PT90434B - Processo para a preparacao de um antibiotico polieter - Google Patents

Processo para a preparacao de um antibiotico polieter Download PDF

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Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE UM ANTIBIÓTICO POLIÉTER
MEMÓRIA DESCRITIVA
Resumo
O presente invento diz respeito a um processo para a preparação do novo antibiótico poliéte-r A82810, de fórmula 1 ow·
em que R é hidrogénio, ou de um seu derivado em que R é -LUNHR^ e ha 1oari1 o, o, a r ι i c ι um derivado éster
Ré alqu ilo, arilo, a 1qui1-ari1α, arila1 quilo, nitroarilo, haloarilalquilo, alcoxiaril cloalquilo, acilarilo e cicloalquilo;
D t, arilox
ou de um
DU de um
GS? A32S10
' Ξ· ·£*. sp. no
alquílico ou éter acílico ou alquílico; ou de um seu sal □ orocesso cara a precaração
ORIGINAL de um seu mutante produtor de AS2310, num meio de cultura contendo fontes assimiláveis de carbono, azoto, e sais inorgânicos em condiçSes de fermentação aeróbicas submersas, de modo a preparar-se o antibiótico AS23Í0; e, facultativamente, se salificar, esterificar, acilar, formar um seu derivado éter ou fazer reagir com um isocianato com a fórmula R^-NCO, conforme apropriado. έ também referido o processo para a preparação de composiçoes sinérgicas dos compostos A82S10 com nicarbazina, 4,4 -dinitrocarbanilida, certos compostos nafta 1enamina e benzenamina e metic1orpindo1.
BAD ORIGINAL novo •an t i biótico um i_om
Este invento relaciona-se poli-éter. Em particular, relaciona—se com o antibiótico A82S10 e com a sua preparação por meio de cultura de um novo mic roorqari ismo.
Os produtos relacionados com a saúde animal são muito procurados. Os antibióticos continuam a constituir um tipo importante de produto para a saúde animal, não apenas para o tratamento da doença, mas também para a promoção do aumenta do crescimento nos animais.Os antibióticos podem promover o crescimento reduzindo as doenças ou aumentando a. eficácia, da utilização dos alimentos.
Uma doença que tem um grave impacto sobre a industria das aves domésticas é a coccidiose. A coccidiose resulta da infecção por uma ou mais espécies de Eimer ia ou Isopora Continua a procura de agentes an ti-cocc i.d ianos aperfeiçoadas devido aos contínuos prejuízos de ordem económica devidos ã coccidiose.
A promoção do crescimento aumentando a. eficácia da. utilização dos alimentos constitui um outro objectivo económicamente desejável da ciência veterinária. Este tipo de promoção do crescimento é particularmente importante para os ruminantes, tais como o gado bovino, e para os animais monogástrioos tais como as aves domésticas e os suínos.
Um grupo de antibióticos que se tem revelado especialmente importante no campo da saúde animal são os antibióticos poliéter. Por exemplo, a monensina poliéter constitui um produto comercial importante; é utilizada tanto para o tratamento da coccidiose nas aves domésticas como para o aumenta da eficácia da utilização oos alimentos nos animais.
AD ORIGINALJ
Este invento proporciona um antibiótico poliéter, chamado A82810. Westley (John W. Westley, Polyether Antibiotics: Maturally Occurring Acid Ionophores, Vol.2, Chemistry, Mareei Dekker: New York, 1983) separou os ooliéteres existentes por classes e tipos. Usando o sistema de Westley, A82810 constitui um novo membro da Classe lb, tipo (1), do grupo dos poliéteres devido ao facto de ter um sistema espiroquetal. Outros membros deste grupo incluem Α8019Ό (Patente dos E.U. A. No. 4.582.822); A-28695 A e B (Patente dos E.U.A. Na. 3.839.558); A2041 e II (Patente dos E.U.A. No. 3.705.238); A—32887 (Patente dos E.U.A. Mo. 4.133.876); carriomicina; eteromicina; CP-47.434, RP37454 e os antibióticos X—14868.
Assim, num aspecto, este invento proporciona um composto A32310 com a fórmula 1: '
- OMe
em que R é hidrogénio ou -CCNHR^ e Ρμ é alquilo, arilo, alquiIo-ari1 o, arilalquilo, haloarilo, nitroarilo, ha 1oari1 a 1 quilo, alcoxiarilo, ariloxiarilo, ari1cic1oa1qui1 o, aci1arilo e cicloalquilo; ou um derivado éster acilico ou alquilico ou éter
BAD ORIGINAL Ϊ
Lar :as d>
Α32310
Foi atribuída uma estrutura 1_ ao antibiótico AS2S10 (tendo como base estudas de espectrometria de massa e de RMN). (432810 (na sua forma de ácido livre) apresenta as seguintes características:
Estado: cristais brancos
P.F.: 69-712C pFa: - b, b (dimetil sulfóxido aquoso a 807.)
Lu325 D: -7,35o (ç í, MeOH)
Peso molecular: 342 (espectrometria de massa de desabsorção de campo)
Fármula empírica: C. =tqn0, .
j /q 14
UO: apenas absorção final
IV (CHC1-,): Figura 1; revela que se sequem (cm ^): 3020, 1453, 1379, 1200, 1164, 1146
1050, 1025, 1006, 991, 93o e
Solubilidade; Insolúvel em água;
absorção nas frequências 977, 2935, 2330, 1726,
1115, 1104, 1094, 1073,
946 solúvel em a 1c o o is inferiores tais como metanol, cetonas tais como acetona, ésteres tais como acetato de etilo, hidrocarbonetos halogenados tais como clorofórmio e hidrocarbonetos tais como éter dietílico, benzeno, tolueno e hexano quente»
Tal como se torna aparente a partir da sua estrutura, A37310 tem uma função ácida capaz de formar sais e derivados éster e tem pelo menos um qrupo hidroxilo que pode ser esterifi— ca.op ou que pode formar derivados eter»
Os compostos com a fórmula I em que R é diferente de hidrogénio são chamados- derivados uretano» Os compostos com a fórmula 1 são úteis como antibióticos e como agentes que aumentam a eficácia da utilização dos alimentos»
BAD ORIGINAL
J
Ο Γ:
fórmu1 a
a.
A expressão acilo
C„, de preferência / significa uma metade Acido alcanoia C-^, isto é, radicais com a
R, -C la „ em que R la acetilo, propionilo.
alquilo ou hidrogénio, butirilo, etc.
por exemplo.
formi 1 o,
A expressão cicloalquilo significa grupos hidrocarboneto cíclicos contendo de 3a 7 átomos de carbono, tais como, ciclobutilo, ciclahexilo, etc., sendo o ciclohexilo grupo cicloalquilo pode ser substituído por um c ic 1opropi1 o, preferido. □ resíduo arilo, por exemplo.
( fen i 1 '/ c ic 1 opropi 1 o .
A expressão alcoxi significa um grupo a C-, alquilo inferior tendo nele uma funçSo oxigénio substituída, tal como, metoxi, etoxi, propoxi, etc.
A expressão arilo indica um resíduo aromático derivado pela remoção de um átomo de hidrogénio a partir de um hidro— carboneto aromático, tal como, por exemplo, fenilo, piridilo ou furilo, especialmente fenilo. 0 resíduo arilo pode ser substituído por vários grupos. Um substituinte num núcleo fenilo situa-se de preferência na posição—4. Exemplos são 4-alqui1arilo, por exemplo, 4—me ti 1 f en i. 1 o (4-tolilo); 4-balofenilo, por exemplo, 4-c1orofeni1 o; 4-nitrofenilo; 4-ari1oxi-ari1 o, por exemplo, 4-fenoxifenilo; 4-alcoxif enilo, par exemplo, 4-me toxif eni. lo; e 4-(a 1qui1-carboni1)feni1 o, por exemplo, 4-(meti1 carfaoni1)feni1 o ou 4-(fenilcarbonilo)fenilo.
BAD ORIGiNAL
A expressão “alquilo significa um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada a Cy, de preferencia um hidrocarboneto a C^, por exemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, etc. 0 grupo alquilo pode ser substituído por um resídua arilo, tal como foi definido supra, a fim de formar um resíduo arilalquilo, por exemplo, feniletilo ou 2-feni1eti1 o ou por um resíduo haloarilo a fim de formar um resíduo haloarilalquilo, por exemplo, 4-bromofeneti1 o.
Os sais de A32310 e dos seus derivados são úteis para a separação e purificação dos antibióticos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são particularmente úteis. Exemplos de sais são os sais de metal alcalino, de metal alcalino terroso e de amina de A82810 e dos seus derivados.
Sais de AB2810 de metal alcalinc e de metal alcali no terroso representativos e apropriados incluem sais de sódio, potássio, lítio, césio, rubidio, bario, cálcio e magnésio. Sais de amina apropriados de A32810 incluem os sais de amónio e o C,-C.-CAlqui lamónic· e hidrox.i-C„-C ..-alqui 1 amónio primários, secundários, e terciários. Os sais de amina ilustrativos incluem os formados por reacção de A32810 com hidróxido de amónio, meti 1amina, sec-buti1amina, isopropi1amina, dietilamina, di-isopropilamina, etanolamina, trietilamina, 3-amina-1-propano1, etc.
Quando se trata um animal, não é habitualmente de grande significado o facto de se utilizar a base livre ou u.m sal de um composto. Contudo, a forma salina. pode ser escolhida por razões de economia, conveniência ou toxicidade.
Um outro aspecto deste invento é constituído por um processo para a preparação de A323Í0 que compreende a cultura de Ac t ί ηomad ur a f i brosa sp. nov. NRRL 13343, ou de um seu mutante f
BAD ORIGINAL ί t
f e rmen t aç S.o ae r 6 b i c a s u. b ι n e r otico Ao 88 1 *j, e salificaçã o partir do caldo de fermentação orgânicos polares. D A82810 é por meio de técnicas tais como produtor de A8'2tíl0, em condicôes de sã, d e mod a pr e p;d r ci . o a.n titi
f acu.1 tativa. 0 AS2S10 é extraido a
e a partir do micélio com solventes
separado e em seguida é purificado
c r o m a t o g r a f i a de coluna.
Este invento proporciona ainda uma cultura biologicamente pura de Ac tinomadura fibrosa sp. nov. WRRL 18348, ou de um seu. mutante produtor de AB2810, Ror razões de conveniência, este microorganismo é denominado cultura AS2S10.1. A cultura. A32810.1 constitui uma. variante natural derivada de uma estirpe afim (cultura A,32S10) que foi isolada a de Togo, África Ocidental.
Uma cultura do organismo tada e tornada parte da reserva Northern Regional Research Center Central Region, 1315 Nor th Uni ver· 31óú4,, a partir da qual se encor.tr o número de axesso WRRL 18343.
partir de uma amostra do solo produtor de A82810 foi deposida colecção de culturas do ftgrieultural Research, North ity Street, Peoria, Illinois, disponível para o público sob
Os estudos taxonómicos da variante foram realizados por Frederick P. Mertz dos Lilly Research Laboratories. Tendo como base estes estudos, o novo organismo é classificado como uma nova espécie do género Act inornado, r a. para a qual se oropõe o nome Ac t i n orna d ura f i brosa sp. nov.. Esta. classificação baseia-se na comparação laboratorial com espécies semelhantes e ria comparação das caracteristicas de A82810.1 com descrições publicadas das carac terí sticas de espécies seme 1 hantes ,
M é t ο ds Utilizado s
Estes estudos foram realizados utilizando métodos recomendados pelo International St reptom vces Froject (ISP) para a caracterização de espécies de Strptomyces EE. B. Shirling and Gottlieb, Methods for Characterization of Streotomyces Species, Int,. J„ Syst.Bacteriol. 1ó:313-340 (19óó)J, assim como métodos indicados por Gortíon CP;. E. Gordon, D. A. Barnett, J. E. Handerhan, and C. Pang, 11 Noc ardia coei iaca, Nocardla autotrophica, and the Nocardin Strain, Int. 3. Syst. Bacteriol. 24:54—63 (1974)3.
A hidrólise do amido foi determinada fazendo o teste quanto à presença de amido com iodo em placas ISF' No. 4 (sais inorqãnicDS-agar de amido).
A tolerância ao NaCl foi medida adicionando NaCl ao agar ISP No. 2 para igualar a concentração desejada.
As Tabelas de Cor Centroid, amostra padrão No. 2106 (National Bureau of Standards, 1953, U. E ce, Washington, D.C.) e o Manual da. Harmonia, das Cores (4th ed . , Container Corporation of America, Chicago, Illinois, 195S) foram usados para atribuir nomes das cores ao lado inverso e às aéreas, respectivamente.
Department of Cammerhif aí
Ai morfologia foi estudada, usando um microscópio óptico e um microscópio electrónico (SEM).
Os isómeros do ácido diaminopimélico (DAP) em hidrolisadcs da totalidade das célu.las foram estabelecidos pelos métodos cromatográficos de Becker et al. EB. Becker, Μ. P. Lechevalier, R. E. Gordon, and Η. E. Lechevalier, Rapid Differentiation between Hocardia and Streptomvces by Paper Chromatography of
BAD ORIGINAL^;
J
(1964)3 e de of Aerobic .Medx. 71 :934-Whole-cell Hydrolysates, Aool . Microbiol. 1.2:421-423 Lechevalier EM. P. Lechevalier, Identification Actinomycetes of Clinicai Importance, J. Lab. Clin. -944 (1968)3.
A res is te nc ia. aos antibióticos foi medida colocando discos de sensibilidade ao antibiótico sobre a. superfície de placas de agar ISF' No. 2 semeadas. A resistência foi registada como (+) quando não se observou qualquer zona de inibição e como (-) quando se observou uma zona de inibição.
Os ácidos micólicos foram determinados por meio de um método baseado em técnicas descritas por Minnikin CD. E. Minnikín, L. Alshamaony and M. Goodfellow, Differentiation of Mycobact κι-ium , IMocardia, and Related Taxa by Thin-Layer Chroma.toqraphic
Analysis of Whole-organism Methano 1 ysates , ·3 Gen ._Microbiol
88:200-204 (1975)3.
□s fosfolipido foram determinados por meio dos processos de
1) M,. F'. Lechevalier and H. Lechevalier In A Uni ver s i t y La b o r a t o r y A o o r o a. c h, Dietz and Thayer (eds.!, Special Publication No.. 6, Society for Industrial Microbiology, Arlington VA, 1930; pp. 277-234;
2) D.. E. Minnikin, I.. 8. Hutchinson an
Tbin-layer Chromatography of Fietha.no 1 ysates of c c í n t a j. η ι rι q Bactéria, 3 L h> r _ m a t oq r a ρ hι y 1 Bb: 2’ 2' 1 — 2
A. B. Ualdicott, Flycolic Acidί1930); e
3) J. C. Dittmer and R. L. Lester, A Simple, Soecific Spray for the Dstection of Phospholipids on Thin-layer Chromatoqrains, J . Lioid Research 5(1):126-123 (1964).
BAD ORIGINAL j
LA composição menaquinona foi e t e r m inada s e □ u .i n d o
Systematií
1) R. M. Kroppenstedt in Chemical Methods in Bacterial :s, M. Goodfellow and D. E. Minnikin (eds.), 1965, pp.
173-196; e
2) kk D. Collins; ibid, pp. 267-2St>
Aanálise do é.cido gordo foi realizada u.sando o HF' 589SA Microbial Identification System (Ver L. Mil ler and T. Berger, Bacterial Identification by 6a.s Chromatoqraphy of Whole Cell Fatty Acids, Hewlett-Packard Application Note 228-41, 1985; 8 pp. Os ésteres metílicos do é.cido gordo foram produzidos a partir de células totais liofilisadas feitas crescer em condiçoes iden ticas.
dendrograma indicado na Figura 7 é baseado na distancia Euclidiana e foi produzido por computador.
Características das Culturas
A cultura A82310 cresceu bem nos meios tanta complexo como definido. Contudo, os micélios aéreos foram raramente produzidos exceptuando no meio ISP 2, agar de Bennetts, e agar pasta de tomate/farinha de aveia (TPO).Ouando produzida, a massa aérea de esporos tinha uma cor variando entre púrpura e branco., 0 lado inverso tinha uma cor variando entre castanho avermelhado e laranja avermelhado identificativo. Não foram observados pigmentos solúveis. As características culturais da cultura AS2B10.1 são resumidas no Quadro I.
BAD ORIGINAL
Lluadro I: Características Culturais de AS2810 em Vários Mecos de figar
Meia de Agar
A32S10.1 Característic as
G: Abundante
ISP R: 55.s.Br
Mo. 2 Am: Abundante: b Branco
Sp: Castanho claro
ISP No. 3 G: R: Am Sp: Bom 39.gy.rO Vest í g i o:Pu r pura Menhum
G · Abundante
ISP R: 4 3 . m . r B r .
No. 4 Am: V e s t í q i α : P ú r ρ u r a
Sp: Nen hum
I SP
No. 5
G: Abundante
R: 37.m.rD
Am: Nenhum
Sp: Nenhum
A bund an t e
ISP
Na. 7
Am: Nenhum bad original '
Sp: Nenhum
ATCC
No. Í72
Bennett
G: Bom
R: 39.gy.r0
Am: Vestígio: 5ca 1 . y . Púrpura
Sp: Nenhum
G: Abundante
R: 42.1.rBr.
Am: Bom:Branco
Sp: Nenhum
Quadro I: Características Culturais de A82810.1 em Vários Meios de Aqard ( Con t í nuaç 3o ) ιΊ:·? i o de Ap a
AS2S10.1 Caracterist
Emerson
G 1 u c o s e Asoaragina
G: Abundante
R: 54.br0
A m : V e s t í g i o : B r a. n c o Sp: Nenhum
U: Abundante i \ . ·_> 7 . y y · f !_< .
Am: Vestígio: 5ça. l.y. Púrpura
Sp: Nenhum ^7
BAD ORIGINAL '
ÍMutr ien t
Sp: Nenhum
G: Bom
R: 53.ro,0
Am: Nenhum
Sp: Nenhum
Batata
Cenoura
G: Bom
R: 39.gy.rD
Aro: Vestígio:Branco
Sp: Menhum
G: Abundante
R; 5S.ro.Br.
TRO Am: Boro:5cb gy.y. Púrpura
Sp: Nenhum
G: Boro
R: 43.ro.rBr
Czaoe): Am: Ra soáve 1 : Branc o
Sp: Nenhum
Guando incubado a 30CC durante 14 dias u
UG crescimento; R ·- inverso; Am = micêiio aéreo; Sp - pigmento solúvel
C a r a c te r í s t_i ç a s fi or f o 1 6 q, i c as
A rnicélio. As mie rcscópio cultura de A828810.1 produziu um extensa substrato de bifas aéreas foram não usuais. Quando observada com óptico e com micrcscóoia electrónico, não se observou
BAD ORIGINAL 1 segmentação em esporos. As hifas revelaram ser completamente asporoqéneas. Tornaram—se aparentes numerosos feixes de hifas formaram assemefarmando fibras espessas. Algumas destas hifas aéreas protuberãncias ou projecções curtas gue de certo modo se lhavam a esporos. □ exame com microscopia electrónica indicou que estas estruturas não eram verdadeiros esporos. Ocasiona 1mente ,observaram-se outras estruturas fibrosas. Estas estruturas, para além dc· aspecto fibroso das hifas aéreas em geral , estiveram na base do nome f1brcsa para a espécie.
Caracteristicas Fisiológicas
A cultura A32310.1 produziu, ácido a partir dos seguintes hidrates de carbono: adonitol, L-arabinose, celobiose, frutose, galactose, glucose, glicerol, glicogénio, lactose, maltose, manose, ramnooe, ribose, sucrose, trehalose e xilose. 0 A328Í0.1 não produziu ácida a partir de: D-arabinose, celulose, dextrina, dulcitol, etanol, eritritol, inositol, inulina, manitol, mslizitose, melibiose, al f a-meti I-u-g lu.cosido , rafinose, salicina, sorbitol, sorbose, e xilitol.
A cultura A82810.1 u.tilicou o sequem (sob a forma de sais de sódio): nato e piruvato. Mão utilizou benzoato, to, malato, mucato, oxalato, succinato ácidos orgânicos que st acetato, butirato, propiocitrato, formata, lacta? tartrato.
A82310.1 decompôs caseína, elastina, esculina, hipoxantina, amido, testosterona, tirosina e ureia, mas não decompôs adenina, alantoina, maleato de cálcio, guanina, hipurato e xantina.
A32310.1 ;duziu fosfatase urease;
liquefez gelatina; hidrolisou. leite magro e foi capjaz }
BAD^TliGINAL '
ló sobreviver a 502C durante 3 horas. Não produziu pigmentos melanoi· des ou não reduziu nitratos ou peptonizou o leite magro.
incomicina (2p.g), penicilina G (10 unidades), rifampina (C pg e
1 S Li Z 1 ÍTi a. 'J‘ μg/nu. ί rtevelou ser sensível bacitracina (10 unidades), gentamicina (10 pq) , neomicina (30 ug ) , oleandomicina (15pg), estreptomicina (10 pg) (10 qq ) e vancoinicina (30 uq) .
.clina (30 pg), tobramicina cresceu a temperaturas variando entre 20 e 452C. A temperatura de crescimento óptima pareceu. ter o valor de 372C. A cultura tolerou NaCl a níveis até e incluindo
A cultura de AS23Í0.1
Análise da Parei
As células totais hidrolisadas contém ácido meso-diaminopimélico. Foram detectados nos extratos de células totais os açucares que se sequem: galactose, glucose, manose, madurose e ribose. Assim, A32310.1 tem uma parede celular do tipo III e um padrão de açúcar do tipo õ CVer id. F'. Lechevalier and H. Lechevalier, Chemical Composition as a Criterion in the Classification of Aerobic Actinomycetes, Int. J. Svst. Bacteriol. 20:435—443 ( 19 7 0 5 3 .
Nãc foram detectados ácidos micólict
As determinações dos fcsfolípidcs na célula tota .ndicaram a presença de fosfatidil inositol, difosfatitíil glice1 u N u (u m a e s t r u t u. r a d e s c ο π — 7 Η .ο, ,— r, f c<
m£l 1CÍ Ã dão foi detectada nem a fosfatidil etanolamina nem a fosfatidil osfolípido do tipo IV colina. Assim, A32810.1 tem um padrão de
BAt?
•<U7í Cd-,
CVer Μ. P. Lechevalier, ft. E. Stern, and H. Phospholipids in the Taxonomy of ftctinomvcetes G» Pulverer (eds); Zbl. Bakt. Suppl. 11, Gusta· Stu.ttgart, New York, 19813.
A. Lee heva1ie r, K. F‘. Schaal and F i sche r Ve r1ag,
As menaquinonas detectadas em A82810.1 eram aenaquinonas hexahidroqenadas com nove unidades isoprenc, MK-9(H ) e uma O quantidade menor de menaquinonas octahitírogenadas, ΜΚ~9(ΗΟ).
I d en t i dade da Estirpe A82b'10.1
As propriedades quimiotaxonóraicas e as características culturais e morfológicas de A82810.1 apoiam a atribuição do género Actinom-adura (Ver V. B „ D. Skerman, V. McGowan, e P.H.A. Sneath, fioproved Lists of Bacterial Mames, American Society for
Microbio1oqy, Washington D.C», 1980
Vinte e três tipos de estirpes da espécie A c τ ι η o m a. d u r a foram feitas crescer juntamente com cultura de A82S10.1 em 21 diferentes meios de agar. Foram comparadas as características culturais e morfológicas. A cultura de A82810.1 revelou ser semelhante às que se seguem: A. coeru 1. ea, A. madurae. A. oulvera^ çeus > β. “ roseorufa , A» rutra , A. sal mensa s A. verruc osospera »
As características bioquímicas destas sete espécies foram reunidas a partir da biblic
AS2S10.1 elaborando um quadro de í~ o r a m uti 11 c a c o s <_> c oe 71 c ι —h l d e correspondência simples S (W.
sm
Wocnicka, W. Kurzatkowski and T.
StreptqmyceLãS, FOlish Medicai Pui
Quadro II resume estes jqrafia e foram comparadas com coeficientes de simi1 aridade. Jaccarrf Sj, e o coeficiente de Kurylowi.cz, A. Paskiewicz, W» S cu 1 ga, Numeric a 1 Taxor!omy__q_f slishers, Warsaw, 1975, p. 37).
□ dados.
Quadro II; Comparação ds AS2810.1 com ftc t i nom a d u r a. usando Coeficientes de
várias tspéciss de Si mi 1ari d ad ed
Cultura Si S sm
A82810.1 1 00 7*7 1 00 81
A. ve rruc ososdora
A « madurae — / 79
A, sa1monea 70 78
A - rubra 70 78
-
A. roseoru f a. AO -7 cr / —)
A« pulv eracsu s 5? 74
3,
Ná o foram obtidos dados para A. C DÇ'/“L1 1 Ξ-9. n
As análises dos ácidos gordos foram realizadas nas células totais destas culturas. Um dendoqrama e uma análise do componente primário obtidos a partir destes dados são indicados nas Figuras 7 e 8, respectivamente.
As análises dos coeficientes de similaridade e do ácido gordo indicam que, das sete espécies conhecidas comparadas, o A32310.1 partilha a maior parte das características com pu 1 veraceus e com A. verrucosospora.. Contudo, as similaridades são insuficientes Dara concluir gue A828Í0.1 é uma estirpe de qualquer uma dessas espécies. 0 Quadro III indica as diferenças entre A82S10.1 e estas duas espécies.
Quadro III : Diferenças Entre A8Z810.1, A. Silyerac.eu θ Q v £ FLi CO5 O S p Ο r~ S.
ASZíu i O u 1 A» ρ u 1 veratceu —·
JlSSQSPú,
L,' a r ã cteristica
Produção de urease Hidrólise guanina +
Hidrólise amido +
Produção ácido
a partir de:
L-arabinose +
De x t r i n a -
P rutose +
I nosi to 1 -
Lactose +
Mani to 1 -
Manose +
T rebalose +
U t i 11 z a A c e t a t o
d e S ό· d ι o 4-
Crescimento a 45°C 4-
FTc-.çnça de esporos -
Cor esporos
cinzento azulado
ND~
ND
-L
H+ +
HíND ·+Resistência a:
0Ϊ eandomic ina. C 16 ug) - ND
P en i c iIi n a G (10 unidades) ·*· ND
Tolera 57. NaCl + ND
ND = não realizados
BAD ORIGINAL '
L.ste estudo apoia assim a conclusão de que a cultura de constitui uma nova esoécie de Actinomadura , Por esta.
Α82810.1 razão, a cultura de A32810.1 foi. denominada Ac tinomadura madura sp. nov,, referindo-se o adjectivo latino fibrosa, á. aparência fibrosa das hifas aéreas.
Como acontece com outros organismos, a.s características da cultura que produz A82S10 deste invento, Aotinomadura fibrasa sp. nov. NPRL 18348, são sujeitas a. variação. Os mutantes da. estirpe podem ser obtidos por métodos conhecidos na técnica, por exemplo, por tratamento com vários mutagénios físicos e químicostais como luz ultravioleta, raios X, raios gama e produtos químicos tais como n-metil-N -nitro-N-nitrosoquanidina. Ds mutantes naturais e induzidos da Aotinomadura fibrosa sp. nov. NRRL 18348 que retêm a característica de produção de A32310 são considerados como parte deste invento.
meio de cultura usado •a fazer >scer a cultura de um certo rend iman to
Ac t iηomadura fibrosa pode ser qualquer um de entre número de meios. Contudo, para economia na produção, óptimo, e facilidade de isolamento do produto, são preferidos certos meios de cultura. Assim, por exemplo, as fontes preferidas de hidratos de carbono na fermentação em larqa escala são a glucose e a dextrina da. batata, embora, possam também ser utilizados ribose, xilose, frutose, galactose, manose, manitol, etc.
fon tes pre eferidas de azoto são a caseína hidrolisada por enzima e evedura embora sejam também úteis farinha de ígado, pepte mas da carne, farinha de peixe, etc. tntre oí sais inorqãnicos nutritivos gue podem ser incorporados nos meios de cultura encontram-se os sais babitua1mente solúveis capazes de proporcionar zinco, sódio, magnésio, cálcio, amónio, cloreto, carbonato, sulfato, nitrato e iSes afins.
r —“Tqg*··»
BAD ORIGINAL
Devem também ser incluidos no meio de cultura elementos vestiqiais essenciais necessários para o crescimento e desenvolvimento do organismo. Esses elementos vestiqiais ocorrem habitualmerite sob a forma de impurezas noutros substituintes do meio em quantidades suficientes para satisfazer as necessidades de crescimento do organismo, A formação de espuma não constitui usualments um problema, mas se necessário pequenas quantidades (isto é 0,2 mL/L) de um agente anti-espuma tal como propileno glicol podem ser adicionadas ao meio de fermentação em larga esc a1 a, produção de quantidades substanciais de antibiórara a
tico AS281O, é pref e
t a n qu es. F' o d e m ser ob
meio de cultura em fra
na produção de antibi
grandes tanques com a
u t i 11 z a r u m i η ó c li 1 o ve
>tiCD comumente associado à inoculação de inoculando um pequeno volume de meio de cultura com a forma, esporo ou com fragmentos micsliais do organismo a fim de se obter uma cultura do organismo em crescimento activo, recente. 0 inóculo vegetativo e então transferido para um tanque maior. 0 meio do inóculo vepetativo pode ser igual ao utilizado para maiores fermentações, mas são também apropriados outros meios.
□ A82810 é produzido pelo organismo produtor de A82810 quando feito crescer a temperaturas variando entre cerca de 252 e cerca de 40SC. Uma temperatura óptima para a produção de A82810 parece variar entre cerca de 34 s cerca
Como é habitual nos processos de cultura aeróbica submersa, é feito soprar ar estéril para o interior do recipiente a partir do fundo enquanto agita o meio com impulsores ds·
BAD ORIGINAL turbina convencionais. A fixação máxima de oxigénio da fermentação nas condiçSes usadas até aqui não excedeu cerca de 0,35 mM/L/minuto. Num fermentador com 165 litros completamente reflectido contendo aproximadamente 115 litros de caldo, uma taxa de arejamento de 0,125 v/v/m com uma taxa de agitação de 300 rpm é suficiente para manter o nível de oxigénio dissolvido a ou acima de 45*/. de saturação do ar com uma pressão de 0,34 atmosferas.
A produção de antibiótico A82810 pode ser seguida durante a fermentação testando amostras do caldo quanto à actividade antibiótica contra organismos conhecidos como sendo sensíveis ao antibiótico. Um organismo de ensaio útil para testar o
A82810 é o Bac i11us subtilis ATCC 6633. 0 bioe temente realizado por meio do teste de difusão saio é Lunvenienno reservatório de agar.
A seguir de íermentao
ΡΟΓΑ sua produção em condições de fermentação recuperado a partir do meio métodos usados na técnica de fermentação. A actividade antibiótica produzida durante a fermentação do organismo produtor de A82810 ocorre tanto no caldo filtrado como na massa micelial. Contudo a recuperação máxima do A82310 é realizada filtrando inicialmente o meio a. fim de separar o caldo da massa micelial. 0 caldo e a massa micelial filtrados podem então ser purificados separadamente a fim de dar orioem à sua respectiva por;’' de técnicas. Uma técnica preferida para a filtrado envolve o seu ajustamento para um extracção com um solvente apropriado tal :ão de A82810. Pode-se utilizar nesta purificação uma s purificação do caldo pH de cerca de ? e a c orno, por e x em ρ1 o, acetato de etilo. 0 solvente de extracção pode então ser evaporado sob vácuo a fim de dar origem à porção de caldo com A82810,
BAD ORIGINAL ’
L
Um método preferido para a purificação da massa micelial consiste em extrair a massa micelial separada filtrada com um solvente apropriado tal como, por exemplo, acetona. □ solvente de extracção é então evaporado sob vácuo a fim de dar origem a uma solução aquosa concentrada. Esta solução aquosa é então ajustada até um pH de cerca de 9 e é extraída com um solvente apropriado tal como, por exemplo, acetato de etilo, □ solvente de extracção é então concentrado sob vácuo a fim de dar origem à porção micelial com A828Í0.
As pcrçoes de caldo e micelial com A82S10 são posterior-mente purificadas por meio de processos semelhantes. Um processo preferido envolve cromatografia com gel de sílica.
Alternativaments, os sólidos de cultura, incluindo os constituintes do meio e o micélio podem ser utilizados sem
extra c ç ão ou sepa ra.ç ão , mas de preferência após remoção da água.
como f o nte d ε A82310. F'or exemplo, após produ ção de A82810, o
caldo de fermentação total pode ser seco por 1 i o f i 1 i z ação, por
s e c a o e ítí e m t a m b o r , o u por destilação aze ot róp 3. ·_ crt e s ecagem. 0
caldo seco é então misturado directamente com a pré—mistura al imantar ..
Os sais catiónicos de metal a no terroso dos compostos com a fórmula com processos habitualmente utilizados catiónicos. Por exemplo, o ácido livre solvente apropriado tal como acetona; de água; e esta solução é ajustada até do sal a t i ón i desejado ( sal aisiiTi formado pude por como filtr ão ou evaporação do solvente.
calino e de metal alcali1_ são preparados de acordo para a preparação de sais de A82S10 é dissolvido num adiciona-se 1/3 do volume um pH de cerca de 9 a 10 por exemplo NaOH, KOH). 0 métodos de rotina, tais
BAD ORIGIN'3
Um método preferido! para -a formação de sais consiste em dissolver AS2310 (forma ácida) num solvente não miscível com a áqua tal como acetato de etilo, adicionar um volume igual de água.,, e ajustar a mistura até um pH 10 com a correspondente base catiónica (por exemplo NaOH, UOH, etc.i . A fase orgânica separada é lavada com água e concentrada até à secura. 0 resíduo é liofilizado a partir de dioxano. 0 sal pode ser cristalizado a partir de u.m solvente apropriado, tal como hexano.
Os sais formados com aminas orgânicas podem sei preparados de um modo ;emel hante,
F'or exemplo.
cl ct (Π Λ Π cl □ ci 3 C> 3 ct ou líquida pode ser adicionada a uma solução de AtíOtílÕ num sol- ince apropriado tal como acetona; o solvente e a amina em excesso podem ser removidos por evaporação.
□s derivados com a fórmula éster 1_ acílico são preparados, por exemplo, tratando A82310 com um anidrido ácido ou cloreto ácido correspondentes. A esterificação ocorre num dos qrupos hidroxilo A32310. Esses ésteres são tipicamente preparados fazendo reagir A82810 com, por exemplo, o anidrido ácido correspondente à temperatura ambiente.
Os derivados com a fórmula éster 1_ alquílico são preparados oor ester i f icação do qru.po carboxilico, usando proces— ;os normalizados. Os derivados éster χ alquílico ;âo típicamente menos activos quando testados in vitro. Contudo, quando administrados a um animal, esses ésteres podem actuar como pro drogas qus são convertidas na forma activa in vivo.
Us derivados éter alquílico com a fórmula X são os compostos em que um ou mais dos grupos hidroxilo foi substituído por um grupo YRO em que;
representa U ou 'ó
BAD ORIGIN apresenta C.
, 3.1 q u ila.
C, -C , -alcoxi-C„-C,_-a 1 qui Ια ,
2 5
C -C.-alcoxicarboni. l-C_-C_-alqui lei, 14 2 5 am i no-C,_-C^.-a 1 qυ.i 1 o , íitercapto-C9-C,.-alquilo, hi d rox ia1quilo, haloalqui lo, ou.
(R ) -f en i1(CH_) m, 2 n am que R representa hidroxi;
m representa 0-2; e n representa 0-3.
C.-C -alquilo, C-C -alcoxi, ou 1 Η 1
As expressões alquilo e alcoxi têm o significado discutida supra, mas são limitadas a um determinada número de átomos de carbono especificados.
A expressão '‘hidroxialquilo refere-se quer a uma metade monohidroxi-C^-C^-a1qui1o ou, quando Y é 0, a uma metade 2,3-dihidrox iprop„
A expressão haloalquilo refere-se a uma metade C^-C^-alquilo tendo de um a três substituintes halogénio, seleccionados de entre o grupo que consiste em bromo, cloro e fluoro. Quando a metade alquila é substituída por dihalo ou trihalo, devendo os substituintes halo ser constituídos pela mesma metade ha 1oqénio.
Os derj ivados éter ccm a fórmu 1 a
stos em qu>5 Y representa 0 e R represen X. _ cd.
ados etj e r ξ são preparados faze ndo reaq i. r
seu sal, com o desejado o o m ρ o s t o A 8 2 81 0, ou u m
Ρ ι-1 m á r i. o d e s e j a d o .
- C Λ - a 1 q u i 1 o . U s o o r r e s pi o n d e π t e álcool ou tiol
BAD ORICx/ml
-τ·
Com alguns dos álcoois ou. t.iois de partida pode ser necessário adicionar um catalisador ácido à reacção. Os catalisadores apropriados incluem ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfónico, ácido benzenossu 1 f ónico , ácido toluenos— sulfónico, dióxido de selénio, e trifluoreto de boro.
FOde-se adicionar a fim de facilitar a reacção, um solvente tal como, por exemplo, água, acetona, benzeno, éter, tetrahidrofurano ou dioxano. As reacçSes ocorrem geralmente á temperatura ambiente, embora possam ser utilizadas temperaturas mais- elevadas.
Embora os processos de manipulação da reacção habitual sejam por vezes suficientes, pode ser requerida uma purificação adicional a fim de se obter os compostos deste invento. Essa purificação pode ser realizada por métodos bem conhecidos, tais como,, por exemplo, cromatograf ia de coluna, cromatograf ia de placa delgada, cristalização fraccionada, etc.
Proporciona-se também uni processo para a preparação dos derivados uretano com a fórmula N que comoreende a reacção de Λ82810 ou de um seu sai, com um isoeianato com a fórmula 2.
E ~NCO h q li e r·;
ê tal como foi definido supra c ome apropr
Tormat um derivado uretano
Ho.
De preferáncia,uti1isa-se um sal de A'8'2810, em particular o sal de so-dic. cí i soc j. anat o deve ser- adicionado com um liaeiro excesso, cor exemplo um excesso de cerca de 104, a f.im de formar o derivado mono numa quantidade óptima. A reacção é realizada de preferencia num solvente inerte tal como •^5'
BAD ΟΡ'^ Νη-.
hidrocarboneto clorinado, por exemplo, tetracloreto de carbono, cloreto de metileno ou clorofórmio, éter, acetato de etilo ou num solvente hidrocarboneto aromático tal cama benzeno ou. tolueno. A temperatura de reacção não é cie importância crítica mas pode variar entre acima de 00C e o ponto de ebulição da mistura da reacção, sendo de preferência mais ou menos a temperatura ambiente .
são especia.1 mente activos
Os compostos com a fórmula 1_ (compostos A62810) possuem actividade anti-bacteriana e anti-coccidial. Os compostos A32810 ntra as bactérias anaeróbicas. As concentrações inibidores mínimas (CIMs) com as quais A32S10 inibe várias bactérias, tal como foi determinado por ensaios de diluição de agar normalizados, são resumidas nos Quadros IV e V. Os pontos finais foram lidos após 24 horas de incubação.
BAD ORIGINAL
Quadro IV: Actividade Anti-bac do Antibiótico AS2B10
iana In Vit.ro
Organismos do Teste CIM (mcg/mL)
Staphvlococcu.s aureus XI „1 1 , o
Sta.phvlococcus aureus V41 1 , o
S t a p h v 1 o c o c c u. s a u r e u s X 4 Q õ 1 ,o
L fc c?. p Π 'v i O C O C C «J. S 3 Ll P £ Ll 55 23 1 < E 1 , o
Sta.phvlococcus epidertnidis 270 1 ,0
Sta.phvlococcus eaidermidis 222 0,5
Streptococcus pvoqenes C203 1 ,0
Streptococcus pneumoniae Park 1 1,0
Streptococcus faeciu.m X66 1 ,0
Streptococcus faecalis 2041 1,0
HaemophiIus influenzae C.L. 128
Haemophilus influenzae 76 64
Escherichia coli N10 1 ,0
•Σ. ! liei r 1. í_ t ι 1. 3 t„ t_í 1 X ELI '4 8,0
Escherichia coli TEM > 128
Enterobacter aerogenes 832 8,0
Εn te ro ba.eter aeroa enes ΕB17 8, (J
ί Ά UO i ~ i i-3 'Ζ- p - >123
Sa 1mone1 la sρ > 1 28
F;’ s e u. d o ro o n a s a e r u qi.no s a X 5 2 8 2,0
F' s e u d o ro o n a s a e r u o i η o s a X 2 3 9 0,25
Fseudomonas aerucinosa PS 18 >120
pseudo ros o nas- aeruainosa PS72 0,25
3 e r r a t i. a m a r c e s c e n s X 9 9 >128
j ~n Í' R’ ! -. <=. □ .Λ > 1 28
Ehiqella sonnei 'Ρ O
BAD ORIGINAL
Liuadro V: Suscept.ibilid3.de des Isolndcs Bacterisncis
Anasrobicos ao Antibiótico AS2S.10
Bacterias Anaerobica
CIM (mcp/mL)
Clostridium difíici1s 2994 0,5
Clostridium oerfrinqens 81 0,5
Clostridium septicum 1128 0,5
Eubacterium aerofaciens 1235 <0,25
Peptococcus asaccharolvticus 1302 < 0,25
Peotococcus prevoti 1281 .·· -n cr XU , zl.J
Peptostreptococcus anaerobius 1451 <0,25
Peptostreotccoccus intermedius 1824 2 0,25
Propionibacterium acnes 79 2
Bacteroides fraqilis 111 8
Bacteroides fracilis 1877 S
Bacteroides fraqilis 1938B El
Bacteroides thetaiotamicron 1438 O
Bac t er o i d es mel a n i n oqeri icus 1856 / 28 E!
Bacteroides melaninoqenicus 2736 O
Bacteroides vulqatis 1211 4
Bacteroides corrodens 1874 o
Fusobac tεr i um svmb i osum 1470 C-,
Fusc.bactsrium necrophorum S054A x 0 2 5
A actividade anti-coccidial constitui uma propriedade importante dos compostos A82810.
Por exemplo, num ensaio de cultura de tecido contra Eimeria tenel l.a, o AS2810 foi activo a <0,0025 rocq/mL, o propioni1-A32310
BAD ORIGINAL foi activo a 0,05 mcq/mL e o aceti 1-AE'2810 foi t i ν o a. 0 , 01 mo g / ml. .
Para. o tratamento da. coccidiose nas aves domésticas, administra-se uma quantidade anti-coccidial nao tóxica do composto A32810 às aves infectadas ou susceptíveis, de preferência oralmente numa base diária. 0 composto A32810 pode ser fornecido de varias maneiras, ma.s é fornecido mais conven ien temente com um veículo farmacêuticamente aceitável, de preferência o alimento ingerido pelas aves.Embora se deva considerar uma série de factores para a determinação de uma concentração apropriada do composto AB2B10, a.s taxas de administração variam geralmente ppm na ração e variam de j ppm da ração alimenentre cerca de 0,5 e cerca de 100 preferência, entre cerca, de 1 e cerca de tar .
Num outro aspecto, este invento relaciona—se com composiçoes para o tratamento da coccidiose. Um grupo de composições é constituído pelas que compreendem uma quantidade eficaz dc< composto A32810 para o tratamento da coccidiose, juntamente com u.m veículo apropriado.
Préviamsnte, verificou-se que um certo número de compostos apresentavam um efeito sinergistico sobre a actividade anti-coccidiai de um ou mais antibióticos poliéter. F'or exemplo.
as combinações anti—coccidiais compreendendo nicarbazina ou 4,4 -d i n i trocar ban i 1 ida. e antibióticos poliéter foram apresentadas por Kaurice E. Callender e Thomas K. deffers na Patente dos; E.U. A. No. 4.218.433. Albert J. Clin ton e Georqe 0. F'. 0 Doherty verificaram que certas na.f talenaminas· e benzenaminas apresentam um efeito sinergistico sobre a actividade an ti-cocc i. d ia 1 ds alguns antibióticos poliéter [Ver Patentes dos E.U.A. Nos. 4.764.534 e 4.366.168, respectivamente!. Uma combinação coccidiocida de monensina e de meticlorpindol foi apresentada por
Larry R. McE>oo.qald na Paten te doe E.U.A. No. 4.061.753.
í-ι nicarbazina e a 4,4 ---dini trocarbani 1 ida são descritas na Patente dos E.U.A. Mo. 2.731.392. A nioarbazina é um complexo de 4,4 -dinitrocarbani1 ida e de 2-hidroxi-4,6-dimeti1pirimidina, mas a 4,4 -dinitrocarbani1 ida isoladaments apresenta actividade anti-coccidial [Ver Science 122, 244 (1955)].
Os compostos AS2810 deste invento também apresentam efeitos sinergísticos com estes tipos de compostos. Assim, um outro grupo de composiçoes deste invento são composiçoes siner— gísticas compreendendo 1) um composto AS231Õ com a fórmula 1_ ou um seu sal farmacãuticamente aceitável em combinação com 2) um composto seleccionado a partir dp grupo que consiste ém
a) nioarbazina,
b) 4,4 -dinitrocarbani1 ida,
c) um composto naftalenamina com a fórmula 3;
em que í;
F'
R'
r. — C a 1 GUI li 14 haloqén n
Cl-C fluoroalcoxi ou C-C, 1 4
f1uoroa1qui1 o, C^-C^ f1uo r oa1q u i11 i o
BAD ORIGINAL
R. é bdluqéniu;
ê
R’ é hidrogénio ou halogênio; m é 0, 1 ou. 2; e n é 0 ou 1;
desde que, quando exista um substituinte R , ele se situe numa posição qu.e não seja a posição-2;
d) uma benzenamina seleccionada a. partir de 2,4—d in i tro—N— -C4-(trifluorometoxi)feni13-ó-(trifluorometi1)benzenamina;
2,4-din i tro-N-C4-(1,1,2,2-tetrafluoroetox i>fenil3-6-(trifluorometi 1 ) benzenamina ou 2,4-dini tro-N-C4-(pen tafIuoroetox i)feni13-ó- (trif 1 u.orometi 1 ) benzenamina.;
e) met.ic 1 orpindo 1 ; ou
f) um sal farmacêuticamente aceitável de um composto (a) —
- ( e ) .
Na fórmula 4, C.-C. alquilo inclui metilo, etilo, — 1 4 n—propilo, isopropilo, n—butilo, sec.-bu tilo, isobutilo, t-butilo , etc.
A expressão halogênio representa,
1.0 d u « fluoro, cloro.
bromo e
C.-C. F1uoroa1qui1 o é um qrupo C.-C. alquilo tendo um 14 -14 ou maia átomos de fluoro. Esses grupos f1uoroa1qui1o incluem tr ι f 1 uorometi lo, 1,1,2,2-tet raf 1 uoro propi 1 o , nonaf 1 uorobu t. ilo, etc .
C.-C, Fluoroalcoxi é um qrupo C.-C, alcoxi tendo um ou 14 1 4 mais; átomos de fluoro. Esses grupos f luoroa 1 cox i incluem difluorometoxi, t r i f 1 uorome tox i , 1 -f 1 uoroetox ι, 1 , 1,2,2-tetra.f 1 uoroetox i , pentafluorcetoxi, 1,2,2,3,3-pen taf1uor xi, 4,4,4~trif1uorobutoxi, etc.
opoxi, heptaf1uoropropoBAD ORIGINAL
C,~C, Fluoroalqui1 tio é um qruqci C.-C, alquil tio tendo 14 “'14' um ou mais átomos de fluoro. Esses qrupos f 1 uoroa. 1 qui 1 tio incluem trif1uorometi 1 tio, 1,1,2,2-tetraf1uoroeti1 tio, pentafluoroeti1tio, 4,4,4-trifluorobuti1 tio, etc.
□s compostos com a fórmula 3 preferidos são aqueles em que m e n são 0 e é hidrogénio.
Os compostos com a fórmula 3 típicos são:
4-F1uoro—N-C2,4-dinitro-ó-í trif1uorometi1)-feni131-naftalenamin a;
4-1odo-N-E2,4-dinitro-ó-(trifluorometi1)-feni131-naf talenamina;
4-Tri f1uoromet i 1-N-E 2,4-d ini tro-ó-(tri f1uoromet i1>feni13-1-naf ta1enamina
4-Pen taf 1 uoroeti .1 -N- E 2,4-d ini t ro-ó- (tri f 1 uor ome t i 1 ) fenil -1 — n a f ta 1 en ami na ά , 7-Dimeti I ~4- \ 1 , 1 ,2,2-tetraf 1 uoroetox i ) -IM-C2,4 -dinitro6-(tr i f1uorome ti 1)feni13 -1 —nafta1en am in a
... -1 sopr
1-4-c 1 oro-N-E 3íinitro-ó(trifluorometi1>fenil3-1-naftalenamina d in i tr bi - n - Bu t: 11 - 4 - ( 4,4,4 -1 r i f 1 u o r o ou t oι • Ctrifluorometi1)fenil1-i-naftalenamina hj_. r — _ tromo-2,43-idet i 1 - ó- propi1-4-heptaf1u oro pro pi 1 - Ν- E 6~<trifluorometi1)fenil3-1-naftalenamina iitr
BAD ORIGINAL
3,4—Bic 1 oro—Ν- Γ 2,4—d ir? i tro—6- ( trif I uorometi 1 ) t ο η 1.i j .1 n a f t a 1 en am ι n a
4-(1,1-Dif1uoroetoxi > —Μ-E 2,4—d in i tr fluorometi1Jfenil3-1-nafts1enamina
- A — ( t r i ··
4-(1,1,2,2-Tetraf1uoroetoxi >-N-C2,4-dini tro-6(trif1uorometi1)feni13-1-naf ta ienamina e
4-(1,1, 2,2-Tetra í trif1uorometi1)feni13-1-naftalenamina , >-M-C2,4-dini tro-óQs componentes das combinações de um composto A32310 com compostos 2(a)-(e> são usados em quantidades que, em combinação, são sinerqisticas em relação a pelo menos um organismo causador da coccidiose. Em geral, as quantidades máximas a serem utilizadas em combinações são iguais às quantidades máximas para, o tratamento anti-coccidial pelos componentes individuais. Us limites mais baixos são geral mente inferiores aos requeridos para a terapêutica pelos componentes individuais. Consequentemente, o presente invento é geralmente realizado com composiçoes contendo 1) de cerca de 0,5 a cerca de 100 ppm de um
a) de cerca de 5 a 125 ppm de nicarbazina, cerca de 150 ppm de 4,4 -dinitrocarbani1 ida, c) de cerca de 1 cerca de 1.000 ppm da nafta 1enamina especificada, d) de cerca 1 a cerca de 125 ppm de uma foenzenamina especificada, ou e) de cerca de 20 a cerca de 70 ppm de meticlorpindol. Os compostos AS2810 são particu 1 armente eficazes quando administrados com u.ma
Lomposto A82310 e
b) de cerc a d e 25
2) .-3.
a de preferidas contêm de cerca de 2 a cerca de 20 ppm de um composto 432310 com de cerca de 5 a cerca de 80 ppm de uma benzeneamina, nafta 1eneamina ou nicarbazina.
bad original u
Uma outra propriedade importante dos compostos A82810 & constituída pela capacidade de aumentar a eficácia da utilização dos alimentos pelos animais» Por exemplo, os compostos A823Í0 aumentam a eficácia da utilização dos alimentos nos ruminantes que possuem uma. função ruminatória desenvolvida, A eficácia da utilização dos alimentos pode ser monitorizada observando a produção e concentração dos compostos prcpionato no rumen usando o método descrito por Artbur F'. Raun na Patente dos E.U.A. No. 3.794.732 (ver especialmente o Exemplo 5)-Os compostos A82810 são desse modo aumentar quando administrados a tipicamente eficazes para aumentar os propionatos e, para a eficácia da utilização dos alimentos, ruminantes oralmente CDm taxas variando entre cerca de 0,02 mg/kg/dia e cerca de 1,5 mg/kg/dia. As taxas de administração preferíveis variam entre cerca de 0,05 mg/kg/dia e cerca de 0,5 mg/kg/dia.
Um método preferido de administração consiste em misturar o composto com a ração animal; contudo, pode ser administrado de outros modos, por exemplo, comprimidos, poçSes, bolus, ou cápsulas. A formulação destas várias formas de dosagem pode ser realizada por métodos bem conhecidos na técnica farmacêutica veterinária. Cada unidade de dosagem individual deve conter uma quantidade de um composto deste invento directamente relacionada com a dose diária apropriada para o animal a ser
Este invento relaciona—se ainda com composiçoes alimentares adaptadas ao aumento da utilização dos alimentos compreendendo a ração alimentar e de 2 a 40 gramas por tonelada de um com pos to A82810.
Num outro aspecto os compostos AS2810 são úteis no tratamento da disenteria dos suínos. 0 A82810 inibe o crescimento
BAD ORIGINAL da Treponema hyociysenteriae, um agente causador da disenteria dos suínos, comi níveis tão baixos coroo 1,56 rocq/roL, Um método preferido de administração aos suínos consiste na incorporação cie uma. quantidade apropriada de um composto AS2S10 na ração alimentar ou na ãgua para beber. Uma quantidade apropriada dependerá da
curar a i n fec c ão.
baixa do c o ro posto
necessária para a
Em geral, quanti—
gramas do compos—
eficazes para a
finalidade do tratamento, ou seja evitar ou Usualmente, é necessária uma concentração mais activo para a prevenção da infecção do que a eliminação da infecção em animais já atingidos, dades variando entre cerca de 20 e cerca de 100 to A32310 por tonelada da ração alimentar são prevenção da. infecção. Cíuan ti dades variando entre cerca de 100 e cerca de 500 g de composto A82310 por tonelada da ração alimentar são recomendadas para o tratamento de suínos gue sofram de disenteria.Estas quantidades proporcionam ds cerca de 1 a cerca de 5 mq/kq do peso corporal por dia (tratamento pre de 5 a cerca de 25 mg/kg do peso corporal por dia (tratamento animal infectado). Guando adicionadas água para ecomendadas quantidades variando entre cerca de 0,04 beber, e cerca ou do
SãO de
0,2 g (profiláticas) ou entre- cerca de 0,2 e cerca de 1 q pãuticas) do composto A82310 por galão de água.
(teras alimen— ndendo a c oroposto quan ticerca de
Este invento relaciona-se ainda com coroposiçSe tares para o tratamento da disenteria dos suínos compree ração alimentar dos suínos e uma quantidade eficaz de um A828Í0 para esta finalidade. Tal como foi. discutido, uma dade eficaz é tipicamente uma quantidade que varia entre 20 e cerca de 500 gramas do composto A82S10 por tonelada a 1imen tar.
Tal como foi desc activos contra as bactérias perfrinqens.. 0s compostos AE ito supra„ os compostos A82S10 são π a e r o b i c a. s, incluindo o C l_o str.i dium 310 devem, assim, ser benéficos no
BAD ORIGINAL >
tratamento ou prevenção da enterite nos frangos, suínos, gado bovino e carneiros. Ds compostos A828Í0 são também úteis no tratamento da en te roto;; em ia nos ruminantes.
Os compostos A82810 também possuem actividade anti—virai. Por exempla, os testes de cultura de tecido revelam que o A82810 é activo contra os vírus do Herpes simples (HSV I e II) a níveis tão baixos como 1,56 mcq/mL e contra os vírus Friend da leucemia a níveis tão baixos como 0,04 mcq/mL. Noutros testes de cultura de tecida, a A82810 foi activa contra os vírus da gripe dos; Grandes Lagos e do Efrasil a um nível de 250 mcq/mL.
Além disso, os compostos A82810 possuem uma certa actividade anti-helmintica. F'or exemplo, em estudos in vitro, o A82810 (sal de Na) inibiu a Caenorbabditis e1eqans quando administrado a um nível de 50 ppm (inibição de B5X), medida ãs 72 horas.
Ds compostos A82810 podem ser administrados a animais oralmente ou parentéricamente.Podem também ser administrados por insuflação, isto é soprando o antibiótico, sob a forma de uma peira mediaca, para um espaço ou quarto fechado em que os animais ou aves domésticas são mantidos. Os animais ou as aves domésticas respiram a poeira medicada presente no ar; a poeira medicada é também introduzida no corpo através dos olhos (um processo denominado injecção intraocular).
D modo mais prático para administrar os compostos A32810 consiste na formulação com a ração alimentar. Podem ser usadas várias rações, incluindo as rações secas, as rações liquidas, e as rações em pi Iu1 as.Embora o método preferido de administração consista em misturá-los com a ração animal, podem também ser administrados de outros modos, por exemplo sob a forma
BAD ORIGINAL — . '-.Η de '_UlTipr ílTllduS , piJÇOt 'ZJ , bulU.S, ου.
C a d a u. n i d a. d e dosagem individual deve conter uma quantidade de composto AB2310 directamente relacionada com a dosagem diária apropriada para o animal a ser tratado.
Os métodos para a formulação de drogas nas raçSes animais são bem conhecidas. Um método preferido consiste em produzir uma pré-mistura concentrada da droga a qual por seu lado é utilizada para preparar rações medicadas. Assim, um asoecto deste invento é constituído por uma pré-mistura de ração animal compreendendo como um ingrediente activo 1) um composto A32310 ou 2) uma composição sinergistica AS2S10, supra„ associada com um ou mais veículos ag ronómica.men te aceitáveis para esse fim. As pré-misturas típicas podem conter de cerca de 1 a cerca de 200 gramas de droga por libra da pré—mistura. As pré-misturas podem ser preparações ou líquidas ou sólidas.
A formulação final das rações para animais ou para aves de capoeira vai depender da quantidade de droga a ser administrada. Os métodos comuns de formulação, mistura e formação de pílulas; das rações podem ser usados para preparar raçSes contendo u m c o m ρ o s t o A32310.
Os compostos A32810 podem ser formulados para administração parentérica por métodos reconhecidos na técnica farmacêutica veterinária. As composições injectáveis eficazes contendo os compostos A32310 podem apresentar-se sob a forma de ou suspensão ou solução. Na forma de solução, o composto A32310 é dissolvido num veículo fisio 1 óqica/nente aceitável. Esses veículos compreenbem um solvente apropriado, preservativos tai;
álcool benzílico, se necessário, e tampões. Os solventes úteis incluem, por exemplo, álcoois, glicois, ou óleos inertes tais como óleos vepetais ou. óleos minerais altamente refinados.
bad original
As composições ent suspensão injectá.vel são preparadas
usando um não solvente para o composto
C Oifi .d juvantes veículo. 0 não solvente pode ser, por exemplo, água ou uni glicol tal como polietileno glicol.
Os adjuvantes fisiolóçicamente aceitáveis apropriados são necessários para manter o composto suspenso em composiçoes em suspensão. Os adjuvantes podem ser escolhidos de entre agentes de espessamento tais como celulose carboximetíiica, polivini1pirrolidona, gelatina, e os alginatos. Muitos surfactantes são também úteis para a suspensão dos compostos. A lecitina, os aductos de óxido de polietileno alqui1fenol, sulfonatos de naftaleno, sulfonatos de a 1gui1benzeno, e os ésteres de sorbitan polioxietileno são agentes de suspensão úteis em não solventes líquidos.
Muitas substancias que aíectam a hidrofi1icidade, a densidade, e a tensão superficial do líquido não solvente podem auxiliar a formação das suspensões injectáveis em casos individuais. Por exemplo, os agentes anti formação de espuma de silicone, os glicois, o sorbitol, e os açucares podem ser agentes de susoensão úteis.
Ma preparação de poeiras ou pós para administração por insuflação, os compostos são tipicamente misturados com talco, terra cliatomãcea, ou qualquer outra substancia inerte como um adjuvante.
Os compostos AS2810 são também úteis como insecticidas. Por exemplo, A82810 é activo contra o verme cia armada do sul, aracnídeos e larvas da mosca varejeira a níveis tão baixos como 100 ppm e contra as moscas adultas dos estábulos a níveis tão baixos como 50 ppm.
r
BAD ORIGINAL
A fim de ilustrar mais ampiamente a operação deste proporcionados oe· exemplos que se sequem:
EXEMPLO 1
Preparação de A82810 Fermentação em frasco agitado de fi':12810
Utiliza-se a cultura de ftctinomadura fibrosa sp. nov. NRRL 18348, quer como pílula liofilizada quer como uma suspensão mantida em azoto líquido, para inocular um meio de sementeira tendo a composição que se segue:
Meio de Sementeira I
Ing rediente
R 1 ij.r
Amido solúvel
Extracto de levedura Hidroiisado enzimática de caseínaΐ
CaC0T
Agua desionizada
Qu anti d a de (*/.) 1 ,0 pH não ajustado = 6,6; adicionar NaOH a fim de elevar o pH para 7,2 antes da esterilização; pH = 6,8 após a ester i1ização.
f;NZ Amina A, Sbeffield Chemical Co. ,
Norwich, N.Y.
Preparar planos inclinados ou placas adicionando 2L de aqar ao meio de sementeira. Incubar o plano inclinado inoculado a
BAD ORIGINAL par
30yC durante um período de cerca de 10 a cerca, a cultura em plane inclinado madura com um ut fim de soltar os esporos e remover e macerar a. Utilizar cerca de um quarto dos esporos solto crescimento da cultura. a fim de inocular 50 sementeira de primeiro estádio..
de 14 dias,. Ras ensílio estéril camada miceli s e do produto mL de um meio do de
Incubar o meio de primeiro estádio inoculado num frasco de Erlenmeyer com 250 ml_ a 3022 durante cerca de 120 horas num agitador com uma órbita num círculo de duas polegadas (5,08 cm) a 250 rpm.
Utilizar este meio de primeiro estádio incubado (0,4 mL) a fim de inocular 50 mL de um meio de produção tenda a composição que se seque:
Meio de Produção I
Ingrediente
G1 iteose
Hidrolisado enzimatico de caseinaí
Extracto de levedura
Mo l asses de ligula negra
MqSCJ. (anidro)
CaC0_
D e x t r i n a d a b a t a t a □leato de metilo
Agua corrente fria
Quantidade (/L)
5,0 g
3,0 q
5,0 q (blackstrap) 15,0 g ,0 g ? 0 g 25,0 q 20,0 ml·
q.b. 1 litro (Ajustar pH pré-esterilização para 7,0 ÍNZ Amina A m NaOH 50
- -- --------BAD ORIGINAL
Incubar o meio de produção inoculado num frasco ae
Erlenraeyer de boca ampla :om iõ m!_
30-322C durante a a 10 dias num agitador tendo uma órbita num círculo de duas polegadas a rpm, θ Fermentação em Tanque de A82S10
A fim de proporcionar um maior volume de inóculo, utilizar 10 mL de um meio de primeiro estádio incubado, preparado tal como foi descrito na Secção A, a fim de inocular 400 mL de um meio de crescimento de segundo estádio tendo a mesma composição que o meio de primeiro estádio. Incubar este meio vegetativo de sequndo estádio num frasco de Erlenmeyer de boca ampla com 2 L durante cerca de 72 horas a 30QC num agitador tendo uma órbita num círculo de duas polegadas a 250 rpm.
Utilizar este meio vegetativo de segundo estadia incubado (B00 mí_) a fim de inocular 115 L de meio de produção estéril (preparar tal como é descrito na Secção A exceptuando o facto de se adicionar agentes anti-formação de espuma). Permitir que o meio de produção inoculado fermente num tanque de fermentação agitado com 165 L durante S a 10 dias a uma temperatura de 342C. Manter um nível de oxigénio dissolvido acima dos 407 de saturação do ar com um baixo fluxo de ar (0,12-0,25v/v/m) e rpm baixa ¢150-200) no recipiente agitado.
AB2B10 é produzido de acordo com o método do exemplo 1, :cm excepção de, na Secção B: 1) o 'ctádio tem a seguinte composição:
meio egetativo uo segundo ’χBAD ORIGINAL '
Me de Sí nu nao e 2)
Ingrediente
Extracto de levedura
Glucose
Dextrina de batata
MgSO^ . 7H^,0
Quantidad (q/L)
-I , rj 5,0 10,0 2,0
Glicerol 1,0
Água desionizada q.b. 1 litro pH não ajustado = 6,5; sem ajustamento do pH; oH = 6,4 após esterilização.
o meio de produção tem a composição que se segue
Meio de Produção II
I ngredιente
Quantidade (q/L)
G1 ucose
Farinha de fígado de porco
Molassos de lígula negra (blackstrap M Cj ϋ . Z H o Ú Dextrina da batata Agua, corrente
10,0 15,0
S í~»
0,5
q.b. 1 litro pH não ajustado 0 6,1; ajustar até pH 7,0 com cerca de 170 mL de NaOH 5N; pH 0 6,4 após estrei 1 ização.
Agente anti formação de espumas Sag 471 (0,2 g/L) ε P-2000 (0,1 mL/L).
BAD ORIGíNAL
EXEMPLO 3
A828ÍÚ é produzido utilizando os processos do Exemplo exceptuando o tacto de: ί) o meio de sementeira ser:
Meio de Sementeira II
I nqrediente Qij.a_n ti dad_e _(_g
Caldo de soja tripticase 30
Extracto de levedura 3
Glucose 5
Ms1 tose 4
MgG04.7H70 2
Agua desionizada ρΗ έ de 7,0 sem ajustamento o meio de primeiro estádio inoculado é incubado a 362'C durante horas; 3) o meio de segunda estádio inoculado é incubado a
CC durante 24 horas; e 4) o volume do meio de produção á de 10 a. temperatura de incubação de 3E2C, e a composição 4:
BAD
Ingrediente
Quantidade (q/L) p r o dução do Meio III
Dextrina da
GI ucose
Hidrolisado
Levedura batata enzimático da caseinaí
Molasscs de líqula negra (blackstrs.p) o
MgSO (anidro) CaCO,
Água corrente o
litro pH não ajustado = 6,3; ajustar para pH 7,0 oom NaOH 5N; pH = após esteri1ização.
Adicionou-se agente anti formação de espuma: Saq 471 (0,2 g/L) e P-2000 (0,5 mL/L fNZ Amina A
EXEMPLO 4
Isolamento de A32310
Os caldos de fermentação total a partir de dois tanques 100 L., preparados de um modo semelhante ao descrito nos emplos 1 e 2, foram combinados (215 L) e filtrados através de prensa para filtrar, utilizando um auxiliar de filtração (37, fio Super-Ce1, Manville Products Corp-, Lompoc CA 93436) a fim proporcionar 180 L de filtrado.
A massa do filtro micelial foi extraida duas vezes com etona (60 L de cada vez). Os extractos de acetona foram
ÃJ
BAD ORIGINAL1 combinados e concentrados in vacuo até se obter um volume de cerca de 18 L. 0 concentrado foi combinado com o filtrado do caldo. Esta mistura foi ajustada para um pH de 9 com hidróxido de sódio 5N, e a solução resultante foi extraída com 2/3 do volume de acetato de etilo, misturando durante 1 hora e arrefecendo durante a noite. 0 extracto de acetato de etilo (115 L) foi separado, misturado com uma pequena quantidade de auxiliar de filtração e filtrado. O extracto clarificado foi concentrado in vacuo até se obter um resíduo.
Este resíduo foi dissolvido em tolueno (200 mL ) , e a solução foi aplicada a uma coluna contenda 2 L de gel de sílica (Grace Grade, crivo 20-300) embalado em tolueno, A coluna foi lavada com tolueno (10 L) e desenvolvida com to 1ueno:etano1 ilmente com 10 L cada um com (98:2), (9ó:4) e (90:10)1, recolhendo fracções de 1-L.
A eluição do A82310 foi monitorizada por bio-ensaio usando Bac i11us subti lis e lise de glóbulos vermelhos em placas de agar. As; fracções contendo a maior parte do A82310 (#13-20) foram combinadas e concentradas até se obter um óleo. Este óleo em dioxano (200 mL) s foi seco por congelação a fim de oroporcionar A82310 crú, também sob a forma de um óleo.
A82S1Õ crú foi dissolvido em clorofórmio (200 mL) e aplicado a uma coluna contendo 2 L de gel de sílica (Grace Grade 62, crivo 20-300), embalado em clorofórmio. A coluna foi lavada com clorofórmio (10 mL) e desenvolvida com c1orofórmio:acetona
L s £-? ci u ε n c i a 1 in e n t e
L um com (9:1), (4:1) (1:1)1 e depois coin acetona. (10 L), recolhendo fracções 1 ~L.
As fracções foram monitorizadas por meio de bio-ensaio e foram reunidas de acordo com os resultados do bio—ensaio como
PAD
ORIGINAL I
se segue: #6-9 (reunião A), #1C>-18 (reunião B) e #19-28 (reunião C). Cada reunião foi concentrada até se obter um resíduo que foi dissolvido em dioxano e seco por congelação. As reuniões A e C proporcionaram óleos tendo que ser posteriormente purificados, enquanto que a reunião B proporcionou. 9,9 q de A32310 sob a forma de um pó. branco.
A reunião A foi dissolvida em acetona (900 mL) e adicionada a ãgua (1 L) . □ pH da. solução foi ajustado para 9,0 com NaOH 5N, e a solução foi concentrada in vacuo até um volume de cerca de 1 L. □ concentrado foi extraído duas vezes com
tolueno, e DS extractos combinad os foram concentrados e secos por
congelação a partir de d iox ano a fim de proporcionar 2,8 g
adie iona.is de A82810 sob a forma de um pó branco.
A reunião C foi tratada do mesmo modo mas manteve-se na mesma um óleo após secagem por congelação. 0 óleo foi dissolvido em acetonitrilo (5= mL), e em seguida formaram-se imediatamente cristais. Ds- cristais foram filtrados e secos in vacuo a fim de proporcionar outros 1244 mg de A82S10 puro sob a forma do sal de sód i o (p.f. 173-175DC) .
ELéENPL0,_5
Cristalização do Sal de Sódio A32810 em de sal de sódio de AS2810 amorfo (400 mg) foi suspenso hexano (50 mL) por sonificação num tubo de teste sendo então xado repousar à temperatura ambiente. Os cristais que se formaram no lado do tubo foram removidos e secos in. y_ê3J30. 5 f.im de porporcionar 50 mg de sal de sódio de A82S10 (p.f. 255-257DC).
BAD ORIGINAL '
IV em CHUI-., indicada na Fig. 2, revela absorção repetências que se seauem (cm : 3020, 2970, 2952,
1570, 1458, 1393, 1380, 1363, 1359, 1163, 1115, 1093 1054, 1027, 1010, 1001, 990, 979 e 940.
tro de massa desabsorção de campo (FD); Figura 6.
máxima
2936, 1075, nas ί
2679 , 1067, Espec
EXEMPLO 6
Preparação de A82810 (ácido livre)
AS2810 (sal de Na, 200 mg), obtido tal como foi descrito no Exemplo 4, ê dissolvido em dioxano (75 ml_) . Adicionou-se água (25 mL) a esta solução; o pH da solução resultante é ajustado para pH 3 pela adição de HCl IN. A solução acidificada é agitada durante uma hora sendo então extraída duas vezes com clorofórmio (100 mL de cada vez). 0s extractos de clorofórmio são combinados e concentrados sob vácuo a fim de dar origem a A82810 sob a forma de ácido livre.
EXEMPLO 7
Presaracão de Aceti. 1-AB2810.
A82610 (sal de sódio, 200 mg) foi dissolvido em piri-
dina (4 mL) ; adicionou
f O 1 dei xada repousar
A d IC ionou-se água (10
c lor o f ó r m i o 1 (50 mL) . 0
s i.vasiien te lugi 50 mL de c e n t o d e N a H C 0 , e á. c o n c e n t r a d o i n v a c u o dissolvido em acetona.
-se anidrido acético (4 mL); e a mistura durante 40 horas á temperatura ambiente. mL), e a solução aquosa foi extraída com extracto de clorofórmio foi lavado sucescada um de HCl 0,10, água contendo 1 por pua. 0 extracto de clorofórmio foi então até se obter um resíduo, e o resíduo foi A solução de acetona foi concentrada in vacuo a fim de remove a piridina e o ácido acético residuais.
BAD ORIGiNAL
Este passo foi repetido três vezes, e dissolvido em benzeno e seco por congelação a fim de proporcionar
204 iriQ de aceti 1--A32310 (sal de Na).
Peso molecular = 906 por espectrometria de massa por bombardeamento com átomo rápido (FABNS).
o resíduo resultante foi
IV em CHC1-., .jt máxima nas freqúãncias indicado na Figura 3, , ' -1 , que se seguem (cm ): revela absorção 3021, 2976, 2935,
2880, 2831, 1728, 1458, 1379, 1357, 1321, 1314, 1247, 1226, 1223,
1201, 1185, 1101, 1094, 1076, 1056, 1024, 990, 981, 947, 929, 896
e 875.
EXEMPLO S
Preparação de Propioni1-A82910
A82810 (sal de sódio, 200 mg) foi dissolvido em piridina (4 mL); adicionou.-se anidrido propiónico (4 mL) ; e a mistura foi deixada repousar à temperatura ambiente durante 44 horas. Adicionou-se água (10 mL), e a solução foi extraída com clorofórmio (50 mL). 0 extracto de clorofórmio foi lavado sucessivamente com 50 mL de cada um de HCl 0,lM, água contendo 1 por cento de NaHCCq e água. 0 extracto de clorofórmio foi concentrado in vacuo
até se obter um residuo que foi dissolvi do em acetona (100 mL ) . A
S O 1 U Ç -5 O d O tS o etona foi. concentrada in v acuo a fim de remover a.
p i r i d i n a e o ãcido propi ónico residuais. Este passo f Ol repetido
t. Γ t1 S V d 2 9 S . 0 resídua foi d isso 1v id α em benzeno seco por
congelação a fim de proporcionar propionil AB2810 (sal de sódio) sob a forma de um óleo.
óleo foi dissolvido em acetonitrilo (5 mL) e aplicado a uma coluna contendo 20 mL de gel de sílica (Woelm, 100-200 pm) □AD ORIGINAL
“»( ϊ — embalado em acetonitrilo. A coluna foi lavada com acetonitrilo (100 mL) e desenvolvida com acetonitri1 o:acetona Csucessivamente com 100 mL cada de (9:1), (4:1), (7:3) e (1:1)1 e finalmsnte com acetona (100 mL), recolhendo-se fracções de 25 mL.
A eluição foi monitorizada por meio de cromatografia de placa delgada em gel cie sílica, fazendo—se o desenvolvimento com acetonitrilo:acetona (1:1) e fazenda a detecção com pulverização com vani1ina-H^SO^. As fracções contendo a maior parte do propionil AS2B10 (sal de sódio, #13-23) foram combinadas e concentradas in vacuo a fim de dar origem a um resíduo. 0 resíduo foi dissolvido em dioxano e seco por congelação a fim de proporcionar 47 mg uo éster desejado.
Peso molecular - 920 por FDMS.
IV em CHlI.,, indicado na Fig. 4, revela absorção máxima 1 nas frequências que se 2331, 1571, 1457, 1393, ): 2975, 2971,
1359., 1321, 1237
2379 , 121Ó, >eauem (cm 1380, 1364,
1213, 1191, 1163, 1116, 1093, 1076, 1063, 1054, 1027, 1010, 1001, 990, 930, 945, 940, 929 e 861.
EXEMPLOS
1
0s derivados de éster de AS2S10 que se seguem podem s preparados usando o método dos Exemplos 7-8:
n-Heptanoi1-A82310 Valeri1-A82810 terc-Butiri1-AS2S10 ’ -j originai»
EXEMPLO 12
Preparação do Derivado 4—bromofeniluretano de AS2810
A82310 (sal de sódio, 200 mg) foi dissolvida em benzeno (25 mL), e adicionou-se com agitação isocianato de 4-bromofeni1 o (225 mg) em benzeno (25 mL). Adicionou—se uma gota de trietilamina, e a mistura. foi agitada â temperatura ambiente durante lóO horas. 0 precipitado que se formou foi separado por filtração, e o filtrado foi seco por congelação para dar origem a 400 mg do derivada 4-bromofeniluretena de A82810 (sal de sódio).
Peso molecular = 1061 por FDMS.
IV em CHC1-., indicado na Fig. 5, revela absorção máxima 1 nas frequências que ;eouem (cm
1727
1589, 1570, 1517, 1489, 14Ó0.
): 2969, 2935, 2879, 2830,
1399, 1379, 13Ó3, 1344, 1316,
1306, 1287, 1265, 1247, 1238, 1216, 1211, 1192, 1163, 1146, 1116,
1102, 1093,
923 e 861.
1071
1054, 1025, 1009
1000, 990, 979, 943,
EXEMPLOS
Os derivados uretano de A82810 que se sequem podem ser preparados utilizando o método do Exemplo 12:
4—c1orofeni1uretano de A82810 4-nitrofeni1uretano de A82810 feniluretano A82810
4-meti1feniluretano de A82310 — iodo f en i1u ret a ηo d e A82tí10
4-f1uorofeniIuretano de A82S10 cic1ohexi1uretano de A82810 2-fenetiluretano de A82S10 2-(feni1)ciclopropiluretano de A82810 4-f eno;: i fen i 1 uretano de A82S10
ORIGINAL
Ί
tXEMPLU
Preparação do Derivado éter Metílico de A82oí0 □ A32810 sob a forma ácida é dissolvido em metanol; adiciona-se água (1/2 volume). Deixa-se a solução repousar até se formar o derivado éter. A solução é evaporada sob vácuo. 0 produto é cromatografado usando, por exemplo, gel de silica a fim de dar origem ao derivado éter metílico do A32810.
EXEMPLOS 24 a 26
Utilizando um processo semelhante ao do Exemplo 23 e o álcool ou tiol aporpriados, podem ser preparados os derivados éter de A32810 que se seguem:
Derivado éter n—Propilico de AS2810
Derivada Tioéter Metílico de A82810
Derivado éter n-Butílico de AB2S10
EXEMPLO 27
Ident i. f ic ação Cromatográf ic a de A52610 1: Cromatográfia de Placa Delgada ftdsorvente: gel de silica
Sistema: acetonitrilo:acetona (1:1)
Detecção: Bac i11us sub t i1i s
R = 0,25 τ (Neste sistema ASO190 tem um Fte de cerca de 0,44, fazendo-se a d e t e c ç ão c o m pu 1 v e r i z a ç ão c o m v an i 1 i n a i jRIGINAL
J
Cromatografia Líquida de Elevada Resolução Adsorvente: Waters pBondapak C18 (coluna 4- x 300—mm)
Sistema solvente; CH.JCN:H,_Q (9:1) contendo 17. de HOAc Detecção; refractómetro Taxa de fluxo: 3,0 mL/min Tempo de retenção: 5,37 min3
Para comparação, neste sistema A80Í90 tem um tempo de retenção de aproximadamente 4,65 minutos.
EXEMPLO 28
Actividade Anticoccidia1 das Composiçoes Sinerqísticas
Frangos recentemente incubados são criado ambiente livre de coccidias durante sete dias. Na oitavo dia, os frangos são pesados e atribuídos a tratamen to.
num meio manhãa do grupos de
Cada grupo de pintainhos (usualmente 4 ou 5 pintainhos por grupo) é alojado numa gaiola com bateria durante a experiência .. Proporc iona —se aos pintainhos em cada bateria um horário de iluminação constante , um acesso aos alimentos e à água ad libitum (cada experiência inclui tratamentos não medicados e medicados com drogas). Dois dias depois de se ter iniciado a experiência, os pintainhos que se destinam a ser infectados sã'c>
incubados no papo com uma suspensão pura de oocistos coccid.tais.
A d o sagsm de □oci stos u sad a em cada tes t e è destinada a produzir
cocc idiose c línica em animais infectados; não medicados.
Após um período ds crescimento adicional de sete dias, a experiência dá—se por terminada, Cada grupo de pintainhos é
D ORIGINAL
CT Λ , J-t pesado, e a quantidade de alimentos consumida por cada grupo é determinada. A partir destas mediçSes, os pesos finais das aves e a eficácia da utilização dos alimentos são calculados. São então sacrificadas todas as aves, e o intestino e o cego são examinados quanto â presença de lesSes induzidas por coccidi-as.
Alguns testes incluem a determinação da produção de oocistos. Nesta avaliação, é recolhido o material fecal produzido por cada grupo de aves no período durante o qual ocorre a introdução do oocisto. As fezes são então dilu.idas, e os oocistos são contados utilizando um hemacitorneiro. A medição ê utilizada como um indicador da capacidade reprodutora dos parasitas no frango, proporcionando assim uma medição exacta da capacidade da droga para controlar infecçSes nos animais.
Ds Quadros VI a XXIV resumem os resultados observados quando foram testadas deste modo comaosições sinergísticas ilustrativas deste invento.
ORIGINAL
Quad ro e em
VI: Actividade Anticoccidia1 do A82810 Isoladamente
Combinação Contra £ irneri a acervu 1 ina Estirpe 5'?
Ε E. tene11a Estirpe 15e7
KEGISTQ LESRO HJTAL
82810 (ppm)
Benzeneamina ( ppm ) * 0 0,5 1 ,0 1 , cr 2,0
0 10,1 12,1 10,7 3, 4 5,4
4 12,4 7 q Õ 6,3 4, o 3,5
3 10,9 6,3 3,7 ·—1 Jl 6 r-, f
12 10,4 cr 4,9 -A- «, 1 4,3
16 10,3 6,5 3,6 1, 0 0,5
T
BAD ORIGINAL
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO
A82810 < ppm
Benzeneamina 0 0,5 1,0 1,5 5· ή ί*
( ppm)
o 67 60 81 85 V2
4 75 81 98 96 97
8 63 84 89 101 101
12 73 93 93 92 91
16 76 86 97 94 97
Estirpes de EDCcidia sensíveis a ionóforo
2,4-Dinitrc-N-C 4-(1,1,2,2-tetraf1uoroetoxi)feni13-6(trifluorometi1)benzeneamina
BAD ORIGINAL
Quadra VII: Actividade Anticoccidial cio Ab'231C Isoladamente e em Lambin àa Lontra Eimeria a<
stirpe 1-8-31
E . tenel Ia Estirpe 1-8-456
REGISTO LESSQ TOTAL A82810 (ppm)
Benzeneamina (pprni) ,0
8,
4,3
7,9
6,5
4,2
5.9 3,6
2.9
7.5
3.5
1.6
3,6 3,3 2,0 2,0 1,5 1,1
BAD ORIGINAL^
J
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO A32910 (ppm)
zeneamina ppm) 0 0,5 1 ,0 1,5 2,'
0 89 37 39 95 OT / ·_'
4 90 89 89 93 98
8 94 87 94 95 98
12 88 96 95 90 95
16 87 94 94 90 93
Estirpes de coccidia resistentes a ionoforo
2,4-Dini tro-N-[4-(1,1,2,2-tetrafluoroetoxi)fen i13-6( trifluoremet.il ) benzeneamina
T3
BAD ORIGINAL '
Quadro VIII: Actividade Anticoccidial do A32310 Isoladamente
E Combinação Contra E, acervulina Estirpe FS-316 E E. tenella Estirpe FS-456^
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO
A82S10 ( ppm)
Composto o (ppm > (j 2,5 3,0 -r <| >-/ 4,0
0 80 81 77 85 80
B 76 88 86 83 89
10 77 36 88 91 92
12 75 89 88 91 91
14 70 88 83 87 90
Composto (ppm) REGISTOS A32 LESÃO INTESTINAL M±D IA
810 (ppm) 0 3
o cr •4~ ( ,—* cr 4,0
0 8,1 /-) T jÍ. , -2’ .7 .7 , o 1,2
3 5,9 2,9 1 , 1 1 1 ,2
10 4,8 1,7 1 , 4 0 ,7 Ο Δ R _>
12 5,9 2,0 1 , 1 0 ,4 0,5
14 4,5 1,5 1 , T ,0 1,4
REGISTOS LESÃO CECAL MÉDIA A82810 (ppm)
BAD ORIGINAL
Composto ( ppm ) * i cr •Η ? Ο
,0 ' R é.
.,1
2,9
2,9
,Β ,0
Estirpes de coccidia resistentes a ionoforo
2,4-Din i tro-N-14-(1,1,2,2-tetraf1uoroetox i)fen i13-6(tri fluorometi1)benzeneamina bad ORIGINAL
Quadro IX: Actividade Anticoccidial de A82310 Isoladamente E Em Combinação Contra E. acervulina Estirpe FS-316
Ε E. tenella Estirpe FS-4561
GANHO PESO, PERCENTAGEM A32S10 (ppm) CONTROLO
Composto ·~Ί ( ppm ) 0 4 5 6
0 39 37 95 93
16 91 89 39 86
13 91 90 OO t 37
2 0 84 91 86 B7
22 38 39 34 35
24 85 92 85 84
BAD ORIGINAL 1
J
CC
RtblbiUtí LESfcU INTEtíTINAL ΜέϋΙΑ AS2310 (ppm)
Composto ( ppm) o
ló ??
a , c> — *4 4 —· ι , 1 ,3 3,0 0,3
2,8 o
o o
, o
o o
o
f) .
o o
o o
o [J
BAD ORIGINAL
REGISTOS LESKO CECAL MÉDIA
A82S1O (ppm)
Composto
->
( ppm) *
Õ
2,9 3,0 2,9
2,6 1,6
1,0 0,4 ,2 1,2 , 8
Z. ->
0,8 0, 5 0,8 0,4 1 ,6
0, 6 0,5 0,6 0,5
Estirpes de cocoidia resistentes a ionóforo
2,4-Din i t ro-N-14-(1,1,2,2-te traf 1 uoroetox i)feni13-6(tritiuorometi1)ben zeneamina
BAD ORIGINAL ’
Quadro X: Actividade Anticoccidial de A82810 Isoladamente E Em Combinação Contra E» acervulina Estirpe FS-316
GANHO PESO, PERCENTAGEM A82810 (ppm) CONTROLO
Composto (ppm > 0 0,5 1,0 1,5 2,0
0 6? 72 ~r~z / ·_* 73 76
4 74 75 71 76 83
m O 71 81 80 81 78
12 82 e.3 87 84 87
16 75 87 82 84 90
r bad original 1
REGISTOS LESsO INTESTINAL MéDIA
AS2S10 (ppm)
Composto 'n ( ppm) * O 0,5 1 ,õ 1 ,5 2,0
0 3,5 Ύ 7 f ·_· 7,3 7,9 3,3
4 6,9 7,1 3,4 7,5 6,5
S 3,4 6,4 7,3 5,9 4,3
12 4 · j* 5,3 4,3 2,4 0,3
16 5,8 0,1 0,9 0,1 Õ, 1
Estirpe de coccidia resistente a lonótoro
2,4-Din itro-N-14-(1,1,2,2-tetrafluoroetoxi)feni13-6(trif luorometi 1 > benzerieamina bad original tK.íadro WI: Actividade Anticoccidial de A32310 Isoladamente E Em Combinação Contra Eimeria max ima. Estirpes FS-177^
REGISTO LESKQ INTESTINAL
A82310 (ρ pm)
Composto ·“> (ppm)* 0 1,5 2,0
0 4,0 3,7 3,6
R 3,6 0,4 '-y C xl «
12 T o ·-' !» ' 1,3 0,3
16 ·_> X ·-? 0 1 , 1
bad original ò 7
bANHU PEtíO, PERCENTAGEM CONIRULO A82B10 (ppm) (ompos to 0
O (ppm)*
Q 6? 79 92
8 77 91 88
12 S4 88 86
1 Cl 87 94 87
Estirpe de coccidia sensível a ionoforo
2,4-Dinι tro-N- £4-(1,1,2,2-tetraf 1 uoroetox i ) f en i 1 3-é(trifluorometi1)benzeneamina
BAD ORIGINAL1
Quadro XII: Actividade Antiooccidial do
AS2S10 Iso1adament E Em combinação Contra Ei miaria max ima Estirpe FS-177^
REGISTOS LESÃO INTESTINAL NÉDIA A32310 (ppm) moosto 0 ppm >
,4 ,9 tí
0,1 0,1 θ!
0,
0,
BAD ORIGINAL ΰπΝΗυ Pfc.SU, PERUENTAfcjEM CuNTRuLu AS2310 (ppm)
Composto •—1 ( ppm> *~
0 8 12 105 79 QS 107 1 1 1 103 105 10 91
16 102 114 1 07 91
Estirpe de coocidia sensível a ionoforo
2,4-Dini tro-N- C4 ( 1 ,1 ,2,2-tetraf 1 uoroeto;; i)fen i13-6(trifluorometil)benzeneamina ——τ- BAD ORIGINAL
Quadro XIII; Actividade Anticoccidial do A82310 Isoladament E Em Combinação Contra E. mar ima
Estirpe LIT-626^
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO AS281Õ (ppm)
Composto (ppm) 0 1,25 1,5 1,75 o ?
0 9S 97 102 101 94
8 94 97 94 99 95
10 99 95 92 97 97
12 93 94 89 97 95
14 98 r-»er 7 93 92 94
BAD ORIGINAL
Composto '-Ί (ppm)*
Cj
4,8
Fít.U I. ST ι.
S LESSO
A82810
INTESTINAL Né.DIA ppm) ,75
2.0
3,5 0,9 1 ,0
IO O O 1 o
H X. I, V
3,8 1,2 1,7 ,4 1,2 , 1 0,8 ,2 1,3
Estirpe de coccidia resistente a ionóforo
2,4-Dini tro-N-14-(1,1,2,2-tetraf 1 uoroetoxi ) f eni 1 .1 -6(trifluorometi1)benzeneamina
BAD ORIGINAL 1 j
Quadro XIV: Actividade Anticoccidial de AS2810 Isolatíamente E Em Combinação Contra E. maxima
Estirpe FS-410^
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO AS2S10 (ppm)
Composto (ppm) 0 2,5 3,0 τ cr •D , U 4,·
0 36 90 oo 83 91
8 90 90 Q'2 92 tíó
10 90 93 94 37 37
12 92 92 89 90 91
14 92 ?2 89 90 91
BAD ORIGINAL
REGISTO LES2SO INTESTINAL MéDIA AS2B10 (ppm)
Composto ( ppiTl )
Cf
4,0
3,8
3,3
2.3 2,7 0,3
1.4
1.3
1.4 0,7 1,2
1,7 1 , Õ
Estirpe de coccidia resistente a ionoforo
2,4-Dini tro-N-C 4 —(1,1,2,2-tetraf1uoroetoxi)feni13-6(tr i f1uorometiI)benzeneamina
BAD ORIGINAL
Quadra XV: Actividade Anticoccidial do A82810 Isoladamente E Em Combinação Contra E. maxima Estirpe FS-410
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO A82310 (ppm)
Composto ( ppm)* 0 1,25 1,5 1
0 93 93 i-—S Oxi 91
9 90 95 98 94
10 94 92 98 89
11 37 96 94 95
12 84 91 91 92
BAD ORIGINAL ’
Composto ''y ( ppm) *
REGISTOS LESÃO INTESTINAL MéDIA A8281Õ (ppm) ,75
4,0 4,0 4,0 2,4 3,8 2,2 3,7 1,6 4,0 3,1
TO T L <1 u.· <1 l_*
Estirpe de coccidia resistente a ionófero
2,4-Dini tro-N-14-(1,1,2,2-tetraf1uoroetox i)fen i13-6(trif1uorometi 1)benzeneamina
BAD ORIGINAL ‘
Quadro XVI: Actividade Anticoccidia1 do AS2810 Isoladamente E Em Combinação Contra E. maxima
E.s tirpes FS—41o
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO A82010 (ppm)
Composto l (ppm) 0 4 ET ^1 6
0 65 74 74 Sl
16 71 93 88 88
18 76 90 82 89
20 81 90 S3 90
99 79 89 87 82
83 86 eo 82
BAD ORIGINAL í
J
REGISTOS LESÃO INTESTINAL MÉDIA
AtíGSiO (ppm)
Composto 0 -> (ppm) 4 5
υ ο, o 4,0 Η· ι O 4 íj
16 4,0 0,5 0 0,7
18 3,1 0 o 0,2
20 3,4 0,5 0 0
22 3,7 ζ) 0 0,2
24 2,6 0 (J, 3 0
1
Estirpe de coccidia resi stente a ionóforo
-1
2,4-Dinitro-N-14-(1,1,2, 2-tetraf1uoroetoxi ) feni13-6-
(trifluorometil)benzeneamina
BAD ORIGINAL 1
Actividade An t. icocc id ia 1 do A82810 Isoladamente m Combinação Contra Eimeria ma;·; ima
Estirpe FS-410^
Quadro XVII
E
REGISTO LESÃO
A82810 (ppm)
Composto '“l ( ppm)* 0 6 10
0 3,9 *~i T 2- q ·_’ ~7 Λ— * , 2,4
fcj 12 2,9 2,1 1,4 1 , 1
ló 2,4 1 ,9 1,10 0,8
GANHO F'E SO, PERCENTAGEM CONTROLO
A32810 (ppm)
Composto 0 O ò 10
( ppm)*
0 65 85 O 7 83
3 68
12 59 90 So 35
J. ò 74 90 79 —í *T O_<
-ad original ·
REDUÇÃO PERCENTUAL NA PRODUÇÃO OOCISTO
AB2810 ( open )
Composto O (ppm)
o 0 l y 18 36
8 4
12 0 12 38 59
1 di 0 TC 73 78
Estirpe de coccidia resistente a ionóforo
2,4-Din i tro-N- C 4- ( 1 , 1 ,2,2-tetrafl Lioroetox i)fen i 1 3-6(tri f1uorometi 1)ten zeneamina
BAD ORIGINAL '
Quadro XVIII: Actividade Anticoccidia 1 do AS2S10 Isoladamente E Em Combinação Contra Eimeria ma;·:ima. Estirpe F 5 - 410
REGISTO LESSO INTESTINAL A82S10 (ppm)
Composto ( ppm ) o
CJ
4,0
4,0
4,0 1 ,5 ,9
V.
4,0
O T
0,9 1 ,1
BAD ORIGINAL ;
j
Co mposto
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO AS2310 (ppm) ( ppm >
Çj 89 97 89
8 91 95 100
12 95 96 99
16 93 92 96
resistente i onoforo
2,4-Dini tro-N-C4- (1,1,2,2-tstraf 1 uoroeto:; i ; f en i 1 3-6(tr i f 1 uor ome ti 1 ) benzeneaniina
BAD ORIGINAL^
Quadro XIX: Actividade Anticoccidia1 do A82810
Isoiadamente E Em Combinação Contra Eimeria acervu.1 ina H & C E Eimeria tenel la Wis^
REGISTOS LES20 INTESTINAL MÉDIA A82810 (ppm)
Composto ( ppm) * 0 2 6 10
0 o 6, 2 6,0 b i 0,4 0,3
12 5,1 1,0 0 0,4
1 6 4,7 0,4 0,5 0,1
BAD ORIGINAL ’
GANHO PESO
, PERCENTAGEM CONTROLO A82310 (ppm)
Composto —Ί (ppm) o 10
0 65 98 91 80
3 62
12 64 95 90 76
16 69 97 90 65
Estirpes de cocoidia sensíveis a ionoforo
2,4-Dini tro-N-14-(1,1,2,2-tetrafluoroetoxi)feni13-6(trifIuorometi1)benseneamina
BAD ORIGINAL
Quadro XX: Actividade Antiooccidial do Ab'2310
I so.1 adamente E Em Combinação Contra Ei.neria acervulina Estirpe FS--273 e E. tenel Ia
Estirpe FS-ASó'*'
REGISTO LESÃO A8281O (ppm)
Composto r-| ( pom >
ii
8,9
9.4
3.4 8,0
7,2 3,7 2,0
4,9 1,2 1,2
1,6 2,0 0,9
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO AS2310 (ppm)
Composto (ppm) 0 — 6 10
0 A 3 L· nn 89 86
8 70
12 /2 O A oo Γ5 λ O xi
í ó. 74 8? S3
BAD ORIGINAL ’
PERCENTAGEM REDUÇÃO NA PRODUÇÃO OOCISTO
A82810 (ppm)
Composto (ppm) 0 2 6 10
0 0 65 83
8 17
12 13 84 94 100
16 20 95 99 99
Estirpes de ccccidia resistentes a ionoforo
2,4-Dini tro-N-14-(1,1,2,2-tetrai1uaroetoxi)fenil3-6(tr i f1uorometi1)ben zeneamina
BAD ORIGINAL
Quadro XXI: Efeito do AS2810 Isoladamente E Em Combinação Sobre o Crescimento de Pintainhos
Não Infectados
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO AS2S10 (ppm)
(omposto O (ppm)^ 0 1,25 1,5 1,75 D 1 ·*— n
0 - 98 101 105 99
8 1 QQ 100 103 98 1 02
10 101 102 98 97 1 00
1 2 94 98 102 97 97
14 93 99 99 100 9ó
BAD ORIGINAL
Quadro XXII: Actividade Anticoccidial do AS2S10 Iso1adamente E Em Combinação Contra Eimerla acervulina Estirpe 59 e E. tanel 1.a Estirpe 1551
RESISTO LESÃO TOTAL Ã82810 (ppm) (ompos to (ppm)
o 11,5 8,9 4,5
4 1 1 ,2 3,7 1 ,9'
8 8,7 O ^7 0,8
12 5,0 1 ,3 0,8
16 4,4 1,3 0,3
BAD ORIGINAL
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO ASCSI O (ppm)
Composto 0 1,5 2,0 ( ppm) *
o 70 97
4 80 92 105
8 78 101 98
12 80 í~i ~r 7·-' 92
16 92 72 102
Estirpes ds coccidia sensíveis a ionoforo
4-o 1 ογο-Μ-Ε2,4-dinitro-ó- (trif luorometi 1 '> feni 1 31-na f a ta 1en eamina
ORIGINAL
Uu.adro XXIII: Actividade An ticocc id ia. 1 do A'd2810 Iso1adamente E Em Combinação Contra Eimeria maxima
Estirpes FS-1771
REGISfiO LESSO INTESTINAL A82810 (ppm)
Composto ( ppm>
,9
3, 1 1,3
Jj 0,5
O , tí
1,5 0,3
BAD ORIGINAL 1 j
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO
A89281 <? ( ppm !
Composta 0 1,5 2,0
0 87 99 100
4 87 98
8 80 88 97
12 35 83 93
.16 84 87 86
1
Estirpe de coccídia sensí vel a ionoforo
·*—
4-c1oro-N-12,4-din i tro-6- (trif1uorometi 1)fen i1□ —
1-nafata. leneamina
BAD ORIGINAL 4
Quadro XXIV: Actividade Anticoccidial do A82810 Isoladamente E Em Combinação Contra E. acervu1ina
Estirpe 59 Ε E . terie 11 a Estirpe 155^
GANHO PESO, PERCENTAGEM CONTROLO A82810 (ppm)
(omposto <7 ( ppm) * õ 1,25 1 ,5 1 ,'
0 70 87 SO O ”?
4 79 84 83
Q 66 94 91 83
12 “7 O 84 87 85
16 67 76 79 70
REGISTOS L.ESSO INTESTINAL MÉDIA A82310 (ppm)
Compost ( ppm )
1,3 0,5 1,8
-· , o
3,4 0,3 2,1
O
3,1 0,4
0,8
BAD ORIGINAL '
Composto ( ppm)
6
REGISTOS LESÃO CECAL MÉDIA Ató'2'S 1o ( ppm )
·“? T ·?
9 2,9
er *“1 L.
U
o 1,8
o / 1,7
,75
2.3 1,6
1.4 0,7
I? ,9 0,5
Estirpes de coccidia sensíveis a ionoforo
4-Bromo-N-C 2,4-din i tro-6-trif1uorometi1)f en i1□ — 1-naf taleneamina
EXEMPLO 29
Racão Pintainhos Modificada A82S10_para Controlo Coccidiose
Prepara—se uma ração altamente energética, equilibrada para alimentar pintainhos para obter um aumento rápido seguindo a r“Ç?C€-?Ít3 CJLlfc? 5S S nqrediente bs
Milho -amarelo moido
Farinha de soja, solvente e :< t r a i d o, d esc asc ad o , 5 Ο ρ o r cento proteína
Gordura animal (sebo do vaca.)
31,09 6,5
621,3 130
BAD ORIGINAL
Farinha de peixe com s o 1 ti v e i s (6 0 λ proteína) Solúveis de destilação do milho
Fosfato dicálcico, grau livre Carbonato de cálcio
5,0 100
4,0 80
1,8 36
0,3 16
Ingrediente
Premistura vitaminas (representando vitaminas A, D, Ε, K, e colina, rtiacina, ácido pantotén.ico, riboflavina, biotina, com agente de enchimento g 1 u.cose )
7. 1 bs
0,5 10
Premistura vestígios minerais írepresentando MnSO , ZnO, i
Η I F e £ 0 , L a L· U )
Ac i c! o 2- am in ο-4-h i dr o x i butírico (hidroxi análogo de metionina)
0,1 >310 C
Na)
Estas substâncias são misturadas de acordo com técnicas de mistura ds alimentos normalizadas. Os pintainhos alimentados com essa ração, com água ad 1ibitum, são protegidos contra a exposição à coccidiose; os ganhos no peso são comparáveis aos obtidos nos pintainhos livres de coccidiose alimentados com uma dieta semelhante, não medicada.
BAD ORIGINAL
Al
EXEMPLOS
Composiçoes Ração Pintainhos Sinerqística-A828í0 para Oor>trolo Loccidíose
A ração dos pintainhos é preparada tal como foi descrito no Exemplo 29, mas usando a seguinte combinação sinergística
como os ingredientes activos: Inqrediente ppm
AS2810 0,25 -
2,4-dinitro-N-C4-<1,1,2,2- tetrei.f luoroetoxi ) feni 1 ]- 6-(tri f1uorometi1)ben zeneamina 4 - Ξ4
Inqred i en te ppm
A32810 0,25 -
4-c1oro-N-12,4-d in i tro-6- (tr i f1uo rometil)f en i11 — 1 — naftal eneamina 4 - 24
Ing redien te ppm
A82810 r, -
4-bromo-M-C 2,4-din i tro-6- (trif1uorometi1)feni13 - 1 - nafta1eneamina 4 - 24
BAD ORIGINAL ]
EXEMPLO 55
Ração Gado Bovino Melhorada fiB2810
Prepara—se uma ração para gado bovino de elevado equilibrada, como se seque:
teor
Inqrediente lbs
Milho finamente moido
67,8
1356
Espiga de milho moida ;OO
Farinha de alfalfa deshidratada, 17 par cento de proteína
00
Farinha de soja descascada, solvente extraido, por cento proteína
9,9956 199,91:
do lassos de cana
Ureia
12,0
A82810 (sal de Na) í’i „ (iíi44
Fosfato dicãlcico, prau 11vr e arbonato de cálcio bad ORIGINAL
I ηgredien te lbs
Cloreto de sódio 0,3 η o
Premistura vestígios miner a i s 0,03 O ti ώ
Premistura vitamina A e· D.., $ 0, 07 1,4
Premistura vitamina E$t 0,05 1,0
Propionato de cálcio 0,15 3,0
$ Contendo por libra : 2.000.000 LI. I : de vitamina A;
227.200 U.I. de vitamina e 385,7 q de ração de soja com 17. de óleo adicionado
O Grãos secos destilados de milho com solúveis contendo 20,000 U.I. de acetato de d-alfa-toooferi1 por libra
A ração misturada é prensada para dar oriqem a pílulas. Com uma taxa de ingestão diária média de 15 libras de ração por animal, esta ração fornece aproximadamente 300 mg de A82810 (sal de Na) por animal por dia.
BAD ORIGINAL '
EXEMPLO
Ração Porcos Melhorada A82810 έ preparada uma ração para ninhada de porquinho; equilibrada, como se seque:
Inqrediente
1bs/tone 1ada
Milho amarelo moído
65, 1 0
1302
Farinha de óleo de soja, descascada, solvente extraído
Polpa de beterraba seca
370
DO •osfa.to dicálcico .80 i8 arbonato de cálcio c , 1 .
Fremistura vitamina porcos
Sal (NaCl) :olina, 252
0, ,>5
Premis tura'- vestiqios minerais 'remistura’ vitamina A náloao hidroxi da metionina
0,05
Total
BAD ORIGINAL
Cada kq de
Vitamina D-,;
1 .. 620 mq de
Vitamina S12
fálico; 1Ó5 >
O
*-·
Cada kg de
mq de niacina; 4,4 ds ácido pantoténico; 2,205
441 mg Vitamina K; 19,180 (ng colina; 110 mg ácido piridoxina; 110 mg tiamina; 22 mg biotina.
mq
Cada kg de premistura contem o seguinte: 50 g de manganésio sob a forma de sulfata de manganésio; 100 g de zinco sob a forma de carbonato de zinco, 50 g de ferro sob a forma de sulfato ferroso; 5 g de cobre sob a forma de óxido de cobre; 1,5 g de iodo sob a forma de iodeto de potássio e 150 q no máximo e 130 g no mínimo de cálcio sob a forma de carbonato de cálcio.
Cada kg de premistura contem 6.Ó138 unidades USr' de Vitamina A.
Para 200 libras desta ração, prepara-se uma premistura adicionando A82810 (10 q) a uma pequena quantidade de ração de soja com o solvente extraído, moendo-cs cont pilão e almofariz, e diluindo a mistura moida até uma libra com ração de soja com solvente extraído adicional. Esta premistura é então adicionada, a 200 libras da ração para porcos atrás descrita, misturando por meio de técnicas normalizadas. Esta ração medicada prooorciona um nível de ICO gramas de A82S1C por tonelada da ração de base. A ração medicada é administrada a porcas durante pelo menos um dia, e dei preferência de sete a dez dias, antes da formação da ninhada e depois da formação da ninhada durante tanto tempo quanto seja desejável.
BAD ORIGINAL^
São preparadas quantidades maiores ou mais pequenas de ração medicada com vários níveis de A82810 variando a quantidade de A82810 na premistura e/ou a quantidade de ração de base.
As porcas são alimentadas com taxas variando entre 1,0 e 10 gramas de A82S10 por 100 libras de ração. A ração medicada fica, disponível a.d 1 ibitum com água. Usualmente, as porcas consomem cerca de 6-8 libras de ração por dia.
EXEMPLO 35
Formulação A82810 para__1 eitSes
A82SÍ0 é dissolvido numa pequena quantidade de etanol. Esta solução de etanol é suspensa em polietileno glicol 200. A suspensão é concentrada de modo a que cada dose unitária tenha, um volume de cerca de 0,5 a 2 mL. Essas suspensões são administradas a. porcos jovens com taxas de 0,5 a 50 mq por libra, trás vezes por dia por introdução no est.omaqo.
EXEMPLO 36
Ração Melhorada para. Controlo da Disenteria dos__Porcos á preparada uma prémistura por métodos normalizados usando os ingredientes que se sequem:
BAD ORIGINAL
Ing red iente
oo
Quan tidades
Composto Activo 150,0
Silicato de Cálcio 20,0
Carbonato de Cálcio (Farinha de Cascas Ostra) 830,0
F'eeo Total 1000 q
Esta premistura é adicionada à ração comercial porcos, usando técnicas de mistura de rações normalizadas, a de se obter 100 g de composto activo/tonelada de ração.
para fim
BAD ORIGINAL

Claims (6)

  1. lê. - Processo para a preparação de antibiótico AB2810 com a fórmula lj
    OMe em que R é hidrogénio, ou de um seu derivado em que R é
    -CuNHRj e R, é alquilo, arilo, alquil-arilo, arilalquila, halo;
    n 3. troari 1 o , baloarilalquilo.
    a 1 c o;·: i a r i 1 o.
    ari 1 □:·: iar i 1 o, ari1cic1 ca1qui1 o, acilarilo e cicloalquilo; ou ds um derivado éster alquílico ou éter acílico ou alquílico; ou de um seu sal; caracterizado por compreender a cultura de Actinomadura fÁláC.Q.éé. sp. nov. NRRL 13348, ou ds um seu mutante produtor de A82310, num freio ds cultura contendo fontes assimiláveis de carbono, azoto, e sais inorgânicos em condições ds fermentação aerábicas submersas, ds tnodo a preparar-se o antibiótico A82810; e, f acul tativamen ts, a sa1ificação, esterificação, acilaçâo, formação de um seu derivado éter ou reacção com um isocianato com a fórmula R^—NCO, con f orme apropriado.
    • -—^βΙ BAD ORIGINALJ
  2. 2â. - Processo ce acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por se preparar o antibiótico ,4828:10 ou um seu sai agronomicamente aceitável.
  3. 3ê. - Processo de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por se preparar o antibiótico AS2810.
  4. 4é. - Cultura biologicamente pura, caracterizada por ser de Ac tinomadura f i brosa sp. nov. NRRL 18348, ou de um seu mutante produtor de A62S1Õ.
  5. 5â. - Processo para a anticoccídica caracterizado por se AS2810, de acordo c.om qualquer uma segundo componente seleccionado de preparação de uma composição incluir na rierida composição das Reivindicações 1 a 3, e um entre o grupo que consiste em:
    a) nicarbazina;
    b) 4,4'-dinitroe arbani1 ida;
    c> uma naftalenamina com a fórmula:
    D ORIGINAL
    NO:
    R! em que:
    ou C,-C 1 ‘
    FT é Cj-C^ alquilo;
    R‘~’ b haloqénio, C -C, 1 4 fluo r o a. 1 q u. i 1t i o ;
    .4 fluoroalquilo, C -C fluoroalco: I 4
    R é haiogenio;
    R é hidrogénio ou halogênio; m é 0 , 1 ou 2; e n é 0 ou 1 ;
    desde que, quando existe um substituinte de k , elt tue numa posição diferente da posição 2;
    d) uma benzenamma seleccionada de entre 2,4-dinitro-N - Γ. 4 - ( tr i f 1 uorometoxi ) f en i 1 3-6- (tr i f 1 liorometi 1 ) benzenamina ,
    2,4-d ini tro-N-C 4-(1,1,2,2- te traf 1 uoroeto:·. i ) - f en i 1 3 -6- ( tr i f 1 uorome t. i 1 ) ben z en ami na ou 2 ,, 4-d i n i tro-N- C 4- ( pen t a f 1 uoro-etox i)fen i 1 3 -6-(trifluorometi1)-ben zenamina;
    e) meticlorpindol; ou
    BAD ORIG.
    104
    f) um sal farmaceuticamente aceitável de um composto (a>—(e>; estando os componentes presentes nos alimentos em quantidades tais que, em combinação, sejam sinérgicos com pelo menos uma estirpe de Eimeria causadora de coccidiose.
  6. 6â. - Processo de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por se preparar uma composição anticoccídica que compreende como ingredientes activos A82810, ou um seu sal agronomicamente aceitável, e 2,4-dinitro-N-C4-(1,1,2,2-tetraf1uoroetoxi)feni11-6-(trifluorometi1)benzenamina ou um seu sal agronómicamente aceitável.
    Lisboa, 2 de Maio de 1988
    I—Ί .
    j. pereira da cruz toante Oficial <Sa l^uatríal . /'''on'·, ,1 ' 3 - A.
    RUA VIU I V. . U~·
    1200 U3E0A
    4L
    RAO ORIG
    FOLHA 1 (8 FOLHAS)
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