KR20230119022A

KR20230119022A - 트라이아진 유도체를 함유하는 경구 투여하는 제제

Info

Publication number: KR20230119022A
Application number: KR1020237025438A
Authority: KR
Inventors: 마사토 고미; 겐스케 호리우치; 마사유키 모리모토; 게이스케 다카가키
Original assignee: 시오노기 앤드 컴파니, 리미티드
Priority date: 2021-11-24
Filing date: 2022-11-22
Publication date: 2023-08-14
Also published as: JPWO2023027198A1; JP7253866B1; JP2023078413A; EP4289432A1; WO2023027198A1; JP7466731B2

Abstract

본 발명은, 바이러스 증식 저해 작용을 갖는 트라이아진 유도체를 함유하는 경구 투여하는 제제를 제공한다.

Description

트라이아진 유도체를 함유하는 경구 투여하는 제제

본 발명은, 트라이아진 유도체를 함유하는, 경구 투여하는 제제에 관한 것이다. 상세하게는, 코로나바이러스 3CL 프로테아제 저해 활성을 나타내는 트라이아진 유도체, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체를 유효 성분으로서 함유하는, 경구 투여하는 제제에 관한 것이다.

니도바이러스목 코로나바이러스과 오르토코로나바이러스아과에 속하는 코로나바이러스는, 약 30킬로베이스의 게놈 사이즈를 가져, 기지의 RNA 바이러스에서는 최대급의 1본쇄 +쇄 RNA 바이러스이다. 코로나바이러스는 알파 코로나바이러스속, 베타 코로나바이러스속, 감마 코로나바이러스속 및 델타 코로나바이러스속의 4개로 분류되고, 인간에게 감염하는 코로나바이러스로서, 알파 코로나바이러스속의 2종류(HCoV-229E, HCoV-NL63) 및 베타 코로나바이러스속의 5종류(HCoV-HKU1, HCoV-OC43, SARS-CoV, MERS-CoV, SARS-CoV-2)의 합계 7종류가 알려져 있다. 이 중, 4종류(HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-HKU1, HCoV-OC43)는 감기의 병원체이지만, 나머지의 3종류는 중증 폐렴을 야기하는 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 코로나바이러스(SARS-CoV), 중동 호흡기 증후군(MERS) 코로나바이러스(MERS-CoV) 및 신형 코로나바이러스(SARS-CoV-2)이다.

2019년 12월에 중국 우한에서 발생한 신형 코로나바이러스 감염증(COVID-19)은 급속히 국제 사회에 만연하여, 2020년 3월 11일에 WHO로부터 팬데믹이 표명되었다. 2022년 9월 21일 시점에서 확인된 감염자수는 6.1억명 이상, 사망자수는 650만명 이상에 이른다(비특허문헌 1). SARS-CoV-2의 주된 감염 경로로서 비말 감염, 접촉 감염 및 에어로졸 감염이 보고되어 있고, SARS-CoV-2는 3시간 정도 에어로졸과 함께 공기 중을 계속 떠다녀, 감염력을 유지하는 것이 확인되어 있다(비특허문헌 2). 잠복 기간은 2∼14일 정도이며, 발열(87.9%), 마른기침(67.7%), 권태감(38.1%), 담(33.4%) 등의 감기 유사 증상이 전형적이다(비특허문헌 3). 중증예에서는, 급성 호흡 궁박 증후군이나 급성 폐 장애, 간질성 폐렴 등에 의한 호흡기 부전이 일어난다. 또한, 신부전이나 간부전 등의 다장기 부전도 보고되어 있다.

일본에 있어서는, 기존 약의 드러그 리포지셔닝으로부터, 항바이러스약인 렘데시비르, 항염증약인 덱사메타존, 류머티즘약인 바리시티닙이 COVID-19에 대한 치료약으로서 승인되고, 2022년 1월에 항IL-6 수용체 항체인 토실리주맙이 추가 승인되어 있다. 또한, 2021년 7월에, 항체 칵테일 요법인 로나프리브(카시리비맙/임데비맙)가 특례 승인되고, 2021년 9월에 소트로비맙이 특례 승인되며, 2021년 12월에 몰누피라비르가 특례 승인되었다. 이들 약제에 대한 유효성이나 안전성에 대해서는, 충분한 에비던스가 얻어지고 있지 않다. 따라서, COVID-19에 대한 치료약의 창제는 급무이다.

코로나바이러스는, 세포에 감염하면, 2개의 폴리단백질을 합성한다. 이 2개의 폴리단백질 중에는, 바이러스 게놈을 만드는 복제 복합체, 2개의 프로테아제가 포함되어 있다. 프로테아제는, 바이러스로부터 합성된 폴리단백질을 절단하여, 각각의 단백질을 기능시키기 위해서 불가결한 기능을 한다. 2개의 프로테아제 중, 폴리단백질의 절단의 대부분을 담당하는 것이, 3CL 프로테아제(메인 프로테아제)이다(비특허문헌 4).

3CL 프로테아제를 표적으로 한, COVID-19 치료약으로서는, 2021년 6월, Pfizer사에 의한 PF-00835231의 프로드러그인 Lufotrelvir(PF-07304814)의 Phase 1b 시험의 완료가 ClinicalTrials.gov에 게재되었다(NCT04535167). 또한, 2021년 3월, Pfizer사는 신형 코로나바이러스 감염증에 대한 치료약 PF-07321332의 Phase 1 시험을 개시한다고 발표했다. PF-00835231, Lufotrelvir 및 PF-07321332의 구조식은 이하에 나타내는 바와 같아, 본 발명 화합물과는 화학 구조가 상이하다(비특허문헌 5, 12 및 13, 및 특허문헌 6 및 7).

PF-00835231:

[화학식 1]

Lufotrelvir(PF-07304814):

[화학식 2]

PF-07321332:

[화학식 3]

나아가 2021년 7월, 하이리스크 인자를 가지는 COVID-19 환자를 대상으로 한, PF-07321332 및 리토나비르 병용의 Phase 2/3 시험이 개시되는 것이 ClinicalTrials.gov에 게재되었다(NCT04960202). 또한, 2021년 11월, Pfizer사의 홈페이지에 있어서, PAXLOVID(TM)(PF-07321332; 리토나비르)는, 성인의 하이리스크 환자에 있어서, 플라세보와 비교해서 입원 또는 사망의 리스크를 89% 감소시켰던 것이 보고되었다(비특허문헌 14). 나아가, 2021년 12월, PAXLOVID(TM)는 미국에서 긴급 사용 허가가 승인되고, 2022년 2월 10일에 팍스로비드(등록상표) 팩이 일본에서 특례 승인되었다.

3CL 프로테아제 저해 활성을 갖는 화합물이 비특허문헌 5∼8에 개시되어 있지만, 어느 문헌에 있어서도 본 발명에 관련되는 화합물, 제조 방법 및 합성 중간체는 기재도 시사도 되어 있지 않다.

P2X₃ 및/또는 P2X_2/3 수용체 길항 작용을 갖는 트라이아진 유도체 및 우라실 유도체가 특허문헌 1∼4 및 8∼12에 개시되어 있지만, 어느 문헌에 있어서도, 3CL 프로테아제 저해 활성 및 항바이러스 효과에 대해서는 기재도 시사도 되어 있지 않다. 또한, 본 발명에 따른 제조 방법 및 합성 중간체는 기재도 시사도 되어 있지 않다.

항종양 효과를 갖는 트라이아진 유도체가 비특허문헌 9∼11에 개시되어 있지만, 어느 문헌에 있어서도, 코로나바이러스 3CL 프로테아제 저해 활성 및 항바이러스 효과에 대해서는 기재되어 있지 않고, 또한 본 발명에 관련되는 화합물, 제조 방법 및 합성 중간체는 기재도 시사도 되어 있지 않다.

갈라닌 수용체 조절 작용을 갖는 트라이아진 유도체가 특허문헌 5에 개시되어 있지만, 어느 문헌에 있어서도, 3CL 프로테아제 저해 활성 및 항바이러스 효과에 대해서는 기재도 시사도 되어 있지 않다. 또한, 본 발명에 따른 제조 방법 및 합성 중간체는 기재도 시사도 되어 있지 않다.

국제공개 제2012/020749호 국제공개 제2013/089212호 국제공개 제2010/092966호 국제공개 제2014/200078호 국제공개 제2012/009258호 국제공개 제2021/205298호 국제공개 제2021/250648호 중국 특허출원공개 제113620888호 명세서 중국 특허출원공개 제113666914호 명세서 중국 특허출원공개 제113735838호 명세서 중국 특허출원공개 제113773300호 명세서 중국 특허출원공개 제113801097호 명세서

"COVID-19 Dashboard by the Center for Systems Science and Engineering at Johns Hopkins University", [online], Johns Hopkins University, [2022년 9월 21일 검색], 인터넷<URL: https://coronavirus.jhu.edu/map.html> The NEW ENGLAND JOURNAL of MEDICINE(2020년), 382권, 1564∼1567페이지 "Report of the WHO-China Joint Mission on Coronavirus Disease 2019 (COVID-19)", [online], 2020년 2월 28일, WHO, [2021년 2월 8일 검색], 인터넷<URL: https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/who-china-joint-mission-on-covid-19-final-report.pdf> Science(2003년), 300권, 1763∼1767페이지 "A comparative analysis of SARS-CoV-2 antivirals characterizes 3CLpro inhibitor PF-00835231 as a potential new treatment for COVID-19", Journal of Virology, 2021년 4월 26일, [2022년 2월 15일 검색], 인터넷<URL: https://journals.asm.org/doi/10.1128/JVI.01819-20><doi: 10.1128/JVI.01819-20> Cell Research(2020년), 30권, 678∼692페이지 Science(2020년), 368권, 409∼412페이지 ACS Central Science(2021년), 7권, 3호, 467∼475페이지 Cancer Treatment Reviews(1984년), 11권, Supplement 1, 99∼110페이지 Contributions to Oncology(1984년), 18권, 221∼234페이지 Arzneimittel-Forschung(1984년), 11권, 6호, 663∼668페이지 261st Am Chem Soc (ACS) Natl Meet · 2021-04-05/2021-04-16 · Virtual, N/A · Abst 243 Science(2021년), 374권, 1586∼1593페이지 "Pfizer's Novel COVID-19 Oral Antiviral Treatment Candidate Reduced Risk Of Hospitalization Or Death By 89% In Interim Analysis Of Phase 2/3 EPIC-HR Study", [online], 2021년 11월 5일, Pfizer Press Release, [2022년 2월 15일 검색], 인터넷<URL: https://www.pfizer.com/news/press-release/press-release-detail/pfizers-novel-covid-19-oral-antiviral-treatment-candidate> AIMECS 2021(AFMC International Medicinal Chemistry Symposium 2021), 온라인 심포지엄, 2021년 11월 29일-12월 2일 bioRxiv preprint doi: https: //doi.org/10.1101/2022.01.26.477782, "Discovery of S-217622, a Non-Covalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19" J. Med. Chem. (2022년), 65권, 6499∼6512페이지, "Discovery of S-217622, a Noncovalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19"

본 발명의 목적은, 코로나바이러스 3CL 프로테아제 저해 활성을 나타내는 트라이아진 유도체, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체의 제조 방법을 제공하는 것에 있다.

또한, 본 발명의 목적은, 코로나바이러스 3CL 프로테아제 저해 활성을 나타내는 트라이아진 유도체, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체를 유효 성분으로서 함유하는, 경구 투여하는 제제를 제공하는 것에 있다.

본 발명은, 이하에 관한 것이다.

(1) 식(I):

[화학식 4]

(식 중, R¹은 치환 혹은 비치환된 C1-C4 알킬, R²는 각각 독립적으로, 할로젠, 사이아노 또는 메틸, n은 1∼5의 정수이다.)로 표시되는 화합물 또는 그의 염과, 식(II):

[화학식 5]

(식 중, R³은 각각 독립적으로, 치환 혹은 비치환된 C1-C4 알킬, m은 0∼5의 정수이다)로 표시되는 화합물 또는 그의 염을, 산 존재하에서 반응시키는 것을 특징으로 하는, 식(III):

[화학식 6]

으로 표시되는 화합물 또는 그의 염의 제조 방법.

(2) 산이, 트라이플루오로아세트산인, 상기 (1)에 기재된 제조 방법.

(3) 식(III)으로 표시되는 화합물이, 식(III-1):

[화학식 7]

인, 상기 (1) 또는 (2)에 기재된 제조 방법.

(4) 식(IV):

[화학식 8]

(식 중, R⁴는 치환 혹은 비치환된 방향족 헤테로환식기, 또는 치환 혹은 비치환된 방향족 탄소환식기이고, p는 0 또는 1이고, 그 밖의 기호는 상기 (1)과 동일한 의의이다.)로 표시되는 화합물 또는 그의 염과, 식(V):

[화학식 9]

(식 중, R⁵는 각각 독립적으로, 할로젠, 또는 치환 혹은 비치환된 알킬이고, q는 0∼5의 정수이다.) 또는 그의 염을, 산 존재하에서 반응시키는 것을 특징으로 하는, 식(VI):

[화학식 10]

(식 중의 기호는 상기와 동일한 의의이다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 염 또는 그들의 용매화물의 제조 방법.

(5) 산이 아세트산인, 상기 (4)에 기재된 제조 방법.

(6) 식(VI)으로 표시되는 화합물이,

식(VII):

[화학식 11]

인, 상기 (4) 또는 (5)에 기재된 제조 방법.

(7) 상기 (1)∼(3) 중 어느 하나의 제조 방법으로부터, 식(III):

[화학식 12]

으로 표시되는 화합물 또는 그의 염을 얻는 공정을 포함하는, 식(VII):

[화학식 13]

로 표시되는 화합물, 또는 그의 염 또는 그들의 용매화물의 제조 방법.

(8) 식(VII):

[화학식 14]

로 표시되는 화합물 또는 그의 염을, 푸마르산, 아세톤 및 물 존재하에서 결정화하는 것을 특징으로 하는, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 제조 방법.

(9) 상기 (1)∼(7) 중 어느 하나에 기재된 제조 방법을 사용하는 것에 의해 얻어진 식(VII):

[화학식 15]

로 표시되는 화합물 또는 그의 염을, 결정화시키는 것을 특징으로 하는, 상기 (8)에 기재된 제조 방법.

(10) 결정화 온도가 40∼60℃이고, 결정화 시간이 120분 이상인, 상기 (8) 또는 (9)에 기재된 제조 방법.

(11) 식(VIII):

[화학식 16]

로 표시되는 화합물, 또는 그의 염.

(12) 식(IX):

[화학식 17]

로 표시되는 화합물, 또는 그의 염.

(13) 식(X):

[화학식 18]

으로 표시되는 화합물, 또는 그의 염.

(14) 식(XI):

[화학식 19]

로 표시되는 화합물, 또는 그의 염.

(15) 식(VII):

[화학식 20]

로 표시되는 화합물의 톨루엔화물.

(16) 실질적으로, 식(VII):

[화학식 21]

로 표시되는 화합물의 프리체가 포함되지 않는, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형.

(17) 이하의 식:

[화학식 22]

로 표시되는 화합물의 메실산염.

(18) 이하의 식:

[화학식 23]

로 표시되는 화합물의 메실산염.

(19) 이하의 식:

[화학식 24]

로 표시되는 화합물, 또는 그의 염.

(20) 이하의 식:

[화학식 25]

로 표시되는 화합물, 또는 그의 염.

(21) 이하의 식:

[화학식 26]

로 표시되는 화합물의 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]-7-운데센염인, 상기 항목(20)에 기재된 염.

(22) 식(VII):

[화학식 27]

로 표시되는 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체를 유효 성분으로서 함유하는, 경구 투여하는 제제(의약 조성물).

(23) 유효 성분이, 식(VII)로 표시되는 화합물의 복합체이며, 당해 복합체가 푸마르산을 포함하는 복합체인, 상기 (22)에 기재된 제제(의약 조성물).

(24) 당해 복합체가, 식(VII)로 표시되는 화합물 및 푸마르산이 1:1의 몰비인 공결정인, 상기 (23)에 기재된 제제(의약 조성물).

(25) 고분자를 제제 중에 함유하는, 상기 (22)∼(24) 중 어느 하나에 기재된 제제(의약 조성물).

(26) 고분자가 셀룰로스계 고분자, 아크릴계 고분자, 바이닐계 고분자로부터 선택되는 1 이상인, 상기 (25)에 기재된 제제(의약 조성물).

(27) 유효 성분이, 상기 (4)∼(10) 중 어느 하나에 기재된 방법에 의해 얻어진 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체인, 상기 (22)∼(26) 중 어느 하나에 기재된 제제(의약 조성물).

(28) 코로나바이러스 감염증을 치료 및/또는 예방하기 위한, 상기 (22)∼(27) 중 어느 하나에 기재된 제제(의약 조성물).

(29) 코로나바이러스 감염증이, 신형 코로나바이러스 감염증(COVID-19)인, 상기 (28)에 기재된 제제(의약 조성물).

(30) 유효 성분으로서 식(VII)로 표시되는 화합물이 125.0mg 포함되는, 상기 (22)에 기재된 제제.

(31) 식(VII)로 표시되는 화합물 및 푸마르산의 몰비가 1:1인 복합체를 152.3mg 포함하는, 상기 (23)에 기재된 제제.

(32) 유효 성분으로서 식(VII)로 표시되는 화합물이 250.0mg 포함되는, 상기 (22)에 기재된 제제.

(33) 식(VII)로 표시되는 화합물 및 푸마르산의 몰비가 1:1인 복합체를 304.6mg 포함하는, 상기 (23)에 기재된 제제.

(34) 유효 성분으로서 식(VII)로 표시되는 화합물이 25.0mg 포함되는, 상기 (22)에 기재된 제제.

(35) 식(VII)로 표시되는 화합물 및 푸마르산의 몰비가 1:1인 복합체를 30.46mg 포함하는, 상기 (23)에 기재된 제제.

(36) 12세 이상의 소아 및 성인에게 이용하는, 상기 (22)∼(35) 중 어느 하나에 기재된 제제.

(37) 6세 이상 12세 미만의 소아에게 이용하는, 상기 (22)∼(35) 중 어느 하나에 기재된 제제.

본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물은, 코로나바이러스 3CL 프로테아제에 대한 저해 활성을 가져, 코로나바이러스 감염증의 치료제 및/또는 예방제로서 유용하다.

또한, 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물은, 의약원체로서 유용하다.

나아가, 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물(I-0005)의 푸마르산 공결정을 함유하는 의약 조성물은, 신형 코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 치료제로서 매우 유용하다. 본 발명에 따른 제조 방법은, 본 발명에 따른 화합물을 수율 좋게 제조할 수 있는 방법이다.

본 발명에 따른, 경구 투여하는 제제(의약 조성물)는, 코로나바이러스 3CL 프로테아제에 대한 저해 활성을 가져, 코로나바이러스 감염증의 치료제 및/또는 예방제로서 유용하다.

도 1은 실시예 a에 있어서의 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 분말 X선 회절 패턴을 나타낸다. 가로축은 2θ(°)이고, 세로축은 강도(Count)를 나타낸다.
도 2는 도 1의 분말 X선 해석 패턴의 피크 리스트를 나타낸다.
도 3은 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 비대칭 단위 중의 구조를 나타낸다.
도 4는 도 1의 분말 X선 해석 패턴을 나타낸 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의, DSC 분석 결과를 나타낸다. 가로축은 온도(℃)를, 세로축은 열량(W/g)을 나타낸다.
도 5는 도 1의 분말 X선 해석 패턴을 나타낸 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의, TG/DTA 분석 결과를 나타낸다. 세로축은 열량(μV) 또는 중량 변화(%)를 나타내고, 가로축은 온도(℃)를 나타낸다. 도면 중의 Cel은, 섭씨도(℃)를 의미한다.
도 6은 도 1의 분말 X선 해석 패턴을 나타낸 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의, DVS 분석 결과를 나타낸다. 습도를 변화시키더라도 실질적인 중량 변화는 보이지 않아, 당해 결정은 수분에 대해서 안정했다.
도 7은 실시예 1a의 공정 4에서 얻어진 화합물 I-005의 HPLC 측정 결과를 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물(화합물 I-005)의 pa%(피크 면적%)는 약 95pa%였다.
도 8은 공정 4'에서 얻어진 화합물 I-005의 HPLC 측정 결과를 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물(화합물 I-005)의 pa%는 약 99pa%였다.
도 9는 실시예 b에 있어서의, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 분말 X선 회절 패턴을 나타낸다. 가로축은 2θ(°)이고, 세로축은 강도(Count)를 나타낸다.
도 10은 도 9의 분말 X선 해석 패턴의 피크 테이블을 나타낸다.
도 11은 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 비대칭 단위 중의 구조도를 나타낸다.
도 12는 실시예 1b의 공정 5-1에서 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 미건조 결정의 HPLC의 결과를 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 pa%는 약 99pa%였다.
도 13은 도 12에 있어서, 톨루엔 유래의 피크(RT=약 9.8min)를 제외한 해석 결과를 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 pa%는 약 99.7pa%이며, 각 불순물은 약 0.1pa% 이하였다.
도 14는 실시예 1b의 공정 5-2에서 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의, DSC 분석 결과를 나타낸다.
도 15는 실시예 1b의 공정 5-2에서 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의, TG/DTA 분석 결과를 나타낸다. 150℃까지의 중량 감소는 0.28%였다.
도 16은 실시예 1b의 공정 5-2에서 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의, HPLC의 결과를 나타낸다.
도 17은 실시예 1b의 공정 5-2에서 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 입도 분포를 나타낸다. D50은 25.35μm, D90은 73.56μm였다.
도 18은 실시예 1b의 공정 5-2에서 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 DVS 분석 결과를 나타낸다. 습도를 변화시키더라도 실질적인 중량 변화는 보이지 않아, 당해 결정은 수분에 대해서 안정했다.
도 19는 도 18의 DVS 측정 전후에서의 분말 X선 해석 패턴의 비교를 나타낸다. DVS 측정의 전후에서 결정형은 변화하지 않아, 안정했다.
도 20은 식(VII)로 표시되는 화합물의 톨루엔화물의 분말 X선 회절 패턴을 나타낸다. 가로축은 2θ(°)이고, 세로축은 강도(Count)를 나타낸다.
도 21은 실시예 6의 용출 거동을 나타낸다. 가로축은 시간(분), 세로축은 용출률(%)을 나타낸다.
도 22는 실시예 6A 및 6B의 제제에 이용한 유효 성분(식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정)의 입도 분포를 나타낸다.
도 23은 실시예 6C 및 6D의 제제에 이용한 유효 성분(식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정)의 입도 분포를 나타낸다.
도 24는 Phase 2a Part의 SARS-CoV-2의 바이러스 역가의 베이스라인으로부터의 변화량을 나타낸다. 세로축은 바이러스 역가의 베이스라인으로부터의 변화량(log₁₀(TCID₅₀/mL)), 가로축은 평가 시점을 나타낸다.
도 25는 바이러스 역가 음성이 최초로 확인될 때까지의 시간을 나타낸다. 세로축은 SARS-CoV-2 바이러스 역가 음성자의 비율(단위: %)을 나타낸다. 가로축은 치료 개시로부터의 시간(단위: 시간)을 나타낸다.
도 26은 각 시점에 있어서의 COVID-19의 12증상 합계 스코어의 베이스라인으로부터의 변화량을 나타낸다. 세로축은 COVID-19의 12증상 합계 스코어의 베이스라인으로부터의 변화량을 나타낸다. 가로축은 평가 시점을 나타낸다.
도 27은 실시예 10의 용출 거동을 나타낸다. 가로축은 시간(분), 세로축은 함량 보정한 용출률(%)을 나타낸다.

이하에 본 명세서에 있어서 이용되는 각 용어의 의미를 설명한다. 각 용어는 특별히 언급이 없는 한, 단독으로 이용되는 경우도, 또는 다른 용어와 조합하여 이용되는 경우도, 동일한 의미로 이용된다.

「로 이루어진다」라는 용어는, 구성 요건만을 갖는 것을 의미한다.

「포함한다」 또는 「함유한다」라는 용어는, 구성 요건으로 한정되지 않고, 기재되어 있지 않은 요소를 배제하지 않는 것을 의미한다.

또한, 본 명세서의 전체에 걸쳐, 단수형의 표현은, 특별히 언급하지 않는 한, 그의 복수형의 개념도 포함하는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 단수형의 관사(예를 들면, 영어의 경우는 「a」, 「an」, 「the」 등)는, 특별히 언급하지 않는 한, 그의 복수형의 개념도 포함하는 것이 이해되어야 한다.

또한, 본 명세서에 있어서 사용되는 용어는, 특별히 언급하지 않는 한, 당해 분야에서 통상 이용되는 의미로 이용되는 것이 이해되어야 한다. 따라서, 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서 중에서 사용되는 모든 전문 용어 및 과학 기술 용어는, 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 모순되는 경우, 본 명세서(정의를 포함시켜)가 우선한다.

「할로젠」이란, 불소 원자, 염소 원자, 브로민 원자, 및 아이오딘 원자를 포함한다. 특히 불소 원자 및 염소 원자가 바람직하다.

「알킬」이란, 탄소수 1∼15, 바람직하게는 탄소수 1∼10, 보다 바람직하게는 탄소수 1∼6, 더 바람직하게는 탄소수 1∼4의 직쇄 또는 분기상의 탄화수소기를 포함한다. 예를 들면, 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-뷰틸, 아이소뷰틸, sec-뷰틸, tert-뷰틸, n-펜틸, 아이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 아이소헥실, n-헵틸, 아이소헵틸, n-옥틸, 아이소옥틸, n-노닐, n-데실 등을 들 수 있다.

「알킬」의 바람직한 태양으로서, 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-뷰틸, 아이소뷰틸, sec-뷰틸, tert-뷰틸, n-펜틸을 들 수 있다. 더 바람직한 태양으로서, 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, tert-뷰틸을 들 수 있다.

「C1-C4 알킬」이란, 탄소수 1∼4의 직쇄 또는 분기상의 탄화수소기를 포함한다. 예를 들면, 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-뷰틸, 아이소뷰틸, sec-뷰틸, tert-뷰틸 등을 들 수 있다.

「방향족 탄소환식기」란, 단환 또는 2환 이상의, 환상 방향족 탄화수소기를 의미한다. 예를 들면, 페닐, 나프틸, 안트릴, 페난트릴 등을 들 수 있다. 6원 방향족 탄소환식기로서는, 예를 들면, 페닐을 들 수 있다. 10원 방향족 탄소환식기로서는, 예를 들면, 나프틸 등을 들 수 있다. 14원 방향족 탄소환식기로서는, 예를 들면, 안트릴, 페난트릴 등을 들 수 있다.

「방향족 탄소환식기」의 바람직한 태양으로서, 페닐을 들 수 있다.

「방향족 탄소환」이란, 상기 「방향족 탄소환식기」로부터 유도되는 환을 의미한다.

「방향족 헤테로환식기」란, O, S 및 N으로부터 임의로 선택되는 동일 또는 상이한 헤테로원자를 환 내에 1 이상 갖는, 단환 또는 2환 이상의, 방향족 환식기를 의미한다.

2환 이상의 방향족 헤테로환식기는, 단환 또는 2환 이상의 방향족 헤테로환식기에, 상기 「방향족 탄소환식기」에 있어서의 환이 축합된 것도 포함하고, 해당 결합손은 어느 환에 갖고 있어도 된다.

단환의 방향족 헤테로환식기로서는, 5∼8원이 바람직하고, 보다 바람직하게는 5원 또는 6원이다. 5원 방향족 헤테로환식기로서는, 예를 들면, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 퓨릴, 싸이엔일, 아이속사졸릴, 옥사졸릴, 옥사다이아졸릴, 아이소싸이아졸릴, 싸이아졸릴, 싸이아다이아졸릴 등을 들 수 있다. 6원 방향족 헤테로환식기로서는, 예를 들면, 피리딜, 피리다진일, 피리미딘일, 피라진일, 트라이아진일 등을 들 수 있다.

2환의 방향족 헤테로환식기로서는, 8∼10원이 바람직하고, 보다 바람직하게는 9원 또는 10원이다. 예를 들면, 인돌릴, 아이소인돌릴, 인다졸릴, 인돌리진일, 퀴놀린일, 아이소퀴놀린일, 신놀린일, 프탈라진일, 퀴나졸린일, 나프티리딘일, 퀴녹살린일, 퓨린일, 프테리딘일, 벤즈이미다졸릴, 벤즈아이속사졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤즈옥사다이아졸릴, 벤즈아이소싸이아졸릴, 벤조싸이아졸릴, 벤조싸이아다이아졸릴, 벤조퓨릴, 아이소벤조퓨릴, 벤조싸이엔일, 벤조트라이아졸릴, 이미다조피리딜, 트라이아졸로피리딜, 이미다조싸이아졸릴, 피라지노피리다진일, 옥사졸로피리딜, 싸이아졸로피리딜 등을 들 수 있다. 9원 방향족 헤테로환식기로서는, 인돌릴, 아이소인돌릴, 인다졸릴, 인돌리진일, 퓨린일, 벤즈이미다졸릴, 벤즈아이속사졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤즈옥사다이아졸릴, 벤즈아이소싸이아졸릴, 벤조싸이아졸릴, 벤조싸이아다이아졸릴, 벤조트라이아졸릴, 벤조퓨란일, 이미다조피리딜, 트라이아졸로피리딜, 옥사졸로피리딜, 싸이아졸로피리딜 등을 들 수 있다. 10원 방향족 헤테로환식기로서는, 퀴놀린일, 아이소퀴놀린일, 신놀린일, 프탈라진일, 퀴나졸린일, 나프티리딘일, 퀴녹살린일, 프테리딘일, 피라지노피리다진일 등을 들 수 있다.

3환 이상의 방향족 헤테로환식기로서는, 13∼15원이 바람직하다. 예를 들면, 카바졸릴, 아크리딘일, 잔텐일, 페노싸이아진일, 페녹사싸이인일, 페녹사진일, 다이벤조퓨릴 등을 들 수 있다.

「방향족 헤테로환식기」의 바람직한 태양으로서, 트라이아졸릴을 들 수 있다.

「방향족 헤테로환」이란, 상기 「방향족 헤테로환식기」로부터 유도되는 환을 의미한다.

「치환 알킬」의 치환기로서는, 다음의 치환기군 A를 들 수 있다. 임의의 위치의 탄소 원자가 다음의 치환기군 A로부터 선택되는 1 이상의 기와 결합하고 있어도 된다.

치환기군 A: 할로젠, 사이아노 및 나이트로.

「치환 C1-C4 알킬」의 치환기로서는, 다음의 치환기군 B를 들 수 있다. 임의의 위치의 탄소 원자가 다음의 치환기군 B로부터 선택되는 1 이상의 기와 결합하고 있어도 된다.

치환기군 B: 할로젠, 사이아노 및 나이트로.

「치환 방향족 탄소환식기」 및 「치환 방향족 헤테로환식기」 등의 「방향족 탄소환」 및 「방향족 헤테로환」의 환 상의 치환기로서는, 다음의 치환기군 C를 들 수 있다. 환 상의 임의의 위치의 원자가 다음의 치환기군 B로부터 선택되는 1 이상의 기와 결합하고 있어도 된다.

치환기군 C: 할로젠, 사이아노, 나이트로 및 알킬.

식(VI) 및 식(VII)로 표시되는 화합물은, 특정한 이성체로 한정하는 것은 아니고, 모든 가능한 이성체(예를 들면, 케토-엔올 이성체, 이민-엔아민 이성체, 다이아스테레오 이성체, 광학 이성체, 회전 이성체 등), 라세미체 또는 그들의 혼합물을 포함한다.

[화학식 28]

예를 들면, 식(VII)로 표시되는 화합물이나 화합물 I-005는, 이하와 같은 호변 이성체를 포함한다.

[화학식 29]

실질적으로, 식(VII):

[화학식 30]

로 표시되는 화합물의 프리체가 포함되지 않는, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형이란, 분말 X선 회절 측정 등의 측정 기기로, 식(VII)로 표시되는 화합물의 프리체 유래의 피크가 검출되지 않는(검출 한계 이하인), 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형을 의미한다.

추가로, 식(I), 식(II), 식(III), 식(IV), 식(V), 식(VI), 식(VII), 식(VIII), 식(IX), 식(X), 및 식(XI)(이하, 식(VII) 등으로 한다)로 표시되는 화합물의 하나 이상의 수소, 탄소 및/또는 다른 원자는, 각각 수소, 탄소 및/또는 다른 원자의 동위체로 치환될 수 있다. 그와 같은 동위체의 예로서는, 각각 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F, ¹²³I 및 ³⁶Cl과 같이, 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 아이오딘 및 염소가 포함된다. 식(VII) 등으로 표시되는 화합물은, 그와 같은 동위체로 치환된 화합물도 포함한다. 해당 동위체로 치환된 화합물은, 의약품으로서도 유용하고, 식(VII) 등으로 표시되는 화합물의 모든 방사성 표지체를 포함한다. 또한 해당 「방사성 표지체」를 제조하기 위한 「방사성 표지화 방법」도 본 발명에 포함되고, 해당 「방사성 표지체」는, 대사 약물 동태 연구, 결합 어세이에 있어서의 연구 및/또는 진단의 툴로서 유용하다.

또한, 본 발명의 결정은 중수소 변환체여도 된다. 본 발명의 결정은 동위 원소(예, ³H, ¹⁴C, ³⁵S, ¹²⁵I 등)로 표지되어 있어도 된다.

식(VII) 등으로 표시되는 화합물의 방사성 표지체는, 당해 기술 분야에서 주지된 방법으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 식(VII) 등으로 표시되는 트라이튬 표지 화합물은, 트라이튬을 이용한 촉매적 탈할로젠화 반응에 의해, 식(VII) 등으로 표시되는 특정한 화합물에 트라이튬을 도입함으로써 조제할 수 있다. 이 방법은, 적절한 촉매, 예를 들면 Pd/C의 존재하, 염기의 존재하 또는 비존재하에서, 식(VII) 등으로 표시되는 화합물이 적절히 할로젠 치환된 전구체와 트라이튬 가스를 반응시키는 것을 포함한다. 트라이튬 표지 화합물을 조제하기 위한 다른 적절한 방법은, "Isotopes in the Physical and Biomedical Sciences, Vol. 1, Labeled Compounds(Part A), Chapter 6(1987년)"을 참조할 수 있다. ¹⁴C-표지 화합물은, ¹⁴C 탄소를 갖는 원료를 이용하는 것에 의해 조제할 수 있다.

본 발명의 제제에 있어서는, 식(VII) 등으로 표시되는 화합물의 제약상 허용되는 염을 이용할 수 있다. 식(VII) 등으로 표시되는 화합물의 제약상 허용되는 염으로서는, 예를 들면, 식(VII) 등으로 표시되는 화합물과, 알칼리 금속(예를 들면, 리튬, 나트륨, 칼륨 등), 알칼리 토류 금속(예를 들면, 칼슘, 바륨 등), 마그네슘, 전이 금속(예를 들면, 아연, 철 등), 암모니아, 유기 염기(예를 들면, 트라이메틸아민, 트라이에틸아민, 다이사이클로헥실아민, 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트라이에탄올아민, 메글루민, 에틸렌다이아민, 피리딘, 피콜린, 퀴놀린 등) 및 아미노산의 염, 또는 무기산(예를 들면, 염산, 황산, 질산, 탄산, 브로민화 수소산, 인산, 아이오딘화 수소산 등), 및 유기산(예를 들면, 폼산, 아세트산, 프로피온산, 트라이플루오로아세트산, 시트르산, 락트산, 타타르산, 옥살산, 말레산, 푸마르산, 석신산, 만델산, 글루타르산, 말산, 벤조산, 프탈산, 아스코브산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 트라이플루오로아세트산 등)의 염을 들 수 있다. 이들의 염은, 통상 행해지는 방법에 의해 형성시킬 수 있다.

식(VII)로 표시되는 화합물의 제약상 허용되는 염으로서는, 예를 들면, 식(VII)로 표시되는 화합물과 카운터 분자 또는 카운터 이온으로 이루어지고, 임의의 수의 카운터 분자 또는 카운터 이온을 포함하고 있어도 된다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 제약상 허용되는 염은, 화합물과 카운터 분자 또는 카운터 원자 사이에서 프로톤 이동하는 것에 의해, 이온 결합을 개재시키는 것을 말한다.

본 발명의 제제에 있어서는, 식(VII)로 표시되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 복합체를 이용할 수 있다. 식(VII)로 표시되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은, 용매화물(예를 들면, 수화물 등), 공결정 및/또는 포접 화합물을 형성하는 경우가 있고, 본 명세서 중에서는 그들을 「복합체」라고 기재한다.

본 명세서 중에서 이용하는 「용매화물」이란, 예를 들면 식(VII) 등으로 표시되는 화합물에 대하여, 임의의 수의 용매 분자(예를 들면, 물 분자 등)와 배위되어 있어도 된다. 식(VII) 등으로 표시되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을, 대기 중에 방치하는 것에 의해, 수분을 흡수하여, 흡착수가 부착되는 경우나, 수화물을 형성하는 경우가 있다.

용매 분자로서는, 예를 들면, 아세토나이트릴, 클로로벤젠, 클로로폼, 사이클로헥세인, 1,2-다이클로로에텐, 다이클로로메테인, 1,2-다이메톡시에테인, N,N-다이메틸아세트아마이드, N,N-다이메틸폼아마이드, 1,4-다이옥세인, 2-에톡시에탄올, 에틸렌 글라이콜, 폼아마이드, 헥세인, 메탄올, 2-메톡시에탄올, 메틸 뷰틸 케톤, 메틸사이클로헥세인, N-메틸피롤리돈, 나이트로메테인, 피리딘, 설폴레인, 테트랄린, 톨루엔, 1,1,2-트라이클로로에텐, 자일렌, 아세트산, 아니솔, 1-뷰탄올, 2-뷰탄올, 아세트산 n-뷰틸, t-뷰틸 메틸 에터, 큐멘, 다이메틸설폭사이드, 아세트산 에틸, 다이에틸 에터, 폼산 에틸, 폼산, 헵테인, 아세트산 아이소뷰틸, 아세트산 아이소프로필, 아세트산 메틸, 3-메틸-1-뷰탄올, 메틸 에틸 케톤, 메틸 아이소뷰틸 케톤, 2-메틸-1-프로판올, 펜테인, 1-펜탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세트산 프로필, 테트라하이드로퓨란, 물(즉 수화물), 에탄올, 아세톤, 1,1-다이에톡시프로페인, 1,1-다이메톡시메테인, 2,2-다이메톡시프로페인, 아이소옥테인, 아이소프로필 에터, 메틸 아이소프로필 케톤, 메틸테트라하이드로퓨란, 석유 에터, 트라이클로로아세트산 및 트라이플루오로아세트산, 바람직하게는, 아세트산, 아니솔, 1-뷰탄올, 2-뷰탄올, 아세트산 n-뷰틸, t-뷰틸 메틸 에터, 큐멘, 다이메틸설폭사이드, 아세트산 에틸, 다이에틸 에터, 폼산 에틸, 폼산, 헵테인, 아세트산 아이소뷰틸, 아세트산 아이소프로필, 아세트산 메틸, 3-메틸-1-뷰탄올, 메틸 에틸 케톤, 메틸 아이소뷰틸 케톤, 2-메틸-1-프로판올, 펜테인, 1-펜탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 아세트산 프로필, 테트라하이드로퓨란, 물(즉 수화물), 에탄올, 아세톤, 1,1-다이에톡시프로페인, 1,1-다이메톡시메테인, 2,2-다이메톡시프로페인, 아이소옥테인, 아이소프로필 에터, 메틸 아이소프로필 케톤, 메틸테트라하이드로퓨란, 석유 에터, 트라이클로로아세트산 및 트라이플루오로아세트산, 보다 바람직하게는, 물(즉 수화물), 에탄올, 아세톤, 1,1-다이에톡시프로페인, 1,1-다이메톡시메테인, 2,2-다이메톡시프로페인, 아이소옥테인, 아이소프로필 에터, 메틸 아이소프로필 케톤, 메틸테트라하이드로퓨란, 석유 에터, 트라이클로로아세트산 및 트라이플루오로아세트산 등을 들 수 있다.

본 명세서 중에서 이용하는 「공결정」이란, 카운터 분자가 동일 결정 격자 내에 규칙적으로 배열되는 것을 의미하고, 임의의 수의 카운터 분자를 포함하고 있어도 된다. 또한, 공결정이란, 화합물과 카운터 분자의 분자간 상호작용이, 수소결합, 반데르발스력 등의, 비공유 결합성 또한 비이온성의 화학적 상호작용을 개재시키는 것을 말한다.

예를 들면, 식(VII)로 표시되는 화합물의 공결정으로서는, 식(VII)로 표시되는 화합물과 카운터 분자로 이루어지고, 임의의 수의 카운터 분자를 포함하고 있어도 된다. 바람직하게는, 식(VII)로 표시되는 화합물과 푸마르산으로 이루어지고, 임의의 수의 푸마르산을 포함하고 있어도 된다. 더 바람직하게는, 식(VII)로 표시되는 화합물 및 푸마르산이 1:1의 몰비인 공결정이다.

공결정은, 화합물이 본질적으로 무전하 또는 중성인 그대로라고 하는 점에서, 염과 구별된다.

공결정은, 카운터 분자가 물 혹은 용매는 아니라고 하는 점에서 수화물 또는 용매화물과 구별된다.

본 발명의 식(I), 식(II), 식(III), 식(IV), 식(V), 식(VI), 식(VII), 식(VIII), 식(IX), 식(X), 및 식(XI)로 표시되는 화합물 또는 그의 염은, 용매화물(예를 들면, 수화물 등), 공결정 및/또는 결정 다형을 형성하는 경우가 있고, 본 발명은 그와 같은 각종의 용매화물, 공결정 및 결정 다형도 포함한다. 「용매화물」은, 식(I), 식(II), 식(III), 식(IV), 식(V), 식(VI), 식(VII), 식(VIII), 식(IX), 식(X), 및 식(XI)로 표시되는 화합물에 대하여, 임의의 수의 용매 분자(예를 들면, 물 분자 등)와 배위되어 있어도 된다. 또한, 식(I), 식(II), 식(III), 식(IV), 식(V), 식(VI), 식(VII), 식(VIII), 식(IX), 식(X), 및 식(XI)로 표시되는 화합물 또는 그의 염을, 재결정함으로써 결정 다형을 형성하는 경우가 있다.

본 명세서 중에서 이용하는 「결정」이란, 구성하는 원자, 이온, 분자 등이 삼차원적으로 규칙 바르게 배열된 고체를 의미하고, 그와 같은 규칙 바른 내부 구조를 가지지 않는 비정질 고체와는 구별된다. 본 발명의 결정은, 단결정, 쌍정, 다결정 등이어도 된다.

추가로, 「결정」에는, 조성이 동일하면서 결정 중의 배열이 상이한 「결정 다형」이 존재하는 경우가 있고, 그들을 포함시켜 「결정 형태」라고 한다.

게다가, 식(I), 식(II), 식(III), 식(IV), 식(V), 식(VI), 식(VII), 식(VIII), 식(IX), 식(X), 및 식(XI)로 표시되는 화합물은, 이들의 염 또는 이들의 제약상 허용되는 용매화물로 변환해도 된다. 본 발명의 결정은, 이들의 염, 수화물, 용매화물, 결정 다형의 어느 것이어도 되고, 2개 이상의 혼합물이어도, 발명의 범위 내에 포함될 것이 의도된다.

결정 형태 및 결정화도는, 예를 들면, 분말 X선 회절 측정, 라만 분광법, 적외 흡수 스펙트럼 측정법, 수분 흡탈착 측정, 시차 주사 열량 측정, 용해 특성을 포함시킨 많은 기술에 의해 측정할 수 있다.

또한, 식(VII) 등으로 표시되는 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체를, 재결정함으로써 「결정 다형」을 형성하는 경우가 있다.

본 발명 제제에 있어서는, 그와 같은 각종의 염, 복합체(수화물, 용매화물, 공결정, 포접 화합물), 결정 다형을 이용할 수 있고, 또한 그들의 2개 이상의 혼합물이어도 이용할 수 있다.

(분말 X선 회절(XRPD))

분말 X선 회절(XRPD)은, 고체의 결정 형태 및 결정성을 측정하기 위한 가장 감도가 좋은 분석법의 하나이다. X선이 결정에 조사되면, 결정 격자면에서 반사되고, 서로 간섭되어, 구조의 주기에 대응한 질서정연한 회절선을 나타낸다. 한편, 비정질 고체에 대해서는, 통상, 그 구조 중에 질서정연한 반복 주기를 가지지 않기 때문에, 회절 현상은 일어나지 않아, 특징이 없는 브로드한 XRPD 패턴(할로 패턴이라고도 불린다)을 나타낸다.

식(VII) 등으로 표시되는 화합물의 결정 형태는, 분말 X선 회절 패턴 및 특징적인 회절 피크에 의해 식별 가능하다. 식(VII) 등으로 표시되는 화합물의 결정 형태는, 특징적인 회절 피크의 존재에 의해 다른 결정 형태와 구별할 수 있다.

본 명세서 중에서 이용하는 특징적인 회절 피크는, 관측된 회절 패턴으로부터 선택되는 피크이다. 특징적인 회절 피크는, 바람직하게는 회절 패턴에 있어서의 약 10개, 보다 바람직하게는 약 5개, 더 바람직하게는 약 3개로부터 선택된다.

복수의 결정을 구별하는 데 있어서는, 피크의 강도보다도, 당해 결정에서 확인되고, 다른 결정에서는 확인되지 않는 피크가, 그 결정을 특정하는 데 있어서 바람직한 특징적인 피크가 된다. 그러한 특징적인 피크이면, 1개 또는 2개의 피크로도, 당해 결정을 특징지을 수 있다. 측정하여 얻어진 차트를 비교해서, 이들의 특징적인 피크가 일치하면, 분말 X선 회절 패턴이 실질적으로 일치한다고 말할 수 있다.

일반적으로, 분말 X선 회절에 있어서의 회절 각도(2θ)는 ±0.2°의 범위 내에서 오차가 생길 수 있기 때문에, 분말 X선 회절의 회절 각도의 값은 ±0.2° 정도의 범위 내의 수치도 포함하는 것으로서 이해될 필요가 있다. 따라서, 분말 X선 회절에 있어서의 피크의 회절 각도가 완전히 일치하는 결정뿐만 아니라, 피크의 회절 각도가 ±0.2° 정도의 오차로 일치하는 결정도 본 발명에 포함된다.

이하의 표 및 도면에 있어서 표시되는 피크의 강도는, 일반적으로, 많은 인자, 예를 들면 X선빔에 대한 결정의 선택 배향의 효과, 조대 입자의 영향, 분석되는 물질의 순도 또는 샘플의 결정화도에 의해 변동할 수 있는 것이 알려져 있다. 또한, 피크 위치에 대해서도, 샘플 높이의 변동에 기초하여 시프트할 수 있다. 나아가, 상이한 파장을 사용하여 측정하면 브래그식(nλ=2dsinθ)에 따라 상이한 시프트가 얻어지지만, 이와 같은 다른 파장의 사용에 의해 얻어지는 다른 XRPD 패턴도, 본 발명의 범위에 포함된다.

(단결정 구조 해석)

결정을 특정하는 방법의 하나로, 당해 결정에 있어서의 결정학적 파라미터, 추가로, 원자 좌표(각 원자의 공간적인 위치 관계를 나타내는 값) 및 3차원 구조 모델을 얻을 수 있다. 사쿠라이 도시오저 「X선 구조 해석의 안내」 쇼카보 출판사 발행(1983년), Stout & Jensen저 X-Ray Structure Determination: A Practical Guide, Macmillan Co., New York (1968) 등을 참조. 본 발명과 같은 복합체, 염, 광학 이성체, 호변 이성체, 기하 이성체의 결정의 구조를 동정할 때에는, 단결정 구조 해석이 유용하다.

식(VII) 등으로 표시되는 화합물은, 코로나바이러스 3CL 프로테아제 저해 활성을 갖기 때문에, 코로나바이러스 3CL 프로테아제가 관여하는 질환의 치료 및/또는 예방제로서 유용하다. 본 발명에 있어서 「치료제 및/또는 예방제」라고 하는 경우, 증상 개선제도 포함한다. 코로나바이러스 3CL 프로테아제가 관여하는 질환으로서는, 바이러스 감염증을 들 수 있고, 바람직하게는 코로나바이러스 감염증을 들 수 있다.

하나의 태양으로서, 코로나바이러스로서는, 인간에게 감염하는 코로나바이러스를 들 수 있다. 인간에게 감염하는 코로나바이러스로서는, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-HKU1, HCoV-OC43, SARS-CoV, MERS-CoV, 및/또는 SARS-CoV-2를 들 수 있다.

하나의 태양으로서, 코로나바이러스로서는, 알파 코로나바이러스 및/또는 베타 코로나바이러스, 보다 바람직하게는 베타 코로나바이러스, 더 바람직하게는 사르베코바이러스를 들 수 있다.

하나의 태양으로서, 알파 코로나바이러스로서는, HCoV-229E 및 HCoV-NL63을 들 수 있다. 특히 바람직하게는, HCoV-229E를 들 수 있다.

하나의 태양으로서, 베타 코로나바이러스로서는, HCoV-HKU1, HCoV-OC43, SARS-CoV, MERS-CoV, 및/또는 SARS-CoV-2를 들 수 있다. 바람직하게는 HCoV-OC43 또는 SARS-CoV-2, 특히 바람직하게는 SARS-CoV-2를 들 수 있다.

하나의 태양으로서, 베타 코로나바이러스로서는, 베타 코로나바이러스 A 계통(β-coronavirus lineage A), 베타 코로나바이러스 B 계통(β-coronavirus lineage B), 및 베타 코로나바이러스 C 계통(β-coronavirus lineage C)을 들 수 있다. 보다 바람직하게는, 베타 코로나바이러스 A 계통(β-coronavirus lineage A), 및 베타 코로나바이러스 B 계통(β-coronavirus lineage B), 특히 바람직하게는 베타 코로나바이러스 B 계통(β-coronavirus lineage B)을 들 수 있다.

베타 코로나바이러스 A 계통(β-coronavirus lineage A)으로서는, 예를 들면 HCoV-HKU1 및 HCoV-OC43, 바람직하게는, HCoV-OC43을 들 수 있다. 베타 코로나바이러스 B 계통(β-coronavirus lineage B)으로서는, 예를 들면 SARS-CoV 및 SARS-CoV-2, 바람직하게는 SARS-CoV-2를 들 수 있다. 베타 코로나바이러스 C 계통(β-coronavirus lineage B)으로서는, 바람직하게는 MERS-CoV를 들 수 있다.

하나의 태양으로서, 코로나바이러스로서는, HCoV-229E, HCoV-OC43, 및/또는 SARS-CoV-2, 특히 바람직하게는 SARS-CoV-2를 들 수 있다.

코로나바이러스 감염증으로서는, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, MERS-CoV, 및/또는 SARS-CoV-2에 의한 감염증을 들 수 있다. 바람직하게는, HCoV-229E, HCoV-OC43, 및/또는 SARS-CoV-2에 의한 감염증, 특히 바람직하게는, SARS-CoV-2에 의한 감염증을 들 수 있다.

코로나바이러스 감염증으로서는, 특히 바람직하게는, 신형 코로나바이러스 감염증(COVID-19)을 들 수 있다.

이하에, 본 발명에 따른 제조 방법에 대하여 설명한다.

공정 1 식(III)으로 표시되는 화합물의 제조 방법

[화학식 31]

식 중의 기호는 상기와 동일한 의의이다.

본 공정은, 식(I)로 표시되는 화합물과 식(II)로 표시되는 화합물을 산 존재하에서 반응시키는 것을 특징으로 하는, 식(III)으로 표시되는 화합물의 제조 방법이다.

식(I)로 표시되는 화합물에 대해서, 식(II)로 표시되는 화합물은, 통상, 1.0∼5.0당량, 예를 들면, 1.0∼3.0당량 이용할 수 있다.

용매로서는, 상기 공정을 효율 좋게 진행시키는 것이면 특별히 제한되지 않고, 산을 용매로서 이용해도 된다. 산, 톨루엔, 염화 메틸렌, 다이클로로에테인 등을 들 수 있고, 단독 또는 혼합하여 이용할 수 있다. 바람직하게는, 산을 들 수 있다.

산으로서는, 프로톤산, 루이스산을 들 수 있고, 바람직하게는, 트라이플루오로아세트산을 들 수 있다.

식(I)로 표시되는 화합물에 대해서, 산의 사용량은 통상, 1.0당량∼대과잉, 예를 들면, 5.0당량∼대과잉 이용할 수 있다.

반응 온도는, 특별히 제한되지 않지만 통상, 약 0℃∼약 50℃, 바람직하게는, 실온∼40℃에서 행할 수 있다.

반응 시간은, 특별히 제한되지 않지만 통상, 0.1시간∼12시간, 바람직하게는, 0.1∼5시간이다.

공정 2 식(VI)으로 표시되는 화합물의 제조 방법

[화학식 32]

식 중의 기호는 상기와 동일한 의의이다.

본 공정은, 식(IV)로 표시되는 화합물과 식(V)로 표시되는 화합물을 산 존재하에서 반응시키는 것을 특징으로 하는, 식(VI)으로 표시되는 화합물의 제조 방법이다.

식(IV)로 표시되는 화합물에 대해서, 식(V)로 표시되는 화합물은, 통상, 1.0∼5.0당량, 예를 들면, 1.0∼1.5당량 이용할 수 있다.

용매로서는, 상기 공정을 효율 좋게 진행시키는 것이면 특별히 제한되지 않고, 산을 용매로서 이용해도 된다. 톨루엔, t 뷰탄올, t 아밀 알코올 등을 들 수 있고, 단독 또는 혼합하여 이용할 수 있다. 바람직하게는, 톨루엔 들 수 있다.

산으로서는, 아세트산, 2,2-다이메틸뷰탄산 등을 들 수 있다. 바람직하게는, 아세트산을 들 수 있다.

식(IV)로 표시되는 화합물에 대해서, 산의 사용량은 통상, 1.0당량∼10당량, 예를 들면, 3.0당량∼10당량 이용할 수 있다.

반응 온도는, 특별히 제한되지 않지만 통상, 실온∼약 150℃ 또는 마이크로웨이브 조사하, 바람직하게는, 50∼150℃ 또는 마이크로웨이브 조사하에서 행할 수 있다.

반응 시간은, 특별히 제한되지 않지만 통상, 0.1시간∼12시간, 바람직하게는, 3∼10시간이다.

공정 3 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 제조 방법

본 공정은, 식(VII)로 표시되는 화합물을 푸마르산, 아세톤 및 물 존재하에서 결정화하는 것을 특징으로 하는, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 제조 방법이다.

식(VII)로 표시되는 화합물에 대해서, 푸마르산의 사용량은 통상, 1.0당량∼3.0, 예를 들면, 1.0당량∼1.5당량 이용할 수 있다.

결정화 온도는, 특별히 제한되지 않지만 통상, 40∼80℃, 바람직하게는, 40∼60℃에서 행할 수 있다.

결정화 시간은, 특별히 제한되지 않지만 통상, 1시간 이상, 바람직하게는, 2시간 이상, 더 바람직하게는 2∼12시간이다.

아세톤 및 물 존재하이면 되고, 바람직하게는 아세톤 및 물의 비율로서는, 85:15∼50:50에서 행할 수 있다.

식(VII)로 표시되는 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체(이하, 식(VII)로 표시되는 화합물 등으로 한다), 및 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물(식(VII)로 표시되는 화합물 등)은, 코로나바이러스 3CL 프로테아제 저해 활성을 갖기 때문에, 바이러스 감염증의 치료 및/또는 예방제로서 유용하다.

나아가 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물은, 의약으로서의 유용성을 구비하고 있고, 바람직하게는, 하기의 어느 하나, 또는 복수의 우수한 특징을 갖고 있다.

a) CYP 효소(예를 들면, CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4 등)에 대한 저해 작용이 약하다.

b) 높은 바이오어베일러빌리티, 적당한 클리어런스 등 양호한 약물 동태를 나타낸다.

c) 대사 안정성이 높다.

d) CYP 효소(예를 들면, CYP3A4)에 대해, 본 명세서에 기재하는 측정 조건의 농도 범위 내에서 불가역적 저해 작용을 나타내지 않는다.

e) 변이원성을 갖지 않다.

f) 심혈관계의 리스크가 낮다.

g) 높은 용해성을 나타낸다.

h) 단백질 비결합률(fu치)이 높다.

i) 높은 코로나바이러스 3CL 프로테아제 선택성을 갖고 있다.

j) 높은 코로나바이러스 증식 저해 활성을 갖고 있다. 예를 들면, 인간 혈청(HS) 또는 인간 혈청 알부민(HSA) 첨가하에 있어서, 높은 코로나바이러스 증식 저해 활성을 갖고 있다.

코로나바이러스 증식 저해제로서는, 예를 들면 후술하는 CPE 억제 효과 확인 시험(SARS-CoV-2)에 있어서, 예를 들면 EC₅₀이 10μM 이하, 바람직하게는 1μM 이하, 보다 바람직하게는 100nM 이하인 태양을 들 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화합물의 염·결정·복합체·공결정은, 의약으로서의 유용성을 구비하고 있고, 바람직하게는, 하기의 어느 하나, 또는 복수의 우수한 특징을 갖고 있다.

bb) 높은 바이오어베일러빌리티, 적당한 클리어런스, 높은 AUC, 높은 최고 혈중 농도 등, 양호한 약물 동태를 나타낸다.

gg) 높은 용해성, 높은 화학 안정성, 낮은 흡습성을 나타낸다.

식(VII)로 표시되는 화합물 등(예를 들면, 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물)을 함유하는 의약 조성물은, 경구적, 비경구적의 어느 방법으로도 투여할 수 있다. 비경구 투여의 방법으로서는, 경피, 피하, 정맥내, 동맥내, 근육내, 복강내, 경점막, 흡입, 경비, 점안, 점이, 질내 투여 등을 들 수 있다.

경구 투여의 경우는 통상적 방법에 따라서, 내용 고형 제제(예를 들면, 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 필름제 등), 내용 액제(예를 들면, 현탁제, 유제, 엘릭시르제, 시럽제, 리모나데제, 주정제, 방향수제, 엑기스제, 전제(煎劑), 팅크제 등) 등의 통상 이용되는 어느 제형으로 조제하여 투여하면 된다. 정제는, 당의정, 필름 코팅정, 장용성 코팅정, 서방정, 트로키정, 설하정, 버컬정, 추어블정 또는 구강내 붕괴정이어도 되고, 산제 및 과립제는 드라이 시럽이어도 되며, 캡슐제는, 소프트 캡슐제, 마이크로캡슐제 또는 서방성 캡슐제여도 된다.

비경구 투여의 경우는, 주사제, 점적제, 외용제(예를 들면, 점안제, 점비제, 점이제, 에어졸제, 흡입제, 로션제, 주입제, 도포제, 함수제, 관장제, 연고제, 경고제, 젤리제, 크림제, 첨부제, 파프제, 외용 산제, 좌제 등) 등의 통상 이용되는 어느 제형으로도 적합하게 투여할 수 있다. 주사제는, O/W, W/O, O/W/O, W/O/W형 등의 에멀션이어도 된다.

식(VII)로 표시되는 화합물 등(예를 들면, 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물)의 유효량에 그 제형에 적합한 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제 등의 각종 의약용 첨가제를 필요에 따라서 혼합하여, 의약 조성물로 할 수 있다. 추가로, 해당 의약 조성물은, 본 발명 화합물의 유효량, 제형 및/또는 각종 의약용 첨가제를 적절히 변경하는 것에 의해, 소아용, 고령자용, 중증 환자용 또는 수술용의 의약 조성물로 할 수도 있다. 예를 들면, 소아용 의약 조성물은, 신생아(출생 후 4주 미만), 유아(乳兒)(출생 후 4주∼1세 미만) 유아(幼兒)(1세 이상 7세 미만), 소아(7세 이상 15세 미만) 혹은 15세∼18세의 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, 고령자용 의약 조성물은, 65세 이상의 환자에게 투여될 수 있다.

식(VII)로 표시되는 화합물 등(예를 들면, 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물)을 함유하는 의약 조성물(예를 들면, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형을 포함하는 의약 조성물)의 투여량은, 환자의 연령, 체중, 질병의 종류나 정도, 투여 경로 등을 고려한 뒤에 설정하는 것이 바람직하지만, 경구 투여하는 경우, 통상 0.05∼200mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.1∼100mg/kg/일의 범위 내이다. 비경구 투여의 경우에는 투여 경로에 따라 크게 상이하지만, 통상 0.005∼200mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01∼100mg/kg/일의 범위 내이다. 이것을 1일 1회∼수회로 나누어 투여하면 된다.

식(VII)로 표시되는 화합물 등(예를 들면, 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물))은, 해당 화합물의 작용의 증강 또는 해당 화합물의 투여량의 저감 등을 목적으로 하여, 예를 들면, 다른 신형 코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 치료약(해당 치료약으로서는, 승인을 받은 약제, 및 개발 중 또는 향후 개발되는 약제를 포함한다)(이하, 병용 약제라고 칭한다)과 조합하여 이용해도 된다. 이때, 본 발명 화합물과 병용 약제의 투여 시기는 한정되지 않고, 이들을 투여 대상에 대해, 동시에 투여해도 되고, 시간차를 두어 투여해도 된다. 나아가, 본 발명 화합물과 병용 약제는, 각각의 활성 성분을 포함하는 2종류 이상의 제제로서 투여되어도 되고, 그들의 활성 성분을 포함하는 단일의 제제로서 투여되어도 된다.

병용 약제의 투여량은, 임상상 이용되고 있는 용량을 기준으로 하여 적절히 선택할 수 있다. 또한, 본 발명 화합물과 병용 약제의 배합비는, 투여 대상, 투여 루트, 대상 질환, 증상, 조합 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들면, 투여 대상이 인간인 경우, 본 발명 화합물 1중량부에 대해, 병용 약제를 0.01∼100중량부 이용하면 된다.

식(VII)로 표시되는 화합물 등의 유효량에 그 제형에 적합한 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제 등의 각종 의약용 첨가제를 필요에 따라서 혼합하여, 제제로 할 수 있다.

본 발명 제제는, 경구 투여하는 제제이면 된다. 경구 투여의 경우는 통상적 방법에 따라서, 내용 고형 제제(예를 들면, 정제, 산제, 과립제, 드라이 시럽제, 캡슐제, 환제, 필름제 등), 내용 액제(예를 들면, 현탁제, 유제, 엘릭시르제, 시럽제, 리모나데제, 주정제, 방향수제, 엑기스제, 전제, 팅크제 등) 등의 통상 이용되는 어느 제형으로 조제하여 투여하면 된다. 정제는, 당의정, 필름 코팅정, 장용성 코팅정, 서방정, 트로키정, 설하정, 버컬정, 추어블정 또는 구강내 붕괴정이어도 되고, 산제 및 과립제는 드라이 시럽이어도 되며, 캡슐제는, 소프트 캡슐제, 마이크로캡슐제 또는 서방성 캡슐제여도 된다. 바람직하게는 경구 투여하는 고형 제제 또는 현탁제이고, 보다 바람직하게는 경구 투여하는 고형 제제이며, 특히 바람직하게는, 정제, 과립제이다.

정제의 형상으로서는, 어떠한 형상도 채용할 수 있고, 구체적으로는, 환형, 타원형, 구형, 봉상형, 도넛형의 형상의 정제로 할 수 있다. 또한, 적층정, 유핵정등이어도 되지만, 바람직하게는 제조법이 간편한 단층정이 바람직하다. 나아가서는, 식별성 향상을 위한 마크, 문자 등의 각인 나아가서는 분할용의 할선을 그어도 된다.

추가로, 본 발명 제제는, 식(VII)로 표시되는 화합물 등의 유효량, 제형 및/또는 각종 의약용 첨가제를 적절히 변경하는 것에 의해, 소아용, 고령자용, 중증 환자용 또는 수술용의 제제로 할 수도 있다. 예를 들면, 소아용 의약 조성물은, 신생아(출생 후 4주 미만), 유아(출생 후 4주∼1세 미만) 유아(1세 이상 7세 미만), 소아(7세 이상 15세 미만) 혹은 15세∼18세의 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들면, 고령자용 제제는, 65세 이상의 환자에게 투여될 수 있다.

본 발명 제제(예를 들면, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형을 포함하는 제제)의 투여량은, 환자의 연령, 체중, 질병의 종류나 정도, 투여 경로 등을 고려한 뒤에 설정하는 것이 바람직하지만, 경구 투여하는 경우, 통상 0.05∼200mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.1∼100mg/kg/일의 범위 내이다. 비경구 투여의 경우에는 투여 경로에 따라 크게 상이하지만, 통상 0.005∼200mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01∼100mg/kg/일의 범위 내이다. 이것을 1일 1회∼수회로 나누어 투여하면 된다.

본 발명 제제 중에 함유하는, 식(VII)로 표시되는 화합물 등의 중량은, 환자가 복용하기 쉽고, 제제 제조할 수 있는 함량이면, 특별히 제한되지 않지만, 1∼450mg, 바람직하게는 5∼350mg, 보다 바람직하게는 25∼250mg이다.

구체적으로는, 1정, 1캡슐 또는 1포당 함유하는, 식(VII)로 표시되는 화합물 등의 중량은, 25mg, 50mg, 75mg, 100mg, 125mg, 150mg, 175mg, 200mg, 225mg 또는 250mg이다.

이 경우, 25mg이란, 22.5mg∼27.5mg, 바람직하게는 23.7mg∼26.3mg의 범위를 나타내고, 50mg이란, 45.0mg∼55.0mg, 바람직하게는 47.5mg∼52.5mg의 범위를 나타내고, 75mg이란, 67.5mg∼82.5mg의 범위를 나타내고, 바람직하게는 71.2mg∼78.8mg의 범위를 나타내고, 100mg이란, 90.0mg∼110.0mg, 바람직하게는 95.0mg∼105.0mg의 범위를 나타내고, 125mg이란, 112.5mg∼137.5mg, 바람직하게는 118.7mg∼131.3mg의 범위를 나타내고, 150mg이란, 135.0mg∼165.0mg, 바람직하게는 142.5mg∼157.5mg의 범위를 나타내고, 175mg이란, 157.5mg∼192.5mg, 바람직하게는 166.2∼183.8mg의 범위를 나타내고, 200mg이란, 180.0mg∼220.0mg, 바람직하게는 190.0mg∼210.0mg의 범위를 나타내고, 225mg이란, 202.5mg∼247.5mg, 바람직하게는 213.7mg∼236.3mg의 범위를 나타내며, 250mg이란, 225.0mg∼275.0mg, 바람직하게는 237.5mg∼262.5mg의 범위를 나타낸다.

식(VII)로 표시되는 화합물 등은, 해당 화합물의 작용의 증강 또는 해당 화합물의 투여량의 저감 등을 목적으로 하여, 예를 들면, 다른 신형 코로나바이러스 감염증(COVID-19)의 치료약(해당 치료약으로서는, 승인을 받은 약제, 및 개발 중 또는 향후 개발되는 약제를 포함한다)(이하, 병용 약제라고 칭한다)과 조합하여 이용해도 된다. 이때, 식(VII)로 표시되는 화합물 등과 병용 약제의 투여 시기는 한정되지 않고, 이들을 투여 대상에 대해, 동시에 투여해도 되고, 시간차를 두어 투여해도 된다. 추가로, 식(VII)로 표시되는 화합물 등과 병용 약제는, 각각의 활성 성분을 포함하는 2종류 이상의 제제로서 투여되어도 되고, 그들의 활성 성분을 포함하는 단일의 제제로서 투여되어도 된다.

병용 약제의 투여량은, 임상상 이용되고 있는 용량을 기준으로 하여 적절히 선택할 수 있다. 또한, 식(VII)로 표시되는 화합물 등으로 표시되는 화합물과 병용 약제의 배합비는, 투여 대상, 투여 루트, 대상 질환, 증상, 조합 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들면, 투여 대상이 인간인 경우, 식(VII)로 표시되는 화합물 등으로 표시되는 화합물 1중량부에 대해, 병용 약제를 0.01∼100중량부 이용하면 된다.

본 발명 제제는 고분자를 함유해도 되고, 고분자로서는, 일본 약국방, 일본 약국방외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 또는 식품 첨가물 공정서 등에 수재(收載)되어 있는 고분자를 사용할 수 있다.

식(VII)로 표시되는 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체, 및 고분자를 함유하는 제제는, 제제 중의 식(VII)로 표시되는 화합물의 용해도를 향상시킬 수 있다.

고분자로서는, 예를 들면, 셀룰로스계 고분자, 아크릴계 고분자, 바이닐계 고분자, 다당류 등을 들 수 있다.

셀룰로스계 고분자로서는, 하이드록시프로필셀룰로스(HPC), 하이프로멜로스(하이드록시프로필메틸셀룰로스)(HPMC), 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시에틸 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 아세테이트 석시네이트, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 프탈레이트, 메틸셀룰로스(MC), 메틸하이드록시에틸셀룰로스, 카복시메틸에틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 결정 셀룰로스, 미(微)결정 셀룰로스, 결정 셀룰로스·카멜로스 나트륨, 카멜로스, 카멜로스 나트륨, 카멜로스 칼슘, 분말 셀룰로스, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로스, 푸마르산·스테아르산·폴리바이닐아세탈다이에틸아미노아세테이트·하이드록시프로필메틸셀룰로스 혼합물 등을 들 수 있다.

아크릴계 고분자로서는, 아미노알킬 아크릴레이트 코폴리머 E, 폴리바이닐아세탈다이에틸아미노아세테이트, 아크릴산 에틸·메타크릴산 메틸 코폴리머 분산액, 아미노알킬 메타크릴레이트 코폴리머, 메타크릴산 코폴리머, 2-메틸-5-바이닐피리딘 메틸아크릴레이트·메타크릴산 코폴리머, 건조 메타크릴산 코폴리머, 다이메틸아미노에틸메타아크릴레이트·메틸메타아크릴레이트 코폴리머 등을 들 수 있다.

바이닐계 고분자로서는, 폴리바이닐 피롤리돈, 폴리바이닐 알코올, 폴리바이닐 알코올·메틸 메타크릴레이트·아크릴산 공중합체, 크로스포비돈, 카복시바이닐 폴리머, 폴리바이닐아세탈다이에틸아미노아세테이트, 및 폴리바이닐 알코올 코폴리머 등을 들 수 있다.

또한, 다당류로서는 풀룰란 등을 들 수 있다.

바람직하게는, 셀룰로스계 고분자, 아크릴계 고분자 및/또는 바이닐계 고분자이고, 보다 바람직하게는 셀룰로스계 고분자이며, 더 바람직하게는 하이프로멜로스(하이드록시프로필메틸셀룰로스)이다.

다른 태양으로서는, 식(VII)로 표시되는 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체를 유효 성분, 및 셀룰로스계 고분자를 함유하는, 경구 투여하는 정제가 바람직하다.

본 발명 제제에 있어서는, 부형제, 결합제, 붕괴제 및 활택제로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 1 이상의 첨가제를 이용해도 된다.

본 발명 제제에 있어서는, 부형제(충전제라고 하는 경우도 있다.)를 이용해도 된다. 부형제로서는, 일본 약국방, 일본 약국방외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 또는 식품 첨가물 공정서 등에 수재되어 있는 부형제를 사용할 수 있다. 예를 들면, 부형제로서는, 당 유도체, 전분 유도체, 셀룰로스 유도체, 무기계 부형제, β-사이클로덱스트린, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 자당 지방산 에스터, 크로스포비돈, 대두 레시틴, 트래거캔스말(末), 아라비아 고무, 덱스트란, 풀룰란 등을 들 수 있다.

당 유도체로서는, 당류, 당 알코올이 있고, 당류로서는, 유당, 백당, 포도당, 과당, 자당 등을 들 수 있고, 또한 당 알코올로서는, 만니톨, 소비톨, 에리트리톨, 자일리톨, 분말 맥아당 물엿, 말티톨 등을 들 수 있다.

전분 유도체로서는, 전분, 감자 전분, 옥수수 전분(콘스타치), 쌀 전분, 부분 알파화 전분, 알파화 전분, 유공(有孔) 전분, 카복시 스타치 나트륨, 하이드록시프로필 스타치, 저치환도 카복시메틸 스타치 나트륨 등을 들 수 있다.

셀룰로스 유도체로서는, 결정 셀룰로스, 분말 셀룰로스, 카멜로스 나트륨, 카멜로스, 크로스카멜로스 나트륨, 카멜로스 칼슘, 카복시메틸에틸셀룰로스, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로스 등을 들 수 있다.

무기계 부형제로서는, 규산염 유도체, 인산염, 탄산염, 황산염, 산화 마그네슘, 산화 타이타늄, 락트산 칼슘, 합성 하이드로탈사이트, 탤크, 카올린, 건조 수산화 알루미늄, 산화 마그네슘, 벤토나이트 등을 들 수 있다.

규산염 유도체로서는, 함수 이산화 규소, 경질 무수 규산 등의 이산화 규소, 메타규산 알루미늄산 마그네슘, 합성 규산 알루미늄, 규산 칼슘 등을 들 수 있다.

인산염으로서는, 무수 인산수소 칼슘, 인산일수소 칼슘, 인산수소 칼슘, 인산수소 나트륨, 인산 이칼륨, 인산이수소 칼륨, 인산이수소 칼슘, 인산이수소 나트륨 등을 들 수 있다.

탄산염으로서는, 침강 탄산 칼슘, 탄산 칼슘, 탄산 마그네슘 등을 들 수 있다. 황산염으로서는, 황산 칼슘 등을 들 수 있다.

이들 부형제는, 2종 이상을 적절한 비율로 혼합하여 이용해도 된다.

본 발명 제제에 있어서의 부형제는, 바람직하게는 만니톨 및/또는 크로스카멜로스 나트륨이다.

본 발명 제제에 있어서는, 결합제를 이용해도 되고, 일본 약국방, 일본 약국방외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 또는 식품 첨가물 공정서 등에 수재되어 있는 결합제를 사용할 수 있다. 예를 들면, 결합제로서는, 셀룰로스계 결합제, 전분계 결합제, 바이닐계 결합제, 폴리에터, 아라비아 고무, 아라비아 고무 분말, 아라비아 고무말(末), 알긴산, 알긴산 나트륨, 자당, 젤라틴, 덱스트린, 풀룰란, 트래거캔스, 트래거캔스말, 잔탄 검, 펙틴, 폴리아크릴산 나트륨, 한천, 황벽말(黃蘗末), 구아 검, 경질 무수 규산, 경화유 등을 들 수 있다.

셀룰로스계 결합제로서는, 카복시메틸셀룰로스(카멜로스, CMC), 카복시메틸셀룰로스 나트륨(카멜로스 나트륨), 하이드록시에틸셀룰로스(HEC), 하이드록시프로필셀룰로스(HPC), 하이드록시프로필메틸셀룰로스(하이프로멜로스)(HPMC), 메틸셀룰로스(MC), 결정 셀룰로스, 미결정 셀룰로스, 에틸셀룰로스, 결정 셀룰로스·카멜로스 나트륨, 카멜로스 칼슘, 분말 셀룰로스, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로스 등을 들 수 있다.

전분계 결합제로서는, 전분, α화 전분, 부분 α화 전분, 감자 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 유공 전분, 옥수수 전분, 하이드록시프로필 스타치, 전분 글라이콜산 나트륨(카복시메틸 스타치 나트륨) 등을 들 수 있다.

바이닐계 결합제로서는, 폴리바이닐 알코올(PVA), 폴리바이닐 피롤리돈(포비돈)(PVP), 카복시바이닐 폴리머, 코폴리비돈 등을 들 수 있다.

폴리에터로서는, 매크로골(폴리에틸렌 글라이콜) 200, 매크로골 300, 매크로골 400, 매크로골 600, 매크로골 1000, 매크로골 1500, 매크로골 1540, 매크로골 4000, 매크로골 6000, 매크로골 20000, 글리세린, 폴리옥시에틸렌[105] 폴리옥시프로필렌[5] 글라이콜, 프로필렌 글라이콜 등을 들 수 있다.

이들 결합제는, 2종 이상을 적절한 비율로 혼합하여 이용해도 된다.

본 발명 제제에 있어서의 결합제는, 바람직하게는 하이드록시프로필셀룰로스(HPC)이다.

본 발명 제제에 있어서는, 붕괴제를 이용해도 되고, 일본 약국방, 일본 약국방외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 또는 식품 첨가물 공정서 등에 수재되어 있는 붕괴제를 사용할 수 있다. 예를 들면, 붕괴제로서는, 셀룰로스계 붕괴제, 전분계 붕괴제, 바이닐계 붕괴제, 메타규산 알루미늄산 마그네슘 등을 들 수 있다.

셀룰로스계 붕괴제로서는, 카멜로스, 카멜로스 칼슘, 카멜로스 나트륨, 하이드록시프로필셀룰로스, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로스, 크로스카멜로스 나트륨(Ac-Di-Sol), 결정 셀룰로스, 분말 셀룰로스 등을 들 수 있다.

전분계 붕괴제로서는, 부분 알파화 전분, 감자 전분, 콘스타치, 하이드록시프로필 스타치, 카복시메틸 스타치 나트륨, 저치환도 카복시메틸 스타치 나트륨, 전분 글라이콜산 나트륨, 알파화 전분, 전분 등을 들 수 있다.

바이닐계 붕괴제로서는, 크로스포비돈, 폴리바이닐 알코올 등을 들 수 있다.

이들 붕괴제는, 2종 이상을 적절한 비율로 혼합하여 이용해도 된다.

붕괴제 중에서도, 팽윤율이 매우 큰 팽윤형 붕괴제는 「슈퍼 붕괴제」로서 알려져 있다. 슈퍼 붕괴제로서는, 카멜로스 칼슘, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로스, 크로스카멜로스 나트륨, 크로스포비돈, 전분 글라이콜산 나트륨 등을 들 수 있다.

이들 슈퍼 붕괴제는, 2종 이상을 적절한 비율로 혼합하여 이용해도 된다. 또한, 붕괴제 및 슈퍼 붕괴제를 조합해도 된다.

본 발명 제제에 있어서의 붕괴제는, 바람직하게는 크로스카멜로스 나트륨이다.

본 발명 제제에 있어서는, 활택제를 함유해도 되고, 일본 약국방, 일본 약국방외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 또는 식품 첨가물 공정서 등에 수재되어 있는 활택제를 사용할 수 있다. 예를 들면, 활택제로서는, 스테아르산 및 스테아르산 금속염, 무기계 활택제, 소수성 활택제, 친수성 활택제, 푸마르산 스테아릴 나트륨 등을 들 수 있다.

스테아르산 및 스테아르산 금속염으로서는, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아르산, 스테아릴알코올, 스테아르산 폴리옥실 40 등을 들 수 있다.

무기계 활택제로서는, 탤크, 경질 무수 규산, 함수 이산화 규소, 탄산 마그네슘, 침강 탄산 칼슘, 건조 수산화 알루미늄 겔, 메타규산 알루미늄산 마그네슘, 규산 마그네슘, 합성 규산 알루미늄, 산화 마그네슘, 황산 마그네슘 등을 들 수 있다.

소수성 활택제로서는, 카카오 버터, 카르나우바 납, 글리세린 지방산 에스터, 경화유, 백랍, 대두 경화유, 밀랍, 세타놀, 라우르산 나트륨 등을 들 수 있다.

친수성 활택제로서는, 자당 지방산 에스터, 폴리에틸렌 글라이콜(매크로골) 등을 들 수 있다.

이들 활택제는, 2종 이상을 적절한 비율로 혼합하여 이용해도 된다.

본 발명 제제에 있어서의 결합제는, 바람직하게는 스테아르산 마그네슘이다.

본 발명 제제에 있어서는, 유동화제를 함유해도 되고, 일본 약국방, 일본 약국방외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 또는 식품 첨가물 공정서 등에 수재되어 있는 유동화제를 사용할 수 있다. 예를 들면, 유동화제로서는, 이산화 규소, 스테아르산 및 그의 금속염, 결정 셀룰로스, 합성 규산 알루미늄, 산화 타이타늄, 중질 무수 규산, 수산화 알루미나 마그네슘, 제3인산 칼슘, 탤크, 옥수수 전분, 메타규산 알루미늄산 마그네슘, 인산수소 칼슘 조립물(造粒物), 규산 칼슘, 무수 인산수소 칼슘, 합성 하이드로탈사이트 등을 들 수 있다.

이산화 규소로서는, 함수 이산화 규소, 경질 무수 규산 등을 들 수 있다. 스테아르산 및 그의 금속염으로서는, 스테아르산, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 마그네슘 등을 들 수 있다.

이들 유동화제는, 2종 이상을 적절한 비율로 혼합하여 이용해도 된다.

본 발명 제제에 있어서의 결합제는, 바람직하게는 결정 셀룰로스이다.

본 발명 제제 중 과립제의 제조 방법은, 특별히 제한되지 않지만, 구체적으로는, 유효 성분, 붕괴제, 부형제 등의 첨가제를 혼합하여, 혼합말(末)을 제조 후, 당해 혼합말을 조립하는 방법이며, 바람직하게는 물이나 결합제를 함유하는 물이나 용매를 첨가하여 조립하는 습식 조립법이나 압축 성형하여 물을 사용하지 않는 건식 조립법이나 용융 조립법이다.

본 발명 제제 중, 정제의 제조 방법은, 특별히 제한되지 않지만, 구체적으로는, 상기 방법에 의해 과립을 제조하고, 추가로, 이 과립에 대해서, 붕괴제 및 활택제를 혼합하고, 당해 혼합 과립을 타정기로 타정하는 타정법이다.

본 발명 제제는, 상기의 과립제나 정제를 제조 후, 당해 과립제나 정제를 피복층으로 피복하는 경우가 있다. 과립제에 피복층을 형성할 때, 유동층 조립 코팅기, 유동층 전동 코팅기 등을 이용할 수 있다. 정제에 피복층을 형성할 때, 팬 코팅기, 통기식 코팅기 등을 이용할 수 있다. 코팅기 중에서, 과립제나 정제를 유동시키면서, 이 과립제나 정제에 당해 코팅액을 분무, 건조하여, 피복층을 형성한다.

(실시예)

이하에 실시예 및 참고예, 및 시험예를 들어 본 발명을 더 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 명세서 중에서 이용하는 약어는 이하의 의미를 나타낸다.

Boc: tert-뷰톡시카보닐

CDI: 카보닐다이이미다졸

DBU: 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]-7-운데센

DIEA: N,N-다이아이소프로필에틸아민

DMA: N,N-다이메틸아세트아마이드

DMF: N,N-다이메틸폼아마이드

DMSO: 다이메틸설폭사이드

DTT: 다이싸이오트레이톨

EDC: 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드

EDT: 1,2-에테인다이싸이올

EDTA: 에틸렌다이아민 사아세트산

FBS: 소 태아 혈청

HOBT: 1-하이드록시벤조트라이아졸

LHMDS: 리튬 비스(트라이메틸실릴)아마이드

MEM: 이글 최소 필수 배지

NMP: N-메틸피롤리돈

Pd(OAc)₂: 아세트산 팔라듐

TFA: 트라이플루오로아세트산

TMSCl: 클로로트라이메틸실레인

Xantphos: 4,5'-비스(다이페닐포스피노)-9,9'-다이메틸잔텐

mM: mmol/L

μM: μmol/L

nM: nmol/L

(실시예 a)

(화합물의 동정 방법)

각 실시예에서 얻어진 NMR 분석은 400MHz에서 행하고, DMSO-d₆, CDCl₃, Methanol-d₄를 이용하여 측정했다. 또한, NMR 데이터를 나타내는 경우는, 측정한 모든 피크를 기재하고 있지 않는 경우가 존재한다.

RT는, LC/MS: 액체 크로마토그래피/질량 분석에서의 리텐션 타임을 나타내고, 이하의 조건에서 측정했다.

(측정 조건 1')

칼럼: ACQUITY UPLC(등록상표) BEH C18(1.7μm i.d. 2.1x50mm)(Waters)

유속: 0.8mL/분

UV 검출 파장: 254nm

이동상: [A]는 0.1% 폼산 함유 수용액, [B]는 0.1% 폼산 함유 아세토나이트릴 용액

그래디언트: 3.5분간으로 5%-100% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행한 후, 0.5분간, 100% 용매 [B]를 유지했다.

(측정 조건 2')

칼럼: Shim-pack XR-ODS(2.2μm, i.d. 3.0x50mm)(Shimadzu)

유속: 1.6mL/분

UV 검출 파장: 254nm

그래디언트: 3분간으로 10%-100% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행하고, 0.5분간, 100% 용매 [B]를 유지했다.

한편, 명세서 중, MS(m/z)라는 기재는, 질량 분석으로 관측된 값을 나타낸다.

(HPLC 측정 조건)

칼럼: Xselect CSH Fluoro-Phenyl(3.5μm i.d. 4.6x150mm)(Waters)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 255nm

이동상: [A]는 0.1% 폼산 함유 수용액, [B]는 액체 크로마토그래피용 아세토나이트릴

그래디언트: 2분간, 20% 용매 [B]를 유지하고, 6분간으로 20%-37% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행하고, 10분간으로 37%-50% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행하며, 2분간으로 50%-95% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행했다.

유량: 1.0mL/분

주입량: 10μL

(분말 X선 회절 패턴의 측정)

일본 약국방의 일반 시험법에 기재된 분말 X선 회절 측정법에 따라, 각 실시예에서 얻어진 결정의 분말 X선 회절 측정을 행했다. 측정 조건을 이하에 나타낸다.

(장치)

리가쿠사제 SmartLab

(조작 방법)

측정법: 반사법

사용 파장: CuKα선

관 전류: 200mA

관 전압: 45kV

시료 플레이트: 알루미늄

X선의 입사각: 2.5°

샘플링 폭: 0.02°

검출기: HyPix-3000(2차원 검출 모드)

(시차 주사 열량(DSC)의 측정)

실시예에서 얻어진 결정의 DSC의 측정을 행했다. 알루미늄 팬에 시료 약 3mg을 달아서, 크림프하여 측정했다. 측정 조건을 이하에 나타낸다. 한편, 시차 주사 열량(DSC)에 의한 측정은 ±2℃의 범위 내에서 오차가 생길 수 있다.

장치: TA Instrument Q1000/TA Instrument

측정 온도 범위: 0℃-295℃

승온 속도: 10℃/분

분위기: N₂ 50mL/분

(TG/DTA 데이터의 측정)

실시예에서 얻어진 결정 약 3mg을 달아서, 알루미늄 팬에 채우고, 개방계에서 측정했다. 측정 조건은 이하와 같다.

장치: 히타치 하이테크놀로지즈 TG/DTA STA7200RV

측정 온도 범위: 실온-350℃

승온 속도: 10℃/분

(수분 흡탈착 등온선 측정)

샘플 팬에 시료 약 15∼25mg을 측정해서 취하여 측정을 행했다. 측정 조건을 이하에 나타낸다.

장치: Surface Measurement Systems Ltd.사제 DVS Adventure

측정 포인트: 0%부터 5%마다 95% RH, 및 95% RH부터 5%마다 0%까지

온도: 25℃

(단결정 구조 해석의 측정과 해석 방법)

단결정 구조 해석의 측정 조건 및 해석 방법을 이하에 나타낸다.

(장치)

리가쿠사제 XtaLAB P200 MM007

(측정 조건)

측정 온도: 25℃

사용 파장: CuKα선(λ=1.5418Å)

소프트웨어: CrysAlisPro 1.171.39.46e(Rigaku Oxford Diffraction, 2018)

(데이터 처리)

소프트웨어: CrysAlisPro 1.171.39.46e(Rigaku Oxford Diffraction, 2018)

데이터는 로렌츠 및 편광 보정, 흡수 보정을 행했다.

(결정 구조 해석)

직접법 프로그램 ShelXT(Sheldrick, G. M., 2015)를 이용하여 위상 결정을 행하고, 정밀화는 ShelXL(Sheldrick, G. M., 2015)을 이용하여, full-matrix 최소 이승법을 실시했다. 비수소 원자의 온도 인자는 모두 이방성으로 정밀화를 행했다. 수소 원자는 ShelXL의 디폴트 파라미터를 이용하여 계산에 의해 도입하고, riding atom으로서 취급했다. 모든 수소 원자는, 등방성 파라미터로 정밀화를 행했다.

작도에는 PLATON(Spek, 1991)/ORTEP(Johnson, 1976)를 사용했다.

(실시예 1a)

화합물(I-005)의 합성

[화학식 33]

공정 1 화합물 18의 합성

화합물 4a(926mg, 4.04mmol), 아세토나이트릴(7.41mL), 탄산 칼륨(726mg, 5.25mmol) 및 2,4,5-트라이플루오로벤질 브로마이드(1000mg, 4.44mmol)를 혼합했다. 반응 용액을 80℃에서 40분간 교반하고, 방랭 후, 아세트산 에틸로 희석했다. 불용물을 여과 분별 후, 여과액을 농축하여, 화합물 18의 조생성물(1.51g, 4.04mmol, 수율: 정량)을 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=374, RT=2.54min, LC/MS 측정 조건 1'

공정 2 화합물 19의 합성

화합물 18(1.51g, 4.04mmol) 및 TFA(3.02mL)를 혼합했다. 반응 용액을 실온에서 4시간 교반하고, 하룻밤 정치했다. TFA를 감압 증류 제거하고, 잔사에 톨루엔을 가하고 공비했다. 잔사에 아이소프로필 에터를 가하고 현탁 후, 여과하여 취하여, 화합물 19(1.22g, 3.84mmol, 수율 95%)를 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=318, RT=1.68min, LC/MS 측정 조건 1'

공정 3 화합물 20의 합성

화합물 19(200mg, 0.63mmol), DMF(1.8mL), 탄산 칼륨(261mg, 1.89mmol) 및 3-(클로로메틸)-1-메틸-1H-1,2,4-트라이아졸 염산염(159mg, 0.946mmol)을 혼합했다. 반응 용액을 60℃에서 2시간 교반하고, 포화 염화 암모늄 수용액을 가했다. 수층을 아세트산 에틸로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정했다. 유기층을 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과하여 농축했다. 잔사를 아이소프로필 에터, 헥세인, 아세트산 에틸 및 클로로폼의 혼합 용매로 현탁하고, 여과하여 취했다. 잔사, DMF(1.8mL), 탄산 칼륨(261mg, 1.89mmol) 및 3-(클로로메틸)-1-메틸-1H-1,2,4-트라이아졸 염산염(159mg, 0.946mmol)을 혼합했다. 반응 용액을 60℃에서 6시간 교반하고, 포화 염화 암모늄 수용액을 가했다. 수층을 아세트산 에틸로 추출하고, 유기층을 포화 식염수로 세정했다. 유기층을 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과하여 농축했다. 잔사를 아이소프로필 에터, 헥세인, 아세트산 에틸 및 클로로폼의 혼합 용매로 현탁하고 여과하여 취하여, 화합물 20(116mg, 0.281mmol, 수율 45%)을 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=413, RT=1.84min, LC/MS 측정 조건 1'

공정 4 화합물(I-005)의 합성

화합물 20(115mg, 0.279mmol), THF(2.30mL) 및 6-클로로-2-메틸-2H-인다졸-5-아민(60.8mg, 0.335mmol)을 혼합했다. 반응 용액에, LHMDS(558μL, 0.558mmol)를 0℃에서 적하했다. 반응 용액을 0℃에서 2시간 반, 실온에서 40분간 교반하고, 포화 염화 암모늄 수용액을 가했다. 클로로폼으로 추출하고, 유기층을 농축했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(클로로폼/메탄올)로 정제하여, 화합물(I-005)(61.8mg, 0.116mmol, 수율 42%)를 얻었다. 얻어진 화합물 I-005의 HPLC 측정 결과를 도 7에 나타낸다.

¹H-NMR(CDCl₃)δ: 7.96 (s, 1H), 7.82 (d, J=2.5Hz, 2H), 7.48 (br s, 1H), 7.45-7.37 (m, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.97-6.88 (m, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.17 (s, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).

LC/MS(ESI): m/z=532, RT=1.70min, LC/MS 측정 조건 1'

(실시예 2a)

화합물(I-005) 1170mg에 푸마르산 278mg(1.1eq) 및 아세트산 에틸 5.85mL를 가하고, 실온하에서 45분간 교반했다. 고체를 여과하여 취하고, 건조함으로써, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정(1369.4mg, 94.6%)을 얻었다.

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 단결정 구조 해석의 결과를 이하에 나타낸다.

R1(I>2.00s(I))은 0.0470이며, 최종의 차(差) 푸리에로부터 전자 밀도의 결여도 오치(誤置)도 없는 것을 확인했다.

결정학적 데이터를 표 1에 나타낸다.

여기에서, Volume은 단위 격자 체적, Z는 단위 격자 중의 분자수를 의미한다.

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의, 비대칭 단위 중의 구조를 도 3에 나타낸다.

비대칭 단위 중에, 식(VII)로 표시되는 화합물, 푸마르산이 각각 1분자 존재하고 있었다. 이온성의 화학적 상호작용은 확인되지 않고, 1:1의 몰비의 공결정인 것을 확인했다.

N10-C9의 결합 거리는 약 1.26Å이며, N16-C9의 결합 거리는 약 1.37Å이었다. 이 결합 거리로부터, 푸마르산 공결정 I형의 식(VII)로 표시되는 화합물은, 이미노 구조:

[화학식 34]

라고 동정했다.

또한, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정의 분말 X선 회절의 결과를 나타낸다.

도 1에, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 분말 X선 회절 패턴을 나타낸다. 도 1의 분말 X선 회절 패턴의 피크 테이블을 도 2에 나타낸다.

분말 X선 회절 패턴에 있어서, 회절 각도(2θ): 7.8±0.2°, 9.5±0.2°, 10.1±0.2°, 10.9±0.2°, 13.8±0.2°, 14.7±0.2°, 18.6±0.2°, 22.6±0.2°, 23.5±0.2° 및 24.6±0.2°에 피크가 확인되었다.

상기 분말 X선 회절 피크에 있어서, 회절 각도(2θ): 9.5±0.2°, 10.9±0.2°, 18.6±0.2°, 23.5±0.2° 및 24.6±0.2°의 피크가 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정으로서 특히 특징적이다.

도 1의 분말 X선 해석 패턴을 나타낸, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정의 DSC 분석 결과를 도 4에 나타낸다. 흡열 피크의 온셋 온도는 약 272℃를 나타냈다.

도 1의 분말 X선 해석 패턴을 나타낸, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 TG/DTA 분석 결과를 도 5에 나타낸다.

도 1의 분말 X선 해석 패턴을 나타낸, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 DVS 분석 결과를 도 6에 나타낸다.

한편, 식(VII)로 표시되는 화합물(I-005)의 합성은, 이하와 같이도 행할 수 있다.

공정 4'

THF(6mL) 중, 화합물 20(300mg, 0.727mmol), 6-클로로-2-메틸-2H-인다졸-5-아민(172mg, 0.946mmol)에, LHMDS(1M in THF; 1.46mL, 1.46mmol)를 0℃에서 적하했다. 반응액을 0℃에서 2시간 반, 실온에서 40분간 교반하고, 포화 염화 암모늄 수용액을 가했다. 수층을 EtOAc로 추출했다. 유기층을 포화 식염수로 세정하고, 황산 마그네슘으로 건조하고, 감압하에서 농축했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(CHCl3/MeOH, 그래디언트 0-20% MeOH)로 정제했다. 얻어진 고체를 아세톤/H2O로부터 고화시켜, 화합물 I-005(95.3mg, 수율 25%, 갈색 고체)를 얻었다. 얻어진 화합물 I-005의 HPLC 측정 결과를 도 8에 나타낸다(약 99pa%).

BINAP: 2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸

CPME: 사이클로펜틸 메틸 에터

CbzCl: 클로로산 벤질

DME: 다이메틸 에터

MEK: 메틸 에틸 케톤

(실시예 b)

(화합물의 동정 방법)

각 실시예 및 참고예에서 얻어진 NMR 분석은 400MHz에서 행하고, DMSO-d₆, CDCl₃을 이용하여 측정했다. 또한, NMR 데이터를 나타내는 경우는, 측정한 모든 피크를 기재하고 있지 않는 경우가 존재한다.

「RT」 또는 「유지 시간」이라는 것은, LC/MS: 액체 크로마토그래피/질량 분석 또는 액체 크로마토그래피(HPLC)에서의 리텐션 타임을 나타내고, 이하의 조건에서 측정했다.

한편, MS(m/z)라는 기재는, 질량 분석으로 관측된 값을 나타낸다.

(측정 조건 1)

칼럼: ACQUITY UPLC(등록상표) BEH C18(1.7μm i.d. 2.1x50mm)(Waters)

유속: 0.8mL/분

UV 검출 파장: 254nm

(측정 조건 2)

칼럼: ACQUITY UPLC(등록상표) BEH C18(1.7μm i.d. 2.1x50mm)(Waters)

유속: 0.8mL/분

UV 검출 파장: 254nm

이동상: [A]는 10mM 탄산 암모늄 함유 수용액, [B]는 0.1% 폼산 함유 아세토나이트릴 용액

(측정 조건 4)

칼럼: Xselect CSH C18(3.5μm i.d. 4.6x150mm)(Waters)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 254nm

그래디언트: 17분간으로 5%-95% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행한 후, 3분간, 95% 용매 [B]를 유지했다.

유량: 1.0mL/분

주입량: 5μL

(측정 조건 5)

칼럼: Xselect CSH C18(3.5μm i.d. 4.6x150mm)(Waters)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 254nm

유량: 1.0mL/분

주입량: 10μL

(측정 조건 7)

칼럼: Xselect CSH Fluoro-Phenyl(3.5μm i.d. 4.6x150mm)(Waters)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 255nm

그래디언트: 6분간, 20% 용매 [B]를 유지하고, 21분간으로 20%-42% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행하고, 4분간으로 42%-50% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행하며, 마지막으로 3분간으로 50%-95% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행했다.

유량: 1.0mL/분

주입량: 10μL

(측정 조건 8)

칼럼: Xselect CSH Fluoro-Phenyl(3.5μm i.d. 4.6x150mm)(Waters)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 255nm

유량: 1.0mL/분

주입량: 10μL

(측정 조건 9)

칼럼: YMC Jsphere ODS-H80(4μm i.d. 4.6x250mm)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 250nm

이동상: [A]는 0.2%트라이플루오로아세트산 함유 수용액, [B]는 액체 크로마토그래피용 메탄올

그래디언트: 6분간으로 10%-70% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행한 후, 3분간, 70% 용매 [B]를 유지, 그 후, 3분간으로 70%-90%의 리니어 그래디언트, 그 후, 5분간, 90% 용매 [B]를 유지, 그 후, 1분간으로 90%-95%의 리니어 그래디언트, 그 후 5분간, 95% 용매 [B]를 유지

유량: 1.0mL/분

주입량: 5μL

(측정 조건 10)

칼럼: Xselect CSH C18(3.5μm i.d. 4.6x150mm)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 254nm

그래디언트: 17분간으로 5%-95% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행한 후, 3분간, 95% 용매 [B]를 유지

유량: 1.0mL/분

주입량: 10μL

(측정 조건 11)

칼럼: XBridge C18(3.5μm i.d. 4.6x150mm)

칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

UV 검출 파장: 210nm

이동상: [A]는 10mM 암모니아 함유 수용액, [B]는 액체 크로마토그래피용 메탄올

그래디언트: 5분간으로 5% 용매 [B]를 유지하고, 10분간으로 5%-38% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행하고, 5분간으로 38%-95% 용매 [B]의 리니어 그래디언트를 행했다.

유량: 0.8mL/분

주입량: 10μL

(측정 조건 12)

칼럼: C18 칼럼

칼럼 온도: 40℃

UV 검출 파장: 255nm

이동상: [A]는 10mM 폼산 암모니아 함유 수용액, [B]는 액체 크로마토그래피용 메탄올

그래디언트는, 9:1부터 1:9까지 서서히 이동상 B의 혼합비를 높여, 28분간으로 측정을 행했다.

유량: 0.3mL/분

주입량: 4μL

(분말 X선 회절 패턴의 측정)

(장치)

리가쿠사제 MiniFlex600

(조작 방법)

검출기: 고속 일차원 검출기(D/TecUltra2)

광원의 종류: Cu 관구

사용 파장: CuKα선

관 전류: 15mA

관 전압: 40Kv

시료 플레이트: 무반사 시료판

(단결정 구조 해석의 측정과 해석 방법)

(장치)

리가쿠사제 XtaLAB P200 MM007

(측정 조건)

측정 온도: 25℃

사용 파장: CuKα선(λ=1.5418Å)

소프트웨어: CrysAlisPro 1.171.39.46e(Rigaku Oxford Diffraction, 2018)

(데이터 처리)

소프트웨어: CrysAlisPro 1.171.39.46e(Rigaku Oxford Diffraction, 2018)

데이터는 로렌츠 및 편광 보정, 흡수 보정을 행했다.

(결정 구조 해석)

직접법 프로그램 ShelXT(Sheldrick, G.M., 2015)를 이용하여 위상 결정을 행하고, 정밀화는 ShelXL(Sheldrick, G.M., 2015)을 이용하여, full-matrix 최소 이승법을 실시했다. 비수소 원자의 온도 인자는 모두 이방성으로 정밀화를 행했다. 수소 원자는 ShelXL의 디폴트 파라미터를 이용하여 계산에 의해 도입하고, riding atom으로서 취급했다. 모든 수소 원자는, 등방성 파라미터로 정밀화를 행했다.

작도에는 PLATON(Spek, 1991)/ORTEP(Johnson, 1976)를 사용했다.

(시차 주사 열량(DSC)의 측정)

실시예에서 얻어진 결정의 DSC의 측정을 행했다. SUS제 팬에 시료 약 2mg을 달아서, 크림프하여 측정했다. 측정 조건을 이하에 나타낸다. 한편, 시차 주사 열량(DSC)에 의한 측정은 ±2℃의 범위 내에서 오차가 생길 수 있다.

장치: DSC 3+

측정 온도 범위: 30℃-300℃

승온 속도: 10℃/분

분위기: N₂ 40mL/분

(TG/DTA 데이터의 측정)

장치: 히타치 하이테크 사이언스 TG/DTA7200

측정 온도 범위: 30-350℃

승온 속도: 10℃/분

(수분 흡탈착 등온선 측정)

장치: Surface Measurement Systems Ltd.사제 DVS Adventure

측정 포인트: 0%부터 5%마다 95% RH, 및 95% RH부터 5%마다 0%까지

온도: 25℃

한편, DVS 측정의 전후에서의 분말 X선 해석 패턴의 비교는 이하의 방법에 의해 측정했다.

(장치)

리가쿠사제 SmartLab

(조작 방법)

측정법: 반사법

사용 파장: CuKα선

관 전류: 200mA

관 전압: 45kV

시료 플레이트: 알루미늄

X선의 입사각: 2.5°

샘플링 폭: 0.02°

검출기: HyPix-3000(2차원 검출 모드)

(입도 분포의 측정)

측정 조건은 이하와 같다.

제조사: 심파텍

장치: 레이저 회절식 HELOS＆RODOS 입도 분포 측정 장치

레인지: R4

분산압: 3bar

트리거 조건: 스톱 2s 측정 농도≤1%이거나 10s 실시간

(실시예 1b)

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 합성

[화학식 35]

공정 1: 화합물 3의 합성

화합물 1(35.0kg, 238.8mol, 염산염), N,N-다이메틸아세트아마이드(273L), 1,8-다이아자바이사이클로[5,4,0]-7-운데센(87.2kg, 573.1mol) 및 화합물 2(26.0kg, 262.7mol)를 혼합하고, 25℃에서 10분간 교반했다. 반응 용액에 N,N'-카보닐다이이미다졸(50.3kg, 310.4mol), N,N-다이메틸아세트아마이드(7L)를 혼합하고, 50℃에서 90분간 교반했다. 반응 용액에 메탄올(18.4kg, 573.1mol)을 가하고, 25℃로 냉각하고, 10% 황산으로 pH를 2.5로 조정했다. 슬러리를 5℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 20% 메탄올수로 세정 후, 건조함으로써 화합물 3(38.12kg, 162.0mol, 수율: 67.9%)을 얻었다.

HPLC(UV=254nm): RT=8.9min, HPLC 측정 조건 4

공정 2: 화합물 5의 합성

화합물 3(34.5kg, 146.7mol), 아세토나이트릴(345L), 다이아이소프로필에틸아민(26.5kg, 205.4mol) 및 화합물 4(39.6kg, 176.0mol)를 혼합하고, 60℃에서 300분간 교반했다. 반응 용액을 25℃로 냉각하고, 물(172.5L)을 가했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 66% 아세토나이트릴수로 세정 후, 건조함으로써 화합물 5(46.10kg, 121.5mol, 수율: 82.9%)를 얻었다.

HPLC(UV=254nm): RT=14.7min, HPLC 측정 조건 4

공정 3: 화합물 7의 합성

화합물 5(29.0kg, 76.4mol), 트라이플루오로아세트산(72.5L), 화합물 6(16.5kg, 152.9mol)을 혼합하고, 35℃에서 180분간 교반했다. 반응 용액을 냉각하고, 아세트산 에틸(348L)을 가하고, 38% 인산 삼칼륨 수용액, 2.3% 식염수, 물로 세정했다. 아세트산 에틸 용액을 203L까지 농축하고, 헵테인(261L)을 가했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 아세트산 에틸과 헵테인의 혼합 용매로 세정 후, 건조함으로써 화합물 7(23.60kg, 65.0mol, 수율: 85.0%)을 얻었다.

HPLC(UV=254nm): RT=12.5min, HPLC 측정 조건 5

공정 4: 화합물 9의 합성

화합물 7(23.3kg, 64.1mol), 화합물 8(14.0kg, 83.4mol, 염산염), 아이오딘화 칼륨(6.4kg, 38.5mol), 탄산 세슘(31.3kg, 96.2mol) 및 N,N-다이메틸아세트아마이드(139.8L)를 혼합하고, 40℃에서 360분간 교반했다. 반응 용액을 25℃로 냉각하고, 아세트산(34.6kg, 577.2mol)을 가했다. 불용물을 여과 분별하고, 여과액에 아세토나이트릴(93.2L), 물(326.2L)을 가했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 20% 아세토나이트릴 수용액으로 세정 후, 건조함으로써 화합물 9(20.35kg, 44.4mol, 수율: 69.2%)를 얻었다.

HPLC(UV=255nm): RT=25.1min, HPLC 측정 조건 7

공정 1∼4에 대하여, 마찬가지의 조작을 2회 행했다.

공정 5-1: 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 합성

공정 1∼4에서 얻어진 화합물 9(39.0kg, 80.7mol), 화합물 10(16.2kg, 84.8mol), 아세트산(30.7kg, 484.3mol) 및 톨루엔(234L)을 혼합하고, 100℃에서 360분간 교반했다. 톨루엔(390L)을 가하고, 얻어진 슬러리를 25℃로 냉각했다. 고체를 여과하여 취하고, 아세톤으로 세정하여, 식(VII)로 표시되는 화합물의 미건조 결정을 얻었다(여기에서 얻어진 미건조 결정을, HPLC 측정 조건 8에 의해 측정한 결과를 도 12 및 도 13에 나타낸다. RT=9.8min의 피크는 톨루엔이다).

공정 5-2: 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 반량의 미건조 결정에 아세톤(613.5L)과 물(109.2L)을 가하고, 50℃에서 용해했다. 얻어진 용해액을 활성탄 처리하고, 처리액에 아세톤(150.2L)과 물(5.9L)을 가하고, 702L까지 농축했다. 농축액을 50℃로 온도 조절하고, 푸마르산(4.6kg, 72.6mol), 아세톤(150.2L), 물(5.9L)을 가하고, 464L까지 농축했다. 농축액에 아세톤(78L)을 가하고, 265L까지 농축하고, 아세톤(19.5L)을 가했다. 슬러리를 55℃로 온도 조절하고, 120분간 이상 교반했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 아세톤으로 세정 후, 건조했다(여기에서 얻어진 건조 결정의, DSC, TG/DTA, HPLC, 입도 분포, DVS 측정의 결과를 도 14∼18에 나타낸다. HPLC는 측정 조건 12에 의해 측정했다. 도 19는, 당해 DVS 측정의 전후에서의 분말 X선 해석 패턴의 비교를 나타낸다.).

마찬가지의 조작을 나머지의 반량에 대해서도 반복함으로써, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(41.68kg, 64.3mol, 수율: 75.6%)을 얻었다.

HPLC(UV=255nm): RT=12.8min, HPLC 측정 조건 8

(실시예 2b)

식(VII)로 표시되는 화합물의 톨루엔화물의 합성

공정 1

화합물 9(150mg, 0.327mmol)와 화합물 10(65.4mg, 0.360mmol)을 톨루엔(1.5mL) 및 아세트산(0.187ml, 3.27mmol)과 혼합하고, 100℃에서 9시간 교반했다. 실온으로 냉각 후, 헵테인(1.5mL, 10V)을 가하여 여과하고, 얻어진 결정을 헵테인(0.7mL)으로 3회 세정했다. 감압 건조를 행하여, 식(VII)로 표시되는 화합물의 결정(168mg, 수율 87%)을 얻었다. 얻어진 결정에는 톨루엔이 용매화물로서 0.5 내지 0.6 분자 상당이 포함되어 있고, 통상 조작 범위의 감압 건조하에서는, 톨루엔은 제거되지 않았다. 품질적으로 양호한 식(VII)로 표시되는 화합물의 톨루엔화물의 취득을 확인했다.

1H-NMR(400MHz, CDCl₃)δ ppm: 7.93(s, 1H), 7.70(d, J=2.57Hz, 2H), 7.62(brs, 1H), 7.35-7, 45(m, 1H), 7.07(m, 1H), 6.92-6.97(td, J=9.63, 6.42, 1H), 5.34(s, 2H), 5.14(s, 2H), 4.20(s, 3H), 3.87(s, 2H).

7.14-7.27ppm, 2.35ppm에, 톨루엔 0.5 분자 내지 0.6 분자에 상당하는 피크를 확인했다.

참고예 1 화합물 S-4의 합성

[화학식 36]

공정 1: 화합물 S-2의 합성

화합물 S-1(5.50kg, 29.5mol), 아세토나이트릴(21.7kg) 및 빙초산(115.00kg)을 혼합하고, 5℃로 냉각했다. 17% 아질산 나트륨 수용액(13.03kg)을 가하고, 1시간 교반하고, 25℃로 승온 후 1.5시간 교반했다. 불용물을 여과 분별하고, 아세토나이트릴(21.7kg), 테트라하이드로퓨란(49.0kg)으로 불용물을 세정했다. 모은 여과액에 물(460L)을 가했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 물로 세정 후, 건조함으로써 화합물 S-2(3.75kg, 19.0mol, 수율: 64.4%)를 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=196(M-H), RT=11.8min, LC/MS 측정 조건 4

공정 2: 화합물 S-3의 합성

화합물 S-2(3.25kg, 16.4mol)와 아세트산 에틸(58.7kg)을 혼합하고, 트라이메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트(2.09kg, 14.1mol)를 가하고, 25℃에서 7시간 교반했다. 이 반응액에 아세트산 에틸(29.5kg), 메탄올(10.3kg)의 혼합액을 가했다. 이 혼합액을 5% 탄산 나트륨 수용액(66.3kg)에 가하고, 유기층과 수층으로 분리했다. 유기층을 5% 염화 나트륨 수용액(65.8kg)으로 2회 세정하고, 활성탄 처리하고, 42kg까지 농축했다. 테트라하이드로퓨란(87.0kg)을 가하고, 23kg까지 농축하는 조작을 2회 반복하고, 추가로 테트라하이드로퓨란(87.0kg)을 가하고, 18.9kg까지 농축하고, 33℃로 승온했다. 이 혼합액에 헵테인(47.0kg)을 가했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 테트라하이드로퓨란, 헵테인의 혼합액으로 세정 후, 건조함으로써 화합물 S-3(1.68kg, 7.9mol, 수율: 48.2%)을 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=212(M+H), 253(M+CH₃CN+H)RT=12.4min, LC/MS 측정 조건 4

공정 3: 화합물 S-4의 합성

화합물 S-3(1040g, 4.9mol), 10% 팔라듐 탄소(PE 타입, 함수)(523g, 0.25mol) 및 아세트산 에틸(8.99kg)을 혼합하고, 하이드라진 일수화물(504g, 10.1mol)을 가하고, 35℃에서 3시간 교반했다. 10% 팔라듐 탄소를 여과 분별하고, 물(1560g), 아세트산 에틸(9.00kg)로 10% 팔라듐 탄소를 세정했다. 모은 여과액에 2mol/L 염산(750g)을 가하고, 유기층과 수층으로 분리했다. 얻어진 수층을 아세트산 에틸(4.69kg)로 추출했다. 유기층을 합쳐 활성탄 처리하고, 11.09kg까지 농축했다. 이 농축액에 4mol/L 염화 수소·아세트산 에틸 용액(1124g)을 가했다. 고체를 여과하여 취하고, 아세트산 에틸로 세정 후, 건조함으로써 화합물 S-4(0.84kg, 3.9mol, 수율: 78.5%)를 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=182(M+H), 223(M+CH₃CN+H)RT=6.6min, LC/MS 측정 조건 4

염소 농도(이온 크로마토그래피): 16.74%

참고예 2 화합물 A-3의 합성

[화학식 37]

공정 1: 화합물 A-2의 다이클로로메테인 용액의 합성

화합물 A-1(9.2kg, 65.1mol) 및 테트라하이드로퓨란(64L)을 혼합하고, 0℃로 냉각하고, 슬러리로 했다. 여기에서, 수소화 비스(2-메톡시)알루미늄 나트륨(Red-AL)/톨루엔 용액(65wt%)(26.4kg, 84.9mol)과 테트라하이드로퓨란(28L)을 혼합한 Red-AL/테트라하이드로퓨란 용액을 내온 8℃ 이하로 유지하면서 60분간에 걸쳐 적하했다. 그 후, 0℃∼5℃에서 30분간 교반했다. 본 반응액에 대해서 아세톤(4.9kg, 84.3mol)을 30분간에 걸쳐 적하하고, 25℃로 승온했다. 다른 반응기에 타타르산 칼륨 나트륨·사수화물(46kg, 163mol)과 테트라하이드로퓨란(138L)을 혼합한 슬러리를 준비하고, 앞의 Red-AL 환원을 아세톤으로 쿠엔칭(quenching)한 반응액을 30분간에 걸쳐 적하했다(이 동안에 내온은 40℃ 부근이 되었다). 2시간, 40℃에서 교반을 계속한 후, 25℃로 냉각했다. 물(2.5kg)을 가하고 교반한 후, 부흐너 여과를 행하고, 얻어진 여과액을 35kg(28L)까지 감압 농축했다. 여과액(28L)을 3등분하고, 1개째에 대하여 톨루엔(2.6kg)을 가하고, 감압 농축을 행하는 조작을 8회 반복한 후, 최종적으로 농축 건고(乾固)했다. 농축 건고한 생성물에 다이클로로메테인(13.5kg)을 가하고 생성물 A-2의 다이클로로메테인 용액으로 했다. 동일한 조작을 2개째, 3개째에도 실시하여, A-2(5.53kg)와 다이클로로메테인(42.7kg)으로 구성되는 A-2/다이클로로메테인 용액을 조정했다(수율: 74.8%).

1H-NMR(400MHz, CDCl3, 30℃)δ ppm: 8.00(s, 1H), 4.74(s, 2H), 3.90(s, 3H).

공정 2: 화합물 8의 합성

공정 1에서 제조한 A-2/다이클로로메테인 용액(5.53kg의 A-2(48.8mol)를 포함하는 다이클로로메테인 용액 49.8kg)에 다이클로로메테인(44L)을 가하고, 25℃로 온도 조정했다. 염화 싸이온일(7.8kg, 65.5mol)과 다이클로로메테인(27L)의 혼합 용액을 30분간에 걸쳐 적하하고, 다이클로로메테인(8.2L)을 이용하여 라인 세정하고 세액으로서 유입 후, 실온에서 7시간 교반했다. 별도로, 아세트산 나트륨(36.2kg, 436mol)과 수돗물(143L)로부터 20% 아세트산 나트륨 수용액(179kg)을 조정했다. 20% 아세트산 나트륨(119kg)을 앞의 반응액에 적하했다. 적하 종료 시점의 pH는 4.6 부근이었다. 본 조작으로 얻어진 유기층을 염화 나트륨(5.5kg)과 수돗물(49L)로부터 조정한 10% 염화 나트륨 수용액으로 세정하고, 수층에 대해서도 다이클로로메테인(55L)으로 추출했다. 합친 유기층(다이클로로메테인 용액)을 33L까지 농축한 후, 아세트산 에틸(27.5L)을 가하여, 농축했다. 33L까지 농축 후, 다시 아세트산 에틸(47.5L)을 가하여, 재킷 온도 60℃하에서 상압 농축하고, 생긴 무기염을 여과했다. 여과액에 염산·아세트산 에틸 용액(4mol/L, 12.6kg)을 가하여, 염산염화하고, 25℃에서 30분간 교반한 후, 5℃ 부근으로 냉각했다. 30분간 교반하고, 정석 숙성 후, 얻어진 정석 슬러리를 여과, 냉각한 아세트산 에틸(55L)로 세정, 감압 건조하여, 화합물 8(5.25kg)을 얻었다(담황색 분말, 수율: 64.8%).

1H-NMR(400MHz, DMSO-D6, 30℃)δ ppm: 8.54(s, 1H), 4.70(s, 2H), 3.86(s, 3H).

참고예 3 화합물 10의 합성

[화학식 38]

공정 1: 화합물 B-2의 합성

질소 분위기하에서, 0℃∼5℃하로 냉각한 98% 황산(395.7L)에 대해서 화합물 B-1(79.1kg, 499mol)을 분할하여 가했다(내온을 0℃∼5℃로 유지한다). 질산 칼륨(55.5kg)을 내온 0℃∼12℃로 유지하고, 15회로 나누어(20분 이상의 간격을 두고) 분할 투입했다. 내온 0℃∼5℃로 5시간 교반했다. 0℃∼5℃로 냉각한 물(791L)에 내온 0℃∼5℃로 유지하면서, 앞의 반응액을 천천히 유입하고, 98% 황산(39.6L)으로 씻어 넣기를 행한 후, 내온 0℃에서 5시간 교반했다. 슬러리를 원심 분리기에 의해 여과하고, 물(791L)로 세정했다. 얻어진 조(粗)고체를 물(791L)에 현탁시키고, 20℃∼30℃에서 30분간 교반한 후, 고체를 여과, 물(791L)로 3회 세정한 후, 감압 건조하여, 화합물 B-2(99.61kg)를 얻었다.

1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm: 10.31(s, 1H), 8.46(d, J=6.60Hz, 1H), 7.47(d, J=9.17Hz, 1H).

HPLC(UV=250nm): RT=10.9min, HPLC 측정 조건 9

공정 2: 화합물 S-2의 합성

에탄올(697L), 물(697L) 및 하이드라진 일수화물(73.5kg, 1468mol)을 혼합하고, 45℃로 가열했다. 여기에서, 화합물 B-2(99.6kg, 489mol)와 에탄올(299L)의 혼합 용액을 60분에 걸쳐 적하하고, 추가로 8시간, 45℃ 내지 50℃에서 9시간 교반했다. 내온을 40℃∼50℃로 유지하면서, 탄산수소 칼륨(53.9kg, 538mol)과 물(1295L)로부터 조정한 수용액을 30분간 이상에 걸쳐 적하했다. 0℃∼5℃로 냉각하고, 1시간 교반한 후, 여과를 행했다. 물(1335L)과 에탄올(657L)을 혼합하고, 0℃∼5℃로 냉각시킨 에탄올 수용액을 이용하여 앞의 고체를 세정했다. 감압 건조를 행하여, 화합물 S-2(83.25kg)를 얻었다(수율: 86.9%).

1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ ppm: 13.56-13.98(m, 1H), 8.67(s, 1H), 8.37(d, J=0.98Hz, 1H), 7.92(d, J=0.61, 1H).

HPLC(UV=250nm): RT=10.4min, HPLC 측정 조건 9

공정 3: 화합물 S-3의 합성

화합물 S-2(84kg, 430mol)와 아세트산 에틸(1596L)을 혼합하고, 20℃∼30℃에서 교반했다. 트라이메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트(77.6kg, 525mol)를 수회로 나누어 투입하고, 아세트산 에틸(84L)을 가하고, 25℃에서 6시간 교반했다. 메탄올(252L)과 아세트산 에틸(420L)의 혼합 용액을 2시간에 걸쳐 앞의 반응액에 적하하고, 과잉의 트라이메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트의 쿠엔칭을 행했다. 탄산 나트륨(84kg)과 물(1596L)을 혼합한 탄산 나트륨 수용액에, 앞의 쿠엔칭 후의 반응액을 1시간에 걸쳐 적하하고, 아세트산 에틸(420L)과 메탄올(84L)을 가했다. 분액 조작에 의해 얻어진 유기층을 포화 식염수(1680kg)로 2회 세정하고, 얻어진 유기층에 대해서 활성탄 여과 처리를 행했다. 그 후, 유기층을 감압 농축한 후, 테트라하이드로퓨란(2520L)을 유입하고, 추가로 감압 농축을 행했다. 테트라하이드로퓨란의 추가 유입과 감압 농축의 조작을 재차 실시한 후, 헵테인(2139L)을 적하하고, -5℃∼5℃로 냉각한 후, 0℃ 부근에서 1시간 교반, 정석 숙성했다. 정석 슬러리를 여과하고, 냉각한 테트라하이드로퓨란(224L)과 헵테인(912L)의 혼합 용액으로 세정했다. 감압 건조를 행하여, 화합물 S-3(65.73kg)를 얻었다(수율: 74.1%).

1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm: 8.31(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.81(s, 1H), 4.27(s, 3H).

HPLC(UV=254nm): RT=10.3min, HPLC 측정 조건 10

공정 4: 화합물 10의 합성

화합물 S-3(65.7kg, 310mol)과 아세트산 에틸(657L)을 혼합하고, 실온에서 교반한 후, 10℃ 부근으로 냉각하고, 질소 치환을 행했다. 5%의 백금-탄소(57.7kg, 53% 수분 함유)를 가했다. 수소 치환 후, 내온을 25℃ 부근으로 조절하면서 4시간 교반했다. 원료 소실을 확인 후에 질소 치환, 여과 조작을 실시하여 백금-탄소 촉매를 제거했다. 분액 조작을 실시 후, 유기층을 농축하고, 아세트산 에틸 용액에 헵테인을 적하하고, 정석 슬러리를 형성시켰다. 여과하고, 헵테인/아세트산 에틸로 세정 후, 감압 건조를 행하여, 화합물 10(37.24kg)를 얻었다(수율: 66.2%).

1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm: 7.70(s, 1H), 7.64(s, 1H), 6.89(s, 1H), 4.15(s, 3H).

HPLC(UV=254nm): RT=4.8min, HPLC 측정 조건 10

참고예 4 화합물 9의 합성

[화학식 39]

공정 1: 화합물 C-2의 합성

화합물 C-1(10.00g, 48.0mmol, 메실산염), N,N'-카보닐다이이미다졸(8.18g, 50.4mmol), 아세토나이트릴(60.00mL), 및 다이아이소프로필에틸아민(6.83g, 52.8mmol)을 혼합하고, 10℃에서 60분간 교반했다. 반응액에 화합물 1(8.09g, 55.2mmol, 염산염), 다이아이소프로필에틸아민(7.14g, 55.2mmol)을 혼합하고, 50℃에서 210분간 교반했다. 반응액을 냉각하고, 45g까지 농축했다. 2-프로판올(100mL)을 가하고, 60g까지 농축한 후, 2-프로판올(100mL)을 가했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고, 고체를 여과하여 취하고, 2-프로판올로 세정 후, 건조함으로써 화합물 C-2(10.48g, 42.2mmol, 수율: 88%)를 얻었다.

HPLC(UV=210nm): RT=14.5min, HPLC 측정 조건 11

공정 2: 화합물 C-3의 합성

화합물 C-2(8.00g, 32.2mmol), N,N'-카보닐다이이미다졸(6.79g, 41.9mmol), 테트라하이드로퓨란(80.0mL), 및 1,8-다이아자바이사이클로[5,4,0]-7-운데센(5.40g, 35.4mmol)을 혼합하고, 25℃에서 120분간 교반했다. 테트라하이드로퓨란(80.0mL)을 적하하고, 반응액을 0℃로 냉각하고, 정석 슬러리를 형성시켰다. 고체를 여과하여 취하고, 테트라하이드로퓨란으로 세정 후, 가열 건조함으로써 화합물 C-3의 결정(12.6g, 29.6mmol, 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]-7-운데센염, 수율: 92%)을 얻었다.

HPLC(UV=210nm): RT=1.9min, HPLC 측정 조건 11

공정 3: 화합물 9의 합성

화합물 C-3(1.00g, 2.3mmol, 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]-7-운데센염), N,N-다이메틸아세트아마이드(5.0mL), 및 화합물 4(579.2mg, 2.6mmol)를 혼합하고, 70℃에서 300분간 교반했다. 반응액을 냉각하고, 아세토나이트릴(10mL)을 가하고, 9.4g까지 농축하는 조작을 2회 반복했다. 농축액에 화합물 6(461mg, 4.7mmol) 및 다이아이소프로필에틸아민(456mg, 3.5mmol)을 가하고, 60℃에서 160분간 교반했다. 반응액을 25℃로 냉각하고, 아세트산(703mg, 11.7mmol), 물(8.0mL) 및 종정(種晶)을 가하고, 얻어진 정석 슬러리를 0℃로 냉각했다. 슬러리에 물(12.0mL)을 가하고, 고체를 여과하여 취하고, 20% 아세토나이트릴 수용액으로 세정 후, 건조함으로써 화합물 9(0.86g, 1.9mmol, 수율: 79.5%)를 얻었다.

HPLC(UV=255nm): RT=14.5min, HPLC 측정 조건 8

참고예 5 화합물 S-3의 합성

[화학식 40]

공정 1: 화합물 S-3의 합성

참고예 3의 공정 1과 마찬가지로 하여, 화합물 B-2를 얻었다. 계속해서, 화합물 B-2(30g, 147mmol)와 NMP(120mL)를 혼합하고, 빙랭하에서 Boc-카복실레이트(56g, 383mmol)를 가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 반응액에 다이아이소프로필에틸아민(38.6mL, 221mmol)을 가하고, 90℃에서 20시간 교반했다. 반응액을 80℃로 하여 물(240mL)을 가한 후, 실온으로 냉각하고, 석출된 불용물을 여과 분별했다. 얻어진 고체를 NMP/물=1/2(15mL)의 혼합액으로 3회 세정하고, 추가로 물(30mL)로 3회 세정했다. 얻어진 고체를 아세트산 아이소프로필(60mL), 헵테인(240mL)에 현탁시킨 실온에서 교반 후, 아세트산 아이소프로필/헵테인=1/4(30mL)로 3회 세정함으로써 화합물 D-3을 얻었다. 얻어진 고체를 아세트산 아이소프로필(100mL)에 현탁시켰다. 얻어진 현탁액을 메실산(96mL, 1474mmol)과 아세트산 아이소프로필(100mL)의 혼액에 55℃에서 가하고, 아세트산 아이소프로필(60mL)로 씻어 넣고, 동 온도에서 25분간 교반했다. 빙랭하, 물(240mL), 수산화 나트륨 수용액(239mL, 1916mmol) 및 아세트산 아이소프로필(150mL)을 반응액에 가하고, 40℃에서 교반했다. 얻어진 반응액에 아세트산 아이소프로필(150mL)을 가했다. 얻어진 유기층을 물(90mL)로 3회 세정하고, 45g까지 농축했다. 아세트산 아이소프로필(12g), 헵테인(210mL)을 가하고, 얻어진 불용물을 여과 분별하고, 고체를 아세트산 아이소프로필/헵테인=1/7(30ml)으로 3회 세정, 건조함으로써, 화합물 S-3(25.3g, 120mmol, 수율: 81.1%)을 얻었다.

1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm: 8.34(s, 1H), 8.13(s, 1H), 7.84(s, 1H), 4.28(s, 3H).

참고예 6 화합물 10의 합성

[화학식 41]

공정 1: 화합물 T-2, T-3의 합성

빙랭하, 화합물 T-1(40g, 182mmol), 농황산(200mL, 3677mmol) 및 69% 질산(23.3g, 255mmol)을 혼합하고, 빙랭으로부터 실온에서 3시간 교반하고, 그 후 밤새 정치했다. 빙수 520mL에 그 혼합액을 주입하고, 다이클로로메테인(200mL)을 가하고, 분액 조작을 행했다. 얻어진 다이클로로메테인 용액을 5% 탄산수소 나트륨 수용액(400mL)으로 2회 세정하고, 농축 건고했다. 얻어진 고체에 메탄올(120mL)을 가한 후, 내용량이 116g이 될 때까지 농축했다. 얻어진 슬러리에 내용량이 333g이 될 때까지 메탄올을 가한 후, 물(240mL)을 가하고, 얻어진 불용물을 여과 분별하고, 고체를 메탄올/물=1/1(200mL)로 세정, 건조함으로써, 화합물 T-2/T-3=1/2.78의 혼합물(30.67g, 수율: 58.5%)을 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z로서 MS 검출되지 않고, RT=2.04min, LC/MS 측정 조건 1

공정 2: 화합물 T-4의 합성

질소 기류하, T-2/T-3=1/2.78의 혼합물(200mg)에 2-프로판올(1.4mL)을 가하고, 60℃까지 승온하고, 트라이에틸아민(0.289mL, 2.07mmol)을 가하고, 1.5시간 교반했다. 그 후, 메틸아민 염산염(94mg, 1.39mmol)을 물(0.4mL)에 녹인 용액을 60℃에서 반응액에 가하고, 3시간 교반했다. 얻어진 반응액에 60℃에서 물(8mL)을 가한 후, 실온으로 냉각하고 30분간 교반했다. 석출된 불용물을 여과 분별하고, 얻어진 고체를 물(5mL)로 세정, 건조함으로써, 화합물 T-4(194mg, 0.699mmol, 수율: 100%)를 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=277(M+H), RT=2.46min, LC/MS 측정 조건 2

공정 3: 화합물 T-5의 합성

질소 기류하, 화합물 T-4(500mg, 1.80mmol)와 2-프로판올(2.5mL) 및 트라이 뷰틸포스핀(802mg, 3.96mmol)을 혼합하고, 80℃에서 1.5시간 교반했다. 실온으로 냉각한 후, 톨루엔(3mL)으로 3회 용매 치환을 행하고, 농축 후의 잔사가 5g이 될 때까지 농축을 행했다. 그 후, 반응액을 4℃까지 빙랭하고, 4mol/L 염산-아세트산 에틸 용액(1.5mL)을 가하고 20분간 교반했다. 얻어진 정석 슬러리를 여과 분별하고, 톨루엔(2.5mL)으로 세정, 건조함으로써 고체를 얻었다. 물(4.3mL)과 탄산수소 나트륨(0.192g, 2.29mmol)의 혼액에, 얻어진 고체를 조금씩 가하고, pH를 7∼8로 조정하고 30분간 교반하여, 정석 슬러리를 얻었다. 여과 분별하고, 물(8.6mL)로 세정, 건조함으로써, 화합물 T-5(351mg, 1.43mmol, 수율: 79.4%)를 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=245(M+H), RT=1.90min, LC/MS 측정 조건 1

공정 4: 화합물 10의 합성

질소 기류하, 화합물 T-5(2.015g, 8.21mmol), DME(20mL), 나트륨 tert-뷰톡사이드(1.104g, 11.49mmol), 벤조페논이민(1.645mL, 9.80mmol), BINAP(0.153g, 0.246mmol), 및 다이아세톡시팔라듐(0.036g, 0.160mmol)을 혼합하고, 80℃에서 9시간 교반하고, 밤새 정치했다. 얻어진 현탁액에 에탄올(10mL)을 가하고, 5℃로 냉각했다. 현탁액에 30% 황산(20mL)을 조금씩 가하고, 실온에서 밤새 교반했다. 얻어진 반응액에 아세트산 에틸(40mL), 물(20mL)을 가하고, 분액 조작을 실시했다. 얻어진 수층을 아세트산 에틸(10mL)로 세정하고, 유기층을 10% 황산(10mL)으로 세정했다. 얻어진 수층을 합쳐 빙랭 후, 48% 수산화 나트륨 수용액을 이용하여 pH가 8이 될 때까지 중화시켰다. 아세트산 에틸(20mL)을 가하고, 석출된 황산 나트륨을 여과 분별하고, 분액 조작을 실시했다. 얻어진 수층에 아세트산 에틸(20mL)을 가하고, 분액 조작을 실시했다. 얻어진 유기층을 합쳐 농축하고, 추가로 아세트산 에틸(10mL)로 용매 치환을 4회 반복했다. 헵테인(12mL)을 가하고, 얻어진 정석 슬러리를 빙랭하 1시간 교반했다. 여과 분별하고, 아세트산 에틸/헵테인=1/3(6mL)으로 세정, 건조함으로써, 화합물 10(1.18g, 6.5mmol, 수율: 79.2%)을 얻었다.

LC/MS(ESI): m/z=182(M+H), RT=0.88min, LC/MS 측정 조건 1

참고예 7 화합물 U-4의 합성

[화학식 42]

공정 1: 화합물 U-2의 합성

화합물 U-1(2.09g, 22.6mmol, 염산염)과 CPME(12.04g) 및 물(7g)을 혼합하고, 탄산 칼륨(4.25g, 30.8mmol)을 물(7g)에 용해시킨 용액을, 반응액의 온도가 20∼30℃가 되도록 천천히 가했다. 얻어진 혼합 용액을 격렬하게 교반하고, CbzCl(3.50g, 20.5mmol)을 반응액의 온도가 20∼30℃가 되도록 천천히 가하고, 실온에서 1시간 교반했다. 얻어진 용액에 분액 조작을 실시하고, 유기층을 물(14g)로 세정 후, 농축했다. 잔사에 CPME(15.05g)를 가하고, 추가로 잔사가 10.5g이 될 때까지 농축했다. 얻어진 용액을 45℃까지 승온하고, 헵테인(9.58g)을 온도를 유지한 채로 30분간에 걸쳐 가하고, 그 후 추가로 30분간 교반했다. 헵테인(19.15g)을 가한 후, 얻어진 정석 슬러리를 빙랭하에서 30분간 교반했다. 여과 분별하고, 얻어진 고체를 CPME-헵테인(3g-9.58g)의 혼액으로 세정, 건조함으로써, 화합물 U-2(3.41g, 17.93mmol, 수율: 86%)를 얻었다.

HPLC(UV=254nm): RT=9.51min, HPLC 측정 조건 5

공정 2: 화합물 U-3의 합성

화합물 U-2(8.00g, 42.1mmol)에 메탄올(31.66g)을 가하고, 0℃까지 냉각 후, 나트륨 메톡사이드의 28% 메탄올 용액(2.43g, 12.6mmol)을 가하고, 동 온도에서 4시간 교반했다. 얻어진 용액에, N-메틸포모하이드라자이드(3.74g, 50.5mmol)를 메탄올(19g)에 녹인 용액을 0∼5℃에서 가하고, 추가로 아세트산(2.53g, 42.1mmol)을 동 온도에서 가하고, 0℃에서 2시간 교반했다. 얻어진 용액을 60℃까지 승온하고, 동 온도에서 4시간 교반했다. 반응액을 32g까지 농축한 후, 아세트산 에틸(57.73g), 5% 탄산수소 나트륨 수용액(67.53g)을 가했다. 얻어진 혼합 용액을 10분간 교반하고, 분액 조작을 행했다. 얻어진 수층에 대해서도 아세트산 에틸(57.73g)로 추출했다. 합친 유기층을 40g까지 농축했다. MEK(64.4g)를 가하고, 추가로 40g까지 농축하는 조작을 2회 반복했다. 얻어진 농축액에 메실산(4.04g, 42.0mmol)을 MEK(32.2g)에 녹인 용액을 20∼30℃에서 가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 석출된 정석 슬러리를 여과 분별하고, 얻어진 고체를 MEK(25.76g)로 세정, 건조함으로써, 화합물 U-3(10.1g, 29.5mmol, 메실산염, 수율: 70%)을 얻었다.

HPLC(UV=254nm): RT=7.90min, HPLC 측정 조건 5

공정 3: 화합물 C-1의 합성

화합물 U-3(10g, 29.2mol, 메실산염)과 메탄올(79.15g)을 혼합하고, 실온에서 교반한 후, 질소 치환을 행했다. 팔라듐-탄소(팔라듐 10%)(0.5g, 5중량%)를 가하고, 수소 치환 후, 실온에서 7시간 교반했다. 질소 치환 후, 셀라이트(등록상표) 여과 조작으로 팔라듐-탄소 촉매를 제거했다. 얻어진 여과액을 50g까지 농축했다. MEK(40.25g)를 가하고, 40g까지 농축하는 조작을 2회 반복했다. 얻어진 정석 슬러리를 여과 분별하고, MEK(25.76g)로 세정, 건조함으로써, 화합물 C-1(5.3g, 25.5mmol, 메실산염, 수율: 87%)을 얻었다.

HPLC(UV=254nm): RT=2.75min, HPLC 측정 조건 11

R1(I>2.00s(I))은 0.0470이며, 최종의 차 푸리에로부터 전자 밀도의 결여도 오치도 없는 것을 확인했다.

결정학적 데이터를 표 2에 나타낸다.

또한, 비수소 원자의 원자 좌표를 표 3∼표 4에 나타낸다. 여기에서, U(eq)란, 등가 등방성 온도 인자를 의미한다.

다음으로, 수소 원자의 원자 좌표를 표 5에 나타낸다. 여기에서, U(iso)란, 등방성 온도 인자를 의미한다. 또한, 표 5의 수소 원자의 번호는, 결합하고 있는 비수소 원자의 번호에 관련하여 붙였다.

추가로, 원자간 결합 거리(단위: 옹스트롬)를 표 6에 나타낸다.

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형은, 비대칭 단위 중에, 식(VII)로 표시되는 화합물이 1분자 존재하고 있었다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 비대칭 단위 중의 구조를, 도 11에 나타낸다.

한편, 표 3∼표 4 및 표 6에 있어서의 비수소 원자의 번호는, 각각 도 11에 기재된 번호에 대응하고 있다.

표 6에 기재된 바와 같이, N10-C9의 결합 거리는 약 1.26Å을 나타내고, N16-C9의 결합 거리는 약 1.37Å을 나타냈다.

N10-C9의 결합 거리(약 1.26Å)는, N16-C9의 결합 거리(약 1.37Å)보다도 짧기 때문에, 푸마르산 공결정 I형의 식(VII)로 표시되는 화합물은, 이미노 구조:

[화학식 43]

라고 동정했다.

즉, 동일한 화합물이라도, 결정화 조건 등에 따라, 이미노 구조를 취하는 경우와 아미노 구조를 취하는 경우가 존재하고, 염이나 복합체를 형성하고 있는 경우에 있어서도, 그의 염이나 복합체의 카운터 분자의 종류에 따라, 이미노 구조를 취하는 경우와 아미노 구조를 취하는 경우가 존재하며, 동일 카운터 분자여도, 결정화 조건 등에 따라, 이미노 구조를 취하는 경우와 아미노 구조를 취하는 경우가 존재한다. 또한, 이미노 구조를 취하는 화합물, 그의 염 또는 그들의 복합체와 아미노 구조를 취하는 화합물, 그의 염 또는 그들의 복합체의 혼합물인 경우도 있다.

실시예 1b의 공정 5-2와 마찬가지의 제조 방법에 의해 얻어진 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형의 분말 X선 회절의 결과를 나타낸다.

분말 X선 회절 패턴에 있어서, 회절 각도(2θ): 7.7±0.2°, 9.5±0.2°, 10.0±0.2°, 10.9±0.2°, 13.8±0.2°, 14.6±0.2°, 18.6±0.2°, 22.6±0.2°, 23.4±0.2° 및 24.6±0.2°에 피크가 확인되었다.

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형(Form I)의 분말 X선 회절 패턴을 도 9에 나타낸다. 가로축은 2θ(°)이고, 세로축은 강도(Count)를 나타낸다.

도 9의 분말 X선 회절 패턴에 있어서의 피크 테이블을 도 10에 나타낸다.

또한, 식(VII)로 표시되는 화합물의 톨루엔화물의 분말 X선 회절의 결과를 나타낸다.

분말 X선 회절 패턴에 있어서, 회절 각도(2θ): 7.4±0.2°, 8.1±0.2°, 13.7±0.2°, 15.1±0.2°, 16.3±0.2°, 19.3±0.2°, 21.4±0.2°, 22.6±0.2°, 24.6±0.2°, 26.6±0.2°, 27.8±0.2° 및 29.5±0.2°에 피크가 확인되었다.

식(VII)로 표시되는 화합물의 톨루엔화물의 분말 X선 회절 패턴을 도 20에 나타낸다. 가로축은 2θ(°)이고, 세로축은 강도(Count)를 나타낸다.

식(VII)로 표시되는 화합물의 톨루엔화물에 대해서는, 분자 구조(아미노체/이미노체)는 동정하고 있지 않다.

이하에, 본 발명 화합물의 생물 시험예를 기재한다.

본 발명에 따른 식(VII)로 표시되는 화합물은, 코로나바이러스 3CL 프로테아제 저해 작용을 가져, 코로나바이러스 3CL 프로테아제를 저해하는 것이면 된다.

구체적으로는, 이하에 기재하는 평가 방법에 있어서, IC₅₀은 50μM 이하가 바람직하고, 보다 바람직하게는, 1μM 이하, 보다 더 바람직하게는 100nM 이하이다.

시험예 1: human TMPRSS2 발현 Vero E6 세포(Vero E6/TMPRSS2 세포)를 이용한 Cytopathic effect(CPE) 억제 효과 확인 시험

<조작 수순>

· 피험 시료의 희석, 분주

미리 피험 시료를 DMSO로 적당한 농도로 희석하여, 2∼5배 단계 희석 계열을 제작 후, 384웰 플레이트에 분주한다.

· 세포 및 SARS-CoV-2의 희석, 분주

VeroE6/TMPRSS2 세포(JCRB1819, 5×10³cells/well)와 SARS-CoV-2(100 TCID₅₀/well)를 배지(MEM, 2% FBS, 페니실린-스트렙토마이신)에서 혼합하고, 피험 시료가 들어간 웰에 분주한 후, CO₂ 인큐베이터로 3일간 배양한다.

· CellTiter-Glo(등록상표) 2.0의 분주 및 발광 시그널의 측정

3일간 배양한 플레이트를 실온으로 되돌린 후, CellTiter-Glo(등록상표) 2.0을 각 웰에 분주하고, 플레이트 믹서로 혼화한다. 일정 시간 둔 후, 플레이트 리더로 발광 시그널(Lum)을 측정한다.

<각 측정 항목치의 산출>

· 50% SARS-CoV-2 감염 세포사 저해 농도(EC₅₀) 산출

x를 화합물 농도의 대수치, y를 %Efficacy로 했을 때, 이하의 Logistic 회귀식으로 저해 곡선을 근사하여, y=50(%)을 대입했을 때의 x의 값을 EC₅₀으로서 산출한다.

y=min+(max-min)/{1+(X50/x)^Hill}

%Efficacy={(Sample-virus control)/(cell control-virus control)}*100%

cell control: the average of Lum of cell control wells

virus control: the average of Lum of virus control wells

min: y축 하한치, max: y축 상한치, X50: 변곡점의 x좌표, Hill: min과 max의 중간점에서의 커브의 기울기

본 발명 화합물을 본질적으로 상기와 같이 시험했다. 결과를 이하에 나타낸다.

화합물 I-005: 0.328μM

시험예 2: SARS-CoV-2 3CL 프로테아제에 대한 저해 활성 시험

<재료>

· 시판되는 Recombinant SARS-CoV-2 3CL Protease

· 시판되는 기질 펩타이드

Dabcyl-Lys-Thr-Ser-Ala-Val-Leu-Gln-Ser-Gly-Phe-Arg-Lys-Met-Glu(Edans)-NH2(서열 번호: 1)

· Internal Standard 펩타이드

Dabcyl-Lys-Thr-Ser-Ala-Val-Leu(13C6, 15N)-Gln(서열 번호: 2)

Dabcyl-Lys-Thr-Ser-Ala-Val-Leu(13C6, 15N)-Gln은, 문헌(Atherton, E.; Sheppard, R.C., "In Solid Phase Peptide Synthesis, A Practical Approach", IRL Press at Oxford University Pres, 1989. 및 Bioorg. Med. Chem., 5권, 9호, 1997년, 1883-1891페이지 등)을 참고하여 합성할 수 있다. 이하에 일례를 나타낸다.

Rink 아마이드 수지를 이용하여, Fmoc 고상 합성에 의해, H-Lys-Thr-Ser-Ala-Val-Leu(13C6, 15N)-Glu(resin)-OαOtBu(Lys 측쇄는 Boc 보호, Thr 측쇄는 tert-뷰틸기로 보호, Ser 측쇄는 tert-뷰틸기로 보호, Glu의 C말단 OH는 tert-뷰틸기로 보호되어 있고, Glu 측쇄의 카복실산을 수지에 축합)를 합성한다. N말단 Dabcyl기의 수식은 4-다이메틸아미노아조벤젠-4'-카복실산(Dabcyl-OH)을 EDC/HOBT를 이용하여 수지 상에서 축합한다. 최종 탈보호, 및 수지로부터의 절출은 TFA/EDT=95:5로 처리함으로써 행한다. 그 후, 역상 HPLC에 의해 정제한다.

· RapidFire Cartridge C4 type A

<조작 수순>

· 어세이 버퍼의 조제

본 시험에서는, 20mM Tris-HCl, 100mM 염화 나트륨, 1mM EDTA, 10mM DTT, 0.01% BSA로 이루어지는 어세이 버퍼를 사용한다. IC₅₀치가 10nM 이하인 화합물에 대해서는, 20mM Tris-HCl, 1mM EDTA, 10mM DTT, 0.01% BSA로 이루어지는 어세이 버퍼를 사용한다.

· 피험 시료의 희석, 분주

· 효소와 기질의 첨가, 효소 반응

준비한 화합물 플레이트에, 8μM의 기질, 및 6 또는 0.6nM의 효소 용액을 첨가하고, 실온에서 3∼5시간 인큐베이션을 행한다. 그 후, 반응 정지액(0.067μM Internal Standard, 0.1% 폼산, 10 또는 25% 아세토나이트릴)을 가하여 효소 반응을 정지시킨다.

· 반응 산물의 측정

반응 완료된 플레이트는 RapidFire System 360 및 질량 분석기(Agilent, 6550 iFunnel Q-TOF), 또는 Rapid Fire System 365 및 질량 분석기(Agilent, 6495C Triple Quadrupole)를 이용하여 측정한다. 측정 시의 이동상으로서 A 용액(75% 아이소프로판올, 15% 아세토나이트릴, 5mM 폼산 암모늄)과 B 용액(0.01% 트라이플루오로아세트산, 0.09% 폼산)을 이용한다.

질량 분석기에 의해 검출된 반응 산물은, RapidFire Integrator 또는 동등한 해석이 가능한 프로그램을 이용하여 산출하여 Product area치로 한다. 또한, 동시에 검출된 Internal Standard도 산출하여 Internal Standard area치로 한다.

<각 측정 항목치의 산출>

· P/IS의 산출

앞 항목에서 얻어진 area치를 하기의 식에 의해 계산하여, P/IS를 산출한다.

P/IS=Product area치/Internal Standard area치

· 50% SARS-CoV-2 3CL 프로테아제 저해 농도(IC₅₀) 산출

x를 화합물 농도의 대수치, y를 %Inhibition으로 했을 때, 이하의 Logistic 회귀식으로 저해 곡선을 근사하여, y=50(%)을 대입했을 때의 x의 값을 IC₅₀으로서 산출한다.

y=min+(max-min)/{1+(X50/x)^Hill}

%Inhibition={1-(Sample-Control(-))/Control(+)-Control(-))}*100

Control(-): the average of P/IS of enzyme inhibited condition wells

Control(+): the average of P/IS of DMSO control wells

화합물 I-005: 0.010μM

시험예 1-2: human TMPRSS2 발현 Vero E6 세포(Vero E6/TMPRSS2 세포)를 이용한 Cytopathic effect(CPE) 억제 효과 확인 시험

<조작 수순>

· 피험 시료의 희석, 분주

미리 피험 시료를 DMSO로 적당한 농도로 희석하여, 3배 단계 희석 계열을 제작 후, 96웰 플레이트에 분주한다.

· 세포 및 SARS-CoV-2의 희석, 분주

VeroE6/TMPRSS2 세포(JCRB1819, 1.5×10⁴cells/well)와 SARS-CoV-2 hCoV-19/Japan/TY/WK-521/2020, hCoV-19/Japan/QK002/2020, hCoV-19/Japan/QHN001/2020, hCoV-19/Japan/QHN002/2020, hCoV-19/Japan/TY7-501/2021, hCoV-19/Japan/TY7-503/2021, hCoV-19/Japan/TY8-612/2021, hCoV-19/Japan/TY11-927-P1/2021(30-1000TCID₅₀/well)을 배지(MEM, 2% FBS, 페니실린-스트렙토마이신)에서 혼합하고, 피험 시료가 들어간 웰에 분주한 후, CO₂ 인큐베이터로 3일간 배양한다.

· CellTiter-Glo(등록상표) 2.0의 분주 및 발광 시그널의 측정

<각 측정 항목치의 산출>

· 50% SARS-CoV-2 감염 세포사 저해 농도(EC₅₀) 산출

y=min+(max-min)/{1+(X50/x)^Hill}

%Efficacy={(Sample-virus control)/(cell control-virus control)}*100%

cell control: the average of Lum of cell control wells

virus control: the average of Lum of virus control wells

(SARS-CoV-2 hCoV-19/Japan/TY/WK-521/2020)

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형: 0.37μM

시험예 2-2: SARS-CoV-2 3CL 프로테아제에 대한 저해 활성 시험

<재료>

· 시판되는 Recombinant SARS-CoV-2 3CL Protease

· 시판되는 기질 펩타이드

· Internal Standard 펩타이드

Dabcyl-Lys-Thr-Ser-Ala-Val-Leu(13C6, 15N)-Gln(서열 번호: 2)

· RapidFire Cartridge C4 type A

<조작 수순>

· 어세이 버퍼의 조제

본 시험에서는, 20mM Tris-HCl, 1mM EDTA, 10mM DTT, 0.01% BSA로 이루어지는 어세이 버퍼를 사용한다.

· 피험 시료의 희석, 분주

미리 피험 시료를 DMSO로 적당한 농도로 희석하여, 3배 단계 희석 계열을 제작 후, 384웰 플레이트에 분주한다.

· 효소와 기질의 첨가, 효소 반응

준비한 화합물 플레이트에, 8μM의 기질, 및 6nM의 효소 용액을 첨가하고, 실온에서 3시간 인큐베이션을 행한다. 그 후, 반응 정지액(0.072μM Internal Standard, 0.1% 폼산, 10% 아세토나이트릴)을 가하여 효소 반응을 정지시킨다.

· 반응 산물의 측정

반응 완료된 플레이트는 RapidFire System 360 및 질량 분석기(Agilent, 6550 iFunnel Q-TOF)를 이용하여 측정한다. 측정 시의 이동상으로서 A 용액(75% 아이소프로판올, 15% 아세토나이트릴, 5mM 폼산 암모늄)과 B 용액(0.01% 트라이플루오로아세트산, 0.09% 폼산)을 이용한다.

질량 분석기에 의해 검출된 반응 산물은, RapidFire Integrator를 이용하여 산출하여 Product area치로 한다. 또한, 동시에 검출된 Internal Standard도 산출하여 Internal Standard area치로 한다.

<각 측정 항목치의 산출>

· P/IS의 산출

P/IS=Product area치/Internal Standard area치

· 50% SARS-CoV-2 3CL 프로테아제 저해 농도(IC₅₀) 산출

y=min+(max-min)/{1+(X50/x)^Hill}

%Inhibition ={1-(Sample-Control(-))/Control(+)-Control(-))}*100

Control(-): the average of P/IS ratio in the wells without SARS-CoV-2 3CL protease and test substance

Control(+): the average of P/IS ratio in the wells with SARS-CoV-2 3CL protease and without test substance

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형: 0.0132μM

(실시예 5)

식(VII)로 표시되는 화합물의 양이 약 1.8(w/v)%가 되도록, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 달아서, 0.3(w/v)%의 고분자를 용해한 수용액에 첨가하여 분산시켰다.

첨가제로서는, 아미노알킬 메타크릴레이트 코폴리머 E(Evonik사제), 하이드록시프로필셀룰로스(닛폰 소다사제), 하이프로멜로스(신에쓰 화학공업사제), 폴리바이닐 알코올(Merck사제), 폴리바이닐 피롤리돈(BASF사제), 폴리바이닐 알코올·메틸 메타크릴레이트·아크릴산 공중합체(닛신 화성사제)를 사용했다.

시험예 3: 용해도 평가

실시예 5의 각 분산액 1mL를, 공복 시 모의 인공 장액(FaSSIF) 14mL에 가하고, 항온 스터러로 37℃, 400rpm으로 1시간 교반했다. 1시간 교반 후, 검체를 0.45μm 필터로 여과하고, 여과액 중의 식(VII)로 표시되는 화합물의 농도를 액체 크로마토그래피법에 의해 측정했다.

(측정법)

· 검출기: 자외 흡광 광도계(측정 파장 222nm)

· 칼럼: ACQUITY UPLC BEH C18 2.1×50mm, 1.7μm

· 칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

· 이동상 A: 0.1M 폼산 암모늄 용액, 이동상 B: 아세토나이트릴

· 이동상의 송액: 이동상 A 및 이동상 B의 혼합비를 7:3 또는 이하의 표와 같이 변경하여 농도 구배 제어했다.

· 유량: 약 0.6mL/min

· 주입량: 1μL 또는 1.5μL

· 샘플 쿨러 온도: 약 10℃

· 오토 인젝터 세정액: 물/메탄올 혼액(7:3)

· 면적 측정 범위: 시료 용액 주입 후 4분간 또는 7.5분간

· 식(VII)로 표시되는 화합물의 양의 계산식

식(VII)로 표시되는 화합물의 양(%)=ATII/ΣAT×100

ATII: 시료 용액의 식(VII)로 표시되는 화합물의 피크 면적

ΣAT: 시료 용액의 피크 면적의 합계(블랭크 및 시스템 피크는 제외한다)

(결과)

식(VII)로 표시되는 화합물의 용해도 시험 결과를 이하의 표에 나타낸다. 그 결과, 식(VII)로 표시되는 화합물은, 고분자를 첨가함으로써 용해도가 대폭으로 향상되었다.

본 실험에서 이용한, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정의 입자경은, D50이 3.44μm, D90이 8.33μm였다.

(실시예 6)

(정제의 제조 방법)

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 함유하는 정제를 제조했다.

이하의 표에, 1정제당 처방을 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정, D-만니톨(Roquette사제), 크로스카멜로스 나트륨(DuPont사제), 하이드록시프로필셀룰로스(닛폰 소다사제), 경질 무수 규산(Cabot사제) 및 스테아르산 마그네슘(Mallinckrodt사제)을 30메시 체로 체통과(篩過)시켜 혼합한 후, 조립했다.

조립 및 정립(整粒)한 과립, 결정 셀룰로스(아사히 화성사제) 및 스테아르산 마그네슘(Mallinckrodt사제), 또는 경질 무수 규산(Cabot사제)을 첨가하여 혼합한 후, 정적 압축기 또는 로터리식 타정기로 직경 9.0mm로 압축 성형하여, 하기 조성의 정제를 얻었다.

시험예 4: 정제의 용출 시험

(용출 시험법)

용출 시험은, 제 18 개정 일본 약국방 용출 시험법 제 2 법(계면활성제를 함유한 용출 시험 제 1 액, 패들법, 패들 회전수: 50rpm, 결과: 2정의 평균치)에 의해 행했다.

(실험 결과)

실시예 6A, 6B, 6C 및 6D의 용출 시험 결과를 도 21에 나타낸다. 그 결과, 어느 실시예에 있어서도 신속한 용출성을 나타냈다.

시험예 4에 이용한 실시예 6A 및 6B의 제제에 이용한, 유효 성분(식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정)의 입도 분포를 도 22에 나타낸다. 10% 입자경이 0.69μm, 50% 입자경이 4.00μm, 90% 입자경이 10.80μm였다.

시험예 4에 이용한, 실시예 6C 및 6D의 제제에 이용한 유효 성분(식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정)의 입도 분포를 도 23에 나타낸다. 10% 입자경이 0.67μm, 50% 입자경이 3.63μm, 90% 입자경이 10.98μm였다.

입도 분포의 측정 조건을 이하에 나타낸다.

제조사: 심파텍

장치: 레이저 회절식 HELOS&RODOS 입도 분포 측정 장치

레인지: R2

분산압: 3bar

트리거 조건: 스톱 2s 측정 농도≤1%이거나 10s 실시간

시험예 5: 시간 경과 안정성 시험에 있어서의 제제 중의 안정화제의 영향

시험예 4에서 이용한 것과 동일 로트의 실시예 6A의 제제의 시간 경과 안정성을 확인한 결과를 나타낸다.

a. 안정성 시험법

실시예 6A의 제제를, 1) 갈색 유리병 폐전(閉栓) 상태에서 60℃, 2주간, 또는 2) 갈색 유리병 개전(開栓) 상태에서 40℃, 75% 상대 습도하, 1개월 보관했다. 그 후, 본 발명 제제 중의 식(VII)로 표시되는 화합물의 유연 물질량을 측정했다.

(시료액 조제 방법)

(측정 방법)

이하의 방법, 조건에 의해, 액체 크로마토그래프로, 본 발명 제제 중의 식(VII)로 표시되는 화합물의 유연 물질량을 측정했다.

· 검출기: 자외 흡광 광도계(측정 파장: 222nm)

· 칼럼: C18 칼럼

· 칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

· 이동상 A: 0.01mol/L 폼산 암모늄 용액, 이동상 B: 아세토나이트릴

· 이동상 A 및 이동상 B의 혼합비는, 9:1부터 1:9까지 서서히 이동상 B의 혼합비를 높여, 32분간으로 측정을 행했다.

· 유량: 0.6mL/분

유연 물질량은, HPLC 차트의 크로마토그램의 피크 면적의 합계를 100%로 하여, 그 양에 대한 비율(%)을 산출했다.

b. 결과

안정성 시험의 결과를 이하의 표에 나타낸다. 실시예 6A의 제제의 총 유연 물질량은, 1) 갈색 유리병 폐전 상태에서 60℃, 2주간, 및 2) 갈색 유리병 개전 상태에서 40℃, 75% 상대 습도하, 1개월 보관 후에도 증가하고 있지 않아, 안정했다.

이상으로부터, 본 발명 제제는, 습도 및 온도에 대해서 안정성이 높다.

(실시예 7)

시험예 6 임상 시험(Ph2a)

경증/중등증 및 무증후/경도 증상만 갖는 SARS-CoV-2 감염자에게 피검약(유효 성분: 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정)을 반복 경구 투여했을 때의 유효성 및 안전성의 평가를, 플라세보를 비교 대상으로 한 무작위 할당에 의한 이중 맹검 비교 시험에 의해 실시했다.

Phase 2a Part의 주요 평가 항목은, 경증/중등증 및 무증후의 SARS-CoV-2 감염자 공통으로, 각 시점에 있어서의 SARS-CoV-2의 바이러스 역가의 베이스라인으로부터의 변화량이며, 피검약의 항바이러스 효과를 확인했다.

경증/중등증의 SARS-CoV-2 감염자는 하기의 기준 모두에 해당하는 환자를 선택했다.

(a) 12세 이상 70세 미만의 남성 또는 여성 환자.

(b) 등록 전 120시간 이내에 SARS-CoV-2 양성으로 진단된 자.

(c) COVID-19 발증부터 등록까지의 시간이 120시간 이내인 자.

(d) 등록 시에 COVID-19에 의한 이하의 증상(COVID-19의 12증상) 중 어느 것에서, 중등도(COVID-19 증상 스코어: 2) 이상의 증상을 1항목 이상(COVID-19 발증 전부터 존재한 증상을 제외한다) 갖는 자.

전신 증상: 피로감, 근육 또는 몸의 통증, 두통, 오한, 미열

호흡기 증상: 콧물 또는 코막힘, 목의 통증, 기침, 헐떡임

소화기 증상: 메스꺼움, 구토, 설사

무증후의 SARS-CoV-2 감염자는 하기의 기준 모두에 해당하는 환자를 선택했다.

(a) 12세 이상 70세 미만의 남성 또는 여성 환자.

(b) 등록 전 120시간 이내에 SARS-CoV-2 양성으로 진단된 자.

(c) 무증후: 등록 전 2주간 이내에, 이하의 COVID-19 증상(SARS-CoV-2 감염 전부터 존재한 증상을 제외한다)이 확인되고 있지 않은 자.

전신 증상: 피로감, 근육 또는 몸의 통증, 두통, 오한, 미열, 미각 이상, 후각 이상

호흡기 증상: 콧물 또는 코막힘, 목의 통증, 기침, 헐떡임

소화기 증상: 메스꺼움, 구토, 설사

무증후/경도 증상만: 무작위 할당 전 2주간 이내에, COVID-19에 의한 이하의 증상(COVID-19의 12증상) 중 어느 것에 있어서도, 중등도(COVID-19 증상 스코어: 2) 이상의 증상을 갖지 않는 자(COVID-19 발증 전부터 존재한 증상을 제외한다).

전신 증상: 권태감(피로감), 근육통 또는 몸의 통증, 두통, 오한/발한, 미열 또는 발열

호흡기 증상: 콧물 또는 코막힘, 목의 통증, 기침, 헐떡임(호흡 곤란)

소화기 증상: 메스꺼움, 구토, 설사

치험약의 투여 방법

(i) 피험약

250mg정: 정제 중에 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 포함하고, 식(VII)로 표시되는 화합물로서 250mg을 포함한다. 본 250mg정은, 실시예 6C와 마찬가지의 각 조성을 2배하여 제조한 정제이다.

125mg정: 정제 중에 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 포함하고, 식(VII)로 표시되는 화합물로서 125mg을 포함한다. 본 125mg정은, 실시예 6C와 마찬가지의 조성의 정제이다.

(ii) 플라세보

Placebo-D정: 상기 250mg정과 외관이 식별 불능한 정제이고, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 포함하지 않는다.

Placebo-B정: 상기 125mg정과 외관이 식별 불능한 정제이고, 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 포함하지 않는다.

투여량 및 투여 방법

Phase 2a Part에서는, 경증/중등증 또는 무증후의 SARS-CoV-2 감염자로서 적격이라고 판단된 피험자를, 1:1:1의 비율로, 피검약의 375/125mg군, 피검약의750/250mg군, 플라세보군 중 어느 것에 무작위로 할당했다.

투여군마다의 치험약

375/125mg군

Day 1에 125mg정 및 Placebo-D정을 각각 3정, Day 2∼5에 125mg정 및 Placebo-D정을 각각 1일당 1정 투여한다.

750/250mg군

Day 1에 250mg정 및 Placebo-B정을 각각 3정, Day 2∼5에 250mg정 및 Placebo-B정을 각각 1일당 1정 투여한다.

플라세보군

Day 1에 Placebo-D정 및 Placebo-B정을 각각 3정, Day 2∼5에 Placebo-D정 및 Placebo-B정을 각각 1일당 1정 투여한다.

한편, 「Day 1」은 투여 첫날을 나타내고, 「Day 2∼Day 5」는 투여 첫날부터 세어, 2일째∼5일째를 나타낸다.

유효성의 주요 평가 항목(Phase 2a Part)

Phase 2a Part의 유효성의 주요 평가 항목은, 경증/중등증 및 무증후의 SARS-CoV-2 감염자 공통으로, 각 시점에 있어서의 SARS-CoV-2의 바이러스 역가의 베이스라인으로부터의 변화량이다. 각 시점에 있어서의 SARS-CoV-2 바이러스 역가의 관측치의 베이스라인으로부터의 절대 변화량이라고 정의한다.

주요 평가 항목의 해석(Phase 2a Part)

경증/중등증의 SARS-CoV-2 감염자 집단, 무증후의 SARS-CoV-2 감염자 집단, 및 이들의 병합 집단 각각에 대하여, mITT 집단을 대상으로, 각 시점에 있어서의 SARS-CoV-2의 바이러스 역가의 베이스라인으로부터의 변화량의 요약 통계량을 산출했다. 추가로, 경증/중등증과 무증후의 SARS-CoV-2 감염자를 병합한 집단에 대해서 van Elteren 검정을 적용하여, 양측 유의 수준 5%로 각 시점에 있어서의 SARS-CoV-2의 바이러스 역가에 대하여 피검약의 각 용량군과 플라세보군 사이에서 쌍(對)비교를 행했다. van Elteren 검정에서 사용하는 층에는, 경증/중등증의 SARS-CoV-2 감염자 집단, 및 무증후의 SARS-CoV-2 감염자 집단을 이용했다.

주요 평가 항목의 결과

(1) 각 시점에 있어서의 SARS-CoV-2의 바이러스 역가의 베이스라인으로부터의 변화량(Phase 2a Part)

Phase 2a Part에는 69예가 무작위화되고, 375/125mg군에는 22예(이 중 1예 미투여예), 750/250mg군에는 23예, 플라세보군에는 24예가 할당되었다. 69예 중, 베이스라인의 RT-PCR이 양성이었던 증례(症例)수는 44예이고, 그 중 베이스라인의 바이러스 역가가 검출된 증례수는 40예였다. 이 40예의 구성은, 375/125mg군에서 14예, 750/250mg군에서 13예, 플라세보군에서 13예였다. 한편, 이들 집단의 예수 및 그 내역은, 2022년 1월 17일 시점까지 입수할 수 있던 RT-PCR 측정 결과, 및 바이러스 역가 측정 결과에 기초하여 산출된 것이다.

Phase 2a Part의 최종 결과로서, 69예 중, 베이스라인의 RT-PCR이 양성이었던 증례수는 47예이고, 그 중 베이스라인의 바이러스 역가가 검출된 증례수는 43예였다. 이 43예의 구성은, 375/125mg군에서 15예, 750/250mg군에서 14예, 플라세보군에서 14예였다.

치험 프로토콜로 정해진 내원일을 Visit으로 표기하고, 투약일(Day)과의 대응 관계 및 허용폭은 이하와 같다. Op V는 Optional Visit을 의미하고, 임의 내원일을 나타낸다.

Modified intention-to-treat population(무작위화되고, 또한 베이스라인의 RT-PCR과 바이러스 역가가 모두 양성이었던 모든 피험자)을 대상으로, SARS-CoV-2 바이러스 역가의 베이스라인으로부터의 변화량의 군마다의 평균치의 추이를 도 24에 나타낸다. 본 해석은 경증/중등증의 SARS-CoV-2 감염자, 및 무증후의 SARS-CoV-2 감염자를 해석에 포함하고, 필수 내원일로 된 Visit만을 표시했다. 또한, 바이러스 역가가 검출 하한(0.8log₁₀(TCID₅₀/mL)) 미만인 경우, 그 바이러스 역가의 값은 0.8log₁₀(TCID₅₀/mL)으로서 취급했다. 375/125mg군에서는 Visit 3(투약 개시 후 4일째), 750/250mg군에서는 Visit 2(투약 개시 후 2일째) 및 Visit 3(투약 개시 후 4일째)의 시점에 있어서, 유의 수준 0.05로 플라세보군에 비해 바이러스 역가가 통계적으로 유의하게 감소하고 있었다. 한편, 2022년 1월 17일 시점까지 입수할 수 있던 RT-PCR 측정 결과, 및 바이러스 역가 측정 결과에 있어서도, 375/125mg군에서는 Visit 3(투약 개시 후 4일째) 이후, 750/250mg군에서는 Visit 2(투약 개시 후 2일째) 이후의 모든 시점에 있어서, 플라세보군에 비해 바이러스 역가가 감소하고 있는 경향이 보이고 있었다.

또한, 각 시점에 있어서의 바이러스 역가의 양성 환자의 비율에 대해 이하에 나타낸다.

Day 4의 시점에 있어서, 플라세보군에 있어서의 바이러스 역가가 0.8 이상인 양성자의 비율에 대해서, 750/250mg군에서는 80% 감소하고 있고, 375/125mg군에서는 63% 감소하고 있었다. Day 6의 시점에 있어서, 플라세보군에 있어서의 바이러스 역가가 0.8 이상인 양성자의 비율에 대해서, 750/250mg군에서는 54% 감소하고 있고, 375/125mg군에서는 100% 감소하고 있었다.

Day 4 및 Day 6의 시점에 있어서, 750/250mg군 및 375/125mg군의 양쪽에 있어서, 플라세보군과 비교해서, 바이러스 역가가 양성인 환자 비율이 낮은 경향이 보였다. 따라서, 본 발명의 의약 조성물을 복약하는 것에 의해, 감염성을 갖는 바이러스를 배출하는 환자를 신속하게 감소시킬 수 있는 것이 시사되었다.

부차 평가 항목의 결과

(1) 바이러스 역가 음성이 최초로 확인될 때까지의 시간(Phase 2a Part)

SARS-CoV-2의 바이러스 역가 음성이 최초로 확인될 때까지의 시간을 이하의 표 13 및 도 25에 나타낸다.

Phase 2a Part의 69예 중, 375/125mg군에서 15예, 750/250mg군에서 13예, 플라세보군에서 14예에 있어서의 결과를 나타낸다.

[층별 로그 랭크 검정에서는, 피험자층(경증/중등증, 무증후/경도만)을 층별 인자로 한다]

표 13에 나타나는 바와 같이, 375/125mg군에서는, 플라세보군과 비교해서 중앙치가 49.8시간 짧고, 바이러스 역가 음성이 최초로 확인될 때까지의 시간에 대하여 유의한 차이가 확인되었다(p=0.0159). 750/250mg군에서는, 플라세보군과 비교해서 중앙치가 48.4시간 짧고, 바이러스 역가 음성이 최초로 확인될 때까지의 시간에 대하여 유의한 차이가 확인되었다(p=0.0205).

또한, 도 25에 나타나는 바와 같이, 플라세보군에 있어서는, 50%의 환자의 바이러스 역가가 음성으로 될 때까지의 시간은, 치료 개시로부터 대략 4.6일 경과 후였다. 그에 반해, 750/250mg군 및 375/125mg군에 있어서는, 50%의 환자의 바이러스 역가가 음성으로 될 때까지의 시간은, 치료 개시로부터 대략 2.6일 경과 후였다. 따라서, 50%의 환자의 바이러스 역가가 최초로 음성으로 될 때까지의 시간을 약 2일 단축하는 것이 확인되었다.

(2) 각 시점에 있어서의 COVID-19의 12증상 합계 스코어의 베이스라인으로부터의 변화량(Phase 2a Part)

각 시점에 있어서의 COVID-19의 12증상 합계 스코어의 베이스라인으로부터의 변화량을 도 6에 나타낸다.

Phase 2a Part의 69예 중, 경증/중등증의 피험자를 대상으로 한 375/125mg군에서 13예, 750/250mg군에서 12예, 플라세보군에서 14예에 있어서의 결과를 나타낸다.

도 26에 나타나는 바와 같이, 375/125mg군 및 750/250mg군에 있어서, Day 2(1회 투여 후) 이후의 모든 시점에 있어서, 플라세보군에 비해 COVID-19의 12증상 합계 스코어가 수치적으로 개선되어 있는 경향이 보였다.

(3) 중증화 억제 효과(Phase 2a Part)

Phase 2a Part의 69예 중, 경증/중등증의 피험자를 대상으로 하여, 투여 개시 후의 어느 시점에서 처음으로 Ordinal scale(8단계로 임상적 중증도를 분류하는 순서 척도, 표 14)의 스코어가 3 이상으로 악화된 피험자의 비율을 표 15에 나타낸다.

표 15에 나타나는 바와 같이, 375/125mg군 및 750/250mg군에 있어서, 투여 개시 후에 처음으로 Ordinal scale이 3 이상으로 악화되는 증례는 확인되지 않았다.

유해 사상(事象)의 발현 빈도

Phase 2a Part에 있어서, 사망, 심각한 유해 사상 및 투여 중지에 이른 유해 사상은 없었다.

본 발명의 제제는, 12세 이상의 소아 및 성인에게 이용할 수 있다.

(실시예 8)

(정제의 제조 방법)

이하의 표에, 1정제당 처방을 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정, D-만니톨(Roquette사제), 크로스카멜로스 나트륨(DuPont사제), 하이드록시프로필셀룰로스(닛폰 소다사제), 경질 무수 규산(Cabot사제) 및 스테아르산 마그네슘(Mallinckrodt사제)을 30메시 체로 체통과시켜 혼합한 후, 조립했다.

조립 및 정립한 과립, 결정 셀룰로스(아사히 화성사제) 및 스테아르산 마그네슘(Mallinckrodt사제), 또는 경질 무수 규산(Cabot사제)을 첨가하여 혼합한 후, 정적 압축기 또는 로터리식 타정기로 장경 15.4mm×단경 8mm로 압축 성형하여, 하기 조성의 정제를 얻었다.

시험예 7: 정제의 용출 시험

(용출 시험법)

실시예 8A, 8B, 8C 및 8D에 대하여, 제 18 개정 일본 약국방 용출 시험법 제 2 법(계면활성제를 함유한 용출 시험 제 1 액, 패들법, 패들 회전수: 50rpm, 결과: 2정의 평균치)에 의해 용출 시험을 행했다.

(실험 결과)

어느 실시예에 있어서도 신속한 용출성을 나타냈다.

(실시예 9)

(정제의 제조 방법)

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 함유하는 정제를 제조한다.

이하의 표에, 1정제당 처방을 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정, D-만니톨(Roquette사제), 크로스카멜로스 나트륨(DuPont사제), 하이드록시프로필셀룰로스(닛폰 소다사제), 경질 무수 규산(Cabot사제) 및 스테아르산 마그네슘(Mallinckrodt사제)을 30메시 체로 체통과시켜 혼합한 후, 조립한다.

조립 및 정립한 과립, 결정 셀룰로스(아사히 화성사제) 및 스테아르산 마그네슘(Mallinckrodt사제), 또는 경질 무수 규산(Cabot사제)을 첨가하여 혼합한 후, 정적 압축기 또는 로터리식 타정기로 직경 5.0mm 또는 5.5mm로 압축 성형하여, 하기 조성의 정제를 얻는다.

시험예 8: 정제의 용출 시험

(용출 시험법)

실시예 9 중 2처방에 대하여, 제 18 개정 일본 약국방 용출 시험법 제 2 법(계면활성제를 함유한 용출 시험 제 1 액, 패들법, 패들 회전수: 50rpm, 결과: 2정의 평균치)에 의해 용출 시험을 행했다.

(실험 결과)

어느 실시예에 있어서도 신속한 용출성을 나타냈다.

본 발명의 제제는, 6세 이상 12세 미만의 소아에게도 이용할 수 있다.

(실시예 10)

(과립제의 제조 방법)

식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정을 함유하는 과립제를 제조한다.

이하의 표에, 1과립제당 처방을 나타낸다. 식(VII)로 표시되는 화합물의 푸마르산 공결정 I형 결정, D-만니톨(Roquette사제), 분말 환원 맥아당 물엿(말티톨, Roquette사제), 크로스카멜로스 나트륨(DuPont사제), 하이드록시프로필셀룰로스(닛폰 소다사제), 경질 무수 규산(Cabot사제), 스테아르산 마그네슘(Mallinckrodt사제) 및 수크랄로스(산에이겐에프·에프·아이사제)를 30메시 체로 체통과시켜 혼합한 후, 조립한다.

조립 및 정립한 과립, 경질 무수 규산(Cabot사제) 및 수크랄로스(산에이겐에프·에프·아이사제)를 첨가하여 혼합하고, 하기 조성의 과립제를 얻는다.

시험예 9: 과립제의 용출 시험

(용출 시험법)

실시예 10 중 2처방에 대하여, 제 18 개정 일본 약국방 용출 시험법 제 2 법(계면활성제를 함유한 용출 시험 제 1 액, 패들법, 패들 회전수: 50rpm, 결과: 2과립제의 평균치)에 의해 용출 시험을 행했다.

(실험 결과)

함량 보정한 용출 시험 결과를 도 27에 나타낸다. 그 결과, 어느 실시예에 있어서도 신속한 용출성을 나타냈다.

시험예 10: 과립제의 시간 경과 안정성 시험

실시예 10 중 2처방에 대하여, 시간 경과 안정성을 확인한 결과를 나타낸다.

a. 안정성 시험법

실시예 10의 제제를, 1) DUMA 보틀(플라스틱 용기, GERRESHEIMER) 폐전 상태에서 40℃, 75% 상대 습도하, 3주간, 혹은 2) 실리카 겔을 넣은 DUMA 보틀 폐전 상태에서 40℃, 75% 상대 습도하, 3주간, 또는 3) DUMA 보틀 폐전 상태에서 40℃, 75% 상대 습도하, 1개월, 혹은 4) 실리카 겔을 넣은 DUMA 보틀 폐전 상태에서 40℃, 75% 상대 습도하, 1개월, 보존했다. 그 후, 본 발명 제제 중의 식(VII)로 표시되는 화합물의 유연 물질량을 측정했다.

(시료액 조제 방법)

(측정 방법)

· 검출기: 자외 흡광 광도계(측정 파장: 222nm)

· 칼럼: C18 칼럼

· 칼럼 온도: 40℃ 부근의 일정 온도

· 유량: 0.3mL/분

b. 결과

안정성 시험의 결과를 이하의 표 19 및 20에 나타낸다. 실시예 10의 제제의 총 유연 물질량은, 어느 조건에 있어서도 증가하고 있지 않아, 안정했다.

이하에 나타내는 제제예는 예시에 지나지 않는 것이고, 발명의 범위를 한정하는 것을 의도하는 것은 전혀 아니다.

본 발명의 화합물은, 임의의 종래의 경로에 의해, 특히, 경장, 예를 들면, 경구로, 예를 들면, 정제, 과립제 또는 캡슐제의 형태로, 또는 비경구로, 예를 들면 주사액제 또는 현탁제의 형태로, 국소로, 예를 들면, 로션제, 겔제, 연고제 또는 크림제의 형태로, 또는 경비 형태 또는 좌제 형태로 의약 조성물로서 투여할 수 있다. 적어도 1종의 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 하나로 하여, 유리 형태 또는 약학적으로 허용되는 염의 형태의 본 발명의 화합물을 포함하는 의약 조성물은, 종래의 방법으로, 혼합, 조립 또는 코팅법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 경구용 조성물로서는, 부형제, 붕괴제, 결합제, 활택제 등 및 유효 성분 등을 함유하는 정제, 과립제, 캡슐제로 할 수 있다. 또한, 주사용 조성물로서는, 용액제 또는 현탁제로 할 수 있고, 멸균되어 있어도 되고, 또한 보존제, 안정화제, 완충화제 등을 함유해도 된다.

(제제예 1) 현탁제

식(VII)로 표시되는 화합물의 원약에, 예를 들면, 주사 용수를 가하여, 현탁제로 했다.

(제제예 2) 정제

식(VII)로 표시되는 화합물의 원약에, 첨가제로서 예를 들면, D-만니톨, 스테아르산 마그네슘을 가하여, 정제로 했다.

(제제예 3) 과립제

식(VII)로 표시되는 화합물의 원약에, 첨가제로서 예를 들면, D-만니톨, 스테아르산 마그네슘을 가하여, 과립제로 했다.

본 발명에 따른 제조 방법에 의해 제조된 화합물은, 코로나바이러스 3CL 프로테아제에 대한 저해 작용을 가져, 코로나바이러스 3CL 프로테아제가 관여하는 질환 또는 상태의 치료제 및/또는 예방제로서 유용하다고 생각된다. 본 발명에 따른 신규 합성 중간체 또는 그들의 염, 및 본 발명에 따른 제조 방법은 의약품 제조에 유용하다.

본 발명 제제는, 코로나바이러스 3CL 프로테아제에 대한 저해 작용을 가져, 코로나바이러스 3CL 프로테아제가 관여하는 질환 또는 상태의 치료제 및/또는 예방제로서 유용하다고 생각된다.

Claims

식(VII):

로 표시되는 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 그들의 복합체를 유효 성분으로서 함유하는, 경구 투여하는 제제.
제 1 항에 있어서,
유효 성분이, 식(VII)로 표시되는 화합물의 복합체이며, 당해 복합체가 푸마르산을 포함하는 복합체인, 제제.
제 2 항에 있어서,
당해 복합체가, 식(VII)로 표시되는 화합물 및 푸마르산이 1:1의 몰비인 공결정인, 제제.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
고분자를 제제 중에 함유하는, 제제.
제 4 항에 있어서,
고분자가, 셀룰로스계 고분자, 아크릴산계 고분자, 바이닐계 고분자로부터 선택되는 1 이상인, 제제.