PT1675625E - Imagiologia de células beta pancreáticas direccionada com base no mecanismo - Google Patents

Description

ΕΡ 1 675 625/ΡΤ

DESCRIÇÃO "Imagiologia de células beta pancreáticas direccionada com base no mecanismo"

Anterioridade da Invenção

Nos Estados Unidos, aproximadamente 16 milhões de pessoas (6 porcento da população) sofrem de diabetes mellitus. Todos os anos são diagnosticados cerca de 800 000 novos casos e mais 6 milhões de pessoas mantêm-se em desconhecimento de que têm a doença. A diabetes mellitus mata cerca de 193 000 residentes norte-americanos em cada ano, e é a sétima principal causa de todas as mortes e a sexta principal causa de todas as mortes causadas pela doença. Existe um aumento constante das crianças que desenvolvem diabetes do tipo 2. No Canadá, mais de 2,2 milhões de residentes (7 porcento da população) têm diabetes mellitus, e a doença contribui para mais de 25 000 mortes por ano. O adenocarcinoma do pâncreas é a quinta mais comum causa de morte por cancro nos Estados Unidos. Nos Estados Unidos, quase 45 000 pessoas ficam afectadas com cancro pancreático todos os anos. O cancro ocorre mais frequentemente na cabeça do pâncreas e frequentemente conduz a obstrução biliar com uma apresentação clinica de icterícia indolor. A taxa de sobrevivência a 5 anos para pacientes operáveis é de cerca de 10% com uma sobrevivência mediana de 12 a 18 meses. Os pacientes não operáveis vivem cerca de 6 meses. Ambas as doenças estão associadas à função pancreática. Igualmente, o risco de cancro pancreático é aumentado em diabéticos com início na idade adulta.

No pâncreas, os Ilhéus de Langerhans são compostos por quatro tipos de células, cada um sintetizando e segregando uma hormona polipeptídica distinta: insulina na célula beta (60%), glucagon na célula alfa (25%), somatostatina na célula D (10%) e polipéptido pancreático na célula F (5%) . As células beta são o principal tipo de células no pâncreas. Determinados nutrientes e factores de crescimento podem estimular o crescimento de células beta pancreáticas. Contudo, as vias de sinalização mitogénicas apropriadas nas células beta estão relativamente indefinidas. Esta incapacidade de definir estas 2 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ importantes vias de sinalização deve-se, pelo menos em parte, a uma falta de tecnologias de imagiologia eficazes. 0 actual estado da imagiologia nas doenças pancreáticas foi recentemente revisto por Kalra et al. Journal of Computer Assisted Topography 26:661-675. As tecnologias revistas incluem varrimentos de CT, MRI, EUS e PET.

Heindel et al. (1975) descrevem quelatos de 99m Tc como potenciais agentes de imagiologia radiofarmacêuticos.

Sumário A presente divulgação aborda, pelo menos em parte, algumas deficiências no estado da técnica proporcionando novos conjugados DTPA-antidiabético úteis para imagiologia da função de células beta. A função pancreática é monitora através da ligação de conjugados radiomarcados, tais como conjugados "mTc-DTPA-antidiabético, por exemplo, a receptores beta pancreáticos, detectáveis por cintigrafia gama. Foram sintetizados e avaliados quatro conjugados DTPA-antidiabético. Estudos em animais mostraram que DTPA-nateglinida e DTPA-glipizida são capazes de obter selectivamente a imagem de células beta pancreáticas sem toxicidade aguda em determinadas doses. Estes agentes são marcados com isótopos de modo a avaliar a função de células beta em pacientes diabéticos ou de insulinoma tanto pré- como pós-tratamento. Estas composições são úteis para proporcionar diagnósticos precoces assim como para monitorar a resposta da doença pancreática durante o tratamento. A presente invenção pode portanto ser descrita em determinadas concretizações como uma composição compreendendo ácido dietilenotriaminopenta-acético- nateglinida, ácido dietilenotriaminopenta-acético-glipizida, ácido dietilenotriaminopenta-acético-gliburida ou ácido dietilenotriaminopenta-acético-glimepirida e um ião metálico quelado, em que o ião metálico é seleccionado de entre um emissor beta, um emissor gama e Tc-99m, Cu-60-64, Ga-67, 68,

Gd, Ho-166, ou Re-187, 188. A utilização de composições compreendendo metais ou iões metálicos na imagiologia in vivo de tecidos ou órgãos de mamíferos, incluindo órgãos humanos, é bem conhecida na especialidade, e qualquer destas utilizações 3 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ de um metal apropriado de acordo com as reivindicações para um tipo particular de detecção está contemplada pela presente divulgação.

As composições da presente divulgação pode incluir, portanto, metais apropriados para imagiologia melhorada por contraste ou para imagiologia cintigráfica por PET, MRI, ou mesmo imagiologia por CT. 0 metal pode ser um emissor beta ou gama, ou pode ser seleccionado de entre tecnécio (Tc-99m), gálio (Ga-67, 68), cobre (Cu-60-64), gadolinio (Gd), hólmio (Ho-166) ou hólmio (Re-187, 188). 0 quelante das composições divulgadas é ácido dietilenotriaminopenta-acético (DTPA).

Os agentes antidiabéticos da invenção divulgada são seleccionados de entre nateglinida, glipizida, gliburida ou glimepirida.

Em determinadas concretizações as composições da presente invenção podem incluir quaisquer dos compostos ou elementos mencionados em qualquer combinação, e preferivelmente incluem "mTc-DTPA-nateglinida, "mTc-DTPA-glipizida, "mTc-DTPA- gliburida ou "mTc-DTPA-glimepirida para imagiologia gama.

As composições aqui descritas são úteis em várias aplicações, tanto de diagnóstico, de prognóstico e terapêuticas. Deste modo, determinadas concretizações da invenção podem ser descritas como métodos de imagiologia para o pâncreas de um mamifero compreendendo a administração ao mamífero de uma composição compreendendo um agente antidiabético, um quelante e um ião metálico quelado como descrito acima e a detecção de uma imagem do pâncreas. Como descrito, a imagem pode ser uma imagem gama, uma imagem PET, uma imagem MRI, ou outros tipos de imagens conhecidos na especialidade.

Os métodos exemplificativos incluem métodos de monitorização da massa ou da morfologia de células beta pancreáticas num mamífero, úteis para a monitorização da condição do pâncreas num indivíduo susceptível antes do início de uma doença pancreática, ou para a monitorização da 4 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ progressão de uma doença, ou ainda métodos de monitorização do resultado de determinadas terapias durante o tratamento ou a gestão de uma doença pancreática. Os métodos da invenção podem ser utilizados portanto para monitorar a massa, o número, a função de células beta, ou a infiltração de linfócitos na massa de células beta.

Em todas a presente divulgação, a menos que o contexto o dite de outro modo, a palavra "compreender" ou variações como "compreendem" ou "compreendendo", é entendida como significando "incluir, mas não lhe estando limitado", de modo que outros elementos que não estão explicitamente mencionados podem também ser incluídos. Adicionalmente, a menos que o contexto o dite de outro modo, a utilização dos termos "um", "uma", "a" ou "o" pode significar um objecto ou elemento singulares, ou pode significar uma pluralidade, ou um ou mais destes objectos ou elementos.

Breve Descrição dos Desenhos

Os desenhos que se seguem fazem parte do presente fascículo e são incluídos para adicionalmente demonstrar determinados aspectos da presente invenção. A invenção pode ser mais bem entendida por referência a um ou mais destes desenhos em combinação com a descrição detalhada de concretizações específicas aqui apresentadas. A FIG. DTPA-NGN2. A FIG. 2 A FIG. 3 A FIG. 4 A FIG. 5 A FIG. 6 A FIG. 7 A FIG. 8 9 A FIG. 1 é um esquema é o espectro de é o espectro de é o espectro de é o espectro de é o espectro de é o espectro de é um esquema de são os dados de de síntese de metal-(99mTc, 1H-RMN de Nateglinida. 1H-RMN de NGN-Et. 1H-RMN de NGN-EA. massa de NGN-EA. 1H-RMN de NGN2. massa de DTPA-NGN2. síntese de DTPA-GLP. 1H-RMN de Glipizida.

Gd) 5 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. A FIG. 5 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ 10 é o espectro de 3h-rmn de Glipizida. 11 sao os dados de 13c-rmn de Glipizida. 12 é o espectro de 13c-rmn de Glipizida. 13 sao os dados de 3h-rmn de DTPA-Glipizida. 14 é o espectro de 3h-rmn de DTPA-Glipizida. 15 sao os dados de 13c-rmn de DTPA-Glipizida. 16 é o espectro de 13c-rmn de DTPA-Glipizida. 17 é o espectro de massa de DTPA-Glipizida. 18 é um esquema de síntese para DTPA-Gliburida 19 sao os dados de 3H-RMN de Gliburida. 20 é 0 espectro de 3h-rmn de Gliburida. 21 sao os dados de 13c-rmn de Gliburida. 22 é o espectro de 13c-rmn de Gliburida. 23 sao os dados de 3h-rmn de DTPA-Gliburida. 24 é o espectro de 3h-rmn de DTPA-Gliburida. 25 é o espectro de 13c-rmn de DTPA-Gliburida. 26 é um esquema de síntese para DTPA-GLMP. 27 sao os dados de 3H-RMN de GLMP. 2 8 é um espectro de 1H-RMN de GLMP. 29 são os dados de 13C-RMN de GLMP. 3 0 é um espectro de 13C-RMN de GLMP. 31 são os dados de 3H-RMN de DTPA-GLMP. 32 é um espectro de 3H-RMN de DTPA-GLMP. 6 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ A FIG. 33 são os dados de 13C-RMN de DTPA-GLMP. A FIG. 34 é um espectro de 13C-RMN de DTPA-GLMP. A FIG. 35 são os dados de ITLC para Tc-DTPA-NGN2. A FIG. 36 é a imagiologia nuclear de "mTc-DTPA-Nateglinida. Obtiveram-se imagens de ratos portadores de tumor mamário com "mTc-DTPA (painel esquerdo) e "mTc-DTPA-NGN2 (painel direito) (300 pCi, i.v.). São apresentadas imagens planas seleccionadas de "mTc-DTPA-NGN2 a 5 e 50 minutos após a injecção. A seta indica o pâncreas. A FIG. 3 7 é uma imagem de um rato portador de tumor mamário obtida com "mTc-DTPA-NGN2 (300 pCi, i.v.). São apresentadas imagens planas seleccionadas de "mTc-DTPA-NGN2 a 50 minutos após a injecção. A seta indica o pâncreas. A FIG. 38 são imagens de cintigrafia plana de "mTc-DTPA em ratos portadores de tumor 13762 (300 pCi/rato, injecção i.v.). A FIG. 39 são NGN (2) em ratos injecção i.v.). A FIG. 40 são NGN (1) em ratos injecção i.v.). imagens de cintigrafia plana de "mTc-DTPA-portadores de tumor 13762 (300 pCi/rato, imagens de cintigrafia plana de "mTc-DTPA-portadores de tumor 13762 (300 pCi/rato, A FIG. 41 são imagens de ratos portadores de tumor da mama obtidas com "mTc-DTPA (painel esquerdo) , "mTc-DTPA-NGN2 (painel do meio) e "mTc-DTPA-NGN2 com uma dose de bloqueio de 4mg/kg de NGN2 (painel direito) (300 pCi, i.v.). São apresentadas imagens planas seleccionadas a 150 minutos após a injecção. A FIG. 42 são imagens de ratos portadores de tumor da mama obtidas com 99ir'Tc-DTPA (painel esquerdo) , "mTc-DTPA-NGN2 (painel do meio) e "mTc-DTPA-NGN2 com uma dose de bloqueio de 4mg/kg NGN2 (painel direito) (300 pCi, i.v.). São apresentadas 7 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ imagens planas seleccionadas a 150 minutos após a injecção. A seta indica o pâncreas. A FIG. 43 são imagens de cintigrafia plana de "mTc-DTPA e "mTc-DTPA-Glipizida (GLUCOTROL) em ratos (300 pCi/rato, injecção i.v.) a 5 minutos após a injecção. A FIG. 44 são imagens de cintigrafia plana de "mTc-DTPA e "mTc-DTPA-Glipizida (GLUCOTROL) em ratos (300 pCi/rato, injecção i.v.) a 15 minutos após a injecção. A FIG. 45 são imagens de cintigrafia plana de "mTc-DTPA em coelhos portadores de tumor VX2 (1 mCi/coelho, injecção i.v.). A FIG. 46 são imagens de cintigrafia plana de "mTc-DTPA-NGN em coelhos portadores de tumor VX2 (1 mCi/coelho, injecção i.v.). P indica o pâncreas. A FIG. 47 é uma representação gráfica que compara a assimilação pelo pâncreas de "mTc-DTPA e "mTc-DTPA-NGN em ratos portadores de tumor da mama (n=3/intervalo de tempo, 20pCi, IV, p=0,11, 0,05, e 0,01). A FIG. 48 é uma representação gráfica da razão de densidade de contagens entre o pâncreas e o músculo de 99mTc-DTPA e "mTc-NGN em ratos portadores de tumor da mama (n=3/intervalo de tempo, 20pCi/rato, IV, p=0,19, 0,19 e 0, 029) .

Descrição Detalhada A presente divulgação proporciona composições para melhorar o diagnóstico e o tratamento de doenças associadas ao pâncreas incluindo, mas não se lhes limitando, diabetes, pancreatite, insulinoma, adenocarcinoma, tumor de células dos ilhéus, hipertrofia dos ilhéus em diabéticos e hiperinsulinemia baseadas na identificação de composições e métodos para a imagiologia de células beta in vivo assim como a entrega de agentes com valor terapêutico especificamente a células beta pancreáticas. 8 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ A divulgação é baseada no desenvolvimento de composições para o direccionamento com base no mecanismo para células beta para fins de imagiologia e terapêuticos. As composições divulgadas incluem um agente antidiabético, um quelante e um ião metálico quelado como descrito acima. Os presentes inventores demonstraram com sucesso a visualização cintigráfica do pâncreas em modelos animais de rato e de coelho utilizando estas composições, incluindo "mTc-DTPA-nateglinida (NGN) e "mTc-DTPA-glipizida.

Os agentes antidiabéticos da presente divulgação são preferivelmente agentes que preferencialmente interactuam com, ou se ligam a, receptores específicos nas células beta pancreáticas. Estes agentes podem ligar-se aos receptores de sulfonilureia, incluindo SUR1, SUR2A e SUR2B, ao receptor de GLP-1, ao receptor de somatostatina, ao receptor de angiotensina II, e/ou ao receptor de bradiquinina. Os agentes da presente invenção são seleccionados de entre nateglinida, glipizida, gliburida e glimepirida.

As composições aquosas da presente invenção compreendem uma quantidade eficaz das composições descritas dissolvida e/ou dispersa num meio aquoso e/ou num transportador farmaceuticamente aceitável. As expressões "farmaceuticamente e/ou farmacologicamente aceitável" referem-se a entidades moleculares e/ou composições que não produzem uma reacção adversa, alérgica e/ou de outro modo desfavorável, quando administradas a um animal, e/ou um ser humano, conforme apropriado.

Como aqui se utiliza, "transportador farmaceuticamente aceitável" inclui quaisquer e/ou todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e/ou antifúngicos, agentes isotónicos e/ou retardadores da absorção e/ou similares. A utilização destes meios e/ou agentes para substâncias farmacêuticas activas é bem conhecida na especialidade. Excepto na medida em que qualquer meio e/ou agente convencionais seja incompatível com o ingrediente activo, a sua utilização nas composições está contemplada. Ingredientes activos suplementares podem também ser incorporados nas composições. 9 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ

Os transportadores aquosos podem incluir água, soluções alcoólicas/aquosas, soluções salinas, veículos parentéricos tais como cloreto de sódio, dextrose de Ringer, etc. Os veículos intravenosos podem incluir reabastecedores de fluidos e de nutrientes. Conservantes podem incluir agentes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes e gases inertes. 0 pH e a concentração exacta dos vários componentes no produto farmacêutico são ajustados de acordo com parâmetros bem conhecidos.

Para os fins desta divulgação, os iões metálicos preferidos são geralmente os conhecidos na especialidade como sendo úteis para técnicas de imagiologia incluindo, cintigrafia gama, ressonância magnética, tomografia de emissão de positrões e tomografia computadorizada. Os iões metálicos úteis para a quelação em composições de agentes e utilizações para contraste em MRI Tipo Tl paramagnética podem incluir catiões bivalentes e trivalentes de metais seleccionados de entre ferro, manganês, crómio, cobre, níquel, gadolínio, érbio, európio, disprósio e hólmio. Os iões metálicos quelados geralmente úteis para imagiologia de radionuclidos e em composições e utilizações radioterapêuticas, podem incluir metais seleccionados de entre gálio, germânio, cobalto, cálcio, rubídio, ítrio, tecnécio, ruténio, rénio, índio, irídio, platina, tálio e samário. Os iões metálicos úteis em terapia de radiação com captura de neutrões podem incluir boro e outros com grandes secções transversais nucleares. Os iões metálicos úteis em composições e utilizações para contraste em Ultra-sons e contraste em Raios X podem, desde que atinjam concentrações locais adequadas, incluir quaisquer dos iões metálicos enumerados acima, e em particular, podem incluir iões metálicos de número atómico pelo menos igual ao do ferro.

As composições são proporcionadas com um marcador. Podem ser utilizados vários marcadores radioactivos, conforme seja adequado para a aplicação particular. Por exemplo, um marcador 99mTc pode ser preferido para imagiologia gama, 61Cu para imagiologia PET, gadolínio para MRI e 188Re (166Ho-) para aplicações radioterapêuticas internas. Os iões metálicos da presente invenção são como estabelecido nas reivindicações. 10 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ

Os exemplos seguintes são incluídos para demonstrar concretizações preferidas da invenção. Os peritos na especialidade notarão que as técnicas divulgadas nos exemplos que se seguem representam técnicas que o inventor identificou como funcionando bem na prática da invenção, e assim podem ser consideradas como constituindo modos preferidos para a sua prática. Contudo, os peritos na especialidade deverão, à luz da presente divulgação, notar que podem ser feitas quaisquer alterações nas concretizações específicas que são divulgadas e ainda obter um resultado igual ou similar sem afastamento às reivindicações.

Exemplo 1 Síntese de DTPA-Nateglinida (DTPA-NGN)

Sintetizou-se DTPA-nateglinida num modo de duas etapas. O esquema de síntese está apresentado na Figura 1.

Etapa 1. Síntese de análogo aminoetilamida de nateglinida

Dissolveu-se nateglinida (3,1742 g, 10 mmol) em 20 mL de álcool etílico. Adicionou-se cloreto de tionilo (5,1 mL, 70 mmol), gota a gota, à solução. Agitou-se a mistura reaccional durante a noite e evaporou-se o solvente a pressão reduzida. As Figuras 2 e 3 mostram o 1H-RMN de nateglinida e da sua forma éster.

Adicionaram-se álcool etílico (20 mL) e etilenodiamina (3,4 mL, 50 mmol). Agitou-se a mistura durante a noite. Evaporou-se o solvente a pressão reduzida. Dissolveu-se o sólido em clorofórmio (50 mL) e lavou-se com água (2 X 50 mL). Secou-se a camada do clorofórmio sobre sulfato de magnésio anidro. Filtrou-se o solvente e evaporou-se a pressão reduzida. Obteve-se o análogo aminoetilamida de nateglinida sob a forma de um sólido branco (3,559 g, rendimento de 99%). As Figuras 4 e 5 mostram o espectro de 1HRMN e o espectro de massa do análogo aminoetilamida de nateglinida.

Etapa 2. Síntese de DTPA-Nateglinida

Dissolveu-se o análogo aminoetilamida de nateglinida (359,5 mg, 1,0 mmol) em DMSO (anidro, 10 ml). Adicionaram-se dianidrido de DTPA (178,7 mg, 0,5 mmol) e trietilamina (279 uL, 2,0 mmol) à solução e aqueceu-se a mistura a 60°C 11 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ durante 4 horas. Após arrefecimento, adicionaram-se água (8 mL) e solução IN de bicarbonato de sódio (8 mL) . Agitou-se a mistura durante 2 horas. Dialisou-se a fase aquosa com membrana (MWCO < 500) durante 2 dias. O DTPA-NGN (413,9 mg, rendimento de 87,7%), sob a forma de um sólido branco, foi obtido após liofilização. As Figuras 6 e 7 mostram o espectro de 1H-RMN e o espectro de massa de DTPA-Nateglinida.

Exemplo 2 Síntese de DTPA-Glipizida (DTPA-GLP)

Dissolveu-se glipizida (445,5 mg, 1,0 mmol) em DMSO (anidro, 10 ml). Adicionou-se depois amida de sódio (76,03 mg, 2.0 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 10 min. Dissolveu-se dianidrido de DTPA (357,32 mg, 1,0 mmol) em DMSO (anidro, 10 ml). Adicionou-se depois amida de sódio (76,03 mg, 2,0 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 10 min. Adicionou-se o dianidrido de DTPA (357,32 mg, 1,0 mmol) dissolvido em 5 ml de DMSO (anidro) e agitou-se a mistura durante 4 horas. Adicionou-se água (10 mL) à mistura, seguida de solução IN de hidróxido de sódio (3 mL) e agitou-se durante 2 horas. Filtrou-se o sólido e lavou-se com água. Este material de partida recuperado era 142,6 mg (32%) após secagem sob vácuo. Dialisou-se a fase aquosa com membrana (MWCO < 500) durante 2 dias. 0 DTPA-GLP (506,6 mg; rendimento de 61,7%), sob a forma de um sólido branco, foi obtido após liofilização. O esquema de sintese está apresentado na Figura 8. As Figuras 9-17 mostram os espectros de 1H-, 13C-RMN e atribuição e espectrometria de massa de DTPA-glipizida.

Exemplo 3 Síntese de DTPA-Gliburida (DTPA-GLB)

Dissolveu-se gliburida (494,0 mg, 1,0 mmol) em DMSO (anidro, 5 ml). Adicionou-se depois amida de sódio (195,0 mg, 5.0 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 10 min. Adicionou-se dianidrido de DTPA (357,32 mg, 1,0 mmol) dissolvido em 5 ml de DMSO (anidro) e agitou-se a mistura durante 22 horas. Adicionou-se água (10 mL) à mistura de cor verde escura, seguida de solução IN de hidróxido de sódio (5 mL) e agitou-se durante 2 horas. Filtrou-se o sólido e lavou-se com água. Este material de 12 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ partida recuperado era 88,9 mg (18%) após secagem sob vácuo. Dialisou-se a fase aquosa com membrana (MWCO < 500) durante 2 dias. O DTPA-LB (695, 5 mg, rendimento de 80%), sob a forma de um sólido branco, foi obtido após liofilização. O esquema de síntese está apresentado na Figura 18. As Figuras 19-25 mostram os espectros de 1H-, 13C-RMN e atribuição de gliburida e DTPA-gliburida.

Exemplo 4 Síntese de DTPA-Glimepirida (DTPA-GLMP)

Dissolveu-se glimepirida (490,6 mg, 1,0 mmol) em DMSO (anidro, 10 ml). Adicionou-se depois amida de sódio (195,0 mg, 5,0 mmol). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 10 min. Adicionou-se dianidrido de DTPA (357,32 mg, 1,0 mmol) dissolvido em 5 ml de DMSO (anidro) e agitou-se a mistura durante 18 horas. Adicionou-se água (10 mL) à mistura de cor castanho-escuro, seguida de solução IN de hidróxido de sódio (5 mL) e agitou-se durante 2 horas. Filtrou-se o sólido e lavou-se com água. Dialisou-se a fase aquosa com membrana (MWCO < 500) durante 2 dias. O DTPA-GLMP (782,3 mg, rendimento de 90,3%), sob a forma de um sólido branco, foi obtido após liofilização. O esquema de síntese está apresentado na Figura 27. As Figuras 28-34 mostram os espectros de 3Η-, 13C-RMN e atribuição de glimepirida e DTPA-glimepirida.

Exemplo 5

Conjugados Radiomarcador-DTPA-antidiabético A radiossintese dos "mTc-DTPA-agente antidiabético foi realizada adicionando a quantidade requerida de DTPA-agente antidiabético (5-10 mg) e cloreto de estanho (II) (SnCl2, 100μ9) e pertecnetato (Na99mTcC>4, 5 mCi). A pureza radioquímica foi avaliada por radio-TLC (Bioscan, Washington, D.C.) utilizando acetato de amónio 1 M: metanol (4:1) como eluente. Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC), equipada com um detector Nal e detector UV (254 nm) , foi realizada numa coluna de permeação de gel (Biosep SEC-S3000, 7, 8 X 300 mm,

Phenomenex, Torrance CA) utilizando um caudal de 1,0 ml/min. O eluente era LiBr a 0,1% em solução salina tamponada com fosfato (PBS 10 mM, pH = 7,4). A pureza radioquímica foi < 96% 13 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ para todos os quatro agentes. Os dados de Radio-TLC de 99mTc-DTPA-nateglinida estão apresentados na Figura 35.

Exemplo 6

Imagiologia cintigráfica: A imagiologia cintigráfica em roedores foi conduzida como se segue:

Ratos Fischer 344 fêmea (150-175 g) (Harlan Sprague-

Dawley, Inc., Indianapolis, IN) foram inoculados subcutaneamente na perna direita com células de cancro da mama (106 células/rato) da linha celular 13762 NF (conhecida como linha celular de cancro da mama induzido por DMBA). A imagiologia cintigráfica foi realizada em série no dia 14 após a inoculação. Obtiveram-se imagens planas a 0,5 e 2 horas após a injecção de 300 pCi de "mTc-DTPA-NGN ou "mTc-DTPA-GLP através da veia da cauda. Grupos de controlo receberam 99mTc-DTPA. A imagiologia foi conduzida com uma câmara gama de Digirad (2020tc Imager, San Diego, CA) equipada com um colimador de orifício paralelo de baixa energia. O campo de visão é de 20 cm X 20 cm com uma aresta de 1,3 cm. A resolução espacial intrínseca é de 3 mm e a matriz é de 64 X 64. O sistema é desenhado para uma imagem plana com sensibilidade de 56 contagens/segundo (cps)/MBq e resolução espacial de 7,6 mm. As Figuras 36-44 mostram que o pâncreas pode ser visualizado com "mTc-DTPA-nateglinida (NGN) ou "mTc-DTPA-glipizida em ratos normais e ratos portadores de tumor. A imagiologia cintigráfica em coelhos foi conduzida como se segue:

Coelhos New Zealand brancos machos (n = 4) (Raynichols Rabbitry, Lumberton, TX) foram inoculados com células VX-2 (carcinoma de células escamosas mamárias conduzido em coelho). No dia 14 após a inoculação, conduziram-se estudos de imagiologia cintigráfica com "mTc-DTPA-NGN (1 mCi, iv). Utilizou-se a região de interesse salientada pelo computador para analisar razões direccionado-para-não direccionado. As Figuras 45 e 46 mostram que o pâncreas pode ser visualizado com "mTc-DTPA-nateglinida (NGN) . As Figuras 47 e 48 mostram que a assimilação pelo pâncreas foi superior aos grupos de controlo. 14 ΕΡ 1 675 625/ΡΤ

Em resumo, os resultados de imagiologia demonstraram que pode ser obtida a imagem do pâncreas com nateglinida e glipizida radiomarcadas. Assim, alterações de assimilação no pâncreas podem ser determinadas utilizando este marcador molecular especifico.

Todas as composições e métodos divulgados e reivindicados aqui podem ser realizados e executados sem experimentação excessiva à luz a presente divulgação. Embora as composições e métodos da presente invenção tenham sido descrito em termos de concretizações preferidas, será evidente para os peritos na especialidade que podem ser aplicadas variações às composições e/ou métodos e nas etapas ou na sequência de etapas dos métodos aqui descritos sem afastamento às reivindicações anexas.

Lisboa, 2013-05-16

Claims (7)

1. ΕΡ 1 675 625/ΡΤ 1/1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição para imagiologia de um pâncreas compreendendo ácido dietilenotriaminopenta-acético- nateglinida, ácido dietilenotriaminopenta-acético-glipizida, ácido dietilenotriaminopenta-acético-gliburida ou ácido dietilenotriaminopenta-acético-glimepirida e um ião metálico quelado, em que o ião metálico é seleccionado de entre: um emissor beta; um emissor gama; e Tc-99m, Cu-60-64, Ga-67,68, Gd, Ho-166, ou Re-187,188.
2. 2. Composição da reivindicação 1, em que o ião metálico é eficaz para imagiologia melhorada com contraste quando a composição é administrada a um mamífero durante a utilização.
3. 3. Composição da reivindicação 1, adicionalmente definida como "mTc-DTPA-nateglinida, ggmTc-DTPA-glipizida, "mTc-DTPA-gliburida ou "mTc-DTPA-glirnepirida.
4. 4. Método de imagiologia de um pâncreas de mamífero compreendendo a administração ao mamífero de uma composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e a detecção de uma imagem do pâncreas.
5. 5. Método de acordo com a reivindicação 4, em que a imagem é uma imagem gama, uma imagem PET ou uma imagem MRI.
6. 6. Método de acordo com a reivindicação 4, em que a composição compreende "mTcDTPA-nateglinida.
7. 7. Método de acordo com a reivindicação 4, em que o método de imagiologia é um método de monitorização da massa ou da morfologia de células beta pancreáticas num mamífero. Lisboa, 2013-05-16