KR20020000223A

KR20020000223A - 표피성장인자 수용체 길항제를 사용한 인간 난치성 종양의치료 방법

Info

Publication number: KR20020000223A
Application number: KR1020017014494A
Authority: KR
Inventors: 할란 더블유. 왝샐
Original assignee: 존 비. 랜디스; 임클론 시스템즈 인코포레이티드
Priority date: 1999-05-14
Filing date: 2000-05-01
Publication date: 2002-01-05
Also published as: CA2373815A1; JP2009120583A; CN1200734C; JP2003520195A; AU4687100A; NO20015546D0; WO2000069459A1; EP1218032A4; PL365999A1; EP2042194A3; HUP0201480A3; BG106110A; CZ20014083A3; HUP0201480A2; EE200100603A; CN1361700A; SK16522001A3; NO20015546L; US20020012663A1; HK1047236A1

Abstract

본 발명은 유효량의 표피성장인자 수용체 길항제를 사용하여 치료하는 것을 포함하는, 인간 환자에서 표피성장인자의 리간드에 의해 자극되는 난치성 종양의 증식 억제 방법에 관한 것이다.

Description

표피성장인자 수용체 길항제를 사용한 인간 난치성 종양의 치료 방법 {Treatment of Refractory Human Tumors with Epidermal Growth Factor Receptor Antagonists}

암은 미국에서 심장병 다음으로 사망의 주 원인이 되는 질병이다. 이러한 심각한 질병의 치료를 위한 새로운 요법의 개발에 있어서 중요한 진척이 있어 왔다. 이러한 진척의 대부분은 정상 세포 및 암세포 둘 다에 있어서 세포 증식에 대한 이해의 증진으로 인한 것이다.

정상 세포들은 성장인자 수용체가 그들 각각의 리간드에 의해 고도로 조절되어 활성화됨으로써 증식한다. 이러한 수용체의 예로는 성장인자 수용체 티로신 키나제가 있다.

암세포도 또한 성장인자 수용체의 활성화에 의해 증식하지만, 정상적인 세포 증식의 정확한 조절은 상실하게 된다. 이러한 조절 상실은 성장인자 및(또는) 수용체의 과다발현 및 성장인자에 의해 조절되는 생화학적 경로의 자율적인 활성화와 같은 많은 요소들에 의해 유발될 수 있다.

종양발생에 관여하는 수용체의 몇몇 예로는 표피성장인자(EGFR), 혈소판-유래 성장인자(PDGFR), 인슐린-유사 성장인자(IGFR), 신경성장인자(NGFR) 및 섬유아세포성장인자(FGF)의 수용체가 있다.

표피성장인자(EGF) 수용체 족의 구성원은 표피세포의 종양발생과 관련되는 특히 중요한 성장인자 수용체 티로신 키나제이다. EGF 수용체 족의 밝혀진 첫번째 구성원은 약 165 kD의 겉보기 분자량을 갖는 당단백질이었다. 이 당단백질은 문헌[Mendelsohn et al., in U.S. Patent No. 4,943,533]에 기재되어 있으며, EGF 수용체(EGFR)로도, 인간 EGF 수용체-1(HER1)으로도 알려져 있다.

EGFR은 많은 유형의 표피모양 종양세포에서 과다발현된다. EGF 및 변형 성장인자 알파(TGF-알파)는 EGFR의 두가지 공지된 리간드이다. EGF 수용체를 발현시키는 종양의 예로는 교모세포종뿐만 아니라 폐, 유방, 두부 및 경부, 및 방광의 암을 들 수 있다. 종양 세포막상의 EGF 수용체의 증폭 및(또는) 과다발현은 불량한 예후와 관계가 있다.

암의 치료에는 통상적으로 화학요법 및 방사선요법이 포함된다. 화학요법제의 몇가지 예로는 독소루비신, 시스플라틴 및 탁솔이 포함된다. 방사선은 외부로부터의 빔 또는 환자의 체내에 위치한 공급원으로부터의 빔(즉, 근접치료법)일 수 있다.

또다른 유형의 치료에는 세포의 증식에 관여하는 성장인자 또는 성장인자 수용체의 길항제가 포함된다. 이러한 길항제는 성장인자 또는 수용체의 활성을 중화시키고, 이러한 수용체를 발현시키는 종양의 증식을 억제한다.

예를 들어, 미국특허 제4,943,533호에는 EGF 수용체와 결합하는 225라 부르는 쥐 모노클로날 항체에 대하여 기술되어 있다. 이 특허는 유니버시티 오브 캘리포니아(University of California)로 양도되었으며, 임클론 시스템즈 인코포레이티드(ImClone Systems Incorporated)사가 독점적인 특허권을 가지고 있다. 225 항체는 배양된 EGFR-발현 종양 세포주의 증식을 억제할 뿐만 아니라, 흉선없는 마우스에서 이종이식편으로 배양될 때 생체내에서 이러한 종양의 증식을 억제할 수 있다[문헌[Masui et al., Cancer Res. 44, 5592-5598 (1986)]을 참조].

인간 치료법에서 쥐 모노클로날 항체를 사용하는 방법의 단점은 마우스 Ig 서열의 존재로 인한 인간 항-마우스 항체(HAMA) 반응의 가능성이다. 이러한 단점은 쥐(또는 인간 이외의 다른 포유동물) 항체의 불변 영역 전체를 인간 항체의 불변 영역으로 대체함으로써 최소화할 수 있다. 쥐 항체의 불변 영역을 인간 항체의 서열로 대체하는 것은 일반적으로 키메라화라고 한다.

키메라화 과정은 또한 쥐 항체의 구조 가변 영역을 그에 상응하는 인간 항체의 서열로 대체함으로써 보다 더 효과적으로 수행될 수 있다. 쥐 항체의 구조 가변 영역은 초가변 영역 이외의 항체의 가변 영역이다. 초가변 영역은 또한 상보성 결정 영역(CDR)으로도 알려져 있다.

쥐 항체의 불변 영역 및 구조 가변 영역을 인간 항체의 서열로 대체하는 것은 일반적으로 인간화라고 한다. 쥐 항체의 서열을 인간 항체의 서열로 대체하면 할수록 인간화 항체의 면역원성은 더 떨어진다(즉, HAMA 반응을 덜 유도함). 유감스럽게도, 쥐 항체의 영역을 인간 항체의 서열로 대체하면 할수록 이에 드는 비용과 그에 따른 노력이 둘 다 증가하게 된다.

인간 이외의 포유동물 항체의 불변 영역을 인간 항체의 불변 영역으로 대체하여도 항체의 활성에 영향을 줄 것으로 예상되진 않는다. 예를 들어,프레웨트(Prewett) 등은 상기 논의된 항-EGFR 225 모노클로날 항체의 키메라 형태를 사용하여 마우스에서 잘 확립된 전립선 종양 이종이식편의 종양 진행을 억제하는 것에 대하여 보고하였다. 이와 같은 키메라 형태는 c225라고 한다[Journal of Immunotherapy 19, 419-427 (1997)].

항체의 면역원성을 줄이기 위한 다른 방법은 항체 단편을 사용하는 것이다. 예를 들어, 문헌[Aboud-Pirak et al., Journal of the National Cancer Institute 80, 1605-1611 (1998)]의 한 부분에서는 108.4라고 불리는 항-EGF 수용체 항체와 이 항체의 단편의 항-종양 효과에 대하여 비교하고 있다. 이 종양 모델은 흉선없는 마우스에서 이종이식편으로서 KB 세포를 기초로 한 것이었다. KB 세포는 인간 구강의 표피모양암종에서 유래하며, EGF 수용체를 높은 수준으로 발현시킨다.

아보우드-피락(Aboud-Pirak) 등은 항체 및 그의 2가 F(ab')₂단편이 둘 다 생체내에서 종양의 증식을 지연시킬 수 있지만, F(ab')₂단편은 덜 효과적임을 알아내었다. 이 항체의 1가 Fab 단편은 세포에 결합된 수용체와 결합하는 능력이 있긴 하지만, 종양의 증식을 지연시키지는 못하였다.

또한, 상기 언급된 몇가지 기술들을 조합하여 암 치료를 개선하기 위한 시도가 이루어져 왔다. 예를 들어, 바젤가(Baselga) 등은 문헌[Journal of the National Cancer Institute 85, 1327-1333 (1993)]에 기재된 항-EGFR 모노클로날 항체를 병용한 화학요법제 독소루비신의 항-종양 효과에 대하여 보고하였다.

방사선과 보조제를 병용하여 방사선에 대한 암세포의 감수성을 증대시키려는다른 시도도 있었다. 예를 들어, 문헌[Bonnen, U.S. Patent 4,846,782]에는 방사선을 인터페론과 병용하였을 때 방사선에 대한 인간 암 세포의 감수성 증가에 대하여 보고되어 있다. 스넬링(Snelling) 등은 방사선을 임상 시험 단계 II에서 요오드-125로 방사성표지된 항-EGFR 모노클로날 항체와 병용하였을 때 퇴행성 병소를 포함하는 성상세포종에 걸린 환자의 방사선 치료에 있어서의 작은 개선에 대하여 보고하였다[문헌[Hybridoma 14, 111-114 (1995)]을 참조].

마찬가지로, 발라반(Balaban) 등은 방사선 치료 이후에 LA22라 불리는 항-EGFR 항체를 투여하였을 때 항-EGFR 모노클로날 항체가 방사선에 대해 마우스에서 인간 편평세포암종 이식조직편을 감작할 수 있다고 보고하였다[문헌[Biochimica et Biophysica Acta 1314, 147-156 (1996)]을 참조]. 살레(Saleh) 등은 또한 항-EGFR 모노클로날 항체를 사용하여 방사선요법을 증진시켰을 때 시험관내 및 마우스에서 종양을 더 잘 억제시킬 수 있다고 보고하였다. 살레(Saleh) 등은 "추가의 연구 등에 의해 조합된 새로운 양상의 RT/Mab 요법을 개발할 수 있다고 결론짓고 있다[문헌[abstract 4197 in the proceedings of the American Association for Cancer Research 37, 612 (1996)]을 참조].

암의 치료를 위한 상기 기술된 치료법에도 불구하고, 종래의 화학요법 및 방사선요법에 의해서는 난치성인 종양의 치료에 특별히 지시된 치료법은 전혀 없었다. 난치성 종양은 급속한 질병의 진행, 일반적으로는 불량한 예후를 초래한다. 현재로서는, 종래의 암 치료법에 의해서는 난치성 종양에 걸린 환자에 대해 할 수 있는 바가 거의 없다.

상기 사실로 보아, 인간의 난치성 종양을 치료하기 위한 방법을 개선해야할 필요가 있다.

<발명의 개요>

본 발명의 목적 및 기타 목적은 당업계의 통상의 기술을 가진 자에게는 자명한 것이며, 인간 환자에서 표피성장인자 수용체(EGFR)의 리간드에 의해 자극되는 난치성 종양의 증식을 억제하는 방법을 제공함으로써 달성된다. 본 발명의 방법은 유효량의 EGFR/HER1 길항제를 사용하여 인간 환자를 치료하는 것을 포함한다.

다른 실시양태에서, 본 발명의 방법은 유효량의 EGFR/HER1 길항제 및 화학요법제를 병용하여 인간 환자를 치료하는 것을 포함한다.

또다른 실시양태에서, 본 발명의 방법은 유효량의 EGFR/HER1 길항제 및 방사선을 병용하여 인간 환자를 치료하는 것을 포함한다.

본 발명은 난치성 종양, 특히 난치성 암에 걸린 인간 환자에서 난치성 악성 종양을 치료하는 개선된 방법을 제공한다.

난치성 종양

난치성 종양에는 화학요법제 단독, 방사선 단독 또는 이들의 조합에 의해서는 치료할 수 없거나 이러한 치료에 대해 내성을 갖는 종양이 포함된다. 본원의 목적을 위해, 난치성 종양에는 화학요법제 및(또는) 방사선에 의한 치료에 의해 억제되는 것처럼 보이지만, 치료 중단 후 5년 내에, 때로는 10년내에 또는 그 이상 후에 재발되는 종양이 또한 포함된다.

본 발명에 따라 치료될 수 있는 난치성 종양의 유형은 EGFR의 리간드에 의해 자극되는 임의 난치성 종양이다. EGFR을 자극하는 리간드의 몇몇 예로는 EGF 및 TGF-알파가 포함된다.

EGFR 수용체 족에는 또한 문헌에서 HER1으로도 언급되는 EGFR이 포함된다. 본원에서, EGFR은 EGFR/HER1으로 불리는 EGFR 수용체 족의 특정 구성원을 의미한다.

본 발명에 의해 치료가능한 난치성 종양은 인간 환자의 선천적인 내생 종양이다. 이러한 종양은 동물에서 치료되었던 인간의 내생 종양 이식조직편보다 치료하기가 더 어렵다[예를 들어, 문헌[Prewett et al., Journal of Immunotherapy 19, 419-427 (1997)]을 참조].

난치성 종양의 몇몇 예로는 암종, 신경교종, 육종, 선암종, 선육종 및 선종이 포함된다. 이러한 종양은 실제로 인간의 모든 기관을 비롯한 신체의 모든 부위에서 발생한다. 이러한 종양은, 예를 들어, 유방, 심장, 폐, 소장, 결장, 비장, 신장, 방광, 두부 및 경부, 난소, 전립선, 뇌, 췌장, 피부, 골, 골수, 혈액, 흉선, 자궁, 고환, 자궁경부 및 간에 존재할 수 있다.

이러한 종양은 EGFR을 정상 수준으로 발현하거나 또는 EGFR을, 예를 들어, 정상 수준보다 10배, 100배 또는 1,000배 이상의 수준으로 과다발현시킬 수 있다. EGFR을 과다발현시키는 몇몇 종양으로는 유방, 폐, 결장, 신장, 방광, 두부 및 경부, 특히 두부 및 경부, 난소, 전립선 및 뇌의 편평세포암종이 포함된다.

EGFR/HER1 길항제

본 발명의 난치성 종양은 EGFR/HER1 길항제로 치료할 수 있다. 본원의 목적을 위해, EGFR/HER1 길항제는 EGFR/HER1 리간드에 의한 EGFR/HER1의 자극을 억제하는 임의 물질이다. 이러한 자극의 억제는 EGFR/HER1을 발현시키는 세포의 성장을 억제한다.

난치성 종양의 증식은 암의 진행(즉, 증식, 침투, 전이 및(또는) 재발)을 방지하거나 줄이려는 환자에게서 충분히 억제된다. 본 발명의 EGFR 길항제는 세포증식억제성이거나 또는 난치성 종양의 증식을 억제할 수 있다. 바람직하게는, EGFR 길항제는 세포용해성이거나 종양을 파괴한다.

본 발명에서 작동하는 바와 같이, 특별한 억제 메카니즘은 포함되지 않는다. 그럼에도 불구하고, EGFR 티로신 키나제는 일반적으로 인산화 반응에 의해 활성화된다. 따라서, 인산화 분석은 본 발명에서 유용한 길항제를 찾아내는데 유용하다. EGFR 티로신 키나제 활성의 몇가지 유용한 분석에 대하여는 문헌[Panek et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 283, 1433-1444 (1997) and Batley et al., Life Sciences 62, 143-150 (1998)]에 기재되어 있다. 이러한 분석에 대한 설명은 본원에 참고로 포함된다.

EGFR/HER1 길항제에는 생물학적 분자 또는 소분자가 포함된다. 생물학적 분자에는 분자량이 450을 초과하는 모든 지질류 및 모노사카라이드, 아미노산 및 뉴클레오티드의 중합체가 포함된다. 따라서, 생물학적 분자에는, 예를 들어, 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드; 올리고펩티드, 폴리펩티드, 펩티드 및 단백질; 및 올리고뉴클레오티드 및 폴리뉴클레오티드가 포함된다. 올리고뉴클레오티드 및 폴리뉴클레오티드에는, 예를 들어, DNA 및 RNA가 포함된다.

생물학적 분자에는 상기 기재된 임의 분자의 유도체가 추가로 포함된다. 예를 들어, 생물학적 분자의 유도체에는 지질, 및 올리고펩티드, 폴리펩티드, 펩티드 및 단백질의 글리코실화 유도체가 포함된다. 생물학적 분자의 유도체에는 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드의 지질 유도체, 예를 들어, 리포폴리사카라이드가 추가로 포함된다. 가장 전형적으로는, 생물학적 분자는 항체이거나 또는 항체의 기능적 동등물이다.

항체의 기능적 동등물은 항체의 결합 특성에 필적하는 결합 특성을 가지며, EGFR을 발현시키는 세포의 증식을 억제한다. 이러한 기능적 동등물에는, 예를 들어, 키메라 항체, 인간화 항체 및 단쇄 항체뿐 아니라 이들의 단편도 포함된다.

항체의 기능적 동등물에는 본 발명의 항체의 가변성 또는 초가변 영역의 아미노산 서열과 실질적으로는 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드가 포함된다. 다른 서열과 실질적으로 동일하지만 한개 이상의 아미노산이 치환, 부가 및(또는) 결실된 차이가 있는 아미노산 서열은 동등한 서열인 것으로 고려된다. 서열에서 아미노산 잔기수의 바람직하게는 50 % 미만, 보다 바람직하게는 25 % 미만, 보다 더 바람직하게는 10 % 미만이 단백질 대신 치환되거나, 단백질에 부가되거나 또는 단백질로부터 결실된다.

항체의 기능적 동등물은 바람직하게는 키메라 또는 인간화 항체이다. 키메라 항체는 비인간 항체의 가변 영역 및 인간 항체의 불변 영역을 포함한다. 인간화 항체는 비인간 항체의 초가변 영역(CDR)을 포함한다. 인간화 항체의 초가변 영역 이외의 가변 영역(예를 들어, 구조 가변 영역) 및 불변 영역은 인간 항체의 영역들이다.

본원의 목적을 위해, 비인간 항체의 적합한 가변 영역 및 초가변 영역은 모노클로날 항체가 만들어지는 인간 이외의 임의 포유동물에 의해 생산되는 항체로부터 유도될 수 있다. 인간 이외의 다른 포유동물의 적합한 예로는, 예를 들어, 토끼, 래트, 마우스, 말, 염소 또는 영장류가 포함된다. 바람직한 것은 마우스이다.

기능적 동등물에는 전체 항체의 결합 특성과 동일하거나 또는 그에 필적할만한 결합 특성을 갖는 항체의 단편이 추가로 포함된다. 적합한 항체 단편은 EGFR을 발현시키는 세포의 증식을 억제하는 EGFR 티로신 키나제와 특이적으로 결합하며, 그에 대해 충분한 친화성을 갖는 초가변성(즉, 상보성 결정) 영역의 충분한 부분을 포함하는 임의 단편을 포함한다.

이러한 단편은, 예를 들어, Fab 단편 또는 F(ab')₂단편의 어느 하나 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 항체 단편은 전체 항체의 상보성 결정 영역 6개 모두를 포함하지만, 이러한 영역들 모두 보다는 적은 수의 영역(예를 들어, 3개, 4개 또는 5개의 CDR)을 포함하는 기능적 단편이 또한 포함된다.

바람직한 단편은 단쇄 항체 또는 Fv 단편이다. 단쇄 항체는 내부연결 링커를 갖거나 갖지 않는 경쇄의 가변 영역에 연결된 항체 중쇄의 가변 영역을 적어도 포함하는 폴리펩티드이다. 따라서, Fv 단편은 항체 연결 부위 전체를 포함한다. 이 쇄는 박테리아 또는 진핵세포에서 생산될 수 있다.

항체 및 그의 기능적 동등물은 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE와 같은 이뮤노글로불린의 특정 군 및 그의 하위 군의 구성원일 수 있다. 바람직한 항체는 IgG1 하위 군의 구성원이다. 기능적 동등물은 또한 상기 임의의 군 및 그의 하위 군의 조합의 동등물일 수도 있다.

항체는 당업계에 잘 알려져 있는 방법에 의해 목적 수용체로부터 만들어질 수 있다. 수용체는 시판되거나 또는 잘 알려진 방법에 의해 단리될 수 있다. 예를 들어, EGFR의 단리 및 정제 방법은 문헌[Spada, U.S. Patent 5,646,153 starting at column 41, line 55]에 기재되어 있다. 문헌[Spada patent]에 기재된 EGFR의 단리 및 정제 방법은 본원에 참고로 포함된다.

모노클로날 항체의 제조 방법에는 문헌 [Kohler and Milstein in Nature 256,495-497 (1975) and; Campbell in"Monoclonal Antibody Technology, The Production and Characterization of Rodent and Human Hybridomas"in Burdon et al., Eds, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Volume 13, Elsevier Science Publishers, Amsterdam (1985)]에 기재된 면역학적 방법이 포함된다. 문헌 [Huse et al. in Science 246, 1275-1281 (1989)]에 기재된 재조합 DNA 방법도 적합하다.

요약하건대, 모노클로날 항체를 제조하기 위해서, 숙주 포유동물을 상기 기재한 바와 같이 수용체 또는 수용체의 단편으로 접종한 후, 임의로 부스팅한다. 유용한 모노클로날 항체를 제조하기 위해서, 상기 수용체 단편은 검출될 상기 분자의 에피토프를 한정하기에 충분한 아미노산 잔기를 포함해야 한다. 상기 단편이면역원으로 사용되기에 너무 짧으면, 상기 단편을 캐리어 분자에 접합시킬 수 있다. 몇몇 적합한 캐리어 분자로는 키홀드 림펫 헤모시아닌 (keyhold limpet hemocyanin) 및 소 혈청 알부민이 있다. 접합은 당업계에 공지된 방법으로 수행할 수 있다. 상기 방법 중 한 방법은 단편의 시스테인 잔기를 캐리어 분자 상 시스테인 잔기와 결합시키는 것이다.

최종 부스트로부터 수일 후, 접종된 포유동물로부터 비장을 적출하였다. 항체를 발현하는 생성된 하이브리도마 세포를 단리하고 생장시키고 배양물 중에 유지시켰다.

상기 하이브리도마 세포를 제조하기에 적합한 모노클로날 항체 뿐만 아니라 성장 인자 수용체 티로신 키나제도 예컨대, 업스테이트 바이오테크놀러지 (Upstate Biotechnology), 산타 크루즈 바이오테크놀러지 (Santa Cruz Biotechnology of Santa Cruz, California), 트랜스덕션 레이보러토리 (Transduction Laboratories of Lexington, Kentucky), R & D 시스템스 인크 (R & D Systems Inc of Minneapolis, Minnesota) 및 다코 코포레이션 (Carpinteria, California)으로부터 구입가능하다.

키메라 및 인간화 항체의 제조 방법도 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 키메라 항체의 제조 방법으로는 미국 특허 [Boss (Celltech) and Cabilly (Genentech)]에 기재된 방법이 있다. 미국 특허 제4,816,397호 및 제4,816,567호 각각도 참조한다. 인간화 항체의 제조 방법은 예를 들어, 미국 특허 제5,225,539호 (Winter)에 기재되어 있다.

항체의 인간화에 바람직한 방법은 CDR-이식이라고 불린다. CDR-이식에 있어서, 항원과의 결합에 직접 관여하는 마우스 항체의 영역, 상보성 결정 영역 또는 CDR을 인간 가변 영역에 이식하여 "재형성된 인간" 가변 영역을 생성한다. 이어서, 완전히 인간화된 가변 영역을 인간 불변 영역에 결합시켜 완전한 "완전 인간화" 항체를 생성한다.

항체에 잘 결합하는 완전 인간화 항체를 생성하기 위해, 재형성된 인간 가변 영역을 조심스럽게 디자인하는 것이 바람직하다. CDR이 이식될 인간 가변 영역은 조심스럽게 선별해야 하고, 통상적으로 인간 가변 영역의 골격 영역 (FR) 내의 결정적인 위치에 있는 수 개의 아미노산을 변화시키는 것이 필요하다.

예를 들어, 재형성된 인간 가변 영역은 선택된 인간 경쇄 가변 영역의 FR 내에 10개 이하의 아미노산 변화를 포함할 수 있고, 선택된 인간 중쇄 가변 영역의 FR 내에 12개 만큼 많은 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 이들 재형성된 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자를 코딩하는 DNA 서열은 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역 유전자, 바람직하게는 각각 γ1 및 κ를 코딩하는 DNA 서열에 결합시킨다. 이어서, 재형성된 인간화 항체를 포유동물 세포에서 발현시키고 그의 표적에 대한 인간화 항체의 친화도를 상응하는 뮤린 항체 및 키메라 항체의 친화도와 비교한다.

치환될 인간화 항체의 잔기를 선별하고 치환시키는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다 (예를 들어, Co et al., Nature 351, 501-502 (1992); Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 86, 10029-1003 (1989) and Rodrigues et al., Int. J. Cancer, Supplement 7, 45-50 (1992) 참조). 225 항-EGFR 모노클로날 항체를 인간화시키고 재형성하는 방법은 문헌 (Goldstein et al. in PCT application WO 96/40210)에 기재되어 있다. 이 방법은 기타 성장 인자 수용체 티로신 키나제에 대한 항체를 인간화시키고 재형성하는 데 사용할 수 있다.

단쇄 항체의 제조 방법도 당업계에 공지되어 있다. 몇몇 적합한 예로는 문헌 [Wels et al. in European patent application 502 812 and Int. J. Cancer 60, 137-144 (1995)]에 기재된 것이 있다.

상기 기능적 등가물을 제조하는 기타 방법은 국제 출원 WO 93/21319, 유럽 특허 출원 239 400, 국제 출원 WO 89/09622, 유럽 특허 출원 338 745, 미국 특허 제5,658,570호, 미국 특허 제5,693,780호 및 유럽 특허 출원 332 424에 개시되어 있다.

바람직한 EGFR 항체는 225로 불리는 뮤린 항체로부터 유도된 키메라 인간화 단쇄 항체인데, 상기 225 항체는 미국 특허 제4,943,533호에 기재되어 있다. 이 특허는 캘리포니아 대학에 양도되고 임클론 시스템즈 인코포레이티드 (ImClone Systems Incorporated)가 독점적으로 특허를 받았다.

상기 225 항체는 시험관내에서 배양된 EGFR/HER1-발현 종양 세포의 증식을 억제할 수 있을 뿐만 아니라 이 종양 세포가 흉선없는 마우스에 이종이식되어 증식되는 경우 생체내에서도 상기 종양 세포의 증식을 억제할 수 있다 [Masui et al., Cancer Res. 44,5592-5598 (1986)]. 보다 최근에, 독소루비신 또는 시스플라틴과 225의 병용 치료법은 마우스에서 잘 확립된 몇몇 인간 이종이식 모델에 대한 상승작용을 나타내었다 [Basalga et al., J. Natl. Cancer Inst. 85,1327-1333(1993)].

본 발명의 한 실시양태에서, EGFR/HER1 길항제 (키메라 항-EGFR 모노클로날 항체, C225) 및 시스플라틴을 병용하여 난치성 두부 및 경부 편평 세포암을 앓는 인간 환자를 치료하였다. 이 치료전, 이들 환자는 방사선 치료 단독, 화학요법 단독 또는 그의 병용법으로 치료하지 못하였다. EGFR/HER1 길항제는 난치성 종양의 증식을 억제하였다.

뮤린 항체 225로부터 유도된 키메라 인간화 단쇄 항체는 ATCC로부터 입수할 수 있는 225 항체로부터 제조할 수 있다. 별법으로, 키메라 인간화 단쇄 225 항체를 제조하는 데 필요한 다양한 단편을 문헌 [Wels et al. in Int. J. Cancer 60, 137-144 (1995)]에 제공된 서열로부터 합성할 수 있다. 키메라 225 항체 (c225)는 상기 방법에 따라 제조할 수 있다. 인간화 225 항체는 국제 출원 WO 96/40210의 실시예 IV에 기재된 방법에 따라 제조할 수 있는데, 상기 출원의 내용은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다. 단쇄 225 항체 (Fv225)는 문헌 [Wels et al. in Int. J. Cancer 60, 137-144 (1995)] 및 유럽 특허 출원 502 812에 기재된 방법에 따라 제조할 수 있다.

경쇄 및 중쇄의 초가변 (CDR) 영역의 서열은 아래에 기재되어 있다. 아미노산 서열은 뉴클레오티드 서열 아래에 표시되어 있다.

중쇄 초가변 영역 (VH):

CDR1

AACTATGGTGTACAC (서열 1)

N Y G V H (서열 2)

CDR2

GTGATATGGAGTGGTGGAAACACAGACTATAATACACCTTTCACATCC (서열 3)

V I W S G G N T D Y N T P F T S (서열 4)

CDR3

GCCCTCACCTACTATGATTACGAGTTTGCTTAC (서열 5)

A L T Y Y D Y E F A Y (서열 6)

경쇄 초가변 영역 (VL):

CDR1

AGGGCCAGTCAGAGTATTGGCACAAACATACAC (서열 7)

R A S Q S I G T N I H (서열 8)

CDR2

GCTTCTGAGTCTATCTCT (서열 9)

A S E S I S (서열 10)

CDR3

CAACAAAATAATAACTGGCCAACCACG (서열 ll)

Q Q N N N W P T T (서열 12)

위에 논의된 생물학적 분자 이외에, 본 발명에 유용한 길항제는 소분자일 수도 있다. 생물학적 분자가 아닌 임의의 분자는 본 명세서에서 소분자로 간주된다. 소분자의 몇 가지 예에는 유기 화합물, 유기금속 화합물, 유기 및 유기금속 화합물의 염, 사카라이드, 아미노산 및 뉴클레오티드가 포함된다. 또한, 소분자에는 분자량이 450을 초과하지 않는다는 점을 제외하고 다른 점에서 생물학적 분자로 간주될 수 있는 분자도 포함된다. 따라서, 소분자는 분자량이 450 이하인 지질, 올리고사카라이드, 올리고펩티드, 올리고뉴클레오티드 및 이들의 유도체일 수 있다.

소분자가 임의의 분자량을 갖을 수 있다는 것을 강조한다. 이들은 전형적으로 분자량이 450 이하이기 때문에 단지 소분자라고 불린다. 소분자에는 자연에서 발견되는 화합물 뿐만 아니라 합성 화합물이 포함된다. 바람직하게는, 소분자는 EGFR/HER1 티로신 키나제를 발현하는 난치성 종양 세포의 증식을 억제한다.

다수의 소분자가 EGFR을 억제하는 데 유용한 것으로 기재되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,656,655호 (Spada et al.)에는 EGFR을 억제하는 스티릴 치환 헤테로아릴 화합물이 개시되어 있다. 헤테로아릴기는 한 개 또는 두 개의 헤테로원자가 있는 모노시클릭 고리, 또는 1 내지 약 4 개의 헤테로원자가 있는 비시클릭 고리이고, 헤테로아릴 화합물은 임의로 치환 또는 다치환된다. 미국 특허 제5,656,655호에 개시된 화합물은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

미국 특허 제5,646,153호 (Spada et al.)에는 EGFR을 억제하는 비스 모노 및(또는) 비시클릭 아릴 헤테로아릴, 카르보시클릭 및 헤테로카르보시클릭 화합물이 개시되어 있다. 미국 특허 제5,646,153호에 개시된 화합물은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

미국 특허 제5,679,683호 (Bridges et al.)에는 EGFR을 억제하는 트리시클릭 피리미딘 화합물이 개시되어 있다. 상기 화합물은 3열 35행 내지 5열 6행에 기재된 융합 헤테로시클릭 피리미딘 유도체이다. 3열 35행 내지 5열 6행에 있는 이들 화합물의 설명은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

미국 특허 제5,616,582호 (Barker)에는 수용체 티로신 키나제 억제 활성을 나타내는 퀴나졸린 유도체가 개시되어 있다. 미국 특허 제5,616,582호에 개시된 화합물은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

문헌 [Fry et al., Science 265, 1093-1095 (1994)]에는 EGFR을 억제하는 구조를 갖는 화합물이 개시되어 있다. 상기 구조는 도 1에 나타나 있다. 상기 문헌의 도 1에 나타낸 화합물은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

문헌 (Osherov et al.)에는 EGFR/HER1 및 HER2를 억제하는 티르포스틴 (tyrphostin)이 개시되어 있다. 상기 문헌에 개시된 화합물 및, 특히 표 I, II, III 및 IV에 기재된 화합물은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

미국 특허 제5,196,446호 (Levitzki et al.)에는 EGFR을 억제하는 헤테로아릴에텐디일 또는 헤테로아릴에텐디일아릴 화합물이 개시되어 있다. 미국 특허 제5,196,446호의 2열 42행 내지 3열 40행에 기재된 화합물은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

문헌 [Panek, et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 283, 1433-1444 (1997)]에는 수용체의 EGFR, PDGFR 및 FGFR 족을 억제하는 PD166285로 확인된 화합물이 개시되어 있다. PD166285는 1436면의 도 1에 나타낸 구조를 갖는 6-(2,6-디클로로페닐)-2-(4-(2-디에틸아미노에톡시)페닐아미노)-8-메틸-8H-피리도(2,3d)피리미딘-7-온으로서 확인된다. 상기 문헌의 1436면의도 1에 기재된 화합물은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

EGFR/HER1 길항제의 투여

본 발명은 유효량의 EGFR/HER1 길항제를 인간 환자에게 투여하는 것을 포함한다. EGFR/HER1 길항제는 비경구 및 장내 경로로 전신 투여하는 것을 포함하는 다양한 방식으로 투여할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 EGFR/HER1 길항제는 바람직한 전달 경로인 정맥내 경로 (예컨대, 정맥내 감염)로 용이하게 투여할 수 있다. 정맥내 투여는 EGFR/HER1 길항제를 당업자에게 공지된 적합한 제약 담체 (비히클) 또는 부형제와 접촉시킴으로써 달성할 수 있다. EGFR/HER1 길항제는 예를 들어, BCG, 면역계 자극제 및 화학요법제와 같은 보조제와 함께 투여할 수 있다.

소분자 또는 생물학적 약물인 EGFR/HER1 길항제는 미국 특허 제5,646,153호 (Spada)의 57열 47행 내지 59열 67행에 기재된 바와 같이 투여할 수 있다. 소분자의 투여에 대한 이 설명은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

본 발명의 EGFR/HER1 길항제는 유효량으로 인간 환자에게 투여되는 경우 난치성 종양 세포의 증식을 상당히 억제한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 유효량은 난치성 종양의 증식을 억제하는 구체적 결과를 달성하기에 유효한 양이다.

바람직하게는, EGFR/HER1 길항제는 정상 조직의 증식을 방해하지 않으면서 종양의 증식을 억제하는 양으로 종양에게 제공된다. 가장 바람직하게는, EGFR/HER1 길항제는 심각한 부작용 없이 종양의 증식을 억제한다. 몇몇 심각한 부작용으로는 골수 억제, 빈혈 및 감염이 있다.

항체 및 항체의 기능적 등가물인 EGFR/HER1 길항제의 최적 투여량은 예를 들어, 연령, 성별, 체중, 치료할 증상의 심각도, 투여할 항체 및 투여 경로를 비롯한 다수의 파라미터를 기초로 하여 의사가 결정할 수 있다. 일반적으로, 표적 수용체의 포화를 허용하는 폴리펩티드 및 항체의 혈청 농도가 바람직하다. 예를 들면, 대략 0.1 nM을 초과하는 농도가 통상적으로 충분하다. 예컨대, 100 mg/m²투여량의 C225는 대략 8일 동안 대략 20 nM의 혈청 농도를 제공한다.

대략적인 지침에 따라, 항체는 10-300 mg/m²의 투여량으로 매주 투여한다. 수용체의 포화를 허용하는 농도를 초과한 혈청 농도를 유지하기 위해서는 상기 투여량과 동일한 투여량의 항체 단편을 보다 빈번한 간격으로 사용해야 한다.

병용 요법

바람직한 한 실시양태에서, 난치성 종양은 화학요법제, 방사선요법 또는 그의 병용법과 함께 유효량의 EGFR/HER1 길항제로 치료할 수 있다.

화학요법제 또는 화학요법의 예로는 알킬화제, 예를 들어, 질소 머스타드, 에틸렌이민 화합물, 알킬 술포네이트 및 알킬화제 작용을 갖는 기타 화합물 (예컨대, 니트로소우레아, 시스플라틴 및 다카르바진); 항대사물질, 예를 들어, 엽산, 퓨린 또는 피리미딘 길항제; 체세포분열 억제제, 예를 들어, 빈카 알칼로이드 및 포도필로톡신의 유도체; 세포독성 항생제 및 캄프토테신 유도체가 있다.

캄프토테신 유도체로는 예를 들어, 캄프토테신, 7-에틸 캄프토테신, 10-히드록시-7-에틸-캄프토테신 (SN38), 9-아미노 캄프토테신, 10,1-메틸렌디옥시-캄프토테신 (MDCPT) 및 토포테칸이 있다. 이러한 캄프토테신 유도체에는 미국 특허제5,604,233호에 기재된 7-에틸-캄프토테신의 안정한 락톤 제제도 포함되며, 상기 특허의 전체 개시 내용은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

본 발명은 친지질성이 높은 캄프토테신 유도체, 예컨대, 10,11-메틸렌디옥시-캄프토테신, 10,11-에틸렌디옥시-캄프토테신, 9-에틸-캄프토테신, 7-에틸-10-히드록시-캄프토테신, 9-메틸-캄프토테신, 9-클로로-10,11-메틸렌디옥시-캄프토테신, 9-클로로-캄프토테신, 10-히드록시-캄프토테신, 9,10-디클로로-캄프토테신, 10-브로모-캄프토테신, 10-클로로-캄프토테신, 9-플루오로-캄프토테신, 10-메틸-캄프토테신, 10-플루오로-캄프토테신, 9-메톡시-캄프토테신, 9-클로로-7-에틸-캄프토테신 및 11-플루오로-캄프토테신을 포함한다. 친지질성이 높은 이러한 캄프토테신 유도체는 미국 특허 제5,880,133호에 개시되어 있고, 상기 특허의 전체 내용은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

수용성 캄프토테신 유도체로는 예를 들어, CPT-11로서 공지된 캄프토테신의 수용성 동족체, 11-히드록시-7-알콕시-캄프토테신, 11-히드록시-7-메톡시-캄프토테신 (11,7-HMCPT) 및 11-히드록시-7-에틸 캄프토테신 (11, 7-HECPT), 7-디메틸아미노메틸렌-10,11-메틸렌디옥시-20(R,S)-캄프토테신, 7-디메틸아미노메틸렌-10,11-메틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신, 7-디메틸아미노메틸렌-10,11-에틸렌디옥시-20(R,S)-캄프토테신 및 7-모르폴리노메틸렌-10,11-에틸렌디옥시-20(S)-캄프토테신이 있다. 이러한 수용성 캄프토테신 유도체는 미국 특허 제5,559,235호 및 제5,468,754호에 개시되어 있으며, 이 특허의 전체 내용은 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

바람직한 화학요법제 또는 화학요법으로는 아미포스틴 (에티올), 시스플라틴, 다카르바진 (DTIC), 닥티노마이신, 메클로레타민 (질소 머스타드), 스트렙토조신, 시클로포스파미드, 카르무스틴 (BCNU), 로무스틴 (CCNU), 독소루비신 (아드리아마이신), 독소루비신 리포 (독실), 젬시타빈 (겜자르), 다우노루비신, 다우노루비신 리포 (다우녹솜), 프로카르바진, 미토마이신, 시타라빈, 에토포사이드, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 블레오마이신, 파클리탁셀 (탁솔), 도세탁셀 (탁소테레), 알데슬루킨, 아스파라기나제, 부술판, 카르보플라틴, 클라드리빈, 캄프토테신, CPT-11, 10-히드록시-7-에틸-캄프토테신 (SN38), 다카르바진, 플록수리딘, 플루다라빈, 히드록시우레아, 이포스파미드, 이다루비신, 메스나, 인터페론 알파, 인터페론 베타, 이리노테칸, 미톡산트론, 토포테칸, 루프롤리드, 메게스트롤, 멜팔란, 메캅토퓨린, 플리카마이신, 미토탄, 페가스파르가제, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 스트렙토조신, 타목시펜, 테니포사이드, 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실 및 그의 배합물이 있다.

화학요법제는 비경구 및 장내 경로에 의한 전신 투여를 포함하는 다양한 방식으로 투여될 수 있다. 바람직하게는, 화학요법제는 당업자에게 공지된 적합한 제약 담체 (비히클) 또는 부형제와 상기 화학요법제를 접촉시킴으로써 정맥내 투여한다. 화학요법제의 투여량은 당업계에 잘 공지되어 있는 다수의 인자에 달려 있다. 이러한 인자로는 연령, 성별, 체중, 치료할 증상의 심각도, 투여할 화학요법제, 및 투여 경로가 있다. 예를 들어, 시스플라틴은 약 100 mg/m²의 양으로 편리하게 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명이 임의의 특정 투여량으로 제한되지 않음을 인지해야 한다.

또다른 실시양태에서, 난치성 종양은 방사선과 함께 유효량의 EGFR/HER1 길항제로 치료할 수 있다. 방사선 공급원은 치료할 환자의 외부 또는 내부에 있을 수 있다. 상기 공급원이 환자의 외부에 있을 때, 이 요법을 외부선 방사선요법 (EBRT)이라 부른다. 방사선 공급원이 환자의 내부에 있을 때, 이 치료법을 근접요법 (BT)이라 부른다.

방사선은 방사선 투여 목적으로 제조된 표준 장치, 예컨대, AECL 테라트론 (AECL Theratron) 및 바리안 클리낵 (Varian Clinac)을 사용하는 잘 공지된 표준 기술에 따라 투여한다. 방사선의 투여량은 당업계에 잘 공지되어 있는 다수의 인자에 달려 있다. 이러한 인자로는 치료할 기관, 우연히 악영향을 받을 수 있는, 방사선 경로내의 건강한 기관, 방사선요법에 대한 환자의 내성 및 치료할 체면적이 있다. 투여량은 전형적으로 1 내지 100 Gy이고, 특히 2 내지 80 Gy이다. 보고된 바 있는 몇몇 투여량으로는 척수의 경우 35 Gy, 신장의 경우 15 Gy, 간의 경우 20 Gy 및 전립선의 경우 65-80 Gy가 있다. 그러나, 본 발명은 임의의 특정 투여량으로 제한되지 않음을 알아야 한다. 투여량은 상기 언급한 인자를 비롯하여 주어진 조건의 구체적 인자에 따라 주치의에 의해 결정될 것이다.

외부 방사선의 공급원과 환자내로의 도입점 사이의 거리는 표적 세포를 살해하는 것과 부작용을 최소화하는 것 사이의 허용 가능한 균형을 나타내는 임의의 거리일 수 있다. 전형적으로, 외부 방사선의 공급원은 환자내로의 도입점으로부터70 내지 100 cm 떨어져 있다.

근접요법은 일반적으로 방사선의 공급원을 환자내에 위치시킴으로써 수행한다. 대표적으로, 방사선의 공급원을 치료할 조직으로부터 0 내지 3 cm 떨어지도록 위치시킨다. 공지된 기술로는 간질 (interstitial) 근접요법, 강간 (intercavitary) 근접요법 및 표면 근접요법이 있다. 방사능 시드 (seed)는 영구적으로 또는 일시적으로 이식할 수 있다. 영구적 이식에 사용되는 몇몇 대표적 방사성 원자로는 요오드-125 및 라돈이 있다. 일시적인 이식에 사용되는 몇몇 대표적 방사성 원자로는 라듐, 세슘-137 및 이리듐-192가 있다. 근접요법에 사용되는 몇몇 추가적인 방사성 원자로는 아메리슘-241 및 금-198이 있다.

근접요법의 경우 방사선의 투여량은 외부선 방사선요법에 대해 상기 언급한 양과 동일한 양일 수 있다. 외부선 방사선요법의 투여량을 결정하기 위한 상기 인자 이외에, 근접요법의 투여량을 결정할 때 사용된 방사성 원자의 성질도 고려한다.

바람직한 실시양태에서, 인간 환자의 난치성 종양을 EGFR/HER1 길항제 및 화학요법제, 방사선 또는 그의 병용법으로 치료할 때 상승작용이 있다. 다시 말해, EGFR/HER1 길항제에 의한 종양 증식의 억제는 화학요법제, 방사선 또는 그의 병용법과 함께 병용될 때 상승된다. 예를 들어, EGFR/HER1 길항제, 화학요법제 또는 방사선 단독으로의 치료로부터 기대되는 것보다 병용 치료법으로 치료할 때 난치성 종양 증식의 억제가 더 높아지는 상승작용이 나타날 수 있다. 바람직하게는, 상승작용은 EGFR/HER1 길항제, 화학요법제 또는 방사선 단독으로의 치료로부터 완화를기대하지 못하는 암의 완화에 의해 입증된다.

EGFR/HER1 길항제는 화학요법 또는 방사선요법 뿐만 아니라 그의 임의의 병용법을 개시하기 전, 개시하는 동안, 개시한 후, 즉, 화학요법 및(또는) 방사선요법을 개시하기 전 및 개시하는 동안, 개시하기 전 및 개시한 후, 개시하는 동안 및 개시한 후, 또는 개시하기 전, 개시하는 동안 및 개시한 후에 투여한다. 예를 들어, EGFR/HER1 길항제가 항체일 때, 상기 항체는 전형적으로 방사선요법 및(또는) 화학요법을 개시하기 전 1 내지 30일, 바람직하게는 3 내지 20일, 보다 바람직하게는 5 내지 12일에 투여한다.

실시예 1. 임상 시험

임상 시험에서, EGFR/HER1 길항제 (키메라 항-EGFR 모노클로날 항체, C225) 및 시스플라틴을 병용하여 난치성 두부 및 경부 편평 세포암에 걸린 인간 환자를 치료하였다. 환자는 3주 마다 100 mg/m²의 시스플라틴과 함께 100/100, 400/250 또는 500/250 mg/m²의 로딩양/유지량으로 C225를 매주 관주 받았다. 종양 샘플을 초기 관주 후 24 시간 및 세 번째 관주 전 24 시간에서 기준치로 수득하여 종양 EGFR의 포화 및 기능을 평가하였다. 일차 항체로서 M225 (C225의 뮤린 대응물) 및 2차 항체로서 항-마우스 IgG를 사용하는 면역조직화학법 (IHC)으로 항체가 결합되지 않은 EGFR를 검출하여 종양 EGFR의 포화도를 평가하였다.

활성화된 EGFR에 대해 특이적인 항체 (트랜스덕션 랩; Transduction Lab)를 사용한 IHC를 수행하고, C225-EGFR 결합체를 세척한 후 종양 용해물에 대한 EGFR티로신 키나제 활성을 측정하여 EGFR 기능을 평가하였다. 수용체 포화도에 있어서의 투여량 의존성 증가는 수용체의 포화도가 500/250 mg/m²의 투여량에서 70%를 초과한다는 것으로 알 수 있었다. 유사하게, EGFR-티로신 키나제 활성의 상당한 감소는 100/100 mg/m²의 투여량에서 67%의 환자로부터 검출가능한 활성이 없다는 것으로 알 수 있는데, 이는 기능성 포화를 암시한다. 부작용은 열, 알레르기성 반응, 및 소포성 발진 또는 손톱층 변화로 나타나는 피부 독성이었고, 이들은 치료를 중지한 후 완전히 해결되었다. 평가 가능한 7명의 환자에서, 물리적인 조사 및 실험적인 값에 의해 결정된 1명의 최소 반응, 5명의 부분 반응 및 1명의 완전 반응이 있었다. 이전에 시스플라틴으로 치료받은 1명의 환자에서 완전 반응을 관찰하였다. 이전에 화학요법을 받은 4명의 환자 및 이전에 방사선 치료를 받은 1명의 환자에서 부분 반응을 관찰하였다. 이전에 방사선 치료를 받은 1명의 환자에서 최소 반응을 관찰하였다. 결과는 표에 나타내었는데, 표에서 CR은 완전 반응, PR은 부분 반응, 그리고 MR은 최소 반응을 의미한다.

임상시험

환자	이전 치료	총 반응
1	시스플라틴	CR
2	Ad p53	PR
3	시스플라틴	PR
4	시스플라틴	PR
5	방사선 단독	PR
6	화학요법	PR
7	방사선 단독	MR

실시예 2. 임상 시험

임상 시험에서, EGFR/HER1 길항제 (키메라 항-EGFR 모노클로날 항체, C225) 및 CPT-11을 병용하여 난치성 결장암에 걸린 1명의 환자를 치료하였다. 환자는 125 mg/m²의 CPT-11과 함께 400 mg/m²의 로딩양으로 C225를 매주 관주 받았다. 69-125 mg/m²의 CPT-11과 함께 250 mg/m²의 유지량으로 C225를 매주 투여하였다. 임상적으로, 환자는 완전 반응을 보였다. 투여 스케쥴은 아래 표 2에 요약되어 있다.

임상 시험

C225/CPT-11매주 투여량 (mg/m²)	C225/CPT-11(실제 투여량, mg)	C225 관주 시간 (분)	CPT-11 관주 시간 (분)
400/125	576/180	120	90
250/125	360/180	60	90
250/CPT-11유지	360/0	60	N/A
250/94	360/135	50	75
250/69	360/100	60	85
250/69	360/100	60	75

Claims

유효량의 EGFR/HER1 길항제를 사용하여 치료하는 것을 포함하는, 인간 환자에서 표피성장인자 수용체(EGFR)의 리간드에 의해 자극되는 난치성 종양의 증식 억제 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 EGFR/HER1에 대해 특이적인 모노클로날 항체 또는 그의 초가변 영역을 포함하는 단편인 방법.
제2항에 있어서, 모노클로날 항체가 키메라 항체 또는 인간화 항체인 방법.
제1항에 있어서, 길항제가 EGFR/HER1과 특이적으로 결합하는 소분자인 방법.
제4항에 있어서, 소분자가 EGFR/HER1 인산화를 억제하는 것인 방법.
제2항에 있어서, 모노클로날 항체가 EGFR/HER1 인산화를 억제하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 난치성 종양이 방사선요법, 화학요법 또는 이들의 조합에 의해 치료된 적이 있는 것인 방법.
제1항에 있어서, 종양이 유방, 심장, 폐, 소장, 결장, 비장, 신장, 방광, 두부 및 경부, 난소, 전립선, 뇌, 췌장, 피부, 골, 골수, 혈액, 흉선, 자궁, 고환, 자궁경부 및 간의 종양인 방법.
제1항에 있어서, 종양이 편평세포암종인 방법.
유효량의 EGFR/HER1 길항제 및 방사선을 병용하여 치료하는 것을 포함하는, 인간 환자에서 표피성장인자 수용체(EGFR)의 리간드에 의해 자극되는 난치성 종양의 증식 억제 방법.
제10항에 있어서, 방사선 조사 이전에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 조사 동안에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 조사 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 조사 이전 및 조사 동안에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 조사 동안 및 조사 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 조사 이전 및 조사 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 조사 이전, 조사 동안 및 조사 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 공급원이 인간 환자의 외부에 있는 것인 방법.
제10항에 있어서, 방사선 공급원이 인간 환자의 내부에 있는 것인 방법.
제10항에 있어서, 길항제가 모노클로날 항체인 방법.
제10항에 있어서, 종양이 유방, 심장, 폐, 소장, 결장, 비장, 신장, 방광, 두부 및 경부, 난소, 전립선, 뇌, 췌장, 피부, 골, 골수, 혈액, 흉선, 자궁, 고환, 자궁경부 및 간의 종양인 방법.
유효량의 EGFR/HER1 길항제 및 화학요법제를 사용하여 치료하는 것을 포함하는, 인간 환자에서 표피성장인자 수용체(EGFR)의 리간드에 의해 자극되는 난치성 종양의 증식 억제 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제를 사용하는 치료 이전에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제를 사용하는 치료 동안에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제를 사용하는 치료 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제를 사용하는 치료 이전에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제를 사용하는 치료 동안 및 치료 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제를 사용하는 치료 이전 및 치료 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제를 사용한 치료 이전, 치료 동안 및 치료 이후에 길항제가 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제가 아미포스틴, 시스플라틴, 다카르바진, 닥티노마이신, 메클로레타민, 스트렙토조신, 시클로포스파미드, 카르무스틴, 로무스틴, 독소루비신, 독소루비신 리포, 젬시타빈, 다우노루비신, 프로카르바진, 미토마이신, 시타라빈, 에토포시드, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 블레오마이신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 알데슬루킨, 아스파라기나제, 부술판, 카르보플라틴, 클라드리빈, 캄프토테신, CPT-11, 10-히드록시-7-에틸-캄프토테신(SN38), 다카르바진, 플록수리딘, 플루다라빈, 히드록시우레아, 이포스파미드, 이다루비신, 메스나, 인터페론 알파, 인터페론 베타, 이리노테칸, 미톡산트론, 토포테칸, 루프롤리드, 메게스트롤, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 플리카마이신, 미토탄, 페가스파르가제, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 스트렙토조신, 타목시펜, 테니포시드, 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실 및 이들의 배합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 화학요법제가 시스플라틴, 독소루비신, 파클리탁셀, CPT-11, 토포테칸 및 이들의 배합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 종양이 유방, 심장, 폐, 소장, 결장, 비장, 신장, 방광, 두부 및 경부, 난소, 전립선, 뇌, 췌장, 피부, 골, 골수, 혈액, 흉선, 자궁, 고환, 자궁경부 및 간의 종양인 방법.
제22항에 있어서, 길항제가 모노클로날 항체인 방법.