CN1845734B - 苯并咪唑衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的制药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供具有依赖细胞周期蛋白的激酶、糖原合成酶激酶-3和Aurora激酶抑制剂活性的化合物，这类化合物用于治疗由所述激酶介导的疾病或病症例如癌症。这类化合物具有通式(I)。化合物的盐、溶剂合物和N-氧化物也包括在式(I)中。
Description
本发明涉及抑制或调节依赖细胞周期蛋白的激酶(CDK)、糖原合成酶激酶(GSK)和Aurora激酶活性的吡唑化合物；此类化合物在治疗或预防激酶介导的疾病或病症中的用途；和具有抑制或调节激酶活性的新化合物。本发明还提供含此类化合物的药用组合物和新的化学中间体。
发明背景
蛋白激酶构成结构相关的酶的大家族，这些酶在细胞内负责控制很多种信号转导过程(Hardie，G.和Hanks，S.(1995)The ProteinKinase Facts Book.I and II，Academic Press，San Diego，CA)。按它们磷酸化底物的类型(例如蛋白-酪氨酸、蛋白-丝氨酸/苏氨酸、脂类等)，可将这些激酶归类到各个家族。已鉴别出通常对这些激酶家族中的每个产生应答的序列基元(例如Hanks，S.K.，Hunter，T.，FASEB J.，9：576-596(1995)；Knighton等，Science，253：407-414(1991)；Hiles等，Cell，70：419-429(1992)；Kunnz等，Cell，73：585-596(1993)；Garcia-Bustos等，EMBOJ.，13：2352-2361(1994))。
蛋白激酶可由它们的调节机理表征。这些机理包括例如自身磷酸化、其它激酶导致的转磷酸化作用、蛋白-蛋白相互作用、蛋白-脂质相互作用和蛋白-多核苷酸相互作用。单个蛋白激酶可受到大于1个的机理调节。
通过将磷酸酯基加到靶蛋白上，激酶调节多个不同的细胞过程，它们包括但不限于增殖、分化、细胞凋亡、游动性、转录、翻译和其它信号过程。这些磷酸化事件起分子开/关的作用，分子开/关可调节靶蛋白的生物功能。靶蛋白磷酸化是对多种细胞外信号(激素、神经递质、生长和分化因子等)、细胞周期事件、环境或营养应激等的响应。适当的蛋白激酶在信号途径中的作用是激活或钝化(直接或间接)例如代谢酶、调节蛋白、受体、细胞骨架蛋白、离子通道或泵，或转录因子。由于缺乏控制蛋白磷酸化，未受控制的信号涉及多种疾病，它们包括如炎症、癌症、***反应/哮喘、免疫***疾病和病症、中枢神经***疾病和病症以及血管生成。
依赖细胞周期蛋白的激酶
真核细胞***的过程可广泛地分为一系列连续的称为G1、S、G2和M期。已证实通过细胞周期各期的正确进展取决于对称为依赖细胞周期蛋白的激酶(cdks)的蛋白家族和多组它们称为细胞周期蛋白的关联蛋白配偶体的空间和时间调节。Cdks是与丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白同源的cdc2(又称为cdk1)，丝氨酸-苏氨酸激酶在多种多肽磷酸化中可以序列依赖方式，利用ATP为底物。细胞周期蛋白是特征在于含约100个氨基酸同源区域的蛋白质家族，称为“细胞周期蛋白箱”，它用于按定义的选择性与特异性cdk配偶体蛋白结合。
细胞周期内各种cdks和细胞周期蛋白的表达水平调节、降低速率和活化水平导致周期性形成一系列cdk/细胞周期蛋白复合物，其中cdks是酶活性的。这些复合物的形成控制了通过单独细胞周期关卡的途径，因此使细胞***过程继续进行。如在特定的细胞周期关卡上未满足该必须的生化标准，即未形成必需的cdk/细胞周期蛋白复合物，则可导致细胞周期停滞和/或细胞凋亡。如同在癌中表现的异常细胞增殖经常可促使丧失正确的细胞周期控制。因此，可通过其反常地***细胞使它们的***停滞和/或杀死，提供抑制cdk酶活性的方法。cdks、cdk复合物的多样性及其在调节细胞周期的关键作用提供了根据定义的生化基本原理选择潜在广谱治疗靶标。
从细胞周期的G1期进展到S期主要由通过与D和E型细胞周期蛋白的成员缔合的cdk2、cdk3、cdk4和cdk6调节。D型细胞周期蛋白似乎有助于使途径越过G1限制点，其中因为cdk2/细胞周期蛋白E复合物是从G1到S期过渡的关键。据认为，随后通过S期和进入G2的进程需要cdk2/细胞周期蛋白A复合物。有丝***和引起G2至M期过渡均由cdk1和A、B型细胞周期蛋白的复合物调节。
在G1期成视网膜淋巴瘤蛋白(Rb)和有关的袋蛋白例如p130是cdk(2、4和6)/细胞周期蛋白复合物的底物。通过cdk(4/6)/细胞周期蛋白-D复合物使Rb和p130超磷酸化并因而钝化，部分促进通过G1的进程。Rb和p130超磷酸化后引起转录因子例如E2F释放，因而表达通过G1和进入S期的进程所必需的基因，例如细胞周期蛋白E的基因。通过使Rb进一步磷酸化，表达细胞周期蛋白E促使形成扩增或维持E2F水平的cdk2/细胞周期蛋白E复合物。cdk2/细胞周期蛋白E复合物还使DNA复制必需的其它蛋白例如涉及组蛋白生物合成的NPAT磷酸化。G1进程和G1/S过渡还受刺激Myc途径的有丝分离原调节，有丝分离原进入cdk2/细胞周期蛋白E途径。通过p53调节p21水平，Cdk2还与p53介导的DNA损伤应答途径相关。p21是cdk2/细胞周期蛋白E的蛋白抑制剂，因此可阻断或延迟G1/S过渡。因而，cdk2/细胞周期蛋白E复合物可代表一个点，在该点上，由Rb、Myc和p53途径产生的生化刺激累积到某种程度。因此，Cdk2和/或cdk2/细胞周期蛋白E复合物代表设计用于停滞或恢复控制异常***细胞的细胞周期的适当治疗靶标。
cdk3在细胞周期的确切作用不明。由于尚未鉴别出关联细胞周期蛋白配偶体，但显性阴性型cdk3延迟G1中的细胞，因而提示cdk3具有调节G1/S过渡的作用。
尽管大多数cdks涉及调节细胞周期，但有证据表明cdk家族的某些成员涉及其它生化过程。可通过cdk5举例说明这一点，必需cdk5维持正确的神经元发育，而且cdk5还涉及几种神经元蛋白例如τ、NUDE-1、突触蛋白1、DARPP32和Munc18/突触融合蛋白1A复合物的磷酸化。通常通过与p35/p39蛋白结合，激活神经元cdk5。但是，可通过与p25，即截短的p35结合，使Cdk5活性下调。可通过局部缺血、兴奋毒性和β-淀粉状肽诱导p35转化为p25和随后的cdk5活性下调。结果，p25涉及神经变性疾病例如早老性痴呆的发病病理，因此，具有作为针对这些疾病的治疗靶标的意义。
Cdk7是具有cdc2 CAK活性的核蛋白，并与细胞周期蛋白H结合。已鉴别出Cdk7是TFIIH转录复合物的成分，它具有RNA聚合酶IIC末端域(CTD)活性。该活性与通过Tat介导生化途径的HIV-1转录调节有关。
Cdk8与细胞周期蛋白C结合，并涉及RNA聚合酶II的CTD磷酸化。同样，cdk9/细胞周期蛋白-T1复合物(P-TEFb复合物)涉及延常控制RNA聚合酶II。还需要PTEF-b通过病毒反式激活蛋白Tat与细胞周期蛋白T1相互作用激活HIV-1基因组转录。因此，cdk7、cdk8、cdk9和P-TEFb复合物是潜在的抗病毒治疗药的靶标。
在分子水平上，调节cdk/细胞周期蛋白复合物活性需要一系列刺激和抑制磷酸化或去磷酸化、事件。通过一组由cdk激活的激酶(CAKs)和/或激酶例如wee1、Myt1和Mik1进行Cdk磷酸化。通过磷酸酯酶例如cdc25(a&c)、pp2a或KAP进行脱磷酸化。
Cdk/细胞周期蛋白复合物活性也可通过两个内源性细胞蛋白质抑制剂家族调节：Kip/Cip家族或INK家族。INK蛋白与cdk4和cdk6特异性结合。P16ink4(又称为MTS1)是潜在的在多种原发性癌症中突变或缺失的肿瘤抑制基因。Kip/Cip家族含蛋白例如p21Cip1，Waf1、p27Kip1和p57kip2。同前所述，p21经p53诱导，而使cdk2/细胞周期蛋白(E/A)和cdk4/细胞周期蛋白(D1/D2/D3)复合物失活。已在乳腺、结肠和***癌中发现非典型低p27表达水平。相反，细胞周期蛋白E在实体瘤中过度表达证实与患者预后差相关。细胞周期蛋白D1过度表达与食管、乳腺、鳞状癌和非小细胞肺癌有关。
以上概括cdks及其相关蛋白在增殖细胞中协调和驱动细胞周期的重要作用。也描述cdks在其中的某些生化途径中的关键作用。因此，潜在非常需要发展在cdks或具体cdks使用基因靶向疗法治疗增殖性疾病例如癌症的单一疗法。毫无疑问，Cdk抑制剂也可用于治疗其它病症例如病毒感染、自身免疫性疾病和神经变性疾病等。当用于与现有或新的治疗药物联合治疗时，Cdk靶向疗法还可在治疗前述疾病中提供临床益处。Cdk靶向抗癌疗法潜在具有超过目前许多抗肿瘤药物的优势，因为它们不与DNA直接相互作用，因此，应能减少发生继发性肿瘤的风险。
Aurora激酶
不久前，发现称为Aurora激酶的丝氨酸/苏氨酸激酶家族涉及细胞周期的G2和M期，它们是有丝***的重要调节剂。
Aurora激酶确切的作用有待阐明，但它们涉及有丝***关卡控制、染色体动力学和胞质***(Adams等，Trends Cell Biol.，11：49-54(2001)。Aurora激酶位于***间期细胞的中心体、两极纺锤体的极上和位于有丝***器的中体中。
迄今为止，在哺乳动物中已发现Aurora激酶家族的三个成员(E.A.Nigg，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2：21-32，(2001))。它们是：
Aurora A(文献中又称为Aurora 2)；
Aurora B(文献中又称为Aurora 1)；和
Aurora C(文献中又称为Aurora 3)。
各Aurora激酶具有高度同源催化域，但其N末端部分相当不同(Katayama H，Brinkley WR，Sen S.；The Aurora kinases：role in celltransformation and tumorigenesis(Aurora激酶：在细胞转化和肿瘤发生中的作用)；Cancer Metastasis Rev.2003年12月；22(4)：451-64)。
发现Aurora激酶A和B的底物包括驱动蛋白样动力蛋白、纺锤体器蛋白、组蛋白H3蛋白、着丝点蛋白和肿瘤抑制剂蛋白p53。
据认为，Aurora A激酶涉及纺锤体形成，因而在G2期早期定位于中心体，它们在其中使与纺锤体缔合的蛋白磷酸化(Prigent等，Cell，114：531-535(2003)。Hirota等，Cell，114：585-598，(2003)发现缺失Aurora A蛋白激酶的细胞不能进入有丝***。此外，已发现(Adams，2001)各物种中的Aurora A基因突变和破坏导致有丝***异常，它们包括中心体分离和突变缺陷、纺锤体畸形和染色体分离缺陷。
通常在大多数正常组织中低水平表达Aurora激酶，具有高比例的***细胞的组织例如胸腺和睾丸是例外。但是，在人肿瘤中发现高水平Aurora激酶(Giet等，J.Cell.Sci.112：3591-361，(1999)和Katayama(2003)。此外，Aurora A激酶绘制在许多人肿瘤中经常发现扩增的染色体20q13域图。
因此，例如在人乳腺、卵巢和胰腺癌中检测出显著的Aurora A过度表达(参见Zhou等，Nat.Genet.20：189-193，(1998)，Tanaka等，Cancer Res.，59：2041-2044，(1999)和Han等，cancer Res.，62：2890-2896，(2002)。
此外，Isola，American Journal of Pathology 147，905-911(1995)报道，Aurora A基因座(20q13)扩增与结节阴性乳腺癌患者预后差相关。
在人膀胱癌中发现Aurora-A扩增和/或过度表达，而Aurora-A扩增与非整数倍性和攻击性临床行为有关，参见Sen等，J.Natl.CancerInst，94：1320-1329(2002)。
在50％以上的结肠直肠癌中发现Aurora-A表达增加，(参见Bischoff等，EMBO J.，17：3052-3065，(1998)和Takahashi等，Jpn.J.Cancer Res.，91：1007-1014(2000))、卵巢癌(参见Gritsko等Clin.CancerRes.，9：1420-1426(2003)和胃瘤Sakakura等，British Journal of Cancer，84：824-831(2001)。
Tanaka等Cancer Research，59：2041-2044(1999)发现Aurora A在94％乳腺侵入管腺癌中过度表达的证据。
还在肾、子宫颈、成神经细胞瘤、黑素瘤、淋巴瘤、胰腺和***肿瘤细胞系中发现高水平的Aurora A激酶Bischoff等(1998)，EMBO J.，17：3052-3065(1998)；Kimura等J.Biol.Chem.，274：7334-7340(1999)；Zhou等，Nature Genetics，20：189-193(1998)；Li等，ClinCancer Res.9(3)：991-7(2003)]。
Aurora-B在多种人肿瘤细胞系包括白血病细胞中高达表达[Katayama等，Gene 244：1-7]]。在原发性结肠直肠癌中，该酶水平作为Duke阶段功能增加[Katayama等，J.Natl Cancer Inst.，91：1160-1162(1999)]。
既使Aurora-3激酶在正常组织中倾向于限制至细菌细胞，但在几种肿瘤细胞系中检测到高水平的Aurora-3(Aurora-C)(参见Kimura等Journal of Biological Chemistry，274：7334-7340(1999))。Takahashi等，Jpn J.Cancer Res.91：1007-1014(2001)]文章报道，Aurora-3在约50％结肠直肠癌中过度表达。
可在Bischoff等，Trends in Cell Biology 9：454-459(1999)；Giet等.Journal of Cell Science，112：3591-3601(1999)和Dutertre等Oncogene，21：6175-6183(2002)中找到关于Aurora激酶在增殖性疾病中作用的其它报道。
Royce等报道已注意到Aurora 2基因(称为STK15或BTAK)在约1/4的原发性乳腺瘤中表达。(Royce ME，Xia W，Sahin AA，KatayamaH，Johnston DA，Hortobagyi G，Sen S，Hung MC；STK15/Aurora-Aexpression in primary breast tumours is correlated with nuclear grade butnot with prognosis(在原发性乳腺瘤中表达的STK15/Aurora-A与核级有关，但与预后无关)；Cancer.2004年1月1日；100(1)：12-9)。
子宫内膜癌(EC)包括至少两种癌：子宫内膜样癌(EECs)是***相关肿瘤，它们经常为整倍体并具有良好预后。非子宫内膜样癌(NEECs；浆液和透明细胞形式)与***无关，经常为非整数倍，是临床攻击性的。还发现Aurora在55.5％NEECs扩增，而不在任何EECs中扩增(P＜或＝0.001)(Moreno-Bueno G，Sanchez-Estevez C，Cassia R，Rodriguez-Perales S，Diaz-Uriarte R，Dominguez O，Hardisson D，Andujar M，Prat J，Matias-Guiu X，Cigudosa JC，Palacios J.Cancer Res.2003年9月15日；63(18)：5697-702)。
Reichardt等(Oncol Rep.2003年9月-10月；10(5)：1275-9)报道，通过PCR定量DNA分析在神经胶质瘤中寻找Aurora扩增发现，不同WHO等级(1×II级、1×III级、3×IV级)的16种肿瘤中的5种(31％)表明Aurora 2基因的DNA扩增。假定Aurora 2基因扩增可能是在发生肿瘤的遗传途径中起作用的人神经胶质瘤中非随机遗传变更。
Hamada等的结果(Br.J.Haematol.2003年5月；121(3)：439-47)也提示Aurora 2是有效的候选，不仅表明非霍奇金淋巴瘤的疾病活性而且表明肿瘤发生。限制该基因功能所致肿瘤细胞生长延缓可能是治疗非霍奇金淋巴瘤的方法。
在Gritsko等的研究(Clin Cancer Res.2003年4月；9(4)：1420-6))中，在92个患有原发性卵巢癌的患者中检查了Aurora A的激酶活性和蛋白水平。体外激酶分析表明有44例(48％)Aurora A激酶活性增加。在52(57％)份样本中检出高Aurora A蛋白水平。高蛋白Aurora A水平与高激酶活性非常相关。
Li等得到的结果(Clin.Cancer Res.2003年3月；9(3)：991-7)表明Aurora A基因在胰腺肿瘤和癌细胞系过度表达，因而提示过度表达的Aurora A可能在胰腺癌发生中起作用。
类似地，Aurora A基因扩增和其编码的有丝***激酶的相关表达增加表明与人膀胱癌中非整数性和攻击性临床行为有关。(J.Natl.Cancer Inst.2002年9月4日；94(17)：1320-9)。
几组研究(Dutertre S，Prigent C.，Aurora-A overexpression leads tooverride of the microtubule-kinetochore attachment checkpoint(Aurora-A过度表达导致微管-着丝点附着关卡越过)；Mol.Interv.2003年5月；3(3)：127-30和Anand S，Penrhyn-Lowe S，Venkitaraman AR.，Aurora-Aamplification overrides the mitotic spindle assembly checkpoint，inducingresistance to Taxol(Aurora-A越过有丝***纺锤体集群关卡包括对紫杉醇耐药)，Cancer Cell.2003年1月；3(1)：51-62)提示，Aurora激酶活性过度表达与对目前某些癌症治疗产生耐药性有关。例如，在小鼠胚胎成纤维细胞中过度表达Aurora A，可减少这些细胞对紫杉烷衍生物细胞毒性作用的敏感性。因此，Aurora激酶抑制剂可在对现有治疗产生耐药性的患者中发挥特殊的作用。
根据迄今为止的工作，可以预计，抑制Aurora激酶，尤其抑制Aurora激酶A和Aurora激酶B将证明是抑制肿瘤发展的有效方法。
Harrington等(Nat Med.2004年3月；10(3)：262-7)证明Aurora激酶抑制剂体内抑制肿瘤生长，从而诱导肿瘤消退。在该研究中，Aurora激酶抑制剂阻滞癌细胞增殖，而且还在多种癌细胞系包括白血病、结肠直肠和乳腺细胞系中引发细胞死亡。
尤其易对Aurora抑制剂敏感的癌包括乳腺、膀胱、结肠直肠、胰腺、卵巢、非霍奇金淋巴瘤、神经胶质瘤和非子宫内膜样子宫内膜癌。
糖原合成酶激酶
糖原合成酶激酶-3(GSK3)是以在人中广泛表达的两个同种型(GSK3α和βGSK3β)出现的丝氨酸-苏氨酸激酶。GSK3涉及胚胎发育、蛋白质合成、细胞增殖、细胞分化、微管动力、细胞运动性和细胞凋亡。同样，GSK3涉及疾病例如糖尿病、癌症、早老性痴呆、中风、癫痫、运动神经原疾病和/或头部创伤。在种系发育中，GSK3与依赖细胞周期蛋白的激酶(CDKs)最密切相关。
由GSK3识别的共有序列肽底物序列是(Ser/Thr)-X-X-X-(pSer/pThr)，其中X是任何氨基酸(在(n+1)、(n+2)、(n+3)位置)，而pSer和pThr分别是磷酸-丝氨酸和磷酸-苏氨酸(n+4)。GSK3在位置(n)使第一个丝氨酸或苏氨酸磷酸化。引发GSK3提供最大底物更新似乎必需在(n+4)位置上的磷酸-丝氨酸或磷酸-苏氨酸。在Ser21使GSK3α磷酸化，或在Ser9使GSK3β磷酸化导致抑制GSK3。诱变和肽竞争研究得到通过自身抑制机制，GSK3的磷酸化N末端可与磷酸-肽底物(S/TXXXpS/pT)竞争的模型。也有数据提示，可通过分别使酪氨酸279和216磷酸化，精细调节GSK3α和GSKβ。这些残基突变为Phe导致体内激酶活性减少。GSK3β的X射线晶体结构使所有激活和调节GSK3的方面清析显现。
GSK3形成哺乳动物胰岛素应答途径的一部分并可磷酸化，因而使糖原合成酶失活。据认为，通过抑制GSK3上调糖原合成酶的活性，因此促使糖原合成是抗II型或非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)的潜在方法，NIDDM为其中身体组织对胰岛素刺激产生耐受性的病症。在肝脏、脂或肌肉组织中的细胞胰岛素反应由与胞外胰岛素受体结合的胰岛素引发。这导致胰岛素受体底物(IRS)蛋白磷酸化，然后募集至血浆膜上。IRS蛋白进一步磷酸化引发磷酸肌醇-3激酶(PI3K)募集至血浆膜上，它在其中可释放第二信使3，4，5-三磷酸磷脂酰肌酯(PIP3)。这促使3-磷酸肌醇-依赖蛋白激酶1(PDK1)和蛋白激酶B(PKB或Akt)共同定位至膜上，其中PDK1激活PKB。PKB可以磷酸化，因而通过分别使Ser9或ser21磷酸化，抑制GSK3α和/或GSKβ。然后抑制GSK3引发上调糖原合成酶活性。因此，能抑制GSK3的治疗药物可诱导细胞反应，与在胰岛素刺激中看到的那些反应同类。体内GSK3的另一个底物是真核细胞蛋白合成起始因子2B(eIF2B)。经磷酸化使eIF2B失活，因而可抑制蛋白生物合成。抑制GSK3，例如通过使“雷帕霉素的哺乳动物靶标”蛋白(mTOR)失活，从而可上调蛋白生物合成。最后，有某些证据表明通过用激酶例如有丝***原激活的蛋白激酶激活的蛋白激酶1(MAPKAP-K1或RSK)使GSK3磷酸化，通过有丝***原激活的蛋白激酶(MAPK)途径调节GSK3活性。这些数据提示GSK3活性可通过有丝***原、胰岛素和/或氨基酸刺激调节。
GSK3β已表明是脊椎动物Wnt信号途径中的关键成分。该生化途径已表明对正常胚胎发育是至关重要的，它调节正常组织中的细胞增殖。响应Wnt刺激后，GSK3受到抑制。这可导致GSK3底物例如Axin、腺瘤结肠息肉病(APC)基因产物和β-连环蛋白脱磷酸化。Wnt途径的异常调节与许多癌症相关。APC和/或β-连环蛋白中的突变在结肠直肠癌和其它肿瘤中是常见的。β-连环蛋白还表明在细胞粘联中具有重要作用。因此，GSK3也可调节细胞粘联至某种程度。除了所述的生化途径外，还有数据涉及GSK3通过使细胞周期蛋白-D1磷酸化调节细胞***；在使转录因子例如c-Jun、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、c-Myc和/或其它底物例如激活的T-细胞核因子(NFATc)、热休克因子-1(HSF-1)和c-AMP应答元件结合蛋白(CREB)磷酸化调节细胞***。尽管是组织特异性，GSK3还似乎在调节细胞凋亡中起作用。GSK3通过副细胞凋亡机制调节细胞凋亡的作用，可能与其中可发生神经原细胞凋亡的疾病相关。这些实例有头部创伤、中风、癫痫、早老性痴呆和运动神经元疾病、进行性核上麻痹、基于皮质的变性和皮克病。体外表明，GSK3可使微管结合蛋白τ超磷酸化。超磷酸化的τ破坏其与微管正常结合，可导致形成胞内τ丝体。据认为，这些丝体不断蓄积导致最终神经元功能紊乱、降解。因此，通过抑制GSK3抑制τ磷酸化提供限制和/或防止神经变性作用的方法。
Du Pont的WO 02/34721公开用作依赖细胞周期蛋白的激酶抑制剂的一类茚并[1，2-c]吡唑-4-酮。
Bristol Myers Squibb的WO 01/81348公开了5-硫-、亚磺酰基-和磺酰基吡唑并[3，4-b]-吡啶作为依赖细胞周期蛋白的激酶抑制剂的用途。
Bristol Myers Squibb的WO 00/62778还公开一类蛋白酪氨酸激酶抑制剂。
Cyclacel的WO 01/72745A1描述2-取代的4-杂芳基-嘧啶及其制备方法、含它们的药用组合物及其作为依赖细胞周期蛋白的激酶(cdks)抑制剂的用途，以及它们在治疗增殖性疾病如癌症、白血病、银屑病等中的用途。
Agouron的WO 99/21845描述抑制依赖细胞周期蛋白的激酶(cdks)例如CDK1、CDk2、CDK4和CDK6的4-氨基噻唑衍生物。该发明还涉及含此类化合物的药用组合物的治疗或预防用途；涉及通过给予有效量的此类化合物治疗恶性肿瘤和其它疾病的方法。
Agouron的WO 01/53274公开一类用作CDK激酶抑制剂的化合物，它们可含有与含N杂环基团连接的酰胺取代的苯环。尽管一般未提及吲唑化合物，但其中一个例举化合物含有通过甲硫基与吡唑并嘧啶连接的吲唑3-甲酰苯胺部分。
WO 01/98290(Pharmacia&Upjohn)公开用作蛋白激酶抑制剂的一类3-氨基羰基-2-羧酰胺基噻吩衍生物。据称，这些化合物具有多种蛋白激酶活性。
Agouron的WO 01/53268和WO 01/02369公开通过抑制蛋白激酶例如依赖细胞周期蛋白的激酶或酪氨酸激酶介导或抑制细胞增殖的化合物。这些Agouron化合物具有直接或通过CH＝CH或CH＝N基团与吲唑环的3位连接的芳基或杂芳基环。
WO 00/39108和WO 02/00651(均属Du Pont Pharmaceuticals)描述为酪氨酸样丝氨酸蛋白酶、尤其是Xa因子和凝血酶抑制剂的多类杂环化合物。据称，这些化合物可用于抗凝血剂或防止血栓栓塞疾病。
具有抗Xa因子活性的杂环化合物还在WO 01/1978 CorTherapeutics)和US 2002/009 1116(Zhu等)中公开。
WO 03/035065(Aventis)公开用作蛋白激酶抑制剂的多种苯并咪唑衍生物，但未公开抗CDK激酶或GSK激酶活性。
WO 97/36585和US 5,874,452(均属Merck)公开为法尼基转移酶抑制剂的二杂芳基化合物。
WO 03/066629(Vertex)公开用作GSK-3抑制剂的苯并咪唑基吡唑胺。
WO 97/12615(Warner Lambert)公开用作15-脂肪氧合酶抑制剂的苯并咪唑类化合物。
发明概述
本发明提供具有抑制或调节依赖细胞周期蛋白的激酶活性；抑制或调节糖原合成酶激酶-3(GSK3)活性和/或抑制或调节Aurora激酶活性的化合物，并且预计它们可用于预防或治疗由上述激酶介导的疾病或病症。
因此，例如预计本发明化合物可用于缓解或减少癌症发生率。
因此，本发明尤其提供：
●本文中定义的式(I)化合物在制备预防或治疗由依赖细胞周期蛋白的激酶或糖原合成酶激酶-3介导的疾病或病症的药物中的用途。
●预防或治疗由依赖细胞周期蛋白的激酶或糖原合成酶激酶-3介导的疾病或病症的方法，该方法包括给予有需要的患者本文中定义的式(I)化合物。
●缓解或减少由依赖细胞周期蛋白的激酶或糖原合成酶激酶-3介导的疾病或病症发生率的方法，该方法包括给予有需要的患者本文中定义的式(I)化合物。
●治疗包括或由哺乳动物中异常细胞生长引起的疾病或病症的方法，该方法包括给予哺乳动物有效抑制异常细胞生长的量的本文中定义的式(I)化合物。
●缓解或减少包括或由哺乳动物中异常细胞生长引起的疾病或病症发生率的方法，该方法包括给予哺乳动物有效抑制异常细胞生长的量的本文中定义的式(I)化合物。
●治疗包括或由哺乳动物中异常细胞生长引起的疾病或病症的方法，该方法包括给予哺乳动物有效抑制cdk激酶(例如cdk1或cdk2)或糖原合成酶激酶-3活性的量的本文中定义的式(I)化合物。
●缓解或减少包括或由哺乳动物中异常细胞生长引起的疾病或病症发生率的方法，该方法包括给予哺乳动物有效抑制cdk激酶(例如cdk1或cdk2)或糖原合成酶激酶-3活性的量的本文中定义的式(I)化合物。
●抑制依赖细胞周期蛋白的激酶或糖原合成酶激酶-3的方法，该方法包括使所述激酶与本文中定义的式(I)激酶抑制化合物接触。
●通过用本文中定义的式(I)化合物抑制依赖细胞周期蛋白的激酶或糖原合成酶激酶-3活性，来调节细胞过程(例如细胞***)的方法。
●本文中定义的式(I)化合物在制备预防或治疗特征在于Aurora激酶(例如Aurora A激酶或Aurora B激酶)上调的疾病或病症的药物中的用途。
●本文中定义的式(I)化合物在制备预防或治疗癌症的药物中的用途，所述癌症是特征在于Aurora激酶(例如Aurora A激酶或AuroraB激酶)上调的癌症。
●本文中定义的式(I)化合物在制备预防或治疗患者癌症的药物中的用途，所述患者选自具有Aurora A基因Ile31变种的亚种群。
●本文中定义的式(I)化合物在制备预防或治疗患者癌症的药物中的用途，所述患者被诊断为具有Aurora A基因Ile31变种的亚种群的形成部分。
●预防或治疗特征在于Aurora激酶(例如Aurora A激酶或Aurora B激酶)上调的疾病或病症的方法，该方法包括给予本文中定义的式(I)化合物。
●缓解或减少特征在于Aurora激酶(例如Aurora A激酶或AuroraB激酶)上调的疾病或病症发生率的方法，该方法包括给予本文中定义的式(I)化合物。
●在患有或疑似患有癌症的患者中预防或治疗(或缓解或减少发生)癌症的方法；该方法包括(i)使患者进行诊断测试，确定该患者是否具有Aurora A基因Ile31变种；(ii)当患者确实具有所述变种时，则给予该患者具有抑制Aurora激酶活性的本文中定义的式(I)化合物。
●预防或治疗(或缓解或减少发生)特征在于Aurora激酶(例如Aurora A激酶或Aurora B激酶)上调的疾病或病症的方法；该方法包括(i)使患者进行诊断测试，检测Aurora激酶上调的特征标记，和(ii)当诊断测试表明Aurora激酶上调时，则给予该患者具有抑制Aurora激酶活性的本文中定义的式(I)化合物。
本发明化合物为具有通式(I)的化合物及其盐、N-氧化物和溶剂合物：
其中
X为CR5或N；
A为键或-(CH2)m-(B)n-；
B为C＝O、NRg(C＝O)或O(C＝O)，其中Rg为氢或任选被羟基或C1-4烷氧基取代的C1-4烃基；
m为0、1或2；
n为0或1；
R0为氢，或当存在NRg时，与NRg一起形成-(CH2)p-，其中p为2-4；
R1为氢、具有3-12个环成员的碳环或杂环基或任选取代的C1-8烃基；
R2为氢、卤素、甲氧基，或任选被卤素、羟基或甲氧基取代的C1-4烃基；
R3和R4与它们连接的碳原子一起形成任选取代的具有5-7个环成员的稠合碳环或杂环，其中最多达3个环成员可以为选自N、O和S的杂原子；和
R5为氢、R2基团或R10基团，其中R10选自卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12个环成员的碳环和杂环基；Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X1C(X2)、C(X2)X1、X1C(X2)X1、S、SO、SO2、NRc、SO2NRc或NRcSO2；Rb选自氢、具有3-12个环成员的碳环和杂环基、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12个环成员的碳环和杂环基，其中C1-8烃基中的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、NRc、X1C(X2)、C(X2)X1或X1C(X2)X1置换；
Rc选自氢和C1-4烃基；和
X1为O、S或NRc，X2为＝O、＝S或＝NRc。
除本文中另有所指外，前述方法和用途、任何其它治疗和诊断方法和用途以及治疗本文中定义的动物和植物的方法也可使用式(I)化合物范围内的任何亚类、亚属、优先选择或实例，例如式(II)-(IXa)化合物及其任何亚类。
通用的优先选择和定义
除本文中另有所指外，以下通用的优先选择和定义适用于R1-R10的各部分、它们的各亚类、副定义、实例和实施方案。在本说明书中，R基团数字后的上标字母表示该基团为只由该数字指定的R基团亚类。因此，例如R1a、R1b和R1c都为R1的亚类，类似地，R9a和R9b为R9的亚类。因此，除另有所指外，描述的如R1的通用优先选择、定义和实例也适用于其亚类R1a、R1b、R1c等，其它R基团类似。
除本文中另有所指外，本文中只要涉及式(I)还指式(II)-(VII)和式(I)中化合物的任何其它亚类。
本文中使用的术语Aurora激酶上调定义为包括提高表达或过度表达Aurora激酶；包括基因扩增(即多基因模板)和通过转录作用增加表达；Aurora激酶活动过强和激活包括通过突变激活。
除本文中另有所指外，本文中使用的“碳环”和“杂环”基团包括芳族和非芳族环***。因此，例如术语“碳环和杂环基”包括在其范围内的芳族、非芳族、不饱和、部分饱和和完全饱和的碳环和杂环环***。一般而言，此类基团可以为单环或双环，并可含有例如3-12个环成员，更通常5-10个环成员。单环基团的实例为含有3、4、5、6、7和8个环成员，更通常3-7，优选5或6个环成员的基团。双环基团的实例为那些含有8、9、10、11和12个环成员，更通常9或10个环成员的基团。
碳环或杂环基团可以为具有5-12个环成员，更通常5-10个环成员的芳基或杂芳基。本文中使用的术语“芳基”指具有芳族特性的碳环基团，而本文中使用的术语“杂芳基”表示具有芳族特性的杂环基团。术语“芳基”和“杂芳基”包括多环(例如双环)环***，其中一个或多个环为非芳族环，条件是至少一个环为芳族环。在此类多环***中，可通过芳环或通过非芳环连接基团。芳基或杂芳基可以为单环或双环基团，并可未被取代，或被一个或多个取代基例如一个或多个本文中定义的R10基团取代。
术语“非芳族基团”包含无芳族特性的不饱和环***、部分饱和和完全饱和的碳环和杂环环***。术语“不饱和”和“部分饱和”指其中环结构含有共用大于一个价键的原子的环，即该环含有至少一个重键例如C＝C、C≡C或N＝C键。术语“完全饱和”指其中环原子间无重键的环。饱和碳环基团包括以下定义的环烷基，部分饱和的碳环基团包括如下定义的环烯基，例如环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。
杂芳基的实例为含有5-12个环成员，更通常5-10个环成员的单环和双环基团。杂芳基可以为例如5元或6元单环，或由稠合的5元和6元环、或两个稠合的6元环、或两个稠合的5元环形成的双环结构。各个环可含最高达约4个通常选自氮、硫和氧的杂原子。通常，杂芳环含最高达4个杂原子，更通常最高达3个杂原子，还更通常最高达2个，例如单个杂原子。在一个实施方案中，杂芳环含至少一个环氮原子。例如在咪唑或吡啶的情况中，在杂芳环中的氮原子可以为碱性，或在吲哚或吡咯氮的情况中，基本上无碱性。一般而言，存在于杂芳基包括环上的任何氨基取代基的碱性氮原子的数目小于5。
5元杂芳基的实例包括但不限于吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、呋咱、
唑、
二唑、
***、异唑、噻唑、异噻唑、吡唑、***和四唑的基团。
6元杂芳基的实例包括但不限于吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶和三嗪的基团。
双环杂芳基可以为例如选自以下的基团：
a)与含1、2或3个环杂原子的5元或6元环稠合的苯环；
b)与含1、2或3个环杂原子的5元或6元环稠合的吡啶环；
c)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的嘧啶环；
d)与含1、2或3个环杂原子的5元或6元环稠合的吡咯环；
e)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的吡唑环；
f)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的咪唑环；
g)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的唑环；
h)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的异
唑环；
i)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的噻唑环；
j)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的异噻唑环；
k)与含1、2或3个环杂原子的5元或6元环稠合的噻吩环；
l)与含1、2或3个环杂原子的5元或6元环稠合的呋喃环；
m)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的
唑环；
n)与含1或2个环杂原子的5元或6元环稠合的异唑环；
o)与含1、2或3个环杂原子的5元或6元环稠合的环己基环；和
p)与含1、2或3个环杂原子的5元或6元环稠合的环戊基环。
含与另一个5元环稠合的5元环的双环杂芳基的具体实例包括但不限于咪唑并噻唑(例如咪唑并[2，1-b]噻唑)和咪唑并咪唑(例如咪唑并[1，2-a]咪唑)。
含与5元环稠合的6元环的双环杂芳基的具体实例包括但不限于苯并呋喃、苯并噻吩、苯并咪唑、苯并唑、异苯并
唑、苯并异
唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、异苯并呋喃、吲哚、异吲哚、中氮茚、二氢吲哚、异二氢吲哚、嘌呤(例如腺嘌呤、鸟嘌呤)、吲唑、吡唑并嘧啶(例如吡唑并[1，5-a]嘧啶)、***并嘧啶(例如[1，2，4]***并[1，5-a]嘧啶)、苯并间二氧杂环戊烯和吡唑并吡啶(例如吡唑并[1，5-a]吡啶)基团。
含两个稠合的6元环的双环杂芳基的具体实例包括但不限于喹啉、异喹啉、苯并二氢吡喃、二氢苯并噻喃、苯并吡喃、异苯并吡喃、苯并二氢吡喃、异苯并二氢吡喃、苯并二烷、喹嗪、苯并嗪、苯并二嗪、吡啶并吡啶、喹喔啉、喹唑啉、肉啉、2，3-二氮杂萘、萘啶和蝶啶基团。
含芳环和非芳环的多环芳基和杂芳基的实例包括四氢化萘、四氢异喹啉、四氢喹啉、二氢苯并噻吩(dihydrobenzthiene)、二氢苯并呋喃、2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯、苯并[1，3]间二氧杂环戊烯、4，5，6，7-四氢苯并呋喃、二氢吲哚和1，2-二氢化茚基团。
碳环芳基的实例包括苯基、萘基、茚基和四氢萘基。
非芳族杂环基的实例为具有3-12个环成员，更通常5-10个环成员的基团。此类基团可以为单环或双环，例如通常具有1-5个杂原子环成员(更通常1、2、3或4个杂原子环成员)，通常选自氮、氧和硫。这些杂环基团可含有例如环醚部分(例如在四氢呋喃和二烷中)、环硫醚部分(例如在四氢噻吩和二噻烷中)、环胺部分(例如在吡咯烷中)、环酰胺部分(例如在吡咯烷酮)、环硫代酰胺、环硫代酸酯、环脲(例如在咪唑烷-2-酮)、环酯部分(例如在丁内酯)、环砜(例如在环戊烷砜和环戊烯砜中)、环亚砜、环磺酰胺及其组合(例如硫代吗啉)。
具体实例包括吗啉、哌啶(例如1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基和4-哌啶基)、哌啶酮、吡咯烷(例如1-吡咯烷基、2-吡咯烷基和3-吡咯烷基)、吡咯烷酮、氮杂环丁烷、吡喃(2H-吡喃或4H-吡喃)、二氢噻吩、二氢吡喃、二氢呋喃、二氢噻唑、四氢呋喃、四氢噻吩、二烷、四氢吡喃(例如4-四氢吡喃基)、咪唑啉、咪唑烷酮、
唑啉、噻唑啉、2-吡唑啉、吡唑烷、哌嗪酮(piperazone)、哌嗪和N-烷基哌嗪例如N-甲基哌嗪。一般而言，优选的非芳族杂环基包括饱和基团例如哌啶、吡咯烷、氮杂环丁烷、吗啉、哌嗪和N-烷基哌嗪。
非芳族碳环基的实例包括环烷基例如环己基和环戊基；环烯基例如环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基；以及环己二烯基、环辛四烯、四氢萘次甲基和萘烷基。
当在本文中提到碳环和杂环基时，除本文中另有所指外，这些碳环和杂环可未被取代或被选自以下的一个或多个R10取代基取代：卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12个环成员的碳环和杂环基团；Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X1C(X2)、C(X2)X1、X1C(X2)X1、S、SO、SO2、NRc、SO2NRc或NRcSO2；Rb选自氢、具有3-12个环成员的碳环和杂环基团、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12个环成员的碳环和杂环基团，其中C1-8烃基上的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、NRc、X1C(X2)、C(X2)X1或X1C(X2)X1置换；或两相邻基团R10与其连接的碳原子或杂原子一起形成5元杂芳基环或5元或6元非芳族碳环或杂环，其中所述杂芳基和杂环基含最多达3个选自N、O和S的杂原子环成员；
Rc选自氢和C1-4烃基；和
X1为O、S或NRc，X2为＝O、＝S或＝NRc。
其中取代基R10含有或包括碳环或杂环基，所述碳环或杂环基可未取代或本身可被一个或多个另外的R10取代基取代。在式(I)化合物的一个亚类中，此类另外的取代基R10可包括碳环或杂环基，它们一般不再被取代。在式(I)化合物的另一个亚类中，所述另外的取代基不包括碳环或杂环基，但另外选自以上R10定义中列举的基团。
可如此选择取代基R10，以使它们所含的非氢原子不超过20个，例如不超过15个非氢原子，例如不超过12，或11，或10，或9，或8，或7，或6，或5个非氢原子。
当碳环和杂环基在相邻环原子上具有一对取代基时，这两个取代基可连接形成环状基团。例如，环中相邻碳原子上的相邻两取代基可通过一个或多个杂原子和任选取代的亚烷基连接，形成稠合的氧杂-、二氧杂-、氮杂-、二氮杂-或氧杂-氮杂-环烷基。这样连接的取代基的实例包括：
卤素取代基的实例包括氟、氯、溴和碘。尤其优选氟和氯。
在上式(I)化合物的定义中及下文使用的术语“烃基”为包括除另有说明外的具有全碳骨架的脂族、脂环族和芳族基团的通用术语。在本文定义的某些情况中，组成碳骨架的一个或多个碳原子可被指定的原子或原子团置换。烃基的实例包括烷基、环烷基、环烯基、碳环芳基、烯基、炔基、环烷基烷基、环烯基烷基以及碳环芳烷基、芳烯基和芳炔基。此类基团可未被取代，或说明被一个或多个本文中定义的取代基取代。除另有说明外，下述实例和优先选择适用于在式(I)化合物取代基的各种定义提及的各个烃基取代基或含烃基的取代基。
优选的非芳族烃基为饱和基团例如烷基和环烷基。
除本文另有要求外，通常作为实例，烃基可具有最多达8个碳原子。在具有1-8个碳原子的烃基亚组中，特别的实例为C1-6烃基例如C1-4烃基(例如C1-3烃基或C1-2烃基)，具体的实例为选自C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7和C8烃基的任何单独的值或这些值的组合。
术语“烷基”包括直链和支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基丁基、3-甲基丁基和正己基及其异构体。在具有1-8个碳原子的烷基亚组中，特别的实例为C1-6烷基，例如C1-4烷基(例如C1-3烷基或C1-2烷基)。
环烷基的实例为源自环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷和环庚烷的那些环烷基。在环烷基的亚组中，环烷基具有3-8个碳原子，特别的实例为C3-6环烷基。
烯基的实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、异丙烯基、丁烯基、丁-1，4-二烯基、戊烯基和己烯基。在烯基的亚组中，烯基具有2-8个碳原子，特别的实例为C2-6烯基，例如C2-4烯基。
环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环戊二烯基和环己烯基。在环烯基亚组中，环烯基具有3-8个碳原子，特别的实例为C3-6环烯基。
炔基的实例包括但不限于乙炔基和2-丙炔基(炔丙基)。在具有2-8个碳原子的炔基的亚类中，特别的实例为C2-6炔基，例如C2-4炔基。
碳环芳基的实例包括取代的和未取代的苯基。
环烷基烷基、环烯基烷基及碳环芳烷基、芳烯基和芳炔基的实例包括苯乙基、苄基、苯乙烯基、苯乙炔基、环己基甲基、环戊基甲基、环丁基甲基、环丙基甲基和环戊烯基甲基。
当存在和其中指出时，烃基可被一个或多个选自以下的取代基任选取代：羟基、氧代基、烷氧基、羧基、卤素、氰基、硝基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12(通常3-10，更通常5-10)个环成员的单环或双环碳环和杂环基。优选的取代基包括卤素例如氟。因此，例如取代的烃基可以为部分氟代或全氟代基团例如二氟甲基或三氟甲基。在一个实施方案中，优选的取代基包括具有3-7个，更通常3、4、5或6个环成员的单环碳环和杂环基。
当指出时，烃基的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、NRc、X1C(X2)、C(X2)X1或X1C(X2)X1置换，其中X1和X2定义同前，条件是保留烃基的至少一个碳原子。例如，烃基的1、2、3或4个碳原子可被列出的原子或基团中的一种置换，置换原子或基团可以相同或不同。一般而言，被置换的直链或骨架碳原子的数目对应于置换它们的基团中的直链或骨架原子的数目。其中烃基的一个或多个碳原子被定义同上的置换原子或基团置换的基团实例包括醚和硫醚(C被O或S置换)、酰胺、酯、硫代酰胺和硫代酸酯(C-C被X1C(X2)或C(X2)X1置换)、砜和亚砜(C被SO或SO2置换)、胺(C被NRc置换)、脲、碳酸酯和氨基甲酸酯(C-C-C被X1C(X2)X1置换)。
当氨基具有两个烃基取代基时，它们可与其连接的氮原子并任选与其它杂原子例如氮、硫或氧一起连接形成4-7个环成员的环结构。
无论指存在于碳环或杂环部分的取代基，还是指存在于式(I)化合物其它位置的其它取代基，本文中定义的″Ra-Rb″尤其包括化合物：其中Ra选自键、O、CO、OC(O)、SC(O)、NRcC(O)、OC(S)、SC(S)、NRcC(S)、OC(NRc)、SC(NRc)、NRcC(NRc)、C(O)O、C(O)S、C(O)NRc、C(S)O、C(S)S、C(S)NRc、C(NRc)O、C(NRc)S、C(NRc)NRc、OC(O)O、SC(O)O、NRcC(O)O、OC(S)O、SC(S)O、NRcC(S)O、OC(NRc)O、SC(NRc)O、NRcC(NRc)O、OC(O)S、SC(O)S、NRcC(O)S、OC(S)S、SC(S)S、NRcC(S)S、OC(NRc)S、SC(NRc)S、NRcC(NRc)S、OC(O)NRc、SC(O)NRc、NRcC(O)NRc、OC(S)NRc、SC(S)NRc、NRcC(S)NRc、OC(NRc)NRc、SC(NRc)NRc、NRcC(NRcNRc、S、SO、SO2、NRc、SO2NRc和NRcSO2，其中Rc定义同前。
Rb部分可以为氢，或可为选自以下的基团：具有3-12个环成员(通常3-10，更通常5-10个)的碳环和杂环基、任选取代的定义同前的C1-8烃基。烃基、碳环和杂环基的实例描述同上。
当Ra为O，而Rb为C1-8烃基时，Ra和Rb一起形成烃氧基。优选的烃氧基包括饱和烃氧基例如烷氧基(例如C1-6烷氧基，更通常C1-4烷氧基例如乙氧基和甲氧基，尤其甲氧基)、环烷氧基(例如C3-6环烷氧基例如环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基)和环烷基烷氧基(例如C3-6环烷基-C1-2烷氧基例如环丙基甲氧基)。
烃氧基可被各种本文中定义的取代基取代。例如，烷氧基可被卤素取代(例如在二氟甲氧基和三氟甲氧基)、羟基(例如在羟基乙氧基)、C1-2烷氧基(例如在甲氧基乙氧基)、羟基-C1-2烷基(如在羟基乙氧基乙氧基)或环状基团(例如前文定义的环烷基或非芳族杂环基)。连接作为取代基的非芳族杂环基的烷氧基实例为其中杂环基为饱和的环胺例如吗啉、哌啶、吡咯烷、哌嗪、C1-4-烷基-哌嗪、C3-7-环烷基-哌嗪、四氢吡喃或四氢呋喃，且烷氧基为C1-4烷氧基，更通常C1-3烷氧基例如甲氧基、乙氧基或正丙氧基的那些基团。
烷氧基被单环基例如吡咯烷、哌啶、吗啉和哌嗪及其N-取代的衍生物例如N-苄基、N-C1-4酰基和N-C1-4烷氧基羰基取代。具体实例包括吡咯烷-1-基乙氧基、哌啶子基乙氧基和哌嗪-1-基乙氧基。
当Ra为键，而Rb为C1-8烃基时，烃基Ra-Rb的实例定义同前。烃基可以为饱和的基团例如环烷基和烷基，此类基团的具体实例包括甲基、乙基和环丙基。烃基(例如烷基)可被本文定义的各种基团和原子取代。取代的烷基实例包括被一个或多个卤素原子例如氟和氯取代的烷基(具体实例包括溴乙基、氯乙基和三氟甲基)或羟基(例如羟甲基和羟乙基)、C1-8酰氧基(例如乙酰氧基甲基和苄氧基甲基)、氨基和一-和二烷基氨基(例如氨基乙基、甲基氨基乙基、二甲基氨基甲基、二甲基氨基乙基和叔丁基氨基甲基)、烷氧基(例如C1-2烷氧基例如甲氧基-如在甲氧基乙基中)和环状基团，例如前文定义的环烷基、芳基、杂芳基和非芳族杂环基)。
被环状基团取代的烷基的具体实例为那些这样的基团：其中环状基团为饱和环胺例如吗啉、哌啶、吡咯烷、哌嗪、C1-4-烷基-哌嗪、C3-7-环烷基-哌嗪、四氢吡喃或四氢呋喃，且烷基为C1-4烷基，更通常C1-3烷基例如甲基、乙基或正丙基。被环状基团取代的烷基的具体实例包括吡咯烷-1-基甲基、吡咯烷-1-基丙基、吗啉代甲基、吗啉代乙基、吗啉代丙基、哌啶基甲基、哌嗪-1-基甲基及其定义同本文的N-取代形式。
被芳基和杂芳基取代的烷基的具体实例包括苄基和吡啶基甲基。
当Ra为SO2NRc时，Rb可以为例如氢或任选取代的C1-8烃基，或碳环或杂环基。其中Ra为SO2NRc的Ra-Rb的实例包括氨基磺酰基、C1-4烷基氨基磺酰基和二-C1-4烷基氨基磺酰基及由环状氨基例如哌啶、吗啉、吡咯烷形成的磺酰胺，或任选N-取代的哌嗪例如N-甲基哌嗪。
其中Ra为SO2的Ra-Rb基团的实例包括烷基磺酰基、杂芳基磺酰基和芳基磺酰基，尤其单环芳基和杂芳基磺酰基。具体实例包括甲基磺酰基、苯基磺酰基和甲苯磺酰基。
当Ra为NRc时，Rb可以为例如氢或任选取代的C1-8烃基，或碳环或杂环基。其中Ra为NRc的Ra-Rb的实例包括氨基、C1-4烷基氨基(例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、叔丁基氨基)、二-C1-4烷基氨基(例如二甲氨基和二乙氨基)和环烷基氨基(例如环丙基氨基、环戊基氨基和环己基氨基)。
R0-R10和X的具体实施方案和优先选择
在式(I)中，X可以为CR5或N。在一个特别的实施方案中，X为N。在另一个特别的实施方案中，X为CH。优选X为N。
R0可以为氢，或当存在Rg时，可与Rg基团一起形成桥连基-(CH2)p-，其中p为2-4，更通常2-3例如2。优选R0为氢。
当R0和Rg基团形成桥连基-(CH2)p-时，则实体-(CH2)m-(B)n-NR0-可由下式代表：
当A为键或-(CH2)m-(B)n-基团，其中n为0时，X可以为N或CR5，其中R5为氢或R10基团。更优选X为N。
当A为键或-(CH2)m-(B)n-，其中n为1时，优选X为N或CR5，其中R5为氢或R2基团。更优选X为N。
当R5不为氢时，更特别地是当n为1时，优选含不多于14个原子的小取代基，例如C1-4烷基或C3-6环烷基例如甲基、乙基、丙基和丁基，或环丙基和环丁基。
A为键或-(CH2)m-(B)n-，其中B为C＝O、NRg(C＝O)或O(C＝O)，m为0、1或2；n为0或1。在本发明化合物的一个优选的基团中，m为0或1，n为1，B为C＝O或NRg(C＝O)，优选C＝O。更优选m为0，n为1，B为C＝O。现优选，当B为NRg(C＝O)时，Rg为氢。
可以认识到，与吡唑环4位连接的R1-A-NH部分可采取R1-(CH2)m-NH胺、R1-(CH2)m-C(＝O)NH酰胺、R1-(CH2)m-NHC(＝O)NH脲或R1-(CH2)m-OC(＝O)NH氨基甲酸酯的形式，其中在各情况中，m为0、1或2，优选0或1，最优选0。
R1为氢、具有3-12个环成员的碳环或杂环基，或前文定义的任选取代的C1-8烃基。碳环和杂环基、任选取代的烃基的实例描述同上。
例如，R1可以为具有3-10个环成员的单环或双环基团。
其中R1为单环基团，通常它具有3-7个环成员，更通常3-6个环成员，例如3、4、5或6。
当单环基团R1为芳基时，它具有6个环成员，为未取代的或取代的苯环。
当单环基团R1为非芳族碳环基时，它可具有3-7个环成员，更通常3-6个环成员，例如3或4、或5、或6个环成员。非芳族碳环基可以饱和或部分不饱和，但优选其饱和，即R1为环烷基。
当单环基团R1为杂芳基时，它含有5或6个环成员。具有5和6个环成员的杂芳基的实例描述同上，具体实例描述如下。
在化合物的一个亚类中，杂芳基具有5个环成员。
在化合物的另一个亚类中，杂芳基具有6个环成员。
单环杂芳基R1通常具有最多达4个选自N、O和S的环杂原子，更通常最高达3个环杂原子，例如1、2或3个环杂原子。
当R1为非芳族单环杂环基时，它可以为上文或下文列出基团中的任何一个。此类基团通常具有4-7个环成员，更优选5或6个环成员。非芳族单环杂环基通常含最多达3个选自N、S和O的环杂原子，更通常1或2个环杂原子。杂环基可以饱和或部分不饱和，但优选其饱和。非芳族单环杂环基的具体实例为在上节“通用优先选择和定义”中定义的具体和优选的实例，同下表和实例中描述。
当R1为双环基团时，通常它具有8-10个环成员，例如8或9、或10个环成员。双环基团可以为芳基或杂芳基，此类基团的实例包括包含以下的基团：与另一个5元环稠合的5元环；与6元环稠合的5元环；和与另一个6元环稠合的6元环。其中每一类基团的实例在上节“通用优先选择和定义”中阐明。
双环芳基或杂芳基可包含两个芳族或不饱和环，或一个芳族和一个非芳族(例如部分饱和)环。
双环杂芳基通常含最高达4个选自N、S和O的杂原子环成员。因此，例如它们可含有1、或2、或3或4个杂原子环成员。
在单环和双环杂环基团R1中，杂原子环成员组合的实例包括N；NN；NNN；NNNN；NO；NNO；NS、NNS、O、S、OO和SS。
R1的具体实例包括选自以下的任选取代或未取代的杂芳基：吡唑并[1，5-a]吡啶基(例如吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)、呋喃基(例如2-呋喃基和3-呋喃基)、吲哚基(例如3-吲哚基、4-吲哚基和7-吲哚基)、唑基、噻唑基(例如噻唑-2-基和噻唑-5-基)、异唑基(例如异
唑-3-基和异唑-4-基)、吡咯基(例如3-吡咯基)、吡啶基(例如2-吡啶基)、喹啉基(例如喹啉-8-基)、2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯(例如2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-基)、苯并[1，3]间氧杂环戊烯(例如苯并[1，3]间氧杂环戊烯-4-基)、2，3-二氢苯并呋喃基(例如2，3-二氢苯并呋喃-7-基)、咪唑基和噻吩基(例如3-噻吩基)。
R1的其它实例包括选自以下的取代或未取代的杂芳基：吡唑并[1，5-a]嘧啶、异苯并呋喃、[1，2，4]***并[1，5-a]嘧啶、四唑基、四氢异喹啉基(例如1，2，3，4-四氢异喹啉-7-基)、嘧啶基、吡唑基、***基、4，5，6，7-四氢-苯并[d]异
唑、2，3-二氮杂萘、2H-酞嗪-1-酮、苯并
唑、肉啉、喹喔啉、萘、苯并[c]异唑、咪唑并[2，1-b]噻唑、吡啶酮、四氢喹啉基(例如1，2，3，4-四氢喹啉-6-基)和4，5，6，7-四氢-苯并呋喃基。
优选的R1杂芳基包括吡唑并[1，5-a]吡啶基、呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、噻吩基、吲哚基、噻唑基、异唑基和2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯基。
优选的芳基R1为任选取代的苯基。
非芳基R1的实例包括单环环烷基和氮杂环烷基例如环己基、环戊基和哌啶基，尤其环己基和4-哌啶基。非芳基R1的其它实例包括单环氧杂环烷基例如四氢吡喃基和氮杂-氧杂环烷基例如吗啉代(例如2-吗啉代和4-吗啉代)。
优选的取代的和未取代的C1-8烃基包括三氟甲基和叔丁基。
优选的R1基团的一个亚类包括苯基、吡唑并[1，5-a]吡啶基和2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯基。
优选的R1基团的另一个亚类包括未取代的和取代的苯基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯、吲哚-4-基、2，3-二氢苯并呋喃基、叔丁基、呋喃基、吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基、吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基、
唑基、异唑基、苯并唑-2-基、2H-四唑-5-基、吡嗪-2-基、吡唑基、苄基、α，α-二甲基苄基、α-氨基苄基、α-甲基氨基苄基、4，5，6，7-四氢-苯并[d]异唑-3-基、2H-酞嗪-1-酮-4-基、苯并唑-7-基、喹唑啉基、2-萘基、环丙基、苯并[c]异唑-3-基、4-哌啶基、5-噻唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、3-吡咯基、异
唑基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、4-嘧啶基、环己基、四氢吡喃-4-基、四氢喹啉基、4，5，6，7-四氢-苯并呋喃基和吗啉基。
R1基团可以为未取代的或取代的碳环或杂环基，其中一个或多个取代基可选自前文定义的R10基团。在一个实施方案中，R1上的取代基可选自由以下基团组成的R10a：卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基，具有5或6个环成员和最多达2个选自O、N和S的杂原子的杂环基，Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X3C(X4)、C(X4)X3、X3C(X4)X3、S、SO或SO2，Rb选自氢、具有5或6个环成员和最多达2个选自O、N和S的杂原子的杂环基、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有5或6个环成员和最多达2个选自O、N和S的杂原子的碳环和杂环基；其中C1-8烃基的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、X3C(X4)、C(X4)X3或X3C(X4)X3置换；X3为O或S；X4为＝O或＝S。
在再一个实施方案中，R1上的取代基可选自由以下基团组成的R10b基团：卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X3C(X4)、C(X4)X3、X3C(X4)X3、S、SO或SO2，Rb选自氢和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基；其中C1-8烃基的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、X3C(X4)、C(X4)X3或X3C(X4)X3置换；X3为O或S；X4为＝O或＝S。
在另一个实施方案中，R1上的取代基可选自卤素、羟基、三氟甲基、Ra-Rb基团，其中Ra为键或O，Rb选自氢、任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃基。
可在R1基团(例如芳基或杂芳基R1)上存在的一亚类取代基包括氟、氯、甲氧基、甲基、唑基、吗啉代、三氟甲基、溴甲基、氯乙基、吡咯烷-1-基、吡咯烷基乙氧基、吡咯烷基甲基、二氟甲氧基和吗啉代甲基。
可在R1基团上存在的另一亚类取代基包括氟、氯、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、氨基、
唑基、吗啉代、三氟甲基、溴甲基、氯乙基、吡咯烷-1-基、吡咯烷基乙氧基、吡咯烷基甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、吗啉代、N-甲基哌嗪-1-基、哌嗪基、哌啶子基、吡咯烷-1-基和吗啉代甲基。
R1部分可被大于一个的取代基取代。因此，例如可以有1、2、3或4个取代基，更通常1、2或3个取代基。在一个实施方案中，当R1为6元环(例如碳环例如苯环)时，可以有可位于环上2-、3-和4-位中任何一个位置的单一取代基。在另一个实施方案中，可以有两个或三个取代基，这些取代基可位于环上的2-、3-、4-或6-位。作为实例，R1苯基可被2，6-二取代、2，3-二取代、2，4-二取代、2，5-二取代、2，3，6-三取代或2，4，6-三取代。
在一个实施方案中，R1苯基可在2-和6-位被选自氟、氯和Ra-Rb的取代基二取代，其中Ra为O，R6为C1-4烷基，氟为特别的取代基。
在化合物的一个亚类中，R1基团为含1或2个选自O、N和S的环杂原子的5元杂芳基。具体的杂芳基包括呋喃、噻吩、吡咯、
唑、异
唑和噻唑基。这些杂芳基可未被取代或被一个或多个前文定义的取代基取代。
5元杂芳基的一种优选的基团由任选取代的异
唑和噻唑基组成。
在化合物的另一个亚类中，R1为吡唑并吡啶基，例如吡唑并[1，5-a]吡啶基例如3-吡唑并[1，5-a]吡啶基。
R1基团的具体实例包括下表1中列出的A1-A183基团(例如A1-A60)。
表1
本发明化合物的一个优选的亚类为其中R1为选自A1-A34基团的亚类。
本发明化合物的另一个优选的亚类为其中R1为选自A1-A24、A26-A34、A38-A46、A48-A57、A59-A64、A66-A114、A116-A165、A167-A168和A170-A183的亚类。
R1基团的一个特别优选的亚类包括2，6-二氟苯基、2-氯-6-氟苯基、2-氟-6-甲氧基苯基、2，6-二氯苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基、2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-基和吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基。含选自该亚类的R1基团的化合物尤其具有优异的cdk抑制活性。
R1基团的另一个特别优选的亚类包括2，6-二氟苯基、2-甲氧基苯基、2，6-二氟-4-甲氧基苯基、2-氟-6-甲氧基苯基、2-氟-5-甲氧基苯基、2，6-二甲氧基苯基、2，4-二甲氧基苯基、2-氯-6-氟苯基、2，6-二氯苯基、2，4，6-三氟苯基、2-氯-6-甲基、2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-基和吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基。
在抑制cdk激酶的有关部分中，目前最优选的一个R1基团为2，6-二氟苯基。
R2为氢、卤素、甲氧基或任选被卤素、羟基或甲氧基取代的C1-4烃基。优选R2为氢、氯或甲基，最优选R2为氢。
在式(I)化合物中，R3和R4与它们连接的碳原子一起形成稠合的具有5-7个环成员的杂环或碳环基，其中最高达3个环成员可以为选自N、O和S的杂原子。稠合的碳环或杂环可任选被0-4个定义同本文的R10基团取代。稠合的杂环或碳环基可以为芳族或非芳族，但优选芳族。
在化合物的一种优选的基团中，R3和R4与它们连接的碳原子一起形成稠合的具有5-7个环成员的碳环基。
尤其优选稠合的5元和6元碳环或杂环基。稠合杂环的实例包括5元和6元环例如噻唑并、异噻唑并、
唑并、异
唑并、吡咯并、吡啶并、噻吩并、呋喃并、嘧啶并、吡唑并、吡嗪并、四氢氮杂酮以及咪唑并稠合的环。优选的稠合杂环基选自6元环基团，一个特别优选的基团为吡啶并基团。
稠合碳环的实例包括5元和6元环例如苯并、二氢或四氢苯并及环戊烷稠合的环。优选6元环。一个特别优选的基团为苯并基团。
由5元环、R3和R4形成的环***的具体实例为下述的环***(i)-(iv)。通常优选环***(i)。
稠合的碳环或杂环基可任选被一个或多个前文中定义的R10基团取代。
在一个实施方案中，稠合碳环或杂环基上的取代基可选自卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、氨基、具有3-7个(通常5或6个)环成员的单环碳环和杂环基团、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X1C(X2)、C(X2)X1、X1C(X2)X1、S、SO、SO2、NRc、SO2NRc或NRcSO2；Rb选自氢、具有3-7个环成员的碳环或杂环基团和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-7个环成员的碳环或杂环基团，其中C1-8烃基的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、NRc、X1C(X2)、C(X2)X1或X1C(X2)X1置换；Rc、X1和X2定义同前，或两个相邻R10基团与它们连接的碳原子或杂原子一起形成5元杂芳基环、或5元或6元非芳族杂环，其中所述杂芳基和杂环基含最多达3个选自N、O和S的杂原子环成员。
在由R3和R4形成的稠合碳环或杂环基上优选的R10基团包括卤素(例如氟和氯)、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、C(X2)X1，Rb选自氢、具有3-7个环成员(优选5或6个环成员)的杂环基、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-4烃基(例如饱和烃基例如烷基或环烷基)：羟基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基和具有3-7个环成员(例如5或6个环成员)的杂环基。
一种优选基团的本发明化合物由式(II)代表：
其中R1、R2和X定义同本文；
Y为N或CR9，其中R9为氢或R10基团；和
R6、R7和R8相同或不同，各自为氢或定义同本文的R10基团。
在式(II)化合物的一个亚类中，X为N。
在式(II)化合物的另一个亚类中，Y为CR9。
当Y为N时，优选R6不为氨基。
在一个实施方案中，本发明化合物由式(III)代表：
其中R1、R2和R6-R9定义同本文。
本发明的另一个实施方案可由式(IIIa)代表：
在式(III)和式(IIIa)中，优选R2为氢或C1-4烷基，更通常R2为氢。
在式(III)定义的化合物的基团中，优选R1为2，3-二取代、2，6-二取代或2，4，6-三取代的苯基，或2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯，其中取代基选自卤素和C1-4烷氧基。
更优选R1选自2，6-二氟苯基、2-氟-6-甲氧基苯基、2-氯-6-氟苯基、2，6-二氯苯基、2，4，6-三氟苯基、2，6-二氟-4-甲氧基苯基和2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯。
一个特别优选的R1基团为2，6-二氟苯基。
R6、R7、R8和R9部分通常选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、氨基、具有3-12(优选3-7，更通常5或6)个环成员的单环碳环和杂环基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X1C(X2)、C(X2)X1、X1C(X2)X1、S、SO、SO2、NRc、SO2NRc或NRcSO2；Rb选自氢、具有3-7个环成员的碳环或杂环基、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、C1-4酰氧基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-7个环成员的碳环或杂环基，其中C1-8烃基的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、NRc、X1C(X2)、C(X2)X1或X1C(X2)X1置换；Rc、X1和X2；或选自R6、R7、R8和R9的相邻两取代基可与它们连接的碳原子一起形成含最多达3个选自O、N和S的杂原子的非芳族5元或6元环。
在一个实施方案中，R6-R9各自为氢，或选自卤素、氰基、羟基、三氟甲基、硝基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO或C(X2)X1，Rb选自氢、具有3-12个环成员(优选4-7个环成员，例如5和6个环成员)的杂环基、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基(优选C1-4烃基，例如饱和烃基例如烷基或环丙基)：羟基、C1-4酰氧基、一-或二-C1-4烃基氨基(例如一烷基氨基和二烷基氨基)、具有3-12个环成员更优选4-7个环成员(例如5或6个环成员)的杂环基；其中Rc选自氢和C1-4烃基(例如饱和烃基例如烷基和环烷基)，X1为O或NRc，X2为＝O。
在另一个实施方案中，R6、R7、R8和R9选自氢、氟、氯、溴、硝基、三氟甲基、羧基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、C(X2)X1，Rb选自氢、具有3-7个环成员的杂环基(例如吡咯烷、N-甲基哌嗪或吗啉)、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-4烃基：羟基、羧基、C1-4酰氧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-7个环成员的杂环基(例如吡咯烷、N-甲基哌嗪或吗啉；或选自R6、R7、R8和R9的相邻两取代基可与它们连接的碳原子一起形成含1或2个氧原子环成员的非芳族5元或6元环。
在一个更优选的实施方案中，R6、R7、R8和R9选自氢、氟、氯、三氟甲基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、C(X2)X1，Rb选自氢、具有5-6个环成员的饱和杂环基团和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-2烃基：羟基、羧基、C1-2酰氧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有5-6个环成员的杂环基；或选自R6、R7、R8和R9的相邻两取代基可形成亚甲二氧基或亚乙二氧基，各自任选被一个或多个氟原子取代。
在另一个实施方案中，特别的R6-R9取代基包括卤素、硝基、羧基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、C(X2)X1，Rb选自氢、具有3-7个环成员的杂环基、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-4烃基：羟基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-7个环成员的杂环基。
尽管R6-R9中的每一个可以为氢或前文中定义的取代基，但优选R6-R9中至少一个，更优选至少两个为氢。
在一个特别的实施方案中，R6-R9中的一个为取代基，而其它各自为氢。例如，R6可以为取代基，而R7-R9可以各自为氢，或R9可以为取代基，而R6、R7和R8可各自为氢。
在另一个特别的实施方案中，R6-R9中的两个为取代基，而另两个都为氢。例如，当R7和R8都为氢时，R6和R9可都为取代基；或当R8和R9都为氢时，R6和R7可都为取代基；或当R6和R8都为氢时，R7和R9可都为取代基。
优选R6选自：
氢；
卤素(优选氟或氯)；
任选被选自以下的取代基取代的甲基：羟基、卤素(例如氟，优选二氟或三氟，更优选三氟)和NR11R12；和
C(＝O)NR11R12；
其中R11和R12相同或不同，各自选自氢和C1-4烷基，或R11和R12与氮原子一起形成具有1或2个选自O、N和S(优选O和N的杂原子环成员的5元或6元杂环。
优选R7选自：
氢；
卤素(优选氟或氯)；
C1-4烷氧基(例如甲氧基)；
任选被选自以下的取代基取代的甲基：羟基、卤素(例如氟，优选二氟或三氟，更优选三氟)和NR11R12；和
C(＝O)NR11R12；
其中R11和R12相同或不同，各自选自氢和C1-4烷基，或R11和R12与氮原子一起形成具有1或2个选自O、N和S(优选O和N的杂原子环成员的5元或6元杂环。
优选R8选自氢、氟和甲基，最优选氢。
优选R9选自：
氢；
卤素(优选氟或氯)；
C1-4烷氧基(例如甲氧基)；
任选被选自以下的取代基取代的甲基：羟基、卤素(例如氟，优选二氟或三氟，更优选三氟)和NR11R12；和
C(＝O)NR11R12；
其中R11和R12相同或不同，各自选自氢和C1-4烷基，或R11和R12与氮原子一起形成具有1或2个选自O、N和S(优选O和N的杂原子环成员的5元或6元杂环。
或者，R6和R9或R7和R9可与它们连接的碳原子一起形成选自以下的环状基团：
在前文定义中，当R11和R12与NR11R12中的氮原子一起形成5元或6元杂环时，优选杂原子环成员选自O和N。杂环通常为非芳族，此类环的实例包括吗啉、哌嗪、N-C1-4-烷基哌嗪、哌啶和吡咯烷。N-C1-4-烷基哌嗪基的具体实例包括N-甲基哌嗪和N-异丙基哌嗪。
优选的R6-R9基团包括其中苯并咪唑基团
如下表2所示的那些基团。
表2
在以上表2描述的苯并咪唑基团中，特别的基团包括基团B1、B3、B5-B8、B11-B20、B23-B30和B32-B47。
优选的化合物的一个亚类为一组化合物，其中苯并咪唑部分选自B1、B3、B5-B8、B11-B20、B24、B25、B27-B30和B32-B47基团。
尤其优选的苯并咪唑部分为B8、B15和B35基团，更尤其优选B15基团。
本发明的一组新化合物可由式(IV)代表：
A为NH(C＝O)、O(C＝O)或C＝O；
R6a、R7a、R8a和R9a相同或不同，各自选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12个环成员的碳环和杂环基团；Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X1C(X2)、C(X2)X1、X1C(X2)X1、S、SO、SO2、NRc、SO2NRc或NRcSO2；Rb选自氢、具有3-12个环成员的碳环和杂环基团、任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12个环成员的碳环和杂环基团，其中C1-8烃基的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、NRc、X1C(X2)、C(X2)X1或X1C(X2)X1置换；或两个相邻基团R6a、R7a、R8a或R9a可与它们连接的碳原子一起形成5元杂芳环或5元或6元非芳族杂环，其中所述杂芳基和杂环基含最多达3个选自N、O和S的杂原子环成员；
Rc选自氢和C1-4烃基；和
X1为O、S或NRc，X2为＝O、＝S或＝NRc；
或选自R6a、R7a、R8a和R9a的相邻两取代基可与它们连接的碳原子一起形成含最多达3个选自O、N和S的杂原子的非芳族5元或6元环；
R1a选自：
o被1-3个R10c取代基取代的6元单环芳基，条件是芳基被甲基取代时，存在至少一个除甲基以外的取代基；
o含单个氮杂原子环成员的6元单环杂芳基，杂芳基被1-3个R10c取代基取代；
o含最多达3个选自氮和硫的杂原子环成员的5元单环杂芳基，并任选被1-3个R10c取代基取代；
o含单个氧杂原子和任选氮杂原子环成员的5元单环杂芳基，并被1-3个R10c取代基取代，条件是当杂芳基含有氮环成员和被甲基取代时，存在至少一个除甲基以外的取代基；
o具有最多达4个杂原子环成员的双环芳基和杂芳基，其中任一个环为芳环，而另一个环为非芳环，或其中两个环都为芳环，任选双环基团被1-3个R10c取代基取代；
o含最多达3个选自氮、氧和硫的杂原子的4元、6元和7元单环C-连接的饱和杂环基，杂环基任选被1-3个R10c取代基取代，条件是当杂环基具有6个环成员和只含一个氧杂原子时，存在至少一个R10c取代基；
o含最多达3个选自氮、氧和硫的杂原子的5元单环C-连接的饱和杂环基，杂环基任选被1-3个R10c取代基取代，条件是当杂环基具有5个环成员和只含一个氮杂原子时，存在至少一个除羟基以外的R10c取代基；
o任选被1-3个R10c取代基取代的4元和6元环烷基；
o被1-3个R10c取代基取代的3元和5元环烷基；和
o Ph′CR17R18-基团，其中Ph′为被1-3个R10c取代基取代的苯基；R17和R18相同或不同，各自选自氢和甲基；或R17和R18与它们所连接的碳原子一起形成环丙基；或R17和R18中的一个为氢，而另一个选自氨基、甲基氨基、C1-4酰基氨基和C1-4烷氧基羰基氨基；
和当R6a、R7a、R8a和R9a中的一个为吗啉代甲基时，R1a另外选自：
o未取代的苯基和被一个或多个甲基取代的苯基；
o含单个氮杂原子环成员的未取代的6元单环杂芳基；
o未取代的呋喃基；
o含单个氧杂原子环成员和氮杂原子环成员的5元单环杂芳基，且未取代或被一个或多个甲基取代；
o只含一个氧杂原子的未取代的6元单环C-连接的饱和杂环基团；和
o未取代的3元和5元环烷基；
和R10c选自：
o卤素(例如F和Cl)；
o羟基；
o任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃氧基；
o被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-4烃基：羟基、卤素和含1或2个选自氮、氧和硫的杂原子环成员的5元和6元饱和杂环；
oS-C1-4烃基；
o任选被1-3个选自以下的取代基取代的苯基：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；
o具有5或6个环成员和含最多达3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基(例如
唑基、吡啶基、嘧啶基)，杂芳基任选被1-3个选自以下的取代基取代：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；
o含最多达3个选自N、O和S的杂原子的5元和6元非芳族杂环基(例如吡咯烷-1-基、哌啶子基、哌嗪基、N-甲基哌嗪-1-基、吗啉代)，和任选被1-3个选自以下的取代基取代：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；
o氰基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、二-C1-4烷基氨基、C1-4酰基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基；
oR19-S(O)n-基团，其中n为0、1或2，R19选自氨基；C1-4烷基氨基；二-C1-4烷基氨基；C1-4烃基；任选被1-3个选自以下的取代基取代的苯基：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；和含最多达3个选自N、O和S的杂原子的5元和6元非芳族杂环基，并任选被1-3个C1-4烷基取代基取代；和
oR20-Q-基团，其中R20为任选被1-3个选自以下的取代基取代的苯基：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；Q为选自以下的连接基团：OCH2、CH2O、NH、CH2NH、NCH2、CH2、NHCO和CONH。
在化合物的一个优选的亚类中，R1a选自具有5或6个环成员和含最多达3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基(例如
唑、噻唑、吡啶基、嘧啶基)，杂芳基任选被1-3个选自以下的取代基取代：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯。取代的噻唑基，例如2-甲基-4-三氟甲基-2-噻唑基代表一个优选的实施方案。
在化合物的另一个优选的亚类中，R1a选自含单个氧杂原子环成员和任选氮杂原子环成员的5元单环杂芳基，并被1-3个R10c取代基取代，条件是当杂芳基含氮环成员和被甲基取代时，存在至少一个除甲基以外的取代基。这样的一个基团为被C2-4烷基例如丙基或丁基如异丁基取代的异
唑。
在化合物的另一个优选的亚类中，R1a选自被1-3个R10c取代基取代的3元和5元环烷基。尤其优选取代的环丙基，例如被苯基或氰基取代的环丙基，例如1-氰基环丙基和1-苯基环丙基。
在化合物的再一个亚类中，R1a选自Ph′CR17R18-基团，其中Ph′为被1-3个R10c取代基取代的苯基；R17和R18相同或不同，各自选自氢和甲基；或R17和R18与它们所连接的碳原子一起形成环丙基；或R17和R18中的一个为氢，而另一个选自氨基、甲基氨基、C1-4酰基氨基和C1-4烷氧基羰基氨基。
本发明的另一类新化合物可由式(V)代表：
其中
A为NH(C＝O)或C＝O；
R1b为具有1-4个取代基的取代苯基，其中：
(i)当R1b具有单个取代基时，它选自卤素、羟基、被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃氧基；被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃基；具有5个环成员的杂芳基；和5元和6元非芳族杂环基，其中杂芳基和杂环基含最多达3个选自N、O和S的杂原子；
(ii)当R1b具有2、3或4个取代基时，各自选自卤素、羟基、任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃氧基；任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃基；具有5个环成员的杂芳基；氨基；和5元和6元非芳族杂环基；或两个相邻取代基与它们连接的碳原子一起形成5元杂芳环或5元或6元非芳族杂环；其中所述杂芳基和杂环基含最多达3个选自N、O和S的杂原子；和
R6a、R7a、R8a和R9a定义同前。
与吡唑环的4位连接的R1a-A-NH或R1b-A-NH基团可采取酰胺R1a/1b-C(＝O)NH、脲R1a/1b-NHC(＝O)或氨基甲酸酯R1a/1b-OC(＝O)的形式。优选酰胺和脲。在一个实施方案中，化合物为酰胺。在另一个实施方案中，化合物为脲。
在式(V)中，取代的苯基R1b被前文定义的单个取代基或被大于一个的取代基取代。因此，可以有1、2、3或4个取代基，更优选1、2或3个取代基。在一个实施方案中，有2或3个取代基，这些取代基可位于环的2-、3-、4-、5-或6位。
作为实例，苯基R1b可被2，6-二取代、2，3-二取代、2，4-二取代、2，5-二取代、2，3，6-三取代或2，4，6-三取代。在一组优选化合物中，苯基R1b为2，6-二取代、2，3-二取代或2，4，6-三取代。更特别是，苯基R1b可在2-和6-位被选自氟、氯和Ra-Rb的取代基二取代，其中Ra为O，Rb为C1-4烷基，氟为特别的取代基。或者，两个相邻(优选2-和3-位)取代基与它们连接的苯环一起可形成2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯基，或吲哚基或2，3-二氢苯并呋喃基。
在另一类优选的化合物中，苯基R1b被2，4-二取代或2，5-二取代。2-位取代基可以为例如卤素(例如F或Cl)或甲氧基。在一个特别类的化合物中，2-位取代基为甲氧基。当存在时，5-位取代基可以选自例如卤素(例如Cl或F)、C1-4烷基(例如叔丁基或异丙基)、甲氧基、三氟甲氧基、三氟甲基或HetN-SO2-基团，其中″HetN″为含氮饱和单环杂环，例如哌嗪-1-基、N-C1-4烷基哌嗪-1-基、吗啉代、哌啶子基或吡咯烷-1-基。一个优选的5-位取代基为Cl，优选的2，5-组合为2-甲氧基-5-氯苯基。
在再一组化合物中，苯基R1b在苯环的4-位具有单个取代基。该取代基可以为例如卤原子(优选氟或氯，最优选氟)或三氟甲基。
在另一组化合物中，苯基R1b被2，4-二取代。
当两相邻取代基与它们连接的苯环一起形成吲哚基或2，3-二氢苯并呋喃基时，优选所述基团分别为4-吲哚基和7-(2，3-二氢苯并呋喃基)。
当R1b被一取代时，取代基位于苯环的4-位，优选它为除二氟甲氧基或2-氯乙基以外的基团(尽管4-(2-氯乙基)-苯基可作为其它式(V)化合物的中间体)。
在一个实施方案中，其中R1b被二取代，取代的苯基可以为除二甲氧基苯基以外的基团，并可以为除2-氟-5-甲氧基苯基以外的基团。
在另一个实施方案中，R1b亚类可包括2-氟-5-甲氧基苯基。此类化合物具有良好的抗Aurora激酶活性。
当两个相邻取代基结合形成环，以致R1b为吲哚基时，优选该吲哚基为除吲哚-7-基以外的基团。
本发明化合物的一个优选的亚类为其中R1b选自以上表1列出的A1-A8、A10、A12和A14-A24基团的一类化合物。
尤其优选的基团R1＇包括2，6-二氟苯基、2-氟-6-甲氧基苯基、2-氯-6-氟苯基、2，6-二氯苯基、2，4，6-三氟苯基和2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯。
现优选的一个R1＇基团为2，6-二氟苯基。
R6a、R7a、R8a和R9a部分通常选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、氰基、硝基、羧基、氨基、具有3-12个(优选3-7个，更通常5或6个)环成员的单环碳环和杂环基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、X1C(X2)、C(X2)X1、X1C(X2)X1、S、SO、SO2、NRc、SO2NRc或NRcSO2；Rb选自氢、具有3-7个环成员的碳环或杂环基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基：羟基、C1-4酰氧基、氧代基、卤素、氰基、硝基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-7个环成员的碳环或杂环基，其中C1-8烃基的一个或多个碳原子可任选被O、S、SO、SO2、NRc、X1C(X2)、C(X2)X1或X1C(X2)X1置换；和Rc、X1和X2；或选自R6a、R7a、R8a和R9a的两个相邻取代基与它们连接的碳原子可一起形成含最多达3个选自N、O和S的杂原子的非芳族5元或6元环。
在一个实施方案中，R6a-R9a各自为氢，或选自卤素、氰基、羟基、三氟甲基、硝基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO或C(X2)X1，Rb选自氢、具有3-12个环成员(优选4-7个环成员)的杂环基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-8烃基(优选C1-4烃基)：羟基、C1-4酰氧基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-12个环成员更优选4-7个环成员的杂环基；其中Rc选自氢和C1-4烃基，X1为O或NRc，X2为＝O。
在另一个实施方案中，R6a、R7a、R8a和R9a选自氢、氟、氯、溴、硝基、三氟甲基、羧基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、C(X2)X1，Rb选自氢、具有3-7(优选5或6)个环成员的杂环基(例如吡咯烷、N-甲基哌嗪或吗啉)和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-4烃基：羟基、羧基、C1-4酰氧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基、具有3-7(优选5或6)个环成员的杂环基(例如吡咯烷、N-甲基哌嗪或吗啉)；或选自R6a、R7a、R8a和R9a的相邻两取代基与它们所连接的碳原子可一起形成含1或2个氧原子环成员的非芳族5元或6元环。
在一个更优选的实施方案中，R6a、R7a、R8a和R9a选自氢、氟、氯、三氟甲基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、C(X2)X1，Rb选自氢、具有5-6个环成员的饱和杂环基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-2烃基(例如烷基)：羟基、羧基、C1-2酰氧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基(例如一-或二烷基氨基)、具有5-6个环成员的杂环基；或选自R6a、R7a、R8a和R9a的相邻两取代基可形成亚甲二氧基或亚乙二氧基，各自任选被一个或多个氟原子取代。
在另一个实施方案中，具体的R6a-R9a取代基包括卤素、硝基、羧基、Ra-Rb基团，其中Ra为键、O、CO、C(X2)X1，Rb选自氢、具有3-7个环成员(优选5或6个环成员)的杂环基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-4烃基(例如烷基或环烷基)：羟基、羧基、氨基、一-或二-C1-4烃基氨基(例如一-或二-烷基氨基)、具有3-7个环成员(优选5或6个环成员)的杂环基。
尽管R6a-R9a中的每一个可以为氢或除氢以外的前文定义的取代基，但优选R6a-R9a中至少一个、更优选至少两个为氢。
在一个特别的实施方案中，R6a-R9a中的一个为除氢以外的取代基，而其它各自为氢。例如，R6a可以为除氢以外的取代基，而R7a-R9a各自可以为氢，或R9a可以为除氢以外的取代基，而R6a、R7a和R8a各自可以为氢。
在另一个特别的实施方案中，R6a-R9a中的两个为除氢以外的取代基，而另外两个都为氢。例如，当R7a和R8a都为氢时，R6a和R9a都可以为除氢以外的取代基；或当R9a和R8a都为氢时，R6a和R7a都可以为除氢以外的取代基；或当R6a和R8a都为氢时，R9a和R7a都可以为除氢以外的取代基。
优选R6a选自：
氢；
卤素(优选氟或氯)；
任选被选自以下的取代基取代的甲基：羟基、卤素(例如氟，优选二氟或三氟，更优选三氟)和
NR11R12；和
C(＝O)NR11R12；
其中R11R12相同或不同，各自选自氢和C1-4烷基，或R11和R12与氮原子一起形成具有1或2个选自N、O和S(优选O和N)的杂原子环成员的5元或6元杂环。
优选R9a选自：
氢；
卤素(优选氟或氯)；
C1-4烷氧基(例如甲氧基)；
任选被选自以下的取代基取代的甲基：羟基、卤素(例如氟，优选二氟或三氟，更优选三氟)和
NR11R12；和
C(＝O)NR11R12；
其中R11和R12相同或不同，各自选自氢和C1-4烷基，或R11和R12与氮原子一起形成具有1或2个选自N、O和S(优选O和N的杂原子环成员的5元或6元杂环。
优选R7a选自：
氢；
卤素(优选氟或氯)；
C1-4烷氧基(例如甲氧基)；
任选被选自以下的取代基取代的甲基：羟基、卤素(例如氟，优选二氟或三氟，更优选三氟)和
NR11R12；和
C(＝O)NR11R12；
其中R11和R12相同或不同，各自选自氢和C1-4烷基，或R11和R12与氮原子一起形成具有1或2个选自N、O和S(优选O和N的杂原子环成员的5元或6元杂环。
优选R8a选自氢、氟和甲基，最优选氢。
或者，R6a和R9a或R9a和R7a与它们所连接的碳原子可一起形成选自以下的环状基团：
在前文定义中，当R11和R12与NR11R12基团中氮原子一起形成5元或6元杂环时，优选杂原子环成员选自O和N。该杂环通常为非芳族，此类环的实例包括吗啉、哌嗪、N-C1-4-烷基哌嗪、哌啶和吡咯烷。N-C1-4-烷基哌嗪基的特别实例包括N-甲基哌嗪和N-异丙基哌嗪。
优选的R6a-R9a基团包括那些其中苯并咪唑基
如以上表2所示的基团。
在以上表2列出的苯并咪唑基中，特别的基团包括B1、B3、B5-B8、B11-B20、B23-B30和B32-B47基团。
尤其优选的基团为B1、B3、B5-B8、B11-B20、B24、B25、B27-B30和B32-B47基团。
优选的一组式(V)化合物可由式(Va)代表：
其中R6a-R9a定义同前文；和
(i)R13为甲氧基，R14-R16各自为氢；或
(ii)R14为
唑基、咪唑基或噻唑基，优选
唑基，R13、R15和R16各自为氢；或
(iii)R13选自氟、氯和甲基，R16选自氟、氯、甲基和甲氧基，R14和R15各自为氢；或
(iv)R13和R16各自选自氟、氯和甲基；R14选自氟、氯、甲基和甲氧基；和R15为氢；或
(v)R13和R14各自为氢；R15选自氟、氯、甲基和甲氧基(更优选甲基和甲氧基)，R16选自氟、氯和甲基(更优选氟)，或R15和R16与苯环的碳原子一起形成选自以下的基团：
尤其优选的苯环取代基为(i)、(iii)、(iv)和(v)取代基的基团。
在式(Va)中，一组特别的亚类化合物为这样一组化合物，其中：
(i)R13为甲氧基，R14-R16各自为氢；或
(iii)R13选自氟、氯和甲基，R16选自氟、氯、甲基和甲氧基，R14和R15各自为氢；或
(vi)R13和R16各自选自氟、氯和甲基；R14选自氟、氯和甲氧基；R15为氢；或
(vii)R13和R14各自为氢，R15为甲氧基，R16为氟，或R15和R16与苯环的碳原子一起形成选自以下的基团：
和
在式(Va)中，特别优选的亚类化合物为一组化合物，其中：
(iii)R13选自氟、氯和甲基，R16选自氟、氯、甲基和甲氧基，R14和R15各自为氢；或
(vi)R13、R14和R16各自为氟，R15为氢；或
(vii)R13和R14各自为氢，R15和R16与苯环的碳原子一起形成基团：
尤其优选式(V)和(Va)化合物作为CDK抑制剂。
在再一个实施方案中，本发明提供式(VI)化合物：
其中：
当A为NH(C＝O)或C＝O时；
R1c选自：
(a)单取代的苯基，其中取代基选自邻-氨基、邻-甲氧基；邻-氯；对-氯；邻-二氟甲氧基；邻-三氟甲氧基；邻-叔丁氧基；间-甲磺酰基和对-氟；
(b)2，4-或2，6-二取代苯基，其中一个取代基选自邻-甲氧基、邻-乙氧基、邻-氟、对-吗啉代，而另一个取代基选自邻-氟、邻-氯、对-氯和对-氨基；
(c)2，5-二取代苯基，其中一个取代基选自邻-氟和邻-甲氧基，而另一个取代基选自间-甲氧基、间-异丙基；间-氟、间-三氟甲氧基、间-三氟甲基、间-甲硫基、间-吡咯烷-1-基磺酰基、间-(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基、间-吗啉代磺酰基、间-甲基、间-氯和间-氨基磺酰基；
(d)2，4，6-三取代的苯基，其中取代基相同或不同，各自选自邻-甲氧基、邻-氟、对-氟、对-甲氧基，条件是存在的甲氧基取代基不多于1个；
(e)2，4，5-三取代的苯基，其中取代基相同或不同，各自选自邻-甲氧基、间-氯和对-氨基；
(f)未取代的苄基；2，6-二氟苄基；α，α-二甲基苄基；1-苯基环丙-1-基；和α-叔丁氧基羰基氨基苄基；
(g)未取代的2-呋喃基或具有单个选自4-(吗啉-4-基甲基)、哌啶基甲基的取代基的2-呋喃基；和任选选自甲基的另一个取代基；
(h)未取代的吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基；
(i)被一个或两个C1-4烷基取代的异
唑基；
(i)4，5，6，7-四氢-苯并[d]异
唑-3-基；
(k)3-叔丁基-苯基-1H-吡唑-5-基；
(l)喹喔啉基(quioxalinyl)；
(m)苯并[c]异
唑-3-基；
(n)2-甲基-4-三氟甲基-噻唑-5-基；
(o)3-苯基氨基-2-吡啶基；
(p)1-甲苯磺酰基吡咯-3-基；
(q)2，4-二甲氧基-3-吡啶基；和6-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基；
(r)咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基；
(s)5-氯-2-甲硫基-嘧啶-4-基；
(t)3-甲氧基-萘-2-基；
(u)2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-基；
(v)在5元环上任选被1或2个甲基取代的2，3-二氢-苯并呋喃基；
(w)2-甲基-苯并
唑-7-基；
(x)4-氨基环己-1-基；
(y)1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基；
(z)2-甲基-4，5，6，7-四氢-苯并呋喃-3-基；
(aa)2-嘧啶基-1-哌啶-4-基；和1-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-哌啶-4-基和1-甲基磺酰基哌啶-4-基；
(ab)1-氰基环丙基；
(ac)N-苄基吗啉-2-基；
并当A为NH(C＝O)时，R1＇另外选自：
(ad)未取代的苯基；
R9b选自氢；氯；甲氧基；甲基磺酰基；4-甲基-哌嗪-1-基羰基；吗啉代羰基；吗啉代甲基；吡咯烷基羰基；N-甲基-哌啶氧基；吡咯烷基乙氧基；吗啉代丙基氨基甲基；4-环戊基-哌嗪-1-基甲基；4-乙基磺酰基-哌嗪-1-基甲基；吗啉代磺酰基；4-(4-甲基环己基)-哌嗪-1-基甲基；和
R7b选自氢；甲基；甲氧基和乙氧基。
式(VI)化合物具有良好的抗Aurora激酶的活性。
当用本文中所述方法测定时，优选的式(VI)化合物为具有抗Aurora激酶A平均IC50小于0.03μM，更优选0.01μM或更小的那些化合物。
特别的一亚类式(VI)化合物为其中R9b选自吗啉代甲基和甲氧基的一类化合物，且其中当R9b为甲氧基时，R7b为甲氧基，或当R9b为吗啉代甲基时，R7b为氢。
本发明的再一类新化合物可由式(VII)代表：
其中R1d为前文定义的R1、R1a、R1b或R1c基团。
式(VII)化合物证实具有抑制CDK的良好活性，也尤其具有抗Aurora激酶活性。
在式(VII)中，尤其优选的一亚类化合物由式(VIIa)代表：
其中R1d定义同前。
本发明的另一亚类新化合物由式(VIII)代表：
其中R1e为定义同前的R1a或R1b基团。
本发明的再一类新化合物由通式(IX)代表：
其中R1d定义同前，E为键、CH2或CH2CH2、R22选自氢、卤素(例如氟或氯)和C1-2烷氧基(例如甲氧基)，G为含最多达3个选自N、O和S的杂原子环成员的4元-7元饱和杂环，杂环任选被1-4(优选最高达2，例如0或1)个R10基团(或其定义同本文的亚类)取代。
在式(IX)中，特别的一组化合物由式(IXa)代表：
其中R1d、E和R22定义同本文，R21选自氢、C1-4烷基(例如甲基)、C1-4酰基和C1-4烷氧基羰基。一个优选的组合为其中E为CH2、R21为甲基，R22为甲氧基。
为避免疑惑，应理解R1基团的各个通用和具体优先选择、实施方案和实例可与R2和/或R3和/或R4和/或R5和/或R6和/或R7和/或R8和/或R9和/或R10基团及其任何亚类组合，所有此类组合均包括在本申请中。
例如，表1中所示任何一个R1基团(例如在R1-A中，其中A为C＝O)可与表2中所示任何一个苯并咪唑基组合。
通常选择构成式(I)化合物的各种官能团和取代基以便式(I)化合物的分子量不超过1000。更通常，化合物的分子量小于750，例如小于700，或小于650，或小于600，或小于550。更优选分子量小于525，例如500或更小。
本发明的特别和具体化合物如以下实施例中举例说明。
除另有说明外，所述的特别化合物还包括其离子、盐、溶剂合物和保护形式，例如描述如下。
许多式(I)化合物可存在盐形式例如酸加成盐，或在某些情况中，为有机和无机碱的盐例如羧酸盐、磺酸盐和磷酸盐。所有此类盐均在本发明范围内，所述的式(I)化合物包括化合物的这些盐形式。
可用多种无机和有机酸形成酸加成盐。酸加成盐的实例包括用以下酸形成的盐：盐酸、氢碘酸、磷酸、硝酸、硫酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、苹果酸、羟乙磺酸、富马酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸、戊酸、乙酸、丙酸、丁酸、丙二酸、葡糖醛酸和乳糖酸。
例如，如果化合物是阴离子或具有可为阴离子的官能团(例如-COOH可为-COO-)，那么可用合适的阳离子形成盐。合适的无机阳离子实例包括但不限于碱金属离子例如Na+和K+、碱土金属阳离子例如Ca2+和Mg2+和其它阳离子例如Al3+。合适的有机阳离子实例包括但不限于铵离子(即NH4 +)和取代的铵离子(例如NH3R+、NH2R2 +、NHR3 +、NR4 +)。某些合适的取代铵离子的实例是衍生自以下物质的那些铵离子：乙胺、二乙胺、二环己基胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇和氨基酸例如赖氨酸和精氨酸。常用的季铵离子的实例是N(CH3)4 +。
当式(I)化合物含胺官能团时，例如通过技术人员熟知的方法与烷基化试剂反应可形成季铵盐。这样的季铵盐在式(I)范围内。
本发明化合物的盐通常是药学上可接受的盐，在Berge等，1977，″Pharmaceutically Acceptable Salts″(药学上可接受的盐)，J.Pharm.Sci.，第66卷，第1-19页中有药学上可接受的盐的实例的描述。但是，也可将非药学上可接受的盐制成中间体，然后将其转化为药学上可接受的盐。可用于例如纯化或分离本发明化合物的此类非药学上可接受的盐也形成本发明的一部分。
含胺官能团的式(I)化合物还可形成N-氧化物。本文中所述含胺官能团的式(I)化合物也包括N-氧化物。
当化合物含几个胺官能团时，可将1个或大于1个的氮原子氧化形成N-氧化物。N-氧化物的特殊实例是叔胺的N-氧化物或含氮杂环氮原子的N-氧化物。
可用氧化剂例如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸)处理相应的胺形成N-氧化物，参见例如Jerry March的Advanced Organic Chemistry，第4版，Wiley Interscience，pages。更尤其是，N-氧化物可用L.W.Deady的方法制备(Syn.Comm.1977，7，509-514)，其中例如在惰性溶剂例如二氯甲烷中，使胺化合物与间-氯过苯甲酸(MCPBA)反应。
式化合物可存在多种不同几何异构体和互变异构体，所述式(I)化合物包括所有此类形式。为避免疑惑，当化合物以几种几何异构体或互变异构体之一存在并且只具体描述或显示一种时，显然所有其它形式包括在式(I)中。
例如，在式(I)化合物中，苯并咪唑基团可采取下列两种互变异构体A和B中的任一种。为简化起见，通式(I)说明形式A，但可认为该式包括两种互变异构体。
吡唑环也可出现互变异构现象，可存在以下两种互变异构体C和D。
互变异构体的其它实例包括例如在以下的互变异构体对中的例如酮式、烯醇式和烯醇化物形式：酮/烯醇(描述如下)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇和硝基/酸式硝基。
酮 烯醇 烯醇化物
当式(I)化合物含一个或多个手性中心并可存在两种或多种旋光异构体时，除本文中另有要求外，所述式(I)化合物包括其所有旋光异构体(例如对映体、差向异构体和非对映体)，可以为单一旋光异构体或两种或多种旋光异构体的混合物。
例如，A基团可包括一个或多个手性中心。因此，当E和R1都与连接基团A上的同一碳原子连接时，所述碳原子通常是手性的，因而式(I)化合物存在一对对映体(或大于一对的对映体，其中化合物中存在大于一个的手性中心)。
旋光异构体可通过其旋光性表征(即用+和-异构体或d和l异构体表征)，或可按照它们的绝对立体化学，用Cahn，Ingold和Prelog开发的″R和S″命名法表征，参见Jerry March的Advanced OrganicChemistry，第4版，John Wiley&Sons，New York，1992，第109-114页；也可参见Cahn，Ingold&Prelog，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.，1966，5，385-415。
可通过多种技术包括手性层析(在手性载体上层析)分离旋光异构体，本领域技术人员熟知此类技术。
当式(I)化合物存在两种或多种旋光异构体时，一对对映体中的一个对映体可比另一个对映体具有优势，例如按生物活性比较。因此，在某些情况下，需要使用的治疗药物可能只是对映体对中的一个或多个非对映体中的一个。因此，本发明提供含具有一个或多个手性中心的式(I)化合物的组合物，其中存在至少55％(例如至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95%式(I)化合物单一旋光异构体(例如对映体或非对映体)。在一个通用的实施方案中，式(I)化合物总量的99％或更高(例如基本上完全)可以单一旋光异构体(例如对映体或非对映体)存在。
本发明化合物包括用一种或多种同位素取代的化合物，所述的特别元素在其范围内包括该元素所有的同位素。例如所述的氢在其范围内包括1H、2H(D)和3H(T)。类似地，所述碳和氧分别在其范围内包括12C、13C和14C及16O和18O。
同位素可以是放射性或非放射性。在本发明的一个实施方案中，这些化合物不含放射性同位素。优选此类化合物用于治疗。但在另一个实施方案中，化合物可含一个或多个放射性同位素。含此类放射性同位素的化合物可用于诊断。
酯例如具有羧基或羟基的式(I)化合物的羧酸酯和酰氧基酯也包括在式(I)中。酯的实例是含-C(＝O)OR基团的化合物，其中R为酯取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酯基的具体实例包括但不限于-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3、-C(＝O)OC(CH3)3和-C(＝O)OPh。酰氧基(逆向酯基)的实例由-OC(＝O)R代表，其中R为酰氧基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酰氧基的具体实例包括但不限于-OC(＝O)CH3(乙酰氧基)、 -OC(＝O)CH2CH3、 -OC(＝O)C(CH3)3、 -OC(＝O)Ph和-OC(＝O)CH2Ph。
式(I)也包括化合物的任何多晶型、溶剂合物(例如水合物)、化合物的复合物(例如与化合物例如环糊精的包合复合物或包合物，或与金属的络合物)和化合物的前药。“前药”表示例如可在体内转化为式(I)生物活性化合物的任何化合物。
例如，某些前药是活性化合物的酯(例如生理上可接受的易代谢的酯)。在代谢期间，酯基(-C(＝O)OR)解离，产生活性药物。可通过例如使母体化合物上的任一羧基(-C(＝O)OH)酯化形成此类酯，如果合适，先将存在于母体化合物中的任何其它活性基团保护，随后如需要脱保护。
此类易代谢酯的实例包括式-C(＝O)OR的那些酯，其中R为：
C1-7烷基
(例如-Me、-Et、-nPr、-iPr、-nBu、-sBu、-iBu、-tBu)；
C1-7基烷基
(例如氨基乙基；2-(N，N-二乙基氨基)乙基；2-(4-吗啉代)乙基)；和
酰氧基-C1-7烷基
(例如酰氧基甲基；
酰氧基乙基；
新戊酰氧基甲基；
乙酰氧基甲基；
1-乙酰氧基乙基；
1-(1-甲氧基-1-甲基)乙基-羰基(carbonxyl)氧基乙基；
1-(苯甲酰基氧基)乙基；
异丙氧基-羰基氧基甲基；
1-异丙氧基-羰基氧基乙基；
环己基-羰基氧基甲基；
1-环己基-羰基氧基乙基；
环己基氧基-羰基氧基甲基；
1-环己基氧基-羰基氧基乙基；
(4-四氢吡喃基氧基)羰基氧基甲基；
1-(4-四氢吡喃基氧基)羰基氧基乙基；
(4-四氢吡喃基)羰基氧基甲基；和
1-(4-四氢吡喃基)羰基氧基乙基)。
某些前药还通过酶活化生成活性化合物或经进一步化学反应后生成活性化合物的化合物(例如在ADEPT、GDEPT、LIDEPT等中)。例如，前药可以是糖衍生物或其它苷轭合物，或可以是氨基酸酯衍生物。
生物活性
式(I)化合物是依赖细胞周期蛋白的激酶的抑制剂。例如，本发明化合物具有抗CDK1、CDK2、CDK3、CDK5、CDK6和CDK7激酶的活性。
此外，CDK4、CDK8和/或CDK9可能为目标。
本发明化合物还具有抗糖原合成酶激酶-3(GSK-3)的活性。
本发明化合物还具有抗Aurora激酶的活性。
由于它们具有调节或抑制CDK和Aurora激酶和糖原合成酶激酶的活性，预期它们可有效提供在异常***细胞中停止或恢复控制细胞周期的方法。因此，预期这些化合物可用于治疗或预防增殖性疾病例如癌症。还预计本发明化合物可用于治疗病症例如病毒感染、自身免疫性疾病和神经变性疾病，例如。
CDKs在调节细胞周期、细胞凋亡、转录、分化和CNS功能。因此，CDK抑制剂可用于治疗其中增殖、细胞凋亡或分化障碍的疾病，例如癌症。尤其是RB+ve肿瘤可对CDK抑制剂特别敏感。RB-Ve肿瘤也对CDK抑制剂敏感。
可被抑制的癌症实例包括但不限于癌：例如膀胱、乳腺、结肠癌(例如结肠直肠癌例如结肠腺癌和结肠腺瘤)、肾、表皮、肝癌，肺癌例如腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌，食道、胆囊、卵巢癌，胰腺癌例如外分泌胰腺癌，胃、宫颈、甲状腺、***或皮肤癌例如鳞状上皮细胞癌；淋巴造血***肿瘤，例如白血病、急性淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛状细胞淋巴瘤或伯基特淋巴瘤；骨髓造血***肿瘤，例如急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征或早幼粒细胞白血病；滤泡性甲状腺癌；间质来源的肿瘤，例如纤维肉瘤或肌肉瘤(habdomyosarcoma)；中枢或外周神经***肿瘤，例如星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤或神经鞘瘤；黑素瘤；***瘤；畸胎样癌；骨肉瘤；xenoderoma pigmentoum；keratoctanthoma；滤泡性甲状腺癌；或卡波西肉瘤。
也已知CDKs在细胞凋亡、增殖、分化和转录中起作用，因而CDK抑制剂也可用于治疗以下除癌症以外的疾病；病毒感染，例如疱疹病毒、痘病毒、EB(Epstein-Barr)病毒、新培斯(Sindbis)病毒、腺病毒、HIV、HPV、HCV和HCMV；预防感染HIV个体中AIDS的发展；慢性炎性疾病例如全身性红斑狼疮、自身免疫介导的肾小球肾炎、类风湿性关节炎、银屑病、炎性肠病和自身免疫性糖尿病；心血管病例如心肥大、再狭窄、动脉粥样硬化；神经变性疾病例如早老性痴呆、AIDS相关痴呆、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化、色素性视网膜炎、脊髓性肌萎缩和小脑变性；肾小球肾炎；骨髓增生异常综合征、心肌梗塞相关的缺血性损伤、中风和再灌注损伤、心律失常、动脉粥样硬化、毒素引起或酒精相关性肝病、血液病例如慢性贫血和再生障碍性贫血；肌骨骼***变性疾病，例如骨质疏松症和关节炎、对阿司匹林敏感的鼻窦炎、囊性纤维化、多发性硬化、肾病和癌痛。
发现一些依赖细胞周期蛋白的激酶抑制剂可与其它抗癌药物联合使用。例如依赖细胞周期蛋白的激酶抑制剂flavopiridol的细胞毒活性已与其它抗癌药物一起用于联合疗法。
因此，在本发明的治疗包括异常细胞生长的疾病或病症的药用组合物、用途或方法中，在一个实施方案中，上述的包括异常细胞生长的疾病或病症是癌症。
具体癌的亚类包括乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、***癌、食管癌、鳞状癌和非小细胞肺癌。
在具有抗Aurora激酶活性的化合物的情况中，其中预计抑制Aurora激酶的本发明化合物可用于包括以下的疾病：
人乳腺癌(原发性乳腺肿瘤、结节阴性(node-negative)乳腺癌、乳腺的侵入性管腺癌、非子宫内膜样乳腺癌)；
卵巢癌(例如原发性卵巢瘤)；
胰腺癌；
人膀胱癌；
结肠直肠癌(例如原发性结肠直肠癌)；
胃瘤；
肾癌；
***；
成神经细胞瘤；
黑素瘤；
淋巴瘤；
***癌；
白血病；
非子宫内膜样子宫内膜癌；
神经胶质瘤；
非霍奇金淋巴瘤；
尤其适用于Aurora抑制剂治疗的癌包括乳腺、膀胱、结肠直肠、胰腺、卵巢、非霍奇金淋巴瘤、神经胶质瘤和非子宫内膜样子宫内膜癌。
用作依赖细胞周期蛋白的激酶、Aurora激酶和糖原合成酶激酶-3抑制剂的本发明化合物的活性可用以下实施例描述的测定方法测量，给出化合物的活性水平可按IC50值定义。优选的本发明化合物是IC50值小于1μmol，更优选小于0.1μmol的化合物。
制备式(I)化合物的方法
式(I)化合物可按技术人员熟知的合成方法制备。
除另有说明外，R1、R2、R3和R4定义同本文。
其中R1-A-形成酰基的式(I)化合物可按以下流程1描述的方法制备。
如流程1所示，在标准酰胺形成条件下，可使式(X)胺与式R1-B-CO2H羧酸或其活性衍生物反应。因此例如，可在用于形成肽键的常用种类试剂存在下，进行该羧酸和胺(X)的偶合反应。此类试剂的实例包括1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)(Sheehan等，J.Amer.Chem Soc.1955，77，1067)、1-乙基-3-(3′-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)(Sheehan等，J.Org.Chem.，1961，26，2525)；脲类偶合试剂例如O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N＇，N＇-四甲基脲
六氟磷酸盐(HATU)(L.A.Catpino，J.Amer.Chem.Soc.，1993，115，4397)和磷
类偶合试剂例如1-苯并***基氧基三(吡咯烷-1-基)磷六氟磷酸盐(PyBOP)(Castro等，Tetrahedron Letters，1990，31，205)。碳二亚胺类偶合试剂最好与1-羟基氮杂苯并***(HOAt)或1-羟基苯并***(HOBt)联用(Konig等，Chem.Ber.，103，708，2024-2034)。优选的偶合试剂包括与HOAt或HOBt组合的EDC和DCC。
流程1
该偶合反应通常在非水、非质子溶剂例如乙腈、二
烷、二甲亚砜、二氯甲烷、二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷，或在任选与一种或多种可互溶助溶剂一起的水性溶剂中进行。反应可室温或在其中反应物活性较低(例如在具有吸电子基团例如磺酰胺基的缺电子苯胺情况中)的适当高温下进行。反应可在不干扰碱例如叔胺例如三乙胺或N，N-二异丙基乙胺的存在下进行。
可使用作为备选的羧酸活性衍生物例如酸酐或酰氯。通常在室温下，在碱例如吡啶的存在下通过搅拌完成与酸酐活性衍生物的反应。
可通过在标准条件下，将相应的式(XI)硝基化合物还原，制备式(X)胺。可通过在催化剂例如披钯碳的存在下，在极性溶剂例如乙醇或二甲基甲酰胺中，在室温下如经催化氢化实现该还原。
当X是氮时，可通过使式(XII)硝基-吡唑甲酸与式(XII)二胺反应制备式(XI)化合物。可在例如DCC或EDC和上述HOBt的试剂存在下，在前述酰胺偶合条件下进行二胺(XIII)与甲酸(XII)的反应，得到中间体邻-氨基苯基酰胺(未列出)，然后使其环合形成苯并咪唑环。最后的环合步骤通常在乙酸的存在下，加热回流进行。
式(XIII)二胺可通过市售得到，或可用标准化学和熟知的官能团互变，由适当取代的苯基前体化合物制备，参见例如Fiesers′Reagentsfor Organic Synthesis，第1-17卷，John Wiley，Mary Fieser编辑(ISBN：0-471-58283-2)和Organic Syntheses，第1-8卷，John Wiley，Jeremiah P.Freeman编辑(ISBN：0-471-31192-8)，1995。在以下实施例中提供制备式(XIII)二胺方法的实例。
式(XIII)二胺也可与式(XIV)甲酸反应，得到式(I)化合物。
在那些与上述制备硝基化合物(XI)相似的条件下，可使二胺(XIII)与甲酸(XIV)反应。可按流程2中所示反应顺序制备式(XIV)甲酸。
如流程2所示，可通过与亚硫酰氯反应，得到酰氯中间体，随后与乙醇反应，形成乙基酯(XVI)，使取代或未取代的4-硝基-3-吡唑羧酸(XV)酯化。或者，可在酸性催化剂的存在下，使醇与羧酸反应进行酯化，酸性催化剂的一个实例是亚硫酰氯。用进行酯化的醇(例如乙醇)作溶剂，反应通常在室温下进行。然后按标准方法，用披钯碳还原硝基，得到胺(XVII)。在与上述那些相同或相似的酰胺形成条件下，使胺(XVII)与适当的羧酸R1-CO2H偶合，得到酰胺(XVIII)。然后在与水互溶的极性溶剂例如甲醇中，通常在室温下，用碱金属氢氧化物例如氢氧化钠水解酰胺(XVIII)的酯基。
流程2
可用合成脲的标准方法，制备其中A是NH(CO)的式(I)化合物。例如，可通过在极性溶剂例如DMF中，使式(X)氨基吡唑化合物与适当取代的异氰酸苯酯反应制备此类化合物。该反应在室温下方便地进行。
制备式(I)化合物的另一条路线见以下流程3所示。
流程3
如流程3中所示，可在高温下，使酮(XIX)与二甲基甲酰胺-二甲基缩醛反应，得到α，β-不饱和酮(XX)(Jachak等，Montash.Chem.，1993，124(2)，199-207)，将其与水合肼一起加热，得到式(XXI)吡唑。然后，可按本文中描述的方法使该产物硝化，得到硝基吡唑(XXII)。
流程3中所述方法在制备X是CR5基团的化合物时特别有用。
以上流程中所示合成路线的原料式(XII)和(XV)吡唑可通过市售获得，或可通过本领域技术人员已知的方法制备。可用已知方法例如在EP308020(Merck)中描述的方法，或通过Schmidt在Helv.Chim.Acta.，1956，39，986-991和Helv.Chim.Acta.，1958，41，306-309中描述的方法由例如酮得到它们。或者，通过本领域技术人员已知的标准方法，将市售例如含卤素、硝基、酯或酰胺官能团的那些吡唑转化为含需要官能团的吡唑以得到它们。例如，在3-羧基-4-硝基吡唑中，可通过标准方法，将硝基还原为胺。4-硝基-吡唑-3-甲酸(XII)可通过市售得到，或可通过将相应的4-未取代的吡唑羧基化合物硝化制备，在偶合反应中可使用含卤素的吡唑和锡或靶化学。取代或未取代的4-硝基-3-吡唑甲酸可通过与亚硫酰氯反应，得到酰氯中间体，随后与醇反应酯化形成式(XVI)酯。或者，可通过在酸性催化剂的存在下，使醇和羧酸反应进行酯化，酸性催化剂的一个实例是亚硫酰氯。用进行酯化的醇(例如乙醇)作溶剂，反应通常在室温下进行。
在许多上述反应中，可能需要保护一个或多个基团以防止反应在分子不合适的位置上发生。保护基团的实例、保护和脱去官能团保护的方法可在Protective Groups in Organic Synthesis(T.Green和P.Wuts；第3版；John Wiley and Sons，1999)中找到。可将羟基保护成例如醚(-OR)或酯(-OC(＝O)R)，例如：叔丁醚；苄基、二苯甲基或三苯基甲基醚；三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基醚；或乙酰基酯(-OC(＝O)Ch3、-OAc)。可通过例如与伯醇反应，将醛或酮基分别保护成缩醛(R-CH(OR)2)或缩酮(R2C(OR)2)，其中可将羰基(＞C＝O)转化成双醚(＞C(OR)2)。通过在酸的存在下，用大量过量的水水解，容易再生醛或酮基。可将胺基保护成例如酰胺(-NRCO-R)或脲烷(-NRCO-OR)，例如：甲基酰胺(-NHCO-CH3)；苄氧基酰胺(-NHCO-OCH2C6H5，-NH-Cbz)；叔丁氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)3，-NH-Boc)；2-联苯-2-丙氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)2C6H4C6H5，-NH-Bpoc)、9-芴基甲氧基酰胺(-NH-Fmoc)、6-硝基藜芦基氧基酰胺(-NH-Nvoc)、2-三甲基甲硅烷基乙氧基酰胺(-NH-Teoc)、2，2，2-三氯乙氧基酰胺(-NH-Troc)、烯丙氧基酰胺(-NH-Alloc)或2(-苯基磺酰基)乙氧基酰胺(-NH-Psec)。胺例如环胺和杂环N-H基团的其它保护基团包括甲苯磺酰基(tosyl)、甲磺酰基(mesyl)和苄基例如对-甲氧基苄基(PMB)。可将羧基保护成酯，例如：C1-7烷基酯(例如甲酯；叔丁酯)；C1-7卤代烷基酯(例如C1-7三卤烷基酯)；三C1-7烷基甲硅烷基-C1-7烷基酯；或C5-20芳基-C1-7烷基酯(例如苄酯；硝基苄酯)；或酰胺例如甲基酰胺。可将硫醇基保护成如硫醚(-SR)，例如：苄基硫醚；乙酰氨基甲基醚(-S-CH2NHC(＝O)CH3)。
纯化方法
可通过多种本领域技术人员熟知的方法分离和纯化化合物，此类方法的实例包括层析技术例如柱层析(例如快速层析)和HPLC。制备性LC-MS是纯化有机小分子例如本文中所述化合物使用的标准和有效方法。可改变液相色谱(LC)和质谱(MS)方法以提供较佳的粗物质分离和改善MS检测样品的效果。优化制备性梯度LC法涉及改变柱、挥发性洗脱液、改性剂和梯度。方法是本领域中熟知的优化制备性LC-MS法，然后用它们纯化化合物。此类方法在Rosentreter U.Huber U.；Optimal fraction collecting in preparative LC/MS(在制备性LC/MS中收集最佳组分)；J Comb Chem.；2004；6(2)，159-64和LeisterW，Strauss K，Wisnoski D，Zhao Z，Lindsley C.，Development of a customhigh-throughput preparative liquid chromatography/ mass spectrometerplatform for the preparative purification and analytical analysis ofcompound librar
一个通过制备性LC-MS纯化化合物的这种***在以下的实验部分描述，尽管本领域技术人员认识到可以使用那些描述***的备选***和方法。具体地说，可用正相制备性LC类方法代替本文所述的反相方法。大多数制备性LC-MS***利用反相LC和挥发性酸性改性剂，因为该方法对于纯化小分子非常有效和因为洗脱液与正离子电喷雾质谱相配合。使用其它层析方法例如在以上分析方法中概括的正相LC、另外的缓冲流动相、碱性改性剂等也可纯化化合物。
药物制剂
尽管单独给予活性化合物是可行的，但优选其以含至少一种以上定义的活性化合物和一种或多种药学上可接受的载体、助剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂或本领域技术人员熟知的其它物质及任选其它治疗或预防药物的药用组合物(例如制剂)来提供。
因此，本发明还提供以上定义的药用组合物；制备组合物的方法，该方法包括使至少一种以上定义的活性化合物与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂、缓冲剂、助剂、稳定剂或本文中描述的其它物质混合。
本文中使用的术语″药学上可接受的″适用于化合物、物质、组合物和/或剂型，在合理的医学判断范围内，它们适用于与患者(例如人)的组织接触，而无过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题，或并发症，与合理的利益/风险比率相称。每种载体、赋形剂等在与制剂中的其它成分相配伍的意义上也必须″可接受″。
药用组合物可以是合适口服、肠胃外、局部、鼻内、眼睛、耳、直肠、***内或透皮给药的任何形式。当预定肠胃外给予组合物时，可将其配制成静脉内、肌内、腹膜内、皮下给药形式，或将其配制用于通过注射、输注或其它释放方式直接释放到靶器官或组织。
合适口服给药的药用剂型包括片剂、胶囊剂、胶囊形片剂、丸剂、锭剂、糖浆剂、溶液剂、散剂、颗粒剂、酏剂和混悬剂、舌下片、糯米纸囊剂或贴剂和口颊贴片剂。
含式(I)化合物的药用组合物可按已知技术配制，参见例如Remington＇s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA，USA。
因此，片剂组合物可含有单位剂量的活性化合物以及惰性稀释剂或载体例如糖或糖醇例如；乳糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇；和/或非糖类稀释剂如碳酸钠、磷酸钙、碳酸钙或纤维素或其衍生物例如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和淀粉例如玉米淀粉。片剂也可含有此类标准组分如粘合剂和造粒剂例如聚乙烯吡咯烷酮、崩解剂(例如膨化交联聚合物例如交联羧甲基纤维素)、润滑剂(例如硬脂酸盐)、防腐剂(例如尼泊金酯)、抗氧化剂(例如BHT)、缓冲剂(例如磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)和泡腾剂例如柠檬酸盐/碳酸氢盐的混合物。众所周知此类赋形剂，无需在本文中详细描述。
胶囊剂可为硬明胶或软明胶类，可含有固体、半固体或液体形式的活性成分。明胶胶囊可由动物明胶或其合成或植物来源等同物形成。
固体剂型(例如片剂、胶囊等)可包衣或不包衣，但通常具有包衣，例如保护膜衣(例如蜡或涂剂)或控释包衣。可将包衣(例如EudragitTM型聚合物)设计为在胃肠道中需要的位置释放活性组分。因此，可选择包衣以便在胃肠道中的某种pH条件下降解，从而在胃或在回肠或十二指肠中选择性地释放化合物。
代替包衣或此外，可用含控释制剂例如可在胃肠道中的不同酸性或碱性条件下适合选择性释放化合物的缓释制剂的固体骨架提供药物。或者，骨架材料或延迟释放的包衣可采用易侵蚀聚合物形式(例如马来酸酐聚合物)，当剂型通过胃肠道时，这种形式基本上被连续侵蚀。作为另一个选择，可活性化合物配制成提供渗透性控释化合物的递药***。渗透性释放和其它延迟释放或缓释制剂可按本领域技术人员熟知的方法制备。
局部用组合物包括软膏剂、霜剂、喷雾剂、贴剂、凝胶剂、液体滴剂和***剂(例如眼内***剂)。此类组合物可按已知方法配制。
肠胃外给药的组合物通常以无菌水溶液或油性溶液或微细混悬液提供，或可以粉碎的无菌粉末形式提供，使用前其与无菌注射用水临时组成。
直肠或***内给药的剂型实例包括***栓和栓剂，它们可由例如模制形成或含活性化合物的蜡物质形成。
通过吸入给药的组合物可采用可吸入粉末组合物或液体或粉末喷雾剂的形式，可用粉末吸入器装置或气雾剂分散装置，按标准形式给药。众所周知此类装置。对于吸入给药，粉末剂通常含活性化合物与惰性固体粉末稀释剂例如乳糖。
通常以单位剂型提供本发明化合物，同样，这种剂型通常含足够量的化合物以提供需要的生物活性水平。例如，预定口服给药的制剂可含0.1毫克至2克，更通常10毫克至1克例如50毫克至500毫克的活性成分。
给予有需要的患者(例如人或动物患者)活性化合物的量足够达到需要的治疗效果。
诊断和治疗方法
预计式(I)化合物可用于预防或治疗依赖细胞周期蛋白的激酶、糖原合成酶激酶-3和Aurora激酶介导的多种疾病或病症。此类疾病和病症的实例在上文中已说明。
式(I)化合物通常给予有这种给药需要的患者，例如人或动物患者，优选人。
通常给予化合物的量是治疗或预防有效的并且通常是无毒量。但在某些情况中(例如在危及生命的疾病情况下)，给予式(I)化合物的效益可能超过任何毒、副作用的缺点，在这种情况中，可以考虑给予与毒性程度相关量的化合物。
可长期给予化合物以维持有益的治疗效果，或可只短期给予。或者，可按脉冲或连续方式给予它们。
尽管当需要时可给予更高或更低剂量，但典型的化合物日剂量可在每公斤体重100皮克至100毫克范围内，更典型为每公斤体重10毫微克至10毫克。最终，给予化合物的量和所使用的组合物种类要与所治疗的疾病或生理状况相称，和由医师判断。
可按单独治疗药物给予式(I)化合物或可与治疗具体疾病的一种或多种其它化合物联合按联合疗法给予，例如肿瘤疾病例如前文定义的癌。可与式(I)化合物一起给予(无论同时或不同时间间隔)的其它治疗药物的实例包括但不限于拓扑异构酶抑制剂、烷基化剂、抗代谢药、DNA结合剂和微管抑制剂(微管蛋白靶向药物)，例如顺铂、环磷酰胺、多柔比星、伊立替康、氟达拉滨、5FU、紫杉烷类、丝裂霉素C或放疗。对于CDK或Aurora抑制剂和其它疗法联合的情况，可按各个不同剂量方案和通过不同途径给予两种或多种治疗。
当式(I)化合物与1、2、3、4或多种(优选1或2，优选1种)其它治疗药物以联合疗法给予时，这些化合物可同时或序贯给予。当序贯给予时，可在相近的时间间隔(例如5-10分钟)或更长间隔(例如1、2、3、4或更多小时间隔，或如果需要，甚至更长时间间隔)给予它们，确切的给药方案与治疗药物的性质相称。
本发明化合物还可与非化疗法例如放疗、光动力学疗法、基因疗法；手术和控制饮食联合给予。
对于和另一种化疗药物一起用于联合疗法，式(I)化合物和1、2、3、4或更多其它治疗药物可一起配制成例如含2、3、4或更多治疗药物的剂型。在一个备选中，各种治疗药物可分开配制，以任选带有它们的使用说明书的药剂盒形式一起提供。
本领域技术人员通过他们的一般知识可知晓给药方案和使用的联合疗法。
在给予式(I)化合物前，可选择患者，以确定患者的疾病或病症是否对或可能患的疾病或病症是否对用具有抗Aurora激酶活性化合物的治疗敏感。例如，可分析从患者采集的生物样本，以确定患者所患或可能患的疾病或病症例如癌是否特征在于Aurora激酶上调，该上调包括Aurora激酶表达增加或过度表达，包括基因扩增(即多基因模板)和通过转录作用表达增加，和Aurora激酶活动过强和激活包括通过突变的激活。因此，可对患者进行诊断测试以检测Aurora激酶过度表达、上调或激活的标记特征。术语诊断包括筛选。本发明人使用的标记包括遗传标记，它们包括例如测量DNA成分以鉴别Aurora或CDC4突变。术语标记还包括特征是Aurora或细胞周期蛋白E上调的标记，它们包括酶活性、酶水平、酶状态(例如磷酸化或无)和前述蛋白的mRNA水平。
诊断测试通常在选自以下的生物样本中进行：肿瘤活检样本、血液样本(分离和富集释放的肿瘤细胞)、大便检查、唾液、染色体分析、胸膜液、腹膜液或尿。
已发现形成亚群体部分的具有STK基因(Aurora激酶A的基因)的Ile31变种的个体可能对某些形式癌的敏感性增加，参见Ewart-Toland等，(Nat Genet.2003年8月；34(4)：403-12)。因此，预计患有癌的此类个体会从使用具有Aurora激酶抑制活性的化合物中受益。因此，可筛选患有或疑似患有癌的患者以确定他们是否是Ile31变种亚群体的一部分。该筛选过程通常涉及定向测序、寡核苷酸微序列分析或突变体特异性抗体。
具有Aurora活化突变体或Aurora包括其任何同种型上调的肿瘤可能对Aurora抑制剂尤其敏感。治疗前，可优先筛选Aurora上调或具有Ile31变种的Aurora的肿瘤(Ewart-Toland等，Nat Genet.2003年8月；34(4)：403-12)。Ewart-Toland等鉴定出STK15中的普通基因变种(导致氨基酸取代F31I)，它优先扩增并与人结肠肿瘤中非整倍体程度相关。这些结果与STK15的Ile3I变种在人癌中敏感性的重要作用一致。
Aurora A基因绘制经常在多种癌例如乳腺、膀胱、结肠、卵巢、胰腺癌中扩增染色体20q13域的图。具有该基因扩增肿瘤的患者可能尤其对aurora激酶抑制靶向治疗敏感。
本领域技术人员已知鉴定和分析Aurora突变、Aurora同种型上调和染色体20q13扩增的方法。筛选方法可包括但不限于标准方法，例如逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)或原位杂交。
在RT-PCR筛选中，通过创建mRNA的cDNA模板，随后通过PCR扩增cDNA评价肿瘤中Aurora mRNA水平。本领域技术人员已知PCR扩增的方法、选择引物和扩增的条件。通过例如在Ausubel，F.M.等编辑，Current Protocols in Molecular Biology，2004，John Wiley&Sons Inc.，或Innis，M.A.等编辑，PCR Protocols：a guide to methods andapplications，1990，Academic Press，San Diego中描述的标准方法进行核酸操作和PCR。还在Sambrook等，2001，第3版，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press中有涉及核酸技术的反应和操作的描述。或者，可以使用市售RT-PCR试剂盒(例如Roche Molecular Biochemicals)，或在美国专利4,666,828；4,683,202；4,801,531；5,192,659；5,272,057；5,882,864和6,218,529中描述的方法，这些专利通过引用结合到本文中。
评价Aurora mRNA表达的原位杂交技术的实例是荧光原位杂交(FISH(参见Angerer，1987 Meth.Enzymol.，152：649)。
通常，原位杂交包括以下主要步骤：(1)固定待分析的组织；(2)对样品进行预杂交处理以增加靶核酸的可接近性和减少非特异性结合；(3)将核酸混合物杂交成生物结构或组织中的核酸；(4)杂交后洗涤以除去在杂交中未结合的核酸片段，和(5)检测杂交的核酸片段。通常，用于此类用途的探针例如用放射性同位素或荧光报道分子标记。优选的探针足够长，例如约50、100或200个核苷酸至约1000或更多个核苷酸，以使在苛刻的条件下与靶核酸特异性杂化。进行FISH的标准方法在Ausubel，F.M.等编辑的Current Protocols inMolecular Biology，2004，John Wiley&Sons Inc和由John M.S.Bartlett在Molecular Diagnosis of Cancer，Methods and Protocols，第2版；ISBN：1-59259-760-2中撰写的Fluorescence In Situ Hybridization：TechnicalOverview(原位杂交中的荧光：技术概观)；2004年3月，第077-088页；Series：Methods in Molecular Medicine中描述。
或者，由mRNAs表达的蛋白产物可通过以下评价：肿瘤样本的免疫组织化学、使用微量滴定板的固相免疫测定、蛋白质印迹法、2-维SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、ELISA、流式细胞术和其它本领域中已知的检测特异性蛋白的方法。检测方法包括使用部位特异性抗体。熟练的技术人员会认识到，所有此类熟知的检测Aurora上调和Aurora突变体的技术都可适用于本发明。
此外，也可用所有这些技术鉴别特别合适用CDK抑制剂治疗的肿瘤。具有CDC4突变体或细胞周期蛋白E上调、尤其过度表达或p21或p27缺失的肿瘤尤其可能对CDK抑制剂敏感。治疗前，可优先筛选细胞周期蛋白E上调，尤其过度表达的肿瘤(Harwell RM，Mull BB，Porter DC，Keyomarsi K.；J Biol Chem.2004年3月26日；279(13)：12695-705)或缺失p21或p27或CDC4变种的肿瘤(Rajagopalan H，Jallepalli PV，Rago C，Velculescu VE，Kinzler KW，Vogelstein B，Lengauer C.；Nature.2004年3月4日；428(6978)：77-81)。
抗真菌用途
在再一个方面，本发明提供前文中定义的式(I)化合物作为抗真菌药物的用途。
式(I)化合物可用于动物药物(例如用于治疗哺乳动物例如人)，或用于治疗植物(例如用于农业和园艺)或用作一般的抗真菌药物，例如用作防腐剂和消毒剂。
在一个实施方案中，本发明提供用于预防或治疗哺乳动物例如人真菌感染的前文定义的式(I)化合物。
还提供式(I)化合物在制备用于预防或治疗哺乳动物例如人真菌感染的药物中的用途。
例如，本发明化合物可给予患有或处于被其中念株菌属(Candida)、毛癣菌属(Trichophyton)、小孢子菌属(Microsporum)或表皮癣菌属(Epidermophyton)的其它生物体引起的局部真菌感染，或由白色念株菌(Candida albicans)(例如真菌性口炎和***念株菌病)引起的粘膜感染的风险的人患者。也可给予本发明化合物来治疗或预防由以下真菌引起的全身性真菌感染：例如白色念株菌(Candidaalbicans)、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)、黄曲霉(Aspergillusflavus)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、球孢子菌属(Coccidiodies)、Paracoccidioides、组织孢浆菌属(Histoplasma)或芽生酵母菌(Blastomyces)。
在另一方面，本发明提供农业用(包括园艺)抗真菌组合物，该组合物包括式(I)化合物以及农业上可接受的稀释剂或载体。
本发明还提供治疗被真菌感染的动物(包括哺乳动物例如人)、植物或或种子的方法，该方法包括用有效量的式(I)化合物治疗所述动物、处理所述植物或种子，或所述植物或种子的所在场所。
本发明还提供治疗植物或种子真菌感染的方法，该方法包括用抗真菌有效量的含有前文定义的式(I)化合物的杀真菌组合物处理植物或种子。
可用差别筛选测定选择具有非人CDK酶特异性的那些本发明化合物。特异性作用于真核细胞病原体CDK酶的化合物可用作抗真菌或抗寄生虫药物。念株菌CDK激酶抑制剂CKSI可用于治疗念株菌病。可用抗真菌药物抗前文定义的感染类型，或通常发生在身体衰弱者和免疫抑制患者例如患有白血病和淋巴瘤患者、接受免疫抑制治疗的人、患有素因性病症例如糖尿病或AIDS的患者和非免疫抑制患者中的机会感染。
可用本领域中所述测定筛选可用于抑制至少一种涉及以下真菌病的真菌的药物，例如念珠菌病(candidiasis、曲霉病(aspergillosis)、毛霉病(mucormycosis)、芽生菌病(blastomycosis)、地丝菌病(geotrichosis)、隐球菌病(cryptococcosis)、着色芽生菌病(chromoblastomycosis)、球孢子菌病(coccidiodomycosis)、conidiosporosis、组织胞浆菌病(histoplasmosis)、足菌肿(maduromycosis)、鼻孢子虫病(rhinosporidosis)、诺卡氏菌病(nocaidiosis)、拟-放线菌病(para-actinomycosis)、青霉病(penicilliosis)、monoliasis或孢子丝菌病(sporotrichosis)。通过使用由酵母例如烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)或土曲霉(Aspergillusterreus)克隆的CDK基因，可用差别筛选测定鉴别可能具有治疗曲霉病的价值的抗真菌药物，或当真菌感染是mucon-nycosis时，CDK测定可源自酵母例如少根根霉(Rhizopus arrhizus)、米根霉(Rhizopusoryzae)、伞枝梨头霉(Absidia corymbifera)、分枝梨头霉(Absidia ramose)或微小毛霉(Mucorpusillus)。其它CDK酶的来源包括卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)病原体
作为实例，可通过体外测定最小抑制浓度(M.I.C.)评价化合物的抗真菌活性，最小抑制浓度为测试化合物在合适的介质中的最低浓度，在该浓度下，未发生具体的微生物生长。在实践中，制备一系列琼脂板，在每个加有特定浓度测试化合物的板上接种例如白念珠菌(Candida albicans)的标准培养基，然后使每板在37℃下温育适当的时间。然后检查板是否存在真菌生长，记录适当的M.I.C.值。或者，可进行液体培养基中浊度测定，在实施例314中可找到描述该测定实例的方案。
可通过腹膜内或静脉内注射或通过经口给予已接种真菌例如白念珠菌或黄曲霉株的小鼠化合物，在一系列剂量水平上进行体内评价化合物。可通过监测在治疗组和未治疗组小鼠的真菌感染生长(通过组织学或通过从感染中回收真菌)评价化合物的活性。可按剂量水平测量活性，在该剂量下，化合物提供抗感染致死作用的50％保护(PD50)。
对于人中抗真菌用途，可单独或与药学上可接受的载体混合给予式(I)化合物，根据预定给药途径和标准的药学实践选择载体。因此，例如可通过在标题为″药物制剂″部分中的上述制剂，口服、肠胃外、静脉内、肌内或皮下给予它们。
对于经口和肠胃外给予人患者，式(I)化合物的抗真菌日剂量水平可为0.01-10mg/kg(分剂量)，当经口或肠胃外途径给药时，尤其取决于化合物的效力。化合物的片剂或胶囊可含有例如5mg-0.5g活性化合物，酌情一次、两次或多次给予。无论如何，医师决定实际的剂量(有效量)，该剂量是最合适个体患者的量，它随具体患者的年龄、重量和反应而不同。
或者，可以栓剂或***栓形式给予式(I)抗真菌化合物，或它们可以洗剂、溶液剂、霜剂、软膏剂或扑粉的形式局部使用。例如，可将它们加入由聚乙二醇或液体石蜡的水性乳剂组成的软膏中；或将它们按1-10％浓度加入由白蜡或白软石蜡基质及可能需要的稳定剂和防腐剂一起组成的乳膏中。
除上述治疗用途外，用这种差别筛选测定开发的抗真菌药物可用作例如用于食品、家畜增重饲料补充剂的防腐剂，或用于处理非生命物质例如净化医院设备和房间的消毒剂。按相似方式，并排比较哺乳动物CDK和昆虫的CDK例如果蝇CDK5基因的抑制结果(Hellmich等(1994)FEBS Lett 356：317-21)，将允许在本文中的化合物中选择区分人/哺乳动物和昆虫酶的抑制剂。因此，本发明尤其预计本发明化合物在杀虫剂例如在控制昆虫如果蝇中的用途和制剂。
在还另一个实施方案中，可根据相对于哺乳动物酶特异性抑制植物CDK，选择某些主题CDK抑制剂。例如，可在使用一种或多种人酶的差别筛选中排列植物CDK，以选择在抑制植物酶中有最大选择性的那些化合物。因此，本发明尤其预计用于农业的主题CDK抑制剂的制剂，例如脱叶剂等形式的制剂。
在农业和园艺目的上，本发明化合物可以配制成合适用于具体用途和预定目的的组合物形式使用。因此化合物可以扑粉或颗粒、拌种、水溶液、分散体或乳液、浸泡液、喷雾剂、气雾剂或烟雾的形式使用。也可以分散粉末、颗粒或细粒，或使用前稀释的浓缩液形式提供组合物。此类组合物可含有农业和园艺上已知和可接受的常用载体、稀释剂或助剂，它们可按常规方法制备。也可将这些组合物与其它活性成分例如具有除草或杀虫活性的化合物或其它杀真菌剂混合。这些化合物和组合物可按多种方式使用，例如它们可直接施用于植物叶、茎、枝、种子或根，或施用于土壤或其它生长介质，并且不仅可用它们根除疾病，而且可预防性保护植物或种子免受侵害。作为实例，这些组合物可含0.01-1％(重量)活性成分。在田间使用时，活性成分可能的使用比例可为50-5000g/公顷。
本发明还预计式(I)化合物在控制木材腐烂真菌和处理植物生长的土壤、秧苗稻田或浇灌水中的用途。本发明还预计式(I)化合物在保护储存谷物和其它非植物场所免受真菌感染中的用途。
实施例
现通过参照但不限于以下实施例中描述的具体实施方案说明本发明。
在这些实施例中，通过使用下述***和操作条件的液相色谱和质谱表征制备的化合物。当存在氯时，提供化合物的质量是指35Cl。使用描述如下的几种***，配备这些***并建立以在非常接近的操作条件下运行。使用的操作条件也描述如下。
平台(Platform)***1
***：Waters 2790/Platform LC
质谱检测器：Micromass Platform LC
PDA检测器：Waters 996 PDA
分析条件：
洗脱液A：5％CH3CN/95％H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：10-95％洗脱液B
流速：1.2ml/min
柱：Synergi4μm Max-RP C12，80A，50×4.6mm(Phenomenex)
MS条件：
毛细管电压：3.5kV
锥体(Cone)电压：30V
离子源温度：120℃
FractionLynx***1
***：Waters FractionLynx(双重分析/制备)
质谱检测器：Waters-Micromass ZQ
PDA检测器：Waters 2996 PDA
分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：5-95％洗脱液B
流速：1.5ml/min
柱：Synergi4μm Max-RP C12，80A，50×4.6mm(Phenomenex)
MS条件：
毛细管电压：3.5kV
锥体电压：30V
离子源温度：120℃
去溶剂化温度：300℃
平台***2
HPLC***：Waters 2795
质谱检测器：Micromass Platform LC
PDA检测器：Waters 2996 PDA
酸性分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：5-95％洗脱液B洗脱3.5分钟
流速：1.5ml/min
柱：Phenomenex Synergi4μMax-RP 80A，50×4.6mm
碱性分析条件：
洗脱液A：H2O(10mM NH4HCO3缓冲液，用NH4OH调节至pH＝9.5)
洗脱液B：CH3CN
梯度：05-95％洗脱液B洗脱3.5分钟
流速：1.5ml/min
柱：Waters XTerra MS C18 5μm 4.6×50mm
极性分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：00-50％洗脱液B洗脱3分钟
流速：1.5ml/min
柱：Phenomenex Synergi4μHydro 80A，50×4.6mm
MS条件：
毛细管电压：3.5kV
锥体电压：30V
离子源温度：120℃
扫描范围：165-700amu
离子化模式：-/+或+&-离子电喷雾
FractionLynx***2
***：Waters FractionLynx(分析/制备两用)
HPLC泵：Waters 2525
自动进样器：Waters 2767
质谱检测器：Waters-Micromass ZQ
PDA检测器：Waters 2996 PDA
分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：5-95％洗脱液B洗脱5分钟
流速：2.0ml/min
柱：Phenomenex Synergi4μMax-RP 80A，50×4.6mm
极性分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：00-50％洗脱液B洗脱5分钟
流速：2.0ml/min
柱：Phenomenex Synergi4μMax-RP 80A，50×4.6mm
MS条件：
毛细管电压：3.5kV
锥体电压：25V
离子源温度：120℃
扫描范围：125-800amu
离子化模式：+或+&-离子电喷雾
质谱指导下的LC-MS纯化***
可用以下制备色谱***纯化本发明化合物。
硬件：
Waters Fractionlynx***：
2767自动进样器/流份收集器两用
2525制备泵
用于柱选择的CFO(柱流体组织器)
补充液泵的RMA(Waters试剂管理器)
Waters ZQ质谱仪
Waters 2996光二级管阵列检测器
软件：Masslynx 4.0
柱：
1.低pH层析：Phenomenex Synergy MAX-RP，10μ，150×15mm(或者使用具有100×21.2mm尺寸的同一类型的柱)。
2.高pH层析：Phenomenex Luna C18(2)，10μ，100×21.2mm(或者使用Thermo Hypersil Keystone BetaBasic C18，5μ，100×21.2mm)
洗脱液：
1.低pH层析：
溶剂A：H2O+0.1％甲酸，pH1.5
溶剂B：CH3CN+0.1％甲酸
2.高pH层析：
溶剂A：H2O+10mM NH4HCO3+NH4OH，pH9.5
溶剂B：CH3CN
3.溶剂组成：MeOH+0.1％甲酸(两种层析类型通用)
方法：在使用分离和纯化产物化合物的制备色谱前，可先用分析型LC-MS确定制备色谱最合适的条件。典型的操作是用最合适化合物结构的色谱类型(低或高pH)运行分析型LC-MS。一但分析痕迹表现出良好的色谱结果，可选择同一类型的合适的制备方法。典型的低和高pH色谱方法的运行条件是：
流速：24ml/min
梯度：通常所有的梯度均具有初始用95％A+5％B运行0.4min的步骤。然后，根据分析痕迹选择3.6min梯度，以便完成良好分离(例如对于先保留的化合物为5％-50％B；对于中间保留的化合物为35％-80％B等)
洗涤：在梯度结束时，进行1分钟洗涤步骤
再平衡：进行2.1分钟再平衡步骤以制备下一个运行的***
补充液流速：1ml/min
溶剂：
通常，将所有化合物溶于100％MeOH或100％DMSO
MS运行条件：
毛细管电压：3.2kV
锥体电压：25V
离子源温度：120℃
倍增器：500V
扫描范围：125-800amu
离子化模式：正离子电喷雾
分析型LC-MS***
HPLC***：Waters 2795
质谱检测器：Micromass Platform LC
PDA检测器：Waters 2996 PDA
酸性分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：5-95％洗脱液B洗脱3.5分钟
流速：0.8ml/min
柱：Phenomenex Synergi4μMAX-RP 80A，2.0×50mm
碱性分析条件：
洗脱液A：H2O(10mM NH4HCO3缓冲液，用NH4OH调至pH＝9.5)
脱液B：CH3CN
梯度：05-95％洗脱液B洗脱3.5分钟
流速：0.8ml/min
柱：Thermo Hypersil-Keystone BetaBasic-185μm 2.1×50mm或
柱：Phenomenex Luna C18(2)5μm 2.0×50mm
极性分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：00-50％洗脱液B洗脱3分钟
流速：0.8ml/min
柱：Thermo Hypersil-Keystone HyPurity Aquastar，5μ，2.1×50mm或
柱：Phenomenex Synergi4μMAX-RP80A，2.0×50mm或
更长时间分析条件：
洗脱液A：H2O(0.1％甲酸)
洗脱液B：CH3CN(0.1％甲酸)
梯度：05-95％洗脱液B洗脱15分钟
流速：0.4ml/min
柱：Phenomenex Synergi4μ MAX-RP 80A，2.0×150mm
MS条件：
毛细管电压：3.6kV
锥体电压：30V
离子源温度：120℃
扫描范围：165-700amu
离子化模式：正离子电喷雾或
负离子电喷雾或
正和负离子电喷雾
除另有说明外，各个实施例的原料来自市售。
实施例1
合成2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)-1H-苯并咪唑
将邻-苯二胺(1.51g，14.0mmol)、4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸(2.00g，12.7mmol)、EDC(2.93g，15.3mmol)和HOBt(2.08g，15.3mmol)在DMF(70ml)中的混合物在环境温度下搅拌24h。将混合物真空浓缩，将残渣溶于AcOH(150ml)，加热回流3h。真空除去溶剂，加入水(100ml)，过滤收集固体，用水洗涤。通过与甲苯(3×150ml)共沸使固体干燥，得到2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)-1H-苯并咪唑，为黄色固体(1.44g，50％)。使100mg份经制备LC/MS纯化，随后蒸发含产物的流份，得到70mg标题化合物。(LC/MS：Rt1.72，[M+H]+229.61)。
实施例2
合成3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺
在室温下，使2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)-1H-苯并咪唑(1.34g，5.85mmol)和10％Pd/C(0.13g)在DMF(200ml)中的混合物经历氢气氛36h。将反应混合物通过硅藻土塞过滤，真空浓缩。使残渣在EtOAc和水之间分配，干燥(MgSO4)有机部分，过滤，真空浓缩。使残渣与甲苯(3×150ml)共沸，得到3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺，为紫色固体(0.32g，26％)。(LC/MS：Rt0.97，[M+H]+199.62)。
实施例3
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将苯甲酸(34mg，0.28mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)、EDC(58mg，0.30mmol)和HOBt(40.5mg，0.30mmol)在DMF(5ml)中的混合物在室温下搅拌24h。真空除去溶剂，使粗产物经制备LC/MS纯化，随后浓缩含产物的流份，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺，为棕色固体(23mg，30％)。(LC/MS：Rt3.66，[M+H]+303.67)。
实施例4
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-乙酰胺
将乙酸酐(27μl，0.28mmol)加入3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)的吡啶(5ml)溶液中，将混合物在环境温度下搅拌24h。将混合物真空浓缩，使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-汽油(1∶2.5，2∶1)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-乙酰胺，为棕色结晶固体(29mg，48％)。(LC/MS：Rt1.70，[M+H]+241.64)。
实施例5
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，2，2-三氟-乙酰胺
将三氟乙酸酐(40μl，0.28mmol)加入3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)的吡啶(5ml)溶液中，将混合物在环境温度下搅拌24h。将混合物真空浓缩，使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-汽油(1∶2)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，2，2-三氟-乙酰胺，为膏状固体(23mg，32％)。(LC/MS：Rt3.67，[M+H]+295.63)。
实施例6
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
将2，6-二氟苯甲酸(43mg，0.28mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)、EDC(58mg，0.30mmol)和HOBt(40.5mg，0.30mmol)在DMF(10ml)中的混合物在环境温度下搅拌24h。将混合物真空浓缩，加入水(30ml)，将得到的固体过滤，收集，在真空干燥箱中干燥，经快速柱层析[SiO2，EtOAc-汽油(1∶2，1∶1，3∶1)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺(20mg，24％)。
(LC/MS：Rt3.29，[M+H]+339.64)。
实施例7
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-环己烷甲酰胺
将环己烷甲酸(36mg，0.28mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)、EDC(58mg，0.30mmol)和HOBt(41mg，0.30mmol)在DMSO(2ml)中的混合物在环境温度下搅拌24h。使反应混合物在EtOAc(40ml)和水(40ml)之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-汽油(1∶4，1∶3，1∶2，1∶1)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-环己烷甲酰胺，为灰白色固体(25mg，32％)。
(LC/MS：Rt3.59，[M+H]+310.16)。
实施例8
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-苯基乙酰胺
将苯乙酸(38mg，0.28mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)、EDC(58mg，0.30mmol)和HOBt(41mg，0.30mmol)在DMSO(2ml)中的混合物在环境温度下搅拌24h。使反应混合物在EtOAc(40ml)和水(40ml)之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-汽油(1∶2，1∶1，2∶1)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-苯基乙酰胺，为棕色固体(15mg，19％)。(LC/MS：Rt3.26，[M+H]+318.13)。
实施例9
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-甲基-3-苯基-异唑-4-甲酰胺
将5-甲基-3-苯基异唑-4-甲酸(57mg，0.28mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)、EDC(58mg，0.30mmol)和HOBt(41mg，0.30mmol)在DMSO(2ml)中的混合物在环境温度下搅拌24h。使反应混合物在EtOAc和水之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-汽油(1∶2，1∶1，2∶1)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-甲基-3-苯基-异
唑-4-甲酰胺，为膏状固体(15mg，16％)。
(LC/MS：Rt3.73，[M+H]+385.14)。
实施例10
合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-甲酸甲酯
10A.2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯
将甲醇钠(1.50g，27.7mmol)加入2-(乙酰基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(1.0g，4.2mmol)的MeOH(30ml)溶液中，在环境温度下，将混合物在氮气下搅拌16h。用浓盐酸小心酸化反应物，然后加热，回流过夜，随后蒸发和通过甲苯(2×30ml)再蒸发。残渣用CH2Cl2(50ml)处理，使不溶物通过过滤除去，将滤液真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-己烷(1∶4，1∶0)]纯化，得到2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(535mg)，为浅黄色固体。
10B.2，3-二氨基苯甲酸甲酯
在环境温度下，将2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(530mg)和10％Pd/C(55mg)在EtOH(10ml)中的混合物在氢气氛下搅拌16h。通过硅藻土过滤除去催化剂，将滤液真空浓缩，得到2，3-二氨基苯甲酸甲酯(420mg)，为黄色/棕色油状物，其在放置后固化。
10C.2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-甲酸甲酯
将4-(2，6-二氟苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(690mg，2.6mmol)实施例16D)、2，3-二氨基苯甲酸甲酯(415mg，2.6mmol)、EDC(590mg，3.1mmol)和HOBt(415mg，3.1mmol)在DMF(10ml)中的混合物在环境温度下搅拌16h，然后真空浓缩。使残渣在EtOAc和盐水之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，然后在热EtOH中结晶。将该酰胺中间体(480mg)溶于AcOH(10ml)，然后加热，回流3h。将反应混合物真空浓缩，然后与甲苯(2×20ml)共沸，得到2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-甲酸甲酯(420mg)，为浅黄褐色固体。
(LC/MS：Rt3.82，[M+H]+398)。
实施例11
合成2，6-二氟-N-[3-(4-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺和乙酸2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-基甲酯
11A.2-氨基-3-硝基苯甲酸
用浓盐酸(10ml)处理2-(乙酰基氨基)-3-硝基苯甲酸甲酯(2.6g)的EtOH(50ml)溶液，然后加热，回流16h。将反应混合物冷却，真空浓缩，与甲苯(2×50ml)共沸，得到2-氨基-3-硝基苯甲酸(1.83g)，为浅黄色固体。
11B.2-氨基-3-硝基苯甲醇
向2-氨基-3-硝基苯甲酸(1.82g，10.0mmol)的无水THF(50ml)溶液中加入氢硼化钠(770mg，20.0mmol)，随后加入***合三氟化硼(2.5ml，20mmol)，将混合物在环境温度下，在氮气氛下搅拌2h。小心加入MeOH直至气体生成停止，真空浓缩混合物。使残渣在EtOAc和盐水之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到2-氨基-3-硝基苯甲醇(1.42g)，为黄色固体。
11C.2，3-二氨基苯甲醇
在环境温度下，在氢气氛下将2-氨基-3-硝基苯甲醇(1.4g)和10％Pd/C(140mg)在EtOH(40ml)和DMF(10ml)中的混合物搅拌18h。通过硅藻土过滤除去催化剂，真空浓缩滤液，与甲苯(2×50ml)共沸，得到2，3-二氨基苯甲醇(1.15g)，为深棕色固体。
11D.合成N-(2-氨基-3-羟甲基-苯基)-4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
将4-(2，6-二氟苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(1.0g，3.7mmol)(实施例16D)、2，3-二氨基苯甲醇(560mg，4.1mmol)、EDC(870mg，4.5mmol)和HOBt(610mg，4.5mmol)在DMF(20ml)中的混合物在环境温度下搅拌18h，然后真空浓缩。使残渣在EtOAc和盐水之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-己烷(1∶1，2∶1)]纯化，得到N-(2-氨基-3-羟甲基-苯基)-4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(860mg)。
11E.合成2，6-二氟-N-[3-(4-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺和乙酸2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-基甲酯
将N-(2-氨基-3-羟甲基-苯基)-4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(100mg，0.26mmol)溶于乙酸(10ml)，然后在CEMDiscover微波合成器中，在150℃(100W)下加热10min。然后使反应混合物与甲苯(2×20ml)共沸浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-己烷(1∶1，2∶1，3∶1)]纯化，得到2，6-二氟-N-[3-(4-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(25mg)，为灰白色固体(LC/MS：Rt2.70，[M+H]+370)和乙酸2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-基甲酯(20mg)，为灰白色固体。
(LC/MS：Rt3.60，[M+H]+412)。
实施例12
合成2，6-二氟-N-[3-(4-吗啉-4-基-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
12A.2，6-二氟-N-[3-(4-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将2，6-二氟-N-[3-(4-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(200mg，0.54mmol)和MnO2(500mg)在CH2Cl2/MeOH(5∶1，12ml)中的混合物在环境温度下搅拌18h，然后通过硅藻土过滤，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-己烷(1∶3，1∶2)]纯化，得到2，6-二氟-N-[3-(4-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基1-苯甲酰胺(30mg)，为膏状固体。
12B.2.6-二氟-N-[3-(4-吗啉-4-基-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
向2，6-二氟-N-[3-(4-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基1-苯甲酰胺(30mg，0.08mmol)和吗啉(14mg，0.16mmol)的CH2Cl2(5ml)和THF(2ml)溶液中加入3分子筛(1g)，随后加入三乙酰氧基氢硼化钠(50mg，0.24mmol)，将混合物在环境温度下，在氮气氛下搅拌2h。使反应混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，然后经快速柱层析[SiO2，EtOAc-己烷(1∶1，1∶0)，然后CH2Cl2-MeOH(95∶5)]纯化，得到2，6-二氟-N-[3-(4-吗啉-4-基-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(13mg)，为膏状固体。(LC/MS：Rt1.80，[M+H]+439)。
实施例13
合成2，6-二氟-N-[3-(N-甲基-哌嗪-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
按与实施例12B相似的方法制备该化合物，但用N-甲基哌嗪代替吗啉。(LC/MS：Rt1.93，[M+H]+452)。
实施例14
合成N-{3-[4-(叔丁基氨基-甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-2，6-二氟-苯甲酰胺
按与实施例12B相似的方法制备该化合物，但用叔丁胺代替吗啉。(LC/MS：Rt2.04，[M+H]+425)。
实施例15
合成N-[3-(4-二甲氨基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
按与实施例12B相似的方法制备该化合物，但用35％二甲胺的EtOH溶液代替吗啉。(LC/MS：Rt1.85，[M+H]+397)。
实施例16
合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯
16A.合成4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
将亚硫酰氯(2.90ml，39.8mmol)缓慢加入4-硝基-3-吡唑甲酸(5.68g，36.2mmol)在EtOH(100ml)中的混合物中，在环境温度下搅拌48h。将混合物真空浓缩，通过与甲苯共沸干燥，得到4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯，为白色固体(6.42g，96％)。
(1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ14.4(s，1H)，9.0(s，1H)，4.4(q，2H)，1.3(t，3H)).
16B.合成4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
将4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(6.40g，34.6mmol)和10％Pd/C(650mg)在EtOH(150ml)中的混合物在氢气氛下搅拌20h。使混合物通过硅藻土塞过滤，真空浓缩，通过与甲苯共沸干燥，得到4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯，为粉红色固体(5.28g，98％)。
(1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.7(s，1H)，7.1(s，1H)，4.8(s，2H)，4.3(q，2H)，1.3(t，3H)).
16C.合成4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
将2，6-二氟苯甲酸(6.32g，40.0mmol)、4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(5.96g，38.4mmol)、EDC(8.83g，46.1mmol)和HOBt(6.23g，46.1mmol)在DMF(100ml)中的混合物在环境温度下搅拌6h。将混合物真空浓缩，加入水，将形成的固体过滤，收集，晾干，得到4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯，为混合物的主要成分(15.3g)。(LC/MS：Rt3.11，[M+H]+295.99)。
16D.合成4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(10.2g)在2M含水NaOH/MeOH(1∶1，250ml)中的混合物在环境温度下搅拌14h。将挥发物真空除去，加入水(300ml)，用1M HCl水溶液将混合物调至pH5。将得到的沉淀过滤，收集，通过与甲苯共沸干燥，得到4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸，为粉红色固体(5.70g)。(LC/MS：Rt2.33，[M+H]+267.96)。
16E.合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(500mg，1.87mmol)、3，4-二氨基苯甲酸甲酯(375mg，2.25mmol)、EDC(430mg，2.25mmol)和HOBt(305mg，2.25mmol)在DMF(5ml)中的混合物在室温下搅拌12h。将残渣真空浓缩，然后溶于极少量的甲醇，加入石油醚，得到中间体酰胺，为粉红色固体，将其过滤，收集(427mg)。(LC/MS：Rt3.24，[M+H]+416.02)。
将该酰胺(150mg，0.36mmol)在冰乙酸(4ml)中的混合物在微波(100W中，在120℃加热10min。将混合物真空浓缩，加入石油醚(3ml)和甲醇(2ml)，形成沉淀，将其过滤，收集，得到2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯(96mg，67％)，为粉红色固体。(LC/MS：Rt3.67，[M+H]+397.99)。
实施例17
合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸
将2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯(12.0mg，0.03mmol)在2M NaOH/MeOH水溶液(1∶1，4ml)中的混合物在环境温度下搅拌14h。将混合物真空浓缩，加入水(5ml)，用1M HCl水溶液将混合物调至pH4。将形成的沉淀过滤，收集，真空干燥，得到2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸，为苍白色固体(6mg，52％)。
(LC/MS：Rt2.88，[M+H]+383.97)。
实施例18
合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺
向2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸(100mg，0.26mmol)、EDC(75mg，0.39mmol)和HOBt(53mg，0.39mmol)在DMF(1.5ml)中的混合物中依次加入二异丙基乙胺(0.15ml，1.04mmol)和氯化铵(28mg，0.52mmol)。将混合物在环境温度下搅拌48h，然后真空浓缩。加入水，将形成的沉淀过滤，收集，通过与甲苯共沸干燥，得到2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酰胺(49mg，49％)，为浅褐色固体。(LC/MS：Rt2.54，[M+H]+382.99)。
实施例19
合成2，6-二氟-N-[3-(5-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(584mg，2.19mmol)、(3，4-二氨基-苯基)-甲醇(332mg，2.40mmol)、EDC(504mg，2.63mmol)和HOBt(355mg，2.63mmol)在DMF(15ml)中的混合物在室温下搅拌20h。将混合物真空浓缩，将残渣溶于EtOAc，用水和盐水洗涤，将有机部分干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体(591mg)，为棕色固体。(LC/MS：Rt2.34，[M+H]+388.00)。
将该酰胺(575mg)在冰醋酸(4ml)中的混合物在微波(80W)中，在90℃下加热20min。将混合物倾入水中，将形成的固体过滤，收集。将残渣溶于MeOH(10ml)，在NaOMe(320mg，5.90mmol)的存在下搅拌30min。将混合物真空浓缩，溶于EtOAc，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经柱层析[SiO2，EtOAc]纯化，得到2，6-二氟-N-[3-(5-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺，为白色固体(78mg，10％两步)。(LC/MS：Rt2.45，[M+H]+370.05)。
实施例20
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺
将2-氟-3-甲氧基苯甲酸(47mg，0.28mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.25mmol)、EDC(58mg，0.30mmol)和HOBt(41mg，0.30mmol)在DMF(1.5ml)中的混合物在环境温度下搅拌20h。将反应混合物倾入水(30ml)中，将得到的固体过滤，收集，通过MeOH/汽油重结晶纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺(7mg，8％)，为灰色固体。(LC/MS：Rt3.63，[M+H]+352.00)。
实施例21
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-甲酸(115mg，0.30mmol)、1-甲基-哌嗪(50.0μL，0.45mmol)、EDC(104mg，0.54mmol)和HOBt(73.0mg，0.54mmol)在DMF(5ml)中的混合物在环境温度下搅拌14h。将残渣真空浓缩，溶于EtOAc，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(37mg，26％)，为浅黄色固体。(LC/MS：Rt1.78，[M+H]+466.09)。
实施例22
合成2，6-二氟-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
22A.合成2，6-二氟-N-[3-(5-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将2，6-二氟-N-[3-(5-羟基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(800mg，2.17mmol)和MnO2(5.00g，57.5mmol)在CH2Cl2/MeOH(10∶1，110ml)中的混合物在室温下搅拌5天。使混合物通过硅藻土塞过滤，用MeOH洗涤，将滤液真空浓缩，得到2，6-二氟-N-[3-(5-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(380mg，48％)，为黄色固体。(LC/MS：Rt3.41，[M+H]+368.04)。
22B.合成2，6-二氟-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
搅拌下，在环境温度下，向2，6-二氟-N-[3-(5-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(75.0mg，0.20mmol)在无水THF(5ml)中的混合物中依次加入3
分子筛、吗啉(35μL，0.40mmol)和三乙酰氧基氢硼化钠(127mg，0.60mmol)。将混合物搅拌4h，加入MeOH(3ml)，然后真空浓缩。将残渣溶于EtOAc，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，然后通过制备LC/MS纯化，得到2，6-二氟-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(9mg，10％)，为白色固体。(LC/MS：Rt1.90，[M+H]+439.09)。
实施例23
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
按与实施例22B相似的方法制备该化合物，但用1-甲基哌嗪(44.0μL，0.40mmol)作胺片段，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(4mg，5％)，为黄色固体。(LC/MS：Rt1.66，[M+H]+452.11)
实施例24
合成N-{3-[5-(叔丁基氨基-甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-2，6-二氟-苯甲酰胺
按与实施例22B相似的方法制备该化合物，但用叔丁胺(42μL，0.40mmol)作胺片段，得到N-{3-[5-(叔丁基氨基-甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-2，6-二氟-苯甲酰胺(5mg，6％)，为白色固体。(LC/MS：Rt2.00，[M+H]+425.11)
实施例25
合成N-[3-(5-二甲基氨基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
按与实施例22B相似的方法制备该化合物，但用2，6-二氟-N-[3-(5-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(57.4mg，0.16mmol)、无水THF(5ml)、3
分子筛、二甲胺(35％的EtOH溶液)(55μL，0.31mmol)和三乙酰氧基氢硼化钠(100mg，0.47mmol)，得到N-[3-(5-二甲基氨基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺(11mg，18％)，为黄色固体。(LC/MS：Rt2.85，[M+H]+397.17)。
实施例26
合成N-[3-(5-氯-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(50mg，0.18mmol)、4-氯苯二胺(30mg，0.21mmol)、EDC(45mg，0.22mmol)和HOBt(30mg，0.22mmol)在DMF(5ml)中的混合物在环境温度下搅拌18h。将反应混合物真空浓缩，使残渣经柱层析[SiO2，EtOAc/己烷(1∶1)]纯化，得到酰胺中间体。将该酰胺在AcOH(2ml)中的混合物在微波(50W)中，在140℃下加热15min，然后真空浓缩。使残渣经柱层析[SiO2，EtOAc/汽油(1∶1)]纯化，得到N-[3-(5-氯-1 H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺(20mg)，为浅黄褐色固体。(LC/MS：Rt4.16，[M+H]+374)。
实施例27
合成2，6-二氟-N-[3-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
按与实施例26相似的方法制备该化合物，但用4-甲氧基苯二胺(28mg，0.21mmol)作胺片段，得到2，6-二氟-N-[3-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(25mg)，为浅棕色固体。(LC/MS：Rt3.26，[M+H]+370)。
实施例28
合成2，6-二氟-N-[3-(5-硝基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
按与实施例26相似的方法制备该化合物，但用4-硝基苯二胺(32mg，0.21mmol)作胺片段，得到2，6-二氟-N-[3-(5-硝基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基1-苯甲酰胺(18mg)。(LC/MS：Rt3.84，[M+H]+385)。
实施例29
合成2，6-二氟-N-[3-(1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
按与实施例26相似的方法制备该化合物，但用3，4-二氨基吡啶(22mg，0.21mmol)作胺片段，得到2，6-二氟-N-[3-(1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(13mg)，为棕色固体。(LC/MS：Rt4.16，[M+H]+341)。
实施例30
合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-甲酸
用氢氧化锂水合物(70mg，1.66mmol)处理2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-甲酸甲酯(220mg，0.55mmol)的THF/水(1∶1，10ml)溶液，将混合物在环境温度下搅拌18h。将挥发物在真空下除去，加入2M盐酸水溶液，将混合物酸化至pH5，将形成的固体过滤，收集，用水洗涤，然后真空干燥，得到2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-甲酸(165mg)，为棕色固体。(LC/MS：Rt3.28，[M+H]+384)。
实施例31
合成2，6-二氟-N-{3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-4-甲酸(50mg，0.13mmol)、N-甲基哌嗪(20μl，0.18mmol)、EDC(30mg，0.15mmol)和HOBt(22mg，0.15mmol)在DMF(5ml)中的混合物在环境温度下搅拌18h。将混合物真空浓缩，使残渣经快速柱层析[SiO2，CH2Cl2/MeOH(95∶5，90∶10)]纯化，得到2，6-二氟-N-{3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(14mg)，为膏状固体。
(LC/MS：Rt2.21，[M+H]+466)。
实施例32
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯甲酰胺
32A.合成2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯甲酸甲酯
向三苯膦(0.79g，3.0mmol)在THF(15ml)中的混合物中依次加入偶氮二甲酸二异丙酯(0.61g，3.0mmol)、水杨酸甲酯(0.46g，3.0mmol)，将得到的混合物在环境温度下搅拌1h。然后滴加1-(2-羟乙基)-吡咯烷(0.35g，3.0mmol)，将反应混合物在环境温度下再搅拌5h。将反应混合物真空浓缩，经快速柱层析[SiO2，EtOAc/MeOH(3∶1，1∶1)]纯化，得到2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯甲酸甲酯，为澄清黄色油(446 mg，60％)。
(LC/MS：Rt1.58，[M+H]+250.05)。
32B.合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯甲酰胺
将2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯甲酸甲酯(125mg，0.50mmol)和氢氧化锂(21mg，0.50mmol)溶于THF/H2O(1∶1，2ml)，将混合物在环境温度下搅拌20h。将反应混合物真空浓缩，与甲苯(3×5ml)共沸，得到白色固体，将其溶于水(1ml)，用2M HCl水溶液(1ml)酸化。将得到的溶液真空浓缩，与甲苯(3×5ml)共沸，得到浅黄色凝胶，将其与3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(100mg，0.50mmol)、EDC(116mg，0.60mmol)和HOBt(81mg，0.60mmo）混合，并在环境温度下，在DMF(3ml)中搅拌20h。将反应混合物真空浓缩，经快速柱层析[SiO2，CH2Cl2/MeOH(95∶5，87.5∶12.5)，然后120 DMAW]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯甲酰胺(63mg，30％)，为浅粉红色固体。(LC/MS：Rt2.08，[M+H]+417.11)。
实施例33
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲氧基-苯甲酰胺
将3-甲氧基苯甲酸(84mg，0.55mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(100mg，0.50mmol)、EDC(116mg，0.60mmol)和HOBt(81mg，0.60mmol)在DMSO(3ml)中的混合物在环境温度下搅拌20h。将反应混合物倾入水(30ml)中，将得到的固体过滤，收集，经快速柱层析[SiO2，(二氯甲烷120ml、甲醇15、乙酸3ml、水2ml(DMAW120)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-3-甲氧基-苯甲酰胺，为浅粉红色-灰色固体(21mg，13％)。(LC/MS：Rt3.81，[M+H]+334.03)。
实施例34
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉-8-甲酰胺
在室温下，将喹啉-8-甲酸(104mg，0.60mmol)、3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(100mg，0.50mmol)、EDC(116mg，0.60mmol)和HOBt(81mg，0.60mmol)的混合物在DMF(1.5ml)中搅拌20h。使反应混合物经制备LC/MS纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉-8-甲酰胺(11mg，6％)，为棕色固体。(LC/MS：Rt3.85，[M+H]+355.11)。
实施例35-67
按实施例34中所述方法，但用合适的羧酸代替喹啉-8-甲酸，制备以下化合物。
实施例68-70
按实施例21和22中所述方法，制备以下化合物。
实施例71-75
通用方法A
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.134g，0.50mmol)、适当的苯-1，2-二胺(0.60mmol)、EDC(0.116 g，0.60mmol)和HOBt(0.081g，0.60mmol)在DMF(3ml)中的混合物在环境温度下搅拌18h。将反应混合物真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体。将乙酸(6ml)加入该粗酰胺中，将混合物在微波(120W)中，在110℃下加热10min，然后真空浓缩。残渣经制备LC/MS纯化，得到需要的产物。
以下化合物用通用方法A制备：
实施例76
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将3，4-二硝基氟苯(1.86g，10mmol)和4-羟基-1-甲基哌啶(1.38g，12mmol)溶于THF(20ml)，在环境温度下搅拌，同时分几小批加入氢化钠(60％的矿物油分散液，0.40g，10mmol)。将反应混合物搅拌1小时，然后真空浓缩，在乙酸乙酯和水之间分配，有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使得到的残渣经历柱层析，用5％MeOH/DCM洗脱，得到黄色固体(1.76g，2∶1比例的需要的4-(3，4-二硝基-苯氧基)-1-甲基-哌啶和副产物4-(4-氟-2-硝基-苯氧基)-1-甲基-哌啶)。
在氮气氛下，将得到的产物混合物样品(0.562g)溶于DMF(10ml)。然后在氢气氛下，将反应混合物震动40小时，将固体过滤除去，将滤液真空浓缩，得到黑色油状物(1∶1的需要的4-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯-1，2-二胺和还原副产物5-氟-2-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-苯胺的混合物)。
将黑色油状物的样品(0.221g)与4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.134g，0.50mmol)、EDC(0.116g，0.60mmol)和HOBt(0.081g，0.60mmol)和DMF(3ml)混合，将反应混合物在环境温度下搅拌18小时。将一半反应混合物进行后处理：真空浓缩后，使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体。将乙酸(6ml)加入该粗酰胺中，将混合物加热，回流3.5小时，然后真空浓缩。残渣经制备LC/MS纯化，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(1-甲基-哌啶-4-基氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(0.035g)的甲酸盐，为棕色固体。
(LC/MS：Rt1.82，[M+H]+453.30)。
实施例77
合成N-[3-(4-氯-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
77A.合成3-氯-苯-1，2-二胺
将3-氯-2-硝基-苯胺(0.345g，2mmol)溶于异丙醇(10ml)和水(2ml)。加入催化剂乙酸(0.1ml)，随后在氮气流下，加入Raney镍(0.02g，50％H2O的浆状物)。然后在环境温度下，将反应混合物在氢气氛下震动5小时，将催化剂在氮气氛下过滤除去。将滤液真空浓缩，在乙酸乙酯和水之间分配，将有机层真空浓缩，得到3-氯-苯-1，2-二胺，为棕色油状物(0.190g，67％)。(LC/MS：Rt1.84，[M+H]+143.07)。
77B.合成N-[3-(4-氯-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.134g，0.50mmol)、3-氯-苯-1，2-二胺(0.085g，0.60mmol)、EDC(0.116g，0.60mmol)和HOBt(0.081g，0.60mmol)在DMF(3ml)中的混合物在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体。将乙酸(5ml)加入该粗酰胺中，将混合物加热，回流3小时，然后真空浓缩。残渣经制备LC/MS纯化，得到N-[3-(4-氯-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基1-2，6-二氟-苯甲酰胺(0.052g，28％)，为棕色固体。(LC/MS：Rt3.18，[M+H]+374.09)。
实施例78-81
通用方法B
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(100mg，0.37mmol)、相关的二胺(1.2当量)、EDC(1.2当量)和HOAt(1.2当量)在DMF(1.2ml)中的混合物在环境温度下搅拌16小时。通过倾入水和用EtOAc萃取(×2)对反应物进行后处理。合并的有机层再用水、盐水洗涤，经MgSO4干燥。将产物过滤，蒸发至干，剩下酰胺中间体固体。将该酰胺在AcOH(2ml)中的混合物在微波(50W)中，在110℃下加热直至反应完全。将悬浮液真空浓缩，残渣经制备HPLC纯化。
以下化合物按通用方法B制备：
实施例82-86
通用方法C
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(150mg，0.56mmol)、相关二胺(1.1当量)、EDC(1.2当量)和HOBt(1.2当量)在DMF(4ml)中的混合物在环境温度下搅拌16小时，然后真空浓缩。使残渣在EtOAc和饱和NaHCO3水溶液之间分配，有机部分用水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。将残渣溶于AcOH(4ml)，在微波(100W)中，在120℃下加热10分钟。将混合物真空浓缩，经制备HPLC纯化。
以下化合物按通用方法C制备：
实施例87
合成1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基-1H-吡唑-4-基]-3-叔丁基-脲
将3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(100mg，0.50mmol)、异氰酸叔丁酯(60μl，0.60mmol)在DMF(5ml)中的混合物在环境温度下搅拌4h。将混合物真空浓缩。残渣经制备LC/MS纯化，随后蒸发，得到52mg标题化合物，为白色固体(35％)。(LC/MS：Rt2.61，[M+H]+299.15)。
实施例88
合成1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-3-(2，6-二氟-苯基)-脲
按与实施例87相似的方法，但用异氰酸2，6-二氟苯基酯制备该化合物，得到标题化合物，为白色固体(15mg)。
(LC/MS：Rt2.82，[M+H]+355)。
实施例89
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(4-异丙基-哌嗪-1-羰基-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
按与实施例21相似的方法，但用1-异丙基哌嗪作胺片段制备该化合物，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(4-异丙基-哌嗪-1-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺，为黄色固体(63mg)。(LC/MS：Rt1.87，[M+H]+494.18)。
实施例90
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(吡咯烷-1-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
按与实施例21相似的方法，但用吡咯烷作胺片段制备该化合物，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(吡咯烷-1-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺，为白色固体(17mg)。(LC/MS：Rt3.03，[M+H]+437.16)。
实施例91
合成2，6-二氟-N-[3-(5-羟基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将2，6-二氟-N-[3-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例27)(850mg)和氯化铝(III)(220mg)在甲苯(4ml)中的混合物在80℃下加热3小时，冷却至环境温度，依次加入饱和NaHCO3水溶液(4ml)和5％柠檬酸水溶液(4ml)。混合物用EtOAc萃取，有机萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经历LC/MS，得到2，6-二氟-N-[3-(5-羟基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(22mg)，为浅褐色固体。(LC/MS：Rt2.01，[M+H]+356.09)。
实施例92
合成2，6-二氟-N-{3-[5-羟基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将2，6-二氟-N-[3-(5-羟基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(50mg)、37％甲醛水溶液(1ml)和N-甲基哌嗪(150μL)在苯(1ml)中的混合物在微波(100℃和50W)中加热10分钟，真空浓缩，经制备LC/MS纯化，得到2，6-二氟-N-{3-[5-羟基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(7mg)，为黄色固体。
(LC/MS：Rt1.98，[M+H]+468.19)。
实施例93
合成2，6-二氟-N-[3-(5-羟基-4-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
按与实施例92相似的方法，但用吗啉作胺片段制备该化合物，得到2，6-二氟-N-[3-(5-羟基-4-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(14mg)，为黄色固体。(LC/MS：Rt1.82，[M+H]+455.13)。
实施例94
合成2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
94A.合成(3，4-二硝基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮
将3，4-二硝基苯甲酸(10.0g)和亚硫酰氯(30ml)的混合物加热，回流2小时，冷却至环境温度，通过与甲苯共沸除去过量亚硫酰氯。在0℃下，将残渣溶于THF(100ml)和吗啉(4.1ml)，同时向混合物中加入Et3N(7.2ml)。将混合物搅拌3小时，加入水(100ml)，然后用EtOAc萃取。有机部分用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣在MeOH中重结晶，得到(3，4-二硝基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(8.23g)，为黄色固体。
(1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.3(d，1H)，8.3(s，1H)，8.0(d，1H)，3.7-3.5(m，8H)).
94B.合成(3，4-二氨基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮
将(3，4-二硝基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(1.0g)和10％Pd/C(150mg)在MeOH(30ml)中的混合物在氢气氛下，在环境温度下震动10小时，然后通过硅藻土塞过滤，真空浓缩，得到(3，4-二氨基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(900mg)。
(1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ6.6(s，1H)，6.5(s，2H)， 4.8(s，1.5H)，4.6(s，1.5H)，4.1(s，1H)，3.6(m，4H)，3.4(m，4H)).
94C.合成4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺
向(3，4-二硝基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(2.84g)在无水THF(50ml)中的混合物中加入NaBH4(954mg)，随后滴加BF3·Et2O(3.2ml)。将混合物在环境温度下搅拌3小时，然后通过加入MeOH猝灭。将混合物真空浓缩，在EtOAc和水之间分配，有机部分用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。残渣经快速柱层析纯化，用EtOAc洗脱，得到4-(3，4-二硝基-苄基)-吗啉(1.08g)。在氢气氛下，在环境温度下，使4-(3，4-二硝基-苄基)-吗啉(550mg)和10％Pd/C(75mg)在MeOH(10ml)中的混合物震动4小时，然后通过硅藻土塞过滤，真空浓缩，得到4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺(483mg)，为混合物的主要成分。
94D.合成4-(2，6-二氯-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
将亚硫酰氯(0.65ml)加入2，6-二氯苯甲酸(825mg)，将混合物在70℃下加热2小时。使混合物冷却，通过与甲苯共沸除去过量的亚硫酰氯。在0℃下，将残渣溶于THF(30ml)，同时向混合物中加入4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(609mg)和Et3N(0.75ml)。将混合物搅拌4小时，加入水(100ml)，然后用EtOAc萃取。有机部分用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到4-(2，6-二氯-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.23g)，为红色固体。(LC/MS：Rt3.05，[M+H]+313.96)。
将4-(2，6-二氯-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1.21g)在2MNaOH/MeOH水溶液(1∶1，50ml)中的混合物在环境温度下搅拌14小时。将挥发物真空除去，加入水(100ml)，用1M HCl水溶液将混合物调至pH5。将得到的沉淀过滤，收集，通过与甲苯共沸干燥，得到4-(2，6-二氯-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸，为浅褐色固体(790mg)。(LC/MS：Rt2.53，[M+H]+299.95)。
94E.合成2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将4-(2，6-二氯-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(75mg，0.25mmol)、4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺(52mg，0.25mmol)、EDC(58mg，0.3mmol)和HOBt(41mg，0.3mmol)在DMF(4ml)中的混合物在环境温度下搅拌48小时。使混合物在EtOAc和饱和NaHCO3水溶液之间分配，有机部分用饱和NH4Cl水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。将残渣溶于AcOH，在100℃下加热14小时，冷却至环境温度，真空浓缩。使残渣通过快速柱层析纯化，用CH2Cl2-MeOH(20∶1-10∶1)洗脱，得到2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(30mg)，为粉红色固体。(LC/MS：Rt2.12，[M+H]+471.14)。
实施例95
合成2-氯-6-氟-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
95A.合成4-(2-氯-6-氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
按与4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例16D)相似的方法，但用2-氯-6-氟苯甲酸作原料制备该化合物，得到4-(2-氯-6-氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(4.42g)，为浅蓝色固体。
(LC/MS：Rt2.35，[M+H]+283.94)。
95B.合成2-氯-6-氟-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-(2-氯-6-氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸制备该化合物，得到2-氯-6-氟-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(37mg)，为粉红色固体。(LC/MS：Rt2.04，[M+H]+455.18)。
实施例96
合成2，6-二氟-4-甲氧基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
96A.合成4-(26-二氟-4-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
按与4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例16D)相似的方法，但用2，6-二氟-4-甲氧基苯甲酸作原料制备该化合物，得到4-(2，6-二氟-4-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(1.58g)，为白色固体。
(1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.0(s，2H)，10.7(s，1H)，8.0(s，1H)，6.9(s，1H)，6.8(s，1H)，3.7(s，3H)).
96B.合成2，6-二氟-4-甲氧基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)的方法，但用4-(2，6-二氟-4-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸制备该化合物，得到2，6-二氟-4-甲氧基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(32mg)，为粉红色固体。
(LC/MS：Rt1.99，[M+H]+469.21)。
实施例97
合成N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-甲酰胺
97A.合成4-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-羰基)-氨基]-1H-吡唑-3-甲酸
按与4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例16D)相似的方法，但用2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-甲酸作原料制备该化合物，得到4-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-羰基)-氨基]-1H-吡唑-3-甲酸(340mg)，为白色固体。
(1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.5(s，2H)，11.2(s，1H)，8.4(s，1H)，7.7(d，1H)，7.1(d，1H)，7.0(t，1H)，4.5(s，2H)，4.4(s，2H)).
97B.合成N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-羰基)-氨基]-1H-吡唑-3-甲酸制备该化合物，得到N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-甲酰胺(39mg)，为粉红色固体。(LC/MS：Rt1.99，[M+H]+461.23)。
实施例98
合成2，6-二氯-N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用(3，4-二氨基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(实施例94B)制备该化合物，得到2，6-二氯-N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(17mg)，为浅褐色固体。
(LC/MS：Rt2.98，[M+H]+485.13)。
实施例99
合成2-氯-6-氟-N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-(2-氯-6-氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例95A)和(3，4-二氨基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(实施例94B)制备该化合物，得到2-氯-6-氟-N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(18mg)，为浅褐色固体。(LC/MS：Rt2.89，[M+H]+469.15)。
实施例100
合成2，6-二氟-4-甲氧基-N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-(2，6-二氟-4-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例96A)和(3，4-二氨基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(实施例94B)制备该化合物，得到2，6-二氟-4-甲氧基-N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(24mg)，为浅褐色固体。(LC/MS：Rt2.94，[M+H]+483.20)。
实施例101
合成N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-[(2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-羰基)-氨基]-1H-吡唑-3-甲酸(实施例97A)和(3，4-二氨基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(实施例94B)制备该化合物，得到N-{3-[5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-甲酰胺(15mg)，为浅褐色固体。(LC/MS：Rt2.89，[M+H]+475.20)。
实施例102
合成N-[3-(4，6-二-三氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例16D)和3，5-二(三氟甲基)-1，2-二氨基苯制备该化合物，得到N-[3-(4，6-二-三氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺(51mg)，为粉红色固体。(LC/MS：Rt3.64，[M+H]+476.07)。
实施例103
合成N-[3-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例16D)和4，5-二氯-1，2-苯二胺制备该化合物，得到N-[3-(5，6-二氯-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺(29mg)，为浅褐色固体。(LC/MS：Rt3.53，[M+H]+408.02)。
实施例104
合成N-[3-(4，5-二甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2.6-二氟-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(实施例94E)相似的方法，但用4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例16D)和3，4-二甲基-1，2-苯二胺制备该化合物，得到N-[3-(4，5-二甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺(89mg)，为浅橙色固体。(LC/MS：Rt2.98，[M+H]+368.15)。
实施例105
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-氟-3-吡咯烷-1-基甲基-苯甲酰胺
105A.合成3-溴甲基-2-氟-苯甲酸
将2-氟-3-甲基苯甲酸(0.462g，3mmol)、N-溴琥珀酰亚胺(0.560g，3.15mmol)、偶氮二异丁腈(AIBN)(0.024g，0.15mmol)和CCl4(10ml)的混合物加热，回流18h。然后将反应混合物真空浓缩，在乙酸乙酯和K2CO3水溶液之间分配。将水层酸化(2M HCl)，在冰中冷却。将得到沉淀过滤，收集，真空干燥，得到3-溴甲基-2-氟-苯甲酸(0.1225g，13％)，为无色固体。
(LC/MS：Rt3.18，[M-H]-232.91)。
105B.合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-氟-3-吡咯烷-1-基甲基-苯甲酰胺
将3-溴甲基-2-氟-苯甲酸(0.058g，0.25mmol)和吡咯烷(0.036g，0.5mmol)在环境温度下搅拌18h。然后使反应混合物与甲苯共沸三次，用2M HCl酸化，再与甲苯共沸三次，得到2-氟-3-吡咯烷-1-基甲基-苯甲酸，为其HCl盐。将该盐与3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(0.050g，0.25mmol)、EDC(0.048g，0.25mmol)和HOBt(0.032g，0.25mmol)混合，将反应混合物在环境温度下，在DMF(0.5ml)中搅拌20h。反应混合物经制备LC/MS纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-氟-3-吡咯烷-1-基甲基-苯甲酰胺(0.015g，15％)，为棕色固体。
(LC/MS：Rt1.79，[M+H]+405.13)。
实施例106
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-3-吡咯烷-1-基甲基-苯甲酰胺
将3-(溴甲基)苯甲酸甲酯(0.115g，0.5mmol)、吡咯烷(0.036g，0.5mmol)和K2CO3(0.069g，0.5mmol)溶于DMF(2.5ml)，搅拌回流18h。将反应混合物真空浓缩，经历柱层析，用己烷乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到粗3-吡咯烷-1-基甲基-苯甲酸甲酯，将其加入LiOH(0.014g，0.33mmol)的1∶1的THF∶H2O(1ml)溶液中。将反应混合物在环境温度下搅拌18h，真空浓缩，通过与甲苯(×3)共沸干燥。将得到的固体溶于水(1ml)，用2M HCl(1ml)酸化，真空浓缩，通过与甲苯(×3)共沸干燥，得到澄清浅黄色凝胶。将该凝胶与3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(0.050g，0.25mmol)、EDC(0.058g，0.30mmol)和HOBt(0.041g，0.30mmol)混合，将反应混合物在环境温度下，在DMSO(0.75ml)中搅拌64h。反应混合物经制备LC/MS纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-3-吡咯烷-1-基甲基-苯甲酰胺的甲酸盐(0.018g，3步9％)，为浅黄色固体。(LC/MS：Rt1.86，[M+H]+387.16)。
实施例107-125
通用方法D
向相关羧酸(1.2当量)、EDC(1.2当量)、HOAt(1.2当量)在DMSO(1ml)中的混合物中加入3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg)。将反应物在室温下搅拌16小时。产物经制备HPLC纯化。
以下化合物按通用方法D制备：
实施例126
126A.合成{2-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基氨基}-氨基甲酸叔丁酯
将3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(250mg，1.3mmol)、乙酸(108μl，1.9mmol)、三乙酰氧基氢硼化钠(401mg，1.9mmol)和N-(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(301mg，1.9mmol)在二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物在环境温度下搅拌4h。将混合物真空浓缩。使残渣在乙酸乙酯和氢氧化钠溶液(2N)之间分配。将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩，得到240mg标题化合物，为无色油状物(56％)。(LC/MS：Rt2.59，[M+H]+343.19)。
126B.合成N*1*-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-乙-1，2-二胺
将{2-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基氨基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(240mg，0.70mmol)溶于三氟乙酸(5ml)和二氯甲烷(5ml)的混合物中，在环境温度下搅拌1h。将溶剂真空浓缩。将残渣溶于甲醇(10ml)和甲苯(10ml)的混合物中，然后真空浓缩，得到300mg标题化合物，为双三氟乙酸盐(91％)。(LC/MS：Rt1.86，[M+H]+243.11)。
126C.合成1-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-咪唑烷-2-酮
将N*-1*-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-乙-1，2-二胺(300mg，0.64mmol)、三乙胺(535μl，3.84mmol)和N，N′-羰基二咪唑(156mg，0.96mmol)在二氯甲烷(10ml)中的混合物在环境温度下搅拌1H。使混合物在乙酸乙酯和氢氧化钠溶液(2N)之间分配。水层用氯化钠饱和，用乙酸乙酯洗涤(×2)。合并有机部分，干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩。残渣经制备LC/MS纯化，随后蒸发含产物的流份，得到8mg标题化合物，为白色固体(5％)。(LC/MS：Rt1.86，[M+H]+269.07)。
实施例127
合成[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-吡啶-2-基-胺
将3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(150mg，0.75mmol)和2-氟吡啶(0.26ml，3.0mmol)的混合物在微波(150℃和100W)中加热15min。加入石油醚，将形成的固体过滤，收集。在甲醇中重结晶，得到[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-吡啶-2-基-胺(12mg)。(LC/MS：Rt0.91，[M+H]+277.00)。
实施例128
合成N-[3-(5，6-二甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-4-甲基-苯甲酰胺
128A.合成4-(4-甲基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
将对甲基苯甲酸(272mg)、4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(310mg)、EDC(460mg)和HOBt(324mg)在DMF(8ml)中的混合物在环境温度下搅拌48h。将混合物真空浓缩，在EtOAc和饱和NaHCO3水溶液之间分配，然后有机部分用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到4-(4-甲基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(486mg)。
将4-(4-甲基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(486mg)在2MNaOH/MeOH水溶液(1∶1，50ml)中的混合物在环境温度下搅拌14h。将挥发物真空除去，加入水(100ml)，然后用2M HCl水溶液将混合物调至pH5。将得到的沉淀过滤，收集，通过与甲苯共沸干燥，得到4-(4-甲基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸，为灰色固体(345mg)。(LC/MS：Rt2.35，[M+H]+246.09)。
128B.合成N-[3-(5，6-二甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-4-甲基-苯甲酰胺
按与2，6-二氯-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺相似的方法，但用4-(4-甲基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸和4，5-二甲基苯-1，2-二胺制备该化合物，得到N-[3-(5，6-二甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-4-甲基-苯甲酰胺(32mg)，为白色固体。(LC/MS：Rt3.42，[M+H]+346.26)。
实施例129
合成2，6-二氟-N-[3-(5-甲磺酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将Pd/C(10％，0.011g)加入4-甲氧基磺酰基-2-硝基苯胺(0.108g，0.5mmol)的DMF(5ml)溶液中。在氢气氛下，在环境温度下，将反应混合物震动4h。将催化剂残渣通过硅藻土滤除，将滤液真空浓缩，然后与4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.112g，0.42mmol)、EDC(0.096g，0.50mmol)、HOBt(0.068g，0.50mmol)和DMF(4ml)混合。将反应混合物在环境温度下搅拌64h，真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。将形成的白色沉淀过滤分离，用水洗涤(3×25ml)，与甲苯共沸干燥，得到中间体酰胺。将乙酸(3ml)加入粗酰胺中，将混合物在微波中(120℃，110W，40min加热。残渣经制备LC/MS纯化，得到2，6-二氟-N-[3-(5-甲磺酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(0.016g，3步8％)，为无色固体。(LC/MS：Rt2.61，[M+H]+417.99)。
实施例130
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(2-哌啶-4-基-乙氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
130A.合成4-[2-(3，4-二硝基-苯氧基)-乙基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
将氢化钠(60％的矿物油分散液，0.096g，2.4mmol)分批加入N-Boc-4-哌啶乙醇(0.550g，2.4mmol)的THF(20ml)溶液中。向该混合物中加入3，4-二硝基氟苯(0.372g，2.0mmol)溶液，将得到的混合物在环境温度下搅拌16h。反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，用水(60ml)洗涤，水相用乙酸乙酯(3×50ml)反萃取。合并的有机相用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使得到的残渣经历柱层析，用0-50％梯度乙酸乙酯/石油醚洗脱。得到4-[2-(3，4-二硝基-苯氧基)-乙基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯，为黄色油状物(0.361g，46％)。
130B.合成4-[2-(3，4-二氨基-苯氧基)-乙基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯
在氮气氛下，将4-[2-(3，4-二硝基-苯氧基)-乙基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.12g，0.3mmol)溶于DMF(3ml)。加入Pd/C(10％，0.012g)，将反应混合物在氢气氛下震动24h。反应混合物用甲醇(20ml)稀释，将不溶物滤除。将滤液真空浓缩，得到4-[2-(3，4-二氨基-苯氧基)-乙基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯，为棕色油状物(0.101g，100％)。(LC/MS：Rt2.21，[M+H]+336.16)。
130C.合成2.6-二氟-N-{3-[5-(2-哌啶-4-基-乙氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将4-[2-(3，4-二氨基-苯氧基)-乙基]-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.101g，0.30mmol)、4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.080g，0.30mmol)、EDC(0.057g，0.30mmol)和HOBt(0.040g，0.30mmol)溶于DMF(2ml)，在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体。将乙酸(3ml)加入该粗酰胺中，将混合物在微波(120℃，110W，30min)中加热，然后真空浓缩。发现原位发生部分Boc-脱保护，使需要的脱保护胺经制备LC/MS纯化，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(2-哌啶-4-基-乙氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺的甲酸盐(0.017g)，为棕色油状物。(LC/MS：Rt1.97，[M+H]+467.05)。
实施例131
合成N-[3-(6-氯-4-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
131A.合成乙酸2-乙酰基氨基-5-氯-苄基酯
将2-氨基-5-氯苯甲醇(3.0g，19mmol)的乙酸酐(150ml)溶液在环境温度下搅拌16h。加入水(50ml)，将混合物再搅拌16h。将反应混合物真空浓缩，通过与甲苯共沸干燥(×2)，再加入乙酸酐(100ml)。将得到的悬浮液搅拌16h，然后将固体过滤，收集，得到乙酸2-乙酰基氨基-5-氯-苄基酯，为白色固体(4.61g)。
(LC/MS：Rt2.46，[M-H]-240.10)。
131B.合成乙酸2-乙酰基氨基-5-氯-3-硝基-苄基酯
在0℃下，将硝酸钾(1.01g，10mmol)加入浓H2SO4(10ml)中。将该混合物在0℃下搅拌15min，然后在15min内，小量分批加入乙酸2-乙酰基氨基-5-氯-苄基酯(1.92g，8mmol)。将反应混合物在0℃下，再搅拌1h，然后倾入碎冰上。将形成的沉淀过滤，收集，得到异构体混合物，使其经柱层析分离，用梯度0-60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到需要的乙酸2-乙酰基氨基-5-氯-3-硝基-苄基酯，为黄色固体(0.454g，20％)。
131C.合成(2-氨基-5-氯-3-硝基-苯基)-甲醇
将乙酸2-乙酰基氨基-5-氯-3-硝基-苄基酯(0.454g，0.45mmol)和氢氧化钠(0.436g，11mmol)溶于甲醇-水(1∶3，40ml)，将得到的溶液加热回流5h。冷却后，加入浓HCl使混合物pH为6。将形成的沉淀过滤，收集，得到(2-氨基-5-氯-3-硝基-苯基)-甲醇，为深橙色固体(0.237g，73％)。(LC/MS：Rt2.63，[M-H]-200.96)。
131D.合成(2，3-二氨基-5-氯-苯基)-甲醇
将(2-氨基-5-氯-3-硝基-苯基)-甲醇(0.202g，1mmol)悬浮于异丙醇(5ml)、水(2ml)、甲醇(3ml)和乙酸(0.05ml)的混合物中。在氮气下，小心加入Raney镍(0.015g，水浆状物)。在氢气氛下，将得到的反应混合物震动4h，然后用甲醇-水(1∶1，50ml)稀释，过滤除去催化剂残渣。将挥发物真空除去，残余水层用乙酸乙酯萃取(4×30ml)。合并的有机液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到(2，3-二氨基-5-氯-苯基)-甲醇，为橙色固体(0.144g，84％)。(LC/MS：Rt0.85，[M+H]+173.03)。
131E.合成N-[3-(6-氯-4-羟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2.6-二氟-苯甲酰胺
将(2，3-二氨基-5-氯-苯基)-甲醇(0.144g，0.84mmol)、4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.187g，0.70mmol)、EDC(0.161g，0.84mmol)和HOBt(0.113g，0.84mmol)溶于DMF(5ml)，在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体。将乙酸(5ml)加入该粗酰胺中，将混合物加热回流4h，然后真空浓缩。使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。将形成的橙色固体(0.185g)溶于甲醇(3ml)，加入NaOMe(0.090g，1.6mmol)。将混合物在环境温度下搅拌4h，然后真空浓缩，在乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到橙色固体，使其经柱层析纯化，用梯度0-100％乙酸乙酯/石油醚洗脱。将含产物的流份真空浓缩，得到N-[3-(6-氯-4-羟基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺，为橙色-棕色固体(0.061g，22％)。
(LC/MS：Rt2.79，[M+H]+403.98)。
实施例132
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
132A.合成1-(4-氯-3-硝基-苯磺酰基)-4-甲基-哌嗪
在0℃下，将4-氯-3-硝基-苯磺酰氯(2.56g，10mmol)小量分批加入N-甲基哌嗪(1.33ml，12mmol)的DCM(25ml)溶液中。向该溶液中滴加三乙胺(2.08ml，15mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌2h，然后真空浓缩。使残渣在乙酸乙酯和水之间分配，有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。用柱层析纯化，用0-20％甲醇/乙酸乙酯洗脱，得到1-(4-氯-3-硝基-苯磺酰基)-4-甲基-哌嗪，为灰白色固体(1.84g，58％)。(LC/MS：Rt1.84，[M+H]+319.97)。
132B.合成苄基-[4-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-2-硝基-苯基]-胺
将1-(4-氯-3-硝基-苯磺酰基)-4-甲基-哌嗪(0.50g，1.57mmol)和苄胺(0.502g，4.70mmol)溶于THF(10ml)，加热回流3h。然后将反应混合物真空浓缩，在乙酸乙酯和水之间分配。有机液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到的残渣经柱层析纯化，用0-10％甲醇/乙酸乙酯洗脱，得到苄基-[4-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-2-硝基-苯基]-胺，为黄色固体(0.53g，86％)。(LC/MS：Rt2.21，[M+H]+391.05)。
132C.合成4-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-苯-1，2-二胺
将苄基-[4-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-2-硝基-苯基]-胺(0.53g，1.35mmol)溶于DMF(15ml)，在氮气下，加入Pd/C(10％，0.05g)。在氢气氛下，将反应混合物震动16h，然后用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，得到部分还原的N-1-苄基-4-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-苯-1，2-二胺。将该粗物质溶于乙醇(15ml)，加入浓HCl(1ml)，随后加入Pd/C(10％，0.05g)。将得到的反应混合物在氢气氛下震动16h，用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤。将滤液真空浓缩，通过与甲苯共沸干燥。使残渣在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到4-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-苯-1，2-二胺，为灰白色固体(0.114g，31％)。(LC/MS：Rt0.37，[M+H]+271.02)。
132D.合成2，6-二氟-N-{3-[5-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将4-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-苯-1，2-二胺(0.083g，0.31mmol)、4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.069g，0.26mmol)、EDC(0.060g，0.31mmol)和HOBt(0.041g，0.31mmol)溶于DMF(2ml)，在环境温度下搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯(50ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体。将乙酸(3ml)加入该粗酰胺中，将混合物在微波中加热(120℃，110W，20min)，然后真空浓缩。使残渣在乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，经制备LC/MS纯化，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺的甲酸盐，为白色固体(0.031g，20％)。(LC/MS：Rt2.04，[M+H]+502.06)。
实施例133
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将4-{2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-基氧基甲基}-哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.024g，0.043mmol)(按与实施例130相似的方法制备)用1∶1的TFA∶DCM(2ml)处理20min。将溶液真空浓缩，与甲苯共沸(×3)。经制备LC/MS纯化，得到2，6-二氟-N-{3-[5-(哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺，为白色固体(8mg，41％)。(LC/MS：Rt1.99，[M+H]+453.06)。
实施例134
合成2，6-二氟-N-{3-[5-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
134A：合成1-甲基-哌啶-4-甲酸乙酯
将亚硫酰氯(0.80ml，11mmol)滴加到1-甲基-哌啶-4-甲酸(1.80g，10mmol)HCl盐的乙醇(25ml)悬浮液中。将反应混合物在环境温度下搅拌过夜，然后真空浓缩，通过与甲苯共沸(×3)干燥，得到1-甲基-哌啶-4-甲酸乙酯，为无色固体(1.7g，100％)。
(LC/MS：Rt0.41，[M+H]+172.08)。
134B：合成(1-甲基-哌啶-4-基)-甲醇
向冰冷却的1-甲基-哌啶-4-甲酸乙酯(0.855g，5mmol)的THF(30ml)溶液中滴加1M LiAlH4的THF溶液(20ml，20mmol)。然后将反应混合物搅拌18h，同时升温至环境温度，然后小心依次加入水(0.75ml)、10％NaOH水溶液(0.75ml)、水(3×0.75ml)猝灭，在环境温度下搅拌2h。将得到的混合物真空浓缩，与乙酸乙酯一起震动，过滤除去无机残渣。将滤液真空浓缩，得到(1-甲基-哌啶-4-基)-甲醇，为无色油状物(0.468g，73％)。(LC/MS：Rt0.33，[M+H]+130.20)。
134C：合成2，6-二氟-N-{3-[5-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
按与实施例130类似的方法合成2，6-二氟-N-{3-[5-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺，用(1-甲基-哌啶-4-基)-甲醇作醇原料，得到标题化合物(1.0mg)。(LC/MS：Rt1.99，[M+H]+467.09)。
实施例135
合成2-[4-(2.6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-6-乙氧基-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯
135A.合成4，5-二硝基-2-乙氧基-苯甲酸
在0℃下，向硝酸钾(4.80g，47.4mmol)在浓硫酸(20mL)中的混合物中分批加入2-乙氧基-4-硝基苯甲酸(4.00g，19.0mmol)。将混合物在0℃-室温下搅拌3h，然后倾入冰(120mL)上，再搅拌1h。将形成的沉淀过滤，收集，用水洗涤，通过与甲苯共沸干燥，得到标题化合物(4.28g)，为白色固体。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.50(s，1H)，7.95(s，1H)，4.35(q，2H)，1.35(t，3H).
135B.合成4，5-二硝基-2-乙氧基-苯甲酸甲酯
在室温下，将亚硫酰氯(315μl，4.30mmol)缓慢加入4，5-二硝基-2-乙氧基-苯甲酸(1.00g，3.91mmol)在甲醇(10mL)中的混合物中。将混合物搅拌16h，然后与甲苯共沸，真空浓缩。然后使残渣经柱层析纯化，用P.E.-EtOAc(1∶0-1∶1)洗脱，得到标题化合物(606mg)，为白色固体。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.55(s，1H)，8.00(s，1H)，4.35(q，2H)，3.85(s，3H)，1.35(t，3H).
135C.合成4，5-二氨基-2-乙氧基-苯甲酸甲酯
在氢气氛下，在室温下，将4，5-二硝基-2-乙氧基-苯甲酸甲酯(320mg)和10％Pd/C(40mg)在MeOH(8mL)中的混合物搅拌4h，通过硅藻土塞过滤，真空浓缩，得到标题化合物(234mg)，为黑色胶状物。
1HNMR(300MHz，MeOD)δ7.30(s，1H)，6.40(s，1H)，4.00(q，2H)，3.80(s，3H)，1.35(t，3H).
135D.合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-6-乙氧基-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯
将4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(254mg，0.95mmol)、4，5-二氨基-2-乙氧基-苯甲酸甲酯(234mg，1.11mmol)、EDC(240mg，1.25mmol)和HOBt(169mg，1.25mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌14h。将反应混合物真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到酰胺中间体。将乙酸(10mL)加入该粗酰胺中，将混合物加热回流3小时，使冷却至室温，然后真空浓缩。将残渣在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配，然后有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。将水加入残渣中，将形成的固体过滤，收集，通过与甲苯共沸干燥，得到标题化合物(182mg)，为棕色固体。(LC/MS：Rt2.94，[M+H]+442.02)。
实施例136
合成N-{3-[6-乙氧基-5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-2，6-二氟-苯甲酰胺
136A.合成2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-6-乙氧基-1H-苯并咪唑-5-甲酸
将2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-6-乙氧基-1H-苯并咪唑-5-甲酸甲酯(90mg)在MeOH-2MNaOH水溶液(1∶1，10mL)中的混合物在室温下搅拌14h。将MeOH真空除去，加入水(30mL)。用2M HCl水溶液将混合物调至pH＝3，然后用EtOAc萃取(×3)。将合并的萃取液真空浓缩，通过与甲苯共沸干燥，得到标题化合物(72mg)，为灰色固体。(LC/MS：Rt2.70，[M+H]+428.04)。
136B.合成N-{3-[6-乙氧基-5-(吗啉-4-羰基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-2，6-二氟-苯甲酰胺
将2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-6-乙氧基-1H-苯并咪唑-5-甲酸(50mg，0.12mmol)、吗啉(13μl，0.14mmol)、EDC(29mg，0.15mmol)和HOBt(21mg，0.15mmol)在DMF(5mL)中的混合物在室温下搅拌48h。将反应混合物真空浓缩，使残渣在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到标题化合物(29mg)，为灰色固体。(LC/MS：Rt2.56，[M+H]+497.03)。
实施例137
合成2，6-二氟-N-[3-(5-哌嗪-1-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
137A.合成4-{2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-基甲基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在室温搅拌下，向2，6-二氟-N-[3-(5-甲酰基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(50mg，0.14mmol)在无水THF(1.5mL)中的混合物中依次加入3分子筛、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(52mg，0.28mmol)和三乙酰氧基氢硼化钠(90mg，0.42mmol)。将混合物搅拌4h，加入MeOH(3ml)，然后将混合物真空浓缩。将残渣溶于EtOAc，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，然后通过制备LC/MS纯化，得到标题化合物(84mg)，为黄色油状物。(LC/MS：Rt2.22，[M+H]+538.15)。
137B.合成2，6-二氟-N-[3-(5-哌嗪-1-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将4-{2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-基甲基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(84mg)、MeOH(3mL)和饱和HCl/EtOAc(3mL)的混合物在室温下搅拌16h，然后真空浓缩，与甲苯共沸，得到标题化合物(21mg)，为黄色固体。(LC/MS：Rt1.60，[M+H]+438.09)。
实施例138
合成2-氟-6-甲氧基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
138A.合成4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
搅拌下，将亚硫酰氯(3.8ml，52.5mmol)小心加入4-硝基吡唑-3-甲酸(7.5g，47.7mmol)在EtOH(150ml)中的冰冷却混合物中，将混合物在环境温度下搅拌1小时，然后加热回流3小时。将反应混合物冷却，真空蒸发，然后与甲苯共沸，得到4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(8.8g)。
138B.合成1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
向4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(8.8g，47.5mmol)的MeCN(100ml)溶液中加入K2CO3(7.9g，57.0mmol)，随后加入4-甲氧基苄基氯(7.1ml，52.3mmol)，将混合物在环境温度下搅拌20小时。将混合物真空蒸发，使残渣在EtOAc和2M盐酸水溶液之间分配，有机部分用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，真空蒸发。使残渣通过快速柱层析[SiO2，EtOAc-己烷(1∶4)]纯化，得到1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(11g)，为无色胶状物。
138C.合成1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸
在环境温度下，将1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(15.9g，52mmol)在2M NaOH/MeOH水溶液(1∶1，400ml)中的混合物搅拌14h。将挥发物真空除去，将残渣溶于EtOAc(200ml)，加入水(100ml)，用1M HCl水溶液将混合物调至pH3。将各液层分离，有机部分用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将EtOAc加入酸化至pH3-4的水层中，将合并的有机部分干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸(13g，86％)，为白色固体。(LC/MS：Rt2.63，[M+H]+292)。
138D.合成4-(3，4-二硝基-苄基)-吗啉
在0℃下，向3，4-二硝基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮(实施例94A)(4.5g，16mmol)的无水THF(50ml)溶液中加入氢硼化钠(1.2g，32mmol)，随后滴加***合三氟化硼(4ml，32mmol)，在氮气氛下，在0℃下，将混合物搅拌2.5h。小心加入无水MeOH直至气体发生停止，将混合物真空浓缩。使残渣在EtOAc和盐水之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到黄色-橙色固体，使其在MeOH中重结晶，得到4-(3，4-二硝基-苄基)-吗啉(3.5g，82％)，为黄色固体。(LC/MS：Rt1.52，[M+H]+268)。
138E.合成4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺
向4-(3，4-二硝基-苄基)-吗啉(2.5g,9.3mmol)、铁粉(5.2g，93mmol)和FeSO4.7H2O(1.3g，4.6mmol)的混合物中加入1，4-二烷∶水(5∶1，60ml)。将混合物回流3h，通过硅藻土过滤，用MeOH洗涤，与甲苯共沸，真空浓缩。加入EtOAc(100ml)，将不溶物滤除。将滤液真空浓缩，得到4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺，为深棕色固体(1.4g，73％)。(LC/MS：Rt0.40，无离子化)。
138F.合成2-[1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-基]-5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑
将4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺(2.5g，12mmol)、1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸(2.91g，10mmol)、EDC(2.3g，12mmol)和HOBt(1.62g，12mmol)在无水DMF(40ml)中的混合物在环境温度下搅拌24h。将混合物真空浓缩，使残渣在EtOAc (100ml)和水(50ml)之间分配，有机部分用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。将残渣溶于AcOH(70ml)，加热回流3h。将溶剂真空除去，使残渣经快速柱层析[SiO2，MeOH∶DCM(5∶95)]纯化，得到2-[1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-基]-5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑(2g，37％)，为黄色泡沫状物。(LC/MS：Rt1.91，[M+H]+449)。
138G.合成1-(4-甲氧基-苄基)-3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺
向2-[1-(4-甲氧基-苄基)-4-硝基-1H-吡唑-3-基]-5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑(1.6g，3.57mmol)、铁粉(2g，35mmol)和FeSO4.7H2O(0.496g，1.78mmol)的混合物中加入1，4-二烷∶水(5∶1，120ml)。将混合物回流3h，通过硅藻土过滤，用MeOH洗涤，与甲苯共沸，真空浓缩。加入EtOAc(100ml)，将不溶物滤除。将滤液真空浓缩，得到1-(4-甲氧基-苄基)-3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺，为深棕色固体(1.4g，94％)。(LC/MS：Rt1.72，[M+H]+419)。
138H.合成2-氟-6-甲氧基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1 H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将2-氟-6-甲氧基-苯甲酸(20mg，0.12mmol)、1-(4-甲氧基-苄基)-3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.12mmol)、EDC(116mg，0.14mmol)和HOBt(81mg，0.14mmol)的混合物在室温下，在DMF(2ml)中搅拌20h。将混合物真空浓缩，使残渣在EtOAc(5ml)和水(2ml)之间分配，有机部分用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc]纯化，得到2-氟-6-甲氧基-N-[1-(4-甲氧基-苄基)-3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺，为白色固体(80mg，61％)。
将2-氟-6-甲氧基-N-[1-(4-甲氧基-苄基)-3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(80mg)和苯甲醚(25μl)在三氟乙酸(1ml)中的混合物在CEM DiscoverTM微波合成器中，在140℃(100W)下加热20min。将反应混合物蒸发，然后与甲苯(2×10ml)共沸。将***(5ml)加入该粗物质中，得到2-氟-6-甲氧基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺的三氟乙酸盐(30mg，32％)，为白色固体。(LC/MS：Rt1.96，[M+H]+451)。
实施例139
合成N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-三氟甲氧基-苯甲酰胺
按与实施例138F相似的方法，但用2-三氟甲氧基-苯甲酸代替2-氟-6-甲氧基-苯甲酸和用以下脱去吡唑环的对-甲氧基苄基取代基保护的方法制备该化合物。
将N-[1-(4-甲氧基-苄基)-3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-三氟甲氧基-苯甲酰胺(50mg)和苯甲醚(25μl)在三氟乙酸(1ml)中的混合物在CEM DiscoverTM微波合成器中，在140℃(100W)下加热20min。将反应混合物蒸发，然后与甲苯(2×10ml)共沸。向该粗物质加入EtOAc(5ml)，混合物用饱和碳酸氢钠水溶液中和。有机部分用水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，CH2Cl2-MeOH(100∶0-95∶5)]纯化，得到N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-三氟甲氧基-苯甲酰胺(12mg)，为白色固体。(LC/MS：Rt2.06，[M+H]+487)。
实施例140
合成N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-H-吡唑-4-基]-苯并[c]异
唑-3-甲酰胺
140A.合成5-吗啉-4-基甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)1H-苯并咪唑
将4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺(2.30g，11.1mmol)、4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸(1.57g，10.0mmol)、EDC(2.13g，11.1mmol)和HOBt(1.50g，11.1mmol)在无水DMF(25ml)中的混合物在环境温度下搅拌24h。将混合物真空浓缩，将粗残渣溶于AcOH(40ml)，加热回流3h。将溶剂真空除去，使残渣经快速柱层析纯化，用0-20％MeOH/EtOAc洗脱，得到5-吗啉-4-基甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)1H-苯并咪唑，为黄色固体。(1.0g，61％)。(LC/MS：Rt1.83，[M+H]+329)。
140B.合成3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑基胺
在氮气氛下，将披钯碳(10％，0.08g)加入5-吗啉-4-基甲基-2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)1H-苯并咪唑(0.82g，2.5mmol)的DMF(30ml)溶液中。在氢气氛下，将混合物震动4h，然后通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤。将滤液真空浓缩，得到3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺，为棕色固体(530mg，71％)。
(LC/MS：Rt1.94，[M+H]+299)。
140C.合成N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-H-吡唑-4-基]-苯并[c]异
唑-3-甲酰胺
将苯并[c]异
唑-3-甲酸(46mg，0.28mmol)、3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(100mg，0.33mmol)、EDC(64mg，0.33mmol)和HOBt(45mg，0.33mmol)的混合物在室温下，在DMF(2.5ml)中搅拌20h。将混合物真空浓缩，使残渣在EtOAc(5ml)和水(2ml)之间分配，有机部分用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc-MeOH(100∶0-90∶10)]纯化，得到N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯并[c]异唑-3-甲酰胺，为白色固体(40mg，32％)。(LC/MS：Rt2.13，[M+H]+444)。
实施例141
合成N-[3-(4-溴-6-三氟甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
将4-(2，6-二氟苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(520mg，1.96mmol)(实施例16D)、3-溴-5-三氟甲基-1，2-苯二胺(500mg，1.96mmol)、EDC(413mg，2.15mmol)和HOBt(290mg，2.15mmol)在DMF(20ml)中的混合物在环境温度下搅拌16h，然后真空浓缩。使残渣在EtOAc和盐水之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。将该酰胺中间体经层析纯化，用EtOAc-P.E.(1∶4-1∶0)洗脱。将酰胺中间体(271mg)(LC/MS：Rt3.31，[M+H]+505)溶于AcOH(3ml)，然后加热回流1h。将反应混合物冷却，此时固体结晶析出，过滤，用P.E洗涤，干燥，得到标题化合物(50mg)。(LC/MS：Rt3.42，[M+H]+486，488)
实施例142
合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-氟-2-甲氧基-苯甲酰胺
142A.合成5，6-二甲氧基-2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)-1H-苯并咪唑
向EDC(4.81g，25mmol)、HOBt(3.40g，25mmol)和三乙胺(4.67g，46mmol)的DMF(100ml)溶液中加入4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸(3.63g，23.09mmol)和4，5-二甲氧基-苯-1，2-二胺二盐酸盐(5.06g，20.99mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂真空除去，所得到的固体在乙酸乙酯(50ml)和碳酸氢钠(50ml)之间分配。形成沉淀，过滤除去。该沉淀依次用水和***洗涤，然后与甲醇和甲苯共沸，得到N-(2-氨基-4，5-二甲氧基-苯基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酰胺(2.35g，36％)。
将N-(2-氨基-4，5-二甲氧基-苯基)-4-硝基-1H-吡唑-3-甲酰胺(2.35g，7.65mmol)溶于乙酸(150ml)，在140℃下回流5小时。使溶液冷却，将溶剂真空除去。使得到的固体在乙酸乙酯(25ml)和盐水(25ml)之间分配。将有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤，将溶剂真空除去，得到5，6-二甲氧基-2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)-1H-苯并咪唑(2.08g，94％)。
142B.合成3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺
将5，6-二甲氧基-2-(4-硝基-1H-吡唑-3-基)-1H-苯并咪唑(2.08g，7.2mmol)和10％披钯碳(200mg)在乙醇(150ml)和DMF(50ml)中的混合物在室温和压力下氢化过夜。使反应混合物通过硅藻土过滤，将溶剂真空除去。使得到的固体与甲醇和甲苯共沸，将溶剂真空除去。使粗物质经过柱，用DCM、甲醇、乙酸、水(120∶18∶3∶2)[DMAW120]洗脱，随后用二氯甲烷90ml、甲醇18ml、乙酸3ml、水2ml(90∶18∶3∶2)(DMAW 90)洗脱。合并产物流份，将溶剂真空除去，得到3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(～1g，～53％)。
142C.合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-氟-2-甲氧基-苯甲酰胺
向EDC(44mg，0.23mmol)和HOBt(31mg，0.23mmol)的DMF(5ml)溶液中加入3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.19mmol)和5-氟-2-甲氧基-苯甲酸(36mg，0.21mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。将溶剂真空除去，使得到的固体在DCM(20ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)之间分配。将形成的沉淀过滤分离，在干燥箱中干燥，得到N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-氟-2-甲氧基-苯甲酰胺(64mg，81％)。(LC/MS：Rt2.64，[M+H]+412)。
实施例143
合成1-(2，6-二氟-苯基)-3-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲
在70℃下，将3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.19mmol)、异氰酸2，4-二氟苯基酯(31.4mg，0.20mmol)和Et3N(0.027ml)悬浮于DMF和EtOH的混合物(5ml)中，搅拌1h，然后真空浓缩。将残渣经制备HPLC纯化，得到1-(2，6-二氟-苯基)-3-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲，为白色固体(11mg)(LC/MS：Rt2.10，[M+H]+415)。
实施例144
合成4-氨基-N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-乙氧基-苯甲酰胺
在氢气氛下，在室温下，将4-硝基-N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-乙氧基-苯甲酰胺(115mg)和10％Pd/C(20mg)在EtOH(10mL)中的混合物搅拌2h。将混合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，得到标题化合物(95mg)。(LC/MS：Rt2.11，[M+H]+423)。
实施例145-239
按前述实施例的所述方法，如有必要可修改，制备列在表3中的化合物。在″方法″列中，根据前述实施例或方法给出用于制备化合物的通用方法。在″区别″列中，列出在参考实施例中所述的通用方法和用于制备所描述化合物的具体方法之间的主要区别。
表3
制备实施例216的原料：
2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-苯甲酸
向5-氯磺酰基-2-甲氧基-苯甲酸(0.5g，1.99mmol)的丙酮(5ml)溶液中加入N-甲基哌嗪(0.219g，2.19mmol)和三乙胺(0.33ml，2.3mmol)，将混合物在室温下搅拌。2小时后，将反应混合物过滤，收集的固体依次用丙酮、水和***洗涤，得到2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-磺酰基)-苯甲酸(150mg，24％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt0.34，[M+H]+315)。
实施例270
合成1-(2，6-二氟苯基)-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲
将悬浮于甲苯(2ml)和IPA(1ml)的混合物中的3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.16mmol)、异氰酸2，4-二氟苯基酯(26mg，0.16mmol)和Et3N(0.024ml)的混合物在80℃下搅拌1h，然后用EtOAc稀释。反应混合物依次用水和盐水洗涤，将有机液干燥(MgSO4)，真空浓缩。残渣经快速柱层析[SiO2，CH2Cl2-MeOH(90∶10)]纯化，得到1-(2，6-二氟苯基)-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-脲(AT7787)，为无色固体(30mg，39％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt1.80，[M+H]+454)。
实施例271-278
按实施例270中所述方法，制备表4列出的化合物。
表4
实施例279
合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-反式-1，4-氨基环己烷甲酰胺
279A：合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-N-BOC-反式-1，4-氨基环己烷甲酰胺
向BOC-反式-1，4-甲酸-铯盐(95mg，0.25mmol)的THF(2ml)悬浮液中加入DMF(1.9μl，0.025mmol)，随后加入草酰氯(30μl，0.3mmol)。室温下搅拌20min后，将混合物蒸发至干，然后再悬浮于THF(2ml)。然后加入3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.17mmol)和二异丙基乙胺(62μl，0.5mmol)的THF(1ml)溶液，将反应混合物在室温下搅拌1h。1h后，加入MeOH(1ml)，使混合物在氯仿和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc]纯化，得到N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-N-BOC-反式-1，4-氨基环己烷甲酰胺，为白色固体(45mg，55％)。(LC/MS(碱性方法)：Rt2.79min，[M+H]+485)。
279B：合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-反式-1，4-氨基环己烷甲酰胺
将N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-N-BOC-反式-1，4-氨基环己烷甲酰胺(45mg，0.093mmol)和苯甲醚(40μl，0.28mmol)溶于三氟乙酸和二氯甲烷(1∶2；3ml)的混合物中。在室温下3h后，将混合物蒸发至干，得到N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-反式-1，4-氨基环己烷甲酰胺(AT8241)，为白色固体(49mg)。(LC/MS(碱性方法)：Rt2.03min，[M+H]+385)。
实施例280
N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-吡咯烷-2-甲酰胺
按实施例279中描述的方法，得到标题化合物。[M+H]+357Rt2.23(碱性方法)。
实施例281
合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-外消旋-4-苄基-2-吗啉甲酰胺
向外消旋-4-苄基-2-吗啉甲酸盐酸盐(77mg，0.30mmol)的THF(2ml)悬浮液中加入DMF(2.0μl，0.025mmol)，随后加入草酰氯(36μl，0.41mmol)。在室温下搅拌20min后，将混合物蒸发至干，然后再悬浮于THF(2ml)。然后加入3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(60mg，0.2mmol)和二异丙基乙胺(110μl，0.9mmol)的THF(1ml)溶液，将反应混合物在室温下搅拌1h。1h后，加入MeOH(1ml)，浓缩混合物，使残渣通过制备LC/MS纯化，得到N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-外消旋-4-苄基-2-吗啉甲酰胺(AT8769)，为白色固体(10mg，9％)。(LC/MS(碱性方法)：Rt2.86min，[M+H]+463)。
实施例282
合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-N-甲基-D-苯基甘氨酰胺
按与N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-氟-2-甲氧基-苯甲酰胺(实施例142C)相似的方法，但用N-BOC-N-甲基-D-苯基甘氨酸代替5-氟-2-甲氧基-苯甲酸和用HOAt代替HOBt制备该化合物。使粗反应混合物在EtOAc和H2O之间分配。EtOAc层用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣通过制备LC/MS纯化，而非快速层析，得到N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-N-BOC-N-甲基-D-苯基甘氨酰胺(10mg，10％)，为白色固体。(LC/MS(碱性)：RT3.07min，[M+H]+507)。
按与实施例279B相似的方法进行脱保护，得到N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-N-甲基-D-苯基甘氨酸(AT8768)，为白色固体(10mg)。(LC/MS(碱性方法)：Rt2.54min，[M+H]+407)。
实施例283
合成4-吗啉基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-H-吡唑-4-基]-脲
将3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(70mg，0.23mmol)、吗啉-4-甲酰氯(80μl，0.7mmol)和二异丙基乙胺(170μl，0.92mmol)在THF(2ml)中的混合物在0℃下搅拌，然后升温至室温，保持16h。反应物通过加入浓NH3水溶液猝灭，然后真空浓缩。使残渣通过制备LC/MS纯化，得到4-吗啉基-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1-H-吡唑-4-基]-脲，为白色固体(35mg)。(LC/MS(碱性方法)：Rt2.28min，[M-H+]-415)。
实施例284
合成2，6-二氟-N-[3-(4-氧代-1，4，5，6，7，8-六氢-1，3，5-三氮杂-甘菊环-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
284A.合成[7-乙氧基-4，6-二氧代-5-(三苯基-λ*5*-亚磷烷基(phosphanylidene))-庚基]氨基甲酸叔丁酯
将(乙氧基羰基亚甲基)三苯基正膦(5.2g，14.91mmol)、4-叔丁氧基羰基氨基-丁酸(3.3g，16.26mmol)、EDC(3.4g，17.89mmol)和DMAP(0.182g，1.49mmol)的二氯甲烷溶液在室温下搅拌48小时。使反应混合物在EtOAc和水之间分配。将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空浓缩。将残渣纯化[Biotage SP4，40M，流速40ml/min，3∶2的EtOAc/汽油-EtOAc梯度]，得到[7-乙氧基-4，6-二氧代-5-(三苯基-λ*5*-亚磷烷基)-庚基]氨基甲酸叔丁酯，为浅棕色固体(4.7g，59％)。
284B.合成(7-乙氧基-4，5，6-三氧代-庚基)-氨基甲酸叔丁酯
向得到的[7-乙氧基-4，6-二氧代-5-(三苯基-λ*5*-亚磷烷基)-庚基]氨基甲酸叔丁酯(4.7g，8.82mmol)的THF(75ml)和水(20ml)溶液中加入OxoneTM(6.5g，10.58mmol)。将悬浮液在环境温度下搅拌3小时。使反应混合物在EtOAc和水之间分配。将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空蒸发。使残渣经快速柱层析[二氧化硅，EtOAc∶汽油(1∶2)]纯化，得到(7-乙氧基-4，5，6-三氧代-庚基)-氨基甲酸叔丁酯，为无色油状物(1.7g，67％)。
284C.合成5-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基-1-(四氢-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯
将(7-乙氧基-4，5，6-三氧代-庚基)-氨基甲酸叔丁酯(1.7g，5.92mmol)和2，6-二氟-N-[3-甲酰基-1-(四氢-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(0.99g，2.96mmol)的氨/甲醇溶液(2N，20ml)在环境温度下搅拌2小时。将溶剂真空除去。将残渣纯化[Biotage SP4，40M，流速40ml/min，1∶4的EtOAc/汽油-4∶1的EtOAc/汽油梯度]，得到5-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基-1-(四氢-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑-4-甲酸甲酯，为淡黄色固体(320mg，18％)。
(LC/MS：Rt3.36，[M+H]+589.16)。
284D.合成5-(叔丁氧基羰基氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1-(四氢-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑-4-甲酸
向5-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1-(四氢-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(320mg，0.544mmol)的甲醇(10ml)溶液中加入NaOH溶液(2N，10ml)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。将甲醇真空除去。使残渣在EtOAc和5％柠檬酸溶液之间分配。将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空蒸发，得到5-(叔丁氧基羰基氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1-(四氢-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑-4-甲酸，为淡黄色固体(300mg，96％)。(LC/MS：Rt3.03[M+H]+575.17)。
284E.合成5-(3-氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑甲酸
将5-(叔丁氧基羰基氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1-(四氢-吡喃-2-基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑-4-甲酸(300mg，0.52mmol)和苯甲醚(114μl，1.04mmol)的TFA(3ml)溶液在CEM discover微波合成器中，在100℃(80W)下加热10分钟。加入甲苯(10ml)，将溶剂真空除去，得到5-(3-氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑甲酸，为黄色/棕色固体(200mg，99％)。(LC/MS：Rt1.58，[M+H]+391.00)。
284F.合成2，6-二氟-N-[3-(4-氧代-1，4，5，6，7，8-六氢-1，3，5-三氮杂-甘菊环-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
搅拌下，向5-(3-氨基-丙基)-2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-咪唑甲酸(200mg，0.51mmol)的DMF(10ml)和二氯甲烷(10ml)溶液中加入EDC(118mg，0.62mmol)、HOBt(84mg，0.62mmol)和NEM(260μl，2.04mmol)。将溶液在环境温度下搅拌48小时，然后在EtOAc和水之间分配。将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，真空蒸发。使残渣经快速柱层析[二氧化硅，3％-5％-10％MeOH/DCM]纯化，得到2，6-二氟-N-[3-(4-氧代-1，4，5，6，7，8-六氢-1，3，5-三氮杂-甘菊环-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺，为淡黄色固体(10mg，13％)。(LC/MS：Rt1.93，[M+H]+372.99)。
实施例285
合成2-氨基-N-[3-(5-吗啉-4-基-甲基-1H-苯并咪唑-2-基-)-1H-吡唑-4-基]-2-苯基-乙酰胺
将{[3-(5-吗啉-4-基-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基-氨基甲酰基]-苯基-甲基}-氨基甲酸叔丁酯(实施例232)(30mg)溶于4M HCl/二
烷和3ml甲醇，在室温下搅拌过夜。将溶剂真空除去，残渣用***研磨，得到2-氨基-N-[3-(5-吗啉-4-基-甲基-1H-苯并咪唑-2-基-)-1H-吡唑-4-基]-2-苯基-乙酰胺(AT8162)，为白色固体(20mg，83％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt2.39min，[M+H]+432)。
实施例286-287
按实施例285中所述方法，制备列在表5中的化合物。
表5
实施例288
合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰胺
288A：合成4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
按与4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(实施例16A)相似的方法，用4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸(100g，636mmol)、亚硫酰氯(55.5ml，764ml)和MeOH(750ml)代替EtOH制备该化合物。得到4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯，为灰白色固体(109g，100％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt1.82min，[M+H]+172)。
288B：合成4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
将4-硝基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(10g，58mmol)和10％披钯碳(500mg)在乙醇(150ml)和DMF(30ml)中的混合物在氢气氛下搅拌过夜。使反应化合物通过硅藻土过滤，真空浓缩，通过与甲苯和甲醇共沸干燥，得到4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯，为深琥珀色焦油(9.35g)。
(LC/MS(酸性)：Rt0.39min，[M+H]+142)。
288C：合成4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
向EDC(11.59g，60.7mmol)、HOBt(8.19g，60.7mmol)和4-氨基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(7.84g，55.6mmol)的DMF(100ml)溶液中加入5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酸(10.52g，50.6mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物真空浓缩，使残渣在EtOAc(500ml)和盐水(200ml)之间分配，有机部分用饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯，为淡黄色固体(17.07g，93％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt3.12min，[M+H]+332)。
288D：合成4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
按与实施例16D相似的方法，但用4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(17.068g)作原料制备该化合物。得到4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸，为棕色固体(～15.6g，95％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt2.79min，[M+H]+318)。
288E：合成N-(2-氨基-苯基)-4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
向EDC(720mg，3.8mmol)、HOBt(510mg，3.8mmol)和4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(1g，3.16mmol)的DMF(25ml)溶液中加入苯-1，2-二胺(375mg，3.5mmol)，将混合物在室温下搅拌5小时。将混合物真空浓缩，使残渣在EtOAc(50ml)和盐水(2×50ml)之间分配。将不溶沉淀物过滤除去，有机部分用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到N-(2-氨基-苯基)-4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酰胺，为淡黄色粉末(848mg，66％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt3.21min，[M+H]+408)。
288F：合成N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰胺
将N-(2-氨基-苯基)-4-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(848mg，2.08mmol)溶于乙酸(150ml)，在140℃下回流3小时。使溶液冷却，真空除去溶剂，得到的固体通过与甲醇和甲苯共沸干燥。使粗产物经柱层析[SiO2，EtOAc/汽油(2∶1)]纯化，得到N-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酰胺(500mg，62％收率)，为淡黄色粉末。(LC/MS：Rt3.44，[M+H]+390，酸性方法。
实施例289
合成4-(2-氯-5-(甲硫基)-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-y)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
289A：合成4-(2-氯-5-(甲硫基)-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
按与实施例288C相似的方法，但用2-氯-5-(甲硫基)苯甲酸(15.34g，72.7mmol)代替5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲酸制备标题化合物。得到产物，为含4-(2-氯-5-(甲硫基)-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯主要成分的浅褐色固体(25g)。(LC/MS(酸性方法)：Rt2.78，[M+H]+325.94)。
289B：合成4-(2-氯-5-(甲硫基)-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
按与实施例16D相似的方法，但用4-(2-氯-5-(甲硫基)-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(11.8g)为酯原料制备该化合物。由此得到4-(2-氯-5-(甲硫基)-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸，为浅褐色固体(5.82g)。
(LC/MS(酸性方法)：Rt2.46，[M+H]+311.99)。
289C：合成4-(2-氯-5-(甲硫基)-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺
将4-(2-氯-5-(甲硫基)-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(2g，6.43mmol)、4-吗啉-4-基甲基-苯-1，2-二胺(1.33g，6.43mmol)(实施例138C)、EDC(1.36g，7.07mmol)和HOBt(0.96g，7.07mmol)在DMF(20ml)中的混合物在环境温度下搅拌18h。将残渣真空浓缩，然后在饱和NaHCO3溶液(150ml)和EtOAc(3×150ml)之间分配。将合并的有机液干燥(Na2SO4)，过滤，真空蒸发，得到粗油状物。该油经快速层析[SiO2；用CH2Cl2∶MeOH(100∶0-95∶5)洗脱]纯化，得到产物，为浅褐色固体(1.23g)。(LC/MS(酸性方法)：Rt2.10，[M+H]+501.09)。
将该产物(1.23g，2.46mmol)在冰醋酸(20ml)中的混合物在120℃下加热1.5h。将混合物真空浓缩，在饱和NaHCO3溶液(150ml)和EtOAc(2×150ml)之间分配。将合并的有机液干燥(Na2SO4)，过滤，真空蒸发，得到粗油。使该油经快速层析[SiO2；用CH2Cl2∶MeOH(100∶0-95∶5)洗脱]纯化，得到4-(2-氯-5-(甲硫基)-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-苯甲酰胺(AT8608)，为浅褐色固体(0.9g，29％)。(LC/MS(酸性方法)：Rt2.14，[M+H]+483.13)。
实施例290
合成[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-氨基甲酸4-氟-苯基酯
将3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基胺(50mg，0.16mmol)和吡啶(0.02ml，0.24mmol)的混合物溶于CH2Cl2(1ml)和THF(1ml)的混合物中，在0℃下搅拌，然后用氯甲酸4-氟苯基酯(30.7mg，0.168mmol)处理。将反应混合物在室温下搅拌直至反应完全，然后用CH2Cl2稀释。CH2Cl2组分用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩。使残渣经快速柱层析[SiO2，CH2Cl2-MeOH(90∶10)]纯化，得到[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-氨基甲酸4-氟-苯基酯(AT8428)，为无色固体(5mg，7％)。
(LC/MS(酸性方法)：Rt2.08，[M+H]+437)。
实施例291
合成N-[3-(6-氯-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟-苯甲酰胺
将4-(2，6-二氟苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(100mg，0.37mmol)(实施例16D)、6-氯-吡啶-3，4-二胺(54mg，0.37mmol)、EDC(72mg，0.40mmol)、HOBt(57.3mg，0.40mmol)和Et3N(0.075ml，0.55mmol)在DMF(20ml)中的混合物在环境温度下搅拌48h，然后在EtOAc和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配，将有机部分干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。将酰胺中间体溶于AcOH(3ml)，加热回流1h，然后在微波(150W)中，在160℃下加热直至反应完全。使反应混合物冷却，固体结晶析出，将其过滤，然后用石油醚洗涤，干燥，得到需要的产物(9mg)。
(LC/MS：Rt2.74，[M+H]+375)
实施例292-293
以下化合物用表6中所示改进的通用方法A制备。
表6
实施例294-303
实施例294-303化合物按前述实施例的方法制备。
实施例294
4-(2-{2-[4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-基]-1H-苯并咪唑-5-基氧基}-乙基)-哌啶-1-甲酸叔丁酯
实施例295
N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-5-甲基-2-三氟甲基-呋喃-3-甲酰胺
实施例296
N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-异苯并呋喃-1-甲酰胺
实施例297
N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-(4-氯-苯基)-4-甲基-噻唑-5-甲酰胺
实施例298
N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-(4-氟-苯基)-5-甲基-2H-[1，2，3]***-4-甲酰胺
实施例299
N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-联苯-2-甲酰胺
实施例300
N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-4，6-二甲基-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-甲酰胺
实施例301
N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-氧代-1，2-二氢-吡啶-3-甲酰胺
实施例302
N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-3-(4-氟-苯基)-5-甲基-异
唑-4-甲酰胺
实施例303
2-(4-氯-苯基磺酰基)-N-[3-(5-吗啉-4-基甲基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-烟酰胺
实施例304
合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酰胺
304A：合成2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酸甲酯
将5-碘-2-甲氧基-苯甲酸甲酯(500mg，1.7mmol)、吗啉(223μl，2.5mmol)、碳酸铯(850mg，2.7mmol)、xantphos(60mg，0.1mmol)和二(二亚苄基丙酮)合二钯(35mg，0.04mmol)悬浮于二烷(5ml)，在100℃下加热5h。然后将混合物冷却，过滤，使残渣经快速柱层析[SiO2，EtOAc]纯化，得到2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酸甲酯(170mg)，为无色固体。(LC/MS(碱性方法)：Rt2.35min，[M+H]+252)。
304B：合成2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酸
将2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酸甲酯(170mg)溶于MeOH(5ml)和H2O(5ml)，用1 M氢氧化钠水溶液(2ml)处理。在室温下搅拌16h后，将混合物浓缩，在EtOAc和H2O之间分配，将水层酸化(pH2.0)，然后再用EtOAc萃取(×3)。合并的有机组分用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩，得到2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酸(90mg)，为黄色油状物。(LC/MS(碱性方法)：Rt0.91min.，[M+H]+238)。
304C：合成N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酰胺
按与实施例142C相似的方法制备该化合物，但在后处理期间用EtOAc代替CH2Cl2。使粗产物直接通过制备LC/MS纯化，得到N-[3-(5，6-二甲氧基-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吡唑-4-基]-2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯甲酰胺(AT8659)(20mg)，为无色固体。(LC/MS(酸性方法)：Rt2.34min.，[M+H]+479)。
实施例305
5-氯-2-甲氧基-N-{3-[6-甲氧基-5-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
305A.N-[4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-2-硝基-苯基]-乙酰胺
在0℃下，向1-甲基-4-哌啶甲醇(0.566g,4.3mmol)的THF(25ml)溶液中分批加入60％NaH(0.63g，15.48mmol)，将混合物搅拌15min。
将N-(5-氟-4-甲氧基-2-硝基-苯基)-乙酰胺[US 4431807](1g，4.38mmol)的THF(40ml)溶液加入反应物中，在室温下搅拌30min，随后在50℃下加热1小时。反应物用水猝灭，然后用EtOAc萃取两次，有机部分用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到N-[4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-2-硝基-苯基]-乙酰胺(1.34g)，(LC/MS(酸性方法)：Rt1.84，[M+H]+338)
305B.4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-2-硝基-苯胺
向N-[4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-2-硝基-苯基]-乙酰胺(1.34g，3.97mmol)的MeOH(40ml)溶液中加入甲醇钠(1g，18.5mmol)，将反应物在室温下搅拌48小时，然后真空浓缩。残渣用水研磨，将固体过滤，再用水洗涤。将固体干燥，得到4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-2-硝基-苯胺(0.9g)，(LC/MS(酸性方法)：Rt1.72，[M+H]+296)
305C.4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-苯-1，2-二胺
将4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-2-硝基-苯胺(0.9g，3.0mmol)和10％披钯碳(90mg)在MeOH(20ml)中的混合物在氢气氛下震动4小时。使反应混合物通过GF/A纸过滤，直接加入饱和EtOAc/HCl中，得到紫色溶液，将其真空浓缩，得到4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-苯-1，2-二胺，为紫色泡沫状物(0.8g)，(LC/MS(酸性方法)：Rt0.34，[M+H]+266)
305D.合成4-(5-氯-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸
按与4-(2，6-二氟-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(实施例16D)相似的方法，但用5-氯-2-甲氧基-苯甲酸作原料制备该化合物，得到4-(5-氯-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(12g)，为无色固体。
(LC/MS：Rt2.48，[M-H+]-294)
305E.5-氯-2-甲氧基-N-{3-[6-甲氧基-5-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺
将4-(5-氯-2-甲氧基-苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸(0.22g，0.745mmol)、4-甲氧基-5-(4-甲基-哌啶-1-基甲氧基)-苯-1，2-二胺(0.2g，0.745mmol)、EDC(0.173g，0.89mmol)和HOBt(0.122g，0.89mmol)在DMF(20ml)中的混合物在80℃下搅拌1小时，然后在环境温度下搅拌16小时，然后真空浓缩。使残渣在EtOAc和饱和碳酸氢盐之间分配，有机部分用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发。将酰胺中间体(150mg)，(LC/MS(酸性方法)：Rt2.13，[M+H]+543)溶于AcOH(5ml)，然后加热回流4小时。使反应混合物冷却，真空浓缩，使残渣通过制备TLC纯化，得到5-氯-2-甲氧基-N-{3-[6-甲氧基-5-(1-甲基-哌啶-4-基甲氧基)-1H-苯并咪唑-2-基]-1H-吡唑-4-基}-苯甲酰胺(2mg)。(LC/MS(酸性方法)：Rt2.25，[M+H]+525)
生物活性
实施例306
测量CDK2激酶抑制活性(IC50)
用方案A或方案B测试本发明化合物抑制激酶的活性。
方案A
将1.7μl活性CDK2/细胞周期蛋白A(Upstate Biotechnology，10U/μl)用测定缓冲液(250μl 10×强度测定缓冲液(200mM MOPS pH7.2，250mM β-甘油磷酸酯，50mM EDTA，150mM MgCl2)、11.27μl10mM ATP、2.5μl 1M DTT、25μl100mM原钒酸钠、708.53μl H2O)稀释，取10μl与10μl组蛋白底物混合液(60μl牛组蛋白H1(UpstateBiotechnology，5mg/ml)、940μl H2O、35μCiγ33P-ATP)混合，与5μl各种稀释度的测试化合物的DMSO(最高达2.5％)溶液一起加入96孔板中。使反应进行5小时，然后用过量正磷酸(30μl 2％)终止反应。
在Millipore MAPH滤板上，使未与组织蛋白H1结合的γ33P-ATP与磷酸化的组蛋白H1分离。将MAPH板中各孔用0.5％正磷酸润湿，然后用Millipore真空过滤单元通过孔将反应生成物过滤。过滤后，残余物用200μl 0.5％正磷酸冲洗两次。待滤器干燥后，加入25μlMicroscint20闪烁体，然后在Packard Topcount上计数30秒。
计算CDK2活性抑制百分率并作图，以确定抑制50％CDK2活性所需测试化合物的浓度(IC50)。
实施例3-128中的各个化合物的IC50值均小于20μM，或在10μM浓度下，提供至少抑制50％CDK2活性。优选的化合物的IC50值小于1μM。
方案B
将活化的CDK2/细胞周期蛋白A(Brown等，Nat.Cell Biol.，1，第438-443页，1999；Lowe，E.D.等，Biochemistry，41，第15625-15634页，2002)用2.5×强度测定缓冲液(50mM MOPS pH7.2，62.5mM β-甘油磷酸酯，12.5mM EDTA，37.5mM MgCl2，112.5mM ATP，2.5mM DTT，2.5mM原钒酸钠，0.25mg/ml牛血清白蛋白)稀释成125pM，取10μl与10μl组蛋白底物混合液(60μl牛组蛋白H1(Upstate Biotechnology，5mg/ml)、940μl H2O、35μCiγ33P-ATP)混合，与5μl各种稀释度的测试化合物的DMSO溶液(最高达2.5％)一起加入96孔板中。使反应进行2-4小时，然后用过量正磷酸(5μl 2％)终止反应。
在Millipore MAPH滤板上，使未与组蛋白H1结合的γ33P-ATP与磷酸化的组蛋白H1分离。将MAPH板中各孔用0.5％正磷酸润湿，然后用Millipore真空过滤单元将反应生成物通过孔过滤。过滤后，残余物用200μl 0.5％正磷酸冲洗两次。待滤器干燥后，加入20μlMicroscint 20闪烁体，然后在Packard Topcount上计数30秒。
计算CDK2活性抑制百分率并作图，以确定抑制50％CDK2活性所需测试化合物的浓度(IC50)。
CDK1/细胞周期蛋白B测定
除使用CDK1/细胞周期蛋白B(Upstate Discovery)，将酶稀释成6.25nM外，CDK1/细胞周期蛋白B测定与以上CDK2/细胞周期蛋白A方法相同。
实施例307
GSK3-B/Aurora激酶活性抑制测定
将Aurora A(Upstate Discovery)或GSK3-β(Upstate Discovery)用25mM MOPS，pH7.00，25mg/ml BSA，0.0025％Brij-35，1.25％甘油，0.5mM EDTA，25mM MgCl2，0.025％β-巯基乙醇，37.5mM ATP分别稀释成10nM和7.5nM，取10μl与10μl底物混合液混合。Aurora的底物混合液是500μM肯普肽(LRRASLG，Upstate Discovery)和35μCiγ33P-ATP的1ml水溶液。GSK3-β的底物混合液是12.5μM磷酸-糖原合成酶肽-2(Upstate Discovery)和35μCiγ33P-ATP的1ml水溶液。将酶、底物与与5μl各种稀释度的测试化合物的DMSO溶液(最高达2.5%)一起加入96孔板中。让反应进行30分钟(Aurora)或3小时(GSK3-β)，然后用过量正磷酸(5μl 2％)终止反应。过滤方法与以上活化的CDK2/细胞周期蛋白A测定相同。
实施例309
对比测试
已将用作CDK抑制剂的本发明新化合物的活性与WO 03/035065(Aventis)中公开的活性化合物作对比。其中WO 03/035065中公开的多数化合物是含4-苯甲酰基氨基-3-(2-苯并咪唑基)-吡唑环骨架的化合物。
以下对比实施例说明在苯甲酰基氨基的苯环上取代方式的不同对CDK抑制活性的影响。
对比实施例A
以下化合物A在WO 03/035065第110页，表2中第2列A1-B32组合中公开。
该化合物按WO 03/035065描述的通用方法制备。或者，可按本文中的实施例3中所述方法制备。
在下表中，将化合物A的CDK抑制活性(用以上实施例306所述的方案测定)与具有类似未取代苯并咪唑基，但在苯环上具有取代基的本发明新化合物的CDK抑制活性进行对比。
| 化合物/实施例编号 | 苯环取代 | IC50(μM)或抑制％ |
| 化合物A | 未取代 | 0.0967μM |
| 实施例6 | 2，6-二氟苯基 | 0.0048μM |
| 实施例43 | 2-氯-6-氟苯基 | 52％@0.003μM |
| 实施例44 | 2-氟-6-甲氧基苯基 | 57％@0.003μM |
| 实施例56 | 2，4，6-三氟苯基 | 58％@0.003μM |
| 实施例57 | 2-氯-6-甲基苯基 | 41％@0.003μM |
| 实施例59 | 2，6-二氯苯基 | 67％@0.003μM |
对比实施例B
以下化合物B在WO 03/035065，117页表中第1列A9-B101组合中公开，在WO 03/035065，428页中作为实施例(y)进行示范。化合物B可按WO 03/035065中所述方法或本文中实施例128方法制备。
化合物B在实施例306中所述CDK抑制测定中测得的IC50为3μM。通过对比，化合物B的2，6-二氟苯基类似物，即实施例73化合物的IC50为0.0046μM。
通过测量HCT-116细胞系中细胞生长抑制测得本发明化合物的抗增殖活性。与在HCT-116细胞系中的IC50为5.7μM的化合物B对比，实施例73化合物在HCT-116细胞系中的IC50是0.49μM(用以下实施例310描述的方案测定)。
实施例310
CDK选择性测定
用实施例129中所述通用方案，但按以下修改的方法，对本发明化合物抗多种不同激酶的激酶抑制活性进行测试。
将激酶用20mM MOPS pH7.0，1mM EDTA，0.1％γ-巯基乙醇，0.01％Brij-35，5％甘油，1mg/ml BSA稀释成10×工作储备液。1个单位等于在30℃下每分钟1nmol磷酸盐与0.1mg/ml组蛋白H1结合，或与CDK7底物肽结合，终ATP浓度为100μM。
所有CDK测定(CDK7除外)的底物是组蛋白H1，临用前，用20mM MOPS pH 7.4稀释成10×工作储备液。CDK7的底物是用去离子水稀释成10×工作储备液的特异性肽。
测定CDK1/细胞周期蛋白B、CDK2/细胞周期蛋白A、CDK2/细胞周期蛋白E、CDK3/细胞周期蛋白E、CDK5/p35、CDK6/细胞周期蛋白D3的方法：
在25μl终反应体积中，将酶(5-10mU)与8mM MOPS pH 7.0，0.2mM EDTA，0.1mg/ml组蛋白H1，10mM乙酸镁和[γ-33P-ATP](比活性约500cpm/pmol需要的浓度)一起温育。加入Mg2+[γ-33P-ATP]引发反应。在室温下，温育40分钟后，加入5μl3％磷酸溶液终止反应。将10ml反应液加入P30过滤垫中，在5分钟内，用75mM磷酸冲洗3次，甲醇冲洗一次，然后干燥，计数。
测定CDK7/细胞周期蛋白H/MAT1的方法
在25μl终反应体积中，将酶(5-10mU)与8mM MOPS pH 7.0，0.2mM EDTA，500μM肽，10mM乙酸镁和[γ-33P-ATP](比活性约500cpm/pmol，需要的浓度)一起温育。加入Mg2+[γ-33P-ATP]引发反应。在室温下，温育40分钟后，加入5μl 3％磷酸溶液终止反应。将10ml反应液加入P30过滤垫中，在5分钟内，用75mM磷酸冲洗3次，甲醇冲洗一次，然后干燥，计数。
实施例6、12、13、14、21和41化合物抗CDK1、3和5的IC50值＜1μM。
实施例311
抗增殖活性
通过测量化合物在多种细胞系中抑制细胞生长的能力，测定本发明化合物的抗增殖活性。用Alamar蓝测定(Nociari，M.M，Shalev，A.，Benias，P.，Russo，C.Journal of Immunological Methods 1998，213，157-167)测量细胞生长抑制。该方法根据活细胞使刃天青还原为其荧光产物试卤灵的能力而建立。对于每次增殖测定，将细胞接种在96孔板上，让其恢复16小时，然后加入抑制剂化合物再保持72小时。在温育结束时，加入10％(v/v)Alamar蓝，再温育6小时，然后在535nM(激发)/590nM(发射)处测定荧光产物。在非增殖细胞测定的情况中，将细胞保持融合96小时，然后加入抑制剂化合物，再保持72小时。活细胞数通过同前的Alamar蓝测定确定。所有细胞系均来自ECACC(European Collection of cell Cultures(欧洲细胞培养物保藏中心))。
按上述方案，发现本发明化合物在多种细胞系中抑制细胞生长。
实施例312
测量对糖原合成酶激酶-3(GSK-3)的抑制活性
将GSK3β(人)用50mM Tris pH 7.5，0.1mM EGTA，0.1mM原钒酸钠，0.1％β-巯基乙醇，1mg/ml BSA稀释成10×工作储备液。1个单位等于1nmol磷酸盐/分钟与磷酸-糖原合成酶肽2/分钟结合。
在25μl终反应体积中，将GSK3β(5-10mU)与8mM MOPS 7.0，0.2mM EDTA，20μM YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQS(p)EDEEE(磷酸GS2肽)，10mM乙酸镁和[γ-33P-ATP](比活性约500cpm/pmol，需要的浓度)一起温育。加入Mg2+[γ-33P-ATP]引发反应。在室温下，温育40分钟后，加入5μl 3％磷酸溶液终止反应。将10μl反应液加入P30过滤垫中，在5分钟内，用50mM磷酸冲洗3次，甲醇冲洗一次，然后干燥，计数。
实施例6和12化合物抗GSK3β的IC50值＜1μM。
药物制剂
实施例313
(i)片剂
按本领域中已知方法，通过使50mg化合物与197mg乳糖(BP)稀释剂和3mg硬脂酸镁润滑剂混合，制备含式(I)化合物的片剂组合物，压制，形成片剂。
(ii)胶囊
通过将100mg式(I)化合物与100mg乳糖混合，将得到的混合物装填到标准的不透明硬明胶胶囊中，制备胶囊剂。
实施例314
抗真菌活性测定
式(I)化合物的抗真菌活性用以下方案测定。
对化合物抗一系列真菌包括***滑念珠菌(Candida parpsilosis)、热带念珠菌(Candida tropicalis)、白念珠菌(Candida albicans)-ATCC36082和新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)的活性进行测试。在4℃下，将待测生物保存在沙氏葡萄糖琼脂斜面上。通过使酵母在具有氨基酸(Difco，Detroit，Mich.)，pH 7.0和0.05M吗啉丙磺酸(MOPS)的酵母-氮基质培养液(YNB)的转鼓上，在27℃下过夜生长，制备每种生物的单一悬浮液。然后将悬浮液离心，用0.85％NaCl冲洗两次，然后将冲洗过的细胞悬浮液超声4秒钟(Branson Sonifier，350型，Danbury，Conn.)。在血细胞计数器中统计单一芽生孢子，用0.85％NaCl调至需要的浓度。
用改良培养液微稀释技术测定待测化合物的活性。用DMSO将测试化合物稀释至1.0mg/ml比例，然后用具有MOPS的YNB培养液pH 7.0稀释至64μg/ml(用氟康唑作对照)，以提供每个化合物的工作溶液。在96孔板上，用YNB培养液制备第1、第3至第12孔，在第2-11孔中制备10倍稀释度的化合物溶液(浓度范围为64-0.125μl/ml)。第1孔用作分光光度法测定的无菌对照和空白。第12孔用作生长对照。在微量滴定板中的第2-11孔中各接种10μl(终接种体积为104生物体/ml)。将接种板在35℃温育48小时。用涡旋混合器(Vorte-Genie 2混合器，Scientific Industries，Inc.，Bolemia，N.Y.)搅伴板2分钟后，通过在420nm处分光光度法测量吸收度(AutomaticMicroplate Reader，DuPont Instruments，Wilmington，Del.)确定IC50值。IC50终点定义为与对照孔相比出现约50％(或更高)生长降低时的最小药物浓度。用浊度测定时，该指标定义为孔中浊度＜50％对照浊度时的最小药物浓度(IC50)。通过将96孔板中的所有孔内物在Sabourahd葡萄糖琼脂(SDA)板再培养，测定最小溶细胞浓度(MCC)，在35℃下温育1-2天，然后检查生存力。
实施例315
生物评价体内全植物真菌感染控制的方案
将式(I)化合物溶于丙酮，随后用丙酮稀释成系列稀释度，得到一组需要的浓度。根据病原体，加入9个体积0.05％吐温-20TM水溶液或0.01％Triton X-100TM，得到终处理体积。
然后按以下方案，用组合物测试本发明化合物抗番茄枯萎病(致病疫霉(Phytophthora infestans))的活性。使番茄(栽培品种Rutgers)种在少土壤泥炭基质的盆栽混合物中生长直至幼苗10-20cm高。然后以100ppm比例向植物喷洒待测化合物至挂珠流下。24小时后，向测试植物喷雾接种致病疫霉(Phytophthora infestans)的孢子囊水悬浮液，在露室过夜。然后将植物移至温室直至疾病在未处理的对照植物中发生。
类似的方案还用于测试本发明化合物抗小麦叶锈病(柄锈菌属(Puccinia))、小麦及小麦(栽培品种Monon)白粉病(白粉菌(Ervsiphevraminis))、小麦斑枯病(小麦壳针孢(Septoria tritici))和小麦颖枯病(颖枯壳针孢小球腔菌(Leptosphaeria nodorum))的活性。
等同实施方案
提供前述实施例用于举例说明本发明之目的，不应理解为对本发明范围构成任何限定。可对上述本发明和实施例中举例说明的具体实施方案进行很多修改和替换而不背离本发明的宗旨，这是显而易见的。所有此类修改和替换均包括在本申请内。
Claims (7)
1.一种式(VII)化合物或其盐：
其中A为NH(C＝O)或C＝O；
R1d为R1a，其中R1a选自：
ο被1-3个R10c取代基取代的6元单环芳基，条件是芳基被甲基取代时，存在至少一个除甲基以外的取代基；
ο含单个氮杂原子环成员的6元单环杂芳基，这类杂芳基被1-3个R10c取代基取代；
ο含最多达3个选自氮和硫的杂原子环成员的5元单环杂芳基，并任选被1-3个R10c取代基取代；
ο含单个氧杂原子环成员和任选氮杂原子环成员的5元单环杂芳基，并被1-3个R10c取代基取代，条件是当杂芳基含有氮环成员和被甲基取代时，存在至少一个除甲基以外的取代基；
ο具有最多达4个杂原子环成员的双环芳基和杂芳基，其中任一个环为芳环，而另一个环为非芳环，或其中两个环都为芳环，任选该双环基团被1-3个R10c取代基取代；
ο含最多达3个选自氮、氧和硫的杂原子的4元、6元和7元单环C-连接的饱和杂环基，该杂环基任选被1-3个R10c取代基取代，条件是当杂环基具有6个环成员和只含一个氧杂原子时，存在至少一个R10c取代基；
ο含最多达3个选自氮、氧和硫的杂原子的5元单环C-连接的饱和杂环基，该杂环基任选被1-3个R10c取代基取代，条件是当杂环基具有5个环成员和只含一个氮杂原子时，存在至少一个除羟基以外的R10c取代基；
ο任选被1-3个R10c取代基取代的4元和6元环烷基；
ο被1-3个R10c取代基取代的3元和5元环烷基；和
οPh′CR17R18-基团，其中Ph′为被1-3个R10c取代基取代的苯基；R17和R18相同或不同，并各自选自氢和甲基；或R17和R18与它们所连接的碳原子一起形成环丙基；或R17和R18中的一个为氢，且另一个选自氨基、甲基氨基、C1-4酰基氨基和C1-4烷氧基羰基氨基；
ο未取代的苯基和被一个或多个甲基取代的苯基；
ο含单个氮杂原子环成员的未取代6元单环杂芳基；
ο未取代的呋喃基；
ο含单个氧杂原子环成员和氮杂原子环成员的5元单环杂芳基，且未取代或被一个或多个甲基取代；
ο只含一个氧杂原子的未取代6元单环C-连接饱和杂环基团；和
ο未取代的3元和5元环烷基；
且R10c选自：
ο卤素；
ο羟基；
ο任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃氧基；
ο被一个或多个选自以下的取代基取代的C1-4烃基：羟基、卤素和含1或2个选自氮、氧和硫的杂原子环成员的5元和6元饱和杂环；
οS-C1-4烃基；
ο任选被1-3个选自以下的取代基取代的苯基：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；
ο具有5或6个环成员和含最多达3个选自N、O和S的杂原子的杂芳基，所述杂芳基任选被1-3个选自以下的取代基取代：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；
ο含最多达3个选自N、O和S的杂原子并任选被1-3个选自以下的取代基取代的的5元和6元非芳族杂环基：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；
ο氰基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、-C1-4烷基氨基、C1-4酰基氨基、C1-4烷氧基羰基氨基；
οR19-S(O)n-基团，其中n为0、1或2，且R19选自氨基；C1-4烷基氨基；二-C1-4烷基氨基；C1-4烃基；任选被1-3个选自以下的取代基取代的苯基：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；和含最多达3个选自N、O和S的杂原子并任选被1-3个C1-4烷基取代基取代的5元和6元非芳族杂环基；和
οR20-Q-基团，其中R20为任选被1-3个选自以下的取代基取代的苯基：C1-4烷基、三氟甲基、氟和氯；且Q为选自以下的连接基团：OCH2、CH2O、NH、CH2NH、NCH2、CH2、NHCO和CONH。
2.一种式(VII)化合物或其盐：
其中
A为NH(C＝O)或C＝O；
R1d为R1b，其中R1b为具有1-4个取代基的取代苯基
其中：
(i)当R1b具有单个取代基时，其选自卤素、羟基、任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃氧基；被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃基；具有5个环成员的杂芳基；及5元和6元非芳族杂环基，其中所述杂芳基和杂环基含最多达3个选自N、O和S的杂原子；
(ii)当R1b具有2、3或4个取代基时，各取代基选自卤素、羟基、任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃氧基；任选被一个或多个选自羟基和卤素的取代基取代的C1-4烃基；具有5个环成员的杂芳基；氨基；及5元和6元非芳族杂环基；或两个相邻取代基与它们连接的碳原子一起形成5元杂芳环或5元或6元非芳族杂环；其中所述杂芳基和杂环基含最多达3个选自N、O和S的杂原子。
3.一种式(VII)化合物或其盐：
其中：
当A为NH(C＝O)或C＝O时；
R1d为R1c，其中R1c选自：
(a)单取代的苯基，其中所述取代基选自邻-氨基、邻-甲氧基；邻-氯；对-氯；邻-二氟甲氧基；邻-三氟甲氧基；邻-叔丁氧基；间-甲基磺酰基和对-氟；
(b)2，4-或2，6-二取代的苯基，其中一个取代基选自邻-甲氧基、邻-乙氧基、邻-氟、对-吗啉代，且另一个取代基选自邻-氟、邻-氯、对-氯和对-氨基；
(c)2，5-二取代的苯基，其中一个取代基选自邻-氟和邻-甲氧基，且另一个取代基选自间-甲氧基、间-异丙基；间-氟、间-三氟甲氧基、间-三氟甲基、间-甲硫基、间-吡咯烷-1-基磺酰基、间-(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基、间-吗啉代磺酰基、间-甲基、间-氯和间-氨基磺酰基；
(d)2，4，6-三取代的苯基，其中所述取代基相同或不同，并各自选自邻-甲氧基、邻-氟、对-氟、对-甲氧基，条件是存在不多于1个甲氧基取代基；
(e)2，4，5-三取代的苯基，其中所述取代基相同或不同，并各自选自邻-甲氧基、间-氯和对-氨基；
(f)未取代的苄基；2，6-二氟苄基；α，α-二甲基苄基；1-苯基环丙-1-基；和α-叔丁氧基羰基氨基苄基；
(g)未取代的2-呋喃基或具有单个选自4-(吗啉-4-基甲基)、哌啶基甲基的取代基的2-呋喃基；和任选选自甲基的另一个取代基；
(h)未取代的吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基；
(i)被一个或两个C1-4烷基取代的异
唑基；
(j)4，5，6，7-四氢-苯并[d]异唑-3-基；
(k)3-叔丁基-苯基-1H-吡唑-5-基；
(l)喹喔啉基；
(m)苯并[c]异唑-3-基；
(n)2-甲基-4-三氟甲基-噻唑-5-基；
(o)3-苯基氨基-2-吡啶基；
(p)1-甲苯磺酰基吡咯-3-基；
(q)2，4-二甲氧基-3-吡啶基；和6-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶基；
(r)咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基；
(s)5-氯-2-甲硫基-嘧啶-4-基；
(t)3-甲氧基-萘-2-基；
(u)2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-5-基；
(v)任选在5元环上被1或2个甲基取代的2，3-二氢-苯并呋喃基；
(w)2-甲基-苯并
唑-7-基；
(x)4-氨基环己-1-基；
(y)1，2，3，4-四氢-喹啉-6-基；
(z)2-甲基-4，5，6，7-四氢-苯并呋喃3-基；
(aa)2-嘧啶基-1-哌啶-4-基；和1-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-哌啶-4-基和1-甲基磺酰基哌啶-4-基；
(ab)1-氰基环丙基；
(ac)N-苄基吗啉-2-基；
且当A为NH(C＝O)时，R1′另外选自：
(ad)未取代的苯基。
4.权利要求1-3中任一项的化合物或其盐，所述化合物具有式(VIIa)：
其中A如前述权利要求中任一项的定义，R1d为前述权利要求中任一项所定义的R1a、R1b或R1c。
5.权利要求1-4中任一项所定义的化合物或其盐在制备用于预防或治疗选癌症的药物中的用途。
6.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求1-4中任一项定义的化合物或其盐和药学上可接受的载体。
7.一种制备权利要求1-4中任一项定义的化合物或其盐的方法，所述方法包括：
(i)使下式化合物：
与式R1-A′化合物反应，其中A′为异氰酸酯基N＝C＝O、CO2H基团或其活化衍生物；或
(ii)使下式化合物：
与下式二胺化合物反应：
其中R1d和A同前述权利要求1-4中任一项定义；
然后任选将权利要求1-4中任一项定义的化合物或其盐转化为另一种权利要求1-4中任一项定义的化合物或其盐。
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