MX2015002792A - Un metodo para la seleccion de agentes que afectan los trastornos de motilidad intestinal y el dolor. - Google Patents
Un metodo para la seleccion de agentes que afectan los trastornos de motilidad intestinal y el dolor.Info
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Abstract
Se proporciona un método para evaluar los agentes para el tratamiento de diferentes trastornos de motilidad intestinal, usando distintas partes metodológicas relacionadas con la musculatura y los nervios del tracto GI que se comunican con el cerebro. Particularmente, la presente invención proporciona un método para la selección de un agente efectivo para el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal, donde el método comprende: a) una etapa de mapeo espaciotemporal (ST, por sus siglas en inglés) realizado en un segmento gastrointestinal para analizar el efecto de dicho agente en la motilidad gastrointestinal; y b) una etapa de grabación del haz nervioso ex vivo realizada en un segmento gastrointestinal para analizar el efecto de dicho agente en la descarga del nervio aferente mesentérico. También se proporcionan las cepas bacterianas seleccionadas por los métodos de la invención y el uso de las cepas bacterianas en el tratamiento de los trastornos de motilidad intestinal motilidad.
Description
UN MÉTODO PARA LA SELECCIÓN DE AGENTES QUE AFECTAN LOS TRASTORNOS DE MOTILIDAD INTESTINAL Y EL
DOLOR
Campo de la Invención
El termino trastornos de motilidad intestinal aplica frecuentemente a las contracciones intestinales anormales asociadas con el dolor, con el estreñimiento o la diarrea. Esta frase se usa para describir una variedad de trastornos en los cuales, el intestino no se ha desarrollado correctamente o ha perdido su capacidad de coordinar la actividad muscular debido a varias causas. Tales trastornos pueden manifestarse en una variedad de maneras, e incluyen pero no se limitan a lo siguiente: Distención abdominal
Obstrucción recurrente
Dolor espasmódico abdominal - Estreñimiento
Enfermedad de reflujo gastroesofágico
Vomito persistente, recurrente
Diarrea
Síndrome de intestino irritable (I BS, por sus siglas en inglés) Enfermedad inflamatoria intestinal
Incontinencia fecal
Cólico infantil
Dolor abdominal recurrente frecuente (FRAP, por sus siglas en
ingles)
Regurgitación
I ntolerancia al alimento
En un amplio sentido, cualquier alteración significativa en el tránsito de alimentos y las secreciones en el tracto digestivo se pueden considerar un trastorno de motilidad intestinal.
Los movimientos coordinados apropiados del estómago y de los intestinos se requieren para digerir y propulsar los contenidos intestinales a lo largo del tracto digestivo. Los patrones de contracción y de relajación necesarios para la motilidad apropiada del tracto gastromtestinal (Gl, por sus siglas en inglés) son complejos y usan los nervios y los músculos dentro de las paredes del Gl . Cada día, en cualquier momento, muchos factores pueden influenciar la motilidad Gl (por ejemplo, ejercicio físico, problemas emocionales). Los infantes recién nacidos tienen que desarrollar el sistema complejo de motilidad en la zona del tracto Gl . La patogénesis de los trastornos de la motilidad intestinal es en la mayoría de los casos multifactorial.
Aunque la organización estructural global de los nervios y de la musculatura es similar a través del intestino delgado y del intestino grueso, cada parte tiene distintas actividades motrices. Las contracciones estacionarias o cortas propagadas con los complejos peristálticos y antiperistálicos más largos ocasionales ocurren durante y después de la alimentación y esto permite que el bolo alimenticio se disuelva y se mezcle con los jugos
digestivos para una absorción apropiada. Despues de la digestión el programa motriz cambia a uno con contracciones propagadas más largas que mueven los productos digeridos en la dirección anal. Otra actividad motora ocurre, lo cual es más regular, haciendo que las ondas peristálticas (es decir, las de la musculatura circular del intestino pequeño) permitan la progresión del alimento indigerido a través de los intestinos.
El envejecimiento, la demencia, el derrame cerebral, la enfermedad de Parkinson, las lesiones de la médula espinal, los desgarres rectales durante el alumbramiento, la diabetes, las complicaciones quirúrgicas, y los trastornos neuromusculares (por ejemplo, miastenia gravis) pueden causar trastornos de motilidad .
IBS, un desorden comúnmente diagnosticado de la motilidad intestinal, se ha considerado una enfermedad de colón por décadas, pero la investigación sobre la motilidad G l ha demostrado que los disturbios de la motilidad subyacente pueden ocurrir también en el intestino pequeño. I BS se puede acompañar por dolor abdominal.
Las causas del síndrome de intestino irritable (IBS, por sus siglas en inglés) siguen siendo desconocidas. De acuerdo con algunos informes, el intestino delgado y el colón de pacientes con IBS son más sensibles y reactivos a los estímulos suaves que los usuales.
Ocasionalmente, la incontinencia fecal puede ocurrir después de la ingestión de ciertos alimentos. Los azúcares, las
fibras insolubles, y los almidones (excepto el arroz) se disuelven normalmente en los intestinos, formando una cantidad variable de gas que deberá ser expelido. La mayoría de la gente que tiene deficiencia de lactasa no puede digerir la lactosa, un azúcar común en varios alimentos (por ejemplo, leche, pasteles). La gente que tiene deficiencia a la lactosa puede experimentar diarrea líquida incontrolada despues de la ingestión de la lactosa.
El estreñimiento es el padecimiento digestivo más común de los Estados Unidos pero a pesar de su frecuencia, permanece siendo frecuentemente desconocido hasta que el paciente desarrolla trastornos secundarios, como, trastornos anorectales o enfermedad diverticulares.
No existe una definición ampliamente útil clínicamente aceptada del estreñimiento. Los proveedores del cuidado de la salud usan generalmente la frecuencia de los movimientos del intestino (es decir, menos de 3 movimientos del intestino por semana) para definir el estreñimiento. Sin embargo, los criterios de Roma, introducidos inicialmente en 1988 y posteriormente modificados dos veces para producir los criterios de Roma I I I, se han convertido en la definición de la investigación estándar del estreñimiento.
De acuerdo con los criterios de Roma I I I para el estreñimiento, un paciente debe haber experimentado por lo menos 2 de los siguientes síntomas durante 3 meses anteriores:
· Menos de 3 movimientos intestinales por semana
Esfuerzos
Heces duras, grumosas
Sensación de obstrucción anorectal
Sensación de defecación incompleta
Maniobra manual requerida para defecar
El estreñimiento que es con frecuencia crónico, puede afectar significativamente la calidad de vida de un individuo, y se puede asociar con costos significativos en el cuidado de la salud. Se considera crónico si ocurrió durante por lo menos 12 semanas (en total, no necesariamente de forma consecutiva) durante el año anterior.
El estreñimiento tiene comúnmente varias causas, ya sean, primarias o secundarias. La más frecuente de estas son las siguientes:
Dieta que es muy pobre en fibra
Embarazo
Estreñimiento psicológico y depresión clínica relacionada con los cambios en la forma de vida (por ejemplo, viajar, un nuevo trabajo, o divorcio), en los cuales un paciente ignora que necesita defecar.
Hipotiroidismo
Desequilibrio de electrólitos, especialmente si implica Ca + + o K+.
Tumores que producen la compresión mecánica en un tracto intestinal, interna o externamente.
Lesiones del sistema nervioso
Envejecimiento
• Enfermedad de Parkinson
Intoxicación por plomo, mercurio, fósforo, o arsenico
El estreñimiento es absolutamente común durante el embarazo. Las contracciones del músculo que mueven normalmente el alimento a través de los intestinos se retarda debido a niveles más altos de la hormona progesterona y posiblemente del hierro adicional tomados como vitamina prenatal. Esto en ocasiones también se acompaña por un dolor abdominal más bajo.
El estreñimiento también se asocia con el aumento de edad y el “envejecimiento del intestino” encontrado comúnmente principalmente en la gente mayor a los 70 años y en instituciones de cuidado crónico. Esta condición se acompaña por:
Una cantidad reducida de neuronas en el plexo mientérico deteriorado en respuesta al estímulo directo que conduce a la disfunción mientérica.
La deposición de colágeno aumentado del colón izquierdo, que conduce a anormalidades en la motilidad y distensibilidad rectal y de colon.
• La reducción en la amplitud de la entrada del nervio inhibitorio en la capa del músculo circular del colón, da por resultado la falta de coordinación motora segmentaria.
Unión creciente de las endorfinas del plasma en los
receptores intestinales en las personas de 60 años y más.
En el otro extremo de los trastornos de motilidad intestinal de espectro de envejecimiento, el llanto persistente o excesivo del cólico infantil es uno de los problemas más estresantes de la infancia. Esto es estresante para el infante, los padres y los profesionales en el cuidado de la salud involucrados. Los padres del infante irritado pueden ver el llanto como acusación de su capacidad de cuidado o como evidencia de una enfermedad en su niño. El cólico infantil es una condición que se resuelve con tiempo.
La definición más extensamente aceptada para el cólico es el criterio Wessel o la "regla de tres": el llanto por más de tres horas por día, el que ocurre en más de tres días por semana, y el que persiste por más de tres semanas. Esta definición tambien requiere que el infante este de "otra manera sano y bien alimentado".
La hipermotilidad intestinal secundaria en un presunto desequilibrio autonómico también se ha propuesto como una etiología para el cólico. Muchos de los mecanismos que regulan la actividad motora son inmaduros en infantes. La inmadurez de estos mecanismos puede dar lugar a la vulnerabilidad creciente para la intolerancia a la alimentación . Por lo tanto, el cólico puede ser una manifestación clínica común en la subpoblación de infantes quienes tienen disfunción de madurez en uno o más de los aspectos de la regulación de la motilidad.
De acuerdo con algunos reportes epidemiológicos, tanto como 30 millones de Americanos tienen trastornos de motilidad intestinal. Los datos disponibles de la literatura medica indican que en todo el mundo, 30-45% de todas las condiciones Gl son referibles a los trastornos de la motilidad intestinal.
Los tratamientos y las recomendaciones actuales varían dependiendo del tipo de trastornos de motilidad, debido al estreñimiento, algunos ejemplos son:
Agentes digeribles o fibra (no útiles para el estreñimiento de tránsito lento)
Ablandadores de heces
Laxantes estimulantes
Laxantes osmóticos (por ejemplo polietilenglicol)
Activador del canal de cloruro (por ejemplo Lubiproston) Agentes Serotoninérgicos (agonistas del receptor 5-HT4)
Adicionalmente se ha estudiado en un ensayo clínico aleatorio el uso de Bacterias de Ácido Láctico (LAB, por sus siglas en inglés): La eficacia de alcachofas enriquecidas con Lactobacilos paracasei en el Tratamiento de Pacientes con Estreñimiento Funcional (Riezzo et al; Aliment Pharmacol Ther. 2012 Feb;35(4):441 -50).
También, 90 infantes bebes lactantes con dolor espasmódico se asignaron aleatoriamente al tratamiento con L. reuteri o a la simeticona en un ensayo. En la línea base, el tiempo promedio de llanto diario fue de 197 minutos en ambos grupos. Entre los
83 infantes quienes completaron el ensayo, el tiempo promedio del llanto diario fue más bajo con L. reuteri, que en el grupo de simeticona en el día 7 (159 contra 177 minutos) y en el día 28 (51 contra 145 minutos). (Savino F et al, Pediatrics.
5 2007 ; 1 19(l):e124).
Los trastornos de motilidad intestinal se aplican a las contracciones intestinales anormales asociadas frecuentemente con el dolor, existen muchas diferentes clases de tratamientos y de recomendaciones para los diferentes trastornos, algunos de ío los cuales trabajan mejor que muchos otros.
Por lo que existe una necesidad global y problemas específicos a solucionar para varios trastornos de motilidad, es decir; Cómo los agentes mejor seleccionados normalizan o tratan los trastornos de la motilidad intestinal y del dolor 15 intestinal/estomago
Breve Descripción de la Invención
Los inventores de la invención de la presente han desarrollado un nuevo metodo para evaluar a los agentes para el tratamiento de diferentes trastornos de motilidad intestinal, 20 usando las distintas partes metodológicas relacionadas con la musculatura y los nervios del tracto Gl y su comunicación con el cerebro.
Por lo tanto, la presente invención se relaciona con un método para la selección de un agente efectivo para el 25 tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal, donde dicho
metodo comprende:
a) una etapa de representación del espaciotemporal (ST, por sus siglas en inglés) realizado en un segmento gastromtestinal para analizar el efecto de un agente en motilidad gastrointestinal;
5 y
b) una etapa de mapeo del haz nervioso ex vivo llevado a cabo en un segmento gastrointestinal para analizar el efecto de un agente en descarga del nervio aferente mesentérico.
En modalidades preferidas el mapeo de ST en la etapa a) se 10 lleva a cabo por la imagen o el registro de un video. En los métodos de la invención , la etapa a) comprende preferiblemente el uso del mapa de ST generado en la etapa a) para medir frecuencia compleja del motor migrante (MMC, por sus siglas en inglés) y/o la velocidad del complejo de motor migrante (M MC, por ís sus siglas en inglés) en dicho segmento gastrointestinal.
En los métodos de la invención, la etapa a) además preferiblemente comprende la medida de la presión intraluminal, por ejemplo, presión pico intraluminal (PPr, por sus siglas en inglés).
20 En los métodos de la invención, preferiblemente la etapa b) comprende medir las frecuencias de descarga espontánea de los haces nerviosas aferentes mesentéricos.
En aspectos preferidos, la presente invención divulga un método de dos etapas para la selección de los agentes efectivos 25 en trastornos de motilidad . En la primera etapa los inventores
combinaron los registros de la presión intraluminal con los mapas espaciotemporales para analizar los efectos de diferentes agentes en motilidad. En esta etapa la presión pico intraluminal (PPr, por sus siglas en ingles) se mide y se graba el video hecho del ycyuno ex vivo de ratón y de los segmentos del colón antes y después de las aplicaciones intraluminales de agentes. La frecuencia y la velocidad del complejo de motor migrante también se calculan en la primera etapa del método. En la segunda etapa la señalización del nervio intestinal se analiza y se miden las frecuencias de descarga espontánea de los haces nerviosas aferentes mesentéricos. Por lo tanto, la presente invención divulga un método para la selección de agentes efectivos en los trastornos de motilidad que comprenden una primera etapa usando el registro simultáneo de los cambios de presión intraluminal en adición a la grabación de video y el mapeo espaciotemporal y de una segunda etapa la cual es un análisis de la señalización del nervio, por ejemplo, tomando mesentérico, por ejemplo, mesentérico extracelular, grabaciones del nervio.
Por lo tanto, en incluso otra modalidad, la presente invención proporciona un método para la selección de un agente efectivo para el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal, que comprende las etapas de:
(a) registrar la presión intraluminal, creando un mapa espaciotemporal (ST, por sus siglas en inglés) para permitir un análisis de los efectos de diferentes agentes en motilidad
gastromtestinal donde dicho mapa espaciotemporal se usa para medir la frecuencia y la velocidad del complejo de motor migrante, en una muestra intestinal en la presencia y en la ausencia de un agente de prueba; y
(b) analizar la señalización del nervio intestinal midiendo las frecuencias de descarga espontánea de los haces nerviosas aferentes mesentericos en una muestra intestinal en presencia y en ausencia de un agente de prueba.
En modalidades preferidas de este método en la etapa (a) se mide la presión pico intraluminal (PPr, por sus siglas en inglés).
La presente invención se relaciona con el método de dos etapas descritas y también con las nuevas cepas bacterianas.
Breve Descripción de las Figuras
Figura 1 grabaciones de la motilidad del órgano.
Figura 2 salida de datos y foto de las grabaciones de motilidad.
Figura 3 salida de datos y fotos de las grabaciones de motilidad .
Figura 4 registro del nervio mesentérico; inervación del intestino.
Figura 5 registros extracelulares.
Figura 6 detalles de la conexión del software StMAP.
Figura 7 gráficas que muestran los resultados de la etapa A). Los agentes probados son (A) L. gasseri 345A (DSM 27123),
(B) L. gasseri 621 A (DSM 27126), (C) L. gasseri T1 , (d) L. gasseri T2, (E) L. reuteri ATCC PTA 6475, (F) L. reuteri DSM 17938 y (G) L. rhamnosus (J B-1 ).
Figura 8 gráficas que muestran los resultados de la etapa b), agentes probados son L. rhamnosus (JB-1 ), L. reuteri DSM
17938, L., reuteri ATCC PTA 6475, L. gasseri 345A (DSM 27123) L. gasseri 621 A (DSM 27126) L. gasseri T1 y L. gasseri T2.
Descripción Detallada de la Invención
Para facilitar la comprensión de la invención, una cantidad de terminos se definen a continuación.
Según se usa en la presente el término "presión máxima intraluminal" (PPr, por sus referencias en inglés) se basa en los registros de la presión intraluminal, donde los cambios de presión intraluminal se miden en el punto medio del eje longitudinal del segmento del intestino. Se analiza la señal de la presión y se identifica y se mide la presión pico intraluminal (PPr, por sus siglas en inglés).
Según se usó en la presente el término "frecuencia compleja del motor migrante" (frecuencia MMC) se calcula contando la cantidad de las bandas MC oscuras en los mapas espaciotemporales.
Según se usó en la presente el término "velocidad del complejo de motor migrante" (velocidad MMC) se mide de las pendientes de cada banda en el mapa espaciotemporal generado por los complejos motores migrantes.
Según se usó en la presente el termino "frecuencia de descarga" se usa para medir los trenes de espiga sensoriales en el cerebro.
Según se usa en la presente el término "agente" se usa para significar cualquier sustancia o material que incluye las células enteras, los microorganismos, las proteínas, los péptidos, las enzimas, las moléculas u otro material biológico o químico que se puede usar para influenciar la motilidad y o el dolor en el sistema gastromtestinal de un mamífero. Los agentes preferidos son cepas bacterianas, por ejemplo, cepas bacterianas probióticas.
El método de la invención en la presente es un método de dos etapas, en base a un método de mapeo (etapa 1 ) espaciotemporal (ST, por sus siglas en inglés) combinado con una teenología mejorada por el registro del haz nervioso ex vivo (etapa 2) en el cual un segmento gastrointestinal se remueve o sin la arcada mesentérica que contiene el haz nervioso que suministra el segmento compuesto de fibras espinales y vagales.
En la primera etapa del presente método preferido los registros de la presión intraluminal se combinan con los mapas espaciotemporales (ST, por sus siglas en inglés) para analizar los efectos de los diferentes agentes en motilidad.
Los mapas ST proporcionan una herramienta para visualizar un campo que varía espacialmente y que se involucra temporalmente, lo cual se puede usar en el análisis de la motilidad gastrointestinal incluyendo comportamientos en los
trastornos de salud y de motilidad. Usando la proyección de imagen de video espaciotemporal los inventores han desarrollado en la presente una parte del nuevo metodo usando el análisis computarizado de mapas espaciotemporales de cambios en el diámetro del intestino. Esto revela los patrones del motor que son muy difíciles de detectar con cualquier otra téenica. Los parámetros de estos patrones correlacionan directamente los resultados obtenidos con los segmentos intestinales ex vivo de ratón con la farmacología del intestino humano. Los complejos motores peristálticos propagados (MC) o los movimientos mezclados (MC estacionario) se registran digitalmente en tiempo real y se almacenan las imágenes. El software del análisis, se describe adicionalmente más abajo, detecta los bordes del intestino y puede ser capaz de calcular automáticamente el diámetro a lo largo de la longitud del segmento en un cierto plazo. Estos datos se usan mediante el programa para construir mapas espaciotemporales que pueden extraer información altamente específica sobre patrones del motor; por ejemplo, la frecuencia (frecuencia MMC neuralmente dependiente) del motor migrante (MMC , por sus siglas en inglés) velocidad MMC e índices de contracción miogénica (relacionada con la onda retardada) de la contracción.
Además, se comienza a aceptar que la señal de los microorganismos intestinales en el cerebro es parte del eje del microbioma-intestino-cerebro. Sin embargo, se conoce muy poco
sobre la función del microbioma intestinal en el desarrollo o la función del sistema nervioso. No existe nada presente conocido sobre la naturaleza cuantitativa de la señal nerviosa transmitida del intestino en el sistema nervioso central.
Solo las neuronas sensoriales, incluye esos entre las fibras vagales, representan estímulos físicos continuos como trenes de espiga modelados que codifican la naturaleza y la intensidad del estímulo. En adición a esto, los estímulos se pueden representar en un código de población determinado por la cantidad de fibras activas en el haz. Toda la información que alcanza el cerebro a través de los aferentes primarios tiene que codificarse en el lenguaje de los trenes de espiga neuronales. Por lo tanto, conociendo cómo los trenes de espiga sensoriales se afectan por las cepas probióticas, comensales y diferentes sustancias nos permiten identificar los nuevos microorganismos benéficos del intestino y sus moléculas activas por sus efectos en la descarga aferente primaria así como los nuevos fármacos y otros compuestos que en varias maneras pueden intervenir en este sistema de señalización.
El nuevo método de la invención en la presente para los agentes de evaluación para el tratamiento de diferentes trastornos de la motilidad intestinal permite la diferenciación de diferentes efectos específicos de los agentes, por ejemplo, una cepa bacteriana probiótica u otro agente biológico o químico, en el músculo y en los nervios. Los datos experimentales confirman
que no es necesariamente el mismo agente el que puede modular, por ejemplo, mezclar el patrón o el patrón de propulsión en cierta parte del tracto Gl que tambien es el más efectivo en el dolor de modulación asociado con el sistema nervioso central y/o entérico.
Además, para investigar los efectos de ciertas moléculas en diferentes enfermedades, nuestro método permite que diferentes estudios de la perfusión y difusión luminal y a través de la barrera epitelial.
Dos patrones fundamentales de motilidad son conducidos por el tubo digestivo:
Propulsión : los alimentos se deben propulsar a lo largo de la longitud completa del tubo digestivo para que se sometan a la serie secuencial del procesamiento implicada en el desmontaje y la absorción. El tipo principal de motilidad propulsivo, se considera particularmente en el esófago y el intestino pequeño, es peristalsis - un anillo de contracción del músculo que se mueve desde el lado oral de un bolo de ingesta y hacia el ano, que propulsa los contenidos del lumen en esa dirección; mientras el anillo se mueve, el músculo en el otro lado del área dilatada se relaja, facilitando el paso suave del bolo.
Mezclado: Si los materiales injeridos se impulsan simplemente a través del tubo digestivo, usted esperaría una digestión y absorción pobre, debido a que las enzimas digestivas no se mezclarían adecuadamente con la ingesta y el volumen de la ingesta no haría contacto con las células epiteliales que
absorben los nutrientes, incluyendo agua. Las contracciones de segmentación son un tipo común de mezcla de motilidad considerada especialmente en el intestino delgado - anillos segmentarios de contracción corta y mezcla de la ingesta. Alternando la relajación y la contracción del músculo longitudinal en la pared del intestino tambien proporciona el mezclado efectivo de sus contenidos.
Usando el nuevo método en la presente, la motilidad del intestino cambiante, considerado como el patrón de mezclado (poste de alimentación) o el patrón propulsivo, considerado claramente usando el método de mapeo ST, en combinación con los cambios en el dolor causado por diferentes trastornos de motilidad, y manifestado central o periféricamente, puede ser detectado y puede ser registrado.
Una clase de dolor es el dolor visceral ese que resulta de la descarga de nociceptores de las visceras abdominales (órganos). Las estructuras viscerales son altamente sensibles a la distención (estiramiento), a la isquemia y a la inflamación , pero relativamente insensible a otros estímulos que evocan normalmente dolor. El dolor visceral es difuso, difícil de localizar y frecuentemente referido a una estructura distante, usualmente superficial. Esto se puede acompañar por los síntomas como náusea, vomito, cambios en señales vitales así como manifestaciones emocionales. El dolor se puede describir como nauseabundo, profundo, extrujante, y embotado. Las distintas
lesiones estructurales o las anormalidades bioquímicas explican este tipo de dolor en únicamente una proporción de pacientes. Estas enfermedades se agrupan en ocasiones bajo enfermedades neuromusculares gastromtestinales (GI NMD, por sus siglas en ingles). Las personas pueden también experimentar dolores viscerales, frecuentemente muy intensos en naturaleza, sin ninguna evidencia de razón estructural, bioquímica o histolopatológica de tales síntomas.
Un nociceptor es un receptor sensorial que responde a los estímulos potencialmente dañinos enviando potenciales de acción a las neuronas nociceptivas específicas (Ad o C) que transmiten a los tractos anterolaterales de la médula espinal (más una proyección vagal menor) y entonces al tálamo, y prosencéfalo incluyendo las cortezas insulares y cíngulas. Es crucial para la percepción del dolor que se origina en la patología del intestino la descarga de los mensajes del dolor desde el intestino al sistema nervioso central a través de las fibras aferentes primarias extrínsecas que viajan en haces nerviosas aferentes mesentéricos.
En el sistema de la invención en la presente, los cambios en la motilidad y en el dolor, son las salidas leídas como alteraciones en los patrones de la motilidad (por ejemplo, PPr, velocidad MMC y/o frecuencia MMC) o las amplitudes de la contracción o tráfico espinal creciente del nervio mesentérico aferente para las partes específicas y seleccionadas del intestino.
Ha estado sorprendiendo encontrar esos diferentes agentes que pueden promover el mezclado en una parte del tracto Gl y la propulsión en otra parte, o no tiene ningún efecto en todos, y la influencia de los sistemas de señalización del dolor en una porción , pero no en otra parte del tracto Gl, y a traves de diferentes trayectorias de los nervios como el dolor vagal o visceral a través del ganglio de raíz dorsal. Tal especificidad regional exacta destaca la energ ía y la especificidad de nuestro método en la valoración de los efectos de las moléculas de prueba.
Es por lo tanto un objetivo de la presente invención encontrar agentes convenientes para el tratamiento, la prevención o la modulación específica de los trastornos de motilidad específica, usando el modelo en la presente.
Las dos etapas en el método presentado proporcionarán datos en la motilidad gastromtestinal y la descarga nerviosa aferente mesentérica. Analizando estos parámetros dará lugar a un método para seleccionar los agentes efectivos en el tratamiento de un trastorno intestinal de la motilidad. Así, el análisis del efecto de un agente en la etapa a) y en la etapa b) de los métodos proporcionados se usa para determinar si el agente es efectivo para el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal.
Los parámetros preferidos que se medirán en la etapa a) son frecuencia de MMC y/o velocidad de MMC y esto se hace
convenientemente por medio de un mapa ST el cual se genera preferiblemente por de imagen de video, por ejemplo, usando una grabación de video, y comprende preferiblemente un patrón de bandas alternativas tonalidades obscuras y claras que contiene 3 conjuntos de información : posición a lo largo del intestino
(ordenada), de tiempo (abscisa) y de diámetro del intestino (aplicado o eje-z). Usando estas variables, el mapa espaciotemporal puede convertirse en una motilidad de "huella digital" cuya sensibilidad es importante en definir los efectos detallados y matizados que las cepas probióticas específicas y otros agentes tienen en motilidad y en la capacidad de distinguir entre ellas.
Otros parámetros preferidos que se medirán en la etapa a) son presión intraluminal, particularmente en la presión pico intraluminal (PPr, por sus siglas en ingles). Otros parámetros, por ejemplo, según se describió en los ejemplos, se pueden medir opcionalmente desde el mapa de ST y en la etapa a) del método.
Un parámetro preferido que se medirá en la etapa b) son las frecuencias de descarga espontáneas de los haces nerviosas aferentes mesentéricos. Esta téenica se puede usar para determinar cambios en la excitabilidad de las fibras nerviosas mesentéricas inducidas por diferentes tratamientos.
Analizando uno o más de estos parámetros dará lugar a un método para seleccionar los agentes efectivos en trastornos de motilidad. Los métodos apropiados y los aparatos para generar el
mapa de ST y medir estos parámetros se describen en los ejemplos y las figuras experimentales.
Por lo tanto, en metodos preferidos, las dos etapas en el método presentado proporcionarán datos en la presión pico intraluminal (PPr), frecuencia de MMC, velocidad de MMC y las frecuencias de descarga espontáneas de los haces nerviosas aferentes mesentéricos. Analizando todos estos parámetros dará lugar a un método preferido para seleccionar los agentes efectivos en trastornos de motilidad .
Los métodos de la invención se pueden usar para encontrar agentes convenientes para diferentes trastornos de motilidad. Los agentes se eligen para afectar la velocidad de MMC y/o la frecuencia de MMC y/o PPr y la frecuencia de descarga nerviosa del paciente de una manera beneficiosa para influenciar, prevenir o tratar el desorden de motilidad.
La etapa a) del método usa el mapeo de ST (análisis de ST) de un segmento gastromtestinal para analizar el efecto de un agente en la motilidad gastrointestinal. Para hacer esto, preferiblemente se miden la frecuencia de MMC y/o la velocidad de MMC usando el mapa de ST. El mapa de ST muestra convenientemente las imágenes de las bandas MC de las cuales se pueden medir la frecuencia y la velocidad, por ejemplo según se describe en los ejemplos experimentales. Además, preferiblemente la presión intraluminal y, más preferiblemente, la presión pico intraluminal (PPr, por sus siglas en inglés) se mide
dentro del segmento gastromtestinal.
El segmento gastrointestinal para uso en los metodos de la presente invención puede ser desde cualquier parte apropiada del tracto gastrointestinal, por ejemplo, puede ser un segmento del intestino delgado (por ejemplo, ycyuno) o desde el intestino grueso (por ejemplo, colón). Los segmentos apropiados para la etapa b) del método requerirán la presencia de un haz nervioso apropiado para permitir la medición de la descarga nerviosa aferente mesentérico. Esto se puede proporcionar convenientemente teniendo un segmento gastrointestinal con el tejido mesentérico unido, por ejemplo, según se describe en los ejemplos experimentales. Por lo tanto, los métodos de la invención se realizan convenientemente en los segmentos ex vivo de un animal experimental apropiado, por ejemplo, en segmentos gastrointestinales de ratón (por ejemplo, segmentos de colón de o yeyuno). Asombrosamente, los métodos de la presente invención pueden detectar diferencias en la acción del mismo agente en ambos tipos de sección intestinal. La capacidad para realizar una comparación del efecto de un agente en el intestino grueso contra el intestino delgado podría ser ventajosa, particularmente como, dependiendo en el trastorno de motilidad intestinal que se tratará y la etapa clínica y los síntomas de los mismos, un tratamiento que es de región-específica, por ejemplo, específico para el intestino delgado o grueso puede ser beneficioso.
Los cambios en la motilidad gastrointestinal inducidos por
un agente se pueden detectar como leído en la etapa a) del metodo, por ejemplo, como una alteración en las amplitudes del patrón o de la contracción de la motilidad. Algunos agentes no tendrán ningún efecto para nada. Un agente que puede aumentar la motilidad gastromtestinal, por ejemplo aumentando la frecuencia de MMC y/o la velocidad de M MC y/o la presión intraluminal, como, PPr probablemente sea útil para tratar los trastornos en los cuales sería ventajoso aumentar la motilidad propulsiva a lo largo del tubo digestivo, como, el estreñimiento y el cólico. Si un agente se muestra para reducir o para no cambiar significativamente la motilidad gastrointestinal, por ejemplo, reduciendo o no cambiando significativamente la frecuencia de MMC y/o la velocidad de MMC y/o lapresión intraluminal, como, PPr, entonces dicho agente será poco útil para tratar tales trastornos y no será seleccionado, particularmente si existe una reducción o ningún cambio significativo en todos los parámetros medidos. Sin embargo, un agente que puede dar lugar a una reducción en la motilidad gastrointestinal, por ejemplo, reduciendo uno o más de la frecuencia de MMC y/o de la velocidad de MMC y/o de la presión intraluminal, como, PPr, será probablemente útil tratar los trastornos en los cuales sería ventajoso disminuir la motilidad propulsiva a lo largo del tubo digestivo, como I BS o diarrea.
Un aumento en la motilidad gastrointestinal, por ejemplo, un aumento en la frecuencia de MMC y/o en la velocidad de MMC y/o
en la presión intraluminal, como, PPr en un segmento del intestino grueso, por un agente en los metodos de la invención es particularmente preferido seleccionar un agente para uso en el tratamiento del estreñimiento o cólico.
La etapa b) de los métodos de la invención analiza el efecto de un agente en el haz nervioso aferente mesentérico (señalización de dolor) y, por lo tanto, se puede usar así como lectura para el dolor, es decir, sí o no un agente es propenso a tener un efecto en el dolor, por ejemplo, dolor visceral. Un aumento o sin efecto significativo en la descarga nerviosa aferente es indicativo de un agente que es probable que resulte en un aumento en el dolor, o sin ningún efecto significante en el dolor, respectivamente, mientras una disminución en la descarga nerviosa aferente sea indicativo de un agente que reducirá el dolor. Los agentes preferidos son, por lo tanto, aquellos que resultan en una disminución en la descarga nerviosa aferente, por ejemplo, una disminución de la frecuencia de descarga espontánea de los haces nerviosas aferentes. Alternativamente, un agente que resulta en ningún cambio significativo en la descarga nerviosa se puede seleccionar si la cepa muestra propiedades ventajosas según se midió por la etapa a) del método.
El agente que se probará se agrega al segmento gastromtestinal elegido de cualquier manera apropiada. Convenientemente, los agentes se agregan al espacio intraluminal
del segmento, es decir, se aplican intraluminalmente. Para analizar el efecto del agente en motilidad (en la etapa a) o señalar el dolor (en la etapa b), las etapas se realizan convenientemente en presencia y en ausencia del agente. Por ejemplo, las etapas a) y b) se llevan a cabo antes y despues de se aplica el agente. Por lo tanto, en tales métodos el efecto del agente se compara con un control apropiado, por ejemplo, los resultados en presencia del agente de prueba se comparan con los resultados en ausencia de un agente de prueba, por ejemplo, los resultados con el amortiguador solo en comparación con el amortiguador más el agente (por ejemplo, amortiguador más una cepa bacteriana).
Por lo tanto, en incluso otro aspecto de la invención proporciona un agente seleccionado por los métodos de la invención. Un agente preferido es un microorganismo, más preferiblemente una cepa bacteriana, preferiblemente una cepa bacteriana probiótica. Los agentes seleccionados por los métodos de la invención pueden tomar la forma de un compuesto o una composición farmacéutica o un compuesto o una composición alimenticia.
Según se describe anteriormente, dependiendo del trastorno de la motilidad el cual se desea tratar, los criterios de selección variarán. Por ejemplo, si el trastorno de la motilidad intestinal es uno en el cual se desea reducir el tiempo de tránsito del material a través del intestino (o aumentar el motilidad propulsiva a lo
largo del tubo digestivo), por ejemplo, estreñimiento, regurgitación o cólico, entonces en la etapa a) del metodo, un agente de interés actuará para aumentar la motilidad gastromtestinal, por ejemplo, aumentando la frecuencia de MMC o la velocidad de MMC o la presión intraluminal (por ejemplo, PPr). Los agentes preferidos aumentarán dos o más de estos parámetros, por ejemplo, aumentarán la frecuencia de MMC y velocidad de MMC o aumentarán la frecuencia de MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr), o aumentarán la velocidad MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr). La mayoría de los agentes preferidos aumentarán todos estos parámetros, por ejemplo, aumentarán la frecuencia de MMC, la velocidad de M MC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr). La etapa a) del método se puede determinar en un segmento gastrointestinal apropiado del intestino delgado o grueso, por ejemplo, un segmento jejunal para el intestino delgado o un segmento del colón para el intestino grueso. En algunas modalidades, se prefiere el uso del intestino grueso, por ejemplo, segmentos del colón.
Para el tratamiento de tales trastornos, un agente será seleccionado, el cual no efectuará o ni aumentará la señalización de dolor, o actuará preferiblemente para disminuir la señalización de dolor. En la etapa b) del método tales agentes no tendrán ningún efecto ni actuarán preferiblemente para reducir o para disminuir el haz nervioso aferente mesentérico. El agente
preferiblemente no tendrá ningún efecto en ni actuará preferiblemente para reducir las frecuencias de descarga espontáneas de los haces nerviosas aferentes mesentericos. La etapa b) del método se puede determinar en cualquier segmento gastromtestinal apropiado del intestino delgado o grueso, por ejemplo, un segmento de ycyuno para el intestino delgado o un segmento del colón para el intestino grueso. En algunas modalidades, el uso del intestino delgado, por ejemplo, se prefieren segmentos de yeyuno.
Usando el método de la presente invención, los inventores han seleccionado una nueva cepa bacteriana, Lactobacillus gasseri 345A (LG345A), que ha mostrado aumentar la motilidad gatrointestinal de modo que se muestra el aumento de la frecuencia de MMC, la velocidad de MMC y la presión pico intraluminal. Esta cepa también ha probado disminuir la señalización de dolor disminuyendo la descarga nerviosa aferente mesentérica (disminuyendo la frecuencia de la descarga del haz nervioso aferente mesentérico). Esta cepa bacteriana aislada (y otras cepas, por ejemplo, las cepas L. gasseri, con las características, por ejemplo, la capacidad de inducir los efectos antes mencionados en la motilidad gastrointestinal y la señalización de dolor, de esta cepa depositada) forma un aspecto preferido de la invención y se puede usar para tratar los trastornos de motilidad intestinal, particularmente aquellos en los cuales se desee para reducir el tiempo de tránsito del material a
traves del intestino. Así, las condiciones preferidas que se tratarán con esta cepa son estreñimiento o cólico. Las cepas, por ejemplo, las cepas L. gasseri, las cuales pueden aumentar la motilidad gatromtestinal teniendo la capacidad de aumentar cada frecuencia de MMC, velocidad de M MC y presión pico intraluminal, y que puede disminuir la señalización de dolor, por ejemplo, teniendo una capacidad de para disminuir la descarga nerviosa aferente mesentérica (por ejemplo, disminuyendo la frecuencia de descarga de los haces nerviosas aferentes mesentéricos) de la presente invención.
Alternativamente, si por ejemplo, el trastorno de la motilidad intestinal para tratamiento es uno en el cual se desea aumentar el tiempo de tránsito del material a través del intestino (por ejemplo, trastornos que implican tránsito de paso rápido), por ejemplo, I BS o diarrea, entonces en la etapa a) del método, un agente de interés actuará para disminuir la motilidad gastrointestinal, por ejemplo, disminuyendo la frecuencia de M MC o la velocidad de M MC o presión intraluminal, por ejemplo, PPr. Loa agentes preferidos disminuirán por lo menos la velocidad de M MC. Los agentes preferidos disminuirán dos o más de estos parámetros, por ejemplo, disminuirán la velocidad de MMC y la frecuencia de MMC o disminuirán la frecuencia de MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr) o disminuirán la velocidad MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr). La mayoría de los agentes preferidos disminuirán todos estos parámetros, por ejemplo,
disminuirán la frecuencia de MMC, la velocidad de MMC y la presión intraluminal (por ejemplo, PPr). La etapa a) del metodo se puede determinar en un segmento gastromtestinal apropiado del intestino delgado o grueso, por ejemplo un segmento jejunal para el intestino delgado o un segmento de colón para el intestino grueso. En algunas modalidades, el uso del intestino grueso, por ejemplo, se prefiere segmentos, colón .
Para el tratamiento de tales trastornos, un agente será seleccionado, el cual no tiene efecto ni aumenta la señalización de dolor, o actúa preferiblemente para disminuir la señalización de dolor. En la etapa b) del método tales agentes no tendrán ningún efecto ni actuarán preferiblemente para reducir o para disminuir la descarga nerviosa aferente mesentérica. El agente preferiblemente no tendrá ningún efecto en, ni actuará preferiblemente para reducir las frecuencias de descarga espontáneas de los haces nerviosas aferentes mesentéricos. La etapa b) del método se puede determinar en un segmento gastrointestinal apropiado del intestino delgado o grueso, por ejemplo un segmento jejunal para el intestino delgado o un segmento de colón para el intestino grueso. En algunas modalidades, el uso del intestino delgado, por ejemplo, se prefiere ycyuno, segmentos.
Usando el método de la presente invención, los inventores han seleccionado una nueva cepa, Lactobacillus gasseri 621 A (LG621 A), ha probado disminuir la motilidad gastrointestinal al
mostrar la disminución de la velocidad de MMC y que no tiene ningún efecto en la frecuencia de MMC o en la presión pico intraluminal. Esta cepa tambien ha mostrada que aumenta la señalización al dolor disminuyendo la descarga nerviosa aferente mesentérica (disminuyendo la frecuencia de la descarga de los haces aferentes mesentéricos). Esta cepa bacteriana aislada (y otras cepas, por ejemplo, las cepas L gasseri, con las características, por ejemplo, la capacidad de inducir los efectos antes mencionados en la motilidad gastromtestinal y la señalización de dolor, de esta cepa depositada) forma un aspecto preferido de la invención y se puede usar para tratar los trastornos de motilidad intestinal, particularmente aquellos en los cuales se desee aumentar el tiempo de tránsito del material a través del intestino (por ejemplo, trastornos que implican paso de tránsito rápido). Así, las condiciones preferidas que se tratarán con esta cepa son I BS o diarrea. Las cepas, por ejemplo, las cepas L gasseri, las cuales pueden disminuir la motilidad gatrointestinal, por ejemplo, teniendo la capacidad de disminuir uno o más de la frecuencia de MMC, de la velocidad de M MC y de la presión pico intraluminal (preferiblemente la velocidad de MMC), y la cual puede disminuir la señalización de dolor, por ejemplo, teniendo una capacidad de disminuir la descarga nerviosa aferente mesentérica (por ejemplo, disminuyendo la frecuencia de los haces nerviosas aferentes mesentéricos) de la presente invención.
Está claro con referencia a lo antes mencionado, que los metodos de la invención se pueden también usar para seleccionar o para identificar los agentes que no son apropiados para el tratamiento de los trastornos de motilidad intestinal, por ejemplo, los agentes que no muestran ningún efecto en uno o más, o dos o más, o los tres de velocidad de MMC o frecuencia de MMC o presión intraluminal pueden no ser convenientes para uso en el tratamiento de los trastornos de motilidad intestinal, especialmente si tales agentes no tienen un efecto beneficioso en la reducción de la señalización del dolor. Particularmente esos agentes que no muestran ningún efecto en cualquiera de estos parámetros son poco probables a ser convenientes para el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal. Además, esos agentes que tienen un efecto de aumentar la señalización de dolor según se midió mediante un aumento en la descarga nerviosa aferente mesentérica en la etapa b) del método son poco probables para ser convenientes en el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal.
Por lo tanto, incluso otro aspecto preferido de la invención proporciona un agente, preferiblemente una cepa bacteriana, seleccionada por el método de la invención para uso en terapia, más particularmente para uso en el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal, como ésos descritos en la presente. Los trastornos de motilidad intestinal apropiados que se tratarán se describen en otro sitio en la presente. Los trastornos de
motilidad intestinal preferidos que se tratarán por los agentes o por las cepas bacterianas de la invención son aquellos en los cuales se desea reducir el tiempo de tránsito del material a traves del intestino, por ejemplo cólico, regurgitación o estreñimiento. Otros trastornos de motilidad intestinal preferidos son aquellos en los cuales se desea aumentar el tiempo de tránsito del material a través del intestino, por ejemplo IBS o diarrea.
Los métodos para tratamiento de un sujeto con un trastorno de motilidad intestinal también se proporcionan por la presente invención, dichos métodos comprenden la administración de un agente, preferiblemente una cepa bacteriana, seleccionada por el método de la invención , a dicho sujeto en una cantidad efectiva para tratar dicho trastorno de motilidad intestinal.
Los métodos para el tratamiento de un sujeto con un trastorno de motilidad intestinal también se proporcionan por la presente invención, dichos métodos comprenden la administración de una cepa bacteriana de la invención a dicho sujeto en una cantidad efectiva para tratar el trastorno de motilidad intestinal. Las cepas preferidas son LG345A o LG621 A para el tratamiento de los trastornos de motilidad intestinal según se describe en otro sitio en la presente.
Los trastornos de motilidad intestinal preferidos y otras características preferidas están según se describen en otro sitio en la presente para otros aspectos de la invención.
También se proporciona por la presente invención el uso de
un agente, preferiblemente una cepa bacteriana, seleccionada por el metodo de la invención, en la fabricación de una composición o de un medicamento para uso en el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal.
También proporcionado por la presente invención está el uso de una cepa bacteriana de la invención, en la fabricación de una composición o de un medicamento para uso en el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal. Las cepas preferidas son LG345A o LG621 A para el tratamiento de los trastornos de motilidad intestinal según lo descrito en otro sitio en la presente.
Los trastornos de motilidad intestinal preferidos y otras características preferidas son según se describen en otro sitio en la presente para otros aspectos de la invención .
En los métodos y en los usos de la presente invención descritos en la presente, los términos "aumentar", "disminuir", " reducir", etcétera, se refieren a un cambio mensurable en niveles, preferiblemente un cambio significativo en niveles, más preferiblemente un cambio estadísticamente significativo, preferiblemente con un valor de probabilidad de <0.05.
Los sujetos preferidos para el tratamiento que usan los métodos de la invención son mamíferos, más preferiblemente humanos. Donde el trastorno de motilidad intestinal que se tratará es el estreñimiento por lo que los sujetos preferidos son pacientes adultos mayores o mujeres embarazadas. Un paciente adulto mayor generalmente entenderá que es un paciente adulto
mayor por ser un paciente de 70 años o más. Donde el trastorno de motilidad intestinal que se tratará es cólico, preferiblemente este es un cólico infantil.
Incluso un aspecto adicional de la invención proporciona un producto que comprende a los agentes o a las cepas de la invención (por ejemplo, agentes o cepas seleccionadas por los metodos de la invención) para usos terapéuticos según se define en otro sitio en la presente, donde dicho uso adicionalmente comprende la administración de por lo menos un agente terapéutico o alimenticio adicional. En dichas modalidades, el agente terapéutico adicional puede ser cualquier agente adicional que sea útil en el tratamiento del trastorno de la motilidad intestinal en cuestión. El agente nutricional adicional puede ser cualquier componente alimenticio apropiado, por ejemplo, un producto alimenticio o un suplemento del alimento.
Dichos agentes adicionales se pueden administrar junto con el agente o la cepa de la invención (por ejemplo, como una composición) o se pueden administrar por separado. Además, dichos agentes adicionales se pueden administrar al mismo tiempo que el agente o la cepa de la invención o en diferentes puntos de tiempo. Los regímenes y las sincronizaciones de administración convenientes se pueden determinar fácilmente por el experto en la téenica dependiendo del agente adicional en cuestión.
La presente invención también proporciona una composición
que comprende:
(i) un agente, preferiblemente una cepa bacteriana, obtenible mediante el metodo de selección de la invención, o una cepa bacteriana de la invención según se define de otra manera en la presente; y
(ii) por lo menos un componente adicional seleccionado del grupo que consiste de un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable, un producto alimenticio o un suplemento alimenticio, u otro agente terapéutico o agente nutricional. Por lo tanto, dichas composiciones se pueden formular como composiciones farmacéuticas o como composiciones nutricionales, por ejemplo, como, producto alimenticio.
Los usos terapéuticos de los agentes, de las cepas y de las composiciones de la invención según se define en la presente incluyen la reducción, la prevención o el alivio del trastorno o de los síntomas relevantes del trastorno (por ejemplo, puede resultar en la modulación de los síntomas de la enfermedad). Tal reducción, a prevención o alivio de un trastorno o de los síntomas de los mismos se pueden medir por cualquier ensayo apropiado. Preferiblemente la reducción o el aligeramiento de un trastorno o de los síntomas son estadísticamente significativos, preferiblemente con un valor de probabilidad de <0.05. Tal reducción o alivio de un trastorno o de los síntomas generalmente se determinan comparados con un individuo o una población de
control apropiado, por ejemplo, un sujeto sano o sujeto no tratado o sujeto tratado con placebo.
Un modo apropiado de administración y de formulación de los agentes, cepas, composiciones, etcetera, se eligen dependiendo del sitio de la enfermedad . Un modo preferido de administración es la vía oral, sin embargo, igualmente sería apropiado para algunos tratamientos los intravenosos o la inyección intramuscular.
Las dosis apropiadas de los agentes, de las cepas y de las composiciones de la invención según se define en la presente puede elegirse o determinarse fácilmente por un experto en la téenica dependiendo del trastorno que se tratará, del modo de administración y de la formulación referida.
Según se describió anteriormente, usando la invención en la presente los inventores han obtenido dos nuevas cepas, Lactobacillus gasseri 345A del y Lactobacillus gasseri 621 A. Estas cepas se han depositado en DSMZ (Leibniz Institute DSMZ - Germán Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Brunswick, Alemania) el 18 de abril de 2013 y se han diseñado los números DSM 27123 y DSM 27126, respectivamente.
El descubrimiento de los inventores en la presente con relación a los efectos de un agente que influencia los trastornos de motilidad son en la mayoría de los casos multi-factoriales y son diferentes en varias partes del tracto Gl y, por lo tanto, tienen
que estudiarse de modo que encuentren el mejor agente para el trastorno específico, conducido con el metodo de la invención.
Por lo tanto, es un objetivo de la presente invención encontrar agentes convenientes para el tratamiento, la prevención o modulación de los trastornos de la motilidad específica, usando el modelo en la presente.
En una modalidad de la invención el objetivo es seleccionar un compuesto u otro agente, con usos potenciales como un compuesto nutricional o un farmacéutico, que sea efectivo en la prevención o para tratar el estreñimiento en humanos, especialmente adultos mayores.
En una modalidad de la invención el objetivo es seleccionar una cepa bacteriana probiótica que pueda ser eficaz en la prevención o tratamiento del estreñimiento en humanos, especialmente en sujetos adultos mayores o mujeres embarazadas.
En otra modalidad, el objetivo de la invención es seleccionar un agente, por ejemplo, una cepa probiótica, que pueda ser efectiva en la prevención o tratamiento del cólico infantil.
En otra modalidad, el objetivo de la invención es seleccionar un agente, por ejemplo, una cepa probiótica, que pueda ser efectiva en la prevención o en el tratamiento de diarrea u otros trastornos de la motilidad donde se beneficioso disminuir la velocidad y de tal modo aumentar tiempo de tránsito.
En una modalidad de la invención el objetivo es seleccionar
un agente, por ejemplo, una cepa probiótica, que pueda ser efectiva en síntomas que tratan o que modulan los síntomas del síndrome de intestino irritable (I BS, por sus siglas en ingles). Tal agente se selecciona para aumentar el tiempo de tránsito, preferiblemente sin causar ningún dolor y reducir preferiblemente el dolor.
En otra modalidad, el objetivo de la invención es seleccionar un agente, por ejemplo, una cepa probiótica, que puede ser efectiva en la prevención de la incontinencia fecal.
En incluso otra modalidad, el objetivo de la invención es para seleccionar un agente, por ejemplo, una cepa probiótica, que puede ser efectiva para aumentar el mezclado en el intestino delgado y grueso sin causar ningún dolor y preferiblemente la reducción de dolor, para facilitar o dar lugar a una absorción alimenticia mejor en un sujeto, especialmente en adultos mayores.
Los siguientes son algunos ejemplos de la invención , que no significan que se limitan al uso de la invención en la presente pero muestran ejemplos prácticos en detalle de cómo la invención se puede usar. El ejemplo 1 se relaciona con la descripción del complemento del software de mapeo espaciotemporal (Mapa de St) y el ejemplo 2 se relaciona con las etapas de la selección de los agentes efectivos y del ejemplo 3 con una selección de agentes para un trastorno de motilidad específico.
EJEMPLO 1
Descripción del complemento del Mapa de St para el software N 1H ImageJ ;
ImageJ es un programa de procesamiento de imagen de dominio público Java inspirado por N 1H Image para Macintosh. Este funciona, como un subprograma en línea o como una aplicación descargable, en cualquier computadora con una Java 1 .4 o con la última máquma virtual. Las distribuciones descargables están disponibles para Windows, Mac OS, Mac OS X y Linux.
ImageJ se diseñó con una arquitectura abierta que proporciona extensibilidad a traves de los complementos de Java. La adquisición del sistema, análisis y complementos del procesamiento se pueden desarrollar usando la construcción de ImageJ's en el editor y en el recopilador de Java. Los complementos escritos del usuario permiten solucionar casi cualquier problema del proceso o del análisis de la imagen .
Desarrollamos el complemento después de la descripción del software disponible en (http://rsbweb.nih.gov) (National Institutes of Health (N I H , por sus siglas en inglés), 9000 Rockville Pike, Bethesda, Maryland, USA) de acuerdo con los detalles en la figura 6.
Posición ROI para la "Región de Interés"
EJ EM PLO 2
Selección de agentes efectivos en trastornos de motilidad. Esta selección comprende un método de dos etapas. La
primera etapa usa simulación de registros de cambios de presión intraluminal en adición de la grabación de video y de los mapas espaciotemporal. La segunda etapa es un análisis de señalamiento del nervio.
Todos los agentes se comparan con un control y los agentes no se comparan entre sí, esto darán lugar a una gráfica por agente probado.
Primera etapa, análisis espaciotemporal
Utilizamos ratones adultos machos suizos Webster (20-30 g) comprados de los Charles River Laboratories (Wilmington, MA, USA). Los ratones se sacrificaron por dislocación cervical, en línea con las pautas de McMaster para el uso y el cuidado de animales. Todos los procedimientos efectuados fueron ex vivo. Registros de Motilidad del Baño de Órgano
Los segmentos de colón distal o jejunal largo de 4 cm se removieron y los contenidos permitieron vaciar, mediante chorro de agua, el segmento con una solución salina Krebs una presión principal de gravedad de 2 hPa. Cada segmento se montó en una cámara de baño de órgano de 20 mi y se sumergió en Krebs oxigenado (figura 1 A). Los extremos orales y anales se canularon, y el lumen se perfusionó por gravedad con (95% 02 y 5% de CO2)— Krebs gaseado usando varias botellas de Mariotte. El compartimiento intraluminal se perfusionó en 0.5 ml/min con amortiguador a temperatura ambiente (de 19 a 22°C). La cámara del órgano (cámara serosal) se prefusionó con la solución Krebs,
gaseada con carbógeno, pre-calentada (34°C), en un una relación de (5 ml/min). El amortiguador oxigenado Krebs fue de la siguiente composición (mM): 1 18 NaCI, 4.8 KC1 , 25 NaHCO3 1 .0 NaH2P04, 1 .2 MgSO4, 1 1.1 de glucosa, y 2.5 de CaCI2 5 burbujeante con el gas carbógeno (95% 02 y 5% CO2). Al principio del experimento, la presión intraluminal se ajustó a 3 hPa y los registros se hicieron a esta presión de relleno. Las bacterias se aplicaron al cambiar la afluencia oral del luminal de las botellas de Marriotte que contenían Krebs a unas que ío contenían Krebs más bacterias al cerrar y al abrir las llaves de paso apropiadas, según se ilustra en la figura 1 A. Los cambios de presión intraluminal se midieron en el punto medio del eje longitudinal del segmento del intestino. La señal de presión se amplificó, digitalizó, almacenó en una computadora y se analizó 15 fuera de línea usando el software PCIamp 9 (Dispositivos
Moleculares, Sunny Vale, USA).
Las imágenes se registraron usando una cámara de video (Cámara de video JVC Everio de Disco Duro Modelo GZ-MG 155U) la cual se colocó 10 centímetros sobre un segmento del intestino 0 (figura 1 A). La grabación se inició en sincronización con el registro de la presión usando un campo visual de 8 a 12 cm para la duración del experimento. La salida de la cámara fue en un formato de video original (MOD) a 30 marcos por segundo (fps). 10 min de videoclips largos fueron removidos del archivo MOD
25 usando el software de edición de vídeo (Avidemux versión 2.5.0,
software de fuente Abierta disponible en www.avidemux.org). Los clips entonces fueron convertidos en el formato de MOV usando un convertidor de video (Convertidor Zuñe versión 1.1 , software de código abierto disponible en http://ffmpeg.mplayerhq.hu). Los 5 videoclips finales se remuestrearon en una resolución de 384 x 256 pixeles y de 25 fps.
Las grabaciones de video se analizaron usando el software de procesamiento de imagen en lugar (StMap, ver ejemplo 1 ) desarrollado como un complemento para ImageJ N 1H (versión ío 1 .43c, software de código abierto disponible en http://rsbweb.nih.gov/ij/). El software convierte la imagen (1 B) en cada marco del vídeo en una silueta blanca y negra (1 C) y genera un mapa espaciotemporal usando una rutina de detección del borde. La primera rutina mide el diámetro en cada posición a lo ís largo del intestino y entonces representa el diámetro físico en cada posición como un valor de tonalidad (tiene un intervalo de 0- 255, negro a blanco). Mientras el diámetro del intestino disminuye durante las contracciones, el valor de la tonalidad se reduce hacia 0 y será mostrado hacia valores más oscuros. 20 Mientras el software lee a traves de cada clip de 10 minutos, éste genera un mapa espaciotemporal - un patrón de bandas que alternan las tonalidades claras y oscuras que contiene 3 conjuntos de información: posición a lo largo del intestino
(ordenada), tiempo (abscisa) y diámetro del intestino
25 (subprograma o eje-z) (figura 1 D). Usando estas variables, el
mapa espaciotemporal se convierte en un motilidad "huella digital" cuya sensibilidad es críticamente importante al definir los efectos detallados y matizados que las cepas probióticas específicas y otros agentes tienen en la motilidad y la capacidad de distinguir entre ellos.
Puesto que las medidas del diámetro del Mapa de St cambian en cada posición , el Mapa de St se puede interpretar como una pila de numerosos diámetros 2D contra las gráficas de tiempo. De hecho, para el mapa, si la localización del transductor de presión fuera identificada (línea punteada en la figura 2A) y se mostraran como una gráfica de tiempo contra escala de grises (Figura 2B), esta gráfica estaría en registro con la presión simultáneamente registrada contra la grabación de tiempo en ese lugar (Figura 2C).
Los parámetros de la motilidad se midieron directamente desde el mapa espaciotemporal usando el complemento del Mapa de St. En este sistema podemos probar (usando el silencioador de neurona tetrodotoxina) si las contracciones dependen del sistema nervioso enterico o son miogénicas (conducidas por las contracciones rítmicas del músculo pero independientes de la neurona) El complejo motor migrante MC, la propagación anal, y lo generado neuralmente generó bandas oscuras gruesas que se inclinan diagonalmente de izquierda a derecha; la velocidad de propagación (mm s 1) se mide desde las pendientes de cada banda (figura 3). Para cada tratamiento, las pendientes de 3-5
MCs sucesivas se promediaron para calcular la velocidad de propagación. La frecuencia MC (mHz) se calibró contando la cantidad de bandas oscuras de MC durante un segmento de 10 min. La amplitud de MC se midió directamente desde el diámetro de la línea base (figura 2B) o de la presión (figura 2C) al siguiente pico con 3 valores que se promediaron para cada tratamiento. El índice del cambio del diámetro (cm/s) se calculó a partir del tiempo tomado para el diámetro para contraer al máximo desde la línea de base (retroceso de MC en la (figura 2B).
Agentes que se probarán
Lactobacillus Rhamnosus (JB-1 ), Lactobacillus reuteri (DSM 17938),
Lactobacillus reuteri ATCC PTA 6475 Lactobacillus gasseri 345A (DSM 27123), Lactobacillus gasseri 621 A (DSM 27126) Lactobacillus gasseri TI y Lactobacillus gasseri T2 fueron todos probados en la primera etapa de los metodos de la invención.
Las cantidades de célula se determinaron ópticamente y la viabilidad siempre se comprobó por la capacidad de crecimiento después de platear en las placas de agar de crecimiento medio. Las células de acción congelada se deshelaron y se centrifugaron en 2000 rpm durante 15 minutos, y el gránulo se suspendió en un volumen igual del amortiguador Krebs. Entonces la suspensión se centrifugó nuevamente, y las células e retiraron y se volvieron a suspender en Krebs a una concentración original. Justo antes de usarse, las bacterias se diluyeron a concentraciones de
trabajo con el amortiguador Krebs fresco.
Las bacterias que contienen Krebs se alimentaron en el compartimiento intraluminal mientras los fármacos que modulan el canal iónico agregados al amortiguador Krebs perfusionando el 5 compartimiento de serosidad que fluye desde la llave a la cámara de registro fue de 30 s. El bloqueador del canal iónico IKCa 1 -[(2- clorofenil)difenilmetil]-1 H-pirazol (TRAM-34) (Tocris Bioscience, Ellisville, MO, USA) se disolvió con sulfóxido de dimetilo (DMSO, por sus siglas en ingles) para hacer la solución común de 10 mM, ío y éstos se diluyeron en Krebs oxigenado para hacer las concentraciones de trabajo durante 30 minutos antes de usarse. El abridor de cañar I KCa, 5,6-dicloro-1 -etil-2-benzimidazolinona (DCEBIO, pro sus siglas en inglés) (Tocris) se disolvió en DMSO para hacer 10-mM de la solución común ; la concentración de 13 trabajo final en el amortiguador Krebs fue de 0.1 o 1 pm.
Los agentes se analizaron de acuerdo con la etapa presentada 1 arriba y los resultados se muestran en la figura 7. Estadísticas
Las estadísticas se calcularon usando el GraphPad Prism 20 5.0 (software de GraphPad, San Diego, CA, USA). Se proporcionan las estadísticas descriptivas con significado ± SD, pero en diagramas de respuesta de concentración, se exhiben los errores de muestreo usando SEM ; el tamaño de la muestra es denota por n. La diferencia estadísticamente discernible para las
25 pruebas de significación se fijaron en P = 0.05; todas las pruebas
fueron 2 colas.
Segunda etapa el análisis de señalización del nervio
Todos los procedimientos adheridos al Consejo Canadiense sobre las pautas del Cuidado Animal y fueron aprobados por el Animal Research Ethics Board of McMaster University (Permiso # 08-08-35).
Registros extracelulares
Ratones adultos machos suizos Webster (20-30 g) fue se procuraron de los Charles River Laboratories (Wilmington , MA, USA). Los ratones se sacrificaron por dislocación cervical. Todos los procedimientos que surgieron fueron ex vivo. Los segmentos de ycyuno distal removidos (-2.5 cm) con el tejido mesenterico unido se eliminaron de los animales sacrificados (figura 4) y colocados inmediatamente en un plato Petri de registro recubierto con Sylgard relleno con Krebs de la siguiente composición (mM): 1 18 NaCI, 4.8 KC1 , 25 NaHCOg, 1 .0 NaH2P04, 1.2 MgS04, 1 1.1 glucosa y 2.5 CaC 12 burbujeante con carbógeno (95% 02/5% C02). Los extremos orales y anales del segmento del intestino se canularon con tubería de plástico y se vaciaron suavemente usando una jeringa unida llenada con el amortiguador Krebs oxigenado; entonces, el segmento y el tejido mesentérico se sometieron y el haz nervioso mesentérico se aíslo mediante la disección cuidadosa debajo de un microscopio estéreo (figura 5) según se describió por Barbara et al. (Gastroenterology, Volumen 132, Edición 1 , páginas 26-37, enero 2007). La preparación fue
transferida a un microscopio invertido y la gravedad del lumen perfusionada en 0.5-lml/min a temperatura ambiente (~22°C) Krebs oxigenado y/o aditivos usando varias botellas de Mariotte. El compartimento de serosidad fue se perfusionó por separado con una solución de Krebs precalentada (34°C) durante 3-5 ml/min. El haz nervioso se impulsó suavemente mediante la succión en una pipeta de cristal unida a un sujetador de electrodo patch-clamp (CV-7B; Molecular Devices, Sunnyvale, California, USA) y se hicieron registros de nervios extracelulares usando un convertidor de señal Digidata 1440A y el amplicador Multi-Clamp 700B (Dispositivos Moleculares). Las señales electricas se filtraron mediante la banda de paso de 0.1 a 2 kHz, muestreadas en 20 kHz y almacenadas en un computadora personal que funciona con el software pClamp 10 (Dispositivos Moleculares) para el análisis post-hoc.
Vagotomía
Para algunos experimentos, una vagotomía subdiafragmática se realizó según se describió descrito previamente (van der Kleij H . , Am J Physiol Regul I ntegr Comp Physiol 295: 1 131 -1 137, 2008)). Los animales se dejaron recuperar durante 10-14 días antes de cosechar el ycyuno y el tejido mesentérico para los experimentos electrofisiológicos. La vagotomía simulada se realizó en 3 animales. Postoperatoriamente, el peso corporal y la salud general de los ratones fueron medidos diariamente. No encontramos ninguna evidencia de diferencias significativas en
aumento del peso 1 semana post-cirugía en animales vagotomizados o tratados de forma simulada. Todos los ratones vagotomizados fueron probados para completar el procedimiento registrando despues las respuestas de cada experimento en las aplicaciones de serosidad de colecistocinina (CCK, por sus siglas en inglés).
La vagotomía se juzga por haber sido efectiva cuando encontramos que CCK no aumentó el índice de descarga del nervio mesentérico.
Integridad de los segmentos yeyunales
Para probar la integridad de los segmentos yeyunales con respecto al desplazamiento de bacterias a través del epitelio durante un experimento, etiquetamos JB-1 con 5-(6)-carboxifluoresceína succinimidilo éster (CFSE, por sus siglas en inglés), colocados éstos en una concentración de 109/ml Krebs en el lumen y después de la incubación durante 75 minutos, se fijó el tejido en paraformaldehído, y las secciones examinadas por su presencia debajo del epitelio en la microscopía confocal (microscopía dual-láser, LSM 510, Cari Zeiss, Alemania). JB-1 fueron lavados dos veces en PBS y suspendidos en una concentración final de CFSE de 5 mM en PBS suplementado con 5% de suero de becerro fetal e incubado durante 25 minutos a 37 37°C. Los tejidos ( n = 3) se fijaron en 4% de paraformaldehído a 4°C durante la noche, después se lavaron 3 veces en PBS durante 10 minutos cada uno, seccionado en 10 y 30 miti y las
secciones transversales transferidas a las diapositivas del microscopio y montadas. Éstos fueron revisados en diapositivas ópticas por la metodolog ía de apilamiento Z.
Agentes que se probarán
Lactobacillus rhamnosus (JB-1 ), Lactobacillus reuteri (DSM 17938),
Lactobacillus Reuteri ATCC PTA 6475, Lactobacillus gasseri 345A (DSM 27123), Lactobacillus gasseri 621 A (DSM 27126), Lactobacillus gasseri TI y Lactobacillus gasseri T2 fueron todos probados en la segunda etapa de los metodos de la presente invención.
Las cantidades de células determinados ópticamente, y la viabilidad comprobada por la capacidad de crecimiento después se colocaron en placas, en placas de agar en el medio de crecimiento. El L. rhamnosus vivo creció (-80°C) 1 mi alícuotas, las cuales consistieron de células de 5x 109 en un caldo Man-Rogosa Sharpe (Difeo Laboratories, Sparks, M D, USA). Las células de las reservas congeladas se deshelaron y se centrifugaron a 2000 rpm durante 15 minutos, y e| granulo se suspendió en un volumen igual del amortiguador Krebs. La suspensión se centrífuga nuevamente, y las células se retiraron y se resuspendieron en Krebs en la concentración original. Justo antes de usarse, las células se diluyeron a concentraciones de trabajo con el amortiguador Krebs. Para algunos experimentos las bacterias fueron diluidas directamente a las concentraciones
de trabajo despues de deshelar (en caldo); las bacterias se aplicaron siempre en el lumen del segmento ycyunal. Colecistocinina (25-33) sulfatado (CCK; AnaSpec, Fremont, CA) se disolvió en DMSO para hacer un solución común de 1 mM . Las partes alícuotas fueron diluidas el día del experimento a la concentración de trabajo en el amortiguador Krebs, con concentraciones finales de DMSO <0.0001 %.
Análisis de datos fuera de línea
Las frecuencias de descarga espontáneas de una sola unidad y de múltiples unidades de los haces nerviosas aferentes mesentéricos se midieron usando Clampfit 10.2 (Dispositivos Moleculares). Ambos métodos (descarga del marcador multi-unidad y análisis de la forma de onda) de medida se usan rutinariamente para determinar cambios en la excitabilidad de las fibras nerviosas mesentéricas inducidas por diferentes tratamientos. La sincronización de marcadores multi-unidad se determinó usando el módulo de detección de pico de Clampfit, y la frecuencia promedio calculada de los intervalos marcadores. La actividad de una sola unidad se aíslo desde la actividad de la multi-unidad usando la herramienta de detección de plantilla automática de forma de marcador de Clampfit (análisis de forma de onda automatizado). Después de la detección de la plantilla, la discriminación fue comprobada siempre por inspección visual y los eventos de formas sin marcador se eliminaron (<0.2%). Los resultados se presentaron en la figura 8.
Estadísticas
Se expresan los datos que significan ±SEM con referencia n en la cantidad total de los segmentos yuyonales registrados; la cantidad máximo de segmentos registrados desde el mismo animal fue dos. La prueba de Wilcoxon se usó para las comparaciones apareadas de los datos y la prueba de Friedman con la prueba post hoc de Dunn para el análisis de medidas repetidas de variación realizado usando el software Prism 5.0 (GraphPad Software, Inc. , San Diego, CA). Debido a grandes variaciones en la actividad espontánea pueden ocurrir entre una preparación y otra actividad neuronal de multi-unidad, todas las comparaciones fueron apareadas con registros antes y despues del tratamiento hecho donde cada haz nervioso sirvió como su propio control. Las diferencias se consideraron significativas si P <. 0.05.
EJ EM PLO 3
A. Selección de los agentes bacterianos probióticos óptimos para avudar a tratar trastornos de motilidad (por ejemplo. estreñimiento en los adultos mayores) que usan las etapas definidas de la presente invención:
L. rhamnosus. (JB-1 ), Lactobacillus reuteri (DSM 17938), Lactobacillus reuteri ATCC PTA 6475, Lactobacillus gasseri 345A (DSM 27123), Lactobacillus gasseri 621 A (DSM 27126), Lactobacillus gasseri T1 y Lactobacillus gasseri T2 se analizaron de acuerdo con el ejemplo 2. Los resultados se concluyen en la tabla 1.
El L. reuteri DSM 17938 y el L. gasseri 345A aumentan la velocidad MMC en el colón y tambien aumentan por lo menos uno de los parámetros de PPr o de la frecuencia de MMC en el colón (L. reuteri DSM 17938 aumenta la frecuencia de MMC y el L. gasseri 345A aumenta el PPr). Ambas de estas cepas disminuyen la frecuencia de la descarga espontánea de los haces nerviosas aferentes mesentéricos. Por lo tanto, estas cepas se seleccionan para el tratamiento del cólico, por ejemplo, cólico infantil, puesto que estas cepas aumentan la velocidad del flujo de propagación de MC y al mismo tiempo disminuyen la frecuencia de descarga de las haces nerviosas aferente mesentérico.
El aumento en la velocidad de M MC y la disminución de la frecuencia de la descarga espontánea de los haces nerviosas aferente mesentérico causados por el L. retueri DSM 17938 y por el L. gasseri 345A los hace convenientes para el tratamiento del estreñimiento, especialmente en las mujeres embarazadas donde se desea una reducción, o en los adultos mayores.
L. rhamnosus JB-1 y L. gasseri 621 A disminuyó la velocidad de M MC. L. gasseri 621A también disminuye la frecuencia de la descarga de los haces nerviosas aferentes mesentéricos y, por lo tanto, se puede usar para el tratamiento de los trastornos que involucran el tránsito de paso rápido, por ejemplo, I BS. L. rhamnosus JB-1 no ha tenido ningún efecto en la frecuencia de descarga de los haces nerviosas aferentes mesentéricos y, por lo tanto, no es aplicable para el tratamiento de los trastornos de
motilidad.
El L. reuteri ATCC PTA 6475, L. gasseri T1 y L. gasseri T2 no muestran ningún efecto en la velocidad de MMC ni en la descarga de la frecuencia espontánea de los haces nerviosas aferente mesentericos y, por lo tanto, no se recomienda para uso en trastornos de la motilidad .
Claims (26)
1. Un método para la selección de un agente efectivo para el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal, donde el método comprende: a) una etapa de mapeo espaciotemporal (ST) llevado a cabo en un segmento gastromtestinal para analizar el efecto de dicho agente en la motilidad gastrointestinal; y b) una etapa de grabación del haz nervioso ex vivo realizado en un segmento gastrointestinal para analizar el efecto de dicho agente en la descarga del nervio aferente mesentérica.
2. El método de acuerdo con la reivindicación 1 , donde el mapeo de ST en la etapa a) se realiza por imagen de video.
3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2, donde la etapa a) comprende usar un mapa de ST para medir la frecuencia compleja del motor migratorio (MMC, por sus siglas en inglés) y/o la velocidad del complejo de motor migratorio (MMC) en dicho segmento gastrointestinal.
4. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde la etapa a) además comprende la medición de la presión intraluminal.
5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, donde dicha medida de presión intraluminal es la presión pico intraluminal (PPr, por sus siglas en inglés) .
6. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde la etapa b) comprende medir las frecuencias de descarga espontáneas de los haces nerviosas aferente mesenterico.
7. El método de acuerdo con cualquiera de las 5 reivindicaciones 1 a 6, donde dicho segmento gastromtestinal es un segmento ex vivo del ycyuno o del colón.
8. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde dicho segmento gastrointestinal es de un ratón. ío
9. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde las etapas a) y b) se llevan a cabo antes y después de la aplicación intraluminal del agente.
10. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde dicho agente es una célula 15 completa, el microorganismo, la proteína, el péptido, la enzima, u otro material biológico o químico.
1 1 . El método de acuerdo con la reivindicación 10, donde dicho agente es un microorganismo, más preferiblemente una cepa bacteriana. 0
12. Una cepa bacteriana seleccionada por el método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 1 .
13. La cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 12, donde el trastorno de motilidad intestinal es uno en el cual se desea reducir el tiempo de tránsito del material a través del tracto 25 gastrointestinal y donde en la etapa a) dicha cepa bacteriana muestra una capacidad de aumentar la motilidad gastromtestinal y en la etapa b) la cepa bacteriana muestra una capacidad para disminuir la descarga del nervio aferente mesenterico.
14. La cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 5 13, donde en la etapa a) dicha cepa bacteriana muestra una capacidad para aumentar la frecuencia del MMC o para aumentar la velocidad del MMC o para aumentar la presión intraluminal y en la etapa b) la cepa bacteriana muestra una capacidad para disminuir la señalización de dolor. ío
15. La cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 13 o la reivindicación 14, donde dicha cepa es LG345A (DSM 27123).
16. La cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 12, donde el trastorno de motilidad intestinal es uno del cual se desea aumentar el tiempo de tránsito del material a través del 15 tracto gastrointestinal y donde en la etapa a) dicha cepa bacteriana muestra una capacidad para disminuir la motilidad gastrointestinal y en la etapa b) dicha cepa bacteriana muestra una capacidad para disminuir la descarga del nervio aferente mesentérico. 20
17. La cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 16, donde en la etapa a) dicha cepa bacteriana muestra una capacidad de disminuir la frecuencia del MMC o de disminuir la velocidad del MMC o de disminuir la presión intraluminal y en la etapa b) la cepa bacteriana muestra una capacidad para disminuir 25 la señalización de dolor.
18. La cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 16 o la reivindicación 17, donde dicha cepa es LG621 A (DSM 27126).
19. Una cepa bacteriana donde dicha cepa es LG345A (DSM 27123) o LG621 A (DSM 27126). 5
20. La cepa bacteriana de acuerdo con la reivindicación 19, para uso en terapia.
21 . La cepa bacteriana de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 19 para uso en el tratamiento de un trastorno de motilidad intestinal. ío
22. La cepa bacteriana de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15 o la cepa LG345A (DSM 27123) para uso en el tratamiento del estreñimiento o del cólico.
23. La cepa bacteriana para uso de acuerdo con la reivindicación 22, donde dicho estreñimiento está en un paciente 15 adulto mayor o una mujer embarazada, o donde dicho cólico es un cólico infantil.
24. La cepa bacteriana de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o la cepa LG621 A (DSM 27126) para uso en el tratamiento del síndrome de intestino irritable. 20
25. Un método de tratamiento de un sujeto con un trastorno de motilidad intestinal que comprende la administración de una cepa bacteriana de cualquiera de las reivindicaciones 12 a 19 a dicho sujeto en una cantidad efectiva para tratar dicho trastorno de motilidad intestinal. 25
26. El método de acuerdo con la reivindicación 25, donde dicho trastorno de motilidad intestinal y dichas cepas se definen de acuerdo con las reivindicaciones 22 a 24.
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