TW202325280A

TW202325280A - 一種胺基吡唑衍生物及其製備方法和用途

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Publication number: TW202325280A
Application number: TW111142871A
Authority: TW
Inventors: 李云飛; 劉浩淼; 張瑱; 龔紅龍; 韓寶丰; 林曉燕; 龐夏明
Original assignee: 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司
Priority date: 2021-11-09
Filing date: 2022-11-09
Publication date: 2023-07-01
Also published as: WO2023083201A1

Abstract

本揭露提供一種胺基吡唑衍生物及其製備方法和用途。具體而言，本揭露提供一種式I所示化合物或其可藥用的鹽。該式I所示化合物可作為細胞週期蛋白-依賴性激酶抑制劑，用於預防和/或治療與蛋白依賴性激酶或細胞週期蛋白相關的疾病。其中通式I中各基團如說明書中所定義。

Description

一種胺基吡唑衍生物及其製備方法和用途

本揭露關於一種胺基吡唑衍生物及其製備方法和用途，屬於醫藥領域。

細胞週期蛋白-依賴性激酶(CDK)是絲胺酸/蘇胺酸激酶亞家族的成員，每個CDK/細胞週期蛋白複合物負責細胞週期內特定期的轉換或進展，其在調節真核細胞***和增殖中發揮重要作用。細胞週期蛋白-依賴性激酶催化單元被稱為細胞週期蛋白的調節亞基激活。已經鑑定出至少16種哺乳動物細胞週期蛋白(Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.(1999)39：295-312)。細胞週期蛋白B/CDK1、細胞週期蛋白A/CDK2、細胞週期蛋白E/CDK2、細胞週期蛋白D/CDK4、細胞週期蛋白D/CDK6和可能的其他heterodynes是細胞週期進展的重要調節因子。細胞週期蛋白/CDK heterodynes的其他功能包括轉錄調節、DNA修復、分化和凋亡(Annu.Rev.Cell.Dev.Biol.(1997)13：261-291)。

近年來，乳腺癌治療領域最大的進展無疑是CDK4/6單用或聯合內分泌治療在激素受體陽性晚期乳腺癌，如帕博西尼(palbociclib)、瑞博西尼 (ribociclib)和玻瑪西尼(abemaciclib)已被批准與芳香酶抑制劑組合用於治療絕經後婦女的激素受體(HR)-陽性、人類表皮生長因子受體2(HER2)-陰性晚期或轉移性乳腺癌，並且帕博西尼和玻瑪西尼(abemaciclib)已被批准與氟維司群組合用於在內分泌療法後疾病進展後治療絕經後婦女的激素受體(HR)-陽性、人類表皮生長因子受體2(HER2)-陰性晚期或轉移性乳腺癌(Nature Reviews(2016)13：417-430、J Clin Oncol 2017,35,2875-2884)。儘管CDK4/6抑制劑在***受體ER陽性轉移性乳腺癌中顯示出顯著的臨床功效，但與其他激酶一樣，它們的作用可能隨著時間的推移被原發性或獲得性抗性的發展限制。

CDK2的過表達與細胞週期的異常調節有關。細胞週期蛋白E/CDK2複合物在調節G1/S轉換、組蛋白生物合成和中心體複製中起重要作用。細胞週期蛋白D/Cdk4/6和細胞週期蛋白E/Cdk2對Rb的進行性磷酸化釋放G1轉錄因子E2F，並促進S期進入。在早期S期期間細胞週期蛋白A/CDK2的激活促進內源性受質的磷酸化，其允許DNA複製和E2F的失活，以完成S期(Nat.Rev.Drug.Discov.2015；14(2)：130-146)。細胞週期蛋白E在多種癌症中過度表達，特別是乳腺癌、肺癌、白血病、淋巴瘤(郭翠萍等，細胞週期蛋白E的調控與惡性腫瘤.國際腫瘤學雜誌，2012,39(005)：337-340)，細胞週期蛋白E的擴增或過表達也與卵巢癌、胃癌、子宮內膜癌和其他癌症的不良預後有關。

研究表明，抑制CDK2激酶會誘導腫瘤細胞調亡，但對於正常細胞只會造成較小的損傷。CDK激酶的單體形式是無活性的，而細胞週期蛋白A/E與CDK2結合並促發磷酸化的結合激活CDK2。CDK2還可結合細胞週期蛋白A用於S期的整個進展並參與DNA修復。近幾年各大公司分別鑑定發現了一系列選擇性抑制CDK 2的抑制劑，用於治療癌症等疾病，如塞利西利 (Seliciclib)、迪納西利(Dinaciclib)等，但是為了達到更好的癌症治療效果的目的，更好的滿足市場需求，仍需要開發出新一代的高效低毒的選擇性CDK2抑制劑。

本揭露提供一種式I所示的化合物或其可藥用的鹽，

其中，該R¹和R²各自獨立地選自氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基，該烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基視需要被一個或多個獨立地選自R^1A的取代基取代；

該R^1A選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、雜環烷基或NR'(R")，該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基或雜環烷基視需要被一個或者多個獨立地選自R⁵的取代基取代；

或者R¹和R²與其共同連接的氮原子形成3至7員的雜環烷基，該雜環烷基視需要被一個或者多個獨立地選自R^1B的取代基取代；

該R^1B選各自獨立地自鹵素、氰基、羥基、胺基、烷基或烷氧基；

該R³選自H、COR'或

；

該環A選自5至6員的芳基、5至6員的雜芳基、環烷基或雜環烷基；

該R⁴各自獨立地選自鹵素、氰基、硝基、羥基、烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基、SR'、SOR'、SO₂R'、-NHSO₂R'、SO₂NR'(R")、NR'(R")、COR'、 -NHCOR'、COOR'、CONR'(R")、-(P=O)R'(R")、

或側氧基，該烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基視需要被一個或多個各自獨立地選自R^4A的取代基取代；

或者，兩個相鄰的R⁴與環A一起形成視需要被一個或多個獨立地選自R^4A 取代的

或

；

該R^4A選自鹵素、氰基、硝基、羥基、烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基、SR'、SOR'、SO₂R'、-NHSO₂R'、SO₂NR'(R")、NR'(R")、COR'、-NHCOR'、 COOR'、CONR'(R")、-(P=O)R'(R")或

，該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基視需要被一個或者多個R⁸取代；

該X獨立地選自O或S；

該R⁵選自鹵素、羥基、烷基、氰基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基或NR'(R")；

該R⁶和R⁷各自獨立地選自氫、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基或雜環烷基；

該R⁸選自鹵素、羥基、氰基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基或NR'(R")；

該R'和R"各自獨立地選自H或烷基；

該n選自1、2、3、4、5。

可選的實施方案中，本揭露中的式I所示的化合物或其可藥用的鹽，其為式II所示化合物或其可藥用的鹽，

其中，該R¹、R²、R³、R⁴、n分別如式I所示的化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露中的式I所示的化合物或其可藥用的鹽，其為式III所示化合物或其可藥用的鹽，

其中，該R¹、R²、R⁴、n分別如式I所示的化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露中的式I所示的化合物或其可藥用的鹽，其為式IV所示化合物或其可藥用的鹽，

其中，該R¹、R²、R⁴、n分別如式I所示的化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A選自苯基、五員含氮雜芳基、六員含氮雜芳基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A選自吡啶基、嘧啶基、哌啶基、咪唑基、吡咯基、吡唑基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A選自吡啶基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A選自苯基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A為I-1，

，該G¹、G²、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴或N，其中，G¹、G²、G³、G⁴和G⁵中至少有一個為CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A為I-2，

，該G¹、G²、G³和G⁴各自獨立地選自CR⁴或N或NR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A為

，該G²、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G¹、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G¹、G²、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自 CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G²、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G²、G³和G⁴各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G¹、G³和G⁴各自獨立地選自 CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G²、G³和G⁵各自獨立地選自 CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G¹、G³和G⁵各自獨立地選自 CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G³和G4各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G⁴為CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，該G³為CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，G¹、G²、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴。

，G¹、G²、G³、G⁴和G⁵選自CR⁴，該

選自

、

或

。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，該

為

。

，G²、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴。

，診

選自

、

。

，G¹、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴。

或

。

，G²、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴。

。

，G²、G³、G⁴各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，G¹、G³、G⁴各自獨立地選自CR⁴。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A選自

或

。

，G²、G³、G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，G¹、G³和G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，G³、G⁴各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，G⁴選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

，G³選自CR⁴，該R⁴如式I所示化合物中定義。

可選的實施方案中，兩個相鄰的R⁴與環A一起形成視需要被一個或多個R^4A取代的

，其中環A的定義如本文任一方案所述。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R¹選自氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R¹選自氫、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6羥烷基、3至7員的環烷基或3-7員的雜環烷基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R¹選自氫、C_1-3烷基或C_1-3鹵烷基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R¹為氫。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R²選自烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基，該烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基視需要被一個或多個R^1A取代，該R^1A選自鹵烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、雜環烷基或NR'(R")，該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、雜環烷基視需要被一個或者多個R⁵取代。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R²選自C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6羥烷基、3至7員的環烷基或3至7員的雜環烷基，該C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6羥烷基、3 至7員的環烷基或3至7員的雜環烷基視需要被一個或多個R^1A取代；該R^1A選自鹵素、C_1-6烷基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R²選自甲基、乙基、異丙基、第三丁基、環丙基、環丁基、環戊基，該環丙基、環丁基、環戊基被一個或多個R^1A取代，該R^1A選自甲基、乙基、異丙基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R²選自異丙基或甲基環丙基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R³選自

，其中X為O，該R⁶和R⁷各自獨立地選自氫、C_1-6烷基。

，其中X為O，該R⁶和R⁷各自獨立地選自氫、甲基、乙基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R³選佳

、

、

或

。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，R⁴選自鹵素、氰基、硝基、羥基、烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基、SR'、SOR'、SO₂R'、-NHSO₂R'、SO₂NR'(R")、NR'(R")、 COR'、-NHCOR'、COOR'、CONR'(R")、-(P=O)R'(R")或

，該烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基視需要被一個或多個R^4A取代，其中，R^4A如式I所示的化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，R⁴選自鹵素、氰基、硝基、羥基、烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基、SR'、SOR'、SO₂R'、-NHSO₂R'、SO₂NR'(R")、NR'(R")、 COR'、-NHCOR'、COOR'、CONR'(R")、-(P=O)R'(R")、

或側氧基，該烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基視需要被一個或多個R^4A取代，其中，R^4A如式I所示的化合物中定義。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，R⁴為側氧基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R⁴各自獨立地選自氫、氰基、鹵素、羥基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、雜芳基、SO₂R'、-NHSO₂R'、COR'、-NHCOR'、COOR'、CONR'(R")、或

，該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、雜芳基視需要被一個或多個R^4A取代；

該R^4A選自鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、SO₂R'、-NHSO₂R'、COR'、-NHCOR'、 COOR'、CONR'(R")或

。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，各個R⁴各自獨立地選自氫、氰基或鹵素。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R⁴各自獨立地選自氫、COR'、-NHSO₂R'、SO₂R'

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R⁴各自獨立地選自氫、烷基、羥烷基、該烷基視需要被一個或者多個R^4A取代，該R^4A選自鹵素、氰基、烷氧基、SO₂R'或

。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R⁴各自獨立地選自氫、烷氧基、雜環烷基氧基，或各個R⁴各自獨立地選自C_1-6烷氧基或3至7員的雜環烷基氧基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，該環A為吡啶基，該R⁴至少有一個為氰基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，R'和R"各自獨立地選自氫或者C_1-6烷基。

可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，可選的實施方案中，本揭露提供的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽，其中，R'和R"各自獨立地選自氫或甲基、乙基。

本揭露提供的化合物或其可藥用的鹽，其選自：

本揭露還提供上述化合物的同位素取代物。

一些實施方案中，該同位素取代物為氘原子取代。

本揭露還提供一種醫藥組成物，其包含前述式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物和至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或者賦形劑。在一些實施方案中，該醫藥組成物的單位劑量為0.001mg-1000mg。

在某些實施方案中，基於組成物的總重量，該醫藥組成物含有0.01-99.99%的前述式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有0.1-99.9%的前述式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有0.5%-99.5%的前述式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有1%-99%的前述式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有2%-98%的前述式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物。

在某些實施方案中，基於組成物的總重量，該醫藥組成物含有0.01%-99.99%的藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有0.1%-99.9%的藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有0.5%-99.5%的藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有1%-99%的藥學上可接受的賦形劑。在某些實施方案中，該醫藥組成物含有2%-98%的藥學上可接受的賦形劑。

本揭露還提供一種預防和/或治療患有與蛋白依賴性激酶相關疾病的患者的方法，其藉由向該患者施用治療有效量的本揭露所述的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物或前述醫藥組成物。

本揭露還提供一種預防和/或治療患有與細胞週期蛋白相關疾病的患者的方法，其藉由向該患者施用治療有效量的本揭露所述的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物或前述醫藥組成物。

在一些實施方案中，該與蛋白依賴性激酶相關疾病或與細胞週期蛋白相關疾病選細胞增殖性疾病，癌症或免疫性疾病。

在一些實施方案中，該與蛋白依賴性激酶相關疾病或與細胞週期蛋白相關疾病選自乳腺癌、卵巢癌、***癌、黑色素瘤、腦瘤、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、結直腸癌、肺癌、腎癌、皮膚癌、成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、肉瘤。

一些具體的實施方案中，該癌症選自細胞週期蛋白E1和/或細胞週期蛋白E2擴增的癌症。

本揭露還提供一種預防和/或治療患有癌症的患者的方法，其藉由向該患者施用治療有效量的本揭露所述的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物或前述醫藥組成物，該癌症選自乳腺癌、卵巢癌、***癌、黑色素瘤、腦瘤、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、結直腸癌、肺癌、腎癌、皮膚癌、成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、肉瘤。

本揭露提供了治療有效量的本揭露所述的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物或前述醫藥組成物在製備用於預防和/或治療與蛋白依賴性激酶相關疾病的藥物中的用途，

一些具體的實施方案中，蛋白依賴性激酶選自CDK2，與蛋白依賴性激酶相關疾病選自細胞增殖性疾病，癌症或免疫性疾病。

另一方面，本揭露提供了治療有效量的本揭露所述的式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物或前述醫藥組成物在製備用於預防和/或治療與細胞週期蛋白相關疾病的藥物中的用途。

一些具體的實施方案中，細胞週期蛋白選自細胞週期蛋白E，例如細胞週期蛋白E1、細胞週期蛋白E2。與細胞週期蛋白相關疾病選自細胞增殖性疾病，癌症或免疫性疾病。

在一些實施方案中，本揭露提供了治療有效量的本揭露式I、II、III、IV所示的化合物或其可藥用的鹽或其同位素取代物或前述醫藥組成物在製備治療癌症的藥物中的用途。

一些具體的實施方案中，該癌症選自選自乳腺癌、卵巢癌、***癌、黑色素瘤、腦瘤、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、結直腸癌、肺癌、腎癌、皮膚癌、成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤、肉瘤。

本揭露另一方面提供一種式III所示化合物或其可藥用的鹽、同位素取代物的製備方法，其包括式V所示化合物在酸性條件下脫除胺基保護基PG的步驟，

其中，R¹、R²、R⁴、n分別如式III所示化合物中所定義，PG為胺基保護基，可選為第三丁基、乙醯基、三氟乙醯基、三苯甲基、苄基、甲醯基。

本揭露另一方面提供一種式V所示的化合物，

本揭露中所述化合物可藥用鹽選自無機鹽或有機鹽，本揭露所述化合物可與酸性或鹼性物質反應成相應鹽。

本揭露化合物對細胞週期蛋白-依賴性激酶具有很好的抑制作用，對CDK2/Cyclin E的抑制活性的IC₅₀值在0.01至1000nM，某些化合物對CDK2/Cyclin E的抑制活性的IC₅₀值在0.01至500nM，某些化合物對CDK2/Cyclin E的抑制活性的IC₅₀值在0.01至300nM，某些化合物對CDK2/Cyclin E的抑制活性的IC₅₀值在0.01至200nM，某些化合物對CDK2/Cyclin E的抑制活性的IC₅₀值在0.01至100nM，某些化合物對CDK2/Cyclin E的抑制活性的IC50值<100nM。

一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin E抑制活性達到<50nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin E抑制活性達到<20nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin E抑制活性達到<10nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin E抑制活性達到<5nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin E抑制活性達到<1nM。

另一方面，本揭露化合物對CDK2/Cyclin A也有較好的抑制效果。一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin A抑制活性達到<500nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin A抑制活性達到<200nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin A抑制活性達到<150nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin A抑制活性達到<100nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin A抑制活性達到<50nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin A抑制活性達到<20nM。另一些實施方案提供的化合物對CDK2/Cyclin A抑制活性達到<10nM。

在另一些實施方案中，本揭露化合物對其他激酶如CDK1、CDK4、CDK5、CDK7、CDK9或GSK3β抑制活性偏弱，具有CDK2特異性選擇。

另一方面，本揭露化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本揭露設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)-和(+)-對對映體、(R)-和(S)-對映體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬本揭露的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本揭露的範圍之內。

另外，本揭露的化合物和中間體還可以以不同的互變異構體形式存在，並且所有這樣的形式包含於本揭露的範圍內。術語“互變異構體”或“互變異構體形式”是指可經由低能壘互變的不同能量的結構異構體。例如，質子互變異構體(也稱為質子轉移互變異構體)包括經由質子遷移的互變，如酮-烯醇及亞胺-烯胺、內醯胺-內醯亞胺、吡唑基異構化。

吡唑基平衡實例是在如下所示的E和F之間：

具體到本申請：

所有的互變異構形式在本發明的範圍內。化合物的命名不排除任何互變異構體。

本揭露化合物可以是不對稱的，例如，具有一個或多個立體異構體。除非另有說明，所有立體異構體都包括，如對映異構體和非對映異構體。本揭露的含有不對稱碳原子的化合物可以以光學活性純的形式或外消旋形式被分離出來。光學活性純的形式可以從外消旋混合物拆分，或藉由使用手性原料或手性試劑合成。

可以藉由的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(R)-和(S)-異構體以及D和L異構體。如果想得到本揭露某化合物的一種對映體，可以藉由不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。或者，當分子中含有鹼性官能團(如胺基)或酸性官能團(如羧基)時，與適當的光學活性的酸或堿形成非對映異構體的鹽，然後藉由本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是藉由使用色譜法完成的，該色譜法採用手性固定相，並視需要地與化學衍生法相結合(例如由胺生成胺基甲酸鹽)。

本揭露還包括一些與本文中記載的那些相同的，但一個或多個原子被原子量或質量數不同於自然中通常發現的原子量或質量數的原子置換的同位素標記的本揭露化合物。可結合到本揭露化合物的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，諸如分別為²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、¹²³I、¹²⁵I和³⁶Cl等。

除另有說明，當一個位置被特別地指定為氘(D)時，該位置應理解為具有大於氘的天然豐度(其為0.015%)至少1000倍的豐度的氘(即，至少10%的氘摻入)。示例中化合物的具有大於氘的天然豐度可以是至少1000倍的豐度的氘、至少2000倍的豐度的氘、至少3000倍的豐度的氘、至少4000倍的豐度的氘、至少5000倍的豐度的氘、至少6000倍的豐度的氘或更高豐度的氘。本揭露還包括各種氘化形式的式I化合物。與碳原子連接的各個可用的氫原子可獨立地被氘原子替換。所屬技術領域具有通常知識者能夠參考相關文獻合成氘化形式的式I化合物。在製備氘代形式的式I化合物時可使用市售的氘代起始物質，或它們可使用常規技術採用氘代試劑合成，氘代試劑包括但不限於氘代硼烷、三氘代硼烷四氫呋喃溶液、氘代氫化鋰鋁、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。

“視需要地”或“視需要”是指意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如“視需要的被鹵素或者氰基取代的C_1-6烷基”是指鹵素或者氰基可以但不必須存在，該說明包括烷基被鹵素或者氰基取代的情形和烷基不被鹵素和氰基取代的情形。

本發明所述化合物的化學結構中，鍵“

”表示未指定構型，即如果化學結構中存在手性異構體，鍵“

”可以為“

”或“

”，或者同時包含“

”和“

”兩種構型。雖然為簡便起見將全部上述結構式畫成某些異構體形式，但是本發明可以包括所有的異構體，如互變異構體、旋轉異構體、幾何異構體、非對映異構體、外消旋體和對映異構體。

本揭露所述化合物的化學結構中，鍵“

”並未指定構型，即可以為Z構型或E構型，或者同時包含兩種構型。

術語解釋

“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

“可藥用賦形劑”包括但不限於任何已經被美國食品和藥物管理局(FDA)批准對於人類或家畜動物使用可接受的任何助劑、載體、助流劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增香劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、助懸劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。

本揭露中所述“有效量”或“有效治療量”包含足以改善或預防醫學病症的症狀或病症的量。有效量還意指足以允許或促進診斷的量。用於特定患者或獸醫學受試者的有效量可依據以下因素而變化：如待治療的病症、患者的總體健康情況、給藥的方法途徑和劑量以及副作用嚴重性。有效量可以是避免顯著副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。

“烷基”指飽和的脂族烴基團，包括1至20個碳原子的直鏈和支鏈基團。含有1至6個碳原子的烷基。非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、 1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基及其各種支鏈異構體等。烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、側氧、氰基、胺基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、3至6員環烷基或3至6員雜環烷基，該烷基、烷氧基、環烷基或雜環烷基視需要被鹵素、羥基、硝基、氰基或胺基所取代。

術語“烯基”指分子中含有至少一個碳碳雙鍵的烷基化合物，其中烷基的定義如上所述。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷氧基、鹵素、鹵烷基、鹵烷氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基。

術語“炔基”指分子中含有至少一個碳碳三鍵的烷基化合物，其中烷基的定義如上所述。炔基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷氧基、鹵素、鹵烷基、鹵烷氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環烷基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基。

術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含3至20個碳原子，較佳包含3至6個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基等；多環環烷基包括螺環、並環和橋環的環烷基。環烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、側氧、氰基、胺基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、3至6員環烷基或3至6員雜環烷基，該烷基、烷氧基、環烷基或雜環烷基視需要被鹵素、羥基、硝基、氰基或胺基所取代。

術語“雜環烷基(Heterocycloalkyl)”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包含3至20個環原子，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。較佳包含3至12個環原子，其中1~4個是雜原子；更佳包含3至7個環原子。“雜環烷基”非限制性實例包括：

，等等。

該雜環烷基環可以稠合於芳基或雜芳基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環烷基，其非限制性實例包括：

和

等。

雜環烷基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自鹵素、羥基、側氧、氰基、胺基、C_1- ₆烷基、C_1-6烷氧基、3至6員環烷基或3至6員雜環烷基，該烷基、烷氧基、環烷基或雜環烷基視需要被鹵素、羥基、硝基、氰基或胺基所取代。

術語“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基。烷氧基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自鹵素、羥基、側氧、氰基、胺基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、3至7員環烷基或3至7員雜環烷基，該烷基、烷氧基、環烷基或雜環烷基視需要被鹵素、羥基、硝基、氰基或胺基所取代。

同理，“環烷基氧基”、“雜環烷基氧基”同上述“烷氧基”定義，具體可以是-O-(環烷基)、-O-(雜環烷基)。

術語“烷硫基”指-S-(烷基)，其中烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基。烷硫基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自C_1-6烷氧基、3至6員環烷基、3至6員雜環烷基、3至6員環烷氧基、3至6員雜環烷基氧基、C_1-6烷硫基、3至6員環烷硫基、3至6員雜環烷硫基，該烷氧基、環烷基、雜環烷基、環烷氧基、雜環氧基、烷硫基、環烷硫基、雜環烷硫基視需要被鹵素、羥基、氰基或胺基所取代。

同理，“環烷硫基”、“雜環烷硫基”同上述“烷硫基”定義。

“一價基團”是指一個化合物從“形式上”消除一個單價的原子或基團。“亞基”則是指化合物從“形式上”消除兩個單價或一個雙價形成的原子或原子團。

術語“亞(伸)烷基”表示烷烴分子中去除2個氫原子後餘下的部分，包括1至20個碳原子的直鏈和支鏈亞基團。含有1至6個碳原子的亞(伸)烷基，非限制性實施例包括亞甲基(-CH₂-)、亞(伸)乙基(如-CH₂CH₂-或-CH(CH₃)-)。如無特殊說明，亞烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。

同理，“亞(伸)烷氧基”、“亞(伸)烯基”、“亞(伸)烯氧基”、“亞(伸)環烷基”、“亞(伸)雜環烷基”的定義如“亞(伸)烷基”。

術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14員全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團，較佳為6至12員，例如苯基和萘基。該芳基環可以稠合於雜芳基、雜環烷基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，其非限制性實例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自鹵素、羥基、側氧、硝基、氰基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、C_2-6炔氧基、3至6員環烷氧基、3至6員雜環烷基氧基、C_3-8環烯氧基、5至6員芳基或雜芳基，該C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、C_2-6炔氧基、3至6員環烷氧基、3至6員雜環烷基氧基、3至8員環烯氧基、5至6員芳基或雜芳基視需要被一個或多個選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。

術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至14個環原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基較佳為6至12員，更佳為5員或6員。例如。其非限制性實例包括：咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基(oxazolyl)、異噁唑基(isoxazolyl)、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基、***基、吲唑基、苯并咪唑基、

，

、

等。

該雜芳基環可以稠合於芳基、雜環烷基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，其非限制性實例包括：

雜芳基可以是視需要取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C_1-6烷基或C_1-6烷氧基。

術語“螺環”指兩環共用一個原子的化合物。螺環烷基的非限制性實例包括：

術語“并環”指兩個或兩個以上環藉由共用兩個相鄰的原子併合而成的化合物。並環烷基的非限制性實例包括：

術語“橋環”指兩個或兩個以上環狀結構彼此共用兩個非相鄰的環原子所形成的結構。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，較佳為雙環、三環或四環，更佳為雙環或三環。橋環烷基的非限制性實例包括：

術語“雜環”指構成環的原子除碳原子外還有其他原子，其包括雜環烷基和雜芳環。

術語“羥基”指-OH基團。

術語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。

術語“氰基”指-CN。

術語“胺基”指-NH₂。

術語“硝基”指-NO₂。

術語“側氧”指=O取代基。

“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。當取代基是酮或側氧(即，=O)時，則原子上有兩個(2個)氫被替代。

“被一個或多個……取代”是指可以被單個或多個取代基取代。當被多個取代基取代時，可以是複數個相同取代基，也可以是一個或複數個不同取代基的組合。

以下結合實施例進一步描述本揭露，但這些實施例並非限制著本揭露的範圍。

本揭露實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。

化合物的結構是藉由核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d₆)，氘代氯仿(CDCl₃)，氘代甲醇(CD₃OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。

MS的測定用Shimadzu 2010 Mass Spectrometer或Agilent 6110A MSD質譜儀。

HPLC的測定使用Shimadzu LC-20A systems、Shimadzu LC-2010HT series或安捷倫Agilent 1200 LC高壓液相色譜儀(Ultimate XB-C18 3.0*150mm色譜管柱或Xtimate C182.1*30mm色譜管柱)。

手性HPLC分析測定使用Chiralpak IC-3 100×4.6mm I.D.,3um、Chiralpak AD-3 150×4.6mm I.D.,3um、Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3um、Chiralpak AS-3 150×4.6mm I.D.,3um、Chiralpak AS-3 100×4.6mm I.D.,3μm、ChiralCel OD-3 150×4.6mm I.D.,3um、Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D.,3μm、ChiralCel OJ-H 150×4.6mmI.D.,5um、Chiralcel OJ-3 150×4.6mmI.D.,3um色譜管柱；

薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.2mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。

管柱層析一般使用煙臺黃海矽膠100~200目、200~300目或300~400目矽膠為載體。

手性製備管柱使用DAICEL CHIRALPAK IC(250mm*30mm,10um)或Phenomenex-Amylose-1(250mm*30mm,5um)。

CombiFlash快速製備儀使用Combiflash Rf150(TELEDYNE ISCO)。

本揭露的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)、達瑞化學品等公司。

實施例中無特殊說明，反應能夠均在氬氣氛或氮氣氛下進行。

氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。

氫氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。

加壓氫化反應使用Parr 3916EKX型氫化儀和清藍QL-500型氫氣發生器或HC2-SS型氫化儀。

氫化反應通常抽真空，充入氫氣，重複操作3次。

微波反應使用CEM Discover-S 908860型微波反應器。

實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。

實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。

實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)，反應所使用的展開劑，純化化合物採用的管柱層析的沖提劑的體系和薄層色譜法的展開劑體系，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等鹼性或酸性試劑進行調節。

實施例1

(1R,3S)-3-(3-((4-氰基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

第一步

(1R,3S)-3-(1-(第三-丁基)-5-((4-氰基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯1b

將(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(40mg,0.13mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)， 2-氯代異煙腈(20mg,0.14mmol)，醋酸鈀(5.8mg,0.03mmol),1,1'-聯萘-2.2'-二苯膦(32.3mg,0.05mmol)，碳酸銫(84.5mg,0.26mmol)和1,4-二噁烷(1.5mL)置於微波管中，用氮氣吹1分鐘。反應液在100℃微波反應2小時。反應結束後，冷卻至室溫，減壓濃縮得到粗品1b呈黑色固體，直接用於下一步反應(80mg，產率30%)。

MS m/z(ESI)：411.4[M+H]⁺。

第二步

(1R,3S)-3-(3-((4-氰基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯1

在室溫下，向(1R,3S)-3-(1-(第三-丁基)-5-((4-氰基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(80mg,0.04mmol)中加入甲酸(1.5mL)。反應液在100℃下攪拌反應1個小時。反應結束後，反應液直接用C-18反相色譜法純化得到標題化合物1(5.4mg，產率38%)。

MS m/z(ESI)：355.4[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)：δ 11.99(s,1H),9.69(s,1H),8.33(s,1H),7.67(s,1H),7.00(d,J=35.1Hz,2H),6.08(s,1H),5.00(s,1H),3.58(s,1H),3.06(s,1H),1.96(m,3H),1.67(m,3H),1.13-0.92(m,6H)。

實施例2

(1R,3S)-3-(3-((5-(氰基甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

第一步

(1R,3S)-3-(1-(第三-丁基)-5-((5-(氰基甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯2b

氮氣氛下，依次將2-(6-氯吡啶-3-基)乙醯腈(20mg，0.13mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(40.4mg，0.13mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、醋酸鈀(5.9mg，0.03mmol)、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(16.3mg，0.03mmol)溶於1,4-二噁烷(3mL)中。加入碳酸銫(106.8mg，0.33mmol)，80℃條件下反應2小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後得到標題化合物2b(40mg，產率71.8%)。

MS m/z(ESI)：425.6[M+H]⁺。

第二步

(1R,3S)-3-(3-((5-(氰基甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯2

將(1R,3S)-3-(1-(第三-丁基)-5-((5-(氰基甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(40mg,0.09mmol)溶於6mL甲酸中，在80℃條件下反應3小時。冷卻至室溫，反應液直接用C-18反相色譜法純化得到標題化合物2(12mg，產率34.5%)。

MS m/z(ESI)：369.4[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)：δ 11.84(s,1H),9.20(s,1H),8.06(d,J=2.4Hz,1H),7.52(dd,J=8.7,2.5Hz,1H),7.29(s,1H),6.96(d,J=7.9Hz,1H),6.07(s,1H), 5.00(s,1H),3.88(s,2H),3.58(m,2H),3.11-2.97(m,1H),2.00(t,J=8.3Hz,1H),1.90(m,1H),1.73(d,J=9.8Hz,2H),1.61(s,1H),1.03(d,J=6.5,6H)。

實施例3

(1R,3S)-3-(3-((4-(1H-1,2,4-***-1-基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

第一步

2-氯-4-(1H-1,2,4-***-1-基)吡啶3b

氮氣氛下，將1H-1,2,4-***(420mg，6.08mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(8mL)中。在室溫下將氫化鈉(243.2mg，6.08mmol)分批加入到反應液中，在室溫下攪拌半小時，將2,4-二氯吡啶(300mg，2.02mmol)分批加入到反應液中，在100℃下攪拌2小時，降溫至室溫，反應液加入50ml水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，將有機相洗滌，乾燥，減壓濃縮後殘餘物用C-18反相色譜法純化得到標題化合物3b(120mg，產率32.8%)。

MS m/z(ESI)：181.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)：δ 9.58(s,1H),8.58(d,J=5.5Hz,1H),8.38(s,1H),8.11(d,J=2.0Hz,1H),7.95(dd,J=5.6,1.9Hz,1H)。

第二步

(1R,3S)-3-(5-((4-(1H-1,2,4-***-1-基)吡啶-2-基)胺基)-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯3c

氮氣氛下，依次將2-氯-4-(1H-1,2,4-***-1-基)吡啶(15mg，0.08mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(25.6mg，0.08mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、醋酸鈀(3.7mg，0.02mmol)、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(10.3mg，0.02mmol)溶於1,4-二噁烷(2mL)中。加入碳酸銫(67.7mg，0.21mmol)，80℃條件下反應2小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後得到標題化合物3c(30mg，產率79.8%)

MS m/z(ESI)：453.7[M+H]⁺。

第三步

(1R,3S)-3-(3-((4-(1H-1,2,4-***-1-基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯3

將(1R,3S)-3-(5-((4-(1H-1,2,4-***-1-基)吡啶-2-基)胺基)-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(30mg,0.07mmol)溶於3mL甲酸中，在80℃條件下反應12小時。冷卻至室溫，反應液直接用C-18反相色譜法純化得到標題化合物3(10.7mg，產率40.7%)。

MS m/z(ESI)：397.4[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ12.21-11.66(m,1H),9.52-9.42(m,1H),9.42-9.33(m,1H),8.34-8.18(m,2H),7.81(s,1H),7.20(d,J=2.1Hz,1H),7.04-6.83(m,1H),6.05(s,1H),5.05-4.95(m,1H),3.69-3.47(m,3H),2.10-1.96(m, 1H),1.95-1.83(m,1H),1.79-1.67(m,2H),1.66-1.54(m,1H),1.03(br d,J=6.4Hz,6H)。

實施例4

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({4-[(甲基胺基)二氧亞基-6-硫基]苯基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

根據實施例1合成步驟替換相應原料製得化合物4。

MS m/z(ESI)：422.2[M+H]⁺。

實施例5

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[5-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

第一步

2-(5-溴吡嗪-2-基)-2-氰基乙酸-2-甲基丙-2-基酯5b

首先將2-溴-5-氯吡嗪5a(500mg,2.6mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(20ml)中，隨後加入2-氰基乙酸第三丁酯(733mg,5.2mmol)、碳酸銫(2.1g，6.5mmol)，室溫反應4小時。經萃取、乾燥、濃縮後得到粗產品，該粗產物可直接用於下一步反應。

MS m/z(ESI)：298.4[M+H]⁺。

第二步

(5-溴吡嗪-2-基)乙腈5c

將2-(5-溴吡嗪-2-基)-2-氰基乙酸-2-甲基丙-2-基酯5b溶於二氯甲烷(10ml)中，隨後加入過量的三氟乙酸(2ml)，室溫反應1小時。經萃取、乾燥、濃縮後得到粗產品，正相管柱層析分離同時得到(5-溴吡嗪-2-基)乙腈5c(150mg，29%)。

MS m/z(ESI)：198.2[M+H]⁺。

第三步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[5-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-1-(2-甲基丙-2-基)吡唑-3-基)環戊基酯5d

氮氣氛下，依次將(5-溴吡嗪-2-基)乙腈(50mg，0.25mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(77mg，0.25mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、XantPhos(8.7mg 0.015mmol)、Pd2dba3(11.4mg，0.0125mmol)、碳酸銫(81.2mg，0.25mmol)溶於二噁烷(2mL)中，微波120℃條件下反應1小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後正相分離後得到標題化合物5d(50mg，產率47%)。

MS m/z(ESI)：426.2[M+H]⁺。

第四步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[5-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯5

將(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[5-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-1-(2-甲基丙-2-基)吡唑-3-基)環戊基酯(40mg,0.09mmol)溶於3mL甲酸中，在100℃條件下反應1小時。冷卻至室溫，反應液用C-18反相色譜法純化得到標題化合物5(8mg，產率23.0%)。

MS m/z(ESI)：370.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)：δ 12.00(s,1H),9.70(s,1H),8.55(s,1H),8.11(d,J=1.4Hz,1H),6.94(d,J=7.7Hz,1H),6.19(s,1H),5.00(s,1H),4.05(s,2H),3.63-3.54(m,1H),3.11-3.02(m,1H),2.10-1.84(m,3H),1.79-1.68(m,2H),1.64-1.60(m,1H),1.04(dJ=6.7Hz,6H)。

實施例6

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(5-氰基吡嗪-2-基)胺基]-2H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例1類似步驟替換相應原料和試劑製得化合物6。

MS m/z(ESI)：356.4[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.21(s,1H),10.47(s,1H),7.93(d,J=9.6Hz,1H),7.69(d,J=Hz,1H),6.93(d,J=7.2Hz,1H),6.19(s,1H),5.01(d,J=4.4Hz,1H),3.62-3.54(m,1H),3.11-3.05(m,1H),2.08-1.58(m,6H),1.03(d,J=6.4Hz,6H)。

實施例7

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(6-氰基-1,2-二氮雜環己熳-3-基)胺基]-2H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例1合成步驟替換相應原料製得化合物7。

MS m/z(ESI)：356.4[M+H]⁺。

實施例8

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({4-[(胺基)二氧亞基-6-硫基]苯基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

第一步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((4-磺醯苯基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯8b

氮氣氛下，依次將4-溴苯磺醯胺(23.5mg，0.10mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(30.8mg，0.10mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、XantPhos Pd G3(9.5 mg，0.01mmol)、磷酸鉀(63.6mg，0.30mmol)溶於NMP(2mL)中，微波80℃條件下反應2小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後正相分離後得到標題化合物8b(40mg，產率85%)。

MS m/z(ESI)：464.3[M+H]^+。

第三步

(1R,3S)-3-(3-((4-磺醯苯基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯8

將8b(40mg,0.08mmol)溶於3mL甲酸中，在80℃條件下反應12小時。冷卻至室溫，反應液用C-18反相色譜法純化得到標題化合物8(7.7mg，產率18.9%)。

MS m/z(ESI)：408.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.87(s,1H),8.86(s,1H),7.64-7.57(m,2H),7.40(d,J=8.4Hz,2H),7.03-6.91(m,3H),5.69(s,1H),5.00(s,1H),3.63-3.53(m,1H),3.11-3.01(m,1H),2.49-2.41(m,1H),2.05-1.99(m,1H),1.97-1.84(m,1H),1.73(m,2H),1.27-1.22(m,1H),1.08-1.00(d,J=6.6,6H)。

實施例9

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({4-[(胺基)二氧亞基-6-硫基]-2氟苯基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

第一步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[4-(胺基二氧亞基-6-硫基)-2-氟苯基]胺基}-1-(2-甲基丙-2-基)吡唑-3-基)環戊基酯9b

將化合物9a(2.7g,10.6mmol)，1a(3.0g,9.7mmol)，Xantphos-Pd-G3(300mg,0.3mmol)和磷酸鉀(2.5g,11.6mmol)，溶於N-甲基吡咯烷酮(15mL)中，在微波下120℃反應5小時。待反應完全後，向反應液中加入水(30mL)，用EtOAc(20mL×2)萃取。合併有機相並用無水Na₂SO₄乾燥，過濾，真空減壓濃縮得到化合物粗品。粗品藉由C18管柱純化得到化合物9b(4.0g，產率85.7%)。

MS m/z(ESI)：482.2[M+H]⁺。

第二步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({4-[(胺基)二氧亞基-6-硫基]-2氟苯基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯9

將化合物9b(4.0g,8.3mmol)溶於甲酸(20mL)中，在120℃反應5小時。待反應完全後，將反應液濃縮得到化合物粗品，粗品藉由反相HPLC純化得到化合物9(1.7g，產率48.2%)。

MS m/z(ESI)：426.5[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.96(s,1H),8.62(s,1H),8.19(t,J=8.5Hz,1H),7.51(d,2H),7.17(s,2H),6.94(d,J=7.8Hz,1H),5.83(s,1H),5.08-4.96(m,1H),3.69-3.48(m,1H),3.16-2.92(m,1H),2.48-2.40(m,1H),2.09-1.98(m,1H),1.96-1.86(m,1H),1.76-1.69(m,2H),1.66-1.55(m,1H),1.04(d,J=6.6,6H)。

實施例10

{[(2S)-丁-2-基]胺基}甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[4-(胺基二氧亞基-6-硫基)-2-氟苯基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

第一步

{[(2S)-丁-2-基]胺基}甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[4-(胺基二氧亞基-6-硫基)-2-氟苯基]胺基}-1-(2-甲基丙-2-基)吡唑-3-基)環戊基酯10c

將化合物10a(0.5g,1.96mmol)，10b(0.65g,2.0mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)，Xantphos-Pd-G3(95mg,0.1mmol)，磷酸鉀(0.53g,2.5mmol)，溶於N-甲基吡咯烷酮(10mL)中，在微波下120℃反應5小時。待反應完全，向反應液中加入水(30mL)，用EtOAc(20mL×2)萃取。合併有機相並用無水Na₂SO₄乾燥，過濾，真空減壓濃縮得到化合物粗品。粗品藉由C18矽膠管柱純化得到化合物10c(454mg,0.91mmol，產率：46.4%)。

MS(ESI)m/z 496.4[M+H]⁺

第二步

{[(2S)-丁-2-基]胺基}甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[4-(胺基二氧亞基-6-硫基)-2-氟苯基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯10

將化合物10c(454mg,0.91mmol)溶於甲酸(10mL)中，在120℃反應5小時。待反應完全後，將反應液濃縮得到化合物粗品，粗品藉由HPLC純化得到化合物10(250mg,0.57mmol，產率：62.5%)。

MS m/z(ESI)：440.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.95(s,1H),8.61(s,1H),8.19(t,J=8.5Hz,1H),7.58-7.46(m,2H),7.17(s,2H),6.88(d,J=8.3Hz,1H),5.83(s,1H),5.07-4.95(m,1H),3.47-3.35(m,1H),3.15-2.99(m,1H),2.49-2.40(m,1H),2.11-1.99(m,1H),1.98-1.84(m,1H),1.80-1.66(m,2H),1.66-1.53(m,1H),1.43-1.31(m,2H),1.02(d,J=6.6Hz,3H),0.81(t,J=7.4Hz,3H)。

實施例11

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({6-[(甲基胺基)二氧亞基-6-硫基]吡啶-3-基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

第一步

5-溴-N-甲基吡啶-2-磺醯胺11b

室溫下，將甲胺鹽酸鹽(180mg,3mmol)、DIEA(650mg,5mmol)溶於無水二氯甲烷(10mL)中，澄清後慢慢加入5-溴吡啶-2-磺醯氯(250mg,1mmol)，繼續攪拌，TLC監測至反應結束後，加入水(10mL)洗滌1次，飽和食鹽水(10mL)洗滌1次，收集有機相層無水硫酸鈉乾燥，旋至小體積直接正相管柱層析，得到11b(180mg，產率72%)。

第二步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((6-(N-甲基胺基磺醯基)吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯11c

氮氣氛下，依次將5-溴-N-甲基吡啶-2-磺醯胺(25.1mg，0.10mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(30.8mg，0.10mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、Pd₂(dba)₃(9.1mg，0.01mmol)、Xantphos(11.4mg，0.02mmol)、CS₂CO₃(96.2mg，0.30mmol)溶於1，4-二噁烷(2mL)中，微波80℃條件下反應2小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後正相分離後得到標題化合物11c(15mg，產率32%)。

MS m/z(ESI)：479.3[M+H]⁺。

第三步

(1R,3S)-3-(3-((6-(N-甲基胺基磺醯基)吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯11

將((1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((6-(N-甲基胺基磺醯基)吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(15mg,0.03mmol)溶於2mL甲酸中，在80℃條件下反應12小時。冷卻至室溫，反應液用C-18反相色譜法純化得到標題化合物(2.2mg，產率17.3%)。

MS m/z(ESI)：423.2[M+H]⁺。

實施例12

{[(2S)-丁-2-基]胺基}甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({6-[(乙基胺基)二氧亞基-6-硫基]吡啶-3-基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物12。

MS m/z(ESI)：451.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 12.00(s,1H),9.02(s,1H),8.57(d,J=1.6Hz,1H),7.97(dd,J ₁=1.6Hz,J ₂=8.4Hz,1H),7.73(d,J=8.8Hz,1H),7.43(t,J=5.6Hz,1H),6.87(d,J=8.4Hz,1H),5.72(s,1H),5.00(d,J=2.4Hz,1H),3.42-3.35(m,1H),3.09-3.05(m,1H),2.90-2.83(m,2H),2.08-1.56(m,6H),1.40-1.30(m,2H),1.01(d,J=6.4Hz,3H),0.96(t,J=7.2Hz,3H),0.80(t,J=7.6Hz,3H)。

實施例13

(1R,3S)-3-(3-((5-(2-(氘代甲胺基)-2-側氧乙基)吡嗪-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基(S)-第二丁基胺基甲酸酯

第一步

2-(5-氯吡嗪-2-基)丙二酸二乙酯13b

氮氣氛下，依次將丙二酸二乙酯(2.49g,15.51mmol)，2-吡啶甲酸(127.3mg,1.04mmol)，碳酸銫(5.06g,15.51mmol)和碘化亞銅(393.9mg,2.07mmol)加到2-溴-5-氯吡嗪13a(1g,5.17mmol)的二噁烷(30mL)溶液中。在105℃下反應過夜，降至室溫，將反應液減壓濃縮，加入30mL水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，將有機相用飽和食鹽水洗滌，乾燥，減壓濃縮後殘餘物用矽膠管柱色譜分離純化得到標題化合物13b(1.1g，產率79%)。

MS m/z(ESI)：273.1[M+H]⁺。

第二步

2-(5-氯吡嗪-2-基)乙酸乙酯13c

將2-(5-氯吡嗪-2-基)丙二酸二乙酯13b(1g,3.68mmol)用N,N-二甲基亞碸(20mL)溶解，向溶液中加氯化鈉(234.6mg,4mmol)和水(132.4mg,7.35mmol)。在145℃下反應，待反應結束後將反應液降至室溫，加入30mL水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，將有機相用飽和食鹽水洗滌，乾燥，減壓濃縮後殘餘物用矽膠管柱色譜分離純化得到標題化合物13c(514.7mg，產率70%)。

MS m/z(ESI)：201.1[M+H]⁺。

第三步

2-(5-((1-(第三丁基)-3-((1S,3R)-3-((((S)-第二丁基)胺基甲醯基)氧基)環戊基)-1H-吡唑-5-基)胺基)吡嗪-2-基)乙酸乙酯13d

將2-(5-氯吡嗪-2-基)乙酸乙酯(500mg,2.5mmol)，(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基((S)-第二丁基)胺基甲酸酯(805mg,2.5mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)，碳酸銫(2.45g,7.5mmol)和XantPhos Pd G3(119mg,0.125mmol)用1,4-二噁烷(10mL)溶解，氮氣保護下回流，待反應結束後將反應液降至室溫，加入20ml水，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，將有機相用飽和食鹽水洗滌，乾燥，減壓濃縮後殘餘物用矽膠管柱色譜分離純化得到標題化合物13d(850.5mg，產率70%)。

MS m/z(ESI)：487.5[M+H]⁺。

第四步

2-(5-((1-(第三丁基)-3-((1S,3R)-3-((((S)-第二丁基)胺基甲醯基)氧基)環戊基)-1H-吡唑-5-基)胺基)吡嗪-2-基)乙酸13e

將2-(5-((1-(第三丁基)-3-((1S,3R)-3-((((S)-第二丁基)胺基甲醯基)氧基)環戊基)-1H-吡唑-5-基)胺基)吡嗪-2-基)乙酸乙酯13d(500mg,1.03mmol)溶於四氫呋喃(4mL)中，向溶液中加氫氧化鋰水溶液(2M,2.06mmol)。室溫反應，待反應結束後將反應液用1M鹽酸酸化，用乙酸乙酯萃取，合併有機相，將有機相用飽和食鹽水洗滌，乾燥，減壓濃縮得到標題化合物13e(424.6mg，產率90%)。

MS m/z(ESI)：457.4[M-H]^-。

第五步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((5-(2-(氘代甲胺基)-2-側氧乙基)吡嗪-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基((S)-第二丁基)胺基甲酸酯13f

將13e(400mg,0.87mmol)用二氯甲烷(5mL)溶解，向溶液中加1,1’羰基二咪唑(141.6mg,0.88mmol)，反應液在室溫下攪拌1小時。將氘代甲胺鹽酸鹽(62.2mg,0.87mmol)用二氯甲烷(1mL)溶解，向其中加入三乙胺(138μL,1mmol)，室溫下攪拌30分鐘。將該懸濁液緩慢加入到上述混合液中，繼續反應過夜。反應液用水淬滅，用二氯甲烷萃取，合併有機相，將有機相依次用1M鹽酸，1M氫氧化鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，乾燥，減壓濃縮後殘餘物用矽膠管柱色譜分離純化得到標題化合物13f(247.4mg，產率60%)。

MS m/z(ESI)：475.5[M+H]⁺。

第六步

(1R,3S)-3-(3-((5-(2-(氘代甲胺基)-2-側氧乙基)吡嗪-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基-(S)-第二丁基胺基甲酸酯13

將13f(173mg,0.36mmol)溶於甲酸(3mL)，反應液在100℃下反應約2小時。待反應液冷卻至室溫減壓濃縮後殘餘物用C-18反相色譜法純化得到標題化合物13(30mg，產率20%)。

MS m/z(ESI)：419.4[M+H]⁺。

實施例14

(1R,3S)-3-(3-((5-(氰甲基)-3-甲基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)異丙基胺基甲酸環戊酯

第一步

4-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)異噁唑14b

氮氣氛下，將5-溴-2-氯-3-甲基吡啶(1g，4.84mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)和水(5ml)中，依次加入4-異噁唑硼酸頻那醇酯(1.04g,5.32mmol)、氟化鉀(0.84g,14.52mmol)、Pd(dppf)Cl₂(0.35g,0.48mmol)，升至80℃反應16h，降至室溫，將反應液倒入10ml水中，乙酸乙酯(10ml*2)萃取，合併有機相，將有機相洗滌，乾燥，減壓濃縮得標題化合物14b(1g，產率105%)。

MS m/z(ESI)：195.2[M+H]⁺。

第二步

2-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)乙腈14c

將4-(6-氯-5-甲基吡啶-3-基)異噁唑(1g,5mmol)溶於甲醇(10ml)和水(1ml)中，再加入氟化鉀(60mg,1mmol)，升溫至90℃，反應1h，降至室溫，旋去甲醇，加入3ml水，用乙酸乙酯(5ml*2)萃取，合併有機相，拌樣過管柱得到標題化合物14c(350mg，產率40.9%)。

MS m/z(ESI)：167.2[M+H]⁺。

第三步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((5-(氰甲基)-3-甲基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)異丙基胺基甲酸環戊酯14d

依次將14c(35.8mg，0.21mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(60mg，0.19mmol)採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、Pd2(dba)3(17.8mg，0.02mmol)、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(24.3mg，0.04mmol)溶於1,4-二噁烷(2mL)中。加入磷酸鉀(103.4mg，0.49mmol)，微波反應120℃，4h。反應液冷卻至室溫，將反應液倒入5ml 水中，乙酸乙酯(5ml*2)萃取，有機相合併，拌樣過管柱得標題化合物14d(40mg，產率46.9%)。

MS m/z(ESI)：439.3[M+H]⁺。

第四步

(1R,3S)-3-(3-((5-(氰甲基)-3-甲基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)異丙基胺基甲酸環戊酯14

將14d(40mg,0.07mmol)溶於4mL甲酸中，在100℃條件下反應3小時。冷卻至室溫，反應液用C-18反相色譜法純化得到標題化合物14(20mg，產率57.1%)。

MS m/z(ESI)：383.3[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.94(s,1H),8.17(s,1H),7.98-7.92(m,1H),7.38(s,1H),6.93(d,J=7.6Hz,1H),6.28(s,1H),5.00(d,J=6.9Hz,1H),3.87(s,2H),3.58(h,J=6.7Hz,1H),3.09-2.99(m,1H),2.5-2.40(m,1H),2.22(s,3H),2.00(t,J=7.8Hz,1H),1.90(ddd,J=13.3,8.0,5.0Hz,1H),1.74(s,2H),1.65(s,1H),1.03(dd,J=6.6,2.1Hz,6H)。

實施例15

(1R,3S)-3-(3-((5-(氰甲基)-4-甲基吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)異丙基胺基甲酸環戊酯

合成參考實施例14，變換相關原料可合成化合物15。

MS m/z(ESI)：383.3[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.82(s,1H),9.09(s,1H),7.99(s,1H),7.16(s,1H),6.94(d,J=7.8Hz,1H),6.05(s,1H),5.00(d,J=7.3Hz,1H),3.87(s,2H),3.58(h,J=6.6Hz,1H),3.11-2.97(m,1H),2.45(dd,J=14.2,7.4Hz,1H),2.25(s,3H),2.01(q,J=8.5,6.9Hz,1H),1.96-1.83(m,1H),1.73(q,J=7.3,6.2Hz,2H),1.59(d,J=14.3Hz,1H),1.04(d,J=6.6Hz,6H)。

實施例16

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[5-(甲醯胺基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物16。

MS m/z(ESI)：388.4[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)：δ 11.93(s,1H),9.44(s,1H),8.51(s,1H),8.02(d,J=1.4Hz,1H),7.43(s,1H),6.93(s,2H),6.15(s,1H),5.00(s,1H),3.63-3.54(m,1H),3.46(s,1H),3.10-3.01(m,1H),2.06-1.83(m,3H),1.81-1.55(m,4H),1.04(d,J=6.4Hz,6H)。

實施例17

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[6-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

第一步

2-(6-溴吡嗪-2-基)-2-氰基乙酸-2-甲基丙-2-基酯17b

首先將2,6-二溴吡嗪(1g,4.2mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(40ml)中，隨後加入2-氰基乙酸第三丁酯(1.2g,8.4mmol)、碳酸銫(3.4g，10.5mmol)，室溫反應4小時。經萃取、乾燥、濃縮後得到粗產品，該粗產物可直接用於下一步反應。

MS m/z(ESI)：298.2[M+H]⁺。

第二步

(6-溴吡嗪-2-基)乙腈17c

首先將所得粗產品2-(6-溴吡嗪-2-基)-2-氰基乙酸-2-甲基丙-2-基酯溶於二氯甲烷(20ml)中，隨後加入過量的三氟乙酸(4ml)，室溫反應1小時。經萃取、乾燥、濃縮後得到粗產品，正相管柱層析分離得到(6-溴吡嗪-2-基)乙腈17c(250mg，30%)。

MS m/z(ESI)：198.2[M+H]⁺。

第三步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[6-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-1-(2-甲基丙-2-基)吡唑-3-基)環戊基酯17e

氮氣氛下，依次將(6-溴吡嗪-2-基)乙腈(50mg，0.25mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(77mg，0.25mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、XantPhos(8.7mg 0.015mmol)、Pd2dba3(11.4mg，0.0125mmol)、碳酸銫(81.2mg，0.25mmol)溶於二噁烷(2mL)中，微波120℃條件下反應1小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後正相分離後得到標題化合物17e(38mg，產率36%)。

MS m/z(ESI)：426.4[M+H]⁺。

第四步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[6-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯17

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[6-(氰基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-1-(2-甲基丙-2-基)吡唑-3-基)環戊基酯(38mg,0.09mmol)溶於3mL甲酸中，在100℃條件下反應1小時。冷卻至室溫，反應液用C-18反相色譜法純化得到標題化合物636(9mg，產率28%)。

MS m/z(ESI)：370.2[M+H]⁺。

實施例18

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[6-(甲醯胺基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物18。

¹H NMR(400MHz,DMSO)：δ 11.93(s,1H),9.45(s,1H),8.51(s,1H),8.02(d,J=1.5Hz,1H),7.43(s,1H),6.93(s,1H),6.88(d,J=8.3Hz,1H),6.15(s,1H),5.00(d,J=8.4Hz,1H),3.46(s,2H),3.41-3.36(m,1H),3.13-3.01(m,1H),2.09-1.84(m,3H),1.82-1.54(m,3H),1.01(d,J=6.6Hz,6H)。

實施例19

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[6-(氰基甲基)-1,2-二氮雜環己烷-3-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物19。

MS m/z(ESI)：370.2[M+H]⁺。

實施例20

(丁-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[5-(甲醯胺基甲基)吡嗪-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物20。

MS m/z(ESI)：402.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)：δ 11.94(s,1H),9.54(s,1H),8.45(s,1H),7.83(s,1H),7.54(s,1H),7.00(s,1H),6.94(d,J=7.9Hz,1H),6.18(s,1H),5.01(s,1H),3.63-3.53(m,1H),3.48(s,2H),3.09-3.00(m,1H),2.49-2.41(m,1H),2.07-1.96(m,3H),1.94-1.85(m,1H),1.78-1.57(m,3H),1.06-1.04(m,3H),1.03-1.02(m,3H)。

實施例21

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({4-[二甲基(氧亞基)-5-甲磷基]苯基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物21。

MS m/z(ESI)：405.2[M+H]⁺。

實施例22

(1R,3S)-3-(3-((6-氰基噠嗪-3-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基((S)-第二丁基)胺基甲酸酯

第一步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((6-氰基噠嗪-3-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基((S)-第二丁基)胺基甲酸酯

將(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基((S)-第二丁基)胺基甲酸酯(84mg,0.26mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10mL)中，0℃下加入氫化鈉(13mg,0.31mmol)，0℃下攪拌0.5小時，隨後加入6-氯噠嗪-3-甲腈22a(36mg,0.26mmol)，待反應結束後，將反應液用1mL水洗滌，20mL乙酸乙酯萃取，20mL飽和氯化鈉水溶液洗滌，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液。濾液減壓濃縮，殘留物用矽膠色譜法純化得到標題化合物22c(40mg，產率40.9%)。

MS m/z(ESI)：426.2[M+H]⁺。

第二步

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物22。

MS m/z(ESI)：370.2[M+H]⁺。

實施例23

(1R,3S)-3-(3-((2-氟-4-(N-(氘代甲基)磺醯)苯基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

第一步

4-溴-3-氟-N-(氘代甲基)苯磺醯胺23b

將氘代甲胺鹽酸鹽(154mg,2.2mmol)溶於15mL二氯甲烷中，向體系中加入三乙胺(557mg,5.52mmol)、4-二甲胺基吡啶(45mg,0.37mmol)，0℃下加入4-溴-3-氟苯磺醯氯(500mg,1.84mmol)，室溫下攪拌過夜。反應結束後，將反應液減壓濃縮，殘留物用矽膠色譜法純化得到標題化合物23b(145mg，產率29.2%)。

MS m/z(ESI)：270.9[M+H]⁺。

第二步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((2-氟-4-(N-(氘代甲基)磺醯)苯基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯23c

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物23c。(56mg，產率75.9%)。

MS m/z(ESI)：499.2[M+H]⁺。

第三步

(1R,3S)-3-(3-((2-氟-4-(N-(氘代甲基)磺醯)苯基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯23

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物23。(19mg，產率38.2%)。MS m/z(ESI)：443.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 11.99(s,1H),8.68(d,J=1.6Hz,1H),8.23-8.19(m,1H),7.47-7.43(m,2 H),7.18(s,1H),6.96(d,J=7.2Hz,1H),5.84(s,1H),5.01(d,J=4.0Hz,1H),3.61-3.56(m,1H),3.09-3.05(m,1H),2.06-1.60(m,6H),1.03(d,J=6.4Hz,6H)。

實施例24

(1R,3S)-3-(3-((4-(N-(氘代甲基)磺醯)苯基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

根據實施例23合成步驟替換相應原料製得化合物24(19mg，產率38.2%)。MS m/z(ESI)：425.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.91(s,1H),8.93(s,1H),7.55(d,J=8.8Hz,2H),7.41(d,J=8.0Hz,2H),7.02(s,1H),6.94(d,J=7.2Hz,1H),5.71(s,1H),5.00(d,J=2.8Hz,1H),3.61-3.56(m,1H),3.08-3.04(m,1H),2.06-1.61(m,6H),1.03(d,J=6.4Hz,6H)。

實施例25

(1R,3S)-3-(3-((6-(N-(甲基-d3)胺基磺醯基)吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙胺基甲酸酯

第一步

5-溴-N-(甲基-d3)吡啶-2-磺醯胺25b

室溫下，將氘代甲胺鹽酸鹽(210mg,3mmol)、DIEA(650mg,5mmol)溶於無水二氯甲烷(10mL)中，澄清後慢慢加入5-溴吡啶-2-磺醯氯(250mg,1mmol)，繼續攪拌，TLC監測至反應結束後，加入水(10mL)洗滌1次，飽和食鹽水(10mL)洗滌1次，收集有機相層無水硫酸鈉乾燥，旋至小體積直接正相管柱層析，得到標題化合物25b(200mg，產率82%)。

MS m/z(ESI)：253.9[M+H]⁺。

第二步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((6-(N-(甲基-d3)胺基磺醯基)吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙胺基甲酸酯25c

氮氣氛下，依次將5-溴-N-(甲基-d3)吡啶-2-磺醯胺(25.3mg，0.10mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(30.8mg，0.10mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、Pd2(dba)3(9.1mg，0.01mmol)、Xantphos(11.4mg，0.02mmol)、CS2CO3(96.2mg，0.30mmol)溶於1，4-二噁烷(2mL)中，微波80℃條件下反應2小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後正相分離後得到標題化合物25c(16mg，產率32%)。

MS m/z(ESI)：482.3[M+H]⁺。

第三步

(1R,3S)-3-(3-((6-(N-(甲基-d3)胺基磺醯基)吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙胺基甲酸酯25

將25c(16mg,0.03mmol)溶於2mL甲酸中，在80℃條件下反應12小時。冷卻至室溫，反應液用C-18反相色譜法純化得到標題化合物25(2.5mg，產率19.6%)。

MS m/z(ESI)：426.2[M+H]⁺。

實施例26

(1R,3S)-3-(3-((6-(N-甲基胺基磺醯基)吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基((S)-第二丁基)胺基甲酸酯

根據實施例25合成步驟替換相應原料製得標題化合物26。

MS m/z(ESI)：437.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.01(s,1H),9.23(s,1H),8.58(d,J=2.6Hz,1H),8.45(s,1H),7.99(d,J=8.6Hz,1H),7.74(d,J=8.7Hz,1H),7.33(q,J=5.0Hz,1H),6.89(d,J=8.3Hz,1H),5.73(s,1H),5.00(s,1H),3.12-3.03(m,1H),2.47(d,J=4.8Hz,3H),2.01(dp,J=12.9,7.0,6.3Hz,2H),1.91(ddd,J=12.9,8.4,4.3Hz,1H),1.78-1.70(m,2H),1.61(t,J=14.2Hz,1H),1.47(d,J=7.3Hz,1H),1.41-1.30(m,1H),1.02(d,J=6.6Hz,3H),0.83(dt,J=23.5,6.9Hz,3H)。

實施例27

(1R,3S)-3-(3-((5-(N-甲基胺基磺醯基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

根據實施例25合成步驟替換相應原料製得標題化合物27。

MS m/z(ESI)：423.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.03(s,1H),9.84(s,1H),8.44(d,J=2.5Hz,1H),7.82(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),7.34(s,1H),7.26(d,J=5.5Hz,1H),6.94(d,J=7.7Hz,1H),6.18(s,1H),5.01(s,1H),3.63-3.53(m,1H),3.07(t,J=8.9Hz,1H),2.41(d,J=4.8Hz,3H),2.00(p,J=6.9,6.5Hz,1H),1.74(d,J=9.0Hz,1H),1.62(s,1H),1.46(t,J=7.1Hz,1H),1.25(m,4H),1.04(dd,J=6.6,2.2Hz,3H)。

實施例28

(1R,3S)-3-(3-((6-氰基吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物28。

MS m/z(ESI)：355.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.08(s,1H),9.43(s,1H),8.58(d,J=2.6Hz,1H),7.96(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),7.77(d,J=8.7Hz,1H),6.94(d,J=7.8Hz,1H),5.75(s,1H),5.00(dd,J=6.6,3.2Hz,1H),3.58(dt,J=9.8,5.0Hz,1H),3.12-3.01(m,1H),2.09-1.97(m,1H),2.00-1.84(m,1H),1.74(q,J=7.6,4.7Hz,2H),1.61(s,1H),1.24(d,J=3.7Hz,1H),1.04(dd,J=6.6,2.3Hz,6H)。

實施例29

(1R,3S)-3-(3-((5-氰基吡啶-3-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物29。

MS m/z(ESI)：355.2[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.97(s,1H),9.15(s,1H),8.70(d,J=2.5Hz,1H),8.34-8.27(m,2H),6.94(d,J=7.7Hz,1H),5.70(d,J=1.9Hz,1H),5.00(s,1H),3.62-3.53(m,1H),3.12-3.02(m,1H),2.09-1.84(m,1H),1.73(s,1H),1.61(s,1H),1.46(s,1H),1.24(s,2H),1.04(d,J=6.5Hz,6H).

實施例30

(1R,3S)-3-(3-((4-(甲磺醯基)苯基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物30。

MS m/z(ESI)：407.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.95(s,1H),9.06(s,1H),7.67(d,J=8.8Hz,2H),7.50-7.43(m,2H),6.94(d,J=6.8Hz,1H),5.72(s,1H),5.01(s,1H),3.57(s,1H),3.08(s,3H),2.03(dt,J=11.0,7.5Hz,1H),1.99-1.84(m,1H),1.73(d,J=8.5Hz,2H),1.61(s,1H),1.24(s,1H),1.04(dd,J=6.7,2.2Hz,6H)。

實施例31

(1R,3S)-3-(3-((5-((甲磺醯基)甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯

第一步

2-氯-5-((甲硫基)甲基)吡啶31b

室溫下，將2-氯-5-(氯甲基)吡啶(1000mg,6.2mmol)溶於95%乙醇(10mL)中，澄清後慢慢加入甲硫醇鈉(700mg,10mmol)，繼續攪拌，TLC監測至反應結束後，加入水(10mL)洗滌1次，飽和食鹽水(10mL)洗滌1次，收集有機相層無水硫酸鈉乾燥，減壓旋去溶劑，管柱層析後得到化合物31b(800mg，產率74%)。

MS m/z(ESI)：174.0[M+H]⁺。

第二步

2-氯-5-((甲磺醯基)甲基)吡啶31c

室溫下，將2-氯-5-((甲硫基)甲基)吡啶(800mg,4.5mmol)溶於二氯甲烷(10mL)中，澄清後慢慢加入m-CPBA(1100mg，6.75mmol)，繼續攪拌，TLC監測至反應結束後，濾除沉澱，加入水(10mL)洗滌1次，飽和食鹽水(10mL)洗滌1次，收集有機相層，無水硫酸鈉乾燥，減壓旋去溶劑，管柱層析後得到化合物31c(800mg，產率85%)。

MS m/z(ESI)：206.0[M+H]⁺。

第三步

(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((5-((甲磺醯)甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯31d

氮氣氛下，依次將2-氯-5-((甲磺醯基)甲基)吡啶(20.6mg，0.10mmol)、(1R,3S)-3-(5-胺基-1-(第三-丁基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(30.8mg，0.10mmol，採用專利申請“WO 2020/157652 A2”公開的方法製備而得)、Pd₂(dba)₃(9.1mg，0.01mmol)、Xantphos(11.4mg，0.02mmol)、CS₂CO₃(96.2mg，0.30mmol)溶於1，4-二噁烷(2mL)中，微波80℃條件下反應2小時。反應液冷卻至室溫，過濾，收集濾液，減壓濃縮後正相分離後得到標題化合物31d(5mg,產率10%)。

MS m/z(ESI)：478.3[M+H]⁺。

第四步

(1R,3S)-3-(3-((5-((甲磺醯基)甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-5-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯31

將(1R,3S)-3-(1-(第三丁基)-5-((5-((甲磺醯)甲基)吡啶-2-基)胺基)-1H-吡唑-3-基)環戊基異丙基胺基甲酸酯(5mg,0.01mmol)溶於1mL甲酸中，在80℃條件下反應12小時。冷卻至室溫，反應液用C-18反相色譜法純化得到標題化合物31(1.2mg，產率28.3%)。

MS m/z(ESI)：422.2[M+H]⁺。

實施例32

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(4-甲醯胺基苯基)胺基]-1H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例8合成步驟替換相應原料製得化合物32。

MS m/z(ESI)：372.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.81(s,1H),8.66(s,1H),7.71(d,J=8.8Hz,2H),7.61(s,1H),7.30(d,J=8.3Hz,2H),6.94(d,J=6.9Hz,2H),5.67(s,1H),5.08-4.95(m,1H),3.76-3.51(m,1H),3.16-2.95(m,1H),2.47-2.40(m,1H),2.09-1.97(m,1H),1.93-1.85(m,1H),1.80-1.64(m,2H),1.64-1.58(m,1H),1.08-1.00(m,6H)。

實施例33

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({2-氟-4-[(甲基胺基)二氧亞基-6-硫基]苯基}胺基)-1H-吡唑-3-基]環戊基酯

根據實施例8合成步驟替換相應原料製得化合物33。

MS m/z(ESI)：440.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.99(s,1H),8.69(s,1H),8.21(t,J=8.7Hz,1H),7.54-7.41(m,2H),7.26-7.15(m,1H),6.94(d,J=7.8Hz,1H),5.84(s,1H),5.03-4.98(m,1H),3.60-3.55(m,1H),3.14-3.00(m,1H),2.49-2.43(m,1H),2.39(d,J=5.1Hz,3H),2.10-1.84(m,2H),1.76-1.65(m,2H),1.64-1.54(m,1H),1.04(d,J=6.8,2.1Hz,6H)。

實施例34

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(4-{[(2-羥基乙基)胺基]二氧亞基-6-硫基}苯基)胺基]-1H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例8合成步驟替換相應原料製得化合物34。

MS m/z(ESI)：452.2[M+H]⁺。

實施例35

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(5-氰基嘧啶-2-基)胺基]-1H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例8合成步驟替換相應原料製得化合物35。

MS m/z(ESI)：356.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.21(s,1H),9.74(s,1H),8.94(s,2H),6.94(s,1H),5.79(s,1H),5.00(s,1H),3.62-3.55(m,1H),3.13-3.04(m,1H),2.48-2.38(m,1H),2.09-1.94(m,1H),1.97-1.86(m,1H),1.77-1.69(m,2H),1.64-1.59(m,1H),1.04(d,J=6.5Hz,6H)。

實施例36

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(5-甲醯胺基吡嗪-2-基)胺基]-2H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料和試劑製得化合物36。

MS m/z(ESI)：374.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 12.12(s,1H),10.14(s,1H),8.67(s,1H),8.47(s,1H),7.77(s,1H),7.40(s,1H),6.95(d,J=7.7Hz,1H),6.29(s,1H),5.04-4.99(m,1H),3.65-3.52(m,1H),3.13-3.04(m,1H),2.48-2.42(m,1H),2.09-1.99(m,1H),1.98-1.83(m,1H),1.78-1.71(m,2H),1.65-1.60(m,1H),1.04(d,J=6.6,2.4Hz,6H)。

實施例37

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[5-(甲醯胺基甲基)吡啶-2-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料和試劑製得化合物37。

MS m/z(ESI)：387.3[M+H]⁺。

實施例38

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-({4-[二氧亞基(丙醯基胺基)-6-硫基]苯基}胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料和試劑製得化合物38。

MS m/z(ESI)：464.2[M+H]⁺。

實施例39

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(4-氰基嘧啶-2-基)胺基]-2H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料和試劑製得化合物39。

MS m/z(ESI)：356.2[M+H]⁺。

實施例40

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[1-(甲基二氧亞基-6-硫基)六氫吡啶-4-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯

第一步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[1-(甲基二氧亞基-6-硫基)六氫吡啶-4-基]胺基}-1-(2-甲基丙-2-基)吡唑-3-基)環戊基酯40b

將化合物1-N-甲磺醯基-4-哌啶酮(178mg,1.0mmol)，1a(310mg,1.0mmol)，溶於二氯甲烷(10mL)中，加入乾燥的4A分子篩室溫攪拌1小時。加入冰乙酸(1滴)，氰基硼氫化鈉(124mg,2.0mmol)室溫反應過夜。向反應液中加入水(30mL)，用二氯甲烷(20mL×2)萃取。合併有機相並用無水Na₂SO₄乾燥，過濾，真空減壓濃縮得到化合物粗品。粗品藉由C18純化得到化合物40b(234mg,0.5mmol，產率：50%)。MS(ESI)m/z 470.3[M+H]

第二步

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-(5-{[1-(甲基二氧亞基-6-硫基)六氫吡啶-4-基]胺基}-2H-吡唑-3-基)環戊基酯40

根據實施例8合成步驟替換相應原料製得化合物40。

MS m/z(ESI)：414.3[M+H]⁺。

實施例41

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-[5-(1,2-二氮雜環己熳-3-基胺基)-2H-吡唑-3-基]環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物41。

MS m/z(ESI)：331.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 11.94(s,1H),9.51(s,1H),8.59(d,1H),7.54(d,J=9.1Hz,1H),7.44-7.35(m,1H),6.95(d,J=7.7Hz,1H),6.22(s,1H),5.05-4.98(m,1H),3.65-3.53(m,1H),3.11-3.02(m,1H),2.49-2.43(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.98-1.83(m,1H),1.80-1.67(m,2H),1.65-1.60(m,1H),1.04(d,J=6.7,2.0Hz,6H)。

實施例42

(丙-2-基胺基)甲烷酸-(1R,3S)-3-{5-[(5-氰基-4-甲基吡啶-2-基)胺基]-2H-吡唑-3-基}環戊基酯

根據實施例11合成步驟替換相應原料製得化合物42。

MS m/z(ESI)：369.2[M+H]⁺。

生物學評價

以下結合測試例進一步描述解釋本揭露，但這些實施例並非意味著限制本揭露的範圍。

測試例1.本揭露化合物對卵巢癌細胞(OVCAR3)抑制活性測試

表1. 實驗材料和儀器

實驗步驟

卵巢癌細胞OVCAR3使用10%FBS的RPMI 1640培養在37%，5% CO₂的細胞培養箱中培養。第一天，細胞鋪板在96-孔板中，鋪板細胞濃度為2500個細胞/孔，在培養箱中培養過夜。第二天進行化合物處理，化合物處理最高濃度為10uM，3倍稀釋，9個濃度，DMSO的終濃度為0.1%。細胞繼續在培養箱中培養7天後，使用Celltiter Glo assay kit(Promega)測試細胞活力，測試方法與試劑盒提供的操作方法保持一致。使用GraphPad Prism 8處理數據並計算IC₅₀。

計算公式Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))。

X：化合物濃度的對數值；Y：%抑制。

本揭露化合物對OVCAR3的IC₅₀(nM)，A

400nM，400nM<B

600nM，600nM<C

1000nM。

表2. 本揭露化合物的對OVCAR3的IC₅₀(nM)

測試例2.本揭露化合物對細胞週期蛋白-依賴性激酶(CDK1,2,9)活性檢測。

2.1 實驗材料及儀器(見表3)

表3. 實驗材料和儀器

2.2 實驗步驟

使用Echo 550將化合物稀釋液轉移到測定板的每個孔中(784075，Greiner)。密封測定板，以1000g離心測定板1分鐘；在1x激酶緩衝液(40mM Tris-HCl,pH7.4,20mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,50uM DTT)中準備2x酶，將2.5μl 2x酶加入384孔測定板，將板在1000g下離心30s，在室溫放置10分鐘。在1x激酶緩衝液中製備2x受質和ATP混合物，加入2.5μl 2x受質和ATP混合物開始反應。將板以1000g離心30秒，密封測定板，室溫反應1小時。加入4μl ADP-Glo試劑，在室溫下孵育40分鐘，再加入8μl激酶檢測試劑，在室溫下孵育40分鐘。

在Envision 2104讀板器上讀取每個孔發光信號。

抑制百分率計算如下：抑制百分率=100-(cmpd信號-Ave_PC信號)/(Ave_VC信號-Ave_PC信號)×100。cmpd信號：化合物信號；Ave_PC信號：陽性對照信號平均值；Ave_VC信號：載體組信號平均值。

使用GraphPad 8.0藉由將抑制百分率值和化合物濃度的對數擬合為非線性回歸(劑量響應-可變斜率)來計算IC₅₀。Y=底部+(頂部-底部)/(1+10^((LogIC₅₀-X)*斜率))，其中X：抑制劑濃度的對數；Y：%抑制。

表4. 本揭露化合物對CDK1/B、CDK2/Cyclin E、CDK9/Cyclin T1的IC₅₀值

測試例3.本發明實施例8和實施例9的藥物代謝動力學測試

以Balb/c nude mouse為受試動物，應用LC/MS/MS法測定其灌胃給予實施例8和實施例9後不同時刻血漿中的藥物濃度。研究本發明的化合物在Balb/c nude mouse體內的藥物代謝動力學行為，評價其藥動學特徵。

3.1 實驗動物

健康的雌性Balb/c nude mouse2隻，購自集萃藥康公司。

3.2 藥物配製

稱取適量的樣品，以5% DMSO/40% PEG400/55% saline為溶媒，製得7.5mg/mL溶液。

3.3 給藥

健康的雌性Balb/c nude mouse 2隻，禁食一夜後分別灌胃給藥，劑量為75mg/kg，給藥體積10mL/kg。

於給藥前及給藥後0.25、0.5、1、2、4、8、24小時採血，置於肝素化抗凝試管中，離心分離血漿，低溫保存。用LC/MS/MS法測定血漿中的待測化合物含量。血漿樣品經過沉澱蛋白預處理後進行分析。

3.4 藥物代謝動力學參數結果

表5. 本揭露化合物的藥物代謝動力學參數如下：

。

Claims

一種式I所示的化合物或其可藥用的鹽，

其中，該R¹和R²各自獨立地選自氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基，該烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基視需要被一個或多個獨立地選自R^1A的取代基取代；

該R^1A選自鹵素、羥基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、雜環烷基或NR'(R")，該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基或雜環烷基視需要被一個或者多個獨立地選自R⁵的取代基取代；

或者該R¹和R²與其共同連接的氮原子形成3至7員的雜環烷基，該雜環烷基視需要被一個或者多個獨立地選自R^1B的取代基取代；

該R^1B選自鹵素、氰基、羥基、胺基、烷基或烷氧基；

該R³選自H、COR'或
；

該環A選自5至6員的芳基、5至6員的雜芳基、環烷基或雜環烷基；

該R⁴各自獨立地選自氫、鹵素、氰基、硝基、羥基、烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基、SR'、SOR'、SO₂R'、-NHSO₂R'、SO₂NR'(R")、NR'(R")、 COR'、-NHCOR'、COOR'、CONR'(R")、-(P=O)R'(R")、
或側氧基，該烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個獨立地選自R^4A的取代基取代；

或者，兩個相鄰的R⁴與環A一起形成視需要被一個或多個獨立地選自R^4A取代的
或
；

該R^4A選自鹵素、氰基、硝基、羥基、烯基、炔基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基、雜芳基、SR'、SOR'、SO₂R'、-NHSO₂R'、SO₂NR'(R")、NR'(R")、COR'、-NHCOR'、 COOR'、CONR'(R")、-(P=O)R'(R")或
，該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、芳基或雜芳基視需要被一個或者多個獨立地選自R⁸的取代基取代；

該X獨立地選自O或S；

該R⁵選自鹵素、羥基、烷基、氰基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基或NR'(R")；

該R⁶和R⁷各自獨立地選自氫、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基或雜環烷基；

該R⁸選自鹵素、羥基、氰基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基或NR'(R")；

該R'和R"各自獨立地選自氫或烷基；

該n選自1、2、3、4或5。
如請求項1所述的化合物或其可藥用的鹽，其為式II所示化合物或其可藥用的鹽，

其中，該R¹、R²、R³、R⁴和n分別如請求項1中定義。
如請求項1所述的化合物或其可藥用的鹽，其為式III或IV所示化合物或其可藥用的鹽，

其中，該R¹、R²、R⁴和n分別如請求項1中定義。
如請求項1至3中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A選自苯基、五員含氮雜芳基或六員含氮雜芳基；較佳吡啶基、嘧啶基、哌啶基、咪唑基、吡咯基或吡唑基；最佳吡啶基。
如請求項1至3中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A為I-1，
，該G¹、G²、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴或N，其中，G¹、G²、G³、G⁴和G⁵中至少有一個為CR⁴；或

環A為I-2，
，該G¹、G2、G³和G⁴各自獨立地選自CR⁴或N或NR⁴，該R⁴如請求項1中定義。
如請求項5所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，環A選自I-3至1-14，

其中，G¹、G²、G³、G⁴和G⁵各自獨立地選自CR⁴，該R⁴如請求項1中定義。
如請求項1至4中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R¹選自氫、烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基；較佳氫、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6羥烷基、3至7員的環烷基或3-7員的雜環烷基，更佳氫、C_1-3烷基、C_1-3鹵烷基；最佳氫。
如請求項1至5中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R²選自烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基，該烷基、鹵烷基、羥烷基、環烷基或雜環烷基視需要被一個或多個獨立地選自R^1A的取代基取代，該R^1A選自鹵烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、雜環烷基或NR'(R")，該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、雜環烷基視需要被一個或者多個R⁵取代；

較佳地，該R²選自C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6羥烷基、3至7員的環烷基或3至7員的雜環烷基，該C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6羥烷基、3至7員的環烷基或3至7員的雜環烷基視需要被一個或多個獨立地選自R^1A的取代基取代，該R^1A選自鹵素或C_1-6烷基；

更佳地，該R²選自甲基、乙基、異丙基、第三丁基、環丙基、環丁基、環戊基，該環丙基、環丁基、環戊基被一個或多個R^1A取代，該R^1A選自甲基、乙基、異丙基；

特別佳地，該R²選自異丙基或甲基環丙基。
如請求項1至2、4至8中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R³選自
；其中X為O，該述R⁶和R⁷各自獨立地選自氫、C_1-6烷基，較佳氫、甲基、乙基。
如請求項1至9中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，各個R⁴各自獨立地選自氫、氰基、鹵素、羥基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、雜芳基、SO₂R'、 -NHSO₂R'、COR'、-NHCOR'、COOR'、CONR'(R")、或
；該烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、雜芳基視需要被一個或多個R^4A取代；

該R^4A選自鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、羥烷基、環烷基、雜環烷基、環烷基氧基、雜環烷基氧基、SO₂R'、-NHSO₂R'、COR'、-NHCOR'、 COOR'、CONR'(R")、或
，

該R'和R"分別如請求項1中定義。
如請求項1至9中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R⁴各自獨立地選自氫、氰基或鹵素；

或者，該R⁴各自獨立地選自氫、COR'、-NHSO₂R'、SO₂R'、
；

或者，各個R⁴各自獨立地選自氫、烷基、羥烷基、該烷基視需要被一個或者多個R^4A取代，該R^4A選自鹵素、氰基、烷氧基、SO₂R'、
；

或者，各個R⁴各自獨立地選自氫、烷氧基、雜環烷基氧基，較佳C_1-6烷氧基或3至7員的雜環烷基氧基；

該R'和R"分別如請求項1中定義。
如請求項1至11中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，該R¹為氫，該R²選自異丙基或甲基環丙基。
如請求項1至12中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，中，該R'和R"各自獨立地選自氫或C_1-6烷基，較佳氫或甲基、乙基。
如請求項3至8、10至13中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，該環A為苯基；

該R⁴各自獨立的選自氫、鹵素、-NHSO₂R'或SO₂NR'(R")；

該R¹和R²各自獨立地選自氫、烷基、鹵烷基；

該R'和R"選自氫或C_1-6烷基；

該n選自1、2、3、4或5；

較佳地，該R⁴各自獨立的選自氫、鹵素或SO₂NR'(R")；

該R¹和R²各自獨立地選自氫或C_1-6烷基；

該R'和R"選自氫或C_1-3烷基；

該n選自1、2、3、4或5。
如請求項3至14中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，該
選自
、
或
，較佳
。
一種如下所示的化合物或其可藥用的鹽，其選自：
一種如請求項1至16中任一項所述的化合物的同位素取代物；較佳地，該同位素取代物為氘原子取代。
一種醫藥組成物，包括至少一種治療有效量的如請求項1至16中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽、如請求項17所述的同位素取代物以及藥學上可接受的賦形劑。
一種如請求項1至16中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽、如請求項17所述的同位素取代物或如請求項18所述的醫藥組成物在製備用於預防和/或治療與蛋白依賴性激酶相關疾病的藥物中的用途，該蛋白依賴性激酶較佳CDK2，該與蛋白依賴性激酶相關疾病較佳細胞增殖性疾病、癌症或免疫性疾病。
一種如請求項1至16中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽、如請求項17所述的同位素取代物或如請求項18所述的醫藥組成物在製備用於預防和/或治療與細胞週期蛋白相關疾病的藥物中的用途，該細胞週期蛋白較佳細胞週期蛋白E，更佳細胞週期蛋白E1、細胞週期蛋白E2，該與細胞週期蛋白相關疾病較佳細胞增殖性疾病、癌症或免疫性疾病。
一種如請求項1至16中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽、如請求項17所述的同位素取代物或如請求項18所述的醫藥組成物在製備用於預防和/或治療癌症的藥物中的用途，該癌症選自乳腺癌、卵巢癌、***癌、黑色素瘤、腦瘤、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、結直腸癌、肺癌、腎癌、皮膚癌、成膠質細胞瘤、神經母細胞瘤或肉瘤。
一種如請求項3至9、11至16中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽或如請求項17所述的同位素取代物的製備方法，其包括式V所示化合物在酸性條件下脫除胺基保護基PG的步驟，

其中，R¹、R²、R⁴、n分別如請求項1中所定義，PG為胺基保護基，較佳為第三丁基、乙醯基、三氟乙醯基、三苯甲基、苄基、甲醯基，最佳為第三丁基。
一種式V所示的化合物，

其中，R¹、R²、R⁴、n分別如請求項1中所定義，PG為胺基保護基，較佳為第三丁基、乙醯基、三氟乙醯基、三苯甲基、苄基、甲醯基，最佳為第三丁基。