KR20080074950A

KR20080074950A - Ｃ―ｍｅｔ／ｈｇｆｒ 억제제의 다형체

Info

Publication number: KR20080074950A
Application number: KR1020087013452A
Authority: KR
Inventors: 징롱 진 쿠이; 미쉘 비치 트란-듀브
Original assignee: 화이자 프로덕츠 인크.
Priority date: 2005-12-05
Filing date: 2006-11-23
Publication date: 2008-08-13
Also published as: EP1963302B1; TW200730522A; CA2632283A1; AR057964A1; BRPI0619420A2; WO2007066185A2; AU2006323025B2; CN101326175A; ZA200804374B; TWI389902B; ES2402419T3; AU2006323025A1; PL1963302T3; WO2007066185A3; PT1963302E; US8217057B2; SI1963302T1; CA2632283C; KR101146852B1; HK1126477A1

Abstract

본 발명은 포유동물에서 암과 같은 비정상적인 세포 성장의 치료에 유용한 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 다형체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 그러한 염 및 다형체를 포함하는 조성물, 및 포유동물, 특히 인간에서 비정상적인 세포 성장의 치료에 있어서 상기 조성물의 사용 방법에 관한 것이다.

비정상적인 세포 성장, 암, Ｃ―ＭＥＴ／ＨＧＦＲ 억제제의 다형체

Description

Ｃ―ＭＥＴ／ＨＧＦＲ 억제제의 다형체 {POLYMORPHS OF A C-MET/HGFR INHIBITOR}

본 출원은 2005년 12월 5일 출원된 미국 가출원 제60/742,676호를 우선권으로 주장하며, 그의 전문은 본원에 참고로 포함된다.

하기 화학식 1로 표시되는 화합물 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민 (본원에서 "화합물 1"로도 지칭함)은 c-Met/HGFR (간세포 성장인자 수용체) 키나제 및 ALK (퇴행성 림프종 키나제) 활성의 강력한 소분자 억제제이다.

화합물 1은 광범위한 종양 유형의 성장 및 전이 과정의 조절에 관여하는 c-Met/HGFR, 및 ALCL (퇴행성 대세포 림프종)의 발병과 관련된 ALK의 억제를 통해 약리학적으로 매개되는 항-종양 특성을 갖는다. 화합물 1은 국제 특허 출원 제PCT/IB2005/002837호 및 미국 특허 출원 제11/212,331호에 개시되어 있으며, 상기 문헌 둘 다 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 또한, 화합물 1의 라세미체가 국제 특허 출원 제PCT/IB05/002695호 및 미국 특허 출원 제11/213,039호에 개시되어 있으며, 이들 둘 다 그의 전문이 본원에 참고로 포함된다.

인간의 암은 전세계의 선진국에서 총체적으로 주요 사망 원인 중 하나인 다양한 질병군을 포함한다 (문헌 [American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005. Atlanta: American Cancer Society; 2005]). 암의 진행은 유전자 변이, 염색체 전좌, 및 비정상 핵형을 비롯한 일련의 복합적인 다중 유전자 및 분자 사건에 의해 야기된다 (문헌 [Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of Cancer. Cell 2000; 100: 57-70]). 암의 기저 유전적 원인이 다양하고 복잡하긴 하지만, 각각의 암 유형은 그의 진행을 용이하게 하는 공통된 특징 및 선천적 소질을 나타내는 것으로 관찰되었다. 이러한 선천적 소질에는 조절되지 않은 세포 성 장, 혈관 동원 능력의 유지 (즉, 맥관형성), 및 종양 세포가 국소적으로 퍼질뿐 아니라 2차 기관 부위로 전이하는 능력이 포함된다 (문헌 [Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of Cancer. Cell 2000; 100: 57-70]). 따라서, 1) 암의 진행 동안 변경되는 분자 표적을 억제하거나 2) 다양한 종양에서 암 진행과 공통되는 표적 다중 과정을 억제하는 신규 치료제를 확인하기 위한 능력이 상당히 요구되고 있다.

미국 특허 출원 제11/212,331호의 실시예 19에는 무정형으로 확인된 화합물 1의 제조가 기재되어 있다. 화학적 및 거울상이성질체적 안정성을 유지하면서, 개선된 결정도, 용해 특성 및/또는 감소된 흡습성과 같은 개선된 특성을 갖는 다형체 형태가 유리하다.

<발명의 개요>

한 실시양태에서, 본 발명은 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 유리 염기의 결정질 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 유리 염기의 결정질 형태는 무수물이다. 다른 실시양태에서, (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 유리 염기의 결정질 형태는 수화물이다.

추가의 측면에서, 결정질 형태는 상기 유리 염기의 다형체 형태 1이다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 19.7 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 17.3 ± 0.1 및 19.7 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 포함한다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 15.7 ± 0.1, 17.3 ± 0.1, 및 19.7 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 15.7 ± 0.1, 17.3 ± 0.1, 19.7 ± 0.1, 및 26.8 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 15.7 ± 0.1, 17.3 ± 0.1, 19.7 ± 0.1, 21.0 ± 0.1, 및 26.8 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 15.7 ± 0.1, 17.3 ± 0.1, 19.7 ± 0.1, 21.0 ± 0.1, 21.7 ± 0.1, 및 26.8 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 12.8 ± 0.1, 15.7 ± 0.1, 17.3 ± 0.1, 19.7 ± 0.1, 21.0 ± 0.1, 21.7 ± 0.1, 및 26.8 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가의 측면에서, 결정질 형태는 도 1에 도시된 것과 본질적으로 동일한 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다.

본 발명은 추가로 화합물 1의 유리 염기 다형체 형태 1을 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명은 추가로 상기 제약 조성물을 포함하는 캡슐을 제공한다. 이 실시양태의 특정 측면에서, 상기 캡슐은 화합물 1의 유리 염기 다형체 형태 1을 0.1 내지 200 mg 포함한다. 추가의 측면에서, 상기 캡슐은 화합물 1의 유리 염기 다형체 형태 1을 25 내지 150 mg 포함한다. 추가의 실시양태에서, 상기 캡슐은 화합물 1의 유리 염기 다형체 형태 1을 50 내지 100 mg 포함한다.

다른 실시양태에서, 본 발명은 인간을 비롯한 포유동물에게 치료 유효량의 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.

다른 실시양태에서, 본 발명은 인간을 비롯한 포유동물에게 본 발명의 캡슐을 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 치료가 필요한 인간을 비롯한 포유동물에게 치료 유효량의 화합물 1의 유리 염기 다형체 형태 1을 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에서 비정상적인 세포 성장을 치료하는 방법을 제공한다.

다른 실시양태에서, 비정상적인 세포 성장은 유전적으로 변경된 하나 이상의 티로신 키나제에 의해 매개된다. 다른 실시양태에서, 비정상적인 세포 성장은 간세포 성장인자 수용체 (c-Met/HGFR) 키나제 또는 퇴행성 림프종 키나제 (ALK)에 의해 매개된다. 다른 실시양태에서, 비정상적인 세포 성장은 간세포 성장인자 수용체 (c-Met/HGFR) 키나제에 의해 매개된다. 다른 실시양태에서, 비정상적인 세포 성장은 퇴행성 림프종 키나제 (ALK)에 의해 매개된다.

다른 실시양태에서, 비정상적인 세포 성장은 암이다. 다른 실시양태에서, 암은 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문암, 위암, 결장암, 유방암, 팔로피오관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨(Hodgkin) 질병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신세포 암종, 신우 암종, 중추신경계 (CNS) 신생물, 1차 CNS 림프종, 척수 축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

또 다른 실시양태에서, 암은 소세포 폐암 (NSCLC), 편평상피 세포 암종, 호르몬-저항성 전립선암, 유두상 신세포 암종, 대장직장 선암종, 신경모세포종, 퇴행성 대세포 림프종 (ALCL) 및 위암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

정의

달리 언급하지 않는다면, 본원에 사용된 용어 "비정상적인 세포 성장"은 정상적인 조절 메카니즘과 독립적인 세포 성장 (예를 들어, 접촉 억제의 손실)을 나타낸다.

달리 언급하지 않는다면, 본원에 사용된 용어 "치료하는"은 이러한 용어가 적용되는 질병 또는 증상, 또는 상기 질병 또는 증상의 하나 이상의 징후를 예방하거나, 그의 진행을 역전, 경감, 억제하는 것을 의미한다. 달리 언급하지 않는다면, 본원에 사용된 용어 "치료"는 상기 정의한 "치료하는"의 행위를 나타낸다.

X-선 회절 피크 위치와 관련하여 본원에 사용된 용어 "본질적으로 동일한"은 전형적인 피크 위치 및 강도 변동성을 고려한 것을 의미한다. 예를 들어, 당업자는 피크 위치 (2θ)가 일부 기계내 변동성 (전형적으로 0.1°만큼)을 나타낼 것이라고 이해할 것이다. 또한, 당업자는 상대적인 피크 강도가 기계내 변동성 뿐만 아니라, 결정도, 바람직한 배향, 제조된 샘플 표면, 및 당업자에게 공지된 다른 인자로 인한 변동성을 나타낼 것이고, 정성적인 척도로만 고려되어야 한다는 것을 잘 알 것이다.

도 1은 유리 염기 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 결정질 형태 (다형체 형태 1)의 분말 X-선 회절 패턴을 도시한다.

도 2는 유리 염기 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 결정질 형태 (다형체 형태 1)의시차 주사 열량계 (DSC) 열분석도를 도시한다.

본 발명에서, 독특한 물리적 형태의 유리 염기 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민이 제조되었다. 유리 염기 다형체 형태 1의 분말 X-선 회절 (PXRD) 패턴은 도 1에 도시되어 있고, 이는 표 1에 기재된 데이타 목록에 상응한다.

결정질 유리 염기 형태 1에 대한 DSC 열분석도는 도 2에 도시되어 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 화합물 1의 유리 염기 다형체 형태 1을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 제약 조성물은 예를 들어 정제, 캡슐, 환제, 분말, 지연 방출 제형, 용액, 현탁액으로서 경구 투여에 적합한 형태, 멸균 용액, 현탁액 또는 에멀젼으로서 비경구 주사에 적합한 형태, 연고 또는 크림으로서 국소 투여에 적합한 형태, 또는 좌약으로서 직장 투여에 적합한 형태일 수 있다. 제약 조성물은 정확한 투여량의 단일 투여에 적합한 단위 투여 형태일 수 있다. 제약 조성물은 통상적인 제약학적 담체 또는 부형제, 및 활성 성분으로서 본 발명에 따른 화합물을 포함할 것이다. 또한, 이는 다른 의학적 또는 제약학적 제제, 담체, 보조제 등을 포함할 수 있다.

예시적인 비경구 투여 형태로는 멸균 수용액, 예를 들어 수성 프로필렌 글리콜 또는 덱스트로스 용액 중 활성 화합물의 용액 또는 현탁액이 있다. 이러한 투여 형태는 필요에 따라 적합하게 완충될 수 있다.

적합한 제약학적 담체로는 불활성 희석제 또는 충전제, 물 및 다양한 유기 용매가 있다. 제약 조성물은 필요에 따라 추가의 성분, 예컨대 향미제, 결합제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 따라서, 경구 투여의 경우, 다양한 부형제, 예컨대 시트르산을 함유하는 정제는 다양한 붕괴제, 예컨대 전분, 알긴산 및 특정 복합 실리케이트, 및 결합제, 예컨대 수크로스, 젤라틴 및 아카시아와 함께 사용될 수 있다. 추가로, 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 라우릴 술페이트 및 탈크가 타정 목적을 위해 종종 사용된다. 유사한 유형의 고체 조성물 또한 연질 및 경질 충전 젤라틴 캡슐에 사용될 수 있다. 바람직한 물질로는 락토스 또는 유당 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜이 있다. 수성 현탁액 또는 엘릭시르가 경구 투여에 바람직한 경우, 그 안의 활성 화합물은 다양한 감미제 또는 향미제, 착색제 또는 염료, 및 필요에 따라 유화제, 현탁제, 및 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린 또는 이들의 조합물과 함께 조합될 수 있다.

특정량의 활성 화합물을 갖는 다양한 제약 조성물의 제조 방법이 공지되어 있거나, 당업자에게 자명할 것이다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975)]을 참조한다.

하기 제공된 실시예 및 제조예는 본 발명의 실시양태의 특정 측면을 설명하고 예시한다. 본 발명의 범위가 어떠한 방식으로도 하기 실시예의 범위로 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다.

방법 및 재료

분말 X-선 회절 (PXRD): 도 1에 도시된 PXRD 데이타는 하기 프로토콜에 따라 수집하였다. 샘플 (2 mg)을 제로 백그라운드에서 현미경 슬라이드 상에 놓았다. 그 후, 샘플을 GADDS 검출기를 구비한 디스커버(Discover) D8 (Bruker AXS Instruments)에 넣었다. 시스템은 40kV 및 40 mA에서 유지되는 구리 X-선 광원을 사용하여, 1.5406 Å에서 CUα1 방출을 제공하였다. 60.1 초의 단계 시간에서 0.02°의 단계 스캔을 이용하여 4 내지 40°2θ에서 데이타를 수집하였다. 회절 피크는 전형적으로 ± 0.1°(2θ)의 오차하에 측정한다.

시차 주사 열량계 (DSC): 도 2에 도시된 DSC 측정은 Q1000, 열 분석 장치를 이용하여 수행하였다. 1.6 mg 중량의 샘플을 핀홀을 가진 기밀 밀봉된 알루미늄 팬에 넣었다. 샘플을 25℃로 평형화한 다음, 10℃/분의 스캔 속도로 250℃까지 측정하였다. 퍼지 기체로서 건조 질소를 사용하였다.

화합물 1의 합성

PLE는 로체(Roche)에 의해 생산되는 효소이며, 바이오카탈리틱스 인크.(Biocatalytics Inc.)에서 돼지 간으로부터의 조질의 에스테라제 제제로서 시판되며, 보통 PLE-AS (바이오카탈리틱스로부터 ICR-123으로 구입되며, 암모늄 술페이트 현탁액으로 판매됨)로 알려져 있다. 상기 효소는 CAS 등록에서 "카르복실릭-에스테르 히드롤라제, CAS 제9016-18-6호"로 분류된다. 상응하는 효소 분류 번호는 EC 3.1.1.1이다. 상기 효소는 광범위한 에스테르의 가수분해에 대한 넓은 기질 특이성을 갖는 것으로 알려져 있다. 리파제 활성은 pH 적정기에서 에틸 부티레이트의 가수분해에 기초한 방법을 이용하여 측정된다. 1 LU (리파제 단위)는 22℃, pH 8.2에서 분당 적정가능한 부티르산 1 μmol을 유리시키는 효소의 양이다. 본원에 보고된 제제 (PLE-AS, 현탁액으로서)는 보통 45 LU/mg 초과의 (단백질 함량 대략 40 mg/mL) 공지된 활성을 갖는 불투명한 녹갈색 액체로서 제공된다.

(1S)-1-(2,6- 디클로로 -3- 플루오로페닐 )에탄올

하기 반응식에서 화합물 (S-1)로 도시된 (1S)-1-(2,6-디클로로-3-플루오로페닐)에탄올은 반응식 B에 따라 1-(2,6-디클로로-3-플루오로페닐)에틸 아세테이트 라세미체의 효소적 가수분해, 에스테르화, 및 전위를 수반한 화학적 가수분해의 조합에 의해 제조하였다. 1-(2,6-디클로로-3-플루오로페닐)에틸 아세테이트 라세미체 (화합물 A2)는 반응식 A에 따라 제조하였다.

1-(2,6- 디클로로 -3- 플루오로페닐 )에탄올 (A1): 나트륨 보로하이드라이드 (90 mg, 2.4 mmol)를 무수 CH₃OH 2 mL 중 2',6'-디클로로-3'-플루오로-아세토페논 (알드치리(Aldrich), 카탈로그 # 52,294-5) (207 mg, 1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 증발시켜, 무색 오일 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 중 0→10％ EtOAc로 용출)에 의해 정제하여, 무색 오일로서 화합물 A1 (180 mg; 0.88 mmol; 86.5％ 수율)을 수득하였다.

1-(2,6- 디클로로 -3- 플루오로페닐 )에틸 아세테이트 (A2): 아세트산 무수물 (1.42 mL, 15 mmol) 및 피리딘 (1.7 mL, 21 mmol)을 순차적으로 CH₂Cl₂ 20 mL 중 화합물 A1 (2.2 g, 10.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반한 다음 증발시켜, 황색 오일 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 중 7→9％ EtOAc로 용출)에 의해 정제하여, 무색 오일로서 화합물 A2 (2.26 g; 9.0 mmol; 85.6％ 수율)을 수득하였다.

pH 전극, 오버헤드 교반기 및 염기 첨가 라인 (1M NaOH)을 구비한 50 mL 쟈켓 플라스크에 100 mM 칼륨 포스페이트 완충액 (pH 7.0) 1.2 mL 및 PLE AS 현탁액 0.13 mL를 첨가하였다. 그 후, 화합물 A2 (0.13 g, 0.5 mmol, 1.00 eq)를 적가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하고, 1 M NaOH를 이용하여 반응의 pH를 7.0으로 일정하게 유지시켰다. 반응의 전환율 및 ee 둘 다를 RP-HPLC에 의해 모니터링하고, 출발 물질의 50％가 소모된 후에 (이러한 조건하에 대략 17시간 후에) 중단하였다. 그 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 10 mL로 3회 추출하여, R-1 및 S-2의 혼합물로서 에스테르 및 알콜 둘 다를 회수하였다.

메탄술포닐 클로라이드 (0.06 mL, 0.6 mmol)를 질소 분위기하에 피리딘 4 mL 중 R-1 및 S-2의 혼합물 (0.48 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 증발시켜, 오일을 수득하였다. 물 (20 mL)을 혼합물에 첨가한 다음, EtOAc (20 mL x 2)를 첨가하여 수용액을 추출하였다. 유기 층을 합하고, 건조, 여과 및 증발시켜, R-3 및 S-2의 혼합물을 수득하였다. 이 혼합물을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.

칼륨 아세테이트 (0.027 g, 0.26 mmol)를 질소 분위기하에 DMF 4 mL 중 R-3 및 S-2의 혼합물 (0.48 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 100℃로 가열하였다. 물 (20 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, EtOAc (20 mL x 2)를 첨가하여 수용액을 추출하였다. 합한 유기 상을 건조, 여과 및 증발시켜, S-2의 오일 (72 mg, 두 단계에서 61％ 수율; 키랄성 ee: 97.6％)을 수득하였다.

나트륨 메톡시드 (19 mmol; 메탄올 중 0.5 M)를 0℃에서 질소 분위기하에 화합물 S-2 (4.64 g, 18.8 mmol)에 천천히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, H₂O (100 mL)를 첨가하였다. 냉각된 반응 혼합물을 나트륨 아세테이트-아세트산 완충액 용액으로 pH 7로 중화시켰다. 에틸 아세테이트 (100 mL x 2)를 첨가하여 수용액을 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 여과 및 증발시켜, 백색 고체로서 S-1 (4.36 g, 94.9％ 수 율; SFC-MS: 97％ ee)을 수득하였다.

5- 브로모 -3-[1-(2,6- 디클로로 -3- 플루오로 - 페닐 )- 에톡시 ]-피리딘-2- 일아민 (라세미체):

1. 2,6-디클로로-3-플루오로아세토페논 (15 g, 0.072 mol)을 얼음조를 이용하여 0℃에서 10분 동안 THF (150 mL, 0.5 M) 중에서 교반하였다. 리튬 알루미늄 수소화물 (2.75 g, 0.072 mol)을 천천히 첨가하였다. 반응을 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 얼음조에서 냉각시키고, 물 (3 mL)을 신중하게 적가한 다음, 15％ NaOH (3 mL)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 30분 동안 교반하였다. 15％ NaOH (9 mL), MgSO₄를 첨가하고, 혼합물을 여과하여 고체를 제거하였다. 고체를 THF (50 mL)로 세척하고, 여액을 농축시켜, 1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에탄올 (14.8 gm, 95％ 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.

2. 0℃에서 THF (200 mL) 중 트리페닐 포스핀 (8.2 g, 0.03 mol) 및 DEAD (톨루엔 중 40％ 용액 13.65 mL)의 교반된 용액에 THF (200 mL) 중 1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에탄올 (4.55 g, 0.021 mol) 및 3-히드록시-니트로피리딘 (3.35 g, 0.023 mol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 밝은 오렌지색 용액을 질소 분위기하에 상온에서 4시간 동안 교반하였고, 이 때 모든 출발 물질이 소모되었다. 용매를 제거하고, 조질의 물질을 실리카 겔 상에 건조 로딩하고, 에틸 아세테이트-헥산 (20:80)으로 용출시켜, 3-(2,6-디클로로-3-플루오로-벤질옥시)-2-니트로-피리딘 (6.21 g, 0.021 mol, 98％)를 분홍색 고체로서 수득하였다.

3. AcOH (650 mL) 및 EtOH (500 mL)의 교반된 용액에 3-(2,6-디클로로-3-플루오로-벤질옥시)-2-니트로-피리딘 (9.43 g, 0.028 mol) 및 철 조각 (15.7 g, 0.28 mol)을 현탁시켰다. 반응을 천천히 환류 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응을 실온으로 냉각시킨 다음, 디에틸 에테르 (500 mL) 및 물 (500 mL)을 첨가하였다. 나트륨 카르보네이트를 첨가하여 용액을 주의해서 중화시켰다. 합한 유기 추출물을 포화 NaHCO₃ (2 x 100 mL), H₂O (2 x 100 mL) 및 염수 (1 x 100 mL)로 세척한 다음, 건조 (Na₂SO₄)하고, 여과하고, 진공하에 농축 건조하여, 3-(2,6-디클로로-3-플루오로-벤질옥시)-피리딘-2-일아민 (9.04 g, 0.027 mol, 99％)을 밝은 분홍색 고체로서 수득하였다.

4. 아세토니트릴 중 3-(2,6-디클로로-3-플루오로-벤질옥시)-피리딘-2-일아민 (9.07 g, 0.03 mol)의 교반 용액을 얼음조를 이용하여 0℃로 냉각하였다. 이 용액 에 N-브로모숙신이미드 (NBS) (5.33 g, 0.03 mol)를 일부씩 나누어 첨가하였다. 반응을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응을 진공하에 농축 건조하였다. 생성된 어두운색 오일을 EtOAc (500 mL)에 용해하고, 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 그 후, 용매를 진공에서 제거하여, 5-브로모-3-(2,6-디클로로-3-플루오로-벤질옥시)-피리딘-2-일아민 (5.8 g, 0.015 mol, 51％)을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.

5- 브로모 -3-[1(R)-(2,6- 디클로로 -3- 플루오로 - 페닐 )- 에톡시 ]-피리딘-2- 일아민 :

거울상이성질체적으로 순수한 R 이성질체를 라세미체에 대해 상기 기재된 바와 같이 제조하였으나, 단 상기 기재한 거울상이성질체적으로 순수한 출발 물질을 사용하였다.

4- 메탄술포닐옥시 -피페리딘-1- 카르복실산 tert -부틸 에스테르 (2)

0℃로 냉각된 CH₂Cl₂ (100 mL) 중 4-히드록시-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (7.94 g, 39.45 mmol)의 교반된 용액에 NEt₃ (5.54 mL, 39.45 mmol)에 이어 메탄 술포닐 클로라이드 (3.06 mL, 39.45 mmol) 및 DMAP (48 mg, 0.39 mmol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 혼합물에 물 (30 mL)을 첨가하였다. CH₂Cl₂ (3 x 30 mL)로 추출한 다음, 건조 (Na₂SO₄)하고, 진공에서 용매를 제거하여, 4-메탄술포닐옥시-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 백색 고체 (11.00 g, >99％ 수율)로서 수득하였다.

tert -부틸-4-[4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 디옥사보롤란 -2-일)-1H- 피라졸 -1-일]피페리딘-1- 카르복실레이트

tert -부틸 4-(4- 요오도 -1H- 피라졸 -1-일)피페리딘-1- 카르복실레이트 (3)

NaH (1.2 eq., 0.68 mmol)를 4℃에서 DMF (2 L) 중 4-요오도피라졸 (0.57 mmol)의 교반된 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 4-메탄술포닐옥시-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르, 화합물 2 (1.1 eq., 0.63 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 12시간 동안 100℃로 가열하였다. 반응을 H₂O로 켄칭하고, EtOAc로 수회 추출하였다. 합한 유기 층을 건조, 여과 및 농축하여, 오렌지색 오일을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (펜탄 중 5％ EtOAc로 용출)에 의해 정제하여, 백색 고체로서 화합물 3 (140 g, 66％)을 수득하였다.

tert -부틸-4-[4-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 디옥사보롤란 -2-일)-1H- 피라 졸-1-일]피페리딘-1- 카르복실레이트 (4)

비스(피나콜레이토)디보론 (1.4 eq., 134 g, 0.52 mol) 및 칼륨 아세테이트 (4 eq., 145 g, 1.48 mol)를 순차적으로 DMSO 1.5 L 중 화합물 3 (140 g, 0.37 mol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 질소로 수회 퍼징한 다음, 디클로로비스(트리페닐포스피노) 팔라듐 (II) (0.05 eq., 12.9 g, 0.018 mol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여액을 포화 NaCl (500 mL x 2)로 추출하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 중 5％ EtOAc로 용출)로 정제하여, 백색 고체로서 화합물 4 (55 g, 40％)를 수득하였다.

3-[(R)-1-(2,6- 디클로로 -3- 플루오로 - 페닐 )- 에톡시 ]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2- 일아민 (1)

DME (143 mL) 중 3-[(R)-1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-피리딘-2-일아민 (15.22 g, 35.64 mmol) 및 4-(4-브로모-피라졸-1-일)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (14.12 g, 42.77 mmol)의 교반된 용액에 물 (36 mL) 중 Na₂CO₃ (11.33 g, 10692 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 용액을 탈기시키고, 질소로 수회 충전하였다. 상기 용액에 Pd(PPh₃)₂Cl₂ (1.25 g, 1.782 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 탈기시키고, 다시 질소로 3회 충전하였다. 반응 용액을 87℃ 오일조에서 약 16시간 동안 (또는 보란 피나콜 에스테르가 소모될 때까지) 교반하고, 상온으로 냉각시키고, EtOAc (600 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. EtOAc 용액을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하였다. 조질의 생성물을 EtOAc/헥산 시스템 (바이오테이지(Biotage) 90+ 컬럼: 평형 600 mL 100％ 헥산, 세그먼트 1: 2250 mL 50％ EtOAc/헥산 선형, 세그먼트 2: 4500 mL 75％ EtOAc/헥산 선형, 세그먼트 3: 4500 mL 100％ EtOAc)으로 용출시키는 실리카 겔 컬럼 상에서 정제하여, Rf 0.15 (50％ EtOAc/헥산)를 갖는 4-(4-{6-아미노-5-[(R)-1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-피리딘-3-일}-피라졸-1-일)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (11.8 g, 60％ 수율, 대략 95％ 순도)를 수득하였다. MS m/e 550 (M+1)⁺.

CH₂Cl₂ (59 mL, 0.2M) 중 4-(4-{6-아미노-5-[(R)-1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-피리딘-3-일}-피라졸-1-일)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (11.8 g, 21.45 mmol)의 용액에 4N HCl/디옥산 (21 mL)을 첨가하였다. 상기 용액을 밤새 교반하여 고체를 형성하였다. 상기 고체를 유리 막대로 철저히 분쇄하고 초음파 처리하여, 고체 중에 포획되어 있는 출발 물질을 방출시켰다. 추가의 4N HCl/디옥산 (21 mL)을 첨가하고, 실온에서 2시간 더 교반하였고, 이 때 LCMS는 출발 물질이 없음을 나타내었다. 현탁액을 여과지가 대어진 부흐너 깔대기로 여과하였다. 모액이 5％ 미만의 생성물을 함유하였기 때문에 모액을 모았다. 고체를 500 mL 비이커로 옮기고, 고체가 완전히 용해될 때까지 HPLC 물을 첨가하였다. 고체 Na₂CO₃를 첨가하여 pH를 10으로 조정하였다. 물 용액을 CH₂Cl₂ (5 x 200 mL)로 추출하거나, LCMS가 수성 층에서 생성물이 없음을 나타낼 때까지 추출하였다. CH₂Cl₂ 용액을 Na₂SO₄ 상에서 건조하고 농축하였다. CH₂Cl₂ (10 mL) 및 MeOH (1 mL) 중에 재용해된 조질의 생성물을 CH₂Cl₂/MeOH/NEt₃ 시스템 (바이오테이지 40+ 컬럼: 평형 600 mL CH₂Cl₂ 100％ 부산물 제공, 세그먼트 1: 1200 mL 10％ MeOH/CH₂Cl₂ 선형, 세그먼트 2: 2400 mL 10％ MeOH/CH₂Cl₂ 단계식, 세그먼트 3: 2400 mL 9％ MeOH/1％ NEt₃/CH₂Cl₂)으로 용출시키는 실리카 겔 컬럼 상에서 정제하였다. 목적하는 분획을 수집하여, 3-[(R)-1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민 (7.19 g, 75％ 합한 수율, 백색 고체)을 제공하였다. MS m/e 450 (M+1)⁺.

고체 생성물 3-[(R)-1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민을 디클로로메탄에 용해하고, 용매를 천천히 증발시켜, 미세한 결정질 고체를 수득하였다. 고진공하에 건조시킨 후, 샘플이 194℃의 융점을 갖는 단일 결정질 다형체 형태 1임을 확인하였다.

하기 용매를 고체의 재결정화를 위해 사용하였다: 이소프로판올, 이소부탄올, 에탄올, 에틸 아세테이트, 톨루엔, 테트라히드로푸란, 및 디옥산. 7가지의 모든 용매가 디클로로메탄으로부터의 원래의 결정질 고체와 동일한 다형체 형태 1 결정질 고체를 생성하였다.

Claims

결정질 형태로서 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 유리 염기.
제1항에 있어서, 결정질 형태가 유리 염기의 다형체 형태 1인 유리 염기.
제1항 또는 제2항에 있어서, 결정질 형태가 19.7 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것인 유리 염기.
제1항 또는 제2항에 있어서, 결정질 형태가 17.3 ± 0.1 및 19.7 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것인 유리 염기.
제1항 또는 제2항에 있어서, 결정질 형태가 15.7 ± 0.1, 17.3 ± 0.1, 및 19.7 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것인 유리 염기.
제1항 또는 제2항에 있어서, 결정질 형태가 15.7 ± 0.1, 17.3 ± 0.1, 19.7 ± 0.1, 및 26.8 ± 0.1의 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것인 유리 염기.
제1항 또는 제2항에 있어서, 결정질 형태가 도 1에 도시된 것과 본질적으로 동일한 회절각 (2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 것인 유리 염기.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 유리 염기를 포함하는 제약 조성물.
제8항의 제약 조성물을 포함하는 캡슐.
제9항에 있어서, (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 다형체 형태 1을 0.1 내지 200 mg 포함하는 캡슐.
제9항에 있어서, (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 다형체 형태 1을 25 내지 150 mg 포함하는 캡슐.
제9항에 있어서, (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 다형체 형태 1을 50 내지 100 mg 포함하는 캡슐.
인간을 비롯한 포유동물에게 치료 유효량의 제8항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에서 암을 치료하는 방법.
포유동물에게 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항의 캡슐을 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에서 암을 치료하는 방법.
포유동물에게 치료 유효량의 (R)-3-[1-(2,6-디클로로-3-플루오로-페닐)-에톡시]-5-(1-피페리딘-4-일-1H-피라졸-4-일)-피리딘-2-일아민의 유리 염기 다형체 형태 1을 투여하는 것을 포함하는, 치료가 필요한 포유동물에서 비정상적인 세포 성장을 치료하는 방법.