KR20190085935A - 항-dkk-1 항체를 사용하여 암을 치료하기 위한 바이오마커로서의 베타-카테닌의 용도 - Google Patents

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Abstract

암의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 방법이 개시된다. 암은 식도암, 자궁암, 간암 또는 쓸개관암종일 수 있다. 이 방법은 대상체에 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상체는 베타-카테닌 단백질의 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 갖는 것으로 결정된다.

Description

항-DKK-1 항체를 사용하여 암을 치료하기 위한 바이오마커로서의 베타-카테닌의 용도
관련 출원
본 출원은 2016년 10월 26일에 출원된 미국 가출원 제62/413,198호의 이익을 청구한다. 상기 출원의 전체 교시가 본원에 참조로 포함된다.
암은 불량한 예후를 가지며 여러 유형에 대해 이용 가능한 치료가 제한된 중요한 공중 보건의 위협으로 남아 있다. 암, 특히 식도암, 자궁암, 간암 및 쓸개관암종 또는 쓸개관암의 치료에서 유효성을 증가시킬 수 있는 치료법에 대해 상당한 충족되지 않은 필요성이 존재한다. 본 출원은 이러한 치료법을 제공한다.
본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암(예컨대, 식도 선암종)의 치료 방법에 관한 것이다.
따라서 하나의 양태에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 방법이다. 암은 식도암, 자궁암, 간암 또는 쓸개관암종일 수 있다. 대안적으로, 암은 위암일 수 있다. 이 방법은 대상체에 치료 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상체는 베타-카테닌 단백질(SEQ ID NO: 2)의 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 갖는 것으로 결정된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 암을 앓는 대상체의 치료 방법이다. 암은 식도암, 자궁암, 간암 또는 쓸개관암종일 수 있다. 대안적으로, 암은 위암일 수 있다. 이 방법은 대상체로부터 종양 세포의 샘플을 수득하는 단계; 샘플에서 베타-카테닌 단백질의 서열을 결정하는 단계; 그리고 베타-카테닌 단백질의 서열(SEQ ID NO: 2)에 구성적으로 활성화하는 돌연변이가 포함되는 경우, 대상체에 치료 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 방법이다. 암은 식도암, 자궁암, 간암 또는 쓸개관암종일 수 있다. 대안적으로, 암은 위암일 수 있다. 이 방법은 대상체에 치료 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상체는 베타-카테닌 단백질(SEQ ID NO: 2)의 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 갖는다.
상기 내용은 수반되는 도면에서 예시되는 바와 같이, 하기 본 발명의 예시적 구현예의 보다 구체적인 설명으로부터 자명할 것이다. 도면이 반드시 축적에 맞지는 않으며, 대신 본 발명의 구현예의 예시가 강조된다.
도 1은 DKN-01 치료법을 받는 환자에서 CTNNB1(베타-카테닌) 단백질 돌연변이 데이터의 분석을 나타내는 표이다.
도 2a는 식도암을 앓고 파클리탁셀 및 DKN-01의 조합 치료법을 받는 환자 105-023에서 병소 크기의 변화(크기 백분율)를 시사하는 그래프이다. 환자 105-023은 CTNNB1(베타 카테닌) 유전자의 엑손 2부터 4까지의 결실을 갖는 것으로 나타났다.
도 2b는 연구 시작 시 및 사이클 10에서 환자 105-023의 표적 병소의 단층촬영 이미지이다.
도 3a 내지 3f는 인간 CTNNB1 유전자의 서열을 예시한다.
도 4a 내지 4d는 종합적으로 베타-카테닌 단백질의 돌연변이의 예를 나타내는 표 1을 나타낸다.
본 발명의 예시적 구현예의 설명이 뒤따른다.
Dickkopf-1(Dkk-1)은 정준 Wnt/β-카테닌 신호전달 경로의 천연 억제제로서 작용하는 단백질이다. Wnt 경로는 세포 성장, 세포 증식, 줄기 세포 유지, 세포 분화, 세포 극성, 뼈 발생 및 성인 조직 항상성과 같은 여러 생물학적 과정에 영향을 미친다.
정준 Wnt/β-카테닌 신호전달 경로에서, 세포외 Wnt 리간드는 그 인지체 수용체 "Frizzled"에 결합하고, 막통과 지단백질 LPR5 및 LPR6(저밀도 지단백질 수용체-관련 단백질 5 및 6) 공동-수용체를 추가로 모집한다. Wnt/Frizzled/LPR5/6 복합체의 형성은 CTNNB1 유전자의 유전자 산물인 β-카테닌 단백질에 의해 매개되는 것을 포함하는 몇몇 세포내 신호전달 캐스케이드를 유발한다. 특히, Wnt/Frizzled/LPR5/6 복합체의 형성은 베타-카테닌 인산화의 억제로 인해 베타-카테닌의 세포질 수준을 안정화시킨다. 인산화된 베타-카테닌은 세포질에서 분해되는 반면, 인산화되지 않은 베타-카테닌은 핵으로 전위하며, 여기서, 다른 성장 인자 가운데, 예컨대 사이클린 D1, c-myc, c-jun, 사이클로옥시게나제-2, 매트릭스 메탈로프로티나제-7, 혈관 내피 성장 인자 및 서비빈(survivin)과 같은 표적 유전자 발현을 증강시킨다. Wnt/Frizzled/LPR5/6 복합체로부터의 신호 부재 시, 베타-카테닌은 세포내 키나제, 예컨대 글리코겐 합성효소 키나제 3β(GSK3β) 및 카제인 키나제 I(CKI)에 의해 인산화된다. Wnt/Frizzled/LPR5/6 복합체로부터의 신호 전달은 이러한 인산화를 억제한다.
세포외 Dkk-1은 LPR5/6 공동-수용체에 결합하고 Wnt 리간드 결합을 방지한다. 이는 베타-카테닌 인산화의 재개 및 그 후속 분해를 일으키며, 이에 따라 정준 Wnt 신호전달 경로를 억제한다.
인간 CTNNB1의 뉴클레오타이드 서열 및 게놈(염색체) 좌표에 대해서는 URL "https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/1499"를 참고한다. 간략하게, CTNNB1 유전자의 게놈(염색체) 좌표는 chr3:41,240,942-41,281,939이다. 모든 좌표는 빌드 GRCh37/hg19로부터이다. CTNNB1의 뉴클레오타이드 서열은 SEQ ID NO: 1에 제공된다(대문자로 표시되는 엑손 포함). 본원에서 베타-카테닌 또는 베타-카테닌 단백질로 불리는 인간 CNNTB1 유전자의 유전자 산물은 SEQ ID NO: 2(UniProt 접근 번호 P35222)에 의해 제공되는 서열을 갖는 단백질이다. 특히 관심 대상은 SEQ ID NO: 2에서 아미노산 잔기 1 내지 4(엑손 2), 5~81(엑손 3) 및 82~165(엑손 4)에 대응하는 엑손 2, 3 및 4이다. 엑손 2 내지 4의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 3, 4 및 5에 의해 제공된다.
본원에서 사용되는 "베타-카테닌 단백질의 구성적으로 활성화하는 돌연변이"는 야생형 단백질과 비교되는 경우, 기능적으로 세포 핵으로 신호를 전달할 수 있는 베타-카테닌의 세포 수준을 상승시키는 베타-카테닌의 아미노산 서열의 돌연변이를 나타낸다. 베타-카테닌의 구성적으로 활성화하는 돌연변이의 예에는 Wnt/Frizzled/LPR5/6 복합체의 부재 하에 GSK3-베타 키나제 및/또는 카제인 키나제 I에 의해 인산화되지 못하는 불능을 일으키는 돌연변이가 포함된다. 이러한 돌연변이의 예에는 엑손 2 내지 4의 결실, 엑손 3의 또는 엑손 3 내의 결실 및 Wnt/Frizzled/LPR5/6 복합체의 부재 하에 인산화되는 세린 및 트레오닌 잔기, 예컨대 SEQ ID NO: 2의 Ser33, Ser37, Thr41 및 Ser45의 돌연변이가 포함된다.
다양한 구현예에서, 베타-카테닌 단백질의 돌연변이는 도 4a 내지 4d에 나타내는, 표 1에 기재된 돌연변이로부터 선택된다.
당업자가 인식할 바와 같이, 본원에서 사용되는 "식도암"은 식도뿐만 아니라 위-식도 접합부의 암을 나타낸다. 당분야에서 일반적으로 사용되는 식도암은 식도 편평 상피 세포 암종(ESCC) 및 식도 선암종(EAC)을 포함한다. 일반적으로, ESCC는 기관의 대략 상부 2/3에서 식도에 라이닝되는 편평 상피 세포에서 유래되는 암을 나타낸다. EAC는 전형적으로 식도의 하부 1/3에서, 편평 상피 세포 영역을 대체하는(예컨대, 바레트 식도에서), 샘 세포에서 유래되는 암을 나타낸다. 이와 같이, 본원에서 사용되는 식도 선암종은 식도뿐 아니라 위-식도 접합부의 선암종을 나타낸다.
"자궁암"은 자궁 조직에서 나타나는 임의의 유형의 암이다. 이는 몇몇 유형의 암을 나타낼 수 있으며, 자궁경부암(자궁의 하부 부분에서 발생함)이 가장 일반적인 유형이다.
간 암 및 원발성 간 암으로도 알려져 있는 "간암"은 간에서 시작되는 암이다. 간 전이로 알려져 있는, 다른 곳으로부터 간으로 퍼진 암이 간에서 시작되는 암보다 일반적이다. 원발성 간암은 세계적으로 6번째로 빈번한 암(6%)이며, 암으로 인한 사망의 두 번째 원인이다(9%).
"쓸개관암종" 또는 쓸개관 암은 간으로부터 소장으로 담즙을 배액하는 쓸개관에서 유래되는 돌연변이된 상피 세포(또는 상피 분화 특징을 나타내는 세포)로 이루어지는 암의 형태이다. 쓸개관암종의 비율은 지난 수 십 년에 걸쳐 세계적으로 상승해왔다. 쓸개관암종은 원발성 종양 및 임의의 전이가 모두 수술에 의해 완전 제거될 수 있지 않은 한, 치유 불가능하며 빠르게 치명적인 암으로 간주된다. 수술 이외에 잠재적으로 치유 가능한 치료는 존재하지 않지만, 대부분의 사람들은 나타났을 때 진전된 단계의 질병을 가지고 있고 진단 시 수술이 불가능하다.
위 암(gastric cancer)으로도 불리는 "위암(stomach cancer)"은 위에서 시작되는 암이다. 위암의 약 90% 내지 95%는 선암종이다. 용어 위암 또는 위 암이 사용되는 경우, 이는 거의 항상 선암종을 나타낸다. 이들 암은 위의 최내부 라이닝(점막층으로 알려짐)을 형성하는 세포로부터 발생한다.
용어 "유효량"은 나타낸 장애를 예방적으로 또는 치료적으로 치료하는 데 유효한 치료제, 예컨대 항체의 양을 의미한다. "유효량"은 또한 표적 장애를 치료하는 데 치료적으로 또는 예방적으로 충분한 치료제 조합의 양을 나타낼 수 있다. 유효량은 환자의 연령, 성별 및 체중, 환자의 현재 의학적 상태 및 치료받는 식도암의 성질에 의존할 것이다. 당업자는 이들 및 다른 요인에 따라 적절한 투여량을 결정할 수 있을 것이다.
이제 소정 암을 앓으며 베타-카테닌 단백질(SEQ ID NO: 2) 내에 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 갖는 암 환자가 이러한 돌연변이를 갖지 않는 환자에 비해 항-Dkk-1 항체 치료법에 더 반응성인 것으로 예상됨이 발견되었다. 따라서, 본 발명은 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암(예컨대, 식도암, 자궁암, 간암 및 쓸개관암종)의 치료 방법에 관한 것이며, 여기서 대상체는 베타-카테닌 단백질(SEQ ID NO: 2)의 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 갖는 것으로 결정된다.
Dkk-1 항체
Dkk-1 항체는 이전에 기재되었다(예컨대, 이의 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,148,498호 및 제7,446,181호 참고). 본원에 개시되는 Dkk-1 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 27에 나타낸 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함하는 인간 Dkk-1에 결합하는 인간 조작 항체에 관한 것이다. 본 발명의 Dkk-1 항체는 여러 바람직한 특성을 보유하는 치료적으로 유용한 Dkk-1 길항제이다. 예를 들어, Dkk-1 항체는 알칼리성 포스파타제, 마커 또는 골모세포 활성의 Dkk-1 매개 억제를 차단할뿐만 아니라 다양한 유형의 암(예컨대, 비-소세포 폐암)을 치료한다.
천연 존재하는 바와 같은 전장 항체는 디설파이드 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 면역글로불린 분자이다. 각 사슬의 아미노 말단부에는 내부에 함유된 상보성 결정 영역(CDR)을 통해 항원 인식에 주로 관여하는 약 100개~110개 아미노산의 가변 영역이 포함된다. 각 사슬의 카복시-말단부는 효과기 기능에 주로 관여하는 불변 영역을 정의한다.
CDR에는 틀 영역("FR")으로 명명되는, 보다 보존된 영역이 산재되어 있다. 각각의 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)은 하기 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 아미노-말단부터 카복시-말단으로 배열되는, 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어진다. 경쇄의 3개 CDR은 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"으로 불리며, 중쇄의 3개 CDR은 "HCDR1, HCDR2 및 HCDR3"으로 불린다. CDR은 항원과 특이적 상호작용을 형성하는 대부분의 잔기를 함유한다. LCVR 및 HCVR 영역 내 CDR 아미노산 잔기의 넘버링 및 배치는 널리 알려진 Kabat 넘버링 관례에 따른다.
경쇄는 카파 또는 람다로 분류되며, 당분야에 알려진 바와 같은 특정 불변 영역을 특징으로 한다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되며, 항체 이소형은 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE로 정의한다. IgG 항체는 서브클래스, 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4로 추가 구분될 수 있다. 각각의 중쇄 유형은 당분야에 널리 알려진 서열을 갖는 특정 불변 영역을 특징으로 한다.
본원에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체"(Mab)는, 예를 들어, 임의의 진핵, 원핵 또는 파지 클론을 포함하는 단일 카피 또는 클론으로부터 유래되며, 이것이 제조되는 방법으로부터 유래되는 것이 아닌 항체를 나타낸다. 본 발명의 Mab은 바람직하게는 동종성 집단 또는 실질적으로 동종성 집단으로 존재한다. 완전 Mab은 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 함유한다.
달리 특정되지 않는 한, 용어 "Dkk-1 항체"는 전장 항체뿐만 아니라 Dkk-1 항체의 항원 결합 단편 둘 모두를 포괄한다.
이러한 모노클로날 항체의 "항원 결합 단편"에는, 예를 들어, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편 및 단일쇄 Fv 단편이 포함된다. 모노클로날 항체 및 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 예컨대 CDR-그래프팅 또는 이러한 기술의 조합 또는 당분야에 알려진 다른 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 마우스는 인간 DKK-1 또는 이의 단편으로 면역화될 수 있고, 생성 항체가 회수되고 정제될 수 있으며, 이들이 본원에 개시되는 항체 화합물과 유사하거나 동일한 결합 및 기능적 특성을 보유하는지 여부의 결정은 당분야에 알려진 방법에 의해 평가될 수 있다. 항원 결합 단편은 또한 통상적 방법에 의해 제조될 수 있다. 항체 및 항원 결합 단편의 제조 및 정제 방법은 당분야에 널리 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 5-8 and 15, ISBN 0-87969-314-2]에서 확인될 수 있다.
본원에 개시되는 모노클로날 Dkk-1 항체는 비-인간 항체로부터 유래되는 CDR 주변이 실질적으로 인간인 또는 전체 인간인 틀 영역을 포함하도록 조작된다. 이러한 인간 조작 항체의 "항원 결합 단편"에는, 예를 들어, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편 및 단일쇄 Fv 단편이 포함된다. "틀 영역" 또는 "틀 서열"은 임의의 하나의 틀 영역 1 내지 4를 나타낸다. 본원에 개시되는 항체에 의해 포괄되는 인간 조작 항체 및 이의 항원 결합 단편에는 임의의 하나 이상의 틀 영역 1 내지 4가 실질적으로 또는 전체 인간인 분자, 즉 개별의 실질적으로 또는 전체 인간인 틀 영역 1 내지 4의 임의의 가능한 조합이 존재하는 분자가 포함된다. 예를 들어, 여기에는 틀 영역 1 및 틀 영역 2, 틀 영역 1 및 틀 영역 3, 틀 영역 1, 2 및 3 등이 실질적으로 또는 전체 인간인 분자가 포함된다. 실질적으로 인간인 틀은 알려진 인간 생식계열 틀 서열과 적어도 약 80% 서열 동일성을 갖는 것들이다. 바람직하게는, 실질적으로 인간인 틀은 알려진 인간 생식계열 틀 서열과 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 99% 서열 동일성을 갖는다.
유사한 기능적 특성을 나타내는 본원에 개시되는 것들에 부가하여 인간 조작 항체는 몇몇 상이한 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 본원에 개시되는 특이적 항체 화합물은 추가적인 항체 화합물을 제조하기 위한 주형 또는 모체 항체 화합물로서 사용될 수 있다. 하나의 접근에서, 모체 항체 화합물 CDR은 모체 항체 화합물 틀과 높은 서열 동일성을 갖는 인간 틀 내로 그래프팅된다. 새로운 틀의 서열 동일성은 일반적으로 모체 항체 화합물에서 대응하는 틀의 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99% 동일할 것이다. 상기 그래프팅은 모체 항체의 결합 친화도 대비 결합 친화도의 감소를 일으킬 수 있다. 이러한 경우, 틀은 문헌[Queen et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2869]에 의해 개시되는 특정 기준에 기반하여 소정 위치에서 모체 틀로 역-돌연변이될 수 있다. 마우스 항체의 인간화에 유용한 방법을 설명하는 추가 참고문헌에는 미국 특허 제4,816,397호; 제5,225,539호 및 제5,693,761호; 문헌[Levitt (1983) J. Mol. Biol. 168:595-620]에 기재되는 컴퓨터 프로그램 ABMOD 및 ENCAD; 및 Winter 및 공동 연구자의 방법(Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; 및 Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536)이 포함된다. 역-돌연변이를 위해 고려해야 하는 잔기의 확인 방법은 당분야에 알려져 있다(예컨대, 미국 특허 제8,148,498호 참고).
본원에 제공되는 방법은 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하는 Dkk-1 항체의 용도에 관한 것이며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6의 아미노 서열을 갖고, HCDR1은 SEQ ID NO: 9의 아미노 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NO: 10의 아미노 서열을 갖는다.
하나의 구현예에서, Dkk-1 항체는 SEQ ID NO: 6의 아미노 서열을 갖는 LCDR1, SEQ ID NO: 7의 아미노 서열을 갖는 LCDR2, SEQ ID NO: 8의 아미노 서열을 갖는 LCDR3, SEQ ID NO: 9의 아미노 서열을 갖는 HCDR1, SEQ ID NO: 10의 아미노 서열을 갖는 HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노 서열을 갖는 HCDR3을 포함한다.
또 다른 구현예에서, Dkk-1 항체는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함한다. 특정 구현예에서, LCVR은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며 HCVR은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함한다.
추가 구현예에서, Dkk-1 항체는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 갖는 중쇄(HC) 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 갖는 경쇄(LC)를 포함한다. SEQ ID NO: 22 및 SEQ ID NO: 23의 HC 및 LC 아미노산 서열을 각각 포함하는 Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편은 본원에서 DKN-01로 불린다. 특히, DKN-01은 분자식/실험식 C6394 H9810 N1698 O2012 S42 및 분자량 144015달톤(온전한 형태)을 갖는다.
소정 구현예에서, 본원에 개시되는 Dkk-1 항체는 이의 단편의, SEQ ID NO: 27에 나타낸 서열을 포함하는 인간 Dkk-1에 대한 중화 활성을 갖는 IgG4 항체이다. 예를 들어, 정준 Wnt 신호전달은 골모세포 분화 및 활성을 위해 중요하다. BMP-4와 조합된 Wnt-3a는 다능성 마우스 C2C12 세포가 골모세포 활성 마커인 알칼리성 포스파타제("AP")의 측정 가능한 종결점을 가지며 골모세포로 분화하도록 유도한다. 정준 Wnt 신호전달의 억제제인 Dkk-1은 분화 및 AP의 제조를 억제한다. 중화 Dkk-1 항체는 AP의 Dkk-1-매개 억제를 방지한다. Dkk-1 억제 활성을 차단하는 항체는 AP 활성의 손실을 방지한다(미국 특허 제8,148,498호 참고). 특정 구현예에서, 중화 활성을 보유하는 Dkk-1 항체는 DKN-01이며, 이는 IgG4 항체이다.
본원에 개시되는 Dkk-1 항체는 미국 특허 제8,148,498호에 기재된 바와 같이, Dkk-1(예컨대, 인간 Dkk-1, SEQ ID NO: 27)에 대해 높은 친화도(Kd)를 보유한다. 예를 들어, 본 발명의 Dkk-1 항체는 37℃에서 0.5×10-12 M 내지 3.0×10-11 M의 Kd를 보유한다.
투여 방식
본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 Dkk-1 항체 및 화학치료제는 비경구, 경구, 경피, 설하, 협측, 직장, 비강내, 기관지내 또는 폐내 투여를 위해 제형화될 수 있다.
비경구 투여를 위해, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 주사 또는 주입, 예를 들어, 정맥내, 근육내 또는 피하 주사 또는 주입을 위해 또는 볼루스 용량 및/또는 주입(예컨대, 연속 주입)으로의 투여를 위해 제형화될 수 있다. 선택적으로 다른 제형화 제제, 예컨대 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유하는 유성 또는 수성 비히클 중 현탁액, 용액 또는 에멀젼이 사용될 수 있다.
경구 투여를 위해, 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 예컨대 결합제(예컨대, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필메틸셀룰로스); 충전제(예컨대, 락토스, 미정질 셀룰로스 또는 칼슘 포스페이트); 윤활제(예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 활석 또는 실리카); 붕해제(예컨대, 나트륨 전분 글리콜레이트); 또는 수화제(예컨대, 나트륨 라우릴 설페이트)와 함께 통상적인 수단에 의해 제조되는 정제 또는 캡슐 형태일 수 있다. 요망되는 경우, 정제는 적합한 방법을 사용하여 코팅될 수 있다. 경구 투여용 액체 조제물은 용액, 시럽 또는 현탁액 형태일 수 있다. 액체 조제물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제, 예컨대 현탁화제(예컨대, 소르비톨 시럽, 메틸 셀룰로스 또는 수소화된 식용 지방); 유화제(예컨대, 레시틴 또는 아카시아); 비수성 비히클(예컨대, 아몬드 오일, 유성 에스테르 또는 에틸 알코올); 및 보존제(예컨대, 메틸 또는 프로필 p-하이드록시 벤조에이트 또는 소르브산)와 함께 통상적 수단에 의해 제조될 수 있다.
협측 투여를 위해, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 통상적 방식으로 제형화된 정제 또는 로젠지 형태일 수 있다.
직장 투여를 위해, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 좌약 형태일 수 있다.
설하 투여를 위해, 정제는 통상적 방식으로 제형화될 수 있다.
비강내, 기관지내 또는 폐내 투여를 위해, 통상적 제형이 채택될 수 있다.
추가로, 본 발명의 방법 또는 조성물에서 사용하기 위한 화합물은 서방성 조제물로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 화합물은 활성 제제 화합물에 서방성 및/또는 제어 방출 특성을 제공하는 적합한 중합체 또는 소수성 물질로 제형화될 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 화합물은, 예를 들어, 주사에 의해 마이크로입자 형태로 또는 삽입에 의해 웨이퍼 또는 디스크 형태로 투여될 수 있다. 제어 방출 약물 조제물의 다양한 제형화 방법은 당분야에 알려져 있다.
본원에 기재되는 방법을 실시하기 유용한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 하나 이상의 화합물(또는 이의 약제학적 염)을 포함하는 조성물의 투여는 연속, 매 시간, 1일 4회, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 2일 1회, 1주 2회, 1주 1회, 2주 1회, 1개월 1회 또는 2개월 1회 이상 또는 일부 다른 간헐적 투여 요법일 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 하나 이상의 화합물(또는 이의 약제학적 염)을 포함하는 조성물의 투여의 예에는 말초 투여가 포함된다. 말초 투여의 예에는 경구, 피하, 복강내, 근육내, 정맥내, 직장, 경피 또는 비강내 투여 형태가 포함된다.
본원에서 사용되는 말초 투여에는 두개내 투여를 제외하는, 본 발명의 화합물 또는 화합물을 포함하는 조성물의 모든 투여 형태가 포함된다. 말초 투여의 예에는 비제한적으로 경구, 비경구(예컨대, 근육내, 복강내, 정맥내 또는 피하 주사, 연장 방출, 서방성 임플란트, 데팟 등), 비강, 질, 직장, 설하 또는 경피 패치 적용을 포함하는 국소 투여 경로 등이 포함된다.
조합 치료법
본원에 개시되는 Dkk-1 항체는 제2량의 화학치료제(때때로 본원에서 "제2 제제"로 불림)와의 조합으로 식도암 치료를 위해 사용될 수 있다. 이러한 조합 투여는 Dkk-1 항체 및 제2 제제를 포함하는 단일 투여량 형태에 의할 수 있고, 이러한 단일 투여량 형태에는 정제, 캡슐, 스프레이, 흡입 분말, 주사액 등이 포함된다. 조합 투여는 단일 투여량 형태에 부가하여 추가 제2 제제(예컨대, 화학치료제)를 포함할 수 있다. 대안적으로, 조합 투여는 하나의 투여량 형태는 Dkk-1 항체를 포함하고 다른 하나의 투여량 형태는 제2량의 화학치료제를 포함하는, 2개의 상이한 투여량 형태의 투여에 의할 수 있다. 이 경우에서, 투여량 형태는 동일하거나 상이할 수 있다. 조합 치료법을 제한하고자 하지 않고, 하기 내용은 채택될 수 있는 소정 조합 치료법을 예시한다. 요구되는 제2량의 화학치료제 이외의 추가적인 화학치료제가 본원에 기재되는 방법에서 채택될 수 있음이 이해된다.
제2량의 화학치료제(때때로 본원에서 제2 제제로 불림)는 Dkk-1 항체의 투여 전에, 이와 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 따라서, Dkk-1 항체 및 제2 제제는 단일 제형물로 함께 투여될 수 있거나 별도 제형물로, 예컨대 동시에 또는 순차적으로 또는 둘 모두로 투여될 수 있다. 예를 들어, Dkk-1 항체 및 제2 제제가 별도 조성물로 순차적으로 투여되는 경우, Dkk-1 항체는 화학치료제 전에 또는 후에 투여될 수 있다. Dkk-1 항체 및 제2량의 화학치료제의 투여 사이의 시기는 화학치료제의 성질에 의존할 것이다. 소정 구현예에서, Dkk-1 항체는 화학치료제에 선행하거나 그 직후 또는 당업자에 의해 적절한 것으로 간주되는 일부 시기 후일 수 있다.
또한, Dkk-1 항체 및 제2량의 화학치료제는 유사한 투여 일정으로 투여될 수도 있고 그렇게 투여되지 않을 수도 있다. 예를 들어, Dkk-1 항체 및 화학치료제는 Dkk-1 항체가 화학치료제보다 더 큰 빈도로 또는 그 반대로 투여되도록 하는 상이한 반감기를 갖고/갖거나 상이한 시간-척도 상에서 작용할 수 있다. 예를 들어, Dkk-1 항체 및 화학치료제는 같은 날 함께(예컨대, 단일 투여량으로 또는 순차적으로) 투여된 후, 설정된 일수 후 화학치료제만(또는 상이한 화학치료제)의 투여가 뒤따를 수 있다. 치료제의 투여 사이의 일수는 각 약물의 안전성 및 약력학에 따라 적절히 결정될 수 있다. Dkk-1 항체 또는 화학치료제는 급성으로 또는 만성으로 투여될 수 있다.
본원에서 사용되는 "유효량"은 표적 장애를 치료적으로 또는 예방적으로 치료하기 충분한 치료제 또는 치료제 조합의 양을 나타낸다. 유효량은 환자의 연령, 성별 및 체중, 환자의 현재 의학적 상태 및 치료받고 있는 식도암의 성질에 의존할 것이다. 당업자는 이들 및 다른 요인에 따라 적절한 투여량을 결정할 수 있을 것이다.
Dkk-1 항체에 대한 투여 당 적합한 용량에는 약 15 ㎎, 약 20 ㎎, 약 30 ㎎, 약 40 ㎎, 약 50 ㎎, 약 100 ㎎, 약 200 ㎎, 약 300 ㎎, 약 400 ㎎, 약 500 ㎎, 약 600 ㎎, 약 625 ㎎, 약 650 ㎎, 약 675 ㎎, 약 700 ㎎, 약 725 ㎎, 약 750 ㎎, 약 775 ㎎, 약 800 ㎎, 약 825 ㎎, 약 850 ㎎, 약 875 ㎎, 약 900 ㎎, 약 925 ㎎, 약 950 ㎎, 약 975 ㎎, 약 1000 ㎎, 약 1025 ㎎, 약 1050 ㎎, 약 1075 ㎎, 약 1100 ㎎, 약 1125 ㎎, 약 1150 ㎎, 약 1175 ㎎, 약 1200 ㎎, 약 1225 ㎎, 약 1250 ㎎, 약 1275 ㎎, 약 1300 ㎎, 약 1325 ㎎, 약 1350 ㎎, 약 1375 ㎎, 약 1400 ㎎, 약 1425 ㎎, 약 1450 ㎎, 약 1475 ㎎, 약 1500 ㎎, 약 1525 ㎎, 약 1550 ㎎, 약 1575 ㎎, 약 1600 ㎎, 약 1625 ㎎, 약 1650 ㎎, 약 1675 ㎎, 약 1700 ㎎, 약 1725 ㎎, 약 1750 ㎎, 약 1775 ㎎, 약 1800 ㎎, 약 1825 ㎎, 약 1850 ㎎, 약 1875 ㎎, 약 1900 ㎎, 약 1925 ㎎, 약 1950 ㎎, 약 1975 ㎎, 약 2000 ㎎, 약 2025 ㎎, 약 2050 ㎎, 약 2075 ㎎, 약 2100 ㎎, 약 2125 ㎎, 약 2150 ㎎, 약 2175 ㎎, 약 2200 ㎎, 약 2225 ㎎, 약 2250 ㎎, 약 2275 ㎎, 약 2300 ㎎, 약 2325 ㎎, 약 2350 ㎎, 약 2375 ㎎, 약 2400 ㎎, 약 2425 ㎎, 약 2450 ㎎, 약 2475 ㎎, 약 2500 ㎎, 약 2525 ㎎, 약 2550 ㎎, 약 2575 ㎎, 약 2600 ㎎ 또는 약 3,000 ㎎ 이상의 용량이 포함된다. 각각의 적합한 용량은 당업자에 의해 적절한 것으로 간주되는 시기에 걸쳐 투여될 수 있다. 예를 들어, 각각의 적합한 용량은 약 30분 내지 최대 약 1시간, 약 2시간, 약 3,시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간 또는 약 8시간의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, Dkk-1 항체에 대한 적합한 용량은 약 30분 및 최대 약 2시간의 기간에 걸쳐 투여되는 약 150 ㎎일 수 있다. Dkk-1 항체에 대한 또 다른 적합한 용량은 약 30분 및 최대 약 2시간의 기간에 걸쳐 투여되는 약 300 ㎎일 수 있다.
제2량의 화학치료제에 대한 투여 당 적합한 용량은 라벨에서 확인되는 권장 용량에 기반하여 결정될 수 있다. 제2량의 화학치료제에서 파클리탁셀이 사용되는 경우, 약 8 ㎎/㎡, 10 ㎎/㎡, 약 15 ㎎/㎡, 약 20 ㎎/㎡, 약 25 ㎎/㎡, 약 30 ㎎/㎡, 약 35 ㎎/㎡, 약 40 ㎎/㎡, 약 45 ㎎/㎡, 약 50 ㎎/㎡, 약 55 ㎎/㎡, 약 60 ㎎/㎡, 약 65 ㎎/㎡, 약 70 ㎎/㎡, 약 75 ㎎/㎡, 약 80 ㎎/㎡, 약 85 ㎎/㎡, 약 90 ㎎/㎡, 약 95 ㎎/㎡, 약 100 ㎎/㎡, 약 105 ㎎/㎡, 약 110 ㎎/㎡, 약 120 ㎎/㎡, 약 130 ㎎/㎡, 약 140 ㎎/㎡, 약 150 ㎎/㎡, 약 160 ㎎/㎡, 약 170 ㎎/㎡, 약 180 ㎎/㎡, 약 190 ㎎/㎡, 약 200 ㎎/㎡, 약 225 ㎎/㎡, 약 250 ㎎/㎡, 약 275 ㎎/㎡, 약 300 ㎎/㎡, 약 600 ㎎/㎡ 또는 약 800 ㎎/㎡ 이상의 용량이다. 예를 들어, 파클리탁셀의 투여 당 적합한 용량은 약 1시간의 기간에 걸쳐 약 80 ㎎/㎡이다.
유효량은 제1량의 Dkk-1 항체(또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물 또는 용매화물) 및 제2량의 적어도 하나의 화학치료제의 공동 투여에 의해 본 발명의 방법 또는 조성물에서 달성될 수 있다. 하나의 구현예에서, Dkk-1 항체 및 화학치료제는 각각의 유효량으로 각각 투여된다(예컨대, 각각 단독 투여되는 경우 치료적으로 효과적일 양으로). 또 다른 구현예에서, Dkk-1 항체 및 화학치료제는 각각 단독으로는 치료 효과를 제공하지 않는 양(치료 용량-미만)으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, Dkk-1 항체는 유효량으로 투여될 수 있는 반면, 화학치료제는 치료 용량-미만으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, Dkk-1 항체는 치료 용량-미만으로 투여될 수 있는 반면, 화학치료제는 유효량으로 투여된다.
본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 포유류, 바람직하게는 인간을 나타내지만, 또한 수의과적 치료를 필요로 하는 동물, 예컨대 반려 동물(예컨대, 개, 고양이 등), 농장 동물(예컨대, 소, 양, 돼지, 말 등) 및 실험실 동물(예컨대, 래트, 마우스, 기니아픽 등)을 의미할 수 있다.
본원에서 사용되는 "치료"에는 치료받고 있는 암에 관련된 임상 적응증 진행의, 부분적으로 또는 실질적으로의, 지연, 억제 또는 방지의 달성이 포함된다. 예를 들어, "치료"에는, 예를 들어, 전산화 단층촬영(CT) 스캔, 자기 공명 조영(MRI), 흉부 x-선 및 CT/양성자 방출 단층촬영(CT/PET) 스캔을 포함하는, 당분야에 알려진 표준 조영 방법에 의해 검출되고 당분야에 알려진 가이드라인 및 방법에 따라 평가되는, 종양 성장의 감소 또는 추가 성장의 방지가 포함된다. 예를 들어, 치료에 대한 반응은 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST)(개정된 RECIST 가이드라인 버전 1.1; 문헌[Eisenhauer et al., Eur. J. Cancer 45(2):228-47, 2009] 참고)을 통해 평가될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, "치료"는 RECIST 가이드라인에 따라 모든 표적 병소의 소실로서 정의되는 완전 반응(CR) 또는 기준선 합계 지름을 참조하여 취해지는, 표적 병소 지름의 합계에서의 적어도 30% 감소로서 정의되는 부분 반응(PR)을 나타낸다. 치료에 대한 종양 반응을 평가하기 위한 다른 수단에는 종양 마커의 평가 및 수행 상태의 평가(예컨대, 크레아티닌 제거율의 평가; 문헌[Cockcroft and Gault, Nephron. 16:31-41, 1976] 참고)가 포함된다.
약학 조성물
본원에 개시되는 Dkk-1 항체 및 화학치료제는 투여에 적합한 약학 조성물 내로 포함될 수 있다. 이러한 조성물은 전형적으로 항체 또는 하나 이상의 화학치료제 또는 둘 모두, 그리고 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본원에서 사용되는 언어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 약학적 투여와 상용성인, 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장성 제제 및 흡수 지연제 등을 포함하려는 것이다. 약학 활성 성분을 위한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당분야에 널리 알려져 있다. 임의의 통상적 매질 또는 제제는 활성 화합물과 비상용성인 범위까지를 제외하고, 조성물에서 이의 사용이 고려된다.
본 발명의 약학 조성물은 그 의도되는 투여 경로와 상용성으로 제형화된다. 투여 경로의 예에는 비경구, 예컨대, 정맥내, 피내, 피하, 경구(예컨대, 흡입), 경피(국소), 경점막 및 직장 투여가 포함된다. 비경구, 피내 또는 피하 적용을 위해 사용되는 용액 또는 현탁액에는 하기 성분: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수 용액, 신전유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항균제, 예컨대 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 나트륨 바이설파이트; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 긴장성 조정을 위한 제제, 예컨대 나트륨 클로라이드 또는 덱스트로스가 포함될 수 있다. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염화수소산 또는 나트륨 하이드록사이드로 조정될 수 있다. 비경구 조제물은 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 주사기 또는 다회 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
주사제 용도에 적합한 약학 조성물에는 멸균 수용액(수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 주사제 용액 또는 분산액의 체외 제조를 위한 멸균 분말이 포함된다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체에는 생리 식염수, 정균수, Cremophor EL(TM)(BASF, Parsippany, N.J.) 또는 인산염 완충 식염수(PBS)가 포함된다. 모든 경우에서, 조성물은 멸균이어야 하며, 용이한 주사성이 존재하는 정도까지 유체여야 한다. 이는 제조 및 보관 조건 하에 안정해야 하며, 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에서, 등장성 제제, 예를 들어, 당, 폴리알코올, 예컨대 만니톨, 소르비톨 및 나트륨 클로라이드를 조성물에 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사제 조성물의 연장된 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시켜 일으킬 수 있다.
멸균 주사제 용액은 요구되는 바에 따라, 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매 중 요구되는 양의 활성 화합물(예컨대, Dkk-1 항체)을 포함시킨 후, 여과 멸균에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 활성 화합물을 포함시켜 제조된다. 멸균 주사제 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 이의 사전 멸균-여과 용액으로부터 활성 성분 + 임의의 추가적인 요망되는 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동 건조이다.
경구 조성물에는 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체가 포함된다. 이들은 젤라틴 캡슐에 봉입되거나 정제로 압축될 수 있다. 경구 치료제 투여의 목적을 위해, 활성 화합물은 부형제와 함께 포함되고 정제, 트로키 또는 캡슐 형태로 사용될 수 있다. 경구 조성물은 또한 구강세척제로서 사용하기 위해 유체 담체를 사용하여 제조될 수 있고, 여기서 유체 담체 중 화합물은 경구 적용되고 가글로 헹궈지고 배출되거나 삼켜진다. 약제학적으로 상용성인 결합제, 및/또는 아주반트 물질이 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 알약, 캡슐, 트로키 등은 유사한 성질의 임의의 하기 성분 또는 화합물: 결합제, 예컨대 미정질 셀룰로스, 트래거캔스 고무 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대 전분 또는 락토스, 붕해제, 예컨대 알긴산, Primogel 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트 또는 Sterotes; 활택제, 예컨대 콜로이드성 실리콘 디옥사이드; 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린; 또는 풍미제, 예컨대 박하, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 풍미제를 함유할 수 있다.
흡입에 의한 투여를 위해, 화합물은 적합한 추진제, 예컨대 이산화탄소와 같은 기체를 함유하는 가압 용기 또는 분배기 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 전달된다.
전신 투여는 또한 경점막 또는 경피 수단에 의할 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 투과될 장벽에 적절한 침투제가 제형물에서 사용된다. 이러한 침투제는 당분야에 일반적으로 알려져 있으며, 예를 들어, 경점막 투여를 위해, 세제, 담즙산 염 및 푸시딘산-유도체가 포함된다. 경점막 투여는 비강 스프레이 또는 좌약의 사용을 통해 달성될 수 있다.
경피 투여를 위해, 활성 화합물은 당분야에서 일반적으로 알려진 연고, 고약, 겔 또는 크림으로 제형화된다.
화합물은 또한 직장 전달을 위한 좌약(예컨대, 통상적인 좌약 기재, 예컨대 코코아 버터 및 다른 글리세라이드와 함께) 또는 체류 하제 형태로 제조될 수 있다.
하나의 구현예에서, 활성 화합물은 화합물을 신체로부터의 빠른 제거에 대해 보호할 담체와 함께, 예컨대 임플란트 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형으로 제조된다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 다중무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르소에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 당업자에게 자명할 것이다. 물질은 또한 Alza Corporation 및 Nova Pharmaceuticals, Inc.로부터 상업적으로 수득될 수 있다. 리포좀 현탁액(바이러스 항원에 대한 모노클로날 항체로 감염된 세포에 표적화된 리포좀 포함)이 또한 약제학적으로 허용 가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 당업자에게 알려진, 예를 들어, 미국 특허 제4,522,811호에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다.
특히 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여량 단위 형태로 경구 또는 비경구 조성물을 제형화하는 것이 유리하다. 본원에서 사용되는 투여량 단위 형태는 치료받을 대상체에 대한 단위 투여량으로서 적합한 물리적 개별 단위를 나타낸다; 각각의 단위는 요구되는 약학 담체와 함께 요망되는 치료 효과를 생성하기 위해 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여량 단위 형태에 대한 사양은 활성 화합물의 고유 특징 및 달성될 특정 치료 효과 그리고 개인의 치료를 위해 이러한 활성 화합물의 화합 분야에 내재적인 한계에 의해 지정되며 이에 직접 의존한다.
본 발명을 이의 예시적 구현예를 참조하여 구체적으로 나타내고 기재하였으나, 당업자에게는 형태 및 세부사항의 다양한 변화가 첨부되는 청구범위에 의해 포괄되는 발명의 범위로부터 벗어나지 않고 여기에서 만들어질 수 있음이 이해될 것이다.
실시예
실시예 1 - CTNNB1 유전자의 구성적으로 활성화하는 돌연변이의 검출
베타-카테닌 유전자의 서열 결정을 위해 환자로부터 생검 샘플을 수득할 수 있다. 유전자 서열분석은 당업자의 권한범위 내에 잘 속하며, 상업적으로 이용 가능한 제품, 예컨대 Boulder, CO의 ArcherDX, Inc.에서 이용 가능한 Archer® VariantPlex 고형 종양 키트 및 차세대 서열분석 플랫폼, 예컨대 San Diego CA의 Illumina, Inc.(전세계 본사)에서 이용 가능한 플랫폼을 사용해서 달성할 수 있다. 비교는 유전자의 공개적으로 이용 가능한 유전 서열에 대해, 예컨대 NCBI 데이터베이스에서 수행할 수 있다.
실시예 2 - 베타-카테닌 단백질의 구성적으로 활성화하는 돌연변이의 검출
베타-카테닌의 인산화 상태는 베타-카테닌의 인산화된 형태를 인식하는 항체로의 웨스턴 블롯 분석에 의해 결정할 수 있다. 베타-카테닌의 안정화 및 활성화는 세포 단백질 수준 증가를 실증하는 웨스턴 블롯 및 베타-카테닌의 핵 편재를 실증하는 면역형광에 의해 결정할 수 있다. 하류 베타-카테닌 표적 유전자 또는 외인성 베타-카테닌 리포터 유전자 작제물의 발현 측정을 베타-카테닌의 활성화 상태를 결정하기 위해 이용할 수 있다.
실시예 3 - DKN-01 치료법을 거치는 환자에서의 CTNNB1 돌연변이 데이터
파클리탁셀/DKN-01 조합 치료법의 임상 연구
1상 비-무작위, 용량-증량, 공개 라벨, 다기관 연구로서 설계된 조합 DKN-01/파클리탁셀® 치료법의 임상 연구를 위해 환자를 선택하였다.
재발성 또는 전이성 식도 또는 위-식도 접합부 선암종이 조직학적으로 확진된 환자를 선택하였다. 표 1에 보고된 각각의 환자를 28일 치료 사이클에 배치하였다: 1일 및 15일에 DKN-01 항체 300 ㎎; 1일, 8일, 15일 및 22일에 Paclitaxel® 80 ㎎/㎡.
DKN-01을 최소 30분 및 최대 2시간에 걸쳐 중단 없이 정맥내(IV) 투여하였다. Paclitaxel®을 표준 임상 관례에 따라 각 사이클의 1일, 8일, 15일 및 22일에 1시간에 걸쳐 IV 투여하였다. 파클리탁셀에 대한 관리 예비투약 표준을 투여 전에 제공하였다. 투여 순서: 파클리탁셀에 대한 예비투약, DKN-01, 파클리탁셀. 2개 약물이 모두 전달된 때인 1일 및 15일에는 먼저 DKN-01에 이어 파클리탁셀을 투여하였다.
연구 개시 전에 수집한 생검 샘플로 유전자 발현 분석을 거쳤다.
방사선학적 종양 평가를 수행하였다. 최소 시, 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST)에 의해 정의되는 방사선학적 조영으로 측정 가능한 하나 이상의 전이성 종양의 보고를 갖는 흉부, 복부 및 골반의 전산화 단층촬영(CT) 스캔을 종양 평가를 위해 수행하였다. 타당한 경우 항상, 연구를 통해 바람직한 조영 방식은 CT/PET 스캔이었다. 사이클 1의 1일 전 28일 내에 기준선 방사선학적 종양 평가를 수행하고, 후속 종양 평가를 모든 짝수 사이클 후 수행하였다.
하기 반응 기준을 사용하였다:
완전 반응(CR): 모든 병소의 소실. 모든 병리적 림프절은 단축 10 ㎜ 미만으로 감소하였다. 종양 마커 결과를 정규화하였다.
부분 반응(PR): 기준선 합계 지름을 참조하여 취하는, 병소 지름 합계의 적어도 30% 감소.
진행성 질병(PD): 연구에서 최소 합계(최소인 경우, 기준선 합계 포함)를 참조하여 취하는, 병소 지름 합계의 적어도 20% 증가. 20%의 상대 증가에 부가하여, 합계는 적어도 5 ㎜의 절대적 증가를 실증하였다. 하나 이상의 신규 병소의 출현도 진행으로 간주하였다.
안정한 질병(SD): 연구에 있는 동안 최저 합계 지름을 참조하여 취하는, PR을 정량적으로 나타내기 충분한 수축도 PD를 정량적으로 나타내기 충분한 증가도 없음.
결과 분석
베타-카테닌 돌연변이의 분석을 상술된 방법에 따라 Paclitaxel® 및 DKN-01의 조합 치료법을 거치는 환자에서 수행하였다. 이 결과를 도 1에 나타낸다. 알 수 있듯이, 엑손 2~4, S45F 및 T41I의 결실로 생성되는 베타-카테닌 돌연변이가 부분 반응을 나타내거나 적어도 안정한 질병 상태인 환자에서 확인된다.
상기 데이터는 베타-카테닌의 활성화 돌연변이가 항-Dkk-1 항체 투여에 대한 치료 반응의 바이오마커 예측인자임을 실증한다.
실시예 4 - 환자 105-023의 사례 연구: β-카테닌 활성화 돌연변이가 식도암 치료법에서 DKN-01 감수성에 대한 바이오마커임.
도 1에 나타낸 바와 같이, GEJ 선암종 종양을 앓는 환자 105-023은 가장 높은 종양 부피 감소를 나타내었다. 환자 105-023에 관한 임상 데이터를 추가 분석하였다.
환자 105-023은 14회의 28일 치료 사이클 과정에 걸쳐 73%의 종양 회귀를 경험하였다. 이 결과가 도 2a 및 도 2b에 예시된다. 도 2a는 치료 사이클 수의 함수로서 환자 105-023에서의 종양 부피 그래프를 나타낸다(사이클은 시작일 별로 표시됨). 환자 105-023은 1일 및 15일에 DKN-01 300 ㎎ 및 최초 10회 사이클에 있어서 28일 사이클 동안 매주 파클리탁셀 80 ㎎/㎡을 수여받았다. 사이클 10 동안 파클리탁셀을 중단하였다; 그러나 반응은 계속 심화되었다. 도 2b는 기준선에서부터 사이클 10까지 환자 105-023에서 원발성 병소 크기의 감소를 실증하는 전산화 단층촬영 이미지이다. 화살표는 원발성 종양을 표시한다.
데이터로부터 알 수 있듯이, 환자 105-023은 사이클 10에 파클리탁셀을 중단하였고, DKN-01 단독치료법에 대한 심화 반응을 계속 가졌다. 상기 환자의 종양으로부터의 생검 샘플의 유전 분석(Foundation Medicine, Inc., Cambridge, MA에서 상업적으로 이용 가능한 FoundationOne® 패널을 채택하여 실시예 1에 기재된 방법을 사용하여 수행함)은 구성적 활성화를 일으키는 β-카테닌 엑손 2~4 결실의 존재를 시사하였다.
상기 데이터는 베타-카테닌의 활성화 돌연변이가 항-Dkk-1 항체 투여에 대한 치료 반응의 바이오마커 예측인자라는 발견을 추가로 뒷받침한다.
서열
CTNNB1의 게놈 DNA 서열 - SEQ ID NO: 1
도 3a 내지 3f에 나타낸 SEQ ID NO: 1은 염색체 좌표 chr3:41,240,942-41,281,939를 갖는 인간 CTNNB1 유전자의 서열을 나타낸다. 모든 좌표는 빌드 GRCh37/hg19로부터 유래된다. 5'UTR 및 3'UTR 엑손은 포함되지 않는다. 대문자는 엑손이며, 소문자는 인트론이다. 엑손 2, 3 및 4에는 밑줄을 치고 위에 표시한다.
베타-카테닌 단백질의 아미노산 서열 - SEQ ID NO: 2
아래의 SEQ ID NO: 2는 인간 베타-카테닌의 아미노산 서열, 781개 아미노산 단백질 UniProt Database ID - P35222(http://www.uniprot.org/uniprot/P35222)이다. 엑손 2, 3 및 4에는 밑줄을 치고 위에 표시한다.
Figure pct00001
베타-카테닌 단백질의 엑손
아미노산 번호 범위는 전사체의 스플라이싱으로 인해 SEQ ID NO: 1에서 표시된 바와 같이 엑손에 정확히 대응하지 않는다. 예를 들어 아미노산 #5에 대한 코돈의 첫 번째 염기 "G"는 엑손 2에 있으며 두 번째 및 세 번째 염기 "CT"는 엑손 3에 있다.
엑손 3의 강조된 잔기(진한 밑줄 친 글씨체)는 이들이 돌연변이되거나 결실되는 경우 베타-카테닌을 안정화하는 GSK3B 및 CK1α 인산화 부위: S33, S37, T41, S45를 시사한다). (문헌[de La Coste A, Romagnolo B, Billuart P, Renard CA, Buendia MA, Soubrane O, et al. (1998). Somatic mutations of the beta-catenin gene are frequent in mouse and human hepatocellular carcinomas. Proc Natl Acad Sci U S A 95: 8847-8851; 및 Xu W, & Kimelman D (2007). Mechanistic insights from structural studies of beta-catenin its binding partners. J Cell Sci 120: 3337-3344] 참고).
엑손 1(비-코딩)
엑손 2 - SEQ ID NO: 3(SEQ ID NO: 2의 아미노산 1~4)
Figure pct00002
엑손 3 - SEQ ID NO: 4(SEQ ID NO: 2의 아미노산 5~81)
Figure pct00003
엑손 4 - SEQ ID NO: 5(SEQ ID NO: 2의 아미노산 82~165)
Figure pct00004
LCDR1
Figure pct00005
LCDR2
Figure pct00006
식 중, 위치 2에서의 Xaa는 Gly 또는 Ala이며; 위치 6에서의 Xaa는 Ile 또는 Glu임.
LCDR3
Figure pct00007
식 중, 위치 4에서의 Xaa는 Glu 또는 Ala임.
HCDR1
Figure pct00008
HCDR2
Figure pct00009
HCDR3
Figure pct00010
식 중, 위치 4에서의 Xaa는 His 또는 Asn임.
LCVR
Figure pct00011
식 중, 위치 51에서의 Xaa는 Gly 또는 Ala이며; 위치 55에서의 Xaa는 Ile 또는 Glu이고, 위치 92에서의 Xaa는 Glu 또는 Ala임.
HCVR
Figure pct00012
식 중, 위치 102에서의 Xaa는 His 또는 Asn임.
LCVR
Figure pct00013
HCVR
Figure pct00014
LCVR
Figure pct00015
HCVR
Figure pct00016
LCVR
Figure pct00017
LCVR
Figure pct00018
HC
Figure pct00019
LC
Figure pct00020
HC
Figure pct00021
LC
Figure pct00022
HC
Figure pct00023
LC
Figure pct00024
LC
Figure pct00025
인간 Dkk-1 아미노산 서열
Figure pct00026
SEQUENCE LISTING <110> LEAP THERAPEUTICS, INC. <120> USE OF BETA-CATENIN AS A BIOMARKER FOR TREATING CANCERS USING ANTI-DKK-1 ANTIBODY <130> DCQ-00425 <140> PCT/US2017/058555 <141> 2017-10-26 <150> 62/413,198 <151> 2016-10-26 <160> 27 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15274 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggctactc aaggtttgtg tcattaaatc tttagttact gaattggggc tctgcttcgt 60 tgccattaag ccagtctggc tgagatcccc ctgctttcct ctctccctgc ttacttgtca 120 ggctaccttt tgctccattt tctgctcact cctcctaatg gcttggtgaa atagcaaaca 180 agccaccagc aggaatctag tctggatgac tgcttctgga gcctggatgc agtaccattc 240 ttccactgat tcagtgagta actgttaggt ggttccctaa gggattaggt atttcatcac 300 tgagctaacc ctggctatca ttctgctttt cttggctgtc tttcagattt gactttattt 360 ctaaaaatat ttcaatgggt catatcacag attctttttt tttaaattaa agtaacattt 420 ccaatctact aatgctaata ctgtttcgta tttatagctg atttgatgga gttggacatg 480 gccatggaac cagacagaaa agcggctgtt agtcactggc agcaacagtc ttacctggac 540 tctggaatcc attctggtgc cactaccaca gctccttctc 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380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 25 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 25 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Gly Arg Gln Ser Ile Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu 85 90 95 His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 26 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 26 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys His Ala Ser Asp Ser Ile Ser Asn Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Arg Gln Ser Glu Gln Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala Ser Trp Pro Leu 85 90 95 His Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 27 <211> 235 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 27 Thr Leu Asn Ser Val Leu Asn Ser Asn Ala Ile Lys Asn Leu Pro Pro 1 5 10 15 Pro Leu Gly Gly Ala Ala Gly His Pro Gly Ser Ala Val Ser Ala Ala 20 25 30 Pro Gly Ile Leu Tyr Pro Gly Gly Asn Lys Tyr Gln Thr Ile Asp Asn 35 40 45 Tyr Gln Pro Tyr Pro Cys Ala Glu Asp Glu Glu Cys Gly Thr Asp Glu 50 55 60 Tyr Cys Ala Ser Pro Thr Arg Gly Gly Asp Ala Gly Val Gln Ile Cys 65 70 75 80 Leu Ala Cys Arg Lys Arg Arg Lys Arg Cys Met Arg His Ala Met Cys 85 90 95 Cys Pro Gly Asn Tyr Cys Lys Asn Gly Ile Cys Val Ser Ser Asp Gln 100 105 110 Asn His Phe Arg Gly Glu Ile Glu Glu Thr Ile Thr Glu Ser Phe Gly 115 120 125 Asn Asp His Ser Thr Leu Asp Gly Tyr Ser Arg Arg Thr Thr Leu Ser 130 135 140 Ser Lys Met Tyr His Thr Lys Gly Gln Glu Gly Ser Val Cys Leu Arg 145 150 155 160 Ser Ser Asp Cys Ala Ser Gly Leu Cys Cys Ala Arg His Phe Trp Ser 165 170 175 Lys Ile Cys Lys Pro Val Leu Lys Glu Gly Gln Val Cys Thr Lys His 180 185 190 Arg Arg Lys Gly Ser His Gly Leu Glu Ile Phe Gln Arg Cys Tyr Cys 195 200 205 Gly Glu Gly Leu Ser Cys Arg Ile Gln Lys Asp His His Gln Ala Ser 210 215 220 Asn Ser Ser Arg Leu His Thr Cys Gln Arg His 225 230 235

Claims (34)

  1. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 방법으로서,
    대상체에 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하며,
    대상체는 베타-카테닌 단백질(SEQ ID NO: 2)의 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 갖는 것으로 결정되고,
    암은 식도암, 자궁암, 간암 또는 쓸개관암종인 방법.
  2. 암을 앓는 대상체의 치료 방법으로서,
    대상체로부터 암 세포의 샘플을 수득하는 단계;
    샘플에서 베타-카테닌 단백질의 서열을 결정하는 단계; 및
    베타-카테닌 단백질의 서열(SEQ ID NO: 2)에 구성적으로 활성화하는 돌연변이가 포함되는 경우, 대상체에 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하며,
    암은 식도암, 자궁암, 간암 또는 쓸개관암종인 방법.
  3. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 방법으로서,
    대상체에 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하며,
    대상체는 베타-카테닌 단백질(SEQ ID NO: 2)의 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 가지고,
    암은 식도암, 자궁암, 간암 또는 쓸개관암종인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 유효량의 화학치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 화학치료제는 탁산, 파클리탁셀, 도세탁셀, 카바지탁셀, 젬시타빈, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 플루오로우라실, 카페시타빈 또는 테가포르 또는 이의 임의의 기능적 유사체인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편은 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하며, LCVR은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고 HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6의 아미노 서열을 갖고, LCDR2는 SEQ ID NO: 7의 아미노 서열을 갖고, LCDR3은 SEQ ID NO: 8의 아미노 서열을 갖고, HCDR1은 SEQ ID NO: 9의 아미노 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NO: 10의 아미노 서열을 갖고, HCDR3은 SEQ ID NO: 11의 아미노 서열을 갖는 방법.
  7. 제6항에 있어서, LCVR은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하며, HCVR은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, LCVR 및 HCVR은 (i) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (ii) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iii) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iv) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, LCVR은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며 HCVR은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 항-Dkk-1 항체는 a) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, b) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, c) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 d) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로 구성되는 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 항-Dkk-1 항체는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  13. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이에 엑손 3(SEQ ID NO: 4)의 결실이 포함되는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 돌연변이에 엑손 2, 3 및 4(SEQ ID NO. 3, 4 및 5)의 결실이 포함되는 방법.
  15. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이에 엑손 3(SEQ ID NO: 4) 내의 결실이 포함되는 방법.
  16. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2의 단백질의 아미노산 서열 내의 임의의 하위서열의 결실이며, 상기 하위서열에는 Ser33, Ser37, Thr41 및 Ser45로부터 선택되는 적어도 하나의 잔기가 포함되는 방법.
  17. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2의 단백질의 Ser33, Ser37, Thr41 및 Ser45로부터 선택되는 임의의 하나의 아미노산 잔기의 돌연변이인 방법.
  18. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이는 표 1에 기재된 SEQ ID NO: 2의 단백질에서 아미노산 잔기의 임의의 하나의 돌연변이인 방법.
  19. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 암의 치료 방법으로서,
    대상체에 유효량의 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편을 투여하는 단계를 포함하며,
    대상체는 베타-카테닌 단백질(SEQ ID NO: 2)의 구성적으로 활성화하는 돌연변이를 갖는 것으로 결정되고,
    암은 위암인 방법.
  20. 제19항에 있어서, 유효량의 화학치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 화학치료제가 탁산, 파클리탁셀, 도세탁셀, 카바지탁셀, 젬시타빈, 카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 플루오로우라실, 카페시타빈 또는 테가포르 또는 이의 임의의 기능적 유사체인 방법.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-Dkk-1 항체 또는 이의 항원 결합-단편은 경쇄 가변 영역(LCVR) 및 중쇄 가변 영역(HCVR)을 포함하며, LCVR은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고 HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, LCDR1은 SEQ ID NO: 6의 아미노 서열을 갖고, LCDR2는 SEQ ID NO: 7의 아미노 서열을 갖고, LCDR3은 SEQ ID NO: 8의 아미노 서열을 갖고, HCDR1은 SEQ ID NO: 9의 아미노 서열을 갖고, HCDR2는 SEQ ID NO: 10의 아미노 서열을 갖고, HCDR3은 SEQ ID NO: 11의 아미노 서열을 갖는 방법.
  23. 제22항에 있어서, LCVR은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하며, HCVR은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, LCVR 및 HCVR은 (i) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (ii) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iii) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR; (iv) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR 및 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, LCVR은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며 HCVR은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 항-Dkk-1 항체는 a) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, b) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, c) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 d) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로 구성되는 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  27. 제26항에 있어서, 항-Dkk-1 항체는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 방법.
  28. 제19항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  29. 제19항에 있어서, 돌연변이에 엑손 3(SEQ ID NO: 4)의 결실이 포함되는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 돌연변이에 엑손 2, 3 및 4(SEQ ID NO. 3, 4 및 5)의 결실이 포함되는 방법.
  31. 제19항에 있어서, 돌연변이에 엑손 3(SEQ ID NO: 4) 내의 결실이 포함되는 방법.
  32. 제19항에 있어서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2의 단백질의 아미노산 서열 내의 임의의 하위서열의 결실이며, 상기 하위서열에는 Ser33, Ser37, Thr41 및 Ser45로부터 선택되는 적어도 하나의 잔기가 포함되는 방법.
  33. 제19항에 있어서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2의 단백질의 Ser33, Ser37, Thr41 및 Ser45로부터 선택되는 임의의 하나의 아미노산 잔기의 돌연변이인 방법.
  34. 제19항에 있어서, 돌연변이는 표 1에 기재된 SEQ ID NO: 2의 단백질에서 아미노산 잔기의 임의의 하나의 돌연변이인 방법.
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