SE469131B - Foerfarande foer selektiv blockering av aminogrupper - Google Patents

Description

ON x0 _. a.

(N 2 primära och/eller sekundära och/eller tertiära karaktären av amin- grupperna är det ofta möjligt att, ehuru i måttliga till låga ut- byten, selektivt skydda vissa aminofunktioner, medan andra amino- funktioner, vid vilka man önskar att en reaktion sker, lämnas oskyd- dade. Sådana förfaranden omfattar vanligen flerstegstransformationer innefattande isolering och rening av varje mellanprodukt. Det är ofta omöjligt att skydda alla andra aminofunktioner än den som man önskar skall undergå en transformation, såsom när två aminofunktio- ner har lika reaktionsbenägenhet, varvid i bästa fall endast vissa funktioner blockeras, vilka reducerar antalet bildade produkter vid en given reaktion och ger en blandning av produkter i dåliga utbyten av de önskade produkterna, som endast med svårighet kan isoleras och renas.

Enligt uppfinningen är det nu möjligt att på ett enkelt sätt och i goda utbyten framställa selektivt N-acylerade aminoglyko- sider, vari minst en aminofunktion har en tillgänglig, i grannställ- ning belägen hydroxylgrupp. Uppfinningen finner sin största använd- ning inom aminocyklitol-aminoglykosidkemin, där det nu är möjligt att med lätthet och i goda utbyten framställa N-acylerade derivat, vilka hittills har varit omöjliga att framställa eller endast har kunnat framställas i små mängder. Vidare är den selektivt N-acylera- de aminoglykosiden av tillräcklig renhet och erhålles i ett på förhand bestämbart utbyte utan isolering av den N-acylerade poly- aminomellanprodukten. å Före tillkomsten av denna uppfinning var tvàvärda metall- saltkomplex av i grannställning belägna amino- och hydroxylgrupp-par okända. Litteraturen [Bull. Chem. Soc. Japan, vol, §g, nr 6, 1235- 1248 (l966)] antyder existensen av koppar-ammoniumkomplex mellan aminer på ett chiralcenter och i grannställning belägna, vicinala hydroxylgrupper på ett chiralcenter in situ i utspädda ammoniumlös- ningar i vatten, vilka koppar-ammoniumkomplex användes för under- sökning avseende optisk vridning såsom analytiskt redskap för bestämning av det absoluta rymdsambandet mellan vicinala amino/- hydroxylgrupp-par.

Det har nu visat sig att tvåvärda övergångsmetallsalt- komplex av i grannställning belägna amino/hydroxylgrupp-par (vari amino- och hydroxylgrupperna eventuellt är vicinala och eventuellt -LT a. Ö'\ \f) Ål; 3 kan föreligga i ett chiralt centrum) kan bildas, och dessutom kan bildas i ett organiskt lösningsmedel med minsta möjliga mängd två- värd övergångsmetalljon utan användning av ammoniumhydroxid för bildning av en övergångsmetallammoniumjon (såsom kopparammoniumjon).

Det har även visat sig att aminoglykosid-övergångsmetallsalt- komplexen enligt uppfinningen förblir beständiga under acylerings- betingelser som överför en fri aminogrupp till ett N-acylerat deri- vat därav, samt vidare att övergångsmetallsaltkomplexen enligt uppfinningen hindrar de komplexbildade grupperna från att ingå i reaktionen. J Uppfinningen avser även ett förfarande för selektiv N- acylering av aminogrupper med en acylblockerande grupp, Y, i en aminoglykosid, varvid minst en av nämnda aminogrupper uppvisar en tillgänglig, i grannställning belägen hydroxylgrupp och minst en av nämnda aminogrupper saknar eller är steriskt mindre mottaglig för en tillgänglig, i grannställning belägen hydroxylgrupp, varvid man omsätter nämnda aminoglykosid i ett inert organiskt lösningsmedel med ett salt av en tvåvärd övergàngsmetallkatjon, vald bland koppar(II), nickel(II), kobolt(II), kadmium(II) eller med bland- ningar därav, varigenom det bildas ett komplex av nämnda aminoglyko- sid och nämnda övergångsmetallsalt och minst ett par av grupper bestående av nämnda aminogrupp med en tillgänglig, i grannställning belägen hydroxylgrupp, varefter man omsätter det bildade aminoglyko- sid-övergångsmetallsalt-komplexet med en aminblockerande reaktant uppvisande en acylblockerande grupp Y, varefter man omsätter det bildade aminoglykosid-övergângsmetallsalt-komplexet uppvisande acylblockerande grupper Y på icke komplexbildade aminogrupper med ett övergångsmetallutfällande reagens eller ammoniumhydroxid, var- igenom övergångsmetallkatjonen avlägsnas.

Uttrycket "en av nämnda aminogrupper med en tillgänglig, i grannställning belägen hydroxylgrupp" och “tillgängliga, i grann- ställning belägna amino- och hydroxylgrupp-par" inkluderar häri amino- och hydroxifunktioner, som är belägna på de i grannställning föreliggande kolatomerna på cis-vicinalt eller deekvatoriellt, trans-vicinalt sätt, samt omfattar även amino- och hydroxylgrupper som icke är belägna på vicinala kolatomer, men som rymdmässigt ligger nära varandra (dvs. de ligger tillräckligt nära för att vara v- 0\ Åk! ... *I 4 vätebundna) och tillgängliga för varandra. Med uttrycket "tillgäng- lig" avses, förutom att grupperna skall vara tillgängliga för varan- dra, att för att de skall kunna vara användbara vid förfarandet enligt uppfinningen måste de i grannställning belägna amino- och hydroxylgrupp-paren vara belägna på så sätt att de är steriskt tillgängliga för en tillförd reaktant, såsom en katjon av en tvåvärd övergångsmetall. Exempelvis i en 4,6-di-O-(aminoglykosyl)-2-deoxi- streptamin med en 2'-aminogrupp, såsom i sisomicin, tobramicin, verdamicin och gentamicin, Cl, Cla och C2 är, ehuru 5-hydroxigruppen i 2-deoxistreptamindelen föreligger i grannställning och är till- gänglig för 2'-aminogruppen, 5-hydroxigruppen så steriskt hindrad att ett salt av en tvåvärd övergångsmetall, såsom koppar(II)acetat, icke kan komma tillräckligt nära 5-hydroxi-2'-aminoparet för bild- ning av ett övergángsmetallsalt därav. övergàngsmetallsalter användbara såsom komplexbildande _ medel vid detta förfarande innefattar varje tvåvärt salt av koppar(II), nickel(II), kobolt(II) och kadmium(II). Bland dem som har den starkaste komplexbildande aktiviteten är tvåvärda övergàngs- metallsalter av svaga syror, företrädesvis svaga organiska syror, såsom bensoesyra, propionsyra och ättiksyra. Särskilt lämpliga tvåvärda övergàngsmetallsalter innefattar acetatsaltet av koppar(II), nickel(II), kobolt(II) och kadmium(II) och blandningar därav. Speciellt användbara är nickel(II)acetat, koppar(II)acetat och kobolt(II)acetat.

När envärda övergàngsmetallsalter användes, såsom koppar- (I)acetat, bildas koppar(I)acetatkomplexet av tillgängliga hydroxyl- och aminogrupp-par i låga utbyten och bindes så svagt att när N- acyleringssteget utföres, sker N-acylering på ställen vid svagt komplexbildade amincgrupper (ehuru med något lägre hastighet) såväl som vid icke komplexbildade aminogruppställen, vilket resulterar i produktblandningar och sämre utbyten av den önskade produkten.

Förfarandet enligt uppfinningen genomföres i ett inert organiskt lösningsmedel, innefattande varje organiskt lösningsmedel i vilket aminoglykosiden och övergångsmetallsaltet liksom den bilda- de aminoglykosid-övergångsmetallsalt-mellanprodukten är någorlunda lösliga och som icke i någon högre grad reagerar med reaktanterna vid detta förfarande. Särskilt lämpliga lösningsmedel är polära O\ \ O ...à C x! s. 5 aprotiska lösningsmedel, i synnerhet dialkylamider (såsom dimetyl- formamid) och dialkylsulfoxider (såsom dimetylsulfoxid). Polära protiska lösningsmedel, såsom lägre alkanoler, i synnerhet metanol och etanol, kan även användas vid förfarandet när sådana lösnings- medel erfordras av löslighetsskäl. Vid användning av protiska lös- ningsmedel är det vanligen önskvärt att använda en större mängd tvåvärt övergångsmetallsalt än vid användning av aprotiska lösnings- medel, eftersom protiska lösningsmedel försvagar komplexfunktionerna i aminoglykosid-övergàngsmetallsalt-komplexet.

Det är särskilt lämpligt att använda i huvudsak vattenfria lösningsmedel för att uppnå maximala utbyten. Vatten kan emellertid vara närvarande (vilket ofta är önskvärt av löslighetsskäl), även i mängder motsvarande upp till 25 volymprocent och däröver, utan att utbytena av selektivt blockerad N-acylerad aminoglykosid försämras, förutsatt att en ytterligare mängd tvåvärt övergángsmetallsalt användes, eftersom vatten är ett protiskt lösningsmedel, varigenom även komplexfunktionerna i aminoglykosid-övergångsmetallsaltkomplex- mellanprodukterna försvagas.

Vid detta förfarande synes en jämvikt föreligga mellan aminoglykosiden med minst ett tillgängligt, i grannställning beläget amino/hydroxylgrupp-par [A], övergångsmetallsaltet [såsom koppar- (II)acetat, Cu(0Ac)2] och lösningsmedlet, som kan åskàdliggöras på följande sätt: aprotiskt lösningsmedel [A]+cu(oAc)2+1ösningsmeae1 g_::____:__* A.cu(oAc)2.1ösningsmeae1+ +Cu(OAc)2.lösningsmedel+lösningsmedel protiskt [A]+0ué0Ac)'2+1ösningsmeae1 A.cu(oAc)2.1zssningsmeae1+ +Cu(OAc)2.lösningsmedel+lösningsmedel Med ett aprotiskt lösningsmedel gynnar jämvikten bildning av ett övergàngsmetallsaltkomplex av en aminoglykosid med tillgäng- liga, i grannställning belägna amino/hydroxylgrupper, medan ett organiskt, protiskt lösningsmedel eller närvaro av ett överskott av 469 .....\ CN ms. 6 vatten i ett organiskt, aprotiskt lösningsmedel gynnar nedbrytning av aminoglykosid-övergångsmetallsalt-komplexet. För att i det sist- nämnda fallet erhålla höga utbyten av aminoglykosid-saltkomplexet i lösning erfordras således större mängder övergångsmetallsalt för att driva jämvikten i den önskade riktningen än som är nödvändigt när ett i huvudsak vattenfritt aprotiskt lösningsmedel användes.

Vid genomförandet av förfarandet enligt uppfinningen är den molära mängden använt övergångsmetallsalt i det första steget av förfarandet minst lika stor som den molära mängden aminoglykosid gånger antalet tillgängliga, i grannställning belägna aminohydroxyl- grupp-par däri, och den molära mängden acyleringsmedel använt i det andra steget av förfarandet, som företrädesvis genomföres in situ, är ungefär lika stor som den molära mängden aminoglykosid gånger antalet aminofunktioner i den molekyl som skall skyddas.

När det emellertid föreligger en skillnad i reaktions- benägenhet för de icke komplexbildade aminerna kan man använda en mindre mängd N-acyleringsmedel, om man önskar N-acylera endast de mera reaktionsbenägna aminerna.

När aminoglykosid-övergångsmetallsalt-komplexet har omsatts med ett acyleringsmedel för N-acylering av icke komplex- bildade aminogrupper, avlägsnas lämpligen övergångsmetallkatjonen från det N-acylerade aminoglykosid-övergångsmetallsalt-komplexet med hjälp av ett övergàngsmetall-utfällningsmedel eller med ammonium- hydroxid. I det sistnämnda fallet sker avlägsnandet genom gynnad bildning av ett komplex med ammoniumhydroxid som är lösligt i ammo- niumhydroxid och vatten. Denna metod att avlägsna övergångsmetall- jonen är lämplig när det selektivt blockerade N-acylerade amino- glykosidderivatet är lösligt i organiska lösningsmedel, eftersom det sedan kan extraheras ur blandningen av vatten och organiskt lösningsmedel som innehåller ammoniumhydroxid-övergångsmetallsalt- komplexet.

Det är vanligen enklare att avlägsna övergångsmetallkatjonen med hjälp av utfällningsmedel kända inom detta tekniska område. Använd- bara utfällningsmedel omfattar dioxim av dimetylglyoxal, l,3-dikarbo- nylalkaner, såsom acetylaceton och heptan-3,5-dion såväl som sulfid- utfällningsmedel, såsom ammoniumsulfid, alkalimetallsulfider (såsom natriumsulfid), jordalkalimetallsulfider (såsom kalciumsulfid), jord- alkalimetallvätesulfider (såsom natriumvätesulfid) och svavelväte.

.Ra Ö\ \\o \ C *J -. X 7 Av de nämnda utgöres särskilt användbara utfällningsmedel av dioxim av dimetylglyoxal, acetylaceton och svavelväte.

Vid eliminering av övergångsmetallkatjonen är svavelvätet det lämpligaste utfällningsmedlet, eftersom det är lätt att helt enkelt låta svavelväte bubbla genom reaktionsblandningen; vidare utfälles den bildade övergångsmetallsulfiden fullständigt inom en kort period och kan med lätthet avlägsnas genom filtrering.

Acylblockeringsgrupperna Y och motsvarande acyleringsmedel med vilka de framställes såväl som metoder för deras eliminering efter en önskad kemisk transformation har utförts pà något annat ställe i molekylen. Acylblockeringsgrupperna Y, vilka enligt upp- finningen selektivt kan påföras icke komplexbildade funktioner i en aminoglykosid-övergångsmetallsaltkomplex-mellanprodukt, avses in- kludera bensyloxikarbonyl- och substituerade bensyloxikarbonylgrup- per, såsom p-nitrobensyloxikarbonyl och p-metoxibensyloxikarbonyl (vilka med lätthet kan elimineras genom katalytisk reduktion); aryloxikarbonylgrupper, såsom fenoxikarbonyl; och alkoxikarbonyl- grupper, såsom metoxikarbonyl, etoxikarbonyl och liknande (vilka företrädesvis avlägsnas genom basisk hydrolys); trikloretoxi- karbonylgrupper (elimineringsbara med zink i ättiksyra); tertiära arylalkoxikarbonylgrupper, såsom tert.-butoxikarbonyl och tert.- amyloxikarbonyl (elimineringsbara genom mild sur hydrolys); halogen- alkylkarbonyl, såsom kloracetyl (elimineringsbar med bas, tiokarba- mid eller liknande reaktant) och trifluoracetyl (med lätthet elimi- neringsbar under milt basiska betingelser); succinimido- och ftal- imidogrupper (med lätthet elimineringsbara med hydrazin) och alka- noylgrupper, såsom acetyl, propionyl och liknande såväl som aroyl- grupper, såsom bensoyl (vilka avlägsnas genom basisk hydrolys).

Omsättningsbetingelser nödvändiga för att införa något av nämnda N-acylderivat på en fri aminofunkticn är allmänt kända inom tekni- ken.

Aminoglykosider användbara såsom utgángsmaterial vid förfarandet innefattar varje aminoglykosid som uppvisar minst en aminofunkticn, vilken har en tillgänglig, i grannställning belägen hydroxylgrupp och även uppvisar minst en aminofunkticn, vilken an- tingen saknar tillgänglig, i grannställning belägen hydroxylgrupp och därför icke kan bilda komplex med ett övergångsmetallsalt eller dutförande av kemiska transformationer av pseudosackarider, xD ...så QN ...å 8 vilken steriskt är mindre tillgänglig för en i grannställning be- lägen hydroxylgrupp, varför varje på detta ställe bildat saltkomplex blir mindre beständigt än andra kraftigt komplexbildade amino/ hydroxylgrupp-par, varigenom aminofunktionen således blir tillgäng- lig för N-acylering i det andra steget av förfarandet.

Aminoglykosid-utgångsföreningarna kan vara substituerade med andra grupper än hydroxigrupper och kan innehålla heteroatomer, förutsatt att de icke reagerar med övergàngsmetallsalter eller med acyleringsmedlen. Aminoglykosid-utgàngsföreningarna vid föreliggande förfarande saknar därför företrädesvis sulfhydryl- och merkaptyl- grupper.

Aminoglykosid-utgångsföreningarna vid förfarandet enligt uppfinningen avses innefatta monocykliska, bicykliska och tricyklis- ka polyaminoarylhydroxider, såsom 2,4-diaminofenol, 2,4-diamino-l- naftol, 2,6-diamino-1-naftol, 1,4-diamino-2-naftol och 5,8-diamino- 1-naftol; såväl som polyaminocykloalkanoler, såsom (cis,cis,cis)- 2,4-diaminocyklohexanol och (trans,cis,trans)-2,4-diaminocyklohexa- nol och acykliska polyaminoföreningar, såsom 2,5-diaminohexanol.

I acykliska aminoglykosid-utgångsföreningar vid förfaran- det föreligger amino- och hydroxylgrupper i grannställning och är tillgängliga för varandra samt är belägna på sådant sätt att kol- kedjan (heterokolatomen) innehållande amino/hydroxylgrupp-paren, kan bilda en 5-, 6- eller 7-ledad ring tillsammans med övergàngsmetall- katjonen.

Förfarandet är särskilt användbart inom kolhydratkemin vid såsom 4-O-(6'-amino-6'-deoxiglukosyl)-deoxistreptamin, neamin, garamin, kana- min, paromamin och gentaminerna (såsom Cl, Cl¿,dC2, Czb, etc.)- Förfarandet har emellertid sin största användning inom amino- cyklitol-aminoglykosidkemin, varvid kemiska transformationer av amino- . glykosidæantibiotika kontinuerligt utföres för syntetisering av nya derivat med förbättrad antibakteriell aktivitet och/eller ett mera gynnsamt antibakteriellt spektrum. Flertalet av dessa transformationer utgöres av flerstegsförfaranden med lågt utbyte, varvid ett flertal steg är inriktade enbart pá att skydda amino- och/eller hydroxifunk- tioner med blockerande grupper innan man utför det väsentliga kemiska transformationssteget i försök att förbättra utbytet av den: önskade Pb 0\ V) U! ..\ transforuætionsprodukten. Enligt detta förfarande blockeras de amino- grupper som erfordrar skydd selektivt i ett utomordentligt utbyte i ett enkelt, 'perieaiekt förfarande. 4,5-bundna aminoglykosidantibiotika, innehållande deoxi- streptamin, som är användbara utgångsföreningar vid förfarandet, omfattar ribostamycin (vari l-amino-6-hydroxigrupp-paret överföres in situ till ett övergångsmetallsaltkomplex, varefter samtliga andra aminofunktioner Nßacyleras och övergångsmetallsaltet avlägsnas, den bildade L-N-osubstituerade poly-N-arylribostamycinen metyleras med användning av känd metyleringsteknik för bildning av l-N%metylribosta- mycin med antibakteriell aktivitet); xylostamycin, 3'-deoxiribostamycin och 3',4',5"-trideoxiribostamycin. Andra användbara utgångsföreningar omfattar 4-O-bunden streptamin, innehållande aminocyklitol-aminoglyko- sider, såsom 1,3-di-de-Neamidinodihydrostreptomycin.

Den lämpligaste utföringsformen av förfarandet består däri att aminogrupperna selektivt blockeras i ett antibakteriellt 4,6-di-0- -(aminoglykosyl)-1,3-diaminocyklitol-medel. Med förfarandet enligt upp- finningen är det nu möjligt att med lätthet och i gott utbyte framw ställa blockerade aminoglykosid-antibiotikumderivat, såsom 2',6'-di-N; -acyl, 3,6'-di-Nèacyl, 3,2',6'-tri-Nëacyl och l,3,2',6'-tetraderivat av 4,6-ai-o-(em1neg1ykeey1)-1,æaiemmeeykiiteiaerivet medelst ett perio- diskt tvåstegsförfarande, vilka samtliga har varit hittills okända och är värdefulla såsom mellanprodukter för framställning av anti- bakteriellt aktiva transformationsprodukter av moderaminoglykosiden.

En speciellt värdefull utföringsform är den varvid man framställer ett 3,2',6'-tri-Nßacylderivat av en 4,6-di-0-(aminoglykosyl)- -1,3-diaminocyklitol, såsom sisomicin, tobramycin, verdamicin, gentami- cin Cl, gentamicin Cla och gentamicin 02, vilka är värdefulla mellan- produkter vid framställning av motsvarande l-Nëalkylaminoglykosider (efter eliminering av Eèacylgrupperna vid 3,2'- och 6'-ställningarna), vilka är värdefulla antibakteriella medel beskrivna i den amerikanska patentskriften 4.002.742. Av de ovannämnda är 3,2',6'-tri-N>acy1siso- miciner, särskilt 3,2',6'-tri-Nëacetylsisomicin, av_stort värde såsom mellanprodukter av l-Nëetylsisomicin, ett kraftigt antibakteriellt medel.

C)\ MC) _.. x LN _.. x 10 Vid genomförandet av förfarandet enligt uppfinningen har det visat sig att blandningar av övergångsmetallsaltkomplex ibland med fördel kan användas för att ge goda utbyten av selektivt N- acylerade aminoglykosider. Man antar att detta beror på att vissa övergångsmetallsalter bildar mera kraftigt bundna övergångsmetall- saltkomplex med vissa tillgängliga, i grannställning belägna amino/ hydroxylgrupp-par än vad fallet är med andra övergångsmetallsalter.

När man således framställer 3,2',6'-tri-N-acetylsisomicin erhåller man förbättrade utbyten när förfarandet genomföres med användning såsom tvåvärda övergångsmetallsalter av en ekvimolär blandning av nickel(II)acetat och koppar(II)acetat (de totala molära ekvivalen- terna av övergångsmetallsalterna är ungefär 4 gånger större än de av sisomicin). Det därvid erhållna utbytet är lägst 90 %, jämfört med 76 %-igt utbyte när koppar(II)acetat användes separat. Det är särskilt lämpligt att använda kobolt(II)acetat såsom övergångs- metall, varvid man erhåller nästan teoretiska utbyten av väsentligen rena, selektivt blockerade N-acylerade derivat.

Genom att modifera mängden övergångsmetallsalt och acylerings- medel och ibland byta lösningsmedel kan man erhålla goda utbyten av l,3,2',6'-tetra-Nßacetylsisomicin istället för 3,2',6'-tri-N%acetylsiso- micin. Genom att således tillsätta ungefär 0,5-1 ekvimolär ekvivalent mängd koppar(II)acetathydrat per mol sisomicin i en vattenhaltig meta- nollösning, erhåller man in situ ett sisomicin-koppar(II)-acetatkomplex omfattande 3"-amino-4"-hydroxigrupp-par. Omsättningen därav in situ är ungefär 4 molekvivalenter ättiksyraanhydrid och därefter elimine- ring av koppar(II)katjonen genom utfällning i form av sulfidsaltet och därefter isolering och rening med användning av känd teknik ger l,3,2',6'-tetra-Nßacetylsisomicin i utbyten av nära 80 % av det teoretiska, en mellanprodukt värdefull vid transformation vid 3"-amino- gTuPPen- Förfarandet enligt uppfinningen ger även möjlighet att stegvis in situ framställa blandade N-acylderivat av de kvarvarande icke-komplexbildade aminogrupperna, när nämnda aminer har olika grader av reaktivitet. Alltefter typerna av N-acylgrupper införda i molekylen och deras relativa lätthett att avlägsnas är det möjligt att framställa varje önskad kombination av selektivt N-acylerade aminoglykosider. Således erhåller man exempelvis vid reaktion av sisomicin i 95 %-ig vattenhaltig metanol med ungefär en ekvimolär m, CA xffi) -..A LN _.. .B ll mängd koppar(II)acetat in situ ett sisomicin-koppar(II)acetat- komplex, som väsentligen innefattar 3"-amino- och 4"-hydroxigrup- perna. Omsättning av nämnda sisomicin-koppar(II)aoetat-komplex med ungefär en molekvivalent etyltioltrifluoraoetat ger ett monoacyl- derivat av den mest reaktionsbenägna icke-komplexbildade aminofunk- tionen däri, nämligen 6'-amino, för bildning in situ av 6'-N-tri- fluoracetylsisomicin-koppar(II)acetat-komplex. Genom att därtill sätta ungefär 3 molekvivalenter ättiksyraanhydrid till nämnda deri- vat in situ N-acetyleras de återstående tre icke-komplexbildade aminogrupperna för bildning av 1,3,2'-tri-N-acetyl-6'-N-trifluor- aoetylsisomicin-koppar(II)acetat-komplex. Efter förstöring av koppar(II)acetat-komplexet och efterföljande behandling av åter- stoden innehållande l,3,2'-tri-N-acetyl-6'-N-trifluoracetylsisomicin med ammoniumhydroxid medför hydrolys av 6'-N-trifluoracetylgruppen, utan att störa N-acetylgrupperna, isolering av 1,3,2'-tri-N-acetyl- sisomicin medelst känd teknik. 1,3,2'-tri-N-acylaminoglykosiderna är värdefulla mellanprodukter vid framställning av 6'-N-alkylamino- glykosiderna, vilka är värdefulla antibakteriella medel.

Genom att in situ bilda 6'-Nëtrifluoracetylsisomicinfkoppar- (II)-acetat-nickel(II)-acetatkomplex i dimetylsulfoxid och tillsätta tvâ ekvivalenter ättiksyraanhydrid, erhåller man ett di-Nßacetylderivat omfattande de två mera reaktiva icke-komplexbildade aminofunktionerna i 3- och 2'-ställningarna för bildning in situ av 3,2'-di-N¥acetyl-6'- -Nßtrifluoracetylsisomicin-koppar(II)-acetatkomplex, som efter elimine- ring av komplexet med svavelväte och hydrolys av 6'-N¥trifluoracetyl- gruppen med hjälp av milt basisk hydrolys ger 3,2'-di-Neacetylsisomicin. 3,2'-di-Neacetylaminocyklitol-aminoglykosiderna är värdefulla mellan- produkter vid framställning av 1,6'-di-Nëalkylaminoglykosider, värdefulla antibakteriella medel beskrivna i den belgiska patentskriften 847.900.

Man kan även framställa N-acylderivat av en aminoglykosid genom att in situ införa vissa N-acylderivat i alkylglykosid-över- gångsmetallsalt-komplexet, därefter förstöra komplexet och vidare N-acylera aminofunktionerna som tidigare gjorts inaktiva genom när- varon av komplexen. Genom att tillämpa denna procedur är det möjligt att erhålla ett l,3,3"-tri-N-aoylsisomicinderivat, en värdefull mellanprodukt för framställning av 2',6'-di-N-substituerade derivat, såsom 2',6'-di~N-alkylsisomicin med antibakteriell aktivitet. Således (in »o små ..-Ra 12 ger exempelvis behandling av sisomicin med ungefär 2-3 molekvivalenter nickel(II)-acetat i metanol in situ ett sisomicin-nickel(II)-acetat- komplex omfattande 3"-amino-4"-hydroxigrupp-par och l-amino-2"-hydroxi- grupp-par. Omsättning av sisomicin-nickel(II)acetatkomplexet in situ med ungefär 2 mol Netert.-butoxikarbonyloxiftalimid ger ett di-N-acyl- derivat omfattande de mera reaktionsbenägna icke-komplexbildade 2'- och 6'-aminogrupperna jämfört med den icke komplexbildade 3-amino- gruppen för bildning av 2',63-di-Nètert.-butoxikarbonylsisomicin-nickel- -(II)-acetatkomplex. Elimineringen av nickel(II)jonen såsom nickelsulfid och efterföljande reaktion in situ av det erhållna filtratet, inne- hållande 2',6'-di-Nëtert.-butoxikarbonylsisomicin med ättiksyraanhydrid ger l,3,3"-tri-Nëacetyl-2',6'-di-Netert.-butoxikarbonylsisomicin, som efter reglerad syrahydrolys in situ, såsom med 5%-ig trifluorättik- syra i tetrahydrofuran ger l,3,3”-tri-Nèacetylsisomicin.

' Den enligt ovan erhållna 2',6'-di-Nëtert.-butoxikarbonyl- sisomicinmellanprodukten kan alternativt isoleras såsom sådan och där- efter reduceras med litiumaluminiumhydrid i tetrahydrofuran för bild- ning av 2',6'-di-Nkmetylsisomicin, användbar såsom antibakteriellt medel.

Nämda diskussion som beskriver framställningen av selektivt Nëacylerade sisomicinderivat, särskilt värdefulla mellan- gprodukter framställda enligt förfarandet, åskådliggör flexibiliteten roch mångsidigheten av förfarandet och de värdefulla mellanprodukter som därvid erhålles. füppfinningen avser således även nya selektivt blockerade aminocyklitol-aminoglykosidderivat, som framställes vid förfarandet och kan definieras såsom 4,6-<1i-0-(aminog1ykosy1)-1,B-aiaminocykii- toler, vilka selektivt blockeras i ställningarna 3,2'- och 6'-ställ- ningarna, vilka väljes bland: 3,2',6'-tri-N¥Y-sisomicin, 3,2',6'-tri-NLY-verdamicin, 3,2',6'-tri-Nšï-tobramycin, 3,2',6'-tri-N>Y-gentamicin Cl, 3,2',6'-tri-N>Y-gentamicin Ola, 3,2',6'-tri-Nëï-gentamicin G2, 3,2',6'-tri-N¥Y-gentamicin Cza, 3,2',6'-tri-N>Y-gentamicin Cab, 3,2',6'-tri-N>Y-antibiotikum 66-4OB, ' 3,2',6'-tri-Nëï-antibiotikum 66-4OD, 3,2',6'-tri-NëY-antibiotikum JI-20A, 3,2',6'-tri-N¥Y-antibiotikum JI-ZOB, 3,2',6'-tri-N>Y-antibiotikum G-52 13 5-epi- och 5-epí-azidof5-deoxi-analoger av dessa; 3,2',6'-tri-NQY-kanamycin B, 3,2',6'-tri-NFY-3',4'-dideoxikanamycin B, 3,2',6'-tri-N¥Y-nebramycin faktor 4, 3,2',6'-tri-N¥Y-nebramycin faktor 5', 3,2',6'-tri-NIY-3',4'-dideoxi-3',4'-dehydrokanamycin B, 3,2',6'-tri-N¥Y-3',4'-dideoxi-6'-Nßmetylkanamycin B, och 3,2',6'-tri-N>Y-5-deoxisisomicin; ' _ vari Y är en acylgrupp, inklusive acetyl, 2,2,2-trikloretoxikarbonyl och bensyloxikarbonyl.

Av särskilt värde såsom mellanprodukter är de föreningar vari Y är lägre alkanoyl, företrädesvis acetyl. Om dessa är 3,2',6'- -tri-Nëacetylsisomicin speciellt lämplig.

Andra värdefulla 3,2',6'-tri-Nëacylaminocyklito1-amino- u glykosider är de vari Y är 2,2,2-trikloretoxikarbonyl, varvid en sne- ciellt lämplig förening är 3,2',6'-tri-N>(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)- -sisomicin, en värdefull mellanprodukt vid framställning av l-Nßacyl- -4,6;a1-o-(amin0g1y1<0sy1)-1,æaiaminocykiitøier, särskilt l-N-acyl- ' derivat av sisomicin, såsom l-N>acetylsisomisin, värdefulla såsom antibakteriella medel och såsom mellanprodukter vid framställning av motsvarande l-Nëalkylderivat.

Andra nya mellanprodukter är 4,6-di-O-(aminoglykosyl)- -1,3-diaminocyklitoler, vilka är selektivt blockerade i ställningarna 2',6', vilka väljes bland: 2',6'-di-NFY-sisomicin, 2',6'-di-NLY-verdamicin, 2',6'-di-NFY-tobramycin, 2',6'-di-N%Y-gentamicin Cl, 2',6'-di-NLY-gentamicin Cla, 2',6'-di-N4Y-gentamicin C2, 2',6'-di-NÄY-gentamicin Cza, 2',6'-di-N¥Y-gentamicin Céb, 2',6'-di-N¥Y-antibiotikum 66-4OB, 2',6'-di-N#Y-antibiotikum 66-4OD, 2',6'-di-N>Y-antibiotikum JI-20A, 2',6'-di-N#Y-antibiotikum JI-2OB, 2',6'-di-N4Y-antibiotikum G-52, 5-epi och 5-epi-azido-5-deoxi-analoger av dessa; 2',6'-di-NLY-kanamycin B, 2',6'-di-NFY-3',4'-dideoxikanamycin B, 2',6'-di-NÄY-nebramycin faktor 4, 2',6'-di-N=Y-nebramycin faktor 5', 2',6'-di-NÄY-3',4'-dideoxi-3',4'-dehydrokanamycin B, 2',6'-di-NëY-2',4'-dideoxi-6'-Nèmetylkanamycin B och 2',6'-di-N¥Y-5-deoxisisomicin; vari Y är en acylgrupp. 45 Û\ MO ...x (N .. x 14 Speciellt värdefulla derivat av de föregående är de vari Y är 2,2,2-trikloretoxikarbonyl eller tert.-butoxikarbonyl, speciellt 2',6'-di-Në(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-sisomicin och 2',6'-di-N; -(tert.-butoxikarbonyl)-sisomicin, värdefulla mellanprodukter för fram» ställning av 2',6'-di-Nëalkyl-4,6-di-0-(aminoglykosyl)-l,3-diamino- cyklitoler med antibakteriell aktivitet, såsom 2',6'-di-Nëetylsisomicin.

Andra nya mellanprodukter är 4,6-di-0-(aminoglykosyl)-1,3- -diaminocyklitoler, vilka selektivt blockeras i ställningarna 3,6' och som väljes bland 3,6'-di-NëY-kanamycin A, 3,6'-di-N#Y-gentamicin B, 3,6'-di-NLY-gentamicin Bl, 3,6'-di-NLY-gentamicin A3, 3,6'-di-N#Y-6'- -Nšmetylkanamycin A, vari Y är en acylgrupp, företrädesvis acetyl, tert.-butoxikarbonyl, bensyloxikarbonyl och 2,2,2-trikloretoxikarbonyl.

När Y är acetyl är de föregående derivaten värdefulla i huvudsak såsom mellanprodukter vid framställning av motsvarande 1-Nëalkylderivat.

När Y är tert.-butoxikarbonyl, bensyloxikarbonyl och 2,2,2-trikloretoxi karbonyl, är de föregående föreningarna av speciellt intresse vid frame ställning av motsvarande 1-NL(Y-amino-a-hydroxibutyryl), l-Në(B-amino- -a-hydroxipropionyl) och l-N>(í§-amino-a-hydroxivaleryl)-derivat, vilka när 3,6'-di-N-acylgrupperna avlägsnas, är kraftiga antibakteriella medel av känt slag.

Nämnda derivat erhållna enligt förfarandet enligt upp- finningen är användbara för framställning av 4,6-di-O-(aminoglykosyl)- -1,3-diaminocyklitoler med substituenter vid aminogrupperna, vilka icke skyddades under förfarandet för framställningen därav. Substi- tution i 1-ställning i molekylen ger särskilt lämpliga föreningar.

Uppfinningen avser således även ett förfarande för framställning av' l-Nësubstituerade derivat av 4,6-di-0-(aminoglykosyl)-1,3+diamino- cyklitolerna sisomicin, verdamicin, tobramycin, gentamicin Cl, gentami- cin Cla, gentamicin G2, gentamicin Cza, gentamicin 02.0, antibiotikum 66-40B, antibiotikum 66-4OD,_antibiotikum JI-20A, antibiotikum JI-2OB, antibiotikum G-52, 5~epi och 5-epi-azido-5-deoxi-analoger av.dessa; kanamycin B, 3',4'-dideoxikanamycin B, nebramycin faktor 4, nebramcin faktor 5', 3',4'-dideoxi-3',4'-dehydrokanamwcin B, 3',4'-dideoxi-6'- -Nëmetylkanamycin B, 5-deoxisisomioin, gentamicin B, gentamicin Bl, gentamicin A , kanamycin A, ößfl-metylkanamycin A, kanamycin C, anti- biotikum G-418, gentamicin A, gentamicin Al och gentamicin X2; vari //° l-N>substituenten är -C?-X , vari X är väte, alkyl, .Fr O\ vi) o... å; U-J ...ö 15 -alkenyl, cykloallcyl, cykloalkylalkyl, hydroxialkyl, aminoallqrl, mono- eller di-Hëalkylaminoalkyl, aminohydroxialkyl, mono- eller di-N;alkyl- aminohydroxialkyl, fenyl, bensyl eller tolyl, vilka alifatiska radikaler innehåller upp till 7 kolatomer och om de är substituerade med amino och hydroxi, uppbär substituenterna på olika kolatomer, och av farma- ceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav, varvid man omsätter någon av nämnda 4,6-di-0-(aminoglykosyl)-l,3-diaminocyklitoler i ett -inert organiskt lösningsmedel med ett salt av en tvåvärd övergångs- metallkatjon vald bland koppar(II), nickel(II), kobolt(II) och kadmiumf (II) eller med blandningar därav, varigenom det bildas ett komplex av nämnda 4,6-di-0-(aminoglykosyl)-l,3-diaminocyklitol mellan nämnda över- gångsmetallsalt och par av amino- och hydroxigrupper, varefter man in situ omsätter det bildade komplexet med en aminblockeringsreaktant med en acylblockerande grupp X, varefter man omsätter det bildade komplexet uppvisande acylblockerade grupper, Y, på icke-komplexbildade aminogrupper, med dn;övergångsmetallfällande medel eller med ammoniumf hydroxid. varigenom nämnda övergångsmetallkatjon avlägsnas och en 3,2',6'-tri-N%Y- eller en 3,6'-di-NëY- eller en 3,2'-di-N¥Y-4,6-di-O- -(aminoglykosyl)-1,3-diaminocyklitol erhålles, varefter man inför l-N; substituenten'_ _CfÉ__X , vari X har den angivna betydelsen och därefter avlägsnar samtliga aminoblockerade grupper närvarande i molekylen och isolerar det l-N¥substituerade derivatet såsom sådant eller i form av ett farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt. 0 Införing av l-Nësubstituenten - <-X omfattar reaktion av 3,2',6'-tri-N;Y- eller 3,6'-di-N¥Y- eller 3,2'-di-N¥Y-4,6-di-O- -(aminoglykosyl)-1,3-diaminocyklitolen, vari Y är en blockerande grupp som kan avlägsnas utan att skadligt påverka l-Nëacylsubstituenten, med en syra med formeln /0 HO-C-X vari X har den angivna betydelsen, med vilken som helst primära eller sekundär aminogrupp skyddad, i närvaro av en karbodiimid, eller med ett reaktionsbenäget derivat av nämnda syra, Enligt en lämplig utförings- form av detta förfarande användes 3,6'-di-N4Y-derivat av kanamycin A, gentamicin B och gentamicin Bl, vari Y är tertiär butoxikarbonyl eller bensyloxikarbonyl och acylgruppen i syran 1 HO-C-X -Lin Û'\ XC) ._ ...x CN _.. m. 16 är B-amino-a-hydroxipropionyl, I-amino-a-hydroxibutyryl e1le:~§-amino- -a-hydroxivaleryl, vari aminogruppen är skyddad.

* Ibt bör observeras att l-Nä(aminohydroxialkanoyl)-substituen- -ten i de på så sätt erhållna l-N;(aminohydroxialkanoyl)-aminocyklitol- -aminoglykosiderna kan föreligga i ILS-form eller i R-form eller i S- form. Enligt uppfinningen inkluderas samtliga dessa tre former.

Med hjälp av de nya 3,6'-di-Nëacylderivaten av gentamicinerna B och Bl, och av kanamycin A, framställda via övergângsmetallkomplexen, kan vardera av gentamicinerna B och Bl och kanamycin A numera överföras till motsvarande l-Nëaminohydroxialkanoylderivat i höga utbyten i ren form. Således kan exempelvis kanamcin A överföras till kristallin 3,6'-di-Nëbensyloxikarbonylkanamwcin A utan kromatografisk rening via di-nickel(II)-acetatkomplexet i dimetylsulfoxid i ett utbyte av över 80 %. Omsättning av nämda 3,6'-di-Nëacylderivat med N¥(S~ï>bensyloxi- karbonylamino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid och efterföljande behandw ling av enhållen_1-Nä(S-Yëbensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryl)- -3,6'-di-Näbensyloxikafbonylkanamycin A med väte och en katalysator för eliminering av bensyloxikarbonylskyddsgrupperna ger 1-N>(S-Yë -amino-a-hydroxibutyryl)-kanamycin A (även känd såsom amikacin och såsom antibiotikum BB~Kë8) av hög renhet i ett utomordentligt utbyte över 50 %. _ .

Uppfinningen innebär således en stor förbättring i förhållande till tidigare metoder för överföring av kanamycin A till amikacin, såsom den som beskrives i J. Antibiotics gå, 695-708 (1972), varigenom kanamycin A först överföres till 6'-Nëbensyloxikarbonylderivat i 45%- igt utobyte, som vid behandling enligt i huvudsak de ovan beskrivna metoderna ger renad amikacin i totalutbyten av lägre än 10 %. Likaledes kan man enligt uppfinningen överföra kanamycin A via 3,6'-di-Nëbensyloxi- karbonylmellanprodukten till l-N;(B-amino-a-hydroxipropionyl)-kanamy- cin A (även känd såsom 1-Nëisoserylkanamycin A) i totalutbyten högre än 50 %, jämfört med totalutbyten av lägre än 8 % via tidigare metoder med användning av 6'-Nëtert.-butoxikarbonylmellanprodukten, såsom beskrives i den amerikanska patentskriften 3,939,l43.

Likaledes erhåller man genom omsättning av gentamicin B i dimetylsulfoxid med ungefär 3 molekvivalenter koppar(II)acetat in situ motsvarande gentamicin B-koppar(II)acetatkomplex omfattande 3"-amino-4“-hydroxi- och l-amino-2"-hydroxigrupp-par. Omsättningen därav in situ med ungefär l molekvivalent N-tert.-butoxikarbonyloxi- ftalimid ger motsvarande 6'-Nëtert.-butoxikarbonylgentamicin B-di-koppar- n L « l 3 4-59 “z C f! 17 -(II)-acetatkomplex, medan omsättning med minst två mol N¥tert.-butoxi- karbonyloxiftalimid ger motsvarande 3,6'-di-Nßtert.-butoxikarbonylgenta- micin B-dikoppar(II)-acetatkomplex. Omsättning av vardera av nämnda komplex med svavelväte följt av separation av den bildade koppar(II)- sulfiden genom filtrering ger en lösning innehållande 6'-N>tert.- W butoxíkarbonylgentamicin B resp. 3,6'-di-Nßtert.-butoxikarbony1genta- micin B, Dessa kan isoleras ur respektive reaktionslösning och renas på känt sätt och därefter omsättas med N;(S-Y-bensyloxikarbonylamino- -a-hydroxibutyryloxi)-suceinimid eller med Ne(S-6êbensyloxikarbonyl- amino-a-hydroxipropionyloxí)-succinimid eller med Nè(S-¿§ëamino-a- -hydroxivaleryl)-succinimid för bildning av 1-N#(Sf Y-amino-a-hydroxi- butyryl)-gentamicin B, eller l-Në(S-B-amino-a-hydroxipropionyl)- gentamicin B_resp. 1-Në(SÅ gfamino-a-hydroxivaleryl)-gentamicin B, vilka alla ar värdefulla antibakneriella _neael._ alternativt utför man den kemiska genversienen via c-l in sifu uran isslering av 3,6uai-N-ferfQ-bunexikarbenylšentaniein B för bildning av motsvarande l-N>(S-T-amino-a-hydroxibutyryl)-gentamicin B eller_l-Ne(S-Bfamino-a-hydroxipropionyl)fgentamicin B-eller_l-Eë(S- -S-amino-a-hydroxivaleryl)-gentamicin B i utomordentligt utbyte av ' ungefär so a. Även denna innebär en- signifikant förbättring i förhållan- de till tidigare metoder för framställning av dessa föreningar, såsom beskrivas av P.JÄL. Ibniels et als, i J. Antibiøtics 21, 889 (1974) varvid man erhåller 1-Nëaminohydroxialkanoylgentamicin Cl-derivat i utbyten av lägre än 15 %.

Det bör även observeras att utbytet av 6'-N¥tert.-butoxi- karbonylgentamicin B är nästan kvantitativt och erfordrar icke någon kromatografisk rening i motsats till tidigare metoder, vilka ger utbyten av ungefär endast 46 % och erfordrar kromatografisk isolering.

När 3,6'-di-Nèacyl-gentamicin B-mellanprodukter, såsom 3,6' -di-Nëbensyloxikarbonylgentamicin B, användes för överföring av genta- micin B till ett 1-N;(aminohydroxialkanoyl)-derivat därav, såsom l-N#(B- -amino~a-hydroxipropionyl)-gentamicin B, ger reaktion av 3,6'-di-N; -acylderivatet med ett racemiskt medel, såsom N=(6-bensyloxikarbonyl- anino-u-hy arexiprepienyleri y-sueeininia, en 3, 6 uai-N-aeyl-l-N- (R, s- -aminohydroxialkanoyl)-gentamicin B-diastereoisomerisk blandning (såsom 3,6'fidi-N;(bensyloxikarbonyl)-l-Në(R,S-B-bensyloxikarbonylamino-d~ -hydroxipropionyl)-gentamicin B). Helt oväntat kan denna blandning med lätthet separeras via kromatografiska metoder till varje diastereo- isomer, såsom till 3,6'-di-Nëbensyloxikarbonyl-l-N;(R-B-bensyloxi- karbonylamíno-a-hydroxipropionyl)-gentamicin B och 3,6'-di-N#(bensyl- oxikarbonyl)-l-N;(S-B-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxipropionyl)- -gentamicin B, som efter elimínering av 3,6'-di~N#blockeringsgrupperna ä. (få \D _. \ Cm! 18 ger resp. diastereoisomeriska antibakteriella medel, såsom l-N¥(R- B-amino-a-hydroxipropionyl)-gentamicin B resp. l~N>(S-B-amino-a- -hydroxipropionyl)-gentamicin B. Alternativt ger eliminering av skydds- grupperna från 3,6'-di-N;(bensyloxikarbonyl)-1-N;(R,S,-B-bensyloxi- karbonylamino-a-hydfoxipropionyl)-gentamicin B föreningen l-Në(R,S-B- -amino-a-hydroxipropionyl)-gentamicin B, som kan erhållas i ren form fri från föroreningar genom kromatograferíng på silikagel men som därvid icke senareras i respektive diastereomerer.

Ytterligare mellanprodukter utgöres av aminoglykosid-över- gångsmetallsalt-komplex, i vilka minst en av aminogrupperna har en tillgänglig, i grannställning belägen hydroxylgrupp och nämnda salt är ett salt av en tvàvärd övergàngsmetallkatjon, vald bland koppar- (II), nickel(II), kobolt(II) och kadmium(II) eller en blandning av nämnda salter, vilket aminoglykosid-övergàngsmetallsalt-komplex har komplexa funktioner mellan nämnda tvàvärda övergångsmetallsalt och nämnda tillgängliga, i grannställning belägna amino- och hydroxyl- grupp-par, varvid antalet komplexa funktioner icke är större än antalet av nämnda tillgängliga, i grannställning belägna amino- och hydroxylgrupp-par.

Aminoglykosid-övergångsmetallsalt-komplexen användes vanligen såsom mellanprodukter in situ i ett inert lösningsmedels- medium i vilket de framställes, och det är därför vanligen icke nödvändigt att isolera övergångsmetallsaltkomplexet. En betydelse- full aspekt utgöres således av en komposition innehållande ett aminoglykosid-övergångsmetallsalt~komplex i ett inert organiskt lösningsmedel. Övergångsmetallsaltkomplexen kan emellertid isoleras, antingen genom avdunstning av lösningsmedelsmediet i vakuum eller genom utfällning av komplexet genom att hälla lösningen därav i eter, varigenom man erhåller ett aminoglykosid-övergångsmetallsalt- komplex i form av ett amorft pulver, som karaktäriseras av färger som skiljer sig från övergångsmetallsaltet och från aminoglykosid- prekursorn och som även karaktäriseras av IR-spektret taget i det fasta tillståndet.

Särskilt lämpliga övergångsmetallsaltkomplex är sådana som erhålles från koppar(II)acetat, nickel(II)aoetat, kobolt(II)acetat eller blandningar därav, i synnerhet sådana vari aminoglykosiden är en aminocyklitol-aminoglykosid, företrädesvis en 4,6-di-O-(amino- glykosyl)-1,3-diaminocyklitol. ...s (JJ ...A 19 Inkluderade bland de lämpliga aminoglykosid-övergångs- metallsalt-komplexen är sisomicin-dikoppar(II)acetat-komplex, siso- micin-dikobolt(II)acetat-komplex, sisomicin-dinickel(II)acetat- komplex och det blandade sisomicin-koppar(II)aoetat-nickel(II)- acetat-komplexet, av vilka samtliga är värdefulla mellanprodukter för framställning av selektivt blockerade 3,2',6'-tri-N-acyl- sisomicinföreningar.

Andra värdefulla aminoglykosid-övergângsmetallsalt-komplex är gentamicin B-dikoppar(II)acetat-komplex, gentamicin B-dikobolt- (II)acetat-komplex och kanamycin A-dinickel(II)acetat-komplex, vilka är värdefulla mellanprodukter för framställning av 3,6'-di-N-acyl- derivat av gentamicin B och kanamycin A, såsom 3,6'-di-N-tert.-but- oxikarbonylgentamicin B och 3,6'-di-N-bensyloxikarbonylkanamycin A.

Uppfinningen åskàdliggöres närmare medelst följande exempel, i vilka de angivna temperaturerna avser Celsius-grader.

Exempel 1. 3,2',6'-tri-Nëacetxlsisomicin A. Via koppar(II)acetatkomplex Försätt 9 g (45 mmol) koppar(II)acetathydrat till en omrörd lösning av 1,3 g (2,9 mmol) sisomicin i 16 ml vatten och 54 ml dimetyl- formamid. Omrör 35 minuter vid rumstemperatur, försett därefter det bildade koppar(II)saltkomplexet droppvis med en hastighet med ungefär 25 droppen/minut med 9,3 m1 av en im lösning av ättiksyraannyaria i 9,3 møl dimetylformamid. Omrör reaktionsblandningen ytterligare 30 minuter, tillsätt 30 ml vatten och bubbla svavelväte genom lösningen under ungefär 10 minuter, omæör blandningen ytterligare 30 minuter, filtrera lösningen genom en kudde av Celite och tvätta koppar(II)- sulfidåterstoden med 3;x 20 ml vatten. Koncentrera dëtâ med vatten- tvättvätskorna kombinerade filtratet och kromatografera den erhållna återstoden på silikagel (150 g, 60-200 mesh), eluera med kloroform: metanolzammoniumhydroxid (30:lO:l). Kombinera lika fraktioner, såsom bestämts med tunnskiktskromatografering på silikagel med användning av ett lösningsmedelssystem bestående av kloroformzmetanolzammonium- hydroxid (2:l:0,34) och índunsta fraktionerna innehållande den väsent- liga produkten i vakuum och lyofilisera den erhållna vattenblandningen till en återstod omfattande 3,2',6'-tri-Nëacetylsiscmicin (l,29 g, 76 % utbyte); [a]š6 + l86,7° (C 4,4 i Vatten); pmr (ppm) (IbO): 51,22 (4"-C-CH3); 1,94, 1,98, 2,0 (Nra0ëtyler); 2,51 (3"-N#CH3); ha \Ö Ms CN Mm 20 2959 (Hfšna J2us3n=995HZ)§ 5910 (H-lus 'Jl|n2u=4v0 HZ); 5951 (H“l'9 Jl.,2,=2,5 Hz; meeepektrum= (mf°)*m/e 573, även mye 392, 374, 364, 346, 233, 215, 2Û5, 187, 150, 443, 425, 415, 397, 159, °2sH43°loNs°H2°°3 Beräknat: C 49,13 H 7,14 N 11,02 % runner: c 49,10 H 7,02 N 11,38 % B. Via blandning av koppar§II2acetat och nickel§II2-acetatkomplex (1) sätt 8 g (40 mel) kopper(lI)eeetexhyaret een lo g (40 mmol) nickel(II)acetattetrahydrat till en omrörd lösning av 8,94 g (20 mmol) sisomicin i 400 ml dimetylsulfoxid. Tillsätt efter 30 - minuter vid rumstemperatur droppvis en lösning av 5,4 ml ättiksyra- Äanhydrid i 50 ml tetrahydrofuran (60 mmol). Efter avslutad tillsats omrör reaktionsblandningen ytterligare 30 minuter. Häll reaktions- bleeaningen 1 1,5 liter eæer een blenae innehållet omsorgsfullt.

Efter det att blandningen fått avsätta sig dekantera eterskiktet.

-Upprepa denna procedur tre gånger med användning av 500 ml eter varje gång. Lös den halvfasta återstoden i 400 ml metanol och bubbla svavel- väte genom lösningen för att avlägsna koppar- och nickel(II)-joner.

Avlägsna de fasta substanserna genom filtrering genom Celite och tvätta återstoden i metanol. Kbncentrera de kombinerade filtraten i vakunm och lös återstoden i 150 ml vatten. Behandla vattenlösningen med Amberlite IRA-4018-jonbytarharts i hydroxidoykeln, tills pH är ungefär 9. Avlägsna hartset genom filtrering, tvätta omsorgsfullt och antingen lyofilisera vattenlösningen för bildning av 3,2',6'-tri-N>acetylsisomicin i 90%-igt utbyte (l0,3 g) eller koncentrera vattenlösningen till en tjock siraps- liknande substans, lös återstoden i minsta möjliga mängd isopropanol och utfäll produkten med ett överskott av eter. (2) Efter eliminering av koppar(II)- och nickel(II)-jonerna genom behandling med svavelväte och filtrering kan man alternativt koncentrera filtratet och lösta återstoden i minsta möjliga mängd isopropanol och utfälla produkten med överskott av eter för bildning av 3,2',6'-tri-Nëacetylsisomicinättiksyrasalt i 90%-igt utbyte.

C. Via koboltgllzacetatkomplex . (1) Omrör 0,447 g (1 mmol) sisomicin i 20 ml dimetylformamid och tillsätt 0,516 g (2,07 mmol) kobolt(II)acetattetrahydrat. Omrör 20 minuter vid rumstemperatur, försätt sedan kobolt(II)acetatkomplexet som därvid bildats droppvis med lM lösning av ättiksyraanhydrid i 3 ml tetrahydrofuran. Fortsätt omröringen en timme, tillsätt 10 ml vatten och bubbla svavelväte genom lösningen, tills allikobolt(II) ut- fällts. Avlägsna kobolt(II)sulfiden genom filtrering genom en kudde av Celite och tvätta återstoden med vatten. Indunsta filtratet i vakuum cs Cm vi) ._ å. od ..-X 21 och lös den erhållna återstoden i minsta möjliga mängd kloroform: metanolzammoniumhydroxid (2:l:O,35). För lösningen genom en pelare av silikagel (50 g. 60-200 mesh), tvätta pelaren med samma lösnings- medel. Tillvaratag de homogena fraktionerna innehållande 3,2',6'-tri- -Nëacetylsinmicin såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, indunsta de kombinerade fraktionerna i vakuum och lyofilisera den erhållna återstoden för bildning av 3,2',6'-tri-Nhacetylsisomicin (utbyte = 0,498 g, 88 % teoretiskt). (2) I nämnda procedur kan man genom att använda dimetyl- sulfoxid i stället för dimetylformamid och isolera och rena den erhållna produkten enligt exempel lB erhålla 3,2',6'-tri-Nëacetylsisomicin i goda utbyten.

D. gpvändning av acgtylaceton såsom övergångsmetallutfällningsmedel -ßAnvänd«~~if procedurerna enligt exempel 1A, lB och lC acetyl-aceton i stället för svavelväte såsom övergångsmetallutfäll- ningsmedel och separera genom filtrering av den erhållna fällningen av motsvarande övergångsmetallacetyl-acetonat, isolera och rena var och en av de erhållna produkterna på samma sätt som angivits för framställ- ningen av 3,2',6'-tri-N#acetylsisomicin.

Exempel 2. §¿g!,6'-tri-Nëacetglverdamicin via koppar(II)acetatkomplex Försätt en omrörd lösning av 4,61 g (10 mmol) verdamicin i 3oo m1 aimetyiformamia och 90 m1 vatten med 14 g (70 mmol) kopparun- acetatmonohydrat, omrör reaktionsblandningen vid rumstemperatur under ungefär 30 minuter, försätt därefter det bildade koppar(II)saltkom- plexet droppvis med 33 ml lM lösning av ättiksyraanhydrid i dimetyl- formamid (3,3 ekvivalenter). Fortsätt omröringen vid rumstemperatur under ungefär 18-20 timmar, tillsätt därefter vatten oöh bubbla svavelväte genom lösningen. Filtrera av den bildade kopparsulfiden genom filterhjälpmedel på en sintrad glastratt och skölj med vatten (50-200 ml). Indunsta filtratet i vakuum, lös den erhållna återstoden i vatten och install pH i vattenlösningen på ungefär 9 med användning av Amberlite IRA~40lS-jonbytarharts i hydroxidformen. Frystorka lös- ningen till en återstod omfattande 3,2',6'-tri-Nëacetylverdamicin (5,5 g). Rena genom kromatografering på 300 g silikagel (60-200 mesh) och eluera med kloroformzmetanol:ammoniumhydroxid (28 %) (30:l0:l).

Kombinera lika fraktioner, såsom fastställts genom tunnskiktskromato- grafering, och indunsta de kombinerade fraktionerna i vakuum till en återstod omfattande 3,2',6'-tri-N-acetylverdamicin, utbyte l,68 g, (2,8 mmol, 28 % av det teoretiska); pmr (ppm) (Dë0)= 51,25 (4“-C-CH3); Ö\ .v\.o EQ --.Ä 22 1,36 (6'-C-cH3, J6.,7.=7Hz); 1,97, 2,04 (N-aootyiefl; 2,56 (-3"-N-cH3); 4991 (H"4")§ 5:11 (H"'1'9J 1 = 432)? 5960 (d, H-l", 111921: = 295 HZ)§ masspoktrum: m/o 587 [m].l;' šåz, 374, 364, 346, 233, 215, 205, 187, 457, 439, 429, 411, 183.

Exempel 2. §,2',6'-tri-N-(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-derivat av sisomicin och gentamicin Cla via koppar(II2acetatkomplex A. §,2',6'-tri-N-(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-sísomicin sätt 14 g (70 mmol) kopparulfiaoetatnyarat till en omrörd lösning av 5,0 g (l1,1 mmol) sisomicin i 300 ml dimetylsulfoxid, omrör 45 minuter och försätt det därvid bildade koppar(II)sa1tkomp1exet med 9,25 g (32 mmol) N-(2,2,2-trikloretoxikarbonyloxi)-succinimid i por- tioner under 2-3 minuter. Omrör den erhållna gröna lösningen en timme, utspäd reaktionsblandningen med 2N ammoniumhydroxid (3 liter) och extra- hera med 2 x 600 ml etylacetat. Kombinera de organiska extrakten, tvätta med 600 ml 2N amoniumhydroxid, innehållande 60 g natriumklorid, .torka över natriumsulfat och indunsta i vakuum. Kromatografera den bildade återstoden på silikagel (300-350 g), eluera med en kloroformz metanol:koncentrerad ammoniumhydroxid-lösningsmedelsblandning (7:2:0,1, volym). Kombinera de lika eluaten, innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinerade eluaten i vakunm, torka den bildade återstoden vid 60° och 0,1 mm Hg för bildning av 3,2',6'-tri-N-(2,2,2-trikloretoxikarbony1)- -sisomicin, utbyte 7,52 g (77 % teor,); smältpunkt 124-l27° [a]š6 +9l,O° (o 0,5 i Kloroform» pmr (ppm) (cDc13)= 51,17 (4"-c-cH3) 2,58 (3"-N-cH3) och 4,77 (-CH¿CCl3).

B. },2',6'-tri-N-(2,2,2-trikloretogikarbonyl)-gentamicin Cla_ Sätt 2,8 g (14 mmol) koppar(II)acetathydrat till en omrörd lösning av 1,0 g (2,22 mol) gentamicin Ola i 56 ml dimetylsulfoxid vid 250. Fortsätt omröringen en timme, försätt däràfter det bildade koppar- (II)saltkomp1exet portionsvis med 1,8 g (62 mmol) N-(2,2,2-trikloretoxi- karbonyloxi)-succinimid under 15 minuter. Fortsätt omröringen två timmar, utspäd reaktionsblandningen med 800 ml 2N ammoniumhydroxid och extra- hera med 3 x 75 ml etylacetat. Indunsta de kombinerade extrakten i vakuum och kromatografera den erhållna återstoden på silikagelpelare (110 x 2,5 cm), eluera första med 250 ml kloroform och eluera sedan med kloroformzmetanol:koncentrerad ammoniumhydroxid (7:2:0,1, volym).

Kombinera de lika eluaten, innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinerade eluaten till en återstod av 3,2',6'-tri-N-(2,2,2-trik1oretoxikarbonyl)- Ls- O\ \ f' .._ à (N --.s 23 -gentamicin Cla, utbyte 1,51 g (78 % teor.); [d]š§ +80,0° (c 0,3 i klorofomnyfiš 3330, 1730, 1520, 1040, 1025 onfl; pmr (rpm) (011013): 51,14 (4"-0-0H3'), 2,55 (3"-N-0H3) och 4,64 (--0H20013).

Exempel 4. 2',6'-di¿N¥substituerad sísomicin A.~2',6'-di-Nëš2,2,2-trikloretoxikarboggl2-sisomicin via nickel(II)- acetatkomplex sätt 5 g (11,1 mmol) sisomioin ooh 15 g (75 moi) niokolun- acetathydrat till 350 ml metanol och omrör tills saltet löser sig.

Försätt lösningen av det bildade nickel(II)saltkomplexet kylt i isbad med 6,40 g (22 mmol) Në(2,2,2-trikloretoxikarbonyloxi)-succinimid i por- tioner under 2-3 minuter och omrör reaktionsblandningen vid rums- .temperatur en timme. Sätt 5 ml koncentrerad ammoniumhydroxid till reak- tionsblandningen, indunsta i vakuum till en volym av ungefär 100 ml, tillsätt 500 ml 2N ammoniumhydroxid tillsammans med 50 g natriumklorid och extrahera med 3 x 300 ml kloroform. Kombinera de organiska faserna, torka över natriumsulfat och iñdunsta; Kromatografera den erhållna åter- stoden på 300 g silikagel och eluera med en kloroform:metanol:koncen» tror-aa ammoniumhydroxialassningsmeaeisbiananing (3=1=o,1, volym). Kombi- nera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom bestämts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinerade fraktioner na i vakuum. Torka fällningen vid 60°, 0,1 mm Hg, till en återstod av 2',6'-di-NF(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-sisomicin, utbyte = 5,80 g (72 % soon), smältpunm 115-119°; m? + 94° (o 0,4 i klorofom), pmr (ppm) (CDCl3): 51,16 (4“-C-CH3); 1,33 (Hè2, J2ax,2eq=Jl,2ax=J2ax,3= 10 112); 2,60 (3"-N-0H3); 4,73 (-0H20013); 4,95 (H-i" ooh 11-40; 5,50 (Hël', J1',2' = 3Hz); 6,28 (2'-NH, J=8 Hz) och 7,45 šö'-NH).

B. 2',6'-di-Nëtert.-butoxikarbonylsisomicin via koppar(II)-acetatkomplex sätt 0,6 g (3 mmol) koppal-(Inaoetatnyarat :111 en iosnnlg av 447 mg (1 mmol) sisomicin i 10 ml dimetylsulfoxid och omrör l0 minuter vid rumstemperatur. Försätt det därvid bildade koppar(II)sa1tkomplexet droppvis med en lösning av 576 mg (2,2 mmol) N-tert.-butoxikarbonyl- oxíftalimid i 3 ml dimetylsulfoxid. Omrör 18 timmar vid rumstemperatur och sätt sedan reaktionslösningen droppvis till 75 ml omrörd dietyleter.

Lät den erhållna fällningen avsätta sig, dekantera dietyleterlösningen och triturera fällningen två gånger med 75 ml dietyleter. Lös fäll- ningen i metanol och bubbla svavelväte genom metanollösningen, avskilj den erhållna koppar(II)sulfidfällningen genom filtrering, avjonisera metanollösningen med 20 g Amberlite IBA-4018 (OHSÖ-jonbytarharts, J» CN. ko (Al .. å. 24 filtrera, koncentrera filtratet i vakuum och kromatografera den erhållna återstoden på 75 g aluminiumoxid i en pelare (2,4 x 30 cm), eluera med kloroformzmetanol:koncentrerad ammoniumhydroxid (30:lO:l, volym). Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinerade fraktionerna och frystorka den erhållna återstoden för bildning av 2',6'-di-Nëtert.-butoxikarbonylsisomicin, utbyte 258 mg (40 % teor.); masspektrum: (Mf') m/e 647, även m/e 547; 530; 517, 499, 489, 471; 462; 350, 332, 322, 304; 191; 160- 'C. 2',6'-di-Nëtert.-butoxikarbonylsisomicin via kobolt(II)acetatkomplex eller via nickelšïlzacetatkomplex Genom att använda metanol såsom lösningsmedel i stället för dimetylsulfoxid i metoden enligt exempel 4B och antingen nickel(II)- acetat eller kobolt(II)acetat såsom övergångsmetallsalt i stället för koppar(II)acetat erhåller man 2',6'-di-Nètert.-butoxikarbonylsiso- micin i förbättrade utbyten. _ Exempel 2. ;¿},2(,6'Ätetra-Nëacetglsisomicin via koppar§II2acetatkomplex saw 49 g (24,5 mmoi) kopparunacetatnyarat till en omröra lösning av 22 g (49,2 mmol) sisomicin i 91%-ig metanol i vatten.

Fortsätt omröringen av lösningen i ett isvattenbad under 15 minuter och försätt det därvid bildade koppar(II)saltkomplexet droppvis under 10 minuter med 21 ml (226 mmol) ättiksyraanhydrid, varvid temperaturen upprättnälies under 25°. omrör reaktionsblandningen tre timmar via rumstemperatur och bubbla därefter svavelväte genom lösningen. Avlägsna den erhållna fällningen av kopparsulfid genom filtrering genom Celite och tvätta återstoden med metanol. Kombinera filtratet och tvättvätskor- na och koncentrera i vakuum. Kromatografera den erhållna återstoden på 600 g silikagel (60-200 mesh) och eluera med en lösningsmedelsbland- ning av kloroformzmetanolzkoncentrerad ammoniumhydroxid (30:l0:l).

Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta i vakuum och lyofilisera den erhållna återstoden för bildning av l,3,2',6'- -tetra-Nëacetylsisomicin, utbyte 23,5 g (78 % teor.); [a]šF +l9l° (c, 0,2 i vatten); pmr (ppm) (Dë0)= 31,18 (C-CH3); 1,88-1,98 (N#ace- tyier), 2,48 (N-cny; 4,88 (H-4'); 5,07 (H-i", _1122" = 4 Hm; 5,48 (H#l',Jl',2' = 3Hz); masspektrum: (M+°) m/e 615; även m/e 592, 550; 485, 467, 457, 439; 434, 416, 406, 388; 275, 257, 247, 228; 211; 160; F" QR MO f-š. f h! .. B 25 Exemgel 6. l,3,2'-tri-N-acetylsisomicin A. 6!-N-trifluoracetylsisomicin via koppar(II)acetatkomplex Sätt 17,48 g (87,3 mmol) koppar(II)acetathydrat till en omrörc mening av 40 g (89,5 mmol) sisomicin i 3,12 iiter 95%-ig metanøi i vatten. Omrör fem minuter, och försätt det därvid erhållna koppar(II)- saltkomplexet droppvis under tre minuter med ll,65 ml (9l,9 mmol) tri- fluortiolacetat. Fortsätt omröringen en timme och tillsätt ytterligare 1,6 ml (l2,45 mmol) etyltrifluortiolacetat. Denna reaktionslösning: innehållande 6'-N-trifluoracetylsisomicin är den som användes i för- farandet enligt exempel 6B.

B.~åï§,24-tri-N-acetzlsisomicin Kyl den enligt exempel 6A erhållna reaktionsblandningen i isvattenbad och tillsätt droppvis 28 g (280 mmol) ättiksyraanhydriâ med en hastighet av 25 droppar per minut. Omrör 18 timmar vid rums- temperatur, bubbla sedan svavelväte genom lösningen under 10 minuter.

Avlägsna den utfällda koppar(II)sulfiden genom filtrering genom en kudde av Celite. Indunsta filtratet i vakuum, lös den erhållna åter- stoden i 1 liter koncentrerad ammoniumhydroxid och omrör tre timmar vid rumstemperatur. Koncentrera lösningen i vakuum och kromatografera den erhållna återstoden på 4,5 kg silíkagel (60-200 mesh) och eluera med ett lösningsmedelssystem bestående av kloroform:metanol:koncentrerad ammoniumhydroxid. Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, koncen- trera de kombinerade fraktionerna i vakunm och lyofilisera den erhållna återstoden för bildning av 1,3,2'-tri-N-acetylsisomicin; [a]êf +l9l,5° (c 0,3 i vatten); pmr (PPM) (D20): Sl,3l (C-CH3); 1,92, 1,94, l{96 (N-acetylern 2,82 (N-cH3); 5,15 (H-1",J1",2." = 3,5 Hz); 5,55 (H-:Lg Jlgz' = 2,5 212); masspektrum: (M*°) 573 även m/e 443, 425, 415, 397; 275, 257, 247, 229; 434, 416, 406, 388; 169, 160. ' Exemgel 7. 6'-N-hydrokarbonyloxikarbonylaminoglykosider A. 64+N-bensyloxikarbonylgentamicin B via koppar(II)kloridkomplex Sätt 0,34 g (2 mmol) koppar(II)kloriddihydrat till en omrörd lösning av 0,964 g (2 mmol) gentamicin B i 3 ml vatten och 30 ml di- metylsulfoxid. Omrör 20 minuter vid rumstemperatur och försätt därefter det in situ erhållna koppar(II)saltkomplexet droppvis med en lösning av 1,105 g (4 mmol) N-bensyloxikarbonyloxiftalimid i 5 ml dimetylsulfoxid. Övervaka reaktionsförloppet genom tunnskiktskromatografering på silika- gel med användning av ett lösningsmedelssystem bestående av kloroform: ..{.":=.

CH 'š CJ-I ...mh 26 metanolzkoncentrerad ammoniumhydroxid (2:l:O,35). När reaktionen är fullständig, som fastställts genom tunnskiktskromatografering (ungefär tre timmar) tillsätt l0 ml vatten till reaktionsblandningen och bubbla svavelväte genom lösningen. Avlägsna den erhållna fällningen av koppar- (II)sulfid genom filtrering genom en kudde av Celite och tvätta åter- stoden med metanol. Omrör det med metanoltvättvätskan kombinerade filt- ratet tillsammans med Amberlite IRA-40lS (OHQ). Avfiltrera hartset och tvätta med metanol. Indunsta det kombinerade filtratet och metanol- tvättvätskan i vakuum med användning av bensen såsom samlösningsmedel, tills allt vatten avlägsnats. Häll den erhållna koncentrerade reak- tionslösningen i stor volymmängd metylenklorid under omröring. Avskilj den bildade fällningen genom filtrering och tvätta fällningen med eter för bildning av 6'-N-bensyloxikarbonylgentamicin B; utbyte 100 %; pm- (ppmï (1120): 51,26 (4"-c-cn3); 2,65 (3"-N-cH3); 5,13 och 7,43 (0-CH2-C6H5). I B. Ersätt i exempel 7A gentamicin B med ett annat antibakteriellt aminoglykosidmedel med en primär karbinamin vid C-5' för bildning av motsvarande 6'-N-bensyloxikarbonylaminoglykosid, såsom sisomicin, genta- micin Cla, gentamicin A, antibiotikum JI-20A, antibiotikum 66-40B, ~antibiotikum 66-4OD, 5-epi-, 5-epi-azido-5-deoxi- och 5-epi-amino-5- -deoxi-analogerna därav, antibiotikum Mn-l, antibiotikum Mu-2, anti- biotikum Mu-4, antibiotikum Mn-5, tobramycin, kanamycin A, kanamycin B, antibiotikum BBK-8, antibiotikum XK-88-3 och antibiotikum XK-88-5.

C. Ersätt i exempel 7A och 7B N-bensyloxikarbonyloxiftalimid~ med ekvivalenta mängder av andra ftalimidreaktanter, såsom N-tert.- butoxikarbonyloxiftalimid eller N-(2,2,2-trikloretoxikarbonyloxi)- -ftalimid, varvid man erhåller motsvarande 6'-N-hydrokarbonyloxikarbo- nylaminoglykosid, såsom motsvarande 6'-N-tert.-butoxikarbonylamino- glykosid och 6'-N-(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-aminoglykosidderivat.

D. 6'-N-tert.-butoxikarbonylgentamicin B via koppar(II)acetatkomplex Sätt 24 g (120 mmol) koppar(II)acetathydrat till en omrörd lösning av 19,28 g (40 mmol) gentamicin B i l liter dimetylsulfoxid.

Fortsätt omröringen 20 minuter och försätt det in situ bildade koppar- (II)saltkomplexet med en lösning av 16 g (61 mmol) N-tert.-butoxikarbo-« nyloxiftalimid i 200 ml dimetylsulfoxid under 20 minuter. Omrör 18 timmar vid rumstemperatur och bubbla sedan svavelväte genom lösningen för utfällning av koppar(II)sulfid. Avlägsna de fasta produkterna genom filtrering genom en kudde av Celite och tvätta återstoden med 200 ml vatten. Omrör det med tvättvätskorna kombinerade filtratet tillsammans med 200 ml Amberlite IBA-4013 (OHE) under en timme.

Avlägsna hartset genom filtrering, tvätta med vatten och koncentrera 27 det med tvättvätskorna kombinerade filtratet i vakuum med användning av bensen för azeotrop destillation med vatten.wLös den_erhållna åter- stoden i metanol och häll metanollösningen i överskott av eter under omröring. Filtrera och lufttorka den erhållna fällningen som består av 6*-N-tert.-butoxikarbonylgentamicin B, utbyte 23Ég (100 % teor.); [mjšó +124° (c 1 1 metanol). pmm (ppm) (D2o)=.§1,21 (4"-c-oH3); 1,42 (t-buty1); 2,55 (3"-N:cH3), 5,06 (H-l", Jl",2" = 4,0 Hz); 5,21 (H-1',Jl',2' = 3,0 Hz).

C24H46N¿Ol2.C02.H2O: Beräknat: C 46,57 H 7,51 N 8,68 % Funnet: C 46,80 H 7,82 N 8,54 % Exempel 8. ' },6'-di-N-hydrokarbonyloxikarbonxl-aminogllkosider A. 3,6'-di-N-bensyloxikarbonllgentamicin B via blandning av koppar§II2- acetat och nickel§II2acetatkomplex sam; 8 g (40 mmol) koppar(II)aeetathyaram och 9,92 g (40 mmol) nickel(II)acetat-tetrahydrat till en omrörd lösning av 9,64 g (20 mmol) gentamiein B 1 400 mi aimety1su1foxiá._omrör 30 minuter vid rums- temperatur och försätt det bildade koppar(II)-nickel(II)-saltkomplexet med 14 g (47,2 mmol) N-bensyloxikarbonyloxiftalimid i 70 ml dimetyl- sulfoxid droppvis under 10 minuter. Omrör en timme vid rumstemperatur och häll sedan reaktionsblandningen i 4 liter eter och skaka en minut.

Låg oljan avsätta sig och avdekantera den överstående etern. Upprepa denna procedur ytterligare två gånger med användning av 1500 ml resp. 1000 ml dietyleter. Lös den erhållna klisterartade återstoden i 400 ml metanol och 40 ml koncentrerad ammoniumhydroxid och bubbla svavelväte genom lösningen, separera den erhållna fällningen innehållande koppar- (II)sulfíd och nickelsulfid genom filtrering genom en kudde av Celíte.

Tvätta återstoden med metanol och omrör sedan det med metanoltvätt- vätskan kombinerade filtratet med Amberlite IRA-40lS (0É9)-jonbytar- harts (400 ml) för att avlägsna N-hydroxiftalimiden. Filtrera lösningen, tvätta hartset med metanol, indunsta det med metanoltvättvätskan kombi- nerade filtratet i vakuum och kromatografera återstoden på 900 g silika- gel, elura med kloroform:metanol:koncentrerad ammoniumhydroxid (30:l0:l) Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinera- de fraktionerna i vakuum till en återstod omfattande 3,6'-di-N-bensyl- oxikarbonylgentamicin B; utbyte 10,86 g (75 % teor.); [a]šf +l05,3° (c, 4,07 i vatten).

Cs 9 š5'š 28 c35H5Oo14N¿.co2.232o= Beräknat: c 52,04 H 6,55 N 6,74 % runner; c 51,94 H 6,33 N 6,83 % B. §,6'-di-Nëbensgloxikarbogllgentamicin B via koboltšlllacetatkomplex Lös 4,82 g (10 mmol) gentamicin B i 195 ml dímetylsulfoxid och 5 ml vatten. Tillsätt 2 ml trietylamin och omrör. Tillsätt 7,08 g (28,5 mmol) kobolt(II)acetat-tetranyarat, fortsätt omráringen 30 minu~ ter, försätt det bildade gentamicin B-kobolt(II)-acetatkomplexet dropp- vis med en lösning av 6,5 g (20 mol) NL(bensyloxikarbonyloxi)-ftalimid i 20 ml dimetylsulfoxid och omrör tre timmar, häll därefter blandningen i eter och isolera på det i exempel 8A angivna sättet. Rena den erhåll- na återstoden genom upplösning i en ringa mängd metanol och tillsätt etylacetat och därefter dietyleter i överskott. Avskilj~ den erhållna 'fällningen genom filtrering och lufttorka för bildning av ren 3,6'- -di-N¥bensyloxikarbonylgentamicin B, utbyte 90 % teor.

C. §,6'-di-Nëbenszloxikarbogzlgentamicin B via kadmiumšlïzacetatkomplex _ Lös 4,82 g (10 mmol) gentamicin B i 195 ml dimetylsulfoxid och tillsätt 7,98 g (30 mol) kadmium(II)acetat-dihydrat. Omrör 30 nünnteruoch försätt det bildade gentamicin B-kadmium(II)-acetatkomplexet med en lösning av 6,5 g (20 mmol) N;(bensyloxikarbonyloxi)-ftalimid i 20 ml dimetylsulfoxid. Omrör tre timmar vid rumstemperatur och isolera och rena på samma sätt som beskrivits i exempel 8A för bildning av 3,6'-di-Nëbensyloxikarbonylgentamicin B.

D. §;6'-di-Nëbensyloxikarbonylkanamzcin A via nickel§II2acetatkomplex Sätt 24,8 g (10 mmol) nicke1(II)acetat-tetrahydrat till en omrörd lösning av 9,7 g (20 mmol) kanamycin A i 400 ml dimetylsulfoxid.

Omrör 30 minuter vid rumstemperatur och försätt sedan det bildade nicke1(II)saltkomplexet med 13,0-15,6 g (44-52 mmol) Nëbensyloxikarbo- nyloxiftalimid i 70 ml dimetylsulfoxid under 10 minuter. Omrör en timme vid rumstemperatur och häll därefter blandningen i 2500 ml eter och skaka en minut. Låt oljan avsätta sig och avdekantera den överstående dimetylsulfoxidetern. Upprepa denna procedur ytterligare två gånger med användning av 1500 resp. l000 ml eter. Lös den erhållna klister- artade substansen i 1000 ml metanol och 50 ml koncentrerad ammonium- hydroxid. Bubbla svavelväte genom lösningen och avskilj den erhållna fällningen av nickel(II)sulfid genom en kudde av Celite och tvätta återstoden med metanol. Omrör det med metanoltvättvätskan kombinerade filtratet med Amberlite IBA-40lS (OHÉÖ-jonbytarharts (300 g), avfilt- 29 469 m rera hartset och indunsta filtratet i vakuum.cTriturera den erhållna klisterartade substansen med en 50:50-blandning av acetonitrilzeter och filtrera den erhållna vita kristallina substansen för bildning av 3,6'-di-N-bensyloxikarbonylkanamycin A; utbyte l2,5 g (83,5 % teor.); [d]š6 + 780 (c 4,84 i 50%-ig metanol i vatten). c34H¿80l5N4.H2o= Ber-enat: c 56,2 H 6,75 N 6,94 92 rummet: c 51,02 H 6,26 N 6,85 9% E. Behandla var och en av följande aminoglykosider med en bland- .ning av koppar(II)acetathydrat och nicke1(II)acetat-tetrahydrat eller med kobolt(II)acetat-tetrahydrat eller med kadmium(II)acetat-dihydrat enligt exempel 8A-8D.. l) gentamicin Bl, 2) gentamicin A , 3) 6'-N-metylkanamycin A.

Isolera och rena var och en av de erhållna produkterna för bildning av 1) 3,6'-di-N-bensyloxikarbonylgentamicin Bl, 2) 3,6'-di-N-bensyloxikarbonylgentamicin A3, 3) 3,6'-di-N-bensyloxikarbonyl-6'-N-metylkanamycin A.

F. Framställn' av 3.6'-di;N-tert.-butoxikarbogïlgentamicin B ur 6'-tert.-butoxikarbonzlgentamicin B via koggarfllï)-acetatkomglex Försätt en lösning av 10 g (l7,l mmol) 6'-N-tert.-butoxikarbo nylgentamicin B i 300 ml dimetylsulfoxid med 6,9 g (34,5 mmol) koppar- (II)acetatmonohydrat och omrör 20 minuter. Försätt det in situ bildade koppar(II)-saltkomplexet droppvis med en lösning av 4,5 g (17,l mmol) N-tert.-butoxikarbonyloxiftalimid i 20 ml dimetylsulfoxid. Forsätt omröringen två timmar, tillsätt ytterligare 2,4 g N-tert.-butoxikarbo- nyloxiftalimid och fortsätt omröringen av reaktionsblandningen 10 timma: Häll reaktionsblandningen i 1,5 liter eter under omröring. Låt den erhållna fällningen eller oljan avsätta sig och dekantera omsorgsfullt den överstående vätskan. Tvätta återstoden två gånger med 300 ml eter.

Lös den erhållna återstoden i 100 ml metanol och bubbla svavelväte genom lösningen för fullständig utfällning av koppar(II)sulfiden. Av- lägsna den fasta substansen genom filtrering genom en kudde av Celite och tvätta med metanol. Omrör metanollösningen tillsammans med just en tillräcklig mängd Amberlite IRA-40lS (0Éæ)-jonbytarharts för att in- ställa pH på ungefär 9 och avlägsna N-hydroxiftalimid. Avlägsna hartset genom filtrering, tvätta med metanol och koncentrera det med tvätt- vätskorna kombinerade filtratet till en volym av ungefär 50 ml inne- hållande 3,6'-di-N-tert.-butoxikarbonylgentamicin B, som utan ytter- 5. . n Ö\ 9 3o ' ligare rening kan användas såsom utgångsmaterial i exempel 15 och l6B.

' -Nètert.-butoxikarbonylgentamicin B (utbyte För isolering av föreningen kristallisera genom triturering åter- stoden efter indunstning tillsammans med eter för bildning av 3,6'-di- 90 % teor.). Rena alternativt genom kromatografering på silikagel (förhållande mellan förening och silikagel = 1:40) med användning av kloroformzmetanol: ammoniumhydroxid (2:l:0,35) såsom framkallningslösningsmedelsbland- ning. Sammanför lika fraktioner innehållande 3,6'-di-N¥tert.-butoxi- karbonylgentamicin B, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografe- ring, koncentrera och lyofilisera för bildning av 3,6'-di-Nëtert.-butoxi karbonylgentamicin B; [a]%6 + 113,30 (c 0,39 i vatten); pmr (ppm) (D20): 51,17 (wc-cfiy; 1,38 (f-bufvn; 2,5 (a"-N-<:H3>;52,s4 (H-sm-Izmg' = 10 Hz); 4,02 (H+5" eq, JS" ax,eq = 12 Hz); 5,04 (H+l",Jl",2" = 3,5 Hz ; 5,23 4H"l'¶Jl'r2' = 3,Û H5)- C29H570l5NÅ.Há0:_ Beräknat: C 49,63 H 8,19 N 7,98 % Funnet: C 49,83 H 7,81 N 7,68 % G. 3,6'-di-Hètert.-butoxikarbonïlgentamicin B ur gentamicin B via ko2gar(II2acetatkomglex Sätt 5,0 g (25 mmol) koppar(II)acetatmonohydrat till en omrörd lösning av 4,82 g (10 mmol) gentamicin B i 250 ml dimetylsulf- oxid. Omrör 30 minutersoch försätt det in situ bildade koppar(II)salt- komplexet droppvis med en lösning av 10,5 g (40 mmol) N4tert.butoxi- karbonyloxiftalimid i 20 ml dimetylsulfoxid. Omrör två timmar vid rumstemperatur och tillsätt ytterligare 1,5 g (5,7 mmol) N4tert.-butoxi- karbonyloxiftalimid. Omrör 16 timmar och tillsätt ytterligare 0,35 g (l,33 mmol) Nßtert.-butoxikarbonyloxiftalimid. Fortsätt omröringen sex timmar och häll därefter reaktionsblandningen i 1,5 liter omrörd eter. Omrör 30 minuter, låt reaktionsblandningen vila, avdekantera den överstående lösningen, tillsätt åter 500 ml eter till återstoden, låt blandningen vila och avdekantera den överstående lösningen. Lös den erhållna fällningen i 100 ml metanol och bubbla svavelväte genom under 15 minuter. Avlägsna den fasta koppar(II)sulfiden genom filt- rering genom en kudde av Celite och tvätta återstoden med metanol.

Behandla metanollösningen med Amberlite IRA~40lS(Ofia)-jonbytarharts för inställning av pH i lösningen på ungefär 8,5-9,0, avlägsna de fasta substanserna genom filtrering och tvätta dessa med metanol.

Indunsta lösningen till nära torrhet och lyofilisera med vatten. Kri- stallisera 3,6'-di-N-tert.-butoxikarbonylgentamicin B genom triturering med eter. Det orena koncentratet kan alternativt användas såsom utgångs- material i exemplen 15 och l6B.

...Läs Ch vi) ...s (JJ ._..§ 31 Exempel 2.

Andra 3,2',6'-tri-N4acylaminoglykosider A. 3,2',6'-t;i¿Nèbensyloxikarbonylgentamicin C, via blandning av koppar§II2acetatkomplex och nickel§II2acetatkomplex sätt 0,6 s (3 mmol) køpparmjacetathyarat och 0,743 g (3 mo; nickel(II)acetat-tetrahydrat till en omrörd lösning av 0,925 g (2 mmol) gentamicin C2 i 40 ml dimetylsulfoxid. Omrör 30 minuter vid rums- temperatur och försätt det erhållna blandade koppar- och nickelsalt- komplexet med l,8 g (6,5 mmol) N>bensyloxikarbonyloxiftalimid i 7 ml dimetylsulfoxid under 10 minuter. Fortsätt omröringen en timme och häll därefter reaktionsblandningen i 400 ml eter under omröring. Av- dekantera den överstående etern, upprepa den föregående processen med användning av 200 ml resp. 100 ml eter. Lös den erhållna klisterartade substansen i lOO ml metanol och 5 ml koncentrerad ammoniumhydroxid och bubbla därefter svavelväte genom lösingen. Avlägsna den erhållna fällningen av koppar(II)sulfid och nickel(II)sulfid genom filtrering genom en kudde av Celite, tvätta fällningen med metanol och omrör sedan det med metanoltvättvätskan kombinerade filtratet med Amberlite IRA-4013 (OHQ)-jonbytarharts. Avskilj hartset genom filtrering och tvätta med metanol. Indunsta det med metanoltvättvätskan kombinerade filtratet i vakuum, kromatografera den erhållna klisterartade produkten på 50 g silikagel och eluera med kloroformzmetanolzkoncentrerad ammo- niumhydroxid (30:10:l). Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinerade eluaten till en återstod omfattande 3,2',6'- -tri-N¥bensyloxikarbonylgentamicin 02; utbyte 1,4 g (81 % teor.): masspektrum: m/e 484; 411; 325; 160.

B. Behandla på i exempel 9A angivet sätt gentamicin G1 med koppar(II)acetathydrat och nickel(II)acetat-tetrahydrat i dimetylsulf- oxid och behandla det därvid bildade saltkomplexet med N>bensyloxikarbo- nyloxiftalimid och behandla därefter med svavelväte och isolera och rena den erhållna produkten för bildning av 3,2',6'-tri-NLbensyloxi- karbonylgentamicin Cl, utbyte 1,3 g, 72,5 % teor. Masspektrum: m/e 749; 615; 454; 466, 456; 425, 407; 325, 307, 297; 291; 160.

C. Blandade 3,2',6'-tri-N4acylaminoglykosider och överföring till 3,6'- -di-N-acylaminoglykosid (l) 6'-N%acetyl-2'-N>(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-sisomicin via koppar- (II)-acetatkomplex Behandla på i exempel 4A angivet sätt 6'-Nëacetylsisomicin med ungefär 7 ekvivalenter koppar(II)acetathydrat i metanol och försätt det bildade koppar(II)saltkomplexet i portioner med ungefär l ekvivalent ~.'3>~ ax xO ...ä LN .__ .ä- 32 N>(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-succinimid. Omrör reaktionsblandningen en timme, behandla med ammoniumhydroxid och isolera och rena den erhåll- na produkten på samma sätt som angivits i exempel 4A för bildning av 2'-N#(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-6'-N>acetylsisomicin. (2) 3, 6 uai-N-acetyl-z '-N-( 2 , 2, z-trrlgioretøxgfrarbonyl»sisomicin via koggarfilïåacetatkomglex Sätt 24 g (120 mmol) koppar(II)acetathydrat till en omrörd lösning av 26,5 g (40 mmol) 2'-N>(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-6'-N; -acetylsisomicin i l liter dimetylsulfoxid. Fortsätt omröringen 20 minuter och försätt det bildade koppar(II)saltkomplexet droppvis med en hastighet av ungefär 25 dropparßminut av 40 ml lM lösning av ättik- syraanhydrid i tetrahydrofuran (40 mmol). Qmrör reaktionsblandningen ytterligare 30 minuter och häll den i 8 liter eter. Skaka omsorgsfullt och låt blandningen vila. Avdekantera eterskiktet och tvätta återstoden två gånger ytterligare med l liter eter varje gång. Lös återstoden i 800 ml metanol och genombubbla svavelväte under 15 minuter. Omrör blandningen ytterligare 30 minuter, filtrera sedan lösningen genom en kudde av Celite och tvätta koppar(II)sulfidåterstoden med vatten.

Koncentrera det med vattentvättvätskorna kombinerade filtratet och kromatografera den erhållna återstoden på silikagel samt eluera med kloroformzmetanol:ammoniumhydroxid (30:lO:l). Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskikts- kromatografering, och indunsta de kombinerade fraktionerna i vakuum till en återstod omfattande 3,6'-di-Nëacetyl-2'-Në(2,2,2-trikloretoxi- karbonyl)-sisomicin. (3) 3,6'-di-Nëacetylsisomicin Sätt 3,9 molekvivalenter zinkpulver till en lösning av 3,6'- -di-Neacetyl-2'-N¥(2,2,2-trikloretoxikarbonyl)-sisomicin i 10%-ig ättiksyra i metanol. Upphetta lösningen vid återflödestemperatur under två timmar och övervaka reaktionen genom tunnskiktskromatografering på silikagel med användning av kloroformzmetanol:ammoniumhydroxid (39: lO:l) såsom lösningsmedelssystem. När reaktionen är fullständig, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, filtrera lösningen, sätt natriumkarbonat till filtratet, filtrera och koncentrera filtratet i vakuum. Rena genom kromatografering den erhållna återstoden på silikagel med eluering med kloroformzmetanolzammoniumhydroxid (30:lO:l).

Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, indunsta sedan de kombi- nerade fraktionerna i vakuum och lyofilisera den erhållna vattenbland- ningen till en återstod omfattande 3,6'-di-Nëacetylsisomicin.

/I se vi) ._ .S CN ...A 33 Exempel 10. 1,3,2',3"-tetra-Nëacetylsisomicin via koppar(II)acetatkomplex A. 6'-N-trifluoracetylsisomicin via koppar(II)acetatkomplex Lös 39,1 g (87,5 mmol) sisomicin i 2950 ml metanol och 200 ml vatten. Under omröring tillsätt 8,92 g (44,7 mmol) koppar(II)acetat- hydrat. Omrör 15 minuter och tillsätt sedan under en period av tre minuter droppvis 11,55 ml (14,2 g, 90 mmol) etyltrifluortiolacetat och därefter ytterligare 1,3 ml (1,6 g, 10 mmol) etyltrifluortiol- acetat. Avlägsna metanolen genom avdunstning i vakuum och tillsätt sedan vatten, tills reaktionsvolymen är 300 ml. För svavelväte genom reaktionslösningen och filtrera sedan den erhållna koppar(II)su1fid-. fällningen genom en Celite-kudde för bildning av en lösning inne- hållande 6'-Nätrifluoracetylsisomicin, vilken användes såsom sådan i förfarandet enligt exempel l0B.

B. l,3,2',§“-tetra-Nëacetyl-6'-Nstrifluoracetylsisomicin Försätt en lösning erhållen i exempel 10A med 300 ml metanol och därefter med 109 ml (l,l6 mol, 13,2 ekvivalenter) ättiksyraanhyd- rid, inställ pH i reaktionsblandningen på 8,5 med trietylamin innan man tillsätter de sista 10 ml ättiksyraanhydrid. Omrör 18 timmar vid rumstemperatur och indunsta sedan i vakuum till en återstod omfattande l,3,2',3"-tetra-Nkacetyl-6'-Nätrifluoracetylsisomicin.

C. l,3,2',§f-tetra-Nëacetylsisomicin Lös 1,3,2',3"-tetra-Nëacetyl-6'-Nëtrifluoracetylsisomicin, framställd i exempel 10 B, i 500 ml koncentrerad ammoniumhydroxid.

Omrör vid rumstemperatur över natten och indunsta i vakuum. Lös den erhållna återstoden i vatten och omrör lösningen med Amberlite IRAf401S (OHÉÜ-jonbytarharts. Avlägsna hartset genom filtrering, tvätta med metanol, indunsta det med metanoltvättvätskan kombinerade filtratet i vakuum, kromatografera den erhållna återstoden på en 1,7 kilo silikagel- pelare (7,5 x 165 cm) och eluera med den lägre fasen av kloroformzmeta- nol:ammoniumhydroxid (28 %) (2:l:l) -lösningsmedelssystem. Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, som fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinerade eluaten till en återstod omfattande l,3,2',3"-tetra-N-acetylsisomicin, utbyte 29,9 g (55 % teor.); [a]D +207,4° (c 0,3 i vatten); pmr (ppm) (D20): ål,07, 1,17 (4"-C-CH3); 1,95, 1,98, 2,03 (N#acetyler); 3,13, 3,00 (3"-N-cH3); 5,29 (H-i", J1",2" ( 4,0 Hm; 5,64 (H-r, Jlgz' = 2,5 112); masspektrvm; (M+°) m/e 615, även m/e 598; 592; 550; 443, 425, 415, 397; 453, 411; 275, 257, 247, 229; 202; 169.

.Pa vö ...Ba LN ... \ 34 c27H45ollN5.1,5H2o= Beräknat: C 50,43 H 7,52 N 10,89 % Funnet= c,5o,61 H 7,36 N 10,79 % Exempel ll.

Isolering av aminocyklitolfaminoglykosid-övergàngsmetallsaltkomplex A. Isolerin av entamicin B-diko ar II acetatkom lex Sätt 0,4 g (2 mmol) koppar(II)acetathydrat till en lösning av 0,482 g (l mmol) gentamicin B i 25 ml metanol, omrör 30 minuter' vid rumstemperatur, avdunsta lösningsmedlet i vakuum och torka den erhållna återstoden vid 600 i vakuum för bildning av gentamicin B-di- koppar(II)acetatkomplex i form av en djupblå fast substans (i kontrast till det grönfärgade koppar(II)acetatdihydratet); utbyte 0,8 g,}_ä:å°l 6,42, 8,72, l3,90 mp.

B. Isolering av gentamicin B-dikobolt§Ilåacetatkomplex (1) Lös 0,482 g (1 mmol) gentamicin B i 20 ml dimetylsulfoxid och tillsätt 0,598 g (2 mmol) kobolt(II)acetat-tetrahydrat. Omrör 30 minuter vid rumstemperatur och häll sedan blandningen i 30 ml eter.

Avdekantera eterskiktet och triturera återstoden med 20 ml färsk eter.

Upprepa detta förfarande ytterligare en gång och triturera sedan med etyleter. Isolera den erhållna fasta substansen genom filtrering, tvätta med etyleter och torka för bildning av gentamicin B-dikobo1t(II)acetat- komplex i form av lavendelfärgad fast substans (i motsats till det _ ljusrött färgade kobo1t(II)acetat-retrahydratet), utbyte 0,8 g,¿_fi:i°1 5,88, 6,36, 10,59, 12,42, 12,92, 13,90 p. (2) Lös nämnda isolerade gentamicin B-dikobolt(II)acetat- komplex i dimetylsulfoxid och behandla med NF(bensyloxikarbonyloxi)- -succinimid på samma sätt som beskrivits i exempel 8B, isolera och rena på angivet sätt för bildning av 3,6'-di-Nëbensyloxikarbonylgentamicin B.

C. Behandla på i exempel llA och llB angivet sätt gentamicin B med nickel(II)acetat-tetrahydrat och med kadmium(II)acetat-dihydrat och isolera och rena de därvid bildade komplexen för bildning av genta- micin B-dinickel(II)acetatkomplex och gentamicin B-dikadmium(II)-acetat- komplex.

På samma sätt kan vart och ett av aminocyklitolaminoglykosid~ övergångsmetallsaltkomplexen framställda in situ i de föregående exemplex isoleras.

-Ps Ö 'x V.) .__ x (N .n 35 ' Exempel 12. eomsärtning av 1,3-ai-ae-N=amia1noa1hyarostreptømycin med N=beney1øxi- karbonyloxiftalimid med beh' utan kgppar(II)acetatkomp1ex I A. 1;3-di-de-Nëamidinodihydrostreptomycin Sätt en lösning av 25 g (l7,1 mmol) dihydrostreptomycins sulfat i 100 ml vatten till en lösning av 54 g bariumhydroxid i 600 ml vatten. Separera det därvid bildade bariumsulfatet genom filtrering och upphetta filtratet 62 timmar under âterflöde i kväveatmosfär.

Försätt den kylda reaktionsblandningen med 4N svavelsyra droppvis, tills reaktionsblandningen får ett pH-värde av 7. Avskilj det därvid bildade bariumsulfatet genom filtrering, tillsätt Amberlite IRA-40lS (OÉQÖ-harts till filtratet och upphetta blandningen tills filtratet får ett pH+värde av 10. Avlägsna vattnet genom destillation och kremato- grafera den erhållna återstoden på 600 g silikagel och eluera med an Ilösningsmedelsblandning av kloroform/metanol/28%-ig ammoniumhydroxid (3:4:2). Tillvaratag lika fraktioner innehållande 1,3-di-de-Nëamidino- dihydrostreptomycin, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering øch.inauneta ae_kombinerade eluaten till en återstod av 1,3-ai-ae-N; -amídinodihydrostreptomycin (utbyte - 10,9 g). acetatkomplex med Nßbensyloxikarbonyloxiftalimid för bildning av 2"-N; -benszloxikarboggl-1,3-di-de-N¥amidinodihydrostreptomycin Försätt en lösning av 5 g (10 mmol) l,3-di-de-N%amidinodi- hydrostreptomycin i 200 ml dimetylsulfoxid med 2 g (10 mmol) koppar(II)- acetatmonohydrat och omrör 15 minuter vid rumstemperatur, försätt det därvid bildade koppar(II)saltkomplexet droppvis under kontinuerlig omröring av reaktionsblandningen med 5,5 g Nsbensyloxikarbonyloxië ftalimid i 20 ml dimetylsulfoxid. Fortsätt omröringen 2 timmar och häll reaktionsblandningen i 2 liter dietyleter. Avdekantera den överstående f etern och upprepa nämnda förfarande med l liter resp. 500 ml dietyleter.

Lös den erhållna klisterartade substansen i en lösningsmedelsblandning omfattande 150 ml metanol och 10 ml 28%-ig ammoniumhydroxid. Bubbla svavelväte genom lösningen och avskilj den erhållna fällningen av koppar(II)sulfid genom filtrering genom en kudde av Celite, indunsta filtratet och kromatografera den erhållna återstoden på 400 g silika- gel samt eluera med en lösningsmedelsblandning av kloroform/metano1/ 28%-ig ammoniumhydroxid (2:l:0,35). Kombinera lika eluat innehållande den önskade föreningen, såsom fastställts genom tunnskiktskromato- grafering, och koncentrera de kombinerade eluaten till en återstod om» fattande 2"-Nëbensyloxikarbonyl-l,3-di-de-N#amidinodihydrostreptomycin, utbyte 6 g (98 % teor-); [&]šF -96,50 (c 0,5 i vatten); pmr (ppm) (D2O): 23% \O -....\ Q~l --.s 36 31,21 (d, u-c-cns, J=6Hz); 3,04 (s, 2"-N-cH3); 5,13 (s, cósscfizocomn), 7,41 (s, cóflscnzoconïn; °z7H43°14N3°H2°; Beräknat: C 49,76 H 6,96 N 6,45 % Funnet: C 49,69 H 6,78 N 6,27 en: [ojåââu = +7.32o.

C. Omsättning av l,§fdi-deëflëamidinodingdrostregtomycin med Nëbensxloxi- gagbonyloxiftalimid utan koppar(II) acetatkomplex, varigenom man erhålla: l-Nëbensïloxíkarbogyl-l,3-di-de-Nëamidinodihgdrostregtoggcin Fal-sätt en lösning av~=1 g (2,0 moi) 1,3_-<1i-ae-N-afiiainoai- hydrostreptomycin i 40 ml N, N-dimetylformamid med en lösning av 0,8 g (2,7 mmol) N-bensyloxikarbonyloxiftalimid i 4 ml ILN-dimetylformamid. »0mrör reaktionsblandningen en timme, tillsätt därefter 10 ml vatten och Amberlite IRAf40lS (OÉEÜ-harts, tills pH i reaktionsblandningen är 8,5. Avskilj hartset genom filtrering, avlägsna lösningsmedlet genom destillation, kromatografera den erhållna återstoden på 100 g silikagel och eluera med en lösningsmedelsblandning av klorofornväætanol/28%-ig ammoniumhydroxid (2:l:0,35). Tillvaratag lika eluat innehållande l-N>bensyloxikarbonyl4l,3-di-de-Nëamidinodihydrostreptomycin såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinera- de eluaten till en återstod l-N>bensyloxikarbonyl-1,3-di-de-N#amidino- dihydrostreptomwcin, utbyte 0,417 g (33 % teor.); [a]šf -93,6° (c 0,55 7 i vatten). pmr (ppm) (1120): 51,22 (a, 4'-c-cH3, J=6Hz); 2,42 (s, zfl-N- CH3); 5,12 (s, C6H CH20C0NH); 7,40 (s, C6H5CH20C0NH); 5 °z1H43°14Ns°H2°* sei-ämm c 49,76 H 6,96 N 6,45 az Funnet: c 49,41 H 6,55 N 6,21 9% en: [91282 = +11.1oo.

TaCu Exemgel 13. Överföring av 3,6'-di-N-tert.-butoxikarbonylgentamicin B till l-N-(Y- -amino-d-hydroxibutyryl)-gentamicin B A. l-NF(S-Y-amino-a-hydroxibutyryl)+gentamidin B (1) Försätt en lösning av 68,2 g (0,1 mmol) 3,6'-di-N- -tert.-butoxikarbonylgentamicin B (renad produkt från exempel 8F) i l ml vatten, tillsätt l ml metanol och tillsätt därefter droppvis under omröring 0,25 ml lösning av N-(S-Y-bensyloxikarbonylamino-a- -hydroxíbutyryloxi)-succinímid (0,1 mmol) i 0,4 M dimetylformamid- lösning. Omrör en timme och tillsätt därefter ytterligare 0,125 ml A ! (N 021 #159 N-(S-Y-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid. Fortsätt omröringen av reaktionsblandningen vid rumstemperatur under 18 timmar, koncentrera i vakuum och upplös den erhållna återstoden i 4 ml metanol och 16 ml vatten. Tillsätt 0,05 g 5%-ig palladium-på-kol-katalysator och hydrera vid 4 at över natten. Avlägsna den fasta substansen genom filtrering genom en kudde av Celite, tvätta Celite-kudden med vatten och koncentrera dazmed tvättvätskorna kombinerade filtratet till en ringa volym och lyofilisera. Upplös den erhållna återstoden i 0,5 ml trifluorättiksyra och låg blandningen vila tre minuter. Häll lösningen i överskott av eter, tillvaratag fällningen genom filtrering, tvätta med eter och torka för bildning av l-N-(S-Y-amino-a-hydroxibutyryl)- -gentamicin B i form av trifluoracetatsaltet. Framställ den fria basen genom upplösning av nämnda salt i vatten och omröring av lösningen med Amberlite IBA-4018 (OÉQÜ-jonbytarharts. Filtrera och lyofilisera filtra- tet för bildning av l-N-(S-Y-amino-a-hydroxibutyryl)-gentamicin B, utbyte 49,7 g (83 % teor.). (2) Hr oren 5,6'-di-N-tert.-butoxikarbonllgentamicin B Försätt 50 ml lösning innehållande 3,6'-di-N-tert.-butoxi- 'karbonylgentamicin B framställd i exempel 8F,med 50 ml metanol. För- sätt denna lösning droppvis under omröring med 10 ml lM lösning av l-N-(S-Y-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid i dimetylformamid. Omrör en timme och övervaka reaktionen genom tunnskikts- kromatografering med användning av kloroformzmetanol:ammoniumhydroxid (2:l:0,35). Tillsätt ytterligare 5 ml av den lM-lösningen av l-N-(S-Y- -bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid och omrör reaktionsblandningen 10 timmar. Koncentrera lösningen i vakuum och kro- matografera den erhållna återstoden på 300 g silikagel med användning av kloroformzmetanolzammoniumhydroxid (30:l0:O,5) såsom elueringsíös- ningsmedel. Kbmbinera lika fraktioner innehållande l-N-(S-Y-bensyloxi- karbonylamino-a-hydroxibuturyl)-3,6'-di-N-tert.-butoxikarbcnylgentami- cin B och indunsta till en återstod. Upplös återstoden i 50 ml vatten och 18 ml metanol och hydrera i närvaro av 600 mg 5%-igt palladium/kol vid 4 at under 10 timmar. Avlägsna katalysatorn genom filtrering genom en kudde av Celite och tvätta återstoden med vatten. Kombinera filtra- tet och tvättvätskorna och indunsta i vakuum för eliminering av meta- nolen. Tvätta det erhållna vattenskiktet med 3 x 25 ml kloroform, koncentrera vattenlösningen i vakuum och torka den erhållna återstoden över fosforpentoxid i vakuum. Upplös den erhållna återstoden i minsta möjliga mängd trifluorättiksyra och låt lösningen vila tre minuter.

Tillsätt eter och isolera den erhållna fällningen genom filtrering.

CJ\ xü ... S. o: s-...å 38 clvätta fällningen med eter och torka. Upplös den fasta substansen i 30 ml vatten och inställ lösningen på ungefär pH 8,5 genom omröring tillsammans hsa mbarlits “ IRA-flols (ofä-jonbytarharts. avlägsna aan fasta substansen genom filtrering, tvätta med vatten, kombinera filtra- tet och tvättvätskorna och lyofilisera för bildning av l-N4(S-Y-amino- -a-hydroxibutyryl)-gentamicin B.

Tillsätt alternativt svavelsyra för inställning av nämnda vattenlösning på pH 4 och lyofilisera för bildning av sulfatsaltet.av l-N-(s-ï-amino-a-nyaroxibutyryl»gsntamicin B; pmr (ppm) (1120): J 1,3 (4"-C-CH3); 2,9 (3"-N-CH3); 4,28 (H-2", J = 9 Hz och 4 1-12); 5,16 (H-l", Jl",2“ = 3,5 Hz); 6,12 (H+l', Jl',2' = 3,0 Hz).

B. 1-NL R~Y-amino-a- droxibut l - entamicin B (1) Försätt under omröring en lösning av 3,41 8 (5 mmol) 3,6'-di-Nëtert.-butoxikarbonylgentamicin B i 25 ml metanol och 25 ml vatten med en lösning av 1,8 g (5 mmol) N;(Bfï-Nsbensyloxikarbonyle amino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid i 10 ml dimetylformamid. Omrör reaktionsblandníngen 6 timmar, koncentrera i vakuum och kromatografera den erhållna återstoden på silikagel (60-200 mesh, 300 g) med användning av lösningsmedelssystemet bestående av kloroformzmetanolzammonium» hydroxid (30:l0:O,25). Kbmbinera lika fraktioner innehållande den_ önskade produkten, såsom fastställts genom.tunnskiktskromatografering, koncentrera i vakuum och kromatografera åter återstoden på samma pelare med användning av samma lösningsmedelssysteml Kombinera likadana åter- kromatograferade fraktioner och indunsta i vakuum till en återstod omf fattande l-N;(R-Y-Nsbensyloxikarbonylamino-d-hydroxibutyryloxi)-3,6'- -di-Nëtert.-butoxíkarbonylgentamicin B. (2) Upplös produkten från exempel l3B(l) i 20 ml 50%-ig metanol och hydrera över 0,2 g 5%-ig palladium/kol-katalysator vid rumstemperatur och 4 at under 24 timmar. Avlägsna katalysatorn genom filtrering genom en kudde av Celite, tvätta vattnet och indunsta de kombinerade filtraten i vakuum. Upplös den erhållna återstoden i 25 ml trifluorättiksyra och låt blandningen vila tre minuter. Tillsätt eter och isolera den erhållna fällningen omfattande trifluorättiksyraaddi- tionssaltet av l-Ns(R-Y-amino-a-hydroxibutyryl)~gentamicin B, tvätta med eter och torka. Upplös den torra fällningen i 10 ml vatten och omrör tillsammans med Amberlite IBA-40lS (OH5)-jonbytarharts, tillräckligt för att inställa pH på 9,5. Avlägsna hartset genom filtrering, tvätta med vatten och lyofilisera de kombinerde filtraten till en återstod omfattande ren 1-NF(R-Y-amino-d-hydroxibutyryl)-gentamicin B, utbyte 0,5 åš falšö +ll8,l° (c, 1 i vatten); pmr (PPM) (D2O):,Sl,23 (4"-C-CH3); 2,66 (3"-N-<:H3); 4,2 (H-2"', J = 5Hz ash 3Hz); 5,03 (H-l", J = 4Hz); 29 *69 lå? 5,4 (H-1', J = 3,5 Hz). c23H450l2N¿.3co2.4H20; _ Beräknat: C 39,64 H 6,78 N 8,89 % Funnet= C 39,88 H 6,58 N 9,28 % Erempel 14. Överföring av 3,6'-di-N-tert.-butoxikarbonylgentamicin B till 1-N-(S- -B-amino-a-hydroxipropionyl)-gentamicin B A. l-N-(S-B-N-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxipropionyl)-3,6'-di-N- -tert.-butoxikarbonylgentamicin B Försätt en omrörd lösning av 11,28 g (l6,4 mmol) 3,6'-N- -tert.-butoxikarbonylgentamicin B i 100 ml metanol och 100 ml vatten med en lösning av 10 g (30 mmol) N-(S-B-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxi- propíonyloxi)-succinimid i 40 ml N,N-dimetylformamid under 15 minuter.

Efter en period av två timmar avdunsta lösningsmedlet i vakuum vid 500.

Kromatografera den erhållna återstoden på 500 g silikagel med använd- ning av ett 30:10:0,5-förhållande av kloroformzmetanolzkoncentrerad ammoniumhydroxid för bildning av 13,22 g l-N-(S-B-bensyloxikarbonylami- no-a-hydroxipropionyl)-3,6'-di-N-tert.-butoxikarbonylgentamicin B.

B. l-N-(S-B-amino-a-hydroxipropionyl)-gentamicin B ' Hydrera produkten från exempel 14A vid 4 at och rumstempera- tur i en blandning av 730 ml vatten och 240 ml metanol i närvaro av 0,7 5%-igt palladium/kol-katalysator under 24 timmar. Avlägsna katalysatorn genom filtrering genom en kudde av Celite och tvätta med vatten. Koncen- trera de kombinerade filtraten och torka återstoden omsorgsfullt.

Upplös produkten i 80 ml trifluorättiksyra och låt blandningen vila tre minuter. Häll lösningen i överskott av eter (2 liter) för utfällning av trifluorättiksyrasaltet av ren l-N-(S-B-amino-a-hydroxipropionyl)- -gentamicin B. Isolera genom filtrering, tvätta med eter och torka.

Behandla produkten med Amberlite IRA-4018 (OH5)-harts i vatten till pH 9, filtrera lösningen, tvätta hartset och lyofilisera den kombinerade lösningen för bildning av 1-N:(s-5-amino-n-hyaroxipropionyi)-gentnmi- cin B; [a]š6 + 112,50 (c 0,4 i vatten); pmr (ppm) (D20): âl,l5 (4"-C- cH3); 1,36 (H-zax, Jl,2 = J2,3 = Jlax,leq=12,5 Hz); 1,90 (H-2eq); 2,45 (3"-N-CH3); 4,06 (H-5"eq, J5"eq,ax = 13,0 Hz); 4,13 (H-2"',J2"',3"' = 4,0 och 7,0 Hz); 5,05 (H-1", Jl",2“ = 4,0 Hz); 5,32 (H-1',J1',2' = 3,0 Hz). Utbyte = nära kvantitativt.

C. Upprepa försöket enligt exempel 14A och 14B med användning av N-(S-Å;-bensyloxikarbonylamino-d-hydroxivaleryloxi)-succinimid i stället för succinimidreaktanten angiven i exempel 14A varigenom man erhåller l-N-(S-5 -amino-a-hydroxivaleryl)-gentamicin B. -ps Ch xO _ \ (N ...A 40 Exemgel 15. _ _ Överföring av 3,6'-di-N-bensyloxikarbonxlaminoglykosider till l-N-(S- -Y-amino-a-hydroxibutyryl)-aminoglykosider A. Framställning av l-N-(S-Y-amino-a-hydroxibutyryl)-kanamycin A (1) För-sätt en ømröra lösning av 1,54 g (2 mmol) 3,6'-ai-N- -bensyloxikarbonylkanamycin A i 20 ml tetrahydrofuran och 20 ml vatten droppvis med en lösning av 1,163 g (3 mmol) N-(S-Y-bensvloxikarbonyl- amino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid i 2 ml N,N-dimetylformamid.

Omrör två timmar, koncentrera i vakuum och kromatografera den erhållna sirapsliknande återstoden på 150 g silikagel samt eluera med kloroform: metanolzkoncentrerad ammoniumhydroxid (2:l:O,35)-lösningsmedelsbland- ning. Kombinera lika fraktioner innehållande den önskade produkten, såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta de kombinerade eluaten i vakuum till en återstod omfattande l-R-(S-Y- bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryl)-3,6'-di-N-bensyloxikarbonyl- kanamcin A, utbyte 1,3 g. _ (2) Hdrera produkten från exempel l5A(l) i 20 ml vatten/meta- nol (l:l) i närvaro av 0,1 g 5%-igt palladium/kol under tre timmar.

Avskilj katalysatorn genom filtrering och indunsta det erhållna filtra- tet i vakuum till en återstod omfattande l-N-(S-Y-amino~a-hydroxi- butyryl)-kanamycin A i kvantitativa utbyten. ' B. Använd i förfarandet enligt exempel 15A N-(S-6-bensyloxi- kartonyiamino-a-nyaroxipropionyloxi»suecinimia i stället för N-(s-*r- -bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid för bildning av l-N-(S-B-amino-a-hydroxipropionyl)-kanamycin A i totalutbyte högre än 50 9%.

Exemgel 15. Överföring av 3,6'-di-N-bensglgšikarbonylgentamicin B till l-N-(S-ß- -amino-d-hvdroxigrogionyl)-gentamicin B och till l-N-(R-ß-am¿n9-a- -hxdroxigrogioggl2-gentamicin B A. l-N-(S-B-amino-a-hydroxipropionyl)-gentamicin B Försätt en lösning av 3,75 g (5 mmol) 3,6'-di-N-bensyloxi- karbonylgentamicin B i 25 ml metanol och 25 ml vatten under omröring med en lösning av 2,18 g (6,5 mmol) N-(S-B-bensyloxikarbonylamino-a- -hydroxipropionyloxi)-succinimid i 12 ml dimetylformamid. Omrör reak- tionsblandningen två timmar, koncentrera i vakuum och upplös den er- hållna återstoden i 75 ml vatten och 75 ml metanol. Hydrera i närvaro av 5 g 5%-igt palladium/kol vid 4 at under 24 timmar. Avlägsna kata- lysatorn genom filtrering genom en kudde av Celite och tvätta med vatten. Koncentrera det med tvättvätskorna kombinerade filtratet, kromatografera den erhållna återstoden på Dowex-l x 2-jonbytharts (200 g, 200-400 mesh) i hydroxidformen och eluera med vatten. Kombinera 5 41 lika fraktioner innehållande l-Në(S-B-amino-a-hydroxipröpionyl)-gente- micin B såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering på silikagel med användning av kloroformzmetanolzammoniumhydroxid (3:4:2) såsom lösningsmedelssystem. Koncentrera till en ringa volym, utspäd med ' vatten och lyofilisera för bildning av l-Ne(S-B-amino-a-hydroxipropio- nyn-gentemiein B, utbyte 1,7 g (60 74 teen).

B. l-N-(Rrß-amino-a-hydroxipropionyl)-gentamicin B _ Behandla på det i exempel 16A angivna sättet 3,6'-di-N-benf syloxikarbonylgentamicin B med l-N-(R-B-bensyloxikarbonylamino-a- -hydroxipropionyloxi)-succinimid och isolera och rena den erhållna pro- dukten på angivet sätt för bildning av l-N-(R-B-amino-a-hydroxipropio- nyl)-gentamicin B.

C. Överför' av -Q-amino-a-gydroxigrogiogvl)-gentamioin B och 1-NL(R=B-amino-q-hïdroxi- grogiogll)-gentamicingëvmed användning av racemisk ß-N¥ben§1loxikarbo- gïlamino-a-hydroxinropionsgra h (1) För-satt en emrzsra :Lösning ev 1 g (1,33 moi) 3,6'-ai-N- -bensyloxikarbonylgentamicin B i 5 ml metanol och 5 ml vatten med en lösning av 0,674 g (0,2 mmol) racemisk N;(B-bensyloxikarbonylamino-a- -hydroxipropionyloxi)-succinimid i 2 ml dimetylformamid. Omrör två timmar och avdunsta sedan lösningsmedlet i vakuum. Kromatografera den erhållna återstoden på silikagel (60-100 mesh, 100 g) och eluera med en lösning av kloroform:metanolzammoniumhydroxid (30:lO:l). övervaka fraktionerna genom tunnskiktskromatografering på silikagel med använd- ning av kloroform:metanolzammoniumhydroxid (2:l:O,35) såsom lösnings- medelssystem. Kombinera lika fraktioner innehållande l-N#(S-B-bensyl- oxikarbonylamino-a-hydroxipropionyl)-3,6'-di-N-bensyloxikarbonylgenta- sätt vatten till den erhållna återstoden micin B, indunsta i vakuum, och lyofilisera ur vattnet, utbyte 0,43 g (65 % teor.). Kombinera på samma sätt likadana fraktioner innehållande 1-Ne(R-B-bensyloxikarbonyl amino-d-hydroxipropionyl)-gentamicin B, avdunsta lösningsmedlen i vakuum, tillsätt vatten och lyofilisera, utbyte 0,36 g (55,8 % teor.). (2) Hydrera vardera av de båda fraktionerna separat i 5 ml metanol och 5 ml vatten i närvaro av 5 %-igt palladium/kol-katalysator vid 4 at under 24 timmar. I varje enskilt fall avlägsna katalysatorn genom filtrering genom Celite, tvätta med vatten och indunsta de båda kombinerade filtraten till en återstod. Sätt vatten till återstoden och lyofilisera för bildning av ren l-N-(S-B-amino-a-hydrozipropionyl)- -gentamicin B och 1-Ne(R-B-amino-d-hydroxipropionyl)-gentamicin B í nästa kvantitativa utbyten. 469 ...nå 5 _ 42 Exemgel 17. _ Överföring av 3,6'-di-Nëbensyloxiggrbonylgentamicin B till 1-N4(S-Y- -amino-a-hydroxibutyryl)-gentamicin B och l-N;(R~Y-amino-a-hydroxi~ butyryl)-gentamicin B med användning av racemisk Nëïëbensyloxikarbonyl- -a-hydroxismörsyra Behandla på i exempel l6C angivet sätt 3,6'-di-N>bensyloxi- karbonylgentamicin B i vattenhaltig metanol med en lösning av racemisk Nëï-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryloxi)-succinimid i dimetyl- formamid, indunsta reaktionsblandningen i vakuum till en återstod inne- hållande l-N>(R,S-Y-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryl)-3,6'-di- -Nëbensyloxikarbonylgentamícin B. Kromatografera på silikagel på samma sätt som beskrivits i exempel l6C och kombinera de likadana fraktionernz såsom fastställts genom tunnskiktskromatografering, och indunsta var och en av de kombinerade fraktionerna i vakuum till en återstod om- fattande 1-Na(S-Y-bensyloxikarbonylamino-a-hydroxibutyryl)-3,6'-di-N; -bensyloxikarbonylgentamicin B resp. 1-Në(R-Y-bensyloxikarbonylamino-a- -hydroxibutyryl)-3,6'-di-Nèbensyloxikarbonylgentamicin B. Hydrera var och en av ae bada fraktioner-na i närvaro av s-ß-igt pallaaium/køl-kata- lysator på samma sätt som beskrivits i exempel l6C(2) för bildning av 1-NL(S-Y-amino-a-hydroxibutyryl)-gentamicin B resp. l-N#(RaY-amino-a- -hydroxibutyryl)-gentamicin B.

Claims (10)

469 ...i LN! ...n 43 PATENTKRAV

1. Förfarande för selektiv N-acylering av en aminoglykosid genom reaktion mellan en selektivt N-blockerad aminoglykosid med minst en oblockerad amingrupp och ett acyleringsreagens, varefter de blocke- rande grupperna avlägsnas, k ä n n e t e c k n a t därav att de selektivt N-blockerade aminoglykosiderna erhålles genom reaktion mellan en aminoglykosid, vari minst en av dess aminogrupper har en i grannställning belägen hydroxylgrupp och minst en aminogrupp antingen saknar, eller är steriskt mindre tillgänglig för, en i grannställning belägen tillgänglig hydroxylgrupp, i ett aprotiskt eller protiskt inert lösningsmedel, och ett salt av en tvâvärd övergångsmetallkatjon, vald bland koppar(II), nickel(II), kobolt(II) och kadmium(II) eller blandningar därav, för bildning av ett komplex av nämnda aminoglykosid mellan nämnda övergångsmetallsalt och minst ett par av grupper bestående av nämnda aminogrupp med en i grann- ställning belägen hydroxylgrupp och nämnda i grannställning belägna hydroxylgrupp; följd av reaktion mellan det erhållna aminoglykosid- övergàngsmetallsalt-komplexet och ett aminblockerande medel med en acylaminblockerande grupp; och därefter reaktion mellan det erhållna aminoglykosid-övergångsmetallsalt-komplexet med acylgrupper, som blockerar icke-komplexbildade aminogrupper, och ett övergångsmetall- utfällande reagens eller ammoniumhydroxid, varigenom nämnda över- gångsmetallkatjon avlägsnas.

2. Förfarande enligt patentkravet l, k ä n n e t e c k n a t därav att aminoglykosiden är en 4,6-di-O-(aminoglykosid)-1,3-diaminocykli- tol, i vilken amingrupperna i 3,2',6'- eller 3,6'- eller 3,2'-ställ- ning selektivt blockeras och amingruppen i l-ställning selektivt E? acyleras genom införande av en substituent -C-X, vari X är väte, alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkylalkyl, hydroxialkyl, amino- alkyl, mono- eller di-N-alkylaminohydroxialkyl, fenyl, bensyl eller tolyl, och nämnda alifatiska radikaler har upp till 7 kolatomer, och om de är substituerade med amino och hydroxi är substituenterna belägna på olika kolatomer, varvid det l-N-substituerade derivatet efter deblockering isoleras som sådant eller i form av ett farmaceu- $> (§\ MO ...mb- CN 44 tiskt godtagbart syraadditionssalt.

3. Förfarande enligt patentkravet l eller 2, k ä n n e t e c k - n a t därav att aminoglykosiden väljes bland sisomicin, verdamicin, tobramycin, gentamicin Cl, gentamicin Cla, gentamicin CZ, gentamicin Cza, gentamicin Czb, antibiotikum 66-40B, antibiotikum 66-40D, antibiotikum JI-20A, antibiotikum JI-ZOB, antibiotikum G-52, 5-epi- och 5-epi-azido-5-deoxi-analogerna av de föregående; kanamycin B, 3',4'-dideoxikanamycin B, nebramycin faktor 4, nebramycin faktor 5', 3',4'-dideoxi-3',4'-dehydrokanamycin B, 3',4'-dideoxi-6'-N-metyl- kanamycin B, 5-deoxisisomycin, gentamicin B, gentamicin Bl, gentami- cin A3, kanamycin A, 6'-N-metylkanamycin A, kanamycin C, antibioti- kum G-418, gentamicin A, gentamicin A1 och gentamicin Xá.

4. Förfarande enligt något av patentkraven 1 till 3, k ä n n e - t e c k n a t därav att den tvåvärda övergångsmetallkatjonen väljes bland koppar(II)acetat, nickel(II)acetat och kobolt(II)acetat.

5. Förfarande enligt något av föregående patentkrav, k ä n n e - t e c k n a t därav att övergångsmetallkatjonen avlägsnas med användning av svavelväte eller ammoniumhydroxid.

6. Förfarande enligt något av föregående patentkrav, k ä n n e - t e c k n a t därav att reaktionen mellan komplexet och det amin- blockerande medlet utföres in situ.

7. k ä n n e t e c k n a d e därav att de utgöres av: 3,2',6'-tri-N-Y-sisomicin, 3,2',6'-tri-N-Y-verdamicin, N-acylerade aminoglykosider framställda enligt patentkravet 3, 3,2',6'-tri-N-Y-tobramycin, 3,2',6'-tri-N-Y-gentamicin Cl, 3,2',6'-tri-N-Y-gentamicin Cla, 3,2',6'-tri-N-Y-gentamicin C2, 3,2',6'-tri-N-Y-gentamicin Cza, 3,2',6'-tri-N-Y-gentamicin Czb, 3,2',6'-tri-N-Y-antibiotikum 66-4OB, 3,2',6'-tri-N-Y-antibiotikum 66-40D, 3,2',6'-tri-N-Y-antibiotikum JI-20A, 3,2',6'-tri-N-Y-antibiotikum JI-ZOB, 3,2',6'-tri-N-Y-antibiotikum G-52, 45 5-epi- och 5-epi-azido-5-deoxi-analogerna av de föregående; 3,2',6'-tri-N-Y-kanamycin B, 3,2',6'-tri-N-Y-3',4'-dideoxikanamycin B, 3,2',6'-tri-N-Y-nebramycin faktor 4, 3,2',6'-tri-N-Y-nebramycin faktor 5', 3,2',6'-tri-N-Y-3',4'-dideoxi-3',4'-dehydrokanamycin B, 3,2',6'-tri-N-Y-3',4'-dideoxi-6'-N-metylkanamycin B, och 3,2',6'-tri-N-Y-5-deoxisisomicin; vari Y är en acylgrupp.

8. N-acylerad aminoglykosid enligt patentkravet 7, k ä n n e t e c k n a d därav att den utgöres av 3,2',6'-tri-N-acetyl- sisomicin.

9. N-acylerade aminoglykosider framställda enligt patentkravet 3, k ä n n e t e c.k n a d e därav att de utgöres av: 3,6'-di-N-Y-gentamicin B, 3,6'-di-N-Y-gentamicin Bl, 3,6'-di-N-Y-gentamicin A3, 3,6'-di-N-Y-kanamycin A, 3,6'-di-N-Y-6'-N-metylkanamicin A; vari Y är en acylgrupp.

10. N-acylerade aminoglykosider framställda enligt patentkravet 3, k ä n n e t e c k n a d e därav att de utgöres av: 2',6'-di-N-Y-sisomicin, 2',6'-di-N-Y-verdamicin, 2',6'-di-N-Y-tobramycin, 2',6'-di-N-Y-gentamicin Cl, 2',6'-di-N-Y-gentamicin Cla, 2',6'-di-N-Y-gentamicin CZ, 2',6'-di-N-Y-gentamicin C23, 2',6'-di-N-Y-antibiotikum 66-40B, 2',6'-di-N-Y-antibiotikum 66-40D, 2',6'-di-N-Y-antibiotikum JI-20A, 2',6'-di-N-Y-antibiotikum JI-20B, 2',6'-di-N-Y-antibiotikum G-52, 5-epi- och 5-epi-azido-5-deoxi-analogerna av de föregående och av gentamicin Czb; 2',6'-di-N-Y-nebramycin faktor 4, 2',6'-di-N-Y-nebramycin faktor 5', 2',6'-di-N-Y-3',4'-dideoxi-3',4'-dehydrokanamycin B, J» ox \D ....,.\. ma. 46 2',6'-di-N-Y-3',4'-dideoxi-6'-N-metylkanamycin B och 2',6'-di-N-Y-5-deoxisisomicin; vari Y är en acylgrupp.