NO174719B - Fremgangsmaate for fremstilling av monoklonale antistoffer - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av monoklonale antistoffer Download PDFInfo
- Publication number
- NO174719B NO174719B NO870770A NO870770A NO174719B NO 174719 B NO174719 B NO 174719B NO 870770 A NO870770 A NO 870770A NO 870770 A NO870770 A NO 870770A NO 174719 B NO174719 B NO 174719B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- antibody
- antigen
- monoclonal antibody
- hybridoma
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 49
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 97
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 68
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 68
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 67
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 44
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 38
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 32
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 21
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 16
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 14
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 9
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 18
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 17
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 16
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 15
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 15
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 13
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 9
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 5
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 5
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 4
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LPMXVESGRSUGHW-UHFFFAOYSA-N Acolongiflorosid K Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1CC2(O)CCC3C4(O)CCC(C=5COC(=O)C=5)C4(C)CC(O)C3C2(CO)C(O)C1 LPMXVESGRSUGHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 101001035658 Mus musculus 28 kDa heat- and acid-stable phosphoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101000785917 Mus musculus Arf-GAP with SH3 domain, ANK repeat and PH domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000735426 Mus musculus Poly(A) RNA polymerase, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- LPMXVESGRSUGHW-GHYGWZAOSA-N Ouabain Natural products O([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)[C@H]1C[C@@H](O)[C@@]2(CO)[C@@](O)(C1)CC[C@H]1[C@]3(O)[C@@](C)([C@H](C4=CC(=O)OC4)CC3)C[C@@H](O)[C@H]21 LPMXVESGRSUGHW-GHYGWZAOSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 244000166550 Strophanthus gratus Species 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N dibutyl phthalate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCC DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N ouabain Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C[C@@]2(O)CC[C@H]3[C@@]4(O)CC[C@H](C=5COC(=O)C=5)[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@@H]3[C@@]2(CO)[C@H](O)C1 LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N 0.000 description 2
- 229960003343 ouabain Drugs 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- GPKUGWDQUVWHIC-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine tetrahydrochloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.NNC1=CC=C(C=C1)C1=CC=C(NN)C=C1 GPKUGWDQUVWHIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DROMNWUQASBTFM-UHFFFAOYSA-N dinonyl benzene-1,2-dicarboxylate Chemical compound CCCCCCCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCCCCCCC DROMNWUQASBTFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 108010026195 glycanase Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000009595 pap smear Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- -1 phenylthio-hydantoin amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000013197 protein A assay Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002476 tumorcidal effect Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3015—Breast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
- C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling og anvendelse in vivo og in vitro av et hittil ukjent monoklonalt antistoff som er spesifikt for carcinoma-antigener. Nærmere bestemt bindes det monoklonale antistoff fremstilt ifølge oppfinnelsen til en determinantplass på et celleoverflate-glycoprotein-antigen fra humane, ikke-småcellede lungecarcinomaceller, humane brystcarcinomaceller eller humane tykktarmcarcinomaceller.
Det monoklonale antistoff fremstilt ifølge oppfinnelsen er reaktivt med en determinant av et glycoprotein-antigen assosiert med NSCLC-celler og også med andre carcinomer, herunder brystcarcinoma, tykktarmcarcinoma og småcellet lungecarcinoma. Det monoklonale antistoff fremstilt ifølge oppfinnelsen er i besittelse av karakteristiske egenskaper og evner som gjør et slikt antistoff egnet til kliniske diagnoseformål både in vivo og in vitro. Antistoffet kan videre f.eks. anvendes som mål-selektiv bærer av forskjellige midler som har anti-tumoreffekt, omfattende, men ikke begrenset til, kjemoterapeutiske legemidler, toksiner, immunologisk-reaksjonsmodi-fiserende midler og radioisotoper. Enn videre kan de hybridomer som produserer slike antistoffer, modifiseres under anvendelse av rekombinant-DNA-teknologi slik at de resulterende antistoffer kan formidle antistoff-avhengig cellulær cytotoksisitet, eller kan være cytolyttiske overfor tumorceller i nærvær av komplekskomponenter.
Lungecarcinomer er ansvarlige for størstedelen av dødsfall på grunn av cancer hos menn og er i ferd med å overstige brystcancer som den mest hyppige årsak til cancer-død blant kvinner. Denne sykdom kan oppdeles i fire histologiske hovedtyper: (1) epidermoid eller squamocellulær carcinoma (30%), (2) adenocarcinoma (35%), (3) udifferensi-ert storcellet carcinoma (15%) og (4) småcellet carcinoma (20%). Uttrykket ikke-småcellet lungecarcinoma ("NSCLC") omfatter følgende celletyper: epidermoide carcinomaceller, adenocarcinomaceller og udifferensierte store carcinomaceller.
De fleste tilfeller av lungecarcinomer kan ikke hel-bredes ved kjemoterapi og radioterapi. Småcellede lungecarcinomer kan reagere på kjemoterapi og radioterapi ved en reduksjon i størrelse, men dette gir ikke en fullstendig helbredelse. Fullstendig fjerning av tumoren ved operasjon synes å være den eneste virksomme behandling. Dessverre har mindre enn 30% av pasienter med lungecancer imidlertid tumorer som kan resekteres ved diagnose. Av disse overlever mindre enn 1/3 5 år etter tilsynelatende fullstendig fjerning av tumoren ved operasjon. Det er derfor et stort behov for metoder som kan muliggjøre en tidligere diagnose av lungecancer, en bedre bestemmelse av graden av spredning av cancer og en mer virksom behandling.
Monoklonale antistoffer som representerer homogene antistoffmolekyler som bindes til en enkelt molekylær plass (dvs. en epitop) på et antigen med en spesifikk bindings-eller affinitetskonstant, fremstilles ved hjelp av 3 metoder som er kjente innen teknikken.
Monoklonale antistoffer kan fremstilles ved hjelp av hybridomateknikk som beskrevet av Kohler & Milstein (1975, Nature 256: 495, 1976, Eur. J. Immunol. 6:511). Ved fusjon av antistoffproduserende celler (miltlymfocytter) med myelomaceller skapte Kohler og Milstein hybridceller, hvorved det oppsto udødelige cellelinjer som både var i besittelse av evnen til å produsere antistoff og evnen til å vokse permanent i cellekulturer. Hybridomene utskiller en enkelt type immunoglobulin med en på forhånd definert antigen-spesifisitet avhengig av det antigen overfor hvilket lymfo-cyttene tidligere er blitt eksponert.
Alternativt kan monoklonale antistoffer fremstilles ved in vitro-transformasjon av B-lymfocytter fra perifert blod fra pattedyr, f.eks. med Epstein Barr-virus (EBV). Nevnte virus udødeliggjør de antistoffproduserende lymfocytter. Metoder for en slik omdannelse er kjent innen teknikken (se f.eks. Steinmetz et al., 1977, Nature 269, 420, Crawford et al., 1983, The Lancet, i:386).
Endelig kan monoklonale antistoffer produseres
under anvendelse av teknikk som kombinerer både EBV-udødelig-gjørelsen og cellefusjon eller hybridomateknikk. Cole et al., (1985, i Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,
Alan Liss, Inc., side 77-96) beskriver metoder for fusjon
av en human plasmacytoma- eller lymfoblastoid-cellelinje-fusjonspartner med EBV-transformerte donorlymfocytter som
på forhånd er blitt etablert som en cellelinje. I et slikt system er begge foreldre-cellelinjer udødelige. Følgelig skal en fusjonspartner inneholde passende legemiddelmarkører til kontra-utvelgelse mot foreldrelinjene når de fusjonerte hybridomer dyrkes. De resulterende EBV-hybridomer produserer antistoffer med den anvendte EBV-lymfocyttcellelinjes spesifisitet.
Monoklonale antistoffer kan fremstilles i store mengder ved in vitro celledyrkning av særlige hybridomacellelinjer eller transformerte cellelinjer. Enn videre kan inokulering med en hybridomacellelinje i det peritoneale hulrom hos forenlige pattedyr slik som mus, resultere i en tumor som utskiller høye konsentrasjoner (1-20 mg/ml) av monoklonalt antistoff i tumor-ascitesvæsken. Ved fjerning av ascitesvæsken og rensing av det monoklonale antistoff kan en enkelt mus tilveiebringe tilstrekkelig antistoff for anvendelse ved tusenvis av diagnoseforsøk.
Monoklonale antistoffer mot humane lungecancer-antigener er blitt beskrevet av Sikora et al., 1981, Brit. J. Cancer 43: 696, Cuttita et al., 1981, Proe. Nat'l. Acad. Sei. USA 78:4591, Moody et al., 1981, Science 214, Minna et al., 1981, In vitro, 17:1058, Kennel et al., 1981, Cancer Res. 41:3465, Chem. Abstr. 95 (15):1308502, Baylin et al., 1982, Proe. Nat'l. Acad. Sei. USA 79:4650, Carney et al., 1982, Patho-biology Annual, 12:115, Gazdar et al., 1983, Seminars in Oncology 10:3, Hollinshead et al., 1983, Cancer Detect. Prevent 6:185, Mulshine et al., 1983, J. Immunol. 131:497, Huang et al., 1983, Arch. Biochem. Biophys. 220:318, Saji et al., 1984, Hybridoma 3:119, Bio. Abstr. 79005569, Bosslet et al., Behring Inst. Mitt. 74:27, Chem. Abstr., AC10K9): 706686, Roset et al., 1984, Cancer Res. 44:2052, Bio. Ast. 79023605, Princler et al., 1982, Cancer Res. 42:843,
Mazauric et al., 1982, Cancer Res. 42:150, Braatz et al., 1982, Cancer Res., 42:849, Sobel et al., 1982, Fed. Proe, 41:409, Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan Liss, Inc., side 77-96 og Varki et al., 1985,
i Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan Liss, Inc., side 207.
US-patentsøknad nr. 667.521, 785.177, 684.759, 776.321 og 738.612 beskriver visse monoklonale antistoffer overfor humant, ikke-småcellet lungecarcinoma.
Monoklonale antistoffer kan anvendes ved metoder som vil kunne muliggjøre en tidligere diagnose av lungecancer,
en bedre bestemmelse av spredningen av cancer og mer virksomme metoder for behandling av lungecancer. En forutset-ning er imidlertid å finne antistoffer mot antigener som er kraftigere uttrykt i lungecancervev enn i normalt vev fra voksne. I betraktning av den kjente heterogenitet hos tumorcellepopulasjoner, tilstedeværelsen av forskjellige determinanter på samme antigenmolekyl, de forventede forskjeller mellom antigener med hensyn til deres stabilitet som diagnosemarkører og terapeutiske mål, og de forskjellige biologiske karakteristika hos forskjellige antistoffer mot samme antigen, kan det være nødvendig med et antall forskjellige antistoffer mot et antall forskjellige antigener.
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av en hittil ukjent klasse av monoklonalt antistoff, illustrert ved L20, som er spesifikt for et determi-nantsted på et glycoproteinantigen assosiert med humane, ikke-småcellede lungecarcinomaceller (NSCLC). Uttrykket "NSCLC-celler" omfatter epidermoide carcinomaceller, adenocarcinomaceller og udifferensierte, storcellede carcinomaceller. Determinant stedet kan også finnes på antigener av enkelte andre carcinomer, f.eks. enkelte bryst- og tykktarmscarcinomer og småcellet lungecarcinoma. Det her omhandlede antistoff vil således også bindes til celler fra andre carcinomer og være anvendelig til diagnose av alle andre tumorer som uttrykker det antigen som identifiseres med antistoff L20. Det her omhandlede monoklonale antistoff bindes i meget mindre grad til normale voksne celler enn til tumorceller. Uttrykket "bindes i meget mindre grad" betyr at bindingen overhodet ikke vil være påviselig, eller bare vil være påviselig som et meget svak farging når det anvendes immunohistologisk teknikk. Antistoffet har således en høy grad av spesifisitet overfor antigen som er karakteristisk for NSCLC og visse andre carcinomer.
Ved foreliggende oppfinnelse beskrives også det hittil ukjente L20-antigen identifisert ved antistoff L20, og den klasse av antistoffer som bindes hertil, er immunospesifikk for, eller immunoreaktiv med dette antigen. Fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved at
a) en hybridoma med identifiserende karakteristika som ATCC nr. HB 8913, hvilken hybridoma er oppnådd ved fusjon
av (i) en antistoffproduserende celle som stammer fra milten av dyr immunisert med pleurale effusjoner, dyrkede celler eller lungevev fra en pasient med ikke-småcellet lungecarcinoma, og med (ii) en myeloma-celle, formeres og
b) de monoklonale antistoffer av IgG-klassen, under-klasse IgGl, hybridomen, som bindes til et antigen, høstes, hvilket antigen ved polyacrylamidgelelektroforese utviser følgende aminosyresekvens i aminoterminaldelen:
hvori X betegner en uidentifisert aminosyre.
Foreliggende oppfinnelse angår også anvendelse av et monoklonalt antistoff, fremstilt ved fremgangsmåten ifølge krav 1, til in vitro-påvisning av ondartede celler i en prøve som er mistenkt for å inneholde slike celler, hvori
a) prøven bringes i kontakt med det monoklonale antistoff under slike reaksjonsbetingelser at det monoklonale
antistoff bindes til determinantplassen,
b) ubundne monoklonale antistoffmolekyler fra prøven fjernes, og c) prøven undersøkes for nærvær av bundet monoklonalt antistoff, hvorved bindingen av det monoklonale antistoff ved immunhistologisk farging indikerer nærvær av ond artede celler omfatter ikke-småcellede lungecarcinomaceller i lungevev, brystcarcinomaceller eller tykktarmcarcinomaceller.
L20-antistoffet og tilsvarende antistoffer kan reagere med det L20-antigen som ved ekspresjon produseres i høye konsentrasjoner på overflaten av tumorcellene. Antistoffer kan derfor anvendes som bærere for forskjellige midler som har en antitumor virkning, herunder, men ikke begrenset til, kjemoterapeutiske midler, toksiner, immunologisk reak-sjonsmodifiserende midler og radioisotoper.
Enn videre kan L20-antistoffet modifiseres slik at det kan formidle antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC), dvs. at det kan drepe NSCLC-celler i nærvær av humanlymfocytter eller -makrofager, eller at det blir cyto-lyttisk overfor tumorceller i nærvær av humankomplement.
En slik modifikasjon kan f.eks. oppnås ved en teknikk som nylig er utviklet for produksjon av "kimære antistoffer". Følgelig spleises gener som koder for det variable området
av L20-antistoffmolekylet, sammen med humangener som koder for Fc-området av et antistoff med en passende biologisk aktivitet (slik som evnen til å aktivere humankomplement og formidle ADCC). Hittil ukjente antistoffer av museopprinn-else eller human opprinnelse med passende biologiske funksjoner kan også fremstilles mot L20-antigenet.
Metoder for fremstilling av monoklonalt antistoff overfor
NSCLC
Monoklonale antistoffer mot humant NSCLC og
visse andre humane carcinomer kan fremstilles ved hybridomafusjonsteknikk, ved EBV-transformasjon av humane antistoffproduserende lymfocytter, eller ved teknikk som kombinerer cellefusjon og EBV-udødeliggjørelsesteknikk.
Fusjonsteknikk
Ifølge en utførelsesform av foreliggende oppfinnelse fremstilles monoklonale antistoffer mot NSCLC under anvendelse av hybridoma-cellefusjonsteknikk. Eksempelvis anvendes humane lungecarcinomaceller fra pleurale effusjoner, dyrkede celler fra eksplanterte humane NSCLC-tumorer eller celler fra en normal fosterlunge eller lysater fra slike celler som immunogen. I et illustrativt eksempel anvendes eksplanterte celler fra en NSCLC, humant lunge-adenocarcinoma nr. 3082 som immunogen (se under eksemplene). Cellene injiseres eksempelvis i en mus, og etter tilstrekkelig tid avlives musen, og det oppnås somatiske antistoffproduserende lymfocytter. Antistoffproduserende celler kan utledes fra lymfekjertler, milt og perifert blod fra disse behandlede dyr. Det foretrekkes miltceller. Muselymfocytter gir en høyere prosent av stabile fusjoner med de musemyelomer som beskrives i det etterfølgende. Anvendelse av somatiske celler fra rotter, kaniner og frosk, er også mulig. De milt-cellekromosomer som innkoder ønskede immunoglobuliner, gjøres udødelige ved fusjon av miltcellene med myelomaceller, vanligvis i nærvær av polyethylenglycol. Det kan anvendes flere myelomacellelinjer for fremstilling av fusjonerte cellehybrider, herunder NSI-Ag4/l, X63-Ag8, MPC11-45.6TG1.7, X63-Ag.653, Sp2/0-Agl4, Fo og S194/5XXO.BU.1 som stammer fra mus, og 210.RCY3.Agl.2.3, U-226AR og GM1500GTGAL2 som stammer fra rotter (Hammerling et al., 1981, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, i Research Monographs in Immunology, bind 3, J.L. Tucker, red., Elsevier/North Holland Biomedical Press, New York). I et illustrativt eksempel anvendes NSl-celler (se eksempler). De resulterende celler som omfatter fusjonerte hybridomer, får vokse i et selektivt medium, slik som et HAT-medium, og de overlevende celler dyrkes i et slikt medium med begrensede fortynnings-betingelser. Cellene dyrkes i en egnet beholder, f.eks. i mikrotiterbrønner, og supernatanten screenes for monoklonale
antistoffer med den ønskede spesifisitet.
Det foreligger forskjellige konvensjonelle metoder for isolering og rensing av de monoklonale antistoffer slik at de befris for andre proteiner og andre urenheter.
EBV- transformasjonsteknikk
Ifølge en alternativ utførelsesform av foreliggende oppfinnelse fremstilles antistoffer mot NSCLC under anvendelse av EBV-transformasjonsteknikk. Eksempelvis udødelig-gjøres lymfocytter som stammer fra perifert blod, tumor-drenerende lymfeknuter, benmargaspirater, tumorer eller pleuraleffusjoner fra pasienter med NSCLC under anvendelse av EBV ifølge de metoder som er beskrevet av Cole et al., 1984, Cancer Research, 44:2750. Som bemerket av Cole et al., er B-lymfocytter som er spesifikke for tumorantigener, sjeldne hos pasienter med lungecancer. Følgelig er det særlig viktig å øke antallet av lymfocytter som produserer antistoff ved på forhånd utvelgelse av lymfocytter som produserer antistoff mot det relevante antigen. EBV-trans-formasjoner omfatter således to trinn: (1) berikelse av celler med reseptorer for det gitte antigen, dvs. L20-antigen beskrevet i det etterfølgende, og (2) udødeliggjørelse av slike celler ved infeksjon med EBV.
EBV- hybridomateknikk
Ifølge en annen alternativ utførelsesform av oppfinnelsen fremstilles monoklonale antistoffer mot NSCLC under anvendelse av en kombinasjon av EBV-transformasjonsteknikk og hybridomafusjonsteknikk som beskrevet av Cole et al., 1985, i Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., side 77-96. Eksempelvis fusjoneres en myeloma-cellelinje med donorlymfocytter fra NSCLC-pasienter som tidligere er blitt omdannet ved EBV og etablert som en cellelinje som er i stand til å gro og utvikle seg under dyrkningsbetingelser. Til utvelgelse av de resulterende EBV-hybridomafusjonscellelinjer er det nødvendig at fusjons-partneren er i besittelse av dominante, passende, valgbare legemiddelmarkører, slik som ouabain- eller neomycin-resistens, slik at foreldreceller ikke utvikles ved dyrkning av de fusjonerte hybridomacellelinjer. En egnet linje er den thioguamin-resistente GM-150, ouabain-resistente lymfoblastoid-cellelinje KR4, beskrevet av Cole et al.. De resulterende hybridomer klones ved konvensjonell teknikk.
Celleformering , og antistoffproduksjon
Når de ønskede fusjonerte cellehybrider eller transformerte cellelinjer er blitt utvalgt og klonet i individuelle antistoffproduserende cellelinjer, kan hver celle formeres på to konvensjonelle måter. Den individuelle cellelinje kan formeres in vitro, f.eks. i labora- torie-dyrkningsbeholdere, og kulturmediet inneholdende store konsentrasjoner av et enkelt spesifikt monoklonalt antistoff kan høstes ved dekantering, filtrering eller sentrifugering. Alternativt kan utbyttet av monoklonalt antistoff økes ved injeksjon av en prøve av angjeldende hybridoma i et histoforenlig dyr av den type som anvendes for tilveiebringelse av somatiske celler og myelomaceller ved den opprinnelige fusjon. Tumorer som utskiller det spesifikke antistoff som produseres av det fusjonerte cellehybrid, utvikles i det ved injeksjon behandlede dyr. Kroppsvæske fra dyret, slik som ascitesvæske eller serum, tilveiebringer monoklonale antistoffer i store konsentrasjoner. Som beskrevet ovenfor av Cole et al., er det ved anvendelse av humane hybridomer eller EBV-hybridomer, nødvendig å unngå avvisning av det i dyr, slik som mus, injiserte xenograft. Immunosvekkede eller nakne mus kan anvendes, eller hybridomer kan først overføres til bestrålte, nakne mus som en fast subkutan tumor dyrket in vitro, og deretter injiseres intraperitonealt i pristanbehandlede, bestrålte, nakne mus som utviklet ascitestumorer som utskiller store mengder spesifikke humane monoklonale antistoffer (se Cole et al., ovenfor).
Monoklonale antistoffer
Antistoffet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse bindes til et hittil ukjent celleoverflate-glycoprotein-antigen som betegnes L20-antigen, og som er karakteristisk for humane NSCLC-celler og celler fra visse andre humane carcinomer (se ovenfor). Glycoprotein-antigenet har en molekylvekt på ca. 110.000 dalton når det underkastes immunoutfelling og polyacrylamidgel-elektroforese (se nedenfor). Nedbrytning av L20-antigenet med glycanase viser at det inneholder N-bundne oligosaccharidkjeder.
Som et illustrativt eksempel på foreliggende oppfinnelse produseres L20-antistoffet ved hjelp av den nedenfor beskrevne L20-musehybridoma. L20-antistoffet er av IgGl-isotypen og (se nedenfor) har en aviditet på ca. 3 x 10 . Det bindes ikke i påviselig grad til normale celler slik
som fibroblastceller, endotelceller eller epitelceller i
hovedorganer. Ved "bindes ikke i påviselig grad" menes at det bare kan påvises en meget svak farving eller over hodet ingen farving ved immunhistologi.
Innenfor foreliggende oppfinnelses ramme faller også fremstilling av anvendelige bindingsfragmenter av ovenfor angitte monoklonale antistoff, slik som Fab-, F(ab')2-, Fv-fragmenter, etc. Antistoff-fragmentene oppnås ved konvensjonell teknikk. Anvendbare bindingsfragmenter kan eksempelvis fremstilles ved peptidasenedbrytning av antistoffet under anvendelse av papain eller pepsin.
Lignende antistoffer, herunder antistoffer av forskjellige isotyper, med forskjellig affinitet og hittil ukjente biologiske funksjoner, slik som evnen til å destruere tumorceller i nærvær av komplementceller eller effektor-celler, slik som lymfocytter eller makrofager, faller også innenfor rammen av foreliggende oppfinnelse. Selv om det ovenfor angitte spesifikke eksempel på et hittil ukjent antistoff ifølge oppfinnelsen angår et antistoff som bindes til en spesifikk determinantplass på det respektive antigen, og er av IgGl-underklassen fra en musekilde, skal dette ikke oppfattes som en begrensning av oppfinnelsens ramme. Ovenfor angitte antistoff og de antistoffer som har funksjonell likhet med det ovennevnte antistoff, enten fra en musekilde, annen pattedyrkilde, herunder human, eller andre kilder eller kombinasjoner derav, er omfattet av oppfinnelsens ramme, slik som også antistoffer av andre isotyper. Ved uttrykket "funksjonell likhet" menes at antistoffet kan bindes til ovenfor angitte determinantplass og er i stand til å konkurrere med et særlig antistoff ifølge oppfinnelsen om en slik plass. Det vil si at et slikt antistoff, hvis det kombineres med en prøve inneholdende en celle eller et cellefragment med en slik determinantplass, vil bindes til en slik determinantplass og vil forhindre at et antistoff ifølge oppfinnelsen bindes til en slik plass. Da antigenet ifølge oppfinnelsen kan ha mer enn én determinantplass, omfatter oppfinnelsen enn videre monoklonale antistoffer som bestemmer determinantplasser som er forskjellige fra deter-minantplassene bestemt av ovennevnte monoklonale antistoff, og som kan identifiseres ved sekvens-immunoutfellings-
analyser som er kjent innen faget.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også fremstilling av antistoffer som reaksjon på antigenbindingsplasser eller idiotyper av L20-antistoffet, idet slike anti-idiotype antistoffer for diagnoseformål kan anvendes for analyse av immunreaksjonen med tumorantigener, og til fremkallelse av immunreaksjoner med terapeutiske eller profylaktiske formål (Nepom et al., 1984, Proe. Nat'l. Acad. Sei. 81:2664).
L20- antigen gjenkjent av monoklonale antistoffer
Det antigen som gjenkjennes av de her omhandlede monoklonale antistoffer, omfatter et hittil ukjent celleoverflate-glycoproteinantigen som er karakteristisk for NSCLC-celler, og visse andre carcinomer, herunder bryst- og tykktarmscarcinoma samt småcellet lungecarcinoma. Antigenet har en molekylvekt på ca. 110.000 dalton.
Aminosyresekvensen i aminoterminaldelen av det hittil ukjente glycoprotein-antigen er som følger:
hvori X betegner en aminosyre som ennå ikke er blitt identifisert, og resten av bokstavene representerer de konvensjonelle, enkeltbokstavsforkortelser for aminosyrer. En sammenligning av denne sekvens med sekvenser oppbevart i en proteindatabase (PIR Release 6,0, november 1985), avslører ingen signifikant sekvenshomologi med andre kjente sekvenser.
Anvendelse av monoklonale antistoffer og L20- antigenet Diagnostisk anvendelse
De monoklonale antistoffer fremstilt ifølge oppfinnelsen kan anvendes som prober til påvisning av adskilte antigener i humane NSCLC-tumorer og andre humane tumorer. En anvendelse ifølge oppfinnelsen omfatter bestemmelse av nærvær av en ondartet tilstand i lungevev og andre humane vev, ved undersøkelse av vevet for ekspresjon av eller mangel på ekspresjon av et glycoprotein-antigen med karakteristika som L20-antigenet. Uttrykket "med karakteristika som" betyr at antigenet er reaktivt med et antistoff som gjenkjenner L20-antigenet. Ekspresjon eller mangel på ekspresjon av dette antigen kan tilveiebringe klinisk nyttig informasjon som ikke er tilgjengelig med standardhistopatologisk teknikk.
Monoklonale antistoffer fremstilt ifølge oppfinnelsen kan eksempelvis anvendes til påvisning av ikke-småcellede lungecarcinomaceller i histologiske eller cytologiske prøver. Ved anvendelse av den immunoperoxydase-fargningsteknikk som beskrives i det etterfølgende, gir f.eks. uttatte vevs-prøver av adenocarcinoma, epidermoidcarcinoma og småcellet lungecarcinoma, intens positiv farging. Normal lunge, milt, bryst, tykktarm, nyrer, lever, hjerne, hjerte, hud, skjold-bruskkjertel, testis, vagina og normale lymfocytter er negative.
En annen viktig in vitro-diagnoseanvendelse av de monoklonale antistoffer fremstilt ifølge oppfinnelsen er vurdering av andre carcinomer enn NSCLC. Antistoffet er blitt anvendt til påvisning av epitopen ved carcinomer i bryst og tykktarm og ved småcellet lungecarcinoma. Normale prøver av dette vev uttrykker ikke determinanten. Det monoklonale antistoff er således anvendelig for påvisning av en antigendeter-minant som er tumorassosiert ved disse carcinomer. Det monoklonale antistoff kan således være et anvendbart diagnose-reagens for bryst- og tykktarmscarcinoma og småcellet lungecarcinoma .
Alternativt kan immunofluorescensteknikk anvendes for undersøkelse av humane vevsprøver med de monoklonale antistoffer. Ved en typisk undersøkelse lufttørkes preparatglass inneholdende cryostatseksjoner av frosset, ikke-fikserte vevsbiopsiprøver eller uttatte tumorprøver eller cytologiske utstrykningspreparater, og inkuberes med det monoklonale antistoff i et fuktighetskammer ved romtemperatur. De cytologiske utstrykningspreparater omfatter exfoliative celleprøver. Med uttrykket "exfoliativ" menes at prøven inneholder isolerte celler eller klumper av celler oppnådd ved skraping eller vasking av overflaten av vev, hvilke celler fjernes individu-elt i skjell eller tynne plater. Denne exfoliative celleprøve må skjelnes fra det uttatte vev, slik som det som oppnås ved biopsi. Metoden kan finne anvendelse ved påvisning av en ond artet tilstand i exfoliative celleprøver fra lungen, slik som en spyttprøve, fra bronkier, den gastrointestinale traktus, herunder oral farynx, munn, et cervikalt utstrykningspreparat etc.
Etter tørking belegges preparatglasset med et preparat av antistoff mot det monoklonale antistoff, vanligvis en type antimus-immunoglobulin, hvis det anvendte, monoklonale antistoff stammer fra en fusjon av en musemiltlymfocytt og en musemyelomalinje. Dette antimus-immunoglobulin konjugeres under anvendelse av kjent teknikk med en forbindelse slik som rhodamin eller fluorescein-isothiocyanat, som fluores-cerer ved en bestemt bølgelengde. Deretter bestemmes farg-ingsmønsteret og intensitetene innenfor prøven ved fluor-escent lysmikroskopi og opptas eventuelt fotografisk.
Ovennevnte beskrivelse angår primært anvendelse av de her omhandlede antistoffer ved immunofluorescensteknikk. Antistoffene kan imidlertid anvendes ved de fleste undersøk-elser som omfatter antigen-antistoffreaskjoner. Prøvene kan være homogene eller heterogene. Ved en homogen prøve kan prøven være et vev som er lysert og renset for fjerning av rester. Til den immunologiske reaksjon anvendes vanligvis det spesifikke antistoff, et merket analysemiddel og angjeldende prøve. Det signal som kommer fra merket, modifiseres, direkte eller indirekte ved binding av antistoffet til det merkede analysemiddel. Både den immunologiske reaksjon og påvisningen av utstrekningen derav, utføres i en homogen oppløsning. Immunokjemiske merker som kan anvendes, omfatter frie radi-kaler, fluorescente fargestoffer, enzymer, bakteriofager, co-enzymer og lignende.
Ved en heterogen prøve er reagensene vanligvis prøven, det spesifikke antistoff og en anordning til produksjon av et påviselig signal. Det monoklonale antistoff er vanligvis belagt på et fast underlag eller en fast fase. Prøven i en flytende fase bringes deretter i kontakt med antistoffet i den faste fase. Den faste fase separeres deretter fra den flytende fase, og enten den faste fase eller den flytende fase undersøkes for et påviselig signal under anvendelse av anordninger til produksjon av slike signaler. Sig-nalet har forbindelse med tilstedeværelsen av analysemidlet i prøven. Anordninger for produksjon av et påviselig signal omfatter anvendelse av radioaktive merker, fluorescerende merker, enzymer og lignende. Eksempler på heterogene immuno-prøver er radioimmunoprøver, immunofluorescensmetoder, enzym-bundne immunoprøver og lignende.
For en mer detaljert beskrivelse av ovennevnte immuno-prøveteknikk henvises det til "Enzyme-Immunoassay", av Edward T. Maggio, 1980, CRC Press, Inc., Boca Raton,
Florida. Se også f.eks. US patentskrifter 3 690 834,
3 791 932, 3 817 837, 3 850 578, 3 853 987, 3 867 517, 3 901 654, 3 935 074, 3 984 533, 3 996 345 og 4 098 876, hvilken liste ikke skal oppfattes som uttømmende.
Antistoffene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan også anvendes til in vivo-diagnoseanvendelser. Eksempelvis kan antistoffer eller fragmenter fremstilt fra antistoffer, f.eks. Fab- og F(ab<1>)2-fragmenter, anvendes til avbildning av tumorer, herunder metastatiske avleiringer i humane pasienter med NSCLC, på en måte som er analog med den som er beskrevet for ondartet melanoma av Larson et al., 1983,
J. Nucl. Med. 24:123, og Larson et al., 1983, J. Clin. Invest., 72:2101. Det rensede antistoff eller fragmenter derav merkes med et middel som gir påviselig signal, f.eks.
131
en radioisotop slik som I, og administreres i en egnet bærer, f.eks. intravenøst, til en pasient. Lokaliseringen av det tumorbundne antistoff påvises ved ekstern scinto-grafi, emisjonstomografi eller radionukleær scanning under anvendelse av f.eks. et7-kamera.
Terapeutisk anvendelse
Antistoffene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse kan også anvendes terapeutisk. De monoklonale antistoffer kan anvendes i forbindelse med et bredt spekter av farmasøyt-iske eller cytotoksiske midler. Et antistoff kan f.eks. være bundet til et toksin under dannelse av et immunotoksin
(Jansen et al., 1982, Immunol. Rev. 62:185), eller til et radioaktivt materiale, f.eks.<125>I, 131I, etc. (Order, 1984, Compr. Ther. 10:9, Larson et al., 1983, J. Clin. Invest.
72:2101, Carrasquillo et al., 1984, Cancer Treatment Reports, 68:317), eller til et legemiddel (Rowland et al.,
1985, Cancer Immunol. Immunother. 19:1) under dannelse av et radiofarmasøytisk eller farmasøytisk preparat. Konju-gerte antistoffer kan administreres til pasienter under opp-nåelse av øket tumoricid virkning via den cytotoksiske virkning av det kjemoterapeutiske middel som avgis til tumoren, som følge av antistoffets bindingsaffinitet.
Såkalte "kimære antistoff"-molekyler av antistoffet inneholdende et muse-antigen-bindingsområde med konstant humant områdedomene (Morrison et al., 1984, Proe. Nat'l. Acad. Sei. USA, 81:6851, Takeda et al., 1985, Nature, 314:452), kan fremstilles, og denne metode kan anvendes til konstruksjon av hittil ukjente antistoffmolekyler med ønskelige effektorfunk-sjoner, slik som evnen til aktivering av humant komplement og formidling av ADCC (Neuberger et al., 1984, Nature, 312:604).
En annen terapeutisk anvendelse av de monoklonale antistoffer er fremstilling av et antiidiotypt antistoff under anvendelse av L20-antistoffet som immunogen (se f.eks. Nepom et al., 1984, Proe. Nat'l. Acad. Sei., USA, 81:2865, Lee et al., 1985, Proe. Nat'l. Acad. Sei., 82:6286).
Et attraktivt aspekt er at de her omhandlede antistoffer kan kombineres med andre antistoffer mot NSCLC eller andre tumorer, slik som de som er beskrevet i US patent-søknader nr. 667 521, 684 759 og 738 612. Kombinasjonen er virksom for påvisning av de typer av ikke-småcellede lungecarcinomer som er nevnt ovenfor, nemlig storcellede, udifferensierte lungecarcinomer, adenocarcinorner og epidermoid carcinoma.
De monoklonale antistoffer fremstilt ifølge oppfinnelsen bestemmer også determinantplasser på et antigen assosiert med andre carcinomaer slik som brystcarcinoma, tykktarmscarcinoma og småcellet lungecarcinoma (se tabell I). Følgelig kan antistoffene finne anvendelse ved terapeutisk metoder og terapeutiske produkter som er rettet mot slike carcinomer.
Det hittil ukjente antigen betegnet som antigen L20, kan også anvendes til terapeutiske formål. Antigenet kan renses fra tumorer eller fremstilles ved rekombinant DNA-teknologi (se US patentsøknad 827 313). Det gen som koder for L20-antigenet, kan klones ved metoder som først beriker mRNA av L20-antigenet. Ved en slik metode kan polysomer (bestående av mRNA, ribosomer og dannende polypeptidkjeder) renses ved immunoaffinitetskromatografi med antistoff som gjenkjenner L20-antigendeterminanten med den dannede kjede. mRNA isoleres ved immunoutfelling med f.eks. L20-antistoffet, og cDNA klones i en passende ekspresjonsvektor. Alternativt kan L20-antistoff eller antiserum til L20-antigenet anvendes til screening av et cDNA-bibliotek under anvendelse av en ekspresjonsvektor. Det rensede eller klonede L20-antigen kan administreres alene som et immunogen eller sammen med en egnet immunologisk adjuvans. Alternativt kan det gen som koder for antigenet, innsettes i genet for et virus, slik som vacciniavirus, for produksjon av et rekombinant DNA-produkt som kan anvendes som immunogen (se US patentsøknad 827 313)..
Diagnoseutstyr
Antistoffet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse kan også anvendes i diagnoseutstyr for utførelse av de ovenfor angitte metoder. I en utførelsesform omfatter diagnoseutstyret (a) et monoklonalt antistoff av den ovenfor angitte art, og (b) et konjugat av en spesifikk bindingspartner for det monoklonale antistoff, og et merke som er i stand til å produsere et påviselig signal. Reagensene kan også omfatte hjelpemidler slik som puffere og proteinstabilisereingsmidler, f.eks. poly-saccharider og lignende. Diagnoseutstyret kan enn videre, om nødvendig, omfatte andre komponenter av det signalproduserende system, herunder midler til reduksjon av bakgrunnsforstyrr-elser, kontrollreagenser, et apparat til testutførelse, etc. I en annen utførelsesform omfatter diagnoseutstyret et konjugat av et monoklonalt antistoff ifølge oppfinnelsen og et merke som er i stand til å produsere et påviselig signal. Hjelpemidler som nevnt ovenfor, kan også være til stede.
Eksempler
Foreliggende oppfinnelse belyses nærmere i de etter-følgende eksempler.
Fremstilling av monoklonale antistoffer
Monoklonale antistoffer ble fremstilt under anvendelse av hybridomafusjonsteknikken som tidligere beskrevet av Yeh et al., 1979, Int. J. Cancer, 29:299. En 3 måneder gammel Balb/c-mus ble immunisert under anvendelse av eksplanterte, dyrkede celler fra et humant lungeadenocarcinoma, betegnet 3082, som immunogen. Musen fikk 4 intraperiton-eale injeksjoner bestående av ca. 10<7>celler. 3 dager etter siste immunisering ble musens milt fjernet, suspendert i et dyrkningsmedium og fusjonert med NSl-musemyelomaceller (se Kohler&Milstein, ovenfor). Blandingen ble podet under dannelse av kulturer med lav tetthet stammende fra enkelte fusjonerte celler (kloner).
Supernatanter fra hybridceller ble screenet for direkte bindingsaktivitet på lungecancercellelinjer under anvendelse av både en "ELISA-prøvning og en autoradiografisk, 125
indirekte I-merket protein A-prøvning (Brown et al.,
1979, J. Immunol. Meth. 31:201). Ekstrakter av cellemem-braner fra den tumor som ble anvendt til immunisering, ble fremstilt under anvendelse av en metode modifisert i forhold til Colcher et al., 1981, Cancer Res., 42:1451, Yeh et al., ovenfor. Vev ble vasket med PBS, og celler fra intakte tumorer ble suspendert ved pressing gjennom en sikt av rust-fritt stål. Deretter ble 1 mM NaHC02inneholdende ImM fenylmethylsulfonylfluorid (Calbiochem-Behring Corp.,
San Diego, CA) tilsatt, og materialet ble homogenisert deretter på is med 50 støt av en B-pistil i en Dounce-homogeni-sator. Etter sentrifugering i 15 minutter ved 27.000 G ble supernatanten fjernet, og pelleten ble resuspendert i PBS, ble sonikert i 1 minutt og oppbevart ved -70°C.
De hybridomer som produserte antistoffer som ble bundet til cellemembranekstraktene, ble klonet, ekspandert in vitro og testet ytterligere med hensyn til antistoff-spesifisitet. De hybridomer som produserte antistoffer med tydelig spesifisitet for human lungecancer, ble reklonet, ekspandert og injisert til pristan-behandlede, 3 måneder gamle Balb/c-mus hvor de vokste som ascites-tumorer.
Ved å følge denne metode ble hybridomacellelinje L20 erholdt, denne ble klonet og injisert i mus til utvikling som en ascitestumor. Antistoffet som ble utskilt i ascites, ble renset på protein A-Sepharose<®>(Ey et al., 1978, Immunochemistry, 15:429) eller ved gelfiltrering i Sephacryl<®>S-300. Renset antistoff ble anvendt til ytterligere karakterisering.
Karakterisering av det monoklonale antistoff L20
Påvisning og binding av L20 til dyrkede celler
Den subcellulære lokalisering av antigen ble bestemt ved måling av antistoffbinding til celler før eller etter permeabilisering med en ikke-ionisk detergent. Antistoffer som ble bundet til celleoverflaten av intakte, dyrkede celler, ble identifisert enten ved direkte bindingsprøvning
125
med I-merket antistoff (Brown et al., 1981, Proe. Nat'l. Acad. Sei., USA, 78:539), eller ved indirekte fluorescens under anvendelse av fluorescensaktivert cellesortering II (FACS). Antistoffer som ble bundet til intracellulære
125
plasser, ble bestemt ved direkte binding av I-merket antistoff til celler etter fiksering med paraformaldehyd og etterfølgende permeabilisering med den ikke-ioniske detergent NP-40.
Til bindingsprøvninger som ble utført under anvendelse av radiomerkede antistoffer (Brown et al., ovenfor), ble dyrkede celler (10^) inkubert på is i 30 minutter med 10 cpm av I-merket antistoff i 100 ul bindingspuffer. Suspensjonen ble anbragt som lag på 0,2 ml dinonylfthal-at:dibutylfthalat (1:1 vol/vol) og ble sentrifugert.
125 Pelleten og den vandige fase ble tellet med hensyn til I. For måling av ikke-spesifikk binding ble parallellinkuber-inger utført med ikke-merket antistoff som konkurrent (Brown et al., ovenfor).
Isotypebestemmelse av L20- antistoff
For bestemmelse av klassen av immunoglobuliner som produseres ved hjelp av L20-hybridomacellelinjen, ble følgende teknikk anvendt:
(a) " Ouchterlony"- immunodiffusjon
En del av supernatanten av bestemte hybridomaceller ble anbragt i midtbrønnen på en 25% agarplate. Monospesifikke kanin-antimus-Ig-isotype-antistoffer (Southern Biotechnology, Birmingham, AL) ble anbragt i de ytre brønner, og platen ble inkubert i 2 timer ved romtemperatur og natten over ved 4°C.
(b) " ELISA"- isotypebestemmelse
Dynatech<®>Immunolon-plater med 96 brønner ble belagt med hvert antiserum i en konsentrasjon på 1 ug/ml,
50 ul/brønn i PBS, og fikk stå tildekket over natten ved 4°C. Platene ble vasket med PBS/Tween<®>20, 0,05%, og ble blokkert med medium i en mengde på 100 ul/brønn i 1 time ved romtemperatur. Etter vasking av platene ble supernatanter fra L20-hybridomer tilsatt og inkubert ved romtemperatur i 1 time. Etter vasking med PBS ble okseserumalbumin-(BSA) platene inkubert ved 3 7°C i 2 timer med monospesifikke, kanin-antimus-Ig-isotype-antistoffer koblet til peroxydase føymed"). Etter vasking ble platene inkubert med 1 mg/ml orthofenylendiamin og 0,03% # 2^ 2 i 0,1 M citratpuffer ved en pH-verdi på 4,5. Den optiske tetthet ved 630 nm ble bestemt på et Dynatech<®>ELISA-plateavlesningsapparat.
Det monoklonale antistoff L20 er av IgG^-isotypen.
Antigen- gjenkjennelse ved hjelp av L20- antistoff
Til identifisering av proteinantigener ble lungecarcinomaceller radiojodert på overflaten eller merket meta-35
bolisk med S-methionin.Antigenene ble isolert fra cellelysater ved inkubering med monoklonalt antistoff, til-setning av geite-antimus-IgG og adsorpsjon til Staphylo-coccus aureus. Immunutfellinger ble vasket og underkastet preparativ natriumdodecylsulfat-polyacrylamid-gelelektro-forese (SDS-PAGE) på en 10-20% acrylamidgel. Etter elektroforese ble gelen farget med Coomassie Brilliant Blue (0,5 vekt% til 10% eddiksyre og 30% isopropanol) og ble avfarget i en oppløsning av eddiksyre (5 vol%) og methanol (17 vol%). Det fargede L20-antigenbånd ble fjernet med et barberblad og underkastet omgående elektroeluering med en "ECU-040 Electroelutor/Concentrator" (C.B.S. Scientific Co., San Diego, CA) ifølge metoder beskrevet av Hunkapiller et al., 1983, Methods in Enzymol., 91:227-236.
Automatisert Edman-nedbrytning ble utført med ca.
23 pmol L20-antigen (basert på utbyttet av identifisert L-l) i et gassfase-sekvensoppdelingsapparat (Model "470A", Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). Fenylthio-hydantoinaminosyrederivatene ble analysert ved revers-fase HPLC under anvendelse av et "Model 120A on-line HPLC"-apparat (Applied Biosystems, Inc.) med en "PTH-C18"-kolonne (2,1 x 220 mm, Applied Biosystems, Inc.), og en natrium-acetat/tetrahydrofuran/acetonitril-gradient til eluering.
Aminosyresekvensen i aminoterminaldelen er som
følger:
hvori X er en aminosyre som ikke er blitt identifisert.
Sammenligning av denne s_ekvens med sekvenser som finnes i den aktuelle proteindatabase (PIR Release 6.0, nov. 1985) avslørte ikke noen signifikant sekvenshomologi med noen annen kjent sekvens.
Det antigen som ble gjenkjent av L20-antistoffet, er et glycoprotein-antigen med en molekylvekt på ca. 110.000 dalton.
In vitro immunohistologisk anvendelse
Teknikken med umerket antistoff ifølge Sternberger, 1979, i Immunochemistry, John Wiley&Sons, New York,
side 104-169, som modifisert av Garrigues et al., 1982,
Int. J. Cancer, 29:511, ble anvendt til immunohistologiske undersøkelser på frosne seksjoner. Målevevene for disse forsøk ble oppnådd ved operasjon og ble etter fjerning i løpet av 4 timer nedfrosset i isopentan som var på forhånd avkjølt i flytende nitrogen. Vevene ble deretter oppbevart i flytende nitrogen eller ved -70°C inntil anvendelse. Kanin-antimus-IgG (Sternberger-Meyer Immunochemicals, Inc., Jarettesville, MD) ble anvendt i en fortynning på 1/50. Muse-peroxydase-antiperoxydase-komplekser (PAP, Sternberger-Meyer Immunochemicals, Inc.) inneholdende 2 mg/ml spesifikt renset PAP, ble anvendt i en fortynning på 1:80. Frosne seksjoner ble fremstilt, tørket, behandlet med aceton og tørket (Garrigues et al., ovenfor). Seksjoner som skulle anvendes til histologisk vurdering, ble farget med hemato-xylin. For reduksjon av ikke-spesifikk bakgrunn ble seksjoner preinkubert med normalt humant serum som var fortynnet 1/5 (Garrigues et al., ovenfor). Muse-antistoffer, geite-antimus-IgG og muse-PAP ble fortynnet i en oppløsning av 10% normalt humant serum og 3% kaninserum.
Fargemetoden besto av behandling av serieseksjoner med enten spesifikt antistoff eller kontrollantistoff i 2,5 timer, idet det ble inkubert i 30 minutter med kanin-antimuse-IgG fortynnet 1:50 og eksponert overfor muse-PAP-kompleks fortynnet 1:80 i 30 minutter. Etter hver behandling med antistoff ble stykkene vasket to ganger i PAP. Den immunohistokjemiske reaksjon ble utviklet med friskt fremstilt 0,5% 3,3<1->diaminobenzidin, tetrahydroklorid (Sigma, St. Louis, MO) og 0,01% H2°2i 0,05 M tris_Puffer/pH-verdi 7,6, i 8 minutter. Ytterligere eksponering overfor en 1% Os04~oppløsning i destillert vann i 20 minutter for-sterket fargingen. Seksjonene ble renset med vann, dehyd-ratisert i alkohol, klaret i xylen og anbragt på preparatglass.
Preparatene ble vurdert hvert især under kode, og kodede prøver ble undersøkt av en uavhengig person.
Typiske preparater ble fotografert ved hjelp av differensial-interferenskontrast-optikk (Zeiss-Nomarski). Graden av antistoff-farging ble vurdert som 0 (ingen reaktivitet),
+ (noen få svakt positive celler), ++ (minst 1/3 av cellene positive), +++ (de fleste celler positive) og +++++ (omtrent alle celler meget positive). Da forskjeller mellom + og 0 farging var mindre tydelige enn mellom + og ++ farging,
ble fargingsgraden ++ eller derover, betraktet som "positiv". Både neoplastiske celler og stromaceller ble iakttatt i tumorprøver. Den registrerte farging var fargingen av tumorceller, idet stromaceller overhodet ikke ble farget, eller var meget svakere farget enn tumorcellene.
Alle undersøkte prøver var fryste seksjoner av vev erholdt ved operasjon. Se teksten for detaljert beskrivelse av immunohistologiske metoder. En fargingsgrad på ++ (dvs. hvor minst 1/3 av cellene var positive) ble betraktet som positiv.
En cellelinje, L20, som beskrevet i det foregående, er blitt deponert ved American Type Tissue Culture Collection, Rockville, Maryland, og har fått deponeringsnr. ATCC HB8 913. Foreliggende oppfinnelse skal ikke begrenses i omfang til
den deponerte cellelinje, idet den deponerte cellelinje bare er angitt med henblikk på belysning av et aspekt ifølge foreliggende oppfinnelse, og en hvilken som helst ekvivalent cellelinje som produserer et funksjonelt, ekvivalent, monoklonalt antistoff, er omfattet av oppfinnelsens ramme. Forskjellige modifikasjoner av foreliggende oppfinnelse utover de viste, vil være åpenbare for fagmannen. Slike modifikasjoner faller inn under oppfinnelsens ramme.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et monoklonalt antistoff som bindes til en determinantplass på et celleoverflate-glycoprotein-antigen fra humane, ikke-småcellede lungecarcinomaceller, humane brystcarcinomaceller eller humane tykktarmcarcinomaceller, for anvendelse in vivo og in vitro,karakterisert vedat a) en hybridoma med identifiserende karakteristika som ATCC nr. HB 8913, hvilken hybridoma er oppnådd ved fusjon av (i) en antistoffproduserende celle som stammer fra milten av dyr immunisert med pleurale effusjoner, dyrkede celler eller lungevev fra en pasient med ikke-småcellet lungecarcinoma, og med (ii) en myeloma-celle, formeres og b) de monoklonale antistoffer av IgG-klassen, under-klasse IgGl, hybridomen, som bindes til et antigen, høstes, hvilket antigen ved polyacrylamidgelelektroforese utviser føl-gende aminosyresekvens i aminoterminaldelen:
hvori X betegner en uidentifisert aminosyre.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisert vedat hybridomen formeres in vivo i dyr.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,karakterisert vedat hybridomen formeres ved injeksjon i en prisant-behandlet Balb/c-mus til dyrkning av en ascites-tumor, og at de monoklonale antistoffer som utskilles i ascites, renses ved adsorpsjon på protein A-Sepharose<R>eller ved gelfiltrering.
4. Anvendelse av et monoklonalt antistoff, fremstilt ved fremgangsmåten ifølge krav 1, til in vitro-påvisning av ondartede celler i en prøve som er mistenkt for å inneholde slike celler, hvori a) prøven bringes i kontakt med det monoklonale antistoff under slike reaksjonsbetingelser at det monoklonale antistoff bindes til determinantplassen, b) ubundne monoklonale antistoffmolekyler fra prøven fjernes, og c) prøven undersøkes for nærvær av bundet monoklonalt antistoff, hvorved bindingen av det monoklonale antistoff ved immunhistologisk farging indikerer nærvær av ondartede celler omfatter ikke-småcellede lungecarcinomaceller i lungevev, brystcarcinomaceller eller tykktarmcarcinomaceller.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/834,172 US5185432A (en) | 1986-02-26 | 1986-02-26 | Monoclonal antibodies and antigen for human non-small cell lung carcinoma and other certain human carcinomas |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO870770D0 NO870770D0 (no) | 1987-02-25 |
NO870770L NO870770L (no) | 1987-08-27 |
NO174719B true NO174719B (no) | 1994-03-14 |
NO174719C NO174719C (no) | 1994-06-22 |
Family
ID=25266276
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO870770A NO174719C (no) | 1986-02-26 | 1987-02-25 | Fremgangsmåte for fremstilling av monoklonale antistoffer |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5185432A (no) |
JP (1) | JPS62220197A (no) |
KR (2) | KR900006338B1 (no) |
CN (1) | CN87100927A (no) |
AT (1) | AT400577B (no) |
AU (1) | AU612967B2 (no) |
BE (1) | BE1000611A5 (no) |
CA (1) | CA1312025C (no) |
CH (1) | CH675880A5 (no) |
DD (2) | DD266028A5 (no) |
DE (1) | DE3705276A1 (no) |
DK (1) | DK98187A (no) |
ES (1) | ES2004245A6 (no) |
FI (1) | FI870764A (no) |
FR (1) | FR2596062B1 (no) |
GB (1) | GB2186885B (no) |
GR (1) | GR870294B (no) |
IE (1) | IE60286B1 (no) |
IT (1) | IT1203511B (no) |
LU (1) | LU86786A1 (no) |
NL (1) | NL8700415A (no) |
NO (1) | NO174719C (no) |
NZ (1) | NZ219338A (no) |
OA (1) | OA08485A (no) |
PT (1) | PT84370B (no) |
SE (2) | SE467988B (no) |
YU (1) | YU46189B (no) |
ZA (1) | ZA869494B (no) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3531301A1 (de) * | 1985-09-02 | 1987-03-05 | Behringwerke Ag | Monoklonale antikoerper gegen tumorassoziierte glykoproteine, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung |
JPH0813840B2 (ja) * | 1987-03-31 | 1996-02-14 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体 |
US5134075A (en) * | 1989-02-17 | 1992-07-28 | Oncogen Limited Partnership | Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors |
US5171665A (en) * | 1989-04-17 | 1992-12-15 | Oncogen | Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors |
US5342774A (en) * | 1991-05-23 | 1994-08-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | Nucleotide sequence encoding the tumor rejection antigen precursor, MAGE-1 |
US5589579A (en) * | 1994-07-19 | 1996-12-31 | Cytoclonal Pharmaceutics, Inc. | Gene sequence and probe for a marker of non-small cell lung carinoma |
DE69831522T2 (de) | 1997-03-03 | 2006-06-14 | Amersham Biosciences Uk Ltd | In-situ Zellextraktion und Assay-Verfahren |
DE19725133A1 (de) * | 1997-06-13 | 1998-12-17 | Micromet Ges Fuer Biomedizinis | Nachweis von seltenen Zellen |
US20050089918A1 (en) * | 1998-02-23 | 2005-04-28 | Amersham Biosciences Uk Limited | In-situ cell extraction and assay method |
US6117981A (en) * | 1999-06-03 | 2000-09-12 | Cytoclonal Pharmaceutics, Inc. | Hybridomas for lung cancer marker and monoclonal antibodies thereof |
AU7337400A (en) * | 1999-09-03 | 2001-04-10 | Human Genome Sciences, Inc. | B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies |
WO2001094413A2 (en) | 2000-06-06 | 2001-12-13 | Bristol-Myers Squibb Company | B7-related nucleic acids and polypeptides and their uses for immunomodulation |
TWI317285B (en) * | 2000-07-28 | 2009-11-21 | Dainippon Sumitomo Pharma Co | New use and kit for remedies for cancer |
CN101724072B (zh) * | 2008-10-27 | 2013-10-09 | 谷为岳 | 一种抗肿瘤的单克隆抗体的序列及应用 |
GB0916686D0 (en) * | 2009-09-23 | 2009-11-04 | Univ Manchester Metropolitan | Treatment of cancer |
US8802091B2 (en) | 2010-03-04 | 2014-08-12 | Macrogenics, Inc. | Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof |
SG183847A1 (en) | 2010-03-04 | 2012-10-30 | Macrogenics Inc | Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof |
CN105424942B (zh) * | 2010-09-17 | 2017-07-18 | 国立研究开发法人产业技术综合研究所 | 肺癌鉴定标志物 |
CN102391992B (zh) * | 2011-11-03 | 2012-08-29 | 潘世扬 | 抗人非小细胞肺癌单克隆抗体及其应用 |
EP3442574A4 (en) | 2016-04-15 | 2019-12-11 | MacroGenics, Inc. | NOVEL B7-H3 BINDING MOLECULES, THEIR ANTIBODY-MEDICINAL CONJUGATES AND METHODS OF USE |
CN111662371B (zh) * | 2020-04-30 | 2023-07-04 | 美康生物科技股份有限公司 | 细胞角蛋白19片段抗原及其制备方法和应用 |
CN112300284B (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-06 | 慈达(广州)生物技术有限公司 | 核酸筛选结合抗体检测用于癌症检测中的用途及其制备的试剂盒 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4569788A (en) * | 1983-05-18 | 1986-02-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies against non small cell lung cancer |
ZA858371B (en) * | 1984-11-02 | 1987-03-25 | Oncogen | Monoclonal antibodies for human non-small cell lung carcinomas |
IL76877A (en) * | 1984-11-02 | 1991-11-21 | Oncogen | Diagnostic method for the determination of human non-small cell lung carcinomas employing novel monoclonal antibodies and compositions containing said antibodies |
-
1986
- 1986-02-26 US US06/834,172 patent/US5185432A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-12-18 ZA ZA869494A patent/ZA869494B/xx unknown
-
1987
- 1987-02-18 GB GB8703700A patent/GB2186885B/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-19 DE DE19873705276 patent/DE3705276A1/de not_active Ceased
- 1987-02-19 NL NL8700415A patent/NL8700415A/nl not_active Application Discontinuation
- 1987-02-19 NZ NZ219338A patent/NZ219338A/xx unknown
- 1987-02-20 YU YU25787A patent/YU46189B/sh unknown
- 1987-02-23 FR FR878702304A patent/FR2596062B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-23 GR GR870294A patent/GR870294B/el unknown
- 1987-02-23 FI FI870764A patent/FI870764A/fi not_active Application Discontinuation
- 1987-02-24 LU LU86786A patent/LU86786A1/fr unknown
- 1987-02-24 BE BE8700172A patent/BE1000611A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1987-02-25 ES ES8700501A patent/ES2004245A6/es not_active Expired
- 1987-02-25 CH CH714/87A patent/CH675880A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-02-25 JP JP62042467A patent/JPS62220197A/ja active Pending
- 1987-02-25 OA OA59076A patent/OA08485A/xx unknown
- 1987-02-25 DK DK098187A patent/DK98187A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-02-25 SE SE8700805A patent/SE467988B/sv not_active Application Discontinuation
- 1987-02-25 IE IE48787A patent/IE60286B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-02-25 IT IT19491/87A patent/IT1203511B/it active
- 1987-02-25 KR KR1019870001623A patent/KR900006338B1/ko not_active Application Discontinuation
- 1987-02-25 DD DD30018987A patent/DD266028A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-02-25 KR KR870001623A patent/KR870008026A/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-02-25 NO NO870770A patent/NO174719C/no unknown
- 1987-02-25 DD DD87322420A patent/DD276165A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-02-26 AT AT0043587A patent/AT400577B/de not_active IP Right Cessation
- 1987-02-26 CA CA000530728A patent/CA1312025C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-02-26 AU AU69272/87A patent/AU612967B2/en not_active Ceased
- 1987-02-26 PT PT84370A patent/PT84370B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-03-14 CN CN198787100927A patent/CN87100927A/zh active Pending
-
1992
- 1992-05-14 SE SE9201529A patent/SE9201529D0/xx not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5185432A (en) | Monoclonal antibodies and antigen for human non-small cell lung carcinoma and other certain human carcinomas | |
US4906562A (en) | Monocolonal antibodies and antigen for human non-small cell lung carcinomas | |
US5091177A (en) | Monoclonal antibodies for treatment of human non-small cell lung carcinomas | |
KR900003923B1 (ko) | 인체 암종양과 관련된 항원에 대한 단일클론성 항체 | |
CA1320459C (en) | Anti-human pulmonary carcinoma monoclonal antibody | |
US4737579A (en) | Monoclonal antibodies for human non-small cell lung carinomas | |
JPH04505102A (ja) | ヒトの腫瘍に附帯した新規な抗原に対する新規なモノクローナル抗体 | |
WO1986007089A1 (en) | Murine hybridoma lym-2 and diagnostic antibody produced thereby | |
EP0203552B1 (en) | Monoclonal antibodies for human non-small cell lung carcinomas | |
US5879911A (en) | Cell surface protein expressed on human cortical thymocyte and their use | |
EP0184369B1 (en) | Monoclonal antibody specific for a mammary tumor cell surface antigen | |
CA1320460C (en) | Anti-human gastric cancer monoclonal antibody | |
EP0143367A2 (en) | Method for production of monoclonal antibodies for cancer diagnosis and therapy | |
CA2080835A1 (en) | A 35kd tumor associated protein antigen and immune complex | |
CA1294905C (en) | Anti-lafora body monoclonal antibody | |
EP0268468A2 (en) | Antibodies |