PT2305250E - Derivados de benzimidazol e seu uso como inibidores de proteínas quinases - Google Patents

Derivados de benzimidazol e seu uso como inibidores de proteínas quinases Download PDF

Info

Publication number
PT2305250E
PT2305250E PT101954980T PT10195498T PT2305250E PT 2305250 E PT2305250 E PT 2305250E PT 101954980 T PT101954980 T PT 101954980T PT 10195498 T PT10195498 T PT 10195498T PT 2305250 E PT2305250 E PT 2305250E
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
groups
group
substituted
mmol
carbocyclic
Prior art date
Application number
PT101954980T
Other languages
English (en)
Inventor
Valerio Berdini
Paul Graham Wyatt
Maria Grazia Carr
Andrew James Woodhead
Steven Howard
Michael Alistair O'brien
Theresa Rachel Early
Adrian Liam Gill
Gary Trewartha
Alison Jo-Ann Woolford
Eva Figueroa Navarro
Original Assignee
Astex Therapeutics Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB0315657.7A external-priority patent/GB0315657D0/en
Priority claimed from GB0324919A external-priority patent/GB0324919D0/en
Application filed by Astex Therapeutics Ltd filed Critical Astex Therapeutics Ltd
Publication of PT2305250E publication Critical patent/PT2305250E/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

1
DESCRIÇÃO
"DERIVADOS DE BENZIMIDAZOL E SEU USO COMO INIBIDORES DE PROTEÍNAS QUINASES" A presente invenção refere-se a compostos de pirazol que inibem ou modulam a atividade de Quinases Dependentes de Ciclina (CDK), Glicogénio Sintase quinases (GSK) e Aurora quinases para a utilização dos compostos no tratamento ou profilaxia de estados de doença ou condições mediadas pelas quinases, e a novos compostos tendo atividade inibitória ou moduladora de quinase. Também são proporcionadas composições farmacêuticas contendo os compostos e novos intermediários químicos.
Antecedentes da Invenção
As proteínas quinases constituem uma grande família de enzimas estruturalmente relacionadas que são responsáveis pelo controlo de uma ampla variedade de processos de transdução de sinal dentro da célula (Hardie, G. e Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I and II, Academic Press, San Diego, CA). As quinases podem ser categorizadas em famílias pelos substratos que fosforilam (por exemplo, proteína-tirosina, proteína-serina/treonina, lípidos, etc.). Motivos de sequências foram identificados que geralmente correspondem a cada uma destas famílias de quinase (por exemplo, Hanks, S.K., Hunter, T., FASEB J., 9:576-596 (1995); Knighton, et ai., Science, 253:407-414 (1991); Hiles, et ai., Cell, 70:419-429 (1992); Kunz, et ai., Cell, 73:585-596 (1993); Garcia-Bustos, et ai., EMBOJ., 13:2352-2361 (1994)). 2
As proteínas quinases podem ser caracterizadas pelos seus mecanismos de regulação. Estes mecanismos incluem, por exemplo, a autofosforilação, transfosforilação por outras quinases, interações proteína-proteína, interações proteína-lípido, e interações proteína-polinucleótidos. Uma proteína quinase individual pode ser regulada por mais do que um mecanismo.
As quinases regulam muitos processos celulares diferentes, incluindo, mas não limitado a, proliferação, diferenciação, apoptose, motilidade, transcrição, tradução e outros processos de sinalização, através da adição de grupos fosfato a proteínas alvo. Estes eventos de fosforilação atuam como comutadores moleculares de ativação/desativação que podem modular ou regular a função biológica da proteína alvo. A fosforilação de proteínas alvo ocorre em resposta a uma variedade de sinais extracelulares (hormonas, neurotransmissores, fatores de crescimento e de diferenciação, etc.), os eventos do ciclo celular, stresses ambientais ou nutricionais, etc.. As funções da proteína quinase adequadas nas vias de sinalização para ativar ou inativar (direta ou indiretamente) , por exemplo, uma enzima metabólica, proteína reguladora, recetora, proteína do citoesqueleto, canal de iões ou uma bomba, ou o fator de transcrição. A sinalização não controlada devido a um controlo deficiente da fosforilação da proteína tem sido implicada num número de doenças, incluindo, por exemplo, inflamação, cancro, alergia/asma, doença e condições do sistema imunitário, doenças e condições do sistema nervoso central, e a angiogénese. 3
Quinases Dependentes de Ciclina 0 processo de divisão de células eucarióticas pode ser amplamente dividido numa série de fases sequenciais denominada Gl, S, G2 e Μ. A progressão correta através das várias fases do ciclo celular, demonstrou ser criticamente dependente da regulação espacial e temporal de uma família de proteínas conhecidas como quinases dependentes da ciclina (cdks) e um conjunto diversificado de seus parceiros de proteínas cognatas denominado ciclinas. As cdks são cdc2 (também conhecidas como cdkl) proteínas de quinases de serina- treonina homólogas que são capazes de utilizar ATP como um substrato na fosforilação de diversos polipeptídeos num contexto dependente de sequência. As ciclinas são uma familia de proteínas caracterizada por uma região de homologia, contendo cerca de 100 aminoácidos, designada por "caixa de ciclina", que é usada na ligação a, e que define a seletividade para, proteínas parceiras cdks específicas. A modulação dos níveis de expressão, as taxas de degradação, e os níveis de ativação de várias cdks e ciclinas durante o ciclo celular leva à formação cíclica de uma série de complexos de cdk/ciclina, em que as cdks são enzimaticamente ativas. A formação destes complexos controla a passagem através de pontos de verificação discretos do ciclo celular e permite assim que o processo de divisão celular continue. A falha em satisfazer os pré-requisitos de critérios bioquímicos para um dado ponto de verificação do ciclo celular, ou seja, a ausência de formação de um complexo de cdk/ciclina necessário, pode levar ao sequestro do ciclo celular e/ou apoptose celular. A proliferação celular aberrante, tal como se manifesta no cancro, pode muitas vezes ser atribuída à perda de controlo 4 do ciclo celular correto. A inibição da atividade enzimática de cdk, portanto, proporciona um meio pelo qual as células em divisão anormal podem ter a sua divisão sequestrada e/ou ser mortas. A diversidade de cdks, e complexos de cdk, e os seus papéis essenciais na mediação do ciclo celular, proporciona um amplo espetro de potenciais alvos terapêuticos selecionados a partir de uma lógica bioquímica definida. A progressão da fase G1 para a fase S do ciclo celular é regulada principalmente pela cdk2, cdk3, cdk4 e cdk6 via associação com membros ciclina do tipo D e E. As ciclinas de tipo D parecem ser determinantes para permitir a passagem para além do ponto de restrição Gl, enquanto que o complexo de cdk2/ciclina E é fundamental para a transição da fase Gl para a fase S. Julga-se que a progressão subsequente através da fase S e entrada na G2 exige o complexo cdk2/ciclina A. Tanto a mitose, como a transição da fase G2 para a M que a aciona, são reguladas por complexos de cdkl e ciclinas do tipo A e B.
Durante a fase Gl, a proteína Retinoblastoma (Rb), e proteínas de bolso relacionadas, tais como pl30, são substratos para complexos cdk (2, 4, & 6)/ciclina. A progressão através de Gl é, em parte, facilitada pela hiperfosforilação, e, assim, a inativação de Rb e pl30 por complexos cdk(4/6)/ciclina-D . Hiperfosforilação de Rb e pl30 provoca a libertação de fatores de transcrição, tais como E2F, e, assim, a expressão de genes necessários para a progressão através de Gl e para a entrada na fase S, tal como o gene para a ciclina E. A expressão de ciclina E facilita a formação do complexo cdk2/ciclina E que amplifica, ou mantém, os níveis de E2F via fosforilação 5 adicional de Rb. 0 complexo de cdk2/ciclina E também fosforila outras proteínas necessárias para a replicação do ADN, tais como NPAT, que tem sido implicada na biossíntese de histona. A progressão de G1 e da transição Gl/S também são reguladas através da via Myc estimulada por mitogénio, que se alimenta na via cdk2/ciclina E. A cdk2 também está ligada à via de resposta do dano de ADN mediado por p53, através da regulação de p53 dos níveis de p21. p21 é um inibidor da proteína de cdk2/ciclina E e, portanto, é capaz de bloquear ou atrasar, a transição Gl/S. 0 complexo cdk2/ciclina E pode, assim, representar um ponto no qual os estímulos bioquímicos do Rb, Myc e as vias p53 são, até certo ponto integradas. A cdk2 e/ou o complexo de cdk2/ciclina E, por conseguinte, representam bons alvos para terapêuticas destinadas a sequestrar ou a recuperar o controlo do ciclo celular em células em divisão de forma aberrante. 0 papel exato da cdk3 no ciclo celular não é claro. Até ao momento nenhum parceiro ciclina cognato foi identificado, mas uma forma dominante negativa de células atrasadas cdk3 em Gl, sugerindo assim que cdk3 tem um papel na regulação da transição Gl/S.
Embora a maioria das cdks tenha sido implicada na regulação do ciclo celular, existe evidência de que alguns membros da família cdk estão envolvidos noutros processos bioquímicos. Isto é exemplificado pela cdk5 que é necessária para o desenvolvimento neuronal correto e que também tem sido implicado na fosforilação de várias proteínas neuronais, como a Tau, NUDE-1, sinapsinal, DARPP32 e o complexo Muncl8/SintaxinalA. A cdk5 neuronal é convencionalmente ativada pela ligação com as proteínas p35/p39. A atividade 6 de cdk5 pode, no entanto, ser desregulada pela ligação de p25, uma versão truncada da p35. A conversão de p35 em p25, e subsequente desregulação da atividade de cdk5, pode ser induzida por isquemia, excitotoxicidade, e peptideo β-amiloide. Consequentemente a p25 tem sido implicada na patogénese de doenças neurodegenerativas, tais como a doença de Alzheimer, e é, portanto, de interesse, como um alvo para terapias dirigidas contra estas doenças. A cdk7 é uma proteína nuclear que tem atividade de CAK cdc2 e liga-se a ciclina Η. A cdk7 foi identificada como um componente do complexo da transcrição TFIIH que tem atividade ARN polimerase II do domínio C-terminal (CTD). Isto tem sido associado com a regulação da transcrição de HIV - 1 através de uma via bioquímica Tat mediada. A cdk8 liga a ciclina C e tem sido implicada na fosforilação de CTD de ARN polimerase II. Da mesma forma o complexo cdk9/ciclina-Tl (complexo P-TEFb) tem sido implicado no controlo do alongamento da ARN polimerase II. 0 PTEF-b também é necessário para a ativação da transcrição do genoma HIV-1 pelo transativador virai Tat através da sua interação com a ciclina Tl. A cdk7, cdk8, cdk9 e complexo P-TEFb são portanto alvos potenciais para terapias antivirais .
Numa mediação a nível molecular, a atividade do complexo cdk/ciclina exige uma série de eventos de fosforilação estimulante e inibidora, ou desfosforilação. A fosforilação de cdk é realizada por um grupo de ativação de cdk quinases (CAKs) e/ou quinases, tais como Weel, Mytl e Mikl. A desfosforilação é realizada por fosfatases, tais como cdc25 (a & c), pp2a, ou KAP. 7 A atividade do complexo cdk/ciclina pode ser ainda regulada por duas famílias de inibidores proteicos celulares endógenos: a família Kip/Cip, ou a família INK. As proteínas INK ligam especificamente a cdk4 e cdk6. A pl6INK4 (também conhecida como MTS1) é um potencial gene supressor de tumor que é mutado, ou suprimido, num grande número de cancros primários. A família Kip/Cip contém proteínas como a p21Cipl'wafl, p27Kipl e p57kip2. Como discutido anteriormente p21 é induzida por p53 e é capaz de inativar os complexos cdk2/ciclina (E/A) e cdk4/ciclina (D1/D2/D3). Níveis de expressão de p27 anormalmente baixos têm sido observados em cancros da mama, cólon e próstata. Por outro lado, a super-expressão da ciclina E em tumores sólidos tem demonstrado estar correlacionada com um prognóstico pobre do paciente. A super-expressão de ciclina Dl tem sido associada com carcinoma esofágico, da mama, escamoso e pulmonar de células não pequenas.
Os papéis principais das cdks, e suas proteínas associadas, na coordenação e condução do ciclo celular em células em proliferação foram descritos acima. Algumas das vias bioquímicas em que as cdks desempenham um papel fundamental, também têm sido descritas. 0 desenvolvimento das monoterapias para o tratamento de distúrbios proliferativos, tais como cancros, utilizando terapias específicas genericamente para cdks, ou em cdks específicas é, portanto, potencialmente e altamente desejável. Os inibidores de cdk podem concebivelmente ser também utilizados para o tratamento de outras condições, tais como infeções virais, doenças autoimunes e doenças neuro-degenerativas, entre outros. A terapêutica direcionada a cdk pode também fornecer benefícios clínicos no tratamento das doenças anteriormente descritas, quando usada na 8 terapia de combinação com agentes terapêuticos existentes, ou novos. As terapias anticancro direcionadas a cdk poderiam potencialmente ter vantagens em relação a muitos dos agentes anti-tumorais correntes uma vez que não interagem diretamente com o ADN e, por conseguinte, deveriam reduzir o risco de desenvolvimento de tumores secundários.
Aurora Kinases Há relativamente pouco tempo, uma nova familia de serina/treonina quinases, conhecida como as Aurora quinases, foi descoberta as quais estão envolvidas nas fases G2 e M do ciclo celular, e que são importantes reguladoras da mitose. 0 papel preciso das Aurora quinases ainda não foi elucidado, mas elas desempenham um papel no controlo de ponto de verificação mitótica, dinâmica de cromossomas e citoquinese (Adams et al., Trends Cell Biol., 11: 49-54 (2001). As Aurora quinases estão localizadas nos centrossomas de células de interfase, nos polos do fuso bipolar e no meio do corpo do aparelho mitótico.
Três membros da familia Aurora quinase foram encontrados em mamíferos até agora (E.A. Nigg, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2: 21-32, (2001)). Estes são:
Aurora A (também referida na literatura como Aurora 2);
Aurora B (também referida na literatura como Aurora 1); e
Aurora C (também referida na literatura como Aurora 3).
As Aurora quinases têm domínios catalíticos altamente homólogos mas diferem consideravelmente nas suas porções N-terminais (Katayama H, Brinkley WR, Sen S.; The Aurora 9 kinases: role in cell transformation and tumorigenesis; Câncer Metastasis Rev. dez. 2003; 22(4) :451-64) .
Os substratos das Aurora quinases A e B foram identificados como contendo uma proteína motora semelhante a cinesina, proteínas do aparelho do fuso, a proteína histona H3, proteína cinetocoro e a proteína p53 supressora de tumores.
Crê-se que as Aurora A quinases estão envolvidas na formação do fuso e tornam-se localizadas no centrossoma na fase inicial G2 onde fosforilam proteínas associadas ao fuso (Prigent et al., Cell, 114: 531-535 (2003). Hirota et al, Cell, 114:585-598, (2003) verificaram que as células desprovidas de Aurora A proteína-quinase não foram capazes de introduzir a mitose. Além disso, verificou-se (Adams, 2001) que a mutação ou a rutura do gene de Aurora A em várias espécies leva a anormalidades mitóticas, incluindo a separação do centrossoma e defeitos de maturação, aberrações do fuso e defeitos de segregação cromossómica.
As Aurora quinases são geralmente expressas a um nível baixo, na maioria dos tecidos normais, as exceções sendo os tecidos com uma alta proporção de células em divisão, tais como o timo e testículo. No entanto, os níveis elevados de Aurora quinases têm sido encontrados em muitos cancros humanos (Giet et al, J. Cell. Sei.112: 3591-361, (1999) e
Katayama (2003) . Além disso, a Aurora A quinase mapeia a região do cromossoma 20ql3 região que tem sido frequentemente encontrada como amplificada em muitos cancros humanos.
Assim, por exemplo, a super-expressão significativa de Aurora A foi detetada em cancro da mama humano, cancros do 10 ovário e do pâncreas (ver Zhou et al., Nat. Genet. 20: 189-193, (1998), Tanaka et al., Câncer Res., 59: 2041-2044, (1999) e Han et al., câncer Res., 62: 2890-2896, (2002).
Além disso, Isola, American Journal of Pathology 147,905-911 (1995) relatou que a ampliação do locus da Aurora A (20ql3) correlaciona-se com um prognóstico pobre para pacientes com cancro de mama nódulo-negativos. A amplificação e/ou a super-expressão de Aurora-A é observada em cancros da bexiga humanos e a amplificação de Aurora-A está associada com a aneuploidia e comportamento clinico agressivo, ver Sen et al., J. Natl.Câncer Inst, 94: 1320-1329 (2002). A expressão elevada de Aurora-A foi detetada em mais de 50% dos cancros colorretais, (ver Bischoff et al, EMBOJ., 17: 3052-3065, (1998) e Takahashi et al., Jpn. J. Câncer Res., 91: 1007-1014 (2000)) cancros nos ovários (ver Gritsko et al. Clin. Câncer Res., 9: 1420-1426 (2003), e tumores gástricos Sakakura et al, British Journal of Câncer, 84: 824-831 (2001) .
Tanaka et ai. Câncer Research, 59: 2041-2044 (1999) encontraram evidências da super-expressão de Aurora A em 94% dos adenocarcinomas do dueto invasivo da mama.
Os níveis elevados de quinase Aurora A também foram encontrados em linhas celulares tumorais renais, do colo do útero, neuroblastoma, melanoma, linfoma, do pâncreas e da próstata, Bischoff et al. (1998), EMBO J., 17: 3052-3065 (1998); Kimura et al. J. Biol. Chem., 274: 7334-7340 11 (1999); Zhou et al., Nature Genetics, 20: 189-193 (1998); Li et al., Clin Câncer Res. 9 (3): 991-7 (2003)]. A Aurora-B é altamente expressa em várias linhas celulares tumorais humanas, incluindo células leucémicas [Katayama et al, Gene 244: 1-7)]. Os níveis desta enzima aumentam em função da fase de Duke em cancros colorretais primários [ Katayama et al, J. Natl Câncer Inst, 91: 1160-1162 (1999)]. Níveis elevados de Aurora-3 (Aurora-C) foram detetados em várias linhas de células tumorais, embora esta quinase tenda a ser restrita às células germinais em tecidos normais (ver Kimura et al. Journal of Biological Chemistry, 274: 7334-7340 (1999)). A super-expressão de Aurora-3 em aproximadamente 50% dos cancros colorretais também foi relatada no artigo por Takahashi et al., Jpn J. Câncer Res. 91: 1007-1014 (2001) ] .
Outros relatórios sobre o papel de Aurora quinases em doenças proliferativas podem ser encontrados em Bischoff et al., Trends in Cell Biology 9: 454-459 (1999); Giet et al. Journal of Cell Science, 112: 3591-3601 (1999) e Dutertre, et al. Oncogene, 21: 6175-6183 (2002) .
Royce et al relatam que a expressão do gene da Aurora 2 (conhecido como STK15 ou BTAK) foi observada em cerca de um quarto dos tumores mamários primários. (Royce ME, Xia W, Sahin AA, Katayama H, Johnston DA, Hortobagyi G, Sen S, Hung MC; STK15/Aurora-A expression in primary breast tumours is correlated with nuclear grade but not with prognosis; Câncer. 2004 Jan 1; 100(1) : 12-9) . 12 0 carcinoma endometrial (EC) compreende pelo menos dois tipos de cancro: carcinomas endometrioides (EECs) são tumores estrógeno-relacionados, que são frequentemente euploides e têm um bom prognóstico. Os carcinomas nonendometrioides (NEECs; formas de células serosas e claras) não estão relacionados com o estrogénio, são frequentemente aneuploides, e são clinicamente agressivos. Também foi descoberto que Aurora foi amplificada em 55,5% de NEECs mas não em quaisquer EECs (P < ou = 0,001) (Moreno-Bueno G, Sanchez-Estevez C, Cassia R, Rodriguez-Perales S, Diaz-Uriarte R, Dominguez O, Hardisson D, Andujar M, Prat J, Matias-Guiu X, Cigudosa JC, Palacios J. Câncer Res. set. 2003 15:63(18):5697-702).
Reichardt et al (Oncol Rep. set.-out. 2003; 10 (5):1275-9) relataram que a análise quantitativa de ADN por PCR para procurar a amplificação Aurora em gliomas revelou que cinco dos 16 tumores (31%) de diferente grau OMS (lx grau II, 1 x grau III, 3x grau IV) apresentaram amplificação de ADN do gene Aurora 2. Postula-se que a amplificação do gene da Aurora 2 pode ser uma alteração genética não aleatória em gliomas humanos, desempenhando um papel nas vias genéticas de tumorigénese.
Os resultados por Hamada et al (Br. J. Haematol. maio 2003; 121 (3) :439-47) também sugerem que a Aurora 2 é um candidato eficaz para indicar não só a atividade da doença, mas também tumorigénese de linfoma não-Hodgkin. O retardamento do crescimento das células tumorais resultante da restrição das funções deste gene poderia ser uma abordagem terapêutica para o linfoma não-Hodgkin. 13
Num estudo de Gritsko et al (Clin Câncer Res. abril de 2003; 9 (4):1420-6)), a atividade de quinase e os niveis de proteína de Aurora A, foram analisados em 92 pacientes com tumores ovarianos primários. Análises in vitro de quinase revelaram uma elevada atividade de Aurora A quinase em 44 casos (48%) . Níveis elevados de proteína Aurora A foram detetados em 52 (57%) amostras. Altos niveis de proteína de Aurora A correlacionaram-se bem com elevada atividade quinase.
Resultados obtidos por Li et al (Clin. Câncer Res. março de 2003; 9 (3) :991-7) mostraram que o gene Aurora A é sobre-expresso em tumores pancreáticos e linhas celulares de carcinoma e sugerem que a super-expressão da Aurora A pode desempenhar um papel na carcinogénese do pâncreas.
Do mesmo modo, demonstrou-se que a amplificação do gene Aurora A e o aumento da expressão associada da quinase mitótica que codifica estão associados com aneuploidia e comportamento clínico agressivo no cancro da bexiga humano. (J. Natl. Câncer Inst. 4 set. 2002; 94(17):1320-9).
Investigação por vários grupos (Dutertre S, Prigent C.,Aurora-A overexpression leads to override of the microtubule- kinetochore attachment checkpoint; Mol. Interv. maio 2003; 3(3):127-30 e Anand S, Penrhyn-Lowe S, Venkitaraman AR., Aurora-A amplification overrides the mitotic spindle assembly checkpoint, inducing resistance to Taxol, Câncer Cell. jan. 2003; 3(1):51-62), sugere que a sobre-expressão de atividade de Aurora quinase está associada com resistência a algumas terapias atuais contra o cancro. Por exemplo, a sobre-expressão de Aurora A em fibroblastos de embrião de rato pode reduzir a 14 sensibilidade destas células aos efeitos citotóxicos de derivados do taxano. Portanto, os inibidores da Aurora quinase podem encontrar utilização em particular em pacientes que desenvolveram resistência às terapias existentes.
Com base nos trabalhos realizados até à data, prevê-se que a inibição das Aurora quinases, particularmente a Aurora quinase A e Aurora quinase B, irá revelar um meio eficaz de deter o desenvolvimento do tumor.
Harrington et al (Nat Med. março 2004; 10 (3):262-7) demonstraram que um inibidor das Aurora quinases suprime o crescimento tumoral e induz a regressão de tumores in vivo. No estudo, o inibidor Aurora quinase bloqueou a proliferação de células cancerígenas, e também desencadeou a morte celular de uma variedade de linhas celulares de cancro, incluindo leucemia, linhas celulares colorretais e da mama.
Os cancros que podem ser particularmente sensíveis a inibidores de Aurora incluem carcinomas da mama, bexiga, colorretal, pancreático, do ovário, linfoma de não-Hodgkin, gliomas e carcinomas endometriais nonendometrioides.
Glicogénio Sintase Quinase A glicogénio sintase quinase 3 (GSK3) é uma serina-treonina-quinase que ocorre em duas isoformas expressas ubiquamente em seres humanos (GSK3a & beta GSK3p) . A GSK3 foi implicada como desempenhando papéis importantes no desenvolvimento embrionário, síntese de proteínas, proliferação celular, diferenciação celular, dinâmica dos microtúbulos, a motilidade celular e a apoptose celular. 15
Como tal, a GSK3 tem sido implicada na progressão de estados de doença, tais como a diabetes, cancro, doença de Alzheimer, AVC, epilepsia, doença dos neurónios motores e/ou traumatismo craniano. Filogeneticamente, a GSK3 está mais estreitamente relacionada com as quinases dependentes da ciclina (CDKs). A sequência de consenso do substrato péptido reconhecida pela GSK3 é (Ser/Thr) -X-X-X- (pSer/pThr) , onde X é qualquer aminoácido (nas posições (n +1) , (n +2), (n + 3)) e pSer e pThr são fosfo-serina e fosfo-treonina, respetivamente (n+4) . A GSK3 fosforila a primeira serina ou treonina, na posição (n). A fosfo-serina, ou fosfo-treonina, na posição (n+4) parecem ser necessárias para a iniciação de GSK3 para uma renovação de substrato máxima. A fosforilação da GSK3a em Seer21, ou GSK3p em Ser9, leva à inibição da GSK3. Estudos de mutagénese e de competição de péptidos levaram ao modelo que o N-terminal fosforilado de GSK3 é capaz de competir com o substrato fosfo-péptido (S/TXXXpS/pT) através de um mecanismo autoinibidor. Existem também dados que sugerem que a GSK3a e ΰΞΚβ podem ser subtilmente reguladas por fosforilação de tirosinas 279 e 216, respetivamente. A mutação destes residuos em Phe causou uma redução na atividade de quinase in vivo. A estrutura cristalográfica de raios-X de GSK3p ajudou a lançar luz sobre todos os aspetos da ativação e regulação de GSK3. A GSK3 faz parte da via de resposta à insulina de mamíferos e é capaz de fosforilar e, assim, inativar, a sintase do glicogénio. A super-regulação da atividade de sintase do glicogénio, e desse modo a síntese de glicogénio, por meio da inibição da GSK3, tem portanto sido considerada um potencial meio de combate à diabetes mellitus do tipo II ou 16 não-insulino-dependente (NIDDM): uma condição em que os tecidos do corpo se tornam resistentes à estimulação pela insulina. A resposta celular à insulina no fígado, tecido adiposo, ou tecidos musculares, é desencadeada pela ligação da insulina a um recetor de insulina extracelular. Isto causa a fosforilação e subsequente recrutamento para a membrana do plasma, das proteínas substrato do recetor de insulina (IRS). Além disso a fosforilação das proteínas de IRS inicia o recrutamento de fosfoinositida 3-quinase (PI3K) para a membrana do plasma onde é capaz de libertar o segundo mensageiro fosfatidilinositilo 3,4,5-trifosfato (PIP3). Isto facilita a colocação da proteína quinase 1 dependente de 3-fosfoinositida (PDK1) e proteína quinase B (PKB ou Akt) na membrana, onde PDK1 ativa PKB. A PKB é capaz de fosforilar e, desse modo inibir a GSK3oí e/ou GSKP através da fosforilação de Ser9, ou sear21, respetivamente. A inibição da GSK3 então aciona a sobreregulação da atividade de glicogénio sintase. Os agentes terapêuticos capazes de inibir a GSK3 podem, assim, ser capazes de induzir respostas celulares semelhantes às observadas na estimulação da insulina. Um outro substrato in vivo de GSK3 é o fator de iniciação da síntese de proteínas eucarióticas 2B (eIF2B). 0 eIF2B é inativado por meio de fosforilação e é assim capaz de suprimir a biossíntese proteica. A inibição da GSK3, por exemplo, por inativação da proteína "alvo em mamíferos rapamicina" (mTOR), pode, assim, sobreregular a biossíntese de proteínas. Finalmente, há alguma evidência de regulação da atividade de GSK3 através da via da proteína quinase ativada pelo mitogénio (MAPK) através da fosforilação de GSK3 por quinases como a proteína quinase 1 ativada pela proteína quinase ativada pelo mitogénio (MAPKAP-K1 ou RSK) . Estes dados sugerem que 17 a atividade da GSK3 pode ser modulada por estímulos mitogénicos de insulina e/ou aminoácidos.
Também foi demonstrado que a GSK3p é um componente chave na via de sinalização Wnt vertebrado. Essa via bioquímica demonstrou ser essencial para o desenvolvimento embrionário normal e regula a proliferação das células em tecidos normais. A GSK3 torna-se inibida em resposta a estímulos Wnt. Isto pode levar à desf osf orilação de substratos de GSK3, tais como Axin, o produto do gene da polipose adenomatosa coli (APC) e β-catenina. A regulação aberrante da via Wnt tem sido associada a muitos cancros. As mutações no APC, e/ou β-catenina, são comuns em cancro colorretal e outros tumores. A β-catenina também tem mostrado ser importante para a adesão celular. Assim, a GSK3 também pode modular os processos de adesão celular a certo ponto. Além das vias bioquímicas já descritas existem também dados que implicam a GSK3 na regulação da divisão celular através da fosforilação de ciclina Dl, na fosforilação de fatores de transcrição, tais como c-Jun, proteína α de ligação CCAAT/promotor (C/ΕΒΡα), c-Myc e/ou outros substratos como o Fator Nuclear de células T Ativadas (NFATc), Fator do Choque Térmico 1 (HSF-1) e a proteína de ligação do elemento de resposta c-AMP (CREB). A GSK3 também parece desempenhar um papel, embora específico do tecido, na regulação da apoptose celular. 0 papel da GSK3 na modulação da apoptose celular, através de um mecanismo pró-apoptótico, pode ser de particular importância para as condições médicas em que a apoptose neuronal pode ocorrer. Exemplos destes são o traumatismo craniano, acidente vascular cerebral, epilepsia, doença de Alzheimer e doenças do neurónio motor, paralisia supranuclear progressiva, degeneração córtico-basal e doença de Pick. In vitro, 18 demonstrou-se que a GSK3 é capaz de hiperfosforilar o microtúbulo da proteína Tau associada. A hiperfosforilação de Tau perturba a sua ligação normal aos microtúbulos e pode também levar à formação de filamentos de Tau intracelulares. Acredita-se que a acumulação progressiva destes filamentos leve à eventual disfunção neuronal e degeneração. A inibição da fosforilação de Tau, através da inibição da GSK3, pode assim proporcionar um meio de limitação e/ou prevenção dos efeitos neurodegenerativos. 0 documento WO 02/34721 de Du Pont descreve uma classe de indeno[1,2-c] pirazol-4-onas como inibidores de quinases dependentes de ciclina. O documento WO 01/81348 de Bristol Myers Squibb descreve a utilização de 5-tio-, sulfinil- e sulfonilpirazolo[3,4-b]piridinas como inibidores de quinases dependentes de ciclina. O documento WO 00/62778, também de Bristol Myers Squibb descreve uma classe de inibidores de proteína tirosina quinase. O documento WO 01/72743A1 de Cyclacel descreve 4-heteroaril-pirimidinas 2-substituídas e a sua preparação, composições farmacêuticas que as contêm e sua utilização como inibidores de quinases dependentes de ciclina (cdks) e, portanto, a sua utilização no tratamento de doenças proliferativas tais como o cancro, leucemia, psoríase e semelhantes. O documento WO 99/21845 de Agouron descreve derivados de 4-aminotiazol para inibir quinases dependentes da ciclina 19 (cdks), tais como CDK1, CDK2, CDK4, e CDK6. A invenção é também dirigida à utilização terapêutica ou profilática de composições farmacêuticas contendo esses compostos e a métodos de tratamento de doenças malignas e outras doenças através da administração de quantidades eficazes de tais compostos. 0 documento WO 01/53274 de Agouron divulga como inibidores da CDK quinase uma classe de compostos que podem compreender um anel benzeno amida-substituido ligado a um grupo heterociclico que contém N. Embora os compostos de indazol não sejam mencionados genericamente, um dos compostos exemplificados, compreende uma porção anilida ácida indazol-3-carboxilica ligada através de um grupo metilsulffanilo a uma pirazolopirimidina. 0 documento WO 01/98290 (Pharmacia & Upjohn) divulga uma classe de derivados de tiofeno de 3-aminocarbonil-2-carboxamido como inibidores da proteína quinase. Os compostos são referidos como tendo atividade de proteína quinase múltipla.
Os documentos WO 01/53268 e WO 01/02369 de Agouron divulgam compostos que medeiam ou inibem a proliferação celular através da inibição de proteína quinases, tais como a quinase dependente de ciclina ou tirosina-quinase. Os compostos de Agouron têm um anel arilo ou heteroarilo ligado diretamente ou através de um grupo CH=CH ou CH=N à posição 3 de um anel de indazol.
Os documentos WO 00/39108 e WO 02/00651 (ambos de Du Pont Pharmaceuticals) descrevem amplas classes de compostos heterocíclicos que são inibidores de enzimas de proteases 20 de serina semelhantes a tripsina, especialmente fator Xa e trombina. Os compostos são considerados como sendo úteis como anticoagulantes ou na prevenção de distúrbios tromboembólicos.
Os compostos heterocíclicos que têm atividade contra o fator Xa são também divulgados no documento WO 01/1978 Cor Therapeutics) e US 2002/0091116 (Zhu et al.) . O documento WO 03/035065 (Aventis) descreve uma ampla classe de derivados de benzimidazol como inibidores de proteína quinase, mas não divulga a atividade contra CDK quinases ou GSK quinases.
Os documentos WO 97/36585 e US 5,874,452 (ambos da Merck) divulgam compostos bi-heteroarilo que são inibidores de farnesil-transferase. O documento WO 03/066629 (Vertex) divulga aminas de benzimidazolilpirazol como inibidores da GSK-3. O documento WO 97/12615 (Warner Lambert) divulga benzimidazóis como inibidores da 15-lipoxigenase.
Sumário da Invenção A invenção proporciona compostos que têm atividade inibidora ou moduladora de quinase dependente de ciclina e atividade inibidora ou moduladora de glicogénio sintase quinase 3 (GSK3) e/ou atividade inibidora ou moduladora de Aurora quinase, e que se prevê que seja útil na prevenção ou o tratamento de estados de doença ou condições mediadas por quinases. 21
Assim, por exemplo, prevê-se que os compostos da invenção serão úteis para aliviar ou reduzir a incidência de cancro.
Desse modo, a invenção proporciona, entre outros: • 0 uso de um composto de uma combinação tal como aqui definida para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de um estado de doença ou condição mediada por uma quinase dependente de ciclina ou glicogénio sintase quinase 3. • Uma combinação tal como aqui definida para uso num método para a profilaxia ou tratamento de um estado de doença ou condição mediada por uma quinase dependente de ciclina ou glicogénio sintase quinase 3, cujo método compreende a administração a um sujeito em necessidade de uma combinação tal como aqui definida. • Uma combinação tal como aqui definida para uso num método para o alivio ou redução da incidência de um estado de doença ou condição mediada por uma quinase dependente de ciclina ou glicogénio sintase quinase 3, cujo método compreende a administração a um sujeito em necessidade de uma combinação tal como aqui definida. • A combinação tal como aqui definida para uso num método para o tratamento de uma doença ou condição que compreende ou resulta de crescimento celular anormal num mamífero, método esse que compreende a administração ao mamífero de uma combinação tal como aqui definida numa quantidade eficaz na inibição do crescimento celular anormal. • Uma combinação tal como aqui definida para utilização num método para o alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição compreendendo ou resultante de um crescimento celular anormal num mamífero, método esse que compreende a administração ao mamífero de uma combinação tal como aqui 22 definida numa quantidade eficaz na inibição do crescimento celular anormal. • Uma combinação tal como aqui definida para utilização num método para o tratamento de uma doença ou condição compreendendo ou resultante de um crescimento celular anormal num mamífero, método esse que compreende a administração ao mamífero de uma combinação tal como aqui definida numa quantidade eficaz para a inibição da atividade de cdk quinase (tal como cdkl ou cdk2) ou glicogénio sintase quinase 3. • Uma combinação tal como aqui definida para utilização num método para o alívio ou redução da incidência de uma doença ou condição compreendendo ou resultante de um crescimento celular anormal num mamífero, método esse que compreende a administração ao mamífero de uma combinação tal como aqui definida numa quantidade eficaz para a inibição da atividade de cdk quinase (tal como cdkl ou cdk2) ou glicogénio sintase quinase 3. • Uma combinação tal como aqui definida para uso num método para a inibição de uma quinase dependente de ciclina ou glicogénio sintase quinase 3, cujo método compreende o contacto da quinase com uma combinação inibidora de quinase tal como aqui definida. • Uma combinação tal como aqui definida para utilização num método de modulação de um processo celular (por exemplo, divisão celular), pela inibição da atividade de uma quinase dependente de ciclina ou glicogénio sintase quinase 3, utilizando uma combinação tal como aqui definida. • A utilização de uma combinação tal como aqui definida para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de uma doença ou condição caracterizada pelo aumento da regulação de uma Aurora quinase (por exemplo, Aurora quinase A ou Aurora quinase B). 23 • A utilização de uma combinação tal como aqui definida para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de um cancro, o cancro sendo caracterizado pelo aumento da regulação de uma Aurora quinase (por exemplo, Aurora quinase A ou Aurora quinase B). • A utilização de uma combinação tal como aqui definida para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de cancro num doente selecionado a partir de uma subpopulação possuindo a variante Ile31 do gene Aurora A. • A utilização de uma combinação tal como aqui definida para o fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de cancro num paciente que tenha sido diagnosticado como fazendo parte de uma subpopulação possuindo a variante Ile31 do gene Aurora A. • Uma combinação tal como aqui definida para uso num método para a profilaxia ou tratamento de uma doença ou condição caracterizada pelo aumento da regulação de uma Aurora quinase (por exemplo, Aurora quinase A ou Aurora quinase B) , o método compreendendo a administração de uma combinação tal como aqui definida. • Uma combinação tal como aqui definida para uso num método para aliviar ou reduzir a incidência de uma doença ou condição caracterizada pelo aumento da regulação de uma Aurora quinase (por exemplo, Aurora quinase A ou Aurora quinase B) , o método compreendendo a administração de uma combinação tal como aqui definida. • Uma combinação tal como aqui definida para uso num método para a profilaxia ou tratamento de (ou para aliviar ou reduzir a incidência de) cancro num paciente sofrendo de, ou suspeito de sofrer de cancro; método esse que compreende (i) a sujeição de um paciente a um teste de diagnóstico para determinar se o paciente possui a variante Ile31 do gene Aurora A; e (ii) se o paciente não possuir a referida variante, em seguida administrar ao paciente uma combinação tal como aqui definida tendo atividade inibidora de Aurora quinase. • Uma combinação tal como aqui definida para uso num método para a profilaxia ou tratamento de (ou para aliviar ou reduzir a incidência de) um estado de doença ou condição caracterizada pelo aumento da regulação de uma Aurora quinase (por exemplo, Aurora quinase A ou Aurora quinase B) ; método esse que compreende (i) submeter um paciente a um teste de diagnóstico para detetar uma característica do marcador do aumento da regulação da Aurora quinase e (ii) se o teste de diagnóstico for indicativo de aumento de regulação de Aurora quinase, em seguida administrar ao paciente uma combinação tal como aqui definida que tem atividade inibidora da Aurora quinase.
As combinações da invenção compreendem: (i) um composto da fórmula geral (VII):
H (Vtl) ou um seu sal, N-óxido ou solvato; em que A é - (CH2) m- (B) n-; em que méOoul, néleBé C=0 ou NRg(C=0);
Rg é hidrogénio;
Rld é um grupo R1, em que R1 é hidrogénio, um grupo carbociclico ou heterociclico possuindo de 3 a 12 membros de anel, ou um grupo hidrocarbilo Ci-s opcionalmente substituído; 25 em que os substituintes opcionais para o grupo hidrocarbilo Ci-8 são selecionados a partir de hidroxi, oxo, alcoxi, carboxi, halogéneo, ciano, nitro, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci_4, e grupos carbociclicos e heterocíclicos monociclicos ou biciclicos que possuam entre 3 a 12 membros de anel; e, em que os grupos carbociclicos e heterocíclicos, em cada caso, são não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos substituintes R10 selecionados de entre halogéneo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbociclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, XbC(X2), C(X2)X1, X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC, so2nrc ou NRcS02; e Rb é selecionado a partir de hidrogénio, grupos carbociclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e um grupo hidrocarbilo Ci_8 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxi, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbociclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo C1-8 podem ser opcionalmente substituídos por 0, S, SO, S02, NRC, X1C(X2), C(X2)X1 ou X1C(X2)X1; ou dois grupos adjacentes R10, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados podendo formar um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel carbocíclico ou heterocíclico não aromático com 5 ou 6 membros, em que os referidos grupos 26 heteroarilo e heterocíclicos contêm até 3 membros de anel heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S;
Rc é selecionado a partir de hidrogénio e hidrocarbilo Ci_4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou =NRC; e desde que, quando o grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo carbociclico ou heterociclico, o referido grupo carbociclico ou heterociclico pode ser não substituído ou pode ele próprio ser substituído por um ou mais outros grupos substituintes R10 e em que (a) esses outros grupos substituintes R10 incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos > que não são, eles próprios, adicionalmente substituídos; ou (b) os referidos outros substituintes não incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, mas são de outro modo selecionados a partir dos grupos listados acima na definição de R10; e (ii) um ou mais agentes terapêuticos. A invenção também fornece um composto da fórmula (VII):
ou um seu sal, N-óxido ou solvato; em que A é - (CH2) m- (B) n-; em que méOoul, néleBé C=0 ou NRg (C=0) ;
Rg é hidrogénio; 27
Rld é um grupo R1, em que R1 é hidrogénio, um grupo carbociclico ou heterociclico possuindo de 3 a 12 membros de anel, ou um grupo hidrocarbilo Ci~8 opcionalmente substituído; em que os subst ituintes opcionais para o grupo hidrocarbilo Ci-8 são selecionados a partir de hidroxi, oxo, alcoxi, carboxi, halogéneo, ciano, nitro, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci_4, e grupos carbociclicos e heterociclicos monociclicos ou biciclicos que possuam entre 3 a 12 membros de anel; e, em que os grupos carbociclicos e heterociclicos, em cada caso, são não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos substituintes R10 selecionados de entre halogénio, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci_4, grupos carbociclicos e heterociclicos tendo de 3 a 12 membros de anel; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X2C(X2), C(X2)X\ X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC, S02NRc ou NRcS02; e Rb é selecionado a partir de hidrogénio, grupos carbociclicos e heterociclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e um grupo hidrocarbilo Ci_8 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxi, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di- hidrocarbilamino Ci-4, grupos carbociclicos e heterociclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo Ci_8 podem ser opcionalmente substituídos por 0, S, SO, S02, NRC, Χ20(Χ2), C(X2)Xb ou X1C(X2)X1; ou dois grupos adjacentes R10, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados podendo formar um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel carbociclico ou heterociclico não aromático com 5 ou 6 membros, em 28 que os referidos grupos heteroarilo e heterocíclicos contêm até 3 membros de anel heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S;
Rc é selecionado a partir de hidrogénio e hidrocarbilo 2-1-4 r e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou =NRC; e desde que, quando o grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo carbociclico ou heterocíclico, o referido grupo carbociclico ou heterocíclico pode ser não substituído ou pode ele próprio ser substituído por um ou mais outros grupos substituintes R10 e em que (a) esses outros grupos substituintes R10 incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, que não são, eles próprios, adicionalmente substituídos; ou (b) os referidos outros substituintes não incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, mas são de outro modo selecionados a partir dos grupos listados acima na definição de R10; para utilização no tratamento de uma doença que seja: - infeções virais; ou doenças inflamatórias crónicas; ou - doenças neurodegenerativas; ou doenças cardiovasculares; ou - glomerulonefrite; ou - síndrome mielodisplásica; ou - lesão isquémica associada a enfarte do miocárdio, lesão de acidente vascular cerebral e reperfusão; ou - doenças hepáticas induzidas por toxinas ou relacionadas com o álcool; ou - doenças hematológicas; ou doenças degenerativas do sistema musculoesquelético, ou 29 - rinossinusite aspirino-sensível; ou fibrose cística; ou esclerose múltipla; ou doenças renais; ou dor associada ao cancro.
Os métodos e usos mencionados acima, e quaisquer outros métodos e utilizações terapêuticas e de diagnóstico, e os métodos de tratamento de animais e plantas aqui definidos, podem também empregar qualquer subgrupo, subgénero, preferência ou exemplo abrangidos pela fórmula (VII), a menos que o contexto indique o contrário.
Preferências e Definições Gerais
As seguintes preferências gerais e definições aplicam-se a cada uma das quantidades de R1 e R10 e seus vários subgrupos, subdefinições, exemplos e formas de realização, a menos que o contexto indique o contrário. Na presente descrição, uma letra superior à linha seguindo o número de um grupo R indica que o grupo R é um subgrupo do grupo R designado unicamente pelo número. Assim, por exemplo Rla, Rlb e Rlc são todos subgrupos de R1. Assim, salvo indicação em contrário, as preferências gerais, definições e exemplos estabelecidos para, por exemplo, R1 também são aplicáveis aos seus subgrupos Rla, Rlb e Rlc etc., e da mesma forma aos outros grupos R.
Todas as referências à fórmula (VII) aqui feitas serão também entendidas como se referindo a qualquer subgrupo de compostos dentro da fórmula (VII), a menos que o contexto indique o contrário. 30 O termo aumento da regulação de Aurora quinase, tal como aqui utilizado, é definido como incluindo uma expressão elevada ou sobre-expressão da Aurora quinase, incluindo amplificação do gene (ou seja, as cópias do gene múltiplo) e o aumento da expressão por um efeito transcricional, e hiperatividade e ativação de Aurora quinase, incluindo ativação por mutações.
As referências a grupos "carbocíclicos" e "heterocíclicos", como aqui utilizadas, a menos que o contexto indique de outro modo, incluem tanto os sistemas de anel aromáticos como não aromáticos. Assim, por exemplo, o termo "grupos carbocíclicos e heterocíclicos" inclui no seu âmbito sistemas de anel carbocíclicos e heterocíclicos aromáticos, não aromáticos, insaturados, parcialmente saturados e totalmente saturados. De um modo geral, tais grupos podem ser monocíclicos ou bicíclicos e podem conter, por exemplo, 3 a 12 membros de anel, mais geralmente 5 a 10 membros de anel. Exemplos de grupos monocíclicos são os grupos que contêm 3, 4, 5, 6, 7, e 8 membros de anel, mais usualmente de 3 a 7, e de preferência 5 ou 6 membros de anel. Exemplos de grupos bicíclicos são aqueles contendo 8, 9, 10, 11 e 12 membros de anel, e mais usualmente de 9 ou 10 membros de anel.
Os grupos carbocíclicos ou heterocíclicos podem ser grupos arilo ou heteroarilo com 5 a 12 membros de anel, mais usualmente de 5 a 10 membros de anel. 0 termo "arilo", tal como aqui utilizado refere-se a um grupo carbocíclico possuindo de caráter aromático e o termo "heteroarilo" é aqui utilizado para designar um grupo heterocíclico com caráter aromático. Os termos "arilo" e "heteroarilo" abrangem sistemas de anel policíclicos (por exemplo, 31 bicíclicos) em que um ou mais anéis são não aromáticos, desde que pelo menos um anel seja aromático. Em tais sistemas policíclicos, o grupo pode estar ligado pelo anel aromático, ou por um anel não aromático. Os grupos arilo ou heteroarilo podem ser grupos monocíclicos ou bicíclicos e podem ser não substituídos ou substituídos por um ou mais substituintes, por exemplo um ou mais grupos R10 tal como aqui definidos. 0 termo "grupo não aromático" abrange sistemas de anel insaturados sem caráter aromático, sistemas de anel carbocíclicos e heterocíclicos parcialmente saturados e totalmente saturados. Os termos "insaturado" e "parcialmente saturado" referem-se aos anéis em que a(s) estrutura(s) de anel contém(êm) átomos que partilham mais do que uma ligação de valência, ou seja, o anel contém pelo menos uma ligação múltipla, por exemplo, uma ligação C=C, C=C ou N=C. 0 termo "totalmente saturado" refere-se aos anéis, onde não existem ligações múltiplas entre átomos de anel. Grupos carbocíclicos saturados incluem grupos cicloalquilo, tal como definidos abaixo. Grupos carbocíclicos parcialmente saturados incluem grupos cicloalquenilo, tal como definidos a seguir, por exemplo, ciclopentenilo, ciclo-hexenilo, ciclo-heptenilo e ciclo-octenilo.
Exemplos de grupos heteroarilo são os grupos monocíclicos e bicíclicos contendo de cinco a doze membros de anel, e mais geralmente de cinco a dez membros de anel. 0 grupo heteroarilo pode ser, por exemplo, um anel monocíclico de cinco membros ou de seis membros, ou uma estrutura bicíclica formada a partir de anéis de cinco e seis membros fundidos, ou dois anéis de seis membros fundidos ou dois 32 anéis de cinco membros fundidos. Cada anel pode conter até cerca de quatro heteroátomos selecionados tipicamente a partir de azoto, enxofre e oxigénio. Tipicamente, o anel heteroarilo irá conter até 4 heteroátomos, mais tipicamente até 3 heteroátomos, mais usualmente até 2, por exemplo, um único heteroátomo. Numa forma de realização, o anel heteroarilo contém pelo menos um átomo de anel de azoto. Os átomos de azoto nos anéis heteroarilo podem ser básicos, como no caso de um imidazol ou piridina, ou essencialmente não-básicos, como no caso de um índole ou de azoto pirrol. Em geral, o número de átomos de azoto básicos presentes no grupo heteroarilo, incluindo quaisquer substituintes do grupo amino do anel, será menor do que cinco.
Exemplos de grupos heteroarilo com cinco membros incluem, mas não estão limitados a, grupos pirrole, furano, tiofeno, imidazol, furazano, oxazol, oxadiazol, oxatriazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, pirazol, triazol e tetrazol.
Exemplos de grupos heteroarilo com seis membros incluem, mas não estão limitados a piridina, pirazina, piridazina, pirimidina e triazina.
Um grupo heteroarilo bicíclico pode ser, por exemplo, um grupo selecionado a partir de: a) um anel benzeno fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel; b) um anel de piridina fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel; c) um anel de pirimidina fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; d) um anel de pirrole fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel; 33 e) um anel de pirazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; f) um anel de imidazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; g) um anel de oxazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; h) um anel de isoxazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; i) um anel de tiazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; j) um anel de isotiazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; k) um anel de tiofeno fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel; l) um anel de furano fundido com um anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel; m) um anel de oxazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; n) um anel de isoxazol fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, ou 2 heteroátomos de anel; o) um anel de ciclohexilo fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel; e p) um anel de ciclopentilo fundido num anel de 5 ou 6 membros, contendo 1, 2 ou 3 heteroátomos de anel.
Os exemplos particulares de grupos heteroarilo biciclicos contendo um anel de cinco membros fundido num outro anel de cinco membros incluem, mas não estão limitados a imidazotiazol (por exemplo, imidazo[2,1-b]tiazol) e imidazoimidazol (por exemplo, imidazo[1,2-a ]imidazol).
Os exemplos particulares de grupos heteroarilo biciclicos contendo um anel de seis membros fundido num anel de cinco 34 membros incluem, mas não estão limitados a grupos benzfurano, benztiofeno, benzimidazol, benzoxazol, isobenzoxazol, benzisoxazol, benzotiazol, benzisotiazol, isobenzofurano, indole, isoindole, indolizina, indolina, isoindolina, purina (por exemplo, adenina, guanina), indazol, pirazolopirimidina (por exemplo, pirazolo[1,5-a]pirimidina), triazolopirimidina (por exemplo, [ 1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina), benzodioxole e pirazolopiridina (por exemplo, pirazolo[1,5-a]piridina).
Os exemplos particulares de grupos heteroarilo biciclicos contendo dois anéis de seis membros fundidos incluem, mas não estão limitados a grupos quinolina, isoquinolina, cromano, tiocromano, cromeno, isocromeno, cromano, isocromano, benzodioxano, quinolizina, benzoxazina, benzodiazina, piridopiridina, quinoxalina, quinazolina, cinolina, ftalazina, naftiridina e pteridina.
Exemplos de grupos arilo e heteroarilo policiclicos contendo um anel aromático e um anel não aromático incluem grupos tetra-hidronaftaleno, tetra-hidroisoquinolina, tetra-hidroquinolina, dihidrobenzotieno, dihidrobenzofurano, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina, benzo[1,3]dioxole, 4,5,6,7-tetrahidrobenzofurano, grupos de indolina e indano.
Exemplos de grupos arilo carbociclicos incluem grupos fenilo, naftilo, indenilo, e tetra-hidronaftilo.
Exemplos de grupos heterocíclicos são grupos com 3 a 12 membros de anel, mais usualmente de 5 a 10 membros de anel. Tais grupos podem ser monociclicos ou biciclicos, por exemplo, e tipicamente têm de 1 a 5 membros de anel 35 heteroátomos (mais geralmente 1, 2, 3 ou 4 membros de anel heteroátomo), tipicamente selecionados de entre azoto, oxigénio e enxofre. Os grupos heterociclicos podem conter, por exemplo, porções de éter ciclico (por exemplo, como em tetra-hidrofurano e dioxano), porções de tioéter ciclico (por exemplo, como em tetra-hidrotiofeno e ditiano), porções de amina cíclica (por exemplo, como na pirrolidina), porções de amida cíclica (por exemplo, como em pirrolidona) , porções de tioamidas cíclicas, tioésteres cíclicos, ureias cíclicas (por exemplo, como em imidazolina-2-ona) éster cíclico (por exemplo, como em butirolactona), sulfonas cíclicas (por exemplo, como em sulfolano e sulfoleno), sulfóxidos cíclicos, sulfonamidas cíclicas e suas combinações (por exemplo, tiomorfolina).
Os exemplos particulares incluem morfolina, piperidina (por exemplo, 1-piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo e 4-piperidinilo), piperidona, pirrolidina (por exemplo, 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo e 3-pirrolidinilo), pirrolidona, azetidina, pirano (2H-pirano ou 4H-pirano), dihidrotiofeno, dihidropirano, dihidrofurano, dihidrotiazol, tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, dioxano, tetra-hidropirano (por exemplo, 4-tetrahidro-piranilo), imidazolina, imidazolidinona, oxazolina, tiazolina, 2-pirazolina, pirazolidina, piperazona, piperazina, e N-alquil piperazinas, tais como N-metil-piperazina. De um modo geral, grupos heterociclicos não aromáticos preferidos incluem grupos saturados, tais como piperidina, pirrolidina, azetidina, morfolina, piperazina, e N-alquil-piperazinas.
Exemplos de grupos carbocíclicos não aromáticos incluem grupos cicloalcano, tais como ciclo-hexilo e ciclopentilo, 36 grupos cicloalquenilo, tais como ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo e ciclooctenilo, assim como ciclohexadienilo, ciclooctatetraeno, tetrahidro-naftenilo e decalinilo.
Quando for aqui feita referência a grupos carbociclicos e heterocíclicos, o anel carbocíclico ou heterocíclico pode, exceto quando indicado em contrário, ser não substituído ou substituído por um ou mais grupos substituintes R10 selecionados de entre halogéneo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou dihidrocarbilamino Ci-4, grupos carbociclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X^ÍX2), C(X2)X1, X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC, S02NRc ou NRcS02; e Rb é selecionado a partir de hidrogénio, grupos carbociclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e um grupo hidrocarbilo Ci-8 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxi, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou dihidrocarbilamino Ci_4, grupos carbociclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo Ci_8 podem ser opcionalmente substituídos por 0, S, SO, S02, NRC, X1C (X2) , C (X2) X1 ou X1C(X2)X1; ou dois grupos adjacentes R10, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados podendo formar um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel carbocíclico ou heterocíclico não aromático com 5 ou 6 membros, em que o referido heteroarilo e os grupos heterocíclicos contêm até 3 membros de anel heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S;
Rc é selecionado a partir de hidrogénio e hidrocarbilo Ci-4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou =NRC; 37
Quando o grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo heterociclico ou carbocíclico, o referido grupo carbociclico ou heterociclico pode ser não substituído ou pode ele próprio ser substituído por um ou mais grupos substituintes R10 adicionais. Num subgrupo de compostos da fórmula (VII), tais outros grupos substituintes R10 podem incluir grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, que normalmente não são eles mesmos adicionalmente substituídos. Num outro subgrupo de compostos da fórmula (VII), os referidos substituintes adicionais não incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, mas são de outro modo selecionados a partir dos grupos listados acima na definição de R10.
Os substituintes R10 podem ser selecionados de tal forma que não contenham mais de 20 átomos de não-hidrogénio, por exemplo, não mais de 15 átomos de não-hidrogénio, por exemplo, não mais do que 12, ou 11, ou 10, ou 9, ou 8, ou 7, ou 6, ou 5 átomos de não-hidrogénio.
Quando os grupos carbocíclicos e heterocíclicos têm um par de substituintes sobre átomos de anel adjacentes, os dois substituintes podem estar ligados de modo a formar um grupo cíclico. Por exemplo, um par adjacente de substituintes em átomos de carbono adjacentes de um anel, pode ser ligado através de um ou mais heteroátomos e ser grupos alquileno opcionalmente substituídos para formar um grupo fundido oxa-, dioxa-, aza-, diaza- ou oxa-aza-cicloalquilo. Exemplos de tais grupos substituintes ligados incluem: 38
Exemplos de substituintes de halogéneo incluem flúor, cloro, bromo e iodo. 0 flúor e cloro são particularmente preferidos.
Na definição dos compostos de fórmula (VII) acima e tal como utilizados daqui em diante, o termo "hidrocarbilo" é um termo genérico que engloba grupos alifáticos, alicíclicos e aromáticos, que têm uma cadeia totalmente de carbono, exceto onde indicado em contrário. Em certos casos, tal como aqui definido, um ou mais dos átomos de carbono que formam a cadeia de carbono podem ser substituídos por um átomo especificado ou grupo de átomos. Exemplos de grupos hidrocarbilo incluem alquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo carbocíclico, alquenilo, alquinilo, cicloalquilalquilo, cicloalquenilalquilo, e grupos aralquilo, aralquenilo e aralquinilo carbocíclicos. Tais grupos podem ser não substituídos ou, quando indicado, substituídos por um ou mais substituintes tal como aqui definidos. Os exemplos e as preferências expressas abaixo aplicam-se a cada um dos grupos substituintes de hidrocarbilo ou grupos substituintes contendo hidrocarbilo mencionados nas várias definições de substituintes para os compostos de fórmula (VII), a menos que o contexto indique o contrário.
Os grupos hidrocarbilo não aromáticos preferidos são grupos saturados, tais como grupos alquilo e cicloalquilo. 39
Em geral, a título de exemplo, os grupos hidrocarbilo podem conter até oito átomos de carbono, a menos que o contexto exija de outra forma. Dentro do subconjunto de grupos hidrocarbilo possuindo 1 a 8 átomos de carbono, os exemplos específicos são grupos hidrocarbilo Ci-6, tais como grupos hidrocarbilo C1-4 (por exemplo, grupos hidrocarbilo C1-3 ou grupos hidrocarbilo C1-2) , os exemplos específicos sendo qualquer valor individual ou combinação de valores selecionados a partir de grupos hidrocarbilo Ci, C2, C3, C4, C5, Ce, C7, e Os· 0 termo "alquilo" abrange grupos alquilo tanto de cadeia linear como de cadeia ramificada. Exemplos de grupos alquilo incluem metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 2-metil-butilo, 3-metil-butilo, e n-hexilo e os seus isómeros. Dentro do subconjunto de grupos alquilo tendo 1 a 8 átomos de carbono, os exemplos específicos são grupos alquilo C1-6, tal como grupos alquilo C1-4 (por exemplo, grupos alquilo Ci_3 ou grupos alquilo C1-2) ·
Exemplos de grupos cicloalquilo são os derivados de ciclobutano, ciclopropano, ciclopentano, ciclohexano e cicloheptano. Dentro do subconjunto de grupos cicloalquilo, o grupo cicloalquilo irá ter entre 3 a 8 átomos de carbono, sendo exemplos particulares grupos cicloalquilo C3-6.
Exemplos de grupos alquenilo incluem, mas não estão limitados a, etenilo (vinilo) , 1-propenilo, 2-propenilo (alilo), isopropenilo, butenilo, buta-1,4-dienilo, pentenilo, e hexenilo. Dentro do subconjunto de grupos alquenilo, o grupo alquenilo irá ter entre 2 a 8 átomos de 40 carbono, sendo exemplos particulares grupos alquenilo C2-6, tais como grupos alquenilo C2-4 ·
Exemplos de grupos cicloalcenilo incluem, mas não estão limitados a, ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo e ciclo-hexenilo. Dentro do subconjunto de grupos cicloalquenilo, os grupos cicloalquenilo têm entre 3 a 8 átomos de carbono, sendo exemplos particulares grupos cicloalquenilo C3-6.
Exemplos de grupos alquinilo incluem, mas não estão limitados a, etinilo e grupos 2-propinilo (propargilo). Dentro do subconjunto de grupos alquinilo com 2 a 8 átomos de carbono, são exemplos particulares grupos alquinilo C2-6, tais como grupos alquinilo C2-4 ·
Exemplos de grupos arilo carbociclicos incluem grupos fenilo substituído e não substituído.
Exemplos de grupos cicloalquilalquilo, cicloalquenilalquilo, aralquilo carbociclico, aralcenilo e aralcinilo incluem grupos fenetilo, benzilo, estirilo, feniletinilo, ciclohexilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopropilmetilo e ciclopentenilmetilo.
Quando presente, e quando indicado, um grupo hidrocarbilo pode ser opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de entre hidroxi, oxo, alcoxi, carboxi, halogéneo, ciano, nitro, amino, mono- ou dihidrocarbilamino Ci-4, e grupos carbociclicos e heterocíclicos monocíclicos ou bicíclicos tendo de 3 a 12 (tipicamente 3 a 10 e mais habitualmente de 5 a 10) membros de anel. Os substituintes preferidos incluem halogéneo, 41 tais como flúor. Assim, por exemplo, o grupo hidrocarbilo substituído pode ser um grupo parcialmente fluorado ou perfluorado, tais como difluorometilo ou trifluorometilo. Numa forma de realização, os substituintes preferidos incluem grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos com 3-7 membros de anel, mais usualmente 3, 4, 5 ou 6 membros de anel.
Sempre que indicado, um ou mais átomos de carbono de um grupo hidrocarbilo podem opcionalmente ser substituídos por 0, S, SO, S02, NRC, Χα0(Χ2), C(X2)Xx ou X1C(X2)X1 em que X1 e X2 são como anteriormente definidos, desde que pelo menos um átomo de carbono do grupo hidrocarbilo permaneça. Por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono do grupo hidrocarbilo podem ser substituídos por um dos átomos ou grupos mencionados, e os átomos ou grupos de substituição podem ser os mesmos ou diferentes. Em geral, o número de átomos de carbono lineares ou básicos substituídos irão corresponder ao número de átomos lineares ou básicos do grupo de substituição. Exemplos de grupos em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo foram substituídos por um átomo ou um grupo de substituição como definido acima incluem éteres e tioéteres (C substituído por 0 ou S), amidas, ésteres, tioamidas e tioésteres (C-C substituído por X2C(X2) ou C(X2)X2), sulfonas e sulfóxidos (C substituído por SO ou S02) , aminas (C substituído por NRC) e ureias, carbonatos e carbamatos (C-C-C substituído por X2C (X2) X1) .
Quando um grupo amino tem dois substituintes hidrocarbilo, eles podem, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados e fixados, opcionalmente, com um outro heteroátomo 42 tal como azoto, enxofre ou oxigénio, ligar-se de modo a formar uma estrutura em anel de 4 a 7 membros de anel. A definição "Ra-Rb", como aqui utilizada, tanto no que diz respeito aos substituintes presentes numa porção carbociclica ou heterocíclica, como no que diz respeito a outros substituintes presentes em outros locais dos compostos da fórmula (VII), inclui, inter alia compostos em que Ra é selecionado a partir de uma ligação, 0, CO, OC(0), SC(0), NRcC (0) , 0C(S), SC(S), NRcC(S), OC (NRC) , SC (NRCc) , NRcC (NRC) , C(0)0, C(0)S, C(0)NRc, C(S)0, C (S) S, C(S)NRc, C (NRC) 0, C(NRc)S, C(NRc)NRc, OC (0) 0, SC (0) 0, NRcC (0) 0, 0C(S)0, SC(S)0, NRcC (S) 0, OC (NRC) 0, SC (NRC) 0, NRcC (NRC) 0, 0C(0)S, SC(0)S, NRcC (0) S, 0C(S)S, SC(S)S, NRcC(S)S, OC (NRC) S, SC (NRC) S, NRcC(NRc)S, 0C(0)NRc, SC(0)NRc, NRcC (0) NRC, OC (S) NRC, SC(S)NRc, NRcC(S)NRc, OC (NRC) NRC, SC (NRC) NRC, NRcC (NRCNRC, S, SO, S02, NRC, S02NRc e NRcS02 em que Rc é como anteriormente definido. A porção de Rb pode ser hidrogénio, ou pode ser um grupo selecionado entre grupos carbociclicos e heterociclicos que possuam entre 3 a 12 membros de anel (tipicamente 3 a 10 e mais habitualmente de 5 a 10), e um grupo Ci-8 hidrocarbilo opcionalmente substituído como aqui definido anteriormente. Exemplos de grupos hidrocarbilo, carbocíclico e heterociclicos são indicados acima.
Quando Ra é 0 e Rb é um grupo hidrocarbilo Ci_8, Ra e Rb em conjunto formam um grupo hidrocarbiloxi. Grupos hidrocarbiloxi preferidos incluem hidrocarbiloxi saturado, tais como alcoxi (por exemplo, alcoxi Ci_6, mais usualmente alcoxi Ci—4, tais como etoxi e metoxi, especialmente metoxi) , cicloalcoxi (por exemplo, cicloalcoxi C3-6, tal 43 como ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi e ciclohexiloxi) e cicloalquilalcoxi (por exemplo, cicloalquil-Ci-2 alcoxi C3-6, tais como ciclopropilmetoxi) .
Os grupos hidrocarbiloxi podem ser substituídos por vários substituintes tal como aqui definidos. Por exemplo, os grupos alcoxi podem ser substituídos por halogéneo (por exemplo, como em difluorometoxi e trifluorometoxi), hidroxi (por exemplo, como em hidroxietoxi) , alcoxi Ci-2 (por exemplo, como em metoxietoxi) , hidroxialquilo C1-2 (como em hidroxietoxietoxi) ou um grupo cíclico (por exemplo, um grupo cicloalquilo ou um grupo heterocíclico não-aromático tal como definido anteriormente). Exemplos de grupos alcoxi contendo um grupo heterocíclico não aromático como substituinte são aqueles em que o grupo heterocíclico é uma amina cíclica saturada, tais como morfolina, piperidina, pirrolidina, piperazina, alquil-piperazinas C1-4, cicloalquilo-piperazinas C3-7, tetra-hidropirano ou tetra-hidrofurano e o grupo alcoxi é um grupo alcoxi C1-4, mais tipicamente um grupo alcoxi Ci_3, tais como metoxi, etoxi ou n-propoxi.
Os grupos alcoxi substituídos por um grupo monocíclico, tais como pirrolidina, piperidina, morfolina e piperazina e os seus derivados N-substituídos, tais como N-benzilo, N-acilo C1-4 e N-alcoxicarbonilo C1-4. Os exemplos particulares incluem pirrolidinoetoxi, piperidinoetoxi e piperazinoethoxi.
Quando Ra representa uma ligação e Rb representa um grupo hidrocarbilo Ci-s^ os exemplos de grupos hidrocarbilo Ra-Rb são como aqui anteriormente definidos. Os grupos hidrocarbilo podem ser saturados, tais como grupos 44 cicloalquilo e alquilo e exemplos particulares de tais grupos incluem metilo, etilo e ciclopropilo. Os grupos hidrocarbilo (por exemplo, alquilo) podem ser substituídos por vários grupos e átomos, tal como aqui definido. Exemplos de grupos alquilo substituídos incluem grupos alquilo substituídos por um ou mais átomos de halogéneo, tais como flúor e cloro (exemplos particulares incluindo bromoetilo, cloroetilo e trifluorometilo), ou hidroxi (por exemplo, hidroximetilo e hidroxietilo), aciloxi Ci-s (por exemplo, acetoximetilo e benziloximetilo), amino e mono- e dialquilamino (por exemplo, aminoetilo, metilaminoetilo, dimetilaminometilo, dimetilaminoetilo e terc-butilaminometilo) , alcoxi (por exemplo, alcoxi C1-2 tal como metoxi - como em metoxietilo) e grupos cíclicos tais como grupos cicloalquilo, grupos arilo, grupos heteroarilo e grupos heterocíclicos não aromáticos como atrás definidos).
Os exemplos particulares de grupos alquilo substituídos por um grupo cíclico são aqueles em que o grupo cíclico é uma amina cíclica saturada, tais como a morfolina, piperidina, pirrolidina, piperazina, alquil-piperazinas Ci_4, cicloalquil-piperazinas C3-7, tetra-hidropirano ou tetra-hidrofurano e o grupo alquilo é um grupo alquilo Ci_4, mais tipicamente um grupo alquilo C1-3 tal como metilo, etilo ou n-propilo. Exemplos específicos de grupos alquilo substituídos por um grupo cíclico incluem pirrolidinometilo, pirrolidinopropilo, morfolinometilo, morfolinoetilo, morfolinopropilo, piperidinilmetilo, piperazinomethyl e formas N-substituídas dos mesmos tal como aqui definidos. 45
Os exemplos particulares de grupos alquilo substituídos por grupos arilo ou grupos heteroarilo incluem grupos benzilo e piridilmetilo.
Quando Ra é S02NRG, Rb pode ser, por exemplo, hidrogénio ou um grupo hidrocarbilo Ci-8 opcionalmente substituído, ou um grupo carboxilico ou heterocíclico. Exemplos de Ra-Rb em que Ra é S02NRc incluem grupos aminossulfonilo, alquilaminosulfonilo Ci-4 e di-alquilaminosulf onilo Ci_4, e sulfonamidas formadas a partir de um grupo amino cíclico tal como piperidina, morfolina, pirrolidina, ou uma piperazina opcionalmente N-substituída tal como N-metil-piperazina.
Exemplos de grupos Ra-Rb em que Ra é S02 incluem grupos alquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, e arilsulfonilo, em especial os grupos sulfonilo arilo e heteroarilo monocíclicos. Os exemplos particulares incluem metilsulfonilo, fenilsulfonilo, e toluenossulfonilo.
Quando Ra é NRC, Rb pode ser, por exemplo, hidrogénio ou um grupo hidrocarbilo Ci_8 opcionalmente substituído, ou um grupo carboxilico ou heterocíclico. Exemplos de Ra-Rb em que Ra é NRC incluem amino, alquilamino C2-4 (por exemplo, metilamino, etilamino, propilamino, isopropilamino, terc-butilamino), di-alquilamino C4-4 (por exemplo, dimetilamino e dietilamino) e cicloalquilamino (por exemplo, ciclopropilamino, ciclopentilamino e ciclohexilamino). 46
Formas de Realização Específicas e Preferências para Rld e R“ A é - (CH2) m- (B) n- em que méOoul, néleBé C=0 ou NRg(C=0), de preferência, C=0. Mais preferencialmente, m é 0, néleBé C=0. É presentemente preferido que, quando B é NRg(C=0), Rg é hidrogénio.
Será apreciado que a porção de R1-A-NH ligada à posição 4 do anel pirazol pode tomar a forma de uma amida, R1-(CH2)m_ C (=0) NH ou uma ureia R1- (CH2) m-NHC (=0) NH em que em cada caso, m é 0 ou 1 e mais preferencialmente 0.
Rld é um grupo R1, em que R1 é hidrogénio, um grupo carbociclico ou heterociclico possuindo de 3 a 12 membros de anel, ou um grupo hidrocarbilo Ci_8 opcionalmente substituído, como anteriormente definido. Exemplos de grupos hidrocarbilo, carbociclicos e heterociclicos e opcionalmente substituídos são indicados acima.
Por exemplo, R1 pode ser um grupo monocíclico ou bicíclico, tendo de 3 a 10 membros de anel.
Quando R1 é um grupo monocíclico, tipicamente tem 3 a 7 membros do anel, mais usualmente de 3 a 6 membros de anel, por exemplo, 3, 4, 5 ou 6.
Quando o grupo monocíclico R1 é um grupo arilo, ele terá 6 membros de anel e será um anel fenilo não substituído ou substituído.
Quando o grupo monocíclico R1 é um grupo carboxílico não aromático, poderá ter 3 a 7 membros de anel, mais 47 usualmente de 3 a 6 membros de anel, por exemplo, 3, ou 4, ou 5, ou 6 membros de anel. 0 grupo carboxílico não aromático pode ser saturado ou parcialmente insaturado, mas de preferência, é saturado, isto é R1 é um grupo cicloalquilo.
Quando o grupo monociclico R1 é um grupo heteroarilo, ele terá 5 ou 6 membros de anel. Exemplos de grupos heteroarilo com 5 e 6 membros de anel são definidos acima, e exemplos específicos são descritos abaixo.
Num subgrupo de compostos, o grupo heteroarilo tem 5 membros de anel.
Num outro subgrupo de compostos, o grupo heteroarilo tem 6 membros de anel.
Os grupos heteroarilo monociclicos R1 têm tipicamente até 4 heteroátomos de anel selecionados de entre N, 0 e S, e mais tipicamente até 3 heteroátomos de anel, por exemplo, 1 ou 2, ou 3 heteroátomos de anel.
Quando R1 é um grupo heterociclico monociclico não aromático, pode ser qualquer um dos grupos mencionados acima ou a seguir. Tais grupos têm tipicamente 4 a 7 membros de anel e mais preferencialmente 5 ou 6 membros de anel. Os grupos heterociclicos monociclicos não aromáticos geralmente contêm até 3 heteroátomos de anel, mais usualmente 1 ou 2 heteroátomos de anel, selecionados a partir de N, S e 0. 0 grupo heterociclico pode ser saturado ou parcialmente insaturado, mas preferencialmente é saturado. Os exemplos particulares de grupos heterociclicos monociclicos não aromáticos são os exemplos particulares e 48 preferidos definidos na seção "Preferências e Definições Gerais" acima, e tal como definidos nas tabelas e exemplos abaixo.
Quando R1 é um grupo biciclico, tipicamente tem 8 a 10 membros de anel, por exemplo 8, 9, ou 10 membros de anel. O grupo biciclico pode ser um grupo arilo ou heteroarilo, e exemplos de tais grupos incluem os grupos que compreendem um anel de 5 membros fundido num outro anel de 5 membros; um anel de 5 membros fundido num anel de 6 membros; e um anel de 6 membros fundido num outro anel de 6 membros. Exemplos de grupos em cada uma dessas categorias foram definidos acima na secção "Preferências e Definições Gerais".
Um grupo arilo ou heteroarilo biciclico pode compreender dois anéis aromáticos ou não saturados, ou um anel aromático e um não aromático (por exemplo, parcialmente saturado).
Os grupos heteroarilo biciclicos contêm tipicamente até 4 membros de anel de heteroátomo selecionados a partir de N, S e O. Assim, por exemplo, eles podem conter 1, ou 2, ou 3, ou 4 membros de anel de heteroátomo.
Nos grupos heterociclicos monociclicos e biciclicos R1, os exemplos de combinações de membros de anel de heteroátomo incluem N; NN; NNN; NNNN; NO; NNO; NS, NNS, O, S, 00 e SS.
Os exemplos particulares de R1 incluem grupos heteroarilo opcionalmente substituídos ou não substituídos, selecionado a partir de pirazolo[1,5-a]piridinilo (por exemplo, pirazolo[ 1,5-a ]piridin-3-ilo) , furanilo (por exemplo, 2- 49 furanilo e 3-furanilo), indolilo (por exemplo, 3-indolilo, 4- indolilo e 7-indolilo), oxazolilo, tiazolilo (por exemplo, tiazol-2-ilo e tiazol-5-ilo), isoxazolilo (por exemplo, isoxazol-3-ilo e isoxazol-4-ilo), pirrolilo (por exemplo, 3-pirrolilo), piridilo (por exemplo 2-piridilo), quinolilo (por exemplo, quinolin-8-il) , 2,3-dihidro-benzo [1.4] dioxina (por exemplo, 2,3-dihidro-benzo [1,4 Jdioxin- 5- ilo), benzo[l,3] dioxole (por exemplo, benzo[1,3]dioxol- 4-ilo), 2,3-dihidrobenzofuranilo (por exemplo, 2,3- dihidrobenzofuran-7-ilo), imidazolilo e tiofenilo (por exemplo, 3-tiofenilo).
Outros exemplos de R1 incluem grupos heteroarilo substituídos ou não substituídos selecionado a partir de grupos pirazolo[ 1,5-a]pirimidina, isobenzofurano, [1.2.4] triazolo[1,5-a]pirimidina, tetrazolilo, tetra- hidroisoquinolinilo (por exemplo, 1, 2,3,4-tetra- hidroisoquinolin-7-ilo) , pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, 4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[d]isoxazol, ftalazina, 2H-ftalazin-l-ona, benzoxazol, cinolina, quinoxalina, naftaleno, benzo[c]isoxazol, imidazo[2,l-b]tiazol, piridona, tetrahidroquinolinilo (por exemplo, 1,2,3,4-tetra-hidroquinolin-6-ilo), e 4,5,6,7-tetra-hidro-benzofurano.
Os grupos heteroarilo R1 preferidos incluem grupos pirazolo[1,5-a]piridinilo, furanilo, 2,3- dihidrobenzofuranilo, tiofenilo, indolilo, tiazolilo, isoxazolilo e 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina.
Os grupos arilo R1 preferidos são grupos fenilo opcionalmente substituídos. 50
Exemplos de grupos R1 não aromáticos incluem grupos cicloalquilo monociclico e azacicloalquilo, tais como grupos ciclohexilo, ciclopentilo e piperidinilo, em particular ciclohexilo e 4-piperidinilo. Outros exemplos de grupos R1 não aromáticos incluem grupos oxacicloalquilo monocíclicos, tais como os grupos tetra-hidropiranilo e aza-oxa cicloalquilo, tais como morfolino (por exemplo, 2-morfolino e 4-morfolino).
Grupos hidrocarbilo Ci-s substituídos e não substituídos preferidos incluem grupos trifluorometilo e butilo terciário.
Um subconjunto de grupos R1 preferidos incluem grupos fenilo, pirazolo[1,5-a]piridinilo e 2,3-dihidro-benzo[1,4 ]dioxina.
Um outro subconjunto de grupos R1 preferidos inclui grupos fenilo não substituído e substituído, pirazolo[1,5-a]piridinilo, 2,3-dihidro-benzo [ 1,4]dioxina, indol-4-ilo, 2,3-dihidrobenzofuranilo, terc-butilo, furanilo, pirazolo[1,5-a]piridin-3-ilo, pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-ilo, oxazolilo, isoxazolilo, benzoxazol-2-ilo, 2H-tetrazol-5-ilo, pirazin-2-ilo, pirazolilo, benzilo, α,α-dimetilbenzilo, α-aminobenzilo, a-metilaminobenzilo, 4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[d]isoxazol-3-ilo, 2H-ftalazin-l-ona-4-ilo, benzoxazol-7-ilo, quinazolinilo, 2-naftilo, ciclopropilo, benzo[c]isoxazol-3-ilo, 4-piperidinilo, 5-tiazolilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 3-pirrolilo, isoxazolilo, imidazo[2,1-b]tiazolilo, 4-pirimidinilo, ciclohexilo, tetrahidropiran-4-ilo, tetra-hidroquinolipiridilo, 4,5,6,7-tetra-hidro-benzofuranilo e morfolinilo. 51 0 grupo R1 pode ser um grupo carbocíclico ou heterocíclico substituído ou não substituído em que um ou mais substituintes podem ser selecionados de entre o grupo R10 como aqui definido anteriormente. Numa forma de realização, os substituintes de R1 podem ser selecionados de entre o grupo R10a consistindo de grupos halogéneo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxi, heterocíclicos com 5 ou 6 membros de anel e até 2 heteroátomos selecionados a partir de 0, Ne S, um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X3C (X4), C(X4)X3, X3C(X4)X3, S, SO, ou S02, e Rb é selecionado a partir de grupos de hidrogénio heterocíclicos com 5 ou 6 membros de anel e até 2 heteroátomos selecionados a partir de 0, N e S, e um grupo de hidrocarbilo Ci_8 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxi, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou dihidrocarbilamino C1-4, grupos carbocí clicos e heterocíclicos com 5 ou 6 membros de anel e até 2 heteroátomos selecionados a partir de 0, N e S; em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo Ci_8 podem opcionalmente ser substituídos por 0, S, SO, S02, X3C (X4) , C(X4)X3 ou X3C (X4) X3; X3 é 0 ou S; e X4 é =0 ou =S.
Numa outra forma de realização, os substituintes de R1 podem ser selecionados de entre o grupo R10b consistindo de grupos halogéneo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxi, um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0, CO, X3C(X4), C(X4)X3, X3C(X4)X3, S, SO, ou S02, e Rb é selecionado a partir de hidrogénio, um grupo de hidrocarbilo Ci-8 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxi, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxi; em que um ou mais átomos de carbono do 52 grupo hidrocarbilo Ci-8 podem opcionalmente ser substituídos por 0, S, SO, S02, X3C(X4), C(X4)X3 ou X3C(X4)X3; X3 é 0 ou S; e X4 é =0 ou =S.
Numa outra forma de realização, os substituintes de R1 podem ser selecionados a partir de halogéneo, hidroxi, trifluorometilo, um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação ou 0, e Rb é selecionado a partir de hidrogénio e um grupo hidrocarbilo C1-4 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxilo e halogéneo.
Um subconjunto de substituintes que podem estar presentes num grupo R1 (por exemplo, um grupo R1 arilo ou heteroarilo) inclui flúor, cloro, metoxi, metilo, oxazolilo, morfolino, trifluorometilo, bromometilo, cloroetilo, pirrolidino, pirrolidiniletoxi, pirrolidinilmetilo, difluorometoxi e morfolinometilo.
Outro sub-conjunto de substituintes que pode estar presente num grupo R1 inclui flúor, cloro, metoxi, etoxi, metilo, etilo, isopropilo, terc-butilo, amino, oxazolilo, morfolino, trifluorometilo, bromometilo, cloroetilo, pirrolidino, pirrolidiniletoxi, pirrolidinilmetilo, difluorometoxi, trifluorometoxi, morfolino, N-metilpiperazino, piperazina, piperidino, pirrolidino, e morfolinometilo. A porção de R1 pode ser substituída por mais do que um substituinte. Assim, por exemplo, pode haver 1 ou 2 ou 3 ou 4 substituintes, mais tipicamente 1, 2 ou 3 substituintes. Numa forma de realização, em que R1 é um anel de seis membros (por exemplo, um anel carbocíclico, tal como um 53 anel fenilo), pode haver um único substituinte, que pode estar localizado em qualquer uma das posições 2, 3 e 4 no anel. Numa outra forma de realização, pode haver dois ou três substituintes e estes podem estar localizados nas posições 2, 3, 4 ou 6 em torno do anel. A título de exemplo, um grupo R1 fenilo pode ser 2,6-di-substituído, 2,3-di-substituido, 2,4-di-substituido 2,5-di-substituido, 2,3,6-tri-substituido, ou 2,4,6-tri-substituido.
Numa forma de realização, um qrupo R1 fenilo pode ser di-substituido nas posições 2 e 6 por substituintes selecionados a partir de flúor, cloro e Ra-Rb, em que Ra é 0 e Rb é alquilo Ci_4, em que o flúor é um substituinte particular.
Num subgrupo de compostos, o grupo R1 é um grupo heteroarilo de cinco membros contendo 1 ou 2 heteroátomos de anel selecionados a partir de 0, N e S. Grupos heteroarilo particulares incluem grupos furano, tiofeno, pirrole, oxazol, isoxazol e de tiazol. Os grupos heteroarilo podem ser não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos substituintes como definidos anteriormente.
Um grupo preferido de grupos heteroarilo de cinco membros consiste de grupos de isoxazol e tiazol opcionalmente substituídos.
Num outro subgrupo de compostos, R1 é um grupo de pirazolopiridina, por exemplo, um grupo pirazolo[1,5-a]piridina, tal como um grupo 3-pirazolo[1,5-a]piridinilo. 54
Os exemplos particulares a A183 (por exemplo AI abaixo. 54 de grupos R1 incluem a A60) apresentados os grupos AI na Tabela 1
Tabela 1
55 j ] /*s*\ í iy ^ils. y ifVF 'xr·' ° H'''\ ]i J C Y** i ,j M L-/ Meô x H A37 A38 A39 A40 ,-'L, -O F f x ' :-- -'0 F X» u f Ofule A41 A42 A43 A44 is 1 1 »' '-\V Y"N . χ^ρ ^ li l> J i S : ' ! OCHF? x, *> í Χ..Ά x xx...w-. í t CS A4S A46 A47 A48 Y fcte cr x^ Λ/ vr Λ U *? OMe F Me A 49 ASO A51 AS2 /L «, Cl cr Q“N ÍSt2^ \ N, Me < "*í v_/ A53 A54 A 55 A56 ί O-ii Me .Y;-,,-· Μβ \\ / XV' /"Ύ, %-Q Mt /_~Λ xo q 'N_y w A57 A58 A59 A60 ,1,0». A ,ΟΜβ í Y -·ίχχα íi f A'' u- V Γ KJ Mo o A61 A62 A63 A64 Me Η Y ,=s: OMss p5J °—i A65 A86 A67 A68 56
57 Μβ 0Υ Λα μ Ρ F CPC Ν \ Α.97 AS8 Α&9 Α100 -*< Ί \V"0 Α101 f*ss\ <Hp 102 <Μ 103 Ο Ν“4 Me ^ Α104 r~*\ Ν ' a—Ν Me 0 ΜβΟ ^sN ,: ;,-οΜβ ,/ F w Ν Ο W/ 0 V vse Ο Ν*-\ Q A1CS A10S Α107 \ Α108 CijQrQMè ’Α F Υ^Υ-'ΟΜ» 'tU A1G9 Α110 Α111 Α112 ,°Q /^\- 0Μθ Μβ-*^ Α113 ρ Ρ fy^\ \) Α114 Α115 Μβ /»Ν ^ΜθΜβ Α118 Ύ α ° 0 τ\ 'Ί^'ΟΜβ Ο Ο Μ© Υ ΓΜθ ,μ^ Me V A11? Λ·· 1.5 Α119 I Α120 ιΤ5 0 Pp* ΐΎ^-ΘΜβ Ό> Υ Υ Α121 Α122 Α123 A: 24 58
59
Um subconjunto preferido de compostos de acordo com a invenção é o subgrupo, em que R1 é um grupo selecionado a partir de Al a A34. 60
Um outro subconjunto preferido de compostos de acordo com a invenção é o subgrupo, em que R1 é um grupo selecionado a partir de AI a A24, A26 a A34, A38 a A46, A48 a A57, A59 a A64, A66 a A114, A116 a A165, A167 a A168 e A170 a A183.
Um grupo de grupos R1 preferidos é fenilo 2,3 di-substituido, 2,6 di-substituído ou 2,4,6, tri-substituído ou 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina, em que os substituintes são selecionados a partir de halogéneo e alcoxi C1-4.
Um subconjunto de grupos R1 particularmente preferido inclui 2,6-difluorofenilo, 2-cloro-6-fluorofenilo, 2-fluoro-6-metoxifenilo, 2,6-diclorofenilo, 2,4,6-trifluorofenilo, 2-cloro-6-metilo, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxin-5-ilo e pirazolo[1,5-a]piridin-3-ilo. Os compostos que contêm grupos R1 selecionados a partir deste subconjunto têm particularmente boa atividade inibitória de cdk.
Um outro subconjunto particularmente preferido de grupos R1 inclui 2,6-difluorofenilo, 2-metoxifenilo, 2,6-difluoro-4-metoxifenilo, 2-fluoro-6-metoxifenilo, 2-fluoro-5-metoxifenilo, 2,6-dimetoxifenilo, 2,4-dimetoxifenilo, 2-cloro-6-fluorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 2,4,6-trifluorofenilo, 2-cloro-6-metilo, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxin-5-ilo e pirazolo[1,5-a]piridin-3-ilo.
Um outro sub-grupo preferido de grupos R1 inclui 2,6-difluorofenilo, 2-fluoro-6-metoxifenilo, 2-cloro-6-fluorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 2,4,6-trifluorofenilo, 2,6-difluoro-4-metoxifenilo e 2,3-dihidro-benzo [1,4]dioxina. 61
No contexto da inibição de cdk quinases, um grupo atualmente mais preferido de R1 é 2,6-difluorofenilo. 0 grupo de benzimidazol da fórmula (VII) inclui:
As combinações da invenção incluem um composto da fórmula (VII):
em que Rld é um grupo R1, Rla, Rlb ou Rlc ou como aqui definido anteriormente, e:
Rla é selecionado a partir de: • grupos arilo monociclicos de 6 membros substituídos por um a três substituintes R10c desde que, quando o grupo arilo é substituído por um grupo metilo, pelo menos um substituinte diferente de metilo esteja presente; • grupos heteroarilo monociclicos de 6 membros contendo um único membro de anel heteroátomo que é azoto, os grupos heteroarilo sendo substituídos por um a três substitumtes R ; grupos heteroarilo monociclicos de 5 membros contendo até três membros de anel heteroátomo selecionados a 62 partir de azoto e enxofre, e sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes R10c; • grupos heteroarilo monocíclicos de 5 membros contendo um único membro de anel heteroátomo de oxigénio e, opcionalmente, um membro de anel heteroátomo de azoto, 1 oc e sendo substituídos por um a tres substituintes R desde que, quando o grupo heteroarilo contém um membro de anel de azoto e é substituído por um grupo metilo, pelo menos, um substituinte diferente de metilo está presente; • grupos arilo e heteroarilo bicíclicos tendo até quatro membros de anel heteroátomo e em que um anel é aromático e o outro anel é não-aromático, ou em que ambos os anéis são aromáticos, os grupos bicíclicos sendo opcionalmente substituídos por um a três
Ί 0 C substituintes R ;
• grupos heterocíclicos saturados com ligação C monocíclicos de quatro membros, seis membros e sete membros contendo até três heteroátomos selecionados a partir de azoto, oxigénio e enxofre, os grupos heterocíclicos sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes R10c desde que, quando o grupo heterocíclico tem seis membros de anel e contém apenas um heteroátomo que é oxigénio, pelo menos um substituinte R10c está presente;
• grupos heterocíclicos saturados com ligação C monocíclicos de cinco membros contendo até três heteroátomos selecionados a partir de azoto, oxigénio e enxofre, os grupos heterocíclicos sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes R10c desde que, quando o grupo heterocíclico tem cinco membros de anel 63 e contém apenas um heteroátomo que é azoto, pelo menos um substituinte R10c está presente, que não um hidroxi; • qrupos cicloalquilo de quatro e seis membros opcionalmente substituídos por um a três substituintes R10c; • grupos cicloalquilo de três e cinco membros substituídos por um a tres substituintes R ; e • um grupo Ph' CR17R18- em que Ph' é um grupo fenilo substituído por um a três subst ituintes R ; R e R são iguais ou diferentes e cada um é selecionado a partir de hidrogénio e metilo; ou R17 e R18 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um grupo ciclopropilo; ou um de R17 e R18 é hidrogénio e o outro é selecionado entre amino, metilamino, acilamino Ci-4, e alcóxicarbonilamino Ci-4; • fenilo não substituído e fenilo substituído por um ou mais grupos metilo; • grupos heteroarilo monocíclicos de 6 membros não substituídos contendo um único membro de anel heteroátomo que é azoto; • furilo não substituído; • grupos heteroarilo monocíclicos de 5 membros contendo um único membro de anel heteroátomo de oxigénio e um membro de anel heteroátomo de azoto, e sendo não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos metilo;
• grupos heterocíclicos saturados com ligação C monocíclicos de seis membros não substituídos contendo apenas um heteroátomo que é oxigénio; e • grupos cicloalquilo de três e cinco membros não substituídos; e R10C é selecionado a partir de: 64 • halogéneo (por exemplo F e Cl) ; • hidroxilo; • hidrocarbiloxi Ci-4 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de entre hidroxilo e halogéneo; • hidrocarbilo C1-4 substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxilo, halogéneo e anéis heterociclicos saturados de cinco e seis membros contendo um ou dois membros de anel de heteroátomo selecionados a partir de azoto, oxigénio e enxofre; • hidrocarbilo S-C1-4; • fenilo opcionalmente substituído por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo C1-4, trifluorometilo, flúor e cloro; • grupos heteroarilo com 5 ou 6 membros de anel ( por exemplo, oxazol, piridilo, pirimidinilo) e contendo até 3 heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S, os grupos heteroarilo sendo substituídos facultativamente por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo Ci—4, trifluorometilo, flúor e cloro; • grupos heterociclicos não aromáticos com 5 e 6 membros (por exemplo, pirrolidino, piperidino, piperazina, N-metilpiperazino, morfolino) contendo até 3 heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S, sendo substituídos facultativamente por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo C1-4, trif luorometilo, flúor e cloro; • ciano, nitro, amino, alquilamino C1-4, di-alquilamino C1-4, acilamino C1-4, alcoxicarbonilamino Ci-4; 65 • um grupo R19-S(0)n-»· em que n é 0, 1 ou 2 e R19 é selecionado a partir de amino; alquilamino Ci_4; di-alquilamino Ci-4; • hidrocarbilo Ci-4; fenilo opcionalmente substituído por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo Ci-4, trifluorometilo, flúor e cloro; e grupos heterocíclicos não-aromáticos de 5 e 6 membros contendo até 3 heteroátomos selecionados de entre N, e S e sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes do grupo alquilo C4-4; e • um grupo R20-Q- em que R20 é fenilo opcionalmente substituído por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo Ci-4, trif luorometilo, flúor e cloro; e Q é um grupo ligante selecionado de entre OCH2, CH20, NH, CH2NH, NCH2, CH2, NHCO e CONH.
Num subgrupo preferido dos compostos, Rla é selecionado a partir de grupos heteroarilo com 5 ou 6 membros de anel (por exemplo, oxazol, tiazol, piridilo, pirimidinilo) e contendo até 3 heteroátomos selecionados a partir de N, e S, os grupos heteroarilo sendo substituídos facultativamente por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo C2-4, trif luorometilo, flúor e cloro. Um grupo tiazol substituído, por exemplo, 2-metil-4-trifluorometil-2-tiazolilo, representa uma forma de realização preferida.
Num outro subgrupo preferido dos compostos, Rla é selecionado a partir de grupos heteroarilo monocíclicos de 5 membros contendo um único membro de anel heteroátomo de oxigénio e, opcionalmente, um membro de anel heteroátomo de azoto, e sendo substituído por um a três substituintes R10c 66 desde que, quando o grupo heteroarilo contém um membro de anel de azoto e é substituído por um grupo metilo, pelo menos, um substituinte diferente de metilo está presente. Tal tipo de grupo é isoxazol substituído por um grupo alquilo C2-4, tal como um grupo propilo ou butilo, por exemplo isobutilo.
Num outro subgrupo preferido de compostos, Rla é selecionado de entre grupos cicloalquilo com três e cinco membros substituído por um a tres substítuintes R . Grupos ciclopropilo substituídos são particularmente preferidos, por exemplo, grupo ciclopropilo substituído por fenilo ou ciano, por exemplo, 1-cianociclopropilo e 1-fenilciclopropilo.
Num outro subgrupo preferido de compostos, Rla é selecionado a partir de um grupo Ph'CR17R18~ em que Ph' é um grupo fenilo substituído por um a tres substítuintes R ; R17 e R18 são iguais ou diferentes e cada um é selecionado a partir de hidrogénio e metilo; ou R17 e R18 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um grupo ciclopropilo; ou um de R17 e R18 é hidrogénio e o outro é selecionado entre amino, metilamino, acilamino Ci_4, e alcóxicarbonilamino Ci-4.
Rlb pode ser um grupo fenilo substituído com 1 a 4 substituintes, em que: (i) quando Rlb tem um único substituinte, é selecionado a partir de halogéneo, hidroxilo, hidrocarbiloxi Ci-4 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de entre hidroxilo e halogéneo; hidrocarbilo Ci^4 substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de 67 hidroxilo e halogéneo; grupos heteroarilo com 5 membros de anel; e grupos heterocíclicos não-aromáticos de 5 e 6 membros, em que os grupos heteroarilo e heterocíclico contêm até 3 heteroátomos selecionados de entre N, 0 e S; (ii) quando Rlb tem 2, 3 ou 4 substituintes, cada um é selecionado a partir de halogéneo, hidroxilo, hidrocarbiloxi Ci_4 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de entre hidroxilo e halogéneo; hidrocarbilo Ci-4 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxilo e halogéneo; grupos heteroarilo com 5 membros de anel; amino; e grupos heterocíclicos não aromáticos com 5 e 6 membros; ou dois substituintes adjacentes em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão ligados, formam um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel heterocíclico não aromático de 5 ou 6 membros; em que os referidos grupos heteroarilo e heterocíclicos contêm até 3 heteroátomos selecionados de entre N, 0 e S. 0 grupo Rla-A-NH ou Rlb-A-NH ligado à posição 4 do anel pirazol pode assumir a forma de uma amida Rla/lb-C (=0) NH, ureia Rla/lb-NHC ( = S) ou carbamato Rla/lb-0C (= 0) . As amidas e ureias são preferidas. Numa forma de realização, o composto é uma amida. Numa outra forma de realização, o composto é uma ureia. 0 grupo fenilo substituído Rlb é substituído por um único substituinte, como anteriormente definido, ou por mais do que um substituinte. Assim, pode haver 1 ou 2 ou 3 ou 4 substituintes, mais preferivelmente 1, 2 ou 3 68 substituintes. Numa forma de realização, pode haver dois ou três substituintes e estes podem estar localizados nas posições 2, 3, 4, 5 ou 6 em torno do anel. A titulo de exemplo, um grupo Rlb fenilo pode ser 2,6-di-substituído, 2,3-di-substituido, 2,4-di-substituido, 2,5-di-substituído, 2,3,6-tri-substituido, ou 2,4,6-tri-substituído. Num grupo de compostos preferidos, o grupo Rlb fenilo é 2,6-di-substituido, 2,3-di-substituido, ou 2,4,6-tri-substituido. Mais particularmente, um grupo Rlb fenilo pode ser di-subst ituido nas posições 2 e 6 por substituintes selecionados a partir de flúor, cloro e Ra-Rb, em que Ra é e Rb é alquilo Ci-4, em que o flúor é um substituinte particular. Alternativamente, dois substituintes adjacentes (de preferência nas posições 2 e 3) , em conjunto com o anel fenilo ao qual estão ligados, podem formar um grupo 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina, ou um grupo indolilo ou um grupo 2,3-dihidrobenzofuranilo.
Num outro grupo de compostos preferidos, o grupo Rlb fenilo é 2,4-di-substituido, ou 2,5-di-substituido. 0 2-substituinte pode ser, por exemplo, um halogéneo (por exemplo, F ou Cl) ou um grupo metoxi. Num grupo particular de compostos, o 2-substituinte é metoxi. 0 5-substituinte, quando presente, pode ser selecionado a partir de, por exemplo, halogéneo (por exemplo, Cl ou F) , alquilo C1-4 (por exemplo, terc-butilo ou isopropilo), metoxi, trifluorometoxi, trifluorometilo, ou um grupo HetN-S02- em que "HetN" é um heterociclo monociclico saturado contendo azoto, tal como piperazino, alquilpiperazino N-Ci-4, morfolino, piperidino ou pirrolidino. Um 5-substituinte preferido é Cl, e uma combinação 2,5 preferida é 2-metoxi-5-clorofenilo. 69
Num outro grupo de compostos, o grupo fenilo Rlb tem um único substituinte na posição 4 do anel de fenilo. 0 substituinte pode ser, por exemplo, um átomo de halogéneo (de preferência flúor ou cloro, mais preferencialmente flúor) ou um grupo trifluorometilo.
Num outro grupo de compostos, o grupo fenilo Rlb é 2,4-di-substituído.
Quando dois substituintes adjacentes em conjunto com o anel fenilo ao qual eles estão ligados formam um grupo indolilo ou um grupo 2,3-dihidrobenzofuranilo, é preferido que os referidos grupos sejam o 4-indolilo e 7-(2,3-hidrobenzofuranil) , respetivamente.
Sempre que Rlb é mono-substituído, e o substituinte está localizado na posição 4 do anel fenilo, ele é de preferência diferente de um grupo difluorometoxilo ou de um grupo 2-cloroetilo.
Numa forma de realização, em que Rlb é di-substituido, o grupo fenilo substituído pode ser outro que não um grupo dimetoxifenilo, e pode ser diferente de um grupo 2-flúor-5-metoxifenilo.
Numa outra forma de realização, a subgrupo Rlb pode incluir o grupo 2-flúor-5-metoxifenilo. Tais compostos têm uma boa atividade contra a Aurora quinase.
Quando dois substituintes adjacentes se combinam para formar um anel, de modo que Rlb seja um grupo índole, o 70 grupo índole é de preferência diferente de um grupo indol-7-ilo.
Um subgrupo preferido de compostos de acordo com a invenção é o grupo em que Rlb é selecionado de entre os grupos AI a A8, AIO, A12 e A14 a A24 apresentados na Tabela 1 acima.
Grupos particularmente preferidos de R1' incluem 2,6-difluorofenilo, 2-fluoro-6-metoxifenilo, 2-cloro-6- fluorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 2,4,6-trifluorofenilo, e 2,3-dihidro-benzo[l,4]dioxina.
Um grupo atualmente preferido de R1’ é 2,6-difluorofenilo. Rlc é selecionado a partir de: (a) um grupo fenilo mono-substituído em que o substituinte é selecionado a partir de o-amino, o-metoxi; o-cloro; p-cloro; o-difluorometoxi; o-trifluorometoxi; o-terc-butiloxi; m-metilsulfonil e p-flúor; (b) um grupo fenilo 2,4- ou 2, 6-di-substituído em que um substituinte é selecionado a partir de o-metoxi, o-etoxi, o-flúor, p-morfolino e o outro substituinte é selecionado a partir de o-flúor, o-cloro, p-cloro, e p-amino; (c) um grupo fenilo 2,5-di-substituído em que um substituinte é selecionado a partir de o-flúor e o-metoxi e o outro substituinte é selecionado a partir de m-metoxi, m-isopropilo; m-flúor, ni tri, f luorometoxi, m-trifluorometilo, m-metilsulfanilo, m-pirrolidinosulfonilo, m-(4-metilpiperazin-l- il) sulfonilo, /n-morfolinossulfonil, m-metilo, m-cloro e m-aminossulfonilo; 71 (d) um grupo fenilo 2,4,β-tri-substituído, em que os substituintes são iguais ou diferentes e são cada um selecionados a partir de o-metoxi, o-flúor, p-flúor, p-metoxi, desde que não mais do que um substituinte metoxi esteja presente; (e) um grupo fenilo 2,4,5-tri-substituido, em que os substituintes são iguais ou diferentes e cada um é selecionado a partir de o-metoxi, m-cloro e p-amino; (f) benzilo não substituído; 2,6-difluorobenzilo; α,α- dimetilbenzilo, 1-fenilcicloprop-l-ilo, e ot-terc-butoxicarbonilaminobenzilo; (g) um grupo 2-furilo não substituído ou um grupo 2-furilo tendo um único substituinte selecionado a partir de 4-(morfolin-4-ilmetil), piperidinilmetilo; e opcionalmente um outro substituinte selecionado a partir de metilo; (h) um grupo não substituído de pirazolo[1,5-a]piridin-3- ilo; (i) isoxazolilo substituído por um ou dois grupos alquilo
Cl-4 r (j) 4,5,6,7-tetra-hidro-benzo[d]isoxazol-3-ilo; (k) 3-terc-butil-fenil-lH-pirazol-5-ilo; (l) quioxalinilo; (m) benzo[c]isoxazol-3-ilo; (n) 2-metil-4-trifluorometil-tiazol-5-ilo; (o) 3-fenilamino-2-piridilo; (p) 1-toluenosulfonilpirrol-3-ilo; (q) 2,4-dimetoxi-3-piridilo; e 6-cloro-2-metoxi-4-metil-3- piridilo; (r) imidazo[2,1-b]tiazol-6-ilo; (s) 5-cloro-2-metilsulfanil-pirimidin-4-ilo; (t) 3-metoxi-naft-2-ilo; (u) 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-ilo; 72 (ν) ο grupo 2,3-dihidro-benzofuranilo opcionalmente substituído no anel de cinco membros por um ou dois grupos metilo; (w) 2-metil-benzoxazol-7-ilo; (x) 4-aminociclohex-l-ilo; (y) 1,2,3,4-tetra-hidro-quinolin-6-ilo; (z) 2-metil-4,5,6,7-tetra-hidro-benzfuran3-ilo; (aa) 2-pirimidinil-lpiperidin-4-ilo; e 1-(5-trifluorometil- 2-piridil)-piperidin-4-il e 1-metilsulfonilpiperidin-4-ilo; (ab) 1-cianociclopropilo; (ac) N-benzilmorfolin-2-ilo; e quando A é NH(C=0), R1’ é adicionalmente selecionado a partir de: (ad) fenilo não substituído.
Os compostos da fórmula (VII) mostram uma boa atividade inibidora de CDK e também são particularmente ativos contra Aurora quinases.
Um da subgrupo fórmula particularmente preferido de compostos (VII) é representado pela fórmula (Vila): dentro
N o <Vna) em que Rld é como anteriormente definido. 73
Para que não restem dúvidas, é para ser entendido que cada preferência geral e especifica, forma de realização, e exemplo dos grupos R1 pode ser combinada com cada preferência geral e especifica, forma de realização, e exemplo dos grupos R10 e quaisquer subgrupos dos mesmos, e que todas essas combinações são abrangidas pelo presente pedido.
Os diferentes grupos funcionais e substituintes que formam os compostos da fórmula (VII) são geralmente escolhidos de modo que o peso molecular do composto da fórmula (VII) não seja superior a 1000. Mais geralmente, o peso molecular do composto será menor do que 750, por exemplo, menos do que 700, ou menos do que 650, ou menos do que 600, ou menos do que 550. Mais preferivelmente, o peso molecular é inferior a 525 e, por exemplo, é inferior a 500.
Compostos particulares e específicos da invenção são como se ilustra nos exemplos abaixo.
Salvo indicação em contrário, uma referência a um composto em particular inclui também formas iónicas, em sal, solvatos, e formas protegidas do mesmo, por exemplo, como discutido abaixo.
Muitos dos compostos da fórmula (VII) podem existir sob a forma de sais, por exemplo sais de adição de ácidos ou, em certos casos, os sais de bases orgânicas e inorgânicas, tais como sais de sulfonato, carboxilato e fosfato. Todos estes sais estão dentro do âmbito da presente invenção, e as referências a compostos com a fórmula (VII) incluem as formas de sal dos compostos.
Os sais de adição de ácido podem ser formados com uma grande variedade de ácidos, tanto inorgânicos como orgânicos. Exemplos de sais de adição de ácido incluem sais formados com ácido clorídrico, iodídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, cítrico, láctico, succínico, maleico, málico, isetiónico, fumárico, benzenossulfónico, toluenossulfónico, metanossulfónico, etanossulfónico, naftalenossulfónico, valérico, acético, propanoico, butanoico, malónico, glucurônico e lactobiónico.
Por exemplo, se o composto for aniónico, ou tiver um grupo funcional gue possa ser aniónico (por exemplo, -COOH pode ser -COO”) , então um sal pode ser formado com um catião adequado. Exemplos de catiões inorgânicos adequados incluem, mas não estão limitados a, iões de metais alcalinos, tais como Na+ e K+, catiões de metais alcalinoterrosos, tais como Ca2+ e Mg2+, e outros catiões tais como o Al3+. Exemplos de catiões orgânicos adequados incluem, mas não estão limitados a, iões de amónio (por exemplo, NH4+) e iões de amónio substituídos (por exemplo, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+) . Os exemplos de alguns iões de amónio substituídos adequados são os que derivam de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilbenzilamina, colina, meglumina, e trometamina, assim como os aminoácidos, tais como lisina e arginina. Um exemplo de um ião de amónio quaternário comum é N(CH3)4+.
Quando os compostos de fórmula (VII) contêm uma função amina, estes podem formar sais de amónio quaternário, por exemplo por reação com um agente de alquilação de acordo com métodos bem conhecidos do perito na arte. Tais 75 compostos de amónio quaternários estão abrangidos pelo âmbito da fórmula (VII).
As formas de sal dos compostos da presente invenção são tipicamente sais farmaceuticamente aceitáveis, e os exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são discutidos em Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts", J. Pharm. Sei., Vol. 66, pp. 1-19. No entanto, os sais que não são farmaceuticamente aceitáveis podem também ser preparados como formas intermédias que podem então ser convertidas em sais farmaceuticamente aceitáveis. Tais formas de sais não-farmaceuticamente aceitáveis, que podem ser úteis, por exemplo, na purificação ou separação dos compostos da invenção, também formam parte da invenção.
Os compostos da fórmula (VII) que contém uma função amina podem também formar N-óxidos. Uma referência aqui feita a um composto de fórmula (VII) que contém uma função amina também inclui o N-óxido.
Quando um composto contém várias funções amina, um ou mais do que um átomo de azoto pode ser oxidado para formar um N-óxido. Os exemplos particulares de N-óxidos são os N-óxidos de amina terciária ou de um átomo de azoto de um heterociclo contendo azoto.
Os N-óxidos podem ser formados por tratamento da amina correspondente com um agente oxidante tal como peróxido de hidrogénio ou um per-ácido (por exemplo um ácido peroxicarboxilico), ver por exemplo Advanced Organic
Chemistry, por Jerry March, 4a Edição, Wiley Interscience, páginas. Mais particularmente, os N-óxidos podem ser feitos 76 pelo processo de LW Deady (Syn. Comm. 1977, 7, 509-514), no qual o composto amina é feito reagir com ácido m-cloroperoxibenzoico (MCPBA), por exemplo, num solvente inerte tal como o diclorometano.
Os compostos da fórmula (VII) podem existir sob um certo número de formas geométricas isoméricas e tautoméricas diferentes e as referências aos compostos da fórmula (VII) incluem todas estas formas. Para que não restem dúvidas, quando um composto pode existir numa das várias formas geométricas isoméricas ou tautoméricas e somente uma é especificamente descrita ou mostrada, todas as outras são todavia abrangidas pela fórmula (VII).
Por exemplo, nos compostos da fórmula (VII), o grupo benzimidazol pode assumir qualquer uma das duas seguintes formas tautoméricas A e B. Para efeitos de simplicidade, a fórmula geral (VII), ilustra a forma A, mas a fórmula é para ser tomada como abrangendo ambas as formas tautoméricas.
B
A O anel de pirazol pode também exibir tautomerismo e pode existir nas duas formas tautoméricas C e D abaixo.
77 R i
A
R—A \
N-NH \
C
O
Outros exemplos de formas tautoméricas incluem, por exemplo, formas ceto, enol, e enolato, como por exemplo, os pares tautoméricos seguintes: ceto/enol (ilustrado abaixo), imina/enamina, álcool de amida/imino, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol, e nitro/aci-nitro. 1 J> X ^OH H* \ P C-C 55=¾ c~c C-C i ^ / X H* / X ceto enol enolato
Quando os compostos de fórmula (VII) contêm um ou mais centros quirais e podem existir sob a forma de dois ou mais isómeros óticos, as referências aos compostos com a fórmula (VII) incluem todas as formas isoméricas óticas dos mesmos (por exemplo, enantiómeros, epímeros e diastereoisómeros), quer como isómeros óticos individuais, ou misturas, ou dois ou mais isómeros óticos, a menos que o contexto exija o contrário.
Por exemplo, o grupo A pode conter um ou mais centros quirais. Assim, quando E e R1 estão ambos ligados ao mesmo átomo de carbono do grupo ligador A, o referido átomo de carbono é tipicamente quiral e, portanto, o composto da fórmula (VII) existirá como um par de enantiómeros (ou mais do que um par de enantiómeros em que mais do que um centro quiral se encontra presente no composto). 78
Os isómeros óticos podem ser caracterizados e identificados pela sua atividade ótica (isto é, como + e - isómeros, ou d e 1 isómeros) ou podem ser caracterizados em termos da sua estereoquimica absoluta, utilizando a nomenclatura "R e S" desenvolvida por Cahn, Ingold e Prelog, ver Advanced Organic Chemistry por Jerry March, 4a Edição, John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1992, páginas 109-114, e também ver Cahn, Ingold e Prelog, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1966, 5, 385-415.
Os isómeros óticos podem ser separados por um número de técnicas que incluem a cromatografia quiral (cromatografia sobre um suporte quiral) e essas técnicas são bem conhecidas do perito na arte.
Quando os compostos de fórmula (VII) existem como duas ou mais formas isoméricas óticas, um enantiómero de um par de enantiómeros pode apresentar vantagens em relação ao outro enantiómero, por exemplo, em termos de atividade biológica. Assim, em certas circunstâncias, pode ser desejável utilizar como agente terapêutico apenas um de um par de enantiómeros, ou apenas um de uma pluralidade de diastereoisómeros. Por conseguinte, a presente invenção proporciona composições contendo um composto da fórmula (VII) com um ou mais centros quirais, em que pelo menos 55% (por exemplo, pelo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95%) do composto de fórmula (VII) está presente como um único isómero ótico (por exemplo, enantiómero ou diastereoisómero). Numa forma de realização geral, 99% ou mais (por exemplo, substancialmente toda) da quantidade total do composto de fórmula (VII) podem estar presentes como um único isómero ótico (por exemplo, enantiómeros ou diastereoisómeros). 79
Os compostos da invenção incluem compostos com uma ou mais substituições isotópicas, e uma referência a um elemento particular inclui no seu âmbito todos os isótopos do elemento. Por exemplo, uma referência a hidrogénio inclui no seu âmbito 3H, 2H (D) , e 3H (T) . Da mesma forma, as referências a carbono e oxigénio incluem no seu âmbito, respetivamente, 12C, 13C e 14C e 160 e 180.
Os isótopos podem ser radioativos ou não-radioativos. Numa forma de realização da invenção, os compostos não contêm isótopos radioativos. Tais compostos são preferidos para uso terapêutico. Noutra forma de realização, no entanto, o composto pode conter um ou mais radioisótopos. Compostos contendo tais radioisótopos podem ser úteis num contexto de diagnóstico.
Os ésteres tais como ésteres de ácidos carboxílicos e ésteres de aciloxi dos compostos de fórmula geral (VII) tendo um grupo ácido carboxilico ou um grupo hidroxilo, são também abrangidos pela fórmula geral (VII). Exemplos de ésteres são os compostos contendo o grupo -C(=0)0R, em que R é um substituinte de éster, por exemplo, um grupo alquilo Ci-7, um grupo heterociclilo C3-2o, ou um grupo arilo C5-2CV de preferência um grupo alquilo C1-7. Os exemplos particulares de grupos de ésteres incluem, mas não estão limitados a, -C(=0)0CH3, -C (=0) OCH2CH3, -C (=0) OC (CH3) 3, e -C(=0)OPh. Exemplos de grupos aciloxi (éster inverso) são representados por -0C(=0)R, em que R é um substituinte aciloxi, por exemplo, um grupo alquilo C1-7, um grupo heterociclilo C3-2o, ou um grupo arilo Cs^2o, de preferência um grupo alquilo C1-7. Os exemplos particulares de grupos aciloxi incluem, mas não estão limitados a, - 80 OC (=0) CH3 (acetoxi) , -OC (=0) CH2CH3, -0C (=0) C (CH3) 3, OC(=0)Ph, e -OC(=0)CH2Ph.
Também englobadas pela fórmula (VII) estão as formas polimórficas dos compostos, solvatos (por exemplo hidratos), complexos (por exemplo, complexos de inclusão ou clatratos com compostos tais como ciclodextrinas, ou complexos com metais) dos compostos e pró-fármacos dos compostos. "Pró-fármacos" significa, por exemplo, qualquer composto que é convertido in vivo num composto biologicamente ativo da fórmula (VII).
Por exemplo, alguns pró-fármacos são ésteres do composto ativo (por exemplo, um éster metabolicamente lábil fisiologicamente aceitável). Durante o metabolismo, o grupo éster (-C(=0)0R) é clivado para originar o fármaco ativo. Tais ésteres podem ser formados por esterificação, por exemplo, de qualquer um dos grupos de ácido carboxilico (-C (=0)OH) no composto inicial, com, quando apropriado, proteção prévia de quaisquer outros grupos reativos presentes no composto inicial, seguido de desproteção se necessário.
Exemplos de tais ésteres metabolicamente lábeis incluem os da fórmula -C(=0)OR em que R é: alquilo Ci-7 (por exemplo,-Me, -Et, -nPr, -iPr, -nBu, -sBu, -iBu, -tBu) ; aminoalquilo Ci_7 (por exemplo, aminoetilo; 2-(N,N-dietilamino)etilo; 2— (4 — morfolino) etilo) , e aciloxi-alquilo Ci-7 (por exemplo, aciloximetilo; aciloxietilo; pivaloiloximetilo; 81 acetoximetilo; 1-acetoxietilo; 1-((1-metoxi-l-metil)etil-carbonxiloxietilo; 1- ( (benzoiloxi)etilo; isopropoxi-carboniloximetilo; 1-isopropoxi-carboniloxietilo; ciclo-hexil- carboniloximetilo; 1-ciclo-hexil-carboniloxietilo; ciclo-hexiloxi-carboniloximetilo; 1-ciclo-hexiloxi-carboniloxietilo; (4-tetra-hidropiraniloxi)carboniloximetilo; 1-((4-tetra-hidropiraniloxi)carboniloxietilo; (4-tetra-hidropiranil)carboniloximetilo; e 1-((4-tetra-hidropiranilo)carboniloxietilo).
Além disso, alguns pró-fármacos são ativados enzimaticamente para originar o composto ativo, ou um composto gue, após reação guímica posterior, origina o composto ativo (por exemplo, como em ADEPT, GDEPT, LIDEPT, etc.) . Por exemplo, o pró-fármaco pode ser um derivado de açúcar ou outro conjugado de glicósido, ou pode ser um derivado de éster de aminoácido.
Atividade Biológica
Os compostos da fórmula (VII) são inibidores de quinases dependentes de ciclina. Por exemplo, os compostos da invenção têm atividade contra CDK1, CDK2, CDK3, CDK5, CDK6 e CDK7 quinases.
Além disso, CDK4, CDK8 e/ou CDK9 podem ser de interesse.
Os compostos da invenção também têm atividade contra glicogénio sintase quinase 3 (GSK-3). 82
Os compostos da invenção também têm atividade contra Aurora quinases.
Como consequência da sua atividade na modulação ou inibição de CDK e Aurora quinases e glicogénio sintase quinase, espera-se que seja útil proporcionar um meio de sequestro, ou de recuperação de controlo do ciclo celular em células em divisão anormal. Por conseguinte, é previsível que os compostos sejam úteis no tratamento ou na prevenção de distúrbios proliferativos, tais como cancros. Prevê-se também que os compostos da invenção sejam úteis no tratamento de condições, tais como infeções virais, doenças autoimunes e doenças neurodegenerativas, por exemplo.
As CDKs desempenham um papel na regulação do ciclo celular, apoptose, transcrição, a diferenciação e função do SNC. Assim, os inibidores de CDK podem ser úteis no tratamento de doenças em que há um distúrbio da proliferação, diferenciação ou apoptose, tais como o cancro. Em particular, tumores RB+ve podem ser particularmente sensíveis aos inibidores de CDK. Os tumores RB-ve podem também ser sensíveis aos inibidores de CDK.
Exemplos de cancros que podem ser inibidos incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, por exemplo, um carcinoma da bexiga, da mama, do cólon (por exemplo carcinomas colorretais, tais como o adenocarcinoma do cólon e adenoma do cólon), rins, epiderme, fígado, pulmão, por exemplo adenocarcinoma, o cancro do pulmão de células pequenas e carcinomas do pulmão de células não pequenas, esófago, vesícula biliar, ovário, pâncreas, por exemplo, carcinoma pancreático exócrino, estômago, colo do útero, tiroide, 83 próstata, ou da pele, como por exemplo o carcinoma de células escamosas; um tumor hematopoiético de linhagem linfoide, por exemplo, leucemia, leucemia linfocitica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, linfoma das células pilosas, ou linfoma de Burkett; um tumor hematopoiético de linhagem mieloide, por exemplo leucemias mielógenas agudas e crónicas, sindroma mielodisplásico, ou leucemia promielocitica; cancro folicular da tiroide; um tumor de origem mesenquimal, por exemplo fibrossarcoma ou habdomiossarcoma; um tumor do sistema nervoso central ou periférico, por exemplo, astrocitoma, neuroblastoma, glioma, ou schwannoma; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteossarcoma; xeroderma pigmentosum; queratoacantoma; cancro folicular da tiroide; ou sarcoma de Kaposi. As CDKs também são conhecidas por desempenhar um papel na apoptose, proliferação, diferenciação e transcrição e, por conseguinte, os inibidores de CDK podem também ser úteis no tratamento das seguintes doenças diferentes do cancro; infeções virais, por exemplo o vírus do herpes, vírus da varíola, virus de Epstein-Barr, vírus Sindbis, adenovírus, HIV, HPV, HCV e HCMV; prevenção do desenvolvimento de SIDA em indivíduos infetados por HIV; doenças inflamatórias crónicas, por exemplo, lúpus eritematoso sistémico, a doença autoimune mediada por glomerulonefrite, artrite reumatoide, psoríase, doença inflamatória do intestino, e diabetes mellitus autoimune; doenças cardiovasculares, por exemplo, hipertrofia cardíaca, restenose, aterosclerose; doenças neurodegenerativas, por exemplo, doença de Alzheimer, demência relacionada com a SIDA, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrópica, retinite pigmentosa, atrofia muscular espinhal e degeneração cerebelar; glomerulonefrite; síndromes mielodisplásicas, 84 lesão isquémica associada a enfarte do miocárdio, lesão de acidente vascular cerebral e reperfusão, arritmia, aterosclerose, doenças hepáticas induzidas por toxinas ou relacionadas com o álcool, doenças hematológicas, por exemplo, anemia crónica e anemia aplástica: doenças degenerativas do sistema músculo-esquelético, por exemplo, osteoporose e artrite, rinossinusite aspirino-sensível, fibrose cística, esclerose múltipla, doenças renais e dor associada ao cancro.
Também foi descoberto que alguns inibidores da quinase dependente da ciclina podem ser utilizados em combinação com outros agentes anticancerígenos. Por exemplo, a atividade citotóxica do inibidor de quinase dependente da ciclina flavopiridol, tem sido utilizada com outros agentes anticancerígenos em terapia de combinação.
Assim, nas composições farmacêuticas, utilizações ou métodos da presente invenção para o tratamento de uma doença ou condição que compreende o crescimento anormal de células, a doença ou condição que compreende o crescimento anormal de células, numa forma de realização é um cancro.
Subconjuntos particulares de cancros incluem cancro da mama, cancro do ovário, cancro do cólon, cancro da próstata, cancro no esófago, cancro escamoso e carcinomas de pulmão de células não pequenas.
No caso de compostos que têm atividade contra Aurora quinase, exemplos particulares de cancros em que se prevê que os compostos inibidores de Aurora quinase da invenção serão úteis incluem: 85 cancros de mama humanos (por exemplo, cancros primários da mama, linfonodos negativos da mama, adenocarcinomas invasivos da mama, cancros da mama não-endometrioides); cancros do ovário (por exemplo, tumores de ovário primário); cancros de pâncreas; cancros da bexiga humanos; cancros colorretais (por exemplo, cancros colorretais primários); tumores gástricos; cancros renais; cancros cervicais: neuroblastornas; melanomas; linfornas; cancros de próstata; leucemia; carcinomas do endométrio não endometrioides; gliomas; linfoma não-Hodgkin;
Os cancros que podem ser particularmente sensíveis a inibidores de Aurora incluem carcinomas da mama, bexiga, colorretal, pancreático, do ovário, linfoma de não-Hodgkin, gliomas e carcinomas endometriais nonendometrioides. A atividade dos compostos da invenção como inibidores de quinases dependentes de ciclina, Aurora quinases e glicogénio sintase quinase 3, pode ser medida utilizando os ensaios estabelecidos nos exemplos abaixo e o nível de atividade apresentada por um dado composto pode ser definida em termos do valor de IC50. Os compostos preferidos da presente invenção são compostos que têm um 86 valor de IC50 de menos do que 1 micromole, mais preferivelmente menos de 0,1 micromole. Métodos para a Preparação de Compostos da Fórmula (VII)
Os compostos da fórmula (VII) podem ser preparados de acordo com métodos sintéticos bem conhecidos do perito na arte.
Salvo indicação em contrário R1 e R10 são como aqui definidos.
Os compostos da fórmula (VII), em que R1-A- forma um qrupo acilo podem ser preparados como ilustrado no Esquema 1 abaixo (em que R2 é H e R3 e R4 juntamente com os carbonos aos quais estão liqados formam um anel fenilo).
Como se mostra no Esquema 1, uma amina de fórmula (X) pode ser feita reaqir com um ácido carboxilico, ou seu derivado reativo, com a fórmula R^B-CC^H, sob condições padrão de formação de amida. Assim, por exemplo, a reação de acoplamento entre o ácido carboxilico e a amina (X) pode ser levada a cabo na presença de um reagente do tipo comummente usado na formação de ligações peptídicas. Exemplos de tais reagentes incluem 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) (Sheehan et al, J. Amer. Chem. Soc. 1955, 77, 1067), 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)- carbodiimida (EDC) (Sheehan et al, J. Org. Chem., 1961, 26, 2525) , agentes de acoplamento à base de urónio tais como hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, Ν',N'-tetrametilurónio (HATU) (L.A. Carpino, J. Amer. Chem. Soc., 1993, 115, 4397) e agentes de acoplamento à base de fosfónio, tais como hexafluorofosfato de 1-benzo-triazoliloxitris(pirrolidino)fosfónio (PyBOP) (Castro et 87 al, Tetrahedron Letters, 1990, 31, 205) . Os agentes de acoplamento à base de carbodiimida são vantajosamente utilizados em combinação com 1-hidroxiazabenzotriazol (HOAt) ou 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) (Konig et al, Chem. Ber. , 103, 708, 2024-2034) . Os reagentes de acoplamento preferidos incluem EDO e DCC em combinação com HOAt ou HOBt.
(D
Esquema 1 88 A reação de acoplamento é tipicamente levada a cabo de uma forma não-aquosa, não-solvente prótico, tal como acetonitrilo, dioxano, sulfóxido de dimetilo, diclorometano, dimetilformamida ou N-metilpirrolidina, ou num solvente aquoso, opcionalmente em conjunto com um ou mais co-solventes miscíveis. A reação pode ser realizada à temperatura ambiente ou, quando os reagentes forem menos reativos (por exemplo, no caso de anilinas pobres em eletrões tendo grupos de remoção de eletrões tais como grupos sulfonamida), a uma temperatura adequadamente elevada. A reação pode ser levada a cabo na presença de uma base não-interferente, por exemplo, uma amina terciária, tal como trietilamina ou N,N-diisopropiletilamina.
Em alternativa, um derivado reativo do ácido carboxílico, por exemplo, um anidrido ou cloreto de ácido, pode ser usado. A reação com um derivado reativo tal como um anidrido é tipicamente realizada por agitação da amina e anidrido à temperatura ambiente na presença de uma base tal como piridina.
As aminas de fórmula (X) podem ser preparadas por redução do correspondente composto nitro da fórmula (XI) sob condições normais. A redução pode ser efetuada, por exemplo, por hidrogenação catalítica na presença de um catalisador tal como paládio sobre carbono, num solvente polar tal como etanol ou dimetilformamida, à temperatura ambiente.
Quando X é azoto, os compostos da fórmula (XI) podem ser preparados por reação de um ácido carboxílico nitro-pirazol da fórmula (XII) com uma diamina da fórmula (XII). A reação entre a diamina (XIII) e o ácido carboxílico (XII) pode ser 89 levada a cabo na presença de um reagente, tal como DCC ou EDC, na presença de HOBt, como descrito acima, sob condições de acoplamento de amida, como descrito anteriormente, para dar um intermediário orto-aminofenilamida (não mostrado) o qual é então ciclizado para formar o anel de benzimidazol. 0 último passo de ciclização é tipicamente realizado por aquecimento sob refluxo na presença de ácido acético.
As diaminas da fórmula (XIII) podem ser obtidas comercialmente ou podem ser preparadas a partir de compostos precursores de fenilo apropriadamente substituídos utilizando química padrão e interconversões de grupos funcionais bem conhecidas, ver, por exemplo, Fiesers' Reagentes for Organic Synthesis, Volumes 1-17, John Wiley, editado por Mary Fieser (ISBN: 0-471-58283-2) e Organic Synthesis, Volumes 1-8, John Wiley, editado por Jeremiah P. Freeman (ISBN: 0-471-31192-8), 1995. Exemplos de métodos de preparação de diaminas da fórmula (XIII) são proporcionados nos exemplos abaixo.
As diaminas da fórmula (XIII) também podem ser feitas reagir com ácidos carboxílicos da fórmula (XIV) para dar compostos da fórmula (VII).
A reação da diamina (XIII) com o ácido carboxílico (XIV) pode ser efetuada sob condições análogas às acima descritas para a preparação dos compostos nitro (XI). Os ácidos 90 carboxílicos da fórmula (XIV) podem ser preparados pela sequência de reações apresentadas no Esquema 2.
Tal como mostrado no Esquema 2 (em que R2 é H) , um ácido carboxílico de 4-nitro-3-pirazol substituído ou não substituído (XV) pode ser esterificado por reação com cloreto de tionilo para dar o cloreto de ácido intermediário, seguido pela reação com o etanol para formar o éster etílico (XVI). Alternativamente, a esterificação pode ser levada a cabo por reação do álcool e do ácido carboxílico na presença de um catalisador ácido, um exemplo do qual é o cloreto de tionilo. A reação é tipicamente realizada à temperatura ambiente utilizando a esterificação de álcool (por exemplo etanol) como o solvente. 0 grupo nitro pode então ser reduzido usando-se paládio sobre carvão de acordo com métodos convencionais para se obter a amina (XVII). A amina (XVII) é acoplada a um ácido carboxílico R1-C02H apropriado sob condições de formação de amida iguais ou análogas às descritas acima, para dar a amida (XVIII). O grupo éster da amida (XVIII) pode, então, ser hidrolisado usando um hidróxido de metal alcalino, tal como hidróxido de sódio num solvente miscível de água polar, tal como metanol, tipicamente à temperatura ambiente. 91
Os compostos da fórmula (VII) em que A é NH (CO) podem ser preparados usando métodos padrão para a síntese de ureias. Por exemplo, tais compostos podem ser preparados por reação de um composto de aminopirazol de fórmula (X) com um isocianato de fenilo adequadamente substituído num solvente polar, tal como DMF. A reação é convenientemente levada a cabo à temperatura ambiente. 92
Uma outra via para compostos de fórmula (VII) é mostrada no Esquema 3 abaixo (em que X representa N).
Esquema 3
Tal como ilustrado no Esquema 3 (em que R3 e R4 em conjunto com os carbonos aos quais estão ligados, formam um anel fenilo), a cetona (XIX) pode reagir com dimetilformamida-dimetilacetal a uma temperatura elevada para dar uma cetona a,β-insaturada (XX) (Jachak et al, Montash. Chem., 1993,124 (2), 199-207), que por aquecimento com hidrato de hidrazina dá um pirazol de fórmula (XXI) . Este pode, então, ser nitrados como aqui discutido para dar o nitropirazol (XXII).
Os materiais de partida para as vias sintéticas apresentadas nos Esquemas acima, os pirazóis de Fórmula (XII) e (XV), podem ser obtidos comercialmente ou podem ser preparados por métodos conhecidos dos peritos na arte. Eles podem ser obtidos usando métodos conhecidos, por exemplo, a 93 partir de cetonas, tal como num processo descrito na EP308020 (Merck), ou os métodos discutidos por Schmidt em Helv. Chim. Acta., 1956, 39, 986-991 e Helv. Chim. Acta., 1958, 41, 306-309. Alternativamente, eles podem ser obtidos por conversão de um pirazol disponível comercialmente, por exemplo os que contêm funcionalidades de halogéneo, nitro, éster, ou amida, em pirazóis contendo a funcionalidade desejada, por métodos padrão conhecidos de um perito na técnica. Por exemplo, em 3-carboxi-4-nitropirazol, o grupo nitro pode ser reduzido para uma amina por métodos convencionais. O ácido 4-nitro-pirazol-3-carboxílico (XII) pode ser obtido comercialmente ou pode ser preparado por nitração do composto correspondente carboxi pirazol 4-não substituído, e pirazóis que contêm um halogéneo, podem ser utilizados em reações de acoplamento com química de paládio ou estanho. Um ácido carboxílico de 4-nitro-3-pirazol substituído ou não substituído pode ser esterificado por reação com cloreto de tionilo para dar o cloreto de ácido intermediário, seguido pela reação com um álcool para formar o éster de fórmula (XVI). Alternativamente, a esterificação pode ser levada a cabo por reação do álcool e do ácido carboxílico na presença de um catalisador ácido, um exemplo do qual é o cloreto de tionilo. A reação é tipicamente realizada à temperatura ambiente utilizando a esterificação de álcool (por exemplo etanol) como o solvente.
Em muitas das reações descritas acima, pode ser necessário proteger um ou mais grupos para impedir que a reação tenha lugar a uma posição indesejável na molécula. Exemplos de grupos protetores, e dos métodos de proteção e desproteção de grupos funcionais, podem ser encontrados em Protective 94
Groups in Organic Synthesis (T. Green e P. Wuts; 3a Edição; John Wiley and Sons, 1999).
Um grupo hidroxi pode ser protegido, por exemplo, como um éter (-0R) ou um éster (-0C(=0)R), por exemplo, como: um éter t-butilico; um benzilo, benzidrilo(difenilmetilo) ou éter tritilo(trifenilmetilo) ; um éter de trimetilsililo ou t-butildimetilsililo; ou um éster acetilo (-0C(=0)CH3,-OAc) . Um grupo aldeído ou cetona pode ser protegido, por exemplo, como um acetal (R-CH(0R)2) ou cetal (R2C(OR)2), respetivamente, no qual o grupo carbonilo (>C=0) é convertido num diéter (>C(OR)2), por reação com, por exemplo, um álcool primário. 0 grupo aldeído ou cetona é facilmente regenerado por hidrólise usando um grande excesso de água na presença de ácido. Um grupo amina pode ser protegido, por exemplo, como uma amida (-NRCO-R) ou um uretano (-NRCO-OR), por exemplo, como: uma metil amida (-NHCO-CH3) ; uma amida benziloxi (-NHCO-OCH2C6H5,-NH-Cbz) ; como uma t-butoxi-amida (-NHCO-OC(CH3) 3,-NH-Boc); uma amida de 2-bifenil-2-propoxi (-NHCO-OC (CH3) 2C6H4C6H5, -NH-Bpoc) , como uma amida 9-fluorenilmethoxi (-NH-Fmoc), como uma amida 6-nitroveratriloxi (-NH-Nvoc), como uma amida de 2-trimetilsililetiloxi (-NH-Teoc), como uma amida 2,2,2-tricloroetiloxi (-NH-Troc), como uma amida aliloxi (-NH-Alloc) , ou como uma amida de 2(-fenilsulfonil)etiloxi (-NH-Psec). Outros grupos protetores de aminas, tais como aminas cíclicas e grupos heterocíclicos N-H incluem grupos toluenossulfonilo (tosilo) e de metanossulfonilo(mesilo) e grupos benzilo tais como um grupo para-metoxibenzilo (PMB). Um grupo de ácido carboxílico pode ser protegido como um éster, por exemplo, como: um éster de alquilo C1-7 (por exemplo, um éster metílico; um éster t-butílico) ; um éster de haloalquilo Ci_7 (por exemplo, um éster tri-haloalquilo 95
Ci-7) ; um éster triCi-7alquilsilil-Ci-7alquilo; ou um éster de C5-2oaril-Ci-7alquilo (por exemplo, um éster benzílico; um éster de nitrobenzilo) ; ou como uma amida, por exemplo, como uma amida de metilo. Um grupo tiol pode ser protegido, por exemplo, como um tioéter (-SR), por exemplo, como: um tioéter benzílico, um éter acetamidometilo (-S-CH2NHC (=0) CH3) . Métodos de Purificação
Os compostos podem ser isolados e purificados por um número de métodos bem conhecidos dos peritos na arte e os exemplos de tais métodos incluem técnicas cromatográficas tais como cromatografia em coluna (por exemplo, cromatografia flash) e HPLC. A LC-MS preparativa é um método padrão e eficaz usado para a purificação de moléculas orgânicas pequenas, tais como os compostos descritos no presente documento. Os métodos para a cromatografia líquida (CL) e espetrometria de massa (MS) podem ser variados para proporcionar uma melhor separação dos materiais em bruto e deteção melhorada das amostras por MS. A otimização do método preparativo LC gradiente envolverá colunas diferentes, eluentes voláteis e modificadores e gradientes. Os métodos são bem conhecidos na arte para otimizar os métodos preparativos LC-MS e, em seguida, utilizando-os para purificar os compostos. Tais métodos são descritos em Rosentreter U, Huber U.; Optimal fraction collecting in preparative LC/MS; J Comb Chem.; 2004; 6(2), 159-64 e Leister W, Strauss K, Wisnoski D, Zhao Z, Lindsley C., Development of a custom high-throughput preparative liquid chromatography/mass spectrometer platform for the preparative purification and analytical analysis of compound libraries; J Comb Chem.; 2003; 5(3); 322-9. 96
Um tal sistema para a purificação de compostos por meio de LC-MS preparativa é descrito na secção experimental a seguir, embora um perito na arte vá apreciar que sistemas e métodos alternativos aos descritos poderiam ser usados. Em particular, os métodos preparativos de fase normal à base de LC podem ser usados no lugar de métodos de fase reversa aqui descritos. A maioria dos métodos preparativos de LC-MS utilizam a fase inversa LC e modificadores ácidos voláteis, uma vez que a abordagem é muito eficaz para a purificação de moléculas pequenas e porque os eluentes são compatíveis com a espetrometria de massa de iões positivos por eletropulverização. 0 emprego de outras soluções cromatográficas, por exemplo, LC de fase normal, fase móvel alternativamente tamponada, modificadores de base, etc., conforme descrito nos métodos analíticos acima, pode alternativamente ser utilizado para purificar os compostos.
Formulações Farmacêuticas
Embora seja possível que o composto ativo seja administrado sozinho, é preferível apresentá-lo como uma composição farmacêutica (por exemplo, formulação) compreendendo pelo menos um composto ativo, tal como definido acima, juntamente com um ou mais suportes farmaceuticamente aceitáveis, adjuvantes, excipientes, diluentes, agentes de enchimento, tampões, estabilizantes, conservantes, lubrificantes, ou outros materiais bem conhecidos dos peritos na arte e opcionalmente outros agentes terapêuticos ou profiláticos.
Assim, a presente invenção proporciona ainda composições farmacêuticas, tal como definido acima, e os métodos de preparação de uma composição farmacêutica compreendendo a 97 mistura de pelo menos um composto ativo, como definido acima, juntamente com um ou mais agentes de suporte farmaceuticamente aceitáveis, excipientes, tampões, adjuvantes, estabilizantes, ou outros materiais, tal como aqui descrito. 0 termo "farmaceuticamente aceitável", como usado neste documento, refere-se a compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito do correto julgamento médico, adequados para utilização em contacto com os tecidos de um sujeito (por exemplo, um humano) sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurável com uma razão beneficio/risco razoável. Cada agente de suporte, excipiente, etc., deve também ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação.
As composições farmacêuticas podem estar em qualquer forma adequada para administração oral, parentérica, tópica, oftálmica, intranasal, ótica, retal, intravaginal, ou transdérmica. Quando as composições se destinam a administração parentérica, podem ser formuladas para administração intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea ou para libertação direta num órgão ou tecido alvo por infusão, injeção ou outros meios de entrega.
As formas de dosagem farmacêuticas adequadas para administração oral incluem comprimidos, cápsulas, comprimidos ovais, pílulas, pastilhas, xaropes, soluções, pós, grânulos, elixires e suspensões, comprimidos sublinguais, bolachas ou emplastros e adesivos bucais. 98
As composições farmacêuticas contendo os compostos da fórmula (VII) podem ser formuladas de acordo com técnicas conhecidas, ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, EUA.
Assim, as composições para comprimidos podem conter uma dose unitária do composto ativo em conjunto com um diluente ou veiculo inerte, tal como um açúcar ou álcool de açúcar, por exemplo; lactose, sacarose, sorbitol ou manitol; e/ou um diluente derivado de não açúcar tal como carbonato de sódio, fosfato de cálcio, carbonato de cálcio, ou uma celulose ou seu derivado tal como metilcelulose, etilcelulose, hidroxipropil-metilcelulose, e amidos tais como amido de milho. Os comprimidos podem também conter ingredientes tais como agentes de ligação padrão e de granulação tais como polivinilpirrolidona, desintegrantes (por exemplo, polímeros reticulados dilatáveis tais como carboximetilcelulose reticulada), agentes lubrificantes (por exemplo, estearatos), conservantes (por exemplo, parabenos), antioxidantes (por exemplo, BHT), agentes tamponantes (por exemplo, tampões de fosfato ou citrato), e agentes efervescentes tais como misturas de citrato/bicarbonato. Tais excipientes são bem conhecidos e não necessitam de ser discutidos em detalhe agui.
As formulações de cápsulas podem ser da variedade de gelatina mole ou de gelatina dura, e podem conter o componente ativo no estado sólido, semissólido, ou líquido. As cápsulas de gelatina podem ser formadas a partir de gelatina animal ou sintética ou um equivalente vegetal deles derivado. 99
As formas de dosagem sólidas (por exemplo, comprimidos, cápsulas, etc.) podem ser revestidas ou não-revestidas, mas têm tipicamente um revestimento, por exemplo, um revestimento de película de proteção (por exemplo, uma cera ou verniz) ou um revestimento de libertação controlada. 0 revestimento (por exemplo, um tipo de polímero Eudragit™) pode ser concebido para libertar o componente ativo num local desejado dentro do trato gastrointestinal. Assim, o revestimento pode ser selecionado de modo a se degradar sob certas condições de pH no trato gastrointestinal, desse modo libertando seletivamente o composto no estômago ou no duodeno ou íleo.
Em vez de, ou além de, um revestimento, o fármaco pode ser apresentado numa matriz sólida compreendendo um agente de controlo da libertação, por exemplo, um agente de retardamento de libertação, que pode ser adaptado para libertar o composto seletivamente sob condições de acidez ou alcalinidade variada no trato gastrointestinal. Alternativamente, o material de matriz ou do revestimento de retardamento de libertação pode ter a forma de um polímero erodível (por exemplo, um polímero de anidrido maleico), que é substancialmente continuamente erodido à medida que a forma de dosagem passa através do trato gastrointestinal. Como outra alternativa, o composto ativo pode ser formulado num sistema de entrega que proporciona um controlo osmótico da libertação do composto. A libertação osmótica e outras formulações de libertação retardada ou sustentada podem ser preparadas de acordo com métodos bem conhecidos dos peritos na arte.
As composições para utilização tópica incluem unguentos, cremes, sprays, adesivos, geles, gotas líquidas e inserções 100 (por exemplo, inserções intraoculares). Tais composições podem ser formuladas de acordo com métodos conhecidos.
As composições para administração parentérica são tipicamente apresentadas como soluções estéreis aquosas ou oleosas ou suspensões finas, ou podem ser fornecidas em forma de pó finamente dividido, esterilizado para a formação extemporânea com água estéril para injeção.
Exemplos de formulações para administração retal ou intravaginal incluem pessários e supositórios que podem ser, por exemplo, formados a partir de um material em forma moldável ou ceroso contendo o composto ativo.
As composições para administração por inalação podem assumir a forma de composições em pó inaláveis ou sprays líquidos ou em pó, e podem ser administradas na forma normalizada através de inaladores de pó ou dispositivos de pulverização de aerossóis. Tais dispositivos são bem conhecidos. Para administração por inalação, as formulações em pó compreendem, tipicamente, o composto ativo em conjunto com um diluente sólido inerte, em pó, tal como a lactose.
Os compostos das invenções serão geralmente apresentados na forma de dosagem unitária e, como tal, irão tipicamente conter composto suficiente para proporcionar um nível desejado de atividade biológica. Por exemplo, uma formulação destinada a administração oral pode conter de 0,1 miligramas a 2 gramas de ingrediente ativo, mais habitualmente de 10 miligramas a 1 grama, por exemplo, de 50 miligramas a 500 miligramas. 101 O composto ativo vai ser administrado a um paciente em necessidade do mesmo (por exemplo, um paciente humano ou animal) numa quantidade suficiente para alcançar o efeito terapêutico desejado. Métodos de Diagnóstico e Tratamento
Prevê-se que os compostos da fórmula (VII) serão úteis para a profilaxia ou tratamento de uma variedade de estados de doença ou condições mediadas por quinases dependentes de ciclina, glicogénio sintase quinase 3 e Aurora quinases. Exemplos de estados de doença e condições foram expostos anteriormente.
Os compostos da fórmula (VII) são geralmente administrados a um paciente com necessidade de tal administração, por exemplo, um paciente humano ou animal, de preferência um humano.
Os compostos serão tipicamente administrados em quantidades que são terapeuticamente ou profilaticamente úteis, e que são geralmente não-tóxicas. No entanto, em certas situações (por exemplo, no caso de doenças potencialmente fatais), os benefícios da administração de um composto da fórmula (VII) podem superar as desvantagens de quaisquer efeitos tóxicos ou efeitos secundários, em cujo caso pode ser considerado desejável administrar compostos em quantidades que estejam associadas com um grau de toxicidade.
Os compostos podem ser administrados ao longo de um período prolongado para manter os efeitos terapêuticos benéficos, ou podem ser administrados por um período curto. Alternativamente, eles podem ser administrados de uma forma pulsátil ou contínua. 102 A dose diária típica do composto pode estar na gama de 100 picogramas a 100 miligramas por quilograma de peso corporal, mais tipicamente de 10 nanogramas até 10 miligramas por quilograma de peso corporal, embora doses mais altas ou mais baixas possam ser administrados quando necessário. Por fim, a quantidade do composto administrado e o tipo de composição utilizado será proporcional à natureza da doença ou condição fisiológica a ser tratada e será à discrição do médico.
Os compostos da fórmula (VII) podem ser administrados como o único agente terapêutico, ou podem ser administrados em terapia de combinação com um de mais outros compostos para o tratamento de um estado de doença particular, por exemplo, uma doença neoplásica, tal como o cancro, como aqui definido anteriormente. Exemplos de outros agentes terapêuticos que podem ser administrados em conjunto (quer simultaneamente ou em intervalos de tempo diferentes) com os compostos da fórmula (VII) incluem, mas não estão limitados a inibidores da topoisomerase, agentes alquilantes, anti-metabolitos, agentes ligantes de ADN e inibidores de microtúbulos (agentes direcionados a tubulina), tais como a cisplatina, ciclofosfamida, doxorubicina, irinotecano, fludarabina, 5-FU, taxanos, mitomicina C, ou radioterapia. Para o caso de inibidores de CDK ou Aurora, combinados com outras terapias, os dois ou mais tratamentos podem ser administrados individualmente, em vários esquemas de dosagem e por vias diferentes.
Quando o composto da fórmula (VII) é administrado em terapia de combinação com um, dois, três, quatro ou mais outros agentes terapêuticos, (de preferência um ou dois, 103 preferivelmente um) , os compostos podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente. Quando administrados sequencialmente, eles podem ser administrados em intervalos espaçados (por exemplo, durante um período de 5-10 minutos) ou em intervalos mais longos (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou mais horas de intervalo, ou períodos ainda mais longos separados quando necessário) , o regime de dosagem precisa de ser compatível com as propriedades do(s) agente(s) terapêutico(s). A combinação pode também incluir tratamentos não quimioterapêuticos, tais como a radioterapia, a terapia fotodinâmica, a terapia de genes; cirurgia e dietas controladas.
Para a utilização em terapia de combinação com outro agente quimioterapêutico, o composto da fórmula (VII) e um, dois, três, quatro ou mais outros agentes terapêuticos podem ser, por exemplo, formulados em conjunto numa forma de dosagem contendo dois, três, quatro ou mais agentes terapêuticos. Em alternativa, os agentes terapêuticos individuais podem ser formulados separadamente e apresentados conjuntamente na forma de um kit, opcionalmente com instruções para a sua utilização.
Um perito na arte saberia, através do seu conhecimento geral comum, os regimes de dosagem e as terapias de combinação a usar.
Antes da administração de um composto da fórmula (VII) , um doente pode ser examinado para determinar se a doença ou condição a partir da qual o paciente está ou pode estar a sofrer é uma doença que seria suscetível de tratamento com 104 um composto com atividade contra Aurora quinases. Por exemplo, uma amostra biológica tomada a partir de um paciente pode ser analisada para determinar se uma condição ou doença, tal como o cancro, da qual o paciente está ou pode estar a sofrer, é uma condição ou doença que é caracterizada pelo aumento da regulação de Aurora quinase, o que inclui a expressão elevada ou sobre-expressão de Aurora quinase, incluindo amplificação do gene (ou seja, as cópias do gene múltiplo) e o aumento da expressão por um efeito transcricional, e hiperatividade e ativação de Aurora quinase, incluindo a ativação por mutações. Assim, o paciente pode ser submetido a um teste de diagnóstico para detetar uma caracteristica do marcador de sobre-regulação, super-regulação ou ativação de Aurora quinase. O termo diagnóstico inclui a triagem. No termo marcador incluímos marcadores genéticos, incluindo, por exemplo, a medição da composição de ADN para identificar as mutações de Aurora ou CDK4. O termo marcador também inclui marcadores que são caracteristicos do aumento de regulação de Aurora ou ciclina E, incluindo a atividade da enzima, os níveis da enzima, o estado da enzima (por exemplo, fosforilada ou não) e os níveis de ARNm das proteínas acima mencionadas.
Os testes de diagnóstico são tipicamente realizados numa amostra biológica selecionada a partir de amostras de biopsias do tumor, amostras de sangue (o isolamento e enriquecimento de células tumorais vertentes), biopsias de fezes, expetoração, análise de cromossomas, fluido pleural, fluido peritoneal, ou urina.
Verificou-se, ver Ewart-Toland et al, (Nat Genet. agosto 2003; 34 (4):403-12), que os indivíduos que fazem parte da subpopulação que possui a variante do gene Ile31 STK (o 105 gene da Aurora quinase A) pode ter uma suscetibilidade aumentada a certas formas de cancro. Prevê-se, portanto, que tais indivíduos que sofram de cancro venham a beneficiar da administração de compostos possuindo atividade inibidora da Aurora quinase. Um paciente que sofra, ou se suspeite que sofra de um cancro pode, portanto, ser examinado para determinar se ele ou ela faz parte da subpopulação da variante Ile31. O processo de rastreio irá tipicamente envolver sequenciação direta, análise de micromatriz de oligonucleótidos, ou um anticorpo específico mutante.
Os tumores com ativação de mutantes de Aurora ou com aumento de regulação da Aurora, incluindo qualquer das isoformas da mesma, podem ser particularmente sensíveis aos inibidores de Aurora. Os tumores podem ser preferencialmente rastreados em termos de sobre-regulação de Aurora ou em termos de Aurora possuindo a variante Ile31 antes do tratamento (Ewart-Toland et ai, Nat. Genet. agosto 2003; 34 (4) :403-12) . Ewart-Toland et al identificaram uma variante genética comum em STK15 (resultando na substituição de aminoácido F3II) que é preferencialmente amplificada e associada com o grau de aneuploidia em tumores do cólon humanos. Estes resultados são consistentes com um papel importante para a variante de Ile31 STK15 na suscetibilidade ao cancro humano. A aurora A mapeia genes para a região cromossómica 20ql3 que é frequentemente amplificada em muitos tipos de cancro, por exemplo, da mama, da bexiga, do cólon, do ovário, do pâncreas. Os pacientes com um tumor que tenha essa amplificação do gene podem ser particularmente sensíveis a tratamentos direcionados à inibição da aurora quinase. 106
Os métodos para a identificação e análise de mutações Aurora e aumento da regulação de isoformas de Aurora e amplificação do cromossoma 20ql3 são bem conhecidos para um perito na arte. Métodos de rastreio podem incluir, mas não estão limitados aos métodos convencionais, tais como a reação da polimerase em cadeia de transcriptase inversa (RT-PCR), hibridação in situ.
Na triagem por meio de RT-PCR, o nível de ARNm de Aurora no tumor é avaliado através da criação de uma cópia de ADNc do ARNm, seguido por amplificação do ADNc através de PCR. Os métodos de amplificação por PCR, a seleção dos iniciadores, e condições para a amplificação, são conhecidos por um perito na arte. As manipulações de ácido nucleico e de PCR são realizadas por métodos normalizados, tal como descrito por exemplo, em Ausubel, FM et ai., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc., ou Innis, M.A. et-al., eds. PCR Protocols: a guide to methods and applications, 1990, Academic Press, San Diego. As reações e manipulações que envolvem técnicas de ácido nucleico também são descritas em Sambrook et al, 2001, 3a Ed., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Alternativamente, um kit disponível comercialmente para RT-PCR (por exemplo, Roche Molecular Biochemicals), pode ser usado, ou uma metodologia, conforme estabelecida nas patentes dos Estados Unidos 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659, 5,272,057, 5,882,864, e 6,218,529 e aqui incorporadas a título de referência.
Um exemplo de uma técnica de hibridação in situ para avaliar a expressão do ARNm de Aurora seria a hibridação in 107 situ por fluorescência (FISH) (ver Angerer, 1987 Meth. Enzymol., 152: 649).
Em geral, a hibridação in situ compreende as seguintes etapas principais: (1) fixação do tecido a ser analisado; (2) tratamento de pré-hibridação da amostra para aumentar a acessibilidade do ácido nucleico alvo, e para reduzir a ligação não específica; (3) hibridação da mistura de ácidos nucleicos para o ácido nucleico na estrutura biológica ou tecido; (4) lavagens pós-hibridação para remover os fragmentos de ácido nucleico não ligados na hibridação, e (5) deteção dos fragmentos de ácidos nucleicos hibridizados. As sondas utilizadas em tais aplicações são tipicamente marcadas, por exemplo, com radioisótopos ou repórteres fluorescentes. As sondas preferidas são suficientemente longas, por exemplo, de cerca de 50, 100 ou 200 nucleótidos a cerca de 1000 ou mais nucleótidos, para permitir a hibridação especifica com o(s) ácido (s) nucleico(s) alvo, sob condições rigorosas. Métodos padrão para a realização de FISH estão descritos em Ausubel, FM et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc e Fluorescence In Situ Hybridization: Technical OverView por John M. S. Bartlett em Molecular Diagnosis of Câncer, Methods and Protocols, 2a Edição.; ISBN: 1-59259-7 60-2; março de 2004, pps. 077-088; Série: Methods in Molecular Medicine.
Em alternativa, os produtos de proteínas expressos a partir dos mARNs podem ser analisados por imuno-histoquímica de amostras de tumores, de imunoensaio de fase sólida com placas de microtitulação, Western blotting, eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida bidimensional, ELISA, citometria de fluxo e outros métodos conhecidos na arte para a deteção 108 de proteínas específicas. Os métodos de deteção incluiriam o uso de anticorpos específicos do local. O perito na técnica irá reconhecer que todas essas técnicas bem conhecidas para a deteção de aumento de regulação de Aurora e mutantes de Aurora poderiam ser aplicadas no presente caso.
Para além disso, todas estas técnicas poderiam também ser utilizadas para identificar tumores particularmente adequados para o tratamento com os inibidores de CDK. Os tumores com mutantes de CDC4 ou aumento da regulação, em especial, a sobre-expressão, da ciclina E ou perda de p21 ou p27 podem ser particularmente sensíveis aos inibidores de CDK. Os tumores podem ser preferencialmente selecionados para aumento da regulação, em especial, a sobre-expressão, da ciclina E (Harwell RM, Mull BB, Porter DC, Keyomarsi K.; . J Biol Chem. 26 de março 2004: 279 (13) :12695-705) ou perda de p21 ou p27 ou para variantes CDC4 antes do tratamento (Rajagopalan H, Jallepalli PV, Rago C, Velculescu VE, Kinzler KW, Vogelstein B, Lengauer C.;. Nature. 4 de março 2004; 428 (6978) :77-81) .
Utilização Antifúngica
Num outro aspeto, a invenção proporciona a utilização dos compostos da fórmula (VII) tal como aqui anteriormente definidos, como agentes antifúngicos.
Os compostos da fórmula (VII) podem ser utilizados em medicina animal (por exemplo, no tratamento de mamíferos, tais como seres humanos) , ou no tratamento de plantas (por exemplo, na agricultura e na horticultura), ou como agentes 109 antifúngicos gerais, por exemplo, como conservantes e desinfetantes.
Numa forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (VII) tal como anteriormente definido para ser utilizado na profilaxia ou tratamento de uma infeção fúngica num mamífero tal como um humano.
Também é proporcionada a utilização de um composto da fórmula (VII) para o fabrico de um medicamento para uso na profilaxia ou tratamento de uma infeção fúngica num mamífero tal como um humano.
Por exemplo, os compostos da invenção podem ser administrados a pacientes humanos que sofrem de, ou estão em risco de infeção por infeções fúngicas tópicas provocadas por, entre outros organismos, espécies de Cândida, Trichophyton, Microsporum ou Epidermophyton, ou em infeções das mucosas causadas por Candida albicans (por exemplo aftas e candidíase vaginal). Os compostos da invenção também podem ser administrados para o tratamento ou profilaxia de infeções fúngicas sistémicas causadas por, por exemplo, Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus, Coccidiodies, Paracoccidioides, Histoplasma ou Blastomyces.
Noutro aspeto, a invenção fornece uma composição antifúngica para uso na agricultura (incluindo horticultura), incluindo um composto com a fórmula (VII), em conjunto com um diluente ou veículo agricolamente aceitável. 110 A invenção proporciona ainda um método de tratamento de um animal (incluindo um mamífero tal como um ser humano), planta ou semente, tendo uma infeção fúngica, o qual compreende o tratamento do referido animal, planta ou semente, ou o local da referida planta ou semente, com uma quantidade eficaz de um composto da fórmula (VII). A invenção também fornece um método de tratamento de uma infeção fúngica, numa planta ou semente que compreende o tratamento da planta ou semente, com uma quantidade antifungicamente eficaz de uma composição fungicida contendo um composto da fórmula (VII) tal como anteriormente definido.
Os ensaios de rastreio diferencial podem ser utilizados para selecionar os compostos da presente invenção com especificidade para enzimas CDK não-humanas. Os compostos que atuam especificamente nas enzimas CDK de patogénios eucarióticos podem ser utilizados como agentes antifúngicos ou antiparasitários. Os inibidores da Cândida CDK quinase, CKSI, podem ser usados no tratamento da candidíase. Agentes antifúngicos podem ser usados contra infeções do tipo definido anteriormente, ou infeções oportunistas que ocorrem geralmente em pacientes debilitados e imunodeprimidos, como portadores de leucemias e linfomas, as pessoas que estão a receber terapia imunossupressora, e pacientes com condições predisponentes, como a diabetes mellitus ou SIDA, bem como para pacientes não imunossuprimidos.
Os ensaios descritos na arte podem ser utilizados para o rastreio de agentes que podem ser úteis para inibir, pelo menos, um fungo implicado em micoses, tais como candidíase, 111 aspergilose, mucormicose, blastomicose, geotricose, criptococose, cromoblastomicose, coccidiodomicose, conidiosporosis, histoplasmose, maduromicose, rinosporidose, nocaidiose, para-actinomicose, peniciliose, monilíase ou esporotricose. Os ensaios de rastreio diferencial podem ser utilizados para identificar agentes antifúngicos que podem ter valor terapêutico no tratamento de aspergilose, fazendo uso de genes clonados de CDK de leveduras, tais como Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans, ou Aspergillus terreus, ou quando a infeção micótica é mucon-nycosis; o ensaio de CDK pode ser derivado de leveduras, tais como Rhizopus arrhizus, Rhizopus oryzae, Absidia corymbifera, Absidia ramosa, ou Mucorpusillus. Fontes de outras enzimas CDK incluem os agentes patogénicos de Pneumocystis carinii. A titulo de exemplo, avaliação in vitro da atividade antifúngica dos compostos pode ser realizada pela determinação da concentração inibitória mínima (M.L.C.) que é a mais baixa concentração de compostos de teste, num meio adequado, em que o crescimento do determinado micro-organismo não ocorre. Na prática, uma série de placas de ágar, tendo cada uma o composto de teste incorporado a uma concentração particular, é inoculada com uma cultura padrão de, por exemplo, Candida albicans e cada placa é então incubada durante um período adequado, a 37 °C. As placas são então examinadas quanto à presença ou ausência de crescimento do fungo e o valor de MIC apropriado é anotado. Alternativamente, um ensaio de turbidez em culturas líquidas podem ser realizado e um protocolo descrevendo um exemplo deste ensaio pode ser encontrado no Exemplo 314. 112 A avaliação in vivo dos compostos pode ser realizada numa série de níveis de dose por injeção intraperitoneal ou intravenosa ou por administração oral, a ratinhos que tenham sido inoculados com um fungo, por exemplo, uma estirpe de Cândida albicans ou Aspergillus flavus. A atividade dos compostos pode ser avaliada através da monitorização do aumento da infeção fúngica em grupos de ratos tratados e não tratados (por histologia ou por recuperação de fungos da infeção). A atividade pode ser medida em termos do nível de dosagem ao qual o composto proporciona uma proteção de 50% contra o efeito letal da infeção (PD50) .
Para uso antifúngico humano, os compostos da fórmula (VII) podem ser administrados isoladamente ou em mistura com um veículo farmacêutico selecionado de acordo com a via de administração e prática farmacêutica padrão. Assim, por exemplo, eles podem ser administrados por via oral, parentérica, por via intravenosa, por via intramuscular ou subcutânea, por meio das formulações descritas acima na secção intitulada "Formulações Farmacêuticas".
Para a administração oral e parentérica a pacientes humanos, o nível de dosagem diária dos compostos antifúngicos da fórmula (VII) pode ser de 0,01 a 10 mg/kg (em doses divididas), dependendo, inter alia, da potência dos compostos quando administrados quer por via oral ou parentérica. Os comprimidos ou cápsulas dos compostos podem conter, por exemplo, a partir de 5 mg a 0,5 g de composto ativo para administração isoladamente ou duas ou mais de uma vez, conforme apropriado. O médico em qualquer evento determinará a dosagem efetiva (quantidade eficaz), que será 113 a mais adequada para um paciente individual e variará com a idade, peso e resposta do paciente em particular.
Alternativamente, os compostos antifúngicos da fórmula (VII) podem ser administrados na forma de um supositório ou pessário, ou podem ser aplicados topicamente na forma de uma loção, solução, creme, pomada ou pó para polvilhar. Por exemplo, eles podem ser incorporados num creme constituído por uma emulsão aquosa de polietilenoglicóis ou parafina liquida; ou podem ser incorporados, a concentração entre 1 e 10%, num unguento consistindo numa cera branca ou base de parafina macia em conjunto com os estabilizadores e conservantes que possam ser necessários.
Para além das utilizações terapêuticas acima descritas, os agentes antifúngicos desenvolvidos com tais ensaios de rastreio diferencial podem ser usados, por exemplo, como conservantes em alimentos, suplemento alimentar para promover o ganho de peso em gado, ou em formulações de desinfetantes para tratamento de matéria não-viva, por exemplo, para a descontaminação de equipamentos hospitalares e quartos. De forma semelhante, a comparação lado a lado da inibição de CDK mamífero e CDK de insetos, tais como o gene Drosophilia CDK5 (Hellmich et al. (1994) FEBS Lett 356:317-21), vai permitir a seleção de entre os compostos aqui presentes de inibidores que discriminem entre as enzimas humanas/mamíferas e de insetos. Por conseguinte, a presente invenção contempla expressamente a utilização e formulação dos compostos da invenção em inseticidas, tais como para utilização na gestão de insetos como a mosca da fruta. 114
Ainda noutra forma de realização, alguns dos inibidores de CDK sujeitos podem ser selecionados com base na especificidade para a inibição de CDK da planta em relação à enzima de mamíferos. Por exemplo, uma CDK de planta pode ser eliminada num rastreio diferencial com uma ou mais das enzimas humanas para selecionar os compostos de maior seletividade para a inibição da enzima da planta. Assim, a presente invenção contempla especificamente as formulações de inibidores de CDK sujeitos para aplicações agrícolas, tais como sob a forma de um desfolhante ou semelhantes.
Para fins agrícolas e hortícolas, os compostos da invenção podem ser utilizados sob a forma de uma composição formulada como apropriado para a utilização particular e fim pretendido. Assim, os compostos podem ser aplicados na forma de pós para polvilhar, ou grânulos, revestimentos de sementes, soluções aquosas, dispersões ou emulsões, imersões, pulverizações, aerossóis ou fumos. As composições também podem ser fornecidas sob a forma de pós dispersíveis, grânulos ou grãos, ou concentrados para diluição antes da sua utilização. Tais composições podem conter tais veículos convencionais, diluentes ou adjuvantes, como são conhecidos e aceitáveis em agricultura e horticultura e podem ser fabricadas de acordo com procedimentos convencionais. As composições podem também incorporar outros ingredientes ativos, por exemplo, compostos tendo atividade herbicida ou inseticida ou um outro fungicida. Os compostos e composições podem ser aplicados de várias maneiras, por exemplo eles podem ser aplicados diretamente à folhagem da planta, caule, ramos, sementes ou raízes ou ao solo ou outro meio de crescimento, e podem ser utilizados não só para erradicar doenças, mas também profilaticamente para proteger as plantas ou 115 sementes de ataques. A título de exemplo, as composições podem conter 0,01 a 1% em peso do ingrediente ativo. Para uso em campo, as taxas de aplicação prováveis do ingrediente ativo podem ser de 50 a 5000 g/hectare. A invenção também contempla a utilização da combinação da invenção, no controlo de fungos provocadores de decomposição da madeira e no tratamento do solo onde as plantas crescem, campos de arroz para plântulas, ou água para perfusão. Também contemplada pela invenção está a utilização da combinação da invenção para proteger cereais armazenados e outros locais não planta contra infestação fúngica.
EXEMPLOS A invenção será agora ilustrada, mas não limitada, por referência às formas de realização específicas descritas nos exemplos seguintes.
Nos exemplos, os compostos preparados foram caracterizados por cromatografia líquida e espetroscopia de massa utilizando os sistemas e condições de operação indicados a seguir. Quando cloro estiver presente, a massa citada para os compostos é para 35 cL. Diferentes sistemas foram utilizados, tal como descrito abaixo, e estes foram equipados com, e foram configurados para serem executados sob condições de funcionamento, estreitamente semelhantes. As condições de funcionamento usadas são também descritas a seguir. 116
Sistema da Plataforma 1
Sistema: Waters 2790/Platform LC
Detetor de Espetrometria de Massa: Micromass Platform LC Detetor PDA: PDA Waters 996
Condições analíticas:
Eluente A: 5% de CH3CN em 95% de H20 (0,1% Ácido Fórmico) Eluente B: CH3CN (0,1% Ácido Fórmico)
Gradiente: 10-95% do eluente B Fluxo: 1,2 mL/min mm
Coluna: Synergi 4pm Max-RP C12, 80A, 50 x 4,6 (Phenomenex)
Condições MS:
Tensão capilar: 3,5 kV Tensão Cone: 30 V Temperatura de base: 120°C
Sistema FractionLynx 1
Sistema: Waters FractionLynx (análise/prep.dupla) Detetor de Espetrometria de Massa: Waters-Micromass ZQ Detetor PDA: PDA Waters 2996
Condições analíticas:
Eluente A: H20 (0,1% de Ácido Fórmico) Eluente B: CH3CN (0,1% de Ácido Fórmico) Gradiente: 5-95% do eluente B Fluxo: 1,5 mL/min. 117
Coluna: Synergi 4μιη Max-RP Ci2, 80A, 50 x 4,6 mm (Phenomenex)
Condiçoes MS:
Tensão capilar: 3,5 kV.
Tensão Cone: 30 V.
Temperatura de base: 120 °C Temperatura de Dessolvatação: 300 °C
Sistema da Plataforma 2
Sistema HPLC: Waters 2795
Detetor de Espetrometria de Massa: Micromass Platform LC Detetor PDA: PDA Waters 2996
Condições Analíticas Acídicas:
Eluente A: H20 (0,1% de Ácido Fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1 % de Ácido Fórmico)
Gradiente: 5-95% de eluente B durante 3,5 minutos Fluxo: 1,5 mL/min.
Coluna: Phenomenex Synergi 4μ Max-RP 80A, 50x4,6mm Condições Analíticas Básicas:
Eluente A: H20 (lOmM de tampão de NH4HCO3 adjustado para pH=9,5 com NH4OH)
Eluente B: CH3CN
Gradiente: 05-95% de eluente B durante 3,5 minutos Fluxo: 1,5 mL/min.
Coluna: Waters XTerra MS Ci8 5pm 4,6x50mm 118
Condições Analíticas Polares:
Eluente A: H20 (0,1% de Ácido Fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de Ácido Fórmico)
Gradiente: 00-50% de eluente B durante 3 minutos Fluxo: 1,5 mL/min.
Coluna: Phenomenex Synergi 4μ Hydro 80A, 50x4,6mm Condições MS:
Tensão capilar: 3,5 kV.
Tensão Cone: 30 V.
Temperatura de base: 120 °C Intervalo de Varrimento: 165-700 amu
Modo de ionização: EletroPulverização Negativa, Positiva, ou Positiva & Negativa
Sistema FractionLynx 2
Sistema: Waters FractionLynx (análise/prep.dupla)
Bomba HPLC: Waters 2525
Amostrador automático do injetor: Waters 2767 Detetor de Espetrometria de Massa: Waters-Micromass ZQ Detetor PDA: PDA Waters 2996
Condições analíticas:
Eluente A: H20 (0,1% de Ácido Fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de Ácido Fórmico)
Gradiente: 5-95% de eluente B durante 5 minutos Fluxo: 2,0 mL/min.
Coluna: Phenomenex Synergi 4μ Max-RP 80A, 50x4,6mm 119
Condiçoes Analíticas Polares:
Eluente A: H20 (0,1% de Acido Fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de Ácido Fórmico)
Gradiente: 00-50% de eluente B durante 5 minutos Fluxo: 2,0 mL/min.
Coluna: Phenomenex Synergi 4μ Max-RP 80A, 50x4,6mm Condições MS:
Tensão capilar: 3,5 kV.
Tensão Cone: 25 V.
Temperatura de base: 120 °C Intervalo de Varrimento: 125-800 amu
Modo de ionização: EletroPulverização Positiva, ou
EletroPulverização Positiva & Negativa
Sistema LC-MS de Purificação Direcionada à Massa
Os seguintes sistemas de cromatografia preparativa podem ser utilizados para purificar os compostos da invenção. • Hardware: sistema Waters Fractionlynx
Amostrador automático Duplo 2767/Coletor de frações Bomba preparativa 2525 CFO (Organizador fluidico de coluna) para a seleção da coluna RMA (gestor do reagente Waters) como bomba de formação Espetrómetro de Massa Waters ZQ Detetor de Foto-Díodos Waters 2996 • Software: Masslynx 4.0 • Colunas: 120 1. Cromatografia de baixo pH: Phenomenex Synergy MAX-RP, 10μ, 150 x 15mm (em alternativa usou-se o mesmo tipo de coluna com dimensões de 100 x 21,2mm). 2. Cromatograf ia de alto pH: Phenomenex Luna C 18 (2), 10 μ, 100 x 21,2 mm (em alternativa udou-se Thermo Hypersil Keystone BetaBasic C18, 5μ, 100 x 21,2 mm) • Eluentes: 1. Cromatografia de baixo pH:
Solvente A: H20 + 0,1% de Ácido Fórmico, pH 1,5 Solvente B: CH3CN + 0,1% de Ácido Fórmico 2. Cromatografia de alto pH:
Solvente A: H20 + 10 mM de NH4HC03 + NH4OH, pH 9,5 Solvente B: CH3CN 3. Solvente de formação: MeOH + 0,1% de ácido fórmico (para ambos os tipo de cromatografia) • Métodos:
Antes de utilizar a cromatografia preparativa para isolar e purificar os compostos de produtos, uma análise LC-MS pode ser primeiramente utilizada para determinar as condições mais adequadas para a cromatografia preparativa. Uma rotina típica é executar uma análise LC-MS utilizando o tipo de cromatografia (baixo ou alto pH) mais adequado para a estrutura do composto. Uma vez que o rastreio analítico mostrar boa cromatografia, um método de preparação adequado do mesmo tipo pode ser escolhido. As condições de funcionamento típicas para os métodos de cromatografia de baixo e alto pH são: 121
Caudal: 24 mL/min.
Gradiente: Em geral, todos os gradientes têm um passo inicial de 0,4 min com 95% de A + 5% de B. Em seguida, de acordo com um rastreio analítico, 3, 6 min de gradiente são escolhidos de forma a conseguir uma boa separação (por exemplo, de 5% a 50% de B para os compostos iniciais de retenção; de 35% a 80% de B, para compostos de retenção secundária e assim por diante)
Lavagem: Um passo de lavagem de 1 minuto é realizado no final do gradiente. Re-eguilíbrio: Uma etapa de re-equilíbrio de 2,1 minutos é realizada para preparar o sistema para o próximo ciclo
Caudal de formação: 1 mL/min. • Solvente:
Todos os compostos foram normalmente dissolvidos em 100% de MeOH ou 100% de DMSO. * Condições de execução MS:
Tensão capilar: 3,2 kV.
Tensão Cone: 25 V.
Temperatura de base: 120 °C Multiplicador: 500 V
Intervalo de Varrimento: 125-800 amu
Modo de ionização: EletroPulverização Positiva
Sistema LC-MS Analítico Sistema HPLC: Waters 2795
Detetor de Espetrometria de Massa: Micromass Platform LC Detetor PDA: PDA Waters 2996 122
Condições Analíticas Acídicas:
Eluente A: H20 (0,1% de Ácido Fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de Ácido Fórmico)
Gradiente: 5-95% de eluente B durante 3,5 minutos Fluxo: 0,8 mL/min
Coluna: Phenomenex Synergi 4μ MAX-RP 80A, 2,0 x 50 mm
Condições Analíticas Básicas:
Eluente A: H20 (lOmM de tampão de NH4HC03 adjustado para pH=9,5 com NH4OH)
Eluente B: CH3CN
Gradiente: 05-95% de eluente B durante 3,5 minutos Fluxo: 0,8 mL/min
Coluna: Thermo Hypersil-Keystone BetaBasic-18 5pm 2,1 x 50 mm ou
Coluna: Phenomenex Luna C18(2) 5pm 2,0 x 50 mm
Condições Analíticas Polares:
Eluente A: H20 (0,1% de Ácido Fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de Ácido Fórmico)
Gradiente: 00-50% de eluente B durante 3 minutos Fluxo: 0,8 mL/min
Coluna: Thermo Hypersil-Keystone HyPurity Aquastar, 5 μ, 2,1 x 50 mm ou
Coluna: Phenomenex Synergi 4μ MAX-RP 80A, 2,0 x 50 mm ou 123
Condições Analíticas mais Longas:
Eluente A: H20 (0,1% de Ácido Fórmico)
Eluente B: CH3CN (0,1% de Ácido Fórmico)
Gradiente: 05-95% de eluente B durante 15 minutos Fluxo: 0,4 mL/min
Coluna: Phenomenex Synergi 4μ MAX-RP 80A, 2,0 x 150 mm
Condições MS:
Tensão capilar: 3,6 kV
Tensão Cone: 30 V
Temperatura de base: 120 °C
Intervalo de Varrimento: 165-700 amu
Modo de ionização: EletroPulverização Positiva ou
EletroPulverização Negativa ou
EletroPulverização Positiva & Negativa
Os materiais de partida para cada um dos Exemplos estão comercialmente disponíveis, exceto quando de outro modo especificado. EXEMPLO 1 (exemplo de referência) Síntese de 2-(4-Nitro-lH-pirazol-3-il)-lH-benzimidazol
Uma mistura de o-fenilenodiamina (1,51 g, 14,0 mmol), ácido 4-amino-lH-pirazol-3-carboxílico (2,00 g, 12,7 mmol), EDC (2,93 g, 15,3 mmol) e HOBt (2,08 g, 15,3 mmol) em DMF (70 124 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o residuo dissolvido em AcOH (150 mL) e aqueceu-se a refluxo durante 3 h. O solvente foi removido in vacuo, água (100 mL) foi adicionada e o sólido resultante foi recolhido por lavagem de filtração com água. O sólido foi seco por azeótropo com tolueno (3 x 150 mL) produzindo 2-(4-nitro-lH-pirazol-3-il)-lH-benzimidazol como um sólido amarelo (1,44 g, 50%). Uma porção de 100 mg foi purificada por LC/MS preparativa e após a evaporação das frações contendo produto obteve-se 70 mg do composto do titulo. (LC/MS: Rt 1,72, [M+H]+ 229,61). EXEMPLO 2 (exemplo de referência) Síntese de 3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina
Uma mistura de 2-(4-nitro-lH-pirazol-3-il)-lH-benzimidazol (1,34 g, 5,85 mmol) e 10% Pd/C (0,13 g) em DMF (200 mL) foi submetida a uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 36 h. A mistura de reaçãoreação foi filtrada através de um tampão de Celite e reduziu-se in vacuo. 0 resíduo foi partilhado entre EtOAc e água e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e reduzida in vacuo. 0 resíduo foi azeotropado com tolueno ( 3 x 150 mL), produzindo 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina sob a forma de um sólido púrpura (0,32 g, 26 %). (LC/MS: Rt 0, 97, [M+H]+ 199, 62) . EXEMPLO 3 (exemplo de referência) 125 Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 125
Uma mistura de ácido benzoico (34 mg, 0,28 mmol), 3-(lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,25 mmol), EDC (58 mg, 0,30 mmol) e HOBt (40,5 mg, 0,30 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. O solvente foi removido in vacuo, o produto bruto foi purificado por LC/MS preparativa e após a redução das frações contendo o produto N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-benzamida foi obtida na forma de um sólido castanho (23 mg, 30%). (LC/MS: Rt 3,66, [M+H]+ 303,67). EXEMPLO 4 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-acetamida
H
Anidrido acético (27 pL, 0,28 mmol) foi adicionado a uma solução de 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,25 mmol) em piridina (5 mL) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-gasolina (1:2,5, 2:l)]para dar origem a N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-1H- 126 pirazol-4-il]-acetamida como um sólido cristalino castanho (29 mg, 48%). (LC/MS: Rt 1,70, [M+H]+ 241,64). EXEMPLO 5 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,2,2-trifluoroacetamida
Anidrido trifluoroacético (40 pL, 0,28 mmol) foi adicionado a uma solução de 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,25 mmol) em piridina (5 mL) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-gasolina (1:2)] para se obter N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,2,2-trifluoro-acetamida como um sólido creme (23 mg, 32%). (LC/MS: Rt 3,67, [M+H]+ 295, 63). EXEMPLO 6 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
H
Uma mistura de ácido 2,6-difluorobenzoico (43 mg, 0,28 mmol), 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,2 5 mmol), EDC (58 mg, 0,30 mmol) e HOBt (40,5 mg, 127 0,30 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi reduzida in vacuo, água (30 mL) foi adicionada e o sólido resultante foi recolhido por filtração, seco numa estufa de vácuo e purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-gasolina (1:2, 1:1, 3:1)], originando N-[3-(lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida (20 mg, 24%). (LC/MS: Rt 3,29, [M+H]+ 339, 64). EXEMPLO 7 (exemplo de referência) Síntese de [3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido ciclo-hexanocarboxílico
Uma mistura de ácido ciclo-hexanocarboxílico (36 mg, 0,28 mmol), 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,25 mmol), EDC (58 mg, 0,30 mmol) e HOBt (41 mg, 0,30 mmol) em DMSO (2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura de reação foi repartida entre EtOAc (40 mL) e água (40 mL) e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-gasolina (1:4, 1:3, 1:2, 1:1)] obtendo-se [3-(lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido ciclo-hexanocarboxí lico como um sólido esbranquiçado (25 mg, 32%). (LC/MS: Rt 3,59, [M+H]+ 310,16). EXEMPLO 8 (exemplo de referência) 128 Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-fenil-acetamida 128
H
Uma mistura de ácido fenilacético (38 mg, 0,28 mmol), 3- (lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,25 mmol), EDC (58 mg, 0,30 mmol) e HOBt (41 mg, 0,30 mmol) em DMSO (2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura de reação foi repartida entre EtOAc (40 mL) e água (40 mL) e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-gasolina (1:2, 1:1, 2:1)] para dar origem a N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)- lH-pirazol-4-il]-2-fenil-acetamida como um sólido castanho (15 mg, 19%). (LC/MS: Rt 3,26, [M+H]+ 318,13). EXEMPLO 9 (exemplo de referência) Síntese de [3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido 5-Metil-3-fenil-isoxazol-4-carboxílico
Uma mistura de ácido 5-metil-3-fenilisoxazol-4-carboxílico (57 mg, 0,28 mmol), 3- (lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,25 mmol), EDC (58 mg, 0,30 mmol) e HOBt (41 mg, 0,30 mmol) em DMSO (2 mL) foi agitada à temperatura 129 ambiente durante 24 h. A mistura de reação foi repartida entre EtOAc e água e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e reduzida in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-gasolina (1:2, 1:1, 2:1)] obtendo-se [3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido 5-metil-3-fenil-isoxazol-4-carboxílico como um sólido creme (15 mg, 16%). (LC/MS: Rt 3,73, [M+H]+ 385, 14) . EXEMPLO 10 (exemplo de referência) Síntese do éster metílico do ácido 2-[4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-carboxílico 10A. Metil-2-amino-3-nitrobenzoato
Metóxido de sódio (1,50 g, 27,7 mmol) foi adicionado a uma solução de metil-2-(acetilamino)-3-nitrobenzoato de metilo (1,0 g, 4,2 mmol) em MeOH (30 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto durante 16 h. A reação foi acidificada cuidadosamente com ácido clorídrico concentrado, em seguida, aquecida a refluxo durante a noite, seguido de evaporação e re-evaporação por tolueno (2 x 30 mL) . O resíduo foi tratado com CH2CI2 (50 mL) , o material insolúvel foi removido através de filtração e o filtrado reduzido in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-hexano (1:4, 1:0)] obtendo-se metil-2-amino-3-nitrobenzoato (535 mg) como um sólido amarelo brilhante. 10B. 2,3-diaminobenzoato metílico
Uma mistura de metil-2-amino-3-nitrobenzoato (530 mg) e 10% de Pd/C (55 mg) em EtOH (10 mL) foi agitada sob uma 130 atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 16 h. O catalisador foi removido por filtração através de Celite e o filtrado reduzido in vacuo para se obter 2,3-diaminobenzoato metílico (420 mg) como um óleo amarelo/castanho, o qual solidificou em repouso. 10C. éster metílico de 2-[ 4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-carboxílico OMe
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluorobenzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (690 mg, 2,6 mmol), Exemplo 16D) , 2,3-diaminobenzoato metílico (415 mg, 2,6 mmol), EDC (590 mg, 3,1 mmol) e HOBt (415 mg, 3,1 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi partilhado entre EtOAc e salmoura e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, reduzida e cristalizada a partir de EtOH quente. O produto intermédio de amida (480 mg) foi dissolvido em AcOH (10 mL) e depois aqueceu-se a refluxo durante 3 h. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e, em seguida, azeotropada com tolueno (2 x 20 mL) para se obter éster metílico de ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-1H-benzimidazol-4- carboxílico (420 mg) como um sólido castanho amarelado colorido. (LC/MS: Rt 3,82, [M+H]+ 398). EXEMPLO 11 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Difluoro-N- [3- (4-hidroximetil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-yl]-benzamida e metil éster 131 do ácido acético 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-ilo 11A. Ácido 2-amino-3-nitrobenzoico
Uma solução de metil-2-(acetilamino)-3-nitrobenzoato (2,6 g) em EtOH (50 mL) foi tratada com ácido clorídrico concentrado (10 mL) e depois aqueceu-se a refluxo durante 16 h. A mistura de reação foi arrefecida, reduzida in vacuo e azeotropada com tolueno (2 x 50 mL) para dar ácido 2-amino-3-nitrobenzoico (1,83 g) como um sólido amarelo brilhante. IIB. Álcool 2-amino-3-nitrobenzilo A uma solução de ácido 2-amino-3-nitrobenzoico (1,82 g, 10,0 mmol) em THF anidro (50 mL) foi adicionado borohidreto de sódio (770 mg, 20,0 mmol), seguido por eterato de trifluoreto de boro éter (2,5 mL, 20 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto durante 2 h. MeOH foi adicionado cuidadosamente até a evolução de gás ter cessado, e a mistura foi reduzida in vacuo. O resíduo foi partilhado entre EtOAc e salmoura e a porção orgânica foi seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar o álcool 2-amino-3-nitrobenzilo (1,42 g) como um sólido amarelo. IIC. Álcool 2,3-diaminobenzilo
Uma mistura de álcool 2-amino-3-nitrobenzilo (1,4 g) e 10% Pd/C (140 mg) em EtOH (40 mL) e DMF (10 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 18 h. O catalisador foi removido por filtração através de
Celite, o filtrado foi reduzido in vacuo e sujeito a azeotropado com tolueno (2 x 50 mL) para se obter o álcool 2,3-diaminobenzilo (1,15 g) como um sólido castanho escuro. 132 IIP. Síntese de (2-amino-3-hidroximetil-fenil)-amida do ácido 4-(2, 6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3 carboxílico
OH
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluorobenzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (1,0 g, 3,7 mmol), Exemplo 16D) , lacool 2,3-diaminobenzilo (560 mg, 4,1 mmol), EDC (870 mg, 4,5 mmol) e HOBt (610 mg, 4,5 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi partilhado entre EtOAc e salmoura e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatograf ia em coluna flash [SiC>2, EtOAc-gasolina (1:1, 2:1)] para dar origem a ácido 4-(2,6-difluorobenzoilamino) -lH-pirazol-3-carboxílico (2-amino-3-hidroximetil-fenil)-amida (860 mg). 11E. Síntese de 2,6-Difluoro-N-[3-(4-hidroximetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-yl]-benzamida e metil éster do ácido acético 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-ilo
133 (2-amino-3-hidroximetil-fenil)-amida do ácido 4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (100 mg, 0,26 mmol) foi dissolvida em ácido acético (10 mL) , em seguida, aquecida durante 10 min a 150 °C (100 W) , num sintetizador de micro-ondas CEM discover. A mistura de reação foi reduzida e então azeotropada com tolueno (2 x 20 mL) . O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-hexano (1:1, 2:1, 3:1)] para dar 2,6- difluoro-N-[3-(4-hidroximetil-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-benzamida (25 mg) como um sólido esbranquiçado (LC/MS: Rt 2,70, [M+H]+ 370) e ácido acético de éster metílico de 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-ilo (20 mg) como um sólido esbranquiçado. (LC/MS: Rt 3,60, [M+H]+ 412). EXEMPLO 12 Síntese_de_2, 6-Difluoro-N- [3- (4-morfolin-4-ilmetil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 12A. 2,6-difluoro-N-[3-(4-formil-lH-benzimidazol-2-il)-1H- pirazol-4-il]-benzamida
Uma mistura de 2,6-difluoro-N-[3-(4-hidroximetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (200 mg, 0,54 mmol) e Mn02 (500 mg) em CH2Cl2/MeOH (5:1, 12 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h, em seguida, filtrada através de Celite e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-hexano (1:3, l:2)]para dar 2,6-difluoro-N-[3-(4- 134 formil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (30 mg) como um sólido creme. 12B._2,6-Difluoro-N- [3- (4-morfolin-4-ilmetil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida .. o. ti
A uma solução de 2, 6-difluoro-N-[3-(4-formil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (30 mg, 0,08 mmol) e morfolina (14 mg, 0,16 mmol) em CH2CI2 (5 mL) e THF (2 mL) adicionaram-se 3Â de peneiras moleculares (1 g), seguido por triacetoxiboro-hidreto de sódio (50 mg, 0,24 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de azoto durante 2 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite, reduzida in vacuo, em seguida, purificada por cromatografia em coluna flash [SÍO2, EtOAc-hexano (1:1, 1:0), seguida de CH2Cl2-MeOH (95:5)]originando 2,6-difluoro-N-[3-(4-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (13 mg) como um sólido creme. (LC/MS: Rt 1,80, [M+H]+ 439). EXEMPLO 13 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Difluoro-N- [3- (N-metil-piperazinil-4- ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 135
Η Ο composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 12B, mas utilizando N-metilpiperazina em vez de morfolina. (LC/MS: Rt 1,93, [M+H]+ 452). EXEMPLO 14 (exemplo de referência) Síntese de N-{3-[4-(te-rc-Butilamino-metil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-2,6-difluoro-benzamida
H 0 composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 12B, mas utilizando terc-Butilamina em vez de morfolina. (LC/MS: Rt 2,04, [M+H]+ 425). EXEMPLO 15 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(4-Dimetilaminometil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
136 0 composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 12B, mas utilizando 35% de dimetilamina em EtOH em vez de morfolina. (LC/MS: Rt 1,85, [M+H]+ 397). EXEMPLO 16 (exemplo de referência) Síntese do éster metílico do ácido 2-[4-(2, 6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-carboxílico 16A. Síntese do éster etílico do ácido 4-Nitro-lH-pirazol-3-carboxílico
Cloreto de tionilo (2,90 mL, 39,8 mmol) foi lentamente adicionado a uma mistura de ácido 4-nitro-3-pirazolcarboxílico (5,68 g, 36,2 mmol) em EtOH (100 mL) à temperatura ambiente e a mistura foi agitada durante 48 h. A mistura foi reduzida in vacuo e seca através de azeótropo com tolueno para se obter o éster etílico do ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico como um sólido branco (6,42 g, 96%). (XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 514,4 (s, 1H) , 9,0 (s, 1H) , 4,4 (q, 2H) , 1,3 (t, 3H) ) . 16B. Síntese do éster etílico do ácido 4-Amino-lH-pirazol-3-carboxílico
^ O
Uma mistura de éster etílico do ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (6,40 g, 34,6 mmol) e 10% Pd/C (650 mg) em EtOH 137 (150 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 20 h. A mistura foi filtrada através de um tampão de Celite, reduzida in vacuo e seca através de azeótropo com tolueno para se obter o éster etílico do ácido 4-amino-lH-pirazol-3-carboxílico como um sólido cor-de-rosa (5,28 g, 98%). ("H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 512,7 (s, 1H) , 7,1 (s, 1H), 4,8 (s, 2H), 4,3 (q, 2H) , 1,3 (t, 3H) ) . 16C. Síntese do éster etílico do ácido 4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico
Uma mistura de ácido 2,6-difluorobenzoico (6,32 g, 40,0 mmol), éster etílico do ácido 4-amino-lH-pirazol-3-carboxílico (5,96 g, 38,4 mmol), EDC (8,83 g, 46,1 mmol) e HOBt (6,23 g, 46,1 mmol) em DMF (100 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h. A mistura foi reduzida in vacuo, adição de água e o sólido que se formou recolheu-se por filtração e foi seco ao ar para dar o éster etílico do ácido 4- (2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3- carboxílico como o componente principal de uma mistura (15,3 g) . (LC/MS: Rt 3,11, [M+H]+ 295, 99). 16D. Síntese do ácido 4-(2,6-Difluoro-benzoilaminol-lH-pirazol-3-carboxílico 138
Uma mistura de éster etílico do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (10,2 g) em 2 M de NaOH aquoso/MeOH (1:1, 250 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. Os materiais voláteis foram removidos in vacuo, a água (300 mL) adicionada e a mistura levada a pH 5 com 1M de HC1 aquoso. O precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco através de azeótropo com tolueno para dar o ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico como um sólido cor de rosa (5,70 g) . (LC/MS: Rt 2,33, [M+H]+ 267, 96). 16E. Síntese do éster metílico do ácido 2-[4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-carboxílico
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (500 mg, 1,87 mmol), 3,4-diaminobenzoato de metilo (375 mg, 2,25 mmol), EDC (430 mg, 2,2 5 mmol) e HOBt (305 mg, 2,2 5 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h. O resíduo foi reduzida in vacuo e, em seguida, dissolvido na quantidade mínima de metanol e éter de petróleo foi adicionado para dar o intermediário amida como um sólido cor-de-rosa o qual 139 foi recolhido por filtração (427 mg). (LC/MS: Rt 3,24, [M+H]+ 416,02) .
Uma mistura da amida (150 mg, 0,36 mmol) em ácido acético glacial (4 mL) foi aquecida no micro-ondas (100 W), a 120 °C durante 10 minutos. A mistura foi reduzida in vacuo, e éter de petróleo (3 mL) e metanol (2 mL) adicionado formando um precipitado, que foi recolhido por filtração para dar éster metilico do ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-ΙΗ-pirazol- 3-il]-lH-benzimidazol-5- carboxílico (96 mg, 67%) como um sólido cor de rosa. (LC/MS: Rt 3,67, [M+H]+ 397,99). EXEMPLO 17 (exemplo de referência) Síntese do ácido 2-[4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-carboxílico
Uma mistura de éster metilico do ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-carboxílico (12,0 mg, 0,03 mmol) em 2 M de NaOH aquoso/MeOH (1:1, 4 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura foi reduzida in vacuo, a água (5 mL) foi adicionada e a mistura levada a pH 4 utilizando 1-m de HC1 aquoso. O precipitado formado foi recolhido por filtração e seco sob vácuo para dar ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino) -lH-pirazol-3-il]-lHbenzimidazol-5-carboxílico como um sólido de cor pálida (6 mg, 52 %). (LC/MS: Rt 2,88, [M+H]+ 383,97). 140 EXEMPLO 18 (exemplo de referência) Síntese da amida do ácido 2-[ 4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-carboxílico
B A uma mistura de ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-carboxílico (100 mg, 0,26 mmol), EDC (75 mg, 0,39 mmol) e HOBt (53 mg, 0,39 mmol) em sucessivamente DMF (1,5 mL) foi adicionada diisopropiletilamina (0,15 mL, 1,04 mmol) e cloreto de amónio (28 mg, 0,52 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h e, em seguida, reduzida in vacuo. Foi adicionada água e o precipitado formado foi recolhido por filtração e seco através de azeótropo com tolueno para se obter a amida do ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino) -lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazolo-5-carboxílico (49 mg, 49%) como um sólido bege. (LC/MS: Rt 2,54, [M+H]+ 382, 99) . EXEMPLO 19 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Difluoro-N- [3- (5-hidroximetil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
OH N-N H H 141
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (584 mg, 2,19 mmol), (3,4— diaminofenil)-metanol (332 mg, 2,40 mmol), EDC (504 mg, 2,63 mmol) e HOBt (355 mg, 2,63 mmol) em DMF (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo foi retomado em EtOAc, lavado com água e salmoura e secou-se a porção orgânica (MgSCU) e reduziu-se in vacuo para dar o intermediário amida (591 mg) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 2,34, [M+H]+ 388,00).
Uma mistura da amida (575 mg) em AcOH glacial (4 mL) foi aquecida no micro-ondas (80 W) a 90 °C durante 20 min. A mistura foi vertida em água e o sólido que se formou foi recolhido por filtração. 0 resíduo foi retomado em MeOH (10 mL) e agitou-se na presença de NaOMe (320 mg, 5, 90 mmol) durante 30 min. A mistura foi reduzida in vacuo, retomada em EtOAc e lavada com água e salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna [S1O2, EtOAc] para dar 2,6- difluoro-N-[3-(5-hidroximetil-lH-benzimidazol-2-il) -1H-pirazol-4-il]-benzamida como um sólido branco (78 mg, 10% ao longo de dois passos) . (LC/MS: Rt 2,45, [M+H]+ 370,05) . EXEMPLO 20 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-fluoro-3-metoxibenzamida
142
Uma mistura de ácido 2-fluoro-3-metoxibenzoico (47 mg, 0,28 mmol), 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,25 mmol), EDC (58 mg, 0,30 mmol) e HOBt (41 mg, 0,30 mmol) em DMF (1,5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura de reação foi vertida em água (30 mL) e o sólido resultante recolhido por filtração e purificado por meio de re-cristalização a partir de MeOH/gasolina para se obter N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-2-fluoro-3-metoxi-benzamida (7 mg, 8%) como um sólido cinzento. (LC/MS: Rt 3,63, [M+H]+ 352,00). EXEMPLO 21 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Dif luoro-N- { 3- [ 5- (4-metil-piperazin-l- carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
N-N H H
Uma mistura do acido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-carboxílico (115 mg, 0,30 mmol), 1-metil-piperazina (50,0 pL, 0,45 mmol), EDC (104 mg, 0,54 mmol) e HOBt (73,0 mg, 0,54 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. O resíduo foi reduzido In vacuo, tomado em EtOAc e lavado com água e salmoura, seco (MgS04) e reduzido in vacuo para dar 2,6-difluoro-N-{3-[5-(4-metil-piperazina-l-carbonil)-1H-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida (37 mg, 26%) como um sólido amarelo pálido. (LC/MS: Rt 1,78, [M+H]+ 466, 09) . 143 EXEMPLO 22 Síntese_de_2, 6-Difluoro-N- [3- (5-morfolin-4-ilmetil-lH- benzimidazol-2-il)-1 H-pirazol-4-il]-benzamida 22A._Síntese_de_2, 6-Dif luoro-N- [3- (5-formil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
Uma mistura de 2, 6-difluoro-N-[3-(5-hidroximetil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (800 mg, 2,17 mmol) e Mn02 (5, 00 g, 57,5 mmol) em CH2Cl2/MeOH (10:1, 110 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 5 dias. A mistura foi filtrada através de um tampão de celite lavando-se com MeOH e o filtrado reduzido in vacuo para dar 2,6-difluoro-N-[3-(5-formil-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-benzamida (380 mg, 48%) como um sólido amarelo. (LC/MS: Rt 3,41, [M+H]+ 368,04). 22B. Síntese de 2, 6-Difluoro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
—· \ o
A uma mistura de 2,6-difluoro-N-[3-(5-formil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (75,0 mg, 0,20 mmol) em THF anidro (5 mL) com agitação à temperatura ambiente, adicionaram-se, sucessivamente, crivos moleculares de 3Â, morfolina (35 pL, 0,40 mmol) e borohidreto de sódio triacetoxilo (127 mg, 0, 60 mmol) . A 144 mistura foi agitada durante 4 h, MeOH (3 mL) foi adicionado e depois a mistura reduziu-se in vacuo. 0 resíduo foi ornado em EtOAc, lavado com água e salmoura, seco (MgSOí) , reduziu-se in vacuo e, em seguida, purificou-se por meio de LC /MS preparativa para dar 2,6-difluoro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (9 mg, 10%) como um sólido branco. (LC/MS: Rt 1,90, [M+H]+ 439,09). EXEMPLO 23 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Dif luoro-N- { 3- [ 5- (4-metilpiperazin-1- ilmetil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
O composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 22B, mas utilizando 1-metil-piperazina (44,0 pL, 0,40 mmol) como o fragmento de amina para dar 2, 6-dif luoro-N-{ 3— [ 5 — (4-metil-piperazin-l-ilmetil)-lH-benzimidazol-2-il]-1H-pirazol-4-il }-benzamida (4 mg, 5%) como um sólido amarelo. (LC/MS: Rt 1,66, [M+H]+ 452,11). EXEMPLO 24 (exemplo de referência) Síntese de N-{3-[5-(terc-Butilamino-metil)-lH-benzimidazol-2 — i1]-lH-pirazol-4-il}-2,6-difluoro-benzamida
145 0 composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 22B, mas utilizando terc-butilamina (42 pL, 0,40 mmol) como o fragmento de amina, para dar N-{3-[5-(terc-butilamino-metil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-2, 6-difluoro-benzamida (5 mg, 6%) como um sólido branco. (LC/MS: Rt 2, 00, [M+H]+ 425, 11) . EXEMPLO 25 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5-Dimetilaminometil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
0 composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 22B, mas utilizando 2,6-difluoro-N-[3-(5-formil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (57,4 mg, 0,16 mmol), THF seco (5 mL) , crivos moleculares de 3Â, dimetilamina (35% em EtOH) (55 pL, 0,31 mmol) e triacetoxi borohidreto de sódio (100 mg, 0,47 mmol) para dar N-[3-(5-dimetilaminometil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il] -2,6-difluoro-benzamida (11 mg, 18%) como um sólido amarelo. (LC/MS: Rt 2,85, [M+H]+ 397,17). EXEMPLO 26 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5-Cloro-lH-benzimidazo-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida 146
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxilico (50 mg, 0,18 mmol), 4- clorofenilenodiamina (30 mg, 0,21 mmol), EDC (45 mg, 0,22 mmol) e HOBt (30 mg, 0,22 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna [Si02, EtOAc/hexano (1:1)] para dar a amida intermediária. Uma mistura da amida em AcOH (2 mL) foi aquecida num forno de micro-ondas (50W) a 140 °C durante 15 minutos e depois reduziu-se in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna [SiCb, EtOAc/gasolina (1:1)] para dar origem a N-[3-(5-cloro-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluorobenzamida (20 mg) como um sólido castanho amarelado. (LC/MS: Rt 4,16, [M+H]+ 374) . EXEMPLO 27 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-Difluoro-N-[3-(5-metoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
O composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 26, mas utilizando 4-metoxifenilenodiamina (28 mg, 0,21 mmol) como o fragmento de amina para dar 2,6-difluoro-N-[3- 147 (5-metoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (25 mg) como um sólido castanho pálido. (LC/MS: Rt 3,26, [M+H]+ 370). EXEMPLO 28 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-Difluoro-N-[3-(5-nitro-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
O composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 26, mas utilizando 4-nitrofenilenodiamina (32 mg, 0,21 mmol) como o fragmento de amina para dar 2,6-difluoro-N-[3-(5-nitro-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (18 mg). (LC/MS: Rt 3,84, [M+H]+ 385). EXEMPLO 29 (exemplo de referência) Síntese de 2, 6-Difluoro-N-[3-(lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
O composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 26, mas utilizando 3,4-diaminopiridina (22 mg, 0,21 mmol) como o fragmento de amina para dar 2,6-difluoro-N-[3-(1H-imidazol[4,5-c]piridin-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (13 mg) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 4,16, [M+H]+ 341) . EXEMPLO 30 (exemplo de referência) 148 Síntese do ácido 2-[4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-carboxílico 148
H
Uma solução de éster metílico do ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino) -lH-pirazol-3-il]-éster-lH-benzimidazol-4-carboxílico (220 mg, 0,55 mmol) em THF/água (1:1, 10 mL) foi tratado com hidrato de hidróxido de lítio (70 mg, 1,66 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. Os voláteis foram removidos in vacuo, a mistura foi acidificada a pH 5 por adição de 2M de ácido clorídrico aquoso e o sólido formado foi recolhido por filtração, lavado com água e em seguida seco sob vácuo para dar ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino ácido)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-carboxílico (165 mg) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 3,28, [M+H]+ 384). EXEMPLO 31 (exemplo de referência) Síntese_de_2,6-Dif luoro-N- { 3- [ 4 - (4-metil-piperazin-l- carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
Uma mistura de ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-4-carboxílico (50 mg, 0,13 149 mmol) , N-metilpiperazina (20 pL, 0,18 mmol) , EDC (30 mg, 0,15 mmol) e HOBt (22 mg, 0,15 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, CH2Cl2/MeOH (95:5, 90:10)]para dar 2, 6-difluoro-N-{3-[4-(4-metil-piperazina-l-carbonil)-1H-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamide (14 mg) como um sólido creme. (LC/MS: Rt 2,21, [M+H]+ 466). EXEMPLO 32 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-benzamida 32A. Síntese do éster metílico do ácido 2-(2-Pirrolidin-l-il-etoxi)-benzoico
A uma mistura de trifenilfosfina (0,79 g, 3,0 mmol) em THF (15 mL) foi adicionado sucessivamente diisopropilazodicarboxilato (0,61 g, 3,0 mmol) seguido de salicilato de metilo (0,46 g, 3,0 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina (0,35 g, 3,0 mmol) foi então adicionada gota a gota e a mistura de reação foi deixada em agitação à temperatura ambiente durante mais 5 horas. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e purificada por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc/MeOH (3:1, 1:1)] para dar éster metílico do ácido 2-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-benzoico como um óleo amarelo-claro (446 mg, 60%). (LC/MS: Rt 1,58, [M+H]+ 250,05). 150 32Β. Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-benzamida
Éster metílico do ácido 2-(2-Pirrolidin-l-il-etoxi)-benzoico (125 mg, 0,50 mmol) e hidróxido de litio (21 mg, 0,50 mmol) foram dissolvidos em THF/H20 (1:1, 2 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e azeotropada com tolueno (3x5 mL) para dar um sólido branco, o qual foi dissolvido em água (1 mL) e acidificado com 2M de HC1 aquoso (1 mL). A solução resultante foi reduzida in vacuo e sujeita a azeotropia com tolueno (3x5 mL) para dar um gel amarelo pálido, o qual foi combinado com 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (100 mg, 0,50 mmol), EDC (116 mg, 0,60 mmol) e HOBt (81 mg, 0,60 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente em DMF (3 mL) durante 20 h. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e purificada por cromatografia em coluna flash [Si02, CH2Cl2/MeOH (95:5, 87.5:12.5), em seguida, 120 DMAW] para dar origem a N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-(2-pirrolidin-l-il-etoxi )-benzamida (63 mg, 30%) como um sólido cor de rosa pálido. (LC/MS: Rt 2,08, [M+H]+ 417,11). EXEMPLO 33 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-3-metoxi-benzamida 151
Uma mistura de ácido 3-metoxibenzoico (84 mg, 0,55 mmol), 3- (lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (100 mg, 0,50 mmol) , EDC (116 mg, 0, 60 mmol) e HOBt (81 mg, 0, 60 mmol) foi agitada à temperatura ambiente em DMSO (3 mL) durante 20 h. A mistura de reação foi vertida em água (30 mL) e o sólido resultante foi recolhido por filtração e purificado por cromatograf ia em coluna flash [SiC>2, (120 mL de diclorometano, metanol 15, 3 mL de ácido acético, 2 mL de água (DMAW 120)] para se obter N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-3-metoxi-benzamida como um sólido cinzento rosa pálido, (21 mg, 13%). (LC/MS: Rt 3,81, [M+H]+ 334,03). EXEMPLO 34 (exemplo de referência) Síntese de [3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido Quinolina-8-carboxílico
Uma mistura de ácido quinolina-8-carboxílico (104 mg, 0,60 mmol), 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (100 mg, 0,50 mmol), EDC (116 mg, 0,60 mmol) e HOBt (81 mg, 0,60 mmol) foi agitada à temperatura ambiente em DMF (1,5 mL) durante 20 h. A mistura de reação foi purificada por LC/MS preparativa para dar 0 [3-(lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-amida do ácido quinolina-8-carboxílico (11 152 mg, 6 %) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 3,85, 355,11). EXEMPLOS 35-67
Seguindo o procedimento descrito no Exemplo 34 utilizando o ácido carboxílico apropriado em vez do quinolina-8-carboxílico, foram preparados os seg compostos.
[M+H] mas ácido intes *Exemplos de referência
153
Exemplo COMPOSTO Rs mSz [M+Hf 36* O fí f{ N-N H H 3.54 362.07 37* fT>4 N-N H H 4.26 384.04 38” CT^NH „, MP ^~H H 3.51 334 33’ Co O^NH ^ \ff^H Nl-N H H 2.9-8 294 40'· J\ 1 ^ ajtO \ ,/ 'Ν' ί|··« « 3.QS 357 41* OMe I í\ r-r-T A °'· τ »-*/ Λ •A-.—i{ PP V ΐΓ Μ Μ-Μ Μ Η 3.32 370 154
Exempio COMPOSTO míz |M+H3+ 42* Sf 0 1 J^CXs U Ít H 3.45 337 43* n r ta o; Km N /-1 .Λ À~/ ^ » 3.50 350· 44* O F^^r^^OMe ,·ν\ O NH N_f Xs \ ff H ^ N » 3.32 352: 45* ,·>. -OMe ,Q f γ NH „7^ J Lj 5 ,y V M-N » « 3.88 352.03 46* j 1 Meõ' 'NpVOMe o'-' MB .,.^3 j :TT.\ \ - -•V J* £ > tT‘ ^ —* \ » N N-M W H 3,07 364,06- 47* “DO F-Y ο4' Ψ X j L/ V >"Y 4. .06 336,01 155
Exemplo COMPOSTO Rs m!z [y+H|+ 48* Μθ^ I Xl 'ν' 0- N H /^\ i T\J r yf-fí N-J4 H H 2,85 403,03· 49* 0M* I. na y omô Ο'^ΝΗ H/'^\ ΓΓ'κ ||'-M H 3.58 364.11 50* Π3 '-'Ζ 'Ν j H θ' NH w XT\J Γ Η N kj-N H 4.22 343.07 51* OCHFj r S 1J 'X' ! O" m Ww ϊ P^v Λ .Xy^Z Jx~js í // N N-N H H 3.S1 370.07 52* Çl é I ^ r ν-/*Λ 5λ^< XJ \ ff « H 4.11 366.08· 53* f"T"íl ,-ΓΛχ ^ ΗΝ'^Ο '-ΟΧ 3.53 346,06 156
Exempio COMPOSTO R. ítí/z p+HJ* 54* n Nt V yj. .VV í ÚO 3.82 384.09 55* UVv / HW fc —,o r1 MA / O T MeO 3.77 348.10 56* q3-Çt km V50 -vi /' v-p Vi / F 3.62 358.07 57* OcV-tr HK 'ν~~Τ,0 Me.. jT Ci 3.75 352.07 58* K 1 ,1 TN. J mi f., r° 0 / F 3.95 340.06 59* .^-mh CKU r \^a %J 2.96 372'374 157
Exempío COMPOSTO Rt inlz [M-Hj· 60* prV£r HN ΜβΟ / y^k \j 3,49 343.14 er ft l 1 ViV ^-.5-' ".n v~ HN >S=° Γ V-ci Vi j 4,46 406,00 62* íYVvr "n y55" H» M« f X Çf~ 3,73 332,10 63* 1 XvvV HN -sss-9 /· ' / Ato 0.93 325.13 64* H :i Γr Γ 'n '/-HN Vi-ϊΛ Μβ / s T r m 4.42 346.13 158
Exerapío COMPOSTO Rt íJí/zp-s-Hf 65* /5 ~~HH P J J '·-..:···· "M y-' HW saíO P r\ 3,44 371.07 66* OcJ-Cr n y HN CUsJ 9 u> 4.44 407.11 6-7 ιΓ^τΛ—Ζτ i.ANí^yJ V-o Cí. / j / f G ^ 3,47 423.12 EXEMPLOS 68-70
Através do seguimento dos métodos descritos nos Exemplos 21 e 22, foram preparados os seguintes compostos.
Exempfo Método COMPOSTO R, mfz fM+Bf 68' Exempto 21 í \ r X F \ tf ^ N-N M 2.82 453.07 159
Exemplo Método COMPOSTO Ri miz es* Exemplo 21 'd- \v ' 2.84 411.08 70* Exemplo 22 jCl O'" MH .. N_/ AJ~%) U 8 H 1.91 423,14 EXEMPLOS 71-75
Procedimento Geral A
Uma mistura do ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H- pirazol-3-carboxílico (0,134 g, 0, 50 mmol), benzeno-1,2- diamina apropriada (0 , 6 0 mmol), EDC (0, 116 g, 0,60 mmol) e HOBt (0,081 g, 0,60 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura de reação foi reduzida in vácuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL) . A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar o intermediário amida. Ácido acético (6 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida em um forno de micro-ondas (120 W), a 110 °C durante 10 min e, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por LC/MS preparativa para dar o produto desejado.
Os seguintes compostos foram feitos utilizando o
Procedimento Geral A: 160
Exemplo COMPOSTO R, mlz [M+H]* 71* \sso \U U"F 3.03 376.06 72* YtWr T / ..-O r-U ff 103 376.05
Exemplo COMPOSTO ffílz P+H]+ YV\ 1 \<J n-i 'ESSO c / CrF 2.79 368.17 74* i ' > F' «*\r«' fr \ V Η N N" ''V' H 2,0·/ 398.12 75* ..O" Ví .· v/ Ο ζΤ w 2.52 384.09 EXEMPLO 76 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-Difluoro-N-{3-[5-(1-metil-piperidin-4-iloxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida 161
3,4-dinitrofluorobenzeno (1,86 g, 10 mmol) e 4-hidroxi-l-metilpiperidina (1,38 g, 12 mmol) foram dissolvidos em THF (20 mL) e agitou-se à temperatura ambiente enquanto hidreto de sódio (60% de dispersão em óleo mineral, 0,40 g, 10 mmol) foi adicionado em várias porções pequenas. A mistura de reação foi agitada durante uma hora e, em seguida, reduziu-se in vacuo, repartiu-se entre acetato de etilo e água, e a fase orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduziu-se in vacuo. O resíduo resultante foi sujeito a cromatografia em coluna, eluindo com 5% de MeOH/DCM para dar um sólido amarelo (1,76 g, proporção de 2:1 da desejada 4- (3,4-dinitro-fenoxi)-1-metil-piperidina e um produto secundário 4-(4-fluoro-2-nitro-fenoxi)-1-metil-piperidina) .
Uma amostra da mistura dos produtos obtidos (0,562 g) foi dissolvida em DMF (10 mL) sob uma atmosfera de azoto. A mistura de reação foi em seguida agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 40 horas, os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado reduzido in vacuo para dar um óleo preto (mistura 1:1 da desejada 4-(1-metil-piperidin-4-iloxi)-benzeno-1,2-diamina e o produto secundário reduzido, de 5-fluoro-2-(l-metil-piperidin-4-iloxi)-fenilamina).
Uma amostra do óleo preto (0,221 g) foi combinada com ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (0,134 g, 0,50 mmol) , EDC (0,116 g, 0, 60 mmol) e HOBt (0,081 g, 0, 60 mmol) e DMF (3 mL) e a mistura de reação 162 resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. Uma metade da mistura de reação foi submetida a condições de processamento: após redução in vacuo, o resíduo foi dividido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduziu-se in vacuo para dar o intermediário amida. Ácido acético (6 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida a refluxo durante 3,5 horas e, em seguida, reduzida in vacuo. 0 resíduo foi purificado por LC/MS preparativa para dar o sal de formato de 2,6-difluoro-N-{3-[5-(l-metil-piperidin-4-iloxi)-lH-benzimidazol-2-il]-1H-pirazol-4-il }-benzamida (0,035 g) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 1,82, [M+H]+ 453,30). EXEMPLO 77 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(4-Cloro-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4 — i1]-2,6-difluoro-benzamida 77A. Síntese de 3-Cloro-benzeno-l,2-diamina α NH, 3-Cloro-2-nitro-anilina (0,345 g, 2 mmol) foi dissolvida em iso-propanol (10 mL) e água (2 mL) . Ácido acético catalítico (0,1 mL) foi adicionado, seguido de níquel de Raney (0,02 g, como pasta de 50% em H20) , sob um fluxo de azoto. A mistura de reação foi em seguida agitada sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 5 horas e o catalisador foi removido por filtração sob uma atmosfera de azoto. O filtrado foi reduzido in vacuo, repartido entre acetato de etilo e água, e a camada 163 orgânica foi reduzida in vácuo, para dar 3-cloro-benzeno-1,2-diamina como um óleo castanho (0,190 g, 67%) . (LC/MS: Rt 1,84, [M+H]+ 143, 07) . 77B. Síntese de N-[3-(4-Cloro-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (0,134 g, 0,50 mmol), 3-cloro-benzeno-1,2-diamina (0,085 g, 0,60 mmol), EDC (0,116 g, 0,60 mmol) e HOBt (0,081 g, 0,60 mmol) em DMF (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar o intermediário amida. Ácido acético (5 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida a refluxo durante 3 horas e, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por LC/MS preparativa para dar N-[3-(4-cloro-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida (0, 052 g, 28%) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 3,18, [M+H]+ 374,09) .
EXEMPLOS 78-81 Procedimento Geral B 164
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (100 mg, 0,37 mmol), a diamina correspondente (1,2 eq.), EDC (1,2 eq.) e HOAt (1,2 eq.) em DMF (1,2 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi tratada vertendo-a em água e extraindo-a com EtOAc (x2) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas novamente com água, salmoura e secas sobre MgSCu. O produto foi filtrado e evaporado até à secura para deixar o produto intermédio de amida, como um sólido. Uma mistura desta amida em AcOH (2 mL) foi aquecida num forno de micro-ondas (50W) a 110 °C até que a reação estivesse completa. A suspensão foi reduzida in vacuo, e o resíduo foi purificado por HPLC prep.
Os seguintes compostos foram preparados utilizando o Procedimento Geral B:
Exemplo GornpostO' nifzW 78* Cl HK, u VíQ \JÍ 442. RT 3.51 min 79* 1 ] >>—? j m vT CT 389, RT 3.33 nrân 80* XTXj y^ m Dr* 392Í394, RT 3.24 rwn * u i rt / Hti 376. RT 3.09 rran s (exemplo de referência'! 165
EXEMPLOS 82-86 Procedimento Geral C
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (150 mg, 0,56 mmol), a diamina correspondente (1,1 eq) , EDC (1,2 eq.) e HOBt (1,2 eq.) em DMF (4 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e, em seguida, foi reduzida in vacuo. O resíduo foi repartido entre EtOAc e NaHC03 aquoso saturado e a porção orgânica foi lavada com água, seca (MgS04) e reduzida in vacuo. O resíduo foi tomado em AcOH (4 mL) e aquecida em um forno de micro-ondas (100 W) , a 120 °C durante 10 minutos. A mistura foi reduzida in vacuo e purificada por HPLC preparativa.
Os seguintes compostos foram preparados utilizando o Procedimento Geral C: 16 6
Exemplo Composto ítííz 82’ w* I \ Vt I Ή r HM '^0 F. / Cr 354, RT 2.88 mio 83" ,AmH MeQ N f ' G (/ y-* 400, RT 2.18 mio 84’ li T \........// Γ A f \<A mA N f HN ''tsíO F / x Λ (X 354, RT 2.78 mio 85' I* L-f ry-F f // VA o < ,.-N 420, RT 3.22 mio 86’ ,VnH 0oAA/^yJ MM Fx J / 398, RT 2,42 mio * iexemplo de referência) EXEMPLO 87 (exemplo de referência) Síntese de 1-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-3- terc-butil-ureia 167
Uma mistura de 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (100 mg, 0,50 mmol) , terc-butil-isocianato (60ul, 0,60 mmol) em DMF (5mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por LC/MS preparativa e, após evaporação, obteve-se 52 mg do composto do titulo como um sólido branco (35%). (LC/MS: Rt 2,61, [M+H]+ 299,15). EXEMPLO 88 (exemplo de referência) Síntese de 1-[3- (lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-3-(2,6-difluoro-fenil)-ureia
O composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 87, mas utilizando 2,6-difluorofenil isocianato para se obter o composto do título como um sólido branco (15 mg) . (LC/MS: Rt 2,82, [M+H]+ 355). 168 EXEMPLO 89 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-Difluoro-N-{3-[5-(4-isopropil-piperazina-l-carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
O composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 21, mas utilizando 1-isopropilpiperazina como o fragmento de amina para dar 2,6-difluoro-N-{3-[5-(4-isopropil-piperazina-l-carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida como um sólido amarelo (63 mg). (LC/MS: Rt 1,87, [M+H]+ 494, 18) . EXEMPLO 90 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-Difluoro-N-{3-[5-(pirrolidina-l-carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
O composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 21, mas utilizando pirrolidina como o fragmento de amina para dar 2,6-difluoro-N-{ 3-[5-(pirrolidina-l-carbonil)-1H-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida, como um sólido branco (17 mg) . (LC/MS: Rt 3,03, [M+H]+ 437,16) . 169 EXEMPLO 91 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-Difluoro-N-[3-(5-hidroxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
Uma mistura de 2,6-difluoro-N-[3-(5-metoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 27) (850 mg) e de alumínio (III), cloreto (220 mg) em tolueno (4 mL) foi aquecida a 80 °C durante 3 horas, arrefecida até à temperatura ambiente e adicionou-se NaHC03 aquoso saturado (4 mL) seguido de ácido cítrico aquoso a 5% (4 mL) . A mistura foi extraída com EtOAc e o extrato orgânico foi lavado com salmoura, seco (MgS04) e reduzido in vacuo. O resíduo foi submetido para LC/MS preparativa para dar 2,6-difluoro-N-(3-(5-hidroxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (22 mg) como um sólido bege. (LC/MS: Rt 2,01, [M+H]+ 356, 09) . EXEMPLO 92 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Dif luoro-N- { 3- [ 5-hidroxi-4- (4-metil- piperazin-l-ilmetil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
Uma mistura de 2,6-difluoro-N-[3-(5-hidroxi-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (50 mg), 37% 170 de formaldeído aquoso (1 mL) e N-metilpiperazina (150 pL) em benzeno (1 mL) foi aquecida num micro-ondas a 100 °C e 50 W durante 10 minutos, reduziu-se in vacuo e foi submetida a LC/MS preparativa para purificação para dar 2,6-difluoro-N-{3-[5-hidroxi-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida (7 mg) como um sólido amarelo. (LC/MS: Rt 1,98, [M+H]+ 468, 19) . EXEMPLO 93 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Difluoro-N- [3- (5-hidroxi-4-morfolin-4- ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
H O composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 92, mas utilizando morfolina como o fragmento de amina para dar 2,6-difluoro-N-[3-(5-hidroxi-4-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (14 mg) como um sólido amarelo. (LC/MS: Rt 1,82, [M+H]+ 455,13). EXEMPLO 94 Síntese_de_2, 6-Dicloro-N- [3- (5-morfolin-4-ilmetil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]benzamida 94A. Síntese de (3,4-Dinitro-fenil)-morfolin-4-il-metanona
O
171
Uma mistura de ácido 3,4-dinitrobenzoico (10,0 g) e cloreto de tionilo (30 mL) foi aquecida a refluxo durante 2 horas, arrefecida até à temperatura ambiente e o excesso de cloreto de tionilo removido por azeotropo com tolueno. O resíduo foi retomado em THF (100 mL) e morfolina (4,1 mL) e EtsN (7,2 mL) foi adicionada em simultâneo com a mistura, a 0 °C. A mistura foi agitada durante 3 horas, água (100 mL) foi adicionada e em seguida extraída com EtOAc. A porção orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCU) e reduzida in vacuo. A recristalização do resíduo a partir de MeOH deu origem a (3,4-dinitro-fenil)-morfolin-4-il-metanona (8,23 g) como um sólido amarelo. Ch NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,3 (d, 1H) , 8,3 (s, 1H) , 8,0 (d, 1H) , 3,7-3,5 (m, 8H) ) . 94B. Síntese de (3,4-Diamino-fenil)-morfolin-4-il-metanona
O
Uma mistura de (3,4-dinitro-fenil)-morfolin-4-il-metanona (1,0 g) e 10% Pd/C (150 mg) em MeOH (30 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 10 horas, em seguida filtrada através de um tampão de Celite e reduzida in vacuo para dar (3,4-diamino-fenil)-morfolin-4-il-metanona (900 mg) . (ΤΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 6,6 (s, 1H) , 6,5 (s, 2H) , 4,8 (s, 1,5H), 4,6 (s, 1,5H), 4,1 (s, 1H) , 3,6 (m, 4H) , 3,4 (m, 4H) ) . 94C. Síntese de 4-Morfolin-4-ilmetil-benzeno-l,2-diamina
172 A uma mistura de (3,4-dinitro-fenil)-morfolin-4-il-metanona (2,84 g) em THF seco (50 mL) foi adicionado NaBH4 (954 mg) seguido gota a gota por BF3.Et20 (3,2 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas e depois extinguiu-se independentemente da adição de MeOH. A mistura foi reduzida in vacuo, repartida entre EtOAc e água e a porção orgânica lavada com solução salina, secou-se (MgS04) e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna flash eluindo com EtOAc para dar 4-(3,4-dinitro-benzil)-morfolina (1,08 g).
Uma mistura de 4-(3,4-dinitro-benzil)-morfolina (550 mg) e 10% Pd/C (75 mg) em MeOH (10 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 4 horas, sendo então filtrada através de um tampão de Celite e reduzida in vacuo para dar origem a 4-morfolin-4-ilmetil-benzeno-1,2-diamina (483 mg) como componente principal de uma mistura. 94D. Síntese do ácido 4-(2,6-Dicloro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico
Cloreto de tionilo (0,65 mL) foi adicionado a ácido 2,6-diclorobenzoico (825 mg) e a mistura aquecida a 70 0 C durante 2 horas. A mistura foi deixada a arrefecer e o excesso de cloreto de tionilo foi removido por azeotropo com tolueno. O resíduo foi retomado em THF (30 mL) e éster metílico do ácido 4-amino-lH-pirazol-3-carboxílico (609 mg) e Et3N (0,75 mL) adicionado em simultâneo com a mistura, a 173 0 °C. A mistura foi agitada durante 4 horas, água (100 mL) foi adicionada e em seguida extraída com EtOAc. A porção orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar o éster metílico do ácido 4-(2, 6-dicloro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (1,23 g) como um sólido vermelho. (LC/MS: Rt 3,05, [M+H]+ 313,96).
Uma mistura de éster metílico do ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (1,21 g) em NaOH aquoso a 2 M/MeOH (1:1, 50 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 horas. Os materiais voláteis foram removidos in vacuo, a água (100 mL) foi adicionada e a mistura foi levada a pH 5 com HC1 aquoso a 1M. O precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco através de azeótropo com tolueno para dar o ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico como um sólido bege (790 mg). (LC/MS: Rt 2,53, [M+H]+ 299,95). 94E. Síntese de 2,6-Dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
H
Uma mistura de ácido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (75 mg, 0,25 mmol), 4-morfolin-4-ilmetil-benzeno-1,2-diamina (52 mg, 0,25 mmol), EDC (58 mg, 0,3 mmol) e HOBt (41 mg, 0,3 mmol) em DMF (4 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A mistura foi repartida entre EtOAc e NaHC03 saturado aquoso e a porção orgânica foi lavada com NH4C1 aquoso saturado, seca 174 (MgSCq) e reduzida in vacuo. 0 resíduo foi retomado em AcOH e aquecida a 100 °C durante 14 horas. Arrefecida até à temperatura ambiente e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna flash eluindo com CH2Cl2-MeOH (20:1-10:1) para dar 2, 6-dicloro-N-[3- (5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (30 mg) como um sólido cor de rosa. (LC/MS: Rt 2, 12, [M+H]+ 471,14) . EXEMPLO 95 Síntese de 2-Cloro-6-fluoro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazo-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 95A. Síntese do ácido 4-(2-Cloro-6-fluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico
O composto foi preparado de forma análoga ao ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (Exemplo 16D) , mas utilizando ácido 2-cloro-6-fluorobenzoico como o ácido de partida para dar origem ao ácido 4-(2-cloro-6-fluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (4,42 g) como um sólido azul pálido. (LC/MS: Rt 2,35, [M+H]+ 283,94). 175 95Β. Síntese de 2-Cloro-6-fluoro-N-[3-(5-morfolin-4- ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
0 composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E), mas utilizando o ácido 4-(2-cloro-6-fluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3- carboxílico, para se obter 2-cloro-6-fluoro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (37 mg) como um sólido cor de rosa. (LC/MS: Rt 2, 04, [M+H]+ 455, 18) . EXEMPLO 96 Síntese_de_2, 6-Difluoro-4-metoxi-N- [3- (5-morfolin-4- ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 96A._Síntese_do_ácido_4- (2, 6-Difluoro-4-metoxi- benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico
O composto foi preparado de forma análoga ao ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (Exemplo 16D), mas usando ácido 2,6-difluoro-4-metoxibenzoico como o ácido de partida, para dar o ácido 4-(2,6-difluoro-4-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (1,58 g) como 176 um sólido branco . (ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-dg) δ 13,0 (s, 2H), 10,7 (s, 1H) , 8,0 (s, 1H) , 6, 9 (s, 1H), 6,8 (s, 1H), 3,7 (s, 3H)). 96B. Síntese de 2,6-Difluoro-4- -metoxi-N-[3-(5-morfolin-4- ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 0 composto foi preparado de uma maneira análoga ao 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E), mas utilizando ácido 4-(2,6-difluoro-4-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxilico para se obter 2,6-difluoro-4-metoxi-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (32 mg) como um sólido cor de rosa. (LC/MS: Rt 1, 99, [M+H]+ 469,21) . EXEMPLO 97 Síntese de [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)- lHpirazol-4-il] -amida_do_ácido_2,3-Dihidro- benzo[1,4]dioxina-5-carboxílico 97A. Síntese do ácido 4-[(2,3-Dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carbonil)-amino]-lH-pirazol-3-carboxílico OMe
177 0 composto foi preparado de forma análoga ao ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (Exemplo 16D), mas utilizando ácido 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carboxilico como o ácido de partida para dar o ácido 4-[(2, 3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carbonil)-amino]-1H- pirazol-3 -carboxílico (34 0 mg) como um sólido branco. (¾ NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 13,5 (s, 2H), 11,2 (s, 1H) , oo (s, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,1 (d, 1H), 7, 0 (t, 1H) , 4,5 (s, 2H), 4,4 (s, 2H)). 97B. Síntese de [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2- il) -lH-pirazol-4-il] -amida_do_ácido_2,3-Dihidro- benzo[1,4]dioxina-5-carboxílico
0 composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E), mas utilizando ácido 4-[(2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carbonil)-amino]-lH-pirazol-3-carboxílico para dar a [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carboxílico (39 mg) como um rosa sólido. (LC/MS: Rt 1,99, [M+H]+ 461,23) . EXEMPLO 98 (exemplo de referência) Síntese de 2, 6-Dicloro-N-{3-[5-morfolina-4-carbonil)-1H-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
178 C
N-M H 0 composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E), mas utilizando (3,4-diamino-fenil)-morfolin-4-il-metanona (Exemplo 94B), para dar 2, 6-dicloro-N-{3-[5-(morfolina-4-carbonil)-1H-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida (17 mg) como um sólido bege. (LC/MS: Rt 2,98, [M+H]+ 485,13). EXEMPLO 99 (exemplo de referência) Síntese de 2-Cloro-6-fluoro-N-{3-[5-(morfolina-4-carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
H 0 composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E) , mas utilizando ácido 4-(2-cloro-6-fluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3 carboxílico (Exemplo 95A) e (3,4-diamino-fenil)-morfolin-4-il-metanona (Exemplo 94B), para dar 2-cloro-6-fluoro-N-{3-[5-(morfolina-4-carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida (18 mg) como um sólido bege. (LC/MS: Rt 2,89, [M+H]+ 469, 15) . 179 EXEMPLO 100 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-Dif luoro-4-metoxi-N- { 3- [ 5- (morfolina-4- carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
O composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E) , mas utilizando ácido 4-(2,6-difluoro-4-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (Exemplo 96A) e (3,4-diamino-fenil)-morfolin-4-il-metanona (Exemplo 94B), para dar 2,6-difluoro-4-metoxi-N-{3-[5-(morfolina-4-carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-1H-pirazol-4-il}-benzamida (24 mg) como um sólido bege. (LC/MS: Rt 2,94, [M+H]+ 483,20). EXEMPLO 101 (exemplo de referência) Síntese de {3-[5-(morfolina-4-carbonil)-lH-benzimidazol-2- il ] -lH-pirazol-4-il} -amida_do_ácido_2,3-Dihidro- benzo[1,4]dioxina-5-carboxílico
O composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E) , mas utilizando ácido 4-[(2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carbonil) -amino]-lH-pirazol-3-carboxílico (Exemplo 97A) e (3, 4-diamino- 180 fenil)-morfolin-4-il-metanona (Exemplo 94B), para dar { 3-[5-(morfolina-4-carbonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-amida do ácido 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carboxílico (15 mg) como um sólido bege. (LC/MS: Rt 2,89, [M+H]+ 475,20) . EXEMPLO 102 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(4,6-Bis-trifluorometil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
O composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3- (5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E), mas utilizando ácido 4- (2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3- carboxílico (Exemplo 16D) e 3,5-bis(trifluorometil)-1,2-diaminobenzeno para se obter N-[3-(4,6-bis-trifluorometil-lHbenzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida (51 mg) como um sólido cor de rosa. (LC/MS: Rt 3, 64, [M+H]+ 476, 07) . EXEMPLO 103 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5,6-Dicloro-lH-benzimidazol-2-il)-1H- pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
181 0 composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E) , mas utilizando ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3- carboxilico (Exemplo 16D) e 4,5-dicloro-l,2-fenileno-diamina para dar N-[3-(5,6-dicloro-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida (29 mg) como um sólido bege. (LC/MS: Rt 3,53, [M+H]+ 408,02). EXEMPLO 104 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(4,5-Dimetil-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
0 composto foi preparado de uma maneira análoga a 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (Exemplo 94E) , mas utilizando ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3- carboxílico (Exemplo 16D) e 3,4-dimetil-1,2-fenileno-diamina para dar N-[3-(4,5-dimetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida (89 mg) como um sólido cor de laranja pálido. (LC/MS: Rt 2,98, [M+H]+ 368,15) . EXEMPLO 105 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(ÍH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il] -2-fluoro-3-pirrolidin-l-ilmetil-benzamida 105A. Síntese do ácido 3-Bromometil-2-fluoro-benzoico
182 HO
Uma mistura de ácido 2-fluoro-3-metilbenzoico (0,462 g, 3 mmol), N-bromossuccinimida (0,560 g, 3,15 mmol), azobisisobutironitrilo (AIBN) (0,024 g, 0,15 mmol) e CC14 (10 mL) foi aquecida a refluxo durante 18 h. A mistura da reação foi então reduzida in vacuo e repartida entre acetato de etilo e K2C03 aquoso. A camada aquosa foi acidificada (HC1 a 2M) e arrefecida em gelo. O precipitado obtido foi recolhido por filtração e seco in vacuo para dar o ácido 3-bromometil-2-fluoro-benzoico (0,1225 g, 13%), como um sólido incolor. (LC/MS: Rt 3,18, [M-H]“ 232,91). 105B. Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-fluoro-3-pirrolidin-l-ilmetil-benzamida
\ O ácido 3-bromometil-2-fluoro-benzoico (0,058 g, 0,25 mmol) e pirrolidina (0,036 g, 0,5 mmol) foram agitados à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura de reação foi, em seguida, azeotropada três vezes com tolueno, acidificada com HC1 a 2M e azeotropada mais três vezes com tolueno para dar o ácido 2-fluoro-3-pirrolidin-l-ilmetil-benzoico na forma do seu sal de HC1. Este foi combinado com 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (0,050 g, 0,25 183 mmol), EDC (0,048 g, 0,25 mmol) e HOBt (0,032 g, 0,25 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente em DMF (0,5 mL) durante 20 h. A mistura de reação foi purificada por LC/MS preparativa para dar N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-fluoro-3-pirrolidin-1-ilmetil-benzamida (0,015 g, 15%) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 1,79, [M+H]+ 405,13). EXEMPLO 106 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-3-pirrolidin-l-ilmetil-benzamida
Metil-3-(bromometil)benzoato (0,115 g, 0,5 mmol), pirrolidina (0,036 g, 0,5 mmol) e K2CO3 (0,069 g, 0,5 mmol) foram dissolvidos em DMF (2,5 mL) e agitados ao refluxo durante 18 h. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e sujeita a cromatografia em coluna eluindo com hexano acetato de etilo (1:1) para dar o éster metílico em bruto do ácido 3-pirrolidin-l-ilmetil-benzoico, que foi adicionado a uma solução de LiOH (0,014 g; 0,33 mmol) em 1:1 de THF: H20 (1 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas, reduzida in vacuo e seca por meio de azeótropo com tolueno (x3) . O sólido resultante foi dissolvido em água (1 mL) , acidificado com HC1 a 2M (1 mL) , reduzido in vacuo e seco através de azeótropo com tolueno (3x) para dar um gel amarelo claro, transparente. Este foi combinado com 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (0,050 g, 0,25 mmol), EDC (0,058 184 g, 0,30 mmol) e HOBt (0,041 g, 0,30 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente em DMSO (0,75 mL) durante 64 h. A mistura de reação foi purificada por LC/MS preparativa para dar o sal de formato N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-3-pirrolidin-l-ilmetil-benzamida (0,018 g, 9% nos 3 passos) como um sólido cor de camurça. (LC/MS: Rt 1,86, [M+H]+ 387,16).
EXEMPLOS 107-125 Procedimento Geral D
Uma mistura do ácido carboxilico correspondente (1,2 eq) , EDC (1,2 eq) , HOAt (1,2 eq) em DMSO (1 mL) foi adicionada com 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. O produto foi purificado por HPLC prep.
Os seguintes compostos foram preparados utilizando o Procedimento Geral D: 185
186
Exemplo Composto mSi 113* (Ρτν^Υ if-N ó 293, RT 2,40 mira 114* ' X*—<**) H'K „ •jUPO xr=:\ S-^f -V 304, RT 4.94 mín 1 '15* Hfl, N^O ν€μ N'o | 377, RT 4.15 mÍR 116* H jj j ^ { ν' 'y^ V^O O s 340, RT 3,49 mim 117* N ,·'':νϊ> ,.N, ,Μ—«·Η U | ;,........* ? '--.p· "N ''f^ mÁ rr Ní=j/ \ 339, RT 3,35 min 11ο* ívv~o" H-N. „ ftzO X / Υ"·\ 323, RT 2.70 mi» 187
Exemplo Composto miz. P+IH]+ 119" Μ CQ^yJ u-fi X^-sO j """ s 311, RT 2,55 R3fn 120" XVA KJ-ίγ H'h, 'ys^O D 303, RT 2.81 msn 121* H D XMJ oÓ / o^/ 407, RT 1,67 men 122* Hl .XVA h^n» N y \-ísO í V-x Η-κ' Λ WX 344, RT 2.45 min 123" Cô-Çf ,é f'T^ 386, RT 3,47 msn
EXEMPLO 126 (exemplo de referência) 126A. Síntese do éster terc-butílico do ácido {2—[3—(1H— Benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamino}-carbâmico
Uma mistura de 3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (250 mg, 1,3 mmol), ácido acético (108ul, 1,9 mmol), triacetoxi borohidreto de sódio (401mg, 1,9 mmol) e terc-butil-N-(2-oxoetil) carbamato (301mg, 1,9 mmol) em
dimetil formamida (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 4h. A mistura foi reduzida in vacuo. O 189 resíduo foi repartido entre acetato de etilo e solução de hidróxido de sódio (2N). A porção orgânica foi seca (MgSCU) , filtrada e reduzida in vacuo para dar 240 mg do composto do título como um óleo incolor (56%) . (LC/MS: Rt 2, 59, [M+H]+ 343, 19) . 126B Síntese de N* 1*-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-etano-1,2-diamina
H Éster terc-butílico do ácido {2-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamino]-etil}-carbâmico e (240 mg, 0,70 mmol) foi dissolvido numa mistura de trifluoroacético ácido (5 mL) e diclorometano (5 mL) e agitado à temperatura ambiente durante lh. 0 solvente foi reduzido in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de metanol (10 mL) e tolueno (10 mL) e, em seguida, reduziu-se in vacuo para se obter 300 mg do composto do titulo como um sal di trif luoroacetato (91%). (LC/MS: Rt 1,86, [M+H]+ 243,11). 126C. Síntese de 1-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-imidazolidin-2-ona
190
Uma mistura de n*-1*-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-etano-1,2-diamina (300 mg, 0,64 mmol), trietilamina (535ul, 3,84 mmol) e N, N'-carbonildiimidazol (156 mg, 0,96 mmol) em diclorometano (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1H. A mistura foi particionada entre acetato de etilo e solução de hidróxido de sódio (2N) . A fase aquosa foi saturada com cloreto de sódio e lavada com acetato de etilo (x2) . As porções orgânicas foram combinadas, secas (MgSCq) , filtradas e reduzidas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por LC/MS preparativa e após a evaporação das frações contendo produto deu 8 mg do composto do título como um sólido branco (5%) . (LC/MS: Rt 1,86, [M+H]+ 269, 07) . EXEMPLO 127 (exemplo de referência) Síntese_de_[ 3- (lH-Benzimidazol-2-il) -lH-pirazol-4-il ] - piridin-2-il-amina
Uma mistura de 3- (lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (150 mg, 0,75 mmol) e 2-fluoropiridina (0,26 mL, 3,0 mmol) foi aquecida no micro-ondas a 150 °C e 100 W durante 15 minutos. O éter de petróleo foi adicionado e o sólido que se formou foi recolhido por filtração. A recristalização a partir de metanol deu origem a[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-piridin-2-il-amina (12 mg). (LC/MS: Rt 0,91, [M+H]+ 277,00). EXEMPLO 128 (exemplo de referência) 191 Síntese_de_N- [3- (5, 6-Dimetil-lH-benzimidazol-2-il) -1H- pirazol-4-il]-4-metil-benzamida 128A. Síntese do ácido 4-(4-Metil-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico
N-N H
Uma mistura de ácido p-toluico (272 mg), éster metílico do ácido 4-amino-lH-pirazol-3-carboxílico (310 mg) , EDC (460 mg) e HOBt (324 mg) em DMF (8 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h. A mistura foi reduzida in vacuo, repartida entre EtOAc e NaHC03 saturado aquoso e, em seguida, a parte orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar éster metílico do ácido 4- (4-metil-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (4 8 6 mg) .
Uma mistura de éster metílico do ácido 4-(4-metil-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (486 mg) em NaOH aquoso a 2M/MeOH (1:1, 50 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. Os materiais voláteis foram removidos in vacuo, a água (100 mL) foi adicionada e a mistura levada a pH 5 com HC1 aquoso a 2M. O precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco através de azeótropo com tolueno para dar o ácido 4-(4-metil-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico como um sólido cinzento (345 mg). (LC/MS: Rt 2,35, [M+H]+ 246,09). 192 128Β. Síntese de N-(3-(5, 6-Dimetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ill-4-metil-benzamida
0 composto foi preparado de uma maneira análoga ao 2,6-dicloro-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida, no entanto, utilizando o ácido 4-(4-metil-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxilico e 4,5-dimetil-benzeno-l,2-diamina para dar N-[3-(5,6-dimetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-4-metil-benzamida (32 mg) como um sólido branco. (LC/MS: Rt 3,42, [M+H]+ 346,26) . EXEMPLO 129 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-difluoro-N- [3- (5-metanosulfonil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
Pd/C (10%, 0,011 g) foi adicionado a uma solução de 4- metoxisulfonil-2-nitroanilina (0,108 g, 0,5 mmol) em DMF (5 mL) . A mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 4 h. Resíduos catalisadores foram removidos por filtração através de celite e o filtrado foi reduzido in vácuo, e, em seguida, 193 combinado com ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (0,112 g, 0,42 mmol), EDC (0,096 g, 0,50 mmol) e HOBt (0, 068 g, 0,50 mmol) e DMF (4 mL) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 64 h, reduzidas in vacuo e o residuo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL). O precipitado branco que se formou foi isolado por filtração, lavado com água (3 x 25 mL) e seco por mistura azeotrópica com tolueno para dar o intermediário de amida. Ácido acético (3 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida num forno de micro-ondas (120 °C, 110 W, 40 min). 0 resíduo foi purificado por LC/MS preparativa para dar 2,6-difluoro-N-[3-(5-metanossulfonil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (0,016 g, 8% em 3 passos) como um sólido incolor. (LC/MS: Rt 2,61, [M+H]+ 417,99). EXEMPLO 130 (exemplo de referência) Síntese de 2, 6-difluoro-N-{3-[5-(2-piperidin-4-il-etoxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida 130A. Síntese do éster terc-butílico do ácido 4-[2-(3,4-dinitro-fenoxi)-etil]-piperidina-l-carboxílico
Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 0,096 g, 2,4 mmol) foi adicionado em várias porções a uma solução de etanol de N-Boc-4-piperidina (0,550 g, 2,4 mmol) em THF (20 mL) . A esta mistura foi adicionada uma solução de 3,4-dinitrofluorobenzeno (0,372g, 2,0 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura de reação foi diluída com acetato de etilo (100 mL) , lavada com água (60 mL) e a fase aquosa extraída de novo com acetato de etilo (3 x 50 mL) . Os orgânicos 194 combinados foram lavados com salmoura (50 mL), secos (MgSCú) e reduzidos in vacuo. O resíduo resultante foi submetido a cromatografia em coluna eluindo com um gradiente de 0-50% de acetato de etilo em éter de petróleo. Éster terc-butílico do ácido 4-[2-(3,4-dinitro-fenoxi)-etil]-piperidina-l-carboxílico foi obtido como um óleo amarelo (0,361 g, 46%). 130B. Síntese do éster terc-butílico do ácido 4-[2-(3,4-diamino-fenoxi)-etil]-piperidina-l-carboxílico Éster terc-butílico do ácido 4-[2-(3,4-dinitro-fenoxi)-etil]-piperidina-l-carboxílico (0,12 g, 0,3 mmol) foi
dissolvido em DMF (3 mL) sob uma atmosfera de azoto. Pd/C (10%, 0, 012 g) foi adicionado e a mistura de reaçao foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 24 h. A mistura de reação foi diluída com metanol (20 mL) e 0 material insolúvel foi removido por filtração. 0 filtrado foi reduzido in vacuo para dar o éster terc-butílico do ácido 4-[2-(3,4-diamino-fenoxi)-etil]-piperidina-1- carboxilico como um óleo castanho (0,101 g, 100%) . (LC/MS: Rt 2,21, [M+H] + 336, 16) . 130C. Síntese de 2,6-difluoro-N-{3-[5-(2-piperidin-4-il-etoxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida rv r- f ) Éster terc-butílico do ácido 4- [2- (3,4-Diamino-fenoxi etil]-piperidina-l-carboxílico (0,101 g, 0,30 mmol), ácido 4- (2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico 195 0,080 <2, 0,30 mmol) , EDC (0,057 g, 0,30 mmol) e HOBt 0,040 g, 0,30 mmol) foram dissolvidos em DMF (2 mL) e agitados à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar o intermediário amida. Ácido acético (3 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida num forno de micro-ondas (120 °C, 110 W, 30 min) , em seguida, reduzida in vacuo. Desproteção Boc parcial foi observada in situ, e a amina desprotegida desejada foi purificada por LC/MS preparativa para dar o sal de formato de 2,6-difluoro-N-{3-[5-(2-piperidin-4-il-etoxi)-lHbenzimidazol-2-il]-1H-pirazol-4-il}-benzamida (0,017 g) como um óleo castanho. (LC/MS: Rt 1,97, [M+H]+ 467,05). EXEMPLO 131 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-( 6-cloro-4-hidroximetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida 131A. Síntese do éster do ácido acético 2-acetilamino-5-cloro-benzilo Álcool 2-Amino-5-clorobenzilo (3,0 g, 19 mmol) em anidrido acético (150 mL) foi agitado à temperatura ambiente durante 16 h. Água (50 mL) foi adicionada e a mistura agitada por mais 16 h. A mistura de reação foi reduzida in vacuo, seca por mistura azeotrópica com tolueno (x2) e ainda anidrido acético (100 mL). A suspensão resultante foi agitada durante 16 h, em seguida, os sólidos foram recolhidos por filtração, para dar o éster do ácido acético 2-acetilamino- 196 5-cloro-benzilo na forma de um sólido branco (4,61 g) . (LC/MS: Rt 2,46, [M-H]_ 240,10) . 131B. Síntese do éster do ácido acético 2-acetilamino-5-cloro-3-nitro-benzilo
Nitrato de potássio (1,01 g, 10 mmol) foi adicionado a H2S04 conc. (10 mL) a 0 °C. Esta mistura foi agitada a 0 °C durante 15 min, em seguida, éster acético do ácido 2-acetilamino-5-cloro-benzílico (1,92 g, 8 mmol) foi adicionado em pequenas porções ao longo de 15 min. A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante mais 1 h, e, em seguida, vertida sobre gelo picado. O precipitado formado foi recolhido por filtração para dar uma mistura de isómeros, que foram separados por cromatografia em coluna eluindo com um gradiente de 0-60% de acetato de etilo em éter de petróleo para dar o éster do ácido acético desejado 2-acetilamino-5-cloro-3-nitrobenzilo como um sólido amarelo (0,454 g, 20 %) . 131C. Síntese de (2-amino-5-cloro-3-nitro-fenil)-metanol O éster do ácido acético 2-acetilamino-5-cloro-3-nitro-benzilo (0,454 g, 0,45 mmol) e hidróxido de sódio (0,436 g, 11 mmol) foram dissolvidos em metanol-água (1:3, 40 mL) e a solução resultante foi aquecida a refluxo durante 5 h. Após arrefecimento, a mistura foi levada a pH 6 pela adição de HC1 conc.. O precipitado formado foi recolhido por filtração para dar (2-amino-5-cloro-3-nitro-fenil)-metanol como um sólido cor de laranja escuro (0,237 g, 73%) . (LC/MS: Rt 2,63, [M-H ] - 200,96) . 131D. Síntese de (2,3-amino-5-cloro-fenil)-metanol 197 (2-Amino-5-cloro-3-nitro-fenil)-metanol (0,202 g, 1 mmol) foi suspenso numa mistura de iso-propanol (5 mL) , água (2 mL) , metanol (3 mL) e ácido acético (0,05 mL) . Níquel de Raney (0,015 g, como uma pasta em água) foi adicionado cuidadosamente sob azoto. A mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 4 horas, depois diluída com metanol-água (1:1, 50 mL) e filtrada para remover resíduos de catalisador. Os voláteis foram removidos in vacuo, e a camada aquosa remanescente foi extraída com acetato de etilo (4 x 30 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos (MgS04) e reduzidos in vacuo para dar (2,3-diamino-5-cloro-fenil)-metanol como um sólido cor de laranja (0,144 g, 84%). (LC/MS: Rt 0,85, [M+H]+ 173,03). 131E ._Síntese_de_N- [3- (6-cloro-4-hidroximetil-lH- benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
(2,3-diamino-5-cloro-fenil)-metanol (0,144 g, 0,84 mmol), ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3- carboxílico (0,187 g, 0,70 mmol), EDC (0,161 g, 0,84 mmol) e HOBt (0,113 g, 0,84 mmol) foram dissolvidos em DMF (5 mL) e agitados à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL) . A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCq) e reduzida in vacuo par dar o intermediário amida. Ácido acético (5 198 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida a refluxo durante 4 h, em seguida, reduzida in vacuo. 0 resíduo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo. O sólido cor de laranja formado (0,185 g) foi recolhido em metanol (3 mL) e NaOMe (0,090 g, 1,6 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h, em seguida, reduzida in vacuo e dividida entre acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar um sólido cor de laranja, que foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com um gradiente de 0-100% de acetato de etilo em éter de petróleo. Frações contendo o produto foram reduzidas in vacuo para dar N-[3-(6-cloro-4-hidroximetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2, 6-difluoro-benzamida como um sólido castanho alaranjado (0,061 g, 22%). (LC/MS: Rt 2,79, [M+H]+ 403,98). EXEMPLO 132 (exemplo de referência) Síntese_de_2,6-Dif luoro-N- { 3- [ 5- (4-metil-piperazina-1- sulfonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida 132A. Síntese de 1-(4-cloro-3-nitro-benzenesulfonil)-4- metil-piperazina
Cloreto de 4-cloro-3-nitro-benzeno (2,56 g, 10 mmol) foi adicionado em pequenas porções a uma solução de N-metil piperazina (1,33 mL, 12 mmol) em DCM (25 mL) a 0 °C. A esta solução foi adicionada trietilamina (2,08 mL, 15 mmol) gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e, em seguida, reduzida in vacuo. 0 resíduo foi repartido entre acetato de etilo e água, e a 199 camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna eluindo com 0-20% de metanol em acetato de etilo deu origem a 1-(4-cloro-3-nitro-benzeno-sulfonil)-4-metil-piperazina como um sólido esbranquiçado (1,84 g, 58%). (LC/MS: Rt 1,84, [M+H]+ 319,97). 132B. Síntese de benzil-[4-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-2-nitro-fenil]-amina (4-Cloro-3-nitro-benzeno-sulfonil)-4-metil-piperazina (0,50 g, 1,57 mmol) e benzilamina (0, 502 g, 4,70 mmol) foram dissolvidas em THF (10 mL) e aquecidas a refluxo durante 3 h. A mistura da reação foi então reduzida in vacuo e repartida entre acetato de etilo e água. Os orgânicos foram lavados com salmoura, secos (MgS04) e reduzidos in vacuo, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com 0-10% de metanol em acetato de etilo para se obter benzil-[4-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-2-nitro-fenil]-amina como um sólido amarelo (0,53 g, 86%). (LC/MS: Rt 2,21, [M+H]+ 391,05). 132C. Síntese de 4-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-benzeno-1,2-diamina
Benzil-[4-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-2-nitro-fenil]-amina (0,53 g, 1,35 mmol) foi dissolvida em DMF (15 mL) e Pd/C (10%, 0,05 g) sob azoto. A mistura de reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 16 horas, depois diluída com acetato de etilo e filtrada através de celite. O filtrado foi reduzido in vacuo para dar a N-l-benzil-4-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-benzeno-1,2-diamina parcialmente reduzida. Este material bruto foi dissolvido em etanol (15 mL), e HC1 conc. foi adicionado (1 mL) , seguido por Pd/C (10%, 0,05 g) . A mistura de reação 200 resultante foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 16 h, diluída com acetato de etilo e filtrada através de celite lavando com metanol. O filtrado foi reduzido in vacuo e seco por mistura azeotrópica com tolueno. O resíduo foi repartido entre acetato de etilo e solução de carbonato de hidrogénio de sódio saturado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCb) e reduzida in vacuo para dar 4-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-benzeno-1,2-diamina como um sólido esbranquiçado (0,114 g, 31%). (LC/MS: Rt 0,37, [M+H]+ 271,02). 132D. Síntese de 2,6-Difluoro-N-{3-[5-(4-metil-piperazina-1-sulfonil)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
4- (4-Metil-piperazina-l-sulfonil)-benzeno-1,2-diamina (0,083 g, 0,31 mmol), ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (0,069 g, 0,26 mmol), EDC (0,060 g, 0,31 mmol) e HOBt (0,041 g, 0,31 mmol) foram dissolvidos em DMF (2 mL) e agitados à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (50 mL) . A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo par dar o intermediário amida. Ácido acético (3 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida num forno de micro-ondas (120 °C, 110 W, 20
min) , em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi repartido entre acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL). A 201 camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCg) , reduzida in vacuo e purificada por LC/MS preparativa para dar o sal de formato de 2, 6-difluoro-N-{3-[5-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-lH-benzamidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida como um sólido branco (0,031 g, 20%). (LC/MS: Rt 2,04, [M+H] + 502, 06) . EXEMPLO 133 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-difluoro-N-{3-[5-(piperidin-4-ilmetoxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
O éster terc-butílico do ácido 4-{2-[4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-iloximetil}-piperidina-l-carboxílico (0,024 g, 0,043 mmol) (preparado de um modo análogo ao do Exemplo 130), foi tratado com uma mistura 1:1 de TFA: DCM (2 mL) durante 20 min. A solução foi reduzida in vacuo e sujeita a azeotropia com tolueno (3x) . A purificação por LC/MS preparativa deu 2,6-difluoro-N-{3-[5-(piperidin-4-ilmetoxi)-1H-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida, como um sólido branco (8 mg, 41%). (LC/MS: Rt 1,99, [M+H]+ 453,06). EXEMPLO 134 (exemplo de referência) Síntese_de_2, 6-dif luoro-N-{3- [5- (l-metil-piperidin-4- ilmetoxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida 134A: Síntese do éster etílico do ácido 1-metil-piperidina-4-carboxílico 202
Cloreto de tionilo (0,80 mL, 11 mmol) foi adicionado gota a gota a uma suspensão do sal de HC1 de 1-metil-piperidina-4-carboxílico (1,80 g, 10 mmol) em etanol (25 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, em seguida, reduzida in vacuo e seca por mistura azeotrópica com tolueno (3x) para dar o éster etílico do ácido l-metil-piperidina-4-carboxílico como um sólido incolor (1,7 g, 100%). (LC/MS: Rt 0,41, [M+H]+ 172,08). 134B: Síntese de (l-Metil-piperidin-4-il)-metanol A uma solução arrefecida em gelo de éster etílico do ácido 1-metil-piperidina-4-carboxílico (0,855 g, 5 mmol) em THF (30 mL) foi adicionada gota a gota uma solução a 1M de LíA1H4 em THF (20 mL, 20 mmol) . A mistura de reação foi então agitada durante 18 h enquanto aquecida até à temperatura ambiente, e depois extinguida por adição cuidadosa de água (0,75 mL) , 10% NaOH aquoso (0,75 mL) e depois com água (3 x 0,75 mL) e agitou-se à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura resultante foi reduzida in vacuo, agitada com acetato de etilo e filtrada para remover os resíduos inorgânicos. O filtrado foi reduzido in vacuo para se obter (l-metilpiperidin-4-il)-metanol como um óleo incolor (0,468 g, 73%). (LC/MS: Rt 0,33, [M+H]+ 130,20). 134C: Síntese de 2,6-difluoro-N-{3-[5-(1-metil-piperidin-4-ilmetoxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
203 A síntese de 2,6-difluoro-N-{3-[5-(l-metil-piperidin-4-ilmetoxy)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida foi realizada de um modo análogo ao Exemplo 130 utilizando (l-metil-piperidin-4-il)-metanol como álcool de partida para dar o composto do título (1,0 mg). (LC/MS: Rt 1,99, [M+H]+ 467, 09) . EXEMPLO 135 (exemplo de referência) Síntese do éster metílico do ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-6-etoxi-lH-benzimidazol-5-carboxílico 135A. Síntese do ácido 4,5-dinitro-2-etoxi-benzoico A uma mistura de nitrato de potássio (4,80 g, 47,4 mmol) em ácido sulfúrico concentrado (20 mL) foi adicionado em porções, ácido 2-etoxi-4-nitrobenzoico (4,00 g, 19,0 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C-t.a. durante 3 h, em seguida vertida em gelo (120 mL) e agitada durante mais 1 h. O precipitado formado foi recolhido por filtração, lavado com água, e seco através de azeótropo com tolueno para dar o composto do título (4,28 g) como um sólido branco. (ΤΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,50 (s, 1H) , 7,95 (s, 1H) , 4,35 (q, 2H) , 1,35 (t, 3H) . 135B. Síntese do éster metílico do ácido 4,5-dinitro-2-etoxi-benzoico
Cloreto de tionilo (315 pL 4,30 mmol) foi lentamente adicionado a uma mistura de ácido 4,5-dinitro-2-etoxi-benzoico (1,00 g, 3,91 mmol) em metanol (10 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 16 h, depois reduzida in vacuo de azeotropia com tolueno. O resíduo foi então purificado por cromatografia em coluna, 204 utilizando EtOAc-PE (1:0-1:1) para dar o composto do titulo (606 mg) como um sólido branco. (ΧΗ NMR (300 MHz, DMSO-de) δ 8,55 (s, 1H) , 8,00 (s, 1H) , 4,35 (q, 2H) , 3,85 (s, 3H) , 1,35 (t, 3H) . 135C. Síntese do éster metílico do ácido 4,5-diamino-2-etoxi-benzoico
Uma mistura de éster metílico do ácido 4,5-dinitro-2-etoxi-benzoico (320 mg) e 10% Pd/C (40 mg) em MeOH (8 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio gasoso durante 4 h à temperatura ambiente, filtrada através de um tampão de Celite e reduzida in vacuo para dar o composto do título (234 mg) como uma goma preta. (1H NMR (300 MHz, MeOD) δ 7,30 (s, 1H), 6,40 (s, 1H) , 4,00 (q, 2H) , 3,80 (s, 3H), 1,35 (t, 3H). 135D. Síntese do éster metílico do ácido 2- [4-(2,6- difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3- i1]-6-etoxi-lH- benzimidazol-5- carboxílico
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (254 mg, 0,95 mmol), éster metílico do ácido 4,5-diamino-2-etoxi-benzoico (234 mg, 1,11 mmol), EDC (240 mg, 1,25 mmol) e HOBt (169 mg, 1,25 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura de reação foi reduzida in vacuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar o 205 intermediário amida. Ácido acético (10 mL) foi adicionado à amida em bruto e a mistura foi aquecida a refluxo durante 3 horas, deixada a arrefecer até à temperatura ambiente e, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi repartido entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e a camada orgânica foi, em seguida, lavada com salmoura, seca (MgSCM e reduzida in vacuo. Foi adicionada água ao resíduo e o sólido que se formou recolheu-se por filtração e secou-se através de azeótropo com tolueno para dar o composto do título (182 mg) como um sólido castanho. (LC/MS: Rt 2,94, [M+H]+ 442,02). EXEMPLO 136 (exemplo de referência) Síntese_de_N- { 3 - [6-etoxi-5- (morfolin-4-carbonil) -1H- benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-2,6-difluoro-benzamida 136A. Síntese do ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-6-etoxi-lH-benzimidazol-5-carboxílico
Uma mistura do éster metílico do ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino) -lH-pirazol-3-il]-6-etoxi-lH-benzimidazol-5-carboxílico (90 mg) em MeOH-2M de NaOH aquoso (1:1, 10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. O MeOH foi removido in vacuo e água (30 mL) foi adicionada. A mistura foi levada a pH = 3 com HC1 aquoso a 2M e depois extraiu-se com EtOAc (x3) . Os extratos orgânicos combinados foram reduzidos in vacuo e secos através de azeótropo com tolueno para dar o composto do titulo (72 mg) como um sólido cinzento. (LC/MS: Rt 2,70, [M+H]+ 428,04). 206 136Β. Síntese de N-{3-[6-etoxi-5-(morfolina-4-carbonil)-1H-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-2,6-difluoro-benzamida
Uma mistura de ácido 2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1H-pirazol-3-il]-6-etoxi-lH-benzimidazol-5-carboxilico (50 mg, 0,12 mmol), morfolina (13 pL, 0,14 mmol), EDC (29 mg, 0,15 mmol) e HOBt (21 mg, 0,15 mmol) em DMF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h. A mistura de reação foi reduzida in vácuo e o resíduo foi repartido entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCg) e reduzida in vacuo para dar o composto do título (29 mg) como um sólido cinzento. (LC/MS: Rt 2,56, [M+H]+ 497,03). EXEMPLO 137 (exemplo de referência) Síntese de 2, 6-difluoro-N-[3-(5-piperazin-l-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 137A. Síntese do éster terc-butílico do ácido 4—{2—[4 — (2,6 — difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-il}-piperazina-l-carboxílico
207 A uma mistura de 2,6-difluoro-N-[3-(5-formil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (50 mg, 0,14 mmol) em THF anidro (1,5 mL) com agitação à temperatura ambiente adicionou-se, sucessivamente, crivos moleculares de 3Á, éster terc-butilico do ácido piperazina-1-carboxílico (52 mg, 0,28 mmol) e boro-hidreto de triacetoxi de sódio (90 mg, 0,42 mmol). A mistura foi agitada durante 4 h, MeOH (3 mL) adicionado e, em seguida, a mistura foi reduzida in vacuo. O resíduo foi retomado em EtOAc, lavado com salmoura, seco (MgSOí) , reduzido in vacuo e, em seguida, purificado por meio de LC/MS preparativa para dar o composto do título (84 mg) como um óleo amarelo. (LC/MS: Rt 2,22, [M+H]+ 538,15) . il- 137B. Síntese de 2,6-difluoro-N-[3-(5-piperazin-l-ilmet lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
•F
Uma mistura de éster terc-butílico do ácido 4—{2—[4 — (2,6 — difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-ilmetil}-piperazina-l-carboxílico (84 mg), MeOH (3 mL) e solução saturada de HCl/EtOAc (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e, em seguida, reduzida in vacuo com mistura azeotrópica com tolueno para dar o composto do título (21 mg) como um sólido amarelo. (LC/MS: Rt 1, 60, [M+H] + 438,09) . EXEMPLO 138 Síntese de 2-fluoro-6-metoxi-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 208 138Α. Síntese do éster etílico do ácido 4-Nitro-lH-pirazol-3-carboxílico 208
N-N H
Cloreto de tionilo (3,8 mL, 52,5 mmol) foi adicionado cautelosamente a uma mistura agitada arrefecida em gelo de ácido 4-nitropirazol-3-carboxílico (7,5 g, 47,7 mmol) em EtOH (150 mL), a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e depois aquecida a refluxo durante 3 horas. A mistura de reação foi arrefecida, evaporada in vacuo e depois azeotropada com tolueno para dar o éster etilico do ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (8,8 g). 138B. Síntese do éster etílico do ácido 1-(4-metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico
A uma solução de éster etílico do ácido 4-nitro-lH-pirazol- 3- carboxí lico (8,8 g, 47,5 mmol) em MeCN (100 mL) foi adicionado K2C03 (7,9 g, 57,0 mmol) seguido por cloreto de 4- metoxibenzilo (7,1 mL, 52,3 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura foi evaporada in vacuo, o resíduo foi repartido entre ácido clorídrico aquoso a 2M e EtOAc e a porção orgânica foi lavada com solução aquosa de carbonato de hidrogénio de sódio saturado, seca (MgS04) e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAc-hexano (l:4)]para dar o éster etílico do ácido 209 1-(4-metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (11 g) como uma goma incolor. 138C. Síntese do ácido 1-(4-metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico
Uma mistura de éster etílico do ácido 1-(4-metoxi-benzil) -4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (15,9 g, 52 mmol) em NaOH aquoso a 2 M/MeOH (1:1, 400 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 14 h. Os materiais voláteis foram removidos in vacuo, o resíduo dissolvido em EtOAc (200 mL), água (100 mL) foi adicionada e a mistura levada a pH 3 com HC1 aquoso a 1M. As camadas foram separadas e a porção orgânica lavada com solução aquosa de carbonato de hidrogénio de sódio saturado. EtOAc foi adicionado à camada aquosa a qual foi acidificada até pH 3-4, e as porções orgânicas combinadas foram secas (MgS04) e reduzidas in vacuo para dar o ácido 1-(4-metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (13 g, 86%) como um sólido branco. (LC/MS: Rt 2,63, [M+H]+ 292).
138D. Síntese de 4-(3,4-dinitro-benzil)-morfolina A uma solução de 3,4-dinitro-fenil)-morfolin-4-il-metanona (Exemplo 94A) (4,5 g, 16 mmol) em THF anidro (50 mL) a 0 °C
foi adicionado borohidreto de sódio (1,2 g, 32 mmol) seguido por adição gota a gota de eterato dietílico de trifluoreto de boro (4 mL, 32 mmol) e a mistura foi agitada a 0 °C sob uma atmosfera de azoto durante 2,5 h. MeOH seco foi adicionado cuidadosamente até a evolução de gás ter cessado, e a mistura foi reduzida in vacuo. O resíduo foi repartido entre EtOAc e salmoura e a porção orgânica foi seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar um sólido amarelo-alaranjado, que foi recristalizado a partir de MeOH 210 para dar 4-(3,4-dinitro-benzil)-morfolina (3,5 g, 82%) como um sólido amarelo. (LC/MS: Rt 1,52, [M+H]+ 268) . 138E. Síntese de 4-morfolin-4-ilmetil-benzeno-1,2-diamina A uma mistura de 4-(3,4-dinitro-benzil)-morfolina (2,5 g, 9,3 mmol) , pó de Fe (5,2 g, 93 mmol) e FeSCg. 7H20 (1,3 g, 4,6 mmol) foi adicionado com 1,4-dioxano: água (5:1, 60mL). A mistura foi submetida a refluxo durante 3 h, filtrada através de celite, lavando-se com MeOH, e reduziu-se in vacuo de azeotropia com tolueno. EtOAc (100 mL) foi adicionado e o material insolúvel removido por filtração. O filtrado foi reduzido in vacuo para dar 4-morfolin-4-ilmetil-benzeno-1,2-diamina como um sólido castanho escuro (1,4 g, 73%). (LC/MS: Rt 0,40, sem ionização). 138F, Síntese de 2-[1-(4-metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-il]-5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol
Uma mistura de 4-morfolin-4-ilmetil-benzeno-1,2-diamina (2,5 g, 12 mmol), ácido 1-(4-metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-carboxí lico (2,91 g, 10 mmol), EDC (2,3 g, 12 mmol) e HOBt (1,62 g, 12 mmol) em DMF seco (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi reduzida in vacuo, o resíduo foi dividido entre EtOAc (100 mL) e água (50 mL) e a porção orgânica lavada com carbonato de hidrogénio de sódio aquoso saturado, seca (MgSOí) e reduzida in vacuo. O resíduo foi dissolvido em AcOH (70 mL) e aquecido a refluxo durante 3 h. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna flash [SiC>2, MeOH: DCM (5:95)] para se obter 2— [1— (4 — metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-il]-5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol (2 g, 37%) como uma espuma amarela. (LC/MS: Rt 1,91, [M+H]+ 449). 211 138G. Síntese de 1-(4-metoxi-benzil)-3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina A uma mistura de 2-[1-(4-metoxi-benzil)-4-nitro-lH-pirazol-3-il]-5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol (1,6 g, 3,57
mmol) , pó de Fe (2 g, 35 mmol) e FeS04.7H20 (0,496 g, 1,78 mmol) foi adicionado 1,4-dioxano: água (5: 1, 120 mL) . A mistura foi submetida a refluxo durante 3 h, filtrada através de celite, lavando-se com MeOH, e reduziu-se in vacuo de azeotropia com tolueno. EtOAc (100 mL) foi adicionado e o material insolúvel removido por filtração. O filtrado foi reduzido in vacuo para dar l-(4-metoxi-benzil)-3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il-amina como um sólido castanho escuro (1,4 g, 94%). (LC/MS: Rt 1,72, [M+H]+ 419). 138H. Síntese de 2-fluoro-6-metoxi-N-[3-5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
O
Uma mistura do ácido 2-fluoro-6-metoxi-benzoico (20 mg, 0,12 mmol), 1-(4-metoxibenzil)-3-(5-morfo-lin-4 ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,12 mmol), EDC (116 mg, 0,14 mmol) e HOBt (81 mg, 0,14 mmol) foi agitada à temperatura ambiente em DMF (2 mL) durante 20 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo foi dividido entre EtOAc (5 mL) e água (2 mL) e a porção orgânica lavada com solução aquosa de carbonato de hidrogénio de sódio saturado, seca 212 (MgSC>4) e reduzida in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [SiCt, EtOAc] para dar 2-fluoro-6-metoxi-N-[1-(4-methoxibenzil)-3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida como um sólido branco (80 mg, 61%).
Uma mistura de 2-fluoro-6-metoxi-N-[1-(4-metoxi-benzil)-3-
(5-morfolin-4-ilmetil-lH- -benzimidazol-2 -il) -lH-pirazol-4- il]-benzamida (80 mg) e anisole (25 pL) em ácido trifluoroacético (1 mL) foi aquecida a 140 °C (100 W) durante 20 minutos num sintetizador de micro-ondas CEM
Discover™. A mistura de reação foi evaporada e, em seguida, azeotropada com tolueno (2x10 mL) . Éter dietílico (5 mL) foi adicionado ao material em bruto para se obter o sal trifluoroacetato de 2-flúor-6-metoxi-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (30 mg, 32%) como um sólido branco. (LC/MS: Rt 1,96, [M+H]+ 451) . EXEMPLO 139 Síntese de N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-trifluorometoxi-benzamida
O composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 138F, mas utilizando ácido 2-trifluorometoxi-benzoico em vez de ácido 2-flúor-6-metoxi-benzoico e usando o 213 procedimento a seguir para a desproteção do substituinte benzilo para-metoxi do anel de pirazol.
Uma mistura de N-[1-(4-metoxi-benzil)-3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il] -2-trifluorometoxi-benzamida (50 mg) e anisole (25 pL) em ácido trifluoroacético (1 mL) foi aquecida a 140 °C (100 W) durante 20 minutos num sintetizador de micro-ondas CEM Discover™. A mistura de reação foi evaporada e, em seguida, azeotropada com tolueno (2x10 mL). Ao material em bruto foi adicionado EtOAc (5 mL) e a mistura neutralizada com solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio saturado. A porção orgânica foi lavada com água, seca (MgSCq) e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, CH2Cl2-MeOH (100:0— 95:5)]para dar origem a N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-trifluorometoxi-benzamida (12 mg) como um sólido branco. (LC/MS: Rt 2,06, [M+H]+ 487). EXEMPLO 140 Síntese de [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)- l-H-pirazol-4-il ] -amida do ácido benzo[c ]isoxazol-3- carboxílico 140A. Síntese de 5-morfolin-4-ilmetil-2- (4-nitro-lH- pirazol-3-il)lH-benzimidazol
Uma mistura de 4-morfolin-4-ilmetil-benzeno-l,2-diamina (2,30 g, 11,1 mmol), ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (1,57 g, 10,0 mmol), EDC (2,13 g, 11,1 mmol) e HOBt (1,50 g, 11,1 mmol) em DMF seco (25 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo bruto dissolvido em AcOH (40 mL) e foi aquecida a 214 refluxo durante 3 h. 0 solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna, com eluição com 0-20% de MeOH em EtOAc para dar origem a 5-morfolin-4-ilmetil-2-(4-nitro-lH-pirazol-3-il) 1H-benzimidazol na forma de um sólido amarelo. (1.0 g, 61%) . (LC/MS: Rt 1,83, [M+H]+ 329). 140B. Síntese de 3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-ilamina
Paládio sobre carbono (10%, 0,08 g) foi adicionado a uma solução de 5-morfolin-4-ilmetil-2-(4-nitro-lH-pirazol-3-il)-lH-benzimidazol (0,82 g, 2,5 mmol) em DMF (30 mL) sob uma atmosfera de azoto. A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 4 horas e em seguida filtrada através de celite, lavando com metanol. O filtrado foi concentrado in vacuo para dar 3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il-amina como um sólido castanho (530 mg, 71%). (LC/MS: Rt 1,94, [M+H]+ 299). 140C. Síntese de [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-l-H-pirazol-4-il]-amida do ácido benzo[c]isoxazol-3-carboxílico
Uma mistura de ácido benzo[c]isoxazol-3-carboxílico (46 mg, 0,28 mmol), 3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (100 mg, 0,33 mmol), EDC (64 mg, 0,33 mmol) e HOBt (45 mg, 0,33 mmol) foi agitada à temperatura 215 ambiente em DMF (2,5 mL) durante 20 h. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo foi dividido entre EtOAc (5 mL) e água (2 mL), a porção orgânica foi lavada com solução aquosa de carbonato de hidrogénio de sódio saturado, seca (MgS04) e reduzida in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna flash [SÍO2, EtOAc-MeOH (100:0-90:10)] para se obter a [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-l-H-pirazol-4-il]-amida do ácido benzo[c]isoxazol-3-carboxílico na forma de um sólido branco (40 mg, 32%). (LC/MS: Rt 2,13, [M+H]+ 444). EXEMPLO 141 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(4-bromo-6-trifluorometil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluorobenzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (520 mg, 1,96 mmol) (Exemplo 16D), 3-bromo-5-trifluorometil-1,2-benzenodiamina (500 mg, 1,96 mmol), EDC (413 mg, 2,15 mmol) e HOBt (290 mg, 2,15 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi repartido entre EtOAc e salmoura e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e evaporada. O intermediário amida foi submetido a cromatografia utilizando EtOAc-PE (1:4— 1:0). O intermediário de amida (271 mg), (LC/MS: Rt 3,31, [M+H]+ 505), foi dissolvido em AcOH (3 mL) e depois aqueceu-se ao refluxo durante 1 h. A mistura de reação foi deixada arrefecer, altura em que um sólido cristalizado, 216 que foi filtrado, lavado com PE e seco para dar o composto do titulo (50 mg). (LC/MS: Rt 3,42, [M+H]+ 486,488). EXEMPLO 142 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-5-fluoro-2-metoxi-benzamida 142A. Síntese de 5,6-dimetoxi-2-(4-nitro-lH-pilazol-3-il)-lH-benzimidazol A uma solução de EDC (4,81 g, 25 mmol) , HOBt (3,40 g, 25 mmol) e trietilamina (4,67 g, 46 mmol) em DMF (100 mL) foi adicionado ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (3,63 g, 23,09 mmol) e 4,5-dimetoxi-benzeno-l,2-diamina, dicloridrato (5,06 g, 20,99 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido in vacuo e o sólido resultante repartido entre acetato de etilo (50 mL) e bicarbonato de sódio (50 mL). Um precipitado foi formado e removido por filtração. Este foi lavado com água seguido de éter dietílico e, em seguida, submetido a mistura azeotrópica com metanol e tolueno para produzir (2-amino-4,5-dimetoxi-fenil)-amida do ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (2,35 g, 36%). (2-amino-4,5-dimetoxi-fenil)-amida do ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (2,35 g, 7,65 mmol) foi dissolvida em ácido acético (150 mL) e submetida a refluxo a 140 °C durante 5 horas. A solução foi deixada a arrefecer e o solvente removido in vacuo. O sólido resultante foi partilhado entre acetato de etilo (25 mL) e salmoura (25 mL) . A camada orgânica foi separada, seca (MgS04) , filtrada e o solvente removido in vacuo para produzir 5,6-dimetoxi-2-(4-nitro-lH-pirazol-3-il)-lH-benzimidazol (2,08 g, 94%). 217 142Β. Síntese de 3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina
Uma mistura de 5,6-dimetoxi-2-(4-nitro-lH-pirazol-3-il)-1H-benzimidazol (2,08 g, 7,2 mmol) e 10% de paládio em carbono (200 mg) em etanol (150 mL) e DMF (50 mL) foi hidrogenada à temperatura ambiente e à pressão durante a noite. A mistura de reação foi filtrada através de celite e o solvente removido in vacuo. O sólido resultante foi submetido a destilação azeotrópica com metanol e tolueno e o solvente foi removido in vacuo. 0 material em bruto foi introduzido numa coluna em DCM, metanol, ácido acético, água (120:18:3:2)[DMAW120]seguido de 90 mL de diclorometano, metanol 18 mL, 3 mL de ácido acético, 2 mL de água (90:18:3:2) (DMAW90). As frações de produto foram combinadas e o solvente removido in vacuo para produzir 3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il-amina (~ 1 g, ~ 53%) . 142C. Síntese de N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-]-5-fluoro-2-metoxi-benzamida
A uma solução de EDC (44 mg, 0,23 mmol) e HOBt (31 mg, 0,23 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionada 3- (5, 6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,19 mmol) e ácido 5-fluoro-2-metoxi-benzoico (36 mg, 0,21 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido in vacuo e o sólido resultante repartido entre DCM (20 mL) e bicarbonato de sódio aquoso 218 saturado (20 mL) . Um precipitado foi formado, que foi removido por filtração e seco em estufa para se obter N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-5-fluoro-2-metoxi-benzamida (64 mg, 81%). (LC/MS: Rt 2,64, [M+H]+ 412) . EXEMPLO 143 (exemplo de referência) Síntese de 1-(2,6-difluoro-fenyl)-3-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-ureia
Uma mistura de 3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,19 mmol), 2,4 difluorofenil isocianato (31,4 mg, 0,20 mmol) e Et3N (0, 027 mL) em suspensão numa mistura de DMF e EtOH (5 mL) foi agitada a 70 °C durante lhe, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC prep para dar 1-(2,6-difluoro-fenil)-3-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-ureia como um sólido branco (11 mg). (LC/MS: Rt 2,10, [M+H]+ 415). EXEMPLO 144 (exemplo de referência) Síntese de 4-amino-N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-etoxi-benzamida
219
Uma mistura de 4-nitro-N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-etoxi-benzamida (115 mg) e 10% de Pd/C (20 mg) em EtOH (10 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada através de Celite e reduzida in vacuo para dar o composto do titulo (95 mg) . (LC/MS: Rt 2,11, [M+H]+ 423). EXEMPLOS 145-239
De acordo com os procedimentos descritos nos exemplos anteriores, modificados quando necessário, prepararam-se os compostos indicados na tabela 3. Na coluna intitulada "Método", o procedimento geral utilizado para preparar o composto é dado com referência a um exemplo ou procedimento anterior. Na coluna intitulada "Diferenças", estão listadas as principais diferenças entre o procedimento geral descrito no exemplo de referência e o procedimento específico usado para preparar o composto em questão.
Tabela 3
220
221
222
M*ís>á» LCMS 1 ·*§.$* ^Ai-ssk. í· ^ £ ^Ssyf 5 $ 5 . Nw' V Ϊ? # W £* 2? ΐ ·>'**.- Á .f $ >sí*\ í' \4 % V & v^"Vv '. M . H S'jC; $ Ã>Yí i Sss, í;SS j -oí m í""'\> <,*. J 1 ^ ..-< | Λ j· ijíV :)v S \„£' **' V > . '.x >' Sí ò W ^ st Si ϊ®·"-, s *í'i ! S.^iS'X« £s SÍ-'S \ m \ w. í f Jp / jr*^ j^~*í J? w «3 F% '»*** *C*f í^S, f Xj' rS %y «v >* %P :iif..: * ssrs j | &.: í§|: 1 Sí ' S-S·5' s w ; 4*g:;íSSS 1 £> íí? j — |M*Hfc. 4KS Γ :&i*N5«· «S «5* ?.*$ m \_ r> / f'S»X ^V° aJ V V-/* V £x. 1-3XS. s-ssrs ; :í:«-jssSs j &... j® i 4§S Z:M 223
Έ* Ν'. Esfelaters. TásteáS Sifsíéagss L€&! £ 1*5 ί— isf" ( ; / ?ί— s /”' \ <, fi f%J[ #; γ )r~ β~*" Η à ;CH K.. & *í .©£,' '40C p^Í*;51Sl R$,7,71 r> i r^: /-Cr f) V/ havj V\ ^ 0 H * álX. ί4&ί-7 i«W4jr 4?J. ΦΖψ: À» ’αΛ-Ο N Εχ. 34 PíssíRcasisi íssr iíàiír^jJss ca™ èísr 34«,S? '•12’ -<r oK« HS**\ J\A .Λ-**' Λ >7 ίΆ iS-fiS Η V«'· :·"' mm·· SOf- íf« U'*-jbydK.·· -·£<??! 4:¾5 2 2% $73* „Ρ 0 α γΟ η Μ E&v. ;'M. NfiS&ÍÍSS SSSpS? 3;M jQ r^jp õ' ^ \ ir α ί$~ίί » Η E>: 24 JilsssSsiíras 222M 224 £κ Esírutu « LC&1S .*75*· ί'"1 ?'~ Ό' 0'^ ,,,.¾ •^»»· ·' $ Es> 24:: fJessfeLSTSá ·· rww.-íw ώ\Λ>'Λν 1,23 Ç Γΐ «*V Κ-Λ X-.V ν $ fcí $***$ Μ. Μ Èx2#í· ?-;en>y<?3 âe •j. íí ΐί¥-:: ji*#: Η •ώ ‘Ε*2.3Ϊ;· fiesíviaas 345.07 3yívT 1%' &m* , i 4 ' ϊ: Η ^y< J^J γ\λ Η J$í. \-.vw< <í & ^ ç M 8. Ev t*l2C A psmi ét»·. acsfo- S- : SH^síbsíss'-®- carK-íis-as 424,-5% ’ 0" s * ,sA..v..i ,V W4 iW .> f “ Jf-M· rw**. . § \w./ H / tf * u? v* :k .Es.: ,'MSS: A fssasr <5s soão 5- !«;«:- £<urS-i'-fS:r<S;2H· jxssEtt-S-í Garfesslsss: - Hs? = .3.06 ?Μ* Λ ' ο "Λ . ? .,,. .( X í y y0 y·* Λ, s >k s¥ . \ ·?' V~\J # Λ..../ H· Í5 A 'Λ !Í ,;.«- .wt £.<. vi2C T&yHfr = Φ53 ": Slr'= ' 2 ./7§ 1SS* ^w / ** , 'r' (A.J yy ,?. tf '~VJ « t >~Λ. >S é £ X •X. s ·$* S* E> ttt- ^¾¾ ·=. $ £> 225
Esc. m. Estrtstera Métoda diferenças LCMS jsar /V"^v 1 } / ,1 £$*$ ijT *jgp /^'' fcx, 14Ζϋ Usas&s HGAi esn vez ée :ΗΟ®ϊ Processado sâravés >áe E-OAc e ^iaHOCv sç, Resmtsfeste a ssrtà ds MsOH ‘ P+H]+ 45 Si Z./S pèkxid bâséEQ} \ 1 .o-. 0^*f* H~/*\ v ír ^ * fc35. 144?ϋ - P+H]+ 45* Si S.d? |ífièfed® asssê&so} SM* VA r\ Q^X r^L%* x M^N H ti Εκ. 142C iASÍSrSíSS: csísísísSo· Οδ&ΐ separada e píMteada :p®r SKsmsts^rafs em KsSssa P#i]4 432 SÍ 2,59 ^snássste emmsa} 1&5* ?yjf r\ *a í ? j Ex. 1420 - P+HJ+ 435 Ri 2.15 pèfeds scíSs®) 1®§* 1 E* 142C PíSjâReasfc per LCMS ΡΐΗ]+ 473 Si 2.21 ifrièiísáo· xsMdd) is?·* Γ o«W " i f\ Y Es 1420 Osssssds sxsÃecsds DC&1 separada e psrifcsda jssr srsraatsgrsfís srçj ss&ssa P*H]+ 543 Ri 2.51 pèkxfc scídssi 226
Ese. B* Esfrtrfura Metoda Diferenças LCMS /’-χ f' \Λ «V ' 1 Es. MSC - pí1+Hl+- 4®? Rí 174 Isiétsífe 3SSÍ®3] 78S* r% f" \A Λα O & <v ú â $ κ ..** $ E*. ÍIOC Ptó:í>C5>S-0· :pffi!· LLS1S" P*H|+ 449 Rí 2.06 pèfeâ» asssseí "SS&Í" ,Jh ju HJ< ίϊ è O fc*. Í425J iSílsfers sfe reaçâ» asíksfersada s $S$3 3 ^sHGOj asjiíass saííírssês. Preslpjíafe psssfâsasfe !»?<Í«iiÉ!p^ em ©sílsís P+HJ* 51® Rí 2.7? pétíKfe assfes) Aa tP\U> fjf t ! «''V >jj 3 fl* Ϊ £x. ':4ííC SB!?! ÍÍSt®?l€ÍSÍ© a^isoss. spíhsksso «rsmsísgraf:® ero «®taa segskài sfe tesas p-^Γ 4SS Rí 7.77 pèfeáe adsSss) 192 (° vCTi 1? y>-2 V" :Hl £s. 742C Sfefesra sfe rsaqse ssS®®!5®Sa ÇSÍ3 3 gsls s MSHCO* assíss© saferssfc. PfSSípsfeíS pLír&aá© ps-í ©ríMJiaísgrsísa s?n ©ates P+HJ+ 4S3 Rí 2.05 pétsés 227 Εχ. Η» Estrutura Mfifeíto Diferenças LCMS 793 ο ι^να λ| *γ\Μ é ι% '8'' E*. í4ísC Sbki írstsoieoí® 3ÇÍÍS«3, PiSríiSSSO p®f srorns&ígr-afss 8SS3 SOÍ1K53 ρ+Η|+ sse :ΗΪ t,93 (:01 è5 ÍXfcS sctdsso) r> ί», pA ,k 1 ί .1 w ΚΛ η %λ r'N / Ρ & |™Ι < .Μ & Μ fcx. S«ÊU Mssisiirs ds rsaoào assssKirsSa ^>ís a gsãa s íSisHGOj asp-nso satssraâõ, iPfSSípsiSÍO jss^teàsfô por S^í-ítI stogfsfs ar? £>2^rsS P+HJ+ 437 Rí 2J3 pêtssd» aerdsco) ξϊ& Γ% .,-^J à %Α ί "* *€ Τ / .¾ ?S- || fcX. S42U Tílsissra de reação sdkssíiads ^»ts :a gsía s JsisHGOj açooss saibras®. iPrespàts çtíffcado por SÍO^iatSSgfSiiiS SOI eSfiíSSS P+HJ+ 475 Rs 2..2S psísxts ad&ss} Γ $ $ Γ::ίΚ·5 „>* f*y*v Ai vH-iK * #i 8 Ex. Í42C &1síssrs de reação adssksnada gota a gaia s ífáHCOj sçòksso sairsrsds-Prespats pussfcaéo fsaar crornstcçraõs soí ©SlUnS ;:M+:H]+ SÍ7 m 2,sõ ps-isdo asÈSss) *£. (V Mistísra de reação adksffresda $síb a gsta 3 JSiáHCCv as®nasQ sMaé. P+H3* mt •^τ+ Ha (tf â IA Jf £x. 742C Prarspíato çiíífesáo por ©somaBasprafia sor ©otea, ssgosá* de SJJ&fS Ht r.s; psbods aeÈfeo) 228 Εκ. Estrutura Métade Diferenças LC«l:S tss o <h?«<v !<r(f 1 t>: 142S SíSsiara de resoss as&stee&E gota s §s4a a íáaHCOj a^isss® saissrsdo. p«e5.%âaas jhbsí ssaáss ;pssr císííistsígirsísa eas! sstes Ρ-+Ή3-Ϊ- 476 í?í 2,15 {íSÍSKSS&í 3S:(áS50) % Ύ SíJ aae k™\ o h>: ;4iXJ RspadMs esstee Es.OA-c e i^isHCSj ssí. fcuíã® &S 5yg3J5«SS forssi savsdos ssíh S3S!T!0íírS S psastisaSse jssr LGMS :prsp P4H]4 3®S,SS E, -ξ ;53 pèísáo scsSe>3} ZSÍ O ^ ;?* N H t* ;*x: Rspasisás? ereire EíOAos^siHCevsa-í Eráâs? os or^áossss íoraoi â^ssãss s«n ss&ríotíía s psiaíjssSos pai LGMS ;p?sp p*h]4 m®7 Rí 2.13 pêíxsêo spíSs&s} '20? £θ' BNl /** „-'\J « n H Is, Γ o Yt H C N H E.x. 140C RSp$!3.5SS SiSre EíOAcs^sHCO-sat Eráss os oogassss ísrsoí ί3ΐ®3»ϊ s«n sáms s pisrsísadss çar Cíffiííisisígísisa ®!5! eaMsa |'S5Ui eM&a Eta^-MsOH í'1SS:&-S-kS-S)} P4H]4 4?$,§4 Sí ÍM (:Tíáit2*3& 2XÂ2 r\> < ,ÁÉ N H fcx. S4SKJ Kessstido sstrs EiaAoe?4aH€0,s«l Eoíso as OrgSSXSaS forsar svassss «c-fn SS.íí^PUía S psa^kasfcss· p®r eíowsats^rsSa «sn oíSsíís 14¾½ eS-isasfc EtQAo-yeQH ííSS:©-SS:2S>] P4H]4 4SS.SS Hl Ί,ΐ?ΐ pétsdo sssSsa) 229 Εκ. Η* Estrutura Msteda Qiferençss LCM:S 203 Εκ. 154SC ríassites eí5í?e iJ5JS>l e S4hHC£3j saí. sa^Mess setesâss *· vací®. e píHsffscassots ps? sj-oífiatagirsíss sei estas 12¾ etete BQto^eQH Í1SS:©· 5£?:'2SS}| fM f:H] * 4-Τ.δδ iRi ÍS2 testes SBK&S®) 2-34 0 JH& Ex„ 14SG· Ksparis-So cns MM e MaHCO» saí. Bsgissisea jetestes m vscíss. e ptefte-áss psr '«jsmaicgjate ®s» cates 1¾¾ sstete P+iHf 4δδ,®? m im ims-.oús s«ite®j 2S5 θ> ó V"$ ^ C vN: í Ex. M8C islístars Pa reaçao· íeéiítes ss vs®® e asesa W r>-Liste tes-Ss. Preapíaífe tastasí® resa^tessb steçãs e pcstesas çc<; síCOTalSi-giraSa s?íi «atoa |S&· etete EíOAe-SffeS^ 02S:0-SS:2S}] pitei]-*· 443JS :R í 2 Ss® te^síís ateSc®} 23® O '1^5 H *C^T / y»N Ϊ-Ν 0 V“W H < M H M Ex. 14SG ííís.íiírs sss ísa^sas ísfeite as vadb s agssa p ai L) a® farteis. Pfe®$Áaás fcmisês issd&tassè sesçãs s pssrtesS® psr aswiaí-sgíafss em estes |SD* stete EíOÃ&&ís0H P®:^SS;23}] P+HJ+ 40 J3 iRs 2J3 teeíssSo atesa) 230 Εκ. W Estrutura Mêtods DifereRças LCÍS5 287 J i ^ / %< 41 V®í M *1 V" f\4 v*k Xas/ * « ri< " *j: #* Ex, 14¾ Mísíííís 3s íssqas jsSsasSs ss vasa» e ági.® (2 ssij aáksffisaéa, Fssclspèifác· fofsis-ào ssoãssfe SSfe -SiiCÇSE s psssffa«í& p» ©ΓΕ»η®ο§!»58 «rs ©stoa psQ~ áMs EtaAs^fsOH {mS-SS:2&)] sst ssgakia exi «ates s£ »*- ρ>ο&-MsOH SSM, «HS, m zm P*H]+ 495, Ή Ri 2,25 {rosbKks assfes) 2SS & w/ N C?' y % /~ ti %«'** M Ex. 14SC SílIStSXa SS JSSÇSS· jedsasás ss vasa® s s-Sisa P ssaL) sAisKsaáa. Prespiaés fcsssHids ?e«s4Pkt ssb s ííssáss e Si£&Srí£ÍS3® 3* eístrisís^ra-fss arc «tea 1¾¾ eSa&s&s EiOAs-PeOH í1SS:&m2Sl Sejxss sspasstè® 8!5&a EíCSAs s NsHCOj ssl GTgájsjsssíSísgfea {sSS!iiSK.«a) S SSSS PgSG^s sk&sks&ss s!s vassss. P*H|+ 545,83 Si 2,24 pái©8» ®b:kS®s) 289 ím%J vom o jpl Ή H Es HS€ MiSíiííS SiS ÍS35SS5 3®áí£sds ίίϊ vasés s ags.® p siL) aáksffisaáa, PiSB^sèaáo ftxwaáo ΓΒδΦ&ίίΕ sofe ffiHSçãS s ss&sns&S® a" ssriá^rafís tm sstoa piO,. sksjk&s EíOÀc-:MVdh 08S;S-SS:2S‘í]: âç&ss repstsss eíSfe EíOAo s iisHCq, sai. Cifsíssas Imsâos Psííísxís) s esx» PgSOJe fesfesEsSos ss VSSii®. P+SF 457,8¾ S. 2.'7 {aieioási SSXSSS·) 231
Ex Ns. Estustors Método Diferenças LCMS F Π f ? W o H * V H Ex. Í4SG Síissíiirs ob íeaça® reSissSs ss vasco e égvs (2 inL; iSSSfflSSSSSfe. Eresptasfe fooaad® íessakSoss* srasças s piMissés :psf síffísafegrsSa era· sotas 5SS, éSfeta EÍCÀC-&ÍÔSDH -íec-efe era ssSíss ^Η2^ίΟίωΜ3Η SCirtSí)]: :p+H]+ SSS.Sis :R-, 2JS pSÍSSfe acsfês®} m r> ,^h^j o Vf H v*r H, Ex. H3C WspajMsssáís SJOsí e àgsis. or^vbss «Ktasos® ss varas». S^srassâo a •anirriTst cursiva era gritas ;[SsCv stasá® ESQA-c-MeOH eai ssgííids rejsartsads· eei?e EíOfe e NaHCGg sal. Organsísisvsls 5sí*sisjsís5| sesss P§S04> s reiksidss íís veem p+Hf 484,84 Pt 2.14 pètedo ass&ss) ZtZ rC? H r\~H Q gψ, C -H tx. S40&; Esfera Oa raeçsss íe&ssda fe tfsoíis. e psríssSs pSSf SKfsra^.sgfafts sssi osSirss ΙΓΒΐΟ,., eisssrafe EíOÍteJeGH s e g a sás Se osiesa 54Ή,.-ÍE>OAc4v5eOiH ílèDS mm sá 2S}| P+H]-í- 448,SS «: 1,86 ^rastosfc sotdiss} 213* '^X> & ** Ex. ® Kre;-ars-'ía hssjkís áeta 4- ffesss-2-msíoíBDsresosss era vez da ásita 2,§-di^febarszèbo, PiMk;sés ic-ssr fc^astaca® com tósfer plH]f 352,05 :S.t 3.85 pètsxfe .scsfeci 2 : Βί- Κ EsfeiJÍHfà: ííl-éto-d-o DífaeíV^s LCM-S' jÇ.^ ^ o )r% H H :£χ. $4-3· .· 1^4-Hj* 413 R< 2.45 irasíssSa: acs&Of * i ^¾¾^¾. Λ^ίΝ!/,ΰ·ν Q^» „ <y V"4Í /"» ê >i M e *n fr jfeMJ* 43.K hí 2 ^eJOtÍG S^Q^íto* 256' '«3 ,, í f^V0' j < y . í* \s,^k t ~*i s-r-'„/ « «V “ 0 ,--¾ >li e r"í N 4* $$ gfclifZS E:,fci ,' ^i-SSÍj-iS-·- CS ^55-5:5-¾¾ Ct ç-sssàa -ás-ic essj ís>&sí4, ss Ts-bes ií P5j4-H]-f- S5® Ri 2 32 {PíêSíCS-C· SC CSC 5 ::i&7 : r> - c ^Í>L J rV\ o M, H. <v >-íí·· 2’ V_«?’ H Q «1 *L ^ 44 H fc\. 545X1· Psl+H]*· 471 K> 2 iS íiraéísás as síssmí '256 xA. 5' 0 O, ,-Φ <T W K CgW '#·' n £:>:..· 54:50 |M*Hj+ 415 m -tsfy íínèlos» ϋ esc:- 25§ %h «fWXTO H £s. ϊ3&Ρ ss« .ss-gssàa· Ex. *23 |M«i]+3Sf Rí 5.S6 ímâtoás ®2:jSS®| 233
Ex. W. Estrutura Ííista-díi Biíersrsças LCMS \pH ® MH H Ex. Í3SF; s arei: segsíiáa Ex. Í3S P#4]+4®7 Sí 2,4® mz&âs .assífc®} 221 y^ O'^ Λ-ííC. Er -4®C P*H]+4SS :Ri 2 St iriSSCsiS aStíákíS) 222 Và^ &Á.^ u m H Ex. Í4SC P +H1 r4õ2· K: 2.¾ {íB^SSífe ssskÈiesiJ '££& *^ζΐΐ t*. ;4ík- P#i]*4S? H.í i.Ví pèísrás .sssSks) 224 ® 'm K^O H Er ;40C P+HJ+4SS m 2,23 PèSsás ass^ss) 234 Εϊ. JSi*. ÉA^ia;' Í3iitejs^çáé LC^S 225 $Kr ° fJH yy<xy^f% h^-n S^v M Sx. ?4§C [Μ+Η']+4δΤ Et 2JS pètsás ãO&CC.Ji XLx ôVi X“·' ,Λ X h~\ A X X o H HX S&K&GS^ •ti!.'!. . 0’ X tlNvX ^'‘Χί#5' Ex. >.4·3€ Et 2,07 SSXSíÇSJí 22S Λ N^M 9 Λ*Λ ** s#t «kMA*1 O &« Iplpiãli ?3í 22£ r ¥ *. >HV c<^ ;« ΤΎΧ'Χ «N*N XkX *-ν^ H &::$4§£i P>è#H*S2 Rí -2.01 p “lí-ÍNl· SCS^S^í· 235 Ε*. ít. Esctrateifa Mèto-da Diferenças LOãS 23=2= ύ^ΗΗ Es., HSC ΡΐΗ]*4®5 Ri 2.S3 {ftSêssás assSKKS) 235 çro H Ex. HSG P*H]-t4SS H' 2, /3 Pèksds asids®) 232 Ovi ^^y.íSHi 0 «» HM | Ξ>: 54S€ UÍSíSSS-SS ?ii- tía©-feri gíKSRS J3K5®náS «8® maísssS ds sssiids P+H]+S32 Ht 2.53 pè^sác· aSÈ&£3$ 233 ^ # \. *!* §L . ô yx u MH H: Es., HSC P+H]:-t-4SS pSKX&S assssss) 234 #"9 Xás» m·;^, °^*#4 fAj* γ'^τ^Μ^ ιH-V ^ tt E>: ;+3>C P+H3+4S3 Ri 2. 52 pèístís· sssSffi®) 236
S6M*. . È&tftítiáirâ íáfitode LO»1S 235 CL j * Q J O" ty&S NH *\J* J'”v^ ^ ^ --Yjí^ xSi,»e N £x ' 4ΞίΟ piE!]*-iS2 Ri 2. §3 XXi-s-io fc®S3ÇS| / V MX ^ Jtf* rV/Y^Y^O \Α^ k.,0 Μ Εκ }4SC p*Mj;+4S3 Ííi· 2.; 2? p^toác SC ®Ci\. ' J Jf-K ’^Χ,ίίΧ,, / o"* ^ f-ÍH ,ssí\ ^^Xss^’''·'^ "'""''x ΛΓ',-ν k_° íí E*. t4SC PrHI+^Sô Ri 2R3 í^éscíto SCKSCO} 2Ξ® F- ’1q XísM. ^ j -O H P:R-5j:+SSS ·: Ri 2,¾ SC-íiffiSJ '23® t 9 vs ''•yS^1 ...β:®χ:':, «H H EsvMSS; P:p}444S:: Rí 2;®? P&soíSo 3®S§5SSJ 237 Ε*. Ν '. Estrutura Métad® S;ífer«R>ças LCM 243 1.1 vf <»** ‘"X ι-ί'ΓΟ Es. t40C Usísií-se ΗΟΦ s!ji:xs ds ΡίΙΜΐ, Φ ptos&Sffl em &?«£© fes p-íísfficasfe {^r^amate po·? IC.432 ptspats&xs P+H|+ 575 K: 2;5t fmsfcséB ;baskx>) 2AÍ “^ί" Γ0'"Ο Es. 74SC EtssMs em Sfiílo tss Pítifcasss diretara-essíe jssr LC-ME prspsjstrss p-H+]-43§ St 2,57 pétssfc Sasss) 242” ,,, ?-$ ν,.χ Τ Μ gmit «*' f ***'**( Λ^ί,Ο^· |~Ι $. ES. t42>3 *s»a sís <eaç®s ssssHstssdà písdfkíads éifstsinsivte sai S®s. potó ísstáíKSS, ϊ:ΐ} P+Hj* 43: K: 2, >25 pét®ífe aB*Sc®} 243* SÍV. .™·;.·' I ] »**Y ***V* & Sx. 142S asstss® Sfi resçse S!!S5aS'!Sf=íÍtã áifetsisieráe «*» SSÍJ2 (CH2Gmte3«, 38:2) P*H]* 4)3 st 2 te pé&K&s 3S:SSSS) 244*· 2'«srs &J JL .« .8*** 0* fcf ,,Λ< jj-4 M E. :42C Písdísts íessfcts s®m ©resMad© SP®=. :ÍSP3ÍÍSÇ35S ds sass-toa ds ÍSSÇ®» S!5ífS CHjCtf s fJsHOOj SSÍ. .3^. PíkH]+ 4HS5 κ· 5,3® íris·',¢.-2¾ assfcs} 245* 1 ^ Ά. «Af* w··^ r* « Ex. í4_C Psxfcséíí «Síl: SíO. E&iijsés esm ÍCR&^leOH, SS*2 - 35:5) P+Hj* 5tS Pt 3,53 pèt®áb ss*Èbo) 245* CM? eAs*» Ex. ?42G Pisfstsad® em SíD; SKiSX&S ©Βίϊΐ: Sè:t^6:4> P*H]+ 455 St 2..S3 pétods aC:KS5SX>) 238
Ex. fr. .Esíríittifá: ^eísda: Difer&rsçsS iCJ^S 24?" í? * s"’ s> 1 ..-.X ·.·'· 4»·· *♦*»· t> «*· ». j: Si ™"f, 5 ·· . «S‘...... «·· N H rt Ea. 742-5 Tfsia^efí-í 3;c-kc®lí :ElOA©: «stsíe£ ás CHxClx. Rifálcãào ssa Sí3 e&siisá© •PS!Y: -C H*G s? &!sOH. ' S5.5í 475 Ei 2,72 -K Í3M-0Í ;24i*: XÍSiV i ê r-\ .1 ...** C5M* j *""£ V Λ/ * \ <V hei' · & M Ex 742C Mssííss <Se íssfis·: . -ssSsiíyréss&s s MsM5% sat. «*>· T^OxíSíiO .'ÊíiC^SS ,is®jns·, prs': 447 ES. 1.T.S iWi-eSoás «csícs; 24S* ^ π / N^dtíhí ..6 i- *' « y v~'\ J M f ‘-y w 0 £ v .H· Pfspsjsás ícíSc, 2-'-t^r^fteRzcto s«i vsr -áe -=e>s 2,5- ·5ί;ΐϊ·:-!·ο5·ϊ γεχι-ο HlífWlCSSS pó? crcí^3.1cg.“353 ?Í55^ íSsGv, 3.5 EtOAS' ' S'35«:-R :P5;í«3*-37f7 Ei 3 25 lí^pii.-SS ΐίβζ'Οϊ rsr 0'"* ,.-.=3>y..-Õ fV« Á J << ^ y^ vH >w» á h ^ < .S Ex. 142C Llsâa^SS-EíC&s íssís í> írstafnsfiío. E'iifs5sã>50 3*'3:··~3 í® LC.-MS ps?f.®r.=.;\ís 415 Eí = 1.S |!asíS3é5 251 r·— ί i 1 -j vx.S>" o ** .KJ. 42 Λ /i · ►< - .«H* « :*i EÀA ^ Bteãf&sáa «a. SSJj iM . p+Hjf *5» Sí =2 Si ^fíiíiíxk. í:ks:K 25». , i J f$ y' nvw^ H· l ’ < ^sá' \ *íL· v O ¥* \ '---" >·· :Γ' :'r àt Ex 142C : Pwsfcsáo s?« S-fO- Si^cswomív -123 P+H]+ 432 7?t =£23 - 1í5íS«fc sssSsfiíi 239 Εχ. Ν’. Estrutura Mstado Bífersrsfas ICMS 253 r> Ν«=\ .( rU £) ~ψ Εκ. t45C H«|S8®®B «SM! SiU?í! è NsHCOa s.sè. £>r^ãíss.«s reáiSEstes «r ¥SSUQ., PM^ssdo po» sratsratísgísJss ssr ssferig [SO, ftPiísás EíOAc-SsfeOH i«SmS4$ii:2S(Jí P*H]+ 455.07 m i m pet&so aatès») 2S4 -Γ? fT jÇ-ftm :N Ex. t4SSU ííiíSli&S SS ÍSSjÇSS ssáísárÈa ás vasa» s :ag:ií3 ρ mL) 4'ák»s!S'â:s, Precsj&sá® ferma-á» E®C«§SK&> SSS SSSCÇSS a jsLSíítsasSs· poí cswtsicgrafs efs coksrss fSKX. sfeds EsC5te-Sí&OH |tS0:5^5:23|S: p#i]+ StSJt m 2,24 psíaxss astfes) 255 avp ^Nsl· H Εκ. ΉδΟ iSiíSS.íiírS SÍS 5S3Ç3S :5®&SSSÈS 555 ¥;S5KÍ3 S SgTÍS $2 OTL) 3iStS5S5?535áS, Rsssptssis fasmatâa te&tâsàá® safe sssssças s pífstssSs SKSfSiatBgfSfíS S551 sssksvs [S5O,. efeissás Etas^teQH {m8-8S:2Sl P*E]+ sbsjs Et 2,43 ps&s!® assisa} 256 rv^t^ v^‘ Q'^m 4/tTA & Ex. 74SS «assas® && reaçao reáisÈáa m vasa® « S?gíia p ®JL) 35&®js.aáa. FíespSaés farraasiss resstekí sc-t ssssçãs s pspsaâ® ps? artmstpjrafis sm aatea |SiO„ efarnêo EiCë-&ffiOH (m&B&Sgi Ρ+Ή]+ 525,15 Ri 2,32 PsássÈ» assíã®} 257 fV* Λ Çi ry» ty*Á ’V fj|j· fC/tYY"! M Εκ. 140C K«SS5Í:SS3 S!SíS SJÍJSíl è NsHCOj; sal CSSPSSK» ÍK&SEKtes «s síssss. IRissÍKsds p®? srsfsatBgrsfia an ce&ssa [S5O,. Ms Eta^feQH pSS:S-S6:2S)]: P*H]+ 50è.12 Ri 2. >0 {Sf«NxíO asK&»> 240 Εχ. Ν
Estrutura ϋέΐαάο 25® Ο íuísj >> \ ^ Κ..^· Sífsr®n§as Rspêl^ssSsUCSt e MsHCOj sat. OfgsiíkKss rsássHdsss «5 LOãt P+H}* 47S.S2 Εχ. Í480
Psa^teS» pas srofnatssgirsísa sm. «ssiíjsa psGu etesÈs EK5Ac4síe0H :(mS-SS:2S$S Eí 2,2® pstes asMsís} 25®
UssBáo âssáss SÍÍSStKií.S- Sj ' Fte,áte*3- SSíbíSX.feS ©S!Í1S? o Ss pSíSXÍS P+H]+ 444 «í t,/s P&oáss ®csSffi©|
25S C41 ftívsΛ *«4"
y^i
Ex. í4èC T?spS5SãsssKsTJES5 e INa^COj saí. QsSkksos íséíssd&s ss ημηβ. Pssdfàsaás :pa; ST^sísgrafia si?!: sstea fSsO-, staá® E>OA-:-5.-1«2H {«•S- mcím
P+MJ+ 47S Rí tss Péicés assises
Ex, Í48C k^attaAs UUí| a fJsHCOj saí. O^hssss faásssáss «í «asm ftefãcasfc» p® srofnaí&giraísa sin esíiiKa íSíOu sSííííkès EáDAs4sSe0H ÍÍ5®:S-M;ÍSJ]
Ρ+Ή3+ 5SS
Rt 2,22 países acsísss) 252
Ex. -:4§C
Heps&sfcess&e UÍM\ a NsHCO. saí. Oigãates ísásssáss SS MSffaa RiíríseasSa p® sramais^sfís es* cates :[SsOs eteaSs EíOAc^eCSH !ÍmS-SS:2Síj Rep®i3ted& :psr "Γ·"'”':3.\·Ώςχ5ίί5 ST: cotes fSsCv etóá® DMAW S2SÍSSJ; P+H]+ 45 í R3. 2,Zí pteás assÊssi 241 £*. Μ*. Estruíura $5s:lodo diferenças LCMS 253 0 k-*« Ex. I4SG í4e£®ntK&3 s^tre U5^¥! s NsHCO. ssi UígSSSCSS 5®5í£SSÍSS ÍÍ3 ^ãffi-is. PsjKfiead» pos SÍSTOalffifrsSa 8JR ssfes |SIQ., sSiíinás Είϋ«©^.1βυ« {^:S-SS:tS;| Ρ-ίΗΓ 452 R.' 2,17 petaSs èàSSSS} 2S4 1« 4-çero Ex. Í4SC íiSPSrSXSS δ!5Κ® iiSJSíi δ :NaHCOs saí. Qígss&ss ?®5ískfes ss vaom·. FíMkss&s p® oíwiaiografia «n sotas piQ, eistas ESSÀ^ÍsOH C1S&M$:2S® Ρ+ΗΓ 47S m Z2S paíosSc sciSica} 2S5 r\> 0r; «O-ÇO o Ex. 14BC Ηδ£ί5ίί$3& δίΐ&ίδ' è íisHCDu saí. QrgãskMs tatata ÍTí v&sna. Físsfesás p® 'Ι::-Ξ;:?.5·:'ΰ^;? 3;ΐ5 δίΤ: sotas píCU tatas EíOAshÍíIsCsH (SÍ>3:S'-S®:1S1 ρϋ!+ΗΓ 455 m 2M Péisss ssta®} 2ÊS ^-¾ «~*"*ν *JÊ í UT Ex. I4SG n apanhos sssvrs jua e NsHCOj saí. Oi^SRkíSS fsássHáss ífS varns. Fcsfesdiss ρ® císííísís^aís ah cota» PS>j etata EíOÂcPeSH CmS-®S:2SI Fepsrifksífc psr SKmaíggíáíS 5ί?Ί cota» [Ssí% etasfc scstí OUAW 248í12B| P««af 24® è: iSci&rffiíisíaíse 24Sífí:L, ítaata 2SmL âssá» aoètks Smi, ágss 2mL.j P+H|~ 487 Rí 2..5-¾ Pétafe aáss-a) 242
Estnrtura Método Diferenças LC&iS 2S7* Λ ® > 4 \ f _>·* 1 f « n v <& Es 142C Pissfcaáo ÇC? LCliS písparaJára P+íhr m Si 3.72 pèssás· JSS^Sf} 2ÕÇ' 0 1 ? t-4 F 0SS&. 142Ώ PiK&iséo jsef tÁjMS pfsfsrstsvs P+Hf 443 Si 3.35 toiai.oOs :C<8S?) 25®* í L JF «w A- ,.- & ^ ^ Es. 7420 Fa?sfss®a LCM 5 jsreçeraeiva [M*Hf 4S§ Si 2.3 ífT3SÍS.'áo ijssSaí)
Preparação do material de partida para o Exemplo 216: ácido 2-Metoxi-5-(4-metil-piperazin-l-sulfonil)-benzoico A uma solução de ácido 5-cloro-sulfonil-2-metoxi-benzoico (0,5 g, 1,99 mmol) em acetona (5 mL) foi adicionada N-metilpiperazina (0,219 g, 2,19 mmol) e trietilamina (0,33 mL, 2,3 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente. Após 2 horas, a mistura de reação foi filtrada e o sólido recolhido foi lavado com acetona, água e, em seguida, éter dietilico para produzir ácido 2-metoxi-5-( 4-metil-piperazina-l-sulfonil)-benzoico (150 mg, 24% ). ( LC/MS ( método acidico): Rt 0,34, [M+H]+ 315). EXEMPLO 270 Síntese de 1-(2,β-Difluorofenil)-N-[3-(5-Morfolin-4-ilmet il-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-urea
Uma mistura de 3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,16 mmol), 2,4 difluorofenil isocianato (26 mg, 0,16 mmol) e Et3N (0,024 mL) em suspensão numa mistura de tolueno (2 mL) e IPA (1 mL) foi agitada a 80 °C durante lhe, em seguida, diluiu-se com EtOAc. A mistura de reação foi lavada com água, em seguida salmoura, os orgânicos foram secos (MgS04) e reduzidos in vacuo. 0 residuo foi purificado por cromatografia em coluna flash [SÍO2, CH2Cl2-MeOH (90:10)] para originar 1-(2,6-difluorofenil)-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-ureia (AT7787) como um sólido incolor (30 mg, 39%). (LC/MS (método acídico): Rt 1,80, [M+H]+ 454). EXEMPLOS 271-278
De acordo com o procedimento descrito no Exemplo 270, prepararam-se os compostos indicados na tabela 4. 244
Tabela 4 Εκ. f$a. B:ife-í«-n$as. ta Ejfc· 24-¾ LCíáS ;Ijí: r"« |-ίΚ^ - , «-O I -ί,^ίί H N„ í ,ν Γ ô ^ss"1, i :w $£& . i- í ίι' [M*Hj- 4SS 5¾¾ W^MOM 'ItéMtàj·; .27'2· Γ'""'ο '•í í‘!*H ^ Μ ΉΓ^ Γ r.r-l y ,:·- N > ti w ''*** 0 w * %** W £<. 2?0 4¾^. Pr 2.0S {Mè&dta sks$ící$ :W%-' *v ., jf* >?sssv .^X. QsJi ♦, ^"V >A_>s ° ti N >* Εϊ 27ΰ ry-rHi~ m' Rtt>s& pSs&s-áfe âss§ss| ***&*& f o C#\ K^VR H 'íV"' n o^V"” V* ES..-273 [ísUHf+437 Sil; ?S 275’ „.v\·. í ο , ^,....4 ? ^ Λ* é ΐΓ'^,.Λ-δ η %. Γ «~Ό ir* Η ,>~g ί <3- ίΠν Ο < .Η Η Étfe:-'27S [M+Hr m : EtS. 2S IMéí^s^ka; 245
Ex Mo. Estruters Método Diferenças Í3 Ex. 24$ LOAS jC$ «r* V St. 2?S P-rH]+ 4S2 Sí2,S4P«Ss^s.sskÍssí§ 277 n r «Á w MH Ex. 27§ THF Jos iísaâo soms ssSsfeoís e s fsasão lot P+^p4S2 St 2, ÍS iMsssá» acxSco} 2?S Ex. 2TS PHF fel iisssfei esmo .ssPssie * s atavio f® rssssaes â am&tes&s % ítss | rn. 1S3 pèseb sdsês# 11 EXEMPLO 279 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-trans-1,4-aminociclohexanocarboxamida
279A: Synthesis of N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2- il)-lH-pirazol-4-il]-N-BOC-trans-1,4 aminociclohexanocarboxamida A uma suspensão de ácido BOC-trans-1, 4-carboxílico - sal de césio (95 mg, 0,25 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado DMF (1,9 pL, 0,025 mmol) seguido por cloreto de oxalilo (30 ul, 0,3 mmol). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 20 min. A mistura foi evaporada até à secura e, em 246 seguida, ressuspensa em THF (2 mL). Uma solução de 3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,17 mmol) e diisopropiletilamina (62 pL, 0,5 mmol) em THF (1 mL) foi então adicionada e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após 1 h, MeOH (1 mL) foi adicionado e a mistura foi repartida entre clorofórmio e carbonato de hidrogénio de sódio aquoso saturado, a (MgS04) e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [SÍO2, EtOAc] para se obter N-[3-(5,6-dimetoxi-lHbenzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-N-BOC-trans-1,4-aminociclo-hexano carboxamida, como um sólido branco (45 mg, 55%) . (LC/MS (método básico) : Rt 2,79 min, [M+H]+ 485). 279B: Síntese de N-[3-5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-trans-l,4-aminociclohexano carboxamida N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il] -N-BOC-trans-l,4-aminociclo-hexano carboxamida (45 mg, 0,093 mmol) e anisole (40 pL, 0,28 mmol) foram dissolvidos numa mistura de ácido trifluoroacético e diclorometano (1:2, 3 mL) . Após 3 h à temperatura ambiente, a mistura foi evaporada até à secura para dar N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-trans-l, 4 aminociclo-hexano carboxamida (AT8241) como um sólido branco (49 mg) . (LC/MS (método básico) : Rt 2,03 min, [M+H]+ 385) . EXEMPLO 280 (exemplo de referência) [3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido pirrolidin-2-carboxílico 247
Seguindo o procedimento estabelecido no Exemplo 279 deu o composto do título. [M+H]+ 357 t.a. 2,23 (método básico). EXEMPLO 281 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-rac-4-benzil-2-morfolina carboxamida
A uma suspensão de cloridrato do ácido rac-4-benzil-2-morfolinacarboxílico (77 mg, 0,30 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado DMF (2,0 pL, 0,025 mmol) seguido por cloreto de oxalilo (36 ul, 0,41 mmol). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 20 min. a mistura foi evaporada até à secura e, em seguida, ressuspensa em THF (2 mL) . Uma solução de 3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (60 mg, 0,2 mmol) e diisopropiletilamina (110 pL, 0,9 mmol) em THF (1 mL) foi então adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após 1 h, MeOH (1 mL) foi adicionado, a mistura foi concentrada e o resíduo purificado por meio de LC/MS preparativa para dar N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-rac-4-benzil-2-morfolinocarboxamida (AT8769) como um sólido branco (10 mg, 9%) . (LC/MS (método básico) : Rt 2,86 min, [M+H]+ 463) . 248 EXEMPLO 282 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-N-metil-D-fenilglicina amida
O composto foi preparado de uma maneira análoga a N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-5-fluoro-2-metoxi-benzamida (Exemplo 142C), mas utilizando N-BOC-N-metil-D-fenilglicina em vez de ácido 5-fluoro-2-metoxi-benzoico e HOAt em vez de HOBt. A mistura de reação em bruto foi repartida entre EtOAc e H20. A camada de EtOAc foi lavada com carbonato de hidrogénio de sódio aquoso saturado, salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo. 0 resíduo foi purificado por meio de LC/MS preparativa, em vez de cromatografia flash, para dar N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-N-BOC -N-metil-D- fenilglicina amida (10 mg, 10%) como um sólido branco. (LC/MS (base): Rt 3,07 min, [M+H]+ 507). A desproteção foi realizada de um modo análogo ao descrito no Exemplo 279B para dar N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-N-metil-D-fenilglicina (AT8768) como um sólido branco (10 mg) . (LC/MS (método básico) : Rt 2,54 min, [M+H]+ 407) . EXEMPLO 283 Síntese de 4-Morfolinil-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-l-H-pirazol-4-il]-urea 249
Uma mistura de 3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (70 mg, 0,23 mmol), cloreto de morfolina-4-carbonilo (80 0,7 mmol) e diisopropiletilamina (170 pL, 0,92 mmol) em THF (2 mL) foi agitada a 0 °C e, em seguida, deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 16 h. A reação foi extinta pela adição de NH3 aq. conc. e em seguida concentrou-se in vacuo. 0 residuo foi purificado por meio de LC/MS preparativa para dar 4-morfolinil-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-l-H-pirazol-4-il]-ureia como um sólido branco (35 mg) . (LC/MS (método básico) : Rt 2,28 min, [M-H+] ” 415) . EXEMPLO 284 (exemplo de referência) Síntese de 2,6-difluoro-N-[3-(4-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahidro-1,3,5-triaza~azulen-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 284A. Síntese do éster terc-butílico do ácido [7-etoxi-4,6-dioxo-5-(trifenil-lamda*5*-fosfanilidene)-heptil]carbâmico
Uma solução de (etoxicarbonilmetileno) trifenil fosforano (5,2 g, 14,91 mmoles), ácido 4-terc-butoxicarbonilamino-butírico (3,3 g, 16,26 mmoles), EDC (3,4 g, 17,89 mmoles) e DMAP (0,182 g, 1,49 mmol) em diclorometano foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A mistura de reação foi dividida entre EtOAc e água. A porção orgânica foi seca 250 (MgS04) , filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado [Biotage SP4, 40M, caudal 40mL/min, gradiente de 3:2 de EtOAc/gasolina para EtOAc]para se obter o éster terc-butílico do ácido [7-etoxi-4,6-dioxo-5-(trifenil-lambda*5*-fosfanilideno)-heptil]carbâmico como um sólido castanho claro (4,7 g, 59%). 250 284B. Síntese de éster de terc-butílico do ácido (7-etoxi-4,5,6-trioxo-heptil)-carbâmico
A uma solução de éster terc-butílico do ácido [7-etoxi-4,6-dioxo-5-(trifenil-lambda*5*-fosfanilideno)-heptil]carbâmico (4,7 g, 8,82 mmoles) em THF (75mL) e água (20 mL) foi adicionado Oxone™ (6,5 g, 10,58 mmoles). A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reação foi dividida entre EtOAc e água. A porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [silica, EtOAc: gasolina (1:2)] para dar éster de terc-butílico do ácido (7-etoxi-4,5,6-trioxo-heptil)-carbâmico como um óleo incolor (1,7 g, 67%) 284C. Síntese do éster metílico do ácido 5-(3-terc-butoxicarbonilamino-propil)-2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino-1-(tetrahidro-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il]-1H-imiadzol-4-carboxílico
ÇiHBOG
251
Uma solução de éster de terc-butílico do ácido (7-etoxi-4,5,6-trioxo-heptil)-carbâmico (1,7 g, 5,92 mmoles) e 2,6-difluoro-N-[3-formil-l-(tetra-hidro-piran-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (0,99 g, 2,96 mmoles) em amónia metanólica (2N, 20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi purificado [Biotage SP4, 40M, caudal 40mL/min, gradiente de 1:4 de EtOAc/gasolina a 4:1 de EtOAc/gasolina] para dar o éster metílico do ácido 5-(3-terc-butoxicarbonilamino-propil)-2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino-1-(tetrahidro-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il]-lH-imiadzol-4-carboxílico como um sólido amarelo pálido (320 mg, 18%) . (LC/MS: Rt 3,36, [M+H]+ 589, 16) . 284D. Síntese do ácido 5-(terc-butoxicarbonilamino-propil)-2-[4-(2,6-difluorobenzoilamino)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il]-lH-imidazol-4-carboxílico
ÍÍHSQC
A uma solução de éster metílico do ácido 5-(3-terc-butoxicarbonilamino-propil)-2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il]-lH-imidazol-4-carboxílico (320 mg, 0,544 mmoles) em metanol (10 mL) foi adicionada uma solução de NaOH (2N, 10 mL)) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. O metanol foi removido in vacuo. O resíduo foi dividido entre EtOAc e uma solução de ácido cítrico a 5%. A porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e evaporada in vacuo para dar o ácido 5-(terc- 252 butoxicarbonilamino-propil)-2-[4-(2,6- difluorobenzoilamino)-1-(tetrahidro-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il]-lH-imidazol-4-carboxílico como um sólido amarelo pálido (300 mg, 96%). (LC/MS: Rt 3,03, [M+H]+ 575,17). 284E. Síntese do ácido 5-(3-amino-propil)-2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-imidazol carboxílico
Uma solução de ácido 5-(terc-butoxicarbonilamino-propil)-2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-1-(tetra-hidro-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il]-lH-imidazol-4-carboxílico (300 mg, 0,52 mmoles) e anisole (114pL, 1,04 mmoles) em TFA (3 mL) foi aquecida a 100 °C (80W) num sintetizador de micro-ondas CEM discover durante 10 minutos. Tolueno (10 mL) foi adicionado e o solvente removido in vacuo para dar ácido 5-(3-amino-propil) -2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-ΙΗ-imidazol carboxílico como um sido amarelo/castanho sólido (200mg, 99%). (LC/MS: Rt 1,58, [M+H]+ 391,00). 284F. Síntese de 2,6-difluoro-N-[3-(4-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahidro-1,3,5-triaza-azulen-2-il-lH-pirazol-4-il] -benzamida
253 A uma solução agitada do ácido 5-(3-amino-propil)-2-[4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-imidazol carboxilico (200 mg, 0,51 mmol) em DMF (10 mL) e diclorometano (10 mL) foi adicionado EDC (118 mg, 0,62 mmoles) , HOBt (84 mg, 0,62 mmoles) e NEM (260 pL, 2,04 mmoles). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas e depois repartiu-se entre EtOAc e água. A porção orgânica foi seca (MgSCp) , filtrada e evaporada in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna flash [silica, 3% de MeOH em DCM a 5% a 10%] para dar 2, 6-difluoro-N-[3-(4-oxo-l, 4,5,6,7,8-hexa-hidro-l,3,5-triaza- azulen-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida como um sólido amarelo pálido (10 mg, 13%) . (LC/MS: Rt 1,93, [M+H] + 372, 99) . EXEMPLO 285 Síntese_de_2-amino-N- [3- (5-morfolin-4-ilmetil-lH- benzimidazol-2-il-)-lH-pirazol-4-il]-2-fenil-acetamida
Éster terc-butílico do ácido {[3-(5-Morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il-carbamoil]-fenil-metil}-carbâmico (Exemplo 232) (30 mg) foi dissolvido em 4M HCl/dioxano, e 3 mL de metanol e agitou-se à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar 2-amino-N-[3- (5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il-)-1H-pirazol-4-il]-2-fenil-acetamida (AT8162) como um sólido branco (20mg, 83%) . (LC/MS (método acídico) : Rt 2,39 min, [M+H]+ 432). 254 EXEMPLOS 286-287
Seguindo o procedimento descrito no Exemplo 285 prepararam-se os compostos indicados na tabela 5.
Tabela 5 ex. n° Estrutura Método Diferenças t.a Ex. 285 LCMS 236' vs v1 .,ί ,Μ ,ΟΜβ tir* H Ex. 285 Começou-se com o produto: do Ex. 245. HGÍ S3f. em EfOAc utiiizado em vez de HQídi&xano [M-s-HJ-s- 419 Rt 1.73 (Método acídico) fM+HJ-í- 410 287 6 ° MH O Ex. 285 Éster terc-butílico do ácido 4-í3-{5-morfofii-4-SmeiB-1 H-benzimíd azcti-2-Β}-1H- pÍf3Z0Mfl- carbamoifj-pipendtn-i -carboxiKco usado como mateilaf de palias Rt 2 Q3 (Método básico) ' exemoío de referência EXEMPLO 288 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-5-terc-butil-2-metoxi-benzamida 288A: Síntese do éster metílico do ácido 4-Nitro-lH- pirazol-3-carboxílico 0 composto foi preparado de um modo análogo ao éster etílico do ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (Exemplo 16A) , utilizando o ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (100 g, 636 mmol) , cloreto de tionilo (55,5 mL, 764 mL) e MeOH (750 mL), em vez de EtOH. O éster metílico do ácido 4-Nitro-lH-pirazolo-3-carboxílico foi obtido como um sólido 255 esbranquiçado (109 g, 100%). (LC/MS (método acídico): Rt 1,82 min, [M+H]+ 172) . 288B: Síntese do éster metílico do ácido 4-amino-lH- pirazol-3-carboxílico
Uma mistura de éster metílico do ácido 4-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico (10 g, 58 mmol) e 10% de paládio em carbono (500 mg) em etanol (150 mL) e DMF (30mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante a noite. A mistura de reação foi filtrada através de celite reduzida in vacuo e seca através de azeótropo com tolueno e metanol, para se obter o éster metílico do ácido 4- -amino- lH-pirazol-3- carboxilico sob a forma de um condensado âmbar escuro (9,35g) . (LC/MS (acídico): Rt 0 ,39 min, [M+H]+ 142) . 288C: Síntese do éster metílico do ácido 4-(5-fcerc-butil-2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico A uma solução de EDC (11,59 g, 60,7 mmol), HOBt (8,19 g, 60,7 mmol) e éster metílico do ácido 4-amino-lH-pirazol-3-carboxílico (7,84 g, 55,6 mmol) em DMF (lOOmL) foi adicionado ácido 5-terc-butil-2-metoxi-benzoico (10,52 g, 50,6 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo foi repartido entre EtOAc (500 mL) e salmoura (200 mL), a porção orgânica foi lavada com carbonato de hidrogénio de sódio aquoso saturado (200 mL), seca (MgS04) e reduzida in vacuo para se obter o éster metílico do ácido 4-(5-terc-butil-2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico como um sólido amarelo pálido (17,07 g, 93%). (LC/MS (método acídico): Rt 3,12 min, [M+H]+ 332). 256 288D: Síntese do éster metílico do ácido 4-(5-terc-butil-2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico 0 composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 16D, mas utilizando éster metálico do ácido 4-(5-terc-buti1-2-metoxibenzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (17,068 g) como material de partida. Ácido 4-(5-terc-butil-2-metoxibenzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxilico foi obtido sob a forma de um sólido castanho (-15,6 g, 95%) . (LC/MS (método acidico) : Rt 2,79 min, [M+H]+ 318) . 288E: Síntese de (2-amino-fenil)-amida do ácido 4-(5-fcerc-buti1-2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico A uma solução de EDC (720 mg, 3,8 mmol), HOBt (510 mg, 3,8 mmol) e ácido 4-(5-terc-butil-2-metoxi-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (1 g, 3,16 mmol) em DMF (25 mL) foi adicionada benzeno-1,2-diamina (375 mg, 3,5 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura foi reduzida in vacuo e o resíduo foi dividido entre EtOAc (50 mL) e salmoura (2x50 mL). 0 precipitado não dissolvido foi removido por filtração, as porções orgânicas foram lavadas com carbonato de hidrogénio de sódio aquoso saturado (50 mL) , secas (MgSCh) e reduzidas in vacuo para produzir (2-amino-fenil)-amida do ácido 4-(5-terc-butil-2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico na forma de um pó amarelo claro (848mg, 66%). (LC/MS (método acidico):
Rt 3, 21 min, [M+H]+ 408) . 288F: Síntese de N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-5-terc-buti1-2-metoxi-benzamida 257
A (2-amino-fenil)-amida do ácido 4-(5-terc-Butil-2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (848mg, 2,08 mmol) foi dissolvida em ácido acético (150 mL) e submetida a refluxo a 140 °C durante 3 horas. A solução foi deixada a arrefecer, o solvente foi removido in vacuo e o sólido resultante foi seco através de azeótropo com metanol e tolueno. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (Si02, EtOAc/gasolina (2:1)] para dar origem a N-[3-(lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-5-terc-butil-2-metoxi-benzamida (500 mg, 62% de rendimento) como um pó amarelo pálido. (LC/MS: Rt 3,44, [M+H]+ 390, método acidico) . EXEMPLO 289 Síntese_de_4- (2-cloro-5- (metiltio) -N- [3- (5-morfolin-4- ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida 289A: Síntese do éster metílico do ácido 4-(2-cloro-5-(metiltiol-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico O composto do título foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 288C, mas utilizando ácido 2-cloro-5-(metiltio)benzoico (15,34 g, 72,7 mmol) em vez de ácido 5-terc-butil-2-metoxi-benzoico. O produto foi obtido como um sólido bege contendo éster metílico do ácido 4- (2-cloro-5-(metiltio)-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico como componente principal (25 g). (LC/MS (método acidico): Rt 2,78, [M+H]+ 325, 94) . 258 258 289Β Síntese do ácido_4-(2-cloro-5-(metiltio)- benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico 0 composto foi preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 16D, mas utilizando éster metílico do ácido 4-(2-cloro-5-(metiltio)-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (11,8 g) como o éster de partida. Isto deu origem ao ácido 4-(2-cloro-5-(metiltio)-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico como um sólido bege (5,82 g) . (LC/MS (método acídico) : Rt 2,46, [M+H]+ 311,99) . 289C: Síntese de 4-(2-cloro-5-(metiltio)-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida
······
Uma mistura de ácido 4-(2-cloro-5-(metiltio)-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (2 g, 6,43 mmol), 4-morfolin-4-ilmetil-benzeno-1,2-diamina (1,33 g, 6,43 mmol) (Exemplo 138C), EDC (1,36 g, 7,07 mmol) e HOBt (0,96 g, 7,07 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. O resíduo foi reduzido in vacuo e depois repartiu-se entre uma solução saturada de NaHCCb (150 mL) e EtOAc (3x150 mL) . Os orgânicos combinados foram secos (Na2S04) , filtrados e evaporados in vacuo para dar um óleo em bruto. Este foi purificado por cromatografia flash [Si02; eluindo com CH2C12: MeOH (100:0-95:5)] para dar o produto como um sólido bege (1,23 g) . (LC/MS (método acídico): Rt 2,10, [M+H]+ 501,09) . 259
Uma mistura deste produto (1,23 g, 2,46 mmol) em AcOH glacial (20 mL) foi aquecida a 120 °C durante 1,5 h. A mistura foi reduzida in vacuo e repartiu-se entre uma solução saturada de NaHC03 (150 mL) e EtOAc (2x150 mL). Os orgânicos combinados foram secos (Na2S04) , filtrados e evaporados in vacuo para dar um óleo em bruto. Este foi purificado por cromatografia flash [Si02; eluindo com CH2C12: MeOH (100:0-95:5)] para se obter 4-(2-cloro-5-(metiltio)-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-benzamida (AT8608) como um sólido bege (0,9 g, 29%). (LC/MS (método acidico): Rt 2,14, [M+H]+ 483,13). EXEMPLO 290 Síntese de: éster 4-fluoro-fenil do ácido [3-(5-Morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-carbâmico
Uma mistura de 3- (5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-ilamina (50 mg, 0,16 mmol) e piridina (0,02 mL, 0,24 mmol) dissolvida numa mistura de CH2C12 (1 mL) e THF (1 mL) foi agitada a 0 °C e, em seguida, tratada com 4-fluorofenilcloroformato (30,7 mgs, 0,168 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente até estar completa e, em seguida, diluiu-se com CH2C12. A fração de CH2C12 foi lavada com bicarbonato sat., salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatograf ia em coluna flash (Si02, CH2Cl2-MeOH (90:10)] para dar o éster 4-fluoro-fenil do ácido [3-(5- 260 morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-carbâmico (AT8428) como um sólido incolor (5 mg, 7%) . (LC/MS (método acídico): Rt 2,08, [M+H]+ 437). EXEMPLO 291 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-6-Cloro-lH-imidazo[4,5-c] piridin-2-il)-1H-pirazol-4-il]-2,6-difluoro-benzamida
Uma mistura de ácido 4-(2,6-difluorobenzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (100 mg, 0,37 mmol) (Exemplo 16D), 6-cloro-piridin-3,4-diamina (54 mg, 0,37 mmol), EDO (72 mg, 0,40 mmol), HOBt (57,3 mg, 0,40 mmol) e Et3N (0, 075 mL, 0,55 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h e depois repartiu-se entre EtOAc e bicarbonato de sódio aquoso e a porção orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e evaporada. 0 intermediário amida foi dissolvida em AcOH (3 mL), aquecido a refluxo durante 1 h, e, em seguida, aquecido no micro-ondas (150W) a 160 °C até que a reação ficou completa. A mistura de reação foi deixada a arrefecer, um sólido surgiu por cristalização, o qual foi filtrado e, em seguida, lavada com éter de petróleo e seca para dar o produto requerido (9 mg) . (LC/MS: Rt 2,74, [M+H]+ 375). EXEMPLOS 292-293
Os seguintes compostos foram preparados utilizando o Procedimento Geral A modificado, conforme ilustrado na Tabela 6. 261
Tabela 6
Ejí , Nc Estrutura Método Diferenças LGKIS 23:2" ÇtF mV *Τ*\)~** ° ri w Proc. Gefa!AP032-GP B Acoplamento aquecido a S5°C, ciclização fesiizada a 18G°C. [M+Hf 360 R} 1,74 293* rv, 0 ‘L M N Proc. Gerai A Acoplamento aquecido 3 85°C, cic&zacâo reaftzadg a 18ÒCC. [M+Hf 441 Rf 2,66 *exemninrte referência EXEMPLOS 294-303
Os compostos dos Exemplos 294 a 303 foram preparados pelos métodos dos Exemplos precedentes. EXEMPLO 294 (exemplo de referência) éster terc-butílico do ácido 4-(2-{2-[4-(2,6-Difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-il]-lH-benzimidazol-5-iloxi}-etil)-piperidina-l-carboxílico
EXEMPLO 295 [3- (5-morfolin-4-flmetfl-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pfrazol-4-il]-amida do ácido 5-Metil-2-trifluorometil-furan-3- carboxilico
262 EXEMPLO 296 [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazoL-2-il)-lH-pirazol- 4-il]-amida do ácido isobenzofuran-l-carboxílico
EXEMPLO 297 (exemplo de referência) [3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]- amida_do_ácido_2- (4-Cloro-fenil) -4-metil-tiazol-5- carboxilico
:ÉS ò s .Á í s f*'"
H EXEMPLO 298 (exemplo de referência) [3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-irazol-4-il]- amida_do_ácido_2- (4-Fluoro-fenyl) -5-metil-2H- [l,2,3]triazol-4-carboxílico £
EXEMPLO 299 [3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-amida do ácido bifenil-2-carboxílico EXEMPLO 300 [3- (5-morfolin- -4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol- 4-il]-amida do ácido 4,6-Dimetil-2-oxo-l,2-dihidro-piridin- 3-carboxílico m: / EXEMPLO 301 ,<*ssV ««'ΛΛ 0 m [3- (5-morfolin- -4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol- 4-il]-amida do ácido 2-oxo-l,2-dihidro-piridin-3- carboxilico /"V ^ fíN· EXEMPLO 302 [3- (5-morfolin- -4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol- 4-il]-amida do ácido 3- (4-Fluoro-fenil)-5-metil-isoxazol-4- carboxilico 264 EXEMPLO 303 2-(4-Cloro-fenilsulfanil)-N-[3-(5-morfolin-4-ilmetil-lH-benzimidazol-2-il-lH-pirazol-4-il1-nicotinamida
EXEMPLO 304 (exemplo de referência) Síntese de N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-1H-pirazol-4-il]-2-metoxi-5-morfolin-4-il~benzamida
<*** \ # >a' 304A: Síntese do éster metálico do ácido 2-metoxi-5- morfolin-4-il-benzoico Éster metílico do ácido 5-iodo-2-metoxi-benzoico (500 mg, 1,7 mmol), morfolina (223 pL, 2,5 mmol), carbonato de césio (850 mg, 2,7 mmol), Xantphos (60 mg, 0,1 mmol) e bis(dibenzilidenoacetona) dipaládio (35 mg, 0,04 mmol) foram suspensos em dioxano (5 mL) e aquecidos a 100 °C durante 5 h. A mistura foi então arrefecida, filtrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash [Si02, EtOAcJpara dar o éster metílico do ácido 2-metoxi-5-morfolin-4-il-benzoico (170 mg) como um sólido incolor. (LC/MS (método básico): Rt 2,35 min, [M+H]+ 252). 265 304Β: Síntese do ácido 2-metoxi-5-morfolin-4-il-benzoico Éster metílico do ácido 2-metoxi-5-morfolin-4-il-benzoico (170 mg) foi dissolvido em MeOH (5 mL) e H20 (5 mL) e tratado com 1 M de hidróxido de sódio aq. (2 mL). Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 16 h, a mistura foi concentrada e partilhada entre EtOAc e H20. a camada aquosa foi acidificada (pH 2,0) e, em seguida, extraiu-se ainda mais com EtOAc (x3). A fração orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca (MgS04) e reduzida in vacuo para dar o ácido 2-metoxi-5-morfolin-4-il-benzoico (90 mg) como um óleo amarelo. (LC/MS (método básico) : Rt 0,91 min, [M+H]+ 238). 304C: Síntese de N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-metoxi-5-morfolin-4-il-benzamida O composto foi preparado de um modo análogo ao do Exemplo 142C, mas utilizando EtOAc, em vez de CH2C12, durante o tratamento. O produto bruto foi purificado diretamente por meio de LC/MS preparativa para dar N-[3-(5,6-dimetoxi-lH-benzimidazol-2-il)-lH-pirazol-4-il]-2-metoxi-5-morfolin-4-il-benzamida (AT8659) (20 mg) como um sólido incolor. (LC/MS (método acídico) : Rt 2,34 min, [M+H]+ 479) . EXEMPLO 305 (exemplo de referência) 5-Cloro-2-metoxi-N-{3-[6-metoxi-5-(l-metil-piperidin-4-ilmetoxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida 305A. N-[4-Metoxi-5-(4-metil-piperidin-l-ilmetoxi)-2-nitro-fenil]-acetamida A uma solução de l-metil-4-piperidinametanol (0,566 g, 4,3 iranol) em THF (25 mL) a 0 °C foi adicionado, em porções, NaH a 60% (0,63 g, 15,48 mmol) e a mistura foi agitada durante 15 min. N-(5-Fluoro-4-metoxi-2-nitro-fenil)-acetamida [US 4431807] (1 g, 4,38 mmol) em THF (40 mL) foi adicionada à reação, que foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos, seguido por aquecimento a 50 °C durante 1 hora. A reação foi temperada com água e, em seguida, extraída com EtOAc, duas vezes, a porção orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre MgS04, filtrada e reduzida in vacuo para se obter N-[4-metoxi-5-(4-metilpiperidin-l-ilmetoxi)-2-nitro-fenil]-acetamida (1,34 g), (LC/MS (método acídico): Rt 1,84, [M+H]+ 338) . 305B ._4-Metoxi-5~(4-metil-piperidin-l-ilmetoxi-2-nitro- fenilamina
\ P
A uma solução de N-[4-metoxi-5-(4-metil-piperidin-l-ilmetoxi)-2-nitro-fenil]-acetamida (1,34 g, 3,97 mmol)) em MeOH (40 mL) foi adicionado metóxido de sódio (1 g, 18,5 mmol) a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi triturado com água e o sólido foi filtrado e lavado com mais água. O sólido foi seco para produzir 4-metoxi-5-(4- 267 metil-piperidin-l-ilmetoxi)-2-nitro-fenilamina (0,9 g), (LC/MS (método acídico) : Rt 1,72, [M+H]+ 296) . 305C._4-Metoxi-5-(4-metil-piperidin-l-ilmetoxi)-benzeno- 1,2-diamina
Uma mistura de 4-metoxi-5-(4-metil-piperidin-l-ilmetoxi)-2-nitro-fenilamina (0,9 g, 3,0 mmol) e 10% de paládio sobre carbono (90 mg) em MeOH (20 mL) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 4 horas. A mistura de reação foi filtrada através de filtros GF/A de papel diretamente em EtOAc/HCl saturado para dar uma solução de cor púrpura, a qual foi reduzida in vacuo para produzir 4-metoxi-5-(4-metil-piperidin-l-ilmetoxi)-benzeno-1,2-diamina sob a forma de uma espuma púrpura (0,8 g), (LC/MS (método acídico): Rt 0,34, [M+H]+ 266). 305D. Síntese do ácido 4-(5-cloro-2-metoxi-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico
0 composto foi preparado de forma análoga ao ácido 4-(2,6-difluoro-benzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (Exemplo 16D), mas utilizando ácido 5-cloro-2-metoxi-benzoico como o ácido de partida, para dar o ácido 4-(5-cloro-2- 268 metoxibenzoilamino)-lH-pirazol-3-carboxílico (12 g) como um sólido incolor. (LC/MS: Rt 2,48, [M-H+]~ 294) . 305E. 5-Cloro-2-metoxi-N-{3-[6-metoxi-5-(1-metil-piperidin-4-ilmetoxy)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida
Uma mistura de ácido 4-(5-Cloro-2-metoxi-benzoilamino)-1H-pirazol-3-carboxílico (0,22 g, 0,745 mmol), 4-metoxi-5-(4-metil-piperidin-l-ilmetoxi)-benzeno-1,2-diamina (0,2 g, 0,745 mmol), EDC (0,173 g, 0,89 mmol) e HOBt (0,122 g, 0,89 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada a 80 °C durante 1 hora, em seguida à temperatura ambiente durante 16 horas e, em seguida, reduzida in vacuo. O resíduo foi dividido entre EtOAc e bicarbonato saturado, a camada orgânica foi lavada com salmoura e seca (MgS04) , filtrada e evaporada. O intermediário de amida (150 mg) , (LC/MS (método acídico) : Rt 2,13, [M+H]+ 543) foi dissolvido em AcOH (5 mL) e depois aqueceu-se ao refluxo durante 4 horas. A mistura de reação foi deixada a arrefecer, reduziu-se in vacuo, o resíduo foi purificado por TLC preparativa para dar origem a 5-cloro-2-metoxi-N-{3-[6-metoxi-5-(1-metilpiperidin-4-ilmetoxi)-lH-benzimidazol-2-il]-lH-pirazol-4-il}-benzamida (2 mg). (LC/MS (método acídico): Rt 2,25, [M+H]+ 525). 269 ATIVIDADE BIOLÓGICA EXEMPLO 306
Medição da Atividade Inibidora de CDK2 Quinase (IC50)
Os compostos da invenção foram testados em termos da atividade inibidora de quinase usando o Protocolo A ou o Protocolo B.
Protocolo A
1,7 pL de CDK2/Ciclina A ativa (Upstate Biotechnology, lOU/DpL) são diluídos em tampão de ensaio (250DpL de 10X tampão de ensaio de resistência (200 mM MOPS pH 7,2, 250mM
β-glicerofosfato, 50 mM de EDTA, 150 mM MgCl2) , 11,27 pL ATP 10 mM, 2,5 pL de 1 M DTT, 25 pL de ortovanadato de sódio a 100 mM, 708,53 pL de H20) , e 10 pL misturados com 10 pL de mistura de substrato de histona (60 pL de histona Hl de bovino (Upstate Biotechnology, 5 mg/mL), 940 pL de H20, 35 pCi y33P-ATP) e adicionados a placas de 96 poços juntamente com 5 pL de várias diluições do composto de teste em DMSO (até 2,5%). A reação é deixada prosseguir durante 5 horas antes de ser parada com um excesso de ácido ortofosfórico (30 pL a 2%). y33P-ATP que permanece não incorporada na histona Hl é separada da histona Hl fosforilada numa placa de filtro Millipore MAPH. Os poços da placa de MAPH são humedecidos com ácido ortofosfórico a 0,5%, e, em seguida, os resultados da reação são filtrados com um aparelho de filtração in vacuo Millipore através dos poços. Depois da filtração, o resíduo é lavado duas vezes com 200 pL de ácido fosfórico a 0,5%. Assim que os filtros estejam secos, 25 pL de líquido de cintilação Microscint 20 é adicionado, 270 e em seguida, contado num Packard Topcount durante 30 segundos. A % de inibição da atividade de CDK2 é calculada e plotada a fim de determinar a concentração do composto de teste necessária para inibir 50% da atividade de CDK2 (IC5o) ·
Os compostos dos Exemplos 3 a 128 têm cada um os valores de IC50 inferiores a 20 μΜ ou fornecem, pelo menos, 50% de inibição da atividade de CDK2, a uma concentração de 10 μΜ. Os compostos preferidos têm valores de IC50 de menos do que 1 μΜ.
Protocolo B CDK2/Ciclina A ativada (Brown et al, Nat Cell Biol, 1, pp438-443, 1999; Lowe, ED, et al Biochemistry, 41, pp 15625-15634, 2002) é diluída para 125pM em tampão de ensaio de resistência a 2,5x (50 mM de MOPS pH 7,2, 62,5 mM de β- glicerof osf ato, 12,5 mM de EDTA, 37,5 mM de MgCl2, ATP 112,5 mM, DTT 2,5 mM, ortovanadato de sódio 2,5 mM, 0,25 mg/mL de albumina de soro de bovino) , e 10 pL misturados com 10 pL de mistura de substrato (60 pL de histona Hl de bovino (Upstate Biotechnology, 5 mg/mL), 940 pL de H20, 35 pCI y33P-ATP) e adicionados a placas de 96 poços juntamente com 5 pL de diferentes diluições do composto de teste em DMSO (até 2,5%). A reação é deixada prosseguir durante 2 a 4 horas antes de ser parada com um excesso de ácido orto-fosfórico (5 pL a 2%). y33P-ATP que permanece não incorporada na histona Hl é separada da histona Hl fosforilada numa placa de filtro Millipore MAPH. Os poços da placa de MAPH são humedecidos com ácido ortofosfórico a 0,5%, e, em seguida, os 271 resultados da reação são filtrados com um aparelho de filtração in vacuo Millipore através dos poços. Depois da filtração, o resíduo é lavado duas vezes com 200 pL de ácido fosfórico a 0,5%. Assim que os filtros estejam secos, 20 pL de líquido de cintilação Microscint 20 é adicionado, e em seguida, contado num Packard Topcount durante 30 segundos. A % de inibição da atividade de CDK2 é calculada e plotada a fim de determinar a concentração do composto de teste necessária para inibir 50% da atividade de CDK2 (IC50) .
Ensaio CDKl/Ciclina B O Ensaio CDKl/Ciclina B é idêntico ao de CDK2/Caclina A acima, exceto que CDKl/Ciclina B (Upstate Discovery) é usado e a enzima é diluída para 6,25nM. EXEMPLO 307
Ensaio de atividade inibidora de GSK3-B/Aurora Quinase
Aurora A (Upstate Discovery) ou GSKS-β (Upstate Discovery) são diluídas para 10 nM e 7,5nM respetivamente em 25 mM de MOPS, pH 7,00, 25mg/mL de BSA, 0,0025% de Brij-35, 1,25% de glicerol, 0,5 mM de EDTA, 25 mM de MgCl2, 0, 025% de β-mercaptoetanol, 37,5 mM de ATP e 10 pL misturados com 10 pL
de mistura de substrato. A mistura de substrato para a Aurora é 500 pM Peptídeo Kemptide (LRRASLG, Upstate Discovery) em 1 mL de água com 35 pCi de y33P- -ATP. A mistura de substrato para GSK3-0 é de 12,5 pM de peptídeo 2 de fosfo-glicogénio sintase (Upstate Discovery) em 1 mL de água com 35 pCi y33P-ATP. A enzima e substrato são adicionados a placas de 96 poços juntamente com 5 pL de 272 várias diluições do composto de teste em DMSO (até 2,5%) . A reação é deixada prosseguir durante 30 minutos (Aurora) ou 3 horas (GSKS-β), antes de ser interrompida com um excesso de ácido ortofosfórico (5 pL a 2%) . O procedimento de filtragem é como para o ensaio de CDK2/Ciclina A ativada acima. EXEMPLO 309 Testes Comparativos
As atividades dos novos compostos da invenção como inibidores de CDK foram comparadas com as atividades de compostos descritos no documento WO 03/035065 (Aventis). Entre o grande número de compostos descritos no documento WO 03/035065 estão compostos contendo um esqueleto de anel 4-benzoilamino-3-(2-benzimidazolil) -pirazol.
Os seguintes exemplos comparativos ilustram o efeito sobre a atividade inibidora de CDK das diferenças no padrão de substituição no anel fenilo do grupo benzoilamino.
EXEMPLO COMPARATIVO A O Composto A abaixo é divulgado como combinação A1-B32 na página 110, coluna 2 da tabela 2 do documento WO 03/035065.
Este composto pode ser preparado pelos métodos gerais estabelecidos no WO 03/035065. Alternativamente, pode ser preparado pelo método indicado no Exemplo 3 do presente documento. 273
Na tabela abaixo, a atividade inibidora de CDK do Composto A (determinada utilizando o protocolo indicado no Exemplo 306 acima) é comparada com as atividades inibidoras de CDK de novos compostos do invento tendo um grupo benzimidazol não substituído de forma semelhante, mas tendo substituintes no anel de fenilo.
Ccnposto/Exenplo n2 Substituição do anel fenilo ICso (iA4) ou % de inibição Composto A Não substituído 0,0967 μΜ Exemplo 6 2,6-difluorofenilo 0,0048 μΜ Exemplo 43 2-cloro-6-fluorofenilo 52%@ 0,003 μΜ Exemplo 44 2-fluoro-6-metoxifenilo 57%@ 0,003 μΜ Exemplo 56 2,4,6-trifluorofenilo 58%Θ0,003 μΜ Exemplo 57 2-cloro-6-metilfenilo 41%Θ0,003 μΜ Exemplo 59 2, 6-diclorofenilo 67%@0,003 μΜ
EXEMPLO COMPARATIVO B O composto B abaixo é divulgado como a combinação A9-B101 na coluna 1 da tabela na página 117 do documento WO 03/035065 e é exemplificado como Exemplo (y) na página 428 do WO 03/035065. O composto B pode ser preparado pelo método descrito no documento WO 03/035065, ou pelo método do Exemplo 128 do presente documento.
O Composto B tem um IC50 de 3 μΜ no ensaio de inibição de CDK descrito no Exemplo 306. Em contraste, o composto do Exemplo 73, que é o análogo 2, 6-difluorofenilo do Composto B, tem um valor de IC50 de 0, 0046 μΜ. A atividade antiproliferativa dos compostos da invenção foi determinada pela medição da inibição do crescimento celular 274 na linha celular HCT-116. 0 Exemplo 73 tem um IC50 de 0,49 μΜ na linha celular HCT-116 (determinado utilizando o protocolo indicado no Exemplo 310 abaixo) em comparação com o Composto B, que tem um IC50 de 5,7 μΜ em HCT-116 da linha celular. EXEMPLO 310
Ensaios de Seletividade CDK
Os compostos da invenção foram testados em termos de atividade inibidora de quinase contra um número de diferentes quinases utilizando o protocolo qeral descrito no Exemplo 129, mas modificado como definido abaixo.
As quinases são diluídas para um stock de trabalho de lOx em 20 mM de MOPS pH 7,0, 1 mM EDTA, 0,1% y-mercaptoetanol, 0,01% de Brij-35, 5% de glicerol, lmg/mL de BSA. Uma unidade é igual à incorporação de 1 nmol de fosfato por minuto em 0,1 mg/mL de histona Hl, ou péptido do substrato CDK7 a 30 °C, com uma concentração final de ATP de lOOuM. O substrato para todos os ensaios de CDK (excepto CDK7) é histona Hl, diluída para um stock de trabalho a 10X em 20 mM de MOPS pH 7,4, antes da utilização. O substrato para CDK7 é um péptido específico diluído para um stock de trabalho a 10X em água desionizada.
Procedimento do ensaio para CDKl/ciclina B, CDK2/ciclina A, CDK2/ciclina E, CDK3/ciclina E, CDK5/p35, CDK6/ciclina D3:
Num volume de reação final de 25 pL, a enzima (5-10 mU) é incubada com MOPS a 8 mM pH 7,0, EDTA a 0,2 mM, 0,1 mg/mL de histona Hl, e 10 mM MgAcetato e [y-33P-ATP] (atividade 275 específica aprox. de 500cpm/pmol, concentração, como necessário) . A reação é iniciada pela adição de Mg2+ [y-33P-ATP]. Após incubação durante 40 minutos à temperatura ambiente, a reação é interrompida pela adição de 5 pL de uma solução de ácido fosfórico a 3%. lOmL de reação são maculados num tapete de filtro P30 e lavados 3 vezes durante 5 minutos em ácido fosfórico a 75 mM e uma vez em metanol antes de secagem e contagem.
Procedimento de ensaio para CDK7/ciclina H/MAT1
Num volume de reação final de 25 pL, a enzima (5-10 mU) é incubada com MOPS a 8 mM pH 7,0, EDTA a 0,2 mM, 500 pM de péptido, 10 mM MgAcetato e [y-33P-ATP] (atividade especifica aprox. de 500cpm/pmol, concentração, como necessário). A reação é iniciada pela adição de Mg [y- P-ATP] . Após incubação durante 4 0 minutos à temperatura ambiente, a reação é interrompida pela adição de 5 pL de uma solução de ácido fosfórico a 3%. lOmL de reação são maculados num tapete de filtro P30 e lavados 3 vezes durante 5 minutos em ácido fosfórico a 75 mM e uma vez em metanol antes de secagem e contagem.
Os compostos dos Exemplos 6, 12, 13, 14, 21 e 41 possuem valores de IC50 de < lpM contra CDK 1, 3 e 5. EXEMPLO 311
Atividade Antiproliferativa
As atividades antiproliferativas dos compostos da presente invenção foram determinadas pela medição da capacidade dos compostos na inibição do crescimento das células numa série de linhas celulares. A inibição do crescimento das células 276 é medida utilizando o ensaio Alamar Blue (Nociari, Μ. M, Shalev, A., Benias, P., Russo, C. Journal of Immunological Methods 1998, 213, 157-167). 0 método baseia-se na capacidade das células viáveis em reduzir a sua resazurina para a sua resorufina de produto fluorescente. Para cada ensaio de proliferação, as células foram plaqueadas em placas de 96 poços e são deixadas a recuperar durante 16 horas antes da adição de compostos inibidores durante mais 72 horas. No final do periodo de incubação, 10% (v/v) de
Alamar Blue foram adicionados e incubados durante mais 6 horas antes da determinação da fluorescência do produto em 535nM ex/ 590nm em. No caso de células não-proliferativas, as células de ensaio foram mantidas em confluência por 96 horas antes da adição de compostos inibidores por mais 72 horas. 0 número de células viáveis foi determinado pelo ensaio Alamar Blue como anteriormente. Todas as linhas celulares foram obtidas a partir de ECACC (Coleção Europeia de Culturas de células).
De acordo com o protocolo estabelecido acima, os compostos da invenção foram considerados como inibindo o crescimento celular numa série de linhas de células. EXEMPLO 312
Medição da atividade inibidora contra Glicogénio Sintase Quinase-3 (GSK-3) A GSK33 (humana) é diluída para um stock de trabalho a lOx em 50 mM de Tris pH 7,5, EGTA 0,1 mM, vanadato de sódio a 0,1 mM, 0,1% β-mercaptoetanol, lmg/mL de BSA. Uma unidade é igual à incorporação de 1 nmol de fosfato por minuto, péptido 2 de fosfoglicogénio sintase por minuto. 277
Num volume de reação final de 25 pL, a GSK3p (5-10 mU) é incubada com 8 mM de MOPS 7,0, 0,2 mM de EDTA, 2 0 μΜ de YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQS(p)EDEEE (péptido fosfo GS2), 10 mM de
MgAcetato e [y-33P-ATP](atividade específica aprox de 500cpm/pmol, concentração, se necessário). A reação é iniciada pela adição de Mg2+[y-33P-ATP] . Após incubação durante 40 minutos à temperatura ambiente, a reação é interrompida pela adição de 5 pL de uma solução de ácido fosfórico a 3%. 10 pL de reação são maculados num tapete de filtro P30 e lavados 3 vezes durante 5 minutos em ácido fosfórico a 50 mM e uma vez em metanol antes de secagem e contagem.
Os compostos dos Exemplos 6 e 12 têm valores de IC5o de < 1 uM contra a GSK3p.
FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS EXEMPLO 313 (i) Formulação de Comprimidos
Uma composição de comprimido contendo um composto da fórmula (VII) é preparada por mistura de 50mg do composto com 197 mg de lactose (BP) como diluente, e 3mg de estearato de magnésio como um lubrificante e por compressão para formar um comprimido de forma conhecida. (ii) Formulação de Cápsulas
Uma formulação de cápsulas é preparada por mistura de 100 mg de um composto da fórmula (VII) com 100 mg de lactose e enchimento da mistura resultante em cápsulas de gelatina dura opacas normalizadas. 278 EXEMPLO 314
Determinação da Atividade Antifúnqica A atividade antifúngica dos compostos da fórmula (VII) é determinada usando o seguinte protocolo.
Os compostos são testados contra um painel de fungos, incluindo Candida parpsilosis, Candida tropicalis, Candida albicans ATCC-36082 e Cryptococcus neoformans. Os organismos de teste são mantidos em rampas de Sabourahd Dextrose Agar a 4 °C. Suspensões singleto de cada organismo são preparadas fazendo crescer a levedura durante a noite a 27 °C num tambor rotativo em caldo à base de levedura-azoto (YNB) com aminoácidos (Difco, Detroit, Michigan), pH 7,0 com 0,05 M de ácido propanossulfónico de morfolina (MOPS). A suspensão é depois centrifugada e lavada duas vezes com NaCl a 0,85% antes da sonicação da suspensão de células lavadas por 4 segundos (Branson Sonifier, modelo 350, de Danbury, Conn.) . Os blastosporos singleto são contados num hemocitómetro e ajustados à concentração desejada em 0,85% de NaCl. A atividade dos compostos de teste é determinada utilizando uma modificação de uma técnica de microdiluição em caldo. Os compostos de teste são diluídos em DMSO a uma razão de 1,0 mg/mL, em seguida, diluídos para 64 pg/mL em caldo YNB, pH 7,0 com MOPS (Fluconazol é utilizado como controlo) para fornecer uma solução de trabalho de cada composto. Usando uma placa de 96 poços, os poços 1 e 3 a 12, são preparados com caldo YNB, diluições a dez vezes da solução de composto são feitas nos poços de 2 a 11 (as gamas de concentrações são 64 para 0,125 pg/mL) . O poço 1 serve como um controlo de esterilidade e espaço em branco para os ensaios 279 espetrofotométricos. 0 poço 12 serve como um controlo de crescimento. As placas de microtitulação são inoculadas com 10 pL em cada um dos poços 2 a 11 (tamanho final inoculo é de 104 organismos/mL). As placas inoculadas são incubadas durante 48 horas a 35 °C. Os valores de IC50 são determinados espetrofotometricamente por medição da absorvância a 420 nm (Leitor de Microplacas Automático, DuPont Instruments, Wilmington, Del.), após agitação das placas durante 2 minutos com um misturador de vórtice (Vorte-Genie 2 Mixer, Scientific Industries, Inc., Bolemia, NY) . O ponto final de IC50 é definido como a concentração mais baixa do fármaco exibindo cerca de 50% (ou mais) de redução do crescimento em comparação com o poço de controlo. Com o ensaio de turbidez esta é definida como a menor concentração de fármaco em que a turbidez no poço é < 50% do controlo (IC50). Concentrações citoliticas mínimas (MCC) são determinadas por subcultura de todos os poços da placa de 96 poços numa placa de Sabourahd Dextrose Agar (SDA) , incubando-se durante 1 a 2 dias a 35 °C e em seguida, verificando a viabilidade. EXEMPLO 315
Protocolo para a Avaliação Biológica de Controlo de Infeção Fúngica in vivo em Plantas
Os compostos da fórmula (VII) são dissolvidos em acetona, com diluições em série subsequentes em acetona para se obter uma gama de concentrações desejadas. Volumes de tratamento final são obtidos por adição de 9 volumes de 0,05% de solução aquosa de Tween-20™ ou 0,01% de Triton X-100™, dependendo do agente patogénico. 280
As composições são, então, usadas para testar a atividade dos compostos da invenção contra a ferrugem do tomate (Phytophthora infestans), utilizando o seguinte protocolo. Os tomates (cultivar Rutgers) são cultivados a partir de sementes numa mistura de vaso à base de turfa sem solo até que as plântulas tenham 10-20 cm de altura. As plantas são então pulverizadas até ficarem a escorrer com o composto de teste a uma taxa de 100 ppm. Após 24 horas, as plantas de ensaio são inoculadas por pulverização com uma suspensão aquosa de esporos de Phytophthora infestans, e mantidas numa câmara de orvalho durante a noite. As plantas são então transferidas para a estufa até que a doença se desenvolva nas plantas de controlo não tratadas.
Protocolos semelhantes são também utilizados para testar a atividade dos compostos da invenção no combate à Ferrugem Castanha do Trigo (Puccinia), Oídio de Trigo (Ervsiphe vraminis), trigo (cultivar Monon), Mancha da Folha de Trigo (Septoria tritici) e Septoriose de Trigo (Leptosphaeria nodorum) .
Lisboa,

Claims (18)

1. 1 REIVINDICAÇÕES Uma combinação compreendendo (i) um composto da fórmula (VII):
(Vlí) ou um seu sal, N-óxido ou solvato; em que A é - (CH2) m- (B) n-; em que méOoul, néleBé C=0 ou NRg(C=0); Rg é hidrogénio; Rld é um grupo R1, em que R1 é hidrogénio, um grupo carbociclico ou heterocíclico possuindo de 3 a 12 membros de anel, ou um grupo hidrocarbilo Ci-8 opcionalmente substituído; em que os subst ituintes opcionais para o grupo hidrocarbilo Ci-8 são selecionados a partir de hidroxi, oxo, alcoxi, carboxi, halogéneo, ciano, nitro, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, e grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos ou bicíclicos que possuam entre 3 a 12 membros de anel; e, em que os grupos carbocíclicos e heterocíclicos, em cada caso, são não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos substituintes R10 selecionados de entre halogéneo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci_4, grupos 2 carbocíclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0 0 0 X2C(X2), C(X2)X2, X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC, so2nrc ou NRcS02; e Rb é selecionado a partir de hidrogénio, grupos carbociclicos e heterociclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e um grupo hidrocarbilo Ci-s opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxi, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbociclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo C1-8 podem ser opcionalmente substituídos por 0, S, SO, S02, NRC, X1C(X2), C(X2)X1 ou X1C(X2)X1; ou dois grupos adjacentes R10, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados podendo formar um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel carbocíclico ou heterocíclico não aromático com 5 ou 6 membros, em que os referidos grupos heteroarilo e heterocíclicos contêm até 3 membros de anel heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S; Rc é selecionado a partir de hidrogénio e hidrocarbilo C1-4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou = :NRC; e desde que, quando 0 grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo carbocíclico OU heterocíclico, 0 referido grupo carbocíclico ou heterocíclico pode ser não substituído ou pode ele próprio ser substituído por um ou mais outros grupos substituintes R10 e em que (a) esses outros grupos substituintes R10 incluem grupos 3 carbocíclicos ou heterocíclicos, que não são, eles próprios, adicionalmente substituídos; ou (b) os referidos outros substituintes não incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, mas são de outro modo selecionados a partir dos grupos listados acima na definição de R10; e (ii) um ou mais agentes terapêuticos.
2. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1, em que R1 é um grupo carbocíclico ou heterocíclico monocíclico ou bicíclico opcionalmente substituído, tendo de 3 a 12 membros de anel.
3. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em R1 é não substituído.
4. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o grupo carboxílico não aromático substituído ou não substituído, tem de 3 a 6 membros de anel.
5. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o grupo carboxílico R1 não aromático substituído ou não substituído é um grupo cicloalquilo.
6. Um composto de acordo com a reivindicação 1, em que A é NH (C=0) ou C=0 e Rld é um grupo Rla em que Rla é selecionado a partir de: o grupos arilo monociclicos de 6 membros substituídos por um a três substituintes R10c desde que, quando o grupo arilo é substituído por um grupo metilo, pelo menos um substituinte diferente de metilo esteja presente; 4 o grupos heteroarilo monocíclicos de 6 membros contendo um único membro de anel heteroátomo que é azoto, os grupos heteroarilo sendo substituídos por um a tres substituintes R ; o grupos heteroarilo monocíclicos de 5 membros contendo até três membros de anel heteroátomo selecionados a partir de azoto e enxofre, e sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes R10c; o grupos heteroarilo monocíclicos de 5 membros contendo um único membro de anel heteroátomo de oxigénio e, opcionalmente, um membro de anel heteroátomo de azoto, e sendo substituídos por um a três substituintes R10c desde que, quando o grupo heteroarilo contém um membro de anel de azoto e é substituído por um grupo metilo, pelo menos, um substituinte diferente de metilo está presente; o grupos arilo e heteroarilo bicíclicos tendo até quatro membros de anel heteroátomo e em que um anel é aromático e o outro anel é não-aromático, ou em que ambos os anéis são aromáticos, os grupos bicíclicos sendo opcionalmente substituídos por um a tres substituintes R ; o grupos heterocíclicos saturados com ligação C monocíclicos de quatro membros, seis membros e sete membros contendo até três heteroátomos selecionados a partir de azoto, oxigénio e enxofre, os grupos heterociclicos sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes R10c desde que, quando o grupo heterocíclico tem seis membros de anel e contém apenas um heteroátomo que é oxigénio, pelo menos um substituinte R10c está presente; 5 o grupos heterocíclicos saturados com ligação C monocíclicos de cinco membros contendo até três heteroátomos selecionados a partir de azoto, oxigénio e enxofre, os grupos heterocíclicos sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes R10c desde que, quando o grupo heterocíclico tem cinco membros de anel e contém apenas um heteroátomo que é azoto, pelo menos um substituinte R10c está presente, que não um hidróxi; o grupos cicloalquilo de quatro e seis membros opcionalmente substituídos por um a três substituintes R ; o grupos cicloalquilo de três e cinco membros substituídos por um a tres substituintes R ; e o um grupo Ph'CR17R18- em que Ph' é um grupo fenilo substituído por um a tres substituintes R ; R e R18 são iguais ou diferentes e cada um é selecionado a partir de hidrogénio e metilo; ou R17 e R18 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados, formam um grupo ciclopropilo; ou um de R17 e R18 é hidrogénio e o outro é selecionado entre amino, metilamino, acilamino C1-4, e alcóxicarbonilamino Ci-4; o fenilo não substituído e fenilo substituído por um ou mais grupos metilo; o grupos heteroarilo monocíclicos de 6 membros não substituídos contendo um único membro de anel heteroátomo que é azoto; o furilo não substituído; o grupos heteroarilo monocíclicos de 5 membros contendo um único membro de anel heteroátomo de oxigénio e um membro de anel heteroátomo de azoto, 6 e sendo não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos metilo; o grupos heterocíclicos saturados com ligação C monocíclicos de seis membros não substituídos contendo apenas um heteroátomo que é oxigénio; e o grupos cicloalquilo de três e cinco membros não substituídos; e R10c é selecionado a partir de: o halogéneo; o hidroxilo; o hidrocarbiloxi Ci_4 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de entre hidroxilo e halogéneo; o hidrocarbilo C1-4 substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxilo, halogéneo e anéis heterocíclicos saturados de cinco e seis membros contendo um ou dois membros de anel de heteroátomo selecionados a partir de azoto, oxigénio e enxofre; o hidrocarbilo S-Ci_4; o fenilo opcionalmente substituído por um a três subst ituintes selecionados a partir de alquilo Ci_4, trifluorometilo, flúor e cloro; o grupos heteroarilo com 5 ou 6 membros de anel e contendo até 3 heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S, os grupos heteroarilo sendo substituídos facultativamente por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo Ci_4, trifluorometilo, flúor e cloro; o grupos heterocíclicos não aromáticos com 5 e 6 membros contendo até 3 heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S, e sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes 7 selecionados a partir de alquilo C1-4, trifluorometilo, flúor e cloro; o ciano, nitro, amino, alquilamino C1-4, di-alquilamino Ci_4, acilamino Ci-4, alcoxicarbonilamino C1-4 } o um grupo R19-S(0)n-f em que n é 0, 1 ou 2 e R19 é selecionado a partir de amino; alquilamino C1-4; di-alquilamino Ci_4; o hidrocarbilo C1-4; fenilo opcionalmente substituído por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo C1-4, trif luoromet ilo, flúor e cloro; e grupos heterocíclicos não-aromáticos de 5 e 6 membros contendo até 3 heteroátomos selecionados de entre N, O e S e sendo opcionalmente substituídos por um a três substituintes do grupo alquilo Ci-4; e o um grupo R20-Q-, em que R20 é fenilo opcionalmente substituído por um a três substituintes selecionados a partir de alquilo Cl-4, trifluorometilo, flúor e cloro; e Q é um grupo de ligação selecionado a partir OCH2, CH20, NH, CH2NH, NCH2, CH2, NHCO e CONH.
7. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1, em que o composto da fórmula (VII) é um composto da fórmula (Vila):
onde Rld e A sao como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.
8. Uma combinação de acordo com a reivindicação 7, em que A é NH(C=0).
9. Uma combinação de acordo com a reivindicação 8, em que A é C=0.
10. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o um ou mais outros agentes terapêuticos são selecionados a partir de agentes anticancerigenos incluindo: inibidores da topoisomerase agentes alquilantes anti-metabolitos ligantes de ADN inibidores de microtúbulos (agentes direcionados a tubulina) radioterapia.
11. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o um ou mais outros agentes terapêuticos são selecionados a partir de agentes anticancerigenos incluindo cisplatina, ciclofosfamida, doxorubicina, irinotecano, fludarabina, 5-FU, taxanos e mitomicina C.
12. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o composto da fórmula (Ia) e o um ou mais outros agentes terapêuticos são administrados seja em simultâneo ou sequencialmente.
13. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o composto da fórmula (Ia) e o um ou mais outros agentes terapêuticos são 9 formulados em conjunto numa forma de dosagem que contém dois, três, quatro ou mais agentes terapêuticos.
14. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores para o tratamento de um cancro.
15. Uma combinação para uso de acordo com a reivindicação 14, para o tratamento de um cancro.
16. Uma composição farmacêutica compreendendo pelo menos um composto da fórmula (VII), de acordo com a reivindicação 1, e um ou mais agentes terapêuticos ou profiláticos, em conjunto com um ou mais suportes farmaceuticamente aceitáveis, adjuvantes, excipientes, diluentes, agentes de enchimento, tampões, estabilizantes, conservantes, lubrificantes.
17. Uma composição farmacêutica compreendendo uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13 em conjunto com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
18. Um composto da fórmula (VII):
H (VII) ou um seu sal, N-óxido ou solvato; em que A é - (CH2) m- (B) n-; em que méOoul, néleBé C=0 ou NRg(C=0); 10 Rg é hidrogénio; Rld é um grupo R1, em que R1 é hidrogénio, um grupo carbociclico ou heterociclico possuindo de 3 a 12 membros de anel, ou um grupo hidrocarbilo Ci-s opcionalmente substituído; em que os subst ituintes opcionais para o grupo hidrocarbilo Ci-8 são selecionados a partir de hidroxi, oxo, alcoxi, carboxi, halogéneo, ciano, nitro, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino Ci-4, e grupos carbocíclicos e heterocíclicos monocíclicos ou bicíclicos que possuam entre 3 a 12 membros de anel; e, em que os grupos carbocíclicos e heterocíclicos, em cada caso, são não substituídos ou substituídos por um ou mais grupos substituintes R10 selecionados de entre halogéneo, hidroxi, trifluorometilo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbocíclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel; um grupo Ra-Rb em que Ra é uma ligação, 0 , co, Χ20(Χ2), C(X2)X1, X1C(X2)X1, S, SO, S02, NRC r so2nrc ou nrcS02; e Rb é selecionado a partir de hidrogénio, grupos carbocíclicos e ou dois grupos heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e um grupo hidrocarbilo Ci-8 opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados a partir de hidroxi, oxo, halogéneo, ciano, nitro, carboxi, amino, mono- ou di-hidrocarbilamino C1-4, grupos carbocíclicos e heterocíclicos tendo de 3 a 12 membros de anel e em que um ou mais átomos de carbono do grupo hidrocarbilo Ci-s podem ser opcionalmente substituídos por 0, S, SO, SO2, NRC, X^ÍX2) , CÍX^X1 ou X1C(X2)X1; 11 adjacentes R10, em conjunto com os átomos de carbono ou heteroátomos aos quais estão ligados podendo formar um anel heteroarilo de 5 membros ou um anel carbociclico ou heterocíclico não aromático com 5 ou 6 membros, em que os referidos grupos heteroarilo e heterocíclicos contêm até 3 membros de anel heteroátomos selecionados a partir de N, 0 e S; Rc é selecionado a partir de hidrogénio e hidrocarbilo Ci- 4; e X1 é 0, S ou NRC e X2 é =0, =S ou = :NRC; e desde que, quando o grupo substituinte R10 compreende ou inclui um grupo carbociclico ou heterocíclico, o referido grupo carbociclico ou heterocíclico pode ser não substituído ou pode ele próprio ser substituído por um ou mais outros grupos substituintes R10 e em que (a) esses outros grupos substituintes R10 incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, que não são, eles próprios, adicionalmente substituídos; ou (b) os referidos outros substituintes não incluem grupos carbocíclicos ou heterocíclicos, mas são de outro modo selecionados a partir dos grupos listados acima na definição de R10; para utilização no tratamento de uma doença que seja: infeções virais; ou doenças inflamatórias crónicas; ou doenças neurodegenerativas; ou doenças cardiovasculares; ou glomerulonefrite; ou síndrome mielodisplásica; ou 12 lesão isquémica associada a enfarte do miocárdio, lesão de acidente vascular cerebral e reperfusão; ou doenças hepáticas induzidas por toxinas ou relacionadas com o álcool; ou doenças hematológicas; ou doenças degenerativas do sistema musculoesquelético, ou rinossinusite aspirino-sensivel; ou fibrose cistica; ou esclerose múltipla; ou doenças renais; ou dor associada ao cancro. Lisboa,
PT101954980T 2003-07-03 2004-07-05 Derivados de benzimidazol e seu uso como inibidores de proteínas quinases PT2305250E (pt)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US48468503P 2003-07-03 2003-07-03
GBGB0315657.7A GB0315657D0 (en) 2003-07-03 2003-07-03 Pharmaceutical compounds
US51437403P 2003-10-24 2003-10-24
GB0324919A GB0324919D0 (en) 2003-10-24 2003-10-24 Pharmaceutical compounds

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PT2305250E true PT2305250E (pt) 2014-05-19

Family

ID=46045485

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT101954980T PT2305250E (pt) 2003-07-03 2004-07-05 Derivados de benzimidazol e seu uso como inibidores de proteínas quinases
PT47431721T PT1648426E (pt) 2003-07-03 2004-07-05 Derivados benzimidazol e seu uso como inibidores de proteínas quinases

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT47431721T PT1648426E (pt) 2003-07-03 2004-07-05 Derivados benzimidazol e seu uso como inibidores de proteínas quinases

Country Status (15)

Country Link
US (3) US7977477B2 (pt)
EP (2) EP1648426B1 (pt)
JP (1) JP4833059B2 (pt)
CN (1) CN1845734B (pt)
AU (1) AU2004253338B2 (pt)
CA (1) CA2531050C (pt)
DK (2) DK2305250T3 (pt)
ES (2) ES2443995T3 (pt)
MX (1) MXPA05014223A (pt)
NZ (1) NZ543959A (pt)
PL (2) PL1648426T3 (pt)
PT (2) PT2305250E (pt)
SI (2) SI1648426T1 (pt)
TW (1) TWI372050B (pt)
WO (1) WO2005002552A2 (pt)

Families Citing this family (118)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI372050B (en) * 2003-07-03 2012-09-11 Astex Therapeutics Ltd (morpholin-4-ylmethyl-1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyrazoles
KR101204247B1 (ko) 2003-07-22 2012-11-22 아스텍스 테라퓨틱스 리미티드 3,4-이치환된 1ｈ-피라졸 화합물 및 그의 시클린 의존성키나제 (ｃｄｋ) 및 글리코겐 합성효소 키나제-3(ｇｓｋ-3) 조정제로서 용도
US8759335B2 (en) 2004-01-30 2014-06-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
US7977322B2 (en) 2004-08-20 2011-07-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
WO2006003440A1 (en) * 2004-07-05 2006-01-12 Astex Therapeutics Limited 3,4-disubstituted pyrazoles as cyclin dependent kinases (cdk) or aurora kinase or glycogen synthase 3 (gsk-3) inhibitors
DE602005023333D1 (de) 2004-10-15 2010-10-14 Takeda Pharmaceutical Kinaseinhibitoren
CA2587489C (en) 2004-11-03 2013-12-31 Curis, Inc. Mediators of hedgehog signaling pathways, compositions and uses related thereto
WO2006070198A1 (en) * 2004-12-30 2006-07-06 Astex Therapeutics Limited Pyrazole derivatives as that modulate the activity of cdk, gsk and aurora kinases
JP5507049B2 (ja) * 2004-12-30 2014-05-28 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬品
JP2008526721A (ja) 2004-12-30 2008-07-24 アステックス、セラピューティックス、リミテッド Ｃｄｋ、ｇｓｋ及びオーロラキナーゼの活性を調節するチアゾールおよびイソチアゾール誘導体
CN101146532B (zh) * 2005-01-21 2012-05-09 阿斯泰克斯治疗有限公司 药物化合物
US8404718B2 (en) 2005-01-21 2013-03-26 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors
AR053662A1 (es) * 2005-01-21 2007-05-16 Astex Therapeutics Ltd Compuestos de pirazol inhibidores de la actividad quinasa cdk y gsk
ES2552338T3 (es) * 2005-01-21 2015-11-27 Astex Therapeutics Limited Compuestos farmacéuticos
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
WO2006085685A1 (ja) * 2005-02-09 2006-08-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited ピラゾール化合物
AU2006233537A1 (en) 2005-04-14 2006-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Aminopyrazole derivatives, their manufacture and use as pharmaceutical agents
EP1749523A1 (en) * 2005-07-29 2007-02-07 Neuropharma, S.A. GSK-3 inhibitors
US8088928B2 (en) 2005-08-04 2012-01-03 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Sirtuin modulating compounds
US8093401B2 (en) 2005-08-04 2012-01-10 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Sirtuin modulating compounds
US7855289B2 (en) 2005-08-04 2010-12-21 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Sirtuin modulating compounds
ES2431050T3 (es) * 2005-08-04 2013-11-22 Sirtris Pharmaceuticals, Inc. Benzotiazoles y tiazolopiridinas como moduladores de la sirtuína
EP1928437A2 (en) 2005-08-26 2008-06-11 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation
EP2258359A3 (en) 2005-08-26 2011-04-06 Braincells, Inc. Neurogenesis by muscarinic receptor modulation with sabcomelin
US8119655B2 (en) 2005-10-07 2012-02-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Kinase inhibitors
CA2625153A1 (en) 2005-10-21 2007-04-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by pde inhibition
AU2006308889A1 (en) 2005-10-31 2007-05-10 Braincells, Inc. GABA receptor mediated modulation of neurogenesis
RU2008127263A (ru) * 2005-12-08 2010-01-20 Новартис АГ (CH) ПИРАЗОЛ [1,5-a] ПИРИДИН-3-КАРБОНОВЫЕ КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ EphB-И VEGFR2-КИНАЗЫ
AU2006326247A1 (en) * 2005-12-15 2007-06-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Tricyclic lactam derivatives, their manufacture and use as pharmaceutical agents
US7572809B2 (en) 2005-12-19 2009-08-11 Hoffmann-La Roche Inc. Isoquinoline aminopyrazole derivatives
JP5474354B2 (ja) * 2005-12-30 2014-04-16 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
JP2009523845A (ja) * 2006-01-23 2009-06-25 クリスタルゲノミクス インコーポレーテッド たんぱく質キナーゼの活性を阻害するイミダゾピリジン誘導体、これの製造方法およびこれを含む薬学組成物
US20100216734A1 (en) 2006-03-08 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by nootropic agents
EP2382975A3 (en) 2006-05-09 2012-02-29 Braincells, Inc. Neurogenesis by modulating angiotensin
JP5523829B2 (ja) * 2006-06-29 2014-06-18 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 複合薬剤
US20110159111A1 (en) * 2006-06-29 2011-06-30 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
FR2903406B1 (fr) * 2006-07-04 2012-08-10 Aventis Pharma Sa Derives de pyrazolylbenzimidazole,compositions les contenant et utilisation
EP2086970B1 (en) * 2006-08-24 2014-02-26 Novartis AG 2-(pyrazin-2-yl)-thiazole and 2-(1h pyrazol-3-yl)-thiazole derivatives as well as related compounds as stearoyl-coa desaturase (scd) inhibitors for the treatment of metabolic, cardiovascular and other disorders
US20100184806A1 (en) 2006-09-19 2010-07-22 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis by ppar agents
BRPI0718509A2 (pt) 2006-09-22 2015-09-29 Novartis Ag compostos orgânicos heterocíclicos
US20100022404A1 (en) * 2006-10-05 2010-01-28 Shinichi Hasako Gene/protein marker for prediction or diagnosis of pharmacological efficacy of aurora a inhibitor
EA200970361A1 (ru) 2006-10-09 2010-02-26 Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед Ингибиторы киназы
JP5528806B2 (ja) 2006-10-12 2014-06-25 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 複合薬剤
WO2008044045A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
ES2446269T3 (es) 2006-12-19 2014-03-06 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois 3-Benzofuranil-4-indolil-maleimidas como potentes inhibidores de GSK-3 para trastornos neurodegenerativos
MX2009006728A (es) 2006-12-20 2009-09-09 Novartis Ag Heterociclos de 5 miembros 2-sustituidos como inhibidores de scd.
DE102006060598A1 (de) * 2006-12-21 2008-06-26 Merck Patent Gmbh Tetrahydrobenzoisoxazole
TW200916472A (en) 2007-06-20 2009-04-16 Sirtris Pharmaceuticals Inc Sirtuin modulating compounds
MX2010004876A (es) * 2007-10-29 2010-07-28 Schering Corp Derivados de diamido tiazol como inhibidores de la proteina cinasa.
WO2009058728A1 (en) * 2007-10-29 2009-05-07 Schering Corporation Thiazole derivatives as protein kinase inhibitors
NZ585298A (en) 2007-11-16 2012-08-31 Rigel Pharmaceuticals Inc Carboxamide, sulfonamide and amine compounds for metabolic disorders
CA2707047C (en) 2007-12-12 2017-11-28 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Carboxamide, sulfonamide and amine compounds for metabolic disorders
BRPI0906495B8 (pt) * 2008-01-22 2021-05-25 Vernalis R&D Ltd compostos derivados de indolil-piridona e composição farmacêutica
BRPI0911681B8 (pt) 2008-04-23 2021-05-25 Rigel Pharmaceuticals Inc composto, composição farmacêutica, e, método para ativar a via de proteína quinase ativada por 5'-amp em uma célula in vitro
WO2010028192A1 (en) 2008-09-03 2010-03-11 Repligen Corporation Compositions including 6-aminohexanoic acid derivatives as hdac inhibitors
CN102271515B (zh) 2008-10-31 2014-07-02 健泰科生物技术公司 吡唑并嘧啶jak抑制剂化合物和方法
KR20110086750A (ko) * 2008-11-20 2011-07-29 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 7-히드록시-벤조이미다졸-4-일-메타논 유도체를 포함하는 당원 합성효소 키나아제-3베타 저해제
US8318928B2 (en) * 2008-12-15 2012-11-27 Glenmark Pharmaceuticals, S.A. Fused imidazole carboxamides as TRPV3 modulators
JP5628828B2 (ja) 2008-12-19 2014-11-19 サートリス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド チアゾロピリジンサーチュイン調節化合物
WO2010074724A1 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Combination of aurora kinase inhibitors and anti-cd20 antibodies
US20100216805A1 (en) 2009-02-25 2010-08-26 Braincells, Inc. Modulation of neurogenesis using d-cycloserine combinations
UA103918C2 (en) * 2009-03-02 2013-12-10 Айерем Элелси N-(hetero)aryl, 2-(hetero)aryl-substituted acetamides for use as wnt signaling modulators
WO2010151710A2 (en) * 2009-06-25 2010-12-29 Medolution Limited Substituted heterocyclic compounds as kinases inhibitors and method of use thereof
UA110324C2 (en) * 2009-07-02 2015-12-25 Genentech Inc Jak inhibitory compounds based on pyrazolo pyrimidine
WO2011058139A1 (en) * 2009-11-12 2011-05-19 Selvita Sp. Z O. O. A compound, a process for its preparation, a pharmaceutical composition, use of a compound, a method for modulating or regulating serine/threonine kinases and a serine/threonine kinases modulating agent
CN101857589B (zh) * 2010-06-08 2013-12-18 东南大学 吡唑-苯并咪唑类衍生物及其应用
RU2604062C2 (ru) * 2010-07-13 2016-12-10 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛО[1,5-a]ПИРИМИДИНА И ТИЕНО[3,2-b]ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ IRAK-4
WO2012118782A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Repligen Corporation Histone deacetylase inhibitors
US8957066B2 (en) 2011-02-28 2015-02-17 Biomarin Pharmaceutical Inc. Histone deacetylase inhibitors
US10059723B2 (en) 2011-02-28 2018-08-28 Biomarin Pharmaceutical Inc. Histone deacetylase inhibitors
GB201106817D0 (en) 2011-04-21 2011-06-01 Astex Therapeutics Ltd New compound
WO2013055949A2 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Dana Farber Cancer Institute, Inc. Pyrazol-3-ones that activate pro-apoptotic bax
PH12017500997A1 (en) 2012-04-04 2018-02-19 Samumed Llc Indazole inhibitors of the wnt signal pathway and therapeutic uses thereof
GB201211021D0 (en) * 2012-06-21 2012-08-01 Cancer Rec Tech Ltd Pharmaceutically active compounds
TW201406758A (zh) * 2012-06-28 2014-02-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 三環性化合物
GB201218862D0 (en) 2012-10-19 2012-12-05 Astex Therapeutics Ltd Bicyclic heterocycle compounds and their uses in therapy
GB201218864D0 (en) 2012-10-19 2012-12-05 Astex Therapeutics Ltd Bicyclic heterocycle compounds and their uses in therapy
GB201218850D0 (en) 2012-10-19 2012-12-05 Astex Therapeutics Ltd Bicyclic heterocycle compounds and their uses in therapy
US9980973B2 (en) 2012-10-19 2018-05-29 Astex Therapeutics Limited Bicyclic heterocycle compounds and their uses in therapy
US9988378B2 (en) * 2012-10-26 2018-06-05 Hoffmann-La Roche Inc. 1 H-pyrazole and 4,5-disubstituted thiazole inhibitors of SYK
DK2970139T3 (en) 2013-03-15 2018-08-13 Biomarin Pharm Inc HDAC inhibitors
JO3368B1 (ar) 2013-06-04 2019-03-13 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات 6، 7- ثاني هيدرو بيرازولو [5،1-a] بيرازين- 4 (5 يد)- اون واستخدامها بصفة منظمات تفارغية سلبية لمستقبلات ميجلور 2
CN104211692B (zh) * 2013-06-04 2019-05-24 广东东阳光药业有限公司 作为欧若拉激酶抑制剂的衍生物
CN104447701B (zh) * 2013-09-17 2019-03-22 广东东阳光药业有限公司 吡唑类衍生物及其用途
WO2015085289A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Combination of aurora kinase inhibitors and anti-cd30 antibodies
MX2016008131A (es) 2013-12-20 2016-09-16 Astex Therapeutics Ltd Compuestos heterociclos biciclicos y sus usos en terapia.
PE20211782A1 (es) * 2014-05-23 2021-09-08 Hoffmann La Roche Compuestos de 5-cloro-2-difluorometoxifenil pirazolopirimidina, composiciones y metodos de uso de los mismos
JOP20150177B1 (ar) 2014-08-01 2021-08-17 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات 6 ، 7 ثاني هيدرو بيرازولو [ 1، 5 الفا ] بيرازين – 4 (5 يد) – اون واستخدامها كمنظمات الوسترية سلبية لمستقبلات ملجور 2
JOP20150179B1 (ar) 2014-08-01 2021-08-17 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات 6 ، 7 ثاني هيدرو بيرازولو [ 1، 5 الفا ] بيرازين – 4 (5 يد) – اون واستخدامها كمنظمات الوسترية سلبية لمستقبلات ملجور 2
HRP20211813T1 (hr) 2014-08-11 2022-03-04 Acerta Pharma B.V. Terapeutske kombinacije inhibitora btk i inhibitora bcl-2
SI3179992T1 (sl) 2014-08-11 2022-09-30 Acerta Pharma B.V. Terapevtske kombinacije zaviralca BTK, zaviralca PD-1 in/ali zaviralca PD-L1
WO2016024232A1 (en) 2014-08-11 2016-02-18 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combinations of a btk inhibitor, a pi3k inhibitor, a jak-2 inhibitor and/or a cdk 4/6 inhibitor
WO2016087489A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Janssen Pharmaceutica Nv Radiolabelled mglur2 pet ligands
US10072014B2 (en) 2014-12-03 2018-09-11 Janssen Pharmaceutica Nv 6,7-dihydropyrazolo[1,5-a]pyrazin-4(5H)-one compounds and their use as negative allosteric modulators of MGLUR2 receptors
CN105801563B (zh) * 2015-01-15 2020-01-14 广东东阳光药业有限公司 吡唑类衍生物及其用途
SG11201707752SA (en) * 2015-04-22 2017-11-29 Rigel Pharmaceuticals Inc Pyrazole compounds and method for making and using the compounds
WO2016202758A1 (en) * 2015-06-18 2016-12-22 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted 2-(1h-pyrazol-1-yl)-1h-benzimidazole compounds
WO2017079765A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 Samumed, Llc Treatment of osteoarthritis
WO2017103182A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Janssen Pharmaceutica Nv Radiolabelled mglur2/3 pet ligands
AU2016374568B2 (en) 2015-12-18 2020-08-27 Janssen Pharmaceutica Nv Radiolabelled mGluR2/3 PET ligands
WO2017132511A1 (en) * 2016-01-27 2017-08-03 Southern Research Institute Benzimidazole compounds, use as inhibitors of wnt signaling pathway in cancers, and methods for preparation thereof
JP2020510061A (ja) * 2017-03-14 2020-04-02 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ピラゾロクロロフェニル化合物、組成物及びその使用方法
PE20200341A1 (es) 2017-05-22 2020-02-14 Hoffmann La Roche Composiciones y compuestos terapeuticos y metodos para utilizarlos
DE102017127039A1 (de) 2017-11-16 2019-05-16 Eppendorf Ag Zentrifuge und Ausschwingrotor
WO2019195658A1 (en) 2018-04-05 2019-10-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Sting levels as a biomarker for cancer immunotherapy
WO2020010155A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Ifm Due, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with sting activity
US11174263B2 (en) 2018-12-31 2021-11-16 Biomea Fusion, Inc. Inhibitors of menin-MLL interaction
CA3125350A1 (en) 2018-12-31 2020-07-09 Biomea Fusion, Llc Irreversible inhibitors of menin-mll interaction
EP3911317A2 (en) * 2019-01-17 2021-11-24 BioSplice Therapeutics, Inc. Methods of treating cartilage disorders through inhibition of clk and dyrk
CN112047932B (zh) * 2019-06-05 2022-11-08 中国药科大学 吡唑类脾酪氨酸激酶抑制剂及其制备方法与用途
WO2021041532A1 (en) 2019-08-26 2021-03-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Use of heparin to promote type 1 interferon signaling
PE20220970A1 (es) 2019-08-30 2022-06-10 Rigel Pharmaceuticals Inc Compuestos de pirazol, formulaciones de los mismos y un metodo para usar los compuestos y/o formulaciones
CN111004221B (zh) * 2019-12-13 2021-02-02 长治学院 一种嘧啶/苯并咪唑杂合物、制备方法及医药用途
CN112592839B (zh) * 2021-01-08 2022-08-19 浙江工业大学 一株降解氨基甲酸乙酯的米根霉及其应用
CN113149978A (zh) * 2021-02-04 2021-07-23 中国药科大学 一种中间体化合物、制备方法及其用途
CN113549038B (zh) * 2021-07-07 2023-05-23 常州大学 多取代异苯并呋喃化合物及其用途
CN116178358B (zh) * 2022-11-04 2024-04-19 济南大学 一种靶向c-Src激酶SH3结构域的化合物及其应用
WO2024100115A1 (en) * 2022-11-09 2024-05-16 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal pyrazole derivatives

Family Cites Families (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4431807A (en) 1980-06-12 1984-02-14 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army 4-Methyl-5-(unsubstituted and substituted phenoxy)-6-methoxy-8-(aminoalkylamino)quinolines
US4619686A (en) 1984-07-17 1986-10-28 Eli Lilly And Company Pyridazinylurea compounds and methods of use as herbicides
US4666828A (en) 1984-08-15 1987-05-19 The General Hospital Corporation Test for Huntington's disease
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4801531A (en) 1985-04-17 1989-01-31 Biotechnology Research Partners, Ltd. Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis
EP0308020A3 (en) 1987-09-18 1990-12-05 Merck & Co. Inc. 5-(aryl and heteroaryl)-6-(aryl and heteroaryl)-1,2-dihydro-2-oxo 3-pyridinecarboxylic acids and derivatives thereof
US5272057A (en) 1988-10-14 1993-12-21 Georgetown University Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase
US5192659A (en) 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
US5451596A (en) 1992-12-29 1995-09-19 Rhone Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Cycloalkyl amine bis-aryl squalene synthase inhibitors
FR2707295A1 (fr) 1993-06-07 1995-01-13 Rhone Poulenc Agrochimie Fongicides pyrazoles substitués en position 3 par un hétérocycle.
US5852011A (en) 1994-05-31 1998-12-22 Mitsui Chemicals, Inc. Benzimidazole derivatives
CA2193725A1 (en) 1994-06-24 1996-01-04 David Cavalla Aryl derivative compounds and uses to inhibit phosphodiesterase iv acti vity
AU707323B2 (en) * 1995-03-10 1999-07-08 Berlex Laboratories, Inc. Benzamidine derivatives and their use as anti-coagulants
CA2262403C (en) 1995-07-31 2011-09-20 Urocor, Inc. Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate disease
US6218529B1 (en) 1995-07-31 2001-04-17 Urocor, Inc. Biomarkers and targets for diagnosis, prognosis and management of prostate, breast and bladder cancer
AU6966696A (en) 1995-10-05 1997-04-28 Warner-Lambert Company Method for treating and preventing inflammation and atherosclerosis
EP0904076A1 (en) 1996-04-03 1999-03-31 Merck & Co., Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
US5874452A (en) 1996-04-03 1999-02-23 Merck & Co., Inc. Biheteroaryl inhibitors of farnesyl-protein transferase
CN1225629A (zh) * 1996-05-30 1999-08-11 霍夫曼-拉罗奇有限公司 新的吡咯衍生物
EE200000289A (et) 1997-10-27 2001-06-15 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Asendatud 4-amino-tiasool-2-üüli ühendid kui tsükliinisõltuvusega kinaaside inhibiitorid
WO1999046244A1 (en) 1998-03-12 1999-09-16 Novo Nordisk A/S Modulators of protein tyrosine phosphatases (ptpases)
ES2258331T3 (es) 1998-05-22 2006-08-16 Scios Inc. Compuestos heterociclicos y procedimientos de tratamiento de insuficiencia cardiaca y otros trastornos.
WO2000038683A1 (en) 1998-12-23 2000-07-06 Du Pont Pharmaceuticals Company THROMBIN OR FACTOR Xa INHIBITORS
UA73492C2 (en) 1999-01-19 2005-08-15 Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
DE60003025T2 (de) 1999-04-02 2004-03-18 Bristol-Myers Squibb Pharma Co. Arylsulfonyle als faktor xa inhibitoren
BRPI0009721B8 (pt) 1999-04-15 2021-11-23 Bristol Myers Squibb Co Inibidores de tirosina quinase de proteína cíclica
BR0010605A (pt) 1999-04-28 2002-02-13 Aventis Pharma Gmbh Derivados ácidos de di-aril como ligantes de receptores ppar
DE19920936A1 (de) * 1999-05-07 2000-11-09 Basf Ag Heterozyklisch substituierte Benzimidazole, deren Herstellung und Anwendung
PT1194425E (pt) * 1999-06-23 2005-10-31 Aventis Pharma Gmbh Benzimidazoles substituidos
JP4627356B2 (ja) 1999-06-30 2011-02-09 松森　　昭 ウイルス性心筋炎の予防または治療薬剤
FR2795726A1 (fr) 1999-06-30 2001-01-05 Aventis Cropscience Sa Nouveaux pyrazoles fongicides
PE20010306A1 (es) 1999-07-02 2001-03-29 Agouron Pharma Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa
US6632815B2 (en) 1999-09-17 2003-10-14 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of factor Xa
TR200201413T2 (tr) 1999-09-17 2003-02-21 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Faktör Xa' nın inhibitörleri.
CA2385592C (en) 1999-09-17 2011-01-11 Bing-Yan Zhu Benzamides and related inhibitors of factor xa
WO2002034721A1 (en) 2000-10-20 2002-05-02 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Acylsemicarbazides and their use as cyclin dependent kinase (cdk) inhibitors
YU54202A (sh) 2000-01-18 2006-01-16 Agouron Pharmaceuticals Inc. Jedinjenja indazola, farmaceutske smeše i postupci za stimulisanje i inhibiranje ćelijske proliferacije
HN2001000008A (es) 2000-01-21 2003-12-11 Inc Agouron Pharmaceuticals Compuesto de amida y composiciones farmaceuticas para inhibir proteinquinasas, y su modo de empleo
EP1200422A2 (en) 2000-02-05 2002-05-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compositions useful as inhibitors of erk
WO2001064642A2 (en) 2000-02-29 2001-09-07 Cor Therapeutics, Inc. Benzamides and related inhibitors of factor xa
EP1264820A4 (en) 2000-03-14 2004-09-15 Fujisawa Pharmaceutical Co amide compounds
WO2001072745A1 (en) 2000-03-29 2001-10-04 Cyclacel Limited 2-substituted 4-heteroaryl-pyrimidines and their use in the treatmetn of proliferative disorders
CA2398446A1 (en) 2000-04-18 2001-10-25 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Pyrazoles for inhibiting protein kinases
WO2001081348A1 (en) 2000-04-25 2001-11-01 Bristol-Myers Squibb Company USE OF 5-THIO-, SULFINYL- AND SULFONYLPYRAZOLO[3,4-b]-PYRIDINES AS CYCLIN DEPENDENT KINASE INHIBITORS
US6414013B1 (en) 2000-06-19 2002-07-02 Pharmacia & Upjohn S.P.A. Thiophene compounds, process for preparing the same, and pharmaceutical compositions containing the same background of the invention
CA2409762A1 (en) 2000-06-23 2002-01-03 Donald J.P. Pinto Heteroaryl-phenyl substituted factor xa inhibitors
WO2002000655A1 (en) 2000-06-23 2002-01-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company 1 - (heteroaryl-phenyl) - condensed pyrazol derivatives as factor xa inhibitors
AU2001273040A1 (en) 2000-06-27 2002-01-08 Du Pont Pharmaceuticals Company Factor xa inhibitors
ATE528303T1 (de) * 2000-12-21 2011-10-15 Vertex Pharma Pyrazoleverbindungen als proteinkinasehemmer
DE10108480A1 (de) * 2001-02-22 2002-09-05 Bayer Ag Pyrazolylpyrimidine
DE10110750A1 (de) * 2001-03-07 2002-09-12 Bayer Ag Neuartige Aminodicarbonsäurederivate mit pharmazeutischen Eigenschaften
US6951848B2 (en) 2001-03-12 2005-10-04 Millennium Pharmaceuticals, Inc., Functionalized heterocycles as modulators of chemokine receptor function and methods of use therefor
ATE445400T1 (de) 2001-05-25 2009-10-15 Bristol Myers Squibb Co Hydantion-derivate als hemmer von matrix- metalloproteinasen
EP1401837B1 (en) 2001-06-29 2005-10-19 Cv Therapeutics, Inc. Purine derivatives as a2b adenosine receptor antagonists
US7064215B2 (en) * 2001-07-03 2006-06-20 Chiron Corporation Indazole benzimidazole compounds
WO2003006465A1 (en) 2001-07-13 2003-01-23 Cv Therapeutics, Inc. Partial and full agonist of a adenosine receptors
US6897208B2 (en) * 2001-10-26 2005-05-24 Aventis Pharmaceuticals Inc. Benzimidazoles
FR2831536A1 (fr) * 2001-10-26 2003-05-02 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de benzimidazoles, leur procede de preparation, leur application a titre de medicament, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilisation notamment comme inhibiteurs de kdr
EP1441725A1 (en) 2001-10-26 2004-08-04 Aventis Pharmaceuticals Inc. Benzimidazoles and analogues and their use as protein kinases inhibitors
EP1314733A1 (en) 2001-11-22 2003-05-28 Aventis Pharma Deutschland GmbH Indole-2-carboxamides as factor Xa inhibitors
US7622479B2 (en) 2001-11-26 2009-11-24 Takeda Pharmaceutical Company Limited Bicyclic derivative, its production and use
WO2003053941A2 (en) 2001-12-20 2003-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Barbituric acid derivatives as inhibitors of tnf-alpha converting enzyme (tace) and/or matrix metalloproteinases
WO2003066629A2 (en) 2002-02-06 2003-08-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heteroaryl compounds useful as inhibitors of gsk-3
CA2504044A1 (en) 2002-11-01 2004-05-21 Merck & Co., Inc. Carbonylamino-benzimidazole derivatives as androgen receptor modulators
JP4504820B2 (ja) 2002-12-04 2010-07-14 サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング Ｘａ因子阻害剤としてのイミダゾール誘導体
CA2508681A1 (en) 2002-12-11 2004-06-24 7Tm Pharma A/S Quinoline compounds for use in mch receptor related disorders
US20060084682A1 (en) 2002-12-13 2006-04-20 Heerding Dirk A Thrombopoietin mimetics
MXPA05006200A (es) 2002-12-23 2005-08-19 Aventis Pharma Gmbh Derivados de pirazol como inhibidores del factor xa.
US20040242559A1 (en) * 2003-04-25 2004-12-02 Aventis Pharma S.A. Novel indole derivatives, preparation thereof as medicinal products and pharmaceutical compositions, and especially as KDR inhibitors
FR2854159B1 (fr) * 2003-04-25 2008-01-11 Aventis Pharma Sa Nouveaux derives de l'indole, leur preparation a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et notamment comme inhibiteurs de kdr
GB0315657D0 (en) 2003-07-03 2003-08-13 Astex Technology Ltd Pharmaceutical compounds
TWI372050B (en) * 2003-07-03 2012-09-11 Astex Therapeutics Ltd (morpholin-4-ylmethyl-1h-benzimidazol-2-yl)-1h-pyrazoles
US20050032869A1 (en) 2003-07-08 2005-02-10 Pharmacia Italia S.P.A. Pyrazolyl-indole derivatives active as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
WO2005028624A2 (en) 2003-09-15 2005-03-31 Plexxikon, Inc. Molecular scaffolds for kinase ligand development
WO2005047266A1 (en) 2003-11-14 2005-05-26 Lorus Therapeutics Inc. Aryl imidazoles and their use as anti-cancer agents
JP3977411B2 (ja) * 2004-03-10 2007-09-19 株式会社クレハ アミン系塩基性化合物とその用途
JP5507049B2 (ja) * 2004-12-30 2014-05-28 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬品
JP2008526721A (ja) * 2004-12-30 2008-07-24 アステックス、セラピューティックス、リミテッド Ｃｄｋ、ｇｓｋ及びオーロラキナーゼの活性を調節するチアゾールおよびイソチアゾール誘導体
JP5474354B2 (ja) 2005-12-30 2014-04-16 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
US20110159111A1 (en) * 2006-06-29 2011-06-30 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
JP5523829B2 (ja) 2006-06-29 2014-06-18 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 複合薬剤
WO2008044045A1 (en) * 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations

Also Published As

Publication number Publication date
US20140010892A1 (en) 2014-01-09
SI1648426T1 (sl) 2014-04-30
TWI372050B (en) 2012-09-11
EP1648426A2 (en) 2006-04-26
CN1845734B (zh) 2011-06-22
WO2005002552A3 (en) 2005-06-16
WO2005002552A2 (en) 2005-01-13
ES2457466T3 (es) 2014-04-25
AU2004253338A1 (en) 2005-01-13
PL2305250T3 (pl) 2014-07-31
DK2305250T3 (da) 2014-04-22
MXPA05014223A (es) 2006-07-03
NZ543959A (en) 2009-08-28
CA2531050A1 (en) 2005-01-13
SI2305250T1 (sl) 2014-06-30
TW200524598A (en) 2005-08-01
JP4833059B2 (ja) 2011-12-07
EP2305250A1 (en) 2011-04-06
EP1648426B1 (en) 2014-01-08
DK1648426T3 (da) 2014-02-10
CN1845734A (zh) 2006-10-11
US7977477B2 (en) 2011-07-12
ES2443995T3 (es) 2014-02-21
PT1648426E (pt) 2014-03-07
US20110224203A1 (en) 2011-09-15
US20070135477A1 (en) 2007-06-14
AU2004253338B2 (en) 2010-02-18
CA2531050C (en) 2013-04-09
PL1648426T3 (pl) 2014-05-30
EP2305250B1 (en) 2014-03-26
JP2007516194A (ja) 2007-06-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PT2305250E (pt) Derivados de benzimidazol e seu uso como inibidores de proteínas quinases
KR101204247B1 (ko) 3,4-이치환된 1ｈ-피라졸 화합물 및 그의 시클린 의존성키나제 (ｃｄｋ) 및 글리코겐 합성효소 키나제-3(ｇｓｋ-3) 조정제로서 용도
JP5507049B2 (ja) 医薬品
JP2007516201A (ja) 医薬化合物
JP2008505167A (ja) 医薬組成物
JP2008526721A (ja) Ｃｄｋ、ｇｓｋ及びオーロラキナーゼの活性を調節するチアゾールおよびイソチアゾール誘導体
JP2008526723A (ja) Ｃｄｋ、ｇｓｋ及びオーロラキナーゼの活性を調節するピラゾール誘導体
KR20070098928A (ko) Ｃｄｋ 및 ｇｓｋ의 억제를 위한 피라졸 유도체
JP2008506761A (ja) プロテインキナーゼ阻害剤としてのチアゾールおよびイソチアゾール誘導体
PT1651612E (pt) Compostos de 1h-pirazole 3,4-dissubstituídos e sua utilização como moduladores de cinases dependentes de ciclina (cdk) e de glicogénio sintase-cinase-3 (gsk-3)
KR101190964B1 (ko) 벤즈이미다졸 유도체 및 단백질 키나제로서의 그의 용도