HU204893B - Process for producing polyether antibiotics and pharmaceutical compositions comprising same - Google Patents
Process for producing polyether antibiotics and pharmaceutical compositions comprising same Download PDFInfo
- Publication number
- HU204893B HU204893B HU892064A HU206489A HU204893B HU 204893 B HU204893 B HU 204893B HU 892064 A HU892064 A HU 892064A HU 206489 A HU206489 A HU 206489A HU 204893 B HU204893 B HU 204893B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ppm
- antibiotic
- dinitro
- phenyl
- compound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/445—The saccharide radical is condensed with a heterocyclic radical, e.g. everninomycin, papulacandin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/03—Actinomadura
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Anti-Oxidant Or Stabilizer Compositions (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
A találmány új poliéter-antibiotikumok előállítására vonatkozik. Közelebbről tárgya az A82810 antibiotikumnak egy új mikroorganizmussal vagy mutánsával végzett fermentáció útján történő előállítására, valamint egyes származékai kémiai úton történő előáll!- 5 tása.
Az állategészségügy területén nagy szükség van hatásos anyagokra. Az antibiotikumok továbbra is jelentős szerepet töltenek be az állategészségügyi készítmények között, nemcsak betegségek kezelésével kapcso- 10 latban, hanem a tömeggyarapodásnak az állatokban való elősegítése szempontjából is. Az antibiotikumok oly módon segíthetik elő a növekedést, hogy csökkentik a megbetegedéseket vagy növelik a takarmányhasznosítás hatásfokát 15
A kokcidiózis olyan betegség, amely komolyan befolyásolja a baromfiipart A kokcidiózis egy vagy több Eimeria vagy Isospora fajtával való fertőzés eredménye. Akokcidiózissal összefüggő folytatódó gazdasági veszteségek következtében továbbfejlesztett antikokéi- 20 diális szerekre van szükség.
Az állattartási tudomány egy másik, gazdasági szempontból kívánatos célja a növekedésnek a takarmányhasznosítás hatékonyságának növelése útján történő elősegítése. Ez a típusú növekedésgyorsítás 25 különösen fontos a kérődzők - pl. a szarvasmarha és az egygyomrú állatok, pl. a baromfi és a sertés . esetében.
A poliéter-antibiotikumok az antibiotikumok olyan csoportját képezik, amely különösen fontossá vált az 30 állategészségügy területén. A poliéter típusú monenzim pl. értékes kereskedelmi termék; felhasználták mind a kokcidiózis baromfiban való kezelésére, mind a takarmányhasznosítás hatásfokának növelésére állatokban. 35
A találmány tárgya eljárás egy A82810-nek nevezett poliéter-antibiotikum előállítására.
Westley (J. W. Westley: Poíyether Antibiotics; Naturally occuning Acid Ionophores, Vol. 2, Chemistry. M. Dekker, New York, 1983) az ismert poliétereket ősz- 40 tály és típus szerint sorolja be. Westley rendszerének alkalmazásával az A82810 a poliéterek csoportjának lb osztályába és ennek (1) típusába tartozó új tag, mivel spiroketális rendszert tartalmaz. E csoport többi tagja pl. az A80190 (4 582 822 sz. amerikai egyesült 45 államokbeli szabadalmi leírás); az A-28695 A és B (3 839 558 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás); az A2041 és H (3 705 238 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás); az A-32887 (4133 876 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás); a 50 karriomicin, éteromicin; a CP-47 434; RP37454 és az X-14868 antibiotikum.
így a találmány egyik tárgya eljárás az (I) általános képletű A82810 vegyület - ahol R hidrogénatom ennek származékai - ahol R jelentése -CONHRi-cso- 55 port és Rj jelentése monohalogén-fenil-csoport- és az A82810 vegyület szabad hidroxicsoportján képzett 1-4 szénatomos alkanoilszármazékainak és az (I) általános képletí vegyületek bázisokkal alkotott sóinak előállítására. 60
Az A82810 antibiotikumnak tulajdonított (I) szerkezet tömegspektrometriás méréseken és NMR-vizsgálatokon alapul. Az A82810 jellemzői (szabad sav alakban) a következők:
halmazállapota: fehér kristályok.
Op.: 69-71 ’C.
pKa=6,6 (80%-os dimetil-szulfoxidos oldat).
[a]& D: -7,35’ (c-1, MeOH).
Molekulatömege: 842 (íérdeszorpciós tömegspektrometria).
Tapasztalati képlet: C45H78O14.
UV: csakvégabszoipció.
IR (CHCI3); az 1. ábra a következő frekvenciákon (cm4) mutat abszorpciót: 3020, 2977, 2935, 2880, 1726,1458,1379,1206,1164,1146,1115,1104,1094, 1073,1050,1025,1006,991,980 és 946.
Oldhatóság: oldhatatlan vízben; oldható rövid szénláncú alkoholokban, így metanolban, ketonokban, így acetonban, észterekben, így etil-acetátban, halogénezettszénhidrogénekben, így kloroformban és szénhidrogénekben, benzolban, toluolban és meleg hexánban, éterekben, így dietil-éterben.
Mint szerkezetéből kitűnik, az A82810 tartalmaz egy sók és észterszármazékok képzésére alkalmas savfunkciót és egy vagy két OH-csoporíot, amely észterezhető vagy éterszármazékokat képezhet.
Az (I) általános képletí vegyületek antibiotikumként és olyan szerként használhatók fel, amely növeli a takarmányhasznosítás hatásfokát
Az A82810 és származékainak sói egyrészt antibiotikumok elkülönítésére és tisztítására használhatók fel. Különösen hasznosak a gyógyászati szempontból elfogadható sók. A sókra például az A82810 és származékai alkálifém-, alkáliföldfém- és aminsói.
Az A82810 jellegzetes és megfelelő alkálifém- és alkáliföldfémsói közé tartozik a nátrium-, kálium-, lítium-, cézium-, rubidium-, bárium-, kalcium- és magnéziumsó. Az A82810 megfelelő aminsói közé tartozik az ammónium-, a primer, szekunder és tercier 1-4 szénatomos alkilammónium- és a hidroxi-(2-4 szénatomos)alkil- ammónium-só. Jellegzetesek pl. azok az aminsók, amelyek úgy képződnek, hogy az A82810-et ammónium-hidroxiddal, metil-aminnal, szek-butil-aminnal, izopropil-aminnal, dietil-aminnal, diizopropil-aminnal, etanol-aminnal, trietil-aminnal, 3-amino-l-propanollaI stb. reagáltatjuk.
Állatok kezelése esetében rendszerint nem nagy jelentőségű, hogy a szabad bázist vagy a vegyület egy sóját alkalmazzuk. Gazdaságossági okokból, egyszeri adagolás kedvéért vagy a toxicitás csökkentése miatt azonban választhatjuk a sóalakot.
A találmány tárgya - egyebek között - eljárás az A82810 előállítására, oly módon, hogy az Actinomadura fibrosa sp. nov. NRRL 18348 törzset vagy ennek egy A82810-et termelő mutánsát süllyesztett aerob fermentációs körülmények között tenyésztjük az A82810 antibiotikum előállítására, és kívánt esetben sót képzőnk. Az A82810-et poláris szerves oldószerekkel extraháljuk a felmentjéből és a micéliumból. Az A82810et elkülönítjük és különböző technikákkal, pl. oszlopkromatográfíával tovább tisztítjuk.
HU 204 893 Β
A találmány kidolgozása során az Actinomadura fíbrosa sp. nov. NRRL18348 biológiailag tiszta tenyészetét állítottuk elő. Egyszerűség kedvéért ezt a mikroorganizmust A82810.1-nek nevezzük. Az A82810.1 egy, a kiindulási törzsből (A82810 tenyészet) származik. Ezt a törzset egy talajmintából különítettük el, NyugatAfrikában.
Az A82810 antibiotikumot termelő mikroorganizmus tenyészetét a Northern Régiónál Research Centerben (Agricultural Research, North Cental Region, Peoria, Illinois) letétbe helyeztük és az így a tenyészetgyűjtemény részét képezi. A köz számára az NRRL 18348 számon számon szerezhető be.
A variáns rendszertani vizsgálatát F. P. Mertz (Lilly Research Laboratories) végezte el. Ezen vizsgálatok alapján az új mikroorganizmust az Actinomadura genushoz tartozó új fajként osztályoztuk, és neveként az „Actinomadura fibrosa sp. nov.” kifejezést javasoltuk. Ez az osztályozás hasonló fajokkal való laboratóriumi összehasonlításon, valamint az A82810.1 és hasonló fajok jellemzői összehasonlításán alapul, amely utóbbiak a közzétett leírásokból váltak ismertté.
Alkalmazott módszerek
Ezeket a vizsgálatokat olyan eljárások alkalmazásával végeztük, amelyeket az International Strepíomyces Project (ISP) javasol a Streptomyces fajták jellemzésére (Ε. B. Shirling, D. Gottlieb: Methods fór Characterization of Streptomyces Species, Int. J. Syst. Bacteriol. 16, 313-340, 1966), valamint a Gordon által közölt módszereket alkalmaztuk (R. E. Gordon és munkatársai, Nocardia coeliaca, Nocardia autotrophica, and the Nocardia Strain, Int. J. Syst. Bacteriol. 24, 54-63, 1974).
A keményítőhidrolízist úgy vizsgáljuk, hogy ISP No.4 lemezeken (szervetlen só - keményítőagar) jóddal meghatározzuk, hogy van-e jelen keményítő.
A NaCl-toleranciát úgy mérjük, hogy a kívánt koncentráció eléréséig NaCl-ot adunk ISP No.2 agárhoz.
A színek megnevezésére, ill. a légmicélium és a fonákoldal színének leírására a következő kézikönyveket használtuk:
- ICSS-NBS Centroid Color Charts, Standard Sample
No. 2106 (National Bureau of Standards, 1958, U. S.
Department of Commerce, Washington, D. C.) és
- The Color Haimony Manual (4. kiadás, Container
Corporation of America, Chicago, Illinois, 1958).
A morfológiát optikai fénymikroszkóppal és pásztázó elektronmikroszkóppal (SEM) tanulmányoztuk.
A teljes sejtek hidrolizátumaiban a diamino-pimelinsav (DAP) izomerek mennyiségét Becker és munkatársai (B. Becker és munkatársai, Rapid Differeníi; ation between Nocardia and Streptomyces by Paper Chromatography of Whole-cell Hydrolysates, Appl. Microbiol. 12, 421-423, 1964) és Lechevalier (Μ. P. Lechevalier, Identification of Aerobic Actinomycetes of Clinical Importance, J. Láb. Clin. Med. 71, 934— 944, 1968) kromatográfiás módszerével határoztuk meg.
Az antibiotikumokra való rezisztenciát úgy mértjük, hogy az antibiotikum-érzékenység vizsgálatára szolgáló korongokat vittünk fel beoltott ISP No.2 agarlemezekre. A rezisztenciát (+)-nak tekintettük, ha nem volt megfigyelhető gátlási zóna és (-)-ként minősítettük, ha gátlási zóna megfigyelhető volt.
A mikolsavakat a Minnikin (D. E. Minnikin és munkatársai, Differentiation of Mycobacterium, Nocardia and Related Taxa by Thin-Layer Chromatographic Analysis of Whole-organism Methanolysates, J. Gén. Microbiol. 88, 200-204, 1975) által leírt technikán alapuló módszerrel határoztuk meg.
A foszfolipidek meghatározására a következő módszereket alkalmaztuk:
1) Μ. P. Lechevalier and H. Lechevalier, University Laboratory Approach, kiadó Dietz and Thayer, Spec. Publ. No.6, Soc. Ind. Microbiol., Arlington, 1980, p. 277-284;
2) D. E. Minnikin és munkatársai, Thin-Layer Chromatography of Methanolysates of Mycolic Acid - containing Bacteria, J. Chromatogr. 188, p. 211— 233,1980 és
3) J. C. Dittmer and R. L. Lester, A Simple, Spéciik Spray fór the Detection of Phospholipids on ThinLayer Chromatograms, J. Lipid Research 5, 1, p. 126-128,1964.
A menakinon-összetételt a következő eljárásokkal határoztuk meg:
1) R. M. Kroppenstedt, Chemical Methods in Bacterial Systematics, kiadó M. Goodfellow - D. E. Minnikin, 1985, p. 173-196 és
2) M. D. Collins, ibid, p. 267-285.
A zsírsavelemzést a HP 5898A Microbial Identification System (L. Miller-T. Bergen Bacterial Identification by Gas Chromatography of Whole Cell Fatty Acids, Hewlett-Packard Application Note 228-41,1985, p. 8) felhasználásával végeztük. A zsírsav-metil- észtereket azonos körülmények között tenyésztett liofilizált teljes sejtekből állítottuk elő.
A 7. ábrán bemutatott dendrogram - amelyet számítógéppel szerkesztettünk - az euklideszi távolságokon alapul.
A 8. ábrán bemutatott fő komponenselemzés kétdimenziós; ezt ugyancsak számítógéppel szerkesztettük.
Tenyésztési jellemzők
Az A82810.1 tenyészet komplex és mesterséges (jól definiált) táptalajokon egyaránt jól növekszik. Légmicélium azonban csak ritkán képződik, kivéve az ISP No.2 közeget, a Bennet’s agart és a paradicsompépzabliszt (TPO) agart. Ha képződik, a lég- spóratömeg színe rózsaszín-fehér. A fonákoldal barnásvörös - jellegzetes vöröses-narancs színű. Oldható pigment általában nem figyelhető meg. Az A82810.1 tenyészetének jellegzetes tulajdonságait az 1. táblázatban foglaljuk össze.
HU 204893 Β
I. táblázat
Az A82810 tenyésztési jellemzői különböző agartáptalajokon1
| Agartáptalaj | Az A82810.1 jellemzői6 |
| ISPNo.2 | bőséges 55.s.Br bőséges; b fehér világosbarna |
| ISPNo.3 | jő 39.gy.iO nyomokban; rózsaszín nincs |
| ISPNo.4 | bőséges 43.m.rBr nyomokban; rózsaszínű nincs |
| ISPNo.5 | bőséges 37.m.rO nincs nincs |
| ISPNo.7 | bőséges 43jmrBr nincs nincs |
| ATCC No. | 172 jő 39.gy.rO nyomok: 5cal.y; rózsaszín nincs |
| Benett-f. agar | bőséges 42.I.rBr jó; fehér nincs |
| Emerson | bőséges 54.brO nyomok; fehér nincs |
| Glükóz-aszparagin | bőséges 39.gy.rO nyomok; 5cal.y; rózsaszín nincs |
| Jensen-f. agar | megfelelő 39.gy.rO nyomok; fehér nincs |
| Tápagar | jó 53an.O nincs nincs |
| Burgonya-sárgarépa | jó 39.gy.rO nyomok; fehér nincs |
| TPO-agar | bőséges 58jn.Br jó; 5cb gy.y.; rózsaszín nincs |
| Czapek-f. agar | jó 43.m.rBr jő; fehér nincs 1 |
A jelölések magyarázata:
130 °C-on 14 napon át tenyésztve b az adatok sorrendje: növekedés fonák légmicélium oldható pigment
Morfológiai jellemzők
Az A82810.1 tenyészetre bőséges szubsztrát-micéli10 um jellemző. A léghifák szokatlanok. Fénymikroszkóppal és SEM-mel megvizsgálva nem figyelhető meg spórákká való szegmentáció. A hifák láthatóan teljesen asporogének. Könnyen észlelhető, hogy számos hifaköteg vastag szálakat képez. Egyes ilyen léghifák rövid 15 csomókat vagy kacsokat képeznek, amelyek kissé hasonlóak a spórákhoz. SEM-mel végzett vizsgálat arra mutat hogy ezek a szerkezetek nem valódi spórák. Esetenként más szálas szerkezetek figyelhetők meg. Ezek a szerkezetek, a léghifák általános szálas megje20 lenéséhez hozzájárulva, képezték az alapot arra, hogy a fajtának a fíbrosa (szálas) nevet adjuk.
Fiziológiai jellemzők
Azk82%lOA tenyészet savat termel a kővetkező szén25 hidrátokból: adonit; L-arabinóz; cellobiőz; fruktóz; galaktóz; glükóz; glicerin; glikogén; Iaktőz; maltóz; mannőz; ramnóz; ribóz; szacharóz; trehalózés xilóz.
- Az A82810.1 nem termel savat a következő vegyületekből: D-arabinóz; cellulóz; dextrin; dulcit; etanol; erit30 rit; inozit; inulin; manóit; melicitóz; melibióz; alfa-metilD-glükozid; raffínóz; szalicin; szorbít; szorbóz és xilit.
Az A82810.1 tenyészet hasznosítja a következő szerves savakat (nátriumsóként): acetát, butirát, propionát és piruvát Nem hasznosítja a benzoátot, citrátot, 35 foimiátot, laktátot, malátot, mukátot, oxalátot, szukcinátotés tartaráfot
Az A82810.1 elbontja a kazeint, elasztint, eszkulint, hipoxaníint, keményítőt, tesztoszteront, tirozint és a karbamidot, de nem bontja el az adenint, allantoint, 40 kalcium-malátot, guanint, hippurátot és a xantint.
Az A82810.1 termel katalázt, foszfatázt és ureázt; elfolyósítja a zselatint, hidrolizálja a lefölözött tejet és 50 °C-on 8 órán át életképes marad. Nem termel melanoid pigmenteket vagy H2S-ot; nem redukálja a nitráto45 kát és nem peptonizálja a lefölözött tejet.
Az A82810.1 rezisztens a cefalotinre (30 pg), linkomicinre (2 pg), penicillin G-re (10 egység), rifampinre (5 pg) és a lizozimre (50 pg/ml). Érzékeny bacitracinra (10 egység), gentamicinre (10 pg), neomicinre (30 pg), 50 oleandomicinre (15 pg), streptomicinre (10 pg), tetra ciklinre (30 pg), tobramicinre (10 pg) és vankomicinre (30 pg).
Az A82810.1 tenyészet a 20-45 °C hőmérséklet-tartományban növekszik. Az optimális növekedési hő55 mérséklet láthatóan 37 ’C, A tenyészet max. 5% NaClkoncentrációt visel el.
Sejtfalelemzés
A hidrolizált teljes sejtek mezo-diamino-pimelinsa60 vat tartalmaznak. A teljes sejtek kivonataiban a követ4
HU 204 893 Β kezd cukrok mutathatók ki: galaktóz, glükóz, mannóz, maduróz és ribóz. így az A82810.1 HL típusú sejtfallal és B típusú cukormetabolizmussal (Μ. P. Lechevalier and H. Lechevalier: Chemical Composition as a Criterion in the Clasifícation of Aerobic Actinomycetes, Int. J. Syst. Bacteriol. 20, p. 435-443,1970).
Mikolsavak nem mutathatók ki.
A teljes sejtekkel végzett foszfolipid-meghatározások foszfatidil-inozit, difoszfatidil-glicerin és GluNu (egy ismeretlen szerkezetű, glükóz-amint tartalmazó vegyület) jelenlétére mutatnak. Sem foszfatidil-etanol-amin, sem foszfatidil-kolin nem mutatható ki. Az A82810.1 tehát IV típusú foszfolipid összetételű (Μ. P. Lechevalier és munkatársai, Phospholipids in the Taxonomy of Actinomycetes. Actinomycetes, Zbl. Bakt. Suppl. 11, G. Fischer Verlag, Stuttgart-New York, 1981).
Az A82810.1-ben kimutatott menakinonok hexahidrogénezett vegyületek, amelyek 9 izoprén egységet MK-9(He) - és kisebb mennyiségű oktahidrogénezett terméket - MK-9(Hg) - tartalmaznak.
AzA82810.1 törzs azonosítása
A kemotaxonomikus tulajdonságok és a tenyésztési, ill. a morfológiai jellemzők alátámasztják azt a véleményt, hogy az izolált A82810.1-et az Actinomadura genusba kell sorolni (B. D. Skerma és munkatársai, Approved Lists of Bacterial Names, Am. Soc. Microbiol., Washington D. C., 1980).
Actinomadura nemzetséghez tartozó 23 fajtípus-törzset tenyésztettünk, 21 különböző agartáptalajon, az A82810.1 törzs mellett. Összehasonlítottuk a tenyésztési és a morfológiai jellemzőket. Az A82810.1 a következő tenyészetekhez mutat hasonlóságot: A. coerulea, A. madurae, A. pulveraceus, A. reseorufa, A. rabra, A. salmonea és A. verracosospora.
Az irodalomból összegyűjtöttünk ennek a 7 fajnak a biokémiai jellemzőit és - táblázatot állítva össze a hasonlósági együtthatókból - összehasonlítottuk azokat az A82810.1 jellemzőivel. A Jaccard-együtthatót (Sj) és az egyszerű megfelelési együtthatót (Ssm) használtuk ennek során (W. Kurylowicz és munkatársai, Numerical Taxonomy of Streptomycetes. Polish Medical Publishers, Varsó, 1975, p. 37).
Ezeket az adatokat a II. táblázatban foglaljuk össze.
II. táblázat
Az A82810.1 és több Actinomadura faj össze hasonlítása a hasonlósági együtthatók segítségéve?
| Tenyészet | Sí | Ssm |
| A82810.1 | 100 | 100 |
| A. verracosospora | 72 | 81 |
| A. madurae | 73 | 79 |
| A. salmonea | 70 | 78 |
| A. rabra | 70 | 76 |
| A. roseorufa | 60 | 75 |
| A. pulveraceus | 59 | 74 |
4 Az A. coeralea-ra vonatkozó adatok nem álltak rendelkezésre.
Ezekből a tenyészetekből származó teljes sejtekkel elvégeztük a zsírsavelemzést. Az ezen adatok alapján kapott dendrogramot és egy fő komponensekre vonatkozó elemzés eredményeit a 7., ill. 8. ábrán mutatjuk be.
A hasonlósági együtthatók és a zsírsavelemzés eredményei arra mutatnak, hogy a 7 ismert és összehasonlított faj közül az A82810.1 legtöbb jellemzője közös az A. pulveraceus és az A. verracosospora tulajdonságaival. A hasonlóság azonban nem elégséges ahhoz, hogy az A82810.1-et bármelyik fajhoz tartozó törzsnek tekinthessük. A HI. táblázat az A82810.1 és az említett két faj közötti különbségeket mutatja be.
HL táblázat
Különbségek az A82810.1, az A. pulveraceus és az A. verracosospora között
| Tulajdonság A82810.1 | A. pulve- A. verraco | ||
| raceus | sospora | ||
| ureáztermelés | + | ||
| guanin-hidrolízis | - | NDa | + |
| keményítőhidrolízis | + | + | - |
| savtermelés a | |||
| következőkből: | |||
| L-arabinóz | + | - | + |
| dextrin | - | ND | + |
| ffuktóz | + | - | + |
| inozit | - | + | - |
| laktóz | + | - | + |
| mannit | - | - | + |
| mannóz | + | - | - |
| trehalóz | + | - | + |
| Na-acetát-hasznosítás | - | + | ND |
| növekedés 45 °C-on | + | - | - |
| spórák jelenléte | - | + | + |
| kékesszürke spóra-szín | - | + | - |
| rezisztencia | |||
| oleandomicinre | - | ND | + |
| (16 pg) | |||
| penicillin G-re | + | ND | - |
| (10 egység) | |||
| 5% NaCl-tűrés | + | ND |
aND-nem határoztuk meg
Ez a vizsgálat tehát azt a következtetést támasztja alá, hogy az A82810.1 egy új Actinomadura faj. Ez okból az A82810.1 tenyészetet Actinomadura fibrosa sp. nov.-ként neveztük el. A latin jelző - „fibrosa” - a léghifák szálas megjelenésére utal.
Mint más organizmusok esetében, úgy a találmány szerinti Actinomadura fibrosa sp. nov. NRRL 18348 A82810-termelő tenyészetének jellemzői is változá5
HU 204 893 Β soknak vannak kitéve. A törzs mutánsait a szakember számára ismert módszerekkel állíthatjuk elő. Ilyen pl. a különböző fizikai és kémiai mutagénekkel (pl. UVfény, X-sugár, gamma-sugár) és vegyszerekkel - pl. N-metil-N’-nitro-N-nítrozo-guanidinnel végzett ke- 5 zelés. Az Actinomadura fibrosa sp. nov. NRRL18348 olyan természetes és indukált mutánsainak alkalmazását, amely mutánsok megőrzik az A82810-termelés tulajdonságát, a találmány részének tekintjük.
Az Actinomadura fibrosa tenyésztésére szolgáló kö- 10 zeget számos táptalaj’ közül választhatjuk ki. Bizonyos táptalajokat azonban előnyben részesítünk, a termelés gazdaságossága, az optimális kitermelés és a termék elkülönítésének egyszerűsége miatt. így pl. a nagy volumenű fermentációban kitüntetett szénhidrátforrás a 15 glükóz és a burgonya-dextrin, bár használhatunk ribőzt, xilózt, fruktózt, galaktózt, mannózt, mannitot és hasonlókat is.
Kitüntetett nitrogénforrás az enzimmel hidrolizált kazein és élesztő, de használható a májliszt, az étkezési 20 peptonok, a halliszt és a hasonló anyagok is. A táptalajhoz adhatunk szervetlen íápsókat; ezek a szokásos oldható sók, amelyek cink-, nátrium-, magnézium-, kalcium-, ammónium-, klorid-, karbonát-, szulfát-, nitrátstb. ion leadására képesek. 25
A táptalajnak tartalmaznia kell az organizmus növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges nyomelemeket is. Ezek a nyomelemek a táptalaj többi komponensében szennyezésként rendszerint megfelelő mennyiségben fordulnak elő ahhoz, hogy fedezzék az 30 organizmus növekedési igényeit. A habzás általában nem okoz problémát, de szükség esetén kis mennyiségben (0,2 ml/liter) egy habzásgátló szert, pl. polipropilénglikolt adhatunk a nagy térfogatú fermentációs közeghez. 35
Jelentős mennyiségű A82810 antibiotikum előállításához előnyben részesítjük a tankokban végzett süllyesztett aerob fermentációt. Rázott lombikos tenyésztéssel kis mennyiségben állítható elő az A82810.
Mivel az antibiotikum-gyártásban általában lag-fázis 40 lép fel abban az esetben, ha a nagy tankokat az organizmus spóraalakjával oltjuk be, előnyös a vegatatív inokulum alkalmazása. A vegatatív inokulum úgy állítható i elő, hogy kis térfogatú táptalajt inokulálunk az organiz- i mus spóraalakjával vagy micélium-fragmentumával; 45 j így az organizmus friss, aktívan növekvő tenyészetéhez jutunk. A vegetatív inokulumot ezután egy na- j gyofab tankba visszük át. A vegatatív inokulum táptala- 1 ja azonos lehet azzal, amelyet a nagyobb térfogatú fermentációhoz használunk, de más táptalajok ugyan- 50 1 csak megfelelők. i
Az A82810-et az A82810-termeIő törzs kb. 25 és i kb. 40 ’C közötti hőmérsékleten való tenyésztés so- r rán termeli. Az A82810 termelés optimális hőmérsék- z lete 34-36’C. 55 z
Mint ez a süllyesztett aerob tenyésztéses eljárások- é bán szokásos, a tankba alulról steril levegőt fúvatunk v be, miközben a táptalajt a szokásos turbókeverökkel kevertetjük. A fermentáció maximális oxigénigénye á az eddig alkalmazott körülmények között max. kb. 60 £
0,35 mM/liter/perc. Egy 165 literes, kb. 115 liter feimentlevet tartalmazó, teljes térfogatában kevertetett fermentorban a 0,125 vlvlperc levegőztetési sebesség, 300 ford/perc keverési sebesség mellett, 5 elégséges, ahhoz, hogy az oldott oxigén szintjét 34 kPa nyomás mellett 45%-os levegőtelítettségnek vagy ennél magasabb értéknek megfelelő szinten tartsa.
Az A82810 antibiotikum termelése a fermentáció 0 alatt oly módon követhető, hogy a fermentléböl mintát veszünk és meghatározzuk ennek antibiotikus aktivitását olyan organizmusokkal szemben, amelyekről ismert, hogy az antibiotikumra érzékenyek. Az A82810 meghatározásában egyik hasznos tesztorga5 nizmus a Bac. subtilis ATCC 6633. A biológiai vizsgálatot előnyösen az agardiffúziós eljárással végezhetjük.
A süllyesztett aerob fermentációs körülmények között való képződést követően az A82810 a fermentá) ciós szakterületen alkalmazott módszerekkel nyerhető ki a fermentációs közegből. Az A82810-teimelő organizmussal végzett fermentáció során képződő antibiotikus aktivitás jelen van mind a szúrt fermentlében, mind a micéliumtőmegben. A maximális A82810 > kitermelést azonban úgy érhetjük el, hogy először megszűrjük a fermentlevet, a folyékony fázis és a micéliumtömeg szétválasztására. A szűrt fermentlevet és a micéliumtömeget ezután külön-külön tisztíthatjuk, a bennük lévő megfelelő A82810 mennyiség kinyerésére. Ezen tisz-títás során számos különböző technika alkalmazható. A szűrt feimentlé tisztítására kitüntetett megoldás a kb. 9 pH-ra való beállítás, és extrahálás megfelelő oldószerrel, pl. etil-acetáttal. Az extraháló oldószer ezután vákuumban ledesztillálható és így megkapjuk a feimentlében jelen volt A82810 hányadot.
A micéliumtömeg tisztítására kitüntetett módszer szerint az elkülönített, micéliumból álló szűrőlepényt egy megfelelő oldószerrel, pl. acetonnal extraháljuk. Az extraháló oldószert ezután vákuumban ledesztilláljuk; így tömény vizes oldatot kapunk. Ezt a vizes oldatot ezután kb. 9 pH-ra állítjuk be, és megfelelő oldószerrel, pl. etil-acetáttal extraháljuk. Az extraháló oldószert vákuumban ledesztilláljuk, és így kinyerjük a micéliumfázisban jelen levő A82810-et.
A szúrt fermentléböl, ill. a micéliumból kinyert A828l0-et hasonló eljárásokkal tovább tisztíthatjuk. Kitüntetett eljárás a szilikagél-kromatográfia.
Egy másik megoldás szerint a tenyészetben jelen levő szilárd anyagok, ideértve a táptalaj komponenseit és a micéliumot, extrakciő vagy elkülönítés nélkül is felhasználhatók (de előnyösen a víz eltávolítása után) A82810 forrásként. Az A82810 termelés befejeződése után pl. a teljes feimentlé beszárítható liofilizálással, dobszárítással, vagy azeoírop desztillációval és szárítással. A szárított fermentátumot azután közvetlenül hozzáadhatjuk a takarmány-premixhez.
Az (T) általános képletű vegyületek alkálifém- és alkáliföldfém (kationos) sóit az ilyen sók előállítására általában alkalmazott eljárások szerint állítjuk elő. Az
HU 204 893 Β
IV. táblázat
Az A82810 antibiotikum in vitro antibakteriális aktivitása
A8281O szabad sav pl. feloldható egy megfelelő oldószerben, pl. acetonban; ehhez az oldathoz 1/3 térfogatoyi vizet adunk és ezt az oldatot kb. pH 9-10-re állítjuk be a kívánt kationos sónak megfelelő bázissal (amilyen pl. a NaOH, KOH). Az így képződött só rutineljárásokkal - pl. szűréssel vagy az oldószer ledesztillálásával - különíthető el.
A sóképzésre egy kitüntetett módszer szerint úgy járunk el, hogy az A82810-et (savas alak) egy vízzel nem elegyedő oldószerben, pl. etil-acetátban oldjuk, hozzáadunk azonos térfogatú vizet, és a keveréket pH= 10-re állítjuk be a megfelelő kationok bázissal (pl. NaOH-dal, KOH-dal stb.). Az elkülönített szerves fázist vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot dioxánból liofilizáljuk. A só egy megfelelő oldószerből, pl. hexánból kristályosítható.
A szerves amínokkal képzett sókat hasonló módon állíthatjuk elő. Az A82810-et pl. megfelelő oldószerben, így acetonban oldhatjuk, és ehhez az oldathoz hozzáadhatjuk a gáz alakú vagy cseppfolyós amint. Az oldószer és az aminfelesleg desztillációval eltávolítható.
Az A82810 vegyület 1-4 szénatomos alkanoil-észtereit pl. úgy állítjuk elő, hogy az A82810-et egy megfelelő savanhidriddel vagy savkloriddal kezeljük. Az észterezés az A82810 egyik hidroxilcsoportján következik be. Hyen észtereket jellegzetes módon úgy állítunk elő, hogy az A82810-et pl. a megfelelő savanhidriddel szobahőmérsékleten reagáltatjuk.
A találmány tárgya továbbá eljárás az (I) általános képletű uretánszármazékok előállítására, amely abból áll, hogy az A82810-et vagy egy sóját egy (H) általános képletű izocianáttal reagáltatjuk - amelyben Rí jelentése az előbbiekben megadott - amely képes az A82810 uretánszármazékának előállítására.
Előnyösen az A82810 egy sóját, pl. különösen a nátriumsót alkalmazzuk. Az izocianátot enyhe feleslegben - pl. kb. 10% feleslegben - kell alkalmazni annak érdekében, hogy a monoszármazék optimális mennyiségben képződjék. A reakciót előnyösen egy közömbös oldószerben, így egy klórozott szénhidrogénben, pl. széntetrakloridban, metilén-kloridban vagy kloroformban végezzük, de étert, etil-acetátot vagy aromás szénhidrogén oldószert (így benzolt vagy toluolt) is alkalmazhatunk. A reakció hőmérséklete nem kritikus, de kb. 0 °C és a reakcióelegy forráspontja között helyezkedhet el. Előnyösen a reakciót szobahőmérsékleten végezzük.
Az (I) általános képletű vegyületek (A82810 vegyületek) antibakteriális és antikokcidiális aktivitással rendelkeznek. E vegyületek különösen aktívak anaerob baktériumokkal szemben. AIV. és az V. táblázatban foglaljuk össze azokat a minimális gátló koncentráció értékeket (MIC), amelyekben az A82810 gátolja a különböző baktériumokat, amint ezt a standard agarhígításos vizsgálattal meghatározhatjuk. A végpontokat 24 órán át tartó inkubálás után olvassuk le.
| Vizsgált organizmusok | MIC (mcg/ml) |
| Staphylococcus auieus XI. 1 | 1,0 |
| Staphylococcus aureus V41 | 1,0 |
| Staphylococcus aureus X400 | 1,0 |
| Staphylococcus aureus S13E | 1,0 |
| Staphylococcus epidermidis 270 | 1,0 |
| Staphylococcus epidermidis 222 | 0,5 |
| Streptococcus pyogenes C203 | 1,0 |
| Streptococcus pneumoniae Park 1 | 1,0 |
| Streptococcus faecium X66 | 1,0 |
| Streptococcus faecalis 2041 | 1,0 |
| Haemophilus influenzáé C.L. | 128 |
| Haemophilus influenzáé 76 | 64 |
| Escherichia coli N10 | 1,0 |
| Escherichia coli EC14 | 8,0 |
| Escherichia coli TEM | >128 |
| Enterobacter aerogenes C32 | 8,0 |
| Enterobacter aerogenes EB 17 | 8,0 |
| Klebsiella sp. | >128 |
| Salmonella sp. | >128 |
| Pseudomonas aeruginosa X528 | 2,0 |
| Pseudomonas aeruginosa X239 | 0,25 |
| Pseudomonas aeruginosa PS18 | >128 |
| Pseudomonas aeruginosa PS72 | 0,25 |
| Serratia marcescens X99 | >128 |
| Proteus sp. | >128 |
| Shigella sonnei | 2,0 |
| V. táblázat | |
| Anaerob baktérium-izolátumok érzékenysége az | |
| A82810 antibiotikumra | |
| Aerob baktériumok | MIC (mcg/ml) |
| Clostridium difiieile 2994 | 0,5 |
| Clostridium perfringens 81 | 0,5 |
| Clostridium septicum 1128 | 0,5 |
| Eubacterium aerofaciens 1235 | <0,25 |
| Peptococcus asaccharolyticus 1302 | <0,25 |
| Peptococcus prevoti 1281 | <0,25 |
| Peptostieptococcus anaerobius 1451 | <0,25 |
| Peptosüeptococcus intermedius 1624 | <0,25 |
| Propionibacterium acnes 79 | 2 |
| Bacteroides fragilis lll | 8 |
| Bacteroides fragilis 1877 | 8 |
| Bacteroides fragilis 1936B | 8 |
| Bacteroides thetaiotaomicron 1438 | 8 |
| Bacteroides melaninogenicus 1856/28 | 8 |
| Bacteroides melaninogenicus 2736 | 8 |
| Bacteroides vulgatis 1211 | 4 |
| Bacteroides corrodens 1874 | 8 |
| Fusobacterium symbiosum 1470 | 0,5 |
| Fusobacterium necrophorum 6054A | <0,25 |
HU 204893 Β
Az A82810 vegyületek jellemző fontos tulajdonsága az antikokcidiális aktivitás. Egy Eimeria tenella-val végzett in vitro szövettenyésztéses in vitro vizsgálatban az A82810 0,0025 pg/ml-nél kisebb koncentrációban, a propionií-A82810 0,05 gg/ml koncentrációban és az acetiI-A82810 0,01 gg/ml koncentrációban bizonyult aktívnak.
A kokcidiózis baromfiban való kezelésére a fertőzött vagy fertőzésre érzékeny szárnyasoknak nem toxikus, antikokcidiálisan hatékony mennyiségű A828l0-et adagolunk, előnyösen orálisan, meghatározott napi időrendben. Az A82810 többféleképpen adagolható, de legelőnyösebben egy gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal együtt alkalmazhatjuk, célszerűen a szárnyasok tápjában. Bár a megfelelő A82810 koncentráció meghatározásához számos tényezőt figyelembe kell venni, az adagolt koncentráció általában a 0,5-100 ppm és előnyösen az 1-25 ppm (a tápban) tartományba esik.
A találmány egy másik tárgya eljárás a kokcidiózis kezelésére alkalmas készítmények előállítására. Ide tartoznak azok a készítmények, amelyek a kokcidiőzis kezelése szempontjából hatásos mennyiségű A82810-et tartalmaznak, egy megfelelő vivőanyaggal együtt.
Korábban számos vegyületről állapították meg, hogy szinergetikusan befolyásolja egy vagy több poliéter-antibiotikum antikokcidiális aktivitását A 4 218 438 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás pl. olyan antikokcidiális készítményeket ír le, amelyek nikarbazint v. 4,4’-dinitro-karbanilidet és poliéterantibiotikumokat tartalmaznak. Mások azt találták (1. a 4 764 534 és a 4 366 168 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást), hogy bizonyos naftalinaminok és benzaminok szinergetikusan befolyásolják egyes poliéter-antibiotikumok antikokcidiális aktivitását. A 4 061 755 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás olyan kokcidiocid készítményt ismertet, amely monenzint és metiklóipindolt tartalmaz.
A nikarbazint és a 4,4’-dinitro-karbanilidet a 2 731 382 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban írják le. A nikarbazin a 4,4’-dinifro-karbanilid és a 2-hidroxi-4,6-dimeíiI-pirimidin komplexe, de egyedül a 4,4’-dinitro-karbanilid mutat antikokcidiális hatást (Science 122, p. 244,1955).
A találmány szerinti A828I0 vegyületek ugyancsak szinergetikus hatást fejtenek ki az ilyen típusú vegyületekkel együtt alkalmazva. Ezért a találmány tárgya egyben eljárás olyan szinergetikus készítmények előállítására, amelyek
1) egy, az (I) általános képlet szerinti vegyületet vagy ennek egy gyógyászati szempontból elfogadható sóját és
2) a kővetkezőkben felsorolt vegyületek valamelyikét tartalmazzák:
aj egy (III) általános képletű nafialin-amin-vegyület- e képletben
R3 jelentése halogénatom vagy 1-4 szénatomos fluor-alkil-csoport,
b) egy benzamin, mégpedig a következők egyike:
- 2,4-dinitro-N-[4-(trifluor-meíoxi)-fenil]-6-trifluormetil-benzamin,
- 2,4-dinitro-N-[N-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6trifluor-metil-benzamin és
- 2,4-dinitro-N-[4-(peníafluor-etoxi)-fenil]-6-trifluor
-metil-benzamin; vagy
c) az a) vagy b) vegyületek közül bármelyiknek egy gyógyászati szempontból elfogadható sója.
A (ΠΙ) általános képletben az 1-4 szénatomos alkilcsoport metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, n-butil-, szek-butil-, izobutil-, terc-butil-csoportot jelent.
A „halogénatom” kifejezés fluor-, klór-, bróm- vagy 15 jódatomra vonatkozik.
Az 1-4 szénatomos fluor-alkil-csoport olyan 1-4 szénatomos alkilcsoport, amely egy vagy több fluoratommal helyettesített. Hyen fluor-alkil-csoport pl. a trifluor-metil-, 1,1,2,2-tetrafluor-etil-, pentafluor-etíl-, 20 1,2,3,3-tetrafluor-propil-, nonafluor-butil- stb. csoport.
Egy A82810 vegyület és a 2. a)-c) vegyületek keverékeiben a komponenseket olyan mennyiségben alkalmazzuk, amelyek egymással kombinálva legalább 1 kokcidiózist okozó organizmus tekintetében szinergeti25 kusak. A keverékekben használandó maximális menynyiségek általában azonosak azokkal a maximális menynyiségekkel, amelyeket az egyes komponensekből az antikokcidiális kezelés során felhasználunk. Az alsó határok általában alacsonyabbak, mint amekkorák az 30 egyes komponensekkel végzett kezelés során szükségesek. Ennek megfelelően a találmány gyakorlatban való alkalmazása során olyan keverékeket veszünk, amelyek
1.0,5-100 ppm A82810 vegyületet és 35 2. a) 1-1000 ppm (ΠΙ) általános képletű vegyületet, vagy
b) 1-125 ppm fentiekben meghatározott benzamint tartalmaznak.
Az A82810 vegyületek egy másik fontos tulajdonsága az a képességük, hogy javítják állatokban a takarmányhasznosítás hatékonyságát. Az A82810 vegyületek pl. javítják a takarmányhasznosítás hatásfokát kérődzőkben, amelyek kifejlett bendőfunkcióval rendelkeznek. A takarmány hatékonysága oly módon követhető, hogy megfigyeljük a propionátvegyületek képződését és meghatározzuk ezek koncentrációját a bendőben, az A. P. Raun (3 794 732 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) által leírt el50 járással (1. különösen az 5. példát). Az A82810 vegyületek jellegzetes módon hatásosak a propionátkoncentráció növelése területén és ennélfogva fokozzák a takarmányhasznosítás hatékonyságát kérődzőknek orálisan, kb. 0,02 mg/kg/nap-kb. 1,5 mg/kg/nap mennyiségben való bevitel esetén. Előnyös adagolási intervallum a kővetkező: kb. 0,05 mg/kg/nap - kb. 0,5 mg/kg/nap.
Egy kitüntetett beviteli mód szerint a vegyületet összekeverjük az állati takarmánnyal, de a vegyület bevihető más módokon is, pl. tabletták, bóluszok vagy
HU 204 893 Β kapszulák alakjában vagy az itatóvízben. Ezek a különböző adagolási formák az állatgyógyászati gyakorlatban jól ismert eljárásokkal állíthatók elő.
Az egyes egyedi adagolási egységek a találmány szerint előállított vegyületeket olyan mennyiségben kell, hogy tartalmazzák, amely közvetlenül megfelel annak a napi dózisnak, amely a kezelendő állat szempontjából megfelelő.
Takaimányhasznosítás fokozására: takarmányt és 240 gramm/tonna A82810 vegyületet keverünk általában.
A találmány egy további tárgya azzal függ össze, hogy az A82810 vegyületek felhasználhatók a sertésdizentéria kezelésére. Az A82810 igen alacsony dózisokban (1,56 μg/ml) gátolja a Treponema hyodysenteriae, a sertésdizentéria egyik kórokozójának növekedését. A sertésbe való bevitel egyik kitüntetett módszere az, amely szerint megfelelő mennyiségű A82810 vegyületet viszünk be egy takarmányadagba vagy az állat ivóvizébe. A megfelelő mennyiség attól függ, hogy a kezelés a fertőzés megelőzésére vagy gyógyítására irányul-e. A fertőzés megelőzéséhez általában kisebb koncentrációjú aktív vegyületre van szükség, mint a fertőzés megszüntetésére a már megbetegedett állatokban. Általában a kb. 20-kb. 100 g/tonna takarmány A82810 vegyületmennyiségek hatásosak a fertőzés megelőzésére. A kb. 100-kb. 500 g A82810 vegyület/tonna takarmánytartományba eső mennyiségeket a dizentéria által megtámadott sertések kezelésére javasoljuk. Ezek a mennyiségek kb. 1-kb. 5 mg/kg testtömeg/nap koncentrációt (megelőző kezelés) vagy kb. 5-kb.
mg/testtömeg kg/nap koncentrációt (fertőzött állatok kezelése) biztosítanak. Az ivóvízhez adagolva kb. 0,04-kb. 0,2 g (megelőző) vagy kb. 0,2-kb. 1 g (kezelésre szolgáló) mennyiségű A82810 vegyület alkalmazása javasolható, 1 gallon (4,54 liter) vízre számítva.
A sertésdizentéria kezelésére szolgáló takarmánykeverékek sertéstakarmányt és egy ilyen vonatkozásban hatásos mennyiségű A82810 vegyületet tartalmaznak. Mint ezt az előzőekben tárgyaltuk, a hatásos mennyiség jellegzetes esetben a 20-500 g A82810 vegyület/tonna takaimánytartományba esik.
Mint ezt az előzőekben leírtuk, az A82810 vegyületek aktívak anaerob baktériumokkal szemben, ideértve a Clostridium perfringenst. Az A82810 vegyületek ezért jó hatásúak lehetnek az enteritis csirkében, sertésben, szarvasmarhában és juhban való kezelésében vagy megelőzésében. Az A82810 vegyületek ugyancsak felhasználhatók az enterotoxémia kérődzőkben való kezelésére.
Az A82810 vegyületek antivirális aktivitással is rendelkeznek. Szövettenyésztési vizsgálatok pl. arra mutatnak, hogy az A82810 aktív a Herpes simplex (HSVI és II) vírusokkal szemben (igen alacsony koncentrációban, 1,56 μg/ml mellett) és a Friend-f. leukémiavírussal szemben, már 0,04 pg/ml koncentrációban. Más szövettenyésztési vizsgálatokban az A82810 aktív a Great Lakes és a Brazil influenza vírusokkal szemben, 250 pg/ml koncentrációban.
Az A82810 vegyületek ezenkívül bizonyos mértékű anthelmintikus hatással is rendelkeznek. In vitro vizsgálatokban pl. az A82810 (Na-só) gátolja a Caenorhabditis elegáns növekedését, 50 ppm koncentrációban (85%-os gátlás), 72 óra múlva mérve.
Az A82810 vegyületek az állatoknak orálisan vagy parenterálisan adagolhatok be. Bevihetők belélegeztetéssel is, azaz oly módon, hogy az antibiotikumot egy gyógyszerként kikészített por alakjában befújjuk egy olyan zárt térbe vagy helyiségbe, amelyben az állatokat, pl. a baromfiállományt tartjuk. Az állatok, pl. a baromfik belélegzik a levegőben levő, gyógyszert tartalmazó port; ez a gyógyszertartalmú por a szemen keresztül is bejut a szrvezetbe (ez az ún. intraokuláris injekciós eljárás).
Az A82810 vegyületek bevitelére a legcélszerűbb mód a takarmányadalékként való kikészítés. Számos takarmány alkalmazható, ideértve a közönséges száraz takarmányokat, folyékony takarmányokat és a pelletizált tápokat. Bár a kitüntetett beviteli mód szerint a vegyületet összekeverjük az állati takarmánnyal, bevihetjük ezt más úton is, pl. tabletta, bólusz, kapszula alakjában vagy az itatóvízben. Az egyes egyedi adagolási egységek olyan mennyiségű Á82810 vegyületet kell, hogy tartalmazzanak, amely közvetlenül megfelel a kezelendő állat szempontjából megfelelő napi dózisnak.
Jól ismertek azok a módszerek, amelyekkel a gyógyszerek állati tápok alakjában készíthetők ki. Egy kitüntetett módszer szerint koncentrált gyógy-premixet állítunk elő, amelyet a gyógyszert tartalmazó tápok előállítására használunk fel. Egy ilyen állati takarmány-premix, aktív komponensként
1) egy A82810 vegyületet vagy
2) egy fentebb tárgyalt, A82810-et tartalmazó szinergetikus készítményt tartalmaz, egy vagy több, állategészségügyi szempontból elfogadható vivőanyaggal együtt. A tipikus premixek 2-400 g/kg premix-mennyiségű gyógyszert tartalmazhatnak. A premixek folyékony vagy szilárd készítmények lehetnek.
Az állati, pl. baromfitakarmány végső összetétele attól függ, hogy milyen mennyiségű gyógyszert kívánunk bevinni. Az A82810 vegyületet tartalmazó tápok előállítására a tápok kikészítésére, keverésére és pelletizálására általánosan alkalmazott módszerek használhatók.
Az A82810 vegyületek parenterális bevitelre az állatgyógyászati gyakorlatban ismert módszerekkel készíthetők ki. Az A82810 vegyületeket tartalmazó hatékony injektálható készítmények, szuszpenziók vagy oldatok lehetnek. Oldat elkészítése esetén az A82810 vegyületet egy fiziológiailag elfogadható vivőanyagban oldjuk. Ilyen vivőanyag pl. egy megfelelő oldószer, tartósítószerek - szükség esetén - pl. benzil-alkohol és pufferek, A hasznos oldószerek közé tartoznak pl. az alkoholok, glikolok, vagy közömbös olajok, pl. növényi olajok vagy nagy tisztaságú ásványolajok.
Az injektálható szuszpenziós készítményeket úgy állítjuk elő, hogy egy, a vegyületet nem oldó közeget
HU 204893 Β alkalmazunk, vivőanyagként egy hatásfokozóval. A nem oldószer lehet pl. víz vagy egy glikol, pl. polietilénglikol.
Megfelelő, fiziológiailag elfogadható hatásfokozókra van szükség ahhoz, hogy a vegyületet a szuszpenziós készítményekben szuszpendálva tartsuk. A hatásfokozőkat a sűrítok, pl. a karboxi-metil-cellulóz, po]i(vinil-piiTolidon), zselatin és az alginátok közül választhatjuk ki. A vegyületek szuszpendálására számos felületaktív anyag is alkalmazható. Folyékony nem oldószerekben hasznos szuszpendálőszer a lecitin, az alkil-fenol-políetilén-dioxid-adduktumok, a naftalinszulfonátok, alkil-benzol-szulfonátok és a polioxietiIén-szorbitán-észterek.
Számos olyan anyag, amely befolyásolja a folyékony nem oldószer hidrofilitását, sűrűségét, és felületi nyomását, elősegítheti - egyes esetekben - injektálható szuszpenziók előállítását Szuszpendálőszerként hasznosak lehetnek, pl. a szilikon habzásgátlők, a glikolok, szorbitésacukrok.
Belélegeztetésre szolgáló köd vagy por előállításához - ha a vegyületeket ilyen módon kívánjuk bevinni - a vegyületeket jellegzetes esetben talkummal, diatómafőlddel vagy valamely más közömbös anyaggal, mint hatásfokozóval keverjük össze.
Az A82810 vegyületek rovarirtóként is felhasználhatók. Az A82810 pl. igen alacsony koncentrációban (100 ppm) aktív a déli selyemhernyó, a pókféreg és a dongó lárváival, és ugyancsak alacsony koncentrációban (50 ppm) a lódarázs lárváival szemben.
A találmány foganatosítási módjainak teljesebb bemutatására a következő példákat hozzuk fel.
l.példa
Az A828I0 előállítása 35
A) AzA82810 előállítása rázatott lombikban végzett fermentációval
A következő összetételű inokulum-táptalajt az Actinomadura fibrosa sp. nov. NRRL18348 tenyészetével oltjuk be, liofilizált pellet vagy folyékony nitrogénben 40 tartott szuszpenzió alakjában:
I. sz. inokulum-táptalaj
| Komponens | Mennyiség (%) | |
| glükóz | 1,0 | 45 |
| oldható keményítő | 2,0 | |
| élesztókivonat | 0,5 | |
| enzimes kazein-hidrolizátum | 0,5 | |
| (NZAmineA, Sheffield | ||
| Chem. Co.jNorwich, N. Y.) | 50 | |
| CaCO3 | 0,1 | |
| ionmentesített víz | 1 literre |
A táptalaj beállítás nélküli pH-ja 6,6; sterilizálás ' előtt NaOH-ot adagolunk a pH 7,2-re való emelésére; £ sterilezés után a pH 6,8.
Az inokulum-táptalajhoz 2% agart adva ferde agart tartalmazó kémcsöveket vagy lemezeket készítünk elő. A beoltott ferde agar tenyészeteket 10-14 napon át 30 ’C-on tartjuk. A spórák fellazítására az érett 6 agartenyészetet steril eszközzel kapargatjuk és a micélium-bevonatot eltávolítjuk és fellazítjuk. A spórák és a tenyészet kb. 1/4-ét használjuk fel 50 ml első fázisú inokulumtenyészet beoltására.
A beoltott első fázisú táptalajt 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban tenyésztjük 30 ’C-on 120 órán át egy olyan rázógépen, amely 250 ford/perc sebességgel 5,08 cm-es körpályát tesz meg.
0,4 ml ilyen beoltott első fázisú tenyészetet használunk fel 50 ml tenyészkőzeg beoltására, amely a következő összetételű:
L sz. termelő táptalaj
Komponens Mennyiség (1 literre) glükóz 5,0 g enzimes kazein-hidrolízátum 3,0 g (NZAmineA) élesztókivonat 5,0 g melasz 15,0 g
MgSCU (vízmentes) 1,0 g
CaCO3 2,0 g burgonya-dextrin 25,0 g metil-oleát 20,0 g hideg csapvíz 1 literre
Sterilizálás előtt a pH-t 5 N NaOH-dal 7,0-re állítjuk be.
A beoltott termelő táptalajt 250 ml-es széles szájú Erlenmeyer-Iombikban 9 napon át 32 ’C-on tenyésztjük olyan rázógépen, amely 250 ford/perc sebességgel 5,08 cm-es körpályát ír le.
B) ÁZÁ82810 előállítása fermentorban
Nagyobb mennyiségű inokulum előállítására 10 ml inkubált első fázisú közeget használunk fel, amelyet az A) pontban leírtak szerint állítottunk elő. Ezzel a mennyiséggel 400 ml második fázisú tenyészközeget oltunk be, amely ugyanolyan összetételű, mint az első fázisú táptalaj. Ezt a második fázisú vegetatív táptalajt 2 literes széles szájú Erlenmeyer-Iombikban inkubáljuk 72 órán át 30 ’C-on egy rázógépen, amely 250 ford./perc sebességgel 5,08 cm-es köröket ír le.
800 ml ilyen inkubált második fázisú vegetatív közeget használunk fel 115 1 steril termelő táptalaj beoltására (amelyet az A) pontban leírtak szerint állítunk elő azzal az eltéréssel, hogy habzásgátlót nem adagolunk). Az inokulált termelő táptalajt 9 napon át 34 ’C hőmérsékleten 165 literes kevertetett tankban fermentáljuk. A kevertetett tankban az oldott oxigénszintet 40%-os levegőtelítés feletti szinten tartjuk alacsony Ievegőztetési sebesség (0,20 térf./térf./perc) és alacsony kevertetési sebesség (150 ford./perc) alkalmazásával.
2. példa
Az A82810-et az 1. példa szerinti eljárással állítjuk elő, a következő különbségekkel a B) fázisban:
1) a második fázisú vegetatív táptalaj összetétele a következő:
HU 204 893 B
H. sz. második fázisú táptalaj
| Komponens élesztőkivonat | Mennyiség (g 5,0 |
| glükóz | 5,0 |
| burgonya-dextrin | 10,0 |
| MgSO4«7H2O | 2,0 |
| glicerin | 1,0 |
| ionmentesített víz | 1 literre |
A beállítás nélküli pH 6,5; pH-állítást nem végzünk; a sterilezés utáni pH 6,4; és
2) a termelő táptalaj a következő összetételű:
H. sz. termelő táptalaj
| Komponens | Mennyiség (g/1) |
| glükóz | 10,0 |
| sertésmájliszt | 15,0 |
| melasz | 5,0 |
| MgSO4»7H2O | 0,5 |
| kukorica-dextrin | 25,0 |
| csapvíz | 1 literre |
A beállítás nélküli pH 6,1; kb. 170 ml 5 N NaOH hozzáadásával a pH-t 7,0-re állítjuk be; a sterilizálás utáni pH 6,4.
Hozzáadott habzásgátló: Ság 471 (0,2 g/1) és P-2000 (0,1 ml/1).
3, példa
Az A82810-et az 1. példa szerinti eljárással állítjuk elő, a következő eltérésekkel:
1) az inokulum-táptalajok összetétele a következő:
II. sz. inokulum-táptalaj Komponens Mennyiség (g/1) triptikáz szójahúsleves 30 élesztőkivonat 3 glükóz 5 maltóz 4
MgSO4«7H2O 2 ionmentesített víz 1 literre
A pH értéke beállítás nélkül 7,0;
2) a beoltott első fázisú táptalajt 36 ’C-on 48 órán át ínkubáljuk;
3) az inokulált második fázisú táptalajt 36 ’C-on 24 órán át Ínkubáljuk és
4) a termelő táptalaj térfogata 10 liter, a tenyésztés hőmérséklete 36 ’C és összetétele a következő:
DL sz. termelő táptalaj
| Komponens | Mennyiség (g/1) |
| burgonya-dextrin | 30 |
| glükóz | 10 |
| enzimes kazein-hidrolizátum (NZ Amine A) 3 | |
| élesztő | 5 |
| melasz | 15 |
| MgSO4 (vízmentes) | 1 |
| CaCO3 | 2 |
| csapvíz | 1 literre |
A beállítás nélküli pH 6,3; a pH-t 5 N NaOH-dal 7,0-re állítjuk be; a sterilezés utáni pH 6,4.
Hozzáadott habzásgátló: Ság 471 (0,2 g/1) és P-2000 (0,5 ml/1).
4. példa
AzA82810 elkülönítése
Az 1. és a 2. példában leírtakhoz hasonló módon előállított teljes fermentlevet - két 100 literes fermentáció tartalmát; térfogat 215 liter - összekeverés után présen szűrünk át, szűrési segédanyagként 3% Hyflo Super-Cel (Manville Products Corp., Lompoc, California) alkalmazásával. 180 liter szürletet kapunk.
A micéliumot tartalmazó szűrőlepényt 2*60 liter acetonnal extraháljuk. Az acetonos kivonatokat egyesítjük és vákuumban betöményítjük, 18 liter térfogatra. A koncentrátumot egyesítjük a tenyészet szűrletével. Ezt a keveréket 5 N NaOH-dal pH 9-re állítjuk be, és a kapott oldatot 2/3 térfogatmennyiségű etil- acetáttal extraháljuk, egy éjjelen át való kevertetés és hűtés közben. 115 liter etil-acetátos kivonatot különítünk el; ezt kis mennyiségű szűrési segédanyaggal keverjük össze és szűrjük. A derített kivonatot vákuumban betöményítjük.
Ezt a maradékot 200 ml toluolban oldjuk és az oldatot felvisszük egy oszlopra, amely 2 liter szilikagélt (Grace Grade, 0,84-0,05 mm) tartalmaz, toluolba ágyazva. Az oszlopot 10 liter toluollal mossuk, és toluohetanol eleggyel fejlesztjük ki (rendre: 10-10 liter 98:2; 96:4 és 90:10 arányú eleggyel) és 1 literes frakciókat szedünk.
Az A82810 elúcióját biológiai vizsgálattal követjük, Bac. subtilis alkalmazásával, a vörösvérsejteket tartalmazó agarlemezeken megfigyelhető lízis alapján. Az A82810 zömét tartalmazó (13-20. sz.) frakciókat egyesítjük és olajjá töményítjük be. Ezt az olajat 200 ml dioxánban oldjuk és fagyasztva szárítjuk, olaj alakjában nyers A82810-et kapunk.
A nyers A82810-et 200 ml kloroformban oldjuk és felvisszük egy oszlopra, amely 2 liter szilikagélt tartalmaz (Grace Grade 62, 0,84-0,05 mm) kloroformba beágyazva. Az oszlopot 10 ml kloroformmal mossuk és kloroform:aceton eleggyel felesztjük ki (ennek összetétele rendre: 10-10 liter 9:1; 4:1; 7:3 és 1:1), majd 10 liter acetonnal eluálunk. 1 literes frakciókat szedünk.
A frakciókat biológiai vizsgálatnak vetjük alá és ennek eredményétől függően öntjük össze, a következők szerint:
- 6-9. frakció: A. oldat;
- 10-18. frakció: B. oldat; és
- 19-28. frakció: C. oldat.
Mindegyik oldatot betöményítjük és a maradékot dioxánban oldjuk, majd fagyasztva szárítjuk. Az A. és a C. oldatból olajokat kapunk, amelyeket további tisztításnak kell alávetni, míg a B. oldatból 9,9 g A82810 válik ki fehér por alakjában.
Az A. oldat maradékát 900 ml acetonban oldjuk és hozzáadunk 1 liter vizet. Az oldat pH-ját 5 N NaOHdal 9,0-re állítjuk be és az oldatot vákuumban 1 liter térfogatra töményítjük be. A maradékot kétszer extra11 háljuk toluollal és az egyesített kivonatokat betöményítjük, majd dioxánből fagyasztva szántjuk. így további 2,8 g A82810-et kapunk fehér por alakjában.
A C. oldat maradékát hasonló módon kezeljük, de ebből még fagyasztva szárítás után is olaj marad visz- 5 sza. Az olajat 50 ml acetonitrilben oldjuk, amikor is azonnal kritályok képződnek. A kristályokat szűrjük és vákuumban szárítjuk. így további 1244 mg tiszta A828l0-et kapunk, Na-só alakjában (op.: 173-175 ’C).
5. példa
AzA82810-Na-só kristályosítása 400 mg amorf A82810-nátriumsót ultrahangos kezelés mellett egy nagyméretű kémcsőben 50 ml hexánban szuszpendálunk, és az elegyet szobahőmérsékleten áll- 15 ni hagyjuk. A kémcső falán képződött kristályokat elkülönítjük és vákuumban szárítjuk. 50 mg tiszta A82810-nátriumsót kapunk (op.: 255-257 ’C).
A 2. ábra szerinti IR-spektrum (CHCh-ban) a kővetkező frekvenciáknál mutat abszorpciós maximumokat 20 (cm*1): 3020, 2970, 2952, 2936, 2679, 1570, 1458,
1393,1380,1363,1359,1163,1115,1093,1075,1067,
1054,1027,1010,1001,990,979 és 940.
Térdeszorpcrós (FD) tömegspektrum; 6. ábra.
ő. példa
AzA828I0 (szabad sav) előállítása 200 mg A82810-Na-sót-amelyet a 4.példában leírtak · szerint állítunk elő - 75 ml dioxánban oldunk. Ehhez az oldathoz 25 ml vizet adunk; a kapott oldat pH-ját 1 N 30 HC1 hozzáadásával 3-ra állítjuk be. A megsavanyított oldatot 1 órán át kevertetjük, majd 2*100 ml kloroformmal extraháljuk. Akloroformos kivonatokat egyesítjük, és vákuumban betöményítjük. így A82810 szabad savat kapunk. [aji)89™- -7,35° (c-1,0, CH3OH), meződeszorp- 35 ciós tömegspektrum; molekulaion (M+Na): 865.
7. példa
Az acetil-A828I0 előállítása
200 mg A82810-Na-sőt 4 ml piridrnben oldunk; az 40 oldathoz 4 ml ecetsavanhidridet adunk, és a keveréket 40 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 10 ml vizet adunk hozzá és a vizes oldatot 50 ml kloroformmal extraháljuk. Akloroformos kivonatot egymás után 50-50 ml 0,1 N HCI-dal; 1% NaHCO3-ot tartalmazó 45 ; vízzel és vízzel mossuk. A kloroformos kivonatot ezután vákuumban betöményítjük, és a maradékot ace- 1 ionban oldjuk. Az acetonos oldatot vákuumban betö- i ményítjük a maradék piridin és ecetsav eltávolítására. < Ezt a lépést háromszor megismételjük, és a kapott 50 < maradékot benzolban oldjuk, majd fagyasztva szárít- r juk. 204 mg acetiI-A82810-Na-sót kapunk.
Molekulatömege: a gyors atombombázásos tömegspektrum (FABMS) alapján: 906. λ
A 3. ábra szerinti IR-spektrum (CHCR-ban) a kö- 55 1 vetkező frekvenciáknál mutat abszorpciós maximu- 1 mókát (cm-1): 3021, 2976, 2935, 2880, 2831, 1728, 1
1458, 1379, 1357, 1321, 1314, 1247, 1226, 1223, 1
1201, 1185, 1100,1094,1076, 1056,1024, 990, 981, 9
947,929, 896 és 875. 60
8. példa
Apropionil-A82810 előállítása 200 mg A82810-Na-sót 4 ml piridinben oldunk, hozzáadunk 4 ml propionsavanhidridet és a keveréket 5 szobahőmérsékleten 44 órán át állni hagyjuk. 10 ml vizet adunk hozzá, és az oldatot 50 ml kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatot egymás után 50-50 0,1 N HCI-dal, 1% NaHCO3-ot tartalmazó vízzel és vízzel mossuk. A kloroformos kivonatot váku0 umban betöményítjük, és a maradékot 100 ml acetonban oldjuk. Az acetonos oldatot vákuumban betöményítjük a visszamaradt piridin és propionsav eltávolítására. Ezt a lépést háromszor megismételjük. A maradékot benzolban oldjuk, és fagyasztva szárítjuk. így 5 olaj alakjában propioníl-A82810-et kapunk, Na-só alakjában.
Az olajat 5 ml acetonitrilben oldjuk és felvisszük egy oszlopra, amely 20 ml szilikagélt (Woelm, 100200 pm) tartalmaz, acetonitrilben. Az oszlopot 100 ) ml acetonitrillel mossuk, és 100-100 ml 9:1, 4:1, 7:3 és 1:1 arányú acetonitrihaceton eleggyel, majd 100 ml acetonnal fejlesztjük ki. 25 ml-es frakciókat szedünk.
Az eluálást vékonyréteg-kromatográfiával követ» jük; a kifejlesztést 1:1 acetonitrihaceton eleggyel és acetonnal végezzük, és a kimutatáshoz vanillinH2SO4 sprayt alkalmazunk. A propionil-A828I0 fő tömegét tartalmazó frakciókat (13-23., Na-só) egyesítjük, és vákuumban betöményítjük. A maradékot dioxánban oldjuk és fagyasztva szárítjuk. 47 mg keresett észtert kapunk.
Molekulatömege: 920 (FDMS-sel).
A 4. ábrán látható IR abszorpciós spektrum (CHCl3-ban) a kővetkező helyeken mutat abszorpciós maximumokat (cm1): 2975,2971, 2935,2879, 2831, 1571, 1457, 1398, 1380, 1364, 1359, 1321, 1237, 1225, 1216, 1213, 1191, 1163, 1116, 1093, 1076, 1068, 1054, 1027, 1010, 1001, 990, 980, 945, 940, 929 és 861.
9. példa
AzA828104-bróm-fenil-karbonil-származéka (R=4-Br-Ph-NHCO-) előállítására
200 mg A82810-Na-sőt 25 ml benzolban oldunk és az oldathoz kevertetés közben hozzáadunk 225 mg 4-bróm-fenil-izocianátot 25 ml benzolban oldva. 1 csepp trietil-amint adunk az elegyhez, és 160 órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük és a szűrletet fagyasztva szárítjuk. 400 mg A82810 4-bróm-fenil-karbonil-származékot kapunk (Na-só).
Molekulatömege: 1061 (FDMS-sel).
Az 5. ábrán látható IR-spektrum (CHCl3-ban) a kővetkező frekvenciákon mutat abszorpciós maximumokat: 2969, 2935, 2878,2830, 1727,1589,1570,1517, 1489,1460,1399,1379,1363,1344,1316,1306,1287, 1265,1247,1238,1216,1211,1192,1163,1146,1116, 1102,1093,1075,1068,1054,1025,1009,1000, 990, 979,943,923 és 861 cm-’.
HU 204 893 Β
10. példa
Az A82810 kromatográfiás azonosítása
I. TLC (vékonyréteg-kromatográfia)
Adszorbens: szilikagél
Rendszer: 1:1 acetonitrihaceton
Kimutatás: Bac. subtilis
Rf=0,25 (Ebben a rendszerben az A80190 Rf-értéke kb. 0,44; a kimutatás vanillin-sprayjel történik.)
11. HPLC (nagynyomású folyadékkromatográfia)
Adszorbens: Waters pBondapak C18 (4·300 mm-es oszlop)
Oldőszerrendszer: 1% HOAc-t tartalmazó 9:1 CH3CN:H2O
Kimutatás: refraktométerrel
Áramlási sebesség: 3,0 ml/perc
Retenciós idő: 5,37 perc (Összehasonlítás céljából közöljük, hogy ebben a rendszerben az A80190 retenciós ideje kb. 4,65 perc.)
II. példa
A szinergetikus készítmények antikokcidiális aktivitása
Frissen kikelt csirkéket 7 napon át Coccidium-mentes közegben tartunk. A 8. nap reggelén a csirkéket lemérjük és a kezelés előkészítéseként különböző csoportokba osztjuk.
Mindegyik (rendszerint 4 vagy 5 csirkéből álló) csoportot zárt ketrecben tartjuk a kísérlet alatt. Mindegyik ketrecben meghatározott terv szerint szabályozzuk a fényviszonyokat és a csirkéket ad libitum engedjük takarmányhoz és vízhez jutni (mimeliett mindegyik kísérlet magában foglal kezeletlen és gyógyszerrel kezelt csoportokat is). A kísérlet megkezdése után 2 nappal a fertőzésre kijelölt csirkéket a begyükön intubáljuk és Coccidium oocisztákat tartalmazó vegyes tenyészet tiszta szuszpenzióval fertőzzük. Az egyes kísérletekben alkalmazott oociszta-dózist úgy határozzuk meg, hogy az a fertőzött, gyógyszerrel nem kezelt állatokban klinikai kokcidiózist idézzen elő.
További 7 napos tenyésztési periódus után a kísérletet befejezzük. Az egyes csirkecsoportokat lemérjük és meghatározzuk az egyes csoportok által elfogyasztott tápanyag mennyiségét. Ezeknek a méréseknek az alapján kiszámítjuk az állatok végeredményben elért tömegét és a takarmányhasznosítás hatékonyságát. Ezután valamennyi baromfit levágjuk és belüket és vakbelüket megvizsgáljuk a Coccidiumok által okozott károsodás megállapítására.
Egyes vizsgálatok magukban foglalják a termelt oociszták számának meghatározását. Ebben az értékelésben az egyes csoportok által kiválasztott ürüléket gyűjtjük össze abban az időtartamban, amikor az oociszta-képződés bekövetkezik. Az ürüléket ezután hígítjuk, és az oocisztákat hemacitométer felhasználásával megszámláljuk. A mérést annak értékelésére használjuk fel, hogy jellemezzük a parazita reproduktív kapacitását a csirkékben. így a kapott adatok a gyógyszer azon képességének pontos mérését teszik lehetővé azzal kapcsolatban, hogy ez milyen mértékben befolyásolja a fertőzéseket az állatokban.
A VI-XXIV. táblázat foglalja össze azokat az eredményeket, amelyeket a találmány szerinti jellegzetes szinergetikus készítmények ily módon végzett vizsgálata során kaptunk.
VI. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása - önmagában és keverékben - az Eimeria acervulina 59. törzzsel és az E. tenella 155. törzzsel (ionofór-érzékeny Coccidium törzs) szemben
A károsodás alapján megállapított végső osztályzat4 A82810 (ppm)
| Benzamin (ppm)2 | 0 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 10,1 | 12,1 | 10,7 | 8,4 | 5,4 |
| 4 | 12,4 | 7,6 | 6,3 | 4,0 | 3,5 |
| 8 | 10,9 | 6,8 | 3,7 | 3,6 | 2,5 |
| 12 | 10,4 | 5,2 | 4,9 | 2,1 | 4,3 |
| 16 | 10,8 | 6,5 | 3,6 | 1,0 | 0,5 |
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában3 A82810(ppm)
| Benzamin (ppm)2 | 0 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 67 | 60 | 81 | 85 | 92 |
| 4 | 75 | 81 | 98 | 96 | 97 |
| 8 | 68 | 84 | 89 | 101 | 101 |
| 12 | 73 | 93 | 93 | 92 | 91 |
| 16 | 76 | 86 | 97 | 94 | 97 |
2=2,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin 3=kontroll=nem kezelt és nem fertőzött állatok 4=értékelést lásd Joyce Johnson, Malcolm Reid, Experimental Parasitology, Vol 28,30-36 (1970)
VII. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása - önmagában és keverékben - Eimeria acervulina FS-316 törzzsel és E. tenella FS-456 törzzsel1 szemben
A károsodás alapján megállapított végső osztályzat A82810 (ppm)
| Benzamin (ppm)2 | 0 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 9,7 | 8,7 | 9,3 | 7,7 | 9,6 |
| 4 | 9,6 | 8,3 | 7,2 | 6,5 | 4,3 |
| 8 | 7,9 | 5,9 | 7,5 | 3,6 | 3,3 |
| 12 | 6,5 | 3,6 | 3,5 | 2,0 | 2,0 |
| 16 | 4,2 | 2,9 | 1,6 | 1,5 | 1,1 |
HU 204 893 Β
IX. táblázat
Az A82810 antikokcidiális hatása önmagában és keverékben az E. acervulina FS-316 és az E. tenella
FS-4561 törzzsel szemben
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában
| Benzamin (ppm)* 2 | A82810 (ppm) | ||||
| 0 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 | |
| 0 | 89 | 87 | 89 | 95 | 93 |
| 4 | 90 | 89 | 89 | 93 | 98 |
| 8 | 94 | 87 | 94 | 95 | 98 |
| 12 | 88 | 96 | 95 | 90 | 95 |
| 16 | 87 | 94 | 94 | 90 | 93 |
Honofór-rezisztens Coccidium törzsek 22,4-dinitro-N-[4-(1,1,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(írifluor-metil)-benzamin
VIH. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása önmagában és keverékben E. acervulina FS-316 törzzsel és E. tenella FS-4561 törzzsel szemben
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában
| Vegyület (ppm)2 | A82810 (ppm) | ||||
| 0 | 2,5 | 3,0 | 3,5 | 4,0 | |
| 0 | 80 | 81 | 77 | 85 | 80 |
| 8 | 76 | 88 | 86 | 83 | 89 |
| 10 | 77 | 86 | 88 | 91 | 92 |
| 12 | 75 | 89 | 88 | 91 | 91 |
| 14 | 70 | 88 | 88 | 87 | 90 |
Átlagos osztályzat a bél sérülései alapján A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2,5 | 3,0 | 3,5 | 4,0 |
| 0 | 8,1 | 2,3 | 3,3 | 3,0 | 1,2 |
| 8 | 5,9 | 2,9 | 1,1 | 1,3 | 1,2 2 |
| 10 | 4,8 | 1,7 | 1,4 | 0,7 | 2,6 |
| 12 | 5,9 | 2,0 | 1,1 | 0,4 | 0,5 |
| 14 | 4fi | 1,5 | 1,3 | 2,0 | 1,4 |
Vegyület
Átlagos osztályzat a vakbél sérülései alapján
A82810(ppm)
| (ppm)2 | 0 | 2,5 | 3,0 | 3,5 | 4,0 | 50 |
| 0 | 3,3 | 3,2 | 2,9 | 3,2 | 3,0 | |
| 8 | 3,3 | 3,1 | 3,4 | 3,3 | 3,1 | |
| 10 | 3,2 | 3,3 | 2,8 | 2,6 | 3,0 | |
| 12 | 3,1 | 3,3 | 2,9 | 2,7 | 2,8 | 55 |
| 14 | 2,8 | 3,1 | 2,8 | 3,6 | 2,0 |
’ionofór-rezisztens Coccidium törzsek 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
Tömeggyarapodás a kontroll %-ában
| Vegyület (ppm)2 | 0 | A82810 (ppm) | 6 | |
| 4 | 5 | |||
| 0 | 89 | 87 | 95 | 98 |
| 16 | 91 | 89 | 89 | 86 |
| 18 | 91 | 90 | 89 | 87 |
| 20 | 84 | 91 | 86 | 87 |
| 22 | 88 | 89 | 84 | 85 |
| 24 | 85 | 92 | 85 | 84 |
Átlagos osztályzat a bél károsodása alapján
Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 4 | 5 | 6 |
| 0 | 5,3 | 2,8 | 1,3 | 1,7 |
| 16 | 2,3 | 0 | 0 | 0 |
| 18 | 1,1 | 0 | 0 | 0 |
| 20 | 1,8 | 0 | 0 | 0 |
| 22 | 3,0 | 0 | 0 | 0 |
| 24 | 0,8 | 0 | 0 | 0 |
Átlagos osztályzat a vakbél károsodása alapján A82810 (ppm)
| Vegyület > (ppm)2 | 0 | 4 | 5 | 6 |
| 0 | 3,2 | 3,2 | 2,3 | 3,2 |
| 16 | 2,9 | 1,0 | 0,8 | 0,6 |
| 18 | 3,0 | 0,4 | 0,5 | 0,5 |
| 1 20 | 2,9 | 1,2 | 0,8 | 0,6 |
| 22 | 2,6 | 1,2 | 0,4 | 0,5 |
| 24 | 1,6 | 0,8 | 1,6 | 0,3 |
lionofór-rezisztens kokcidium-tőrzs 45 22,4-dinitro-N-[4-(l, 1,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
X. táblázat
Az A8281O antikokcidiális aktivitása önmagában és keverékben E. acervulina FS-3161 törzzsel szemben
Tömeggyarapodás a kontroll %-ában Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 69 | 72 | 73 | 73 | 76 |
| 4 | 74 | 75 | 71 | 76 | 83 |
| 8 | 71 | 81 | 80 | 81 | 79 |
| 12 | 82 | 83 | 87 | 84 | 87 |
| 16 | 75 | 87 | 82 | 84 | 90 |
HU 204 893 Β
Átlagos osztályzat a bélben észlelt károsodás alapján
Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 8,5 | 7,3 | 7,8 | 7,9 | 8,9 |
| 4 | 6,9 | 7,1 | 8,4 | 7,5 | 6,5 |
| 8 | 8,4 | 6,4 | 7,3 | 5,9 | 4,3 |
| 12 | 6,3 | 5,3 | 4,8 | 2,4 | 0,3 |
| 16 | 5,8 | 0,1 | 0,9 | 0,1 | 0,1 |
'ionofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l ,1,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
XI. táblázat
Az A8281O antikokcidiális aktivitása önmagában és kombinációban E. maxima FS-1771 törzzsel szemben
Minősítés a bélben észlelhető károsodás alapján
Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 4,0 | 3,7 | 3,6 |
| 8 | 3,6 | 0,4 | 2,5 |
| 12 | 3,9 | 1,3 | 0,8 |
| 16 | 3,3 | 0 | 1,1 |
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában Vegyület A82810 (ppm) (ppm)2 0 2 6 10
| 0 | 105 | 107 | 108 | 102 |
| 8 | 79 | |||
| 12 | 88 | 111 | 105 | 101 |
| 16 | 102 | 114 | 107 | 91 |
’ionofór-érzékeny kokcidium-töizs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
ΧΙΠ. táblázat
Az A82810 antikokcidiális hatása önmagában és kombinálva E. maxima LIT-6261 törzzsel szemben
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 1,25 | 1,5 | 1,75 | 2,0 |
| 0 | 98 | 99 | 102 | 101 | 94 |
| 8 | 94 | 97 | 94 | 99 | 95 |
| 10 | 99 | 95 | 92 | 97 | 97 |
| 12 | 93 | 94 | 89 | 97 | 95 |
| 14 | 98 | 95 | 93 | 92 | 94 |
Tömeggyarapodás a kontroll %-ában A82810 (ppm)
| Vegyület (PP®)2 | 0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 69 | 79 | 92 |
| 8 | 77 | 91 | 88 |
| 12 | 84 | 88 | 86 |
| 16 | 87 | 94 | 87 |
Átlagos osztályzat a bél károsodása alapján A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 1,24 | 1,5 | 1,75 | 2,0 |
| 0 | 4,0 | 3,7 | 3,3 | 4,0 | 3,3 |
| 8 | 2,5 | 1,5 | 3,7 | 0,3 | 2,0 |
| 10 | 3,5 | 0,9 | 1,0 | 3,4 | 1,2 |
| 12 | 1,8 | 2,9 | 1,8 | 2,1 | 0,8 |
| 14 | 3,8 | 1,2 | 1,7 | 2,2 | 1,3 |
’ionofór-érzékeny kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin 'ionofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
XII. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása önmagában és keverékben E. maxima FS-1771 törzzsel szemben
Átlagos osztályzat a bél károsodása alapján
Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 3,4 | 1,9 | 0,6 | 0,2 |
| 8 | 2,6 | |||
| 12 | 2,2 | 0,1 | 0,3 | 0,5 |
| 16 | 2,3 | 0,1 | 0,3 | 0,1 |
XIV. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása önmagában és kombinációban E. maxima FS-4101 törzzsel szemben
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 2,5 | 3,0 | 3,5 | 4,0 |
| 0 | 86 | 90 | 88 | 88 | 91 |
| 8 | 90 | 90 | 92 | 92 | 86 |
| 10 | 90 | 93 | 94 | 87 | 87 |
| 12 | 88 | 91 | 96 | 90 | 98 |
| 14 | 92 | 92 | 89 | 90 | 91 |
HU 204893 Β
Átlagos osztályzat a bél károsodása alapján
Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 25 | 3,0 | 3,5 | 4,0 |
| 0 | 3,8 | 3,8 | 3,1 | 3,5 | 2,2 |
| 8 | 3,8 | 2,8 | 1,3 | 2,8 | 1,7 |
| 10 | 3,8 | 2,7 | 1,4 | 3,2 | 1,0 |
| 12 | 3,7 | 0,8 | 0,7 | 0,3 | 1,1 |
| 14 | 3,3 | 1,4 | 1,2 | 0 | 0 |
Monofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
XV. táblázat
Az A82810 antikokcidiálís aktivitása önmagában és kombinációban E. maxima FS-4101 törzzsel szemben
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában Vegyület A82810 (ppm) (ppm)2 0 1,25 1,5 1,75
| 0 | 93 | 93 | 82 | 91 |
| 9 | 90 | 95 | 98 | 94 |
| 10 | 94 | 92 | 98 | 89 |
| 11 | 87 | 96 | 94 | 95 |
| 12 | 84 | 91 | 91 | 92 |
Átlagos osztályzat a bél károsodása alapján
Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 1,25 | 1,5 | 1,75 |
| 0 | 4,0 | 4,0 | 3,3 | 3,8 |
| 9 | 4,0 | 2,4 | 3,8 | 3,6 |
| 10 | 3,8 | 2,2 | 2,3 | 2,8 |
| 11 | 3,7 | 1,6 | 2,5 | 2,6 |
| 12 | 4,0 | 3,1 | 3,0 | 2,3 |
’ionofór-iezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l, 1,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
XVI. táblázat
Az A82810 antikokcidiálís aktivitása önmagában és kombinációban E. maxima FS-4101 törzzsel szemben
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában Vegyület A82810 (ppm) (ppm)2 0 4 5 6
| 0 | 65 | 74 | 74 | 81 |
| 16 | 71 | 93 | 88 | 88 |
| 18 | 76 | 90 | 82 | 89 |
| 20 | 81 | 90 | 83 | 90 |
| 22 | 79 | 89 | 87 | 87 |
| 24 | 83 | 86 | 80 | 82 |
| Vegyület (ppm)2 | Átlagos osztályzat a bél károsodása | |||
| 0 | alapján A82810 (ppm) | 6 | ||
| 4 | 5 | |||
| 0 | 3,3 | 4,0 | 4,0 | 4,0 |
| 16 | 4,0 | 0,5 | 0 | 0,7 |
| 18 | 3,1 | 0 | 0 | 0,2 |
| 20 | 3,4 | 0,5 | 0 | 0 |
| 22 | 3,7 | 0 | 0 | 0,2 |
| 24 | 2,6 | 0 | 0,3 | 0 |
Tonofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-feniI]-6“(trifluor-metil)-benzamin
XVII. táblázat
Az A82810 antikokcidiálís aktivitása önmagában és kombinációban E. maxima FS-4101 törzzsel szemben
A károsodás mértéke A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 3,9 | 2,3 | 2,7 | 2,4 |
| 8 | 3,3 | |||
| 12 | 2,9 | 2,1 | 1,4 | 1,1 |
| 16 | 2,4 | 1,9 | 1,1 | 0,8 |
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 65 | 85 | 89 | 88 |
| 8 | 68 | |||
| 12 | 59 | 90 | 88 | 85 |
| 16 | 74 | 90 | 79 | 83 |
Az oociszía-teimelés %-os csökkenése
A82810 (ppm)
Vegyület 0 2 6 10 (ppm)2
| 0 | 0 | 18 | 18 | 36 |
| 8 | 4 | |||
| 12 | 0 | 12 | 39 | 59 |
| 16 | 0 | 35 | 73 | 78 |
’ionofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-diniíro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-660 -(trifluor-metil)-benzamin
HU 204 893 Β
XVIH. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása önmagában és kombinációban E, maxima FS-4101 törzzsel szemben
Osztályzat a bél károsodása alapján A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 4,0 | 4,0 | 4,0 |
| 8 | 4,0 | 1,5 | 2,3 |
| 12 | 3,9 | 2,3 | 0,9 |
| 16 | 3,3 | 0,6 | 1,1 |
XX. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása önmagában és kombinációban WE. acervulina FS-273 és E. tenella FS-4561 törzzsel szemben
Minősítés a sérülések alapján A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 8,9 | 7,2 | 3,7 | 2,0 |
| 8 | 9,4 | |||
| 12 | 8,4 | 4,9 | 1,2 | 1,2 |
| 16 | 8,0 | 1,6 | 2,0 | 0,9 |
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 1,5 | 2,0 |
| 0 | 89 | 87 | 89 |
| 8 | 91 | 95 | 100 |
| 12 | 95 | 96 | 99 |
| 16 | 93 | 92 | 96 |
‘ionofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
XIX. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása önmagában és kombinációban E. acervulina Hand C és E. tenella Wis1 törzzsel szemben
Átlagos minősítés a bélben okozott károsodás alapján A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 6,2 | 1,2 | 0,4 | 0,3 |
| 8 | 6,0 | |||
| 12 | 5,1 | 1,0 | 0 | 0,4 |
| 16 | 4,7 | 0,4 | 0,5 | 0,1 |
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 65 | 98 | 91 | 80 |
| 8 | 62 | |||
| 12 | 64 | 95 | 90 | 76 |
| 16 | 69 | 97 | 90 | 65 · |
‘ionofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában A82810(ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 63 | 68 | 89 | 86 |
| 8 | 70 | |||
| 12 | 72 | 86 | 92 | 82 |
| 16 | 74 | 95 | 89 | 83 |
Az oociszta-termelés %-os csökkenése
A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 2 | 6 | 10 |
| 0 | 0 | 22 | 65 | 83 |
| 8 | 17 | |||
| 12 | 18 | 84 | 94 | 100 |
| 16 | 20 | 95 | 99 | 99 |
‘ionofór-rezisztens kokcidium-törzs 22,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
XXI. táblázat
Az A82810 hatása önmagában és kombinációban nem fertőzött csirkék fejlődésére
Tömeggyarapodás a kontroll %-ában A82810 (ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 1,25 | 1,5 | 1,75 | 2,0 |
| 0 | 98 | 101 | 105 | 99 | |
| 8 | 100 | 100 | 103 | 98 | 102 |
| 10 | 101 | 102 | 98 | 97 | 100 |
| 12 | 94 | 98 | 102 | 97 | 97 |
| 14 | 98 | 99 | 99 | 100 | 96 |
22,4-dinitro-N-[4-(l, 1,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin
HU 204893 Β
ΧΧΠ. táblázat XXIV. táblázat
Az A828I0 antikokcidiális aktivitása önmagában és Az A82810 antikokcídiális aktivitása önmagában és kombinációban E. acervulina 59 és E, tenella 1551 kombinációban E. acervulina 59 és E. tenella 1551 törzzsel szemben törzzsel szemben
| Vegyület (ppm)2 | Minősítés a teljes károsodás alapján A82810 (ppm) | - 5 | Vegyület (ppm)2 0 | Tömeggyarapodás, a kontroll %-ában | |||||
| 0 | A82810 (ppm) | 1,75 | |||||||
| 0 | 1,5 | 2,0 | 1,25 | 1,5 | |||||
| 0 4 | 11,5 11(2 | 8,9 3,7 | 4,5 1,9 | 10 | 70 | 87 | 80 | 82 | |
| 8 | 8,7 | 2,2 | 0,8 | 4 | 73 | 79 | 84 | 83 | |
| 12 | 5,0 | 1,3 | 0,8 | 8 | 66 | 94 | 91 | 88 | |
| 16 | 4,4 | 1,3 | 0,3 | 12 | 72 | 84 | 87 | 85 | |
| 15 | 16 | 67 | 76 | 79 | 70 |
Tőmeggyarapodás, a kontroll %-ában —-----—
Vegyület A82810(ppm) A bélkárosodás átlagos mértéke
| (ppm)2 | 0 | 1,5 | 2,0 | 20 | Vegyület | A82810 (ppm) | |||
| o | 125 | 15 | 1,75 | ||||||
| 0 4 | 70 80 | 93 92 | 97 105 | ||||||
| (ppm)2 | |||||||||
| 8 | 78 | 101 | 98 | 0 | 6,0 | 6,0 | 3,6 | 2,3 | |
| 12 | 80 | 93 | 92 | 25 | 4 | 6,2 | 3,7 | 3,4 | 3,1 |
| 16 | 92 | 92 | 102 | 8 12 16 | 6,9 6,6 3,8 | 1,3 0,5 1,8 | 0,3 2,1 0 | 0,4 0,3 0,8 | |
| ’ionofór-rezisztens kokcidium-törzs | |||||||||
| 24-klór-N-[2,4-dinitro-6-(trifluor-metil)-fenil]-l- |
-naftalin-amin
XXHI. táblázat
Az A82810 antikokcidiális aktivitása önmagában és kombinációban E. maxima FS-1771 törzzsel szemben „ c 03
Bélkárosodás mértéke Vegyület A82810 (ppm)
| (ppm)2 | 0 | 1,5 | 2,0 | |
| 0 | 3,9 | 3,5 | 3,3 | 40 |
| 4 | 3,8 | 3,1 | 0,8 | |
| 8 | 3,8 | 1,3 | 1,5 | |
| 12 | 3,2 | 1,0 | 0,3 | |
| 16 | 1,0 | 0,5 | 0,5 | 45 |
| Vegyület (ppm)2 | Tőmeggyarapodás, a kontroll %-ában A82810 (ppm) | 50 | |
| 0 1,5 | 2,0 | ||
| 0 | 87 99 | 100 | |
| 4 | 87 95 | 98 | |
| 8 | 80 88 | 97 | |
| 12 | 85 88 | 93 | 55 |
| 16 | 84 87 | 86 | |
| ’ionofór-érzékeny kokcidium-törzs | |||
| 24-klór-N-[2,4-dinitro-6-(trifluor-metil)-fenil]-l- | |||
| -naftalin-amin | 60 |
A vakbélkárosodás átlagos mértéke A82810(ppm)
| Vegyület (ppm)2 | 0 | 1,25 | 1,5 | 1,75 |
| 0 | 3,2 | 3,2 | 2,6 | 2,0 |
| 4 | 2,9 | 2,9 | 2,8 | 2,6 |
| 8 | 3,5 | 2,6 | 2,3 | 1,6 |
| 12 | 3,0 | 1,8 | 1,4 | 0,7 |
| 16 | 2,9 | 1,7 | 0,9 | 0,5 |
Tonofór-érzékeny kokcidium-törzs 24-bróm-N-[2,4-dinitro-6-(trifluor-metil)-fenil]-l-naftalin-amin /
12. példa
A 82810-et tartalmazó módosított csirketápok a kokcidiózis leküzdésére
A következő összetételű kiegyensúlyozott, nagyenergiájú tápot állítjuk elő, amely alkalmas csirkékben gyors tömeggyarapodás elérésére:
Komponens t% őrölt sárgakukorica 50 szójaliszt, 50%-os fehérjetartalmú 31,09 oldószerrel extrahált, héjmentesített, finomra őrölt) állati zsír (marhafaggyú) 6,5
HU 204 893 Β
Komponens t%
| szárított halliszt, oldható | 5,0 |
| anyagokkal (60% fehérje) kukoricából nyert oldható | 4,0 |
| desztillációs maradék dikalcium-foszfát | 1,8 |
| (étkezési minőség) kalcium-karbonát | 0,8 |
| vitamin-premix (A, D, Ε, K | 0,5 |
| és Bn-vitamin, kolin, niacin, pantoténsav, riboflavin, biotin glükózzal, mint testesítő anyaggal) nyomelem-premix (MnSCL, ZnO, | 0,2 |
| KI, FeSO4, CaCO3) | |
| 2-amino-4-hidroxi-vajsav (a | 0,1 |
| metionin hidroxilanalógja) A82810 (Na-só) | 0,01 |
Ezeket az anyagokat a szokásos takarmánykeverési eljárások alkalmazásával összekeverjük. Az ilyen takarmánnyal táplált csirkék - amelyek ad libitum kapnak vizet - védettek a kokcidiőzissal szemben és tömeggyarapodásuk összehasonlítható azoknak a kokcidiózismentes csirkéknek a növekedésével, amelyeket hasonló összetételű, de gyógyszert nem tartalmazó takarmánnyal táplálunk.
13-15. példa
A82810-et tartalmazó szinergetikus készítmények, mint csirketáp-komponensek a kokcidiózis leküzdésére
A 12. példában leírt módon csirketápot állítunk elő, de a következő, A82810-et tartalmazó szinergetikus készítményeket alkalmazzuk aktív komponensként
| Komponens | ppm · |
| A8281O | 0,25-10 |
| 2,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2- | 4-24 |
| -tetrafluor-etoxi)-fenil] -6- | |
| -(trifluor-metil)-benzamin | |
| Komponens | ppm |
| A82810 | 0,25-10 |
| 4-klór-N-[2,4-dinitro-6-(trifluor-metil)- | 4-24 |
| -fenil]- 1-naftalin-amin | |
| Komponens | ppm |
| A82810 | 0,25-10 |
| 4-bróm-N-[2,4-dinitro-6-(trifluor-metil)- | 4-24 |
| -fenil]- 1-naftalin-amin |
16. példa
A82810-zel feljavított szarvasmarha/borjú takarmány
Kiegyensúlyozott, nagyszemcsés szarvasmarha/borjú takarmányt állítunk elő a következő komponensekből:
| Komponens | t% |
| finomra őrölt kukorica | 67,8 |
| őrölt kukoricacsutka | 10 |
| dehidratált alfalfa-liszt | 5 |
| (17% fehérje) héjmentesített, oldószerrel | 9,9956 |
| extrahált szójaliszt (50% fehérje) cukomádmelasz | 5 |
| karbamid | 0,6 |
| A82810 (Na-só) | 0,0044 |
| dikalcium-foszfát, | 0,5 |
| étkezési minőség kalcium-karbonát | 0,5 |
| NaCl | 0,3 |
| nyomelem-premix | 0,03 |
| A- és D2-vitamin-premix+ | 0,07 |
| E-vitamin-premix++ | 0,05 |
| kalcium-propionát | 0,15 |
+összetétele/0,453 kg:
000 000 nemzetközi egység A-vitamin,
227 200 nemzetközi egység Drvitamin,
385,7 g szójatáp, 1% olajjal ^kukorica-desztillátum, szárított szemcsék alakjában, oldható anyagokkal, 20 000 nemzetközi egység/0,453 kg d-alfa-tokoferil-acetáttal
Az összekevert takarmányt pelletekké préseljük. 6,75 kg takarmány/állat/nap átlagos táplálékfelvételi arány mellett ez a takarmánymennyiség kb. 300 mg A82810 (Na-só) egy-egy állatnak való napi bevitelét jelenti.
17. példa
A82810 hozzáadásával feljavított sertéstakarmány
Kiegyensúlyozott sertés (malac) takarmányt állítunk elő a következőkből:
| Komponens | t% |
| őrölt sárgakukorica | 65,10 |
| szójababliszt, oldószerrel | 18,50 |
| extrahált, héjmentesített | |
| szárított répapép | 10,00 |
| dikalcium-foszfát | 2,90 |
| kalcium-karbonát | 1,20 |
| sertés vitamin-premix1 | 1,10 |
| só (NaCl) | 0,55 |
| kolin-klorid, 25%-os | 0,35 |
| nyomelem-premix2 | 0,15 |
| A-vitamin-premix3 | 0,10 |
| a metionin hidroxilanalógja | 0,05 |
| összesen | 100,00 |
11 kg premix a következő komponenseket tartalmazza:
HU 204893 Β
77,161 USP (AEÁ-Győgyszerkönyv) szerinti Di-vitamin-egység
2,205 nemzetközi egység E-vitamin 441mgriboflavin
1,620 mg pantoténsav 2,205 mg niacin
4.4 mg Bu-vitamin 441 mgK-vitamin
19,180 mg kolin llOmgfólsav 165mgpiridoxin llOmgtiamin 22 mg biotin.
21 kg premix a következőket tartalmazza:
g mangán, mangán-szulfát alakjában 100 g cink, cink-karbonát alakjában 50 g vas, vas(II)-szulfát alakjában 5 g réz, réz-oxid alakjában
1.5 g jód, kálium-jodid alakjában 130 (min.)-150 (max.) g kalcium, kalcium-karbonát alakjában.
31 kg premix 6 613 800 USP A-vitamínt tartalmaz.
90,6 kg előbbi takarmány előállításához piemixet készítünk elő oly módon, hogy 10 g A82810-et hozzáadunk kis mennyiségű oldószerrel extrahált szójaliszthez, mozsárban - mozsáríörővel - eldöizsöljük és a megőrölt keveréket 453 g mennyiségűre hígítjuk, további, oldószenei extrahált szójatakarmány hozzáadásával. Ezt a premixet ezután hozzáadjuk 90,6 kg az előbbiekben leírt sertéstakarmányhoz, a keverést a szokásos módon végezve. Ez a gyógyszert tartalmazó takarmány az alaptáp 1 tonnájára vonatkoztatva 100 g A82810 szintet biztosít A gyógyszert tartalmazó takarmányt legalább 1 napon át (és előnyösen 7-10 napon át) etetjük a kocákkal az ellés előtt, ellés után pedig mindaddig, amíg ez célszerűnek tűnik.
Kisebb vagy nagyobb mennyiségű, gyógyszert tartalmazó takarmányt - változó A82810 szintekkel - állíthatunk elő oly módon, hogy változtatjuk a premixben levő A82810 és/vagy az alaptakarmány mennyiségét
A kocákat 2,1-21 g A82810/100 kg takarmány mennyiségű antibiotikummal etetjük. A gyógyszertartalmú takarmányt vízzel együtt ad libitum hozzáférhetővé tesszük. A kocák általában kb. 3-4 kg/nap takarmányt fogyasztanak.
18. példa
A828I0-et tartalmazó takarmány malacoknak
Az A82810-et kis mennyiségű etanolban oldjuk. Ezt 50 az etanolos oldatot polietilénglíkol 200-ban szuszpendáljuk. A szuszpenziót betöményítjük oly mértékben, hogy egy egységdőzis kb. 0,5-2 ml térfogatú legyen. Ezeket a szuszpenziókat 1,1-110 mg/kg mennyiségben, naponta háromszor, szonda segítségével adagoljuk a kismalacoknak.
19. példa
Továbbfejlesztett takarmány sertésdizentéria megszüntetésére
A szokásos módszerekkel premixet állítunk elő, a következő komponensek alkalmazásával:
| Komponensek | Mennyiség (g/kg) |
| aktív vegyület | 150,0 |
| kalcium-szilikát | 20,0 |
| kalcium-karbonát | 830,0 |
| (Oyster Shell Flour) Teljes tömeg: | 1000 g |
Ezt a premixet a szokásos takarmánykeverési technikák alkalmazásával hozzáadjuk a kereskedelemben 15 kapható sertéstakarmányhoz. így kb. 100 g aktív vegyület/tonna takarmány végső szintet érünk el.
Claims (5)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK20 1. Eljárás (I) általános képletű A82810 antibiotikum- ahol R hidrogénatom. ennek származékai, ahol R jelentése -CONHRi általános képletű csoport és Rí jelentése monohalogén-fenil-csoport, az A82810 antibiotikum egy szabad hidroxilcsoportján képzett 1-4 szén25 atomos alkanoilszármazékai és az (I) általános képletű vegyületek bázisokkal alkotott sói előállítására, azzal jellemezve, hogy az Actinomadura fibrosa sp. nov. NRRL 18348 törzset vagy annak egy A82810-et termelő mutánsát asszimilálható szén- és nitrogénforráso30 kát és szervetlen sókat tartalmazó táptalajban süllyesztett aerob fermentációs körülmények között tenyésztjük, és az így előállított A82810 antibiotikumot kívánt esetben bázissal alkotott sóvá alakítjuk és/vagy acilezzük vagy egy Ri-NCO általános képletű izocianáttal - ahol35 Rí jelentése az előbbiekben megadott - reagáltatjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás az A82810 antibiotikum és ennek állategészségügyi szempontból elfogadható sói előállítására, αζζαΖ jellemezve, hogy a fermentációs eljárást alkalmazzuk, majd az előállított A8281040 antibiotikumot kívánt esetben bázissal kezeljük.
- 3. Eljárás szinergetikns hatású antikokcidiális készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy 0,5100 ppm, az 1. vagy a 2. igénypont szerint előállított A828I0 antibiotikumot és/vagy az 1. igénypont szerinti bármely származékát valamely állategészségügyi szempontból elfogadható hordozóanyaggal, valaminta) 1-1000 ppm (ΠΙ) általános képletű naftalin-aminnal, amelyben R3 jelentése halogénatom vagy 1-4 szénatomos fluor-alkil-csoport,b) 1-125 ppm benzaminnal, mégpedig a következők valamelyikével2.4- dinitro-N-[4-(trifIuor-metoxi)-fenil]-6-(írifluor-metil)-benzamin,2.4- dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluor-etoxi)-fenil]-655 -(írifluor-metil)-benzamin vagy2.4- dinitro-N-[4-(pentafluor-etoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamin, vagyc) az a) vagy b) vegyületek bármelyikének egy gyógyászati szempontból elfogadható sója fentieknek meg60 felelő mennyiségével keverjük.HU 204 893 B
- 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aktív komponensként 0,5-100 ppm A82810-et vagy egy állategészségügyi szempontból elfogadható sóját és 1-125 ppm 2,4-dinitro-N-[4-(l,l,2,2-tetrafluoretoxi)-fenil]-6-(trifluor-metil)-benzamint vagy egy állategészségügyi szempontból elfogadható sóját alkalmazzuk.
- 5. Eljárás kokcidiózis-ellenes, takarmányhasznosítást javító sertésdizentéria elleni készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított A82810 antibiotikumot és/vagy az 1. igénypont szerint 5 előállított bármely származékát legalább egy, állategészségügyi szempontból elfogadható hordozóanyaggal keveqük.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US18949988A | 1988-05-02 | 1988-05-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT54418A HUT54418A (en) | 1991-02-28 |
| HU204893B true HU204893B (en) | 1992-02-28 |
Family
ID=22697597
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU892064A HU204893B (en) | 1988-05-02 | 1989-05-02 | Process for producing polyether antibiotics and pharmaceutical compositions comprising same |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0341019B1 (hu) |
| JP (1) | JPH0215085A (hu) |
| KR (1) | KR890017362A (hu) |
| CN (1) | CN1038838A (hu) |
| AT (1) | ATE84535T1 (hu) |
| AU (1) | AU625818B2 (hu) |
| CY (1) | CY1699A (hu) |
| DE (1) | DE68904348T2 (hu) |
| DK (1) | DK211289A (hu) |
| FI (1) | FI892077A (hu) |
| GR (1) | GR3007507T3 (hu) |
| HK (1) | HK54893A (hu) |
| HU (1) | HU204893B (hu) |
| IE (1) | IE891420L (hu) |
| IL (1) | IL90130A (hu) |
| NZ (1) | NZ228935A (hu) |
| PT (1) | PT90434B (hu) |
| RU (1) | RU1825377C (hu) |
| ZA (1) | ZA893234B (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989006963A1 (en) * | 1988-02-08 | 1989-08-10 | Pfizer Inc. | Acidic polycyclic ether antibiotic having anticoccidial and growth promotant activity |
| US4920050A (en) * | 1989-02-27 | 1990-04-24 | Pfizer Inc. | Acidic polycyclic ether antibiotic |
| US5278053A (en) * | 1991-09-16 | 1994-01-11 | Eli Lilly And Company | Method of producing a polyether antibiotic from actinomadura fibrosa sp. nov. NRRL 18348 and actinomadura sp. NRRL 18880 |
| US5217993A (en) * | 1992-07-20 | 1993-06-08 | Eli Lilly And Company | Monensin derivatives |
| US5331003A (en) * | 1993-03-26 | 1994-07-19 | Eli Lilly And Company | Anticoccidial methods |
| DE69837795T2 (de) | 1998-03-13 | 2008-01-31 | Hitachi Plant Technologies, Ltd. | Zentrifugalkompressor und wellendichtung |
| CN104877925B (zh) * | 2014-02-28 | 2018-05-25 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 | 一种异壁放线菌和三种新的抗真菌maclafungins类化合物及其制备和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE58637B1 (en) * | 1984-10-09 | 1993-10-20 | Lilly Co Eli | Polyether antibiotic A80190 |
| WO1989006963A1 (en) * | 1988-02-08 | 1989-08-10 | Pfizer Inc. | Acidic polycyclic ether antibiotic having anticoccidial and growth promotant activity |
-
1989
- 1989-04-28 RU SU894613956A patent/RU1825377C/ru active
- 1989-05-01 IL IL9013089A patent/IL90130A/en unknown
- 1989-05-01 NZ NZ228935A patent/NZ228935A/en unknown
- 1989-05-01 IE IE891420A patent/IE891420L/xx unknown
- 1989-05-01 DK DK211289A patent/DK211289A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-05-01 AU AU33916/89A patent/AU625818B2/en not_active Ceased
- 1989-05-01 KR KR1019890005813A patent/KR890017362A/ko not_active Application Discontinuation
- 1989-05-02 ZA ZA893234A patent/ZA893234B/xx unknown
- 1989-05-02 CN CN89104280A patent/CN1038838A/zh active Pending
- 1989-05-02 HU HU892064A patent/HU204893B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-05-02 AT AT89304398T patent/ATE84535T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-05-02 FI FI892077A patent/FI892077A/fi not_active Application Discontinuation
- 1989-05-02 DE DE8989304398T patent/DE68904348T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-02 EP EP89304398A patent/EP0341019B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-02 JP JP1113534A patent/JPH0215085A/ja active Pending
- 1989-05-02 PT PT90434A patent/PT90434B/pt not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-03-30 GR GR930400692T patent/GR3007507T3/el unknown
- 1993-06-03 HK HK548/93A patent/HK54893A/xx unknown
-
1994
- 1994-01-14 CY CY169994A patent/CY1699A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR890017362A (ko) | 1989-12-15 |
| ATE84535T1 (de) | 1993-01-15 |
| HUT54418A (en) | 1991-02-28 |
| DE68904348T2 (de) | 1993-05-27 |
| HK54893A (en) | 1993-06-11 |
| IE891420L (en) | 1989-11-02 |
| PT90434B (pt) | 1994-08-31 |
| PT90434A (pt) | 1989-11-30 |
| GR3007507T3 (hu) | 1993-08-31 |
| FI892077A0 (fi) | 1989-05-02 |
| CN1038838A (zh) | 1990-01-17 |
| IL90130A (en) | 1994-02-27 |
| NZ228935A (en) | 1991-05-28 |
| JPH0215085A (ja) | 1990-01-18 |
| EP0341019A3 (en) | 1990-04-04 |
| AU3391689A (en) | 1989-11-02 |
| DK211289D0 (da) | 1989-05-01 |
| EP0341019B1 (en) | 1993-01-13 |
| AU625818B2 (en) | 1992-07-16 |
| EP0341019A2 (en) | 1989-11-08 |
| FI892077A (fi) | 1989-11-03 |
| RU1825377C (ru) | 1993-06-30 |
| ZA893234B (en) | 1991-01-30 |
| DK211289A (da) | 1989-11-02 |
| CY1699A (en) | 1994-01-14 |
| DE68904348D1 (de) | 1993-02-25 |
| IL90130A0 (en) | 1989-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4582822A (en) | Antibiotic A80190, pharmaceutical compositions containing same and method of use | |
| JP2551550B2 (ja) | 抗生物質ａａｄ２１６のアグリコンおよびシウドアグリコン | |
| US4683201A (en) | Antibiotic A80190-producing Actinomadura oligospora and process | |
| US4885170A (en) | Antibiotic A80509 | |
| JPH0695941B2 (ja) | 新規抗生物質 | |
| HU204893B (en) | Process for producing polyether antibiotics and pharmaceutical compositions comprising same | |
| CA1337803C (en) | Antibiotic produced by fermentation with amycolatopsis orientalis | |
| HU199559B (en) | Process for producing antibioticum a 10255 complex and factors and pharmaceutical compositions containing them | |
| US4824863A (en) | Antibiotic A80438 | |
| EP0184291B1 (en) | Polyether antibiotic a80190 | |
| US4517178A (en) | Novel antibiotic 76-11, process for the production thereof, anticoccidiosis agent and domestic animals growth accelerator comprising the same as an effective ingredient | |
| US5314875A (en) | Method for treating swine dysentery with the derivatives of the antibiotic A82810 | |
| US5098834A (en) | Process for producing antibiotic A8210 which comprises cultivating Actinomadura Fibrosa sp nov. NRRL 18348, or an A82810-producing mutant thereof | |
| US5043353A (en) | A80789 polyether antibiotic | |
| US4110436A (en) | Antibiotic a-28086 factor d and process for production thereof | |
| HU203789B (en) | Process for producing polycyclic acidic ether-type antibiotica of anticoccidial and growth-stimulating activity | |
| US4110435A (en) | Antibiotic a-28086 factor d and process for production thereof | |
| US3932619A (en) | Metabolite A-27106 and processes for its preparation and use | |
| US4672036A (en) | Pure cultures of Kibdelsporangium aridum Shearer gen. nov., sp. nov. ATCC 39323 and mutants thereof | |
| US5242814A (en) | Polyether antibiotic | |
| US4876273A (en) | Antibotic A80577 and process for its production | |
| EP0211490A2 (en) | Antibiotics of the vancomycin-class | |
| US4996148A (en) | A80407 antibiotics | |
| US5213797A (en) | A80407 antibiotics | |
| CA1320464C (en) | Antibiotic a80190 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |