MXPA02007449A

MXPA02007449A - Anticuerpos anti-ccr2 humanizados y metodos para el uso de los mismos.

Info

Publication number: MXPA02007449A
Application number: MXPA02007449A
Authority: MX
Inventors: Walter Newman
Original assignee: Millennium Pharm Inc
Priority date: 2000-02-03
Filing date: 2001-02-02
Publication date: 2003-04-14
Also published as: ES2293973T3; DE60130538D1; WO2001057226A1; JP2008069150A; CA2399080A1; AU2009201216A1; CA2399080C; JP4398620B2; ATE373719T1; AU2009201216A8; DE60130538T2; JP2003521927A; EP1255844A1; AU3327701A; EP1255844B1; AU2001233277B2

Abstract

La presente invencion se refiere a anticuerpos humanizados o sus fragmentos funcionales, que se enlazan a un receptor (2) (CCR2) de CC-quimiocina de mamifero (por ejemplo, humano) o una porcion del receptor, y bloquean el enlazamiento de un ligando al receptor. La invencion ademas se refiere a un metodo para inhibir la interaccion de un CCR2 de mamifero portador celular con un ligando del mismo, y al uso de los anticuerpos y fragmentos en metodos terapeuticos, profilacticos y de diagnostico.

Description

ANTICUERPOS ANTI-CCR2 HUMANIZADOS Y MÉTODOS DE USO PARA LOS MISMOS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud es una continuación en parte de la Solicitud EE.UU. N° de Serie 09/497.625, presentada el 3 de Febrero de 2000, la cual es una continuación en parte de la Solicitud EE.UU. N° de Serie 09/359.193, presentada el 22 de Julio de 1999, la cual es una continuación en parte de la Solicitud EE.UU. N° de Serie 09/121.781, presentada el 23 de Julio de 1998, cuyas enseñanzas son todas ellas aquí incorporadas a modo de referencia. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En los últimos años, se ha descrito una familia cada vez mayor de factores quimioatrayentes/activadores de los leucocitos denominados quimiokinas (Oppenheim, J.J. y col ^ Annu . Rév. Immunol . , 9 : 617-648 (1991); Schall y Bacon, Curr. Opin . Immunol .- 6:_ }65-873 (1994) ; ~ Baggioli i, - .- t col., Adv. Immunol . 55 : 97-179 (1994~) )~~ Los miembros de esta familia son producidos y segregados por muchos tipos celulares en respuesta a los mediadores inflamatorios precoces, tales como IL-ß o TNFa. La superfamilia de las quimiokinas consiste en dos ramas principales: la rama de las a-quimiokinas incluye proteínas tales como la IL-8, el péptido-2 activador de neutrófilos (NAP-2) , la actividad estimuladora del crecimiento de melanomas (MGSA/gro o GROa) y ENA-78, cada uno de los cuales tiene efectos atrayentes y activadores predominantemente sobre los neutrófilos. Los miembros de la rama de las ß-quimiokinas afectan a otros tipos celulares, tales como mo-nocitos, linfocitos, basófilos y eosinófilos (Oppenheim, J.J. y col., Annu . Rev. Immunol . , 9 : 617-648 (1991); Baggiolini, M. y col., Adv. I munol . 55 : 97-179 (1994); Miller y Krangel, Cri t . Rev. Immunol . 12 : 17-46 (1992); José, P.J. y col., J". Exp . Med . 179 : 881-118 (1994); Ponath, P.D. y col., J. Clin .

Invest. 97 : 604-612 (1996)), e incluyen proteínas tales como las proteínas quimiotácticas de monocitos 1-4 (MCP-1, MCP-2, MCP-3 y MCP-4) , RANTES y proteínas inflamatorias de macrófagos (MlP-la, MlP-lß) . Recientemente, se ha identificado una clase de quimiokinas unidas a membranas denominadas quimiokinas CX3C (Bazon, J.F. y col., Nature 385 : 640-644 (1997)). Las quimiokinas pueden mediar en un rango de efectos proin-flamatorios sobre los leucocitos, tales como el disparo de la quimiotaxis, la degranulación, la síntesis de mediadores li-pídicos y la activación de integrinas (Oppenheim, J.J. y col., Annu. Rev. Immunol . , 9 : 617-648 (1991); Baggiolini, M. y col., Adv. Immunol . 55 : 97-179 (1994); Miller y Krangel, Crit. Rev. Immunol . 12 : 17-46 (1992)). Últimamente, se ha visto que determinadas ß-quimiokinas suprimen la infección por HIV-1 de las líneas de células T humanas in vi tro (Coc-chi, F. y col., Science (Wash . DC) , 270 : 1811-1815 (1995)). Las quimiokinas se unen a 7 receptores acoplados a proteína G de extensión de transmembrana (7TMS) (Murphy, P.M., Annu . Rev. Immunol . 12 : 593-633 (1994)). Algunos recep-tores conocidos para las quimiokinas CC o ß incluyen CCRl, que se une a MlP-la y RA?TES (?eote, K. y col., Cell , 72 : 415-425 (1993); Gao, J.L., J. Exp . Med . , 177 : 1421-1427 (1993)), CCR2 , que se une a quimiokinas entre las que se incluyen MCP-1, MCP-2, MCP-3 y MCP-4 (Charo, I.F. y col., Proc . Natl . Acad. Sci . USA, 91 : 2752-2756 (1994); Myers, S.J. y col., J. Biol . Chem . 270 : 5786-5792 (1995); Gong y col., J". Biol . Chem. 272 : 11682-11685 (1997); García-Zepeda y col., J". Im unol . 157 : 5613-5626 (1996)); CCR3 , que se une a quimiokinas entre las que se incluyen eotaxina, RA?TES y MCP-3 (Po-nath, P.D. y col., J. Exp . Med . , 183 : 2437-2448 (1996)); CCR4 , que se ha visto que produce una señal en respuesta a MCP-1, MlP-la y RA?TES (Power, C.A. y col., J". Biol . Chem. , 270 : 19495-19500 (1995)), y CCR5 , que se ha visto que produce una señal en respuesta a MlP-la, MlP-lß y RA?TES (Boring, L. y col., J. Biol . Chem. 271 (13) : 7551-7558 (1996); Raport, C.J., J". Biol . Chem . , 271 : 17161-17166 (1996), y Samson, M. y col., Biochemistry, 35 : 3362-3367 (1996)). CCR2 se expresa sobre la superficie de varios subgrupos de leucocitos y parece expresarse en dos formas ligeramente diferentes (CCR2a y CCR2b) debido al ayustamiento alternativo del ARNm codificante de la región carboxiterminal (Charo y col., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 91 : 2752-2756 (1994)). MCP-1 actúa sobre los monocitos, los linfocitos y los basófilos, incluyendo la quimiotaxis, la liberación de granulos, la explosión respiratoria y la liberación de histamina y citokinas. Estudios han sugerido que MCP-1 está implicado en la patología de enfermedades tales como la artritis reumatoide, la aterosclerosis, las enfermedades granulomato-sas y la esclerosis múltiple (Koch, J. Clin . Invest . 90 : 772-79 (1992); Hosaka y col., Clin . Exp . Immunol . 97 : 451-457 (1994); Schwartz y col., Am . J. Cardiol . 71 (6) : 9B-14B (1993); Schimmer y col., J. Immunol . 160 : 1466-1471 (1998); Flory y col., Lab . Invest . 69 : 396-404 (1993); Gong y col., J. Exp . Med . 186 : 131-137 (1997)). Adicionalmente, CCR2 puede actuar como co-receptor para HIV (Connor y col., J. Exp. Med . 185 : 621-628 (1997)). Por lo tanto, los antagonistas de los receptores CCR2 pueden representar una nueva clase de importantes agentes terapéuticos. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un anticuerpo (inmunoglobulina) o fragmento funcional del mismo (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno) que se une a un receptor 2 de quimiokina CC (al que también se hace referen-cia como CCR2 , CKR-2, MCP-1RA o MCP-1RB) de mamífero o porción del receptor (anti-CCR2) . En una realización, el anticuerpo de la presente invención o su fragmento tiene especificidad para el CCR2 humano o rhesus o una porción del mismo. En otra realización, el anticuerpo o fragmento de la inven- ción bloquea la unión de un ligando (por ejemplo, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4) al receptor e inhibe la función asociada a la unión del ligando al receptor (por ejemplo, tráfico de leucocitos) . Por ejemplo, como se describe aquí, los anti-cuerpos y fragmentos de éstos de la presente invención que se unen a CCR2 humano o rhesus o a una porción del mismo, pueden bloquear la unión de una quimiokina (por ejemplo, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4) al receptor e inhibir la función asociada a la unión de la quimiokina al receptor. En una realización, el anticuerpo es anticuerpo monoclonal ("mAb") LS132.1D9 (1D9) o un anticuerpo que pueda competir con 1D9 por la unión al CCR2 humano o a una porción del CCR2 humano. También se contemplan fragmentos funcionales de los anticuerpos anteriores. En otra realización, el anticuerpo o fragmento funcional de la presente invención se une al CCR2 humano o a una porción del mismo e inhibe la unión del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) al receptor, inhibiendo así la función asociada a la unión del HIV al receptor (por ejemplo, liberación de antígenos HIV e infectividad) . En una realiza-ción, el anticuerpo es anticuerpo monoclonal 1D9 o un anticuerpo que pueda competir con 1D9 por la unión al CCR2 humano o a una porción del CCR2 humano. La presente invención se relaciona también con un anticuerpo o fragmento funcional del mismo (por ejemplo, un fragmento de unión a antígeno) que se une a un CCR2 de mamífero o porción del receptor y proporciona una mayor intensidad de tinción fluorescente del CCR2 o de composiciones que contienen CCR2 en relación a otros anticuerpos anti-CCR2. En una realización, el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal 1D9 o LS132.8G2 (8G2) o un anticuerpo que puede competir con 1D9 o 8G2 por la unión al CCR2 humano o a una porción del CCR2 humano. La presente invención se relaciona también con una inmunoglobulina humanizada o un fragmento de unión a an- tígeno de ésta que tiene especificidad de unión por el CCR2 , cuya inmunoglobulina contiene una región de unión a antígeno de origen no humano (por ejemplo, de roedor) y al menos una porción de una inmunoglobulina de origen humano (por ejemplo, una región de marco humana, una región constante humana del tipo gamma) . En una realización, la inmunoglobulina humanizada o fragmento de la misma aquí descritos puede competir con 1D9 por la unión a CCR2. En una realización preferida, la región de unión a antígeno de la inmunoglobulina humanizada de-riva del anticuerpo monoclonal 1D9 (por ejemplo, una inmuno-globulina que contiene las regiones variables de las cadenas ligeras y pesadas según se muestra en la Figura 7 (SEC ID N° : 9) y en la Figura 8 (SEC ID N° : 10), respectivamente). Por ejemplo, la inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma puede incluir una región de unión a antígeno que contenga al menos una región determinante de complementariedad ("CDR") de origen no humano y una región de marco ("FR") derivada de una región de marco humana. En un aspecto, la inmunoglobulina humanizada que tie-ne especificidad de unión por CCR2 contiene una cadena ligera que incluye al menos una CDR derivada de un anticuerpo de origen no humano que se une a CCR2 y una FR derivada de una cadena ligera de origen humano (por ejemplo, de HF-21/28) , y una cadena pesada que incluye una CDR derivada de un anti-cuerpo de origen no humano que se une a CCR2 y una FR derivada de una cadena pesada de origen humano (por ejemplo, de 4B4'CL) . En otro aspecto, la cadena ligera contiene tres CDR derivadas de la cadena ligera del anticuerpo 1D9 y la cadena pesada contiene tres CDR derivadas de la cadena pesada del anticuerpo 1D9. La presente invención se relaciona también con cadenas ligeras de inmunoglobulinas humanizadas y con fragmentos de unión a antígeno de las mismas (por ejemplo, que contienen CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera del anticuer- po 1D9, y una FR de cadena ligera humana) y con cadenas pesadas de inmunoglobulinas humanizadas y con fragmentos de unión a antígeno de las mismas (por ejemplo, que contienen CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada del anticuerpo 1D9, y una FR de cadena pesada humana) . En una realización preferida, la invención se relaciona con cadenas pesadas y ligeras humanizadas aquí descritas (por ejemplo, una cadena ligera humanizada que contiene la región variable de la cadena ligera mostrada en la Figura 7 (SEC ID N° : 9), una cadena pesada húmanizada que contiene la región variable de la cadena pesada mostrada en la Figura 8 (SEC ID N° : 10) . También se incluyen inmunoglobulinas humanizadas que contienen una o más cadenas ligeras y/o pesadas humanizadas. La presente invención se relaciona también con una inmunoglobulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2, consistente en una cadena pesada y una cadena ligera, donde dicha cadena ligera contiene al menos una región determinante de complementariedad derivada del anticuerpo monoclonal muri-ho 1D9 y una región de marco derivada de la cadena ligera del anticuerpo humano HF-21/28, y donde dicha cadena pesada contiene al menos una región determinante de complementariedad derivada del anticuerpo monoclonal murino 1D9 y una región de marco derivada de la cadena pesada del anticuerpo humano 4B4'CL. En una realización, la cadena ligera contiene tres regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena ligera del anticuerpo 1D9 y la cadena pesada contiene tres regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena pesada del anticuerpo 1D9. En otra realización, las regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena ligera de 1D9 son los aminoácidos 24-39 de la SEC ID N° : 9, los aminoácidos 55-61 de la SEC ID N° : 9 y los aminoácidos 94-102 de la SEC ID N° : 9, y las regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena pesada de 1D9 son los aminoácidos 31-35 de la SEC ID N° : 10, los aminoácidos 50-68 de la SEC ID N° : 10 y los aminoácidos 101-106 de la SEC ID N° : 10. La invención se relaciona además con una inmuno-globulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad por CCR2 , consistente en una cadena ligera y una cadena pesada complementaria, donde dicha cadena ligera contiene una región variable que comprende la SEC ID N° : 12. La invención se relaciona también con una in-munoglobulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , que contiene una cadena pesada y una cadena ligera complementaria, donde dicha cadena pesada contiene una región variable que comprende la SEC ID N° : 17. En una realización preferida, la invención se relaciona con una inmunoglobulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , que contiene una cadena pesada y una cadena ligera, donde dicha cadena ligera contiene una región variable que comprende la SEC ID N° : 12 y donde dicha cadena pesada contiene una región variable que comprende la SEC ID N° : 17. En una realización, la inmunoglobulina humanizada o el fragmento de unión a antígeno de la misma pueden competir con el anticuerpo murino 1D9 por la unión a CCR2. En otra realización, la inmunoglobulina humanizada o el fragmen-to de unión a antígeno inhiben la unión de un ligando a CCR2. La invención se relaciona también con moléculas de ácido nucleico aislado consistentes en una secuencia de ácido nucleico que codifica para una inmunoglobulina humanizada de la presente invención (por ejemplo, un anticuerpo de una sola cadena) , así como moléculas de ácido nucleico aislado consistentes en una secuencia que codifica para una cadena ligera (por ejemplo, que comprende los nucleótidos 52-390 de la SEC ID N° : 95) o una cadena pesada (por ejemplo, que comprende los nucleótidos 58-411 de la SEC ID N° : 96) de inmuno- globulina humanizada de la presente invención. Por ejemplo, la presente invención proporciona un gen (por ejemplo, un gen fusionado) codificante de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina humanizada que incluye una primera secuencia de ácido nucleico codificante de una región de unión a antígeno derivada del anticuerpo monoclonal murino 1D9 y una segunda secuencia de ácido nucleico codificante de al menos una porción de una región constante de una inmunoglobulina de origen humano . La presente invención se relaciona también con un constructo consistente en una molécula de ácido nucleico codificante de una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 o una cadena de dicha inmunoglobulina. Por ejemplo, se proporciona un vector de expresión que contiene un gen (por ejemplo, un gen fusionado) codificante de una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada, que tiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de una cadena ligera de un anticuerpo no humano que tiene especificidad de unión por CCR2 , y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano. Un vector de expresión que contiene un gen codificante de una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada, que tiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de una cadena pesada de un anticuerpo no humano que tiene especificidad de unión por CCR2 , y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano, es otro ejemplo de dicho constructo. La presente invención se relaciona también con una célula huésped que contiene una molécula de ácido nucleico de la presente invención, que incluye uno o más construc-tos que contienen una molécula de ácido nucleico de la presente invención. En una realización, la invención se relaciona con una célula huésped que contiene un primer ácido nucleico recombinante codificante de una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada y un segundo ácido nucleico recombi- nante codificante de una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada, cuyo primer ácido nucleico contiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de la cadena ligera del anticuerpo 1D9 murino y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano, y cuyo segundo ácido nucleico contiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de la cadena pesada del anticuerpo 1D9 murino y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano. La presente invención también proporciona un método de preparación de una inmunoglobulina humanizada consistente en mantener una célula huésped de la presente invención en condiciones apropiadas para la expresión de una inmunoglobulina humanizada, mediante lo cual se expresa una cadena (s) de inmunoglobulina humanizada y se produce una inmunoglobulina humanizada. El método puede incluir además la etapa de aislamiento de la inmunoglobulina humanizada. Las inmunoglobulinas humanizadas de la presente invención pueden ser menos inmunogénicas que sus contraparti-das murinas u otras no humanas. Así, las inmunoglobulinas humanizadas aquí descritas pueden ser usadas como agentes terapéuticos en humanos, por ejemplo para controlar la migración de los linfocitos hacia el tejido linfoide de las mucosas, reduciendo de este modo las respuestas inflamatorias. La invención se relaciona también con una inmuno-globulina humanizada de la presente invención para uso en diagnóstico o terapia (incluyendo la profilaxis) . En una realización, la invención se relaciona con una inmunoglobulina humanizada de la presente invención para uso en el tratamien-to de enfermedades asociadas a la infiltración leucocitaria de tejidos, por ejemplo en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, rechazo de injertos, infección por HIV y trastornos mediados por monocitos, tales como la aterosclerosis.

En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de una inmunoglobulina humanizada de la presente invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades asociadas a la infiltración leucocitaria de los tejidos, por ejemplo en el tratamiento de las enfermedades inflamatorias, de las enfermedades autoinmunes, de los trastornos mediados por monocitos tales como la aterosclerosis, del rechazo de injertos o de la infección por HIV. La presente invención se relaciona además con un método de inhibición de la interacción de una célula que lleva CCR2 de mamífero (por ejemplo, humano, de primate no humano o murino) con un ligando del mismo, consistente en poner en contacto la célula con una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 o una porción de CCR2 de mamífero. Como células adecuadas se incluyen granulocitos, leucocitos tales como monocitos, macrófagos, basófilos y eosinófilos, células cebadas y linfocitos, incluyendo las células T (por ejemplo, células CD8+, células CD4+, células CD25+, células CD45RO+) , y otras células que expresan CCR2 , tales como una célula recombinante que expresa CCR2 (por ejemplo, células transfectadas) . En una realización particular, el anticuerpo es 1D9 o un anticuerpo que puede competir con 1D9 por la unión al CCR2 humano o a una porción del CCR2 humano. Otra realización de la invención se relaciona con un método de inhibición de la interacción de una célula portadora de CCR2 de mamífero con una quimiokina, consistente en poner en contacto dicha célula con una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a CCR2 o a una porción de dicho receptor. En una realización del método, el anticuerpo o fragmento funcional del mismo es cualquiera o más de 1D9, un fragmento de unión a antígeno de 1D9 o un anticuerpo o fragmento del mismo que tiene una especificidad epitópica que es igual o similar a la de 1D9. Más aún, la invención se relaciona con un método de inhibición de una función asociada a la unión de una quimiokina a CCR2 , consistente en administrar una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a una pro-teína CCR2 de mamífero o a una porción de dicho receptor. En un aspecto del método, el anticuerpo o fragmento funcional del mismo es cualquiera o más de 1D9, un fragmento de unión a antígeno de 1D9 o un anticuerpo o fragmento del mismo que tiene una especificidad epitópica que es igual o similar a la de 1D9. Otro aspecto de la invención es un método de identificación de la expresión de un CCR2 de mamífero o porción del receptor por una célula. Según el método, se pone en contacto una composición que contiene una célula o fracción de la misma (por ejemplo, una fracción de membrana) con un anticuerpo o fragmento funcional del mismo (por ejemplo, 1D9 o 8G2) que se une a una proteína CCR2 de mamífero o porción del receptor en condiciones apropiadas para la unión del anticuerpo al mismo, y se detecta la formación de un complejo entre dicho anticuerpo o fragmento y dicha proteína o porción de la misma. La detección del complejo, directa o indirectamente, indica la presencia del receptor sobre la célula. La presente invención se relaciona también con un kit para uso en la detección de la presencia de CCR2 o una porción del mismo en una muestra biológica, consistente en un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un receptor 2 de quimiokina CC de mamífero o una porción de dicho receptor y uno o más reactivos auxiliares adecuados para detectar la presencia de un complejo entre dicho anticuerpo o fragmento y dicha proteína o porción de la misma. También se incluyen en la presente invención métodos de identificación de ligandos adicionales u otras substancias que se unen a una proteína CCR2 de mamífero, incluyendo inhibidores y/o promotores de la función CCR2 de mamí- fero. Por ejemplo, se pueden identificar agentes que tienen la misma especificidad de unión o similar que la de un anticuerpo de la presente invención o fragmento funcional del mismo por un ensayo competitivo con dicho anticuerpo o frag-mentó. Así, la presente invención también incluye métodos de identificación de ligandos u otras substancias que se unen al receptor CCR2 , incluyendo inhibidores (por ejemplo, antagonistas) o promotores (por ejemplo, agonistas) de la función del receptor. En una realización, se usan células que expre-san de forma natural la proteína receptora CCR2 o células huésped adecuadas que han sido sometidas a ingeniería para expresar un receptor CCR2 o variante codificada por un ácido nucleico introducido en dichas células en un ensayo para identificar y valorar la eficacia de los ligandos, inhibido-res o promotores de la función del receptor. Dichas células son también útiles en la determinación de la función de la proteína o polipéptido expresados del receptor. De este modo, la invención se relaciona también con un método de detección o identificación de un agente que se une a un CCR2 de mamífero o variante de unión a ligando del mismo, consistente en combinar un agente que ha de ser estudiado, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de la presente invención (por ejemplo, anticuerpo monoclonal 1D9, un anticuerpo que tiene una especificidad epitópica igual o similar a la de 1D9, fragmentos de unión a antígeno de 1D9, anticuerpo monoclonal 8G2 , un anticuerpo que tiene una especificidad epitópica igual o similar a la de 8G2 y fragmentos de unión a antígeno de 8G2) y una composición que consiste en una proteína CCR2 de mamífero o variante de unión a ligando de la misma. Los componentes anteriores pueden ser combinados en condiciones adecuadas para la unión del anticuerpo o fragmento de unión a antígeno a la proteína CCR2 de mamífero o una variante de unión a ligando de ésta y se puede detectar o medir directa o indirectamente la unión del anti- cuerpo o fragmento a la proteína CCR2 de mamífero o variante de unión a ligando según los métodos aquí descritos u otros métodos adecuados. Una reducción en la cantidad de complejo formado en relación a un control adecuado (por ejemplo, en ausencia del agente de ensayo) es indicativa de que el agente se une a dicho receptor o variante. La composición que contiene una proteína CCR2 de mamífero o variante de unión a ligando de la misma puede ser una fracción de membrana de una célula portadora de una proteína CCR2 recombinante o variante de unión a ligando de la misma. El anticuerpo o fragmento del mismo puede ser marcado con un mareaje tal como un radioisótopo, un mareaje de espín, un mareaje antigénico, un mareaje enzimático, un grupo fluorescente y un grupo quimioluminiscente. Estos ensayos y otros similares pueden ser usados para detectar agentes, incluyendo ligandos (por ejemplo, quimiokinas que interaccionan con CCR2) u otras substancias, incluyendo inhibidores o promotores de la función de receptores, que pueden unirse a CCR2 y competir con los anticuerpos aquí descritos por la unión al receptor. Según la presente invención, los ligandos, inhibidores o promotores de la función de receptores pueden ser identificados en un ensayo adecuado y además valorados en cuanto a su efecto terapéutico. Los inhibidores de la función de los receptores pueden ser usados para inhibir (reducir o evitar) la actividad de los receptores y los ligandos y/o promotores pueden ser usados para inducir (disparar o intensificar) la función normal de los receptores cuando esté indicado. La presente invención proporciona también un método de tratamiento de enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, aterosclerosis y rechazo de injertos o infección por HIV, consistente en administrar un inhibidor de la función de los receptores (por ejemplo, unión de quimiokinas o unión de HIV) a un individuo (por ejemplo, un mamífero, tal como un humano) . La presente invención proporciona además un método de estimulación de la función de receptores administrando un nuevo ligando o promotor a un individuo, lo que proporciona una nueva aproximación a la estimulación selectiva de la función de los leucocitos, que es útil, por ejemplo, en el tratamiento de las enfermedades infecciosas y del cáncer. Otro aspecto de la invención se relaciona con un método de inhibición de la infección por HIV de una célula que expresa un CCR2 de mamífero o porción del mismo, consis-tente en poner en contacto la célula con una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 de mamífero o a una porción del receptor e inhibe la unión a HIV y la infección por este último. En una realización particular de la invención, el anticuerpo o frag-mentó funcional del mismo es cualquiera de 1D9, un anticuerpo que tiene especificidad epitópica igual o similar a la 1D9, un anticuerpo que puede competir con 1D9 por la unión a CCR2 humano y fragmentos de unión a antígeno de éste. También se incluye en la presente invención un método de inhibición (por ejemplo, de tratamiento) de HIV en un paciente, consistente en administrar al paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 de mamífero o a una porción de dicho receptor e inhibe la unión de HIV al receptor CCR2. El anticuerpo anti-CCR2 o fragmento puede ser administrado solo o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo uno o más anticuerpos que se unen a un co-receptor para la infección por HIV e inhiben la unión a dicho co-receptor, tales como un anticuerpo anti-CCR3, anti-CCR5 y/o anti-CXCR4. Otro aspecto de la invención se relaciona también con un método de prevención o inhibición de la infección por HIV en un individuo, consistente en administrar al individuo una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a CCR2 e inhibe la unión de HIV a CCR2. Según el método, la prevención de la infección por HIV incluye el tratamiento para prevenir (reducir o eliminar) la infección de nuevas células en un individuo infectado o para prevenir la infección en un individuo que puede estar, que puede haber estado o que ha estado expuesto al HIV. Por ejemplo, individuos tales como un individuo infectado por HIV, un feto de una mujer infectada por HIV, o un trabajador del área de la salud pueden ser tratados según el método de la présente invención. La presente invención también incluye un método de inhibición del tráfico de leucocitos en un paciente, consistente en administrar al paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 de mamífero o porción de dicho receptor e inhibe la función asociada a la unión de un ligando al receptor. La presente invención se relaciona también con un método de inhibición o tratamiento de los trastornos mediados por CCR2 , tales como trastornos inflamatorios, consistente en administrar a un paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 de mamífero o porción de dicho receptor e inhibe la función mediada por CCR2. Por ejemplo, la invención se relaciona con un método de inhibición o tratamiento de la estenosis o re-estenosis de la vasculatura, consistente en administrar a un paciente una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 de mamífero o porción de dicho receptor e inhibe la función mediada por CCR2. La presente invención se relaciona además con un anticuerpo o fragmento del mismo como se describe aquí (por ejemplo, el anticuerpo monoclonal ID o un fragmento de unión a antígeno del mismo) para uso en terapia (incluida la profilaxis) o en diagnóstico y con el uso de dicho anticuerpo o fragmento para la fabricación de un medicamento para el tra- tamiento de un trastorno mediado por CCR2 u otra enfermedad o condición inflamatoria como aquí se describe. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es un perfil de histograma de barrido de células activadas por fluorescencia ("FACS") que ilustra que los mAb 1D9 y 8G2 tiñen a transfectantes CCR2 , pero no a transfectantes CCR5 o CCRl. Se transfectaron células de linfoma pre-B murino Ll/2 (a las que también se hará aquí referencia como L1.2) con CCR2 , CCR5 y CCRl según se indique, y se tiñeron con anticuerpos con diferentes especificidades de receptores. Se analizó la tinción por citometría de flujo. La Figura 2 es un gráfico de puntos FACS que muestra expresión de CCR2 en la mayoría de los monocitos, una subpoblación de linfocitos y un pequeño subgrupo de granulo-citos. Se tiñeron células de sangre entera con uno de tres mAb anti-CCR2 (5A11, generados usando un péptido consistente en los primeros 32 aminoácidos del extremo amino de CCR2 como inmunógeno, y 1D9 y 8G2 , generados como se describe aquí usando transfectantes CCR2b de células Ll/2 como inmunógeno) . Se analizó la tinción por citometría de flujo y se abrieron las compuertas para las poblaciones de linfocitos, granulocitos y monocitos usando la dispersión de la luz hacia delante y hacia los lados. El eje de las X representa la dispersión de la luz hacia delante (una medida del tamaño celular) y el eje de las Y la intensidad de fluorescencia de la tinción por CCR2. El nivel de tinción del control negativo está indicado por una línea. La Figura 3 es un gráfico de puntos FACS que muestra que el mAb 1D9 tiñe una población positiva a IgE en sangre periférica (basófilos) usando tinción de dos colores para IgE y CCR2. Se tiñeron primeramente células de sangre entera con un anticuerpo control negativo (anti-Flag) , anticuerpo anti-CCR2 1D9 o un anticuerpo anti-CXCRl, según se indica, y se detectaron por medio de un conjugado anti-ratón- FITC. Se hizo una segunda tinción usando PBS o un anticuerpo biotinilado específico para IgE o CD16, según se indica, y se detectó con estreptavidina- ficoeritrina. Se analizó la tinción por citometría de flujo. La Figura 4 ilustra que el mAb 1D9 inhibe la unión de [125I]MCP-1 a membranas de células THP-1. Se incubaron 3,0 µg de proteína de membranas de THP-1 con [1 5I] MCP-1 0,1 nM en presencia de varias concentraciones de 1D9 o del anticuerpo anti-CXCR3 1C6 con correspondencia de isotipo. Se determinó la cantidad de rastreador unido por separación del libre y el unido por filtración y contaje de centelleo. Se analizaron los datos para determinar el valor de la CI50 por regresión no lineal usando una ecuación logística de 4 parámetros con un programa KaleidaGraph. La Figura 5 ilustra que el mAb 1D9 inhibe la unión de [125I]MCP-1 a PBMC (células mononucleares de sangre periférica) humanas frescas. Se incubaron células mononucleares de sangre periférica recién aisladas (500.000) con [125I] MCP-1 0,1 nM en presencia de diversas concentraciones de 1D9 o del anticuerpo anti-CXCR3 1C6 con correspondencia de isotipo. Se determinó la cantidad de rastreador unido por separación libre y el unido mediante filtración y contaje de centelleo. Se analizaron los datos para determinar el valor de la CI50 como para la Figura 4. Las Figuras 6A y 6B son gráficos que demuestran que el mAb 1D9 inhibe la quimiotaxis inducida por MCP-1, pero no la quimiotaxis inducida por RANTES, de PBMC frescas. La Figura 6A muestra los resultados de los ensayos de quimiotaxis de PBMC para MCP-1 10 nM sin anticuerpo o con 0,1 ó 10 µg/ml de 1D9 o de IgG2a murina no específica. Se indica también la migración inespecífica espontánea. La Figura 6B muestra los resultados de los ensayos de quimiotaxis de PBMC para RANTES 10 nM sin anticuerpo, con 10 µg/ml de 1D9 o con 10 µg/ml de IgG2a murina inespecífica. También se indica la mi- gración inespecífica espontánea en ausencia de RANTES . La Figura 7 muestra la secuencia de aminoácidos (SEC ID ?° : 9) de la región variable de la cadena ligera kappa del anticuerpo 1D9 murino. Las CDR están resaltadas en ne-grilla. La Figura 8 muestra la secuencia de aminoácidos (SEC ID ?° : 10) de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 1D9 murino. Las CDR están resaltadas en negrilla. La Figura 9 ilustra las clases canónicas de las CDR en la región V? del 1D9 murino. "Clases canónicas de Chothia" indica dónde se usaron las clases canónicas definidas por Chothia y sus colaboradores (Chothia y Lesk, J. Mol . Biol . 197 : 901 (1987); Chothia y col., Nature 34 : 877 (1989); Tramontano y col., J". Mol . Biol . 215 : 175 (1990), y Chothia y col., J. Mol . Biol . 227 : 799 (1992)), mientras que "Clases canónicas de Martin" significa dónde se usaron las clases canónicas definidas por Martin y Thornton (Martin y Thornton, J". Mol . Biol . 263 : 800 (1996)). Los residuos de FR están resaltados en negrilla. La Figura 10 ilustra las clases canónicas de CDR en la región VH del 1D9 murino. "Clases canónicas de Chothia" indica dónde se usaron las clases canónicas definidas por Chothia y sus colaboradores (Chothia y Lesk, J. Mol . Biol . 197 : 901 (1987); Chothia y col., Nature 34 : 877 (1989); Tra-montano y col., J. Mol . Biol . 215 : 175 (1990), y Chothia y col., J. Mol . Biol . 227 : 799 (1992)), mientras que "Clases canónicas de Martin" significa dónde se usaron las clases canónicas definidas por Martin y Thornton (Martin y Thornton, J. Mol . Biol . 263 : 800 (1996)). Los residuos de FR están re-saltados en negrilla. La Figura 11 muestra las secuencias de aminoácidos de varias versiones de la región V? del 1D9 humanizado (SEC ID ?° : 12-15 y 107, respectivamente) . Donde los residuos de la región V? del 1D9 (SEC ID ?° : 9) y las secuencias de la región V? del HF-21/28 humano (SEC ID N° : 11) se corresponden se muestra un punto [.] . Cuando no hay ningún aminoácido presente en una posición específica de residuo, se muestra un guión [-] . Cuando un aminoácido en las FR de HF-21/28 está cambiado en la región V? del 1D9 humanizado, está resaltado en negrilla. Las CDR están descritas mediante el uso de la nomenclatura [=L1=] . La numeración utilizada está de acuerdo con Kabat y col., Sequences of proteins of immunological interest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991). La Figura 12 muestra las secuencias de aminoácidos de varias versiones de la región VH del 1D9 humanizado (SEC ID N° : 17-20, respectivamente) . Donde los residuos de la región VH del 1D9 (SEC ID N° : 10) y las secuencias de la re-gión VH del 4B4'CL humano (SEC ID N° : 16) se corresponden, se muestra un punto [ . ] . Cuando no hay ningún aminoácido presente en una posición específica de residuo, se muestra un guión [-] . Cuando un aminoácido en 4B4 ' CL está cambiado en la región VH del 1D9 humanizado, está resaltado en negrilla. Las CDR están descritas mediante el uso de la nomenclatura [=H1=] , mientras que [ ] representa parte del bucle de la estructura Hl . La numeración utilizada está de acuerdo con Kabat y col., Sequences of proteins of immunological interest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Ser-vices, U.S. Government Printing Office (1991). La Figura 13 muestra una comparación de una porción de la región V? del 1D9 murino (SEC ID N° : 21) con secuencias del gen V? de la línea germinal del ratón (SEC ID N° : 22-23, respectivamente). "Residuos idénticos" representa el número de residuos idénticos en una región V? de la línea germinal del ratón a la región V? del 1D9 murino. Donde la secuencia de la región V? del 1D9 y las secuencias de la región V? de la línea germinal del ratón se corresponden, se muestra un punto [ . ] . Cuando no hay ningún aminoácido presen- te en una posición de residuo específica, se muestra un guión [-] . La Figura 14 muestra una comparación de una porción de la región VH del 1D9 murino (SEC ID N° : 34) con la secuencias del gen VH de la línea germinal del ratón (SEC ID N° : 35-53, respectivamente). "Residuos idénticos" representa el número de residuos idénticos en una región VH de la línea germinal del ratón a la región VH del 1D9 murino. Cuando la secuencia de la región VH de 1D9 y las secuencias de la re-gión VH de la línea germinal del ratón se corresponden, se muestra un punto [ . ] . Cuando no hay ningún aminoácido presente en una posición de residuo específica, se muestra un guión [-] • La Figura 15 muestra una comparación de la región V? del 1D9 murino (SEC ID N° : 9) con las diecisiete secuencias de aminoácidos V? humanos más homólogos (SEC ID N° : 54-70, respectivamente). "ID" significa el porcentaje de identidad de las secuencias V? humanas con respecto a la región V? del 1D9 murino. Cuando los residuos de la región V? de 1D9 y las secuencias de la región V? humana se corresponden, se muestra un punto [ . ] . Cuando no hay ningún aminoácido presente en una posición de residuo específica, se muestra un guión [-] . "S" indica las posiciones de aminoácidos sobre la superficie del dominio Fv. "C" indica los residuos localizados en el núcleo del dominio Fv. Los residuos que se hallan a 5Á de una CDR son definidos usando letras mayúsculas, mientras que los localizados lejos son descritos con una letra minúscula. Las propias CDR son descritas usando la nomenclatura ==L1==. "v" representa los residuos de Vernier (Foote y Winter, J. Mol . Biol . 224 : 487 (1992)) localizados en las FR. Los residuos en las secuencias de la región V? humana que están subrayados difieren de su gen de la línea germinal de V? humana más próxima. La numeración usada es la de Kabat y col., Sequences of proteins of immunological interest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991) . La Figura 16 muestra una comparación de la región V? del 1D9 murino con las diecisiete secuencias de aminoáci-dos de la V? humana más homologas. "ID" indica el porcentaje de identidad de la secuencia de la V? humana con la región V? del 1D9 murino. "Superficie indica" el número de residuos idénticos sobre la superficie. "Núcleo" indica el número de residuos idénticos en el núcleo del dominio Fv. "CDR" indica el número de residuos idénticos en las CDR. FR indica el número de residuos idénticos en las FR. "Superficie FR" indica el número de residuos idénticos que están expuestos en superficie. "Núcleo FR" indica el número de residuos idénticos que se localizan en el núcleo del dominio Fv. "FR próxima a CDR" representa el número de residuos idénticos entre los aminoácidos de las FR en 5Á de una CDR. "Vernier" indica el número de residuos idénticos entre los 14 aminoácidos de Vernier (Foote y Winter, J. Mol . Biol . 224 : 487 (1992)). "V?" indica el número de residuos idénticos en el gen V?. "Cadena J" in-dica el número de residuos idénticos en el gen de la cadena J. "Ll Len" a "L3 Len" define el número de residuos en cada CDR, mientras que "Clase Ll" a "Clase L3" describe la clase canónica de la CDR según Martin y Thornton (Martin y Thornton, J. Mol . Biol . 263 : 800 (1996)). Las Figuras 17A-17B muestran una comparación de la región VH del 1D9 murino (SEC ID N° : 10) con las 24 secuencias de aminoácidos de la VH humana más homologas (SEC (D N° : 71-94, respectivamente). "ID" representa el porcentaje de identidad de las secuencias VH humanas con respecto a la re-gión VH del 1D9 murino. Cuando los residuos de la región VH del 1D9 y las secuencias de la región V humana se corresponden, se muestra un punto [.] . Cuando no hay ningún aminoácido presente en una posición de residuo específica, se muestra un guión [-] . "S" indica las posiciones de aminoácidos sobre la superficie del dominio Fv, "C" indica los residuos localizados en el núcleo del dominio Fv. Los residuos que se encuentran en un intervalo de 5Á de una CDR son definidos usando letras mayúsculas, mientras que los localizados más lejos son descritos con una letra minúscula. Las propias CDR son descritas utilizando la nomenclatura ==H1==. "v" representa los residuos de Vernier (Foote y Winter, J. Mol . Biol . 224 : 487 (1992) ) localizados en las FR. Aquellos residuos de las secuencias de la región VH humana que están subrayados difieren de su gen de la línea germinal V humana más próximo. La numeración empleada es la de Kabat y col . , Sequences of proteins of immunological interest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991) . Las Figuras 18A-18B muestran una comparación de la región VH del 1D9 murino con las 24 secuencias de aminoácidos de la VH humana más homologas. "ID" indica el porcentaje de identidad de la secuencia de la VH humana con respecto a la región VH del 1D9 murino "Todo" indica el número de re-siduos idénticos en la totalidad de la región VH humana cuando se compara con la totalidad de la región VH del 1D9 murino. "Superficie" indica el número de residuos idénticos sobre la superficie. "Núcleo" indica el número de residuos idénticos en el núcleo del dominio Fv. "CDR" indica el número de residuos idénticos en las CDR. "FR" indica el número de residuos idénticos en las FR. "Superficie FR" indica el número de residuos idénticos que están expuestos en superficie. "Núcleo FR" indica el número de residuos idénticos que se localizan en el núcleo del dominio Fv. "FR próxima a CDR" representa el número de residuos idénticos entre los aminoácidos de las FR en 5Á de una CDR. "Vernier" indica el número de residuos idénticos entre los 14 aminoácidos de Vernier (Foote y Winter, J. Mol . Biol . 224 : 487 (1992)). "VH" indica el número de residuos idénticos en el gen VH. "Cadena J" indica el número de residuos idénticos en el gen de la cadena J. "Tamaño Hl" "Tamaño H3" define el número de residuos en cada CDR, mientras que "Clase Hl" a "Clase H2" describe la clase canónica de la CDR según Martin y Thornton (Martin y Thornton, J. Mol . Biol . 263 : 800 (1996) ) . Las Figuras 19A-19C muestran la alineación de las secuencias de aminoácidos que da lugar al diseño de la primera (1D9RKA) y la segunda (1D9RKB) versión humanizada de la región variable de la cadena ligera kappa del anticuerpo 1D9. No se muestran los aminoácidos idénticos al 1D9 del ratón en una posición de residuo particular en la columna 7; "-" indica que no se localiza ningún aminoácido en esta posición de residuo. La letra negrilla indica las posiciones en las FR y en las CDR en las que el residuo de aminoácido humano fue substituido por el correspondiente residuo murino. "?" indica la numeración de los cambios en las FR humanas de 1D9RKA. "V? de 1D9 murino" indica la secuencia de aminoácidos de la región V? de la región variable de la cadena ligera kappa del 1D9 murino. "?-II murina" indica la secuencia consenso de las regiones V? de ratón del subgrupo Kabat ?-II. "?-II humana" indica la secuencia consenso de las regiones V? humanas del subgrupo Kabat ?-II. "HF-21/28" indica la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo humano HF-21/28 (Chastagner y col., Gene 101 (2) : 305-6 (1991) ) . El número entre paréntesis (005056) es el número de ID de la base de datos Kabat. "Superficie o Núcleo" indica la posición del aminoácido en relación al resto de los residuos en ambas cadenas de las regiones variables del anticuerpo. Los residuos dentro del intervalo de 5Á de una CDR se definen usando letras mayúsculas. "ID9RKA" indica la secuencia de aminoácidos de la primera versión de la región V? del 1D9 humanizado. "ID9RKB" indica la secuencia de aminoácidos de la segunda versión de la región V? del 1D9 humanizado. Las Figuras 20A-20C muestran la alineación de las secuencias de aminoácidos que dan lugar al diseño de la primera (1D9RHA) y de la segunda (1D9RKB) versión humana humanizada de la región variable de la cadena ligera kappa del anticuerpo 1D9. Otros aminoácidos idénticos al 1D9 murino en una posición de residuo particular en la columna 7 no son mostrados. "-" indica que no hay ningún aminoácido localizado en esta posición de residuo. La letra negrilla indica las posiciones en las FR y en las CDR en que el residuo de aminoácido humano fue substituido por el residuo murino correspon-diente. "?" indica la numeración de los cambios en las FR humanas de 1D9RHA. "VH del 1D9 murino" indica la secuencia de aminoácidos de la región VH de la región variable de la cadena pesada del 1D9 murino. "IIIc murina" indica la secuencia consenso de las regiones VH de ratón del subgrupo Kabat lile. "III humana" indica la secuencia consenso de las regiones VH humanas del subgrupo Kabat III. "4B4'CL" indica la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 4B4'CL humano (Sanz y col., Journal of Imunology 142 : 883 (1989)). El número entre paréntesis (000490) es el número de ID de la base de datos de Kabat. "Superficie o Núcleo" indica la posición del aminoácido en relación al resto de los residuos en ambas cadenas de las regiones variables del anticuerpo. Los residuos que se hallan en el intervalo de 5Á de una CDR se definen usando letras mayúsculas. "1D9RHA" indica la secuencia de aminoácidos de la primera versión de la región VH de 1D9 humanizado. "1D9RHB" indica la secuencia de aminoácidos de la segunda versión de la región VH de 1D9 humanizado. La Figura 21 muestra la secuencia nucleotídica, la complementaria y la secuencia de aminoácidos codificada de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo 1D9 murino. También se muestran la secuencia líder y una porción de la región constante. La secuencia nucleotídica ilustrada es la SEC ID N° : 96, la secuencia complementaria es la SEC ID N° : 99 y la secuencia de aminoácidos es la SEC ID N° : 100. La Figura 22 muestra la secuencia de nucleótidos, la complementaria y la secuencia de aminoácidos codificada de la región variable de la cadena ligera kappa del anticuerpo 1D9 murino. La secuencia nucleotídica ilustrada es la SEC ID N° : 95, la secuencia complementaria es la SEC ID N° : 101 y la secuencia de aminoácidos es la SEC ID N° : 102. La Figura 23 muestra la secuencia nucleotídica de la cadena pesada humanizada 1D9RHA. Los sitios enzimáticos indicados fueron añadidos para la clonación en el vector pLKTOK41. El vector también tiene regiones líder y constantes humanas. La secuencia nucleotídica ilustrada es la SEC ID N° : 97, la secuencia complementaria es la SEC ID N° : 103 y la secuencia de aminoácidos es la SEC ID N° : 104. La Figura 24 muestra la secuencia nucleotídica de la cadena ligera humanizada 1D9RKA. Los sitios enzimáticos indicados fueron añadidos para la clonación en el vector pLKTOK41. El vector también tiene regiones líder y constantes humanas. La Y entre corchetes indica un residuo que cambia a aspartato cuando se clona en el sitio de clonación Eco RV de pLKTOK41. La secuencia nucleotídica ilustrada es la SEC ID N° : 98, la secuencia complementaria es la SEC ID N° : 105 y la secuencia de aminoácidos es la SEC ID N° : 106. La Figura 25 ilustra una comparación de las capa-cidades del mAb 1D9 murino y una versión humanizada del mAb 1D9 (cadena pesada de 1D9RHA VH, cadena ligera de 1D9RKA V?) para inhibir la unión de [125I] -MCP-1 a células THP-1 enteras. Los puntos de datos para el 1D9 murino (mus-lD9) están mostrados como triángulos cerrados. Los puntos de datos para la versión humanizada de 1D9 (hum-lD9) están mostrados como cuadrados cerrados . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un anticuerpo (anti-CCR2) o un fragmento funcional del mismo que se une al receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero (CCR2, CKR-2, MCP-1RA o MCP-1RB) o a una porción de CCR2. En una realización, el anticuerpo tiene especificidad por el CCR2 humano o rhesus o una porción del mismo. En una realización, los anti-cuerpos (inmunoglobulinas) son producidos frente a un CCR2 de mamífero aislado y/o recombinante o porción del mismo (por ejemplo, péptido) o frente a una célula huésped que expresa CCR2 de mamífero. En una realización preferida, los anticuerpos se unen específicamente al (a los) receptor (es) CCR2 huma-no(s) (por ejemplo, CCR2a y/o CCR2b) o a una porción del (de los) mismo (s) y, en una realización particularmente preferida, los anticuerpos tienen especificidad para un CCR2 humano natural o endógeno. Tal como se usa aquí, "receptor 2 de quimiokinas CC" ("CCR2") se refiere al receptor de quimiokinas CC 2a y/o al receptor de quimiokinas CC 2b. También se incluyen en la presente invención anticuerpos o fragmentos funcionales de los mismos que pueden inhibir una o más funciones características de un CCR2 de mamífero, tales como una actividad de unión (por ejemplo, unión a ligando, inhibidor y/o promotor) , una actividad de señalización (por ejemplo, activación de una proteína G de mamífero, inducción de un aumento rápido y transitorio en la concentración de calcio libre citosólico [Ca+]i) y/o estimulación de una respuesta celular (por ejemplo, estimulación de la quimiotaxis, de la exocito-sis o de la liberación de mediadores inflamatorios por los leucocitos, activación de integrinas), tales como un anticuerpo que puede inhibir la unión de un ligando (es decir, uno o más ligandos) a CCR2 y/o una o más funciones mediadas por CCR2 en respuesta a un ligando. Por ejemplo, en un aspee-to, los anticuerpos o fragmentos funcionales de los mismos pueden inhibir (reducir o prevenir) la interacción del receptor con un ligando natural, tal como MCP-1, MCP-2, MCP-3 y/o MCP-4. En otro aspecto, un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a CCR2 puede inhibir la unión de MCP-1, MCP-2, MCP-3 y/o MCP-4 y/o HIV a CCR2 de mamíferos (por ejemplo, CCR2 humano, CCR2 de primate no humano, CCR2 murino) . Los anticuerpos o sus fragmentos funcionales de la presente invención pueden inhibir funciones mediadas por el CCR2 huma-no, incluyendo el tráfico de leucocitos, la entrada de HIV en una célula, la activación de células T, la liberación de mediadores inflamatorios y/o la degranulación de los leucocitos. Preferiblemente, los anticuerpos o fragmentos pueden unirse a CCR2 con una afinidad de al menos aproximadamente 0,1 x 10~9 M, preferiblemente de al menos aproximadamente 1 x 10~9 M y, más preferiblemente, de al menos aproximadamente 3 x 10~9 M. En una realización particular, los anticuerpos o sus fragmentos funcionales demuestran inhibición de la quimiotaxis inducida por quimiokinas (por ejemplo, inducida por MCP-1) de las células (por ejemplo, PBMC) a menos de aproximadamente 150 µg/ml, preferiblemente menos de aproximadamente 100 µg/ml, más preferiblemente menos de aproximadamente 50 µg/ml, e incluso más preferiblemente menos de aproximadamente 20 µg/ml. En otra realización de la invención, los anticuerpos o sus fragmentos funcionales de la invención pueden inhibir la unión de un ligando de CCR2 (por ejemplo, una quimiokina) a CCR2 con una CI50 de menos de aproximadamente 1,0 µg/ml, preferiblemente menos de aproximadamente 0,5 µg/ml y, más preferiblemente, menos de aproximadamente 0,005 µg/ml. Se produjeron anticuerpos monoclonales murinos específicos por CCR2 , denominados 1D9 y 8G2 , como aquí se describe. En una realización preferida, los anticuerpos de la presente invención se unen al CCR2 humano y tienen una espe-cificidad epitópica que es igual o similar a la del anticuerpo 1D9 ó 8G2 murino aquí descrito. Los anticuerpos con una especificidad epitópica igual o similar a la del anticuerpo monoclonal 1D9 murino pueden ser identificados por su capacidad para competir con el anticuerpo monoclonal 1D9 murino por la unión al CCR2 humano (por ejemplo, a células portadoras del CCR2 humano, tales como transfectantes portadores de CCR2, células CD8+, células CD4+, células CDR45RO+, células CD25+, monocitos, células dendríticas, macrófagos y basófi-los) . De forma similar, los anticuerpos con una especificidad epitópica igual o similar a la del anticuerpo monoclonal 8G2 murino pueden ser identificados por su capacidad para competir con el anticuerpo monoclonal 8G2 murino por la unión al CCR2 humano. Utilizando quimeras de receptores (Rucker y col., Cell 87 : 437-446 (1996)), se ha mapeado el sitio de unión de los mAb 1D9 y 8G2 en el dominio amino-terminal del receptor 2 de quimiokinas CC humanas, específicamente en un epitopo que comprende desde aproximadamente el aminoácido 1 hasta aproximadamente el aminoácido 30 de la proteína. Usando éstas u otras técnicas adecuadas, se pueden identificar anticuerpos, que tienen una especificidad epitópica igual o similar a la de un anticuerpo de la presente invención. Los mAb 1D9 y 8G2 tienen especificidad epitópica por el dominio amino-terminal del receptor CCR2 , por ejemplo desde aproximada-mente el aminoácido número 1 hasta aproximadamente el aminoácido número 30 de la proteína del receptor. Así, la invención se relaciona con un anticuerpo o porción funcional del mismo que se une al dominio amino-terminal o porción del mismo del receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero y, particularmente, a un epitopo que comprende desde aproximadamente el aminoácido 1 hasta aproximadamente el aminoácido 30 del receptor 2 de quimiokinas de mamífero. La invención se relaciona también con anticuerpo biespecífico o fragmento funcional del mismo (por ejemplo, F(ab') ) que tiene la misma o similar especificidad epitópica que al menos dos de los anticuerpos aquí descritos (véanse, por ejemplo, la Patente EE.UU. N° 5.141.736 (Iwasa y col.), las Patentes EE.UU. N° 4.444.878, 5.292,668, 5.523.210 (todas de Paulus y col.) y la Patente EE.UU. N° 5.496.549 (Yamazaki y col.). Por ejemplo, un anticuerpo biespecífico de la presente invención puede tener la misma o similar especificidad epitópica que el mAb 1D9 y el 8G2 ; por ejemplo, se une al dominio amino-terminal, o porción del mismo, de la proteína CCR2 de mamífero. Las líneas celulares de hibridoma productoras de anticuerpos según la presente invención fueron depositadas el 17 de Julio de 1998 a nombre de LeukoSite, Inc., 215 First Street, Cambridge, MA 02142, EE.UU. (ahora Millennium Pharma-ceuticals, Inc., 75 Sidney Street, Cambridge, MA 02139, EE.UU.) en la American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 20110, EE.UU., bajo los N° de Acceso HB-12549 (1D9) y HB-12550 (8G2) . La presente invención se relaciona también con las líneas celulares de hibri-doma depositadas bajo el N° de Acceso ATCC HB-12549 y el N° de Acceso ATCC HB- 12550, así como con los anticuerpos monoclonales producidos por las líneas celulares de hibridoma depositadas bajo los N° de Acceso ATCC HB-12549 y HB-12550. Los anticuerpos de la presente invención pueden ser policlonales o monoclonales y el término "anticuerpo" pretende incluir tanto a los anticuerpos policlonales como a los monoclonales. Más aún, se entiende que los métodos aquí descritos que utilizan 8G2 pueden también utilizar fragmentos funcionales (por ejemplo, fragmentos de unión a antígeno) de 8G2 , anticuerpos que tienen la misma o similar especificidad épitópica que 8G2 y combinaciones de éstos, eventualmente en combinación con anticuerpos o fragmentos que tienen una especificidad epitópica que no es igual o similar a 8G2 ; de forma similar, los métodos descritos que utilizan 1D9 pueden tam-bién utilizar fragmentos funcionales de 1D9, anticuerpos que tienen la misma o similar especificidad epitópica que 1D9 y combinaciones de éstos, eventualmente en combinación con anticuerpos o fragmentos que tienen una especificidad epitópica que no es la misma o similar que la de 1D9. Los anticuerpos de la presente invención pueden ser producidos frente a un inmunógeno apropiado, tal como proteína CCR2 de mamífero aislada y/o recombinante o una porción de la misma, o moléculas sintéticas, tales como péptidos sintéticos. En una realiza-ción preferida, las células que expresan el receptor, tales como células transfectadas. pueden ser usadas como inmunógenos o en una selección de anticuerpos que se unen al receptor. Los anticuerpos de la presente invención y sus fragmentos son útiles en aplicaciones terapéuticas, diagnósticas y de investigación, tal como aquí se describe. La presente invención incluye un anticuerpo o porción funcional del mismo de la presente invención (por ejemplo, mAb 1D9 ó 8G2, 9 fragmentos de unión a antígeno de éstos) para uso en terapia (incluyendo la profilaxis) o diagnóstico (por ejemplo, de enfermedades o condiciones particulares tal como aquí se describe) y el uso de dichos anticuerpos o porciones funcionales de los mismos para la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de enfermedades o condiciones según aquí se describe. La preparación de antígeno inmunizante y la producción de anticuerpos policlonales y monoclonales pueden ser llevadas a cabo como se describe aquí o usando otras técnicas adecuadas. Se ha descrito una variedad de métodos (véanse, por ejemplo, Kohler y col., Nature 256 : 495-497 (1975), y Eur. J. Immunol . 6 : 511-519 (1976); Milstein y col., Nature 266 : 550-552 (1977); Koprowski y col., Patente EE.UU. ?° 4.172.124; Harlow, E. y D. Lañe, 1988, Antibodies : A Labora tory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory: Cold Spring Har-bor, ?Y) ; Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2 (Suplemento 27, Verano 94), Ausubel, F.M. y col., Eds. (John Wiley & Sons: ?ew York, ?Y) , Capítulo 11 (1991)). En general, puede producirse un hibridoma fusionando una línea celular inmortal adecuada (por ejemplo, una línea de células de míe- loma tal como SP2/0) con células productoras de anticuerpo. La célula productora de anticuerpo, preferiblemente las del bazo o los nodulos linfáticos, son obtenidas de animales inmunizados con el antígeno de interés. Las células fusionadas (hibridomas) pueden ser aisladas usando condiciones de cultivo selectivas y clonadas por dilución limitante. Las células que producen anticuerpos con las propiedades de unión deseadas pueden ser seleccionadas mediante un ensayo adecuado (por ejemplo, ELISA) . Se pueden usar otros métodos adecuados de producción o aislamiento de anticuerpos que se unen a CCR2 , incluyendo anticuerpos humanos o artificiales, incluyendo, por ejemplo, métodos que seleccionan anticuerpo recombinante (por ejemplo, Fv o Fab de una sola cadena) de una librería, o que se basan en la inmunización de animales transgénicos (por ejemplo, ratones) capaces de producir un repertorio de anticuerpos humanos (véanse, por ejemplo, Jakobovits y col., Proc . Natl . Acad. Sci . USA, 90 : 2551-2555 (1993); Jakobovits y col., Nature, 362 : 255-258 (1993); Lonberg y col., patente EE.UU. ?° 5.545.806; Surani y col., Patente EE.UU. ?° 5.545.807) . Los anticuerpos de cadena sencilla y los anticuerpos quiméricos, humanizados o primatizados (injertados con CDR) , así como los anticuerpos de una sola cadena quimé-ricos o injertados con CDR y similares, que contienen porciones derivadas de diferentes especies, quedan también incluidos en la presente invención y en el término "anticuerpo" . Las diversas porciones de estos anticuerpos pueden juntarse químicamente por técnicas convencionales, o pueden ser prepa-radas como una proteína contigua usando técnicas de ingeniería genética. Por ejemplo, se pueden expresar ácidos nucleicos codificantes de una cadena quimérica o humanizada para producir una proteína contigua. Véanse, por ejemplo, Cabilly y col., Patente EE.UU. ?° 4.816.567; Cabilly y col., Patente Europea N° 0.125.023 Bl ; Boss y col., Patente EE.UU. N° 4.816.397; Boss y col., Patente Europea N° 0.120.694 Bl; Neuberger, M.S. y col., WO 86/01553; Neuberger, M.S. y col., Patente Europea N° 0.194.276 Bl; Winter, Patente EE.UU. N° 5.225.539; Winter, Patente Europea N° 0.239.400 Bl, y Queen y col., Patentes EE.UU. N° 5.585.089, 5.698.761 y 5.698.762. Véanse también Newman, R. y col., BioTechnology 10 : 1455-1460 (1992) , en cuanto a anticuerpos primatizados, y Ladner y col., Patente EE.UU. N° 4.946.778, y Bird, R.E. y col., Science, 242 : 423-426 (1988) en cuanto a anticuerpos de cadena sencilla. Además, también se pueden producir fragmentos funcionales de anticuerpos, incluyendo fragmentos de anticuerpos quiméricos, humanizadas, primatizados o de cadena sencilla. Los fragmentos funcionales de los anticuerpos anteriores conservan al menos una función de unión y/o función de modulación del anticuerpo de longitud completa del que derivan. Los fragmentos funcionales preferidos conservan una función de unión a antígeno de un anticuerpo de longitud total correspondiente (por ejemplo, la capacidad para unirse a un CCR2 de mamífero) . Los fragmentos funcionales particularmente preferidos conservan la capacidad para inhibir una o más funciones características de un CCR2 de mamífero, tales como una actividad de unión, una actividad de señalización y/o estimu-lación de una respuesta celular. Por ejemplo, en una realización, un fragmento funcional puede inhibir la interacción de CCR2 con uno o más de sus ligandos (por ejemplo, MCP-1, MCP-2, MCP-3 y/o MCP-4) y/o puede inhibir una o más funciones mediadas por receptores, tales como el tráfico de leucocitos, la entrada de HIV en las células, la activación de células T, la liberación de mediadores inflamatorios y/o la degranulación de leucocitos. Por ejemplo, se incluyen en la invención fragmentos de anticuerpo capaces de unirse a un receptor CCR2 de ma- mífero o porción del mismo, incluyendo, aunque sin limitación, los fragmentos Fv, Fab, Fab' y F(ab')2. Dichos fragmentos pueden ser producidos por escisión enzimática o por técnicas recombinantes, por ejemplo. Por ejemplo, la escisión con papaína o con pepsina puede generar fragmentos Fab o F(ab')2, respectivamente. También se pueden producir anticuerpos en una variedad de formas truncadas usando genes de anticuerpos en los que se han introducido uno o más codones de parada aguas arriba del sitio de parada natural. Por ejem-pío, se puede diseñar un gen quimérico codificante de una porción de la cadena pesada de F(ab')2 de manera que incluya secuencias de ADN codificantes del dominio CHi y de la región de bisagra de la cadena pesada. La presente invención se relaciona con una inmu-noglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una región de unión a antígeno de origen no humano (por ejemplo, de roedor) y al menos una porción de una inmunoglobulina de origen humano (por ejemplo, una región de marco humana, una región constante humana o una porción de la misma) . En una realización, la inmunoglobulina humanizada incluye una región de unión a antígeno de origen no humano que se une a CCR2 y una región constante derivada de una región constante humana. En otra realización, la inmunoglobulina humanizada que se une a CCR2 consiste en una región determinante de complementariedad de origen no humano y una región de marco variable de origen humano y, eventualmente, una región constante de origen humano. Por ejemplo, la inmunoglobulina humanizada puede consistir en una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena ligera contiene una región determinante de complementariedad derivada de un anticuerpo de origen no humano que se une a CCR2 y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano, y la cadena pesada contiene una región determinante de complementariedad derivada de un anticuerpo de origen no humano que se une a CCR2 y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano. En una realización, la inmunoglobulina humanizada puede competir con el anticuerpo monoclonal 1D9 ó 8G2 murino por la unión al CCR2 humano. En una realización preferida, la región de unión a antígeno de la inmunoglobulina humanizada (a) deriva del anticuerpo monoclonal 1D9 (por ejemplo, como en una inmunoglobulina humanizada que contiene CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera de 1D9 y/o CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada de 1D9) o (b) deriva del anticuerpo monoclonal 8G2 (por ejemplo, como en una inmunoglobulina humanizada que contiene CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera de 8G2 y/o CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada de 8G2) . Los anticuer-pos quiméricos o injertados con CDR de una sola cadena están también amparados por el término inmunoglobulina humanizada. La presente invención se relaciona también con una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma o con una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma. En una realización, la invención se relaciona con una cadena ligera humanizada que contiene una CDR de cadena ligera (es decir, una o más CDR) de origen no humano y una región de marco de cadena ligera humana. En otra realización, la presente invención se relaciona con una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada que contiene una CDR de cadena pesada (es decir, una o más CDR) de origen no humano y una región de marco de cadena pesada humana . Las CDR pueden derivar de una inmunoglobulina no humana. Las inmunoglobulinas naturales tienen una estructura nuclear común en la que dos cadenas ligeras idénticas (de aproximadamente 24 kD) y dos cadenas pesadas idénticas (de aproximadamente 55 ó 70 kD) forman un tetrámero. La porción amino-terminal de cada cadena es conocida como la región variable (V) y puede distinguirse de las regiones constantes (C) más conservadas del resto de cada cadena. Dentro de la región variable de la cadena ligera hay una porción C-terminal conocida como la región J. En la región variable de la cadena pesada, hay una región D además de la región J. La mayor parte de la variación en la secuencia de aminoácidos en las inmunoglobulinas se confina a tres localizaciones separadas en las regiones V conocidas como regiones hipervariables o regiones determinantes de complementariedad (CDR) , que es-tan directamente implicadas en la unión a antígeno. Procediendo desde el extremo amino, estas regiones son denominadas CDRl, CDR2 y CDR3 , respectivamente. Las CDR se mantienen en su sitio mediante regiones de marco (FR) más conservadas) Procediendo desde el extremo amino, estas regiones son deno-minadas FR1, FR2 , FR3 y FR4 , respectivamente. Las localizaciones de las regiones CDR y FR y un sistema de numeración han sido definidos por Kabat y col. (Kabat y col. Seguences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991) . Las inmunoglobulinas humanas pueden ser divididas en clases y subclases, dependiendo del isotipo de la cadena pesada. Las clases incluyen IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, en donde las cadenas pesadas son del tipo gamma (?) , mu (µ) , alfa (a) , delta (d) o épsilon (e) , respectivamente. Las subclases incluyen IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG4 , IgAl e IgA2 , en donde las cadenas pesadas son del tipo ?l, ?2 , ?3 , ?4, al y a2 , respectivamente. Las moléculas de inmunoglobulinas humanas de una clase o subclase seleccionada pueden contener una cadena kap-pa (K) O lambda (?) . Véase, por ejemplo, Cellular and Molecular Immunology, Wonsiewicz, M.J., Ed. Capítulo 45, pp. 41-50, W.B. Saunders Co., Philadelphia, PA (1991); Nisonoff, a., Jn-troduction to Molecular Immunology, 2a Ed. , Capítulo 4, pp. 45-65, Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA (1984).

El término "inmunoglobulina", tal como se utiliza aquí, incluye anticuerpos enteros y fragmentos de los mismos biológicamente funcionales. Dichos fragmentos biológicamente funcionales conservan al menos una función de unión a antíge-no de un anticuerpo de longitud total correspondiente (por ejemplo, especificidad por CCR2 del anticuerpo 1D9) y, preferiblemente, conservan la capacidad para inhibir la interacción de CCR2 con uno o más de sus ligandos (por ejemplo, HIV, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4) . Como ejemplos de fragmentos de anticuerpo biológicamente funcionales que pueden ser usados se incluyen fragmentos capaces de unirse a CCR2 , tales como anticuerpos de cadena sencilla y fragmentos Fv, Fab, Fab' y F(ab') . Dichos fragmentos pueden ser producidos por escisión enzimática o por técnicas recombinantes. Por ejemplo, se pue-de utilizar la escisión con papaína o con pepsina para generar fragmentos Fab o F(ab')2, respectivamente. También se pueden producir anticuerpos en una variedad de formas truncadas usando genes de anticuerpos en los que se han introducido uno o más codones de parada aguas arriba del sitio de parada natural. Por ejemplo, se puede diseñar un gen quimérico codificante de la cadena pesada de un fragmento F(ab')2 para que incluya secuencias de ADN codificantes del dominio CHi y de la región de bisagra de la cadena pesada. Tal como se usa aquí, un fragmento de unión a antígeno de una cadena pesada o ligera de inmunoglobulina humanizada pretende significar un fragmento que se une a un antígeno cuando se empareja con una cadena complementaria. Es decir, que un fragmento de unión a antígeno de una cadena ligera humanizada se unirá a un antígeno cuando se empareje con una cadena pesada (por ejemplo, murina, quimérica, humanizada) que contenga una región variable y un fragmento de unión a antígeno de una cadena pesada humanizada se unirá a un antígeno cuando se empareje con una cadena ligera (por ejemplo, murina, quimérica, humanizada) que contenga una región variable.

El término "inmunoglobulina humanizada", tal como se utiliza aquí, se refiere a una inmunoglobulina que contiene porciones de inmunoglobulinas de diferente origen, donde al menos una porción es de origen humano. Por ejemplo, el an-ticuerpo humanizado puede contener porciones derivadas de una inmunoglobulina de origen no humano con la especificidad necesaria, tal como un ratón, y de secuencias de inmunoglobulinas de origen humano (por ejemplo, inmunoglobulina quimérica) unidas entre sí químicamente por técnicas convencionales (por ejemplo, sintéticas) o preparadas como un polipéptido contiguo usando técnicas de ingeniería genética (por ejemplo, se puede expresar ADN codificante de las porciones de proteína del anticuerpo quimérico para producir una cadena polipeptídica contigua) . Otro ejemplo de una inmunoglobulina humaniza-da de la presente invención es una inmunoglobulina que contiene una o más cadenas de inmunoglobulina que contienen una CDR derivada de un anticuerpo de origen no humano y una región de marco derivada de una cadena ligera y/o pesada de origen humano (por ejemplo, anticuerpos injertados con CDR con o sin cambios de marco) . Los anticuerpos quiméricos o injertados con CDR de cadena sencilla están también amparados por el término inmunoglobulina humanizada. Véanse, por ejemplo, Cabilly y col., Patente EE.UU. 4.816.567; Cabilly y col., Patente Europea N° 0.125.023 Bl; Boss y col., Patente EE.UU. 4.816.397; Boss y col., Patente Europea N° 0.120.694 Bl; Neuberger, M.S. y col., WO 86/01533; Neuberger, M.S. y col., Patente Europea N° 0.194.276 Bl; Winter, Patente EE.UU. N° 5.225.539; Winter, Patente Europea N° 0.239.400 Bl; Pad-lan, E.A. y col., Solicitud de Patente Europea N° 0.519.596 Al. Véanse también Ladner y col.. Patente EE.UU. N° 4.946.778; Huston, Patente EE.UU. N° 5.476.786, y Bird, R.E. y col., Science, 242 : 423-426 (1988), en cuanto a anticuerpos de cadena sencilla. Por ejemplo, se pueden producir inmunoglobulinas humanizadas usando ácidos nucleicos sintéticos y/o recombinantes para preparar genes (por ejemplo, ADNc) codificantes de la cadena humanizada deseada. Por ejemplo, se pueden construir secuencias de ácido nucleico (por ejemplo, ADN) codifi-cantes de regiones variables humanizadas usando métodos de mutagénesis de PCR (reacción en cadena de polimerasa) para alterar las secuencias de ADN codificantes de una cadena humana o humanizada, tales como una plantilla de ADN de una región variable previamente humanizada (véanse, por ejemplo, Kamman, M. y col., Nucí . Acids Res . , 17 : 5404 (1989); Sato, K. y col., Cáncer Research, 53 : 851-856 (1993); Daugherty, B.L. y col., Nucleic Acids Res . , 19 (9) : 2471-2476 (1991), Lewis, A.P. y J.S. Crowe, Gene, 101 : 297-302 (1991)). Usando éstos u otros métodos adecuados, se pueden producir también variantes fácilmente. En una realización, se pueden mutagenizar regiones variables clonadas y se pueden seleccionar las secuencias codificantes de variantes con la especificidad deseada (por ejemplo, a partir de una librería de fago; véanse, por ejemplo, Krebber y col., EE.UU. 5.514.548; Hoogenboom y col., WO 93/06213, publicada el 1 de Abril de 1993). La región de unión a antígeno de la inmunoglobulina humanizada (la porción no humana) puede derivar de una inmunoglobulina de origen no humano (a la que se hace referencia como inmunoglobulina donante) que tiene especificidad de unión por CCR2. Por ejemplo, una región de unión a antígeno adecuada puede derivar del anticuerpo murino 1D9. Otras fuentes incluyen anticuerpos específicos por CCR2 obtenidos de fuentes no humanas, tales como roedores (por ejemplo, ratón, rata), conejos, cerdos, cabras o primates no humanos (por ejemplo, monos). Adicionalmente, se pueden preparar otros anticuerpos policlonales o monoclonales, tales como anticuerpos que se unen al mismo epitopo o similar que el anticuerpo 1D9 (por ejemplo, Kohler y col., Nature, 256 : 495-497 (1975); Harlow y col., 1988, Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, NY) , y Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2 (Suplemento 27, Verano 94), Ausubel y col., Eds. (John Wiley & Sons: New York, NY) , Capítulo 11 (1991)). Por ejemplo, se pueden producir anticuerpos fren-te a un inmunógeno apropiado en un mamífero adecuado (por ejemplo, un ratón, rata, conejo u oveja) . Las células portadoras de CCR2 , las fracciones de membrana que contienen CCR2 y los fragmentos inmunogénicos de CCR2 son ejemplos de inmunógenos adecuados. Se pueden aislar células productoras de anticuerpos (por ejemplo, un linfocito) de, por ejemplo, los nodulos linfáticos o el bazo de un animal inmunizado. Las células pueden ser entonces fusionadas a una célula inmortalizada adecuada (por ejemplo, una línea celular de mieloma) , formando así un hibridoma. Las células fusionadas pueden ser aisladas empleando técnicas de cultivo selectivas. Las células que producen anticuerpos con la especificidad deseada pueden ser seleccionadas mediante un ensayo adecuado (por ejemplo, ELISA) . También se pueden obtener inmunoglobulinas de origen no humano que tienen especificidad de unión por CCR2 de librerías de anticuerpos (por ejemplo, una librería de fago que contiene moléculas de Fab no humano) . En una realización, la región de unión a antígeno de la inmunoglobulina humanizada contiene una CDR de origen no humano. En esta realización, la inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 contiene al menos una CDR de origen no humano. Por ejemplo, las CDR pueden derivar de las regiones variables de cadena ligera y pesada de inmunoglobulinas de origen no humano, de tal forma que una inmunoglobulina humanizada incluye substancialmente CDRl, CDR2 y/o CDR3 de cadena pesada y/o CDRl, CDR2 y/o CDR3 de cadena ligera, de una o más inmunoglobulinas de origen no humano y la inmunoglobulina humanizada resultante tiene especificidad de unión por CCR2. Preferiblemente, las tres CDR de una cadena seleccionada son substancialmente las mismas que las CDR de la cadena correspondiente de una donante y, más preferiblemente, las tres CDR de las cadenas ligeras y pesadas son substancialmente las mismas que las CDR de la correspondiente cadena donante. En una realización, la invención se relaciona con una inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una cadena ligera humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que contiene CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera del anticuerpo 1D9, y una cadena pesada, por ejemplo una cadena pesada humana. La invención también incluye una inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2 y que consiste en una cadena pesada humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que contiene CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada del anticuerpo 1D9, y una cadena ligera, por ejemplo IiaairradHoáóñigerselamánaa también con una inmuno-globulina que tiene especificidad de unión por CCR2 , que consiste en una cadena ligera y una cadena pesada, donde la cadena ligera contiene al menos 1 CDR de un anticuerpo de origen no humano (por ejemplo, 1D9) y regiones de marco y cons-tantes de origen humano (por ejemplo, SEC ID N° : 12, SEC ID N° : 13, SEC ID N° : 14, SEC ID N° : 15 y SEC ID N° : 107) y donde la cadena pesada contiene una región variable de origen no humano (por ejemplo, 1D9) y una región constante de origen humano. La invención proporciona también fragmentos de unión a antígeno de estas inmunoglobulinas. La invención se relaciona también con una inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una cadena ligera y una cadena pesada, donde la cadena ligera contiene una cadena variable de origen no humano (por ejemplo, de 1D9) y una región constante de origen humano, y donde la cadena pesada contiene al menos 1 CDR de un anticuerpo de origen no humano (por ejemplo, 1D9) y regiones de marco y constantes de origen humano (por ejemplo, SEC ID N° : 17, SEC ID N° : 18, SEC ID N° : 19 y SEC ID Na : 20) . La invención proporciona también frag- mentos de unión a antígenos de estas inmunoglobulinas. La porción de la inmunoglobulina o cadena de inmunoglobulina humanizada que es de origen humano (la porción humana) puede derivar de cualquier inmunoglobulina o cadena de inmunoglobulina humana adecuada. Por ejemplo, una región constante humana o porción de la misma, si está presente, puede derivar de las cadenas ligeras K o ? y/o de las cadenas pesadas ? (por ejemplo, ?l, ?2 , ?3 , ?4) , µ, a (por ejemplo, al, a2) , d o e de anticuerpos humanos, incluyendo variantes alélicas. Se puede seleccionar una región constante particular (por ejemplo, IgGl) , variantes o porciones de la misma para confeccionar la función efectora. Por ejemplo, se puede incorporar una región constante mutada (variante) a una proteína de fusión para minimizar la unión a receptores Fc y/o la capacidad para fijar el complemento (véase, por ejemplo, el Ejemplo 3; véanse también Winter y col., GB 2.209.757 Bl; Morrison y col., WO 89/07142; Morgan y col., WO 94/29351, 22 de Diciembre de 1994) . Si están presentes, las regiones de marco humanas (por ejemplo, región variable de la cadena ligera) derivan preferiblemente de una región variable de anticuerpo humano que tiene similitud de secuencia con la región análoga o equivalente (por ejemplo, región variable de cadena ligera) del donante de la región de unión a antígeno. Otras fuentes de regiones de marco para porciones de origen humano de una inmunoglobulina humanizada incluyen secuencias consenso variables humanas (véanse, por ejemplo, Kettleborough, C.A. y col., Protein Engineering 4 : 773-783 (1991); Cárter y col., WO 94/04679, publicada el 3 de Marzo de 1994)). Por ejemplo, la secuencia del anticuerpo o región variable usada para obtener la porción no humana puede ser comparada con secuencias humanas según describen Kabat y col . , Sequences of Proteins of Immunological Interest , Quinta Edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991) . En una realización particularmente preferida, las regiones de marco de una cadena de inmunoglobulina humanizada derivan de una región variable humana que tiene al menos aproximadamente un 60% de identidad de secuencia global, pre-feriblemente al menos un 70% de identidad de secuencia global y, más preferiblemente, al menos aproximadamente un 85% de identidad de secuencia global, con la región variable del donante no humano (por ejemplo, anticuerpo 1D9 murino) . Una porción humana puede derivar también de un anticuerpo humano que tiene al menos aproximadamente un 65% de identidad de secuencia y, preferiblemente al menos aproximadamente un 70% de identidad de secuencia, dentro de la porción particular (por ejemplo, FR) que se esté usando en comparación con la porción equivalente (por ejemplo, FR) de un donante no humano. En una realización, la inmunoglobulina humanizada contiene al menos una de las regiones de marco (FR) derivadas de una o más cadenas de un anticuerpo de origen humano. Por lo tanto, la FR puede incluir una FR1 y/o FR2 y/o FR3 y/o FR4 derivada de uno o más anticuerpos de origen humano. Preferí-blemente, la porción humana de una cadena humanizada seleccionada incluye FR1, FR2 , FR3 y FR4 derivadas de una región variable de origen humano (por ejemplo de una cadena de inmunoglobulina humana, de una secuencia consenso humana) . Las porciones de inmunoglobulina de origen no humano y humano para uso en la presente invención tienen secuencias idénticas a las inmunoglobulinas o porciones de inmunoglobulinas de las que derivan o a variantes de éstas. Dichas variantes incluyen mutantes que difieren por adición, deleción o substitución de uno o más residuos. Tal como se indicó anteriormente, las CDR que son de origen no humano son substancialmente las mismas que en el donante no humano y, preferiblemente, son idénticas a las CDR del donante no humano. Según se describe en el Ejemplo 2, se pueden hacer cambios en la región de marco, tales como los que substituyen un residuo de la región de marco de origen humano por un residuo de la posición correspondiente del donante. Se pueden hacer una o más mutaciones en la región de marco, incluyendo deleciones, inserciones y substituciones de uno o más aminoáci-dos. Varias de tales substituciones están descritas en el diseño de anticuerpos 1D9 humanizados en el Ejemplo 2. Para un anticuerpo o cadena humanizada seleccionada, se pueden diseñar mutaciones de marco según se describe aquí. Preferiblemente, las inmunoglobulinas humanizadas pueden unirse a CCR2 con una afinidad similar o mejor que la del donante no humano. Se pueden producir variantes por una variedad de métodos adecuados, incluyendo la mutagénesis de cadenas donantes no humanas o aceptoras humanas . Las inmunoglobulinas humanizadas de la presente invención tienen especificidad de unión por el CCR2 humano. En una realización preferida, la inmunoglobulina humanizada de la presente invención tiene al menos una característica funcional del anticuerpo murino 1D9, tal como función de unión (por ejemplo, con especificidad por CCR2 , con especifi-cidad epitópica igual o similar) y/o función inhibitoria (por ejemplo, capacidad para inhibir la función dependiente de CCR2 in vi tro y/o in vivo, tal como la capacidad para inhibir la unión de una célula portadora de CCR2 a un ligando del mismo (por ejemplo, una quimiokina)). Así, las inmunoglobuli-ñas humanizadas preferidas pueden tener la especificidad de unión del anticuerpo murino 1D9, la especificidad epitópica del anticuerpo murino 1D9 (por ejemplo, pueden competir con el 1D9 murino, con un anticuerpo quimérico 1D9 o con un 1D9 humanizado por la unión a CCR2 (por ejemplo, sobre una célula portadora de CCR2)) y/o la función inhibitoria del anticuerpo murino 1D9. La función de unión de una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 puede ser detectada por métodos inmunológicos estándar, por ejemplo usando ensayos que monitorizan la formación de un complejo entre la inmunoglobulina humanizada y CCR2 (por ejemplo, una fracción de membrana que contiene CCR2 , sobre una célula portadora de CCR2 , una línea celular humana o una célula huésped recombinante que contienen ácido nucleico codificante de CCR2 que expresa CCR2) . Se pueden usar también ensayos de unión y/o adhesión u otros métodos adecuados en procedimientos para la identificación y/o aislamiento de inmunoglobulinas humanizadas (por ejemplo, a partir de una librería) con la especi-ficidad necesaria (por ejemplo, un ensayo que monitoriza la adhesión entre una célula portadora de CCR2 y un ligando de éste (por ejemplo, HIV, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4) u otros métodos adecuados . Las porciones de inmunoglobulina de origen no humano y humano para uso en la presente invención incluyen cadenas ligeras, cadenas pesadas y porciones de cadenas ligeras y pesadas. Estas porciones de inmunoglobulinas pueden ser obtenidas o derivar de inmunoglobulinas (por ejemplo, por síntesis de novo de una porción) , o se pueden producir y ex-presar moléculas de ácido nucleico codificantes de una inmunoglobulina o cadena de la misma con la propiedad deseada (por ejemplo, unión a CCR2 , similitud de secuencia). Las inmunoglobulinas humanizadas que contienen las porciones deseadas (por ejemplo, región de unión a antígeno, CDR, FR, región C) de origen humano y no humano pueden ser producidas usando ácidos nucleicos sintéticos y/o recombinantes para preparar genes (por ejemplo, ADNc) codificantes de la cadena humanizada deseada. Para preparar una porción de una cadena, se pueden introducir uno o más codones de parada en la posición de-seada. Por ejemplo, se pueden construir secuencias de ácido nucleico (por ejemplo, ADN) codificantes de regiones variables humanizadas recién diseñadas usando métodos de mutagénesis de PCR para alterar las secuencias de ADN existentes (véase, por ejemplo, Kamman, M. y col., Nucí . Acids Res . 17 : 5404 (1989) ) . Se pueden hibridar cebadores de PCR codificantes de las nuevas CDR a una plantilla de ADN de una región variable humanizada previamente que se basa en la misma región variable humana o en una muy similar (Sato, K. y col., Cáncer Research 53 : 851-856 (1993)). Si no se dispone de una secuencia de ADN similar para uso como plantilla, se puede construir un ácido nucleico que contenga una secuencia codificante de una secuencia de región variable a partir de oligonucleótidos sintéticos (véase, por ejemplo, Kolbinger, F., Protein Engineering 8 : 971-980 (1993)). Se puede incorporar también una secuencia codificante de un péptido señal en el ácido nucleico (por ejemplo, en la síntesis, por inserción en un vector) . Si no se dispone de la secuencia del péptido señal natural, se puede usar una secuencia de péptido señal de otro anticuerpo (véase, por ejemplo, Kettleborough, C.A., Protein Engineering 4 : 773-783 (1991)). Usando estos métodos, los métodos aquí descritos u otros métodos adecuados, se pueden producir variantes fácilmente. En una realización, se pueden mutagenizar regiones variables clonadas y se pueden seleccionar secuencias codificantes de variantes con la especificidad deseada (por ejemplo, a partir de una librería de fago; véanse, por ejemplo, Krebber y col., EE.UU. 5.514.548; Hoogenboom y col., WO 93/06213, publicada el 1 de Abril de 1993) ) . La invención se relaciona con una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o con un fragmento de unión a antígeno de la misma, cuya cadena ligera o fragmento de unión a antígeno de la misma tiene una secuencia de aminoácidos consistente en al menos una porción funcional de la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera de la SEC ID N° : 9. En una realización preferida, la secuencia de aminoácidos consiste en al menos, preferiblemente dos y, más preferiblemente, tres de las CDR de la SEC ID N° : 9. La invención se relaciona también con una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de noglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma, cuya cadena pesada o fragmento de unión a antígeno de la misma tiene una secuencia de aminoácidos que contiene al menos una porción funcional de la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada mostrada en la SEC ID N° : 10. En una realización preferida, la secuencia de aminoácidos contiene al menos, preferiblemente dos y, más preferiblemente, tres de las CDR de la SEC ID N° : 10. Se hace notar que las secuencias murinas aquí descritas derivan todas ellas de Mus musculus . Según una realización de la invención, una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 puede contener una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 12, la SEC ID N° : 13, la SEC ID N° : 14, la SEC ID N° : 15 y la SEC ID N° : 107. Según otra realización de la invención, una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 puede con-tener una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 17, la SEC ID N° : 18, la SEC ID N° : 19 y la SEC ID N° : 20. En una realización particular, una inmunoglobulina humanizada de la invención puede contener tanto una cadena ligera o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 12, la SEC ID N° : 13, la SEC ID N° : 14, la SEC ID N° : 15 y la SEC ID N° : 107, como una cadena pesada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 17, la SEC ID N° : 18, la SEC ID N° : 19 y la SEC ID N° : 20. En una realización, la invención se relaciona con una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una cadena ligera que contiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 12 y una cadena pesada complementaria, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2. En otra realización, la invención se relaciona con una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 17 y una cadena ligera complementaria, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2. Una cadena ligera o pesada complementaria es una que puede asociarse con una cadena pesada o ligera seleccionada, respectivamente, dando lugar a la capacidad de una inmunoglobulina que contiene dichas cadenas pesadas y ligeras complementarias para tener especificidad de unión por CCR2. En una realización preferida, la invención se relaciona con una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 12 y una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 17, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En una realización alternativa, una inmunoglobu-lina humanizada de la invención contiene tanto una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 12 como una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 18, la SEC ID N° : 19 y la SEC ID N° : 20, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad por CCR2. En otra realización, una inmunoglobulina humanizada de la invención consiste en una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 13 y una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos selec- cionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 17, la SEC ID N° : 18, la SEC ID N° : 19 y la SEC ID N° : 20, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En una realización adicional, una inmunoglobulina humanizada de la invención contiene tanto una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 14 como una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 17, la SEC ID N° : 18, la SEC ID N° : 19 y la SEC ID N° : 20, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En otra realización, una inmunoglobulina humanizada de la invención contiene una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 15 y una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 17, la SEC ID N° : 18, la SEC ID N° : 19 y la SEC ID N° : 20, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En una realización al-ternativa, una inmunoglobulina humanizada de la invención contiene una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 107 y una cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 17, la SEC ID N° : 18, la SEC ID N° : 19 y la SEC ID N° : 20, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En otra realización, una inmunoglobulina humanizada de la invención contiene una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 13, la SEC ID N° : 14, la SEC ID N° : 15 y la SEC ID N° : 107 y una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 17, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especifi- cidad de unión por CCR2. En una realización alternativa, una inmunoglobulina humanizada de la invención contiene una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 12, la SEC ID N° : 13, la SEC ID N° : 14, la SEC ID N° : 15 y la SEC ID N° : 107 y una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 18, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En otra realización, una inmunoglobulina humanizada de la inven-ción contiene una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 12, la SEC ID N° : 13, la SEC ID N° : 14, la SEC ID N° : 15 y la SEC ID N° : 107 y una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 19, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En una realización adicional, una inmunoglobulina humanizada de la invención contiene una cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en la SEC ID N° : 12, la SEC ID N° : 13, la SEC ID N° : 14, la SEC ID N° : 15 y la SEC ID N° : 107 y una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 20, o un fragmento de unión a antígeno de dicha inmunoglobulina que tiene especificidad de unión por CCR2. En una realización, la cadena ligera de inmuno-globulina humanizada o el fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 puede ser codificada por una molécula de ácido nucleico consistente en la SEC ID N° : 98. En otra realización, la cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o el fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 puede ser codificada por una molécula de ácido nucleico consistente en la SEC ID N° : 97. La invención se relaciona también con una inmuno-globulina quimérica o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una región variable de cadena ligera de origen no humano y una región constante humana (por ejemplo, una región constante de cadena ligera) . La invención se relaciona además con una inmunoglobulina quimérica o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una región variable de cadena pesada de origen no humano y una región constante humana (por ejemplo, una región constante de cadena pesada) . En otra realización, la inmuno-globulina quimérica o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consiste en una región de cadena variable de cadena ligera de origen no humano y una región variable de cadena pesada de origen no humano y contiene además una región constante humana (por ejemplo, una región constante de cadena ligera humana y/o una región constante de cadena pesada humana) . Ácidos nucleicos y constructos La presente invención se relaciona también con moléculas de ácido nucleico aisladas y/o recombinantes (in-cluyendo, por ejemplo, las esencialmente puras) consistentes en secuencias de ácido nucleico que codifican para una inmunoglobulina humanizada o cadena ligera o pesada de inmunoglobulina humanizada de la presente invención. Las moléculas de ácido nucleico a las que se hace aquí referencia como "aisladas" son moléculas de ácido nucleico que han sido separadas de los ácidos nucleicos del ADN genómico o del ARN celular de su fuente de origen (por ejemplo, como existe en las células o en una mezcla de ácidos nucleicos, tal como una librería) e incluyen moléculas de áci-dos nucleicos obtenidas por los métodos aquí descritos u otros métodos adecuados, incluyendo moléculas de ácidos nucleicos esencialmente puras, moléculas de ácidos nucleicos producidas por síntesis química o por combinaciones de métodos biológicos y químicos y moléculas de ácidos nucleicos re- combinantes que son aisladas (véanse, por ejemplo, Daugherty, B.L. y col., Nucleic Acids Res . 19 (9) : 2471-2476 (1991); Lewis, A.P. y J.S. Crowe, Gene, 101 : 297-302 (1991)). Las moléculas de ácido nucleico a las que se hace aquí referencia como "recombinantes" son moléculas de ácidos nucleicos que han sido producidas por metodología de ADN re-combinante, incluyendo aquellas moléculas de ácido nucleico que se generan por procedimientos que se basan en un método de recombinación artificial, tal como la reacción en cadena de polimerasa ("PCR") y/o la clonación en un vector usando enzimas de restricción. Las moléculas de ácido nucleico "re-combinantes" son también aquellas que resultan de los fenómenos de recombinación que se producen a través de los mecanismos naturales de las células, pero que son seleccionadas des-pues de la introducción en las células de ácidos nucleicos diseñados para permitir y hacer que sea probable un suceso de recombinación deseado. La presente invención se relaciona también más específicamente con moléculas de ácido nucleico aisladas y/o recombinantes que tienen una secuencia de nucleótidos que codifica para una inmunoglobulina 1D9 humanizada (es decir, una inmunoglobulina humanizada de la presente invención en la que la porción no humana deriva del anticuerpo monoclonal murino 1D9) o una cadena de la misma. En una realización, la cadena ligera contiene tres regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena ligera del anticuerpo 1D9 y la cadena pesada contiene tres regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena pesada del anticuerpo 1D9. Dichas moléculas de ácido nucleico incluyen, por ejemplo, (a) una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia que codifica para un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada de una inmunoglobulina 1D9 humanizada (por ejemplo, región variable de cadena pesada de las Figuras 8 y 21) (por ejemplo, nucleóti- dos 58-411 de la SEC ID N° : 96); (b) una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia que codifica para un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera de una inmunoglobulina 1D9 humani-zada (por ejemplo, región variable de cadena ligera de las Figuras 7 y 22) (por ejemplo, nucleótidos 52-390 de la SEC ID N° : 95) ; (c) una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia que codifica para al menos una porción funcional de la región variable de cadena ligera o pesada de una inmuno-globulina 1D9 humanizada (por ejemplo, una porción suficiente para la unión a antígeno de una inmunoglobulina humanizada que contiene dicha cadena) . Debido a la degeneración del código genético, se pueden hacer una variedad de ácidos nucleicos que codifiquen para un polipéptido seleccionado. En una realización, el ácido nucleico contiene la secuencia de nucleótidos de la región variable expuesta, o substancialmente como se expone, en la Figura 21 o expuesta, o substancialmente como se expone, en la Figura 22, incluyendo polinucleótidos de doble hebra o de una sola hebra. (Aunque varias figu-ras pueden ilustrar polipéptidos que son mayores que la región variable (es decir, que incluyen una secuencia codificante de péptido señal o una porción de una secuencia codificante de región constante) , al hacer referencia a la región variable de una figura particular se quiere incluir la por-ción de la región variable de la secuencia mostrada) . Las moléculas de ácido nucleico aisladas y/o recombinantes que cumplen estos criterios pueden incluir moléculas de ácido nucleico codificantes de secuencias idénticas alas secuencias del anticuerpo 1D9 humanizado o variantes del mismo según se ha discutido anteriormente. Las moléculas de ácido nucleico de la presente invención pueden ser usadas en la producción de inmunoglobulinas humanizadas que tienen especificidad de unión por CCR2. Por ejemplo, se puede incorporar una molécula de ácido nu- cleico (por ejemplo, ADN) codificante de una inmunoglobulina humanizada de la presente invención en un constructo adecuado (por ejemplo, un vector) para posterior manipulación de secuencias o para producción del polipéptido codificado en cé-lulas huésped adecuadas. Moléculas que se dirigen a un blanco La presente invención se relaciona también con moléculas que se dirigen a un blanco y que pueden efectuar la interacción de una célula que expresa CCR2 con una célula blanco. La molécula que se dirige a un blanco incluye un primer resto de unión que puede unirse al CCR2 de mamífero y un segundo resto de unión que puede unirse a una molécula expresada sobre la superficie de una célula blanco. Las células blanco preferidas incluyen células tumorales y las células infectadas con virus. Se conoce en la técnica una variedad de moléculas que se expresan a mayores niveles o de manera única sobre células tumorales (por ejemplo, antígenos tumorales, tales como Lewis Y, HER-2/neu, disialogangliósido G3 , antígeno carcinoembrionario, CD30) y/o células infectadas con virus (por ejemplo, antígenos víricos, tales como la hemaglutinina del virus de la influenza, el LMP-1 del virus Epstein-Barr, la glicoproteína E2 del virus de la hepatitis C, gpl60 de HIV, gp 120 de HIV) . La molécula que se dirige a un blanco puede contener cualquier segundo resto de unión adecuado que se una a una molécula expresada sobre una célula blanco deseada (véase, por ejemplo, Ring, Patente EE.UU. N° 5.948.647, cuyas enseñanzas son aquí incorporadas en su totalidad a modo de referencia) . Como restos de unión adecuados se incluyen, por ejemplo, proteínas y péptidos (incluyendo formas modifi-cadas con posterioridad a la traducción, por ejemplo glicosiladas, fosforiladas, lipidadas) , azúcares, lípidos, peptidomiméticos, pequeñas moléculas orgánicas, ácidos nucleicos y otros agentes que se unen al CCR2 de mamífero o a una molécula expresada sobre la superficie de una célula blanco. Los restos de unión adecuados pueden ser identificados usando cualquier método adecuado, tal como los ensayos de unión aquí descritos . En una realización preferida, el primer resto de unión puede ser, por ejemplo, una inmunoglobulina humanizada de la invención que se una al CCR2 de mamíferos o un fragmento de unión a antígeno de ésta (por ejemplo, Fab, Fv, Fab', F(ab')2). El segundo resto de unión puede ser, por ejemplo, un anticuerpo (por ejemplo, una segunda inmunoglobulina húmanizada) o fragmento de unión a antígeno del mismo que se una a una molécula expresada sobre la célula blanco o un fragmento de unión a antígeno de ésta. Cuando la molécula que se dirige a un blanco contiene un primer resto de unión que es una inmunoglobulina anti-CCR2 humanizada o un fragmento de unión a antígeno de ésta, se prefiere que la inmunoglobulina anti-CCR2 humanizada no inhiba la unión del ligando a CCR2. El primer resto de unión puede unirse directa o indirectamente al segundo resto de unión a través de una variedad de uniones adecuadas. Por ejemplo, cuando el primer resto de unión y el segundo resto de unión son ambos proteínas o péptidos, los restos pueden ser parte de un polipéptido contiguo (por ejemplo, una proteína de fusión) . Cuando la molécula que se dirige a un blanco es una proteína de fusión, los primeros y segundos restos de unión pueden estar dispues-tos sobre el polipéptido en cualquier configuración adecuada. Los primeros y segundos restos de unión pueden unirse indirectamente a través de un (es decir, uno o más) ligante peptídico o unirse directamente entre sí a través de un enlace peptídico. Cuando los restos de unión no forman parte de un polipéptido contiguo, pueden unirse directamente por un enlace químico formado por reacción de un grupo funcional (o derivado activado del mismo) sobre el primer resto con un segundo grupo funcional (o derivado activado del mismo) sobre el segundo resto. Por ejemplo, dos tioles pueden reaccionar para formar un enlace disulfuro y una amina puede reaccionar con un ácido carboxílico o haluro de acilo para formar una amida. Se conoce en la técnica una variedad de otras reaccio-nes adecuadas que pueden ser utilizadas (véase, por ejemplo, Hermanson, G.T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996) ) . Los restos de unión pueden unirse indirectamente a través de un ligante adecuado (por ejemplo, un ligante peptídico) . En general, un ligante contiene dos grupos reactivos que pueden reaccionar para formar enlaces con el primer resto de unión y/o el segundo resto de unión. Los ligantes que contienen dos grupos reactivos diferentes (por ejemplo, un ligante heterobifuncional) pueden ser usados para conjugar selectivamente el primer resto de unión al segundo resto de unión. Se conocen muchos ligantes que son adecuados para formar conjugados entre proteínas, ácidos nucleicos, péptidos, vitaminas, azúcares, lípidos, pequeñas moléculas orgánicas y otros agentes adecuados (véanse, por ejemplo, las Patentes EE.UU. N° 5.856.571, 5.880.270; Hermanson, G.T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996) ) . Preferiblemente, las actividades independientes de los restos de unión (por ejemplo, actividades de unión, actividad quimioatrayente) de la molécula que se dirige a un blanco no son significativamente diferentes de las actividades de los restos de unión como entidades moleculares separadas. Por ejemplo, cuando el primer resto de unión es una inmunoglobulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno que se une a CCR2 , la molécula que se dirige a un blanco pue-de unirse a CCR2 con una afinidad que está dentro de un factor de aproximadamente 1.000, preferiblemente dentro de un factor de 100, más preferiblemente dentro de un factor de 10 o substancialmente igual que la afinidad del anticuerpo libre o de un fragmento de unión a antígeno. Se pueden preparar mo- léculas blanco con estas características preferidas usando cualquier método adecuado. La molécula que se dirige a un blanco resultante puede ser estudiada en cuanto a unión (por ejemplo, por ELISA) y en cuanto a actividad de quimioatrac-ción. En una realización, la molécula que se dirige a un blanco es un anticuerpo humanizado biespecífico o un fragmento de unión a antígeno biespecífico del mismo (por ejemplo, F(ab')2) que tiene especificidad por el CCR2 de mamífero y una molécula expresada sobre una célula blanco (por ejemplo, antígeno tumoral, antígeno vírico). Los anticuerpos biespecíficos pueden ser segregados por triomas y por hibridomas híbridos. Los sobrenadantes de triomas y de hibridomas híbridos pueden ser estudiados en cuanto a anticuerpo biespe-cífico usando un ensayo adecuado (por ejemplo, ELISA) y los anticuerpos biespecíficos pueden ser purificados usando métodos convencionales. Estos anticuerpos pueden ser entonces humanizados según métodos aquí descritos. Por lo tanto, la invención proporciona una molécula que se dirige a un blanco y que es un anticuerpo biespecífico humanizado que tiene especificidad de unión por CCR2 y un antígeno expresado sobre una célula blanco, o un fragmento de unión a antígeno bivalente del anticuerpo biespecífico. La invención se relaciona también con un método para efectuar la interacción de una cé-lula portadora de CCR2 con una célula blanco en un paciente, consistente en administrar al paciente una cantidad efectiva de una molécula que se dirige a un blanco y que es un anticuerpo biespecífico humanizado que tiene especificidad de unión por CCR2 y un antígeno expresado sobre una célula blan-co, o un fragmento de unión a antígeno bivalente del anticuerpo biespecífico. Método de producción de inmunoglobulinas humanizadas que tienen especificidad por CCR2 Otro aspecto de la invención se relaciona con un método de preparación de una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2. La inmunoglobulina humanizada puede ser obtenida, por ejemplo, por expresión de uno o más ácidos nucleicos recombinantes codificantes de una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 en una célula huésped adecuada, por ejemplo. También se proporcionan constructos o vectores de expresión adecuados para la expresión de una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2. Los constructos pueden ser introducidos en una célula huésped adecuada y las células que expresan una inmunoglobulina humanizada de la presente invención pueden ser producidas y mantenidas en cultivo. Las células huésped adecuadas pueden ser procarióticas, incluyendo células bacterianas tales como E. coli , B . subtilis y/o otras bacterias adecuadas, o eucarióticas, tales como células fúngicas o de levaduras (por ejemplo, Pichia pastoris, Aspergillus species, Saccharomyces cerevi siae, Schizosaccharomyces pombe, Neurospora crassa) u otras células eucarióticas inferiores, y células de eucariontes su-periores, tales como las de insectos (por ejemplo, células de insecto Sf9 (WO 94/26087, O'Connor, publicada el 24 de Noviembre de 1994) ) o de mamíferos (por ejemplo, células COS, tales como COS-1 (N° de Acceso ATCC CRL-1650) y COS-7 (N° de Acceso ATCC CRL-1651) , CHO (por ejemplo, N° de Acceso ATCC CRL-9096) , 293 (N° de Acceso ATCC CRL-1573), HeLa (N° de Acceso ATCC CCL-2), CV1 (N° de Acceso ATCC CCL-70) , WOP (Dailey y col., J". Virol . 54 : 739-749 (1985)), 3T3, 293T (Pear y col., Proc . Natl . Acad. Sci . U. S . A . 90 : 8392-8396 (1993)), células NSO, SP2/0, células HuT 78 y similares (véase, por ejemplo, Ausubel, F.M. y col., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons Inc. (1993) ) . Las células huésped que producen una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 pueden ser producidas como se indica a continuación. Por ejemplo, se puede insertar un ácido nucleico codificante de toda o de parte de la secuencia codificante para la inmuno-globulina humanizada deseada en un vector de ácido nucleico, por ejemplo un vector de ADN, tal como un plásmido, virus u otro replicón adecuado para expresión. Se dispone de una variedad de vectores, incluyendo vectores que se mantienen en una sola copia o en copias múltiples, o que se integran en el cromosoma de la célula huésped. Los vectores de expresión adecuados pueden contener una serie de componentes, incluyendo, aunque sin limitación, uno o más de los siguientes: un origen de replicación, un gen marcador seleccionable, uno o más elementos para el control de la expresión, tales como un elemento para el con-trol de la transcripción (por ejemplo, un promotor, un intensificador, un finalizador) , y/o una o más señales de traducción; una secuencia de señal o secuencia líder para dirigirse a membranas o para la secreción. En un constructo, se puede disponer de una secuencia de señal gracias al vector o a otra fuente. Por ejemplo, se pueden usar señales de transcripción y/o de traducción de una inmunoglobulina para dirigir la expresión. Se puede disponer de un' promotor para expresión en una célula huésped adecuada. Los promotores pueden ser constitutivos o inducibles. Por ejemplo, se puede unir de un modo operable un promotor a un ácido nucleico codificante de una inmunoglobulina o cadena de inmunoglobulina humanizada, de tal forma que dirija la expresión del polipéptido codificado. Se dispone de una variedad de promotores adecuados para hospedadores procarióticos (por ejemplo, promotores lac, tc, T3 , T7 para E. coli ) y eucarióticos (por ejemplo, alcohol deshidrogenasa de levaduras (ADH1) , SV40, CMV) . Además, los vectores de expresión contienen típicamente un marcador seleccionable para selección de células huésped que llevan el vector y, en el caso de un vector de expresión replicable, un origen de replicación. Los genes codificantes de productos que confieren resistencia a antibióticos o fármacos son marcadores seleccionables comunes y pueden ser usados en células procarióticas (por ejemplo, gen de la ß-lactamasa (resistencia a ampicilina) , gen Tet para resistencia a tetraciclina) y eucarióticas (por ejemplo, genes de resistencia a neomicina (G418 o geneticina) , gpt (ácido micofenólico) , ampicilina o higromicina. Los genes márcadores de la dihidrofolato reductasa permiten la selección con metotrexato en una variedad de hospedadores. Los genes codificantes del producto génico de marcadores auxotróficos del hospedador (por ejemplo, LEU2 , URA3 , HIS3) son frecuentemente usados como marcadores seleccionables en levaduras. También se contempla el uso de vectores víricos (por ejemplo, baculovirus) o de fagos y vectores que son capaces de integrarse en el genoma de la célula huésped, tales como los vectores re-trovíricos. En una realización, el vector es pLKTOK38. La presente invención se relaciona también con células portado-ras de estos vectores de expresión. Un vector de expresión consiste en un gen fusionado codificante de una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada, cuyo gen contiene una secuencia de nucleótidos codificante de una CDR derivada de una cadena ligera de un anticuerpo no humano que tiene especificidad de unión por CCR2 y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano. Así, la invención incluye un vector de expresión que contiene un gen codificante de una cadena ligera de inmu-noglobulina humanizada, cuyo gen contiene una secuencia de nucleótidos codificante de una CDR derivada de una cadena ligera de un anticuerpo no humano que tiene especificidad de unión por CCR2 y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano. La invención se relaciona también con un vector de expresión que contiene un gen codificante de una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada, cuyo gen contiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de una cadena pesada de un anticuerpo no humano que tiene especificidad de unión por CCR2 y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano. En una realización, el anticuerpo no humano es el anticuerpo murino 1D9. La invención también incluye células huésped que contienen los vectores de expresión de la invención. La invención se relaciona también con un gen aislado o recombinante codificante de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina humanizada que contiene una primera secuencia de ácido nucleico codificante de una región de unión a antígeno derivada del anticuerpo monoclonal murino 1D9 y una segunda secuencia de ácido nucleico codificante de al menos una porción de una región constante de una inmunoglobulina de origen humano. La invención se relaciona también con una célula huésped (por ejemplo, que expresa una inmunoglobulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2) que contiene una primera molécula de ácido nucleico recombinante codificante de una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de la misma y una segunda molécula de ácido nucleico recombinante codificante de una cadena pesada de inmunoglobulina humaniza-da o fragmento de la misma, donde dicha primera molécula de ácido nucleico tiene una secuencia de nucleótidos codificante de una CDR derivada de la cadena ligera del anticuerpo murino 1D9 y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano, y donde dicha segunda molécula de ácido nu-cleico tiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de la cadena pesada del anticuerpo murino 1D9 y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano. La invención también incluye un método de preparación de una inmunoglobulina humanizada o de un fragmento de unión a antígeno de la misma, consistente en mantener una célula huésped de la invención en condiciones apropiadas para la expresión de una inmunoglobulina humanizada, mediante lo cual se expresan las cadenas de inmunoglobulina humanizada y se produce una inmunoglobulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno de la misma con especificidad para el CCR2. El método puede consistir también en la etapa de aislamiento de la inmunoglobulina humanizada o fragmento de la misma. Por ejemplo, se puede introducir una molécula de ácido nucleico (es decir, una o más moléculas de ácido nucleico) codificante de las cadenas pesadas y ligeras de una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por CCR2 , o un constructo (es decir, uno o más constructos) que contiene dicha (s) molécula (s) de ácido nucleico en una célula huésped adecuada mediante un método apropiado para la célula huésped seleccionada (por ejemplo, transformación, transfección, electroporación, infección) , de tal forma que la(s) molécula (s) de ácido nucleico se une (n) operablemente a uno o más elementos para el control de la expresión (por ejemplo, en un vector, en un constructo creado por procesos en la célula, integrada en el genoma de la célula huésped) . Las células huésped pueden ser mantenidas en condiciones adecuadas para la expresión (por ejemplo, en presencia de un inductor, medios adecuados suplementados con sales apropiadas, factores de crecimiento, antibiótico, suplementos nutricionales, etc.), mediante lo cual se produce (n) el (los) polipéptido (s) codificado (s) . Si se desea, la proteína codificada (por ejemplo, anticuerpo 1D9 humanizado) puede ser aislada de, por ejemplo, las células huésped, el medio, la leche. Este proce-dimiento incluye la expresión en una célula huésped de un animal transgénico (véase WO 92/03918, GenPharm International, publicada el 19 de Marzo de 1992) . Se pueden producir proteínas de fusión en las que una inmunoglobulina o cadena de inmunoglobulina humanizada está unida a un resto distinto de inmunoglobulina (es decir, un resto que no aparece en las inmunoglobulinas tal como se encuentran en la naturaleza) en una localización N-terminal, una localización C-terminal o internas a la proteína de fu-sión. Por ejemplo, se pueden producir algunas realizaciones mediante inserción de un ácido nucleico codificante de secuencias de inmunoglobulinas en un vector de expresión adecuado, tal como un vector pET (por ejemplo, pET-15b, Nova-gen) , un vector de fago (por ejemplo, pCANTAB 5 E, Pharmacia) u otro vector (por ejemplo, vector de fusión pRIT2T Proteína A, Pharmacia) . El constructo resultante puede ser introducido en una célula huésped adecuada para expresión. Al expresarse, algunas proteínas de fusión pueden ser aisladas o purificadas de un lisado celular por medio de una matriz de afinidad ade-cuada (véase, por ejemplo, Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F.M. y col., eds., Vol. 2, Supl. 26, pp. 16.4.1-16.7.8 (1991) ) . Métodos y composiciones terapéuticas La presente invención proporciona inmunoglobuli-ñas humanizadas que (1) pueden unirse a CCR2 in vi tro y/o in vivo y (2) puede modular una actividad o función de CCR2 , tal como (a) una función de unión (por ejemplo, la capacidad de CCR2 para unirse a un ligando) y/o (b) el tráfico de leucocitos, incluyendo el reclutamiento y/o la acumulación de leuco-citos en los tejidos. Preferiblemente, las inmunoglobulinas humanizadas son capaces de unirse selectivamente a CCR2 in vi tro y/o in vivo y de inhibir las interacciones mediadas por CCR2. En una realización, una inmunoglobulina humanizada puede unirse a CCR2 y puede inhibir la unión de CCR2 a uno o más de sus ligandos (por ejemplo, HIV, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4) . Las inmunoglobulinas humanizadas de la presente invención son útiles en una variedad de procedimientos con aplicaciones en investigación, diagnóstico y terapia. Por ejemplo, pueden ser usadas para detectar, aislar y/o purificar CCR2 o varian- tes de éste (por ejemplo, por purificación de afinidad u otros métodos adecuados) y para estudiar la estructura de CCR2 (por ejemplo, la conformación) y su función. Las inmuno-globulinas humanizadas de la presente invención pueden ser usadas también en aplicaciones de diagnóstico (por ejemplo, in vi tro, ex vivo) o para modular la función de CCR2 en aplicaciones terapéuticas (incluidas las profilácticas) . Por ejemplo, las inmunoglobulinas humanizadas de la presente invención pueden ser usadas para detectar y/o me-dir el nivel de CCR2 en una muestra (por ejemplo, tejidos o fluidos corporales, tal como un exudado inflamatorio, sangre, suero, fluido intestinal, sobre células portadoras de CCR2) . Por ejemplo, se puede obtener una muestra (por ejemplo, tejido y/o fluido corporal) de un individuo y se puede usar un método inmunológico adecuado para detectar y/o medir la expresión de CCR2 , incluyendo métodos tales como los ensayos inmunosorbentes ligados a enzimas (ELISA) , ensayos quimioluminiscentes, radioinmunoensayo e inmunohistología. En una realización, se proporciona un método de detección de un CCR2 seleccionado en una muestra, consistente en poner en contacto una muestra con una inmunoglobulina humanizada de la presente invención en condiciones adecuadas para la unión específica de la inmunoglobulina humanizada a CCR2 y detectar los complejos de anticuerpo-CCR2 que se forman. En una aplicación del método, se pueden usar inmunoglobulinas humanizadas para analizar los tejidos normales frente a los inflamados (por ejemplo, de un humano) en cuanto a la reactividad y/o la expresión de CCR2 (por ejemplo, inmunohistológicamente) , para detectar asociaciones entre condiciones particulares y una mayor expresión de CCR2 (por ejemplo, en tejidos afectados) .

Las inmunoglobulinas humanizadas de la presente invención permiten métodos inmunológicos de valoración de la presencia de CCR2 en tejidos normales frente a inflamados, mediante los cuales se puede determinar la presencia de la enfermedad, el progreso de la enfermedad y/o la eficacia de la terapia con integrinas anti-CCR2 en la enfermedad inflamatoria. Las inmunoglobulinas humanizadas de la presente invención pueden ser también usadas para modular (por ejem-pío, inhibir (reducir o prevenir) ) la función de unión y/o el tráfico de leucocitos (por ejemplo, linfocitos, monocitos) modulado por CCR2. Por ejemplo, se pueden administrar inmuno-globulinas humanizadas que inhiben la unión de CCR2 a un ligando (es decir, uno o más ligandos) según el método en el tratamiento de enfermedades asociadas con la infiltración de leucocitos (por ejemplo, linfocitos, monocitos) de los tejidos. Adicionalmente, las inmunoglobulinas humanizadas que inhiben la unión de CCR2 a un ligando (es decir, uno o más ligandos) pueden ser administradas según el método en el trata-miento del HIV. Se administra una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada de la presente invención (es decir, una o más) a un individuo (por ejemplo, un mamífero, tal como un humano u otro primate) para tratar dicha enfermedad. La inmunoglobulina humanizada es administrada en una cantidad efectiva que inhibe la unión de CCR2 a un ligando del mismo. Para terapia, una cantidad efectiva será suficiente para alcanzar el efecto terapéutico (incluido el profiláctico) deseado (tal como una cantidad suficiente para reducir o prevenir la unión y/o la señalización mediada por CCR2) . La inmunoglobulina humanizada puede ser administrada en una sola dosis o en dosis múltiples. La dosificación puede ser determinada por métodos conocidos en la técnica y puede depender, por ejemplo, de la edad del individuo, de la sensibilidad, de la tolerancia y del estado general de salud. Las dosificaciones adecuadas para anticuerpos pueden ser de aproximadamente 0 , 1 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 10,0 mg/kg de peso corporal por tratamiento. Según el método, la inmunoglobulina humanizada puede ser administrada a un individuo (por ejemplo, un huma- no) sola o junto con otro agente. Una inmunoglobulina humanizada puede ser administrada antes, junto con o a continuación de la administración del agente adicional. Así, la invención incluye composiciones farmacéuticas consistentes en una inmu-noglobulina humanizada o un fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención y un vehículo adecuado. En una realización, se administra más de una inmunoglobulina humanizada que inhibe la unión de CCR2 a sus ligandos. En otra realización, se administra un anticuerpo monoclonal adicional además de una inmunoglobulina humanizada de la presente invención. En aún otra realización, se puede administrar un ingrediente farmacológicamente activo adicional (por ejemplo, un compuesto antiinflamatorio, tal como sulfasalazina, otro compuesto antiinflamatorio no esteroideo o un compuesto antiinflamato-rio esteroideo) junto con una inmunoglobulina humanizada de la presente invención. Son posibles una variedad de vías de administración, incluyendo, aunque sin limitarse necesariamente a ellas, la parenteral (por ejemplo, inyección intravenosa, in-traarterial, intramuscular o subcutánea) , la oral (por ejemplo, a través de la dieta) , la tópica, la inhalatoria (por ejemplo, intrabronquial, inhalación intranasal u oral, gotas intranasales) o la rectal, dependiendo de la enfermedad o condición que haya de ser tratada. La administración parente-ral es un modo preferido de administración. La formulación variará según la vía de administración seleccionada (por ejemplo, solución, emulsión) . Una composición apropiada que contenga el anticuerpo humanizado que ha de ser administrado puede ser preparada en un vehículo o soporte fisiológicamente aceptable. Para las soluciones o emulsiones, como soportes adecuados se incluyen, por ejemplo, soluciones, emulsiones o suspensiones acuosas o alcohólicas/acuosas, incluyendo medios salinos y tamponados . Los vehículos parenterales pueden incluir solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, Rin-ger-lactato o aceites fijos. Los vehículos intravenosos pueden incluir diversos aditivos, conservantes o fluidos, nutrientes o reponedores de electrolitos (véase, en general, Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 17a Edición, Mack Publishing Co., PA, 1985). Para la inhalación, el compuesto puede ser solubilizado y cargado en un dispensador adecuado para administración (por ejemplo, un atomizador, nebulizador o dispensador de aerosol presurizado) . Por lo tanto, la invención incluye un método de inhibición de la infección por HIV de una célula, consistente en poner en contacto una célula con una cantidad efectiva de una composición que incluye una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención. La invención se relaciona también con un método de tratamiento del HIV o de inhibición de la infección por HIV en un paciente, que consiste en administrar al paciente una composición que incluye una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o de un fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención. La invención se relaciona también con un método de inhibición de una función asociada a la unión de una quimiokina a CCR2 de mamífero o a una porción funcional de CCR2 , consistente en poner en contacto una composición que contiene CCR2 o una porción del mismo con una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de ésta de la invención, donde dicha inmunoglobulina humanizada inhibe la unión de la quimiokina al CCR2 de mamífero e inhibe una o más funciones asociadas a la unión de la quimiokina a CCR2. Por ejemplo, la quimiokina puede ser seleccionada entre el grupo consistente en MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4 y sus combinaciones . La invención se relaciona también con un método de inhibición del tráfico de leucocitos en un paciente, con- sistente en administrar al paciente una composición que contiene una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención que se une a CCR2 de mamífero e inhibe la unión de un ligando al receptor. Por ejemplo, el ligando puede ser una quimiokina (por ejemplo, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4) o HIV. La invención se relaciona también con un método de inhibición de la interacción de una primera célula que expresa CCR2 con un ligando (por ejemplo, sobre una segunda cé-lula que expresa un ligando de CCR2) , que consiste en poner en contacto la primera célula con una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o de un fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención, particularmente donde dicha inmunoglobulina o fragmento inhibe la unión del ligando a CCR2. Por ejemplo, la célula puede ser seleccionada entre el grupo consistente en linfocitos, monocitos, granulocitos, células T, basófilos y células que contienen un ácido nucleico recombinante codificante de CCR2 o de una porción del mismo. En una realización, el ligando es una quimiokina (por ejemplo, MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4) . En otra realización, el ligando es HIV. La invención también incluye un método de tratamiento de un trastorno mediado por CCR2 en un paciente, consistente en administrar al paciente una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención que se une a CCR2 de mamífero. El trastorno puede incluir, aunque sin limitación, alergia, aterogénesis, anafilaxia, malignidad, trastornos inflamatorios crónicos y agudos, reacciones alérgicas mediadas por histamina y por IgE, shock y artritis reumatoide, aterosclerosis, esclerosis múltiple, estenosis, re-estenosis, rechazo de aloinjertos, enfermedad fibrótica, asma y glomerulopatías inflamatorias . En una realización particular, la invención se relaciona con un método de inhibición de la re-estenosis en un paciente, que consiste en administrar al paciente una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención que se une a CCR2 de mamífero. La invención también incluye una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención para uso en terapia o diagnóstico o para uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por CCR2. La invención también incluye el uso de una inmunoglobu-lina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la invención para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad mediada por CCR2. También se proporcionan anticuerpos antiidiotípi-cos . Los anticuerpos antiidiotípicos reconocen determinantes antigénicos asociados con el sitio de unión a antígeno de otro anticuerpo. Los anticuerpos antiidiotípicos pueden ser preparados frente a un segundo anticuerpo por inmunización de un animal de la misma especie y, preferiblemente, de la misma raza, que el animal usado para producir el segundo anticuer-po. Véase, por ejemplo, la Patente EE.UU. N° 4.699.880. La presente invención se relaciona también con las líneas celulares de hibridoma depositadas bajo los N° de Acceso ATCC HB-12549 y HB-12550, así como con los anticuerpos monoclonales producidos por las líneas celulares de hibridoma depositadas bajo los N° de Acceso ATCC HB-12549 y HB-12550. Las líneas celulares de la presente invención tienen usos distintos de los de la producción de los anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, las líneas celulares de la presente invención pueden fusionarse con otras células (tales como célu-las adecuadamente marcadas con fármacos de mieloma humano, mieloma murino, heteromieloma humano-murino o linfoblastoides humanas) para producir hibridomas adicionales y permitir así la transferencia de los genes codificantes de los anticuerpos monoclonales. Además, las líneas celulares pueden ser usadas como fuente de ácidos nucleicos codificantes de las cadenas de inmunoglobulinas anti-CCR2, que pueden ser aisladas y expresadas (por ejemplo tras la transferencia a otras células usando cualquier técnica adecuada (véanse, por ejemplo, Cabi-lly y col., Patente EE.UU. N° 4.816.567; Winter, Patente EE.UU. N° 5.225.539)). Por ejemplo, se pueden aislar clones que contienen una cadena ligera o pesada anti-CCR2 reorganizada (por ejemplo, por PCR) o se pueden preparar librerías de ADNc a partir de ARNm aislado de las líneas celulares y se pueden aislar clones de ADNc codificantes de una cadena de inmunoglobulina anti-CCR2. Así, se pueden obtener ácidos nucleicos codificantes de las cadenas pesadas y/o ligeras de los anticuerpos o porciones de los mismos y usarlos según técnicas de ADN recombinantes para la producción de la inmu-noglobulina específica, de la cadena de inmunoglobulina o de variantes de la misma (por ejemplo, inmunoglobulinas humanizadas) en una variedad de células huésped o en sistema de traducción in vi tro . Por ejemplo, se pueden poner los ácidos nucleicos, incluidos los ADNc, o sus derivados codificantes de variantes tales como una inmunoglobulina o cadena de inmunoglobulina humanizada en vectores procarióticos o eucarióticos adecuados (por ejemplo, vectores de expresión) e introducirlos en una célula huésped adecuada por un método apropiado (por ejemplo, transformación, transfección, electroporación, infección) , de tal forma que el ácido nucleico se una operablemente a uno o más elementos para el control de la expresión (por ejemplo, en el vector o integrado en el genoma de la célula huésped) . Para la producción, las células huésped pueden ser mantenidas en condiciones adecuadas para la expre-sión (por ejemplo, en presencia de inductor, medios adecuados suplementados con sales apropiadas, factores de crecimiento, antibióticos, suplementos nutricionales, etc.), mediante lo cual se produce el polipéptido codificado. Si se desea, se puede recuperar y/o aislar la proteína codificada (por ejem- pío, a partir de las células huésped, del medio, de la leche) . Se apreciará que el método de producción incluye la expresión en una célula huésped de un animal transgénico (véase WO 92/03918, GenPharm International, publicada el 19 de Marzo de 1992) . Tal como se describe aquí, los anticuerpos y sus fragmentos funcionales de la presente invención pueden bloquear (inhibir) la unión de un ligando a CCR2 y/o inhibir la función asociada con la unión del ligando al CCR2. Tal como se discute a continuación, se pueden usar varios métodos para valorar la inhibición de la unión de un ligando a CCR2 y/o la función asociada a la unión del ligando al receptor. Ensayos de unión Tal como se usa aquí, "proteína CCR2 de mamífero" se refiere a proteínas CCR2 de mamífero naturales o endógenas y a proteínas que tienen una secuencia de aminoácidos que es la misma que la de una proteína CCR2 de mamífero natural o endógena correspondiente (por ejemplo, proteínas recombinantes) . En consecuencia, según se define aquí, el término in-cluye la proteína del receptor maduro, variantes polimórficas o alélicas y otras isoformas de un CCR2 de mamífero (por ejemplo, producidas por ayustamiento alternativo u otros procesos celulares) y formas modificadas o no modificadas de las anteriores (por ejemplo, glicosiladas y no glicosiladas) . Las proteínas CCR2 de mamífero pueden ser proteínas aisladas y/o recombinantes (incluyendo las proteínas producidas sintéticamente) . Las proteínas CCR2 de mamífero naturales o endógenas incluyen proteínas de tipo salvaje tales como el CCR2 maduro, variantes polimórficas o alélicas y otras isoformas que se producen de manera natural en mamíferos (por ejemplo, humanos, primates no humanos) , tales como las formas CCR2a y CCR2b de la proteína del receptor, que se producen por ayustamiento alternativo del extremo carboxi de la proteína. Dichas proteínas pueden ser recuperadas o aisladas de una fuen- te que produce CCR2 de mamífero de manera natural, por ejemplo. Se hace referencia a estas proteínas y las proteínas CCR2 de mamífero que tienen la misma secuencia de aminoácidos que el CCR2 de mamífero correspondiente natural o endógeno por el nombre del mamífero correspondiente. Por ejemplo, cuando el mamífero correspondiente es un humano, la proteína es denominada proteína CCR2 humana (por ejemplo, CCR2 humano recombinante producido en una célula huésped adecuada) . Las "variantes funcionales" de las proteínas CCR2 de mamífero incluyen fragmentos funcionales, proteínas mutantes funcionales y/o proteínas de fusión funcionales (por ejemplo, producidas por mutagénesis y/o técnicas recombinantes) . En general, los fragmentos o porciones de las proteínas CCR2 de mamífero incluyen los que tienen una deleción (es de-cir, una o más deleciones) de un aminoácido (es decir, uno o más aminoácidos) en relación a la proteína del CCR2 de mamífero maduro (tal como deleciones N-terminales, C-terminales o internas) . También se contemplan fragmentos o porciones en los que sólo se han suprimido aminoácidos contiguos o en los que se han suprimido aminoácidos no contiguos en relación a la proteína del CCR2 de mamífero maduro. En general, los mutantes de las proteínas del CCR2 de mamífero incluyen variantes naturales o artificiales de una proteína de CCR2 de mamífero que difieren por la adi-ción, deleción y/o substitución de uno o más residuos de aminoácido contiguos o no contiguos (por ejemplo, quimeras de receptores) . Dichas mutaciones pueden estar en una región conservada o en una región no conservada (en comparación con otros receptores de quimiokinas CXC y/o CC) , ser extracelula-res o citoplásmico o estar en una región de transmembrana, por ejemplo. En general, las proteínas de fusión incluyen polipéptidos que contienen un CCR2 de mamífero (por ejemplo, CCR2 humano) como primer resto, unido mediante un enlace pep- tídico a un segundo resto que no aparece en el CCR2 de mamífero tal como se encuentra en la naturaleza. Así, el segundo resto puede ser un aminoácido, un oligopéptido o un polipéptido. El primer resto puede estar en una localización N-terminal, una localización C-terminal o interno a la proteína de fusión. En una realización, la proteína de fusión incluye un ligando de afinidad (por ejemplo, una enzima, un antígeno, un mareaje epitópico) como primer resto y un segundo resto consistente en una secuencia ligante y CCR2 humano o una por-ción del mismo. Un "fragmento o porción funcional" "mutante funcional" y/o "proteína de fusión funcional" de una proteína de CCR2 de mamífero se refiere a una proteína o polipéptido aislado y/o recombinante que tiene al menos una función caracte-rística de una proteína CCR2 de mamífero tal como aquí se describe, tal como una actividad de unión, una actividad de señalización y/o capacidad para estimular una respuesta celular. Las variantes funcionales preferidas pueden unirse a un ligando (es decir, uno o más ligandos, tales como MCP-1, MCP-2, MCP-3 y/o MCP-4) y se hace referencia a ellas aquí como "variantes de unión a ligando" . En una realización, una variante funcional de CCR2 de mamífero comparte al menos un 85% de identidad de secuencia con dicho CCR2 de mamífero, preferiblemente al menos un 90% de identidad de secuencia y, más preferiblemente, al menos aproximadamente un 95% de identidad de secuencia con dicho CCR2 de mamífero. Las secuencias de ácido nucleico y de aminoácidos de los CCR2a y CCR2b humanos están descritas en la Patente EE.UU. N° 5.707.815. La identidad de secuencia puede ser determinada usando un programa adecuado, tal como el programa Blastx (Versión 1.4), usando parámetros apropiados, tales como parámetros de defecto. En una realización, los parámetros para la búsqueda Blastx son la matriz de puntuación BLOSUM62, W=3. En otra realización, una variante fun- cional consiste en una secuencia de ácido nucleico que es diferente de la molécula de ácido nucleico natural, pero que, debido a la degeneración del código genético, codifica para CCR2 de mamífero o una porción del mismo. Se puede mantener una composición que contiene un CCR2 de mamífero aislado y/o recombinante o variante funcional del mismo en condiciones adecuadas para unión, se pone en contacto el CCR2 de mamífero o variante con un anticuerpo o fragmento de ensayo y se detecta o mide la unión directa o indirectamente. En una realización, se usan células que expresan de manera natural CCR2 o células que contienen una secuencia de ácido nucleico recombinante que codifica para un CCR2 de mamífero o variante del mismo. Las células son mantenidas en condiciones apropiadas para la expresión del recep-tor. Las células son puestas en contacto con un anticuerpo o fragmento en condiciones adecuadas para la unión (por ejemplo, en un tampón de unión adecuado) y se detecta la unión por técnicas estándar. Para determinar la unión, se puede determinar el grado de unión en relación a un control adecuado (por ejemplo, en comparación con el fondo determinado en ausencia de anticuerpo, en comparación con la unión de un segundo anticuerpo (es decir, un patrón) , en comparación con la unión de anticuerpo a células no transfectadas) . Se puede usar una fracción celular, tal como una fracción de membrana, que contenga receptor o liposomas que contengan el receptor en lugar de células enteras. En una realización, se marca el anticuerpo con un mareaje adecuado (por ejemplo, mareaje fluorescente, mareaje isotópico, mareaje antigénico o epitópico, mareaje enzimáti-co) y se determina la unión por detección del mareaje. En otra realización, se puede detectar el anticuerpo unido por un segundo anticuerpo marcado. Se puede valorar la especificidad de la unión por competición o desplazamiento, por ejemplo usando anticuerpo no marcado o un ligando como competí- dor. También se pueden utilizar los ensayos de inhibición de la unión para identificar anticuerpos o fragmentos de éstos que se unen a CCR2 e inhiben la unión a otro compuesto, tal como un ligando (por ejemplo, MCP-1, MCP-2, MCP-3 y/o MCP-4) a CCR2 o a una variante funcional del mismo. Por ejemplo, se puede realizar un ensayo de unión en el que se detecta o mide la reducción en la unión de un ligando de CCR2 (en presencia de un anticuerpo) , en comparación con la unión del ligando en ausencia del anticuerpo. Se puede poner en contacto una composición que contenga un CCR2 de mamífero aislado y/o recombinante o una variante funcional del mismo con el ligando y el anticuerpo simultáneamente, o uno después del otro en cualquier orden. Una reducción en el grado de unión del ligando en presencia del anticuerpo es indicativa de inhibición de la unión por el anticuerpo. Por ejemplo, la unión del ligando podría disminuir o quedar abolida. En una realización, se monitoriza la inhibición directa de la unión de un ligando (por ejemplo, una quimioki-na tal como MCP-1) a un CCR2 de mamífero o variante del mismo por un anticuerpo o fragmento. Por ejemplo, se puede monito-rizar la capacidad de un anticuerpo para inhibir la unión de MCP-1 marcado con 125I, de MCP-2 marcado con 125I, de MCP-3 marcado con 125I o de MCP-4 marcado con 125I a un CCR2 de mamí-fero. Dicho ensayo puede ser conducido usando células adecuadas portadoras de CCR2 o de una variante funcional del mismo, tales como células sanguíneas aisladas (por ejemplo, células T, PBMC), o una línea celular adecuada que exprese CCR2 , o una línea celular que contenga ácido nucleico codificante de un CCR2 de mamífero, o una fracción de membrana de dichas células, por ejemplo. Se dispone de otros métodos de identificación de la presencia de un anticuerpo que se une a CCR2 , tales como otros ensayos de unión adecuado, o métodos que monitorizan sucesos que son disparados por la unión de receptores, incluyendo la función de señalización y/o la estimulación de una respuesta celular (por ejemplo, tráfico de leucocitos) . Se entenderá que el efecto inhibitorio de los an- ticuerpos de la presente invención puede ser determinado en un ensayo de inhibición de la unión. La competición entre anticuerpos por la unión al receptor puede ser también valorada en el método. Los anticuerpos que se identifican de este modo pueden ser valorados además para determinar si, a continúación de la unión, actúan inhibiendo otras funciones de CCR2 y/o para valorar su utilidad terapéutica. Ensayos de señalización La unión de un ligando o promotor, tal como un agonista, a CCR2 puede dar lugar a señalización por este re- ceptor acoplado a proteína G y se estimula la actividad de las proteínas G, así como otras moléculas de señalización intracelulares. Se puede monitorizar la inducción de la función de señalización por un compuesto (por ejemplo, un anticuerpo o fragmento del mismo) usando cualquier método adecuado. Di-• cho ensayo puede ser empleado para identificar agonistas de anticuerpo de CCR2. Se puede determinar la actividad inhibitoria de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo usando un ligando o promotor en el ensayo y determinando la capacidad del anticuerpo para inhibir la actividad inducida por el ligando o el promotor. La actividad de la proteína G, tal como hidrólisis de GTP a GDP, o los posteriores fenómenos de señalización disparados por la unión a receptores, tal como inducción de un aumento rápido y transitorio en la concentración de calcio libre intracelular (citosólico) [Ca2+]i, pueden ser estudiados por métodos conocidos en la técnica o por otros métodos adecuados (véanse, por ejemplo, Neote, K. y col., Cell , 72 : 415- 425 (1993); Van Riper y col., J. Exp . Med . , 177 : 851-856 (1993); Dahinden, C.A. y col., J. Exp. Med . , 179 : 751-756 (1994) ) . Por ejemplo, se puede utilizar el ensayo funcional de Sledziewski y col . usando receptores acoplados a proteína G híbrida para monitorizar la capacidad de un ligando o promotor para unirse al receptor y activar una proteína G (Sledziewski y col., Patente EE.UU. N° 5.284.746, cuyas enseñanzas son aquí incorporadas como referencia) . Dichos ensayos pueden ser llevados a cabo en presencia del anticuerpo o fragmento del mismo que ha de ser va-lorado y la capacidad del anticuerpo o fragmento para inhibir la actividad inducida por el ligando o promotor es determinada usando métodos conocidos y/o los métodos aquí descritos. Quimiotaxis y ensayos de estimulación celular Se pueden usar también ensayos de quimiotaxis pa-ra determinar la capacidad de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo para bloquear la unión de un ligando a un CCR2 de mamífero o variante funcional del mismo y/o para inhibir la función asociada a la unión del ligando al receptor. Estos ensayos se basan en la migración funcional de las célu-las in vi tro o in vivo inducida por un compuesto. Se puede valorar la quimiotaxis según se describe en los Ejemplos, v.g., en un ensayo que utiliza una placa de quimiotaxis de 96 pocilios, o usando otros métodos reconocidos en la técnica para valorar la quimiotaxis. Por ejemplo, el uso de un ensayo de quimiotaxis transendotelial in vi tro está descrito por Springer y col. (Springer y col., WO 94/20142, publicada el 15 de Septiembre de 1994, cuyas enseñanzas son aquí incorporadas como referencia; véase también Berman y col., Immunol . Invest . 17 : 625-677 (1988)). También se ha descrito la migra-ción a través del endotelio hacia geles de colágeno (Kavanaugh y col., J". I munol . , 146 : 4149-4156 (1991)). Se pueden utilizar en los ensayos de quimiotaxis transfectantes estables de células pre-B Ll-2 de ratón o de otras células huésped adecuadas capaces de quimiotaxis, por ejemplo.

En general, los ensayos de quimiotaxis monitorizan el movimiento direccional o la migración de una célula adecuada (tal como un leucocito (por ejemplo, linfocito, eosinófilo, basófilo) ) hacia o a través de una barrera (por ejemplo, endotelio, un filtro) , hacia mayores niveles de un compuesto, desde una primera superficie de la barrera hacia una segunda superficie opuesta. Las membranas o filtros proporcionan barreras convenientes, de tal forma que se monito-riza el movimiento direccional o la migración de una célula adecuada hacia o a través de un filtro, hacia mayores niveles de un compuesto, desde una primera superficie del filtro hacia una segunda superficie opuesta del filtro. En algunos ensayos, se reviste la membrana con una substancia para facilitar la adhesión, tal como ICAM-1, fibronectina o colágeno. Dichos ensayos proporcionan una aproximación in vi tro de la "migración" leucocitaria. Por ejemplo, se puede detectar o medir la inhibición de la migración de las células en un recipiente adecuado (un medio de contención) desde una primera cámara hacia o a través de una membrana microporosa hacia una segunda cámara que contiene un anticuerpo que ha de ser estudiado y que se divide de la primera cámara por la membrana. Se selecciona una membrana adecuada, que tiene un tamaño de poro adecuado para monitorizar la migración específica en respuesta a un compuesto, que incluye, por ejemplo, nitrocelulosa o policarbonato. Por ejemplo, se pueden usar tamaños de poro de aproximadamente 3-8 mieras y, preferiblemente, de aproximadamente 5-8 mieras. El tamaño de poro puede ser uniforme sobre un filtro o estar dentro de un rango de tamaños de poro ade-cuados. Para valorar la migración y la inhibición de la migración, se puede determinar la distancia de migración en el filtro, el número de células que cruzan el filtro que permanecen adheridas a la segunda superficie del filtro y/o el número de células que se acumulan en la segunda cámara usando técnicas estándar (por ejemplo, microscopía) . En una realización, se marcan las células con un mareaje detectable (por ejemplo, radioisótopo, mareaje fluorescente, mareaje antigé-nico o epitópico) y se puede valorar la migración en presencia y ausencia del anticuerpo o fragmento determinando la presencia del mareaje adherido a la membrana y/o presente en la segunda cámara usando un método apropiado (por ejemplo, detectando la radioactividad, fluorescencia, inmunoensayo) . Se puede determinar el grado de migración inducida por un agonista de anticuerpo en relación a un control adecuado (por ejemplo,, en comparación con la migración de fondo determinada en ausencia del anticuerpo, en comparación con el grado de migración inducida por un segundo compuesto (es decir, un pa-trón) , en comparación con la migración de células no transfectadas inducidas por el anticuerpo) . En alguna realización, particularmente para células T, monocitos o células que expresan un CCR2 de mamífero, se puede monitorizar la migración transendotelial . En esta realización, se valora la transmigración a través de una capa de células endoteliales. Para preparar la capa de células, se pueden cultivar las células endoteliales sobre un filtro o membrana microporosos, eventualmente revestidos con una substancia tal como colágeno, fibronectina u otras proteínas de la matriz extracelular para facilitar la unión de las células endoteliales. Preferiblemente, las células endoteliales son cultivadas hasta formarse una monocapa confluente. Se dispone de una variedad de células endoteliales de mamífero para la formación de monocapas, incluyendo, por ejemplo, el endotelio de venas, arterias o microvascular, tal como las células endoteliales de la vena umbilical humana (Clonetics Corp., San Diego, CA) . Para estudiar la quimiotaxis en respuesta a un receptor de mamífero en particular, se prefieren células endoteliales del mismo mamífero; sin embargo, se pueden usar también células endoteliales de una especie o género de mamífero heterólogos . En general, el ensayo es realizado detectando la migración direccional de las células hacia o a través de una membrana o filtro, en una dirección hacia mayores niveles de un compuesto, desde una primera superficie del filtro hacia una segunda superficie opuesta del filtro, donde el filtro contiene una capa de células endoteliales sobre una primera superficie. La migración dirección se produce desde el área adyacente a la primera superficie hacia o a través de la membrana, hacia un compuesto situado en el lado opuesto del filtro. La concentración de compuesto presente en el área adyacente a la segunda superficie es mayor que en el área adyacente a la primera superficie. En una realización usada para estudiar un inhibidor de anticuerpos, se puede poner una composición que contenga células capaces de migrar y expresar un receptor CCR2 de mamífero en la primera cámara. Se pone una composición que contiene uno o más ligandos o promotores capaces de inducir quimiotaxis de las células en la primera cámara (que tienen función quimioatrayente) en la segunda cámara. Preferiblemente, poco antes de poner las células en la primera cámara o al mismo tiempo que las células, se pone una composición que contiene el anticuerpo de ensayo, preferiblemente, en la pri-mera cámara. Los anticuerpos o fragmentos funcionales de los mismos que pueden unirse al receptor e inhibir la inducción de quimiotaxis, por un ligando o promotor, de las células que expresan un CCR2 de mamífero en este ensayo son inhibidores de la función del receptor (por ejemplo, inhibidores de la función estimuladora) . Una reducción en el grado de migración inducida por el ligando o promotor en presencia del anticuerpo o fragmento es indicativa de actividad inhibitoria. Se podrían realizar estudios de unión aparte (véase lo que antecede) para determinar si la inhibición es el resultado de la unión del anticuerpo al receptor o si se produce por un mecanismo diferente. A continuación, se describen ensayos in vivo que monitorizan la infiltración leucocitaria de un tejido en res-puesta a la inyección de un compuesto (por ejemplo, quimiokina o anticuerpo) en el temido (véase Modelos de Inflamación) . Estos modelos de migración in vivo miden la capacidad de las células para responder a un ligando o promotor por emigración y quimiotaxis hacia un sitio de inflamación y valoran la ca-pacidad de un anticuerpo o fragmento del mismo para bloquear esta emigración. Además de los métodos descritos, se pueden valorar los efectos de un anticuerpo o fragmento sobre la función estimuladora de CCR2 monitorizando las respuestas celulares inducidas por el receptor activo usando células huésped adecuadas que contienen receptor. Identificación de ligandos adicionales, inhibidores y/o promotores de la función CCR2 de mamífero Los ensayos antes descritos, que pueden ser usa-dos para determinar la unión y la función de los anticuerpos y fragmentos de la presente invención pueden ser adaptados para identificar ligandos adicionales u otras substancias que se unen a un CCR2 de mamífero o variante funcional del mismo, así como inhibidores y/o promotores de la función CCR2 de ma-mífero. Por ejemplo, se pueden identificar agentes que tienen la misma o similar especificidad de unión que la de un anticuerpo de la presente invención o porción funcional del mismo mediante un ensayo competitivo con dicho anticuerpo o porción del mismo. Así, la presente invención también incluye métodos de identificación de ligandos del receptor u otras substancias que se unen a una proteína de CCR2 de mamífero, así como inhibidores (por ejemplo, antagonistas) o promotores (por ejemplo, agonistas) de la función del receptor. En una realización, se usan células portadoras de una proteína CCR2 de mamífero o variante funcional de la misma (por ejemplo, leucocitos, líneas celulares o células huésped adecuadas que han sido sometidas a ingeniería para expresar una proteína CCR2 de mamífero o una variante funcional codificada por un ácido nucleico introducido en dichas células) en un ensayo para identificar y valorar la eficacia de los ligandos u otras substancias que se unen al receptor, incluyendo inhibidores o promotores de la función del receptor. Dichas células son también útiles para determinar la función de la proteína o polipéptido del receptor expresada. Según la presente invención, se pueden identificar ligandos y otras substancias que se unen al receptor, inhibidores y promotores de la función del receptor en un ensayo adecuado y se puede determinar también su efecto terapéu-tico. Los inhibidores de la función del receptor pueden ser usados para inhibir (reducir o prevenir) la actividad del receptor y los ligandos y/o promotores pueden ser usados para inducir (disparar o aumentar) la función normal del receptor cuando esté indicado. De este modo, la presente invención proporciona un método de tratamiento de enfermedades inflamatorias, incluyendo las enfermedades autoinmunes y el rechazo de injertos, el cual consiste en administrar un inhibidor de la función del receptor a un individuo (por ejemplo, un mamífero) . La presente invención proporciona también un método de estimulación de la función del receptor administrando un nuevo ligando o promotor de la función del receptor a un individuo, proporcionando una nueva aproximación a la estimulación selectiva de la función de los leucocitos, que es útil, por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades infecciosas y del cáncer. Tal como se utiliza aquí, un "ligando" de una proteína CCR2 de mamífero se refiere a una clase particular de substancias que se unen a una proteína CCR2 de mamífero, incluyendo ligandos naturales y formas sintéticas y/o recom- binantes de ligandos naturales. Los agentes infecciosos que tienen tropismo por las células positivas a CCR2 de mamífero (por ejemplo, virus tales como el HIV) pueden también unirse a una proteína CCR2 de mamífero. Un ligando natural de un re-ceptor de mamífero seleccionado es de un origen mamífero igual al de la proteína CCR2 de mamífero (por ejemplo, una quimiokina tal como MCP-1, MCP-2, MCP-3 y/o MCP-4) . En una realización preferida, la unión a ligando de una proteína CCR2 de mamífero se produce con una elevada afinidad. Tal como se utiliza aquí, un "inhibidor" es una substancia que inhibe (reduce o previene) al menos una función característica de una proteína CCR2 de mamífero (por ejemplo, un CCR2 humano) , tal como una actividad de unión (por ejemplo, unión a ligando, unión a promotor, unión a an-ticuerpo) , una actividad de señalización (por ejemplo, activación de una proteína G de mamífero, inducción de un aumento rápido y transitorio en la concentración de calcio libre citosólico [Ca2+]i) y/o una función de respuesta celular (por ejemplo, estimulación de la quimiotaxis, exocitosis o libera-ción de mediadores inflamatorios por los leucocitos) . Un inhibidor es también una substancia que inhibe la entrada de HIV en una célula. El término inhibidor se refiere a substancias que incluyen antagonistas que se unen al receptor (por ejemplo, un anticuerpo, un mutante de un ligando natural, mo-léculas orgánicas de pequeño peso molecular, otros inhibidores competitivos de la unión a ligando) y a substancias que inhiben la función del receptor sin unirse a él (por ejemplo, anticuerpos antiidiotípicos) . Tal como se usa aquí, un "promotor" es una subs-tancia que promueve (induce, causa, intensifica o aumenta) al menos una función característica de una proteína CCR2 de mamífero (por ejemplo, un CCR2 humano) , tal como una actividad de unión (por ejemplo, unión a ligando, inhibidor y/o promotor) , una actividad de señalización (por ejemplo, activación de una proteína G de mamífero, inducción de un aumento rápido y transitorio en la concentración de calcio libre citosólico [Ca2+]i) y/o una función de respuesta celular (por ejemplo, estimulación de la quimiotaxis, exocitosis o liberación de mediadores inflamatorios por los leucocitos) . El término promotor se refiere a substancias que incluyen agonistas que se unen al receptor (por ejemplo, un anticuerpo, un homólogo de un ligando natural de otra especie) y a substancias que promueven la función del receptor sin unirse a él (por ejemplo, activando una proteína asociada) . En una realización preferida, el agonista es distinto de un homólogo de un ligando natural . Por lo tanto, la invención se relaciona también con un método de detección o identificación de un agente que se une a un receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o a una variante de unión a ligando del mismo, incluyendo ligandos, inhibidores, promotores y otras substancias que se unen a un receptor CCR2 de mamífero o variante funcional. Según el método, se pueden combinar un agente de ensayo, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de la presente invención (por ejemplo, 8G2, 1D9, un anticuerpo con una especificidad epitópica igual o similar a la de 8G2 o 1D9 y fragmentos de unión a antígeno de éstos) y una composición que contiene un receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o variante de unión a li-gando. Los componentes anteriores son combinados en condiciones adecuadas para la unión del anticuerpo o fragmento de unión a antígeno al receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o a una variante de unión a ligando del mismo y se 'detecta o mide la unión del anticuerpo o fragmento al receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o variante de unión a ligando directa o indirectamente según los métodos aquí descritos u otros métodos adecuados. Una reducción en la cantidad de complejo formado en relación a un control adecuado (por ejemplo, en ausencia del agente de ensayo) es indicativa de que el agente se une a dicho receptor o variante. La composición que contiene un receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o una variante de unión a ligando del mismo puede ser una facción de membrana de una célula portadora de proteína del receptor 2 de quimiokinas recombinante o de una variante de unión a ligando de la misma. El anticuerpo o fragmento del mismo pueden ser marcados con un mareaje tal como un radioisótopo, un mareaje de espín, un mareaje antigénico o epitópico, un mareaje enzimático, un grupo fluorescente y un grupo quimiolumi-niscente. En una realización, la invención se relaciona con un método de detección o identificación de un agente que se une a un receptor 2 de quimiokina CC de mamífero o una variante de unión a ligando del mismo, el cual consiste en com-binar un agente de ensayo, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de la presente invención (por ejemplo, 1D9, 8G2 , un anticuerpo con especificidad epitópica igual o similar a la de 1D9 o 8G2 o fragmentos de unión a antígeno de éstos) y una célula portadora de un receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o una variante de unión a ligando del mismo. Los componentes anteriores son combinados en condiciones adecuadas para la unión del anticuerpo o fragmento de unión a antígeno a la proteína CCR2 o variante de unión a ligando de ésta y se detecta o mide la unión del anticuerpo o fragmento al receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o variante directa o indirectamente por los métodos aquí descritos y/u otros métodos adecuados. Una reducción en la cantidad de complejo formado en relación a un control adecuado es indicativa de que el agente se une al receptor o variante. El anticuerpo o fragmento del mismo puede ser marcado con un mareaje seleccionado entre el grupo consistente en un radioisótopo, un mareaje de espín, un mareaje antigénico o epitópico, un mareaje enzimático, un grupo fluorescente y un grupo quimioluminiscente. Estos ensayos y otros similares pueden ser usados para detectar agentes, incluyendo ligandos (por ejemplo, quimiokinas o cepas de HIV que interaccionan con CCR2) u otras substancias, incluyendo inhibidores o promotores de la función del receptor, que se unen a CCR2 y compiten con los an-ticuerpos descritos aquí por la unión al receptor. Los ensayos antes descritos pueden ser usados, solos o en combinación entre ellos o con otros métodos adecuados, para identificar ligandos o promotores de una proteína CCR2 de mamífero o variante. Los métodos in vi tro de la presente invención pueden ser adaptados para un estudio selectivo de alto rendimiento en el que se procesan grandes números de muestras (por ejemplo, un formato de 96 pocilios) . Se pueden usar células que expresan CCR2 de mamífero (por ejemplo, CCR2 humano) a niveles adecuados para el estudio de alto rendimiento y, de este modo, son particularmente valiosas en la identificación y/o aislamiento de ligandos u otras substancias que se unen al receptor e inhibidores o promotores de las proteínas CCR2 de mamífero. La expresión del receptor puede ser monitorizada en una variedad de formas. Por ejemplo, la expresión puede ser monitorizada usando anticuerpos de la presente invención que se unen al receptor o a una porción del mismo. Además, se pueden usar anticuerpos comercializados para detectar la expresión de una proteína de fusión marcada con antígeno o con epitopo que contenga una pro-teína o polipéptido receptor (por ejemplo, receptores marcados con FLAG) y se pueden seleccionar las células que expresan el nivel deseado. Se puede incorporar ácido nucleico codificante de una proteína CCR2 de mamífero o variante funcional de la mis-ma en un sistema de expresión para producir una proteína o polipéptido receptor. Se puede usar una proteína CCR2 de mamífero aislada y/o recombinante o variante, tal como un receptor expresado en células estable o transitoriamente transfectadas con un constructo que contiene un ácido nucleico re- combinante codificante de una proteína CCR2 de mamífero o variante, o en una fracción celular que contiene receptor (por ejemplo, una fracción de membrana de células transfectadas, liposomas que incorporan el receptor) en pruebas para la fun-ción del receptor. El receptor puede ser luego purificado, si se desea. El estudio de la función del receptor puede ser llevado a cabo in vi tro o in vivo. Se puede usar una proteína CCR2 de mamífero aislada y/o recombinante o variante funcional de la misma, tal como un CCR2 humano, en el presente método, en donde se valora el efecto de un compuesto monitorizando la función del re-ceptor como se describe aquí o usando otras técnicas adecuadas. Por ejemplo, se pueden usar transfectantes estables o transitorios (por ejemplo, células Sf9 infectadas con baculo-virus, transfectantes estables de células pre-B Ll/2 de ratón) en los ensayos de unión. Los transfectantes estables de células Jurkat o de otras células adecuadas capaces de quimiotaxis pueden ser usados (por ejemplo, células pre-B Ll/2 de ratón) en ensayos de quimiotaxis, por ejemplo. Según el método de la presente invención, los compuestos pueden ser individualmente seleccionados o se pueden estudiar uno o más compuestos simultáneamente según los presentes métodos. Cuando se estudia una mezcla de compuestos, los compuestos seleccionados por los procedimientos des-critos pueden ser separados (según sea apropiado) e identificados por métodos adecuados (por ejemplo, PCR, secuenciación, cromatografía, espectroscopia de masas) . La presencia de uno o más compuestos (por ejemplo, un ligando, inhibidor, promotor) en una muestra de ensayo puede ser también determinada según estos métodos. Se pueden estudiar grandes librerías combinatorias de compuestos (por ejemplo, compuestos orgánicos, péptidos recombinantes o sintéticos, "peptoides", ácidos nucleicos) producidos por síntesis química combinatoria u otros mé- todos (véase, por ejemplo, Zuckerman, R.N. y col., J. Med . Chem. 37 : 2678-2685 (1994) y las referencias allí citadas; véanse también Ohlmeyer, M.H.J. y col., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90 : 10922-10926 (1993), y DeWitt, S.H. y col., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90 : 6909-6913 (1993), en relación a compuestos marcados; Rutter, W.J. y col., Patente EE.UU. N° 5.010.175; Huebner, V.D. y col., Patente EE.UU. N° 5.182.366, y Geysen, H.M., Patente EE.UU. N° 4.833.092). Cuando los compuestos seleccionados a partir de una librería combinatoria por el presente método llevan mareajes únicos, es posible la identificación de compuestos individuales por métodos cromatográficos . En una realización, se usa metodología de exhibición de fagos. Por ejemplo, se pueden combinar una proteína CCR2 de mamífero o variante funcional, un anticuerpo o porción funcional del mismo de la presente invención y un fago > (por ejemplo, un fago o colección de fagos, tal como una librería) que exhibe un polipéptido en condiciones apropiadas para la unión del anticuerpo o porción del mismo a la proteí- na CCR2 de mamífero variante (por ejemplo, en un tampón de unión adecuado) . El fago que puede competir con el anticuerpo o porción del mismo y se une a la proteína CCR2 de mamífero o variante puede ser detectado o seleccionado usando técnicas estándar u otros métodos adecuados. Se puede separar el fago unido del receptor usando un tampón de elución adecuado. Por ejemplo, un cambio en la intensidad iónica o pH puede dar lugar a una liberación del fago. Alternativamente, el tampón de elución puede contener un componente o componentes de liberación diseñados para alterar la unión de los compuestos (por ejemplo, uno o más compuestos que pueden alterar la unión del péptido exhibido al receptor, tales como un ligando, inhibidor y/o promotor que inhibe competitivamente la unión) . Eventualmente, se puede repetir el proceso de selección o se puede usar otra etapa de selección para enriquecer aún más en cuanto a fagos que se unen al receptor. El polipéptido exhibido puede ser caracterizado (por ejemplo, por secuenciación del ADN del fago) . Los polipéptidos identificados pueden ser producidos y luego estudiados en cuanto a unión y en cuanto a función inhibidora o promotora. Se pueden producir análogos de tales péptidos que tendrán una mayor estabilidad u otras propiedades deseables . En una realización, se pueden producir fagos que expresan y exhiban proteínas de fusión consistentes en una proteína de revestimiento con un péptido N-terminal codificado por ácidos nucleicos de secuencia aleatoria. Se combinan célula huésped adecuadas que expresan una proteína CCR2 de mamífero o variante y un anticuerpo anti-CCR2 o porción funcional del mismo con el fago, se seleccionan los fagos uni-dos, se recuperan y se caracterizan. (Véase, por ejemplo, Doorbar, J. y G. Winter, ". Mol . Biol . , 244 : 361 (1994), para una discusión de un procedimiento de exhibición de fagos usado con un receptor acoplado a proteína G) . Otras fuentes de ligandos potenciales u otras substancias que se unen a, o inhibidores y/o promotores de, las proteínas CCR2 de mamífero incluyen, aunque sin limitación, variantes de ligandos CCR2 , incluyendo variantes naturales, sintéticas o recombinantes de MCP-1, MCP-2, MCP-3 y/o MCP-4, substancias tales como otros quimioatrayentes o qui-miokinas, variantes de éstas, moléculas orgánicas de bajo peso molecular, otros inhibidores y/o promotores (por ejemplo, anticuerpos anti-CCR2, antagonistas, agonistas), otros ligan-dos de receptores acoplados a proteína G, inhibidores y/o promotores (por ejemplo, antagonistas o agonistas) y porcio-nes solubles de un receptor CCR2 de mamífero, tales como un péptido receptor adecuado o análogo que puede inhibir la función del receptor (véase, por ejemplo, Murphy, R.B., WO 94/05695) . Modelos de inflamación Se dispone de modelos in vivo de inflamación que pueden ser usados para valorar los efectos de anticuerpos y fragmentos de la invención in vivo como agentes terapéuticos. Por ejemplo, se puede monitorizar la infiltración leucocita-ria tras inyección transdérmica de una quimiokina y un anticuerpo o fragmento del mismo reactivo con CCR2 de mamífero en un animal adecuado, tal como un conejo, ratón, rata, cobaya o macaco rhesus (véanse, por ejemplo, Van Damme, J. y col., J. Exp. Med. , 176 : 59-65 (1992); Zachariae, C.O.C. y col., J. Exp . Med. 171 : 2177-2182 (1990); José, P.J. y col., J. Exp . Med. 179 : 881-887 (1994) . En una realización, se valoran histológicamente biopsias de piel en cuanto a la infiltración de leucocitos (por ejemplo, eosinófilos, granulocitos) . En otra realización, se administran al animal células marcadas (por ejemplo, células establemente transfectadas que expresan un CCR2 de mamífero, marcadas con 111In, por ejemplo) capaces de quimiotaxis y de extravasación. Por ejemplo, se puede administrar un anticuerpo o fragmento para su valoración antes, simultáneamente o después de administrar ligando o agonista al animal de ensayo. Una reducción en el grado de infiltración en presencia de anticuerpo en comparación con el grado de infiltración en ausencia de inhibidor es indicativa de inhibición. Aplicaciones diagnósticas y terapéuticas Los anticuerpos y fragmentos de la presente invención son útiles en una variedad de aplicaciones, incluidas las aplicaciones de investigación, diagnóstico y terapia. En una realización, los anticuerpos son marcados con un mareaje adecuado (por ejemplo, mareaje fluorescente, mareaje quimio-luminiscente, mareaje isotópico, mareaje antigénico o epitópico o mareaje enzimático) . Por ejemplo, pueden ser usados para aislar y/o purificar el receptor o porciones de éste y para estudiar la estructura (por ejemplo, la conformación) y la función del receptor.

Además, los diversos anticuerpos de la presente invención pueden ser usados para detectar CCR2 o para medir la expresión del receptor, por ejemplo sobre células T (por ejemplo, células CD8+, células CD45RO+) , monocitos y/o célu-las transfectadas con un gen receptor. Así, tienen también utilidad en aplicaciones tales como la clasificación celular (por ejemplo, citometría de flujo, clasificación celular activada por fluorescencia) , para fines diagnósticos o de investigación. Los anticuerpos anti-CCR2 de la presente invención tienen valor en aplicaciones de diagnóstico. Se puede usar un anticuerpo anti-CCR2 o fragmento del mismo para moni-torizar la expresión de este receptor en individuos infectados por HIV, de forma similar a como se ha utilizado el anti-CD4 como indicador diagnóstico del estadio de la enfermedad. Típicamente, los ensayos diagnósticos conllevan la detección de la formación de un complejo resultante de la unión de un anticuerpo o fragmento del mismo a CCR2. Para fines diagnósticos, los anticuerpos o fragmentos de unión a an-tígeno pueden ser marcados o no. Los anticuerpos o fragmentos pueden ser marcados directamente. Se puede emplear una variedad de mareajes, incluyendo, aunque sin limitación, radionúclidos, fluorescedores, enzimas, substratos enzimáticos, cofactores enzimáticos, inhibidores enzimáticos y ligandos (por ejemplo, biotina, haptenos). Se conocen numerosos inmunoensayos apropiados por parte del experto en la técnica (véanse, por ejemplo, las Patentes EE.UU. N° 3.817.827, 3.850.752, 3.901.654 y 4.098.876). Cuando no están marcados, los anticuerpos o fragmentos pueden ser detectados por medios adecua-dos, como en los ensayos de aglutinación, por ejemplo. También se pueden usar anticuerpos o fragmentos no marcados en combinación con otro (es decir, uno o más) reactivo adecuado que pueda ser usado para detectar anticuerpos, tal como un anticuerpo marcado (por ejemplo, un segundo anticuerpo) reac- tivo con el primer anticuerpo (por ejemplo, anticuerpos anti-idiotipo u otros anticuerpos que son específicos para la inmunoglobulina no marcada) u otro reactivo adecuado (por ejemplo, proteína A marcada) . En una realización, los anticuerpos o fragmentos de la presente invención pueden ser utilizados en enzimoinmu-noensayos, donde el anticuerpo o fragmento en cuestión, o los segundos anticuerpos, se conjugan a una enzima. Cuando se combina una muestra biológica que contiene una proteína CCR2 de mamífero con los anticuerpos en cuestión, se produce la unión entre los anticuerpos y la proteína CCR2. En una realización, se combina una muestra que contiene células que expresan una proteína CCR2 de mamífero, tales como sangre humana, con los anticuerpos en cuestión y se produce la unión en-tre los anticuerpos y las células portadoras de proteína CCR2 humana que contienen un epitopo reconocido por el anticuerpo. Estas células unidas pueden separarse de los reactivos no unidos y se puede determinar la presencia del conjugado anticuerpo-enzima específicamente unido a las células, por ejem-pío, por contacto de la muestra con un substrato de la enzima que produce un color u otro cambio detectable cuando la enzima actúa sobre él. En otra realización, los anticuerpos en cuestión pueden no estar marcados y se puede añadir un segundo anticuerpo marcado que reconoce al anticuerpo en cuestión. También se pueden preparar kits para uso en la detección de la presencia de una proteína CCR2 de mamífero en una muestra biológica. Dichos kits incluirán un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un receptor 2 de quimiokinas CC de mamífero o porción de dicho receptor, así como uno o más reactivos auxiliares adecuados para detectar la presencia de un complejo entre el anticuerpo o fragmento y CCR2 o la porción del mismo. Las composiciones de anticuerpo de la presente invención pueden ser presentadas en forma liofilizada, solas o en combinación con anticuerpos adicionales específicos para otros epitopos. Los anticuerpos, que pueden estar marcados o no, pueden ser incluidos en los kits con ingredientes accesorios (por ejemplo, tampones, tales como Tris, fosfato y carbonato, estabilizadores, excipientes, bio-5 cidas y/o proteínas inertes, por ejemplo seroalbúmina bovina) . Por ejemplo, los anticuerpos pueden presentarse como una mezcla liofilizada con los ingredientes accesorios, o los ingredientes accesorios pueden presentarse por separado para combinación por el usuario. En general, estos materiales ac-0 cesorios estarán presentes en menos de aproximadamente un 5% en peso en base a la cantidad de anticuerpo activo y, normalmente, estarán presentes en una cantidad total de al menos aproximadamente un 0,001% en peso en base a la concentración de anticuerpo. Cuando se emplea un segundo anticuerpo capaz 5 de unirse al anticuerpo monoclonal, dicho anticuerpo puede ser aportado en el kit, por ejemplo en un vial o recipiente aparte. El segundo anticuerpo, si está presente, está típicamente marcado y puede ser formulado de una forma análoga con i las formulaciones de anticuerpo antes descritas. 0 De forma similar, la presente invención se relaciona también con un método de detección y/o cuantificación de la expresión de un CCR2 de mamífero o porción del receptor por una célula, en donde se pone en contacto una composición que contiene una célula o fracción de la misma (por ejemplo, 5 una fracción de membrana) con un anticuerpo o fragmento funcional del mismo (por ejemplo, 1D9 y/o 8G2) que se une a un CCR2 de mamífero o porción del receptor en condiciones apropiadas para la unión del anticuerpo o fragmento al mismo y se monitoriza la unión. La detección del anticuerpo, indicativa de la formación de un complejo entre el anticuerpo y CCR2 o una porción del mismo, indica la presencia del receptor. La unión del anticuerpo a la célula puede ser determinada como se ha descrito antes bajo el encabezamiento "Ensayos de unión", por ejemplo. El método puede ser usado para detecta la expresión de CCR2 en células de un individuo (por ejemplo, en una muestra, tal como un fluido corporal, como sangre, saliva u otra muestra adecuada) . Se puede determinar también el nivel de expresión de CCR2 en la superficie de las células T o de los monocitos, por ejemplo, por citometría de flujo, y se puede hacer una correlación entre el nivel de expresión (por ejemplo, intensidad de tinción) y la susceptibilidad a la enfermedad, su progresión o su riesgo. Los receptores de quimiokinas funcionan en la mi-gración de los leucocitos por todo el organismo, particularmente hacia sitios inflamatorios. La emigración de células inflamatorias desde la vasculatura está regulada por un proceso de tres etapas que implica interacciones de las proteínas de adhesión de leucocitos y células endoteliales y qui-mioatrayentes específicos de células y factores activantes (Springer, T.A. , Cell , 76 : 301-314 (1994); Butcher, E.C., Cell , 67 : 1033-1036 (1991); Butcher, E.C. y Picker, L.J., Science (Wash . DC) , 272 : 60-66 (1996)). Éstos son: (a) una interacción de baja afinidad entre selectinas de leucocitos y carbohidratos de células endoteliales, (b) una interacción de alta afinidad entre receptores quimioatrayentes de leucocitos y factores quimioatrayentes/activantes y (c) una estrecha unión entre integrinas de leucocitos y proteínas de adhesión de células endoteliales de la superfamilia de las inmunoglo-bulinas. Diferentes subgrupos de leucocitos expresan diferentes repertorios de selectinas, receptores quimioatrayentes e integrinas. Adicionalmente, la inflamación altera la expresión de las proteínas de adhesión endoteliales y la expresión de factores quimioatrayentes y activadores de leucocitos. Co-mo consecuencia, hay una gran cantidad de diversidad para la regulación de la selectividad del reclutamiento de leucocitos a los sitios extravasculares . La segunda etapa es crucial, en el sentido de que se piensa que la activación de los receptores quimioatrayentes de leucocitos provocan la transición del rodamiento celular mediado por selectinas a la unión estrecha mediada por integrinas. Esto da como resultado el que los leucocitos están dispuestos para transmigrar a los sitios pe-rivasculares . La interacción quimioatrayente/receptor de qui-mioatrayente es también crucial para la migración transendo-telial y la localización en un tejido (Campbell, J.J. y col., J". Cell Biol . , 134 : 255-266 (1996); Carr, M.W. y col., Immu -ni ty, 4 : 179-187 (1996)). Esta migración está dirigida por un gradiente de concentración que va hacia el foco inflamatorio. CCR2 tiene un importante papel en el tráfico de leucocitos. Es probable que CCR2 sea un receptor de quimiokinas clave para la migración de células T o de subgrupos de células T o de monocitos a ciertos sitios inflamatorios y, por lo tanto, se pueden usar los mAb anti-CCR2 para inhibir (reducir o prevenir) la migración de células T o monocitos, particularmente la asociada a disfunción de las células T, tal como en enfermedades autoinmunes o reacciones alérgicas o en trastornos mediados por monocitos, como la aterosclerosis. En consecuencia, los anticuerpos y fragmentos de los mismos de la presente invención pueden ser usados para modular la función de los receptores en aplicaciones de investigación y terapéuticas. Por ejemplo, los anticuerpos y fragmentos funcionales aquí descritos pueden actuar como inhibidores para inhibir (reducir o prevenir) (a) la unión (por ejemplo, de un ligando, un inhibidor o un promotor) al receptor, (b) una función de señalización del receptor y/o (c una función esti-mulatoria. Los anticuerpos que actúan como inhibidores de la función de los receptores pueden bloquear la unión de ligan-dos o promotores directa o indirectamente (por ejemplo, pro-vocando un cambio conformacional) . Por ejemplo, los anticuerpos pueden inhibir la función de los receptores inhibiendo la unión de un ligando o por desensibilización (con o sin inhibición de la unión de un ligando) . Los anticuerpos que se unen al receptor pueden actuar también como agonistas de la función del receptor, disparando o estimulando una función del receptor, tal como una función de señalización y/o esti-mulatoria de un receptor (por ejemplo, tráfico de leucocitos) al unirse al receptor. Así, la presente invención proporciona un método de inhibición del tráfico de leucocitos en un mamífero (por ejemplo, un paciente humano) , consistente en administrar al mamífero una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional de la presente invención. La administración de un anticuerpo o fragmento de la presente invención puede dar como resultado la mejoría o la eliminación del estado de la enfermedad. El anticuerpo de la presente invención o fragmento funcional del mismo puede ser también usado para tratar trastornos en los que está implicada la activación del receptor CCR2 por unión de quimiokinas. Por ejemplo, los anticuerpos o fragmentos funcionales de los mismos (por ejemplo, 1D9 y/o 8G2 o fragmentos funcionales de éstos) pueden ser usados para tratar alergias, aterogénesis, anafilaxia, malignidades, inflamación crónica y aguda, reacciones alérgicas mediadas por histamina y por IgE, shock y artritis reumatoide, aterosclerosis, esclerosis múltiple, estenosis, re-estenosis, rechazo de. aloinjertos, enfermedad fibrótica, asma y glomerulo-patías inflamatorias. Las enfermedades o condiciones de humanos o de otras especies que pueden ser tratadas con inhibidores de la función del receptor CCR2 (incluidos anticuerpos o fragmentos adecuados de los mismos) incluyen, aunque sin limitación: enfermedades y condiciones inflamatorias o alérgicas, incluyendo enfermedades alérgicas respiratorias, tales como asma, rinitis alérgica, enfermedades pulmonares por hipersensibilidad, pneumonitis por hipersensibilidad, enfermedades pulmonares intersticiales ("ILD") (por ejemplo, fibrosis pulmonar idiopática o ILD asociadas con artritis reumatoide, lupus eritematosus sistémico, espondilitis anquilosante, esclerosis sistémica, síndrome de Sjogren, polimiositis o dermatomiositis) ; enfermedad pulmonar obstructiva crónica; respuestas anafilácticas o de hipersensibilidad, alergias a fármacos (por ejemplo, a penicilina o cefalospori-nas) , alergias a las picaduras de insectos; enfermedades intestinales inflamatorias, tales como la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerativa; espondiloartropatías; esclerodermia; psoriasis y dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis, eczema, dermatitis atópica, dermatitis alérgica por contacto, urticaria; vasculitis (por ejemplo, necrotizante, cutánea y vasculitis por hipersensibilidad) ; enfermedades autoinmunes, tales como la artritis (por ejemplo, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artritis psoriásica) , esclerosis múltiple, lupus eritematosus sistémico, miastenia gravis, diabetes de aparición juvenil, nefritis tales como glomerulonefritis, tiroiditis autoinmune, enfermedad de Behcet; rechazo de injertos (por ejemplo, en trasplan-tes) , incluyendo el rechazo de aloinjertos o la enfermedad del injerto contra el huésped, y la arteriosclerosis asociada a trasplantes; aterosclerosis; cánceres con infiltración leucocitaria de la piel o de los órganos; estenosis o re-estenosis de la vasculatura, particularmente de las arterias, por ejemplo de la arteria coronaria, tal como la estenosis o re-estenosis que resulta de una intervención vascular (por ejemplo, intervención qui-rúrgica, terapéutica o mecánica) , así como hiperplasia de la neoíntima. Por ejemplo, se puede producir re-estenosis, que típicamente produce un estrechamiento de la abertura luminal del vaso, como resultado de lesión vascular, incluyendo, aunque sin limitación, la producida por procedimientos de injer- tos vasculares, angioplastia, incluyendo la angioplastia realizada por balón, aterectomía, láser u otro método adecuado (por ejemplo, angioplastia coronaria transluminal percutánea ("PTCA")), colocación de stents (por ejemplo, colocación de stents endovasculares mecánicos o biológicos) , procedimientos de bypass vascular o combinaciones de éstos, así como otros procedimientos usados para tratar los vasos sanguíneos este-nósicos u ocluidos; se pueden tratar otras enfermedades o condicio-nes (incluyendo enfermedades o condiciones mediadas por CCR2) en las que se han de inhibir las respuestas inflamatorias no deseadas, incluyendo, aunque sin limitación, la lesión por reperfusión, determinadas malignidades hematológicas, toxicidad inducida por citokinas (por ejemplo, shock séptico, shock endotóxico) , polimiositis, dermatomiositis y enfermedades granulomatosas, incluyendo la sarcoidosis. Entre las enfermedades o condiciones de humanos o de otras especies que pueden ser tratadas con promotores de la función de receptores CCR2 (incluyendo anticuerpos o frag-mentos de éstos) se incluyen, aunque sin limitación: inmunosupresión, tal como la de individuos con síndromes de inmunodeficiencia tales como el SIDA, individuos que están siendo sometidos a terapia por radiación, quimioterapia, terapia para enfermedades autoinmunes u otra terapia farmacológica (por ejemplo, terapia con corticosteroides) que causa inmunosupresión, e inmunosupresión debida a deficiencia congénita en la función del receptor o a otras causas. Los anticuerpos anti-CCR2 de la presente invención pueden bloquear la unión de una o más quimiokinas, blo-queando así la cascada aguas debajo de uno o más fenómenos que conducen a los trastornos anteriores . Los anticuerpos y fragmentos funcionales de los mismos que son antagonistas de CCR2 pueden ser usados como agentes terapéuticos para el SIDA, así como para determinadas enfermedades inflamatorias. HIV-1 y HIV-2 son los agentes etiológicos del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en humanos. El SIDA se produce como resultado en parte de la depleción de linfocitos T CD4+ en los individuos afectados por HIV. El HIV-1 infecta primariamente los linfocitos T, monocitos/macrófagos, células dendríticas y, en el sistema nervioso central, la microglía. Todas estas células expresan la glicoproteína CD4 , que sirve como receptor para HIV-1 y HIV-2. La entrada eficiente de HIV en las células blanco depende de la unión de la glicoproteína de la envuelta vírica exterior, gpl20, al dominio CD4 amino-terminal. Después de la unión del virus, las glicoproteínas de la envuelta de HIV-1 median en la fusión de las membranas del virus y de la célula huésped para completar el proceso de entrada. La fusión de membranas dirigida por las glicoproteínas de la envuelta de HIV-1 expresadas sobre la superficie de las células infectadas conduce a la fusión célula-célula, dando lugar a sinci-tios . Recientemente, se han sugerido factores de las células huésped además de CD4 para determinar la eficacia de la fusión de membranas mediada por las glicoproteínas de la envuelta de HIV-1. El receptor 7 de transmembrana (7TMR) , denominado HUMSTSR, LESTR o "fusina" , ha mostrado permitir a un rango de células que expresan CD4 soportar la infección y la fusión celular mediada por glicoproteínas de la envuelta de HIV-1 adaptado a laboratorio (Feng, Y. y col., Science (Wash . DC) , 272 : 872-877 (1996)). Los anticuerpos para HUMSTSR bloqueaban la fusión celular y la infección por aislados de HIV-1 adaptados a laboratorio, pero no por virus primarios con tropismo por los macrófagos in vi tro (Feng, Y. y col., Science (Wash . DC) , 272: 872-877 (1996)). La capacidad de los receptores de quimiokinas y moléculas relacionadas para facilitar la infección de aislados de HIV-1 clínicos primarios ha sido descrita recientemen- te por varios grupos (véanse, por ejemplo, Bates, P., Cell , 86 : 1-3 (1996); Choe, H. y col., Cell , 85 : 1135-1148 (1996); Doranz y col., Cell , 85 : 1149-1158 (1996)). Estos estudios indicaban que la implicación de varios miembros de la familia de receptores de quimiokinas en los estadios precoces de la infección por HIV-1 ayuda a explicar el tropismo vírico y la inhibición de quimiokinas ß de los aislados primarios de HIV-1. La presente invención proporciona también un mé-todo de inhibición de la infección por HIV de una célula (por ejemplo, nueva infección y/o formación de sincitios) que expresa un CCR2 de mamífero o porción del mismo, consistente en poner en contacto la célula con una composición que contiene una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 de mamífero o porción de dicho receptor. La composición puede contener también uno o más agentes adicionales efectivos frente a HIV, incluyendo, aunque sin limitación, anticuerpos anti-CCR3, anticuerpos anti-CCR5 y anticuerpos anti-fusina. Se pueden usar varios métodos para valorar la unión de HIV a una célula y/o la infección de una célula por HIV en presencia de los anticuerpos de la presente invención. Por ejemplo, se pueden usar ensayos que determinan la unión de gpl20 o de una porción de ésta al receptor, la infección por HIV y la formación de sincitios (véase, por ejemplo, Choe, H. y col., Cell , 85 : 1135-1148 (1996)). La capacidad del anticuerpo de la presente invención para inhibir estos procesos puede ser valorada usando éstos u otros métodos adecuados . Además, la presente invención proporciona un método de tratamiento del HIV en un paciente, consistente en administrar al paciente una composición que contiene una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a un CCR2 de mamífero o porción de dicho re- ceptor. Una vez más, la composición puede contener también uno o más agentes adicionales efectivos frente a HIV, incluyendo, aunque sin limitación, anticuerpos anti-CCR3, anticuerpos anti-CCR5 y anticuerpos anti-fusina. El uso terapéu-tico de anticuerpos para tratar el HIV incluye el uso profiláctico (por ejemplo, para el tratamiento de un paciente que puede estar o que puede haber estado expuesto al HIV) . Por ejemplo, los profesionales de los cuidados de la salud que pueden estar expuestos o que pueden haber estado expuestos al HIV (por ejemplo, por pinchazos con agujas) pueden ser tratados según el método. Otro ejemplo es el tratamiento de un paciente expuesto al virus después de un contacto sexual sin protección o en caso de fallo de la protección. En el SIDA, el tratamiento con múltiples fármacos parece ser el más prometedor. Se puede añadir un antagonista anti-receptor de quimiokina que inhiba la infección por HIV al régimen de tratamiento con fármacos, en particular bloqueando la infección vírica de nuevas células. Así, se contempla la administración de un anticuerpo o fragmento de la presente invención en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticos, tales como análogos de nucleósidos (por ejemplo, AZT, 3TC, ddl) y/o inhibidores de proteasas, y proporciona una importante adición al régimen de tratamiento del HIV. En una realización, se usa un mAb anti-CCR2 humanizado en combinación con un (es decir, uno o más) agente terapéutico para reducir la carga vírica de los pacientes, evitando la fusión y/o infección de nuevas células. Dicho anticuerpo puede ser también útil en la prevención de la infección perina-tal. Otro aspecto de la invención se relaciona con un método de prevención de infección por HIV en un individuo, consistente en administrar al individuo una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento funcional del mismo que se une a CCR2. Según el método, la prevención de la infección por HIV incluye el tratamiento para prevenir (reducir o eliminar) la infección de nuevas células en un individuo infectado o para prevenir la infección de un individuo que puede estar, que puede haber estado, o que ha estado expuesto al HIV. Por ejemplo, individuos tales como un individuo infectado por HIV, un feto de una mujer infectada por HIV o un cuidador del área de los cuidados de la salud pueden ser tratados según el método de la presente invención. Modos de administración Se pueden administrar uno o más anticuerpos o fragmentos de a presente invención a un individuo por una vía adecuada, ya sean solos o en combinación con (antes, al mismo tiempo o después) otro fármaco o agente, o antes, al mismo tiempo o después de una intervención quirúrgica, mecánica o terapéutica. Por ejemplo, los anticuerpos de la presente invención pueden ser también usados en combinación con otros anticuerpos monoclonales o policlonales (por ejemplo, en combinación con anticuerpos que se unen a otros receptores de quimiokinas, incluyendo, aunque sin limitación, CCR3 y CCR5) o con productos existentes de plasma sanguíneo, tales como los productos de gamma-globulinas y de inmunoglobulinas comercializados usados en tratamientos profilácticos o terapéuticos. Los anticuerpos o fragmentos de la presente invención pueden ser usados como composiciones administradas por sepa-rado dadas junto con antibióticos y/o agentes antimicrobianos . Se administra una cantidad efectiva de un anticuerpo o fragmento (es decir, uno o más anticuerpos o fragmentos) . Una cantidad efectiva es una cantidad suficiente pa-ra conseguir el efecto terapéutico (incluyendo el profiláctico) deseado en las condiciones de administración, tal como una cantidad suficiente para la inhibición de una función de CCR2 y, por lo tanto, para la inhibición de una respuesta inflamatoria o de la infección por HIV, o una cantidad sufi- cíente para promover una función de CCR2 , según esté indicado. El anticuerpo o fragmento puede ser administrado en una sola dosis o en múltiples dosis. La dosificación puede ser determinada por métodos conocidos en la técnica y depende, por ejemplo, del anticuerpo o fragmento elegido, de la edad del sujeto, de la sensibilidad y tolerancia a fármacos y del estado general de salud. Los anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno de los mismos, tales como anticuerpos humanos, humanizados y quiméricos y fragmentos de unión a antíge-no, pueden ser administrados con menos frecuencia que otros tipos de agentes terapéuticos. Por ejemplo, una cantidad efectiva de un anticuerpo puede variar entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 5 ó 10 mg/kg administrados diariamente, semanalmente, cada dos semanas o mensualmente. Son posibles una variedad de vías de administración, incluyendo, aunque sin limitación, la oral, la dietética, la tópica, la parenteral (por ejemplo, inyección o infusión intravenosa, intraarterial, intramuscular o subcutánea), la inhalación (por ejemplo, inhalación intrabronquial, in-traocular, intranasal u oral y las gotas intranasales) , dependiendo de la enfermedad o condición que haya de ser tratada. Otros métodos adecuados de administración pueden incluir también dispositivos recargables o biodegradables y dispositivos poliméricos de liberación lenta. Las composiciones far-macéuticas de esta invención pueden ser también administradas como parte de una terapia de combinación con otros agentes. La formulación de un anticuerpo o fragmento para administración variará según la vía de administración y la formulación (por ejemplo, solución, emulsión, cápsula) selec-cionadas. Una composición farmacéutica apropiada que contiene un anticuerpo o fragmento funcional del mismo para su administración puede ser preparada en un vehículo o soporte fisiológicamente aceptable. Se puede usar también una mezcla de anticuerpos y/o fragmentos. Para soluciones o emulsiones, co- mo soportes adecuados se incluyen, por ejemplo, soluciones, emulsiones o suspensiones acuosas o alcohólicas/acuosas, incluyendo medios salinos y tamponados. Los vehículos parenterales pueden incluir una solución de cloruro de sodio, dex-trosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, Ringer-lactato o aceites fijos. Son conocidos una variedad de soportes acuosos apropiados para el experto en la técnica, incluyendo agua, agua tamponada, solución salina tamponada, polioles (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol lí-quido) , solución de dextrosa y glicina. Como vehículos intravenosos se pueden incluir diversos aditivos, conservantes < o reponedores de fluidos, nutrientes o electrolitos (véase, en general, Remington ' s Pharmaceutical Sciences , 16 a Edición, Mack, Ed. , 1980) . Las composiciones pueden eventualmente con-tener substancias auxiliares farmacéuticamente aceptables según se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas, tales como agentes para el ajuste del pH y tamponantes y agentes para el ajuste de la tonicidad, por ejemplo acetato de sodio, cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de calcio y lactato de sodio. Los anticuerpos y fragmentos de esta invención pueden ser liofilizados para su almacenamiento y reconstituidos en un soporte adecuado antes de su uso según técnicas de liofilización y reconstitución conocidos en este campo. La concentración óptima del (de los) componente (s) ac-tivo(s) en el medio elegido puede ser determinada empíricamente según procedimientos bien conocidos para el experto en la técnica y dependerá de la formulación farmacéutica final deseada. Para inhalación, el anticuerpo o fragmento puede ser solubilizado y cargado en un dispensador adecuado para admi-nistración (por ejemplo, un atomizador, nebulizador o dispensador en aerosol presurizado) . La presente invención será ahora ilustrada mediante los Ejemplos siguientes, que no pretenden ser limitantes en modo alguno. Las enseñanzas de todas las referencias aquí citadas son aquí incorporadas a modo de referencia. EJEMPLOS Ej emplo 1 Materiales : Se obtuvieron los siguientes materiales de las fuentes indicadas: El anti-CD16 conjugado a PE, la estreptavidina conjugada a PE y la IgE anti-humana biotinilada eran de Pharmingen (San Diego, CA) . La IgG de cabra anti-ratón conjugada a FITC era de Jackson Immunoresearch Laboratories (West Grove, PA) . El tampón de lisis para FACS era de Becton Dickinson (Mountain View, CA) y la [125I] -MCP-1 era de NEN (Boston, MA) . Células, líneas celulares y cultivo de tejidos: Se mantuvo la línea celular de linfoma pre-B mu-riño Ll/2 en RPMI-1640 suplementado con un 10% de Fetal Clone I (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) , 50 unidades/ml de penicilina (Gibco BRL) , 50 µg/ml de estreptomicina (Gibco BRL) , L-glutamina 2 mM (Gibco BRL) y ß-mercaptoetanol 55 µM (Gibco BRL) . Otras líneas celulares incluían transfectantes de célu-las Ll/2 que expresaban CCRl (Campbell, J. y col. (1966), J. Cell Biol . , 134 : 255-266) o CCR5 (Wu y col., Nature 384 : 179-183 (1996) ) crecidos en el medio de cultivo anterior suple-mentado con 800 µg/ml de G418 activo. Se hicieron crecer células THP-1 (ATCC N° TIB202) según las instrucciones ATCC. Se purificaron PBMC a partir de sangre heparinizada según describen Ponath y col., J". Clin . Invest . , 97 : 604-612 (1996). Preparación de un constructo de expresión de CCR2b y transfectantes estables: Se obtuvo la región codificante para el CCR2b humano (Charo y col. (1994), Proc . Natl . Acad. Sci . USA, 91 : 2752) por amplificación de RT-PCR según se ha descrito (Qin, S. y col. (1996), Eur. J. Immunol . 26 : 640-647). Se preparó ADNc usando imprimación con oligo (dT) y se consiguió la amplificación de la región codificante de CCR2b por PCR jerar- quizada con los siguientes grupos de cebadores que corresponden a las posiciones de la secuencia de CCR2b (N° de Acceso del GenBank U03905; Charo y col., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 91 : 2752-2756 (1994)), según se indica: 1) cebador 5': 5 ' -TGAGACAAGCCACAAGCTGAAC-3 ' (nucleótidos 11 a 32; SEC ID N° : 1); Cebador 3': 5' -TCTGTATTAGTACACACAGCCG-3 ' (nucleótidos 1301 a 1280; SEC ID N° : 2); 2) Cebador 5': 5' -ATGCTGTCCACATCTCGTTCTCGG-3 ' (nucleótidos 81 a 104; SEC ID N° : 3) ; cebador 3': 5' -TTATAAACCAGCCGAGACTTCCTGCTC-3 ' (nucleótidos 1164 a 1137; SEC ID N° : 4). Se modificó la región codificante del ADNc CCR2b para que contuviera la secuencia líder del péptido señal CD5 (Aruffo y col., Cell 61 : 1303-1313 (1990)). La secuencia predicha de aminoácidos de este péptido es: NH2-Met-Rro-Met-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Ala-Thr-Leu-Tyr-Leu-Leu-Gly-Met-Leu-Val -Ala-Ser-Val -Leu-Ala... (SEC ID N° : 5). Usando PCR con el ADNc CCR2b como plantilla y dos cebadores 5' solapantes que contienen un sitio de restricción BamHI , se codifica la secuencia del péptido señal CD5 y la secuencia amino-terminal de CCR2b y un cebador 3' localizado internamente en la región codificante de CCR2b. Cebador Seql CD5 5' 5' - GGGGATCCAGAAACCATGCCCATGGGGTCTCTGCAACCG- CTGGCCACCTTGTACCTGCTG-3' (SEC ID N° : 6) Cebador Seq2 CD5 5' 5' - GCCACCTTGTACCTGCTGGGGATGCTGGTCGCTTCCGTG- CTAGCGATGCTGTCCACATCTCGTTC-3' (SEC ID N° : 7) Cebador CCR2AB2 3' - 5'- GACGACCAGCATGTTGCC-3 ' (SEC ID N°: 8; nucleótidos U03905 272 a 255). El fragmento amplificado de 278 pares de bases fue digerido con BamHI y Apal y se insertó el fragmento de 209 pares de bases resultante en el sitio Apal en la posición 206 del ADNc CCR2b (N° tituir al fragmento de insertó la secuencia r con la secuencia líder del péptido señal CD5 inmediatamente precediendo a la metionina iniciadora del receptor en los sitios BamHI y Xhol de pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, CA) para crear el plásmido de expresión en mamíferos pCD5MCPRB . Se subclonó el fragmento CD5-CCR2b en el sitio BamHI-Notl de pCDEF3 (Goldman y col. (1996), Biotechniques 21 : 1013-1015) y se denominó a este constructo CCR2bDEF3. En este vector de expresión, la expresión del gen insertado está ^.rí ida per el promotor EF-la. Se sembraron 50 ml de células Ll/2 a 4xl05 células/ml el día antes de la electroporación. El día de la elec-troporación, las células, que habían crecido hasta una densidad de lxlOp/ml, fueron separadas del medio por centrifugación y resuspendidas en 800 µl de tampón de electroporación a temperatura ambiente (Zajac y col., DNA 7: 509-513), ácido L-glutámico 120 mM (Sigma) , acetato de Mg 7 mM (EM Science) , glucosa 4,3 mM (Sigma), K Pipes 17 mM, pH 6,9 (Sigma), EGTA 1 mM (Sigma), ATP 5 mM, pH 7,0 (Sigma) . Se pusieron 25 µg de AD? plasmídico CCR2bDEF3 linealizado con Sea I, extraído con fenol/cloroformo/alcohol isoamílico y precipitado con isopropanol en una cubeta de electroporación de 0,4 cm de hueco. Se añadieron las células resuspendidas a la cubeta y se aplicó un único pulso de 450 voltios, 960 µFd. Se transfirieron entonces las células de la cubeta a un matraz T-75 que contenía 15 ml de medio de crecimiento Ll/2 (descrito con anterioridad y dejando crecer durante tres días, en cuyo momento las célu-las fueron centrifugadas fuera del medio y resuspendidas en medio de crecimiento Ll/2 adicionalmente suplementado con piruvato de sodio 1 mM (Gibco BRL) y 0,8 mg/ml de G418 activo (Gibco BRL) . Selección de células que expresan CCR2b por quimiotaxis: en 100 µl de RPMI/BSA en la cámara superior de una cámara de quimiotaxis de 24 pocilios de 3,0 mieras de poro (Becton Dickinson) . Se dejó que las células experimentaran la quimio- 0 taxis durante cuatro horas y veinte minutos en una incubadora con un 5% de C02 humidificada a 37 °C, en cuyo momento se retiró la cámara superior. Se eligió este tiempo de incubación en el momento del experimento por ser lo suficientemente largo como para que las células que respondían a MCP-1 sufrieran 5 quimiotaxis, pero lo suficientemente corto como para mantener bajo el fondo..i:M- Selección "secundaria de células que expresan CCR2b por clasificación por FACS: Se hizo crecer a las células que habían sido so- 0 metidas a quimiotaxis a través de la membrana y hacia la cámara inferior y se las purificó después por clasificación por FACS estéril. Se centrifugaron diez millones de células CCR2bDEF3 para separarlas del medio, se las resuspendió en 2,5 ml de PBS (+Ca, Mg) suplementado con un 1% de suero fetal 5 de ternera inactivado por calor ( "Hl FCS") (Gibco BRL) y 2,5 ml de sobrenadante 5A11 de anticuerpo de péptido amino- terminal anti-CCR2b esterilizado por filtración. Se mezclaron las células y. el anticuerpo y se dejó incubar sobre hielo durante treinta minutos . Se lavaron entonces las células dos 0 veces con PBS(+) (Gibco BRL) y se resuspendieron en 5 ml de una dilución 1:250 esterilizada por filtración de IgG de cabra anti-ratón F(ab')2 conjugada a FITC y purificada por afinidad (Jackson ImmunoResearch Laboratories) en PBS (+) suple- mentado con un 1% de Hl FCS. Se incubaron las células durante treinta .minutos sobre hielo en obscuridad y se lavaron J-.?e cr--dos veces con PBS( +) ('-Gibco BRL) . Se clasificarón~í~ás células en el FACSCalibur® y se recogió el- %" más brillante de células. (FL1 > 3x1 2.)... -- -- " " Se dejó crecer a las células clasificadas y se las clasificó de nuevo usando el mismo protocolo que antes. Se recogió el 1% más brillante de células. (FL1 _> 3xl03) . Producción de anticuerpos monoclonales: Para producir mAb para CCR2b, se monitorizaron continuamente transfectantes para asegurarse de que los niveles de expresión no caían. Se realizó una tinción FACS periódicamente para determinar la expresión del receptor sobre los transfectantes usando el sobrenadante de anticuerpo anti-CCR2b 5A11 con IgG de cabra anti-ratón FITC como anticuerpo secundario. '-í« - Se lavaron veinte millones de células CCR2bDEF3.Ll/2 en RPMI 1640 (Gibco BRL) y se incubaron en RPMI 1640 más 0,2 mg/ml de mitomicina C durante 30 minutos a 37°C. Se lavaron entonces las células dos veces con PBS(+) y se inyectaron 2xl07 células en 0,5 ml de PBS(+) intraperitonealmente a un ratón C57BL/6 hembra. Se repitió esto dos veces más a intervalos de dos semanas. La cuarta vez, se resuspendieron 2xl07 células en 0,25 ml y se inyectaron intravenosamente. Tres días después de la inyección intravenosa, se sacrificó el ratón y se retiró el bazo y se fusionaron las células con la línea celular SP2/0 como está descrito ( Cu rrent Protocols in Immunology, John Wiley and Sons, New York, 1992) . Este grupo de ratones había sido previamente in-munizado muchas veces con 2 líneas celulares diferentes, así como con un péptido sintético, pero no se generaron anticuerpos que tiñeran las células positivas a CCR2 en varias fusiones. Las cuatro inmunizaciones anteriores con la línea celular CCR2bDEF3.Ll/2 que expresa altos niveles de CCR2b eran críticas para obtener el anticuerpo descrito . Selección de un clon celular--único- de transfectantes CCR2 por dilución limitante i^,-^'' Después de que el ratón hubiera recibido la últi-ma, J.n e'c'ción, se dejó que las células dos veces clasificadas crecieran de nuevo y se las purificó de nuevo por dilución limitante. Las células fueron plaqueadas a 1 y 0,5 células por pocilio en placas de 96 pocilios. Se hizo crecer a las células subclonadas de la dilución de 0,5 células por pocilio y se las estudió en cuanto a expresión de CCR2b por análisis FACS inmunofluorescente indirecto usando el sobrenadante 5A11 del anticuerpo anti-CCR2b con IgG de cabra anti-ratón FITC como anticuerpo secundario. El procedimiento era el mismo que el descrito anteriormente, excepto por el hecho de que el vo-lumen de la tinción era de 100 µl . Se seleccionaron cuatro positivos y sellos congeló. Identificación de anticuerpos monoclonales positivos: Se utilizó el análisis de tinción inmunofluorescente usando un FACScan® (Becton Dickinson & Co., Mountain View, CA) para identificar los anticuerpos monoclonales que eran reactivos con el receptor CCR2b. Se estudiaron sobrenadantes de cultivos de hibridomas en un formato de 96 pocilios usando IgG de cabra anti-ratón FITC como anticuerpo secundario., Se usaron células CCR2bDEF3. Ll/2 para identificar los anticuerpos monoclonales reactivos con CCR2b y se usaron células Ll/2 no transfectadas para eliminar los anticuerpos monoclonales reactivos con otras proteínas de la superficie celular. Tinción FACS - Células cultivadas: Para la tinción de líneas celulares transfectantes cultivadas, se resuspendieron 0,5xl06 células en 50 µl en PBS+1% FCS en una placa de poliestireno de 96 pocilios de fondo en V. Se añadieron 50 µl de sobrenadantes de anticuerpos primarios o medio HT (control negativo) y se incubaron tría de flujo con un citómetro FacScan usando el programa CellQuest (Becton Dickinson) . Las células fueron fijadas con PBS/1°% de formaldehído si no iban a ser analizadas el mismo día. Los anticuerpos monoclonales 1D9 y 8G2 tiñen los transfectantes CCR2 , pero no los transfectantes CCRl o CCR5 (Figura 5) . Tinción FACS - Sangre entera: Se mezclaron 100 µl de sangre entera con 100 µl de sobrenadantes de hibridomas de anticuerpo 1D9 o medio HT (control negativo) y se incubó a 4°C durante 30 min. Después de un lavado con PBS, se añadieron 100 µl de anticuerpo IgG de cabra anti-ratón conjugado a FITC (una dilución 1:250) a cada muestra y se incubó durante 30 min. a 4°C en obscuridad. Se lavaron entonces las muestras una vez con PBS si se iba hacer una segunda tinción colorante o, de lo contrario, se lavaron dos veces más en PBS. Para la tinción de dos colores, se añadieron 5 µl de suero de ratón a las pellas celulares después del lavado único, se mezclaron y se incubó durante cinco minutos a 4°C en obscuridad. Se añadieron segundos anticuerpos primarios (o PBS como control negativo) (10 µl de anti-CD16, 100 µl de dilución 1:200 de anti-IgE) y se incubó durante treinta minutos a 4°C en obscuridad. Se lavaron en- tonces las muestras una vez con PBS y se las resuspendió en 100 µl de estreptavidina PE (PBS+BSA 1% 1:200) y se incubó durante quince minutos a 4°C en obscuridad. Se lisaron los eritrocitos añadiendo 2 ml de tampón de lisis FACS a cada muestra y se incubó a temperatura ambiente en obscuridad du- rante quince minutos o hasta que las muestras quedaron transparentes. Se obtuvo una pella celular por centrifugación y se aspiró todo el sobrenadan-te, excepto 200 µl . Se analizaron las muestras por citometría de flujo en un citómetro FacScan usando el programa CellQuest (Becton-Dickinson) . CCR2b se expresa en la mayoría de los monocitos, una subpoblación de linfocitos y un subgrupo de granulocitos (Figura 2). CCR2b se - expresa en una población positiva a IgE en sangre periférica (basófilos) (Figura 3) . Ensayos de unión a MCP-1: Se llevó a cabo a unión de MCP-1 en un volumen final de 0,1 ml de Hepes 50 mM, pH 7,4, CaCl2 1 mM, MgCl2 5 mM, 0,02% azida sódica, 0,5% BSA (HBB), que contenía 2,5 µg de proteína de membrana THP-1 ó 500.000 PBMC y 0,1 nM de [125I] -MCP-1. Se realizaron experimentos de unión competitiva incluyendo concentraciones variables de MCP-1 no marcado, anticuerpo 1D9 o una IgG2a de control negativo. Se determinó la unión inespecífica tras la adición de un exceso de 2.500 veces de MCP-1 no marcado. Se incubaron las muestras durante 60 minutos a temperatura ambiente y se separaron el trazador unido y el libre por filtración a través de placas de filtro GF/B de 96 pocilios preempapadas con polietilenimina al 0,3%. Se lavaron los filtros en HBB suplementado además con NaCl 0,5 M, se secaron y se determinó la cantidad de radioactivi- dad unida por contaje de centelleo líquido. El mAb 1D9 inhibe la unión de [125I] -MCP-1 a las membranas de células THP-1 con una CI50 de aproximadamente 0,004 µg/ml (aproximadamente 0,02 nM; Figura 4) y a PBMC frescas con una CI50 de 0,04 µg/ml (aproximadamente 0,2 nM; Figura 5) . Quimiotaxis de PBMC: Se estudió la quimiotaxis usando una placa de quimiotaxis de 96 pocilios de 3 µm de tamaño de poro (Neuro-probe, Cabin John, MD) . Se lavaron PBMC aisladas por métodos estándar usando centrifugación en gradiente de densidad en Ficoll -Hypaque con PBS/0,5% BSA y se las resuspendió luego en medio de ensayo de quimiotaxis (HBSS/HEPES 10 mM/0,5% BSA libre de ácidos grasos) a una concentración final de lOxlO6 células/ml . Se preincubaron las células en medio de ensayo de quimiotaxis a temperatura ambiente durante 20 min. con varias concentraciones del anticuerpo anti-CCR2, 1D9 o una IgG2a murina inespecífica. Se mezclaron las mismas diluciones de anticuerpo con quimiokina y se añadieron 30 µl de la mezcla a cada uno de los pocilios del fondo de la placa de quimio- taxis. Se cubrieron los pocilios del fondo con la membrana y se añadieron 25 µl de la mezcla de células y anticuerpos a la parte superior del filtro. Se incubaron las placas a 37 °C en una incubadora con un 5% de C02 durante aproximadamente 80 min. Al completarse la migración, se retiró la membrana y se incubó la placa con los pocilios de fondo a -80°C durante 30 minutos para congelar los contenidos. Se descongelaron las placas a 37 °C durante 10 minutos. Se añadieron 6 µl de una dilución 1:400 de reactivo CyQuant (Molecular Probes, Eugene, OR) en un tampón de lisis proporcionado por el proveedor a - cada- pocilio y se cuantificó la migración celular según indicaba la intensidad de fluorescencia determinada usando un lector de placas de fluorescencia CytoFlour a 485ex/535em. El •mAb 1D9 inhibe la quimiotaxis inducida por MCP-1, pero no la quimiotaxis inducida por RANTES, de PBMC frescas (Figuras 6A y 6B) . La inhibición de la quimiotaxis inducida por MCP-1 de PBMC frescas ha sido demostrada con 10 µg/ml (=40 nM) . Ejemplo 2 Humanización del anticuerpo monoclonal 1D9 : Es probable que el anticuerpo monoclonal 1D9 sea inmunogénico en humanos, provocando potencialmente una respuesta de anticuerpos humanos anti-ratón ("HAMA"). Esta respuesta de HAMA da lugar habitualmente a un rápido aclaramiento del anticuerpo monoclonal del ratón del organismo, limitando así cualquier efecto terapéutico que el anticuerpo mo- nocional 1D9 pudiera tener. Por lo tanto, en un esfuerzo por reducir la inmunogenicidad de este anticuerpo en humanos y maximizar su potencial terapéutico, se acometió la humanización del anticuerpo monoclonal murino 1D9. Los siguientes ejemplos proporcionan un análisis detallado de los datos de la secuencia de aminoácidos de 1D9, la construcción de un modelo molecular del dominio Fv del 1D9 murino y la estrategia de diseño para el éxito en la humanización del anticuerpo murino. Esta estrategia de diseño daba lugar al diseño de una serie de versiones humanizadas de la región variable de la cadena ligera kappa (V?) y de la región variable de la cadena pesada (VH) . En total, la región VH humanizada incluía hasta 16 cambios de aminoácidos en las FR de la región VH humana seleccionada. Estos cambios fueron subdivididos entre cuatro versiones de la región VH humanizada. Además, se incluyeron doce cambios de aminoácidos en las FR de la región V? humana seleccionada en las cuatro versiones de la región V? humanizada que fueron también diseñadas. Análisis de secuencia de la región variable de la cadena li-gera kappa del 1D9 del ratón: Se comparó la secuencia de aminoácidos de la región V? de 1D9 (Figura 7) con otras regiones variables de cadena ligera kappa de ratón y también las secuencias consenso de los subgrupos en los que se subdividieron las regiones va-riables en la base de datos Kabat (Kabat y col., Sequences of proteins of immunological interest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)). Gracias a este análisis, se vio que la región V? de 1D9 tenía la más estrecha correspondencia con la secuencia consenso murina del subgrupo II de la kappa murina (Identidad = 79,46%, Similitud = 82,14%). Cuando sólo se compararon las FR de la región variable de la cadena ligera kappa de 1D9 en el subgrupo II del ratón, el porcentaje de identidad aumentó al 87,5%, mientras que el porcentaje de simili- tud aumentó al 88,75%. Además, la región V? de 1D9 de ratón mostraba una buena homología con una traducción del gen de la línea germinal de V? murina 70/3 (Figura 13) . Tomada junta, la anterior evidencia demostró claramente que la secuencia de 1D9 era típica de una región V? de ratón. Análisis de secuencia de la región variable de la cadena pesada del 1D9 del ratón: Mediante un análisis similar de la región VH de 1D9 (Figura 8) , se vio que ésta tenía la correspondencia más estrecha con la secuencia consenso del subgrupo lie de la cadena pesada del ratón en la base de datos Kabat (Kabat y col., Sequences of proteins of immunological interest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)). La identidad entre la se-cuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada murina de 1D9 y la secuencia consenso del subgrupo lile murino fue medida en un 70,94%, mientras que se calculó la similitud en un 76,07%. Cuando sólo se compararon las FR de la región V de 1D9 con el subgrupo lile murino, el porcenta-je de identidad aumentó a un 75,86%, mientras que la similitud aumentó a un 80,46%. La región VH del 1D9 del ratón mostró también una buena homología con una traducción del gen de la línea germinal de la VH murina de MLR-RF24BG, entre otros (Figura 14) . Así, la anterior evidencia confirmó que la se-cuencia de 1D9 era típica de una región VH de ratón. Modelación molecular del dominio de 1D9 : Para ayudar al diseño de las regiones variables humanizadas del anticuerpo 1D9, se construyó una serie de modelos moleculares de la región Fv del 1D9 murino y de las ocho variantes injertadas con CDR. Se hizo esto usando el paquete de modelación molecular AbM suministrado y utilizado por Oxford Molecular Limited (OML) . Se formatearon las estructuras cristalográficas de rayos X de anticuerpos disponibles de la base de datos Brookhaven para permitir su uso para la modelación con AbM. Se modelaron las FR de las regiones variables de 1D9 en FR de regiones variables de inmunoglobulinas resueltas estructuralmente similares. Mientras que las cadenas latera-les de aminoácidos idénticas se mantenían en su orientación original, las cadenas laterales sin correspondencia estaban substituidas como en la Fv del 1D9 original. Los átomos del esqueleto de las FR de la región V? del Fab Bv04-01 fueron usados para el modelo de la región de marco Fv de 1D9 tanto para la cadena V ? como para la cadena V (código de Brookhaven PDB lnbv, resuelto a 2 , 0Á) . La secuencia de Fab Bv04-01 era un buen emparejamiento para las secuencias de la región variable del 1D9 murino y de sus variantes humanizadas. Las identidades entre Fab Bv04-01 y el 1D9 murino y las secuen-cias humanizadas variaba entre un 76% y un 78% para las secuencias V? y entre un 74% y un 84% para las secuencias VH. El estudio de AbM con estructuras conocidas ha mostrado que la homología del esqueleto de las FR es un factor importante en la calidad de cualquier modelo, ya que el uso de estructuras FR que tienen un emparejamiento pobre con una secuencia que esté siendo modelada puede afectar de manera significativa y adversa a la posición y orientación de los bucles CDR. Para las estructuras de esqueleto de las CDR Ll, L2 , L3 , Hl y H2 , se tomaron las conformaciones para todos los modelos de las clases canónicas usadas por AbM sin modificación, usando las clases mostradas en las Figuras 9 y 10. Para la estructura de esqueleto del bucle Ll , se tomó la conformación de bucle de la región V? del 1D9 murino de la Clase canónica 4 de AbM. Esta clase canónica está basa-da en las descritas por Chothia y colaboradores (Chothia y Lesk, J. Mol . Biol . 197 : 901 (1987); Chothia y col., Nature 34 : 877 (1989); Tramontano y col., J". Mol . Biol . 215 : 175 (1990), y Chothia y col., J. Mol . Biol . 227 : 799 (1992)), pero ha sido modificada para tomar en consideración estructuras de las que se puede disponer ahora desde que se publicaron los artículos originales. El estudio del rendimiento de las predicciones de AbM para estructuras conocidas de bucles ha mostrado que los bucles CDR creados de esta forma están habi-tualmente modelados con muchas exactitud, es decir, dentro de una desviación RMS de 1-1, 5Á. El bucle H3 en la región VH de 1D9 es comparativamente corta en seis residuos de longitud. Fue modelada usando una búsqueda de conformaciones de esqueleto a partir de rayos X en el banco de datos Brookhaven. Para bucles cortos como éste, hay suficientes conformaciones de bucle de estructuras de rayos X conocidas para saturar el espacio conformacional disponible para el bucle. El estudio de las predicciones hechas por AbM con las estructuras de nuevos anti-cuerpos, donde la estructura no está incluida en las bases de datos usadas por el programa, muestra que, para bucles H3 de CDR de este tamaño', la exactitud es probablemente de al menos 2, 0Á. Después de ajustar todo el modelo para los con-flictos estéricos obvios, se sometió a minimización de energía, según se lleva a cabo en MACROMODEL, tanto para relajar los contactos atómicos desfavorables como para optimizar las interacciones de van der Waals y electrostáticas. Diseño de las variantes V? del anticuerpo 1D9 humanizado: La primera etapa en el diseño de las regiones variables humanizadas del anticuerpo 1D9 fue la selección de la región variable de la cadena ligera kappa humana que serviría como base para la región V? del 1D9 humanizado. Como ayuda en este proceso, se comparó inicialmente la región V? de 1D9 con la secuencia consenso de los cuatro subgrupos de la región variable de la cadena ligera kappa humana definidos por Kabat (Kabat y col . , Sequences of proteins of immunological interest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)). La región va- riable de la cadena ligera del 1D9 del ratón era la más similar a la secuencia consenso del subgrupo II de la cadena ligera kappa humana, con la que mostraba un 76,2% de identidad en toda la región variable y un 82,5% de identidad dentro de las FR solas. Al medir con respecto a la similitud, estos valores aumentaban a un 79,7% global y un 85,0% dentro de las FR solas. En consecuencia, parecía, en general, corresponderse bien con las secuencias de la región variable de la cadena ligera kappa humana del subgrupo kappa 2. La V? del 1D9 del ratón fue entonces comparada con todos los ejemplos registrados de secuencias individuales de regiones variables humanas públicamente disponibles. La Figura 15 muestra los mejores diecisiete emparejamientos con la región V? del 1D9 del ratón que fueron identificados a través este análisis. Globalmente, el algoritmo de búsqueda seleccionó el anticuerpo de región V? humana 036521 (Rhein-necker y col., Journal of Immunology, 157 (7) : 2989-97 (1996)) como el mejor emparejamiento con la región V? del 1D9 del ratón (Figura 16) . Sin embargo, una revisión del papel original para este anticuerpo reveló que se han usado cebadores oligo-nucleotídicos murinos para rescatar los genes del hibridoma. Esto significaba que este anticuerpo era ciertamente un anticuerpo murino y no humano, según sugería la base de datos Kabat. Así, el siguiente mejor emparejamiento con la región V? del 1D9 murino seleccionado por la búsqueda en la base de datos era la región V? humana del anticuerpo HF-21/28 (número de ID en la base de datos Kabat 005056; Chastagner y col., Gene, 101 (2) : 305-6 (1991) ) . La secuencia humana tenía una identidad global con la región V? del 1D9 de un 79,3% y un 85,0% en las FR solas. Cuando se midió con respecto a la similitud, estos valores aumentaron a un 83,99% global y un 87,5% en las FR solas. Además, los aminoácidos de FR clave se mantenían de una forma más conservadora en la región V? de HF-21/28 que en las otras regiones variables de cadena ligera kappa humana candidatas. En consecuencia, la FR de la región variable de la cadena ligera kappa de HF-21/28 fue seleccionada como secuencia aceptora humana para la humanización de la región variable de la cadena ligera kappa del anticuerpo 1D9. Desafortunadamente, el último residuo en la FR4 (en la posición 107, según el sistema de numeración de Kabat) de la región V? del HF-21/28 humano no fue definido por la base de datos de Kabat o los autores que aislaron original -mente esta secuencia de región variable. Por lo tanto, se decidió insertar el aminoácido más comúnmente encontrado en esta posición en las . secuencias de región variable descritas por el subgrupo ?-II de la cadena ligera kappa humana de Kabat (Kabat y col., Sequences of proteins of immunological in-terest, Quinta edición, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991)). En consecuencia, se añadió lisina en la posición 107 en FR4 en base a un análisis de la base de datos de Kabat, que encontró que un 85,7% de las secuencias en el subgrupo ?-II de la cadena li-gera kappa humana de Kabat tenían una lisina en esta posición. Ésta se convirtió entonces en la base de la primera versión humanizada de la cadena ligera kappa de 1D9 (1D9RKA) , que consistía esencialmente en las CDR de la región V? de 1D9 y las FR de la región V? de HF-21/28. Las Figuras 19A-19C de-finen la secuencia de aminoácidos para esta primer versión injertada con CDR de la región V? de 1D9 humanizado. La siguiente etapa en el proceso de diseño era estudiar las secuencias de aminoácidos de las FR de la región V? de HF-21/28 aceptoras humanas para determinar si algunos de estos residuos de aminoácidos tendría probabilidad para influir de manera adversa sobre la unión al antígeno. Esto podría ser causado directamente a través de interacciones con antígeno o indirectamente por alteración de la conformación u orientación de los bucles de CDR. Éste era un proceso difícil que sólo fue posible a través de la disponibilidad de un modelo de las regiones variables de 1D9, es decir, las regiones V? y las VH. No obstante, cualquier aminoácido en las FR del 1D9 del ratón que sí pareciera afectar a la unión a antígeno fue entonces considerado para la conversión en el anticuerpo 1D9 humanizado. Al decidir qué residuos murinos conservar, se consideraron los siguientes puntos : • Era muy importante que se conservaran las estructuras canónicas de los bucles hipervariables (Chothia y Lesk, J. Mol . Biol . 197 : 901 (1987); Chothia y col., Nature 34 : 811 (1989); Tramontano y col., J. Mol . Biol . 215 : 175 (1990), y Chothia y col., J. Mol . Biol . 227 : 799 (1992)). En consecuencia, era crucial conservar en las regiones variables del 1D9 humanizado todos los residuos de FR del ratón que formaban parte de estas estructuras canónicas (Figuras 9 y 10) . • Las secuencias de las regiones variables del anticuerpo 1D9 fueron comparadas con secuencias similares de otros anticuerpos de ratón para identificar residuos poco habituales o raros que pueden haber indicado un importante papel en la unión a antígeno. Se investigó esto entonces usando el modelo murino de los genes de región variable de 1D9. • También se hizo un análisis directo del modelo para intentar predecir si alguno de los otros residuos de FR de ratón no presentes en las FR humanizadas podrían influir en a unión a antígeno de algún modo. También se hicieron comparaciones de las secuencias aceptoras humanas individuales en cuanto a las re-giones variables de la cadena ligera kappa y de la cadena pesada con la secuencia consenso de los subgrupos de las regiones variables humanas a los que pertenecían las secuencias aceptoras. La identificación de cualquier aminoácido idiosincrásico en las secuencias donantes humanas era importante, ya que éstos podrían haber afectado de forma adversa a la unión a antígeno. • Dado que las regiones variables de cadena ligera y pesada humanas seleccionadas derivarían de dos diferen- tes anticuerpos humanos, habría que realizar un cuidadoso análisis de los residuos de empaquetamiento interdominio de las regiones variables de la cadena ligera kappa donantes y aceptoras (Chothia y col., J. Mol . Biol . 186 : 651 (1985)). Esto es debido a que cualquier empaquetamiento erróneo en es-ta región podría haber tenido un efecto dramático sobre la unión a antígeno, independientemente de a conformación de las estructuras de bucle CDR del anticuerpo 1D9 humanizado. Aunque había 12 aminoácidos diferentes entre las FR de la región V? del 1D9 murino donante y la región V? del HF-21/28 humano aceptora, sólo se consideraron dos residuos de ratón como suficientemente importantes para la afinidad de unión para conservarlos en las FR humanizadas. El primero de los cambios de FR que se introdujo en 1D9RKB se localizaba en la posición 36. El residuo es un residuo de Vernier (Foote y Winter, J". Mol . Biol . 224 : 487 (1992)) y se predice que es un residuo determinante de estructura clave para la estructura del bucle Ll, según definen Chothia y colaboradores (Chothia y Lesk, J. Mol . Biol . 197 : 901 (1987); Chothia y col., Nature 34 : 877 (1989); Tramontano y col., J. Mol . Biol . 215 : 175 (1990), y Chothia y col., J. Mol . Biol . 227 : 799 (1992)). Aunque ambos residuos son hidrofóbicos, la Phe humana es más voluminosa en esta posición y las estructuras de rayos X con Leu y Phe en esta posición muestran que, si hay presencia de Phe, el bloqueo estérico hace que la cadena lateral en 34Asn apunte en sentido contrario. Así, se consideró crítica para el éxito en la humanización de la cadena ligera kappa de 1D9. El segundo cambio incorporado en la versión humanizada 1D9RKB estaba en el residuo 37, es decir, Gln37Leu. Aunque éste era un cambio conservador, se produjo en una re- gión altamente conservada en la base de CDRl . Se pensó que conservando este residuo de Leu murino en esta versión, junto con el residuo Leu murino en la posición 36, se podría preservar la afinidad del anticuerpo humanizado. También se consideraron otras dos versiones de la región V? humanizada para construcción, para explorar las consecuencias estructurales y de afinidad de unión de la manipulación de las FR del anticuerpo 1D9 humanizado. 1D9RKC era esencialmente idéntico a 1D9RKB, excepto por la mutación GlnlOOGly. Hay una dramática diferencia en el volumen de la molécula entre estos dos residuos y, por lo tanto, se hizo esta versión para explorar las consecuencias de este cambio en las FR de la cadena ligera kappa humana reformada sobre la estructura del anticuerpo y la afinidad global del anticuer-po. 1D9RKD contenía las modificaciones descritas en 1D9RKC y, además, contenía el cambio de FR Glnl7His. Aunque Gln e His son similares en cuanto a tamaño y ambos son débilmente polares, el residuo murino (His) en esta posición es extremadamente raro entre todas las secuencias V? murinas (0,07% glo-bal, pero no se ha visto en las secuencias del subgrupo II de Kabat de ratón) y no se ha visto nunca en ninguna secuencia V? humana. Por el contrario, el residuo de Gln es más comúnmente observado en esta posición tanto en secuencias murinas (16,16% global y 6,12% en las secuencias del subgrupo II de Kabat de ratón) como humanas (5,00% global y 39,7% en las secuencias del subgrupo II de Kabat humanas) . Por lo tanto, la simple rareza de His en esta posición sugiere que puede ser importante para la unión, aunque no existe una clara evidencia que soporte esto por los datos de modelación molecular. En la Figura 11, se da una descripción de las secuencias de aminoácidos de todas las variantes de la región V? del anticuerpo 1D9 humanizado propuestas anteriormente. Diseño de variantes VH del anticuerpo 1D9 humanizado: De nuevo, la primera en el diseño de la región VH humanizada del anticuerpo 1D9 del ratón era la selección de la región variable de la cadena pesada humana aceptora que serviría como base de la región VH del 1D9 humanizado. Cuando se comparó inicialmente la región VH de 1D9 con las secuen-cias consenso de los tres subgrupos de la región variable de la cadena pesada humana, se vio que era la más similar a la secuencia consenso para el subgrupo III de la cadena pesada humana, con un 69,231% de identidad global y un 78,161% de identidad entre las FR solas. Cuando se midió con respecto a la similitud, estos valores aumentaron a un 74,359% global y a un 82,759% en las FR solas. La región VH del 1D9 murino fue entonces comparada con todos los ejemplos registrados de secuencias individuales de regiones variables humanas públicamente disponi-bles. Las Figuras 17A-B muestran los 24 mejores emparejamientos con la región VH del ratón que fueron identificados a través de este análisis. Globalmente, el algoritmo de búsqueda seleccionó la región VH humana del anticuerpo 4B4 ' CL (número de ID de la base de datos de Kabat 000490; Sanz y col., Journal of Immunology, 142 : 883 (1989)) como el mejor emparejamiento con la región VH del 1D9 murino. La región VH de este clon tenía una identidad global con la región VH de 1D9 del 67,2%, un valor que aumentó a un 80,95% cuando se compararon las FR solas (Figuras 18A-B) . Cuando se comparó con respecto a la similitud, estos valores aumentaron a un 69,66% global y a un 84,52% en las FR solas. Así, aunque de nuevo no era la más homologa de las secuencias VH aceptoras humanas potenciales, esta FR humana se convirtió en la base de la versión humanizada de la cadena pesada de 1D9. La siguiente etapa en el proceso de diseño era estudiar las secuencias de aminoácidos de las FR de la región VH aceptora de 4B4'CL era determinar si alguno de estos residuos de aminoácido tenía probabilidad de causar efectos adversos sobre la unión a antígeno. Una vez más, los modelos moleculares construidos por OML eran importantes en este proceso de diseño, gracias al cual se identificaron una serie de aminoácidos en las FR de la región VH del 1D9 murino para conversión en las primeros (1D9RHA) versiones y siguientes del anticuerpo 1D9 humanizado (Figura 12 y Figuras 20A-C) . Había 16 diferencias de aminoácidos entre las FR de las regiones VH del 1D9 murino donante y del 4B4'CL humano aceptor y se consideraron hasta 5 residuos murinos para conservación en las FR humanizadas (Figura 12) . 1D9RHA consistía en las CDR de la región VH del anticuerpo murino 1D9 insertadas genéticamente en las FR de la región VH del anticuerpo humano 4B4'CL. 1D9RHB era idéntico a la versión 1D9RHA, aparte de dos mutaciones FR1, Thr28Ser y Asn30Ser. Estos cambios fueron hechos porque representaban aminoácidos de Vernier, según definen Foote y Winter (J. Mol . Biol . 224 : 487 (1992)), los cuales se pensó que eran críticos para la conformación del bucle Hl . Los residuos 27-30 fueron considerados parte del propio bucle Hl y, por lo tanto, son incluso más críticos para la correcta conformación y orienta-ción de este bucle, lo que justifica su conservación incluso con más fuerza. Así, estos dos residuos representaban la suma de los cambios hechos en las FR de la secuencia VH del 4B4 ' CL humano en 1D9RHB. 1D9RHC era idéntico a la versión 1D9RHB, excepto por contener dos cambios más en las posiciones Gly49Ala y Phe67Tyr. El Gly49Ala era un cambio conservador. Sin embargo, la posición de residuo 49 ha sido identificada como un residuo de Vernier (Foote y Winter, J. Mol . Biol . 224 : 487 (1992)), importante para la estructura del bucle hipervaria-ble H2 , de tal forma que se decidió conservar el residuo de Ala murino en esta versión. La posición de residuo 67 era también una posición de residuo de Vernier, lo que lo identificaba como importante para mantener la conformación de bucle de las CDR. Tyr es observado muy raramente en las secuencias VH humanas (0,08% global) y no ha sido previamente encontrado en las regiones VH murinas en esta posición. En consecuencia, debe de haber surgido a través de mutación somática. Por lo tanto, dada su localización próxima a CDR2 según el modelo molecular y su status de residuo de Vernier, se decidió con-servar el residuo de Tyr murino en esta posición. 1D9RHD era idéntico a 1D9RHC, excepto por una mutación Thr93Val . Este residuo ha sido identificado como importante como residuo de empaquetamiento a la vez VH/VK (Chothia y col., J. Mol . Biol . 186 : 651 (1985) ) . Más aún, su posición enterrada entre los bucles de CDR Hl y H3 , según el modelo molecular, apoyaba la decisión de conservar el residuo de Val murino en esta posición. En la Figura 12, se da una descripción de las secuencias de aminoácidos de todas las variantes de la región VH humanizada antes descritas. Inhibición de la unión a MCP-1 por la versión humanizada de 1D9: La Figura 25 ilustra la capacidad del mAb murino 1D9 y de una versión humanizada del mAb 1D9 que contiene la cadena pesada VH de 1D9RHA (Figura 12) y la cadena ligera V? de 1D9RKA (Figura 11) para inhibir la unión de [125I] -MCP-1 a células THP-1 enteras. Se incubaron 0,5xl06 células THP-1 en HEPES 50 mM, CaCl2 1 mM, MgCl2 5 mM, 0,1% BSA, 0,05% azida sódica (tampón de unión) con diferentes diluciones de muestras de anticuerpo durante 10 minutos a 37°C. Se añadió igual vo-lumen de [125I] -MCP-1 en tampón de unión hasta una concentración final de 0,1 nM y se incubó durante 30 minutos más a 37 °C. Se diluyeron las células y se agitaron vorticialmente con igual volumen de tampón de unión con NaCl 0,5 M (tampón de lavado) y se obtuvo una pella por centrifugación (centrí-fuga de mesa, 7.000 rpm, 2 minutos) . Después de eliminar el sobrenadante, se agitó la pella vorticialmente en 200 µl de tampón de lavado, se centrifugó como antes y se eliminó el sobrenadante. Se resuspendieron las células en 100 µl de tampón de lavado y se contaron en un contador gamma (Cobra, Pac- kard Instruments) . El análisis de los datos fue llevado a cabo utilizando el programa Graphpad. Mientras que esta invención ha sido mostrada y descrita en particular con referencias a realizaciones preferidas de la misma, los expertos en la técnica entenderán que se pueden hacer en ella diversos cambios en cuanto a forma y detalles sin desviarse del alcance de la invención amparado por las reivindicaciones adjuntas.

LISTA DE SECUENCIAS <110> Millennium Pharmaceuticals, Inc. LaRosa, Gregory J. Horvath, Christopher Newman, Walter Jones, S. Tarran O'Brien, Siobhan H. O'Keefe, Theresa <120> ANTICUERPOS ANTI-CCR2 HUMANIZADOS Y MÉTODOS DE USO PARA LOS MISMOS <130> 1855.1052005 <140> PCT/US01/03537 <141> 2001-02-02 < 150 > 09/497 . 625 < 151> 03 - 02 - 2000 <150> 09/359.193 <151> 22-07-1999 <150> 09/121,781 <151> 1998-07-23 <160> 107 <170> FastSEQ para Windows Versión 3.0 <210> 1 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia cebadora <400> 1 tgagacaagc cacaagctga ac 2 <210> 2 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia cebadora <400> 2 tctgtattag tacacacagc cc 2 <210> 3 <211> 24 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia cebadora <400> 3 atgctgtcca catctcgttc tcgg 24 <210> 4 <211> 27 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia cebadora <400> 4 ttataaacca gccgagactt cctgctc 27 <210> 5 <211> 24 <212> PR0TEÍNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia líder del péptido señal CD5 <400> 5 Met Pro Met Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Thr Leu Tyr Leu Leu Gly 1 5 10 15 Met Leu Val 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L <; 220> <'. 223> Secuencia humanizada <• 100> 2PLJ r*= Glu val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Ala Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 40 45 Ala Arg He Arg Thr Lys Asn Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Tyr Thr He Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Thr Phe Tyr Gly Asn Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 21 <211> 100 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 21 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Val Gly 1 5 10 15 His Pro Ala Ser He Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 25 30 Asp Gly Lys Thr Phe Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 40 •.. 45 Pro Lys Arg Leu He Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro 100 <210> 22 <211> 100 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 22 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr He Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser He Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu He Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro 100 <210> 23 <211> 100 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 23 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr He Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser He Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu He Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro 100 <210> 24 <211> 100 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (100) <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 24 Asp Val Val Met Thr Gln Xaa Leu His Ser Leu Ser Val Thr He Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser He Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 25 30 Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Val Gln Pro 40 45 Pro Lys Arg Leu He Tyr Leu Val Ser Lys Leu Tyr Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80 Ser Arg Val Xaa Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Xaa Cys Met Gln Asp 85 90 95 Thr His Phe Pro 100 <210> 25 <211> 100 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 25 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu He Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Phe Gln Gly 85 90 95 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Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 40 45 Ala Gln He Arg Leu Lys Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly He Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Gly 100 <210> 37 <211> 100 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 37 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 40 45 Gly Phe He Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser He 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg 100 <210> 38 <211> 98 - <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 38 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr He Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg <210> 39 <211> 98 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 39 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr He Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg <210> 40 <211> 98 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (98) <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 40 Glu Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 40 45 Ala Ala He Ser Thr Asp Gly Ser Phe He Tyr Xaa Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Tyr Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Leu Arg <210> 41 <211> 98 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 41 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr He Ser Asn Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 42 <211> 101 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 42 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val His Arg Pro Pro Gly Lys Pro Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Ala Leu He Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr He Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Met Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Gln Ser He 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Ser Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp 100 <210> 43 <211> 100 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 43 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe 20 25 30 Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp He 40 ¡ 45 Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asp Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe He Val Ser Arg Asp Thr Ser Gln Ser He 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp 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Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Asn Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Gln Glu Trp He 40 45 Gly Glu He Asn Pro Gly Ser Ser Thr He Asn Tyr Thr Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Lys Phe He He Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 53 <211> 87 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 53 Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe 1 5 10 15 Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys 25 30 Arg Leu Glu Trp Val Ala Tyr He Ser Asn Gly Gly Gly Ser Thr Tyr 35 40 45 Tyr Pro Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ala 50 55 60 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr 65 70 75 80 Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 <210> 54 <211> 112 <212> PROTEÍNA <213> Homo sapiens <400> 54 Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Leu Thr Leu 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(128) <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 77 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala He Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Arg Asn Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Xaa Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 78 <211> 128 <212> PROTEÍNA <213> Homo sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (128) <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 78 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Gln Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr 25 30 Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 40 45 Ser Val He Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Val Cys Ser Gly Gly Arg Cys Tyr Pro Xaa Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 79 <211> 128 <212> PROTEÍNA <213> Homo sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (128) <223> Xaa = Cualquier aminoácido <400> 79 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 40 45 Ser Ala He Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Arg Asn Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Xaa Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 80 <211> 116 <212> PROTEÍNA <213> Homo sapiens <400> 80 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala He Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg 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87 <211> 127 <212> PROTEÍNA <213> Homo sapiens <400> 87 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala He Ser Gly Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Thr Pro Arg Asn He Val Ala Thr Lys Gly Met Asp 100 105 110 Ala Phe Asp He Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 88 <211> 119 <212> PROTEÍNA <213> Homo sapiens <400> 88 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly He Ser Trp Asn Ser Gly Ser He Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys 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<211> 426 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 95 atgaagttgc ctgttággct gttggtgctc tggattcggg agacaatcgg cgatgttgtg 60 atgacccaga ctccactcac tttgtcggtt accgttggac acccagcctc catctcttgc 120 aagtcaagtc agagcctctt agatagtgat ggaaagacat ttttgaattg gttgttacag 180 aggccaggcc agtctccaaa gcgcctaatc tatctggtgt ctaaactgga ctctggagtc 240 cctgacaggt tcactggcag tggatcaggg acagatttca cactgaaaat cagcagagtg 300 gaggctgagg atttgggagt ttattattgc tggcaaggta cacattttcc gtacacgttc 360 ggagggggga ccaagctgga aataaaacgg gctgatgctg caccaactgt atccatcttc 420 ccacca 426 <210> 96 <211> 443 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 96 atggacttcg ggttaaactt ggttttcttt gttgtttttt atcaaggtgt gcattgtgag 60 gtgcagcttg ttgagtctgg aggaggattg gtgcagccta aagggtcatt gaaactctca 120 tgtgcagcct ctggattcag cttcaatgcc tacgccatga actgggtccg ccaggctcca 180 ggaaagggtt tggaatgggt tgctcgcata agaactaaaa ataataatta tgcaacatat 240 tatgccgatt cagtgaaaga cagatacacc atctccagag atgattcaga aagtatgctc 300 tttctgcaaa tgaacaactt gaaaactgag gacacagcca 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acagatttca cactgaaaat 240 cagcagagtg gaggctgagg atgttggagt ttattattgc tggcaaggta cacattttcc 300 gtacacgttc ggacaaggga cccgactgga aataaaacgt acgg 344 <210> 99 <211> 443 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 99 accaggggat agacggatgg ggctgttgtt ttggctgagg agacggtgac cgtggtccct 60 gtgccccaga caccgttacc gtaaaaggtc acacagtaat acatggctgt gtcctcagtt 120 ttcaagttgt tcatttgcag aaagagcata ctttctgaat catctctgga gatggtgtat 180 ctgtctttca ctgaatcggc ataatatgtt gcataattat tatttttagt tcttatgcga 240 gcaacccatt ccaaaccctt tcctggagcc tggcggaccc agttcatggc gtaggcattg 300 aagctgaatc cagaggctgc acatgagagt ttcaatgacc ctttaggctg caccaatcct 360 cctccagact caacaagctg cacctcacaa tgcacacctt gataaaaaac aacaaagaaa 420 accaagttta acccgaagtc cat 443 <210> 100 <211> 148 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 100 Met Asp Phe Gly Leu Asn Leu Val Phe Phe Val Val Phe Tyr Gln Gly 1 5 10 15 Val His Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Lys Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe 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accaacagcc taacaggcaa 420 cttcat 426 <210> 102 <211> 142 <212> PROTEÍNA <213> Mus musculus <400> 102 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Trp He Arg Glu Thr He 1 5 10 15 Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Val 20 25 30 Gly His Pro Ala Ser He Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp 35 40 45 Ser Asp Gly Lys Thr Phe Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln 50 55 60 Ser Pro Lys Arg Leu He Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys 85 90 95 He Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln 100 105 110 Gly Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu He 115 120 125 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser He Phe Pro Pro 130 135 140 <210> 103 <211> 357 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> Cadena pesada humanizada <400> 103 tttggctgag ctgacggtga ccagggtccc ctggccccag acaccgttac cgtaaaaggt 60 ggtacagtaa tacacggctg tgtcctcagt tttcaagctg ttcatttgca gatagagcgt 120 gttttttgaa tcatctctgg agatggtgaa tctgtctttc actgaatcgg cataatatgt 180 tgcataatta ttatttttag ttcttatgcg gccaacccat tccaaaccct ttcctggagc 240 ctggcggacc cagttcatgg cgtaggcact gaaagtgaat ccagaggctg cacatgagag 300 tctcaatgac cccccaggct tcaccaatcc tcctccagac tcaaccaatt gcacctc 357 <210> 104 <211> 119 <212> PROTEÍNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Cadena pesada humanizada <400> 104 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg He Arg Thr Lys Asn Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Thr Phe Tyr Gly Asn Gly Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Lys 115 <210> 105 <211> 344 <212> ADN <213> Secuencia artificial <220> <223> Cadena ligera humanizada <400> 105 ccgtacgttt tatttccagt cgggtccctt gtccgaacgt gtacggaaaa tgtgtacctt 60 gccagcaata ataaactcca acatcctcag cctccactct gctgattttc agtgtgaaat 120 ctgtccctga tccactgccg ctgaacctgt cagggactcc agagtccagt ttagacacca 180 gatagattag gcgccttgga gactggcctg gcctctgctg aaaccaattc aaaaatgtct 240 ttccatcact atctaagagg ctctgacttg acttgcaaga gatggaggct ggctgtccaa 300 gggtaacggg caaggagagt ggagactggg tcatcactac gtag 344 <210> 106 <211> 114 <212> PROTEÍNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Cadena ligera humanizada <400> 106 Tyr Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser He Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 25 30 Asp Gly Lys Thr Phe Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu He Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu He Lys 100 105 110 Arg Thr <210> 107 <211> 112 <212> PROTEÍNA <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia humanizada <400> 107 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 His Pro Ala Ser He Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 25 30 Asp Gly Lys Thr Phe Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu He Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu He Lys 100 105 110

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2, cuya inmunoglobulina o fragmento contiene una región de unión a antígeno de origen no humano y al menos una porción de una inmunoglobulina de origen humano.
2. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 1, donde la porción de una inmunoglobulina de origen humano deriva de una región constante humana.
3. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 2, donde la región constante humana es de tipo gamma.
4. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 2, donde la región de unión a antígeno tiene origen en roedor.
5. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 2, donde la región de unión a antígeno deriva del anticuerpo monoclonal 1D9.
6. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 1, donde la región de unión a antígeno contiene al menos una región determinante de complementariedad de origen en roedor y la porción de una in-munoglobulina de origen humano deriva de una región de marco humana .
7. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 6, donde la región determinante de complementariedad deriva del anticuerpo mono-clonal 1D9.
8. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 6, donde la región determinante de complementariedad es seleccionada entre el grupo consistente en: a) aminoácidos 24-39 de la SEC ID N° : 9, b) aminoácidos 55-61 de la SEC ID N° : 9, c) aminoácidos 94-102 de la SEC ID N° : 9, d) aminoácidos 31-35 de la SEC ID N° : 10, e) aminoácidos 50-68 de la SEC ID N° : 10 y f) aminoácidos 101-106 de la SEC ID N° : 10.
9. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , que contiene una cadena pesada y una cadena ligera, donde dicha cadena ligera contiene al menos una región determinante de complementariedad derivada de un anticuerpo de origen no humano que se une a CCR2 y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano, y donde dicha cadena pesada contiene al menos una región determinante de complementariedad derivada de un anticuerpo de origen no humano que se une a CCR2 y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano.
10. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 9, donde dicha inmunoglobulina puede competir con el anticuerpo murino 1D9 por la unión a CCR2.
11. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 9, donde la cadena ligera contiene tres regiones determinantes de comple-mentariedad derivadas de la cadena ligera del anticuerpo 1D9 y la cadena pesada contiene tres regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena pesada del anticuerpo 1D9.
12. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 11, donde las regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena ligera de 1D9 son los aminoácidos 24-39 de la SEC ID N° : 9, los aminoácidos 55-61 de la SEC ID N° : 9 y los aminoácidos 94-102 de la SEC ID N° : 9, y donde las regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena pesada de 1D9 son los aminoácidos 31-35 de la SEC ID N° : 10, los aminoácidos 50-68 de la SEC ID N° : 10 y los aminoácidos 101-106 de la SEC ID N° : 10.
13. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 9, donde la cadena ligera de origen humano es la cadena ligera del anticuerpo HF-21/28.
14. La inmunoglobulina humanizada de la Reivindi-cación 9, donde la cadena pesada de origen humano es el anticuerpo humano 4B4'CL.
15. Una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que contiene CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera del anticuerpo murino 1D9 y una región de marco de cadena ligera humana.
16. La cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 15, donde la región de marco humana deriva de la cadena ligera del anticuerpo HF-21/28.
17. La cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 16, que contiene la región variable de la SEC ID N° : 9.
18. Una molécula de ácido nucleico aislada codi-ficante de la cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 17.
19. La molécula de ácido nucleico aislada de la Reivindicación 18, que contiene la secuencia codificante de región variable de la SEC ID N° : 95.
20. Una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que contiene CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada del anticuerpo 1D9 y una región de marco de cadena pesada humana.
21. La cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 20, donde la región de marco humana deriva de la cadena pesada del anticuerpo humano 4334 'CL.
22. La cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 21, que contiene la región variable de la SEC ID N° : 10.
23. Una molécula de ácido nucleico aislada codi-ficante de la cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 22.
24. La molécula de ácido nucleico aislada de la Reivindicación 23, que contiene la secuencia codificante de región variable de la SEC ID N° : 96.
25. Una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión antígeno de la misma, cuya cadena ligera o fragmento de unión a antígeno de la misma tiene una secuencia de aminoácidos que incluye al menos una porción funcional de la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera de la SEC ID N° : 9.
26. Una molécula de ácido nucleico aislada que contiene una secuencia nucleotídica codificante de una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 25.
27. La molécula de ácido nucleico aislada de la Reivindicación 26, que contiene la secuencia codificante de región variable de la SEC ID N° : 95.
28. Una cadena pesada de inmunoglobulina humani-zada o fragmento de unión antígeno de la misma, cuya cadena pesada o fragmento de unión a antígeno de la misma tiene una secuencia de aminoácidos que incluye al menos una porción funcional de la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada de la SEC ID N° : 10.
29. Una molécula de ácido nucleico aislada que contiene una secuencia nucleotídica codificante de una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 28.
30. La molécula de ácido nucleico aislada la Reivindicación 29, que contiene la secuencia codificante de región variable de la SEC ID N° : 96.
31. Un vector de expresión que contiene un gen fusionado codificante de una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada, cuyo gen contiene una secuencia de nucleótidos codificante de una CDR derivada de una cadena ligera de un anticuerpo no humano que tiene especificidad de unión por CCR2 y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano .
32. El vector de expresión de la Reivindicación 31, donde el anticuerpo no humano es el anticuerpo murino 1D9.
33. Una célula huésped que contiene el vector de expresión de la Reivindicación 31.
34. Un vector de expresión que contiene un gen fusionado codificante de una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada, cuyo gen contiene una secuencia de nucleótidos codificante de una CDR derivada de una cadena pesada de un anticuerpo no humano que tiene especificidad de unión por CCR2 y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano .
35. El vector de expresión de la Reivindicación 34, donde el anticuerpo no humano es el anticuerpo murino 1D9.
36. Una célula huésped que contiene el vector de expresión de la Reivindicación 34.
37. Una célula huésped que contiene una primera molécula de ácido nucleico recombinante codificante de una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada y una segunda mo- lécula de ácido nucleico recombinante codificante de una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada, donde dicha primera molécula de ácido nucleico tiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de la cadena ligera del anticuerpo murino 1D9 y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano, y donde dicha segunda molécula de ácido nucleico tiene una secuencia nucleotídica codificante de una CDR derivada de la cadena pesada del anticuerpo murino 1D9 y una región de marco derivada de una cadena pésada de origen humano.
38. Un método de preparación de una inmunoglobulina humanizada, consistente en mantener una célula huésped de la Reivindicación 37 en condiciones apropiadas para la expresión de una inmunoglobulina humanizada, donde las cadenas de inmunoglobulinas humanizadas se expresan y se produce una inmunoglobulina humanizada .
39. El método de la Reivindicación 38, que además incluye la etapa de aislamiento de la inmunoglobulina humanizada .
40. Un gen fusionado codificante de una cadena ligera o pesada de inmunoglobulina humanizada, que incluye: a) una primera secuencia de ácido nucleico codificante de una región de unión a antígeno derivada del anticuerpo monoclonal murino 1D9 y b) una segunda secuencia de ácido nucleico codificante de al menos una porción de una región constante de una inmunoglobulina de origen humano.
41. Un método de inhibición de la interacción de una célula que expresa CCR2 con un ligando de CCR2 , consis-tente en poner en contacto dicha célula con una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1.
42. Un método según la Reivindicación 41, donde la célula es seleccionada entre el grupo consistente en lin- focitos, monocitos, granulocitos, células T, basófilos y células que contienen un ácido nucleico recombinante codificante de CCR2 o una porción del mismo.
43. Un método según la Reivindicación 41, donde el ligando es una quimiokina.
44. Un método según la Reivindicación 43, donde la quimiokina es seleccionada entre el grupo consistente en MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4 y sus combinaciones.
45. Un método según la Reivindicación 41, donde el ligando es HIV.
46. Un método de inhibición de la infección por HIV en una célula, consistente en poner en contacto la célula con una cantidad efectiva de una composición que contiene una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1.
47. Un método de tratamiento del HIV en un paciente consistente en administrar al paciente una composición que contiene una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1.
48. Un método de inhibición de la infección por HIV en un paciente, consistente en administrar al paciente una composición que contiene una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1.
49. Un método de inhibición de una función asociada a la unión de una quimiokina a un CCR2 de mamífero, consistente en poner en contacto CCR2 con una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1, donde dicha inmunoglobulina humanizada inhibe la unión de dicha quimiokina al CCR2 de mamífero e inhibe una o más funciones asociadas a la unión de la quimiokina a CCR2.
50. Un método según la Reivindicación 49, donde la quimiokina es seleccionada entre el grupo consistente en MCP-1, MCP-2, CP-3, MCP-4 y sus combinaciones.
51. Un método de inhibición del tráfico de leucocitos en un paciente, consistente en administrar al paciente una composición que contiene una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 que se une a un CCR2 o porción de CCR2 de mamífero e inhibe la unión de un ligando al receptor.
52. Un método según la Reivindicación 51, donde el ligando es una quimiokina.
53. Un método según la Reivindicación 42, donde la quimiokina es seleccionada entre el grupo consistente en MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4 y combinaciones de los anteriores.
54. Un método de tratamiento de un trastorno mediado por CCR2 en un paciente, consistente en administrar al paciente una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 que se une a un CCR2 de mamífero o porción del mismo.
55. Un método según la Reivindicación 54, donde el trastorno es un trastorno inflamatorio.
56. Un método de inhibición de la re-estenosis en un paciente, consistente en administrar al paciente una can-tidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 que se une a un CCR2 de mamífero o porción del mismo.
57. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 para uso en terapia o diagnóstico.
58. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 para uso en el tratamiento de una enfermedad mediada por CCR2.
59. Uso de una inmunoglobulina humanizada o frag- mentó de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad mediada por CCR2.
60. Una composición farmacéutica consistente en una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 y un vehículo fisiológicamente aceptable.
61. Una cadena ligera de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en: a) SEC ID N° 12. b) SEC ID N° 13, c) SEC ID N° 14 y d) SEC ID N° 15.
62. Una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , consistente en una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en: a) SEC ID N° 17. b) SEC ID N° 18, c) SEC ID N° 19 y d) SEC ID N° 20.
63. Una cadena ligera de inmunoglobulina humani-zada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 codificada por una molécula de ácido nucleico que tiene la SEC ID N° : 98.
64. Una cadena pesada de inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 codificada por una molécula de ácido nucleico que tiene la SEC ID N° : 97.
65. Una inmunoglobulina quimérica o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2, que contiene una región variable de cadena ligera de origen no humano y una región constante humana.
66. Una inmunoglobulina quimérica o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , que contiene una región variable de cadena pesada de origen no humano y una región constante humana .
67. Una inmunoglobulina quimérica o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 , que tiene una región de cadena variable de cadena ligera de origen no humano y una región variable de cadena pesada de origen no humano y que además contiene una región constante humana.
68. Un método según la Reivindicación 56, donde dicha re-estenosis se asocia a intervención vascular en dicho mamífero.
69. Un método según la Reivindicación 68, donde dicha intervención vascular consiste en angioplastia.
70. Un método según la Reivindicación 68, donde dicha intervención vascular consiste en la colocación de stents .
71. Un método según la Reivindicación 68, donde dicha intervención vascular consiste en angioplastia y colocación de stents.
72. Un método de inhibición del estrechamiento de la luz de un vaso en un mamífero, consistente en administrar a dicho mamífero una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 o de la Reivindicación 9 que se une a un CCR2 de mamífero o a una porción del mismo.
73. Un método de inhibición de la hiperplasia de la neoíntima de un vaso en un mamífero, consistente en administrar a dicho mamífero una cantidad efectiva de una inmuno-globulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 1 o de la Reivindicación 9 que se une a un CCR2 de mamífero o a una porción del mismo.
74. Un método según la Reivindicación 73, donde dicha hiperplasia de la neoíntima se asocia a una intervención vascular en dicho mamífero.
75. Un método según la Reivindicación 74, donde dicha intervención vascular consiste en angioplastia.
76. Un método según la Reivindicación 74, donde dicha intervención vascular consiste en la colocación de stents .
77. Un método según la Reivindicación 74, donde dicha intervención vascular consiste en angioplastia y colocación de stents.
78. Un método según la Reivindicación 54, donde dicho trastorno mediado por CCR2 es un trastorno autoinmune.
79. Un método según la Reivindicación 78, donde el trastorno autoinmune es seleccionado entre el grupo consistente en esclerosis múltiple y artritis reumatoide.
80. Un método según la Reivindicación 79, donde el trastorno autoinmune es esclerosis múltiple.
81. Un método según la Reivindicación 54, donde el trastorno mediado por CCR2 es seleccionado entre el grupo consistente en aterogénesis y aterosclerosis.
82. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2, consistente en una cadena pesada y una cadena lige-ra, donde dicha cadena ligera contiene al menos una región determinante de complementariedad derivada del anticuerpo monoclonal murino 1D9 y una región de marco derivada de la cadena ligera del anticuerpo humano HF-21/28 y donde dicha cadena pesada contiene al menos una región determinante de com-plementariedad derivada del anticuerpo monoclonal murino 1D9 y una región de marco derivada de la cadena pesada del anticuerpo humano 4B4'CL.
83. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de la Reivindicación 82, donde la cadena ligera contiene tres regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena ligera del anticuerpo 1D9 y la cadena pesada contiene tres regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena pesada del anti-cuerpo 1D9.
84. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 83, donde las regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena ligera de 1D9 son los aminoácidos 24-39 de la SEC ID N° : 9, los aminoácidos 55-61 de la SEC ID N° : 9 y los aminoácidos 94-102 de la SEC ID N° : 9, y donde las regiones determinantes de complementariedad derivadas de la cadena pesada de 1D9 son los aminoácidos 31-35 de la SEC ID N° : 10, los aminoácidos 50-68 de la SEC ID N° : 10 y. los aminoácidos 101-106 de la SEC ID N° : 10.
85. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad por CCR2, consistente en una cadena ligera y una cadena pesada complementaria, donde dicha cadena ligera contiene una región variable consistente en la SEC ID N° : 12.
86. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad por CCR2 , consistente en una cadena pesada y una cadena ligera complementaria, donde dicha cadena pesada contiene una región variable consistente en la SEC ID N° : 17.
87. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad por CCR2 , consistente en una cadena pesada y una cadena ligera, donde dicha cadena ligera contiene una región variable con-sistente en la SEC ID N° : 12 y donde dicha cadena pesada contiene una región variable consistente en la SEC ID N° : 17.
88. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 87, donde dicha inmuno-globulina puede competir con el anticuerpo murino 1D9 por la unión a CCR2.
89. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 87, donde dicha inmuno-globulina inhibe la unión de un ligando a CCR2.
90. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 89, donde el ligando es una quimiokina .
91. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la Reivindicación 90, donde la quimiokina es seleccionada entre el grupo consistente en MCP-1, MCP-2, CP-3, MCP-4 y sus combinaciones.
92. Una composición farmacéutica consistente en una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindicaciones 82-87 y un vehículo fisiológicamente aceptable.
93. Un método de inhibición de la interacción de una célula que expresa CCR2 con un ligando de CCR2 , consistente en poner en contacto dicha célula con una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindicaciones 82-87.
94. Un método de inhibición de la infección por HIV en un paciente, consistente en administrar al paciente una composición consistente en una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindicaciones 82-87.
95. Un método de inhibición de una función asociada a la unión de una quimiokina a CCR2 de mamíferos, consistente en poner en contacto CCR2 con una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindicaciones 82-87, donde dicha inmunoglobulina humanizada inhibe la unión de dicha quimiokina al CCR2 de mamífero e inhibe una o más funciones asociadas a la unión de la quimiokina a CCR2.
96. Un método de tratamiento de un trastorno mediado por CCR2 en un paciente, consistente en administrar al paciente una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquie-ra de las Reivindicaciones 82-87 que se une a CCR2 de mamífero o a una porción del mismo.
97. Un método de inhibición de la re-estenosis en un paciente, consistente en administrar al paciente una cantidad efectiva de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindicaciones 82-87 que se une a CCR2 de mamífero o a una porción del mismo.
98. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindica-ciones 82-87 para uso en terapia o diagnóstico.
99. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindicaciones 82-87 para uso en el tratamiento de una enfermedad mediada por CCR2.
100. Uso de una inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la misma de cualquiera de las Reivindicaciones 82-87 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad mediada por CCR2.
101. Una cadena ligera de inmunoglobulina humani-zada o fragmento de unión a antígeno de la misma que tiene especificidad de unión por CCR2 consistente en la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N° : 107.