NO153910B - Direkte agglutineringsproeve for paavisning av antigener i kroppsvaesker. - Google Patents
Direkte agglutineringsproeve for paavisning av antigener i kroppsvaesker. Download PDFInfo
- Publication number
- NO153910B NO153910B NO801830A NO801830A NO153910B NO 153910 B NO153910 B NO 153910B NO 801830 A NO801830 A NO 801830A NO 801830 A NO801830 A NO 801830A NO 153910 B NO153910 B NO 153910B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- serum
- agglutination
- antiserum
- antigens
- sensitivity
- Prior art date
Links
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 title claims description 53
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 36
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 36
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 36
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 48
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 10
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 10
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims description 7
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 4
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims description 3
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 claims description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 48
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 43
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 43
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 32
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 24
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 3
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 3
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000009362 Pneumococcal Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 206010035728 Pneumonia pneumococcal Diseases 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 2
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 208000022218 streptococcal pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 2
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000005062 Polybutadiene Substances 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N azane;7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulfonic acid Chemical compound N.OS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 208000001606 epiglottitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229920002857 polybutadiene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører direkte agglutinerings-prøve for påvisning av antigener i kroppsvæsker, som angitt i krav l's ingress.
Påvisning av mikrobielle antigener i kroppsvæsker kan va-
re nyttig for rask diagnose av etøkende antall infeksjoner. Et vesentlig problem er imidlertid at de i øyeblikket tilgjengelige fremgangsmåter ikke er tilstrekkelig følsomme (immuno-diffusjon, CIE) og kan således ikke anvendes for å indikere tilstedeværelse av antigener hos en vesentlig andel infis-erte pasienter eller også er de altfor tidkrevende for rask diagnose (RIA, ELISA). I visse tilfeller dannes antigen/antistoff komplekset langsomt og/eller også er de dannede partiklene altfor små til å kunne iakttaes med sikkerhet. Påviseligheten er blitt forbedret ved anvendelse av agglut-ineringstester som benytter partikler som bærere hvor antigenet eller antistoffmolekylene er absorbert eller bundet på overflaten av disse.
Slike agglutineringsprøver kan utføres ifølge d en itidirekte metoden, hvorved den kliniske prøven blandes med antistoffer ved en spesifisert fortynning og etter en passende inkuber-ingsperiode kan et indikatorsystem bestående av et kompleks av antigenet bundet til en partikkelformig bærer tilsettes blandingen. Om antigenet er tilstede i den kliniske prøven er antistoffet ikke tilgjengelig for reaksjon med komplekset av antigen/bærer og noen agglutinering forekommer ikke og således er mangel på agglutinering en positiv prøve på antigenet. Om antigenet ikke er tilstede i den kliniske prøven reagerer derimot antistoffet med komplekset av antigen og bærer og agglutinering av indikatorprøven oppstår. Den teori som slike agglutineringsprøver bygger på er velkjent innenfor teknikken og belyses nærmere i de amerikanske pat-entskrifter 3.171.783, 3.775.536, 3.873.683, 3.879.262, 4.003.988 og 4.045.384.
Man har lenge hatt den oppfatning at den eneste virkelige meningsfulle diagnostiske metoden med hensyn til infeksjons-sykdommer er tidlig og rask påvisning av antigener som har tilknytning til det infiserende middel, hvormed man får mulighet for umiddelbar effektiv behandling.
Ifølge foreliggende oppfinnelse har man utviklet en ytterst følsom agglutineringstest for påvisning av antigener så som proteiner og polysakkarider fra ulikeartede mikroorganismer så som bakterier, protozoer og sopper i lave konsentrasjoner i kroppsvæsker. En prøve ifølge foreliggende oppfinnelse beskrives nedenfor, hvilken rutinemessig kan anvendes for å påvise så lite som 0,2 nanogram pr. milliliter av de kapsu-lære polysakkarider som er tilknyttet patogene bakterier. Dette innebærer en følsomhet som er 25 - 250 ganger større enn følsomheten for de allment anvendte motstrøms immuno-elektroforesemetodene (CIE) og en følsomhet som minst til-svarer den for radioimmunoanalyse (RIA). Selv om CIE er rask krever denne metoden dessuten trenet laboratorie-personnel og moderne dyre reagenser og apparater og gir en begrenset følsomhet tilsvarende 10 - 50 nanogram pr. milliliter for de fleste bakteriepolysakkarider. Selv om lavere konsentrasjoner av antigen ofte forekommer i kroppsvæsker forekommer ofte falske negative CIE-prøver hos pasienter med kulturdokumenterte bakterielle infeksjoner. RIA er på den annen side 10 - 100 ganger mer følsom enn CIE, men er meget tidkrevende og dyr.
Før foreliggende oppfinnelse var en generell anvendelse av partikkelagglutineringsprøver begrenset selv om de var ytterst enkle og billige på grunn av den lave følsomhetsgraden til disse prøvene ved små konsentrasjoner av antigen og dår-lig spesifisitet som viste seg i form av ikke-spesifikk agglutinering, spesielt med serumsprøver. Ved tillempning av denne metoden ifølge foreliggende oppfinnelse hvilken beskrives nedenfor, oppnåes en følsomhet med størrelsesorden 0,2 ng/ml og frekvens av ikke-spesifikk agglutinering med humansera reduseres til 2 % eller mindre. Videre har nøyak-tig utvalg og tilberedning av antiserum gitt en prøve som utmerker seg ved enhetlig følsomhet, god stabilitet og spesifisitet .
Begrenset følsomhet er det vesentlige problem ved tidligere kjente metoder for mikrobiell antigenpåvisning. Som en følge herav kan bakterielle antigener ikke påvises hos samtlige pasienter med dokumenterte infeksjoner. Prøver har imidlertid vist at 7 - 22 % av pasienter med haemophilus influenzae type b (H.i.b.) meningitis, 38 % med H.i.b. epiglottitis, 20 - 39 % med bakteriell pneumokokkisk lungebetennelse og 50 - 90 % med ikke-bakteriell pneumokokkisk lungebetennelse ikke har påviselig antigen i serum eller cerebrospinalvæske ved prøv-ning med tilgjengelige analysemetoder basert på motstrøms immunoelektroforese eller partikkelagglutinering. En radio-immunoanalysemetode hvormed man kan påvise 0,5 ng/ml eller derunder, muliggjør imidlertid diagnose av samtlige tilfeller av H.i.b. meningitis når de ankommer til legen. Prøve-resultatene viser også at konsentrasjonen av antigen hos 37
% av pasientene var mindre enn 10 ng/ml og således under føl-somhetsgrensen for de fleste tilgjengelige fremgangsmåter basert på motstrømsimmunoelektroforese.
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det utviklet en analysemetode som er særpreget ved det som er angitt i kravets ka-rakteriserende del.
a. Sensitivitet
Valg av antiserum påvirker markant analysens følsomhet. Seks antisera fremstilt i tre dyrearter gir partikler med følsom-heter varierende fra 0,2 nanogram til mer enn 1000 nanogram polyribosefosfat (PRP) pr. milliliter. Den funksjonelle kvaliteten til de spesifikke antistoffene samt deres konsentrasjon er av betydning. Det antiserum som gir de mest føl-somme "partikler har ikke den høyeste antistoffkonsentrasjon ved bestemmelse med radioantigenbindende analyse.
Seks antisera mot hel Haemophilus Influenzae type b ble fremstilt i fire kaniner, et esel og en hest ifølge den immu-niseringsplan som beskrives av H.E. Alexander et al i Jour-nal of Immunology 54: 207 - 211, 1946.
Uttrykket "partikulær" i foreliggende sammenheng vedrører partikler som er inerte og nøytrale overfor de andre komponen-ter og som kan absorbere antisera på en irreversibel måte. Slike partikler kan være perler av glass, polybutadien, poly-styren, polybutadien-styren etc. med en midlere partikkel-størrelse fra 0,15 til 0,9 jum. Fortrinnsvis sensitiviseres polystyrenlatex partikler med en enhetlig diameter på ca. 0,81^um i form av en suspensjon inneholdende 10 % vekt/volum destillert vann med ovennevnte antisera på følgende måte: De hele antisera som oppnås fra esel og kanin fortynnes hver 1/500 og helt hesteantiserum 1/200 i standardisert glycin-bufret saltløsning (0,1 M glycin, 0,9 % natriumklorid, pH 8,2). Antistoffer absorberes på latexpartikler ved tilsetning av en del 10-prosentig late.x suspensjon på 80.deler fortynnet antiserum og inkuberes ved romtemperatur i en time. Fritt antiserum dekanteres etter sentrifugering i 10 minutter ved 12.000 g. Late x pellets suspenderes i glycin-bufret saltløsning med en liten mengde protein, nemlig 0,1 % hu-mant serumalbumin eller 0,1 % serum fra esel, kanin eller hest ved forskjellige tilfeller for å gi en 0,125-prosentig late x suspensjon hvilken på nytt sentrifugeres og suspenderes i glycinbufret saltløsning. Fetalt kalveserium, som ifølge radioimmunoanalyse viste seg ikke å ha noen anti-PRP-antistoffer, anvendes som fortynningsmiddel for stan-dardiserte løsninger av PRP-antigen.
Agglutinering utføres ved tilsetning av 0,05 deler væske inneholdende'antigen til 0,01 ml sensitivisert latexløsning på en serologisk plate med keramiske ringer. Platen roteres (180 omdreininger pr. minutt) i et fuktighetskammer ved romtemperatur og undersøkes med hensyn til agglutinering etter 45 minutter. Agglutineringen graderes 4<+>når aggluti- neringsblandingen klarner og grovklumper av latexpartikler iakttas, 3 når blandingen forblir uklar, men grove klumper iakttas, 2<+>når blandingen forblir uklar, men granularitet lett iakttas og 1<+>når blandingen forblir uklar, men bare minimal granularitet iakttas. Agglutinering som er lik med 2 eller større anses positiv. De sammenlignende sensitivi-tetene angis nedenfor i tabell 1.
Tabell 1 viser klart at kvaliteten av det antiserum som anvendes for å sensibilisere latexpartiklene er kritisk for sensitiviteten til latexpartikkelagglutineringsprøven for påvisning av PRP-antigen. Av resultatene i tabell 1 fremgår klart at sensitiviteten ikke bare kan forutsies på basis av konsentrasjonen til PRP i antiserum bestemt ifølge radioantigenbindende analyse. Et eselantiserum som bare inne holdt 12 % mer antistoff enn i forhold til innholdet i det beste kaninantiserum, ga en 5 ganger mer sensitiv latexpar-tikkelblanding. Denne forskjell med hensyn på sensibilitet kunne ikke forklares ved mer effektiv belegning av latexpartiklene med eselantistoffer, mens latexpartikler belagt med kaninantiserum hadde 2,3 ganger mer absorbentantistoff. Ag-glutineringsaktiviteten for esel, og kaninantiserum for røde blodceller belagt med PRP fra får var lik tross den meget høye konsentrasjon av PRP-bindende aktivitet i kaninantiserum.
Bestemmelse av assosiasjonshastigheter viser at eselantistoffer kombineres meget raskere med PRP-antigen enn antistoffer fra kanin. Assosieringshalvtiden er 20 minutter for eselantistoffer og mer enn 60 minutter for kaninantistoffer. Grunnen til denne forskjell med hensyn til assos-ieringshastighet er ikke kjent.
Dissosiasjonshastigheten for komplekser av antigen/antistoff i nærvær av overskudd av antigen er et mål for bindingstett-heten eller affiniteten for antistoffet. Kaninantistoff dissosierer langsommere fra polyribosefosfat enn eselantistoffer og har derfor en større affinitet til antigenet. Dette resultatet støtter hypotesen at kombinasjonshastig-heten for antigen og antistoff er mer signifikant ved agg-lutineringsfremgangsmåter enn styrken til reaksjonen mellom antigen og antistoff.
b. Anvendelse av makroglobulinfraksjon for å belegge LP Molekylsiktkromatografi av forskjellige animalske antisera til bakterielle polysakkarider har vist at majoriteten av antipolysakkaridantistoffene hos hestedyr (esel, hest) gjenfinnes i makroglobulinklassen som elueres i void volumet fra denne kolonnen. I motsetning dertil gjenfinnes majoriteten av kaninantistoffer i klassenIgG som elueres senere. Som det fremgår av tabell 2 kan anvendelse av makroglobulinfraksjonen fra esel- eller hesteantiserum ved en konsentrasjon på 50 ug protein/ml for sensibilisering av latexpar-
tiklene markant forbedre sensitiviteten til relativt svake antisera fra hestedyr. Sensitiviteten til de beste antisera forbedres ikke ytterligere ved denne modifikasjon selv om agglutineringsreaksjonens klarhet generelt er bedre med void volumfraksjonen. Anvendelse av fraksjonen igG i kanin-sera gir ikke sammenlignbare forbedringer med hensyn til sensitivitet eller agglutineringens klarhet.
c. Vasking av belagt LP
For å bevirke ytterligere forbedring av sensitiviteten til eselantisera sammenlignes de antistoffbelagte latexpartikl ene belagt med forskjellige fortynninger av eselantiserum 1 glycinpuffret saltløsning, i uvasket tilstand og etter 1,
2 og 3 vask med glycinbuffret saltløsning inneholdende 1/1000 deler fetalt kalveserum og resultatene angis i tabell 3.
Som det fremgår av de i tabell 3 angitte resultater er lave fortynninger av antiserum insensitive. Med fortynninger på 1/500 og derover oppnås maksimal sensitivitet forutsatt at latexpartiklene er vasket. Uvaskete latexpartikler oppnår maksimal sensitivitet med bare et snevert intervall av fortynninger. To vask ga maksimal sensitivitet, mens tre vask kan resultere i redusert sensitivitet.
Sensitiviserte latexpartikler fra vaskeforsøket lagres ved 4°C og prøves på nytt etter 12 og 2 4 måneder. Latexpartikler sensitivisert med eselantiserum med fortynningene 1/500 og 1/1000 og vasket to ganger bibeholdt sine opprinnelige sensitiviteter mens ikke-vaskete latexpartikler var 2-4 ganger mindre sensitive etter 24 måneder.
d. Inkubasjonsperiodens lengde
Figuren viser sammenhengen mellom analysesensitivitet og inkubasjonsperiode. Store konsentrasjoner av antigen agglutinerte latexpartiklene i løpet av 5 minutter. Sensitiviteten økte raskt under de første 45 - 60 minutter og deretter langsomt og nådde et maksimum på 0,05 nanogram/ml ved de mest sensitive preparatene ved 10 timer. Hestedyrserumet var mer sensitivt enn kaninserum ved samtlige inkubasjonsperioder. Ved utførelsen av de sammenlignende forsøk ble 50 mikroliter prøveløsning og 10 mikroliter belagte latexpartikler som beskrevet nedenfor blandet på en serologisk skive og rotert ved 180 omdreininger pr. minutt ved romtemperatur. Skivene ble belagt og fuktigheten opprettholdt med svamper mettet med varmt vann. Skivene ble deretter iakttatt ved angitte tidspunkter.
Forlengelse av inkubasjonsperioden fra 5 minutter til 45 minutter eller derover fører til en 10 - 20 gangers sensi-tivitetsøkning. For praktiske kliniske formål valgtes en inkubasjonsperiode på 15 minutter som normalt ble avlest ved intervaller på 5 - 15 minutter ved anvendelse av latexpartikler belagt med et hestedyrs antiserum. Slike latexpartikler hadde en sensitivitet på 0,2 nanogram antigen pr. milliliter væske. Det kunne ventes at økning av sensitiviteten for partikkelagglutineringsanalysen også skulle øke tilstedeværelsen av ikke—spesifikk agglutinering og når det gjelder serumprøver agglutinerte disse latexpartiklene 69 % av sera fra sykehusbehandlede barn. Denne vesentlige ulem-pen har tidligere begrenset en utstrakt anvendelse av denne analysemetoden. Faktorer som påvirket agglutineringen av latexpartiklene belagt med gammaglobuliner er varmelabile serumkomponenter (formodentlig komplement) og varmestabile antiglobuliner, hvorav lave innhold vesentlig gjenfinnes i humansera, særlig fra pasienter med kroniske betennelses-sykdommer.
Ikke-spesifikk agglutinering konstatertes ved agglutineringen av kontrollatexpartikler som sensitivisertes med helt ikke-immunt animalsk serum. Når latexpartikler belagt med makroglobulin anvendes, er kontrollatexpartiklene belagt med makroglobulinfraksjonen fra ikke-immunserum.
Ved å benytte foreliggende oppfinnelse reduseres frekvensen av ikke-spesifikk agglutinering med humansera til 2 % eller lavere ved (i) tilsetning av ikke-immunt animalskt serum til sensitiviserte latexpartikler; (ii) ved tilsetning av en serum-buffer inneholdende et polyanion og/eller et reduserende middel direkte til inkubasjonsblandingen og/eller (iii) ved varmeinaktivering av sera.
Forekomst av ikke-spesifikk agglutinering ble bestemt med sera fra barn og voksne som var pasienter på sykehus og ikke hadde H.i.b.-sykdom. Samtlige sera ble prøvet med latexpartikler sensitivisert med eselantiserum (anti-PRP LP) og med latexpartikler sensitivisert med ikke-immunt eselserum (kontroll-LP).
Ved innledende forsøk prøvdes sera inneholdende varmestabile agglutiner ved tilsetning av 10 mikroliter av et reduksjonsmiddel så som 1,4-ditiotreitol (DTT) eller 2-merkaptoetanol (ME) til inkubasjonsblandingen på inkubasjonens begynnelse. Optimale konsentrasjoner var 0,018 M for DTT og 0,35 M for ME (sluttkonsentrasjonene i inkubasjonsblandingen var 0,0026 M for DTT og 0,05 M for ME).
Tabell 4 nedenfor sammenfatter de resultater som ble oppnådd med 104 pediatriske sera som ble lagret i minst 24 timer ved 4°C før prøving.
TABELL 4
Forekomst av ikke-spesif ikk agglutinering i lagrede sera"<*>-fra sykehusbehandlede barn uten Haemophilus influenzae type b. 69 % av disse sera ga ikke-spesifikk agglutinering med anti-PRP og alle foruten 4 % ble identifisert ved kontroll-LP.
Varmeinaktivering (6 0°C i 15 minutter) reduserte bare i liten grad ikke-spesifikk agglutinering til 53 % og tilsetning av ikke-immunt eselserum til både anti-PRP og kontroll-LP reduserte ikke—spesifikk agglutinering til 31 %; tilsetning av 10 mikroliter av et reduksjonsmiddel, d.v.s. ditiotreitol, reduserte forekomsten av ikke-spesifikke reduksjoner til 2 %. Resultat erholdt med 52 lagrede sera fra voksne personer var lignende. Bare et serum som ga ikke-spesifikk agglutinering (positiv med anti-PRP-LP og kontroll-LP) ved tilsetning av 2,5 % normalt eselserum sattes til latexpartiklene og DTT sattes til inkubasjonsblandingen.
For å bestemme hvorvidt ferske sera ga en større forekomst av ikke-spesifikk agglutinering ble 100 sera tatt frem fra voksne og plasert umiddelbart på is og analysert samme dag. Hvert serum ble prøvet med og uten reduksjonsmiddel (ME) og med og uten varmeinaktivering (60°C i 5 minutter). Agglutineringen ble prøvet med anti-PRP-LP og kontroll-LP som hver inneholdt 2,5 % normalt eselserum og korresponderte i samtlige tilfeller. Agglutineringsmønsteret er sammenfattet i tabell 5.
sjonsmiddel (ME) ble tilsatt, ble 28 av disse sera negative (mønster 2) som viser tilstedeværelse av antiglobuliner. 14 sera som i begynnelsen var negative ble positive (mønster 4) hvilket viser at et varmestabilt agglutinin ble reaktivert av merkaptoetanol. Nettoeffekten av ME var bare å redusere ikke-spesifikk agglutinering til 38 %. En lignende forekomst av ikke—spesifikk agglutinering oppnås ved varmeinaktivering alene. Kombinasjon av varmeinaktivering av disse sera og tilsetning av et reduksjonsmiddel til inkuberings-blandingen reduserte imidlertid forekomsten av ikke-spesifikk agglutinering til størrelsesorden 2 % eller lavere. Mens varmeinaktivering er tidkrevende, er det utviklet en alternativ metode for å eliminere ikke-spesifikk agglutinering ved innvirkning av varmelabile serumfaktorer. Ulike artede polyanioner omfattende natriumpolyetanolsulfonat (SPS) dextransulfat, karragenin og heparin forhindrer den ikke spesifikke agglutineringen av globulinbelagte latexpartikler ved innvirkning av varmelabile serumfaktorer. 10 0 ferske sera fra voksne personer ble prøvet med en serumbuffer inneholdene både ME (som ovenfor) og SPS ved en konsentrasjon ved 0,05 %. Bare et av de 100 sera ga ikke—spe-sifikk agglutinering med anti-PRP og kontroll-LP. Ikke-spesifikk agglutinering med dette serum ble eliminert ved oppvarming. - Som ønskelig tilsattes en serumbuffer inneholdende både reduksjonsmiddel og et polyanion til inkuberings-blandingen av en stabilisert sensitivisert latexpartikkel og en serumprøve.
En slik serumbuffer ble fremstilt på følgende måte;
Fortynn 14 molar 2-merkaptoetanol (standardisert fullstyrke-løsning) 1/4 0 i glycinbuffret saltløsning (GBS) (0,1 M glycin, 0,9 % natriumklorid, pH 8,2). Spe ut 5 % vannløs-ning av polyetanolsulfonat 1/100 i samme GBS.
Serumbufferen kan inneholde andre reduksjonsmidler så som ditiotreitol glutation, cystein og lignende istedet for 2-merkaptoetanol. Dessuten kan andre polyanioner anvendes så som dextransulfat, heparin, karragenin og lignende såvidt
de ikke forstyrrer antigen-antistoffreaksjonen.
Tabell 6 nedenfor viser den optimale konsentrasjonen av reagenser i serumbuffere. Høye konsentrasjoner av reduksjonsmiddel eller polyanioner reduserte analysens følsomhet og lavere konsentrasjoner kunne ikke eliminere ikke-spesifikk agglutinering i samtlige sera.
Den effektive konsentrasjonen av ikke-immunt animalsk serum
i latexsuspensjonen ble undersøkt på nytt i forsøkssystemet med anvendelse av den ovenfor beskrevne serumbuffer.
Konsentrasjoner av ikke-immunt animalsk serum mindre enn 0,25 % i partikkelsuspensjonen (mindre enn 0,035 % i den endelige analyseblandingen) resulterte i eventuell ikke-spesif ikk agglutinering tross anvendelsen av serumbuf fer.
Konsentrasjoner av ikke-immunt animalsk serum opp til ca.
25 % i latexsuspensjonen (3,5 % av den endelige analyseblandingen) er effektive med hensyn til reduksjon av forekomst av ikke-spesifikk agglutinering, men den høyeste konsentrasjonen, d.v.s. 25 %, reduserte imidlertid analysens
sensitivitet for polyribofosfat to ganger.
Ikke- spesifikk agglutinering i andre kroppsvæsker
De fleste urinprøver gir ikke-spesifikk agglutinering med anti-PRP og kontroll-LP. Dette kan elimineres enten ved oppvarming (100°C i 5 minutter) eller ved å filtrere urinen. Ved den foretrukne utførelsesform anvendes et filter med porestørrelse 0,4 5 yum.
Prøve av cerebrospinalvæske gir meget sjelden ikke-spesifikk agglutinering, hvilket elimineres ved oppvarming (100°C i 5 minutter). PRP-antigenet er stabilt ved den ovenfor nevnte oppvarming og filtrering.
Følgende spesifikke eksempler belyser oppfinnelsen i dens foretrukne utførelsesform.
EKSEMPEL I
a. Belegg av latexpartikler
For fremstilling av anti-PRP-latexpartikler fortynnes helt eselantiserum til K.influenzae type b i forholdet med 1/5CO glycinbuffret saltløsning (GBS) og oppvarmes til 56°C i 30 minutter. En del latexsuspensjon (en 10-prosentig suspensjon med partik-keldiameter 0,81^æi i destilert vann) ble satt til 80 deler fortynnet antiserum til en endelig latexpartikkelkonsentra-sjon på 0,125 %. Blandingen ble inkubert en time ved romtemperatur, sentrifugert ved 12.000g i 10 minutter og super-nantanten ble kastet."Pellet"-en ble gjenoppslemmet i et lite volum GBS inneholdende 0,1 % ikke-immunt eselserum gjensentrifugert som ovenfor og suspendert der-
etter igjen i et likt volum GBS inneholdende 2,5 % ikke-immunt eselserum. Kontrollatexpartikler fremstilt som ovenfor nevnt bortsett fra at ikke-immunt eselserum fortynnet til 1/500 i GBS ble anvendt for initiell dekking av latexpartiklene. Det ikke-immune eselserum som ble anvendt herunder skal være serum som taes før immunisering fra samme dyr som immuniserer.
Når makroglobulinfraksjonen skal anvendes, kromatograferes det hele jJdce-irrir.une og immune eselserumet på en gelfiltrer- ingskolonne inneholdende "Sephacryl G-200" og fraksjonene som elueres i kolonnens voidvolum sammenslås. De sammen-slåtte volumfraksjonene fortynnes til en proteinkonsen-trasjon på 50 ug protein pr. milliliter i GBS og anvendes siden i stedet for fortynnet helt antiserum i den ovenfor beskrevne metoden.
b. Fremstilling av serumbuffer
Fortynn 14 molar 2-merkaptoetanol (standardisert fullstyrke-løsning) 1/40 i GBS. Tilsett natriumpolyetanolsulfonat til en sluttkonsentrasjon av 0,05.
c. Analysemetode
Analysemetoden ifølge oppfinnelsen utføres på følgende måte: 50 mikroliter positivt kontrollserum, negativt kontrollserum og hvert serum, cerebrospinalvæske og urinprøve som skal undersøkes settes til hver og en av to kilder i en ren tørr serologisk skive ifølge det følgende diagram. Det positive kontrollserumet inneholder 2 ng PRP antigen/ml. Det negative kontrollserumet inneholder antiglobuliner som agglutinerer både anti-PRP-LP og kontroll-LP om ikke SB tilsettes og gir således en kontroll av aktiviteten av SB. Urinprøve forfiltreres med et 0,45 pxa filter.
Tilsett 10 mikroliter serumbuffer til hver kilde inneholdende positivt kontrollserum, negativt kontrollserum eller en serumprøve.
Latexsuspensjonene blandes forsiktig uten skumming og 10 mikroliter anti-PRP-latexpartikler settes til en kilde i
hvert par (rad A) og reagensene blandes nøyaktig.
10 mikroliter kontrollatexpartikler settes til den andre kilden i hvert par og reagensene blandes nøyaktig.
Skiven plasseres på et serologisk risteapparat og rote-,
res i 4 5 minutter. Kamrene skal fuktes med svamper dyppet i varmt vann slik at kondensasjonen blir synlig under for-søket. Skivene tas ut fra kamrene, tørkes fri for konden-sat og agglutineringen studeres ved at skivene bøyes frem og tilbake i skrått innfallende lys over sort bakgrunn og i følge følgende skala:
Bedømmelsene 3+ og 4+ skal være lette å skille fra kontrol-lene ved betraktning av skiven på en armlengdes aystand. Reaksjoner 2+ krever nøyaktige studium.
Positiv agglutinering ifølge bedømmelsen 2+ skal angis som å være "svakt positiv".
De i foreliggende sammenheng angitte tidsrommene og temp-eraturene for varmebehandling og inkubering er optimale, hvorved det imidlertid skal forstås at samme resultat kan er-holdes ved høyere temperaturer og under kortere tidsrom. eller omvendt ved lavere temperaturer under lengre tidsrom. Beskrivelsen ovenfor angir videre reagenser, media og fremgangsmåter som anvendes for å konstatere funksjonen til foreliggende oppfinnelse.
Claims (1)
- Direkte agglutineringsprøve for påvisning av antigener i kroppsvæsker, hvor man kombinerer en prøve av en kroppsvæske, som eventuelt kan være varmebehandlet, bestående av serum eller plasma med et flytende reagens som agglutineres ved kontakt med væsker som inneholder antigener, hvilket reagens omfatter en bærer belagt med animalsk antiserum mot nevnte antigener oppslemmet i et passende fysiologisk buffersystem og ikke-immunt animalsk serum fra samme dyreart som dannet antiserumet, hvilket antiserum er hestedyrsantiserum, spesielt makroglobulinfraksjonen derav,karakterisert vedat det benyt-tes et buffersystem inneholdende et polyanion som kan redusere virkningen til varmelabile bestanddeler i prøven, og et reduksjonsmiddel som kan redusere antiglobulinantistof-fene i prøven, og inkubering utføres over et tidsrom på 45 minutter eller lengere, og deretter bestemmes visuelt agglutineringsgraden, hvorunder polyanionene velges blandt natriumpolyetanolsulfonat, dekstransulfonat, karragenin og heparin, og hvorunder reduksjonsmiddelet velges blandt 2-merkaptoetanol, ditiotreitol, glutation og cystein.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/050,269 US4310508A (en) | 1979-06-19 | 1979-06-19 | Diagnostic test and reagent therefor |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO801830L NO801830L (no) | 1980-12-22 |
| NO153910B true NO153910B (no) | 1986-03-03 |
| NO153910C NO153910C (no) | 1986-06-11 |
Family
ID=21964303
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO801830A NO153910C (no) | 1979-06-19 | 1980-06-18 | Direkte agglutineringsproeve for paavisning av antigener i kroppsvaesker. |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4310508A (no) |
| JP (1) | JPS5631648A (no) |
| AU (1) | AU538062B2 (no) |
| BE (1) | BE883905A (no) |
| CA (1) | CA1138331A (no) |
| CH (1) | CH646524A5 (no) |
| DE (1) | DE3022681A1 (no) |
| DK (1) | DK166234C (no) |
| FI (1) | FI68468C (no) |
| FR (1) | FR2459480B1 (no) |
| GB (1) | GB2052059B (no) |
| IT (1) | IT1129088B (no) |
| NL (1) | NL191323C (no) |
| NO (1) | NO153910C (no) |
| SE (1) | SE448577B (no) |
| ZA (1) | ZA803473B (no) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3206729A1 (de) * | 1982-02-25 | 1983-09-01 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches agglutinationsverfahren |
| US4403042A (en) * | 1982-08-19 | 1983-09-06 | Miles Laboratories, Inc. | Detection of cell membrane antigens and corresponding antibodies |
| JPS5992353A (ja) * | 1982-11-19 | 1984-05-28 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | 不溶性担体粒子を用いる凝集反応測定方法 |
| JPS60256057A (ja) * | 1984-06-01 | 1985-12-17 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 免疫学的測定法 |
| JPS63106561A (ja) * | 1986-05-31 | 1988-05-11 | Toshiba Corp | 免疫分析試薬 |
| DE3715333A1 (de) * | 1987-05-08 | 1988-11-24 | Behringwerke Ag | Verfahren zur quantitativen bestimmung von serumproteinen in koerperfluessigkeiten und mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
| US4921809A (en) * | 1987-09-29 | 1990-05-01 | Findley Adhesives, Inc. | Polymer coated solid matrices and use in immunoassays |
| DE68907996T2 (de) * | 1988-05-11 | 1994-01-05 | Abbott Lab | Verfahren zur Erhöhung der Spezifizität in kompetitiven Immuntests. |
| JPH0354465A (ja) * | 1989-07-21 | 1991-03-08 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫学的測定用希釈液 |
| JPH0354466A (ja) * | 1989-07-21 | 1991-03-08 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫学的測定試薬及び測定方法 |
| US5817525A (en) * | 1995-05-19 | 1998-10-06 | Chiron Diagnostics Corporation | Stable protein solutions for diagnostics and method of making and using the same |
| US6927071B2 (en) * | 2001-12-07 | 2005-08-09 | Beckman Coulter, Inc. | Method for reducing non-specific aggregation of latex microparticles in the presence of serum or plasma |
| US20060190188A1 (en) * | 2005-01-25 | 2006-08-24 | Nauta Jozef J | Methods and systems for determining lot consistency |
| CA2552596A1 (en) * | 2005-08-09 | 2007-02-09 | Solvay Pharmaceuticals B.V. | Methods and systems for determining mid-value titers |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1078939A (en) * | 1964-08-12 | 1967-08-09 | Pfizer & Co C | Diagnostic reagent |
| US3600494A (en) * | 1967-11-06 | 1971-08-17 | Fujizokiseiyaku Kk | Serological test for syphilis |
| US3873683A (en) * | 1968-12-10 | 1975-03-25 | Princeton Lab Inc | Pregnancy test composition and method |
| GB1340180A (en) * | 1969-12-18 | 1973-12-12 | Kowa Co | Process for the preparation of diagnostic agents for primary hepatoma |
| GB1362776A (en) * | 1970-07-17 | 1974-08-07 | Wellcome Found | Immunological reagent |
| US3992517A (en) * | 1975-02-19 | 1976-11-16 | Pfizer Inc. | Detection of hepatitis B surface antigen by latex agglutination |
| DE2546166A1 (de) * | 1975-10-15 | 1977-04-28 | Behringwerke Ag | Gegerbte thrombozyten |
| GB2005275B (en) * | 1977-09-19 | 1982-03-10 | Hoffmann La Roche | Immunological reagent |
| JPS5552945U (no) * | 1978-10-05 | 1980-04-09 |
-
1979
- 1979-06-19 US US06/050,269 patent/US4310508A/en not_active Expired - Lifetime
-
1980
- 1980-06-11 IT IT67909/80A patent/IT1129088B/it active
- 1980-06-11 ZA ZA00803473A patent/ZA803473B/xx unknown
- 1980-06-11 FI FI801870A patent/FI68468C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-06-16 JP JP8030880A patent/JPS5631648A/ja active Granted
- 1980-06-17 DK DK258080A patent/DK166234C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-06-18 CH CH467880A patent/CH646524A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1980-06-18 GB GB8019881A patent/GB2052059B/en not_active Expired
- 1980-06-18 SE SE8004542A patent/SE448577B/sv unknown
- 1980-06-18 NO NO801830A patent/NO153910C/no unknown
- 1980-06-18 AU AU59402/80A patent/AU538062B2/en not_active Ceased
- 1980-06-18 NL NL8003542A patent/NL191323C/xx not_active IP Right Cessation
- 1980-06-18 DE DE19803022681 patent/DE3022681A1/de active Granted
- 1980-06-19 FR FR8013626A patent/FR2459480B1/fr not_active Expired
- 1980-06-19 BE BE0/201096A patent/BE883905A/fr not_active IP Right Cessation
- 1980-06-19 CA CA000354397A patent/CA1138331A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK258080A (da) | 1980-12-20 |
| DK166234C (da) | 1993-08-16 |
| GB2052059A (en) | 1981-01-21 |
| CA1138331A (en) | 1982-12-28 |
| US4310508A (en) | 1982-01-12 |
| BE883905A (fr) | 1980-12-19 |
| AU5940280A (en) | 1981-01-08 |
| NO153910C (no) | 1986-06-11 |
| SE448577B (sv) | 1987-03-02 |
| AU538062B2 (en) | 1984-07-26 |
| CH646524A5 (fr) | 1984-11-30 |
| FR2459480B1 (fr) | 1985-01-11 |
| FR2459480A1 (fr) | 1981-01-09 |
| IT8067909A0 (it) | 1980-06-11 |
| DE3022681C2 (no) | 1992-07-30 |
| NL8003542A (nl) | 1980-12-23 |
| NL191323C (nl) | 1995-05-16 |
| DK166234B (da) | 1993-03-22 |
| ZA803473B (en) | 1981-09-30 |
| NO801830L (no) | 1980-12-22 |
| FI68468B (fi) | 1985-05-31 |
| DE3022681A1 (de) | 1981-01-22 |
| NL191323B (nl) | 1994-12-16 |
| GB2052059B (en) | 1983-11-30 |
| IT1129088B (it) | 1986-06-04 |
| SE8004542L (sv) | 1980-12-20 |
| JPH0256633B2 (no) | 1990-11-30 |
| JPS5631648A (en) | 1981-03-31 |
| FI68468C (fi) | 1985-09-10 |
| FI801870A (fi) | 1980-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liebhaber | Measurement of rubella antibody by hemagglutination inhibition: II. Characteristics of an improved HAI test employing a new method for the removal of non-immunoglobulin HA inhibitors from serum | |
| US4680274A (en) | Particles for inhibiting non-specific immunoreaction | |
| US4332783A (en) | Process for immunologic determination tests | |
| NO153910B (no) | Direkte agglutineringsproeve for paavisning av antigener i kroppsvaesker. | |
| US4711841A (en) | Method for determining one or more antigens in a sample | |
| JPS6367864B2 (no) | ||
| US4210622A (en) | Kit for assay of immune complexes | |
| US4141965A (en) | Assay of immune complexes | |
| US4587222A (en) | Reagent comprising treated red blood cells and methods for detecting rheumatoid factor | |
| CA1215923A (en) | Reagent for determination of blood coagulation factor xiii | |
| US4399229A (en) | Rapid radioimmunoassay product and method of making and using same | |
| US4288426A (en) | Serological test for syphilis | |
| Hoffman | [45] Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) for immunoglobulin E and blocking antibodies | |
| US5843794A (en) | Technique for the prevention of false positive reactions in immunological testing due to C1 and C1q components of the complement and method for screening for rheumatic factor | |
| US4617260A (en) | RIA assay for HBcAg | |
| Itoh et al. | Detection of human hemoglobin A (HbA) and human hemoglobin F (HbF) in biological stains by microtiter latex agglutination-inhibition test | |
| Hinchliffe et al. | Detection of complement fixation by enzyme linked immunosorbant assay (COMPELISA). | |
| Schalla et al. | Evaluation of a C-reactive protein latex agglutination detection test with sera from patients with sexually transmitted diseases | |
| JP3032891B2 (ja) | 遊離ヘモグロビン測定用試薬キット及びそれを用いる遊離ヘモグロビンの測定法 | |
| EP0106122A2 (en) | Method for measuring IgG in a neonatal foal or calf and in colostrum | |
| Sølling et al. | The development of a rapid ELISA for IgE utilizing commercially available reagents | |
| JPH0456258B2 (no) | ||
| CA1057194A (en) | C1q in immunochemical determination | |
| Akman et al. | The development and validation of a competitive, microtiter plate enzymeimmunoassay for human albumin in urine | |
| Wheeler et al. | Routine and rapid enzyme linked immunosorbent assays for circulating anti-glomerular basement membrane antibodies. |