KR20100113572A - 항-ＥＤｂ 피브로넥틴 항체-ＩＬ-２ 융합 단백질과 Ｂ 세포, Ｂ 세포 전구체 및/또는 이의 암성 대응물에 결합하는 분자의 조합물 - Google Patents

항-ＥＤｂ 피브로넥틴 항체-ＩＬ-２ 융합 단백질과 Ｂ 세포, Ｂ 세포 전구체 및/또는 이의 암성 대응물에 결합하는 분자의 조합물 Download PDF

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한스 디트리히 멘센
안드레아스 멘라드
크리스토프 쉬리만
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필로겐 에스.피.에이.
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Abstract

본 발명은 항-EDb 피브로넥틴 항체-IL-2 융합 단백질과 B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이의 암성 대응물에 결합하는 분자의 조합물, 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

항-ＥＤｂ 피브로넥틴 항체-ＩＬ-２ 융합 단백질과 Ｂ 세포, Ｂ 세포 전구체 및/또는 이의 암성 대응물에 결합하는 분자의 조합물{COMBINATION OF AN ANTI-EDb FIBRONECTIN ANTIBODY-IL-2 FUSION PROTEIN, AND A MOLECULE BINDING TO B CELLS, B CELL PROGENITORS AND/OR THEIR CANCEROUS COUNTERPART}
본 발명은 항-EDb 피브로넥틴 항체-IL-2 융합 단백질과 B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이의 암성 대응물에 결합하는 분자의 조합물, 및 이의 용도에 관한 것이다.
B 림프구 전구 세포로부터 유래된 일군의 조직병리학적 및 임상적으로 독특한 악성종양인 B 세포 비-호지킨(non-Hodgkin) 림프종 (B-NHL)은 혈액 악성종양의 가장 통상적인 군이다. 따라서, B-NHL 환자로부터의 악성 림프구는 이들의 세포 표면 상에 특징적인 B 세포 마커 예컨대 CD20, CD23 등을 발현한다. B-NHL은 매년 미국에서 50000명을 초과하는 새롭게 진단되는 사례들을 나타내고, 암-관련 사망의 5％를 차지한다.
리툭시맵(rituximab) (리툭산(Rituxan)®; R)은 악성 및 정상 B 세포 집단의 세포 표면 상에서 구성적으로 발현되는 CD20 세포 표면 에피토프에 직접적으로 결합하는 키메라 모노클로날 IgG1 항체이다. 이렇게 결합함으로써, 리툭시맵은 (a) 항체-의존적 세포형 세포독성 (ADCC)을 이끌어내고, (b) 보체-의존적 세포용해 (CDC) 및/또는 보체-의존적 세포형 세포독성을 통해 림프종 세포 사망을 유도하며, (c) 리툭시맵에 의한 CD20의 고용 후 세포자멸사를 직접 유도한다. 또한, (d) 리툭시맵은 항원-제시 세포에 의한 리툭시맵-사망 악성 B 세포로부터의 림프종 항원의 교차-제시 및 림프종 항원-특이적 세포독성 T 세포의 프라이밍(priming)을 통해 실행되는 백신 효과를 지닐 것이다 ([Selenko et al, 2001]).
A) ADCC: 이러한 메커니즘은 항체의 Fc 부분이 세포독성 능력이 있는 면역 세포 예컨대 단핵구, 천연 킬러 세포, 및 과립구 상에서 발현된 Fcγ 수용체에 결합하는 것을 수반하고, 그후 이는 포식작용 또는 면역 이펙터 세포 내에 함유된 세포독성 과립의 방출에 의한 리툭시맵-결합 B 세포의 파괴에 이를 것이다. 현재 ADCC가 리툭시맵의 주요 작용 메커니즘인 것으로 간주된다.
B) CDC: 리툭시맵의 Fc 부분이 보체에 결합하기 때문에, 림프종 세포 사망이 CDC를 통해 달성될 수 있다. 그러나, 보체 인자가 유전학적으로 결핍된 마우스에서 리툭시맵-유도 B 세포 고갈이 여전히 발생한다는 최근의 발견은 이러한 작용 메커니즘에 대한 초기의 열의를 경감시켰다.
C) 세포자멸사의 유도: 시험관내 연구에서, 리툭시맵에 의한 CD20의 고용이 세포내 신호전달 이벤트의 케스케이드 및 항-세포자멸사 인자들의 선택적인 하향조절을 유발하는 것으로 나타났다. 이는 또한 CD20을 지질 뗏목 내로 이동시키고, 증가된 칼슘 동원을 통해 카스페이스를 활성화시킨다 ([Janas et al, 2005]). CLL 환자에서, 리툭시맵의 주입 직후에, ADCC와 같은 다른 가능한 메커니즘이 생체 내에서 유발될 수 있기 오래 전에, 순환 B 세포가 여러 카스페이스 및 폴리 (ADP-리보스) 중합효소 (PARP) 절단의 활성화를 나타낸다는 것이 발견되었다 ([Byrd et al, 2002]).
D) 백신 효과/T 세포 응답: 리툭시맵으로의 재치료가 1차 치료만큼 더 긴 중앙 반응 기간과 관련되었고, 재치료에 응답한 환자에서, 리툭시맵의 항종양 효과가 항체가 순환으로부터 소거된 후 오랫동안 지속되었다는 임상 발견 ([Davis et al, 2000])은 수반되는 특이적인 면역학적 메커니즘을 강하게 암시한다.
단일 작용제로서의 리툭시맵으로의 치료는 거의 모든 아유형의 B-세포 림프종 환자에서 상당한, 그러나 온건하고 짧게 지속되는 응답을 유도한다. 그러나, 이의 가장 큰 이점은 유도 화학요법 계획과 조합될 때 나타난다 ([Coiffier, 2006]). 표준 화학요법, 특히 CHOP (시클로포스파미드, 빈크리스틴, 아드리아마이신 및 프레드니솔론)과 조합되어, 각각의 화학요법 사이클의 제1일의 90분 정맥내 주입물로서의 375 ㎎/㎡ 용량의 리툭시맵은 확산성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL) 환자의 치유율을 화학요법 단독으로의 38％로부터 약 52％로 증가시킨다 ([Coiffier 2002, GELA OS 데이터의 개정판, ASH 2007]).
무통성 림프종에서, 모든 유도 화학요법 조합물 (FCM, CVP, CHOP, FND)에 리툭시맵을 첨가하는 것은 전체적인 응답 및 완전 완화율에서의 상당한 증가, 뿐만 아니라 질환 진행까지의 시간의 지연을 초래하였다 ([Marcus, 2005]; [Hiddemann 2005]). 그러나, 리툭시맵을 화학요법에 첨가하는 것이 항상 개선된 임상 결과에 이르지는 않는다. 외투 세포 림프종 환자에서, CHOP + 리툭시맵으로의 치료는 CHOP 치료법이 단독으로 제공된 환자와 비교하여 유사한 무진행(progression-free) 생존 및 전체 생존을 초래하였다 ([Lenz et al, 2005]).
B-NHL 환자에서 완화를 유도하는 치료 (유도 요법)로서의 확립된 역할에 더하여, 리툭시맵 단독요법은 응답들을 공고하게 하거나 완화를 연장하기 위한 유지 요법으로서 또한 평가되었다. 25 ㎎ 리툭시맵/㎖이 허용가능한 최저 혈청 농도라는 가정 하에, 3개월마다 주입된 375 ㎎/㎡ 리툭시맵의 용량이 예상 약동학 연구에서 리툭시맵 유지 요법에 충분한 것으로 확인되었다 ([Gordan, 2005]). CVP ([Hoechster, 2005]) 또는 CHOP ([Habermann, 2006])으로의 최초의 표준 화학요법 후 유지 리툭시맵을 사용하는 경우에 일부 연구가 상당한 임상 이점을 나타냈지만, 리툭시맵이 유도 화학요법 (예를 들어, R-CHOP)의 일부로서 사용된 환자에게 리툭시맵 유지 요법이 추가적인 이점을 제공하는지 여부는 여전히 불명확하다.
불행하게도, 그리고 화학요법과 조합된 리툭시맵 (예를 들어, R-CHOP)의 의심할 여지가 없는 임상적 유효성에도 불구하고, 여전히 대다수의 B-NHL 환자가 결국 진행성 질환으로 사망한다. 또한, B-NHL의 치료에서 효과적인 작용제임에도 불구하고, 재발/불응성 CD20+ 소포성 림프종 환자의 약 50％가 리툭시맵으로의 최초 치료에 응답하지 않고 (선천적 저항성; [McLaughlin et al 1998]), 기존의 리툭시맵 응답성 환자의 약 60％에게 리툭시맵으로의 재치료가 이롭지 않을 것이다 (후천적 저항성; [Davis et al, 2000]). 이러한 형태들의 리툭시맵-저항성이 악성 B 세포의 적응 성질로 인한 것인지 또는 숙주의 손상된 면역 이펙터 메커니즘으로 인한 것인지 여부가 현재 불명확하다. 어쨌든, 리툭시맵 저항성은 추가적으로 개선되는 임상 결과의 관점에서 B-NHL의 면역요법 및 면역화학요법에 대한 상당한 장벽을 나타낸다.
리툭시맵/화학요법 조합이 분석되었지만, 추가적인 요법 개선이 여전히 강하게 지속적으로 요구된다. 2가지 일반적인 전략이 현재 추구되고 있다: a) 신규 항-CD20 항체의 조작, 및 b) CD20 이외의 B 세포 항원을 표적으로 하는 모노클로날 항체의 생성. 2가지 카테고리의 새로운 항-CD20 모노클로날 항체가 현재 임상 평가 중이다: a) Fc-수용체 FcγRIIIa (CD16)에 대해 리툭시맵보다 더 높은 친화도를 나타내는 항-CD20 항체, 및 b) 면역원성이 더 낮은 항-CD20 항체 (인간화; Tbl 1). 이러한 항체들 중 아마도 가장 강력한 것일 GA-101 (글리코-조작 Fc 부분 및 변형된 팔꿈치 힌지(hinge)가 있는 인간화 항-CD20 항체)는 NHL 세포주에 대한 ADCC에서 10-100배 증가를 초래한다. 면역원성이 더 낮은 항-CD20 항체로의 소규모 I상/II상 연구는 재발 B-NHL 환자에서 약 50％의 응답율을 나타낸다 ([Coiffier, 2006]; [Hagenbeek, 2005]; [Morschhauser, 2005]). B-NHL에서의 CD20 이외의 표면 분자를 표적으로 하는 모노클로날 항체 예컨대 루밀리주맵(lumilixumab) (항-CD23), 에프라투주맵(epratuzumab) (항-CD22), SGN-40 및 HCD122 (모두 항-CD40), 갈릭시맵(galiximab) (항-CD80), 아폴리주맵(apolizumab) (Hu1D10), KRN848, 1D09C3 (모두 항-HLA-DR)은 초기 임상 시험에서 장래성을 나타냈다. 신규 항-CD20 항체 및 비-CD20 B-세포 에피토프에 대해 지시된 항체는 성공적인 것으로 간주되려면 리툭시맵에 비해 현저하게 우수한 효능을 나타내야할 것이지만, 대부분의 이러한 항체로의 초기의 임상 결과는 증가식 이점만을 가리킨다.
리툭시맵을 미접합 IL-2와 조합하려는 노력이 있었다 ([Eisenbeis et al., 2004]; [Gluck et al., 2004]).
그러나, 최근의 II상 시험의 결과는 "리툭시맵 + rIL-2 조합 요법이 안전하고 일반적으로 잘 허용되었지만, 응답이 낮았다"는 것을 가리켰다 ([Khan et al., 2006, Clin Cancer Res 2006; 12(23): 7046-7053]). 또한, "rIL-2가 생체 내에서 FcR-보유 세포 부분집합을 확장시키고, 리툭시맵의 시험관내 ADCC를 강화한다"는 것이 발견되었다. 그러나, 저자들은 이러한 발견이 "리툭시맵-불응성 NHL 환자에 대한 의미있는 임상적 이점으로 직접 번역되지 않았다"는 것으로 결론지었다. 또한, 저자들은 "리툭시맵의 항종양 활성을 유리하게 조정하는 것에서의 추가적인 진전이 이루어질 수 있기 전에 리툭시맵의 생체내 작용 메커니즘의 더 양호한 이해가 필요할 것이다"라고 결론지었다.
암 적응증에 더하여, 항-B 세포 항체, 특히 리툭시맵은 류머티스성 관절염, 크론병 및 자가면역 용혈 빈혈이 포함되는 자가면역 질환의 치료용으로 개발되고 있다. ([Assous et al, 2008]).
표준 요법, 뿐만 아니라 현재 임상 개발 중인 새로운 치료 옵션을 고려하여, 우선적으로 완전 완화에 이르고/이르거나 리툭시맵-저항성 림프종을 치료하는데 유용한, B-세포 림프종 환자에 대한 더욱 활성인 치료법을 고안하는 것이 여전히 의학적으로 강하게 요구된다. 자가면역 질환, 특히 만성 자가면역 질환을 치료하기 위한 새로운 의약을 제공하는 것이 또한 의학적으로 강하게 요구된다.
[표 1]
Figure pct00001
[표 2]
Figure pct00002
피브로넥틴의 엑스트라(extra) 도메인 B (EDB)는 지금까지 기술된 혈관생성의 가장 특성화된 마커들 중 하나이다 ([Zardi et al., Embo J. 1987;6:2337-2342]; [Kaspar et al., Int J Cancer. 2006;118:1331-1339]). 아미노산 91개의 이러한 제III형 상동성 도메인은 별법적인 스플라이싱(splicing)의 메커니즘에 의해 활성 조직 리모델링 동안 피브로넥틴 분자 내로 삽입될 수 있다 ([Zardi et al., 상기 문헌]). EDB는 건강한 성인 조직에서는 본질적으로 검출불가능하지만, 다수의 침습성 고형 종양의 혈관계 내에 고도로 풍부하다. EDB에 대해 특이적인 고친화도 인간 항체 L19 ([Pini et al., J Biol Chem. 1998;273:21769-21776])의 종양-표적화 능력이 암의 동물 모델 ([Tarli et al., Blood. 1999; 94:192-198]; [Borsi et al., Int J Cancer. 2002;102:75-85]; [Berndorff et al., J Nucl Med. 2006;47:1707-1716]; [Berndorff et al., Clin Cancer Res. 2005;11:7053s-7063s]; [Demartis et al., Eur J Nucl Med. 2001;28:534-53]) 및 고형 종양 환자 ([Santimaria et al., Clin Cancer Res. 2003;9:571-579]) 양쪽 모두에서 잘 확립되어 있다. 최근, 다양한 비-호지킨 림프종 환자로부터의 대다수의 림프종-침윤 조직 샘플에서 ED-B 발현이 또한 발견되었다 ([Sauer et al., 2006]).
특히 rIL-2 또는 유사한 사이토카인과 조합된 경우의 항체-기반 암 요법에 관한 현재의 지식을 기초로, 마우스에서의 조합 요법 실험에서, 리툭시맵과 L19-IL2 융합물의 조합이 확립된 라모스(Ramos) 림프종의 완전한 근절을 고용량 L19-IL2 군 내의 5마리의 마우스 중 4마리에서 유도하였음이 뜻밖에 발견되었고 (L19-IL2고용량 대 염수: P < 0.00001), 이때 4마리의 CR (완전 완화) 중 3마리는 3회의 주사 후에 이미 달성되었다. 실제로, 이러한 면역사이토카인은 리툭시맵과 조합된 상응하는 등몰량의 미접합 rIL-2보다 두드러지게 더 강력하였다 (L19-IL2고용량 대 rIL-2고용량: P < 0.001). 특히, 심지어 리툭시맵과 조합된 최저 용량 수준의 L19-IL2도 요법의 4회 사이클 후 5마리의 사례 중 4마리에서 CR을 유도하여 우수한 치료 활성을 여전히 나타낸 한편 (L19-IL2저용량 대 염수: P < 0.00001; L19-IL2저용량 대 rIL-2저용량: P < 0.00001), 리툭시맵과 조합된 3배 더 높은 용량의 표적화되지 않은 사이토카인은 단지 종양 성장을 지연시킬 수만 있었다 (L19-IL2저용량 대 rIL-2고용량: P < 0.001).
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은
(i) EDb-피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체 부분 및 인터루킨-2 부분을 포함하는 융합 단백질, 및
(ii) B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자
를 적어도 포함하는 조합물에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자는 CD20, CD23, CD22, CD40, CD80, HLA-DR 또는 Hu1D10에 특이적으로 결합한다.
바람직한 실시양태에서, B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자는 항체, 항체 단편 또는 항체 모방체로부터 선택된다.
전장 항체 또는 항체 단편, 또는 이들의 융합 단백질인, CD20 , CD23, CD22, CD40 또는 CD80에 특이적으로 결합하는 분자가 바람직하다.
특히 바람직한 실시양태에서, 항체 또는 항체 단편, 또는 이들의 융합 단백질은 CD20에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 본 발명은
(i) EDb-피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체 부분 및 인터루킨-2 부분을 포함하는 융합 단백질, 및
(ii) CD20에 특이적으로 결합하는 분자
를 적어도 포함하는 조합물에 관한 것이다.
추가적인 실시양태에서, 본 발명은
(i) EDb-피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체 부분 및 인터루킨-2 부분을 포함하는 융합 단백질, 및
(ii) CD20을 발현하는 세포에 특이적으로 결합하는 분자
를 적어도 포함하는 조합물에 관한 것이다.
특히 바람직한 실시양태에서, CD20을 발현하는 세포에 특이적으로 결합하고/하거나 CD20에 특이적으로 결합하는 분자는 CD20에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편이다.
바람직한 실시양태에서, (i)의 항체 부분은 피브로넥틴 (FN)의 EDb-도메인에 특이적으로 결합한다. 이같은 항체는 종래 기술에 공지되어 있고, 예를 들어, WO 97/45544에 기술되어 있다.
또다른 실시양태에서, EDb-피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체는 잠복성(cryptic) 에피토프에 결합한다. 이같은 항체의 예는 BC-1 항체이다.
바람직하게는, 피브로넥틴의 EDb-도메인에 결합하는 이같은 항체는 FN의 EDb-도메인에 대해 높은 친화도를 나타내고, 특히 나노몰 또는 나노몰 미만의 친화도로 항체가 EDb 피브로넥틴 도메인에 결합한다. 이같은 항체는 종래 기술에 공지되어 있고, 예를 들어, WO99/58570에 기술되어 있다.
L19 항체가 특히 바람직하다.
EDb 피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체 부분, 특히 L19 항체는 다양한 항체 포맷으로 사용될 수 있다. 바람직한 항체 포맷은 전체 IgG, Fab, (Fab')2, scFv, 디아바디(diabody), 미니바디(minibody) 또는 소형 면역단백질 (SIP) 포맷이다. L19 항체에 대해 전체 IgG, scFv 및 SIP 포맷이 특히 바람직하다. scFv 포맷의 L19 항체가 가장 바람직하다. 예를 들어, CH3 도메인 또는 IgE의 εs2-CH4 도메인을 기초로 하여, 여러 면역단백질 포맷이 종래 기술에 공지되어 있다. IgE의 εs2-CH4 도메인을 기초로 하는 L19에 대한 바람직한 SIP 포맷 및 전체 IgG 포맷의 L19가 WO03/076469에 예를 들어 기술되어 있다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 항체 부분은 L19 항체의 CDR 서열을 1개 이상 함유한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 항체 부분은 L19 항체의 CDR 서열을 포함하고, 특히 서열 6 내지 11에 따른 서열을 포함한다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 항체 부분은 L19 항체의 VL 및 VH 사슬을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 이는 1개 이상의 서열 1에 따른 VH 사슬 또는 1개 이상의 서열 2에 따른 VL 사슬을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 이는 1개 이상의 서열 1에 따른 VH 사슬 및 1개 이상의 서열 2에 따른 VL 사슬을 포함한다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 항체 부분은 1개의 서열 1에 따른 VH 사슬 및 1개의 서열 2에 따른 VL 사슬을 포함한다. 추가적인 바람직한 실시양태에서, 항체 부분은 2개의 서열 1에 따른 VH 사슬 및 2개의 서열 2에 따른 VL 사슬을 포함한다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 항체 링커(linker)에 의해 VH 및 VL 사슬이 연결된다.
바람직한 실시양태에서, 항체 링커는 서열 3에 따른 서열, 또는 서열 3에 따른 서열에 대한 동일성이 90％ 이상인 서열을 포함한다.
EDb-피브로넥틴에 특이적으로 결합하는 항체 부분이 인터루킨-2에 융합된다. 양쪽 부분이 직접적으로 융합될 수 있거나, 또는 링커를 통해, 특히 펩티드성 융합 단백질 링커에 의해 융합될 수 있다. 바람직하게는, 융합 단백질 링커는 아미노산 1개 내지 30개의 길이이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 융합 단백질 링커는 서열 5에 따른 서열을 포함한다.
또다른 특히 바람직한 실시양태에서, 인터루킨-2는 인간 인터루킨-2 (인간 IL-2)이다.
인터루킨-2는 재조합에 의해 생산될 수 있거나, 또는 인간 조직으로부터 단리될 수 있고, 바람직하게는 재조합에 의해 생산된다 (rIL-2). 특히 바람직한 실시양태에서, 인터루킨-2 부분은 서열 4에 따른 서열, 또는 이의 기능성 변이체를 포함한다.
융합 단백질은 단량체성, 또는 다량체성, 예를 들어, 이량체성일 수 있다. 이량체성 또는 기타 다량체성 형태는 공유결합에 의해 또는 비-공유결합에 의해 형성될 수 있다. 예를 들어, L19(scFv)-IL2가 비-공융결합 동종이량체를 형성할 수 있다.
바람직하게는, 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 재조합에 의해 융합 단백질이 생산된다. 특히, 원핵생물 또는 진핵생물 발현 시스템. 예를 들어, 효모 또는 포유류 발현 시스템을 사용할 수 있다.
본 발명의 조합물은 B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자를 추가로 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자가 표지되고, 특히 방사성으로 표지된다. 바람직하게는, 표지화는 공유결합 표지화이다.
특히 바람직한 실시양태에서, B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 표지된 분자는 방사성으로 표지된 항-CD20 항체이다. 다양한 방사성 표지가 의약에서 사용된다.
항체 및 단백질을 표지하기 위한 특히 유용한 방사성 동위원소는 90Y, 111In 및 131I-표지이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 항-CD20 항체가 90Y, 111In 또는 131I로 표지된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 방사성 표지된 항-CD20 항체가 Y-90-이브리튜모맵(Ibritumomab)-티욱세탄(Tiuxetan) (Y90-제발린(Zevalin)® 또는 -제발린®) 및 I-131 토시튜모맵(tositumomab) (벡사르(Bexxar)®)로부터 선택된다. Y-90-이브리튜모맵-티욱세탄 및 이의 생산이 예를 들어 EP 0 669 836에 Y2B8 (이리튬-[90]이 표지된 2B8-MX-DTPA)로서 개시되어 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조합물은 CD20에 특이적으로 결합하는 분자를 추가로 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 이러한 분자는 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 융합 단백질이다.
ADCC 활성을 나타내는 항-CD20 항체가 특히 바람직하다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, 리툭시맵, 오크렐리주맵(Ocrelizumab), PRO131921, 벨투주맵(Veltuzumab), 오파투무맵(Ofatumumab), AME-133, 및 GA-101로부터 항-CD20 항체가 선택된다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, CD20에 특이적으로 결합하는 항체는 전체 IgG, Fab, (Fab)2, scFv, 디아바디, 미니바디 또는 소형 면역단백질 (SIP) 포맷이다.
또한, 항-CD20 항체는 단량체성 또는 다량체성, 예를 들어, 이량체성일 수 있다. 다량체성 항체는 동종성 또는 이종성일 수 있다. 예를 들어, 한 부분은 CD20에 특이적으로 결합하고, 또다른 부분은 또다른 표적에 결합하는 2가 항체가 사용될 수 있다. 또한, CD20에 특이적으로 결합하는 분자는 추가적인 이펙터를 포함할 수 있고, 특히 방사성으로 표지될 수 있다. 본 발명의 이러한 실시양태에서, 상기 기술된 바와 같은 제발린® 또는 벡사르®이 사용될 수 있다.
특히 바람직한 항-CD20 항체는 리툭시맵, 특히 리툭산® (맵테라(MabThera)® 또는 IDEC-C2B8로 또한 칭해짐)이다. 리툭산®은 정상 및 악성 B 림프구의 표면 상에서 발견되는 CD20 항원에 대해 지시된 유전자 조직된 키메라 뮤린(murine)/인간 모노클로날 항체이다. 이러한 항체는 뮤린 경쇄 및 중쇄 가변 영역 서열 및 인간 불변 영역 서열을 함유하는 IgG1 카파 면역글로불린이다. 예를 들어, US 5,843,439; 5,776,456 및 5,736,137에 리툭시맵이 개시되어 있다.
더욱 바람직한 실시양태에서, 조합물은 리툭시맵 및 L19-IL2를 포함한다.
더욱 더 바람직한 실시양태에서, L19 항체는 scFv 포맷이다.
[Carnemolla et al., Blood. 2002;99: 1659-1665]에 기술된 L19-IL2가 특히 바람직하다.
본 발명의 또다른 실시양태는 의약으로 사용하기 위한 상기 기술된 바와 같은 조합물에 관한 것이다.
본 발명의 추가적인 실시양태는 암을 치료하기 위한 의약으로 사용하기 위한 상기 기술된 바와 같은 조합물에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 암은 림프종, 바람직하게는 B-세포 림프종이다. B-세포 비-호지킨 림프종 (B-NHL)을 치료하기 위한 본 발명의 조합물의 용도가 가장 바람직하다.
추가적인 바람직한 실시양태에서, B-세포 림프종은 불응성 또는 재발 B-세포 림프종 또는 리툭시맵-단독요법에 대해 저항성인 림프종이다.
추가로 본 발명은 본 발명의 조합물이 암 환자에게 치료적 유효량으로 투여되는, 암의 치료 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 암은 림프종, 바람직하게는 B-세포 림프종, 특히 NHL이다.
본 발명의 추가적인 양상은 자가면역 질환, 특히 만성 자가면역 질환을 치료하기 위한 의약으로 사용하기 위한 상기 기술된 바와 같은 조합물에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 자가면역 질환은 류머티스성 관절염, 크론병, 궤양성 결장염 또는 자가면역 용혈 빈혈이다.
환자는 임의의 포유동물일 수 있고, 바람직하게는 환자는 인간이다.
다양한 투여 경로, 예를 들어, 정맥내, 피하 또는 복강내 투여가 가능하고, 정맥내 투여가 바람직하다.
또한, EDb 피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 융합 단백질 및 B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자는 동시에 또는 상이한 시점에 투여될 수 있다. 더욱이, 조합물은 환자에게 1회 또는 수회 투여될 수 있다. 또한, 조합물의 한 성분은 1회 투여되고, 또다른 성분은 수회 투여되는 것이 가능하다.
전형적으로, 리툭시맵 및 L19-IL2가 조합 요법으로 투여되는 경우, 이들이 환자에게 동일한 시점에 투여될 수 있는데, 이것이 더 용이한 투여 일정을 허용하기 때문이다. 예를 들어, 리툭시맵 및 L19-IL2 양쪽 모두가 수일 내지 3개월까지 범위의 시간 간격으로 하루에 1회 또는 2회 정맥내 투여될 수 있다. 또한, 1회 이상의 치료 라운드가 가능하다.
또한, 투여량이 변할 수 있다. 예를 들어, 리툭시맵이 투여 당 약 20 내지 500 ㎎/㎡의 양, 바람직하게는 약 100 내지 400 ㎎/㎡, 특히 약 375 ㎎/㎡의 리툭시맵의 양으로 투여될 수 있다. 전형적으로, 6-8회까지의 치료 사이클 (완화 유도)로 2주, 3주, 또는 4주 치료 일정의 제1일에 리툭시맵이 투여되지만, 또다른 투여 일정이 가능하다.
동결건조 제형 또는 수성 용액의 형태로 원하는 정도의 순도를 지니는 활성 작용제를 임의적인 제약상 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 ([Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)])와 함께 혼합함으로써 본 발명에 따라 사용되는 활성 작용제들의 치료 제형이 보관용으로 제조된다.
예시적인 항-CD20 항체 제형이 WO 98/56418에 기술되어 있다. 최소 저장 기간이 2-8℃에서 2년 보관인, 40 ㎎/㎖ 리툭시맵, 25 mM 아세테이트, 150 mM 트레할로스, 0.9％ 벤질 알코올, 0.02％ 폴리소르베이트 20을 포함하는 pH 5.0의 액체 다용량 제형이 이러한 간행물에 기술되어 있다. 흥미로운 또다른 항-CD20 제형은 9.0 ㎎/㎖ 염화나트륨, 7.35 ㎎/㎖ 시트르산나트륨 2수화물, 0.7 ㎎/㎖ 폴리소르베이트 80, 및 주사용 멸균수 (pH 6.5) 내의 10 ㎎/㎖ 리툭시맵을 포함한다. 피하 투여용으로 개조된 동결건조 제형이 WO 97/04801에 기술되어 있다. 적절한 희석제를 사용하여 이같은 동결건조 제형이 높은 단백질 농도로 재구성될 수 있고, 재구성된 제형이 본원에서 치료될 환자에게 피하 투여될 수 있다.
또한, 융합 단백질에 대해, 투여되는 양이 변할 수 있다. 전형적으로, 투여 당 투여되는 L19-IL2의 양은 약 1 내지 10×106 IU/㎡, 특히 약 5 내지 50×106 IU/㎡, 특히 약 10 내지 30×106 IU/㎡이다.
투여량이 시간에 따라 변하는 것이 또한 가능하다; 예를 들어, 1회 이상의 투여 라운드에 대해 리툭시맵 및/또는 L19-IL2의 양이 증가 또는 감소될 수 있다.
또한, 유지 치료, 특히 리툭시맵 또는 L19-IL2 단독으로의 유지 치료가 조합 치료 단계에 이어질 수 있다.
또한, B-NHL에 대한 항체-함유 조합 요법, 특히, 화학면역요법 처방계획 (예를 들어, R-CHOP)으로의 치료를 L19-IL2를 사용하여 지지하는 것이 가능하다.
항체 링커는 Vh 및 Vl 도메인을 연결하는데 적절한 임의의 링커, 바람직하게는 펩티드 링커이다. 적절한 링커가 [Bird et al, Science, 242, 423-426, 1988]; [Huston et al, PNAS USA, 85, 5879-5883, 1988], EP 0 573 551; EP 0 623679 및 EP 0 318554에 예를 들어 기술되어 있고, 상기 문헌들은 거명에 의해 도입된다.
융합 단백질 링커는 항체 또는 항체-단편과 제2의 생물학적으로 활성인 단백질을 연결시키는데 적절한 링커이고, 바람직하게는 링커는 펩티드 링커이다. 적절한 링커가 EP 0 573 551; EP 0 623679 및 EP 0 318554에 기술되어 있고, 상기 문헌들은 거명에 의해 도입된다. 특히, 적절한 링커가 EP 0 623679에 기술되어 있다.
본원에서 사용된 "특이적 결합" 또는 "특이적 인식"은 상응하는 표적에 대한 결합을 지칭한다. 전형적으로, 결합 분자, 항체, 항체 단편 또는 항체 모방체는 적어도 약 1×10-7 M, 바람직하게는 적어도 약 1×10-9 M의 친화도로 결합하고, 미리 정해진 표적 또는 밀접하게 관련된 표적 이외의 비-특이적 표적 (예를 들어, BSA, 카세인)에 결합하는 것에 대한 친화도보다 2배 이상 더 큰 친화도로 미리 정해진 표적에 결합한다.
본원에서 사용된 "항체"는 천연 항체, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체 및 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 및 전체 IgG 항체가 포함되는 전장 항체, 뿐만 아니라 항체 단편을 포함한다.
용어 "항체 단편"은 가변 영역 또는 기능성 능력, 즉 표적에 대한 특이적 결합이 유지된, 전장 항체의 일부분을 지칭한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv 및 scFv-Fc 단편, 디아바디, 선형 항체, 소형 면역단백질 포맷, 단일쇄 항체, 미니바디, 항체 단편들로부터 형성된 디아바디, 및 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 항체 단편은 일반적으로 전체 항체보다 작다. 이에 의해, 약동학이 상이하고, 일부 항체 단편은 오직 1개의 폴리펩티드 사슬로만 구성되며, 이는 제조를 용이하게 할 수 있다. 그러나, 항체 단편을 포함하는 융합 단백질은 종종 감소된 안정성으로 인한 손해가 있다. 바람직하게는, 항체 단편은 scFv, (scFv)2, 또는 소형 면역단백질 포맷이다. 소형 면역단백질 포맷은 CH3-도메인 (예를 들어, US 5,837,821에 기술됨) 또는 인간 IgE의εS2CH4-도메인 (예를 들어, WO 03/076469에 기술됨)을 기초로 하는 포맷일 수 있다.
용어 "모노클로날 항체" (mAb)는 실질적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 집단을 이루는 개별적인 항체들은 미량으로 존재할 수 있는 천연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 결정인자 (에피토프로 또한 지칭됨)에 대해 지시되어 고도로 특이적이다. 수식어구 "모노클로날"은 동일한 에피토프에 대해 지시된 항체들의 실질적으로 균질한 집단을 가리키고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안된다. 당업계에 공지된 임의의 기술 또는 방법, 예를 들어, [Koehler et al., 1975, Nature 256:495]에 최초로 기술된 하이브리도마 방법, 또는 당업계에 공지된 재조합 DNA 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567)에 의해 모노클로날 항체가 제조될 수 있다. 또다른 예에서, [Clackson et al., 1991, Nature 352: 624-628], 및 [Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597]에 기술된 기술을 사용하여, 파지 항체 라이브러리로부터 모노클로날 항체가 또한 단리될 수 있다.
대조적으로, 폴리클로날 항체들의 제제 내의 항체는 전형적으로 면역글로불린 이소타입 및/또는 클래스들의 이종성 집단이고, 다양한 에피토프 특이성을 또한 나타낸다.
본원에서 사용된 용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 영역 또는 도메인 내의 일부 아미노산 서열 또는 완전한 아미노산 서열이 또다른 종으로부터의 모노클로날 항체 또는 또다른 면역글로불린 클래스 또는 이소타입에 속하는 모노클로날 항체 내의 상응하는 서열, 또는 컨센서스(consensus) 서열로부터의 상응하는 서열과 동일하거나, 이와 상동성이거나, 또는 이의 변이체인 모노클로날 항체의 유형이다.
전장 항체의 효소 처리에 의해 특정 유형의 항체 단편이 생성될 수 있다. 항체를 파파인(papain)으로 소화시키면 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는, "Fab" 단편이라고 칭해지는 2개의 동일한 항원-결합 단편과, 나머지 "Fc" 단편 (이의 쉽게 결정화되는 능력으로 인해 이렇게 칭해짐)이 생산된다. Fab 단편은 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 CH1 도메인을 또한 함유한다. 펩신으로 처리하면 2개의 항원 결합 부위를 갖고 여전히 항원과 교차결합할 수 있는 F(ab')2 단편이 산출된다.
Fab' 단편은, 항체 힌지(hinge) 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 C-말단의 몇개의 추가적인 잔기들의 존재에 의해 Fab 단편과 다르다. Fab-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올 기를 갖는 Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 힌지 영역 내의 시스테인 잔기에 의해 연결된 Fab' 단편들의 쌍이다. 항체 단편들의 기타 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
"Fv"는 단단하게 비-공유결합으로 회합되어 있는 1개의 중쇄 가변 도메인과 1개의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된 완전한 항원-인식 및 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이러한 형상 내에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에 항원-결합 부위를 규정한다. 총괄적으로, 6개의 CDR이 항원-결합 특이성을 항체에 부여한다.
"단일쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드 사슬 내에 존재하는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하고, 항원을 인식하여 이에 결합할 수 있는 단일쇄 Fv 변이체이다. scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있도록 하는, VH 도메인과 VL 도메인 사이에 놓인 폴리펩티드 링커를 임의적으로 함유한다 (예를 들어, [Pluckthun, 1994, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315] 참조).
용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위가 있는 소형 항체 단편을 지칭한다. 각각의 단편은 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 함유한다. 동일한 사슬 상의 두 도메인 간에 쌍을 형성하도록 하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 연결된 VH-VL 도메인은 또다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루어 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 강요된다.
디아바디는, 예를 들어, EP 404,097; WO 93/11161; 및 [Hollinger et al., 1993, Proc. Nat. Acad. Sc. USA 90: 6444-6448]에 더욱 상세하게 기술되어 있다.
인간화 항체 또는 인간화 항체 단편은 미리 정해진 항원에 결합할 수 있고, 실질적으로 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 지니는 하나 이상의 프레임워크 영역 (FR) 및 실질적으로 비-인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 지니는 하나 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린 아미노산 서열 변이체 또는 이의 단편을 포함한다. 이러한 비-인간 아미노산 서열은 본원에서 "수입" 서열로 지칭되고, 이는 전형적으로 "수입" 항체 도메인, 특히 가변 도메인으로부터 취해진다. 일반적으로, 인간화 항체는 인간 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 FR들 사이에 삽입된 비-인간 항체의 CDR 또는 HVL을 적어도 포함한다.
"천연 항체"는 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된, 전형적으로 약 150,000 돌턴의 이종사량체성 당단백질로서 본원에서 정의된다. 각각의 경쇄가 1개의 디술피드 결합에 의해 중쇄에 공유결합으로 연결되어, 이종이량체가 형성된다. 이같은 이종이량체들의 2개의 동일한 중쇄들 간의 공유결합 디술피드 결합에 의해 이종사량체가 형성된다 경쇄와 중쇄는 1개의 디술피드 결합에 의해 함께 연결되지만, 2개의 중쇄 간의 디술피드 연결의 개수는 면역글로불린 이소타입마다 다르다. 또한 각각의 중쇄 및 경쇄는 규칙적인 간격의 사슬내 디술피드 다리를 갖는다. 각각의 중쇄에는 아미노 말단에 가변 도메인 (VH)이 있고, 여기에 3개 또는 4개의 불변 도메인 (CH1, CH2, CH3, 및 CH4), 뿐만 아니라 CH1과 CH2 사이의 힌지 영역이 이어진다. 각각의 경쇄에는 아미노-말단 가변 도메인 (VL) 및 카르복시-말단 불변 도메인 (CL)의 2개의 도메인이 있다. VL 도메인은 VH 도메인과 비-공유결합으로 회합되는 한편, CL 도메인은 통상적으로 공유결합으로 디술피드 결합을 통해 CH1 도메인에 연결된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다 ([Chothia et al., 1985, J Mol. Biol. 186:651-663]). 용어 "초가변"은 가변 도메인 내의 특정 서열이 항체들 간에 서열 면에서 광범위하게 상이하고, 각각의 특정 항체의 이의 특이적 항원 결정인자에 대한 결합 및 특이성에서 직접적으로 수반되는 잔기를 함유한다는 사실을 지칭한다. 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 양쪽 모두에서의 초가변성은 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 초가변 루프 (HVL)로 공지된 3개의 절편에 집중된다. CDR은 [Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.]에서의 서열 비교에 의해 정의되는 한편, HVL은 [Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917]에 기술된 바와 같이 가변 도메인의 3차원 구조에 따라 구조적으로 정의된다.
이러한 2가지 방법에서 CDR이 약간 상이하게 확인되는 경우, 구조적 정의가 우선한다. [Kabat et al.]에 정의된 바와 같이, 경쇄 가변 도메인에서 CDR-L1은 대략 잔기 24-34에, CDR-L2는 대략 잔기 50-56에, CDR-L3은 대략 잔기 89-97에 위치하고, 중쇄 가변 도메인에서 CDR-H1은 대략 잔기 31-35에, CDR-H2는 대략 잔기 50-65에, CDR-H3은 대략 잔기 95-102에 위치한다.
용어 "표지"는 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 접합된 검출가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지는 자체가 검출가능할 수 있거나 (예를 들어, 방사성동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는, 효소 표지의 경우에는, 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매할 수 있다.
피브로넥틴 (FN)은 단일 FN 유전자의 생성물이지만, 생성된 단백질은 다중 형태로 존재할 수 있고, 이들은, 번역후 변형과는 달리, 이의 일차 RNA 전사물의 별법적인 스플라이싱으로부터 발생한다. 인간 FN에서 20개만큼 많은 상이한 이소형(isoform)에 이름으로써 상이한 용해도, 세포 부착성 성질 및 리간드-결합 성질을 지니는 FN들을 생성시키는 이러한 다형성은 조직-특이적 방식으로 세포외 매트릭스 (ECM)의 조성을 변형시킬 가능성이 있는 세포를 제공한다. 별법적인 스플라이싱은 1차 RNA 전사물의 3개의 영역에서 일어난다: 엑손 사용 또는 뛰어넘기(skipping)는 2개의 유형-III 반복부, FN 유형-III 반복부 III7과 III8 사이에 삽입된 엑스트라-도메인 B (EDB 또는 ED-B; EIIIB 또는 EDIII으로 또한 명명됨), 또는/및 FN 유형-III 반복부 III11과 III12 사이에 삽입된 엑스트라-도메인 A (EDA; EIIIA 또는 EDI로 또한 명명됨)의 포함 또는 생략에 이른다. 이러한 유형의 스플라이싱이 제노푸스(Xenopus), 닭, 래트, 개 및 인간이 포함되는 다수의 척추동물에서 발생한다.
"ED-B 도메인"은 인간 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B로 이해되어야 한다. 이는 종종 EDb, EIIIB 또는 EDII로 지칭된다.
"항체 모방체"는 표적에 특이적으로 결합하고 항체 및 항체 단편과 상이한 단백질 프레임워크 ("스캐폴드")를 기초로 하는 결합 분자로 이해된다. 이같은 스캐폴드가 [Binz et al., 2005, Nat. Biotechnol. 23, 1257-1268]에 기술되어 있다. ED-B 피브로넥틴에 특이적으로 결합하는 항체 모방체가 [Grabulovski et al., J. Biol. Chem., 2007, 282:3196-3204]에 기술되어 있다.
본 발명에 따른 "인터루킨-2"는 포유류 인터루킨-2, 바람직하게는 인간 인터루킨-2 및 이의 기능성 변이체를 지칭한다. 인터루킨-2의 기능성 변이체는 천연 인간 인터루킨-2의 활성의 10％ 이상, 더욱 바람직하게는 50％ 초과, 더욱 더 바람직하게는 90％ 초과를 나타내는 인간 인터루킨-2의 변이체이다. 인터루킨-2 활성은 생화학적 분석법 또는 생체내에서의 인터루킨-2의 활성이고, 활성화된 T 및 B 림프구 및 천연 킬러 세포의 증식 및/또는 분화 및/또는 세포독성 T 세포 활성 및/또는 NK/림포카인 활성화 킬러 (LAK) 항-종양 활성의 유도에 대한 효과에 의해 인터루킨-2 활성이 특히 측정될 수 있다 ([Meazza R, Marciano S, Sforzini S, et al. Analysis of IL-2 receptor expression and of the biological effects of IL-2 gene transfection in small-cell lung cancer. Br. J. Cancer. 1996; 74: 788- 795]). 특히, 기능성 변이체는 EP 0109748에 기술된 인터루킨-2의 시스테인-125 뮤테인, 및 EP 136489에 기술된 시스테인 뮤테인, 특히 세린 125-인터루킨-2가 포함되는 기타 돌연변이체이다. 또한, hIL.2 변이체의 N-말단, 특히 N-말단의 1-5개의 아미노산이 활성에 현저하게 영향을 미치지 않으면서 변경될 수 있고, 특히 바람직하게는 N-말단 알라닌이 결실 또는 변경, 바람직하게는 결실될 수 있다. 더욱이, 인터루킨-2는 변경 또는 결실된 번역후 변형을 함유할 수 있고, 특히 글리코실화 패턴이 변경되거나 상실될 수 있다. 예를 들어, 서열을 돌연변이시킴으로써 또는 적합한 숙주 내에서의 융합 단백질의 발현에 의해, 상이한 글리코실화 또는 글리코실화의 부재가 수득될 수 있다. 예를 들어, 전이성 RCC에 대해 승인된 알데스류킨(Aldesleukin)은 대장균에서 생산된 비-글리코실화 des-알라닐-1, 세린-125 인간 인터루킨-2이다.
도 1. L19 항체로의 면역조직화학이 B-세포 림프종 이종이식편에서의 EDB 발현을 나타낸다. EDB 피브로넥틴에 대해 특이적인 항체 L19를 사용한 면역조직화학 염색이 이러한 피브로넥틴 이소형의 강한 발현을 나타냈고, 이때 라모스(Ramos) 림프종 이종이식편 (왼쪽 패널)에서의 염색의 혈관 패턴이 두드러졌다. 이러한 염색은 U87 교모세포종 이종이식편 (오른쪽 패널)으로 예시되는 바와 같은 고형 종양에서의 L19의 염색 패턴과 유사하다. 음성 대조군에 대해서는, 1차 항체가 누락되었다. 축척 막대 = 100 ㎛.
도 2. 생체내 국소화 실험: 생체외 면역형광 (a) 및 정량적 생체분포 연구 (b). L19 항체의 생체내 표적화 성능을 피하 SCID/라모스 림프종 모델에서 테스트하였다. (a) 림프종이 있는 마우스에 형광단 Cy3로 화학적으로 표지된 L19-SIP를 주사하였다. 도면은 종양 혈관 구조물 상의 항체 국소화 (적색)를 확증하는, 주사 24시간 후의 림프종 절편의 2색 형광 현미경 영상을 나타낸다. 내피 세포의 윤곽을 그리기 위해 항-CD31 항체를 생체외에서 적용하고, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 488 항-래트 IgG 항체 (녹색)로 검출하였다. 축척 막대 = 100 ㎛. (b) 정량적 생체분포 결과를 125I-방사성표지 L19-SIP를 림프종이 있는 동물에게 주사하고 나서 24시간 및 48시간 후에 수득하였다 (각각의 시점에 대해 n ≥ 3). 평균 표적화 결과는 조직 1 g 당 주사된 용량의 백분율 (％ID/g ± SD)로 표현된다. 주사 48시간 후, 림프종 조직에서의 항체의 선택적인 축적 및 유지를 관찰할 수 있었고, 이때 종양-대-혈액 비율은 4.8이고, 종양-대-장기 비율은 3.8 내지 17.3 범위였다.
도 3. 림프종 성장에 대한 단일 작용제 L19-IL2, 미접합 IL-2 및 리툭시맵의 효과. 확립된 피하 라모스 림프종 이종이식편을 지니는 SCID 마우스에게 혈관 표적화 L19-IL2 융합 단백질 (■; 20 ㎍), 상응하는 용량의 표적화되지 않은 rIL-2 (▲; 6.6 ㎍), 리툭시맵 (●; 200 ㎍), 또는 대조군 염수 (×)를 종양 이식 후 제8일, 제11일, 제14일 및 제17일에 정맥내 주사하였다. 단일 작용제 L19-IL2 및 단일 작용제 리툭시맵 양쪽 모두 종양 성장을 유의하게 지연시켰다 (각각 P = 0.024 및 P = 0.004). 반면에, 미접합 rIL-2는 유의한 치료 활성을 나타내지 않았고 (P = 0.383), 이는 치료 효과에 대한 IL-2의 표적화된 전달의 기여를 가리킨다 (L19-IL2 대 IL-2: P = 0.044).
도 4. 리툭시맵과 조합된 L19-IL2 및 미접합 IL-2의 치료 효과. 확립된 피하 림프종 이종이식편을 지니는 SCID 마우스에게 염수 (×), 200 ㎍ 리툭시맵 + 저용량 미접합 IL-2 (△; 2.2 ㎍), 200 ㎍ 리툭시맵 + 고용량 미접합 IL-2 (▲; 6.6 ㎍), 200 ㎍ 리툭시맵 + 저용량 L19-IL2 (□; 6.6 ㎍, 2.2 ㎍ IL-2에 상응), 또는 200 ㎍ 리툭시맵 + 고용량 L19-IL2 (■; 20 ㎍, 6.6 ㎍ IL-2에 상응)를 제8일, 제11일, 제14일 및 제17일에 정맥내 주사하였다. 저용량, 뿐만 아니라 고용량 L19-IL2 군 내의 마우스 5마리 중 4마리에서 완전 완화를 유도하여, 리툭시맵과 조합된 L19-IL2은 고도로 효능이 있었다. 반면에, 리툭시맵과 조합된 미접합 rIL-2는 종양 퇴행을 유도하지 않았고, 모든 종양이 계속 성장하였다. 모든 완전 완화 (CR) 마우스는 적어도 42일의 기간 동안 여전히 종양이 없었다.
도 5. 파종성 림프종 모델에서의 단독 요법 및 조합 요법에서의 L19-IL2, IL-2 및 리툭시맵의 치료 효과. SCID 마우스 (n ≥ 6)에게 2×106개의 라모스 림프종 세포를 정맥내 주사하고, 8일 후에 하기의 처방계획에 따라 처리하였다: 표적화되지 않은 IL-2 (6.6 ㎍), L19-IL2 (20 ㎍), 리툭시맵 (200 ㎍), 리툭시맵 (200 ㎍) + IL-2 (6.6 ㎍), 리툭시맵 (200 ㎍) + L19-IL2 (20 ㎍), 또는 대조군 염수 (상세하게는, 전신 질환 모델을 만들기 위해, SCID 마우스에게 200 ㎕ PBS에 재현탁된 2×106개의 라모스 림프종 세포를 정맥내 주사하였다. 8일 동안 B-세포 림프종의 파종 및 성장이 발생하도록 한 후, 요법을 시작하였다. 마우스를 무작위로 6개의 군으로 분할하고 (≥ 6마리의 마우스/군), 염수, 20 ㎍ L19-IL2, 6.6 ㎍ 미접합 rIL-2, 또는 200 ㎍ 리툭시맵 (단일 작용제 처리군), 또는 20 ㎍ L19-IL2와 조합된 200 ㎍ 리툭시맵, 또는 6.6 ㎍ 미접합 rIL-2와 조합된 200 ㎍ 리툭시맵 (조합물 처리군)을 제8일, 제11일, 제14일 및 제17일에 정맥내 주사하였다 (Q3D×4). 마우스를 뒷다리 마비 또는 악화되는 용태의 징후의 존재에 대해 매일 모니터링하고, 그러한 경우 마우스를 희생시키고, 사망으로 채점하였다. 치료 효능의 분석을 위해 생존을 기록하였다).
도 6. 인간 림프종 샘플의 표적 확인. 빈번한 아유형인 확산성 거대 B 세포 림프종 및 버킷(Burkitt) 림프종을 포함하는 인간 B-세포 림프종 실체의 신생혈관 구조에서 EDB가 발현되는 것으로 발견되었다. 축척 막대 = 100 ㎛.
도 7. 융합 단백질 L19-IL2는 재현가능하게 림프종 성장을 억제한 한편 (P = 0.031), SIP 또는 IgG 포맷의 등몰량의 네이키드(naked) L19는 단독으로 또는 유리 rIL-2와 조합되어 투여되었을 때 치료적으로 불활성이었다.
실시예
재료 및 방법
동물 및 세포주
6주 내지 8주령 암컷 CB17/lcr SCID 마우스를 찰스 리버 래버러토리즈(Charles River Laboratories) (Sulzfeld, Germany)로부터 수득하였다. 연구 기간 내내 모든 마우스를 미세분리기(microisolator) 유닛에서 사육하고, 연구 기간 동안 무균성 식품 및 물을 자유롭게 제공하였다. <American Type Culture Collection> (ATCC, Manassas, VA)으로부터 EBV-음성 인간 B 세포 림프종 세포주 라모스44를 구입하였다. 2 mM L-글루타민, 10 mM HEPES, 1 mM 피루브산나트륨, 4.5 g/ℓ 글루코스, 1.5 g/ℓ 바이카르보네이트, 10％ 열-불활성화 소 태아 혈청, 100 U/㎖ 페니실린, 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신을 함유하도록 조정된 RPMI 1640 배지에서 로그-단계 성장으로 세포를 유지시켰다. <German Resource Centre for Biological Material> (DSMZ, Braunschweig, Germany)로부터 인간 소포성 림프종 세포주 DoHH-2를 수득하였다.
항체 및 시약
L19는 피브로넥틴의 EDB 도메인에 대해 지시된 혈관 표적화 항체이다. [Borsi et al., Int J Cancer. 2002;102:75-85] 및 [Carnemolla et al., Blood. 2002;99:1659-1665]에서 SIP 포맷 (소형 면역단백질)의 L19 및 L19-IL2 융합 단백질의 발현, 정제 및 특성화가 기존에 기술되었다. 재조합 인간 IL-2 (프로류킨(Proleukin), 18×106 IU)를 프로레로 파마(Prorero Pharma) (Liestal, Switzerland)에서 수득하였고, 키메라 인간 IgG1 항-CD20 모노클로날 항체 리툭시맵 (맵테라(MabThera))를 로쉐(Roche) (Reinach, Switzerland)로부터 수득하였다.
면역조직화학
라모스 이종이식 종양 상에서의 면역조직화학을 위해, 동결된 샘플의 10 ㎛ 냉동미세절단(cryostat) 절편을 빙냉 아세톤에서 고정시키고, TBS (50 mmol/ℓ 트리스, 100 mmol/ℓ NaCl, pH 7.4)에서 재수화시키고, 20％ FCS (인비트로젠(Invitrogen) (Basel, Switzerland))로 차단하였다. L19-SIP를 10 ㎍/㎖의 최종 농도로 절편 상에 첨가하였다. 결합된 1차 항체를 토끼 항-인간 IgE 항체 (다코(Dako) (Glostrup, Denmark))에 이어서 비오틴화 염소 항-토끼 IgG 항체 (바이오스파(Biospa) (Milan, Italy)) 및 스트렙타미딘-알랄리성 포스파테이스 복합체 (바이오스파)로 검출하였다. 패스트 레드(Fast Red) TRSalt (시그마(Sigma))가 포스파테이스 기질로 사용되었다. 인간 림프종 샘플에서의 EDB 발현의 면역조직화학 분석을 비오틴화 L19-SIP 및 스트렙타비딘-알칼리성 포스파테이스 (SAP)를 사용하여 수행하였다. 절편을 헤마톡실린으로 대비-염색하고, 글리세르젤(Glycergel) 마운팅 배지 (다코)로 마운팅하고, 악시오버트(Axiovert) S100 TV 현미경 (자이스(Zeiss) (Feldbach, Switzerland))으로 분석하였다.
인간 림프종 샘플에 대한 면역조직화학이 림프종 이종이식편 상에서와 같이 수행되었지만, 비오틴화 L19-SIP가 1차 항체로 사용되었고, 스트렙타비딘-알칼리성 포스파테이스 복합체 (바이오스파)로 검출되었다.
생체외 형광 실험
제조사의 권고사항 (아머샴 파마시아(Amersham Pharmacia) (Duebendorf, Switzerland))에 따라 형광 시아닌 화합물인 Cy3-NHS 에스테르로 L19-SIP를 표지하였다. 120 ㎍의 L19-Cy3 접합물을 림프종이 있는 마우스의 측면 꼬리 정맥 내로 정맥내 주사하였다. 주사 24시간 후 마우스를 희생시키고, 종양을 절제하고, 저온매립(cryoembedding) 화합물 (마이크롬(Microm) (Walldorf, Germany)) 내에 매립하고, -80℃에서 보관하였다. 10 ㎛ 절편을 절단하고, 37℃에서 15분 동안 건조시키고, 4％ 파라포름알데히드로 15분 동안 실온에서 고정시켰다. 래트 항-CD31 항체 (BD 파미젠(Pharmingen))를 적용하여, 알렉사 플루오르 488 토끼 항-래트 IgG (인비트로젠)를 2차 항체로 사용하여 내피 세포의 윤곽을 그렸다. 악시오캠(AxioCam) MRc 카메라가 장착된 악시오스콥 2 모트 플러스(Axioskop 2 Mot plus) 현미경 (자이스)을 사용하여 영상을 포착하였다.
정량적 생체분포
생체내 표적화 성능을 정량적으로 평가하기 위해, 방사성표지된 항체 제제를 사용하는 생체분포 분석을 기존에 기술된 바와 같이 수행하였다 ([Carnemolla et al., 2002]). 간략하게, 정제된 SIP(L19)를 125I로 방사성요오드화시키고, 피하 이식된 라모스 림프종 이종이식편이 있는 SCID 마우스 또는 전신성 동계 A20 림프종이 있는 Balb/c 마우스 내로 정맥내 주사하였다 (10 ㎍, 12.2 μCi/마우스). 주사 24시간 후 또는 48시간 후 마우스를 희생시켰고, 3마리 이상의 동물이 각각의 시점에 사용되었다. 장기를 칭량하고, 코브라(Cobra) γ 카운터 (패커드(Packard) (Meriden, CT))를 사용하여 방사성을 카운팅하였다. 조직 1 g 당 주사된 용량의 백분율 (％ID/g ± SE)로 대표적인 장기의 방사성 함량이 표현되었다.
국소화된 림프종 이종이식편 모델
1×107개의 라모스 림프종 세포 또는 DoHH-2 (1×107개) 림프종을 6주령 내지 8주령의 암컷 CB17/lcr SCID 마우스의 옆구리 내로 제0일에 피하 주사하였다. 종양이 확립되고 명확하게 촉진가능하였을 때 (50 - 100 ㎣, 주사 후 제8일), 마우스를 군들 간의 균일성이 최적화되도록 조직하고, 측면 꼬리 정맥 내로 20 ㎍의 L19-IL2 (6.6 ㎍ 또는 118000 IU rIL-2에 상응), 6.6 ㎍의 표적화되지 않은 rIL-2, 200 ㎍의 리툭시맵, 또는 대조군 염수 (100 ㎕ 부피)를 제8일, 제11일, 제14일 및 제17일에 주사하였다 (Q3Dx4). 조합 요법 연구를 위해, L19-IL2 (6.6 및 20 ㎍, 각각 2.2 및 6.6 ㎍의 "유리" rIL-2에 상응), 또는 미접합 rIL-2 (2.2 및 6.6 ㎍)를 별도의 정맥내 주사에 의해 리툭시맵 (200 ㎍)과 조합하여 제8일, 제11일, 제14일 및 제17일에 투여하였다. L19 항체 단독이 치료적으로 활성인지를 테스트하기 위해, 마우스를 SIP (x.x ㎍) 또는 IgG (x.x ㎍) 포맷의 등몰량의 L19로 단독으로 또는 유리 rIL-2 (6.6 ㎍)와 조합하여 처치하였다. 모든 작용제 (단독 요법 및 조합 요법)에 대한 처치 일정은 전체적으로 3일마다 4회 (라모스) 또는 3회 (DoHH-2) 주사였다 (각각, Q3D×4 또는 Q3D×3).
마우스를 매일 모니터링하고, 하기의 식을 사용하여 디지털 캘리퍼로 종양 성장을 주당 3회 이상 측정하였다: 부피 = 길이 × 폭2 × 0.5. 완전 완화 (CR, 가시적인 종양 없음) 또는 부분적 완화 (PR, 종양 부피의 50％ 이상의 감소)로 응답이 정의되었다. 종양 부피가 2000 ㎣을 초과했을 때 또는 동물이 질환의 징후를 나타냈을 때 동물을 희생시켰다. 모든 동물 실험은 <Kantonales Veterinaeramt des Kantons Zuerich> (Bewilligung 198/2005)가 D.N.에게 허여한 프로젝트 라이센스 "종양 표적화(Tumor Targeting)" 하에 수행되었다.
파종성 림프종 이종이식편 모델
전신 질환의 모델을 만들기 위해, SCID 마우스에게 200 ㎕ PBS에 재현탁된 2×106개의 라모스 림프종 세포를 정맥내 주사하였다. 8일 동안 B-세포 림프종의 파종 및 성장이 발생하도록 한 후, 요법을 시작하였다. 마우스를 무작위로 6개의 군으로 분할하고 (n ≥ 6), 20 ㎍의 L19-IL2, 6.6 ㎍의 미접합 rIL-2, 또는 200 ㎍의 리툭시맵 (단독요법), 또는 20 ㎍의 L19-IL2와 조합된 200 ㎍의 리툭시맵, 6.6 ㎍의 미접합 IL-2와 조합된 200 ㎍의 리툭시맵 (조합 요법), 또는 염수를 제8일, 제11일, 제14일 및 제17일에 정맥내 주사하였다 (Q3Dx4). 마우스를 뒷다리 마비 또는 악화되는 용태의 징후의 존재에 대해 매일 모니터링하고, 그러한 경우 마우스를 희생시켰다. 마비의 시작 또는 사망을 종점으로 설정하였고, 마우스의 생존을 치료 효능의 분석을 위해 기록하였다. 프로젝트 라이센스 "종양 표적화"에 대한 수정 1에 따라 파종성 림프종 모델을 사용한 동물 실험을 수행하였다.
통계학적 분석
데이터는 평균 ± SE로 표현된다. 상이한 군의 마우스들 간의 종양 부피에서의 차이를 양쪽 꼬리 스튜던트 t-테스트를 사용하여 비교하였다. 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선을 수행하여 파종성 림프종 모델에서의 치료 효능을 나타내고, 로그-순위 테스트를 사용하여 비교를 수행하였다. 양측(Two-sided) P 값 < 0.05가 유의한 것으로 간주되었다.
결과
시험관내 국소화: 이종이식 종양에 대한 면역조직화학
피브로넥틴의 EDB 도메인에 대해 특이적인 L19 항체를 사용하여 라모스 림프종 이종이식편의 절편 상에서의 면역조직화학 분석이 수행되었다. 도 1 (왼쪽 패널)에 나타난 바와 같이, 림프종 조직 내의 혈관 구조물의 특이적 염색이 L19에 대해 관찰될 수 있어, 인간 U87 교모세포종 이종이식편 (오른쪽 패널)으로 예시되는 바와 같은 고형 종양에서의 L19의 염색 패턴을 상기시켰다. 림프종 이종이식편에서의 EDB 발현 패턴은 이러한 이소형이 생체 내에서 림프종 부위로의 생체활성 화합물의 선택적인 전달을 위한 표적으로 작용할 수 있음을 가리킨다.
생체내 표적화 성능: 생체외 형광 및 정량적 생체분포
다음 단계에서, 림프종 이종이식편에서 발현된 EDB 피브로넥틴이 생체 내에서 혈류로부터 L19 항체에 대해 접근가능한지 여부를 연구하였다. 이를 위해, 피하 라모스 림프종 종양이 있는 마우스에게 형광단 Cy3으로 화학적으로 표지된 L19-S1P를 정맥내 주사하였다. 24시간 후, 동물을 희생시키고, 종양 절편을 재료 및 방법 섹션에 기술된 바와 같이 프로세싱하였다. 도 2a는 종양 혈관 구조물 상의 항체 국소화를 확증하는, 림프종 절편의 2색 형광 현미경 영상을 나타낸다.
항체 침착을 정량적으로 평가하기 위해, 피하 이식된 라모스 림프종 이종이식편이 있는 마우스에게 L19-SIP의 방사성요오드화 제제를 정맥내 주사하였다. 도 2b에 묘사된 바와 같이, L19가 림프종 조직에서의 축적을 나타냈고, 이때 주사 24시간 후의 절대 종양 흡수값은 4.7％ ID/g였지만, 이러한 시점의 종양-대-혈액 비율은 2.1로 단지 보통이었다 (종양-대-장기 비율은 2.7 내지 7.1 범위). 그러나, 48시간 후, 항체가 정상 장기로부터 더욱 급속하게 소거되어, 증가된 종양-대-혈액 (4.8) 및 종양-대-장기 (17.3까지에 이름) 비율이 초래되었고, 이는 종양 부위에서의 항체의 특이적 축적 및 유지를 나타낸다.
국소화된 림프종 이종이식편에 대한 단일 작용제 L19-IL2 및 단일 작용제 리툭시맵의 치료 활성
다양한 고형 종양 모델에서 항체-사이토카인 융합 단백질 L19-IL2가 강력한 항암 활성을 나타낸 것으로 기존에 제시되었다 ([Menrad et al., Expert Opin Ther Targets. 2005;9:491-500], [Carnemolla et al., Blood. 2002;99:1659-1665]). B-세포 림프종에서의 L19-IL2의 단독요법 효능을 평가하기 위해, SCID 마우스에게 1×107개의 라모스 세포를 피하 주사하였다. 종양 이식 후 제8일에, 종양 크기가 50 - 100 ㎣에 도달했을 때, 마우스 (n ≥ 4)에게 20 ㎍ L19-IL2 (6.6 ㎍ rIL-2에 상응), 6.6 ㎍ 미접합 rIL-2, 200 ㎍ 리툭시맵, 또는 염수를 정맥내 처치하였다 (Q3Dx4). 도 3은 염수로 처리된 대조군 마우스와 비교하여 단일 작용제 L19-IL2 및 단일 작용제 리툭시맵이 림프종 성장을 실질적으로 억제하였음을 나타낸다 (각각, P = 0.024 및 P = 0.004). 대조적으로, 등몰량의 미접합 rIL-2는 고형 암의 동물 모델에 대해 기존에 보고된 것과 유사하게 어떠한 유의한 치료 효과도 나타내지 않았고 (P = 0.383), 이는 치료 효과에 대한 사이토카인의 항체-매개 혈관 표적화의 기여를 나타낸다 (L19-IL2 대 IL-2: P = 0.044). 그러나, L19-IL2 및 리툭시맵 양쪽 모두 단독요법으로 사용되었을 때 단지 종양 성장을 지연시켰을 뿐이고, 이러한 실험에서 모든 동물이 진행성 질환을 경험하였다. 융합 단백질 L19-IL2는 재현가능하게 림프종 성장을 억제한 한편 (P = 0.031), SIP 또는 IgG 포맷의 등몰량의 네이키드 L19는 단독으로 또는 유리 rIL-2와 조합되어 투여되었을 때 치료적으로 불활성이이어서, L19-IL2의 치료 활성이 림프종 부위에서의 사이토카인의 표적화된 전달에 의존하였다는 개념을 추가로 강화한다 (도 7).
치료-관련 독성에 관한 정보를 제공하기 위해, 동물 체중을 주당 3회 이상 측정하였다. 요법 군 중 어느 것에서도 연구 기간 전반에 걸쳐 마우스의 체중이 3％ 초과로 감소되지 않은 바와 같이, 독성의 증거가 관찰되지 않았다.
국소화된 림프종 이종이식편에 대한 조합된 L19-IL2 및 리툭시맵의 치료 활성
림프종 세포의 ADCC-매개 사망을 강력하게 하기 위한 rIL-2의 투여를 포함하여, 리툭시맵의 임상 효능을 강화하기 위한 다양한 방식들이 보고되었다 ([Cartron et al., Blood. 2004; 104:2635-2642]). 따라서, 본 발명가들은 혈관-표적화 IL-2 및 항-CD20 요법의 조합이 어느 한쪽 치료 접근법 단독보다 치료적으로 더욱 효과적일지 여부, 특히 림프종 조직에서의 IL-2의 항체-매개 축적이 미접합 사이토카인 및 리툭시맵의 조합물의 효능을 능가할지 여부를 질문하였다. 이를 위해, 조합 요법 실험을 하기의 계획에 따라 수행하였다 (군당 ≥ 5마리의 마우스): 200 ㎍ 리툭시맵 + 2.2 ㎍ 미접합 rIL-2 ("저용량"), 200 ㎍ 리툭시맵 + 6.6 ㎍ 미접합 rIL-2 ("고용량"), 200 ㎍ 리툭시맵 + 6.6 ㎍ L19-IL2 ("저용량", 2.2 ㎍ rIL-2에 상응), 200 ㎍ 리툭시맵 + 20 ㎍ L19-IL2 ("고용량", 6.6 ㎍ rIL-2에 상응), 또는 대조군 염수. 단독요법 실험과 유사하게, 촉진가능한 피하 이종이식편이 발달되었을 때 종양 세포 접종 후 제8일에 주사를 시작하였고, 전체적으로 4회의 주사를 3일마다 반복하였다.
도 4에 나타난 바와 같이, 미접합 rIL-2와 조합된 리툭시맵이 대조군과 비교하여 유의한 종양 성장 지연을 야기하였다 (rIL-2저용량 및 고용량 대 염수: P < 0.001). 고용량 rIL-2가 저용량 rIL-2보다 리툭시맵의 효능을 증가시키는 것에서 약간 더 효과적이었지만 (P = 0.038), 종양 퇴행이 관찰되지 않았고, 모든 종양이 계속 성장하였다. 반면에, 리툭시맵과 L19-IL2 융합 단백질의 조합은 현저하게 더 높은 항-림프종 활성을 나타냈고, 확립된 라모스 림프종의 완전한 근절을 고용량 L19-IL2 군 내의 마우스 5마리 중 4마리에서 유도하였으며 (L19-IL2고용량 대 염수: P < 0.00001), 이때 4마리의 CR (완전 완화) 중 3마리는 3회의 주사 후에 이미 달성되었다. 실제로, 이러한 면역사이토카인은 리툭시맵과 조합된 상응하는 등몰량의 미접합 rIL-2보다 두드러지게 더 강력하였다 (L19-IL2고용량 대 rIL-2고용량: P < 0.001). 특히, 심지어 리툭시맵과 조합된 최저 용량 수준의 L19-IL2도 요법의 4회 사이클 후 5마리의 사례 중 4마리에서 CR을 유도하여 우수한 치료 활성을 여전히 나타낸 한편 (L19-IL2저용량 대 염수: P < 0.00001; L19-IL2저용량 대 rIL-2저용량: P < 0.00001), 리툭시맵과 조합된 3배 더 높은 용량의 표적화되지 않은 사이토카인은 단지 종양 성장을 지연시킬 수만 있었다 (L19-IL2저용량 대 rIL-2고용량: P < 0.001). 저용량 L19-IL2 군 내의 CR을 달성한 동물들은 각각 21일, 48일, 50일 및 81일의 완화 기간 후 결국 재발하였지만, 고용량 L19-IL2 군 내의 모든 CR은 지속성이었고, 모든 마우스가 1년의 관찰 기간 동안 여전히 종양이 없었다. 2마리의 마우스 (저용량 군 내의 1마리 및 고용량 L19-IL2 군 내의 1마리)는 CR을 달성하지 않았지만, 종양 덩어리가 20 ㎣ 미만으로 감소되었다.
L19-IL2 (단독 또는 조합물)의 치료 성능이 제2의 림프종 모델에서 재현될 수 있는지 여부를 연구하기 위해, 국소화된 DoHH-2 소포성 림프종 이종이식편이 있는 SCID 마우스를 상기와 유사한 조건으로 처치하였다. 라모스 모델과 유사하게, L19-IL2가 림프종 성장 억제에서 단일 작용제로서 효과적이었지만 (P < 0.0001), 종양 퇴행을 유도하지는 않은 한편, 등가 용량의 이의 성분들 (네이키드 L19 및 rIL-2)의 합은 유의한 치료활성을 나타내지 않았다. 리툭시맵과 조합되었을 때, L19-IL2이 재현가능하게 제41일에 재발 증거가 없으면서 모든 사례 (5/5)에서 완전한 종양 근절에 이르렀고, 단일 작용제 리툭시맵 또는 리툭시맵과 표적화되지 않은 rIL-2 (및 네이키드 L19)의 조합보다, 비록 양쪽 군에서 2/5 CR이 관찰되었지만, 유의하게 더 효과적이었다 (P < 0.01).
단독 요법 및 조합 요법에서 국소화된 라모스 및 DoHH-2 이종이식편에 대해 사용된 모든 작용제의 치료 활성이 표 1에서 요약된다.
중요하게, 조합 요법의 치료 성능이 추가적인 독성과 관련되지 않았다. 처치 동안의 임의의 시점에 마우스가 유의한 체중 감소를 나타내지 않았고 (< 3％), 이는 조합 요법 처방계획이 또한 잘 허용되었음을 가리킨다.
<표 1>
Figure pct00003

파종성 림프종 모델에서의 치료 활성
파종성 림프종 이종이식편에 대한 단일 작용제로서의 L19-IL2 및 리툭시맵과 조합된 L19-IL2의 치료 활성
인간에서의 진행된 NHL은 통상적으로 파종성 질환으로 발달된다. 전신성 림프종에 대한 L19-IL2의 활성을 연구하기 위해, 본 발명가들은 파종성 SCID/라모스 림프종 모델을 선택하였다. 림프종 세포가 정맥내 접종된 SCID 마우스에서 뒷다리의 마비가 정기적으로 발달되는데, 이는 척수에서의 림프종 징후로부터 초래되고, 질환의 최종 단계를 가리킨다. 공개된 정보에 따르면, 라모스 세포의 정맥내 주사는 파일럿 실험에서 모든 사례에서 제26일까지 뒷다리 마비의 발달을 초래하였고, 이는 100％의 이식율을 가리킨다 (데이터는 제시되지 않음). 모든 사례에서 마비가 사망에 선행하였기 때문에, 뒷다리 마비의 출현은 생존 분석에 대해 종점으로 설정되었다. 림프종 세포의 이식 및 증식을 확실히 하기 위해 처치 개시가 8일 동안 지연되었다. 작용제의 투약 및 일정은 국소화된 라모스 림프종 모델에서 사용된 것과 동일하였고, 이러한 실험에서 단독요법 (rIL-2, L19-IL2, 리툭시맵) 및 조합 요법 (리툭시맵 + rIL-2, 리툭시맵 + L19-IL2) 양쪽 모두의 활성이 동시에 평가되었다.
카플란-마이어 생존 곡선이 도 5에서 제시된다. 제25일까지, 모든 염수-처치 대조군 마우스는 24일의 중앙 생존 시간으로 파종성 질환에 굴복하였다. 미접합 rIL-2의 단독 투여는 유의한 치료 이점을 나타내지 않았다 (중앙 생존 24일; P = 0.518, 로그-순위 테스트). 반면에, 상응하는 용량의 단일 작용제 L19-IL2 (20 ㎍)는 중앙 생존 시간을 29일로 연장하였고 (표적화되지 않은 rIL-2와 비교하여 P < 0.010), 염수-처치 대조군과 비교하여 질환 출현을 지연시키는 것에서 리툭시맵만큼 동등하게 효율적이었다 (각각 중앙 생존 29일 및 30일 대 24일; 양쪽 작용제 모두에 대해 P < 0.001). 조합 요법에서, rIL-2를 리툭시맵에 첨가하는 것은 리툭시맵 단독과 비교하여 오직 약간만 질환 출현을 지연시켰고, 통계학적 유의성에는 도달하지 않았다 (34일 대 30일; P = 0.180). 두드러지게, 단일 작용제 요법으로 처치된 모든 마우스, 뿐만 아니라 리툭시맵과 표적화되지 않은 rIL-2의 조합물로 처치된 모든 마우스에서는 결국 최종 마비가 발달되었지만, 조합된 L19-IL2와 리툭시맵이 제공된 6마리의 마우스 중 6마리가 질환의 임상 징후를 나타내지 않으면서 60일을 초과하여 생존하였다. 제62일에, 감염으로 인한 체중 감소 및 안구 분비물때문에 1마리의 마우스를 죽여야 했고, 부검 시 마비 또는 림프종 징후의 증거가 없었다. 뒷다리 마비는 없었지만, 겨드랑이 림프절에서의 림프종 발달로 인해 각각 제73일 및 제79일에 추가적인 2마리의 마우스를 희생시켜야 했다. 나머지 3마리의 마우스는 종양 세포 접종 후 310일 동안 여전히 질환이 없었다.
인간 림프종 샘플에서의 표적 발현의 확인
마지막으로, 면역조직화학 분석으로 확산성 거대 B-세포 및 버킷 림프종이 포함되는 인간 B-세포 악성 종양에서의 EDB 피브로넥틴의 존재 및 혈관 발현 패턴이 확증되었다 (도 6).
참고문헌:
Figure pct00004

Figure pct00005

Figure pct00006
SEQUENCE LISTING <110> Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft <120> Combination of an anti-EDb fibronectin antibody-IL-2 fusion protein, and a molecule binding to B cells, B cell progenitors and/or their cancerous counterpart <130> 53379AEP <160> 11 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Vh L19 <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Vl L19 <400> 2 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Gly Arg Ile Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 3 Gly Asp Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Ser 1 5 10 <210> 4 <211> 133 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys 20 25 30 Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys 35 40 45 Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu 65 70 75 80 Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu 85 90 95 Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala 100 105 110 Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile 115 120 125 Ile Ser Thr Leu Thr 130 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fusion protein linker <400> 5 Glu Phe Ser Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ser 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 Vh <400> 6 Ser Phe Ser Met Ser 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 Vh <400> 7 Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 Vh <400> 8 Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR1 Vl <400> 9 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 Vl <400> 10 Tyr Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 Vl <400> 11 Gln Gln Thr Gly Arg Ile Pro Pro Thr 1 5

Claims (33)

  1. (i) EDb-피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체 부분 및 인터루킨-2 부분을 포함하는 융합 단백질, 및
    (ii) B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자
    를 적어도 포함하는 조합물.
  2. 제1항에 있어서, B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자가 CD20, CD23, CD22, CD40, CD80, HLA-DR 또는 Hu1D10에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, CD20, CD23, CD22, CD40 또는 CD80에 특이적으로 결합하는 분자가 항체 또는 항체 단편, 또는 이들의 융합 단백질인 조합물.
  4. (i) EDb-피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체 부분 및 인터루킨-2 부분을 포함하는 융합 단백질, 및
    (ii) CD20에 특이적으로 결합하는 분자
    를 적어도 포함하는 조합물.
  5. (i) EDb-피브로넥틴을 특이적으로 인식하는 항체 부분 및 인터루킨-2 부분을 포함하는 융합 단백질, 및
    (ii) CD20을 발현하는 세포에 특이적으로 결합하는 분자
    를 적어도 포함하는 조합물.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 분자가 CD20에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편인 조합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, (i)의 항체 부분이 피브로넥틴의 EDb-도메인을 인식하는 것인 조합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이 항체 부분과 인터루킨-2 부분을 연결하는 융합 단백질 링커(linker)를 지니는 것인 조합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 부분이 나노몰 미만 또는 나노몰 친화도로 EDb 종양태아 피브로넥틴 도메인에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 부분이 L19 항체의 CDR 서열을 1개 이상 함유하는 것인 조합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 부분이 서열 6 내지 11에 따른 서열을 포함하는 것인 조합물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 부분이 1개 이상의 서열 1에 따른 V 중쇄 또는 1개 이상의 서열 2에 따른 V 경쇄를 포함하는 것인 조합물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 부분이 1개의 서열 1에 따른 V 중쇄 및 1개의 서열 2에 따른 V 경쇄를 포함하는 것인 조합물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄가 항체 링커에 의해 연결된 것인 조합물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 링커가 서열 3에 따른 서열, 또는 서열 3에 따른 서열에 대한 동일성이 90％ 이상인 서열을 포함하는 것인 조합물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 인터루킨-2 부분이 인간 인터루킨-2 또는 이의 기능성 변이체인 조합물.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 인터루킨-2 부분이 서열 4에 따른 서열을 포함하는 것인 조합물.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질 링커가 항체 부분과 인터루킨-2 부분을 연결하는 것인 조합물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질 링커의 길이가 아미노산 1개 내지 30개인 조합물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질 링커가 서열 5에 따른 서열을 포함하는 것인 조합물.
  21. 제3항 및 제7항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항체 단편, 또는 이들의 융합 단백질이 CD20에 특이적으로 결합하는 것인 조합물.
  22. 제21항에 있어서, 항-CD20 항체가 ADCC 활성을 나타내는 것인 조합물.
  23. 제6항, 제21항 및 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD20 항체가 리툭시맵(rituximab), 오크렐리주맵(Ocrelizumab), PRO131921, 벨투주맵(Veltuzumab), 오파투무맵(Ofatumumab), AME-133, 및 GA-101로부터 선택되는 것인 조합물.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 분자가 표지되고, 특히 방사성으로 표지된 것인 조합물.
  25. 제24항에 있어서, B 세포, B 세포 전구체 및/또는 이들의 암성 대응물에 결합하는 표지된 분자가 방사성으로 표지된 항-CD20 항체인 조합물.
  26. 제25항에 있어서, 방사성으로 표지된 항-CD20 항체가 90Y, 111In 및 131I로 표지된 항-CD20 항체로부터 선택되는 것인 조합물.
  27. 제26항에 있어서, 방사성으로 표지된 항-CD20 항체가 Y-90-이브리튜모맵(Ibritumomab)-티욱세탄(Tiuxetan) (Y90-제발린(Zevalin)®) 및 I-131 토시튜모맵(tositumomab) (벡사르(Bexxar)®)으로부터 선택되는 것인 조합물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 조합물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료를 위한 의약으로 사용하기 위한 조합물.
  30. 제29항에 있어서, 암이 림프종인 조합물.
  31. 제30항에 있어서, 림프종이 B-세포 림프종, 특히 비-호지킨(non-Hodgkins) 림프종 (NHL)인 조합물.
  32. 제28항에 있어서, 자가면역 질환의 치료를 위한 조합물.
  33. 제32항에 있어서, 자가면역 질환이 류머티스성 관절염, 크론병, 궤양성 결장염 및 자가면역 용혈 빈혈로부터 선택되는 것인 조합물.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220092666A (ko) 2020-12-24 2022-07-04 대화제약 주식회사 엑스트라도메인 b 피브로넥틴에 특이적으로 결합하는 신규한 항체

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2382058T3 (es) 2008-01-17 2012-06-04 Philogen S.P.A. Combinación de una proteína de fusión de un anticuerpo dirigido contra el EDB de la fibronectina-IL-2, y una molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de los linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos
AU2009336800A1 (en) * 2009-01-07 2011-07-21 Philogen S.P.A. Cancer treatment
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
US20120258073A1 (en) * 2011-02-10 2012-10-11 Christian Gerdes Immunotherapy
SI2673294T1 (sl) 2011-02-10 2016-08-31 Roche Glycart Ag Mutirani polipeptidi interlevkina-2
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
US20190002516A1 (en) * 2015-12-21 2019-01-03 Hefei Lifeon Pharmaceutical Co., Ltd. Drug Design Method, Obtained Drug and Application Thereof
GB201621806D0 (en) 2016-12-21 2017-02-01 Philogen Spa Immunocytokines with progressive activation mechanism
US12006354B2 (en) 2017-05-24 2024-06-11 Novartis Ag Antibody-IL2 engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
EP3660039A1 (en) 2018-11-30 2020-06-03 Philogen S.p.A. Il2 immunoconjugates
WO2020070150A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Philogen S.P.A Il2 immunoconjugates
WO2020249757A1 (en) 2019-06-14 2020-12-17 Philogen S.P.A Immunoconjugates comprising a single chain diabody and interleukin-15 or interleukin-15 and a sushi domain of interleukin-15 receptor alpha
WO2023180409A1 (en) * 2022-03-23 2023-09-28 Philogen S.P.A Il2 immunoconjuqate preparation
WO2024047237A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Philogen S.P.A. Tnf alpha and interleukin-2 combination therapy for non-melanoma skin cancer

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI82266C (fi) 1982-10-19 1991-02-11 Cetus Corp Foerfarande foer framstaellning av il-2 -mutein.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
WO1985000817A1 (en) 1983-08-10 1985-02-28 Amgen Microbial expression of interleukin ii
US5243029A (en) * 1986-04-09 1993-09-07 Fred Hutchinson Cancer Research Center Oncofetal structure of fibronectin
ATE243754T1 (de) 1987-05-21 2003-07-15 Micromet Ag Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
WO1992015682A1 (en) 1991-02-27 1992-09-17 Creative Biomolecules, Inc. Serine-rich peptide linkers
ATE297465T1 (de) 1991-11-25 2005-06-15 Enzon Inc Verfahren zur herstellung von multivalenten antigenbindenden proteinen
CA2126967A1 (en) 1992-11-04 1994-05-11 Anna M. Wu Novel antibody construct
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
MD1367C2 (ro) 1992-11-13 2000-11-30 Idec Pharmaceuticals Corporation Metode de tratament al limfomului celulelor B, anticorpi anti-CD20, hibridom.
ES2434840T3 (es) 1995-07-27 2013-12-17 Genentech, Inc. Formulación de proteína liofilizada isotónica estable
GB9610967D0 (en) 1996-05-24 1996-07-31 Cambridge Antibody Tech Specific binding members,materials and methods
ATE230277T1 (de) 1997-06-13 2003-01-15 Genentech Inc Stabilisierte antikörperformulierung
TWI259837B (en) 1998-05-11 2006-08-11 Eidgenossische Tech Hochscule Specific binding molecules for scintigraphy, conjugates containing them and therapeutic method for treatment of angiogenesis
US20030176663A1 (en) * 1998-05-11 2003-09-18 Eidgenossische Technische Hochscule Specific binding molecules for scintigraphy
US20030045681A1 (en) * 1998-05-11 2003-03-06 Anthony J. Zelano Specific binding molecules for scintigraphy, conjugates containing them and therapeutic method for treatment of angiogenesis
PT1719528E (pt) * 2000-02-24 2012-01-06 Philogen Spa Composições e métodos para tratamento de angiogénese em lesões patológicas
JP2004529848A (ja) * 2000-09-07 2004-09-30 シエーリング アクチエンゲゼルシャフト ＥＤｂ−フィブロネクチンドメイン（ＩＩ）の受容体
EP1463524A4 (en) * 2001-12-07 2005-02-09 Chiron Corp THERAPEUTIC METHODS FOR TREATING NON-HODGKINIAN LYMPHOMA
WO2003076469A2 (en) 2002-03-11 2003-09-18 Philogen S.P.A. Antibodies derived rom anti ed-b l19 and targeting tumor vasculature
EP1514561A1 (en) * 2003-09-10 2005-03-16 Philogen S.p.A. Targeting of tumor vasculature using radiolabelled antibody L19 against fibronectin ED-B
BRPI0607351A2 (pt) * 2005-02-15 2009-09-01 Novartis Vaccines & Diagnostic métodos para tratamento de linfomas empregando uma combinação de agente quimioterapêutico e il-2 e opcionalmente um anticorpo anti-cd20
EP1842553A1 (en) * 2006-04-07 2007-10-10 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Combination of an anti-EDb fibronectin domain antibody/IL2 fusion protein and a further small molecule
EP2036576A1 (en) * 2007-09-17 2009-03-18 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft ED-B fibronectin as stratification marker for antitumor drugs
ES2382058T3 (es) 2008-01-17 2012-06-04 Philogen S.P.A. Combinación de una proteína de fusión de un anticuerpo dirigido contra el EDB de la fibronectina-IL-2, y una molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de los linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220092666A (ko) 2020-12-24 2022-07-04 대화제약 주식회사 엑스트라도메인 b 피브로넥틴에 특이적으로 결합하는 신규한 항체

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