PT1937671E

PT1937671E - Compostos de benzimidazole tiofeno como inibidores de plk

Info

Publication number: PT1937671E
Application number: PT06813896T
Authority: PT
Inventors: Mui Cheung; Kyle Allen Emmitte; James Michael Salovich
Original assignee: Smithkline Beecham Corp
Priority date: 2005-09-06
Filing date: 2006-08-28
Publication date: 2010-03-12
Also published as: KR20080047585A; CY1109916T1; JP2009508816A; US7786127B2; BRPI0615668A2; EP1937671A2; EA200800546A1; CA2621879A1; PE20070518A1; PL1937671T3; ATE452132T1; HK1117504A1; EP1937671B1; IL189897A0; ES2337929T3; WO2007030361A3; MA29816B1; CR9786A; US20070270437A1; JP5002597B2

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE BENZIMIDAZOLE TIOFENO COMO INIBIDORES DE PLK"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a novos compostos de benzimidazole tiofeno, a formulações farmacêuticas compreendendo estes compostos e à utilização destes compostos em terapia.

As cinases do tipo polo ("PLK") são serina/treonina-cinases evolucionariamente conservadas que desempenham papéis críticos na regulação de processos no ciclo celular. A PLK desempenha um papel na entrada e saída da mitose em diversos organismos desde leveduras a células de mamíferos. A PLK inclui PLK1, PLK2, PLK3 e PLK4. A sobrexpressão de PLKl parece estar fortemente associada a células neoplásicas (incluindo cancros). Um estudo publicado mostrou níveis elevados de expressão de ARN de PLKl em >80% dos tumores do pulmão e da mama, com pouca ou nenhuma expressão no tecido normal adjacente. Vários estudos mostraram correlações entre a expressão de PLK, o grau histológico e prognóstico em vários tipos de cancro. Foram encontradas correlações significativas entre as percentagens de células positivas para PLK e o grau histológico de cancro do ovário e do endométrio (P<0,001). Estes estudos verificaram que a PLK está fortemente expressa em células invasoras de carcinoma do endométrio e que isto poderia reflectir o grau de malignidade e proliferação no carcinoma do endométrio. Utilizando análise por RT-PCR foi 1 detectada sobrexpressão de PLK em 97% dos carcinomas esofágicos e em 73% dos carcinomas gástricos por comparação com os tecidos normais correspondentes. Além disso, doentes com níveis elevados de sobrexpressão de PLK no carcinoma esofágico representaram um grupo com prognóstico significativamente pior do gue agueles com níveis baixos de sobrexpressão de PLK. Nos cancros da cabeça e pescoço foi observada uma expressão elevada de ARNm de PLK1 na maioria dos tumores; uma análise de Kaplan-Meier mostrou gue os doentes com níveis moderados de expressão de PLKl sobreviveram mais tempo do gue agueles com níveis elevados de expressão de PLKl. A análise de doentes com carcinoma de células não pequenas do pulmão mostrou resultados semelhantes relativamente à expressão de PLKl. 0 Pedido PCT N° W02004/014899 de SmithKline Beecham divulga novos compostos de benzimidazole tiofeno de fórmula (I):

em que:

R 1 é seleccionado do grupo consistindo de H, alquilo, alcenilo, alcinilo, -C(0)R7, -C02R7, -C(0)NR7R8, -C(0)N(R7)' -C(0)N(R7)-Ph, -C(0)N(R7)C(0)R8, -C(0)N(R7)C(0)NR7R8, -r2-or7, -r2-o-c (0) r7, -C(S)N(R7)-Ph, -C(S) , -C(0)N(R7)-R2-0R , -C(0)N(R7)-R2-Ph, -C(0)N(R7)C02R8, -C(0)N(R7)S(0)2R8, -C (S) R7, -C(S)NR7R8, (R7)-R2-Ph, -R2-SR7, 2 -C (=NR7)NR7R8, -C (=NR7)N (R8) -Ph, -C (=NR7)N (R8)-R2-Ph, -R2-NR7R8, CN, -OR7, -S(0)fR7, -S(0)2NR7R8, -S(0)2N(R7)-Ph, -s (O) 2N (R7)-R2-Ph, -NR7R8, N (R7) -Ph, -N (R7)-R2-Ph, -N(R7)-S02R8 e

Het;

Ph é fenilo opcionalmente substituído desde 1 a 3 vezes com um substituinte seleccionado do grupo consistindo de halo, alquilo, -OH, -R2-OH, -O-alquilo, -R2-0-alquilo, -NH2, -N(H)alquilo, -N(alquilo)2, -CN e -N3;

Het é um heterociclo de 5-7 membros possuindo 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos seleccionados de N, 0 e S, ou um heteroarilo de 5-6 membros possuindo 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos seleccionados de N, 0 e S, cada um opcionalmente substituído desde 1 a 2 vezes com um substituinte seleccionado do grupo consistindo de halo, alquilo, oxo, -OH, -r2-oh, -O-alquilo, -R2-0-alquilo, -nh2, -N(H)alquilo, -N(alquilo)2, -CN e -N3; Q1 é um grupo de fórmula: - (R2) a-(Y1) b-(R2) C-R3 a, b e c são iguais ou diferentes e são, cada, independentemente 0 ou 1 e, pelo menos, um de a ou b é 1; n é 0, 1, 2, 3 ou 4; Q2 é um grupo de fórmula: - (R2)aa-(Y2)bb-(R2) CC-R4 ou dois grupos Q2 adjacentes são seleccionados do grupo consistindo de alquilo, alcenilo, -OR7, -S(0)fR7 e -NR7R8 e em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão ligados, eles formam um cicloalquiloC5_6, cicloalceniloC5_6, fenilo, 3 aa, bb e cc cada Y1 e Y2 heterociclo de 5-7 membros possuindo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de N, 0 e S, ou heteroarilo de 5-6 membros possuindo 1 ou 2 heteroátomos seleccionados de N, 0 e S; são iguais ou diferentes e são, cada, independentemente 0 ou 1; é igual ou diferente e é independentemente seleccionado do grupo consistindo de -0-, -S(0)f-, -N(R7) - , -C(0)-, -0C(0)-, -C02-, -C(0)N(R7)-, -C(0)N(R7)S(0)2-, -0C(0)N(R7)-, -0S(0)2-, -S (0) 2N (R7) -, -S(0)2N(R7)C(0)-, -N(R7)S(0)2-, -N(R7)C(0)-, -N(R7)C02- e -N (R7) C (0)N (R7) -; cada R2 cada R3 e R4 é igual ou diferente e é independentemente seleccionado do grupo consistindo de alquileno, alcenileno e alcinileno; é igual ou diferente e é, cada independentemente seleccionado do grupo consistindo de H, halo, alquilo, alcenilo, alcinilo, -C(0)R7, -C(0)NR7R8, -C02R7, -C (S) R7, -C(S)NR7R8, -C(=NR7)R8, -C (=NR7)NR7R8, -cr7=n-or7, -0R7-S (0) fR7, -S(0)2NR7R8, -nr7r8, -N(R7)C(0)R8, -N (R7) S (0) 2r8, -no2, -cn, -n3 e um grupo de fórmula (ii):

em que: 4

II

Anel A é seleccionado do grupo consistindo de cicloalquiloC5_io, cicloalceniloC5_io, arilo, heterociclo de 5-10 membros possuindo 1, 2 ou 3 heteroátomos seleccionados de N, O e S e heteroarilo de 5-10 membros possuindo 1, 2 ou 3 heteroátomos seleccionados de N, O e S cada d é 0 ou 1; e é 0, 1, 2, 3 ou 4; cada R6 é igual ou diferente e é independentemente seleccionado do grupo consistindo de H, halo, alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo, cicloalcenilo, Ph,

Het, -CH (OH) -R2-OH, -C(0)R7, -C02R7, -C02-R2-

Ph, -C02-R2-Het, -C(0)N7R8, -C (O) N (R7) C (O) R7, -C(0)N(R7)C02R7, -C(0)N(R7)S(0)2R7, -C(0)N(R7)C(0)NR7R8, -c (s)nr7r8, -C(S)R , -C(=NR7)R8, -c (=NR7)NR7R8, -cr7=n-or8, =0, -OR7, -0C(0)R7, -OC (O) Ph, -OC (O) Het, -0C(0)NR7R8, -0-R2-S (0)2R7, -S (O) fR7, -S(0)2NR7R8, -S (O) 2Ph, -S (O) 2Het, -NR7R8, -N(R7)C(0)R8, -N(R7)C02R8, -N(R7)-R2-C02R8, -N(R7)C(0)NR7R8, -N (R7) -R2-C (0)NR7R8, -N (R') Ph, -N (Rj C (O) Ph, -N(R')C(0)Het, -N (R ) C (O)NR -R -NR R , -N(R7)C (0)N(R7)Het, -N (R7) C (O) N (R7) -R2-Het, -N (R7) S (O) 2R8, -N (R7) - R2-S(0)2R8, -N02, -CN e -N3; em que quando Q1 -N (R') Het, -N (R7) C (O) N (R7) Ph, é definido onde b é 1 e c é 0, R3 não é halo, -C (O) R7, -C(0)NR7R8, -C02R7, -C(S)R7, -C(S)NR7R8, -C(=NR7)R8, -C (=NR7)NR7R8, -cr7=n- 5 OR7, -OR7, -S (O) fR7, -S(0)2NR7R8, -NR7R8, em que quando Q2 R5 é f cada R7 e cada R1 -N(R7)C(0)R8, -N(R7)S (0)2R8, -N02, -CN ou -N3; é definido onde bb é 1 e cc é 0, R4 não é halo, -C (O)R7, -C(0)NR7R8, -C02R7, -C(S)R7, -C(S)NR7R8, -C(=NR7)R8, -C(=NR7)NR7R8; -cr7=n- OR7, -OR7, -S(0)fR7, -S(0)2NR7R8, -NR7R8, --N(R7)C (O)R8, -N(R7)S(0)2R8, -N02, -CN ou -N3; seleccionado do grupo consistindo de H, halo, alquilo, cicloalquilo, OR7, -S(0)fR7,-NR7R8, -NHC (O) R7, -NHC(0)NR7R8 e -NHS(0)2R7; é 0, 1 ou 2; e são iguais ou diferentes e são, cada, independentemente seleccionados do grupo consistindo de H, alquilo, alcenilo, alcinilo, cicloalquilo e cicloalcenilo; em que quando R1 é -C02CH3 e n é 0, Q1 não é -OH; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou seu derivado fisiologicamente funcional.

Também são divulgadas composições farmacêuticas contendo estes compostos, processos para a sua preparação e métodos de tratamento de estados mediada pela PLK utilizando estes compostos.

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com um primeiro aspecto da invenção é proporcionado um composto seleccionado de: 6

em que * indica carbono quiral; e os seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis. composto C, D, E,

Noutro aspecto, é proporcionado um enantiomericamente enriquecido, seleccionado de A, B, F, G e H, em que a estereoquimica do carbono quiral é R. 7

Num terceiro aspecto da invenção é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis. Numa forma de realização, a composição farmacêutica compreende ainda um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Num quarto aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de um estado mediado pela plk num mamífero dele necessitado. 0 método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Num quinto aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de um neoplasma susceptível num mamífero dele necessitado. 0 método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis. 0 neoplasma susceptível pode ser seleccionado do grupo consistindo de cancro da mama, cancro do cólon, cancro do pulmão, incluindo cancro das células pequenas do pulmão e cancro das células não pequenas do pulmão, cancro da próstata, cancro do endométrio, cancro gástrico, melanoma, cancro do ovário, cancro pancreático, carcinoma de células escamosas, carcinoma da cabeça e pescoço, carcinoma esofágico, carcinoma hepatocelular e malignidades hematológicas, tais como leucemias agudas e linfomas agressivos. 8

Num sexto aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de um cancro da mama num mamífero dele necessitado. 0 método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, c, d, e, f, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Num sétimo aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de cancro do ovário num mamífero dele necessitado. 0 método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Num oitavo aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de cancro das células não pequenas do pulmão num mamífero dele necessitado. 0 método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, c, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Num nono aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de cancro da próstata num mamífero dele necessitado. 0 método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis. 9

Num décimo aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de uma malignidade hematológica num mamífero dele necessitado. 0 método compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Noutro aspecto da invenção, é proporcionado um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada. 0 método compreende pôr em contacto a célula com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de inibição da proliferação de uma célula. 0 método compreende pôr em contacto a célula com uma quantidade de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de inibição da mitose numa célula. 0 método compreende administrar à célula uma quantidade de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou 10 solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização em terapia.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização no tratamento de um estado mediado pela PLK num mamífero dele necessitado.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização no tratamento de um neoplasma susceptível num mamífero.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização no tratamento de cancro da mama, cancro do ovário, cancro das células não pequenas do pulmão, cancro da próstata ou uma malignidade hematológica num mamífero.

Noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização no tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização na inibição de proliferação de uma célula. 11

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização na inibição de mitose numa célula.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de um medicamento para o tratamento de um estado mediado por PLK num mamífero.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de um medicamento para o tratamento de um neoplasma susceptível num mamífero.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de um medicamento para o tratamento de um cancro da mama, cancro do ovário, cancro das células não pequenas do pulmão, cancro da próstata ou uma malignidade hematológica num mamífero.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de um medicamento para o tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada num mamífero. 12

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de um medicamento para inibir a proliferação de uma célula.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para a preparação de um medicamento para inibir a mitose numa célula.

Ainda noutro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H e dos seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para utilização no tratamento de um neoplasma susceptivel, tais como cancro da mama, cancro do ovário, cancro das células não pequenas do pulmão, cancro da próstata, e malignidades hematológicas num mamífero.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Como aqui utilizado, "composto(s) da invenção" ou "composto (s) seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H " significa composto (s) seleccionado (s) de A, B, C, D, E, F, G e H, ou composto(s) enantiomericamente enriquecido(s) seleccionado(s) de A, B, C, D, E, F, G e H, ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Como aqui utilizado, "composto(s) seleccionado(s) de A-l, B-l, C-l, D-l, E-l, F-l, G-l e H-l" significa composto(s) 13 seleccionado (s) de A-l, B-l, C-l, D-l, E-l, F-l, G-l e H-l ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Como aqui utilizado, o termo "opcionalmente" significa que o(s) evento(s) subsequentemente descrito(s) pode ou não ocorrer, e inclui ambos evento(s) que ocorre(m) e evento(s) que não ocorre(m).

Os compostos da invenção existem em formas estereoisoméricas (e. g., estes contêm um ou mais átomos de carbono quirais ou assimétricos). 0 termo "quiral" refere-se a uma molécula que não é sobreponivel com a sua imagem no espelho. 0 termo "aquiral" refere-se a uma molécula que é sobreponivel com a sua imagem no espelho. 0 termo "estereoisómeros" refere-se a compostos que têm uma constituição química comum mas diferem na disposição dos átomos ou grupos no espaço. Os estereoisómeros podem ser isómeros ópticos ou geométricos. Os isómeros ópticos incluem enantiómeros e diastereómeros. Um "enantiómero" é um de um par de isómeros ópticos contendo um átomo de carbono quiral cuja configuração molecular tem as formas das mãos esquerda e direita. Isto é, "enantiómero" refere-se a cada um de um par de isómeros ópticos de um composto que são imagens no espelho, não sobreponíveis um do outro. Um "diastereómero" é um de um par de isómeros ópticos de um composto com dois ou mais centros assimétricos e cujas moléculas não são imagens no espelho uma da outra. A nomenclatura de um centro quiral é governada pelo sistema (R)-(S). Se um composto particular é designado como o enantiómero "R" ou "S" de acordo com o sistema depende da 14 natureza dos átomos ou grupos que estão ligados ao carbono quiral.

Os enantiómeros diferem no seu comportamento em relação à luz polarizada no plano, isto é, à sua actividade óptica. Um enantiómero que roda a luz polarizada no plano no sentido dos ponteiros do relógio é referido como sendo dextrorrotatório e é designado pelo símbolo "d" ou "(+)" para rotação positiva. Um enantiómero que roda a luz polarizada no plano no sentido contrário ao dos ponteiros do relógio é referido como sendo levorrotatório e é designado pelo símbolo "I" ou para rotação negativa. Não existe nenhuma correlação entre a configuração de enantiómeros e o sentido no qual estes rodam a luz polarizada no plano. Também não existe nenhuma correlação necessária entre a designação (R) e (S) e a direcção de rotação da luz polarizada no plano. A actividade óptica ou sentido de rotação da luz polarizada no plano, de um enantiómero de um composto da invenção pode ser determinada utilizando técnicas convencionais.

Os termos "racemato" e "mistura racémica" como aqui utilizados referem-se a uma mistura dos isómeros ópticos (R) e (S) (e. g.r enantiómeros) de um composto em proporções iguais, i. e., 50:50. O termo "enantiomericamente enriquecido" como aqui utilizado refere-se a preparações compreendendo uma mistura de isómeros ópticos, no qual a quantidade de um enantiómero é maior do que a quantidade do outro. Assim, "enantiomericamente enriquecido" refere-se a misturas de isómeros ópticos em que a proporção de enantiómeros é maior do que 50:50. Um composto enantiomericamente enriquecido compreende mais do que 50% em 15 peso de um enantiómero em relação ao outro. Por exemplo 5 — {6 — [ (Metilsulfonil)metil]-lH-benzimidazol-l-il}-3-({ (1R) -1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxamida enantiomericamente enriquecida refere-se a uma composição compreendendo mais do que 50% em peso do enantiómero (R) em relação ao enantiómero (S) do composto. Numa forma de realização, um composto enantiomericamente enriquecido compreende, pelo menos, 75% em peso de um enantiómero em relação ao outro. Noutra forma de realização, um composto enantiomericamente enriquecido compreende, pelo menos, 80% em peso de um enantiómero em relação ao outro. Numa forma de realização particular, um composto enantiomericamente enriquecido compreende, pelo menos, 85% em peso de um enantiómero em relação ao outro. 0 termo "enantiomericamente puro" como aqui utilizado refere-se a compostos enantiomericamente enriquecidos compreendendo, pelo menos, 90% em peso de um enantiómero em relação ao outro. Numa forma de realização, um composto enantiomericamente puro compreende, pelo menos, 95% em peso de um enantiómero em relação ao outro. Numa forma de realização particular, um composto enantiomericamente puro compreende, pelo menos, 99% em peso de um enantiómero em relação ao outro. A presente invenção proporciona compostos seleccionados de:

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em que * indica carbono quiral; e os seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Numa forma de realização particular, os compostos A, B, C, D, E, F, G e H são enantiomericamente enriquecidos, em que a estereoquimica do carbono quiral é R. Noutra forma de realização, os compostos A, B, C, D, E, F, G e H são enantiomericamente puros, em que a estereoquimica do carbono quiral é R.

Assim, numa forma de realização preferida, a presente invenção proporciona compostos enantiomericamente enriquecidos e enantiomericamente puros seleccionados de: 17

5 — {6 —[(Metilsulfonil)metil]-Ιϋ-benzimidazol-l-il}-3-({(1R)-1-[2-(trifluorometil)fenil]-etiljoxi)-2-tiofenocarboxamida;

3- { [ (lJ?)-l-(2-Clorofenil)etil] oxi} — 5 — { 6 — [ (metilsulfonil)metil] -lfí-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxamida;

5-{6 - [ ( 4-Metilpiperazin-l-il)metil]-lH-benzimidazol-l-il}-3 - { (1.R) —1— [2— (trif luorometil) fenil] et oxi } tiof eno-2-carboxamida; 18

3 - { [(lí?)-l-(2-Clorofenil)etil] oxi} - 5- { 6 - [ (4-metilpiperazin l-il)metil]-lH-benzimidazol-l-il}tiofeno-2-carboxamida;

5-[6-(4-Piperidiniloxi)-Ιϋ-benzimidazol-l-il]-3-({(1R)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxamida;

3 - { [(lf?)-l-(2-Clorofenil)etil] oxi} - 5- [ 6 - (4-piperidiniloxi) lfí-benzimidazol-l-il] -2-tiofenocarboxamida; 19

5—{6— [ (l-Metil-4-piperidinil) oxi] -líí-benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxamida; e

3-{[(1R)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6-[(l-metil-4-piperidinil)oxi]-líí-benzimidazol-l-il}-2-tiof enocarboxamida; e os seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Será compreendido pelos especialistas na técnica que os compostos da presente invenção podem ser utilizados na forma de um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção (ou das suas formas enantiomericamente enriquecidas ou puras), incluem sais convencionais formados de ácidos ou bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis, bem como sais de amónio quaternário. Exemplos mais específicos de sais de ácido adequados incluem clorídrico, bromidrico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, perclórico, fumárico, acético, propiónico, 20 succínico, glicólico, fórmico, láctico, maleico, tartárico, cítrico, palmóico, malónico, hidroximaleico, fenilacético, glutâmico, benzóico, salicílico, fumárico, toluenossulfónico, metanossulfónico (mesilato), naftaleno-2-sulfónico, benzenossulfónico hidroxinaftóico, iodídrico, málico, esteárico, tânico e semelhantes. Outros ácidos, tal como o oxálico, embora não sejam por si só farmaceuticamente aceitáveis, podem ser úteis na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos da invenção e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos específicos de sais básicos adequados incluem sais de sódio, lítio, potássio, magnésio, alumínio, cálcio, zinco, Ν,Ν'-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, N-metilglucamina e procaína. 0 termo "solvato" como aqui utilizado refere-se a um complexo de estequiometria variável formado por um soluto (um composto da invenção ou uma sua forma enantiomericamente enriquecida ou pura) e um solvente. Os solventes, a título de exemplo, incluem água, metanol, etanol ou ácido acético.

Os processos de preparação de sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção são convencionais na técnica. Ver, e. g., Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 5a Edição, Vol 1: Principies and Practice.

Como será evidente para os especialistas na técnica, nos processos descritos abaixo para a preparação dos compostos da invenção, determinados intermediários podem estar, alternativamente, na forma de sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do composto. Aqueles termos como aplicados a qualquer 21 intermediário utilizado no processo de preparação dos compostos da invenção têm os mesmos significados que os indicados acima em relação aos compostos da invenção. Os processos de preparação de sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis de tais intermediários são conhecidos na técnica e são análogos ao processo de preparação de sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção.

Os compostos da presente invenção são tipicamente inibidores de PLK. Por inibidor de PLK refere-se um composto que apresenta um pICso maior do que 6 no ensaio de Inibição de PLK descrito abaixo nos exemplos ou uma IC50 inferior a 10 μΜ no ensaio de Inibição do Crescimento com Azul-de-metileno ou Cell-Titre-Glo descrito abaixo nos exemplos; mais particularmente um inibidor de PLK é um composto que apresenta um pIC50 maior do que 7 ou uma IC50 inferior a 1 μΜ utilizando os métodos descritos nos exemplos abaixo. A presente invenção proporciona ainda compostos da invenção para utilização em terapia médica num animal, e. g. um mamífero tal como um humano. Em particular, a presente invenção proporciona compostos para utilização no tratamento de um estado mediado pela PLK. A presente invenção também proporciona compostos para utilização no tratamento de um neoplasma susceptível. O termo "neoplasma susceptível" é definido abaixo. Em particular, a presente invenção proporciona compostos para utilização no tratamento de uma variedade de tumores sólidos, incluindo mas não se limitando a cancro da mama, cancro do ovário, cancro das células não pequenas do pulmão cancro da próstata e malignidades hematológicas incluindo mas não se limitando a leucemias agudas (mielóide e linfóide) e linfomas agressivos. 22 A presente invenção proporciona compostos para utilização no tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada. A presente invenção também proporciona compostos para utilização na inibição de proliferação de uma célula. A presente invenção também proporciona compostos para utilização na inibição de mitose numa célula. A presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização em métodos de tratamento de vários estados ou doenças, os quais compreendem todos o passo de administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. Como aqui utilizado, o termo "tratamento" refere-se ao alívio do estado especificado, eliminação ou redução dos sintomas do estado, abrandamento ou eliminação da progressão do estado e prevenção ou retardamento da recorrência do estado num indivíduo anteriormente afectado.

Como aqui utilizado, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade de um composto da invenção que é suficiente para desencadear, no indivíduo à qual é administrada, a resposta biológica ou médica de uma cultura de células, tecido, sistema, animal (incluindo humano) que está a ser procurada, por exemplo, por um investigador ou clinico. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção para o tratamento de um estado mediado pela PLK é uma quantidade suficiente para tratar o estado mediado pela PLK no indivíduo. Analogamente, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção para o tratamento de um neoplasma susceptível é uma quantidade suficiente para tratar o neoplasma susceptível no indivíduo. Numa forma de realização da presente invenção, a quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção é uma quantidade suficiente para inibir a 23 mitose celular. Numa forma de realização da presente invenção, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção é uma quantidade suficiente para regular, modular, ligar ou inibir a PLK. A quantidade terapeuticamente eficaz exacta de um composto da invenção dependerá de um número de factores incluindo, mas não se limitando à idade e peso do indivíduo a ser tratado, ao distúrbio preciso que requer tratamento e sua gravidade, à natureza da formulação e à via de administração, e será em última análise da discrição do médico ou veterinário assistente. Tipicamente, um composto da invenção será administrado para tratamento numa gama de 0,1 a 200 mg/kg de peso corporal do receptor (animal) por dia ou por dose ou por ciclo de tratamento e mais geralmente na gama de 1 a 100 mg/kg de peso corporal por dia ou por dose ou por ciclo de tratamento.

As dosagens aceitáveis podem ser de cerca de 0,1 a cerca de 2000 mg por dia, dose ou ciclo de tratamento e, de um modo preferido, desde cerca de 0,1 a cerca de 500 mg por dia, dose ou ciclo de tratamento.

Como um aspecto, a presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização em métodos de regulação, modulação, ligação ou inibição de PLK para o tratamento de condições mediadas pela PLK, em particular PLKl. "Regulação, modulação, ligação ou inibição de PLK" refere-se à regulação, modulação, ligação ou inibição da actividade da PLK, em particular PLKl, bem como à regulação, modulação, ligação ou inibição da sobrexpressão de PLK, em particular PLKl. Tais estados incluem determinados neoplasmas (incluindo cancros e tumores) que têm sido associados à PLK, em 24 particular PLKl e estados caracterizados por proliferação celular inapropriada. A presente invenção proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de um estado mediado pela plk, em particular PLKl, o qual compreende administrar ao animal uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da invenção. Este método e outros métodos da presente invenção são úteis para o tratamento de um animal tal como um mamifero e, em particular, humanos. Os estados que são medidaos pela PLK são conhecidos na técnica e incluem mas não se limitam a neoplasmas e estados caracterizados por proliferação celular inapropriada. A presente invenção também proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de um neoplasma susceptível (cancro ou tumor) num animal, tal como um mamifero (e. g., um humano) dele necessitado, método esse que compreende administrar ao animal uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da invenção. "Neoplasma susceptivel" como aqui utilizado refere-se a neoplasmas que são susceptíveis ao tratamento com um inibidor de PLK. Os neoplasmas que têm sido associados a PLK e que são, por conseguinte, susceptíveis ao tratamento com um inibidor de PLK são conhecidos na técnica e incluem tumores e cancros primários e metastáticos. Por exemplo, os neoplasmas susceptíveis, dentro do âmbito da presente invenção, incluem mas não se limitam a cancro da mama, cancro do cólon, cancro do pulmão (incluindo cancro das células pequenas do pulmão e cancro das células não pequenas do pulmão), cancro da próstata, cancro do endométrio, cancro gástrico, melanoma, cancro do ovário, cancro pancreático, carcinoma de células escamosas, carcinoma da cabeça e pescoço, 25 carcinoma esofágico, carcinoma hepatocelular, e malignidades hematológicas incluindo mas não se limitando a leucemias agudas e linfomas agressivos. Numa forma de realização particular, a presente invenção proporciona um método de tratamento de cancro da mama num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano) dele necessitado administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. Noutra forma de realização particular, a presente invenção proporciona um método de tratamento de cancro do ovário num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano) dele necessitado administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. Noutra forma de realização particular, a presente invenção proporciona um método de tratamento de cancro das células não pequenas do pulmão num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano) dele necessitado administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. Noutra forma de realização particular, a presente invenção proporciona um método de tratamento de cancro da próstata num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano) dele necessitado administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. Noutra forma de realização particular, a presente invenção proporciona um método de tratamento de leucemia aguda, incluindo leucemia mielóide aguda e leucemia linfóide aguda, num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano) dele necessitado administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. Noutra forma de realização particular, a presente invenção proporciona um método de tratamento de linfoma agressivo num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano) dele necessitado administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. 26

Os compostos da invenção podem ser utilizados sozinhos no tratamento de tais neoplasmas susceptiveis ou podem ser utilizados para proporcionar efeitos aditivos ou sinérgicos com um ou mais de outros compostos da invenção, ou em associação com determinadas quimioterapias existentes e/ou outras terapias antineoplásicas. Além disso, os compostos da invenção podem ser utilizados para restabelecer a eficácia de um ou mais de outros compostos da invenção, determinadas quimioterapias existentes e/ou outras terapias antineoplásicas. Como aqui utilizado, "terapias antineoplásicas" inclui mas não se limita a quimioterapia citotóxica, terapia hormonal, inibidores dirigidos de cinase, anticorpos monoclonais terapêuticos, cirurgia e terapia de radiação. A presente invenção também proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano) dele necessitado. 0 método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. Por "proliferação celular inapropriada" refere-se a proliferação celular resultante de crescimento celular inapropriado, proliferação celular resultante de divisão celular excessiva, proliferação celular resultante de divisão celular a uma taxa acelerada, proliferação celular resultante de sobrevivência celular inapropriada e/ou proliferação celular numa célula normal que ocorre a uma taxa normal, a qual é contudo indesejada. Os estados caracterizados por proliferação celular inapropriada, incluem mas não se limitam a neoplasmas, distúrbios de proliferação de vasos sanguíneos, distúrbios fibróticos, distúrbios proliferativos de células mesangiais e doenças inflamatórias/imuno-mediadas. Os distúrbios de 27 proliferação de vasos sanguíneos incluem artrite e reestenose. Os distúrbios fibróticos incluem cirrose hepática e aterosclerose. Os distúrbios proliferativos de células mesangiais incluem glomerulonefrite, nefrosclerose maligna e glomerulopatias. Os distúrbios inflamatórios/imuno-mediados incluem psoríase, cicatrização crónica de feridas, rejeição de transplante de órgãos, síndromes de microangiopatia trombótica e doenças neurodegenerativas. A osteoartrite e outras doenças de excesso de reabsorção óssea dependentes da proliferação de osteoclastos são exemplos de estados caracterizados por proliferação celular inapropriada, nas quais a proliferação celular ocorre em células normais a uma taxa normal, mas é mesmo assim é indesejada. A presente invenção também proporciona um composto seleccionado de A, B, C, D, E, F, G e H para utilização num método de inibição da proliferação de uma célula, método esse que compreende pôr em contacto a célula com uma quantidade de um composto da invenção suficiente para inibir a proliferação da célula. Numa forma de realização particular, a célula é uma célula neoplásica. Numa forma de realização particular, a célula é uma célula inapropriadamente proliferativa. 0 termo "célula inapropriadamente proliferativa" como aqui utilizado refere-se a células que crescem inapropriadamente (anormalmente), a células que se dividem excessivamente ou a uma taxa acelerada, a células que sobrevivem inapropriadamente (anormalmente) e/ou a células normais que proliferam a uma taxa normal mas para as quais a proliferação é indesejada. As células neoplásicas (incluindo células cancerosas) são um exemplo de células inapropriadamente proliferativas mas não são as únicas células inapropriadamente proliferativas. 28 A PLK é essencial para a mitose celular e, por conseguinte, julga-se que os compostos da invenção sejam eficazes na inibição da mitose. "Inibição da mitose" refere-se à inibição da entrada na fase M do ciclo celular, à inibição da progressão normal da fase M do ciclo celular uma vez iniciada a fase Meã inibição da saida normal da fase M do ciclo celular. Assim, os compostos da presente invenção podem inibir a mitose, inibindo a entrada das células na mitose, inibindo a progressão das células através da mitose ou inibindo a saída das células da mitose. Como um aspecto, a presente invenção proporciona um método de inibição da mitose numa célula, método esse que compreende administrar à célula uma quantidade de um composto da invenção suficiente para inibir a mitose. Numa forma de realização particular, a célula é uma célula neoplásica. Numa forma de realização particular, a célula é uma célula inapropriadamente proliferativa. A presente invenção também proporciona a utilização de um composto da invenção para a preparação de um medicamento para o tratamento de um estado mediado por PLK num animal, tal como um mamífero (e. g., um humano). A presente invenção proporciona ainda a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o tratamento de um neoplasma susceptível num animal. Em particular, a presente invenção proporciona a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o tratamento de um cancro da mama num animal. A presente invenção também proporciona a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o tratamento de cancro do ovário num animal. A presente invenção proporciona a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o tratamento de cancro das células não pequenas do pulmão num animal. A presente invenção também proporciona a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o 29 tratamento de cancro da próstata num animal. A presente invenção proporciona a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o tratamento de leucemia aguda (incluindo leucemia mielóide aguda e linfóide aguda) num animal. A presente invenção proporciona a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o tratamento de linfoma agressivo num animal. A presente invenção proporciona ainda a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para o tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada. A presente invenção proporciona ainda a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para inibir a proliferação de uma célula. A presente invenção proporciona ainda a utilização de um composto para a preparação de um medicamento para inibir a mitose numa célula.

Embora seja possível que, para utilização em terapia, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção seja administrada como a substância química em bruto, este é tipicamente apresentado como o ingrediente activo de uma composição ou formulação farmacêutica. Por conseguinte, a invenção proporciona ainda uma composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção. A composição farmacêutica pode compreender ainda um ou mais veículos, diluentes e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. 0(s) veículo(s), diluente(s) e/ou excipiente (s) têm de ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não prejudiciais para o seu receptor. De acordo com um outro aspecto da invenção, também é proporcionado um processo para a preparação de uma formulação farmacêutica incluindo misturar um composto da invenção com um ou mais veículos, diluentes e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. 30

As formulações farmacêuticas podem ser apresentadas na forma de dosagem unitária contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente activo por dose unitária. Uma tal unidade pode conter uma dose terapeuticamente eficaz do composto da invenção ou uma fracção de uma dose terapeuticamente eficaz de modo a que possam ser administradas formas de dosagem unitárias múltiplas numa determinada altura, para se conseguir a dose terapeuticamente eficaz desejada. As formulações de dosagem unitária preferidas são aquelas contendo uma dose ou sub-dose diária, como especificada acima; ou uma fracção apropriada daquela, de um ingrediente activo. Além disso, tais formulações farmacêuticas podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica farmacêutica.

As formulações farmacêuticas podem ser adaptadas para administração por qualquer via apropriada, por exemplo, pela via oral (incluindo bucal ou sublingual), rectal, nasal, tópica (incluindo bucal, sublingual ou transdérmica), vaginal ou parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa ou intradérmica). Tais formulações podem ser preparadas por qualquer método conhecido na técnica de farmácia, por exemplo, colocando em associação o ingrediente activo com o(s) veiculo (s) ou excipiente (s) .

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas, tais como cápsulas ou comprimidos; pós ou granulados; soluções ou suspensões em líquidos aquosos ou não aquosos; espumas ou batidos comestíveis; ou emulsões líquidas de óleo em água ou emulsões líquidas de água em óleo. Por exemplo, para administração oral na forma de um comprimido ou cápsula, o componente farmacológico activo pode ser combinado com um 31 veículo inerte, não tóxico, farmaceuticamente aceitável, oral, tais como etanol, glicerol, água e semelhantes. Os pós são preparados pulverizando o composto até um tamanho fino adequado e misturando com um veículo farmacêutico tal como um hidrato de carbono comestível como, por exemplo, amido ou manitol, analogamente pulverizado. Também podem estar presentes um aromatizante, conservante, dispersante e corante.

As cápsulas são feitas preparando uma mistura em pó como descrita acima e enchendo invólucros de gelatina moldada. À mistura em pó podem ser adicionados deslizantes e lubrificantes, tais como sílica coloidal, talco, estearato de magnésio, estearato de cálcio ou polietilenoglicol sólido antes da operação de enchimento. Também pode ser adicionado um desintegrante ou solubilizante, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio ou carbonato de sódio para melhorar a disponibilidade do medicamento quando a cápsula é ingerida.

Além do mais, quando desejado ou necessário, também podem ser incorporados aglutinantes, lubrificantes, desintegrantes e corantes adequados na mistura. Os aglutinantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais, tais como glucose ou beta-lactose, edulcorantes de milho, gomas naturais e sintéticas tal como goma-arábica, tragacanta ou alginato de sódio, carboximetilcelulose, polietilenoglicol, ceras e semelhantes. Os lubrificantes utilizados nestas formas de dosagem incluem oleato de sódio, estearato de sódio, estearato de magnésio, benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de sódio e semelhantes. Os desintegrantes incluem, sem limitação, amido, metilcelulose, ágar, bentonite, goma de xantana e semelhantes. Os comprimidos são formulados, por exemplo, preparando uma mistura em pó, granulando ou suspendendo, adicionando um lubrificante e 32 desintegrante e prensando em comprimidos. Uma mistura em pó é preparada misturando o composto, pulverizando adequadamente, com um diluente ou uma base como descrito acima e, opcionalmente, com um aglutinante tal como carboximetilcelulose, um alginato, gelatina ou polivinilpirrolidona, um retardante de solução, tais como parafina, um acelerador de reabsorção, tais como um sal quaternário e/ou um agente de absorção, tais como bentonite, caulino ou fosfato de dicálcio. A mistura em pó pode ser granulada humidificando com um aglutinante, tais como xarope, pasta de amido, mucilagem de acádia ou soluções de materiais celulósicos ou poliméricos e forçando-a através de um crivo. Como uma alternativa à granulação, a mistura em pó pode ser feita passar através de uma máquina de comprimidos e o resultado são pastilhas mal formadas desfeitas em grânulos. Os grânulos podem ser lubrificados para prevenir a aderência aos moldes de formação de comprimidos por meio da adição de ácido esteárico, um sal de estearato, talco ou óleo mineral. A mistura lubrificada é, depois, prensada em comprimidos. Os compostos da presente invenção também podem ser combinados com um veículo inerte solto e prensados directamente em comprimidos sem passar pelos passos de granulação ou suspensão. Pode ser proporcionado um revestimento protector transparente ou opaco consistindo de um revestimento selante de goma-laca, um revestimento de açúcar ou material polimérico e um revestimento de polimento com cera. A estes revestimentos podem ser adicionados corantes para distinguir dosagens unitárias diferentes.

Os fluidos orais, tais como soluções, xaropes e elixires, podem ser preparados na forma de unidade de dosagem de modo a que uma dada quantidade contenha uma quantidade predeterminada de ingrediente activo. Os xaropes podem ser preparados dissolvendo o composto numa solução aquosa adequadamente 33 aromatizada, enquanto os elixires são preparados através da utilização de um veiculo alcoólico não tóxico. As suspensões podem ser formuladas dispersando o composto num veiculo não tóxico. Também podem ser adicionados solubilizantes e emulsionantes, tais como álcoois de isostearilo etoxilado e éteres de polioxietileno e sorbitol, conservantes, aromas, tais como óleo de hortelã-pimenta ou edulcorantes naturais ou sacarina ou outros edulcorantes artificiais e semelhantes.

Quando apropriado, as formulações unitárias de dosagem para administração oral podem ser microencapsuladas. A formulação também pode ser preparada para prolongar ou manter a libertação como, por exemplo, revestindo ou integrando o material na forma de partículas em polímeros, cera ou semelhantes.

Os compostos da invenção também podem ser administrados na forma de sistemas de administração em lipossomas, tais como vesículas unilamelares pequenas, vesículas unilamelares grandes e vesículas multilamelares. Os lipossomas podem ser preparados a partir de uma variedade de fosfolípidos, tais como colesterol, estearilamina ou fosfatidilcolinas.

Os compostos da invenção também podem ser administrados através da utilização de anticorpos monoclonais como veículos individuais, aos quais são ligadas as moléculas do composto. Os compostos também podem ser ligados a polímeros solúveis como veículos farmacológicos direccionáveis. Tais polímeros podem incluir péptidos, polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, poli-hidroxipropilmetacrilamidafenol, poli-hidroxietilasparta-midafenol ou poli(óxido de etileno)polilisina substituído com resíduos de palmitoílo. Além disso, os compostos podem ser ligados a uma classe de polímeros biodegradáveis úteis para se 34 conseguir a libertação controlada de um fármaco, por exemplo, poli(ácido láctico), poli-épsilon-caprolactona, poli(ácido hidroxibutirico), poliortoésteres, poliacetais, polidi-hidropiranos, policianoacrilatos e copolimeros de bloco reticulados ou antipáticos de hidrogeles.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração transdérmica podem ser apresentadas como adesivos discretos destinados a permanecer em contacto íntimo com a epiderme do receptor durante um período de tempo prolongado. Por exemplo, o ingrediente activo pode ser administrado a partir do adesivo por iontoforese como geralmente descrito em Pharmaceutical Research, 3(6):318 (1986).

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração tópica podem ser formuladas como pomadas, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, geles, formulações para pulverização, aerossoles ou óleos.

Para tratamentos do olho ou de outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações são, de um modo preferido, aplicadas como uma pomada ou creme tópico. Quando formuladas numa pomada, o ingrediente activo pode ser utilizado com uma base de pomada parafínica ou miscível com água. Alternativamente, o ingrediente activo pode ser formulado num creme com uma base de óleo em água ou uma base de água em óleo.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administrações tópicas ao olho incluem colírios, em que o ingrediente activo está dissolvido ou suspenso num veículo adequado, especialmente um solvente aquoso. 35

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração tópica na boca incluem rebuçados, pastilhas e colutórios.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração rectal podem ser apresentadas como supositórios ou como enemas.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração nasal em que o veiculo é um sólido, incluem um pó grosseiro possuindo um tamanho de partícula, por exemplo, na gama 20 a 500 mícrones o qual é administrado de um modo em que é tomada uma porção, i. e., por inalação rápida através da passagem nasal a partir de um recipiente de pó mantido próximo do nariz. As formulações adequadas em que o veículo é um líquido, para administração como uma formulação para pulverização nasal ou como gotas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente activo.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração por inalação incluem pós ou aerossoles de partículas finas, os quais podem ser produzidos por meio de vários tipos de aerossoles, nebulizadores ou insufladores pressurizados de dose calibrada.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, geles, pastas, espumas ou formulações para pulverização.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração parentérica incluem soluções injectáveis estéreis aquosas e não aquosas, as quais podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e 36 não aquosas as quais podem incluir agentes de suspensão e espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou doses múltiplas, por exemplo, ampolas e frascos selados, e podem ser conservadas num estado de secagem por congelação (liofilizado) que requer apenas a adição do veiculo liquido estéril, por exemplo água para preparações injectáveis, imediatamente antes da utilização. As soluções e suspensões injectáveis extemporâneas podem ser preparadas de pós, grânulos ou comprimidos estéreis.

Entender-se-á que, além dos ingredientes particularmente mencionados acima, as formulações podem incluir outros agentes convencionais na técnica tendo em consideração o tipo de formulação em questão, por exemplo, as adequadas para administração oral podem incluir aromatizantes.

Nos métodos de tratamento e utilizações acima descritos, um composto da invenção pode ser utilizado sozinho, em associação com um ou mais de outros compostos da invenção ou em associação com outros agentes terapêuticos e/ou em associação com outras terapias antineoplásicas. Em particular, nos métodos de tratamento de condições mediadas pela PLK e métodos de tratamento de neoplasmas susceptíveis, é considerada a combinação com outros agentes quimioterapêuticos, bem como a combinação com terapia cirúrgica e terapia de radiação. 0 termo "quimioterapêutico" como aqui utilizado, refere-se a qualquer agente quimico possuindo um efeito terapêutico no indivíduo ao qual é administrado. Os agentes "quimioterapêuticos" incluem mas não se limitam a agentes antineoplásicos, analgésicos e antieméticos. Como aqui utilizado, "agentes antineoplásicos" incluem agentes citostáticos e citotóxicos, tais como, mas não se limitando a quimioterapia citotóxica, terapia hormonal, 37 inibidores dirigidos de cinase e anticorpos monoclonais terapêuticos. As terapias de associação de acordo com a presente invenção compreendem assim a administração de, pelo menos, um composto da invenção e a utilização de, pelo menos, um outro método de tratamento de cancro. Numa forma de realização, as terapias de associação de acordo com a presente invenção compreendem a administração de, pelo menos, um composto da invenção e, pelo menos, um outro agente quimioterapêutico. Numa forma de realização particular, a presente invenção compreende a administração de, pelo menos, um composto da invenção e, pelo menos, um agente antineoplásico. Como um aspecto adicional, a presente invenção proporciona os métodos de tratamento e utilizações como descritos acima, os quais compreendem administrar um composto da invenção em conjunto com, pelo menos, um agente quimioterapêutico. Numa forma de realização particular, o agente quimioterapêutico é um agente antineoplásico. Noutra forma de realização, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica como descrita acima compreendendo ainda, pelo menos, um outro agente quimioterapêutico, mais particularmente, o agente quimioterapêutico é um agente antineoplásico.

Tipicamente, qualquer agente quimioterapêutico que possua actividade versus um neoplasma susceptivel a ser tratado pode ser utilizado em associação com os compostos da invenção, desde que o agente particular seja clinicamente compatível com terapia, utilizando um composto da invenção. Os agentes antineoplásicos típicos úteis na presente invenção, incluem mas não se limitam a agentes antimicrotúbulos, tais como diterpenóides e alcaloides de vinca; complexos de coordenação de platina; agentes alquilantes, tais como mostardas de azoto, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, nitrosoureias e triazenos; 38 agentes antibióticos tais como antraciclinas, actinomicinas e bleomicinas; inibidores da topoisomerase II, tais como epipodofilotoxinas; antimetabolitos tais como análogos de purina e pirimidina e compostos anti-folato; inibidores da topoisomerase I, tais como camptotecinas; hormonas e análogos hormonais; inibidores da via de transdução de sinal; inibidores da angiogénese de tirosina-cinase não receptora; agentes imunoterapêuticos; agentes pro-apoptóticos; e inibidores de sinalização do ciclo celular.

Os agentes antimicrotúbulos ou antimitóticos são agentes específicos em relação à fase activos contra os microtúbulos de células tumorais durante a fase M ou a mitose do ciclo celular. Exemplos de agentes antimicrotúbulos incluem mas não se limitam a, diterpenóides e alcaloides de vinca. Exemplos de diterpenóides incluem mas não se limitam a, paclitaxel e o seu análogo docetaxel. Exemplos de alcaloides de vinca incluem mas não se limitam a, vinblastina, vincristina e vinorelbina. Os complexos de coordenação de platina são agentes antineoplásicos não específicos em relação à fase, os quais são interactivos com o ADN. Os complexos de platina entram nas células tumorais, sofrem aquação e formam reticulações intra- e intercadeias com o ADN provocando efeitos biológicos adversos no tumor. Exemplos de complexos de coordenação de platina incluem mas não se limitam a oxaliplatina, cisplatina e carboplatina.

Os agentes alquilantes são agentes antineoplásicos não específicos em relação à fase e electrófilos fortes. Tipicamente, os agentes alquilantes formam ligações covalentes, por alquilação, com o ADN através de unidades nucleófilas da molécula de ADN, tais como os grupos fosfato, amino e hidroxilo. Esta alquilação quebra a função do ácido nucleico conduzindo à 39 morte celular. Exemplos de agentes alquilantes incluem mas não se limitam a mostardas de azoto, tais como ciclofosfamida, melfalano e clorambucil; alquilsulfonatos tal como bussulfano; nitrosoureias tal como carmustina; e triazenos tal como dacarbazina.

Os agentes antibióticos quimioterapêuticos são agentes não específicos em relação à fase que se ligam ou intercalam com o ADN. Tipicamente, uma tal acção resulta em complexos de ADN estáveis ou em quebras de cadeia que destroem a função normal dos ácidos nucleicos conduzindo à morte celular. Exemplos de agentes antibióticos antineoplásicos incluem mas não se limitam a actinomicinas, tal como dactinomicina, antraciclinas tal como daunorrubicina e doxorrubicina; e bleomicinas.

Os inibidores de topoisomerase II incluem mas não se limitam a epipodofilotoxinas .

As epipodofilotoxinas são agentes antineoplásicos específicos em relação à fase derivados da planta mandrágora. As epipodofilotoxinas afectam tipicamente células nas fases S e G2 do ciclo celular formando um complexo ternário com a topoisomerase II e o ADN provocando quebras na cadeia de ADN. As quebras na cadeia acumulam-se e segue-se-lhe a morte da célula. Exemplos de epipodofilotoxinas incluem mas não se limitam a etoposido e teniposido.

Os agentes neoplásicos antimetabolito são agentes antineoplásicos específicos em relação à fase que actuam na fase S (síntese de ADN) do ciclo celular para inibir a síntese de ADN ou para inibir a síntese das bases de purina ou pirimidina e, desse modo, limitar a síntese de ADN. 40

Consequentemente, a fase S não prossegue e segue-se-lhe a morte da célula. Exemplos de agentes antineoplásicos antimetabolito incluem mas não se limitam a fluorouracilo, metotrexato, citarabina, mecaptopurina e tioguanina.

As camptotecinas, incluindo, camptotecina e derivados de camptotecina estão disponíveis ou sob desenvolvimento como inibidores da Topoisomerase I. Julga-se que a actividade citotóxica das camptotecinas esteja relacionada com a sua actividade inibidora da Topoisomerase I. Exemplos de camptotecinas incluem mas não se limitam a irinotecano, topotecano e as várias formas ópticas da 7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,ll-etilenodioxi-20-camptotecina. As hormonas e análogos hormonais são compostos úteis para tratar cancros nos quais existe uma relação entre a(s) hormona(s) e o crescimento e/ou ausência de crescimento do cancro. Exemplos de hormonas e análogos hormonais que se julga serem úteis no tratamento de neoplasmas incluem mas não se limitam a adrenocorticosteróides, tais como prednisona e prednisolona, os quais são úteis no tratamento de linfoma maligno e leucemia aguda em crianças; aminoglutetimida e outros inibidores da aromatase, tais como anastrozole, letrazole, vorazole e exemestano úteis no tratamento de carcinoma adrenocortical e de carcinoma da mama dependente de hormonas contendo receptores de estrogénio; progestrinas , tal como acetato de megestrol, útil no tratamento de carcinoma da mama dependente de hormonas e carcinoma do endométrio; estrogénios, androgénios e anti-androgénios, tais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona e 5a-redutases, tais como finasteride e dutasteride, úteis no tratamento de carcinoma da próstata e de hipertrofia prostática benigna; anti-estrogénios, tais como tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno e iodoxifeno úteis no tratamento de 41 carcinoma da mama dependente de hormonas; e a hormona de libertação de gonadotropina (GnRH) e os seus análogos, tais como acetato de goserelina e leuprolida, os quais estimulam a libertação de hormona luteinizante (LH) e/ou de hormona de estimulação de foliculos (FSH) com utilização a curto prazo ou intermitente mas levam à supressão de LH e FSH na utilização a longo prazo indicada para o tratamento de carcinoma da próstata e de carcinoma da mama dependente de hormonas.

Os inibidores da via de transdução de sinal são aqueles inibidores que bloqueiam ou inibem um processo químico que suscita uma modificação intracelular. Como aqui utilizada, esta modificação é a proliferação, sobrevivência, angiogénese ou diferenciação celular. Os inibidores de transdução de sinal úteis na presente invenção incluem inibidores de tirosina-cinases associadas a receptores, tirosinas-cinases não associadas a receptores, bloqueadores do domínio SH2/SH3, serina/treonina-cinases, fosfotidil-inositol-3-cinases, sinalização de mio-inositol e oncogenes Ras. Várias tirosina-cinases de proteínas catalisam a fosforilação de resíduos específicos de tirosilo em várias proteínas envolvidas na regulação do crescimento celular. Tais tirosina-cinases de proteína podem ser classificadas, em termos gerais, como cinases associadas a receptores ou não associadas a receptores.

As tirosina-cinases associadas a receptores são proteínas transmembranares possuindo um domínio extracelular de ligação a ligando, um domínio transmembranar e um domínio tirosina-cinase. As tirosina-cinases associadas a receptores estão envolvidas na regulação do crescimento celular e são, por vezes, designadas 42 receptores do factor de crescimento. Foi demonstrado que a activação inapropriada ou não controlada de muitas destas cinases, í. e. actividade cinase aberrante do receptor do factor de crescimento, por exemplo por sobrexpressão ou mutação, resulta em crescimento celular não controlado. Por conseguinte, a actividade aberrante de tais cinases tem sido associada ao crescimento de tecido maligno. Consequentemente, os inibidores de tais cinases poderiam proporcionar métodos de tratamento de cancro. Os receptores do factor de crescimento incluem, por exemplo, receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR, ErbB2 e ErbB4), receptor do factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR), receptor do factor de crescimento endotelial vascular (VEGFR), tirosina-cinase com domínios homólogos a imunoglobulina e ao factor de crescimento epidérmico (tie-2), receptor do factor de crescimento de insulina-I (IGF-I), factor estimulador de colónias de macrófagos (cfms), BTK, ckit, cmet, receptores do factor de crescimento de fibroblasto (FGF), receptores de Trk (TrkA, TrkB, e TrkC), receptores de efrina (Eph) e o proto-oncogene RET. Estão em desenvolvimento vários inibidores do receptor do factor de crescimentos e incluem antagonistas de ligando, anticorpos, inibidores de tirosina-cinase, oligonucleótidos antimensageiros e aptâmeros. Receptores do factor de crescimento e agentes que inibem a função do receptor do factor de crescimento são descritos, por exemplo, em Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10 (6) :803—818; Shawver et al. DDT Vol 2, No. 2 Fevereiro de 1997; e Lofts, F. J. et al., "Growth Factor Receptors as Targets", New Molecular Targets for Câncer Chemotherapy, Ed. Workman, Paul e Kerr, David, CRC Press 1994, Londres.

As tirosina-cinases que não são cinases do receptor do factor de crescimento são designadas tirosina-cinases não 43 associadas a receptores. As tirosina-cinases não associadas a receptores úteis na presente invenção, as quais são alvos ou alvos potenciais de fármacos antineoplásicos, incluem cSrc, Lck, Fyn, Yes, Jak, cAbl, FAK (cinase de adesão focal), tirosina-cinase de Brutons e Bcr-Abl. Tais cinases não associadas a receptores e os agentes que inibem a função tirosina-cinase não associada a receptores são descritos em Sinh, S. e Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem

Cell Research 8 (5): 465 - 80; e Bolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual Review of Immunology. 15:371-404.

Os bloqueadores do domínio SH2/SH3 são agentes que quebram a ligação ao domínio SH2 ou SH3 numa variedade de enzimas ou proteínas adaptadoras incluindo, subunidade PI3-K p85, cinases da família Src, moléculas adaptadoras (Shc, Crk, Nck, Grb2) e Ras-GAP. Os domínios SH2/SH3 como alvos para fármacos anti-cancro são discutidos em Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32.

Os inibidores de Serina/Treonina-Cinases incluindo os bloqueadores da cascata de MAP-cinase, os quais incluem bloqueadores de Raf-cinases (Rafk), Cinases Reguladas por

Agentes Mitogénicos ou Extracelulares (MEK) e Cinases Reguladas por Agentes Extracelulares (ERK); e os bloqueadores dos membros da família de Proteína-cinase C incluindo os bloqueadores de subtipos de pkc (alfa, beta, gama, épsilon, mu, lambda, iota, zeta), da família de IkB-cinase (IKKa, IKKb), das cinases da família PKB, membros da família da Akt-cinase e cinases do receptor beta do tgf. Tais Serina/Treonina-cinases e os seus inibidores são descritos em Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P,

Samani, A., e Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 44 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) Câncer Surveys. 27:41-64; Philip, P.A., e Harris, A.L. (1995), Câncer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226; e Martinez-Iacaci, L., et al., Int. J. Câncer (2000), 88(1), 44-52.

Os inibidores dos membros da familia de Fosfotidil-Inositol-3-Cinase incluindo os bloqueadores de Pl3-cinase, ATM, DNA-PK, e Ku também são úteis em associação com a presente invenção. Tais cinases são discutidas em Abraham, R. T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S. P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935—8; e Zhong, H. et al., Câncer Res, (2000) 60(6), 1541-1545.

Também são úteis em associação com a presente invenção os inibidores de sinalização de Mio-inositol, tais como os bloqueadores de fosfolipase C e análogos de Mioinositol. Tais inibidores de sinalização são descritos em Powis, G., e Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Câncer Chemotherapy ed., Paul Workman e David Kerr, CRC Press 1994, London.

Outro grupo de inibidores da via de transdução de sinal úteis em associação com a presente invenção são os inibidores do Oncogene Ras. Tais inibidores incluem inibidores de farnesiltransferase, geranil-geranil-transferase e CAAX-proteases bem como oligonucleótidos antimensageiros, ribozimas e imunoterapia. Foi demonstrado que tais inibidores bloqueiam a activação de Ras em células contendo mutantes Ras de tipo selvagem, actuando desse modo como agentes 45 antiproliferação. A inibição do oncogene Ras é discutida em Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9(2)99-102; e BioChim. Biophys. Acta, (1989) 1423(3):19-30.

Como mencionado acima, os anticorpos para a ligação de ligando à cinase de receptor também podem servir como inibidores de transdução de sinal. Este grupo de inibidores da via de transdução de sinal inclui a utilização de anticorpos humanizados contra o domínio extracelular de ligação ao ligando de receptor tirosina-cinases. Por exemplo, o anticorpo específico contra EGFR Imclone C225 (ver Green, M.C. et al., Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Câncer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286); anticorpo contra a ErbB2

Herceptin® (ver Tyrosine Kinase Signaling in Breast Câncer:ErbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast Câncer Res., 2000, 2(3), 176-183); e anticorpo específico contra VEGFR2 2CB (ver

Brekken, R.A. et al., Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a Monoclonal Anti-VEGF Antibody Blocks Tumor Growth in Mice, Câncer Res. (2000) 60, 5117-5124).

Os inibidores da angiogénese da cinase de receptor também podem encontrar aplicação na presente invenção. Os inibidores VEGFR e TIE2 relacionados com angiogénese são discutidos acima relativamente aos inibidores de transdução de sinal (ambos os receptores são receptores tirosina-cinases). Podem ser utilizados outros inibidores em associação com os compostos da presente invenção. Por exemplo, anticorpos anti-VEGF que não reconhecem o VEGFR (o receptor tirosina-cinase), mas que se ligam ao ligando; inibidores de molécula pequena de integrina (alfav beta3) que inibirão a angiogénese; endostatina e 46 angiostatina (não-RTK) também podem demonstrar serem úteis em associação com inibidores de PLK.

Os agentes utilizados em regimes imunoterapêuticos também podem ser úteis em associação com os compostos da invenção. Os agentes utilizados em regimes pró-apoptóticos (e. g., oligonucleótidos antimensageiros bcl-2) também podem ser utilizados na associação da presente invenção. Os membros da família Bcl-2 de proteínas bloqueiam a apoptose. A regulação positiva de bcl-2 tem sido, por isso, associada a quimiorresistência. Estudos demonstraram que o factor de crescimento epidérmico (EGF) estimula membros antiapoptóticos da familia bcl-2 (í. e., mcl-1). Por isso, as estratégias concebidas para regular negativamente a expressão de bcl-2 em tumores apresentaram vantagens clínicas e encontram-se presentemente em Ensaios de Fase II/III, nomeadamente o oligonucleótido antimensageiro de bcl-2 G3139 da Genta.

Tais estratégias pró-apoptóticas utilizando a estratégia de oligonucleótido antimensageiro para a bcl-2 são discutidas em Waters JS et al., J. Clin. Oncol. 18:1812-1823 (2000); e Kitada S et al., Antisense Res. Dev. 4:71-79 (1994).

Os inibidores de sinalização do ciclo celular inibem moléculas envolvidas no controle do ciclo celular. As cinases dependentes de ciclina (CDK) e as suas ciclinas de interacção controlam a progressão através do ciclo celular eucariota. A activação e inactivação coordenada de diferentes complexos de ciclina/CDK são necessárias para a progressão normal através do ciclo celular. Estão em desenvolvimento vários inibidores da sinalização do ciclo celular. Por exemplo, exemplos de cinases dependentes de ciclina, incluindo CDK2, CDK4 e CDK6, e 47 inibidores para as mesmas são descritos em, por exemplo, Rosania, et al., Exp. Opin. Ther. Patents 10(2):215-230 (2000).

Numa forma de realização, os métodos da presente invenção compreendem administrar ao animal um composto da invenção em associação com um inibidor da via de transdução de sinal, em particular gefitinib (IRESSA®).

Os métodos e utilizações que empregam estas associações podem compreender a administração do composto da invenção e de outro agente quimioterapêutico/antineoplásico sequencialmente por qualquer ordem ou simultaneamente em composições farmacêuticas separadas ou associadas. Quando combinados na mesma formulação, entender-se-á que os dois compostos têm de ser estáveis e compatíveis um com o outro e com os outros componentes da formulação e podem ser formulados para administração. Quando formulados separadamente, estes podem ser proporcionados em qualquer formulação conveniente, de um modo como é conhecido na técnica para tais compostos.

Quando um composto da invenção é utilizado em associação com um agente quimioterapêutico, a dose de cada composto pode diferir daquela quando o composto é utilizado sozinho. As doses apropriadas serão prontamente avaliadas pelos especialistas na técnica. A dose apropriada do(s) composto(s) da invenção e do(s) outro(s) agente(s) terapeuticamente activo(s) e as sincronizações relativas de administração serão seleccionadas para se conseguir o efeito terapêutico combinado desejado e estão dentro da perícia e discrição do médico assistente.

Os compostos da invenção podem ser convenientemente preparados pelos métodos descritos nos exemplos que se seguem. 48 A presente invenção também proporciona compostos da invenção marcados radioactivamente e compostos da invenção biotinilados e versões destes ligados a suporte sólido. Os compostos da invenção marcados radioactivamente e os compostos da invenção biotinilados podem ser preparados utilizando técnicas convencionais. Por exemplo, os compostos da invenção marcados radioactivamente podem ser preparados fazendo reagir o composto da invenção com tritio gasoso na presença de um catalisador apropriado para produzir compostos da invenção marcados radioactivamente. Numa forma de realização, os compostos são tritiados.

Os compostos da invenção marcados radioactivamente e os compostos da invenção biotinilados são úteis em ensaios para a identificação de compostos que inibem a PLK, para a identificação de compostos para o tratamento de um estado mediado pela PLK, para o tratamento de neoplasmas susceptíveis, para o tratamento de estados caracterizados por proliferação inapropriada, para a inibição de proliferação de uma célula e para a inibição de mitose numa célula. Por conseguinte, a presente invenção proporciona um método de ensaio para identificar tais compostos, método esse que compreende o passo de ligar especificamente o composto da invenção marcado radioactivamente ou o composto da invenção biotinilado à proteina alvo ou aos homogenatos celulares. Mais especificamente, os métodos de ensaio adequados incluirão ensaios de ligação por competição. Os compostos da invenção marcados radioactivamente e os compostos da invenção biotinilados, e as suas versões ligadas a suporte sólido, podem ser utilizados em ensaios de acordo com os métodos convencionais na técnica. 49

Os exemplos seguintes destinam-se apenas a ilustração e não pretendem de modo algum restringir o âmbito da invenção, sendo a invenção definida pelas reivindicações que se seguem.

As abreviaturas seguintes como utilizadas nos exemplos, têm os significados indicados. g grama mg miligrama mol mole(s) mmol milimole(s) N normal L litro(s) mL mililitro (s) pL microlitro (s) h hora(s) min minuto(s) °C graus Celsius HC1 ácido clorídrico DCM diclorometano MeOH metanol AcOEt acetato de etilo MgS04 sulfato de magnésio NaHC03 bicarbonato de sódio K2C03 carbonato de potássio Na2S04 sulfato de sódio n2 azoto h2 hidrogénio XANTPHOS (4,5-Bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno) é um catalisador comercialmente disponível de Aldrich. 50

Os reagentes são comercialmente disponíveis ou são preparados de acordo com processos na literatura. Nas estruturas seguintes, "Me" refere-se ao grupo -CH3.

Exemplo intermediário 1: 5-Amino-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

Passo A - 5-Nitro-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]-etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

Uma pasta de trifenilfosfina suportada em polímero (62,36 g, 2,21 mmol/g, 137,8 mmol) em DCM (1,0 L), foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. A mistura foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado 3-hidroxi-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metilo (20,00 g, 98:44 mmol), o qual pode ser preparado de um modo análogo ao processo na literatura (Barker, J.M.; Huddleston, P.R.; Wood, M.L.; Burkitt, S.A. Journal of Chemical Research (Miniprint) 2001, 1001-1022), seguido de (IS)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etanol (26,20 g, 137,8 mmol) e azodicarboxilato de di-terc-butilo (31,73 g, 51 137,8 mmol). A mistura reaccional foi agitada, à temperatura ambiente, durante 21,25 h e, em seguida, foi filtrada através de um funil poroso e concentrada. 0 resíduo foi tratado com HC1 4 N em 1,4-dioxano (300 mL) e agitado, à temperatura ambiente, durante 3 h. A mistura foi, depois, desactivada pela adição de hidróxido de sódio 3 N (300 mL) e NaHC03 aquoso saturado (200 mL) . A mistura foi extraída com DCM (3 χ 250 mL) . As fracções orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas sobre sílica gel. A purificação por cromatografia em coluna (0 a 25% AcOEtrhexanos) proporcionou 36,08 g (98%) do composto em epígrafe, como um óleo amarelo. RMN de XH (300 MHz, CDC13) : δ 7,82 (d, 1H, J= 7,8 Hz), 7,68 (d, 1H, J= 7,8 Hz), 7,59 (t, 1H, J= 7,4 Hz), 7,46 (s, 1H) , 7,42 (t, 1H, J= 7,6 Hz), 5,77 (q, 1H, J= 6,1 Hz), 3,94 (s, 3H), 1,74 (d, 3H, J= 6,1 Hz).

Passo B - 5-Amino-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]-etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

A um balão munido com uma sonda de temperatura, um agitador mecânico suspenso, um condensador de refluxo e um funil de carga foi adicionado ferro em pó (26,84 g, 480,6 mmol) e ácido acético (130 mL). A pasta de ferro/ácido acético foi agitada mecanicamente e aquecida até uma temperatura interna de 50 °C. Ao funil de carga foi adicionada uma solução de 5-nitro-3- 52 ({(1R)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (36,08 g, 96,13 mmol) em ácido acético (160 mL) . A solução no funil de carga foi, depois, adicionada, gota a gota, à pasta de ferro/ácido acético a uma velocidade de modo que a temperatura interna foi mantida a <60 °C (2,5 h de tempo total de adição). A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com DCM (500 mL) e, em seguida, desactivada pela adição de hidróxido de sódio 6 N (750 mL) e NaHC03 aquoso saturado (200 mL) . Toda a mistura foi, depois, filtrada através de um tampão de Celite para remover material insolúvel, lavando a Celite com mais DCM (250 mL) . As fracções aquosa e orgânica foram separadas. A fracção aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 400 mL) . As fracções orgânicas foram reunidas, secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para proporcionar 30, 66 g (92%) do composto em epígrafe, como um sólido laranja. RMN de XH (300 MHz, CDC13) : δ 7,89 (d, 1H, J= 7,7 Hz), 7,62 (d, 1H, J= 7,7 Hz), 7,56 (t, 1H, J= 7,7 Hz), 7,36 (t, 1H, J = 7,7 Hz), 5,72 (s, 1H), 5,65 (q, 1H, J = 6,3 Hz), 4,26 (s 1, 2H) , 3,80 (s, 3H), 1,66 (d, 3H, J= 6,3 Hz); MS (APCI): 368, 00 [M+Na]+. 53 intermediário 2j_ clorofenil)etil]-oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo

Exemplo 5-Amino-3-{[(IR)-1-(2

Passo A - 3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-nitro-2- tiofenocarboxilato de metilo

3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metilo foi preparado de 3-hidroxi-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metilo e (IS)-1-(2-clorofenil)etanol por um processo análogo ao Exemplo intermediário 1, Passo A. RMN de XH (400 MHz, DMSO-cb) : δ 7,96 (s, 1H), 7,65 (dd, 1H, J = ^ 1,7 7,8 Hz), 7,4 7 (dd, 1H , J = 1,5, 7, 7 Hz), 7,40 (dt, 1H, J = : 1,3 7,5 Hz), 7, 34 (dt, 1H, J = = 1, 9, 7, 5 Hz) , 5, 98 (q, 1H J = 6,0 : Hz) , 3,85 (s, 3H), 1,59 (d, 3H, J = 6,2 Hz) . 54

Passo B 5-Amino-3-{[(IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2 tiofenocarboxilato de metilo

5-Amino-3-{[(1R)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo foi preparado de 3 — { [ (li?)—1— (2 — clorofenil)etil]oxi}-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metilo por um processo análogo ao Exemplo intermediário 1, Passo B. RMN de (400 MHz, DMSO-d6) : δ 7,5' 4 (dd, 1H, J = 1,8, 7,9 Hz) , 7, 45 (dd, 1H, J = 1,4, 7,7 Hz), 7, 37 (dt, 1H, J = 1,4, 7,7 Hz) , 7,31 (dt, 1H , J = 1,8, 7, 6 Hz) , 6,76 (s 1, 2H), 5,57 (q, 1H, J = 6,2 Hz), 5,49 (s , 1H), 3, 63 (s, 3H) , 1, 51 (d, 3H, J = 6,4 Hz) ; MS (ESI) : 334,03 [M+Na]+. 55

Exemplo 1: 5—{6 —[(Metilsulfonil)metil]-lfl-benzimidazol-1- il} —3 — ({ (1-R) —1 — [2 — (trif luorometil) fenil] etil}oxi) -2-tiofenocarboxamida

Exemplo 1: 5—{6 —[(Metilsulfonil)metil]-lfl-benzimidazol-1-

Via 1:

Passo A - 5- (Hídroximetil)-2-nitrofenol NO„

OH A uma mistura de ácido 3-hidroxi-4-nitrobenzóico (5,0 g, 27,3 mmol) em 1,2-dicloroetano (100 mL), foi adicionado borato de trimetilo (4,9 mL), 43,7 mmol), seguido de eterato de dietilo trifluoreto de boro (5,5 mL, 43,7 mmol). Foi, depois, lentamente adicionado, gota a gota, complexo de borano-piridina (4,1 mL, 41,0 mmol). A reacção foi agitada, 4 h, à temperatura ambiente, em seguida, arrefecida até 0 °C e desactivada com MeOH (10 mL) . A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo refeito em tolueno (200 mL), em seguida, extraído com hidróxido de sódio aquoso 1 N (3 χ 100 mL). As camadas aquosas reunidas foram ajustadas até pH 1,0 pela adição de HC1 12 N, em seguida, extraídas com AcOEt (3 χ 250 mL) . As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgS04 e concentradas sob vácuo, para dar 4,55 g (98%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo 56 claro. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d&) : δ 10,87 (s, 1H), 7,85 (d, 1H, J= 8,6 Hz), 7,08 (s, 1H), 6,88 (dd, 1H, J= 1,19, 8,51 Hz), 5,43 (s, 1H), 3,33 (s, 2H).

Passo B - Pivalato de 3-hidroxi-4-nitrobenzilo NOa

>OH υ T~CH. ch3

Uma mistura de 5-(hidroximetil)-2-nitrofenol (11,35 g, 67,15 mmol) e 3-(2,2-dimetilpropanoil)-1,3-tiazolidina-2-tiona (15,0 g, 73, 89 mmol), a qual pode ser preparada de um modo

análogo ao processo na literatura (Yamada, S. Tetrahedron Letters 1992, 33, 2171-2174), foi agitada em tolueno (670 mL), a 100 °C, durante 40 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente. A reacção foi concentrada sob vácuo até um volume de aproximadamente 200 mL e a pasta resultante foi filtrada através de papel de filtro, lavando o sólido com tolueno frio. O filtrado foi, depois, concentrado sob vácuo e purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de 0 a 20% AcOEt/hexanos para dar 11,09 g (65%) do composto em epígrafe, como um óleo amarelo transparente. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) : δ 11,05 (s, 1H) , 7,87 (d, 1H, J= 8,42 Hz), 7,06 (s, 1H), 6,90 (dd, 1H, J= 1, 46, 8, 42 Hz), 5,09 (s, 2H), 1,18 (s, 9H) . 57

Passo C - Pivalato de 4-nitro-3-{[(trifluorometil)sulfo-nil]oxi}benzilo

A uma solução, mantida sob agitação, arrefecida (0 °C) de pivalato de 3-hidroxi-4-nitrobenzilo (11,11 g, 43,9 mmol) e N-feniltrifluorometanossulfonimida (16,51 g, 46,2 mmol) em DCM (220 mL), foi adicionada lentamente N,N-diisopropiletilamina (15,5 mL, 88,9 mmol). A reacção foi agitada, durante 45 min a 0 °C, em seguida, 45 min, à temperatura ambiente. A reacção foi, depois, concentrada sob vácuo e purificada por cromatografia sobre silica gel eluindo com um gradiente de 5 até 20% AcOEt/hexanos para dar 16,87 g (99%) do composto em epigrafe, como um sólido esbranquiçado. RMN de 1h (400 MHz, DMSO-dfj) : δ 8,36 (d, 1H, J= 8,42 Hz), 7, 75-7, 69 (m, 2H) , 5,27 (s, 2H) , 1,19 (S, 9H). 58

Passo D - 5-[(5-{[(2, 2-Dimetilpropanoil)oxi]metil}-2- nitrofenil)amino]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]e-tiljoxi) tiofeno-2-carboxilato de metilo

Uma mistura de pivalato de 4-nitro-3- {[(trifluorometil)sulfonil]oxi}benzilo (1,0 g, 2,60 mmol), 5-amino-3-({(IR)—1—[2—(trifluorometil)fenil]etil}-oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (1,34 g, 3,88 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (150 mg, 0,13 mmol), trifenilfosfina (68 mg, 0,26 mmol) e K2C03 (900 mg, 6,5 mmol), foi agitada em tolueno (5,2 mL), a 100 °C, durante 2 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada através de Celite, lavando com AcOEt e DCM. O filtrado foi concentrado sob vácuo e purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de 5 a 25% AcOEt/hexano para dar 1,26 g (84%) do composto em epígrafe, como um óleo vermelho. RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 9, 75 (s, 1H), 8,09 (d, 1H, J = 8,6 hz; >, 7,89 (d, 1H, J = 7, 87 Hz), 7,69 '-7, 78 (m, 2H), 7, 52 (t, 1H, j = 7,59 Hz), 7,34 (s, 1H), 7,01 (dd, 1H, J = 1,46, 8,60 Hz) r 6,62 (s, 1H), 5,70- -5,75 (m, 1H), 5, 07 (s, 2H), 3, 74 (s, 3H), 1, ,58 (d, 3H, J = 6,22 Hz), 1,13 (s, 9H) . 59

Passo E - 5-[ (2-Amino-5-{[ (2,2-dimetilpropanoil)oxiJmetil} fenil)amino]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)tio-feno-2 carboxilato de metilo

Uma mistura de 5-[(5-{[(2,2-dimetilpropanoil)oxi]metil}-2-nitrofenil)amino]-3-({(IR)—1—[2 — (trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (2,42 g, 4,17 mmol) e platina (sulfurada, 5% em peso sobre carvão) (811 mg, 0,21 mmol) em AcOEt (30 mL), foi adicionada a um balão reaccional de alta pressão. A reacção foi purgada com vácuo e N2 gasoso, depois foi aplicado H2 gasoso a 50 psi durante 1 h. A mistura reaccional foi filtrada através de Celite, lavando com AcOEt. O filtrado foi concentrado sob vácuo, para dar 2,27 g (99%) do composto em epígrafe, como um sólido castanho-amarelado. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,62 (s, 1H), 7,84 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,72 (dd, 2H, J = 7, 60, 13, 09 Hz), 7,50 (t, 1H, J = 7,60 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 1,46 Hz), 6,88 (dd, 1H, J = 1, 74, 8,15), 6,68 (d, 1H, J = 8,24 Hz), 5,83 (s, 1H) , 5,59-5, 65 (m, 1H), 4,97 (s, 2H), 4,85 (s, 2H), 3,64 (s, 3H) , 1,55 (d, 3H, J = 6,23 Hz), 1,11 (s, 9H); MS (ESI): 551 [M+H]+. 60

Passo F - 5- (6-{[(2, 2-Dimetilpropanoil)oxijmetil}-lH- benzimidazol-l-il)-3-({(IR)-l-[2-(trifluorometil)fenil]e-til}oxí)tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma mistura de 5-[(2-amino-5-{[(2,2-dimetilpropanoil)oxi] metil}fenil)amino]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}-oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (2,27 g, 4,13 mmol) em ortoformato de trietilo (10 mL, 60,2 mmol) e DCM (3 mL), foi adicionado p-toluenossulfonato de piridinio (100 mg, 0,4 mmol). A reacção foi agitada, a 40 °C, durante 1 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente. Toda a mistura reaccional foi carregada sobre silica gel e purificada por cromatografia sobre silica gel eluindo com um gradiente de 0 a 50% AcOEt/hexanos para dar 2,0 g (86%) do composto em epigrafe, como um sólido castanho-amarelado claro. RMN de :Η (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8, 65 (s, 1H), 7 , 99 (d, 1H, J = = 7, 87 Hz) , 7,75- 7, 80 (m, 2H), 7, 72 (d r 1H, J = 7, 87 Hz), 7, 63 (s, 1H), 7 ,53 (t, 1H, J = 7,60 Hz) , 7, 40 (S, 1H), 7, 35 (d, 1H, J = 8,42 Hz), 5,96 (q, 1H , J = 6,10 Hz ), 5,21 (s, 2H), 3, 83 (S, 3H), 1,65 (d, 3H, J = 6,23 Hz) , 1, 16 (s, 9H); MS (ESI): 561 [M+H]+. 61

Passo G - 5-[6-(Hidroximetil)-lH-benzimidazol-l-il]-3- ({(IR)-1-[2- (trífluorometil)fenil]etil}oxi) tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, de 5—(6—{[(2,2— dimetilpropanoil)oxi]metil}-lH-benzimidazol-l-il)-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (5,21 g, de um lote diferente utilizando um processo análogo ao Exemplo 1, Via 1, Passo F, 9,30 mmol) em MeOH (24 mL), foi adicionado hidróxido de sódio 0,5 M em MeOH (24,0 mL, 12 mmol). A reacção foi agitada, à temperatura ambiente, durante 72 h, em seguida, desactivada com ácido acético (2 mL) . A mistura foi diluída com DCM (350 mL) e solução aquosa semi-saturada de cloreto de sódio (150 mL) . A camada aquosa foi extraída com DCM (250 mL) . Os orgânicos reunidos foram secos sobre MgS04 e concentrados sob vácuo, para dar 4,40 g (99%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo claro. RMN de *H (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,58 (s, 1H), 7,99 (d, 1H, J= 7,87 Hz), 7,69-7,81 (m, 3H), 7,51-7,58 (m, 2H) , 7,38 (s, 1H), 7,30 (d, 1H, J = 8,42), 5,96 (q, 1H, J = 6,10 Hz), 5,30 (t, 1H, J = 5,77 Hz) 4,62 (d, 2H, J = 5,86 Hz), 3,83 (s, 3H) , 1,65 (d, 3H, J = 6,23 Hz); MS (ESI): 477 [M+H]+. 62

Passo Η - 5-[6- (Clorometil)-IH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, de 5-[6-(hidroximetil)-IH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etiljoxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (1,47 g, 3,08 mmol) e trifenilfosfina (1,05 g, 4,01 mmol) em DCM (30 mL), foi adicionada N-clorossuccinimida (0,53 g, 4,01 mmol). A reacção foi, depois, aquecida até refluxo e agitada, durante 20 minutos, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente. A reacção foi diluída com DCM (400 mL) e solução aquosa semi-saturada de cloreto de sódio (150 mL). A camada aquosa foi, depois, extraída com DCM. As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre Na2S04, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de 10 a 60% AcOEt/hexanos para dar 1,4 g (92%) do composto em epígrafe, como um sólido branco . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de ) : δ 8,65 (s 1H), 7,99 (d, 1H, J = 7, 87 Hz), 7,72-7,81 (m, 3H), 7, 69 (s, 1H) 7,54 (t, 1H, J = 7,69 Hz) , 7,43 (d, 1H, J = 8,42), 7, 38 (s, 1H) 5,97 (q, 1H, J = 6,10 Hz) , 4,91 (s, 2H), 3,84 (s, 3H) , 1,66 (d 3H, J = 6,23 Hz); MS ( ESI) : 495 [M+H] +. 63

Passo I - 5-{6-[(Metiltio)metil]-lH-benzimidazol-l-il}-3- ({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]et 11}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma mistura, mantida sob agitação, de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2- (trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (200 mg, 0,40 mmol) em N,N-dimetilformamida (2,5 mL), foi adicionado tiometóxido de sódio (37 mg, 0,52 mmol). A reacção foi agitada 30 min, em seguida, diluída com AcOEt, lavada com água (5 x), solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04, concentrada sob vácuo e purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de 0 a 60% AcOEt/hexanos para dar 147 mg (72%) do composto em epígrafe, como um sólido branco. MS (ESI): 507 [M+H]+. 64

Passo J - 5-{6-[(Metiltio)metil]-lH-benzimidazol-l-il}-3- ({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxamida

Uma mistura de 5 — {6 —[(metiltio)metil]-lH-benzimidazol-1-il}—3—({(IR)—1—[2 —(trifluorometil)fenil]etiljoxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (144,0 mg, 0,28 mmol) e amónia 7 N em MeOH (18 mL, 126,0 mmol), foi adicionada a um balão reaccional de alta pressão em vidro. O balão foi selado, em seguida, aquecido até 80 °C, durante aprox. 16 h. O balão foi arrefecido até à temperatura ambiente, aberto e a mistura reaccional concentrada sob vácuo, em seguida, purificada por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a 3% de MeOH/DCM com 1% de hidróxido de amónio para dar 130 mg (93%) do composto em epígrafe, como um sólido branco dourado. RMN de TH (400 MHz, DMSO-cfe) : δ 8,49 (s, 1H), 7,93 (d, 1H, J= 7,68 Hz), 7,85 (s 1, 1H), 7, 80-7, 75 (m, 2H) , 7,69 (d, 1H, J= 8,23 Hz), 7,56 (t, 1H, J= 7,68 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,29 (d, 1H, J= 8,42 Hz), 7,15 (s 1, 1H), 7,08 (S, 1H), 5,94 (m, 1H) , 3,79 (s, 2H) , 1,93 (s, 3H) , 1,75 (d, 3H, J= 6,22 Hz); MS (ESI): 492 [M+H]+. 65

Passo K - 5-{6-[ (Metilsulfonil)metil]-lH-benzimidazol-1- il}-3-({(IR)-l-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi) tiofeno-2-carboxamida

A uma solução, mantida sob agitação, arrefecida (-10 °C) de 5—{6 —[(metiltio)metil]-lH-benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxamida (76 mg, 0,15 mmol) em DCM (3,0 mL), foi adicionado ácido m-cloroperoxibenzóico (70 mg, 0,31 mmol). A reacção foi agitada 30 min, aquecida até à temperatura ambiente e agitada 15 min, em seguida, foi concentrada sob vácuo. 0 resíduo foi diluído com clorofórmio e lavado com NaHCCb aquoso saturado, água, seco sobre Na2S04, concentrado sob vácuo e purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de 0 a 5% MeOH/DCM, com 1% de hidróxido de amónio, para dar 78 mg (96%) do composto em epígrafe, como um sólido branco. RMN de (400 MHz, DMSO-dg) : δ 8, ,57 (s, 1H), 7,95 (d, 1H, J = 7 ,87 Hz), 7, 85 (s 1, 1H), 7, 80 -7,73 (m, 3H) , 7,69 (s, 1H), 7, 55 (t, 1H, J = 7,69 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 8, 42 Hz), 7,19 (S, 1H), 7,12 (s 1, 1H), 5, 95- -5,89 (m, 1H), 4, 61-4 ,58 (m, 2H), 2, 89 (s, 3H), 1, 75 (d, 3H, J = 6,04 Hz); MS (ESI): 524 [M+H] + 66

Via 2:

Passo A - 5-{6-[(Metilsulfonil)metil]-lH-benzimidazol-1- il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]et 11}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

Uma mistura de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (4,53 g, de um lote diferente utilizando um processo análogo ao Exemplo 1, Via 1, Passo H, 9:17 mmol), sal de sódio do ácido metanossulfónico (2,81 g, 27,5 mmol) e etanol (40,0 mL), foi adicionada a um balão reaccional de alta pressão em vidro. O balão foi selado, em seguida, aquecido até 85 °C, durante, aproximadamente, 16 h. O balão foi arrefecido até à temperatura ambiente, aberto e a mistura reaccional concentrada sob vácuo, em seguida, purificada por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 5 a 35% de AcOEt/hexano para dar 4,54 g (92%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo claro. RMN de (400 MHz, DMSO-cW : δ 8,67 (s, 1H), 8,01 (d, 1H, J= 7,87 Hz), 7,82-7,70 (m, 4H), 7,53 (t, 1H, J= 7,69 Hz), 7,45 (s, 1H), 7,40 (d, 1H, J= 8,42 Hz), 5,95 (m, 1H), 4,63 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 1,65 (d, 3H, J= 6,204 Hz); MS (ESI): 539 [M+H]+. 67

Passo B - 5-{6-[(Metilsulfonil)metil]-lH-benzimidazol-1- il}-3-({(IR)-l-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)tiofeno-2-carboxamidâ

Uma mistura of 5-{6-[(metilsulfonil)metil]-lH-benzimidazol-1—il}—3—({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (4,53 g, 8,42 mmol) e amónia 7 N em MeOH (250, 0 mL, 1,75 mol), foi adicionado a um balão reaccional de alta pressão em vidro. O balão foi selado, em seguida, aquecido até 85 °C, durante aprox. 36 h. O balão foi arrefecido até à temperatura ambiente, aberto e a mistura reaccional combinada com um segundo lote de 5-{6-[(metilsulfonil)metil]-lH-benzimidazol-l-il}-3-({(IR)—1—[2— (trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (4,11 g, 7,63 mmol), o qual também tinha sido tratado com amónia 7 N em MeOH (200, 0 mL, 1,40 mol) num balão reaccional de alta pressão em vidro a 85 °C, durante, aproximadamente, 36 h, em seguida, arrefecido até à temperatura ambiente e aberto. As misturas reaccionais reunidas foram concentradas sob vácuo, em seguida, purificadas por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a 5% de MeOH/DCM, com 1% de hidróxido de amónio, para dar 7,47 g (89%) do composto em epígrafe, como um sólido esbranquiçado. MS (ESI): 524 [M+H]+. 68 3-{ [ (l-R)-l-(2-Clorofenil)etil] oxi } -5 - { 6

Exemplo 2j_ [ (metilsulfonil)metil] -lfí-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxamida

Passo A - 3-{[ (IR)-1- (2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6 [(metiltio)metil]-lH-benzimidazol-1-11}tiofeno-2-carboxilato de metilo

0 composto em epígrafe foi preparado de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-{[(IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxijtiofeno-2-carboxilato de metilo por um processo análogo ao Exemplo í, Via 1, Passo I. MS (ESI): 473 [M+H]+. 69

Passo B - 3-{[ (IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6- [ (metiltio)metil]-lH-benzimidazol-1-il}tiofeno-2-carboxamida

0 composto em epígrafe foi preparado de 3—{[(IR)—1—(2— clorofenil)etil]oxi}—5—{6—[(metiltio)metil]-lH-benzimidazol-1-il}tiofeno-2-carboxilato de metilo por um processo análogo ao

Exemplo 1 , Via 1, Passo J . RMN de XH (400 MH z, DMSO-d6 ) : δ 8,53 (s, 1H), 7, 83 (s, 1H) r 7, 71- 7,66 (m, 2H),7,49 (d, 1H, J = 7,87 : Hz) , 7,45-7,35 ( m, 3H) , 7,29 (d, 1H, J = 8, 42 Hz), 7,16 -7,11 (m, 2H), 6,01-5 ,95 (m, 1H), 3,82 (s, 2H), 1, 94 (s, 3H) , 1, 73 (d, 3H, J = 6,41 Hz) ; MS (ESI): 458 [M+H]+.

Passo C - 3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxl}-5-{6- [(metilsulfonil)metil]-lH-benzimidazol-1-il}-2-tiofenocarboxamida

0 composto em epígrafe foi preparado de 3 — { [(IR)—1—(2 — clorofenil)etil]oxi}—5—{6—[(metiltio)metil]-lH-benzimidazol-1- 70 il}tiofeno-2-carboxamida por um processo análogo ao Exemplo 1, via 1, Passo K. RMN de XH (. 400 MHz, DMSO-de) : δ 8, 61 (s, 1H), 7, 84 (s, 1H), 7, 79 (d, 1H, J = 8,24 Hz), 7,73 (s, 1H), 7, 70- -7, 67 (m, 1H), 7,49-7, 47 (m, 1H), 7 , 44-7, 33 (m, , 3H), 7, 26 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 5,97-5 r 93 (m, 1H), 4,64-4,60 (m, 2H), 2, 90 (s, 3H), 1, 73 (d, 3H, J = 6, 41 Hz); MS (ESI) : 490 [M+H]+.

Exemplo intermediário 3: 5-(6-Bromo-lff-benzimidazol-l-il)- 3-hidroxi-2-tiofenocarboxilato de metilo

Passo A - 5- (6-Bromo-lH-benzimidazol-l-il) -3-{[(1,1- dimetiletil) (dimetil)silil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo

A uma mistura de 5-bromo-lH-benzimidazole (43,78 g, 222.0 mmol) em clorofórmio (800 mL), foi adicionado N-metilimidazole (44,5 mL, 560,0 mmol), seguido de 2-cloro-3-oxo-2,3-di-hidro-2-tiofenocarboxilato de metilo (44,8 g, 233.0 mmol). A reacção foi agitada 20 h, à temperatura ambiente, em seguida, foi adicionado N-metilimidazole (18,0 mL, 226.0 mmol), seguido de cloreto de t-butildimetilsililo (36,8 g, 245.0 mmol). A reacção foi agitada 1 h, em seguida, desactivada 71 com MeOH e vertida para DCM e água. A camada aquosa foi extraída com DCM (3x). Os orgânicos reunidos foram, depois, secos sobre Na2S04, concentrados e cromatografados sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 50 a 75% de 25% AcOEt em hexano/hexano para dar 25,18 g (24%) do composto em epígrafe. MS (ESI): 467 [M+H]+.

Passo B - 5- (6-Bromo-lH-benzimidazol-l-il)-3-hidroxi-2- tiofenocarboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(6-bromo-lií-benzimidazol-l-il)-3-{[(1,1-dimetiletil)(dimetil)silil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo (25,18 g, 53,9 mmol) em THF (540,0 mL), foi adicionado fluoreto de tetrabutilamónio 1,0 M em THF (60,0 mL, 60,0 mmol). A reacção foi agitada 1,5 h, em seguida, foi adicionado NH4C1 aquoso saturado (200 mL) . A pasta resultante foi agitada 15 min, em seguida, diluída com água (750 mL) e AcOEt (1,0 L) . A camada aquosa foi separada e o seu pH ajustado até 3,0 pela adição de HC1 aquoso 1 Μ. A camada aquosa foi, depois, extraída com AcOEt (3x) . As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com HC1 aquoso 0,1 M, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MeS04 e concentradas sob vácuo, para dar 19,4 g (100%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo claro. MS (ESI): 353 [M+H]+. 72

Exemplo 3: 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il)metil]-1H- benzimidazol-l-il}-3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxamida

F

Via 1:

Passo A - 3 - 5-(6-Bromo-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxilato de meti lo

Uma pasta de trifenilfosfina suportada em polímero (53,0 g, 2,04 mmol/g, 108 mmol), (IS)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etanol (15,4 g, 81,0 mmol) e 5-(6-bromo-lfí-benzimidazol-l-il) -3-hidroxitiofeno-2-carboxilato de metilo (Exemplo intermediário 3) (19,0 g, 53,9 mmol) em DCM (750 mL), foi agitada, à temperatura ambiente, durante 10 min. A pasta foi, depois, tratada com azodicarboxilato de di-terc-butilo (24,8 g, 108 mmol). A mistura reaccional foi agitada, durante 3 h, em seguida, vertida através de papel de filtro, lavando os sólidos resínicos com DCM e MeOH. O filtrado foi concentrado sob vácuo e purificado por 73 cromatografia sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 5 até 50% de AcOEt/hexano para dar 23,8 g (84%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo claro. RMN de 1E (400 MHz, DMSO- d6) : CO IO 63 (s, 1H), 7,97 (d, 1H, J = 7 ,87 Hz), 1 O 00 r~~~ 7, 71 (m, 3H), 7, 65 (d, 1H, J = 1,65 Hz), 7,57-7,48 (m, 2H), 7,35 (s, 1H), 5, 99 (q, 1H, J = 5,98 Hz), 3,83 (s, 3H) , 1, 65 (d, 3H, J= 6,04 Hz); MS (ESI): 525 [M+H]+.

Passo B - 3-{(1R)-1-[2-(Trifluorometil)fenil]etoxi}-5-(6- vinil-lH-benzimidazol-l-il)tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma mistura de 3-metil-5-(6-bromo-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxilato (23,8 g, 45,4 mmol), viniltrifluoroborato de potássio (7,25 g, 54,5 mmol) e trietilamina ( 6,3 mL, 45,4 mmol), agitada, à temperatura ambiente, em n-propanol (230 mL), foi adicionado complexo de [1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno]- dicloropaládio(II) e diclorometano (750 mg, 0,91 mmol). A mistura foi, depois, aquecida até refluxo e agitada, durante 3 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente, vertida para água e extraída com AcOEt (3x) . As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgSCg, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 74 10 a 40% de AcOEt/hexano para dar 17,06 g (80%) do composto em epígrafe, como um sólido tipo espuma amarelo. RMN de *H (400 MHz, DMSO-df) : δ 8,59 (s, 1H) , 7,98 (d, 1H, J= 7,87 Hz), 7,80-7,71 (m, 3H), 7, 59 (s, 1H), 7,56- 7,52 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 6, 85 (dd, 1H, J = 10,98 e 17, 75 Hz ), 6, 00 (q, 1H, J = 6,10 Hz), 5,86 (d, 1H, J = 17,56 Hz) , 5, ,31 (d, 1H, . J = 10,98 Hz), 3,83 (s, 3H), 1, 65 (d, 3H, J = 6, 04 Hz) ; MS (ESI) : 473 [M+H]+.

Passo C - 5-[6-(1, 2-Di-hidroxietil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-{(IR) -1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}-5-(6-vinil-lH-benzimidazol-l-il)tiofeno-2-carboxilato de metilo (17,06 g, 36,1 mmol) em 360 mL e acetona/água (3:1), foi adicionado N-óxido de 4-metilmorfolina (5,1 g, 43,4 mmol), seguido de solução a 2,5% em peso de tetróxido de ósmio em 2-metil-2-propanol (10,0 mL, 0,8 mmol). A reacção foi agitada, à temperatura ambiente, durante 18 h, em seguida, desactivada com sulfito de sódio aquoso (saturado). A mistura foi extraída com AcOEt (3χ) . As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgS04, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia sobre sílica gel, eluindo 75 com um gradiente de 1 a 8% de MeOH/DCM com 1% de hidróxido de amónio para dar 16,72 g (92%) do composto em epígrafe, como um sólido tipo espuma amarelo claro. RMN de XH (400 MHz, DMSO-dfj) : δ 8,59 (d, 1H, J = i, 46 Hz), 7, 98 (d, 1H, J = 7, 87 Hz), 7, 80 1 Oh co (m, 3H), 7,59-7,52 (m, 2H), 7, 36- 7, 31 (m, 2H), 5, 95 (q/ 1H, J = 6,10 Hz) , 5, 37 (t, 1H, J : = 3 , 6 6 Hz) , 4, 76 -4,64 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,46 -3,42 (m, 2H), 1 , 65 (d, , 3H, J = 6,04 Hz) ; MS ( ESI) : 507 [M+H] +.

Passo D - 5-(6-Formil-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(IR)-l-[2- (trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma solução de 5-[6-(1,2-di-hidroxietil)-lH-benzimidazol-1—il]—3—{(IR)—1—[2—(trifluorornetil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxilato de metilo (16,72 g, 33,0 mmol) em DCM/água/MeOH 1:1:1 (220 mL), foi adicionado periodato de sódio (10,58 g, 49,5 mmol). A pasta resultante foi agitada, durante 1 h, em seguida, foi diluída com água e AcOEt. A camada aquosa foi extraída com AcOEt (3 x) . As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgS04 e concentradas sob vácuo, para dar 14,76 g (94%) do composto em epígrafe, como um sólido tipo espuma amarelo claro. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) : δ 10,09 (s, 1H) , 8,87 (s, 1H) , 8,19 (s, 1H), 8, 02-7, 89 (m, 3H) , 7,81-7,72 (m, 2H) , 7,57-7,51 (m, 76

2Η), 5,98 (q, 1H, J= 6,10 Hz), 3,84 (s, 3H), 1,66 (d, 3H J= 6,22 Hz); MS (ESI): 475 [M+H]+.

Passo E - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il)metil]-1H- benzimidazol-l-il}-3-{ (IR)-l-[2-(trifluorometil)fenilJetoxi}tio-feno-2-carboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(6-formil-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}-tiofeno-2-carboxilato de metilo (14,76 g, 31,1 mmol), n-metilpiperazina (5,72 mL, 62,3 mmol) e ácido acético (2,1 mL, 37,4 mmol) em dicloroetano (150 mL), foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (9,9 g, 46,7 mmol). A reacção foi agitada, durante 1,5 h, em seguida, foi adicionado K2C03 aquoso a 5% até o pH ser aprox. 8. A mistura foi, depois, diluída com AcOEt e água. A camada aquosa foi extraída com AcOEt (3x). As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 1 a 8% de MeOH/DCM com 1% de hidróxido de amónio para dar 15,82 g (91%) do composto em epígrafe, como um sólido tipo espuma amarelo claro. RMN de XH (400 MHz, DMSO-ch) : δ 8,57 (s, 1H), 7 , 98 (d, 1H, J = 7, 87 Hz), 7,80-7,68 (m, 3H) , 7,54 (t, 1H, J = -- 7,59 Hz), 7,46 (s, 1H), 7,33-7,28 (m, 2H), 5,97 (q, 1H, J = 6, 16 Hz), 3,83 (s, 3H) , 3,55 77

1,66 (d, 3H (s, 2H), 2,45-2,20 (m, 8H), 2,13 (s, 3H) J= 6,04 Hz); MS (ESI): 559 [M+H]+.

Passo F - 5-{6-[ (4-Metilpiperazin-l-il)metil]-lH- benzimidazol-l-il}-3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxí}tio-feno-2-carboxamida

Uma mistura de 5—{6—[(4-metilpiperazin-l-il)metil]-1H-benzimidazol-l-il}-3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}-tiofeno-2-carboxilato de metilo (15,82 g, 28,35 mmol) e amónia 7 N em MeOH (250 mL, 1,75 mol), foi adicionada a um balão reaccional de alta pressão em vidro. O balão foi selado, em seguida, aquecido até 80 °C, durante aprox. 40 h. O balão foi arrefecido até à temperatura ambiente, aberto e a mistura reaccional concentrada sob vácuo, em seguida, purificada por cromatografia sobre silica gel, eluindo com um gradiente de 2 até 8% de MeOH/DCM com 1% de hidróxido de amónio para dar 14,11 g (92%) do composto em epigrafe, como um sólido tipo espuma branco. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,49 (s, 1H), 7,93 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,86 (s 1, 1H), 7,80-7,75 (m, 2H), 7,68 (d, 1H, J = 8,23 Hz), 7,56 (t, 1H, J = 7,68 Hz), 7,33 (s, 1H), 7,28 (d, 1H, J = 8, 42 Hz), 7,15 (s 1, 1H), 7,06 (s, 1H), 5, 94 (q, 1H, J = 6,10 Hz) , 3,52 (s, 2H), 2,45-2,20 (m, 8H), 2,13 (s, 3H), 1,74 (d, 3H, J = 6,22 Hz); MS (ESI): 544 [M+H] + 78

Via 2:

Passo A - 2-bromo-4-{[ (metiloxi)metil]oxi}-1-nitrobenzeno N0„

Uma solução de 3-bromo-4-nitrofenol (20,0 g, 91,7 mmol) em DCM (475 mL), foi agitada, a 0 °C. Foi adicionada, diisopropiletilamina (19,2 mL, 110,0 mmol), seguida de adição gota a gota, de uma solução de éter clorometílico e metílico (7,7 mL, 100,9 mmol) em DCM (25 mL) . A reacção foi agitada a 0 °C, durante 1 h, em seguida, aquecida até à temperatura ambiente e desactivada com água (150 mL) . A mistura foi vertida para solução aquosa saturada de cloreto de sódio (150 mL) e a camada aquosa extraída com AcOEt (3x) . As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgS04, concentradas sob vácuo e cromatografadas sobre sílica gel (330 g), eluindo com um gradiente de 0 a 25% de AcOEt/hexano para dar 20,0 g (83%) do composto em epígrafe, como um óleo laranja transparente. RMN de XH (400 MHz, DMSO-cy : δ 8,07 (d, 1H, J= 8,97 Hz), 7,50 (d, 1H, J= 2,20 Hz), 7,21 (dd, 1H, J= 8,97 e 2,38 Hz), 5,34 (s, 2H), 3,39 (s, 3H). 79

Passo B - 5-[ (5-{[ (Metiloxi)metil]oxi}-2-nitrofenil)amino]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metílo

A uma solução, mantida sob agitação, de 5-amino-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]-etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (1,32 g, 3,82 mmol) e 2-bromo-4-{[(metiloxi)metil]oxi}-l-nitrobenzeno (1,0 g, 3,82 mmol) em dioxano (20 mL), foi adicionado tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (70,0 mg, 0,076 mmol) e XANTPHOS (97,0 mg, 0,17 mmol) seguidos de carbonato de césio (6,2 g, 19,0 mmol). A mistura foi aquecida até 60 °C e agitada, durante 12 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com AcOEt e filtrada através de Celite, lavando os sólidos com AcOEt e DCM. O filtrado foi concentrado sob vácuo e cromatografado sobre sílica gel (120 g), eluindo com um gradiente de 5 a 35% de AcOEt/hexano para dar 1,64 g (82%) do composto em epígrafe, como um óleo vermelho. RMN de XH (400 MHz, DMSO ~d6) : δ 9,85 (s, 1H), 8,12 (d, 1H, J = 9,33 Hz), 7, 90 (d, 1H, J = 7, 87 Hz), 7, 74 (m, 2H), 7,53 (t, 1H, J = 7,68 Hz), 6,84 (d, 1H, J = 2,56 Hz) , 6,73 -6,68 (m, 2H), 5, 77 -5,72 (m, r 1H), 5,23 (s , 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37 (s, 3H), 1,58 (d, 3H, J= 6,22 Hz); MS (ESI): 527 [M+H]+. 80

Passo C 5-(6-{[(Metiloxi)metil]oxi}-lH-benzimidazol-1- il)-3-({(IR)-l-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

A um balão reaccional de hidrogenação de alta pressão foi adicionado 5-[(5 — {[(metiloxi)metil]oxi}-2-nitrofenil)amino]-3- ({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (2,0 g, 3,8 mmol), p-toluenossulfonato de piridínio (95,0 mg, 0,38 mmol), 5% em peso de platina sobre carvão (sulfurada) (740 mg, 0,19 mmol) e ortoformato de trimetilo (40 mL) . O balão foi purgado com N2 (gasoso) vácuo (3x), em seguida, com H2 (gasoso) /vácuo (3χ). Foi, depois, aplicado H2 gasoso a 50 psi durante 3 h. A mistura reaccional foi, depois, filtrada através de Celite, lavando os sólidos com AcOEt e DCM. O filtrado foi, depois, concentrado sob vácuo até 1,92 g (100%) do composto em epigrafe, como um sólido tipo espuma amarelo claro. RMN de XH (400 MHz, DMSO-cfe) : δ 8,49 (s, 1H), 7,98 (d, 1H, J = 8, 05 Hz) , 7, 79- -7,66 (m, 3H), 7,53 (t, 1H, J = 7,59 Hz), 7,35 (S, 1H) , 7, 22 (d, 1H, J = 2,20 Hz), 7,06 (dd, 1H, J = 8, 78 e 2,20 Hz) 5,97 (q, 1H, J = 6,04 Hz), 5, 23 (s, 2H), 3,83 (s, 3H) , 3,39 (s, 2H) , 1,65 (d, 3H, J = 6,22 Hz) ; MS (ESI): 507 [M+H] + 81

Passo D 5-(6-Hidroxi-lH-benzimidazol-l-il)-3- ({ (IR)-1-[2- (trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(6-{[(metiloxi)metil]oxi}-lH-benzimidazol-l-il)-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (8,18 g, um lote diferente utilizando um processo análogo ao Exemplo 3, Via 2, Passo C, 16,16 mmol) em THF/MeOH 1:1 (130 mL), foi adicionado HC1 1 N em água (65 mL, 65,0 mmol). A mistura reaccional foi aquecida até 35 °C e agitada, durante 72 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente. A reacção foi vertida para DCM (500 mL) e adicionada água (100 mL) . A mistura foi neutralizada até pH 7 pela adição de NaHC03 aquoso (saturado). A camada aquosa foi, depois, extraída com DCM (lx) e AcOEt (lx). As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, concentradas sob vácuo e cromatografadas sobre sílica gel (120 g), eluindo com um gradiente de 10 a 60% de AcOEt/hexano para dar 6,9 g (92%) do composto em epígrafe, como um sólido tipo espuma de cor salmão. RMN de XH ( O O MHz, DMSO -d6): δ 9,62 (s, 1H) , 8,41 (s, 1H) , 8,00 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,80-7,71 (m, 2H), 7,56-7, 51 ( m, 2H), 7, 38 (S, 1H) , 7, 05 (d, 1H, J = 2,01 Hz), 6,81 (dd, 1H, J = 8, 70 e 2,11 Hz) 5,95 (m, 1H), 3 , 83 (s, 3H), 1,64 (d, 3H, J = 6,23 Hz) ; MS (ESI): 463 [M+H]+. 82

Passo E - 3-({(IR)-1-[2-(Trifluorometil)fenil]etiljoxi)-5-(6-{[(trifluorometil)sulfonilJoxi}-lH-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, arrefecida (0 °C) de 5-(6-hidroxi-lH-benzimidazol-l-il)-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (2,49 g, 5,38 mmol) e n-feniltrifluorometanossulfonamida (2,06 g, 5,76 mmol) em DCM (30 mL), foi adicionada diisopropiletilamina (2,0 mL, 11,5 mmol). A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada, durante 12 h. A mistura reaccional foi, depois, concentrada sob vácuo e cromatografada sobre silica gel (120 g), eluindo com um gradiente de 5 a 40% de AcOEt/hexano, para dar 3,12 g (98%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo claro. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de): δ 8,76 (s, 1H) , 8,01-7,94 (m, 2H) , 7,80-7,70 (m, 3H), 7,56-7,43 (m, 3H), 5,98 (q, 1H, J = 6,10 Hz), 3,84 (s, 3H), 1,65 (d, 3H, J= 6,22 Hz); MS (ESI): 595 [M+H]+. 83

Passo F 3-{ (IR)-1-[2-(Trifluorometil)fenil]etoxi}-5-(6 vinil-lH-benzimidazol-l-il)tiofeno-2-carboxilato

A uma mistura de 3—({(IR)—1—[2— (trifluorometil)fenil]etil}oxi)-5-(6- {[(trifluorometil)sulfonil]oxi}-lH-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metilo (20,69 g, de um lote diferente utilizando um processo análogo ao Exemplo 3, Via 2, Passo E, 34,83 mmol), viniltrifluoroborato de potássio (5,6 g, 42,10 mmol) e trietilamina (4,85 mL, 34,86 mmol), agitada, à temperatura ambiente em n-propanol (175 mL), foi adicionado complexo de [1,1'-bis(difenilfosfino)- ferroceno]dicloropaládio(II) e diclorometano (570 mg, 0,70 mmol). A mistura foi, depois, aquecida até refluxo e agitada, durante 3 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente, vertida para água e extraída com AcOEt (3x) . As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgS04, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com um gradiente de 10 a 50% de AcOEt/hexano para dar 12,98 g (79%) do composto em epígrafe, como um sólido tipo espuma amarelo claro. MS (ESI): 473 [M+H]+. 84

Passo G - 5-[6-(1,2-Di-hidroxietil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-{ (IR)-1-[2 - (trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxilato de metilo

0 composto em epígrafe pode ser preparado por um processo análogo ao Exemplo 3, Via 1, Passo C.

Passo H - 5-(6-Formil-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(IR)-1-[2- (trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxilato de metilo

0 composto em epígrafe pode ser preparado por um processo análogo ao Exemplo 3, Via 1, Passo D. 85

I

Passo I - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il) metil]-1H- benzimidazol-l-il}-3-{ (IR)-1-[2-(trifluorometil)fenilJetoxiJtio-feno-2-carboxilato de metilo

0 composto em epígrafe pode ser preparado por um processo análogo ao Exemplo 3, Via l, Passo E.

Passo J - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il)metil]-1H- benzimidazol-l-il}-3-{(IR)-l-[2-(trifluorometil)fenilJetoxi}tio-feno-2-carboxamida

0 composto em epígrafe pode ser preparado por um processo análogo ao Exemplo 3, Via 1, Passo F. 86

Via 3:

Passo A - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il)metil]-lH- benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenilje-til}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma solução, mantida sob agitação, de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]e-til}oxi)tiofeno-2-carboxilato de metilo (150 mg, 0,30 mmol) em dioxano (1,0 mL), foi adicionada N-metilpiperazina (50 pL, 0,45 mmol). A reacção foi aquecida a 60 °C, durante 18 h, arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em AcOEt e água. A camada aquosa foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de sódio, concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de 0 a 10% de MeOH/DCM, com 1% de hidróxido de amónio, para dar 134 mg (79%) do composto em epígrafe, como um sólido branco. MS (ESI): 559 [M+H]+. 87

Passo

B 5-{ 6- [ (4-Metilpiperazin-l-il)metil] -1H- benzimidazol-l-il}-3-{(IR)-l-[2-(trifluorometíl)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxamida

F 0 composto em epígrafe pode ser preparado por um processo análogo ao Exemplo 3, via 1, Passo F.

Via 4:

Passo A - 4-[Bis (metiloxi)metil]-2-bromo-l-nitrobenzeno

ch3 ch3

Uma solução de 3-bromo-4-nitrobenzaldeído (7,97 g, 34,6 mmol), o qual foi preparado de um modo análogo ao processo da literatura (Katritzky, A.R.; Xie, L. Tetrahedron Letters 1996, 37, 347-350), ortoformato de trimetilo (11,4 mL, 104 mmol) e hidrato do ácido p-toluenossulfónico (329 mg, 1,73 mmol) em MeOH (69 mL), foi submetida a refluxo durante 3 h. A reacção foi, depois, desactivada pela adição de hidróxido de amónio 88 aquoso saturado (1 mL) e concentrada sobre sílica gel. A purificação por cromatografia em coluna (10 a 25% AcOEt:hexanos) proporcionou 8,76 g (92%) do composto em epígrafe, como um óleo laranja. RMN de (300 MHz, CDC13) : δ 7,89 (m, 2H), 7,59 (m, 1H), 5,47 (s, 1H), 3,38 (s, 6H).

Passo B - 5-({5-[Bis(metiloxi)metil]-2-nitrofenil}amino)-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

Uma solução de tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (117 mg, 0,127 mmol), 9, 9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)xanteno (162 mg, 0,280 mmol), 5-amino-3-({ (lf?)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (2,31 g, 6,69 mmol), 4-[bis(metiloxi)metil]-2-bromo-l-nitrobenzeno (1,76 g, 6,37 mmol) e carbonato de césio (10,39 g, 31,89 mmol) em 1,4-dioxano (25 mL), foi preparada num balão de fundo redondo sob N2. O balão foi evacuado e cheio de novo três vezes com N2 e, em seguida, agitado a 60 °C, durante 16 h. A mistura reaccional foi, depois, diluída com tetra-hidrofurano (100 mL) e concentrada sobre sílica gel. A purificação por cromatografia em coluna (5 a 75% AcOEt:hexanos) proporcionou 2,79 g (81%) do composto em epígrafe, como uma espuma vermelha. RMN de XH (300 MHz, CDC13) : δ 9,63 (s 1, 1H), 8,21 - (m, 1H), 89 7,94 (m, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,48 (s, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,73 (q, 1H, J= 6,2 Hz), 3,88 (s, 3H), 3,34 (S, 1H), 3,31 (s, 3H), 3,28 (S, 3H) , 1,72 (d, 3H, J= 6,2 Hz); MS (ESI): 541 [M+H]+.

Passo C - 5-{6-[Bis (metiloxi)metíl]-lh-benzimidazol-l-il}-3({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

A uma solução de 5-({5-[bis(metiloxi)metil]-2-nitrofenil}amino) —3 — ({ (lf?) -1- [2 - (trifluorometil) fenil] etil}oxi) -2-tiofenocarboxilato de metilo (2,71 g, 5,01 mmol) em ortoformato de trimetilo (50 mL) num frasco de Fischer-Porter foi adicionado p-toluenossulfonato de piridinio (126 mg, 0,501 mmol) e platina sulfurada sobre carvão (5% em peso de Pt, 977 mg, 0,250 mmol de Pt). A mistura foi hidrogenada num aparelho de hidrogenação de Fischer-Porter a 50 psi de hidrogénio até parar a captação de hidrogénio (17 h) . A mistura reaccional foi filtrada através de um filtro de vidro sinterizado para remover o catalisador, lavando com DCM (75 mL). O eluente foi concentrado para proporcionar 2,61 g (100%) do composto em epígrafe em bruto como um óleo laranja, o qual foi transferido para o passo seguinte sem purificação. MS (ESI): 521 [M+H]+. 90

Passo D 5-(6-Formil-lR-benzimidazol-l-il)-3-({(IR)-l-[2 (trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

A uma solução de 5-{6-[bis(metiloxi)metil]-lH-benzimidazol-1—il} —3— ({ (1.R) —1— [2— (trifluorometil) fenil] etiljoxi) -2-tiofenocarboxilato de metilo em bruto (2,61 g, 5,01 mmol) (do Passo C, acima) em acetona (20 mL) e água (5 mL), foi adicionado p-toluenossulfonato de piridinio (126 mg, 0,501 mmol). A reacção foi agitada, durante 2 h, à temperatura ambiente e foi, em seguida, vertida para água (30 mL) e NaHC03 aquoso saturado (30 mL) . A mistura foi extraída com DCM (2 χ 30 mL) . As fracções orgânicas reunidas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sobre sílica gel. A purificação por cromatografia em coluna (30 a 100% AcOEtrhexanos) proporcionou 1,37 g (58%, nos 2 passos) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo claro. RMN de ΧΗ (300 MHz , CDC13) : δ 10, 06 (s, 1H), , 8,13 (s, 1H), 7,96-7, 88 (m, 4H), 7,72- -7,61 (m, 2H), 7, 44 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 5 ,84 (q, 1H, J = 6,3 Hz), 3, 95 (S 1 3H), 1,79 (d, 3H, J= 6,3 Hz); MS (ESI): 475 [M+H]+. 91

Passo E - 5-{6-[(4-Metil-l-piperazinil)metil]-1H- benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]e-til}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

0 composto em epígrafe pode ser preparado por um processo análogo ao Exemplo 3, Via í, Passo E.

Passo F - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il)metil]-lH- benzimidazol-l-il}-3-{(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etoxi}tiofeno-2-carboxamida

0 composto em epígrafe pode ser preparado por um processo análogo ao Exemplo 3, Via 1, Passo F. 92

Exemplo 4: 3-{ [ (1-R) -1- (2-Clorofenil) et 11] oxl}-5-{6 - [ (4- metilpiperazln-l-il)metll]-lfl-benzimidazol-l-il}tiofeno-2-carboxamida

Passo A - 3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[(5-{[(2, 2-dimetilpropanoil)oxi]metil}-2-nitrofenil)amino]-2-tiofenocarboxilato de metílo

A uma mistura de 2,2-dimetilpropanoato de (4-nitro-3-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}fenil)metilo (1,0 g, 2,59 mmol), 5-amino-3-{[(1R)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo (Exemplo intermediário 2) (860 mg, 2,75 mmol), tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (70,0 mg, 0,076 mmol) e XANTPHOS (90,0 mg, 0,16 mmol), foi adicionado tolueno (7,0 mL) . Foi começada a agitação, seguida da adição de carbonato de césio (2,95 g, 9,1 mmol). A reacção foi aquecida até 60 °C e agitada, durante 30 min, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com AcOEt e filtrada através de Celite, lavando os sólidos com AcOEt e dcm. O filtrado foi concentrado sob vácuo e cromatografado sobre sílica gel (40 g), eluindo com 93 um gradiente de 5 a 15% de acetona/hexano para dar 920 mg (65%) do composto em epígrafe, como um sólido vermelho. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-d&) : δ 9,77 (s, 1H) , 8,09 (d, 1H, J= 8,61 Hz), 7,63 (dd, 1H, J= 7,69 e 1,65 Hz), 7,46-7,30 (m, 4H), 7,01 (dd, 1H, J = 8, 79 e 1,47 Hz), 6,67 (s, 1H), 5, 76-5, 70 (m, 1H) , 5,09 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 1,56 (d, 3H, j= 6,23 Hz), 1,14 (s, 9H) ; MS (ESI): 547 [M+H]\

Passo B - 5-[(2-Amino-5-{[(2,2-dimetilpropanoil)oxi]metil}-fenil)amino]-3-{[ (IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo

A um balão reaccional de hidrogenação de alta pressão foi adicionado 3-{[(IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-5-[(5 — { [ (2,2 — dimetilpropanoil)oxi]metil}-2-nitrofenil)amino]-2-tiofenocarboxilato de metilo (6,5 g, de um lote diferente utilizando um processo análogo ao Exemplo 4, Passo A, 11,9 mmol), platina a 5% em peso sobre carvão (sulfurada) (2,2 g, 0,56 mmol) e AcOEt (95 mL) . O balão foi purgado com N2 (gasoso) vácuo (3x), em seguida, com H2 (gasoso) vácuo (3x). Foi, depois, aplicado hidrogénio gasoso a 50 psi, durante 3 h. A mistura reaccional foi, depois, filtrada através de Celite, lavando os sólidos com AcOEt e DCM. O filtrado foi, depois, 94 concentrado sob vácuo, para dar 5,46 g (89%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo. MS (ESI): 517 [M+H]+.

Passo C - 3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-(6-{[ (2,2- dimetilpropanoil)oxiJmetil}-lH-benzimidazol-l-il) -2-tiofenocarboxilato de meti lo

Uma mistura, mantida sob agitação, de 5-[(2-amino-5-{[(2,2-dimetilpropanoil)oxi]metil}fenil)amino]-3-{[(IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo (5,45 g, 10,5 mmol), p-toluenossulfonato de piridínio (265 mg, 1,0 mmol) e ortoformato de trietilo (15 mL), foi aquecida até 40 °C, durante 1 h, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente. Toda a mistura foi vertida para um cartucho de sílica gel (25 g) e purificada por cromatografia sobre sílica gel (120 g), eluindo com 100% de hexanos durante 10 min, em seguida, um gradiente de 0 a 10% AcOEt/hexano para dar 4,71 g (85%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo. MS (ESI): 527 [M+H]+. 95

Passo D - 3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[6-(hidroximetil)-lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metilo

0 composto em epígrafe foi preparado de 3—{[(IR)—1—(2— clorofenil)etil]oxi}-5-(6-{[(2,2-dimetilpropanoil)oxi]metil}-1H-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metilo por um processo análogo ao Exemplo 1, Via 1, Passo G. MS (ESI) : 443 [M+H]+.

Passo E - 5-[6-(Clorometil)-lH-benzimidazol-1-il]-3-{[ (IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo

0 composto em epígrafe foi preparado de 3—{[(IR)—1—(2— clorofenil)etil]oxi}-5-[6-(hidroximetil)-lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metilo por um processo análogo ao Exemplo 1, Via 1, Passo H. MS (ESI): 461 [M+H]+. 96

Passo F - 3-{[ (IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6-[(4- metilpiperazin-l-il)metil]-lH-benzimidazol-l-il}tiofeno-2-carboxilato de metilo

A uma mistura, mantida sob agitação, de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-{[(IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo (150 mg, 0,32 mmol) em dioxano (1,5 mL), foi adicionada n-metilpiperazina (55 uL, 0,49 mmol) e trietilamina (136 uL, 0,97 mmol). A reacção foi, depois, aquecida a 45 °C, durante 18 h, arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em AcOEt (125 mL) e água (50 mL) . A camada aquosa foi, depois, extraída com AcOEt. As camadas orgânicas reunidas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgS04, concentradas sob vácuo e cromatografadas sobre sílica gel (4 g), eluindo com um gradiente de 0 a 10% de MeOH/DCM, com 1% de hidróxido de amónio, para dar 123 mg (72%) do composto em epígrafe, como um sólido amarelo claro. MS (ESI): 525 [M+H] +. 97

Passo G - 3-{[ (IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6-[(4- metilpiperazin-l-il)metil]-lH-benzimidazol-l-il}tiofeno-2-carboxamida

0 composto em epígrafe foi preparado de 3—{[(IR)—1—(2— clorofenil)etil]oxi}-5-{6-[(4-metilpiperazin-l-il)metil]-1H-benzimidazol-l-il}tiofeno-2-carboxilato de metilo por um processo análogo ao Exemplo 3, Via 1, Passo F. RMN de (400 MHz, DMSO -d6) : δ 8,52 ( s, 1H), 7, 83 (s, 1H) , 7,69 (d, 2H, J = 8 ,24 H z) , 7,51- 7, 34 (m, 4H) , 7,2 8 (d, 1H, J = 8 ,24 Hz) , 7,16- 7, 11 (m, 2H), 5 , 98 (q , 1H, J = 6,35 Hz), 3,55 ( s, 2H), 2, 42- 2,22 (m, 8H) , 2, 13 (s, 3H), 1 ,72 (d, 3H, J = 6,23 Hz) ; MS (ESI) : 510 [M+H]+. 98

Exemplo Intermediário 4: 3—{[(IR)—1—(2—

Clorof enll) et 11] oxi} -5- (6-hidroxi-lff-benzimidazol-l-il) -2-tiofenocarboxilato de metilo

Passo A - 2-Bromo-4-({[4-(metiloxi) feniljmetil}oxi)-1-nitrobenzeno

2-Bromo-4-fluoro-l-nitrobenzeno (20,0 g, 90,9 mmol) e álcool 4-metoxibenzílico (22,7 mL, 182 mmol) foram dissolvidos em D CM (4 00 mL) com agitação. Foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio 1 N (400 mL) seguida de hidrogenossulfato de tetrabutilamónio (3,09 g, 9,10 mmol). A reacção foi agitada, durante 8 h e vertida para uma ampola de decantação. As camadas foram separadas e a aquosa foi extraída uma vez com DCM e uma vez com éter dietílico. As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 28,01 g (91%) do composto em epígrafe. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) : δ 8,03 (d, 1H, J= 9,2 Hz), 7,50 (d, 1H, J= 2,6 Hz), 7, 39-7,34 (m, 2H), 7,17 (dd, 1H, J= 2,7, 9,0 Hz), 6,95-6,91 (m, 2H), 5,14 (s, 2H), 3, 73 (s, 3H) . 99

Passo B 3-{[ (IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5{[5-({[4- (metiloxi) fenilJmetil}oxi)-2-nitrofenil]amino}-2-tiofenocarboxilato de metilo

2-Bromo-4-({[4-(metiloxi)fenil]metil}oxi)-1-nitrobenzeno (20,19 g, 59,7 mmol) e 5-amino-3-{[(IR)-1-(2- clorofenil)etil]oxil-2-tiofenocarboxilato de metilo (18,60 g, 59,7 mmol) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (500 mL) sob agitação num balão munido com um agitador mecânico, condensador de refluxo e termómetro. A solução foi desarejada durante 75 min borbulhando azoto através da solução sob agitação. Foram adicionados 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)xanteno (1,52 g, 2,63 mmol), carbonato de césio (97,26 g, 299 mmol) e

tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (1,09 g, 1,19 mmol). A reacção foi aquecida até 60 °C e agitada, durante 16 h. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada através de Celite. O sólido foi lavado com 20% MeOH em DCM. O filtrado foi concentrado sobre, aproximadamente, 200 g de silica gel. O sólido foi colocado num funil poroso e lavado com 10% AcOEt em DCM. O filtrado foi concentrado in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 27,18 g (80%) do composto em epígrafe. RMN de (400 MHz, CDC13) : δ 9,87 (s, 1H), 8,10 (d, 1H, J = 9 ,5 Hz), 7, ,63 (m, 1H), 7 r 39- -7,29 (m, 4H), 7,23 (m, 1H), 6,96-6,90 (m, 2H), 6,80 (d, 1H, J = 2, 6 Hz), 6,75 (s, 1H), 6,69 (dd, 1H, J - 2,6, 9,3 Hz), 5,75 (q, 1H, J = 6,3 Hz) , 5,03 (AB, 100 2Η, JAB = 13,2 Hz, JAB = 11,3 Hz) 3,74 (s, 3H) , 3,74 (s, 3H), 1,55 (d, 3H, J= 6,4 Hz).

Passo C - 5-{[2-Amino-5- ({ [4-(metiloxi)fenil]metil}oxi)- fenil]amino}-3-{[ (IR)-1-(2-clorofenil)etil]oxi}-2- tiofenocarboxilato de metilo

3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{[5-({[4-(metiloxi)fenil]-metil}oxi)-2-nitrofenil]amino}-2-tiofenocarboxilato de metilo (27,18 g, 47,8 mmol), foi dissolvido em AcOEt (400 mL) sob agitação. Foi adicionada platina sulfurada (5% em peso sobre carvão, 2,80 g) e a reacção foi colocada sob 1 atm de H2 utilizando um aparelho de balão. Após 36 h foi adicionada uma quantidade adicional de catalisador (2,80 g) e a agitação foi prosseguida sob 1 atm de hidrogénio. Após mais 16 h, a reacção foi filtrada através de um tampão de Celite lavando com AcOEt. O filtrado foi concentrado para proporcionar o composto em epígrafe, o qual foi imediatamente transferido para o passo seguinte. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) : δ 8,66 (S 1, 1H) , 7 , 56 (dd, , 1H , J = 1,7, 7,8 Hz), 7, 41-7,09 (m, 5H) , 6,93-6, 88 (m, 2H) , 6 ,71 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 6 ,65 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6, 57 (dd, 1H, J = = 2,7 , 8,6 Hz), 5,87 (s , 1H), 5, 62 (q, 1H, J = 6,4 Hz) , 4, 82 (s, 2H), 4, 46 (s 1, 2H), 3, 73 (s, 3H), 3,64 (s, 3H) , i ,52 (d, 3H, J = 6,2 Hz) . 101

Passo D - 3-{[ (IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[6-({[4- (metíloxi)fenilJmetil}oxi)-lR-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metilo

5-{[2-Amino-5-({[4-(metiloxi)fenil]metil}oxi)fenil]amino}-3-{[(1R)-1-(2-clorofenil)-etil]oxi}-2-tiofenocarboxilato de metilo foi dissolvido em ortoformato de trimetilo (100 mL) e éter dietilico (100 mL) sob agitação. Foi adicionado p-toluenossulfonato de piridínio (0,601 g, 2,39 mmol) numa única porção. A reacção foi agitada, durante 2,5 h e desactivada pela adição de trietilamina (aproximadamente 3 mL) . A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia flash para proporcionar 25,45 g (97% nos 2 passos) do composto em epígrafe. RMN de 1R (400 MHz, i—1 o Ω O >) : δ 8 ,47 (s, 1H), 7 ,71 (dd, 1H J = 1,6, 8,2 Hz), 7,63 (d, 1H , J = 9,0 Hz), 7,43- 7, 08 (m, 7H) 7,00 (dd, 1H, J = 2,4, 8,8 Hz) , 6, 96-6, 90 (m, 2H), 5,97 (q, 1H J = 6,4 Hz), 5,03 (AB, 2H, Jab : = 17, 1 Hz, r Jab = 11,3 Hz) , 3,80 (s 3H) , 3,73 (s, 3H), 1,60 (d, 3H, J = 6,4 Hz) . 102

Passo E - 3-{[ (1R)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-(6-hidroxi-lR-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metilo

3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[6-({[4-(metiloxi)fenil]-metil}oxi)-lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metilo (25,45 g, 46,4 mmol), foi dissolvido em DCM (120 mL) e arrefecido até 0 °C, sob agitação. Foi adicionado ácido trifluoroacético (40,0 mL, 519 mmol), gota a gota, via funil de carga. A reacção foi agitada, durante lhe foi adicionado hidróxido de sódio (20,0 g, 500 mmol) em água (120 mL) gota a gota via funil de carga. O pH da mistura foi, depois, ajustado até neutro com solução saturada de NaHC03. A reacção foi vertida para uma ampola de decantação e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com AcOEt. As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 14,86 g (75%) do composto em epígrafe. RMN de (400 MHz, CDC13) : δ 9,62 (s, 1H), 8,45 (s, 1H) , 7,74 (dd, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz); 7,53 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7, 46-7, 38 (m, 3H) , 7,32 (m, 1H), 7,08 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 6,79 (dd, 1H, J= 2,2, 8,6 Hz), 5,94 (q, 1H, J= 6,2 Hz), 3,79 (s, 3H), 1,60 (d, 3H, J = 6,2 Hz). 103

Exemplo Intermediário 5: 5-(6-Hidroxi-lH-benzimidazol-l il) —3 — ({ (1.R) —1— [2— (trif luorometil) fenil] etil}oxi) -2-tiofenocarboxilato de metilo

Passo A - 5-{[5-({[4-(Metiloxi)fenil]metil}oxi)-2- nitrofenil]amino}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

0 composto em epígrafe foi preparado de 5-amino-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo e 2-bromo-4-({[4-(metiloxi)fenil]metil}oxi)-1-nitrobenzeno por um processo análogo ao Exemplo Intermediário 4, Passo B. MS (ESI): 603 [M+H]+. 104

Passo B - 5-{ [2-Amino-5- ({[4- (metiloxi)feniljmetil}oxi) fenil]amino}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

0 composto em epígrafe foi preparado de 5-{[5-({[4-(metiloxi)fenil]metil}oxi)-2-nitrofenil]amino}-3-({{IR)(trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo por um processo análogo ao Exemplo Intermediário 4, Passo C. MS (ESI): 573 [M+H]+.

Passo C - 5-(6-Hidroxi-lR-benzimidazol-l-il)-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

5-{[2-Amino-5-({[4-(metiloxi)fenil]metil}oxi)fenil]amino}-3 — ({ (1J?) -1- [ 2 - (trifluorometil) fenil]etil] oxi) -2-tiofenocarboxilato de metilo (11 g, 19,19 mmol), foi dissolvido em 100 mL de ortoformato de trimetilo sob agitação. Foi adicionado p-toluenossulfonato de piridínio (0,502 g, 1,91 mmol) 105 numa única porção. A reacção foi agitada, durante 2,5 h. A mistura foi concentrada e o 5—[6—({[4— (metiloxi)fenil]metil}oxi)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(1R)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo em bruto foi dissolvido em clorofórmio (75 mL) e arrefecido até 0 °C sob agitação. Foi adicionado ácido trifluoroacético (50,0 mL, 649 mmol). A reacção foi agitada, durante lhe elevada aquecer até à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada enquanto se arrefecia para remover a maior parte do ácido trifluoroacético. A mistura foi dissolvida em clorofórmio (200 mL). A reacção foi vertida para uma ampola de decantação, e as camadas foram separadas. O pH da mistura foi, depois, ajustado até neutro com solução saturada de NaHC03. A camada aquosa foi lavada com clorofórmio. As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgSCg, filtradas e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 8,16 g (92% nos 2 passos) do composto em epígrafe. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 7,88 (d, 1H, J= 7,87 Hz), 7,83 (s, 1H), 7,66-7,55 (m, 3H), 7,40 (t, 1H, J= 7,7 Hz), 6,92 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 6,85 (dd, 1H, J= 2,3, 8,7 Hz), 5,78 (q, 1H, J= 6,23 Hz), 5,47 (s, 1H) , 3,91 (s, 3H), 1,75 (d, 3H, J= 6,23 Hz); MS (ESI): 463 [M+H]+. 106

Exemplo 5: 5-[6-(4-Piperidiniloxi)-lH-benzimidazol-l-il]-3- ({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxamida

F

Passo A - 4-({1-[5-[(Metiloxi)carbonil]-4-({(IR)-1-[2- (trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tienil]-lH-benzimidazol-6-11}oxi)-1-piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletilo

5-(6-Hidroxi-lH-benzimidazol-l-il)— 3 —({(IR)—1—[2 — (trifluorometil)fenil]-etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (0,478 g, 1,03 mmol), carbonato de césio (0,470 g, 1,44 mmol) e éster terc-butilico do ácido 4-(tolueno-4-sulfoniloxi)-piperidina-l-carboxilico (0,439 g, 1,24 mmol) foram combinados em 10 mL de N, N-dimetilf ormamida e aquecidos até 60 °C, sob agitação. A reacção foi aquecida durante 36 h e arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi vertida para AcOEt e água e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e as camadas aquosas reunidas foram extraídas com AcOEt. As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 107 0, 482 g (72%) do composto em epígrafe. RMN de (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,43 (s, 1H), 7,95 (dd, J = 7,7 Hz, 1H), 7, 78-7, 66 (m, 2H), 7,63 (d, J= 8,8 Hz, 1H) , 7,50 (m, 1H) , 7,29 (s, 1H) , 7,09 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,01 (dd, J= 8,8, 2,2 Hz, 1H), 5,97 (q, J= 6,2 Hz, 1H), 4,59 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,65-3,56 (m, 2H), 3,25-3,15 (m, 2H), 1,91-1,82 (m, 2H), 1,63 (d, J= 6,2 Hz, 3H), 1,59-1,49 (m, 2H), 1,38 (s, 9H). MS m/z 646 (M+l).

Passo B - 5-[6-(4-Piperidiniloxi)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

4-({1-[5-[(Metiloxi)carbonil]— 4 —({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tienil]-lH-benzimidazol-6-iljoxi)-1-piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletilo (1,84 g, de um lote diferente utilizando um processo análogo ao Exemplo 5, Passo A, 2,85 mmol), foi dissolvido em 30 mL de DCM, sob agitação e arrefecido até 0 °C. Foi adicionado ácido trifluoroacético (10,0 mL, 130 mmol), gota a gota, via funil de carga. A reacção foi agitada, durante lhe foi adicionada solução de hidróxido de sódio 2 N (60 mL) gota a gota via funil de carga. Foi utilizada uma solução aquosa saturada de NaHC03 para ajustar o pH até básico. A mistura foi vertida para uma ampola de decantação e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada uma vez com DCM e uma vez com éter dietílico. 108

As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 1,37 g (88%) do composto em epígrafe. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,42 (s , 1H) , 7,95 (d, J = 7, 9 Hz, 1H), oo -7,67 (m, 2H), 7, 61 (d, J = 8,6 Hz, 1H), ' 7,61 (m, 1H), 7,30 (s, 1H) , 7,05 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 6,97 (dd, J = 8, 8, 2,2 Hz, 1H) , 5,96 (q, J = 6,1 Hz, 1H), 4,41 (m, 1H), 3 ,80 (s, 3H), 2 ,97- 2,88 (m, 2H), 2,59-2 ,49 (m, 2H), 1,92-1,83 (m, 2H) / 1.63 (d, J = 6,1 Hz , 3H), 1,51- -1,38 (m, 2H) . MS m/z 546 (M+l).

Passo C - 5-[6-(4-Piperidiniloxi)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2- (trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxamida

5-[6-(4-Piperidiniloxi)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (0,154 g, 0,282 mmol), foi dissolvido em amónia 7 N em MeOH (12,0 mL, 84,0 mmol) num tubo selado e aquecido até 80 °C, durante 2 dias. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 0,129 g (86%) do composto em epígrafe. RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) δ 8,34 (s, 1H), 7,91 (d, II co o Ή N 1H), 7,81 (s 1, 1H), 7,78-7,70 (m, 2H), 7,61 (d, J = 8, 4 Hz, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,12 (s 1, 1H), 7,03 (s, 1H) , 7, 00-6,93 (m, 2H), 5,94 (q, J= 6,2 Hz, 1H) , 4,44 (m, 1H), 3,03-2,94 (m, 2H) , 2,70- 109 2,61 (m, 2H), 1,96-1,86 (m, 2H), 1,72 (d, J= 6,2 Hz, 3H), 1,59-1,46 (m, 2H). MS m/z 531 (M+l).

Exemplo_6j_3-{ [ (IR) -1- (2-Clorof enil) etil] oxi} —5— [6— (4 — piperidiniloxi)-lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxamida

Passo A - 4-[(1-{4-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5- [ (metiloxi)carbonil]-2-tienil}-lti-benzimidazol-6-il)oxi]-l-piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletilo

3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil] oxi}-5-(6-hidroxi-lH-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metilo (2,00 g, 4,66 mmol), trifenilfosfina (4,89 g, 18,6 mmol) e 4-hidroxi-l-piperidinacarboxilato de t-butilo (1,88 g, 9,34 mmol) foram dissolvidos em DCM (50 mL), sob agitação e arrefecidos até 10 °C. Foi adicionado azodicarboxilato de diisopropilo (1,84 mL, 9,35 mmol) gota a gota via seringa. A reacção foi agitada, durante 5 min e deixada aquecer até temperatura ambiente. A reacção foi agitada, durante 4 h e adsorvida sobre sílica gel. A purificação por cromatografia flash proporcionou o composto em 110

epígrafe juntamente com pequenas quantidades de impurezas. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,47 (s, 1H), 7,70 (dd, 1H, J = 1,6, 7, 7 Hz), 7 , 64 (d, 1H, J = 8, 8 Hz), 7,44-7,37 (m, 2H), 7,34 (s, 1H), 7,31 (m, 1H), 7,15 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,01 (dd, 1H, J = 2,2, 8 ,8 Hz) , 5,97 (q, 1H, J = 6,2 Hz) , 4,59 (m, 1H), 3, 80 (s, 3H), 3, 65-3,56 (m, 2H) , 3,27-3,14 (m, 2H), 1,92-1,81 (m, 2H), 1,60 (d, 3H, J= 6,2 Hz), 1,60-1, 47 (m, 2H) , 1,38 (s, 9H); MS (ESI): 612 [M+H]+.

Passo B - 3-{[ (IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[6-(4-piperidiniloxi)-lR-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metilo

4-[(1 — {4 — {[(1R)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[(metiloxi)-carbonil]-2-tienil}-lH-benzimidazol-6-il)oxi]-1- piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletilo foi dissolvido em DCM (60 mL) e arrefecido até 0 °C. Foi adicionado ácido

trifluoroacético (15,0 mL, 195 mmol), gota a gota, via funil de carga. A reacção foi agitada, durante 1,5 h e foi adicionada solução de hidróxido de sódio 2 N (88 mL), gota a gota, via funil de carga. Foi utilizada solução aquosa saturada de NaHCCó para ajustar o pH até ~8. A mistura foi vertida para uma ampola de decantação e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com DCM (3x) e AcOEt (lx). As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. A 111 purificação por cromatografia flash proporcionou 1,95 g (82% nos 2 passos) do composto em epígrafe. RMN de *H (400 MHz, DMSO-d&) : δ 8,46 (s, 1H), 7,71 (dd, 1H, J= 1,7, 7,7 Hz), 7,62 (d, 1H, J= 8,8 Hz), 7,46-7,38 (m, 2H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (m, 1H), 7,09 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 6,97 (dd, 1H, J= 2,2, 8,8 Hz), 5,97 (q, 1H, j= 6,2 Hz), 4,42 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 2,96-2,88 (m, 2H), 2,58-2, 49 (m, 2H), 1,93-1,84 (m, 2H), 1,60 (d, 3H, J= 6,2 Hz), 1,51-1,39 (m, 2H) ; MS (ESI): 512 [M+l]\

Passo C - 3-{ [ (IR)-1-(2-Clorofenil) etil]oxi}-5-[6-(4- piperidiniloxí)-IR-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxamida

3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[6-(4-piperidiniloxi)-lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metilo (0,150 g, 0,293 mmol), foi dissolvido em amónia 7 N em MeOH (12,0 mL, 84,0 mmol) num tubo selado e aquecido até 80 °C durante 48 h. A solução foi concentrada e recarregada com amónia 7 N em MeOH fresco (12,0 mL, 84,0 mmol) e aquecida até 110 °C, durante 72 h. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 0,126 g (87% ) do composto em epígrafe. RMN de XH (400 MHz, DMSO-cW : δ 8 ,38 (s, 1H), 7,79 (s 1, 1H), 7,66 (dd, 1H, J = 1,6, 1,1 Hz, 1H), 7,61 (d, 1H, J = = 8,8 Hz), 7,45 (dd, 1H, J = 1,3, 7,8 Hz), 7, 40 (m, 1H), 7,84 (m, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,11 (s 1, 1H), 7, 01 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 6,96 (dd, 1H, J = 2,3, 112 8,7 Hz), 5,98 (q, 1H, J= 6,2 Hz), 4,41 (m, 1H) , 2,98-2,89 (m, 2H), 2, 62-2,53 (m, 2H), 1, 94-1, 84 (m, 2H), 1,70 (d, 3H, J= 6,2 Hz), 1,54-1,40 (m, 2H); MS (ESI): 497 [M+H]+.

Exemplo_7j_5 - {6 - [ (l-Metil-4-piperidinil) oxi] -1H- benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]e-til}oxi)-2-tiofenocarboxamida

Passo A - 5-{6-[(l-Metil-4-piperidinil)oxi]-1H- benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenilJetil}-oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo

5-[6-(4-Piperidiniloxi)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (0, 200 g, 0,367 mmol), foi dissolvido em DCM (4 mL) e MeOH (2 mL). Foram adicionados ácido acético (0,025 mL, 0,44 mmol) e formaldeido (0, 055 mL, 37% em água, 0,74 mmol) via seringa. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,117 g, 0,552 mmol) numa única porção. A reacção foi agitada, 113 durante lhe desactivada com solução saturada de NaHC03. A mistura foi vertida para DCM e NaHC03 aquoso semi-saturado. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi lavada com DCM (3x) e AcOEt (1x) . As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 0,150 g (73%) do composto em epigrafe. RMN de (400 MHz, DMSO-cb) : δ 8,43 (s, 1H), 7,96 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 7, 78-7, 68 (m, 2H), 7,62 (d, J= 9,0 Hz, 1H) , 7,51 (m, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,06 (s 1, 1H), 6,98 (m, 1H), 5,97 (q, J= 6,0 Hz, 1H), 4,41 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,26 (s, 3H), 2,52-2, 43 (m, 2H), 2,27-2,11 (m, 2H), 1, 98-1, 85 (m, 2H), 1,73-1,60 (m, 2H), 1,62 (d, J= 6,0 Hz, 3H) . MS (ESI): 560 [M+H]\

Passo B - 5-{6-[(l-Metil-4-piperidinil)oxi]-1H- benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-l-[2- (trifluorometil)fenil]etil}oxi)-2-tiofenocarboxamida

5 — {6 —[(l-Metil-4-piperidinil)oxi]-lH-benzimidazol-l-il}-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil)fenil]etiljoxi)-2-tiofenocarboxilato de metilo (0,148 g, 0,264 mmol), foi dissolvido em amónia 7 N em MeOH (12,0 mL, 84,0 mmol) num tubo selado e aquecido até 80 °C, durante 24 horas. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 0,138 g (96%) do composto em epigrafe. RMN de :H (400 MHz, DMSO-cy : δ 8,35 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 114 7,82 (s 1, 1H), 7,80-7,71 (m, 2H), 7,64-7,51 (m, 2H), 7,12 (s 1, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,99-6,94 (m, 2H), 5,95 (q, J= 6,2 Hz, 1H), 4,36 (m, 1H), 2, 64-2,53 (m, 2H), 2,23-2,11 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1, 94-1, 84 (m, 2H), 1,73 (d, J= 6,2 Hz, 3H), 1,71-1,57 (m, 2H) . MS (ESI) : 545 [M+H]+ .

Exemplo 8: 3-{[(IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6-[(1- metil-4-piperidinil) oxi] -li7-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxamida

Passo A - 3-{ [ (IR)-1- (2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6-[(1- metil-4-piperidinil)oxi]-lR-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxilato de metilo

3-{[(1R)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-[6-(4-piperidiniloxi)-lff-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metilo (0,260 g, 0, 508 mmol), foi dissolvido em DCM (4 mL) e MeOH (2 mL) . Foram adicionados ácido acético (0,035 mL, 0,61 mmol) e formaldeído (0, 076 mL, 37% em água, 1,0 mmol) via seringa. Foi adicionado 115 triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,161 g, 0,760 mmol) numa única porção. A reacção foi agitada, durante 2 h e vertida para DCM e NaHC03 aquoso semi-saturado. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi lavada com DCM e AcOEt. As camadas orgânicas reunidas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 0,215 g (80%) do composto em epígrafe. RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,48 (s, 1H), 7,73 (dd, 1H, J= 1,8, 7,7 Hz), 7,63 (d, 1H, J= 8,8 Hz), 7,47-7,40 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,12 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 6,99 (dd, 1H, J= 2,2, 8,8 Hz), 5,98 (q, 1H, J = 6,2 Hz), 4,41 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 2,65-2, 54 (m, 2H), 2,24-2,13 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,97-1,87 (m, 2H), 1,72-1,61 (m, 2H), 1,62 (d, 3H, J= 6,2 Hz); MS (ESI): 526 [M+H]+.

Passo B - 3-{[ (IR)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}-5-{6-[(1- metil-4-piperidinil)oxi]-lH-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxamída

3-{[(1R)-1-(2-Clorofenil)etil]oxi}—5—{6—[(1-metil-4-piperidinil)oxi]-lH-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxilato de

metilo (0,214 g, 0,407 mmol), foi dissolvido em amónia 7 N em MeOH (12,0 mL, 84,0 mmol) num tubo selado e aquecido até 80 °C durante 2,5 dias. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia flash proporcionou 0,208 g (100%) do composto em epígrafe. RMN 116 de 1 H (400 MHz, DMSO- -d6) : δ 8,39 (s, 1H), 7,80 (e ; 1, 1H), 7 ,67 (dd, 1H, J = 1,5, 7, 6 Hz) , 7,62 (d, 1H, J = 8,6 Hz) , 7, 45 (m, 1H), 7,41 (m, 1H), 7 ,34 ( m, 1H), 7,13 (s, - 1H), 7, , 11 ( :s i, 1H), 7, 02 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 6,97 (dd, 1H, J = 2,2, 8,8 Hz), 5 , 99 (q, 1H, J = 6,2 Hz), 4,37 (m, 1H) i , 2, 63-2 ,53 (m, 2H), 2,22- -2 ,14 (m, 2H), 2,17 (s, 3H) , 1,95-1 , 86 (m, 2H), 1, 71 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 1,70-1,59 (m, 2H); MS (ESI): . 511 [M+H] +

Exemplos Comparativos

Os Exemplos Comparativos números 121, 126, 127, 136 e 143 podem ser preparados utilizando métodos conhecidos na técnica, incluindo aqueles descritos no Pedido PCT N° WO2004/014899 de SmithKline Beecham Corp. Número Estrutura 121 Lo 126 127 H,C 1 11 h3c'° H3C^]Tj 117 (continuação)

Exemplos Biológicos I. Ensaio de inibição de PLKl A. Preparação do domínio cinase de PLK marcado com 6x His N-terminais 0 domínio cinase de PLK marcado com 6* His N-terminais (aminoácidos 21-346 seguidos de MKKGHHHHHHD) SEQ ID: N° 1 foi preparado de células T.ni infectadas por baculovírus sob o controlo do promotor poliedrina. Todos os processos foram realizados a 4 °C. As células foram submetidas a lise em HEPES 50 mM, NaCl 200 mM, imidazole 50 mM, 5% de glicerol; pH 7,5. O homogenato foi centrifugado a 14K rpm num rotor SLA-1500 durante 1 h e o sobrenadante filtrado através de um filtro de 1,2 mícrones. O sobrenadante foi transferido para uma coluna de Sepharose quelante de Níquel (Amersham Pharmacia) e lavado com tampão de lise. A proteína foi eluída utilizando passos de 20%, 118 30% e 100% de tampão B em que o tampão B é HEPES 50 mM, NaCl 200 mM, imidazole 300 mM, 5% de glicerol; pH 7,5. As fracções contendo PLK foram determinadas por SDS-PAGE. As fracções contendo PLK foram diluídas cinco vezes com HEPES 50 mM, DTT 1 mM, 5% de glicerol; pH 7,5, em seguida, transferidas para uma coluna de Sepharose SP (Amersham Pharmacia). Depois de lavar a coluna com HEPES 50 mM, DTT 1 mM, 5% de glicerol; pH 7,5, a PLK foi eluída por passos com HEPES 50 mM, DTT 1 mM, NaCl 500 mM; 5% de glicerol; pH 7,5. A PLK foi concentrada utilizando uma membrana com uma massa molecular de retenção de 10 kDa e, em seguida, transferida para uma coluna de filtração de gel Superdex 200 (Amersham Pharmacia) equilibrada com HEPES 25 mM, DTT 1 mM, NaCl 500 mM, 5% de glicerol; pH 7,5. As fracções contendo PLK foram determinadas por SDS-PAGE. A PLK foi reunida, retiradas alíquotas e conservadas a -80 °C. As amostras foram sujeitas a controlo de qualidade utilizando espectrometria de massa, sequenciação N-terminal e análise de aminoácidos. B. Actividade enzimática +/- inibidores foi determinada como se segue:

Todas as medições foram obtidas em condições em que a produção de sinal aumentou linearmente com o tempo e a enzima. Foram adicionados compostos de ensaio a placas de ensaio brancas com 384 poços (0,1 pL para os ensaios de 10 pL e alguns de 20 pL, 1 pL para alguns ensaios de 20 pL) em concentrações variáveis conhecidas em 100% de DMSO. Como controlos foram utilizados DMSO (1-5% final, consoante apropriado) e edta (65 mM na reacção) . A mistura reaccional foi preparada como se segue a 22 °C: HEPES 25 mM, pH,7,2 119

MgCl2 15 mM ATP 1 μΜ 0,05 pCi/poço de 33Ρ-γ ATP (lOCi/mMol) Péptido substrato (Biotina-Ahx-SFNDTLDFD) SEQ ID N° 2, 1 μΜ

0,15 mg/mL de BSA

DTT 1 mM

Domínio cinase de PLKl 2 nM (adicionado por último) A mistura reaccional (10 ou 20 pL), foi rapidamente adicionada a cada poço imediatamente após a adição da enzima via doseadores automáticos de líquidos e incubada 1-1,5 h a 22 °C. As reacções enzimáticas de 20 pL foram paradas com 50 pL de mistura de paragem (EDTA 50 mM, 4,0 mg/mL de esferas de estreptavidina SPA em pbs de Dulbecco Padrão (sem mg2+ e Ca2+), ATP 50 pM) por poço. As reacções de 10 pL foram paradas com 10 pL de mistura de paragem (EDTA 50 mM, 3,0 mg/mL de Esferas de Visualização de SPA ligado a Estreptavidina ("LeadSeeker") em PBS de Dulbecco Padrão (sem mg2+ e Ca2+), ATP 50 pM) por poço. As placas foram seladas com tampas plásticas transparentes, centrifugadas a 500 χ g durante 1 min ou deixadas em repouso de um dia para o outro e contadas no Packard TopCount durante 30 segundos/poço (SPA normal) ou visualizadas utilizando um equipamento de imagiologia Viewlux (SPA LeadSeeker). O sinal acima do fundo (controlos de EDTA), foi convertido em percentagem de inibição relativamente ao obtido nos poços de controlo (apenas DMSO). 120 C. Resultados

Os dados são apresentados no Quadro 1 baixo. No Quadro 1, + = pICso <6; ++ = pICso 6—8; +++ = pICso >8. II. Ensaio de Inibição de Crescimento com Azul-de-Metileno - Inibição da proliferação celular por inibidores de PLK1

Duma maneira geral, linhas de células em crescimento exponencial com origem em tumores diferentes, cultivadas em meios apropriados contendo 10% de soro fetal bovino a 37 °C numa incubadora com 5% de CO2 foram aplicadas em baixa densidade (menos do que 2000 células/poço) em placas de 96 poços. Vinte e quatro horas após aplicação, as células foram tratadas com concentrações diferentes de compostos de ensaio desde 10 uM a 0,04 nM. Vários poços foram deixados por tratar como um controlo. Setenta e duas horas após tratamento, os números de células foram determinados utilizando 100 pL de azul-de-metileno por poço (Sigma M9140) (0,5% em Etanolrágua 50:50). A mancha foi incubada à temperatura ambiente, durante 30 minutos antes das placas terem sido lavadas e o corante solubilizado em N-lauroilsarcosina, sal de sódio a 1% (Sigma L5125, em PBS) (outros detalhes de um ensaio com azul-de-metileno são descritos abaixo). As placas foram lidas num leitor de microplacas, medindo a OD a 620nm. A percentagem de inibição do crescimento celular foi exprimida como a percentagem de proliferação em relação a 100% de proliferação (controlo). A concentração de composto de ensaio que inibia 50% do crescimento celular (IC50), foi determinada por 121 um ajuste de 4 parâmetros dos dados utilizando XLfit, (o valor do controlo sem células foi subtraído de todas as amostras para referência). Os dados são mostrados no Quadro 1 abaixo e representam uma compilação de várias experiências diferentes, cada, realizada utilizando os parâmetros gerais delineados acima, embora possam ter sido utilizadas variações menores nalguns casos.

Num ensaio, fibroblastos normais de prepúcio humano (HFF), linhas de células de tumores de cólon humano (HCT116, RKO), pulmão (H460, A549) e mama (MCF7) foram cultivados em DMEM rico em glucose (Life Technologies) contendo 10% de soro fetal bovino (FBS), a 37 °C, numa incubadora humidificada com 5% de C02, 95% de ar. As células foram colhidas utilizando tripsina/EDTA, contadas utilizando um hemocitómetro e aplicadas em 100 pL de meio de cultura por poço, às seguintes densidades, numa placa de cultura de tecidos de 96 poços (Falcon 3075) : HFF 5000 células/poço, HCT116 3000 células/poço, RKO 2500 células/poço, H460 2500 células/poço, A549 5000 células/poço, MCF7 4000 células/poço. No dia seguinte, os compostos foram diluídos em DMEM pobre em glucose contendo 100 pg/mL de gentamicina, ao dobro da concentração final requerida, a partir de soluções-mães a 10 mM em DMSO. Foram adicionados 100 pL/poço destas diluições aos 100 pL de meio já presentes nas placas de ensaio. Aos poços de controlo foi adicionado meio contendo 0,6% de DMSO. A concentração final de DMSO em todos os poços era de 0,3%. AS células foram incubadas a 37 °C, 5% de C02 durante 72 h. 0 meio foi removido por aspiração. A biomassa celular foi estimada revelando as células com 80 pL de azul-de-metileno por poço (Sigma M9140, 0,5% em etanol:água 50:50) e incubação à temperatura ambiente, durante 30-60 min. O corante foi removido por aspiração e as placas lavadas por imersão em água, e, em 122 seguida, secas ao ar. Para libertar o corante das células, foram adicionados 100 pL de solução de solubilização (N-lauroilsarcosina, sal de sódio a 1%, Sigma L5125, em PBS) e as placas foram agitadas, suavemente, durante cerca de 30 min. A densidade óptica a 620 nM foi medida num leitor de microplacas. A percentagem de inibição do crescimento celular foi calculada em relação aos poços de controlo tratados com veiculo. A concentração de composto que inibe 50% do crescimento celular (IC50), foi interpolada utilizando regressão não linear (Levenberg-Marquardt) e a equação, y = vmax* (1-(x/(K+x))) + Y2, em que "K" era igual à IC5o·

Os dados são apresentados no Quadro 1 abaixo. No Quadro 1, + = IC50 >1 pM; ++ = IC50 0,1 — 1 pM: +++ = IC50 <0, 1 pM. III. Determinação da ligação de proteína a proteínas do plasma humano utilizando diálise de equilíbrio

Placa de 96 Poços (Diálise de Alto Débito) : Soluções-mães de compostos foram adicionadas a plasma humano numa concentração alvo de 2000 ng/mL. A mistura foi invertida delicadamente várias vezes para garantir homogeneidade e foram recolhidas alíquotas de 50 pL em triplicado para verificar as concentrações iniciais. Após montagem da placa de diálise (tiras de membrana HTDialysis, limite de exclusão de massa molecular de 12000 - 14000 daltons), foi colocado plasma fortificado (150 pL) no compartimento doador do poço e Soro Fisiológico Tamponado com Fosfato pH 7,4 (150 pL) no compartimento receptor. Foram preparados oito poços por composto e tipo de plasma. A placa foi colocada numa incubadora, a 37 °C, num agitador de placas. Após o período de incubação de 6 h, a placa foi removida. Foram analisadas alíquotas únicas de 123 50 pL do compartimento doador e do compartimento receptor (por poço). A análise da amostra foi realizada por LC/MS/MS (resultados apresentados como razões Área do Pico do Fármaco/Área do Pico do Padrão Interno). O ensaio de ligação de proteina também pode ser realizado utilizando células de diálise em vez de placas de diálise de 96 poços ht. Os dados são apresentados no Quadro 1 abaixo. No Quadro 1,% de Ligação de Proteina, + = >98%; ++ = 95-98%: +++ = <95%. IV. Ensaio de Solubilidade de Alto Débito São preparadas duas amostras para cada composto. Uma (a amostra padrão) contém o composto a uma concentração fixa de 20 μΜ numa mistura de solvente misto aquoso/orgânico. A outra (a amostra de ensaio) contém o composto a uma concentração máxima de 200 μΜ em pH 7,4, tampão de fosfato 0,05 Me agitada, durante 24 h. A amostra de ensaio é filtrada através de um filtro de 0,45 μ e, em seguida, centrifugada durante 10 min para remover qualquer sólido não dissolvido. São realizadas análises por HPLC nestas amostras. As áreas dos picos são utilizadas para calcular a solubilidade. Os dados são apresentados no Quadro 1 abaixo. No Quadro 1, solubilidade, + = <30 μΜ; ++ = 30-100 μΜ: +++ = >100 μΜ. 124

Quadro 1

Exemplo # PLKl pIC50 HCT11 6 IC50 (pM) H460 IC50 (pM) MCF7 IC50 (pM) A549 IC50 (pM) RKO IC50 (pM) HFF IC50 (pM) 0, O Ligação de Proteína Solubilidade (pM) 1 ++ + ++ + + + + ++ + +++ + + + ++ + + + + 2 ++ + ++ + + + + ++ + +++ + + + ++ ++ ++ 3 ++ + ++ + + + + ++ + + + + + + + +++ +++ + + + 4 ++ + ++ + + + + ++ + + + + + + + +++ ND + + + 5 ++ + ++ + + + + ++ + + + + +++ ++ + + + + + 6 ++ + ++ + + + + ND + + + +++ + + ++ + ++ + 7 ++ + ++ + + + + ++ + + + + +++ + + ++ + ++ + 8 + + + + + + + + + ND + + + + + + + + + + + + + + + Ex. Com. 127 ++ + ++ + + + ++ + + + +++ + + + Ex. Com. 126 ++ + ++ + +++ + +++ +++ ++ + ND Ex. Com. 121 + + + + + + + + + + ND Ex. Com. 136 + + + + + + ++ ND + + + ++ + ND Ex. Com. 143 + + + + + + + + ++ + + + + + ND: Nao Determinado 0 Quadro 1 mostra que os compostos presentemente reivindicados possuem propriedades superiores em relação aos exemplos comparativos testados. Por exemplo, os compostos dos exemplos 1-8 têm uma potência enzimática e celular superior relativamente aos exemplos comparativos 121, 136 e 143 no ensaio da enzima PLKl e no ensaio de proliferação celular com azul-de-metileno em várias linhas de células examinadas. Os compostos dos exemplos 1-8 têm uma solubilidade superior em tampão de fosfato 0,05 M, pH 7,4, relativamente ao exemplo comparativo 127. Os compostos dos exemplos 1-3 e 5-8 têm uma ligação a proteína mais elevada no soro humano através do ensaio 125 de diálise em equilíbrio relativamente aos exemplos comparativos 126 e 127. V. Cell-Titer-Glo - Inibição da proliferação celular por inibidores de PLKl

Linhas de células em crescimento exponencial com origem em tumores diferentes, cultivadas em meios apropriados contendo 10% de soro fetal bovino a 37 °C numa incubadora com 5% de C02 foram aplicadas a baixa densidade (menos do que 2000 células/poço) em placas de 96 poços. Vinte e quatro horas após aplicação, a células foram tratadas com várias concentrações de compostos de ensaios desde 10 uM a 0,04 nM. Vários poços foram deixados por tratar como um controlo. Setenta e duas horas após tratamento, os números de células foram determinados utilizando 50-100 uL de CellTiter-Glo por poço (Promega N° G7573) . As placas foram incubadas, à temperatura ambiente, durante 15 minutos e o sinal quimioluminescente foi lido no leitor Victor V ou Envison 2100. A percentagem de inibição do crescimento celular foi exprimida como a percentagem de proliferação em relação a 100% de proliferação (controlo). A concentração de composto de ensaio que inibia 50% do crescimento celular (IC50), foi determinada por um ajuste de 4 parâmetros dos dados utilizando XLfit, (o valor do controlo sem células foi subtraído de todas as amostras para referência). Os dados de Cell-Titer Glo são mostrados no Quadro 2 abaixo e representam uma compilação de várias experiências diferentes, cada, realizada utilizando os vários parâmetros delineados acima, embora possam ter sido utilizadas variações menores nalguns casos. No Quadro 2, + = IC50 >1 μΜ; + + = IC50 0,5 —1 μΜι +++ = IC50 <0,5 μΜ. 126

Quadro 2

Linha de Células Ex 1 Ex 2 Ex 3 Ex 4 Ex 5 Ex 6 Ex 7 Ex 8 HCT116 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND A549-L IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND COL0205 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND HT29 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND MX-1 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND SKOV-3 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND LNCaP IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND P388 IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND H1299 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND Hela IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND HN5 IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND MCF7 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND MV522 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND MDA-MB-468 IC50 ND ND + + + ND + + + ND ND ND PANC-1 IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND MiaPaca IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND ASPC3 IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND BXPC3 IC50 ND ND + + + ND ND ND ND ND

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> SmithKline Beecham Corporation

<120> COMPOSTOS DE BENZIMIDAZOLE TIOFENO <130> PR61603 <150> 60/714 337 <151> 2005-09-06 <150> Documento 60/786244 127 <151> 2006-03-27 <160> 2 <170> FastSEQ PARA Windows Versão 4.0

<210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> células T.ni infectadas por baculovirus <400> 1

Met Lys Lys Gly His His His His His His Asp 1 5 10

<210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Substrato Péptido de PLK Optimizado <400> 2

Ser Phe Asn Asp Thr Leu Asp Phe Asp 1 5

Lisboa, 5 de Março de 2010 128

Claims

REIVINDICAÇÕES Composto seleccionado de:

em que * indica um carbono quiral; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
2. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, em que a estereoquimica do carbono quiral é R.
3. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquimica absoluta representada em A-l:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquimica absoluta representada em B-l:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
5. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquimica absoluta representada em C—1: 2

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
6. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquimica absoluta representada em D-l:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
7. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquimica absoluta representada em E-l: 3

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
8. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquímica absoluta representada em F-l:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
9. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquímica absoluta representada em G-l:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 4
10. Composto enantiomericamente enriquecido de acordo com a reivindicação 1, possuindo a estereoquimica absoluta representada em H-l:

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
11. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-10.
12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11 compreendendo ainda um veiculo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11 compreendendo ainda um agente quimioterapêutico.
14. Composição farmacêutica compreendendo um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável de acordo com a reivindicação 5.
15. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10 na preparação de um medicamento ou tratamento de um estado mediado por PLK num mamífero dele necessitado. 5
16. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10 na preparação de um medicamento ou tratamento de um neoplasma susceptivel num mamífero dele necessitado.
17. Utilização de acordo com a reivindicação 16, em que o referido neoplasma susceptivel é seleccionado do grupo consistindo de cancro da mama, cancro do cólon, cancro das células pequenas do pulmão, cancro das células não pequenas do pulmão, cancro da próstata, cancro do endométrio, cancro gástrico, melanoma, cancro do ovário, cancro pancreático, carcinoma de células escamosas, carcinoma da cabeça e pescoço, carcinoma esofágico, carcinoma hepatocelular e malignidades hematológicas.
18. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou tratamento de cancro da mama num mamífero dele necessitado, compreendendo 0 referido método a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1.
19. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou tratamento de cancro do ovário num mamífero dele necessitado.
20. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou tratamento de cancro das células não pequenas do pulmão num mamífero dele necessitado. 6
21. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou tratamento de cancro da próstata num mamífero dele necessitado, compreendendo o referido método a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1.
22. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou tratamento de uma malignidade hematológica num mamífero dele necessitado, compreendendo o referido método a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1.
23. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada num mamífero dele necessitado.
24. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou inibição da proliferação de uma célula.
25. Utilização de um composto de acordo com as reivindicações 1 - 10, na preparação de um medicamento ou inibição de mitose numa célula. 7
26. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-10, para utilização em terapia.
27. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-10, para utilização no tratamento de um estado mediado por plk num mamífero dele necessitado.
28. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-10 para utilização no tratamento de um neoplasma susceptível, tais como cancro da mama, cancro do cólon, cancro das células pequenas do pulmão, cancro das células não pequenas do pulmão, cancro da próstata, cancro do endométrio, cancro gástrico, melanoma, cancro do ovário, cancro pancreático, carcinoma de células escamosas, carcinoma da cabeça e pescoço, carcinoma esofágico, carcinoma hepatocelular e malignidades hematológicas, num mamífero dele necessitado.
29. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-10, para utilização no tratamento de um estado caracterizado por proliferação celular inapropriada num mamífero dele necessitado.
30. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-10, para utilização na inibição de proliferação de uma célula.
31. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-10, para utilização na inibição de mitose numa célula. 8
32. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-10, para utilização no tratamento de um neoplasma susceptivel, tais como cancro da mama, cancro do ovário, cancro das células não pequenas do pulmão, cancro da próstata ou malignidades hematológicas, num mamífero dele necessitado. Lisboa, 5 de Março de 2010 9