RU2501013C1 - Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека - Google Patents
Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2501013C1 RU2501013C1 RU2012131999/15A RU2012131999A RU2501013C1 RU 2501013 C1 RU2501013 C1 RU 2501013C1 RU 2012131999/15 A RU2012131999/15 A RU 2012131999/15A RU 2012131999 A RU2012131999 A RU 2012131999A RU 2501013 C1 RU2501013 C1 RU 2501013C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ldl
- serum
- plasma
- blood
- pvp
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к клинической биохимии, и может быть использовано в лабораторной диагностике для определения атерогенности крови по уровню содержания минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности (ММ-ЛПНП) в сыворотке или плазме крови человека. ММ-ЛПНП агрегируют из сыворотки или плазмы крови путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с мол.массой 12600±2700, при конечной концентрации ПВП от 11,3% до 14,2% в пробе. После инкубации в течение 10 мин измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность и при величине разности более 10 ЕД констатируют атерогенность крови у обследуемого человека за счет повышенного уровня ММ-ЛПНП. Использование простого, доступного и быстрого в осуществлении способа определения ММ-ЛПНП в крови человека позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и диспансеризации населения. 3 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к клинической биохимии, и может быть использовано в лабораторной диагностике для определения атерогенности крови по уровню содержания минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности (ММ-ЛПНП) в сыворотке или плазме крови человека.
ММ-ЛПНП представляют собой слабо модифицированные ЛПНП, отличающиеся от нативных ЛПНП по физико-химическим свойствам, но сохраняющие еще сродство к рецептору ЛПНП и не узнающиеся скавенджер-рецепторами. Физиологическая модификация ЛПНП наблюдается при различных реакциях как ферментативных, так и неферментативных. Продукты всех этих реакций могут быть названы как ММ-ЛПНП, хотя окисление может не быть первичным событием при многих этих модификациях. Липидная пероксидация является первичной реакцией только при липооксигеназном или свободно-радикальном путях окисления ЛПНП. Гидролиз сфингомиелина при помощи секреторной сфингомелиназы (СМ-азы) может наблюдаться при острофазной реакции, когда уровень СМ-азы повышается в плазме или при участии СМ-азы, свойственной для ЛПНП [23, 6]. Гидролиз сфингомиелина до церамида повышает оксидативную чувствительность ЛПНП [16], а также приводит к формированию агрегированного ЛПНП, который превосходит окисленный ЛПНП в способности поглощаться макрофагами с образованием «пенистых» клеток [15]. Действие Фосфолипазы-А2 на ЛПНП продуцирует лизофосфатидилбогатые ЛПНП, которые обладают хемотаксической и провоспалительной активностями. Тертовым В.В. и соавторами (1996) обнаружен в крови десиалированный ЛПНП, который образуется либо при действии фермента сиалидазы, либо в реакциях, опосредованных свободными радикалами. Показано также, что десиалированные ЛПНП запускают образование «пенистых» клеток [18]. Гликирование ЛПНП, наблюдающееся при диабете, также повышает как образование «пенистых» клеток, так и подверженность ЛПНП к окислению [3]. Миелопероксидаза-опосредованное окисление ЛПНП приводит первично к модификации тирозиновых остатков в апоВ белка в составе ЛПНП [5].
Наиболее убедительные доказательства участия окисленных ЛПНП (оЛПНП) в развитии атеросклероза подтверждаются следующими данными:
1) о ЛПНП обнаружены в атеросклеротической бляшке, но не в нормальных артериях [14];
2) аутоантитела, образованные против неоэпитопов о ЛПНП, присутствуют в крови и титр этих антител коррелирует с тяжестью атеросклероза и является маркером заболевания [9, 19];
3) исследования на животных моделях атеросклероза показали протективный эффект антиоксидантов (витамин Е, пробукол, аналоги пробукола и KoQ), хотя клинические испытания на людях с использованием витамина Е потерпели неудачу [22];
4) генетический нокаут различных скавенджер-рецепторов на мышах приводит к значительному подавлению развития атеросклероза [21, 11-13], подтверждая роль этих рецепторов и их лигандов (оЛПНП) в развитии повреждения артерий;
5) истощение 12/15-липооксигеназы, который является физиологическим окисляющим агентом ЛПНП, замедляет развитие атеросклероза [7], в то время как его повышенная экспрессия ускоряет атеросклероз [4], показывая тем самым роль окислительной модификации ЛПНП;
6) исследования Като и соавт.(2009) у апоЕ-дефицитных мышей показали, что повышение плазменного уровня оЛПНП наблюдается до развития повреждений артерий [10];
7) показано, что специфическое снижение плазменного уровня оЛПНП путем экспрессии скавенджер-рецептора (LOX-1) в печени предотвращает прогрессирование атеросклеротического повреждения у апоЕ-дефицитных мышей даже при наличии тяжелой гиперхолестеролемии [8].
Таким образом, учитывая важную патогенетическую роль оЛПНП при атеросклерозе, остается актуальной разработка простых, доступных для клинических лабораторных исследований способов определения ММ-ЛПНП.
В настоящее время в клинической лабораторной практике отсутствуют доступные для рутинных исследований реагенты и методы определения содержания атерогенных минимально модифицированных липопротеинов в сыворотке крови человека.
Известен способ определения атерогенности сыворотки крови по ее способности вызывать накопление холестерина в культивируемых клетках [17]. Недостатком этого способа являются трудоемкость, высокая себестоимость, сложность и длительность проведения исследования.
Наиболее интенсивно разрабатываемыми методами определения мЛПНП являются иммуноферментные тесты с использованием моноклональных антител к in vitro модифицированным ЛПНП [20]. Многостадийность, трудоемкость и длительность иммуноферментного теста, выявление только эпитопов, характерных для искусственно модифицированных липопротеинах низкой плотности (неспецифичность), а также высокая себестоимость реагентов затрудняет использование их в рутинных исследованиях.
Наиболее близким техническим решением является определение множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛПНП) в плазме крови человека путем обработки ее буфером, содержащим поливинилпирролидон 12600±2700, и последующей визуальной регистрацией помутнения по сравнению с контрольной пробой. Наличие помутнения, обусловленной агрегацией ммЛПНП, свидетельствует об атерогенности крови [2]. Для инструментального подтверждения наличия атеросклероза были проведены исследования импульсно-волновым доплеровским сканированием сонных артерий у относительно здоровых молодых людей с повышенным уровнем ммЛПНП в возрасте до 40 лет с нормальным уровнем холестерина и триглицеридов. В результате ультразвукового исследования у 57% было выявлено утолщение интимо-медиального слоя сонных артерий и подтвержден инструментально диагноз атеросклероз брахиоцефальных артерий. У остальных (43%) данные параметры оставались в пределах нормальных величин и свидетельствовали о том, что повышение уровня ммЛПНП предшествует морфологическим изменениям (утолщению) интимо-медиального слоя в обследованных артериях. [1].
Недостатком разработанного ранее метода является то, что способ выявляет только ммЛПНП, которые быстро элиминируются из кровотока при взаимодействии со скавенджер-рецепторами. А также ммЛПНП связываются с аутоантителами к ним с образованием иммунных комплексов, которые при условиях 8,9% ПВП не агрегируют и у некоторых больных с тяжелым атеросклерозом данный тест дает отрицательный результат.
Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала реагентов для определения атерогенности крови по агрегации ММ-ЛПНП, маркера как раннего атеросклероза (до образования ммЛПНП), так и атеросклероза, характеризующегося повышенным уровнем аутоантител к ммЛПНП и наличием клиники атеросклероза у больных, подтвержденых инструментальными методами исследования.
Поставленная задача решается путем добавления к сыворотке крови человека буферного раствора, содержащего поливинилпирролидон 12600±2700 (концентрация в системе от 11,3% до 14,2%, определения степени помутнения турбидиметрическим методом и расчета содержания ММ-ЛПНП по приведенной ниже формуле.
Техническим результатом, получаемым при реализации изобретения, является расширение арсенала реагентов для определения атерогенности крови с целью ранней биохимической диагностики субклинического атеросклероза, а также контроля эффективности терапии клинического атеросклероза.
Этот результат достигается тем, что определение атерогенности сыворотки или плазмы крови человека проводят путем обработки ее буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП), инкубирования пробы в течение 10 мин при комнатной температуре, измерения светопоглощения в опытной и контрольной пробах, вычисления разности между ними, при этом при величине разности более 10 ЕД, констатируют атерогенность крови за счет повышенного уровня ММ-ЛПНП.
Определение атерогенности крови человека по агрегации минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности (ММ-ЛПНП) с использованием поливинилпирролидона (ПВП) 12600±2700 (ООО АК «Синтвита», Россия).
Буфер-1 для агрегации ММ-ЛПНП готовят растворением 15 г ПВП 12600±2700 в 100 мл 0,01М Трис-HCl-буфера, рН 7,4, содержащего 0,15 М NaCl. Буфер-К в отличие от Буфера-1 не содержит ПВП. К буферу-1 добавляют сыворотку крови, тщательно перемешивают, инкубируют, измеряют степень помутнения спетрофотометрически и рассчитывают уровень содержания [ММ-ЛПНП] по формуле:
[ММ-ЛПНП], ЕД=[EO-ЕК]×100,
где:
[ММ-ЛПНП] - уровень содержания минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в опытной пробе в единицах (ЕД);
ЕО - оптическая плотность опытной пробы, сыворотки с соответствующим количеством Буфера-1, при длине волны 450 нм, ед. опт.пл.;
ЕK - оптическая плотность контрольной пробы при длине волны 450 нм, сыворотки с соответствующим количеством Буфера-К, ед. опт.пл.;
100 - коэффициент перерасчета в единицы ЕД.
Пример 1. Определение оптимальной концентрации ПВП 12600±2700 (ООО АК «Синтвита», Россия) для агрегации ММ-ЛПНП в пулированной сыворотке крови больных сердечно-сосудистыми заболеваниями. К 50 мкл пулированной сыворотки крови от 10 больных сердечно-сосудистыми заболеваниями добавляют 100-900 мкл Буфера-1, тщательно перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 10 мин в 9 луночных кюветах биохимического анализатора FP-901 ("Labsystem", Финляндия). Степень помутнения определяют турбидиметрически при длине волны 450 нм. В качестве бланка используют пробы сыворотки с соответствующим количеством Буфера-К. Рассчитывают уровень содержания ММ-ЛПНП по формуле, приведенной выше. Полученные результаты приведены в таблице 1.
Как видно из данных, представленных в таблице 1, с увеличением концентрации ПВП 12600±2700 в инкубационной системе с 11,3% до 14,2% наблюдается агрегация MM-ЛПНП и помутнение раствора. Максимальная агрегация ММ-ЛПНП достигается при концентрации 12,5%, т.е. при объемном соотношении сыворотка:Буфер-1 (1:5). При дальнейшем увеличении концентрации ПВП свыше 12,5% наблюдается снижение степени агрегации.
Пример 2. Определение агрегации нашивных липопротеинов низкой и очень низкой плотности в пулированной сыворотке здоровых доноров в зависимости от концентрации ПВП 12600±2700 (ООО АК «Синтвита», Россия).
Для подтверждения агрегации именно ММ-ЛПНП сыворотки больных атеросклерозом в 12,5% растворе ПВП 12600±2700 нами была исследована пулированная сыворотка от 10 здоровых доноров при условиях, описанных выше. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Добавление к пулированной сыворотке крови здоровых доноров возрастающих концентрации Буфера-1, содержащего 15% ПВП 12600±2700, приводит к агрегации нативных липопротеинов низкой и очень низкой плотности при конечной концентрации ПВП в системе до 12,0%. При дальнейшем увеличении концентрации ПВП свыше 12,5% в системе наблюдается диссоциация образовавшихся агрегатов нативных липопротеинов низкой и очень низкой плотности и характеризуется снижением мутности раствора сыворотки. При концентрации ПВП от 12,5% и до 14,2% в системе оптическая плотность раствора сыворотки практически не меняется. Полученные данные свидетельствуют о том, что при концентрации ПВП 12600±2700 выше 12,5% в системе (от 12,5% до 14,2%) в пулированной сыворотке крови здоровых доноров агрегации нативных липопротеинов низкой и очень низкой плотности практически не наблюдается.
Пример 3. Определение уровня содержания ММ-ЛПНП в сыворотке крови у больных с атеросклерозом каротидных артерий, подтвержденных инструментальными методами. Проведены исследования содержания ММ-ЛПНП предлагаемым способом и прототипом в сыворотке 60 неврологических больных с атеросклерозом каротидных артерий, подтвержденных инструментальными методами. По предлагаемому способу к 50 мкл исследуемой сыворотки добавляли 275 мкл Буфера-1, тщательно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин в 9-ти луночных кюветах биохимического анализатора FP-901 (Labsystem, Финляндия). В прототипе использовали 10% ПВП 12600 (ООО АК «Синтвита», Россия) в 0,01 М Трис-HCl-буфере, содержащем 0,15 М NaCl, рН 7,4, как описано в работе [2]. Степень помутнения определяли турбидиметрически при длине волны 450 нм. В качестве бланка использовали пробы сыворотки с соответствующим количеством Буфера-К. Рассчитывали уровень содержания ММ-ЛПНП и ммЛПНП по формуле, приведенной выше. Полученные результаты по определению ММ-ЛПНП и ммЛПНП приведены в таблице 3.
Таким образом, из приведенных в таблице 3 данных видно, что только у 43% обследованных больных с атеросклерозом каротидных артерий, подтвержденных инструментальными методами выявлен повышенный уровень ммЛПНП. В то время как определение атерогенности крови путем агрегации ММ-ЛПНП у этих же больных в 93% случаев дает положительный результат. Нормальный уровень ММ-ЛПНП у 4 больных, возможно, связано с приемом препаратов снижающих уровень холестерина и в конечном итоге с низким уровнем ЛПНП. Сравнительное исследование содержания ММ-ЛПНП в сыворотке и в плазме крови показало, что ММ-ЛПНП агрегируют как из сыворотки, так и из плазмы больных, что свидетельствует о специфичности процесса агрегации минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности. Причем процент выявления ММ-ЛПНП как в сыворотке, так и в плазме крови одинаков, соответственно 93% и 95%.
Предлагаемый способ отличается простотой, включает всего 2 операции: смешивание сыворотки или плазмы крови человека с раствором ПВП и регистрацию мутности. Для приготовления среды необходимы широко распространенные реактивы: ПВП, NaCl и трис-HCl. Способ позволяет регистрировать наличие ММ-ЛПНП непосредственно в сыворотке или плазме без предварительного ее фракционирования. Способ быстр (10 мин на 1 анализ), легко может быть адаптирован для биохимических автоматических анализаторов. Использование простого и быстрого в осуществлении способа определения атерогенности крови позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и диспансеризации населения. Формирование группы риска по атеросклерозу (повышенный уровень ММ-ЛПНП) позволит установить индивидуальную причину патологического процесса и проводить этиотропную терапию. Исследования уровня содержания ММ-ЛПНП в крови больного с атеросклерозом в условиях клиники позволит контролировать эффективность проводимой терапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Шойбонов Б.Б. Экспресс-определение модифицированных липопротеинов // Кардиология Беларуси. - 2011. - Т.5, №18. - С.49-50.
2. Шойбонов Б.Б., Баронец В.Ю., Панченко Л.Ф., Кубатиев А.А. Способ экспресс-определения атерогенности крови // Патент РФ №2437098 от 20Л2.2011 г.Бюл.№35.
3. Graier W.F. and Kostner G.M. Glycated low-density lipoprotein and atherogenesis: the missing link between diabetes mellitus and hypercholesterolaemia? // Eur J Clin Invest. - 1997. - V.27. - P.457-459.
4. Harats D., Shaish A., Geoege J., at al. Overexpression of 15-lipooxygenase in vascular endothelium accelerates early atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2000. - V.20. - P.2100-2105.
5. Heinecke J.W. Oxidized amino acids: Culprits in human atherosclerosis and indicators of oxidative stress //Free Radical Biol Med. - 2002. - V.32. - P. 1090-1101.
6. Holopainen J.M., Medina O.P., Metso A.J., and Kinnunen P.K. Sphingomyelinase activity associated with human plasma low density lipoprotein. Possible functional implications // J Biol Chem. - 2000. - V. 275.-P.16484-16489.
7. HuoY., Zhao L., Hyman M.C., at al. Critical role of macrophage 12/15-lipooxygenese for atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice // Circulation. - 2004. - V. 110. - P.2024-2031.
8. Ishigaki Y., Katagiri H., Gao J., at al. Impact of plasma oxidized low-density lipoprotein removal on atherosclerosis // Circulation. - 2008. - V. 118. - P.75-83.
9. Itabe H., Mori M., Higashi Y., and Takano T. Minimally modified LDL is an oxidized LDL enriched with oxidized phosphatidylcholines // J Biochem. - 2003. - V.134. - P.459-465.
10. Kato R., Mori C, Kitazato K., at al. Transient increase in plasma oxidized LDL during the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E knockout mice // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2009. - V.29. - P.33-39.
11. Kuchibhotla S., Vanegas D., Kennedy D.J., at al. Absence of CD36 protects against atherosclerosis in ApoE knock-aut mice with no additional protection provided by absence of scavenger receptor AI/II // Cardiovasc Res. - 2008. - V.78. - P.185-196.
12. Manning-Tobin J.J., Moore K.J., Seimon T.A., at al. Loss of SA-A and CD36 activity reduces atherosclerotic lesion complexity without abrogating foam cell formation in hyperlipidemic mice // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2009. - V.29. - P.19-26.
13. Mehta J.L., Sanada N., Ни C.P., at al. Deletion of LOX-1 reduces atherogenesis in LDLR knockout mice fed high cholesterol diet // Circ Res. - 2007. - V.100. - P.1634-1642.
14. Rosenfeld M.E., Palinski W., Yla-Herttuala S. et al. Distribution of oxidation specific lipid-protein adducts and apolipoprotein В in atherosclerotic lesions of varying severity from WHHL rabbits // Atherosclerosis. - 1990. - V.10. -P.336-349.
15. Schissel S.L., Tweedie-Hardman J., Rapp J.H., et al. Rabbit aorta and human atherosclerostic lesions hydrolyze the sphingomyelin of retained low-density lipoprotein. Proposed role for arterial wall sphingomyelinase in subendothelial retention and aggregation of atherogenic lipoproteins // J Clin Invest. - 1996. - V.98. - P. 1455-1464.
16. Subbaiah P.V., Subramanian V.S., and Wang K. Novel physiological functions jf sphingomyelin in plasma. Inhibition of lipid peroxidation in low density lipoproteins // J Biol Chem. - 1999. - V. 274. - P.36409-36414.
17. Tertov V.V., Orekhov A.N., Nikitina N.A. et al. Peritoneal macrophages: a model for detecting atherogenic potential in patiens' blood serum // Ann. Med. - 1989. - V. 21(6). - P.455-459.
18. Tertov V.V., Sobenin I.A., and Orekhov A.N. Similarity between naturally occurring modified desialated, electronegatine and aortic low density lipoprotein // Free Radic Res. - 1996. - V.25. - P.313-319.
19. Tsimikas S. Oxidative biomarkers in the diagnosis and prognosis of cardiovascular disease //Am J Cardiol. - 2006. - V.98. - P. 9P-17P.
20. Virella G., Derrick MB., Pate V. et al. Development of capture assay for different modification of human low-density lipoprotein // Clinical and Diagnostic Lab. Immunol. - 2005. - V. 12, №1. - P.68-75.
21. de Winther M.P.J., van Dijk K.W., Havekes L.M., and Hofker M.H. Macrophage scavenger receptor Class A: A multifunctional receptor in a Atherosclerosis // Artherioscler Thromb Vase Biol. - 2000. - V.20. - P.290-297.
22. Witztum J.L. and Steinberg D. The oxidative modification hypothesis of atherosclerosis: Does it hold for humans? // Trends Cardiovasc Med. - 2001. - V.ll. - P. 93-102.
23. Wong M-L., Xie В., Beatini N et al. Acute systemic inflammation up-regulates secretory sphingomyelinase in vivo: A possible link between inflammatory cytokines and atherogenesis // Proc Natl Acad Sci. - 2000. - V. 97. - P. 8681-8686.
Таблица 1 | |||||||
Влияние ПВП 12600±2700 на агрегацию ММ-ЛПНП в пулированной сыворотке крови больных с атеросклерозом коронарных сосудов | |||||||
№ | Серии экспер. | Сыв., мкл | Буфер-1, мкл | Буфер-К, мкл | %ПВП в системе | А450 | [ММ-ЛПНП], ЕД. |
1 | Опыт Бланк | 50 50 |
100 | 100 | 11,3 0% |
0,643 0,1 |
54,3 |
2 | Опыт Бланк | 50 50 |
200 | 200 | 12,0 0% |
0,756 0,1 |
65,6 |
3 | Опыт Бланк | 50 50 |
250 | 250 | 12,5 0% |
0,802 0,1 |
70,2 |
4 | Опыт Бланк | 50 50 |
300 | 300 | 12,9 0% |
0,775 0,1 |
67,5 |
5 | Опыт Бланк | 50 50 |
400 | 400 | 13,3 0% |
0,547 0,1 |
44,7 |
6 | Опыт Бланк | 50 50 |
500 | 500 | 13,6 0% |
0,437 0,1 |
33,7 |
7 | Опыт Бланк | 50 50 |
600 | 600 | 13,9 0% |
0,403 0,1 |
30,3 |
8 | Опыт Бланк | 50 50 |
700 | 700 | 14,0 0% |
0,379 0,100 |
27,9 |
9 | Опыт Бланк | 50 50 |
800 | 800 | 14,1 0% |
0,377 0,100 |
27,7 |
10 | Опыт Бланк | 50 50 |
900 | 900 | 14,2 0% |
0,362 0,100 |
26,2 |
Таблица 2 | |||||||
Влияние ПВП 12600 на агрегацию нативных липопротеинов в пулированной сыворотке крови здоровых доноров | |||||||
№ | Серии экспер. | Сыв., мкл | Буфер-1, мкл | Буфер К | % ПВП в системе | А450 | [ММ-ЛПНП], ЕД. |
1 | Опыт | 50 | 100 | - | 11,3 | 0,412 | 21,1 |
Бланк | 50 | - | 100 | 0% | 0,099 | ||
2 | Опыт | 50 | 200 | - | 12,0 | 0,438 | 16,2 |
Бланк | 50 | - | 200 | 0% | 0,096 | ||
3 | Опыт | 50 | 250 | - | 12,5 | 0,232 | 9,8 |
Бланк | 50 | - | 250 | 0% | 0,092 | ||
4 | Опыт | 50 | 300 | - | 12,9 | 0,232 | 9,8 |
Бланк | 50 | - | 300 | 0% | 0,092 | ||
5 | Опыт | 50 | 400 | - | 13,3 | 0,192 | 9,1 |
Бланк | 50 | - | 400 | 0% | 0,101 | ||
6 | Опыт | 50 | 500 | - | 13,6 | 0,19 | 9,0 |
Бланк | 50 | - | 500 | 0% | 0,100 | ||
7 | Опыт | 50 | 600 | - | 13,9 | 0,2 | 9,2 |
Бланк | 50 | - | 600 | 0% | 0,100 | ||
8 | Опыт | 50 | 700 | - | 14,0 | 0,2 | 9,2 |
Бланк | 50 | - | 700 | 0% | 0,100 | ||
9 | Опыт | 50 | 800 | - | 14,1 | 0,203 | 9,7 |
Бланк | 50 | - | 800 | 0% | 0,100 | ||
10 | Опыт | 50 | 900 | - | 14,2 | 0,205 | 9,8 |
Бланк | 50 | - | 900 | 0% | 0,100 |
Таблица 3 | |||
Определение уровня ммЛПНП и ММ-ЛПНП в сыворотке или в плазме крови больных с инструментально подтвержденным атеросклерозомкаротидных артерий | |||
Сыворотки | n | ммЛП (>10ЕД) | ММ-ЛПНП, (>10ЕД) |
больных с атеросклерозом каротидных артерий | 60 | 26 | 56 |
Плазма крови больных с атеросклерозом каротидных артерий | 20 | 8 | 19 |
Claims (1)
- Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности (ММ-ЛПНП) в сыворотке (плазме) крови человека путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, отличающийся тем, что обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут раствором ПВП-12600 в 0,01М Трис-HCl-буфере, рН 7,4, содержащем 0,15М NaCl, при концентрации ПВП-12600 в пробе от 11,3% до 14,2%, инкубируют 10 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при величине разности более 10ЕД. констатируют атерогенность крови у обследуемого человека за счет повышенного уровня ММ-ЛПНП.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012131999/15A RU2501013C1 (ru) | 2012-07-26 | 2012-07-26 | Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012131999/15A RU2501013C1 (ru) | 2012-07-26 | 2012-07-26 | Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2501013C1 true RU2501013C1 (ru) | 2013-12-10 |
Family
ID=49711139
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012131999/15A RU2501013C1 (ru) | 2012-07-26 | 2012-07-26 | Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2501013C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2592238C1 (ru) * | 2015-01-15 | 2016-07-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина" (ФГБНУ "НИИНФ им. П.К. Анохина") | Метод выделения и количественного определения множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности |
RU2623879C2 (ru) * | 2015-11-25 | 2017-06-29 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" | Способ оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности |
RU2632118C1 (ru) * | 2016-07-21 | 2017-10-02 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) | Способ выделения и исследования атерогенности иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины |
RU2659211C2 (ru) * | 2016-12-16 | 2018-06-28 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" | Способ измерения концентрации циркулирующих модифицированных липопротеидов низкой плотности в сыворотке крови человека |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1296019A3 (ru) * | 1982-04-23 | 1987-03-07 | Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма) | Способ определени липопротеинов низкой плотности в сыворотке крови |
RU2437098C1 (ru) * | 2010-08-24 | 2011-12-20 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Нии Общей Патологии И Патофизиологии Рамн | Способ экспресс-определения атерогенности крови (варианты) |
RU2444014C1 (ru) * | 2010-08-24 | 2012-02-27 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Нии Общей Патологии И Патофизиологии Рамн | Среда и способ определения множественно модифицированных липопротеинов сыворотки крови человека |
-
2012
- 2012-07-26 RU RU2012131999/15A patent/RU2501013C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1296019A3 (ru) * | 1982-04-23 | 1987-03-07 | Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма) | Способ определени липопротеинов низкой плотности в сыворотке крови |
RU2437098C1 (ru) * | 2010-08-24 | 2011-12-20 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Нии Общей Патологии И Патофизиологии Рамн | Способ экспресс-определения атерогенности крови (варианты) |
RU2444014C1 (ru) * | 2010-08-24 | 2012-02-27 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Нии Общей Патологии И Патофизиологии Рамн | Среда и способ определения множественно модифицированных липопротеинов сыворотки крови человека |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Шойбонов Б.Б. Экспресс-определение модифицированных липопротеинов. Кардиология Беларуси, 2011, т.5, №18, с.49, 50. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2592238C1 (ru) * | 2015-01-15 | 2016-07-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина" (ФГБНУ "НИИНФ им. П.К. Анохина") | Метод выделения и количественного определения множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности |
RU2623879C2 (ru) * | 2015-11-25 | 2017-06-29 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" | Способ оценки содержания циркулирующих десиалированных липопротеидов низкой плотности |
RU2632118C1 (ru) * | 2016-07-21 | 2017-10-02 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) | Способ выделения и исследования атерогенности иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины |
RU2659211C2 (ru) * | 2016-12-16 | 2018-06-28 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" | Способ измерения концентрации циркулирующих модифицированных липопротеидов низкой плотности в сыворотке крови человека |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sano et al. | Thymic stromal lymphopoietin expression is increased in the horny layer of patients with atopic dermatitis | |
Rochman et al. | Profound loss of esophageal tissue differentiation in patients with eosinophilic esophagitis | |
RU2501013C1 (ru) | Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека | |
Li et al. | Podocytopathy and nephrotic syndrome in mice with podocyte-specific deletion of the Asah1 gene: role of ceramide accumulation in glomeruli | |
Huffman et al. | Associations of urinary phthalate metabolites and lipid peroxidation with sperm mitochondrial DNA copy number and deletions | |
Barthélémy et al. | Truncated prelamin A expression in HGPS-like patients: a transcriptional study | |
JP6308393B2 (ja) | プラズマローゲンの定量方法 | |
JP5757627B2 (ja) | 高機能自閉症の発症危険度を判定する方法およびマーカー | |
Batchu et al. | Lung and kidney ACE2 and TMPRSS2 in renin-angiotensin system blocker–treated comorbid diabetic mice mimicking host factors that have been linked to severe COVID-19 | |
Soyoral et al. | Serum paraoxonase activity and oxidative stress in patients with adult nephrotic syndrome | |
Cakmak et al. | Serum prolidase activity and oxidative status in patients with bronchial asthma | |
Ryborg et al. | Intracutaneous injection of lysophosphatidylcholine induces skin inflammation and accumulation of leukocytes. | |
Şimşek et al. | Determination of serum malondialdehyde levels in sheep naturally infected with Dicrocoelium dendriticum | |
Wang et al. | Postnatal deficiency of ADAMTS1 ameliorates thoracic aortic aneurysm and dissection in mice | |
Menschikowski et al. | Expression of secretory group IIA phospholipase A2 in relation to the presence of microbial agents, macrophage infiltrates, and transcripts of proinflammatory cytokines in human aortic tissues | |
JPWO2011152012A1 (ja) | 病気の重症度の検査方法 | |
RU2497116C1 (ru) | Способ определения атерогенности крови человека | |
Rhode et al. | Glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D in blood serum:: is the liver the only source of the enzyme? | |
Zhang et al. | Plasma phospholipids are associated with mild cognitive impairment in type 2 diabetic patients | |
Sumegová et al. | Activity of paraoxonase 1 (PON1) and its relationship to markers of lipoprotein oxidation in healthy Slovaks | |
RU2680848C1 (ru) | Способ оценки характера аутоиммунной реакции организма человека на множественно модифицированные липопротеины низкой плотности в литическом тесте | |
RU2577719C1 (ru) | Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности | |
JP6454950B1 (ja) | 粥状動脈硬化による心筋梗塞や脳梗塞のリスクが高いと判定する易酸化性VLDL(VLDL susceptibility to oxidation)および易酸化性LDL(LDL susceptibility to oxidation)の簡便な測定方法および測定装置 | |
RU2521322C1 (ru) | Способ оценки прогрессирования атерогенности при ишемической болезни сердца | |
RU2437103C2 (ru) | Способ определения нарушения обмена холестерина в организме |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170727 |