KR20180126097A - 콜라겐 생성 촉진제, 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식 촉진제 및 항주름제 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 콜라겐 생성 촉진효과, 히알루론산 생성 촉진효과, 섬유아세포 증식촉진효과 및 주름개선효과가 우수한 식물 종자의 유기용매 추출물의 처리물을 제공한다. 본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진제는 측백나무과(Cupressaceae) 측백나무속(Platycladus)에 속하는 식물의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하여 유성성분을 함유하는 추출물을 수득하고, 상기 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거한 후, 농도 0.5~15 N의 알칼리 수용액을 첨가, 혼합하고, 이어서 산 처리 후 수세하여 수득되는 것을 특징으로 한다.
Description
본 발명은 콜라겐 생성 촉진제, 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식 촉진제 및 항주름제에 관한 것으로, 특히 콜라겐 생성 촉진효과 등에 우수한 식물 종자의 유기용매 추출물의 처리물에 관한 것이다.
피부는 외측으로부터 각질층, 표피, 기저막 및 진피로 구성되어 있다.
진피는 그 중에서도 가장 영역이 넓은 부분이고, 표피만큼 세포가 치밀하게 채워져 있지 않다. 오히려 세포외공간이 많고 「세포외기질(extracellular matrix)」라고 불리는 거대분자의 그물 구조에 의해 채워져 있다. 이 세포외기질은 진피 내의 섬유아세포 등에서 생성되고, 히알루론산이나 더마탄(dermatan) 황산 등의 산성 뮤코 다당이라고 불리는 다당류와, 콜라겐, 엘라스틴 등의 섬유성 단백질로 구성되어 있다. 세포외기질은 피부의 탄력성, 팽팽함, 촉촉함, 신진대사 등에 직접적으로 관계하고 있다. 섬유아세포 등에서의 세포외기질의 생성이 둔화되면, 피부의 탄력성이나 촉촉함이 손실되고 피부 거칠음이 발생하기 쉬워져, 피부노화가 초래되는 한 원인이 된다.
상기 섬유성 단백질은 주로 콜라겐으로 이루어지고, 그 중에서도 Ⅰ형 콜라겐이 전체의 80 %를 차지한다. Ⅰ형 콜라겐 이외에는, Ⅲ, Ⅴ, ⅩⅡ 및 ⅩⅣ형 콜라겐의 존재가 알려져 있다. 노화 피부에서 보이는 처짐의 생성 요인(成因) 중 하나는, 피부조직이 나이가 듦에 따라 비박화(菲薄化; thinning)하는 것에 기인한다. 노화된 피부에서는 진피의 주요한 세포외기질 성분인 콜라겐 섬유(線維)의 감소가 현저하고, 이것이 피부의 두께를 얇게 하는 주된 원인이 되고 있을 가능성이 높다. 따라서, 콜라겐의 생성을 촉진시켜 콜라겐량을 유지하는 것이, 처짐의 예방·개선에 효과적이라고 생각된다.
또한 콜라겐의 생성 촉진은 상기 이외에도, 피부의 창상 치유의 개선은 물론, 골다공증, 관절염, 건초염 등의 치료, 고혈압의 방지 등에도 유효하다.
지금까지 콜라겐 생성 촉진제로서는, 물만을 추출 용매로 하여 백자인(柏子仁)(측백나무의 종자를 건조시킨 것)으로부터 추출된 생약추출물을 포함하는 콜라겐 생성 촉진제가 알려져 있다(예를 들어 특허문헌 1 참조). 그러나, 상기 생약추출물의 콜라겐 생성 촉진효과에는 개선의 여지가 있었다.
한편, 상기 다당류 중의 히알루론산은 세포 간극에서의 수분 유지, 조직내에 젤리 형상의 매트릭스를 형성하는 것에 기초하는 세포의 유지, 조직의 윤활성과 유연성의 유지, 기계적 장해 등의 외력에 대한 저항, 및 세포 감염의 방지 등, 많은 기능을 갖고 있다. 요즘 암 전이와의 관련에 대해서도 많은 연구가 이루어지고 있다.
*또한, 히알루론산은 피부는 물론, 관절액, 초자체, 인대 등, 생체에 널리 분포하고 있다. 이 때문에, 히알루론산의 생성 촉진은 보습효과 향상에 추가하여, 관절통(변형성 슬관절증) 치료, 피부의 처짐 개선, 안구건조증을 주로 한 각결막(角結膜) 상피장해치료, 백내장·각막 이식 수술시에서의 전방(前房) 유지 등에도 유효하다.
지금까지 히알루론산 생성 촉진제로서는, 두빌라에아(Durvillaea)과 두빌라에아속에 속하는 해조 추출물을 유효성분으로서 함유하는 히알루론산 생성 촉진제가 알려져 있다(예를 들어 특허문헌 2 참조).
이와 같이 콜라겐, 히알루론산은 피부의 처짐, 피부 거칠음 등의 개선·방지, 피부 노화의 방지는 물론, 슬관절증의 개선제나 안과 수술용 제제 등에 적용할 수 있다. 이 때문에 콜라겐, 히알루론산 모두의 생성 촉진효과가 있는 물질이 발견되면, 상기의 증상개선이나 예방·치료 등에 널리 적용할 수 있다는 이점이 있다.
한편, 특허문헌 3에는 튜야(Thuja)속 식물, 나무딸기(Rubus)속 식물, 산앵도나무(Vaccinium)속 식물, 다래나무(Actinidia)속 식물 및 들깨(Perilla)속 식물 중에서 선택되는 식물의 종자를 추출하여 식물 추출물로 하고, 이어서 상기 식물 추출물에 알칼리 처리를 실시하여 수득되는 식물성 미백제의 제조방법이 알려져 있다.
그러나, 측백나무 유기용매 추출물의 처리물이 우수한 콜라겐 생성 촉진효과 및 히알루론산 생성 촉진효과를 갖는 것은 알려져 있지 않았다.
본 발명은 상기 종래기술을 감안하여 이루어진 것으로, 그 목적은 콜라겐 생성 촉진효과 및 히알루론산 생성 촉진효과 등이 우수한 식물종자의 유기용매 추출물의 처리물을 제공하는 데에 있다.
상기 과제를 해결하기 위해 본 발명자들이 예의 검토를 거듭한 결과, 측백나무과(Cupressaceae)측백나무속(Platycladus)에 속하는 식물의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하여 유성성분을 함유하는 추출물을 수득하고, 상기 추출물을 알칼리 처리 및 산 처리 후 수세한 처리물이 우수한 콜라겐 생성 촉진효과 등을 갖는 것을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진제는 측백나무과(Cupressaceae) 측백나무속(Platycladus)에 속하는 식물의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하고 유성성분을 함유하는 추출물을 얻어, 상기 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거(留去)한 후, 농도 0.5~15N의 알칼리 수용액을 첨가, 혼합하고 이어서 산 처리 후 수세하여 수득되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 히알루론산 생성 촉진제는 측백나무과(Cupressaceae) 측백나무속(Platycladus)에 속하는 식물의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하여 유성성분을 함유하는 추출물을 수득하고, 상기 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거한 후, 농도 0.5~15N의 알칼리 수용액을 첨가하고 혼합하며, 이어서 산 처리후 수세하여 수득되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 섬유아세포 증식촉진제는 측백나무과(Cupressaceae) 측백나무속(Platycladus)에 속하는 식물의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하여 유성성분을 함유하는 추출물을 수득하고, 상기 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거한 후, 농도가 0.5~15N의 알칼리 수용액을 첨가, 혼합하고 이어서 산 처리후 수세하여 수득되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 항주름제는 측백나무과(Cupressaceae) 측백나무속(Platycladus)에 속하는 식물의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하여 유성성분을 함유하는 추출물을 수득하고, 상기 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거한 후, 농도 0.5~15N의 알칼리 수용액을 첨가, 혼합하고, 이어서 산 처리후 수세하여 수득되는 것을 특징으로 한다.
상기 촉진제 또는 항주름제에 있어서, 첨가하는 순알칼리량은 100~300g/ℓ 추출물인 것이 바람직하다.
상기 촉진제 또는 상기 항주름제에 있어서, 측백나무과 측백나무속에 속하는 식물은 측백나무(Platycladus orientalis)인 것이 바람직하다.
본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진방법은, 상기 콜라겐 생성 촉진제를 도포하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 히알루론산 생성 촉진방법은, 상기 히알루론산 생성 촉진제를 도포하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 섬유아세포 증식촉진 방법은, 상기 섬유아세포 증식 촉진제를 도포하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 주름개선 방법은, 상기 항주름제를 도포하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진방법은, 상기 콜라겐 생성 촉진제를 경구 섭취하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 히알루론산 생성 촉진방법은, 상기 히알루론산 생성 촉진제를 경구 섭취하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 섬유아세포 증식촉진 방법은, 상기 섬유아세포 증식 촉진제를 경구 섭취하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 관한 주름개선 방법은, 상기 항주름제를 경구 섭취하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따르면 콜라겐 생성 촉진제, 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식 촉진제, 항주름제로서 유용한 식물종자의 유기용매 추출물의 처리물을 제공할 수 있다.
도 1은 측백나무 종자의 수(水) 추출물과, 상기 종자의 유기용매 추출물의 처리물의 콜라겐 생성 촉진효과를 비교한 도면이다.
도 2는 측백나무 종자의 유기용매 추출물의 처리물의 주름개선 효과를 나타내는 도면이다.
도 2는 측백나무 종자의 유기용매 추출물의 처리물의 주름개선 효과를 나타내는 도면이다.
본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진제는 측백나무과(Cupressaceae) 측백나무속(Platycladus)에 속하는 식물의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하여 유성성분을 함유하는 추출물을 수득하고, 상기 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거한 후, 농도 0.5~15N의 알칼리 수용액을 첨가, 혼합하고 이어서 산 처리후 수세하여 수득되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 사용되는 식물의 종자는, 측백나무과 측백나무속에 속하는 식물의 종자이다. 이 중, 측백나무(Platycladus orientalis)의 종자를 사용하는 것이 바람직하다.
측백나무는 중국, 한반도가 원산지이고 약 250년전에 일본에 건너와 현재에는 각지에서 식재(植栽)되는 나무 높이 5m ~ 15m의 상록 저목(低木) 또는 소고목(小高木)이다.
측백나무의 종자는 흑갈색의 긴 난구형(卵球形)을 이루고 있고, 「백자인」이라고도 불리고 있다. 중의학에서 널리 사용되고 있으며, 자양강장이나 소염 등에 사용되고 있다.
추출물의 구체적인 추출방법, 알칼리 처리방법, 산 처리방법은 예를 들어 이하의 방법을 사용할 수 있다.
측백나무과 식물의 종자의 질량에 대하여, 1 ~ 100 배, 바람직하게는 1 ~ 30 배 정도의 질량의 유기용매로 일정 기간 추출을 실시한다. 사용하는 종자는 필요에 따라서 적당하게 분쇄하는 것도 가능하지만, 여과시에 눈막힘이 문제가 되는 경우 등에는 미분쇄(未粉碎)인 채로 사용해도 좋다.
또한, 소량의 유기용매로 반복하여 추출하는 것도 가능하고, 속슬렛(soxhlet)과 같은 환류 장치를 사용해도 좋다.
추출에 사용하는 유기용매는 통상 추출에 사용되는 유기용매이면 특별히 한정되지 않지만, 휘발성 유기용매인 것이 바람직하다.
유기용매로서는, 예를 들어 메탄올, 에탄올 등의 알콜류, 함수알콜류, 아세톤, 아세트산에틸에스테르, 헥산, 에테르 등의 극성·비극성 유기용매를, 단독 또는 2 종 이상을 조합하여 사용할 수 있다. 이 중에서도, 아세톤, 아세트산 에틸, 헥산은 저가이고 감압농축이 용이한 점에서 특히 바람직하다. 그 밖에, 초임계 탄산가스에 의한 추출이나 종자를 압착(壓搾)하여, 착즙(搾汁)을 사용할 수도 있다.
이에 대하여, 물을 포함하는 추출용매는 활성성분의 추출이 억제되므로 바람직하지 않다.
상기와 같이 하여 수득된 추출물로부터 유기용매를 제거한 후, 알칼리 처리를 실시한다.
알칼리 처리의 방법은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 유기용매 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거한 후, 농도 0.5 ~ 15N, 바람직하게는 1 ~ 10N의 알칼리 수용액을 첨가, 혼합하는 방법에 의해 수득할 수 있다.
보다 구체적으로 말하면, 예를 들어 용매 유거 후의 추출물에 대하여 0.2 ~ 2배 용량의 진한 알칼리 수용액을 첨가한 후, 충분히 교반 혼합하고 30분 ~ 수일 정도 숙성을 실시한다. 진한 알칼리 수용액으로서는, 0.5 ~ 15N, 바람직하게는 1 ~ 10N의 농도의 NaOH, KOH 등으로 이루어진 수용액을 들 수 있다. 또한, 순알칼리량이 100~300 g/ℓ 추출물이 되도록 진한 알칼리 수용액을 첨가하는 것이 바람직하다.
혼합시의 온도로서는, 실온~70℃의 범위가 바람직하고, 30~60℃의 범위가 더욱 바람직하다. 숙성시에는, 친수성 성분과 친유성 성분이 분리되지 않도록 적절하게 교반을 실시하는 것이 바람직하다.
상술한 바와 같이 알칼리 처리한 처리물은 산 처리를 실시한다.
산 처리의 방법은 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 농도 0.5~15 N의 산용액을 첨가하고, pH를 0.5~2 정도까지 낮추는 방법을 들 수 있다.
산 처리가 실시되면 액상(유상) 물질이 분리된다. 상기 액상 물질은 매우 높은 콜라겐 생성 촉진효과를 가지면서도, 피부에 대해서 높은 안전성을 나타낸다.
액상물질 회수촉진을 위해 수세를 실시한다. 그 후 필요에 따라서 탈색, 탈취, 탈염, 증류 등의 조작을 실시해도 좋다.
측백나무과 측백나무속에 속하는 식물의 종자로부터 상기와 같은 추출·처리한 성분은 콜라겐 생성 촉진효과 이외에, 표피 세포의 히알루론산 합성을 촉진하는 효과, 섬유아세포 증식촉진효과, 주름개선효과를 갖고 있다.
이 때문에, 본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진제는 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식 촉진제, 항주름제로서도 사용할 수 있다.
본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진방법, 히알루론산 생성 촉진방법, 섬유아세포 증식촉진방법, 주름개선방법은 본 발명의 콜라겐 생성 촉진제, 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식 촉진제, 항주름제를 도포하는 것을 특징으로 한다.
상기 촉진방법 또는 주름개선방법은 본 발명의 촉진제 또는 항주름제를 포함하는 피부 외용 조성물을 도포해도 좋다.
피부 외용 조성물은 매우 응용범위가 넓고 여러 분야(예를 들어, 의약부외품을 포함하는 화장품, 의약품, 마이크로니들에 의한 주입제 등)에 응용된다. 그 제품형태는 임의로, 예를 들어 연고, 크림, 유액, 화장수, 에센스, 젤리, 젤, 팩, 마스크, 파운데이션, 마이크로니들(microneedle) 등을 들 수 있다.
피부외용조성물을 조제하는 경우, 유효성분인 촉진제 또는 항주름제를 액상분(分)으로서 0.0001~20 질량% 배합하는 것이 바람직하고, 0.001~2 질량% 배합하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명에 관한 촉진제 또는 항주름제를 배합한 피부외용 조성물은 통상의 방법에 따라 제조할 수 있다. 피부외용 조성물에는, 필수 성분인 촉진제 또는 항주름제 이외에, 통상 피부외용조성물에 사용되는 임의의 성분을, 본 발명의 효과를 손상시키지 않는 범위에서 적절하게 배합할 수 있다.
피부외용조성물에 배합 가능한 임의 성분으로서는, 예를 들어 아미노산, 지질, 당, 호르몬, 효소, 핵산 등의 생리활성물질 등을 들 수 있다.
또한, 물(정제수, 온천수, 심층수 등), 유제, 계면활성제, 금속비누, 겔화제, 분체, 알콜류, 수용성 고분자, 피막형성제, 수지, 포접화합물, 향료, 소취제, 염류, pH조정제, 청량제, 동물·미생물 유래의 추출물, 혈행촉진제, 수렴제, 항지루제, 킬레이트제, 각질 용해제, 효소, 호르몬류, 비타민류, 다른 식물 추출물 등을 적절하게 배합할 수도 있다.
그 밖에, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 베라파밀, 트라넥삼산 및 그 유도체, 감초추출물, 글라브리딘, 피라칸타(pyracantha)의 과실의 열수(熱水) 추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리시리진산 및 그 유도체 또는 그 염 등의 약제, 글루코스, 프룩토스, 프시코스, 알로스, 타가토스, 만노스, 자당, 트레할로스, 자일리톨 등의 당류, β알라닌, 글리신, GABA, 사르코신 등의 이온채널 제어물질, 카르노신, 레티노이드 등도 적절하게 배합할 수 있다.
또한, 본 발명에 관한 촉진제 또는 항주름제를, 다른 약효제의 1종 또는 2종 이상과 조합하여 배합함으로써, 각 효과를 보다 높인, 또는 각 효과와 함께 다른 약효도 갖는 피부외용조성물을 조제할 수도 있다.
상기 약효제로서는, 예를 들어 미백제, 자외선 방어제, 항균제, 항염증제, 혈행촉진제, 각종 약효성분, 활성산소 제거제, 보습제, 다른 촉진제, 다른 항주름제 등을 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명에 관한 촉진제 또는 항주름제를 배합한 피부외용조성물의 제형은, 본 발명의 효과를 발휘할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않는다. 피부외용조성물의 제형은 임의로, 예를 들어 용액계, 가용화계, 유화계, 분말분산계, 물-오일 2층계, 물-오일-분말 3층계, 연고, 젤, 에어졸 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진방법, 히알루론산 생성 촉진방법, 섬유아세포 증식촉진 방법, 주름개선 방법은 본 발명의 콜라겐 생성 촉진제, 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식 촉진제, 항주름제를 경구 섭취하는 것도 바람직하다.
상기 촉진방법 또는 주름개선방법은 본 발명의 촉진제 또는 항주름제를 포함하는 음식품을 경구 섭취해도 좋다.
본 발명의 콜라겐 생성 촉진제, 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식 촉진제, 및 항주름제를 음식품에 배합하는 경우, 촉진제 또는 항주름제의 배합량(건조 질량)은 그들의 종류, 목적, 형태, 이용방법 등에 따라서 적절하게 결정할 수 있다. 예를 들어, 배합량은 음식품 전량 중에 0.0001 ~ 50 질량% 정도인 것이 바람직하다. 특히, 특정 보건용 식품에 배합하는 경우에는, 본 발명의 촉진제 또는 항주름제를 효과가 충분히 발휘되는 양으로 배합시키는 것이 바람직하다.
음식품의 형태로서는, 예를 들어 과립상, 페이스트상, 겔상, 고형상, 액체상 등으로 임의로 성형할 수 있다.
음식품에는, 음식품 등에 배합하는 것이 인정되어 있는 공지의 각종 물질, 예를 들어 결합제, 붕괴제, 증점제, 분산재, 재흡수 촉진제, 교미제(矯味劑), 완충제, 계면활성제, 용해보조제, 보존제, 유화제, 등장화제(等張化劑), 안정화제나 pH조정제 등의 부형제를 적절하게 함유시킬 수 있다.
실시예
본 발명에 대해서 이하에 실시예를 들어 추가로 상술하지만, 본 발명은 이에 의해 전혀 한정되는 것은 아니다. 배합량은 특별히 기재하지 않는 한 질량%로 나타낸다.
처음에 본 발명자들은 측백나무과 측백나무속 식물(측백나무) 종자의 유기용매추출물 및 그 처리물(A)을, 하기 조제방법으로 조제했다. 그리고, 추출물 및 그 처리물의 섬유아세포 증식촉진효과 및 섬유아세포에 의한 Ⅰ형 콜라겐 생성 촉진효과에 대해서 이하에 나타내는 시험을 실시했다.
추출물 및 그 처리물 무첨가의 경우를 100으로 하고, 결과를 표 1에 나타낸다.
측백나무 종자의 유기용매 추출물의 조제방법
측백나무 종자(미분쇄)를 각각 5 배량(v/w)의 유기용매(아세톤)에 침지하고, 실온에서 10일간 추출을 실시했다. 나일론 메시(100 메시)로 미리 잔사를 제거하고, 추가로 여과지로 여과했다. 회전증발기(rotary evaporator)로 여과액으로부터 용매를 제거했다. 이와 같이 하여 추출물을 수득했다.
측백나무 종자의 유기용매 추출물의 처리물의 조제방법 A
상기와 같이 하여 수득된 추출물을, 교반 날개로 교반하면서 0.5 ~ 15N의 NaOH 용액을, 순 NaOH로 하여 100 ~ 300 g/ℓ의 범위내에서 추출물에 첨가했다(온도 50℃). 200rpm으로 교반하면서 5시간 처리를 실시했다. 그 후, 5N의 H2SO4를 서서히 첨가하고 교반하면서 pH를 1 부근까지 낮추고, 분리되는 액상(유상) 물질을 회수했다. 회수된 액상(유상) 물질에 같은 용량의 물을 가하여 수세하여, 불순물·염·과잉의 산을 제거했다. 액상(유상) 물질을 감압 건조하고 액상의 처리물(A)을 수득했다.
<세포부활시험>
사람 신생아 유래의 섬유아세포 HFOK를 10 % 소태아 혈청(FBS) 함유 둘베코 변형법 이글 MEM 배지(DMEM, 닛스이사 제) 중에 접종하고, 계속해서 24웰 플레이트에 파종하여, 37℃, 이산화탄소 농도 5 체적%의 분위기 중에 정치했다. 세포접착 후 배지를 저농도 혈청(0.5 %)을 포함하는 배지로 교환하고, 하루 낮밤 계속해서 배양했다. 그 후, 추출물 또는 그 처리물을, 배지에 대하여 0, 0.5×10-4, 1×10-4, 2×10-4, 3×10-4 체적%가 되도록 검체조제액을 첨가하여 혼합했다. 배양 3일째에 각 검체조제액에서 생육시킨 섬유아세포의 세포수를, 헥스토 33342(도닌가가쿠가부시키가이샤제)를 사용하여 측정하여 구하고, 추출물 또는 그 처리물을 첨가하지 않은 것을 대조군으로 하여 세포부활도를 평가했다.
세포배양 상청을 모으고, Ⅰ형 콜라겐 생성량을 평가했다.
<Ⅰ형 콜라겐 생성의 측정>
모은 세포배양 상청 중의 Ⅰ형 콜라겐을 프로콜라겐(Procollagen) 타입 I C-펩타이드(PIP)EIA키트(TAKARA사제)를 사용하여, 키트에 부속된 매뉴얼에 따라서 배지 상청 중의 Ⅰ형 콜라겐 C말단 펩티드 측정하고, Ⅰ형 콜라겐 생성량의 지표로 했다. 1웰 당의 세포의 양은 헥스토 33342를 사용하여 DNA 량으로서 구하고, 추출물 또는 그 처리물에 의해 합성 촉진되는 Ⅰ형 콜라겐량은 단위세포 당으로서 평가했다.
표 1에 따르면, 측백나무 종자의 유기용매 추출물에 처리를 실시함으로서, 사람 신생아 유래의 섬유아세포 HFOK에 대하여 높은 세포부활능을 갖는 것을 알 수 있었다.
또한, 측백나무 종자의 유기용매 추출물에는Ⅰ형 콜라겐 생성 촉진효과는 보이지 않았지만, 처리를 실시함으로써 매우 저농도에서도 Ⅰ형 콜라겐의 생성을 높이고 있는 것이 인정되었다.
따라서, 본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진제 및 섬유아세포 증식 촉진제는, 측백나무 종자의 유기용매 추출물을 알칼리 처리 및 산 처리하는 것이 필요하다.
다음에, 상기 시험과는 다른 측백나무의 종자를 사용하여, Ⅰ형 콜라겐 생성 촉진효과에 대해서 추가적인 검토를 실시했다.
본 발명자들은 측백나무 종자를 약 3등분하고, 상기 종자의 물(10℃ 및 20℃) 추출물 및 유기용매 추출물의 처리물(B)을, 하기 방법에 의해 조제했다. 그리고, 물 추출물 및 처리물(B)의 단위 세포 당의 Ⅰ형 콜라겐 생성량을, 상기 시험에 의해 측정했다. 물 추출물 및 처리물(B) 무첨가의 경우(대조군)를 100으로 하여 결과를 도 1에 나타낸다.
또한, 도 1은 평균값±SD를 나타내고 있다. 또한, Student t검정(유의수준 * p<0.1, **p<0.05)에 의해 통계처리를 실시하여, 대조군에 대한 유의차 또는 경향차가 인정된 것을 나타냈다.
측백나무 종자의 물 추출물의 조제방법
측백나무 종자를 5배량(v/w)의 물에 침지하고, 10℃ 또는 20℃에서 24시간 추출을 실시했다. 나일론 메시(100 메시)로 미리 잔사를 제거하고 또한 여과지로 여과했다. 이와 같이 하여 물 추출물을 수득했다.
측백나무 종자의 유기용매 추출물의 처리물의 조제방법 B
측백나무의 종자를 5배량(v/w)의 유기용매(아세톤)에 침지하고, 20℃에서 24 시간 추출을 실시했다. 나일론 메시(100 메시)로 미리 잔사를 제거하고, 추가로 여과지로 여과했다. 회전증발기로 여과액으로부터 용매를 제거했다.
수득된 추출물을 교반 날개로 교반하면서, 0.5~15N의 NaOH 용액을 순 NaOH로 하여 100 ~ 300 g/ℓ의 범위내에서 추출물에 첨가했다(온도 50℃). 200rpm으로 교반하면서 5시간 처리를 실시했다. 그 후, 5N의 H2SO4를 서서히 첨가하고 교반하면서 pH를 1 부근까지 낮추고, 분리되는 액상(유상) 물질을 회수했다. 회수한 액상(유상) 물질에 같은 용량의 물을 가하여 수세하여, 불순물·염·과잉의 산을 제거했다. 액상(유상) 물질을 감압 건조하고, 액상의 처리물(B)을 수득했다.
도 1에 따르면, 유기용매 추출물의 처리물은 농도 의존적으로 유의한 콜라겐 생성 촉진효과를 갖는 것이 확인되었다.
그러나, 물 추출물은 어떤 조건에서도 거의 효과가 없고, 유의한 콜라겐 생성 촉진효과가 인정되지 않았다.
따라서, 본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진제는 측백나무 종자의 추출에, 물을 포함하지 않는 유기용매를 사용하는 것이 필요하다.
다음에, 상기 시험과는 다른 측백나무의 종자를 사용하여, 상기 종자의 처리물의 히알루론산 합성촉진 효과에 대한 검토와, Ⅰ형 콜라겐 생성 촉진효과 및 섬유아세포 증식촉진 효과의 확인을 실시했다.
즉, 상기 조제방법 A으로 조제한 측백나무 종자의 처리물에 대해서, 이하에 나타낸 시험에 의해 표피 세포에 의한 히알루론산 합성촉진 효과를 측정하고, 또한 상기 시험에 의해 섬유아세포 증식촉진 효과, 섬유아세포에 의한 Ⅰ형 콜라겐 생성 촉진효과를 측정했다. 처리물 무첨가의 경우를 100으로 하고, 결과를 표 2에 나타낸다.
<표피 세포의 히알루론산 합성촉진시험>
사람 표피 유래 각화세포 HaCaT를 96 웰 디쉬에 파종(6000개/웰)하고, 15% Humedia-KG2(크라보가부시키가이샤제)와 85% Humedia-KB2를 포함하는 배지에서 24 시간 배양했다. 그 후, 조제한 측백나무 종자의 처리물(배지에 대하여 0, 0.005, 0.01 체적%)를 포함하는 100% Humedia-KB2 배지로 교환했다. 2일간 계속 배양하여 세포의 배양 상청을 모았다.
상청 중에 포함되는 히알루론산의 양을, 히알루론산 측정 키트(미츠비시가가쿠메디언스가부시키가이샤제)를 사용하여 측정했다. 1웰 당의 세포의 양은 헥스토33342(도닌가가쿠가부시키가이샤제)를 사용하여, DNA양으로서 구했다. 측백나무 종자의 처리물에 의해 합성 촉진되는 히알루론산 양은, 단위세포 당으로 평가했다.
표 2에 따르면, 본 발명에 관한 측백나무 종자, 즉 백자인의 처리물은 표피 세포의 히알루론산 합성촉진효과도 갖고 있는 것으로 인정되었다.
또한, 백자인의 처리물은 섬유아세포 증식촉진 효과, Ⅰ형 콜라겐 생성 촉진효과를 갖는 것도 재확인할 수 있었다.
<주름개선효과시험>
다음에, 상기 시험과는 다른 측백나무 종자를 사용하여 상기 조제방법 A로 조제한 상기 종자의 처리물의 주름개선효과를 확인했다.
즉, 0.35 %의 측백나무 종자의 유기용매 추출물의 처리물을 배합한 것(액티브) 및 배합하고 있지 않은 것(플라시보(placebo))에 대해서, 하기 표 3에 나타낸 배합 조성의 피부외용제(크림)를 조제했다. 그리고, 28명의 전문 패널에게 2개월간, 1일 2회, 각 피부외용제를 좌우 눈꼬리에 각각 도포하게 하고, 어느 쪽의 잔주름이 눈에 띄지 않게 되었는지에 대해서 평가하게 했다. 결과를 도 2에 나타낸다.
크림 | 액티브(질량%) | 플라시보(질량%) |
다이나마이트글리세린 | 1.0 | 1.0 |
디프로필렌글리콜 | 5.0 | 5.0 |
1,3 부티렌글리콜 | 7.0 | 7.0 |
카르복시비닐폴리머 | 0.3 | 0.3 |
아크릴산메타크릴산알킬중합체 | 0.05 | 0.05 |
올레핀올리고머 | 8.0 | 8.0 |
디메틸폴리실록산 | 1.0 | 1.0 |
메틸페닐폴리실록산 | 1.0 | 1.0 |
측백나무 종자(백자인 아세톤 추출물)의 처리물 | 0.35 | - |
가성칼리 | 0.09 | 0.09 |
EDTA | 0.01 | 0.01 |
방부제 | 적량 | 적량 |
향료 | 적량 | 적량 |
이온교환수 | 잔여 | 잔여 |
(제법)이온교환수에 카르복시비닐폴리머와 아크릴산 메타크릴산 알킬 중합체를 균일하게 용해하고, 한편 올레핀올리고머에 측백나무 종자의 처리물, 디메틸폴리실록산, 메틸페닐폴리실록산을 용해하고 수상에 첨가했다. 이어서, 그 밖의 성분을 가한 후, 가성칼리로 중화시켜 증점하여 제조했다.도 2에 따르면, 반수 이상의 패널이 측백나무 종자의 처리물 배합품에 주름개선효과를 인정한 것이 명백해졌다.
따라서, 본 발명에 관한 측백나무 종자, 즉 백자인의 처리물은 주름개선효과도 갖고 있는 것이 인정되었다.
이하에, 본 발명에 관한 콜라겐 생성 촉진제, 히알루론산 생성 촉진제, 섬유아세포 증식촉진제, 항주름제의 배합예로서, 피부 외용 조성물 및 식품을 나타낸다. 본 발명은 상기 배합예에 의해 한정되는 것은 아니다. 또한, 백자인의 유기용매 추출물의 처리물은 모두, 상기 실시예와 동일한 시험에서 우수한 콜라겐 생성 촉진효과, 히알루론산 생성 촉진효과, 섬유아세포 증식촉진효과, 주름개선효과를 갖고 있었다.
배합예 1: 크림
스테아르산 5.0 질량%
스테아릴알콜 4.0
이소프로필미리스테이트 18.0
글리세린모노스테아르산 에스테르 3.0
프로필렌글리콜 10.0
본 콜라겐 생성 촉진제(백자인 아세톤 추출물의 처리물) 1.0
가성칼리 0.2
아황산 수소나트륨 0.01
방부제 적량
향료 적량
이온교환수 잔여
(제법)
*이온교환수에 프로필렌글리콜과 가성칼리를 가하여 용해하고, 가열하고 70℃로 유지했다(수상). 다른 성분을 혼합하고 가열 융해하여, 70℃로 유지했다(유상). 수상에 유상을 서서히 가하며, 전부 다 가하고 나서 얼마동안 그 온도로 유지하여 반응을 일으켰다. 그 후 호모믹서로 균일하게 유화하고, 잘 섞으면서 30℃까지 냉각하여 제조했다.
배합예 2: 크림
스테아르산 6.0 질량%
소르비탄모노스테아르산 에스테르 2.0
폴리옥시에틸렌(20 몰)소르비탄모노스테아르산 에스테르 1.5
프로필렌글리콜 10.0
본 히알루론산 생성 촉진제(백자인 아세트산에틸 추출물의 처리물)0.1
글리세린트리옥타노에이트 10.0
스쿠알렌 5.0
아황산수소나트륨 0.01
에틸파라벤 0.3
향료 적량
이온교환수 잔여
(제법)
이온교환수에 프로필렌글리콜을 가하여 용해하고, 가열하여 70℃로 유지했다(수상). 다른 성분을 혼합하여 가열 융해하고, 70℃로 유지했다(유상). 수상에 유상을 가하고 예비 유화를 실시하여, 호모믹서로 균일하게 유화한 후, 잘 섞으면서 30℃까지 냉각하여 제조했다.
배합예 3: 크림
스테아릴알콜 7.0 질량%
스테아르산 2.0
수첨 라놀린 2.0
스쿠알란 5.0
2-옥틸도데실알콜 6.0
폴리옥시에틸렌(25 몰)세틸알콜에테르 3.0
글리세린모노스테아르산 에스테르 2.0
프로필렌글리콜 5.0
본 섬유아세포 증식 촉진제(백자인 헥산 추출물의 처리물) 1.0
향료 적량
아황산수소나트륨 0.03
에틸파라벤 0.3
이온교환수 잔여
(제법)
이온교환수에 프로필렌글리콜을 가하여 용해하고 가열하여 70℃로 유지했다(수상). 다른 성분을 혼합하여 가열 융해하고 70℃로 유지했다(유상). 수상에 유상을 가하여 예비 유화를 실시하고 호모믹서로 균일하게 유화한 후, 잘 섞으면서 30℃까지 냉각하여 제조했다.
배합예 4: 유액
스테아르산 2.5 질량%
세틸알콜 1.5
바세린 5.0
유동파라핀 10.0
폴리옥시에틸렌(10 몰)모노올레산 에스테르 2.0
폴리에틸렌글리콜 1500 3.0
트리에탄올아민 1.0
본 콜라겐 생성 촉진제(백자인아세톤 추출물의 처리물) 0.04
카르노신 3.5
니코틴산아미드 1.0
아황산수소나트륨 0.01
에틸파라벤 0.3
카르복시비닐폴리머 0.05
향료 적량
이온교환수 잔여
(제법)
소량의 이온교환수에 카르복시비닐폴리머를 용해했다(A상). 남은 이온교환수에 폴리에틸렌글리콜 1500과 트리에탄올아민, 카르노신, 니코틴산아미드를 가하고, 가열 용해하여, 70℃로 유지했다(수상). 다른 성분을 혼합하여 가열 융해하고, 70℃로 유지했다(유상). 수상에 유상을 가하여 예비 유화를 실시하고, A상을 가하여 호모믹서로 균일하게 유화하여, 유화 후 잘 섞으면서 30℃까지 냉각하여 제조했다.
배합예 5: 유액
(유상부)
스테아릴알콜 1.5 질량%
스쿠알렌 2.0
바세린 2.5
탈취액상 라놀린 1.5
월견초유 2.0
미리스트산이소프로필 5.0
글리세린모노올레에이트 2.0
폴리옥시에틸렌(60 몰)경화피마자유 2.0
아세트산토코페롤 0.05
본 히알루론산 생성 촉진제(백자인 헥산 추출물의 처리물)0.01
에틸파라벤 0.2
부틸파라벤 0.1
에틸글리신 1.0
향료 적량
(수상부)
아황산수소나트륨 0.01
니코틴산아미드 0.05
글리세린 5.0
히알루론산나트륨 0.01
카르복시비닐폴리머 0.2
수산화칼륨 0.2
정제수 잔여
(제법)
유상부를 70℃에서 용해했다. 수상부를 70℃에서 용해하고, 수상부에 유상부를 혼합하여 유화기에서 유화한 후, 열교환기로 30℃까지 냉각하여 제조했다.
배합예 6: 젤상 미용액
95% 에탄올 10.0 질량%
디프로필렌글리콜 15.0
폴리옥시에틸렌(50 몰)올레일알콜에테르 2.0
카르복시비닐폴리머 1.0
가성소다 0.15
본 섬유아세포 증식 촉진제(백자인 아세트산에틸 추출물의 처리물)2.0
레티놀 0.04
L-아르기닌 0.1
사르코신 1.0
메틸파라벤 0.2
향료 적량
이온교환수 잔여
(제법)
이온교환수에 카르복시비닐폴리머를 균일하게 용해하고, 한편 95% 에탄올에 백자인 아세트산에틸 추출물의 처리물, 폴리옥시에틸렌(50 몰) 올레일알콜에테르를 용해하고, 수상에 첨가했다. 이어서, 그 밖의 성분을 가한 후, 가성소다, L-아르기닌으로 중화시켜 증점하여 제조했다.
배합예 7: 미용액
(A 상)
에탄올(95%) 10.0 질량%
폴리옥시에틸렌(20 몰)옥틸도데칸올 1.0
본 콜라겐 생성 촉진제(백자인 헥산 추출물의 처리물) 0.3
메틸파라벤 0.15
판토테닐에틸에테르 0.1
(B상)
수산화칼륨 0.1
(C상)
글리세린 5.0
카르노신 3.0
니코틴산 아미드 3.0
디프로필렌글리콜 10.0
아황산수소나트륨 0.03
카르복시비닐폴리머 0.2
정제수 잔여
(제법)
A상, C상을 각각 균일하게 용해하고, C상에 A상을 가하여 가용화했다. 다음에, B상을 가한 후 충전을 실시하여 제조했다.
배합예 8: 팩
(A상)
디프로필렌글리콜 5.0 질량%
폴리옥시에틸렌(60 몰)경화피마자유 5.0
(B상)
올리브유 5.0
본 히알루론산 생성 촉진제(백자인 아세톤 추출물의 처리물) 1.0
아세트산토코페롤 0.2
에틸파라벤 0.2
향료 0.2
(C상)
아황산수소나트륨 0.03
카르노신 0.1
폴리비닐알콜(비누화도 90, 중합도 2000) 13.0
에탄올 7.0
정제수 잔여
(제법)
A상, B상, C상을 각각 균일하게 용해하고, A상에 B상을 가하여 가용화했다. 이어서, 이것을 C상에 가한 후 충전을 실시하여 제조했다.
배합예 9: 연고
폴리옥시에틸렌(30 몰)세틸에테르 2.0 질량%
글리세린모노스테아레이트 10.0
유동파라핀 10.0
바세린 40.0
세탄올 6.0
메틸파라벤 0.1
부틸파라벤 0.1
글리세린모노스테아르산에스테르 2.0
본 섬유아세포 증식촉진제(백자인 아세톤 추출물의 처리물) 5.0
프로필렌글리콜 10.0
이온교환수 잔여
향료 적량
(제법)
*이온교환수에 프로필렌글리콜을 가하여 용해하고, 가열하여 70℃로 유지했다(수상). 다른 성분을 70℃에서 혼합 용해했다(유상). 상기 수상에 유상을 첨가하고, 호모믹서로 균일하게 유화하고, 냉각 후 충전을 실시하여 제조했다.
이하, 동일하게 하여 배합예 10~13의 크림을 제조했다.
배합예 10: 크림
유동파라핀 8.0 질량%
바세린 3.0
디메틸폴리실록산 2.0
스테아릴알콜 3.0
베헤닐알콜 2.0
글리세린 5.0
디프로필렌글리콜 4.0
트레할로스 1.0
테트라2-에틸헥산산펜타에리스리톨 4.0
모노이소스테아르산폴리옥시에틸렌글리세릴 2.0
모노스테아르산폴리옥시에틸렌글리세린 1.0
친유형 모노스테아르산글리세린 2.0
시트르산 0.05
시트르산나트륨 0.05
수산화칼륨 0.015
유용성 감초 엑기스 0.1
레티놀팔미테이트(100만 단위) 0.25
본 콜라겐 생성 촉진제(백자인 아세트산에틸 추출물의 처리물) 0.3
카르노신 3.5
니코틴산 아미드 2.0
아세트산토코페롤 0.1
파라옥시벤조산에스테르 적량
페녹시에탄올 적량
디부틸히드록시톨루엔 적량
에데트산삼나트륨 0.05
4-t-부틸-4’-메톡시디벤조일메탄 0.01
파라메톡시신남산2-에틸헥실 0.1
β-카로틴 0.01
폴리비닐알콜 0.5
히드록시에틸셀룰로스 0.5
카르복시비닐폴리머 0.05
정제수 잔여
향료 적량
배합예 11: 크림
바세린 2.0 질량%
디메틸폴리실록산 2.0
에탄올 5.0
베헤닐알콜 0.5
바틸알콜 0.2
글리세린 7.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
폴리에틸렌글리콜20000 0.5
호호바유 3.0
스쿠알란 2.0
히드록시스테아르산피토스테릴 0.5
테트라2-에틸헥산산펜타에리스리톨 1.0
폴리옥시에틸렌경화피마자유 1.0
수산화칼륨 0.1
피로아황산나트륨 0.01
헥사메타인산나트륨 0.05
글리시레틴산스테아릴 0.1
판토테닐에틸에테르 0.1
알부틴 7.0
트라넥삼산메틸아미드염산염 11.0
본 히알루론산 생성 촉진제(백자인 헥산 추출물의 처리물) 0.001
카르노신 3.5
아세트산토코페롤 0.1
히알루론산나트륨 0.05
파라옥시벤조산에스테르 적량
에데트산삼나트륨 0.05
4-t-부틸-4’-메톡시디벤조일메탄 0.1
디파라메톡시신남산모노-2-에틸헥산산글리세릴 0.1
황산화철 적량
잔탄검 0.1
카르복시비닐폴리머 0.2
정제수 잔여
배합예 12: 크림
바세린 2.0 질량%
디메틸폴리실록산 2.0
*에탄올 5.0
베헤닐알콜 0.5
바틸알콜 0.2
글리세린 7.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
폴리에틸렌글리콜20000 0.5
호호바유 3.0
스쿠알란 2.0
히드록시스테아르산피토스테릴 0.5
테트라2-에틸헥산산펜타에리스리톨 1.0
폴리옥시에틸렌경화피마자유 1.0
수산화칼륨 0.1
피로아황산나트륨 0.01
헥사메타인산나트륨 0.05
글리시레틴산스테아릴 0.1
판토테닐에틸에테르 0.1
알부틴 7.0
트라넥삼산메틸아미드염산염 11.0
본 항주름제(백자인 아세톤 추출물의 처리물) 1.0
아세트산토코페롤 0.1
히알루론산나트륨 0.05
파라옥시벤조산에스테르 적량
에데트산삼나트륨 0.05
4-t-부틸-4’-메톡시디벤조일메탄 0.1
디파라메톡시신남산모노-2-에틸헥산산글리세릴 0.1
황산화철 적량
잔탄검 0.1
카르복시비닐폴리머 0.2
정제수 잔여
배합예 13: 크림
바세린 2.0 질량%
디메틸폴리실록산 2.0
*에탄올 5.0
베헤닐알콜 0.5
바틸알콜 0.2
글리세린 7.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
폴리에틸렌글리콜20000 0.5
호호바유 3.0
스쿠알란 2.0
히드록시스테아르산 피토스테릴 0.5
테트라2-에틸헥산산펜타에리스리톨 1.0
폴리옥시에틸렌경화피마자유 1.0
수산화칼륨 0.1
피로아황산나트륨 0.01
헥사메타인산나트륨 0.05
글리시레틴산스테아릴 0.1
판토테닐에틸에테르 0.1
4메톡시벤조산 3.0
트라넥삼산메틸아미드염산염 11.0
본 콜라겐 생성 촉진제(백자인 헥산 추출물의 처리물) 0.1
카르노신 3.5
아세트산토코페롤 0.1
히알루론산나트륨 0.05
파라옥시벤조산에스테르 적량
에데트산삼나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 0.1
디파라메톡시신남산모노-2-에틸헥산산글리세릴 0.1
황산화철 적량
잔탄검 0.1
카르복시비닐폴리머 0.2
정제수 잔여
배합예 14: 마이크로니들
일본 공개특허공보 제2005-152180호에 기재된 방법에 의한 제조방법으로, 이하의 조성에 따른다.
말토스 94.5 질량%
*덱스트란 5.0
로사르탄 0.1
본 히알루론산 생성 촉진제(백자인 아세트산에틸 추출물의 처리물)0.4
배합예 15: 소프트캡슐(1,500㎎/일)
식용대두유 530㎎
*두충 엑기스 50
당근 엑기스 50
본 콜라겐 생성 촉진제(백자인 함수 에탄올 추출물의 처리물) 100
로얄젤리 50
마카 30
γ-아미노부티르산(GABA) 30
밀랍 60
젤라틴 375
글리세린 120
글리세린지방산에스테르 105
Claims (4)
- 측백나무(Platycladus orientalis)의 종자를 유기용매를 사용하여 추출하여 유성성분을 함유하는 추출물을 수득하고, 상기 추출물의 용매의 일부 또는 전부를 유거한 후, 농도 0.5 ~ 15N의 알칼리 수용액을 첨가, 혼합하고, 이어서 산 처리후 수세하여 수득되고, 히알루론산 생성을 촉진하는 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
첨가하는 순알칼리량이 100 ~ 300g/ℓ 추출물인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 도포용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 조성물. - 제 2 항에 있어서,
상기 조성물은 도포용인 것을 특징으로 하는, 피부 개선용 조성물.
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