JP7197865B2 - 抗ヒトccr1モノクローナル抗体 - Google Patents
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Description
(1)ヒトCCR1の細胞外領域に結合し、ヒトCCL15によるヒトCCR1の活性化を阻害するモノクローナル抗体または該抗体断片。
(2)ヒトCCL15により誘導されるヒトCCR1発現細胞の遊走を阻害する(1)に記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(3)ヒトCCR1の細胞外ループ2領域のアミノ酸配列のうち、少なくとも1つのアミノ酸残基に結合する、(1)または(2)に記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(4)モノクローナル抗体が、下記(a)~(n)から選ばれるいずれか一つの抗体である、(1)~(3)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(a)重鎖可変領域(heavy chain variable region;以下、VHと略記する)の相補性決定領域(complementarity determining region;以下CDRと略記する)1~3が、それぞれ配列番号69、70および71に記載されるアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域(light chain variable region;以下、VLと略記する)のCDR1~3が、それぞれ配列番号72、73および74に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号75、76および77に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号78、79および80に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号81、82および83に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号84、85および86に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号87、88および89に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号90、91および92に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号93、94および95に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号96、97および98に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号99、100および101に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号102、103および104に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号105、106および107に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号108、109および110に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号111、112および113に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号114、115および116に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(i)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号117、118および119に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号120、121および122に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(j)VHのCDR1が配列番号75に記載されるアミノ酸配列を含み、VHのCDR2が配列番号76に記載されるアミノ酸配列または、配列番号76に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをThrに、9番目のValをAlaに、14番目のPheをAlaに、および15番目のIleをAlaに置換する改変から選ばれる少なくともいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、VHのCDR3が、配列番号77に記載されるアミノ酸配列または、配列番号77に記載されるアミノ酸配列中の5番目のTyrをAlaに、および7番目のThrをAlaに置換する改変の少なくともいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1が、配列番号126に記載されるアミノ酸配列または、配列番号126に記載されるアミノ酸配列中の15番目のPheをAlaに置換する改変が導入されたアミノ酸配列を含み、VLのCDR2が、配列番号127に記載されるアミノ酸配列または、配列番号127に記載されるアミノ酸配列中の2番目のValをIleに、および5番目のArgをLysに置換する改変の少なくともいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、VLのCDR3が、配列番号128に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(k)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号75、131および77に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号126、134および128に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(l)前記(a)~(k)に記載の少なくとも一つの抗体と、ヒトCCR1への結合について競合する抗体。
(m)前記(a)~(k)に記載のいずれか一つの抗体が結合するエピトープを含むエピトープに結合する抗体。
(n)前記(a)~(k)に記載のいずれか一つの抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する抗体。
(5)モノクローナル抗体が、下記(a)~(j)から選ばれるいずれか一つの抗体である、(1)~(4)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(a)VHが配列番号51に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号52に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号53に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号54に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号55に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号56に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号57に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号58に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号59に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号60に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号61に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号62に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHが配列番号63に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号64に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHが配列番号65に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号66に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(i)VHが配列番号67に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号68に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(j)VHが配列番号130に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号133に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(6)モノクローナル抗体が、下記(a)~(c)から選ばれるいずれか一つの抗体である、(1)~(4)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(a)VHが配列番号136に記載されるアミノ酸配列または配列番号136に記載されるアミノ酸配列中の6番目のGluをGlnに、20番目のLeuをIleに、27番目のGlyをPheに、29番目のValをLeuに、30番目のSerをAsnに、37番目のIleをValに、48番目のIleをLeuに、67番目のValをLeuに、71番目のValをLysに、73番目のThrをAspに、76番目のAsnをSerに、78番目のPheをValに、80番目のLeuをPheに、82番目のLeuをMetに、85番目のValをLeuに、92番目のValをIleに、および97番目のArgをLysに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号135に記載されるアミノ酸配列または配列番号135に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをValに、15番目のProをLeuに、50番目のGlnをLysに、92番目のTyrをPheに、および109番目のValをLeuに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列または配列番号146に記載されるアミノ酸配列中の4番目のLeuをValに、44番目のGlyをArgに、49番目のSerをAlaに、92番目のAlaをGlyに、93番目のValをMetに、97番目のAlaをThrに、および98番目のLysをArgに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列または配列番号145に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをValに、15番目のSerをLeuに、19番目のAlaをValに、43番目のGlnをLysに、50番目のGlnをLysに、および109番目のValをLeuに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列または配列番号163に記載されるアミノ酸配列中の42番目のAspをGluに、87番目のLysをArgに、および97番目のAlaをThrに置換するアミノ酸改変のいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列または配列番号162に記載されるアミノ酸配列中の38番目のGlnをHisに、および43番目のAlaをGlyに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(7)モノクローナル抗体が、下記(a)~(h)から選ばれるいずれか一つの抗体である、(1)~(4)および(6)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(a)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号135に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号137に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号138に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号139に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号140に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号141に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号142に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHが配列番号143に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号142に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(8)モノクローナル抗体が、下記(a)~(w)から選ばれるいずれか一つの抗体である、(1)~(4)および(6)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(a)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号147に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号148に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号149に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号150に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号152に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号153に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(i)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(j)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号147に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(k)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号148に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(l)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号149に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(m)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号150に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(n)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(o)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号152に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(p)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号153に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(q)VHが配列番号154に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(r)VHが配列番号155に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(s)VHが配列番号156に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(t)VHが配列番号157に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(u)VHが配列番号158に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(v)VHが配列番号159に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(w)VHが配列番号160に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(9)モノクローナル抗体が、下記(a)~(f)から選ばれるいずれか一つの抗体である、(1)~(4)および(6)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(a)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号165に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号165に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号166に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号166に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(10)モノクローナル抗体が遺伝子組換え抗体である(1)~(9)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(11)遺伝子組換え抗体が、ヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体から選ばれるいずれか1の遺伝子組換え抗体である、(10)に記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(12)抗体断片が、Fab、Fab’、(Fab’)2、一本鎖抗体(scFv)、二量体化V領域(diabody)、ジスルフィド安定化V領域(dsFv)およびCDRを含むペプチドから選ばれるいずれか1の抗体断片である、(1)~(11)のいずれか1つに記載の抗体断片。
(13)(1)~(9)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
(14)(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片をコードする塩基配列を有する核酸。
(15)(14)に記載の核酸を含むベクターを含む形質転換細胞。
(16)(13)に記載のハイブリドーマまたは(15)に記載の形質転換細胞を培養し、培養液から(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片を採取することを含む、(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片の製造方法。
(17)(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片を含む、ヒトCCR1の検出または測定用試薬。
(18)(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片を含む、ヒトCCR1関連疾患の診断薬。
(19)ヒトCCR1関連疾患が、癌、自己免疫疾患または炎症性疾患である、(18)に記載の診断薬。
(20)(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片を有効成分として含有する、ヒトCCR1関連疾患の治療薬。
(21)ヒトCCR1関連疾患が、癌、自己免疫疾患または炎症性疾患である、(20)に記載の治療薬。
(22)(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片を用いたヒトCCR1関連疾患の診断方法。
(23)(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片を用いたヒトCCR1関連疾患の治療方法。
(24)ヒトCCR1関連疾患の診断薬を製造するための、(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片の使用。
(25)ヒトCCR1関連疾患の治療薬を製造するための、(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片の使用。
(26)ヒトCCR1関連疾患の治療薬としての使用のための(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(27)ヒトCCR1関連疾患の診断薬としての使用のための(1)~(12)のいずれか1つに記載のモノクローナル抗体または該抗体断片。
(a)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号69、70および71に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号72、73および74に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号75、76および77に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号78、79および80に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号81、82および83に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号84、85および86に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号87、88および89に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号90、91および92に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号93、94および95に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号96、97および98に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号99、100および101に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号102、103および104に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号105、106および107に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号108、109および110に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号111、112および113に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号114、115および116に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(i)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号117、118および119に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号120、121および122に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(j)VHのCDR1が配列番号75に記載されるアミノ酸配列を含み、VHのCDR2が配列番号76に記載されるアミノ酸配列または、配列番号76に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをThrに、9番目のValをAlaに、14番目のPheをAlaに、および15番目のIleをAlaに置換する改変から選ばれる少なくともいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、VHのCDR3が、配列番号77に記載されるアミノ酸配列または、配列番号77に記載されるアミノ酸配列中の5番目のTyrをAlaに、および7番目のThrをAlaに置換する改変の少なくともいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1が、配列番号126に記載されるアミノ酸配列または、配列番号126に記載されるアミノ酸配列中の15番目のPheをAlaに置換する改変が導入されたアミノ酸配列を含み、VLのCDR2が、配列番号127に記載されるアミノ酸配列または、配列番号127に記載されるアミノ酸配列中の2番目のValをIleに、および5番目のArgをLysに置換する改変の少なくともいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、VLのCDR3が、配列番号128に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(k)VHのCDR1~3が、それぞれ配列番号75、131および77に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLのCDR1~3が、それぞれ配列番号126、134および128に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(l)前記(a)~(k)に記載の少なくとも一つの抗体と、ヒトCCR1への結合について競合する抗体。
(m)前記(a)~(k)に記載のいずれか一つの抗体が結合するエピトープを含むエピトープに結合する抗体。
(n)前記(a)~(k)に記載のいずれか一つの抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する抗体。
(1)-(a)VHが配列番号51に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号52に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(b)VHが配列番号53に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号54に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(c)VHが配列番号55に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号56に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(d)VHが配列番号57に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号58に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(e)VHが配列番号59に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号60に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(f)VHが配列番号61に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号62に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(g)VHが配列番号63に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号64に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(h)VHが配列番号65に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号66に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(i)VHが配列番号67に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号68に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)-(j)VHが配列番号130に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号133に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(2)-(a)VHが配列番号136に記載されるアミノ酸配列または配列番号136に記載されるアミノ酸配列中の6番目のGluをGlnに、20番目のLeuをIleに、27番目のGlyをPheに、29番目のValをLeuに、30番目のSerをAsnに、37番目のIleをValに、48番目のIleをLeuに、67番目のValをLeuに、71番目のValをLysに、73番目のThrをAspに、76番目のAsnをSerに、78番目のPheをValに、80番目のLeuをPheに、82番目のLeuをMetに、85番目のValをLeuに、92番目のValをIleに、および97番目のArgをLysに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号135に記載されるアミノ酸配列または配列番号135に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをValに、15番目のProをLeuに、50番目のGlnをLysに、92番目のTyrをPheに、および109番目のValをLeuに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(2)-(b)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列または配列番号146に記載されるアミノ酸配列中の4番目のLeuをValに、44番目のGlyをArgに、49番目のSerをAlaに、92番目のAlaをGlyに、93番目のValをMetに、97番目のAlaをThrに、および98番目のLysをArgに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列または配列番号145に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをValに、15番目のSerをLeuに、19番目のAlaをValに、43番目のGlnをLysに、50番目のGlnをLysに、および109番目のValをLeuに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(2)-(c)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列または配列番号163に記載されるアミノ酸配列中の42番目のAspをGluに、87番目のLysをArgに、および97番目のAlaをThrに置換するアミノ酸改変のいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列または配列番号162に記載されるアミノ酸配列中の38番目のGlnをHisに、および43番目のAlaをGlyに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(a)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号135に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(b)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号137に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(c)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号138に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(d)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号139に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(e)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号140に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(f)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号141に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(g)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号142に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(3)-(h)VHが配列番号143に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号142に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(a)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(b)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号147に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(c)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号148に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(d)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号149に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(e)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号150に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(f)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(g)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号152に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(h)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号153に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(i)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(j)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号147に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(k)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号148に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(l)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号149に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(m)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号150に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(n)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(o)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号152に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(p)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号153に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(q)VHが配列番号154に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(r)VHが配列番号155に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(s)VHが配列番号156に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(t)VHが配列番号157に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(u)VHが配列番号158に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(v)VHが配列番号159に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(4)-(w)VHが配列番号160に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(5)-(a)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(5)-(b)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(5)-(c)VHが配列番号165に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(5)-(d)VHが配列番号165に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(5)-(e)VHが配列番号166に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(5)-(f)VHが配列番号166に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(1)抗原の調製
抗原となるヒトCCR1またはヒトCCR1発現細胞は、ヒトCCR1全長またはその部分長をコードするcDNAを含む発現ベクターを、大腸菌、酵母、昆虫細胞または動物細胞などに導入することで得ることができる。また、ヒトCCR1は、ヒトCCR1を多量に発現している各種ヒト細胞株、ヒト細胞およびヒト組織などからヒトCCR1を精製することによっても得ることができる。また、これらヒト細胞株、ヒト細胞およびヒト組織などをそのまま抗原として使用することもできる。さらに、Fmoc法またはtBoc法などの化学合成法によりヒトCCR1の部分配列を有する合成ペプチドを調製し、抗原に用いることもできる。ヒトCCR1またはヒトCCR1の部分配列を有する合成ペプチドには、C末端またはN末端にFLAGまたはHisなどの公知のタグが付加されていてもよい。
3~20週令のマウス、ラットまたはハムスターなどの動物に、(1)で得られる抗原を免疫して、その動物の脾、リンパ節、末梢血中の抗体産生細胞を採取する。また、マウスCCR1ノックアウトマウスを被免疫動物として用いることもできる。
骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化細胞を用い、例えば、8-アザグアニン耐性マウス(BALB/c由来)骨髄腫細胞株P3-X63Ag8-U1(P3-U1)[Current Topics in Microbiology and Immunology, 18, 1 (1978)]、P3-NS1/1-Ag41(NS-1)[European J. Immunology, 6, 511 (1976)]、SP2/0-Ag14(SP-2)[Nature, 276, 269 (1978)]、P3-X63-Ag8653(653)[J. Immunology, 123, 1548 (1979)]またはP3-X63-Ag8(X63)[Nature, 256, 495 (1975)]などが用いられる。
(2)で得られる融合用抗体産生細胞と(3)で得られる骨髄腫細胞をMinimum Essential Medium(MEM)培地またはPBS(リン酸二ナトリウム1.83g、リン酸一カリウム0.21g、食塩7.65g、蒸留水1リットル、pH7.2)でよく洗浄し、細胞数が、融合用抗体産生細胞:骨髄腫細胞=5~10:1になるよう混合し、遠心分離した後、上清を除く。沈澱した細胞群をよくほぐした後、ポリエチレングリコール-1000(PEG-1000)、MEM培地およびジメチルスルホキシドの混液を37℃で、攪拌しながら加える。さらに1~2分間毎にMEM培地1~2mLを数回加えた後、MEM培地を加えて全量が50mLになるようにする。遠心分離後、上清を除く。沈澱した細胞群をゆるやかにほぐした後、融合用抗体産生細胞にHAT培地[ヒポキサンチン、チミジン、およびアミノプテリンを加えた正常培地]中にゆるやかに細胞を懸濁する。この懸濁液を5%CO2インキュベーター中、37℃にて7~14日間培養する。
プリスタン処理[2,6,10,14-テトラメチルペンタデカン(Pristane)0.5mLを腹腔内投与し、2週間飼育する]した8~10週令のマウスまたはヌードマウスに、(4)で得られるモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを腹腔内に注射する。10~21日でハイブリドーマは腹水癌化する。このマウスから腹水を採取し、遠心分離して固形分を除去後、40~50%硫酸アンモニウムで塩析し、カプリル酸沈殿法、DEAE-セファロースカラム、プロテインA-カラムまたはゲル濾過カラムによる精製を行ない、IgGまたはIgM画分を集め、精製モノクローナル抗体とする。
モノクローナル抗体の選択は以下に示すように、フローサイトメトリーを用いて、ヒトCCR1発現細胞への抗体の結合性を測定することなどにより行う。ヒトCCR1発現細胞は、細胞表面上にヒトCCR1が発現していればいずれの細胞でもよく、例えば、ヒト細胞、ヒト細胞株および(1)で得られるヒトCCR1強制発現細胞株などが挙げられる。
遺伝子組換え抗体の作製例として、以下にヒト型キメラ抗体、ヒト型キメラ抗体改変体およびヒト化抗体の作製方法を示す。遺伝子組換えのマウス抗体、ラット抗体およびラビット抗体なども同様の方法で作製することができる。
遺伝子組換え抗体発現用ベクターは、ヒト抗体のCHおよびCLをコードするDNAが組み込まれた動物細胞用発現ベクターであり、動物細胞用発現ベクターにヒト抗体のCHおよびCLをコードするDNAをそれぞれクローニングすることにより構築することができる。
非ヒト抗体のVH及びVLをコードするcDNAの取得およびアミノ酸配列の解析は以下のようにして行うことができる。
(1)で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターのヒト抗体のCHまたはCLをコードするそれぞれの遺伝子の上流に、それぞれ非ヒト抗体のVHまたはVLをコードするcDNAをそれぞれクローニングすることで、ヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築することができる。
ヒト化抗体のVHまたはVLをコードするcDNAは、以下のようにして構築することができる。
ヒト化抗体は、非ヒト抗体のVHおよびVLのCDRのみをヒト抗体のVHおよびVLのFRに移植しただけでは、その抗原結合活性は元の非ヒト抗体に比べて低下する[BIO/TECHNOLOGY, 9, 266 (1991)]。ヒト化抗体では、ヒト抗体のVHおよびVLのFRのアミノ酸配列の中で、直接抗原との結合に関与しているアミノ酸残基、CDRのアミノ酸残基と相互作用するアミノ酸残基、および抗体の立体構造を維持し、間接的に抗原との結合に関与しているアミノ酸残基を同定し、それらのアミノ酸残基を元の非ヒト抗体のアミノ酸残基に置換することにより、低下した抗原結合活性を上昇させることができる。
(1)で得られる遺伝子組換え抗体発現用ベクターのヒト抗体のCHまたはCLをコードするそれぞれの遺伝子の上流に、構築した遺伝子組換え抗体のVHまたはVLをコードするcDNAをそれぞれクローニングし、ヒト化抗体発現ベクターを構築することができる。
(3)および(6)で得られる遺伝子組換え抗体発現ベクター、またはそれらを改変した発現ベクターを用いて遺伝子組換え抗体の一過性発現を行い、作製した多種類のヒト型キメラ抗体、ヒト化抗体の抗原結合活性を効率的に評価することができる。
(3)および(6)で得られた遺伝子組換え抗体発現ベクターを適当な宿主細胞に導入することにより遺伝子組換え抗体を安定に発現する形質転換株を得ることができる。
宿主細胞への発現ベクターの導入には、エレクトロポレーション法[日本国特開平2-257891号公報、Cytotechnology, 3, 133 (1990)]などを用いる。
精製した本発明のモノクローナル抗体またはその抗体断片の活性評価は、以下のように行うことができる。
本発明のモノクローナル抗体のエフェクター活性を制御する方法としては、抗体のFc領域の297番目のアスパラギン(Asn)に結合するN結合複合型糖鎖の還元末端に存在するN-アセチルグルコサミン(GlcNAc)にα1,6結合するフコース(コアフコースともいう)の量を制御する方法(国際公開第2005/035586号、国際公開第2002/31140号、国際公開第00/61739号)、又は抗体のFc領域のアミノ酸残基を改変することで制御する方法などが知られている。本発明のモノクローナル抗体にはいずれの方法を用いても、エフェクター活性を制御することができる。
本発明のモノクローナル抗体またはその抗体断片は、ヒトCCR1依存的な細胞遊走、病変などCCR1が関連する疾患であれば、いずれのヒトCCR1関連疾患の治療に用いることができる。
本発明のモノクローナル抗体または該抗体断片を用いて、ヒトCCR1またはヒトCCR1が発現した細胞を検出または測定することにより、ヒトCCR1関連疾患を診断することができる。
(1)各CCR1遺伝子の作製
下記、1~7のヒトまたはマウスのCCR1若しくはCCR1-CCR3キメラ受容体をコードするDNAを合成した(ジェンスクリプトジャパン社)。合成の際には各ベクターに組み込むための制限酵素サイト(BamHIおよびNotI)と、Kozak配列を付加した。
1.ヒトCCR1(以下、hCCR1)をコードするcDNA配列(配列番号1)
2.マウスCCR1(以下、mCCR1)をコードするcDNA配列(配列番号3)
3.ヒトCCR3(以下、hCCR3)をコードするcDNA配列(配列番号5)
4.ヒトCCR1の1番目から31番目のアミノ酸配列をヒトCCR3の対応するN末端のアミノ酸配列に置換したキメラ受容体(以下、NC3-hCCR1)をコードするcDNA配列(配列番号6)
5.マウスCCR1の1番目から31番目のアミノ酸配列をヒトCCR3の対応するN末端のアミノ酸配列に置換したキメラ受容体(以下、NC3-mCCR1)をコードするcDNA配列(配列番号7)
6.ヒトCCR3の171番目から194番目のアミノ酸配列をヒトCCR1の171番目から194番目のアミノ酸配列に置換したキメラ受容体(以下、hCCR3_EL2hCCR1)をコードするcDNA配列(配列番号8)
7.ヒトCCR3の171番目から194番目のアミノ酸配列をマウスCCR1の171番目から194番目のアミノ酸配列に置換したキメラ受容体(以下、hCCR3_EL2mCCR1)をコードするcDNA配列(配列番号9)
上記(1)-1で合成したhCCR1をコードするDNAを制限酵素BamHIおよびNotI(New England Biolab社)で処理し、DNA断片を精製した。Tol2トランスポゾンベクター(国際公開第2010/143698号)(以下、Tn-pMug-Hygroと記載する)を同制限酵素で処理し、CCR1をコードするDNA断片と混ぜたうえで、DNA ligase(タカラバイオ社)処理によって連結した。ライゲーション後のDNAを大腸菌コンピテントセル(タカラバイオ社)に導入し、薬剤耐性を獲得したコロニーの中から目的のプラスミドDNAを持つ大腸菌株を選択した。この大腸菌株を再度培養し、培養液からトランスフェクション用のDNAを精製した。(以下、このように作製したプラスミドをhCCR1/Tn-pMug-Hygroと表わす。)
上記(2)と同様の方法で、上記(1)で合成したmCCR1、hCCR3、NC3-hCCR1、NC3-mCCR1、hCCR3_EL2hCCR1、hCCR3_EL2mCCR1をTn-pMug-Hygroに連結させ、発現ベクターを構築した。(以下、それぞれmCCR1/Tn-pMug-Hygro、hCCR3/Tn-pMug-Hygro、NC3-hCCR1/Tn-pMug-Hygro、NC3-mCCR1/Tn-pMug-Hygro、hCCR3_EL2hCCR1/Tn-pMug-Hygro、hCCR3_EL2mCCR1/Tn-pMug-Hygroと表わす。)
上記(2)と同様の方法で、上記(1)で合成したmCCR1をコードするDNAを、pCAGGS[Gene. 1991 Dec 15;108(2):193-9.]にinternal ribosomal entry site(IRES)とネオマイシン耐性遺伝子が付加されたベクターであるpCAG-IRES-neoに連結させ、発現ベクターを構築した。(以下、mCCR1/pCAG-IRES-neoと表わす。)
(1)hCCR1発現細胞の作製
実施例1で作製したプラスミドDNAであるhCCR1/Tn-pMug-HygroとTol2 transposase発現ベクターTPEX_pMug(国際公開第2013/005649号)をCHO-S(Thermo Fisher Scientific社)に共導入し、発現細胞株を作製した。遺伝子導入はFugene HD(プロメガ社)を用いて下記のように行った。1×105細胞/mLに調製した細胞を6ウェルプレートに2.5mLずつ播種し、24時間後に、hCCR1/Tn-pMug-Hygro、TPEX_pMug、Fugene HDの混合物を培養液に添加した。添加後72時間後に1mg/mLのハイグロマイシン(Invitrogen社)を添加し、約2週間の薬剤選択を行った。薬剤耐性を獲得した細胞を回収し、フローサイトメトリー(FACS Calibur、BD Biosciences社)による発現解析を行ったところ、導入したhCCR1の発現が確認された。この細胞株をCHO-S-hCCR1と表わす。
実施例1で作製したmCCR1/Tn-pMug-Hygro、hCCR3/Tn-pMug-Hygro、NC3-hCCR1/Tn-pMug-Hygro、NC3-mCCR1/Tn-pMug-Hygro、hCCR3_EL2hCCR1/Tn-pMug-HygroおよびhCCR3_EL2mCCR1/Tn-pMug-Hygroについて、上記(1)と同様の方法でCHO-S細胞に導入し、発現細胞株を作製した。以下、これらの細胞株をそれぞれCHO-S-mCCR1、CHO-S-hCCR3、CHO-S-NC3-hCCR1、CHO-S-NC3-mCCR1、CHO-S-hCCR3_EL2hCCR1およびCHO-S-hCCR3_EL2mCCR1と表わす。
実施例1で作製したhCCR1/Tn-pMug-HygroとTol2 transposase発現ベクターTPEX_pMug(国際公開第2013/005649号)をウサギ細胞株RL-33[Yoshii et al., Jpn J Med Sci Biol. 1977 Jun;30(3):149-57]に共導入し、hCCR1発現細胞株を作製した。遺伝子導入はLipofectamine LTX(Thermo Fisher Scientific社)を使用し、以下のように行った。1×105細胞/mLに調製した細胞を6ウェルプレートに2mLずつ播種し、2.5μgのプラスミドDNA、5μLのLipofectamine LTXの混合物を培地中に添加した。添加後72時間後に1mg/mLのハイグロマイシンを添加し、約2週間の薬剤選択を行った。薬剤耐性を獲得した細胞を回収し、フローサイトメトリーによる発現解析を行ったところ、導入したhCCR1の発現が確認された。以下、この細胞株をRL33-hCCR1と表わす。
実施例1(4)で作製したmCCR1/pCAG-IRES-neoを上記(3)と同様の方法でRL-33に導入し、発現細胞株を作製した。薬剤選択は0.5mg/mLのG418で行った。以下、この細胞株をRL33-mCCR1と表わす。
以下の方法で抗CCR1ウサギポリクローナル抗体を作製した。ヒトCCR1のN末端ペプチド(配列番号10)を合成し、2匹のウサギ(New Zealand White)を2週おきに5回免疫した。免疫は、初回のみComplete Freund’s Adjuvant(CFA)を用い、二回目以降はIncomplete Freund’s Adjuvant(IFA)を使用し、背部の複数個所に皮下注入で行った。免疫後に抗体価の上昇した個体から血清を採取し、Protein Aカラム(GE Healthcare社)によるアフィニティ精製でIgGを精製した。このようにして作製した抗CCR1ウサギポリクローナル抗体はE5971と表わす。
(1)CCR1発現の確認
実施例2で作製したCCR1発現細胞株について、実施例3で作製した抗CCR1ウサギポリクローナル抗体E5971を用いて染色し、フローサイトメトリー(FCM)でCCR1の発現を確認した。FCM解析は以下のように行った。細胞を96ウェルプレートに2×105細胞/ウェルで播種し、染色バッファー[3%FBS(Thermo Fisher Scientific社)/DPBS(ナカライテスク社)/0.1%アジ化ナトリウム(ナカライテスク社)]で洗浄した。該細胞を10μg/mLのE5971によって1時間氷上で処理し、染色バッファーによる洗浄後、二次抗体Alexa Fluor 647 goat Anti-Rabbit IgG(Thermo Fisher Scientific社製)を終濃度1μg/mLで添加し、室温にて30分間処理した。該細胞について、再度染色バッファーによる洗浄を行った後に、染色バッファーにて懸濁し、BD FACSCalibur(BD Biosciences社)を用いて解析を行った。これにより、作製したCCR1発現細胞株について、導入したCCR1が発現していることを確認できた。
実施例2で作製したCHO-S-hCCR3についても、上記(1)と同様の方法でCCR3の発現を確認した。一次抗体には、市販の抗CCR3抗体である444-11抗体(MBL社)を、二次抗体にはAlexa Fluor 647 goat Anti-mouseIgG(H+L)(Thermo Fisher Scientific社)を使用した。これにより、CHO-S-hCCR3で導入したCCR3が発現していることを確認できた。
マウス交差性抗体を得るため、市販のCCR1ノックアウト(KO)マウス(B6.129S4-Ccr1tm1Gao N10+N5)(Taconic社)を用いてモノクローナル抗体を作製した。抗体作製は以下の手順で行った。
免疫原として、実施例2で作製したCHO-S-hCCR1、CHO-S-mCCR1、RL33-hCCR1、およびRL33-mCCR1を用いた。一回の免疫あたり1×107細胞/匹を用いた。5~9週齢のCCR1 KO マウスに、初回免疫時のみアジュバントとしてAlumゲル(エル・エス・エル社)(80μL/匹)及び百日咳ワクチン(ナカライテスク社)(1×107細胞/匹)を加え腹腔内投与により免疫感作を行った。いずれの免疫も投与量が500μL/匹になるようにPBSで調製した。初回免疫2週間後に2回目、さらに1週間後に3回目の免疫を行い、3日後に部分採血を行った。
実施例2で作製した各種CCR1発現細胞を用いて、血清中の特異的抗体価をFCMで測定した。測定は以下の手順で行った。細胞をそれぞれ1×105細胞/ウェルになるように、1%BSA(ナカライテスク社)-PBS(ナカライテスク社)[0.02%EDTA(ナカライテスク社)、0.05%NaN3(ナカライテスク社)を含む]で調製し、96ウェル細胞培養用プレートU底に50μL/ウェルで分注した。そこへ被験サンプルとして被免疫動物から採取した血清を、終濃度200倍希釈、1000倍希釈、及び5000倍希釈になるように1%BSA-PBS(0.02%EDTA、0.05%NaN3)で調製し50μL/ウェルで分注し、4℃で30分間放置した。遠心分離(2000rpm、2分間)した後に上清を吸引し、プレートシェーカーで細胞のペレットを解した。1%BSA-PBS(0.02%EDTA、0.05%NaN3)を200μL/ウェルで分注し、再度遠心分離(2000rpm、2分間)した後に上清を吸引し、プレートシェーカーで細胞のペレットを解した。そこへAlexa Fluor647 goat anti-mouse IgG(H+L)、若しくはAlexa Fluor488 goat anti-mouse IgG(H+L)を最終的に300倍希釈になるように1%BSA-PBS(0.02%EDTA、0.05%NaN3)で調製し、50μL/ウェルで分注し遮光下4℃で30分間放置した。遠心分離(2000rpm、2分間)した後に上清を吸引し、プレートシェーカーで細胞のペレットを解した。1%BSA-PBS(0.02%EDTA、0.05%NaN3)を200μL/ウェルで分注し、再度遠心分離(2000rpm、2分間)した後に上清を吸引し、プレートシェーカーで細胞のペレットを解した。そこへ1%BSA-PBS(0.02%EDTA、0.05%NaN3)を50μL/ウェルで分注し、フローサイトメーター[FACSCanto(商標)II/BD]で蛍光強度を測定した。これにより、抗体価の上昇が確認された個体を選択し、脾臓を摘出した。
マウスミエローマ細胞株 P3-U1(P3X63Ag8U.1、ATCC CRL-1597)をエスクロンクローニングメディウム(エーディア社)で培養して無血清馴化したのち、細胞融合の親株として用いた。被免疫動物の脾臓を無菌的に採取しRED BLOOD CELL LYSING BUFFER(Sigma-Aldrich社)で溶血後、PBSで2回洗浄し、脾細胞とP3-U1の細胞数が、脾臓細胞:P3-U1=8:1になるよう混合し、遠心分離(1200rpm、5分間)した。得られた沈澱画分の細胞群をよくほぐした後、攪拌しながら37℃にて1gのポリエチレングリコール-1000(PEG-1000、純正化学社)、1mLのMEM培地(ナカライテスク社)および0.35mLのジメチルスルホキシド(Sigma-Aldrich社)の混液を0.5mL加え、そこに1分間毎に1mLのMEM培地を5回加えた後、MEM培地を加えて全量が50mLになるようにした。細胞懸濁液を遠心分離(900rpm、5分間)し、得られた沈澱画分の細胞をゆるやかにほぐした後、HAT SUPPLEMENT(Thermo Fisher Scientific社)を添加したエスクロンクローニングメディウムで脾臓細胞1.5×107細胞/9mLの細胞濃度に懸濁した。事前に96ウェル培養用プレートにはHAT添加クローニングメディウムを100μL/ウェルで分注しておき、そこへ細胞懸濁液を100μL/ウェルずつ分注し、CO2インキュベーター(5%CO2、37℃)で8~10日間培養した。
ハイブリドーマ培養上清に含まれる抗体のCCR1への結合活性をFCMで評価した。被験サンプルにはハイブリドーマ培養上清を使用し、染色と測定は上記(2)と同様の手順で実施した。
スクリーニングで陽性であったウェルの細胞についてサブクローニングを行い、クローニングメディウム中で7~10日ほど培養した。
サブクラス特異的な二次抗体を用いたFCMで各抗体のサブクラスを決定した。染色、測定の手順は上記(2)と同様に行った。被験サンプルにはハイブリドーマ培養上清を使用した。検出抗体にはAlexa Fluor488 goat anti-mouse IgG(H+L)(Thermo Fisher Scientific社)及び、各サブクラス特異的な抗体(Alexa Fluor488 goat anti-mouse IgG1(Thermo Fisher Scientific社)、Alexa Fluor488 goat anti-mouse IgG2a(Thermo Fisher Scientific社)、 Alexa Fluor488 goat anti-mouse IgG2b(Thermo Fisher Scientific社)、Alexa Fluor488 goat anti-mouse IgG3)(Thermo Fisher Scientific社)を使用した。
上記のようにクローニングしたハイブリドーマの培養上清から抗体を精製した。精製はProtein G Sepharose 4Fast Flow(GE Healthcare社)を使用した。培養上清を遠心分離して沈殿物を除き、フィルターでろ過した。カラムに400μLの担体を充填し、DPBSでバッファーを置換した。培養上清を添加し、単体に抗体を吸着させた後に、10mLのDPBSで2回洗浄した。0.4mLのIgG Elution Buffer(Thermo Fisher Scientific社)を添加して溶出し、直後に0.1mLの1M Tris-HCl(ニッポンジーン社)pH8.6にて中和した。NAPカラム(GE Healthcare社)を用いて脱塩とDPBSへのバッファー置換を行い、以降の解析に使用した。作製された抗体のクローン名、由来、およびサブクラスを表1に示す。
CCR1を発現するヒト細胞株としてはヒト単球性白血病細胞株THP-1が知られている。本細胞はCCL3、CCL5、CCL15またはCCL23等のCCR1リガンドの濃度勾配に対して走化性を示すことが知られており、THP-1を用いた遊走アッセイはCCR1阻害剤の評価系として汎用される系である。よって、実施例5で得られた抗ヒトCCR1抗体についても、この実験系を用いてヒトCCL15によるヒトCCR1の活性化を阻害するか否かを評価した。
実施例5で得られたマウス抗ヒトCCR1モノクローナル抗体のヒトCCR1の結合領域を、CCR1-CCR3キメラ受容体発現細胞を用いてFCMで調べた。測定は実施例4と同様の方法で行った。
(1)既存のマウス抗ヒトCCR1モノクローナル抗体2D4抗体の調製
既存の抗ヒトCCR1抗体である2D4抗体(米国特許第6,756,035号明細書)を産生するハイブリドーマ(LS-125-2D4-11-10-1)をATCCより入手した。本ハイブリドーマをHybridoma-SFM(Thermo Fisher Scientific社)を用いて培養し、培養上清から抗体を精製した。精製はProtein G Sepharose 4Fast Flow(GE Healthcare社)を使用した。培養上清を遠心分離して、得られた培養上清をフィルターでろ過した。カラムに400μLの担体を充填し、DPBSでバッファーを置換した。該カラムに該培養上清を添加し、担体に抗体を吸着させた後に、10mLのDPBSで2回洗浄した。該カラムに0.4mLのIgG Elution Buffer(Thermo Scientific社)を添加して抗体を溶出させ、すぐに0.1mLの1M Tris-Cl(ナカライテスク社)pH8.6にて抗体溶液を中和した。NAPカラム(GE Healthcare社)を用いて該抗体溶液の脱塩とDPBSへのバッファー置換を行い、以降の解析に使用した。
既存の抗ヒトCCR1抗体と、実施例5で得られたマウス抗ヒトCCR1抗体モノクローナル抗体KM5908抗体およびKM5916抗体について、実施例6に記載した方法に準じてヒトCCR1の活性化を阻害する活性を測定し、得られた結果を抗体毎に比較した。
(1)抗体可変領域遺伝子のクローニングと配列決定
実施例5でクローニングしたハイブリドーマからTrizol(Life Technologies社)を用いてトータルRNAを抽出し、5’-RACE法により抗体遺伝子を増幅させた。RACE用cDNAの合成にはSMARTer RACE Kit(Clontech社)を用いた。RACE用cDNA合成過程で付加される配列に特異的なプライマーと、マウスIg gamma鎖またはkappa鎖増幅用プライマー(配列番号11-14)を用いたPCRによって抗体可変領域断片を増幅させ、クローニングして該DNA断片の塩基配列を確認した。
実施例5で作製した各抗ヒトCCR1抗体について、定常領域をS228P、L235EおよびR409Kのアミノ酸改変を含むヒトIgG4定常領域(ヒトIgG4PE_R409K)に置換したキメラ抗体を以下に記載する方法で作製した。(1)で作製した各抗体の可変領域のアミノ酸配列をコードする塩基配列がクローニングされたプラスミドDNAを鋳型として、相同組換え用の塩基配列を付加したプライマーを用いたPCRで各抗体の可変領域のアミノ酸配列をコードする塩基配列を増幅させた。In-Fusion HD Cloning Kit(Clontech社)を使用して、該塩基配列を、N5KG4PE R409Kベクター[N5KG1ベクター(米国特許第6,001,358号明細書)中のヒトIgG1の定常領域をコードする塩基配列を、上記のアミノ酸改変を含む変異ヒトIgG4の定常領域をコードする塩基配列に置換したベクター(以下N5KG4PE R409Kベクターと記載する)]に連結させ、キメラ抗体の発現ベクターを作製した。実験の手順はキットに付属のマニュアルに従った。
(2)で作製した発現ベクターおよびExpi293 Expression System(Life Technologies社)を使用して、キメラ抗体を産生した。手順は付属マニュアルに従い以下のように行った。Expi293F細胞(Thermo Fisher Scientific社)を2×106細胞/mLの密度で37℃、24時間培養し、その後、1反応あたり1.25×108細胞を、42.5mLのExpi293 Expression Medium(Thermo Fisher Scientific社)に加えた。Opti-MEM(Thermo Fisher Scientific社)に50μgのプラスミドDNAとExpiFectamin 293 Reagent(Thermo Fisher Scientific社)を添加し、30分間静置した後に、該プラスミド溶液を上記の細胞液に添加した。さらに一晩の培養後に、該細胞液にExpiFectamin 293 Transfection Enhancerを添加した(培養ボリュームはトータルで50mL)。該細胞液を7~10日間培養した後に、培養上清を回収した。
実施例9で作製したキメラ抗体chKM5907抗体、chKM5908抗体、chKM5909抗体、chKM5911抗体、chKM5915抗体、chKM5916抗体、chKM5954抗体、chKM5955抗体およびchKM5956抗体について、ヒトおよびマウスCCR1への結合性を実施例4に記載する方法に準じてFCMで測定した。ヒトCCR1発現細胞およびマウスCCR1発現細胞としては、それぞれ実施例2で作製したCHO-S-hCCR1、CHO-S-mCCR1を使用した。その結果、chKM5955抗体は、ヒトCCR1に結合することが示された。その他のキメラ抗体は、ヒトおよびマウスCCR1の両方に結合することが示された。
実施例9で作製したキメラ抗体chKM5907抗体、chKM5908抗体、chKM5909抗体、chKM5911抗体、chKM5915抗体、chKM5916抗体、chKM5954抗体、chKM5955抗体およびchKM5956抗体について、実施例6に記載する方法に準じて、ヒトCCR1活性化を阻害する活性測定した。その結果、いずれのキメラ抗体も、活性化ヒトCCL15によるTHP-1の遊走を阻害することが示された。
chKM5908抗体のさらなる改良のため、chKM5908抗体のVLを他の抗CCR1キメラ抗体のVLと置換した抗体の作製を検討した。置換するVLとして、実施例5に記載の方法で取得されたマウス抗ヒトCCR1抗体をもとに、実施例10に記載の方法で作製されたキメラ抗体のVLを複数種類検討した。このうち、THP-1遊走活性等の基準で選抜された、VLがchKM5914抗体のものに置換されたchKM5908抗体改変体の作製について以下に記載する。
置換されるchKM5914のVLは、chKM5908のVLのアミノ酸配列との相同性が高いため選択された。chKM5914抗体のVLのアミノ酸配列をコードする塩基配列、該塩基配列から推定される、シグナル配列を含むアミノ酸配列および該アミノ酸配列からシグナル配列を除いたアミノ酸配列をそれぞれ配列番号123、124および125に示す。また、chKM5914抗体のVLのCDR1~3のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号126~128に示す。
chKM5914抗体のVL可変領域のアミノ酸配列をコードする塩基配列がクローニングされたプラスミドDNAを鋳型として、相同組換え用の塩基配列を付加したプライマーを用いたPCRで各抗体のVL可変領域のアミノ酸配列をコードする塩基配列を増幅させた。chKM5908 VH可変領域についても同様に増幅させた。In-Fusion HD Cloning Kit(Clontech社)を使用して、該塩基配列を、N5hKベクター(L鎖用発現ベクター)またはN5hG4PE_R409Kベクター(H鎖用発現ベクター)に連結させ、キメラ抗体の発現ベクターを作製した。実験の手順はキットに付属のマニュアルに従った。大腸菌DH5αコンピテントセル(タカラバイオ社)を形質転換して、得られたプラスミドのシーケンスを確認した。正しい塩基配列が挿入されたプラスミドを産生する大腸菌のコロニーを選抜し、NucleoBond Xtra Midi EFキット(タカラバイオ社)を用いてプラスミドを調製した。
目的のVL置換キメラ抗体を、Expi293 Expression System Kit(Life Technologies社)を使用して一過性に発現させた。プラスミドの導入の方法は添付書類に従った。軽鎖の発現ベクターと重鎖の発現ベクターは、1:2の比率で混合して導入した。プラスミド導入後の細胞を、120mLの培養液中で、37℃、5% CO2、125rpmの条件下で、3日間培養した。その後、細胞培養懸濁液の遠心分離を行い、0.2μmフィルター(Thermo Scientific社)を通して培養上清を回収した。培養上清からMabSelect SuRe(GE Healthcare社)を用いたアフィニティ精製により、精製抗体を取得した。
実施例2で作製したCHO-S-hCCR1細胞を用いたフローサイトメトリーにより、VL置換キメラ抗体であるchKM5908’抗体の抗原結合活性を測定した。細胞を遠心分離して集めて上清を除き、2%ウシ胎児血清(FBS)、0.05% NaN3及び1mM EDTAを含むPBS(Staining Medium、以下SMと略記する)で懸濁した。次に、細胞数を1ウェルあたり1×105個となるように96ウェルプレートに播種し、10000,2000,400,80,16および3.2ng/mLの各最終濃度のchKM5908’抗体を添加し、4℃で60分間の反応を行った。細胞をSMで洗浄した後、SMで500倍に希釈したGoat F(ab’)2 Anti-Human IgG PE(γchain specific)(Southern Biotech社)を添加し、4℃で60分間の反応を行った。SMで細胞を洗浄した後、細胞を50μLのSMで再懸濁し、蛍光強度をフローサイトメトリー(FACS CantoII、BDバイオサイエンス社)で測定した。
(1)CDRのアミノ酸を改変したキメラ抗体改変体の作製と評価
chKM5908’抗体を基にして更にCDR改変を行うことを試みた。設計したchKM5908 VHの改変VHを表5に示す。また設計したchKM5914 VLの改変VLを表6に示す。さらに、これらを組み合わせたCDR改変キメラ抗体改変体を表7に示す。
(1)mAb5-06ヒト化抗体のVLおよびVHのアミノ酸配列の設計
以下に記載する方法で、mAb5-06ヒト化抗体の各種VLおよびVHのアミノ酸配列を設計した。以降の記述では様々なVL、VHのアミノ酸配列を有するmAb5-06ヒト化抗体の総称として、hzmAb5-06抗体と記載する。VLおよびVHのそれぞれについて、mAb5-06抗体のFRのアミノ酸配列と、Kabatら[Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services(1991)]で報告されているヒトFRコンセンサス配列との相同性を比較した。その結果、human subgroup L chain II(hSGLII)およびhuman subgroup H chain II(hSGHII)が、それぞれmAb5-06抗体のVLおよびVHのFRのアミノ酸配列と最も相同性が高かった。
実施例15-(4)で設計した塩基配列を、実施例12-(2)に示した方法を用いて発現ベクターに導入して必要なプラスミドを作製した。但し、VL発現ベクターとしてはシグナル配列およびヒトκ鎖定常領域配列を有したpCI-OtCMV_hKベクターを、VH発現ベクターとしてはシグナル配列およびヒトγ鎖定常領域配列を有したpCI-OtCAG_hG4PE(R409K)ベクターを用いた。
配列番号7-人工配列の説明:NC3-mCCR1の塩基配列
配列番号8-人工配列の説明:hCCR3_EL2hCCR1の塩基配列
配列番号9-人工配列の説明:hCCR3_EL2mCCR1の塩基配列
配列番号10-人工配列の説明:N末端hCCR1 peptideのアミノ酸配列
配列番号11-人工配列の説明:プライマー_mouse_gamma_r1の塩基配列
配列番号12-人工配列の説明:プライマー_mouse_gamma_r2の塩基配列
配列番号13-人工配列の説明:プライマー_mouse_kappa_r1の塩基配列
配列番号14-人工配列の説明:プライマー_mouse_kappa_r2の塩基配列
配列番号51-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5907 VHのアミノ酸配列
配列番号52-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5907 VLのアミノ酸配列
配列番号53-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5908 VHのアミノ酸配列
配列番号54-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5908 VLのアミノ酸配列
配列番号55-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5909 VHのアミノ酸配列
配列番号56-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5909 VLのアミノ酸配列
配列番号57-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5911 VHのアミノ酸配列
配列番号58-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5911 VLのアミノ酸配列
配列番号59-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5915 VHのアミノ酸配列
配列番号60-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5915 VLのアミノ酸配列
配列番号61-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5916 VHのアミノ酸配列
配列番号62-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5916 VLのアミノ酸配列
配列番号63-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5954 VHのアミノ酸配列
配列番号64-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5954 VLのアミノ酸配列
配列番号65-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5955 VHのアミノ酸配列
配列番号66-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5955 VLのアミノ酸配列
配列番号67-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5956 VHのアミノ酸配列
配列番号68-人工配列の説明:シグナル配列を除いたKM5956 VLのアミノ酸配列
配列番号69-人工配列の説明:KM5907 VH CDR1のアミノ酸配列配列番号70-人工配列の説明:KM5907 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号71-人工配列の説明:KM5907 VH CDR3のアミノ酸配列
配列番号72-人工配列の説明:KM5907 VL CDR1のアミノ酸配列
配列番号73-人工配列の説明:KM5907 VL CDR2のアミノ酸配列
配列番号74-人工配列の説明:KM5907 VL CDR3のアミノ酸配列
配列番号75-人工配列の説明:KM5908 VH CDR1のアミノ酸配列
配列番号76-人工配列の説明:KM5908 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号77-人工配列の説明:KM5908 VH CDR3のアミノ酸配列
配列番号78-人工配列の説明:KM5908 VL CDR1のアミノ酸配列
配列番号79-人工配列の説明:KM5908 VL CDR2のアミノ酸配列
配列番号80-人工配列の説明:KM5908 VL CDR3のアミノ酸配列
配列番号81-人工配列の説明:KM5909 VH CDR1のアミノ酸配列
配列番号82-人工配列の説明:KM5909 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号83-人工配列の説明:KM5909 VH CDR3のアミノ酸配列
配列番号84-人工配列の説明:KM5909 VL CDR1のアミノ酸配列
配列番号85-人工配列の説明:KM5909 VL CDR2のアミノ酸配列
配列番号86-人工配列の説明:KM5909 VL CDR3のアミノ酸配列
配列番号87-人工配列の説明:KM5911 VH CDR1のアミノ酸配列
配列番号88-人工配列の説明:KM5911 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号89-人工配列の説明:KM5911 VH CDR3のアミノ酸配列
配列番号90-人工配列の説明:KM5911 VL CDR1のアミノ酸配列
配列番号91-人工配列の説明:KM5911 VL CDR2のアミノ酸配列
配列番号92-人工配列の説明:KM5911 VL CDR3のアミノ酸配列
配列番号93-人工配列の説明:KM5915 VH CDR1のアミノ酸配列
配列番号94-人工配列の説明:KM5915 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号95-人工配列の説明:KM5915 VH CDR3のアミノ酸配列
配列番号96-人工配列の説明:KM5915 VL CDR1のアミノ酸配列
配列番号97-人工配列の説明:KM5915 VL CDR2のアミノ酸配列
配列番号98-人工配列の説明:KM5915 VL CDR3のアミノ酸配列
配列番号99-人工配列の説明:KM5916 VH CDR1のアミノ酸配列
配列番号100-人工配列の説明:KM5916 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号101-人工配列の説明:KM5916 VH CDR3のアミノ酸配列
配列番号102-人工配列の説明:KM5916 VL CDR1のアミノ酸配列
配列番号103-人工配列の説明:KM5916 VL CDR2のアミノ酸配列
配列番号104-人工配列の説明:KM5916 VL CDR3のアミノ酸配列
配列番号105-人工配列の説明:KM5954 VH CDR1のアミノ酸配列
配列番号106-人工配列の説明:KM5954 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号107-人工配列の説明:KM5954 VH CDR3のアミノ酸配列
配列番号108-人工配列の説明:KM5954 VL CDR1のアミノ酸配列
配列番号109-人工配列の説明:KM5954 VL CDR2のアミノ酸配列
配列番号110-人工配列の説明:KM5954 VL CDR3のアミノ酸配列
配列番号111-人工配列の説明:KM5955 VH CDR1のアミノ酸配列
配列番号112-人工配列の説明:KM5955 VH CDR2のアミノ酸配列
配列番号113-人工配列の説明:KM5955 VH CDR3のアミノ酸配列
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Claims (24)
- ヒトCCケモカイン受容体1(CC chemokine receptor 1;以下CCR1と略記する)の細胞外領域に結合し、ヒトCC chemokine ligand(以下、CCLと略記する)15によるヒトCCR1の活性化を阻害するモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片であって、モノクローナル抗体が、下記(a)~(k)から選ばれるいずれか一つの抗体である、モノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
(a)VHが配列番号51に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号52に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号53に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号54に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号55に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号56に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号57に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号58に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号59に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号60に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号61に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号62に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHが配列番号63に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号64に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHが配列番号65に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号66に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(i)VHが配列番号67に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号68に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(j)VHが配列番号130に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号133に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(k)VHが配列番号53に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号125に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。 - ヒトCCR1の細胞外領域に結合しCCL15によるヒトCCR1の活性化を阻害するモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片であって、モノクローナル抗体が、下記(a)~(c)から選ばれるいずれか一つの抗体である、モノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
(a)VHが配列番号136に記載されるアミノ酸配列または配列番号136に記載されるアミノ酸配列中の6番目のGluをGlnに、20番目のLeuをIleに、27番目のGlyをPheに、29番目のValをLeuに、30番目のSerをAsnに、37番目のIleをValに、48番目のIleをLeuに、67番目のValをLeuに、71番目のValをLysに、73番目のThrをAspに、76番目のAsnをSerに、78番目のPheをValに、80番目のLeuをPheに、82番目のLeuをMetに、85番目のValをLeuに、92番目のValをIleに、および97番目のArgをLysに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号135に記載されるアミノ酸配列または配列番号135に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをValに、15番目のProをLeuに、50番目のGlnをLysに、92番目のTyrをPheに、および109番目のValをLeuに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列または配列番号146に記載されるアミノ酸配列中の4番目のLeuをValに、44番目のGlyをArgに、49番目のSerをAlaに、92番目のAlaをGlyに、93番目のValをMetに、97番目のAlaをThrに、および98番目のLysをArgに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列または配列番号145に記載されるアミノ酸配列中の2番目のIleをValに、15番目のSerをLeuに、19番目のAlaをValに、43番目のGlnをLysに、50番目のGlnをLysに、および109番目のValをLeuに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列または配列番号163に記載されるアミノ酸配列中の42番目のAspをGluに、87番目のLysをArgに、および97番目のAlaをThrに置換するアミノ酸改変のいずれか1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列または配列番号162に記載されるアミノ酸配列中の38番目のGlnをHisに、および43番目のAlaをGlyに置換するアミノ酸改変のうち、少なくとも1つの改変が導入されたアミノ酸配列を含む抗体。 - モノクローナル抗体が、下記(a)~(h)から選ばれるいずれか一つの抗体である、請求項2に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
(a)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号135に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号137に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号138に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号139に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号140に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号141に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHが配列番号144に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号142に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHが配列番号143に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号142に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。 - モノクローナル抗体が、下記(a)~(w)から選ばれるいずれか一つの抗体である、請求項2に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
(a)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号147に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号148に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号149に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号150に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(g)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号152に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(h)VHが配列番号146に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号153に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(i)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号145に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(j)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号147に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(k)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号148に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(l)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号149に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(m)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号150に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(n)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(o)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号152に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(p)VHが配列番号161に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号153に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(q)VHが配列番号154に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(r)VHが配列番号155に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(s)VHが配列番号156に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(t)VHが配列番号157に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(u)VHが配列番号158に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(v)VHが配列番号159に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(w)VHが配列番号160に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号151に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。 - モノクローナル抗体が、下記(a)~(f)から選ばれるいずれか一つの抗体である、請求項2に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
(a)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(b)VHが配列番号163に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(c)VHが配列番号165に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(d)VHが配列番号165に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(e)VHが配列番号166に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号162に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。
(f)VHが配列番号166に記載されるアミノ酸配列を含み、かつVLが配列番号164に記載されるアミノ酸配列を含む抗体。 - モノクローナル抗体が遺伝子組換え抗体である請求項1~5のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
- 遺伝子組換え抗体が、ヒト型キメラ抗体およびヒト化抗体から選ばれる1の遺伝子組換え抗体である、請求項6に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
- 抗体断片が、Fab、Fab’、(Fab’)2、一本鎖抗体(scFv)、二量体化V領域(diabody)およびジスルフィド安定化V領域(dsFv)から選ばれる1の抗体断片である、請求項1~7のいずれか1項に記載の抗体断片。
- 請求項1~5のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
- 請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片をコードする塩基配列を有する核酸。
- 請求項10に記載の核酸を含むベクターを含む形質転換細胞。
- 請求項9に記載のハイブリドーマまたは請求項11に記載の形質転換細胞を培養し、培養液から請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片を採取することを含む、請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片の製造方法。
- 請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片を含む、ヒトCCR1の検出または測定用試薬。
- 請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片を含む、ヒトCCR1関連疾患の診断薬。
- ヒトCCR1関連疾患が、癌、自己免疫疾患または炎症性疾患である、請求項14に記載の診断薬。
- 請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片を有効成分として含有する、ヒトCCR1関連疾患の治療薬。
- ヒトCCR1関連疾患が、癌、自己免疫疾患または炎症性疾患である、請求項16に記載の治療薬。
- ヒトCCR1関連疾患の診断薬を製造するための、請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片の使用。
- ヒトCCR1関連疾患の治療薬を製造するための、請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片の使用。
- ヒトCCR1関連疾患の治療薬としての使用のための請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
- ヒトCCR1関連疾患の診断薬としての使用のための請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片。
- 請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片に、放射性同位元素、低分子の薬剤、高分子の薬剤、タンパク質または抗体医薬を結合させた抗体の誘導体。
- 請求項1~8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗原結合性を有する該抗体断片に、低分子の薬剤を結合させた抗体の誘導体。
- 低分子の薬剤が、アミフォスチン(エチオール)、シスプラチン、ダカルバジン(DTIC)、ダクチノマイシン、メクロレタミン(ナイトロジェンマスタード)、ストレプトゾシン、シクロフォスファミド、イホスファミド、カルムスチン(BCNU)、ロムスチン(CCNU)、ドキソルビシン(アドリアマイシン)、エピルビシン、ゲムシタビン(ゲムザール)、ダウノルビシン、プロカルバジン、マイトマイシン、シタラビン、エトポシド、メトトレキセート、フルオロウラシル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ダウノマイシン、ペプロマイシン、エストラムスチン、パクリタキセル(タキソール)、ドセタキセル(タキソテア)、アルデスロイキン、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボブラチン、オキサリブラチン、ネダプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、10-ヒドロキシ-7-エチルーカンプトテシン(SN38)、フロクスウリジン、フルダラビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、メスナ、イリノテカン(CPT-11)、ノギテカン、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパラガーゼ、ペントスタチン、ピポプロマン、タモキシフェン、ゴセレリン、リユープロレニン、フルタミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシル、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ビンデシン、ニムスチン、セムスチン、カペシタビン、トムデックス、アザシチジン、UFT、オキザロブラチン、ゲフィチニブ(イレッサ)、イマチニブ(STI571)、エルロチニブ、FMS-like tyrosine kinase3 (Flt3)阻害剤、vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR)阻害剤、fibroblast growth factor receptor (FGFR)阻害剤、epidermal growth factor receptor(EGFR)阻害剤、ラディシコール、17-アリルアミノ-17-デメトキシゲルダナマイシン、ラパマイシン、アムサクリン、オール-トランスレチノイン酸、サリドマイド、レナリドマイド、アナストロゾール、ファドロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、金チオマレート、ブシラミン、アザチオプリン、ミゾリビン、シクロスポリン、ヒドロコルチゾン、ベキサロテン(ターグレチン)、デキサメタゾン、プロゲスチン類、エストロゲン類、アナストロゾール(アリミデックス)、アスピリン、インドメタシン、セレコキシブ、ペニシラミン、マレイン酸クロルフェニラミン、クロロフェニラミン、クレマシチン、トレチノイン、砒素、ボルテゾミブ、アロプリノール、カリケアマイシン、イブリツモマブチウキセタン、タルグレチン、オゾガミン、クラリスロマシン、ロイコボリン、ケトコナゾール、アミノグルテチミド、スラミンまたはメイタンシノイドあるいはその誘導体からなる群より少なくとも1つ選ばれる、請求項22または請求項23に記載の抗体の誘導体。
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Citations (1)
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JP3131322B2 (ja) | 1991-12-17 | 2001-01-31 | 協和醗酵工業株式会社 | 新規α2→3シアリルトランスフェラーゼ |
EP0643132B1 (en) | 1993-03-29 | 2006-05-31 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Alpha-1,3-fucosyltransferase |
US6811779B2 (en) * | 1994-02-10 | 2004-11-02 | Imclone Systems Incorporated | Methods for reducing tumor growth with VEGF receptor antibody combined with radiation and chemotherapy |
CN1241944C (zh) | 1995-09-11 | 2006-02-15 | 协和发酵工业株式会社 | 抗人白介素-5受体α链的抗体 |
US6001358A (en) | 1995-11-07 | 1999-12-14 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof |
US6528624B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
US6329510B1 (en) | 1999-01-29 | 2001-12-11 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Anti-CCR1 antibodies and methods of use therefor |
AU2004200923A1 (en) * | 1999-01-29 | 2004-04-01 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Anti-CCR1 antibodies and methods of use thereof |
PT1914244E (pt) | 1999-04-09 | 2013-07-26 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Processo para regular a actividade de moléculas funcionais sob o ponto de vista imunológico |
IL146480A0 (en) * | 1999-05-14 | 2002-07-25 | Imclone Systems Inc | Treatment of refractory human tumors with epidermal growth factor receptor antagonists |
CA2785941C (en) | 2000-10-06 | 2017-01-10 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Antibody composition-producing cell |
US7084257B2 (en) * | 2001-10-05 | 2006-08-01 | Amgen Inc. | Fully human antibody Fab fragments with human interferon-gamma neutralizing activity |
US7317091B2 (en) | 2002-03-01 | 2008-01-08 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
WO2005035586A1 (ja) | 2003-10-08 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 融合蛋白質組成物 |
US7923538B2 (en) | 2005-07-22 | 2011-04-12 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd | Recombinant antibody composition |
ES2568436T3 (es) | 2006-03-31 | 2016-04-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Procedimiento para controlar la farmacocinética en sangre de anticuerpos |
EP4238993A3 (en) | 2008-04-11 | 2023-11-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly |
DK2441831T3 (en) | 2009-06-11 | 2018-12-03 | Inter Univ Research Institute Corporation Research Organization Of Information And Systems | PROCEDURE FOR PRODUCING PROTEIN |
WO2013005649A1 (ja) | 2011-07-01 | 2013-01-10 | 協和発酵キリン株式会社 | 抗ヒトccr6抗体 |
JP6908381B2 (ja) * | 2014-01-29 | 2021-07-28 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート,インコーポレイテッド | Muc1−c/細胞外ドメイン(muc1−c/ecd)に対する抗体 |
AU2015366213B2 (en) * | 2014-12-18 | 2021-10-07 | Bergenbio Asa | Anti-Axl antagonistic antibodies |
JP2019048770A (ja) * | 2016-01-20 | 2019-03-28 | 協和発酵キリン株式会社 | 抗ヒトccr1モノクローナル抗体 |
JP2017139157A (ja) | 2016-02-04 | 2017-08-10 | 株式会社オートネットワーク技術研究所 | 電線、電線の製造方法、および配線モジュール |
-
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2023
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003517810A (ja) | 1999-01-29 | 2003-06-03 | ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 抗−ccr1抗体およびその使用方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Experimental Hematology, 2005, Vol.33, p.272-278 |
FEBS Letters, 2004, Vol.570, p.47-51 |
PLoS ONE, 2011, Vol.6, Issue 7, e21772 (pp.1-7) |
日本外科学会雑誌, 2013, 第114 巻, 臨時増刊号(2), p.387 (SSSA-3-3) |
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