JP2022549156A - 癌を治療するためのｄｋｋ－１阻害剤の使用 - Google Patents

Abstract

癌の治療を必要とする対象において癌を治療する方法であって、前記対象の癌のサンプルにおいてＤＫＫ１発現Ｈ－スコア又は％陽性を決定し；予め決定された値以上のＤＫＫ１発現Ｈ－スコア又は％陽性を有すると判定された対象にＤＫＫ１アンタゴニスを投与することを含む、方法。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１９日に提出された米国仮特許出願第６２／９０２８５７号明細書の利益を主張する。上記の出願の全教示は、参照によって本明細書に組み込まれる。

癌は、制御されない又は調節されない細胞増殖、細胞分化の低下、周囲組織への不適切な侵入能及び／又は異所的部位での新しい増殖の確立能を特徴とする細胞性障害である。関与する具体的な癌に依存して、癌に対する治療は、外科的手術、放射線療法、化学療法又はこれらの治療の組み合わせを含み得る。２０１８年には米国で１，７３５，３５０例の癌の新たな症例が診断され、６０４，６４０名が癌で死亡すると推定される。そのため、癌治療における顕著な進歩にもかかわらず、癌患者に対する新しい改善された治療が引き続いて必要とされている。

例となる実施形態では、本発明は、癌の治療を必要とする対象において癌を治療する方法であり、この方法は、対象の癌のサンプルにおいてＨ－スコア又はパーセント陽性によりＤＫＫ１発現を決定し；予め決定された値を上回るＤＫＫ１発現Ｈ－スコア又はパーセント陽性を有すると判定された対象に第１の量のＤＫＫ１阻害剤を投与することを含む。

上述のことは、異なる観点を通じて、同様の参照文字が同じ部分を指す添付の図面で例示されるように、本発明の例となる実施形態の続くより具体的な説明から明らかとなろう。図面は、必ずしも寸法どおりではなく、代わりに本発明の実施形態を例示することに重点が置かれている。

図１は、実施例１に記載のような、ＲＮＡｓｃｏｐｅによるＤＫＫ１ Ｈ－スコアのプール分析で使用された、合わせて１３４名の患者を含む患者サブグループを表す模式図である。 図２は、３個のプロットの重ね合わせであり、各プロットは、日数の関数としての、無増悪生存期間（ＰＦＳ、確率として測定）のそれらのＤＫＫ１ Ｈ－スコアによる１３４名の患者の三分位値を表す。 図３は、患者のＤＫＫ１ Ｈ－スコア三分位値並びに癌のタイプ及び治療剤により定義される患者のサブグループにより分離される、１３４名の患者のプールのハザード比（ＨＲ）を表す表及びプロットである。 図４は、ＤＫＫ１ Ｈ－スコアの関数としての（本明細書中に記載の）標準化ログランク統計量のプロットである。 図５は、２つのプロット重ね合わせであり、各プロットは、時間の関数としての患者のサブグループのＰＦＳ（確率として表す）を示す。 図６は、それらの最適ＤＫＫ１ Ｈ－スコア並びに癌のタイプ及び治療剤により定義される患者サブグループにより分離される１３４名の患者のプールのハザード比を表す表及びプロットである。 図７は、最適カットポイントが最も適応したハザード比（ＨＲ）を有することを表す、異なるカットポイントの比較のグラフ表示である。 図８は、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれ、ＥＥＣ／ＥＯＣ患者のサブグループの時間の関数としてのＰＦＳ（確率として表す）を示す。 図９は、ＥＥＣ／ＥＯＣ患者のサブ－サブグループに対するＨＲを表す表及びプロットである。 図１０は、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれが、ＧＥＪ／ＧＣ／ＥＣ患者の時間の関数としてのＰＦＳ（確率として表す）を示す。 図１１は、ＧＥＪ／ＧＣ／ＥＣ患者のサブグループに対するＨＲを表す表及びプロットである。 図１２は、ＤＫＮ－０１／抗ＰＤ－１療法を受ける２５名の評価可能なＧＥＪ／ＧＣ ＩＯ－ナイーブ患者における病巣サイズの最大パーセント縮小を表すバープロットである。 図１３は、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれＤＫＮ－０１／抗ＰＤ－１療法を受けるＩＯ－ナイーブＧＥＪ／ＧＣ患者のサブグループの時間の関数としてのＰＦＳ（確率として表す）を示す。 図１４Ａは、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれがＧＥＪ／ＧＣ／ＥＣ患者の時間の関数としてのＰＦＳ（確率として表す）を示し、これは、カットオフ値として高三分位値の下方境界を使用し、％陽性測定基準を使用して計算される。 図１４Ｂは、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれがＧＥＪ／ＧＣ／ＥＣ患者の時間の関数としてのＰＦＳ（確率として表す）を示し、「最適」カットオフ値を使用して、％陽性測定基準を使用して計算される。 図１５は、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれがＤＫＮ－０１／抗ＰＤ－１療法を受けるＩＯ－ナイーブＧＥＪ／ＧＣ患者のサブグループの時間の関数としてのＰＦＳ（確率として表す）を示す。 図１６Ａ及び図１６Ｂは、本明細書中に記載のように治療される胃／ＧＥＪ ＩＯ抵抗性患者のＨ－スコア（Ａ）又は％陽性値（Ｂ）のいずれかを示す散布図である。

本発明の例となる実施形態の記載は次のとおりである。

本明細書中で引用されるすべての特許、公開される出願及び参考文献の教示はそれらの全体において参照により組み込まれる。

その例となる実施形態を参照して本発明を特に示し、記載する一方で、添付の特許請求の範囲により包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細の様々な変更がそこにおいてなされ得ることは当業者により理解されよう。

食道胃癌は、本明細書中で使用される場合、食道癌及び胃の（胃）癌（ＧＣ）を指す。

「食道癌」（ＥＣ）は、本明細書中で使用される場合、食道並びに食道胃接合部（ＧＥＪ）の癌を指す。当技術分野において一般に使用されるように、食道癌は、食道扁平上皮癌（ＥＳＣＣ）及び食道腺癌（ＥＡＣ）を含む。一般に、ＥＳＣＣは、扁平上皮細胞において生じる癌を指し、これらの細胞は、器官のおよそ上部２／３の食道を裏打ちしている。ＥＡＣは、腺細胞において生じる癌を指し、腺細胞は、典型的に食道の下部１／３の扁平上皮細胞の領域に取って代わるものである（例えばバレット食道において）。そのため、本明細書において使用される食道腺癌は、食道及び食道胃接合部の腺癌を指す。

いくつかの実施形態では、食道腺癌は、再発性、転移性又はその両方である。一実施形態では、再発性食道腺癌は、腫瘍成長の原発部位で再発性であり得る（例えば再発性腫瘍増殖が同じ部位で起こる）。別の実施形態では、再発性食道腺癌は、腫瘍成長の原発部位と異なる部位で再発性であり得る（例えば腫瘍が転移している）。さらなる実施形態では、再発性食道腺癌は、原発部位及び腫瘍成長の原発部位とは異なる部位の両方で再発性であり得る。

本明細書中で使用される場合、「再発性」及び「再燃性」という用語は交換可能に使用される。

本明細書中で使用される場合、「胃癌」は、胃の癌を指す。胃癌の具体的なタイプは、「胃腺癌」である。腺癌は、腺性起源、腺性の特徴又はその両方を有する上皮組織の新生物として定義される癌性腫瘍の一タイプである。

胃癌は、世界で癌関連死の上から４番目の原因であり、主に殆どの患者が病態進行を示すため、依然として西側諸国で治癒困難である。胃は、食道胃接合部で始まり、十二指腸で終わる。組織学的に、胃の悪性腫瘍の９０～９５％は腺癌である。根治療法は、外科的切除、最も一般的には、リンパ節郭清術を伴う胃全摘又は亜全摘術を含む。切除可能な胃癌がある患者の全５年生存率は１０％～３０％の範囲である。

本明細書中で使用される場合、「婦人科癌」は、子宮内膜の癌（子宮内膜癌）及び卵巣の癌（卵巣癌）を指す。子宮は、子宮内膜と呼ばれる特異的な組織で裏打ちされている。癌がこの裏打ちにおいて成長する場合、これは子宮内膜癌と呼ばれる。子宮の殆どの癌は子宮内膜癌である。特定の実施形態では、子宮内膜癌は上皮性の子宮内膜癌（ＥＥＣ）である。別の実施形態では、卵巣癌は卵巣上皮癌（ＥＯＣ）である。

本明細書中で使用される場合、「胆道癌」は胆道の癌を指す。胆道癌は、胆管（肝臓から胆汁を輸送する管）で発生し、「胆管細胞癌」又は胆嚢癌と呼ばれる。胆管細胞癌は、胆管においてどこで癌が発生するかに基づいて異なるタイプに分類される：肝内胆管細胞癌は、肝臓内の胆管の部分で発生し、肝臓癌の一タイプとして分類されることもあり；肝門部胆管細胞癌は、肝臓のすぐ外側の胆管で発生する。このタイプは、肝門部周囲胆管細胞癌とも呼ばれ；遠位胆管細胞癌は小腸に最も近い胆管の部分で発生する。胆嚢癌は胆嚢で発生する。

例となる実施形態では、対象は、少なくとも１つ（例えば１、２、３、４、５など）の以前の治療レジメンに対して不耐容である。例えば、対象は、以前の治療レジメンに対して有害反応を経験し、治療を停止した。別の実施形態では、対象は、少なくとも１つの以前の治療レジメンに対して抵抗性である（例えば対象は治療レジメンにもはや応答しなかった）。他の実施形態では、対象は、少なくとも１つの以前の治療レジメンに対して不応性である。様々な実施形態では、対象は、適切な場合、少なくとも１つの以前の治療レジメンに対する本明細書中に記載の失敗の組み合わせを経験した。別の実施形態では、対象は、「癌免疫療法－ナイーブ」（ＩＯナイーブ）である。

さらなる実施形態では、当技術分野で公知の様々な標準的ｍＲＮＡ又はタンパク質検出方法、例えばインシトゥハイブリッド形成又は免疫組織化学、の１つ以上により決定される場合に、ＤＫＫ１を発現する食道胃、婦人科学的及び胆道腫瘍。このような腫瘍の例としては、食道腺癌又は胃腺癌が挙げられる。

本明細書中で使用される場合、「カットポイント」又は「カットポイント値」は、（例えば腫瘍細胞において、以下で論じるようなＨ－スコア値又は「％陽性」値のいずれにせよ）ＤＫＫ１発現の目安を指し、「カットポイント」を上回る発現の目安（Ｈ－スコア又は％陽性）を有するサブグループ中の患者にＤＫＫ１阻害剤（例えばＤＫＮ－０１）が投与される場合に、これらの患者は、「カットポイント」値を下回る発現のそれらの目安を有する患者のサブグループと比較した場合、無増悪生存期間（ＰＦＳ）の統計学的に有意な改善を示す。

本明細書中で使用される場合、「最適ＤＫＫ１発現」は、Ｈ－スコア値により表されるか又は％陽性値により表されるか（「最適なＨ－スコア」、「最適な％陽性」又は単純に「最適なカットポイント」）に関わらず、「標準化されたログランク統計量」の絶対値がその最大に達するＤＫＫ１の発現の目安（Ｈ－スコア値又は％陽性値）を指し、「標準化されたログランク統計量」は、以下で概説されるように計算される。

Ｘ１、…、Ｘｎの範囲で固定されたカットポイントμに対するログランク統計量は、

としてＴμにより定義され、ここで観察値ｉに対するログランクスコア（ａ）が、

により与えられ、ここで、

は、時間Ｚｊの前又はその時間での死亡又は打ち切られた観察の数であり、Ｚ＝（Ｚ₁，．．．，Ｚ_N）及びδ＝（δ₁，．．．，δ_N）はそれぞれ、事象に対する時間及び打ち切り指標についてのベクトルである。ログランク統計量学的Ｔμの標準化は、

として定義されるＳμを導き、ここで帰無仮説下でのＴμの期待値（Ｅ）は、

により与えられ、分散は、

により与えられ、

及び

は、Ｘの経験分布関数を示す。発明者らは、Ｘの予め定められた標本分位数（ε₁，ε₂）に従い、区間μ∈［μ₁，μ₂］に可能なカットポイントを限定する。

及び

（式中、０＜ε₁＜ε₂＜１）
及び

。μにより決定される両群のサンプルサイズは、ｍμ＝ＮＦ_NX（μ）及びｎμ＝Ｎ－ｍμである。

標準化された統計量（ログランク）Ｓμの絶対値の最大は、カットポイント推定因子を定め、これは、観察値の分離を最大にする。上の定義を使用して、最大選択ログランク統計量（ｍａｘｉｍａｌｌｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｌｏｇ－ｒａｎｋ ｓｔａｔｉｓｔｉｃ）は

のように定義される。

完全な詳細についてはＴｏｒｓｔｅｎ Ｈｏｔｈｏｒｎ及びＢｅｒｔｈｏｌｄ Ｌａｕｓｅｎ「Ｏｎ ｔｈｅ ｅｘａｃｔ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｘｉｍａｌｌｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｒａｎｋ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ＆Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ，４３（２）：１２１－１３７，Ｊｕｎｅ ２００３を参照のこと。この参考文献の教示は、それらの全体において参照によって本明細書中により組み込まれる。

完全なアルゴリズム実装は、ｍａｘｓｔａｔ（Ｒ）において記載され、このようなパッケージ「ｍａｘｓｔａｔ」がこの分析に対して使用されたので、ＵＲＬ ｈｔｔｐｓ：／／ＣＲＡＮ．Ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ｐａｃｋａｇｅ＝ｍａｘｓｔａｔで見られるＴｏｒｓｔｅｎ Ｈｏｔｈｏｒｎ（２０１７）．ｍａｘｓｔａｔ：Ｍａｘｉｍａｌｌｙ Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｒａｎｋ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ．Ｒパッケージバージョン０．７－２５を参照のこと。

特定の実施形態では、ＤＫＮ－０１に基づく療法で治療される癌患者は、Ｈ－スコアの値が最適カットポイントを上回った場合、ＤＫＫ１ Ｈ－スコア「高」として分類し、Ｈ－スコアが最適カットポイントを下回った患者をＤＫＫ１「低」として分類した。最適カットポイントは、これらの２つの群の間で観察値の分離を最大化する。

本明細書中で使用される場合、「予め決定された値を上回る」という句は、値のパーセンタイルを指す場合、「予め決定された値と同等又はそれよりも大きい」（例えば「高三分位値」）ことを意味し、「最適ＤＫＫ１発現Ｈ－スコア」などの選択された数値を指す場合、「予め決定された値よりも大きい」ことを意味する。

Ｈ－スコア及び％陽性値
関心のある遺伝子産物の発現、例えばＤＫＫ１の発現、のレベルは、免疫組織化学又はインシトゥハイブリッド形成技術の方法によって評価され得る。発現レベルの都合の良い半定量的目安は、％陽性値（ＤＫＫ－１ ＲＮＡ検出試薬により染色される細胞の％）を計算するか又はＨ－スコア（又は「ヒスト」スコア）を腫瘍サンプルに割り当てることである。Ｈ－スコアに対して、染色強度（０、１＋、２＋又は３＋）を固定した視野において各細胞について判定する。次に、Ｈ－スコアは、優勢な染色強度に基づき得るか、又はより複雑には、見られる各強度レベルに対する個々のパーセンテージの合計を含み得る。ある方法により、各染色強度レベルでの細胞のパーセンテージを計算し、最終的に、次の式を使用してＨ－スコアを割り当てる：
Ｈ－スコア＝［１ｘ（％細胞１＋）＋２ｘ（％細胞２＋）＋３ｘ（％細胞３＋）］

０～３００の範囲である最終スコアは、ある一定の腫瘍サンプルにおけるより高い強度又は染色量に対してより多くの相対的重みを与える。次に、具体的な特徴的閾値に基づいて、サンプルを陽性又は陰性とみなし得る。例えば、Ｈｉｒｓｃｈ ＦＲ，Ｖａｒｅｌｌａ－Ｇａｒｃｉａ Ｍ，Ｂｕｎｎ ＰＡ Ｊｒ，ｅｔ ａｌ：Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｅｎｅ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２１：３７９８－３８０７，２００３；及びＪｏｈｎ Ｔ，Ｌｉｕ Ｇ，Ｔｓａｏ Ｍ－Ｓ：Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ：Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｇｅｎｅ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ、ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ＥＧＦＲ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２８：Ｓ１４－Ｓ２３，２００９を参照のこと。これらの参考文献の関連する教示は参照により本明細書中に組み込まれる。

様々な実施形態では、Ｈ－スコア（例えばＨ－スコアの予め決定された値）は、１～３００、例えば２０～１００又は２０～５０であり得る。Ｈ－スコアの例となる予め決定された値は、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５及び１００である。代替的な例となる実施形態では、Ｈ－スコアの予め決定された値は１０以上、２０以上、３０以上、４０以上、５０以上、６０以上、７０以上、８０以上又は９０以上である。特定の実施形態では、Ｈ－スコアの予め決定された値は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、１０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９又は３００である。

代替的な実施形態では、ＤＫＫ１発現の目安は、ＤＫＫ１に対して陽性染色される腫瘍細胞の割合の値（％陽性）であり得る。最初に、細胞におけるドット数に基づいて、染色量（０、１＋、２＋又は３＋）が固定された視野において各腫瘍細胞に対して決定される。すべての新生物細胞が「陽性」（例えばＲＮＡｓｃｏｐｅインシトゥハイブリッド形成について単一の染色ドットを検出）として割り当てられた後、染色がある総新生物細胞を合計し、新生物細胞の総数で除することによって、陽性腫瘍細胞のパーセンテージが決定される。％陽性は０～１００の範囲であり得る。

様々な実施形態では、％陽性値（例えば％陽性の予め決定された値）は、１５％～５０％、例えば２０％～４０％又は２０％～２５％であり得る。予め決定された％陽性の値の例は、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上又は５０％以上である。特定の実施形態では、予め定められた％陽性の値は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％である。

ＲＮＡｓｃｏｐｅ分析
サンプルのＨ－スコアを計算する方法の１つは、例えばＵＲＬ ｈｔｔｐｓ：／／ａｃｄｂｉｏ．ｃｏｍ／に記載のようなＡｄｖａｎｃｅｄ Ｃｅｌｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．により開発され、そこから市販されているＲＮＡｓｃｏｐｅ（登録商標）インシトゥハイブリッド形成技術である。この技術は、関心のあるｍＲＮＡにとって同族であるハイブリッド形成プローブからの最適シグナルに依存する。シグナルは、明視野又は落射蛍光顕微鏡のいずれかにより検出され得る。この技術は、単分子の検出を可能にする。例えば、ＲＮＡｓｃｏｐｅ：Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｉｎ Ｓｉｔｕ ＲＮＡ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ Ｆｏｒｍａｌｉｎ－Ｆｉｘｅｄ Ｐａｒａｆｆｉｎ－Ｅｍｂｅｄｄｅｄ Ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｗａｎｇ Ｆ，Ｆｌａｎａｇａｎ Ｊ，Ｓｕ Ｎ，Ｗａｎｇ ＬＣ，Ｂｕｉ Ｓ，Ｎｉｅｌｓｏｎ Ａ，Ｗｕ Ｘ，Ｖｏ ＨＴ，Ｍａ ＸＪ，Ｌｕｏ Ｙ（２０１２）．Ｊ ｏｆ Ｍｏｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，１４（１）：２２－２９を参照のこと。

バイオマーカー検出の代替法
ＲＮＡｓｃｏｐｅ（登録商標）技術に加えて、バイオマーカー検出の代替法、例えばＤＫＫ１発現レベルなどの遺伝子産物発現のレベルを使用し得る。

組織切片の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色は、サンプル中のタンパク質の存在を評価又は検出する信頼性のある方法であることが示されてきた。免疫組織化学技術は、プローブに対する抗体を利用し、一般的には発色又は蛍光的方法によって、インシトゥで細胞抗原を可視化する。従って、抗体又は抗血清は、いくつかの実施形態では、ポリクローナル抗血清、及びいくつかの実施形態では、各マーカーに特異的なモノクローナ抗体を使用して発現を検出する。以下でより詳細に論じるように、本抗体は、例えば放射性標識、蛍光標識、ハプテン標識、例えばビオチンなど、又は酵素、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ若しくはアルカリホスファターゼなどで、抗体それ自身の直接標識によって検出され得る。或いは、一次抗体に特異的な抗血清、ポリクローナル抗血清又はモノクローナル抗体を含む、標識される二次抗体と組み合わせて、非標識一次抗体を使用する。免疫組織化学プロトコール及びキットは当技術分野で周知であり、市販されている。

ＩＨＣの２つの一般的な方法、直接及び間接アッセイが利用可能である。第１のアッセイによれば、標的抗原への抗体の結合は直接決定される。この直接アッセイは、標識される試薬、例えば蛍光タグ又は酵素標識一次抗体などを使用し、これは、さらなる抗体相互作用なく可視化され得る。典型的な間接アッセイにおいて、非複合化一次抗体が抗原に結合し、次に、標識された二次抗体が一次抗体に結合する。二次抗体が酵素性標識に複合化される場合、発色性又は蛍光発生的基質を付加して、抗原の可視化を提供する。いくつかの二次抗体は一次抗体上の異なるエピトープと反応し得るので、シグナル増幅が起こる。

免疫組織化学のために使用される一次及び／又は二次抗体は一般的には、検出可能部分で標識され得る。次のカテゴリーに一般的に分類され得る多くの標識が利用可能である：
（ａ）放射性同位体、例えば³⁵Ｓ、¹⁴Ｃ、¹²⁵Ｉ、³Ｈ及び¹³¹Ｉなど。抗体は、例えばＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ａｎｄ ２，Ｃｏｌｉｇｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）に記載の技術を使用して放射性同位体で標識され得、シンチレーションカウントを使用して放射活性を測定し得る。
（ｂ）コロイド金粒子
（ｃ）希土類キレート（ユーロピウムキレート）、テキサスレッド、ローダミン、フルオレセイン、ダンシル、リサミン、ウンベリフェロン、フィコクリセリン（ｐｈｙｃｏｃｒｙｔｈｅｒｉｎ）、フィコシアニン又は市販のフルオロフォア、このようなＳＰＥＣＴＲＵＭ ＯＲＡＮＧＥ（登録商標）及びＳＰＥＣＴＲＵＭ ＧＲＥＥＮ（登録商標）及び／又は上記のもののいずれか１つ以上の誘導体を含むが限定されない蛍光標識。蛍光標識は、例えば前出のＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙで開示される技術を使用して、抗体に複合化され得る。蛍光光度計を使用して蛍光を定量し得る。
（ｄ）様々な酵素基質標識が利用可能であり、米国特許第４，２７５，１４９号明細書は、これらのいくつかの概説を提供する。酵素は一般に、様々な技術を使用して測定され得る発色性基質の化学的代替物を触媒する。例えば、酵素は基質において色の変化を触媒し得、これは、分光光度的に測定され得る。或いは、酵素は、基質の蛍光又は化学発光を変化させ得る。蛍光の変化を定量するための技術は上記である。化学発光基質は、化学反応により電気的に励起されるようになり、次いで測定され得る光を発生させ得るか（例えばケミルミノメーターを使用）又は蛍光アクセプターに対してエネルギーを与える。酵素性標識の例としては、ルシフェラーゼ（例えば蛍ルシフェラーゼ及び細菌性ルシフェラーゼ；米国特許第４，７３７，４５６号明細書）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ、例えばホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）など、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環オキシダーゼ（ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなど）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼなどが挙げられる。抗体に酵素を複合化するための技術は、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．（ｅｄ．Ｊ．Ｌａｎｇｏｎｅ＆Ｈ．Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓ），Ａｃａｄｅｍｉｃ ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，７３：１４７－１６６（１９８１）におけるＯ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ－Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙに記載されている。

酵素基質の組み合わせの例としては、例えば：
（ｉ）基質としての水素ペルオキシダーゼとホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）、この場合、水素ペルオキシダーゼは、色素前駆体［例えばオルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）又は３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン塩酸塩（ＴＭＢ）］を酸化する。ＨＲＰ－標識抗体を可視化するために、３，３－ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）も使用され得る；
（ｉｉ）発色性基質としてのパラ－ニトロフェニルホスフェートとアルカリホスファターゼ（ＡＰ）；及び
（ｉｉｉ）発色性基質（例えばｐ－ニトロフェニル－β－Ｄ－ガラクトシダーゼ）又は蛍光発生基質（例えば４－メチルウンベリフェリル＾－Ｄ－ガラクトシダーゼ）とβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ（β－Ｄ－Ｇａｌ）
が挙げられる。

多くの他の酵素基質の組み合わせが当業者にとって利用可能である。これらの一般的な概説については、米国特許第４，２７５，１４９号明細書及び同第４，３１８，９８０号明細書を参照のこと。

標識が抗体に間接的に複合化されることがある。熟練者は、これを達成するための様々な技術を知っている。例えば、本抗体はビオチンと複合化され得、上述の標識の４つの広いカテゴリーのいずれかをアビジンと複合化し得るか又はその逆である。ビオチンは、アビジンに選択的に結合し、従って標識は、この間接的な方式において抗体と複合化され得る。或いは、抗体との標識の間接的複合化を達成するために、抗体が小さなハプテンと複合化され、上述の標識の異なるタイプの１つが抗ハプテン抗体と複合化される。従って、抗体との標識の間接的な複合化が達成され得る。

当業者にとって公知の標準的なサンプル調製手順に加えて、ＩＨＣの前、ＩＨＣ中又はＩＨＣ後の組織切片のさらなる処理が所望され得る。例えば、クエン酸緩衝液中での組織サンプルの加熱などのエピトープ賦活化法が行われ得る［例えばＬｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．４（３）：２０１（１９９６）を参照］。

任意選択的なブロッキング段階後、十分な時間にわたり、組織サンプルにおいて一次抗体が標的タンパク質抗原に結合するような適切な条件下で組織切片を一次抗体に曝露する。これを達成するための適切な条件は通常の実験により決定され得る。

サンプルに対する抗体の結合度は、上で論じられる検出可能な標識のいずれか１つを使用することにより決定される。好ましくは、標識は、３，３’－ジアミノベンジジン色素原などの発色性基質の化学的変化を触媒する酵素性標識（例えばＨＲＰＯ）である。好ましくは、酵素性標識は、一次抗体に特異的に結合する抗体と複合化される（例えば一次抗体はウサギポリクローナル抗体であり、二次抗体はヤギ抗ウサギ抗体である）。

このように調製される検体を載せ、カバースリップで覆い得る。次に、例えば顕微鏡を使用してスライド評価を決定する。

ＩＨＣを、その前又はその後のいずれかに、形態学的染色と組み合わせ得る。脱パラフィン後、スライド上に載せた切片を評価のために形態学的染色剤で染色し得る。使用しようとする形態学的染色剤は、組織切片の正確な形態学的評価をもたらす。それぞれが個別に異なる細胞成分を染色する１つ以上の色素で切片を染色し得る。一実施形態では、ヘマトキシリンは、スライドの細胞核を染色するために使用される。ヘマトキシリンは広く利用可能である。適切なヘマトキシリンの例はヘマトキシリンＩＩ（Ｖｅｎｔａｎａ）である。より淡い（ｌｉｇｈｔｅｒ）青色の核が望ましい場合、ヘマトキシリン染色後に青色試薬を使用し得る。当業者は、スライドが染料中に残留する時間の長さを長くするか又は短くすることによって、染色がある一定の組織に対して最適化され得ることを認めるであろう。

スライド調製及びＩＨＣ処理のための自動化システムが市販されている。Ｖｅｎｔａｎａ（登録商標）ＢｅｎｃｈＭａｒｋ ＸＴシステムは、このような自動化システムの一例である。染色後、標準的な顕微鏡の技術によって、組織切片を分析し得る。一般に、病理学者などは、異常細胞若しくは正常細胞又は特異的な細胞タイプの存在について組織を評価し、関心のある細胞タイプの位置を提供する。従って、例えば病理学者らは、スライドを審査し、正常細胞（正常肺細胞など）及び異常細胞（異常又は新生物の肺細胞など）を同定する。関心のある細胞の位置を明確にするいずれかの手段（例えばＸ－Ｙ軸上での座標）が使用され得る。

バイオマーカー検出のための他の技術は、当技術分野で公知であり、核酸検出方法（ＰＣＲ、シーケンシング、ｒｔＰＣＴ、ＲＮＡ－ｓｅｑ、マイクロアレイ分析、ＳＡＧＥ、Ｍａｓｓ ＡＲＲＡＹ技術及びＦＩＳＨを含むが限定されない）及びタンパク質検出方法（質量分析、ウエスタンブロッティングを含むが限定されない）が挙げられるが限定されない。ｃ－ｍｅｔ遺伝子の増幅の検出は、当業者にとって公知のある一定の技術を使用して達成される。例えば、染色***置の関数としてＤＮＡ配列コピー数のマップを作製するために、比較ゲノムハイブリッド形成を使用し得る。例えばＫａｌｌｉｏｎｉｅｍｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：８１８－８２１を参照。例えばｃ－ｍｅｔ遺伝子に特異的なプローブを使用してサザンハイブリッド形成法によって、又はリアルタイム定量的ＰＣＲによってまた、ｃ－ｍｅｔ遺伝子の増幅が検出され得る。特定の実施形態では、ｃ－ｍｅｔ遺伝子の増幅の検出は、ｃ－ｍｅｔ遺伝子のコピー数を直接評価することにより、例えばｃ－ｍｅｔ遺伝子とハイブリッド形成するプローブを使用することにより、達成される。例えばＦＩＳＨアッセイが行われ得る。特定の実施形態では、ｃ－ｍｅｔ遺伝子の増幅の検出は、ｃ－ｍｅｔ遺伝子のコピー数を間接的に評価することにより、例えばｃ－ｍｅｔ遺伝子の外側にあるが、ｃ－ｍｅｔ遺伝子とともに同時増幅される染色体領域のコピー数を評価することにより、達成される。バイオマーカー発現はまた、インビボ診断アッセイを使用して、例えば検出しようとする分子に結合し、検出可能な標識（例えば放射活性同位体）でタグ付加される分子（抗体など）を投与し、標識の局在について患者を外部からスキャンすることにより、評価され得る。

ＤＫＫ１抗体
ＤＫＫ１抗体は、以前に記載された（例えば、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８，１４８，４９８号明細書及び米国特許第７，４４６，１８１号明細書を参照）。本明細書において開示されるＤＫＫ１抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むヒトＤＫＫ１に結合するヒト改変抗体又はその断片に関する。本発明のＤＫＫ１抗体は、多くの望ましい特性を持つ治療的に有用なＤＫＫ１アンタゴニスである。例えば、ＤＫＫ１抗体は、骨芽細胞の活性のマーカーであるアルカリホスファターゼのＤＫＫ１媒介性の阻害を遮断し、様々な型の癌（例えば非小細胞肺癌）を治療する。

完全長抗体は、天然に存在するように、ジスルフィド結合によって相互に連結された２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子である。それぞれの鎖のアミノ末端部分は、そこに含有される相補性決定領域（ＣＤＲ）を介して抗原認識を主として担う約１００～１１０のアミノ酸の可変領域を含む。それぞれの鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主として担う定常領域を決定づける。

ＣＤＲの間には、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と名付けられた、より保存された領域が挟まっている。それぞれの軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で並んでいる。軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と呼ばれ、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基の殆どを含有する。ＬＣＶＲ領域及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付け及び位置決めは、よく知られているＫａｂａｔ番号付け規則に従う。

軽鎖は、カッパ又はラムダとして分類され、当技術分野において知られているように特定の定常領域によって特徴付けられる。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、又はＩｇＥとして抗体のアイソタイプを決定づける。ＩｇＧ抗体は、サブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４にさらに分けることができる。それぞれの重鎖のタイプは、当技術分野においてよく知られている配列を有する特定の定常領域によって特徴付けられる。

本明細書において使用されるように、用語「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）は、抗体が産生される方法ではなく、例えば任意の真核生物、原核生物、又はファージクローンを含む単一のコピー又はクローンに由来する抗体を指す。本発明のＭａｂは、好ましくは、均一の又は実質的に均一の集団で存在する。完全Ｍａｂは、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含有する。

他に指定のない限り、用語「ＤＫＫ１抗体」は、完全長抗体及びＤＫＫ１抗体の抗原結合断片の両方を包含する。

このようなモノクローナル抗体の「抗原結合断片」としては、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）₂断片及び１本鎖Ｆｖ断片並びにＤＫＮ－０１ ＣＤＲを利用し得る二特異性及び／又は多価抗体が挙げられる。モノクローナル抗体及びその抗原結合断片は、例えば組換え技術、ファージディスプレー技術、合成技術、例えばＣＤＲグラフティング、若しくはそのような技術の組み合わせ又は当技術分野において知られている他の技術によって産生することができる。例えば、マウスは、ヒトＤＫＫ１又はその断片により免疫化することができ、結果として生じる抗体は、回収し、精製することができ、それらが本明細書において開示される抗体化合物に類似する又はそれと同じ結合特性及び機能的な特性を持つかどうかの決定は、当技術分野において知られている方法によって判断することができる。抗原結合断片もまた、従来の方法によって調製することができる。抗体及び抗原結合断片を産生する及び精製する方法は、当技術分野においてよく知られており、例えばＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ｃｈａｐｔｅｒｓ５－８ ａｎｄ １５，ＩＳＢＮ ０－８７９６９－３１４－２において見つけることができる。

本明細書において開示されるモノクローナルＤＫＫ１抗体は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを囲む、実質的にヒト又は完全にヒトであるフレームワーク領域を含むよう改変される。そのようなヒト改変抗体の「抗原結合断片」は、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）₂断片、及び単鎖Ｆｖ断片を含む。「フレームワーク領域」又は「フレームワーク配列」は、フレームワーク領域１～４のいずれか１つを指す。本明細書において開示される抗体によって包含されるヒト改変抗体及びその抗原結合断片は、任意の１つ又はそれ以上のフレームワーク領域１～４が実質的に又は完全にヒトである、すなわち、実質的に又は完全にヒトのフレームワーク領域１～４の個々の考え得る組み合わせのいずれかが存在する分子を含む。例えば、これは、フレームワーク領域１及びフレームワーク領域２、フレームワーク領域１及びフレームワーク領域３、フレームワーク領域１、２、及び３などが実質的に又は完全にヒトである分子を含む。実質的にヒトのフレームワークは、知られているヒト生殖細胞系列フレームワーク配列と少なくとも約８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、知られているヒト生殖細胞系列フレームワーク配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、又は約９９％の配列同一性を有する。

本明細書において開示される抗体に加えて類似する機能的な特性を示すヒト改変抗体は、いくつかの様々な方法を使用して生成することができる。本明細書において開示される特異的な抗体化合物は、さらなる抗体化合物を調製するための鋳型又は親抗体化合物として使用することができる。１つのアプローチでは、親抗体化合物ＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトフレームワークの中に移植される。新たなフレームワークの配列同一性は、一般に、親抗体化合物における対応するフレームワークの配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９９％同一になるであろう。この移植は、親抗体の結合親和性と比較して、結合親和性の低下をもたらすかもしれない。この場合には、フレームワークは、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２８６９によって開示される特定の基準に基づいて、ある位置で親フレームワークに復帰突然変異させることができる。マウス抗体をヒト化するのに有用な方法を記載するさらなる参考文献は、米国特許第４，８１６，３９７号明細書；米国特許第５，２２５，５３９明細書及び米国特許第５，６９３，７６１号明細書；Ｌｅｖｉｔｔ（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５－６２０において記載されるコンピュータープログラムＡＢＭＯＤ及びＥＮＣＡＤ；並びにＷｉｎｔｅｒ及び共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６）を含む。復帰突然変異を考慮するべき残基を同定する方法は、当技術分野において知られている（例えば米国特許第８，１４８，４９８号明細書を参照）。

本明細書中に記載の治療方法で投与されるＤＫＫ１抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲは、ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ配列を有する。

一実施形態では、ＤＫＫ１抗体は、配列番号１のアミノ配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号２のアミノ配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号３のアミノ配列を有するＬＣＤＲ３、配列番号４のアミノ配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号５のアミノ配列を有するＨＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ配列を有するＨＣＤＲ３を含む。

別の実施形態では、ＤＫＫ１抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。特定の実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＶＲは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。

さらなる実施形態では、ＤＫＫ１抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）及び配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。それぞれ配列番号１７及び配列番号１８のＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含むＤＫＫ１抗体又はその抗原結合断片は、本明細書においてＤＫＮ－０１と呼ばれる。特に、ＤＫＮ－０１は、分子／実験式Ｃ₆₃₉₄Ｈ₉₈₁₀Ｎ₁₆₉₈Ｏ₂₀₁₂Ｓ₄₂及び１４４０１５ダルトンの分子量（未変化）を有する。

ある実施形態では、本明細書において開示されるＤＫＫ１抗体は、配列番号２２において示される配列を含むヒトＤＫＫ１に対して中和活性を有するＩｇＧ₄抗体又はその断片である。例えば、古典的Ｗｎｔシグナル伝達は、骨芽細胞の分化及び活性にとって重大である。ＢＭＰ－４と結合したＷｎｔ－３ａは、多能性マウスＣ２Ｃ１２細胞を、骨芽細胞の活性のマーカーであるアルカリホスファターゼ（「ＡＰ」）の測定可能なエンドポイントを有する骨芽細胞に分化するように誘発する。ＤＫＫ１は、古典的Ｗｎｔシグナル伝達の阻害剤であり、分化及びＡＰの産生を阻害する。中和ＤＫＫ１抗体は、ＡＰのＤＫＫ１媒介性の阻害を予防する。ＤＫＫ１阻害活性を遮断する抗体は、ＡＰ活性の損失を予防する（米国特許第８，１４８，４９８号明細書を参照）。特定の実施形態では、中和活性を持つＤＫＫ１抗体は、ＤＫＮ－０１であり、これはＩｇＧ₄抗体である。

本明細書において開示されるＤＫＫ１抗体は、米国特許第８，１４８，４９８号明細書において記載されるように、ＤＫＫ１（例えばヒトＤＫＫ１、配列番号２２）に対して高い親和性（Ｋｄ）を持つ。例えば、本発明のＤＫＫ１抗体は、３７℃で０．５×１０^-12Ｍ及び３．０×１０^-11Ｍの間のＫｄを持つ。

ペムブロリズマブ
ペムブロリズマブは、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）受容体への結合の高い特異性を有する強力なヒト化ＩｇＧ₄ ｍＡｂであり、従ってプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びプログラム細胞死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）とのその相互作用を阻害する。前臨床インビトロデータに基づき、ペムブロリズマブは、ＰＤ－１に対する高親和性で強力な受容体遮断活性を有する。ペムブロリズマブは、許容可能な前臨床安全性プロファイルを有し、進行した悪性腫瘍に対するＩＶ免疫療法として臨床開発中である。その商品名キイトルーダ（商標）で知られるペムブロリズマブは、多くの適応症にわたり患者の治療に適応される。さらに、ペムブロリズマブは、食道癌を含む胃腸癌の患者において研究されている。予備的であるが、食道癌患者において有望な知見が確かめられている（Ｂｉｌｇｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＰＤ－１ ｐａｔｈｗａｙ：ａ ｎｅｗ ｈｏｐｅ ｆｏｒ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｏｐｉｎ．２０１７；３３（４）：７４９－７５９．；Ｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌｌｙ Ｉｎｖａｓｉｖｅ Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ Ｃａｎｃｅｒ．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｓｕｒｇ．２０１７ Ｍａｒ ７［印刷前にオンラインで先行公開］；Ｃｈａｕ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｒｉｍ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ（ｐｔｓ）ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｊｕｎｃｔｉｏｎ（Ｇ／ＧＥＪ）ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｆｒｏｍ ａ ｍｕｌｔｉｃｏｈｏｒｔ ｐｈａｓｅ １ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ （Ｒ）ｐｌｕｓ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ（Ｐ）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．３５，２０１７（ｓｕｐｐｌ ４Ｓ；ａｂｓｔｒａｃｔ １０２））。２０１７年５月に、ペムブロリズマブは、腫瘍の組織タイプ又は部位に関係なく、ある一定の遺伝子の質を伴うあらゆる切除不能な又は転移性の固形腫瘍に対して承認された。２０１７年９月に、腫瘍がＰＤ－Ｌ１を発現する、再発性の局所的に進行性であるか又は転移性の胃又は食道胃接合部の腺癌がある患者における胃癌の治療に対してペムブロリズマブが承認された。

結果としてマイクロサテライト不安定性が起こることが多いＤＮＡミスマッチ修復を引き起こす突然変異を有する腫瘍は、腫瘍抗原となり得る多くの突然変異したタンパク質を産生する傾向があり；ペムブロリズマブは、自己チェックポイント系がこの排除を阻止することを防ぐことによって、免疫系による何らかのこのような腫瘍の排除を促進すると思われる。

本明細書中で使用される場合、「タキサン」という用語は、パクリタキセル、ドセタキセル、カルバジタキセル及び抗悪性腫瘍特性を保持するそれらの誘導体を含む。例えば、「パクリタキセル」は、天然由来及び化学合成の両方のパクリタキセルを含む。パクリタキセルは、ＴＡＸＯＬ（登録商標）として販売される。本明細書中に記載の本発明での使用に適切な誘導体化パクリタキセルとしては、脱酸素化パクリタキセル化合物、例えば米国特許第５，４４０，０５６号明細書に記載のものなど、アルブミン結合パクリタキセル（アブラキサン）、ＤＨＡ－パクリタキセル及びＰＧ－パクリタキセルが挙げられる。パクリタキセル及びその誘導体に対する化学式は、当技術分野で公知であり、記載されている。他のタキサン化合物は、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔａｘｏｌ ｏｔｈｅｒ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」，Ｄ．Ｇ．Ｉ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．２６，題名「Ｎｅｗ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（１９８６），Ａｔｔａ－ｕｒ－Ｒａｂｍａｎ，Ｐ．Ｗ．ｌｅ Ｑｕｅｓｎｅ，Ｅｄｓ．（Ｅｌｖｅｓｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ １９８６），ｐｐ．２１９－２３５で開示されている。また、例えば米国特許第５，５６９，７２９号明細書；同第５，５６５，４７８号明細書；同第５，５３０，０２０号明細書；同第５，５２７，９２４号明細書；同第５，５０８，４４７号明細書；同第５，４８９，５８９号明細書；同第５，４８８，１１６号明細書；同第５，４８４，８０９号明細書；同第５，４７８，８５４号明細書；同第５，４７８，７３６号明細書；同第５，４７５，１２０号明細書；同第５，４６８，７６９号明細書；同第５，４６１，１６９号明細書；同第５，４４０，０５７号明細書；同第５，４２２，３６４号明細書；同第５，４１１，９８４号明細書；同第５，４０５，９７２号明細書；及び同第５，２９６，５０６号明細書も参照。「ドセタキセル」という用語は、天然由来及び化学合成の両方の化合物ドセタキセルを含む。ドセタキセルはタキソテール（登録商標）としても販売されている。

投与方式
本発明の方法又は組成物での使用のためのＤＫＫ１抗体及びＤＫＫ１抗体と組み合わせて使用される他の治療剤（例えばペムブロリズマブ、パクリタキセル、シスプラチン、ゲムシタビンなど）は、非経口、経口、経皮、舌下、頬側、直腸、鼻腔内、気管支内又は肺内投与のために処方され得る。

非経口投与については、本発明の方法又は組成物において使用される化合物は、注射若しくは注入、例えば静脈内、筋肉内、若しくは皮下注射若しくは注入のために又はボーラス投与及び／若しくは注入（例えば連続注入）における投与のために製剤することができる。任意選択で、懸濁化剤、安定化剤、及び／又は分散剤などのような他の調合剤を含有する油性又は水性ビヒクル中の懸濁剤、水剤、又はエマルションを使用することができる。

経口投与については、化合物は、結合剤（例えばポリビニルピロリドン若しくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（例えばラクトース、結晶セルロース、若しくはリン酸カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、滑石、若しくはシリカ）；崩壊薬（例えばデンプングリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）などのような薬学的に許容され得る賦形剤と共に従来の手段によって調製される錠剤又はカプセルの形態とすることができる。所望の場合、錠剤は、適した方法を使用してコーティングすることができる。経口投与のための液体調製物は、水剤、シロップ、又は懸濁剤の形態を取ることができる。液体調製物は、懸濁化剤（例えばソルビトールシロップ、メチルセルロース、又は硬化食用脂）；乳化剤（例えばレシチン又はアラビアゴム）；非水性ビヒクル（例えば扁桃油、油性エステル、又はエチルアルコール）；及び保存剤（例えばメチル若しくはプロピルｐ－ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸）などのような薬学的に許容され得る添加剤と共に従来の手段によって調製することができる。

頬投与については、本発明の方法又は組成物において使用される化合物は、従来のやり方で製剤される錠剤又はロゼンジの形態を取ることができる。

直腸投与については、本発明の方法又は組成物において使用される化合物は、坐剤の形態を取ることができる。

舌下投与については、錠剤は、従来の方式で製剤することができる。

鼻内、気管支内、又は肺内投与については、従来の製剤を用いることができる。

さらに、本発明の方法又は組成物において使用される化合物は、徐放性調製物で製剤することができる。例えば、化合物は、活性薬剤化合物に持続性の特性及び／又は制御放出特性を提供するのに適したポリマー又は疎水性材料と共に製剤することができる。そのため、本発明の方法において使用される化合物は、例えば注射による微粒子の形態で又は移植によるオブラート若しくはディスクの形態で投与することができる。制御放出薬剤調製物を製剤する様々な方法は、当技術分野において知られている。

化合物（例えば、ＤＫＫ１抗体単独又は１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて）、又は薬学的に許容可能なその塩、又は本明細書中に記載の方法を実施するために有用な１つ以上の本発明の化合物（又はその薬学的塩）を含む組成物の投与は、１時間ごと、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、週２回、週１回、２週間に１回、１カ月に１回又は２カ月若しくはそれより長い時間ごとに１回、又はいくつかの他の断続的な投薬レジメンで継続され得る。

化合物又は本発明の１つ若しくはそれ以上の化合物（若しくはその薬学的な塩）を含む組成物の投与の例は、末梢の投与を含む。末梢の投与の例は、経口、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、直腸、経皮、又は鼻内形態の投与を含む。

本明細書において使用されるように、周辺の投与は、頭蓋内投与を除外する、化合物又は本発明の化合物を含む組成物の投与の形態をすべて含む。末梢の投与の例は、経口、非経口（例えば筋肉内、腹腔内、静脈内若しくは皮下注射、長期にわたる放出、緩効性移植片、デポー、及びその他同種のもの）、経鼻、膣、直腸、舌下、又は経皮パッチ適用を含む局所投与ルート、並びにその他同種のものを含むがこれらに限定されない。

併用療法
本発明の方法又は組成物での使用のためのＤＫＫ１抗体及び１つ以上の第２の治療剤（例えばペムブロリズマブ、パクリタキセル、シスプラチン、ゲムシタビンなど）は、非経口、経口、経皮、舌下、頬側、直腸、鼻腔内、気管支内又は肺内投与のために個別に又は組み合わせて処方され得る。

ペムブロリズマブと組み合わせて食道胃癌（例えば食道癌又は胃腺癌）を治療するために、本明細書中で開示されるＤＫＫ１抗体を使用し得る。そのような併用投与は、ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブを含む単一の投薬形態によるものとすることができ、そのような単一の投薬形態は、錠剤、カプセル、スプレー、吸入パウダー、注射用の液剤、又はその他同種のものを含む。併用投与は、単一の投薬形態に加えて、さらなる追加の薬剤（例えば化学療法剤）を含むことができる。その代わりに、併用投与は、２つの異なる投薬形態の投与によるものとすることができ、一方の投薬形態は、ＤＫＫ１抗体を含有し、他方の投薬形態は、第２の量のペムブロリズマブを含む。この事例では、投薬形態は、同じであってもよい又は異なっていてもよい。併用療法を限定することを望むものではないが、以下のものが、用いられてもよい、ある併用療法を例証する。必要とされる第２の量のペムブロリズマブ以上のさらなる化学療法剤を本明細書において記載される方法において用いることができることが理解される。

第２の量のペムブロリズマブは、ＤＫＫ１抗体の投与の前に、それと同時に、又はその後に投与することができる。従って、ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブは、単一の製剤において一緒に投与することができる又は別個の製剤において、例えば同時に又は連続して又はその両方で投与することができる。例えば、ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブが、別個の組成物において連続して投与される場合、ＤＫＫ１抗体は、ペムブロリズマブの前に又はその後に投与することができる。ＤＫＫ１抗体及び第２の量のペムブロリズマブの投与の間の時間は、当業者によって容易に決定されるであろう。ある実施形態では、ＤＫＫ１抗体は、ペムブロリズマブに先行する又はすぐに若しくは当業者によって適切であるとみなされる時間の後、ペムブロリズマブの後に続けることができる。

そのうえ、ＤＫＫ１抗体及び第２の量のペムブロリズマブは、類似する投薬スケジュールで投与されても、投与されなくてもよい。例えば、ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブは、ＤＫＫ１抗体がペムブロリズマブよりも高い頻度で投与される又はペムブロリズマブがＤＫＫ１抗体よりも高い頻度で投与されるように、異なる半減期を有してもよい及び／又は異なる時間尺度で作用してもよい。例えば、ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブは、ある日、一緒に投与することができ（例えば単一の投薬で又は連続して）、設定した日数の後に、化学療法剤（又は異なる化学療法薬）のみの投与が続く。治療剤の投与間の日数は、各薬物の安全性、薬物動態及び薬力学に従い、適切に決定され得る。急性又は慢性的にＤＫＫ１抗体又はペムブロリズマブのいずれかを投与し得る。

特定の実施形態では、ＤＫＮ－０１及びペムブロリズマブの併用治療のための治療期間は２１日サイクルであり、これは、患者がこの併用療法から臨床的利益を全く得られていないと判断されるまで反復され得る。例えば、患者は、約１サイクル～約３０サイクルの治療（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０）を受け得る。別の実施形態では、対象は、婦人科癌に対して治療されている。治療は、本明細書中に記載の臨床治験に従い、ＤＫＮ－０１などのＤＫＫ１抗体及びパクリタキセルの併用投与を含む。

本明細書において使用されるように、「有効量」は、標的障害を治療するのに治療的に又は予防的に十分な治療剤又は治療剤の組み合わせの量を指す。有効量は、患者の年齢、性別、及び体重、患者の現在の医学的状態、並びに治療されている食道癌又は胃癌の性質に依存するであろう。当業者らは、これらの及び他の因子に依存して適切な投薬量を決定することができるであろう。

例となる実施形態では、それを必要とする対象は、単剤療法を受け（即ち第１の量の第１の治療剤を投与されている）、第１の治療剤の第１の量が有効量となる。別の例となる実施形態では、それを必要とする対象は、併用療法を受け、例えば第１の量の第１の治療剤及び第２の量の第２の治療剤が投与されており、この第１の量及び第２の量が、組み合わせられて有効量となる。さらなる実施形態では、併用療法は、第３の量の第３の治療剤を使用し得、第１の量、第２の量及び第３の量が組み合わせられて有効量となる。

ＤＫＫ１抗体（又は薬学的に許容可能なその塩、水和物又は溶媒和物）の第１の量及びペムブロリズマブの第２の量の同時投与によって、本発明の方法又は組成物において有効量が達成され得る。一実施形態では、ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブは、個々の有効量でそれぞれ（例えば、単独投与される場合に治療的に有効となる量でそれぞれ）投与される。別の実施形態では、ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブのそれぞれは、単独では治療効果を提供しない量（治療用量未満）で投与される。また別の実施形態では、ＤＫＫ１抗体は有効量で投与され得、一方でペムブロリズマブは治療用量未満で投与される。さらに別の実施形態では、ＤＫＫ１抗体は、治療用量未満で投与され得、一方でペムブロリズマブは有効量で投与される。

ＤＫＫ１抗体についての１回の投与当たりの適した用量は、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２４２５ｍｇ、約２４５０ｍｇ、約２４７５ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２５２５ｍｇ、約２５５０ｍｇ、約２５７５ｍｇ、約２６００ｍｇ、又は約３，０００ｍｇ又はそれ以上の用量を含む。それぞれの適した用量は、当業者によって適切であるとみなされる期間にわたって投与することができる。例えば、それぞれの適した用量は、約３０分間且つ約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、又は約８時間以内の期間にわたって投与することができる。特定の実施形態では、ＤＫＫ１抗体（例えばＤＫＮ－０１）に対する適切な用量は、約５０ｍｇ～約３００ｍｇ（５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ又は３００ｍｇなど）であり得る。選択される用量は、約３０分～約２時間にわたり静脈内投与され得る。特定の実施形態では、ＤＫＫ１抗体に対する適切な用量は、約１５０ｍｇであり得、約３０分～約２時間にわたり投与され得る。ＤＫＫ１抗体に対する別の適切な用量は、約３００ｍｇであり得、約３０分～約２時間にわたり投与され得る。引用される時間にわたるこれらの用量の投与は、静脈内経路を使用して遂行され得る。

ペムブロリズマブに対する投与あたりの適切な用量は、ラベル上で見出される推奨される投与に基づいて決定され得る。例えば、ペムブロリズマブの投与あたりの適切な用量は、静脈内で少なくとも３０分にわたり、約５０ｍｇ～約２００ｍｇである。この投与は、３週間ごとに反復され得る。特定の実施形態では、投与あたりの適切な用量は、静脈内経路を使用した３０分の点滴時間にわたり約２００ｍｇである。この用量は３週間ごとに反復され得る。ペムブロリズマブの他の適切な用量としては、２ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ（３週間ごと）、１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ（３週間ごと）及び１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗ（２週間ごと）が挙げられる。特定の実施形態では、ペンブロリキスマブの用量は静脈内で２００ｍｇである。一態様では、３０分間にわたり２００ｍｇが投与される。

タキサン（例えばパクリタキセル）に対する投与あたりの適切な用量は、ラベル上で見出される推奨される投与に基づき決定され得る。例えば、パクリタキセルの投与あたりの適切な用量は、約２００ｍｇ／ｍ２～約２０ｍｇ／ｍ²である。特定の実施形態では、パクリタキセルの用量は８０ｍｇ／ｍ²である。タキサン（例えばパクリタキセル）は静脈内投与され得る。静脈内投与は、約１時間にわたり得る。

ゲムシタビンに対する投与あたりの適切な用量は、ラベル上で見出される推奨される投与に基づき決定され得る。例えば、ゲムシタビンの投与あたりの適切な用量は、約２０００ｍｇ／ｍ²～約５００ｍｇ／ｍ²である。特定の実施形態では、ゲムシタビンの用量は１０００ｍｇ／ｍ²である。

シスプラチンに対する投与あたりの適切な用量は、ラベル上で見出される推奨される投与に基づき決定され得る。例えばシスプラチンの投与あたりの適切な用量は、約１０ｍｇ／ｍ²～約４０ｍｇ／ｍ²である。特定の実施形態では、シスプラチンの用量は２０ｍｇ／ｍ²である。

本明細書において使用されるように、用語「対象」は、哺乳動物、好ましくはヒトを指すが、また、獣医の治療を必要とする動物、例えばコンパニオンアニマル（例えばイヌ、ネコ、及びその他同種のもの）、家畜（例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、及びその他同種のもの）、並びに実験動物（例えばラット、マウス、モルモット、及びその他同種のもの）を意味することもできる。「対象」及び「患者」という用語は本明細書中で交換可能に使用される。特定の実施形態では、対象は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体（例えばペムブロリズマブ、ニボルマブ アテゾリスマグ（ａｔｅｚｏｌｉｓｕｍａｇ）、デュルバルマブ又はアベルマブ）で以前に治療されており、対象の疾患は、このような以前の治療に対して抵抗性である。

本明細書において使用されるように「治療すること」は、食道癌又は胃腺癌に関する臨床的な徴候の進行を遅延させること、阻害すること、又は予防することを部分的に又は実質的に実現することを含む。例えば、「治療すること」は、例えばコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、胸部Ｘ線検査、及びＣＴ／ポジトロン断層撮影（ＣＴ／ＰＥＴ）スキャンを含む、当技術分野において知られている標準的な画像法によって検出され、当技術分野において知られているガイドライン及び方法に従って評価されるように、腫瘍成長の低下又はさらなる成長の予防を含む。例えば、治療に対する応答は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）（Ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｖｅｒｓｉｏｎ １．１；Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４５（２）：２２８－４７，２００９を参照）を通して評価することができる。従って、いくつかの実施形態では、「治療」することは、すべての標的病変の消失としてＲＥＣＩＳＴガイドラインに従って定義される完全奏効（ＣＲ）又はベースライン径和を基準とし、標的病変の径の和の少なくとも３０％の減少として定義される部分奏効（ＰＲ）を指す。治療に対する腫瘍応答を評価するための他の手段は、腫瘍マーカーの評価及びパフォーマンスステータスの評価を含む（例えばクレアチニンクリアランスの判断；Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ ａｎｄ Ｇａｕｌｔ，Ｎｅｐｈｒｏｎ．１６：３１－４１，１９７６を参照）。

医薬組成物
ＤＫＫ１抗体及びペムブロリズマブは、投与に適した医薬組成物の中に組み込むことができる。そのような組成物は、典型的に、抗体又はペムブロリズマブ、１つ若しくはそれ以上の追加の化学療法剤、その任意の組み合わせ、及び薬学的に許容され得るキャリヤを含む。本明細書において使用されるように、用語「薬学的に許容され得るキャリヤ」は、医薬の投与と適合性である任意の及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、並びにその他同種のものを含むことが意図される。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体及び作用物質の使用は、当技術分野においてよく知られている。任意の従来の媒体又は作用物質が活性化合物と不適合性である場合を除いて、その組成物における使用が、企図される。

本発明の医薬組成物は、投与のその意図されるルートと適合性となるように製剤される。投与のルートの例は、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（局所）、経粘膜、及び直腸投与を含む。非経口、皮内、又は皮下適用のために使用される水剤又は懸濁剤は、以下の構成成分を含むことができる：注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶剤などのような滅菌希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどのような抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどのような酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのようなキレート剤；酢酸、クエン酸、又はリン酸などのようなバッファー、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなどのような張性の調節のための作用物質。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどのような、酸又は塩基により調節することができる。非経口調製物は、ガラス又はプラスチックから作製されるアンプル、使い捨ての注射器、又は複数用量のバイアル中に密封することができる。

注射用の使用に適した医薬組成物は、滅菌水性水剤（水溶性）又は分散剤及び滅菌注射用水剤又は分散剤の即時調製のための滅菌パウダーを含む。静脈内投与については、適したキャリヤは、生理的食塩水、静菌性の水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ）、又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合において、組成物は、滅菌されていなければならず、容易な注射針通過が見られる程度まで流動性であるべきである。それは、製造及び保存の条件下で安定していなければならず、細菌及び真菌などのような微生物の混入作用から保護されなければならない。キャリヤは、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール、並びにその他同種のもの）、並びにその適した混合物を含有する溶媒又は分散媒とすることができる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのようなコーティングの使用によって、分散剤の場合には、必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール、及びその他同種のものによって実現することができる。多くの場合において、組成物において、等張剤、例えば糖、マンニトールなどのような多価アルコール、ソルビトール、及び塩化ナトリウムを含むことは好ましいであろう。注射用の組成物の長期間の吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含むことによって、もたらすことができる。

滅菌注射溶液は、上述の１つの成分又は成分の組み合わせとともに、活性化合物（例えばＤＫＫ１抗体単独又はペムブロリズマブと組み合わせたＤＫＫ１抗体、パクリタキセルと組み合わせたＤＫＫ１抗体、ゲムシタビン及びシスプラチンと組み合わせたＤＫＫ１抗体）を適切な溶媒中で必要な量で組み込み、必要に応じて続いてろ過滅菌することにより調製し得る。一般に、分散剤は、塩基性分散媒及び上記に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルの中に、活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用水剤の調製のための滅菌パウダーの場合には、調製の好ましい方法は、活性成分及び任意のさらなる所望の成分のパウダーをその予め滅菌ろ過された水剤から産出する真空乾燥及び凍結乾燥である。

経口組成物は、一般に、不活性希釈剤又は食用のキャリヤを含む。それらは、ゼラチンカプセル中に密封することができる又は錠剤の中に圧縮することができる。経口治療投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ、又はカプセルの形態で使用することができる。経口組成物はまた、口腔洗浄薬としての使用のために、液体キャリヤを使用して調製することができ、液体キャリヤ中の化合物は、経口的に適用され、すばやくすすがれ、吐かれる又は飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤及び／又は補助材料は、組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチ、及びその他同種のものは、類似する性質の以下の成分又は化合物のいずれかを含有することができる：結晶セルロース、トラガカントゴム、若しくはゼラチンなどのようなバインダー；デンプン若しくはラクトースなどのような賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、若しくはコーンスターチなどのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム若しくはＳｔｅｒｏｔｅｓなどのような潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などのような滑剤；スクロース若しくはサッカリンなどのような甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチル、若しくはオレンジ矯味剤などのような調味料。

吸入による投与については、化合物は、適した噴射剤、例えば二酸化炭素などのようなガスを含有する加圧容器若しくはディスペンサー又はネブライザーからのエアロゾル噴霧剤の形態で送達される。

全身投与はまた、経粘膜又は経皮手段によるものとすることもできる。経粘膜又は経皮投与については、透過する障壁に適切な浸透剤が、製剤中に使用される。そのような浸透剤は、当技術分野において一般に知られており、例えば、経粘膜投与については、洗浄剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、経鼻噴霧剤又は坐剤の使用を通して達成することができる。

経皮投与については、活性化合物は、当技術分野において一般に知られている外用薬、軟膏剤、ゲル、又はクリームの中に製剤される。

化合物はまた、坐剤（例えば、カカオバター及び他のグリセリドなどのような従来の坐剤基剤と共に）又は直腸送達のための保持浣腸剤の形態で調製することができる。

一実施形態において、活性化合物は、移植片及びマイクロカプセル化された送達系を含む放出制御製剤などのような、身体からの急速な排除から化合物を防御し得るキャリヤと共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などのような、生分解性で生体適合性のポリマーを、使用することができる。そのような製剤の調製のための方法は、当業者らに明らかであろう。材料はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｎｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販で得ることができる。リポソーム懸濁剤（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞を標的にするリポソームを含む）もまた、薬学的に許容され得るキャリヤとして使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書において記載されるように、当業者らに知られている方法に従って調製することができる。

投与の容易性及び投薬量の均一性のために投薬単位形態で経口又は非経口組成物を製剤することはとりわけ有利である。本明細書において使用される投薬単位形態は、治療されることになっている対象に対する単一の投薬に適した物理的に個別の単位を指し、それぞれの単位は、必要とされる医薬キャリヤと関連して、所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態についての規格は、活性化合物の特有の特徴及び実現されるべき特定の治療効果並びに個人の治療のためにそのような活性化合物を合成することについての当技術分野における固有の制限によって必然的に決められ、それらに直接、依存する。

配列
次のものは、本明細書中に記載の様々な例となる実施形態の実施において使用され得るＤＫＮ－０１抗体の配列である。
ＬＣＤＲ１
Ｈｉｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｈｉｓ（配列番号１）
ＬＣＤＲ２
Ｔｙｒ Ｘａａ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｘａａ Ｇｌｎ（配列番号２）
２位のＸａａは、Ｇｌｙ又はＡｌａであり、６位のＸａａは、Ｉｌｅ又はＧｌｕである。
ＬＣＤＲ３
Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｘａａ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｈｉｓ（配列番号３）
４位のＸａａは、Ｇｌｕ又はＡｌａである。
ＨＣＤＲ１
Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｓｅｒ（配列番号４）
ＨＣＤＲ２
Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ（配列番号５）
ＨＣＤＲ３
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｘａａ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｉｌｅ（配列番号６）
４位のＸａａは、Ｈｉｓ又はＡｓｎである。
ＬＣＶＲ

５１位のＸａａは、Ｇｌｙ又はＡｌａであり、５５位のＸａａは、Ｉｌｅ又はＧｌｕであり、９２位のＸａａは、Ｇｌｕ又はＡｌａである。
ＨＣＶＲ

１０２位のＸａａは、Ｈｉｓ又はＡｓｎである。
ＬＣＶＲ

ＨＣＶＲ

ＬＣＶＲ

ＨＣＶＲ

ＬＣＶＲ

ＬＣＶＲ

ＨＣ

ＬＣ

ＨＣ

ＬＣ

ＨＣ

ＬＣ

ＬＣ

ヒトＤＫＫ１アミノ酸配列

実例
臨床試験の説明
以下で詳しく論じるデータは、３つの個別の臨床試験からの結果であった。この３つの個別の臨床試験は、治療している癌のタイプが異なっていた。この３つの臨床試験は、食道胃癌、婦人科癌及び胆道癌の治療を対象とした。各試験において、単独で又は少なくとも１つの他のさらなる治療剤と組み合わせてのいずれかで、１５０ｍｇのＤＫＮ－０１を受けた２名の患者を除き、３００ｍｇのＤＫＮ－０１を患者に投与した。以下で詳細に各試験を論じる。

食道胃癌
対象：組織学的に確認された再発性又は転移性食道又は食道胃接合部（ＧＥＪ）又は胃腺癌を有する男女の患者。

治療レジメン：
ａ）併用療法－ＤＫＮ－０１及びパクリタキセル、２８日周期：標準的な臨床診療に従い、中断なく各周期の第１日及び第１５日に最短３０分間～最長２時間で３００ｍｇのＤＫＮ－０１をＩＶ投与＋第１、８、１５及び２２日に１時間にわたりパクリタキセルをＩＶ投与した。ＤＫＮ－０１を最初に投与し、続いてパクリタキセルを投与した。ＤＫＮ－０１の用量は３００ｍｇであった。パクリタキセルの用量は８０ｍｇ／ｍ²であった。
ｂ）併用療法－ＤＫＮ－０１及びペムブロリズマブ、２１日周期：標準的な臨床診療に従い、中断なく各周期の第１日及び第１５日に最短３０分間～最長２時間で３００ｍｇのＤＫＮ－０１をＩＶ投与＋各周期の第１日に３０分間にわたりペムブロリズマブをＩＶ投与した。２名の患者には１５０ｍｇ ＤＫＮ－０１を投与した。ＤＫＮ－０１を最初に投与し、続いてペムブロリズマブを投与した。
ｃ）単剤療法－ＤＫＮ－０１、２８日周期：各周期の第１日及び第１５日に最短３０分間～最長２時間で３００ｍｇのＤＫＮ－０１をＩＶ投与した。

患者の試験参加期間には、スクリーニング期間、治療期間（上記のように２１日周期又は２８日周期のいずれか）及びフォローアップ期間が含まれる。フォローアップ期間に対して、試験治療の最後の投与後３０日以内に来院の予定を入れた。患者は、この来院時に、健康診断、併用薬レビュー（ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｖｉｅｗ）、ＥＣＯＧ ＰＳ、バイタルサイン、臨床安全性臨床検査、血清妊娠検査、１２－誘導ＥＣＧ、固形腫瘍測定及び放射線学的評価を行う。ランダムサンプルとして薬物動態及び薬力学評価のための１点採血を行った。試験治療中断後の長期フォローアップ、病態進行がない患者は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１ガイドラインを使用した疾患進行、死亡まで、又は試験終了まで、腫瘍レソンス（ｒｅｓｏｎｓｅ）に対する評価を含め、日常的な臨床診療につき１２週間ごとに監視を継続した。

有効性評価：
併用療法の抗腫瘍活性を次のように評価した。

腫瘍測定のために次の放射線学的検査のうち１つ以上により各患者を評価した：
・コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン
・ＭＲＩ
・胸部Ｘ線
・ＣＴ／陽電子放射断層撮影（ＣＴ／ＰＥＴ）スキャン（実現可能な場合は必ず、この試験を通じて使用すべき好ましいイメージングモダリティーはＣＴ／ＰＥＴスキャンである）。

固形腫瘍のベースライン放射線学的評価を行い、サイクル３の開始前及びその後は各奇数回サイクルに反復し、ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１（Ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ １．１；Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．２００９）を使用して腫瘍応答及び進行について評価した。ＤＫＮ－０１及びペムブロリズマブの併用療法を受けている患者に対して、Ｉｍｍｕｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ Ｒｅｓｏｎｓｅ Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ｉＲＥＣＩＳＴ）を使用して一部の例で腫瘍応答及び進行を評価した（Ｓｅｙｍｏｕｒ Ｌ，Ｂｏｇａｅｒｔｓ Ｊ，Ｐｅｒｒｏｎｅ Ａ，ｅｔ ａｌ．ｉＲＥＣＩＳＴ：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｒｅｓｏｎｓｅ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ ｔｒｉａｌｓ ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ ２０１７；１８（３）：ｅ１４３－ｅ１５２を参照）。

ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１に従い、標的病巣の評価を次のように特徴付けた：

完全奏効（ＣＲ）：すべての標的病巣の消失。病理的リンパ節のいずれも（標的であるか又は標的でないかにかかわらず）単軸が＜１０ｍｍまで縮小しなければならない。腫瘍マーカーの結果が正常化しなければならない。

部分奏効（ＰＲ）：ベースラインの合計直径を基準として、標的病巣の径和が少なくとも３０％縮小。

病態進行（ＰＤ）：試験時の最小合計を対照として、標的病巣の径和が少なくとも２０％拡大（ベースライン径和が最小である場合、ベースライン径和をインクディング（ｉｎｃｄｉｎｇ））。２０％の相対的拡大に加えて、合計がまた、少なくとも５ｍｍの絶対的拡大を示さなければならない。１つ以上の新しい病巣の出現も進行とみなされる。

安定状態（ＳＤ）：試験中の最小径和を基準として、ＰＲの条件を満たすための十分な縮小も、ＰＤの条件を満たすための十分な拡大もない。

評価不能（ＮＥ）：標的病巣の不完全な放射線学的評価が行われるか又はベースラインからの測定方法の変化がある場合。（ＮＥは未実施／欠測も指し得る）。

婦人科癌
対象：上皮性の子宮内膜癌（ＥＥＣ）及び卵巣上皮癌（ＥＯＣ）の女性患者。ＥＥＣの患者は、再発性の以前に治療されたＥＥＣの組織学的に確認された診断がなければならない（原発外科標本又は再発に対する生検のいずれかによる）。ＥＯＣの患者は、再発性の白金耐性／抵抗性ＥＯＣ、原発性腹膜又は卵管癌（即ち白金ベースの化学療法の完了６カ月以内の疾患再発又は白金ベースの化学療法中の進行）の組織学的に確認された診断（原発外科標本又は再発に対する生検のいずれかによる）がなければならない。

治療レジメン：
ａ）ＤＫＮ－０１単剤療法－２８日サイクル：２８日周期の第１日及び第１５日に３００ｍｇ ＤＫＮ－０１。最短３０分間～最長２時間にわたりＤＫＮ－０１を静脈内投与した。
ｂ）併用療法－ＤＫＮ－０１及びパクリタキセル、２８日周期：３００ｍｇのＤＫＮ－０１及び８０ｍｇ／ｍ²。２８日周期の第１日及び第１５日に、３００ｍｇのＤＫＮ－０１を最短３０分間～最長２時間にわたり静脈内投与した。標準的な臨床診療に従い、各２８日周期の第１、８及び１５日にパクリタキセルを１時間にわたり静脈内投与した。各サイクルの第１日及び第１５日に、ＤＫＮ－０１を最初に投与し、続いて個別の点滴としてパクリタキセルを投与した。

患者の試験参加期間には、スクリーニング期間、治療期間及びフォローアップ期間が含まれる。フォローアップ期間に対して、治療期間における最後の治療投与後３０日以内に来院の予定を入れた。治療の中断及び病態進行の放射線学的考証の後、死亡、同意の撤回、追跡不能又は試験終了となるまで生存について生存フォローアップ期において全患者を追跡する。生存フォローアップは、治療来院の終了後、年４回（３カ月ごとに）行う。

有効性評価：
各試験に対する主要有効性エンドポイントは、Ｒｅｓｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ，ｖｅｒｓｉｏｎ １．１（ＲＥＣＩＳＴ １．１）（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡ，Ｔｈｅｒａｓｓｅ Ｐ，Ｂｏｇａｅｒｔｓ Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２００９；４５（２）：２２８－２４７を使用することによって評価した場合の奏効率（ＯＲＲ）であった。ＯＲＲは、完全奏効［ＣＲ］＋部分奏効［ＰＲ］）の最良総合効果［ＢＯＲ］である。

各試験における副次有効性エンドポイントは次のとおりであった：
ａ）ＲＥＣＩＳＴ １．１を使用して評価した場合の客観的病勢コントロール率（ＯＤＣＲ）。ＯＤＣＲは、ＣＲ＋ＰＲ＋安定［ＳＤ］＞６週間（ＣＲ＝完全奏効及びＰＲ＝部分奏効）である；
ｂ）ＯＳ（全生存期間）、最初の試験薬投与から何らかの原因での死亡までの時間として定義；
ｃ）ＰＦＳ（無増悪生存期間）、最初の試験薬投与からＲＥＣＩＳＴ １．１を使用して判定した場合の最初の放射線学的に実証された病態進行（ＰＤ）まで又は何らかの原因による死亡までの時間として定義。
ｄ）ＴＴＰ、最初の試験薬投与からＲＥＣＩＳＴ １．１を使用して判定した場合の最初の放射線学的に実証された病態進行の日付までの時間として定義；
ｅ）ＤｏＲ（奏効期間）、最初の奏効（≧ＰＲ）から放射線学的に実証されたＰＤ又は死亡までの時間として定義；ＰＤはＲＥＣＩＳＴ １．１を使用して定義；
ｆ）ＤｏＣＲ（完全奏効期間）、最初のＣＲから放射線学的に実証されたＰＤ又は死亡までの時間として定義；ＰＤはＲＥＣＩＳＴ １．１を使用して定義；
ｇ）ＤｏＣＢ（臨床利益期間）は、ＣＲ、ＰＲ又はＳＤの最初の腫瘍評価から、ＲＥＣＩＳＴ １．１を使用して判定した場合のＰＤの時間まで又は何らかの原因による死亡までの時間として定義；及び
ｈ）ＴＴＴＦは、最初の試験薬投与から、ＰＤ、毒性及び死亡を含む何らかの理由でのＤＫＮ－０１の中断日までの時間として定義。

胆道癌
対象：切除不能、局所的に進行性又は転移性の疾患の臨床及び／又は放射線学的証拠がある肝内若しくは肝外胆道系又は胆嚢に対して原発性の組織学的又は細胞学的に実証された癌腫を有する男女患者。

治療レジメン：併用療法－ＤＫＮ－０１、ゲムシタビン及びシスプラチン、２１日周期：中断なく２１日周期の第１日及び第８日に最短３０分間～最長２時間にわたり３００ｍｇのＤＫＮ－０１をＩＶ投与した。第１日及び第８日に、標準的な臨床診療に従い、ＩＶ点滴を介してシスプラチン及びゲムシタビンを投与した。２５ｍｇ／ｍ²のシスプラチンを投与し、１０００ｍｇ／ｍ²のゲムシタビンを投与する。

患者の試験参加の期間には、スクリーニング期間、２１日周期からなる治療期間及び治療後期間が含まれる。治療期間の完了後、患者は、臨床診療ごとの来院又は電話を介して（患者が疾患に無関係な理由のために試験薬を中断した場合）、及び死亡又は試験終了まで、生存について追跡される。実証された疾患進行なく試験治療を中断する患者は、疾患進行、死亡まで、又は試験終了まで、ＲＥＣＩＳＴ基準を使用して奏効について評価を継続する。

有効性評価：
進行性の固形悪性腫瘍がある患者において測定可能な疾患の判定を可能にするための、標準治療である放射線学的イメージング（例えば、コンピュータ断層撮影［ＣＴ］、磁気共鳴画像法［ＭＲＩ］）。固形腫瘍のベースライン放射線学的評価を行い、ＲＥＣＩＳＴ基準を使用して腫瘍応答を評価するためにサイクル３の開始前及びその後は各奇数回のサイクル（サイクル開始の３日以内）に反復した。患者は、放射線学的評価に対する均一性を提供するために、試験を通じて（ベースラインで及びその後の評価で）使用される同じ放射線学的イメージングモダリティーを有すべきである。レソンス（ｒｅｓｏｎｓｅ）が記される場合、奏効を確認するための少なくとも４週間後のフォローアップ放射線学評価が必要とされる。

治療に対する臨床応答は、固形腫瘍に対するＲＥＣＩＳＴ １．１基準に基づいた。続く評価が行われる：最初及び最良のレソンス（ｒｅｓｏｎｓｅ）までの時間、奏効率（ＯＲＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、奏効期間（ＤｏＲ及び全生存期間（ＯＳ）。

実施例１：Ｈ－スコア及び％陽性値のＲＮＡｓｃｏｐｅ（登録商標）に基づく判定
本明細書中に記載の分析で使用されるＨ－スコアが次のように得られた。

Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＢＯＮＤ ＲＸプラットフォーム（ＬＳ）上で２．５ ＬＳ又は２．５ ＬＳｘ Ｒｅｄ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（ＡＣＤ）を使用してシングルプレックス自動化ＲＮＡｓｃｏｐｅアッセイを行った。これに続いて、標的賦活化（Ｌｅｉｃａ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ Ｂｕｆｆｅｒ ２を使用する場合は９５℃で１５分）及び４０℃で１５分のプロテアーゼＩＩＩ処理を含む前処理を行った。次に、プローブを４２℃で２時間ハイブリッド形成させ、続いてＲＮＡｓｃｏｐｅ特異的な増幅を行った。次に、Ｂｏｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｒｅｆｉｎｅ Ｒｅｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎキットを使用して発色検出を行った。ＲＮＡｓｃｏｐｅプローブ設計は前に記載されている。次のＡＣＤ ＲＮＡｓｃｏｐｅプローブをこの試験で使用した：Ｈｓ－ＤＫＫ１（ｃａｔ．４２１４１８）、Ｈｓ－ＰＰＩＢ（ｃａｔ．３１３９０８）及びｄａｐＢ（ｃａｔ．３１２０３８）。ヘマトキシリンを使用してＬｅｉｃａ機器上でスライドを対照染色し、対照染色のブルーイングをオフラインで行った。点状の赤いドットとして染色を観察した。４０ｘ対物レンズを使用してＬｅｉｃａからのＡＴ２スキャナーを使用してスライドを画像化した。

中程度に発現されるハウスキーピング遺伝子ＰＰＩＢに特異的なプローブを用いてＲＮＡの完全性について、及び細菌性ｄａｐＢ ＲＮＡに特異的なプローブを使用してバックグラウンドについて、各サンプルの品質管理を行った。対照プローブに対して、ＲＮＡの完全性及びバックグラウンド染色を評価するために半定量的スコアリング基準を適用した。ＡＣＤで認定された科学者が目視で（手作業）スコアリングを行った。次のことに基づき、各対照プローブに対して０～４のスコアを割り当てた：
・スコア０＝染色なし又は＜１個のドット／細胞１０個
・スコア１＝１～３個のドット／細胞
・スコア２＝４～９個のドット／細胞、ドットのクラスターはないか又は非常に少ない
・スコア３＝１０～１５個のドット／細胞及び／又は＜１０％のドットがクラスター状
・スコア４＝＞１５個のドット／細胞及び／又は＞１０％のドットがクラスター状

次の基準に合致した場合、サンプルがクオリティーコントロール（ＱＣ）をパスしたとみなした：１）ＰＰＩＢスコアが≧２であり、サンプル全体にわたる比較的均一な陽性対照シグナルがあることは、ＲＮＡの完全性を示す。２）ｄａｐＢスコアが＜１であることは、最小限のバックグラウンドシグナルを示す。

獣医学の病理学者がＤＫＫ１染色生検スライドからのスキャンされたスライド画像を評価し、ＱｕＰａｔｈオープンソース形態計測分析プログラム（参照により本明細書中で組み込まれるＢａｎｋｈｅａｄ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．ＱｕＰａｔｈ：Ｏｐｅｎ ｓｏｕｒｃｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ ｄｉｇｉｔａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｍａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ ７，１６８７８，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１７－１７２０４－５（２０１７））を使用して分析した。新生物を含有する組織の領域は、関心領域（ＲＯＩ）として同定した。ＤＫＫ１ ｍＲＮＡ発現レベルを次のように計算した。

各新生物細胞に対するＤＫＫ１ ｍＲＮＡ発現を次のビンに割り当てた：
・ビン－０＝０個のドット／細胞
・ビン－１＝１～３個のドット／細胞
・ビン－２＝４～９個のドット／細胞
・ビン－３＝１０＋個のドット／細胞

Ｈ－スコア判定に対して、すべての新生物細胞にスコアを割り当てた後、Ｈ－スコアを計算するためにビン－０、ビン－１、ビン－２又はビン－３におけるパーセンテージスコアリングを使用した：
Ｈ－スコア＝（％ビン－３ｘ３）＋（％ビン－２ｘ２）＋（％ビン－１ｘ１）＋（％ビン－０ｘ０）

この計算により、Ｈ－スコアは０～３００の範囲となり得る。

％陽性判定に対して、すべての新生物細胞にスコアを割り当てた後、染色がある総新生物細胞を合計することによって、陽性腫瘍細胞のパーセンテージを決定した。これは、（ビン－１＋ビン－２＋ビン－３）を足し、新生物細胞の総数（ビン－０＋ビン－１＋ビン－２＋ビン－３）で除するか、又は「陽性」として割り当てられたすべての細胞を数え（例えば少なくとも１つの単一染色ドットを検出することにより）、この数を新生物細胞の総数で除するかのいずれかにより行われ得る。％陽性は０～１００の範囲であり得る。

Ｈ－スコア判定に対して、ＱｕＰａｔｈソフトウェアが腫瘍細胞を同定不能であった場合、上記と同じＨ－スコア式を使用して、ビン－１、ビン－２及びビン－３における細胞のパーセンテージを推定することによってスライドを手作業で分析した。

％陽性判定に対して、ＱｕＰａｔｈソフトウェアが腫瘍細胞を同定不能であった場合、ビン－１、ビン－２及びビン－３における細胞のパーセンテージを推定することによってスライドを手作業で分析した。％陽性は、ビン－１、ビン－２及びビン－３における細胞の推定されたパーセンテージを足すことにより計算した。

実施例２：ＤＫＫ１発現Ｈ－スコア及び臨床転帰相関
１．高三分位値のＨ－スコアを有する患者の無増悪生存期間はより長かった
この試験において、様々な適応症及びさらなる組み合わせにわたる、３００ｍｇのＤＫＮ－０１で治療された全部で１３４名の患者からＲＮＡｓｃｏｐｅデータを回収した。上記の臨床試験に基づいてデータを得た。簡潔に述べると、試験Ｐ１０２は、（腫瘍性ＤＫＫ１ ｍＲＮＡ発現が評価された）食道胃癌に罹患している６７名の患者を含み、そのうち５７名の患者はＤＫＮ－０１／キイトルーダの組み合わせにより治療した。これらの５７名の患者のうち、３１名の患者が食道胃接合部癌と診断され、免疫療法ナイーブであった（即ちキイトルーダ又は他の抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１抗体により以前に治療されたことがなかった）。試験Ｐ２０４は、（腫瘍性ＤＫＫ１ ｍＲＮＡ発現が評価された）婦人科癌に罹患している５４名の患者：子宮内膜癌（ＥＥＣ／上皮性の子宮内膜癌）と診断された３２名の患者及び卵巣癌（ＥＯＣ／卵巣上皮癌）と診断された２２名の患者を含んだ。試験Ｐ１０３は、胆道癌（胆管細胞癌）に罹患している１３名の患者を含んだ。

この試験で分析した１３４名の患者のサブグループを図１で図示する。

１３４名の患者全員のプールの統計学的分析から、ＤＫＫ１ Ｈ－スコアが低三分位値又は中三分位値群である患者と比較してＨ－スコアが高三分位値である患者の無増悪生存期間がより長かったことが示された。これらの結果を図２で図示する。

各三分位値に対して並びに癌タイプ及び治療剤に対して調整された患者のサブグループに対して、ハザード比（ＨＲ、「放射線学的進行」又は何らかの原因による「死亡」のいずれかである事象を有するリスク）も計算した。この結果を図３で図示する。見られ得るように、それらのＤＫＫ１ Ｈ－スコアが高三分位値である患者は、全般的に及び癌タイプ及び治療剤に対して調整した場合の両方で、低三分位値と比較して、ＰＦＳが統計学的に有意に長かった（一番右側のカラムの数は、基準サブグループ：それらのＤＫＫ１ Ｈ－スコアによる患者の低三分位値に対する、各サブグループのＨＲの比較のＰ値を表す）。

２．Ｈ－スコアが最適カットオフを上回る患者の無増悪生存期間はより長かった
最適カットポイント（本明細書中で「最適ＤＫＫ１発現Ｈ－スコア」と呼ぶ）が癌患者群のＤＫＫ１ Ｈ－スコアに関して存在し、Ｈ－スコアが「最適カットポイント」を上回るサブグループの患者にＤＫＫ１阻害剤（例えばＤＫＮ－０１）を投与する場合、これらの患者は、Ｈ－スコアが「最適カットポイント」値以下である患者のサブグループと比較したとき、無増悪生存期間（ＰＦＳ）の統計学的に有意な改善を示すようになることがさらに明らかになった。

最初の例において、本明細書中、上に記載のように標準化ログランク統計量を使用して上記の１３４名の癌患者のプールを分析した。

生存転帰（ＰＦＳ）と最も有意な関係に対応するＤＫＫ１ Ｈ－スコアの値が存在することが発見された。プールした群に対して、３８というＤＫＫ１ Ｈ－スコアの値が得られた。このＤＫＫ１ Ｈ－スコア値は、標準化ログランク統計量の最大値に対応し、より長いＰＦＳと最も有意に関連付けられるプール全体の２つのサブグループ間のカットポイントである。

標準化ログランク統計量のこの最大値の存在を図４で示す。

ＤＫＫ１ Ｈ－スコアが「最適スコア」を上回る患者のＤＫＮ－０１治療の好ましい臨床転帰（より長いＰＦＳ）を図５でさらに例示する。図５は、２つのプロットの重ね合わせである。各プロットは、時間の関数としてのＰＦＳを示す（確率として表す）。１つのプロットは、ＤＫＫ１ Ｈ－スコアが３８という「最適」スコアを上回る患者のサブグループを表し、他方は「最適」スコア以下の患者のサブグループを表す。

それらのＨ－スコアが「最適」スコア以下の患者のサブグループと比較した場合の、それらのＨ－スコアが「最適」スコアを上回る患者の群に対するハザード比（ＨＲ、「放射線学的進行」又は何らかの原因による「死亡」のいずれかである事象を有するリスク）も計算した。癌タイプ及び治療剤について調整した患者のサブグループに対するＨＲも計算した。結果を図６で図示する。見られ得るように、癌タイプ及び治療剤について調整した場合、ＤＫＫ１ Ｈ－スコアが「最適」スコアを上回る患者は、最適スコア以下の患者と比較してＨＲが統計学的に有意に低かった（一番右側のカラムの数は、基準サブグループ：それらのＤＫＫ１ Ｈ－スコアが「最適」スコア以下である患者のサブグループ、に対する各サブグループのＨＲの比較のＰ－値を表す）。

異なるカットポイントの比較から、最適カットポイントが最良の調整されたハザード比（ＨＲ）を有することが明らかになる。結果を図７で図示する。見られ得るように、「最適カットポイント」を上回るＨ－スコアにより定められるサブグループは、高三分位値又は上四分位のいずれかにより定められるサブグループに対して最良の調整されたＨＲを有した。右のカラムはＨＲ値を表し、９５％信頼区間を提供する。

３．最適カットポイントの値は異なる癌に対して同様である。
レジメン及び癌タイプに対する調整後でさえも、異なる癌により定められる患者サブグループにおいて統計学的分析が行われる場合、「最適カットポイント」の同様の値が生成されることが発見された。

具体的には、３８を上回るＤＫＫ１ Ｈ－スコアがＥＥＣ／ＥＯＣにおいてより長いＰＦＳと関連付けられることが発見された。結果を図８及び図９で図示する。図８は、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれがＥＥＣ／ＥＯＣ患者のサブグループのＰＦＳ（確率として表す）を示す。一方のサブグループのＤＫＫ１ Ｈ－スコアは最適なカットポイントを上回り、他方のサブグループはこの最適なカットポイント以下である。図９は、ＥＥＣ／ＥＯＣ患者のサブ－サブグループに対するＨＲを表す表及びプロットを示す。見られ得るように、３つの調整されたサブグループに対するＨＲ値は同様である。右のカラムはＨＲ値を表し、９５％信頼区間を提供する。

さらなる試験において、３８という「最適カットポイント」値を上回るＤＫＫ１ Ｈ－スコアは、ＧＥＪ／ＧＣ／ＥＣ患者においてより長いＰＦＳと関連付けられることが発見された。ＤＫＮ－０１単剤療法又はＤＫＮ－０１とキイトルーダ又はパクリタキセルのいずれかとの併用療法のいずれかを受けた６７名の食道胃癌患者に対してデータをプールした。結果を図１０及び図１１で図示する。

図１０は、２つの重ね合わせプロットを示し、それぞれがＧＥＪ／ＧＣ／ＥＣ患者のサブグループのＰＦＳ（確率として表す）を示す。一方のサブグループのＤＫＫ１ Ｈ－スコアは３８という最適カットポイントを上回り、他方のサブグループはこの最適カットポイント以下である。図１１は、図１０を参照して論じられるようなＧＥＪ／ＧＣ／ＥＣ患者の同じサブ－サブグループに対するＨＲを表す表及びプロットを示す。見られ得るように、「最適カットポイント」を上回るＨ－スコアにより定められるサブグループは、癌タイプ及び治療剤に対して調整された場合、最適カットポイント以下の患者と比較して、統計学的に有意に低いＨＲを有した。右のカラムはＨＲ値を表し、９５％信頼区間を提供する。

４．ＤＫＮ－０１及び抗ＰＤ－１抗体で処理された場合、Ｈ－スコアが高三分位値であるＧＥＪ／胃癌患者の無増悪生存期間はより長い
さらなる試験において、図１０及び１１に関する上記の患者のうち、３１名の患者のサブグループ（そのうち２５名が評価可能であった）を選択した。これらの患者は、胃－食道接合部癌又は胃癌のいずれか（ｅｉｇｈｅｒ）に罹患しており、免疫療法で治療されたことがなかった（いわゆる「ＩＯナイーブ患者」）。図１２で与えられるバープロットが示すように、部分奏効を示した患者のＤＫＫ１ Ｈ－スコアは高三分位値であり（ここでは３５以上のＨ－スコア）、一方で病態進行を呈した殆どの患者のＤＫＫ１ Ｈ－スコアは高三分位値を下回った。

３１名の患者のサブグループの無増悪生存確率（ＰＦＳ）分析から、ＤＫＫ１ Ｈ－スコアの高三分位値（３５以上のＨ－スコア）における患者の中央値ＰＦＳは、２２．２週間であり、ＤＫＫ１ Ｈ－スコアが高三分位値数を下回る患者（５．９週間）と比較して統計学的に有意に長かったことが示された。この分析の結果を図１３で例示する。

実施例３：ＤＫＫ１染色％陽性値及び臨床転帰の相関
さらなる試験において、図１に関して記載されるような、３００ｍｇのＤＫＮ－０１単剤療法又はＤＫＮ－０１及び第２の薬剤の併用療法を受けた６９名の食道胃癌（ＥＧＣ）患者（＋２名の、１５０ｍｇのＤＫＮ－０１及びペムブロリズマブを受けたさらなる患者）のＲＮＡｓｃｏｐｅデータを分析した。

％陽性の目安を使用して患者のＰＦＳを判定した。ＤＫＫ１に対して陽性染色の腫瘍細胞のパーセンテージがより高いＥＧＣ患者は、ＰＦＳの上昇を示すことが発見された。具体的には、患者の高三分位値（「ＤＫＫ１高」、ＲＮＡｓｃｏｐｅによって腫瘍細胞のうち少なくとも２６％がＤＫＫ１に対して陽性染色された患者）の中央値生存期間は１１．６週間であり、一方で高三分位値を下回る患者の中央値生存期間は６．０週間であり、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によりｐ－値＝０．０８であった。この分析の結果（２６％のカットオフ値、高三分位値に対応）を図１４Ａで図示する。

同じ６９名の患者に対する「最適」カットオフ値も計算し、ＰＦＳプロットを生成させた。

簡潔に述べると、（最大限でも分析においてサンプル数と等しい）すべての潜在的なカットポイントに対するログランク統計量を最初に計算した。カットポイントを選択するために、Ｈｏｔｈｏｒｎ及びＬａｕｓｅｎ（Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｉｒｅｃｔ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｐａｐｅｒ Ｎｏ Ｓ１５７４－０３５８（０４）７０１５２－５，５ Ｍａｒ ２０１８，ｈｔｔｐｓ：／／ｐａｐｅｒｓ．ｓｓｒｎ．ｃｏｍ／ｓｏｌ３／ｐａｐｅｒｓ．ｃｆｍ？ａｂｓｔｒａｃｔ＿ｉｄ＝３１３３７１１で利用可能）に記載の方法を適用した。これは、帰無仮説下でログランク統計量の厳密分布を使用してｐ－値の上界を計算することによって行った（Ｈ０：生存は、連続型変数においてカットポイントにより定められる群におけるメンバーシップと独立であり、ここで：％陽性は陽性である）。

ここで、％陽性メジュレ（ｍｅｓｕｒｅ）による最適カットオフ値は２３％であった。ＤＫＫ１－高患者（％陽性が２３％以上）に対する中央値生存期間は１１週間（９５％ＣＩ ６．０００－２８．２８６）であり、ＤＫＫ１－低患者（％陽性が２３％を下回る）に対する中央値生存期間は６週間であった（９５％ＣＩ ５．８５７－８．７１４）。Ｐ－ｖａｌ＝０．１１６。ＰＦＳプロットを図１４Ｂで示す。

さらなる試験において、ＤＫＫ１発現に対する％陽性値を使用して、図１３に関して上記で論じられるような患者の同じサブグループ（３１名の胃（Ｇ）／食道胃接合部（ＧＥＪ）患者）を分析した。結果を図１５で示す。ＤＫＫ１に対して陽性染色となる腫瘍細胞のパーセンテージがより高いＧ／ＧＥＪ ＩＯ－ナイーブ患者は、ＰＦＳ上昇を示すことが発見された。具体的には、％陽性値の高三分位値の患者（腫瘍細胞の少なくとも２０％がＲＮＡｓｃｏｐｅによりＤＫＫ１に対して陽性染色）は、２２．１週間の中央値生存期間を示し、それに対して、高三分位値の外側の患者については６．１週間であった（ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によりｐ－値＝０．０１７）。

実施例４
さらなる試験において、胃癌に罹患している患者／ＧＥＪ ＩＯ抵抗性患者（即ち免疫療法で以前に治療された患者）のサブグループを分析した。５名の患者をペムブロリズマブと組み合わせてＤＫＮ－０１で治療した（４名の患者は３００ｍｇ ＤＫＮ－０１、１名は１５０ｍｇ ＤＫＮ－０１）。この分析の結果を図１６Ａ（Ｈ－スコア）及び図１６Ｂ（％陽性値）で示す。見られ得るように、５名の患者のうち３名は、安定状態（ＳＤ）であり、２名の患者は病態進行（ＰＤ）であった。ＳＤを有するすべての患者のＨ－スコア又は％陽性値はＰＤ患者よりも高かった。ＳＤ患者の最低Ｈ－スコアは５９であり、ＳＤ患者の最低％陽性値は３３％であった。

本明細書中で引用されるすべての特許、公開出願及び参考文献の教示は、それらの全体において参照により組み込まれる。

本発明はその例となる実施形態を参照して特に示され、説明されてきたが、添付の特許請求の範囲により包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細の様々な変更がそこでなされ得ることが当業者により理解されよう。

Claims (68)

1. 癌の治療を必要とする対象において癌を治療するための方法であって、
   前記対象の癌のサンプル中のＤＫＫ１発現Ｈ－スコアを決定することと、
   予め決定された値を上回るＤＫＫ１発現Ｈ－スコアを有すると判定された対象に第１の量のＤＫＫ１阻害剤を投与することと、
   を含む、方法。
2. 前記予め決定された値が最適ＤＫＫ１発現Ｈ－スコアである、請求項１に記載の方法。
3. 前記予め決定された値が、癌に罹患している対象のサンプル中のＤＫＫ１発現Ｈ－スコアの高三分位値の下方境界である、請求項１に記載の方法。
4. 前記癌が、食道胃癌、婦人科癌又は胆管細胞癌から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記癌が、食道癌、食道胃接合部癌、胃癌、上皮性の子宮内膜癌、卵巣上皮癌又は胆管細胞癌から選択される、請求項４に記載の方法。
6. 前記患者が、免疫療法ナイーブであり、食道胃癌に罹患している、請求項４に記載の方法。
7. 前記患者が胃食道癌又は胃癌に罹患している、請求項４に記載の方法。
8. 前記癌が食道胃癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項５に記載の方法。
9. 前記癌が食道胃癌であり、食道胃癌に罹患している対象のサンプルにおいて前記予め決定された値がＤＫＫ１発現Ｈ－スコアの高三分位値の下方境界であるか、又は
   前記癌が婦人科癌であり、婦人科癌に罹患している対象のサンプルにおいて前記予め決定された値がＤＫＫ１発現Ｈ－スコアの高三分位値の下方境界である、
   請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記癌が食道胃癌であり、前記予め決定された値が３８の最適カットオフ値であるか、
    前記癌が婦人科癌であり、前記予め決定された値が３８の最適カットオフ値であるか、又は
    前記癌が胆管細胞癌であり、前記予め決定された値が３８の最適カットオフ値である、
    請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記癌が胃／ＧＥＪ癌であり、前記予め決定された値が３５である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記対象がＩＯ－ナイーブである、請求項１１に記載の方法。
13. 前記ＤＫＫ１阻害剤が、ＤＫＫ１抗体又はその抗原結合断片である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記抗ＤＫＫ１抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲは、ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ配列を有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記ＬＣＶＲは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の方法。
16. 前記ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲが、（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４又は１５に記載の方法。
17. 前記ＬＣＶＲは、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の方法。
18. 前記抗ＤＫＫ１抗体は、ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖、並びにｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる群から選択される重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の方法。
19. 前記抗ＤＫＫ１抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記対象は、ヒトである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 第２の治療剤の第２の量を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記第２の治療剤がタキサンである、請求項２１に記載の方法。
23. 前記第２の薬剤がパクリタキセルである、請求項２２に記載の方法。
24. 前記癌が婦人科癌であり、前記第２の治療剤がパクリタキセルである、請求項２１に記載の方法。
25. 前記癌が上皮性の子宮内膜癌又は卵巣上皮癌であり、前記ＤＫＫ１アンタゴニスがＤＫＮ－０１抗体であり、前記第２の治療剤がパクリタキセルである、請求項２４に記載の方法。
26. 第３の量の第３の治療剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
27. 前記第２の治療剤がゲムシタビンであり、前記第３の治療剤がシスプラチンである、請求項２６に記載の方法。
28. 前記癌が胆道癌である、請求項２７に記載の方法。
29. 癌の治療を必要とする対象において癌を治療する方法であって、
    前記対象の癌のサンプルにおいてＤＫＫ１発現％陽性値を決定することと、
    予め決定された値以上の前記ＤＫＫ１発現％陽性値を有すると判定された対象に第１の量のＤＫＫ１阻害剤を投与することと、
    を含む方法。
30. 前記予め決定された値が、ＤＫＫ１発現％陽性値の最適値である、請求項２９に記載の方法。
31. 前記予め決定された値が、癌に罹患している対象のサンプルにおけるＤＫＫ１発現％陽性値の高三分位値の下方境界である、請求項２９に記載の方法。
32. 前記癌が、食道胃癌、婦人科癌又は胆管細胞癌から選択される、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記癌が、食道癌、食道胃接合部癌、胃癌、上皮性の子宮内膜癌、卵巣上皮癌又は胆管細胞癌から選択される、請求項３２に記載の方法。
34. 前記患者が免疫療法ナイーブであり、食道胃癌に罹患している、請求項３２に記載の方法。
35. 前記患者が胃食道癌又は胃癌に罹患している、請求項３２に記載の方法。
36. 前記癌が食道胃癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項３２に記載の方法。
37. 前記癌が食道胃癌であり、前記予め決定された値が、食道胃癌に罹患している対象のサンプルにおけるＤＫＫ１発現％陽性値の高三分位値の下方境界であるか、又は
    前記癌が婦人科癌であり、前記予め決定された値が、前記婦人科癌に罹患している対象のサンプルにおけるＤＫＫ１発現％陽性値の高三分位値の下方境界である、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の方法。
38. 前記癌が食道胃癌であり、前記予め決定された値が２６％である、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の方法。
39. 前記癌がＧＣ／ＧＥＪであり、前記予め決定された値が２０％である、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の方法。
40. 前記対象がＩＯ－ナイーブである、請求項３９に記載の方法。
41. 前記ＤＫＫ１阻害剤が、ＤＫＫ１抗体又はそれらの抗原結合断片である、請求項２９～４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記抗ＤＫＫ１抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲは、ＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ配列を有する、請求項２９～４１のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記ＬＣＶＲは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載の方法。
44. 前記ＬＣＶＲ及び前記ＨＣＶＲは、（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４２又は４３に記載の方法。
45. 前記ＬＣＶＲは、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載の方法。
46. 前記抗ＤＫＫ１抗体は、ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖、並びにｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる群から選択される重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項４５に記載の方法。
47. 前記抗ＤＫＫ１抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４６に記載の方法。
48. 前記対象は、ヒトである、請求項２９～４７のいずれか一項に記載の方法。
49. 第２の治療剤の第２の量を前記対象に投与することをさらに含む、請求項２９～４８のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記第２の治療剤がタキサンである、請求項４９に記載の方法。
51. 前記第２の薬剤がパクリタキセルである、請求項５０に記載の方法。
52. 前記癌が婦人科癌であり、前記第２の治療剤がパクリタキセルである、請求項４９に記載の方法。
53. 前記癌が、上皮性の子宮内膜癌又は卵巣上皮癌であり、前記ＤＫＫ１アンタゴニスがＤＫＮ－０１抗体であり、前記第２の治療剤がパクリタキセルである、請求項５２に記載の方法。
54. 第３の治療剤の第３の量を前記対象に投与することをさらに含む、請求項５０に記載の方法。
55. 前記第２の治療剤がゲムシタビンであり、前記第３の治療剤がシスプラチンである、請求項５４に記載の方法。
56. 前記癌が胆道癌である、請求項５５に記載の方法。
57. 前記癌が胃／ＧＥＪ癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項４に記載の方法。
58. 前記癌が胃癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項４に記載の方法。
59. 前記癌がＧＥＪ癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項４に記載の方法。
60. 前記予め決定された値が５９である、請求項５７～５９のいずれか一項に記載の方法。
61. 前記癌が胃／ＧＥＪ癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項３２に記載の方法。
62. 前記癌が胃癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項３２に記載の方法。
63. 前記癌がＧＥＪ癌であり、１つ以上の免疫療法剤に対して抵抗性である、請求項３２に記載の方法。
64. 前記予め決定された値が３３％である、請求項６１～６３のいずれか一項に記載の方法。
65. 前記癌が食道胃癌（ＥＧＣ）であり、前記予め決定された値が２３％の最適カットオフ値である、請求項３０に記載の方法。
66. 癌の治療を必要とする対象において癌を治療する方法であって、
    前記対象の癌のサンプルにおけるＤＫＫ１発現Ｈ－スコアを決定することと、
    ３０以上の前記ＤＫＫ１発現Ｈ－スコアを有すると判定された対象にＤＫＫ１阻害剤の第１の量を投与することと、を含む方法。
67. 前記対象が、３５以上のＤＫＫ－１ Ｈ－スコアを有すると判定される、請求項６６に記載の方法。
68. 前記癌がＧＥＪ／ＧＣである、請求項６６又は６７のいずれか一項に記載の方法。
    

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