NO336658B1

NO336658B1 - Preparat for synliggjøring av pankreas og fremgangsmåte for synliggjøring av en pattedyrpankreas ved administrering av preparatet

Info

Publication number: NO336658B1
Application number: NO20061645A
Authority: NO
Inventors: Dong-Fang Yu; David J Yang; Chang-Sok Oh; Jr Jerry L Bryant; Saady Kohanim; Ali Azhdarinia
Original assignee: Univ Texas
Priority date: 2003-09-17
Filing date: 2006-04-11
Publication date: 2015-10-12
Also published as: KR20110119813A; CN1867363B; EP2474328A2; US20100278731A1; KR20060104984A; US20050100506A1; AU2004273911A1; JP2015078223A; PT1675625E; AU2004273911B2; PL1675625T3; EP1675625A4; NO20061645L; EP1675625A1; KR101152729B1; US7611693B2; WO2005027981A1; DK1675625T3; BRPI0414512B8; JP2007505915A

Abstract

Preparater til synliggjøring av betaceller som omfatter chelator-antidiabetiske middelkonjugater og eventuelt chelaterte metaller.

Description

Bakgrunn for oppfinnelsen

I USA lider omtrent 16 mill. mennesker (6 prosent av populasjonen) av diabetes mellitus. Hvert år blir omtrent 800 000 nye tilfeller diagnostisert og nye 6 mill. mennesker forblir uoppmerksomme på at de har sykdommen. Diabetes mellitus dreper omtrent 193 000 amerikanere hvert år og den er den sjuende ledende årsaken til alle dødsfall og den sjette ledende årsaken til alle dødsfall forårsaket av sykdom. Det er en stadig økende andel barn som utvikler type-2-diabetes. I Canada har mer enn 2,2 mill. innbyggere (7 prosent av populasjonen) diabetes mellitus og sykdommen bidrar til mer enn 25 000 dødsfall hvert år.

Adenokarsinom i pankreas er den femte mest vanlige årsaken til kreftdødsfall i USA. I USA blir nesten 45 000 mennesker rammet av pankreaskreft hvert år. Kreft forekommer oftest i pankreashodet og fører ofte til biliær obstruksjon med en klinisk presentasjon av gulsott uten smerte. 5 års overlevelsesraten for pasienter der reseksjon er mulig, er omtrent 10 % med en gjennomsnittlig overlevelse på 12 til 18 måneder. Hos pasienter der reseksjon ikke er mulig, overlever disse omtrent 6 måneder. Begge sykdommer er assosiert med pankreasfunksjonen. Risiko for pankreaskreft er også økt hos diabetikere som får sykdommen i voksen alder.

I pankreas er de langerhanske øyene sammensatt av fire celletyper, der hver av disse syntetiserer og utskiller et spesielt polypeptidhormon: insulin i betacellene (60 %), glukagon i alfacellene (25 %), somatostatin i D-cellene (10 %) og pankreaspolypeptid i F-cellene (5 %). Betacellene er hovedtypen av celler i pankreas. Visse næringsmidler og vekstfaktorer kan stimulere pankreasbetacellevekst. Likevel har de hensiktsmessige mitogene signaliseringsveiene i betaceller vært relativt udefinerte. Denne mangelen på evne til å definere disse viktige signaliseringsveiene skyldes i det minste delvis mangelen på effektive synliggjøringsteknologier.

Den nåværende status for synliggjøring ved pankreassykdommer har nylig blitt gjennomgått av Kalra et al. Journal of Computer Assisted Tomography 26:661- 675. De gjennomgåtte teknologiene inkluderer CT-, MRI-, EUS- og PET-skanninger.

Heindel, N. D et al beskriver i Journal of Pharmaceutical Sciences. 1975, Vol 64, No 4, s. 687-689 syntese og vevsdistribusjon av<99m>Tc-Sulfonylureaforbindelser, som er brukt som radiofarmasøytiske billeddannende midler for å visualisere pankreas.

Rosiére, A. et al beskriver i Clinical Endocrinology. 2002, Vol 57, s. 547-549 deteksjon av en tumor i bukspyttkjertelen hos en eldre kvinne, ved å anvende<ul>In-DTPA-oktreotid.

WO 01/44177 A vedrører radiomerkede peptidbaserte farmakoforer som binder til somatostatin-reseptorer i blant annet bukspyttkjertelen. Disse forbindelsene kan brukes til å visualisere tumorer, og i radioterapi.

Oppsummering av oppfinnelsen

Foreliggende beskrivelse omhandler i det minste delvis noen mangler i den kjente teknikken ved å tilveiebringe nye DTPA-antidiabetiske konjugater som er nyttige for synliggjøring av betacellefunksjonen. Via binding av radiomerkede konjugater, slik som<99m>Tc-DTPA-antidiabetiske konjugater, for eksempel til pankreasbetareseptorer, som er påvisbare ved hjelp av gammascintigrafi, blir pankreasfunksjon overvåket. Fire DTPA-antidiabetiske konjugater har blitt syntetisert og evaluert. Dyreundersøkelser har vist at DTPA-nateglinid og DTPA-glipizid er i stand til selektivt å synliggjøre pankreasbetaceller uten noen akutt toksisitet ved de gitte dosene. Disse midlene er merket med isotoper for å undersøke betacellefunksjonen i diabetiske eller insulinome pasienter både før og etter behandling. Disse preparatene er nyttige for å tilveiebringe tidlig diagnose i tillegg til å overvåke respons på pankreassykdom i løpet av behandling.

Foreliggende oppfinnelse kan derfor i visse utførelsesformer beskrives som et preparat som omfatter omfatter dietylentriaminpenta-eddiksyre-nateglinid, dietylentriaminpentaeddiksyre-glipizid, dietylentriaminpenta-eddiksyre-glyburid eller dietylentriaminpentaeddiksyre-glimepirid, og et chelatert metallion, kjennetegnet ved at metallionet er valgt fra en betastråler, en gammastråler, og enTc-99m, Cu-60-64, Ga-67,68, Gd, Ho-166 eller Re-187, 188. Anvendelsen av preparater som omfatter metaller eller metallioner i in v/vø-syneliggj øringen av pattedyrvev eller organer er velkjent på fagområdet.

Preparatene i foreliggende beskrivelse kan derfor inkludere metaller som er hensiktsmessige til kontrastforsterket synliggjøring eller til scintigrafisk synliggjøring av PET, MRI eller til og med CT-synliggjøring. Metallet kan være en betastråler eller en gammastråler, eller det kan velges fra technetium (Tc-99m), gallium (Ga-67, 68), kopper (Cu-60-64), gadolinium (Gd), holmium (Ho-166) eller holmium (Re-187, 188).

Chelatoren i de beskrevne preparatene er dietylentriaminpentaeddiksyre

(DTPA).

De antidiabetiske midlene ifølge foreliggende oppfinnelse er valgt fra nateglinid, glipizid, glyburid eller glimepirid.

I visse utførelsesformer kan preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse inkludere enhver av de nevnte forbindelsene eller elementene i enhver kombinasjon, og inkludere fortrinnsvis<99m>Tc-DTPA-nateglinid,<99m>Tc-DTPA-glipizid,<99m>Tc-DTPA-glyburid eller<99m>Tc-DTPA-glimepirid for gammasynliggj øring.

Preparater som beskrevet her er nyttige i et antall applikasjoner, både diagnostiske, prognostiske og terapeutiske. Som slike kan visse utførelsesformer av oppfinnelsen beskrives som fremgangsmåter for synliggjøring av en pattedyrpankreas som omfatter å administrere til pattedyr et preparat som omfatter et antidiabetisk middel, en chelator og et chelatert metallion som beskrevet ovenfor og påvise en synliggjøring av pankreas. Som beskrevet kan synliggjøringen være en gammasynliggj øring, en PET- synliggjøring, en MRI-synliggjøring eller andre typer av synliggjøringer som er kjent på fagområdet.

Eksempelfremgangsmåter inkluderer fremgangsmåter for å overvåke pankreasbetacellemasse eller morfologi hos et pattedyr, som er nyttig for å overvåke tilstanden til pankreas i et mottakelig individ før starten av pankreassykdom, eller overvåke utvikling av en sykdom, eller til og med fremgangsmåte for å overvåke resultatet av visse terapier i løpet av behandling eller håndtering av en pankreassykdom. Fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen kan derfor benyttes til å overvåke betacellemasse, celleantall, funksjon eller lymfocyttinfiltrering inn i betacellemassen.

Gjennom denne beskrivelsen, dersom ikke konteksten dikterer noe annet, er det slik at ordet "omfatte" eller variasjoner slik som "omfatter" eller "omfattende" skal bety "inkludere", slik at andre elementer som ikke eksplisitt er nevnt, også kan inkluderes. Dersom ikke konteksten dikterer noe annet, kan videre anvendelsen av uttrykket "en" eller "ei", "et" bety det singulære objektet eller elementet, eller de kan bety et flertall, eller én eller flere av slike objekter eller elementer.

Kort beskrivelse av tegningene

De følgende tegningene danner en del av foreliggende beskrivelse og er inkludert for ytterligere å vise visse aspekter av foreliggende oppfinnelse. Oppfinnelsen kan bedre forstås med referanse til én eller flere av disse tegningene i kombinasjon med den detaljerte beskrivelsen av spesifikke utførelsesformer som er gitt her.

FIG. 1 er et syntetisk skjema av metall-(<99m>Tc, Gd) DTPA-NGN2

FIG. 2 er 'H-NMR-spektrum av nateglinid

FIG. 3 er 1 H-NMR-spektrum avNGN-Et

FIG. 4 er 'H-NMR-spektrum av NGN-EA

FIG. 5 er masse spektret for NGN-EA

FIG. 6 er 'H-NMR-spektrum av NGN2

FIG. 7 er massespektret av DTPA-NGN2

FIG. 8 er et syntetisk skjema for DTPA-GLP

FIG. 9 er<*>H-NMR-data for glipizid

FIG. 10 er 1 H-NMR-spektrum for glipizid

FIG. 11 er<13>C-NMR-data for glipizid

FIG. 12 er<13>C-NMR-spektret for glipizid

FIG. 13 er<*>H-NMR-data for DTPA-glipizid

FIG. 14 er 1 H-NMR-spektrum for DTPA-glipizid

FIG. 15 er<13>C-NMR-data for DTPA-glipizid

FIG. 16 er<13>C-NMR-spektrum for DTPA-glipizid

FIG. 17 er massespektret for DTPA-glipizid

FIG. 18 er et syntetisk skjema for DTPA-glyburid

FIG. 19 er<*>H-NMR-data for glyburid

FIG. 20 er 1 H-NMR-spektret for glyburid

FIG. 21 er<13>C-NMR-data for glyburid

FIG. 22 er<13>C-NMR-spektret for glyburid

FIG. 23 er<*>H-NMR-data for DTPA-glyburid

FIG. 24 er 1 H-NMR-spektret for DTPA-glyburid

FIG. 25 er<13>C-NMR-spektret for DTPA-glyburid

FIG. 26 er et syntetisk skjema for DTPA-GLMP

FIG. 27<*>H-NMR-data for GLMP

FIG. 28 er et ^-NMR-spektrum for GLMP

FIG. 29 er<13>C-NMR-data for GLMP

FIG. 30 er et<13>C-NMR-spektrum for GLMP

FIG. 3ler ^-NMR-data for DTPA-GLMP

FIG. 32 er et ^-NMR-spektrum for DTPA-GLMP

FIG. 33<13>C-NMR-data for DTPA-GLMP

FIG. 34 er et<13>C-NMR-spektrum for DTPA-GLMP

FIG. 35 er ITLC-data for Tc-DTPA-NGN2

FIG. 36 er kjernesynliggj øring i<99m>Tc-DTPA-nateglinid. Brysttumorbærende rotter ble synliggjort med<9>9mTc-DTPA (venstre panel) og<9>9mTc-DTPA-NGN2 (høyre panel) (300 (iCi, i.v.). Valgte plansynliggjøringer av<99m>Tc-DTPA-NGN2 er vist ved 5 og 50 minutter etter injeksjon. Pilen viser pankreas. FIG. 37 er en synliggjøring av brysttumorbærende rotter synliggjort med<99m>Tc-DTPA-NGN2 (300|iCi, i.v.). Valgte plansynliggjøringer av<99m>Tc-DTPA-NGN2 er vist ved 50 minutter etter injeksjon. Pilen indikerer pankreas. FIG. 38 er planscintigrafiske synliggjøringer av<99m>Tc-DTPA i 13762 tumorbærende rotter (300\ iCi/rotte, i.v.-injeksjon). FIG. 39 er planscintigrafiske synliggjøringer av<99m>Tc-DTPA-NGN (2) i 13762 tumorbærende rotter (300|iCi/rotte, i.v.-injeksjon). FIG. 40 er planscintigrafiske synliggjøringer av<99m>Tc-DTPA-NGN (1) i 13762 tumorbærende rotter (300\ iCi/rotte, i.v.-injeksjon). FIG. 41 er synliggjøringer av brysttumorbærende rotter synliggjort med<99m>Tc-DTPA (venstre panel),<99m>Tc-DTPA-NGN2 (midtre panel) og<99m>Tc-DTPA-NGN2 med en blokkeringsdose på 4 mg/kg NGN2 (høyre panel) (300(iCi, i.v.). Valgte plane synliggjøringer er vist ved 150 minutter etter injeksjon. FIG. 42 er synliggjøringer av brysttumorbærende rotter synliggjort med<99m>Tc-DTPA (venstre panel),<99m>Tc-DTPA-NGN2 (midtre panel) og<99m>Tc-DTPA-NGN2 med en blokkeringsdose på 4 mg/kg NGN2 (høyre panel) (300(iCi, i.v.). Valgte plane synliggjører er vist ved 150 minutter etter injeksjon. Pilen indikerer pankreas. FIG. 43 er planscintigrafiske synliggjøringer av<99m>Tc-DTPA og<99m>Tc-DTP<A->glipizid (GLUCOTROL) i rotter (300|iCi/rotte, i.v.-injeksjon) ved 5 minutter etter injeksjon. FIG. 44 er planscintigrafiske synliggjøringer av<99m>Tc-DTPA og<99m>Tc-DTPA-glipizid (GLUCOTROL) i rotter (300|iCi/rotte, i.v.-injeksjon) ved 15 minutter etter injeksjon. FIG. 45 er planscintigrafiske synliggjøringer av<99m>Tc-DTPA i VX2-tumorbærende kaniner (lmCi/kanin, i.v.-injeksjon). FIG. 46 er planscintigrafiske synliggjøringer av<99m>Tc-DTPA-NGN i VX2-tumorbærende kaniner (lmCi/kanin, i.v.-injeksjon). P indikerer pankreas. FIG. 47 er en grafisk fremstilling som sammenligner pankreasopptak av<9>9mTc-DTPA og<99m>Tc-DTPA-NGN i brysttumorbærende rotter (n=3/tidsintervall, 20|iCi, IV, p=0,l 1,0,05 og 0,01). FIG. 48 er en grafisk fremstilling pankreas til muskeltellingstetthet ratio av<99m>Tc-DTPA og<99m>Tc-NGN i brysttumorbærende rotter (n=3/tidsintervall, 20|iCi/rotte, IV,p=0,19, 0,19 og 0,029).

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen

Foreliggende beskrivelse tilveiebringer preparater for å forbedre diagnostiseringen og behandlingen av pankreasassosierte sykdommer, inkludert men ikke begrenset til, diabetes, pankreatitt, insulinom, adenokarsinom, øycelletumor, øyhypertrofi hos diabetikere og hyperinsulinemi basert på oppdagelsen av preparater og fremgangsmåter for synliggjøringen av betaceller in vivo i tillegg til leveringen av midler av terapeutisk verdi, spesifikt til pankreasbetaceller.

Denne beskrivelsen er basert på utviklingen av preparater for mekanismebasert målsøking av betaceller for synliggjøring og terapeutiske hensikter. De omtalte preparatene inkluderer et antidiabetisk middel, en chelator og et chelatert metallion som beskrevet ovenfor. Foreliggende oppfinnere har vellykket vist scintigrafisk visualisering av pankreas i rotte- og kanindyremodeller ved å benytte slike preparater, inkludert<99m>Tc-DTPA-nateglinid (NGN) og<99m>Tc-DTPA-glipizid.

De antidiabetiske midlene ifølge foreliggende beskrivelse er fortrinnsvis midler som fortrinnsvis interagerer med eller binder til spesifikke reseptorer på pankreas-betacellene. Slike midler kan binde til sulfonylureareseptorene, inkludert SURI, SUR2A og SUR2B, GLP-1-reseptor, somatostatinreseptor, angiotensin II-reseptor og/eller bradykininreseptor. Midlene ifølge foreliggende oppfinnelse er nateglinid, glipizid, glyburid og glimepirid.

Vandige preparater ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter en effektiv mengde av de beskrevne preparatene oppløst og/eller dispergert i en farmasøytisk akseptabel bærer og/eller vandig medium. Frasene "farmasøytisk og/eller farmakologisk akseptabel" refererer til molekylære enheter og/eller preparater som ikke frembringer en skadelig, allergisk og/eller på annen måte uheldig reaksjon når de blir administrert til et dyr, og/eller et menneske, der det er hensiktmessig.

Som benyttet her inkluderer "farmasøytisk akseptabel bærer" ethvert og/eller alle løsningsmidler, dispergeringsmedier, belegninger, antibakterielle og/eller antisoppmidler, isotone og/eller absorpsjonsforsinkende midler og/eller lignende. Anvendelsen av slike medier og/eller midler for farmasøytisk aktive stoffer er velkjent på fagområdet. Bortsett fra i den grad ethvert konvensjonelt medium og/eller middel ikke er kompatibelt med den aktive ingrediensen, er dennes anvendelse i preparatene omfattet. Aktive tilleggsingredienser kan også inkorporeres i preparatene.

Vandige bærere kan inkludere vann, alkoholløsninger/vandige løsninger, saltløsninger, parenterale vehikler, slik som natriumklorid, Ringers dekstrose, osv. Intravenøse vehikler kan inkludere væske- og næringsmiddelerstattere. Pre servering s-midler kan inkludere antimikrobielle midler, antioksidanter, chelaterende midler og inerte gasser. pH og den eksakte konsentrasjonen av de ulike komponentene i det farmasøytiske midlet ble justert i henhold til velkjente parametre.

For formål ifølge denne beskrivelsen er foretrukne metallioner generelt de som er kjent på fagområdet for å være nyttige i sine synliggjøringsteknikker, inkludert gammascintigrafi, magnetisk resonans, positron emisjonstomografi og computer-tomografi. Metallioner som er nyttige til chelatering i paramagnetiske Tl-Type MRI-kontrastmiddelpreparater og anvendelser, kan inkludere divalente og trivalente kationer av metaller som er valgt fra jern, mangan, krom, kopper, nikkel, gadolinium, erbium, europium, dysprosium og holmium. Chelaterte metallioner som generelt er nyttige til radionukleinsynliggj øring og i radioterapeutiske preparater og anvendelser, kan inkludere metaller som er valgt fra gallium, germanium, kobolt, kalsium, rubidium, yttrium, technetium, ruthenium, rhenium, indium, iridium, platina, thallium og samarium. Metallioner som er nyttige i nøytroninnfangningsstrålingsterapi, kan inkludere bor og andre med store nukleære kryssnitt. Metallioner som er nyttige i ultralydkontraststrek og røntgenkontrastpreparater og anvendelser, kan, gitt at de oppnår adekvate konsentrasjoner på stedet, inkludere ethvert av metallionene som er beskrevet ovenfor, og spesielt kan de inkludere metallioner med atomnummer som minst er likt atomnummeret til jern.

Preparatene er tilveiebrakt med et merke. Ulike radioaktive merker kan benyttes, slik som det er hensiktsmessig for en spesiell applikasjon. For eksempel kan et<99m>Tc-merke være foretrukket til gammasynliggj øring, 61 Cu for PET-synliggj øring, gadolinium for MRI og 18S Re( 166Ho-) for interne radioterapeutiske applikasjoner. Metallioner ifølge oppfinnelsen er fastsatt i kravene

De følgende eksempler er inkludert for å vise foretrukne utførelsesformer av oppfinnelsen.

Eksempel 1

Syntese av DTPA-nateglinid (DTPA-NGN)

DTPA-nateglinid ble syntetisert i to trinn. Synteseskjemaet er vist i figur 1.

Trinn 1. Syntese av aminoetylamidanalog av nateglinid

Nateglinid (3,1742 g, 10 mmol) ble løst i 20 ml etylalkohol. Tionylklorid (5,1 ml, 70 mmol) ble tilsatt dråpevis til løsningen. Reaksjonsblandingen ble rørt over natt og løsningsmidlet ble avdampet ved redusert trykk. Figurene 2 og 3 viser ^-NMR av nateglinid og dens esterform.

Etylalkohol (20 ml) og etylendiamin (3,4 ml, 50 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt over natt. Løsningsmidlet ble dampet av ved redusert trykk. Det faste stoffet ble løst i kloroform (50 ml) og vasket med vann (2 X 50 ml). Kloroformlaget ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat. Løsningsmidlet ble filtrert og avdampet ved redusert trykk. Aminoetylamidanalog av nateglinid ble fremskaffet som et hvitt fast stoff (3,559 g, 99 % utbytte). Figurene 4 og 5 viser ^-NMR og massespektrometri av aminoetylamidanalog av nateglinid.

Trinn 2. Syntese av DTPA-nateglinid

Aminoetylamidanalog av nateglinid (359,5 mg, 1,0 mmol) ble løst i DMSO (vannfritt, 10 ml). DTPA-dianhydrid (178,7 mg, 0,5 mmol) og trietylamin (279 |il, 2,0 mmol) ble tilsatt til løsningen og blandingen ble varmet opp til 60°C i 4 timer. Etter avkjøling ble vann (8 ml) og lN-natriumbikarbonatløsning (8 ml) tilsatt. Blandingen ble rørt i 2 timer. Den vandige fasen ble dialysert med membran (MW CO < 500) i 2 dager. DTPA-NGN (413,9 mg, 87,7 % utbytte) som et hvitt fast stoff ble samlet etter lyofilisering. Figurene 6 og 7 viser ^-NMR og massespektrometri av DTPA-nateglinid.

Eksempel 2

Syntese av DTPA-glipizid (DTPA-GLP)

Glipizid (445,5 mg, 1,0 mmol) ble løst i DMSO (vannfritt, 10 ml). Natriumamid (76,03 mg, 2,0 mmol) ble deretter tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 10 min. DTPA-dianhydrid (357,32 mg, 1,0 mmol) ble løst i DMSO (vannfritt, 10 ml). Natriumamid (76,03 mg, 2,0 mmol) ble deretter tilsatt. Reaksjonsblandingen ble deretter rørt ved romtemperatur i 10 min. DTPA-dianhydrid (357,32 mg, 1,0 mmol) løst i 5 ml DMSO (vannfritt) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 4 timer. Blandingen ble tilsatt vann (10 ml), etterfulgt av lN-rmtriumhydroksidløsning (3 ml) og rørt i 2 timer. Det faste stoffet ble filtrert og vasket med vann. Dette gjenvunne utgangsmaterialet var 142,6 mg (32 %) etter tørking under vakuum. Den vandige fasen ble dialysert med en membran (MW CO < 500) i 2 dager. DTPA-GLP (506,6 mg, 61,7 % utbytte) som et hvitt fast stoff ble samlet etter lyofilisering. Synteseskjema er vist i figur 8. Figurene 9-17 viser 1 H-,<13>C-NMR-spektrum og overdragelse og massespektrometri av DTPA-glipizid.

Eksempel 3

Syntese av DTPA-glyburid (DTPA-GLB)

Glyburid (494,0 mg, 1,0 mmol) ble løst i DMSO (vannfritt, 5 ml). Natriumamid (195,0 mg, 5,0 mmol) ble deretter tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 10 min. DTPA-dianhydrid (357,32 mg, 1,0 ml) løst i 5 ml DMSO (vannfritt) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 22 timer. Den mørk grønne fargede i blandingen ble tilsatt med vann (10 ml), etterfulgt av lN-rmtriumhydroksidløsning (5 ml) og rørt i 2 timer. Det faste stoffet ble filtrert og vasket med vann. Dette gjenvunne utgangsmaterialet var 88,9 mg (18 %) etter tørking under vakuum. Den vandige fasen ble dialysert med membran (MW CO < 500) i 2 dager. DTPA-LB (695,5 mg, 80 % utbytte) som et hvitt fast stoff ble samlet etter lyofilisering. Synteseskjema er vist i figur 18. Figurene 19-25 viser 1 H-,<13>C-NMR-spektrum og overdragelse av glyburid og DTPA-glyburid.

Eksempel 4

Syntese av DTPA-glimepirid (DTPA-GLMP)

Glimepirid (490,6 mg, 1,0 mmol) ble løst i DMSO (vannfritt, 10 ml). Natriumamid (195,0 mg, 5,0 mmol) ble deretter tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 10 min. DTPA-dianhydrid (357,32 mg, 1,0 mmol) løst i 5 ml DMSO (vannfritt) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 18 timer. Den mørk brune fargede blandingen ble tilsatt vann (10 ml) etterfulgt av lN-natriurrmydroksidløsning (5 ml) og rørt i 2 timer. Det faste stoffet ble filtrert og vasket med vann. Den vandige fasen ble dialysert med membran (MW CO < 500) i 2 dager. DTPA-GLMP (782,3 mg, 90,3 % utbytte) var et hvitt fast stoff som ble samlet etter lyofilisering. Synteseskjema er vist i figur 27. Figurene 28-34 viser 1 H-,<13>C-NMR-spektrum og overdragelse av glimepirid og DTPA-glimepirid.

Eksempel 5

Radiomerkede DTPA-antidiabetiske konjugater

Radiosyntese av<99m>Tc-DTPA-antidiabetiske midler ble oppnådd ved å tilsette den nødvendige mengden med DTPA-antidiabetiske midler (5-10 mg) og tinn (Il)-klorid (SnCi2, 100 (ig) og pertechnat (Na<99m>Tc04, 5 mCi). Radiokjemisk renhet ble undersøkt ved hjelp av radio-TLC (Bioscan, Washington, D.C.) ved å benytte en M ammoniumacetat:metanol (4:1) som elueringsmiddel. Høyeffektiv flytende kromatografi (HPLC), utstyrt med en Nal-detektor og UV-detektor (254 nm), ble utført på en gelgjermomtrengningskolonne (Biosep SEC-S3000, 7,8 X 300 mm, Phenomenex, Torrance CA) ved å benytte en strømningshastighet på 1,0 ml/min. Elueringsmidlet var 0,1 % LiBr i fosfatbufret saltvann (PBS 10 mM, pH = 7,4). Radiokjemisk renhet var < 96 % for alle fire midler. Radio-TLC-data for<99m>Tc-<D>TPA-nateglinid er vist i figur 35.

Eksempel 6

Scintigrafisk synliggjøring:

Scintigr<q>fisk synliggjøring hos gnagere ble utført som følger: Fischer-344-hunnrotter (150-175 g) (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis IN) ble inokulert subkutant i den høyre foten med brystkreftceller (IO<6>celler per rotte) fra 13762-NF-cellelinjen (kjent som DMBA-mdusertbrystkreftcellelinje). Scintigrafisk synliggjøring ble utført i serie på dag 14 etter inokulering. Plane synliggjøringer ble fremskaffet ved 0,5, 1 og 2 timer etter injeksjon av 300 \ iCi med<99m>Tc-DTPA-NGN eller<99m>Tc-DTPA-GLP via nålevenen. Kontrollgruppene ble gitt<99m>Tc-DTPA. Synliggjøring ble utført med et gammakamera fra Digirad (2020tc Imager, San Diego, CA) utstyrt med en lavenergi paralellhullkollimator. Synsfeltet er 20 cm X 20 cm med en kant på 1,3 cm. Den iboende spatielle oppløsningen er 3 mm og matriksen er 64 X 64. Systemet er designet for en plansynliggjøring med sensitivitet på 56 tellinger/sekund (cps)/MBq og spatiell oppløsning på 7,6 mm. Figurene 36-44 viser at pankreas kan bli visualisert enten med<99m>Tc-DTPA-nateglinid (NGN) eller<99m>Tc-DTP-glipizid i normale rotter og i tumorbærende rotter.

Scintigrafisk synliggjøring hos kaniner ble utført som følger.

Hannkaniner (n=4) av typen New Zealand white (Raynichols Rabbitry, Lumberton, TX) ble inokulert med VX-2-celler (kanindrevet skvamøscelle bryst-karsinom).

På dag 14 etter inokulering ble scintigrafisk synliggj øringsundersøkelse utført med<99m>Tc-DTPA-NGN (1 mCi, iv). Databestemt region av interesse ble benyttet for å analysere mål-til-ikkemål ratioer. Figurene 45 og 46 viser at pankreasopptak kan visualiseres med<99m>tc-DTPA-nateglinid og glipizid. Figurene 47 og 48 viser at pankreasopptak var høyere enn kontrollgruppene.

Som oppsummering viste synliggjøringsdataene at pankreas kan synliggjøres med radiomerket nateglinid og glipizid. Slik kan opptaksendringer i pankreas vurderes etter denne spesifikke, molekylære markøren.

Alle preparatene og fremgangsmåtene som er tilkjennegi ort og krevd her, kan fremstilles og utføres uten unødvendig eksperimentering i lys av foreliggende beskrivelse. Mens preparatene og fremgangsmåtene ifølge denne oppfinnelsen som er beskrevet her i kraft av foreliggende utførelsesformer, ville være åpenbart for fagfolk på området at variasjoner kan utføres på preparatene og/eller fremgangsmåtene og i trinnet eller i sekvensen av trinn i fremgangsmåtene som er beskrevet her, uten å fjerne seg fra de tilhørende kravene.

Claims

1. Preparat for synliggjøring av pankreas som omfatter dietylentriaminpenta-eddiksyre-nateglinid, dietylentriaminpentaeddiksyre-glipizid, dietylentriaminpenta-eddiksyre-glyburid eller dietylentriaminpentaeddiksyre-glimepirid, og et chelatert metallion karakterisert vedat metallionet er valgt fra en betastråler, en gammastråler, og enTc-99m, Cu-60-64, Ga-67,68, Gd, Ho-166 eller Re-187, 188.

2. Preparat ifølge krav 1, hvor metallionet er effektivt til kontrastforbedret synliggjøring når preparatet administreres til et pattedyr ved anvendelse.

3. Preparat ifølge krav 1, hvor det er ytterligere definert som<99m>Tc-DTPA-nateglinid,<99m>Tc-DTPA-glipizid,<99m>Tc-DTPA-glyburid eller<99m>Tc-DTPA-glimepirid.

4. Fremgangsmåte for synliggjøring av en pattedyrpankreas, karakterisert vedat den omfatter administrering til pattedyret av et preparat ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3, og påvise et bilde av pankreas.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 4, hvor bildet er et gammabilde, et PET-bilde eller et MRI-bilde.

6. Fremgangsmåte ifølge krav 4, hvor preparatet omfatter<99m>Tc-<D>TPA-nateglinid.

7. Fremgangsmåte ifølge krav 4, hvor synliggj øringsfremgangsmåten er en fremgangsmåte for overvåkning av pankreasbetacellemasse eller morfologi hos et pattedyr.