MXPA02002971A

MXPA02002971A - Compuestos para el tratamiento de isquemia.

Info

Publication number: MXPA02002971A
Application number: MXPA02002971A
Authority: MX
Inventors: Michael Paul Deninno
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2001-03-16
Filing date: 2002-03-15
Publication date: 2003-07-14
Also published as: US20030055021A1; CA2376738A1; EP1241176A1; US20050171049A1; BR0200782A; JP2002322193A

Abstract

Se describen agonistas de A3 que tienen la fórmula I, asícomo métodos de uso de dichos agonistas de A3 y composiciones farmacéuticas que contienen dichos agonistas de A3, (ver fórmula) los agonístas de A3 sonútiles para reducir el daño de tejido que resulta de isquemia o hipoxia de teji

Description

COMPUESTOS PARA EL TRATAMIENTO DE ISQUEMIA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a agonistas del receptor A3 de adenosina, composiciones farmacéuticas que contienen dichos agonistas y el uso de dichos agonistas para tratar, por ejemplo, isquemia, en particular daño isquémico perioperativo de miocardio en mamíferos, incluyendo humanos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Puede ocurrir daño isquémico de miocardio en pacientes en instalaciones de consulta externa así como también en instalaciones perioperativas, y puede llevar al desarrollo de muerte repentina, infarto de miocardio o falla congestiva cardiaca. Existe una necesidad médica no cubierta de prevenir o reducir el daño isquémico de miocardio, particularmente daño isquémico perioperativo. Se espera que dicha terapia sea de salvamento y reduzca hospitalizaciones, mejore la calidad de vida y reduzca los costos generales del cuidado de la salud de pacientes de alto riesgo. La cardioprotección farmacológica reduciría el daño por infarto al miocardio y la disfunción que ocurre en estas instalaciones quirúrgicas (perioperativamente). Además de reducir el daño al miocardio y de mejorar la función del miocardio post-isquémico en pacientes con enfermedad cardiaca isquémica, la cardioprotección también reduciría la incidencia de morbilidad y mortalidad cardiaca debidas a infarto y disfunción de miocardio en pacientes "en riesgo" (tales como los mayores de 65 años, intolerantes al ejercicio, con enfermedad de arteria coronaria, diabetes mellitus, hipertensión) que requieren cirugía no cardiaca. La patente de E.U.A. No. 5,604,210 describe el uso de ciertos ¦ compuestos de tipo adenosina para la prevención o tratamiento de un edema cerebral, una hemorragia intracraneal y un infarto cerebral. La patente de E.U.A. No. 5,688,774 describe agonistas selectivos de A3, particularmente, compuestos de adenina que tienen sustituyentes seleccionados en las posiciones 2, 6 y 9, y compuestos sustituidos relacionados, particularmente los que contienen sustituyentes en los grupos bencilo y/o uronamida, como agentes que activan el receptor A3. La patente de E.U.A. No. 5,773,423 describe N6- benciladenosina-5'-N-uronamida y compuestos sustituidos relacionados, particularmente los que contienen sustituyentes sobre los grupos bencilo y/o uronamida, y ribósidos de xantina modificados, para la activación del receptor A3 de adenosina. En J. Med. Chem. 1994, 37, 636-646, "Structure-Activity Relationships of N6-Benzyladenosine-5'-uronamides as A3-Selective Agonists", se describe la síntesis de análogos de adenosina modificados en la posición 5' como uronamidas y/o como derivados N6-bencilo, que son potencialmente útiles como sondas farmacológicas y bioquímicas para los receptores A3.

En J. Meó. Chem. 1995, 38, 1174-1 188, "Search for New Purine-and Ribose- Modified Adenosine Analogues as Selective Agonists and Antagonists at Adenosine Receptors", se describe que han determinado las afinidades de unión en los receptores de adenosina A1 p A2a y A3 de rata de una amplia gama de derivados de adenosina. En particular, se encontró que los compuestos 3'^-amino no tienen actividad. En J. Med. Chem. 1995, 38, 1720-1735, "Structure-Activity Relationships of 9-Alkyladenine and Ribose-Modified Adenosine Derivatives at Rat A3 Adenosine Receptors", se describe la síntesis de derivados de 9-alquiladenina y derivados de N6-benciladenosina modificados con ribosa como guías para el desarrollo de antagonistas del receptor de adenosina A3 de rata. La patente de E.U.A. No. 5,817,760 describe receptores de adenosina humanos recombinantes A1 , A2a, A2b y A3, que se prepararon mediante técnicas de clonación de ADNc y reacción en cadena de polimerasa. Los receptores de adenosina recombinantes se pueden utilizar en un ensayo para identificar y evaluar entidades que se unen a receptores de adenosina o que incrementan dicha unión. Existe claramente una necesidad y una búsqueda continua en este campo de la técnica para tratamientos de isquemia de miocardio perioperativa.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención está dirigida a un compuesto de la fórmula (I) en donde X es oxi, metileno o tío; Y es CH o N; Z es H, alquilo de C1-C4, alquiloxi de CrC4, trifluorometilo o halógeno; R1 es hidroximetilo, alcoxi(CrC3)metilo, cicloalcoxi(C3-C5)metilo, carboxi, alcoxi(CrC3)carbonilo, cicloalcoxi(C3-C5)carbonilo, 1 ,1-aminoiminometilo, 1 ,1 -(mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)amino)iminometilo, 1 ,1-(mono-N- o di-N,N-cicloalqu¡l(C3-C5)amino)¡minometilo, carbamoilo, mono- o di-N,N-alquil(Ci-C4)aminocarbonilo, mono-N- o di-N,N-cicloalquil(C3-C5)aminocarbonilo o N-alquil(Ci-C4)-N-cicloalquil(C3-C5)aminocarbonilo; R2 es H, alquilo de C1-C3 o cicloalquilo de C3-C5; A es -(CH2)n-, en donde n es 1 a 4, o -(CmH2m-2)-, en donde m es 3 a 6 (por ejemplo ciclopropilo, ciclobutilo, metilciclopropilo, ciclopentilo, metilciclobutilo, ciclohexilo, metilciclopentilo, etilciclobutilo, propilciclopropilo, metilciclopropiletilo, etc.); y B es hidrógeno, heteroarilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, -CH(aril)2, o en donde R , R , R , RB y RB5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, tio, amino, alquiloxi de C Ce, alquiltio de C1-C6, alquilamino de Ci-C6 y D-G, en donde D es oxi, tio, NH, alquiloxi de C1-C6, alquiltio de C C6 o alquilamino de CrC6, y G es un anillo de cinco a ocho miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, que tiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxigeno, azufre y nitrógeno, o un anillo bicíclico que consiste de dos anillos fusionados de tres a seis miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, tomado independientemente, que tiene opcionalmente de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno, en donde G está opcionalmente mono-, di- o tri-sustituido independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, ciano, cicloalquilo de C3-C5, hidroxi o alcoxi de C1-C3, o G es ciano, alcoxi(Ci-C4)carbonilo, cicloalcoxi(C3-C5)carbon¡lo, ¦ C(0)NR R5, C(S)NR R5, C(NH)NR R5, C(N-alquilo(C C3))NR R5 o C(N- cicloalquilo(C3-C 0))NR4R5, en donde R4 es alquilo de C-1-C10, hidroxi, alcoxi de C1-C10, cicloalcoxi de C3-C 0 o un anillo de cinco a ocho miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente ¡nsaturado, enlazado opcionalmente a través de alquilo de C1-C3, que tiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, o un anillo bicíclico, o un anillo bicíclico con puente opcional (C1-C3) (por ejemplo adamantano) enlazado opcionalmente mediante alquilo de Ci-C3, dicho anillo bicíclico o anillo bicíclico puenteado teniendo opcionalmente de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno, en donde dicho alquilo de C1-C10, alcoxi de C1-C10, cicloalcoxi de C3-C-io o anillo o anillos de R4, están opcionalmente mono-, di- o trisustituidos independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3, trifluorometilo, nitro, ciano, cicloalquilo de C3-C5, hidroxi o alcoxi de C1-C3, y R5 es H, alquilo de C1-C10 o cicloalquilo de C1-C10; o R4 y R5 tomados junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo de cuatro a nueve miembros, completamente saturado o parcialmente insaturado, dicho anillo puenteado opcionalmente, teniendo opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, dicho anillo opcionalmente mono- o disustituido independientemente con oxo, hidroxi, alcoxi de C1-C6, alquilo de CrCs, amino, mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)aminocarbonilo, mono-N- o di-N,N-' cicloalquil(C3-C5)aminocarbonilo, N-alquil(C-i-C4)-N-cicloalquil(C3- C5)aminocarbonilo, mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)amino, mono-N- o di-N,N- cicloalquil(C3-C5)amino, N-alquil(Ci-C4)-N-cicloalquil(C3-C5)amino, formilamino, alquil(Ci-C4)carbonilamino, cicloalquil(C3-C5)-carbonilamino, alcoxi(Ci-C4)-carbonilamino, N-alcoxi(Ci-C4)carbonil-N-alquil(CrC4)amino, sulfamoilo(Ci-C4), alquil(Ci-C4)sulfonilamino, cicloalquil(C3-C5)sulfonilamino o un anillo de cinco a ocho miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, enlazado opcionalmente por medio de alquilo de C1-C3, teniendo opcionalmente de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, o un anillo bicíclico que consiste de dos anillos fusionados de tres a seis miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, tomado independientemente, enlazado opcionalmente por medio de alquilo de CrC3, que tiene opcionalmente de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno, opcionalmente mono- o disustituido con halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C3 o alcoxi de C1-C3; con la condición de que A no sea -(CH2)i-, cuando R es -D-G, RB4 es halógeno, trifluorometilo, ciano, alquilo de C1-C3, alquiloxi de C1-C3, etenilo o etinilo, y R82, RB3 y RB5 son hidrógeno; un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. En una modalidad preferida, X es oxi; Y es N; Z es H o Cl; R1 es alquil(Ci-C6)carbamoilo; R2 es H; A es -(Ch^Xr, en donde n es 1 o 2, o ciclopropilo; B es una porción sustituida o no sustituida seleccionada de heteroarilo, naftilo, -CH(aril)2, o en donde RB1, RB2, RB3, RB4 y R85 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, tio, amino, alquiloxi de C C-6, alquiltio de C1-C6. alquilamino de C1-C6 y D-G, en donde D es oxi, tio, alquiloxi de C1-C6 o alquiltio de C1-C6, y G es fenilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridinazinilo, tetrazolilo, isotiazolilo, tiofenilo, furanilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazolilo, pirrolilo, indolilo, naftalenilo, quinolinilo, ísoquinolinilo, benzo[b]furanilo, benzo[b]tiofenilo, benzotiazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, en donde G está opcionalmente mono-, di- o trisustituido independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3 o alcoxi de C1-C3; un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. En una modalidad muy preferida, B es (i) un piridilo, indolilo o ' tiazolilo, sustituido o no sustituido, en donde el piridilo, indolilo o tiazolilo sustituido, está sustituido por lo menos con un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, tio, amino, alquiloxi de Ci-C6, alquiltio de Ci-C6, alquilamino de C C6 y -DG, en donde D es oxi, tio, alquiloxi de CrC6 o alquiltio de CrC6, y G es fenilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridazinilo, tetrazolilo, isotiazolilo, tiofenilo, furanilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazolilo, pirrolilo, indolilo, naftalenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzo[b]furanilo, benzo[b]tiofenilo, benzotiazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, en donde dicho G opcionalmente está mono-, di- o trisustituido independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3 o alcoxi de C-1-C3; o (ii) en donde RB1, RB2, RB3, R84 y RB5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, alquiloxi de Ci-C6 y -D-G, en donde D es alcoxi de d-Ce y G es fenilo, piridilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, furanilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazolilo, pirrolilo o morfolinilo, en donde dicho G opcionalmente está mono-, di- o trisustituido independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3, trifluorometoxi o alcoxi de C1-C3; un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. Otro aspecto de esta invención es el de métodos de tratamiento de un mamífero (por ejemplo ser humano) que tiene una enfermedad o condición mediada por un receptor de adenosina A3, administrando al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I), un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. Una modalidad de la presente invención está dirigida a métodos para reducir el daño de tejido (por ejemplo impedir sustancialmente el daño de tejido induciendo protección de tejido), que resulta de isquemia o hipoxia; dichos métodos comprenden administrar a un mamífero (por ejemplo un humano macho o hembra) en necesidad de dicho tratamiento, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. El método puede incluir reducción del daño de tejido que resulta de isquemia/hipoxia durante transplante de órgano. Los tejidos isquémicos/hipóxicos preferidos tomados individualmente o como un grupo, incluyen tejidos isquémicos/hipóxicos tales como tejido cardiaco, cerebral, de hígado, riñon, pulmón, tubo digestivo, músculo esquelético, bazo, páncreas, nervio, médula espinal, retina, la • vasculatura y tejido intestinal. Un tejido isquémico/hipóxico especialmente preferido es el tejido cardiaco. Se prefiere que los compuestos sean administrados para prevenir daño isquémico perioperativo al miocardio. Preferiblemente, los compuestos de la presente invención se administran profilácticamente.. Preferiblemente, los compuestos de la presente invención se administran antes de cirugía cardiaca o no cardiaca y/o brevemente después de la misma (por ejemplo en infusión continua o en dosis de bolos múltiples durante un período de tres a cuatro días). Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar localmente. Una dosificación preferida es de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 100 mg/kg/día del compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco. Una dosificación especialmente preferida es de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 50 mg/kg/día de un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco.

Otra modalidad de la presente invención está dirigida a métodos para reducir daño de tejido de miocardio (por ejemplo prevenir sustancialmente daño de tejido induciendo protección de tejido) durante cirugía (por ejemplo cirugías de injerto de derivación de arteria coronaria (CABG), cirugías vasculares, angioplastía coronaria transluminal percutánea (PTCA), o cualquier intervención coronaria transluminal percutánea (PTCI), transplante de órgano u otras cirugías no cardiacas), que comprenden administrar a un mamífero (por ejemplo un humano) una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. Los métodos de la presente invención también se pueden usar para reducir daño de tejido cardiaco (por ejemplo prevenir sustancialmente daño del tejido induciendo protección de tejido) en un paciente que presenta eventos isquémicos cardiacos (síndormes coronarios agudos, por ejemplo infarto de miocardio o angina inestable) o cerebrales (por ejemplo apoplejía) en evolución, o un paciente diagnosticado con enfermedad cardiaca coronaria (por ejemplo infarto de miocardio previo o angina inestable), o un paciente que está en alto riesgo de infarto de miocardio (por ejemplo, edad > 65 y dos o más factores de riesgo de enfermedad cardiaca coronaria). En otra modalidad de la presente invención, se proveen métodos para prevenir daño isquémico/hipóxico, que comprenden la administración oral crónica a un mamífero (por ejemplo humano) en necesidad de dicho tratamiento, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato del compuesto o del profármaco. La presente invención también es útil para tratar enfermedades cardiovasculares, arteriesclerosis, arritmia, angina de pecho, hipertrofia cardiaca, enfermedades renales, complicaciones diabéticas, restenosis, • hipertrofias de órgano o hiperplasias, choque séptico y otras enfermedades inflamatorias (por ejemplo septicemia y endotoxemia), trastornos isquémicos del cerebro, impacto de miocardio, disfunción miocárdica y enfermedades cerebrovasculares, administrando a un mamífero (por ejemplo un humano) una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. En otro aspecto de la presente invención, se proveen composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. La presente invención también está dirigida a una composición farmacéutica para la reducción de daño de tejido que se origina de isquemia o hipoxia, que comprende una cantidad reductora de daño a tejido por isquemia o hipoxia, de un compuesto de fórmula (I), un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto de la presente invención, se provee un equipo farmacéutico para ser usado por un consumidor que tiene, o está en riesgo de tener, una enfermedad o condición originada, por ejemplo, de isquemia o hipoxia. El equipo comprende (a) una forma dosificada adecuada tal como ' una solución parenteral inyectable adaptada particularmente para inyección intravenosa o intramuscular que comprende un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco; y (b) instrucciones que describen un método de uso de la forma dosificada para reducir daño de tejido resultante de isquemia o hipoxia. Otro aspecto de esta invención se refiere a combinaciones de un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco, y otros compuestos, como se describe más abajo. En una modalidad, se provee una composición farmacéutica de combinación que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende: (a) un primer compuesto, siendo dicho primer compuesto un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco; (b) un segundo compuesto, siendo dicho segundo compuesto un agente cardiovascular, inhibidor de glicógeno fosforilasa, inhibidor de sorbitol deshidrogenasa o inhibidor de aldosa reductasa; y opcionalmente, (c) un vehículo o diluyente farmacéutico. En otra modalidad de la presente invención, se proveen métodos para reducir el daño de tejido (por ejemplo prevenir sustancialmente el daño ¦ de tejido induciendo protección de tejido) que se origina, o que se podría originar, de isquemia o hipoxia; dichos métodos consisten en administrar a un mamífero (por ejemplo un humano), (a) un primer compuesto, siendo dicho primer compuesto un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco; y (b) un segundo compuesto, siendo dicho segundo compuesto un agente cardiovascular, inhibidor de glicógeno fosforilasa, inhibidor de sorbitol deshidrogenasa o inhibidor de aldosa reductasa, en donde las cantidades del primero y el segundo compuesto producen un efecto terapéutico. En otra modalidad de la presente invención, se provee un equipo que comprende: (a) un compuesto de fórmula I, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, en una primera forma de dosis unitaria; (b) un agente cardiovascular, inhibidor de glicógeno fosforilasa, inhibidor de sorbitol deshidrogenasa o inhibidor de aldosa reductasa y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, en una segunda forma de dosis unitaria; y (c) un envase. De preferencia, en estas composiciones de combinación, ¦ métodos de combinación y equipos farmacéuticos, los agentes cardiovasculares (por ejemplo agentes que tienen un efecto cardiovascular) que incluyen las sales, solvatos o hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos, son por ejemplo p-bloqueadores (por ejemplo acebutolol, atenolol, bopindolol, labetolol, mepindolol, nadolol, oxprenol, pindolol, propanolol, sotalol), bloqueadores del canal de calcio (por ejemplo amlodipina, nifedipina, nisoldipina, nitrendipina, verapamilo), abridores del canal de potasio, adenosina, agonistas del receptor de adenosina, inhibidores de intercambiador de sodio-hidrógeno tipo 1 (NHE-1 ), inhibidores de ACE (por ejemplo captopril, enalaprilo), donadores de óxido nítrico (por ejemplo dinitrato de isosorbida, 5-mononitrato de isosorbida, trinitrato de glicerilo), diuréticos (por ejemplo hidroclorotiazida, indapamida, pi retan id a, xipamida), glicósidos (por ejemplo digoxina, metildigoxina), trombolíticos (por ejemplo tPA), inhibidores de plaquetas (por ejemplo ReoPro™), aspirina, dipiridamol, cloruro de potasio, clonídina, prazosina, inhibidores de píruvato deshidrogenasa cinasa (por ejemplo dicloroacetato), activadores del complejo de piruvato deshidrogenasa, biguanidas (por ejemplo metformina), u otros agonistas del receptor de adenosina. Otros agentes cardiovasculares incluyen antagonistas del receptor de angiotensina II (All), inhibidores de C5a, receptor de complemento soluble tipo 1 (sCR1 ) o análogos, inhibidores de oxidación parcial de ácido graso (PFOX, especialmente ranolazina), activadores de acetil-CoA carboxilasa, inhibidores de malonil CoA descarboxilasa, inhibidores de proteína cinasa 5'-AMP activada (AMPK), inhibidores de nucleósido de adenosina, agentes contra apoptosis (por ejemplo inhibidores de caspasa), monofosforil-lípido A o análogos, activadores/inhibidores de óxido nítrico sintetasa, activadores de proteína cinasa C (específicamente proteína cinasa ), inhibidores de proteína cinasa , inhibidores de poli(ADP ribosa) sintetasa (PARS, PARP), metformina (inhibidores de gluconeogénesis, sensibilizadores de insulina), inhibidores de enzima convertidora de endotelina (ECE), antagonistas del receptor de endotelina ETA, inhibidores de TAFI (inhibidor fibrinolítico activado por trombina) y moduladores de intercambiador de Na/Ca. Los inhibidores de NHE-1 preferidos son [1-(8-bromoquinolin-5-il)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(6-cloroquinolin-5-il)-5-ciclopropil-1/- -pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1-(¡ndazol-7-il)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(bencimidazol-5-il)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1-(1-isoquinolil)-5-ciclopropil-1/- -pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-ciclopropil-1-(4-quinolinil)-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-ciclopropil-1 -(quinolin-5-il)-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-ciclopropil-1 -(quinolin-8-il)-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(indazol-6-il)-5-etil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(indazol-5-il)-5-etil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(bencimidazol-5-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(1-metilbencimidazol-6-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]- ' guanidina; 1-(5-quinolinil)-5-n-propil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(5-quinol¡nil)-5-isopropü-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-etil-1-(6-quinolinil)-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-metilbencimidazol-5-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]- guanidina; [1 -(1 ,4-benzodioxan-6-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina [1 -(benzotriazol-5-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(3-cloroindazol-5-H)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(5-quinolinil)-5-butil-1 W-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-propil-1 -(6-quinolinil)-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-isopropil-1 -(6-quinolinil)-1 /- -pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-cloro-4-metilsulfonilfenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4- carbonil]guanidina; [1 -(2-clorofenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-trifluorometil-4-fluorofenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4- carboniljguanidina; [1-(2-bromofenil)-5-ciclopropil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-fluorofenil)-5-ciclopropil-1 /- -pirazol-4-carbonil]guan¡dina; [1 -(2-cloro-5-metoxifenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1-(2-cloro-4-metilaminosulfonilfenil)-5-ciclopropil-1 V-pirazol-4-carboniljguanidina; [1-(2,5-diclorofenil)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2,3-diclorofenil)-5-ciclopropil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-cloro-5-aminocarbonilfenil)-5-ciclopropil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-cloro-5-aminosulfonilfenil)-5-ciclopropil-1 -/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-fluoro-6-trifluorometilfenil)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carboniljguanidina; [1 -(2-cloro-5-metilsulfonilfenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-cloro-5-dimetilaminosulfonilfenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carboniljguanidina; [1 -(2-trifluorometil-4-clorofenil)-5-ciclopropil-1 /- -pirazol-4-carboniljguanidina; [1 -(2-clorofenil)-5-metil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-metil-1 -(2-trifluorometilfenil)-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-etil-1 -fenil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-cicloprop¡l-1-(2-tr¡fluorometilfenil)-1H-p¡razol-4-carbonil]-guanidina; [5-c¡clopropil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-carbonil]guan¡dina; [5-ciclopropil-1-(2,6-diclorofenil)-1 -/-pirazol-4-carbon¡l]guanidina; y sales, hidratos y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. En las composiciones de combinación, y en los métodos y equipos de combinación de arriba, los inhibidores preferidos de glicógeno fosforilasa son: [(1S)-((R)-hidroxi-dimetilcarbamoil-metil)-2-fenil-etil]-amida de ácido 5-cloro-1 /- -indol-2-carboxílico, {(1S)-[(R)-hidroxi-(metoxi-metil-carbamoil)-metil]-2-fenil-etil}-amida de ácido 5,6-dicloro-1H-indol-2-carboxílico, {(1S)-[(R)-hidroxi-(metoxi-metil-carbamoil)metil]-2-fenil-etil}-amida de ácido 5-cloro-1/-/-indol-2-carboxílico, ((1S)-{(R)-hidroxi-[(2-hidroxi-etil)-metil-carbamoil]-metil}-2-fenil-etil)amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, {(1S)-[(R)-h¡droxi-(metil-piridin-2-il-carbamoil)metil]-2-fenil-etiljamida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, ((1S)-{(R)-hidroxi-[metil-(2-pir¡din-2-il-etil)-carbamoil]-metil}-2-fenil-etil)amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-(4-metil-piperazin-1-il)-3-oxo-propil]-amida clorhidrato de ácido 5-cloro-1 --indol-2-carboxílico, [(1S)-benc¡l-(2R)-hidroxi-3-(3-hidroxi-azetidin-1-il)-3-oxo-propil]-amida de ácido 5-cloro-1 H-indol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-isoxazolidin-2-il-3-oxo-propil)-amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, [(1 S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-[1 ,2]oxazinan-2-il-3-oxo-propil)-amida de ácido 5-cloro-1/-/-¡ndol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-((3S)-hidroxi-pirrolidin-1-il)-3-oxo-propil]-amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-3-((3S,4S)-d¡hidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)--hidroxi-3-oxo-propil]-amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxL-3-oxo-propil]-amida de ácido 5-cloro-1/-/-indol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-(2R)-hidroxi-3-morfolin-4-il-3-oxo-propil]-amida de ácido 5-cloro-1 H-indol-2-earboxílico, [(1S)-bencil-2-(3-hidroxi¡m¡no-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1 H-indol-2-carboxíl¡co, [2-(cis-3,4-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1 H-indol-2-carboxílico, [2-((3S,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, [(1 S)-bencil-2-(cis-3,4-dihidroxi-pirrolidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1 /- -indol-2-carboxílico, [2-(1 ,1-dioxo-tiazolidin-3-il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1 H- indol-2-carboxílico, (2-oxo-2-tiazolid¡n-3-¡l-etil)-amida de ácido 5-cloro-1/-/-indol-2- carboxílico, [(1S)-(4-fluoro-bencil)-2-(4-hidroxi-piperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-2-((3RS)-hidrox¡-piperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida de ' ácido 5-cloro-1 /--indol-2-carboxílico, [2-oxo-2-((1 RS)-oxo-1-tiazolidin-3-il)-etil]-amida de ácido 5-cloro- 1 /-/-indol-2-carboxílico, [(1 S)-(2-fluoro-bencil)-2-(4-hidroxi-piperidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1/-/-indol-2-carboxílico, [(1 S)-bencil-2-((3S,4S)-dihidroxi-pirrolidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1/- -indol-2-carboxílico, [(1 S)-bencil-2-(3-hidroxi-azetidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1 H-indol-2-carboxílico, [(1S)-bencil-2-(3-hidroxiimino-azetidin-1-il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1H-indol-2-carboxílico, y [(1 S)-bencil-2-(4-hidroxiimino-piperidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida de ácido 5-cloro-1 H-indol-2-carboxílico. En las anteriores composiciones de combinación, métodos y equipos de combinación, un inhibidor de aldosa reductasa preferido es zopolrestat: ácido 1 -ftalazinacético, 3,4-dihidro-4-oxo-3-[[5-trifluorometil)-2- benzotiazoliljmetíl]-.

Las composiciones que contienen los compuestos de la presente invención aquí descritas son útiles en el tratamiento, reducción y/o prevención de daño al tejido que se origina, o que se podría originar, de isquemia o hipoxia. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención (incluyendo las composiciones y combinaciones farmacéuticas descritas en la presente) se pueden usar en la fabricación de un medicamento para las aplicaciones • terapéuticas descritas en la presente.

Definiciones Se considera que el término "reducción" incluye prevención o prevención parcial que, aunque mayor que la que resultaría de no tomar compuesto o de tomar un placebo, es menor de 100% además de prevención sustancialmente total. El término "daño que se origina de isquemia o hipoxia", como se emplea aquí, se refiere a una condición o a varias condiciones asociadas directamente con la reducción de flujo sanguíneo o liberación de oxígeno al tejido; por ejemplo debido a un coágulo u obstrucción de vasos sanguíneos que suministran sangre al tejido en cuestión y que da como resultado, entre otras cosas, reducción del transporte de oxígeno a dicho tejido, deterioro del rendimiento del tejido, disfunción del tejido y/o necrosis y/o apoptosis. Alternativamente, en donde el flujo de oxígeno o la perfusión de órgano pueden ser cuantitativamente adecuados, la capacidad acarreadora de oxígeno de la sangre o del medio de perfusión del órgano pueden ser . reducidos, por ejemplo en un medio hipóxico, de tal manera que se reduce dicho suministro de oxígeno al tejido y sobreviene deterioro del rendimiento del tejido, disfunción del tejido y/o necrosis y/o apoptosis del tejido. Los términos "tratar" o "tratamiento", como se usan aquí, incluyen tratamiento preventivo (por ejemplo profiláctico) y paliativo. El término "farmacéuticamente aceptable" se refiere a vehículos, diluyentes, excipientes y/o sales que son compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no perjudiciales para el receptor de los mismos. El término "profármaco" se refiere a compuestos que son precursores de fármaco que, después de su administración, liberan in vivo el fármaco por medio de algún proceso químico o fisiológico (por ejemplo, un profármaco al estar a pH fisiológico o por medio de acción enzimática, es convertido en la forma de fármaco deseada). El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto representado por la fórmula I (incluyendo el profármaco y la sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y una o más moléculas de solvente. Tales moléculas son de solventes usados comúnmente en la técnica farmacéutica, que son conocidos por ser inocuos para el receptor, por ejemplo agua, etanol y similares. El término "hidrato" se refiere al complejo en el cual la molécula de solvente es agua. El término "arilo" se refiere a porciones aromáticas que tienen sistemas de anillos sencillos (por ejemplo fenilo) o fusionados (por ejemplo naftaleno, antraceno, fenantreno, etc.)- Sistemas de anillos fusionados también son referidos aquí como anillos bicíclicos completamente insaturados. Los grupos arilo pueden ser sustituidos o no sustituidos. El término "arilo sustituido" se refiere a los grupos arilo descritos arriba que tienen uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo de CrC4, halógeno, hidroxi, tio, amino, alquiloxi de Ci-C6, • alquiltio de C-i-C6, alquilamino de C1-C6 y -DG, en donde D y G tienen los mismos significados descritos arriba para los compuestos de fórmula (I). El término "heteroarilo" se refiere a porciones aromáticas que contienen por lo menos un heteroátomo dentro del sistema de anillo aromático (por ejemplo pirrol, piridina, indol, tiofeno, furano, benzofurano, imidazol, pirimidina, purina, bencimidazol, quinolina, etc). La porción aromática puede consistir de un sistema de un solo anillo o de anillos fusionados. Los sistemas de anillos fusionados también son referidos en la presente como anillos bicíclicos completamente insaturados. Los grupos heteroarilo pueden ser sustituidos o no sustituidos. El término "heteroarilo sustituido" se refiere a los grupos heteroarilo arriba descritos que tienen por lo menos un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, tio, amino, alquiloxi de Ci-C6, alquiltio de Ci-C6, alquilamino de CrC6 y -DG, en donde D y G tienen los mismos significados descritos arriba para los compuestos de fórmula (I).

Anillos aromáticos ejemplares de cinco a seis miembros que tienen opcionalmente uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, nitrógeno y azufre, son fenilo, furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo y pirazinilo. Anillos ejemplares de cinco a ocho miembros, parcialmente ¦ saturados, completamente saturados o completamente insaturados, que tienen de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, son ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo y fenilo. Anillos ejemplares adicionales de cinco miembros son furilo, tienilo, pirrolilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, pirrolidinilo, 1,3-dioxplanilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, 2H-imidazolilo, 2-imidazolinilo, imidazolidinilo, pirazolilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1 ,2-ditiolilo, 1 ,3- ditiolilo, 3H-1 ,2-oxatioliio, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1 ,3,4- oxadiazolilo, 1 ,2,3-triazolilo, 1 ,2,4-triazolilo, 1 ,3,4-tiadiazolilo, 3H-1 ,2,3- dioxazolilo, 1,2,4-dioxazolilo, 1 ,3,2-dioxazolilo, 1 ,3,4-dioxazolilo, 5H-1 ,2,5- oxatiazolilo y 1 ,3-oxatiolilo. Anillos ejemplares adicionales de seis miembros son 2H-piranilo, 4H-piranilo, piridinilo, piperidinilo, 1 ,2-dioxinilo, 1 ,3-dioxinilo, 1 ,4-dioxanilo, morfolinilo, 1 ,4-ditianilo, tiomorfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo, 1 ,2,4-triazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1 ,3,5-tritianilo, 4H- 1 ,2-oxazinilo, 2H-1 ,3-oxazinilo, 6H-1 ,3-oxazinilo, 6H-1 ,2-oxazinilo, 1 ,4- oxazinilo, 2H-1 ,2-oxazinilo, 4H-1 ,4-oxazinilo, 1 ,2,5-oxatiazinilo, 1 ,4-oxazinilo, o-isoxazinilo, p-isoxazinilo, 1 ,2,5-oxatiazinilo, 1 ,2,6-oxatiazinilo y 1 ,4,2-oxadiazinilo. Anillos ejemplares adicionales de siete miembros son azepinilo, oxepinilo, tiepinilo y 1 ,4-diazepinilo. Anillos ejemplares adicionales de ocho miembros son ciclooctenilo y ciclooctadienilo. Anillos bicíclicos ejemplares que consisten de dos anillos fusionados de cinco y/o seis miembros, parcialmente saturados, completamente saturados o completamente insaturados, tomados independientemente, que tienen opcionalmente de uno a cuatro heteroatomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno, son indolizinilo, indolilo, isoindolilo, indolinilo, ciclopenta(a)piridinilo, pirano(3,4-b)pirrolilo, benzofurilo, isobenzofurilo, benzo(b)tienilo, benzo(c)tienilo, 1 H-indazolilo, indoxazinilo, benzoxazolilo, antranililo, bencimidazolilo, benzotiazolilo, purinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cinolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 1 ,8-naftiridinilo, pteridinilo, indenilo, isoindenilo, naftilo, tetralinilo, decalinilo, 2H-1-benzopiranilo, pirido(3,4-b)-pirid¡nilo, pirido(3,2-b)piridinilo, pirido(4,3-b)-piridinilo, 2H-1 ,3-benzoxazinilo, 2H-1 ,4-benzoxazinilo, 1 H-2,3-benzoxazinilo, 41-1-3,1 -benzoxazinilo, 2H-1.2-benzoxazinilo y 4H-1 ,4-benzoxazinilo. Los sistemas de anillos bicíclicos completamente insaturados que contienen heteroátomos están incluidos en la definición de "heteroarilo", y los sistemas de anillos bicíclicos completamente insaturados que no contienen heteroátomos están incluidos en la definición de "arilo". El término "alquileno" se refiere a un hidrocarburo saturado (de cadena recta o ramificada) en donde un átomo de hidrógeno es removido de cada uno de los carbonos terminales. Ejemplos de estos grupos (suponiendo que la longitud designada abarca el ejemplo particular) son metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno, hexileno, heptileno. Desde luego, dichas porciones de enlace también pueden ser referidas como el sustituyente sin el sufijo "eno" (por ejemplo metilo), como lo hacen comúnmente los expertos en la materia refiriéndose no obstante, a un grupo enlazador. El término "halógeno" se refiere a cloro, bromo, yodo o flúor. El término "alquilo" se refiere a un hidrocarburo saturado de cadena recta o a un hidrocarburo saturado ramificado. Ejemplos de estos grupos alquilo (suponiendo que la longitud designada abarca el ejemplo particular), son metilo, etilo, propilo, iso-propilo, butilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, iso-pentilo, neo-pentilo, ter-pentilo, 1-metilbutilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, hexilo, iso-hexilo, heptilo y octilo. El término "alcoxi" se refiere a un alquilo saturado de cadena recta o a un alquilo saturado ramificado, enlazados por medio de un oxígeno. Ejemplos de dichos grupos alcoxi (suponiendo que la longitud designada abarca el ejemplo particular), son metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, ter-butoxi, pentoxi, isopentoxi, neopentoxi, ter-pentoxi, hexoxi, isohexoxi, heptoxi y octoxi.

Como se usa aquí, el término mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-Cx)... se refiere a la porción alquilo de C Cx tomada independientemente cuando es di-N,N-alquil(d-Cx)... (x se refiere a enteros). Se entiende que si una porción carbocíclica o heterocíclica puede estar enlazada o unida de otra manera a un substrato designado por medio de diferentes átomos de anillo, sin señalar un punto específico de unión, entonces de consideran todos los puntos posibles, ya sea a través de un átomo de carbono o, por ejemplo, a través de un átomo de nitrógeno. Por ejemplo, el término "piridilo" significa 2-, 3- o 4-piridilo; el término "tienilo" significa 2- o 3-tienilo, y así sucesivamente. La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales aniónicas no tóxicas que contienen aniones tales como cloruro, bromuro, yoduro, sulfato, bisulfato, fosfato, acetato, maleato, fumarato, oxalato, lactato, tartrato, citrato, gluconato, metanosulfonato y 4-tolueno-sulfonato (pero no se limitan a estas). Cuando existe más de una porción básica, la expresión incluye sales múltiples (por ejemplo dí-sal). La expresión también se refiere a sales catiónicas no tóxicas tales como las de sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio o benzatina protonada (?,?'-dibenziletilendiamína), colina, etanolamina, dietanolamina, etilendiamina, meglamina (N-metil-glucamina), benetamina (N-bencilfenetilamina), piperazina o trometamina (2-amino-2-hidroximetil-1 ,3-propanodiol) (pero no se limitan a estas).

Como se usan aquí, las expresiones "solvente inerte de reacción" y "solvente inerte", se refieren a un solvente o mezcla de solventes que no interaccionan con materiales de partida, reactivos, intermediarios o productos, de manera que afecten adversamente el rendimiento del producto deseado. La persona con conocimientos medios en Química reconocerá que ciertos compuestos de esta invención contendrán uno o varios átomos que pueden estar en una configuración estereoquímica o geométrica particular, produciendo estereoisómeros e isómeros configuracionales. Todos estos isómeros y sus mezclas están incluidos en esta invención. También están incluidos los hidratos de los compuestos de esta invención. DMF significa ?,?-dimetilformamida, DMSO significa sulfóxido de dimetilo, THF significa tetrahidrofurano. La presente invención también incluye compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a los citados en la fórmula I, excepto por el hecho de que uno o más átomos están reemplazados por átomos que tienen una masa atómica o un número de masa diferente a la masa atómica o al número de masa encontrados comúnmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que se pueden incorporar en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 3C, 4C, 15N, 180, 70, 31P, 32P, 35S, 18F y 38CI, respectivamente. Los compuestos de la presente invención (incluyendo los profármacos de los mismos y las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos y los profármacos) que contienen los isótopos anteriormente mencionados y/o otros isótopos de otros átomos, están dentro del alcance de esta invención. Ciertos compuestos de la presente invención marcados isotópicamente, por ejemplo aquellos en los cuales se incorporan isótopos radioactivos tales como 3H y 14C, son útiles en pruebas de distribución de fármaco y/o substrato en los tejidos. Los isótopos tritiados, esto es, 3H, y los de carbono 14, esto es, 14C, • son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y propiedades de detección. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir 2H, puede producir ciertas ventajas terapéuticas originadas de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, un incremento de la vida media ¡n vivo, o una disminución de la dosificación requerida, y por lo tanto pueden ser preferidos en algunas circunstancias. Los compuestos de fórmula (I) de esta invención marcados isotópicamente, y los profármacos de los mismos, generalmente se pueden preparar llevando a cabo los procedimientos descritos en los esquemas y/o en los ejemplos siguientes, sustituyendo un reactivo no marcado isotópicamente con un reactivo marcado isotópicamente, fácilmente disponible. Otras características y ventajas serán evidentes partiendo de esta descripción y las reivindicaciones que describen la invención.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION En general, los compuestos de esta invención se pueden hacer mediante procedimientos que incluyen procesos análogos a los que se conocen en las técnicas químicas, particularmente a la luz de la descripción aquí contenida. Algunos procedimientos para fabricar los compuestos de esta invención se ilustran con los siguientes esquemas de reacción. Otros procedimientos se describen en la sección experimental.

ESQUEMA 1 En general, los compuestos de esta invención se pueden hacer acoplando el ribósido de cloropurina y la amina deseada, seguido por reacción con azida. El siguiente texto, que sirve de guía para los esquemas I, II y III aquí representados, provee una descripción más detallada. De acuerdo con el esquema de reacción I, los compuestos de fórmula I deseados se pueden preparar por reducción de la azida en el correspondiente compuesto de fórmula II. Típicamente, la reducción se realiza combinando el compuesto de fórmula II con una trialquil- o triarilfosfina, de preferencia trifenilfosfina, en un solvente inerte de reacción tal como tetrahidrofurano, a temperaturas de aproximadamente 0°C a aproximadamente 65°C, por lo regular a temperatura ambiente, durante aproximadamente treinta minutos a aproximadamente dos horas. Después, la reacción se trata con una base, de preferencia una base de amina, preferiblemente hidróxido de amonio, durante aproximadamente seis horas a aproximadamente cuarenta y ocho horas, a una temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 65°C, de preferencia a temperatura ambiente. El compuesto deseado de fórmula II en donde R1 es un éster, se puede preparar a partir del compuesto de fórmula III apropiado y un derivado de amina (H2N-A-B, en donde A y B son como se definió arriba). Típicamente, la reacción de condensación se realiza en un solvente polar como etanol, en presencia de una base, preferiblemente una base de amina, de preferencia en trietilamina, a temperaturas elevadas de aproximadamente 40°C a aproximadamente 75°C, durante alrededor de dos horas a alrededor de veinticuatro horas. De forma análoga, el compuesto deseado de fórmula II en donde R1 es una amida, se puede preparar del compuesto de fórmula VI apropiado y un derivado de amina (H2N-A-B, en donde A y B son como se definió arriba). Típicamente, la reacción de condensación se realiza en un solvente polar como etanol, en presencia de una base, preferiblemente una base de amina, muy preferiblemente en trietilamina, a temperaturas elevadas de aproximadamente 40°C a aproximadamente 75°C, durante alrededor de dos horas a alrededor de veinticuatro horas. La amida de fórmula II se puede preparar del éster correspondiente de fórmula III mediante adiciones de amina consecutivas. Típicamente, se añade la amina apropiada (H2N-A-B) al éster de fórmula III en presencia de una base de amina, preferiblemente trietilamina, a una temperatura de aproximadamente 15°C a aproximadamente 50°C, durante aproximadamente de una hora a aproximadamente veinticuatro horas, en un solvente polar como metanol. Después se agrega en exceso una segunda amina (por ejemplo N-metilamina), y la reacción se agita a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 a aproximadamente 24 horas. Algunos de los métodos útiles para la preparación de los compuestos aquí descritos pueden requerir protección de la funcionalidad distante (por ejemplo amina primaria, amina secundaria, carboxilo, en los precursores de fórmula I). La necesidad de dicha protección varía dependiendo de la naturaleza de la funcionalidad distante y las condiciones de los métodos de preparación. La necesidad de dicha protección es determinada fácilmente por el experto en la técnica. El uso de dichos métodos de protección/desprotección también está dentro de la práctica de la técnica. Para una descripción general de grupos protectores y su uso, véase T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, • New York, 1991. Así, por ejemplo, en una secuencia de reacción alternativa, el compuesto deseado de fórmula I se puede preparar del correspondiente compuesto de fórmula VI mediante protección y adición de amina, seguido por desprotección. De esta manera, el compuesto de fórmula VI sufre reducción de azida. Típicamente, la reducción se realiza combinando el compuesto de fórmula VI con una trialquíl- o triarilfosfina, preferiblemente trífenilfosfina, en un solvente inerte de reacción tal como tetrahidrofurano, a temperaturas de aproximadamente 0°C a aproximadamente 65°C, típicamente a temperatura ambiente, durante aproximadamente de treinta minutos a dos horas. La reacción se trata después con una base, preferiblemente una base de amina, de preferencia hidróxido de amonio, durante aproximadamente de seis horas a cuarenta y ocho horas, a una temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 65°C. Después de la reducción, se protege la porción amina (P1). Preferiblemente, la amina se protege con un grupo ter- butoxicarbonilo. La protección se realiza tratando la amina con anhídrido de ter-butoxicarbonilo y una base, preferiblemente una base de amina, de preferencia trietilamina, en un solvente anhidro tal como diclorometano, a temperatura ambiente, durante aproximadamente de cinco a veinticuatro horas. El compuesto deseado de fórmula IV se prepara del compuesto de fórmula V apropiado y un derivado de amina (H2N-A-B, en donde A y B son como se definió arriba). Típicamente, la reacción de condensación se realiza en un solvente polar como etanol, en presencia de una base, preferiblemente una base de amina, de preferencia en trietilamina, a temperaturas elevadas de aproximadamente 40°C a aproximadamente 75°C, durante alrededor de dos horas a alrededor de veinticuatro horas. Después de la adición de amina, se puede preparar el compuesto deseado de fórmula I partiendo del correspondiente compuesto de fórmula IV protegido, mediante una reacción de desprotección catalizada apropiada. Típicamente, el compuesto protegido (por ejemplo protegido con ter-butoxicarbonilo), se trata con un ácido fuerte, preferiblemente ácido trifluoroacético, a aproximadamente de 10°C a 50°C, de preferencia a temperatura ambiente, durante alrededor de una a ocho horas, para remover la porción protectora.

ESQUEMA 24 XXXV XXXIV De acuerdo con el esquema II, los compuestos de fórmula XXX se preparan de una reacción de glicosidación entre el compuesto de fórmula XXXI apropiado y una 6-cloro-purina sililada. Típicamente, la reacción es catalizada por un ácido de Lewis, preferiblemente trimetilsililtriflato, en un solvente inerte de reacción, tal como dicloroetano o acetonitrilo, a temperaturas de aproximadamente 30°C a aproximadamente 75°C, por lo regular a aproximadamente 60°C, durante alrededor de treinta minutos a alrededor de seis horas. Los compuestos deseados de fórmula XXXI se pueden preparar mediante una hidrólisis catalizada por ácido del compuesto apropiado de fórmula XXXII. Típicamente, el ácido es un ácido mineral fuerte, preferiblemente ácido sulfúrico, en una mezcla de solventes próticos de ácido acético y anhídrido acético, a una temperatura de aproximadamente 5°C a aproximadamente 40°C, durante aproximadamente dos a veinticuatro horas. Análogamente, los compuestos deseados de fórmula XXXVI se pueden preparar de los compuestos apropiados de fórmula XXXIII usando las reacciones de glicosidación e hidrólisis descritas arriba. Los compuestos deseados de fórmula XXXII se preparan del compuesto apropiado de fórmula XXXIII por activación del ácido carboxílico, seguida por reacción con una amina. Típicamente, el compuesto de fórmula XXXIII puede ser activado por conversión a un cloruro de ácido, por ejemplo, tratamiento con cloruro de oxalilo, en un solvente aprótico no polar, preferiblemente diclorometano, con una cantidad catalítica de dimetilformamida, a una temperatura de aproximadamente 0°C con calentamiento hasta temperatura ambiente, durante aproximadamente dos a ocho horas. El cloruro de ácido se trata entonces con exceso de la amina apropiada a una temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 30°C. Los compuestos deseados de fórmula XXXIII se preparan por oxidación del compuesto apropiado de fórmula XXXIV. Generalmente, el oxidante es tetróxido de rutenio, preparado usando una cantidad catalítica de tricloruro de rutenio y una cantidad estequiométrica de peryodato de sodio en una mezcla de solventes de cloroformo, acetonitrilo y agua. La reacción se realiza convenientemente a temperatura ambiente durante aproximadamente cuatro a veinticuatro horas. El compuesto deseado de fórmula XXXIV se prepara del compuesto apropiado de fórmula XXXV por tratamiento con ácido peryódico, que h id rol iza el grupo isopropilideno y separa el glicol para producir el aldehido. La reacción se realiza en solventes etéreos, por lo regular éter dietílico, convenientemente a temperatura ambiente, durante aproximadamente dos a veinticuatro horas. El compuesto deseado de fórmula XXXV se prepara del correspondiente compuesto hidroxilo por activación del grupo hidroxilo y desplazamiento con ion azida. Típicamente, la activación se logra convirtiendo el grupo hidroxilo al correspondiente derivado triflato por reacción con anhídrido tríflico en presencia de una base de amina, preferiblemente piridina, a una temperatura de aproximadamente -30°C a aproximadamente 0°C, durante alrededor de treinta minutos a dos horas. El triflato resultante se trata con una azida de metal alcalino, preferiblemente azida de sodio, en un solvente aprótico polar, preferiblemente dimetilformamida, a una temperatura de aproximadamente la temperatura ambiente hasta aproximadamente 50°C, durante alrededor de seis a veinticuatro horas.

ESQUEMA III El esquema III representa dos rutas sintéticas potenciales que se pueden usar para preparar compuestos de bencilamina que se pueden acoplar al compuesto ribósido de cloropurina representado en el esquema I. La bencilamina deseada se puede preparar mediante reducción del benzonitrilo correspondiente. Generalmente, la reducción se realiza usando un agente reductor tal como hidruro de litio y aluminio bajo condiciones ' anhidras. Después se aisla la amina como su sal ácida. Para una descripción más detallada de las condiciones de reacción, véase la preparación M en los ejemplos. Alternativamente, la bencilamina se puede preparar de la correspondiente azida, que se prepara del benzaldehído o del alcohol bencílico, disponibles más comúnmente. La azida se puede preparar haciendo reaccionar el correspondiente alcohol bencílico con difenilfosforilazida en presencia de una base, tal como 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]- 7-undequeno. La azida resultante se reduce entonces a la amina deseada haciendo reaccionar la azida con trifenilfosfina. Para una descripción más detallada de las condiciones de reacción, véanse las preparaciones P y N en los ejemplos. Los expertos en la materia apreciarán que los esquemas y descripciones de arriba sirven como ejemplos ilustrativos y que se pueden realizar otras modificaciones a los compuestos, usando materiales de partida alternativos (por ejemplo fenetilamina en lugar de bencilamina), o usando química convencional bien conocida para los expertos. Por ejemplo, los grupos éster o ácido carboxilico pueden ser convertidos generalmente en un grupo amida, acoplando el éster o ácido con la amina apropiada en presencia de un agente de acoplamiento adecuado. Un agente de acoplamiento adecuado es el que transforma un ácido carboxílico en una especie reactiva que forma un enlace amida por reacción con una amina. El agente de acoplamiento puede ser un reactivo que efectúa esta condensación en un procedimiento de un recipiente cuando se mezcla junto con el ácido ' carboxílico y la amina. Reactivos de acoplamiento ejemplares son clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida-hidroxibenzotriazol (EDC/HOBT), diciclohexilcarbodiimida/hidroxibenzotriazol (HOBT), 2-etoxi-1- etoxicarbonil-1 ,2-dihidroquinolina (EEDQ), y cianuro de dietilfosforilo. El acoplamiento se realiza en un solvente inerte, preferiblemente en un solvente aprótico, a una temperatura de aproximadamente -20°C a aproximadamente 50°C, durante alrededor de una hora a cuarenta y ocho horas, en presencia de un exceso de amina como base. Solventes ejemplares incluyen acetonitrilo, diclorometano, dimetilformamida, cloroformo, y mezclas de los mismos. El agente de acoplamiento puede ser también el agente que convierte el ácido carboxílico en un intermediario activado el cual se aisla y/o se forma en un primer paso y se deja reaccionar con la amina en un segundo paso. Agentes de acoplamiento adecuados e intermediarios activados incluyen cloruro de tionilo o cloruro de oxalilo para formar el cloruro de ácido, fluoruro cianúrico para formar un fluoruro de ácido o un cloroformiato de alquilo tal como cloroformiato de isobutilo o isopropenilo, o anhídrido propanofosfónico (anhídrido de ácido propanofosfónico, PPA, con una base de amina terciaria), para formar un anhídrido combinado del ácido carboxílico, o carbonildiimidazol para formar un acilimidazol. Si el agente de acoplamiento es cloruro de oxalilo, es conveniente emplear una cantidad pequeña de dimetilformamida como cosolvente con otro solvente (tal como diclorometano) para catalizar la formación del cloruro de ácido. Este derivado de ácido • activado se puede acoplar mezclándolo con exceso de amina en un solvente apropiado junto con una base apropiada. Las combinaciones solvente/base apropiadas incluyen, por ejemplo, diclorometano, dimetilformamida o acetonitrilo, o mezclas de los mismos, en presencia de exceso de amina como base. Otras combinaciones solvente/base apropiadas incluyen agua o un alcohol (C-i-Co), o una mezcla de los mismos, junto con un cosolvente como diclorometano, tetrahidrofurano o dioxano, y una base tal como hidróxido de sodio, potasio o litio, en suficiente cantidad para consumir el ácido liberado en la reacción. El uso de estos agentes de acoplamiento y la selección apropiada de solventes y temperaturas, son conocidos del experto en la materia, o se pueden determinar fácilmente de la literatura. Estas y otras condiciones ejemplares útiles para acoplar ácidos carboxílicos se describen en Houben-Weyl, Vol. XV, parte II, E. Wunsch, Ed., G. Theime Verlag, 1974, Stuttgart; M. Bodansky, "Principies of Peptide Synthesis", Springer-Verlag, Berlín, 1984; y "The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology" (ed. E. Gross y J. Meienhofer), vols. 1-5 (Academic Press, New York, 1979-1983).

Los materiales de partida y reactivos para los compuestos arriba descritos están fácilmente disponibles o pueden ser sintetizados con facilidad por el experto en la materia usando métodos convencionales de síntesis orgánica. Por ejemplo, muchos de los compuestos usados aquí están relacionados, o derivan de, compuestos encontrados en la naturaleza, en los cuales hay mucho interés científico y necesidad comercial, y consecuentemente muchos de estos compuestos están disponibles comercialmente o se reportan en la literatura, o se preparan fácilmente de otras sustancias comúnmente disponibles por medio de métodos que se reportan en la literatura. Los nitrilos, ácidos carboxílicos y aminas representadas en el esquema III se pueden comprar de proveedores comerciales tales como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, New Hampshire) y Acras Organics (Fairlawn, New Jersey). Algunos compuestos de esta invención tienen átomos de carbono asimétricos y por lo tanto pueden existir como enantiómeros o diasterómeros. Las mezclas diasteroméricas se pueden separar en sus diasterómeros individuales en base a sus diferencias fisicoquímicas por medio de métodos conocidos per se, por ejemplo, por cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo la mezcla enantiomérica en una mezcla diasteromérica por reacción con un compuesto ópticamente activo apropiado (por ejemplo alcohol), separando los diasterómeros y convirtiendo (por ejemplo hidrolizando) los diasterómeros individuales en los correspondientes enantiómeros puros. Todos estos isómeros, incluyendo diasterómeros, enantiómeros y sus mezclas, se consideran parte de esta invención. También, algunos de los compuestos de esta invención son atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos), y son considerados como parte de esta invención. Los expertos en la materia reconocerán que los compuestos de ' fórmula (I) pueden existir en varias formas tautoméricas. Todas estas formas tautoméricas se consideran como parte de esta invención. Por ejemplo, todas las formas ceto-enol de los compuestos de fórmula (I) están incluidas en esta invención. Algunos de los compuestos de esta invención son ácidos y forman una sal con un catión farmacéuticamente aceptable. Algunos de los compuestos de esta invención son básicos y forman una sal con un anión farmacéuticamente aceptable. Todas estas sales, incluyendo disales, están dentro del alcance de esta invención y se pueden preparar por medio de métodos convencionales. Por ejemplo, se pueden preparar simplemente poniendo en contacto las entidades ácidas y básicas, en un medio acuoso, no acuoso o parcialmente acuoso. Las sales se recuperan por filtración, por precipitación con un no solvente, seguido por filtración, por evaporación del solvente, o, en el caso de soluciones acuosas, por liofilización, según sea apropiado. Consecuentemente, los compuestos de la presente invención se pueden aislar y usar per se, o como su sal farmacéuticamente aceptable.

Además, cuando los compuestos de esta invención forman metabolitos, hidratos o solvatos, estos también están dentro del alcance de la invención. Otros agentes cardiovasculares (por ejemplo, agentes que tienen un efecto cardiovascular) conocidos para los expertos en la materia, tales como los descritos arriba en la breve descripción, se pueden usar en conjunto con los compuestos de esta invención. En el tratamiento de terapia de combinación, tanto los compuestos de esta invención como los otros fármacos, se administran a los mamíferos (por ejemplo humanos) por medio de los métodos convencionales. Cualquier inhibidor de NHE-1 se puede usar como el segundo compuesto (segundo agente activo) de esta invención para terapias de combinación. El término "inhibidor de NHE-1 " se refiere a compuestos que inhiben el sistema de transporte de intercambio sodio/protón (Na+/H+), y por lo tanto son útiles como agente terapéutico o profiláctico para enfermedades causadas o agravadas por la aceleración del sistema de transporte de intercambio sodio/protón (Na+/H+). Dicha inhibición es determinada fácilmente por el experto en la materia de acuerdo con ensayos estándares tales como los que se describen aquí más adelante, y en ensayos preclínicos convencionales de cardioprotección [véase el ensayo in vivo de Klein y otros, Circulation 92:912-917 (1995); el ensayo de corazón aislado de Scholz W. y otros, Cardiovascular Research 29:260-268 (1995); el ensayo antiarrítmico de Yasutake M. y otros, Am. J. Physiol., 36:H2430-H2440 (1994); el ensayo de RMN de Kolke y otros, J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 112:765-775 (1996)]. Más abajo se describe una variedad de inhibidores de NHE-1 ; sin embargo, otros inhibidores de NHE-1 serán conocidos para los expertos en la materia, tales como los que se describen en WO 99/43663, publicado el 2 de septiembre de 1999. Por lo tanto, ejemplos de inhibidores de NHE-1 útiles en las composiciones y métodos de esta invención incluyen: [1-(8-bromoquinolin-5-il)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(6-cloroquinolin-5-il)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1-(indazol-7-il)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanid¡na; [1-(bencimidazol-5-il)-5-ciclopropil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1-(1-isoquinolil)-5-ciclopropil-1/-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-ciclopropil-1-(4-quinolinil)-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-ciclopropil-1 -(quinolin-5-il)-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-ciclopropil-1-(quinolin-8-il)-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(¡ndazol-6-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(indazol-5-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(benc¡midazol-5-il)-5-etil-1 /- -pirazol-4-carbonil]guanidina¡ [1 -(1 -metilbencimidazol-6-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]-guanidina; 1-(5-quinolinil)-5-n-propil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(5-quinolinil)-5-isopropil-1/-/-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [5-etil-1 -(6-quinolinil)-1 H-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1 -(2-metilbencimidazol-5-il)-5-etil-1 H-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1-(1 ,4-benzodioxan-6-il)-5-etil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(benzotriazol-5-N)-5-etil-1 --pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(3-cloroindazol-5-il)-5-etil-1/-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(5-quinolinil)-5-butil-1 H-pirazol-4-carbonii]guanidina; [5-propil-1 -(6-quinolinil)-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [5-isopropil-1 -(6-quinolinil)-1 W-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-cloro-4-metilsulfonilfenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carboniljguanidina; [1-(2-clorofenil)-5-ciclopropil-1 -/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-trifluorometil-4-fluorofenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-bromofenil)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-fluorofenil)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-cloro-5-metoxifenil)-5-ciclopropil-1 -/-pirazol-4-carbonil]-guanidina; [1-(2-cloro-4-metilaminosulfonilfenil)-5-ciclopropil-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2,5-diclorofenil)-5-ciclopropil-1/-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2,3-diclorofen¡l)-5-c¡cloprop¡l-1 --pirazol-4-carbonil]guan¡dina; [1 -(2-cloro-5-aminocarbonüfenil)-5-ciclopropil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-cloro-5-aminosulfonilfenil)-5-c¡clopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-fluoro-6-trifluoromet¡lfenil)-5-ciclopropil-1 /-/-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-cloro-5-metilsulfonilfenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-cloro-5-dimetilaminosulfon¡lfen¡l)-5-cicloprop¡l-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1 -(2-trifluorometil-4-clorofenil)-5-ciclopropil-1 H-pirazol-4-carbonil]guanidina; [1-(2-clorofenil)-5-metil-1/-/-pirazol-4-carbonil]guanid¡na; [5-metil-1-(2-trifluoromet¡lfenil)-1H-p¡razoW-carbonil]guanidina; [5-etil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-carbon¡l]guanidina; [5-cicloprop¡l-1-(2-trifluoromet¡lfenil)-1/- -pirazol-4-carbonil]-guanidina; [5-ciclopropil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-carbon¡l]guanid¡na; [5-ciclopropil-1-(2,6-diclorofenil)-1H-pirazol-4-carbonil]guanidina; y sales, solvatos o hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Se puede usar cualquier inhibidor de aldosa reductasa como el segundo compuesto (segundo agente activo) de esta invención para terapias de combinación. El término inhibidor de aldosa reductasa se refiere a compuestos que inhiben la bioconversión de glucosa a sorbitol, catalizada por la enzima aldosa reductasa. Dicha inhibición es determinada fácilmente por el experto en la materia de acuerdo a ensayos estándares (J. Malone, Diabetes, 29:861-864, 1980, "Red Cell Sorbitol, an Indicator of Diabetic Control"). A continuación se describe una variedad de inhibidores de aldosa reductasa, sin ' embargo, otros inhibidores de aldosa reductasa serán conocidos para el experto en la materia. Las descripciones de las patentes de E.U.A. mencionadas más abajo se incorporan aquí como referencia. También, cuando es aplicable, se dan entre paréntesis nombres químicos comunes USAN u otra designación, junto con la referencia a la literatura de patente apropiada que describe el compuesto. La actividad de un inhibidor de aldosa reductasa en un tejido se puede determinar probando la cantidad de inhibidor de aldosa reductasa necesaria para reducir el sorbitol en tejido (esto es, inhibiendo la producción adicional de sorbitol consecuente al bloqueo de aldosa reductasa), o reducir la fructosa en tejido (inhibiendo la producción de sorbitol consecuente al bloqueo de aldosa reductasa y consecuentemente la producción de fructosa). Aunque sin desear limitarse a ninguna teoría o mecanismo en particular, se considera que un inhibidor de aldosa reductasa, al inhibir la aldosa reductasa, previene o reduce el daño isquémico o hipóxico como se describe más adelante. Por consiguiente, ejemplos de inhibidores de aldosa reductasa útiles en las composiciones y métodos de esta invención incluyen: 5 1 ácido 3-(4-bromo-2-fluorobencil)-3,4-dihidro-4-oxo-1- ftalazinacético (ponalrestat, Patente de E.U.A. No. 4,251 ,528); 2. N-[[(5-trifIuorometil)-6-metoxi-1 -naftalenil]tioxometil}-N- metilglicina (tolrestat, Patente de E.U.A. No. 4,600,724); 3. ácido 5-[(Z,E)-B-metilcinamilideno]-4-oxo-2-tioxo-3- tiazolidenacético (epalrestat, Patente de E.U.A. No. 4,464,382, Patente de • E.U.A. No. 4,791 ,126, Patente de E.U.A. No. 4,831,045); 4. ácido 3-(4-bromo-2-fIuorobencil)-7-cloro-3,4-dihidro-2,4- dioxo-1(2/-/)-quinazolinacético (zenarestat, Patente de E.U.A. No. 4,734,419, y 4,883,800); 5. ácido 2R,4R-6,7-dicloro-4-hidroxi-2-metilcroman-4--acético (Patente de E.U.A. No. 4,883,410); 6. ácido 2R,4R-6,7-dicloro-6-fluoro-4-hidroxi-2-metilcroman- 4-acético (Patente de E.U.A. No. 4,883,410); 7. ácido 3,4-d¡hidro-2,8-diisopropil-3-oxo-2 -/-1 ,4-benzoxazin- 4-acético (Patente de E.U.A. No. 4,771 ,050); 8. ácido 3,4-dihidro-3-oxo-4-[(4,5,7-trifluoro-2- benzotiazolil)metil]-2H-1,4-benzotiazin-2-acético (SPR-210, Patente de E.U.A. No. 5,252,572); 9. N-[3,5-dimetil-4-[(nitrometil)sulfonil]fenil]-2-metil- bencenacetamida (ZD5522, patente de E.U.A. No. 5,270,342 y patente de E.U.A. No. 5,430,060); 10. (S)-6-fIuoroespiro[croman-4,4'-imidazolidin]-2,5'-diona (sorbinil, Patente de E.U.A. No. 4,130,714): 11. d^-metil-e-fluoro-espiroícroman^'^'-imidazolidin^'.S'-diona (Patente de E.U.A. No. 4,540,704); 12. 2-fluoro-esp¡ro(9H-fluoren-9,4'¡midazol¡d¡n)-2',5'-d¡ona (Patente de E.U.A. No. 4,438,272); 13. 2,7-d¡-fluoro-espiro(9/-/-fIuoren-9,4,¡midazol¡d¡n)-2',5'-d¡ona (Patente de E.U.A. No. 4,436,745, Patente de E.U.A. No. 4,438,272); 14. 2,7-di-fluoro-5-metoxi-esp¡ro(9H-fluoren-9,4'¡midazolidin)-2',5·^???3 (Patente de E.U.A. No. 4,436,745, Patente de E.U.A. No. 4,438,272); 15. 7-fluoro-espiro(5H-indenol[1 ,2-b]pir¡d¡n-5,3'-p¡rrolidin)-2,5'-diona (Patente de E.U.A. No. 4,436,745, Patente de E.U.A. No. 4,438,272); 6. d-cis-e'-cloro^'.S'-dihidro^'-metil-espiro-íimidazolidin^^'-4'-H-pirano(2,3-b)pir¡din)-2,5-diona (Patente de E.U.A. No. 4,980,357); 17. espiro[imidazolidin-4,5'(6H)-quinolin]-2,5-diona-3'-cloro- 7,,8,-d¡h¡dro-7,-metil-(5,-c¡s) (Patente de E.U.A. No. 5,066,659); 18. (2S)4S)-6-fluoro-2,,5,-d¡oxoesp¡ro(croman-4,4'-im¡dazol¡din)-2-carboxamida (Patente de E.U.A. No. 5,447,946); y 19. 2-[(4-bromo-2-fluorofen¡l)met¡l]-6-fluoroespiro[isoquinol¡n-4(1 H),3'-p¡rrolidin]-1 ,2*,3,5'(2H)-tetrona (ARI-509, Patente de E.U.A. No. 5,037,831 ). Otros inhibidores de aldosa reductasa incluyen los compuestos que tienen la fórmula IB: y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde Z es O o S; R1 es hidroxi o un grupo que puede ser removido in vivo para producir un compuesto de fórmula IB en donde R1 es OH; y X y Y son los mismos o diferentes y se seleccionan de hidrógeno, trifluorometilo, flúor y cloro. Un subgrupo preferido dentro del grupo anterior de inhibidores de aldosa reductasa incluye los compuestos 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10 y 17 numerados anteriormente, y los siguientes compuestos de fórmula IB: 20. ácido 3,4-dihidro-3-(5-fluorobenzotiazol-2-ilmetil)-4-oxoftalazin-1-il-acético [R'=hidroxi; x=F; Y=H]; 21. ácido 3-(5,7-difluorobenzotiazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4- oxoftalazin-1-il-acético [R -hidroxi; X=Y=F]; 22. ácido 3-(5-clorobenzotiazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4- oxoftalazin-1-il-acético [R -hidroxi; X=CI; Y=H]; 23. ácido 3-(5,7-diclorobenzot¡azol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4- oxoftalazin-1-il-acético [R -hidroxi; X=Y=CI]; 24. ácido 3,4-dihidro-4-oxo-3-(5-trifluorometilbenzoxazol-2- ilmetil)ftalazin-1-il-acético [R =hidroxi; X=CF3; Y=H]; 25. ácido 3,4-dihidro-3-(5-fluorobenzoxazol-2-ilmetil)-4- 1 oxoftalazin-1-il-acético [R =hidroxi; X=F; Y=H]; 26. ácido 3-(5,7-difluorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4- oxoftalazin-1 -il-acético [R =hidroxi; X=Y=F]; 27. ácido 3-(5-clorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4- 1 oxoftalazin-1 -il-acético [R -hidroxi; X=CI; Y=H]; 28. ácido 3-(5,7-diclorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4- oxoftalazin-1 -il-acético [R -hidroxi; X=Y=CI]; y 29. zopolrestat; ácido 3,4-dihidro-4-oxo-3-[[5-(trifluorometil)-2- benzotiazolil]metil]-1-ftalazinacético [R -hidroxi; X=trifluorometilo; Y=H]. En los compuestos 20-23 y 29, Z es S. En los compuestos 24-28 Z es O. Del subgrupo anterior, los compuestos 20-29 son muy preferidos, siendo el 29 el más preferido. Un inhibidor de aldosa reductasa especialmente preferido es el ácido 3 ,4-d i h id ro-4-oxo-3-[[5-(trifl uorometil )-2-benzotiazol il] metil]-1 -ftalazin-acético. Los compuestos inhibidores de aldosa reductasa de esta invención están fácilmente disponibles o pueden ser sintetizados con facilidad por el experto en la materia, usando métodos convencionales de síntesis orgánica, particularmente en vista de las descripciones de patente pertinentes.

Se puede usar una cantidad de inhibidor de aldosa reductasa de esta invención que sea efectiva para las actividades de esta invención. Típicamente, una dosificación efectiva de los inhibidores de aldosa reductasa para las composiciones, métodos y equipos de combinación de esta invención, está en la escala de aproximadamente 0.1 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día en dosis únicas o divididas, preferiblemente • de alrededor de 0.1 mg/kg/día a alrededor de 20 mg/kg/día en dosis únicas o divididas. Cualquier inhibidor de glicógeno fosforilasa se puede usar como el segundo compuesto de esta invención. El término inhibidor de glicógeno fosforilasa se refiere a cualquier sustancia o agente o combinación de sustancias y/o agentes, que reduce, retarda o elimina la acción enzimática de glicógeno fosforilasa. La acción enzimática actualmente conocida de glicógeno fosforilasa es la degradación de glicógeno por catálisis de la reacción reversible de una macromolécula de glicógeno y fosfato inorgánico para formar glucosa-1 -fosfato y una macromolécula de glicógeno que es un residuo de glucosilo más corto que la macromolécula de glicógeno original (dirección de avance de la glicogenólisis). Dichas acciones son determinadas fácilmente por los expertos en la materia de acuerdo con ensayos estándares (por ejemplo como los que se describen aquí más adelante). Una variedad de estos compuestos se describen en la patente de E.U.A. No. 6,107,329. Sin embargo, los expertos en la materia conocerán otros inhibidores de glicógeno fosforilasa útiles en las combinaciones, métodos y equipos de esta invención.

Inhibidores de glicógeno fosforilasa preferidos incluyen los compuestos que tienen la fórmula IC: Fórmula IC y las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde la línea punteada (— ) es un enlace opcional; A es -C(H)= -C-(alquilo(CrC4))= o -C(halógeno)= cuando la línea punteada (— ) es un enlace, o A es metileno o -CH(alquilo(Ci-C4))-cuando la línea punteada (--) no es un enlace; Ri , Río o R11 son cada uno independientemente H, halógeno, 4-, 6- o 7-nitro, ciano, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, fluorometilo, difluorometilo o trifluorometilo; R2 es H; R3 es H o alquilo de C1-C5; R4 es H, metilo, etilo, n-propilo, hidroxialquilo de C1-C3, alcoxi(d-C3)-alquilo de CrC-3, fenilalquilo de C1-C4, fenilhidroxialquilo de C1-C4, fen¡lalcoxi(C-i-C4)-alquilo de C1-C4, tien-2- o -3-il-alquilo de C^C4 o fur-2- o 3- il-alquilo de C1-C4, en donde dichos anillos de R4 están independientemente mono-, di- o trisustituidos sobre carbono con H, halógeno, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, trifluorometilo, hidroxi, amino o ciano; o R4 es pirid-2-, -3- o — 4-il-alquilo de C C4, tiazol-2-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, imidazol-1-, -2-, -4- o -5-il-alquilo de C C4, pirrol-2- o -3-il-alquilo de C C , oxazol-2-, -4- o -5-il-alquilo de Ci-C , pirazol-3-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, isoxazol-3-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, isotiazol-3-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, piridazin-3- o -4-il-alquilo de Ci-C4, pirimidin-2-, -4-, -5- o -6-il-alquilo de Ci-C , pirazin-2- o -3-il-alquilo de C1-C4 o 1 ,3,5-triazin-2-il-alquilo de C-1-C4, en donde dichos heterociclos precedentes de R4 están opcionalmente mono- o disustituidos independientemente con halógeno, trifluorometilo, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, amino o hidroxi, y dichos mono- o disustituyentes están enlazados a carbono; R5 es H, hidroxi, flúor, alquilo de C1-C5, alcoxi de C1-C5, alcanoilo de C -C6, aminoalcoxi de C1-C4, mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)amino-alcoxi de C1-C4, carboxi-alcoxi de C1-C4, alcoxi(CrC5)-carbonil-alcoxi de C1-C4, benciloxicarbonil-alcoxi de C1-C4, o carboniloxi, en donde dicho carboniloxi está enlazado carbono a carbono con fenilo, tiazolilo, imidazolilo, 1 H-indolilo, furilo, pirrolilo, oxazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo o 1,3,5-triazinilo, y en donde dichos anillos de R5 precedentes están opcionalmente monosustituidos con halógeno, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, hidroxi, amino o trifluorometilo, y dichos sustituyentes están enlazados a carbono; R7 es H, flúor o alquilo de CrC5; o R5 y R7 se pueden tomar juntos para seroxo; R6 es carboxi, alcox¡(CrC8)carbonilo, C(0)NR8R9 o C(0)Ri2, en donde Re es H, alquilo de C1-C3, hidroxi o alcoxi de C1-C3; y R9 es H, alquilo de Ci-C8, hidroxi, alcoxi de Ci-C8, metilen-alquilo(C-i-C8) perfluorado, fenilo, piridilo, tienilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piranilo, piperidinilo, morfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo o 1,3,5-triazinilo, en donde dichos anillos de R9 precedentes están enlazados de carbono a nitrógeno; o R9 está mono-, di- o trisustituido con alquilo de C1-C5. en donde dichos sustituyentes son independientemente H, hidroxi, amino, mono-N- o d¡-N,N-alquil(Ci-C5)amino; o Rg está mono- o disustituido con alquilo de C1-C5, en donde dichos sustituyentes son independientemente fenilo, piridilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piranilo, piridinilo, piperidinilo, morfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo o 1 ,3,5-triazinilo, en donde los anillos de Rg que contienen nitrógeno no aromático están opcionalmente monosustitüidos sobre nitrógeno con alquilo de C1-C6, bencilo, benzoilo o alcoxi(C C6)carbonilo, y en donde los anillos de Rg están opcionalmente monosustitüidos sobre carbono con halógeno, alquilo de C1-C4, 9 alcoxi de C1-C4, hidroxi, amino o mono-N- y d¡-N,N-alqu¡l(Ci-C5)amino, con la condición de que no se incluya nitrógeno cuaternizado y no haya enlaces nitrógeno-oxígeno, nitrógeno-nitrógeno ni nitrógeno-halógeno; R12 es piperazin-1-ilo, 4-alquil(CrC4)piperazin-1-ilo, 4-formilpiperazin-1-ilo, morfolino, tiomorfolino, 1-oxotiomorfolino, 1 ,1-dioxo-tiomorfolino, tiazolidin-3-ilo, 1-oxo-tiazolidin-3-ilo, 1 ,1-dioxo-tiazolidin-3-ilo, 2-alcoxi(Ci-C6)carbonilpirrolidin-1-ilo, oxazolidin-3-ilo o 2(R)-hidroximetilpirrolidin-1-ilo; o R12 es oxazetidin-2-ilo 3- y/o 4-mono- o disustituido, oxazolidin-3-ilo 2-, 4- y/o 5-mono- o disustituido, tiazolidin-3-ilo 2-, 4- y/o 5-mono- o disustituido, 1-oxotiazolidin-3-ilo 2-, 4- y/o 5-mono- o disustituido, 1 ,1-dioxotiazolidin-3-ilo 2-, 4- y/o 5-mono- o disustituido, pirrolidin-1-ilo 3- y/o 4-mono- o disustituido, piperidin-1-ilo 3-, 4- y/o 5-mono, di- o trisustituido, piperazin-1-ilo 3-, 4- y/o 5-mono-, di- o trisustituido, azetidin-1-ilo 3-sustituido, 1 ,2-oxazinan-2-ilo 4- y/o 5-mono- o disustituido, pirazolidin-1-ilo 3- y/o 4-mono-0 disustituido, isoxazolidin-2-ilo 4- y/o 5-mono- o disustituido, isotiazolidin-2-ilo 4- y/o 5-mono- y/o disustituido, en donde dichos sustituyentes de R12 son independientemente H, halógeno, alquilo de C1-C5, hidroxi, amino, mono-N- o d¡-N,N-alquil(CrC5)am¡no, formilo, oxo, hidroxiimino, alcoxi de C1-C5, carboxi, carbamoilo, mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)carbamoilo, alcoxi(CrC4)imino, alcoxi(CrC4)metoxi, alcoxi(C C6)carbonilo, carboxi-alquilo de C C5 o hidroxialquilo de C1-C5; con la condición de que si R4 es H, metilo, etilo o n-propilo, R5 es OH; con la condición de que si R5 y R7 son H, entonces R4 no es H, metilo, etilo, n-propilo, hidroxialquilo de C C3 ni alcoxi(CrC3)alquilo de CrC3, y R6 es C(0)NR8R9, C(0)Ri2 o alcoxi(CrC4)carbonilo. Los inhibidores preferidos de glicógeno fosforilasa incluyen los compuestos que tienen la fórmula ID: y las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde: la línea punteada (— ) es un enlace opcional; A es -C(H)=, -C-(alquilo(CrC4))=, -C(halógeno)= o -N=, cuando la línea punteada ( — ) es un enlace, o A es metileno o -CH(alquilo(CrC4))-cuando la línea punteada (— ) no es un enlace; R-i , R10 o R11 son cada uno independientemente H, halógeno, ciano, 4-, 6- o 7-nitro, alquilo de C C4, alcoxi de C1-C4, fluorometilo, difluorometilo o trifluorometilo; R2 es H; R3 es H o alquilo de C C5; R4 es H, metilo, etilo, n-propilo, hidroxialquilo de CrC3, alcoxi(Cr C3)-alquilo de C1-C3, fenilalquilo de C1-C4, fenilhidroxialquilo de C1-C4, fenilalcoxi(Ci-C4)-alquilo de C1-C4, tien-2- o -3-il-alquilo de C C4 o fur-2- o 3- il-alquilo de C1-C4, en donde dichos anillos de R4 están independientemente mono-, di- o trisustituidos sobre carbono con H, halógeno, alquilo de C1-C4, ' alcoxi de C1-C4, trifluorometilo, hidroxi, amino, ciano o 4,5-dihidro-1-H- imidazol-2-ilo; o R4 es pirid-2-, -3- o -4-il-alquilo de C C4, tiazol-2-, -4- o -5-il- alquilo de C1-C4, imidazol-2-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, pirrol-2- o -3-il-alquilo de C1-C4, oxazol-2-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, pirazol-3-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, isoxazol-3-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, isotiazol-3-, -4- o -5-il-alquilo de C1-C4, piridazin-3- o -4-il-alquilo de C1-C4, pirimidin-2-, -4-, -5- o -6-il-alquilo de C1-C4, pirazin-2- o -3-il-alquilo de C1-C4 , 1 ,3,5-triazin-2-il-alquilo de C1-C4, o indol-2-alquilo de C1-C4, en donde dichos heterociclos precedentes de R4 están opcionalmente mono- o disustituidos independientemente con halógeno, trifluorometilo, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, amino, hidroxi o ciano, y dichos sustituyentes están enlazados a carbono; o R4 es R 5-carboniloximetilo, en donde dicho R^ es fenilo, tiazolilo, imidazolilo, 1 H-indolilo, furilo, pirrolilo, oxazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo o 1 ,3,5-triazinilo, y en donde dichos anillos R15 precedentes están opcionalmente mono- o disustituidos independientemente con halógeno, amino, hidroxi, alquilo de d- C4> alcoxi de C C o trifluorometilo, y dichos mono- y disustituyentes están enlazados a carbono; R5 es H; R6 es carboxi, alcoxi(Ci-C8)carbonilo, benciloxicarbonilo, C(0)NR8Rg o C(0)Ri2, en donde R8 es H, alquilo de CrC6, cicloalquilo de C3-C6, cicloalquil(C3-" C6)alquilo de C1-C5, hidroxi o alcoxi de CrC8; y R9 es H, cicloalquilo de C3-C8, cicloalqu¡l(C3-C8)alquilo de Ci-C5, cicloalquenilo de C4-C7, cicloalquil(C3-C7)alcoxi de C1-C5, cicloalquil(C3-C7)oxi, hidroxi, metilen-alquilo(Ci-C8) perfluorado, fenilo, o un heterociclo en donde dicho heterociclo es piridilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazoliio, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piranilo, piridinilo, piperidinilo, morfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, bencimidazolilo, tiocromaniio o tetrahidrobenzotiazolilo, en donde dichos anillos heterocíclicos están enlazados de carbono a nitrógeno; o Rg es alquilo de C-i-C6 o alcoxi de CrC8, en donde dicho alquilo de C1-C6 o alcoxi de Ci-C8 está monosustituido opcionalmente con cicloalquen-1-ilo de C4-C7, fenilo, tienilo, piridilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazoliio, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piranilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, 1-oxotiomorfolinilo, 1 ,1-dioxotiomorfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1 ,3,5- triazinilo o indolilo, en donde dicho alquilo de Ci-C6 o alcoxi de Ci-C8 está además opcionalmente mono- o disustituido independientemente con halógeno, hidroxi, alcoxi de C1-C5, amino, mono-N- o di-N,N-alquil(Cr C5)amino, ciano, carboxi o alcoxi(CrC4)carbonilo; y en donde los anillos de R9 están opcionalmente mono- o disustituidos independientemente sobre carbono, con halógeno, alquilo de Cr C4, alcoxi de C-i-C4, hidroxi, hidroxialquilo de C1-C4, aminoalquilo de CrC4, ' mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)amino-alquilo de C1-C4, alcoxi(CrC4)-alquilo de CrC4, amino, mono-N- o di-N,N-alquil(CrC4)amino, ciano, carboxi, alcoxi(Cr C5)carbonilo, carbamoilo, formilo o trifluorometilo, y dichos anillos de Rg pueden estar opcionalmente mono- o disustituidos adicionalmente de forma independiente con alquilo de C1-C5 o halógeno; con la condición de que no se incluya nitrógeno cuaternizado sobre cualquier heterociclo de Rg; R12 es morfolino, tiomorfolino, 1-oxotiomorfolino, 1 ,1-dioxo- tiomorfolino, tiazolidin-3-ilo, 1-oxo-tiazolidin-3-ilo, 1 ,1-dioxo-tiazolidin-3-ilo, pirrolidin-1-ilo, piperidin-1-ilo, piperazin-1-ilo, piperazin-4-ilo, azetidin-1-ilo, 1 ,2- oxazinan-2-ilo, pirazolidin-1-ilo, ¡soxazolidin-2-ilo, isotiazolidin-2-ilo, 1 ,2- oxazetidin-2-ilo, oxazolidin-3-ilo, 3,4-dihidroisoquinolin-2-ilo, 1 ,3- dihidroisoindol-2-ilo, 3,4-dihidro-2H-quinol-1-ilo, 2,3-dihidro-benzo[1 ,4]oxazin- 4-ilo, 2,3-dihidro-benzo[1 ,4]-tiazin-4-ilo, 3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-ilo, 3,4- dihidro-benzo[c][1 ,2]oxazin-1-ilo, 1 ,4-dihidro-benzo[d][1,2]oxazin-3-ilo, 3,4- dihidro-benzo[e][1 ,2]-oxazin-2-ilo, 3H-benzo[d]isoxazol-2-ilo, 3H- benzo[c]isoxazol-1-ilo o azepan-1-ilo; en donde dichos anillos de R-12 están opcionalmente mono-, di- o trisustituidos independientemente con halógeno, alquilo de C-1-C5, alcoxi de C1-C5, hidroxi, amino, mono-N- o di-N,N-alquil(CrC5)amino, formilo, carboxi, carbamoilo, mono-N- o di-N,N-alquil(CrC5)carbamoilo, alcoxi(CrC6)-alcoxi de C1-C3, alcoxi(Ci-C5)carbonilo, benciloxicarbonilo, alcoxi(Ci-C5)carbonil-alquilo de C1-C5, alcoxi(CrC4)carbon¡lamino, carboxi(alquilo de C1-C5), carbamoil-alquilo de C1-C5, mono-N- o d¡-N,N-alquil(CrC5)carbamoil-alquilo de C1-C5, hidroxialquilo de C1-C5, alcoxi(CrC4)-alquilo de C1-C4, aminoalquilo de C1-C4, mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)amino-alquilo de C1-C4, oxo, hidroxiimino o alcoxiimino de C1-C6, y en donde no más de dos sustituyentes se seleccionan de oxo, hidroxiimino o alcoxiimino de Ci-C6, y oxo, hidroxiimino o alcoxiimino de Ci-Ce están sobre carbono no aromático; y en donde dichos anillos de R12 están opcionalmente mono- o disustituidos adicionalmente de manera independiente con alquilo de C1-C5 o halógeno; con la condición de que cuando R6 sea alcoxi(CrC5)carbonilo o benciloxicarbonilo, entonces R1 es 5-halógeno, 5-alquilo de C1-C4 o 5-ciano, y R4 es fenil-hidroxialquilo de C1-C4, fenil-alcox^CrC^-alquilo de C1-C4, hidroximetilo o Ar-alquilo de CrC2, en donde Ar es tien-2- o 3-¡lo, fur-2- o -3-ilo o fenilo, en donde dicho Ar está opcionalmente mono- o disustituido independientemente con halógeno; con las condiciones de que cuando R4 sea bencilo y R5 sea metilo, R12 no sea 4-hidroxi-piperidin-1-ilo, o cuando R4 sea bencilo y R5 sea metilo, R6 no sea C(0)N(CH3)2; con la condición de que cuando R-\ y R10 y Rn sean H, R4 no sea ¡midazol-4-ilmetilo, 2-feniletilo ni 2-hidroxi-2-feniletilo; con la condición de que cuando R8 y Rg sean ambos n-pentilo, R1 sea 5-cloro, 5-bromo, 5-ciano, 5-alquilo de C1-C5, 5-alcoxi de C1-C5 o trifluorometilo; con la condición de que cuando R12 sea 3,4-dihidroisoquinol-2-' ilo, dicho 3,4-dihidroisoquinol-2-ilo no esté sustituido con carboxi-alquilo de d- C4; con la condición de que cuando Re sea H y Rg sea alquilo de d- C6, R9 no esté sustituido con carboxi ni alcoxi(C1-C4)carbonilo sobre el carbono que está unido al átomo de nitrógeno N de NHR9; y con la condición de que cuando R6 sea carboxi y R-i , R10, Rn y R5 sean todos H, entonces R4 no sea bencilo, H, fenil-hidroxi-metilo, metilo, etilo ni n-propilo. En general, una dosificación efectiva para las composiciones de combinación farmacológica de esta invención, por ejemplo las actividades reductoras de daño isquémico de las combinaciones que contienen los compuestos inhibidores de glicógeno fosforilasa de esta invención, está en la escala de aproximadamente 0.005 a aproximadamente 50 mg/kg/día, preferiblemente de alrededor de 0.01 a alrededor de 25 mg/kg/día, y de preferencia de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 15 mg/kg/día. Se puede usar cualquier inhibidor de sorbitol deshidrogenase como el segundo compuesto de esta invención. Dichos compuestos inhiben la formación de sorbitol deshidrogenasa. Tales acciones son determinadas fácilmente por los expertos en la materia de acuerdo con ensayos estándares (por ejemplo como los que se describen aquí más adelante). Los expertos en la materia conocerán una variedad de estos compuestos (por ejemplo, patente de E.U.A. No. 5,728,704). Los compuestos de la presente invención afectan ' farmacológicamente los efectos cardioprotectores de precondicionamíento isquémico activando receptores de adenosina A-3, y por lo tanto son útiles como agentes terapéuticos o profilácticos para enfermedades causadas o agravadas por isquemia o hipoxia, o isquemia/reperfusión, por ejemplo enfermedades cardiovasculares [por ejemplo arteriosclerosis, arritmia (por ejemplo arritmia isquémica, arritmia debida a infarto de miocardio, choque de miocardio, disfunción de miocardio, arritmia después de PTCA o después de trombólisis, etc.), angina de pecho, hipertrofia cardiaca, infarto de miocardio, falla cardiaca (por ejemplo falla congestiva cardiaca, falla aguda del corazón, hipertrofia cardiaca, etc.), restenosis después de PTCA, PTCI, choque (por ejemplo choque hemorrágico, choque por endotoxina, etc.)], enfermedades renales (por ejemplo diabetes mellitus, nefropatía diabética, falla renal aguda isquémica, etc.), trastornos de órgano asociados con isquemia o reperfusión isquémica [(por ejemplo trastornos asociados con reperfusión isquémica de músculo cardiaco, falla renal aguda, o trastornos inducidos por tratamientos quirúrgicos tales como cirugías de injerto de derivación de arteria coronaria (CABG), cirugías vasculares, transplante de órgano, cirugías no cardiacas o angioplastía coronaria transluminal percutánea (PTCA)], enfermedades cerebrovasculares (por ejemplo ataque isquémico, ataque hemorrágico, etc.), trastornos isquémicos del cerebro (por ejemplo trastornos asociados con infarto cerebral, trastornos causados después de apoplejía cerebral como secuelas, o edema cerebral). Los compuestos de esta invención se pueden usar también como un agente para la protección de miocardio durante cirugías ' de injerto de derivación de arteria coronaria (CABG), cirugías vasculares, angioplastía coronaria transluminal percutánea (PTCA), PTCI, transplante de órgano o cirugías no cardiacas. Preferiblemente, los compuestos de esta invención se pueden usar como agentes para protección de miocardio antes, durante o después de cirugías de injerto de derivación de arteria coronaria (CABG), cirugías vasculares, angioplastía coronaria transluminal percutánea (PTCA), transplante de órgano, o cirugías no cardiacas. Preferiblemente, los compuestos de esta invención se pueden usar como agentes para protección de miocardio en pacientes que presentan eventos isquémicos cardiacos en desarrollo (síndromes coronarios agudos, por ejemplo infarto de miocardio o angina inestable), o eventos isquémicos cerebrales (por ejemplo apoplejía). De preferencia, los compuestos de esta invención se pueden usar como agentes para protección crónica de miocardio en pacientes con enfermedad cardiaca coronaria diagnosticada (por ejemplo infarto de miocardio o angina inestable previos), o pacientes que están en alto riesgo de infarto de miocardio (por ejemplo mayores de 65 años de edad y dos o más factores de riesgo de enfermedad cardiaca coronaria). Consecuentemente, los compuestos de esta invención reducen la mortalidad. La utilidad de los compuestos de la presente invención como agentes médicos en el tratamiento de enfermedades en mamíferos (por ' ejemplo humanos) como las que aquí se detallan, por ejemplo protección de miocardio durante cirugía o protección de miocardio en pacientes que presentan eventos isquémicos o hipóxicos cardiacos o cerebrales en desarrollo, o cardioprotección crónica en pacientes con enfermedad cardiaca coronaria diagnosticada, o en riesgo de enfermedad cardiaca coronaria, disfunción cardiaca o choque de miocardio, es demostrada por la actividad de los compuestos de esta invención en ensayos preclínicos convencionales de cardioprotección [véase la prueba in vivo de Klein y otros, Circulation, 92:912- 917 (1995); el ensayo de corazón aislado de Tracey W.R. y otros, Cardiovascular Research 33:410-415 (1997); el ensayo antiarrítmico de Yasutake . y otros, Am. J. PhysioL, 36:H2430-H2440 (1994); el ensayo de RMN de Kolke y otros, J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 112:765-775 (1996)], y los ensayos in vitro e in vivo adicionales que se describen abajo. Dichos ensayos también proveen un medio por el cual se pueden comparar las actividades de los compuestos de esta invención con las actividades de otros compuestos conocidos. Los resultados de estas comparaciones son útiles para determinar niveles de dosificación en mamíferos, incluyendo humanos, para el tratamiento de dichas enfermedades.

Ensayos del receptor humano de adenosina A1 y A3 Materiales Se compraron ADNc's del receptor humano de adenosina A-¡ y A3 de longitud completa subclonados en el vector de expresión eucariótica pRcCMV (Invitrogen) al Garvan Institute, Sidney, Australia. Se obtuvieron células de ovario de hámster chino (CHO-K1 ) de la American Type Tissue Collection (Rockville, Maryland, E.U.A.). Se obtuvieron medios de cultivo DMEM y DMEM/F12 y suero fetal de becerro de Gibco-BRL (Grand Island, New York, E.U.A.). El agonista del receptor de adenosina A1/A3 N6-(4-amino-3-[125l]yodobencil)adenosina (125I-ABA) fue preparado por New England Nuclear (Boston, Massachusetts). Se obtuvo adenosina desaminasa (ADA) de Boehringer Mannheim (Indianapolis, Indiana, E.U.A.). El inhibidor de fosfodiesterasa RO-20-1724 se obtuvo de Research Biochemical International (Natick, Maryland, E.U.A.).

Expresión de receptores humanos de adenosina A1 y A3 Para estudios de expresión estable, se transfectan plásmidos de expresión de receptor de adenosina Ai y A3 (20 g) en células CHO-K1 , o células HEK 293s, respectivamente, desarrolladas en DMEM/F12 (CHO) o DMEM (HEK 293s), con medio de suero fetal de becerro, usando un equipo de transfección de célula de mamífero de fosfato de calcio (5 Prime-3 Prime). Se obtienen transfectantes estables por selección en medio completo conteniendo 500 g/ml (CHO) o 700 g/ml (HEK 293s) de neomicina activa (G418) y se tamiza para expresión mediante unión de [125I]-ABA.

Preparación de membrana de receptor Se recolectan células que expresan establemente los receptores humanos A-? o A3 por centrifugación a 300 x g durante 5 minutos, el sobrenadante se desecha y la pella celular se resuspende en amortiguador celular consistente de (mmoles/l): HEPES (10), MgCI2 (5), P SF (0.1 ), bacitracina (100 g/ml), leupeptin (10 g/ml), ADNasa I (100 g/ml), ADA (2 U/ml), pH 7.4. Se preparan membranas de células crudas mediante aspiración repetida a través de una aguja de calibre 21 , se recolectan por centrifugación a 60,000 x g durante 10 minutos y se guardan en amortiguador celular a -80°C.

Estimación de las constantes de afinidad de unión de compuestos (K¡) Se resuspenden membranas de receptor en amortiguador de incubación consistente de (mmoles/l): HEPES (10), EDTA (1 ), MgCI2 (5), pH 7.4. Se llevan a cabo reacciones de unión (10 - 20 g de proteína de membrana) durante una hora a temperatura ambiente en 250 I de amortiguador de incubación conteniendo 0.1 nM de 125I-ABA (200 Ci/mmol) y aumentando las concentraciones del compuesto (0.1 nM-30 M). La reacción se detiene por filtración rápida con PBS enfriado con hielo, a través de filtros de fibra de vidrio (remojados previamente en polietilenimina 0.6%), usando un cosechador Tomtec de 96 pozos (Orange, Connecticut, E.U.A.). Los filtros se cuentan en un contador de escintilación de líquidos Wallac Microbeta (Gaithersberg, Maryland, E.U.A.). La unión no específica se determina en presencia de l-ABA 5 M. Se calculan las constantes inhibidoras del compuesto (K¡) ajustando los datos de unión mediante análisis de regresión no lineal de cuadrados mínimos a la ecuación: % de inhibición = 100/[1 + 10°/10?)°], en donde X = log [concentración de compuesto], C (Cl50) = log [concentración de compuesto para 50% de inhibición], y D = la pendiente de Hill. A la concentración de radioligando usado en el presente estudio (10 veces < Ko), Cl50 = K¡.

Determinación de la actividad de agonista de receptor humano de adenosina A3 La actividad de agonista de A3 de adenosina se determina por medio de inhibición con el compuesto, de los niveles de AMPc estimulado por isoproterenol. Se lavan células HEK293s transfectadas establemente con receptores A3 humanos (como se describió arriba) con solución salina amortiguadora de fosfato (PBS, libre de Ca/Mg), y se desprenden con EDTA 1.0 mM/PBS. Las células se recogen por filtración a 300 x g durante 5 minutos y el sobrenadante se desecha. La pella celular se dispersa y resuspende en amortiguador celular (DMEM/F12 conteniendo HEPES 10 mM, RO-20-1724 20 M y ADA 1 U/ml). Se sigue con preincubación de las células ( 00,000/pozo) durante 10 minutos a 37°C, isoproterenol 1 M, con o sin concentraciones crecientes (0.1 nM-300 nM) de compuesto de prueba, y la incubación se continúa durante 10 minutos. Las reacciones se terminan mediante la adición de HCI 1.0 N seguido por centrifugación a 2000 x g durante 10 minutos. Se retiran muestras de sobrenadante (10 I) y se determinan los niveles de AMPc por medio de radioinmunoensayo (New England Nuclear, Boston, Massachusetts, E.U.A.). La acumulación basal y de control de AMPc estimulado con isoproterenol (pmol/ml/100,000 células) es rutinariamente 3 y 80, respectivamente. Se ajustan las curvas continuas a los datos mediante análisis de regresión no lineal de mínimos cuadrados a la ecuación: % de AMPc estimulado con isoproterenol = 100/[1 + 10?/10°)°], en donde X = log [concentración de compuesto], C (CI50) = log [concentración de compuesto para 50% de inhibición], y D = la pendiente de Hill. Como información básica, es de notar que períodos breves de isquemia de miocardio seguidos por reperfusión de arteria coronaria protegen al corazón de isquemia de miocardio severa subsecuente (Murry y otros, Circulation 74: 1 124-1136, 1986). Los efectos terapéuticos de los compuestos de esta invención para prevenir daño de tejido cardiaco originado de un ataque isquémico pueden ser demostrados in vitro en conformidad con las notas presentadas por Tracey y otros (Cardiovasc. Res., 33:410-415, 1997), como se describe específicamente ahí. La cardioprotección, indicada por una reducción de miocardio infartado, puede ser inducida farmacológicamente usando agonistas del receptor de adenosina en corazones de conejo aislados, perfundidos retrógradamente, como un modelo in vitro de precondicionamiento isquémico de miocardio (Tracey y otros, Cardiovasc. Res., 33:410-415, 1997). La prueba in vitro descrita más abajo demuestra que un compuesto de prueba (esto es, un compuesto como el reclamado en la presente), también puede inducir farmacológicamente cardioprotección, esto es, reducción de tamaño del infarto de miocardio, cuando se administra a un corazón aislado de conejo. Los efectos del compuesto de prueba se comparan con precondicionamiento isquémico. A continuación se describe la metodología exacta. El protocolo usado para estos experimentos sigue estrechamente el que describieron Tracey y otros, Cardiovasc. Res., 33:410-415, 1997. Conejos machos blancos de Nueva Zelandia (3-4 kg) se anestesian con pentobarbital de sodio (30 mg/kg, i.v.). Después de alcanzar anestesia profunda (determinada por la ausencia de reflejo de parpadeo ocular), el animal se intuba y ventila con 02 100% usando un ventilador de presión positiva. Se realiza una toracotomía izquierda; el corazón expuesto y un cordón (seda 2-0) se colocan flojamente alrededor de una rama prominente de la arteria coronaria izquierda, aproximadamente 2/3 de distancia del ápex del corazón. El corazón se retira del pecho y se monta rápidamente (<30 segundos) en un aparato de Langendorff. El corazón se perfunde retrógradamente de manera no recirculante con una solución de Krebs modificada (NaCI 118.5 mM, KCI 4.7 mM, MgS04 1.2 mM, KH2P04 1.2 mM, NaHC03 24.8 mM, CaCI2 2.5 mM y glucosa 10 mM), a una presión constante de 80 mm Hg y una temperatura de 37°C. El pH del perfundido se mantiene a 7.4-7.5 bombeando con 02 95%/C02 5%. La temperatura del corazón se controla estrechamente usando depósitos calientes para la solución fisiológica y una camisa de agua alrededor de la tubería de perfusión y el corazón aislado. Se determinan la frecuencia cardiaca y las presiones del ventrículo izquierdo mediante un balón de látex insertado en el ventrículo izquierdo, y conectado mediante tubería de acero inoxidable a un transductor de presión. El balón intraventricular se infla para proveer una presión sistólica de 80-100 mm Hg, y una presión diastólica 10 mm Hg. También se monitorea continuamente el flujo total coronario usando una sonda de flujo en línea y se normaliza por el peso del corazón. El corazón se deja equilibrar durante 30 minutos, después de lo cual el corazón debe mostrar presiones estables del ventrículo izquierdo dentro de los parámetros delineados arriba. Si la frecuencia cardiaca cae por debajo de 180 Ipm en cualquier momento antes del período de 30 minutos de isquemia regional, el corazón se regula a 200 Ipm por el resto del experimento. Se induce precondicionamiento isquémico por cesación total de perfusión cardiaca (isquemia global) durante 5 minutos, seguido por reperfusión durante 10 minutos. Se provee isquemia regional estrechando el cordón alrededor de la rama de la arteria coronaria. Después de 30 minutos de isquemia regional, se libera el cordón y el corazón se vuelve perfundir durante 120 minutos más. Se induce cardioprotección farmacológica infundiendo el compuesto de prueba a concentraciones predeterminadas, durante un período de 5 minutos que termina 10 minutos antes de la isquemia regional de 30 minutos. Los corazones que reciben los compuestos de prueba no sufren el período de precondicionamiento isquémico. Al final del período de reperfusíón de 120 minutos, el cordón de la arteria coronaria se aprieta y se perfunde una suspensión al 0.5% de partículas fluorescentes de sulfato dé cadmio y zinc (1-10 pm, Duke Scientific Corp., Palo Alto, California) a través del corazón; esto marca todo el miocardio, excepto el área en riesgo de desarrollo de infarto (área en riesgo). El corazón se retira del aparato de Langendorff, se seca en papel y se enrolla en lámina delgada de aluminio; se guarda durante la noche a -20°C. Al día siguiente, el corazón se rebana en secciones transversales de 2 mm desde el ápex hasta la parte superior de los ventrículos. Las rebanadas se tiñen con cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) al 1 % en solución salina amortiguadora de fosfato, durante 20 minutos a 37°C. Puesto que el TTC reacciona con tejido vivo (que contiene deshidrogenases dependientes de NAD), esta tinción diferencia entre tejido vivo (teñido de rojo) y tejido muerto (tejido infartado sin teñir). Se calculan el área infartada (no teñida) y el área en riesgo (partículas no fluorescentes) para cada rebanada del ventrículo izquierdo, usando un analizador de imagen precalibrado. Para normalizar el daño isquémico en cuanto a diferencias en el área en riesgo entre . los corazones, los datos se expresan como la relación de área infartada contra el área en riesgo (% IA/AAR). Todos los datos se expresan como media ± EE y se comparan estadísticamente usando una prueba no paramétrica de ann-Whitney con una corrección de Bonferroni para comparaciones múltiples. La significancia se considera como p < 0.05. Los resultados de la anterior prueba in vitro demuestran que los compuestos de esta invención inducen cardioprotección significativa con respecto al grupo de control. Los efectos terapéuticos de los compuestos de esta invención para prevenir daño de tejido cardiaco originado de un ataque isquémico también pueden ser demostrados in vivo en conformidad con las notas presentadas por Liu y otros (Circulation, Vol. 84:350-356, 1991 ) como se describe específicamente en la presente. El ensayo in vivo prueba la cardioprotección del compuesto de prueba con respecto al grupo de control que recibe vehículo salino. La cardioprotección, indicada por una reducción de miocardio infartado, puede ser inducida farmacológicamente usando agonistas de receptor de adenosina administrados intravenosamente en conejos intactos anestesiados, estudiada como un modelo in vivo de precondicionamiento isquémico de miocardio (Liu y otros Circulation, Vol. 84:350-356, 1991 ). El ensayo in vivo prueba si los compuestos pueden inducir farmacológicamente cardioprotección, esto es, reducción de tamaño del infarto de miocardio, cuando se administran parenteralmente a conejos intactos anestesiados. Los efectos de los compuestos de esta invención se pueden comparar con precondicionamiento isquémico. La metodología se describe abajo.

Cirugía Se anestesian conejos machos blancos de Nueva Zelandia (3-4 ' kg) con pentobarbital de sodio como una dosis de bolo (30 mg/kg, i.v.), seguido por una infusión (100 mg/kg/hora, i.v.) para mantener un plano quirúrgico de anestesia. Se realiza una traqueotomía mediante una incisión cervical en la línea media ventral y los conejos se ventilan con oxígeno 100% usando un ventilador de presión positiva. La ventilación se ajusta para mantener un pH y pC02 dentro de los rangos fisiológicos. La temperatura corporal se mantiene constante a 38°C usando una almohadilla de calentamiento. Se colocan catéteres en la vena yugular izquierda para administración de fármaco y en la arteria carótida izquierda para mediciones de la presión sanguínea. Los corazones se exponen entonces a través de una toracotomía izquierda y se coloca un cordón (seda 00) alrededor de una rama prominente de la arteria coronaria izquierda, aproximadamente dos tercios de distancia del ápex del corazón. Se induce isquemia apretando el cordón. La liberación del cordón permite la reperfusión del área isquémica. La isquemia de miocardio se pone de manifiesto por cianosis regional; la reperfusión se pone de manifiesto por hiperemia reactiva.

Protocolo La prueba comienza una vez que la presión arterial y la frecuencia cardiaca son estables durante al menos 120 minutos. Se induce precondicionamiento isquémico obstruyendo la arteria coronaria durante 5 minutos, seguido por una reperfusión de 10 minutos. Se induce precondicionamiento farmacológico infundiendo compuesto de prueba, por ' ejemplo, durante 5 minutos, y dejando 10 minutos antes de intervención posterior. Después de precondicionamiento isquémico, precondicionamiento farmacológico o ningún condicionamiento (control de vehículo, sin condicionamiento), la arteria se obstruye durante 30 minutos y después se vuelve a perfundir durante dos horas para inducir infarto de miocardio. Al final del período de reperfusión de 2 horas, los corazones se retiran rápidamente, se colocan sobre un aparato de Langendorff y se perfunden 1 minuto con solución salina normal calentada a la temperatura corporal (38°C). La sutura de seda usada como cordón se aprieta fuertemente para volver a obstruir la arteria y se infunde una suspensión al 0.5% de partículas fluorescentes de sulfato de cadmio y zinc (1-10 pm, Duke Scientific Corp., Palo Alto, California) con el perfundido para marcar todo el miocardio, excepto el área en riesgo (ventrículo no fluorescente). Después se retiran los corazones del aparato, se secan en papel y se enrollan en lámina delgada de aluminio y se guardan durante la noche a -20°C. Al día siguiente, los ventrículos se rebanan en secciones transversales de 2 mm desde el ápex hasta la base y se tiñen con cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) al 1 % en solución salina amortiguadora de fosfato, durante 20 minutos a 38°C. Puesto que el TTC reacciona con tejido vivo (deshidrogenasa dependiente de NAD presente), esta tinción diferencia entre tejido vivo (teñido de rojo) y tejido muerto (tejido infartado sin teñir). Se calculan el área infartada (no teñida) y el área en riesgo (partículas no fluorescentes) para cada rebanada de ventrículo izquierdo, usando un analizador de imagen precalibrado. Para normalizar el daño isquémico en cuanto a diferencias en el área en riesgo entre los corazones, los datos se expresan como la relación de área infartada contra el área en riesgo (% IA/AAR). Todos los datos se expresan como media ± EEM y se comparan estadísticamente usando ANOVA de factor simple o una prueba no paramétrica de ann-Whitney. La significancia se considera como p < 0.05. Se puede probar la utilidad de los compuestos de esta invención para reducir o prevenir daño isquémico o hipóxico en tejidos no cardiacos, por ejemplo, el cerebro o el hígado, utilizando procedimientos reportados en la literatura científica. Los compuestos de esta invención en tales pruebas se pueden administrar por la vía de administración preferida, con el vehículo de administración y el tiempo de administración preferidos, antes del episodio isquémico, durante el episodio isquémico o hipóxico, después del episodio isquémico o hipóxico (período de reperfusión), o durante cualquiera de las etapas experimentales mencionadas abajo. El beneficio de la invención para reducir daño cerebral isquémico o hipóxico puede ser demostrado en mamíferos, por ejemplo, utilizando el método de Park y otros {Ann. NeurolA988; 24:543-551 ). De acuerdo con el procedimiento de Park y otros, se anestesian ratas Sprague Dawley machos adultos inicialmente con halotano al 2%, y después por ventilación mecánica con una mezcla óxido nitroso-oxígeno (70%:30%) que contiene halotano 0.5-1 %. Después se realiza una traqueotomía. El volumen de recorrido del ventilador se ajusta para mantener la tensión de dióxido de carbono arterial a aproximadamente 35 mm Hg y oxigenación arterial adecuada (PaO2>90 mm Hg). La temperatura del cuerpo se puede monitorear mediante un termómetro rectal, y los animales se pueden mantener normotérmicos, si es necesario, por medio de calentamiento externo. Enseguida los animales se someten a craneotomía subtemporal para exponer el tronco principal de la arteria cerebral media izquierda (MCA) bajo un microscopio de operación, y la arteria expuesta se obstruye con coagulación microbipolar para generar lesiones isquémicas grandes en la corteza cerebral y los ganglios básales. Después de tres horas de obstrucción de la MCA, las ratas se anestesian profundamente con halotano al 2% y se realiza una toracotomía para infundir solución salina heparinizada en el ventrículo izquierdo. El efluente se recoge mediante una incisión en el atrio derecho. El lavado salino es seguido con aproximadamente 200 mi de una solución de formaldehído al 40%, ácido acético glacial y metanol absoluto (FAM; 1 :1 :8, v/v/v), entonces los animales se decapitan y la cabeza se guarda en un fijador durante 24 horas. Después se extrae el cerebro, se diseca, se fija en cera de parafina y se corta en secciones (aproximadamente 100 secciones de 0.2 mm por cerebro). Las secciones se marcan después con hematoxilina-eosina o con una combinación de violeta de cresilo y azul rápido de Luxol®, y se examinan por microscopía óptica para identificar y cuantificar el daño isquémico usando un analizador de imagen precalibrado. Los volúmenes y áreas isquémicas se expresan en unidades absolutas (mm3 y mm2) y como un porcentaje del total de la región examinada. Se considera que el efecto de los compuestos, composiciones y métodos de esta invención para reducir daño cerebral isquémico inducido por oclusión de MCA se basa en una reducción del área o volumen de daño isquémico relativo o absoluto en las secciones de cerebro de las ratas en el grupo de tratamiento, en comparación con secciones de cerebro de ratas en un grupo de control tratado con placebo. Otros métodos que se podrían usar alternativamente para demostrar el beneficio de la invención para reducir daño cerebral isquémico o hipóxico incluyen los que describen Nakayama y otros en Neurology 1988, 38:1667-1673; Memeza a y otros en Stroke 1992, 23:552-559; Folbergrova y otros en Proc. Nati. Acad. Sci 1995, 92:5057-5059; y Gotti y otros en Brain Res. 1990, 522:290-307. El beneficio de los compuestos, composiciones y métodos de esta invención para reducir daño hepático isquémico o hipóxico puede ser demostrado en mamíferos, por ejemplo, utilizando el método de Yokoyama y otros (Am. J. Physiol. 1990; 258:G564-G570). De acuerdo con el procedimiento de Yokoyama y otros, se anestesian ratas Sprague Dawley machos adultos, en ayuno, con pentobarbital de sodio (40 mg/kg i.p.); después los animales son traqueotomizados y ventilados mecánicamente con aire ambiental. Se extirpa el hígado y se coloca en un cámara ambiental mantenida a temperatura constante (37°C); después se perfunde a través de la vena porta a una presión constante de 15 cm de H20 con un amortiguador Krebs-Henseleit libre de hemoglobina modificado (en mM: 1 18 NaCI, 4.7 KCI, 27 NaHC03) 2.5 CaCI2, 1.2 MgS04, 1.2 KH2P04, 0.05 EDTA, y 1 1 mM glucosa, más 300 U de heparina). El pH del perfundido se mantiene a 7.4 gasificando el amortiguador con 0295%-C02 5%. Cada hígado se perfunde a una velocidad de flujo de 20 ml/minuto en un solo pase durante un período de 30 minutos de lavado y equilibrio (período preisquémico), seguido por un período de 2 horas de isquemia global, y después un período de 2 horas de reperfusión bajo condiciones idénticas a las del período preisquémico. Se recolectan alícuotas (20 mi) del perfundido durante el período preisquémico, inmediatamente después del período isquémico oclusivo, y cada 30 minutos del período de reperfusión de 2 horas. Las muestras de perfundido se analizan en cuanto a aparición de enzimas hepatocelulares, por ejemplo, aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT), y lactato deshidrogenase (LDH), que son tomadas para reflejar cuantitativamente el grado de daño de tejido hepático isquémico durante el procedimiento. Las actividades de AST, ALT, y LDH en el perfundido se pueden determinar por medio de varios métodos, por ejemplo mediante el método de refractometría usando un analizador automático Kodak Ektachem 500, reportado por Nakano y otros (Hepatology, 22, 539-545 (1995)). Se considera que el efecto de los compuestos, composiciones y métodos de esta invención para reducir daño hepático isquémico inducido por oclusión, se basa en una reducción en la liberación de enzimas hepatocelulares inmediatamente después del período oclusivo y/o durante el período posisquémico-de reperfusión en los hígados perfundidos de las ratas en el grupo de tratamiento, en comparación con los hígados perfundidos de ratas en un grupo de control tratado con placebo. Se pueden utilizar alternativamente otros métodos y parámetros para demostrar el beneficio de los compuestos, composiciones y métodos de esta invención para reducir daño hepático isquémico o hipóxico, incluyendo los descritos por Nakano y otros (Hepatology, 22, 539-545 (1995)).

Medición de la Actividad Inhibidora de NHE-1 Humano La metodología para medir la actividad de NHE-1 humano y la potencia inhibidora se basan en las publicadas por Watson y otros, Am. J. Physiol., 24, G229-G238, (1991 ), en donde se mide la recuperación de pH ¡ntracelular mediada por NHE después de acidificación intracelular. De esta manera, se siembran fibroplastos que expresan establemente NHE-1 humana (Counillon, L. y otros, Mol. Pharmacol., 44, 1041-1045 (1993)) sobre placas de 96 pozos recubiertas con colágeno (50,000/pozo) y se desarrollan hasta confluencia en medio de crecimiento (DMEM alto en glucosa, suero fetal de bovino 10%, 50u/ml de penicilina y estreptomicina). Las placas confluentes se incuban durante 30 minutas a 37°C con la sonda BCECF fluorescente sensible a pH (5 µ?; Molecular Probes, Eugene, Oregon). Las células cargadas BCECF se incuban durante 30 minutos a 37°C en un medio de carga ácido (cloruro de colina 70 mM, NHCU 50mM, KCI 5 mM, MgC 1 mM, CaCI2 1 .8 mM, glucosa 5 mM, HEPES 10 mM, pH 7.5), y después se colocan en una lectora de placa de imagen fluorescente (Molecular Devices, California). La fluorescencia de BCECF se monitorea usando longitudes de onda de excitación y emisión de 485 nm y 525 nm, respectivamente. Se inicia acidificación intraceiuiar mediante rápido reemplazo de medio de carga ácido con medio de recuperación (NaCI 120 mM, KCI 5 mM, MgCI2 1 mM, CaCI2 1.8 mM, glucosa 5 mM, HEPES 10 mM, pH 7.5) ± compuesto de prueba, y se monitorea la recuperación del pH intraceiuiar mediada por NHE como el incremento de fluorescencia de BCECF, dependiente de tiempo subsecuente. Se calcula la potencia de los inhibidores NHE-1 humanos como la concentración que reduce la recuperación de pH intraceiuiar en 50% (CI50).

Ensayos de Inhibidor de Aldosa Reductasa Ratas Sprague-Dawley machos se hacen diabéticas por inyección de estreptozocina a 55 mg/kg, i.v., en amortiguador de citrato pH 4.5. Se les alimenta libremente en condiciones controladas de alojamiento, temperatura, e iluminación. Después de cinco semanas, las ratas se anestesian con una sobredosis de pentobarbital, y rápidamente se retiran los tejidos y se analizan para sorbitol y fructosa. Los niveles de sorbitol se analizan de acuerdo con el método de Donald M. Eades y otros, "Rapid Analsys of Sorbitol, galactitol, Mannitol and Myoinositol Mixtures From Biological Sources", Journal of Chromatography, 490, 1 -8, (1989). La fructosa en tejidos de rata se mide enzimáticamente usando una modificación del método de Amayama {Methods in Enzymology, 89:20-29, 1982), en el cual el ferrocianuro es reemplazado con resazurina, un colorante que es reducido a resorufina, altamente fluorescente. La cantidad de fluorescencia de resorufina es estequiométrica con la cantidad de fructosa oxidada por fructosa deshidrogenasa. El ensayo contiene 0.1 mi de extracto de nervio neutralizado con ácido perclórico al 6% en un volumen final de 1.5 mi. Después de incubar durante 60 minutos a temperatura ambiente en un cajón cerrado, se determina la fluorescencia de la muestra a una excitación 560 nm, una emisión de 580 nm con cortes de 5 mm cada uno en un espectrofotómetro de fluorescencia Perkin-Elmer modelo 650-40. Las concentraciones de fructosa se calculan por comparación con una serie de estándares conocidos de fructosa.

Medición de la Actividad de SDH Para estos experimentos se usan ratas Sprague-Dawley machos (350-400 g). Se induce diabetes en algunas de las ratas mediante una inyección de estreptozocina en la vena de la cola, 85 mg/kg. Veinticuatro horas después, a 4 grupos de ratas diabéticas se les da una sola dosis del compuesto de prueba (0.001 a 100 mg/kg) mediante cebadura oral. Los animales se sacrifican 4 a 6 horas después de la dosificación y se les extrae sangre y los nervios ciáticos. Los tejidos y las células se extraen con ácido perclórico al 6%. Se mide sorbitol en eritrocitos y nervios mediante una modificación del método del R. S. Clements y otros (Science, 166, 1007-8, 1969). Se agregan alícuotas de extractos de tejido a un sistema de ensayo que tiene concentraciones finales de reactivos de 0.033 M de glicina, pH 9.4, 88 mM dinucleótido de ß-nicotina adenina 88 mM, y 4 unidades/ml de sorbitol deshidrogenasa. Después de incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente, se determina la fluorescencia de la muestra en un espectrofotómetro de fluorescencia con una excitación a 366 nm y emisión a 452 nm. Después de substracción de los blancos apropiados, se determina la cantidad de sorbitol en cada muestra de una regresión lineal de estándares de sorbitol procesados de la misma manera que los extractos de tejido. La fructosa se determina mediante una modificación del método descrito por M. Ameyama, Methods ¡n Enzymology, 89,20-25 (1982). La resazurina sustituye al ferrocianuro. Se agregan alícuotas de extractos de tejido al sistema de ensayo, que tiene concentraciones finales de reactivos de 1.2 M de ácido cítrico, pH 4.5, 13 mM de resazurina, 3.3 unidades/ml de fructosa deshidrogenasa y 0.068% de Tritón X-100™. Después de incubación por 60 minutos a temperatura ambiente, se determina la fluorescencia de la muestra en un espectrofotómetro de fluorescencia con excitación a 560 nm y emisión a 580 nm. Después de substracción de los blancos apropiados, se determina la cantidad de fructosa en cada muestra de una regresión lineal de estándares de fructosa procesados de la misma manera que los extractos de tejido. La actividad SDH se mide mediante una modificación del método descrito por U. Gerlach, "Methodology of Enzymatic Analyses", editado por H. U. Bergmeyer, 3, 112-117 (1983). Se agregan alícuotas de suero u orina al sistema de prueba, que tiene concentraciones finales de reactivos de amortiguador de fosfato de potasio 0.1 M, pH 7.4, NAD 5 mM, sorbitol 20 mM, y 0.7 unidades/ml de sorbitol de deshidrogenasa. Después de incubar por 10 minutos a temperatura ambiente, se determina el cambio promedio en la absorbencia de la muestra determinada a 340 nm. La actividad SDH se presenta como unidades de miliD034o / minuto (D034o = densidad óptica a 340 nm).

Ensayos de Inhibidor de Glicógeno Fosforilasa Las diferentes isoenzimas purificadas de glicógeno fosforilasa (GP), en donde la glicógeno fosforilasa está en el estado activado "a" (referido como glicógeno fosforilasa a, o la abreviación GPa), y referida aquí como glicógeno fosforilasa a de hígado humano (HLGPa), glicógeno fosforilasa a de músculo humano (HMGPa), y glicógeno fosforilasa a de cerebro humano (HBGPa), se pueden obtener por medio de los siguientes procedimientos.

Expresión y fermentación Los ADNc's de HLGP y HMGP se expresan desde el plásmido pKK233-2 (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey) en E. coli cepa XL-1 Blue (Stratagene Cloning Systems, LaJolla, California). La cepa se inocula en medio LB (consistente de 10 g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 5 g de NaCI y 1 mi de NaOH 1 N por litro), más 100 mg/l de ¦ ampicilina, 100 mg/l de piridoxina y 600 mg/l de MnCb, y se desarrolla a 37°C hasta una densidad celular de DOs5o= 1.0. En este punto, las células son inducidas con ¡sopropil-1-tio-ft-D-galactósido (IPTG) 1 m . Tres horas después de inducción las células se cosechan por centrifugación y las pellas celulares se congelan a -70°C hasta que se les requiera para purificación. El ADNc de HBGP puede ser expresado por medio de varios métodos, por ejemplo por el método descrito por Crerar y otros {J. Biol. Chem. 270:13748-13756). El método descrito por Crerar y otros (J. Biol. Chem. 270:13748-13756) para la expresión de HBGP es como sigue: el ADNc de HBGP puede ser expresado del plásmido pTACTAC en E. coli cepa 25A6. La cepa se inocula en medio LB (que consiste de 10 g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 5 g NaCI y 1 mi de NaOH 1 N por litro), más 50 mg/l de ampicilina, y se desarrolla durante la noche; después se vuelve a suspender en medio LB nuevo más 50 mg/l de ampicilina, y se vuelve a inocular en un volumen 40X de medio LB/amp conteniendo 250 µ? de isopropil-1 -tio-B-D- galactósido (IPTG), 0.5 mM de pirixodina y 3 mM de MgCI2, y se desarrolla a 22°C durante 48-50 horas. Después se pueden cosechar las células por centrifugación y las pellas celulares se congelan a -70°C hasta que se les requiera para purificación. El ADNc de HLGP es expresado desde el plásmido pBlueBac III (Invitrogen Corp., San Diego, California), que es contransfectado con ADN viral BaculoGoId Linear Viral ADN (Pharmingen, San Diego, California) en células Sf9. El virus recombinante se purifica subsecuentemente en placa.

Para la producción de proteína, se infectan células Sf9 desarrolladas en medio de libre de suero a una multiplicidad de infección (moi) de 0.5 y a una densidad celular de 2x106 células/ml. Después de desarrollar durante 72 horas a 27°C, las células se centrifugan y las pellas celulares se congelan a - 70°C hasta que se requieran para purificación.

Purificación de Glicógeno Fosforilasa Expresada en E. coli Las células de E. coli en pellas descritas arriba se resuspenden en ß-glicerofosfato 25 mM (pH 7.0) con DTT 0.2 mM, MgCb 1 mM, más los siguientes inhibidores de proteasa: 0.7 g/ml Pepstatin A 0.5 pg/ml Leupeptin 0.2 mM fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), y 0.5 mM EDTA, Se lisan por pretratamiento con 200 pg/ml de lisozima y 3 pg/ml de ADNasa, seguido por sonicación en lotes de 250 mi durante 5 1.5 minutos sobre hielo utilizando un disruptor de células ultrasónico Branson Modelo 450 (Branson Sonic Power Co., Danbury Connecticut). Después los lisados de células E. coli se lavan por centrifugación a 35,000 X g durante una hora, seguido por filtración a través de filtros de 0.45 mieras. La GP en la fracción soluble de los lisados (calculado en menos de 1% de la proteína total) se purifica monitoreando la actividad de la enzima (como se describe en la sección de ensayo de actividad de GPa, más adelante) de una serie de pasos cromatográficos detallados más adelante.

Cromatografía de Afinidad de Metal Inmovilizado (IMAC) Este paso se basa en el método de Luong y otros (Luong y otros, Journal of Chromatography, 584,77-84 (1992)). Se cargan 500 mi de la fracción soluble filtrada de los lisados celulares (preparados de aproximadamente 160-250 g de pella celular original) en una columna de 130 mi de IMAC Chelating-Sepharose (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, New Jersey), que se ha cargado con CuCI2 50 mM y ß-glicerofosfato 25 mM, NaCI 250 mM e imidazol 1 mM en amortiguador pH 7. La columna se lava con amortiguador hasta que la A2eo retorna a la línea basal. Después la muestra se eluye de la columna con el mismo amortiguador conteniendo imidazol 100 mM para remover la GP enlazada y otras proteínas enlazadas. Las fracciones que contienen la actividad GP se reúnen (aproximadamente 600 mi), y se les agregan ácido etilendiaminatetraacético (EDTA), DL-ditiotreitol (DTT), fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), leupeptina y pepstatin A, para obtener concentraciones respectivamente de 0.3 mM, 0.2 mM, 0.2 mM, 0.5 pg/nril y 0.7 pg/ml. La GP reunida se desala sobre una columna Sephadex G-25 (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri) equilibrada con Tris-HCI 25 mM (pH 7.3), amortiguador DTT 3mM (amortiguador A), para remover imídazol y se guarda sobre hielo hasta el segundo paso cromatográfico.

Cromatografía de 5'-AMP-Sepharose La muestra de GP reunida desalada (aproximadamente 600 mi) se mezcla en seguida con 70 mi de 5'-AMP Sepharose (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, New Jersey), que se ha equilibrado con amortiguador A (véase arriba). La mezcla se agita suavemente durante una hora 22°C y después se empaca en una columna y se lava con amortiguador A hasta que la A2eo regresa a la línea basal. La GP y otras proteínas se eluyen de la columna con Tris-HCI 25 mM, DTT 0.2 mM y adenosina-5'-monofosfato (AMP) 10 mM a pH 7.3 (amortiguador B). Las fracciones que contienen GP se reúnen después de la identificación determinando la actividad de la enzima (descrito más adelante) y visualizando Mr de banda de proteína GP de aproximadamente 97 kdal por medio de electroforesis en gel de poliacrilamida y dodeciisulfato de sodio (SDS-PAGE), seguido por marcación con plata (equipo 2D-silver Stain II "Daiichi Kit", Daiichi Puré Chemicals Co., LTD., Tokio Japón) y después se reúnen. La GP reunida se dializa en ß-glicerofosfato 25 mM, DTT 0.2 mM, EDTA 0.3 mM, NaCI 200 mM, amortiguador pH 7.0 (amortiguador C), y se guarda sobre hielo hasta utilizarse. Antes del uso de la enzima GP, la enzima es convertida de la forma inactiva expresada en la cepa XL-1 Blue de E. coli (designada GPb) (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, California), a la forma activa (designada GPa) por medio del procedimiento descrito en la sección (A), Activación de GP más adelante.

Purificación de Glicógeno Fosforilasa Expresada en células Sf9 Las células Sf9 en pellas descritas arriba se vuelven a suspender en fi-glicerofosfato 25 mM (pH 7.0) con DTT 0.2 mM, MgCI2 1 mM, más los siguientes inhibidores de proteasa: 0.7 pg/ml Pepstatin A 0.5 pg/ml Leupeptin 0.2 mM fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), y 0.5 mM EDTA, Se lisan por pretratamiento con ADNasa 3 pg/ml, seguido por sonicación en lotes por 3 x 1 minuto sobre hielo usando un disruptor de células ultrasónico Branson Modelo 450 (Branson Sonic Power Co., Danbury Connecticut). Los Usados de células Sf9 se clarifican entonces por centrifugación a 35,000 X g durante una hora, seguido por filtración a través de filtros de 0.45 mieras. La GP en la fracción soluble de los lisados (que se estima de 1.5% de la proteína total) se purifica monitoreando la actividad de la enzima (como se describe en la sección de ensayo de actividad GPa, más adelante), de una serie de pasos cromatográficos detallados más adelante.

Cromatografía de Afinidad de Metal Inmovilizado (I AC) Se realiza cromatografía de afinidad de metal inmovilizado como se describe en la sección de arriba. La GP reunida desalada se guarda entonces sobre hielo hasta que sea procesada posteriormente.

Activación de GP Antes de la cromatografía adicional, la fracción de enzima inactiva expresada en células Sf9 (designada como GPb), es convertida a la forma activa (designada como GPa) por medio del siguiente procedimiento descrito en la sección (A), activación de GP.

Cromatografía de Intercambio Aniónico Después de la activación de la GPb IMAC purificada a GPa por reacción con la fosforilasa cinasa inmovilizada, las fracciones de GPa reunidas se dializan contra Tris-HCI 25 mM, pH 7.5, conteniendo DTT 0.5 mM, EDTA 0.2 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) 1.0 mM, leupeptin 1.0 pg/ml y pepstatina A 1.0 pg/ml. Después la muestra se carga sobre una columna de cromatografía de intercambio aniónico MonoQ (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey). La columna se lava con amortiguador de equilibrio hasta que la A2eo retorna a la línea basal. Después se eluye la muestra de la columna con un gradiente lineal de NaCI 0-0.25 M para remover la GP enlazada y otras proteínas enlazadas. Las fracciones que contienen GP eluyen en la escala de 0.1-0.2 M NaCI, detectadas monitoreando el eluyente por la absorbancia máxima de proteína a ?280· La proteína GP se identifica entonces visualizando Mr de la banda de proteína GP de aproximadamente 97 kdal por medio de electroforesis en gel de poliacrilamida y dodeciisulfato de sodio (SDS-PAGE), seguido por marcación con plata (equipo 2D-silver Stain II "Daiichi Kit", Daiichi Puré Chemicals Co., LDT., Tokio, Japón) y después se reúne. La GP reunida se dializa en ácido N,N-bis[2-hidroxietil]-2-aminoetanosulfónico 25 mM, DTT 1.0 mM, EDTA 0.5 mM, NaCI 5 mM, amortiguador pH 6.8 y se guarda sobre hielo hasta que se utiliza.

Determinación de la Actividad de Enzima GP A) Activación de GP: Conversión de GPb a GPa Antes de la determinación de la actividad de la enzima GP, la enzima es convertida de la forma inactiva expresada en la cepa XL-1 Blue de E. coli (designada GPb) (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, California), a la forma activa (designada GPa), por fosforilación de GP usando fosfonlasa cinasa como sigue. La fracción de enzima inactiva expresada en células Sf9 (designada GPb) también es convertida a la forma activa (designada GPa) por medio del siguiente procedimiento.

Reacción de GP con fosforilasa cinasa inmovilizada Se inmoviliza fosforilasa cinasa (Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri), sobre Affi-Gel 10 (BioRad Corp., Melville, New York), según las instrucciones del fabricante. En resumen, la enzima fosforilasa cinasa (10 mg) se incuba con glóbulos Affi-Gel lavados (1 mi) en 2.5 mi de HEPES 100 mM y CaCb 80 mM a pH 7.4, durante 4 horas a 4°C. Los glóbulos Affi-Gel se lavan entonces una vez con el mismo amortiguador antes de bloquear con HEPES 50 mM y éster metílico de glicina 1 M a pH 8.0 durante una hora a temperatura ambiente. El amortiguador de bloqueo se remueve y se reemplaza con HEPES 50 mM (pH 7.4), ß-mercaptoetanol 1 mM y NaN3 0.2% para almacenamiento. Antes de usar para convertir GPb a GPa, los glóbulos de fosforilasa cinasa inmovilizados en Affi-Gel se equilibran lavando en el amortiguador usado para realizar la reacción de cinasa, consistente de ß-glicerofosfato 25 mM, DTT 0.3 mM, y EDTA 0.3 mM, a pH 7.8 (amortiguador de prueba de cinasa). La GPb inactiva, parcialmente purificada, obtenida de la cromatografía 5'-AMP-Sepharose (de E. coli) o la mezcla de GPa y GPb obtenida de IMAC de arriba (de células Sf9), se diluye 1 :10 con el amortiguador de prueba de cinasa y después se mezcla con la enzima fosforilasa cinasa anteriormente mencionada, inmovilizada sobre los glóbulos de Affi-Gel. Se le agrega NaTP hasta 5 mM y MgCI2 hasta 6 mM. La mezcla resultante se agita suavemente a 25°C durante 30 a 60 minutos. La muestra se retira de los glóbulos y se estima el porcentaje de activación de GPb por conversión a GPa determinando la actividad de enzima GP en presencia y en ausencia AMP 3.3 mM. Después se calcula el porcentaje de actividad de enzima GP total debida a la actividad de la enzima GPa (AMP independiente), como sigue: Actividad HLGP - AMP % de HLGPa total = Actividad HLGP + AMP Alternativamente, la conversión de GPb a Gpa se puede monitorear por medio de enfoque isoeléctrico, en base a la desviación en movilidad electroforética que se observa después de la conversión de GPb a GPa. Las muestras de GP se analizan por enfoque isoeléctrico (IEF) utilizando el sistema Pharmacia PfastGel System (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey), usando geles precolados (escala de pl 4-6.5) y el método recomendado por el fabricante. Las bandas de GPa y GPb resueltas se visualizan entonces sobre los geles por marcación con plata (equipo 2D-silver Stain II "Daiichi Kit", Daiichi Puré Chemicals Co., LDT., Tokio, Japón). La identificación de GPa y GPb se hace por comparación con estándares de GPa y GPb derivados de E. coli que se corren en paralelo sobre los mismos geles que las muestras experimentales.

B) Ensayo de Actividad GPa Las actividades de tratamiento/prevención de enfermedad/condición descritas en la presente, de los compuestos inhibidores de glicógeno fosforilasa de esta invención, se pueden determinar indirectamente determinando el efecto de los compuestos de esta invención sobre la actividad de la forma activada de glicógeno fosforilasa (GPa) por uno de dos métodos; la actividad de glicógeno fosforilasa a se mide en dirección de avance monitoreando la producción de glucosa-1 -fosfato a partir de glicógeno, o siguiendo la reacción inversa, midiendo la síntesis de glicógeno a partir de glucosa-1 -fosfato con la liberación de fosfato inorgánico. Todas las reacciones se pueden correr en triplicado en placas de microtítulo de 96 pozos, y se mide el cambio de absorbancia debido a la formación del producto de reacción a la longitud de onda especificada mas abajo en una lectora de ELISA MCC/340 MKII (Lab Systems, Finlandia), conectada a un Titertech Microplate Stacker (ICN Biomedical Co, Huntsville, Alabama). Para medir la actividad de la enzima GPa en dirección de avance, se monitorea la producción de glucosa-1 -fosfato a partir de glicógeno por medio del método general de multienzima acoplada, de Pesce y otros [Pesce, M.A., Bodourian, S. H., Harris, R. C. y Nicholson, J. F. (1997) CHnical Chemistry 23, 1711-1717], modificado como sigue: se diluyen 1 a 100 pg de GPa, 10 unidades de fosfoglucomutasa y 15 unidades de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, Indiana), a 1 mi en amortiguador A (descrito más adelante). El amortiguador A está a pH 7.2 y contiene HEPES 50 mM, KCI 100 mM, ácido etileneglicoltetraacético (EGTA) 2.5 mM, MgCI2 2.5 mM, KH2P04 3.5 mM y ditiotreitol 0.5 mM. Se agregan 20 µ? de esta solución de abastecimiento a 80 µ? de amortiguador A conteniendo 0.47 mg/ml de glicógeno, 9.4 mM de glucosa, 0.63 mM de forma oxidada de fosfato de dinucleótido de nicotinamida y adenina (NADP+). Los compuestos a probar se agregan como 5 µ? de solución en sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 14% antes de la adición de las enzimas. Se determina la proporción basal de la actividad de la enzima GPa en ausencia de inhibidores agregando 5 µ? de DMSO al 14%, y se obtiene una proporción completamente inhibida de la actividad de la enzima GPa agregando 20 µ? de 50 mM de la sustancia de prueba de control positivo, cafeína. La reacción se sigue a temperatura ambiente midiendo la conversión de NADP+ oxidado a NADPH reducido a 340 nm. Para medir la actividad de la enzima GPa en dirección inversa, se mide la conversión de glucosa-1 -fosfato en glicógeno más fosfato inorgánico por medio del método general descrito por Engers y otros [Engers, H.D., Shechosky, S. y Madsen, N. B. Can. J. Biochem. 48, 746-754 (1970)], modificado como sigue: se diluye GPa 1 a 100 pg a 1 mi en amortiguador B (descrito adelante). El amortiguador B está a pH 7.2 y contiene HEPES 50 mM, KCI 100 mM, EGTA 2.5 mM, MgCI2 2.5 mM y ditiotreitol 0.5 mM. Se agregan 20 µ? de esta solución de abastecimiento a 80 µ? de amortiguador B con 1.25 mg/ml de glicógeno, 9.4 mM de glucosa y 0.63 mM de glucosa-1-fosfato. Los compuestos a probar se agregan como 5 µ? de solución en DMSO al 14% antes de la adición de la enzima. Se determina la proporción basal de la actividad de la enzima GPa en ausencia de inhibidores agregados añadiendo 5 µ? de DMSO al 14%, y se obtiene una proporción completamente inhibida de la actividad de la enzima GPa agregando 20 µ? de cafeína 50 mM. Esta mezcla se incuba a temperatura ambiente durante 1 hora y se mide el fosfato inorgánico liberado de la glucosa-1 -fosfato por medio del método general de Lanzetta y otros [Lanzaetta, P. A., Alvarez, L. J., Reinach, P. S. y Candía, O. A, Anal. Biochem. 100, 95-97 (1979)], modificado como sigue: 150 µ?_ de molibdato de amonio 10 mg/ml, verde malaquita 0.38 mg/ml en HCI 1 N, se agregan a 100 µ? de la mezcla de enzima. Después de una incubación de 20 minutos a temperatura ambiente, se mide la absorbancia a 620 nm. Los ensayos anteriores, llevados a cabo con una escala de concentraciones de compuesto de prueba, permite la determinación de un valor de CI50 (concentración de compuesto de prueba necesario para 50% de inhibición) para la inhibición in vitro de la actividad de la enzima GPa por ese compuesto de prueba. La administración de los compuestos de esta invención puede ser mediante cualquier método que suministre un compuesto de esta invención, preferiblemente al tejido dañado (por ejemplo tejido hepático y/o cardiaco). Estos métodos incluyen las vías orales, parenterales, intraduodenales, etc. Generalmente, los compuestos de la presente invención se administran en dosis individuales (por ejemplo una vez al día) o múltiples, o mediante infusión constante. Los compuestos de esta invención son útiles por ejemplo para reducir o minimizar el daño efectuado directamente a cualquier tejido que puede ser susceptible a sufrir daño de isquemia/reperfusión o a daño que resulta de hipoxia (por ejemplo corazón, cerebro, pulmón, riñón, hígado, tubo digestivo, músculo esquelético, retina) como resultado de un evento isquémico o hipóxico (por ejemplo infarto de miocardio). Por lo tanto, el compuesto activo se emplea de manera útil profilácticamente para prevenir, es decir, mitigar o detener (prospectivamente o profilácticamente) daño de tejido (por ejemplo de tejido miocárdico) en pacientes que están en riesgo de isquemia o hipoxia (por ejemplo isquemia de miocardio). Por lo general, los compuestos de esta invención se administran oralmente o parenteralmente (por ejemplo de manera intravenosa, intramuscular, subcutánea o intramédular). También puede estar indicada la administración tópica, por ejemplo cuando el paciente sufre de trastornos gastrointestinales, o si la medicación se aplica mejor a la superficie de un tejido u órgano, según sea determinado por el medico tratante. Como se usa aquí, él termino "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad de compuesto o compuestos de la presente invención que puede inhibir o prevenir varias condiciones y secuelas patológicas descritas en la presente. Los términos "inhibir" o "que inhibe" se refieren a impedir, tratar, aliviar, mejorar, curar, restaurar, reducir o revertir el avance, o reducir la severidad, de una condición patológica relacionada con, o resultante de, daño de tejido (por ejemplo tejido de miocardio) en pacientes que están en riesgo de isquemia e hipoxia (por ejemplo isquemia de miocardio). Como tales, estos métodos incluyen administración médica terapéutica (aguda) y/o profiláctica (prevención), según sea apropiado. La cantidad y la administración de los compuestos dependerán por supuesto del sujeto a tratar, de la severidad de la aflicción, de la manera de administración y de la consideración del médico tratante. De esta manera, debido a la variabilidad de paciente a paciente, las dosis que se dan más adelante son una guía y el médico puede titular las dosis del fármaco para lograr el tratamiento que considere apropiado para el paciente. Al considerar el grado de tratamiento ' deseado, el médico debe balancear una variedad de factores tales como la edad del paciente, la presencia de enfermedad preexistente, así como también la existencia de otras enfermedades (por ejemplo enfermedad cardiovascular). Una cantidad del compuesto de la presente invención que es efectiva para tratamiento o protección de isquemia o hipoxia es preferiblemente una dosificación de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 100 mg/kg/día. Una dosificación especialmente preferida es de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 50 mg/kg/día de un compuesto de esta invención. De esta manera, por ejemplo, en un modo de administración, los compuestos de esta invención se pueden administrar antes de cirugía (por ejemplo veinticuatro horas antes de la cirugía, por ejemplo cirugía cardiaca), durante y/o posteriormente a la cirugía (por ejemplo en el transcurso de veinticuatro después de la cirugía), en donde hay riesgo de isquemia (por ejemplo isquemia de miocardio). En otro modo de administración, los compuestos de esta invención se administran con una dosis de carga inicial (por ejemplo inyección de bolo o infusión) antes de la cirugía, seguido por una infusión constante antes, durante y después de la cirugía. Los compuestos de esta invención también se pueden administrar de un modo diario continuo. Los compuestos de la presente invención se administran generalmente en la forma de una composición farmacéutica que comprende por lo menos uno de los compuestos de esta invención, junto con un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable. Así, los compuestos de esta invención se pueden administrar individualmente o juntos en cualquier forma de dosis convencional oral, parenteral (por ejemplo inyección intravenosa o intramuscular), rectal o transdérmica. Para administración oral, una composición farmacéutica puede tomar la forma de soluciones, suspensiones, tabletas, pildoras, cápsulas, polvos y similares. Las tabletas que contienen varios excipientes tales como citrato de sodio, carbonato de sodio y fosfato de calcio se emplean junto con varios desintegrantes tales como almidón y preferiblemente almidón de papa o tapioca, y ciertos silicatos complejos, junto con agentes aglutinantes tales como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelatina y acacia. Además, para fines de compresión, por lo regular son útiles los agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, laurilsulfato de sodio y talco. También, composiciones sólidas de un tipo similar se emplean como rellenos en cápsulas blandas y duras de gelatina; los materiales preferidos a este respecto incluyen también lactosa o leche de azúcar, así como también polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se dan suspensiones y/o elíxires acuosos para administración oral, los compuestos de esta invención se pueden combinar con varios agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, agentes emulsionantes y/o agentes de suspensión, así como también diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y varias combinaciones de los mismos. Para fines de administración parenteral, se emplean soluciones en aceite de cártamo o cacahuate, o en propilenglicol acuoso, así como también soluciones acuosas estériles de las sales solubles en agua correspondientes. Dichas soluciones acuosas se pueden amortiguar adecuadamente, si es necesario, y el diluyente líquido primero de hace isotónico con suficiente solución salina o glucosa. Estas soluciones acuosas son especialmente adecuadas para fines de inyección intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. A este respecto, el medio acuoso estéril que se emplea se obtiene fácilmente por medio de técnicas estándares bien conocidas para el experto en la materia. Para fines de administración transdérmica (por ejemplo tópica), se preparan soluciones estériles diluidas, acuosas o parcialmente acuosas (usualmente en una concentración de aproximadamente 0.1% a 5%), por lo demás similares a las soluciones parenterales de arriba. Son conocidos los métodos para preparar varias composiciones farmacéuticas con una cierta cantidad de ingrediente activo, o serán evidentes para los expertos en esta técnica a la luz de esta descripción. Para ejemplos de métodos de preparación de composiciones farmacéuticas véase "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Company, Eater, Penssylvania., 16a. edición (1980). Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden contener, por ejemplo, 0.0001 %-95% del compuesto(s) de esta invención. En cualquier caso, la composición o formulación a administrar contendrá una cantidad de compuesto(s) de acuerdo con la invención en una cantidad efectiva para tratar la enfermedad/condición del sujeto por tratar. Convenientemente, la presente invención también provee equipos para ser usados por un consumidor que tiene, o está en riesgo de tener, una enfermedad o condición que resulta por ejemplo de isquemia o hipoxia, que puede ser disminuida por medio de un agonista de A3. Dichos equipos incluyen una forma dosificada adecuada tal como una solución parenteral inyectable, particularmente adaptada para inyección intravenosa o intramuscular, e instrucciones que describen el método de un uso de dicha forma dosificada para reducir el riesgo de daño a tejido para el consumidor. Las instrucciones darían indicaciones al consumidor o al personal médico para administrar la solución parenteral de acuerdo con los métodos de administración conocidos para el experto en la materia. Dichos equipos podrían empacarse y venderse ventajosamente en unidades de equipo parenterales, individuales o múltiples. Los dos compuestos diferentes del aspecto de combinación de esta invención se pueden co-administrar simultáneamente o secuencialmente en cualquier orden, o como una sola composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención y un inhibidor de aldosa reductasa como se describió arriba, o un inhibidor de glicógeno fosforilasa como se describió arriba, o un inhibidor de sorbitol deshidrogenasa o un agente cardiovascular. Puesto que la presente invención tiene un aspecto que se refiere al tratamiento de la enfermedad/condición descrita aquí, con una combinación de ingredientes activos que se pueden administrar separadamente, la invención también se refiere a combinar composiciones farmacéuticas separadas en forma de equipo. El equipo comprende dos composiciones farmacéuticas separadas: un compuesto de formula I, o un profármaco del mismo o una sal de dicho compuesto o de dicho profármaco, y un segundo compuesto como se describió arriba. El equipo comprende un envase (por ejemplo un frasco dividido o un paquete dividido de lámina delgada). Típicamente, el equipo comprende instrucciones para la administración de los componentes separados. La forma de equipo es particularmente ventajosa cuando los componentes separados se administran preferiblemente en diferentes formas de dosis (por ejemplo oral y parenteral), cuando se administran a intervalos diferentes de dosificación, o cuando el médico tratante busca la titulación de los componentes individuales de la combinación. Un ejemplo de dicho equipo es el denominado empaque de burbujas. Los empaques de burbujas son bien conocidos en la industria de embalaje y se usan ampliamente para empacar formas de dosis unitarias farmacéuticas (tabletas, cápsulas y similares). Los empaques de burbujas consisten por lo general de una lámina de material relativamente rígido cubierto con una lámina delgada de un material de plástico preferiblemente transparente. Durante el procedimiento de embalaje se forman huecos en la lámina delgada de plástico. Los huecos tienen el tamaño y la forma de las tabletas o cápsulas que se van a empacar. Después, las tabletas o cápsulas se colocan en los huecos y la lámina de material relativamente rígido se sella contra la lámina delgada de plástico en la cara de la lámina opuesta a la dirección en la cual se formaron los huecos. Como resultado, las tabletas o cápsulas se sellan en los huecos entre la lámina delgada de plástico y la lámina rígida. Preferiblemente, la resistencia de la lámina es tal que las tabletas o cápsulas pueden ser retiradas del empaque de burbujas aplicando presión manualmente sobre los huecos con lo cual se forma una abertura en la lámina en la posición de los huecos. Se puede retirar entonces la tableta o cápsula mediante dicha abertura. Puede ser conveniente proveer un auxiliar de memoria en el equipo, por ejemplo en la forma de números junto a las tabletas o cápsulas, en donde los números corresponden con los días del régimen en que se deben ingerir las tabletas o cápsulas especificadas. Otro ejemplo de dicho auxiliar de memoria es un calendario impreso sobre el cartón, por ejemplo como sigue "primera semana, lunes, martes etc....segunda semana, lunes, martes ", etc. Otras variaciones de auxiliares de memoria serán fácilmente evidentes. Una "dosis diaria" puede ser la toma de una sola tableta o cápsula o varias pildoras o cápsulas en un día determinado. También, una dosis diaria de un primer compuesto puede consistir de una tableta o cápsula mientras que una dosis diaria del segundo compuesto puede consistir de varias tabletas o cápsulas y viceversa. El auxiliar de memoria debe reflejar esto. En otra modalidad específica de la invención, se provee un dispensador diseñado para dispensar las dosis diarias una a la vez en el orden de uso pretendido. Preferiblemente, el dispensador está equipado con un auxiliar de memoria a fin de facilitar adicionalmente el cumplimiento del régimen. Un ejemplo de dicho auxiliar de memoria es un contador mecánico que indica el número de dosis diarias que han sido dispensadas. Otro ejemplo de dicho auxiliar de memoria es una memoria de circuito integrado activada por batería, acoplada con una pantalla de cristal líquido, o una señal recordatoria audible que, por ejemplo, da la fecha en que se ha tomado la última dosis diaria y/o recuerda a uno cuando se debe tomar la siguiente dosis. Los compuestos de esta invención se administran generalmente en una formulación conveniente. Los siguientes ejemplos de formulación son ilustrativos solamente y no pretenden limitar el alcance de la presente invención. En las formulaciones que siguen, "ingrediente activo" significa un compuesto(s) de esta invención. Será entendido por el experto en la materia que el ingrediente activo puede estar formulado como una combinación de agentes.

FORMULACION 1 Cápsulas de gelatina Se preparan cápsulas duras de gelatina usando lo siguiente: Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente activo 0.25-100 Almidón 0-650 Polvo fluido de almidón 0-50 Fluido de silicón 350 centistokes 0-15 FORMULACION 2 Tabletas Se prepara una formulación de tabletas usando los ingredientes siguientes: Ingrediente Cantidad (mg/tableta) Ingrediente activo 0.25-100 Celulosa microcristalina 200-650 Dióxido de silicio fumante 10-650 Acido esteárico 5-15 Los componentes se mezclan y se comprimen para formar tabletas.

FORMULACION 3 Tabletas Alternativamente, se preparan tabletas que contienen cada una 0.25-100 mg de ingredientes activos de la siguiente manera: Ingrediente Cantidad (mg/tableta) Ingrediente activo 0.25-100 Almidón 45 Celulosa microcristalina 35 Polivinilpirrolidona (como solución al 10% en agua) 4 Carboximetilcelulosa de sodio 4.5 Estearato de magnesio 0.5 Talco 1 El ingrediente activo, almidón y celulosa se pasan a través de un tamiz U.S. malla No. 45 y se mezclan completamente. La solución de polivinilpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes que después se pasan a través de un tamiz U.S. de malla No. 14. Los gránulos así producidos se secan a 50°C-60°C y se pasan a través de un tamiz U.S. malla No. 18. La carboximetilcelulosa de sodio, almidón, estearato de magnesio y talco, pasados previamente a través de un tamiz U.S. No. 60, se agregan entonces a los gránulos que, después de mezclar, se comprimen en una máquina tableteadora para producir tabletas.

FORMULACION 4 Suspensiones Se preparan suspensiones conteniendo cada una 0.25-100 mg de ingrediente activo por 5 mi de dosis, de la siguiente manera: Ingrediente Cantidad (mg/5ml) Ingrediente activo 0.25-100 mg Carboximetilcelulosa de sodio 50 mg Jarabe 1.25 mg Solución de ácido benzoico 0.10 ml Saborizante es. Color es. Agua purificada hasta 5 mi El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz U.S. de malla No. 45 y se mezcla con la carboximetilcelulosa de sodio y el jarabe para formar una pasta blanda. La solución de ácido benzoico, saborizante y color se diluyen con un poco de agua y se agregan con agitación. Después se le agrega suficiente agua para producir el volumen requerido.

FORMULACION 5 Aerosol Se prepara una solución de aerosol que contiene los siguientes ingredientes: Ingrediente Cantidad (% en peso) Ingrediente activo 0.25 Etanol 25.75 Propulsor 22 (clorodiflurometano) 74.00 El ingrediente activo se mezcla con etanol y la mezcla se agrega a una porción del propulsor 22, se enfría a 30°C y se transfiere a un dispositivo de llenado. La cantidad requerida se carga entonces en un recipiente de acero inoxidable y se diluye con el propulsor restante. Se í o ajustan entonces las unidades de válvula al recipiente.

FORMULACION 6 Supositorios 15 Se preparan supositorios como sigue: Ingrediente Cantidad (mg/supositorio) Ingrediente activo 250 Glicéridos de ácido graso saturado 2,000 0 El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz U.S. de malla 60 y se suspende en los glicéridos de ácido graso saturado previamente fundidos usando el mínimo calor necesario. Después la mezcla se vacía en un molde de supositorio de capacidad nominal de 2 g y se deja enfriar.

FORMULACION 7 Solución Intravenosa Se prepara una formulación intravenosa como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente activo 25 mg-10,000 mg Solución salina isotónica 1 ,000 mi La solución de los ingredientes anteriores se administra intravenosamente a un paciente. Las composiciones (o formulaciones) farmacéuticas descritas arriba se pueden empacar en una variedad de formas dependiendo del método usado para administrar el fármaco. Generalmente, un artículo (o equipo) para distribución incluye un recipiente que contiene la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los recipientes adecuados son bien conocidos para el experto en la materia e incluyen materiales tales como frascos (de plástico y de vidrio), saches, ampolletas, bolsas de plástico, cilindros de plástico y similares. El recipiente puede incluir también un ensamble inviolable para impedir el acceso indiscreto al contenido del paquete. Además, el recipiente tiene sobre el mismo una etiqueta que describe su contenido. La etiqueta puede incluir también precauciones apropiadas. Los siguientes ejemplos proveen una ilustración de los compuestos dentro del alcance de la invención y las preparaciones de los mismos. Será entendido por el experto en la materia que pueden ser posibles otras rutas sintéticas y que se pueden hacer modificaciones equivalentes (por ejemplo sustituciones de bioisosteros) que entrarán dentro del alcance y espíritu de la invención.

EJEMPLOS Procedimientos Experimentales Generales Se registraron espectros- de RMN en un Varían XL-300 (Varían Co., Palo Alto, California), un espectrómetro Bruker AM-300 (Bruker Co., Billerica, Massachusetts) o un Varían Unty 400, a aproximadamente 23°C, a 300 o 400 MHz para protones. Los desplazamientos químicos se expresan en partes por millón de tetrametilsilano. Las formas de los picos se denotan como sigue: s, singulete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; y bs, singulete amplio. Las resonancias designadas como intercambiables no aparecen en un experimento de RMN separado en donde la muestra se agitó con varias gotas de D2O en el mismo solvente. Se obtuvieron espectros de masa de ionización química a presión atmosférica (APCIMS) en un espectrómetro Fisons Platform II. Se obtuvieron espectros de masa de ionización química (CIMS) en un instrumento Hewlett-Packard 5989 (Hewlett-Packard Co., Palo Alto, California, ionización de amoniaco, PBMS). Cuando se describe la intensidad de iones que contienen cloro o bromo, se observó la relación de intensidad (aproximadamente 3:1 para iones que contienen J5CI/37CI, y 1 :1 para iones que contienen 79Br/81Br), y M se basa en 35CI y 79Br. En algunos casos solo se dan picos representativos 1H RMN y APCIMS. Se realizó cromatografía en columna con gel de sílice Baker (40 pm, J.T.Baker, Phillipsburg, New Jersey) o gel de sílice 60 (EM Sciences, Gibbstown, New Jersey) en columnas de vidrio o en columnas Flash 40™ o Flash 12™ (Biotage, Charlottesville, Virginia) bajo presión de nitrógeno. Se realizó cromatografía radial usando un Chromatron (Harrison Research, Palo Alto, California). A menos que se especifique de otra manera, los reactivos se usaron tal como se obtuvieron de las fuentes comerciales. Usados como solventes de reacción, dimetilformamida, 2-propanol, tetrahidrofurano y diclorometano eran grado anhidro, provistos por Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Wisconsin). Fueron realizados microanálisis por Schwarzkopf Microanalytical Laboratory, Woodside, New York. Los términos "concentrado" y "coevaporado" se refieren a la remoción de solvente a presión de aspirador de agua en un evaporador rotativo con una temperatura de baño de menos de 50°C. Las abreviaciones "min" y "h" representan "minutos" y "horas", respectivamente, y rt representa temperatura ambiente.

Preparación de Intermediarios y Materiales de Partida Se prepararon compuestos intermediarios y materiales de partida para usar en la preparación de los compuestos 1-36 ejemplificados en los ejemplos 1-36, como se describe abajo. Todos los otros materiales están disponibles comercialmente o sus preparaciones son bien conocidas para el experto en la técnica química.

PREPARACION A Metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R) 3-azido-5-f6-f2-(2,5-dimetoxi-fenil)-etil- aminol-purin-9-il -4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto A1 ) Se combinaron 2,5-dimetoxifenetilamina (141 µ?, 0.848 mmoles), éster metílico de ácido (2S;3S,4 ,5R)-4-acetoxi-3-azido-5-(6-cloro-purin-9-il)-tetrahidro-furan-2-carboxílico (270 mg, 0.707 mmoles), etanol (3.0 mi) y trietilamina (295 µ?, 2.1 mmoles), y se calentaron a 70°C durante la noche. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente, se le agregó metilamina (2.12 mi, 2M en MeOH), y la solución se agitó durante 5 horas. El producto se purificó sobre gel de sílice por medio de Flash 40, eluyendo con MeOH 7%/CH2CI2. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.33 a 8.24 (m, 1 H); 8.22 (s, 1 H); 6.82 (d, 1 H, J = 8.9 Hz); 6.78 a 6.67 (m, 3H); 5.98 (d, 1 H, J = 7.1 Hz); 5.06 a 500 (m, 1 H); 4.43 a 4.37 (m, 2H); 3.79 a 3.73 (m, 3H); 3.72 a 3.67 (m, 1 H); 3.66 a 3.63 (m, 3H); 2.99 a 2.92 (m, 2H); 2.86 a 2.81 (m, 3H). Los compuestos A2-A25 se prepararon de acuerdo con el procedimiento general descrito arriba para la preparación del compuesto A1 utilizando la amina apropiada.

Compuesto Nombre de Compuesto No. A2 Metilamida de ácido (2S.3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-[6-(3-metoxi- bencilamino)-purin-9-il]tetrahidro-furan-2-carboxílico A3 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(4-benciloxi-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A4 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-[6-(2-hidroxi-5-metoxi- bencilamino)-purin-9-illtetrahidro-furan-2-carbox¡lico A5 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(3-butoxi-bencilamino)-purin-9- il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A6 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2,5-dimetil-bencilamino)- purin-9-ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxíl¡co A7 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2,5-dicloro-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A8 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-{6-[3-(2-morfolin-4-il- etoxi)bencilamino)purin-9-il}tetrahidro-furan-2-carboxilico A9 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-{6-[3-(3-metil-isoxazol- 5-ilmetoxi)-bencilamino]-purin-9-il}-tetrahidro-furan-2-carboxílico A10 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-[6-(2-metoxi-5-metil- bencilamino)-purin-9-illtetrah¡dro-furan-2-carboxílico A11 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(biciclo[2.2.1]hept-2-iloxi)-5- metoxi-bencilaminol-purin-9-il -hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxilico A12 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2,5-dietil-bencilamino>-purin- 9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A13 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(1-etil-propoxi)-5-metoxi- bencilaminol-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A14 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(3-ciclopentiloxi-bencilamino)- purin-9-ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A15 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-ciclopentiloxi-bencilamino)- purin-9-ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A16 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(5-cloro-2-isopropoxi- bencilamino)-purin-9-ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A17 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2-benciloxi-bencilamino)- purin-9-ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A18 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(4-fluorofenil)-etilamino]- purin-9-il}-4-hidroxi-tetrah¡dro-furan-2-carboxílico A19 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(4-benciloxi-3,5-dimetoxi- fenil)etilaminolpurin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A20 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-(6-met¡lamino-purin-9- il)-tetrahidro-furan-2-carboxílico A21 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(4-fluoro-3-metoxi- fenil)etilaminol-purin-9-ill-4-hidroxi-tetra idro-furan-2-carboxílico A22 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2,5-dimetoxi-bencilamino)- purin-9-ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico A23 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-{6-fenetilamino-purin-9- il-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxilico A24 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-[6-(2-fenil- ciclopropilamino)-purin-9-il]-tetrahidro-furan-2 arboxílico A25 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(4-benciloxi-3-metoxi-fenil)- etilaminol-purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico PREPARACION B Metilamida de ácido (2S.3S,4R,5 )-3-azido-5-f6-r(3-benciloxi-6-metil- p¡r¡din-2-ilmetil)-amino1-purin-9-il)-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2- carboxílico (Compuesto B1 ) Se combinaron 3-benciloxi-6-metil-pirid¡n-2-¡l-metilamina (41 mg, 0.17 mmoles), metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-cloro-purin-9-il)-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (50 mg, 0.15 mmoles), etanol (5.0 mi) y trietilamina (100 µ?, 0.73 mmoles), y se calentaron a 70°C durante la noche. La mezcla se concentró y el residuo se disolvió en diclorometano y se reconcentró 3 veces para producir un rendimiento cuantitativo del compuesto del título como una espuma incolora. EM 531 (M+H)+. Los compuestos B2-B12 se prepararon de acuerdo al procedimiento general descrito arriba para la preparación del compuesto B1 usando la amina apropiada.

Compuesto Nombre de Compuesto No. B2 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[6-(2,2-difenil-etilamino)-purin-9- ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico B3 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[2-cloro-6-(2,5-dimetoxi- bendlamino)-purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-car ox(lico B4 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(3-benciloxi — 4-metoxi- fenil)etilaminol-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico B5 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-h¡droxi-5-[6-(2-piridin-3-il- etilamino)-purin-9-ill-tetrahidro-furan-2-carboxílico B6 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(2-cloro-6-metilamino-purin-9-il]-4- hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico B7 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-[2-cloro-6-(2,5-dicloro- bencilamino)-purin-9-ill-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico B8 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-{6-[2-(2-morfolin-4-il- tiazol-5-il)-etilamino]-purin-9-ill-tetrahidro-furan-2-carboxil¡co Compuesto Nombre de Compuesto No. B9 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-h¡droxi-5-[6-(2-naftaleri-1- iletilam¡no)-pur¡n-9-il]-tetrahidro-furan-2-carboxílico B10 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[(5-fluoro-1 H-indol-3-ilmetil)- amino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico B1 1 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-[6-(2-piridin-2-il- etilamino)-purin-9-ill-tetrahidro-furan-2-carboxílico B12 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-4-hidroxi-5-[6-(2-fenil- ciclopropilamino)-purin-9-ill-tetrahidro-furan-2-carboxílico PREPARACION C Metilamida de ácido (2S,3S,4R.5R)-3-azido-5-(6-cloro-purin-9-in-4-hidroxi- tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto CP Se le agregó trietilamina (4.4 mi, 0.032 mi) a una solución de metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-(6-cloro-purin-9-il)-4-acetoxi-tetraiydro-furan-2-carboxílico (4g, 0.01 1 mmoles) en metanol (80 mi). Después de agitar durante 15 horas, la mezcla se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (metanol 5%/diclorometano) para producir 2.7 g (77 %) del compuesto del título como un sólido incoloro.

MS 339 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CDCI3) d 8.72 (s. 1 H); 7.62 (bs, 1 H); 5.98 (d, 1 H, J=6.7 Hz); 5.07 (t, 1 H, J=6.2 Hz); 4.65 (dd, 1 H, J=5.4, 2.7 Hz); 4.58 (m, 1 H); 4.2 (bs, 1 H); 2.88 (d, 3H, J=4.9 Hz); 1.67 (bs, 1 H).

PREPARACION D Preparación alternativa de metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5 (6-cloropurin-9-il)-4-hidroxitetrahidrofuran-2-carboxíMco (Compuesto CP A una solución de éster 4-azido-2-(6-cloropurin-9-il)-5-' metilcarbamoil-tetrahidrofuran-3-ílico de ácido acético (1.1 g, 2.9 mmoles) en metanol anhidro (100 mi), enfriado a 0°C, se le agregó trietilamina (1.2 mi, 8.6 mmoles). La solución se agitó 2 horas a temperatura ambiente bajo condiciones anhidras. Después de remoción del solvente mediante evaporación rotativa, el sólido resultante se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (MeOH 7%/CH2Cl2) para producir el compuesto del título como una espuma blanca.

C1 1 H1 1 CIN803¡ PM 338.72; EM 339.1 (M+H)+; 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 9.01 (s, 1 H); 8.81 (s, 1 H), 8.22 (quart, 1 H, J=4.2 Hz); 6.41 (dd, 1 H, J=5.2 Hz, J=2.1 Hz); 6.12 (d, 1 H, J=5.2 Hz); 5.03 (quart, 1 H, J=5.2 Hz); 4.57-4.47 (mult, 1 H); 4.41 (d, 1 H, J=3.9 Hz); 2.61 (d, 3H, J=4.2 Hz).

PREPARACION E Metilamida de ácido (2S, 3S,4R.5R)-3-azido-5- 6-cloro-purin-9-il)-4- acetoxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto E1 ) Se suspendió 6-cloropurina (20.4 g, 0.132 moles) en hexametildisilazano (165 mi) y se calentó a 1 10°C. Después de 2h, la mezcla, ahora homogénea, se concentró y el residuo sólido se reconcentró de tolueno 2x y se puso en alto vacío durante 1 hora. El sólido resultante se combinó con metilamida de ácido (2S,3S,4R)-3-azido-4,5-diacetoxitetrahidrofuran-2-carboxílico (12.7 g, 0.044 moles) y se disolvió en dicloroetano anhidro (350 mi). Se agregaron tamices moleculares de 4Á en polvo y la mezcla se agitó durante 15 minutos. Se le agregó triflato de trimetilsililo (TMSOTf, 16.0 mi, 0.088 moles) y después la reacción se calentó a 60°C durante dos horas, se enfrió y se inactivo mediante la adición cuidadosa de solución saturada de bicarbonato de sodio (200 mi). Se le agregó acetato de etilo (350 mi) y la mezcla se filtró a través de vidrio sinterizado. El filtrado se extrajo con acetato de etilo (3x) y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera; se secó (Na2S04), se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (acetona 15%, después 20%/diclorometano) para producir el compuesto del título (10.6) como una espuma blanquecina.

EM 381 (M+H)+: 1 H RMN (400 Hz, CDCI3) d 8.8 (s, 1 H)¡ 8.2 (s, 1 H); 7.6 (bs, 1 H); 6.13 (d, 1 H, J=7.0 Hz); 5.87 (dd, 1 H, J=7.0, 5.6 Hz); 4.87 (dd, 1 H, J=5.6, 3.0 Hz); 4.58 (d, 1 H, J=3.0 Hz); 2.9 (d, 1 H, J=4.9 Hz); 2.11 (s, 3H). Se preparó metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R)-3-azido-5-(2,6-dicloro-purin-9-il)-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto E2) usando el mismo procedimiento general descrito arriba para la preparación del compuesto E1 , usando el material de partida apropiado.

PREPARACION F Metilamida de ácido (2S.3S,4R)-3-azido-4,5-diacetoxitetrahidrofuran-2- carboxílico Se disolvió metilamida de ácido 3-azido-3-desox¡-4,5-0-isopropiliden-a-D-ribofuranurónico (12 g, 0.05 mmoles) en ácido acético (150 mi) y anhídrido acético (50 mi). La mezcla se enfrió en un baño de hielo y se le agregó una solución de ácido sulfúrico (1 mi disuelto en 5 mi de ácido acético). La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó 18 horas. La mezcla de reacción se agregó a gotas a una solución saturada de bicarbonato de sodio (2 I) y después se extrajo con cloroformo (3x). La capa orgánica combinada se lavó con agua (2x), solución saturada de NaHC03 (2x) y salmuera (1X); se secó (Na2S04), se filtró y se concentró para producir el compuesto del título como una mezcla de acetatos anoméricos como un aceite de color tostado.

PREPARACION G Preparación de metilamida de ácido 3-azido-3-desoxi-4,5-Q- isopropiliden-g-D-ribofuranurónico Se agregó cloruro de oxalilo (15 mi) a una solución de ácido 3-azido-3-desoxi-4,5-0-isopropiliden-a-D-ribofuranurónico (30 g) en THF anhidro (250 mi) a 0°C. Se le agregó DMF (1 mi) y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente; en ese momento comenzó el desprendimiento de gas. Después de cinco horas, la mezcla se concentró y el residuo se disolvió en diclorometano (100 mi); después se enfrió a 0°C. Se le agregó lentamente una solución de metilamina en THF (260 mi de una solución 2M). Después de 30 minutos, la mezcla se diluyó con agua (500 mi) y se extrajo con cloroformo (3x). La capa orgánica combinada se secó (Na2S04), se filtró y se concentró para producir el compuesto del título como un sólido de color pardo claro. 1 H RMN (400 MHz, CDCI3) d 6.39 (bs, 1 H); 5.80 (d, 1 H, J=3.7 Hz); 4.67 (dd, 1 H, J=4.0, 3.7 Hz); 4.42 (d, 1 H, J=9.3 Hz); 3.6 (dd, 1 H, J=9.3, 4.0 Hz); 2.9 (d, 3H, J=5.0 Hz); 1.54 (s, 3H); 1.34 (s, 3H).

PREPARACION H Ester metílico de ácido (2S,3S,4R15R)-4-acetoxi-3-azido-5-(6-cloropurin-9- il)tetrahidrofuran-2-carboxi'lico (Compuesto H1 ) Una solución de 6-cloropurina (4.96 g, 32 mmoles) y ' hexametildisilazano (40 mi), se combinó y calentó a 100°C durante 3h bajo condiciones anhidras. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y después se concentró hasta quedar- un sólido en un evaporador rotativo usando tolueno anhidro (3 x 50 mi) para ayudar a remover el solvente. El sólido se filtró al alto vacío durante 15 minutos y después se le agregó acetonitrilo anhidro (50 mi). Se disolvió éster metílico de ácido (2S,3S,4R)-3- azido-4,5-diacetoxi-tetrahidrofuran-2-carboxílico (3.09 g, 10.7 mmoles) en acetonitrilo anhidro (20 mi) y se le agregó a la reacción. Se le agregó trifluorometanosulfonato de trimetilsililo (7.5 mi, 41.4 mmoles). La reacción se agitó a 70°C bajo condiciones anhidras durante 15 horas. La mezcla de reacción se inactivo con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 mi). Se le agregó agua (160 mi) y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc (4 x 100 mi); se secó sobre sulfato de sodio y se concentró hasta dejar un sólido en un evaporador rotativo. Este sólido se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (hexano:EtOAc 7:3) para producir 2.88 g del compuesto del título como una espuma blanca.

H RMN (400 MHz, CDCL) d 8.73 (s, 1 H); 8.60 (s, 1 H); 6.36 (d, 1 H, J=5.4 Hz); 5.83 (t, 1 H, J=5.4 Hz); 4.83-4.77 (mult, 1 H); 4.65 (d, 1H, J=4.2 Hz); 3.84 (s, 3H); 2.14 (s, 3H).

PREPARACION I Ester metílico de ácido (2S,3S,4R)-3-azido-4,5-diacetoxi-tetrahidrofuran- 2-carboxílico (Compuesto 11 ) Se combinaron éster metílico de ácido 3-azido-3-desoxi-4,5-0-isopropiliden- -D-ribofuranurónico (4.85 g, 20 mmoles), H2S04 concentrado (5.5 mi), ácido acético glacial (65 mi) y anhídrido acético (18 mi, 20 mmoles), y se agitaron a temperatura ambiente bajo condiciones anhidras durante 15 horas. La mezcla de reacción se tomó entonces en agua (500 mi), se neutralizó con hidróxido de sodio a pH 7 y se extrajo con EtOAc (3 x 250 mi). La capa orgánica combinada se lavó con solución acuosa saturada de NaCI (500 mi), se secó sobre sulfato de sodio y se concentró en un evaporador rotativo hasta dejar un sólido que se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (hexano:EtOAc 2:1 ) para producir 3.09 g del compuesto del título como un aceite claro, incoloro. 1 H RMN (400 MHz, CDCI3) d 6.18 (s, 1H); 5.33 (d, 1 H, J=5.0 Hz); 4.53 (d, 1 H, J=7.5 Hz); 4.44-4.38 (mult, 1 H); 3.83 (s, 3H); 2.17 (s, 3H); 2.08 (s, 3H).

PREPARACION J Ester metílico de ácido 3-azido-3-desoxi-4.5-Q-isopropiliden-a-D- ribofuranurónico (Compuesto J1 ) A una solución de ácido 3-azido-3-desoxi-4,5-0-isopropiliden-a-D-ribofuranurónico (4.23 g, 18 mmoles) en DMF (50 mi), se le agregó carbonato de potasio (3 g, 22 mmoles) y yodometano (2.3 mi, 37 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo condiciones anhidras durante 15 horas. La mezcla de reacción se tomó en EtOAc (500 mi) y se lavó con agua (500 mi), solución acuosa saturada de NaHC03 (2 x 500 mi), y solución acuosa saturada de NaCI (500 mi). La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio y se concentró en un evaporador rotativo hasta dejar un aceite. El producto se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (hexano:EtOAc 7:3) para producir 4.45 g del compuesto del título como un aceite claro incoloro. 1 H RMN (400 MHz, CDCI3) d 5.89 (d, 1 H, J=3.3 Hz)¡ 4.74-4.68 (mult, 1 H); 4.53 (d, 1 H, J=9.6 Hz); 3.82 (s, 3H); 3.69-3.63 (mult, 1 H); 1.55 (s, 3H); 1.34 (s, 3H).

PREPARACION K Acido 3-azido-3-desoxi-1.2-O-isopropiliden-a-D-ribofuranurónico (Compuesto K1) Una solución de 3-azido-1 ,2,5,6-bis-0-isopropiliden-3-desoxi-D-alofuranosa (451 g, 1.58 moles) en éter dietílico (4.5 I), se trató con ácido peryódico (540 g, 2.37 moles) a temperatura ambiente, que se mantuvo con un baño de agua. Después de 24 horas, las sales precipitadas se filtraron y se lavaron con éter. El filtrado se concentró y el aldehido crudo se le agregó a una mezcla de cloroformo (2.5 I), acetonitrilo (2.5 I) y agua (3.4 I). A esta mezcla, agitada vigorosamente, se le agregó peryodato de sodio (121 \ g, 5.67 moles) y tricloruro de rutenio hidratado (14.5 g, 0.69 moles) a temperatura ambiente mantenida con un baño de agua. Después de 20 horas, la mezcla se diluyó con cloroformo (4 I) y agua (4 I) y la mezcla se filtró a través de Celite™. Las capas se separaron y la fase acuosa se volvió a extraer con cloroformo. La capa orgánica combinada se concentró al vacío y el residuo se dividió entre solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (2 I) y acetato de etilo (3 I). Las capas se separaron y la capa acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2 I). La capa acuosa se acidificó con solución de HCI 2N y se extrajo con acetato de etilo (3 x 3 I). La capa orgánica combinada se secó (Na2S04), se filtró y se concentró para dar 208 g del compuesto del título como un sólido blanquecino, que se purificó mediante ccf y RMN. 1 H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7.5 (bs, 1 H); 5.95 (d, 1 H, J=3.7); 4.8 (dd, 1 H, J=4.0, 3.7 Hz); 4.6 (d, 1 H, J=9.5 Hz); 3.72 (dd, 1 H, J=9.5, 4.0 Hz); 1.58 (s, 3H); 1.38 (s, 3H).

PREPARACION L 3-Azido-1,2,5,6-bis-0-isopropiliden-3-desoxi-D-alofuranosa (Compuesto L1 ) Se agregó a gotas anhídrido tríflico (1500 g, 5.3 moles) a una solución de piridina (493 g, 6.2 moles) en diclorometano (7.5 I) a -15°C. Después de 30 minutos, se agregó una solución de 1 ,2,5,6-bis-O-isopropiliden-D-glucofuranosa (735 g, 2.84 moles) como una solución en diclorometano (2.5 I). Después de 1 hora, la reacción se inactivo mediante la adición a gotas de agua (4 I), dejando subir la temperatura de la reacción a 0°C. Las capas se separaron y la capa orgánica se secó con sulfato de sodio, se filtró y se concentró para dar un aceite rojo. El triflato se disolvió inmediatamente en DMF (8 I) y se trató con NaN3 (554 g, 8.5 moles) y se calentó a 35°C. Después de 18 horas, la mezcla se vació en agua (12 I) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 4 I). La capa orgánica combinada se lavó con agua (2 x 3 I) y salmuera (1 x 3 I), se secó (Na2S04), se filtró y se concentró. El residuo se preadsorbió sobre gel de sílice y se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea (hexano/EtOAc 6:1 , después hexano/EtOAc 4:1 ) para producir 228 g del compuesto del título como un aceite incoloro. 1 H RMN (400 MHz, CDCI3) d 5.77 (d, 1 H, J=3.7 Hz); 4.7 (dd, 1 H, H=4.4, 3.7 Hz); 4.15 (m, 2H); 4.0 (m, 2H); 3.5 (dd, 1 H, J=9.1 , 4.4 Hz); 1.56 (s, 3H); 1.47 (s, 3H); 1.37 (s, 3H); 1.34 (s, 3H).

PREPARACION M Clorhidrato de 2-benciloxi-bencilamina (Compuesto M1 ) Se disolvió 2-benciloxi-benzonitrilo (1.36 g, 6.50 mmoles) en THF anhidro (42 mi) y se agregó en un matraz que contenía hidruro de litio y aluminio (14.9 mi, 1 M en THF). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 90 minutos. La reacción se enfrió en un baño de hielo y se le agregó hidróxido de sodio lentamente durante un período de 5 minutos (2.16 mi, 1 M en H2O). La reacción se filtró y el filtrado se concentró hasta un aceite. El aceite se tomó en etanol y se sometió a ácido clorhídrico acuoso (1 eq, 1 ) y la reacción se agitó 15 minutos. La reacción se concentró, se tomó en éter y se filtró, recogiendo un sólido blanco. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.40 a 8.17 (m, 3H); 7.50 a 7.42 (m, 2H); 7.41 a 7.23 (m, 5H); 7.08 (d, 1 H, J=5.9 Hz); 6.95 (t de d, 1 H, J=7.5 Hz, J=0.8 Hz); 5.14 (s, 2H); 4.00 a 3.91 (m, 2H). Se prepararon los siguientes compuestos M2-M9 partiendo del nitrilo apropiado, de acuerdo con el procedimiento general arriba descrito para la preparación del compuesto M1.

Compuesto Nombre del compuesto No. M2 4-Benc¡loxi-benc¡lamina M3 3-n-butox¡-bencilamina M4 4- etoxi-2-(3-pent¡loxi)-bencilam¡na 5 3-C¡clopent¡loxi-benc¡lamina 6 2-Ciclopentiloxi-bencilamina M7 5-Cloro-2-isopropilox¡-benc¡lamina M8 4-Benciloxi-3,5-dimetoxi-fenetilam¡na M9 4-Fluoro-3-metoxi-fenetilam¡na PREPARACION N Clorhidrato de 2,5-dietil-bencilamina (Compuesto N1 ) Se disolvió 2-azidometil-1 ,4-dietil-benceno (1.84 g, 9.72 mmoles) en THF anhidro (50 mi), y la solución se enfrió a 0°C. A esta solución se le agregó, bajo N2, trifenilfosfina (2.55 g, 9.72 mmoles) y la reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos. Al final de ese tiempo, se le agregó agua destilada (0.25 mi) e hidróxido de amonio (0.39 mi, conc). La reacción se dejó llegar lentamente a temperatura ambiente a la cual se agitó durante la noche. La solución se concentró y el producto se tomó en etanol absoluto (60 mi) y se le agregó ácido clorhídrico acuoso (9.7 mi, 1 ); se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El solvente se arrastró por destilación y se le agregó tolueno (30 mi); después la solución se destiló hasta quedar un aceite. Se le agregó éter (10 mi) y una vez que se formó el sólido, se le agregó tolueno (40 mi) y la solución se agitó durante la noche. El sólido blanco se separó por filtración y se lavó con tolueno, seguido por éter y después hexano. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.46 a 8.28 (m, 3H); 7.30 a 7.24 (m, 1 H); 7.14 a 7.06 (m, 2H); 3.93 (s, 2H); 2.64 a 2.48 (m, 4H); 1.19 a 1.04 (m, 6H). Se prepararon los compuestos N2-N4 a partir de la azida apropiada de acuerdo con el procedimiento general arriba descrito para la preparación del compuesto N1.

PREPARACION O 5-Cloro-2-isopropoxi-benzonitrilo (Compuesto 01 ) Se combinaron 5-cloro-2-hidroxi-benzonitrilo (1.0 g, 6.51 mmoles), THF anhidro (100 ml), 2-propanol (0.50 ml, 6.53 mmoles) y trifenilfosfina (2.57 g, 9-80 mmoles). A esta solución se le agregó azodicarboxilato de dietilo (1.54 ml, 9.78 mmoles) por medio de una jeringa, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se arrastró por destilación y el producto se purificó mediante una columna Flash 40, 90 g, eluida con hexano:CH2CI2 en una relación 2:1 (1 L). 1 H RMN (400 MHz, DMSO) d 7.83 (d, 1 H, J=2.7 Hz); 7.63 (dd, 1 H, J=9.1 , 2.7 Hz); 7.25 (d, 1 H, J=9.1 Hz); 4.74 (sept, 1 H, J=6.0 Hz); 1.25 (d, 1 H, J=6.2 Hz). Los compuestos 02-06 se prepararon usando los materiales de partida apropiados utilizando el procedimiento general arriba descrito para la preparación del compuesto 01.

PREPARACION P 2-Azidometil-1 -metoxi-4-metil-benceno (Compuesto P1 ) Se disolvió (2-metoxi-5-metil-fenil)-metanol (1.14 g, 7.49 mmoles) en tolueno anhidro (100 mi), después se enfrió la mezcla en un baño de hielo a 0°C. Se le agregó a gotas difenilfosforilazida (2.10 mi, 9.74 mmoles) por medio de una jeringa y después se le agregó de la misma manera a la reacción 1 ,8-diazabiciclo[5.4.0]-7-undequeno (1.60 mi, 10.70 mmoles). La reacción se agitó a 0°C y se le dejó subir lentamente a temperatura ambiente, en la cual se agitó durante la noche. La solución resultante se vació en agua (200 mi) y tolueno (100 mi); las capas se separaron y se les extrajo con tolueno (2 x 100 mi). La capa orgánica combinada se lavó con agua (1 x 100 mi) y salmuera (1 x 1000 mi, saturada), después se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró hasta formar un aceite. 1 H RMN (400 MHz, DMSO) d 7.14 a 7.05 (mult, 2H); 6.91 a 6.87 (mult, 1 H); 4.27 (s, 2H); 3.72 (s, 3H); 2.19 (s, 3H). Los compuestos P2-P4 se prepararon usando los materiales de partida apropiados de acuerdo con el procedimiento general arriba descrito para la preparación del compuesto P1.

EJEMPLO 1 Metilamida de ácido (2S,3S.4R.5R)-3-amino-5-í6-r2-(2.5-dimetoxi-fenin- etilaminol-purin-9-il>-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxíNco (Compuesto 1 ) Se disolvió metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-azido-5-{6-[2-(2,5-dimetoxi-fenil)-etilamino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (100 mg, 0.207 mmoles) en THF (2.0 mi), bajo N2, y se enfrió a 0°C. Se le agregó trifenilfosfina (81.5 mg, 0.310 mmoles) y la reacción se agitó fría durante 30 minutos. Al final de este período se le agregó agua (1 gota) e hidróxido de amonio (90 µ?, conc). La reacción se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. El producto se concentró hasta formar un aceite y se purificó sobre gel de sílice mediante Flash 40, eluyendo con MeOH 10%/CH2Cl2, produciendo 50 mg del compuesto del título (1 ) como un polvo blanco.

C21 H27N7°5: PM = 457 49: EM 458 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.30 (s, 1 H); 8.28 a 8.23 (m, 1 H); 6.82 (d, 1 H, J=8.9 Hz); 6.75 (d, 1 H, J=3.1 Hz); 6.73 a 6.67 (m, 2H); 6.04 (d, 1 H, J=4.2 Hz); 5.47 (d, 1 H, J=1.2 Hz); 4.59 a 4.53 (m, 1 H); 4.30 (d de m, 1 H, J=5.6 Hz); 3.76 (s, 3H); 3.75 a 3.70 (m, 1 H); 3.67 (d, 1 H, J=1.0 Hz); 2.99 a 2.92 (m, 2H); 2.82 (s, 3H). Los compuestos 2-36 de los ejemplos 2-36 se prepararon usando el mismo procedimiento general arriba descrito, usando los materiales de partida e intermediarios adecuados.

EJEMPLO 2 Metilamida de ácido (2S.3S.4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-r6-(3-metoxi- bencilamino)-purin-9-¡n-tetrah¡dro-furan-2-carboxílico (Compuesto 2) C19H23N7°4: PM = 413·4·44: EM 414 (M+H)+: 1 H RMN (300 MHz, CD3OD) d 8.31 (s, 1 H); 8.27 (s, 1 H); 7.21 (t, 1 H, J=8.1 Hz); 6.99 a 6.91 (m, 2H); 6.84 a 6.76 (m, 1 H); 6.11 a 6.07 (m, 1 H); 4.82 a 4.74 (m, 1 H); 4.72 (m, 1 H); 4.41 (d, 1 H, J=6.1 Hz); 4.04 a 3.94 (m, 1 H); 3.75 (s, 3H); 2.80 (s, 3H).

EJEMPLO 3 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-r6-r4-(benciioxi- bencilamino)-purin-9-in-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 3) C25H27N7°4: PM = 489 54: EM 490 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.31 (s, 1 H); 8.26 (s, 1 H); 7.41 a 7.35 (m, 2H); 7.34 a 7.23 (m, 5H); 6.91 (d, 2H, J=8.7 Hz); 6.03 (d, 1 H, J=4.2 Hz); 5.03 (s, 2H); 4.95 a 4.85 (m, 2H); 4.78 a 4.73 (m, 1 H); 4.27 (d, 1 H, J=5.6 Hz); 3.76 a 3.68 (m, 1 H); 2.79 (s, 3H).

EJEMPLO 4 Metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R)-3-amino-4-hidroxi-5-r6-(2-hidroxi-5- metoxi-bencilamino)-purin-9-in-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 4) C19H23N7°5: PM = 429 44: EM 430 (M+H)+: 1 H RMN (40° MHz, CD3OD) d 8.36 a 8.34 (m, 1 H); 8.34 a 8.29 (m, 1 H); 8.24 a 8.21 (m, 1 H); 7.94 a 7.87 (m, 1 H); 6.89 a 6.85 (m, 1 H); 6.81 a 6.78 (m, 1 H); 6.72 a 6.67 (m, 3H); 6.05 (d, 1 H, J=4.2 Hz); 6.03 (d, H, J=4.8 Hz); 4.68 a 4.61 (m, 3H); 4.60 a 4.25 (m, 2H); 3.10 a 3.02 (m, 3H); 2.82 a 2.78 (m, 2H).

EJEMPLO 5 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-r6-(3-butoxi-bencilamino)- purin-9-in-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 5) C22H29N7°4: PM = 455 52: EM 456 (M+H)+: 1 H RMN (300 MHz, DMSO) d 8.56 (s, 1 H); 8.52 (d, 1 H, J=4.5 Hz); 8.52 a 8.39 (m, 1 H); 8.26 (s, 1 H); 7.22 a 7.11 (m, 1 H); 6.94 a 6.83 (m, 2H); 6.80 a 6.70 (m, 1 H); 6.03 (d, 1 H, J=3.9 Hz); 6.00 a 5.83 (m, 1 H); 4.76 a 4.57 (m, 2H); 4.46 a 4.32 (m, 1 H); 4.14 (d, 1 H, J=5.6 Hz); 3.94 a 3.83 (m, 2H); 3.63 a 3.53 (m, 1 H); 2.68 (d, 3H, J=4.5 Hz); 1.90 a 1.72 (m, 2H); 1.71 a 1.57 (m, 2H); 1.47 a 1.30 (m, 2H); 0.94 a 0.82 (m, 3H).

EJEMPLO 6 Metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R)-3-amino-5-r6-(2.5-dimetil- benc»lamino)-purin-9-il>-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 6) C20H25N7°3: PM = 41 1 ·47: EM 412 (M+H)+: 1 H RMN (300 MHz, DMSO) d 8.56 (s, 1H); 8.53 (d, 1H, J=4.6 Hz); 8.40 a 8.29 (m, 1H); 8.25 (s, 1 H); 7.09 a 6.98 (m, 2H); 6.91 (d, 1 H, J=7.6 Hz); 6.03 (d, 1 H, J=4.0 Hz); 6.00 a 5.87 (m, 1 H); 4.76 a 4.55 (m, 2H); 4.45 a 4.31 (m, 1 H); 4.14 (d, 1 H, J=5.6 Hz); 3.62 a 3.53 (m.1H); 2.68 (d, 3H, J=4.5 Hz); 2.28 (s, 3H); 2.16 (s, 3H); 1.90 a 1.70 (m, 2H).

EJEMPLO 7 Metilamida de ácido (2S.3S.4R,5R)-3-amino-5-r6-(2,5-dicloro- bencilamino)-purin-9-in-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 7) C18H19CI2N7°3: PM = 452·30: EM 452 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.37 (s, 1H); 8.29 (s, 1H); 7.43 a 7.36 (m, 2H); 7.29 a 7.22 (m, 1H); 6.08 (d, 1H, J=3.9 Hz): 4.90 a 4.85 (m, 2H); 4.64 a 4.58 (m, 1H); 4.36 a 4.28 (m, 1H); 3.80 a 3.75 (m, 1H); 2.81 (s, 3H).

EJEMPLO 8 Metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R)-3-amino-4-hidroxi-5-(6-f3-(2-morfolin- 4-il-etoxi)-bencilamino1-purin-9-il>-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 8) C24H32N8°5: PM = 51Z57: EM 513 (M+H)+: 1| RMN (400 MHz, DMSO) d 8.54 a 8.43 (m, 2H); 8.27 a 8.20 (m, 1H); 7.87 a 7.77 (m, 1H); 7.21 a 7.16 (m, 1H); 6,92 a 6.84 (m, 2H); 6.80 a 6.76 (m, 1H); 6.00 (d, 1H, J=4.2 Hz); 5.95 a 5.85 (m, 1H); 4.40 a 4.33 (m, 1H); 4.11 (d, 1H, J=5.6 Hz); 4.04 a 3.98 (m, 1 H); 3.60 a 3.48 (m, 3H); 2.99 a 2.87 (m, 2H); 2.66 (d, 3H, J=4.6 Hz); 2.64 a 2.59 (m, 1 H); 2.56 a 2.44 (m, 4H); 2.44 a 2.37 (m, 4H); 2.03 a 1.86 (m, 2H).

EJEMPLO 9 Metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R>-3-amino-4-hidroxi-5-f6-f3-(3-metil- isoxazol-5-ilmetoxi)-bencilamino1-purin-9-il)-tetrahidro-furan-2- carboxílico (Compuesto 9) C23H26N8°5: PM = 427 47 ¦ EM 428 (M+H)+: 1 H RMN (300 MHz, CDCI3) d 8.38 a 8.31 (m, 1 H); 8.31 a 8.22 (m, 1 H); 7.86 a 7.78 (m, 1 H); 7.77 a 7.70 (m, 1 H); 7.23 a 7.15 (m, 1 H); 7.02 a 6.91 (m, 2H); 6.91 a 6.83 (m, 2H); 6,09 a 6.00 (m, 1 H); 6.00 a 5.93 (m, 1 H); 5.10 a 5.01 m, 2H); 4.90 a 4.72 (m, 2H); 4.64 a 4.52 (m, 1 H); 4.36 a 4.26 (m, 1 H); 4.20 a 4.05 (m, 1 H); 2.89 a 2.72 (m, 3H); 2.42 a 2.35 (m, 3H); 2.35 a 2.23 (m, 2H). 1 EJEMPLO 10 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-f6-(2-metoxi-5- metil-bencilamino)-purin-9-il-tetrahidro-furan-2-carboxilico (Compuesto 10) C20H25N7°4: PM = 427·479: EM 428 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.54 (s, 1 H); 8.49 (d, 1 H, J=4.6 Hz); 8.21 (s, 1 H); 8.20 a 8.10 (m, 1 H); 7.02 a 6.95 (m, 1 H); 6.95 a 6.87 (m, 1 H); 6.85 (d, 1 H, J=8.1 Hz); 6.15 a 5.75 (m, 1 H); 6.02 (d, 1 H, J=4.2 Hz); 4.70 a 4.58 (m, 2H); 4.46 a 4.38 (m, 1 H); 4.14 (d, 1 H, J=5.4 Hz); 3.77 (s, 3H); 3.65 a 3.58 (m, 1 H); 2.66 (d, 3H, J=4.6 Hz); 2.60 a 2.30 (m, 2H).

EJEMPLO 11 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-r6-f2,5-dietil-bencilamino)- purin-9-in-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 1 ) C22H29N7°3: PM = 439 52: EM 440 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.52 (s, 1H); 8.49 (d, 1 H, J=4.6 Hz); 8.36 a 8.26 (m, 1 H); 8.23 (m, 1 H); 7.14 a 7.09 (m, 1 H); 7.06 (d, 1 H, J=7.7 Hz); 6.98 (d de m, 1 H, J=7.7 Hz); 6.00 (d, 1 H, J=3.9 Hz); 5.94 a 5.83 (m, 1 H); 4.76 a 4.62 (m, 2H); 4.39 a 4.34 (m, 1 H); 4.1 1 (d, 1 H, J=5.6 Hz); 3.60 a 3.54 (m, 1 H); 2.70 a 2.61 (m, 5H); 2.52 a 2.40 (m, 2H); 1.95 a 1.82 (m, 2H); 1.14 (t, 3H, J=7.6 Hz); 1.06 (t, 3H, J=7.6 Hz).

EJEMPLO 12 Metilamida de ácido (2S.3S.4R,5R)-3-amino-5-f6-r2-(1 -et¡l-propoxi)-5- metoxi-bencilamino1-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrah¡dro-furan-2-carboxílico (Compuesto 12) C24H33N7°5: PM = 499 58: EM 500 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.32 (s, 1 H); 8.28 (s, 1 H); 6.90 a 6.82 (m, 2H); 6.79 a 6.74 (m, 1 H); 6.06 (d, 1 H, J=4.2 Hz); 4.82 a 4.73 m, 2H); 4.62 (m, 1 H); 4.30 (d, 1 H, J=5.6 Hz); 4.20 a 4.13 (m, 1 H); 3.79 a 3.73 (m, 1 H); 3.68 (s, 3H); 2.81 (s, 3H); 1.73 a 1.60 (m, 4H); 0.98 a 0.87 (m, 6H).

EJEMPL0 13 Metilamida de ácido (2S,3S,4R.5R)-3-amino-5-f6-(3-ciclopentiloxi- bencilamino)-purin-9-iH-4-hidroxi-tetrahidro-furan»2-carboxílico (Compuesto 13) C23H29N7°4: PM = 467·53: EM 468 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.34 (s, 1 H); 8.28 (s, 1 h); 7.22 a 7.15 (m, 1 H); 6.93 a 6.86 (m, 2H); 6.79 a 6.74 (m, 1 H); 6.06 (d, 1 H, J=4.2 Hz) 4.84 a 4.73 (m, 3H); 4.62 a 4.58 (m, 1H); 4.30 (d, 1H, J=5.6 Hz); 3.79 a 3.73 (m, 1H); 2.81 (s, 3H); 1.94 a 1.81 (m, 2H); 1.81 a 1.70 (m, 4H); 1.67 a 1.56 (m, 2H).

EJEMPLO 14 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-r6-(2-ciclopentiloxi- bencilamino)-purin-9-il1-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxiMco (Compuesto 14) C23H29N7°4: PM = 46753: EM 468 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.54 (s, 1H); 8.49 (d, 1H, J=4.6Hz); 8.19 (s, 1H); 8.16 a 8.03 (m, 1H); 7.20 a 7.12 (m, 1H); 7.12 a 7.02 (m, 1H); 6.92 (d, 1H, J=8.1 Hz); 6.82 a 6.73 (m, 1H); 6.00 (d, 1H, J=4.2 Hz); 5.95 a 5.82 (m, 1H); 4.88 a 4.81 (m, 1H); 4.68 a 4.52 (m, 2); 4.40 a 4.33 (m, 1H); 4.10 (d, 1H, J=5.6 Hz); 3.60 a 3.50 (m, 1H); 2.65 (d.3H, J=4.8 Hz); 1.96 a 1.82 (m, 8H); 1.82 a 1.46 (m, 2H).

EJEMPLO 15 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-f6-(5-cloro-2-isopropoxi- bencilamino)-purin-9-il>-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 15) C21H26CIN704: PM = 475.94: EM 476 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.57 (s, 1H); 8.47 (d, 1H, J=4.6 Hz); 8.32 a 8.23 (m, 1H); 8.22 (s, 1H); 7.18 (d, of d, 1H, J=8.9 Hz, J=2.7 Hz); 7.07 a 7.02 (m, 1H); 7.00 (d, 1H, J=8.9 Hz); 6.01 (d, 1H, J=4.0 Hz); 5.95 a 5.83 (m, 1H); 4.68 a 4.55 (m, 1H); 4.10 (d, 1H, J=5.6 Hz); 3.60 a 3.52 (m, 1H); 2.66 (d, 3H, J=4.6 Hz); 1.86 a 1.75 (m, 2H); 1.26 (d, 6H, J=5.6 Hz).

EJEMPLO 16 Metilamida de ácido (2S,3S.4R.5R)-3-amino-5-í6-(2-benciloxi- bencilamino)-purin-9-il1-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 16) C25H27N7°4: PM = 48954: EM 490 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.56 (s, 1H); 8.53 a 8.48 (m, 1H); 8.28 a 8.20 (m, 1H); 8.20 (s, 1H); 7.53 a 7.46 (m, 1H); 7.41 a 7.36 (m, 2H); 7.36 a 7.26 (m, 1H); 7.21 a 7.10 (m, 1H); 6.86 a 6.80 (m, 1H); 6.02 (d, 1H, J=3.9 Hz); 5.95 a 5.86 (m, 1H); 5.17 (s, 2H); 4.79 a 4.68 (m, 2H); 4.42 a 4.36 (m, 1H); 4.12 (d, 1H, J=5.6 Hz); 3.60 a 3.54 (m, 1 H); 2.67 (d, 3H, J=4.8 Hz); 1.83 a 1.74 (m, 2H).

EJEMPLO 17 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5 6-r2-(4-fluoro- fenil)etilamino1-purin-9-il>-4-hidroxi-tetrah¡dro-furan-2-carboxíl¡co (Compuesto 17) C19H22FN7°3: PM = 41 5·43: EM 416 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.34 (s, 1 H); 8.29 (br, 1H); 7.25 (m, 2H); 7.0 (m, 2H); 6.01 (d, 1 H, J=4.1 Hz); 4.6 (t, 1 H, J=4.2 Hz); 4.3 (d, 1 H, J=5.5 Hz); 3.8 (bs, 2H); 3.77 (m, 1 H); 2.98 (t, 2H, J=7.0 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 18 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(6-r2-(4-benciloxi-3,5- dimetoxi-fenil)etilamino1-purin-9-il>-4-h¡droxi-tetrahidro-furan-2- carboxílico (Compuesto 18) C28H33N7°6: PM = 563 62: EM 564 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.31 (s, 1 H); 8.25 (bs, 1 H); 7.4 (m, 2H); 7.22 (m, 2H); 6.55 (s, 2H); 6.01 (d, 1 H, J=4.1 H); 4.82 (s, 2H); 4.55 (t, 1 H, J=4.4 Hz); 4.24 (d, 1 H, J=5.8 Hz); 3.8 (bs, 2H); 3.72 (s, 6H); 3.70 m, 1 H); 2.9 (t, 2H, J=7.0 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 19 Metilamida de ácido (2S,3S.4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-(6-metilamino- purin-9-il)-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 19) C12H17N7°3: PM = 307 31 : EM 308 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.32 (s, 1 H); 8.27 (s, 1 H); 6.9 (m, 2H); 6.02 (d, 1 H, J=4.0 Hz); 4.59 (m, 1 H); 4.30 (d, 1 H, J=5.5 Hz); 3.72 (m, 1 H); 3.07 (bs, 3H); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 20 Metilamida de ácido (2S,3S.4R,5R)-3-amino-5-f6-r2-(4-fluoro-3-metoxi- fenil)etilamino1-purin-9-il)-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 20) C20H24FN7O4: PM = 445.46: EM 446 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.33 (s, 1 H); 8.3 (bs, 1 H); 7.0 (m, 3H); 6.01 (d, 1 H, J=4.1 Hz); 4.6 (t, 1 H, J=4.5 Hz); 4.28 (d, 1 H, J=5.7 Hz); 3.8 (s, 3H); 3.79 (bs, 2H); 3.70 (m, 1 HJ.2.9 (t, 2H, J=6.9 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 21 Metilamida de ácido (2S,3S,4R.5R)-3-amino-5-f6-r(3-benciloxi-6-metil- piridin-2-ilmetil)-amino1-purin-9-il)-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2- carboxílico (Compuesto 21) C25H28 804: PM = 504.55: EM 505 ( +H)+: 1H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.52 (s, 1H)¡ 8.43 (bs, 1H)¡ 8.2 (bs, 1H); 7-7 (bs 1H); 7.45-7.2 (m, 6H); 7.08 (d, 1H, J=7.03 Hz=; 6.0 (d, 1H, J=4.1 Hz); 5.85 (bs, 1H); 5.16 (s, 2H); 4.71 (bs, 2H): 4.32 (bs, 1H); 4.07 (d, 1H, J=5.6 Hz); 3.5 (m, 1H); 2.6 m, 3H); 2.32 (s, 3H).

EJEMPLO 22 Metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R-3-amino-5-r6-(2.2-difenil-etiiamino)- purin-9-il1-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 22) C25H27N7°3: PM = 47354 : EM 474 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.35 (s, 1H); 8.28 (bs, 1H); 7.4-7.1 (m, 10H); 6.02 (bd, 1H, J=4.1 Hz); (m, 1H); 4.48 (t, 1H, J=7.9 Hz); 4.22 (bs, 2H); 3.72 (t, 1H, J=5.7 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 23 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-r2-cloro-6-(2.5-dimetoxi- bencilamino)-purin-9-in-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 23) C20H24CIN7°5: PM = 477 91 : EM 478 ( +H)+: 1 H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.79 (bs, 1 H); 8.61 (s, 1 H); 8.2 (bs, 2H); 6.9 (m, 1 H); 6.8 (m, 1 H); 6.7 (s, 1 H); 5.98 (bs, 3H); 4.6 (m, 2H); 4.3 (bs, 1H); 4.07 (bs, 1 H); 3.8 (s, 3H); 3.6 (s, 3H); 3.56 (bs, 1 H); 2.63 (s, 3H).

EJEMPLO 24 Metilamida de ácido 2S,3S,4R.5R)-3-amino-5-f6-r2-(3-benciloxi-4-metoxi- feniDetilaminol-pur¡n-9-il>-4-hídroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 24) C27H31 N7°5: PM = 533 59: EM 534 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.35 (s, 1 H); 8.25 (bs, 1H)¡ 7.4-7.2 (m, 5H); 6.9-6.8 (m, 3H); 6.0 (bd, 1 H, J=3.7 Hz); 5.0 (s, 2H); 4.59 (t, 1 H, J=4.2 Hz); 4.28 (d, 1 H, J=5.8 Hz); 3.8 (s, 3H); 3.7 (t, 1H, J=5.6 Hz); 2.86 (t, 2H, J=6.3 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 25 Metilamida de ácido (2S.3S.4R.5R)-3-amino-4-h¡drox¡-5-r6-(2-piridin-3-il- etilamino)-purin-9-in-tetrah¡dro-furan-2-carboxílico (Compuesto 25) C18H22N8°3: PM = 398 43: EM 399 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.43 (bs, 1 H)¡ 8.38 (m, 1 H)¡ 8.37 (s, 1 H)¡ 8.3 (bs, 1 H); 7.8 (m, 1 H); 7.4 (m, 1 H); 6.03 (d, 1 H, J=4.0 Hz); 4.6 (t, 1 H, 4.2 Hz); 4.33 (d, 1 H, J=5.8 Hz); 3.9 (bs, 2H); 3.8 (t, 1 H, J=5.8 Hz); 3.05 (t, 2H, J=7.0 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 26 Metilamida de ácido (2S,3S,4R.5R)-3-amino-5-r6-(2,5-dimetoxi- bencilamino)-purin-9-¡ll-4-h¡droxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 26) C20H25N7°5: PM = 443·46: EM 444 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.35 (s, 1H); 8.25 (bs, 1 H); 6.9 (m, 2H); 6.8 (m, 2H); 6.0 (bd, 1 H, J=4.0 Hz); 4.78 (bs, 2H); 4.6 (t, 1 H, J=4.4 Hz); 4.3 (d, 1 H, J=5.5 Hz); 3.8 (s, 3H); 3.7 (t, 1 H, J=5,5 Hz); 3.65 (s, 3H); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 27 Metilamida de ácido (2S.3S.4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-(6-fenet¡lamino- purin-9-il)-tetrahídro-furan-2-carboxílico (Compuesto 27) C19H23N7°3: PM = 39744 : EM 398 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.3 (s, 1H); 8.25 (bs, 1H); 7.23 (m, 4H); 7.17 (m, 1H)¡ 6.0 (bd, 1H, J=4.2 Hz); 4.55 (m, 1H); 4.27 (d, 1H, J=5.7 Hz); 3.8 (bs, 2H); 3.7 (m, 1H); 2.95 (t, 2H, J=6-9 Hz): 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 28 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(2-cloro-6-met¡lamino- purin-9-il)-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 28) C12H16CIN703: PM = 341.76: EM 342 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, DMSO) d 8.58 (s, 1H); 8.3 (bs, 1H); 8.2 (bs, 2H); 5.98 (d, 1H, J=4.0 Hz); 4.3 (bs, 1H); 4.1 (m, 1H); 3.6 (m, 1H); 3.35 (m, 1H); 2.9 (bs, 3H); 2.63 (s, 3H).

EJEMPLO 29 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-r6-(2-fenil- c¡clopropilamino)-purin-9-¡n-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 29) C20H23N7°3: PM = 40945: EM 410 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.34 (s, 1H); 8.3 (s, 1H); 7.4-7.3 (m, 5H); 6.03 (d, 1H, J=4.1 Hz); 4.6 (m, 1H); 4.35 (d, 1H, J=5.6 Hz); 3.8 (m, 1H); 3.2 (bs, 1H); 2.8 (s, 3H); 2.2 (m, 1H); 1.3 (m, 2H).

EJEMPLO 30 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-f2-cloro-6-(2,5-dicloro- bencilamino)-purin-9-¡n-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 30) C18H18CI3N7°3: PM = 486J5: EM 486 (M+H)+: 1| RMN ( 00 MHz, CD3OD) d 8.36 (bs, 1H); 7.42 (bs, 1H); 7.4 (d, 1H, J=8.6 Hz); 7.27 (m, 1H); 6.0 (bd, 1H, J=3.7 Hz); 4.8 (bs, 2H); 4.58 (t, 1H, J=4.1 Hz); 4.3 (d, 1H; J=5.6 Hz); 3.75 (t, 1H, J=4.1 Hz); 2.82 (s, 3H).

EJEMPLO 31 Metilamida de ácido (2S,3S.4R.5R¾-3-am¡no-4-hidroxi-5-^6-r2-(2-morfol¡n- 4-il-tiazol-5-il)-et¡lam¡no1-purin-9-il)tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 31 ) C20H27NgSO4: PM = 489.56: EM 490 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.3 (s, 1 H)¡ 8.23 (bs, 1 H)¡ 6.4 (s, 1 H); 6.0 (bd, 1 H, J=4.1 Hz); 4.85 (bs, 1 H); 4.57 (t, 1 H, J=4.4 Hz); 4.25 (d, 1 H, J=5.5 Hz); 3.8 (bs, 2H); 3.72 (m, 5H); 3.4 (m, 2H); 2.9 (t, 1 H, J=6.5 Hz); 2.8 (s, 3H); 2.78 (m, 2H).

EJEMPLO 32 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-f6-(2-naftalen-1-il- etilamino)-purin-9-in-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 32) C23H25N7°3: PM = 447 50: EM 448 (M+H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.32 (bs, 1 H); 8.3 (bs, 1H); 7.82 (d, 1 H, J=6.0 Hz); 7.70 (d, 1 H, J=6.0 Hz); 7.5-7.3 (m, 5H); 6.02 (d, 1 H, J=5.5 Hz); 4.58 (t, 1 H, J=4.5 Hz); 4.29 (d, 1 H, J=4.5 Hz); 3.92 (bs, 2H); 3.7 (t, 1 H, J=6.5 Hz); 3.42 (t, 2H, J=7.0 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 33 Metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-f6-r(5-fluoro-1H-indol-3- ilmetil)-am¡no1-pur¡n-9-il)-4-h¡droxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 33) C21H23FN8°3: PM = 454·47: EM 455 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.6 (d, 1H, J=21 Hz); 8.3 (bs, 1H); 7.22 (m, 2H)¡ 6.8 (m, 3H)¡ 6.0 (bd, 1H=22 Hz); 4.6 (bs, 1H); 4.37 (bs.1H); 4.2 (bs, 2H); 3.82 (bs, 2H); 3.15 (t, 1H, J=7.2 Hz); 2.8 (d, 3H, J=9 Hz).

EJEMPLO 34 Metilamida de ácido (2S,3S,4 ,5R)-3-amino-5-{6-f2-(4-benciloxi-3-metox¡- fenil)^tilaminol-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 34) C27H31N7°5: PM = 53359: EM 534 (M+H)+: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.32 (s, 1H); 8.25 (bs, 1H); 7.4-7.2 (m, 5H); 6.9 (d, 1H, J=1.7 Hz); 6.84 (d, 1H, J=8.1 Hz); 6.75 (dd, 1H, J=8.1, 1.7 Hz); 6.03 (d, 1H, J=4.1 Hz); 5.02 (s, 2H); 4.6 (t, 1H, J=5.1 Hz); 4.3 (d, 1H, J=5.8 Hz); 3.81 (bs, 2H); 3,8 (s, 3H); 2.9 (t, 2H, J=7.0 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 35 « Metilamida de ácido (2S,3S,4R.5R)-3-amino-4-hidroxi-5-r6-(2-piridin-2-il- etilamino)-purin-9-il)-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 35) C18H22N8°3: PM = 398-43: EM 399 ( +H)+: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) d 8.31 (s, 1 H); 8.27 (bs, 1 H); 7.3 (m, 4H); 6.02 (d, 1 H, J=3.8 Hz);4.6 (t, 1 H, J=4.2 Hz); 4.3 (d, 1 H, H)5.8 Hz); 3.98 (bs, 2H); 3.75 (t, 1 H, J=5.8 Hz); 3.2 (t, 2H, J=7.0 Hz); 2.8 (s, 3H).

EJEMPLO 36 Metilamida de ácido (2S,3S.4R.5R)-3-amino-4-hidrox¡-5-r6-(2-fenil- ciclopropilamino)-purin-9-il1-tetrahidro-furan-2-carboxílico (Compuesto 36) C20H23N7°3: PM = 409-45: EM 410 (M+H)+: 1 H RMN ( 00 MHz, CD3OD) d 8.34 (s, 1 H); 8.3 (s, 1 H); 7.4-7.3 (m, 5H); 6.03 (d, 1 H, J=4.1 Hz); 4.6 (m, 1 H); 4.35 (, 1 H, J=5.6 Hz); 3.8 (m, 1 H); 3.2 (bs, 1 H); 2.8 (s, 3H); 2.2 (m, 1 H); 1.3 (m, 2H).

Los compuestos ejemplificados arriba en los ejemplos 1-36 mostraron una Cl50 de A3 de 15 nM a 500 nM. Se debe entender que la invención no está limitada a las modalidades particulares aquí descritas, sino que se pueden hacer varios cambios y modificaciones sin apartarse del espíritu y alcance de este concepto novedoso, definido por las siguientes reivindicaciones.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto que tiene la fórmula (I)

(I) en donde X es oxi, metileno o tío; Y es CH o N; Z es H, alquilo de C1-C4, alquiloxi de C1-C4, trifluorometilo o halógeno; R1 es hidroximetilo, alcoxi(CrC3)metilo, cicloalcoxi(C3-C5)metilo, carboxi, alcoxi(C-i-C3)carbonilo, c¡cloalcox¡(C3-C5)carbon¡lo, 1 ,1-aminoiminometilo, 1 ,1- (mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)amino)¡minomet¡lo, 1 ,1-(mono-N- o di-?,?-cicloalquil(C3-C5)amino)¡m¡nomet¡lo, carbamoilo, mono-N- o di-N,N-alquil(d- C4)aminocarbonilo, mono-N- o di-N,N-cicloalquil(C3-C5)-am¡nocarbonilo, o N-alquil(Ci-C4)-N-cicloalqu¡l(C3-C5)aminocarbonilo;

R2 es H, alquilo de C1-C3 o cicloalquilo de C3-C5; A es -(CH2)n-, en donde n es un entero de 1 a 4, o -(CmH2m-2)-, en donde m es un entero de 3 a 6; y B es hidrógeno, heteroarilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, -CH(aril)2, o en donde R , R , R , RB4 y Ra¾ se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, tio, amino, alquiloxi de CrC6, alquiltio de C1-C6, alquilamino de C1-C6 y D-G, en donde D es oxi, tio, NH, alquiloxi de Ci-C6, alquiltio de Ci-C6 o alquilamino de CrC6, y G es un anillo de cinco a ocho miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, que tiene opcionaimente de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, o un anillo bicíclico que consiste de dos anillos fusionados de tres a seis miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, tomado independientemente, que tiene opcionaimente de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno, en donde G está opcionalmente mono-, di- o trisustituido independientemente con halógeno, alquilo de C-1-C3, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, ciano, cicloalquilo de C3-C5, hidroxi o alcoxi de C-1-C3, o G es ciano, alcoxi(Ci-C4)carbonilo, cicloalcoxi(C3-C5)carbonilo, C(0)NR4R5, C(S)NR4R5, C(NH)NR4R5, C(N-alquilo(C C3))NR4R5 o C(N-cicloalquilo(C3-' C10))NR4R5, en donde R4 es alquilo de C1-C10, hidroxi, alcoxi de C1-C10, cicloalcoxi de C3-C10 o un anillo de cinco a ocho miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, enlazado opcionalmente a través de alquilo de C1-C3, que tiene opcionalmente de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, o un anillo bicíclico, o un anillo bicíclico con puente opcional (C1-C3) enlazado opcionalmente mediante alquilo de C1-C3, dicho anillo bicíclico o anillo bicíclico puenteado teniendo opcionalmente de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno, en donde dicho alquilo de CrC10l alcoxi de CrC10, cicloalcoxi de C3-Ci0 o anillo(s) de R4, están opcionalmente mono-, di- o trisustituidos independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3, trifluorometilo, nitro, ciano, cicloalquilo de C3-C5, hidroxi o alcoxi de C1-C3, y R5 es H, alquilo de C1-C10 o cicloalquilo de CrC 0; o R4 y R5 tomados junto con el nitrógeno al cual están unidos forman un anillo de cuatro a nueve miembros, completamente saturado o parcialmente insaturado, dicho anillo puenteado opcionalmente, teniendo opcionalmente de uno a tres heteroátomos adicionales seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, dicho anillo opcionalmente mono- o disustituido independientemente con oxo, hidroxi, alcoxi de C1-C6, alquilo de CrC8, amino, mono-N- o di-N,N-alquil(Ci-C4)aminocarbonilo, mono-N- o di-N,N- cicloalquil(C3-C5)aminocarbonilo, N-alquil(CrC4)-N-cicloalquil(C3-C5)amino-• carbonilo, mono-N- o d¡-N,N-alquil(Ci-C4)amino, mono-N- o di-N,N- cicloalquil(C3-C5)amino, N-alquil(Ci-C4)-N-cicloalquil(C3-C5)amino, formilamino, alquil(C1-C )carbonilamino, cicloalquil(C3-C5)-carbonilamino, alcoxi(Ci-C4)-carbonilamino, N-alcoxi(Ci-C4)carbonil-N-alquil(CrC )amino, sulfamoilo(CrC4), alquil(Ci-C4)sulfonilamino, cicloalquil(C3-C5)sulfonilamino o un anillo de cinco a ocho miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, enlazado opcionalmente por medio de alquilo de C C3, teniendo opcionalmente de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, o un anillo bicíclico que consiste de dos anillos fusionados de tres a seis miembros, parcialmente saturado, completamente saturado o completamente insaturado, tomado independientemente, enlazado opcionalmente por medio de alquilo de Ci-C3, que tiene opcionalmente de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno, opcionalmente mono- o disustituido con halógeno, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C3 o alcoxi de C1-C3; con la condición de que A no sea -(CH2)r, cuando R es -D-G, R es halógeno, trifluorometilo, ciano, alquilo de C1-C3, alquiloxi de C1-C3, etenilo o etinilo, y RB2, RB3 y RB5 son hidrógeno; un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable del compuesto o del profármaco. 2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque X es oxi; Y es N; Z es H o Cl; R1 es alquil(Ci-C6)carbamoilo; R2 es H; A es -(CH2)n-, en donde n es 1 o 2, o ciclopropilo; y B es heteroarilo, naftilo, sustituido o no sustituido, -CH(aril)2, en donde R , R , R , RB4 y Raü se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C C4, halógeno, hidroxi, tío, amino, alquiloxi de CrC6, alquiltio de C1-C6, alquilamino de Ci-C6 y -D-G, en donde D es oxi, tío, alquiloxi de CrC6 o alquiltio de C C6, y G es fenilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridinazinilo, tetrazolilo, isotiazolilo, tiofenilo, furanilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 1 ,2,4- tiadiazolilo, pirazolilo, pirrolilo, indolilo, naftalenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzo[b]furanilo, benzo[b]tiofenilo, benzotiazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, en donde G está ' opcionalmente mono-, di- o trisustituido independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3 o alcoxi de C C3; un profármaco del mismo, o una sal,- hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco. 3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque B es un piridilo, indolilo o tiazolilo, sustituido o no sustituido, un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco.

4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque dicho piridilo, indolilo o tiazolilo sustituido, está sustituido con al menos un sustituyente seleccionado del grupo que consiste de alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, tío, amino, alquiloxi de C1-C6, alquiltio de Ci-C6, alquilamino de Ci-C6 y -D-G, en donde D es oxi, tio, alquiloxi de C-r C6 o alquiltio de C-i-C6, y G es fenilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridinazinilo, tetrazolilo, isotiazolilo, tiofenilo, furanilo, 1 ,2,4-oxadiazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazolilo, pirrolilo, indolilo, naftalenilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzo[b]furanilo, benzo[b]tiofenilo, benzotiazolilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, tetrahidropiranilo, morfolinilo, en donde G está opcionalmente mono-, di- o trisustituido independientemente con halógeno, alquilo de C1-C3 o alcoxi de C C3; un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco.

5.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, ' caracterizado además porque B es en donde R , R , R , RB4 y RBS se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1-C4, halógeno, hidroxi, alquiloxi de d-Ce y -D-G, en donde D es alcoxi de C C6 y G es fenilo, piridilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, furanilo, 1 ,2,4- oxadiazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazolilo, pirrolilo o morfolinilo, en donde dicho G opcionalmente está mono-, di- o trisustituido independientemente con halógeno, alquilo de CrC3, trifluorometoxi o alcoxi de C1-C3; un profármaco del mismo, o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco.

6.- Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(2,5-dimetoxi- fenil)et¡lam¡no]-pur¡n-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-[6-(3-metoxi- bencilamino)-purin-9-il]-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(4-benciloxi-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-[6-(2-hidroxi-5-metoxi-• bencilamino)-purin-9-il]-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(3-butoxi-bencilamino)-purin- 9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2,5-dimetil-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2,5-dicloro-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-{6-[3-(2-morfolin-4-il- etoxi)-bencilamino]-purin-9-il}-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-{6-[3-(3-metil- isoxazol-5-ilmetoxi)-bencilamino]-purin-9-il}-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-[6-(2-metoxi-5-metil- bencilamino)-purin-9-il-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2,5-dietil-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(1-etil-propoxi)-5-metoxi- bencilamino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(3-ciclopentiloxi- bencilamino)-purin-9-il]-4-hidroxi-tetrah¡dro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-ciclopentiloxi- bencilamino)-purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(5-cloro-2-isopropoxi- bencilamino)-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; " metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2-benciloxi-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R.5R)-3-amino-5-{6-[2-(4-fluoro-fenil)etilamino]- purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(4-benciloxi-3,5-dimetoxi- fenil)etilamino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-(6-metilamino-purin-9- il )-tetra h id ro-f u ran-2-carboxíl ico ; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(4-fluoro-3-metoxi- fenil)etilamino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-am¡no-5-{6-[(3-benciloxi-6-metil-p¡ridin- 2-ilmetil)-amino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2,2-d¡fen¡l-etilamino)-purin- 9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[2-cloro-6-(2,5-d¡metoxi- bencilamino)-pur¡n-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(3-benciloxi-4-metoxi- fenil)etilamino]-purin-9-¡l}-4-hidrox¡-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-[6-(2-piridin-3-il- etilamino)-purin-9-il]-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-[6-(2,5-dimetoxi-bencilamino)- purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-(6-fenetilamino-purin-' 9-i l]-tetra h id ro-f u ra ?-2-ca rbox íl i co ; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-(2-cloro-6-metilamino-purin-9- il)-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-[6-(2-fenil- ciclopropilamino)-purin-9-il]-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R15R)-3-amino-5-[2-cloro-6-(2,5-dicloro- bencilamino)-purin-9-il]-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-{6-[2-(2-morfolin-4-il- tiazol-5-il)-etilamino]-purin-9-il}tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-[6-(2-naftalen-1-il- etilamino)-purin-9-il]-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[(5-fluoro-1 H-indol-3-ilmetil)- amino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrahidro-furan-2-carboxílico; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-5-{6-[2-(4-benciloxi-3-metoxi- fenil)-etilamino]-purin-9-il}-4-hidroxi-tetrah¡dro-furan-2-carboxíl¡co; metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidrox¡-5-[6-(2-piridin-2-il- etilamino)-purin-9-il)-tetrahidro-furan-2-carboxílico; y metilamida de ácido (2S,3S,4R,5R)-3-amino-4-hidroxi-5-[6-(2-fenil- ciclopropilamino)-purin-9-il]-tetrahidro-furan-2-carboxílico; un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco.

7.- El uso de un compuesto como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, o un profármaco del mismo, o ' una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, para preparar un medicamento para reducir el daño de tejido que resulta de isquemia o hipoxia en un mamífero,

8.- El uso de conformidad con la reivindicación 7, en donde el tejido es tejido cardiaco, de cerebro, hígado, riñon, pulmón, tubo digestivo, músculo esquelético, bazo, páncreas, nervio, médula espinal, retina, la vasculatura, o tejido intestinal.

9. - El uso de conformidad con la reivindicación 7, en donde dicho medicamento provee aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg de dicho compuesto, profármaco del mismo, o sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, al mamífero, por día.

10. - El uso de un compuesto como el que se reclama en las reivindicaciones 1 , 2, 3, 4, 5 o 6, o un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, para la fabricación de un medicamento para reducir el daño al tejido que resulta de isquemia o hipoxia.

11. - Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto como el que se reclama en las reivindicaciones 1 , 2, 3, 4, 5 o 6, o un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

12. - Un equipo farmacéutico que comprende (a) una forma de ' dosis adaptada para inyección intravenosa o intramuscular, que comprende un compuesto como el que se reclama en las reivindicaciones 1 , 2, 3, 4, 5 o 6, o un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, y (b) instrucciones que describen un método de uso de la forma de dosis para reducir el daño de tejido que resulta de isquemia o hipoxia.

13. - Una composición farmacéutica de combinación que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende (a) un primer compuesto, siendo dicho primer compuesto un compuesto como el que se reclama en las reivindicaciones 1 , 2, 3, 4, 5 o 6, o un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco; (b) un segundo compuesto, siendo dicho segundo compuesto un agente cardiovascular, un inhibidor de glicógeno fosforilasa, un inhibidor de sorbitol deshidrogenasa, o un inhibidor de aldosa reductasa; y (c) un vehículo o diluyente farmacéutico.

14. - El uso de un primer compuesto, siendo dicho primer compuesto un compuesto como el que se reclama en las reivindicaciones 1 , 2, 3, 4, 5 o 6, o un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, en combinación con un segundo compuesto, siendo dicho segundo compuesto un agente cardiovascular, un inhibidor de glicógeno fosforilasa, un inhibidor de sorbitol deshidrogenasa, o un inhibidor de aldosa reductasa, para preparar un medicamento para reducir el daño de tejido que resulta de isquemia o hipoxia ' en un mamífero.

15.- Un equipo farmacéutico que comprende (a) un primer compuesto, siendo dicho primer compuesto un compuesto como el que se reclama en las reivindicaciones 1 , 2, 3, 4, 5 o 6, o un profármaco del mismo, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, en una primera forma de dosis unitaria; (b) un segundo compuesto, siendo dicho segundo compuesto un agente cardiovascular, un inhibidor de glicógeno fosforilasa, un inhibidor de sorbitol deshidrogenasa, o un inhibidor de aldosa reductasa, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, en una segunda forma de dosis unitaria; y (c) un recipiente.