SK832006A3 - Spôsob izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy - Google Patents
Spôsob izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy Download PDFInfo
- Publication number
- SK832006A3 SK832006A3 SK83-2006A SK832006A SK832006A3 SK 832006 A3 SK832006 A3 SK 832006A3 SK 832006 A SK832006 A SK 832006A SK 832006 A3 SK832006 A3 SK 832006A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- polymyxin
- polymyxine
- solution
- base
- eluate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 title claims description 33
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 title claims description 30
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 title claims description 29
- 239000002689 soil Substances 0.000 title claims description 13
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 21
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical group CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 abstract description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 abstract description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 abstract 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 abstract 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SBKRTALNRRAOJP-BWSIXKJUSA-N N-[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-4-amino-1-oxo-1-[[(3S,6S,9S,12S,15R,18R,21S)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-15-benzyl-3-[(1R)-1-hydroxyethyl]-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]-6-methylheptanamide (6S)-N-[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-4-amino-1-oxo-1-[[(3S,6S,9S,12S,15R,18R,21S)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-15-benzyl-3-[(1R)-1-hydroxyethyl]-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]-6-methyloctanamide sulfuric acid Polymers OS(O)(=O)=O.CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@@H](CCN)NC1=O)[C@@H](C)O.CC[C@H](C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@@H](CCN)NC1=O)[C@@H](C)O SBKRTALNRRAOJP-BWSIXKJUSA-N 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 4
- 229960003548 polymyxin b sulfate Drugs 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 241000194105 Paenibacillus polymyxa Species 0.000 description 2
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 2
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 2-ethylhexyl Chemical group 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078777 Colistin Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- SEGLCEQVOFDUPX-UHFFFAOYSA-N di-(2-ethylhexyl)phosphoric acid Chemical compound CCCCC(CC)COP(O)(=O)OCC(CC)CCCC SEGLCEQVOFDUPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid group Chemical group C(CCCCCC)(=O)O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- RGUCBEFVOXUBFX-KKUCYLEMSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-15-benzyl-3-[(1r)-1-hydroxyethyl]-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino] Polymers N1C(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)CCCCCCCC)CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1CC1=CC=CC=C1 RGUCBEFVOXUBFX-KKUCYLEMSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940041153 polymyxins Drugs 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- HWIORSQIDHLVBH-UHFFFAOYSA-N trihydroxy phosphate Chemical compound OOP(=O)(OO)OO HWIORSQIDHLVBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/60—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation occurring through the 4-amino group of 2,4-diamino-butanoic acid
- C07K7/62—Polymyxins; Related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka spôsobu izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy.
Doterajší stav techniky í'»'·..·
Polymyxín B je antibiotický komplex veľmi príbuzných polypeptidov izolovaných z rôznych kmeňov Bacillus polymyxa a príbuzných species. Je cyklický polypeptid s voľnými aminoskupinami obsahujúci charakteristické konštituenty, ako je kyselina α,γ aminobutánová, L-treonín a mastné kyseliny (6-metyloktánová, 3-hydroxy-6metyloktánová, 6-metylheptánová, heptánová, oktánová, nonánová). Semi - preparatívnou PLRP-S s reverznou fázou bol rozdelený tento komplex na 7 komponemtov (Orwa J.A., Govaert C., Busson R., et all, 2001, J.Chromatography A, 912, 369-373). Štruktúra sa charakterizovala metódami *H- a 13C -NMR a molekulová hmotnosť metódou hmotnostnej spektroskopie. Potvrdila sa štruktúra polymyxínu Bi, Ile-Bi, B2, B3 a B4. Dva ďalšie komponenty, polymyxín B5 a Bň, sa prvýkrát izolovali a charakterizovali v tejto práci.
Polymyxíny B a E majú nižšiu toxicitu ako ostatné polymyxíny a využívajú sa v terapeutickej praxi, hlavne antibakteriálne účinnejší polymyxín B.
Postupy na izolovanie polymyxínu z vyfermentovanej pôdy sú v princípe založené na aplikácii aktívneho uhlia a vymieňačov iónov. V US 2 565 057 patente, prioritne chrániacom a popisujúcom vlastnosti bázického polypeptidického antibiotika ako metabolitu Bacillus aerosporus a Bacilluspolymyxa, sú uvedené aj spôsoby jeho získania z kultivačného média využívajúce adsorpčné vlastnosti aktívneho uhlia. Najprv sa z filtrátu vyfermentovanej pôdy aktívnym uhlím v kyslom prostredí (pH 2,5) odstráni časť nečistôt. Takto odfarbený roztok s antibiotikom sa po úprave hodnoty pH do neutrálnej oblasti adsorbuje na aktívnom uhlí. Naadsorbované antibiotikum sa eluuje kyslým vodným roztokom acetónu. Eluát sa ďalej podrobí čistiacim operáciám, spočívajúcim v úprave pH, oddelení acetónu a opätovnej adsorpcii na aktívnom uhlí a neutralizácii eluátu s CaCCh a napokon v lyofilizácii roztoku antibiotika. Inou alternatívou získania antibiotika z eluátu je príprava nerozpustných solí, napr. zrážaním s kyselinou pikrovou a konvertovanie pikrátu - antibiotika na vodorozpustné soli, obvykle vo forme sulfátov (M. Harold a kol.: Antibiotika ČsAV Praha, 1957,strana 285-288).
V ďalších 2 chránených postupoch (GB 742 589 a GB 782 926) filtráty vyfermentovanej pôdy sa purifikujú na slabo kyslých vymieňačoch katiónov v rôznych kolónových usporiadaniach. Naadsorbovaný polymyxín sa eluuje roztokom minerálnej kyseliny alebo tlmivým roztokom o pH 3 až 5. Zo získaného eluátu sa ďalej odstraňujú nečistoty na vymieňačoch aniónov, alebo na silne kyslom vymieňači katiónov. Takto prečistený eluát sa zakoncentruje a prídavkom alkálie sa vyzráža polymyxín. Précipitácia sa robí pri 60 °C až 90 °C.
US patent 3 132 994 (1964) popisuje spôsob na zvýšenie čistoty surových sulfát - a N metylsulfonátov polymyxínu B a E. Podstatou tohto spôsobu je oxidácia roztokov týchto solí v kyslom alebo neutrálnom prostredí (pH 3,5 až 7,5) s 1 % -ným vodným roztokom KMnO4. V ďalšom kroku sa odstránia nízkomolekulové látky, včítane Mn-katiónov, na silne kyslom vymieňači katiónv v H+ cykle, na ktorom sa polymyxín neadsorbuje.
Postup na izolovanie a purifikovanie amfotemých a bázických antibiotík, včítane polymyxínu B, reaktívnou extrakciou do organického rozpúšťadla obmedzene miešateľného s vodou extrakciou v prítomnosti nosičov di (2-etylhexyl)-ester alebo dinonyl esteru kyseliny trihydroxyfosforečnej je chránený patentom GB 979 887 (1964). V príklade sa polymyxín B extrahuje z vyfermentovanej pôdy do 1% roztoku di (2-etylhexyl)-esteru kyseliny fosforečnej v butylacetáte pri pH 7.
Purifíkáciu polymymyxínu B a E spracovaním kyslých roztokov s alkalickými činidlami v prítomnosti chelatačných činidiel pre komplexáciu katiónov Ca, Mg, Mn, Fe chránia patenty GB 1089765 (1964) a US 3413398. Alkalickými činidlami, ako sú hydroxidy a karbonáty alkalických kovov a amoniak, pri pH 8,5 až 11 sa vyzrážajú antibiotiká vo forme báz a prídavok chelatačných činidiel zabraňuje koprecipitácii nečistôt. Je chránený celý rad chelatačných činidiel, ktoré sa pridávajú v ekvimolámom pomere k prítomným polyvalentným anorganickým iónom. Precipitáciu báz antibiotík je možné urobiť v 10%nom roztoku acetónu. V príkladoch týchto patentov je uvedený postup na purifíkáciu polymyxínu B, v ktorom sa kyslý roztok surového polymyxínu B oxiduje s KMnO4 podľa GB 991602 . Prebytok KMnO4 sa odstráni H2O2. Ďalej sa pokračuje v precipitácii bázy v prítomnosti tetrasodnej soli kyseliny etyléndiamín - N,N,N',N'tetraoctovej. Báza sa odfiltrovala, premyla a za vákua vysušila. Báza sa konvertovala na sulfát polymyxín B ekvimolárnym množstvom H2SO4.
V popísaných postupoch získania pevnej substancie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy sa pôda purifikuje komplikovanými spôsobmi a získa sa surové antibiotikum. Surový preparát sa musí niekoľkostupňovo ďalej purifíkovať na čistú substanciu.
Podstata vynálezu
Uvedené nevýhody odstraňuje postup izolácie polymyxínu B z fermentačnej pôdy podľa vynálezu, ktorého podstata spočíva v tom, že filtrát vyfermentovanej pôdy sa purifikuje na neionogénnych syntetických adsorbentoch polystyrénového typu, polymyxin B sa z adsorbentu eluuje vodným roztokom organického rozpúšťadla, z eluátu sa vyzráža polymyxin B báza, potom sa polymyxin B báza konvertuje minerálnou kyselinou na roztok soli polymyxin B, z ktorého sa vysušením pripraví kryštalická substancia.
Z vyfermentovanej pôdy sa oddelí biomasa a nerozpustné zložky kultivačného média. Získaný filtrát upravený na hodnotu pH 2 až 6 pred ďalším spracovaním sa prípadne odfarbí aktívnym uhlím v množstve 1 až 5 g na 1 dm3 filtrátu. Odfarbený alebo neodfarbený filtrát o hodnote pH 2 až 6, s výhodou pH 2,5 až 3,5 sa purifikuje na neionogénnych syntetických polystyrénových adsorbentoch o mernom povrchu 500 až 1000 m2.g'1 a veľkosťou pórov 3 až 30 nm.
Naadsorbovaný polymyxin B sa eluuje neokysleným alebo na hodnotu pH 2 až 4 okysleným vodným roztokom organického rozpúšťadla o koncentrácii 20 až 60 % hmotnostných, predovšetkým nižším alkoholom alebo ketónom, s výhodou metanolom, etanolom, propanolom, sekundárnym propanolom, acetónom.
Zo získaného vodno-organického eluátu, alebo z eluátu po čiastočnom alebo úplnom oddelení organického rozpúšťadla, sa vyzráža polymyxin B báza prídavkom vodného roztoku minerálnej bázy, predovšetkým NaOH, KOH, NH4OH na hodnotu pH 8 až 12, s výhodou na hodnotu pH 9 až 11. Báza sa zráža pri teplote 20 až 60 °C. Vyzrážaná báza polymyxínu B sa odfiltruje a premyje deionizovanou vodou pri teplote 30 až 80°C. K premytej polymyxin B báze, prípadne k vodnej suspenzii bázy, sa pridá roztok minerálnej kyseliny, ako je HCI, H2SO4, do hodnoty pH 5 až 7,5. Vzniknutý roztok polymyxínu B sa v prípade potreby odfarbí aktívnym uhlím, v množstve 0,1 až 0,5 g na g polymyxínu B a čistý roztok substancie sa vysuší.
Patent je doplnený príkladmi, ktoré však v žiadnom prípade jeho rozsah neobmedzujú .
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Z 2,1 dm3 vyfermentovanej pôdy a obsahom 3,1 g polymyxínu B sa centrifugáciou odseparovala biomasa. Supernatant sa acidifíkoval s 10 % -ným roztokom H2SO4 na hodnotu pH 3, pridali sa 4 g aktívneho uhlia a po 30 minútach sa suspenzia prefiltrovala. Odfarbený číry filtrát sa perkoloval kolónou naplnenou s 500 ml neiónogénneho adsorbentu Diaion HP 21, prietokom 2 dm3 .h'1. Po adsorbcii sa kolóna premyla 500 ml deionizovanej vody. Naadsorbovaný polymyxín B sa eluoval 40 %-ným vodným roztokom acetónu pri prietoku 0,5 dm3 .h1. Získalo sa 0,84 dm3 eluátu s obsahom 2,2 g polymyxínu B. K eluátu sa pomaly za miešania pri laboratórnej teplote dávkoval 20 % -ný roztok NaOH do hodnoty pH 11. Po 2 h kryštalizácie sa vylúčená polymyxín B báza odseparovala filtráciou a premyla s 2 dm3 deionizovanej vody o teplote 70 °C. K získaným 20 g vlhkého produktu polymyxín B bázy sa pridalo 5 ml deionizovanej vody a pomaly sa dávkoval roztok 10 % -nej H2SO4 až do vzniku roztoku polymyxín B sulfátu. K 50 ml roztoku polymyxín sulfátu o pH 6 sa pridalo 0,5 g aktívneho uhlia a po 45 min sa suspenzia prefiltrovala. Odfarbený roztok sa potom filtroval cez membránu o veľkosti pórov 0,45 gm a 0,22 gm. Produkt sa vysušil mrazovou sublimáciou. Zíslako sa 1,7 g polymyxín B sulfátu o čistote 7900 I.U./mg
Príklad 2.
Z eluátu pripravenom podľa postupu z príkladu 1, sa vákuovo oddestiloval acetón. K získaným 0,5 dm3 koncentrátu sa pri teplote 60 °C dávkoval do pH 7,5 koncentrovaný NH4OH a potom 20 % -ný roztok NaOH do konečnej hodnoty pH 12. Po 2 h kryštalizácie pri teplote 40 °C sa vylúčená polymyxín báza odfiltrovala a premývala 5 krát s 0,3 dm3 deionizovanej vody o teplote 30 °C. Získaných 15 g vlhkej zrazeniny sa ďalej spracovalo postupom ako v príklade 1. Pripravilo sa 1,3 g polymyxín B sulfátu o čistote 8100 I.U./mg.
Príklad 3.
Postup ako v príklade 1, s tým rozdielom, že na elúciu sa použil 60 % - ný etanol. Získaných 0,58 dm3 eluátu sa ďalej spracovalo ako v postupe 1, s tým rozdielom, že
Claims (5)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Spôsob izolácie polymyxínu B tl vyfermentovanej pôdy vyznačujúci sa tým, že filtrát, získaný z vyfermentovanej pôdy, sa purifikuje na neionogénnych syntetických adsorbentoch polystyrénového typu s merným povrchom 500 až 1000 m2 g’1 a veľkosťou pórov 3 až 30 nm, polymyxin B sa z adsorbentu eluuje vodným roztokom organického rozpúšťadla, z eluátu sa vyzráža polymyxin B báza, ktorá sa konvertuje minerálnou kyselinou na roztok polymyxínu B, z ktorého sa vysušením pripraví kryštalická substancia.
- 2. Spôsob podľa patentového nároku 1 vyznačujúci sa tým , že filtrát získaný z vyfermentovanej pôdy upravený má hodnotu pH 2 až 6 a prípadne sa odfarbuje aktívnym uhlím v množstve 1 až 5 g na 1 dm3 filtrátu.
- 3. Spôsob podľa patentového nároku 1 a 2 vyznačujúci sa tým , že vodným roztokom organického rozpúšťadla na eluovanie polymyxínu B z adsorbentu je nižší alkohol alebo ketón, ako je metanol, etanol, propanol, sekundárny propanol, acetón s koncentráciou 20 až 60 % hmotnostných.
- 4. Spôsob podľa patentového nároku 1 až 3 vyznačujúci sa tým , že z vodnoorganického eluátu, alebo z eluátu po čiastočnom alebo úplnom oddelení organického rozpúšťadla, sa vyzráža polymyxin B báza úpravou pH roztoku na hodnotu 8 až 12 pri teplote 20 až 60 °C.
- 5. Spôsob podľa patentového nároku 1 až 4 vyznačujúci sa tým, že polymyxin B báza sa konvertuje na polymyxin B prídavkom minerálnej kyseliny do hodnoty pH roztoku 5 až 7,5.
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SK83-2006A SK287315B6 (sk) | 2006-06-02 | 2006-06-02 | Spôsob izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy |
| ES07748761T ES2350865T3 (es) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Método de recuperación de la polimixina b a partir de un caldo de fermentación. |
| PL07748761T PL2021355T3 (pl) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Sposób odzyskiwania polimyksyny B z brzeczki fermentacyjnej |
| EP07748761A EP2021355B1 (en) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Method of polymyxin b recovery from fermentation broth |
| SI200730430T SI2021355T1 (sl) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Postopek dobivanja polimiksina b iz fermentacijske juhe |
| AT07748761T ATE479703T1 (de) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Verfahren zur rückgewinnung von polymyxin b aus einer fermentationsbrühe |
| DE602007008877T DE602007008877D1 (de) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Verfahren zur rückgewinnung von polymyxin b aus einer fermentationsbrühe |
| PCT/SK2007/050009 WO2007142611A1 (en) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Method of polymyxin b recovery from fermentation broth |
| US12/303,205 US7951913B2 (en) | 2006-06-02 | 2007-05-11 | Method of polymyxin B recovery from fermentation broth |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SK83-2006A SK287315B6 (sk) | 2006-06-02 | 2006-06-02 | Spôsob izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK832006A3 true SK832006A3 (sk) | 2008-02-05 |
| SK287315B6 SK287315B6 (sk) | 2010-06-07 |
Family
ID=38342659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK83-2006A SK287315B6 (sk) | 2006-06-02 | 2006-06-02 | Spôsob izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7951913B2 (sk) |
| EP (1) | EP2021355B1 (sk) |
| AT (1) | ATE479703T1 (sk) |
| DE (1) | DE602007008877D1 (sk) |
| ES (1) | ES2350865T3 (sk) |
| PL (1) | PL2021355T3 (sk) |
| SI (1) | SI2021355T1 (sk) |
| SK (1) | SK287315B6 (sk) |
| WO (1) | WO2007142611A1 (sk) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010058427A2 (en) | 2008-11-24 | 2010-05-27 | Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. | Process for production and purification of polymyxin b sulfate |
| AT507846B1 (de) * | 2009-01-22 | 2011-12-15 | Fresenius Medical Care De Gmbh | Sorptionsmittel für endotoxine |
| CN101974075A (zh) * | 2010-10-12 | 2011-02-16 | 山东鲁抗医药股份有限公司 | 从发酵技术培养物中提取多粘菌素b、e的方法 |
| CN103130875B (zh) * | 2011-11-25 | 2015-06-24 | 上海医药工业研究院 | 一种从发酵液中提取多粘菌素b的方法 |
| RU2492180C2 (ru) * | 2011-12-07 | 2013-09-10 | Учреждение Российской академии наук Центр "Биоинженерия" РАН | Способ получения фармацевтической субстанции полимиксина в |
| EP2679302A1 (de) | 2012-06-28 | 2014-01-01 | Zentrum für biomedizinische Technologie der Donau- Universität Krems | Selektives Sorptionsmittel für die extrakorporale Blutreinigung |
| CN102718842B (zh) * | 2012-07-16 | 2013-09-11 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 沉淀法提取硫酸粘菌素的工艺 |
| CN102775477A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-11-14 | 浙江钱江生物化学股份有限公司 | 一种改善硫酸黏菌素后提取树脂吸附液质量的方法 |
| CN103044529B (zh) * | 2012-12-06 | 2018-01-30 | 山东鲁抗医药股份有限公司 | 一种在硫酸多粘菌素b中提取b1单组份的方法 |
| TWI634213B (zh) * | 2014-12-18 | 2018-09-01 | 財團法人工業技術研究院 | 誘發微藻細胞自解之活性物質的製造方法、由此方法所獲得之誘發微藻細胞自解之活性物質以及誘發微藻細胞自解的方法 |
| WO2018032505A1 (zh) * | 2016-08-19 | 2018-02-22 | 湖北瑞昊安科医药科技发展有限公司 | 硫酸多粘菌素b1、b2或其混合物的结晶及其制备方法 |
| EP3502121A1 (en) * | 2016-08-19 | 2019-06-26 | Hubei Ruihaoanke Pharmaceutical Technology Development Co., Ltd. | Polymyxin b sulphate crystal and preparation method therefor |
| CN116284254B (zh) * | 2023-02-28 | 2023-08-04 | 黄石曼菲特生物科技有限公司 | 一种从发酵液中提取高纯度高含量硫酸多粘菌素b单组分的方法 |
Family Cites Families (88)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2565057A (en) * | 1946-12-21 | 1951-08-21 | Burroughs Wellcome Co | Polymyxin antibiotic |
| US2602041A (en) * | 1947-04-21 | 1952-07-01 | Burroughs Wellcome Co | Method for the manufacture of polymyxin |
| US2571104A (en) * | 1948-05-07 | 1951-10-16 | Robert G Benedict | Polymyxin production |
| US2595605A (en) * | 1948-08-07 | 1952-05-06 | American Cyanamid Co | Method of producing polymyxin |
| GB742589A (en) | 1953-01-03 | 1955-12-30 | Distillers Co Yeast Ltd | Recovery of polymyxin |
| FR1096978A (fr) | 1953-02-13 | 1955-06-28 | Schaefer Brewing Co | Perfectionnements apportés aux traitements de fermentations pour lesquels on utilise des levures |
| GB757246A (en) | 1953-02-13 | 1956-09-19 | Schaefer Brewing Co | Improvements relating to the treatment of fermentations employing yeasts |
| GB755370A (en) | 1953-07-23 | 1956-08-22 | Schaefer Brewing Co | Improvements relating to the control of micro-biological growth in beer |
| US2964406A (en) * | 1953-12-08 | 1960-12-13 | Schaefer Brewing Co | Inhibiting microbiological growth in fermentations employing yeast |
| GB782926A (en) | 1955-01-06 | 1957-09-18 | Distillers Co Yeast Ltd | Purification of polymyxin |
| GB874188A (en) | 1957-11-27 | 1961-08-02 | Pfizer & Co C | Preparation of steroids |
| US3094460A (en) * | 1959-01-20 | 1963-06-18 | Upjohn Co | Decoyinine |
| CH392779A (fr) | 1960-03-29 | 1965-05-31 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet | Verfahren zur Herstellung eines Heilmittels gegen Polycythaemie |
| US3132994A (en) * | 1961-03-10 | 1964-05-12 | Burroughs Wellcome Co | Polymyxin purification |
| GB991602A (en) | 1961-03-10 | 1965-05-12 | Wellcome Found | Antibiotics and their purification |
| US3281331A (en) * | 1961-11-08 | 1966-10-25 | Astra Ab | Process of isolating and separating proteolytic enzymes |
| FR1357969A (fr) * | 1962-05-19 | 1964-04-10 | Hoechst Ag | Procédé pour augmenter la croissance de bactéries et de streptomycètes et la production de métabolites par ces organismes |
| GB979887A (en) * | 1962-06-12 | 1965-01-06 | Gert Svanholm | Improvements in or relating to the recovery and purification of amphoteric and basic antibiotics |
| GB1064300A (en) | 1962-12-17 | 1967-04-05 | Bristol Banyu Res Inst Ltd | A new antibiotic coumermycin |
| GB1089765A (en) * | 1963-08-30 | 1967-11-08 | Wellcome Found | Purification of polymyxin |
| US3318867A (en) * | 1964-08-20 | 1967-05-09 | Upjohn Co | Process for separating nitrogen-basic materials from aqueous solution |
| GB1119668A (en) | 1965-08-26 | 1968-07-10 | Walter Koch | Method of testing microbial sensitivity to drugs |
| FR1473145A (fr) * | 1966-01-17 | 1967-03-17 | Rhone Poulenc Sa | Procédé de fabrication de l'acide d. lactique et de ses sels |
| US3679742A (en) * | 1969-05-08 | 1972-07-25 | Zaidan Hojin Biseibutsu | Negamycin |
| JPS5544597B1 (sk) * | 1969-06-09 | 1980-11-13 | ||
| US3929571A (en) * | 1973-05-24 | 1975-12-30 | Ajinomoto Kk | Process for preparing L-lysine |
| JPS5831918B2 (ja) | 1976-10-27 | 1983-07-09 | 塩野義製薬株式会社 | 新規抗生物質ポリミキシンｓ↓１ |
| JPS5946502B2 (ja) | 1977-02-02 | 1984-11-13 | 塩野義製薬株式会社 | 新規抗生物質ポリミキシンｔ↓１ |
| DE2733091C2 (de) * | 1977-07-22 | 1982-08-12 | Friedhelm 4600 Dortmund Heymann | Vorrichtung zur Bearbeitung der Oberfläche von unregelmäßige Konturen aufweisenden Körpern |
| JPS54128501A (en) | 1978-03-22 | 1979-10-05 | Squibb & Sons Inc | Polymyxin f and its manufacture |
| USRE32455E (en) * | 1978-10-16 | 1987-07-07 | Eli Lilly And Company | A-21978 antibiotics and process for their production |
| JPS5581584A (en) | 1978-12-14 | 1980-06-19 | Eiken Kagaku Kk | Culture for isolating serratia |
| JPS5648897A (en) * | 1979-09-25 | 1981-05-02 | Nitsusui Seiyaku Kk | Selective isolation medium for cholera bacillus |
| US4444883A (en) * | 1982-08-09 | 1984-04-24 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Method for the isolation and presumptive diagnosis of Bacillus cereus and tellurite medium therefor |
| CA1205029A (en) | 1984-02-21 | 1986-05-27 | George L. Evans | Selective agent for group a streptococci |
| JPS60184100A (ja) | 1984-03-02 | 1985-09-19 | Toray Ind Inc | ポリミキシンの固定化方法 |
| JPH062049B2 (ja) | 1984-03-24 | 1994-01-12 | 栄研化学株式会社 | レジオネラ菌選択分離用培地 |
| CA1267374A (en) | 1984-09-07 | 1990-04-03 | George Boguslawski | Enhanced inhibition of yeast cell growth |
| EP0173937A2 (en) | 1984-09-07 | 1986-03-12 | Miles Laboratories, Inc. | Method of increasing the permeability of yeast cells |
| US4912036A (en) | 1986-09-24 | 1990-03-27 | Eastman Kodak Company | Rapid differentiation of bacteria using cyclic polypeptide antibiotics |
| GB8624253D0 (en) | 1986-10-09 | 1986-11-12 | Harvey W | Endotoxin assay |
| US4870158A (en) * | 1987-01-05 | 1989-09-26 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Polymyxin lipopolysaccharide antigen and associated method |
| JPS63180860A (ja) | 1987-01-22 | 1988-07-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ｇ−ｃｓｆモノクロ−ナル抗体 |
| EP0328256A1 (en) | 1988-01-21 | 1989-08-16 | Owens-Corning Fiberglas Corporation | Glass fibers coated with agarose for use as column packing or chromatographic media for bioseparations |
| JPH0773509B2 (ja) | 1988-05-23 | 1995-08-09 | 味の素株式会社 | ビブリオ属細菌の迅速検出方法 |
| JP3085310B2 (ja) | 1990-04-26 | 2000-09-04 | 日本バイリーン株式会社 | 微生物除去材 |
| JPH04270965A (ja) * | 1990-05-18 | 1992-09-28 | Burton W Blais | オリゴペプタイド吸着担体の調製方法、及びこれを使用したリポ多糖類の検定と除去方法 |
| JPH0471478A (ja) | 1990-07-09 | 1992-03-06 | Bio Material Kenkyusho:Kk | 細胞培養用容器およびその製造方法 |
| US5080209A (en) | 1990-10-15 | 1992-01-14 | General Electric Company | Manual override of an automatic ratio controller in a hydromechanical transmission |
| JPH04200388A (ja) | 1990-11-29 | 1992-07-21 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 流行性非ａ非ｂ型肝炎ウイルス抗原ペプチドおよびこれをコードする核酸断片 |
| US5147441A (en) * | 1991-05-31 | 1992-09-15 | Megeed Mohamed E A | Biological product for soil improvement and method of application to soil |
| DE4227682C1 (de) | 1992-08-21 | 1993-10-07 | Em Te Vertrieb Erika Prochaska | Modifiziertes bakteriologisches Transportmedium |
| US6579696B1 (en) * | 1992-12-21 | 2003-06-17 | Promega Corporation | Polymyxin B conjugates |
| CA2261433A1 (en) * | 1993-12-09 | 1995-06-10 | Belinda Sanchez Ramirez | Composition comprising autologous epidermal growth factor |
| RU2115721C1 (ru) | 1994-01-05 | 1998-07-20 | Закрытое акционерное общество "Гекта" | Штамм bacillus polymyxa - продуцент антибиотика полимиксина м |
| US5648343A (en) * | 1994-02-28 | 1997-07-15 | The University Of Georgia Research Foundation | Method for treating LPS-mediated disorders |
| JP3652388B2 (ja) | 1994-10-03 | 2005-05-25 | 日水製薬株式会社 | セレウス菌分離用培地 |
| JP3687859B2 (ja) | 1994-10-31 | 2005-08-24 | ▲いん▼▲てつ▼ 小林 | 微生物輸送用培地 |
| KR970700994A (ko) * | 1994-12-13 | 1997-03-17 | 고야 마사시 | 헬리코박터 파일로리-전이증식된 몽고 들쥐, 그의 제조방법, 헬리코박터 파일로리 분리용 배지, 및 그들을 이용한 항-헬리코박터 파일로리 물질의 스크리닝 방법(helicobacter pylori-colonized mongolian gerbil, process for preparation the reof. medium for separating helicobacter pylori, and method of screening anti-helicobacter pylori-active substance by using the same) |
| CN1056407C (zh) | 1995-06-30 | 2000-09-13 | 齐涵 | 含有枯草芽胞杆菌的活菌制剂及其在烧伤治疗中的应用 |
| JP3215309B2 (ja) | 1995-11-07 | 2001-10-02 | 渡邊 定治 | 顆粒球マクロファージコロニー刺激因子の製造方法 |
| RU2113471C1 (ru) | 1996-06-05 | 1998-06-20 | Башкирский государственный медицинский университет | Штамм бактерий proteus mirabilis - продуцент термолабильного энтеротоксина |
| RU2113472C1 (ru) | 1996-06-05 | 1998-06-20 | Башкирский государственный медицинский университет | Штамм бактерий proteus mirabilis - продуцент термолабильного энтеротоксина |
| RU2132880C1 (ru) | 1997-07-31 | 1999-07-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Способ выявления возбудителя бруцеллеза |
| RU2139348C1 (ru) | 1997-10-06 | 1999-10-10 | Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им.Г.К.Скрябина РАН | Средство для лизиса клеток грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов |
| US20030008355A1 (en) * | 1998-08-28 | 2003-01-09 | Peter Harrison | High-affinity antibodies |
| RU2158758C2 (ru) | 1998-11-02 | 2000-11-10 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Питательная среда для накопления листерий |
| US6719973B1 (en) * | 1998-12-24 | 2004-04-13 | National University Of Singapore | Recombinant proteins and peptides for endotoxin biosensors, endotoxin removal, and anti-microbial and anti-endotoxin therapeutics |
| CA2376053A1 (en) * | 1999-06-03 | 2000-12-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agricul Ture | Selective media for recovery and enumeration of campylobacters |
| AU1083501A (en) * | 1999-10-13 | 2001-04-23 | Kallestad Laboratories, Inc. | Antibiotic-metal complex and methods |
| RU2223499C2 (ru) | 2000-04-12 | 2004-02-10 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Способ индикации возбудителя сибирской язвы в объектах внешней среды |
| DE10045016B4 (de) * | 2000-09-12 | 2004-07-29 | Heinrich-Pette-Institut | Retrovirale Vektoren mit Fremdsequenzinsertion zwischen retroviraler Primerbindungsstelle und retroviralem Spleißdonor |
| RU2203317C2 (ru) | 2001-05-04 | 2003-04-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Спрособ обнаружения bacillus anthracis в молоке |
| RU2213779C2 (ru) | 2001-08-27 | 2003-10-10 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Питательная среда для выделения лактобактерий |
| RU2214453C2 (ru) | 2001-08-29 | 2003-10-20 | Научно-производственное объединение "Питательные среды" | Питательная среда для накопления сибиреязвенного микроба |
| JP4071478B2 (ja) | 2001-11-12 | 2008-04-02 | 株式会社ユタカ技研 | 流体伝動装置用羽根車 |
| RU2223313C2 (ru) | 2001-12-26 | 2004-02-10 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Дифференциально-диагностическая среда для выделения листерий |
| RU2260040C2 (ru) | 2002-02-11 | 2005-09-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения инозина и инозин 5'-монофосфата, штамм бактерии, принадлежащей к роду bacillus - продуцент инозина (варианты) |
| RU2218395C2 (ru) | 2002-02-20 | 2003-12-10 | Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина | ШТАММ БАКТЕРИЙ Proteus vulgaris № 25, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИММУННЫХ ПРЕПАРАТОВ |
| CN1384200A (zh) | 2002-03-13 | 2002-12-11 | 杜念兴 | 畜禽去势基因疫苗(dna疫苗)的基因工程体 |
| MD2078G2 (ro) | 2002-03-14 | 2003-08-31 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Mediu nutritiv pentru cultivarea Campylobacter jejuni şi Campylobacter coli |
| MD2285G2 (ro) | 2002-09-27 | 2004-04-30 | Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова | Mediu nutritiv pentru cultivarea Campylobacter jejuni şi Campylobacte coli |
| RU2225441C1 (ru) | 2003-03-05 | 2004-03-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-производственное предприятие "Тринита" | Способ получения препарата коллагеназы |
| CN1292794C (zh) | 2003-08-22 | 2007-01-03 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 嗜水气单胞菌中溶血素的免疫刺激复合物的制备工艺 |
| KR20060063804A (ko) | 2003-09-19 | 2006-06-12 | 마쯔시다덴기산교 가부시키가이샤 | 캐시 메모리 및 캐시 메모리 제어 방법 |
| BR0305373A (pt) | 2003-11-06 | 2005-06-28 | Iseu Da Silva Nunes Nelson Edu | Imunomodulador agregado proteico de anidrido de fosfolinoleato-palmitoleato de amÈnia e magnésio e processo de sua obtenção e formulação |
| US20060004185A1 (en) * | 2004-07-01 | 2006-01-05 | Leese Richard A | Peptide antibiotics and peptide intermediates for their prepartion |
| JP4200388B2 (ja) | 2006-06-23 | 2008-12-24 | セイコーエプソン株式会社 | 印刷用紙、印刷制御プログラムを記録した媒体、印刷制御装置および印刷制御方法 |
-
2006
- 2006-06-02 SK SK83-2006A patent/SK287315B6/sk not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-05-11 SI SI200730430T patent/SI2021355T1/sl unknown
- 2007-05-11 ES ES07748761T patent/ES2350865T3/es active Active
- 2007-05-11 EP EP07748761A patent/EP2021355B1/en not_active Not-in-force
- 2007-05-11 PL PL07748761T patent/PL2021355T3/pl unknown
- 2007-05-11 DE DE602007008877T patent/DE602007008877D1/de active Active
- 2007-05-11 AT AT07748761T patent/ATE479703T1/de active
- 2007-05-11 WO PCT/SK2007/050009 patent/WO2007142611A1/en active Application Filing
- 2007-05-11 US US12/303,205 patent/US7951913B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL2021355T3 (pl) | 2011-02-28 |
| WO2007142611A1 (en) | 2007-12-13 |
| ES2350865T3 (es) | 2011-01-27 |
| EP2021355B1 (en) | 2010-09-01 |
| SI2021355T1 (sl) | 2011-01-31 |
| SK287315B6 (sk) | 2010-06-07 |
| ATE479703T1 (de) | 2010-09-15 |
| US20090253894A1 (en) | 2009-10-08 |
| US7951913B2 (en) | 2011-05-31 |
| EP2021355A1 (en) | 2009-02-11 |
| DE602007008877D1 (de) | 2010-10-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK832006A3 (sk) | Spôsob izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy | |
| US9394340B2 (en) | Purification process for lipopeptides | |
| TWI270575B (en) | Process of purifying vancomycin hydrochloride | |
| DK173231B1 (da) | Fremgangsmåde til udvinding af glykopeptidiske antibiotika | |
| KR20130062913A (ko) | 산화형 글루타티온의 결정 및 이의 제조 방법 | |
| CN112979756B (zh) | 达托霉素的提纯方法 | |
| RU2583053C2 (ru) | Способ отделения триптофана | |
| JPH10295396A (ja) | モエノマイシンａの製造法 | |
| EP1756055A1 (en) | Process for the purification of tryptophan | |
| US20210355160A1 (en) | Process for the purification of lipopolypeptide antibiotics | |
| CN101591333B (zh) | 一种提纯假单胞菌酸a的方法 | |
| KR100652320B1 (ko) | 테이코플라닌의 분리 및 정제 방법 | |
| US6790984B1 (en) | Process for purifying pravastatin sodium from a fermentation broth | |
| JPH036139B2 (sk) | ||
| JP2000351791A (ja) | ドキソルビシンの精製方法 | |
| KR101802191B1 (ko) | 테이코플라닌 회수방법 | |
| JPH08176199A (ja) | アフィニティークロマトグラフィーを用いたヒルジンの精製法 | |
| JPH0533715B2 (sk) | ||
| KR20130062912A (ko) | 산화형 글루타티온의 비결정 무정형 및 이의 제조 방법 | |
| CN112940083A (zh) | 一种高纯度硫酸多粘菌素b1晶型及其制备方法 | |
| JPH04187092A (ja) | マイトマイシンｃの精製法 | |
| JP2003300928A (ja) | ポリエンポリカルボン酸又はその塩類の精製回収方法 | |
| JP2005295897A (ja) | 抗生物質ｙｌ−０２７２９ｓ物質の製造方法 | |
| JPH0987268A (ja) | ゾフィエリンの精製法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20230602 |