeno-3-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il]-ureia 558 32 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{2-metil-6-[4-(tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il]-ureia 558 33 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{2-metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il]-ureia 572 ΡΕ1943243 85 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [MfH] 34 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{2-metil-6-[4-(piridina-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 553 35 Metanossulfonato de 1—{6—[4-(2-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 568 36 Metanossulfonato de 1—{6—[4-(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 586 37 Metanossulfonato de 1-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-{2-metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 570 38 Metanossulfonato de 1—{6—[4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 530 39 Metanossulfonato de 1—{6—[4-(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 586 40 Metanossulfonato de 1-{6-[4-(2-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 568 41 Metanossulfonato de 1-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-{5-metil-6-[4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 528 86 ΡΕ1943243 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 42 Metanossulfonato de 1-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-{5-metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 570 43 Metanossulfonato de 1—{6—[4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclo-hexil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 572 44 Metanossulfonato de 1—{6—[4-(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}-3-[5-(1-metil-ciclo-hexil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 628 45 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2,6-dicloro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia (tempo rxn = 5d, HOBt (0,59 mmol) em vez de DMAP) 620

Exemplo 46 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazole-3-il)-3-{6-[4-(2,6--difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia

Coloc .ar 1- (5 -terc-b uti 1 -2-p- tol H-2H-VÁ. .r a z o 1- ... u -ii) - 3- (6-pipe.i; azan -1 - i. ]_ -pi ridi: n-3 -ii)-t treí a (4 8 mc h o ,1 11 mmol) , ácido 2, 6-di flúor· obenzói co (21 rm: b 0 ,133 mmo — ) f 0 4- N,N-c límeti latnir lopir idina (3 mg, 'J f 022 mn ιοί) em acet onit ri lo (5 ml è . Adiei» onar hex aflucro fos fato de 0- (7-a zabe nz O triaz ;oJ.e-l“iJ.) - N, N, N! v N * -tetram et.i iuróni <·*\ ÍHATU) (b 0 m eh v ^ ^ O ... ! mmol) e ; squec :er at :é 70°C durante 13 horas. A rref ec er até á tempera tura ambi .ente e , 3 dicior ia r CHoCl? qu 3 e a camada orgânica e extrair a aquosa com CEgCi?

Seoarar 87 ΡΕ1943243 (2 x 2 5 mL) . Combinar as camadas orgâi - ^ CÍ ^ f secar sobre Mg2S04, filtrar e concentrar sob o: ressão reduzi da. Submeter ϋ L Θ C; JL 'vl uo a cromatografia sobre g ei de silica eluindo cora EtOAc 0 -β0%rhexano para produzir 0 com]; icsto m encionado em título, LCMS(ES): m/z - 574,2 [M+H j . Preparar os seguintes c ompost os usa ndo procedi- mentos substancialmente análogos aos acima descritos.

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 47 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2,6-dicloro-benzoil)-piperazin-l-il]-piridin-3—il}-ureia 608 48 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6-(4-ciclopropanocarbonil-piperazin-l-il)-piridin-3—il]-ureia 502,2 49 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 558,3

Exemplo 50 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2,2--dimetil-propionil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia

Colocar 1- (5-terc-butil-2-p-tolíl-2d-pirazol-3-—il)-3-í6-piperazin-l-il-piridin-3-il)-ureia (200 mg, 0,461 mmol.), trietílamina (0, 071 mL, 0, 507 mmoi), e 4-/1,1/--dimetilaminopiridina (6 mg, 0,051 mmol) em CH2CI2 (10 mL). Adicionar cloreto de 2,2-dimetil-propíonilo (0,062 mL, ΡΕ1943243 r\ U f 507 mmol) e agira r á temperatura s irtib: Lente Cl '·.! £ 3 n L. .e 1 7 h Sn bm.eter 0 resíduo a c r orna 10 g r a f í a SC ibre gel de s .1 li c ei uindo com StOAc 0 ~ 1 0 U % l i 1 θ X ti Γ; 0 p 3. ΙΓ 3 pr· oduzi r 175 π ίο í 7 3% do composto meneio: nado em título. M.S í ES +) : : m/z :::: S 18, [M •+H] ,

Preparar os seguintes compostos usando um procedimento substancialmente análogo ao acima descrito.

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 51 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}-ureia 532,3 52 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{5— cloro-6-[4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il]-ureia 552,2

Exemplo 53 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(3--metil-pentanoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia

Fazer ret igrr r-(5-terc~. butil-2- D~tOili- " 2 E~" pira- zol - 3-il)-3- (6-pipei :azin-1 - i 1. -pi r i d in-3-il.) -ureia (0, 20 g, 0,46 mmol) com ácí .do 3-metil-pen· tanóico ! r\ r\ |p r\ \ V f V 0) V Qr 0,51 mmol ), hidrato de l-hidroxibenzo· triazole (0,06 Q% 0,46 inmol) e carbodiimida suportado por polímero (0,83 g, 1,0 mmol), suspenso numa mistura de CH2CI2/DMF (18/1, mL). Agitar a mistura à temperatura ambiente durante a noite e em seguida filtrar e lavar a resina com CH2CI2. Concentrar e 89 ΡΕ1943243 purificar o resíduo com um cart ucho SCX eiuindo com NH4OH/CH3OH 2 S para produzir 135 mg (55%) do composto mencionado em . título na forma de um sólido oor-de-rosa pálido. MS (H! S -Η -) : m/z 532 [M+H] . Pref >arar os seguintes compostos usando um

Quadro

Exenplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 54 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2-ciclopentil-acetil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 544 55 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2,2,3,3-tetrametil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 558 56 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il]-ureia 516 57 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6-(4-ciclobutanocarbonil-piperazin-l-il)-piridin-3-il]-ureia 516 58 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(1-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il]-ureia 558 59 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2,2-dimetil-pentanoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 546 60 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il]-ureia 516 90 ΡΕ1943243

Exemplo 61 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2,6--difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}- -ureia

Colocar 1-f5-terc-butil-

Sr' -tolil-2H-pirazol- -il)-3”(S-metil-ê-piperazin-l-il-piridin-S-il)-ureia (300 mg, 0, 670 mmol), hidrocloreto de N- í3-dimetilamino-propil)-Wr-etiIcarbodiimida (154 mg, 0,804 mmol), ácido 2, 6-difluorobenzóieo (127 mg, 0,804 mmol), e 4-17,N-dimetil--aminopiridina (15 mg, 0,134 mmol) em acetonitriio (10 rnL).

Aquecer ci reacç ão 3. bi 1 0 C du ra nte 18 heras Arref ecer : a reacçác até â aerap er at Ui :a amb: .ent e e adiei onar Ci Í2C1 - Θ α CU 3. , u epa rar a cama d a 0: rgãnica Θ extrair a camada aqu O S 3. cora CH 2CI, í 2 x 20 mL) Corabi: ar as camad as orç! U'lÍO as, C ,-Ti Q y sot re Mg 2SCh f i.J trar concentrar sob pres S ci O reduzid a. Subrnet P Ύ' O 3: - Ci G O ci crc matografia sobre gel de sllica el- jintío com I ;tOA c 10 - 7 r\ 0 \J "C 9 aexano pai a produziu Γ\ COÍiÍpOb l. o m ΘΠ ϋ IL Oí i d OO err l t í rulo. K S (Ξ S+) : m/z = 538,3 MeK ] .

Preparar os seguintes compostos usando um procedimento substancialmente análogo ao acima descrito.

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 62 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6- (4-ciclopropanocarbonil-piperazin-l-il)-5-metil-piridin-3-il]-ureia 516,3 91 ΡΕ1943243 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [MtH] 63 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{5— metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 572,3 64 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{5— cloro-6-[4-(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il]-ureia 608,0 65 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[5- cloro-6-(4-ciclopropanocarbonil-piperazin-l-il)-piridin-3-il]-ureia 536,2 66 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{5— cloro-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il]-ureia 592,0 67 1—{6—[4-(2,6-Difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-3-(2-p-tolil-5-trimetilsilanil-2H-pirazol-3-il)-ureia 590,2

Exemplo 68 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2,6--difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridim-3-il}--ureia monometanossulfonato

Ari: i.cion ar [4 - (S-araino-ê-n letil-piridir;- -2-ii) -pipe- razín-1 -il] - (2,6- ciif iuoro-fenil) -me ;t anona (1,00 eq, 601,77 mmol, 2 00, 00 g), éster de 2,2,2-tr icloro-etílo do ác ido 5- tere-bu til-2· -p-to -j -j o q l'’1 "f" *'' O .1)-carbâmico d, 00 eq. 602,88 mmol, 1,00 g) , N, W-dirae tilaminopirid i na (60,87 mmol, 7 ,50 g ), di isopropiletilamine i. (229,36 mmol 4 í"i ' f ^ f 00 mL, 2 9, 6 61 g Ϊ P MSO í (1,00 L) a dois ba Iões de três tubul 8 d.U .1.8 3 92 ΡΕ1943243 de 5 L c orn . agit; .ção à cabec ícX - .Aquecer ' b ϋ 65 0 jT-Ί Adicic mar DM Í50 ( 250 mL) e cc -65 a du ra nte 1 hora. Adio ioní ir MTBE o " b 0 0 jr*"- Q ur ante 0,5 b 0 Σ d. 3 , h ν' -y· ,ο f (fh r> (fh y arnbien te • Recoi her os sólido s por f: La v ar 0 bolo co m m?bh; e d; sixar secar dur ant e a noite. , Disso Iver o material * seg ui d a t ratar com carbo no activadc du r ant hora . Fi.lt rar cl 1 mistura Con cen tr cl Γ o filtrado, em seg uida tro tat 0 de etiio. , Fílt rar, A. 3. y AVãJf! hep tan ,·'\ c· '.j o C· i"' · O C V-' t-i . r a 40c ‘ Γ c· o \_· ο ·_/ b p: ressão rí ag.ir.acac rermoeratura 1- (5-te.re-but.il-2>p-tolil-2£-pira.zol-3--Ll) ~.3~ {6- [4- (2, 6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-iI} · ureia (4 90 g) .

Jarregar 3” {6- -piriam-a- (S-terc-butil- 2 ρ toi±i 2A-pirazol uo.ro-benzo.il)- -piperazín- l-il]-2-me a (1,00 eq, 6Í )0,67 mmol, 353,00 g) balão oe 5 L. Aquecer a mistura a .cion ar a o i 0.0 me ta no ssu. Lf ón ICO ( i f {) 0 £ i r··; - -y f d Q u j ( 56 mL,, 5 8, C )0 g) em. 25C ) m.L de a Cf stato G6 a go- ta. Agitar a so J_ [A Ç cX ' o d uran t; e U , o horas a segui d. d. remover a fo: nte de a que cimento . Agitar ras, era seguida filfc rar, r* d- ti noen trar o filtra ido >ob pressão reduzida. Adicionar acetato de etílo (300 mL) dicionar um. adicional. concentrar sob pressão reduzida 30G mL de acetato de etiio e concentrar sob pressão reduzida. Adicionar 2 L de éter dietílico e em seguida 93 ΡΕ1943243 acfitar durante 15 minutos. Deixar reoousar durante a noite,

Agitar du: rante 3 horas e em seguida fi ltrar. Lavar com éter dietilico e hept; ano, em seguida secar sob pressão reduzida a -40°C para p: rodusir o composto ix lenoionado em título (391,4 g)

Exemplo 69 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6-((trans)-4--ciclopropanocarbonil-2,5-dimetil-piperazin-l-il)-5-metil- -piridin-3-il]-ureia

Dissolver o composto rac-[ ( L Lã Π :S ) “4 “ (S-amino-S" -met il-piridin-2-ii)-2, 5- dimetí1-piper azm-1- il] -ciciopro- rj ; — metanona (da Preparaç íQ ri o rv 0,35 m;i !0i) e éster de 2,2, 2-tricloro-etilo do ácido 5-ter c-butil .-2--. p-toli1-2H- pira zol-3-il)-carbâmioo ( Q,283g, 0,7 m ΓΓίΟΐ / ΘΓί i DMSO (3 mL) e DIB, A (0,12 mL, 0,7 mmol) . Aquecer num tubo .ado a 80°C dura nte 15 horas. Deixar arrefecer e verter em geio-água. Extr air com AcOEt várias vezes. Juntar as Cciii lada s orgânicas e 1 .av,· ar com •.j .L. L-l v O aquosa saturar ia de c] .oreto de sód i.o Θ C; íZj Q ar sobre Na2SCt pí ara dar um res íduo. Si ubmeter o res iduo a c :roi matogra fia sobi :e qel de sílí ca eluí ndo com P. kcOE- t em hex ano 50-90 o p cl ã cl ( dar 0,09 g de rãc~1~í 5-terc-bui .til- 2 - p- 94 ΡΕ1943243 toiil-2H-pirazoi-3-ii) - 0 í { L L cxí\ 16 }-4-cic :lopropanocar- b o n 11 - 2,5 - d 1 m e t í 1 - p i p e i :azin-1-11)- 3 meti 1 -piridin-3-il ] ··· ureia (4 7% de rendimen to) na ror ma de um S ó i i do. MS(E S +} m/z 544,5 [M-í-H] . Submeter o cru a resol ução í )or cromatografi quiral usando coluna C :bir alPak AS eluind· o com nexano-uMu. 0,2%:EtOH 25%. t 3,78 min. MS fES-r ϊ " ϊίί/ z = 544,5 [M+H].

Exemplo 70 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-(6—[4—(2,2— -dimetil-propionil)piperazin-l-il]-4-metil-piridin-3-il}- -ureia

Adicionar éster cie 2,2,2-tri.cIoro-etilo do ácido (5-tere-butii-2-p-toiil-2í?-pirazoi-3-il}-carbâmico (Preparação 38, 0,32 mmol, 0,1 r) sobre uma solução de I — [4 — í5 — -amino-4-metiI-piridin-2-il)-piperasin-l-il]-2,2-dimetii- -propan-l-ona (0,3 mmol, 0,08 g) e carbonato de potássio 3 amoi, u, e3 q) em ·:χoron ri rii', raL·] , e aqmar a solução durante 4 horas a 80 °C. Adicionar água e extrair

Comb inar as camadas orgânicas e ' ódio aquoso saturado. Ο V· U- -m Ovbrb O ar e coneentu rar sob ρ ressâo reduzida ioreto um resíduo. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eiuindo com hexanos/acetato de etilo num gradiente (desde 20% até 80%). MS(ES+): m/z = 532 [M+H].

Preparar os seguintes compostos usando um procedimento substancialmente análogo ao acima descrito. 95 ΡΕ1943243

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 71 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{4— metil-6-[4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 530 72 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{4— cloro-6-[4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il]-ureia 552 73 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il]-5-trifluorometil-piridin-3-il}-ureia 586,4

Exemplo 74 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{5-cloro-6-[4--(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3- -il}-ureia

Sobre uma solução de hidrocloreto de 1-(5-terc--butí l“p-tol.il“2.H“p.i.razol“3-i.l) -3- (5-cloro-6-piperazin-l- “il-piridin-3-íl) -ureia (1,6 rnmol, 0,7 g) em 5 ml , de ClpCi adicionar ácido 1-metii-cíclopropa nocarboxílíco (1,6 minol 0,2 g) , hidrato de l-hidroxí-Ih- •benzotriazol (1,6 mmol 0,2 g), hidroolo reto de N-etrl-N’ - (3-dímetí iami nopr; apil) carbodiímida (1, 8 naiol f ο.· ς à o} θ trietílamina (4,8 rmnol 0,7 mL). Agitar a solução durante 2Λ horas a. temperai.: j ra ambiente , Adiolona .r água e extrair com ch2ci2. CcHTUjiiiar as camadas orgânicas; 6 IaV3T com solução aquosa S 5. L U Y ã 0.3. de; cloreto de sódio, s e c a r s o Y) Y 0 O d- I 0 L» Ό de sódio f r i 11 y a i ; e concentrar sob pressão reduzida para dar um resíduo. 96 ΡΕ1943243

Suometer o resíduo a cromai :.ograf ia sobrí í gel de sílica eluindo com hexanos/acetato de etilc c num gradiente (desde até 80%). MS(ES+): m/z = 550 [M+H].

Preparar o seguinte composto usando um proce jbstancia Iraente análogo ao acima descrito,

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 75 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{5— metil-6-[4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 530

Exemplo 76 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2,6--difluoro-benzoil)-piperidin-4-ilamino]-piridin-3-il}-ureia

Agitar 1-(5-1 erc-bu t í1-Ξ-p -1 o1i1-2 H-pi r a z o1-3- -il!-3-[6-{piperidin-4-ilamino)-piridin-3-il]-ureia (0, 22 mmol, 0,1 g), cloreto de 2,6-difluoro-benzoíio (0,2 mmol, 0,03 mL) , e trietiiamina (0,2 mmol, 0,03 mL) em 3 mL de acetonitrilo durante a noite â temperatura ambiente. Adicionar CH2C1v e lavar cora cloreto de sódio aquoso 97 ΡΕ1943243 saturado e água. Secar sobre sulfato de sódio, filtrar e concentrar sob pressão reduzida. Submeter o resíduo a cromatografia sobre gel de sílica eiuindo com CHyCij:MeOH num gradiente (desde 0,5 a 10%) . MS (ES+) : m/z :::: 588 [M+H] .

Exemplo 77 1-(5-terc-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{2-metil-6- [1--(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperidin-4-iloxi]-piridin- -3-il}-ureia

Agitar uma mistura reaccional de 4-{5-[3-(5-terc--butil-2-p-tolil-2íf-pirazol-3-il) -ureidoj -6-metil-piridin--2-íloxí}“píperidina (93 mg, 0,2 mmol), ácido 1-metilcíclo-propil-l-carboxílioo {40 mg, 0,4 mmol) , HOBt (30 mg, 0,25 mmol) e DCC (80 mg, 0,4 mmol) em diclorometano (2 mL) a 22°C durante 18 horas. Filtrar, em seguida submeter a cromatografia sobre gel de sílica eiuindo com hexanos e acetato de etiio para proporcionar um solido branco (111 mg, 100% de rendimento), MS (ES+) : m/z :::: 545, 3 [M+H] .

Preparar os seguintes compostos usando um procedimento substancialmente análogo ao acima descrito. ΡΕ1943243 98

Quadro

Exemplo Composto MS (ES+) :m/z [Mt-H] 78 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(2-fluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 585,3 79 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1- (2,6-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 603,3 80 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(2,4-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 603,3 81 1-[5-tert-Butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-3-{2-metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 573,3 82 1-[5-tert-Butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-3-{6-[4-(2-cloro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 587,3 83 1-[5-tert-Butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-3-{6-[4-(2-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 571,2 84 l-{2-Metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 625,3 85 1—{6—[4—(2-Cloro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5- (1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 639,3 86 1—{6—[4—(2-Fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 623,3 ΡΕ1943243 99 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [MtH] 87 1—{6—[4—(2,β-Difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5- (1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 641,3 88 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(2-fluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-3—il}-ureia 571,3 89 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(2,6-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-3-il}-ureia 589,3 90 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(2,4-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-3-il}-ureia 589,3 91 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-3-il}-ureia 573,3 92 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(5-cloro-tiofeno-2-carbonil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-3-il}-ureia 593,0 93 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6-(1-ciclopropanocarbonil-piperidin-4-iloxi)-5-metil-piridin-3-il]-ureia 531,2 94 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(2,4-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-5-metil-piridin-3-il}-ureia 603,3 95 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{5— metil-6-[1-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-3-il}-ureia 587,3 100 ΡΕ1943243 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 96 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(5-cloro-tiofeno-2-carbonil)-piperidin-4-iloxi]-5-metil-piridin-3-il}-ureia - 607,0 97 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [1-(2,5-dicloro-tiofeno-3-carbonil)-piperidin-4-iloxi]-5-metil-piridin-3-il}-ureia 641,0 98 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6— [4-(2,4-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 574,0

Exemplo 99

Mesilato de 1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3--{5-cloro-6-[1-(2-fluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]oxi- -piridin-3-il}-ureia

remara r a base xivre usando um procedimento substa nc ial: mente análogo ao proce dimento acima. Converter 30 Sã.J. n ies.i ..lato ] por tratamento de uma so." Luçâo ou. pasta da arai na li vre em di clorometano (1 mL ) e MeOS í (5 mL} com ácido metano s s ulf ónico (1 eq., 17,66 it ig 0, .18 3 mL). Agitar a mistura resultante, concentrar e secar sob pressão reduzida para produzir o sal. MS(ES + ) : m/z ^ 605,0 [Mrfí] (na forma de base livre). 101 ΡΕ1943243

Preparar os sais mesilato seguintes usando um procedimento substancialmente anáioao ao acima descrito.

Quadro

Exemplo Composto MS (ES+) :m/z [Mt-H] 100 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{5-cloro-6-[1-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-3-il}-ureia 607,0 101 Mesilato de 1- (5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[5-cloro-6-(1-ciclopropanocarbonil-piperidin-4-iloxi)-piridin-3-il]-ureia 551,2 102 Mesilato de 1—{6—[4-(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-(5-pentafluoroetil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-ureia 650,0 103 Mesilato de l-{6-[4-(2-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il] -2-metil-piridin-3-il}-3-[2-p-tolil-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 622,2 104 Mesilato de 1-{6-[4-(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[2—p— tolil-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 640,0 105 Mesilato de 1-{6-[1-(2-fluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-5-metil-piridin-3-il}-3-[2-p-tolil-5-(2,2,2-trifluoro-l-metil-l-trifluorometil-etil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 693,0 106 Mesilato de l-[5-tert-butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-3-{6-[4-(2,6-difluoro-benzoil) -piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 589,3 107 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[1-(2-fluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 585,3 ΡΕ1943243 102 (continuação)

Exemplo Composto MS (ES+) :m/z [MfH] 108 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[1—(2,β-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 603,3 109 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[1—(2,4-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 603,3 110 Mesilato de 1-[5-tert-butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-3-{2-metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 573,3 111 Mesilato de 1-[5-tert-butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]—3—{6—[4—(2-cloro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-ureia 587,3 112 Mesilato de 1-[5-tert-butil-2-(6-metil-piridin-3-il)-2H-pirazol-3-il]-3-{6-[4-(2-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il]-ureia 571,2 113 Mesilato de l-{2-metil-6-[4-(3-metil-tiofeno-2-carbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 625,3 114 Mesilato de l-{6-[4-(2-cloro-benzoil)-piperazin-l-il] -2-metil-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 639,3 115 Mesilato de l-{6-[4-(2-fluoro-benzoil)-piperazin-l-il] -2-metil-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5-(1-trifluorometil-ciclopropil)-2H-pirazol-3-il]-ureia 623,3 116 Mesilato de 1—{6—[4-(2,β-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[2-(6-metil-piridin-3-il)-5-(1-trifluorometil-ciclopropil) -2H-pirazol-3-il]-ureia 641,3 103 ΡΕ1943243

Exemplo 117 1-{6-[1-(2-Fluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-5-metil--piridin-3-il}-3-[2-p-tolil-5-(2,2,2-trifluoro-l-metil-1--trifluorometil-etil)-2H-pirazol-3-il]-ureia

Bor bu ihar gás azot .o ata Γ 3 V Θ 3 o Θ uma sol: y o a o cie éster d< s 2,2, 2 — y” 1 C' loro- etilc do á eido [ 2· --to li 1 - 5 (2,2,2- -trif Iuí oro-l- me til- 1-tri flúor orne ti i ~ θ t; \ , . / -2i B-pir aooi 'Λ "1 'i -carbâmico í Pr epar ação 3 / f 95 mi J, c ), í. 8 c; mm o.l) e [4- (5- -amino-v 3-meti i — pi.ri din-2 -ilor i) “pi perr di n- -1- ~ i -i J “ (2-f d.uoro- -fenil) -metanon .3. (P repar ação 19, 6 1 mg / Ct r185 mmol) em DMSO (3 mL) durarr ce 5 n rín, A se^ guir, d. d. -Í .c: 1.0 Π 3. .Γ O f N-dr .1 sopro- piletili amína (0 r\ o f 'J w mL, 0 f\ Γ -i / 4Ό0 mmol) A o it . a - L' c a 70° C dr rance a noite, íTi }7| Q íTi gt ida verter em ; CH2C í 71 V ml .) e la n ar numa coluna de 10 y de SCa ΜθΟ8.Bí and E lute • Li sv, ar a col una cora Cfí2CI2 (3 x 3 Γ. m.L) , MeO H (2 x 50 ml, i Ni ;íj 2 M. c sm MeOH (3 x 50 mL) , , jrabir i ’ò- A íl; s f ra cções ίΐθ 3 Θ ja da s e conc lentrar, Submete: r o ·'·· ;·: riduc > a cromai LograJ t í a sobre gel oe sí 1.1 ca eluíndo com ! OH rCl2 e uim t sol ti ç a o MeOh I )% 1.2 9 0% para dar o c rompo st :o men; cionaí lio em títu lo n .a I or ma di 3 um . sólido O T 3 Γί C 0 (69 mc h 54% de rendi mento ) - 1' Ί8 (E ,S + \ « rg /z - 693,5 [M+H]. 104 ΡΕ1943243

Exemplo 118 1-{6- [4- (2,6-Difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil--piridin-3-il}-3-[5-(2-fluoro-l-fluorometil-l-metil-etil)--2-p-tolil-2ií-pirazol-3-il] -ureia

Agita: r h idroclo reto de l-[5 -(2 -í l.uo ΊΟ” O Mb ! ro- me til- 4- metil-e' til} -2-p-tc >111-2 il-o írazo Λ. .J -11]- ! —' \ 2-meti i- — 6 “piF ;erazí n-l-· 11 -piridin-· -3-1.1) -ur eia (0; 8 5 ΓΠΓΓ: ol, 0,5 g), Cl orei Xj de ^ f 6-d iíiuoro: benzoilo (0,í 35 r uinol, 0 f 1. mbí) e tr i etl d. a mim a (Ξ , 6 i amol, 0 , 4 mL) e: a 5 m L d .e CR; Cl2 à tem pe- ra tura i í •mbí ente du rante a norte. -5 .ona ir ági i a e extr air em Π o Cl. 2 . 2 J-3.V5.1 : a camada oceânica com sol -O o aqu osa sa tu- ra da c le cio reto de bOdlO* Secar sobre s ulf ato d .Θ b ódio a ni- dro & cc ince: ntra. y q r )b pr&ss :;ào reduz 1 da. Submeter 0 resíd.u o a cr omat ;og ia sob: t:e gel. Οβ ST:.. i.zca eb cindo c om he xa~ no C· / r o / au :ee .ato de i etil _o (20%- -70%) . MS (ES): m/ 24 [M-t-H] . P: cepa: zar os segi ilntes compost ;os usaRí do um pro 08“ di. ment Sub st ara 0 d. 3. J .mente s má logo a o acr filei de ser itc

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 119 1-[5-(2-Fluoro-l-fluorometil-l-metil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-3-{2-metil-6-[4-(2-metil-benzoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 602 120 1—{6—[4—(2,6-Difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[5-(2-fluoro-l,1-dimetil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 606 105 ΡΕ1943243

Exemplo 121

Metanossulfonato de 1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3--il)-3-{6-[4-(2-ciclopentil-acetil)-piperazin-l-il]--piridin-3-il}-ureia

Adicic miar r\ Ί •J / r rar c .1 e sol } Ç â 0 1 p de ácido s s ul.fó; nicc ) e -m CH2< dl.a/M.e' Ofí (95. /5) a. uma solução de Ι- - (5~ - ter o-bati. L-2-P- tolil-2J í-pir :azo 1-3- -il) -3- { 6- -c ίο lo] oenr :il - acetil) -pípe razin-1 -il] - pir idir mi 2 mL Ge CH2CI2/ 'Me OH / Q n / m 1 1 . O / } U AC; Í rar a mistura à ura a mm iren te du3 2 ante 20 mim J tos, c.<. em i seguida ar GS sol veni 2es ροι ; borb ulhamerr to di m riturar o :om Et r' 20, fí Itrar e se içar pa ra 0.3.1-' 0 composto mencionado em titulo. MS{ES+): m/z = 544 [M+H].

Preparar os seguintes compostos usando um procedimento substancialmente análopo ao acima descrito. ΡΕ1943243 106

Quadro

Exemplo Composto MS (ES+) :m/z [Mt-H] 122 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-[6-(4-ciclobutanocarbonil-piperazin-l-il)-piridin-3-il]-ureia 516 123 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(3-metil-pentanoil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 532 124 Metanossulfonato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4-(1-metil-ciclo-hexanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 558 125 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4-(2,2-dimetil-pentanoil)-piperazin-l-il] -piridin-3-il}-ureia 546 126 Mesilato de 1- (5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{6-[4- (2,2-dimetil-propionil)-piperazin-l-il] -5-trifluorometil-piridin-3-il]-ureia 586 127 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)—3—{6—[4—(2,2-dimetil-propionil)piperazin-l-il] -4-metil-piridin-3-il]-ureia 532 128 Mesilato de 1-(5-tert-Butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{4-metil-6-[4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 530 129 Sal Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{4-cloro-6-[4-(2,2-dimetil-propionil) -piperazin-l-il]-piridin-3-il]-ureia 552 130 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{5-cloro-6-[4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 550 107 ΡΕ1943243 (continuação)

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 131 Mesilato de 1-(5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il)-3-{5-metil-6-[4- (1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 530 132 Mesilato de 1- (5-tert-butil-2-p-tolil-2H-pirazo-1-3-il)-3-{5-metil-6-[4-(1-metil-ciclopropanocarbonil)-piperazin-l-il]-piridin-3-il}-ureia 624 133 1—{6—[4—(2,β-Difluoro-benzoil)-piperazin-l-il]-2-metil-piridin-3-il}-3-[5-(2-fluoro-l,1-dimetil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 606

Exemplo 134

Metanossulfonato de 1-(5-terc-butil-2-p-tolil-2H-pirazol-3--il)-3-{2-[1-(2,6-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]- -piridin-4-il}-ureia

Tratar uma solução cie 1- (5-£erc-butil-2-p-tolil--2tr-pirazol-3-ii) -3- [2- (piperídin-i-iloxi} -piridin-4-il] --ureia (Preparação 71: 179 mg, 400 mmol), ácido 2,6- 108 ΡΕ1943243 dl fluor; obenzó ico ( 7 6 mg, 0,48 mmol) e DMAP (5 mg) e: m dicl ororaet ano (4 m 1) com. EDCI (92 mg, Aai tar a mistura re sultante durante a noite à amb iente e em seguida lavar com solução aquosa bic arbori ato de sódio . Secar a camada or« I] til n 1 C cl w1 de sódio e con centra r sob um ,a corrente < de azoto res iduo com ur ;s poa< sos mili litros de D CM. Após ultra-sons, filtrar o sólido branco e secar sob pressão reduzida para dar 162 mg do composto mencionado em título na forma de da base livre (69% de rendimento).

Tratar uma suspensão da araina livre em DCM:MeOH 3:2 (5 mL) com ácido metanossulfónico 2 M em diciorometano (1 eq.; 0,138 mL) . Agitar a mistura resultante até a solução clarificar, em seguida concentrar sob uma corrente de azoto e secar sob pressão reduzida para produzir o sal mencionado em título. (LCMS SS+ {m/z) 589 [M+H]).

Preparar o seguinte composto usando procedimentos substancialmente análoaos aos acima descritos.

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 135 Metanossulfonato de 1—{2—[1-(2,6-difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-4-il}-3-[5-(1-metil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 587 109 ΡΕ1943243

Exemplo 136 l-{2-[1-(2,6-Difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-piridin--4-il}-3-[5-(2-fluoro-l-fluorometil-l-metil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia

Aquecer uma solução de [4- (4-airdno-piridin-2--iloxi)-piperidin-l-il]- (2, 6-difluOro-fenil)-metanona (265 mg, 0,80 mmol), éster de 2,2,2-tricloro-etiIo do ácido 5- (1 -f 1 uororneti 1 -cic 1 opropi 1) -2-p-toli 1 -2íf-pirazcl···3-i 1 ] --carbâmico (350 mg, 0,80 mmol) e diisopropiletilamina (700 m.L) em 4 mL de DMSO a 60°C durante 16 horas. Arrefecer a mistura resultante até à temperatura ambiente e adicionar água. Filtrar o precipitado, lavar com água, em seguida pentano, e secar em torno a vácuo a 60 °C, Submeter o resíduo a cromatografía sobre gel de sílica eiuindo com um gradiente de amoníaco 2 M-metanoi em diclorometano (0 a 2%) cara dar 85 ma de produto.

Preparar os seguintes compostos usando procedimentos substancialmente análogos aos acima descritos.

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 137 1—{2—[1-(2,β-Difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-4-il}-3-[5-(2-fluoro-l,l-dimetil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 607 138 1—{2—[1—(2,6-Difluoro-benzoil)-piperidin-4-iloxi]-piridin-4-il}-3-[5-(1-fluorometil-ciclopropil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 605 ΡΕ1943243 110

Exemplo 139

Mesilato de 1-{2-[1-(2,6-difluoro-benzoil)-piperidin-4--iloxi]-piridin-4-il}-3-[5-(2-fluoro-l-fluorometil-l-metil--etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia

Adicionar 0,114 ml, (0,114 ratnol) de uma solução 1 M de MeSCAH in DCM/MeOH (95:5) recentemente preparada a uma solução de 71 mg (0,1.14 tnraol) de l-{2- [1- (2,6-difluoro-

Preparar o ncialmente aná .seguinte composto usando proce oqos aos acima descritos. imen -ben zoil) “pip erídín-4-ilo. xi]-piri d ir: ι-4-i 1} — 3 — [ 5 — ( 2-fl uoro” - ]. - f luo.ro: meti 1-1-metiI-et iD-2-ρ- toi .1.1-2 H-pirazol -3-i I ] - -ureia err : 2 r tlL de uma m: -Stura 9 3 v 3 de DCM/MeOH . Ag: itar a mi st u ra 0 iurar ;te 20 min a tempera it-Ul :a an ibiente, em s eguida evaporar OS £ solventes sot ) corren te de N 2. Tritur ar o resi- duo com E ;t2o para produzi r o comi pos to :m encionado em título (76 [M+H mg, 9 ] . 3% d .e rendimento ) \ A. w 'J O de pure za). ES+( Ι*Λ / v’ ^ ití/ ώ / - 625

Quadro

Exemplo Composto MS(ES+) :m/z [Mt-H] 140 Mesilato de 1-{2-[1-(2, 6-difluoro-benzoil)-pipe-ridin-4-iloxi]-piridin-4-il}-3-[5-(2-fluoro-l,l-dimetil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia 607 111 ΡΕ1943243

Exemplo 141

Metanossulfonato de l-{6-[4-(2,6-difluoro-benzoil)--piperazin-l-il]-5-metil-piridin-3-il}-3-[5-(2-fluoro-l,1--dimetil-etil)-2-p-tolil-2H-pirazol-3-il]-ureia

Adicionar DIEA (2 eq.) a uma solução de [4- (5--amíno~3-meti J.-pirrdrn-2-il) -píperazin-l-il] - (2, 6~difiuoro--fenil) -metanona (400 mg, 1,205 rnmol) e éster de 2,2,2-“tri.cloro~et.ilo do ácido [5-(2-fluoro-l,l-dimetil-etíl)-2--p-tolil-2H-pirazoI-3-il]-carbâmico (1 eq) em acetonitrilo (12 C>'· < 1—i £ ta y a mister,; 3. a 8 0 0 C num tu bo vedado „ Após 4 dias , remove V" o solvente . Dr .ruir 0 cru co: n DCM f extrair com água e s ar sobre Sa 2S04 . ETilt γ' jtí ren ao ver 0 solvente sob p- Έ Θ S '0 ci O r ed uzida * Si ibme’ ter 0 SÓlid vi a croma itograria sobr e gel de .t 31. lica, elu ióndc 3 com hexanc } / 5. cetona 3:1 para obter 352 mg de l-{6-[4-(2,6-difluoro-benzoil)-piperazin-l-il] -5-meti.l-piridin~3~i 1} -3- [5- (2-fluoro-l, 1-d.imem.i 1-etil} -2-p-tolil-2íí-pirazoi-3-il3 -ureia na forma de um sólido branco (48% de rendimento) . ES+ (rn/z) : 606 [M-f-1] ,

Dissolver 50 mg (0,083 mrnoi) da base livre 1— {6— 112 ΡΕ1943243 - [4- ¢2,6-difluoro-benzoil) -piperazin-l-il] -5-metil-piridin--3-í1}-3-[5-(2-fluoro-l,1-dimetil-etil)-2-p-tolí1-2. H-pira-zol-3-il] -ureia em DCM ¢0,5 mL) . Adicionar 1 eq de ácido trifluorometanossulfónico em DCM (1 N) . Após 30 min, remou er 0 S 0. Ivente pciXlci prodi ;zj lo um ti 0 1. 1L GO ] oranc o. Após vária s lavage ns com (Ώ τ γ· / DCM, s ecar o sólido sob pressão reduz id( a para obter 5 5 mg do o orti posto menciona do en a titulo (95% de rendimento). ESi ( vã/z.) : r f Ό', )6 [ MU-

Inibição de Cinase p38 Preparações de Solução Padrão l\ solução tampão de C li. Π 3 3 G 1 é pr< epara da P Ό11 comloin d v cl Cl de 2 f 5 π L J_J de ϊ: ris- RCl 1 M ípK *7 l U ) f o d mL drtiot rei to 1 1 Μ, 1, n mL c lo reto de mag nésio | M, e O J 00 ;J L de Triton X-100 1% e drit iin do até 100 mL C( orti cl Q U cl 84 mL desta soluç. cl· Ο 11.3 CUpâO de cí na se são corab rnado s com 1 6 : mL ΟΘ DMSO p ara p 21' Θ p 3. 21' 3 21' cí soluç; ão DMSO 16%„ A S O J. 12 Ç 3 CD A .TP 2 00 μΜ é prepa rada po r a d: Içí ão de 102,6 u... de Xt X P cl·'d O 3f s 10 Tv/f Ρλ; 25 pL de oJ Ρ-ΑΪΡ : e 163, LI ij de Péptid o 661 -681 de F '5. ctor de : Cr esciment O Dpi dé: ::mi co 5. quo c; p. 4 mM (Bíomol, N° de Ca tá lo. go P-121) t em 5 mL de so ruç ão tampão de c inase. A S 01U C ci 0 d te en zima ( sinase p 38 é pi reparo ad; e p dissolução de 9,5 μΑ de solução de enzima concentrada (250 ng de enzima ρ38/μΙ de solução tampão de cinase) em 1536 μ!, de solução tampão de cinase. 113 ΡΕ1943243

Preparação da Amostra

Urre a sol ução 80 μΜ de cada c omposto ae teste e compo S Lf o de contri olo é prepaa rada por di -ssoluçâo de 2 μΡ de uma s ;ol ução rj 0 0 c ;toque 10 m.M dos respe Ptivos compc ístos em dimet li sulic: tido em 248 μΡ aa s o u ç a o de DMSO 1 6% numa Pia ca d .e míc rotit ulação de 9 ό cavidade. s Gostar. A placa é CO o c a d. di no rnani .pui a dor de liquides automatizad o Tecan Genes is paca d.í loa i.ções em sér í e 1:3.

Ensaio 10 μΐ de composto diluído serialmente são colocados com um manipulador de líquidos automatizado de 96 cavidades Beckman Muitimek na placa de ensaio. 20 μΐ de solução de ATP 200 μΜ são adicionados com um manipulador de líquidos de 8 canais Titertek Multidrop. 10 μΐ de solução de enzima cinase ρ3δ são transferidos para a placa de ensaio usando o Muitimek, A mistura é deixada reagir durante 40 minutos a 3G°C e em seguida a reacção é parada por adição de 60 μΐ. de AcCH glaciai 5% recentemente preparado com Multidrop. 80 μΡ desta solução são transferidos para urna placa "ΜΆΡΗ” usando o Muitimek. As placas são deixadas em repouso durante 30 minutos â temperatura ambiente e em seguida lavadas/as-piradas no extractor Titertek MAP com AcOH glacial 0,5% recentemente preparado {1 x 300 μΡ, 2 x 200 μΡ) . As placas são tingidas 100 μΡ de fluido de cintilação MieroScint-20 (Packard Bioscience) são adicionados com o Multidrop, As Dlacas são deixadas em repouso durante 30 min e contadas 114 ΡΕ1943243 num contador de cintilação Pa/Wallac Microbeta Triiux para o isótopo J'P. 0 composto exemplificado no Exemplo 5 é inicial-mente testado em. 10 concentrações (20 μΜ-l nM usando dilui-

ções em série 1 :3), Os compos tos com valores CI5o menores do que 2 5 nM são retestados nur na concentração dt ? partida de 2 μΜ até 0,1 nM (diluições em série 1:3). Os vd.Icred C15o são cal culados (software EDÍ 3S ActivityBase) rara cada composto usando regressão não 1 Linear. 0 Exemplo 5 é testado essencia l.mente conforme descr: ito acima e é e ncontrado a inibir a enzima cinase ρ38 com uma Cl se de 22 nM

Inibição de p-MAPKAPK2 in vitro Células RAW 264,7 (uma linhagem murina monocí-tica/macrófaga ATCC) são semeadas a uma densidade de 50 000 células/cavidade em placas de 96 cavidades com meio RPMI-1640 mais soro bovino fetal 10% (SBF) e deixadas assentar e aderir ao fundo da cavidade durante 48 horas, Após a.LO,ançarem a conf meneia, as c e i a j. a s o a o t.ratadas da r a : í l e 2 horas com 10 diluições em série de compostos diferentes. Um

composto de controlo é sempi r 0 inc luído. Após 2 horas anisomicina (100 pg/mL) é adie: lo: :ada e as células 'ó 3.0 ϊ 11C U badas duranb e 30 minutos a 37' Ί /“H o sob uma atmosfei . 3 0 '·’ 3 'O

Em seguida, as células são fixadas e tratadas com peróxido de hidrogénio de maneira a remover peroxidase endógena. Finalmente, placas sáo bloqueadas com SBF, lavadas e um ensaio ELISA é realizado usando um anticorpo antifosío-ΜΆΡΚΆΡΚ2 (Thr 334, Sinalização de Célula, N° Cat. 3041} e 115 ΡΕ1943243

Anticorpo Secundário Conjugado a ahP. Esta reacção é detec-tada usando EEMTO (Pierce) que é um substrato quimíolumi-nescente aumentado ahP que resulta em saída de luz cinética rápida & alta densidade de sinal.

Os compostos exemplificados foram testados essencialmente conforme descrito acima e foram encontrados a ter valores ciso menores do que ou iguais a 300 nM. Os compostos preparados nos Exemplos 111, 113, 114, 115, 113 foram testados na presença de soro 100%, essencialmente conforme descrito acima, e foram encontrados a ter valores CI^o menores do que ou iguais a 500 nM. Os compostos seguintes foram testados essenciaimente conforme descrito acima e foram encontrados a ter a seguinte actividade:

Exemplo CI50 (nM) 45 6,7 5 4,5 92 16 77 176 128 286

Inibição de TNFoi in vitro Macrófagos Peritoneais de Rato 1 m I, d β G d. 1G í o de tiogl icolato (5,0 g e xtracto de evedura, 15,0 G de casitcna ou tripticase, 5,0 g de dextrose, 2,5 g de cloreto de sódio, 0,75 g de L-cistina, 0,5 g tioglí coiato d e sódio, 1,U mg resasurma e 0,75 g de αΟ'αΓ em 1,0 L de ecj ue desei.. J. e. d. e.) e i. π ί e c t e d o na cavidade 116 ΡΕ1943243

Pv^H 1 L.OÍiedl 0.Θ í-ò- IϋS f Grílwdb Ud-IL·1/C u No 0.1 d 4 OU 5 pOS -injecção os ratos são sacrificados e em seguida injestados i.p. com 4 mL de meio RPMI-1640 (BioWhittaker) e os macrófagos peritoneais são drenados por seringa.

Produção de Citocina

Rato macrófagos peritoneais são contados com um hemoeitómetro e ajustados a 5 x l(r células/cavidade em placas de 96 cavidades em meio RPMI-1640 com soro bovino fetal 10%, 200 uL/cavidade são colocados em placas de 96 '•.-a vidades e as células deixac ias í assentar e ade rd. τ ao fundo da cavidade durante pelo meno. 3 3 horas. 0 c omposto de teste ou inibidor padrão de cinase ρ38 é pré-tri rtado us ando uma C íTi rie de 8 concentrações di jrante 1 hora â J / '* C / ι’Λ f z 0 pL/cavid ade). As células SâO tv τ a ’c 3 da s com uma mistura de 50 ng/ml , de 1ipopo1issa i.cá.r.i ido (LPS) d ·; n v_. w U/mL de in terferão-y durante 18 hora 37°C (20 μΐι/ ca va· dade). 0 meio condicionado é colhido e ensaiado à produção de TNFa usando o procedimento de detecção Luminex.

Ensaio de Detecção de TNFot/Luminex (Bio-Rad Bio-Plex Kit -N° de Catálogo 171-G12221) O padrão de TNFa de pré-mistura liofiiizado (1 tubo padrão/ duas placas de 96 cavidades) é reconstituído com 50 yL de água estéril (500 000 pg/mL). As amostras são turbilhonadas durante 5 segundos, incubadas sobre gelo durante 30 minutos, e turbilhonadas durante 5 segundos 117 ΡΕ1943243 antes do uso. Um conjunto de doze tubos de 1,5 mL é rotulado com #1 até #12 e em seguida as quantidades de meio celular mostradas abaixo adicionadas aos tubos apropriados (as concentrações padrão sào como segue: 50 000; 25 000; 12 500; 6 250; 3 125; 1 562,5; 781,3; 390,6; 195,3; 97,7; 48,8; e 24,4 pg/mL). As pérolas conjugadas anti-citocina são turbiihonadas (25X) vigorosamente durante 30 segundos. As pérolas conjugadas anti-citocina são diluídas até uma conoenoraçao IX usanoc tampao o.e ensa.i.0 zX B.ro—vlex A.ssay Buffer. Para cada uma das placas, 240 pL das pérolas pré- -mistur 3 0.3 8 330 3. dicionados a 5 ’ 760 μΐ de Bio-Plex Ass τ r ° y Buffer < Uma placa de filtrar de 96 cavidades Millipore 0 bloquea da coi m 100 pL/eavídade de tampão de bioqueamento. \.J tampão de bl oquearr :ento é filt rado através de um sistema ri r\ f i 1 tra ça o Millip pi -f Ç\ e em seg* sida seco por toalha. 2 lav a- gen . S 8 ao realiza das na pic :i C ci de f iltro cor α b Γΐ Γΐ ηΤ / ον μ-/ C cl V Í O. cl de de Bi O -P ' ! (fTi c; .y B- uf fer e 3 eca gem cor r toa.Ir L3 . AS pérol 3 3 con .jug ad as anti- •cit( scina IX são turbilho: nad< as dui rante 15 seg und C· Θ S 3 O adie lonado o r-, 0 pL a ca da cav idade, Isto ò. fli tra do e seco i com ooalna . 2 lavagens S 3 O re. aiizad as sob re as pia ca s com 10 0 pi ucavídade de t :ampãc * de J. cl vagem Bio-Pl 0 A Wash Jr dai (fer. De η oi TC'·/ q,2 O f i 11 r; 3 da s e s Θ03 s com toalh a . c: D J w pL de amostra ou padrãc j 3 c io ad icion a dos a cada cavida de C Ofí' í a mo stra. E sta é ri zeut jaUa du ra nte b( ) segundos à temperatura ambiente num agitador protegido da luz e com regulação 6 e em seguida durante 30 min com regulação 3 e em segui .da c oloca da no frigorific lavagens sao ΓΘ3.1 Í. zac ias com Bro-Pie secar co: m to; Ί μ 3 Q anticoroo de < ce: :ca; citocina 118 ΡΕ1943243 preparado (-10 min antes de aso) para cada placa e 60 pL do estoque de anticorpo de detecção de citocina de pré-rrdstura são adicionados a 5940 pL de Diluente de Anticorpo de Detecção Bío-PIex. 50 pL de anticorpo de detecção de citocina são adicionados e incubados durante 60 segundos à temperatura ambiente num agitador protegido da luz com regulação 6 e em seguida durante 30 min com regulação 3. 3 lavagens são realizadas com Bio-Piex Wash Buffer. Isto é iiitrado e seco com to a lha, Strept-PE (· -10 minutos antes do uso) prepara1 do p; ara cada uma d; i ít ρ -L 8. c 3. 'ó θ 6 u μΐι a 5940 pL Bio-Ple. x As; ;ay Buffer são adicionados. 50 pL de Estrepo vid.ína- ΌΤ7 <--i ão adicionados 3. Cada C3.VÍ. d.d.d.0 e mcubad durante 60 segundos à tem tperatura ambiente nuiTi agitad iz pontos cr log ístíco de Cl,-; é ea protegido da luz com regulação 6 e em seguida durante 10 min com regulação 3, 3 lavagens são realizadas com Bio-Piex Wash Buffer. Isto é filtrado. As pérolas sào ressuspensas em 100 pL/cavidade de Bio-Piex Assay Buffer. Padrões e amostras são lidos numa máquina Lumínex. Estas leituras de intensidade são em seguida convertidas para unidades picograma/mililitro com base numa curva padrão de 12 pontos criada em duplicado usando um método de regressão parâmetros (Bio-Piex Manager 2.0, Bio-Rad), alada. 1Ώ. O composto exemplificado no Exemplo 5 é te; essencialmente conforme descrito acima e suprimiu TNF vitro com uma Ciso de 18 nM. ΡΕ1943243 119

Inibição de TNFa in vivo

Os compostos sáo administrados p.o. (30, 10, 3 e 1 mg/kg) a. ratos Balb/c fêmeas (6 ratos/dose) , 1 hora depois da administração do composto em 4 doses (P.O. em volume cie 0,1 mL/rato; veículo: NaCMC l%/Tween-80 0,25% em água); aos ratos são dadas injecções IP de LPS a 400 pg/kg. 1,5 horas depois dos desafios de LPS, os ratos são anestesiados com isofiurano e o sangue é retirado via punctura cardíaca. Os níveis de TNFa no plasma são determinados usando um kit ELISA de R&D Systems e a DE^o de resposta à dose é determinada. O composto exemplificado no Exemplo 5 é testado essencialmente conforme descrito acima e suprimiu TNFa in vivo com uma TMED50 de 2,24 mg./kg. A Dose Eficaz Mínima Limiar (TMED) 50 é a dose à qual uma inibição maior do que ou igual a 50% foi alcançada e é estatisticamente diferente d o contro1o/p1acebo.

Exposição Oral

Os compostos são rastreados à exposição oral em ratazanas Fd.sche r 3 4 4 machos. Os animais são jejuados durante a noite θ <1 cm inistrados com compostos de teste preparados na fo: rma de suspensões em carboximeti .icelulose sódica (1% p/v) conter ido Tween 80 (0,25% v/v) e anti" espumante (0,1% p/v) . As suspensões da dose são preparadas a I mg/mL e administradas a 1 mL/kg por sondagem. Amostras 120 ΡΕ1943243 de sangue são tornadas entre 0,5 h e 7 h depois da adrni- nistração da dose e plasma são preparadas por cent fugação, As amostras de plasma são anali íó a cia cã usa extracçáo em fase sólida on-líne e LC/M.S/MS, 0 composto exemplificado no Exemplo 5 é test essencialmente conforme descrito acima e a Cmáx 9390 ng/mL com uma AUC(0-7h) de 36800 ng.h/mL.

Efeito sobre TNFa induzido por LPS Intra-articular A irrjec zção intra -articular de LP S em tornozelos de T d. L S Z c ana ind uz a sint ese de ΤΝΓα, o qual p ode 3 pt medi .do em. fluido de iavagei m sinoviai. Nivei .s altos de TNFa são detectáveis dentro de 2 horas. Uma v az que a arti- cuiação e o sitio onde a artrite se desenvolve, este modelo pode rapidamente determinar se um composto oralmente administrado tem um efeito sobre uma resposta inflamatória na sinóvia.

Seis ratazanas Lewis fêmeas (150-200 g) são colocadas em cada um dos grupos de tratamento. Aos animais são dados veiculo (carboximetilcelulose-Na 1% - Tween 80 p Pu o„ \ ^ f p -J 'o ; ou composto de teste (1 mg/kg, 3 mg/l P 30 mg/ /kg) oralmente. ; Uma hora mais tarde, Ί 10 mg/kg e (10 μαί são administrados intra-articularmente no tornozelo direito de cada ratazana, enquanto o tornozelo esquerdo recebe 10 μΐ de salina. Após duas noras, cada tornozelo é lavado com 100 uL de salina. A lavaaem é recolhida e cuardada a 121 ΡΕ1943243 G.r' upoH : Ve í. cu.l o (CM· C-N a : 1% - ib ~n 80 0,25 TiL, P Ό) Gr upo#2 pos to de te O L. e (1 rr p/ kgr ] - PO) Gn upo#3 : Com pos to de te q t- e (3 m g/ kg, :i mL, PO) Gr upo#4 : Com pos to de te q Ϊ' e (10 mg 7 kg, i. IlUj , PO) Gr upofS : Com posto de te st e (3 0 mg '/kg, 1. mL , pó) O TNFa >r> medi. do c om ki ELIS., A co me rei alme: nte poni vel (RA D, R AãOO ) • trata mie mto com O c ompo sto mpli ficado no Exe imolo 5 ] or; aduz u ma inifc )ição de r espo st a lose (la S íntes ;e de TN Fog ( sonforme medi .do r IO fluido Hc Uv.. agem co .L110 v/ J_ cl com l uma ΪΜΕ ;D5 0 - 3, d 1 mg/i· ig,

Ensaio de inibição de fosfo-MAPKAPK2 exemplo vivo em ratos estimulada por anisomicina por citometria de fluxo

Ratos Balb/c fêmeas com 3-10 semanas de idade são

compra dos em Taconic Inc 0,2 mL d e compostos na 1 mg/k 9- 0 sangue é obt horas 011 outros perio , H Ri -d tubos con tendo EDTA. 10 0 durant rr 10 minutos. Q mrstur a do com anti-Ly ~6G a ΗΊϊ p (1:250) e , anti coniug ado a APC (1: . Ί r, f\ , J- V <J e doseados p.o. com volume de concentrações de 30, 10, 3, lo por punctura cardíaca após 2 e tempo indicados e recolhido em L de sangue são incubados a 37°C sangue completo é em seguida &b de rato de ratazana conjugado ROllb mAb de rato de ratazana e estimulado com 10 pg/mL de anisomicina. A estimulação oor corante e anisomicina de ambos os antigénios da superfície celular é conduzida a 370C durante 15 mín e seguida com tampão de Lise/Fix (BD Biosciences, N° Cat, 538049) durante 10 min à temperatura 122 ΡΕ1943243 ambiente. As amostras cie sangue Usado são rodadas a 600 x g durante 8 minutos à temperatura ambiente com lavagem adicional uma vez por 4 mL de PBS. 200 pL de anticorpo anti-Fosfo-MAPKAPK-2 (Thr334) (diluição 1:100) (Cell Signaling, N° Cat. 3081) e BD Fc Block de rato (diluição 1:100) (BD Biosciences, 553141) em Mero B de permeabilisaçâo (Caltsg, N° Cat. GAS002S-5) são adicionados a células de sangue e incubados à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após a incubação, 3 mL de tampão de coramento/lavagem são adicionados e as células são giradas conforme descrito acima com uma lavagem adicional com 3 mL de tampão de coramento/lavagem. As células são em seguida submetidas a ensaio de citometria de fluxo Beckman Coulter F5G0. A fluorescência média de coramento de fosfono-MapKap-K2 é medida em células CDllb+Ly6G aprisionadas. A análise de dados é realizada pelo programa JMP. O tratamento com o composto exemplificado no Exemplo 5 produz uma inibição de resposta a dose da síntese de ρ-MAPKAPK2 com TMED50 -2,28 mg/kg·

Modelo de Eficácia de Artrite Induzida por Colagénio de

Ratazana São usadas ratazanas Lewis fêmeas (=190 g, Charles River Labs) são imunizadas com colagénio tipo II de bovino (2 mg/mL) emulsionado com um volume igual de adjuvante (hidróxido de alumínio). As ratazanas são imunizadas com. aproxímadamente 0,3 mg da emulsão intradermi-camente nas costas perto da base da cauda. Todos os animais são re-imunizados 7 dias ma.ís tarde de acordo com. o mesmo protocolo. As ratazanas começam a desenvolver artrite 123 ΡΕ1943243 (caracterizada por inchaço e vermelhidão de um ou ambos os tornozelos) desde 12 a 14 dias após a primeira imunização. As ratazanas são içualmente distribuídas em cinco grupos de tratamento no primeiro sinal, de artrite e o tratamento έ iniciado com cada ratazana doseada B.I.D. durante 14 dias.

Grupos de Tratamento:

Grupo 1: Veículo (Ca: rboxime- LllC '.elulos e-Na 1% e Tween 0,25%) 1 mL, PO, B. I. D . x 14 G .13 3 Grupo 2: Composto de teste, 5 m< 3/kg, 1 . mL, PO, 3íd x 14 Grupo 3: Composto de teste, 15 r ng/kg, 1 mL, PO, Bid x 14 Grupo 4 : Composto de 30 r nç/kg, 1 mL, PO, Bid x 14 Grupo :l) : Prednísol .ona 10 mg/ kg, 1 mL, PO, qd x 14 0 diâmetro do tornozelc 3 é medido cora c raveiras 5 dias numa s emana e r egis tado. Os dados são expres ;sos como a área sob a curva (Ά IfC) gerada a partir das pon tnações de infla ÍP.cí v â 0 compósita G 3 3 n 3 .J. n. 8 0 estatística foi realizada. 0 OOiP posto exemplifi cado no Exemic >lo 5 exibiu uma hrstología TMED50 - 5 mg/ka bid. un rca v.i. a ou mesmo admini stração trans pacien tes que são medica mentos c ; (P) 3 3 ? a tit ulo de con' complí cações .1Γ0 .Ι clC* oompos tos de 1 ’όηϊιΐίΐ A administração oral. do composto da presente invenção é preferida. Contudo, a administração orai não é a única via ou mesmo a única via preferida. Por exemplo, a

Dodem rraica pode ser muito desejável para squecídos ou petulantes sobre tomar a via intravenosa pode ser preferida conveniência ou para evitar potenciais adas com a administração oral. Os E podem também ser administrados pela 124 ΡΕ1943243 via percutânea, intramuscular, intranasai ou intra-rectal em circunstâncias particulares. A via de administração pode ser variada em qualquer via, limitada pelas propriedades físicas das drogas, por conveniência do paciente e do prestador de cuidados, e outras circunstâncias relevantes (Remington 's Phanaaceutícal Sciences, 18a Edição, Mack Publishing Co. (1990)}

As composições farmacêuticas são preparadas de urna maneira bem conhecida na técnica farmacêutica. O agente de suporte ou excipiente pode ser um material sólido, semi-sólido ou liquido que pode servir como veiculo ou meio para o ingrediente actrvo. Agentes de suporte ou exciprentes adequados são bem conhecidos na técnica. A composição farmacêutica pode ser adaptada para uso orai, inalação, parentérico ou tópico e pode ser administrada ao paciente na forma de comprimidos, cápsulas, aerossóis, inalantes, supositórios, soiuções, suspensões ou semelhantes. O composto da presente invenção pode ser administrado oralmente, por exemplo, com um diluente inerte ou cápsulas ou sujeitos a compressão em comprimidos. Para o propósito de administração terapêutica oral, os compostos podem ser incorporados com excipientes e usados na forma de comprimidos, trociscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, hóstias, gomas de mascar e semelhantes. Estas preparações deverão conter pelo menos 4% do composto da presente invenção, o ingrediente activo, mas podem ser variadas dependendo da forma particular e podem convenientemente estar entre 4% até cerca de 70% da massa da unidade. A quantidade do composto presente em 125 ΡΕ1943243 composições é tal que será obtida um; i dosagem adi composições e preparações preferidas da presente podem ser determinadas por métodos be: m conhecidos na técnica. Qs comprimidos, pílulas, , tápsulas, ti semelhantes também podem c onter um ; ou ma is dos adjuvantes: ligantes tais como povidona, hidroxiprt celulose, celulose microcristallna ou gelatina; excipientes ou diluentes tais como: amido, lactose, celulose microcris-talina ou fosfato de dicálcio, agentes de desintegração tais corno: croscarmelose, crospovidona, giicolato de amido e sódio, amido de milho e semelhantes; lubrificantes tais como: estearato de magnésio, ácido esteárico, talco ou óleos vegetais hidrogenados; agentes de deslizamento tais como dióxído de silício coloidal; agentes molhantes tais como: sulfato de laurilo e sódio e polissorbato 80; e agentes adoçantes tais como: sacarose, aspartamo ou sacarina podem ser adicionados ou um agente de aromatização tal como: hortelã-pimenta, salicilato de metilo ou aroma de laranja. Quando a forma de dosagem unitária é uma cápsula, ela pode conter, em adição a materiais do tipo acima, um agente de suporte líquido tal como polietilenoglicol ou um óleo gordo. Outras formas unitárias de dosagem podem conter outros materiais variados que modificam a forma física que modificam a forma física da unidade de dosagem, por exemplo, na forma de revestimentos. Por conseguinte, os comprimidos ou pílulas podem ser revestidos com açúcar, hrdroxípropilmetíIcelulose, polímetacrilatos ou outros agentes de revestimento. Os xaropes podem conter, em adição 126 ΡΕ1943243 aos presentes compostos, sacarose como agente adoçante, e certos conservantes, tintas e corantes e aromatízantes. Os várias composições ϊ não tóxicos nas reàrd.Clci θ Ό T. Θ p 3. Id d. d. -Tween 0,25% à dose materiais usados na preparação destas deverão ser farmaceuticamente puros quantidades usadas. Uma formulação pr por adição de carboximetilceluiose-Na 1 desejada de um composto de Fórmula I.

Os compostos de Fórmula I são geralmente eficazes ao longo de uma larga gama de dosagens. Por exemplo, as dosagens por dia normalmente caiem dentro do intervalo desde ce ;rca de 0,! 0001 até ; seroa de 30 mg/kg de massa corporal, . Em ã .1 Q"U Γi 8 c ^ ~ O F O 8 níveis de dosagem abaixo do limite i nferi or do inti ervalo acima mencionado podem ser mais do que a dequad CS ; enquan· to noutros casos doses ainda maiores podem ser empr -egues sem causar aualauer efeito secundário pr· ej adie. ial, e por conseguinte o intervalo de dosagem acima não tem a intenção de limitar de qualquer modo o âmbito e alcance da invenção. Será entendido que a quantidade do composto actual.mente administrado será determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto ou compostos actuais administrados, a idade, peso e resposta do paciente individual, e a severidade dos sintomas do paciente. 5 de Janeiro de 2011

Claims (8)

1. ΡΕ1943243 1 REIVINDICAÇÕES Um omposto de Fórmula I R H onde: Zés ::cionado do arupo constituído por

   X é seieccionado do grupo constituído por

   Pr é alquilo Ct-C·? facultativamente substituído com um a seis substituintes seleccionados do grupo constituído por halo e haloaiquilo Ci-CR; cioloalquilo Cs-Ct facultativamente substituído com um ou dois substituintes seleccionados do grupo constituído por alquilo C1-C4 e trifluorometilo; ou trimetilsiiiio; é fenílo facultativamente substituído com alquilo C1-C4, ou piridinilo facultativamente substituído com alquilo C1-C4; 2 ΡΕ1943243 Y é hidrogénio, alquilo C;-C,ir halo ou haioalquilo Ci'"C4 ; Pf é alquilo C1-C7 facultativamente substituído cora cicloalquilo Ct-Cd; alcoxí Ch-Ch; haioalquilo Ch-Ch; ciclo-alquilo C3-C6 facultativamente substituído com um a quatro substituintes seleccionados do grupo constituído por alquilo C1-C4 e trifluorometilo; ou piridilo, fenilo ou tienilo cada um facultativamente substituído com um primeiro substituinte seleccionado do grupo constituído por: halo, eiano, alquilo C1-C4, haioalquilo C1-C4 e alcoxi Ci-C4, e facultativaraente ainda substituído com um segundo substituinte seleccionado do grupo constituído por alquilo C1-C4 e halo; R4 é hidrogénio ou alquilo C;—C"4; ou ura sou sal farmaceuticamente aceitável. Um comoosto de acordo com a Reivindicação 1 onde X é O 4 II "n^r3 VN R4 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. 3. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 em que R" é hidrogénio; ou um seu sal farraaceuticamente aceitável. 3 ΡΕ1943243
3. 4. Um composto de acordo com qualquer Reivindicações 1 a 2 onde Pd é f-tolilo; ou um farmaceuticamente aceitável. uma da s SOU S cX I
4. 5. Um composto de acordo com qualquer utna das Reivindicações 1 a 3 onde Pd é alquilo Ci-C?; ou um seu sal farmsceuticamente aceitável.
5. 6. Um composto de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 3 onde R! é tere-butilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ~j Um composto de acordo con :: qual que rvín: iicaçôe s 1 a 4 onde R" é 2,6-dift uorobenzí uma das a; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
6. 8. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 de Fórmula:

   -difluoro-bensoíi)-piperazin-l-il]-2-metii-piridin-3-íi}--ureia; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. ΡΕ1943243 4
7. 9, Uma formulação farmacêutica compreendendo um 1-3 composto de acordo com qualquer uma das Reivindi ou um seu sal famaceutícamente aceitável em combinação com c".í excipientef apense cie suporte ou o 1 iuerte f armaceui.icu— mente aceitável.
8. 10, Ur n compos to ΟΘ ac Leivindí caçoe S .1. -8 ou urr eu O c1 j. ui para uso no tratamen t' o de can 11. 0 uso de um 1 V-' ’-J i mpoí mia da s Rei vi .ndi cações 1 m p ou um. .ceitáve 1 cara c j fabric· 0 < S um mento de cancro, acorco com qualquer cara L li 5' L Lisboa, 5 de Janeiro de 2011 1 ΡΕ1943243 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * EP 1098789 A * WG9S37258SA * WO 0943334 A * WO 9932119 A * mmumA * mmsmA * WQ200512850SA * VSQ 9923881A * VS0910121MA * WO 8400*729 A * WO'04QS7783A * WO 3832111A * !JS 20$4<305SS61 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição * Xse *4 sLÁsskf, S&t, H0-V7O ·*: MaSjar-àssiíirtsifv Cm, Ofik, RtemxzM·,, 1889,; 5.2 i 0-220 SaíHwro st ai VH. 0 507-022 * Pargasís s aí a f. Bfôem- £052. yd. ,3^0.:258-272: * Regaa st aJ. Jsxmsief MedimM ChsM.2002, vsi, 45 it«* 2¾¾ * Jovmé o: Pbwms&gíiikA! scmce.. 1377, osi. SS, 2-18 ‘ «:*'Se8Jy*t si. Ces, m?. m. OS, 277-2S5 - J,R, iíaí,'ksoF! eí sí. J. P^smcsÁ &s.& 7imapm-Sts. 199S,VOÍ 294,687 * Ê&ípgeBsys íafcfcfiafs, of A^gíogsossíS· Jwdsfi, HssTi-^y· Ladd-es· 1ia5sy-Lfes tns, ISSS.SS-SS > Pd&rSiaial p38«P »s® iiioibitas in S» Smí-msd o? cspcer, Sehíífe, R; Pdsress dSds Sa-.saarjft. 20S3-, m. »0, 53-92 K Qr»»»fe8!T8 «fc aí. Αία 1 MspfrJÇM AM. Bm> KM,yd,2%SS8 > 4. Cfc®« ei aí, J. SM Omr.< 2001. vci 276, 47001 »· 4 €φ$8?( 250¾ yd.:3é;,145: * 8, ,?{Í0Fjgí«l at os, j. €$Qcsf; 2®1i 7¾ SI, -172F * sL Ato. Ams-Aèson'· ^m-Rss.. 2®S,.x«d..:43;.S * S. Xtong «ϊ d'. Canc&Res. 2301. yd. 61, 1727 * C. DkSKsS «t aí. £:<{> tAsmtmÍs, 2002, vct 12 79 * T, YofííKÍa sí ai., 2. £4?>, Ííivesí., 1391, ysO §7, 077 * K. Ki^írtfs at aí. ,.í ξιηααχκ&φ·.. vai. 184. 2222-5228 » SStiaaá et sí. i á;yaaí«:tw. 235% vd. 195, 52-4-5220 r Shapira Μ: ^ «A m74224?42® * Lsrssck, R. Qsm$S 'Tmmf-sm>3r Í30S1S. VCH RMsmsg Ssk, 4886. vof. 412 * S^ocÍÍt;il%i.-Os!T^s^ieESS»t»OFsa$»e^^^!is$i^e^S4s:’: yfiH P;jí3&Pjp§, Stsc. 1« AA7S * Sí*eR*:; itòs. PhsbcBw Orsíjss ísi G^ssic %si-tsesís, is% Wisy «tá Sor* '933 * Rss^lgtáfís Píissfsseedsca; 3cfeí®ss, Msófe Put-