LT3175B - Process for the preparation of a standardized human von willebrand factor concentrate for therapeutical use - Google Patents
Process for the preparation of a standardized human von willebrand factor concentrate for therapeutical use Download PDFInfo
- Publication number
- LT3175B LT3175B LTIP266A LTIP266A LT3175B LT 3175 B LT3175 B LT 3175B LT IP266 A LTIP266 A LT IP266A LT IP266 A LTIP266 A LT IP266A LT 3175 B LT3175 B LT 3175B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- vwf
- willebrand factor
- concentrate
- von willebrand
- column
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Išradimas liečia labai aukšto švarini® laipsni© standartizuoto žmogaus von Viillebrand' o faktoriaus koncentrato, turinčio specifinį aktyvumą, didelį kieki, aukšto molekulinio svorio multimerų ir skirto terapiniam,., naudojimui, pramoninį gavimo būdą.
Von Viillebrand’ o faktoriaus (vWF) yra didžiausia žinoma molekulė, cirkuliuojanti plazmoje. Jį sudaro multimerų eilės, sujungtos disulfidiniais ryšiais; . bazinė subvieneto molekulinė masė yra apytiksliai 260
A kilodaltonų (KDa). Mažiausia plazmoje egzistuojanti vWF forma yra apytiksliai 440-500 KDa dimeras; didžiausios formos - dimerų multimerai, kurių molekulinė masė siekia 20 . milijonų daltonų. Sujungtų subvienetų lokalizavimosi vieta gali būti specifinės ląstelės, sintetinančios ir polimerinančios vWF megakariocituose ir endotelio ląstelėse.
Šis faktorius atlieka pagrindinį vaidmenį hemostazėje, vykdydamas skirtingas funkcijas; jis transportuoja ir stabilizuoja VIII faktorių kraujo srovėje- ir, kaip rišąs baltymas, jis užtikrina kraujo trombocitų išplitimą, pririšimą ir susikaupimą ant kraujagyslių subendotelijaus, taip priside'dant prie greito sužeistų kraujagyslių užgijimo.
Įgimtas vWF nepakanKamumas arba šio faktoriaus struktūrinė anomalija sukelia von, Willebrand’o ligą, kuri iš pradžių pasireiškia ypač odos ir gleivinės 30 membranų kraujavimu. Šios ligos klinikinės formas yra labai įvairios ir sukelia daug problemų chirurginės intervencijos atveju. Von Viillebrand'o ligos gydymas reikalauja pirminės hemostazės (kraujavimo laikas) Ir kdaguliasįjos (aktyvuoto cefalino laikas faktoriaus aktyvumas) anomalijų korekcijos.
ir VIII ši l'iga gydoma pakaitų terapija, ®>audoj$nt žmogau^ plazmos darinius, praturtintus vWF (pav., plazmos krioprecipituotą frakciją ar VIII faktoriaus koncentratus, turinčius pakankamą vWF kiekį).Vienok, šie produktai nėra standartizuoti von Willebrand’o ligos gydymui. Be to; nepakankamai valytos kraujo plazmos frakcijos, ypač krioprecipitatas, turi virusinio užkrėtimo galimybę, kadangi dažnai jos nėra efektyviai inaktyvuotos virusų atžvilgiu. Dar daugiau, jos turi užteršiančiųjųbaltymų, kurie nereikalingi pacientams ir kurie p© daugkartinių injekci j ų sąlygoj a imunines reakcijas.
Priešingai, valytas VIII faktorius gali būti efektyviai apdorotas virusų atžvilgiu, vienok jo valymo procesas buvo optimizuotas hemofilijos A, o ne vWF nepakankartumo gydymui. Iš tikrųjų, neseniai surasti ir vis labiau efektyvūs būdai, kaip imųnoafininiai ir jenų mainų valymo būdai, naudojami VIII faktoriaus gavimui,
20, leidžia gąuti koncentratus, kuriuose pakanka vWf kiekio, kad efektyviai gydytų vor. Willebrand'o ligą.
‘ . '··· ··' i .,: h 1 · : · ·. ·'·.' J ' '' į ė·.·; Λ ·'··,’ · ė'. ' e'.'·:·'·· ·<.. '
Būtent tam, kad,, efektyviai gydyti von Willebrand*o ligą, pareiškėjas sukūrė naują pramoninį vWF valymo būdą, kuris ypač efektyvus, atskiriant įvairias plazmos molekules. Jo pagalba per vieną stadiją galima gauti VIII faktoriaus koncentratą (pagal būdą, aprašytą Europos patento paraiškoje Nr. 0 359 ,593) ir išskirti vWF frakciją iš tos pačios krioprecipitato partijos, tai leidžia rentabiliai panaudoti žmogaus plazmą. Tokiu būdu gauta vWF frakcija yra valoma dviejų papildomų chromatografinių stadijų pagalba, tai leidžia gauti labai švarų vWF koncentratą. \ • 35 vWF molekulės kompleksiškumas sąlygoj a labai sunkų jo valymą.· Metodai, apimantys nedideles apimtis, pav., 52000 ml, ir naudojami analitiniams tikslams, jau buvo aprašyti (Thorell ir ·. kt.7 Thromb. Res. 1984,35: 431450), bet jie negali būti pritaikomi pramoniniu būdu gaminant vWF. Be to, krioprecipitato maksimalaus rentabilumo idėja, gaunant vienu metu vWF ir FVIII, nebuvo svarstyta.
vWF buvo valomas, atsižvelgiant i, skirtingus sulfatuotų junginių tirpumus,esant glicinui (Berntrop ir kt., Vox Sang. 1989, 56: 212), i, sulfotuotus junginius (Winkelman ir kt., Vox Sang. 1989, 57: 97) bei naudoj ant Įvairius chromą cograf inius atskyrimo metodus, kaip, pav., molekulinio sieto (Perretirkt., Haemostas 1984, 14: 2890 ir jonų mainų metodus (Austen ir kt.,
Thromb. Haemostas, 1982, 48: 295). Tačiau šie metodai duoda arba nedideles vWFišeigas, arba turi žemą gelio imlumą, arba neužtikrina vienalaikio FVIII , ir vWF atskyrimo*, kas daro juos mažiau tinkamais pramoniniam naudojimui.
Be to, Berntorp ir kt. (Vox Sang. 1989, 56: 212) gauna nedidelio švarumo laipsnio vWF: 45 V Ag/mg baltymo f
(p.213), kai tuo tarpu pareiškėjas gauna 205 V Ag/mg baltymo. Panašiai, Winkelman ir kt. (Vox Sang. 1989, 57: 97). gauna ΙΌ V Ag/ml baltymo (p. 101) .
·
Perret ir kt. (Haembstasis 1984, 14; 289) atlieka defibrinacijos. stadiją, pašalinant fibrinogeną fibrino molekulių pavidale, naudojant kalci, tokiu pat būdu, kaip gyvatės nuodų fermentus. Tai daro . gavimą akivaizdžiai netinkamu terapiniams tikslams. Be to, gelfiltracijos sistemos, kaip jos naudojamos, yra sunkai suderinamos su pramoniniais mastais, užtikrinančiais tik lOcm/val. ar mažesni, tekėjimo greiti, ir turinčiais didelę užsikimšimo riziką, ypač esant fibrinogenui ir fibronektinui. Be to, išvalymo frakcionavimo šioje chromatografinėje sistemoje.
laipsnis dažniausiai yra žemas, kas priklauso nuo menko
Austen- ir kt. (Thromb. Haemostas. 1982, 48: 46) taip .
pat gavo žemo švarumo laipsnio koncentratą (8 V Ag/mg baltymo) ir santykinai žemą išeigą, tikriausiai sąlygojamą griežtų chromatografijos sąlygų (pH 5.5).
5 ' ' '' : u···.'.'. i l'i'
Harrisson ir kt. (Thromb. Res. 1988, 50:295) naudoja dekstrano sulfat-sefarozę kaip chromatografinę matricą;
' ži medžiaga turi nedideli, užlaikymo talpumą vWF atžvilgiu ir taip pat gaunamas vWF preparatas turi žemą specifini, aktyvumą: 2-4 V/mg baltymo (p.301).
Pagaliau šie produktai turi pakankamai didelę dalį vWF denatūruotų ir inaktyvių formų, ką liudija ristocetino 1 kofaktoriaus aktyvumo- (RCo)/antigeno santykis, svyruo15 jantis nuo 0.008 iki 0.8 (Lawrie ir kt., Br.J.Haemotol.
1989, 73: 100). Tai sumažina jų efektyvumą, naudojant ·';
» Willebjfand ligo-s terapijai. Priešingai, pareiškiamas būdas užtikrina vWF atstatymą su RCo/antigeno santykiu, aukštesniu už vienetą, tai prilygsta normalios kraujo plazmos natyvinio vWF rodikliui.
1 Šis išradimas liečia vWF koncentrato, skirto terapijai, gavimo pramoninį būdą, gaunant jį kaip pašalinį produktą gerai išvalyto FVIII gavimo metu; kai galima gaminti standartizuotas partijas, charakterizuojamas dideliu kiekiu aukšto moleku1inio svorio multimerai s, iš labai didelių plazmos kiekių (4000 ir daugiau ltr). Būdas leidžia optimaliai panaudoti krioprecipitatą .·
Konkrečiai šis išradimas liečia vWF koncentrato gavimo būdą, kuris susideda iš trijų sekančių viena paskui kitą chromatogrfinių stadijų, leidžiančių vWF praturtinti aukšto molekulinio svorio multimerais, kurie sąlygoja jo biogeninį aktyvumą. Pradinė medžiaga
3-5 yra žmogaus plazmos krioprecipituota frakcija, prieš tai apdorota įprastinėje valymo stadijoje, apimančioje absorbciją ant aliuminio oksido. Po to ši medžiagą
' -'^Α/δ/Α.··. ' ; , prieš jos valymą inaktyvuojama virusų atžvilgiu, pavį, naudojant tirpiklį-detergentą.
Valymo būdas pagal šį išradimą susideda šių trijų 5 sekančių viena paskui kitą chromątdgrafinių stadijų kombinacijos, naudojamos gaunant vWF kaip pašalinį produktą FVIII- gavimo procese; pirmos dvi stadijos apima jonų mainų chromotografiją, o trečioj i - afininę chromotografiją. .
io
Atliekamos dvi jonų main į chromątografijo®, naudojant tą pačią vinil-polimerinę dervą, ant kurios fiksuotos dietilaminoetilo grupės (DEAE), ypač ant DEAEFrac.togelR TSK 650 (Merck) kolonėlių, hulygsvarihant buferiu, turinčiu 0.01 M trinatrio citrato, 0.11 M natrio chlorido, 0.001 kalcio chlorido, 0.12 M,glicind ir 0.016 M lizino, pH 7.
DEAE-FractogelR TSK 650 yra sintetinis hidrofilinis gelis. Nešėjas yra oligoetilenglikolio, glicidinmetakrilato ir pentaeritritoldimet-akrilato kopolimeras, prie kurio yra prijungtos dietilaminoetilo grupės, t.y. -O-CH2-CH2N+ (C2H5) 2HC1, kas sąlygoja silpnai šarminį anijojitą. DEAE-FractogelR TSK 650 būna dviejų rūšių pagal dalelių dydžius (kada brinkinama vandenyje): tipo s (0.025-0.050 mm) ir- tipo M (0.045-0.090 · mm) . Šiame išradime yra naudojami abu tipai.
Krioprecipituotos plazmos frakcija, prieš tai valyta įr inaktyvuota virusų atžvilgiu panaudojant įprastinius būdus, buvo panaudota pirmoje chromatografinėje kolonėlėje, kuri užlaiko didelę dalį vWF. Tada vWF buvo eliuojamas, didinant natrio chlorido koncentraciją buferyje iki 0.14-0.15 M.
7/A''./ · : τ
Po to eliuota frakcija, praturtinta vWF, yra naudojama antroje chromatografinėje kolonėlėje, esant tokioms pat
' '6. ' y · sąlygoms, kaip pirma. Kadangi frakcija, užnešta ant antros kolonėlės, yra laisva nuo daugelio baltymų (ypač nuo FVIII, ir fibronektino), kurie konkuravo dėl • absorbcinių centrų pirmos chromatografinės stadijos 5 metu, tai antrojoje kolonėlėje absorbcinis imlumas vWF atžvilgiu yra žymiai didesnis. Po filtrato pašalinimo ir kolonėlės praplovimo nulygsvarinimo buferiu adsorbuotas vWF eliuojamas, padidinant buferio natrio chlorido koncentraciją iki 0.15-0.17 M. Dėl aukštos
DEADE-Fractogel* dervos adsorbcinio imlumo ir efektyvumo vWF atžvilgiu, vWF 'gali būti eliuojamas iš kolonėlės su aukštu aktyvumu {>150 μ RCo/ml), taip , galima išvengti ultrafiltracijos mechaninio slėgio, koncentruojant produktą.
.
Tokiu būdu eliuota frakcija _ yra. naudojama afininės chromatografijos stadijoje (ant · geli^ su želatinos pagrięi4u) imant tą patį ftulygsvarinimo buferį, kas leidžia išvengti dializės ar ultrafiltracijos stadijos, pašalinant druskas; ši kolonėlė sulaiko liekamojo fibronektino molekules, kurios dar teršia ,vWF. Gelio, asocijuoto šu želatina, pasirinkimas nėra ribojamas: šiam tikslui tinkami yra .Gelatin-Sepharose/ Gelatin(JtrogelR, Gelatin-SpherodexR bei,Gelatin-FractogelR.
Gelatin-Sepharose gali būti geriausias pasirinkimas, kadangi fiksuoja 5-10 mg fibronektino/ml gelio sąlygomis, taikomomis šiame išradime.
Šiose sąlygose labai gerai valytas vWF oesusiriša su geliu ir pereina į filtratą; kadangi chromatografinė stadija, naudojant želatiną, nesąlygoja didelio vWF frakeijos praskiedimo, produktas gali būti tiesiogiai paskirstomas, nenaudojant' koncentravimo stadijas, pav., ultrafiltracijos. Kadangi galutinis produktas neturi proteolitinių -fermentų, jis labai stabilus tfiitruoja.nt ir liofilinant bei nereikalauja stabilizuoj ančių agentų. ' · /'
vWF koncentratas, gautas Šio išradimo būdu, turi išskirtinai aukštą valymo laipsnį - >10,000 kartų, lyginant su pradine plazma; jo specifinis aktyvumas yrą Ί 345 V CBA/mg baltymo (kolageno surišimo aktyvumo vienetais) ir > 100 V RCo/mg baltymo, (ristocetino kofaktoriaus aktyvumo vienetais).' Kiekvienos chromatografinės stadijos įnašas, valant vWF, parodytas 1 fig-.'7'; 7/'/7' ' '
Produkto kokybės gerėjimas sekančiu viena paskui kitą stadijų metu/ žymiai priklauso nuo aukšte molekulinio svorio multimerų kiekio (vWF molekulinės formos., turinčios aukštą biologinį aktyvumą), tai buvo stebima elektroforetinių tyrimų metu.
Įdomu, jog šie. tyrimai parodo didėjantį praturtinimą '/j multimerais > - .4 '*2 fig.j r kurie atstovauja 79% vWF
- polimerų, tuo tarpu krioprecipitacija pusę iš jų pašalina. Netikėtai pasirodė, jog būtent chromatografija ant DEAE-Fractogėl TSK 650 padeda selektyviai užlaikyti' j.abai didelius multimerus ir pašalina su filtratu nedidelius' formas, anomalios struktūros (patyrusias dalinę proteolizę) ir žemo aktyvumo formas. · . '>·. ' /
Standartizuotas vWF koncentratas, pasižymintis aukštu išvalymo laipsniu, aukštu specifiniu aktyvumu ir dideliu kieku aukšto molekulinio svorio miltimerų, gautas šio išradimo būdu, yra ypač gerai tinkamas įvairių von Viillebrand ligos formos terapijoje, tai patvirtino preliminariniai klinikiniai tyrimai.
Preliminariniai klinikiniai tyrimai parodė, jog šis koncentratus efektyviai sutrumpina kraujavimo laiką, esant kraujoplūdžiui. j
..... 8 · ' :
Tyrimai' in vitro patvirtino, jog feioshemįnės ir fiziologinės savybės yra identiškos natyvių molekulių .savybėms, ypatingai savo sugebėjimo surišti kraujo trombocitus perfuzijos aparate ir savo sugebėjimu f surišti in vivo endogeninį VIII1 faktorių.
Dėl savo aukšto valymo ,laipsnio vWF, gautas šio išradimo būdu, taip pat gali būti naudojamas įvairiems \ laboratoriniams tikslams ( smulki struktūrinė analizė, funkcionalumo tyrimai, diagnozė ir t.t.) ir specifinių antikūnų gamyboje. ' ·.
Koncentratas pagal šį išradimą taip pat gali būti naudojamas kaip stabilizatorius, gaunant VIII faktorių ląstelių, transformuotų genuose inžinerijos metodų pagalba, ir stabilizuojant VIII faktorių valymo metu.
Sekantis pavyzdys iliustruoja vieną išradimo įgyvendinimo formą, neapribojant jo apimties. (
S© . . . .,· ' ' ' ; . .'1' \ .
PAVYZDYS; ‘'J. f · į ,
.. .. .... ; · · ' - . : i · 'n .
Pradinė medžiaga t 2.5 Krioprecipitatas yra paruoštas iš šviežios plazmos, surinktos esant natrio citratui (4%) ar antikoaguliantiniam tirpalui CPD (citratas, fosfatas, dekstrozė)ir Užšaldytos ne vėliau kaip praėjus 6 valandoms po jos surinkimo. Plazma užšaldoma prie -60° C, po -lo laikoma prie -35° C. Plazmos partijas sudaro 1800-2000 1, kurios yra sujungiamos į 4000 1 partijas kiekvienam proceso taikymui. Atšildant, plazma apie 12 .vai.
* . \ patalpinama i' kamerą su reguliuojama temperatūra, kur užtikrinamas lėtas reguliarus atšildymas iki -7° C, tada atitirpinama termostatiškai reguliuojamame inde iki 0 -2° C, pastoviai maišant. Po to krioprecipitatas
(kuris sudaro apytikriai 9 g/1 plazmos) yra surenkamas centrifuguojant žemoje temperatūroje. '
Nucentrifugavus, surinktas krioprecipitatas yra 5 resoliubilizuojamas ir adsorbuojamas ant aliuminio hidroksido kai. kurių teršalų pašalinimui, pav., protrombino komplekso komponentų (ypač VIII faktoriaūs) ir XII faktoriaus pašalinimui. Supernatantas po to yra atvėsinamas iki 15° C (tas dalinai pašalina fibrinogeną ir fibronektiną) . \
Šis apdorojimas leidžia gauti iš krioprecipitato 80-86% VIII. faktoriaus/vWF mišinio; VIII faktoriaus specifinis aktyvumas yra 0.7 TV/mg, o vWF specifinis aktyvumas yra
0.6 RCo/mg (rištocetino kofaktoriaus aktyvumas) ir 1.2
V CBA/mg (kolageno surišimo aktyvumas).
Virusinė in&ktyvacijs . Tirpalas, turintis VIIIF/vWF mišinį, yra apdorojamas tirpikliu-detergentu, žinomu savo efektyvumu, / ardant virusus su lipidų apvalkalėliais (Horowitz ir kt., Transfųsion, 1985, 25; 516); apdorojama inkubupjant 8 vai. esant 25° c ir 0.3% trin-n-butilfosfatui (TnBPJ bei 1% Tween 80.
Po. šio apdorojimo randama, kad išlieka 95% VIII faktoriaus ir vWF aktyvumo, išmatuoto ankstesnėje stadijoje. Elektroforezė gali patvirtinti, jog vWF vis dar yramultimerinėje formoje. \
Chromatografinisaktyvumas vWF valymas yra kilęs iš VIII faktoriaus valymo būdo, pareiškėjo aprašytoje paraiškoje Europos patentui Nr .EP
359 593. /
atliekama DEAE- .
(Merck) užkrautoje sudaro tr^natrio (0.001 M), glicinas
Pirmoji chromatografijos stadija Fractogel* TSK 650 (Type S arba M) kolonėlėje. Nulygsvarinimo buferį citratas (0.01 M), kalcio chloridas (0.12 M), L-lizinas (0.016 M) > ir 0.11 M natrio chloridas. vWF, VIII faktorius ir fibronektinas yra užlaikomi kolonėlėje; užteršiantieji baltymai (pagrindiniai fibrinogenas ir šiek tiek IgG) silpnai surišami ar nesurišami kolonėlėje, o’ virusus sterilizuojantys agentai yra pašalinami, keletą kartų nuosekliai tuo pačiu buferio tirpalu. ; J ' ,
Linijinis srovės greitis kolonėlėje yra 100 cm/val. Esant šioms sąlygoms, vWF užlaikymo imlumas kolonėlėje apytiksliai 75% nuo užnešto kiekio (matuojant kaip Ag, antigeną), o likutis pereina į filtratą. Šis surišimo imlumas atitinka 45 V vWF Ag/nl gelio.
Nuo kolonėlės vWF desorbuojamas, padidinus NaCl kėncentracij , buferio tirpale iki 0.15 M. SurinktaįvWF frakcija turi 30-35% pradinio vWF kiekio, tuo tarpi, jo 40% pasilieka adsorbuotų kartu su VIII faktoriumi; jie gali būti kartu eliuoti, padidinus NaCl koncentraciją buferio tirpale iki 0.25 M, o po to kartu išvalyti.
' +7 į Y, . Λ ' ; //7+/+
Frakcija, turinti šios pirmos kolonėlės eliuotą vWF, yra užnešama ant antros identiškos kolonėlės, nežymiai praskiedus nulygsvarinimo buferiu, turint tikslą nustatyti vWF frakcijos joninę jėgą, «kvivąlentišką
0.11 M natrio chlorido joninei jėgai.
Kadangi teršalai ir VIII faktorius, kurie kartu su vWF varžosi dėl adsorbcijos centrų pirmoje kolonėlėje; yra beveik pašalinti pirmoje chromatografijos stadijoje, antroje kolonėlėje sufišimo imlumas yra žymiai didesnis: 320 V vWF Ag/mg gelio.
/;////'..,.; 11 7////./ ' vWF yra desorbuojamas, padidinus buferio tirpalo NaCl koncentraciją iki 0.17 M. / /'.'/.-./
Ši antroji chromatografijos/ stadija leidžią sukoncentruoti vWF 8-10 kartų, lyginant su pitma stadija, tai atmeta būtinumą papildomai koncentruoti, pav., ultrafiltracijos pagalba. Naudojant standartinius metodus, eliuate randami sekantys vWF kiekiai bei aktyvumai:
-Antigenas (Ag)
- Ristocetino kofaktorius (RCo)
- Kolageno surišimo aktyvumas (CBA)
- Didelės molekulinės masės multimerai (> 4 raultimerai) ± 9 TV/ml 97 ± 19 TV/ml 149 ± 13 TV/ml
79%
CBA vienetai (ko^ogeno surišimo aktyvumas) yra nustatomi EL1SA metodu, kaip aprašyta Brown ir Bosak (Throm. Res. 1 986, 43: 303). Standartinė plazma, kalibruota pagal 2-ą Britų Standartą (86/717), buvo naudojama kaip pagrindas tarptautiniais vienetais.
išreiškiant reikšmes
Santykis CBAzAg, lygus 1.69, rodo, jod vWF aktyvumas yra gerai išsilaikęs. Tai suderinama su aukštu /:.·/'.//<//^-//-/-///:/:--- ./7::7// y/·// 7//:-/::/,././ 7/:' /; /y·. // 7-'·///-,////7.,/. .·/. .7 ·' .v-.-.- /:-..- ..-/- //,; - /·. '· ’ .. .---.7--. '-7/.· ? . ·· procentiniu kiekiu- didelės molekulinės masės multimeru (79%) ir palyginama su natyvinio vWF iš plazmos tokiu pat rodikliu (70%).
šio vWF eliuato elektroforetiniai tyrimai rodo nežymų užteršimą fibronektinu ir i^ter-alfa tripsino inhibitoriumi, serin-proteazės inhibitoriumi.
Fibronektinui pašalinti antras vWF eliuatas yra patei30 kiamas trečiai valymo stadijai, atliekamai kolonėlėje su želatin-sefaroze CL4B (Pharmacia), nųlygsvarintoje tuo pačiu buferiu ankstesnėje kolonėlėje.
Afininės chromatografijos geli® į uŽlaik^o imlumas fibronektįno atžvilgiu yra > 5 mg/ml, tai leidžia šio teršalo kieki, sumažinti iki nedetektuojamų kiekiu (< 4 mg/ltr) vWF frakeijoje.
/ 5 j/< /-/ /:' / '<,/'< v/.
Pagal šį išradimą valytas vWF randasi šios paskutinės stadijos filtrate ir gali būti tuojau pat išskirstomas
į. ir liofilinamas. K ..·
Galutinio produkto elektroforetiniai tyrimai neparodo j okių teršalu · vWF kiekis yra 205 V Ag/ml baltymo; j o specifinis aktyvumas yra 345 V GBA/mg baltymo ir 18 6z 220 V RCo/mg’ baltymo. / . '
Bendras išvalymo laipsnis lyginant su pradine pldzma yra > 10,000 kartų. ·, .
Elektroforetiniai tyrimai (SDS-agarozė ir juostų išskleidimas) rodo, jog šiuo būdu išvalytas vWF susideda iš 65-80% didelės molekulinės masės multimerų, t.y. ,* kiekio, palyginamo su natyviniu vWF atitinkančiu šių multimerų kiekiu,, lygiu 70%.
Koncentrato stabilumas buvo tiriamas skystame būvyje, jį laikant 24 valandas kambario temperatūroje: neužfiksuotas nei proteolitinis aktyvumas, nei specifinio aktyvumo pakeitimas..
Trombogeninio aktyvumo nebuvimas koncentrate buvo patvirtintas, naudoj ant įprastinius testus, kaip, pav./ neaktyvuoto dalinio tromboplastino laikas (NAPTT). Trombinas, PKAirkalikreinas nerasti. j
Todėl nebūtina pridėti stabilizuojančių agentų į galutinį vWF produktą.
Valymo būdo, specialiai skirto vWF išskyrimui, kaip pašalinio produkto gaminant VIII faktorių, sukūrimas pirmą kartą įgalina gaut/ labai švarų ir labai efektyvų ) terapinį koncentratą, standartizuotą von Willebrand’o ligos gydymui.
FIGŪRŲ PAAIŠKINIMAI
Fig.l. SDS-PAGE vWF valymo frakcijos. 1 ’juosta:
krioprecipitatas; 2 juosta: SD paveiktas krioprecipitatas; 3 juosta: nesurištą DEAE-fractogel frakcija; 4 juosta: 1-as vWF eliuatas; 5 juosta: 2-as vWF eliuatas; 6 juosta: nesurišta želatinos frakcija; 7. juosta: standartai. Fbn.= fibronektinas; IgG+ Imunoglobulinas;
Alb = albuminas.
Fig.2Multimerų pasiskirstymas vWF valymo frakcijose. 1 juosta: normali, plazma; 2 juosta: krioprecipitatas; 3juosta: SD paveiktas krioprecipitatas; 4 juosta:
nesurištaDEAE-Fractogel frakcija; 5 juosta: 1-as vWF eliuatas; 6 juosta: 2-as vWF eliuatas; 7 juosta: nesurišta želatinos frakcija.
Claims (9)
- IŠRADIMO APIBRĖŽTIS1. Būdas gauti standartizuotą, labai gerai išvalytą žmogaus von Willebrand’o faktoriaus koncentratą,5 praturtintą didelio molekulinio svorio multimerais, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad koncentratą gamina iš krioprecipituotos plazmos frakcijos, taikant trijų, viena paskui kitą sekančių chromatografijos stadijų serijas, kurių pirmos· dvi stadijos yra jonų '10 mainų chromatografija, naudojant stambiai porėtas polimerines dervas su prijungtomis dietilamino etilo grupėmis, o trečioji stadija yra afininė chromatografija ant želatin-sefarozės.15
- 2. Būdas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad pradinė medžiaga yra J krięprecipituota plazmos frakcija, prieš tai išvalyta ant aliuminio hidroksido. .
- 3. Būdas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i antis20 tuo, kad pirmoji ir antroji jonų mainų derva yra DEAEFractogelR TSK 650, nulygsvarinta buferio tirpalu, turinčiu 0,01 M trinatrio citrato, 0,11 M natrio chlorido, 0,001 Vi. kalcio chlorido, 0,12 M glicino ir 0,016 M L-lizino.jT/'jbj ι''?'/· l:··/
- 4. Būdas pagal 1 punktą, be.siskiriant i s tuo, kad prieš tai išvalytą krioprecipituotą plazmos frakciją užneša ant pirmos jonų mainų chromatografijos kolonėlės, ir pirmąją von Willebrard'o faktorių30 . turinčią frakciją eliuoja, padidinus buferio natrio chlorido koncentraciją iki 0.14-0.15 M.
- 5. Būdas pagal .1 punktą,· b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad po pirmos chromatografijos gautą von ·35 Willebrand’o faktorių turintį eliuatą užneša ant antros jonųΛ mainų chromatografijos kolonėlės, ir von jLTViillebrand15 ... . . .o faktorių eliuoja, padidinus buferio natrio chlorido koncentraciją iki .0.15-0.17 M.
- 6. Budas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad po antros chromatografijos eliuatą užneša ant želatin-sefarozės chromatografijos kolonėlės, nulygsvarintos eliuacijos buferiu iš ankstesnės chromatograf inės stadijos, siekiant selektyviai adsorbuoti kolonėlėje liekamąjį fibronektiną..Ί. Būdas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad esantį želatin-sefarozės kolonėlės filtrate von Willebrand'o faktorių surenka, išskirsto ir liofilina.'„-.'i i] ·;·<··ύ.'·</;: ·/ ;?;\6'ū6/-'.:7.-.· į?,H.;'·6;.'h'. < '·. \··ΐ·ρ··;·'< j' ·;·; .1t,.i. ’ />'/:> ·'·.'.'/-Ι/.''''·',';. ·.;<; ·:·:ι ·.<·'. j 1T
- 8. Labai gerai išvalytas ir aukšto specifinio,aktyvumo (RCo ir CBa vienetais) bei daug didelio molekulinio svorio multįmerų. turintis’ von Willebrand’o faktoriaus koncentratas, besiskiriantis4 tuo, kad jis gautas pagal vieną iš 1-7 punktų.
- 9. Von Willebrand’o faktoriaus koncentratas pagal 8 punktą, besiskiriantis tuo, kad aktyvumo (matuoto CBa vienetais) santykis su antigeno kiekiu yra mažiausiai 1.5.
- 10. Von Willebrand’o faktoriaus koncentratas pagal 8 arba 9 'punktą, besiskiriantis tuo, kad didelio molekulinio svorio multimerų kiekis yra mažiausiai 65-80%.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9102804A FR2673632A1 (fr) | 1991-03-08 | 1991-03-08 | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LTIP266A LTIP266A (en) | 1994-07-15 |
| LT3175B true LT3175B (en) | 1995-02-27 |
Family
ID=9410505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LTIP266A LT3175B (en) | 1991-03-08 | 1992-12-30 | Process for the preparation of a standardized human von willebrand factor concentrate for therapeutical use |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5408039A (lt) |
| EP (1) | EP0503991B1 (lt) |
| JP (1) | JP3435668B2 (lt) |
| AT (1) | AT407115B (lt) |
| AU (1) | AU645172B2 (lt) |
| BE (1) | BE1004178A3 (lt) |
| BR (1) | BR9200770A (lt) |
| CA (1) | CA2062340C (lt) |
| CZ (1) | CZ283633B6 (lt) |
| DE (2) | DE69227055T2 (lt) |
| DK (1) | DK0503991T3 (lt) |
| EE (1) | EE03057B1 (lt) |
| EG (1) | EG20300A (lt) |
| ES (1) | ES2121830T3 (lt) |
| FI (1) | FI106721B (lt) |
| FR (1) | FR2673632A1 (lt) |
| HU (1) | HU215098B (lt) |
| IL (1) | IL101043A (lt) |
| IT (1) | IT1256692B (lt) |
| LT (1) | LT3175B (lt) |
| NL (1) | NL300394I1 (lt) |
| NO (1) | NO301278B1 (lt) |
| NZ (1) | NZ241701A (lt) |
| PL (1) | PL168353B1 (lt) |
| RU (1) | RU2088590C1 (lt) |
| SA (1) | SA92120446B1 (lt) |
| SK (1) | SK279533B6 (lt) |
| UA (1) | UA27732C2 (lt) |
| ZA (1) | ZA921430B (lt) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4435392B4 (de) * | 1994-10-04 | 2008-02-07 | Immuno Ag | Verfahren zur Trennung von vWF in hochmolekularen vWF und niedermolekularen vWF |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| DE4437544A1 (de) * | 1994-10-20 | 1996-04-25 | Behringwerke Ag | Einsatz von vWF-enthaltenden Konzentraten als Kombinationstherapie bei Therapie mit Antithrombotika und Fibrinolytika |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| DE19616540A1 (de) * | 1995-11-10 | 1997-05-15 | Immuno Ag | Verwendung von von Willebrand-Faktor und pharmazeutische Zubereitung |
| US6005077A (en) * | 1995-11-10 | 1999-12-21 | Immuno Aktiengesellschaft | Use of von willebrand factor and pharmaceutical formulation |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| US6068838A (en) * | 1996-04-29 | 2000-05-30 | Baxter Aktiengesellschaft | Purified multimerase |
| AT404358B (de) | 1997-02-04 | 1998-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial |
| AT405403B (de) | 1997-02-27 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Reinigung von von willebrand-faktor durch kationenaustauscherchromatographie |
| AT405485B (de) * | 1997-05-28 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Eine das vwf-propeptid enthaltende pharmazeutische präparation |
| BR0008405B1 (pt) | 1999-02-22 | 2014-04-22 | Baxter Int | Composição de fator viii formulada sem a adição de albumina, uso de uma composição de fator viii, e, método de liofilizar uma formulação farmacêutica aquosa |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| EP1593388A1 (en) * | 2004-05-05 | 2005-11-09 | ZLB Behring GmbH | Therapeutic plasma protein-concentrates containing von willebrand factor as high molecular weight multimers |
| FR2874216B1 (fr) | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| DE102004044419B4 (de) | 2004-09-14 | 2010-04-15 | Biotest Ag | Verfahren zur Aufreinigung eines von Willebrand Faktors mittels Hydroxylapatit-Durchlaufchromatographie |
| DE102004044429B4 (de) * | 2004-09-14 | 2009-04-30 | Biotest Ag | Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung enthaltend von Willebrand Faktor |
| ITLU20070007A1 (it) * | 2007-05-07 | 2008-11-08 | Kedrion Spa | Processo cromatografico per l'ottenimento di un complesso fviii/vwf con differenti rapporti tra le due proteine da utilizzare nella terapia della emofilia a e nella malattia di von willebrand. |
| DK2167117T3 (da) | 2007-06-13 | 2012-11-19 | Csl Behring Gmbh | Anvendelse af VWF-stabiliserede FVIII-præparater til ekstravaskulær administration til terapeutisk og profylaktisk behandling af blødningsforstyrrelser |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| EP2073015A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | CSL Behring GmbH | Diagnostic in vitro method for assessing Von Willebrand Disease and bleeding risk associated with Von Willebrand Disease and acquired or congenital disorders of platelet function |
| US20100273206A1 (en) * | 2007-12-21 | 2010-10-28 | Manfred Rauh | Diagnostic in vitro method for assessing von willebrand disease and increased bleeding risk associated with von willebrand disease and acquired or congenital disorders of platelet function |
| KR101648734B1 (ko) | 2008-06-24 | 2016-08-18 | 체에스엘 베링 게엠베하 | 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ｖｉｉｉ, 폰 빌레브란트 인자 또는 이들의 복합체 |
| US20100168018A1 (en) * | 2008-11-07 | 2010-07-01 | Baxter International Inc. | Factor viii formulations |
| IT1396528B1 (it) | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| US20120148557A1 (en) | 2009-08-20 | 2012-06-14 | Ulrich Kronthaler | Albumin fused coagulation factors for non-intravenous administration in the therapy and prophylactic treatment of bleeding disorders |
| WO2012082933A1 (en) | 2010-12-15 | 2012-06-21 | Baxter International, Inc. | Eluate collection using conductivity gradient |
| US9393289B2 (en) | 2011-10-18 | 2016-07-19 | Csl Behring Gmbh | Use of sulfated glycosaminoglycans for improving the bioavailability of factor VIII |
| DK2768521T3 (en) | 2011-10-18 | 2016-10-24 | Csl Behring Gmbh | Combined use of a sulfated glykosamin glycan and a Hyaluronidase to improve bio-availability of factor VIII |
| EP2814502B1 (en) | 2012-02-15 | 2017-09-13 | CSL Behring GmbH | Von willebrand factor variants having improved factor viii binding affinity |
| EP2796145B1 (en) | 2013-04-22 | 2017-11-01 | CSL Ltd. | A covalent complex of von willebrand factor and faktor viii linked by a disulphide bridge |
| AU2014346343B2 (en) * | 2013-11-08 | 2018-05-10 | Csl Ltd. | New method to concentrate von Willebrand factor or complexes thereof |
| DK3164150T3 (da) | 2014-07-02 | 2021-02-08 | CSL Behring Lengnau AG | Modificeret von willebrand-faktor |
| US10626164B2 (en) | 2014-07-25 | 2020-04-21 | Csl Limited | Purification of VWF |
| FR3034669B1 (fr) | 2015-04-07 | 2020-02-14 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Nouvelle utilisation du facteur von willebrand |
| WO2017066683A1 (en) * | 2015-10-15 | 2017-04-20 | Plasma Technologies, Llc | Methods for extracting proteins from blood plasma |
| SG10201912857XA (en) | 2016-01-07 | 2020-02-27 | CSL Behring Lengnau AG | Mutated von willebrand factor |
| SG11201805497QA (en) | 2016-01-07 | 2018-07-30 | Csl Behring Recombinant Facility Ag | Mutated truncated von willebrand factor |
| CN105622747A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-01 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种vWF活性保护液 |
| CN105622746A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-06-01 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种从冷沉淀提取凝血因子ⅷ的废料中提取人血管性血友病因子的制备工艺 |
| CN105541997A (zh) * | 2016-02-04 | 2016-05-04 | 江西博雅生物制药股份有限公司 | 一种高纯度和高活性血管性血友病因子的制备工艺 |
| EP3488858A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-29 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | A von willebrand factor composition for use in treating a pathology mediated by angiogenesis |
| CN114249812B (zh) * | 2020-09-22 | 2023-09-15 | 四川远大蜀阳药业有限责任公司 | 一种降低vWF制品中IgM含量的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0359593A1 (fr) | 1988-06-07 | 1990-03-21 | Centre Regional De Transfusion Sanguine De Lille | Séparation chromatographique des protéines du plasma, notamment du facteur VIII, du facteur von Willebrand, de la fibronectine et du fibrinogène |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61166542A (ja) * | 1985-01-18 | 1986-07-28 | Hitachi Chem Co Ltd | 感光性組成物 |
| US4970300A (en) * | 1985-02-01 | 1990-11-13 | New York University | Modified factor VIII |
| US5006642A (en) * | 1987-06-29 | 1991-04-09 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Purification of von Willebrand Factor by affinity chromatography |
-
1991
- 1991-03-08 FR FR9102804A patent/FR2673632A1/fr active Granted
-
1992
- 1992-02-19 AU AU11131/92A patent/AU645172B2/en not_active Expired
- 1992-02-24 NZ NZ241701A patent/NZ241701A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-02-24 IL IL10104392A patent/IL101043A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 SK SK568-92A patent/SK279533B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-02-26 ZA ZA921430A patent/ZA921430B/xx unknown
- 1992-02-26 CZ CS92568A patent/CZ283633B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-02-27 ES ES92400505T patent/ES2121830T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-27 DK DK92400505T patent/DK0503991T3/da active
- 1992-02-27 DE DE69227055T patent/DE69227055T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-02-27 DE DE122009000034C patent/DE122009000034I2/de active Active
- 1992-02-27 EP EP92400505A patent/EP0503991B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-03 JP JP08030592A patent/JP3435668B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 BE BE9200215A patent/BE1004178A3/fr not_active IP Right Cessation
- 1992-03-05 CA CA002062340A patent/CA2062340C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-05 NO NO920867A patent/NO301278B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 IT ITTO920189A patent/IT1256692B/it active IP Right Grant
- 1992-03-06 PL PL92293738A patent/PL168353B1/pl unknown
- 1992-03-06 US US07/846,852 patent/US5408039A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-06 FI FI920992A patent/FI106721B/fi active
- 1992-03-06 BR BR929200770A patent/BR9200770A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-03-06 AT AT0043692A patent/AT407115B/de not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 HU HU9200767A patent/HU215098B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-03-06 RU SU925011041A patent/RU2088590C1/ru active
- 1992-03-07 EG EG13192A patent/EG20300A/xx active
- 1992-04-18 SA SA92120446A patent/SA92120446B1/ar unknown
- 1992-12-30 LT LTIP266A patent/LT3175B/lt not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-05-21 UA UA93002713A patent/UA27732C2/uk unknown
-
1994
- 1994-05-23 EE EE9400004A patent/EE03057B1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-07-07 NL NL300394C patent/NL300394I1/nl unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0359593A1 (fr) | 1988-06-07 | 1990-03-21 | Centre Regional De Transfusion Sanguine De Lille | Séparation chromatographique des protéines du plasma, notamment du facteur VIII, du facteur von Willebrand, de la fibronectine et du fibrinogène |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| LT3175B (en) | Process for the preparation of a standardized human von willebrand factor concentrate for therapeutical use | |
| CA2201714C (en) | Method for isolation of highly pure von willebrand factor | |
| LT3333B (en) | Chromatographic separation of plasma protein and concentrates obtained by this method | |
| US5869617A (en) | High and low molecular weight fractions of von Willebrand Factor and preparations of same | |
| AU2003244850B2 (en) | Processes for the preparation of fibrinogen | |
| US7888476B2 (en) | Process for the preparation of a von Willebrand (FvW) factor concentrate by chromatography and a FvW concentrate thus obtainable | |
| DK162233B (da) | Fremgangsmaade til isolering af faktor viii fra blodplasma og pharmaceutisk praeparat indeholdende den saaledes isolerede fator viii | |
| US6579723B1 (en) | Method of recovering highly purified vWF or factor VIII/vWF-complex | |
| US4774323A (en) | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography | |
| ES2224245T3 (es) | Purificacion del complejo factor viii mediante cromatografia de inmunoafinidad. | |
| CA2749902C (en) | New process for highly selective purification of two plasma proteins: von willebrand factor (vwf) and fibronectin (fn) | |
| AU2004212324B2 (en) | Albumin solution and method for the production thereof | |
| de Lille | Burnouf-Radosevich et a1. | |
| LV10193B (en) | Highly clean and therapeutically usable standardized method for producing Willebrand factor concentrate for industrial production | |
| JPS59167519A (ja) | 不活化トロンビンゲルにより血漿タンパク質混合液からフイブリノ−ゲンを除去する方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC9A | Transfer of patents |
Owner name: THE LABORATOIRE FRANCAIS DU FRACTIONNEMENT ET DES Effective date: 20090511 |
|
| TC9A | Change of representative |
Representative=s name: ZABOLIENE, REDA, LT |
|
| MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 20091230 |