PT88991B

PT88991B - Processo para a preparacao de analogos de avermectinas e milbemicinas

Info

Publication number: PT88991B
Application number: PT88991A
Authority: PT
Inventors: Christopher James Dutton; Stephen Paul Gibson
Original assignee: Pfizer Ltd
Priority date: 1987-11-14
Filing date: 1988-11-11
Publication date: 1993-02-26
Also published as: JP2854869B2; ATE85796T1; EP0317148A2; DK170343B1; GB8726730D0; EP0317148B1; DE3878535T2; US5702924A; EP0317148A3; JPH01160983A; DK627088A; IE61513B1; IE883399L; US6362168B1; ES2053764T3; DK627088D0; PT88991A; DE3878535D1

Description

PFIZER LIMITED

PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE ANALOGOS DE AVERMECTINAS E MIL BEMICINAS

-2em que a linha tracejada na posição 22-23 representa uma ligação dupla, facultativa, e em que R ê H ou OH e a ligação du 1 2 pia não existe, ou a ligação dupla existe e R não existe; R ê H, alquilo C^-Cg, alquenilo C₂-Cg, alquinilo C2-Cg, alcoxialquilo ou alquimtialquilo contendo de 1 a 6 ãtomos de carbono em cada grupo amquilo ou alcoxi, em que qualquer dos referidos grupos alquilo, alcoxi, alquenilo ou alquinilo pode estar substituido por um, ou mais, átomos de halo; ou um grupo cicloalquilo Cg-Cg ou cicloalquenilo Cg-Cg; qualquer dos quais pode estar substituido, facultativamente, por metileno ou um, grupos alquilo C^-C^, ou por átomos de halo; ou um anel hetero cíclico, contendo oxigénio ou enxofre, de 3 a 6 elementos, que pode ser saturado ou total ou parcialmente insaturado e que possa estar substituido, facultativamente, por um, ou mais, grupos alquilo CpC^, ou por ãtomos de halo; ou um grupo da fórmula SR^, em que R$ ê alquilo C^-Cg, alquenilo C2Cg, al quinilo Cg-Cg-cicloalquenilo Cg-Οθ, fenilo ou fenilo 'substi tuido, em que o substituinte ê alquilo C^-C^, alcoxi C^-C^ ou halo, ou um anel heterociclico, contendo oxigénio ou enxofre, de 3 a 6 elementos, que pode ser saturado ou total ou parcialmente insaturado, e que pode estar substituido, facultativamen te, por um, ou mais, grupos alquilo C.-C, ou por átomos de ha3 4 lo; R ê hidrogénio ou metilo; e R ê H ou um grupo de 4’-(alfa-LT-oleandrosi 1 )-alfa-L-oleandrosiloxi da fórmula:

-34 1 com a ressalva de que, quando R e R são ambos H e não exis2 te a ligação dupla, R não ê H, ou CHg. Estes compostos agentes antiparasíticos de espectro largo, com utilidade como antelmínticos, ectoparasiticidas, insecticidas e acaricidas.

processo de preparação consiste em se fermentar um organismo mutante Streptomices avermitilis ATCC 53567 ou 53568 na presença de R^CHzCOgH, ou de um seu derivado, se isolar o composto de fórmula (I) e, se for desejado, se hidrogenar o produto obtido, ou se hidrolisar o mesmo seguido de halogenação e redução.

-4AGENTES ANTIPARASÍTICOS

Este invento diz respeito a agentes antiparasíticos e, em particular, a compostos relacionados com as avermectinas e as milbemicinas, mas que têm um grupo de substituintes novos, na posição 25, e a um processo, para a sua preparação.

As avermectinas são um grupo de agentes antiparasíticos de espectro largo, citado previamente como os compostos C-076. Eles são produzidos pela fermentação de uma estirpe dos microrganismos Streptomyces avermitilis ATCC 31267, 31271 ou 31272, sob condições aeróbicas, num meio nutriente aquoso, contendo sais inorgânicos e fontes assimiláveis de carbono e de azoto. As propriedades morfológicas e cul turais das estirpes ATCC 31267, 31271 e 31272 encontram-se des critas, em pormenor, na Memória Descritiva da Patente Inglesa, N²1573955, a qual descreve, também, o isolamento e a estrutura química de oito componentes individuais, que constituem o complexo C-076. As milbemicinas são antibióticos macrolidos relacionados estruturalmente, que carecem de resíduos de açúcar, na posição 13. Elas são produzidas pela fermentação, por exemplo como se encontram descritas na Memória Descritiva da Paten te Inglesa, N^s 1390336, e no Pedido da Patente Europeia, Publi cação N² 0170006.

No nosso Pedido de Patente Europeia Publicação N^s 0214731, nós divulgamos que, adicionando determinados ácidos carboxílicos espicifiçados, ou os seus derivados, à fermentação de um organismo produtor de avermectinas, ê possível obterem-se compostos novos, relacionados com as avermectinas, mas tendo um grupo de substituintes não naturais na posição 25, em vez do grupo de isopropilo ou de sec-butilo, que, habitualmente se encontra presente.

-5Os compostos novos produzidos são caracterizados por o grupo substituinte, na posição 25, ser alfa-ramifiçado, isto ê, por o ãtomo de carbono, ligado à posição do anel C-25, ser um átomo de carbono secundário, ligado a dois outros átomos de carbono.

No nosso Pedido de Patente, dos Estados Unidos, da América, pendente, Série N^s 6512, nós descrevemos e reclamamos novas estirpes mutantes do microrganismo Streptomyces avermitilis, que carecem da actividade de dehidrogenase do ácido 2-oxo de cadeia ramificada. As citadas estirpes têm sido depositadas na Colecção de Cultura do Tipo Americano, Maryland, sob as designações de Streptomyces avermitilis ATCC 53567 e ATCC 53568.

Descobrimos, agora, que, empregando-se estas novas estirpes mutantes de Streptomyces avermitilis, ê possível obter-se uma outra série de derivados novos de avermectina, não adquiríveis previamente, em que o substituinte C-25 está ligado por um átomo de carbono não ramificado (primário). Os compostos novos são agentes antiparasíticos muito activos, com particular utilidade como antelmínticos, ectoparasitieidas, insecticidas e acaricidas. Os compostos podem ser submetidos a reacções de transformação química convencional, para se obterem outros novos derivados semi-sintêticos E, assim, de acordo com o invento em consideração, estabelecem -se compostos, que têm a fórmula (I):

em que a linha tracejada, na posição 22-23, representa uma li<1 gação dupla facultativa, e em que R é H ou OH e não existe a 1 ligação dupla, e em que existe a ligação dupla e R não existe;

'

R ê H, alquilo CyCg, alquenilo C₂-Cg, alquinilo C₂-Cg, alcoxialquilo ou alquiltioalquilo contendo de 1 a 6 átomos de carbono em cada grupo de alquilo ou de alcoxi, em que quaisquer dos citados grupos alquilo alquenilo, alcoxi ou alquinilo podem ser substituídos por um, ou mais, átomos halo; ou um grupo cicloalquilo de Cg-Cg ou cicloalquenilo Cg-Cg, qualquer dos quais pode ser facultativamente substituído por metileno ou um, ou mais, grupos alquilo C^-C^ ou ãtomo halo; ou um anel heterocíclico contendo oxigénio ou enxofre de 3 a 6 elementos, que pode ser saturado, ou total ou parcialmente insaturado, e que pode, facultativamente, ser substituído por um, ou mais, grupos alquilo ou átomos halo; ou um grupo da fórmula SR em que R⁵ ê alquilo C2-C3, alquenilo C2-Cq₅ alquinilo C3-C8,

-7cicloalquilo Cg-Cg, cicloalquenilo Cg-Cg, fenilo ou fenilo substituído em que o substituinte é alquilo C^-C^, alcoxi C^ C₄ ou halo, ou um anel heterocíclico contendo oxigénio ou enxofre de 3 a 6 elementos, que pode ser saturado, ou total ou parcialmente insaturado, e que pode, facultativamente, ser substituído por um, ou mais, grupos alquilo ou átomos de halo;

R ê hidrogénio ou metilo;

e R⁴ é H ou um grupo 4'-(alfa-L-oleandrosil)-alfa-L-oleandrosiloxi da fórmula:

1 com a ressalva de que, quando R e R são ambos H e não existe 2 a ligação dupla, R nao ê H ou CHg.

Na definição precedente, os grupos alquilo contendo 3, ou mais, átomos de carbono, podem ser de cadeia linear ou ramificada. Halo designa fluor, cloro, bromo ou iodo.

complexo C-076 compreende oito compostos distintos, mas intimamente relacionados, descritos como C-076 Ala, Alb, A2a, A2b, Bla, Blb, B2a e B2b. A série a de compostos refere-se'à avermectina natural, em que o substituinte 25 ê (S)-sec-butilo, e a série b refere-se âqu£

-8les em que o substituinte 25 é o isopropilo. As designações A e B referem-se a avermectinas, em que o substituinte 5 é metoxi ou hidroxi, respectivamente, e o número ”1 refere-se a avermectinas, em que existe uma ligação dupla na posição 22-23, e o número 2 refere-se a avermectinas que têm um hidrogénio na posição 22 e um hidroxi na posição 23.

Neste Pedido, os identificadores a e b foram renunciados. Os identificadores A1, A2, B1, e B2 foram retidos para se ferirem a avermectinas não naturais, tendo as caracteristicas estruturais correspondentes àqueles das avermectinas naturais, como foi observado no precedente.

Os compostos preferidos da fórmula (I) são aqueles em que R⁴ ê 4'-(alfa-L-oleandrosil)-alfa-L-oleandrosiloxi.

Também preferidos são os compostos n r r da fórmula (I) em que R ê SR- e R ê metilo ou etilo.

Num outro grupo de compostos prefe2 ridos, R ê metilo, isopropilo ou sec-butilo.

Num ainda outro grupo de compostos preferidos, R ê um grupo alquilo C₃-C₈ substituído por um, ou mais, átomos halo, particularmente 1 -(trifluorometi1)etilo.

De acordo com o invento, os compostos de fórmula (I), em que R ê OH e não existe a ligação du1 4 pia, ou em que existe a ligação dupla e R não existe, e R ê 4¹ -(alfa-L-oleandrosi1)-alfa-L-oleandrosiloxi, são preparados pela fermentação de um organismo mutante Streptomyces avermitilis ATCC 53567 ou 53568, como se encontra descrito no Pedido de Patente do Estados Unidos da América, Série N^a 6212, na presença do ácido carboxílico adequado, da fórmula R CH₂C0₂H, em que R² ê o que ficou definido no precedente, ou um seu sal,

-9,- j11mxim mi Λ¹ ou um seu sal éster, ou uma sua amida, ou um precusor oxidativo para esse efeito. 0 ãcido é adicionado à fermentação, quer no momento da inoculação, quer nos intervalos durante a fermentação. A produção dos compostos de fórmula (I) pode ser controlada retirando protótipos da fermentação, extraindo-se com um solvente orgânico e acompanhado o aspecto do composto de fórmula (I), pela cromatografia, por exemplo, empregando-se a cromatografia líquida de elevada pressão. Continua-se a incubação, atê que o rendimento do composto de fórmula (I) tenha sido levado ao seu ponto extremo, geralmente durante um período de 12 a 16 dias.

Uma quantidade preferida de cada adição do ácido carboxílico, ou do seu derivado, oscila entre 0,05 e 4,0 gramas por litro. Os melhores rendimentos dos compostos de fórmula (I) são obtidos adieionalmente, gradualmente, o ãcido à fermentação, por exemplo por adições diãrias do ãcido, ou do seu derivado, durante um período de mais de diversos dias. 0 ácido pode ser adicionado como um sal, tal como o sal de sódio ou de amónio, ou como um éster, tal como o éster de metilo ou de etilo, ou como uma amida, mas ê adicionado, de preferência, como o ácido livre. Os substratos alternativos, que podem ser empregados na fermentação, são derivados, que são precusores oxidativos para os ácidos carboxílicos; deste modo, por exemplo, os substratos adequados serão álcoois da fórmula R (CH_?) OH, ou os derivados de aminas da fórmula R^(CH₂)_nNH₂, em que n ê 2, 4 ou 6, ácidos alcanóicos inferiores substituídos da fórmula R^(CH₂)_nCO₂H em que n ê 3 ou 5, ou aldeídos da fórmula R²(CH₂)_nCH0 em que n ê 1, 3 ou 5 e R² ê o que ficou definido no precedente. Os meios empregados, para a fermentação, podem ser um meio complexo convencional, contendo fontes assimiláveis de carbono, de azoto ou de outros elementos com vestígios.

Após a fermentação durante um período de diversos dias, a uma temperatura de preferência compreendida entre 24 e 33⁹ C, o caldo da fermentação ê centrifu-

-10gado ou filtrado, e o bolo micelial é extraído com acetona ou com metanol. 0 extracto de solventes ê concentrado e o produto desejado ê, em seguida, extraído num solvente orgânico imis cível em ãgua, tal como o cloreto de metileno, o acetato de etilo, o clorofórmio, o butanol ou a cetona de isobutilo de metilo. 0 extracto de solventes ê concentrado, e o produto bru to, contendo os compostos de fórmula (I), é, a seguir, purificado, se necessário, pela cromatografia, por exemplo, empregando-se a cromatografia líquida de elevada pressão, de fase inversa preparativa.

produto é geralmente, obtido como uma mistura dos compostos de fórmula (I), em que R⁴ é 4'-(alfa-L-oleandrosi1)-alfa-L-oleandrosiloxi, R ê OH e, não existe a ligação dupla, ou R não existe, mas existe a ligação dupla, 3 e em que R ê H ou CH₃; não obstante, as proporções podem variar, dependendo do ácido carboxílico específico empregado e das circunstâncias em que se efectua a fermentação.

Temos verificado que uma serie de 2 ácidos carboxílicos, tais como os definidos por R CH₂C0₂H, podem ser adicionados à fermentação, para se obterem avermectinas com um grupo novo de substituinte, na posição 25. Exemplos dos ácidos específicos, que podem ser empregados, incluem os seguintes:

ácido metiltioacêtico, ácido etiltioacêtico, ácido 3-metilbutírico, ácido 3-trifluormetilbutírico, ácido 3-metilpentanóico, ácido ciclopentanoacético, ácido tiofeno-3-acético e ácido propiónico.

-11Sob um aspecto específico e preferido do invento, a fermentação ê levada a efeito na presença do ácido metiltioacêtico, para dar origem, predominantemente, j

ao composto de fórmula (I), em que R ê OH, não existe a ligação dupla, ê SCHg, R^ ê CHg e R⁴ ê 4¹ -(alfa-L-oleandrosi1)-alfa-4-oleandrosiloxi, designado, nesta Memória Descritiva, por avermectina A2 de 25-metiltiometilo.

Sob um outro aspecto preferido do invento, a fermentação ê levada a efeito na presença do ácido propiónieo, para dar origem, predominantemente, ao composto de fórmula (I), em que R ê OH, não existe a ligação dupla, R é CHg, r3 ê CHg e R^ 4¹-(alfa-L-oleandrosi1)-alfa-4-oleandrosiloxi, designado, nesta Memória Descritiva, por avermectina A2 de 25-etilo.

Sob ainda um outro aspecto preferido do invento, a fermentação ê levada a efeito na presença do ácido 3-metilbutírico, para dar origem, predominantemente, ao composto de fórmula (I), em que R não existe, a ligação dupla 2 3 4 existe, R ê isopropilo, R é H, e R é 4'-(alfa-L-oleandrosilJ_ -alfa-4-oleandrosiloxi, designado nesta Memória Descritiva por avermectina B1 de 25-isobutilo.

Sob mais ainda outro aspecto preferido do invento, a fermentação ê levada a efeito na presença do ácido 3-trifluormetilbutírico, para dar origem, predominantemente, aos compostos de fórmula (I), em que R ê OH, não

4 existe a ligação dupla, R ê 1-(trifluormetilo)etilo, R ê 4'-(alfa-oleandrosil)-alfa-4-oleandrosiloxi, e R ê CHg ou H, designados, nesta Memória Descritiva, por avermentinas A2 eB2 de 25-(2-trifluormetilpropilo), respectivamente.

Os compostos da fórmula (I), em que existe a ligação dupla e não existe R , podem ser preparados, alternativamente, a partir do composto correspondente de fórmula (I), em que R¹ ê OH, e não existe a ligação dupla, por

-12uma reacção de desidratação. A reacção é levada a efeito, primeiramente, protegendo selectivamente os grupos de hidroxilo, nas posições 5 e 4, por exemplo como o derivado de t-butildimetiIsi1iloxiacetilo, em seguida pondo em reacção com um haleto de tiocarbonilo substituído, tal como o cloreto de (4-metilfenoxi)tiocarbonilo, seguido pelo aquecimento num solvente de elevado ponto de ebulição, por exemplo o triclorobenzeno, para se efectuar a deshidratação. 0 produto ê, finalmente, desprotegido, para se obter o composto não saturado. Estas fases, em conjunto com os reagentes apropriados e as-condições da reac ção adequadas, eneontram-se descritas na Patente N² 4328335, dos Estados Unidos da América.

Os compostos de fórmula I, em que

R ê H, podem, também, ser preparados a partir dos compostos 3 correspondentes em que R ê CHg, por desmetilação. Esta reacção ê lavada a efeito tratando-se o composto 5-metoxi, ou um seu derivado protegido adequadamente, com o acetato mercúrico, e hidrolisando o êter 3-acetoxienol resultante com o ãcido diluído, para se obter o composto 5-ceto. Este ê, em seguida, reduzido empregando-se, por exemplo, o borohidreto de sódio, dando origem ao derivado 5-hidroxi. Os reagentes adequados e as condições apropriadas para estas fases encontram-se descritos na Patente N^s 4423209, dos Estados Unidos da América.

Os compostos de fórmula I, em que

R ê H, e não existe a ligação dupla, podem ser preparados a partir do composto correspondente, em que existe a ligação dupla, e não existe R , pela hidrogenação catalítica selectiva, empregando-se um catalisador adequado. Por exemplo, a redução pode ser efectuada empregando-se o cloreto de tris(trifenilfosfina)ródio (I), como se encontra descrito na Publicação, do Pedido da Patente Europeia, N² 0001689.

Os compostos de fórmula (I), em que R⁴ é H, são preparados a partir dos compostos correspondentes

-13em que R⁴ ê 4'-(alfa-L-oleandrosil)-alfa-L-oleandrosiloxi, removendo-se o grupo de 4'-(alfa-L-oleandrosil)-alfa-L-oleandrose, por hidrólise moderada, com um ãcido num solvente orgânico aquoso, obtendo-se a glicona, com um grupo de hidroxi na posição 13; este ê, em seguida, halogenado, por exemplo por reacção com um haleto de sulfonilo de benzeno, obtendo-se o derivado 13-deoxi-13-halo, que ê finalmente, reduzido, selectivamente, por exemplo empregando-se o hidreto de tributiltin. Com o fim de se evitarem reacções secundárias indesejáveis, ê desejável protegerem-se quaisquer ou outros grupos hidroxi, que se encontrem presentes, por exemplo empregando-se um grupo tert-buti1dimetiIsi1ilo. Este ê, em seguida, removido facilmen te, depois da fase da halogenação ou da redução, por tratamento com metanol contendo um vestígio de ácido. Todas estas fases, em conjunto com os reagentes adequados e as condições da reacção apropriadas para a sua realização, encontram-se descri tas na Publicação do Pedido da Patente Europeia N^s 0002615.

Os compostos do invento são agentes antiparasíticos muito activos, tendo utilidade particular, como antelmínticos, eetoparasiticidas, insecticidas e acaricidas.

E, assim, os compostos são eficientes no tratamento de uma diversidade de doenças originadas por endoparasitas, incluindo, em particular, a helmintíase, que ê originada, o mais frequentemente, por um grupo de vermes parasíticos, descritos como nematodes, e que podem causar perdas económicas graves nos suínos, ovelhas, cavalos e gado vacum, bem como afectar os animais domésticos e as aves domésticas.

Os compostos são, também, eficientes contra outros nematodes, que têm influência sobre diversas espécies de animais, incluin do, por exemplo, a Dirofilaria em cães, e contra diversos parasitas, que podem infectar os seres humanos, incluindo os parasitas gastro-intestinais, tais como Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Trichinella, Capillaría, Trichuris, Enterobius e parasitas que se encontram no sangue e em outros

-14tecidos e orgãos,.tais como os vermes filiariais e as fases extra intestinais de Strongyloides e de Trichinella.

Os compostos são, também de importância, no tratamento de infecções ectoparasitas, incluindo, em particular, ectoparasitas de artrópodos de animais e de aves, tais como os carrapatos, os ãcaros, os piolhos, as pulgas, as moscas varejeiras, os insectos mordedores e as larvas de dípteros de arribação, que podem afectar o gado vacum e os cavalos.

Os compostos são, também, insecticidas activos contra insectos nocivos domésticos, tais como a barata, a traça do vestuário, o escaravelho dos tapetes e a mosca doméstica, bem como são proveitosos contra as pragas de insectos de cereais armazenados e de plantas agrícolas, tais como os ácaros de aranhas, os pulgões, as lagartas e contra os ortôpteros de arribação, tais como os gafanhotos.

Os compostos de fórmula (I) são administrados como uma composição adequada ao emprego específico planeado e espécie particular do animal hospedeiro a ser tratado, e ao parasita ou insecto envolvido. Para emprego como um antelmíntieo, os compostos podem ser administrados por via oral, na forma de uma cápsula, de uma pílula, de um comprimido ou de preferência como uma poção líquida, ou alternativamente, eles podem ser administrados como uma injecção ou como um implante. Tais composições são preparadas de uma maneira convencional, de acordo eom a prática veterinária normalizada. As cápsulas, as pílulas ou os comprimidos podem ser preparados misturamdo-se o ingrediente activo com um diluente ou com um veiculo, dividido finamente, adequado, contendo adicionalmente um agente de desintegração e/ou um agente de ligação, tal como o amido, a lactose, o talco, o estearato de magnésio, etc.

Uma composição de poção pode ser preparada pela dispersão do ingrediente activo numa solução aquosa, em conjunto com agentes de dispersão ou de humedecimento, etc, e as composições

-15injectáveis podem ser preparadas na forma de uma solução esterilizada, que pode conter outras substâncias, por exemplo, sais ou glucose suficiente para tornar a solução isotónica com o sangue. Estas composições variam de acordo com o peso do com posto activo, dependendo da espécie do animal hospedeiro a ser tratado, da gravidade e do tipo da infecção e do peso do corpo do hospedeiro. De uma forma geral, para a administração por via oral, uma dose de cerca de 0,001 a 10 mg, por kg do peso do corpo do animal, dada como uma dose única, ou em doses parciais, durante um período de 1 a 5 dias, ê satisfatória, mas, como ê evidente, circunstâncias haverá em que escalões de dose mais elevadas, ou inferiores, estarão indicados, e tais doses então no âmbito deste invento.

Como uma alternativa, os compostos podem ser administrados com a alimentação do animal, e, com esta finalidade, um aditivo concentrado de alimentação, ou uma pré-mistura concentrada de alimentação, pode ser preparada, para se misturar com a alimentação normal do animal.

Para emprego como um insecticida e para o tratamento de pragas agrícolas, os compostos são aplica dos como pulverização, poeiras, emulsões e outras afins, de acordo com a prática agrícola normalizada.

Para o emprego humano, os compostos são administrados como uma composição farmacêutica aceitáveel, de acordo com a prática médica normalizada.

invento é esclarecido pelos Exemplos, que se segue, nos quais os Exemplos 1 a 8 são Exemplos da preparação de compostos da fórmula (I), o Exemplo 9 ê um exemplo de uma composição de poção, e os Exemplos 10 e 11 esclarecem a actividade antiparasítica e insecticida dos compostos .

-16EXEMPLO 1

Avermectina A2 de 25-Etilo

Um inóculo congelado (2 ml) de uma cultura de um organismo mutante de Streptomyces avermitilis ATCC 53568 foi inoculado em 50 mis de um meio contendo o amido (1 grama), Pharmamedia (Marca de Fábrica) (0,75 grama), ar damina pH (0,25 grama), e carbonato de cálcio (0,1 grama), num balão de 300 ml, e foi incubado a 28^SC, durante 2 dias. Este inóculo (50 ml) foi transferido para um segundo balão de inóculo ( 1 litro), contendo amido (20 gramas), Pharmamedia (15 gramas), ardamina pH (5 g) ecarbonato de sódio (2 gramas) e foi incubado a 28⁹C, durante outros 2 dias. Este inóculo foi empregado para se inocularem 60 litros de um meio contendo o amido (6 kg), sulfato de magnésio (60 gramas), Pharmamedia (300 gramas), fosfato de hidrogénio de dipotâssio (60 gra^ mas), sulfato ferroso (0,6 grama), carbonato de cálcio (420 gramas), ácido glutâmico (36 gramas), sulfato de zinco (0,06 grama) e sulfato manganoso (0,06 grama), contido num fermen tador de 60 litros. A fermentação foi incubada a 29^SC, com agitação a 350 rotações por minuto e agseificação a 60 litros por minuto. Adicionou-se o propionato de sódio (140 gramas), depois de 96 horas, e novamente depois de 192 horas (54 gra mas). Depois de 288 horas, o micêlio foi removido por filtração, e foi extraído com acetona (2 x 50 litros), seguida com de etilo (50 litros). 0 extracto de acetona foi concentrado atê cerca de 10 litros e foi extraído com o extracto de aceta to de etilo precedente, em três parcelas. Os estratos de acetato de etilo resultantes foram reunidos e foram evaporados, dando origem a um Óleo castanho (112 gramas).

óleo precedente foi dissolvido em 160 ml de uma mistura de metanol e de água (95:5) e foi extraído com n-hexano (2 χ 300 ml), os extractos de hexano

-17b&Qb&Rí.

foram postos de parte, e o estrato de metanol foi evaporado dando origem a um óleo castanho (87 gramas). Este foi dissolvido em cloreto de metileno (250 ml) e foi agitado com gel de sílica (80 gramas) e carvão vegetal (30 gramas), durante 1 ho ra. A sílica e o carvão vegetal foram removidos por filtração através de Arbacel, e o filtrado foi evaporado, dando origem a um óleo amarelo (53 gramas). Este foi dissolvido em cloreto de metileno (2,2 litros) e foi agitado com alumina (190 gra mas), durante duas horas. A alumina foi removida por filtra ção, e o filtrado foi agitado com mais alumina (64 gramas), durante mais uma hora. A alumina foi removida por filtração, e os bolos do filtrado reunidos, de ambas as filtrações, fo ram agitados eom o clorofórmio (1,3 litros), durante 45 minutos, e, em seguida, a alumina foi removida por filtração. 0 filtrado foi evaporado, dando origem a um óleo amarelo pãlido (12,5 gramas), que foi dissolvido em êter dietílico e foi adj_ cionado a uma coluna de gel de sílica (400 gramas). A coluna foi eluida com o êter dietílico, e foram recolhidas parcelas de 100 ml. As parcelas 21 a 28 foram reunidas, e o solvente foi evaporado, dando origem a um material parcialmente purin cado. 0 produto foi dissolvido em metanol (0,5 ml), e foi cro matografado numa coluna de C18 Zorbax ODS (Marca de Fábrica, Dupont) (21 mm χ 25 cm), eluindo-se com uma mistura de meta nol e água (77:23), a um ritmo de fluxo de 9 mis, por minuto. As parcelas pertinentes foram reunidas e o solvente foi evapo rado, dando origem ao composto de fórmula (I), em que R ê 0H 2 3 4 não existe a ligação dupla, R e R são ambos GH₃ e R ê 4'(alfa-L-oleandrosi1)-alfa-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 146 a 153^aC. A estrutura do prodi£ to foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardea mento atómico rápido, levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trietileno de glicol, com o cloreto de sódio sólido.

(M + Na)⁺ observado no espectro de massa 899 (teórico 899).

A espectrometria de massa de impac to electrónico foi levada a efeito empregando-se um espectró-18metro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 570, 295, 277, 275, 183, 165, 145, 127, 113, 95 e 87.

EXEMPLO 2

Avermectina A2 de 25-metiltiometiIo

Um inóculo congelado (2 ml) de uma cultura de um organismo mutante de Streptomyces avermitilis ATCC 53568 foi inoculado em 50 mis de um meio contendo o amido contendo o amido (1 grama), Pharmamedia (Marca de Fábrica) '0,75 grama), ardamina pH (0,25 grama) e carbonato de cálcio (0,1 grama), num balão de 300 ml, e foi incubado durante 2 dias, a 28⁹C, num vibrador recíproco, accionando-se a 180 rotações por minuto. Um inóculo deste balão (25 ml) foi transfe rido para um balão de 3 litros, contendo 600 mis do meio precedente (todos os ingredientes em proporção), e foi incubado, durante dois dias, a 28⁹C, com agitação, num vibrador recípro co, accionando-se a 180 rotações por minuto. 0 produto deste balão (40 ml) foi empregado para se inocular um fermentador de 3 litros, contendo 2,5 litros de um meio constituído por amido (250 gramas), sulfato de magnésio (2,5 gramas), Pharmamedia (12,5 gramas), fosfato de hidrogénio de dipotássio (2,5 gramas), sulfato ferroso (0,025 grama), carbonato de cãl_ cio (1,75 gramas), ácido glutâmico (1,5 gramas), sulfato de zinco (0,0025 grama) e sulfato manganoso (1,5 gramas). Esta fermentação foi incubada a 28^aC, com agitação a 1.000 rotações por minuto. 0 ácido metiltioacético (1 grama) foi adicionado decorridas 96 horas e a fermentação se continuou durante outros 11 dias. Em seguida, o micêlio foi removido por filtração θ foi extraído com acetona (2x2 litros), seguida com acetato

-19de etilo (2 litros). 0 extracto de acetona foi concentrado atê cerca de 400 mis e foi extraído com o extracto de acetato de etilo, em três parcelas. Os estratos de acetato de etilo resultante foram reunidos e foram evaporados, dando origem a um óleo castanho (4 gramas), que foi dissolvido em êter dietílico e foi aplicado a uma coluna de gel de sílica (100 gramas). A coluna foi eluida com o êter dietílico, e recolheram-se parcelas de 50 ml. As parcelas 11 a 18 foram reunidas e foram evaporadas, dando origem a um material parcialmente purificado, que foi em seguida purificado pela cromatografia sobre uma coluna de C18 Zorbax ODS (Marca de Fábrica, Dupont) (21 mm x 25 cm), eluindo-se com uma mistura de-metanol e água (77:23), a um ritmo de fluxo de 9 mis, por minuto. As parcelas pertinentes foram reunidas e foram evaporadas, dando origem ao composto de fórmula (I), em que R ê GH, não existe a ligação dupla, R ê SCHg R³ é CH₃ e R⁴ ê 4'-(alfa-L-oleandrosil)-alfa-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 105 a 112⁹C. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento atómico rápido, que' foi levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trietileno glicol, com o cloreto de sódio

I sólido. (Μ Ι Na)^T observado no espectro de massa 931 (teórico 931).

A espectrometria de massa de impacto electrónico foi levada a efeito empregando-se um espectrómetro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 327, 309, 243,

225, 215, 145, 127, 113, 95 e 87.

EXEMPLO 3

Avermectinas A2 e B2 de 25-(2-trifluormetil)propilo

Seguiu-se o processamento do Exemplo 1, mas empregando-se o ácido 3-trifluormetilbutírico, como substrato, em vez do propionato de sódio. As parcelas pertinen tes reunidas da cromatografia de gel de sílica, contendo o derivado A2 bruto, foram cromatografadas numa coluna de C18 Zorbax ODS (Marca de Fábrica, Dupont) (21 mm x 25 cm), eluindo-se com uma mistura de metanol e água (75:25), a um ritmo de fluxo de 9 mis, por minuto. As parcelas 167 a 179 foram reunidas e foram reunidas e foram evaporadas, dando origem ao composto de fórmula (I), em que R ê OH, a ligação dupla não existe, R ê 1 -(trifluorometi1)etilo, é CH^ e R⁴ é 4¹ -(alfa-L-oleandrosi1)-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 130 a 136⁹C. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento atómico rápido, levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trietileno glícol, com o cloreto de sódio sólido. (M {· Na)^T observado no espectro de massa 981 (teórico 981).

A espectrometria de massa de impacto electrónico foi levada a efeito empregando-se um espêctrómetro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 652, 377, 359, 293, 275, 265, 257, 247, 223, 179, 145, 127, 113, 111 e 87.

As parcelas pertinentes da cromatografia de gel de sílica, contendo o derivado bruto B2, foram reunidas e foram cromatografadas sobre uma coluna de C-18 Dynamax (Marca de Fábrica Rainin) (41,4 mm x 25 cm), eluindo-se com uma mistura de metanol e água (73:27), a um ritmo de 60 mis por minuto. As parcelas pertinentes foram reunidas, para

dar origem ao composto de fórmula (I), em que R ê OH, a liga

3 ^— ção dupla não existe, R ê 1 -(trifluorometi1)etilo, R ê H, e R^21- ê 4'-(alfa-L-oleandrosil)-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 158 a 160^sC. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombar deamento rãpido, levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trie^ tileno glicol, com o cloreto de sódio sólido. (M + Na)⁺ obser vado no espectrómetro de massa 967 (teórico 967).

A espectrometria de massa de impac to electrónico foi levada a efeito empregando-se um espectrómetro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectrómetros de massa, para os fragmentos principais, foram: 638, 377, 359, 293, 275, 265, 261, 257, 247, 223, 145, 127, 113, 111, 95 e

EXEMPLO 4

Avermectina A2 de 25-etiltiometilo processamento do Exemplo 1 foi seguido, mas empregando-se o ácido etiltioacético, como substrato, em vez do propionato de sódio. Depois da cromatografia numa coluna de Zorbax ODS (Marca de Fábrica, Dupont), as parcelas 24 a 72 foram reunidas, dando origem ao composto de fór

2 ~ mula (I), em que R ê OH, a ligação dupla não existe, R ê

4 etiltio, R ê CH₃ e R ê 4¹-(alfa-L-oleandrosi1)-L-oleandro siloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 265 a 270^aC (com decomposição). A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento atómico rãpido,

-22levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trietileno glicol, com o cloreto de sódio sólido. (M + Na)⁺ observado no espectrômetro de massa 945 (teórico 945).

A espectrometria de massa de impac to electrónico foi levada a efeito, empregando-se um espêctro metro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 616, 473, 341, 323, 239, 229, 211, 187, 179, 145, 113 e 87.

EXEMPLO 5

Avermectina B1 de 25-isobutilo

Foi seguido o processamento do Exemplo 1, mas empregando-se o ácido 3-metilbutírico, como substrato, em vez de propionato de sódio. As parcelas pertinentes da cromatografia de gel de sílica foram reunidas e cromatografadas numa coluna de C18 Zorbax ODS (Marca de Fãbrj_ ca, Dupont) (12 mm χ 25 cm), eluindo-se com' uma mistura de me tanol e de água (81:19), a um ritmo de fluxo de 9 mis por minuto. As parcelas 93 a 98 foram reunidas e foram evaporadas, dando origem ao composto de fórmula (I), em que R não existe, 2 3 4 a ligação dupla existe, R ê isopropilo, R é H, e R ê 4'(alfa-L-oleandrosi1)-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 120 a 123⁹C. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento ató mico rápido, levada a efeito num espectrómetro de massa VG Mo delo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de col trietileno glicol, com o cloreto de sódio sólido. (M + Na)⁺ obser

-23vado no espectrómetro de massa 895 (teórico 895).

A espectrometria de massa de impac to electrónico foi elevada a efeito empregando-se um espectró metro de massa VG MODELO 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 565, 319, 305, 221, 193, 169, 145, 127, 113 e 87.

EXEMPLO 6

Avermectinas A2 e B1 de 25-(2-metilbutilo)

Seguiu-se o processamento do Exempl 1, mas empregando-se o ácido 3-metiIpentanóico, como substrato, em vez do propionato de sódio. As parcelas pertinentes da cromatografia de gel de sílica, contendo o derivado bruto A2, foram reunidas e foram cromatografadas numa coluna de C-18 Zorbax ODS (Marca de Fábrica DUpont) (21 mm χ 25 cm), eluindo -se com uma mistura de metanol e água (80:20), a um ritmo de fluxo de 9 mis por minuto. As parcelas pertinentes foram reunidas, dando origem ao composto de fórmula (I), em que R ê 2 3

OH, a ligação dupla não existe, R ê sec-butilo, R ê metilo, e R⁴ ê 4'-(alfa-L-oleandrosil)-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 120 a 125^aC. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombar deamento atómico rápido, levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, emoregando-se uma matriz de espécime de trietileno glicol, com o cloreto de sódio sólido. (M + Na) observado no espectrómetro de massa 941 (teórico 941).

A espectrometria de massa de impacto electrónico foi levada a efeito empregando-se um espectrómetro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 337, 319, 253, 235, 225, 207, 179, 145, 113 e 87.

As parcelas pertinentes da cromato grafia de gel de sílica, contendo o derivado bruto B1, foram reunidas e foram cromatografadas numa coluna de C-18 Ultraesfera (Marca de Fábrica Beckman) (10 mm χ 25 cm), eluindo-se com uma mistura de metanol e água (85:15), a um ritmo de fluxo de 4 ml por minuto. As parcelas pertinentes foram reunidas dando origem ao composto de fórmula (I), em que R ê H, a ligação dupla existe, R ê sec-butilo, R ê H, e R ê 4'-(alfa-L-oleandrosi1)-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 158 a 164⁹C. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento atómico rápido, levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de glicol

I trietileno, com cloreto de sódio sólido. (Μ Ι Na)^T observado na espectrómetro de massa 909 (teórico 909).

A espectrometria de massa de impacto electrónico foi levada a efeito empregando-se um espectrómetro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 319, 235, 207, 183, 113, 95 e 87.

-25EXEMPLO 7

Avermectina A2 de 25-n-propilo.

processamento do Exemplo 1 foi seguido, mas empregando-se o ãcido n-butírico, como substrato, em vez do propionato de sódio. As parcelas pertinentes da cromatografia de gel de sílica foram reunidas e foram cromatografadas numa coluna de C-18 Dynamax (Marca de Fábrica Rainin) (41,4 mm x 25 cm), eluindo-se com um gradiente de metanol e ãgua de (75:25) atê (100:0), durante mais de 170 minutos, a um ritmo de fluxo de 40 mis por minuto. As parcelas de um minuto foram recolhidas e as parcelas 36 e 37 foram reunidas, dando origem ao composto de fórmula (I), em que R ê 0H, a ligação dupla não existe, R² ê etilo, R³ ê metilo, e R⁴ é 4'-(alfa-L-oleandrosi1)-L-oleandrosiloxi,como um pó branco, com o ponto de fusão de 150 a 155^SC. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento atómico rápido, num espectrômetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trietileno glicol, com o cloreto 1 de sódio sólido. (M ί Na)^T observado no espectrômetro de massa 913 (teórico 913).

A espectrometria de massa de impacto electrônico foi levada a efeito empregando-se um espectrómetro de massa VG Modelo 7070 F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 584, 309, 291, 225, 207, 197, 179, 145, 113 e 87.

-26EXEMPLO 8

Avermectinas BI e B2 de 25-ciclopentilmetilo

O processamento do Exemplo 1 foi seguido, mas empregando-se o ácido acético de ciclopentano, em vez do propionato de sódio. As parcelas pertinentes da cromatografia de gel de sílica, contendo o derivado bruto B1, foram reunidas e foram cromatografadas numa coluna de C-18 Dynamax (Marca de Fábrica Rainin) (41,4 mm x 25 cm), eluindo-se com a mistura de metanol e água (84:16), a um ritmo de fluxo de 60 mis por minuto. As parcelas pertinentes foram reunidas, dando origem a um composto de fórmula (I), em que não existe

2 3 4

R , a ligação dupla existe, R ê ciclopentilo, R ê H, e R ê 4¹-(alfa-L-oleandrosi1)-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 140 a 146²C. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento atómico rápido, realizada num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trietileno glíI col, com o cloreto de sódio sólido. (M { Na)^T observado no espectrômetro de massa 921 (teórico 921).

A espectrometria de massa de impacto electrónico foi levada a efeito empregando-se um espectrómetro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 592, 331, 295, 257, 247, 218, 195, 145, 127, 113, 111, 95 e 87.

As parcelas pertinentes da cromatografia de gel de sílica, contendo o derivado bruto B2, foram reunidas e foram cromatografadas numa coluna de C-18 U1 traésfera (Marca de FBrica Beckman) (10 mm x 25 cm), eluindo-se com uma mistura de metanol e água (80:20), a um ritmo de fluxo de 4 mis por minuto. As parcelas pertinentes foram reunidas dando origem ao composto de fórmula (I), em que R’ê 0H, a li2 3 4 gação dupla não existe, R é ciclopentilo, R é H, e R ê 4¹-(alfa-L-oleandrosi1)-L-oleandrosiloxi, como um pó branco, com o ponto de fusão de 155 a 165²C. A estrutura do produto foi confirmada pela espectrometria de massa de bombardeamento, atómico rápido, levada a efeito num espectrómetro de massa VG Modelo 7070E, empregando-se uma matriz de espécime de trietiI leno glicol, com o cloreto de sódio sólido. (M } Na)^T observado no espectrómetro de massa 939 (teórico 939).

A espectrometria de massa de impacto electrónico foi levada a efeito empregando-se um espectrómetro de massa VG Modelo 7070F. Os valores dos espectros de massa, para os fragmentos principais, foram: 349, 335, 331, 289, 265, 261, 257, 247, 237, 219, 195, 179, 145, 127, 113, 111, 95 e 87.

EXEMPLO 9

Composição de Poção produto de qualquer um dos Exemplos precedentes foi dissolvido em glicol de polietileno (peso molecular médio 300), para se obter uma solução contendo 400 microgramas por ml, para emprego como uma composição de poção.

EXEMPLO 10

Actividade Antelmíntica

A actividade antelmíntica foi avaliada contra Caenorhabditis elegans, empregando-se a análise de crivo in vitro, descrita por K. G. Simpkin e G. L. Coles, em Parasitologia, 1979, 79, 19. Os produtos dos Exemplos 1 a 8 mataram 100% dos vermes, a uma concentração do reservatório de 0,1 micrograma por ml.

EXEMPLO 11

Actividade Insecticida

A actividade, contra o estádio larval da mosca varejeira Lucilia cuprina (estirpe Q), ê verificada empregando-se um processamento normalizado, no qual as primeiras larvas de instar (estádio determinado de desenvolvimento da vida dos artrópodes, especialmente de insectos) são mantidas em contacto com o papel de filtro, tratado com o composto em análise. 0 composto em análise ê aplicado, primeiramente, ao papel, como uma solução de acetona. Os papéis de fil tro tratados são, em seguida, colocados em tubos, contendo 1 ml de soro de vitela recém-nascida, e adicionam-se as primeiras larvas de instars (estádio determinado de desenvolvimento da vida dos artrópodes, especialmente de insectos). Os produtos dos Exemplos 1 a 8 mataram 100% das larvas, quando aplicados ao papel de filtro, numa quantidade de 1 miligrama por metro quadrado.

Claims

1^â. - Processo, para a preparação de um composto, que tem a fórmula:

em que a linha tracejada na posição 22-23 representa uma liga1 ção dupla, facultativa, e em que R ê H ou OH e a ligação du1 2 pia não existe, ou a ligação dupla existe e R não existe; R ê H, alquilo C^-Cg, alquenilo C₂~Cg, alquinilo C₂-Cg, alcoxialquilo ou alquiItioalquilo contendo de 1 a 6 átomos de carbono em cada grupo alquilo ou alcoxi, em que qualquer dos referidos grupos alquilo, alcoxi, alquenilo ou alquinilo pode estar substituído por um, ou mais, átomos de halo; ou um grupo cicloalquilo Cg-Cg ou cicloalquenilo C^-Cg, qualquer dos quais pode estar substituído, facultativamente, por metileno ou um, ou mais grupos de alquilo ou por ãtomos de halo; ou um anel heterocíclico, contendo oxigénio ou enxofre; de 3 a 6 elementos, que pode ser saturado, ou total ou parcialmente insaturado, e que pode ser substituído, facultativamente, por um ou mais, grupos alquilo C^-C^, ou por ãtomos de halo; ou um

-305 5 grupo da fórmula SR , em que R é alquilo C^-Cg, alquenilo C₂-Cg, cicloalquilo Cg-Cg, cicloalquenilo Cg-Cg, fenilo ou fenilo substituído, em que o substituinte é alquilo C^C^, alcoxi C^-C₄ ou halo, ou um anel heterocíclico, contendo oxigénio ou enxofre, de 3 a 6 elementos, que pode ser saturado, ou total ou parcialmente insaturado, e que pode estar substituído, facultativamente, por um, ou mais, grupos alquilo C.-Cy,

3 4 14 ou por átomos de halo; R ê hidrogénio ou metilo; e R ê H, ou um grupo 4¹-(alfa-L-oleandrosi1)-alfa-L-oleandrosiloxi da fórmula:

4 1 com a ressalva de que, quando R e R são ambos H e não existe a ligação dupla, R não ê H, ou CHg, caracterizado por compreender a fermentação de um organismo mutante Streptomyces avermitilis ATCC 53567 ou 53568, na presença do ácido carboxílico adequado da fórmula R CH₂C0₂H, em que r2 ê o que ficou definido no precedente, ou de um seu sal, de um seu éster ou de uma sua amida ou de um seu precursor oxi dativo para esse fim, e o isolamento do composto de fórmula I, 1 em que R ê OH e não existe a ligação dupla, ou em que existe 1 4 a ligação dupla e R não existe, e R ê 4¹ -(alfa-L-oleandrosil )-alfa-L-oleandrosiloxi, e se for desejado, a hidrogenação do produto em que existe a ligação dupla e R¹ não existe, para ' . -31se obterem os compostos de fórmula (I) em que a ligação dupla não existe e R é H, ou a hidrólise seguida de halogenação e de redução, para se obterem os compostos de fórmula (I), em que R⁴ é H.

2². - Processo, de acordo com a rei vindicação 1, caracterizado por R⁴ ser 4¹ -(alfa-L-oleandrosi1) alfa-L-oleandrosiloxi, e não se realizarem os passos facultativos de hidrólise, halogenação e redução.

3^â. - Processo, de acordo com a rei 2 5 5 vindicação 2, caracterizado por R ser SR e R ser metilo ou etilo.

4^â. - Processo, de acordo com a rei 2 vindicação 2, caracterizado por R ser metilo, isopropilo ou sec-butilo.

5⁵. - Processo, de acordo com a rei o vindicação 2, caracterizado por R ser 1-(trifluorometil)etilo