KR20020021398A - 정의된 에피토프 구역에 아미노산 치환을 가진 서브틸리신프로테아제 변이체 - Google Patents

정의된 에피토프 구역에 아미노산 치환을 가진 서브틸리신프로테아제 변이체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 야생형 프로테아제보다 감소된 면역원성을 가진 서브틸리신-유사 프로테아제에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 하나 이상의 에피토프 구역 내의 치환체를 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가진 변이체에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기의 변이체를 코딩하는 변이 유전자, 및 상기 변이체를 함유하는 퍼스널 케어용 조성물에 관한 것이다.

Description

정의된 에피토프 구역에 아미노산 치환을 가진 서브틸리신 프로테아제 변이체{SUBTILISIN PROTEASE VARIANTS HAVING AMINO ACID SUBSTITUTIONS IN DEFINED EPITOPE REGIONS}
효소는 천연 생성 단백질의 가장 큰 군을 구성한다. 효소의 한 군에는 다른 단백질의 가수분해를 촉매하는 프로테아제가 포함된다. 단백질을 가수분해하는 상기 능력은, 천연 생성 프로테아제 및 유전적으로 조작된 프로테아제를 세정용 조성물, 특히 세탁 적용에 적합한 것들에 도입함으로써, 전형적으로 이용되어 왔다.
세정 분야에서, 가장 널리 사용되는 상기 프로테아제는 세린 프로테아제이다. 상기 세린 프로테아제의 대부분은 박테리아 개체에 의해 생성되지만, 일부는 곰팡이와 같은 다른 개체에 의해 생성된다. Siezen 등의 문헌 ["Homology Modelling and Protein Engineering Strategy of Subtilase, the Family of Subtilisin-Like Serine Proteases", Protein Engineering, Vol. 4, No. 7, pp. 719 - 737 (1991)] 을 참조. 불행하게도, 천연 환경에서의 야생형 프로테아제의유효성은 세정용 조성물의 인공 환경에서는 자주 최적화되어 있지 않다. 구체적으로, 예를 들어 열 안정성, pH 안정성, 산화 안정성 및 기질 특이성과 같은 프로테아제 특징이, 프로테아제의 천연 환경 외부에서의 이용을 위해 반드시 최적화되어 있지는 않다.
비천연 세정 환경에서의 프로테아제 유효성을 증가시키기 위한 목적으로, 세린 프로테아제의 야생형 아미노산 서열을 변화시키려는 일부 접근법이 채택되고 있다. 상기 접근법에는, 상당히 다양한 조건 하에서 열 안정성을 증강시키고, 산화 안정성을 개선하기 위한 프로테아제의 유전적 재설계 및/또는 화학적 변형이 포함된다.
그러나, 상기 변형된 프로테아제는 포유류에게 외부물이므로, 잠재적인 항원이다. 항원으로서, 상기 프로테아제는 포유류에서 면역원성 및/또는 알러지성 반응(본원에서는 총체적으로 면역원성 반응으로 기재함)을 일으킨다.
더욱이, 세탁 용도를 위해 보다 더 효과적인 프로테아제를 위한 지속적인 연구에서 유전공학은 두각을 나타내지만, 유전적으로 설계된 프로테아제는 퍼스널 케어용 조성물 및 가사 경감용 세제에 상업적으로 이용되진 않는다. 예를 들어, 비누, 겔, 바디 워시, 및 샴푸와 같은 제품에 설계된 프로테아제가 없는 일차적인 이유는, 인간 감작으로 바람직하지 않은 면역원성 반응을 일으키는 문제 때문이다. 따라서, 면역원성 반응을 야기하지 않으면서 프로테아제의 세정 특성을 제공하는 퍼스널 케어용 조성물 또는 가사 경감용 세제를 제공하는 것이 매우 유익할 것이다.
프로테아제의 면역학적 활성을 경감시키기 위한 한 가지 접근법은 프로테아제의 하나 이상의 에피토프의 재고안을 이용하는 것이다. 에피토프는 항체의 결합을 통해, 또는 주조직적합체 단백질(MHC)을 경유해 T 세포에 처리되는 항원의 제공을 통해 면역원성 반응을 야기하는 항원의 아미노산 구역이다. 에피토프에서의 변화는 항원으로서의 효과에 영향을 미칠 수 있다. 문헌[Walsh, B.J. 및 M.E.H.Howden, "A Method for the Detection of IgE Binding Sequences of Allergens Based on a Modification of Epitope Mapping",Journal of Immunological Methods, Vol. 121, 275 - 280 쪽 (1989)] 참조.
본 발명자들은 서브틸리신 BPN' 을 포함하여, 서브틸리신으로서 일반적으로 공지된 세린 프로테아제가 서브틸리신 BPN' 의, 아미노산 위치 103 - 126, 220 - 246, 및 아미노산 위치 70 - 84 에 두드러진 에피토프 구역을 가진다는 것을 발견했다. 본 발명자들은 본원에서 상기 서브틸리신을 유전적으로 재설계하여 상기 에피토프 구역에 부여된 면역원성 성질을 경감시켰다. 상기와 같이 하는 중에, 본 발명자들은 면역원성 반응을 덜 야기하는 서브틸리신이 효과적인 세척용 프로테아제로서의 그들의 활성을 유지하는 것을 발견했다. 따라서, 본 발명의 변이체는, 세탁용, 식기용, 경질 표면용, 피부 케어용, 헤어 케어용, 뷰티 케어용, 구강 케어용, 및 콘택트 렌즈 조성물을 포함하는 여러 유형의 조성물에 사용하기 적합하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
발명의 개요
본 발명은, 야생형 프로테아제에 비해 감소된 면역원성을 가진 세린 프로테아제의 변이체에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 변경된 아미노산 서열이, 에피토프 구역이 서브틸리신 BPN' 의 103 - 126 및 220 - 246 인 야생형 아미노산 서열의 하나 이상의 에피토프 구역에 치환을 포함하는, 변경된 아미노산 서열을 가진 변이체에 관한 것이다. 추가적으로, 본 발명은 에피토프 구역이 서브틸리신 BPN' 의 70 - 84, 103 - 126 및 220 - 246 인 2 개 이상의 에피토프 구역 내에 하나 이상의 치환을 포함하는 변경된 아미노산 서열에 관한 것이다. 또한본 발명은 상기 변이체를 코딩하는 변이 유전자, 및 상기 변이체를 함유하는 세정용 및 퍼스널 케어용 조성물에 관한 것이다.
본 발명은, 예를 들어, 퍼스널 케어용 조성물, 세탁용 조성물, 경질 표면 세척용 조성물 및 가사 경감용 세정용 조성물과 같은 조성물에 유용한 유전공학적으로 설계된 서브틸리신 프로테아제에 관한 것이다.
본 발명의 필수 성분을 본원에서 하기에 설명한다. 또한, 본 발명의 구현에 유용한, 다양한 선택적이고 바람직한 성분들의 비제한적 설명이 포함된다.
본 발명은, 본원에 기재된 임의의 필요하거나 선택적인 성분들 및/또는 제한들을 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 본질적으로 구성될 수 있다.
모든 퍼센트 및 비는 달리 명시되지 않으면 중량으로 계산된다. 모든 퍼센트는 달리 명시되지 않으면 전체 조성물을 기준으로 계산된다.
모든 성분 또는 조성물 레벨은 성분 또는 조성물의 활성 레벨을 참고로 하였고, 시판원에 존재할 수 있는 불순물, 예를 들어 잔류 용매 또는 부산물은 배제된다.
모든 특허, 특허 출원 및 공보를 포함하는 본원에 참고된 모든 문헌은, 그들의 전문이 본원에 참고문헌으로 인용된다.
본원에서는, 약어를 사용하여 아미노산을 기재할 것이다. 표 I 은 본원에 사용되는 약어 리스트를 제공한다.
정의
본원에 사용되는 용어 "변이" 는, 유전자 서열 및/또는 상기 유전자 서열에 의해 생성되는 아미노산 서열의 변화를 말한다. 변이에는 야생형 단백질 서열에 대한 아미노산 잔기의 결실, 치환 및 첨가가 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "야생형" 은, 비변이 유기체에 의해 생성되는 단백질, 본원에서는 구체적으로 프로테아제를 말한다.
본원에서 사용되는 용어 "변이체" 은, 상응하는 야생형 단백질과 상이한 아미노산 서열을 갖는 단백질, 본원에서는 구체적으로 프로테아제를 말한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본 발명의 변이체가 서브틸리신 BPN' 및 이들의 변이체를 포함하는 것들에 제한되지는 않지만, 모든 아미노산 숫자 지정은 서열번호 1 에 나타내는 서브틸리신 BPN' 의 아미노산 서열을 참고로 하였다. 서브틸리신 BPN' 의 아미노산 서열은Wells 등의 문헌 [Nucleic Acids Research, Vol. Ⅱ, 7911 - 7925 쪽 (1983)] 에서 더욱 설명된다.
본 발명의 변이체
본 발명자들은 서브틸리신 BPN' 의 103 - 126(본원에서 제 1 에피토프 구역으로 명명), 220 - 246 (본원에서 제 2 에피토프 구역으로 명명) 및 70 - 84 (본원에서 제 3 에피토프 구역으로 명명) 위치에 상응하는, 세린 프로테아제의 3 개의 에피토프 구역을 발견했다. 본 발명가들은 또한 하나 이상의 에피토프 구역 내에 하나 이상의 아미노산 치환이 야생형 세린 프로테아제에 비해 감소된 알러지성 및/또는 면역원성 반응을 야기하는 변이체를 제공한다는 것을 발견했다.
본원에 사용된 바와 같이, 변이체를 특징짓는 치환된 아미노산 위치를 참고하여 변이체를 표시할 수 있다. 본원에서의 치환체는, 치환될 야생형 아미노산 잔기에 이어, 위치 번호, 및 이어서 치환된 아미노산 잔기를 제공함으로써 표시했다. 치환된 아미노산 잔기가 특정 위치에서 인정되는 임의의 천연 아미노산일 수 있는 곳에는 부호 "*" 표시를 했다. 변이체를 포함하는 다중 치환은 부호 "+" 로 구분했다. 상술한다면, 위치 70 의 글리신에 대한 발린의 치환은 Gly70Val 또는 G70V 로 표시된다. 70 및 108 위치 모두에 치환을 가진 변이체의 예는 Gly70Val + Ile108Ala 또는 G70V + I108A 로 표시할 수 있다.
본 발명의 변이체는 서브틸리신-유사 프로테아제의 변이체가다. 본원에 사용된 용어 "서브틸리신-유사 프로테아제"는 서브틸리신 BPN' 의 서열과 50% 이상,바람직하게는 80% 이상의 아미노산 서열 상동성을 가진 프로테아제를 의미한다. 야생형 서브틸리신-유사 프로테아제는, 예를 들어 바실러스 알칼로필러스(Bacillus alcalophilus), 바실러스 아밀로리쿠에파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스 아밀로사카리쿠스(Bacillus amylosaccharicus), 바실러스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 렌투스(Bacillus lentus), 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 미생물에 의해 생성된다. 서브틸리신 유사 세린 프로테아제 및 그 동종체에 관한 논의는 하기 참고 문헌에서 찾을 수 있다:Siezen 등, "Homology Modelling and Protein Engineering Strategy of Subtilases, the Family of Subtilisin-Like Serine Proteases",Protein Engineering, 제 4 권, 제 7 호, 719 - 737 쪽 (1991).
본 발명의 변이체는, 변경된 아미노산 서열이, 제 1 에피토프 구역은 서브틸리신 BPN'의 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126 (103 - 126) 위치에 해당하며, 제 2 에피토프 구역은 서브틸리신 BPN'의 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 및 246 (220 - 246) 위치에 해당하는, 하나 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는, 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가진 세린 프로테아제의 변이체가다. 더욱 바람직하게는, 변경된 아미노산 서열은 2 개 이상의 상기 위치에 치환을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 변경된 아미노산 서열은 3 개 이상의 상기 위치에 치환을 포함한다. 가장 바람직하게는, 변경된 아미노산 서열이 4 개 이상의 상기 위치에 치환을 포함한다. 상기 위치들의 치환은, 표 1 에 제시한 것과 같은 또다른 천연 아미노산 잔기로 야생형 아미노산 잔기를 치환함으로써 만들어진다.
바람직하게는, 세린 프로테아제 변이체가 제 1 에피토프 구역 및 제 2 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가진 경우, 변경된 아미노산 서열은, 하기와 같이 하나 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다:
(a) 치환이 제 1 에피토프 구역에서 발생할 때, 치환은 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
(i) 103 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 104 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Trp 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 105 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 106 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 107 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xx) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiv) 126 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
(b) 치환이 제 2 에피토프 구역에서 발생할 때, 치환은 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 및 246 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
(i) 220 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xx) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxi) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxii) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiv) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxvi) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxvii) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨.
더욱 바람직하게는, 세린 프로테아제 변이체가 제 1 에피토프 구역 및 제 2 에피토프 구역을 포함하는 야생형의 변경된 아미노산 서열을 가진 경우, 변경된 아미노산 서열은, 하기와 같이 하나 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다:
(a) 치환이 제 1 에피토프 구역에서 발생할 때, 치환은 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
(i) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Phe, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gln, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe,His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Gln, Arg, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 126 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
(b) 치환이 제 2 에피토프 구역에서 발생할 때, 치환은 221, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 및 246 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
(i) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xx) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxi) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxii) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiii) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiv) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxv) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
더욱 바람직하게는, 세린 프로테아제 변이체가 제 1 에피토프 구역 및 제 2 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가진 경우, 변경된 아미노산 서열은, 하기와 같이 하나 이상의 에피토프 구역 내의 2 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다:
(a) 치환이 제 1 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 및 125 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
(i) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
(b) 치환이 제 2 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 및 246 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
(i) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xx) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxi) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiii) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxv) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxvi) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, 변이체는 2 개 이상의 에피토프 구역 내에 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다. 상기 구현예에서, 에피토프 구역은 서브틸리신 BPN' 의 103 - 126 위치에 상응하는 제 1 에피토프 구역, 서브틸리신 BPN' 의 220 - 246 위치에 상응하는 제 2 에피토프 구역, 및 서브틸리신 BPN' 의 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 및 84 (70 - 84) 위치에 상응하는 제 3 에피토프 구역이다. 상기 구현예에서, 용어 "2 개 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환" 은, 하나 이상의 치환이 하나 이상의 에피토프 구역에서 발생하며 하나 이상의 치환이 상이한 에피토프 구역에서 발생하는 것을 의미한다. 물론, 상기 구현예에서 하나 이상의 치환이 각각의 에피토프 구역들에서 발생할 수 있다. 바람직하게는 상기 구현예에서 변경된 아미노산 서열이 하나 이상의 에피토프 구역 중의 2 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다 (즉, 변이체는 하나 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환, 및 또다른 에피토프 구역 내의 2 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다). 더욱 바람직하게는 상기 구현예에서, 변경된 아미노산 서열이 하나 이상의 에피토프 구역 내의 3 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다 (즉, 변이체는 하나 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환, 및 또다른 에피토프 구역 내의 3 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다). 상기 위치의 치환체는 야생형 아미노산 잔기를 표 I 에 제시된 다른 천연 아미노산 잔기로 치환시킴으로써 만들어진다.
상기 구현예에서 바람직하게는, 세린 프로테아제 변이체는, 제 1 에피토프 구역, 제 2 에피토프 구역 및 제 3 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가지며, 하기와 같이 2 개 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함한다:
(a) 치환이 제 1 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
(i) 103 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 104 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Trp 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 105 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 106 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 107 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xx) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiv) 126 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
(b) 치환이 제 2 에피토프 구역 내 발생할 때, 치환은 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 및 246 위치들 중 하나 이상에서 발생하며:
(i) 220 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xx) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxi) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxii) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiv) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxvi) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxvii) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
(c) 치환이 제 3 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 및 84 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
(i) 70 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 71 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 72 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 73 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 74 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 75 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 76 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 77 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 78 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 79 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 80 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 81 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 82 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 83 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 84 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택됨.
상기 구현예에서 더욱 바람직하게는, 세린 프로테아제 변이체는, 하기와 같은 2 개 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하며, 제 1 에피토프 구역, 제 2 에피토프 구역 및 제 3 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가진다:
(a) 치환이 제 1 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 및 125 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
(i) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp,Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
(b) 치환이 제 2 에피토프 구역 내에 발생할 때 하나 이상의 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 및 246 위치에 하기와 같이 발생되며:
(i) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvi) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xvii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xviii) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xix) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xx) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxi) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiii) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxiv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxv) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xxvi) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
(c) 치환이 제 2 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 및 84 위치 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
(i) 70 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 71 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 72 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 73 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 74 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 75 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 76 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Cys, Ile, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 77 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 78 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 79 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 80 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 81 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 82 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 83 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 84 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
상기 구현예에서 더욱더 바람직하게는, 치환이 제 3 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 및 84 위치 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생한다:
(i) 70 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ii) 71 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Cys, Gln, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iii) 72 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp,Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(iv) 73 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(v) 74 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vi) 75 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(vii) 76 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Cys, Ile, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(viii) 77 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(ix) 78 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(x) 79 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Cys,Gln, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xi) 80 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xii) 81 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiii) 82 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xiv) 83 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
(xv) 84 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
가장 바람직하게는, 제 3 에피토프 구역 내에 하나 이상의 치환이 발생한 본 발명의 변이체는 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 (73 - 83) 중 하나 이상, 더욱더 바람직하게는 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 (75 - 82) 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 78 또는 79 위치의 치환을 포함한다.
하나 이상의 추가적인 치환 변이("안정화 치환")가, 예를 들어 에피토프 구역 상의 변이에 대해 프로테아제를 재안정화하거나 또는 변이체의 단백질 가수분해 활성을 증진시키기 위해 세린 프로테아제의 임의의 위치에서 추가적으로 발생할 수 있다. 다수의 그러한 안정화 변이가 당 분야에 공지되어 있다. 그러한 안정화 변이의 예는, 예를 들어 하기 참고 문헌에 개시되어 있다[WO 95/10591,Baeck 등1995 년 4 월 20 일 공개; 미국 특허 제 4,914,031 호,Zukowski 등, 1990 년 4 월 3 일 허여; 미국 특허 제 5,470,733 호,Bryan 등, 1995 년 11 월 28 일 허여; 미국 특허 제 5,567,601 호,Bryan 등, 1996 년 10 월 22 일 허여; WO 89/07642, 미국 특허 제 5,707,848 호,Bryan 등, 1998 년 1 월 13 일 허여;Van Eekelen 등, 1989 년 8 월 24 일 공개; WO 87/04461,Stabinsky 등, 1987 년 7 월 30 일 공개; 미국 특허 제 4,760,025 호,Estell 등, 1988 년 7 월 26 일 허여; WO 92/11348,Branner 등, 1992 년 7 월 9 일 공개; EP 0,405,901,Casteleijin 등, 1991 년 1 월 2 일 공개; WO 91/00345 호,Branner 등, 1991 년 1 월 10 일 공개; 및 WO 94/10020,Brode 등, 1995 년 3 월 23 일 공개].
바람직한 안정화 변이는 하기 중 하나 이상을 포함한다: I107V; K213R; Y217L; Y217K; N218S; G169A; M50F; Q19E; P5A; S9A; I31L; E156S; G169A; N212G; S188P; T254A; S3C+Q206C; 및 Q271E. 더욱 바람직한 안정화 변이는 하기 중 하나 이상을 포함한다: P5A; S9A; I31L; E156S; G169A; N212G; S188P; T254A; S3C+Q206C; Q271E; Y217L; 및 Y217K. 가장 바람직한 안정화 변이는 Y217L 및Y217K 이다.
제조 방법
변이체는 야생형 세린 프로테아제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 변이화함으로써 변이체 내에 변경된 아미노산 서열을 갖도록 제조된다. 그러한 방법은 당 업계에 공지되어 있으며, 한 가지 방법을 하기에 기재한다.
야생형 서브틸리신 BPN' 유전자를 함유하는 파지미드 (pSS-5) (Mitchison, C. 및 J.A, Wells, "Protein Engineering of Disulfide Bonds in Subtilisin BPN'",Biochemistry, 제 28 권, 4807 - 4815 쪽 (1989)) 를 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) dut-ung-균주 CJ236 에 형질전환시키고, 단일 나선 우라실-함유 DNA 주형을 VCSM13 헬퍼 파지 (Kunkel 등, "Rapid and Efficient Site-Specific Mutagenesis Without Phenotypic Selection",Methods in Enzymology, 제 154 권, 367 - 382 쪽 (1987))를 사용하여 하기 문헌에서 변형한 바와 같이 제조한다 [Yuckenberg 등, "Site-Directedin vitroMutagenesis Using Uracil-Containing DNA and Phagemid vectors",Directed Mutagenesis - A Practical Approach, McPherson, M.J. 편저, 27 - 48 쪽 (1991)]. Zoller 및 Smith 의 방법 (Zoller, M. J. 및 M. Smith, "Oligonucleotide - Directed Mutagenesis Using M13 - Derived Vectors: An Efficient and General Procedure for the Production of Point Mutations in any Fragment of DNA",Nucleic Acids Research, 제 10 권, 6487 - 6500 쪽 (1982))으로부터 변형된 프라이머 위치 돌연변이를 사용해 모든 변이체(구체적으로는 상기Yuckenberg 등에 의해 기재된 것)을 제조한다.
올리고뉴클레오티드는 380B DNA 합성기(Applied Biosystems Inc.)를 사용해 제조한다. 변이유발 반응 생성물은 에스케리키아 콜라이 균주 MM294 (Americal Type Culture CollectionE. coli33625) 에 형질전환한다. 모든 변이들은 DNA 서열분석으로 확인하며, 분리된 DNA 를 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 발현 균주 PG632 [Saunders 등, "Optimization of the Signal-Sequence Cleavage Site for Secretion fromBacillus subtilisof 34-amino acid Fragment of Human Parathyroid Hormone",Gene, 제 102 권, 277 - 282 쪽 (1991) 및 Yang 등, "Cloning of the Neutral Protease Gene ofBacillus subtilisand the Use of the Cloned Gene to Create anin vitro- Derived Deletion Mutation",Journal of Bacteriology, 제 160 권, 15 - 21 쪽 (1984)]에 형질전환한다. 변이체 활성의 예비 평가는 변이 플라스미드로 형질전환된 PG632 세포의 카세인 가수분해능으로 결정했다.
이어서 발효시킨다. 관심있는 변이체를 함유하는 바실러스 서브틸리스 세포 (PG632) 를 10 g/L 글루코스를 함유하는 LB 브로쓰 1 리터 중에서 미드-로그 상까지 배양하여, Biostat C 발효기(Braun Biotech, Inc., Allentown, PA)에 총 부피 9 리터가 되게 하여 접종한다. 발효용 배지는 효모 추출물, 카세인 수화물, 가용성 부분 수화 전분(Maltrin M-250), 소포제, 완충액, 및 미량 원소를 함유한다(참고: "Biology of Bacilli: Appplications to Industry", Doi, R. H. 및 M. McGloughlin, 편저. (1992)). 브로쓰는 발효 진행 동안은 pH 7.5 로 일정하게 유지된다. 카나마이신(50 ㎍/mL) 을 첨가해 변이화된 플라스미드의 항생제성선별(antibiotic selection)을 한다. 세포를 37℃에서 18 시간 동안 배양해 약 60 의 A600가 되면 생성물을 수합한다.
발효 브로쓰는 하기 단계를 거치도록 해 순수한 변이체를 수득한다. 브로쓰는 0.16 ㎛ 막에 접하여 유동시켜 바실러스 서브틸리스 세포를 제거한다. 세포가 없는 브로쓰는 이어서 분자량 8000 을 걸러내는 막으로 한외여과하여 농축한다. pH 는 농축된 MES 완충액(2-(N-모르폴리노)에탄술폰산)으로 5.5 로 조정한다. 변이체는 S-세파로스를 사용한 양이온 교환 크로마토그래피 및 NaCl 농도구배의 용출로써 추가로 정제한다 (참조: Scopes, R. K., "Protein Purification Principles and Practice", Springer-Verlag, New York (1984)).
pNA 검정(DelMar 등,Analytical Biochemistry, 제 99 권, 316 - 320 쪽(1979))을 사용해 농도구배 용출 동안 수집된 분획에 대해 활성인 변이체 활성 농도를 측정했다. 상기 검정은 변이체가, 가용성 합성 기질인 숙시닐-알라닌-알라닌-페닐알라닌-p-니트로아닐린(sAAPE-pNA)을 가수분해하면서 p-니트로아닐린이 유리되는 속도를 측정한다. 가수분해 반응으로부터의 황색의 생성 속도가 분광기 상의 410 nm 에서 측정되어, 활성 효소 농도로 계산된다. 추가로, 280 nm 에서의 흡광도 측정은 총 단백질 농도를 측정하는데 사용된다. 활성 효소/총 단백질 비는 변이체 순도를 나타내며, 원액 용액을 위해 풀링(pooling)할 분획들을 측정하는데 사용된다.
보관 동안 변이체의 자가분해를 막기 위해, 동 중량의 프로필렌 글리콜을 크로마토그래피 칼럼으로부터 수득된 풀링(pooling)한 분획에 첨가한다. 정제 과정의 완결 시, 변이체 원액의 순도는 SDS-PAGE(나트륨 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동)로 확인하고, 절대 효소 농도는 트립신 억제제 유형 II-T:터키 에그 화이트(turkey egg white) (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri) 를 사용해 활성 위치 적정 방법을 통해 측정한다.
사용을 위한 제조에서, 효소 원액 용액은 Sephadex-G25 (Pharmacia, Piscataway, New Jersey) 크기 분리 칼럼을 통해 용출하여 프로필렌 글리콜을 제거하고 완충액을 교환한다. 효소 원액 용액 중의 MES 완충액은 0.01 M CaCl2를 함유하는 0.1 M 트리스 완충액 (트리스(히드록시메틸-아미노메탄)) 으로 교환되며, HCl 로 pH 는 8.6 으로 조정된다. 모든 실험은 25℃ 의 온도 조건에서 트리스 완충액 중의 pH 8.6 에서 수행된다.
분석 방법
본 발명의 변이체는 하기의 방법을 이용하여 효소 활성 및 면역원성 및/또는 알러지성 반응에 대하여 시험할 수 있으며, 이 두 방법은 당업자에게는 공지되어 있다. 당해 기술에 공지된 다른 방법들도 대안적으로 사용될 수 있다.
변이체 활성
본 발명의 변이체의 프로테아제 활성은 당해 기술에 공지된 방법으로 분석할 수 있다. 이러한 두 방법이 하기에 기술되어 있다 :
피부박편(flake) 활성 방법
Scotch#375OG 테이프를 이용하여, 사람의 피부 박편을, 테이프가 박편에 의해서 실질적으로 불투명해질 때까지 반복적으로 피험자의 다리로부터 박리시킨다. 이어서 테이프를 1 인치 x 1 인치로 절단하여, 준비하여 둔다. 10 mm x 35 mm 페트리 접시에, 2 mL의 대조군 효소(0.75 mg/mL) (예, 서브틸리신 BPN') 또는 시험코자하는 프로테아제를 0.01 M KH2PO4pH 5.5 완충액에 첨가한다. 이 용액에, 1mL 의 2.5% 나트륨 라우레이트 pH 8.6 용액을 첨가한다. 이 용액을 플래트폼 쉐이커에서 부드럽게 혼합시킨다. 계속하여 부드럽게 혼합시키면서 미리 준비된 테이프 조각을 상기 용액에 10분간 침지시킨다(박편을 위로함). 이어서 테이프 조각을 15 초간 수돗물에 부드럽게 헹군다. Stevenel Blue Stain (3 mL, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO 에서 시판)을 피펫으로 깨끗한 페트리 접시로 옮긴다. 헹궈진 테이프 조각을 부드럽게 혼합하면서 3 분간 염색시킨다 (박편을 위로함). 테이프 조각을 염색약으로부터 꺼내 연속적으로 2 개의 300 mL 증류수 비이커에서 15 초씩 헹군다. 이어서 테이프 조각을 공기건조시킨다. 대조군 효소로부터 수득한 테이프 조각과 프로테아제로부터 수득한 테이프 조각 사이의 색상의 강도를 육안 또는 색도계를 이용하여 비교한다. 대조군 효소 테이프 조각에 비하여, 덜한 색상 강도를 보이는 변이체 테이프 조각이 더 높은 활성을 가진 변이체임을 나타낸다.
염색 콜라겐 활성 방법
0.01 M CaCl2를 함유하는 50 mL 의 0.1 M 트리스 완충액 (트리스-히드록시메틸-아미노메탄) pH 8.6 와 0.5 g 의 아조콜 (아조 염료가 함침된 콜라겐, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)을 합친다. 이 혼합물을 플래트폼 쉐이커를 이용하여 부드럽게 혼합하면서 25 ℃ 에서 인큐베이션시킨다. 0.2 미크론 시린지 필터를 통해 2 mL 의 상기 혼합물을 여과한 후, 분광광도계를 이용하여 520nm 에서의 값을 0 으로 하여, 혼합물의 흡광도를 읽는다. 1 ppm 의 대조군 효소 (예, 서브틸리신 BPN') 또는 시험코자하는 변이체를 남아 있는 48 mL 의 트리스/아조콜 혼합물에 첨가한다. 2 mL 의 대조군/변이체 함유 용액을 0.2 미크론 시린지 필터를 통해 매 2 분씩 총 10 분간 여과시킨다. 각 여과된 시료에 대하여, 바로 520 nm 에서의 흡광도를 읽는다. 결과를 시간에 대한 그래프로 작성한다. 대조군 및 시험 변이체의 기울기는 시료의 상대적 활성을 나타낸다. 기울기가 클수록 더 높은 활성을 나타낸다. 시험 변이체 활성 (기울기)는 대조군 활성(기울기)의 백분율로 나타낼 수 있다.
면역원성에 대한 마우스 비강내 시험
본 발명의 세린 프로테아제 변이체의 면역원성의 포텐셜은 당 분야에 공지된 방법 또는 후술된 면역원성에 대한 마우스 비강내 시험으로 측정될 수 있다. 이 시험은 문헌Robinson et al.,"Specific Antibody Responses to Subtilisin Carlsberg (Alcalase) in Mice: Development of an Intranasal Exposure Model", Fundamental and Applied Toxicology, Vol. 34, 15 - 24 쪽 (1996) andRobinson et al.,"Use of the Mouse Intranasal Test (MINT) to Determine the Allergenic Potency of Detergent Enzymes: Comparison to the Guinea Pig Intratracheal(GPIT) Test", Toxicological Science, Vol. 43, 39 - 46 쪽 (1998)에 기재되어 있는 분석과 유사하며, 이 두 분석은 후술된 시험을 대신하여 사용될 수 있다.
체중이 약 18 내지 약 20 g 인 암컷 BDF1 마우스들 (Charles River Laboratories, Portage, MI)을 시험에 이용한다. 이 마우스는 약물투여 전 1 주일간 격리시킨다. 이 마우스는 습도 (30 - 70%), 온도 (67 - 77℉) 및 12 시간의 명암 주기로 조절되는 실내에서 목재칩으로 잠자리가 마련된 케이지에 수용시킨다. 이 마우스에 Purina마우스 사료(Purina Mills, Richmond, IN) 및 물을 자유로이 공급한다.
시험코자 하는 포텐셜 항원 (양성 대조군으로서 서브틸리신 BPN' 또는 본 발명의 변이체)을 5 마리로 이루어진 일군에 투여한다. 투여전, 각 마우스를 Ketaset (88.8 mg/kg) 및 Rompun (6.67 mg/kg)의 혼합물을 복강내 주사하여 마취시킨다. 마취된 동물을 손바닥에 뉘여 완충액 용액(0.01 M KH2PO4, pH 5.5)중 5mL 프로테아제로 비강내 투여한다. 각 군에 동일한 용량을 투여하면서, 다양한 용량을 시험할 수 있다. 투여 용액은 각 비강의 외부에 부드럽게 놓아 마우스가 흡입토록한다. 투여는 3, 10, 17 및 24 일째 반복한다.
혈청 시료를 29 일째 채취한다. 마우스 혈청내 효소특이적 IgG1 항체를 항원 캡춰 ELISA 방법으로 측정한다. 변이체의 면역원성은 표준 ED50값을 이용하여 서브틸리신 BPN' 의 면역원성과 비교할 수 있다.
본 발명의 조성물
본 변이체는 각각의 모(母) 프로테아제에 적합한 임의의 용도에서 사용할 수 있다. 이러한 예의 하나는 세정용 조성물이다. 본 발명의 변이체의 바람직한 감소된 알러지성 및/또는 면역원성 특성 때문에, 본 변이체는 역사적으로 프로테아제를 사용함으로써 별다른 혜택을 받지 못한 용도들에서 사용될 수 있다. 이러한 용도들의 예로는 퍼스널 케어용 조성물의 사용에서와 같은, 변이체가 인간 피부와 필연적으로 밀접하게 접촉하게 되는 용도가 포함된다.
세정용 조성물
본 발명의 변이체는 세탁용 조성물, 경질 표면 세척용 조성물, 식기 세척용 조성물을 포함한 경미한 오염 세정용 조성물 및 자동 식기세척기 세제용 조성물을 포함하는 세정용 조성물에서 사용될 수 있으며, 이에만 국한되는 것은 아니다.
본 세정용 조성물은 유효량의 본 발명의 하나 이상의 변이체 및 세정용 조성물 담체를 포함한다.
본원에 사용된 "유효량의 프로테아제" 등은 특정의 세정용 조성물에서 필요한 단백질분해 활성을 달성하는데 필요한 변이체의 양을 의미한다. 이러한 유효량은 당업자에 의해서 쉽게 확인되며, 많은 요소, 예컨대, 사용되는 특정의 변이체, 세정 용도, 세정용 조성물의 특이적 조성 및 액성 또는 건조 (예, 과립, 바아) 조성물의 필요 여부 등에 기초한다. 바람직하게는, 세정용 조성물은 약 0.0001% 내지 약 10%, 좀더 바람직하게는 약 0.001% 내지 약 1%, 가장 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 0.1% 의 본 발명의 하나 이상의 변이체를 포함한다. 프로테아제가 사용될 수 있는 다양한 세정용 조성물의 여러 예가 하기에 추가로 논의된다.
본 발명의 변이체 외에, 본 발명의 세정용 조성물은 추가로 변이체과 상용적인 하나 이상의 세정용 조성물 재료를 포함하는 세정용 조성물 담체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "세정용 조성물 재료" 는 목적하는 세정용 조성물의 특정 유형 및 제품의 형태 (예, 액체, 과립, 바아, 스프레이, 스틱, 페이스트, 겔)을 위해 선택된 임의의 재료를 의미하며, 이 재료들은 또한 조성물에서 사용하는 변이체과 상용적이다. 세정용 조성물 재료의 구체적인 선택은 세정코자하는 표면의 재료, 사용 동안 세정 상태에 대한 조성물의 목적하는 형태 (예, 워시 세제 사용을 통해)를 고려하여 용이하게 수행된다. 본원에 사용된 용어 "상용적" 은 세정용 조성물 재료가 정상적인 사용 조건에서는 변이체의 단백질 분해 활성을, 그의 목적에 효과적이지 않을 정도로는 감소시키지 않는 것을 의미한다. 구체적인 세정용 조성물 재료는 이하에 상세히 예시된다.
본 발명의 변이체는 고 거품성(sudsing) 및 양호한 세정성이 요망되는 다양한 세제 조성물에서 사용될 수 있다. 따라서, 본 변이체는 다양한 통상의 성분들과 함께 사용하여 완전히 제형화된 경질 표면 크리너, 식기세정용 조성물, 직물 세탁 조성물 등을 제공할 수 있다. 이러한 조성물은 액체, 과립, 바아 등의 형태일 수 있다. 이러한 조성물은 계면활성제를 약 30 중량% 내지 약 60 중량% 함유하는 "농축"세제로 제형화될 수 있다.
여기에서 세정용 조성물은 임의적으로, 바람직하게는 다양한 계면활성제 (예, 음이온성, 비이온성 또는 쯔비터이온성 계면활성제)을 포함할 수 있다. 이러한 계면활성제는 통상적으로 조성물의 약 5% 내지 약 35% 의 수준에서 제공된다.
여기에서 유용한 계면활성제의 비제한적 예에는 통상의 C11-C18알킬벤젠 술폰에이트 및 일차 및 랜덤 알킬 술페이트, 화학식 CH3(CH2)x(CHOS03 -M+)CH3및 CH3(CH2)y(CHOSO3 -M+)CH2CH3(식중, x 및 (y+l) 은 적어도 약 7, 바람직하게는 적어도 약 9 의 정수이고, M 은 수용성 양이온, 특히 나트륨이다)의 C10-C18이차 (2,3) 알킬 술페이트, C1O-Cl8알킬 알콕시 술페이트 (특히 EO 1-5 에톡시 술페이트), C1O-C18알킬 알콕시 카르복실레이트 (특히 EO 1-5 에톡시카르복실레이트), C10-Cl8알킬 폴리글리코시드 및 이들의 대응하는 술페이트화 폴리글리코시드, C12-C18a-술폰화 지방산 에스테르, C12-C18알킬 및 알킬 페놀 알콕실레이트 (특히 에톡실레이트 및 복합 에톡시/프로폭시), C12-C18베타인 및 술포베타인 ("술타인"), C10-C18아민 옥시드 등이 포함된다. 알킬 알콕시 술페이트 (AES) 및 알킬 알콕시 카르복실레이트 (AEC) 가 여기에서는 바람직하다. 이러한 계면활성제와 아민 옥시드 및/또는 베타인 또는 술타인 계면활성제를 조합하여 사용하는 것이, 제조자의 목적에 따라 또한 바람직하다. 기타 통상의 유용한 계면활성제가 표준 텍스트에 열거되어 있다. 특히 유용한 계면활성제에는 문헌[미국 특허 제 5, 194,639 호,Cannor 등, 1993 년 3 월 16 일 허여]에 개시된 C1O-Cl8N-메틸 글루카미드가 포함된다.
세제 세정용 조성물에서 유용한 다양한 다른 성분들이, 예컨대, 기타 활성성분, 담체, 하이드로트로프, 가공보조제, 염료 또는 안료 및 액체 제제용 용매를 포함하는 본 조성물에 포함될 수 있다. 만일 거품성의 추가의 증가가 필요하면, C1O-C16알콜아미드와 같은 거품 부스터 (suds booster) 를 조성물에 약 1% 내지 약 10% 수준으로 혼입시킬 수 있다. C1O-C14모노에탄올 및 디에탄올 아미드가 이러한 거품 부스터의 전형적인 종류이다. 이러한 거품 부스터와 함께 전술한 아민 옥시드, 베타인 및 술타인과 같은 고 거품성 보조 계면활성제의 사용이 또한 유리하다. 필요하다면, 가용성 마그네슘염, 예컨대, MgCl2, MgSO4등을 통상적으로 약 0.1% 내지 약 2% 의 수준으로 첨가하여 추가의 거품성을 제공할 수 있다.
본원의 액체 세제 조성물은 담체로서 물 및 다른 용매를 함유할 수 있다. 메탄올, 에탄올, 프로판올, 및 이소프로판올로 대표되는 저분자량의 1차 또는 2차 알콜이 적절하다. 1가 알콜이 계면활성제의 용해를 위해 바람직하지만, 폴리올, 예를 들어 약 2 내지 약 6 개의 탄소 원자 및 약 2 내지 약 6 개의 히드록실기를 포함하는 것 (예컨대, 1,3-프로판디올, 에틸렌 글리콜, 글리세린, 및 1,2-프로판디올) 또한 사용될 수 있다. 조성물은 약 5 % 내지 약 90 %, 전형적으로는 약 10 % 내지 약 50 % 의 상기 담체를 함유할 수 있다.
본원의 세제 조성물은 바람직하게는 수성 세정 작업에서의 사용 동안, 세척수가 약 6.8 내지 약 11 의 pH 를 갖도록 제형화된다. 최종 생성물은 전형적으로는 상기 범위로 제형화된다. 권장되는 사용 수준으로 pH 를 조절하는 기술에는 예를 들어 완충액, 알칼리 및 산의 사용이 포함된다. 상기 기술은 당업계의 숙련자에게 잘 공지되어 있다.
본 발명의 경질 표면 세척용 조성물 및 직물 세정용 조성물을 제형화할 경우, 제형화제는 약 5 중량% 내지 약 50 중량% 의 수준으로 다양한 빌더 (builer) 를 사용하는 것을 기대할 수 있다. 전형적인 빌더에는 1-10 미크론 제올라이트, 폴리카르복실레이트, 예를 들어 시트레이트 및 옥시디숙시네이트, 층화 (layered) 실리케이트, 포스페이트 등이 포함된다. 다른 통상적인 빌더들이 표준 제형물로 나열된다.
이와같이, 제형자는 다양한 부가적인 효소, 예를 들어 셀룰라제, 리파제, 아밀라제 및 프로테아제를, 전형적으로는 약 0.001 중량% 내지 약 1 중량% 의 수준으로 상기 조성물에서 사용하도록 기대할 수 있다. 다양한 세제 및 직물 케어 효소가 세탁 세제 당업계에 잘 공지되어 있다.
다양한 표백 화합물, 예를 들어 퍼카르보네이트, 퍼보레이트 등이 상기 조성물에서 전형적으로는 약 1 중량% 내지 약 15 중량% 의 수준으로 사용될 수 있다. 바람직한 경우, 상기 조성물은 또한 표백 활성제, 예를 들어 테트라아세틸 에틸렌디아민, 노나노일옥시벤젠 술포네이트 등을 함유할 수 있고, 이들 역시 당업계에 공지되어 있다. 사용 수준은 전형적으로는 약 1 중량% 내지 약 10 중량% 이다.
특히 음이온성 올리고에스테르 형태의 오염 방출제, 킬레이트제, 특히 아미노포스포네이트 및 에틸렌디아민디숙시네이트, 점질토 제거제, 특히 에톡실화 테트라에틸렌 펜타민, 분산제, 특히 폴리아크릴레이트 및 폴리아스파라테이트, 광택제, 특히 음이온성 광택제, 담금 억제제, 특히 실리콘 및 이차 알콜, 직물 유연제, 특히 스멕타이트 점토 등이 모두 상기 조성물에서 약 1 중량% 내지 약 35 중량% 의 수준으로 사용될 수 있다. 표준 제형 및 공고된 특허는 상기 통상적인 물질의 복합적인, 상세한 설명을 포함한다.
효소 안정화제는 또한 세정용 조성물에 사용될 수 있다. 상기 효소 안정화제에는 프로필렌 글리콜 (바람직하게는 약 1 % 내지 약 10 %), 나트륨 포르메이트 (바람직하게는 약 0.1 % 내지 약 1 %) 및 칼슘 포르메이트 (바람직하게는 약 0.1 % 내지 약 1 %) 가 포함된다.
본 변이체는 경질 표면 세척용 조성물에 유용하다. 본원에서 사용된 "경질 표면 세척용 조성물" 이라는 용어는 경질 표면, 예를 들어 바닥, 벽, 욕실 타일 등을 세척하기 위한 액체 및 과립형 세제 조성물을 일컫는다. 본 발명의 경질 표면 세척용 조성물은 유효량의 본 발명의 하나 이상의 변이체를 조성물의 변이체의 바람직하게는 약 0.001 중량% 내지 약 10 중량%, 더욱 바람직하게는 약 0.01 중량% 내지 약 5 중량%, 더욱 더 바람직하게는 약 0.05 중량% 내지 약 1 중량% 로 함유한다. 하나 이상의 변이체를 함유하는 것 외에도, 상기 경질 표면 세척용 조성물은 전형적으로 계면활성제 및 수용성 격리 빌더를 함유한다. 그러나, 분사식 윈도우 클리너와 같이 특정의 구체화된 제품에서는, 유리 표면 상에 막 및/또는 줄무늬의 잔류물을 생성할 수 있으므로 계면활성제가 때때로 사용되지 않는다.
존재할 경우, 계면활성제 성분은 본원에서 조성물의 0.1 % 만큼을 함유할 수 있으나, 전형적으로는 조성물은 약 0.25 % 내지 약 10 %, 더욱 바람직하게는 약 1 % 내지 약 5 % 의 계면활성제를 함유할 것이다.
전형적으로는 조성물은 약 0.5 % 내지 약 50 %, 바람직하게는 약 1 % 내지 약 10 % 의 세제 빌더를 함유할 것이다.
바람직하게는, pH 는 약 7 내지 12 의 범위에 있어야 한다. 조정이 요구되는 경우, 통상적인 pH 조절제, 예를 들어 수산화나트륨, 탄산나트륨 또는 염화수소산이 사용될 수 있다.
용매가 조성물에 포함될 수 있다. 유용한 용매에는 글리콜 에테르, 예를 들어 디에틸렌글리콜 모노헥실 에테르, 디에틸렌글리콜 모노부틸 에테르, 에틸렌글리콜 모노부틸 에테르, 에틸렌글리콜 모노헥실 에테르, 프로필렌글리콜 모노부틸 에테르, 디프로필렌글리콜 모노부틸 에테르, 및 디올, 예를 들어 2,2,4-트리메틸-1,3-펜탄디올 및 2-에틸-1,3-헥산디올이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 사용될 경우, 상기 용매는 전형적으로는 약 0.5 % 내지 약 15 %, 더욱 바람직하게는 약 3 % 내지 약 11 % 의 수준으로 존재한다.
부가적으로, 조성물을 표면에 "완전 강도" 적용한 후 표면을 린스하지 않는 경우, 표면으로부터의 조성물의 더욱 빠른 증발을 촉진하기 위해 고휘발성 용매, 예를 들어 이소프로판올 또는 에탄올이 본 조성물에 사용될 수 있다. 사용될 경우, 휘발성 용매는 전형적으로 조성물에서 약 2 % 내지 약 12 % 의 수준으로 존재한다.
본 발명의 경질 표면 세척용 조성물은 하기 실시예로 설명된다.
실시예 1-6
액체 경질 표면 세척용 조성물
실시예 1 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5 실시예 6
변이체 N109A 0.05 % 0.50 % 0.02 % 0.03 % 0.30 % 0.05 %
EDTA - - 2.90 % 2.90 % - -
나트륨 시트레이트 - - - - 2.90 % 2.90 %
NaC12알킬-벤젠 술포네이트 1.95 % - 1.95 % - 1.95 % -
NaC12알킬술페이트 - 2.20 % - 2.20 % - 2.20 %
NaC12(에톡시)술페이트 - 2.20 % - 2.20 % - 2.20 %
C12디메틸아민 옥시드 - 0.50 % - 0.50 % - 0.50 %
나트륨 쿠멘 술포네이트 1.30 % - 1.30 % - 1.30 % -
헥실 카르비톨 6.30 % 6.30 % 6.30 % 6.30 % 6.30 % 6.30 %
물 90.4 % 88.3 % 87.53 % 85.87 % 87.25 % 85.85 %
모든 제형물은 pH 7 로 조정된다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 식기 세척용 조성물은 본 발명의 하나 이상의 변이체를 함유한다. 본원에서 사용된 "식기 세척용 조성물" 은 과립 및 액체 형태를 포함하는, 그러나 이에 한정되지 않는 모든 형태의 식기 세척용 조성물을 일컫는다. 본 발명의 식기 세척용 조성물은 하기 실시예에 의해 예시화된다.
실시예 7-10
액체 식기 세제
실시예 7 실시예 8 실시예 9 실시예 10
변이체 I115A 0.05 % 0.50 % 0.02 % 0.40 %
C12-C14N-메틸 글루카미드 0.90 % 0.90 % 0.90 % 0.90 %
C12에톡시 (1) 술페이트 12.0 % 12.0 % 12.0 % 12.0 %
2-메틸 운데칸산 4.50 % 4.50 % 4.50 % 4.50 %
C12에톡시 (2) 카르복실레이트 4.50 % 4.50 % 4.50 % 4.50 %
C12알콜 에톡실레이트 (4) 3.00 % 3.00 % 3.00 % 3.00 %
C12아민 옥시드 3.00 % 3.00 % 3.00 % 3.00 %
나트륨 쿠멘 술포네이트 2.00 % 2.00 % 2.00 % 2.00 %
에탄올 4.00 % 4.00 % 4.00 % 4.00 %
Mg2+(MgCl2로서) 0.20 % 0.20 % 0.20 % 0.20 %
Ca2+(CaCl2로서) 0.40 % 0.40 % 0.40 % 0.40 %
물 65.45 % 65 % 65.48 % 65.1 %
모든 제형물은 pH 7 로 조정된다.
본 발명의 액체 직물 세정용 조성물은 하기 실시예로 예시화된다.
실시예 11-13
액체 직물 세정용 조성물
실시예 11 실시예 12 실시예 13
변이체 A116V 0.05 % 0.03 % 0.30 %
나트륨 C12-C14알킬 술페이트 20.0 % 20.0 % 20.0 %
2-부틸 옥탄산 5.0 % 5.0 % 5.0 %
나트륨 시트레이트 1.0 % 1.0 % 1.0 %
C10알콜 에톡실레이트 (3) 13.0 % 13.0 % 13.0 %
모노에탄올아민 2.50 % 2.50 % 2.50 %
물/프로필렌 글리콜/에탄올 (100:1:1) 58.45 % 58.47 % 58.20 %
퍼스날 케어용 조성물
본 변이체는 특히 퍼스날 케어용 조성물, 예를 들어 리브-온 (leave-on) 및 린스-오프 (rinse-off) 헤어 컨디셔너, 샴푸, 리브-온 및 린스-오프 여드름 조성물, 페이셜 밀크 및 컨디셔너, 샤워 겔, 비누, 거품성 및 비-거품성 페이셜 클렌져, 화장품, 손, 페이스, 및 바디 로션 및 보습제, 리브-온 페이셜 보습제, 화장용 및 클렌징 와이프, 구강 케어용 조성물, 및 콘택트 렌즈 케어용 조성물에 사용되기 적합하다. 본 퍼스날 케어용 조성물은 본 발명의 하나 이상의 변이체 및 퍼스날 케어 담체를 함유한다.
예시화를 위하여, 본 변이체는 하기 참고문헌에 기재된 조성물에 포함되기 적절하다: 미국 특허 제 5,641,479 호,Linares 등, 1997 년 6 월 24 일 허여 (피부 클렌져); 미국 특허 제 5,599,549 호Wivell 등, 1997 년 2 월 4 일 허여 (피부 클렌져); 미국 특허 제 5,585,104 호,Ha 등, 1996 년 12 월 17 일 허여 (피부 클렌져); 미국 특허 제 5,540,852 호,Kefauver 등, 1996 년 7 월 30 일 허여 (피부클렌져); 미국 특허 제 5,510,050 호,Dunbar 등, 1996 년 4 월 23 일 허여 (피부 클렌져); 미국 특허 제 5,612,324 호,Guang Lin 등, 1997 년 3 월 18 일 허여 (항-여드름 제제); 미국 특허 제 5,587,176 호,Warren 등, 1996 년 12 월 24 일 허여 (항-여드름 제제); 미국 특허 제 5,549,888 호,Venkateswaran, 1996 년 8 월 27 일 허여 (항-여드름 제제); 미국 특허 제 5,470,884 호,Corless 등, 1995 년 11 월 28 일 허여 (항-여드름 제제); 미국 특허 제 5,650,384 호,Gordon 등, 1997 년 7 월 22 일 허여 (샤워 겔); 미국 특허 제 5,607,678 호,Moore 등, 1997 년 3 월 4 일 허여 (샤워 겔); 미국 특허 제 5,624,666 호,Coffindaffer 등, 1997 년 4 월 29 일 허여 (헤어 컨디셔너 및/또는 샴푸); 미국 특허 제 5,618,524 호,Bolich 등, 1997 년 4 월 8 일 허여 (헤어 컨디셔너 및/또는 샴푸); 미국 특허 제 5,612,301 호,Inman, 1997 년 3 월 18 일 허여 (헤어 컨디셔너 및/또는 샴푸); 미국 특허 제 5,573,709 호,Well 등, 1996 년 11 월 12 일 허여 (헤어 컨디셔너 및/또는 샴푸); 미국 특허 제 5,482,703 호,Pings, 1996 년 1 월 9 일 허여 (헤어 컨디셔너 및/또는 샴푸); 미국 특허 제 Re. 34,584 호,Grote 등, 1994 년 4 월 12 일 재허여 (헤어 컨디셔너 및/또는 삼푸); 미국 특허 제 5,641,493 호,Date 등, 1997 년 6 월 24 일 허여 (화장품); 미국 특허 제 5,605,894 호,Blank 등, 1997 년 2 월 25 일 허여 (화장품); 미국 특허 제 5,585,090 호,Yoshioka 등, 1996 년 12 월 17 일 허여 (화장품); 미국 특허 제 4,939,179 호,Cheney 등, 1990 년 7 월 3 일 허여 (손, 페이스, 및/또는 바디 로션); 미국 특허 제 5,607,980 호,McAtee 등, 1997 년 3 월 4 일 허여 (손, 페이스, 및/또는 바디 로션); 미국 특허 제4,045,364 호,Richter 등, 1977 년 8 월 30 일 허여 (화장용 및 클렌징 와이프); 유럽 특허 출원, EP 0 619 074,Touchet 등, 1994 년 10 월 12 일 공고 (화장용 및 클렌징 와이프); 미국 특허 제 4,975,217 호,Brown-Skrobot 등, 1990 년 12 월 4 일 허여 (화장용 및 클렌징 와이프); 미국 특허 제 5,096,700 호,Seibel, 1992 년 3 월 17 일 허여 (구강 세정용 조성물); 미국 특허 제 5,028,414 호,Sampathkumar, 1991 년 7 월 2 일 허여 (구강 세정용 조성물); 미국 특허 제 5,028,415 호,Benedict 등, 1991 년 7 월 2 일 허여 (구강 세정용 조성물); 미국 특허 제 5,028,415 호,Benedict 등, 1991 년 7 월 2 일 허여 (구강 세정용 조성물); 미국 특허 제 4,863,627 호,Davies 등, 1989 년 9 월 5 일 허여 (콘택트 렌즈 세정용 용액); 미국 특허 제 Re. 32,672,Huth 등, 1988 년 5 월 24 일 재허여 (콘택트 렌즈 세정용 용액); 및 미국 특허 제 4,609,493 호,Schafer, 1986 년 9 월 2 일 허여 (콘택트 렌즈 세정용 용액).
본 발명의 구강 세정용 조성물을 더 설명하기 위해서, 본 발명의 하나 이상의 변이체의 약제학적으로 허용되는 양이 치아 또는 의치로부터 단백질성 얼룩 제거에 유용한 조성물에 함유된다. 본원에 사용된 "구강 세정용 조성물" 은 치약, 크림 치약, 가루 치약, 구강청결제, 구강용 스프레이, 구강용 겔, 츄잉 검, 약용 박하 드롭스(lozenge), 구강용 향(sachets), 정제, 바이오겔, 예방용 페이스트, 치과용 치료 용액 등을 의미한다. 바람직하게는 구강 세정용 조성물은, 조성물의 약 0.0001 중량% 내지 약 20 중량%, 더 바람직하게는 약 0.001 중량% 내지 약 10 중량%, 더욱더 바람직하게는 약 0.01 중량% 내지 약 5 중량%의 본 발명의 하나 이상의 변이체, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유한다. 본원에 사용된 "약제학적으로 허용되는" 은, 부적절한 독성, 비상용성, 불안정성, 과민증, 알러지 반응 등이 없이 인간 및 하등 동물의 조직에 접촉하여 사용하기에 적합하며, 합리적인 효과/위험 비로 균형잡힌 약물, 의약 또는 불활성 성분을 의미한다.
전형적으로는, 구강 세정용 조성물의 구강 세정 성분들의 약제학적으로 허용되는 구강 세정용 담체 성분은 일반적으로 조성물의 약 50 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 약 65 중량% 내지 약 99.99 중량%, 더욱 바람직하게는 약 65 중량% 내지 약 99 중량%로 함유한다.
본 발명의 구강 세정용 조성물에 함유될 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체 성분 및 임의의 성분은 당 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 광범위한 각종 구강 세정용 조성물에 유용한 조성물 유형, 담체 성분 및 임의의 구성 성분은 상기 본원에 인용된 참고 문헌에 개시되어 있다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 구강 외부의 의치 세정을 위한 의치 세정용 조성물은 본 발명의 하나 이상의 변이체를 함유한다. 그러한 의치 세정용 조성물은 유효량, 바람직하게는 조성물에 대해 약 0.0001 중량% 내지 약 50 중량%, 더 바람직하게는 약 0.001 중량% 내지 약 35 중량%, 더욱더 바람직하게는 약 0.01 중량% 내지 약 20 중량%의 하나 이상의 변이체 및 의치 세정용 담체를 함유한다. 발포형 정제 등과 같은 다양한 의치 세정용 조성물 포맷이 당 분야에 공지되어 있으며(참고: 미국 특허 5,055,305,Young), 일반적으로 의치로부터 단백질성 얼룩을 제거를 위한 본 발명의 하나 이상의 변이체의 혼입에 적당하다.
본 발명의 또다른 구현예에서, 콘택트 렌즈 세정용 조성물은 본 발명의 하나 이상의 변이체를 함유한다. 그러한 콘택트 렌즈 세정용 조성물은 유효량, 바람직하게는 조성물에 대해 약 0.01 중량% 내지 약 50 중량%, 더 바람직하게는 약 0.01 중량% 내지 약 20 중량%, 더 바람직하게는 약 1 중량% 내지 약 5 중량%의 하나 이상의 변이체, 및 콘택트 렌즈 세정용 담체를 함유한다. 정제, 액체 등과 같은 각종 콘택트 렌즈 세정용 조성물 포맷은 당 분야에 공지되었으며, 일반적으로 콘택트 렌즈로부터 단백질성 얼룩 제거를 위한 본 발명의 하나 이상의 변이체의 혼입에 적당하다.
본 발명의 콘택트 렌즈 세정용 조성물 구현예는 실시예 14 - 17 에서 설명된다.
실시예 14 - 17
콘택트 렌즈 세정 용액
실시예 14 실시예 15 실시예 16 실시예 17
변이체 M119A 0.01% 0.5% 0.1% 2.0%
글루코오스 50.0% 50.0% 50.0% 50.0%
비이온성 계면활성제(폴리옥시에틸렌-폴리 2.0% 2.0% 2.0% 2.0%
음이온성 계면활성제(폴리옥시에틸렌-알킬페닐에테르 나트륨 설프리세스터) 1.0% 1.0% 1.0% 1.0%
염화나트륨 1.0% 1.0% 1.0% 1.0%
보락스 0.30% 0.30% 0.30% 0.30%
물 45.69% 45.20% 45.60% 43.70%
실시예 18 - 21 은 바디워시 제품에서의 본 발명의 변이체의 용도를 설명한다.
실시예 18 - 21
바디워시 제품
실시예 18 실시예 19 실시예 20 실시예 21
물 62.62% 65.72% 57.72% 60.72%
EDTA 2 나트륨 0.2% 0.2% 0.2% 0.2%
글리세린 3.0% 3.0% 3.0% 3.0%
폴리콰터늄 10 0.4% 0.4% 0.4% 0.4%
나트륨 라우레트 설페이트 12.0% 12.0% 12.0% 12.0%
코카미드 MEA 2.8% 2.8% 2.8% 2.8%
나트륨 라우라포아세테이트 6.0% 6.0% 6.0% 6.0%
미리스트산 1.6% 1.6% 1.6% 1.6%
마그네슘 설페이트 헵타히드레이트 0.3% 0.3% 0.3% 0.3%
트리히드록시스테아린 0.5% 0.5% 0.5% 0.5%
PEG-6 카프릴산/카프르산 트리글리세리드 3.0% - - -
코토네이트 지방산의 수크로스 폴리에스테르 3.0% - - -
베헤네이트 지방산의 수크로스 폴리에스테르 3.0% - 4.0% -
페트롤라툼 - 4.0% 8.0% -
미네랄 오일 - - - 6.0%
DMDM 히단토인 0.08% 0.08% 0.08% 0.08%
변이체 D120A 0.1% 2.0% 2.0% 5.0%
시트르산 1.40% 1.40% 1.40% 1.40%
실시예 22 - 25 는 페이스워시 제품에서의 본 발명의 변이체의 용도를 설명한다.
실시예 22 - 25
페이스워시 제품
실시예 22 실시예 23 실시예 24 실시예 25
물 66.52% 65.17% 68.47% 68.72%
EDTA 2 나트륨 0.1% 0.1% 0.2% 0.2%
시트르산 - - 1.4% 1.4%
나트륨 라우레트-3 설페이트 3.0% 3.5% - -
나트륨 라우레트-4 카르복실레이트 3.0% 3.5% - -
라우레트-12 1.0% 1.2% - -
폴리콰터늄 10 - - 0.4% 0.4%
폴리콰터늄 25 0.3% 0.3% - -
글리세린 3.0% 3.0% 3.0% 3.0%
나트륨 라우로암포아세테이트 - - 6.0% 6.0%
라우르산 6.0% 6.0% 3.0% 3.0%
미리스트산 - - 3.0% 3.0%
마그네슘 설페이트 헵타히드레이트 2.3% 2.0% 2.0% 2.0%
트리에탄올 아민 4.0% 4.0% 4.0% 4.0%
트리히드록시스테아린 0.5% 0.5% 0.5% 0.5%
베헤네이트 지방산의 수크로오스 폴리에스테르 2.0% 2.0% - -
코토네이트 지방산의 수크로스 폴리에스테르 3.0% 2.0% - -
PEG-6 카프릴산/카프르산 트리글리세리드 - - - 2.0%
페트롤라툼 - - 4.0% -
미네랄 오일 - - - 2.0%
코카미도프로필 베타인 2.0% 3.0% 1.8% 1.8%
라우릴 디메틸아민 옥시드 1.0% 1.2% 1.2% 1.2%
덱스 판테놀 1.0% 0.25% 0.25% -
DMDM 히단토인 0.08% 0.08% 0.08% 0.08%
변이체 A114* 1.0% 2.0% 0.5% 0.5%
향료 0.2% 0.2% 0.2% 0.2%
실시예 26 - 27 은 리브-온 피부 보습용 조성물에서의 본 발명의 변이체의 용도를 설명한다.
실시예 26 - 27
리브-온 피부 보습용 조성물
실시예 26 실시예 27
글리세린 5.0% -
스테아르산 3.0% -
C11-13이소파라핀 2.0% -
글리콜 스테아레이트 1.5% -
프로필렌 글리콜 - 3.0%
미네랄 오일 1.0% 10.0%
참기름 - 7.0%
페트롤라툼 - 1.8%
트리에탄올아민 0.7% -
세틸 아세테이트 0.65% -
글리세릴 스테아레이트 0.48% 2.0%
TEA 스테아레이트 - 2.5%
세틸 알콜 0.47% -
라놀린 알콜 - 1.8%
DEA-세틸 포스페이트 0.25% -
메틸파라벤 0.2% 0.2%
프로필파라벤 0.12% 0.1%
Carbomer 934 0.11% -
EDTA 2나트륨 0.1% -
변이체 N117A 0.1% 0.5%
물 84.32% 71.1%
실시예 28 은 세정용 와이프 조성물에서의 본 발명의 변이체의 용도를 설명한다.
실시예 28
세정용 와이프 조성물
프로필렌 글리콜 1.0%
암모늄 라우릴 설페이트 0.6%
숙신산 4.0%
나트륨 숙시네이트 3.2%
Triclosan 0.15%
변이체 I122A 0.05%
물 91.0%
상기 조성물은, 흡습용 시트에 대해 셀룰로오스 및/또는 폴리에스테르를 약 250 중량%으로 함유하는 흡습용 직포 시트 상에 함침된다.

Claims (12)

  1. 제 1 에피토프 구역 및 제 2 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가지며, 변경된 아미노산 서열은 하나 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 서브틸리신-유사 프로테아제 변이체:
    (a) 치환이 제 1 에피토프 구역에서 발생할 때, 치환은 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
    (i) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Phe, Gly, His, Leu, Met, Pro, Gln, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Gln, Arg, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp,Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 126 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
    (b) 치환이 제 2 에피토프 구역에서 발생할 때, 치환은 221, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 및 246 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
    (i) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Asn, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe,Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xx) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxi) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxii) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiii) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiv) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxv) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
  2. 제 1 에피토프 구역 및 제 2 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가지며, 변경된 아미노산 서열은 2 개 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 서브틸리신-유사 프로테아제 변이체:
    (a) 치환이 제 1 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 및 125 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
    (i) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
    (b) 치환이 제 2 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 및 246 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
    (i) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp,Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xx) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxi) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiii) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxv) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxvi) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
  3. 제 1 에피토프 구역 및 제 2 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가지며, 변경된 아미노산 서열은 하나 이상의 에피토프 구역 내의 2 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 서브틸리신-유사 프로테아제 변이체:
    (a) 치환이 제 1 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 및 125 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
    (i) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe,Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
    (b) 치환이 제 2 에피토프 구역 내에 발생할 때 하나 이상의 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 및 246 위치에 하기와 같이 발생되며:
    (i) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Met, Asn, Pro, Gln, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xx) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxi) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiii) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxv) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxvi) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
    (c) 치환이 제 2 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 및 84 위치 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생함:
    (i) 70 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 71 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 72 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 73 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 74 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 75 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 76 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Cys, Ile, Leu, Met, Gln, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 77 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 78 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 79 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, Phe, His, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 80 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 81 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 82 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 83 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 84 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 변경된 아미노산 서열이 2 개 이상의 에피토프 구역 내의 2 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 변이체.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 세린 프로테아제는 서브틸리신 BPN', 서브틸리신 칼스베르그(Carlsberg), 서브틸리신 DY, 서브틸리신 309, 프로테이나제 K 및 테르미타제로 구성되는 군으로부터 선택되며, 상기 변이체가 하나 이상의 안정화 변이를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 변이체.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 변경된 아미노산 서열이 하나 이상의 에피토프 구역 내에 3 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 변이체.
  7. 제 1 항에 따른 변이체 및 세정용 조성물 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 세정용 조성물.
  8. 제 1 에피토프 구역 및 제 2 에피토프 구역을 포함하는 야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가지며, 변경된 아미노산 서열은 하나 이상의 에피토프 구역 내의 하나 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 서브틸리신-유사 프로테아제 변이체, 및 퍼스널 케어용 담체를 조성물 중에 함유하는 것을 특징으로 하는 퍼스널 케어용 조성물:
    (a) 치환이 제 1 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121, 122, 123, 124, 125, 및 126 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
    (i) 103 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며; ,
    (ii) 104 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Trp 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 105 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 106 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 107 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xx) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiv) 126 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨;
    (b) 치환이 제 2 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 및 246 위치들 중 하나 이상에서 발생함:
    (i) 220 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xx) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxi) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxii) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiv) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxvi) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxvii) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택됨.
  9. 제 1 에피토프 구역, 제 2 에피토프 구역 및 제 3 에피토프 구역을 포함하는야생형 아미노산 서열의 변경된 아미노산 서열을 가지며, 변경된 아미노산 서열은 하나 이상의 에피토프 구역 내의 2 개 이상의 위치에 치환 아미노산에 의한 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 서브틸리신-유사 프로테아제 변이체, 및 퍼스널 케어용 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 퍼스널 케어용 조성물:
    (a) 치환이 제 1 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 및 126 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
    (i) 103 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 104 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Trp 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 105 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 106 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 107 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 108 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 109 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 110 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 111 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 112 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 113 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 114 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 115 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 116 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 117 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 118 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 119 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 120 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 121 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xx) 122 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxi) 123 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxii) 124 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiii) 125 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiv) 126 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (b) 치환이 제 2 에피토프 구역 내 발생할 때, 치환은 220, 221, 222, 223,224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245 및 246 위치들 중 하나 이상에서 발생하며:
    (i) 220 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 221 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 222 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 223 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 224 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 225 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 226 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 227 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 228 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 229 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 230 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 231 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 232 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 233 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 234 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvi) 235 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xvii) 236 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xviii) 237 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xix) 238 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xx) 239 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxi) 240 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxii) 241 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiii) 242 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxiv) 243 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxv) 244 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxvi) 245 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xxvii) 246 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (c) 치환이 제 3 에피토프 구역 내에 발생할 때, 치환은 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 및 84 위치들 중 하나 이상에서 하기와 같이 발생하며:
    (i) 70 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ii) 71 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iii) 72 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (iv) 73 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (v) 74 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vi) 75 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (vii) 76 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (viii) 77 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (ix) 78 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (x) 79 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xi) 80 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xii) 81 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu,Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiii) 82 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xiv) 83 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택되며;
    (xv) 84 위치에 치환이 발생할 때, 치환 아미노산은 Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Trp 및 Tyr 로 구성되는 군으로부터 선택된다.
  10. 제 1 항에 따른 변이체 및 퍼스널 케어용 조성물 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 퍼스널 케어용 조성물.
  11. 제 3 항에 따른 변이체 및 세정용 조성물 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 세정용 조성물.
  12. 제 3 항에 따른 변이체 및 퍼스널 케어용 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 퍼스널 케어용 조성물.
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