TW200539867A - Human g protein-coupled receptor and modulators thereof for the treatment of hyperglycemia and related disorders - Google Patents

Description

200539867 九、發明說明： 本申請案係請求來自下列臨時申請案之優先權益，該申 请案係經由具有美國專利商標局之美國快遞郵件，於所指 示之日期提出申請：2004年4月13日提出申請之美國臨時案 號60/561，954。前述臨時申請案之揭示内容係以其全文併於 本文供參考。 【發明所屬之技術領域】 φ 本發明係關於確認一或多種候選化合物是否為G蛋白偶 合受體（GPCR)調節物或血糖濃度調節物之方法。在某些具 體實施例中，GPCR係為人類。本發明亦關於使用GpcR調節 物之方法。較佳調節物為催動劑。本發明之催動劑可作為 治療劑使用，以降低血糖濃度，預防或治療某些代謝病症， 譬如胰島素抗藥性、減弱之葡萄糖容許度及糖尿病，及預 防或治療高血糖濃度之併發症，譬如動脈粥瘤硬化、心臟 疾病、中風、高血壓及末梢血管疾病。 a 【先前技術】

認其成為本發明之先前技藝。 A. 高金糖

人可進行以發展第2型糖尿病。 素之釋出，然後其係作用於標 血糖等％性之調節功能障礙可 南血糖。一些具有高血糖之個 弓。組織之慢性曝露至高血糖可 101004 200539867 能會造成各種不同併發症，包括神經病、視網膜病及腎病 _ - ~ - *. 之微血管問題，以及中風、冠狀心臟疾病及末梢血管疾病 之巨血管併發症。高血糖為主要且成長中之醫療問題，需 要更良好管理選擇[Nesto,於心血管醫藥上之回顧（2003) 4 ·· S11-S18 ;其揭示内容係據此以其全文併於本文供參考]。 B. G蛋白偶合受體 雖然有許多受體種類存在於人類中，但顯然最豐富且治 療上有關聯者係以G蛋白偶合受體（GPCR)種類為代表。據估 計有大約30,000-40,000基因在人類基因組内，且估計其中大 約2%係使GPCR編碼。 GPCR係代表醫藥產物發展之一個重要領域：從100種已 知GPCR之大約20種，已發展出所有處方醫藥之大約60%。 例如，在1999年，於前100種品牌名稱處方藥物中，下列藥 物係與GPCR交互作用（相關於該藥物經治療之主要疾病及 /或病症係指示於括弧中）：

Claritin® (過敏反應）Prozac® (抑營） Vasotec® (高血壓）

Paxil® (抑鬱） Zoloft® (抑鬱） Zyprexa® (精神病症）

Cozaar® (高血壓） Imitrex® (偏頭痛） Zantac® (回流）

Propulsid® (回流疾病）Risperdal® (精神***症）Serevent® (氣喘） Pepcid® (回流） Gaster® (潰瘍） Atrovent® (枝氣管痙攣)

Effexor® (抑繁） Dq)akote® (癲癇） Cardura® (***肥大）

Allegra® (過敏反應）Lupron® (***癌）Zoladex® (***癌） Diprivan® (麻木） BuSpar® (焦慮） Ventolin® (枝氣管痙攣）

Hytrin® (高血壓） Wellbutrin® (抑鬱） Zyrtec® (鼻炎） 101004 200539867

Plavk® (MI/ 中風） Toprol-XL® (高血壓）Tenormin® (絞痛） Xalatan® (青光眼）Singulair® (氣喘） Diovan® (高血壓） Hamal㊣（***增生） (Med Ad新聞1999資料）。 GPCR係共用一個共同結構主體，具有介於22至24個疏水 性胺基酸間之七種順序，其係形成七種α螺旋結構，其每 一個係跨越細胞膜（各跨距係藉由數目確認，意即跨膜彳 (ΤΜ-1)、跨膜-2 (ΤΜ-2)等）。跨膜螺旋結構係藉由跨膜與跨 膜-3、跨膜-4與跨膜-5及跨膜-6與跨膜-7間之胺基酸股鏈， 在細胞膜之外部或’’胞外”側面上接合（此等係個別被稱為 ’’胞外’’區域1、2及3(EC-1、EC-2及EC-3))。跨膜螺旋結構亦 藉由跨膜-1與跨膜-2、跨膜-3與跨膜_4及跨膜_5與跨膜_6間 之胺基酸股鏈，在細胞膜之内部或”胞内"側面接合（此等係 個別被稱為’’胞内，，區域！、2及3 、IC-2及IC_邛。受體 之’’羧基’’末端係位於細胞内之胞内空間中，而受體之 月女基（N |)末端係位於細胞外部之胞外空間中。 一般而言，當配位體與受體結合時（經常被稱為受體之 ”活化作用")’於受體構形上有變化，這有助於在胞内區域 與胞内"G-蛋白質"間之偶合。已報告GpCR關於g蛋白質係 為”混雜” ’意即GPCR可與超過一種〇蛋白質交互作用。、參 閱Kenakm，T·，43至命存學射n〇95 (1988)。雖然有其他g蛋白 質:在，但目前Gq、Gs、Gi、G4G〇係為已被確認之〇蛋 白貝與G-蛋白偶合之配位體活化GpcR會引發一種發出味 息級聯反應過程（被稱為”訊息轉導,ν在正常條件下，訊 101004 200539867 息轉導最後會造成細胞活化或細胞抑制。雖然不希望被理 論所束缚，但一般認為IC-3圈環以及受體之羧基末端會與G 蛋白質交互作用。 亦有混雜G蛋白質，其顯示會使數種GPCR類別偶合至磷 脂酶C途徑，譬如 Gal5 或 Gal6 [Offermanns & Simon，J biol Chem (1995)270: 15175-80]，或經設計之嵌合G蛋白質，以使極大 數目之不同GPCR偶合至相同途徑，例如磷脂酶C [Milligan & Rees，醫藥科學上之趨勢（1999) 20 : 118-24]。 在生理學條件下，GPCR係存在於細胞膜中，在兩種不同 構形之間呈平衡：π不活性π狀態與π活性π狀態。呈不活性 狀態之受體不能夠連結至胞内發出訊息轉導途徑以引發導 致生物回應之訊息轉導。改變受體構形至活化態，允許連 結至轉導途徑（經由G-蛋白質）並產生生物回應。 受體可藉由配位體或化合物譬如藥物，被安定化呈活性 狀態。最近之發現，包括但並非唯一限制於修正成受體之 胺基酸順序，其係提供配位體或藥物以外之方式，以促進 並使受體安定化呈活性狀態構形。此等方式係藉由模擬配 位體結合至受體之作用，有效地使受體安定化呈活性狀 態。藉由此種與配位體無關方式之安定化作用，係被稱為’’ 構成受體活化作用π。 D. RUP43 最近已報告RUP43 (其中應明瞭的是，内源RUP43可為 GPR131，例如GenBank®收受號碼ΝΜ_170699)係充作膽汁酸之 受體[歐洲專利申請案號02717114.9，以ΕΡ1378749於2004年1 101004 200539867 月 7 日公告；及 Kawamata 等人，J Biol Chem (2003) 278 : 9435-9440 ; 其中每一案之揭示内容係據此以其全文併於本文供參考]。 據報告RUP43在白血球内之表現對單細胞係為專一，且據報 告作用於單細胞RUP43之膽汁酸係抑制腫瘤壞死因子α (TNFa)之表現。經揭示於ΕΡ1378749中之化合物可使用於本 發明方法中。 【發明内容】 申請人已意外地發現RUP43之催動劑會增加葡萄糖在脂 肪細胞與骨骼肌細胞中之吸收。申請人揭示RUP43之催動劑 具有令人意外之利用性，用以降低哺乳動物中之血糖濃度。 申請人進一步揭示對於RUP43具有催動劑活性之新穎化合 物，及供其使用之用途。 在篇一方面，本發明之特徵為一種確認一或多種候選化 合物作為RUP43 GPCR調節物之方法，該受體包含GPR131胺 基酸順序，其中受體係偶合至G蛋白質；其包括以下步驟： (a) 使候選化合物與受體接觸；與 (b) 測定受體功能性是否經調節； 其中於受體功能性上之變化係為候選化合物為RUP43 GPCR調 節物之指標。 在某些具體實施例中，GPR131胺基酸順序係選自包括： (a)順序識別碼：2之胺基酸順序； ⑼順序識別碼：2之胺基酸2-330 ; (c) 順序識別碼：2之胺基酸2-330，其附帶條件是RUP43 G 蛋白偶合受體未包含曱硫胺酸殘基在順序識別碼：2之 101004 -10- 200539867 胺基酸位置1上； ⑹ 被包含核酸順序之多核錢編碼之G蛋白w 胺基酸順序’該核酸順序可藉由—種程序獲得，其勺 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別^ # = 識別碼：4進行pcr ; 、 (e)順序識別碼·· 6之胺基酸順序；

⑺被包含核酸順序之多核苷酸編碼之〇蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得^其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：7與順= 識別碼：8進行PCR ; (g) 順序識別碼：2之胺基酸順序，其中在順序識別碼· 2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； (h) 順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼·· 2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； (0順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之fee基fee位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶 條件是RUP43 G蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順 序識別碼·· 2之胺基酸位置1上；及 ①被多核甞酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 在某些具體實施例中，該RUP43 GPCR係為重組。在某些 具體實施例中，該接觸包括與表現GPCR之宿主細胞或與宿 主細胞之細胞膜接觸，其中該宿主細胞包含表現載體，此 載體包含使該受體編碼之多核：y：酸。 101004 -11 - 200539867 在一些具體實施例中，該接觸係於GPCR之已知配位體存 在下進行。在-些具體實施例t，該接觸係於gpcr之已知 調節物存在下進行。在-些具體實施例中，該接觸係於 GPCR之已知催動劑存在下進行。在—些具體實施例中，該 GPCR之已知催動劑為化合物丨、化合物2或化合物3。在一 些具體實施例中，該GPCR之已知催動劑為化合^。在一 些具體實施例中，該GPCR之已知催動劑為化合物2。在一 • #具體實施例中，該GPCR之已知催動劑為化合物3。在- 些具體實施例中，該已知催動劑對該測定方式係於約腳 至約EC75下存在。 本發明亦關於一種在哺乳動物中確認一或多種候選化合 物作為血糖濃度調節物之方法，其包括以下步驟： ⑷使候選化合物與包含仰以⑶胺基酸順序之GpcR接觸， 其中受體係偶合至G蛋白質；與 (b)測定受體功能性是否被調節； ^ *中於受體功能性上之變化係為候選化合物為在哺乳動物 中血糖濃度調節物之指標。 在某些具體實施例中，GPR131胺基酸順序係選自包括： ⑻順序識別碼·· 2之胺基酸順序； ⑼順序識別碼：2之胺基酸2-330 ;

(C)順序識別碼：2之胺基酸2-330，其附帶條件是RUP43G 蛋白偶合受體未包含曱硫胺酸殘基在順序識別碼：2之 胺基酸位置1上； ()被匕含核酸順序之多核菩酸編碼之G蛋白偶合受體之 101004 -12- 200539867 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種 裡杈序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：3與順序_ 識別碼：4進行PCR ; ' (e) 順序識別碼：6之胺基酸順序； (f) 被包含核酸順序之多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，勺括 在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：7與順序識 0 別碼：8進行PCR ; (g) 順序識別碼：2之胺基酸順序，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ⑻順序識別碼·· 2之胺基酸2_33〇，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ⑴順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶 條件是RUP43 G蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順 φ 序識別碼：2之胺基酸位置1上；及 ①被多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 在某些具體實施例中，於受體功能性上之增加係為候選 化合物為會降低哺乳動物中血糠濃度之化合物之指標。 在某些具體實施例中，該GPCr係為重組。在某些具體實 施例中’該接觸包括與表現之宿主細胞或與宿主細胞 之細胞膜接觸，其中該宿主細胞包含表現載體，此載體包 含使該受體編碼之多核甞酸。 101004 -13- 200539867 在一些具體實施例中，該接觸係於GPCR之已知配位體存 在下進行在些具體實施例中，該接觸係於GPCR之已知 為即物存在下進行。在—些具體實施例中，該接觸係於 GPCR之已知催動劑存在下進行。在一些具體實施例中，該 GPCR之已知催動劑為化合物i、化合物2或化合物3。在一 些具體實施例中，該GPCR之已知催動劑為化合物i。在一 些具體實施例中’該GPCR之已知催動劑為化合物2。在一 φ 些具體實施例中，該GpCR之已知催動劑為化合物3。在一 些具體貫施例中’該已知催動劑對該測定方式係於約EC5〇 至約EC75下存在。 在某些具體實施例中，該一或多種候選化合物不為抗體 或其抗原結合衍生物。 在某些具體實施例中，該一或多種候選化合物不為肽。 在某些具體實施例中，該一或多種候選化合物不為膽汁 酸0 _ 在一些具體實施例中，GPR131胺基酸順序係為順序識別 碼：2之胺基酸順序。在一些具體實施例中，GPR131胺基酸 順序係為順序識別碼：2胺基酸順序之變種。在一些具體 實施例中，該順序識別碼：2胺基酸順序之變種係為該胺 基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似物。在一些具 體實施例中，該順序識別碼·· 2之胺基酸順序之變種係為 該胺基酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正 交類似物之非内源構成上活化突變種。在某些具體實施例 中，該順序識別碼：2之胺基酸順序之變種係為該胺基酸 101004 -14- 200539867 順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似物 之生物活性片段。在某些具體實施例中，該順序識別碼： 2之胺基酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物 正交類似物之生物活性片段，係為順序識別碼：2之胺基 酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似 物，不存在N-末端甲硫胺酸。在某些具體實施例中，該順 序識別碼· 2之胺基酸順序之變種係為至少約75%，至少約 泰 80/〇，至少約85%，至少約9〇%，至少約91%，至少約92%， 至夕、、句93/〇，至少約94%，至少約95%，至少約96%，至少 約97/〇，至少約98%或至少約99%，相同於順序識別碼：2 之胺基酸順序。 在一些具體實施例中，該順序識別碼：2胺基酸順序之 變種係為至少約90%，至少約91%，至少約92%，至少約93%， 至少約94%，至少約95%，至少約96%，至少約97%，至少 約98/。或至少約99%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。 # 在某些具體實施例中，該包含GPR131胺基酸順序之 RUP43 GPCR係為進一步包含一或多種抗原決定部位標記之 融合蛋白質。在一些具體實施例中，該包含一或多種抗原 决疋部位標記之融合蛋白質為順序識別碼：6之胺基酸順 序。 在某些具體實施例中，該G蛋白質會導致胞内cAMp含量 上之增加。在一些較佳具體實施例中，該^蛋白質為Gs。 在某些具體實施例中，該〇蛋白質為百日咳毒素敏感性。 在某些具體實施例中，該G蛋白質為Gi或G。。在某些具體 101004 -15- 200539867 實施例中，該G蛋白質為❻ 蛋白質為Go。'

在某些具體實施例中，該G 在某些具體實施例中，該G蛋白質為Gal5或⑽6。在某 :具體實施例中’該〇蛋白質編5。在某些具體實施例 中’該G蛋白質為Gai6。 在某些具體實施例中，該G蛋白質為Gq。 人在某些具體實施例中，該方法進—步包括將藉由候選化

口物所造成之受體調節，和經由使受體與受體之已知調節 物接觸所造成之受體第二種調節作比較之步驟。在某些具 體實施例中’胃已知調節物為催動劑。在某些具體實施例 中，該催動劑為化合物丨、化合物2或化合物3。在某些具 體實施例中，該催動劑為化合物丨。在某些具體實施例中， a亥催動劑為化合物2。在某些具體實施例中，該催動劑為化 合物3。 在些較佳具體實施例中，該測定或該比較係經過GTP β 結合至包含該GPCR之細胞膜之度量。在某些具體實施例 中，該GTPrS係以[35S]標識。 在某些具體實施例中，該測定或該比較係經過第二信使 含量之度量，該第二信使係選自包括環AMP (cAMP)、環GMP (cGMP)、肌醇三鱗酸鹽（Ip3)、二醯基甘油（DAG)、MAp激酶 活性及Ca2+。在某些較佳具體實施例中，該第二信使為 cAMP。在某些較佳具體實施例中，CAMP之含量係被增加。 在某些具體實施例中，該cAMP之度量係使用全細胞腺苷基 環化酶檢測進行。在某些具體實施例中，該cAMP之度量係 101004 -16- 200539867 使用包含該GPCR之細胞膜進行。在某些具體實施例中，該 第一 k使為MAP激酶活性。在某些具體實施例中，map激 酶活性之含量係被增加。 在一些較佳具體實施例中，該測定或該比較係經過CR£-報告子檢測。在某些具體實施例中，該報告子為蟲螢光素 酶。在一些具體實施例中，該報告子為分半乳糖苷酶。 在某些具體實施例中，該測定或該比較係經過胞内％之 度量。 在某些具體實施例中，該測定或該比較係經過胞内Ca2 + 之度量。 在某些具體實施例中，該測定或該比較係經過得自哺乳 動物之脂肪細胞之葡萄糖吸收之度量。 在某些具體實施例中，該測定或該比較係經過得自哺乳 動物之骨骼肌細胞之葡萄糖吸收之度量。 在某些較佳具體實施例中，該測定或該比較係經由利用 黑色素細胞檢測。 於茗二方面，本發明之特徵為式（π)化合物：

Rio

或其藥學上可接受之鹽 其中： 心為11或（^6烷基； 101004 -17- 200539867 R2為2_甲基-4,5,6,7-四氫_2H-嘀唑-3-基；或

Rl與R2和彼等所結合之氣一起形成Μ-二氫暮奎琳- 基；及 R10與Rn各獨立為Η或鹵素。 於漭三方面，本發明之特徵為根據裘一方面之方法所確 認之GPCR調節物。在某些具體實施例中，調節物不為抗體 或其抗原結合衍生物。在某些具體實施例中，調節物不為 肽。在某些具體實施例中，調節物不為膽汁酸。在某些且 體實施例中，調節物為會增加得自哺乳動物之脂肪細胞/中 2葡㈣吸收之化合物。在某些具體實施例中，調節物為 θ增加传自哺乳動物之骨骼肌細胞中之葡萄糖吸收之 物。 本fx明之特徵亦為可根撼當—

據〆一方面之方法確認之GPCR 調即物。在某些具體實施例中 έ 士人/丄 彳甲凋即物不為抗體或其抗原 、、、口 5竹生物。在某虺且體眚 此且調節物不為肽。在某 二一體實知例中，調節物為會 侍自哺乳動物之脂肪細 收之化合物。在某些具體實施例中，調節 化合:自哺乳動物之骨路肌細胞中之葡萄糖吸收之 在某些具體實施例中，該調 份#叙 p物係選自包括催動劑、部 催動蚺、逆催動劑及拮抗劑。 調節物為催㈣某些具體實施例中，該 ^ ^ 一體實轭例中，該調節物為部份 催動劑。纟某些具體實施例中 竿 邊調即物為逆催動劑。在 二具體貫施例中，該㈣物為括抗劑。 101004 -18- 200539867 在某些具體實施例中，該纲^ 凋即物較佳為催動劑。在某些 具體實施例中，該催動劑A 储哲 初剞马根據寒二方面之化合物。 在一些具體實施例中，兮,々々仏从 °亥調即物為催動劑，具有ec50低

於K)- ’低於i -，低於1〇〇nM或低於ι〇ηΜ。在一些且 體實㈣中’㈣㈣為催動劑’具有心低於選自讀 至ω-賴之數值。在-些具體實施財，㈣節物為催 動劑’具有ec5w於選自10_至i靡間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有％。低於選自 1〇碰至間隔之數值。在某些具體實施财，該EC5〇 係使用選自包括以下之檢測進行敎：全細胞囊？檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞會表現具有順序識別 碼·· 2或6之胺基酸順序之重組Rup43 GpcR多肽；及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞會表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組Rup43 GPCr多 肽。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇 低於10 /zM，低於1 //Μ，低於1〇〇 nM或低於1〇 nM，在該檢 測中。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5 〇 低於10 /zM在該檢測中，低於9 //Μ在該檢測中，低於8 //Μ 在該檢測中，低於7 //Μ在該檢測中，低於6 //Μ在該檢測中， 低於5 在該檢測中，低於4 //Μ在該檢測中，低於3 //Μ在 該檢測中，低於2 //Μ在該檢測中，低於1 //Μ在該檢測中， 低於900 ηΜ在該檢測中，低於800 ηΜ在該檢測中，低於 700 ηΜ在該檢測中，低於600 ηΜ在該檢測中，低於500 ηΜ在 該檢測中，低於400 ηΜ在該檢測中，低於300 ηΜ在該檢測中， 101004 -19- 200539867 低於200nM在該檢測中，低於100nM在該檢測中，低於9〇nM 在該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測 中，低於60 nM在該檢測中，低於50 nM在該檢測中，低於 40nM在該檢測中，低於30nM在該檢測中，低於2〇nM在該 檢測中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該 調節物為催動劑，在該檢測中具有ec5〇低於選自1〇111^至1〇 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有EC5 〇低於選自1〇 nM至1 //M間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 EC”低於選自i〇nM至l〇〇nM間隔之數值。 在一些具體實施例中，該調節物係對GPCR具選擇性。 在一些具體實施例中，該調節物為化合物1 (”化合物#1， 參閱表1)、化合物2 (”化合物#2”，參閱表1)或化合物3 ("化 合物#3’’，參閱表1)。在一些具體實施例中，該調節物為化 合物1。在一些具體實施例中，該調節物為化合物2。在— 些具體實施例中，該調節物為化合物3。 在一些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少2〇0/。， 至少25%，至少30%，至少35%，至少40%或至少45%。在一 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇%或 至少45%。 在一些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 101004 -20- 200539867 步月b夠越過血液-腦部障壁。 口於矣四方面’本發明之特徵為—種製備藥學或生理學上 可接叉組合物之方法，其包括將載劑與RUP43GPCR之調節 ^合1受體包含GPR131胺基酸順序。在某些具體實施 :”，調節物不為抗體或其抗原結合衍生物。在某些具體 =例中，5周即物不為肽。在某些具體實施例中，調節物 :s曰加仔自哺礼動物之脂肪細胞中之葡萄糖吸收之化 :物。在某些具體實施例中，調節物係為會增加得自哺乳 實二：骼肌細胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體 =:，調節物係選自包括催動劑、部份催動劑、逆催 抗劑。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。 ^些具體實施例中，調節物為部份催動劑。在某些具體 调卽物為逆催動劑。在某些具體實施例中，調 抗劑。在某些具體實施例中，調節物較佳為催動 合物。某些具體實施例中，該催動劑為根據茗二方面之化 物=之特徵亦為一種製備醫藥或生理學上可接受組合 包含〇二！括確認刪⑽之調節物，其中該受體 基酸順序，然後將載劑與調節物混合，並中 ::::係可藉由根據廣-方面之方法確認。在某些具體ί 實施例中ir物！ 方法確認。在某些具體 具體實η/Γ 體或其抗原結合衍生物。在某些 汾、㈠、周節物不為肽。在某些具體實施例中，詷 即物較佳為催動南|。产甘& ' ^ ^ ^ '、二具體貫施例中，調節物係為會 101004 -21 · 200539867 曰加仔自哺乳動物之脂肪細 在草此且靜^”，山 口之葡甸搪吸收之化合物。 系二八體只轭例中，調節物係為會增加 骨骼肌細胞中之葡萄M 、 11礼動物之 中，η:ί 合物。在某些具體實施例 ^ ^ . ^ L 邛伤催動劑、逆催動劑及 ““。纟某些具體實施财，調節物為催動劑。在某此 ^體實施例中，調節物為部份催_。在某些具體實_

中：調節物為逆催動劑。在某些具體實施例中，調節物為 拮抗劑。在某些具體實施例中，調節物較佳為催動劑。在 某些具體實施例中’該催動劑為根據茗二方面之化合物。 在某些具體實施财，該組合物係為醫藥。在某些具體 實施例中，該組合物為生理學上可接受。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC50低 於10/M，低於i ，低於1〇〇nM或低於ι〇ηΜ。在一些且 體實施例中，該調節物為催動劑，具有％。低於選自聽 至H)卿隔之數值。在—些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有EC”低於選自1〇_至1处1間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有^低於選自 1〇nM至ΙΟΟηΜ間隔之數值。在某些具體實施例巾，該％。 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMp檢測， 使用經轉杂HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼·· 2或6之胺基酸順序之重組Rup43 gpcr多肽；及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼· 2或6之胺基酸順序之重組Rup43 GpCR多 肽。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測 101004 -22- 200539867 中具有EC50低於10 ，低於1 //Μ，低於lOOnM或低於 10 nM。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5 〇 低於10 βΜ在該檢測中，低於9 在該檢測中，低於§ 在該檢測中，低於7 //Μ在該檢測中，低於6 /ζΜ在該檢測中， 低於5 _在該檢測中，低於4 //Μ在該檢測中，低於3 //Μ在 該檢測中，低於2 //Μ在該檢測中，低於1 //Μ在該檢測中， 低於900 nM在該檢測中，低於800 nM在該檢測中，低於 • 700nM在該檢測中，低於600nM在該檢測中，低於500nM在 該檢測中，低於400 nM在該檢測中，低於300 nM在該檢測中， 低於200 nM在該檢測中，低於1〇〇 nM在該檢測中，低於9〇 _ 在該檢測中，低於80nM在該檢測中，低於7〇11]^在該檢測 中，低於60 nM在該檢測中，低於5〇 nM在該檢測中，低於 4〇nM在該檢測中，低於30nM在該檢測中，低於2〇nM在該 檢測中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該 調節物為催動劑，在該檢測中具有EC5〇低於選自1〇1^至1〇 •—間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在该檢測中具有ECw低於選自1〇11]^至1 _間隔之數值。在 二八體貫;^例中，遠调節物為催動劑，在該檢測中具有 驼5〇低於選自10nMs100nM間隔之數值。 在些具體實施例中，該調節物係對GPCR具選擇性。 在一些具體實施例巾，該調節物為化合物i、化合物2或 化口物3。在一些具體實施例中，該調節物為化合物卜在 一些具體實施例中，該調節物為化合物2。在—些具體實施 例中’該調節物為化合物3。 101004 -23- 200539867 在一些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少2〇%， 至少25%，至少3〇%，至少35%，至少4〇%或至少45%。在一 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇% 或至少45%。

牡一些具體實施例中 一步能夠越過血液-腦部障壁。 於茗！方面，本發明之特徵為調節RUP43 GPCR活性之方 法^受體包含GPR131胺基酸順序，其包括使受體與受體 :凋即物接觸之步驟。在某些具體實施例中，調節物係可 糟由根據茗一方面之方法確 節物係根據桌—例中，調 調l 方法確認。在某些具體實施例中， 二=抗體或其抗原結合衍生物。在某些具體實施例 包括催動劑不:二催：f些具體實施例中，調節物係選自 體實施例中，；：：催動劑及拮抗劑。在某些具 郎物為部份催動劑。… *杲一、體實施例中，調 動劑。在某“體實：具體實施例中，調節物為逆催 體實施例中:Λ 調節物為括抗劑。在某些具 調節物係為合：：“圭為催動劑。在某些具體實施例中， 收之化合物自嚼乳動物之脂肪細胞中之葡萄糖吸 自哺乳動物之骨㈣―具體實施例中，調節物係為會增加得 101004 °細胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某 -24- 200539867 些具體實施例令’該催動劑為根據茗二方面之化合物。 本發明之特徵亦為㈣RUP43GPCR活性之方法，該受體 包含GPR131胺基酸順序，其包括使受體與該受體之調節物 接觸之步驟，纟中調節物係可藉由農—方面之方法確認。 在某些具體實施例中，調節物係根據農-方面之方法確認。 在某些具體實施例中，調節物不為抗體或其抗原結合衍生 物。在某些具體實施例中，調節物不為肽。在某些具體實

施例中’冑節物為會刺激得自哺乳動物之脂肪細胞中之葡 萄㈣收之化合物。在某些具體實施射，調節物為會刺 激侍自哺乳動物之骨骼肌細胞中之葡萄糖吸收之化合物。 在某些具體實施例中，調節物係選自包括催動劑、部份催 動劑、逆催動劑及拮抗劑。在某些具體實施例中，調節物 為催動劑。在某些具體實施例中，調節物為部份催動劑。 在某些具體實施例中’調節物為逆催動劑。在某些且體實 施例中，㈣物為拮抗劑。在某些具體實施例中，調節物 較佳為催動劑。在某些具體實施例中，該催動劑為根據農 一方面之化合物。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有％0低 於1〇_，低於i -，低㈣0nM或低於ι〇ηΜ。在—些且 體實施例中，該調節物為催動劑，具有心低於選自^ 至10 _間隔之數值。在-些具體實施例中，該調節物為催 動劑’具#EC50低於選自10ΠΜ至1乘間隔之數值。在一此 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5。低於選： Π)應至觸間隔之數值。在某些具體實施財，該Ec 101004 -25- 200539867 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMP檢測’ 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EC5〇低於10 ，低於1 ，低於ΙΟΟηΜ或低於ΙΟηΜ。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於10 在該檢測中，低於9 在該檢測中，低於8 在該檢 測中，低於7 在該檢測中，低於6 在該檢測中，低於 5 //M在該檢測中，低於4 在該檢測中，低於3 //M在該檢 測中，低於2 //M在該檢測中，低於1 //M在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中，低於8〇〇 nM在該檢測中，低於7〇〇 nM在 該檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於500 nM在該檢測中， 低於400ηΜ在該檢測中，低於300ηΜ在該檢測中，低於 200 nM在該檢測中，低於1〇〇 ηΜ在該檢測中，低於9〇 _在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70應在該檢測中， 低於60 nM在該檢測中，低於5〇 nM在該檢測中，低於4〇 nM 在該檢測中，低於3〇nM在該檢測中，低於2〇nM在該檢測 中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有队”低於選自1〇nM至1〇 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在忒檢測中具有EC5 〇低於選自1〇 nM至1 _間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 101004 -26- 200539867 EQo低於選自i〇nMs ι〇〇ηΜ間隔之數值。 在一些具體實施例中’該調節物係對gpCr具選擇性。 在一些具體實施例中，該調節物為化合物1、化合物2或 化合物3。在一些具體實施例中，該調節物為化合物丨。在 一些具體實施例中，該調節物為化合物2。在一些具體實施 例中’该调節物為化合物3。

在一些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 一些具體實施財，相對於腹膜㈣投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少2〇〇/〇， 至少25%，至少3〇%，至少35%，至少4()%或至少桃。在— 些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，肖口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少规，至少逃，至少卿。 或至少45%。 在-些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液·腦部障壁。 在某些具體實施例中 兮姑雜—上 匕川。亥接觸包括投予調節物至包含該 受體之細胞膜。 在某些具體實施例中，該接觸包括投予調節物至包含該 受體之細胞。 在某些具體實施例中’該接觸包括投予調節物至包含該 受體之組織。 在某些具體實施例中 受體之個體。在某些具 體之個體之投藥係為口 β亥接觸包括投予調節物至包含該 體實施例中’該調節物對包含該受 服。在某些具體實施例中，該個體 101004 -27- 200539867 心為_礼動物。在某些具體實施例中，該個體係為非人類 t礼動物。在某些具體實施例中，該哺乳動物為馬、母牛、 綿羊、豬、I苗、狗、条早、卓Θ , ' 、 老乳、大白乳、非人類靈長動 ’人類。在某些具體實施例中’該哺乳動物為老鼠、大 白氣、非人類靈長動物或人類。最佳為人類。 ;茗，方面，本發明之特徵為一種調節RUP43 活性

之方法’該"包含卿131絲_序，其巾該調節 在需要該調節之個體中降低血糖濃度，其包括使該受體盘 :台療上有效量之受體調節物接觸。在某些具體實施例中： 绸節物為催動劑。 本毛日月之特徵亦為一種調節Rup43 GpcR活性之方法，哕 :體包含GPR131胺基酸順序，其中該調節係為在需要該綱 :之個體中預防或治療新陳代謝病症，其包括使該受體斑 -療上有效量之受體調節物接觸。在某些具體實施例中，、 =物為催_。在某些具體實施财，代謝病症係 包括· ⑷糖尿病； (b) 減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 (d) 胰島素過多。 / —些具體實施例中，糖尿病為第旧糖尿病。在某 車:么具體實施例中’糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體 知例中’代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為 101004 -28- 200539867 2型糖尿病。在某4b呈 ·=-、體實轭例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖容許度。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素抗藥 性。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在竿 些具體實施例中’代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為一種調節RUP43gpcr活性之方法，嗜 f體包含GPR131胺基酸順序，其㈣調㈣為在需要該調

:之個體中預防或治療高血糖濃度之併發症，纟包括使該 受體與治療上有效量之受體調節物接觸。在某些具體實施 例中’調節物為催動劑。在某些具體實施例中，併發症係 選自包括： ⑻徵候蔟X ; ⑼動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； (d) 心臟疾病； (e) 南血壓； ①中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； (i) 腎病；及 (])末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 越狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 伐侯簇X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體實 101004 -29- 200539867 轭例中，併發症為心臟疾病。在某些具體" 症為心臟機能不全。在某4b且“歹1 ’併發 機妒不入一體只施例令，併發症為冠狀 機此不全。在某些具體實施例 在苹此且m,… ㈣症為冠狀動脈疾病。 ^ ^ A 動脈疾病。在某4b且 體貝細例中，併發症為高血屋。 一八 ^ ^ ^ ^ ^ 在杲些具體實施例中，併 二且：：塗α在某些具體實施例卜併發症為中風。在 一'施例中，併發症為神經病。在某些具體實施例 中，併發症為視網膜病。在某b 、 神經病。在某些具體實施例中：併中，併發症為 在某些具體實施例中，併發症為，囊正I梢血官疾病。 开^症為多囊卵巢徵候簇。在草此 具體實施例中’併發症為血脂肪過多。 ’、一 在某些具體實施例中，調節物係可藉由根據農一方面之 方法確認^在某些具體實施例中，調節物係根據茗一方面 之方法確§忍。在某些具體實施例令，調節物不為抗體或盆 抗原結合衍生物。在某些具體實施例中，調節物不為肤，。、 在某些具體實施例中’調節物為會刺激得自哺乳動物之脂 肪細胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例中， 調節物為會刺激得自哺乳動物之骨路肌細胞中之葡萄糖吸 收之化合物。在某些具體實施例中，該調節物係選自包括 催動劑、部份催動劑、逆催動劑及拮抗劑。在某些較佳且 體實施例中’該調節物為催動劑。在某些具體實施例卜、 °亥催動劑為根據篇'二方面之化合物。 在某些具體Λ施例中，該調節物係對GpcR具選擇性。 在-些具體實施例中，該調節物為化合物】、化合物之或 101004 -30- 200539867 物在些具體實施例中，該調節物為化合物1。 -些具體實施例中，該調節物為化合物一 例中，該調節物為化合物3。 —貫知 在某些具體實施例t ’該調節物為口服生物可利用 一些具體實施例φ，士 # 相對於腹臈腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少·，至少抓，至少聊。， 至少25% ’至少3()%，至少挪，至少慨或至少桃。在—

些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，肖口服生物利用 率係為至少聰，至少25%，至少聽，至少道，至少4〇% 或至少45%。 在某些具體實施例中’該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例巾，該調節物為催動劑，具有Ec^低 於10 低於1 ，低於1〇〇 _或低於nM。在一些具體 貫鈀例中，該調節物為催動劑，具有扣⑼低於選自⑺^乂至 10 //M間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動 劑，具有EC5 〇低於選自1〇 nM至i _間隔之數值。在一些具 體實鉍例中，該调節物為催動劑，具有Ec5 〇低於選自1〇 nM 至100nM間隔之數值。在某些具體實施例中，該Ec5〇係使用 選自包括以下之檢測進行測定：全細胞CAMP檢測，使用經 轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別碼：2 或6之胺基酸順序之重組RUP43GPCR多肽；及黑色素細胞檢 測’使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具有順序 識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽。在一 101004 200539867 些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有EC^ 低於10 //Μ，低於1 ，低於1〇〇nM或低於1〇nM。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有％“低於1〇_在 该檢測中，低於9 //M在該檢測中，低於8 _在該檢測中， 低於7 //M在該檢測中，低於6 _在該檢測中，低於5 _在 該檢測中，低於4 /zM在該檢測中，低於3 _在該檢測中， 低於2 在該檢測中，低於丨在該檢測中，低於9〇〇nM φ 在该檢測中，低於800 nM在該檢測中，低於700 nM在該檢測 中’低於600ηΜ在該檢測中，低於5〇〇ηΜ在該檢測中，低於 400 ηΜ在该檢測中，低於3〇〇 ηΜ在該檢測中，低於2〇〇 ηΜ在 该檢測中’低於100 ηΜ在該檢測中，低於9〇 ηΜ在該檢測中， 低於80 ηΜ在戎檢測中，低於7〇 ηΜ在該檢測中，低於6〇 ηΜ 在该檢測中，低於50 ηΜ在該檢測中，低於4〇 ηΜ在該檢測 中，低於30 ηΜ在該檢測中，低於2〇 ηΜ在該檢測中或低於 10 ηΜ在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節物為催動 • 劑，在該檢測中具有EC5〇低於選自10nMs10/C/M間隔之數 值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測 中具有ECso低於選自ι〇ηΜ至1 間隔之數值。在一些具體 實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有Ec5 〇低於 選自10 ηΜ至100 ηΜ間隔之數值。 在某些具體實施例中，該接觸包括該調節物對該個體之 口服投藥。在某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。 在某些具體實施例中，該個體係為非人類哺乳動物。在某 些具體實施例中，該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、 101004 -32- 200539867 雜、狗、兔子、老鼠、大白鼠、非人類靈長動物或人類。 在某些具體實施例中，該哺乳動物係為老鼠、大白鼠、非 人類靈長動物或人類。最佳為人類。 於茗七方面，本發明之特徵為一種在需要降低之個體中 降低血糖濃度之方法，其包括使治療上有效量之RUP43 GPCR調節物與該受體接觸，該GPCR包含GPR131胺基酸順 序。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。 本發明之另外特徵為一種降低哺乳動物中血糖濃度之方 法，其包括對需要該降低之哺乳動物提供或投予RUP43 GPCR之調節物，該GPCR包含GPR131胺基酸順序。在某些具 體實施例中，調節物為催動劑。在某些具體實施例中，RUP43 GPCR之催動劑為GPR131 GPCR之催動劑，其中應明瞭的是 GPR131 GPCR 係為内源 RUP43 GPCR。 本發明之特徵亦為一種在需要預防或治療之個體中預防 或治療新陳代謝病症之方法，其包括使治療上有效量之 RUP43 GPCR調節物與該受體接觸，該受體包含GPR131胺基 酸順序。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。在某些 具體實施例中，代謝病症係選自包括： (a) 糖尿病， (b) 減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 (d) 胰島素過多。 本發明另外之特徵為一種預防或治療新陳代謝病症之方 法，其包括對需要該預防或治療之哺乳動物投予RUP43 101004 •33- 200539867 GPCR之調節物，該受體包含GPR131胺基酸順序。在某些具 體實施例中，調節物為催動劑。在某些具體實施例卜麵^ GPCR之催動劑係為卿则败之催動劑，其中應明瞭的是 gpri31gpcr係為内源RUP43GPCR。在某些具體實施例中， 代謝病症係選自包括： ⑻糖尿病； (b) 減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 ⑹胰島素過多。 在一些具體實施例巾，糖尿病為第旧糖尿病。在某些 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 鈀例中’代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝 病症為第丨型糖尿病。在某些㈣實施财，代謝病症為第 /糖尿病在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖容許度。在某些具體實施例巾，代謝病症為胰島素抗藥 性。在某些具體實施例+，代謝病症為胰島素過多。在某 些具體實施例巾，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為一種在需要預防或治療之個體中預防 或治療高血糖濃度併發症之方法，其包括使治療上有效量 之RUP43GPCR調節物與該受體接觸，該受體包含GpRi3i胺 基酸順序。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。在某 些具體實施例中，併發症係選自包括： (a) 徵候簇X; (b) 動脈粥瘤硬化； 101004 -34- 200539867 (C)粥瘤疾病； (d)心臟疾病； (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； 0)腎病；及 ①末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 冠狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施財，併發症為 徵候蔟X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體實 施例中#發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併發 2臟機此不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀 機此不王纟某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病。 在某些具體實施例中，併發症為高血壓。在某些具體實施 例中’併發症為高血麼。在某些具體實施财，併發症為 中：。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些具 體實域t，併發症為視網膜病。在某些具體實施例中， :毛症為神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血 吕疾病。在某些具體實施例中，併發症為多囊卵巢徵候簇。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 、 本發明另外之特徵為一種預防或治療高血糖濃度併發症 方法其包括對需要該預防或治療之哺乳動物提供或投 101004 -35- 200539867 予RUP43 GPCR之調節物，該受體包含GPR131胺基酸順序。 在某些具體實施例中，調節物為催動劑。在某些具體實施 例中，RUP43 GPCR之催動劑係為GPR131 GPCR之催動劑，其 中應明瞭的是GPR131 GPCR係為内源RUP43 GPCR。在某些具 體實施例中，併發症係選自包括： ⑻徵候簇X ; ⑻動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； (d) 心臟疾病； (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑻視網膜病； (i)腎病；及 ①末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 冠狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 徵候簇X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體實 施例中，併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併發 症為心臟機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病。 在某些具體實施例中，併發症為高血壓。在某些具體實施 例中，併發症為高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 101004 -36- 200539867 中=。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些具 體實施例中，併發症為視網膜病。在某些具體實施例中， 併發症為神經病。在某些具體實施例令，併發症為末梢血 官疾病。在某些具體實施例中’併發症為多囊印巢徵候蔟。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 在某些具體實施例中，調節物係可藉由根據襄一方面之 方法確遇。在某些具體實施例中，調節物係根據彦一方面 T方法確認。在某些具體實施例中，調節物不為抗體或其 杬原結合街生物。在某些具體實施例中，調節物不為肤。 在某些具體實施例中，調節物為會刺激得自哺乳動物之脂 肪細胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施财， 調節物為會刺激得自哺乳動物之脂肪細胞中之葡萄糖吸收 物。在某些具體實施例中，調節物為會刺激得自哺 骼肌細胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具 貝：例中’調節物為會刺激得自哺乳動物之骨路肌細胞 物吸收之化合物。在某些具體實施例中，該調節 μ 括催動劑、部份催動劑、逆催動劑及拮抗劑。 在某些較佳且體眚 I*〜該調節物為催動劑。在某些具 體……該催動劑為_二方面之化合物。 在某些具體實施例中’該調節物係對GPCR具選擇性。 些具體實施例中，該調節物為化合物 化:物3。在-些具體實施例中，該調節物為化合物：在 二，貫施例令’該調節物為化合物2。在一些具體實施 例中，该凋節物為化合物3。 101004 -37- 200539867 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少2〇〇/ 至少25%，至少30%，至少35%，至少40%，或至少45〇/〇。 0 0在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇〇/ 或至少45%。 φ 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC”低 於10 //M，低於1 //M，低於ΙΟΟηΜ或低於10nM。在一此且 體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於選自1〇nM 至10//Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑’具有EC5 〇低於選自1〇 ηΜ至1 _間隔之數值。在一此 具體實施例中’該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於選自 _ 10 nM至1〇0 nM間隔之數值。在某些具體實施例中，該EC5 〇 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMp檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組Rup43 GpCR多肽；及黑色素 細胞檢測’使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或ό之胺基酸順序之重組RUp43 GpCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有ECw低於10 ，低於1 /zM，低於1〇〇nM或低於1〇nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於10 101004 -38- 200539867 //Μ在該檢測中，低於9 在該檢測中，低於8 vM在該檢 測中’低於7 //M在該檢測中，低於6 /zM在該檢測中，低於 5 //M在該檢測中，低於4 //M在該檢測中，低於3 //M在該檢 測中，低於2 //M在該檢測中，低於1 _在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中，低於8〇〇 nM在該檢測中，低於7〇〇 nM在 該檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於500 nM在該檢測中， 低於400 nM在該檢測中，低於3〇〇 nM在該檢測中，低於 200 nM在該檢測中，低於1〇〇 nM在該檢測中，低於9〇福在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測中， 低於60 nM在該檢測中，低於5〇 nM在該檢測中，低於4〇虛 在忒檢測中，低於30 nM在該檢測中，低於2〇 nM在該檢測 中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有£(：5()低於選自1〇1^至1〇#河 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有EC"低於選自川^至丨_間隔之數值。在 —些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 Ε(^〇低於選自i〇nM至l〇〇nM間隔之數值。 在某些具體實施例中’該接觸包括該調節物對該個體之 口服投藥。 在某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。在某些且 體實施例中，該個體係為非人類喷乳動物。在某政具體實 施例中，該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、猶、狗、 兔：、老鼠、Λ白鼠、非人類靈長動物或人類。在某些具 體實施例中，該哺乳動物係為去❻. 你苟老乳、大白鼠、非人類靈長 101004 -39- 200539867 動物或人類。最佳為人類。 於篇八方面，本發明夕4 寺徵為醫藥或生理學上可接受之 組合物，其包含、美太μ山山 千」按又心 土本上由或由RUP43 GPCR之調節物所組 成’該受體包含GP咖胺基酸順序。

在某些具體實施例中，調節物係可藉由根據^方面之 方法確 '。在某些具體實施例中，調節物係根據H面 >方法確^。在某些具體實施例中，調節物不為抗體或其 原。口何生物。在某些具體實施例中，調節物不為肽。 在某些具體實施例中，調節物為會刺激得自哺乳動物之脂 肪、胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例中， 調節物為會刺激得自哺乳動物之骨絡肌細胞中之葡萄糖吸 收之化口⑯。在某些具體實施例中，該調節物係選自包括 催動劑、部份催動劑、逆催動劑及拮抗劑。在某些較佳具 體實施例中，該調節物為催動劑。在某些具體實施例中， 該催動劑為根據茗二方面之化合物。 在某些具體實施例中，該組合物為醫藥。在某些具體實 施例中，W藥組合物包含RUP43GPCRi調節物。在某些具 體實施例中，醫藥組合物基本上由Rup43GpcR之調節物所 組成。在某些具體實施例中，醫藥組合物係由Rup43GpcR 之調節物所組成。 在某些具體實施例中，該組合物係為生理學上可接受。 在某些具體實施例中，生理學上可接受之組合物包含Rup43 GPCR之調節物。在某些具體實施例中，生理學上可接受之 組合物基本上包含RUP43 GPCR之調節物。在某些具體實施 101004 -40- 200539867 例中，生理學上 所組成。 可接文之組合物係由RUP43 GPCR之調 節物 在某一 ’、體果知例中，該調節物係對GpcR具選擇性。 在一些具體實施例中，該調節物為化合物1、化合物2或 化合物3。在-些具體實施例中，該調節物為化合物！。在 -些具體實施例中’該調節物為化合物2。在一些具體實施 例中，該調節物為化合物3。

在某些具體實施例中，兮士闲y t J甲3亥调即物為口服生物可利用。在 一些具體貫細*例中，相餅於胺勝_ + 和 相對於腹膜腔内投樂，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5〇/ 5 + m 王夕；>/〇，至少10%，至少15%，至少2〇%， 至少25%，至少30%，$小γ0/ -, 主ν 35/〇，至少40%或至少45%。在一 些具體實施例中，相對於胺暄映& & # 个对於腹膜腔内投樂，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25〇/ 夕乃/°，至少30%，至少35%，至少40% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低 於10 //M ’低於1 //M，低於1〇〇nM或低於1〇囊。在一些具 體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於選自1〇_ 至10 —間隔之數值。在_些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有EC5 〇低於選自10福至i 間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC^低於選自 10nM至ΙΟΟηΜ間隔之數值。在某些具體實施例中，該 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞囊卩檢測， 101004 •41 - 200539867 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EC5 〇低於10 ’低於1乘，低於1〇〇 nM或低於1〇碰。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於10 //M在該檢測中，低於9 在該檢測中，低於8 _在該檢 測中，低於7 /M在該檢測中，低於6 _在該檢測中，低於 5 在該檢測中，低於4 //M在該檢測中，低於3 _在該檢 測中，低於2 —在該檢測中，低於1 _在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中’低於800 nM在該檢測中，低於7〇〇 nM在 該檢測中，低於600 ηΜ在該檢測中，低於5〇〇ηΜ在該檢測中， 低於400 ηΜ在該檢測中，低於3〇〇 ηΜ在該檢測中，低於 200ηΜ在該檢測中，低於ΙΟΟηΜ在該檢測中，低於9〇ηΜ在 該檢測中，低於80 ηΜ在該檢測中，低於7〇 ηΜ在該檢測中， 低於60 ηΜ在該檢測中，低於50 ηΜ在該檢測中，低於4〇碰 在該檢測中，低於30ηΜ在該檢測中，低於2〇ηΜ在該檢測 中或低於ΙΟηΜ在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑’在該檢測中具有EC5G低於選自1〇11]^至1〇#]^ 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在该檢測中具有EC；5 〇低於選自1〇 nM至1 //M間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 此5 0低於選自10 ηΜ至100 ηΜ間隔之數值。 101004 -42- 200539867 ;哀尤方面’本發明之特徵為一種降低血糖濃度之方 法，其包括對需要該降低之個體提供或投予該醫藥或生理 學上可接受之君八方面之组合物。 本I月之特徵亦為一種預防或治療代謝病症之方法，其 ^括對需要該預防或治療之個體提供或投予該醫藥或生理 子上可接党之農八方面之組合物。在某些具體實施例中， 代謝病症係選自包括：

⑻糖尿病； (b) 減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 (d) 胰島素過多。 ‘在一些具體實施例中，糖尿病為第1型糖尿病。在某些 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 %例中’代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 K病在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 降+度在某些具體實施例中，代謝病症為肤島素抗藥 此呈在某些具體實施例中，代謝病症為騰島素過多。在某 二具體實施例中’代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為-種職或治療高Μ濃度併發症之 Μ ’其包括對需要該預防或治療之個體提供或投予該醫 樂或生理學上可接受之茗八方面之組合物。在某些呈體實 施例中，併發症係選自包括： (a)徵候簇X ; 101004 -43- 200539867 (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； ⑹心臟疾病； (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑼視網膜病；

(i)腎病；及 ①末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全 冠狀：脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症 徵候族X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬# 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些且體 施例中，併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，、併 症為心臟機能不全。在某此且 她牡呆二具體實施例中，併發症為冠 機犯不全。在某些具體實施 在某些具體實施例中，併… 為减動脈疾病 例t，併打；^ 纟症“血壓。在某些具體t 〜r ’併發症為鬲血饜尤 中風力甘μ 在某些具體實施例中，併發症, 中風。在某些具體實施例

It ^ . . , y 併^症為神經病。在某些- 併發症為神經病。在某某些具體實施例中 管疾病。在某些具體二二體實施例中，併發症為末梢」 在某些具體實施例中Λ 中’：發症為多囊印巢徵候薦 在羊此且料 症為血脂肪過多。 在某些具體實施例中 1Jτ，3亥調節物為催動劑。 101004 200539867 :某些具體實施例中，係將治療上有效量之該醫藥或生 理學上可接受之組合物提供或投予該個體。 在某些具體實施例中，兮馨塗 4 τ 系商樂或生理學上可接受組合物 之提供或投予係為口服。

在某些具體實施例中’該個體係為哺乳動物。在某些且 體實施例中，該個體係為非人類哺乳動物。在某些具體實 轭例中’該哺乳動物係為馬、母牛、、綿羊、豬、貓、狗、 老乳大白乳、非人類靈長動物或人類。在某些且 體實施例中，該哺乳動物係為老鼠、 靈長 動物或人類。最佳為人類。 類靈長 於茗f方面， 受體包含GPR131 動物身體之方法 本毛明之特徵為RUP43 GPCR之調節物 胺基酸順序，供使用於藉由療法治療 ，該 人類

某些具體實施例中，調節物係可藉由根據廣一方面 古確邊。在某些具體實施例中，調節物係、根據廣—方 士〜-體實轭例中，調節物不為抗體或 在竿此物°在某些具體實施例中，調節物不為肽 在某些具體實施例中， 肪細胞中之㈣糖吸收 ,〜4 化口物。在某些具體實施例中 二二Γ:Γ，類或動物之脂肪細胞中之葡萄㈣ 哺乳動:之骨二節物為會刺_ 里妒“ 肥〒之葡萄糖吸收之化合物。在某ώ 例中，調節物為會刺激得自人類或 ㈣ 胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例：: 101004 -45- 200539867 調節物係選自& k & 目包括催動劑、部 劑。在某些較佳1知催動劑、逆催動劑及拮技 一干乂 1土具體貫施例φ 些具體實施例中，m 相節物為催動劑。在某 巧中，該催動劑為根據 在某些具體實施例中，該調^以 面之化5物。 在-些具體實施例中，該:：對_具選擇性。 …體實施；： 該調節物為化合物卜在 例中，該調節物為化合物3。 一八體實知 在某些具體實施例中，該 一 該凋即物為口服生物可利用。在 二具體實施例中，相對於睢 ”相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5〇/ 〇至丨10°/°，至少15%，至少20〇/〇， 至少25%，至少30%，至少 夕35/〇，至少40%或至少45%。在一 些具體實施例中，相對於胺瞭 子；腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少^ ^ 主少25/〇，至少3〇%，至少35%，至少4〇% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在-些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有％〇低 於10 //M，低於1顺，低於1〇〇nM或低於l〇nM。在一些具 體實施例中，該調節物為催動劑，具有^低於選自1〇碰 至10 //Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有ECw低於選自1〇1^至1 _間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於選自 10 nM至100 nM間隔之數值。在某些具體實施例中，該ECm 101004 -46- 200539867 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMP檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組ruP43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測’使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUp43 GpCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EG 〇低於10 ’低於1 /zM，低於1〇〇 nM或低於1〇 nM。在 φ 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EQo低於10 //M在該檢測中，低於9 //Μ在該檢測中，低於8 _在該檢 測中’低於7 /αΜ在该檢測中，低於6冰[在該檢測中，低於 5 在該檢測中’低於4娜在該檢測中，低於3 _在該檢 測中，低於2 _在該檢測中，低於1冰|在該檢測中，低於 900nM在該檢測中，低於800nM在該檢測中，低於7〇〇nM在 該檢測中，低於600nM在該檢測中，低於5〇〇nM在該檢測中， 低於400 nM在該檢測中，低於3〇〇 nM在該檢測中，低於 鲁 200 nM在該檢測中，低於1〇〇 nM在該檢測中，低於9〇碰在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測中， 低於60ιιΜ在該檢測中，低於50nM在該檢測中，低於4〇nM 在該檢測中，低於30nM在該檢測中，低於2〇nM在該檢測 中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有冗⑼低於選自1〇11]^至1〇成^ 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有EC”低於選自l〇nM至1 //M間隔之數值。在 些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 101004 -47- 200539867 EC5 〇低於選自10 nM至100 nM間隔之數值。 在某些具體實施例中，該動物係為哺乳動物。在某此具 體實施例中，該哺乳動物係為馬'母牛、綿羊、豬、貓: 狗、兔子、老鼠、大白鼠或非人類靈長動物。人類或動物 之更佳者為人類。 於茗十一方面，本發明之特徵為RUP43GPCR之調節物， 該受體包含GPR131胺基酸順序，供使用於藉由療法降低人 物身體中之血糖濃度之方法。在某些具體實施例中， 调節物為催動劑。 本發明之特徵亦為RUP43GPCR2調節物，該受體包含 卿⑶胺基酸順序，供使用於人類或動物身體中藉由療法 預防或治療新陳代謝病症之方法。在某些具體實施例中， 調節物為催動劑。在某些具體實施例中，代謝病症係選自 ⑻糖尿病；

⑼減弱之葡萄糖容許度； ⑻胰島素抗藥性；及 ⑷姨島素過多。 在-些具體實施例中，糖尿病為第㈤糖尿病。在某 ^圭具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體 把例中，代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代 =為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為 2里糖尿病。在某虺且體眚 插a 千一、體實〜例中，代謝病症為減弱之葡 糖谷許度。在某也且者 一 體只轭例中，代謝病症為胰島素抗 101004 -48- 200539867 性。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某 些具體實施例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為RUP43 GPCR之調節物，該受體包含 GPR131私基酸順序’供使用於人類或動物身體中藉由療法 預防或治療高血糖濃度併發症之方法。在某些具體實施例 中’調節物為催動劑。在某些具體實施例中，併發症係選 自包括： ⑷徵候簇X ; (b)動脈粥瘤硬化； ⑷粥瘤疾病； (d) 心臟疾病； (e) 南血壓； (f) 中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； (0腎病；及 (j)末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 对狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 徵候簇X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體實 施例中，併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併發 症為心臟機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病。 101004 -49- 200539867 在某些具體實施例中’併發症為高血M。在某些具體實施 例中’併發症為高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 中風。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些且 體實施例中’併發症為視網膜病。在某些具體實施例中，、 併發症為神經病^某些具體實施例中，併發症為末梢企 :疾病。在某些具體實施例中，併發症為多囊㈣徵候蔡。 某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。

在某些具體實施例中，調節物係、可藉由根據黑一方面之 方法確認。在某些具體實施例中，調節物係根據篇一方面 ，方法確認。在某些具體實施例中，調節物不為抗體或i 几原結合衍生物。在某些具體實施射，調節物不為肤。 在某些具體實施例中，調節物為會刺激得自哺乳動物之脂 肪細胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例中， :郎物為會刺激得自人類或動物之脂肪細胞中之葡萄糖吸 之化合物。在某些具體實施例中，調節物為會刺激得自 礼動物之骨路肌細胞中之㈣糖吸收之化合物。在某些 具體實施例中，調節物為會刺激得自人類或動物之骨路： :田：中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例中，該 ^郎物係選自包括催動劑、部份催動劑、逆催動劑及抄抗 :。在某些較佳具體實施例中，該調節物為催動劑。二 些具體實施例中，該催動劑為根據茗二方面之化合物,、 在某些具體實施例中，該調節物係對GPCR具選擇性。 2 —些具體實施例中，該調節物為化合物丨、化合物2或 化。物3。在一些具體實施例中’該調節物為化合物1。在 101004 -50· 200539867 一些具體實施例中，兮μ μ l从 〜凋卽物為化合物2。在一些具體 例中，該調節物為化合物3。 賞知 某一八體只知例中，該調節物為口服生物可利用。 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該Π服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少，至少·，至少20%: 至少25% ’至少3G%，至少35%，至少40%或至少45%。在— 些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，肖口服生物利用

率係為至少20%，至少25%，至少聽，至少抓，至少卿。 或至少45%。 ° 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在-些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有％。低 於10//M，低於1 ，低於1〇〇nM或低於1〇nM。在一些具 體貫施例中，該調節物為催動劑，具有ECw低於選自1〇福 至10 _間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑’具有EC5 〇低於選自1〇碰至1娜間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5 〇低於選自 10 nM至100 nM間隔之數值。在某些具體實施例中，該Ec5 〇 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMP檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 101004 -51 - 200539867 有EC5 〇低於10 //Μ，低於1 /zM，低於100 nM或低於l〇 nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有ec5 〇低於1〇 ~ //Μ在該檢測中，低於9 //Μ在該檢測中，低於8 //Μ在該檢 測中’低於7 //Μ在該檢測中，低於6 在該檢測中， 低於5 //Μ在該檢測中，低於4 //Μ在該檢測中，低於3 /Μ在 該檢測中，低於2 /ζΜ在該檢測中，低於1 _在該檢測中， 低於900 ηΜ在該檢測中，低於8〇〇 ηΜ在該檢測中，低於 φ 700 _在該檢測中，低於600 ηΜ在該檢測中，低於500 ηΜ在 該檢測中，低於400 ηΜ在該檢測中，低於3〇〇碰在該檢測中， 低於200 ηΜ在該檢測中’低於1〇〇 ηΜ在該檢測中，低於9〇碰 在該檢測中，低於80ηΜ在該檢測中，低於7〇ηΜ在該檢測 中，低於60 ηΜ在該檢測中，低於5〇 ηΜ在該檢測中，低於 40ηΜ在該檢測中，低於30ηΜ在該檢測中，低於2〇ηΜ在該 檢測中或低於ΙΟηΜ在該檢測中。在一些具體實施例中，該 調節物為催動劑，在該檢測中具有EC5〇低於選自1〇11]^至1〇 • 必1間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑’ 在該檢測中具有ECw低於選自⑺^至丨_間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 ECso低於選自ΙΟηΜ至lOOnM間隔之數值。 在某些具體實施例中，該動物係為哺乳動物。在某些具 體實施例中，該哺乳動物係為馬、母牛、绵羊、豬、猶、 狗、兔子、老鼠、大白鼠或非人類靈長動物。人類或動物 之更佳者為人類。 於茗十二方面，本發明之特徵為一種使用RUP43GPCR之 101004 •52- 200539867 凋即物以製備降低血糖濃度用藥劑之方法，該受體包含 GPR131胺基酸順序。在某些具體實施例中，調節物為催動 劑。在某〇tb星辦眘& —、體灵施例中，RUP43GPCR之催動劑為GpRi3i GPCR之催動密丨丨，f 士 J其中應明瞭的是GPR131 GPCR係為内源 RUP43 GPCR 〇

本發明之特徵亦為-種使用RUP43 GPCR之調節物以製備 預防或治療新陳代謝病症用藥劑之方法，It受體包含 隨31胺基酸順序。在某些具體實施例中，調節物為催動 劑。在某些具體實施例中，趣3GPCR之催冑劑為GPRm GPCR之催動劑’其中應明瞭的是GPR131 GPCR係為内源 RUP43GPCR。在某些具體實施例中，代謝病症係選自包括: ⑷糖尿病； ⑼減弱之葡萄糖容許度； (c)騰島素抗藥性；及 ⑼胰島素過多。 體實施例中，糖尿病為第1型糖尿病。在某 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具幻 她例中：代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代盒 =為第1型糖尿病4某些具體實施例中，代謝病症為負 5L糖尿病。在某些具體實 體只轭例中，代謝病症為減弱之葡| 糖谷终度。在某此具體會 一 ”體實轭例中，代謝病症為胰島素抗 性。在某4b呈體每A ^^ 一/、體只施例中，代謝病症為胰島素過多。在著 t具體實施例中，代嘴佐 , 代身病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為_話i m 為種使用RUP43 GPCR之調節物以製伟 101004 -53- 200539867 預防或治療高血糖濃度併發症用藥劑之方法，該受體包含 GPR131胺基酸順序。在某些具體實施例中，調節物為催動 劑。在某些具體實施例中，RUp43GpcR之催動劑為⑼咖 GPCR之催動劑，其中應明瞭的是啦131(5醜係為内源 RUP43GPCR。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。在 某些具體實施例中，併發症係選自包括： (a)徵候簇X ;

⑻動脈粥瘤硬化； ⑷粥瘤疾病； ⑹心臟疾病； (e)南血壓； ①中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； (0腎病；及 ①末梢血管疾病。 ”心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全 冠狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症』 徵候蔟X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化 ^某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體3 施例中’併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併考 症為心臟機能不全。在某些具體實施例中，併發症為㈤ 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病 某…、體只知例中，併發症為高血壓。在某些具體實本 101004 -54- 200539867 例中，併發症為高血虔。在某些具體實施例_，併發 中風。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些^ 體實施例中，併發症為視網膜病。在某些具體實施例厂、 併發症為神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血 管疾病。在某些具體實施例中，併發症為多切巢徵候箱。 在某些具體實施例中，併發症為Α脂肪過多。

在某些具體實施例中，調節物係可藉由根據農一方面之 方法確°在某些具體實施例中，調節物係、根據農一方面 之方法確認。在某些具體實施例中，調節物不為抗體或皇 抗原結切生物。在某些具體實施例中1節物不為肽Γ 在某些具體實施财，物為會刺激得自哺乳動物之脂 肪細胞中之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例中，曰 調節物為會刺激得自哺乳動物之骨路肌細胞中之葡萄糖吸 收之化合物。在某些具體實施例中，該調節物係選自包括 催動劑、部份催動劑、逆催動劑及拮抗劑。在某些較佳具 體實施例中，該調節物為催動劑。在某些具體實施例中， 該催動劑為根據裘二方面之化合物。 在某些具體實施例中，該調節物係對GPCR具選擇性。 些具體實施例中，該調節物為化合物卜化合物2或 化口物3。在-些具體實施例中，該調節物為化合物1。^ 一些具體實施例中，該調節物為化合物2。在一些具體實施 例中’該調節物為化合物3。 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 101004 -55- 200539867 用率係為至少1%，至少S。/ ^ , 夕5/〇，至少1〇%，至少15%，至少2〇〇/。， 至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇%或至少桃。在一 些具體A施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20〇/〇，至少25%，至少3〇%，至少35%，至少卿。 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 • 在一些具體實施例+，該調節物為催動劑，具有EC5a 於10 //Μ，低於1 //Μ，低於1〇〇 nM或低於1〇 nM。在一些具 體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於選自1〇nM 至10 //Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有EC”低於選自⑺福至丨_間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有ECw低於選自 10nM至ΙΟΟηΜ間隔之數值。在某些具體實施例中，該π” 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMp檢測， Φ 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組jyjpe GpCR多肽；及黑色素 細胞檢測’使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼·· 2或6之胺基酸順序之重組Rup43 GpCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EQ 〇低於10 /^Μ，低於1 //M，低於1〇〇 nM或低於10 nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5 〇低於10 //M在該檢測中，低於9 在該檢測中，低於8 #在該檢測 中，低於7 //M在該檢測中，低於6 在該檢測中，低於5 101004 -56- 200539867 /zM在該檢測中，低於4 /zM在該檢測中，低於3 //Μ在該檢 測中，低於2 /zM在該檢測中，低於1 在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中，低於800 nM在該檢測中，低於700 nM在 該檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於500 nM在該檢測中， 低於400 nM在該檢測中，低於300 nM在該檢測中，低於 200 nM在該檢測中，低於1〇〇 nM在該檢測中，低於90 nM在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測中

低於60 nM在該檢測中，低於50 nM在該檢測中，低於40 nM 在該檢測中，低於30 nM在該檢測中，低於2〇 nM在該檢測 中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑’在該檢測中具有ECs()低於選自1〇 nM至1〇 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在邊檢測中具有EC”低於選自i〇nMs 1 _間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 EC”低於選自1〇1^至100nM間隔之數值。 於茗十二方面，本發明之特徵為一種調節Rup43 GpcR活 性之方法，該受體包含GPR131胺基酸順序，其中該調節係 2需要該調節之個體中用以降低域，其包括使該受體岁 /口療上有效里之文體調節物接觸。在某些具體實施例中， /方法包括首先進行根據農一方面之方法，藉以確認調盲 物。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。 、☆本發明之特徵亦為-種調節RUP43GPCR活性之方法，1 又體W GPR131胺錢順序，其巾該調節係在需要該調$ 體中預防或冶療新陳代謝病症，其包括使該受體與 101004 •57· 200539867 療上有效量之受體調節物接觸。在某些具體實施例中，誘 方法包括盲先進行根據，一方面之方法，#以確認調節 物。在某些具體實施例中，冑節物為催動劑。在某些具體 實施例中，代謝病症係選自包括： ⑻糖尿病；

⑼減弱之葡萄糖容許度； (c)胰島素抗藥性；及 ⑹胰島素過多。 在一些具體實施例中，糖尿病為第1型糖尿病。在某a 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體1 施例中，代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代; 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為驾 =糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡案 ♦令^度纟某些具體實施例中，代謝病症為胰I；素抗藥 :°在某些具體實施例中，代謝病症為騰島素過多。在某 ’、實β例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 、☆本’X明之特徵亦為一種調節Rup43 GPCR活性之方法，該 3 GPR131 基酸順序，其巾該調節係在需要該調節 中預防或治療高血糖濃度併發症，#包括使該受體 φ上有效量之受體調節物接觸。在某些具體實施例 “°括首先進行根據束—方面之方法，藉以確認 I:::在某些具體實施例中，言周節物為催動劑。在某些 併癸广Η中’調即物為催動劑。在某些具體實施例中， 併發症係選自包括·· 101004 -58- 200539867 ⑻徵候簇x; (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； ⑼心臟疾病； (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病；

Ui)矾網膜病； (i)腎病；及 ①末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全 冠狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症 徵候簇X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化 在某些具體實施例中’併發症為粥瘤疾病。在某些具體 施例中’併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併 症2 U臟機月b不全。在某些具體實施例中，併發症為冠 2不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病 在某些具體實施例中，你旅 > 幵I症為咼血壓。在某些具體實; 例中，併發症為高血壓。在 、 巾Jif。产甘K 杲二具體實粑例中，併發症/

。〜具體實施例中，併發症為神 體實施例中，併發痄A ^目， 社呆二J 併發、广A I…、、同膜病。在某些具體實施例中： 併毛症為神經病。在某此 管疾病。在某些具體實^實&例中，併發症為末梢』 ._ /、 、e歹中’併發症為多囊卵巢徵候鏟 在某些具體實施财，W果徵候族. 併發症為血脂肪過多。 101004 '59. 200539867 在某些具體實施例中， ,.产甘、 凋即物不為抗體或其抗原紝人， 生物。在某些具體實施例中 柷原、、，。合诃 體實施例中，調節物為會刺激得自：不為肽。在某些具 之㈣糖吸收之化合物㈣細- 二刺哺乳動物之骨路肌細胞中之葡萄糖吸 物。在某些具體實施例中， 口 某些具體實施例中，兮胸;，根據心方面。在

=逆催動劑及括抗劑。在某些較佳具體實二= 调卽物為催動劑。 T 該 在某些具體實施例中，該調節物係對⑽具選擇性。 在一些具體實施例中，兮纲r J "調即物為化合物卜化合物2或 —口 "二具體實施例令，該調節物為化合物！。在 =具體實施例中，該調節物為化合物2。在—些具 例中，該調節物為化合物3。 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 —些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%’至少5%，至少1G%，至少15%，至少聽， 至少25%，至少3G%，至少35%，至少·或至少桃。在一 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少3()%，至少逃，至少衡。 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有ECw低 101004 -60- 200539867 於10 //Μ，低於1 //Μ，低於loo nM或低於1〇碰。在一些具 體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於選自l〇nM 至10 //Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有EQo低於選自10ηΜ至1 //Μ間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC50低於選自 ΙΟηΜ至ΙΟΟηΜ間隔之數值。在某些具體實施例中，該EC5q 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMP檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EC5 〇低於10 //M，低於1 ，低於1〇〇 nM或低於1〇 nM。在

一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於10 在該檢測中，低於9 //M在該檢測中，低於8 在該檢 測中，低於7 //M在該檢測中，低於6 _在該檢測中，低於 5 //M在該檢測中，低於4 //M在該檢測中，低於3 在該檢 測中，低於2 在該檢測中，低於1. /zM在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中，低於800 nM在該檢測中，低於7〇〇 nM在 該檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於500 nM在該檢測中， 低於400 nM在該檢測中，低於300 nM在該檢測中，低於 200 nM在該檢測中，低於100 nM在該檢測中，低於9〇 nM在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測中， 低於60 nM在該檢測中，低於50 nM在該檢測中，低於4〇 nM 101004 -61 - 200539867 在《亥4欢測中’低於30 nM在該檢測中，低於20 nM在該檢測 中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有Ec5G低於選自10ηΜ至1〇 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有EC5〇低於選自ΐ〇ηΜ至1 間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 〇低於選自1〇 ηΜ至1〇〇 nM間隔之數值。 _ 在某些具體實施例中，該接觸包括該調節物對該個體之 口服投藥。在某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。 在某些具體實施例中，該個體係為非人類哺乳動物。在某 些具體實施例中，該喃乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、

在某些具體實施例中， 人類靈長動物或人類。最佳為人類 大白鼠、非人類靈長動物或人類。 該哺乳動物係為老鼠、大白鼠、非 # 中降低血糖之方法， ;家十四方面’本發明之特徵為一種在需要降低之個體

’其包括使治療上有效量之RUP43 GPCR 調節物與該受體接觸， 某些具體實施例中，該 方法，藉以確認調節物 催動劑。 ’該GPCR包含GPR131胺基酸順序。在 該方法包括首先進行根據茗一方面之 物。在某些具體實施例中，調節物為

種在需要預防或治療之個體中預防 之方法’其包括使治療上有效量之 贫受體接觸，該受體包含GPR131胺基 ί施例中，該方法包括首先進行根據 101004 •62- 200539867 某些具體實施例中， 中’代謝病症係選自 I一方面之方法，藉以確認調節物。在 調節物為催動劑。在某些具體實施例 包括： ⑻糖尿病； (b) 減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 (d) 胰島素過多。 • 在一些具體實施例中，糖尿病為第1型糖尿病。在某些 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 施例中，代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 2型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖谷才度。在某些具體實施例中，代謝病症為姨島素抗藥 性。在某些具體實施例令，代謝病症為姨島素過多。在某 些具體實施例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 _ 本發明之特徵亦為—種在f要預防或治療之個體中預防 或治療高血糖濃度併發症之方法，其包括使治療上有效量 之RUP43 GPCR調節物與該受體接觸，該受體包含卿131胺 基酸順序。在某些具體實施例中，該方法包括首先進行根 據廣一方面之方法，藉以確認調節物。在某些具體實施例 中’凋節物為催動劑。在某些具體實施例中，調節物為催 動知彳°在某些具體實施例中，併發症係選自包括： ⑻徵候簇X; (b)動脈粥瘤硬化； 101004 -63- 200539867 (C)粥瘤疾病； (d) 心臟疾病； (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病；

0)腎病；及 ①末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全 冠狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症 徵候簇X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體 把例中’併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併」 ^為心臟機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠; =心。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病 在某t具體實施财，併發症為高血壓 例中’併發症為高血遷。在某：一、體“ 中Μ。A H θ μ 二八體實轭例中，併發症j ㈣J Τ {开發症為神經病。在某些^ •貝也，冑發症為視網膜病。在某此罝體實^由 併發症為神經病。在某些具 、體實施例中， 管疾病。在某4b且體實# γ ^ ，併發症為末梢立 在某些具體實施例中 /曩印巢徵候族‘ —甘& 汁&症為血脂肪過多。 在某些具體實施例中， 生物。在某些具體實施例二:：為抗體或其抗原結合衍 5亥凋郎物不為肽。在某些具 101004 '64- 200539867 體實施例中，調節物為會刺激 夕a s此 f礼動物之脂肪細胞Φ 之匍萄糖吸收之化合物胞中 合刺激π ό 1 β —，、體實鈿例中，調節物為 曰刺激侍自哺乳動物之骨骼肌 巧 t τ < «萄糖吸收之化人 物。在某些具體實施例中， α 甘a θ 〗τ α亥凋即物係根據茗三方面。扁 =體實施例中，該調節物係、選自包括催動劑、部份^ 動劑及拮抗劑。在某些較佳具體實施例中，： 调即物為催動劑。 次

某些具體實施例中，該調節物係對gpcr具選擇性。 在一些具體實施例中’該調節物為化合物1、化合物 化合物3。在一些具體實施例中，該調節物為化合物i。^ -些具體實施例中，該調節物為化合物2。在一些具體實衣 例中’該調節物為化合物3。 、 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 :’、體貝知例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少1〇%，至少15%，至少聰， 至少25% ’至少3G%，至少35%，至少4()%或至少桃。在— 些具體實施财，相對於腹膜腔内投藥，肖口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。

在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有ECw低 於10 //M，低於1灿4，低於100 nM或低於1〇 nM。在一些具 體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於選自1〇nM 101004 -65- 200539867 至10 //Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有EC5 〇低於選自1〇 njy[至1 _間隔之數值。在一些 具體實施例中’該調節物為催動劑，具有EC5 〇低於選自 10nM至ΙΟΟηΜ間隔之數值。在某些具體實施例中，該Ec5〇 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞CAMP檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測’使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUp43 GPCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EQ 〇低於10 _，低於1 //M，低於1〇〇 nM或低於10 nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5 〇低於1〇 μΜ在該檢測中，低於9 //M在該檢測中，低於8 _在該檢 測中，低於7 /zM在該檢測中，低於6 _在該檢測中，低於 5 在該檢測中’低於4 //M在該檢測中，低於3 _在該檢 測中，低於2 在該檢測中，低於1在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中，低於800 nM在該檢測中，低於7〇〇 nM在 該檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於500 nM在該檢測中， 低於400 nM在該檢測中，低於300 nM在該檢測中，低於 200 nM在該檢測中，低於1〇〇 nM在該檢測中，低於9〇 nM在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測中， 低於60 nM在該檢測中，低於50 nM在該檢測中，低於40 nM 在該檢測中，低於30 nM在該檢測中，低於20 nM在該檢測 中或低於10 nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 101004 -66- 200539867 物為催動劑，在該檢測中具有EC5G低於選自1〇1^至l〇 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有ECw低於選自iOnMsi _間隔之數值。在 些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 此5〇低於選自1〇祕至1〇〇nM間隔之數值。 在某些具體實施例中，該接觸包括該調節物對該個體之 口服投藥。 在某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。在某些具 體實施例中，該個體係為非人類哺乳動物。在某些且體實 施例中，該哺乳動物係為馬、母牛、、綿羊、豬、猶、狗： 兔子、老鼠、大白鼠、非人類靈長動物或人類。在某些且 =實施例中，該哺㈣物料老鼠、大自鼠、非人類靈i 動物或人類。最佳為人類。

;十方面本發明之特徵為醫藥或生理學上可接受 ，、且“勿，其包含、基本上由或由黯43 GPCR之調節物所 :成，該受體包含GP咖胺基酸順序。在某些具體實施例 亥調節物係可藉由進行根據農一方面之方法確認。在 ^瑞體實施例中，該調節物係藉由進行根據彦 方法確認。 在某些具體實施例中，# 生物/甘 ° 周即物不為抗體或其抗原結合衍 勿:在某些具體實施例，，該調節物不為肽。在某Μ 葡中，調節物為會刺激得自哺乳動物之脂肪細胞； =糖吸收之化合物。在某些具體實施例中，調節物為 …仔自哺乳動物之骨愁肌細胞中之葡萄糖吸收之化人 101004 -67- 200539867 物。在某些具體實施 <列中，該調節物係根據著三方面。在 某些具體實施例中，該調節物係選自包括催動劑、部份催 動劑、逆催動劑及括抗劑。在某些較佳具體實施例中，該 調節物為催動劑。 在某些具體實施例中，該組合物為醫藥。在某些具體實 施例中’醫藥組合物包含RUP43GPCR之調節物。在某'些且 體實施例中’醫藥組合物基本上由R购嶋之調節物：

組成。在某些具體實施例中，醫藥組合物係由鹏3gpcr 之調節物所組成。 在某些具體實施例中，該組合物係為生理學上可接受。 在某些具體實施例中’生理學上可接受之組合物包含刪3 GPCR之調節物。在某些具體實施例中，生理學上可接受之 組合物基本上由RUP43GPCR之調節物所組成。在某些具體 實轭例中，生理學上可接受之組合物係由rup43 GpcR之調 節物所組成。 在某些具體實施例中，該調節物係對GpcR具選擇性。 在-些具體實施例中，該調節物為化合物i、化合物2或 化口物3 °在-些具體實施例中，該調節物為化合物}。在 -些具體實施例中，該調節物為化合物2。在一些具體實施 例中，該調節物為化合物3。 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 -些具體實_巾，相對於腹膜㈣投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少1Q%，至少，至少2〇%， 至少40%或至少45%。在一 至少25%，至少30%，至少35% 101004 -68- 200539867 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有此5〇低 於10/zM，低於1 ，低於l〇〇nM或低於ι〇ηΜ。在一些具 體實施例中’該調節物為催動劑，具有EC5 〇低於選自1〇 nM 至10 //Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑’具有ECS 〇低於選自1〇 ηΜ至1 //Μ間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5g低於選自 10 nM至100 nM間隔之數值。在某些具體實施例中，該Ec

J U 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMp檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組Rup43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別竭：2或6之胺基酸順序之重組RUp43 GPCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EC5 〇低於10 ，低於1 ，低於1〇〇碰或低於10 nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於1〇 //M在該檢測中，低於9 //M在該檢測中，低於8 _在該檢 測中，低於7 //M在該檢測中，低於6處在該檢測中，低於 5 //M在該檢測中，低於4 _在該檢測中，低於3 //M在該檢 測中，低於2 —在該檢測中，低於1⑽在該檢測中，低於 101004 -69- 200539867 900 nM在該檢測中，低於800 nM在該檢測_，低於700 nM在 該檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於500 nM在該檢測 中，低於400 ηΜ在該檢測中，低於300 ηΜ在該檢測中，低於 200 nM在該檢測中，低於100 nM在該檢測中，低於90 nM在 該檢測中’低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測中， 低於60 nM在該檢測中，低於50 nM在該檢測中，低於40 nM 在該檢測中，低於30 nM在該檢測中，低於20 nM在該檢測 φ 中或低於10nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有Ec5G低於選自10nM至10 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有EQo低於選自10nM至1 //M間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 EC5 0低於選自1〇 nM至ι〇〇 nM間隔之數值。 於篇十片方面，本發明之特徵為一種降低血糖濃度之方 法’其包括對需要該降低之個體提供或投予該醫藥或生理 • 學上可接受之襄十五方面之組合物。 本&月之特彳政亦為一種預防或治療新陳代謝病症之方 法其包括對需要該預防或治療之個體提供或投予該醫藥 或生理學上可接受之茗十五方面之組合物。在某些具體實 施例中，代謝病症係選自包括： ⑻糖尿病； ⑻減弱之葡萄糖容許度； (c) 騰島素抗藥性；及 (d) 胰島素過多。 101004 -70- 200539867 在-具體實知例中，糖尿病為第i型糖尿病 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體^ 知例中二代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例t，代謝

=^^魏尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 乂’丙。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖容許度。在某些具體實施例中，代謝病症為姨島素抗藥 :°在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某 些具體實施例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為—種預防或治療高血㈣度併發症之 方法其包括對需要該預防或治療之個體提供或投予該醫 樂或生理學上可接受之桌十五方面之組合物。在某些具體 實施例中，併發症係選自包括： 、 ⑻徵候簇X; (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； ⑷心臟疾病； (e) 南血·壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑻視網膜病； (i)腎病；及 ①末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 冠狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 101004 -71 - 200539867 徵候簇χ。在某些具體實施例中 在苹此且體實浐仞士 併毛症為動脈粥瘤硬化。 在某一、體實把例中，併發症為粥瘤疾 · 施例t，併發症為心臟疾病。 y體只 症為心臟機能不全。在某此呈 开毛 機妒不八力“ 例中，併發症為冠狀 在苹此且體竇料症為冠狀動脈疾病。 在杲一、體實施例中，併發症為高灰廢 例中，併發症為高血塵。在某此 ^ —體實施 、二八體只苑例中，併發症為 中風。在某些具體實施例中， 七症為神經病。在某些具 體實施例中，併發症為满么 一〆、 ^ I為視、㈣病。在某些具體實施例中， 併發症為神經病。在某此且 Ά产 二，、體實％例中，併發症為末梢血 吕’矢病0在某些具體實施例中 ,^ L 妁甲併發症為多囊卵巢徵候簇。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 春t某些具體實施例中，該調節物為催動劑。在某些具體 只細例中，係將治療上有效量之該醫藥或生理學上可接受 之組合物提供或投予該個體。 某…、體’、知例中’該醫藥或生理學上可接受組合物 之知1供或投予係為口服。 !某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。在某些具 貫施例中’該個體係為非人類哺乳動物。在某些具體實 =中’：哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、猶、狗、 驶恭、大乳非人類靈長動物或人類。在某些具 .例中亥甫礼動物係為老鼠、大白氣、非人類靈長 動物或人類。最佳為人類。 於者 七方面’本發明之特徵為RUP43 GPCR之調節物， 101004 -72· 200539867 順序，供使用於藉由療法以治療 蝴物身體之方法中。在某些具體實施例中，㈣

係可藉由進行根據彦一方面之方法確認。在某Μ體I 私例中，該調節物係藉由進行根據農一方面之方:確/ :某些具體實施例中，調節物不為抗體或其抗原結： i物。在某些具體實施例中，該調節物不為肽。在竿此且 體實施例中’調節物為會刺激得自喷乳動物之脂肪細胞； :葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例中，調節物為 Θ刺激得自哺乳動物之骨路肌細胞中之葡萄糖吸收之化合 物。在某些具體實施例中，該調節物係根據哀三方面。在 某些具體實施例中，該調節物係選自包括催動劑、部份催 動刻、通催動劑及拮抗劑。在某些較佳具體實施例中 調節物為催動劑。 Μ

在某些具體實施例中，該調節物係對GPCR具選擇性。 在一些具體實施例中，該調節物為化合物1、化合物2或 口物3。在一些具體實施例中，該調節物為化合物1。2 —些具體實施例中，該調節物為化合物2。在一些具體 例中，該調節物為化合物3。 也 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 —些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少如％ 至少25%，至少30%，至少35%，至少40%或至少45%。在一 些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，該α服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇0/ 101004 -73- 200539867 或至少45%。 在某些具體實施例中’該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC50低 於10 //M，低於1 /zM，低於1〇〇nM或低於1〇nM。在一些具 體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC^低於選自ωηΜ 至10 //Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 φ 動劑，具有EC5G低於選自至間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於選自 麗至_間隔之數值。在某些具體實施例中，該％。 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMp檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼· 2或6之胺基酸順序之重組Rup43 GpCR多肽，·及黑色素 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼· 2或6之胺基酸順序之重組RUp43 GpCR多肽。 鲁 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EQo低於ίο，低於i _，低於1〇〇nM或低於l〇nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有ECw低於1〇 //M在該檢測中，低於9 在該檢測中，低於8#M在該檢 測中，低於7 在該檢測中，低於6 _在該檢測中，低於 5 //M在泫檢測中，低於4 [在該檢測中，低於3 _在該檢 測中，低於2在該檢測中，低於1//M在該檢測中，低於 900nM在該檢測中，低於8〇〇nM在該檢測中，低於7〇〇nM在 该檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於5〇〇nM在該檢測中， 101004 •74- 200539867 低於400 nM在該檢測中，低於3〇〇 _在該檢測中，低於 200nM在該檢測中，低於i00nM在該檢測中，低於9〇nM在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於7〇 nM在該檢測中， 低於60nM在該檢測中，低於50nM在該檢測中，低於4〇nM 在该檢測中，低於30 nM在該檢測中，低於2〇 nM在該檢測 中或低於10nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有Ec5g低於選自10nM至1〇 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有EC：5 〇低於選自1〇 nM至1 _間隔之數值。在 些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 EQo低於選自l〇nM至ΙΟΟηΜ間隔之數值。 在某些具體實施例中，該動物係為哺乳動物。在某些具 體實施例中，該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、貓、 狗、兔子、老鼠、大白鼠或非人類靈長動物。人類或動物 之更佳者為人類。 於茗十八方面，本發明之特徵為Rup43 GpCR之調節物， 4又體包含GPR131胺基酸順序，供使用於人類或動物身體 中藉由療法降低血糖濃度之方法中。在某些具體實施例 中，該調節物係可藉由進行根據茗一方面之方法確認。在 某些具體貫施例中，該調節物係藉由進行根據I一方面之 方法確認。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。 本發明之特徵亦為RUP43GPCR之調節物，該受體包含 GPR13丨胺基酸順序，供使用於人類或動物身體中藉由療法 預防或治療新陳代謝病症之方法中。在某些具體實施例 101004 •75- 200539867 中，該調節物係可藉由進行根據桌一方面之方法確認。在 某些具體貫施例中，該調節物係藉由進行根據茗一方面之 方法確認。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。在某 些具體實施例中，代謝病症係選自包括·· (a) 糖尿病； (b) 減弱之葡萄糖容許度； ⑷胰島素抗藥性；及 ⑹胰島素過多。 在一些具體實施例中，糖尿病為第丨型糖尿病。在某些 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 施例中’代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 2型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖容許度。在某些具體實施财，代謝病症為騰島素抗藥 性°在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某 些具體實施例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為RUP43GpCR之調節物，該受體包含 咖131胺基酸順序，供使用於人類或動物身體中藉由療法 預防或治療高血糖濃度併於斥 取乂货I症之方法中。在某些具體實施 例中，該調節物係可藉由推^ 」稽由進仃根據癆一方面之方法確認。 在某些具體實施例中，兮嘴銘％各& 4 5周即物係精由進行根據襄一方面 之方法確認。在某4b呈雜& 二八體貫％例中，調節物為催動劑。在 某些具體實施例中，併發症係選自包括： ⑻徵候簇X ; 101004 •76- 200539867 (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病f ⑹心械疾病； (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑻視網膜病；

(0腎病；及 (j)末梢血管疾病。 二臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全 对狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症』 徵候族X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體’ 她例中，併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併考 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為㈤ ::不在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病 例中’併發症為高血塵。在某些具體實衣 中風。在某此且體…r實“列中’併發症# 俨眘，―體a例中，併發症為神經病。在某此』 Ύ併發症為視網臈病。在某此呈體丨+ 併發症為神統病。/ “ θ μ 卡一體實％例中， 管疾病^ b 施例中，併發症為末梢土 某~具體實施例中，併發症為多囊卵巢 一一體具苑例中，併發症為血脂肪過多。 在某些具體實施例中， 心物不為抗體或其抗原結合衍 101004 -77· 200539867 些具趙實施例t，節物不為肽。在某μ 之：=卜劾物為會刺激得自哺乳動物之脂肪細胞；： 之葡萄糖吸收之化合物。在 匕中 , 一二/、體實施例中，調節物為 會刺激得自哺乳動物之骨骼 為 .^ 肌細胞中之葡萄糖吸收之化人 物。在某些具體實施例中， 口 Τ 4過即物係根據農三方面。在 某些具體實施例中，哕纲# t ^ ^ °亥調即物係選自包括催動劑、部份催 動劑、逆催_及料#卜在某些較佳具时施例中

調節物為催動劑。 μ 在某二具體實知例中’該調節物係對GpcR具選擇性。 在一些具體實施例中，該調節物為化合物i、化合物2或 化口物3。在-些具體實施例中，該調節物為化合物1。在 些具體實加例中，該調節物為化合物2 一此 例中，該調節物為化合物3。 —、體^ 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 二具體實轭例中’相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少㈣，至少15%，至少2〇%， 至少25%，至少3〇%，至少35%，至少4〇%或至少桃。在_ 二具體實她例中’相對於腹膜腔内投藥，言亥口服生物利用 率係為至少聰，至少25%，至少3G%，至少35%，至少40% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該π服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC”低 於10 //M，低於1 "Μ，低於1〇〇nM或低於1〇nM。在一些具 101004 -78- 200539867 體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於選自蘭 至10//Μ間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有ECwm於選自…權至丨_間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於選自 10 nM至100 nM間m之數值。在某些具體實施例中，該ECw 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMp檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組ruP43 GPCR多肽；及黑色素 細胞檢測’使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUp43 GpCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EC”低於10 //M，低於1 _，低於1〇〇nM或低於1〇nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5()低於10 //M在該檢測中，低於9 在該檢測中，低於8 vM在該檢 測中，低於7 /zM在該檢測中，低於6 #在該檢測中，低於 5 在該檢測中，低於4 /zM在該檢測中，低於3 在該檢 測中，低於2 //M在該檢測t，低於1冲I在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中，低於800 nM在該檢測中，低於700 nM在 該檢測中，低於600 nM在該檢測中，低於500 nM在該檢測中， 低於400 nM在該檢測中，低於3〇〇 nM在該檢測中，低於 200nM在該檢測中，低於1〇〇nM在該檢測中，低於90nM在 該檢測中，低於80 nM在該檢測中，低於70 nM在該檢測中， 低於60 nM在該檢測中，低於50 nM在該檢測中，低於40 nM 在該檢測中，低於30 nM在該檢測中，低於20 nM在該檢測 101004 -79- 200539867 中或低於10nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有ECs(W&於選自1〇11乂至1〇^^ 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在該檢測中具有EQo低於選自1〇nMSl _間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 ECS 〇低於選自1〇 nM至1〇〇 nM間隔之數值。

在某些具體實施例中，該動物係為哺乳動物。在某些具 體實施例巾，該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、雜、 ° 、子老乳、大白鼠或非人類靈長動物。人類或動物 之更佳者為人類。 ； 尤方面’本發明之特徵為一種使用RUP43 GPCR之 °周即物以製備降低血糖濃度用藥劑之方法，該受體包含 PR131胺基酸順序。在某些具體實施例中，該 先進行根摅梦‘ 蘇’一方面之方法，藉以確認調節物。在草此且 體實：例中，調節物為催動劑。 … 又月之特徵亦為一種使用RUP43 GPCR之調節物以製備 預防或治疼K， ’、々陳代謝病症用藥劑之方法，該受體包含 GPR131胺基酸 ^ ,^ 貝序。在某些具體實施例中，該方法包括進 行根據茗一方面 t方法，藉以確認調節物。在某些具體實 方也例中，調雀斤 、 n p 為催動劑。在某些具體實施例中，代謝病 症係選自包括： ' ⑻糖尿病； (b) 減弱之葡萄 (c) 胰島素抗藥 101004 -80 - 200539867 ⑹胰島素過多。 在一些具體實施财，糖尿病為第1型糖尿病。在某些 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 她例中’代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 2型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖谷許度。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素抗藥 性。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某 些具體實施例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為一種使用Rup43 GpCR之調節物以製備 預防或治療高血糖濃度併發症用藥劑之方法，該受體包含 GPR131胺基酸順序。在某些具體實施例中，該方法包括進 行根據茗一方面之方法，藉以確認調節物。在某些具體實 施例中，調節物為催動劑。在某些具體實施例中，併發症 係選自包括： ⑻徵候簇X; (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； ⑼心臟疾病； (e)高血壓； ⑺中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； (0腎病；及 101004 -81 - 200539867 G)末梢血管疾病。 心臟疾病包括作$ —、於心臟機能不全、冠狀機能不全、 冠狀動脈疾病及高血壓。 在某些具體實施例中，併發症為 徵候簇X。在某些具體眚 、， ’ 、貫⑪例中’併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中，报义 併务症為粥瘤疾病。在某些具體實 施例中，併發症為心臟痂 、 鲰疾病。在某些具體實施例中，併發 症為心臟機能不全。在草此 杲二體只施例中，併發症為冠狀 機能不全。在某4b且辦普a “ & 一 /、實e例中，併發症為冠狀動脈疾病。 在某些具體實施例中，你旅 一 併I症為咼血壓。在某些具體實施 例中’併發症為高血壓。名1 ^在某些具體實施例中，併發症為 中：。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些具 體實施例中’併發症為視網膜病。在某些具體實施例中， 併發症為神經病。在某些㈣實施财，併發症為末梢也 官疾病。在某些具體實施例中，併發症為多囊㈣徵候箱。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。

在某些具體實施财，調節物不為抗體或其抗原結合衍 生物。在某些具體實施例中，該調節物不為肽^在某些具 體實施例中，調節物為會刺激得自哺乳動物之脂肪細胞； 之葡萄糖吸收之化合物。在某些具體實施例中，調節物為 會刺激得自哺乳動物之㈣肌細胞中之葡萄糖吸收之化合 物。在某些具體實施例中’該調節物係根據茗三方面。： 某些具體實施例中’該調節物係選自包括催動劑、部份催 動劑、逆催動劑及拮抗劑。在某些較佳具體實施例中，該 調節物為催動劑。 101004 -82 - 200539867 在某一具體只苑例中，該調節物係對⑽r具選擇性。 2一些具體實施例中，該調節物為化合物1、化合物2或一 化口物3纟I具體實施例中，該調節物為化合物1。在 一些具體實施例中，該調節物為化合物2。在一些具體實施 例中，該調節物為化合物3。 & 在某些具體實施例中，該調節物為口服生物可利用。在 -些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少1〇%，至少15%，至少2〇%， 至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇%或至少㈣。在一 些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25q/。，至少3〇%，至少35%，至少4〇% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之調節物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有£(：5〇低 於10 //M，低於1 ，低於100nM或低於1〇nM。在一些具 體實施例中’該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於選自10nM 至10 /zM間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催 動劑，具有EG 〇低於選自1〇 nM至1 _間隔之數值。在一些 具體實施例中，該調節物為催動劑，具有EC5〇低於選自 10nM至ΙΟΟηΜ間隔之數值。在某些具體實施例中，該Ec5〇 係使用選自包括以下之檢測進行測定：全細胞cAMP檢測， 使用經轉染HEK293細胞進行，該細胞係表現具有順序識別 碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽；及黑色素 101004 •83- 200539867 細胞檢測，使用經轉染黑色素細胞進行，該細胞係表現具 有順序識別碼：2或6之胺基酸順序之重組RUP43 GPCR多肽。 在一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具 有EQ 〇低於10 ，低於1 ，低於1〇〇 nM或低於1〇 nM。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，具有Ec5〇低於10 //M在該檢測中，低於9 //M在該檢測中，低於8 在該檢 測中，低於7 在該檢測中，低於6⑽在該檢測中，低於 修 5 在該檢測中，低於4 在該檢測中，低於3 在該檢 測中，低於2 //M在該檢測中，低於1 _在該檢測中，低於 900 nM在該檢測中，低於8〇〇 nM在該檢測中，低於7〇〇 nM在 4 ^測中’低於600 nM在該檢測中，低於5〇〇 nM在該檢測中， 低於400nM在該檢測中，低於3〇〇nM在該檢測中，低於 200nM在該檢測中，低於100nM在該檢測中，低於9〇nM在 該檢測中，低於80nM在該檢測中，低於7〇nM在該檢測中， 低於60nM在該檢測中，低於50nM在該檢測中，低於4〇nM ® 在该檢測中，低於30 nM在該檢測中，低於2〇 nM在該檢測 中或低於10nM在該檢測中。在一些具體實施例中，該調節 物為催動劑，在該檢測中具有抝⑼低於選自1〇ηΜ至1〇 間隔之數值。在一些具體實施例中，該調節物為催動劑， 在该檢測中具有EC”低於選自1〇11]^至1 _間隔之數值。在 一些具體實施例中，該調節物為催動劑，在該檢測中具有 0低於選自1〇 nM至1〇〇 nM間隔之數值。 於茗二十方面，本發明之特徵為一種製備醫藥或生理學 上可接文組合物之方法，其包括將根據茗二方面之化合物 101004 -84 - 200539867 與載劑混合。 在某些具體實施例中，該組合物為醫藥。在某些具體實〜 施例中，該組合物為生理學上可接受。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少，至少5%，至少1〇%，至少15%，至少2〇%， 至少25%，至少3〇%，至少35%，至少40%或至少45%。在一 • 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少2〇%，至少25%，至少3〇%，至少35%，至少奶％ 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液_腦部障壁。 於贫一* 、屄一十一方面，本發明之特徵為一種醫藥或生理學上 W接又之組合物，其包含、基本上由或由根據農二方面之 化合物所組成。 • 在某些具體實施例中，該組合物為醫藥。在某些具體實 =例中，W藥組合物包含根據|二方面之化合物。在某些 /、體實施例中，醫藥組合物基本上由根據茗二方面之化合 一、、、成在某些具體實施例中，醫藥組合物係由根據茗 二方面之化合物所組成。 在某些具體實施例中，該組合物係為生理學上可接受。 在某些具體實施例中，吐审與 < 一 生里子上可接受之組合物包含根據 —方面之化合物。在某些具體實施例中，生理學上可接 受之組合物基本上包含押墙裳予上了接 上匕3根據茗一方面之化合物。在某些具 101004 -85- 200539867 體實施例中，生理學上可接受之組合物係由根據茗二方面 之化合物所組成。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少1〇%，至少15%，至少， 至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇%或至少45%。在— 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 • 率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 於茗二十二方面，本發明之特徵為一種調節RUP43 GPCH 活性之方法，該受體包含GPR131胺基酸順序，其中該調節 為在需要該調節之個體中降低血糖含量，其包括使該受體 與治療上有效量之根據茗二方面之化合物，或與治療上有 • $ 文量之醫藥或生理學上可接受之根據襄二，一方面之組合 物接觸。在某些具體實施例中，該接觸係與治療上有效: 之根據廣二方面之化合物。在某些具體實施例中，該接觸 係與治療上有效量之醫藥或生理學上可接受之根據茗二女 一方面之組合物。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，該π服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10。/。，至少15%，至少2〇%， 至少25%，至少3〇〇/0 ,至少35%，至少4〇%或至少45%。在— 101004 -86- 200539867 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少30❹/〇，至少35%，至少4〇〇/〇 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。在某些具 體實施例中，該個體係為非人類哺乳動物。在某些具體實

知例中’ 5亥哺乳動物係為馬、母牛、、缔羊、豬、貓、狗、 兔子、老鼠、大白鼠、非人類靈長動物或人類。在某些具 -實知例中’ n乳動物係為老鼠、大白鼠、非人類靈長 動物或人類。最佳為人類。 第十一方面，本發明之特徵為一種調節RUP43 GPCR 活性之方法，該受體包含GPR131胺基酸順序，其中該調節 係在需要㈣節之個體中預防或治療新陳代謝病症，其包 括使該受體與治療上有效詈 3双里之根據茗二方面之化合物，或 與治療上有效| | M + i $欢里之醫樂或生理學上可接受之根據茗二十一 万面之組合物接觸。在草此 呆―、體灵施例中，該接觸係與治 赞上有效量之棍撼梦― 一方面之化合物。在某些具體實施例 中，该接觸係盥治瘆卜古μ θ 根據,-十力面！之醫藥或生理學上可接受之 …十一方面之組合物。在某些具體實施例中，代謝 病症係選自包括： (β糖尿病； ⑼減弱之葡萄糖容許度； (c)胰島素抗藥性；及 101004 -87- 200539867 ⑹胰島素過多。 :-些具體實施例中，糖尿病為第旧糖尿病。在某些 二^體實施财，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝 病症為弟1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第

在某些具體實施例中’代謝病症為減弱之葡萄 糖谷㈣。在某些具體實施财，代謝病症為胰島素抗藥 性。在某些具體實施例巾，代謝病症為胰島素過多。在某 些具體實施财，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為一種調節RUP43GPCR活性之方法，該 受體包含GPR131胺基酸順序，其中該調節係在需要該調節 之個體中預防或治療高血糖濃度之併發症，其包括使該受 體/、⑺療上有效$之根據篇二方面之化合物，或與治療上 有效量之醫藥或生理學上可接受之根據茗二，一方面之組 合物接觸。在某些具體實施例中，該接觸係與治療上有效 量之根據廣二方面之化合物。在某些具體實施例中，該接 觸係與治療上有效量之醫藥或生理學上可接受之根據茗二 十一方面之組合物。在某些具體實施例中，併發症係 包括： ⑻徵候簇X ; (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； ⑹心臟疾病； (e)高血壓； 101004 -88· 200539867 ⑴中風； (g)神經病； ⑻視網膜病； (i)腎病；及 ①末梢血管疾病。

心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 冠狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發以 徵候蔟X。在某些具體實施財，併發症為動脈粥瘤硬化 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體， ^例中’併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併每 症：。臟機此不全。在某些具體實施例中，併發症為冠沿 機月b不王在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病 某一 /、體只苑例中，併發症為高血壓。在某些具體實夠 例中，併發症為高^壓。在某些具體實施例中，併發症為 中風。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些具 體實施例中’併發症為視網膜病。在某些具體實施例中， :發症為神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血 吕疾病。在某些具體實施例中，併發症為多囊卵巢徵候簇。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10。/。，至少15%，至少2〇%， 夕25/〇，至少30〇/〇，至少35%，至少40%或至少450/〇。在一 二具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 101004 -89- 200539867 KU I y 2〇/〇 ’至少25%，至少篇，至少％%，至少術〇 或至少45%。 在某二具體貝轭例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。在某些具 體實^例巾’ 4個體係為非人類哺乳動物。在某些具體實 ^例中，該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、猪、描、狗、 、、老鼠、大白鼠、非人類靈長動物或人類。在某些具 體實^例中’該哺乳動物係為老鼠、大白鼠、非人類靈長 動物或人類。最佳為人類。 於茗一十四方面，本發明之特徵為一種在需要降低之個 ，中降低Jk糖濃度之方法，其包括使該受體與治療上有效 里之根據農二方面之化合物，或與治療上有效量之關於 RUP43GPCR之醫藥或生理學上可接受之根據茗二子一方面 之組合物接觸，該受體包含GPR131胺基酸順序。在某些具 體實施例中，該接觸係與治療上有效量之根據茗二方面之 化口物。在某些具體實施例中，該接觸係與治療上有效量 之醫藥或生理學上可接受之根據茗二十一方面之組合物。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少20〇/〇， 至少25%，至少30%，至少35%，至少40%或至少45%。在— 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇% 101004 -90- 200539867 或至少45%。在某些具體實施例中，該口服生物可利用之 化a物係進一步能夠越過血液-腦部障壁。 在某些具體實施例中，該個體係為哺乳動物。在某些具 體實施例中，該個體係為非人類哺乳動物。在某些具體實 施例中’ δ亥哺乳動物係為馬、母牛、、緯羊、豬、貓、狗、 兔子、老鼠、大白鼠、非人類靈長動物或人類。在某些具

體實施例中，該哺乳動物係為老鼠、大白鼠、非人類靈： 動物或人類。最佳為人類。 於哀二十五方面，本發明之特徵為在需要降低之個體中 預防或治療新陳代謝病症之方法，其包括使該受體與治療 上有效量之根據I二方面之化合物或與治療上有效量之關 於聰3GPCR之醫藥或生理學上可接受之根據#二卜方 合物接觸’該受體包含咖31胺基酸順序。在某些 例中，該接觸係與治療上有效量之根據著二方面 旦^物/在某些具體實施例中，該接觸係與治療上有效 物。在某-且體實施二 十一方面之組合 ⑻糖尿病—例中，代謝病㈣選自包括·· ⑼減弱之葡萄糖容許度； ⑷胰島素抗藥性；及 (d)胰島素過多。 較佳且㈣ 糖尿病為第1㈣尿病。在某此 車乂佳〆、體實施例中，糖尿病 、二 施例中，代謝病症為糖尿病。μ以。在某些具體實 在某1具體實施例中，代謝 101004 -91- 200539867 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 2型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖谷α午度。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素抗藥 性。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某 些具體實施例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。

本發明之特徵亦為在需要預防或治療之個體中預防或治 療高血糖濃度併發症之方法，其包括使該受體與治療上有 效量之根據茗二方面之化合物或與治療上有效量之關於 RUP43 GPCR之醫藥或生理學上可接受之根據茗二，一方面 之組合物接觸’該受體包含GpR131胺基酸順序。在某些且 體實施例中，該接觸係與治療上有效量之根據篇二方^ 化口物。在某些具體實施例中，該接觸係與治療上有效量 之醫藥或生理學上可接受之根據襄二十一方面之組合物。 在某些具體實施例中，併發症係選自包括： ⑻徵候簇X ; (b)動脈粥瘤硬化； ⑻粥瘤疾病； ⑹心臟疾病； (e) 南血壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑻視網膜病； (i)腎病；及 G)末梢jk管疾病。 101004 -92- 200539867 。臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 冠狀⑽疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 徵侯簇X在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中’併發症為粥瘤疾病。在某些具體實 把例中’併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併發 症為。臟機靶不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀 機此不王。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病。 在某些具體實施例中，併發症為高金壓。在某些具體實施 例中，併發症為高企壓。在某些具體實施例中，併發症為 中風。在某些具體實施例中，併發症為神經病4某些具 體實施例中’併發症為視網膜病。在某些具體實施例中， =發症為神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血 官疾病。在某些具體實施例中，併發症為多囊卵巢徵候簇。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 在某些具體實施例中，該化合物係為口服生物可利用。 在一些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥…服生物 利用率係為至少1%，至少5%，至少1〇%，至少15%，至少 20% ’至少25% ’至少3〇%，至少35%，至少·或至少·。 在-些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，肖口服生物 利用率係為至少20%，至少25%，至少3〇%，至少35%，至 少40%或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 —步能夠越過血液-腦部障壁。 在某些具體實施例中’該個體係為哺乳動物。在某些具 101004 -93- 200539867 體實施例中，該個體俜兔卜 -.體係為非人類哺乳動物。在某些具體實 知例中，該哺乳動物俏A 、 & 係為馬、母牛、錦羊、豬、猶、狗Γ . 老乳大白乳、非人類靈長動物或人類。在某些呈 體實施例中，該哺乳動物係 /、 為老私、大白鼠、非人類靈長 動物或人類。最佳為人類。

、；漭i /、方面，本發明之特徵為一種降低血糖濃度之 方法’其包括對需要該降低之個體提供或投予根據茗二方 面之化合物或使用治療上有效量之醫藥或生理學上可接受 之根據茗一十一方面之組合物。在某些具體實施例中，該 提供或投予化合物係提供或投予根據心方面之化合物。 在某些具體實施财，言亥提供或投予醫藥或生理學上可接 受之組合物係提供或投予醫藥或生理學上可接受之根據茗 二十一方面之組合物。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少2〇%， 至少25% ’至少30%，至少35%，至少40%或至少45%。在一 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至少40% 或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在某些具體實施例中，該個體係為11甫乳動物。在某些具 體實施例中，該個體係為非人類哺乳動物。在某些具體實 101004 -94- 200539867 施例中， > ., 〜哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、貓、狗、 尼于、老❽ , 體實施你％、大白鼠、非人類靈長動物或人類。在某些具 動物彳中该哺乳動物係為老鼠、大白鼠、非人類靈長 3人類。最佳為人類。 於第二十七卡 症之方、去 面，本务明之特徵為一種治療新陳代謝病

根據茗2其包括對需要該治療或預防之個體提供或投予 學上可 > 面之化合物或使用治療上有效量之醫藥或生理 I例中接ft根據茗二十一方面之組合物。在某些具體實 之化人亥提供或投予化合物係提供或投予根據茗二方面 理學2 ° ^某些具體實施^，該提供或投予醫藥或生 心 U接又之組合物係提供或投予醫藥或生理學上可接 文之根據# - ; + 一^一方面之組合物。在某些具體實施例中， 代谢病症係選自包括·· ⑷糖尿病； (b)減弱之葡萄糖容許度； (C)姨島素抗藥性；及 (d)胰島素過多。 私在一些具體實施例中，糖尿病為第1型糖尿病。在某些 ^土具體實施例中’糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 例中’代病症為糖展病。在某些具體實施例中，代謝 f症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 ^谷許度。在某些具體實施财，代謝病症為騰島素抗藥 。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某 101004 -95- 200539867 些具體實施例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本&明之特徵亦為一種治療高葡萄糖濃度併發症之方-法，其包括對需要該治療或預防之個體提供或投予根據裏 一方面之化合物或使用治療上有效量之醫藥或生理學上可 接受之根據茗二十一方面之組合物。在某些具體實施例 提仏或彳又予化合物係提供或投予根據I二方面之化 口物在某些具體實施例中，該提供或投予醫藥或生理學 鲁 Jl可接叉之組合物係提供或投予醫藥或生理學上可接受之 才艮據弟二f 一方夕人此 . 万面之組合物。在某些具體實施例中，併發 症係選自包括： ⑷徵候簇X ; (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； ⑼心臟疾病； (e)高血壓； ♦ (f)中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； (0腎病；及 ①末梢血管疾病。 心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 冠狀動脈疾病及高域。在某些具體實施财，併發症為 徵候簇X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體實 101004 -96- 200539867 施例中，併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併發 症為心臟機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病。 在某些具體實施例中，併發症為高血壓。在某些具體實施 例中’併發症為高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 中風。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些具 體實把例中’併發症為視網膜病。在某些具體實施例中， ，發症為神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血 s疾病。在某些具體實施例中，併發症為多囊卵巢徵候簇。 在某些具體實施例中，併發症為Α脂肪過多。 在某…、體實〜例中，該化合物係為口服生物可利用。 在…體實施例中，相對於腹媒腔内投藥，該口服生物 利用率係為至少1%，至少5%，至少跡。，至少㈣，至少 肌，至少25%，至少鳩，至少35%，至少·或至少桃。 在-些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥…服生物 利用率係為至少聰，至少25%，至少3〇%，至少35%，至 少40%或至少45〇/0。 t某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 體杏：“體實施例中，該個體係為哺乳動物。在某些具 ., °亥個體係為非人類哺乳動物。在某些具體實 該哺乳動物係為馬、母牛、料、豬、猫、狗、 兔子、老鼠、大白璧 體實施例中，該哺：二人類靈長動物或人類。在某些具 動物係為老鼠、大白鼠、非人類靈長 101004 -97- 200539867 動物或人類。最佳為人類。 於茗二+八卞^ 、— 面’本發明之特徵為根據裘二方面之化合 物’供使用於藉由療法以治療人類或動物身體之方法中。 在某些具體實施例中’該化合物係為Π服生物可利用。 在一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，$口服生物 利用率係為至少1〇/〇 ’至少5%，至少1〇%，至少15%，至少 2〇/° ’至少25%，至少30%，至少35%，至少40%或至少45%。 在一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物 利用率係為至少20°/。，至少25。/。，至少30¾，至少35°/◦，至 少40%或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在某些具體實施例中，該動物係為哺乳動物。在某些具 體實施例中，該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、貓、 狗、兔子、老鼠、大白鼠或非人類靈長動物。人類或動物 之更佳者為人類。 於篇二十尤方面，本發明之特徵為根據襄二方面之化合 物，供使用於藉由療法以降低人類或動物身體中之血糖濃 度之方法中。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在 一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少20〇/〇， 至少25%，至少30%，至少35%，至少40%或至少45%。在一 些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利用 101004 -98- 200539867 率係為至少篇，至少25%，至少3G%，至少35%，至少卿。 或至少45%。 〇 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 ’' 在某些具體實施例中’該動物係為哺乳動物。在某些具 體實施例巾’該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊 ^ ^ π ?田、

句、兔子、老鼠、Α白鼠或非人類靈長動物。人類或動物 之更佳者為人類。 於牮三十方 ，不發明之特徵為根據茗二方面之化^ 物仏使用於藉由療法以預防或治療人類或動物身體中： 新陳代謝病症之方法中。在某此 — 牡呆二具體實施例中，代謝病 係選自包括： ⑻糖尿病； ⑼減弱之葡萄糖容許度； ⑹胰島素抗藥性；及 (d)姨島素過多。 击在一些具體實施例中，糖尿病為第1型糖尿病。在某 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某此且體 :例中：代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中:、代 2型糖尿病。在某μ體實；; 二實％例中，代謝病症為 糖… 杲一、體貫細例中，代謝病症為減弱之葡彳 在某些具體實施例中，代謝病症為姨島㈣ 體二 =實施例中’代謝病症為胰島素過多… “例中，代謝病症係關於個體令之高血糖濃度。 101004 •99- 200539867 本盔月之特徵亦為根據第二方面之化合物，供使用於藉 由療法以預防或治療人類或動物身體中之高血糖濃度併發〜_ 症之方法中。在某些具體實施例中，併發症係選自包括·· (a) 徵候簇X ; (b) 動脈粥瘤硬化，· ⑷粥瘤疾病； ⑻心臟疾病；

(e)高血壓； ①中風； (g)神經病； ⑻視網膜病； (0腎病；及 ①末梢血管疾病。 ”心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 =動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 徵候族X。在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。 在某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些呈體實 施例中，併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中’併發 =心臟機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀 =不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病。 、， Jτ 1幵知症為同血壓。在某些具體實施 列中’併發症為高企壓。在草此且 m具體實施例中，併發症為 ^在某些具體實施例中，併發症為神經病。 體貫施例中，併發症為視網膜 —” 联病在某些具體實施例中， 101004 -100- 200539867 :發症為神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血 S疾病在某些具體實施例中，併發症為多囊卵巢徵候簇。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 在某些具體實施例中，該化合物為口服生物可利用。在

=/、體貝施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物利 用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至少2〇%， 至少25%，至少3〇%，至少35%，至少氣或至少_。在一 些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，# 口服生物利用 率係為至少聽，至少25%，至少30%，至少35%，至少4〇% 或至少45%。 _\某些具體實施例中，該σ服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 在某些具體實施例中，該動物係為哺乳動物。在某些具 體實施例巾，該哺乳動物係為馬、母牛、綿羊、豬、貓:、 狗、兔子、老鼠、Α白鼠或非人類靈長動物。人類或動物 之更佳者為人類。 於茗三十-方面，本發明之特徵為一種使用根據茗二: 面之化合物以製備降低血糖濃度用藥劑之方法。 在某些具體實施例中，該化合物係為口服生物可利用 在-些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，該口服生4 利用率係為至少1%，至少5%，至少10%，至少15%，至^ 20%，至少25% ’至少30%，至少35%，至少4〇%或至少4% 在-些具體實施例中’相對於腹膜腔内投藥，該口服生米 利用率係為至少20%，至少25%，至少鄕，至少挑，^ 101004 -101- 200539867 少40%或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 於茗三i二方面，本發明之特徵為一種使用根據茗二方 面之化合物以製備預防或治療新陳代謝病症用藥劑之方 法。在某些具體實施例中，代謝病症係選自包括·· ⑷糖尿病； ⑻減弱之葡萄糖容許度； (c)胰島素抗藥性；及 (Φ胰島素過多。 在一些具體實施例中，糖尿病為第〖型糖尿病。在某些 較佳具體實施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實 知例中’代謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝 病症為第1型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第 2型糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄 糖容許度。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素抗藥 ^。在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某 〜、體實&例中’代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 本發明之特徵亦為_種使用根據紅方面之化合物以製 備預防或治療高血糖濃度併發症用藥劑之方法。在某些具 體實施例中，併發症係選自包括： (a) 徵候簇X; (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； 101004 200539867 (d) 心臟疾病； (e) 高血壓，· (f) 中風； (g)神經病； ⑻視網膜病； ①腎病；及 (D末梢血管疾病。

”心臟疾病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、 艰狀動脈疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為 徵侯簇X在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化 ,某些具體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體賓 加例中’併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併潑 症為心臟機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠: 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病 在某些具體實施例中，併發症為高血I。在某些具體實施 例中，併發症為高血遷。在某些具體實施例中，併發症為 中風。在某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些具 -貫知例t <并發症為視網膜病。在某些具體實施例中， 料症為神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血 吕疾病。在某些具體實施例中，併發症為多囊印巢徵候箱。 在某些具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 在某些具體實施財，該化合物係為口服生物可利用。 在-些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥…服生物 利用率係為至少1%，至少5%，至少1()%，至少15%，至少 101004 -103- 200539867 20%，至少25%，至少3〇%，至少35%，至少4〇%或至少衫％。 在一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物 利用率係為至少20%，至少25%，至少30%，至少35%，至 少40%或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 於茗二i二方面，本發明之特徵為一種調節RUP43 GPCR 之方法，該受體包含GPR13i胺基酸順序，其包括使該受體 與根據茗二方面之化合物或與醫藥或生理學上可接受之根 據茗二十一方面之組合物接觸。在某些具體實施例中，該 接觸係與根據茗二方面之化合物。在某些具體實施例中， 遠接觸係與醫藥或生理學上可接受之根據茗二十一方面之 組合物。 在某些具體實施例中，該化合物係為口服生物可利用。 在些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物 利用率係為至少1%，至少5%，至少1〇%，至少15%，至少 20/。，至少25%，至少3〇%，至少35%，至少4〇%或至少45%。 在一些具體實施例中，相對於腹膜腔内投藥，該口服生物 和用率係為至少20%，至少25%，至少3〇%，至少35%，至 少40%或至少45%。 在某些具體實施例中，該口服生物可利用之化合物係進 一步能夠越過血液-腦部障壁。 於茗三十四方面，本發明之特徵為一種確認一或多種候 選化合物作為結合至RUP43GPCR2化合物之方法，該受體 101004 -104- 200539867 u a GPR131胺基酸順序，其包括以下步驟： ⑻使該受體與可谓測地經標識之已知配位，於候 ^^化合物存在或不存在下接觸；與 ⑻測定該經標識配位體之結合是否於候選化合物存在下 被抑制； 八中4抑制係為候選化合物為結合至Rup43 之化合物 之指標。 在某些具體實施财，GPR131胺基酸順序麵自包括： ⑻順序識別碼：2之胺基酸順序； ⑻順序識別碼：2之胺基酸2-330 ; (C)順序識別碼：2之胺基酸2_33〇,其附帶條件是Rup43G蛋 白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順序識別碼：2之胺 基酸位置1上； ⑼被包含核酸順序之多核苷酸編碼之0蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：3與順序 識別碼：4進行PCR ; ⑹順序識別碼：6之胺基酸順序； ⑴被包含核酸順序之多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：7與順序 識別碼·· 8進行PCR ; (g)順序識別碼·· 2之胺基酸順序，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； 101004 -105- 200539867 ⑻順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼·· 2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； (0順序識別碼：2胺基酸2-330，其中在順序識別碼·· 2之 胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶條 件是RUP43G蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順序 識別碼·· 2之胺基酸位置1上；及 (0被多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 φ 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 在某些具體實施例中，RUP43 GPCR係為重組。在某些具 體實施例中，該接觸包括與表現GPCR之宿主細胞或與宿主 細胞之細胞膜接觸。在某些具體實施例中，該表現（}1>(：^之 信主細胞係包含表現載體，此載體包含使該受體編碼之多 核苷酸。 在一些具體實施例中，GPR131胺基酸順序係為順序識別 碼· 2之胺基酸順序。在一些具體實施例中，GpR131胺基酸 鲁 順序係為順序識別碼：2胺基酸順序之變種。在一些具體 實施例中，該順序識別碼：2胺基酸順序之變種係為該胺 基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似物。在一些具 體實施例中，該順序識別碼·· 2之胺基酸順序之變種係為 該胺基酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正 交類似物之非内源構成上活化突變種。在某些具體實施例 中，該順序識別碼：2之胺基酸順序之變種係為該胺基酸 順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似物 之生物活性片段。在某些具體實施例中，該順序識別碼： 101004 -106- 200539867 2之胺基酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物 正交類似物之生物活性片段，係為順序識別碼：2之胺基 酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似 物，不存在N-末端甲硫胺酸。在某些具體實施例中，該順 序識別碼：2之胺基酸順序之變種係為至少約75%，至少約 80%，至少約85%，至少約90%，至少約91%，至少約92%， 至少約93%，至少約94%，至少約95%，至少約96%，至少 鲁約97%，至少約98%或至少約99%，相同於順序識別碼：2 之胺基酸順序。在一些具體實施例中，該順序識別瑪：2 胺基酸順序之變種係為至少約90%，至少約91%，至少約 92%，至少約93%，至少約94%，至少約95%，至少約96%， 至少約97%，至少約98%或至少約99%相同於順序識別碼： 2之胺基酸順序。 在某些具體實施例中’該細胞膜製劑係經由以Brinkman Polytr〇nTM使細胞均化而製成。在某些具體實施例中，該細 _ 胞膜製劑係經由各該Polytron，以10-20秒延續時間之3次爆 裂均化而製成。 在某些具體實施例中，該候選化合物不為抗體或其衍生 物。 在某些具體實施例中，該候選化合物不為肽。 在某些具體實施例中，該已知配位體係為根據茗二方面 之化合物。 在某些具體實施例中，該已知配位體係為根據廣三方面 之調節物。 101004 107- 200539867 在某些具體實施例中，該已知配位體為化合物1、化合 物2或化合物3。在某些具體實施例中，該已知配位體為化 合物1。在某些具體實施例中，該已知配位體為化合物2。 在某些具體實施例中，該已知配位體為化合物3。 在某些具體實施例中，該已知配位體為對GPCR專一之抗 體或该抗體之抗原結合衍生物。 在某些具體實施例中，該標識係選自包括： ⑷放射性同性素； ⑻酵素；及 ⑷螢光團。 在某些具體實施例中，該標識為放射性同性素。在某些 具體實施例中，該標識係選自包括3H、"c、35S及i25][。 化合物1、化合物2或化合物3可使用下文此項技藝中已 知之技術經放射性標識。在某些具體實施例中，化合物1、 化合物2或化合物3係以3 η或14 c經放射性標識。 在其他具體實施例中，該方法進一步包括以下步驟，將 經標識第一種已知配位體之結合被候選化合物抑制之程 度，與該經標識第一種已知配位體之結合被已知會結合至 GPCR之第二種配位體抑制之第二種程度作比較。 於茗三十五方面，本發明之特徵為一種偵測會結合至 RUP43GPCR之配位體之方法，該受體包含GpR131胺基酸順 序，其包括以下步驟： ⑻使試驗配位體與表現該受體之宿主細胞或與宿主細胞 之細胞膜，在允許該受體與該試驗配位體間之交互作 101004 -108- 200539867 用之條件下接觸；與 ⑻偵測經結合至該受體之配位體。 在某些具體實施例中，GpRm胺基酸順序係選自包括·· (a)順序識別碼：2之胺基酸順序； ⑼順序識別碼：2之胺基酸2-330 ; (c)順序識別碼：2之胺基酸2-330，其附帶條件是RUp43G蛋 白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順序識別碼：2之胺 • 基酸位置1上； (Φ被包含核酸順序之多核苷酸編碼之〇蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：3與順序 識別碼：4進行PCR ; (e)順序識別碼：6之胺基酸順序； ⑺被包含核酸順序之多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 _ 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：7與順序 識別碼：8進行PCR ; (g) 順序識別碼：2之胺基酸順序，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； (h) 順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代·， (0順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶 條件是RUP43G蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順 101004 -109- 200539867 序識別碼：2之胺基酸位置1上；及 G)被多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 在一些具體實施例中，GPR131胺基酸順序係為順序識別 碼：2之胺基酸順序。在一些具體實施例中，GPR131胺基酸 順序係為順序識別碼：2胺基酸順序之變種。在一些具體 實施例中，該順序識別碼：2胺基酸順序之變種係為該胺 基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似物。在一些具 體實施例中，該順序識別碼·· 2之胺基酸順序之變種係為 該胺基酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正 交類似物之非内源構成上活化突變種。在某些具體實施例 中’該順序識別碼：2之胺基酸順序之變種係為該胺基酸 順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似物 之生物活性片段。在某些具體實施例中，該順序識別碼：2 之胺基酸順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正 父類似物之生物活性片段，係為順序識別碼：2之胺基酸 順序或該胺基酸順序之對偶質變種或哺乳動物正交類似 物，不存在N-末端甲硫胺酸。在某些具體實施例中，該順 序識別碼· 2之胺基酸順序之變種係為至少約乃％ ,至少約 8〇/° ’至少約85°/° ’至少約90%，至少約91%，至少約92%， 至少約93%，至少約94%，至少約95%，至少約％%，至少 約97/。’至少約98%或至少約99%，相同於順序識別碼：2 之胺基敲順序。在一些具體實施例中，該順序識別碼：2 胺基酸順序之變種係為至少約90% ,至少約91%，至少約 101004 •110- 200539867 92%，至少約93%，至少約94%，至少約95%，至少約96%， 至少約97%，至少約98°/❹或至少約99%相同於順序識別碼： 2之胺基酸順序。 在某些具體實施例中，RUP43 GPCR係為重組。在某些具 體實施例中，該接觸包括與表現GPCR之宿主細胞或與宿主 細胞之細胞膜接觸。在某些具體實施例中，該表現GPCR之 宿主細胞包含表現載體，此載體包含使該受體編碼之多核 ^ 芬酸。 在某些具體實施例中，該試驗配位體不為抗體或其抗原 結合衍生物。 在某些具體實施例中，該試驗配位體不為肽。 在某些具體實施例中，該細胞膜製劑係經由以Brinkman PolytronTM使細胞均化而製成。在某些具體實施例中，該細 胞膜製劑係經由各該Polytron，以10-20秒延續時間之3次爆 裂均化而製成。 _ 在某些具體實施例中，該試驗配位體係經標識。在某些 具體實施例中，該標識係為放射性同性素。在某些具體實 施例中，該標識係選自包括3H、14C、35s及1251。 申請人保留權力以排除來自任何本發明具體實施例之任 何一或多種候選化合物。申請人亦保留權力以排除來自任 何本發明具體實施例之任何一或多種調節物。申請人進一 步保留權力以排除來自任何本發明具體實施例之任何多核 荅酸或多肽。申請人另外保留權力以排除任何代謝病症或 任何高血糖濃度併發症。亦明確地意欲涵蓋在内的是，本 101004 -111 - 200539867 發明之代謝病症可被包含在具體實施例中，無論是個別地 或以任何組合。亦明確地意欲涵蓋在内的是，本發明之高 血*糖、/農度併發症可被包含在具體實施例中，無論是個別地 或以任何組合。 在整個本申請案中，各種公報、專利及已公告之專利申 请案係被引用。在本申請案中論及之此等公報、專利及已 公告之專利申請案之揭示内容，係據此以其全文併於本發 • 明揭示内容中供參考。公報、專利或已公告之專利申請案 由申請人於此處之引用，並非申請人認可該公報、專利或 已公告之專利申請案作為先前技藝。 所揭示本發明在熟練技師範圍内之修正與延伸，係被涵 蓋在上述揭示内容與下文請求項内。 詳細說明 定義 已％繞文體所發展之科學文獻已採用多種術語以指稱對 於受體具有各種作用之配位體。為清楚且一致起見，下述 定義將使用於整個本專利文件中。達此等定義與此等術語 之其他疋義衝突之程度時，下述定義將加以控制： 催動劑係意謂當其結合至受體時會活化胞内回應之物質 (例如配位體、候選化合物）。在一些具體實施例中，催動 劑係為先前未知當其結合至受體時會活化胞内回應(例如 力強GTP 7S…a至細胞膜或提高胞内含量）之物質。在 一 〃體貝化例中，催動劑係為先前未知在得自哺乳動物 之脂肪細胞巾或在㈣肌細胞巾當其結合至受體時會刺激 101004 -112- 200539867 葡萄糖吸收之物質。 於本文中使用之胺基酸縮寫係列示於表A中：

表A

丙胺酸 ALA A 精胺酸 ARG R 天冬素 ASN N 天門冬胺酸 ASP D 半胱胺酸 CYS C 麩胺酸 GLU E 糙醯胺 GLN Q 甘胺酸 GLY G 組胺酸 HIS H 異白胺酸 ILE I 白胺酸 LEU L 離胺酸 LYS K 甲硫胺酸 MET M ***酸 PHE F 脯胺酸 PRO P 絲胺酸 SER S 蘇胺酸 THR T 色胺酸 TRP w 酪胺酸 TYR Y 纈胺酸 VAL V 拮抗劑係意謂在與催動劑相同位置處競爭性地結合至受 體，但其不會活化胞内回應，且可藉以抑制藉由催動劑所 誘出之胞内回應之物質（例如配位體、候選化合物）。拮抗 劑於催動劑不存在下並不會減少基線胞内回應。在一些具 101004 -113- 200539867 體實施例中，拮抗劑係為先前未知當其結合至受體時會與 催動劑競爭以抑制細胞回應之物質，例如其中細胞回應係“ 為GTP tS結合至細胞膜或升高胞内cAMP含量。 抗體於本文中係意欲涵蓋單株抗體與多株抗體。抗體係 進一步意欲涵蓋IgG，IgA，IgD，IgE及IgM。抗體包括整個抗體， 包括單鏈整個抗體，及其抗原結合片段，包括Fab，Fab，，F(ab)2 及F(ab’)2。抗體可來自任何動物來源。抗體較佳為人類、老 鲁鼠、兔子、山羊、天竺鼠、大頰鼠、駱駝、驢子、綿羊、 馬或雞。抗體較佳係具有結合親和力，具有解離常數或Kd 值低於 5x10 6m，10 6m，5xl〇-7M，1〇-7Μ，5χ1(Γ8Μ，1(Τ8Μ，5χ1(Τ9Μ， ΙΟ·9Μ，5χ1(ΤιgM，ητι〇Μ，5χ1〇·uΜ，1〇-丨〖Μ，5χ1〇.i2μ，1〇_丨2μ， 5\1〇-1%1〇-13竓5游14从1〇-14从5前15]^及1〇-15]^。本發 明之抗體可藉此項技藝中已知之任何適當方法製成。抗體 之衍生物係欲予涵蓋，但不限於抗原結合片段。 GPCR多肽或胺基酸順序之生物活性片段係意謂具有天 _ 然生成GPCR之結構與生物化學功能之多肽或胺基酸順序

之片段。在某些具體實施例中，生物活性片段係偶合至G 蛋白質。在某些具體實施例中，生物活性片段係結合至内 源配位體。 候選化合物係意謂易於接受筛檢技術之分子（例如而非 限制於化合物）。 化學基團、部份基困或基困： ΠΑ_6烷基”一詞表示直鏈或分枝狀碳基團，含有如所指示 之碳數目，關於實例，在一些具體實施例中，烷基為％ 101004 -114· 200539867 己基、異己基、第二·己基、新七基等。 炫基，，且基團含有！至4個碳，於再其他具體實施例中，院 基為” C2_6烷基”且基團含有_個碳。在一些具體實施例 中，烧基含有1至3個碳，一些具體實施例含有⑴個碳， 而-些具體實施例含有i個碳。烷基之實例包括但不限於甲 基、乙基、正-丙基、異丙基、正_丁基、異丁基、第三-丁 基、第二-丁基、正-戊基、異戊基、第二_戍基、新-戊基、

’’鹵素"或"鹵基"一詞表示說基、氯基、漠基或峨基。 密瑪子係意謂三個核芬酸（或核#酸之相當物）之基圏 群’其-錢包含-個核L雜）、鳥^核糖嘗⑼、 胞㈣核甞(C)、脲心核嘗⑼及胸帥]經偶合至碟酸根 基團，且其當被轉譯時，會使胺基酸編碼。 組合物係意謂包含至少一種成份之物質。"醫藥組合物" 係為組合物之實例。 化合物功效係意謂化合物抑制或刺激受體功能性能力之 :種度量；意、即活化/抑制訊息轉導途徑之能力，與受體結 合親和力對照。㈣化合物功效之舉例方式係揭示於本專 利文件之實例段落中。 包含基本上由…所組成及由…所組成係根據其標準意義 被^義於本文中。於M.RRR巾所提&之經 ^ 〇於此項技藝中經定義意義，而在控制聯邦電路案件法 律中所提出之經定義意義，係控制高於M.RE.P·中所提出之 意義。 構成上活性之受體係意謂受體藉由不為經過受體結合至 101004 -115- 200539867 其配位體或其化學相當物之方式，被安定化呈活性狀雜。 構成上活性之受體可為内源或非内源。 構成上活化之受體係意謂已被改質以致能夠成為構成上 活性之内源受體。 構成受體活化作用係意謂受體在結合至其配位體或其化 學相當物不存在下之活化作用。 接觸或接觸作用係意謂致使至少兩種部份物質在一起， _ 無論疋在活體外糸統或活體内系統中。 減少係用以指降低可度量之量，且係與術語"降低"、 ”減縮"、"下降"及"減輕"同義地使用。 高血糖濃度係意謂在哺乳動物中之斷食企糖濃度大於哺 乳動物之正常斷食血糖濃度。舉例言之，正常人類斷食血 糖濃度係低於1GG毫克/公合。於本文中使用之高人類血糖 濃度係為斷食血糖濃度1()〇毫克/公合或較大。藉由說明而 非限制，高血糖濃度係涵蓋高血糖。 • 内源係意謂哺乳動物自然產生之物質。内源關於例如而 非限制於"受體"一詞，係意謂其係藉由哺乳動物(例如而非 :制於人類）自然產生。應明瞭的是内源係涵蓋基因之對偶 質變種，以及經如此編碼之對偶質多肤變種。於本文中使 用之"内源GPCR，，與"原本GPCR"可交換使用。比較上而言， 非内源-詞’就此而論，係意謂其並非藉由哺乳動物（例如 而非限制於人類)自然地產生。例如而非限制於受體，在其 内源形式上’其並非構成上活性，但當***控變成構成上 活性時，最佳係於本文中被稱為"非内源構成上活化之受 101004 •116- 200539867 體丨丨。 表現載體在本文中係被定義為DNA順序，其係為在對該 表現載體之適當宿主細胞重組體中之無性繁殖DNA之轉錄 與經轉錄mRNA之轉譯所需要。經適當建構之表現載體應含 有複製來源’以供自律複製於宿主細胞、可選擇標記物、 有限數目之可使用限制酵素位置、供高複本數目之可能性 及活性啟動子中。該欲被轉錄之無性繁殖DNA係可操作地 連結至該表現載體内之構成上或條件上活性啟動子。藉由 說明方式而非限制，pCMV係為表現載體。 G蛋白偶合受體融合蛋白質與GpCR融合蛋白質就本文 中所揭示之本發明而論，各意謂非内源蛋白質，包含内源、 構成上活性GPCR或經融合到至少一個G蛋白質之非内源構 成上活化GPCR’最佳為此種G蛋白質〇亞單位（此係為結 合GTP之亞單位），其中G蛋白質較佳為與天然地和内源 GPCR偶合之G蛋白質相同之類型。例如而非限制，在内源 狀態中，若G蛋白質”Gsa”為與GPCR偶合之主要〇蛋白質， 則以專一 GPCR為基礎之GPCR融合蛋白質係為非内源蛋白 質，包含經融合至Gsa iGPCR;在一些情況中，如將於下 文所敘述者’非主要G蛋白質可經融合至GpCR。〇蛋白質 可經直接融合至構成上活性GPCRiC-末端，或可以有間隔 基介於兩者之間。 宿主細胞係意謂能夠具有載體被併入其中之細胞。在某 些具體實施例中，載體係為表現載體。舉例之宿主細胞包 括但不限於293、293T、CHO、MCB3901及COS-7細胞，以及 101004 -117- 200539867 黑色素細胞。 於本文中使用之需要預防或治療係指藉由看護者（例如.， 在人類之情況中為醫師、護士、護理執行者等；在動物之 情況中，包括非人類哺乳動物’為獸醫）所施行之判斷，個 體或動物需要或將得利於治療。此項判斷係以多種因素為 基礎施行1係在看護者專業知識之領域巾，但其包括個 體或動物係為生病或即將生病之瞭解，由於可藉由本發明 化合物治療之症狀之結果。 於本文中使用之個ϋ係指任何動物’包括哺乳動物，較 佳為老鼠、大白鼠、其他齧齒動物、兔子、狗、猶、豬、 牛、綿羊、馬或靈長類動物，而最佳為人類。 與”回應"一詞有關係之抑制或抑制作用係意謂於化合物 存在下，與化合物不存在之相反情況比較下，回應係被降 低或防止。 於本文中使用之減弱之葡萄糖容許度σ(;τ)係意欲表示 與胰島素抗藥性有關聯之症狀，其係介於顯著第2型糖尿病 與正常葡萄糖容許度（NGT)之中間。IGT係藉由一種程序診 斷，當藉由2-小時餐後血漿葡萄糖含量評估時，其中受感 染人員之餐後葡萄糖回應係被測定為異常。在此項試驗 係對病患給予經度量之葡萄糖量，且血糖含量係於規則間 隔下度量，通常為每半小時，歷經最初兩小時，而接著為 每小時。在”正常”或非IGT個體中，於最初兩小時期間，葡 萄糖含量係上升至低於14〇毫克/公合之程度，然後迅速地 下降。在IGT個體中，金糖含量係較高，且下降程度係在較 101004 118- 2Ό0539867 緩慢速率下。 之使用之胰島素抗藥性係意欲涵蓋藉多種方法中 種轭仃之胰島素抗藥性之一般玲 於：靜脈㈣萄糖料度試㈣斷錢島素含限 在:食：島素含量之高度與姨島素抗藥性 種優越關聯性。因此，吾人可利用提高之斷二 素含置作為胰島素抗藥性之替代標記， 島

::容:度_)個體中何者具有姨島素抗藥性:目::: 二素抗樂性之診斷亦可使用血糖正常之葡萄糖夹持試驗施 活ΓΓΐ劑係意謂結合至受體之無論是内源形式或構成上 …以降低催動劑不存在下所發現之受體基線胞内 應之物質（例如配位體、候選化合物）。 單離係意謂物質被移離其原先環境(例如，若其係為天然 成貝】為天然j哀境）。例如’存在於有生命動物中之天然 =多、核苷酸或多肽並未被單離，但分離自天然系統中二 P伤或王部共存物質之相同多核嘗酸或ο·或多肽，係 5離。此種多核嘗酸可為載體之一部份，及/或此種多核 甘酉夂或多肽可為組合物之一部份，而仍然被單離，因該载 體或組合物並非其天然環境之一部份。 配位艘係意謂專一性地結合至GPCR之分子。配位體可為 例如夕肽、脂質、小分子、抗體。内源配位體為一種配位 體，其係為對原本GPCR之内源天然配位體。配位體可為 GPCR拮抗劑”、”催動劑”、，，部份催動劑，，或，，逆催動劑,， 101004 -119- 200539867 或其類似物。 於本文中使用之調節或改質術語，係意欲指稱增加或減< 少特定活性、功能或分子之量、品質或作用。藉由說明方 式’而非限制，G蛋白偶合受體之催動劑、部份催動劑、 逆催動劑及拮抗劑係為該受體之調節物。 部份催動劑係意謂當其結合至受體時會活化胞内回應之 物質（例如配位體、候選化合物），相較於完全催動劑係達 較小程度/範圍。 醫藥組合物係意謂包含至少一種活性成份之組合物，而 其中組合物係易於接受研究，以在哺乳動物（例如而非限制 於人類）中獲得所指定之有效結果。一般熟諳此藝者將瞭解 且明瞭適於測定活性成份是否具有所要有效結果之技術， 以技師之需求為基礎。 多核#酸係意謂超過一種核苷酸之RNA、DNA或 RNA/DNA雜種順序，呈無論是單鏈或雙螺旋形式。本發明 之多核苷酸可藉任何已知方法製備，包括合成、重組、來 自活體世代或其組合，以及利用任何此項技藝中已知之純 化方法。 多肽係指胺基酸之聚合體，無關於聚合體之長度。因此， 肽、募肽及蛋白質係被包含在多肽之定義内。此術語亦未 指定或排除多肽之表現後改質。例如，包含糖基、乙醯基、 填酸根基團、脂質基團等之共價連接之多1，係明確地被 多肽一詞所涵蓋。 引物係被用於本文中，以表示特定募核甞酸順序，其係 101004 -120- 200539867 對標的核菩酸順序互補，且用以雜化至標的核芬酸順序。 引物係充作藉由DNA聚合酶、rna聚合酶或反轉錄酶催化-之核嘗酸聚合反應之引發點。 純化係被用於本文中，以描述本發明之多核苷酸或多核 芬酸載體，其已自其他化合物分離，包括但不限於其他核 酸、碳水化合物、脂質及蛋白質（譬如用於合成多核荅酸之 酵素）。在某些具體實施例中，當至少約5〇%，至少約6〇%， • 至少約75%，至少約85%，至少約9〇%，至少約_，至少 約96%，至少約97%，至少約98%，至少約99%或至少約99 5% 忒樣含有單一多核甞酸順序時，多核甞酸係實質上純。在 一些具體實施例中，實質上純多核苷酸典型上係包含約 50%，約 60%，約 70%，約 80%，約 90%，約 95%，約 96%， 約97%，約98%，約99%或約99.5%重量/重量多核甞酸試樣。 同樣地，純化一詞係被使用於本文中，以描述本發明之 多肽，其已被分離自其他化合物，包括但不限於核酸、脂 φ 質、碳水化合物及其他蛋白質。在某些具體實施例中，當 至少約50%，至少約60%，至少約75%，至少約85%，至少 約90%，至少約95%，至少約96%，至少約97%，至少約98%， 至少約99%或至少約99.5%多肽分子試樣具有單一胺基酸順 序時，多肽係實質上純。在一些具體實施例中，實質上純 多肽典型上係包含約50%，約60%，約70%，約80%，約90%， 約95%，約96%，約97%，約98°/。，約99%或約99.5❽/〇重量/重 量之蛋白質試樣。 同樣地，純化一詞係被使用於本文中，以描述本發明之 101004 -121 - 200539867 調節物。在某些具體實施 所 ^ J Ύ Μ貝上純之調節物典型上 係包含至少約70%，至少的^ , 主少、，勺80/〇，至少約9〇%，至少約95%， 至少約96%，至少約97%， 王ν98/〇，至少約99%或至少 約99.5%重量/重量之該調節物製劑。在某些具體實施例中， 調節物具有'，至少，'純度範圍從任何數目至千分之一位置， 在90%與1〇〇%之間（例如至少99 995%純）。 再者，當於本文中使用時，純化術語並不需要絕對純度；

而是’其係意欲作為相對定義。 受體功能性係指受體在細胞中接受刺激並緩和作用之正 常操作，包括但不限於調節基因轉錄、調節離子之流入或 ml出里、達成催化反應及/或調節經過蛋白質之活性。 第二信使係意謂由於受體活化作用之結果所產生之胞内 回應。第二信使可包括例如肌醇三磷酸鹽、二醯基甘 油（DAG)、環 AMP (cAMP)、環 GMP (cGMP)、MAP 激酶活性及

Ca2+。第二信使回應可被度量，以測定受體活化作用。此 外’弟一使回應可被度f ’以碟認候選化合物，作為例 如逆催動劑、部份催動劑、催動劑及拮抗劑。 信嚷比係意謂回應活化、放大或刺激所產生之信號，其 中信號係高於回應非活化、非放大或非刺激之本噪聲或基 底含量。 間隔基係意謂胺基酸之經轉譯數目，其係定位於基因（例 如吾人感興趣之GPCR)之最後密碼子或最後胺基酸之後，但 在吾人感興趣G蛋白質之起始密碼子或開始區域之前，其 中經轉譯數目之胺基酸係放置在具有吾人感興趣G蛋白質 101004 -122- 200539867 之開始區域之架構中。經轉譯胺基酸之數目可為一、二、 三、四等，且'高達十二。 與回應"一詞有關係之刺激或刺激作用係意謂與化合物 不存在之相反情況比較下，於化合物存在下，回應係被增 加0 病患係意謂靈長類動物，包括但不限於人類與狒狒，以

及寵物動物，譬如狗與貓，實驗室動物，譬如大白鼠與老 鼠，及農場動物，譬如馬、綿羊及母牛。 於本文中使用之治療上有效量係指活性化合物或藥劑在 組織、系、统、動物、個體或人類中誘出生物或醫藥回應之 量，其係為研究人員、獸醫、醫生或其他臨床家所正在尋 找的，其包括下列之一或多個： ⑴預防疾病；例如在可能易罹患疾病、症狀或病症，但 尚未歷經或顯示該疾病之病理學或徵狀學之個體中預 防疾病、症狀或病症， 卩制疾病；例如在正歷經或顯示疾病、症狀或病症之 病理學或徵狀學之個體中抑制該疾病、症狀或病症（意 即遏制病理學及/或徵狀學之進一步發展），及 ⑺改善疾病；例如在正歷經或顯示疾病、症狀或病症之 病理學或徵狀學之個體中改善疾病、症狀或病症(意即 使病理學及/或徵狀學逆轉）。 變種，當此術語於本文中使用時’係為多核苷酸或多肽， 八係個別與參考多核誓酸或多肽不同，但保留基本性質。 多核菩酸之典型變種係在料_序上與另一種參考多核 101004 -123- 200539867 荅酸不同。於變種之枋4 核甘酸順序上之改變，可以或可以不 i：更已被4考夕核甘酸編碼之多肽之胺基酸順序。多肤之 典型交種係在月女基酸順序上與另一種參考多肽不同。變種 與參考多肽可在胺基酸順序上藉由任何組合之—或多個取 代添加缺失而有所不同。多核芬酸或多肤之變種可為 天然生成者如對偶質變種，或其可為未知會天然地存 在之變種。多核甘酸與多肽之非天然生成變種可藉由致突 變技術或藉由直接合成製成。 A.序文 提出下述段落之順序係為呈現效率，而非意欲亦不應被 解釋為限制下文揭示内容或請求項。 受體表現 1·吾人感興趣之GPCR多肽 本發明之RUP43GPCR係包含GPR131胺基酸順序。於本文 中使用之nGPR131胺基酸順序，’係意欲涵蓋順序識別碼：2 之内源人類GPR131胺基酸順序，以及變種胺基酸順序，至 少約75%，至少約80%，至少約85¾，至少約90%，至少約 91% ’至少約92%，至少約93%，至少約94%，至少約95%， 至少約96%，至少約97%，至少約98%或至少約99%相同於 順序識別碼：2之胺基酸順序。換言之，包含順序識別碼： 2胺基酸順序之變種之GPCR亦可使用於主題方法中。在某 些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含順序 識別碼：2胺基酸順序之對偶質變種。在某些具體實施例 中，順序識別碼：2胺基酸順序之對偶質變種係被内源 101004 -124- 200539867 GPR131核:¾:酸順序編碼，後者可藉由在人類DNA試樣上， 使用專一引物順序識別碼：3與順序識別碼：4，進行聚合& 酶連鎖反應（PCR)而獲得。在一些具體實施例中，順序識別 碼：2胺基酸順序之對偶質變種係被内源GPR131核苷酸順序 編碼，後者可藉由在人類DNA試樣上，使用包含順序識別 碼：3之專一引物與包含順序識別碼·· 4之專一引物，進行 聚合酶連鎖反應（PCR)而獲得。在某些具體實施例中，人類 DN A試樣為人類基因組DN A。在某些具體實施例中，此方 法為RT-PCR(反轉錄-聚合酶連鎖反應）。RT-PCR技術係為熟 練技師所習知。在某些具體實施例中，人類cDNA試樣為人 類單細胞或巨噬細胞cDNA。在某些具體實施例中，人類 cDNA試樣為人類脂肪細胞cDNA。在某些具體實施例中，人 類cDNA試樣為人類骨骼肌細胞cDNA。在某些具體實施例 中，係提供人類DNA試樣。在某些具體實施例中，人類DNA 試樣係得自商業來源。在某些具體實施例中，可使用於主 題方法中之變種胺基酸順序係為順序識別碼：2胺基酸順 序之哺乳動物正交類似物。藉由說明方式而非限制，兔子 (例如GenBank®收受號碼BAC55237)、母牛（例如GenBank®收受 號碼NP_778219)、老鼠（例如GenBank®收受號碼NP_778150)及 大白鼠（例如GenBank®收受號碼NP_808797)之GPR131胺基酸 順序，係被設想為在”GPR131胺基酸順序π之範圍内。應明 瞭的是，於本文中使用之’’GPR131 GPCR”係為内源RUP43 GPCR ;藉由說明方式而非限制，内源人類RUP43 GPCR係為 GenBank®收受號碼ΝΜ—170699 (具有相同於順序識別碼：2之 101004 -125- 200539867 胺基酸順序）之人類GPR131及其對偶基因，内源兔子 RUP43 GPCR 係為 GenBank® 收受號碼 BAC55237 之兔子 GPR131 及其對偶基因，内源母牛RUP43GPCR係為GenBank®收受號碼 NP_778219之母牛GPR131及其對偶基因，内源老鼠RUP43 GPCR係為GenBank®收受號碼NP_778150之老鼠GPR131及其對 偶基因，及内源大白鼠RUP43 GPCR係為GenBank®收受號碼 NP_808797之大白鼠GPR131及其對偶基因。 在某些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包 含順序識別碼：2之胺基酸順序、順序識別碼：2之對偶基 因或順序識別碼：2之哺乳動物正交類似物之非内源構成 上活化突變種。正如此項技藝中所已知，構成上活化之 GPCR可使用多種方法製成（參閱，例如PCT申請案號 PCT/US98/07496，於 1998 年 10 月 22 日以 WO 98/46995 公告；與美 國專利6,555,339 ;其中每一案之揭示内容係據此以其全文併 於本文供參考）。順序識別碼：2之胺基酸順序，順序識別 碼：2之對偶基因，順序識別碼：2之哺乳動物正交類似物， 内源GPR131之非内源構成上活化突變種或至少約75%，至 少約80%，至少約85%，至少約90%，至少約91%，至少約 92%，至少約93%，至少約94%，至少約95%，至少約96%， 至少約97%，至少約98%或至少約99%相同於順序識別碼： 2之胺基酸順序之胺基酸順序之生物活性片段，均可使用於 本發明。藉由說明方式而非限制，N-末端曱硫胺酸或N-末 端訊息肽之缺失係為所設想，以提供可使用於主題方法中 之生物活性片段。藉由進一步說明而非限制，可使用於主 101004 -126- 200539867 題方法中之RUP43 GPCR可包含順序識別碼：2之胺基酸 2-330 ’其附帶條件是Rup43 g蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸 殘基在順序識別碼：2之胺基酸位置1上； 在某些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包 含胺基酸順序，至少約75%，至少約80%，至少約85%，至 少約90°/。，至少約91%，至少約92%，至少約93%，至少約 94% ’至少約95%，至少約96%，至少約97%，至少約98%或 至少約99%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。在某些具 體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含胺基酸順 序’至少約95%，至少約96%，至少約97%，至少約98%或 至少約99%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。在某些具 體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含胺基酸順 序’至少約75%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。在某 些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含胺基 酸順序，至少約80%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。 在某些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含 胺基酸順序，至少約85%相同於順序識別碼：2之胺基酸順 序。在某些具體實施例中，可使用於主題方法中之gpcr可 包含胺基酸順序，至少約9〇%相同於順序識別碼：2之胺基 酸順序。在某些具體實施例中，可使用於主題方法中之 GPCR可包含胺基酸順序，至少約91%相同於順序識別碼：2 之胺基酸順序。在某些具體實施例中，可使用於主題方法 中之GPCR可包含胺基酸順序，至少約92%相同於順序識別 碼：2之胺基酸順序。在某些具體實施例中，可使用於主題 101004 -127- 200539867 方法中之GPCR可包含胺基酸順序，至少約93%相同於順序 識別碼：2之胺基酸順序。在某些具體實施例中，可使用 於主題方法中之GPCR可包含胺基酸順序，至少約94%相同 於順序識別碼：2之胺基酸順序。在某些具體實施例中， 可使用於主題方法中之GPCR可包含胺基酸順序，至少約 95%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。在某些具體實施 例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含胺基酸順序，至 少約96%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。在某些具體 實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含胺基酸順 序’至少約97%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。在某 些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含胺基 酸順序，至少約98%相同於順序識別碼：2之胺基酸順序。 在某些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPCR可包含 胺基酸順序，至少約99%相同於順序識別碼：2之胺基酸順 序。所謂對順序識別碼·· 2之胺基酸順序具有至少例如95%，， 同一性”之胺基酸順序，係指該胺基酸順序係相同於順序識 別碼：2之胺基酸順序，惟順序識別碼：2之胺基酸順序中 每1〇〇個胺基酸可包含至高五個胺基酸改變。因此，為獲得 對順序識別碼：2具有至少95%同一性之胺基酸順序，可將 該順序中之至高5% (1〇〇中之5)胺基酸殘基被另一個胺基酸 ***、取代，或删除，與順序識別碼：2之胺基酸順序比 較。此等改變可發生在胺基或羧基末端或介於此等末端位 置間之任何位置，個別地散置在無論是該順序之殘基中， 或在該順序内之一或多個鄰接基團中。 101004 -128- 200539867 在一些具體實施例中，可使用於主題方法中之GPR131胺 基酸順序’係為被對於多核苷酸順序互補之順序所編碼之 G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係在嚴厲條件下雜化至 渡1§結合之DNA，其具有順序識別碼：1中提出之順序。藉 由祝明方式而非限制，可使用於主題方法中之GpR13]L胺基 酸順序係為被多核甞酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順 序’其係在嚴厲條件雜化至順序識別碼：1之補體。雜化技 • ㈣系為熟練技師所習知。較佳嚴厲雜化條件包括於包含以 下物質之溶液：50%甲醯胺，5xSSC (150mM NaCl，15mM檸檬酸 一鈉），50mM磷酸鈉（ρΗ 7·6)，5χ Denhardt氏溶液，1〇%葡聚醣硫 酸鹽及20微克/毫升變性、經剪切之鮭魚精蟲DNA，在42°C 下過夜培養；接著在O.lxSSC中，於約65°C下洗滌濾器。 順序同一性 種測定質問順序（例如順序識別碼：2之胺基酸順序） 與欲被質問順序間之最良好整體匹配（亦被稱為總體順序 對準）之較佳方法，可使用FASTDB電腦程式測定，以Β加 哲 # 之演算法為基礎[Comp App Biosci (1990) 6 : 237-245 ;其揭 不内容係據此以其全文併於本文供參考]。在順序對準中， 質問與被質問順序均為胺基酸順序。該總體順序對準之結 果係以同一性百分比表示。被使用於fastdb胺基酸對準中 之車乂佳參數為：基質=PAM 〇，K-tuple = 2，失配補償=i，接 合補償=20，隨機群=25，長度=〇，截止評分=1，限幅大 小==順序長度，間隙補償=5，間隙大小補償=〇 〇5，限幅大 小=247或被質問胺基酸順序之長度，看那一個比較短。 101004 -129- 200539867

若被質問順序比質問順序短，此係由於N”tc末端缺失， 而非由於内部缺失所致，則其結果，以同一性百分比表示―， 必須以手動方式校正’因為當計算總體同一性百分比時， FASTDB程式不會考慮被質問順序之N^c·末端截頭。相對 於質問順序’對於在端截頭之被㈣順序，同_ 性百分比㈣校正’其方式是計算質問順序中為被質問順 序之N-與C-末端，不與相應被質問順序殘基匹配/對準之殘 基數目，作為質問順序總驗基之百分I殘基是否匹配/ 對準，係藉由_B順序對準之結果測得。然後，將此百 分比自藉由上述FASTDB㈣，使用所指定參數計算而得之 同一性百分比減去，以達成最後同—性百分比評分。此最 後同-性百分比評分即為用於本發明之目的者。只有對被 貝問順序之N-與C-末端，未與質問順序匹配/對準之殘基被 考慮，以達成手動調整同一性百分比評分之目的。意即， 只質問該被質問順序之最遠N-與c_末端殘基外側之胺基酸 殘基。 例如，將90胺基酸殘基被質問順序與1〇〇-殘基質問順序對 準以測疋同一性百分比。缺失係發生在被質問順序之N- 末端，因此，FASTDB對準並未與队末端之第一個殘基匹配 /對準。10個未成對殘基係表示此順序之1〇% (於N_與c_末端 未匹配之殘基數目/於質問順序中之殘基總數），因此，將 10%自藉由FASTDB程式所計算之同一性百分比評分中減 去。若其餘90個殘基係完全地匹配，則最後同一性百分比 為 90%。 101004 -130- 200539867 在另一項實例中，係將9〇-殘基被質問順序與100-殘基質問 順序比較。此次，缺失係為内部，@此沒有殘基在被質問 、 或c末4，其未與該質問順序匹配/對準。於此情 況中’藉由FASTDB計算之同一性百分比並未以手動方式校 、,再人”有主題順序之N-與c-末端外側之殘基位置， :在FASTDB ff準中顯示時，其未與質問順序匹配/對準， 係以手動方式校正。對本發明之目的而言，未施行其他校 正。 b·融合蛋白質 在某些具體實施例中，吾人感興趣之多肽為融合蛋白質， 並可3有例如親和標記功能部位或報告子功能部位。適當 親和標記包括任何胺基酸順序，其可專一性地結合至另一 種α卩伤物質，通常為另一種多肽，最通常為抗體。適當親 和標記包括抗原決定部位標記，例如V5標記、FLAG標記、 HA心z (仔自紅血球凝集素流感病毒）、標記及其類似 物，正如此項技藝中所已知者。適當親和標記亦包括其結 合受質為已知之功能部位，例如HIS、GST及MBP標記，正 如此項技藝中所已知者，及得自其他蛋白質之功能部位， 專一性結合配對物例如抗體，特別是單株抗體，係可供其 採用。適當親和標記亦包括任何蛋白質-蛋白質交互作用功 能部位，譬如IgG Fc區域，其可專一性地結合，並使用適當 結合配對物例如IgG Fc受體檢出。明確地意欲涵蓋的是，此 種融合蛋白質可含有異種N-末端功能部位（例如抗原決定 部位標記），於架構内與GPCR融合，該GPCR已具有其N-末 101004 • 131 - 200539867 端甲硫胺酸殘基無論是被刪除或被替代胺基酸取代。 適當報告子功能部位包括可報告多肽存在之任何功能部 位。雖，然已明瞭親和標記可用以報告多肽之存在，使用例 如經標識之抗體，其係專一性地結合至該標記，但發光報 告子功能部位係更經常制。適當發光報告子功能部位包 括蟲螢光素酶(得自例如螢火蟲，._、細·"㈣•励戒

或其發光變種。其他適當報告子功能部位包 括螢光蛋白質（得自例如水母、珊鼓其他腔腸動物，其本 多管水母屬、海紫羅蘭屬、海烏屬、細長海筆屬 物種）或其發光變種。此等報告子蛋白f之發光變種係為此 項技藝中所極為習# ’且當與原本報告子蛋自質比較時， 可為較明亮、較微暗或具有不同激發及/或發射光譜。例 仏有些變種係經改變，以致其已不再顯現綠色，而可呈 見藍色3色、汽色、增強之黃紅色（個別稱為BFp、cFp、 卿、撕及_或具有其他發射光譜，正如此項技藝中所 已知者。其他適當報告子功能部位包括可經過生物化學或 顏色改變而報告多肽存在之功能部位，譬如分半乳糖芬 酶、尽尿甘酸酶、氯霉素乙醯轉移酶及分泌之胚胎鹼性磷 酸酶。 亦如此項技藝中所已知者，親和標記或報告子功能部位 可存在於吾人感興趣多肽之任何位置上。但是，在大部份 具體實施财，其係存在於吾人感興趣多肽之&餅末端。 2·使吾人感興趣GPCR多肽編碼之核酸 由於操控核酸之遺傳密碼與重Μ技術係為已知，且吾人 101004 •132· 200539867 感興趣GPCR多肽之胺基酸順序係如上文所述，故使吾人感 興趣GPCR多肽編碼之核酸之設計與製造，係良好地在技師 之技術内。在某些具體實施例中，係使用標準重組DNA技 術（Ausubel等人，分子义勒學之餘葱凝案，第3版，Wiley & Sons， 1995 ; Sambrook等人，分子扃從犛產·· f驗室f #，第二版 (1989) Cold Spring Harbor，Ν·Υ·)方法。例如，GPCR 編碼順序可單 離自GPCR編碼順序庫，使用多種重組方法之任一種或其組 0 合，其不必在本文中描述。核甞酸在使蛋白質編碼之核酸 順序中之後續取代、缺失及/或添加，亦可使用標準重組 DNA技術進行。 例如，位置引導致突變與次代無性繁殖可用以在使吾人 感興趣多肽編碼之多核:y：酸中引進/刪除/替代核酸殘基。 在其他具體實施例中，可使用pcr。使吾人感興趣多肽編 碼之核酸亦可藉由化學合成完全製自寡核甞酸（例如Cell〇 等人，Science (2002) 297 : 1016-8)。 # 在一些具體實施例中，使吾人感興趣多肽編碼之核酸之 密碼子係達最佳化，以供表現於特定物種之細胞中，該物 種特別是哺乳動物，例如老鼠、大白鼠、大頻鼠、非人類 靈長動物或人類物種。在一些具體實施例中，使吾人感興 趣多肽編碼之核酸之密碼子係達最佳化，以供表現於特定 物種之細胞中，該物種特別是兩棲物種。 a·載艘 本發明進一步提供載體（亦被稱為"構造物”），其包含主 題核酸。在本發明之許多具體實施例中，主題核酸順序係 101004 -133- 200539867 在該順序已被可操作地連結至表現控制順序（包括例如啟 動子）後，被表現於宿主中。主題核酸典型上亦被置於表現 載體中，該載體可在宿主細胞中複製，無論是作為附加體 或作為宿主染色體DNA之一個完整部份。通常，表現載體 將含有選擇標記物，例如四環素或新霉素，以允許偵測以 所要DNA順序轉變之細胞（參閱，例如美國專利4,704,362， 其係併於本文供參考）。載體，包括單一與雙重表現卡匣載 體，係為此項技藝中所習知（Ausubel等人，分子兰#學之#迤 凝#，第3版，Wiley & Sons，1995 ; Sambrook等人，分子無從縈 瘦·· f 驗室 f 册，第二版（1989) Cold Spring Harbor，N.Y.)。適當載 體包括病毒載體、質粒、黏接質體、人造染色體（人類人造 染色體、細菌人造染色體、酵母人造染色體等）、微染色體 等。反轉錄酶病毒、腺病毒及與腺有關聯之病毒載體均可 使用。 對於在細胞中產生吾人感興趣多肽之目的而言，多種表 現載體可採用於此項技藝中。一種適當載體為pCMV，其係 使用於某些具體實施例中。此載體係在布達佩斯（Budapest) 條約之條款下，關於微生物寄存物之國際認知，於1998年 10月13日（10801 61¥(1.大學，]^〇1^835，¥八20110-2209113入），寄存 於美國培養物類型收集處（ATCC)，以達成專利程序之目的。 此DNA係由ATCC測試，並測定為可用。ATCC已對pCMV指 定下列寄存物編號：ATCC # 203351。 主題核酸通常包含使吾人感興趣之主題多肽編碼之單一 開放譯讀骨架，但是，在某些具體實施例中，由於供吾人 101004 -134- 200539867 感興趣多肽表現之宿主細胞可為真核細胞，例如哺乳動物 細胞，譬如人類細胞，故開放譯讀骨架可被***序列***。 主題核酸典型上為轉錄單位之一部份，該單位除了主題核 酸以外，可含有3’與5’未轉譯區域(UTR)，其可導引RNA安 定性、轉譯效率等。主題核酸亦可為表現卡匣之一部份， 該卡匣除了主題核酸以外，含有啟動子，其係導引吾人感 興趣多肽之轉錄與表現，及轉錄終止子。 真核生物啟動子可為在真核生物宿主細胞中具功能性之 任何啟動子，包括病毒啟動子與衍生自真核生物基因之啟 動子。舉例之真核生物啟動子包括但不限於下列：老鼠金 屬硫酮素I基因順序之啟動子（Hamer等人，J. Mol. Appl. Gen. 1 ·· 273-288, 1982);疱疹病毒之 TK 啟動子（McKnight，Cell 31 : 355-365, 1982); SV40 早期啟動子（Benoist 等人，Nature (London) 290: 304-310, 1981);酵母膽汁基因順序啟動子（Johnston等人，Proc. Natl. Acad. Sci· (USA) 79 : 6971-6975, 1982) ; Silver 等人，Proc.Natl. Acad· Sci. (USA) 81 : 5951-59SS，1984)，CMV啟動子、EF-1 啟動子、蛻化 素-回應啟動子、四環素-回應啟動子等。病毒啟動子可為特 別令人感興趣的，因其一般而言係為特別強之啟動子。在 某些具體實施例中，係使用一種啟動子，其係為標的病原 之啟動子。供使用於本發明中之啟動子係經選擇，以致其 在其正被引進其中之細胞類型（及/或動物）中具功能性。在 某些具體實施例中，啟動子係為CMV啟動子。 在某些具體實施例中，主題載體亦可提供可選擇標記物 之表現。適當載體與可選擇標記物係為此項技藝中所習 101004 -135- 200539867 知，並討論於Ausubel等人，（分子生物學之簡短擬案，第3版， Wiley & Sons，1995)與Sambrook等人，（分子無性繁殖：實驗室手 冊，第三版（2001) Cold Spring Harbor，N.Y·)。多種不同基因已被採 用作為可選擇標記物，而被採用於主題載體中作為可選擇 標記物之特定基因，主要是為方便而經選擇。已知之可選 擇標記物基因包括：胸腺核甞激酶基因、二氫葉酸鹽還原 酶基因、黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶基因、CAD、腺 苷脫胺酶基因、天冬素合成酶基因、抗生素抗藥性基因， 例如tetr、ampr、Cmr或cat、kanr或neor (胺基糖芬鱗酸轉移酶 基因）、潮霉素B磷酸轉移酶基因等。 如上述，吾人感興趣之多肽可為含有親和力功能部位及/ 或報告子功能部位之融合蛋白質。在報告子或標記與 GPCR(例如在GPCR之C-或N-末端）之間製造融合之方法，係 良好地在熟諳此藝者之技術内（例如McLean等人， Mol. Pharma. Mol. Pharmacol. 1999 56 * 1182-91 ; Ramsay 等人，Br· J. Pharmacology，2001，315-323)，故將不作任何進一步描述。明確 地意欲涵蓋在内的是，此種融合蛋白質可含有異種N-末端 功能部位（例如抗原決定部位標記），於架構内與GPCR融 合，該GPCR已具有其N-末端甲硫胺酸殘基，無論是被刪除 或被替代胺基酸取代。應明瞭的是，吾人感興趣之多肽可 首先製自原本多肽，然後可操作地連結至適當報告子/標 記，如上述。 主題核酸亦可含有限制位置、多重無性繁殖位置、引物 結合位置、可連接末端、重組位置等，通常是為幫助建構 101004 -136- 200539867 使吾人感興趣多肽編碼之核酸。 b·宿主細胞 本發明進一步提供包含載體之宿主細胞，該載體包含主 題核酸。適當宿主細胞包括原核細胞，例如細菌細胞（例如 大腸桿菌），以及真核細胞，例如動物細胞（例如昆蟲、哺 乳動物、魚、兩棲動物、鳥或爬蟲類細胞），植物細胞（例 如玉米或Arabidopsis細胞）或真菌細胞（例如釀酒酵母細 胞）。在某些具體實施例中，適用於表現使核酸編碼之吾人 感興趣多肽之任何細胞，均可作為宿主細胞使用。通常， 係使用動物宿主細胞系，其實例如下··猴子腎臟細胞（COS 細胞）、藉由SV40轉變之猴子腎臟CVI細胞（C0S-7, ATCC CRL 165 1);人類胚胎腎臟細胞（HEK-293「293"]，Graham 等 人，J. Gen Virol. 36 : 59 (1977)) ; HEK-293T [”293ΤΠ]細胞；大頰鼠 嬰兒之腎臟細胞（BHK，ATCC CCL10);中國大頰鼠卵巢細胞 (CHO, Urlaub 與 Chasin，Proc. Natl. Acad. Sci· (USA) 77 : 4216,（1980); 敘利亞金色大頰鼠細胞MCB3901 (ATCC CRL-9595);老鼠賽托 利氏細胞（TM4, Mather，Biol. Reprod· 23 : 243-251 (1980));猴子腎臟 細胞（CVI ATCC CCL 70);非洲綠猴腎細胞（VERO-76, ATCC CRL-1587);人類子宮頸癌細胞（HELA，ATCC CCL2);犬科動物 腎臟細胞（MDCK，ATCC CCL 34);水牛鼠肝細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442);人類肺細胞（W138, ATCC CCL 75);人類肝臟細胞 (hep G2, HB 8065);老鼠***腫瘤（MMT 060562, ATCC CCL 51); TRI 細胞（Mather 等人，Annals Ν. Υ· Acad. Sci 383 : 44-68 (1982)); NIH/3T3 細胞（ATCC CRL-1658);及老鼠L細胞（ATCC CCL-1)。在某些具 101004 -137- 200539867 體實施例中，係使用黑色素細胞。黑色素細胞為已在低等 脊椎動物中發現之皮膚細胞。有關聯之物質與方法將按照' 根據美國專利第5,462,856號與美國專利第6,051，386號之揭示 内容。此等專利揭示内容係據此以其全文併於本文供參 考。其他細胞系將為一般熟諳此項技藝者所明瞭，且極多 種細胞系可得自美國培養物類型收集處，1〇8〇1 B〇ulevard大 學，Manassas，V· 20110-2209。 C·候選化合物之篩檢 1· 一般性GPCR篩選檢測技術 當G蛋白質受體變得活性時，其係結合至〇蛋白質（例如 Gq、Gs、Gi、Gz、Go)且刺激GTP之結合至G蛋白質。然後， G蛋白質係充作GTPase，且慢慢地使GTP水解成GDP，而其 t X體係在正常條件下變成去活化。但是，經活化之受體 係持續使GDP交換成GTP。GTP之不可水解類似物 可用以監測經加強之結合至表現經活化受體之細胞膜。 據報告p5S]GTP7S可於配位體不存在與存在下用以監測G 蛋白偶合至細胞膜。此監測作用之實例，在此項技藝中所 I知且可採用之其他實例中，特別是由Trayn〇r與伽也在 1995所報告。此項檢測系統之一種較佳用途，係為候選化 合物之最初筛檢，因為此系統係一般性地可應用於所有G 蛋白偶合受體’而不管會與受體之胞内功能部位交互作用 之特定G蛋白質為何。 2·專一 GPCR篩選檢測技術 一旦候選化合物係使用” 一般性” G蛋白偶合受體檢測 101004 -138- 200539867 (意即選擇化合物係為催 •X刃 目I / 必曰 Θ或逆催動劑之檢測）而被確 涊，則在一些具體實 峰 W a ^ 〒進一步師檢以確認化合物已在 叉體位置父互作用，係為 所& HU 佳例如，藉由，，一般性，，檢測 所確W之化5物可不結

^ ^ ^ 體，但可替代地僅只是使G 蛋白貝自胞内功能部位”解開，，。

a. Gs、Gz 及 GL

Gs會刺激酵素腺苷基 衣化自母另一方面，Gi (及Gz與Go)， 會抑制腺苷基環化酶。腺詁 脲甘基裱化酶會催化ATP轉化成 cAMP ;因此，會偶合Gs蛋 貝之！活化GPCR係與增加細胞 含量之猶有關聯。另一方面，會偶合Gi(或Gz、Go)蛋白 質之經活化GPCR係與降低細胞含量之讀有關聯。, 避绍"胞突接合傳遞之間接機制”，第8章，從神經元2 i(第3版）Nichols，j. G等人編著，细聯合公司（1992)。因 此，可利用债測CAMP之檢測以測定候選化合物是否為例如 文體之逆催動劑（意即此種化合物將降低cAMp之含量）。此 項技藝中已知用於度量cAMP之多種途徑均可利用；在一些 具體實施例中，一種較佳途徑係在EUSA為基礎之格式中倚 賴利用抗-cAMP抗體。可利用之另一種檢測類型係為全細胞 第二信使報告子系統檢測。對於基因之啟動子係驅動特定 基因所編碼之蛋白質之表現。環AMP係驅動基因表現，其 方式是促進cAMP-回應性DNA結合蛋白質或轉錄因子 (CREB)之結合，其係接著結合至啟動子，在稱為^^回應 構件之專一位置’並驅動該基因之表現。於報告子基因例 如尽半乳糖菩酶或蟲螢光素酶之前，可建構報告子系統， 101004 -139- 200539867 其具有含有多重cAMP回應構件之啟動子。因此，經活化Gs-連結之受體會造成cAMP之蓄積，然後其會活化基因與報告。 子蛋白質之表現。報告子蛋白質，譬如分半乳糖甞酶或蟲 螢光素酶，可接著使用標準生物化學檢測（chen等人1995)偵 測。 b. Go 舆 Gq·

Gq與Go係與酵素磷脂酶c之活化作用有關聯，其係依次 • 使磷脂ΡΠ>2水解，釋出兩種胞内信使··二醯基甘油（DAG)與 肌醇1，4,5-三磷酸鹽（正3)。增加之％蓄積係與Gq_及G〇_結合 文體之活化作用有關聯。一瘦沒施參激"胞突接合傳遞之間 接機制’’，第8章，經元至腦部（第3版）Nichols，J.G.等人編 著，Sinauer聯合公司（1992)。可利用偵測％蓄積之檢測，以測 定候選化合物是否為例如Gq_或G〇_結合受體之逆催動劑 (意即此種化合物會降低％之含量）。Gq_結合受體亦可使用 API報告子檢測進行檢驗，此係由於Gq依賴性磷脂酶c會造 鲁 成含有AP1構件基因之活化作用；因此，經活化Gq-結合受 體將w正實增加此種基因之表現，而其中對其之逆催動劑將 証實降低此種表現，而催動劑將証實增加此種表現。供此 種偵測用之市購可得檢測物係可取用。 3. GPCR融合蛋白質 利用内源構成上活性之GpCR或非内源構成上活化之 GPCR，以用於_檢候選化合物，以直接確認逆催動劑或催 動背]係知1仏々人感興趣之篩檢挑戰，其原因在於藉由定 義，受體係為活性的，即使在結合於其上之内源配位體不 101004 •140- 200539867 存在下亦然。因此，為區別例如候選化合物存在下之非内 源受體與該化合物不存在下之非内源受體間之情況，其目 的是此種區別允許瞭解關於此種化合物是否可為逆催動劑 或催動劑或對於此種受體未具有影響，故在一些具體實2 例中，較佳係利用可加強此種區別之途徑。在一些具體實 施例中，較佳途徑係利用GPCR融合蛋白質。 般而&，一旦使用上文提出之檢測技術（以及熟諳此項 φ 技藝者已知之其他技術）測定出非内源GPCR已於構成上被 活化，即能夠測定會與内源GPCR偶合之主要G蛋白質。〇 蛋白質之偶合至GPCR係提供可被評估之發出訊息途徑。在 一些具體實施例中，篩檢較佳係使用哺乳動物表現系統進 行，因為將預期此種系統具有内源G蛋白質於其中。因此， 藉由定義，在此種系統中，非内源構成上活化2GpCR將連 續地發出訊息。在一些具體實施例中，此訊息較佳係被加 強，以致在例如對受體之逆催動劑存在下，較可能情況是， 翁特別是就篩檢而論，其將能夠更易於區別受體間之情況， 當其與逆催動劑接觸時。 GPCR融合蛋白質係意欲加強與非内源GpCR偶合之〇蛋 白之功效。GPCR融合蛋白質對於以無論是内源、構成上活 性之GPCR或非内源構成上活化之GPCR篩檢可為較佳，因為 此種途徑會增加此種篩檢技術中所產生之信號。這在幫助 顯著”信噪”比之中是重要的；此種顯著比例對於如本文中 所揭示候選化合物之篩檢係為較佳。 可用於GPCR融合蛋白質表現之構造物之建構，係在此項 101004 -141- 200539867 技藝中具有一般技術者之範圍内。市購可得表現載體與系 統係提供可吻合研究人員特定需求之多種途徑。於此種 GPCR融合蛋白質構造物之建構上之重要標準，係包括但不 限於GPCR順序與G蛋白質順序應在架構内（較佳情況是，内 源GPCR之順序係為G蛋白質順序之上游），且GpcR之，，終止， 密碼子應被刪除或置換，以致在GPCR表現時，〇蛋白質亦 可被表現。GPCR可直接連結至G蛋白質，或可以有間隔基 φ 殘基介於此兩者之間（較佳為不超過約12個，惟此數目可容 易地由一般熟諳此藝者確定）。基於方便性，較佳係使用間 隔基。在一些具體實施例中，偶合至非内源(3]?(^之^蛋白 質較佳係在產生GPCR融合蛋白質構造物之前已被確認。由 於只有少數G蛋白質已被確認，故包含〇蛋白質順序之構造 物（意即一般性G蛋白質構造物，參閱下文實例5(a))較佳係 可用於***内源GPCR順序於其中；這就具有不同順序之多 種不同内源GPCR之大規模篩檢而論，係提供進一步效率。 _ 如上述，偶合至Gi、Gz及Go之經活化GPCR，預期會抑 制cAMP形成，使得以此等GPCR類型為基礎之檢測具挑戰性 [意即cAMP訊息會在活化時降低，因此使得直接確認例如 催動劑（其將進一步降低此訊息）具挑戰性]。正如將於本文 中所揭示者，已被確定的是，對於此等受體類型，能夠產 生未以GPCR之内源G蛋白質為基礎之GPCR融合蛋白質，以 努力建立一種可實行之環化酶為基礎之檢測。因此，例如， 内源Gi偶合之受體可被融合至Gs蛋白質-此種融合構造 物，於表現時，會”驅動”或”迫使”内源GPCR與例如Gs而非 101004 -142- 200539867 大天羔Gi蛋白質偶合，以致環化酶為基礎之檢測可被建立。 =此，對&、Gz&G〇偶合之受體，在一些具體實施例中广，_ 田使用GPCiUi合蛋白質’且此檢測係以腺芬基環化酶活性 ^測為基礎時，融合構造物較佳係以Gs(或會刺激酵素腺 苷基環化酶形成之相當G蛋白質）建立。 G 蛋白質

於GPCR活 化作用時 (意即構成 活化作用或 催動劑結 合）對於 cAMP生產 於GPCR活 化作用時 (意即構成 活化作用或 催動劑結 合）對於IP3 在與逆催 動劑接觸 時對於 cAMP生產 之作用 在與逆催 動劑接觸 時對於IP3 蓄積之作 用

同樣地有效者為G蛋白f融合構造物，其係利用與& GKz或G。蛋白質融合之Gq蛋白f。在—些具體實施例中， 較佳融合構造物可以Gq蛋白f達成，#中g_蛋白質仏亞單 位（’Ό〇之最初六⑹個胺基酸係被刪除，而在Gaq之&末 端之最後五⑶個胺基酸係被吾人感興趣G蛋白質之Ga之 相應胺基酸置換。例如，融合構造物可具有與(¾蛋白質融 合之Gq(6胺基酸缺失）而造成”Gq/Gi融合構造物"。此融合構 造物將迫使内源Gl偶合之受體偶合至其非内源G蛋白質 Gq ’以致使第二信使例如肌醇三賴鹽或二醯基甘油可被 度量，代替cAMP生產。 101004 -143- 200539867 4.標的Gi偶合GPCR與訊息增強子&偶合GpcR之共同轉 染（cAMP為基準之檢測） 已知Gi偶合受體會抑制腺:y：基環化酶，因此降低^^^^生 產之含量，其可使得cAMP含量之評估具挑戰性。在某些具 體實施例中，在度量cAMP生產上之降低作為活化作用時主 要偶合Gi之受體活化作用之指標之一種有效技術，可藉由 共同轉染訊息增強子而達成，例如非内源構成上活化之受 體’其主要係於活化作用時與Gs偶合（例如TSHR_A623I ;參 閱下文）’與Gi連結之GPCR偶合。正如所顯見者，Gs偶合 受體之活化作用可以cAMP生產上之增加為基礎進行測定。 Gi偶合受體之活化作用會導致降低cAMp生產。因此，共同 轉染途徑係意欲有利地利用此等”相反”影響。例如，非内 源構成上活化之Gs偶合受體（”訊息增強子”）與單獨表現載 體之共同轉染，係提供基線cAMP訊息（意即，雖然Gi偶合 之受體將降低cAMP含量，但此’’降低”將相對於藉由構成上 活化Gs偶合訊息增強子所建立之實質增加cAMP含量）。然 後，藉由共同轉染訊息增強子與”標的受體”，Gi偶合標的 受體之逆催動劑將會增加所度量之cAMP訊息，而Gi偶合標 的受體之催動劑將會降低此訊息。 使用此途徑直接確認之候選化合物應獨立地評估，以確 保此等並非以訊息增強受體作為標的（這可在針對經共轉 染之受體篩檢之前或之後達成）。 D·醫藥化學 候選化合物 101004 -144- 200539867 此項技藝中已知之任何分子可經測試其調節（增加或降 低）本發明GPCR活性之能力。為確認會調節活性之化合物，. 可將候選化合物直接提供至表現受體之細胞。 本發明之此項具體實施例係極適合筛檢化學庫，關於會 調節例如抑制、拮抗或催動受體之量或活性之分子。此^匕 學庫可為肽化合物庫、擬肽化合物庫、化學合成化合物庫， 重組體例如喔菌體顯示庫，及活體外轉譯為基礎之化合物 • 庫，其他非肽合成有機化合物庫等。本發明之此項具體實 施例亦極適合篩檢内源候選化合物’包含生物物質，包括 但不限於血漿與組織萃取物，及篩檢已知具有生物學活性 之内源化合物庫。 在一些具體實施例中，候選化合物之直接確認係搭配經 由結合化學技術產生之化合物進行，而其中數以千計之化 合物係隨機地製成，以供此種分析用。候選化合物可為化 學庫之一個成員。這可包括任何合宜數目之個體成員，例 春 如數十至數百至數千至數百萬種適當化合物，例如肽、類 肽及其他募聚合化合物（環狀或線性）及模板為基礎之較小 刀子例如本并一鼠七圜類、乙内酿服類、聯芳基類、碳 環狀與多環狀化合物（例如莕類、酚嘧啩類、吖啶類、類固 醇等）、碳水化合物與胺基酸衍生物、二氫吡啶類、二苯甲 基類及雜環類（例如三呼類、Η丨嗓類、隹嗤σ定類等）。所引 用之數目及所列示化合物之類型，係為說明性，而非限制。 車又佳化學庫包括低分子量之化學化合物與潛在治療劑。 舉例之化學庫可市購得自數種來源Trip〇s/panLabs， 101004 -145· 200539867

ChemDesign，藥典）。在一些情況中，此等化學庫係使用結合 策略產生，其係使化合物庫各成員之同-性編碼在成員化 合物所連接之受質上，因此允許直接且立即確認有效調節 物之分子。因在許多結合途徑中，於化合物板上之位 置係指定之化合物之組成。而且，在一項實例中，單一板 位置可具有W0種化學品，其可經由投予含有吾人感興趣 交互作用之井而經篩檢。因&，若檢出調節，則交互作用

對之愈來愈小匯集庫可被檢出關於調節活性。藉由此種方 法’許多候選者分子可經篩檢。 適合使用之許多不同化合物庫係為此項技藝中已知，並 可用以提供根據本發明欲被測試之化合物。或者，化合物 庫可使用標準方法建構。再者，更—般而t，結構±受束 缚之有機不同（例如非肽）化合物庫亦可使用。舉例古之， 可使用苯并二氮七圜庫（參閱，例如Bunin等人，簡，Μ

Natl. Acad· Sci· USA 91 : 4708-4712)。 於本發明之另—項具體實施财，結合化學可用以確認 ▲發明GPCR之調節物。結合化學係能夠建立含有數以百 :、數以千計化合物之化合物庫，其中許多可於結構上類 :。雖然高通過量篩檢程式係能夠篩檢此等巨大化合物 ’關於對已知標的之親和力，但新穎途徑已被發展，其 係達成較小尺寸之化合物座彳立 ^ C其純供最大化學多樣性 匕閱’例如Matter，1997,醫藥化學期刊4〇 : i2i9_i229)。 ㈣種結合化學方法’親和力指紋圖譜，已於先前被用以 /…J、分子之不連續化合物庫’關於對所界定蛋白質名單 101004 -146- 200539867 之結合親和力。藉由此篩檢所獲得之指紋圖譜，係用以預 測個別化合物庫成員對於吾人感興趣之其他蛋白質或受體 (在本發明中，為本發明之受體）之親和力。將此指紋圖譜 與得自已知會與吾人感興趣之蛋白質反應之其他化合物之 指紋圖譜比較，以預測化合物庫之化合物是否可能以類似 方式反應。例如，並非測試大化合物庫中之每一配位體關 於與複合物或蛋白質成份之交互作用，而是僅具有指紋圖 譜類似已知具有該活性之其他化合物之配位體可能被測試 (參閱，例如Kauvar等人，1995,化學與生物學2: 107-118; Kauvar， 1995,親和力指紋圖譜，國際製藥.8 : 25-28 ;及Kauvar，在新穎 未知領域中之農業化學品免疫檢測上藉由圖樣辨識之毒性 化學偵測，編輯者 D. Kurtz·，L. Stanker 及 J.H. Skerritt.，1995, AOAC : Washington，D.C·，305-312)。 經確認為調節物之候選化合物 一般而言，此種篩檢之結果將為具有獨特核心結構之化 合物；接著，可使此等化合物環繞較佳核心結構接受另外 之化學改質，以進一步增強其醫藥性質。此種技術係為此 項技藝中已知，故將不詳細地在本專利文件中提出。 在某些具體實施例中，該經確認之調節物係為生物可利 用。一般熟諳此項技藝者可採用之多種計算途徑已被發展， 以預測藥物之口服生物利用率[Ooms等人，Biochim Biophys Acta (2002) 1587 : 118-25 ; Clark & Grootenhuis，Curr Opin Drug Discov Devel (2002) 5 ·· 382-90; Cheng 等人，J Comput Chem (2002) 23 ·· 172-83 ; Norinder & Haeberlein, Adv Drug Deliv Rev (2002) 54 * 291-313； Matter 101004 -147- 200539867 等人，Comb Chem High Throughput Screen (2001) 4: 453-75 ; Podlogar & Muegge，Curr Top Med Chem (2001) 1 : 257-75 ;其中每一件之揭示 内容係據此以其全文併於本文供參考]。再者，陽電子發射 局部X射線檢法（PET)已成功地由許多集團使用，以獲得藥 物分佈之直接度量，包括在哺乳動物身體中，於藥物之口 服投藥後，口服生物利用率之評估，包括非人類靈長動物 與人類身體[Noda 等人，J Nucl Med (2003) 44 : 105-8 ; Gulyas 等人， Eur J Nucl Med Mol Imaging (2002) 29 : 1031 _8 ; Kanerva 等人，精神藥 理學（1999) 145 : 76-81 ;其中每一件之揭示内容係據此以其全 文併於本文供參考]。亦參閱下文，包括實例25。 在某些具體實施例中，該生物可利用經確認之調節物進 一步能夠越過血液-腦部障壁。一般熟諳此項技藝者可採用 之多種計算途徑已被發展，以預測血液-腦部障壁之滲透 [Ooms 等人，BiochimBiophys Acta (2002) 1587 : 118-25 ; Clark &

Grootenhuis, Curr OpinDrug Discov Devel (2002) 5 · 382-90 ; Cheng 等 人，J Comput Chem (2002) 23 : 172-83 ; Norinder & Haeberlein，Adv Drug Deliv Rev (2002) 54: 291-313; Matter 等人，Comb Chem High Throughput Screen (2001) 4 : 453-75 ; Podlogar & Muegge，Curr Top Med Chem pOOl) 1 : 257-75 ;其中每一件之揭示内容係據此以其全文併於本 文供參考]。多種活體外方法已被發展出，以預測藥物之血 液-腦部障壁滲透性[Lohmann 等人，J Drug Target (2002) 10 : 263-76 ; Hansen 等人，JPharmBiomed Anal (2002) 27 ·· 945-58 ; Otis 等 人，J Pharmocol Toxicol Methods (2001) 45 : 71-7 ; Dehouck 等人， J neurochem (1990) 54 : 1798-801 ;其中每一件之揭示内容係據此 101004 -148- 200539867 以其全文併於本文供參考]。再者，多種策略已被發展出， 以加強藥物傳輸越過血液-腦部障壁[Scherrmann，Vascul Pharmacol (2002) 38 · 349-54 ； Pardridge, Arch Neurol (2002) 59 · 35-40 ； Pardridge，神經元（2002) 36 : 555-8 ;其中每一件之揭示内容係據 此以其全文併於本文供參考]。最後，陽電子發射局部X射 線檢法（PET)已由許多集團成功地使用，以獲得藥物分佈之 直接度量，包括在腦部内，於哺乳動物身體中，包括非人 類靈長動物與人類身體[Noda等人，JNucl Med (2003) 44: 105-8 ; Gulyas 等人，Eur J Nucl Med Mol Imaging (2002) 29 : 1031-8 ; Kanerva 等人，精神藥理學（1999) M5 : 76-81 ;其中每一件之揭示内容 係據此以其全文併於本文供參考]。亦參閱下文，包括實例 26。 E.本發明之化合物 本發明之一方面係關於式（Π)化合物：

或其藥學上可接受之鹽’ 其中： 心為11或cv6烷基； R2為2-甲基-4,5,6,7-四氫_2H-啕唑-3-基；或 心與R2和彼等所結合之氮一起形成3,4-二氫-2H4奎琳-1-基；及 101004 -149- 200539867

Rio與Rii各獨立為Η或鹵素。 F·製造本發明化合物之合成方法 本發明化合物之製備-一般合成方法 本發明之新穎化合物可容易地根據多種合成方法製備， 其全部均為熟諳此藝者所熟悉。某些製備本發明化合物之 方法包括但不限於下文圖式U中所述者。 新穎2-六氫吡啶冰基…塞唑類之中間物（AD)可以圖式i所 • 示製成。於氮上以適當保護基（意即PG)保護之硫醯胺（AA)， 係經由Hantzsch·類似反應，以在羧酸上經保護之基冬酮 基-丙酸（AB)環化，而得二保護之2_六氫峨0定_4_基^塞唑（AC)。 般而a，兩個保護基係為不同。環化作用之適當溶劑包 括例如醇類（譬如甲醇、乙醇及丙醇）、低碳鹵化碳類（譬如 二氣甲烷、二氣乙烷及氯仿）、DMF等。環化作用之反應溫 度可涵蓋從約室溫至約為所使用溶劑沸點之範圍；一般而 言，此溫度範圍係為約50°C至約90°C。 鲁 對於硫醯胺（AA)之適當保護基包括胺基甲酸第三-丁酯 (BOC)、胺基甲酸苄酯（Cbz)、胺基甲酸對-甲氧基芊酯（M〇z) 等。各種方法均可用以保護硫醯胺（AA)之氮。例如，胺基 甲酸第三-丁酯基團可使用多種試劑，譬如（B〇c)2〇，以適 當鹼（譬如NaOH、KOH或Me4NOH)，及在適當溶劑（THF、 CH3 CN、DMF、EtOH、MeOH、Η2 Ο 或其混合物）中，於約 〇 t至約50°C之溫度下引進。 對於3-鹵基-2-S同基-丙酸(AB)之適當保護基，包括烧基g旨 類（譬如甲基、乙基、丙基及第三-丁基）、經取代之甲基酯 101004 -150- 200539867 類（譬如甲氧基甲基、甲氧基乙氧基甲基及爷氧基甲基）、 視情況經取代之苄基醋類（譬如爷基、4_甲氧基爷基及2,6: 二甲氧基芊基）等。一種特別有用之經保護3_函基冬酮基_ 丙酸（AB)係為3-溴基-2-¾基-丙酸乙酯，亦常被稱為溴丙酮 酸乙酯。 適合極多種合成轉變之其他代表性保護基，係揭示於 Greene與Wms，亦襪合竑之保護差，第三版，J〇hnWiley&s〇ns， φ NewYork，1999，其揭示内容係以其全文併於本文供參考。 為方便起見，於2-六氫吡啶斗基^塞唑（AC)中之兩個保護 基係經選擇，因此一個保護基可實質上被移除，而不會實 貝上影響另一個保護基。此類型之策略係被稱為正交保 遵。一項實例包括以BOC基團保護氮，及保護羧酸成為甲 基或乙基酯。在此實例中，B〇c基團可在酸性條件下被移 除，而不會實質上影響酯基。或者，由於B〇c基團並未實 質上在鹼性條件下被水解，故該酯可被移除，而不會實質 _ 上影響BOC基團。許多正交保護圖式係為此項技藝中已 知’並可被應用於此處。 接著，如圖式1中所示，對於2-六氫吡啶斗基·遠唑類（AC) 之氮保護基係被移除（意即去除保護），而實質上保持羧酸 保遵，以獲得共用中間物（AD)。在該氮係以BOC基團保護 蛉之情況中，有效***可於酸存在下，且視情況於適當溶 劑中達成。適當酸包括HC1 (含水或無水）、HBr (含水或無 水）、H2 SO#、三氟醋酸、對-甲苯磺酸等。當存在時，適當 洛劑包括酯溶劑（譬如醋酸乙酯）、烷基醇類（譬如甲醇、乙 101004 -151 - 200539867 、異-丙®?、丙 及 "«丁 35古、 内和及正丁知）、醚性溶劑（譬如四氫呋 喃與二氧陸圜)等或其混合物。可視情況添加清除劑，以捕 獲所釋出之陽離子。適當清除劑包括硫酚、甲苯趟、硫代 甲苯醚、甲硫酚、甲酚、硫化二T烷等。關於2_六氫吡啶斗 基嘍坐類(AC)中之氮’其去除保護之反應溫度範圍可涵蓋 從約魏至約為所使用溶劑之沸點範圍；—般而言，此溫 度範圍係為約-l〇°C至約50°C。

Halo 囷式1

〇 ^Λ^ο-pg環化作t 0 (AB)

pg-〇yI)-CNH ο (AD)

中間物（AD)係於脫水縮合劑與惰性溶劑存在下，使用或 未使用驗，與羧酸偶合，以提供醯胺（AE)，如圖式2方法a 中所不。適當脫水縮合劑包括二環己基碳化二亞胺（DCC)、 1-乙基-3-(3-二曱胺基丙基）碳化二亞胺鹽酸鹽（EDc · HC1)、六 I鱗酸溴-參-四氫吡咯基-鱗（pyBrop)、六氟磷酸α(7-氮苯并 三唾-1-基）_1，1，3,3_四甲基錁（HATU)、1-環己基-3-曱基聚苯乙烯 -碳化二亞胺等。適當鹼包括三級胺類（譬如Ν，Ν-二異丙基-乙胺、Ν-曱基嗎福琳及三乙胺）。適當惰性溶劑包括低碳鹵 化碳溶劑（較佳為二氣曱烷、二氯乙烷及氣仿）、含醚溶劑 (譬如四氫呋喃與二氧陸圜）、腈溶劑（譬如乙腈）、醯胺溶 101004 -152- 200539867 劑（譬如N，N-二甲基甲醯胺與N，N_二甲基乙醯胺）或其混人 物。選用之其他試劑可使用於此偶合反應，且此等試劑包 括1-羥基苯并***（HOBT)、HOBT-6-羧醯胺基甲基聚笨乙 烯、1-羥基-7-氮苯并***(HOAT)等。適當反應溫度範圍為約 -25°C至約60°C，及約〇°C至約35°C。

或者，醯胺（AE)可藉由醯胺化反應，使用鹵化醯與中間 物（AD)，於驗與惰性溶劑存在下獲得，如圖式2方法b中所 示。適當函化醯包括氯化醯或演化醯。適當驗包括驗金屬 碳酸鹽（譬如碳酸鈉與碳酸鉀）、鹼金屬氫碳酸鹽（譬如碳酸 氫鈉與碳酸氫卸）、驗金屬氫氧化物（譬如氫氧化鈉與氫氧 化舒）、三級胺類（譬如N，N-二異丙基乙胺、三乙胺及曱基 嗎福啉）及芳族胺類（譬如吡啶、咪唑及聚（4_乙烯基吡啶））。 適當惰性溶劑包括低碳化碳溶劑（譬如二氣甲烧、二氣乙 烷及氣仿）、含醚溶劑（譬如四氫呋喃與二氧陸圜）、醯胺溶 劑（譬如N，N-二甲基曱醯胺與N，N-二甲基乙醯胺）及芳族溶 劑（譬如甲苯、苯及吡啶）。適當反應溫度範圍為約_25。〇至 101004 -153- 200539867 、力55 C車乂佳為約-5。匸至約。 S盡胺(AE)中之經保護酸基係被移除，而得其相應之羧 酉欠，如圖式3中所示。使羧酸去除保護之適當方法係為原先 U藝者所已知。例如，可使烷基酯類(譬如甲基、乙基 及丙基）、、二由水解作用，於驗存在下及在適當溶劑中轉 化成羧I類適§驗包括驗金屬碳酸鹽（譬如碳酸鈉與碳酸 鉀）鹼金屬氫兔酸鹽（譬如碳酸氳鈉與碳酸氫鉀）及鹼金屬 Φ 氫氧化物（s如氫氧化鋰、氫氧化鈉及氫氧化鉀）。去除保 護之適當溶劑包括烷基醇類（譬如甲醇、乙醇、異-丙醇、 丙醇及正-丁醇）、含醚溶劑（譬如四氫呋喃與二氧陸圜） 等或其混合物，此水解作用較佳係於玛〇存在下進行。供 醯胺(AE)中酸基去除保護之反應溫度，其範圍可為約室溫 至約為所使用溶劑之沸點；一般而言，溫度範圍係為約5〇 C至約90°C。供酯類以及其他其他適當保護基用之其他去 除保護方法，係描述於Greene與Wuts，有譏合成之窈護差，第 鲁三版，：[〇1111\^聆&8〇耶，价〜丫〇1^，1999，同前文出處。羧酸（八]^ 係與無論是甲基_(2_甲基_4,5,6,7-四氳-2H-吲唑_3_基）_胺或 U，3,4-四氫啉偶合，個別獲得式（AG)與（AH)化合物。一般 而舌，此偶合可於脫水縮合劑與惰性溶劑存在下，使用或 未使用鹼，或藉由醯胺化反應，使用產生自羧酸(AF)之_ 化酿，於鹼與惰性溶劑存在下進行，各方法均如前文關於 圖式2所述。 101004 -154- ^10200539867 圓式3 R11 S (AE) (AE) 1. 去除保護，rco2pg RC02H (AF) 2. 偶合

T Rio ▼W 8 (AG) S (AH) CH3

Rio _R” 本發明之一些具體實施例包括如下文所顯示表1中所示 之化合物。 表1 化合物# 結構 化學名稱 1 2-{l-[2-(2-氯苯基）-乙 酿基]-六鼠被σ定-4-基卜塞唑-4-羧酸甲基 -(2-甲基-4,5,6,7-四鼠 -2Η-啕唑-3-基）-醯胺 2 〇 u 2-(2-氯苯基)-1-{4_[4-(3,4-二氫-2H-喳啉-1-羰基）-噻唑-2-基]-六氮被σ定-1_基}-乙酮 3 q^/KKp 2- {1 -[2-(2-氟苯基）-乙 酿基]-六氮说唆-4-基卜塞唑-4-羧酸甲基 _(2_ 曱基-4,5,6,7-四氫 -2Η-啕唑-3-基）-醯胺 G.醫藥組合物 101004 -155- 200539867 本發明係提供治療（與預防）之方法，其方式是對需要該 治療（或預防）之個體投予治療上有效量之本發明調節物 [亦參閱’例如PCT申請案號PCT/I卿〇1461，於雇年8月29 日以W〇 〇2/〇66505公告；其中每一案之揭示内容係據此以其 全文併於本文供參考]。於一項較佳方面，調節物為催動劑。 於-項較佳方面，物係實質上經純化。個體較佳為動 物，包括但不限於譬如母牛、猪、馬、雞、非人㈣長類 動物、貓、狗、兔子、大白gΘ 人臼亂老乳4動物，且較佳為哺 乳動物，而最佳為人類。 本發明之調節物可投予非人類動物[參閱下文實例]及/ 或人類’單獨或在醫藥或生理學上可接受之組合物中，其 中係使用此項技藝中習知之技術，將其與適當載劑或賦形 «’j此口。適备藥學上可接受之载劑係為此項技藝中可取 用；例如’參閱Remington氏醫藥科學，第16版，觸，财出版 公司（Oslo等人編著）。 然後，於治療上有效劑量下提供該醫藥或生理學上可接 受之組合物。治療上有效劑量係指當以說明性而非限制地 藉由本文中所述方法測定時’足以造成預防或改善病症之 病徵或生理狀態之調節物量，其中預防或改#病症之病徵 或生理狀態係包括但不限於降低血糖濃度、預防或治療某 些代謝病症’譬如騰島素抗藥性、減弱之葡萄糖容許度及 糖尿病’以及預防或治療高血糖濃度之併發症，譬如動脈 粥瘤硬化、心臟疾病、中風、高血壓及末梢血管疾病。 特別考慮的是’本發明之調節物可單獨或併用其他藥學 101004 -156- 200539867 上或生理學上可接受之化合物一起提供。用於治療本發明 病症之其他化合物，其中本發明病症之治療係包括但不限 於降低血糖濃度，預防或治療某些代謝病症，譬如胰島素 抗藥性、減弱之葡萄糖容許度及糖尿病，以及預防或治療 高血糖濃度之併發症，譬如動脈粥瘤硬化、心臟疾病、中 風、高血壓及末梢血管疾病，係為目前此項技藝中所習知。 本發明之一方面係涵蓋根據本文中所揭示之具體實施例， 進一步包含一或多種藥劑之用途，該藥劑係選自包括磺醯 脲（例如優降糖（glibenclamide)、葛利皮再得（glipizide)、葛利可 拉再（gliclazide)、葛利美皮利得（glimepiride))、美革里汀奈 (meglitinide)(例如瑞巴葛奈（repaglinide)、拿貼葛奈（nateglinide))、 雙縮脈（例如二曱雙脈(metformin))、α-葡萄糠嘗酶抑制劑（例 如阿卡糖（acarbose)、約巴瑞史塔（epalrestat)、米葛利妥（miglitol)、 沃葛利糖（voglibose))、p塞嗤唆二_ (例如若西葛塔宗 (rosiglitazone)、皮歐葛塔宗（pioglitazone))、胰島素類似物（例如 胰島素利思普羅（lispro)、胰島素阿斯帕特（aspart)、胰島素葛 拉金（glargine))、ρ比咬叛酸鉻/生物素及生物劑（例如脂結合素 或包含其C-末端球形功能部位之片段，或脂結合素或該片 段之多聚體；或脂結合素受體AdipoRl或AdipoR2之催動劑， 較佳為其中該催動劑係為口服生物可利用）。此外，明確意 欲涵蓋在内的是，本發明之調節物，例如本發明之催動劑 與部份催動劑可單獨或併用磷酸二酯酶(PDE)抑制劑（包含 對於類型4 cAMP專一之PDE (PDE4)具選擇性之抑制劑，例如 洛弗拉斯特（Roflumilast);對於PDE4B具選擇性之抑制劑；及 101004 -157- 200539867 對於PDE4B2具選擇性之抑制劑）一起提供。 在某些具體實施例中，代謝病症係選自包括減弱之葡萄 糖容許度、胰島素抗藥性、胰島素過多及糖尿病。在一些 具體實施例中’糖尿病為第1型糖尿病。在某些較佳具體實 施例中’糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實施例中，代 謝病症為糖尿病。在某些具體實施例中，代謝病症為第1 型糖尿病。在某些具體實施财，代謝病症為第2型糖尿 病。在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄糖容許 度。在某些具體實施例中，代謝病症為騰島素抗藥性。在 某些具體實施例中，代謝病症為騰島素過多。在某些具體 實施例中，代謝病症係關於個體中之 在某些具體實施例中，高域濃度之併發二自包括 徵候鎮X、動脈粥瘤硬化、粥瘤疾病、心臟疾病、高血壓、 中風、神經病、視網膜病、腎病及末梢血管疾冑。心臟疾 病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、冠狀動脈 疾病及高企壓。在某些具體實施例中，併發症為徵候鎮％。 在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。在某些具 體實把例巾’併發症為粥瘤疾病。在某些具體實施例中， 併發症為心臟疾病。在某些具體實施例中，併發症為心臟 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀機能不全。 在某些具體實施例中’併發症為冠狀動脈疾病。在某些具 體實施例中，併發症為高血壓。在某些具體實施例中，併 發症為南血壓。在宜此乱雜本 在某些具體實施例中，併發症為中風。在 某些具體實施例中’併發症為神經病。在某些具體實施例 101004 -158· 200539867 中：併發症為視網膜病。在某些具體實施例中，併發症為 神經病。在某些具體實施财，併發症為末梢血管疾病。 在某些具體實施例中’併發症為多囊印巢徵候簇。在某些 具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 一 投藥途經

適當投藥途徑包括口腔、鼻、直腸、經黏膜、經皮或腸 投藥，非經腸傳輸’包括肌内、皮下、髓内注射，以及鞠 内、直接室内、靜脈内、腹膜腔内、鼻内、肺内（吸入）或 眼球内注射，使用此項技藝甲已知之方法。其他特佳投藥 途徑係為氣溶膠與積貯配方。持續釋出配方，特別是本發 明藥劑之積貯，係明確地意欲涵蓋在^在某些具體㈣ 例中，投藥途徑為口腔。 組合物/配方 供使用於根據本發明之醫藥或生理學上可接受之組合物 與藥劑，可以習用方式調配，使用―或多種生理學上^接 受之載劑，包括賦形劑與輔助劑。適當配方係依所選擇之 投藥途徑而定。 某些本文中所述之藥劑係包含藥學上或生理學上可接受 之載劑與至少一種本發明之調節物。對注射而言，可將本 發明之藥劑調配在水溶液中，較佳係在生理學上可相容之 緩衝劑中，譬如Hanks氏溶液、林格氏溶液或生理食鹽水緩 衝劑，譬如磷酸鹽或重碳酸鹽緩衝劑。對於經黏膜投藥而 言，對於欲被滲透障壁適當之浸透劑，係被使用於此配方 中。此種浸透劑係為此項技藝中一般已知。 101004 -159- 200539867 可以經口方式服用之醫藥或生理學上可接受之製劑，包 括由明膠製成之推送配合膠囊，以及由明膠與增塑劑譬如 甘油或花楸醇製成之柔軟密封膠囊。推送配合膠囊可含有 活性成份’並混合填料’譬如乳糖，黏合劑譬如殿粉，及/ 或潤滑劑譬如滑石或硬脂酸鎂，及視情況選用之安定劑。 在軟性膠囊中，可使活性化合物溶解或懸浮於適當液體 中’譬如脂肪油類、液態石蠟或液態聚乙二醇。此外，可

添加安定劑。供口服投藥之所有配方應在適合此種投藥之 劑量中。 對面頰投藥而言，組合物可採取以習用方式調配之片劑 或錠劑形式。 ’ 對於藉吸入投藥，供根據本發明使用之化合物可合宜地 以氣溶膠喷霧呈現形式，自霧化罐用之加壓包裝，並利用 適當氣態推進劑’例如二氧化碳進行傳輸。在加壓氣溶膠 :情，中，可經由提供閥門，決定劑量單位，以傳輸經計 里之ΐ。供使用於吸入器或吹入器中之膠囊與藥筒，例如 明膠製成，可經調配而含有化合物與適當粉末基料譬如乳 糖或澱粉之粉末混合物。 此等化合物可經調配，以藉由注射供非經腸投藥，例如 藉由大丸劑注射或連續灌注。注射用配方可以單位劑量呈 現，例如在安瓶瓶中或在多劑量容器中，具有外加之防腐 劑。組合物可採取多種形式，譬如懸浮液、溶液或乳化液， 在"生媒背!中並可含有調配劑’譬如懸浮、安定化及/ 101004 • 160 - 200539867 醫藥或生理學上可接受之供非經腸投藥之配方，包括呈 水溶性形式之活性化合物之水溶液。含水懸浮液可含有會 增加此懸浮液黏度之物質，譬如羧甲基纖維素鈉、花楸醇 或葡聚醣。此懸浮液亦可視情況含有適當安定劑或會增加 化合物之溶解度以允許製備高度濃縮溶液之藥劑。 或者，活性成份可呈粉末或凍乾形式，在使用之前以適 當媒劑賦形，譬如無菌、不含熱原之水。 除了前述配方之外，化合物亦可被調配成積貯製劑。此 種長期作用配方可藉由植入（例如皮下方式或肌内方式）或 藉由肌内注射投藥。因此，例如此等化合物可使用適當聚 合性或疏水性物質（例如作成在可接受油中之乳化液）或離 子交換樹脂調配，或作成節制性地可溶之衍生物，例如作 成節制性可溶鹽。 在一項特定具體實施例中，化合物可經由受控釋出系統 傳輸。於一項具體實施例中，可使用泵（Langer，同前文出處； Sefton，1987, CRC Crit· Ref· Biomed. Eng· 14 : 201-240 ; Buchwald 等人， 1980,手術，88 : 507-516 ; Saudek 等人，1989, N. Engl. J. Med. 321 : 574-579)。於另一項具體實施例中，可使用聚合物質（受控釋 出之醫療應用，Langer與Wise編著，CRC出版社，Boca Raton， Florida，1974 ;受控藥物生物利用率，藥物產品設計與性能， Smolen 與 Ball 編著，Wiley，New York，1984 ; Ranger 與 Peppas，1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23 : 61 ; Levy 等人，1985, Science 228 ·· 190-192 ; During 等人，1989, Ann· Neurol. 25 : 351-356 ; Howard 等人，1989, J. Neurosurg. 71 : 858-863)。其他受控釋出系統係討 101004 •161- 200539867 論於Unger之回顧（199〇，細咖249: 1527七33)中。 此外’化合物可使用持續釋出系統傳輸，譬如含有治療: 劑之固體疏水性聚合體之半透性基質。各種持續釋出物質 已被建立’且係、為熟諳此藝者所習知。持續釋出膠囊，依

其化學性質而定，可經φ &人P 釋出化a物歷經數週，至高達超過1〇〇 天。 依治療試劑之化學性質與生物安定性而定，可採用調節 物安定化作用之其他策略。 西藥或生理學上可接受之組合物亦可包含適當固體或凝 膠相載劑或賦形劑。此種載劑或賦形劑之實例包括但不限 於反&L鈣、秘酸鈣、各種糖類、澱粉、纖維素衍生物、明 膠，及聚合體，譬如聚乙二醇。 有效齋丨詈 適用於本發明之醫藥或生理學上可接受之組合物，包括 其中係以有效量包含活性成份以達成其意欲目的之組合 物更月確σ之，治療上有效量係意謂有效預防被治療病 〜見有病徵之發展或使其緩和之量。有效量之測定係在熟 Μ㈣者之能力範圍内’尤其是在明白本文中所提供之詳 細揭示内容之後。 曰η ;在本’X明方法中使用之任何化合物，治療上有效劑 田才可估汁自細胞培養物檢測。例如，劑量可被調配在 動物模々式中，以達成循環濃度範圍，其包括或涵蓋一個濃 度點或乾圍’經証實會在細胞中刺激葡萄糖吸收，以預防 或治療某些代謝病，症，或以預防或治療高血糖濃度之併發 101004 -162- 200539867 症u _閱下文貫例，關於活體外檢測與活體内動物模式]。 此種貝λ可用以更精確地測定可使用於人類之劑量。 /口療上有效劑量係指該化合物之量會造成病患中病徵之 改善此種化合物之毒性與治療功效，可藉標準醫藥程序， 在細胞培養物或實驗動物中測定，例如測定LD5Q(使電試 驗個體群致死之劑量）與叫〇(在50%試驗個體群中，於治療 上有效之劑Ϊ )。於毒性與治療作用間之劑量比係為治療指 可以LDS 〇與EDS 〇間之比例表示。顯示高治療指數 之化合物係為較佳。 得自此等細胞培養物檢測與動物研究之資料，可用於調 配供使用於人類之劑量範圍。此種化合物之劑量較佳係位 於循環濃度之範圍内，包括EDs〇 ,具有極少或無毒性。此 劑量可在此範圍内改變，依所採用之劑型及所使用之投藥 途徑而定。正確配方、投藥途徑及劑量可由個別醫師鑒於 病患症狀作選擇（參閱，例如Fingl等人，1975，於"治療學之藥 理學基礎”，第1章中）。 劑量與間隔可個別調整，以提供活性化合物之血漿含 量，其係足以預防或治療本發明之病症，依特定狀況而定。 必須達成此等作用之劑量係依個別特徵與投藥途徑而定。 劑量間隔亦可使用最低有效濃度之數值測定。化合物應 使用保持血漿含量高於最低有效濃度歷經1〇_9〇%時間，較 佳係在30-99%之間，而最佳係在50-90%間之服用法投藥。於 局部投藥或選擇性吸收之情況中，藥物之有效局部濃度可 能不與血漿濃度有關聯。 101004 -163- 200539867 所投予組合物之量當然係依被治療病患、病患體重、疾 患之嚴重性、投藥方式及指定醫師之判斷而定。 可在每日或規則基礎下投藥以達成所要結果之本發明調 節物量之較佳劑量範圍，係為01_100毫克/公斤身體質量。 其他較佳劑量範圍係為αι_30毫克/公斤身體質量。其他較 仫劑里範圍係為0.1-10毫克/公斤身體質量。其他較佳劑量 範圍係為0.1-3.0毫克/公斤身體質量。當然，此等每曰劑量 可在一天之過程期間，以少量週期性地傳輸或投藥。應注 意的是，&等劑量範圍僅為較佳範圍，並非意謂限制本發 明。該所要之結果包括但不限於降低血糖濃度，預防或治 療某些代謝病症，譬如胰島素抗藥性、減弱之葡萄糖容許 度及糖尿病，以及預防或治療高血糖濃度之併發症，譬如 動脈粥瘤硬化、心臟疾病、中風、高血壓及末梢血管疾病。 H·治療方法 本發明係特別描述-些方法，包括但不限於降低血糖濃 度之方法’預防或治療某些代謝病症譬如胰島素抗藥性與 才K病之方法，及預防或治療高血糖濃度之 脈粥瘤硬化、心臟疾病、中風、“壓及末梢血管= 方法，其包括對需要此種治療之個體提供本發明之調節 物。在某些具體實施例中，調節物為催動劑。在一些具體 實施例中，該調節物係為口服生物可湘。在—些:體實 施例中]亥口服生物可利用之調節物係進一步能夠越過血 ’夜知㈣壁。在某些具體實施例中，調節物係在醫藥或生 理學上可接受之組合物中提供至個體。在某些具體實施例 101004 -164- 200539867 =節物係在醫藥組合物中提供至個體。在某 :例中’言周節物係在生理學上可接受之組合物中提供至個 '某些具體實施例中’調節物係在醫藥或生理學上可 接受之組合物中提供至個體，其係以經口方式服用。在某 …、體實把例中，個體係為非人類哺乳動物。在某些具體 實施例中，個體係為哺乳動物。在某些具體實施例；:、個 體或哺乳動物係為人類。

^某些具體實施财，代謝病症係選自包括減弱之葡萄 糖容許度、胰島素抗藥性、月夷島素過多及糖尿病。在一些 /、體實轭例中，糖尿病為第丨型糖尿病。在某些較佳具體實 施例中，糖尿病為第2型糖尿病。在某些具體實施例中，代 谢病症為糖尿病。纟某些具體實施例中，代謝病症為p Ϊ•糖尿病在某些具體實施例中，代謝病症為第2型糖尿病。 在某些具體實施例中，代謝病症為減弱之葡萄糖容許度。 在某些具體實施例中，代謝病症為胰島素抗藥性。在某些 具體實施例中，代謝病症為胰島素過多。在某些具體實施 例中，代謝病症係關於個體中之高血糖濃度。 在某些具體實施例中，高血糖濃度之併發症係選自包括 徵候簇X、動脈粥瘤硬化、粥瘤疾病、心臟疾病、高血壓、 中風、神經病、視網膜病、腎病及末梢血管疾病。心臟疾 病包括但不限於心臟機能不全、冠狀機能不全、冠狀動脈 疾病及高血壓。在某些具體實施例中，併發症為徵候簇χ。 在某些具體實施例中，併發症為動脈粥瘤硬化。在某些具 體實施例中，併發症為粥瘤疾病。在某些具體實施例中， 101004 -165- 200539867

併發症為心礙疾病。在某些具體實施例中，併發症為心臟 機能不全。在某些具體實施例中，併發症為冠狀機能不全。 在某些具體實施例中，併發症為冠狀動脈疾病。在某些具 體貝把例中，併發症為高血麼。在某些具體實施例中，併 發症為高血麼。在某些具體實施例中，併發症為中風。在 某些具體實施例中，併發症為神經病。在某些具體實施例 中’併發症為視網膜病。在某些具體實施例中，併發症為 神經病。在某些具體實施例中，併發症為末梢血管疾病： 在某些具體實施例中，併發症為多㈣巢徵候薦。在某此 具體實施例中，併發症為血脂肪過多。 L 其他利用性 _凋節(意即增加、降低或阻斷)剛3受體功能性之藥劑可 使候广化合物與RUP43受體接觸，並測定候選化合物對 於咖43叉體功能性之作用而被確認。化合物調節尺聰3受 體功能性之選擇性，可經由將其對於刪3受體之作用與直 對於其他G蛋白質偶合受體之作用作比較進行評估。藉由 :明而非限制’内源聰3受體之調節物，在與得自相同物 之—或多種其他内源G蛋白質_偶合受體比較下，可經言正 實係為選擇性。葬gg —., 猎由犮月而非限制，若内源RUP43受體之催 料内源肪_體之咖係為至少励倍低於該催動 μ對於仔自相同物種之一或多種其他内源〇蛋白質_偶合受 " 則忒催動劑可經証實係為選擇性RUP43催動劑。 確認會調節RUP43受體功能性之化合物後，此種候選化合 σ進v在其他檢測中測試，包括但不限於活體内模 101004 -166- 200539867 式，以確認或定量其活性。RUP43受體功能性之調節物係為 治療上可用於治療其中涉及正常或迷行RUP43受體功能性 之疾病與生理學症狀。 RUP43受體配位體之藥劑可經由使候選化合物與RUP43 受體接觸，並測定候選化合物是否結合至RUP43受體而被確 認。結合至RUP43受體之化合物之選擇性，可經由將其結合 至RUP43受體與其在其他受體上之結合作比較進行評估。藉 由說明而非限制，内源RUP43受體之配位體，在與得自相同 物種之一或多種其他内源G蛋白質-偶合受體比較下，可經 証實係為選擇性。RUP43受體功能性調節物之配位體係為治 療上可用於治療其中涉及正常或迷行RUP43受體功能性之 疾病與生理學症狀。 本發明亦關於經確認為RUP43受體調節物或配位體之本 發明化合物之經放射性同性素標識之變型，其不僅可用於 放射線成像，且亦可用於檢測中，活體外與活體内兩者， 以使組織試樣（包括人類）中之RUP43受體定位與定量，並藉 由抑制經放射性同性素標識化合物之結合，以確認RUP43 受體配位體。本發明之進一步目的係為發展新穎RUP43受體 檢測，其包含此種經放射性同性素標識之化合物。 本發明係包含經確認為RUP43受體調節物或配位體之本 發明化合物之經放射性同性素標識之變型。 本發明亦關於可用於偵測經結合至RUP43受體之配位體 之待測配位體之經放射性同性素標識之變型。在一些具體 實施例中，本發明係明確地意欲涵蓋該可用於偵測經結合 101004 -167- 200539867 至腳43受冑 < 配位冑之經放射性標識待測配位體之化合 物庫。在某些具體實施例中，該化合物庫包含至少約10 Γ 至夕約10 ’至少約1〇3，至少約1〇5或至少約1〇6該經放射性 心識之待測化合物。本發明之進—步目的係為發展新賴 RUP43文體檢測，其包含此種經放射性同性素標識之待測配 位體。 在一些具體實施例中，一種化合物之經放射性同性素標 # 冑變型係與該化合物相同，惟以下事實除外，-或多個原 子係被一個具有原子質量或質量數不同於典型上在天然中 發現（意即天然生成）之原子質量或質量數之原子置換或取 代。可被併入本發明化合物中之適當放射性核素，包括但 不限於 2H (氘），3H (氣），"c，13c，14c，13n，15n，15〇, 17〇, 18〇， 入本發明放射性標識化合物中之放射性核素，係依該放射 性私識化合物之特定應用而定。例如，對於活體外RUp43 鲁受體標識與競爭檢測而言，併入3 Η，1 4 c，8 2 Br 1 2 5 I 1 3 11 3 5 S 之化合物一般而言最有用。對放射線成像應用而言，i i c， UF，125I，⑴1，1241，1311，75取76扮或77阶一般而言最有用。在 一些具體實施例中，放射性核素係選自包括3H，11 C，1 8f， 14C，125I，124I，131I，35S 及 82Br。 併入放射同位素至有機化合物中之合成方法係可應用於 本發明化合物’且係為此項技藝中所習知。此等合成方法， 例如併入活性含量之氚至標的分子中，係如下述： A·以氚氣體之催化還原作用-此程序於正常情況下會產 101004 -168- 200539867 生高比活性產物，且需要經鹵化或不飽和之先質。 B·以硼氫化[3h]鈉之還原作用-此程序係頗較不昂貴，且 需要含有可還原官能基之先質，譬如醛類、酮類、内醋、 酯類等。 C·以氫化[3H]鋰鋁之還原作用-此程序係提供在幾乎理 論比活性下之產物。其亦需要含有可還原官能基之先質， 譬如醛類、酮類、内酯、酯類等。 D·氣氣體曝露標識-此程序係涉及使含有可交換質子之 先質，於適當觸媒存在下，曝露至氣氣體。 E·使用碟化甲烧[3 H]之N-甲基化作用·此程序經常被採 用以製備0-甲基或N-甲基(3H)產物，其方式是以高比活性碘 化甲烷（3H)處理適當先質。此方法通常允許較高比活性， 例如約70-90 Ci/毫莫耳。 併入活性含量之1251至標的分子中之合成方法包括： A· Sandmeyer與類似反應-此程序係使芳基或雜芳基胺轉 變成重氮鹽，譬如四氟硼酸鹽，接著使用Na125I成為 標識之化合物。一種代表程序係由Zhu，D.-G.與同事報告於 /· Org· C/zem· 2002, (57, 943_948 中。 B·酚之鄰位125碘化作用-此程序允許併入12勺於酚之鄰 位’如由 Collier，T.L.與同事在 /· Cbm〆 1999, 42, S264-S266中所報告者。 C·芳基與雜芳基溴化物與ΐ25ι交換-此方法一般為兩步 驟程序。第一個步驟為芳基或雜芳基溴化物之轉化成其相 應之三烷基錫中間物，使用例如Pd催化反應[意即Pd(Ph3p)4] 101004 -169- 200539867 或經過芳基或雜芳基鍾，於三烷基錫函化物或六烷基二錫 [例如（CH3)3SnSn(CH3)3]存在下進行。一種代表程序係由 Bas，M_D.與同事報告於η以咖伽吻^ 2刪，#， S280-S282 中。 5

在一些具體實施例中，一種化合物之經放射性同性素標 識變型係與該化合物相同，惟係添加一或多個包含放射性 核素之取代基。在-些進—步具體實施例中，化合物為多 肽。在一些進一步具體實施例中，化合物為抗體或其抗原 結合片段。在一些進一步具體實施例中，該抗體為單株。 適當放射性核素包括但不限於2H(氘），3H(氣 13Ν，Ν，Β〇，η〇，18〇，18ρ，35δ，36α，82ΒΓ，75ΒΓ，76γ 1241，1251及1311。被併入本發明放射性標識化合物中之放射 性核素係依該放射性標識化合物之特定應用而定。例如， 對活體外RUP43受體標識與競爭檢測而言，併入3H， 82Br， 應用 1257 131x350^,,.., 1 5 ， s之化合物一般而言最有用。對放射線成像 而言’ "C，i8F，125l，123l，124l，131i,75Br，76Brf7Bn 而言最有用。在-些具體實施例中，放射性核素係選自包 括 3H，"C，"F，"c，125l，124l，131l，35sn 添加一或多個包含放射性核素之取代基之方法，係在熟 練技師之範圍内，X包括但不限於藉由酵素方法添加同位 素放射性碘[Marchalonic JJ，生物化學期刊（1969) 113 : 299·3〇5 ;

ThorelUI 與 j〇hansson BQBi〇cWmiCaetBi〇physicaActa (腳^

3:3-9;其中每一件之揭示内容係據此以其全文併於本文供 ，考]及/或藉由氯胺-τ/碘同位素/碘珠粒方法[Hunter WM 101004 -170· 200539867 與 Greenwood FC，Nature (1962) 194 ·· 495-6 ; Greenwood FC 等人，生物 化學期刊（1963) 89 : 114-23 ;其中每一件之揭示内容係據此以 其全文併於本文供參考]。 所揭示受體與方法之其他用途，將為熟諳此項技藝者基 於尤其是本專利文件之調閱而變得明瞭。 【實施方式】 實例 提出下述實例係為達說明本發明之目的，而非限制。雖 然於本文中係揭示特定核酸與胺基酸順序，但咸信一般熟 諳此藝者具有對此等順序施行較小修正之能力，同時達成 相同或實質上類似下文所報告之結果。此種修正途徑係被 視為在此揭示内容之範圍内。 提供下述實例係為達說明目的，並非作為限制之方式。 一般熟諳此藝者能夠以本文之揭示内容為基礎，設計相當 之檢測與方法，其全部係構成本發明之一部份。 有關於本發明主題事項且一般熟諳此項技藝者所習知之 重組DNA技術，可參閱例如Maniatis T等人，分子無性繁殖： 實驗室手冊（1989) Cold Spring Harbor實驗室；美國專利第 6,399,373 號；及 PCT 申請案號 PCT/IB02/01461，於 2002 年 8 月 29 曰以WO 02/066505公告；其中每一件之揭示内容係據此以其 全文併於本文供參考。 實例1 人類GPCR之全長無性繁殖 a. 内源人類RUP43 (順序識別碼：1 & 2) 101004 -171 - 200539867 使全長内源人類RUP43 (GPR131，例如GenBank®收受號碼 NM_170699)編碼之多核苷酸順序可按此處所述經無性繁殖。 順序識別碼：1為内源人類RUP43 (GPR131)多核甞酸編碼順 序，可按此處所述經無性繁殖。順序識別碼：2為其相應 經編碼之内源人類RUP43 (GPR131)多肽。 全長内源人類RUP43係使用麵PCR SuperMix (Invitrogen目錄 #11306-016)及專一引物 • 5，-GACAAGCATGACGCCCAACAGCACTGGCGAG-3，（5，·引物；順序 識別碼：3)與 5’-CTTGAATTAGTTCAAGTCCAGGTCGACACTGC-3’ (3’-引物；順序識別碼：4)，以人類DNA作為模板，藉由PCR 進行無性繁殖。人類DNA可為基因組DNA或cDNA。所使用 之循環條件為25次循環之95°C歷經40秒，60°C歷經50秒及72 °C歷經1分鐘。將LOkbPCR產物無性繁殖至？0!111-丁0?01^載 體（Invitrogen)中。 b. HA/V5His雙重標記之内源人類RUP43 (順序識別碼： φ 5 & 6) 使具有N-末端HA抗原決定部位標記與C-末端配置之 V5HiS抗原決定部位標記之全長内源人類RUP43 (GPR131)多 肽（不存在N-末端甲硫胺酸）編碼之多核甞酸，係按此處所 述進行無性繁殖。’ΉΑΠ抗原決定部位標記係包含胺基酸順 序 MYPYDVPDYA。”V5lf 包含胺基酸順序 GKPIPNPLLGLDST ; "Hisn包含胺基酸順序HHHHHH 〇順序識別碼：5係為内源人 類RUP43 (GPR131)多核苷酸編碼順序（不存在使N-末端曱硫 胺酸編碼之密碼子），具有5’-末端HA抗原決定部位標記與 101004 -172- 200539867 3’-末端V5His抗原決定部位標記。順序識別碼：6係為其相 應經編碼之HA/V5His雙重標記之RUP43多肽。 PCR 係使用 EST 無性繁殖系（IMAGE # 5221127，GenBank® 收 受號碼BC033625)作為模板，與pfU聚合酶（Stratagene)，使用由 製造者提供之緩衝系統，經補充1〇%DMSO,0.25 _各引物及 0.5 mM各4種核甞酸進行。循環條件為25次循環之95°C歷經 40秒，60°C歷經50秒及72°C歷經1分鐘40秒。5’PCR引物係併 入Hindlll位置且具有以下順序： 5’-GACAAGCTTGACGCCCAACAGCACTGGCGAG-3,（順序識別 碼：7)。3TCR引物係併入EcoRI位置且具有以下順序： 5’-CTTGAATTCGTTCAAGTCCAGGTCGACACTGC-3,（順序識別 碼：8)。使1.0 kb PCR產物以Hindlll與EcoRI消化，並無性繁 殖至5ΉΑ/3Ύ5Η^雙重標記之PCMV表現載體中。 實例2 非内源構成上活化之人類RUP43之製備 咸信熟諳此藝者具有選擇核酸順序突變技術之能力。下 文所提出者係為可被利用以產生人類GPCR之非内源變型 之途徑。此處關於内源人類RUP43 (GPR131)所揭示之突變型， 係以演算法途徑為基礎，而其中係使對於保守脯胺酸（或供 其使用之内源保守取代）殘基（位於GPCr之TM6區域，接近 TM6/IC3界面）為队末端之第16個胺基酸（位於GPCR之IC3區 域中）突變’較佳係對組胺酸、精胺酸或離胺酸之胺基酸殘 基’最佳係對離胺酸之胺基酸殘基。 藉由說明而非限制，内源人類RUP43 (GPR131)之非内源構 101004 -173- 200539867 成上活化之變型可經由使順序識別碼：2之胺基酸位置223 上之丙胺酸突變而製成，較佳係對離胺酸。 1. Transformer Site_Directed (轉變子位置引導）TM之致突變 非内源人類GPCR之製備可在人類GPCR上，使用特別是 Transformer Site-DirectedT M 致突變套件（Clontech)，根據製造者之 說明書達成。利用兩種致突變引物，最佳為會產生離胺酸 突變之離胺酸致突變寡核苷酸，與選擇標記物寡核甞酸。 為方便起見，亦指出欲被併入人類GPCR中之密碼子突變 型，呈標準形式。 2. QuikChangeT M Site-DirectedT M 致突變 非内源人類GPCR之製備亦可利用QuikChangeTM Site-DirectedTM 致突變套件（Stratagene，根據製造者之說明書）達成。較佳係 使用内源GPCR作為模板，並利用兩種致突變引物，以及最 佳為離胺酸致突變寡核苷酸與選擇標記物寡核苷酸（被包 含在套件中）。為方便起見，係指出被併入新穎人類GPCR 中之密碼子突變型，與個別寡核苷酸，呈標準形式。 實例3 受體表現 雖然有多種細胞可用於此項技藝中，供蛋白質之表現， 但最佳應利用哺乳動物細胞或黑色素細胞。其主要原因係 在實用性上斷定，意即利用例如酵母細胞以表現GPCR，於 可能之情況下，係於擬案中引進非哺乳動物細胞，其可能 不會（事實上，在酵母之情況中確實不會）包括已針對哺乳 動物系統所發展之受體偶合基因機制與分泌途徑-因此，在 101004 -174- 200539867 非哺乳動物細胞中所得之結果，雖然具有潛在用途，但不 像得自嗜乳動物細胞或黑色素細胞之結果一樣地較佳。在 哺乳動物細胞中，CHO、COS-7、MCB3901、293及293T細胞 係為特佳，惟所利用之特定哺乳動物細胞可在技師之特定 需求下斷定。在一些具體實施例中，可使用得自哺乳動物 之脂肪細胞或骨骼肌細胞。參閱關於黑色素細胞之下文， 包括實例10。 a. 短暫轉移感染 於第一天，293細胞之6xl06/10公分培養孤係被浮出覆蓋。 於第二天，製備兩個反應管件（各管件所遵照之比例係為每 板）：管件A係經由將4微克DNA (例如pCMV載體；pCMV載 體具有受體cDNA等）在0.5毫升不含血清DMEM (Gibco BRL)中 混合而製成；管件B係經由將24毫升帶脂胺（Gibco BRL)在0.5 毫升不含血清DMEM中混合而製成。藉由逆轉（數次），使 管件A與B互混，接著在室溫下培養30-45分鐘。此互混物係 被稱為π轉移感染混合物’f。將已覆蓋之293細胞以1XPBS洗 滌，接著添加5毫升不含血清DMEM。將1毫升轉移感染混 合物添加至細胞中，接著在37°C /5%C02下培養4小時。藉由 吸出移除轉移感染混合物，接著添加10毫升DMEM/10%牛胎 兒血清。使細胞在37°C /5% C02下培養。於48小時培養後， 採集細胞，並用於分析。 b. 安定細胞系 將大約12xl06個293細胞覆蓋於15公分組織培養板上。在 含有十百分比牛胎兒血清與一百分比丙酮酸鈉、L-麩醯胺 101004 -175- 200539867 及抗生素之DME高葡萄糖培養基中生長。在覆蓋293細胞之 後二十四小時（或達〜80%匯合），將細胞使用12微克DNA (例 如pCMV載體，具有受體cDNA)轉移感染。將12微克DNA與 60毫升帶脂胺及未具有血清之2毫升DME高葡萄糖培養基 合併。自板吸出培養基，並將細胞以未具有血清之培養基 洗滌一次。將DN A、帶脂胺及培養基混合物，伴隨著未具 有血清之10毫升培養基，添加至板。在37°C下培養四至五 小時之後，將培養基吸出，並添加含有血清之25毫升培養 基。在轉移感染之後二十四小時，再一次吸出培養基，並 添加具有血清之新培養基。在轉移感染之後四十八小時， 將培養基吸出，並添加具有血清之培養基，其含有基因素 (G418藥物），在大約12xl06之最後濃度下，將293細胞覆蓋於 15公分組織培養板上。於含有十百分比牛胎兒血清與一百 分比丙酮酸鈉、L-麩醯胺及抗生素之DME高葡萄糖培養基 中生長。在覆蓋293細胞之後二十四小時（或至〜80%匯合）， 將細胞使用12微克DNA (例如pCMV載體，具有受體cDNA) 轉移感染。使12微克DNA與60毫升帶脂胺及未具有血清之2 毫升DME高葡萄糖培養基合併。將培養基自板吸出，並將 細胞以未具有血清之培養基洗滌一次。將DN A、帶脂胺及 培養基混合物，伴隨著未具有血清之10毫升培養基，添加 至板。在37°C下培養四至五小時之後，吸出培養基，並添 加含有血清之25毫升培養基。在轉移感染之後二十四小 時，再一次吸出培養基，並添加具有血清之新培養基。在 轉移感染之後四十八小時，吸出培養基，並添加具有血清 101004 -176- 200539867 :養基'3有基因素（G418藥物），在最後濃度為微 毫升下。經轉染細胞現在係接受選擇，關於含有㈣抗 藥性基因之陽性轉染細胞。♦ W卞I田選擇發生時，係每隔四至五 天置換培養基。在選槎期門，放3二 ^释期間，使細胞生長，以產生安定匯 集庫，或***供安定無性繁殖系選擇。 實例4 供測定GPCR活化作用之檢測 • 有多種途徑可用於評估人類GPCR之活化作用。下述係為 說明例；咸信-般熟諳此藝者具有決定優先地有利於技師 需求之技術之能力。 1·細胞膜結合檢測：【35S】GTp作檢測 田G蛋白貝偶合文體係呈其活化態時，無論是由於配位 體結合或構成活化作用之結果，受體係偶合至〇蛋白質， 並刺激GDP之釋出，及〇11>對（}蛋白質之後續結合。g蛋白 質-¾:體複合物之α亞單位係充作GTPase，且慢慢地使GTp • 水解成咖，此時受體通常係已失活。經活化之受體係持 續以GDP交換GTP。可利用不可水解iGTp類似物[35s]GTp/S 以紐實[35S]GTP rS對於表現經活化受體之細胞膜之經加強 結合。使用[35S]GTPrS結合以度量活化作用之優點係為：⑷ 其係一般性地可應用於所有G蛋白質_偶合受體；⑻其係於 細胞膜表面之近端’使其較不可能附著會影響胞内階式反 應之分子。 此檢測係利用G蛋白質偶合受體刺激[35s]GTPtS結合至 表現有關聯受體之細胞臈之能力。因此，此檢測可用於直 101004 -177- 200539867 接確認方法，以篩檢候選化合物，對於内源GPCR與非内源 構成上活化之GPCR。此檢測係為一般性，且在所有G蛋白 質-偶合受體上，對於藥物發現具有應用性。 P5 S]GTP r S檢測係在20 mM HEPES，及1與約20 mM間之 MgCl2(此量可經調整，以使結果最佳化，惟20mM為較 佳）？117.4，結合緩衝劑具有約0.3與約1.21^間之[353]〇丁？作 (此量可經調整，以使結果最佳化，惟1.2為較佳）與12.5至 75微克膜蛋白質（例如，表現Gs融合蛋白質之293細胞；此 量可經調整，以達最佳化）及10 GDP (此量可以改變，以 達最佳化）中培養1小時。然後添加麥牙凝集素珠粒（25微 升；Amersham)，並將混合物於室溫下再培養30分鐘。然後， 在室溫下，使管件於1500x克下離心5分鐘，接著在閃爍計 數器中計數。 2. 腺苷基環化酶 經設計供細胞為基礎之檢測用之Flash PlateTM腺苷基環化 酶套件（新英格蘭核能（New England Nuclear);目錄編號 SMP004A)可經修改，與粗製漿膜一起使用。此閃光板之井 可含有閃爍體塗層，其亦含有辨識cAMP之專一抗體。在井 中產生之cAMP可藉由直接競爭放射性cAMP示蹤劑對cAMP 抗體之結合進行定量。下述係充作關於在表現受體之全細 胞中度量cAMP含量上變化之簡略擬案。 經轉染細胞係在短暫轉移感染後大約二十四小時採集。 小心地吸出培養基並拋棄。將10毫升PBS溫和地添加至各 細胞培養孤，接著小心吸出。將1毫升Sigma細胞解離緩衝 101004 -178- 200539867 劑與3耄升PBS添加至各板。將細胞以吸量管吸離板，並將 細胞懸洋液收集至5〇毫升圓錐形離心管中。然後，使細胞 在至>J3ZL下於MOO 下離心5分鐘。小心地使細胞丸粒再 懸序於適當體積之PBS(約3毫升/板）中。然後，將細胞使用 血球什计數’並添加另外之pBs以獲得適當數目之細胞（具 有最後體積為約50微升/井）。 CAMP標準物與偵測緩衝劑（包含1 /zCi示蹤劑[125I]cAMP (50微升）對11毫升偵測緩衝劑）係根據製造者之說明書製 備並保持。檢測緩衝液係經新製備以供篩檢，且含有5〇微 升刺激緩衝劑、3微升待測化合物（12 _最後檢測濃度）及 50微升細胞。將檢測緩衝液儲存在冰上，直到利用為止。 較佳係在例如96-井板中進行之檢測，係藉由添加5〇微升 cAMP標準物至適當井中而引發，接著添加5〇微升pBSA至井 Η-ll與H12。將50微升刺激緩衝劑添加至所有井中。使用能 夠分配3微升化合物溶液之針銷工具，將DMS〇 (或經選擇之 候選化合物）添加至適當井中，其中最後檢測濃度為12_ 待測化合物，與100微升總檢測體積。然後，將細胞添加至 井中’並在室溫下培養60分鐘。接著，添加100微升含有示 蹤劑cAMP之偵測混合物至井中。然後，將板再培養2小時， 接著在Wallac MicmBeta閃爍計數器中計數。然後，將cAMp/ 井之數值自標準cAMP曲線外推，其係被包含在各檢測板 内。

3·供Gi偶合標的GPCR用之細胞為基礎之CA]\JP TSHR為Gs偶合之GPCR，其會造成CAMP於活化作用時蓄 101004 -179- 200539867 積。TSHR將於構成上經由使胺基酸殘基623突變（意即改變 丙胺酸殘基至異白胺酸殘基）而被活化。預期Gi偶合受體會 抑制腺苷基環化酶，因此降低cAMP生產含量，其可使得 cAMP含量之評估具挑戰性。用於度量cAMP生產上之降低作 為Gi偶合受體活化作用指標之有效技術，可藉由共同轉染 作為π訊息增強子”之最佳為非内源構成上活化之TSHR (TSHR-A623I)(或内源構成上活性之Gs偶合受體）與Gi連結 標的GPCR以建立cAMP之基線含量而達成。在建立Gi偶合受 體之非内源變型時，標的GPCR之此非内源變型係接著與訊 息增強子共轉染，且可用於篩檢者即為此物質。吾人將利 用此種途徑以在使用cAMP檢測時有效地產生訊息。在^一些 具體實施例中，此途徑較佳係使用於直接確認針對Gi偶合 受體之候選化合物。應注意的是，對於Gi偶合GPCR，當使 用此途徑時，標的GPCR之逆催動劑將會增加cAMP訊息，而 催動劑將會降低cAMP訊息。 於第一天，2xl04個293細胞/井將浮出覆蓋。於第二天， 將製備兩個反應管件（對各管件所遵照之比例係為每板）： 管件A係經由將2微克經轉染至哺乳動物細胞中之各受體 之DNA，為提供總計4微克DNA (例如pCMV載體；pCMV載 體具有經突變之 THSR(TSHR-A623I) ; TSHR-A623I 與 GPCR 等） 在1.2毫升不含血清之DMEM (Irvine科學，Irvine，CA)中混合而 製成；管件B係經由將120微升帶脂胺（Gibco BRL)在1.2毫升 不含血清之DMEM中混合而製成。然後，藉由逆轉（數次） 使管件A與B互混，接著在室溫下培養30-45分鐘。此互混物 101004 -180- 200539867 係被稱為”轉移感染混合物”。經覆蓋之293細胞係以ixpbs 洗務’接著添加10毫升不含血清之DMEM。然後，將2 4毫 升轉移感染混合物添加至細胞中，接著在37°C /5% C02下培 養4小時。然後，藉由吸出移除轉移感染混合物，接著添加 25宅升DMEM/10%牛胎兒血清。然後，將細胞在37。〇 /5% c〇2 下培養。24小時培養後，接著採集細胞，並利用於分析。

Flash Plate M腺甘基環化酶套件（新英格蘭核能gsjew jgngian(j Nuclear);目錄編號SMP004A)係經設計，針對以細胞為基礎 之檢測，但可經修正，與粗製漿膜一起使用，依熟練技師 之需求而定。閃光板井係含有閃爍體塗層，其亦含有辨識 cAMP之專一抗體。在井中產生之cAMp可藉由直接競爭放射 性cAMP示蹤劑對cAMP抗體之結合進行定量。下述係充作關 於在表現受體之全細胞中度量CAMP含量上變化之簡略擬 經轉染細胞係在短暫轉移感染後大約二十四小時採集。 小心地吸出培養基並拋棄。將1〇毫升pBS溫和地添加至各 細胞培養皿，接著小心吸出。將丨毫升sigma細胞解離緩衝 劑與3笔升PBS添加至各板。將細胞以吸量管吸離板，並將 細胞懸浮液收集至50毫升圓錐形離心管中。然後，使細胞 在室溫下，於l，l〇〇rpm下離心5分鐘。小心地使細胞丸粒再 懸洋於適當體積之PBS (約3毫升/板）中。然後，將細胞使用 血球計計數’並添加另外之PBS以獲得適當數目之細胞（具 有敢後體積為約50微升/井）。 cAMP標準物與彳貞測緩衝劑（包含1 示蹤劑[η5〗] cAMp 101004 -181 - 200539867 (50微升）對11毫升偵測緩衝劑）係根據製造者之說明書製 備並保持。檢測緩衝液係經新製備以供篩檢，且含有50微 升刺激緩衝劑、3微升待測化合物（12 //M最後檢測濃度）及 50微升細胞。將檢測緩衝液儲存在冰上，直到利用為止。 此檢測可藉由添加50微升cAMP標準物至適當井中而引 發，接著添加50微升PBSA至井Η-ll與H12。將50微升刺激緩 衝劑添加至所有井中。使用能夠分配3微升化合物溶液之針 銷工具，將經選擇之化合物（例如TSH)添加至適當井中，其 中最後檢測濃度為12 /zM待測化合物，與100微升總檢測體 積。然後，將細胞添加至井中，並在室溫下培養60分鐘。 接著，添加100微升含有示蹤劑cAMP之偵測混合物至井中。 然後，將板再培養2小時，接著在Wallac MicroBeta閃爍計數 器中計數。然後，將cAMP/井之數值自標準cAMP曲線外推， 其係被包含在各檢測板内。 4.報告子為基礎之檢測 a. CRE-LUC報告子檢測（Gs'结合之受體） 使293與293T細胞浮出覆蓋於96井板上，在每井2x 104個 細胞之密度下，並根據製造者之說明書，於隔天使用帶脂 胺試劑（BRL)轉染。DNA/脂質混合物係對各6-井轉移感染， 按下述製備：將100微升DMEM中之260毫微克質粒DNA溫和 地與100微升DMEM中之2微升脂質混合（260毫微克質粒 DNA包含200毫微克8xCRE-Luc報告子質粒，50毫微克包含内 源受體或非内源受體之pCMV或單獨之pCMV，及10毫微克 GPRS 表現質粒（GPRS 在 pcDNA3 (Invitrogen)中）。8XCRE-Luc 報告 101004 -182- 200539867 子質粒係按下述製成：載體SRIF-/3-gal係經由使大白鼠生長 激素釋放抑制因子啟動子（-71/+51)在p y5gal-基本載體 (Clontech)之BglV-Hindlll位置上無性繁殖而獲得。cAMP回應構 件之八⑻份複製物係藉由PCR自腺病毒模板AdpCF126CCRE8 獲得[參閱 Suzuki 等人，Hum Gene Ther (1996) 7 ·· 1883-1893 ;其揭 示内容係據此以其全文併於本文供參考），並無性繁殖至 SRIF-分gal載體中，於Kpn-BglV位置，造成8xCRE- y3-gal報告子 載體。此8xCRE-Luc報告子質粒係經由以得自pGL3-基本載體 (Promega)之蟲螢光素酶基因，在Hindlll-BamHI位置上置換 8xCRE-/3-gal報告子載體中之分半乳糖苷酶基因而產生。於室 溫下培養30分鐘後，將DNA/脂質混合物以400微升DMEM稀 釋，並將100微升經稀釋之混合物添加至各井中。在細胞培 養物培養器中，於4小時培養後，將具有10%FCS之100微升 DMEM添加至各井中。隔天，將經轉染細胞以200微升/井之 具有10% FCS之DMEM更換。八⑻小時後，在以PBS —次洗 滌後，將井更換成100微升/井未具有酚紅之DMEM。隔天， 使用LucLiteTM報告子基因檢測套件（Packard)，按照製造者之 說明書，度量蟲螢光素酶活性，並於1450 MicroBetaTM閃爍與 發光計數器（Wallac)上讀取。 b· API報告子檢測（Gq-結合之受體） 偵測Gq刺激之方法係依Gq依賴性磷脂酶C造成在其啟 動子中含有API構件之基因之活化作用之已知性質而定。 PathdetectTMAP_l 順式報告系統（Stratagene，目錄 # 219073)可按 照上文關於CREB報告子檢測所提出之擬案加以利用，惟磷 101004 -183- 200539867 酸鈣沉澱物之成份為410毫微克pAPl-Luc、80毫微克pCMV-受體表現質粒及20毫微克CMV-SEAP。 c. SRF-LUC報告子檢測（Gq-結合之受體） 一種偵測Gq刺激之方法係依Gq依賴性磷脂酶C造成在 其啟動子中含有血清回應因子之基因之活化作用之已知性 質而定。可利用卩&^1(1616(：1：71^8处丄110報告系統（811^&§6116)以檢 測在例如COS7細胞中之Gq偶合活性。細胞係使用哺乳動物 TransfectionTM 套件（Stratagene，目錄 #200285)，根據製造者之說 明書，以此系統之質粒成份，及所指示之使内源或非内源 GPCR編碼之表現質粒轉染。簡言之，係依照製造者之說明 書，將410毫微克SRF-Luc、80毫微克pCMV-受體表現質粒及 20毫微克CMV-SEAP (經分泌之驗性填酸酶表現質粒；驗性 磷酸酶活性係在經轉染細胞之培養基中度量，以控制試樣 之間轉移感染效率之偏差）合併於磷酸鈣沉澱物中。使一半 沉澱物均等地分佈在96-井板之3井中，保持在不含血清培 養基中之細胞上’歷經24小時。最後5小時，將細胞與例如 1 //M待測化合物一起培養。然後，依照製造者之說明書， 使細胞溶解，並使用LucliteTM套件（Packard，目錄#6016911)和 ’Trilux 1450 Microbeta”液體閃爍與發光計數器（Wallac)，檢測蟲 螢光素酶活性。數據可使用GraphPadPrismTM2.0a (GraphPad軟 體公司）分析。 d·胞内IP3蓄積檢測（Gq-結合之受體） 在第1天，可將包含受體（内源或非内源）之細胞覆蓋於24 井板上，通常為lxlO5個細胞/井（惟此數目可經最佳化）。於 101004 -184- 200539867 第2天，細胞可經轉染，其方式是首先將5〇微升不含血清 DMEM/井中之0·25微克DNA與50微升不含血清DMEM/井中 之2微升帶脂胺混合。使溶液溫和地混合，並在室溫下典養 15-30分鐘。將細胞以0.5毫升PBS洗滌，並將4〇〇微升不含血 清之培養基與轉移感染培養基混合，且添加至細胞中。 後’將細胞在37 C /5%C〇2下培養3-4小時，接著移除轉移减 染培養基，並以1毫升/井之正規生長培養基置換。於第3 φ 天，將細胞以3 肌-肌醇標識。短暫地移除培養基，並將細 胞以0·5毫升PBS洗滌。然後，添加/井〇·5毫升不含肌醇/不 含血清之培養基（GIBCOBRL)，伴隨著〇·25//α之3Η-肌-肌醇/ 井，並將細胞在37°C /5%C〇2下培養16-18小時過夜。於第4天， 將細胞以0.5毫升PBS洗滌，並添加〇·45毫升檢測培養基，其 含有不含肌醇/不含血清之培養基、1〇^[巴吉林、 10mM氣化裡或〇·4毫升檢測培養基及5〇微升1〇χ凱坦斯林 (ketanserinXket)至最後濃度為10⑽。然後，將細胞在37t下 0 培養30分鐘。接著，將細胞以〇·5毫升PBS洗滌，並添加/井 2〇〇微升剛製成/冰冷終止溶液（1M KOH ; 18 mM觸酸Na ; 3·8 mM EDTA) °使溶液保持在冰上歷經5_1〇分鐘或直到細胞 溶解為止’然後藉由2〇〇微升剛製成/冰冷中和作用溶液中 和（7.5% HC1)。接著將溶胞產物轉移至15毫升Eppend〇rf管件， 並添加/管件1毫升氯仿/甲醇（1 ·· 2)。使溶液形成旋渦15秒， 並將上層相施加至Bi〇rad Α〇ι·χ8ΤΜ陰離子交換樹脂（1〇〇-2〇〇 網目）。首先，將樹脂在i : 125 w/v下，以水洗滌，並將〇·9 毫升上層相裝填至管柱。將管柱以1〇毫升5 ^肌_肌醇與1〇 101004 -185- 200539867 毫升5 mM硼酸Na/60 mM甲酸Na洗滌。肌醇參磷酸鹽係以2 毫升0.1 Μ甲酸/1 Μ甲酸銨溶離至含有10毫升閃爍藥液之閃 爍小玻瓶中。管柱係經由以10毫升αι Μ甲酸/3 Μ甲酸銨洗 滌而再生，並以ddH20沖洗兩次，且於4°C下儲存在水中。 實例5 融合蛋白質製備 a. GPCR: Gs融合構造物 GPCR-G蛋白質融合構造物之設計可按下述達成：大白鼠 G蛋白質Gsa (長形式；ItohH·等人，83/WAS 3776(1986))之兩個 5’與3f末端係經設計以包含Hindlll (5’-AAGCTT-3’）順序於其 上。在正確順序（包含側接Hindlll順序）確認之後，藉由次代 無性繁殖，使用該載體之Hindlll限制位置，使整體順序穿梭 至 pcDNA3_l(-) (Invitrogen，目錄編號 V795-20)中。Gsa 順序之正 確取向係在次代無性繁殖至pcDNA3.1(-)中之後測定。然後確 認在Hindlll順序上含有大白鼠Gs a基因之經改質pcDNA3.1(-); 此載體目前可以π —般性n Gsa蛋白質載體取得。pcDNA3.1㈠ 載體含有多種習知限制位置在Hindlll位置之上游，因此有利 地提供在Gs蛋白質之上游***内源構成上活性GPCR之編 碼順序之能力。可利用此相同途徑以產生其他” 一般性’’ G 蛋白質載體，而當然，可利用技師所習知之其他市購可得 或專利載體-重要標準是GPCR之順序應在上游，並在與G 蛋白質之架構内。 b. Gq(6胺基酸缺失)/Gi融合構造物

Gq(del)/Gi融合構造物之設計可按下述達成：Gaq-亞單位之 101004 -186 - 200539867 N-末端六⑹個胺基酸（胺基酸2至7，具有TLESIM之順序） 係被刪除，且具有順序EYNLV之C-末端五（5)個胺基酸係被 具有順序DCGLF之Goi蛋白質之相應胺基酸置換。此融合構 造物係藉由PCR，使用下列引物： 5，-gatcAAGCTTCCATGGCGTGCTGCCTGAGCGAGGAG-3， (順序識別碼：9)與 5，-gateGGArCCnAGAACAGGCCGCAGTCaTCAGGTrCAGCTGCAGGArGGTG-3, (順序識別碼：10) 與質粒63313獲得，該質粒含有老鼠Gaq_野生型變型，具有 血球凝集素標記，作為模板。在下方封端中之核甞酸係被 包含作為隔體。

TaqPlus精密DNA聚合酶（Stratagene)係被利用於放大作用， 藉由下列循環，其中步驟2至4重複35次：95°C歷經2分鐘； 95°C歷經20秒；56°C歷經20秒；72°C歷經2分鐘；及72°C歷 經7分鐘。PCR產物係被無性繁殖至pCRII-TOPO載體 (Invitrogen)中，並使用ABI大染料終止子套件（P.E. Biosystems) 定序。得自含有融合構造物順序之TOPO無性繁殖系之*** 物，係藉由2步驟無性繁殖程序，被穿梭至表現載體 pcDNA3.1(+)中，在Hindlll/BamHI位置上。亦參閱PCT申請案號 PCT/USO2/05625，於 2002 年 9 月 6 日以 W002068600 公告，其揭 示内容係據此以其全文併於本文供參考。 實例6 [35S]GTPtS 檢測 A.細胞膜製劑 101004 -187- 200539867 包含吾人感興趣之標的GPCR，且 在一些具體實施例中 供使用於確認候選化入 ϋ σ物作為例如逆催動劑、催動劑或拮 抗劑之細胞膜，較佳係按下述製成： a. 物質 細胞膜刮除緩衝劑"包含20mMHEPES與lOmMEDTA， pH7.4，、、田胞膜洗滌緩衝劑，，包含2〇mMHEpES與〇丨福

EDTA’ pH 7.4 ’結合緩衝劑，，包含2〇福HEpEs，削福腦及 10mMMgCl2，pH7.4 〇 b.程序 在整個程序中，所有物質係被保持在冰上。首先，將培 養^自細胞之匯合單層吸出，接著以10毫升冷PBS沖洗， 接著吸出。後，添加5毫升細胞膜刮除緩衝劑，以刮除細 胞；接著，將細胞萃取物轉移至5〇毫升離心管（於4<t下， 在20，_释下離心17分鐘）。然後"及出上層清液，並使丸 粒再懸浮於30毫升細胞膜洗滌緩衝劑中，接著於4艽下，在 2〇,〇〇〇φΓη下離心17分鐘。然後，吸出上層清液，並使丸粒 再懸洋於結合緩衝劑中。然後，使用Brinkmanp〇l柯〇nTM均化 (15-20秒爆裂，直到所有物質均呈懸浮為止）使其均化。 其在本文中係被稱為，，膜蛋白質”。 gl^ord蛋白皙拾诵丨 在均化之後，細胞膜之蛋白質濃度係使用Bradf〇rd蛋白質 檢測測定（蛋白質可被稀釋至約丨.5毫克/毫升，分成數液份 並冷凍（-80°C )供稍後使用；當經冷凍時，供使用之擬案係 如下述：於檢測當天，係使經冷凍之膜蛋白質在室溫下解 101004 -188· 200539867 凍，接著渦動，然後以Polytron，在約12χ下均化約 5-10秒；應注意的是，關於多重製劑，均化器應在不同製 劑均化之間經徹底清潔過）。 a·物質 結合緩衝劑（依照上述）；Bradford染料試劑；Bradf〇rd蛋白 質標準物，將按照製造者之說明書使用（Bi〇rad，目錄編號 500-0006)。

b·程序 製備一式兩份管件，一支包含細胞膜，而一支作為對照,， 空白試驗"。各含有800微升結合緩衝劑。然後，將ι〇微升 Bradford蛋白質標準物（1毫克/毫升）添加至各管件，接著將 1〇微升膜蛋白質添加至僅僅一支管件（並非空白試驗者）。 然後，將200微升Bradford染料試劑添加至各管件，接著使其 各形成旋渦。五（5)分鐘後，使管件再形成旋渦，並將其中 之物質轉移至比色杯。然後，使用CECIL3〇41分光光度計， 在波長595下讀取比色杯。 確認檢測 a·物質 GDP緩衝劑包含37.5毫升結合緩衝劑與2毫克GDp (Sigma，目錄編號G_7127)，接著為在結合緩衝劑中之一系列 稀釋，以獲得0.2_GDP(GDP於各井甲之最後濃度為w _ GDP);各井包含候選化合物，具有最後體積為㈣，包 含U)〇微升GDP緩衝劑（最後濃度ai_GDp)、在結合緩衝劑 中之50微升膜蛋白質及在結合緩衝劑中之5〇微升[35s]GTp作 101004 -189- 200539867 (0·6ηΜ)(每10毫升結合緩衝劑2·5微升[35s]GTp⑼。 b·程序 候遠化合物較佳係使用96-井板格式篩檢（此等可在_8〇。〔 下冷滚）。膜蛋白質（或具有表現載體而排除標的GPCR之細 胞膜’作為對照組）係短暫地經均化，直到呈懸浮為止。然 後，使用上文提出之Bradford蛋白質檢測，測定蛋白質濃度。 然後，使膜蛋白質（與對照組）在結合緩衝劑_稀釋至〇.25 毫克/毫升（最後檢測濃度12.5微克/井）。接著，將ι〇〇微升 GDP緩衝劑添加至Waiiac ScintistripTM(Waiiac)之各井中。接著使 用5微升針銷工具，以轉移5微升候選化合物至此種井中 (意即’ 5微升在總檢測體積2〇〇微升中，係為1: 4〇比例， 以致候選化合物之最後筛檢濃度為10 /M)。再一次，為避 免污染，於各轉移步驟後，應將針銷工具在包含水（ιχ)、 乙醇（IX)及水（2Χ)之三個儲槽中沖洗_於每次沖洗後，應將 過里液體自工具振盪，並以紙與kimwipes乾燥。然後，將5〇 微升膜蛋白質添加至各井（亦利用對照井，其包含未具有標 的GPCR之細胞膜），並在室溫下預培養孓1〇分鐘。然後，將 結合緩衝劑中之50微升[35s]GTP怍（0·6ηΜ)添加至各井中， 接著於室溫下，在振盪器上培養6〇分鐘（再一次，於此實例 中，將板以箔覆蓋）。接著，於22艺下，經由板在4〇〇〇RpM 下旋轉15分鐘，使檢測停止。然後，將板以8通道歧管吸氣， 並以板蓋密封。接著，將板於Wallac 145〇上，使用設定”Pr〇t #37"讀取（依照製造者說明書）。 101004 •190- 200539867 實例7 環AMP檢測 確認候選化合物為例如逆催動劑、催動劑或#抗劑之另 一種檢測途徑，係經由利用環化酶為基礎之檢測達成。除 了直接確認以外，可利用此項檢測途徑作為獨立途徑，以 提供得自如前文實例6中所提出之[35S]GTP rS途徑之結果 之証實。 經修正FlashPlateTM腺苷基環化酶套件（新英格蘭核能 (New England Nuclear);目錄編號SMP004A)較佳係用於直接確認 候選化合物作為對内源或非内源構成上活性GPCR之逆催 動劑與催動劑，根據下列擬案。 於轉移感染後大約三天，採集經轉染細胞。經由使懸浮 細胞在含有20mM HEPES (pH 7.4)與10mM MgCl2之缓衝劑中均 化，製備細胞膜。均化作用係在冰上，使用Brinkman PolytronTM 進行大約10秒。使所形成之勻漿於4°C下，在49,000 X克下離 心15分鐘。然後，使所形成之丸粒再懸浮於含有20mM HEPES (pH 7.4)與0_lmM EDTA之緩衝劑中，均化10秒，接著於 4°C下，在49,000 X克下離心15分鐘。然後，將所形成之丸粒 儲存於-80°C下，直到利用為止。在直接確認篩檢當天，使 細胞膜丸粒在室溫下慢慢地解凍，再懸浮於含有20mM HEPES (pH7.4)與10mMMgCl2之緩衝劑中，產生最後蛋白質濃 度為0.60毫克/毫升（將再懸浮細胞膜置於冰上，直到使用為 止）。 根據製造者之說明書，製備與保持cAMP標準物與偵測緩 101004 -191 - 200539867 衝劑（包含2 /zCi示蹤劑{[i25i]cAMP(100微升）對11毫升僧測 緩衝劑}。檢測緩衝液為新製成以供篩檢，且包含2〇mM HEPES，pH 7.4, 10mM MgCl2，20mM 磷酸肌酸（Sigma), 0.1 單位 / 毫 升肌酸磷酸激酶（Sigma)，50 //M GTP (Sigma)及 0.2 mM ATP (Sigma) ;然後，將檢測緩衝液儲存在冰上，直到利用為止。

較佳係將候選化合物添加至例如96-井板之井中（3微升/ 井；12/zM最後檢測濃度），伴隨著4〇微升膜蛋白質（3〇微克 /井）與50微升檢測緩衝液。然後，在室溫下將此互混物培 養30分鐘，伴隨著溫和振盪。 在培養之後，將1〇〇微升偵測緩衝劑添加至各井，接著其 養2-24小時。然後，將板在WallacMicr〇BetaTM板讀取器中， 使用’Trot· #31”計數（依照製造者說明書）。 作為實例而非限制，所獲得之說明性篩選檢測板（96井招 式）結果係呈現於屬^中。各條塊係表示各井中不同化合物 之結果’ ”標的GPCR"係為與GP則不相關之内源構成上活 性Gs-偶合GPCR之Gsa融合蛋白質構造物。於鏢7中所呈現 之結果’亦提供標準偏差’以各板之平均結果⑽為基礎， 而此平均加上兩個關於選擇逆催動劑作為來自初期筛檢 ”前導"之任意優先性係涉及候選化合物之選擇，其係降低 百刀比回應達至少平均板回應，減去兩個標準偏差。反之， 關於選擇催動劑作為來自初期篩檢”前導"之任意優先性係 涉及候選化合物之選擇，增加 ^加百刀比回應達至少平均板回 應’加上兩個標準偏差。以 寺擇耘序為基礎，在下列 井中之候選化合物係直接經確蜱 雉w為對該内源GPCR之推斷 101004 -192- 200539867 逆催動劑（化合物A)與催動劑（化合物B)，個別在井A2與G9 中。參閱嚴i。為清楚起見應指出的是：此等化合物已被直 接確認，而無需關於此GPCR内源配位體之任何知識。藉由 聚焦在以受體功能為基礎而非化合物結合親和力之檢測技 術，可確定能夠降低此受體之功能活性（化合物A)以及增加 受體之功能活性（化合物B)之化合物。 實例8 用於度量胞内鈣濃度之螢光計成像板讀取器（FUPR)檢測 將得自個別無性繁殖細胞系之標的受體（實驗）與pCMV (負對照組）安定地轉染細胞接種至聚-D-離胺酸預處理之 96-井板（3。(：1:〇1>〇1^]<±18〇11，#356640)，在5.5\104個細胞/井下，使 用完全培養基（DMEM，具有10% FBS，2mML-麩醯胺，ImM丙酮 酸鈉），以供隔天檢測。為製備Fluo4-AM (分子探測物， #F14202)培養緩衝劑儲備液，使1毫克Fluo4-AM溶於467微升 DMSO與467微升Pluoronic酸（分子探測物，#P3000)中，而得 ImM儲備溶液，可將其儲存在-20°C下歷經一個月。Fluo4-AM 為螢光妈指示劑染料。 候選化合物係在洗滌緩衝劑（1XHBSS/2.5 mM羧苯磺胺 (probenicid)/20mM HEPES，於 pH 7.4 下）製成。 於檢測時，係將培養基自井移除，並於細胞中裝填100微 升 4 //M Fluo4_AM/2.5 mM 羧苯磺胺（Sigma，#P8761)/ 20mM HEPES/ 完全培養基，在ρΗ7·4下。在37°C/5%C02下之培養，係允許 進行60分鐘。 1小時培養後，移除Fluo4-AM培養緩衝劑，並將細胞以100 101004 -193- 200539867 微升洗滌緩衝劑洗滌2X。於各井中留置1〇〇微升洗滌緩衝 劑。使板返回培養器，在37°C /5% C02下，歷經6〇分鐘。 FLIPR (螢光計成像板讀取器；分子裝置）係被程式化，以 在第30秒添加50微升候選化合物，並記錄藉由候選化合物 所引起之胞内鈣濃度（[Ca2+])之短暫改變，歷經另一 15〇秒。 利用FLIPR軟體，使用總螢光變化計數，以測定催動劑活 性。此儀益軟體係使螢光讀數正規化，而得在零下之相當 最初讀數。 在一些具體實施例中，包含標的受體之細胞係進一步包 含Gal5、Gal6或嵌合Gq/Gia單位。 雖然前文係提供使用安定地轉染細胞，關於催動劑活性 之FLIPR檢測，但一般熟諳此藝者將容易地能夠修改此檢 測，以特徵鑒定拮抗劑活性。該一般熟諳此藝者亦易於明 瞭的是，或者，可使用暫時地轉染之細胞。 實例9 MAP激酶檢測 可監測MAP激酶（有絲***原活化之激酶）以評估受體活 化作用。MAP激酶可藉由數種途徑偵測。一種途徑係以評 估磷醯化狀態為基礎，無論是未磷醯基化（不活性）或填醯 基化（活性）。磷醯基化蛋白質在SDS-PAGE中具有較緩慢移 動性，且因此可使用Western氏沾吸，與未經刺激之蛋白質 比較。或者，對磷醯基化蛋白質專一之抗體係可取用 (New England Biolabs)，其可用以偵測填醯基化激酶上之增加。 在任一方法中，細胞係以待測化合物刺激，然後以Laemmii 101004 -194- 200539867 缓衝劑萃取。將可溶性離份施加至SDS-PAGE凝膠，並將蛋 白質以電泳方式轉移至硝基纖維素或Immobilin。免疫反應性 譜帶係藉由標準Westem氏沾吸技術偵測。可見或化學發光 信號係被記錄於薄膜上，並可藉由光密度分析法定量。 另一種途徑係經由磷醯化作用檢測，以MAp激酶活性之 評估為基礎。細胞係以待測化合物刺激，並製備可溶性萃 取物。萃取物係在3〇它下培養1〇分鐘，使用Ρ2ρ_ατρ，一 φ 種ATP再生系統，及對MAp激酶之專一受質，譬如藉由胰島 素凋節之磷醯基化熱與酸安定蛋白質，或PHAS-I。藉由添 加HsPO4使反應終止，並使試樣轉移至冰。將一液份點加至 WhatmanP81層析紙上，其係保留磷醯基化蛋白質。將層析 紙洗滌，並在液體閃爍計數器中計數Dp。或者，將細胞萃 取物與P2P-ATP，一種ATP再生系統，及藉由鏈霉胺基酸 結合至過濾載體之生物素化髓磷脂鹼性蛋白質一起培養。 髓磷脂鹼性蛋白質係為經活化MAP激酶之受質。磷醯化反 參 應係在3〇°C下進行10分鐘。萃取物可接著經過濾器吸出， 其係保留磷醯基化髓磷脂鹼性蛋白質。將濾器洗滌，並藉 由液體閃爍計數，計數32p。 實例10 黑色素細胞技術 黑色素細胞為在低等脊椎動物中發現之皮膚細胞。其含 有色素沉著細胞器，稱為黑色素體。黑色素細胞能夠在G_ 蛋白質偶合受體（GPCR)活化作用時，沿著微管網絡再分配 此等黑色素體。此色素移動之結果係為此等細胞之顯見淡 101004 -195- 200539867 化或變暗。在黑色素細胞中，由於Gi-偶合受體活化作用所 造成之胞内cAMP含量降低，會造成黑色素體潛移至細胞中 央，而造成顏色上之急驟淡化。若cAMP含量接著被提升， 則在Gs-偶合受體活化作用之後，黑色素體係被再分散，且 細胞再一次呈現暗色。由於Gq-偶合受體活化作用所锋成之 二醯基甘油含量增加，亦可引致此再分散。此外，此技術 亦適合研究某些受體酪胺酸激酶。黑色素細胞之回應係於 受體活化作用之數分鐘内發生，並造成單純強效顏色改 變。此回應可容易地使用習用吸光率微板讀取器或適度視 頻成像系統偵測。與其他皮膚細胞不同，黑色素細胞係衍 生自神經脊，且顯示會表現發出訊息蛋白質之全部補體。 特定言之’此等細胞會表現極端地廣範圍之G-蛋白質，且 因此能夠於功能性上表現幾乎所有GPCR。 可利用黑色素細胞以確3忍針對GPCR之化合物，包括天然 配位體。此方法可以下述方式進行，引進能夠分散或聚集 其色素以回應特定刺激之色素細胞系之待測細胞，並表現 對GCPR進行編碼之外源無性繁殖系。一種刺激劑，例如褪 黑激素，係設定色素配置之最初狀態，其中若GpCR之活化 作用引致色素分散，則色素係被聚集在待測細胞内。但是， 以刺激劑刺激細胞以設定色素配置之最初狀態，其中若 GPCR之活化作用引致色素聚集，則色素係被分散。然後， 將待測細胞與化學化合物接觸，並測定細胞中之色素配置 疋否伙色素配置之最初狀態改變。色素細胞由於候選化合 物所致之分散，包括但不限於配位體，偶合至〇1>(：11將在陪 101004 -196- 200539867 替氏培養皿上呈現暗色，而色素細胞之聚集將呈現淡色。 物質與方法係遵照根據美國專利第5,462,856號與美國專 利第6,〇51，386號之揭示内容，此等專利揭示内容係據此以其 全文併於本文供參考。 /將細胞t蓋於例如96-井板上（每板一種受體）。轉移感染 後48小呀，將各板上之一半細胞以1〇nM褪黑激素處理。褪 黑激素會活化黑色素細胞中之㈣Gi•偶合受體，並造成彼 等聚集其色素。使其餘-半細胞轉移至不含血清之培養基 〇.7XL-15(Gib十-小時後，在不含血清培養基中之細胞係 保持呈色素分散狀態，而經褪黑激素處理之細胞係呈色素 聚集狀態。此時，將細胞以劑量回應之待測/候選化合物處 理。若所覆蓋之GPCR結合至待測/候選化合物，則預期黑 色素細胞會進行顏色改變，以回應該化合物。若受體㈣ 或Gq偶合受體之任—種，則趣黑激素聚集之黑色素細胞係 進行色素分散。對照上而言，若受體為Gi_偶合受體，則預 期色素分散之細胞會進行劑量依賴性色素聚集。 實例11 人類與老鼠RUP43之組織分佈 刪3被人類與老鼠脂肪細胞與骨骼肌細胞之表現，係藉 由RT-PCR質問。刪3被人類白血球子集之㈣，係藉由 TaqMan RT-PCR 質問。 a. 人類前脂肪細胞係購IBiGWhittakeT，且無論是允許保持未 分化或使其接受分化。人類經分化脂肪細胞係 101004 -197- 200539867

Zen Bio。RNA係製自此等未分化或經分化人類脂肪細胞， 並轉化成cDNA。然後進行RT-PCR，以質問RUP43之表現， 使用專一引物 5’-CTACCTGTACCTCGAAGTCTA-3’（有意義引 物；順序識別碼：11)與 5^AGTGGCGGGCGCTGCTCAT-3’（反有 意義引物；順序識別碼：12)。所使用之循環條件為94°C歷 經2分鐘，94°C歷經15秒，55°C歷經30秒，及72°C歷經1分鐘， 其中對最後三個步驟進行35次循環。發現RUP43係以内源方 式被已分化之人類脂肪細胞表現，而被人類前脂肪細胞則 達較小程度（嚴23)。 b. RUP43被人類皮下（"Sub Q")與内臟脂肪之表現，係藉由如 上文[a]中之RT-PCR質問。皮下脂肪試樣係得自十位具有 BMI範圍為19至35之個體。内臟脂肪試樣係得自八位具有 BMI範圍為19至45之個體。甘油醛-3-填酸脫氫酶（GAPDH)之 RT-PCR係用以顯示可比擬之試樣負載。已發現人類RUP43 係以内源方式表現在皮下與内臟脂肪中（嫌25)。 c. 允許老鼠3T3L1細胞保持未分化或使其接受分化。RNA係 製自未分化之3T3L1細胞，經分化之3T3L1細胞，或老鼠骨 骼肌細胞。RNA之轉化成cDNA無論是於反轉錄酶存在（π+π) 或不存在（π-π ;負對照組）下進行。然後，進行RT-PCR以質問 RUP43之表現，使用專一引物 5，-TGAGCTGTCGGCCATTCCCAT-3,（有意義引物；順序識別碼·· 13)與 S’-GATTGTCCCTCTTGGCTCTTCJ (反有意義-弓丨物；順序 101004 -198- 200539867 識別碼：14)。 所使用之循環條件為94°C歷經2分鐘，94°C歷經15秒，55 °C歷經30秒及72°C歷經1分鐘，其中對於最後三個步驟進行 35次循環。已發現RUP43係被已分化之老鼠3T3L1脂肪細胞 表現，而被未分化之3T3L1脂肪細胞則達較小程度。亦發現 RUP43係以内源方式被老鼠骨骼肌細胞表現（嚴2C)。 d. 人類骨絡肌細胞係得自Cambrex。RNA係製自此骨絡肌細 胞，並轉化成cDNA。使用按[a]中方式製自從Biowhittaker獲 得之人類脂肪細胞之cDNA，作為正對照組。RT-PCR係按[a] 中所述進行。已發現RUP43係以内源方式被骨骼肌細胞表 現，且如前文[a]所示，被脂肪細胞表現（嚴2D)。 實例12 脂肪細胞分化 a.老鼠3T3L1細胞之分化 3T3L1生長培養基 1000毫升 DMEM 1000毫升 10%BCS 100毫升 L-麵醯胺，200mM 10毫升 P/S 10毫升 3T3L1正規培養基 1000毫升 DMEM 1000毫升 10%FBS 100毫升 L-麩醯胺，200mM 10毫升 P/S 10毫升 3T3L1誘發培養基 1000毫升 101004 -199- 200539867 DMEM 1000毫升 10%FBS 100毫升 L-麵醯胺，200mM 10毫升 P/S 10毫升 胰島素（10毫克/毫升） 1毫升 EBMax(10毫克/毫升） 11.1毫升 ***（10毫克/毫升） 328微升 3T3L1只有胰島素之培養基 1000毫升 DMEM 1000毫升 10% FBS 100毫升 L-麩醯胺，200mM 10毫升 P/S 10毫升 胰島素（10毫克/毫升） 1毫升 DMEM : HYQ DEM/ 高葡萄糖，SH30081.01，500 毫升 SH30081.02， 1000毫升 BCS :小牛血清，Hyclone SH30073.03 FBS :牛胎兒血清，Hyclone SH30071.03 L-麩醯胺，200mm，100χ· Hyclone SH40003_11 青霉素-鏈霉素，100毫升，Hyclone SV30010 胰蛋白酶，HYQ，0.05% lx，SH30236.0 1100 毫升 HYQ DPBS/ 變性，lx SH30028.02, 50 毫升 將3T3L1細胞於50%匯合下接種，以致使培養物於隔天完 全匯合。於細胞已達到100%匯合後兩天，添加誘發培養基。 二至五天後，使細胞更換至只有胰島素之培養基。於誘發 後二至五天，使細胞返回正規培養基歷經兩天，完成此 3T3L1分化成脂肪細胞之過程。 b.人類前脂肪細胞之分化 使購自Cambrex之人類前脂肪細胞，於lxlO6個細胞/板下， 接種在24-井板中。兩天後，當細胞達到100%匯合時，添加 101004 -200- 200539867 購自Cambrex之誘發培養基。將細胞在誘發培養基中培養十 天，藉以完成此初生人類前脂肪細胞分化成脂肪細胞之過 程。 實例13 人類骨骼肌細胞之分化 將人類初生未分化骨骼肌細胞在購自Cambrex之SKGM-2 培養基中培養。當骨骼肌胚細胞培養物達成50-70%匯合時， 移除SKGM-2培養基，並添加融合培養基（DMEM-F12，經補 充2%馬血清）。 細胞在融合培養基中之培養係持續4-7天（其中係每隔一 天置換融合培養基）或直到在整個培養物中發現肌管為止。 發現所形成之經分化培養物包含多核（超過3個核）肌管。 若肌管欲被使用於需要長期時間在培養物中之檢測中 時，則將融合培養基移除，並以SKGM-2培養基置換。為達 最良好性能，係每隔一天置換SKGM-2培養基，以保持培養 物歷經2-3週。肌管培養物最好在分化後2週時使用。 實例14

内源RUP43偶合至GS 藉由RUP43之Gs偶合係經由將cAMP在以内源人類、老鼠 或大白鼠RUP43轉染之HEK293細胞中之胞内含量，與假轉染 HEK293細胞（lfpCMVn)作比較而進行質問。胞内cAMP含量之 測定係藉由環化酶檢測，使用Perkin Elmer閃光板套件 (SMP004B)，具有1251作為示蹤劑（NEX130)，基本上依照製造 者說明書進行。 101004 -201 - 200539867 HEK293細胞係在1·2χ107之密度下覆蓋，並允許黏附過夜。 ΗΕΚ293細胞係接著以單獨之pCMV或以含有使内源人類、老 鼠或大白鼠RUP43編碼之多核苷酸之pCMV，使用帶脂胺（每 15公分培養皿120微克）轉染。使經轉染細胞回復過夜。對 於此檢測，係採集經轉染細胞，並添加至閃光板井，在最 後細胞計數為lxlO6個細胞下。允許其黏附，然後使其接受 示蹤劑歷經兩小時。然後抽吸所有井，並將板使用微板讀 取器（Wallac 1450 Microbeta計數器）讀取。已發現RUP43-轉染 HEK293細胞之胞内含量係顯著大於假轉染細胞，顯示RUP43 証明可偵測含量之構成Gs偶合（羼$。 實例15 化合物1作為RUP43催動劑之確認 物質 得自ATCC之HEK293細胞係用於所有檢測。培養基包含90 毫升DMEM，經補充10%牛胎兒血清（Gibco, BRL)。環AMP度 量值係使用具有直接cAMP[125I]偵測系統之腺苷基環化酶 活化作用FlashPlate®檢測進行測定。 短暫轉移感染舆全細胞環化酶閃光板檢測 將HEK293細胞（5xl05個細胞/毫升）覆蓋在15公分培養皿 中。隔天，按製造者建議，將細胞使用FuGENE 6試劑（Roche 應用科學）轉染。簡言之，係將包含OptiMEM (Gibco, BRL)與 FuGENE 6試劑之轉移感染混合物混合在一起，並允許在室 溫下培養5分鐘。將轉移感染試劑逐滴添加至含有2微克内 源人類RUP43受體質粒（·經#袭）或2微克空pCMV載體（銨） 101004 -202- 200539867 之個別管件中，並使其在室溫下培養15分鐘。將DNA/轉移 感染混合物逐滴添加至各透視板中，並在保持於37°C， 95/5% 02/C02下之潮濕培養器中培養過夜。隔天，將培養基 以正常生長培養基置換，並使細胞培養過夜。 於第3天，將細胞以PBS沖洗一次，並使用非酵素細胞-解離緩衝劑（Gibco, BRL)逐出板，及再懸浮於檢測刺激緩衝 劑⑧(Perkin Elmer)中，於2X106個細胞/毫升之密度下，供cAMP 度量。將化合物1或媒劑於2X所要之最後濃度下，連續性 地在刺激緩衝劑中稀釋。將化合物1與媒劑（50微升/井）添 加至96-井FlashPlate® (Perkin Elmer)之透視井中。將經轉染或假 細胞以液份添加至各井（50微升/井），並使其在室溫下，於 板式振盪器上培養1小時。將偵測緩衝劑® (Perkin Elmer，100 微升）添加至各井，並在室溫下培養2小時，伴隨著溫和攪 拌。於2小時培養結束時，將板抽吸，並使用Wallac 1450 Microbeta計數器測定cAMP含量。 已發現化合物1，以劑量依存方式，導致增加胞内cAMP， 特別是在以内源人類RUP43轉染之HEK293細胞中，而未在假 轉染細胞中，確認化合物1係為RUP43之催動劑（琢4)。 實例16 化合物2作為RUP43催動劑之確認 使用黑色素細胞技術（前文實例10)，已發現化合物2係為 内源人類RUP43之催動劑（琢5)。簡言之，黑色素細胞係使 用胰蛋白酶（0.7X)採集自細胞匯合燒瓶（T-185平方公分燒 瓶），並藉由電擊穿孔轉染。使内源人類RUP43編碼之多核 101004 -203 - 200539867 苷酸（30微克）係用於黑色素細胞之轉移感染。於電擊穿孔 後，將細胞預覆蓋在燒瓶中大約3-4小時，以除去未存活細 胞與碎屑。於完成時，使燒瓶接著胰蛋白酶化，並以一式 三份覆蓋於384井聚-D-離胺酸塗覆之板上，以供檢測。轉移 感染後四十八小時，將檢測板在分光光度計中讀取（吸光率 T〇)。然後，使細胞與連續性地稀釋之化合物# 2 (100uM-51.2pM，5-倍稀釋液，0.5% DMSO最後）一起培養一小時，並再 一次讀取（吸光率T6〇)。分析三份複製之吸光率數據，且當 與正對照井（200)及負對照井（100)比較時，以百分比對照回 應描繪。曲線高度為對照組之大約92%，具有EC50=0.212uM。 實例17 活體外葡萄糖吸收檢測 活體外葡萄糖吸收檢測係按此處所述進行。 緩衝劑舆試劑： 飢餓培養基：DMEM/高葡萄糖，具有（X5%BSA。 KRPH緩衝劑：5mMNaHP04，pH7.4(每次使得KRPH緩衝劑為 剛製成）

20mM Hepes, pH 7.4 ImM MgS04 ImM CaCl2 136mM NaCl 4.7mM KC1 1%BSA 2-脫氧葡萄糖（DOG):儲備液100 mM : 16.4毫克/毫升在水中 (於4C下儲存1-2週）。對各井，添加1微升含有1 /zCi[3H]-2-DOG 與1微升冷儲備液2-DOG及2毫升KRPH。 101004 -204- 200539867 細胞鬆弛素B (CytoB): 在-20°C下。 儲備液（10mM，在95%乙醇中）：保持 使用最後10 下之CytoB，丨v kb此#令丨》^ /廿人 AΦ® & 阻斷載劑所媒介之吸收。亦 、口 、 /辰度，以終止反應。終止緩衝劑為PBS力σ 上 10 //Μ CytoB (，，PBS”）。 及 w W 刀口 l%Triton-X:此係為促溶作用緩衝劑。 將細胞覆蓋在24-井板中。 程序： 1· 使細胞仇餓至少2小時。 2·以KRPH緩衝劑洗滌細胞2次，並添加2毫升至 中。 3·以胰島素及/或以待測化合物或以媒劑（對照組）處理細 胞20分鐘。 4. 20刀鐘後，自井吸出緩衝劑，且立即添加1毫升 緩衝劑加上2-DOG。對CytoB處理之細胞，於吸收檢測之 前5分鐘，添加CytoB。 5· 4分鐘後，自井吸出緩衝劑，並添加3毫升冷PBS。於完 成檢測後，將各井中之細胞以冷PBS洗滌2次。完全吸 出終止PBS，然後添加7〇〇微升1% Triton X。於η *立養 器中放置30分鐘。 ° 6·計數全部溶胞產物中之CPM。計算CPM/井。 自以胰島素及/或以待測化合物處理之各細胞及以媒劑 處理之細胞（對照組）所獲得之數值中減去Cyt〇B值。 實例18 化合物2在老鼠3T3L1脂肪細胞中刺激葡萄糖吸收 將經分化老鼠3T3L1脂肪細胞以50 化合物2處理，歷經 不同時間，然後根據實例17測定葡萄糖吸收。自蘑6得以顯 見’化合物2會在3T3L1脂肪細胞中刺激葡萄糠吸收。此等 結果顯示RUP43催動劑為在胰島素未能控制之高血糖中調 101004 -205 - 200539867 卽匍苟糖含量之吸引人佐；登$ . 士 …里々及W人候遠者。經刺激葡萄糖吸收之快速 時間過程，指出RUP43催動劑可屮曰么π y ❻、曲 味初d j比目刖可採用以降低血糖濃 度之藥物提供更快速治療效果。 實例19 化合物2在老鼠3131^脂肪細胞中加強胰島素刺激之葡萄糖 吸收 將經分化老鼠3T3L1脂肪細胞使用（”化合物2，，）或未使用 φ (對知、組’’）化合物2在不含血清之培養基中處理3小時。然 後’將3T3L1細胞以新的KRPH緩衝劑洗滌兩次，並以不同 濃度之胰島素處理20分鐘。在以胰島素處理後，根據實例 17測定葡萄糖吸收。自鏢7得以顯見化合物2會在3T3L1脂肪 細胞中加強胰島素刺激之葡萄糖吸收。此等結果顯示RUp43 催動劑可增加胰島素功效，藉以降低為達成最高葡萄糖吸 收所需要之胰島素濃度。 實例20 化合物2在人類初生人類脂肪細胞中刺激葡萄糖吸收 人類前脂肪細胞（Cambrex)係經分化成脂肪細胞。經分化 之初生人類脂肪細胞係在不含血清之培養基中使用或未使 用50 //M化合物處理23小時。然後，將人類脂肪細胞以新的 KRPH緩衝劑洗滌兩次，並使用或未使用100 nM胰島素處理 20分鐘。在使用或未使用胰島素處理後，根據實例17測定 葡萄糖吸收。自厲$得以顯見化合物2會在初生人類脂肪細 胞中刺激葡萄糖吸收。自琢5亦得以顯見化合物2會在初生 人類脂肪細胞中加強胰島素刺激之葡萄糖吸收。顯著地， 101004 -206- 200539867 如同關於老鼠3T3L1細胞所發現者，RUP43催動劑可在初生 人類脂肪細胞中，於胰島素不存在下，刺激葡萄糖吸收， 且RUP43-刺激之葡萄糖吸收之程度係相當於胰島素刺激之 葡萄糖吸收之程度。 實例21 化合物2在大白鼠L6肌胚細胞中刺激葡萄糖吸收 大白鼠骨骼肌L6肌胚細胞係得自ATCC，並於24-井板中生 長至匯合。 a. 將匯合L6細胞使用或未使用不同濃度之化合物2在不含 血清之培養基中處理3小時。然後，將L6細胞以KRPH緩衝 劑洗滌兩次。將已經以化合物2處理之L6細胞與KRPH緩衝 劑一起培養20分鐘；將未以化合物2處理之L6細胞，以l〇nM 或ΙΟΟηΜ胰島素處理20分鐘。在使用或未使用胰島素處理 後，根據實例17測定葡萄糖吸收。自厲似得以顯見化合物 2會在大白鼠L6肌胚細胞中刺激葡萄糖吸收。RXJP43催動劑 在大白鼠L6肌胚細胞中係比胰島素刺激較大葡萄糖吸收。 因骨路肌細胞係負責活體内葡萄糖處置之80%，故所獲得 之結果顯示RUP43催動劑係為吸引人之候選者，提供比胰島 素更良好之活體内葡萄糖處置。 b. 將匯合L6肌胚細胞以50 /zM化合物2處理，歷經不同時 間。於各治療期間結束時，根據實例17測定葡萄糖吸收。 此等結果顯示RUP43催動劑可於20分鐘内在骨骼肌細胞中 101004 -207- 200539867 刺，葡萄糖吸收’此時間架構係類似胰島素之情況（琢站）。 此等結果顯示鹏3催動劑係為吸引人之候選者，以在相當 於胰島素之短期時間内調節活體内葡萄糖含量。 實例22 化口物2在大白鼠£6肌胚細胞中加強胰島素刺激之葡萄糖 吸收 將匯合大白鼠L6肌胚細胞在不含血清之培養基中使用 _ 或未使用50 —化合物處理23小時。然後，將L6細胞以新的 KRPH緩衝劑洗滌兩次。接著，將L6細胞使用或未使用1⑽ 胰島素處理20分鐘。在使用或未使用胰島素處理後，根據 實例17測定葡萄糖吸收。自嚴μ得以顯見，類似關於脂肪 細胞所發現者’化合物2會在大白鼠L6肌胚細胞中加強胰 島素刺激之葡萄糖吸收。此等結果進一步顯示RUp43催動劑 可增加胰島素功效，藉以降低為達成最高葡萄糖吸收所需 要之胰島素濃度。因此，對於患有胰島素過多所造成關於 癱 騰島素抗藥性問題之個體，RUP43係代表吸引人之治療選 擇。 實例23 化合物2在初生人類骨骼肌細胞中刺激葡萄糖吸收 使得自Cambrex之初生人類骨骼肌細胞生長至50%匯合， 然後在培養時以誘發培養基分化5至7天。然後，將經分化 之初生人類骨骼肌細胞轉移至生長培養基，歷經7至10天。 a. 將經分化之人類骨骼肌細胞使用或未使用不同濃度之化 101004 -208 · 200539867 合物2，在不含血清之培養基中處理3小時。在使用或未使 用化合物2處理後’將細胞以新的緩衝劑洗務兩次。 然後，將已經以化合物2處理之細胞以KRPH緩衝劑培養2〇 分鐘；將未以化合物2處理之細胞以ι〇ηΜ或1〇〇nM胰島素培 養20分鐘。在使用或未使用胰島素處理後，根據實例17測 疋葡萄糖吸收。自思得以顯見RUP43催動劑可在人類骨 赂肌細胞中’於胰島素不存在下調節葡萄糖吸收，且比胰 島素更有效。所獲得之結果顯示RUP43催動劑在人類骨骼肌 細胞中’有效刺激葡萄糖吸收，於其中進行8〇%葡萄糖處 置。所獲得之結果顯示RUP43催動劑係為吸引人之候選者， 在對胰島素作用反拗之高血糖中控制葡萄糖含量。 b. 將經分化之人類骨骼肌細胞以50 //Μ化合物2處理，歷經 不同日守期。於各治療期間結束時，根據實例17測定葡萄糖 吸收。所獲得之結果係呈現於嚴"5中。在人類骨骼肌細胞 中，關於RUP43催動劑所發現之快速刺激葡萄糖吸收，顯示 RUP43催動劑係為吸引人之候選者，直接且在短期時間内調 節活體内葡萄糖含量。 實例24 口服生物利用率 用於直接評估口服生物利用率之物理化學分析途徑，係 為一般熟諳此項技藝者所習知，且可使用[參閱，例如但不 限於：\¥〇哗？(：等人，〇31^(^哪〇〇11^1^(2002)20:137_52,與

Buchan Ρ 等人，Headache (2002)補充 2 ·· S54-62 ;其中每一件之揭 101004 -209- 200539867 示内容係據此以其全文併於本文供參考]。藉由進一步說明 而非限制，該替代分析途徑可包含液相層析法-協力質量光 譜法[Chavez-Eng CM 等人，J chromatogrB Analyt Technol Biomed Life Sci (2002) 767 : 117-29 ; Jetter A 等人，Clin Pharmacol Ther (2002) 71 : 21-9 ; Zimmerman JJ 等人，JClinPharmacol (1999) 39 : 1155-61 ;及 Barrish A 等人，Rapid Commun Mass Spectrom (1996) 10 : 1033-7 ;其中 每一件之揭示内容係據此以其全文併於本文供參考]。最 近，陽電子發射局部X射線檢法（PET)已被成功地用以獲得 藥物分佈之直接度量，包括在哺乳動物身體中，於藥物之 口服投藥後之口服生物利用率[Gulyas等人，Eur J Nucl Med Mol Imaging (2002) 29 : 1031-8 ;其揭示内容係據此以其全文併於本 文供參考]。 或者，藉由說明而非限制，按例如經過實例26之老鼠模 式所發展之活體内數據為基礎。調節物係藉由口腔灌食法， 在劑量範圍為0.1毫克/公斤至100毫克/公斤下投藥。此調節 物之作用係經証實為劑量依賴性，且可比擬腹膜腔内投藥 後之作用，其中作用係為金糖濃度之降低（實例26)。經過 口服投藥達成有利作用之半最高降低所需要之調節物劑 量，係與經過腹膜腔内投藥達成有利作用之半最高降低所 需要之調節物劑量比較。以下述作為說明，若該口服劑量 為該腹膜腔内劑量之兩倍，則調節物之口服生物利用率係 被採取為50%。更一般性而言，若該口服劑量為0毫克/公 斤，而該腹膜腔内劑量為P毫克/公斤，則調節物之口服生 物利用率作為百分比，係被採取為[(p/0)x 1〇〇]。 101004 -210- 200539867 實例25 血液腦部障壁模式 本發明化合物越過血液-腦部障壁之能力，可使用腦部衍 生之細胞測定。藉由說明而非限制，一種所設想之方法係 利用Dehouck等人之血液/腦部障壁模式[JNeurochem(1990) 54 : 1798-801 ;據此以其全文併於本文供參考]，其係使用腦 部微血管内皮細胞與星形細胞之共培養物。 使牛微血管内皮（BBCE)細胞單離並經特徵鑒定，按藉由 Meresse 等人戶斤述[JNeurochem (1989) 53 : 1363-1371 ;據此以其全 文併於本文供參考]。簡言之，在從牛腦部之一個半球藉由 機械均化而單離之後，將微血管接種於塗有藉由牛角膜内 皮細胞分泌之胞外間質之培養皿上。於接種五天後，第一 份内皮細胞係自微血管潛移出，並開始形成微菌落。當菌 落足夠大時，使五個最大島狀物胰蛋白酶化，並接種至35-毫米-直徑明滕-塗覆培養孤（每培養皿一份無性繁殖系），於 Dulbecco氏變性Eagle培養基(DMEM)存在下，經補充15%小牛 血清（Seromed)、3mM麩醯胺、50微克/毫升間他霉素 (gentamicin)、2.5微克/毫升兩性霉素B (霉吉宗（fUngizone))及牛 成纖維細胞生長因子（1毫微克/毫升，每隔一天添加）。將 得自一個35-毫米-直徑培養孤之内皮細胞於匯合時採集，並 接種於60-毫米-直徑明膠-塗覆培養皿上。6-8天後，使融合 細胞於分流比1 : 20下繼代培養。將第三繼代之細胞（〜100 個培養m )儲存於液態氮中。 星形細胞之初生培養物係製自新生大白鼠大腦皮質。在 101004 -211 - 200539867 腦膜已被清除後，強迫腦部組織溫和地經過尼龍筛網，如 由 Booher 與 Sensenbrenner 所述[Neurobiology (1972) 2 : 97_ 105 ;據此 以其全文併於本文供參考]。將補充10%牛胎兒血清 (Seremed)、2mM麩醯胺及50微克/毫升間他霉素之DMEM使 用於大腦組織之解離及星形細胞之發育。 將培養板***物（Millicell-CM ;孔隙大小〇·4 ;直徑3〇毫 米；Millipore)於兩個側面上塗覆藉由Bomstein方法之修正 _ [Lab Invest (1958) 7 · 134-139 ;據此以其全文併於本文供參考] 所製成之大白鼠尾膠原。 將星形細胞在2_5 X 1〇5個細胞/毫升之濃度下，使用倒置淚 器，覆蓋於底侧上。8天後，將濾器正確地定位，並更換培 養基一週兩次。於接種後三週，星形細胞之培養物變得被 女疋化。然後，將在繼代3下冷束之BBCE細胞再培養於6〇_ 毫米-直徑明膠-塗覆培養皿中。使融合細胞胰蛋白酶化，並 在4xl05個細胞之濃度下覆蓋於濾器上側。用於共培養之培 Φ 養基係為DMEM，經補充丨5%小牛血清、2 mM麩醯胺、50 微克/毫升間他霉素及每隔一天添加之丨毫微克/毫升牛成 纖維細胞生長因子。在此等條件下，BBCE細胞係在8天内 形成匯合單層。 將培養板置入六井板中，其中2毫升緩衝劑被添加至上 方室，而2毫升被添加至含有***物之板。將六井板放置在 37 C下之振盪水浴中。將本發明化合物添加至上方室中， 並自下方室，於不同時間點移除1〇〇微升。在某些具體實施 例中，待測化合物係經放射性標識。在某些具體實施例中， 101004 -212- 200539867 放射性標識係為3H或14C。在一些具體實施例中，最後時 間點為約20分鐘，約30分鐘，約40分鐘，約50分鐘，約60 刀鐘，約70分鐘，約go分鐘或約9〇分鐘。於不同時間點， 存在於下方室中之總待測化合物百分比係經測定。使用白 胺酸作為滲透性正對照組。使用菊糖作為滲透性負對照組。 在某些具體實施例中，於最後時間點，在下方室中測定 出至少約10%，至少約2〇%，至少約3〇%，至少約4〇%，至 少約50%，至少約60%，至少約7〇%，至少約8〇%或至少約 之本發明化合物’係為本發明化合物能夠越過血液-腦部障 壁之指標。 實例26 RUP43催動劑在大白鼠中對於葡萄糖等穩性之活體内作用 A·在大白鼠中之口服葡萄糖容許度試驗（〇GTT) 使10週大之雄性Zucker糖尿病脂肪（ZDF)大白鼠（查理士 河（CharlesRiver))斷食18小時，且隨機地分組（n=11)以接受各 種劑量下之RUP43催動劑，或使用已知會增加胰島素敏感性 之對照若西葛塔宗（r〇siglitazone)(RSG，10毫克/公斤）。RUP43 催動劑係以腹膜腔内方式傳輸。RSG係以腹膜腔内方式傳 輪。RUP43催動劑之較佳劑量為〇 M〇〇毫克/公斤。其他較 佳劑量係選自包括：〇·1毫克/公斤，〇·3毫克/公斤，1〇毫克 /公斤，3.0毫克/公斤，1〇毫克/公斤，3〇毫克/公斤及1〇〇毫 克/公斤。安慰劑組係投予媒劑。 於待測化合物與對照RSG投藥後三十分鐘，將大白鼠以 經口方式投予2克/公斤劑量下之右旋糖。血糖含量係在不 101004 -213- 200539867 同'間點，使用葡萄糖计Elite XL (Bayer)測定。將右旋糖投 藥時間採用為，，0分鐘”，則舉例之時間點為_3〇分鐘，〇分鐘， 3〇分鐘，60分鐘，90分鐘及120分鐘。平均葡萄糖濃度係自 各治療組之十一隻動物平均。此等結果可証實Rup43催動劑 會以劑量依存方式，於大白鼠中，在以葡萄糖激發後降低 血糖。 或者，如此處所述之口服葡萄糖容許度試驗，係在大白 鼠中，緊接於七次每曰注射RUp43催動劑、RSG或媒劑之後 進行。 明確地意欲涵蓋在内的是’此處所述之口服葡萄糖容許 度試驗亦可在不同動物中進例如在t鼠或兔子中。 B.ZDF大白鼠對RUP43催動劑之急性回應 將ίο週大之雄性Zucker糖尿病脂肪（ZDF)大白鼠（查理士 河（Charles River))奴機地分組（n=6)以接受媒劑（腹膜腔内方 ^ ) ^ RUP43 (rosiglitazone) (RSG 1〇毛克/公斤，腹膜腔内方式）。RUP43催動劑之較佳 d里為0·1_100零克/公斤。其他較佳劑量係選自包括·· 〇·ι毫 克/ a斤0·3笔克/公斤，1.0毫克/公斤，3 〇毫克/公斤，1〇

毫克/公斤’ 30毫克/公斤及1〇〇毫克/公斤。在化合物投藥 ，、，移除食物，並在不料間下測定血糖含量。葡萄糖含 里測定之舉例日寸間為〇小時，i小時，2小時，3小時及4小 ^ 爰疋每日，歷經達到一週。於各時點之血糖降低係 以原先葡萄糖含量之百分比表示，自各組之六隻動物平均。 此等動物具有血糖含量（健食狀態）為300-400毫克/公合，顯 101004 -214- 200539867 著地局於非糖尿病野生型動物。與媒劑對照物比較，以 RUP43催動劑或RSG處理可証實顯著地降低葡萄糖含量。此^ 等數據可Μ實RUP43催動劑具有改善糖尿病動物中之葡萄 糖等穩性之功效。 或者，將大白鼠每曰以RUP43催動劑、RSG或媒劑注射歷 經七天’然後緊接著每日測定血糖含量，歷經七天。 明確地意欲涵蓋在内的是，此處所述之急性回應試驗亦 可在不同動物中進行，例如在老鼠或兔子中。 實例27 本發明化合物之合成 免例27A : 2-{1-[2-(2-氣苯基)_乙酿基卜六氩峨咬_4_基}-，塞嗤_4-羧酸甲基（2-曱基-4,5,6,7-四氩_2H-峭唑-3-基)-醯胺 2-六氫吡啶-4-基-嘍唑冬羧酸乙酯二氫溴化物鹽 將4-(胺基碳硫基）四氫峨ϋ定-i(2H)-竣酸第三-丁酯（2.0克，8.2 毫莫耳）與溴丙酮酸乙酯（1.6克，8_2毫莫耳）在30毫升EtOH 中之溶液於80 C下擾拌4小時。然後，使混合物冷卻至室溫， 接著添加48% HBr (1.0毫升，14毫莫耳）。將反應混合物再攪 拌1小時，然後濃縮成油性固體。以***研製，獲得3.0克 (91%)黃褐色固體：iHNMRGOOMHADMSOA) (5 9.02(brs，lH)， 8.77(brs，lH)，8.46(s，lH)，7.01(brs，lH)，4.29(q，J = 7.1Hz，2H)，3.44-3.33 (m，3H)，3·02 (q，J = 11.7 Hz，2H)，2.19 (d，J = 13.2 Hz，2H)，1.97-1.88 (m，2H)，1.29 (t，J = 7.0 Hz，3H).對 q 6N2 02 S+H 之 MS 計算值·· 241，發現值：241. 2-{l-[2-(2-氯苯基)-乙酿基]-六氣峨。定-4-基塞哇-4-叛酸乙酯 101004 -215- 200539867 將2-六氫吡啶-4-基-嘧唑-4-羧酸乙酯二氫溴化物鹽（ΐ·〇克， 3.2毫莫耳）、2-氯苯基醋酸（0.55克，3.2毫莫耳）、六氟填酸 〇_(7_氮苯并***小基）-N，N，N’，Nf-四甲基錁（1.4克，3.5毫莫耳） 及二異丙基乙胺（3.0毫升，17毫莫耳）在30毫升CH2C12中之 溶液於40°C下授拌8小時。然後，將粗製混合物以30毫升 CH2C12稀釋，並以1M檸檬酸（3X50毫升）、飽和NaHC03水溶 液（1X30毫升）及飽和NaCl水溶液（1X30毫升）洗滌。將所形 成之有機層以MgS04脫水乾燥，過濾及濃縮成褐色油。於矽 膠上，以EtOAc:己烷（3: 1)純化，獲得0.94克（75%)淡褐色油： 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.08 (s, 1Η), 7.39 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.32 (dd，J = 7.2, 2·0 Hz，1H)，7_25-7.19 (m，2H)，4.76 (appar d，1H)，4.42 (q， J = 7.2 Hz，2H)，3.99-3.95 (m，1H)，3.88 (d，AB 圖樣，JAB= 16.0 Hz，1H)， 3.83(d，AB 圖樣，\3=16.0取111)，3.34仇】=11.7,3_71^，111)，3.21-3.14 (m，1H)，2.83-2.76 (m5 1H)，2.20-2.16 (m，2H)，1.74 (qd，J= 12.3, 4.1 Hz，lH)，1.63(qd，J=12.3,4.0Hz，lH)，1.40(t，J = 7.2Hz，3H)· 對<^191121(：1]^2038+11 之MS計算值：393,發現值·· 393. 2-{l-[2-(2-氣苯基)-乙醯基]-六氫pr比咬_4_基卜p塞嗤斗緩酸 將2-{1-[2-(2_氣苯基）-乙醯基]_六氫峨n定冬基}-p塞嗤-4-叛酸 乙酯（0.94克，2.4毫莫耳）在20毫升MeOH中之溶液，以1 Μ NaOH (20毫升，20毫莫耳）稀釋，並使其在6(rC下攪拌4小時。 然後，使粗製混合物濃縮，以移除MeOH溶劑。然後，將此 鹼性水溶液以CH2C12洗滌（2 X 25毫升），並以5 M HC1酸化至 ρΗ = 1。將所形成之酸性水溶液以ch2C12萃取（3X25毫升）。 將有機層合併，以MgS04脫水乾燥，過濾及濃縮，而得0.51 101004 -216- 200539867 克（58%)白色泡沫狀固體·· 1HNMR(400MHz，DMSO-d6)占 12.96 (br s，1H)，8.36 (s，1H)，7·45-7·40 (m，1H)，7.33-7.25 (m，3H)，4.43 (d，J = 13.2 Hz，1H)，4.06 (d，J = 13.6 Hz，1H)，3.87 (d，AB 圖樣，JAB= 16.0 Hz， 1H)，3·82 (d，AB 圖樣，JAB= 16.0 Hz，1H)，3.38-3.31 (m，1H)，3.25 (appart， J = 11·8 Hz，1H)，2.79 (appart，J = 11.6 Hz，1H)，2.08 (t，J = 10·6 Hz，2H)， I. 67 (qd，J = 12.1，3.7 Hz，1H)，1.53 (qd，J= 12.2, 4.0 Hz，1H). 對 C17H17C1N203S+H 之 MS計算值：365,發現值：365. 氣苯基)-乙酿基]-六氮p比唆-4-基塞嗤-4-魏酸甲基 -(2-甲基-4,5,6,7-四鼠-2Η-Θΐ唾-3-基)-酿胺二鹽酸鹽 將N，l-二甲基-4,5,6,7-四氫-1Η-啕唑·3_胺（23毫克，0.14毫莫 耳）、六氟磷酸〇_(7_氮苯并***-1-基）-Ν，Ν，Ν’，Ν’-四甲基錁（75 毫克，0.20毫莫耳）及2-{1-[2-(2-氣苯基）-乙醯基]-六氫吡啶-4-基}-嘍唑斗羧酸（50毫克，0.14毫莫耳）在10毫升CH2C12中之 溶液於40°C下攪拌8小時。然後，將粗製混合物以20毫升 CH2C12稀釋，並以1M檸檬酸（3X30毫升）、飽和NaHC03水溶 液（1X30毫升）及飽和NaCl水溶液（1X30毫升）洗滌。將所形 成之有機層以MgS04脫水乾燥，過濾及濃縮成黃色油。藉由 梯度HPLC(乙腈-水，具有〇.l%TFA)純化，並轉化成二鹽酸 鹽，獲得 56 毫克（70%)白色固體：iHNMRGOOMHz，CD3OD) ά 8.28 (d，J = 8·8 Hz，1H)，7.43-7.41 (m，1H)，7.30-7.26 (m，3H)，4·50 (t，J = II. 8 Hz，1H)，4.09-4.03 (m，1H)，3.98-3.91 (m，2H)，3.83 (d，J = 12.8 Hz， 3H)5 3.37 (s5 3H), 3.24-3.20 (m51H)5 2.89-2.82 (m5 1H), 2.83-2.66 (m? 2H), 2.47-2.41 (m，1H)，2.03-1.88 (m，4H)，1.72-1.60 (m，3H)，1.46-1.26 (m，3H). 對 C26H30ClN5O2S+H 之 MS 計算值：512,發現值：512. 101004 -217- 200539867 實例 27B: 2_(2_氣苯基)-l_{4_[4_(3,4-二氩 _2H-峻琳 _1_幾基)_〃塞嗤-2- 基】-六氮〃比咬-1-基乙網 藉由如f命/2A4之相同一般程序，2-(2-氣苯基）-1-{4·[4-(3,4-二氫·2Η-^淋-1-幾基X ϋ坐-2-基]-六氫p比π定-1-基卜乙酮係得自 1，2,3,4-四氫喹啉，為黃色固體。1HNMR(400MHz，CD3OD) (5 7.78 (s，1H)，7.42-7.40 (m，1H)，7.30-7-24 (m5 3H)，7· 18 (d，J = 7·6 Hz，1H)， 7.03 (t，J = 7.4 Hz，1H)，6.91 (t，J = 7.6 Hz，1H)，6.72 (br s，1H)，4.28 (d，J = 12.8 Hz，1H)，3.94-3.81 (m，5H)，3.30-3.20 (m，2H)，2.98-2.91 (m，1H)，2.83 (t，J = 6.4 Hz，2H)，2.04 (五重峰，J = 6.6 Hz，2H)，1.99-1.93 (br m，2H)， 1-60-1.51 (m，2H)·對 C26H26C1N302S+H 之 MS 計算值：480,發現 值：480. 實例27C : 2_{1·[2-(2-氟苯基)_乙醯基】六氩吡啶_4_基}_,塞唑-4-羧酸甲基-(2-甲基_4,5,6,7_四氩_2H_喵唑_3_基）-醯胺 藉由如jf分/2Λ4之相同一般程序，2-{1-[2-(2_氟苯基）-乙醯 基]-六氫吡啶-4-基卜噻唑-4-羧酸甲基_(2·甲基-4,5,6,7-四氫_2H-吲唑-3-基）-醯胺係得自2-{l-[2-(2-氟苯基）-乙醯基]-六氫吡啶-4-基}-嘍唑-4-羧酸，為白色固體。1 H NMR (400 MHz，CDC13) δ 7.71 (d，J = 10.4 Ηζ，1Η)，7.30 (t，J = 7·6 Ηζ，1Η)，7·26-7·22 (m，1Η)，7·11 (t，J = 7.4 Hz? 1H)5 7.05 (t? J = 9.0 Hz, 1H), 4.47 (appart, J = 13.6 Hz, 1H)5 3.90- 3.79 (m? 1H)5 3.74 (s? 2H)5 3.63 (d5 J = 4.4Hz5 3H)5 3.32 (s3 3H), 3.17-3.11 (m，1H)，3.04-2.95 (m，1H)，2·91_2·79 (m，1H)，2.61-2.43 (m，2H)，2.27 (dt， J= 15.3, 5·7 Hz，1H)，1.99-1.88 (m，3H)，1·79-1_72 (m，1H)，1.64-1.38 (m， 5H)·對 C26H3〇FN502S+H 之 MS計算值：496,發現值：496. 【圖式簡單說明】 101004 -218- 200539867 圖1 ·作為實例而非限制，圖！係描緣得自候選化合物針對 ”標的受體"之初期篩檢之結果，該受體係為與驅3不相 關之内源構成上活性之Gs_偶合GPCR之Gs α融合蛋白質構 造物。關於"化合物Α"之結果係提供於井Μ中。關於"化合 物Β之結果係提供於井G9中（參閱實例7)。

圓2 ·藉由脂肪細胞與骨骼肌細胞之Rup4 3表現之RT_pcR 分析。人類與老鼠脂肪細胞係表現Rup43。人類與老鼠骨骼 肌細胞係表現RUP43 (參閱實例11)。 圖3·内源RUP43偶合至Gs (參閱實例14)。 圖4·確認化合物1作為RUP43之催動劑（參閱實例15)。 圖5·確認化合物2作為RUP43之催動劑（參閱實例16)。 圓6·化合物2在老鼠3T3L1脂肪細胞中藉由化合物2刺激 葡萄糖吸收（參閱實例18)。 圖7·化合物2在老鼠3T3L1脂肪細胞中加強胰島素刺激之 葡萄糖吸收（參閱實例19)。 圖8·化合物2在初生人類脂肪細胞中刺激葡萄糖吸收（參 閱實例20)。 圖9·化合物2在大白鼠L6肌胚細胞中刺激葡萄糖吸收（參 閱實例21)。 圓10.化合物2在大白鼠L6肌胚細胞中加強騰島素刺激之 葡萄糖吸收（參閱實例22)。 圓11.化合物2在初生人類骨骼肌細胞中刺激葡萄糖吸收 (參閱實例23)。 101004 -219- 200539867 序列表 <110> Arena醫藥公司 Qiu, Jun Webb, Robert R.

Unett, David J.

Gatlin, Joel Connolly, Daniel T. <120>用於治療高血糖症及相關病症之人類G蛋白偶合受體與其調節物 <130> 86.W01 <140〉 094111561 <141> 2005-04-12

<150〉60/561,954 <151> 2004-04-13 <160〉 14 <170〉？&16]11:1113.2版 <210〉 1 <211〉993 <212〉DNA <213>人類 <400〉 1 atgacgccca acagcactgg cgaggtgccc agccccattc ccaagggggc tttggggctc 60 tccctggccc tggcaagcct catcatcacc gcgaacctgc tcctagccct gggcatcgcc 120

tgggaccgcc gcctgcgcag cccacctgct ggctgcttct tcctgagcct actgctggct 180 gggctgctca cgggtctggc attgcccaca ttgccagggc tgtggaacca gagtcgccgg 240 ggttactggt cctgcctcct cgtctacttg gctcccaact tctccttcct ctccctgctt 300 gccaacctct tgctggtgca cggggagcgc tacatggcag tcctgaggcc actccagccc 360 cctgggagca ttcggctggc cctgctcctc acctgggctg gtcccctgct ctttgccagt 420 ctgcccgctc tggggtggaa ccactggacc cctggtgcca actgcagctc ccaggctatc 480 ttcccagccc cctacctgta cctcgaagtc tatgggctcc tgctgcccgc cgtgggtgct 540 gctgccttcc tctctgtccg cgtgctggcc actgcccacc gccagctgca ggacatctgc 600 cggctggagc gggcagtgtg ccgcgatgag ccctccgccc tggcccgggc ccttacctgg 660 aggcaggcaa gggcacaggc tggagccatg ctgctcttcg ggctgtgctg ggggccctac 720 gtggccacac tgctcctctc agtcctggcc tatgagcagc gcccgccact ggggcctggg 780 101004 200539867 acactgttgt ccctcctctc cctaggaagt gccagtgcag cggcagtgcc cgtagccatg 840 gggctgggcg atcagcgcta cacagccccc tggagggcag ccgcccaaag gtgcctgcag 900 gggctgtggg gaagagcctc ccgggacagt cccggcccca gcattgccta ccacccaagc 960 agccaaagca gtgtcgacct ggacttgaac taa 993 <210> 2 <211> 330 <212> PRT <213>人類 <400> 2

Met Thr Pro Asn Ser Thr Gly Glu Val Pro Ser Pro lie Pro Lys Gly 15 10 15

Ala Leu Gly Leu Ser Leu Ala Leu Ala Ser Leu lie He Thr Ala Asn 20 25 30

Leu Leu Leu Ala Leu Gly He Ala Trp Asp Arg Arg Leu Arg Ser Pro 35 40 45

Pro Ala Gly Cys Phe Phe Leu Ser Leu Leu Leu Ala Gly Leu Leu Thr 50 55 60

Gly Leu Ala Leu Pro Thr Leu Pro Gly Leu Trp Asn Gin Ser Arg Arg 65 70 75 80

Gly Tyr Trp Ser Cys Leu Leu Val Tyr Leu Ala Pro Asn Phe Ser Phe 85 90 95

Leu Ser Leu Leu Ala Asn Leu Leu Leu Val His Gly Glu Arg Tyr Met 100 105 110

Ala Val Leu Arg Pro Leu Gin Pro Pro Gly Ser He Arg Leu Ala Leu 115 120 125

Leu Leu Thr Trp Ala Gly Pro Leu Leu Phe Ala Ser Leu Pro Ala Leu 130 135 140

Gly Trp Asn His Trp Thr Pro Gly Ala Asn Cys Ser Ser Gin Ala He 145 150 155 160 101004 -2- 200539867

Phe Pro Ala Pro Tyr Leu Tyr Leu Glu Val Tyr Gly Leu Leu Leu Pro 165 170 175

Ala Val Gly Ala Ala Ala Phe Leu Ser Val Arg Val Leu Ala Thr Ala 180 185 190

His Arg Gin Leu Gin Asp lie Cys Arg Leu Glu Arg Ala Val Cys Arg 195 200 205

Asp Glu Pro Ser Ala Leu Ala Arg Ala Leu Thr Trp Arg Gin Ala Arg 210 215 220

Ala Gin Ala Gly Ala Met Leu Leu Phe Gly Leu Cys Trp Gly Pro Tyr 225 230 235 240

Val Ala Thr Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Tyr Glu Gin Arg Pro Pro 245 250 255

Leu Gly Pro Gly Thr Leu Leu Ser Leu Leu Ser Leu Gly Ser Ala Ser 260 265 270

Ala Ala Ala Val Pro Val Ala Met Gly Leu Gly Asp Gin Arg Tyr Thr 275 280 285

Ala Pro Trp Arg Ala Ala Ala Gin Arg Cys Leu Gin Gly Leu Trp Gly 290 295 300

Arg Ala Ser Arg Asp Ser Pro Gly Pro Ser He Ala Tyr His Pro Ser 305 310 315 320

Ser Gin Ser Ser Val Asp Leu Asp Leu Asn 325 330 <210> 3 <211> 31 <212> DNA <213〉人造 <220〉 <223>引物順序 <400〉 3 gacaagcatg acgcccaaca gcactggcga g <210> 4 101004 200539867 <211> 32 <212> DNA <213〉人造 <220〉 <223>引物順序 <400〉 4 cttgaattag ttcaagtcca ggtcgacact gc 32 <210〉5 <211> 1176 <212〉DNA <213〉人造

<220〉 <223〉新穎順序 <400〉5 atgtacccat acgacgtccc agactacgct ggaagcttga cgcccaacag cactggcgag 60 gtgcccagcc ccattcccaa gggggctttg gggctctccc tggccctggc aagcctcatc 120 atcaccgcga acctgctcct agccctgggc atcgcctggg accgccgcct gcgcagccca 180 cctgctggct gcttcttcct gagcctactg ctggctgggc tgctcacggg tctggcattg 240 cccacattgc cagggctgtg gaaccagagt cgccggggtt actggtcctg cctcctcgtc 300 tacttggctc ccaacttctc cttcctctcc ctgcttgcca acctcttgct ggtgcacggg 360 gagcgctaca tggcagtcct gaggccactc cagccccctg ggagcattcg gctggccctg 420 ctcctcacct gggctggtcc cctgctcttt gccagtctgc ccgctctggg gtggaaccac 480 tggacccctg gtgccaactg cagctcccag gctatcttcc cagcccccta cctgtacctc 540 gaagtctatg ggctcctgct gcccgccgtg ggtgctgctg ccttcctctc tgtccgcgtg 600 ctggccactg cccaccgcca gctgcaggac atctgccggc tggagcgggc agtgtgccgc 660 gatgagccct ccgccctggc ccgggccctt acctggaggc aggcaagggc acaggctgga 720 gccatgctgc tcttcgggct gtgctggggg ccctacgtgg ccacactgct cctctcagtc 780 ctggcctatg agcagcgccc gccactgggg cctgggacac tgttgtccct cctctcccta 840 ggaagtgcca gtgcagcggc agtgcccgta gccatggggc tgggcgatca gcgctacaca 900 gccccctgga gggcagccgc ccaaaggtgc ctgcaggggc tgtggggaag agcctcccgg 960 gacagtcccg gccccagcat tgcctaccac ccaagcagcc aaagcagtgt cgacctggac 1020 ttgaacgaat tcggatccaa gggcaattct gcagatatcc agcacagtgg cggccgctcg 1080 101004 -4- 1140 200539867 1176 agtctagagg gcccgcggtt cgaaggtaag cctatcccta accctctcct cggtctcgat tctacgcgta ccggtcatca tcaccatcac cattga <210〉 6 <211〉 391 <212〉PRT <213〉人造 <220> <223>新穎順序 <400〉 6

Met Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Gly Ser Leu Thr Pro Asn 15 10 15

Ser Thr Gly Glu Val Pro Ser Pro He Pro Lys Gly Ala Leu Gly Leu 20 25 30

Ser Leu Ala Leu Ala Ser Leu He He Thr Ala Asn Leu Leu Leu Ala 35 40 45

Leu Gly He Ala Trp Asp Arg Arg Leu Arg Ser Pro Pro Ala Gly Cys 50 55 60

Phe Phe Leu Ser Leu Leu Leu Ala Gly Leu Leu Thr Gly Leu Ala Leu 65 70 75 80

Pro Thr Leu Pro Gly Leu Trp Asn Gin Ser Arg Arg Gly Tyr Trp Ser 85 90 95

Cys Leu Leu Val Tyr Leu Ala Pro Asn Phe Ser Phe Leu Ser Leu Leu 100 105 110

Ala Asn Leu Leu Leu Val His Gly Glu Arg Tyr Met Ala Val Leu Arg 115 120 125

Pro Leu Gin Pro Pro Gly Ser He Arg Leu Ala Leu Leu Leu Thr Trp 130 135 140

Ala Gly Pro Leu Leu Phe Ala Ser Leu Pro Ala Leu Gly Trp Asn His 145 150 155 160

Trp Thr Pro Gly Ala Asn Cys Ser Ser Gin Ala lie Phe Pro Ala Pro 165 170 175 101004 200539867

Tyr Leu Tyr Leu Glu Val Tyr Gly Leu Leu Leu Pro Ala Val Gly Ala 180 185 190

Ala Ala Phe Leu Ser Val Arg Val Leu Ala Thr Ala His Arg Gin Leu 195 200 205

Gin Asp He Cys Arg Leu Glu Arg Ala Val Cys Arg Asp Glu Pro Ser 210 215 220

Ala Leu Ala Arg Ala Leu Thr Trp Arg Gin Ala Arg Ala Gin Ala Gly 225 230 235 240

Ala Met Leu Leu Phe Gly Leu Cys Trp Gly Pro Tyr Val Ala Thr Leu 245 250 255

Leu Leu Ser Val Leu Ala Tyr Glu Gin Arg Pro Pro Leu Gly Pro Gly 260 265 270

Thr Leu Leu Ser Leu Leu Ser Leu Gly Ser Ala Ser Ala Ala Ala Val 275 280 285

Pro Val Ala Met Gly Leu Gly Asp Gin Arg Tyr Thr Ala Pro Trp Arg 290 295 300

Ala Ala Ala Gin Arg Cys Leu Gin Gly Leu Trp Gly Arg Ala Ser Arg 305 310 315 320

Asp Ser Pro Gly Pro Ser lie Ala Tyr His Pro Ser Ser Gin Ser Ser 325 330 335

Val Asp Leu Asp Leu Asn Glu Phe Gly Ser Lys Gly Asn Ser Ala Asp 340 345 350

He Gin His Ser Gly Gly Arg Ser Ser Leu Glu Gly Pro Arg Phe Glu 355 360 365

Gly Lys Pro He Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr Arg Thr 370 375 380

Gly His His His His His His 385 390

<210〉 7 <211〉 31 <212〉DNA 101004 200539867 <213>人造 <220〉 — <223>引物順序 <400〉 7 gacaagcttg acgcccaaca gcactggcga g 31 <210〉 8 <211〉 32 <212〉DNA <213〉人造 <220〉

<223>引物順序 <400〉 8 cttgaattcg ttcaagtcca ggtcgacact gc 32 <210〉 9 <211〉 36 <212〉DNA <213>人造 <220〉 <223>引物順序 <400> 9 gatcaagctt ccatggcgtg ctgcctgagc gaggag 36

<210> 10 <211〉 53 <212> DNA <213> 人造 <220〉 <223〉 引物順序 <400〉 10 gatcggatcc ttagaacagg ccgcagtcct tcaggttcag ctgcaggatg gtg 53 <210〉 11 <211〉 21 <212〉DNA <213〉人造 101004 200539867 <220〉 <223〉引物順序 <400〉 11 ctacctgtac ctcgaagtct a 21

<210〉 12 <211〉 19 <212〉 DNA <213〉 人造 <220〉 <223> 引物順序 <400〉 12 agtggcgggc gctgctcat 19 <210〉13 <211> 21 <212〉DNA <213〉人造 <220〉 <223>老鼠引物順序 <400〉 13 tgagctgtcg gccattccca t 21

<210> 14 <211> 21 <212> DNA <213〉人造 <220〉 <223〉老鼠引物順序 <400〉 14 21 gattgtccct cttggctctt c 101004

Claims (1)

1. 200539867 十、申請專利範圍： 1· 一種確認一或多種候選化合物作為RUP43 GPCr之調節物 之方法，δ亥受體包含GPR131胺基酸順序，其中受體係偶合 至G蛋白質；其包括以下步驟： (a) 使候選化合物與受體接觸；與 (b) 測定受體功能性是否經調節； 其中於受體功能性上之變化係為候選化合物為 RUP43 GPCR調節物之指標。 如明求項1之方法，其中GPR131胺基酸順序係選自包括· (a)順序識別碼：2之胺基酸順序； ⑼順序識別碼·· 2之胺基酸2-330 ; (C)順序識別碼：2之胺基酸2_330，其附帶條件是RUP43G 蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順序識別碼：2之 胺基酸位置1上； (Φ被包含核酸順序之多核苷酸編碼

   白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種 但柱序獲得，其包 括在人類舰試樣上，使用引物順序識料：; 識別碼：4進行PCR; ”貝序 (e)順序識別碼：6之胺基酸順序； (f)被包含核酸順序之多核甞酸編碼之 ^ 龙白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一 , 裡挂序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順戽角 、丁 ’別碼：7盥順床 識別碼：8進行PCR; "Λ (g)順序識別碼：2之胺基酸順序，复 ，、Τ在順序識別碼： 101004 2 200539867 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ⑻順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； (0順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶 條件是RUP43 G蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順 序識別碼：2之胺基酸位置1上；及 ①被多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 3·如請求項丨或2之方法，其中該RUp43 GpCR係為重組體。 女明求項}或2之方法，其中該接觸包括與表現 之伯主細胞或與宿主細胞之細胞膜接觸，其中該宿主細胞 包含表現載體，此載體包含使RUP43GPCR編碼之多核甞 如明求項1或2之方法，其中該接觸係於Rup43 GpcR之已知 催動劑存在下進行。 6·如明求項5之方法，其中該接觸係於化合物1、化合物2或 化合物3存在下進行。

   確認一或多種候選化合物作為血糖濃 其包括以下步驟： 、〜，u σ初興包含GPR131胺基酸順序之GPCR接 ，其中受體係偶合至G蛋白質；與 其中於受體功能性 (b)測定受體功能性是否經調節； 上之變化係為候選化合物為在哺乳動 101004 200539867 物中血糖濃度調節物之指標。 8·如請求項7之方法，其中GPR131胺基酸順序係選自包括： ⑻順序識別碼：2之胺基酸順序； (b)順序識別碼：2之胺基酸2-330 ; (C)順序識別碼：2之胺基酸2-330，其附帶條件是RUP43G蛋 白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順序識別碼：2之胺 基酸位置1上； ⑷被包含核酸順序之多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼·· 3與順序 識別碼：4進行PCR ; (e) 順序識別碼：6之胺基酸順序； (f) 被包含核酸順序之多核：y：酸編碼之G蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：7與順序 識別碼：8進行PCR ; (g) 順序識別碼：2之胺基酸順序，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ㈨順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼·· 2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ⑴順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶 條件是RUP43 G蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順 序識別碼：2之胺基酸位置1上；及 101004 200539867 (j)被多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 9. 如請求項7或8之方法，其中該RUP43 GPCR係為重組體。 10. 如請求項7或8之方法，其中該接觸包括與表現RUP43 GPCR 之宿主細胞或與宿主細胞之細胞膜接觸，其中該宿主細胞 包含表現載體，此載體包含使RUP43 GPCR編碼之多核苷 酸。 11. 如請求項7或8之方法，其中該接觸係於RUP43 GPCR之已知 催動劑存在下進行。 12. 如請求項11之方法，其中該接觸係於化合物1、化合物2 及化合物3存在下進行。 13. 如請求項1、2、7及8中任一項之方法，其中受體功能性 上之增加係為候選化合物為在哺乳動物中降低血糖濃度 之化合物之指標。 14. 如請求項1、2、7及8中任一項之方法，其中該測定係經 過第二信使含量之度量，該第二信使係選自包括環 AMP (cAMP)、環GMP (cGMP)、肌醇三磷酸鹽（IP3)、二醯基 甘油（DAG)及 Ca2+。 15. 如請求項14之方法，其中cAMP之胞内含量係被增加。 16. 如請求項1、2、7及8中任一項之方法，其中該測定係經 由利用黑色素細胞檢測，或經過GTP τ S結合至包含 RUP43 GPCR之細胞膜之度量。 17. —種製造RUP43 GPCR調節物之方法，其包括以下步驟： (a)如請求項1至16中任一項之方法，確認該調節物； 101004 200539867 與 (b)合成（a)中所確認之調節物。 18_ —種如請來 員1至16中任一項之方法戶斤禮 19. 如請求項18夕— 輯確-之調即物。 部份催動制 係選自包括催動劑 惟動刻、逆催動劑及拮抗劑。 20. 如請求jg ] s j 21·如請求項20之調節物 22. 如請求項18之調節物 功能性。 23. 如請求項18之調節物 、之调節物，其中該調節物為催動劑。 其中該催動劑為部份催動劑。 其中該調節物會增加RUP43 GPCR之 其中該調節物會增加cAMJ>之胞户 含量。 24.如請求項17 、Η之方去，其中該調節物係選自包括催動劑、名 伤催動劑、逆催動劑及拮抗劑。 25·如請求項I? 26·如請求項25之方法 27·如請求項17之方法 能性。 28·如請求項17之方法 量。 29·—種式（11)化合物： 只万去，其中該調節物為催動劑。 其中該催動劑為部份催動劑。 其中該調節物會增加RUP43 GPCR之$ 其中該調節物會增加cAMP之胞内 Rio

   或其藥學上可接受之鹽， 101004 200539867 其中： R!為Η或q _6烧基； R2為2-甲基-4,5,6,7-四氫-2H-W唾-3-基；或 &與R2和彼等所結合之氮一起形成3,4-二氫-2H-喳啉小 基；及 Rio與Rii各獨立為Η或鹵素。 30· —種製備醫藥或生理學上可接受組合物之方法，其包括將 載劑與RUP43 GPCR之調節物互混，該受體包含GPR131胺基 酸順序。 31· —種調節活體外RUP43 GPCR之方法，該受體包含GPR131胺 基酸順序，其包括使該受體與該受體之調節物接觸。 32. —種GPR131 GPCR之催動劑於藥劑製備上之用途，該藥劑 係用於降低血糖。 33· —種GPR131 GPCR之催動劑於藥劑製備上之用途，該藥劑 係用於預防或治療新陳代謝病症，選自包括： ⑻糖展病； (b) 減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 (Φ騰島素過多。 34· 一種GPR131GPCR之催動劑於藥劑製備上之用途，該藥劑 係用於預防或治療高血糠濃度之併發症，選自包括： (a) 徵候簇X ; (b) 動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； 101004 200539867 (d) 心臟疾病； (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑻視網膜病； (i)腎病；及 ①末梢血管疾病。 35. 如請求項32至34中任一項之用途，其中催動劑為部份催動 劑。 36. —種醫藥或生理學上可接受之組合物，其包含RUP43 GPCR 之調節物，基本上由其所組成或由其所組成，該受體包含 GPR131胺基酸順序。 37. —種醫藥組合物，其包含RUP43 GPCR之調節物，該受體包 含GPR131胺基酸順序，及藥學上可接受之載劑。 38. 如請求項37之醫藥組合物，其中調節物係如請求項18至23 中之任一項。 39. 如請求項37之醫藥組合物，其中RUP43 GPCR之調節物為 RUP43 GPCR之催動劑。 40. 如請求項37之醫藥組合物，其中調節物係如請求項29之化 合物。 41. 如請求項37之醫藥組合物，其中調節物為化合物1、化合 物2或化合物3。 42. 如請求項37至41中任一項之醫藥組合物，其中調節物為會 增加藉由得自哺乳動物之脂肪細胞之葡萄糖吸收之化合 101004 200539867 物。 43. 如請求項37至41中任一項之醫藥組合物，其中調節物為會 增加藉由得自哺乳動物之骨骼肌細胞之葡萄糖吸收之化 合物。 44. 一種RUP43 GPCR之調節物，該受體包含GPR131胺基酸順 序，供使用於藉由療法以治療人類或動物身體之方法中。 45. —種RUP43 GPCR之調節物，該受體包含GPR131胺基酸順 序，供使用於藉由療法以降低人類或動物身體中之血糖濃 度之方法中。 46. —種RUP43 GPCR之調節物，該受體包含GPR131胺基酸順 序，供使用於藉由療法以預防或治療人類或動物身體中之 新陳代謝病症之方法中，其中該代謝病症係選自包括 (a) 糖尿病； (b) 減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 (d) 胰島素過多。 47. —種RUP43 GPCR之調節物，該受體包含GPR131胺基酸順 序，供使用於藉由療法以預防或治療人類或動物身體中之 高血糖濃度併發症之方法中，其中併發症係選自包括： ⑻徵候簇X ; ⑻動脈粥瘤硬化； (c) 粥瘤疾病； (d) 心臟疾病； (e) 高血壓； 101004 200539867 (f) 中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； (i) 腎病；及 (j) 末梢血管疾病。 48·如請求項44至47中任一項之調節物，其中動物為哺乳動 物0 φ 49.如請求項44至47中任一項之調節物，其中調節物係如請求 項18至23中之任一項。 50. 如請求項44至47中任一項之調節物，其中rup43 GPCR之調 節物為RUP43 GPCR之催動劑。 51. 如請求項44至47中任一項之調節物，其中調節物係如請求 項29之化合物。 52. 如請求項44至47中任一項之調節物，其中調節物為化合物 1、化合物2或化合物3。 53. 如請求項44至47中任-項之調節物，其中調節物為會增加 藉由得自哺乳動物之脂肪細胞之葡萄糖吸收之化合物曰。 54. 如請求項44至47中任-項之調節物，其中調節物為會增加 藉由得自哺乳動物之骨絡肌細胞之葡萄糖吸收之化合物。 55. —種RUP43GPCR調節物於藥劑製備上之用途，該*體°勺八 GPR131胺基酸順序，該藥劑係用於降低㈣濃Γ。^ 56. —種RUP43 GPCR調節物於藥劑製 胥上之用途，該受體白人 GPRm胺基酸順序，該藥劑係 體^ 症，其中代謝病症係選自包括：預m療新陳代謝病 101004 200539867 ⑻糖尿病； ⑼減弱之葡萄糖容許度； (c)胰島素抗藥性；及 ⑹胰島素過多。 57.種RUP43 GPCR調節物於藥劑製備卜 I備上之用途，該受體包含 R131胺基酸順序，該藥劑传 、， 米釗係用於預防或治療高血糖濃度 之併發症，其中併發症係選自包括 X

   ⑻徵候簇X ; ⑻動脈粥瘤硬化； ⑹粥瘤疾病； ⑹心臟疾病； (e)南血壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑻視網膜病； (i)腎病；及 ①末梢血管疾病。 58. 如請求項55至57中任一項之用途，其中調節物係如請求項 18至23中之任·—項。 59. 如請求項55至57中任一項之用途，其中RUP43 GPCR之調節 物為RUP43 GPCR之催動劑。 60. 如請求項55至57中任一項之用途’其中調節物為如請求項 29之化合物。 61. 如請求項55至57中任一項之用途’其中調節物為化合物 101004 -10 - 200539867 1、化合物2或化合物3。 62·如請求項55至57中任一項之用途’其中調節物為會增加藉 由得自哺乳動物之脂肪細胞之葡萄糖吸收之化合物。 63·如請求項55至57中任一項之用途，其中調節物為會增加藉 由得自哺乳動物之骨骼肌細胞之葡萄糖吸收之化合物。9 64.如請求項56之用途，其中代謝病症為糖尿病。 65·如請求項56之用途，其中代謝病症為減弱之葡萄糖容 •度: 66·如請求項56之用途，其中代謝病症為胰島素抗藥性。 67·如請求項56之用途，其中代謝病症為胰島素過多。 68· —種調節RUP43GPCR活體外活性之方法，該受體包含 GPR131胺基酸順序，其包括以下步驟·· 確認受體之調節物； ⑷如請求項！至16中任一項之方法， 與 ⑻使該受體與⑷中確認之調節物接觸。 之方法，其包括以 •议一種製備醫藥或生理學上可接受組合物 下步驟： ⑷如請求項！至16中任一項之方法 一項之方法， 確認RUP43 GPCR之調 節物，該受體包含GPR131胺基酸順序；與 (b)使載劑與⑷中確認之調節物互浯。

   項之方法經確認。 其中調節物係如請求項1至16中

   項之方法經確認。 其中δ周節物係如請求項1至16中任一 101004 200539867 72.如請求項57之用途，其中調節物係如請求項丨至16中任 項之方法經確認。 73·如請求項7〇至72中任一項之用途，其中調節物係如請東工 19至22中之任一項。 明/項 74.如請求項7〇至72中任一項之用途，其中調節物係如請求工 29之化合物。 > 、 %如請求項70至72中任一項之用途，其中調節物為會増加藉 由得自哺乳動物之脂肪細胞之葡萄糖吸收之化合物。曰 76·如請求項70至72中任一項之用途，其中調節物為會增加藉 由得自哺乳動物之骨骼肌細胞之葡萄糖吸收之化合物。 77.種製備醫藥組合物之方法，其包括使如請求項29之化人 物與藥學上可接受之載劑互混。 口 78·如請求項77之方法，其中化合物為化合物i、化合物2或 化合物3。 79·種醫藥組合物，其包含如請求項29之化合物及藥學上可 接受之載劑。 8〇·如請求項79之醫藥組合物，其中化合物為化合物1、化合 物2或化合物3。 81. —種調節活體外RUP43GPCR之方法，該受體包含证幻以胺 基酸順序，其包括使該受體與如請求項29之化合物或與如 晴求項79或80之醫藥組合物接觸。 82· —種如請求項29之化合物於藥劑製備上之用途，該藥劑係 調節RUP43 GPCR之活性，該受體包含GPR131胺基酸順序， 其中该調節係為降低血糖濃度。 101004 -12- 200539867 83· —種如請求項29夕#人 、之化合物於藥劑製備上之用途， 調節RUP43GPCR之活性 係 计心 邊叉體包含GPR131胺基酸順庠， 其t該謂節係為預防 貝序 ⑻糖尿病； n ⑻減弱之葡萄糖容許度； (c) 胰島素抗藥性；及 (d) 胰島素過多。 84· 一種如請求項29之化合物於藥劑製備上之用途，該藥劑係 調=UP43GPCR ’該受體包含GPR13l胺基酸順序，其中該 調節係為預防或治療高灰糖濃度之併發症，其中併發症係 選自包括： ⑻徵候簇X ; ⑻動脈粥瘤硬化； ⑻粥瘤疾病； (d) 心臟疾病； (e) 馬血壓； (f) 中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病； ①腎病；及 (D末梢血管疾病。 85.—種如請求項29之化合物於藥劑製備上之用途，該藥劑係 用於降低血糖濃度。 、 δ6. —種如請求項29之化合物於藥劑製備上之用途，該藥劑係 101004 •13· 200539867 用於預防或治療新陳代謝病症，選自包括 ⑻糖尿病； ⑻減弱之葡萄糖容許度； (C)胰島素抗藥性；及 ⑹胰島素過多。 上之用途，該藥劑係 ’其中併發症係選自 87· —種如請求項29之化合物於藥劑製備

   用於預防或治療高血糖濃度之併發症 包括 (a)徵候簇X ; ⑻動脈粥瘤硬化； ⑷粥瘤疾病； ⑹心臟疾病； (e)高血壓； (f) 中風； (g) 神經病； ⑻視網膜病； (i)腎病；及 ①末梢血管疾病。 88·如請求項81之方法，直中仆人札达A 八甲化口物為化合物丨、化合物2或 化合物3。 狄如請求額之^，其中化合物會增加藉由得自哺乳動物 之脂肪細胞之葡萄糖吸收。 9〇.如請求項81之方法，其中化合物會增加藉由得自哺乳動物 之骨骼肌細胞之葡萄糖吸收。 101004 -14- 200539867 91.請求項82至87中任一項之用途，其中化合物為化合 化合物2或化合物3。 92.請求項82至87中任一項之用途’其中化合物會增加藉由得 自哺乳動物之脂肪細胞之葡萄糖吸收。 93·請求項82至87中任一項之用途，其中化合物會增加藉由得 自哺乳動物之骨骼肌細胞之葡萄糖吸收。

   94.如請求項29之化合物，其係使用於藉由療法以治療人類或 動物身體之方法中。 ' / 95·如請求項29之化合物，其係使用於藉由療法以降低人類或 動物身體中之血糖濃度之方法中。 96.如請求項29之化合物’其係使用於藉由療法以預防或治療 人類或動物身體中之新陳代謝病症之方法中，其中代=病 症係選自包括·· / (a)糖尿病； ⑻減弱之葡萄糖容許度； ⑷胰島素抗藥性；及 (Φ胰島素過多。 盯如請求項29之化合物’其係使用於藉由療法以預防 人類或動物身體中之高血糖濃度併發症之方法中，你 發症係選自包括： ^ T ⑻徵候簇X ; ⑻動脈粥瘤硬化； ⑹粥瘤疾病； ⑹心臟疾病； 101004 -15- 200539867 (e) 高血壓； (f) 中風； (g) 神經病； (h) 視網膜病， (i) 腎病；及 ①末梢血管疾病。 98. 如請求項94至97中任一項之化合物，其中化合物為化合物 1、化合物2或化合物3。 99. 如請求項94至97中任一項之化合物，其中動物為哺乳動 物。 100. —種確認一或多種候選化合物作為結合至RUP43 GPCR之 化合物之方法，該受體包含GPR131胺基酸順序，其包括以 下步驟： ⑻使該受體與該受體之可偵測地經標識之已知配位 體，於候選化合物存在或不存在下接觸；與 (b)測定該經標識已知配位體之結合至受體是否於候 選化合物存在下被抑制； 其中該抑制係為候選化合物為結合至RUP43 GPCR之化合 物之指標。 101. 如請求項100之方法，其中GPR131胺基酸順序係選自包括： (a) 順序識別碼：2之胺基酸順序； (b) 順序識別碼：2之胺基酸2-330 ; (c) 順序識別碼：2之胺基酸2-330，其附帶條件是RUP43G蛋 白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順序識別碼：2之胺 101004 -16- 200539867 基酸位置1上； (Φ被包含核酸順序之多核甞酸編碼之g蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DN A試樣上，使用引物順序識別碼：3與順序 識別碼：4進行PCR ; (e)順序識別碼：6之胺基酸順序； ⑴被包含核酸順序之多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之 _ 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：7與順序 識別碼：8進行PCR ; (g)順序識別碼：2之胺基酸順序，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ⑻順序識別碼：2之胺基酸2-330,其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； (i)順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 ® 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶 條件是RUP43 G蛋白偶合受體未包含曱硫胺酸殘基在順 序識別碼·· 2之胺基酸位置1上；及 ①被多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 1〇2·如請求項1〇〇或1〇1之方法，其中該接觸包括與表現GpCR 之宿主細胞或與宿主細胞之細胞膜接觸。 1〇3·如請求項102之方法，其中該宿主細胞包含表現載體，此 載體包含使該受體編碼之多核甞酸。 101004 -17- 200539867 刚.如請求項100或101之方法，其中已知配位體為化合物i、 化合物2或化合物3。 1〇5.種偵測會結合至RUP43 GPCR之配位體之方法，該受體包 含GPR131胺基酸順序，其包括以下步驟： ⑷使待測配位體與表現該受體之宿主細胞或與宿主 細胞之細胞膜，在允許該受體與該待測配位體間之交互作 用之條件下接觸；與 φ 作）偵測經結合至該受體之配位體。 1〇6·如請求項105之方法，其中GPR131胺基酸順序係選自包括： ⑷順序識別碼：2之胺基酸順序； (b)順序識別碼：2之胺基酸2-330 ; ⑹順序識別碼：2之胺基酸2-330，其附帶條件是Rup43 G 蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順序識別碼：2之 胺基酸位置1上； (d) 被包含核酸順序之多核苷酸編碼之〇蛋白偶合受體之 • 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其包 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：3與順序 識別碼：4進行PCR ; (e) 順序識別碼：6之胺基酸順序； (f) 被包含核酸順序之多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之 胺基酸順序，該核酸順序可藉由一種程序獲得，其勺 括在人類DNA試樣上，使用引物順序識別碼：7與順序 識別碼：8進行PCR ; (g) 順序識別碼：2之胺基酸順序，其中在順序識別馬. 101004 -18 - 200539867 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ⑻順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代； ①順序識別碼：2之胺基酸2-330，其中在順序識別碼：2 之胺基酸位置223上之丙胺酸係被離胺酸取代，其附帶 條件是RUP43 G蛋白偶合受體未包含甲硫胺酸殘基在順 序識別碼：2之胺基酸位置1上；及 ①被多核苷酸編碼之G蛋白偶合受體之胺基酸順序，其係 在嚴厲條件下雜化至順序識別碼：1之補體。 107·如請求項105或106之方法，其中該接觸包括與表現GpcR 之宿主細胞或與宿主細胞之細胞膜接觸。 1〇8·如請求項107之方法，其中該宿主細胞包含表現載體，此 載體包含使該受體編碼之多核:y：酸。 1〇9·如請求項100、101、105及106中任一項之方法，其中經確 認或偵測之配位體係為如請求項1、2、7及8中任一項之 RUP43 GPCR之調節物。 110·如請求項109之方法，其中調節物係選自包括催動劑、部 份催動劑、逆催動劑及拮抗劑。 111·如請求項109之方法，其中調節物為催動劑。 112·如請求項hi之方法，其中催動劑為部份催動劑。 101004 -19-