TW202317100A

TW202317100A - 包含ｋｒａｓｇ１２ｃ抑制劑的藥物組合及其用於治療癌症之用途

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Publication number: TW202317100A
Application number: TW111123304A
Authority: TW
Inventors: 賽斯吉婭瑪麗亞布拉克曼; 席蒙娜扣泰斯塔; 曉鳴崔; 坎特魯本德; 安娜法拉戈; 馬克吉史帕奇; 波塔黛安娜葛羅斯; 在淵金; 凱薩琳萊柏蘭克; 艾德維莉莉安珍洛提維斯; 雷奈馬曲爾; 羅伯馬; 克里斯托夫穆拉; 巴斯可萊戈利爾; 阿尼魯德普拉哈拉德; 納丁施耐德; 羅文史特林格; 史戴芬史吐滋; 安卓維波; 尼克拉斯華林
Original assignee: 瑞士商諾華公司
Priority date: 2021-06-23
Filing date: 2022-06-22
Publication date: 2023-05-01
Also published as: AU2022299651A9; KR20240024938A; AU2022299651A1; BR112023026408A2; CA3220619A1; WO2022269525A1; IL308279A

Abstract

本發明關於藥物組合，其包含KRAS G12C抑制劑和一或多種選自以下的治療劑：靶向MAPK通路的藥劑或靶向並行通路的藥劑；包含該藥物組合的藥物組成物；以及使用此類組合和組成物治療或預防癌症或腫瘤之方法，特別地其中該癌症或腫瘤係KRAS G12C突變型。

Description

包含KRAS　G12C抑制劑的藥物組合及其用於治療癌症之用途

本發明關於KRAS G12C抑制劑及其與一種或兩種另外的治療活性劑組合用於治療癌症，特別地KRAS G12C突變型癌症（例如，肺癌、非小細胞肺癌、結直腸癌、胰臟癌或實性瘤）之用途。本發明關於藥物組合，其包含 (i) KRAS G12C抑制劑，如化合物A或其藥學上可接受的鹽，以及第二治療劑，該第二治療劑選自靶向MAPK通路或並行通路（如PI3K/AKT通路）的藥劑。第二治療劑可以選自EGFR抑制劑、SOS抑制劑、SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、Raf抑制劑、ERK抑制劑、MEK抑制劑、AKT抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑、CDK4/6抑制劑、FGFR抑制劑及其組合。本發明還關於三重組合，該三重組合包含：KRAS G12C抑制劑，如化合物A或其藥學上可接受的鹽；和為SHP2抑制劑的第二治療劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）；以及第三治療劑，視需要其中該第三治療劑可以選自EGFR抑制劑、SOS抑制劑、Raf抑制劑、ERK抑制劑、MEK抑制劑、AKT抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑、CDK4/6抑制劑和FGFR抑制劑。

本發明還關於包含該組合的藥物組成物；以及使用此類組合和組成物治療或預防癌症或實性瘤，特別地KRAS G12C突變型癌症或KRAS G12C實性瘤之方法。

癌症的生長係由多種多樣複雜的機制驅動的。一些癌症不可避免地會對給定療法產生抗性。抑制MAPK通路誘導了回饋機制和通路重新佈線，導致其在隨後重新激活。例如，一種常見機制係激活受體酪胺酸激酶（RTK）。

另外，儘管靶向療法和免疫療法最近取得了成功，但一些癌症，特別是轉移性癌症，在很大程度上仍然無法治癒。

KRAS癌蛋白係具有作為細胞內傳訊通路（如MAPK、PI3K和Ral通路）調節劑的至關重要角色的GTP酶，該等傳訊通路涉及增殖、細胞生存和腫瘤發生。KRAS的致癌基因激活主要通過密碼子12的錯義突變發生。在大約30%的所有人類癌症中均發現了 KRAS功能獲得性突變。 KRASG12C突變係特異的亞突變，盛行於大約13%的肺腺癌、4%（3%-5%）的結腸腺癌和更小部分的其他癌症類型。

在正常細胞中，KRAS在無活性GDP束縛態與活性GTP束縛態之間交替。密碼子12處 KRAS的突變（如G12C）損害GTP酶活化蛋白（GAP）刺激的GTP水解。因此在這種情況下，KRAS G12C從GTP到GDP形式的轉化會非常緩慢。結果KRAS G12C轉變成活性GTP束縛態，因此驅動致癌基因傳訊。

CDKN2A，也稱為細胞週期蛋白依賴性激酶抑制劑2A，係編碼INK4家族成員p16（或p16INK4a）和p14arf的基因，該等成員藉由調節細胞週期充當腫瘤抑制因子。p16抑制細胞週期蛋白依賴性激酶4和6（CDK4和CDK6），從而激活視網膜母細胞瘤（Rb）蛋白家族，該等蛋白阻斷從G1期到S期的傳遞。p14ARF（在小鼠中稱為p19ARF）激活p53腫瘤抑制因子。CDKN2A被認為是繼p53之後在癌症中第二常見的失活基因。

CDKN2A突變已在以下癌症中均有描述，如黑色素瘤、胃淋巴瘤、柏基特氏淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、口腔癌、胰臟癌、非小細胞肺癌、食道鱗狀細胞癌、胃癌、結直腸癌、上皮性卵巢癌和***癌。

PIK3CA基因（磷脂醯肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亞基α）係編碼p110的基因，p110參與細胞的增殖、生長、分化、運動和生存。PIK3CA基因突變以更高的速率產生異常p110蛋白。在乳癌、卵巢癌、肺癌、胃部癌症、胃癌和腦癌中均已發現PIK3CA基因突變。

肺癌仍然是全世界最常見的癌症類型並且是包括美國在內的許多國家癌症死亡的主要原因。NSCLC占所有肺癌診斷的約85%。在大約25%的肺腺癌患者中檢測到 KRAS突變（Sequist等人 2011）。它們最常見於密碼子12處，其中 KRAS G12C突變在腺癌和鱗狀NSCLC中都是最常見的（總體上占40%）（Liu等人 2020）。 KRAS突變的存在預示著較差的生存期並且與對EGFR TKI治療的反應性降低有關。

KRAS G12C突變型NSCLC患者的標準護理治療由基於鉑的化學療法和免疫檢查點抑制劑組成。索托拉西布（Sotorasib，一種KRAS G12C抑制劑）最近獲得了FDA加速批准，用於治療此適應症和接受過至少一次先前全身性療法的成人患者，目前正在進行進一步的驗證性試驗。索托拉西布於2021年5月獲得美國FDA（食品和藥物管理局）的加速批准，並於2022年1月獲得歐盟委員會（EC）的有條件標記授權，用於KRAS G12C突變型局部晚期或轉移性非小細胞肺癌（NSCLC）患者。在該患者群體中，在一項126名患者的第2期單臂研究中，索托拉西布的ORR為37%（95% CI 28.6-46.2），中位DOR為11.1個月，中位PFS為6.8個月，並且中位OS為12.5個月（Skoulidis等人, N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌]; 384:2371-81）。另一種KRAS G12C抑制劑阿達格拉西布（adagrasib）也在KRAS G12C突變型惡性腫瘤的臨床開發中，在患有NSCLC的患者中初步ORR為45%（Janne等人, 2019, 於2019年10月28日在AACR-NCI-EORTC國際分子靶標會議（AACR-NCI-EORTC International Conference on Molecular Targets）上發表）。

使用免疫檢查點抑制劑的用於NSCLC的免疫療法已經表明係有前景的，其中一些NSCLC患者經歷了持續數年的持久疾病控制。然而，此類長期非進展係不常見的，並且迫切需要可以增加對療法反應並實現療法持久緩解的患者比例的治療策略。

結直腸癌（CRC）係美國第四大最常被診斷的癌症，也是癌症相關死亡的第二大原因。2019年美國新發CRC病例大約為15萬例，而2020年歐盟預計有超過30萬名患者被診斷為CRC（歐洲癌症資訊系統2020）。儘管觀察到CRC的總發病率有所改善，但近年來50歲以下患者的發病率增加（Bailey等人 2015），作者估計，到2030年，20-34歲患者中結腸和直腸癌的發病率可能分別增加90%和約124%。轉移性CRC的全身性療法包括單獨使用或組合使用的各種藥劑，包括化學療法，如5-氟尿嘧啶/亞葉酸、卡培他濱（capecitabine）、奧沙利鉑（oxaliplatin）和伊立替康（irinotecan）；抗血管生成劑，如貝伐單抗（bevacizumab）和雷莫蘆單抗（ramucirumab）；抗EGFR劑，包括針對野生型KRAS/NRAS癌症的西妥昔單抗（cetuximab）和帕尼妥木單抗（panitumumab）；以及免疫療法，包括納武單抗（nivolumab）和派姆單抗（pembrolizumab）。儘管有多種積極療法，轉移性CRC仍然無法治癒。儘管誤配修補（MSI高）缺陷型CRC對免疫檢查點抑制劑療法表現出高反應率，但誤配修補熟練型CRC卻沒有表現出高反應率。KRAS突變型CRC典型地是誤配修補熟練型，並且不是抗EGFR療法的候選者，因此這種CRC亞型尤其需要改善的療法。

腫瘤特徵數據顯示，除NSCLC和CRC外，還有一部分實性瘤具有KRAS G12C突變。 KRAS G12C存在於大約1%-2%的惡性實性瘤中，包括大約1%的所有胰臟癌（Biernacka等人 2016, Zehir等人 2017）。在闌尾癌、小腸癌、肝膽癌、膀胱癌、卵巢癌和原發部位不明的癌症中也發現了 KRAS G12C突變（Hassar等人, N Engl Med [新英格蘭醫學雜誌] 2021 384;2 185-187）。

目前有幾種靶向療法正在進行臨床測試，旨在藉由抑制RAS通路來治療 KRAS突變患者。然而，目前該等療法對具有KRAS G12C突變的腫瘤的益處仍不確定，因為並非所有患者都有反應，並且在一些情況下，所報告的反應持續時間很短，這可能是由於出現了抗性，該抗性至少部分是由破壞抑制劑結合和下游通路的重新激活的RAS基因突變介導的。

用KRAS G12C抑制劑治療的大多數患者最終都會對單一藥劑療法產生獲得性抗性。例如，在阿達格拉西布研究中納入的38名患者：27名非小細胞肺癌患者、10名結直腸癌患者和1名闌尾癌患者，在17名患者（占群組的45%）中檢測到對阿達格拉西布的推定抗性機制，其中7名（占群組的18%）有多種重合機制。獲得性KRAS改變包括G12D/R/V/W、G13D、Q61H、R68S、H95D/Q/R、Y96C和KRASG12C等位基因的高水平擴增。獲得性旁路抗性機制包括MET擴增；NRAS、BRAF、MAP2K1、和RET中的激活突變；涉及ALK、RET、BRAF、RAF1、和FGFR3的致癌性融合；以及NF1和PTEN中的功能喪失性突變（Awad等人, Acquired Resistance to KRASG12C Inhibition in Cancer [癌症中對KRASG12C抑制的獲得性抗性], N Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2021; 384:2382-93）。Tanaka等人（Cancer Discov [癌症發現] 2021;11:1913-22）描述了影響開關-II袋的新型KRAS Y96D突變，阿達格拉西布和其他非活性KRAS G12C抑制劑與該突變結合，干擾了關鍵的蛋白質-藥物相互作用，並在工程化和患者源性KRASG12C癌症模型中賦予該等抑制劑抗性。

因此，需要另外的治療選擇來克服在使用KRAS抑制劑（如阿達格拉西布或索托拉西布）治療期間出現的抗性機制。

因此，對於患有以下癌症的患者（包括晚期和/或轉移性癌症，包括肺癌（包括NSCLC）、結直腸癌、胰臟癌和實性瘤），尤其是當癌症或實性瘤具有KRAS G12C突變時，新治療選擇的醫療需求仍然是迫切的。還重要的是提供用於不治之症，特別是用於患有 KRAS G12C突變型腫瘤的患者的潛在有益的新穎療法，該等患者已接受了針對其適應症的標準護理療法但失敗了，或者對於批准的療法不耐受或不具有資格，並且因此具有有限的治療選擇。

本發明為患有癌症（包括晚期和/或轉移性癌症）的患者提供了新的治療選擇，並且特別尋求改善患有 KRAS G12C驅動的癌症的患者的結果。

本文提供了化合物和化合物的組合，及其在治療癌症（尤其是當癌症或實性瘤具有KRAS G12C突變時）的方法中之用途，該癌症包括肺癌（包括NSCLC）、結直腸癌、胰臟癌和實性瘤。本發明還提供了用於不治之症，特別是用於患有 KRAS G12C突變型腫瘤的患者的潛在有益的新穎療法，該等患者已接受了針對其適應症的標準護理療法但失敗了，或者對於批准的療法不耐受或不具有資格，並且因此具有有限的治療選擇。

另外，本發明還提供了單獨的或與一或多種另外的治療劑組合的化合物A，其用於在治療對其他療法產生抗性的癌症患者之方法中使用，該等其他療法如先前用其他KRAS抑制劑（如阿達格拉西布和索托拉西布）治療；更較佳的是先前用索托拉西布治療。

化合物A係KRAS G12C的選擇性共價不可逆抑制劑，利用與KRASG12C的獨特相互作用表現出新穎的結合模式。值得注意的是，化合物A將KRAS G12C捕獲在GDP結合的非活性狀態，同時避免了與H95（公認的抗性途徑）直接相互作用（Awad-MM等人, New Engl J Med [新英格蘭醫學雜誌] 2021;384:2382-2392）。化合物A強效抑制KRAS G12C H95Q（在臨床試驗仲介導對阿達格拉西布抗性的雙突變體）。

化合物A在臨床前模型中顯示出強效的抗腫瘤活性和有利的藥物動力學特性。化合物A係口服生物可利用的，在預測以賦予抗腫瘤活性的範圍內實現了暴露，並且耐受性良好。

KontRASt-01研究（NCT04699188）的初步數據（Ib期）表明，化合物A係一種選擇性的共價和口服生物可利用的KRASG12C抑制劑，基於患有KRAS G12C突變型實性瘤的患者的初步臨床數據，在其推薦劑量下顯示出抗腫瘤活性、高全身暴露以及良好的安全性。

KRAS G12C抑制劑被專門設計用於抑制KRAS G12C。然而，許多腫瘤具有KRAS WT、HRAS和NRAS蛋白，該等蛋白不受KRAS G12C抑制劑的抑制。例如，在KRAS G12C抑制劑治療後，重新激活的RTK可以經由該等蛋白進入MAPK通路，從而抵消抗腫瘤活性。同樣，許多RTK和RAS蛋白直接激活並行通路，例如PI3K/AKT通路。

本文中的數據和實例表明，在組合療法中向KRAS G12C抑制劑添加靶向MAPK通路或並行通路（例如PI3K/AKT通路）的另一種治療活性劑有潛力增加抗腫瘤反應的深度和持久性。

例如，SHP2抑制劑有潛力與KRAS G12C抑制劑（如化合物A）發揮協同作用。對SHP2的抑制會將KRAS突變型癌症細胞系的生長抑制，這係部分地藉由將KRAS庫轉移到非活性載入GDP的狀態。由於化合物A僅與GDP結合的KRASG12C結合，所以鑒於不可逆化合物A結合的靶庫增加，預測組合的SHP2和KRASG12C的抑制作用係協同的。

如實例中所見，在細胞活力測定中，在與單獨的KRAS G12C抑制劑組合的PI3K抑制劑存在下，或在SHP2抑制劑存在下，獲得了最高的協同作用得分。因此，本發明還提供了如本文所述之三重或四重組合。

如實例中所見，化合物A（KRAS G12C抑制劑）在異種移植模型中顯示出深部腫瘤，特別是在具有選自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A的一或多個突變的癌症異種移植模型中。KRAS G12C抑制劑作為單一藥劑的抗腫瘤反應在具有每個所測試的組合配偶體的情況下都得到了改善，其中一些腫瘤甚至在組合治療的情況下消退。三重組合和四重組合似乎進一步改善了反應。

總之，可以看出，具有其獨特的特性、耐受性和安全性的化合物A單獨時或與本文所述之一或多種（例如，一種、兩種或三種）治療劑組合時，可以特別適用於治療癌症，特別是本文所述之癌症。

特別地，KRAS G12C抑制劑（如化合物A）與MAPK通路的其他抑制劑或PI3K/AKT通路的抑制劑的組合具有進一步增強抗腫瘤反應和克服潛在抗性的潛力。此類組合療法可用於治療癌症，特別是由KRAS G12C突變驅動的癌症。第二治療劑可以選自EGFR抑制劑、SOS抑制劑、SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、Raf抑制劑、ERK抑制劑、MEK抑制劑、AKT抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑、CDK4/6抑制劑及其組合。

因此，本發明之組合和方法還可以藉由重新激活繞過KRAS G12C以通過WT KRAS、NRAS和/或HRAS發出信號的RTK-MAPK通路，為例如對KRAS G12C抑制劑具有獲得性抗性的患者提供臨床益處。另外，EGFR的抑制靶向KRAS上游的KRAS傳訊通路，並且可能增強KRAS G12C抑制劑（如化合物A）在 KRAS G12C突變型癌症中之抗腫瘤活性。待藉由本發明之組合和方法治療的癌症包括具有選自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A及其組合中的一個、兩個或三個突變的癌症或實性瘤；例如，具有KRAS G12C和CDKN2A突變的癌症；以及具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突變的癌症。

因此，本發明還提供了藥物組合，其包含KRAS G12C抑制劑（如化合物A或其藥學上可接受的鹽），以及至少一種另外的治療活性劑。另外的治療活性劑可為靶向MAPK通路的藥劑或靶向並行通路的藥劑。

因此，本發明還提供了藥物組合，其包含KRAS G12C抑制劑（如化合物A或其藥學上可接受的鹽）、以及選自由以下組成之群組的治療活性劑：EGFR抑制劑、SOS抑制劑、SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、Raf抑制劑、ERK抑制劑、MEK抑制劑、AKT抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑、CDK4/6抑制劑及其組合。

因此，本發明還提供了藥物組合，其包含KRAS G12C抑制劑（例如化合物A或其藥學上可接受的鹽）、SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）以及選自由以下組成之群組的另一種治療活性劑：EGFR抑制劑（如西妥昔單抗、帕尼單抗（panitumab）、阿法替尼（afatinib）、拉帕替尼（lapatinib）、厄洛替尼（erlotinib）、吉非替尼（gefitinib）、奧西美替尼（osimertinib）或納紮替尼（nazartinib））、SOS抑制劑（如BAY-293、BI-3406或BI-1701963）、Raf抑制劑（如貝伐非尼（belvarafenib）或LXH254（萘普拉非尼（naporafenib）））、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布（rineterkib））、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼（ulixertinib））、MEK抑制劑（如匹瑪舍替（pimasertib）、PD-0325901、塞洛美替尼（selumetinib）、曲美替尼（trametinib）、比尼替尼（binimetinib）或鈷美替尼（cobimetinib））、AKT抑制劑（如卡帕沙替尼（capivasertib）（AZD5363）或依帕替尼（ipatasertib））、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布（buparlisib）、阿培利司（alpelisib））、mTOR抑制劑（如依維莫司（everolimus）或坦羅莫司（temsirolimus））和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼（ribociclib）、帕博西尼（palbociclib）或阿貝西利（alemaciclib））。

本發明還提供了藥物組合，其包含1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮，其具有結構

（化合物A），或其藥學上可接受的鹽，

以及選自以下的第二治療活性劑：EGFR抑制劑（如西妥昔單抗、帕尼單抗、厄洛替尼、吉非替尼、奧西美替尼或納紮替尼）、SOS抑制劑（如BAY-293、BI-3406或BI-1701963）、Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼））、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼）、MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼）、AKT抑制劑（如卡帕沙替尼（AZD5363）或依帕替尼）、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司）、mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司）和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利）。

本發明還提供了藥物組合，其包含化合物A或其藥學上可接受的鹽、以及選自以下的第二治療活性劑：Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼））、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼）、MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼）、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司）、mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司）和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利）。

在本發明之實施方式中，第二治療活性劑可以選自FGFR抑制劑，如英非替尼（infigratinib）（BGJ398）、培美加替尼（pemigatinib）、耶爾替尼（erdafitinib）、德拉贊蒂尼（derazantinib）；以及福提巴替尼。本發明還提供了藥物組合，其包含 (a) 化合物A或其藥學上可接受的鹽，(b) SHP2抑制劑（如TNO 155或其藥學上可接受的鹽），

以及 (c) 選自以下的第三治療活性劑：Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼））、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼）、MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼）、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司）、mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司）和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利）。

在本發明之實施方式中，第三治療活性劑可以選自FGFR抑制劑，如英非替尼（BGJ398）、培美加替尼、耶爾替尼、德拉贊蒂尼；以及福提巴替尼。

本發明還提供了藥物組合，其包含 (a) 化合物A或其藥學上可接受的鹽，(b) TNO 155或其藥學上可接受的鹽，

本發明還提供了本發明之組合，其包含化合物A或其藥學上可接受的鹽，以及選自以下的第二藥劑： (i) LXH254（萘普拉非尼）或其藥學上可接受的鹽； (ii) 曲美替尼、其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，例如其DMSO溶劑化物； (iii) LTT462（裡內特基布）或其藥學上可接受的鹽，例如其HCl鹽； (iv) BYL719（阿培利司）或其藥學上可接受的鹽； (v) LEE011或其藥學上可接受的鹽，例如其琥珀酸鹽；和 (vi) 依維莫司（RAD001）、或其藥學上可接受的鹽。

本發明還提供了本發明之組合，其包含 (a) 化合物A或其藥學上可接受的鹽，(b) TNO 155或其藥學上可接受的鹽，以及選自以下的第三藥劑： (i) 萘普拉非尼（LXH254）或其藥學上可接受的鹽； (ii) 曲美替尼、其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，例如其DMSO溶劑化物； (iii) 裡內特基布（LTT462）或其藥學上可接受的鹽，例如其HCl鹽； (iv) 阿培利司（BYL719）或其藥學上可接受的鹽； (v) 瑞博西尼（LEE011）或其藥學上可接受的鹽，例如其琥珀酸鹽；和 (vi) 依維莫司（RAD001）、或其藥學上可接受的鹽。

應當理解，本文提到的「本發明之組合」或「本發明之一或多種組合」旨在單獨地包括該等藥物組合中的每一種並且還旨在包括該等組合中的所有作為一組。

特別地，提到「本發明之組合」旨在包括KRASG12C抑制劑和SHP2抑制劑的組合（例如化合物A和TNO155）；KRASG12C抑制劑和PI3K抑制劑的組合（例如化合物A和阿培利司（BYL719））；KRASG12C抑制劑和CDK4/6抑制劑（例如化合物A和瑞博西尼）。

三重組合也包括在「本發明之組合」的定義中。較佳的實施方式包括 (i) 化合物A、TNO155和阿培利司的組合，以及 (ii) 化合物A、TNO155和瑞博西尼的組合。

本發明提供了該等藥物組合，其用於在治療如本文所述之癌症中使用。

本發明之治療方法的功效可藉由本領域所熟知的方法確定，例如根據RECIST v.1.1確定最佳總體反應（BOR）、總體反應率（ORR）、反應持續時間（DOR）、疾病控制率（DCR）、無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）。因此，本發明提供了本發明之藥物組合，其改善了KRAS G12C抑制劑療法，例如，如藉由根據RECIST v.1.1得出的最佳總體反應（BOR）、總體反應率（ORR）、反應持續時間（DOR）、疾病控制率（DCR）、無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）中一項或多項的增加所衡量的。

在本發明之組合的另一個實施方式中，化合物A或其藥學上可接受的鹽、第二治療活性劑和第三治療活性劑（如果存在）係在分開的配製物中。

在另一個實施方式中，本發明之組合用於同時或依序（以任何順序）投與。

在另一個實施方式中係用於治療或預防有需要的受試者的癌症之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的本發明之組合。

在本發明之實施方式中，待治療的癌症或腫瘤選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。

在本發明之實施方式中，待治療的癌症或腫瘤選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌、膽管癌症和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌、十二指腸乳頭癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。

在本發明之實施方式中，待治療的癌症或腫瘤選自非小細胞肺癌、結直腸癌、膽管癌症、卵巢癌、十二指腸乳頭癌和胰臟癌。

原發部位不明但示出KRAS G12C突變的癌症也可以得益於用本發明之方法進行治療。

在本發明之方法的實施方式中，癌症選自非小細胞肺癌、結直腸癌、胰臟癌和實性瘤。

在方法的另外的實施方式中，癌症係實性瘤。

在方法的另外的實施方式中，癌症係結直腸癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係非小細胞肺癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係胰臟癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係實性瘤。

在方法的另外的實施方式中，癌症係闌尾癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係小腸癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係食道癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係肝膽癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係膀胱癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係卵巢癌。

在方法的另外的實施方式中，癌症係膽管癌症。

在方法的另外的實施方式中，癌症係十二指腸乳頭癌。

在另外的實施方式中，本發明提供了用於在製造用於治療選自以下的癌症的藥物中使用的本發明之組合：非小細胞肺癌、結直腸癌、胰臟癌和實性瘤，視需要其中該癌症或實性瘤係KRAS G12C突變型。在另一個實施方式中係藥物組成物，該藥物組成物包含本發明之組合。

在另外的實施方式中，藥物組成物進一步包含如本文所述之一或多種藥學上可接受的賦形劑。 KRAS G12C抑制劑

可用於本發明之組合和方法的KRAS G12C抑制劑之實例包括化合物A、索托拉西布（美商安進公司（Amgen））、阿達格拉西布（Mirati公司）、D-1553（益方生物（InventisBio））、BI1701963（勃林格公司（Boehringer））、GDC6036（羅氏公司（Roche））、JNJ74699157（J&J公司）、X-Chem KRAS（X-Chem公司）、LY3537982（禮來公司）、BI1823911（勃林格公司）、AS KRAS G12C（亞盛藥業公司（Ascentage Pharma））、SF KRAS G12C（賽諾菲公司（Sanofi））、RMC032（革命藥物公司（Revolution Medicine））、JAB-21822（加科思製藥公司（Jacobio Pharmaceuticals））、AST-KRAS G12C（艾力斯製藥公司（Allist Pharmaceuticals））、AZ KRAS G12C（阿斯利康公司（Astra Zeneca））、NYU-12VC1（紐約大學（New York University））、和RMC6291（革命藥物公司）或其藥學上可接受的鹽。

KRAS G12C抑制劑還包括以下詳述的化合物：「KRASG12C抑制劑」係選自詳述於以下中的化合物的化合物：WO 2013/155223、WO 2014/143659、WO 2014/152588、WO 2014/160200、WO 2015/054572、WO 2016/044772、WO 2016/049524、WO 2016164675、WO 2016168540、WO 2017/058805、WO 2017015562、WO 2017058728、WO 2017058768、WO 2017058792、WO 2017058805、WO 2017058807、WO 2017058902、WO 2017058915、WO 2017087528、WO 2017100546、WO 2017/201161、WO 2018/064510、WO 2018/068017、WO 2018/119183、WO 2018/217651、WO 2018/140512、WO 2018/140513、WO 2018/140514、WO 2018/140598、WO 2018/140599、WO 2018/140600、WO 2018/143315、WO 2018/206539、WO 2018/218070、WO 2018/218071、WO 2019/051291、WO 2019/099524、WO 2019/110751、WO 2019/141250、WO 2019/150305、WO 2019/155399、WO 2019/213516、WO 2019/213526、WO 2019/217307和WO 2019/217691。實例為：1-(4-(6-氯-8-氟-7-(3-羥基-5-乙烯基苯基)喹唑啉-4-基)哌𠯤-1-基)丙-2-烯-1-酮-甲烷（1/2）（化合物1）；(S)-1-(4-(6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羥基苯基)喹唑啉-4-基)哌𠯤-1-基)丙-2-烯-1-酮（化合物2）；和2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌𠯤-2-基)乙腈（化合物3）。 KRAS G12C抑制劑化合物A

本發明之較佳的KRAS G12C抑制劑係化合物A，係1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮或其藥學上可接受的鹽。化合物A還被稱作「a( R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮」。

化合物A的合成在以下實例中或在2021年6月24日公開的PCT申請WO 2021/124222的實例1中描述。2021年12月20日提交的PCT/CN 2021/139694中描述了單獨的或與另外的治療劑組合的化合物A之用途。化合物A也稱為「JDQ443」或「NVP-JDQ443」。

化合物A的結構如下：

。

可替代地，化合物A的結構可如下繪製：

。

化合物A係強效的且選擇性的KRAS G12C小分子抑制劑，其可與突變Cys12共價結合，將KRAS G12C捕獲在非活性GDP結合狀態。與索托拉西布或阿達格拉西布相比，化合物A在結構上係獨特的；它的結合模式係一種到達殘基C12的新方式，並且與殘基H95沒有直接相互作用。

臨床前數據表明，化合物A與KRAS G12C結合，其中與RAS SWII袋的可逆結合親和力低，從而抑制下游細胞傳訊和增殖，特別是在KRAS G12C驅動的細胞系中，而不是在KRAS野生型（WT）或MEK Q56P突變細胞系中。化合物A在不同KRAS G12C突變型異種移植模型中表現出深度和持續的目標佔有率，從而產生抗腫瘤活性。 SHP2抑制劑

可用於本發明之組合和方法的SHP2抑制劑之實例包括TNO155、JAB3068（加科思公司（Jacobio））、JAB3312（加科思公司）、RLY1971（羅氏公司）、SAR442720（賽諾菲公司）、RMC4450（革命藥物公司）、BBP398（Navire公司）、BR790（上海藍光公司（Shanghai Blueray））、SH3809（南京聖和公司（Nanjing Sanhome））、PF0724982（輝瑞公司（Pfizer））、ERAS601（Erasca公司）、RX-SHP2（Redx製藥公司（Redx Pharma））、ICP189（諾誠健華（InnoCare））、HBI2376（滬亞生物（HUYA Bioscience））、ETS001（上海ETERN生物製藥公司（Shanghai ETERN Biopharma））、TAS-ASTX（大鵬製藥腫瘤學公司（Taiho Oncology））和X-37-SHP2（X-37）或其藥學上可接受的鹽。

可用於本發明之組合和方法中，特別是在如本文所述，使用雙重組合來治療癌症的雙重組合和方法中的SHP2抑制劑之實例包括JAB3068（加科思公司）、JAB3312（加科思公司）、RLY1971（羅氏公司）、SAR442720（賽諾菲公司）、RMC4450（革命藥物公司）、BBP398（Navire公司）、BR790（上海藍光公司）、SH3809（南京聖和公司）、PF0724982（輝瑞公司）、ERAS601（Erasca公司）、RX-SHP2（Redx製藥公司）、ICP189（諾誠健華）、HBI2376（滬亞生物）、ETS001（上海ETERN生物製藥公司）、TAS-ASTX（大鵬製藥腫瘤學公司）和X-37-SHP2（X-37）。

用於根據本發明使用的、並且尤其是在本發明之三重組合中、以及使用三重組合之方法中使用的特別較佳的SHP2抑制劑可以選自：

、	、
、	和
。

用於根據本發明使用的、並且尤其是在本發明之三重組合中、以及使用三重組合之方法中使用的特別較佳的SHP2抑制劑係(3S,4S)-8-(6-胺基-5-((2-胺基-3-氯吡啶-4-基)硫代)吡𠯤-2-基)-3-甲基-2-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-4-胺（TNO155）或其藥學上可接受的鹽。根據WO 2015/107495之實例69合成TNO155，將該文獻藉由引用以其全文併入。TNO155的較佳的鹽係琥珀酸鹽。

另外，SHP2抑制劑包括以下中描述的化合物：WO 2015/107493、WO 2015/107494、WO 2015/107495、WO 2016/203406、WO 2016/203404、WO 2016/203405、WO 2017/216706、WO 2017/156397、WO 2020/063760、WO 2018/172984、WO 2017/211303、WO 21/061706、WO 2019/183367、WO 2019/183364、WO 2019/165073、WO 2019/067843、WO 2018/218133、WO 2018/081091、WO 2018/057884、WO 2020/247643、WO 2020/076723、WO 2019/199792、WO 2019/118909、WO 2019/075265、WO 2019/051084、WO 2018/136265、WO 2018/136264、WO 2018/013597、WO 2020/033828、WO 2019/213318、WO 2019/158019、WO 2021/088945、WO 2020/081848、WO 21/018287、WO 2020/094018、WO 2021/033153、WO 2020/022323、WO 2020/177653、WO 2021/073439、WO 2020/156243、WO 2020/156242、WO 2020/249079、WO 2020/033286、WO 2021/061515、WO 2019/182960、WO 2020/094104、WO 2020/210384、WO 2020/181283、WO 2021/043077、WO 2021/028362、WO 2020/259679、WO 2020/108590以及WO 2019/051469。

TNO155係含有蛋白酪胺酸磷酸酶-2（SHP2，由 PTPN11基因編碼）的口服生物可利用的Src同源-2結構域變構抑制劑，該蛋白酪胺酸磷酸酶-2將來自激活的受體酪胺酸激酶（RTK）的傳訊到下游通路（包括絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路）。SHP2還涉及免疫檢查點和細胞介素受體傳訊。TNO155已在多種RTK依賴性人癌細胞系和體內腫瘤異種移植物中顯示出功效。 PI3K抑制劑

可用於本發明之組合和方法的PI3K抑制劑之實例包括達托利斯布（dactolisib）、阿匹托利斯布（apitolisib）、加多利西（gedatolisib）、布帕昔布（buparlisib）、杜韋利斯布（duvelisib）、庫潘尼西（copanlisib）、艾代拉裡斯（idelalisib）、阿培利司、塔塞利西蔔（taselisib）和匹替西布（pictilisib）。本發明之較佳的PI3K抑制劑包括AMG 511、布帕昔布和阿培利司。在本發明之優選的實施方式中，阿培利司係PI3K抑制劑。

在本發明之組合中，每種治療活性劑可以分開地、同時地或依序地（以任何順序）投與。

在本發明之組合中，能以口服劑型投與化合物A和/或TNO155。

在另一個實施方式中，提供了藥物組成物，其包含本發明之藥物組合和至少一種藥學上可接受的載體。待藉由本發明之組合和方法治療的癌症

因此，本發明之組合可用於治療癌症和KRAS G12C突變型癌症或腫瘤。本發明之組合可用於治療選自由以下組成之群組的癌症或腫瘤：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。原發部位不明但示出KRAS G12C突變的癌症也可以得益於用本發明之方法進行治療。

待治療的癌症或腫瘤可以選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌、膽管癌症和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌、十二指腸乳頭癌和實性瘤，特別地當癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。

待治療的癌症或腫瘤可以選自非小細胞肺癌、結直腸癌、膽管癌症、卵巢癌、十二指腸乳頭癌和胰臟癌，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。

待藉由本發明之化合物、組合和方法治療的其他癌症包括胃癌、鼻咽癌、肝細胞癌、和何杰金氏淋巴瘤，特別地當該癌症具有KRAS G12C突變時。

特別地，本發明提供了治療方法和用於在治療選自由以下組成之群組的癌症中使用的組合：肺癌（如肺腺癌和非小細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。

如實例所示，本發明之化合物A和組合在具有選自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A的一個、兩個或三個突變的異種移植模型中已經顯示出抗腫瘤活性。因此，待藉由本發明之組合和方法治療的癌症包括具有選自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A及其組合中的一個、兩個或三個突變的癌症或實性瘤；如具有KRAS G12C和CDKN2A突變的癌症；以及具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突變的癌症。例如，待治療的癌症可為肺癌（例如非小細胞肺癌），具有KRAS G12C和CDKN2A突變；或肺癌（例如非小細胞肺癌），具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突變。

具有選自KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A的一個、兩個或三個突變的癌症還可以選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌、膽管癌症和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌、十二指腸乳頭癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。

在本發明之實施方式中，待藉由化合物A或藉由本發明之組合或方法治療的癌症選自由以下組成之群組：黑色素瘤、胃淋巴瘤、柏基特氏淋巴瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、口腔癌、胰臟腺癌、非小細胞肺癌、食道鱗狀細胞癌、胃癌、結直腸癌、上皮性卵巢癌和***癌；視需要，其中癌症具有KRAS G12C突變和/或CDKN2A突變；或其中癌症具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突變。

在本發明之實施方式中，待藉由化合物A或藉由本發明之組合或方法治療的癌症選自由以下組成之群組：乳癌、卵巢癌、肺癌、胃部癌症、胃癌和腦癌；視需要，其中癌症具有KRAS G12C突變和/或PIK3CA突變；或其中癌症具有KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突變。

癌症可以處於早期、中期、晚期或可為轉移性癌症。

在一些實施方式中，癌症係晚期癌症。在一些實施方式中，癌症係轉移性癌症。在一些實施方式中，癌症係復發性癌症。在一些實施方式中，癌症係難治性癌症。在一些實施方式中，癌症係反復性癌症。在一些實施方式中，癌症係不可切除性癌症。

癌症可以處於早期、中期、晚期或係轉移性癌症。

本發明之化合物A和組合還可用於治療以RAS突變為特徵的實性惡性腫瘤。

本發明之化合物A和組合還可用於治療以KRAS的一或多種突變，特別是KRAS中的G12C突變為特徵的實性惡性腫瘤。

本發明提供了本發明之化合物A和組合，其用於在治療以獲得性KRAS改變（選自G12D/R/V/W、G13D、Q61H、R68S、H95D/Q/R、Y96C、Y96 D和KRASG12C等位基因的高水平擴增）為特徵或以獲得性旁路抗性機制為特徵的癌症或實性瘤中使用，該等旁路抗性機制包括MET擴增；NRAS、BRAF、MAP2K1、和RET中的激活突變；涉及ALK、RET、BRAF、RAF1、和FGFR3的致癌性融合；以及NF1和PTEN中的功能喪失性突變。

因此，作為另外的實施方式，本發明提供了本發明之組合，其用於在療法中使用。本發明還提供了由以下組成的三重組合：化合物A或其藥學上可接受的鹽，SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽），以及第三治療活性劑。作為另外的實施方式，本發明提供了本發明之組合，其用於在療法中使用。在較佳的實施方式中，該療法或藥物有用的療法對於選自可以藉由抑制RAS突變蛋白，特別是KRAS、HRAS或NRAS G12C突變蛋白來治療的疾病係有用的。在另一個實施方式中，本發明提供了治療有需要的受試者的疾病之方法，該疾病藉由抑制RAS突變型蛋白，特別地KRAS、HRAS或NRAS蛋白的G12C突變型進行治療，其中該方法包括向受試者投與治療有效量的本發明之組合。

在更較佳的實施方式中，該疾病選自上述列表，適當地是非小細胞肺癌、結直腸癌和胰臟癌。

在較佳的實施方式中，該療法用於疾病，該疾病可以藉由抑制RAS突變蛋白，特別是抑制KRAS、HRAS或NRAS蛋白的G12C突變體來治療。在更較佳的實施方式中，該疾病選自上述列表，適當地是非小細胞肺癌、結直腸癌和胰臟癌，其特徵在於KRAS、HRAS或NRAS中的G12C突變。

在另一個實施方式中係治療（例如，減輕、抑制或延遲進展中的一項或多項）受試者的癌症或腫瘤之方法，該方法包括向有需要的受試者投與包含化合物A或其藥學上可接受的鹽、與如本文所述之第二治療劑組合、視需要與第三組合組合的藥物組成物。

因此，本發明提供了治療（例如，減輕、抑制或延遲進展中的一項或多項）有需要的患者的癌症或腫瘤之方法，其中該方法包括向該有需要的患者投與治療活性量的本發明之組合，其中該癌症係肺癌（包括肺腺癌和非小細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）和實性瘤，視需要其中該癌症係KRAS-、NRAS-或HRAS-G12C突變型。對KRAS G12C抑制劑而言係難治的癌症或腫瘤

本發明之方法和組合可以特別地用於治療對用KRAS G12C抑制劑的先前治療而言續難治的或具有抗性的癌症或腫瘤。此類KRAS G12C抑制劑之實例包括化合物A、索托拉西布（美商安進公司）、阿達格拉西布（Mirati公司）、D-1553（益方生物）、BI1701963（勃林格公司）、GDC6036（羅氏公司）、JNJ74699157（J&J公司）、X-Chem KRAS（X-Chem公司）、LY3537982（禮來公司）、BI1823911（勃林格公司）、AS KRAS G12C（亞盛藥業公司）、SF KRAS G12C（賽諾菲公司）、RMC032（革命藥物公司）、JAB-21822（加科思製藥公司）、AST-KRAS G12C（艾力斯製藥公司）、AZ KRAS G12C（阿斯利康公司）、NYU-12VC1（紐約大學）、和RMC6291（革命藥物公司）或其藥學上可接受的鹽。在一個實施方式中，癌症（例如NSCLC）先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、D-1553、和GDC6036）治療。

預期涉及KRAS G12 C抑制劑（例如化合物A或其藥物活性鹽），以及第二治療活性劑，視需要第三治療劑的組合療法將在克服此抗性方面特別有用。

本發明之方法和組合可用作一線療法（或用作二線或更晚線療法）。例如，患者可能是治療不可知的患者或在先前療法中有進展和/或復發的患者。

例如，待藉由本發明之方法和組合治療的患者或受試者包括患有癌症（例如KRAS G12C突變型NSCLC（包括晚期（轉移性或不可切除性）KRAS G12C突變型NSCLC））的患者，視需要其中該患者已經接受了先前療法並且有進展。

在本發明之實施方式中，待使用化合物A單一療法或使用如本文所述之組合療法的組合療法進行治療並且可能從治療中獲益的受試者或患者選自： - 患有 KRAS G12C突變型實性瘤（例如晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型實性瘤）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，或者對先前的研究性療法和/或批准的療法不耐受或不具有資格； - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者已經接受了組合或順序進行的基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法但失敗了； - 患有 KRAS G12C突變型CRC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型CRC）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，該標準護理療法包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑、和/或伊立替康的化學療法；和 - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療。

如本文所述，單獨的或與另一種治療劑組合的化合物A可以用於治療選自以下的患者：患有NSCLC的患者，其腫瘤具有KRAS G12C腫瘤突變，並且該患者先前已經接受了組合或順序進行的基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法（G12Ci初治）；患有NSCLC的患者，其腫瘤具有KRAS G12C腫瘤突變，並且該患者先前已經接受了組合或順序進行的基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法，緊隨其後是KRAS G12C抑制劑（除化合物A以外）的一個治療線，例如索托拉西布或阿達格拉西布，作為單一藥劑給予，並且在此試驗中研究治療的第一天開始的6個月內停止（G12Ci治療）；患有CRC的患者，其腫瘤具有KRAS G12C腫瘤突變，並且該患者接受了基於氟嘧啶、奧沙利鉑或伊立替康的化學療法。

在另外的實施方式中，以有效治療癌症的量向有需要的受試者投與化合物A或其藥學上可接受的鹽。

在本發明之實施方式中，向有需要的受試者投與一定量的化合物A或其藥學上可接受的鹽、以及第二治療劑和第三治療劑（如果存在），並且該量在為有效治療癌症的量時係有效的。劑量和給藥方案

當化合物A用作單一療法時，化合物A的每日推薦總劑量為400 mg，每日給予一次或每日兩次，連續給予（即無藥物假期）。基於觀察到的安全性、PK和功效數據，化合物A單一療法的推薦劑量係100 mg BID連續給予。

當化合物A用作單一療法或組合療法時，較佳的是與食物一起服用，例如飯後立即（30分鐘內）服用。

根據本發明的組合療法中的KRAS G12 C抑制劑和第二治療活性劑以及第三治療活性劑的劑量被設計為具有藥理活性並且產生抗腫瘤反應。

當KRAS G12 C抑制劑係本發明之組合中的化合物A時，化合物A或其藥學上可接受的鹽以範圍從50至1600 mg/天（例如範圍從200至1600 mg/天，或400至1600 mg/天或50至400 mg/天）的治療有效劑量投與。化合物A的總日劑量可選自50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200和1600 mg。例如，化合物A的總日劑量可以選自100、200、300、400、600、800、1000、1200和1600 mg。

化合物A的總日劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次）方案連續投與。例如，能以200 mg BID（總日劑量為400 mg）、400 mg QD（總日劑量為400 mg）的劑量投與化合物A。能以100 mg BID（總日劑量為200 mg）的劑量或以200 mg QD（總日劑量為200 mg）的劑量投與化合物A。PK/PD建模預測在推薦劑量200 mg BID時，持續的高水平目標佔有率。還預測100 mg BID的化合物A與選擇的療法組合時，允許足夠的治療視窗。

當存在SHP2抑制劑並且TNO155為SHP2抑制劑時，在本發明之組合中，本發明之組合中的TNO 155的劑量被設計為具有藥理活性，並具有協同抗腫瘤作用的潛力，同時最小化由於兩種藥劑對MAPK通路傳訊的抑制活性而產生的不可接受的毒性的可能性。因此，能以範圍從10至80 mg、或從10至60 mg的總日劑量投與TNO155。例如，TNO155的總日劑量可選自10、15、20、30、40、60和80 mg。TNO155的總日劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次），2週投與/1週停用方案QD或BID連續投與。TNO155的總日劑量可以按QD（每日一次）或BID（每日兩次），連續（即無藥物假期）QD或BID連續投與。

在本發明之組合中，以範圍從50至1600 mg/天（例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600 mg）或從200至1600 mg/天（例如，200、300、400、600、800、1000、1200或1600 mg）的劑量投與化合物A，並且以範圍從10至80 mg/天（0、15、20、30、40、60或80 mg）的劑量投與TNO155，其中化合物A按連續方案投與，並且TNO按兩週投與/一週停用方案或連續方案投與。

在本發明之組合中，按連續方案以範圍從50至1600 mg/天（例如，50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、800、1000、1200或1600 mg）或從200至1600 mg/天（例如，200、300、400、600、800、1000、1200或1600 mg）的劑量投與化合物A，按兩週投與/一週停用方案或連續方案以從10至80 mg（0、15、20、30、40、60或80 mg）的範圍的劑量投與TNO155。

EGFR抑制劑（如西妥昔單抗）可以用於本發明之組合療法，特別是當待治療的癌症係結直腸癌時。西妥昔單抗（當存在時）用作濃溶液，用於輸注和靜脈內投與（IV）。西妥昔單抗可以每週投與，其中初始劑量係400 mg/m ²IV（典型地按120分鐘靜脈內輸注投與），並且後續劑量係250 mg/m ²/週（按每週60分鐘輸注投與）。可替代地，西妥昔單抗可以每兩週投與一次，初始和後續劑量係500 mg/m ²，每兩週投與一次。典型地，本發明組合中化合物A的總日劑量可以選自100 mg至400 mg，例如選自200 mg至400 mg。總日劑量可以每日一次或每日兩次（BID）連續投與。

化合物A和西妥昔單抗的組合的給藥方案之實例係化合物A QD或BID與西妥昔單抗每週給藥組合連續投與（初始劑量400 mg/m2，按120分鐘靜脈內輸注投與，後續劑量250 mg/m2，按每週60分鐘輸注投與）。典型地，西妥昔單抗的總暴露量可以不超過每2週500 mg/m2或400 mg/m2初始劑量，然後每週250 mg/m2。

化合物A與西妥昔單抗組合的典型劑量水平可以如下：

給藥方案	化合物 A	西妥昔單抗兩週一次方案
1	每日一次 100 mg	300、400或500 mg/m ²Q2W
2	每日兩次 100 mg	300、400或500 mg/m ²Q2W
3	每日兩次 200 mg	300、400或500 mg/m ²Q2W

MEK抑制劑（如曲美替尼）可以用於本發明之組合療法。曲美替尼可以按每日一次（QD）0.5 mg、1 mg或2 mg的劑量連續投與（即無藥物假期）。基於臨床PK和PD數據，1 mg QD劑量的曲美替尼被認為具有潛在的藥理活性。化合物A和/或曲美替尼可以與食物一起投與。典型地，本發明組合中化合物A的總日劑量可以選自100 mg至400 mg，例如選自200 mg至400 mg。總日劑量可以每日一次或每日兩次（BID）連續投與。

化合物A與曲美替尼組合的典型劑量水平可以如下：

給藥方案	化合物 A	曲美替尼
1	每日一次 100 mg	每日一次 0.5 mg
2	每日兩次 100 mg	每日一次 0.5 mg
3	每日兩次 100 mg	每日一次 1 mg
4	每日兩次 200 mg	每日一次 1 mg
5	每日兩次 200 mg	每日一次 2 mg

CDK4/6抑制劑（如帕博西尼或瑞博西尼）可以用於本發明之組合療法。當瑞博西尼用作組合配偶體時，可以按100 mg至600 mg QD的總日劑量、3週停用/1週停用進行投與。例如，可以每日一次，按100 mg、200 mg、300 mg、400 mg或600 mg的劑量投與瑞博西尼。典型地，本發明組合中化合物A的總日劑量可以選自100 mg至400 mg，例如選自200 mg至400 mg。總日劑量可以每日一次或每日兩次（BID）連續投與。

化合物A與瑞博西尼組合的典型劑量水平可如下：

給藥方案	化合物 A	瑞博西尼（ 3 週投與， 1 週停用）
1	每日一次 100 mg	每日一次 200 mg
2	每日兩次 100 mg	每日一次 200 mg
3	每日兩次 100 mg	每日一次 200 mg
4	每日兩次 200 mg	每日一次 400 mg
5	每日兩次 200 mg	每日一次 600 mg

藥物組成物

KRAS G12 C抑制劑（例如化合物A或其藥學上可接受的鹽）可以與一或多種（例如一種或兩種）其他治療活性劑同時投與，或在其之前或之後投與。化合物A或其藥學上可接受的鹽可以藉由相同或不同的投與途徑分開投與，或與另一種治療活性劑一起在相同的藥物組成物中投與。

在另一個方面，本發明提供了藥學上可接受的組成物，該等藥學上可接受的組成物包含治療有效量的選自KRAS G12C抑制劑（例如化合物A）、SHP2抑制劑（例如TNO155）和視需要如本文所述之第三藥劑的一或多種（例如，一種或兩種）治療劑，該等治療劑與一或多種藥學上可接受的載體（添加劑）和/或稀釋劑配製在一起。

在另一個方面，本發明提供了藥物組成物，其包含一種、兩種或三種本發明之組合中存在的化合物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的載體。在另一個方面，本發明提供了藥物組成物，其包含KRAS G12C抑制劑（如化合物A）或其藥學上可接受的鹽，和一或多種（例如，一種或兩種）治療活性劑，該等治療活性劑選自SHP2抑制劑（如TNO155，或其藥學上可接受的鹽）和第三治療活性劑。在另外的實施方式中，組成物包含至少兩種藥學上可接受的載體，例如本文所述之那些。較佳的是，藥學上可接受的載體係無菌的。可以將藥物組成物配製成用於特定的投與途徑，如口服投與、腸胃外投與和直腸投與等。另外，本發明之藥物組成物能以固體形式（包括但不限於膠囊、片劑、丸劑、顆粒、粉末或栓劑）、或以液體形式（包括但不限於溶液、懸浮液或乳液）製成。可以對藥物組成物進行常規的製藥操作，如滅菌，和/或可以使其含有常規的惰性稀釋劑、潤滑劑或緩衝劑，以及輔助劑（如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑和緩沖劑等）。

通常，藥物組成物係包含活性成分及以下中的一或多種的片劑或明膠膠囊： a) 稀釋劑，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘胺酸； b) 潤滑劑，例如，二氧化矽、滑石、硬酯酸、其鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇； c) 黏合劑，例如，矽酸鋁鎂、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯啶酮； d) 崩散劑，例如，澱粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或泡騰混合物；和 e) 吸附劑、著色劑、風味劑和甜味劑。

在一個實施方式中，藥物組成物係僅包含活性成分的膠囊。

片劑可根據本領域已知的方法進行薄膜包衣或腸溶包衣。

用於口服投與的合適的組成物包括有效量的呈片劑、錠劑、水性或油性懸浮液、可分散的粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑、溶液或固體分散體形式的本發明之組合中的化合物。將旨在用於口服使用的組成物根據本領域已知的用於製造藥物組成物的任何方法來製備，並且為了提供藥學上精緻的並且適口的製劑，此類組成物可以包含一或多種選自由以下組成之群組的試劑：甜味劑、調味劑、著色劑以及防腐劑。片劑可含有活性成分，其與無毒的藥學上可接受的賦形劑混合，該等賦形劑適合生產片劑。該等賦形劑係，例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；製粒劑及崩散劑，例如，玉米澱粉或海藻酸；黏合劑，例如，澱粉、明膠或***膠；以及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑係未包衣的，或者根據已知技術進行包衣以延緩在胃腸道中的崩解和吸收，從而在較長的時間段內提供持久的作用。例如，可採用時間延遲材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用於口服使用的配製物可呈現為硬質明膠膠囊，其中活性成分與惰性固體稀釋劑（例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土）混合，或呈現為軟質明膠膠囊，其中活性成分與水或油介質（例如，花生油、液體石蠟或橄欖油）混合。

某些可注射的組成物係水性等滲溶液或懸浮液，並且栓劑有利地由脂肪乳液或懸浮液製備。所述組成物可為滅菌的和/或含有輔助劑，例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑或乳化劑、溶液促進劑、用於調節滲透壓的鹽和/或緩衝劑。此外，該等組成物還可含有其他有治療價值的物質。所述組成物分別根據常規的混合、造粒或包衣方法製備，並含有約0.1%-75%或約1%-50%的活性成分。

適用於透皮應用的適合的組成物包括有效量的本發明之化合物和適合的載體。適於透皮遞送的載體包括可吸收的藥理學上可接受的溶劑，以幫助通過宿主的皮膚。例如，透皮設備呈繃帶的形式，該繃帶包含背襯構件、含有化合物以及視需要載體的貯存器、視需要控制速率的屏障以在長時間段內以受控和預定的速率將化合物遞送至宿主皮膚、以及將該設備固定在皮膚上的裝置。

適用於局部投與（例如，投與至皮膚及眼睛）的組成物包括水溶液、懸浮液、軟膏劑、霜劑、凝膠或可噴霧配製物，例如，用於借由氣溶膠或類似物遞送。該等局部遞送系統將具體地適用於真皮投與，例如，用於治療皮膚癌，例如，用於防曬霜、洗劑、噴霧及類似物中之預防用途。因此它尤其適用於局部中之用途，包括本領域中熟知的化妝品、配製物。此類系統可含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝劑和防腐劑。

如本文所用，局部投與也可以涉及吸入或鼻內投與。它們可以在使用或不使用合適推進劑的情況下，自乾粉吸入器以乾粉形式（單獨的作為混合物，例如與乳糖的乾摻混物，或經混合的組分顆粒，例如與磷脂混合的組分顆粒）或自加壓容器、泵、噴霧、噴霧器或霧化器以氣溶膠噴霧形式便利地遞送。

在一個實施方式中，本發明提供了產品，其包含化合物A或其藥學上可接受的鹽，和至少一種其他治療劑，該產品作為組合製劑用於在療法中同時、分開或順序使用。在一個實施方式中，該療法係治療由KRAS、HRAS或NRAS G12C突變表徵的疾病或病症。提供的作為組合製劑的產品包括以單獨的形式（例如以套組（kit）的形式）的組成物，該組成物包含本發明之化合物和一或多種（例如，一種或兩種）治療活性劑（選自SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、KRAS抑制劑（如化合物A或其藥學上可接受的鹽）），以及一或多種其他治療劑。

在一個實施方式中，本發明提供了藥物組成物，該藥物組成物包含本發明之化合物和另一或多種治療劑。視需要，該藥物組成物可以包含如上所述之藥學上可接受的載體。

在一個實施方式中，本發明提供了套組，該套組包含兩種或更多種分開的藥物組成物，其中至少一種含有化合物A或其藥學上可接受的鹽；TNO155或其藥學上可接受的鹽，以及如本文所述之第三治療活性劑。在一個實施方式中，套組包含用於分開保留所述組成物的裝置（例如容器、分隔瓶或分隔箔包）。這種套組之實例係泡罩包裝，如通常用於包裝片劑、膠囊及類似物的泡罩包裝。

本發明之套組可用於投與不同劑型（例如，口服及腸胃外），用於以不同劑量間隔投與單獨組成物或用於相對彼此滴定單獨組成物。為有助在依從性，本發明之套組通常包含用於投與的用法說明書。

在本發明之組合療法中，本發明之化合物和其他治療劑可以由相同或不同的製造商生產和/或配製。此外，可以將本發明化合物和另一種治療劑一起形成組合療法：(i) 在將組合產品發佈給醫師之前（例如，在包含本發明之化合物和其他治療劑的套組的情況下）；(ii) 在投與之前不久，由醫師自身（或在醫師的指導下）進行；(iii) 在患者自身中，例如在順序投與本發明之化合物和其他治療劑期間。本發明化合物可以與一或多種其他的治療劑同時投與、或在其之前或之後投與。本發明化合物可以藉由與其他藥劑相同或不同的投與途徑分開投與，或在相同的藥物組成物中一起投與。

通常，本發明之組合的合適日劑量將是每種化合物有效產生治療效果的最低劑量的量。

在另一個方面，本發明提供了藥學上可接受的組成物，其包含治療有效量的一或多種如上所述主題化合物，主題化合物與一或多種藥學上可接受的載劑（添加劑）和/或稀釋劑配製在一起。定義

除非另外指示，否則上文和下文中使用的通用術語較佳的是在本揭露的上下文中具有以下含義，其中無論在什麼情況下使用的更通用的術語可以彼此獨立地由更具體的定義代替或保留，從而定義本發明之更詳細實施方式：特別地，在提及劑量（dose或dosage）的情況下，其旨在包括指定值 ± 10%或 ± 5%附近的範圍。

按照本領域的慣例，劑量係指游離形式的治療劑的量。例如，當提及20 mg的TNO155的劑量，並且TNO155以其琥珀酸鹽使用時，所用治療劑的量相當於20 mg游離形式的TNO155。

如本文所用，術語「受試者」或「患者」旨在包括易於患有癌症或任何障礙（直接或間接涉及癌症）或受其折磨的動物。受試者之實例包括哺乳動物，例如人、猿、猴、狗、乳牛、馬、豬、綿羊、山羊、貓、小鼠、兔、大鼠和轉基因非人動物。在一個實施方式中，受試者係人，例如患有癌症、具有患癌症的風險或可能易於患有癌症的人。

如本文所用，術語「治療（treating或treatment）」包括解除、減輕或緩解受試者的至少一種症狀或者實現疾病進展延遲的治療。例如，治療可為減少一種或幾種障礙的症狀，或者部分或完全根除障礙（如癌症）。在本揭露之含義範圍內，術語「治療」還表示阻止、延遲發作（即在疾病的臨床表現之前的時間段）和/或降低疾病發展或疾病惡化的風險。

「治療」也可以藉由功效和/或藥效學終點來確定，並且可定義為安全性、功效和耐受性中的一或多個的改善。可以藉由根據RECIST v.1.1確定以下項來確定單一療法或組合療法的功效：最佳總體反應（BOR）、總體反應率（ORR）、反應持續時間（DOR）、疾病控制率（DCR）、無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）。

「最佳總體反應」（BOR）率被定義為從治療開始直至疾病進展/復發，並且根據RECIST 1.1記錄的最佳反應。

「總體反應率」（ORR）被定義為根據RECIST 1.1，BOR為CR或PR的患者的比例。

根據RECIST 1.1，「反應持續時間」（DOR）係第一次記錄的反應（CR或PR）與進展或任何原因導致的死亡日期之間的時間。這裡，任何原因導致的死亡被視為保守事件，並且符合PFS事件定義。

根據RECIST 1.1，「疾病控制率」（DCR）被定義為根據RECIST 1.1，BOR為CR、PR或SD的患者的比例。

根據RECIST 1.1，「無進展生存期」（PFS）被定義為從開始治療的日期到根據RECIST 1.1第一次記錄的進展或任何原因導致的死亡的日期之間的時間。如果患者不具有事件，PFS將在最後的充分的腫瘤評估日期進行審查。

「總生存期」（OS）被定義為從開始研究治療的日期到任何原因導致的死亡的日期之間的天數。如果在研究終止或分析截止之前未報告死亡，則將在截止日期之前/當日最後一個已知患者生存日期對生存期進行審查。沒有基線後生存資訊的患者的生存時間將在開始治療的日期進行審查。

「治療」也可以定義為在減少化合物A單一療法或如本文所述之組合療法的不利影響方面的改善。

除非另外指明，否則術語「包含」和「包括」在本文中以其開放式和非限制性的含義使用。

除非本文另外指示或與上下文明顯矛盾，否則在描述本發明的上下文中（尤其是下文請求項的上下文中），術語「一個/種（a和an）」和「該（the）」以及相似的指示語應解釋為包括單數和複數兩者。當將複數形式用於化合物、鹽等時，這也意指單一化合物、鹽等。

術語「組合療法」或「與……組合」係指投與兩種或更多種治療劑以治療在本揭露中描述的病症或障礙（例如癌症）。這種投與涵蓋以基本上同時的方式共同投與該等治療劑，如以具有固定比率的活性成分的單個膠囊投與。可替代地，這種投與涵蓋在多個容器中或在每種活性成分的獨立容器（例如，膠囊、粉末和液體）中共同投與。可以在投與之前將粉末和/或液體重構或稀釋至所期望的劑量。另外，這種投與也涵蓋在大致相同的時間或在不同的時間以依序方式使用每種類型的治療劑。在任何一種情況下，治療方案將在治療本文所述之病症或障礙方面提供藥物組合的有益效果。

組合療法可以提供「協同」並且證明係「協同的」，即，當活性成分一起使用時所實現的效應大於由分別使用該等化合物所產生的效應的總和。當將活性成分為下述情形時可以獲得協同效應：(1) 共同配製並以組合的單位劑量配製物的形式同時投與或遞送；(2) 以分開的配製物的形式交替或平行遞送；或 (3) 藉由一些其他方案進行。當以交替療法遞送時，可以在依序（例如藉由在單獨注射器中不同的注射）投與或遞送化合物時獲得協同效應。通常，在交替療法期間，將有效劑量的每種活性成分依序地即順次地投與，而在組合療法中，將有效劑量的兩種或更多種活性成分一起投與。如本文所用，協同效應係指兩種治療劑（如，例如作為SHP2抑制劑的化合物TNO155和化合物A）的作用，該作用產生例如減緩增殖性疾病（特別是癌症）或其症狀的症狀進展的效果，這比單獨投與每種藥物的效果的簡單加和要大。可以例如使用合適的方法計算協同效應，該等合適的方法如Sigmoid-Emax方程（Holford, N. H. G.和Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. [臨床藥物動力學] 6: 429-453 (1981)）、Loewe可加性方程（Loewe, S.和Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. [實驗病理學與藥理學檔案] 114: 313-326 (1926)）以及中效方程（Chou, T. C.和Talalay, P., Adv.Enzyme Regul. [酶調控研究進展] 22: 27-55 (1984)）。上面所指的每個方程都可以應用於實驗數據以生成相應的圖以説明評估藥物組合的效果。與上文提到的方程相關的相應的圖分別是濃度-效果曲線、等效線圖曲線和組合指數曲線。

如本文所用，術語「藥物組合」係指在一個劑量單位形式中的固定組合、或用於組合投與的非固定組合或套組，其中兩種或更多種治療劑可以在同一時間獨立地投與或在時間間隔內分別投與，特別地其中該等時間間隔允許組合配偶體顯示合作性例如協同效應。

如本文所用，短語「治療有效量」意指包含本發明化合物的化合物、材料或組成物的量，其對於在動物中的至少一個細胞亞群中以適用於任何醫學治療的合理的受益/風險比產生一些所期望的治療效果係有效的。

本文使用的短語「藥學上可接受的」係指在合理的醫學判斷的範圍內，適合用於與人和動物的組織接觸而不產生過度毒性、刺激、過敏反應、或其他問題或併發症，同時具有相稱的合理受益/風險比的那些化合物、材料、組成物、和/或劑型。

如上文所述，本發明化合物的某些實施方式可含有鹼性官能基，例如胺基或烷基胺基，並且由此能夠與藥學上可接受的酸形成藥學上可接受的鹽。在這方面，術語「藥學上可接受的鹽」係指本發明之化合物的相對無毒的無機和有機酸加成鹽。該等鹽可以在投與媒介物或劑型製造過程中原位製備，或者藉由使純化的游離鹼形式的本發明化合物與合適的有機或無機酸分別反應，並在隨後的純化期間分離由此形成的鹽來製備。代表性鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽（napthylate）、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖醛酸鹽和月桂基磺酸鹽等。（參見例如Berge等人 (1977) 「Pharmaceutical Salts [藥用鹽]」, J. Pharm.Sci.[藥物科學雜誌] 66:1-19）。

主題化合物的藥學上可接受的鹽包括化合物的常規的無毒鹽或四級銨鹽，例如來自無毒的有機酸或無機酸。例如，此類常規無毒鹽包括衍生自無機酸的那些，該無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸、硝酸等；以及從有機酸製備的鹽，該有機酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、麩胺酸、苯甲酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙醯氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、異硫磺酸等。例如，TNO155的藥學上可接受的鹽係琥珀酸鹽。

在本發明之組合中，化合物A、TNO155和第三治療活性劑還旨在表示化合物的未經標記的形式以及同位素標記形式。同位素標記的化合物的一或多個原子被具有選定原子質量或質量數的原子代替。可摻入TNO155和第三治療活性劑的同位素之實例包括氫、碳、氮、氧和氯的同位素（在可能的情況下），例如 ²H、 ³H、 ¹¹C、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ³⁵S、 ³⁶Cl。本發明包括同位素標記的TNO155和PD-1抑制劑，例如其中存在放射性同位素（如 ³H和 ¹⁴C）或非放射性同位素（如 ²H和 ¹³C）。同位素標記的TNO155和第三治療活性劑可用於代謝研究（用 ¹⁴C）、反應動力學研究（例如用 ²H或 ³H）、檢測或成像技術，例如正電子發射斷層掃描（PET）或單光子發射電腦斷層掃描（SPECT），包括藥物或底物組織分佈測定，或用於患者的放射治療。本發明之同位素標記的化合物通常可藉由熟悉該項技術者已知的常規技術或與在使用適當的同位素標記的試劑之所附實例中所述之那些類似的方法來製備。

此外，用較重的同位素，特別是氘（即， ²H或D）取代可以提供來源於更大的代謝穩定性（例如，體內半衰期延長或劑量需求減少或治療指數改進）的某些治療優點。應當理解，在此上下文中，氘可以被認為是化合物A、TNO155或第三治療活性劑抑制劑的取代基。這種較重的同位素（特別是氘）的濃度可以由同位素富集因子來定義。如本文所用的術語「同位素富集因子」係指同位素豐度與指定同位素的天然豐度之間的比率。如果本發明之化合物中的取代基指定為氘，則此類化合物具有針對每個指定的氘原子的同位素富集因子為至少3500（在每個指定的氘原子上52.5%氘摻入）、至少4000（60%氘摻入）、至少4500（67.5%氘摻入）、至少5000（75%氘摻入）、至少5500（82.5%氘摻入）、至少6000（90%氘摻入）、至少6333.3（95%氘摻入）、至少6466.7（97%氘摻入）、至少6600（99%氘摻入）或至少6633.3（99.5%氘摻入）。

在化合物A中，例如吲唑基環上的甲基基團，可為氘化或全氘化的。實例實施方式1： 1-{6-[(4M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）的製備

1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）的合成如下所述。

化合物A還被稱作「a( R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮」。一般方法和條件：

溫度以攝氏度給出。如果沒有另外提及，則所有蒸發都在減壓下進行，通常在約15 mm Hg和100 mm Hg（= 20-133 mbar）之間。

使用的縮寫為本領域中常規縮寫。

使用電灑方法、化學方法和電子衝擊游離法在LC-MS、SFC-MS或GC-MS系統上使用一系列以下配置的儀器中獲取質譜：使用ESI方法在LCMS系統上使用一系列以下配置的儀器獲取具有Waters SQ檢測器的Waters Acquity UPLC或質譜：具有PDA檢測器的Waters Acquity LCMS。[M+H] ⁺係指化學物種的質子化分子離子。

NMR譜使用Bruker Ultrashield™ 400（400 MHz）、Bruker Ultrashield™ 600（600 MHz）和Bruker Ascend ^TM400（400 MHz）光譜儀運行，均以或不以四甲基矽烷作為內標。將化學位移（δ值）以四甲基矽烷的低場ppm報告，譜***模式被指定為，單信號（s）、雙信號（d）、三重信號（t）、四重信號（q）、多重信號、未解析的或更多重疊信號（m）、寬信號（br）。溶劑在括弧中給出。僅報告觀察到且與溶劑峰不重疊的質子信號。

Celite：Celite ^R（Celite公司）= 基於矽藻土的助濾劑

相分離器：Biotage - 溶質相分離器 -（部件號：120-1908-F，70 mL，以及部件號：120-1909-J，150 mL）

SiliaMetS®Thiol：SiliCYCLE硫醇金屬淨化劑 -（R51030B，粒徑：40-63 µm）。儀器

微波：除非另有說明，否則所有微波反應均在Biotage引發器中進行，以0-400 W從磁控管在2.45 GHz在Robot Eight/Robot Sixty的處理能力情況下進行輻照。

UPLC-MS和MS分析方法：使用帶Waters SQ檢測器的Waters Acquity UPLC。

UPLC-MS-1: Acquity HSS T3；粒徑：1.8 µm；柱尺寸：2.1 x 50 mm；洗脫液A：H ₂O + 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：CH ₃CN + 0.04% HCOOH；梯度：在1.40 min內5%至98% B，然後98% B持續0.40 min；流速：1 mL/min；柱溫：60°C。

UPLC-MS-3: Acquity BEH C18；粒徑：1.7 µm；柱尺寸：2.1 x 50 mm；洗脫液A：H ₂O + 4.76%異丙醇 + 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：異丙醇 + 0.05% HCOOH；梯度：在1.7 min內1%至98% B，然後98% B持續0.1 min min；流速：0.6 mL/min；柱溫：80°C。

UPLC-MS-4: Acquity BEH C18；粒徑：1.7 µm；柱尺寸：2.1 x 100 mm；洗脫液A：H ₂O + 4.76%異丙醇 + 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：異丙醇 + 0.05% HCOOH；梯度：在8.4 min內1%至60% B，然後在1 min內60%至98% B；流速：0.4 mL/min；柱溫：80°C。

UPLC-MS-6: Acquity BEH C18；粒徑：1.7 µm；柱尺寸：2.1 x 50 mm；洗脫液A：H ₂O + 0.05% HCOOH + 3.75 mM乙酸銨；洗脫液B：異丙醇 + 0.05% HCOOH；梯度：在1.7 min內5%至98% B，然後98% B持續0.1 min；流速：0.6 mL/min；柱溫：80°C。製備型方法：手性SFC方法：

C-SFC-1: 柱：直鏈澱粉-C NEO 5 µm；250 x 30 mm；流動相；流速：80 mL/min；柱溫：40°C；背壓：120巴。

C-SFC-3: 柱：Chiralpak AD-H 5 µm；100 x 4.6 mm；流動相；流速：3 mL/min；柱溫：40°C；背壓：1800 psi。縮寫：

縮寫	描述
AcCN、ACN	乙腈
Ac ₂O	乙酸酐
AcOH	乙酸
AIBN	2,2′-偶氮雙(2-甲基丙腈)
aq.	水性
Ar	氬氣
B ₂Pin ₂	4,4,4′,4′,5,5,5′,5′-八甲基-2,2′-二(1,3,2-二氧雜環戊硼烷)
BPR	背壓
鹽水	飽和氯化鈉水溶液
n-BuLi	正丁基鋰
conc.	濃縮的
DAST	N,N-二乙基-1,1,1-三氟-λ ⁴-硫烷胺
DCE	二氯乙烷
DCM	二氯甲烷
DEA	二乙胺
DHP	3,4-二氫哌喃
DIPEA	N, N-二異丙基乙胺， N-乙基- N-異丙基丙烷-2-胺
DMA	N, N-二甲基乙醯胺
DMAP	N, N-二甲基吡啶-4-胺
DMF	N, N-二甲基甲醯胺
DMSO	二甲亞碸
DMSO-d ₆	六氘代二甲亞碸
dppf	1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵
ee	鏡像異構物過量
ESI	電灑電離
ESI-MS	電灑電離質譜
EtOAc	乙酸乙酯
GBq	千兆貝可
h	小時
HPLC	高效液相層析法
IPA	2-丙醇
KOAc	乙酸鉀
L/mL/μL	升/毫升/微升
LC-MS或LCMS	液相層析法和質譜法
M	莫耳
MeOH	甲醇
min	分鐘
MTBE	甲基三級丁醚
MS	質譜法
MW、mw	微波
m/z	質荷比
N	正態性
N ₂	氮氣
NaOtBu	三級丁醇鈉
NBS	N-溴代琥珀醯亞胺
NCS	N-氯琥珀醯亞胺
NIS	N-碘琥珀醯亞胺
NEt ₃、Et ₃N、TEA	三乙胺
PDA	光電二極體陣列檢測器
NMR	核磁共振
Pd(PPh ₃) ₄	四(三苯基膦)鈀(0)
iPrMgCl	異丙基氯化鎂
PTSA	對甲苯磺酸
RM	反應混合物
RP	逆相
Rt	滯留時間
RT	室溫
RuPhos	2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基二苯基
RuPhos-Pd-G3	(2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基-1,1′-二苯基)[2-(2′-胺基-1,1′-二苯基)]甲磺酸鈀(II)
Sat.	飽和的
SFC	超臨界流體層析法
SQ	單四極桿
TBAF	四丁基氟化銨
tBME、TBME、TBMe	三級丁基甲基醚
TBq	兆貝可（terabecquerel）
t-BuOH	三級丁醇
tBuXPhos-Pd-G3	tBuXPhos-Pd-G3，[(2-二-三級丁基膦基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-二苯基)-2-(2′-胺基-1,1′-二苯基)]甲磺酸鈀(II)
TFA	三氟乙酸
THF	四氫呋喃
TLC	薄層層析法
T ₃P	丙基膦酸酐
TsCl	甲苯磺醯氯，4-甲基苯-1-磺醯氯
UPLC	超高效液相層析法
XPhos	2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基二苯基
XPhos-Pd-G3	(2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-二苯基)[2-(2′-胺基-1,1′-二苯基)]甲磺酸鈀(II)

用於製備本發明化合物的所有起始材料、結構單元、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑和催化劑係可商購獲得的或可藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法生產。此外，本發明之化合物可以藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法生產，如以下實例所示。

所有終產物、中間體和起始材料的結構藉由標準分析光譜特徵（例如，MS、IR、NMR）來確認。較佳的（最具活性的）阻轉異構物之代表性實例的絕對立體化學已經藉由複合物的X射線晶體結構的分析確定，在該等複合物中，各個化合物與KRAS G12C突變型結合。在X射線結構不可得到的所有其他情況下，都以類似方式指定了立體化學，假設對於每一對，在共價競爭測定中表現出最高活性的阻轉異構物具有與X射線晶體學觀察到上述代表性實例的相同質性。絕對立體化學係根據卡恩-英格爾-普雷洛格（Cahn-lngold-Prelog）規則來指定的。中間體C1的合成： 三級丁基6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

步驟C.1：三級丁基 6-(甲苯磺醯基氧基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C2）

在20°C-25°C下，向 三級丁基6-羥基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯 [1147557-97-8]（2.92 kg，12.94 mmol）在DCM（16.5 L）中之溶液中添加DMAP（316.12 g，2.59 mol）和TsCl（2.96 kg，15.52 mol）。在10°C-20°C下，向反應混合物中逐滴添加Et ₃N（2.62 kg，25.88 mol）。將反應混合物在5°C-15°C下攪拌0.5 h，並且然後在18°C-28°C下攪拌1.5 h。反應完成後，將反應混合物在真空下濃縮。向殘餘物添加NaCl（在水中5%，23 L）隨後用EtOAc（23 L）萃取。將合併的水層用EtOAc（10 L x 2）萃取。將合併的有機層用NaHCO ₃（在水中3%，10 L x 2）洗滌並在真空下濃縮以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.81 - 7.70 (m, 2H), 7.53 - 7.36 (m, 2H), 4.79 - 4.62 (m, 1H), 3.84 - 3.68 (m, 4H), 2.46 - 2.38 (m, 5H), 2.26 - 2.16 (m, 2H), 1.33 (s, 9H)。UPLC-MS-1: Rt = 1.18 min；MS m/z [M+H] ⁺；368.2。步驟C.2：3,5-二溴-1 H-吡唑

在-78°C下，經20 min向3,4,5-三溴-1 H-吡唑[17635-44-8]（55.0 g，182.2 mmol）在無水THF（550 mL）中之溶液中逐滴添加n-BuLi（145.8 mL，364.5 mmol），保持內部溫度在-78°C/-60°C。將RM在該溫度下攪拌45 min。然後將反應混合物用MeOH（109 mL）在-78°C下小心淬滅並在該溫度下攪拌30 min。允許混合物達到0°C並攪拌1 h。然後，將混合物用EtOAc（750 mL）稀釋並添加HCl（0.5 N，300 mL）。在真空下濃縮各層。將粗殘餘物溶解於DCM（100 mL）中，冷卻至-50°C並添加石油醚（400 mL）。過濾沈澱的固體並用正己烷（250 mL x2）洗滌並在真空下乾燥以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 13.5 (br s, 1H), 6.58 (s, 1H)。步驟C.3： 三級丁基6-(3,5-二溴-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

在15°C下，向三級丁基 6-(甲苯磺醯基氧基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C2）（步驟C.1，900 g，2.40 mol）在DMF（10.8 L）中之溶液中添加Cs ₂CO ₃（1988 g，6.10 mol）和3,5-二溴-1 H-吡唑（步驟C.2，606 g，2.68 mol）。將反應混合物在90°C下攪拌16 h。將反應混合物倒入冰-水/鹽水（80 L）中並用EtOAc（20 L）萃取。將水層用EtOAc（10 L x 2）再萃取。將合併的有機層用鹽水（10 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾，並在真空下濃縮。將殘餘物與二㗁𠮿（1.8 L）一起研磨，並在60°C下溶解。向淺黃色溶液中緩慢添加水（2.2 L），並在添加900 mL水後開始重結晶。將所得的懸浮液冷卻至0°C，過濾，並用冷水洗滌。將濾餅與正庚烷一起研磨，過濾，然後在真空下在40°C下乾燥以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 6.66 (s, 1H), 4.86 - 4.82 (m, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 4H), 2.69 - 2.62 (m, 4H), 1.37 (s, 9H)；UPLC-MS-3: Rt = 1.19 min；MS m/z [M+H] ⁺；420.0/422.0/424.0。步驟C.4：三級丁基 6-(3-溴-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C3）

在惰性氣氛下，在-80°C下，向三級丁基 6-(3,5-二溴-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（步驟C.3，960 g，2.3 mol）在THF（9.6 L）中之溶液中逐滴添加 n-BuLi（1.2 L，2.5 mol）。將反應混合物在-80°C下攪拌10 min。然後在-80°C下，向反應混合物中逐滴添加碘甲烷（1633 g，11.5 mol）。在-80°C下攪拌5 min後，允許反應混合物溫熱至18°C。將反應混合物倒入飽和NH ₄Cl水溶液（4 L）中並用DCM（10 L）萃取。將分離的水層用DCM（5 L）再萃取，並將合併的有機層在真空下濃縮。將粗產物在60°C下溶解於1,4-二㗁𠮿（4.8 L）中，然後逐滴緩慢添加水（8.00 L）。將所得懸浮液冷卻至17°C並攪拌30 min。將固體過濾，用水洗滌，並在真空下乾燥以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 6.14 (s, 1H), 4.74 - 4.66 (m, 1H), 3.95 - 3.84 (m, 4H), 2.61 - 2.58 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 1.37 (s, 9H)；UPLC-MS-1: Rt = 1.18 min；MS m/z [M+H] ⁺；356.1/358.1。步驟C.5：三級丁基 6-(3-溴-4-碘-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C4）

在15°C下，向三級丁基 6-(3-溴-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C3）（步驟C.4，350 g，0.980 mol）在乙腈（3.5 L）中之溶液中添加NIS（332 g，1.47 mol）。將反應混合物在40°C下攪拌6 h。反應完成後，將反應混合物用EtOAc（3 L）稀釋並用水（5 L x 2）洗滌。將有機層用Na ₂SO ₃（在水中10%，2 L），用鹽水（2 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾，並在真空下濃縮以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 4.81 - 4.77 (m, 1H), 3.94 - 3.83 (m, 4H), 2.61 - 5.59 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 1.37 (s, 9H)；UPLC-MS-1: Rt = 1.31 min；MS m/z [M+H] ⁺；482.0/484.0。步驟C.6：三級丁基 6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C1）

向三級丁基 6-(3-溴-4-碘-5-甲基-1 H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C4）（步驟C.5，136 g，282 mmol）和5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1 H-吲唑（中間體D1，116 g，310 mmol）在1,4-二㗁𠮿（680 mL）中之攪拌懸浮液中添加水性K ₃PO ₄（2 M，467 mL，934 mmol）隨後添加RuPhos（13.1 g，28.2 mmol）和RuPhos-Pd-G3（14.1 g，16.9 mmol）。在惰性氣氛下，將反應混合物在80°C下攪拌1 h。反應完成後，將反應混合物倒入1M NaHCO ₃水溶液（1 L）中並用EtOAc（1L x 3）萃取。將合併的有機層用鹽水（1 L x3）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾，並在真空下濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：石油醚/EtOAc從1/0至0/1）純化以給出黃色油狀物。將該油狀物溶解於石油醚（1 L）和MTBE（500 mL）中，然後在真空中濃縮，以給出標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.81 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 5.94 - 5.81 (m, 1H), 4.90 - 4.78 (m, 1H), 3.99 (br s, 2H), 3.93 - 3.84 (m, 3H), 3.81 - 3.70 (m, 1H), 2.81 - 2.64 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.46 - 2.31 (m, 1H), 2.11 - 1.92 (m, 5H), 1.82 - 1.67 (m, 1H), 1.64 - 1.52 (m, 2H), 1.38 (s, 9H)；UPLC-MS-3: Rt = 1.30 min；MS m/z [M+H] ⁺；604.1/606.1。合成中間體D1：5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1 H-吲唑

步驟D.1：1-氯-2,5-二甲基-4-硝基苯

向2-氯-1,4-二甲基苯（3.40 kg，24.2 mol）在AcOH（20.0 L）中之冰冷的溶液中添加H ₂SO ₄（4.74 kg，48.4.mol，2.58 L）隨後逐滴添加（滴液漏斗）HNO ₃（3.41 kg，36.3 mol，2.44 L，67.0%純度）在H ₂SO ₄（19.0 kg，193.mol，10.3 L）中之***液。然後允許反應混合物在0°C - 5°C下攪拌0.5 h。將反應混合物緩慢倒入碎冰（35.0 L）中並沈澱出黃色固體。將懸浮液過濾並將濾餅用水（5.00 L x 5）洗滌以給出黃色固體，其懸浮於MTBE（2.00 L）中持續1 h，過濾，乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.42 (s, 3H)。步驟D.2：3-溴-2-氯-1,4-二甲基-5-硝基苯

向1-氯-2,5-二甲基-4-硝基苯（步驟D.1，2.00 kg，10.8 mol）在TFA（10.5 L）中之冷卻溶液中緩慢添加濃H ₂SO ₄（4.23 kg，43.1 mol，2.30 L）並將反應混合物在20°C下攪拌。少量分批添加NBS（1.92 kg，10.8 mol）並將反應混合物在55°C下加熱2 h。將反應混合物冷卻至25°C，然後倒入碎冰溶液以獲得淺白色沈澱，其經真空過濾，用冷水洗滌並在真空下乾燥以給出呈黃色固體的標題化合物，將其不經進一步純化用於下一步驟。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 7.65 (s, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.49 (s, 3H)。步驟D.3：3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯胺

向3-溴-2-氯-1,4-二甲基-5-硝基苯（步驟D.2，2.75 kg，10.4 mol）在THF（27.5 L）中之冰冷的溶液中添加HCl（4 M，15.6 L）然後少量分批添加Zn（2.72 kg，41.6 mol）。允許反應混合物在25°C下攪拌2 h。藉由添加飽和NaHCO ₃水溶液鹼化反應混合物（直至pH = 8）。將混合物用EtOAc（2.50 L）稀釋並劇烈攪拌10 min並且然後通過矽藻土墊過濾。分離有機層並將水層用EtOAc（3.00 L x 4）再萃取。將合併的有機層用鹽水（10.0 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾並在真空下濃縮以給出呈黃色固體的標題化合物，將其不經進一步純化用於下一步驟。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 6.59 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.18 (s, 3H)。步驟D.4：3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯重氮四氟硼酸鹽

將BF ₃.Et ₂O（2.00 kg，14.1 mol，1.74 L）溶解於DCM（20.0 L）中並在氮氣氛下冷卻至-5°C至-10°C。將3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯胺（步驟D.3，2.20 kg，9.38 mol）在DCM（5.00 L）中之溶液添加至上述反應混合物中並攪拌0.5 h。逐滴添加亞硝酸三級丁酯（1.16 kg，11.3 mol，1.34 L）並將反應混合物在相同溫度下攪拌1.5 h。TLC（石油醚 : EtOAc = 5 : 1）顯示起始材料（R _f= 0.45）被完全消耗。將MTBE（3.00 L）添加至反應混合物以給出黃色沈澱，其通過真空過濾並用冷MTBE（1.50 L x 2）洗滌以給出呈黃色固體的標題化合物，將其不經進一步純化用於下一步驟。步驟D.5：4-溴-5-氯-6-甲基-1 H-吲唑

向在氯仿（20.0 L）中之18-冠-6 醚（744 g，2.82 mol）添加KOAc（1.29 kg，13.2 mol）並將反應混合物冷卻至20°C。然後緩慢添加3-溴-4-氯-2,5-二甲基苯重氮四氟硼酸鹽（步驟D.4，3.13 kg，9.39 mol）。然後允許反應混合物在25°C下攪拌5 h。反應完成後，將反應混合物倒入冰冷的水（10.0 L）中，並將水層用DCM（5.00 L x 3）萃取。將合併的有機層用飽和NaHCO ₃水溶液（5.00 L）、鹽水（5.00 L）洗滌，乾燥（Na ₂SO ₄），過濾並在真空下濃縮以給出呈黃色固體的標題化合物。 ¹H NMR (600 MHz, CDCl ₃) δ 10.42 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 2.58 (s, 3H)。UPLC-MS-1: Rt = 1.02 min；MS m/z [M+H] ⁺；243/245/247。步驟D.6：4-溴-5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑

25°C下，向PTSA（89.8 g，521 mmol）和4-溴-5-氯-6-甲基-1 H-吲唑（步驟D.5，1.28 kg，5.21 mol）在DCM（12.0 L）中之溶液中逐滴添加DHP（658 g，7.82 mol，715 mL）。將混合物在25°C下攪拌1 h。反應完成後，將反應混合物用水（5.00 L）稀釋並分離有機層。將水層用DCM（2.00 L）再萃取。將合併的有機層用飽和NaHCO ₃水溶液（1.50 L）、鹽水（1.50 L）洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在真空下濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：石油醚/EtOAc 從100/1至10/1）純化以給出呈黃色固體的標題化合物。 ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.04 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 5.88 - 5.79 (m, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.80 - 3.68 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.99 - 1.93 (m, 1H), 1.77 - 1.69 (m, 1H), 1.60 - 1.56 (m, 2H)。UPLC-MS-6: Rt = 1.32 min；MS m/z [M+H] ⁺；329.0/331.0 /333.0 步驟D.7：5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1 H-吲唑（中間體D.1）

將4-溴-5-氯-6-甲基-1-(四氫-2 H-哌喃-2-基)-1 H-吲唑（步驟D.6，450 g，1.37 mol）、KOAc（401 g，4.10 mol）和B ₂Pin ₂（520 g，2.05 mol）在1,4-二㗁𠮿（3.60 L）中之懸浮液用氮氣脫氣0.5 h。添加Pd(dppf)Cl ₂.CH ₂Cl ₂（55.7 g，68.3 mmol）並將反應混合物在90°C下攪拌6 h。將反應混合物通過矽藻土過濾並將濾餅用EtOAc（1.50 L x 3）洗滌。將混合物在真空下濃縮以給出黑色油狀物，其藉由正相層析法（洗脫液：石油醚/EtOAc 從100/1至10/1）純化以給出呈棕色油狀物的所希望的產物。將殘餘物懸浮於石油醚（250 mL）中1 h以獲得白色沈澱。將懸浮液過濾，在真空下乾燥以給出呈白色固體的標題化合物。 ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃) δ 8.17 (d, 1H), 7.52 (s, 1H), 5.69 - 5.66 (m, 1H), 3.99 - 3.96 (m, 1H), 3.75 - 3.70 (m, 1H), 2.51 (d, 4H), 2.21 - 2.10 (m, 1H), 2.09 - 1.99 (m, 1H), 1.84 - 1.61 (m, 3H), 1.44 (s, 12H)；UPLC-MS-6: Rt = 1.29 min；MS m/z [M+H] ⁺；377.1/379。化合物A的合成

步驟1：三級丁基 6-(4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯

在500 mL燒瓶中，在氬氣下，將 三級丁基6-(3-溴-4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（中間體C1，10 g，16.5 mmol）、(1-甲基-1H-吲唑-5-基)硼酸（6.12 g，33.1 mmol）、RuPhos（1.16 g，2.48 mmol）和RuPhos-Pd-G3（1.66 g，1.98 mmol）懸浮於甲苯（165 mL）中。添加K ₃PO ₄（2M，24.8 mL，49.6 mmol）並將反應混合物置於預熱油浴（95°C）中並攪拌45 min。將反應混合物倒入飽和NH ₄Cl水溶液並用EtOAc（x3）萃取。將合併的有機層用飽和NaHCO ₃水溶液洗滌，乾燥（相分離器）並在減壓下濃縮。將粗殘餘物用THF（50 mL）稀釋，添加SiliaMetS®硫醇（15.9 mmol）並將混合物在40°C下渦旋1 h。過濾混合物，將濾液濃縮並將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：在CH ₂Cl ₂中之MeOH從0%至2%）純化，將純化的級分再次藉由正相層析法（洗脫液：在CH ₂Cl ₂中之MeOH從0%至2%）純化以給出呈米黃色泡沫的標題化合物。UPLC-MS-3: Rt = 1.23 min；MS m/z [M+H] ⁺；656.3/658.3。步驟2：5-氯-6-甲基-4-(5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1-(2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑

將TFA（19.4 mL，251 mmol）添加至三級丁基 6-(4-(5-氯-6-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯（步驟1，7.17 g，10.0 mmol）在CH ₂Cl ₂（33 mL）中之溶液中。將反應混合物在RT下在氮氣下攪拌1.5 h。將RM在減壓下濃縮以給出呈三氟乙酸鹽的標題化合物，將其不經純化用於下一步驟。UPLC-MS-3: Rt = 0.74 min；MS m/z [M+H] ⁺；472.3/474.3。步驟3：1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮

將丙烯酸（0.69 mL，10.1 mmol）、丙基膦酸酐（在EtOAc中50%，5.94 mL，7.53 mmol）和DIPEA（21.6 mL，126 mmol）在CH ₂Cl ₂（80 mL）中之混合物在RT下攪拌20 min，然後添加（滴液漏斗）至5-氯-6-甲基-4-(5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1-(2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-基)-1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑三氟乙酸酯（步驟2，6.30 mmol）在CH ₂Cl ₂（40 mL）中之冰冷的溶液中。將反應混合物在RT下在氮氣下攪拌15 min。將RM倒入飽和NaHCO ₃水溶液並用CH ₂Cl ₂（x3）萃取。將合併的有機層乾燥（相分離器）並濃縮。將粗殘餘物用THF（60 mL）稀釋並添加LiOH（2N，15.7 mL，31.5 mmol）。將混合物在RT下攪拌30 min直到由丙烯醯氯與吲唑的游離NH基團反應產生的副產物消失（UPLC），然後倒入飽和NaHCO ₃水溶液中並用CH ₂Cl ₂（3x）萃取。將合併的有機層乾燥（相分離器）並濃縮。將粗殘餘物藉由正相層析法（洗脫液：在CH ₂Cl ₂中之MeOH從0%至5%）純化以給出標題化合物。將異構物藉由手性SFC（C-SFC-1；流動相：CO ₂/[IPA+0.1% Et ₃N]: 69/31）分離，以給出作為第二洗脫峰的化合物A，即a( R)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮（白色粉末）： ¹H NMR (600 MHz, DMSO- d ₆) δ 13.1 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.30 (d, 1H), 6.33 (m, 1H), 6.12 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.91 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 4.11 (s, 1H), 4.04 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.96-2.86 (m, 2H), 2.83-2.78 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.04 (s, 3H)；UPLC-MS-4: Rt = 4.22 min；MS m/z [M+H] ⁺526.3/528.3；C-SFC-3（流動相：CO ₂/[IPA+0.1% Et ₃N]: 67/33）：Rt = 2.23 min。實例1的化合物又稱為「化合物A」。

獲得作為第一洗脫峰的化合物A的阻轉異構物，a( S)-1-(6-(4-(5-氯-6-甲基-1H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-1H-吡唑-1-基)-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基)丙-2-烯-1-酮：C-SFC-3（流動相：CO ₂/[IPA+0.1% Et ₃N]: 67/33）：Rt = 1.55 min。實例2：化合物A（JDQ443）在KRAS G12C突變型CDX模型中顯示出抗腫瘤活性，這係由目標佔有率驅動的

在一組不同適應症的KRAS G12C突變型CDX模型中，每日口服劑量為10 mg/kg、30 mg/kg和100 mg/kg時JDQ443的單一藥劑抗腫瘤活性。異種移植細胞系為：MIA PaCa-2（PDAC）；NCI-H2122，LU99，HCC-44，NCI-H2030（NSCLC）；和KYSE410（食道癌）。JDQ443以劑量依賴性方式抑制所有模型的生長（圖8A），其中劑量反應動力學和最大反應模式的模型特異性差異從消退（MIA PaCa-2，LU99），到停滯（HCC44，NCI-H2122），到中度腫瘤抑制（NCI-H2030，KYSE410）不等。LU99中觀察到最大動態範圍。相比之下，JDQ443在KRASG12V突變型異種移植模型（NCI-H441；圖8B）中未顯示生長抑制，這證實了KRASG12C的特異性，並且與體外數據一致。每日一次（QD）或每日兩次（BID）投與相同的日劑量，功效得以維持：在MIA PaCa-2中，30 mg/kg QD對比15 mg/kg BID（圖8C），或在NCI-H2122和LU99中，100 mg/kg QD對比50 mg/kg BID（圖8D-E）。QD對比BID給藥的功效與血液中濃度-時間曲線下的可比日面積（AUC）密切相關。

該等發現表明，JDQ443的功效與目標佔有率（TO）有關，並且在QD和BID給藥下都可以實現有效的AUC暴露。為了表徵AUC是否可以充當TO的替代物，研究了LU99異種移植模型中連續輸注對比口服給藥的效果。每日一次口服給藥30 mg/kg誘導了約一週的停滯，隨後是腫瘤進展，並且100 mg/kg誘導了腫瘤消退（圖8F），其中穩態平均濃度（Cav）分別大致為0.3 µM和約1 µM。為了評估連續給藥，經由可程式設計微量輸注泵靜脈內遞送JDQ443，從而實現接近口服Cav的目標濃度。連續輸注和口服給藥產生相當的抗腫瘤反應（圖8F、G）。PK/PD模型模擬表明，功效與JDQ443的TO和AUC相關性最好（圖8H、I），而不是其他PK指標。實例3：化合物A強效抑制KRAS G12C H95Q（在臨床試驗仲介導對阿達格拉西布抗性的雙突變體）

GFP標記的KRASG12C H95Q、KRASG12C Y96D或KRASG12C R68S雙突變藉由定點誘變產生（QuikChange Lightning定點誘變套組（目錄號210518）模板：pcDNA3.1(+)EGFP-T2A-FLAG-KRAS G12C），並藉由穩定轉染在含有Ba/F3細胞的Cas9中表現。用從10 mM的DMSO原液中1/3稀釋的10 μM開始的劑量反應曲線處理細胞。用指定的化合物處理細胞系72小時，並且用CellTiter-Glo測量細胞的活力。結果：

與MRTX-849（阿達格拉西布）不同，JDQ443（化合物A）和AMG-510（索托拉西布）強效抑制KRASG12C H95Q雙突變體的細胞活力。MRTX-849、AMG-510或JDQ443在指定的濃度和所述環境下（Ba/F3系統，3天增殖測定）不能抑制KRASG12C Y96D或KRASG12C R68S雙突變體，並且該等雙突變體對所有三種測試的KRASG12C抑制劑產生抗性。

KRAS G12C抑制劑	GI ₅₀[µM] +/- 標準差（STDEV）
KRAS G12C H95Q	KRAS G12C Y96D	KRAS G12C R68S
NVP-JDQ443（化合物A）	0.57 +/- 0.18	＞ 10	＞ 10
AMG-510（索托拉西布）	0.26 +/- 0.06	＞ 10	＞ 10
MRTX-849（阿達格拉西布）	＞ 10	＞ 10	＞ 10

結論：

在KRASG12C H95Q情況下，化合物A可能克服對阿達格拉西布的抗性。另外，由於化合物A與突變型KRAS G12C有獨特的結合相互作用，當與索托拉西布和阿達格拉西布相比時，單獨的或與如本文所述之一或多種治療劑組合的化合物A，可用於治療先前用其他KRAS G12C抑制劑（如索托拉西布或阿達格拉西布）治療的患有癌症的患者，或在初始KRAS G12C抑制劑治療中出現獲得性KRAS抗性突變後靶向抗性。實例4：化合物A強效抑制KRAS G12C雙突變體

如下還研究了化合物A和其他KRASG12C抑制劑對所報導的賦予對阿達格拉西布抗性的第二位點突變的影響。 材料與方法： 細胞系和 KRAS ^G12C 抑制劑：

除非另外指示，否則Ba/F3細胞系係小鼠原B細胞系，並且在補充有10%的胎牛血清（FBS）（生物概念公司（BioConcept），#2-01F30-I）、2 mM丙酮酸鈉（生物概念公司，# 5-60F00-H）、2 mM穩定的麩醯胺酸（生物概念公司，# 5-10K50-H）、10 mM HEPES（生物概念公司，# 5-31F00-H）的RPMI 1640（生物概念公司，#1-41F01-I）中在37°C和5% CO ₂下培養。將親代Ba/F3細胞在5 ng/ml的重組鼠IL-3（生命技術公司（Life Technologies），#PMC0035）存在下培養。Ba/F3細胞通常依賴IL-3生存和增殖，然而，藉由表現致癌基因，它們能夠將其依賴性從IL-3轉向所表現的致癌基因（Curr Opin Oncology [腫瘤學當代視點], 2007年1月; 19(1):55-60. doi: 10.1097/CCO.0b013e328011a25f.） 單個質體誘變和 Ba/F3 穩定細胞系的產生：

使用QuikChange Lightning定點誘變套組（安捷倫公司（Agilent）；# 210519）以在pSG5_Flag-（密碼子優化）KRAS ^G12C_puro質體模板上產生抗性突變，並藉由桑格定序（sanger sequencing）確認序列。

引物	引物序列	SEQ ID NO
H95R_正向	5'-gtcatttgaagatatccaccgttatcgcgagcagattaaga-3'	552
H95R_反向	5'-tcttaatctgctcgcgataacggtggatatcttcaaatgac-3'	553
H95Q_正向	5'-tcatttgaagatatccaccagtatcgcgagcagattaagag-3'	554
H95Q_反向	5'-ctcttaatctgctcgcgatactggtggatatcttcaaatga-3'	555
H95D_正向	5'-agtcatttgaagatatccacgattatcgcgagcagattaag-3'	556
H95D_反向	5'-cttaatctgctcgcgataatcgtggatatcttcaaatgact-3'	557
MR68S_正向	5'-gaagagtactccgcaatgagcgatcaatacatgaggacg-3'	558
R68S_反向	5'-cgtcctcatgtattgatcgctcattgcggagtactcttc-3'	559
Y96C_正向	5'-cgaagtcatttgaagatatccaccattgtcgcgagcagatta-3'	560
Y96C_反向	5'-taatctgctcgcgacaatggtggatatcttcaaatgacttcg-3'	561
Y96D_正向	5'-cgaagtcatttgaagatatccaccatgatcgcgagcagatt-3	562
Y96D_反向	5'-aatctgctcgcgatcatggtggatatcttcaaatgacttcg-3'	563

將突變型質體用NEON轉染套組（英傑公司（Invitrogen），#MPK10025）藉由電穿孔轉染到Ba/F3 WT細胞中。因此，用NEON系統（英傑公司，#MPK5000）（使用以下條件：電壓（V）1635，寬度（ms）20，脈衝1）來用10 μg pf質體電穿孔二百萬個Ba/F3細胞。電穿孔72小時後，以1 μg/ml進行嘌呤黴素選擇，以產生穩定的細胞系。 IL-3 退出（ withdrawal ）

Ba/F3細胞通常依賴IL-3生存和增殖，然而，藉由表現致癌基因，它們能夠將其依賴性從IL-3轉向所表現的致癌基因。為了評估KRAS ^G12C單和雙突變體是否能夠維持Ba/F3細胞的增殖，在不存在IL-3的情況下培養表現突變構建體的工程化Ba/F3細胞。每三天測量一次細胞數量和活力，並且七天後完成IL-3退出。藉由西方墨點法（數據未顯示，觀察到KRAS ^G12C/R68S的上移）確認IL-3退出後突變體的表現。 KRASG12C 抑制劑的藥物反應曲線和抗性突變的驗證：

將1000個Ba/F3細胞/孔接種到96孔板（葛萊娜第一生化公司（Greiner Bio-One），#655098）中。在同一天用Tecan D300e藥物分配器進行處理。在Tecan infinitiy M200 Pro讀數器（積分時間1000 ms）上，使用CellTiter-Glo發光細胞活力測定（普洛麥格公司（Promega），#G7573），在處理起始板（第0天）的同一天和處理後三天（第3天）檢測活力。

為了確定生長情況，將處理後三天（第3天）的讀數相對於起始板（第0天）歸一化。然後藉由將處理過的孔相對於DMSO處理過的對照樣本歸一化來計算活力百分比。使用XLfit來製作Sigmoidal劑量-反應模型的擬合曲線（四參數曲線）（圖9）。水平的紅色虛線代表GI50值。表格數據顯示如下。表：化合物A（JDQ443）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響。（«STDEV»表示%增長值的標準差）

相對於第3天的處理，經處理的細胞的%生長	濃度 [μM]
1	0.333333	0.111111	0.037037	0.012346	0.004115	0.001372	0.000457
G12C	4.279	20.252	44.204	72.785	89.361	93.832	97.516	95.501
G12C STDEV	0.961	0.345	3.567	3.058	1.072	0.770	3.921	3.639
H95R	0.321	5.323	23.425	52.178	66.971	83.996	92.517	103.118
H95R STDEV	0.943	0.276	0.779	1.034	0.897	3.344	3.811	7.044
H95Q	6.635	36.908	71.333	93.319	95.722	103.375	93.606	100.054
H95Q STDEV	2.025	0.910	11.656	4.209	0.919	6.685	3.996	2.621
H95D	28.569	68.199	88.358	102.308	97.783	90.379	91.567	96.429
H95D STDEV	1.055	4.247	2.997	6.409	3.644	0.087	2.074	7.212
R68S	69.159	93.111	103.721	108.276	104.608	100.329	103.390	100.931
R68S STDEV	7.892	4.607	9.627	6.839	0.781	4.288	2.838	0.996
Y96C	80.229	91.765	102.592	104.222	96.167	105.515	102.424	109.116
Y96C STDEV	1.667	0.222	2.981	1.230	0.896	4.837	5.863	4.380
Y96D	90.864	97.260	105.866	103.946	106.613	98.191	102.224	100.903
Y96D STDEV	0.852	0.105	4.943	6.090	3.050	1.435	5.305	3.229

表：索托拉西布（AMG510）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響（«STDEV»表示%增長值的標準差）

相對於第3天的處理，經處理的細胞的%生長	濃度 [μM]
1	0.333333	0.111111	0.037037	0.012346	0.004115	0.001372	0.000457
G12C	24.244	46.199	71.315	77.193	92.241	95.211	94.786	100.303
G12C STDEV	5.785	4.703	0.727	0.776	2.500	1.603	2.016	5.046
H95R	3.485	8.354	23.503	53.471	71.098	83.029	90.450	93.527
H95R STDEV	1.825	1.731	0.971	4.408	1.615	6.613	10.693	5.561
H95Q	8.566	34.323	68.123	89.685	93.396	98.559	103.616	98.858
H95Q STDEV	2.203	1.572	6.416	5.515	0.970	1.603	4.610	1.842
H95D	-1.171	33.638	74.059	91.299	91.484	99.189	93.064	103.216
H95D STDEV	0.374	1.962	1.683	0.716	2.837	6.975	2.489	5.237
R68S	79.748	94.396	102.811	98.842	99.936	100.994	94.166	95.566
R68S STDEV	3.473	7.672	2.021	3.308	0.455	0.885	1.904	1.680
Y96C	111.964	105.031	103.341	97.712	104.892	109.010	106.167	103.355
Y96C STDEV	3.326	0.058	2.472	2.258	0.105	2.374	0.266	3.889
Y96D	106.099	101.660	101.868	97.311	102.190	106.308	101.134	105.511
Y96D STDEV	7.943	8.231	5.850	1.065	8.679	8.652	10.362	3.819

表：阿達格拉西布（MRTX-849）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響（«STDEV»表示%增長值的標準差）

相對於第3天的處理，經處理的細胞的%生長	濃度 [μM]
1	0.333333	0.111111	0.037037	0.012346	0.004115	0.001372	0.000457
G12C	-0.266	16.329	51.013	72.820	87.908	90.538	97.358	99.591
G12C STDEV	0.026	0.281	1.081	5.419	4.200	3.922	1.669	7.272
H95R	64.097	87.126	83.910	90.693	96.751	85.570	95.027	89.422
H95R STDEV	6.732	10.191	5.867	1.326	1.261	8.143	11.049	7.126
H95Q	73.397	88.044	95.662	101.071	92.756	100.136	91.377	98.312
H95Q STDEV	6.148	0.323	0.148	0.289	1.657	1.053	5.052	1.475
H95D	82.356	91.214	103.587	100.461	103.684	89.514	98.169	92.404
H95D STDEV	6.938	2.123	4.434	4.185	5.798	3.766	1.029	2.848
R68S	26.823	84.668	94.008	101.452	105.903	100.837	99.142	97.443
R68S STDEV	2.129	0.233	1.666	0.085	7.640	1.368	3.217	1.746
Y96C	82.638	96.520	99.562	102.615	105.187	101.092	100.220	99.819
Y96C STDEV	9.540	4.002	2.065	3.987	4.264	2.673	6.930	10.013
Y96D	81.671	95.056	108.171	97.824	105.964	97.437	102.545	106.432
Y96D STDEV	3.884	2.842	0.058	4.085	8.415	7.575	0.349	6.625

西方墨點法

用不同化合物以指定濃度處理指定的時間後，將細胞收集，沈澱並在-80°C下速凍。向每個樣本中添加60 μL的裂解緩衝液（50 mM Tris HCl、120 mM NaCl、25 mM NaF、40 mM β-甘油磷酸二鈉五水合物、1% NP40、1 μM微囊藻毒素、0.1 mM Na3VO3、0.1 mM PMSF、1 mM DTT和1 mM苯甲脒，每10 mL緩衝液補充有1片蛋白酶抑制劑混合片劑（羅氏公司））。然後將樣本渦旋，在冰上孵育10 min，再渦旋並在4°C下以14000 rpm離心10 min。用BCA蛋白質測定套組（皮爾斯公司（Pierce），23225）確定蛋白質濃度。用裂解緩衝液歸一到相同的總體積後，添加NuPAGE™ LDS樣本緩衝液4 X（英傑公司，NP0007）和NuPAGE™樣本還原劑10 X（英傑公司，NP0009）。將樣本在70°C下加熱10 min，然後載入到NuPAGE™ Novex™ 4%-12% Bis-Tris Midi蛋白凝膠，26 -孔（英傑公司，WG1403A）上。在NuPAGE MES SDS運行緩衝液（英傑公司，NP0002）中，在200 V下跑膠45 min（PowerPac HC，伯樂公司（Biorad））。使用Trans-Blot® Turbo™系統（伯樂公司），持續7 min將蛋白質以每凝膠135 mA轉移到Trans-Blot® Turbo™ Midi硝酸纖維素轉移包膜（伯樂公司，1704159）上，然後用Ponceau紅（西格瑪公司（Sigma），P7170）對膜染色。用含有5%乳的TBST在RT下阻斷膜。將抗RAS（艾博抗公司（Abcam），108602）抗體和抗磷酸化ERK 1/2 p44/42 MAPK（細胞傳訊公司（Cell Signaling），4370）抗體在4°C下孵育過夜，將抗黏著斑蛋白（西格瑪公司，V9131）抗體在RT下孵育1 h。將膜用TBST洗滌3次持續5 min，並將抗兔（細胞傳訊公司，7074）和抗小鼠（細胞傳訊公司，7076）二抗在RT下孵育1 h。將所有抗體在TBST中稀釋到1/1000，除抗黏著斑蛋白（1/3000）。在Fusion FX（Vilber Lourmat）上使用FusionCapt Advance FX7軟體，用針對Ras和黏著斑蛋白的WesternBright ECL（Advansta公司，K-12045-D20）和SuperSignal West Femto最高靈敏度底物（賽默飛世爾公司（Thermo Fischer），34096）進行確定。（圖10）。結果

表：化合物A（JDQ443）抑制KRAS G12C/H95雙突變體的增殖。用JDQ443（化合物A）、AMG-510（索托拉西布）和MRTX-849（阿達格拉西布）（從1 mM開始進行8點稀釋）處理表現指定FLAG-KRAS ^G12C單突變體或雙突變體的Ba/F3細胞3天，並藉由Cell titer glo活力測定評估增殖抑制。顯示了4個獨立實驗的GI ₅₀± 標準差（St DV）的平均值。

GI50 ± St DV [μM]	JDQ443	AMG-510	MRTX-849
G12C	0.115 ± 0.060	0.389 ± 0.235	0.136 ± 0.071
G12C/H95R	0.024 ± 0.006	0.033 ± 0.008	＞ 1
G12C/H95Q	0.284 ± 0.041	0.233 ± 0.022	＞ 1
G12C/H95D	0.612 ± 0.151	0.262 ± 0.088	＞ 1
G12C/R68S	＞ 1	＞ 1	0.707 ± 0.165
G12C/Y96C	＞ 1	＞ 1	＞ 1
G12C/Y96D	＞ 1	＞ 1	＞ 1

生物物理數據 材料與方法： 試劑的製備： RAS 蛋白構建體的選殖、表現和純化

本研究中使用的大腸桿菌表現構建體基於pET系統，並使用標準的分子選殖技術產生。在可裂解的N-末端his親和純化標籤後，編碼KRAS、NRAS和HRAS的cDNA包含aa 1-169，並藉由GeneArt（賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific））進行密碼子優化和合成。用QuikChange Lightning定點誘變套組（安捷倫公司）引入點突變。藉由桑格定序對所有最終的表現構建體進行序列驗證。

對兩升培養基接種用表現質體新鮮轉化的大腸桿菌BL21（DE3）的預培養物，並用1 mM異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（西格瑪公司）在18°C下誘導蛋白表現16小時。將帶有avi-標籤的蛋白質轉化到攜帶表現生物素連接酶BirA的相容質體的大腸桿菌中，並在培養基中補充135 µM d-生物素（西格瑪公司）。

將細胞沈澱重懸於補充有Turbonuclease（默克公司（Merck））和cOmplete蛋白酶抑制劑片劑（羅氏公司）的緩衝液A（20 mM Tris、500 mM NaCl、5 mM咪唑、2 mM TCEP、10%甘油，pH 8.0）中。將細胞通過勻漿器（Avestin公司）在800-1000巴下裂解三次，並藉由在40000 g下離心40 min來澄清裂解物。

將裂解物載入到安裝在ÄKTA Pure 25層析系統（思拓凡公司（Cytiva））上的HisTrap HP 5 ml柱（思拓凡公司）上。將污染的蛋白質用緩衝液A洗去，並將結合的蛋白質用線性梯度洗脫到緩衝液B（補充有200 mM咪唑的緩衝液A）中。在透析O/N期間，將無標籤和avi-標籤蛋白質上的N-末端His親和純化標籤分別藉由TEV或HRV3C蛋白酶裂解。將蛋白溶液重新載入到HisTrap柱上，並收集含有靶蛋白的流。

添加5'-二磷酸鳥苷鈉鹽（GDP，西格瑪公司）或GppNHp-四鋰鹽（Jena生物科學公司）至超過蛋白質24-32倍的莫耳量。添加EDTA（pH調節至8）至最終濃度為25 mM。室溫下1小時後，在PD-10脫鹽柱（思拓凡公司）上，將緩衝液與40 mM Tris、200 mM (NH4)2SO4、0.1 mM ZnCl2，pH 8.0進行交換。將GDP（用於KRAS G12C抗性突變體H95Q/D/R、Y96D/C和R68S）或GppNHp添加至洗脫蛋白質中至超過蛋白質24-32倍的莫耳量。將40 U蝦鹼性磷酸酶（新英格蘭生物實驗室（New England Biolabs））添加到僅含有樣本的GppNHp中。然後將樣本在5°C下孵育1小時。最後，添加MgCl2至濃度為約30 mM。

然後將蛋白質經HiLoad 16/600 Superdex 200 pg柱（思拓凡公司）進一步純化，該柱用20 mM HEPES、150 mM NaCl、5 mM MgCl2、2 mM TCEP預平衡，pH 7.5。

藉由RP-HPLC確定蛋白質的純度和濃度，藉由LC-MS確認其身份。藉由離子對層析法確定目前的核苷酸[Eberth等人, 2009]。藉由 RapidFire MS 確定共價速率常數 測定和曲線擬合

在384孔板中製備測試化合物的連續稀釋液（50 µM，½稀釋液），並在室溫下與1 µM KRAS G12C（有/無另外的突變體）在20 mM Tris（pH 7.5）、150 mM NaCl、100 µM MgCl ₂、1% DMSO中孵育。在不同的時間點藉由添加1%的甲酸停止反應。使用聯接到Agilent RapidFire自動進樣器RF360設備的Agilent 6530四極桿飛行時間（QToF）MS系統進行MS測量，得出每個孔的%修飾值。同時，藉由比濁法評估化合物溶解度，導致可測濁度的化合物濃度被排除在曲線擬合之外。

繪製%修飾相對於時間的關係圖，以提取不同化合物濃度的k _obs值。在第二步中，將獲得的k _obs值相對於化合物濃度作圖。從所得曲線的初始線性部分得出速率常數（即k _inact/K _I）。 MS 測量

使用RapidFire自動進樣器RF 360進行注射。將溶劑藉由Agilent 1200泵遞送。使用C18固相萃取（SPE）筒用於所有的實驗。

從384孔板的每個孔中吸出30 μL的體積。在1.5 mL/min（H2O，0.1%甲酸）的流速下，樣本載入/清洗時間為3000 ms；洗脫時間為3000 ms（乙腈，0.1%甲酸）；在1.25 mL/min（H2O，0.1%甲酸）的流速下，再平衡時間為500 ms。

在聯接到雙電灑（AJS）離子源（處於正模式）的Agilent 6530四極桿飛行時間（QToF）MS系統上獲得質譜（MS）數據。儀器參數如下：氣體溫度350°C，乾燥氣體10 L/min，霧化器45 psi，保護氣體350°C，保護氣體流速11 L/min，毛細管4000 V，噴嘴1000 V，碎裂電壓250 V，撇渣器65 V，八極RF 750 V。以6個譜/s的速度獲取數據。質量校準在300-3200 m/z範圍內進行。

使用Agilent MassHunter定性分析、Agilent Rapid-Fire控制軟體和Agilent DA Reprocessor Offline Utilities的組合進行所有的數據處理。最大熵演算法產生每個注射的單獨文件中的零電荷譜。批量處理生成單個文件，將文本格式的所有質譜合併為x，y座標。將該文件用於計算每個孔中蛋白質修飾的百分比。結果

使用動力學MS實驗對指定的構建體（所有載入GDP的）的修飾的二階速率常數進行量化，在不同的時間點測量化合物濃度範圍內的%修飾。K _inact/K _I係由k _obs相對於化合物濃度曲線的初始斜率推算出來的。將相對於KRAS G12D:GDP的活性設定為1，並給出了抗性突變體的相對活性。下表給出了KRAS G12C的n = 4次實驗、G12C_Y96D的n = 3次、和其他突變體的n = 2次的平均值。表：抗性突變體相對於KRAS G12C的二階速率常數（K _inact/K _I）的倍數變化

KRAS突變體（GDP）	G12C	G12C_H95R	G12C_H95Q	G12C_H95D	G12C_R68S	G12C_Y96C	G12C_Y96D
化合物A（JDQ443）	1	1.04	0.40	0.20	0.14	0.03	0.004
索托拉西布	1	2.39	1.67	1.45	0.31	＜ 0.002	＜ 0.001
阿達格拉西布	1	＜ 0.05	＜ 0.05	＜ 0.05	0.38	＜ 0.002	＜ 0.001

使用動力學MS實驗對指定的構建體（所有載入GDP的）的修飾的二階速率常數進行量化，在不同的時間點測量化合物濃度範圍內的%修飾。K _inact/KI係由K _obs相對於化合物濃度曲線的初始斜率推算出來的。給出了KRAS G12C的n = 4次實驗、G12C_Y96D的n = 3次、和其他突變體的n = 2次的平均值。表：化合物A（JDQ443）、索托拉西布和阿達格拉西布相對於抗性突變體的二階速率常數（K _inact/KI [mM-1*s-1]）

KRAS突變體（GDP）	G12C	G12C_H95R	G12C_H95Q	G12C_H95D	G12C_R68S	G12C_Y96C	G12C_Y96D
化合物A（JDQ443）	24.3	25	9.5	4.85	3.45	0.65	0.09
索托拉西布	9	21.5	15	13.05	2.75	＜ 0.02	＜ 0.01
阿達格拉西布	26	＜ 1	＜ 1	＜ 1	9.9	＜ 0.04	＜ 0.01

結論

第一代KRAS G12C抑制劑已在臨床試驗中顯示出功效。然而，破壞抑制劑結合和下游通路的重新激活的突變的出現，限制了反應持續時間。據報導，在臨床試驗中，第二位點突變體賦予了對阿達格拉西布的抗性（參考：N Engl J Med. [新英格蘭醫學雜誌] 2021年6月24日;384(25):2382-2393. doi: 10.1056/NEJMoa2105281.、Cancer Discov. [癌症發現] 2021年8月;11(8):1913-1922. doi: 10.1158/2159-8290.CD-21-0365. 2021年4月6日線上發表 PMID: 33824136.），將該等第二位點突變體在Ba/F3細胞中表現，並分析了與KRAS G12C（GI ₅₀= 0.115 ± 0.060 mM）相比它們對化合物A（JDQ443）的敏感性。如結合模式所預期的，化合物A抑制了KRAS G12C H95雙突變體的增殖和傳訊。化合物A強效抑制G12C/H95R和G12C/H95Q的增殖（分別為GI ₅₀= 0.024 ± 0.006 mM，GI ₅₀= 0.284 ± 0.041 mM），而G12C/R68S、G12C/Y96C和G12C/Y96D的表現賦予了對化合物A的抗性（所有的GI ₅₀＞1 mM）。

令人驚訝的是，儘管化合物A不直接與組胺酸95相互作用，但與H95R或Q相比，G12C/H95D的表現導致對化合物A的敏感性降低（GI ₅₀= 0.612 ± 0.151 mM）。化合物A處理後pERK的西方墨點法分析以及生物物理環境中化合物A朝著該等臨床觀察到的SWII袋突變的速率常數分析（ 生物物理數據，上文）都與細胞生長抑制數據一致（參見表）。

H95D與H95R或Q之間的差異可能是由於天冬胺酸的負電荷，其能進一步增加KRAS G12C表面的負靜電電位。這可能影響配位基識別並且因此降低化合物A對該突變體的特異反應性和細胞活性。另一個可能的解釋係，H95D突變可能影響KRAS的動力學，從而使得允許化合物A結合的構象變得更難獲得。

總之，數據顯示，在G12C/Q95R或G12C/H95Q情況下，化合物A應克服阿達格拉西布誘導的抗性。化合物A治療（特別是在本發明之組合中）在其已顯示出活性的G12C/H95Q情況下可能仍然有用。實例5：與RAS上游和RAS下游傳訊的抑制劑組合增強了JDQ443體內抗腫瘤功效

在人類KRAS G12C突變型NSCLC和CRC的PDX小組中，評估了RAS上游或RAS下游傳訊的JDQ443 ± 抑制劑的抗腫瘤功效。

藉由將患者NSCLC或CRC腫瘤組織直接皮下植入裸鼠，建立了人類NSCLC和CRC的患者源性異種移植（PDX）模型。通過體內連續傳代維持PDX模型。

向小鼠群組皮下植入來自每個PDX模型（典型地第4-9次傳代）的腫瘤片段。使用了10種NSCLC和9種CRC PDX模型。出於鑒定和跟蹤之目的，每個模型都用編碼命名，例如30580-HX、30581-HX等。一旦單個小鼠的腫瘤體積達到200-250mm ³（T = 0，在蜘蛛圖的x軸上），將它們分配給治療組或對照組進行給藥。將每個PDX模型的一隻動物分配到每個治療組。一旦入組治療組，每週用卡尺測量兩次腫瘤體積，並且使用以下公式以mm ³估計腫瘤體積：長度 x 寬度 ²/2。每個模型的研究結束被定義為最少28天的治療，或未經治療的腫瘤達到1500 mm ³的持續時間，或未經治療的腫瘤翻兩番的持續時間，以較慢者為準。

使用單獨的或與組合配偶體組合的KRAS G12C抑制劑（按100 mg/kg QD的化合物A）口服治療小鼠，如下表所述。例如，化合物A以100 mg/kg每日一次（QD）與LXH254（萘普拉非尼）以50 mg/kg每日兩次（BID）組合給藥。雙重組合

與化合物A組合的組合配偶體（按100 mg/kg QD的化合物A）	劑量和給藥方案
Raf抑制劑（LXH254（萘普拉非尼））	50 mg/kg，每日兩次（BID）
SHP2抑制劑（TNO155）	10 mg/kg，每日一次（QD）
MEK抑制劑（曲美替尼）	0.3 mg/kg，每日一次（QD）
ERK抑制劑（LTT462（裡內特基布））	50 mg/kg QD
CDK4/6抑制劑（LEE011）	75 mg/kg QD
PI3K抑制劑（BYL719）	50 mg/kg QD
mTOR抑制劑（RAD001）	10 mg/kg QD

三重組合

與化合物A組合的組合配偶體（按100 mg/kg QD的化合物A）	劑量和給藥方案
Raf抑制劑（LXH254（萘普拉非尼））	50 mg/kg，每日兩次（BID）
SHP2抑制劑（TNO155）	10 mg/kg，每日一次（QD）
MEK抑制劑（曲美替尼）	0.3 mg/kg，每日一次（QD）
ERK抑制劑（LTT462（裡內特基布））	50 mg/kg QD
100 mg/kg QD的化合物A + 10 mg/kg每日一次（QD）的SHP2抑制劑（TNO155）	CDK4/6抑制劑（LEE011）-75 mg/kg QD
100 mg/kg QD的化合物A + 10 mg/kg每日一次（QD）的SHP2抑制劑（TNO155）	PI3K抑制劑（BYL719）-50 mg/kg QD

將化合物A和TNO155配製成在0.1% Tween 80和0.5%甲基纖維素水溶液中之懸浮液。將Raf抑制劑（LXH254（萘普拉非尼））配製成懸浮液。將MEK抑制劑（曲美替尼）在0.2% Tween 80、0.5%羥丙基甲基纖維素（HPMC）中配製成懸浮液，pH調節至pH約8。在pH 7.4磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）緩衝液（pH 4）中之0.5%羥丙基纖維素（HPC）/0.5% Pluronic中，將ERK抑制劑（LTT462（裡內特基布））配製成懸浮液。將CDK4/6抑制劑（LEE011）在0.5%甲基纖維素中配製成懸浮液。將PI3K抑制劑（BYL719）配製成在0.5% Tween 80和1%羧甲基纖維素水溶液中之懸浮液。將mTOR抑制劑（RAD001）在5%葡萄糖中進行配製。

對照組未接受治療。結果：

在NSCLC和CRC模型中，所有組合治療的腫瘤體積改善和客觀抗腫瘤反應均大於JDQ443單一療法（圖1-6）。類似地，在兩種模型中觀察到組合治療對腫瘤體積倍增時間的益處（圖7）。

在CRC模型中，在少數模型中，單獨的化合物A治療引起中度抗腫瘤反應。化合物A與每個組合配偶體組合改善了抗腫瘤反應。三重組合似乎進一步改善了反應（圖1和2）。

在NSCLC模型中，單獨的化合物A治療在一半的模型中從未引起抗腫瘤反應到引起中度抗腫瘤反應，而在另一半的模型中引起良好的抗腫瘤反應。化合物A與每個組合配偶體組合改善了抗腫瘤反應（圖3、4和5）。實例6：PI3K抑制劑與單獨的KRAS G12C抑制劑組合使用或在SHP2抑制劑存在下使用，在3天的增殖測定中顯示出最高的協同作用得分。

在 KRAS G12C 突變型 H23細胞系中，在以下項存在的情況下：上游受體激酶抑制劑BGJ398（FGFR抑制劑（圖11中標記為「FGFRi」））和厄洛替尼（EGFR抑制劑（圖11中標記為「EGFRi」））或曲美替尼（MEK抑制劑（圖11中標記為「MEKi」））或PI3K效應子臂抑制劑阿培利司（圖11中標記為「PI3Kαi」）和GDC0941（泛PI3K抑制劑（圖11中標記為「panPI3Ki」）），以KRAS ^G12C抑制劑（圖11中標記為「KRAS ^G12Ci」）作為單一藥劑或與10 μM SHP099（SHP2抑制劑（圖11中標記為「SHP2i」））組合進行矩陣組合增殖測定（治療時間3天，細胞滴度發光測定）。

協同作用得分（SS）係藉由羅威指數（Loewe index）計算的，並且在每個網格頂部表示為「SS」值。網格中的值係生長抑制（%）值：高於100%的值表示細胞死亡。生長抑制%：0-99 = 增殖延遲，100 = 生長驟停/停滯，101-200 = 細胞數量減少/細胞死亡。

每個網格x軸上的值表示所用KRASG12c抑制劑的濃度（μM）。每個網格y軸上的值示出第二藥劑（即分別是FGFR抑制劑、EGFR抑制劑、MEK抑制劑、PI3αK抑制劑和泛PI3K抑制劑）的濃度（μM）。

如圖11A和圖11B所示，向KRASG12C抑制劑和選自FGFR抑制劑、EGFR抑制劑、MEK抑制劑和PI3K抑制劑的第二藥劑的雙重組合中添加SHP2抑制劑增加了協同作用得分。例如，協同作用得分從KRASG12 C抑制劑和EGFR抑制劑的雙重組合的1.522增加至KRASG12 C抑制劑、EGFR抑制劑和SHP2抑制劑的三重組合的3.533。

在與單獨的KRAS G12C抑制劑組合的PI3K抑制劑存在下，或在SHP2抑制劑存在下，獲得了最高的協同作用得分（圖11A和圖11B）。實例7：在NSCLC細胞系中，與厄洛替尼或西妥昔單抗組合的JDQ443的劑量反應化合物A和瑞博西尼的組合對NSCLC異種移植模型的有益作用。

在小鼠KRAS G12C和CDKN2A突變型LU99異種移植模型中進行了化合物A與瑞博西尼的組合研究。化合物A單一藥劑誘導了腫瘤消退，持續大約兩週半，隨後在治療仍在進行時腫瘤復發。瑞博西尼單一藥劑對腫瘤生長沒有任何影響。組合顯著改善了化合物A作為單一藥劑所見的反應的可持續性和復發時間。實例8：在NSCLC異種移植模型中，與用化合物A單一藥劑治療相比，化合物A與SHP2抑制劑、PI3K抑制劑或CDK4/6抑制劑組合使用延遲了進展時間（TPP）。

在小鼠KRAS G12C、PIK3CA和CDKN2A突變型LU99異種移植模型中，進行了化合物A（JDQ443）作為單一藥劑或與TNO155（SHP2抑制劑）、BYL719（阿培利司，PI3K抑制劑）和LEE011（瑞博西尼，CDK4/6抑制劑）組合（雙重、三重、四重）的體內功效研究。以100 mg/kg每日給藥JDQ443誘導了深度腫瘤消退，持續大約兩週半，隨後在治療仍在進行時腫瘤復發。與媒介物組相比，每日給予7.5 mg/kg TNO155對腫瘤生長沒有任何影響。

JDQ443與TNO155、BYL719或LEE011的雙重組合，JDQ443與TNO155與BYL719或LEE011的三重組合，以及JDQ443與TNO155、BYL719和LEE011的四重組合改善了JDQ443作為單一藥劑所見的反應的可持續性和進展時間，順序如下：單一藥劑＜雙重組合＜三重組合＜四重組合（圖12）。實例9：化合物A（JDQ443）與EGFR抑制劑組合用於NSCLC細胞系和CRC細胞系的劑量反應

在CRC細胞系（SW1463）中，西妥昔單抗和化合物A的組合給化合物A治療和西妥昔單抗治療帶來了另外的益處（圖13，頂部小圖）。

在NSCLC（NCI-H358和NCI-H2122）細胞系中，厄洛替尼或西妥昔單抗與化合物A的組合也增加了%生長抑制（圖13，中間和底部的小圖）。實例10：化合物A、SOS抑制劑BI-3406，以及化合物A、SOS抑制劑BI-3406的組合對NSCLC和CRC細胞系的影響。

矩陣組合增殖測定係如下所示進行的。對於每個細胞系，將細胞分配到組織培養處理的384孔板（葛萊娜公司（Greiner）#781098）中，最終體積為25 μL/孔。允許細胞黏附並開始生長二十四小時。在治療前（= 第1天）對平板進行計數，並且另一個平板使用HP D300數位分配器用化合物或DMSO進行處理。七十二小時後，藉由每孔補充25 µl含有相應化合物或DMSO的培養基來更新培養基。一式三份進行所有處理。

在治療開始七天後，使用CellTiter-Glo®（普洛麥格公司，＃G7573）確定細胞生長，該試劑可測量孔中的ATP量。將板平衡至室溫約三十分鐘，並添加等於細胞培養基體積的一體積的CellTiter-Glo®試劑。在軌道振盪器上誘導細胞裂解兩分鐘，將板在室溫下孵育十分鐘，並記錄發光。

用指定最終濃度的化合物處理細胞。使用XLfit劑量反應單位點模型205得出劑量反應曲線。報告的係減去第1天的讀數後，生長抑制相對於DMSO的百分比（百分比GI）。

用SOS抑制劑BI-3406單一藥劑處理觀察到低生長抑制。添加KRAS G12C抑制劑後觀察到組合益處（圖14）。實例11：化合物A作為單一療法和組合療法的臨床功效

在患有具有KRAS G12C突變的晚期實性瘤（包括KRAS G12C突變型NSCLC和KRAS G12C突變型結直腸癌（KontRASt-01（NCT04699188）））的患者中，進行了單獨的化合物A（JDQ443）及其與特定藥劑組合的Ib/II期開放標籤、多中心、劑量遞增研究。進行本研究，從而評估JDQ443作為單一藥劑以及JDQ443與其他藥劑組合的抗腫瘤功效、安全性和耐受性。JDQ443+TNO155和JDQ443+PD1抑制劑（如替雷利珠單抗（tislelizumab））可以用於治療患有KRAS G12C突變型實性瘤的患者。

待治療的患者包括：患有晚期KRAS G12C突變型實性瘤的患者，其已經接受過標準護理療法，或對於批准的療法不耐受或不具有資格；或者，東部腫瘤協作組體能狀態（Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status，ECOG PS 0-1）；或者之前沒有使用過KRAS ^G12C抑制劑進行治療。JDQ443單一療法組的主要排除標準係：活動性腦轉移和/或之前的KRASG12C抑制劑治療。

患有NSCLC的患者包括：先前使用基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑組合或順序治療的患者，除非沒有資格接受此類療法。

患有CRC的患者包括先前接受標準護理療法的患者，該療法包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑和伊立替康的化學療法，除非沒有資格接受此類療法。

來自單一療法劑量遞增組研究的初步數據如下。

截止日期2022年1月5日，使用200 mg QD、400 mg QD、200 mg BID或300 mg BID的化合物A治療了39名患者。化合物A係與食物一起投與的。患者具有的中位數係3個先前線的抗腫瘤療法。單一療法的推薦劑量係每日兩次（BID）口服200 mg化合物A的劑量。來自彙集的Ib期JDQ443單一藥劑群組（n = 39）的功效數據（截止2022年1月05日）顯示： • 在NSCLC中，在200 mg BID時，57%（4/7）確認總體反應率（ORR） • 在NSCLC中，在各劑量下，45%（9/20）確認和未確認ORR • 在NSCLC中，在各劑量下，35%（7/20）確認ORR • PD/PK建模預測在推薦劑量200 mg BID時，持續的高水平目標佔有率

化合物A治療通常是良好耐受的。大多數治療相關不良事件（TRAE）為1-2級（Gr）。不存在4-5級TRAE。在4個單獨的患者中發生四次3級TRAE。最常見的TRAE係疲勞、噁心、水腫、腹瀉和嘔吐。各自在300 mg BID治療的單獨患者中，存在一例DLT（3級疲勞）和一例治療相關的嚴重AE（3級光敏反應）。

在推薦的200 mg BID的劑量下，存在延長吸收，其中在與食物一起投與後，達到最大血漿濃度（Tmax）的中位時間為3-4 hr。在穩定狀態下未觀察到顯著累積，並且也不存在自誘導的證據。半衰期係約7小時，並且穩態曲線下面積（AUCss）比敏感度更低的KRAS G12C異種移植模型的最大功效所需暴露量高出大於三倍。圖15示出了穩態下的PK曲線。

T _max （ hr ），中位數（ min-max ）	C _max,ss （ ng/mL ），幾何平均值（ CV% ）	AUC _0-12,ss （ *nghr/mL ），幾何平均值（ CV%** ）
3.2（2.0-7.8）	5950（35.0）	49,400（39.0）

預測的目標佔有率曲線如圖15所示。對患者PK和臨床前目標佔有率模型進行整合，從而預測在＞ 82%患者中的患者目標佔有率＞ 90%。該等模型假設小鼠和人類中的JDQ443結合和靶點（KRAS）轉化率相同（KRAS的半衰期約為25 hr），並且僅游離藥物可以結合靶點。

圖16上半部分和下表中顯示了各劑量水平和適應症時的最佳總體反應。

研究者根據實性瘤的反應評價標準1.1版（RECIST v1.1）評估的最佳總體反應	所有患者，N = 39， n（%）
部分反應（PR）（確認的）	8（20.5）
穩定疾病（SD）	24（61.5）
進展性疾病（PD）	5（12.8）
不可評估（NE）	2（5.1）
總體反應率（ORR）（確認和未確認的）	11（28.2）
ORR（確認的）	8（20.5）

圖16下半部分和下表顯示了所有患有NSCLC的患者在各劑量水平下的最佳總體反應。所有具有部分反應或未確認的部分反應的患者均在數據截止時繼續進行治療。

研究者根據RECIST v1.1評估的最佳總體反應	所有患有NSCLC的患者，n = 20， n（%）
PR（確認的）	7（35.0）
SD	11（55.0）
PD	0
NE	2（10.0）
ORR（確認和未確認的）	9（45.0）
ORR（確認的）	7（35.0）

NE，不可評估；NSCLC，非小細胞肺癌；ORR，總體反應率；PD，進展性疾病；PR，部分反應；QD，每日一次。

反應係由研究者根據RECIST v1.1評估的。兩名（10.0%）患者有uPR，這有助於ORR（確認和未確認的）。

uPR=未確認的PR待確認，正在進行治療，無PD。在數據截止後，兩名具有uPR的患者中有一名具有確認的PR。 • 圖17顯示，PET掃描顯示，向患有NSCLC的患者投與200 mg BID的化合物A治療四個週期後，腫瘤腫塊的2-[氟-18]-氟-2-去氧-d-葡萄糖（18-F-FDG）親合力大幅下降。患者已經接受培美曲塞/派姆單抗、多西他賽、替加氟/吉美嘧啶/奧替拉西和卡鉑/紫杉醇/阿特珠單抗。第2週期後掃描顯示，與基線相比，靶病灶的最長直徑的總和減少了30.4%。PR在後續掃描中得到確認

化合物A和SHP2抑制劑（如TNO155）的組合也顯示出臨床功效。圖18示出了來自患者的第2週期後掃描，該患者患有 KRAS G12C突變型十二指腸乳頭癌，並且先前已經接受順鉑/吉西他濱和替加氟治療，每種藥物具有進展性疾病的最佳反應。使用JDQ443 200 mg QD連續和TNO155 20 mg QD 2週投與/1週停用治療患者。第2週期後掃描顯示，與基線相比，靶病灶的最長直徑的總和減少了44.2%。

本文提供了兩例在首次人體臨床試驗中接受治療的患者，從而說明單獨的JDQ443或與TNO155組合的臨床抗腫瘤活性（圖17和圖18）。

病例1：患有轉移性KRAS G12C突變型NSCLC的57歲老年男性。使用下一代定序（NGS）進行的局部分子測試鑒定出TP53中沒有突變。STK11、KEAP1和NRF2的突變狀態未知。患者已經接受先前的卡鉑/培美曲塞/派姆單抗、多西他賽、替加氟-吉美嘧啶-奧替拉西和卡鉑/紫杉醇/阿特珠單抗。他被納入研究的JDQ443單一療法劑量遞增部分，劑量為JDQ443 200 mg BID，以21天為週期連續給予。2個治療週期後的疾病評估顯示了RECIST 1.1部分反應，其中與基線相比，靶病灶的最長直徑的總和改變了-30.4%。部分反應在隨後的掃描中得到確認（圖17），並且患者繼續治療。基線處和4個治療週期後的正電子發射斷層掃描成像也顯示腫瘤腫塊的2-[氟-18]-氟-2-去氧-d-葡萄糖親合力大幅下降。

病例2：患有轉移至肝臟的KRAS G12C突變型十二指腸乳頭癌的58歲老年女性。藉由NGS（Foundation One小組）觀察到TP53中存在R175H突變。患者已經接受先前使用順鉑/吉西他濱和替加氟的治療，這兩種方案具有進展性疾病的最佳反應。她被納入研究的JDQ443 + TNO155組的劑量遞增部分，並且接受連續的JDQ443 200 mg QD，伴隨TNO155 20 mg QD，2週投與/2週停用。兩個治療週期後的疾病評估顯示了RECIST 1.1部分反應，其中與基線相比，靶病灶的最長直徑的總和改變了-44.2%（圖18）。部分反應在隨後的掃描中得到確認，並且患者繼續治療。

實例12：在患有先前治療的、局部晚期或轉移性KRAS G12C突變型NSCLC的患者中，研究化合物A對比多西他賽的臨床研究

進行了一項開放標籤研究，該研究被設計為在患有帶有KRAS G12C突變的晚期非小細胞肺癌（NSCLC）的參與者中比較作為單一療法的化合物A與多西他賽，該等參與者先前已用基於鉑的化學療法和免疫檢查點抑制劑療法順序或組合治療。

該研究由2個部分組成：

- 隨機部分將評估與多西他賽相比化合物A作為單一療法的功效和安全性。

- 擴展部分將在最終無進展生存期（PFS）分析後開放（如果主要終點達到統計學意義），以允許隨機接受多西他賽治療的參與者交叉接受化合物A治療。

研究群體包括患有局部晚期或轉移性（IIIB/IIIC或IV期）KRAS G12C突變型非小細胞肺癌的成年參與者，該等參與者之前接受過順序或作為組合療法投與的基於鉑的化學療法和免疫檢查點抑制劑療法。

根據護理標準和產品標籤，按照當地準則用化合物A或多西他賽對參與者進行治療（多西他賽濃縮溶液用於輸注，靜脈內投與）主要結果量度包括：無進展生存期（PFS）

PFS係從隨機化/治療開始的日期到定義為首次記錄的進展或任何原因導致的死亡的事件的日期的時間。PFS基於中心評估並使用RECIST 1.1標準。

次要結果量度包括： ● 總生存期（OS） ● OS被定義為從隨機化日期到任何原因導致的死亡的日期的時間 ● 總體反應率（ORR） ● ORR被定義為根據RECIST 1.1基於中心和當地研究者的評估，具有完全反應（CR）或部分反應（PR）的最佳總體反應的患者比例。 ● 疾病控制率（DCR） ● DCR被定義為具有完全反應（CR）、部分反應（PR）、穩定疾病（SD）或非CR/非PD的最佳總體反應（BOR）的參與者比例。 ● 反應時間（TTR） ● TTR被定義為從隨機化的日期到首次記錄的反應（CR或PR，必須隨後確認）日期的時間 ● 反應持續時間（DOR） ● DOR計算為從首次記錄的反應（完全反應（CR）或部分反應（PR））日期到首次記錄的進展或因潛在癌症死亡的日期的時間。 ● 下一線療法後的無進展生存期（PFS2） ● PFS2（基於當地研究者評估）被定義為從隨機化日期到下一線療法中首次記錄的進展或因任何原因死亡（以先發生者為準）的時間。 ● 血漿中化合物A及其代謝物的濃度 ● 表徵化合物A及其代謝物HZC320的藥物動力學 ● 東部腫瘤協作組（ECOG）體能狀態確定性惡化的時間 ● 東部腫瘤協作組（ECOG）體能狀態（PS）的惡化 ● 根據QLQ-LC13，胸痛、咳嗽和呼吸困難的確定性10分惡化症狀評分的時間 ● EORTC QLQ LC13係一個13個專案的肺癌專用問卷模組，並且其包括對肺癌相關症狀（即咳嗽、咯血、呼吸困難和疼痛）以及常規化學療法和放射療法的副作用（即脫髮、神經病變、口瘡和吞咽困難）的多項目和單項目測量。確定性10分惡化的時間被定義為從隨機化日期到事件發生日期的時間，該事件定義為相較於基線增加至少10分絕對值（惡化），以後沒有低於閾值的變化或任何原因導致的死亡 ● 根據QLQ-C30，整體健康狀況/QoL確定性惡化、呼吸急促和疼痛的時間 ● EORTC QLQ-C30係為評估癌症參與者的健康相關生活品質而開發的問卷。該問卷含有30個項目，並且由多項目量表和單項目測量（基於過去一週的參與者經歷）組成。其中包括五個領域（身體、角色、情緒、認知和社會功能），三個症狀量表（疲勞、噁心/嘔吐和疼痛），六個單項（呼吸困難、失眠、食欲不振、便秘、腹瀉和財務影響）和一個整體健康狀況/HRQoL量表。確定性10點惡化的時間被定義為從隨機化日期到事件發生日期的時間，該事件定義為相較於相應量表評分的基線增加至少10分絕對值（惡化），以後沒有低於閾值的變化或任何原因導致的死亡 ● EORTC-QLQ-C30相較於基線的變化 ● EORTC QLQ-C30係為評估癌症參與者的健康相關生活品質而開發的問卷。該問卷含有30個項目，並且由多項目量表和單項目測量（基於過去一週的參與者經歷）組成。其中包括五個領域（身體、角色、情緒、認知和社會功能），三個症狀量表（疲勞、噁心/嘔吐和疼痛），六個單項（呼吸困難、失眠、食欲不振、便秘、腹瀉和財務影響）和一個整體健康狀況/HRQoL量表。分數越高表示症狀存在程度越高。 ● EORTC-QLQ-LC13相較於基線的變化 o EORTC QLQ LC13係一個13個專案的肺癌專用問卷模組，並且其包括對肺癌相關症狀（即咳嗽、咯血、呼吸困難和疼痛）以及常規化學療法和放射療法的副作用（即脫髮、神經病變、口瘡和吞咽困難）的多項目和單項目測量。分數越高表示症狀存在程度越高。 ● EORTC-EQ-5D-5L相較於基線的變化 o EQ-5D-5L係用於描述和評價健康的通用工具。它基於描述系統，該系統從5個維度定義健康：行動能力、自我照顧能力、日常活動、疼痛/不適、和焦慮/抑鬱。 ● NSCLC-SAQ相較於基線的變化 o 非小細胞肺癌症狀評估問卷（NSCLC-SAQ）係一個7個專案的患者報告的結果測量，其評估患者報告的與晚期NSCLC有關的症狀。它含有被確定為NSCLC症狀的五個領域和伴隨專案：咳嗽（1項）、疼痛（2項）、呼吸困難（1項）、疲勞（2項）和食欲（1項）。 ● 基於血漿中KRAS G12C突變狀態的PFS ● 基於血漿中KRAS G12C突變狀態，比較化合物A相對於多西他賽的臨床結果 ● 基於血漿中KRAS G12C突變狀態的OS。 ● 基於血漿中KRAS G12C突變狀態，比較化合物A相對於多西他賽的臨床結果 ● 基於血漿中KRAS G12C突變狀態的ORR。 ● 基於血漿中KRAS G12C突變狀態，比較化合物A相對於多西他賽的臨床結果實例13：在患有具有 KRAS G12C突變的晚期實性瘤的患者中，JDQ443與選擇的組合的臨床研究

可以在患有具有KRAS G12C突變的晚期實性瘤的患者中，進行JDQ443與選擇的組合的Ib/II期、多中心、開放標籤平臺研究。本研究旨在：在患有具有KRAS G12C突變的實性瘤的成年患者中，對JDQ443與選擇的療法組合的安全性、耐受性、藥物動力學、藥效學和抗腫瘤活性進行表徵。

此研究聚焦於如下患者的單個分子子集：該等患者腫瘤中具有KRAS G12C突變，並且基於歷史數據，該等患者已經顯示出或預測該等患者將對單一藥劑KRAS G12C抑制僅有適度的反應性。JDQ443與選擇的靶向療法或其他抗腫瘤療法的組合，可以預防或克服KRAS G12C突變型腫瘤的這種抗性，並且可以實現比以往在類似患者群體中使用KRAS G12C抑制劑單一療法所見的更深入和更持久的反應。

每個治療組包括劑量遞增部分（Ib期）和II期部分。將在KRAS G12C突變型實性瘤中進行劑量遞增（可以在CRC中探索JDQ443+西妥昔單抗），從而確定安全性/功效，並且確定最大耐受劑量（MTD）和/或推薦劑量（RD）。

研究的II期部分將進一步探索選擇的適應症中的RD（例如，NSCLC和CRC，針對JDQ443與選擇的療法組合）。II期的目的係評估抗腫瘤功效，並且進一步探索JDQ443與RD下的選擇的療法組合的安全性和耐受性。

關鍵納入標準	劑量遞增：● 患有晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型實性瘤的患者，該等患者已經接受標準護理療法或沒有資格接受此類療法。 II 期：● 患有晚期（轉移性或不可切除性）KRAS G12C突變型非小細胞肺癌的患者，該等患者已經接受一種基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法，除非患者沒有資格接受此類療法。 ● 患有晚期（轉移性或不可切除性）KRAS G12C突變型結直腸癌的患者，該等患者已經接受基於氟嘧啶、奧沙利鉑和伊立替康的化學療法，除非患者沒有資格接受此類療法。所有患者：● 0或1的ECOG體能狀態。 ● 患者必須具有適合活檢的疾病部位，並且根據治療機構的準則係腫瘤活檢的候選者。
關鍵排除標準	適用於所有組的關鍵排除● 除KRAS G12C突變外，具有批准的靶向療法的具有驅動突變的腫瘤。 ● 對於II期的組的子集中的患者，排除使用KRAS G12C抑制劑的先前治療。 ● 活動性腦轉移，包括有症狀的腦轉移或已知的軟腦膜疾病 ● 篩查時臨床上顯著的心臟病或風險因素 ● 在篩查時，不足的骨髓、肝或腎功能
研究治療	JDQ443、曲美替尼（TMT212）、瑞博西尼（LEE011）、西妥昔單抗
功效評估	● 藉由RECIST 1.1，每8週直至第56週，然後每12週，局部（劑量遞增）以及局部和中心（II期）評估腫瘤反應。 ● 每12週收集生存狀態（II期）。
藥物動力學評估	對於每個治療組，JDQ443和一或多個相應組合配偶體的濃度和PK參數（若適用）。
關鍵安全性評估	● 每種組合治療的劑量限制毒性（DLT）的發生率和嚴重程度。 ● 藉由治療，不良事件（AE）和嚴重不良事件（SAE）（包括實驗室值、心電圖（ECG）和生命體征的變化）的發生率和嚴重程度 ● 藉由治療，劑量中斷的頻率、減少和劑量強度

本文提及的所有出版物、專利和登錄號均藉由引用以其全文特此併入，如同每個單獨的出版物或專利被明確且單獨地表明藉由引用而併入。

本說明書中對「本發明」的提及旨在反映本說明書中揭露的幾項發明之實施方式，並且不應被視為對所要求保護的主題的不必要限制。

應理解，本文所述之實例和實施方式僅用於舉例說明目的，其各種修飾或改變對於熟悉該項技術者將是明瞭的，並包括在本申請之精神和範圍內和所附申請專利範圍之範圍內。

雖然已經討論了本發明之特定實施方式，但上述說明係說明性而非限制性的。在綜述本說明書和以下申請專利範圍之後，本發明之許多修改對於本領域的技術者將是顯而易見的。應當藉由參考申請專利範圍及其等同形式的全範圍以及說明書連同此類變化來確定本發明之全範圍。

無

[圖1至圖5]係瀑布圖，表示KRAS G12C抑制劑單獨和與其他藥劑組合在CRC和肺癌患者源性異種移植模型中之功效。每個圖示出了各單個小鼠模型對特定治療的反應，表示為（豎直）y軸上的%最佳平均反應（簡寫為Best Avg. Resp.）。最佳平均反應係最小平均反應（第0天到第X天之間所有時間點的平均體積變化-這類似於曲線下的累積總和或面積。它將反應的速度、強度和持久性合併為單個值）。

[圖1A和圖1B]：瀑布圖示出了KRAS G12C抑制劑和與靶向MAPK通路的藥劑組合在CRC患者源性異種移植模型中之功效，顯示為最佳平均反應結果。

[圖2]：瀑布圖示出了KRAS G12C抑制劑和與靶向並行通路的藥劑組合在CRC患者源性異種移植模型中之功效，顯示為最佳平均反應結果。

[圖3A和圖3B]：瀑布圖示出了包含KRAS G12C抑制劑的三重組合在NSCLC患者源性異種移植模型中之功效，顯示為最佳平均反應結果。

[圖4A和圖4B]：瀑布圖示出了KRAS G12C抑制劑和與靶向MAPK通路的藥劑組合在NSCLC患者源性異種移植模型中之功效，顯示為最佳平均反應結果。

[圖5]：瀑布圖示出了KRAS G12C抑制劑和與靶向並行通路的藥劑組合在NSCLC患者源性異種移植模型中之功效，顯示為最佳平均反應結果。

[圖6]：蜘蛛圖示出了隨時間的%腫瘤體積變化。將CRC或肺癌的片段植入小鼠體內，並且當腫瘤達到所需體積時（T = 0，在蜘蛛圖的x軸上），將對照小鼠模型分配到多個組中，並監測腫瘤體積。

蜘蛛圖示出了未治療對照組入組後每個腫瘤模型的隨時間的%腫瘤體積變化。將CRC或肺癌的片段植入小鼠體內，並且當腫瘤達到所需體積時（T = 0，在蜘蛛圖的x軸上），將對照小鼠分配作為對照，並監測腫瘤體積。

[圖7]：患者源性NSCLC和CRC異種移植物的卡普蘭-梅爾（Kaplan-Meier）腫瘤體積倍增時間圖。針對腫瘤體積倍增的時間觀察到組合治療的益處。

[圖8]：化合物A以突變選擇性方式強效抑制KRAS G12C細胞傳訊和增殖，並且顯示出劑量依賴性抗腫瘤活性，其中功效由每日AUC驅動。

A.六種KRASG12C腫瘤模型中的綜合最佳腫瘤生長抑制。在小鼠中的六種人類KRAS G12C突變型CDX模型中，口服給藥10、30和100 mg/kg/天後，評估JDQ443的功效。NSCLC細胞系模型以深灰色描繪，同時PDAC（MIA Paca-2）和食道癌（KYSE-410）細胞系模型以淺灰色示出。數據為來自2-11項獨立體內研究的平均值。B-G. 以指定劑量和方案口服JDQ443治療具有KRAS G12C突變型（C-G）和非KRAS G12C突變型（NCI-441，KRASG12V；B）腫瘤的CDX荷瘤小鼠。G.藉由使用微型泵進行連續靜脈內輸注，用JDQ443治療LU99荷瘤小鼠。H-I. 小鼠血液中JDQ443的模擬pop-PKPD指標每日AUC（H）和穩態腫瘤中的平均游離KRASG12C水平（I）與觀察到的LU99中的功效相關（T/C或%迴歸）。基於100次模擬和觀察到的功效指標，點對應於模擬PK/PD指標的平均值和誤差條 ± 1 S.D。

藉由單因素ANOVA，*與媒介物相比，p ＜ 0.05；#與彼此相比，p ＜ 0.05。

[圖9]：化合物A（JDQ443）、索托拉西布（AMG510）和阿達格拉西布（MRTX-849）對KRAS G12C/H95雙突變體增殖的影響。用指定的化合物濃度處理表現指定FLAG-KRAS ^G12C單突變體或雙突變體的Ba/F3細胞3天，並藉由Cell titer glo活力測定評估增殖抑制。y軸示出經處理細胞相對於第3天處理的%生長，x軸示出KRASG12C抑制劑的對數濃度（μM）。

[圖10]：ERK磷酸化的西方墨點法分析，以評估化合物A（JDQ443）、索托拉西布（AMG510）和阿達格拉西布（MRTX-849）對KRAS G12C/H95雙突變體傳訊的影響。用指定的化合物濃度處理表現指定FLAG-KRAS ^G12C單突變體或雙突變體的Ba/F3細胞30 min，並藉由西方墨點法探測細胞裂解物的pERK減少來評估MAPK通路的抑制。圖11A和圖11B：NCI H23細胞中3天細胞活力測定中獲得的協同作用得分（SS）。在 KRAS G12C 突變型 H23細胞系中，在以下項存在的情況下：上游受體激酶抑制劑BGJ398（FGFR抑制劑（圖11中標記為「FGFRi」））和厄洛替尼（EGFR抑制劑（圖11中標記為「EGFRi」））或曲美替尼（MEK抑制劑（圖11中標記為「MEKi」））或PI3K效應子臂抑制劑阿培利司（圖11中標記為「PI3Kαi」）和GDC0941（泛PI3K抑制劑（圖11中標記為「panPI3Ki」）），以KRAS ^G12C抑制劑（圖11中標記為「KRAS ^G12Ci」）作為單一藥劑或與10 μM SHP099（SHP2抑制劑（圖11中標記為「SHP2i」））組合進行矩陣組合增殖測定（治療時間3天，細胞滴度發光測定）。協同作用得分（SS）在每個網格頂部表示為「SS」值。網格中的值係生長抑制（%）值：高於100%的值表示細胞死亡。每個網格x軸上的值表示所用KRASG12c抑制劑的濃度（μM）。每個網格y軸上的值示出第二藥劑（即分別是FGFR抑制劑、EGFR抑制劑、MEK抑制劑、PI3αK抑制劑和泛PI3K抑制劑）的濃度（μM）。

[圖12]：PI3K +/- CDK4抑制改善了KRASG12C+SHP2組合治療。化合物A（JDQ443）的雙階和高階組合改善了LU99肺異種移植物（KRAS G12C、PIK3CAmut、CDKN2Adel）中之單一藥劑活性。與用化合物A單一藥劑治療相比，化合物A與SHP2抑制劑、PI3K抑制劑或CDK4/6抑制劑組合使用延遲了進展時間（TTP）。從單一藥劑到四重組合，進展時間增加（TTP：單一藥劑＜雙重組合＜三重組合＜四重組合）。

[圖13]：化合物A（JDQ443）與EGFR抑制劑組合用於NSCLC細胞系和CRC細胞系的劑量反應。

[圖14]：在用KRASG12C抑制劑化合物A（圖14中的「NVP-JDQ443」）與SOS1抑制劑BI-3406組合治療7天後，使用CellTiterGlo評估結直腸癌細胞系和肺癌的體外活力。生長抑制%：0-99 = 增殖延遲，100 = 生長驟停/停滯，101-200 = 細胞數量減少/細胞死亡。

[圖15]：JDQ443 RD 200 mg BID的PK和目標佔有率曲線。頂部小圖示出了穩態下的PK曲線。誤差條表示每個時間點的PK曲線的標準差。底部小圖示出了預測的目標佔有率曲線，其中線示出模擬的中位數，並且陰影區域示出5%-95%的預測區間。

[圖16]：頂部小圖示出了JDQ443單一療法在各劑量水平和適應症方面的最佳總體反應。瀑布圖：相較於基線腫瘤評估，37名（94.9%）患者具有可得變化；繪製了N = 39名JDQ443單一藥劑患者的數據。根據RECIST v1.1，研究者對最佳總體反應進行評估。三名（7.7%）患者有uPR，這有助於ORR（確認和未確認的）。uPR = 未確認的PR待確認，正在進行治療，無PD。根據方案，四名患者中發生從200 mg QD到200 mg BID的患者內劑量遞增。

底部小圖示出了所有患有NSCLC的患者在不同劑量下的最佳總體反應。瀑布圖：相較於基線腫瘤評估，19名（95.0%）NSCLC患者具有可得變化；繪製了JDQ443單一藥劑群組中N = 20名NSCLC患者的數據。

[圖17]：PET掃描顯示，向患有NSCLC的患者投與200 mg BID的化合物A治療四個週期後，腫瘤腫塊的2-[氟-18]-氟-2-去氧-d-葡萄糖（18-F-FDG）親合力大幅下降。CT：電腦斷層掃描；PET，正電子發射斷層掃描。箭頭指示腫瘤部位。

[圖18]：用化合物A進行組合療法的連續軸向CT/PET圖像和穩態（第1週期第14天）JDQ443 PK暴露。化合物A和SHP2抑制劑的組合係有效的。化合物A和TNO155在患有十二指腸乳頭癌的患者中之功效。箭頭指示腫瘤部位。

無


          <![CDATA[<110>  瑞士商諾華公司（Novartis AG）]]>
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Claims

一種治療有需要的受試者的癌症或腫瘤之方法，其中該方法包括向該受試者投與治療有效量的單獨的或與至少一種另外的治療活性劑組合的KRAS G12C抑制劑或其藥學上可接受的鹽。
如請求項1所述之方法，其中該KRAS G12C抑制劑選自1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）、索托拉西布（美商安進公司（Amgen））、阿達格拉西布（Mirati公司）、D-1553（益方生物）、BI1701963（勃林格公司）、GDC6036（羅氏公司）、JNJ74699157（J&J公司）、X-Chem KRAS（X-Chem公司）、LY3537982（禮來公司（Lilly））、BI1823911（勃林格公司）、AS KRAS G12C（亞盛藥業公司）、SF KRAS G12C（賽諾菲公司）、RMC032（革命藥物公司）、JAB-21822（加科思製藥公司）、AST-KRAS G12C（艾力斯製藥公司）、AZ KRAS G12C（阿斯利康公司）、NYU-12VC1（紐約大學）、和RMC6291（革命藥物公司）或其藥學上可接受的鹽。
如請求項2所述之方法，其中該KRAS G12C抑制劑選自1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）、索托拉西布、阿達格拉西布、D-1553、和GDC6036或其藥學上可接受的鹽。
如請求項2所述之方法，其中該KRAS G12C抑制劑係1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽。
如請求項2所述之方法，其中該KRAS G12C抑制劑係1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）。
如請求項1至5中任一項所述之方法，其中該另外的治療活性劑選自由以下組成之群組：EGFR抑制劑、SHP2抑制劑、SOS1抑制劑、AKT抑制劑、EGFR抑制劑、SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、Raf抑制劑、ERK抑制劑、MEK抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑、CDK4/6抑制劑、FGFR抑制劑及其組合。
如請求項1至5中任一項所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑選自由以下組成之群組：EGFR抑制劑（如西妥昔單抗、帕尼單抗、厄洛替尼、吉非替尼、奧西美替尼或納紮替尼或其藥學上可接受的鹽）、SOS抑制劑（如BAY-293、BI-3406或BI-1701963或其藥學上可接受的鹽）、SHP2抑制劑（如NO155（諾華股份有限公司）、JAB3068（加科思公司）、JAB3312（加科思公司）、RLY1971（羅氏公司）、SAR442720（賽諾菲公司）、RMC4450（革命藥物公司）、BBP398（Navire公司）、BR790（上海藍光公司）、SH3809（南京聖和公司）、PF0724982（輝瑞公司）、ERAS601（Erasca公司）、RX-SHP2（Redx製藥公司）、ICP189（諾誠健華）、HBI2376（滬亞生物）、ETS001（上海ETERN生物製藥公司）、TAS-ASTX（大鵬製藥腫瘤學公司）和X-37-SHP2（X-37）或其藥學上可接受的鹽）、Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼）或其藥學上可接受的鹽）、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼或其藥學上可接受的鹽）、MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物）、AKT抑制劑（如卡帕沙替尼（AZD5363）或依帕替尼或其藥學上可接受的鹽）、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其藥學上可接受的鹽）、mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司或其藥學上可接受的鹽）、和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係EGFR抑制劑（如西妥昔單抗、帕尼單抗、厄洛替尼、吉非替尼、奧西美替尼或納紮替尼或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係SOS抑制劑（如BAY-293、BI-3406或BI-1701963或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係SHP2抑制劑（如JAB3068（加科思公司）、JAB3312（加科思公司）、RLY1971（羅氏公司）、SAR442720（賽諾菲公司）、RMC4450（革命藥物公司）、BBP398（Navire公司）、BR790（上海藍光公司）、SH3809（南京聖和公司）、PF0724982（輝瑞公司）、ERAS601（Erasca公司）、RX-SHP2（Redx製藥公司）、ICP189（諾誠健華）、HBI2376（滬亞生物）、ETS001（上海ETERN生物製藥公司）、TAS-ASTX（大鵬製藥腫瘤學公司）和X-37-SHP2（X-37）或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼）或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物），或其中該至少一種另外的治療活性劑係AKT抑制劑（如卡帕沙替尼（AZD5363）或依帕替尼或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項1或7所述之方法，其中該至少一種另外的治療活性劑係SHP2抑制劑（如TNO155（諾華股份有限公司）、JAB3068（加科思公司）、JAB3312（加科思公司）、RLY1971（羅氏公司）、SAR442720（賽諾菲公司）、RMC4450（革命藥物公司）、BBP398（Navire公司）、BR790（上海藍光公司）、SH3809（南京聖和公司）、PF0724982（輝瑞公司）、ERAS601（Erasca公司）、RX-SHP2（Redx製藥公司）、ICP189（諾誠健華（InnoCare））、HBI2376（滬亞生物）、ETS001（上海ETERN生物製藥公司）、TAS-ASTX（大鵬製藥腫瘤學公司）和X-37-SHP2（X-37）或其藥學上可接受的鹽），並且其中該方法進一步包括向該受試者投與治療有效量的選自以下的第三治療活性劑： Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼）或其藥學上可接受的鹽）、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼或其藥學上可接受的鹽）、MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物）、AKT抑制劑（如卡帕沙替尼（AZD5363）或依帕替尼或其藥學上可接受的鹽）、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其藥學上可接受的鹽）、mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司或其藥學上可接受的鹽）、和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利或其藥學上可接受的鹽）。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中該癌症或腫瘤係選自由以下組成之群組的癌症或腫瘤：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤；或其中該待治療的癌症或腫瘤可以選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌、膽管癌症和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌、十二指腸乳頭癌和實性瘤，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中該癌症選自肺癌（如非小細胞肺癌）、結直腸癌、胰臟癌和實性瘤，或其中該癌症選自非小細胞肺癌、結直腸癌、膽管癌症、卵巢癌、十二指腸乳頭癌和胰臟癌，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中該癌症或腫瘤係KRAS G12C突變型癌症或腫瘤。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中同時、分開或經一段時間投與組合療法中的治療劑。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中向該有需要的受試者投與的每種治療劑的量對治療該癌症或腫瘤係有效的。
如請求項3、4、8、9、10、13至17中任一項所述之方法，其中該SHP2抑制劑係TNO155或其藥學上可接受的鹽，並且以範圍從10至80 mg或從10至60 mg的總日劑量口服投與。
如請求項18所述之方法，其中TNO155的每日劑量按2週用藥、隨後1週停藥的21天週期投與。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中以範圍從50 mg至1600 mg/天，例如從200至1600 mg/天，例如從400至1600 mg/天的治療有效劑量投與化合物A或其藥學上可接受的鹽。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中以選自50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550和600 mg/天的治療有效劑量投與化合物A或其藥學上可接受的鹽。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中化合物A的總日劑量每日一次或每日兩次投與。
如前述請求項中任一項所述之方法，其中該待治療的受試者或患者選自： - 患有 KRAS G12C突變型實性瘤（例如晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型實性瘤）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，或者對批准的療法不耐受或不具有資格； - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者已經接受了組合或順序進行的基於鉑的化學療法方案和免疫檢查點抑制劑療法但失敗了； - 患有 KRAS G12C突變型NSCLC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型NSCLC）的患者，視需要其中該患者先前已經用KRAS G12C抑制劑（例如索托拉西布、阿達格拉西布、GDC6036或D-1553）治療；和 - 患有 KRAS G12C突變型CRC（例如，晚期（轉移性或不可切除性） KRAS G12C突變型CRC）的患者，視需要其中該患者已經接受了標準護理療法但失敗了，該標準護理療法包括基於氟嘧啶、奧沙利鉑、和/或伊立替康的化學療法。
一種藥物組合，其包含KRAS G12C抑制劑和至少一種另外的治療活性劑，該至少一種另外的治療活性劑係靶向MAPK通路的藥劑或靶向並行通路的藥劑。
一種藥物組合，其包含KRAS G12C抑制劑KRAS G12C抑制劑如化合物A或其藥學上可接受的鹽、以及選自由以下組成之群組的治療活性劑：EGFR抑制劑、SOS抑制劑、SHP2抑制劑（如TNO155或其藥學上可接受的鹽）、Raf抑制劑、ERK抑制劑、MEK抑制劑、AKT抑制劑、PI3K抑制劑、mTOR抑制劑、CDK4/6抑制劑及其組合。
如請求項29或30所述之藥物組合，其中該另外的藥劑選自EGFR抑制劑（如西妥昔單抗、帕尼單抗、阿法替尼、拉帕替尼、厄洛替尼、吉非替尼、奧西美替尼或納紮替尼）、SOS抑制劑（如BAY-293、BI-3406或BI-1701963）、Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼））、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼）、MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼）、AKT抑制劑（如卡帕沙替尼（AZD5363）或依帕替尼）、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司）、mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司）和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利）或其藥學上可接受的鹽。
一種藥物組合，其包含化合物A或其藥學上可接受的鹽，以及選自以下的第二藥劑： (i) 萘普拉非尼（LXH254）或其藥學上可接受的鹽； (ii) 曲美替尼、其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，例如其DMSO溶劑化物； (iii) 裡內特基布（LTT462）或其藥學上可接受的鹽，例如其HCl鹽； (iv) 阿培利司（BYL719）或其藥學上可接受的鹽； (v) 瑞博西尼（LEE011）或其藥學上可接受的鹽，例如其琥珀酸鹽；和 (vi) 依維莫司（RAD001）、或其藥學上可接受的鹽。
一種藥物組合，其包含：(a) 化合物A或其藥學上可接受的鹽，(b) TNO 155或其藥學上可接受的鹽，以及選自以下的第三藥劑： (i) 萘普拉非尼（LXH254）或其藥學上可接受的鹽； (ii) 曲美替尼、其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，例如其DMSO溶劑化物； (iii) 裡內特基布（LTT462）或其藥學上可接受的鹽，例如其HCl鹽； (iv) 阿培利司（BYL719）或其藥學上可接受的鹽； (v) 瑞博西尼（LEE011）或其藥學上可接受的鹽，例如其琥珀酸鹽；和 (vi) 依維莫司（RAD001）、或其藥學上可接受的鹽。
如請求項29至33中任一項所述之藥物組合，用於在治療癌症或實性瘤的方法中使用，其中該方法係如請求項1至28中任一項所述之。
一種化合物，該化合物係1-{6-[(4 M)-4-(5-氯-6-甲基-1 H-吲唑-4-基)-5-甲基-3-(1-甲基-1 H-吲唑-5-基)-1 H-吡唑-1-基]-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-基}丙-2-烯-1-酮（化合物A）或其藥學上可接受的鹽，用於在如請求項1至28中任一項所述之治療癌症或實性瘤之方法中使用。
如請求項35所述使用的化合物，其中該癌症或腫瘤選自由以下組成之群組：肺癌（包括肺腺癌、非小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌）、結直腸癌（包括結直腸腺癌）、胰臟癌（包括胰臟腺癌）、子宮癌（包括子宮內膜癌）、直腸癌（包括直腸腺癌）、闌尾癌、小腸癌、食道癌、肝膽癌（包括肝癌和膽管癌）、膀胱癌、卵巢癌和實性瘤、原發部位不明的癌症，特別地當該癌症或腫瘤具有KRAS G12C突變時。
如請求項36所述使用的化合物，其中該化合物與一種或兩種另外的治療活性劑組合投與。
如請求項35至37中任一項所述使用的化合物，用於在治療癌症或實性瘤的方法中使用，其中該另外的治療活性劑選自SHP2抑制劑（如TNO155（諾華股份有限公司）、JAB3068（加科思公司）、JAB3312（加科思公司）、RLY1971（羅氏公司）、SAR442720（賽諾菲公司）、RMC4450（革命藥物公司）、BBP398（Navire公司）、BR790（上海藍光公司）、SH3809（南京聖和公司）、PF0724982（輝瑞公司）、ERAS601（Erasca公司）、RX-SHP2（Redx製藥公司）、ICP189（諾誠健華（InnoCare））、HBI2376（滬亞生物）、ETS001（上海ETERN生物製藥公司）、TAS-ASTX（大鵬製藥腫瘤學公司）和X-37-SHP2（X-37）或其藥學上可接受的鹽），並且其中該方法進一步包括向該受試者投與治療有效量的選自以下的第三治療活性劑： Raf抑制劑（如貝伐非尼或LXH254（萘普拉非尼）或其藥學上可接受的鹽）、ERK抑制劑（如LTT462（裡內特基布）、GDC-0994、KO-947、Vtx-11e、SCH-772984、MK2853、LY3214996或烏利替尼或其藥學上可接受的鹽）、MEK抑制劑（如匹瑪舍替、PD-0325901、塞洛美替尼、曲美替尼、比尼替尼或鈷美替尼或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物）、AKT抑制劑（如卡帕沙替尼（AZD5363）或依帕替尼或其藥學上可接受的鹽）、PI3K抑制劑（如AMG 511、布帕昔布、阿培利司或其藥學上可接受的鹽）、mTOR抑制劑（如依維莫司或坦羅莫司或其藥學上可接受的鹽）、和CDK4/6抑制劑（如瑞博西尼、帕博西尼或阿貝西利或其藥學上可接受的鹽）。
如請求項中任一項所述之用於在治療癌症或實性瘤的方法中使用的化合物、或用於在治療癌症或實性瘤之方法中使用的組合、或治療癌症或實性瘤之方法，其中該癌症或實性瘤存在於先前已經接受KRAS G12C抑制劑治療的患者或KRAS G12C抑制劑初治患者（即先前未接受KRAS G12C抑制劑治療的患者）中。