TW202322805A

TW202322805A - 具有細胞週期蛋白依賴性激酶抑制活性的雜環化合物及其製備方法和醫藥用途

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Publication number: TW202322805A
Application number: TW111136383A
Authority: TW
Inventors: 閆旭; 陳振華; 劉國標; 谷曉成; 尚飛; 杜佩金
Original assignee: 大陸商中國醫藥研究開發中心有限公司
Priority date: 2021-09-29
Filing date: 2022-09-26
Publication date: 2023-06-16
Also published as: CN116390921A; WO2023051302A1

Abstract

本發明關於具有細胞週期蛋白依賴性激酶抑制活性的雜環化合物及其製備方法和醫藥用途。具體地，本發明關於通式(I)所示的化合物、其製備方法、含有其的醫藥組成物，以及其作為細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑在預防和/或治療異常細胞生長如癌症中的用途。其中通式(I)中的各基團的定義與說明書中的定義相同。

Description

具有細胞週期蛋白依賴性激酶抑制活性的雜環化合物及其製備方法和醫藥用途

本發明屬於醫藥技術領域，具體關於一種嘧啶并吡啶類化合物、及其製備方法及含有其的醫藥組成物，以及其作為細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑在治療異常細胞生長如癌症的藥物中的用途。本發明的化合物可以抑制細胞週期蛋白依賴性激酶CDK2/細胞週期蛋白E1(CCNE1)、CDK6/細胞週期蛋白D1、CDK4/細胞週期蛋白D3，因此可用於治療癌症，如HR+/HER2-轉移性乳腺癌、卵巢癌等。

細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)屬於絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶家族，是調控細胞週期的關鍵蛋白。目前，已發現的CDK主要包括CDK1-15等，藉由與相應的細胞週期蛋白(cyclin)結合，形成穩定形式的CDK/cyclin複合物，來發揮作用。此外，細胞內含有內源性的CDK和CDK/cyclin複合物抑制因子(CKI)，這三者共同組成細胞週期的調控網絡，在細胞***的過程中受到嚴格控制。在許多癌細胞中均發現，CDK、細胞週期蛋白和CKI三者表達失控，且CDK/細胞週期蛋白複合物通常是過度表達。

CDK4和CDK6的結構和功能十分相似，且都能與cyclin D的3種亞型(cyclinD1/D2/D3)結合，形成複合物，使包括視網膜母細胞瘤蛋白(Retinoblastoma protein,Rb)在內的一系列受質磷酸化，促使細胞週期進展。磷酸化的Rb蛋白釋放與其結合的轉錄因子E2F等，E2F激活並轉錄一系列基因，使細胞進入S期，開始DNA複製(Kato等人，Genes Dev，1993，7(3)，331-342；Dyson等人，Genes Dev，1998，12(15)，2245-2262)。CDK4/6的活性同時受INK4家族(包括p16^INK4A、p15^INK4B、p18^INK4C、p19^INK4D)的負性調控，INK4作為內源性抑制蛋白，可與CDK競爭性結合，抑制cyclin D-CDK4/6複合物的形成(Baker等人，Genes & Cancer，2012，3(11-12)，658-669)。

然而，多數人類癌症中均發現，CyclinD-CDK4/6-p16-Rb通路出現異常持續激活，這會促使G1期快速發展，導致細胞異常增殖。其主要原因包括，基因重排或者基因擴增導致cyclin D1的過度表達(Bergsagel等人，Blood，2005，106(1)，296-303)；p16INK4a基因缺失、點突變、或者DNA甲基化導致p16INK4a失活(Ruas等人，Biochim Biophys Acta，1998，1378(2)，F115-177)；CDK4/6基因擴增或者點突變(Hamilton等人，Cancer Treatment Reviews，2016，45,129-138)。基於該通路的異常進行靶向干預，使得CDK4/6成為熱門的抗腫瘤靶點之一。

靶向CDK的治療中，進展最快的是選擇性CDK4/6抑制劑。第一代廣譜類CDK抑制劑Flavopiridol(Alvocidib)可同時抑制CDK1/2/4/6/7/9，但由於其嚴重的毒副作用，導致出現乏力、腹瀉、骨髓抑制等不良反應，最終未能成功應用於臨床(Senderowicz等人，Journal of Clinical Oncology，1998，16(9)，2986-2999)。目前有三款化合物Palbociclib、Ribociclib和Abemaciclib獲得FDA批准，用於晚期乳腺癌的一線或二線治療，還有一項藥物Lerociclib處於臨床開發階段。

Palbociclib是FDA批准的首個CDK4/6抑制劑。它是一種口服的吡啶類化合物，藉由降低Rb蛋白的磷酸化，阻止細胞週期從G1期進入S期，抑制ER+乳腺癌細胞的增殖。多項大型、隨機、前瞻性的臨床研究已經證實Palbociclib聯合來曲唑或Fulvestrant能顯著延長患者無進展生存期，且安全性可靠(Cristofanilli等人，Lancet Oncol，2016，17(4)，425-439；Richard等人，Lancet Oncology，2015；Finn等人，N Engl J Med，2016，375(20)，1925-1936；Nicholas等人，N Engl J Med，2015，373(3)，209-219)。這些臨床試驗數據支持Palbociclib聯合芳香化酶抑制劑或氟維斯群作為標準的一線護理方案，治療ER+/HER2-絕經前或絕經後乳腺癌轉移的女性患者。

Ribociclib(Kisqali，LEE011)和Abemaciclib(Verzenio，LY2835219)均是口服可逆的CDK4/6抑制劑，能夠藉由抑制Rb磷酸化，引起G1期阻滯。Ribociclib對CDK4/6抑制的IC₅₀值分別為10nM和39nM，而對其他CDK家族成員敏感性較低(CDK1和CDK2的IC₅₀值均大於50mM)(Sherr等人，Cancer Discovery，2016，6(4)，353-367)。口服給藥1-4h後，血漿內能達到Cmax值；持續給藥8天後達到血液穩定狀態。Ribociclib與人血漿蛋白的結合率為70%，在體內能被CPY3A4(一種弱抑制劑)分解，主要產物是N-羥基和N-去甲基衍生物。Abemaciclib對CDK4/6激酶的選擇性更高，IC₅₀值分別為2nM和5nM，而對CDK1和CDK2抑制的IC₅₀值>500nM。Abemacielib是一種苯基嘧啶類化合物，結構上與Palbociclib和Ribociclib相近。Abemaciclib表現出更廣泛的抑制作用，同時能夠抑制Dyrk、PIM、HIPK和CAMK激酶家族(Ki<10nM)(Chen等人，Molecular Cancer Therapeutics，2016，15(10)，2273-2281)。體內藥物代謝數據顯示，口服給藥後的4-24小時內達到峰值，持續服用5天後達到穩態。Abemaciclib與人血漿蛋白的結合率約為96%，在體內能被CPY3A4分解，主要分解產物為N-脫乙基衍生物。氘原子的引入，使化合物具有更強的代謝穩定性，代謝穩定性提高了11-45%，表現為較高的半衰期。該藥物被批准，與Fluvestrant聯合治療ER+/HER2-晚期或轉移性乳腺癌。此外，在異種移植腫瘤中，Abemaciclib與吉西他濱聯用，也顯示出協同抗腫瘤活性，並且對多種類型腫瘤也具有抑制效果，包括套細胞淋巴瘤(MCL)、結直腸癌、肺癌、膠質母細胞瘤和急性髓細胞白血病(AML)。

儘管CDK4/6抑制劑聯合內分泌治療方法，能給特定類型乳腺癌患者帶來顯著臨床收益，但仍舊有部分患者是治療無效(10-20%)，且70-80%的腫瘤患者在治療12-36月後會發展為耐藥(Tripathy等人，Lancet Oncol，2018，19(7)，904-915)。CDK4/6治療耐藥的因素有多種，臨床前研究表明，包括Rb丟失、CCND1過表達、p16擴增、CCNE1-CDK2複合物過度激活(例如，CCNE1在乳腺癌和卵巢癌細胞系模型中高表達)、CDK2的旁路激活、CDK4/6活性增高、CDK7過表達等，這些均可能與CDK4/6治療耐藥相關(Taylor Harding等人，Oncotarget，2014，6(2)，696-714；Herrera-Abreu等人，Cancer Res，2016，76(8)，2301-2313)。

藉由生物標記物方法將乳腺癌患者分為不同亞組，不僅有助於區分從Palbociclib最大獲益的患者亞組，還有助於闡明可能導致CDK4/6聯合治療耐藥的機制。Palbociclib最近的III期臨床研究中發現，CCNE1(細胞週期蛋白E1)與治療抵抗密切相關(Turner等人，Journal of Clinical Oncology，2019，37(14)，1-11)。CCNE1 mRNA低表達的亞組人群，Palbociclib療效顯著。同時，對臨床治療中其它變量分析，CDK4、CDK6、cyclin D1、RB1的表達水平與Palbociclib的治療效果均無顯著關聯；該研究引起人們極大興趣，也證實CCNE1是Palbociclib的耐藥的生物標記物。

Cyclin E(細胞週期蛋白E)是由CCNE1編碼的蛋白，在G1中期開始表達，在G1-S期表達水平達到高峰後逐漸降解消失，其表達水平受E2F調控，藉由泛素化蛋白酶體降解(Mazumder等人，Current Cancer Drug Targets，2004，4(1)，65-75)。Cyclin E與CDK2結合，形成複合物，藉由磷酸化下游受質Rb、CDC6、NPAT和P107等使細胞進入DNA合成的S期；Cyclin E在維持染色體穩定，調控細胞紡錘體和中心體週期中具有重要作用；Cyclin E在多種惡性腫瘤中存在高表達，且CCNE1基因擴增或過表達還與多種腫瘤的預後差有關，如子宮內膜瘤、胃癌、卵巢癌(George等人，Clinical cancer research，2017，23(7)，1862-1874；Nakayama等人，Cancer，2010，116(11)，2621-2634；KENTARO等人，Int J Oncol，2015，48(2)，506-516；Ooi等人，Human Pathology，2016，S0046817716303082)等。

CDK2藉由與伴侶蛋白相互作用並磷酸化激活，在細胞週期調控中發揮關鍵作用，並參與一系列生物學過程，例如DNA損傷、細胞內轉運、蛋白質降解、信號轉導、DNA和RNA代謝和轉譯等(Tadesse等人，Drug Discovery Today，2020，25(2)，406-413)。CDK2在大多數正常組織是低表達狀態(McCurdy等人，Oncogene，2016)。***期的細胞，CDK2是關鍵的細胞週期調節因子，從G1期晚期開始激活，持續表達整個S期。CDK2結合CCNE1或E2和Cyclin A2，被細胞週期蛋白複合物(CDK7、MAT1、細胞週期蛋白H)磷酸化激活，同時，可被CDC25A去磷酸化負調控。在G1後期，CDK2-cyclinE和CDK4/6-cyclin-D共同磷酸化Rb，使Rb釋放E2F，啟動細胞週期調控基因的轉錄。除Rb外，CDK2還可調節其他蛋白的磷酸化，使之與細胞週期聯繫起來。例如，CDK2-cyclin-E對Smad3的磷酸化限制了其轉錄活性，最終減緩了細胞週期進展(Matsuura等人，Nature，2004，430(6996)，226-231)。CDK2還能磷酸化複製前複合物蛋白，這些是啟動DNA合成所必需的。如CDC6，它是將微小染色體維持(MCM)蛋白裝載到DNA和MCM解旋酶蛋白上，並啟動DNA複製的必需蛋白(Chuang等人，Molecular Cell，2009，35(2)，206-216)。CDK2在調控中心體複製方面也起著重要作用，藉由靶向磷酸化中心體蛋白如核磷脂(Npm)和cp110，釋放中心粒，然後維持中心粒複製(Adon等人，Molecular & Cellular Biology，2010，30(3)，694-710；Hu等人，Cancer Research，2015，75(10)，2029-2038)。

CDK2的蛋白結構與大多數的蛋白激酶類似，折疊呈“雙葉狀”。體積較小的N-末端區主要由β-折疊構成，包括5個反平行結構的β-長鏈和一個C-螺旋。C-α螺旋含有序列PSTAIRE，是週期蛋白結合所必需的。較大的C-末端區域，富含α-螺旋，並包含激活片段(也稱為T-環(殘基145(天冬胺酸)-172(谷胺酸))和激活磷酸化位點Thr160。T-環結合受質的Ser/Thr(磷酸化受體)區域，進行磷酸化激活，發揮細胞週期調控作用。N-末端和C-末端由柔性鉸鏈區(殘基81(Glu)-84(His))連接，該區域形成一個深裂，即ATP結合位點(Pavletich等人，Journal of Molecular Biology，1999，287(5)，821-828；Malumbres等人，Chemical Reviews，2014，15(6)，122；Honda等人，Embo Journal，2005，24(3))。

CDK2激活和抑制受到以下幾種機制調控：在沒有絲裂原信號時，CDK2處於非活性狀態。在G1期後期，CDK2活性開始升高，這是由於，首先，E2F介導的CCNE基因轉錄，其蛋白產物結合並激活CDK2；CDK2-cyclin E或A複合物的完全激活，需要CAK磷酸化Thr160位點；再者，Wee1和Myt1激酶能分別抑制Thr14和Tyr15位點的磷酸化，CDC25蛋白磷酸酶家族對這些殘基的去磷酸化可以使CDK2重新激活；此外，CDK抑制蛋白家族Cip和Kip，能結合CDK2使其失活，週期蛋白E和A可被泛素連接酶介導的泛素化過程所降解(Solomon等人，Journal of Medicinal Chemistry，2018)。

CDK2還可結合細胞週期蛋白A，參與整個S期的進展，並調控DNA損傷修復。DNA損傷後，DNA損傷反應(DDR)使細胞阻滯在G1/S交界處，以修復受損的DNA，並維持子細胞的基因組保真度。研究發現，有兩種機制，均是藉由抑制CDK2蛋白磷酸化，使細胞維持在G1/S的DNA損傷檢查點，並阻止細胞增殖。首先，p53的積累導致p21Cip1/Waf1轉錄上調，隨後藉由抑制cyclin-D1-CDK4/6和cyclinE-CDK2，使細胞週期停滯(Shieh等人，Genes & Development，2000，14(3)，289-300)。第二個機制是靶向CDC25A進行降解，WEE1藉由持續抑制CDK2蛋白Thr14和Tyr15位置的磷酸化，從而阻止細胞進入S期(Mailand等人，Science，2000，288(5470)，1425-1429)。CDK2的靶蛋白，FOXO1在dsDNA斷裂觸發DNA損傷，從而誘導細胞凋亡中起著重要作用。DNA損傷誘導G1/S期阻滯時，CDK2不再磷酸化FOXO1，使FOXO1發揮轉錄活性，藉由上調多種促凋亡蛋白的表達(FasL、TRAIL和Bim)，促使細胞凋亡過程(Huang等人，Science，2006，314(5797)，294-297；Huang等人，Cell Cycle，2007，6(8)，902-906)。

綜合以上，雖然CDK4/6抑制劑已成為特定類型乳腺癌的一線治療方案，但有些類型乳腺癌對CDK4/6抑制劑是天然的不敏感，如三陰性乳腺癌(TNBC)。另外在ER+Her2-的乳腺癌中也發現對CDK4/6耐藥現象。Cyclin E在多種惡性腫瘤中存在高表達，包括對CDK4/6抑制劑不敏感的腫瘤(TNBC)和卵巢癌等；CDK2與CyclinE形成的複合體，在CDK4/6耐藥中也發揮重要作用；靶向CDK2能夠延緩CDK4/6抑制劑分子產生的治療抵抗，對耐藥的患者進一步發揮療效；而在靶向CDK2/4/6來克服CDK4/6耐藥的化合物中，未見有獲批的藥物，僅有Pfizer的PF-06873600進入臨床II期研究。因此，開發選擇性高、藥物毒性低的CDK2/4/6抑制劑，來克服CDK4/6耐藥，是一個急需解決的問題。

來自輝瑞PF-06873600的專利(US 2018/0044344 A1)數據顯示，在不同腫瘤類型的細胞系中，CCNE1在卵巢癌OVCAR3和乳腺癌HCC1806中具有較高的擴增頻率。因此，合成了一系列具有類藥性質的小分子CDK2/4/6抑制劑。藉由檢測對OVCAR3和HCC1806細胞的抑制水平，評估了CDK2抑制的效果；藉由檢測對MCF-7細胞的抑制水平，評估了CDK4/6抑制的效果。

本發明人經過潛心研究，設計合成了一系列嘧啶并吡啶類化合物，其顯示出抑制細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)活性，可以被開發為治療和/或預防與CDK活性相關的疾病如癌症的藥物。

因此，本發明的目的是提供一種通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

環A選自雜環基，該雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

環B選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R¹選自烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

R²選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；或者，

R¹和R²與他們連接的氮原子和硫原子一起形成雜環基或雜芳基，該雜環基或雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的一個或多個基團取代；

每個R³各自獨立地選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基，該烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；或者，

任意兩個R³與他們連接的原子一起形成環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的一個或多個基團取代；

R⁴選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NHC(O)R^a、-S(O)_mR^a、-S(O)_mNR^aR^b和-NHS(O)_mR^a，該烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

R⁵選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、烷基、烷氧基、醯基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NHC(O)R^a、-S(O)_mR^a、-S(O)_mNR^aR^b和-NHS(O)_mR^a，該烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、氰基、胺基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個基團取代；

或者R^a和R^b與他們連接的原子一起形成環烷基或雜環基，該環烷基或雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個基團取代；

m為0、1、2：

p為0、1、2、3或4。

在本發明的一個實施方案中，根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

環A選自3至12員單環雜環基、螺雜環基、稠雜環基或橋雜環基，較佳5至7員單環雜環基、7至10員螺雜環基、7至10員稠雜環基和7至10員橋雜環基，更佳吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基，該雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、 C₁-C₆鹵烷氧基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基的一個或多個基團所取代。

在本發明的另一個實施方案中，根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，環B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(I)所定義。

在本發明的另一個實施方案中，根據本發明該通式(I)或通式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

環B選自C₃-C₇環烷基、4至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基，更佳

、

、

、

、

、

。

在本發明的另一個實施方案中，根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

其中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(I)所定義。

在本發明的另一個實施方案中，根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其可藥用鹽，

其中，

每個R³各自獨立地選自鹵素、胺基、氰基、羥基、巰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₇環烷基、4至7員雜環基，該C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₇環烷基、4至7員雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、經基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；較佳鹵素、羥基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆鹵烷基；

p為0、1、2或3；較佳1或2。

在本發明的另一個實施方案中，根據本發明所述的通式(I)、通式(II)、或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R¹選自C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，較佳C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基；較佳C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基；

該C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基或C₃-C₆環烷基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基的一個或多個基團所取代；

該5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基的一個或多個基團取代。

在本發明的另一個實施方案中，根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R²選自氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，較佳氫、C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基；較佳氫和C₁-C₆烷基；

在本發明的另一個實施方案中，根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，R¹和R²與他們連接的氮原子和硫原子一起形成5至7員雜環基，該5至7員雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基的一個或多個基團取代。

其中，

R⁴選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基，較佳氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基；較佳R⁴為氫或C₁-C₆烷基。

其中，

R⁵選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基、-C(O)R^a，較佳氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基、-C(O)R^a；

R^a選自C₁-C₆烷基。

本發明典型的化合物包括但不限於以下化合物：

或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其可藥用鹽。

本發明進一步提供一種根據本發明所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其可藥用鹽的製備方法，其包括以下步驟：

在鹼的存在下，在催化劑存在下，化合物Ij與化合物Ia發生脫水反應得到通式(I)化合物；該鹼較佳三乙胺；該催化劑較佳三苯基二氯化磷；

環A、環B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(I)所定義。

本發明進一步提供一種根據本發明所述的通式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其可藥用鹽的製備方法，其包括以下步驟：

在鹼的存在下，在催化劑存在下，化合物IIj與化合物Ia發生脫水反應得到通式(II)化合物；該鹼較佳三乙胺；該催化劑較佳三苯基二氯化磷；

環B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(II)所定義。

本發明進一步提供一種根據本發明所述的通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其前藥、或其可藥用鹽的製備方法，其包括以下步驟：

在鹼的存在下，在催化劑存在下，化合物IIIj與化合物Ia發生脫水反應得到通式(III)化合物；該鹼較佳三乙胺；該催化劑較佳三苯基二氯化磷；

R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(III)所定義。

本發明還提供一種醫藥組成物，其包含本發明所述的通式(I)、通式(II)、或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，和藥學上可接受的載體或賦形劑。

本發明的目的還在於提供根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物在製備細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑中的用途。

本發明的目的還在於提供根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物在製備抑制癌細胞增值、抑制癌細胞侵襲或誘導癌細胞凋亡的藥物中的用途。

本發明的目的還在於提供根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物在製備用於預防和/或治療與細胞週期蛋白-依賴性激酶活性相關的疾病的藥物中的用途，該疾病例如癌症，特別是與以細胞週期蛋白依賴性激酶CDK2/細胞週期蛋白E1(CCNE1)、CDK6/細胞週期蛋白D1、CDK4/細胞週期蛋白D3的擴增或過表達為特徵的癌症，更特別為乳腺癌如HR+/HER2-轉移性乳腺癌或卵巢癌。

本發明還涉及根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物，其用作CDK抑制劑。

本發明還涉及根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物，其用於抑制癌細胞增值、抑制癌細胞侵襲或誘導癌細胞凋亡。

本發明還涉及根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物，其用作用於預防和/或治療與細胞週期蛋白-依賴性激酶活性相關的疾病，該疾病例如癌症，特別是與以細胞週期蛋白依賴性激酶CDK2/細胞週期蛋白E1(CCNE1)、CDK6/細胞週期蛋白D1、CDK4/細胞週期蛋白D3的擴增或過表達為特徵的癌症，更特別為乳腺癌如HR+/HER2-轉移性乳腺癌或卵巢癌的藥物。

本發明還涉及一種抑制CDK的方法，其包含向有需要的受試者施用有效量的根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物。

本發明還涉及一種抑制癌細胞增值、抑制癌細胞侵襲或誘導癌細胞凋亡的方法，其包含向有需要的受試者施用有效量的根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物。

本發明還涉及一種預防和/或治療與細胞週期蛋白-依賴性激酶活性相關的疾病的方法，其包含向有需要的受試者施用有效量的根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物，該疾病例如癌症，特別是與以細胞週期蛋白依賴性激酶CDK2/細胞週期蛋白E1(CCNE1)、CDK6/細胞週期蛋白D1、CDK4/細胞週期蛋白D3的擴增或過表達為特徵的癌症，更特別為乳腺癌如HR+/HER2-轉移性乳腺癌或卵巢癌。

根據本發明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或包含其的醫藥組成物可以與另外一種抗癌治療劑或抗癌治療方法同時、分開或相繼施用。

[發明的詳細說明]

除非有相反陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。

“烷基”是指飽和的一價脂族烴基，其包括具有指定碳原子數的直鏈和支鏈基團。烷基通常含有1-20個碳原子(C₁-C₂₀烷基)，較佳1至12個碳原子(C₁-C₁₂烷基)，更佳1至8個碳原子(C₁-C₈烷基)或1至6個碳原子(C₁-C₆烷基”)或1至4個碳原子(C₁-C₄烷基)。烷基的非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代。適用於烷基的視需要的取代基包括但不限於C₃-C₈環烷基、3-12員雜環基、C₆-C₁₂芳基和5-12員雜芳基、鹵素、=O(側氧基)、=S(硫基)、=N-CN、並且其中每個該C₃-C₈環烷基、3-12員雜環基、C₆-C₁₂芳基和5-12員雜芳基視需要被取代。烷基上的典型取代基包括鹵素、-OH、C₁-C₆烷氧基、-O-C₆-C₁₂芳基、-CN、=O、C₃-C₈環烷基、C₆-C₁₂芳基、5-12員雜芳基和3-12員雜環基；其中每個該C₃-C₈環烷基、C₆-C₁₂芳基、5-12員雜芳基和3-12員雜環基視需要被1-3個獨立地選自鹵素、-OH、=O、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆羥基烷基、C₁-C₆烷氧基-C₁-C₆烷基、-CN、-NH₂、-NH(C₁-C₆烷基)和-N(C₁-C₆烷基)₂的取代基所取代。在一些實施方案中，烷基視需要被一個或多個取代基，較佳被1-3個取代基取代，該取代基獨立地選自鹵素、-OH、C₁-C₆烷氧基、-O-C₆-C₁₂芳基、-CN、=O、C₃-C₈環烷基、C₆-C₁₂芳基、5-12員雜芳基和3-12員雜環基。在其他實施方案中，烷基視需要被一個或多個取代基，較佳被1-3個取代基取代，該取代基獨立地選自鹵素、-OH、C₁-C₆烷氧基、-CN、C₃-C₈環烷基、3-12員雜環基、C₆-C₁₂芳基和5-12員雜芳基，其各自視需要含有1、2或3個選自O、N和S(O)x(其中x是0-2)的另外的雜原子；且其中每個該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被1-3個獨立地選自鹵素、-OH、=O、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆羥基烷基、C₁-C₆烷氧基-C₁-C₆烷基、-CN、-NH₂、-NH(C₁-C₆烷基)和-N(C₁-C₆烷基)₂的取代基所取代。

本文所述的視需要取代的烷基可以被一個或多個取代基取代，除非另有說明，否則這些取代基是獨立選擇的。在這種取代具有化學意義的程度上，取代基的總數可以等於烷基基團上的氫原子總數。視需要取代的烷基通常含有1至6個視需要的取代基，有時1至5個視需要的取代基，較佳1至4個視需要的取代基，或更佳1至3個視需要的取代基。特別地，除非另外指出，烷基可以被一個或多個(直至烷基基團上存在的氫原子總數)鹵素基團取代。因此，C₁-C₄烷基包括鹵烷基，特別是具有1至4個碳原子的氟烷基，例如三氟甲基或二氟乙基(即CF₃和-CH₂CHF₂)。

術語“烯基”指由至少由兩個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵組成的如上定義的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。

術語“炔基”指由至少由兩個碳原子和至少一個碳-碳三鍵組成的如上定義的烷基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。

術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含3至20個碳原子，較佳包含3至12個碳原子，更佳包含3至6個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等；多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。

術語“螺環烷基”指5至20員的單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺環烷基、雙螺環烷基或多螺環烷基，較佳為單螺環烷基和雙螺環烷基。更佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺環烷基。螺環烷基的非限制性實例包括：

術語“稠環烷基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠環烷基，較佳為雙環或三環，更佳為5員/5員或5員/6員雙環烷基。稠環烷基的非限制性實例包括：

術語“橋環烷基”指5至20員，任意兩個環共用兩個不直接連接的碳原子的全碳多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，較佳為雙環、三環或四環，更佳為雙環或三環。橋環烷基的非限制性實例包括：

該環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實例包括茚滿基、四氫萘基、苯并環庚烷基等。環烷基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、羧基或羧酸酯基。

術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀徑取代基，其包含3至20個環原子，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。較佳包含3至12個環原子，其中1~4個是雜原子；最佳包含3至8個環原子，其中1~3個是雜原子；最佳包含5至7個環原子，其中1~2或1~3個是雜原子。單環雜環基的非限制性實例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫咪唑基、二氫呋喃基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、高哌嗪基、吡喃基等，較佳1,2,5-噁二唑基、吡喃基或嗎啉基。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。

術語“螺雜環基”指5至20員的單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，較佳為單螺雜環基和雙螺雜環基。更佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺雜環基。螺雜環基的非限制性實例包括：

術語“稠雜環基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對原子的多環雜環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環基，較佳為雙環或三環，更佳為5員/5員或5員/6員雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性實例包括：

術語“橋雜環基”指5至14員，任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋雜環基，較佳為雙環、三環或四環，更佳為雙環或三環。橋雜環基的非限制性實例包括：

該雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基，其非限制性實例包括：

和

等。

雜環基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基、羧基或羧酸酯基。

術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14員全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團，較佳為6至10員，例如苯基和萘基。更佳苯基。該芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，其非限制性實例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。

術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至14個環原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基較佳為5至10員，含1至3個雜原子；更佳為5員或6員，含1至2個雜原子；較佳例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，較佳為咪唑基、噻唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更佳吡唑基或噻唑基。該雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，其非限制性實例包括：

雜芳基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。

術語“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(環烷基)，其中烷基和環烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基。烷氧基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。

術語“鹵烷基”指被一個或多個鹵素取代的烷基，其中烷基如上所定義。

術語“鹵烷氧基”指被一個或多個鹵素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定義。

術語“羥基”指-OH基團。

術語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。

術語“胺基”指-NH₂。

術語“氰基”指-CN。

術語“硝基”指-NO₂。

術語“側氧基”指=O。

術語“羧基”指-C(O)OH。

術語“巰基”指-SH。

術語“酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(環烷基)，其中烷基和環烷基如上所定義。

術語“醯基”指含有-C(O)R基團的化合物，其中R為烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基。

“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，“視需要被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。

“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，所屬技術領域具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。

“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

“可藥用鹽”是指本發明化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性。

“癌症”是指任何惡性和/或侵襲性生長或腫瘤(由異常細胞生長引起)。癌症包括以形成它們的細胞類型命名的實體瘤，血液、骨髓或淋巴系統的癌症。實體瘤的實例包括肉瘤和癌。血液癌症包括但不限於白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。癌症還包括起源於身體具體部位的原發性癌症，已經從其開始的部位擴散到身體的其它部位的轉移性癌症，緩解後從原始的原發性癌症的復發，以及第二原發性癌症(這是在具有與新的原發性癌症不同類型的先前癌症病史的人中的新的原發性癌症)。在本文提供的一些實施方案中，癌症可以選自乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宮癌、***癌、肺癌、食道癌、肝癌、胰腺癌和胃癌。在一些這種實施方案中，癌症的特徵在於CCNE1和/或CCNE2的擴增或過表達。

本文所述的立體異構體可包括本發明化合物(包括表現出超過一種異構類型的化合物)的順式和反式異構體、光學異構體如(R)和(S)對映異構體、非對映異構體、幾何異構體、旋轉異構體、阻轉異構體、構象異構體和互變異構體；及其混合物(如外消旋體和非對映異構體對)。

本發明化合物可以表現出互變異構現象和結構異構現象。例如，化合物可以數種互變異構形式，包括烯醇和亞胺形式以及酮和烯胺形式，和幾何異構體及其混合物存在。所有這種互變異構形式都包括在本發明化合物的範圍內。互變異構體作為在溶液中的互變異構組的混合物存在。在固體形式中，通常一種互變異構體佔優勢。即使可以描述一種互變異構體，但本發明包括所提供的化合物的所有互變異構體。

用於製備/分離單一的對映異構體的常規技術包括由合適的光學純的前體手性合成或利用例如手性高壓液相色譜(HPLC)或超臨界流體色譜(SFC)拆分外消旋體(或鹽或衍生物的外消旋體)。

本文所述化合物的對映異構體純度可以用對映異構體過量(ee)來描述，其表示樣品以比另一種對映異構體更大的量含有一種對映異構體的程度。外消旋混合物的ee為0%，而單一的完全純的對映異構體的ee為100%。類似地，非對映異構體純度可以用非對映異構體過量(de)來描述。

按照本發明所屬領域的常規方法，本發明通式(I)所示的化合物可以與鹼或者酸生成藥學上可接受的鹼式加成鹽或酸式加成鹽。該鹼包括無機鹼和有機鹼，可接受的有機鹼包括二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、胺丁三醇等，可接受的無機鹼包括氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉和氫氧化鈉等。該酸包括無機酸和有機酸，可接受的無機酸包括鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫溴酸等。可接受的有機酸包括乙酸、三氟乙酸、甲酸、抗環血酸等。

含活性成分的醫藥組成物可以是適用於口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。可按照本領域任何已知製備醫藥組成物的方法製備口服組成物，此類組成物可含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用製劑。片劑含有活性成分和用於混合的適宜製備片劑的無毒的可藥用的賦形劑。這些賦形劑可以是惰性賦形劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、玉米澱粉或藻酸；黏合劑，例如澱粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮或***膠；和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。這些片劑可以不包衣或可藉由掩蓋藥物的味道或在胃腸道中延遲崩解和吸收，因而在較長時間內提供緩釋作用的已知技術將其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物質，例如羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素，或延長時間物質例如乙基纖維素、醋酸丁酸纖維素。

也可用其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬明膠膠囊，或其中活性成分與水溶性載體例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的軟明膠膠囊提供口服製劑。

水混懸液含有活性物質和用於混合的適宜製備水混懸液的賦形劑。此類賦形劑是懸浮劑，例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和***膠；分散劑或濕潤劑，可以是天然產生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產物，例如十七碳亞乙基氧基鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)，或環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產物，例如聚環氧乙烷山梨醇單油酸酯，或環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產物，例如聚環氧乙烷脫水山梨醇單油酸酯。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。

油混懸液可藉由使活性成分懸浮於植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或礦物油例如液體石蠟中配製而成。油混懸液可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入上述的甜味劑和矯味劑，以提供可口的製劑。可藉由加入抗氧化劑例如丁羥茴醚或α-生育酚保存這些組成物。

藉由加入水，適用於製備水混懸液的可分散粉末和顆粒可以提供活性成分和用於混合的分散劑或濕潤劑、懸浮劑或一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑如上所述。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。藉由加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組成物。

本發明的醫藥組成物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或其混合物。適宜的乳化劑可以是天然產生的磷脂，例如大豆卵磷脂，和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如山梨坦單油酸酯，和該偏酯和環氧乙烷的縮合產物，例如聚環氧乙烷山梨醇單油酸酯。乳劑也可以含有甜味劑、矯味劑、防腐劑和抗氧劑。可用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配製的糖漿和酏劑。此類製劑也可含有緩和劑、防腐劑、著色劑和抗氧劑。

本發明的醫藥組成物可以是無菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒和溶劑有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射製劑可以是其中活性成分溶於油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶於大豆油和卵磷脂的混合物中。然後將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可藉由局部大量注射，將注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本發明化合物恆定循環濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種恆定濃度，可使用連續靜脈內遞藥裝置。

本發明的醫藥組成物可以是用於肌內和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式。可按已知技術，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配製該混懸液。無菌注射製劑也可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中製備的無菌注射溶液或混懸液，例如在1,3-丁二醇中製備的溶液。此外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可使用包括合成甘油單或二酯在內的任何調和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以製備注射劑。

可按用於直腸給藥的栓劑形式給予本發明化合物。可藉由將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會溶化而釋放藥物的適宜的無刺激性賦形劑混合來製備這些醫藥組成物。此類物質包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

所屬技術領域具有通常知識者熟知，藥物的給藥劑量依賴於多種因素，包括但並非限定於以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年齡、病人的體重、病人的健康狀況、病人的行被、病人的飲食、給藥時間、給藥方式、***的速率、藥物的組合等。另外，最佳的治療方式如治療的模式、通式化合物的日用量或可藥用的鹽的種類可以根據傳統的治療方案來驗證。

本發明可以含有通式(I)所示的化合物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物作為活性成分，與藥學上可接受的載體或賦型劑混合製備成組成物，並製備成臨床上可接受的劑型。本發明的衍生物可以與其他活性成分組合使用，只要它們不產生其他不利的作用，例如過敏反應等。本發明化合物可作為唯一的活性成分，也可以與其它治療與酪胺酸激酶活性相關的疾病的藥物聯合使用。聯合治療藉由將各個治療組分同時、分開或相繼給藥來實現。

[本發明化合物的合成方法]

為了完成本發明的目的，本發明採用如下合成方案製備本發明的通式(I)化合物。

本發明採用如下方案1製備本發明的通式(I)所示的化合物。

方案1

步驟1：在極性非質子溶劑(如二氯甲烷)中，在適合的鹼(如三乙胺)存在的條件下，磺醯氯化合物發生反應得到磺醯胺化合物Ia；

步驟2：在合適的溶劑中，在適合的還原劑存在下，4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯發生還原反應得到化合物Ib；該溶劑例如四氫呋喃，該還原劑例如二異丁基氫化鋁；

步驟3：在合適的溶劑中，在適合的鹼的存在下，化合物Ib與化合物Ic反應得到化合物Id；該溶劑例如異丙醇，該鹼例如二異丙基乙胺，反應溫度可以為室溫至80℃之間；

步驟4：在合適的溶劑中，在適合的氧化劑存在下，化合物Id發生氧化反應得到化合物Ie；該溶劑例如乙酸乙酯，該氧化劑例如二氧化錳，反應溫度可以在50℃至80℃之間；

步驟5：在合適的溶劑中，在適合的催化劑存在下，化合物Ie發生Aldol環化反應(參見VanderWel等人，J.Med.Chezn.2005，4S，2371)，得到化合物If；該溶劑例如四氫呋喃，該催化劑例如LHMDS，反應溫度可以為-20℃至室溫之間，反應在氮氣氛的條件下進行；

步驟6：在合適的溶劑中，在適合的氧化劑存在下，化合物If發生氧化反應得到化合物Ig；該溶劑特別為混合溶劑，如2-甲基四氫呋喃和水的混合溶劑，該氧化劑包括但不限於過硫酸氫鉀、間氯過氧苯甲酸等，過量的氧化劑有助於反應徹底進行，反應溫度可以為10℃至80℃之間；

步驟7：在合適的溶劑中，在適合的鹼存在下，化合物Ig與化合物Ih發生反應得到化合物Ii；該溶劑例如異丙醇、2-甲基四氫呋喃，該鹼例如二異丙基乙胺，反應溫度可以在室溫至80℃之間；

步驟8：在合適的溶劑中，在適當的酸的存在下，將化合物Ii脫保護得到化合物Ij；該溶劑例如二噁烷，該酸例如鹽酸，反應溫度典型地在室溫進行；進一步藉由如氫氧化鈉、氫氧化鉀的鹼將化合物游離；

步驟9：在合適的溶劑中，在適當的鹼和催化劑的存在下，化合物Ij與化合物Ia發生脫水反應得到通式(I)化合物；該溶劑例如二氯甲烷，該鹼例如三乙胺，該催化劑例如三苯基二氯化磷；反應典型地在氮氣氛下反應進行；反應溫度典型地為0℃至室溫；

其中，環A、環B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(I)所定義。

本發明採用如下方案2製備本發明的通式(II)化合物。

方案2

步驟7：在合適的溶劑中，在適合的鹼存在下，化合物Ig與化合物IIh發生反應得到化合物IIi；該溶劑例如異丙醇、2-甲基四氫呋喃，該鹼例如二異丙基乙胺，反應溫度可以在室溫至80℃之間；

步驟8：在合適的溶劑中，在適當的酸的存在下，將化合物IIi脫保護得到化合物IIj；該溶劑例如二噁烷，該酸例如鹽酸，反應溫度典型地在室溫進行；進一步藉由如氫氧化鈉、氫氧化鉀的鹼將化合物游離；

步驟9：在合適的溶劑中，在適當的鹼和催化劑的存在下，化合物IIj與化合物Ia發生脫水反應得到通式(II)化合物；該溶劑例如二氯甲烷，該鹼例如三乙胺，該催化劑例如三苯基二氯化磷；反應典型地在氮氣氛下反應進行；反應溫度典型地為0℃至室溫；

其中，環B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(II)所定義。

本發明採用如下方案3製備本發明的通式(III)化合物。

方案3

步驟2：在合適的溶劑中，在適合的還原劑存在下，4-氯-2-(甲硫基)略啶-5-羧酸乙酯發生還原反應得到化合物Ib；該溶劑例如四氫呋喃，該還原劑例如二異丁基氫化鋁；

步驟3：在合適的溶劑中，在適合的鹼的存在下，化合物Ib與化合物IIIc反應得到化合物IIId；該溶劑例如異丙醇，該鹼例如二異丙基乙胺，反應溫度可以為室溫至80℃之間；

步驟4：在合適的溶劑中，在適合的氧化劑存在下，化合物IIId發生氧化反應得到化合物IIIe；該溶劑例如乙酸乙酯，該氧化劑例如二氧化錳，反應溫度可以在50℃至80℃之間；

步驟5：在合適的溶劑中，在適合的催化劑存在下，化合物IIIe發生Aldol環化反應(參見VanderWel等人，J.Med.Chezn.2005，4S，2371)，得到化合物IIIf；該溶劑例如四氫呋喃，該催化劑例如LHMDS，反應溫度可以為-20℃至室溫之間，反應在氮氣氛的條件下進行；

步驟6：在合適的溶劑中，在適合的氧化劑存在下，化合物IIIf發生氧化反應得到化合物IIIg；該溶劑特別為混合溶劑，如2-甲基四氫呋喃和水的混合溶劑，該氧化劑包括但不限於過硫酸氫鉀、間氯過氧苯甲酸等，過量的氧化劑有助於反應徹底進行，反應溫度可以為10℃至80℃之間；

步驟7：在合適的溶劑中，在適合的鹼存在下，化合物IIIg與化合物IIh發生反應得到化合物IIIi；該溶劑例如異丙醇、2-甲基四氫呋喃，該鹼例如二異丙基乙胺，反應溫度可以在室溫至80℃之間；

步驟8：在合適的溶劑中，在適當的酸的存在下，將化合物IIIi脫保護得到化合物IIIj；該溶劑例如二噁烷，該酸例如鹽酸，反應溫度典型地在室溫進行；進一步藉由如氫氧化鈉、氫氧化鉀的鹼將化合物游離；

步驟9：在合適的溶劑中，在適當的鹼和催化劑的存在下，化合物IIIj與化合物Ia發生脫水反應得到通式(III)化合物；該溶劑例如二氯甲烷，該鹼例如三乙胺，該催化劑例如三苯基二氯化磷；反應典型地在氮氣氛下反應進行；反應溫度典型地為0℃至室溫；

其中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如通式(III)所定義。

進一步藉由實施例來理解本發明的化合物及其製備，這些實施例說明了一些製備或使用該化合物的方法。然而，要理解的是，這些實施例並不限制本發明的範圍。現在已知的或進一步開發的本發明的變化被認為落入本文中描述的和要求保護的本發明範圍之內。

本發明化合物是利用便利的起始原料和通用的製備步驟來完成製備的。本發明給出了典型的或傾向性的反應條件，諸如反應溫度、時間、溶劑、壓力、反應物的莫耳比。但是除非特殊說明，其他反應條件也能採納。優化條件可能隨著具體的反應物或溶劑的使用而改變，但在通常情況下，反應優化步驟和條件都能得到確定。

另外，本發明中可能用到了一些保護基團來保護某些官能團避免不必要的反應。適宜於各種官能團的保護基以及它們的保護或脫保護條件已經為所屬技術領域具有通常知識者廣泛熟知。例如T.W.Greene和G.M.Wuts的《有機製備中的保護基團》(第3版，Wiley,New York,1999和書中的引用文獻)詳細描述了大量的保護基團的保護或脫保護。

化合物和中間體的分離和純化依據具體的需求採取適當的方法和步驟，例如過濾、萃取、蒸餾、結晶、管柱層析、製備薄層板色譜、製備高效液相色譜或上述方法的混合使用。其具體使用方法可參閱本發明描述的實例。當然，其他類似的分離和純化手段也是可以採用的。可以使用常規方法(包括物理常數和波譜數據)對其進行表徵。

化合物的結構是藉由核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移以10^-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Brukerdps 300型核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d ₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。

MS的測定用LC(Waters 2695)/MS(Quattro Premier xE)質譜儀(生產商：沃特世)(Photodiode Array Detector)。

製備液相色譜法使用lc6000高效液相色譜儀(生產商：創新通恒)。色譜管柱為DaisogelC18 10μm 100A(30mm×250mm)，流動相：乙腈/水。

薄層層析矽膠板使用青島海洋化工GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.20mm~0.25mm，製備薄層層析分離純化產品採用的規格是0.5mm。

管柱層析一般使用青島海洋矽膠100~200目、200~300目和300~400目矽膠為載體。

本發明的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自網化商城、北京偶合、Sigma、百靈威、易世明、上海書亞、上海伊諾凱、安耐吉化學、上海畢得等公司。

實施例中無特殊說明，反應能夠均在氮氣氛下進行。

氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。

反應溶劑，有機溶劑或惰性溶劑各自表述為使用的該溶劑在所描述的反應條件下不參與反應，包括如苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(THF)、二甲基甲醯胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、***、甲醇、氮-甲基吡咯碄酮(NMP)、吡啶等。實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。

本發明中所描述的化學反應一般在常壓下進行。反應溫度在-78℃至200℃之間。反應時間和條件為，例如，一個大氣壓下，-78℃至200℃之間，大約1至24小時內完成。如果反應過夜，則反應時間一般為16小時。實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。

實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)，反應所使用的展開劑的體系有：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：石油醚和乙酸乙酯體系，C：丙酮，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節。

純化化合物採用的管柱層析的沖提劑的體系和薄層色譜法的展開劑體系包括：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：石油醚和乙酸乙酯體系，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的三乙胺和三氟乙酸等鹼性或酸性試劑進行調節。

除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用於本發明方法中。

根據本文提供的示例性程序及其所屬技術領域具有通常知識者已知的改變來製備本發明的化合物。

縮略語

Ac=乙醯基

AcO或OAc=乙醯氧基

ACN=乙腈

aq=水溶液

Boc=第三丁氧基羰基

Bn=苄基

DIPEA=二異丙基乙基胺

DMAP=4-二甲胺基吡啶

DMF=N,N-二甲基甲醯胺

DMSO=二甲亞碸

DCM=二氯甲烷

EA=乙酸乙酯

EDTA=乙二胺四乙酸

HPLC=高效液相色譜法

IC₅₀=抑制50%活性的濃度

LHMDS=六甲基二矽氮烷鋰鹽(雙(三甲基甲矽烷基)胺基鋰)

LC-MS=液相色譜-質普聯用

M+H⁺=母體化合物質量+一質子

Ms=甲磺醯基

MS=質譜

MsCl=甲基磺醯氯

mCPBA=間氯過氧苯甲酸

NBS=N-溴丁二醯亞胺

NCS=N-氯丁二醯亞胺

NIS=N-碘丁二醯亞胺

NMR=核磁共振

OXONE=過硫酸氫鉀

PE=石油醚

Pro=保護基

TBS=第三丁基二甲基矽基

TBHP=第三丁基過氧化氫

TEA=三乙胺

TFA=三氟乙酸

THF=四氫呋喃

[實施例]

實施例1：2-((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1)的製備

步驟1：1-甲基-6-氧雜二環[3.1.0]己烷(1a)的製備

於室溫，將1-甲基環戊-1-烯(112g，1366mmol)、DCM(4400mL)加到反應瓶中，然後將間氯過氧苯甲酸(496g，2049mmol，71%wt)分批加入瓶中，室溫攪拌反應過夜。反應結束後，加矽藻土抽濾，加入飽和碳酸氫鈉(2500mL)、10%硫代硫酸鈉(500mL)，有機相在低於20℃的水浴鍋中濃縮得到125g棕色油狀物的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 99.07[M+H]⁺。

步驟2：(±)-(1R*,2R*)-2-(苄基胺基)-1-甲基環戊-1-醇((±)1b)的製備

於室溫，向玻璃封管中裝入水(250mL)和苄胺(146g，1366mmol)，然後用氮氣吹掃5min，然後加入1-甲基-6-氧雜雙環[3.1.0]己烷(125g，粗品)。100℃加熱18h，此時觀察到兩相混合物。冷卻至室溫後，加入濃鹽酸水溶液(約12M，150mL)以使pH達到1。用乙酸乙酯(1500mL)萃出有機雜質。將酸性水層在冰水浴中冷卻，並使用5N氫氧化鈉水溶液調節pH至10。用乙酸乙酯(1200mL×3)萃取所得的兩相混合物，合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮，得棕色油狀物。於80℃減壓濃縮5h，降至室溫，在石油醚中分散，過濾得到85.0g棕色固體狀的標題產物。

LCMS：m/z 206.15[M+H]⁺。

步驟3：(1R,2R)-2-(苄基胺基)-1-甲基環戊-1-醇(1c)的製備

於室溫，在反應瓶中加入(±)-(1R*,2R*)-2-(苄基胺基)-1-甲基環戊-1-醇(85.0g，414mmol)和乙醇(600mL)，80℃加熱30min。向另一反應瓶中加入(R)-2-(3,5-二硝基苯甲醯胺基)-2-苯基乙酸(71.4g，207mmol)和乙醇(1200mL)，80℃加熱直至固體溶解，並繼續攪拌30min。將來自第一個反應瓶的醇的熱溶液以穩定流速倒入第二個反應瓶中熱的手性酸溶液中。反應混合物保持澄清約1min，然後開始沉澱。5min後，形成濃稠的白色懸浮液，但不妨礙攪拌。在80℃繼續攪拌4h，然後停止加熱並繼續攪拌混合物，同時逐漸冷卻至室溫過夜。過濾收集母液，濃縮得到45g棕色固體。將該棕色固體懸浮於1L分液漏斗中的水(250mL)和乙酸乙酯(500mL)中。加入鹽酸水溶液(4M，150mL，600mmol)並將混合物攪拌約30秒。獲得澄清的雙相混合物。分離各層，並將有機層用鹽酸水溶液(4M，100mL×3)進一步洗滌。合併酸性水層，在冰水浴中冷卻，加入氫氧化鈉水溶液(aq)，使pH達到10。在該pH下形成白色懸浮液。用飽和氯化鈉水溶液(250mL)稀釋，並用乙酸乙酯(1000mL×3)萃取。將合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮，得到26.0g棕色固體狀的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 206.15[M+H]⁺。

步驟4：(1R,2R)-2-胺基-1-甲基環戊-1-醇(1d)的製備

於室溫，將20%氫氧化鈀碳(2.6g)加入到(1R,2R)-2-胺基-1-甲基環戊-1-醇(26.0g,127mmol)的異丙醇(250mL)溶液中，50℃在氫氣環境中攪拌16h。藉由矽藻土過濾除去催化劑，濾液濃縮得到15.0g紅棕色油狀物的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 116.10[M+H]⁺。

步驟5：(4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇(1e)的製備

於室溫，將4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-羧酸乙酯(76.6g，330mmol)、四氫呋喃(3000mL)加入到反應瓶中，在氮氣氛下，於-78℃將二異丁基氫化鋁(990mL，1M四氫呋喃溶液，990mmol)慢慢滴加到反應瓶中，期間控制溫度不超過-60℃，攪拌反應過夜，期間允許溫度升至室溫。反應結束後，於0℃用飽和氯化銨溶液(1000mL)淬滅反應，加入濃鹽酸水溶液(約12M)以使pH達到2，收集有機相用飽和食鹽水(1000mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮，得到53.2g淡黃色固體狀的標題產物，直接用於下一步，收率：84.8%。

LCMS：m/z 191[M+H]⁺。

步驟6：(1R,2R)-2-((5-(羥甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)-1-甲基環戊-1-醇(1f)的製備

於室溫，將(4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇(24.5g，129mmol)、(1R,2R)-2-胺基-1-甲基環戊-1-醇(15.0g，129mmol)、二異丙基乙胺(49.9g，387mmol)、異丙醇(200mL)加到500mL反應瓶中，於80℃攪拌反應過夜。反應結束後，減壓濃縮，殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：二氯甲烷：甲醇=0-20：1)純化，得到25.0g白色固體狀的標題產物，收率：92.9%。

LCMS：m/z 270.12[M+H]⁺。

步驟7：4-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(1g)的製備

於室溫，將(1R,2R)-2-((5-(羥甲基)-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)胺基)-1-甲基環戊-1-醇(25.0g，92.9mmol)、二氧化錳(161g，1858mmol)、乙酸乙酯(600mL)加到反應瓶中，於50℃攪拌反應過夜。反應結束後，過濾除去固體，濾液濃縮後藉由管柱層析色譜法(沖提劑：二氯甲烷：甲醇=0-20：1)純化，得到19.0g白色固體狀的標題產物，收率：76.6%。

LCMS：m/z 268.10[M+H]⁺。

步驟8：8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1h)的製備

於室溫，將4-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(13.4g，50.2mmol)、四氫呋喃(250mL)和乙酸乙酯(13.1mL，126mmol)加入到三口瓶中，甲醇-冰浴中冷卻至-5℃，在氮氣氛下，緩慢地加入六甲基矽胺基鋰(151mL，1.0M四氫呋喃溶液，151mmol)。期間允許溫度逐漸升至室溫並過夜。將得到的紅色溶液在冰水浴中冷卻至約3℃，然後緩慢地加入乙醇(88mL，1506mmol)。將混合物在冰浴中攪拌1h，然後移去冷卻浴，使溶液升至室溫，繼續攪拌1h。減壓除去溶劑，將殘餘物用水(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(100mL)稀釋，水層用乙酸乙酯(400mL×3)萃取，將合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。得到17.0g棕色固體狀的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 292.10[M+H]⁺。

步驟9：8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(甲基磺醯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1i)的製備

於室溫，將8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(17.0g，粗品)、過硫酸氫鉀(76.9g，125mmol)、2-甲基四氫呋喃(250mL)、水(60mL)加入到反應瓶中，室溫攪拌4h。將溶液在水浴中冷卻，用水(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(100mL)稀釋並用乙酸乙酯(500mL×3)萃取。合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=1：1-1)純化，得到10.8g泡沫狀棕色固體物的標題產物，收率：66.6%。

LCMS：m/z 306.09[M-18]⁺。

步驟10：4-((8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(1j)的製備

於室溫，將8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(甲基磺醯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3.80g，11.8mmol)和4-胺基哌啶-1-羧酸第三丁酯(2.82g，14.2mmol)、二異丙基乙胺(3.05g，23.6mmol)、2-甲基四氫呋喃(50mL)加入到反應瓶中，60℃攪拌反應過夜。冷卻至室溫後，加入乙酸乙酯(200mL)、水(50mL)和飽和碳酸氫鈉水溶液(50mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：二氯甲烷：甲醇=0-5%)純化，得到4.55g黃色泡沫固體狀的標題產物，收率：87.1%。

步驟11：8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(哌啶-4-基胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1k)的製備

於室溫，將4-((8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3.63g，8.20mmol)加入到10mL鹽酸的二噁烷溶液中，攪拌反應2h，有黃色固體析出，減壓濃縮。於0℃，殘餘物中加入氫氧化鈉(aq)以使pH達到10，加入二氯甲烷(200mL×3)，收集有機相，減壓濃縮，得到2.57g黃色固體狀的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 314.19[M+H]⁺。

步驟12：N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)的製備

於室溫，在氮氣氛下，將環丙烷磺醯胺(2.42g，20.0mmol)、三乙胺(4.04g，40.0mmol)、四氫呋喃(40mL)加入到反應瓶中，攪拌10min後，緩慢加入第三丁基二甲基氯矽烷(3.60g，24.0mmol)、二甲胺基吡啶(254mg，2.00mmol)，30℃攪拌反應16h，有固體析出，減壓濃縮，殘餘物中加入乙酸乙酯(50mL×3)和水(30mL)，收集有機相，水層用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，將合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮，殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-20%)純化，得到3.27g白色固體的標題產物，收率：69.6%。

LCMS：m/z 236.11[M+H]⁺。

步驟13：2-((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1)的製備

於室溫，在氮氣氛下，將三苯基二氯化磷(1.83g，5.50mmol)的二氯甲烷溶液(6mL)冷卻到0℃，加入三乙胺(808mg，8.00mmol)，攪拌15min後，加入化合物N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(1.18g,5.00mmol)，攪拌20min後加入化合物1k(343mg，1.00mmol)，加畢緩慢升至室溫，於室溫攪拌反應16h。加入飽和氯化銨溶液(1mL)淬滅反應，收集有機相，減壓濃縮，所得殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：乙酸乙酯：甲醇=0-10%)純化，再用製備液相色譜法分離(色譜管柱型號：Daisogei 30mm*250mm，C18，10um，100A，流動相：乙腈/水，梯度：30%-80%)，得71.0mg白色固體狀標題化合物，收率15.9%。

LCMS：m/z 447.21[M+H]⁺。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 8.45(s,1H),7.50(d,J=8.9Hz,1H),6.43(d,J=9.4Hz,1H),5.76(s,1H),3.96(s,3H),3.01(t,J=10.7Hz,2H),2.73(s,1H),2.37(ddd,J=12.6,8.0,4.7Hz,1H),2.16(s,4H),1.91-1.77(m,2H),1.67(s,6H),1.36(s,3H),1.21(dd,J=4.5,2.7Hz,2H),0.99(t,J=8.1Hz,2H)。

實施例2：2-((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(2)的製備

步驟1：2-((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-6-(二氟甲基)-8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(2)的製備

於室溫，將雙(((二氟甲基)亞磺醯基)氧基)鋅(59.0mg，0.200mmol)、氯化亞鐵(6.35mg，0.050mmol)的水溶液(1mL)滴加到2-((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(44.6mg，0.100mmol)、TFA(11.4mg，0.100mmol)的DMSO溶液(6mL)中。將TBHP(51.2mg，70%wt水溶液，0.400mmol)稀釋為1mL的水溶液，然後加入0.2mL稀釋後的TBHP，20℃反應2h；再次加入0.2mL稀釋後的TBHP，20℃反應2h；再次加入0.2mL稀釋後的TBHP，20℃反應過夜；最後加入0.2mL稀釋後的TBHP，20℃反應2h。將反應溶液倒入10%乙二胺四乙酸(10mL)中，並用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合併的有機相減壓濃縮，殘餘物用製備薄層色譜法(展開劑：二氯甲烷：甲醇=20：1)純化，並用製備液相色譜法分離(色譜管柱型號：Daisogei 30mm*250mm，C18，10um，100A，流動相：乙腈/水，梯度：30%-80%)，得10.1mg白色固體狀的標題化合物，收率20.4%。

LCMS：m/z 497.21[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.55(s,1H),7.87(s,1H),6.79(t,J=55.2Hz,1H),5.75(s,1H),3.96(d,J=34.2Hz,3H),3.16-2.92(m,2H),2.72(s,1H),2.48(d,J=57.2Hz,4H),2.27-2.03(m,4H),1.98-1.84(m,2H),1.72(s,3H),1.36(s,3H),1.33-1.22(m,2H),1.14-1.04(m,2H)。

實施例3：8-環戊基-2-(((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3)的製備

步驟1：(4-(環戊基胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇(3a)的製備

於室溫，將(4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇(1e)(4.66g，20.0mmol)、環戊胺(2.04g，24.0mmol)、三乙胺(6.06g，60.0mmol)、四氫呋喃(50mL)加入250mL反應瓶中，室溫攪拌反應過夜。反應結束後，減壓濃縮，加入乙酸乙酯(100mL×3)和水(70mL)，收集有機相，減壓濃縮得到5.10g淡黃色固體狀的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 240.11[M+H]⁺。

步驟2：4-(環戊基胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(3b)的製備

於室溫，將(4-(環戊基胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)甲醇(13.4g，粗品)、二氧化錳(76.9g,884mmol)、乙酸乙酯(310mL)加到1L反應瓶中，於50℃攪拌反應過夜。反應結束後，過濾除去固體，濾液濃縮後藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-20%)純化，得到9.37g黃色油狀的標題產物，收率：89.4%。

LCMS：m/z 238.09[M+H]⁺。

步驟3：8-環戊基-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3c)的製備

於室溫，將4-(環戊基胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(11.8g，49.8mmol)、四氫呋喃(250mL)和乙酸乙酯(11.0g，125mmol)加入到1L三口瓶中，甲醇-冰浴中冷卻至-5℃，在氮氣氛下，緩慢地加入六甲基矽胺基鋰(150mL,1.0M四氫呋喃溶液，150mmol)，期間允許溫度逐漸升至室溫並攪拌過夜。將得到的紅色溶液在冰水浴中冷卻至約3℃，然後緩慢地加入乙醇(200mL)。將混合物在冰浴中攪拌1h，然後移去冷卻浴，使溶液升至室溫，繼續攪拌1h。減壓濃縮，將殘餘物用水(100mL)和飽和氯化鈉水溶液(100mL)稀釋，水層用乙酸乙酯(500mL×3)萃取，將合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-40%)純化，得到11.0g黃色固體物的標題產物，收率：84.6%。

LCMS：m/z 262.09[M+H]⁺。

步驟4：8-環戊基-2-(甲基磺醯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3d)的製備

於室溫，將8-環戊基-2-(甲硫基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(11.0g，42.2mmoI)、過硫酸氫鉀(64.8g，105mmol)、2-甲基四氫呋喃(200mL)、水(40mL)加入到1L反應瓶中，於室溫攪拌反應過夜。過濾，濾餅用乙酸乙酯(100mL×3)沖洗，收集濾液，加入乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)，將合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-100%)純化，得到8.37g黃棕色固體物的標題產物，收率：67.7%。

LCMS：m/z 294.08[M+H]⁺。

步驟5：4-((8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3e)的製備

於室溫，將8-環戊基-2-(甲基磺醯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(4.40g，15.0mmol)、4-胺基哌啶-1-羧酸第三丁酯(3.60g,18.0mmol)、二異丙基乙胺(3.87g，30.0mmol)、四氫呋喃(75mL)加入到反應瓶中，60℃攪拌反應過夜。冷卻至室溫後，加入乙酸乙酯(100mL×3)和水(100mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：二氯甲烷：甲醇=0-5%)純化，得到5.80g黃色泡沫固體狀的標題產物，收率：93.6%。

LCMS：m/z 414.24[M+H]⁺。

步驟6：8-環戊基-2-(哌啶-4-基胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3f)的製備

於室溫，將4-((8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(4.13g，10.0mmol)加入到10mL鹽酸的二噁烷溶液中，攪拌反應2h，有黃色固體析出，減壓濃縮。於0℃，殘餘物中加入氫氧化鈉(aq)以使pH達到10，加入二氯甲烷(200mL×3)，收集有機相，減壓濃縮，得到2.42g黃色固體物的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 314.19[M+H]⁺。

步驟7：8-環戊基-2-(((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3)的製備

於室溫，在氮氣氛下，將三苯基二氯化磷(1.82g,5.50mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)冷卻到0℃，加入三乙胺(909mg,9.00mmol)，攪拌15min後，加入化合物N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(1l)(690mg,5.00mmol)，攪拌20min後，加入化合物(8-環戊基-2-(哌啶-4-基胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(313mg,1.00mmol)，加畢緩慢升至室溫，攪拌反應16h。加入飽和氯化銨溶液(5mL)淬滅反應，收集有機相，減壓濃縮，所得殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：乙酸乙酯：甲醇=0-10%)純化，得384mg淡黃色固體產物，取60mg用製備液相色譜法分離(色譜管柱型號：Daisogei 30mm*250mm，C18，10um，100A，流動相：乙腈/水，梯度：30%-80%)，得48.0mg白色固體標題化合物，收率80.0%。

LCMS：m/z 417.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.40(s,1H),7.44-7.40(d,J=16Hz,1H),6.39-6.36(d,J=12Hz,1H),5.87-5.82(m,1H),4.02(s,1H),3.88(s,2H),3.11-3.06(m,2H),2.40-2.34(m,3H),2.14-2.03(m,6H),1.84(s,2H),1.68(s,4H),1.23-1.20(m,2H),1.00-0.97(m,2H)。

實施例4：8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(((1-(N-甲基環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(4)的製備

步驟1：N-甲基丙烷-1-磺醯胺(4a)的製備

於室溫，將環丙烷磺醯氯(1.43g，10.0mmol)、四氫呋喃(5mL)加入到玻璃封管中，降溫至0℃，加入三乙胺(4.04g，40.0mmol)、甲胺水溶液(5mL)，室溫攪拌反應16h。減壓濃縮，殘餘物中加入乙酸乙酯(50mL×3)和水(30mL)，收集有機相，水層用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，將合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮，殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-50%)純化，得到1.26g白油狀物的標題產物，收率：92.0%。

LCMS：m/z 138.08[M+H]⁺。

步驟2：8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(((1-(N-甲基環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(4)的製備

與實施例1的步驟13的製備方法相同，除了用N-甲基丙烷-1-磺醯胺代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺，製得標題化合物。

LCMS：m/z 461.23[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.46(s,1H),7.50(d,J=8.5Hz,1H),6.44(d,J=9.2Hz,1H),5.77(s,1H),4.03(s,1H),3.82(s,2H),3.17-2.99(m,2H),2.73(s,4H),2.17(d,J=13.5Hz,6H),2.02(s,1H),1.84(dd,J=13.9,6.0Hz,2H),1.67(d,J=9.0Hz,3H),1.36(s,3H),1.26(s,2H),1.12(s,1H),1.04(s,1H)。

實施例5：6-(二氟甲基)-8-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(((1-(N-甲基環丙烷磺醯亞胺基))哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(5)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物4代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 511.22[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.55(s,1H),7.86(s,1H),6.79(t,J=55.2Hz,1H),5.73(s,1H),4.05(d,J=44.6Hz,1H),3.78(s,2H),3.16-2.90(m,2H),2.70(s,3H),2.47(s,1H),2.15(d,J=13.1Hz,3H),1.86(s,6H),1.67(s,3H),1.36(s,3H),1.20(d,J=3.8Hz,2H),0.99(dd,J=19.7,6.3Hz,2H)。

實施例6：8-環戊基-2-(((8-(環丙烷磺醯亞胺基)-8-氮雜雙[3.2.1]辛-3-基]胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(6)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用2-((8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)胺代替步驟1中的環戊胺，製得標題化合物。

LCMS：m/z 443.22[M+H]⁺。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.37(s,1H),7.42(d,J=9.3Hz,1H),6.38(d,J=9.3Hz,1H),5.89-5.77(m,1H),4.38(s,1H),4.33-4.22(m,2H),2.63-2.29(m,7H),2.23(d,J=9.2Hz,2H),2.13(dd,J=15.7,6.7Hz,2H),2.02(dd,J=15.4,12.1Hz,4H),1.91-1.78(m,2H),1.73-1.62(m,2H),1.23(dq,J=11.5,5.7Hz,2H),1.07-0.99(m,1H),0.96(dd,J=7.5,2.1Hz,1H)。

實施例7：8-環戊基-2-(((1-(丙-2-基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(7)的製備

步驟1：N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)丙烷-2-磺醯胺(7a)的製備

與實施例1的步驟12的方法相同，除了用丙烷-2-磺醯胺代替環丙烷磺醯胺，製得標題化合物。

步驟2：8-環戊基-2-(((1-(丙-2-基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)丙烷-2-磺醯胺(7a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 419.22[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.42-7.40(d,J=8Hz,1H),6.38-6.35(d,J=12Hz,1H),5.88-5.79(m,1H),4.03(s,1H),3.94(s,2H),3.30-3.23(m,1H),3.11-3.06(m,2H),2.37(s,2H),2.17-2.11(m,2H),2.03(s,3H),1.86-1.84(m,3H),1.69-1.58(m,4H),1.41-1.36(m,6H)。

實施例8：8-環戊基-2-(((1-(丙基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(8)的製備

步驟1：N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)丙烷-1-磺醯胺(8a)的製備

與實施例1的步驟12的方法相同，除了用丙烷-1-磺醯胺代替環丙烷磺醯胺，製得標題化合物。

與實施例3的製備方法相同，除了用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)丙烷-1-磺醯胺(8a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 419.22[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.42-7.40(d,J=8Hz,1H),6.38-6.35(d,J=12Hz,1H),5.86-5.82(m,1H),4.01(s,1H),3.87(s,2H),2.99-2.86(m,3H),2.85-2.81(m,1H),2.01(s,2H),1.93-1.91(m,2H),1.89(s,2H),1.87-1.85(m,5H),1.68-1.62(m,5H),1.09-1.06(t,J=12Hz,3H)。

實施例9：8-環戊基-2-(((1-(N-甲基丙基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(9)的製備

步驟1：N-甲基丙烷-1-磺醯胺(9a)的製備

與實施例4的步驟1的方法相同，除了用丙烷-1-磺醯氯代替環丙烷磺醯氯，製得標題化合物。

與實施例3的製備方法相同，除了用N-甲基丙烷-1-磺醯胺(9a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 432.23[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.43-7.40(d,J=12Hz,1H),6.38-6.35(d,J=12Hz,1H),5.87-5.78(m,1H),4.02(s,1H),3.82-3.71(s,2H),3.03-2.81(m,4H),2.69(s,3H),2.36-2.16(m,5H),2.03(m,2H),1.96-1.84(m,4H),1.68-1.64(m,4H),1.08-1.03(m,3H)。

實施例10：8-環戊基-6-(二氟甲基)-2-(((1-(N-甲基丙基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶基[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(10)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物9代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 483.1[M+H]⁺。

¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ 8.51(s,1H),7.80(s,1H),6.99-6.62(m,1H),5.88-5.82(m,1H),4.05(s,1H),3.79(s,2H),3.02-2.98(m,4H),2.70(s,3H),2.18(m,5H),2.04(m,2H),1.92-1.88(m,4H),1.69(s,4H),1.09-1.04(m,3H)。

實施例11：8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(11)的製備

步驟1：N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)的製備

與實施例1的步驟12的方法相同，除了用甲磺醯胺代替環丙烷磺醯胺，製得標題化合物。

其餘步驟與實施例1的步驟相同，除了用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替實施例1步驟13的N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 421.19[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.45(s,1H),7.50(d,J=8.2Hz,1H),6.44(d,J=9.1Hz,1H),5.76(s,1H),3.94(d,J=42.8Hz,3H),2.87(d,J=7.0Hz,5H),2.73(s,1H),2.18(s,3H),1.99-1.78(m,6H),1.68(s,3H),1.36(s,3H)。

實施例12：6-(二氟甲基)-8-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(12)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物11代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 471.19[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.55(s,1H),7.87(s,1H),6.79(t,J=55.2Hz,1H),5.75(s,1H),3.90(s,3H),2.88(s,3H),2.71(s,1H),2.19(s,4H),1.77(d,J=53.5Hz,10H),1.36(s,3H)。

實施例13：8-環戊基-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(13)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替步驟7中的N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 391.18[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.44-7.41(d,J=12Hz,1H),6.40-6.37(d,J=12Hz,1H),5.90-5.78(m,1H),4.03(s,1H),3.85(s,2H),2.95(s,2H),2.86(s,3H),2.35-2.19(m,6H),2.03(s,2H),1.87-1.84(m,2H),1.70(s,4H)。

實施例14：2-((1-(N,S-二甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(14)的製備

步驟1：N-甲基甲磺醯胺(14a)的製備

與實施例4的步驟1的方法相同，除了用甲磺醯氯代替環丙烷磺醯氯，製得標題化合物。

其餘步驟與實施例1的步驟相同，除了用N-甲基甲磺醯胺(14a)代替實施例1步驟13的N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 435.21[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.45(s,1H),7.53-7.46(m,1H),6.44(d,J=9.2Hz,1H),5.76(s,1H),4.02(s,1H),3.87-3.67(m,2H),2.94(s,6H),2.72(s,1H),2.69(d,J=1.1Hz,3H),2.28-1.97(m,5H),1.90-1.80(m,2H),1.68(d,J=9.0Hz,3H),1.36(s,3H)。

實施例15：6-(二氟甲基)-2-(((1-(N,S-二甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-((1R,2R)-2-羥基-2-甲基環戊基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(15)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物14代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 485.21[M+H]⁺。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.55(s,1H),7.87(s,1H),6.79(t,J=55.2Hz,1H),5.70(s,1H),4.05(d,J=46.6Hz,1H),3.78(d,J=18.8Hz,2H),2.90(s,5H),2.69(d,J=1.2Hz,4H),2.29-1.95(m,6H),1.86(dd,J=13.2,6.1Hz,2H),1.70(s,3H),1.36(s,3H)。

實施例16：8-環戊基-2-(((1-(N,S-二甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(16)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用N-甲基甲磺醯胺(14a)代替步驟7中的N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 405.203[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.4-7.41(d,J=12Hz,1H),6.39-6.36(d,J=12Hz,1H),5.90-5.78(m,1H),4.02(s,1H),3.80-3.67(s,2H),2.96-2.92(m,2H),2.69(s,3H),2.37-2.18(m,5H),2.03(m,2H),1.87-1.84(m,2H),1.68(m,4H)。

實施例17：8-環戊基-6-(二氟甲基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(17)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物13代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 441.18[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.51(s,1H),7.79(s,1H),6.80(t,J=55.3Hz,1H),6.11(s,0.5H),5.94-5.73(m,1H),5.30(s,0.5H),4.06(s,1H),3.84(s,2H),3.01(s,1H),2.90(s,3H),2.62(s,2H),2.27(d,J=55.8Hz,4H),2.02(d,J=13.3Hz,2H),1.87(s,2H),1.70(s,4H)。

實施例18：8-環戊基-6-(二氟甲基)-2-(((1-(N,S-甲基磺醯亞胺基))哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(18)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物16代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 455.20[M+H]⁺。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.51(s,1H),7.79(s,1H),6.80(t,J=55.3Hz,1H),6.00-5.73(m,1H),4.05(s,1H),3.76(s,2H),2.96(s,5H),2.71(s,3H),2.35(s,2H),2.22(s,3H),2.04(s,2H),1.86(s,2H),1.69(s,4H)。

實施例19：8-環戊基-2-(((1-(N-甲基環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用N-甲基丙烷-1-磺醯胺(4a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 431.23[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.40(s,1H),7.41(d,J=9.3Hz,1H),6.37(d,J=9.3Hz,1H),5.84(p,J=9.0Hz,1H),5.41(s,1H),4.05(s,1H),3.78(s,2H),3.07(t,J=11.3Hz,2H),2.72(s,3H),2.55(d,J=2.9Hz,1H),2.37(s,2H),2.19(t,J=12.8Hz,2H),2.03(s,2H),1.90-1.80(m,2H),1.69(s,4H),1.33-1.16(m,2H),1.01(dd,J=22.1,9.7Hz,2H)。

實施例20：8-環戊基-2-(((1-(環丙烷磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-6-(二氟甲基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(20)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物3代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 467.20[M+H]⁺。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.49(s,1H),7.79(s,1H),6.80(t,J=55.3Hz,1H),5.85(p,J=8.9Hz,1H),4.05(s,1H),3.88(s,2H),3.09(s,2H),2.50(s,2H),2.43(ddd,J=12.8,8.1,4.9Hz,3H),2.18(s,2H),2.04(s,2H),1.87(s,2H),1.70(s,4H),1.28-1.18(m,2H),1.02(dd,J=9.9,8.3Hz,2H)。

實施例21：8-環戊基-6-(二氟甲基)-2-(((1-(N-甲基丙基磺醯亞胺基)哌啶丁-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(21)的製備

與實施例2的製備方法相同，除了用化合物19代替化合物1，製得標題化合物。

LCMS：m/z 481.21[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.52(s,1H),7.79(s,1H),6.80(t,J=55.3Hz,1H),5.90-5.79(m,1H),5.45(d,J=98.8Hz,1H),4.07(s,1H),3.81(s,2H),3.09(s,2H),2.74(s,3H),2.67(s,1H),2.37(s,2H),2.21(t,J=13.5Hz,2H),2.04(s,2H),1.87(s,2H),1.69(s,4H),1.32-1.21(m,2H),1.15-0.95(m,2H)。

實施例22：8-(2-甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(22-P1和22-P2)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用2-甲基環戊烷-1-胺鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。藉由管柱層析色譜法(沖提劑：乙酸乙酯：甲醇=0-10%)純化，再用製備液相色譜法分離得到化合物22-P1和22-P2。

LCMS：m/z 405.20[M+H]⁺。

單一構型化合物22-P1(較短保留時間)：

製備液相色譜法：色譜管柱：Daisogei 30mm×250mm，C18，10um，100A，流動相：乙腈/水，梯度：30%-80%。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.38(s,1H),7.43(d,J=9.3Hz,1H),6.40(d,J=9.3Hz,1H),5.41(d,J=9.1Hz,1H),4.01(d,J=3.4Hz,1H),3.84(s,2H),3.04-2.89(m,2H),2.87(s,3H),2.41(s,4H),2.18(d,J=8.7Hz,2H),2.11-1.97(m,2H),1.96-1.85(m,1H),1.83-1.60(m,3H),1.33(dd,J=20.2,9.7Hz,1H),0.94(d,J=6.6Hz,3H)。

單一構型化合物22-P2(較長保留時間)：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.37(s,1H),7.42(d,J=9.3Hz,1H),6.37(d,J=9.2Hz,1H),5.92(dd,J=17.3,9.7Hz,1H),4.14-3.98(m,1H),3.82(s,2H),3.01(s,2H),2.87(s,3H),2.69(s,3H),2.37(td,J=10.1,5.0Hz,1H),2.19(s,2H),2.12-1.97(m,1H),1.98-1.83(m,3H),1.71(s,2H),1.57(dd,J=19.0,8.4Hz,1H),0.79(d,J=7.1Hz,3H)。

實施例23：8-(2,2-二甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(23)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用2,2-二甲基環戊胺代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 419.20[M+H]+。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.44-7.41(d,J=12Hz,1H),6.40-6.37(d,J=12Hz,1H),5.90-5.78(m,1H),4.03(s,1H),3.85(s,2H),2.95(s,2H),2.86(s,3H),2.62-2.20(m,2H),2.09-1.98(m,6H),1.67-1.50(m,3H),1.50(s,1H),1.16(s,3H),0.85(s,3H)。

實施例24：2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(四氫呋喃-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(24)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用四氫呋喃-3-胺代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 393.16[M+H]⁺。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.41(s,1H),7.45(d,J=9.4Hz,1H),6.40(d,J=9.3Hz,1H),6.25-6.07(m,1H),4.41-4.06(m,3H),3.98(t,J=8.7Hz,1H),3.88(s,2H),2.94(s,2H),2.87(s,3H),2.56(s,1H),2.17(d,J=4.3Hz,6H),1.76-1.54(m,2H)。

實施例25：2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(螺[2.4]庚-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(25)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用螺[2.4]庚-4-胺代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 417.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.36(s,1H),7.41(d,J=9.4Hz,1H),6.38(d,J=9.1Hz,1H),5.80(t,J=8.1Hz,1H),4.00(s,1H),3.80(s,2H),3.03(d,J=11.5Hz,2H),2.87(s,3H),2.75-2.31(m,4H),2.10(dd,J=26.9,18.9Hz,4H),1.85(s,1H),1.69(s,2H),1.38(s,1H),0.60(s,2H),0.49(s,1H),0.25-0.06(m,1H)。

實施例26：8-環戊基-6-甲基-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(26)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用丙酸乙酯代替乙酸乙酯和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 405.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.32(s,1H),7.30(d,J=1.1Hz,1H),5.87(p,J=8.9Hz,1H),4.09-4.00(m,1H),3.81(s,2H),3.00(d,J=5.1Hz,2H),2.86(s,3H),2.49(s,2H),2.33(s,2H),2.22-2.12(m,5H),2.05(s,2H),1.91-1.80(m,2H),1.77-1.61(m,4H)。

實施例27：8-環戊基-5,6-二甲基-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(27)的製備

步驟1：1-(4-(環戊胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1-乙醇(27a)的製備

於室溫，將4-(環戊胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(3b)(929mg，3.70mmol)、THF(30mL)加入到三口瓶中，冷卻至-75℃，氮氣氛下，緩慢地加入甲基溴化鎂(3.7mL，1.0M THF溶液，3.70mmol)，期間允許溫度逐漸升至室溫並攪拌過夜。降溫到0℃，加入水(10mL)淬滅反應，收集有機相，減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-75%)純化，得到740mg白色固體的標題產物，收率：75.0%。

LCMS：m/z 254.14[M+H]⁺。

步驟2：1-(4-(環戊胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1-乙酮(27b)的製備

於室溫，將1-(4-(環戊胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1-乙醇(27a)(740mg,2.77mmol)、二氧化錳(4.54g,55.4mmol)、乙酸乙酯(10mL)加到反應瓶中，50℃攪拌反應過夜。反應結束後，過濾除去固體，濾液濃縮後藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-20%)純化，得到700mg淡黃色固體的標題產物，收率：95.4%。

LCMS：m/z 252.14[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例3的製備方法相同，除了用1-(4-(環戊胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1-乙酮(27b)代替4-(環戊基胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(3b)，用丙酸乙酯代替乙酸乙酯，和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製化合物27。

LCMS：m/z 419.22[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.53(s,1H),5.89(p,J=8.9Hz,1H),4.02(td,J=13.7,7.0Hz,1H),3.83(s,2H),2.97(t,J=10.3Hz,2H),2.86(s,3H),2.82-2.36(m,2H),2.34(s,5H),2.24-2.13(m,SH),2.10-1.99(m,2H),1.83(dt,J=11.4,8.4Hz,2H),1.68(dd,J=10.2,5.7Hz,4H)。

實施例28：6-乙醯基-8-環戊基-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(28)的製備

步驟1：4-((6-碘-8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(28a)的製備

於室溫，將4-((8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3e)(149mg，0.36mmol)、NIS(122mg，0.55mmol)、對甲苯磺酸(6.24mg，0.036mmol)、乙腈(2mL)加入到反應瓶中，室溫攪拌反應過夜。減壓濃縮，殘餘物中加入EtOAc(10mL×3)和水(5mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-40%)純化，得到164mg黃色固體物的標題產物，收率：84.7%。

LCMS：m/z 540.15[M+H]⁺。

步驟2：4-(((8-環戊基-6-(1-乙氧基乙烯基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(28b)的製備

於室溫，將4-((6-碘-8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(28a)(296mg，0.55mmol)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(299mg，0.825mmol)、四三苯基膦鈀(76.3mg，0.066mmol)、甲苯(5mL)加入到反應瓶中，回流攪拌反應過夜。冷卻至室溫後，減壓濃縮，殘餘物中加入EtOAc(20mL×3)和水(10mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-40%)純化，得到160mg淡黃色固體物的標題產物，收率：63.8%。

LCMS：m/z 484.28[M+H]⁺/456.25[M+H]⁺。

步驟3：6-乙醯基-8-環戊基-2-(哌啶-4-基胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(28c)的製備

於室溫，將4-(((8-環戊基-6-(1-乙氧基乙烯基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(28b)(160mg，0.350mmol)加入到2mL鹽酸的二噁烷溶液中，攪拌反應2h。有黃色固體析出，減壓濃縮，得到黃色固體。加入碳酸鉀(276mg，2.00mmol)，加入水(5mL)，攪拌反應2h。加入二氯甲烷(10mL×3)，收集有機相，減壓濃縮，得到93mg淡黃色固體物的標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 356.20[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例3的製備方法相同，除了用6-乙醯基-8-環戊基-2-(哌啶-4-基胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(28c)代替8-環戊基-2-(哌啶-4-基胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(3f)，用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物28。

LCMS：m/z 433.19[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.56(s,1H),8.24(s,1H),6.03(s,0.6H),5.90-5.81(m,1H),5.39(s,0.4H),4.06(s,1H),3.85(s,2H),3.03(d,J=34.2Hz,3H),2.91(s,3H),2.70(s,3H),2.35(m,2H),2.20(s,2H),2.03(d,J=17.0Hz,2H),1.87(s,2H),1.72(s,4H)。

實施例29：6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(29)的製備

步驟1：4-((6-溴-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(29a)的製備

於室溫，將4-胺基哌啶-1-羧酸第三丁酯(2.52g,12.0mmol)、甲苯(10mL)加入到反應瓶中，氮氣氛下，降至0℃，加入雙(三甲基甲矽烷基)胺基鋰(1M在THF中，12mL，12.0mmol)，攪拌反應20分鐘，加入化合物6-溴-2-氯-8-環戊基-5-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(1.03g,3.00mmol)(商品化試劑CAS：1016636-76-2)，攪拌反應過夜。減壓濃縮，殘餘物中加入EtOAc(20mL×3)和水(10mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-40%)純化，得到620mg淡黃色固體物的標題產物，收率：40.9%。

LCMS：m/z 506.17[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例28的製備方法相同，除了用4-((6-溴-8-環戊基-5-甲基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(29a)代替4-((6-碘-8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(28a)，製得化合物29。

LCMS：m/z 447.21[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.63(s,1H),6.35(s,0.6H),5.88-5.75(m,1H),5.21(s,0.4H),4.05(s,1H),3.82(s,2H),3.01(s,3H),2.88(s,3H),2.53(s,3H),2.33(s,5H),2.19(s,2H),2.02(s,2H),1.85(s,2H),1.69(s,4H)。

實施例30：8-環戊基-2-(((1-(1-氧化-4,5-二氫-3H-1λ⁶-異噻唑-1-基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(30)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用異噻唑烷1,1-二氧化物代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物30。

LCMS：m/z 417.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.41(d,J=9.3Hz,1H),6.37(d,J=9.2Hz,1H),5.83(p,J=8.9Hz,1H),4.06(s,1H),3.77(s,3H),3.05(s,4H),2.51-2.32(m,4H),2.27-2.11(m,4H),2.03(s,3H),1.92-1.79(m,3H),1.70(s,5H),1.26(s,3H)。

實施例31：6-甲基-8-(2-甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(31)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了用丙酸乙酯代替乙酸乙酯，製得化合物31。

LCMS：m/z 419.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.32(s,1H),7.30(d,J=9.3Hz,1H),6.40(d,J=9.3Hz,1H),4.04(d,J=3.4Hz,1H),3.84(s,2H),2.97-2.96(m,2H),2.86(s,3H),2.62(s,1H),2.40(s,1H),2.09-1.64(m,11H),1.56(s,1H),1.32-1.26(m,2H),0.93-0.76(m,3H)。

實施例32：5,6-二甲基-8-(2-甲基環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(32)的製備

與實施例27的製備方法相同，除了用4-((2-甲基環戊基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(22b)代替4-(環戊胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲醛(3b)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 433.23[M+H]⁺。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.51(s,1H),5.98(dd,J=17.2,9.7Hz,1H),4.02(dd,J=10.6,6.8Hz,1H),3.82(s,2H),2.99(s,2H),2.86(s,3H),2.68(d,J=7.4Hz,1H),2.39-2.29(m,4H),2.24-2.13(m,5H),1.97(m,5H),1.61(m,3.5H),1.30(m,0.5H),0.93(d,J=6.6Hz,0.7H),0.77(d,J=7.1Hz,2.3H)。

實施例33：6-(二氟甲基)-8-(2-甲基環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(33-P1和33-P2)的製備

步驟1：6-(二氟甲基)-8-(2-甲基環戊基)-2-(((1-(甲基磺醯亞胺基)哌啶丁-4-基)胺基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(33-P1和33-P2)的製備

於室溫，反應瓶中加入二氟甲烷亞磺酸鈉(172mg，1.25mmol)、水(3mL)、二甲基亞碸(15mL)，室溫攪拌25分鐘，加入8-(2-甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(202mg，0.50mmol)、氯化亞鐵(10.2mg，0.08mmol)。取過氧化第三丁醇(64.0mg，70%wt水溶液，0.50mmol)，用DMSO稀釋為1mL，，滴加到反應體系中，室溫攪拌過夜。將反應溶液倒入10%EDTA(30mL)中，並用EtOAc(50mL×3)萃取。合併有機相，用製備薄層色譜法(展開劑：二氯甲烷：甲醇=20：1)純化，並用製備液相色譜法分離，得到化合物33-P1(10.0mg)和33-P2(24.5mg)。

單一構型化合物33-P1(較短保留時間)

LCMS：m/z 455.54[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.49(s,1H),7.79(s,1H),6.79(t,J=55.3Hz,1H),5.94(dd,J=17.2,9.7Hz,1H),4.04(s,1H),3.85(s,2H),2.97(s,2H),2.87(s,3H),2.68(d,J=44.8Hz,1H),2.47-2.28(m,2H),2.21(s,2H),2.06(dd,J=10.8,7.4Hz,1H),1.92(dd,J=18.9,9.6Hz,3H),1.77-1.55(m,3H),0.79(d,J=7.1Hz,3H)。

單一構型化合物33-P2(較長保留時間)

LCMS：m/z 455.54[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.49(s,1H),7.79(s,1H),6.79(t,J=55.3Hz,1H),5.94(dd,J=17.2,9.7Hz,1H),4.04(s,1H),3.85(s,2H),2.97(s,2H),2.87(s,3H), 2.68(d,J=44.8Hz,1H),2.47-2.28(m,2H),2.21(s,2H),2.06(dd,J=10.8,7.4Hz,1H),1.92(dd,J=18.9,9.6Hz,3H),1.77-1.55(m,3H),0.79(d,J=7.1Hz,3H).)。

實施例34：6-乙醯基-5-甲基-8-(2-甲基環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶基-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(34)的製備

步驟1：4-(((5-甲基-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(34c)的製備

與實施例27中化合物27e的製備方法相同，除了用1-(4-((2-甲基環戊基)胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)乙-1-酮(32b)代替1-(4-(環戊胺基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-1-乙酮(27b)和用乙酸乙酯代替丙酸乙酯，製得化合物34c。

其餘步驟與實施例28的相同，除了用4-(((5-甲基-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)第三丁基-1-羧酸第三丁酯 (34c)代替4-((8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3e)，製得化合物34。

LCMS：m/z 461.21[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.60(s,1H),6.38(s,0.5H),6.01-5.83(m,1H),5.41(m,0.5H),4.04(s,1H),3.81(s,2H),3.01(s,2H),2.88(s,3H),2.69(d,J=11.5Hz,1H),2.52(d,J=7.0Hz,3H),2.37-2.27(m,4H),2.19(s,2H),2.10-1.93(m,2H),1.90(d,J=8.2Hz,2H),1.71(m,3H),1.32(dd,J=19.8,9.6Hz,1H),0.94(d,J=6.6Hz,1H),0.80(d,J=7.1Hz,2H)。

實施例35：6-乙醯基-8-(2-甲基環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(35)的製備

與實施例28的製備方法相同，除了用4-(((8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(22e)代替4-((8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3e)，製得化合物35。

LCMS：m/z 447.19[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.53(s,1H),8.23(s,1H),6.18(d,J=22.3Hz,0.5H),5.92(dd,J=17.8,9.4Hz,1H),5.41(d,J=24.1Hz,0.5H),4.07(s,1H),3.85(s,2H),3.00(d,J=11.5Hz,2H),2.92(s,4H),2.68(s,3H),2.55-2.28(m,1H),2.20(s,2H),2.02(m,4H),1.67(d,J=51.4Hz,3H),1.30(d,J=29.8Hz,1H),0.95(d,J=6.5Hz,1H),0.80(d,J=7.0Hz,2H)。

實施例36：8-環戊基-2-(((1-(噻吩-2-磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(36)的製備

步驟1：N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)噻吩-2-磺醯胺(36a)的製備

與實施例1的步驟12的方法相同，除了用噻吩-2-磺醯胺代替環丙烷磺醯胺，製得標題化合物。

其餘步驟與實施例3的製備方法相同，除了用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)噻吩-2-磺醯胺(36a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物36。

LCMS：m/z 459.18[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.33(s,1H),7.72-7.50(m,2H),7.40(d,J=9.3Hz,1H),7.22-7.11(m,1H),6.39(d,J=6.9Hz,1H),5.92-5.64(m,1H),4.02-381(m,1H),3.74(s,2H),2.91-2.54(m,2H),2.30(s,2H),2.20-2.07(m,2H),1.94(s,2H),1.85-1.76(m,3H),1.71(d,J=15.6Hz,2H),1.64(dd,J=10.3,5.3Hz,3H)。

實施例37：6-氟-8-(2-甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(37)的製備

與實施例22的製備方法相同，除了用2-氟乙酸乙酯代替乙酸乙酯，製得化合物37。

LCMS：m/z 423.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.18(d,J=7.8Hz,1H),5.97(d,J=7.9Hz,1H),4.02(d,J=7.1Hz,1H),3.85(s,2H),2.92(m,7H),2.70(s,1H),2.38(tdd,J=14.3,8.6,5.2Hz,1H),2.27-2.14(m,2H),2.09(m,1H),1.92(m,3H),1.81-1.49(m,3H),0.95(d,J=6.6Hz,0.4H),0.80(d,J=7.1Hz,2.7H)。

實施例38：6-氯-8-(2-甲基環戊基)-2-((1-(甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(38)的製備

步驟1：4-(((6-氯-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(38a)的製備

於室溫，將4-(((8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(22e)(341mg，0.80mmol)、NCS(128mg，0.96mmol)、2-甲基四氫呋喃(10mL)加入到反應瓶中，60℃攪拌反應過夜。減壓濃縮，殘餘物中加入EtOAc(20mL×3)和水(10mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-50%)純化，得到0.32g黃色固體物的標題產物，收率：86.0%。

LCMS：m/z 462.15[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例3的製備方法相同，除了用4-(((6-氯-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(38a)代替4-((8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3e)，用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物38。

LCMS：m/z 439.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.38(s,1H),7.66(d,J=9.3Hz,1H),6.02(d,J=9.3Hz,1H),4.01(d,J=3.4Hz,1H),3.84(s,2H),3.04-2.92(m,3H),2.91(s,3H),2.64-2.36(m,1H),2.19-2.00(m,4H),1.83-1.60(m,3H),1.60-1.56(m,3H),0.80(d,J=6.6Hz,3H)。

實施例39：6-異丙基-8-(2-甲基環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(39)的製備

步驟1：4-(((6-溴-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(39a)的製備

於室溫，將4-(((8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(22e)(854mg，2.00mmol)、NBS(391.0mg，2.20mmol)、2-甲基四氫呋喃(20mL)加入到反應瓶中，60℃攪拌反應過夜。減壓濃縮，殘餘物中加入EtOAc(20mL×3)和水(10mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。殘餘物藉由管柱層析色譜法(沖提劑：石油醚：乙酸乙酯=0-50%)純化，得到0.95g黃色固體物的標題產物，收率：93.0%。

LCMS：m/z 507.15[M+H]⁺。

步驟2：4-((8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-6-(丙-1-烯-2-基)-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(39b)的製備

於室溫，將4-(((6-溴-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(39a)(405mg，0.8mmol)、異丙烯硼酸酯(268.0mg，1.60mmol)、四三苯基膦鈀(124mg,0.08mmol)、磷酸鉀(508mg,2.40mmol)、二噁烷：水(15mL：3mL)加入到反應瓶中，回流攪拌反應過夜。冷卻至室溫後，減壓濃縮，殘餘物中加入EtOAc(20mL×3)和水(10mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。得到373mg黑色油狀物的粗品標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 468.28[M+H]⁺。

步驟3：4-(((6-異丙基-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(39c)的製備

於室溫，將4-((8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-6-(丙-1-烯-2-基)-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(39b)(373mg，0.80mmol)、鈀碳(37.0mg)、甲醇(15mL)加入到反應瓶中，氫氣氛下，50℃攪拌反應過夜。冷卻至室溫後，減壓濃縮，殘餘物中加入EtOAc(20mL×3)和水(10mL)。有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到180mg油狀物的粗品標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 470.28[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例3的製備方法相同，除了用4-(((6-異丙基-8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(39c)代替4-((8-環戊基-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(3e)，用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物39。

LCMS：m/z 447.19[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.36(s,1H),7.27(s,1H),6.18(d,J=22.3Hz,1H),5.92(dd,J=17.8,9.4Hz,1H),4.07(s,1H),3.85(s,2H),3.19(d,J=11.5Hz,1H),2.92(s,2H),2.86(s,3H),2.55-2.28(m,1H),2.20(s,2H),2.15-2.02(m,5H),1.67(d,J=51.4Hz,3H),1.20-1.19(m,6H),0.76(d,J=7.0Hz,3H)。

實施例40：8-環丁基-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(40)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用環丁胺代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物40。

LCMS：m/z 377.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.35(s,1H),7.41(d,J=9.4Hz,1H),6.39(d,J=9.1Hz,1H),5.81-5.68(m,1H),4.12(s,1H),3.81(s,2H),3.32-2.51(m,9H),2.35(s,2H),2.26-2.14(m,2H),2.06-1.83(m,2H),1.74(s,2H)。

實施例41：8-(3,3-二氟環丁基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(41)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用3,3-二氟環丁-1-胺鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物41。

LCMS：m/z 413.15[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.42(s,1H),7.45(d,J=9.3Hz,1H),6.38(d,J=9.3Hz,1H),5.88(s,1H),4.12(s,1H),3.90(t,J=13.9Hz,4H),2.91(d,J=11.2Hz,4H),2.86(d,J=9.6Hz,3H),2.17(s,2H),1.97(d,J=27.6Hz,2H),1.72-1.56(m,2H)。

實施例42：8-(3,3-二甲基環丁基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(42)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用3,3-二甲基環丁胺鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物42。

LCMS：m/z 405.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.36(s,1H),7.40(d,J=9.4Hz,1H),6.35(d,J=9.3Hz,1H),5.67(s,1H),4.15-3.99(m,1H),3.84(s,2H),2.99(s,2H),2.88(m,5H),2.56(s,2H),2.19(ddd,J=23.5,14.1,6.6Hz,4H),1.70(s,2H),1.27(d,J=4.0Hz,6H)。

實施例43：8-((1R,2R)-2-羥基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(43)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用(1R,2R)-2-胺基環戊醇鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物43。

LCMS：m/z 407.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.45(s,1H),7.50(d,J=9.3Hz,1H),6.44(d,J=9.2Hz,1H),5.82(dd,J=16.0,9.4Hz,1H),4.38(dd,J=10.6,4.5Hz,1H),4.00(s,1H),3.84(s,2H),2.98(s,2H),2.88(s,3H),2.69(s,1H),2.40(s,2H),2.14(ddd,J=16.5,13.1,8.4Hz,3H),2.01(dd,J=12.2,7.1Hz,2H),1.88-1.40(m,5H)。

實施例44：8-((1R,2S)-2-羥基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(44)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用(1S,2R)-2-胺基環戊醇鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物44。

LCMS：m/z 407.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.45(s,1H),7.51(d,J=9.3Hz,1H),6.43(d,J=9.2Hz,1H),5.82(td,J=9.4,6.9Hz,1H),4.38(dd,J=11.0,4.5Hz,1H),4.01(s,1H),3.85(s,2H),2.98(d,J=20.4Hz,2H),2.89(s,4H),2.70(d,J=10.0Hz,2H),2.15(ddd,J=20.4,8.3,4.1Hz,3H),2.00(dt,J=11.2,5.6Hz,2H),1.78(d,J=17.1Hz,1H),1.75-1.54(m,3H)。

實施例45：8-((1R,3R)-3-羥基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(45)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用(1R,3R)-2-胺基環戊醇鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物45。

LCMS：m/z 407.20[M+H]⁺。

實施例46：8-((1R,3S)-3-羥基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(46)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用(1S,3R)-3-胺基環戊醇鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物46。

LCMS：m/z 407.10[M+H]⁺。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.47(s,1H),7.51(d,J=9.3Hz,1H),6.40(d,J=9.3Hz,1H),6.04(ddd,J=13.8,9.5,4.8Hz,1H),5.35(s,1H),4.34(t,J=4.4Hz,1H),4.05(s,1H),3.85(s,2H),2.95(s,2H),2.86(s,3H),2.61-2.46(m,1H),2.33(ddd,J=14.8, 12.0,5.7Hz,2H),2.26-2.17(m,2H),2.13(s,1H),2.06(dd,J=13.3,6.9Hz,2H),1.91(dt,J=12.2,8.1Hz,1H),1.68(s,3H)。

實施例47：8-(3,3-二氟環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶丁-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(47)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用3,3-二氟環戊胺鹽酸鹽代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物47。

LCMS：m/z 427.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.42(s,1H),7.46(d,J=9.4Hz,1H),6.40(d,J=8.9Hz,1H),6.09(dd,J=18.3,9.1Hz,1H),4.16-4.02(m,1H),3.87(s,2H),3.16(d,J=36.7Hz,1H),2.96(s,2H),2.89(s,3H),2.86-2.44(m,4H),2.31(d,J=11.3Hz,1H),2.25-2.06(m,4H),1.69(d,J=10.0Hz,2H)。

實施例48：8-(3,3-二甲基環戊基)-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(48)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用3,3-二甲基環戊烷-1-胺代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物48。

LCMS：m/z 419.20[M+H]⁺。

實施例49：8-(3-甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(49)的製備

步驟1：N-苄基-3-甲基環戊烷-1-胺(49a)的製備

於室溫，將3-甲基環戊酮(10.0g,101.9mmol)、DCM(200mL)、苄胺(9.84g,91.7mmol)、乙酸(10.0mL)依次加入至反應瓶中，室溫攪拌1.5小時。分批加入三乙醯氧基硼氫化鈉(43.2g,203.8mmol)，室溫攪拌過夜。將反應液濃縮後再次以DCM稀釋，以飽和NaOH水溶液調節PH至10，水相以DCM萃取，合併有機相後濃縮得25.0g粗品黃色油狀標題產物，直接用於下一步。

LCMS：m/z 190.15[M+H]⁺。

步驟2：3-甲基環戊胺鹽酸鹽(49b)的製備

於室溫，將N-苄基-3-甲基環戊烷-1-胺(25.0g，粗品)、異丙醇(200mL)加入至反應瓶中，氮氣氛下加入氫氧化鈀碳(3.00g)。置換氫氣，45℃反應過夜。反應結束後過濾，濾液降溫至5℃，滴加鹽酸二噁烷溶液(4.0M，50mL)，室溫攪拌過夜。反應液減壓濃縮，得17.9g紅褐色固體粗品，直接用於下一步。

LCMS：m/z 100.10[M+H]⁺。

其餘步驟與實施例3的製備方法相同，除了用3-甲基環戊胺鹽酸鹽(49b)代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 405.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.37(s,1H),7.41(d,J=9.3,1H),6.38(d,J=9.1,1H),5.90(ddd,J=14.6,13.6,7.2,1H),4.17-3.96(m,1H),3.83(s,2H),3.00(d,J=20.9,2H),2.86(s,3H),2.78-2.50(m,2H),2.40(s,2H),2.28-2.05(m,3H),2.05-1.97(m,1H),1.97-1.81(m,2H),1.70(d,J=8.4,2H),1.50(s,1H),1.26(s,1H),1.10(dd,J=31.4,6.5,3H)。

實施例50：8-環己基-2-(((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(50)的製備

與實施例3的製備方法相同，除了用環己胺代替環戊胺和用N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)甲磺醯胺(11a)代替N-(第三丁基二甲基甲矽烷基)環丙烷磺醯胺(11)，製得化合物50。

LCMS：m/z 405.20[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.36(s,1H),7.40(d,J=9.3Hz,1H),6.38(s,1H),5.32(t,J=12.2Hz,1H),4.02(s,1H),3.86(s,2H),2.97(s,2H),2.86(s,3H),2.68(d, J=11.4Hz,4H),2.22(t,J=8.8Hz,2H),1.90(d,J=12.2Hz,2H),1.69(s,5H),1.34(d,J=55.9Hz,3H)。

實施例51：6-(二氟甲基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(螺[2.4]庚-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-(8H)-酮(51)的製備

與實施例33的製備方法相同，除了用2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(螺[2.4]庚-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(25)代替8-(2-甲基環戊基)-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(22)，製得化合物51。

LCMS：m/z 433.23[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.39(s,1H),7.66(s,1H),5.99(dd,J=16.8,9.7Hz,1H),4.04(s,1H),3.84(s,2H),3.05(d,J=26.6Hz,3H),2.91(s,3H),2.64(s,1H),2.36(dtd,J=17.4,7.1,3.3Hz,1H),2.26-2.15(m,2H),2.14-2.06(m,1H),2.03-1.84(m,3H),1.81-1.44(m,4H),0.79(d,J=7.1Hz,3H)。

實施例52：6-氯-2-((1-(S-甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)-8-(螺[2.4]庚-4-基)吡啶[2,3-d]嘧啶-7(8H))-酮(52)的製備

與實施例38的製備方法相同，除了用4-(((7-側氧基-8-(螺[2.4]庚基-4-基]-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基]胺基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(25e)代替4-(((8-(2-甲基環戊基)-7-側氧基-7,8-二氫吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)胺基)哌啶-1-羧酸第三丁酯(22e)，製得化合物52。

LCMS：m/z 451.20[M+H]⁺。

實施例53：8-環戊基-6-(二氟甲基)-2-(((1-(噻吩-2-磺醯亞胺基))哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(53)的製備

與實施例33的製備方法相同，除了用8-環戊基-2-(((1-(噻吩-2-磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(36)代替8-(2-甲基環戊基)-2-((1-(S- 甲基磺醯亞胺基)哌啶-4-基)胺基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(22)，製得標題化合物。

LCMS：m/z 509.15[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.45(s,1H),7.77(s,1H),7.59(dd,J=19.5,3.7Hz,2H),7.22-7.12(m,1H),6.78(t,J=55.2Hz,1H),5.78(s,1H),3.92(s,2H),3.73(s,1H),2.79(s,2H),2.58(s,1H),2.30(s,2H),2.14(s,2H),1.97(d,J=28.0Hz,2H),1.84(dd,J=12.7,6.9Hz,2H),1.77(d,J=19.3Hz,2H),1.72-1.51(m,3H)。

[生物學測試]

試驗例1：本發明化合物對CDK2/4/6的抑制活性

(1)CDK2/CyclinE1激酶活性抑制

使用ADP-Glo激酶測定試劑盒(Promega，貨號V9102)檢測待測化合物對CDK2/CyclinE1激酶的抑制活性。在激酶反應中，激酶將受質磷酸化，同時消耗ATP，殘留ATP，能被Ultra-Glo^TM螢光素酶轉化成光，發光信號與激酶活性正相關，檢測這種發光信號值，即可反應出激酶活性。

試驗方法

首先，將待測化合物在DMSO(Sigma，貨號D8418)中溶解，然後稀釋為200nM濃度，設定試驗起始濃度100nM，3倍稀釋，10個梯度。用Echo 550在384孔反應板中(Greiner，貨號784075)加入5μl稀釋後的化合物和2.5μl CDK2/Cyclin E1激酶(Carna，貨號04-165)，用封板膜封住板子，1000rpm離心1分鐘，25℃孵育10分鐘。再向反應板中加入2.5μl Histone H1蛋白(SignalChem，貨號H10-54N)和ATP(Promega，貨號V910B)的混合液，1000rpm離心1分鐘，25℃孵育反應60分鐘。吸取5μl的ADP-Glo試劑(Promega，貨號V9102)到反應板中，瞬時離心後，孵育40分鐘。最後加入10μl的檢測試劑到反應板中，孵育40分鐘。使用Envision2104多功能讀板機(PerkinElmer，型號Oct-04)讀取相對螢光單員(relative luminescence unit，RLU)值。RLU值大小用於表徵酶與受質反應程度。實驗數據採用GraphPad prism 6.0軟件進行非線性擬合公式計算化合物IC₅₀值：

Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×HillSlope))。

X為化合物濃度對數值，Y為抑制的百分比，Bottom最小抑制百分比，Top為最大抑制百分比，HillSlope為曲線斜率。

(2)CDK6/CyclinD1激酶活性抑制

使用ADP-Glo激酶測定試劑盒(Promega，貨號V9102)檢測待測化合物對CDK6/CyclinD1激酶的抑制活性。

試驗方法

首先，將待測化合物溶解在DMSO(Sigma，貨號D8418)中，設定試驗起始濃度1000nM，3倍稀釋，10個梯度。用Echo 550在384孔反應板中(Greiner，貨號784075)加入5μl稀釋後的化合物和2.5μl CDK6/CyclinD1激酶(ThermoFisher，貨號PV4401)，用封板膜封住板子，瞬時離心30s，孵育10分鐘。再向反應板中加入2.5μl Histone H1蛋白(SignalChem，貨號H10-54N)和ATP(Promega，貨號V910B)的混合液，1000g離心30s，25℃孵育反應60分鐘。再加入5μl的ADP-Glo試劑(Promega，貨號V9102)到反應板中，瞬時離心後，孵育40分鐘。最後加入10μl的檢測試劑到反應板中，孵育40分鐘。使用Envision 2104多功能讀板機(PerkinElmer，型號Oct-04)讀取RLU值。RLU 值大小用於表徵酶與受質反應程度。實驗數據採用GraphPad prism 6.0軟件進行非線性擬合公式計算化合物的IC₅₀值：

Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×HillSlope))。

X為化合物濃度對數值，Y為抑制的百分比，Bottom最小抑制百分比，Top為最大抑制百分比，HillSlope為曲線斜率。(3)CDK4/CyclinD3激酶活性抑制

使用ADP-Glo激酶測定試劑盒(Promega，貨號V9102)檢測待測化合物對CDK4/CyclinD3激酶的抑制活性。

試驗方法

首先，將待測化合物溶解在DMSO(Sigma，貨號D8418)中，設定試驗起始濃度1000nM，3倍稀釋，10個梯度。用Echo 550在384孔反應板中(Greiner，貨號784075)，加入5μl稀釋後的化合物和2.5μl CDK4/CyclinD3激酶(Carna，貨號04-105)，用封板膜封住板子，瞬時離心30s，孵育10分鐘。再向反應板中加入2.5μl Histone H1蛋白(SignalChem，貨號H10-54N)和ATP(Promega，貨號V910B)的混合液，1000g離心30s，25℃孵育反應1h。再加入5μl的ADP-Glo試劑(Promega，貨號V9102)到反應板中，瞬時離心後，孵育40分鐘。最後加入10μl的檢測試劑到反應板中，孵育40分鐘。使用Envision 2104多功能讀板機(PerkinElmer，型號Oct-04)讀取RLU值。RLU值大小用於表徵酶與受質反應程度。實驗數據採用GraphPad prism 6.0軟件進行非線性擬合公式計算化合物的IC₅₀值：

Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)×HillSlope))。

本發明化合物對CDK2、CDK6和CDK4激酶抑制的IC₅₀值如下表1所示。

表1本發明化合物對CDK2、CDK6和CDK4激酶抑制的IC₅₀值

結論：從表1可以看出，本發明化合物具有良好的CDK2/4/6激酶抑制活性。

試驗例2：本發明化合物對CDK2/4/6途徑的細胞學抑制水平

(1)OVCAR3和HCC1806細胞增殖試驗

藉由細胞增殖實驗，檢測待測化合物對卵巢癌細胞系OVCAR3和乳腺癌細胞系HCC1806的抑制水平，根據檢測指標IC₅₀，篩選候選化合物。

OVCAR3和HCC1806細胞株(均購買自南京科佰生物公司，ATCC編號分別為ATCC® HTB-161^TM和ATCC® CRL-2335^TM)培養於RPMI1640(Gibco，C11875500BT)，加入10%的FBS(Gbico，10099141)和雙抗(1%的青黴素和鏈黴素，Gibco公司，15140-122)。5,000個OVCAR3或HCC1806細胞接種在白色透明底96孔(Nunc，249944)/384孔板中(Corning，3570)，置於37℃，5%的培養箱內過夜。第二天，加入待測化合物，化合物用DMSO溶解，稀釋，試驗起始濃度從10mM開始，3倍稀釋，設置10個濃度梯度，每個梯度3個複孔。將細胞板放置培養箱中，37℃，5% CO₂共培養7天。使用CELL Titer-GLO發光法，檢測總的ATP含量來測定細胞增殖水平。將384孔板細胞取出，室溫平衡30min；每孔加入30μL CTG(CTG，Promega，貨號G7572)，振盪混勻，室溫孵育10min；多功能酶標儀(Biotek，型號Cytation 3)讀取螢光值。GraphPad Prism 6.0軟件分析不同濃度下化合物反應的Log值來測定增殖抑制的IC₅₀。

(2)MCF7細胞增殖試驗

人乳腺癌細胞(MCF7細胞)(購自ATCC，編號為HTB-22)培養於EMEM培養基中(ATCC，30-2003)，加入10% FBS(Gbico，10099141)。待細胞生長至70~80%的匯合度，消化細胞，製備細胞懸液。接種細胞在384孔板中(Corning，3570)，500個/孔，置於37℃，5%的培養箱內過夜。第二天加入待測化合物，化合物用DMSO溶解，稀釋，試驗起始濃度從10mM開始，3倍稀釋，設置10個濃度梯度，每個梯度3個複孔。將細胞板放置培養箱中，37℃，5% CO₂共培養7天。使用CELL Titer-GLO發光法，檢測總的ATP含量來測定細胞增殖水平，室溫平衡30min；每孔加入20μL CTG(CTG，Promega，貨號 G7572)，振盪混勻，室溫孵育10min；多功能酶標儀(Biotek，型號Cytation 3)讀取螢光值。GraphPad Prism 6.0軟件分析不同濃度下化合物反應的Log值來測定增殖抑制的IC₅₀。

本發明化合物對OVCAR3，HCC1806和MCF-7細胞抑制的IC₅₀值如下表2所示。

表2本發明化合物對OVCAR3、HCC1806和MCF-7細胞抑制的IC₅₀值

結論：從表2可以看出，本發明化合物對OVCAR3、HCC1806和MCF-7細胞增殖具有顯著抑制作用。

試驗例3：本發明化合物的小鼠藥物代謝動力學實驗

實驗動物選用7-8週齡雄性ICR小鼠，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，飼養於SPF環境，溫度20~26℃，每日溫差不超過4℃，相對濕度40~70%RH，每日12h/12h交替照明。實驗動物經過3-5天的適應期，其中口服給藥動物於實驗前1天禁食過夜(>12h)，不禁水。

每個待測化合物分為iv(靜脈給藥)和po(灌胃)組(n=6)，劑量設為iv 1mg/kg、p.o 10mg/kg。靜脈組和灌胃組溶媒均為3%DMSO+97%(20% HP-β-CD溶液)。化合物溶液配製流程如下：先用DMSO溶解化合物，配成10mg/mL的儲液；取100μL儲液，用20%的HP-β-CD定容至5mL，得到濃度為0.2mg/mL的靜脈給藥溶液；取100μL的儲液，加入溶媒定容至5mL，渦旋，使分散均勻，得到化合物濃度為1mg/mL的灌胃給藥溶液。

給藥前稱量體重，藉由眼靜脈叢採血方式，採集0.1mL血樣加入肝素鈉抗凝管中，防止凝血。每個受試化合物6隻靜脈給藥，6隻口服給藥，並於給藥後2h給予食物。樣品採集時間點為，灌胃組：給藥前及給藥後5min、15min、30min、1h、2h、4h；靜脈組：給藥前及給藥後5min、15min、30min、1h、2h、4h。動物採血分成2部分分別進行，採用交叉時間點採血，同1隻小鼠最多設5個採血點。在取血60min內，用Sorvall ST 8R高速低溫離心機以3000rpm離心10min，取上層血漿，凍存到-20℃冰箱內，備用。使用LC-MS/MS的分析方法檢測樣品中化合物濃度。採用MAS Studio(V1.3.1 stable)軟件計算並得到化合物在小鼠體內的血藥濃度-時間曲線，以及主要的PK參數：AUC_0-t、C_max、T_max、T_1/2和F%。F%=(AUC_po×劑量_iv)/(AUC_iv×劑量_po)×100%。

本發明化合物對小鼠的藥物代謝動力學參數如下表3所示。

表3本發明化合物的小鼠藥物代謝動力學參數

結論：從表3可以看出，本發明化合物在小鼠的藥物代謝動力學實驗中具有較好的性質。

Claims

一種通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

環A選自雜環基，該雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

環B選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R¹選自烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

R²選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；或者，

R¹和R²與他們連接的氮原子和硫原子一起形成雜環基或雜芳基，該雜環基或雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的一個或多個基團取代；

每個R³各自獨立地選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基，該烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；或者，

任意兩個R³與他們連接的原子一起形成環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基和雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基的一個或多個基團取代；

R⁴選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NHC(O)R^a、-S(O)_mR^a、-S(O)_mNR^aR^b和-NHS(O)_mR^a，該烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

R⁵選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、烷基、烷氧基、醯基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-C(O)R^a、-O(O)CR^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^aR^b、-NHC(O)R^a、-S(O)_mR^a、-S(O)_mNR^aR^b和-NHS(O)_mR^a，該烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；

R^a和R^b各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、氰基、胺基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個基團取代；

或者R^a和R^b與他們連接的原子一起形成環烷基或雜環基，該環烷基或雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個基團取代；

m為0、1、2；

p為0、1、2、3或4。
如請求項1所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

環A選自3至12員單環雜環基、螺雜環基、稠雜環基或橋雜環基，較佳5至7員單環雜環基、7至10員螺雜環基、7至10員稠雜環基和7至10員橋雜環基，更佳吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基，該雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、 C₁-C₆鹵烷氧基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基的一個或多個基團所取代。
如請求項1或2所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(II)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，環B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如請求項1所定義。
如請求項1至3中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

環B選自C₃-C₇環烷基、4至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基，更佳
、
、
、
、
、
。
如請求項1至4中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其為通式(III)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如請求項1所定義。
如請求項1至5中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

每個R³各自獨立地選自鹵素、胺基、氰基、羥基、巰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₇環烷基、4至7員雜環基，該C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₇環烷基、4至7員雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基的一個或多個基團所取代；較佳鹵素、羥基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆鹵烷基；

p為0、1、2或3；較佳1或2。
如請求項1至6中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R¹選自C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，較佳C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基；較佳C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基；

該C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基或C₃-C₆環烷基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基的一個或多個基團所取代；

該5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基的一個或多個基團取代。
如請求項1至7中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R²選自氫、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基，較佳氫、C₁-C₆烷基、C₃-C₆環烷基；較佳氫和C₁-C₆烷基；

該C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基或C₃-C₆環烷基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基的一個或多個基團所取代；

該5至7員雜環基、C₆-C₁₀芳基和5至10員雜芳基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、羧基、酯基、側氧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基的一個或多個基團取代。
如請求項1至6中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中，R¹和R²與他們連接的氮原子和硫原子一起形成5至7員雜環基，該5至7員雜環基視需要進一步被選自鹵素、胺基、硝基、氰基、側氧基、羥基、巰基、羧基、酯基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₃-C₆環烷基、5至7員雜環基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆烷氧基、C₆-C₁₀芳基、5至10員雜芳基的一個或多個基團取代。
如請求項1至9中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R⁴選自氫、鹵素、胺基、硝基、氰基、羥基、巰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基，較佳氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基；較佳R⁴為氫或C₁-C₆烷基。
如請求項1至10中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，

其中，

R⁵選自氫、鹵素、胺基、氰基、羥基、巰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、乙醯基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基、-C(O)R^a，較佳氫、鹵素、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆鹵烷基、C₁-C₆鹵烷氧基、-C(O)R^a；

R^a選自C₁-C₆烷基。
如請求項1至11中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽，其中該化合物選自：
一種如請求項1至12中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽的製備方法，其包括以下步驟：

在鹼的存在下，在催化劑存在下，化合物Ij與化合物Ia發生脫水反應得到通式(I)化合物；該鹼較佳三乙胺；該催化劑較佳三苯基二氯化磷；

環A、環B、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、p如請求項1至12中任一項所定義。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至12中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽和藥學上可接受的載體或賦形劑。
一種如請求項1至12中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或如請求項14所述的醫藥組成物在製備細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)抑制劑中的用途。
一種如請求項1至12中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或如請求項14所述的醫藥組成物在製備抑制癌細胞增值、抑制癌細胞侵襲或誘導癌細胞凋亡的藥物中的用途。
一種如請求項1至12中任一項所述的通式(I)所示的化合物或其立體異構體、互變異構體、內消旋體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式、或其可藥用鹽或如請求項14所述的醫藥組成物在製備用於預防和/或治療與細胞週期蛋白-依賴性激酶活性相關的疾病的藥物中的用途，該疾病例如癌症，特別是與以細胞週期蛋白依賴性激酶CDK2/細胞週期蛋白E1(CCNE1)、CDK6/細胞週期蛋白D1、CDK4/細胞週期蛋白D3的擴增或過表達為特徵的癌症，更特別為乳腺癌如HR+/HER2-轉移性乳腺癌或卵巢癌。
如請求項15至17中任一項所述的用途，其中該藥物可以與另外一種抗癌治療劑或抗癌治療方法同時、分開或相繼施用。