KR20010108388A

KR20010108388A - 수태율 증진 조성물

Info

Publication number: KR20010108388A
Application number: KR1020017012144A
Authority: KR
Inventors: 브로꾸아삐에르
Original assignee: 훼링 비.브이.
Priority date: 1999-03-23
Filing date: 2000-03-21
Publication date: 2001-12-07
Also published as: IL145569A0; PL195779B1; CA2366911A1; AU765912B2; EP1162969B1; DK1162969T3; NZ514449A; CZ20013410A3; NO20014607D0; PL350797A1; MY135683A; GB9906714D0; AR023129A1; CN1196483C; HK1046647A1; UA77644C2; DE60028552T2; HK1046647B; RU2246944C2; TR200102647T2

Abstract

본 발명은 다이펩티딜 펩티다제 Ⅳ 억제제 및 이들 억제제를 포함하는 제약학적 조성물에 관한 것으로, 이들은 불임 치료, 특히 다낭포성 난소증에 기인한 인간 여성의 불임 치료에 유용하다.

Description

수태율 증진 조성물 {COMPOSITIONS FOR IMPROVING FERTILITY}

DP-Ⅳ의 억제제

디펩티딜 펩티다제 Ⅳ(DP-Ⅳ, 디펩티딜 아미노펩티다제 Ⅳ, DPP-Ⅳ, DAP-Ⅳ, EC 3.4.14.5로도 알려짐)는 펩타이드와 단백질로부터 아미노-말단의 다이펩타이드를 절단하는 세린 펩티다제이다. 이것은 N-말단의 서열이 X-Pro 또는 X-Ala인 물질을 인식한다. DP-Ⅳ의 억제제는 염증성 질병 및 AIDS의 치료를 위한 치료제로서 제안되어 왔다. 일반적으로 DP-Ⅳ의 공지된 억제제는 상기 물질의 유사체이다. DP-Ⅳ 억제제의 예는 DD 296 075 A5(Neubert et al., 1991년 11월), WO91/16339(Bachovchin et al, 1991년 10월), WO93/08259(Bachovchin et al, 1993년 4월), WO95/15309(Jenkins et al, 1995년 6월), WO98/19998(Villhauer, 1998년 5월), WO99/46272(Scharpe et al., 1999년 9월) 및 WO99/61431(Demuth et al., 1999년 12월)에 기재되어 있는 것이 있다. 이들 억제제의 일부 프로드러그(prodrug)는 WO99/67278 및 WO99/67279(이 둘은 모두 Demuth et al., 1999년 12월)에 기재되어 있다.

다음의 표에는 DP-Ⅳ 억제제 화합물의 일반적 종류 및 본 발명에서 사용하기 바람직한 것 중 특정 예가 기재되어 있다. 또한 개시된 광범위한 화합물 중에서 본 명세서에서는 이들 종류의 화합물이 예로서 도시되어 있다. 인용된 DD 및 WO 명세서에 기재된 모든 DP-Ⅳ 억제제는 본 발명에 사용될 수도 있으며, 인용 문헌은 관련된 개별 화합물 및 일반식 및 특정 화학식에 대한 모든 정보를 포괄적으로 가리키는 것이다. 예를 들면 이하의 표에서, 지시된 피롤리딘 및 티아졸리딘 고리는 다양한 고리의 크기를 가지는 광범위한 다른 이종원자 고리로 대체될 수도 있고 및/또는 아미노-아실 성분은 광범위한 다른 것으로 치환되어 본 명세서에서 지시하는 바와 같이 다른 DP-Ⅳ억제제를 제공할 수도 있다.

아미노-아실 피롤리다이드 및 티아졸리다이드 (DD 296 075 A5 참조), 예를 들면

아미노-아실 피롤리딘 알데하이드 (DD 296 075 A5 및 WO95/15309 참조), 예를 들면

아미노-아실 피롤리딘 보론산 (WO91/16339 및 WO93/08259 참조), 예를 들면

아미노-아실 피롤리딘 니트릴 (WO95/15309 및 WO98/19998 참조), 예를 들면

다낭포성 난소증(polycystic ovary syndrome)

다낭포성 난소증(PCOS, Stein-Leventhal syndrome)은 난소 캡슐이 두꺼워지고, 다중 여포성 낭포(multiple follicular cyst)를 형성하는 것이 특징적인 증상이다. 이것으로부터 불임 또는 무월경이 초래된다. 순환 호르몬 수치가 억제된다. 즉 황체형성 호르몬 및 스테로이드는 증가하고 난포자극 호르몬(FSH)은 감소한다. 비록 이것은 시상하부에서 성선자극 호르몬 방출 호르몬(GnRH)의 비정상적인 분비를 유도하지만, PCOS하에 따른 생리적 결함이 고찰의 대상으로 남아 있다. LH 및 FSH의 수준을 조절하는 치료법을 사용하여 인공 수정을 성공시킬 수 있지만, 이러한 방법은 복잡하고 비용이 많이 드는 경향이 있다. DP-Ⅳ 저해제는 PCOS의 치료에 유용성이 있다는 것을 알게 되었다.

본 발명은 동물의 암컷, 특히 통상 인간 여성의 수태율을 증진시키는 약제 및 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 첫 번째 양태는 불임의 치료를 위한 제약학적 조성물이고, 이 조성물은 DP-Ⅳ의 억제제를 포함하는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 두 번째 양태는 DP-Ⅳ 억제제의 새로운 용도, 즉 불임 치료, 구체적으로 PCOS으로 인한 인간 여성의 불임 치료에 있는 것이다. 본 발명의 세 번째 양태는 PCOS를 가지는 대상에게 인공 수정을 위한 개선된 프로토콜로서, 대상에게는 DP-Ⅳ 억제제를 포함하는 조성물이 투여된다.

이러한 방식으로 DP-Ⅳ 억제제를 사용하는 것은 GnRH 길항제 및 FSH 및 LH를 포함하는 현재의 치료법에 비해 많은 이점이 있다. LH 및 FSH는 천연의 공급원(일반적으로 폐경기 후의 여성의 뇨)에서 분리되거나 재조합 세포를 이용한 배양물에서 제조된 대형 펩타이드이다. 뇨로부터 분리하는 것은 질병의 전이 및 항원성 단백질 오염의 위험을 감수해야만 한다. 또한, 재조합 호르몬은 인간에게 병원체를 전달하지 않을 것이지만, 항원성 단백질에 의한 오염의 가능성이 잠재하고 있으며, 뇨 단백질 보다 상당히 가격이 비싸다. 또한, 재조합 펩타이드는 일반적으로 완전하게 "인체에 적응된(humanized)" 글리코실화 패턴을 가지지는 않는 것으로, 항원으로 작용하고 효율이 낮을 것이다. GnRH 길항제는 일반적으로 데카펩타이드로, 다단계의 합성 과정이 필요하다. 반대로, DP-Ⅳ 억제제는 소형의 분자로, 표준 합성 방법으로 용이하게 얻을 수 있는 것이다. 이들은 비항원성이며, 정제하기에 용이하고 가격도 저렴하다.

DP-Ⅳ 억제제는 많은 경우 경구 투여 후의 생물학적 활성이 있다는 점에서 추가의 이점이 있다. 이것은 주사로 투여해야만 하는 GnRH 길항제, FSH 및 LH와는 대조적인 것이다. 따라서 DP-Ⅳ 억제제는 환자들에게 스트레스를 덜 주는 덜 침입적인 프로토콜을 유도한다.

본 발명의 제약학적 조성물은 인간 여성의 불임 치료에 특히 효과적이다. 이때, 불임은 다낭포성 난소증과 관련된 것이 바람직하다. 조성물은 DP-Ⅳ 억제제를 포함하는 것을 특징으로 한다. 조성물은 희석제, 캐리어, 벌킹제, 결착제, 분산제, 안정화제 등과 같은 일반적으로 공지된 제약학적으로 수용가능한 부형제를 추가로 포함할 수도 있다.

본 발명의 범주에서는 화합물이 1μM의 농도로 효소의 작용을 억제한다면 DP-Ⅳ의 억제제인 것으로 고려된다. 이러한 화합물은 100 nM 이하의 농도에서는 DP-Ⅳ의 작용을 억제하고, 1μM 이하의 농도에서는 다른 효소를 억제하지 않는다.다음의 표는 일반적인 종류의 DP-Ⅳ 억제제 화합물 및 본 발명에서 사용하기 바람직한 것들 중 특정 예를 기재하고 있다. 개시된 광범위한 화합물 중에서 다음의 종류의 예가 기재되어 있다. 인용된 DD 및 WO 명세서에 기재된 모든 DP-Ⅳ 억제제는 본 발명에 사용될 수 있으며, 인용은 관련된 개별 화합물 및 일반식 및 특정 화학식에 대한 모든 정보를 포괄적으로 가리키는 것이다. 예를 들면 이하의 표에서 표시된 피롤리딘 및 티아졸리딘 고리는 다양한 고리의 크기의 광범위한 다른 이종원자 고리로 교체될 수 있고 및/또는 표시된 아미노-아실 성분은 표시된 공보에서 지시된 바와 같이 광범위한 다른 것으로 교체되어 본 발명에서 사용하기 위한 다른 DP-Ⅳ 억제제를 제공할 수도 있다.

본 발명의 바람직한 실시예에서, DP-Ⅳ 억제제는 아미노-아실피롤리딘 니트릴이다. 특히 바람직한 것은 WO95/15309 및 WO98/19998에 기재된 아미노-아실 피롤리딘 니트릴이다.

본 발명에 따르는 조성물은 경구 투여, 점막내 투여(협내, 설하, 비강내, 질내, 직장내 투여 등), 경피 투여 또는 주사(정맥내, 근육내 및 피하내 주사를 포함)를 포함하는 공지된 임의의 경로를 통해 인간에게 투여하기 위해 조제될 수 있다. 바람직한 투여 경로는 경구 투여이다. 이 경우, 조성물은 정제 또는 캡슐로 적절하게 제조된다.

본 발명은 DP-Ⅳ의 억제제로 알려진 화합물을 불임 치료제, 특히 다낭포성 난소증에 기인한 인간 여성의 불임 치료제로 사용하는 새로운 용도를 제공한다.

본 발명은 개선된 불임 치료방법, 특히 PCOS에 기인한 인간 여성의 불임 치료방법을 포함하는 것으로, 환자에게는 DP-Ⅳ의 억제제의 치료학적 유효량을 포함하는 치료용 조성물이 투여된다. 치료 과정은 상기 조성물을 단독으로 또는 상기에 기재된 바와 같은 다른 약제와 함께 사용하는 것을 포함한다. 투여는 단일 투여되거나, 예를 들면 2-6 시간의 간격을 두고 분할 투여될 수 있다. 치료 과정은 하루 또는 적합한 임상 목적에 도달할 때까지 수일 또는 수주의 기간 동안 지속할 수 있다. 적절한 목적은 예를 들면 수태(인공적이지 않은 수정의 경우), 및 불임난자의 성공적인 회수 또는 태아의 성공적인 착상(인공 수정의 경우)을 포함한다. 상세한 복용법 및 치료 기간은 담당 의사에 의해 결정될 것이다.

실시예 1

억제제의 제조

DP-Ⅳ 억제제는 문헌에 기재된 방법에 따라 제조할 수 있다. 아미노-아실 피롤리딘 니트릴의 합성법은 WO95/15309 및 WO98/19998에 기재되어 있다. 다음의 방법은 이들 방법의 예로서 기재된 것이다.

실시예 1A - (2S)-N-이소류실피롤리딘-2-카보니트릴의 합성

(a) tert-부틸옥시카보닐-이소류실피롤린아미드

프롤린아미드 하이드로클로라이드를 무수 디클로로메탄(15 ㎖)에 현탁시킨 교반된 현탁액에 디이소프로필에틸아민을 첨가하여 투명한 염기성 용액(pH 9)을 얻었다. N-(tert-부틸옥시카보닐-이소류실옥시)숙신이미드(328 ㎎, 1.0 mmol)를 일부 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 질소 분위기 하에서 교반하였다. 용매를 진공하에서 증발시킨 후, 잔류물을 에틸 아세테이트와 0.3N 황산수소칼륨 용액 사이에 분획시켰다. 유기층을 탄산수소 나트륨 포화용액, 물 및 소금물로 세척한 후, 황산나트륨으로 건조하고 진공하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔의 짧은 플러그로 여과시켜 정제하고, 핵산/에틸 아세테이트(10:90)로 용리시킨 후 에틸 에세테이트로 용리시켰다. 산물을 함유한 용리액의 농축물은 무색의 발포 유리로서 표제 화합물을 301 ㎎(92%) 제공하였다.

(b) (2S)-N-(tert-부틸옥시카보닐-이소류실)피롤리딘-2-카보니트릴

질소 분위기하에서 상기 (a)의 아미드(203 ㎎, 0.62 mmmol)를 무수 피리딘(10 ㎖)에서 교반시킨 용액에 이미다졸(84 ㎎, 1.24 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 -35℃로 냉각한 후, 포스포러스의 옥시클로라이드(0.25 ㎖, 2.48 mmol)를 점적하여 첨가하였다. 혼합물을 온도가 -20℃까지 상승하는 시간인 1시간 동안 교반한 후, 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 무색의 오일인 표제의 화합물을 180 ㎎(94%)의 수율로 얻었다.

(c) (2S)-N-(이소류실)-피롤리딘-2-카보니트릴 트리플루오로아세테이트

상기 (b)의 니트릴을 트리플루오로아세트산에 용해시키고 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시키고 잔류물을 물에 용해시켰다. 용액을 동결건조시켜 백색 솜털 모양의 고체인 표제 화합물을 60 ㎎의 수율로얻었다.

FAB Mass Spec.: 계산값 m/e 209.3; 실험값 210.2 (M+H)

실시예 1B - (2S)-N-((2'S)-2'-아미노-3',3'-디메틸부타노일)피롤리딘-2-카보니트릴

이소류신 유도체를 해당하는 tert-부틸글리신 유도체로 대체하여 실시예 1A의 방법에 따라 제조하였다.

실시예 2

인간 불임의 동물 모델

Zucker Diabetic Fatty(ZDF) 래트를 특히 PCOS에 기인한 인간 불임에 대한 치료제의 활용가능성을 보여주는 적절한 모델로 간주하였다. 이들 동물의 호르몬 상태는 이들이 비만이 됨에 따라 변경되어 있다. 인간의 비만은 CPOS와 관련되어 있다고 알려져 있는 것으로 이들 동물의 비만도 인간의 질병과 유사하다.

실험동물

비만의 Sucker Diabetic Fatty 수컷 및 암컷과 번식력이 있는 마른 수컷 및 암컷을 개별 케이지에 넣고 Purina 5008(6.5 % 지방)을 먹었다. 6.5 주령에서, 비만의 래트를 3개의 군으로 무작위하게 나누었다.

1. 대조군 - 비히클로 처리되는 비만의 ZDF 래트(n=8)

2. 1일 1회 처리군 - 1일 1회 실시예 1B의 화합물을 경구로 제공한 비만의 ZDF 래트(n=8)

3. 1일 2회 처르군 - 1일 2회 실시예 1B의 화합물을 경구로 제공한 비만의 ZDF 래트(n=8)

방법

마른 래트 및 비만 래트의 혈액 및 뇌하수체를 실험의 마지막에 수집하였다. 뇌하수체 LH 및 혈장의 테스토스테론 농도를 방사면역분석법에 의해 측정하였다. 발정 주기(estrous cyclicity)는 질의 얼룩을 관찰하여 평가하였다.

2.1 뇌하수체 LH

비만 래트의 뇌하수체에는 마른 래트보다 LH가 더 많이 함유되어 있었다(비만의 래트는 8.1 ±0.6 ㎍/뇌하수체 대 마른 래트는 6.3 ±0.6 ㎍/뇌하수체, p < 0.05). 비만 래트를 실시예 1B의 화합물로 치료한 결과 마른 쥐의 뇌하수체 LH 함량으로 정상화되었다(대조군에서는 8.1 ±0.6 ㎍/뇌하수체 대 치료된 비만 래트에서는 5.2 ±0.4 ㎍/뇌하수체).

2.2 혈장의 테스토스테론

비만의 수컷에서 혈장의 테스토스테론의 수치는 마른 수컷보다 낮았다(비만의 래트는 1145 ±328 ng/㎖ 대 마른 래트는 2410 ±239 ng/㎖, p < 0.05). 비만 래트를 실시예 1B의 화합물로 치료한 결과 마른 쥐의 뇌하수체 LH 함량으로 정상화되었다(마른 래트에서는 2410 ±239 ng/㎖ 대 치료된 비만 래트에서는 2392 ±759 ng/㎖).

2.3 주기

비만의 암컷은 마른 래트에 비하여 비정상적인 발정 주기를 가졌다. 비만의 암컷을 실시예 1B의 화합물로 치료한 결과 발정 주기를 정상화되었다.

얻어진 결과에서는 DP-Ⅳ의 억제제가 암컷 및 수컷, 특히 PCOS에 대한 불임의 치료에 유용하다는 것을 가리킨다.

실시예 3

약제의 제형

3A-50 ㎎ 정제

활성제로서 화합물 1A 50 ㎎ 당량을 포함하는 정제를 다음과 같이 조제한다:

실시예 1A의 화합물(트리플루오로아세테이트 염) 154.5 g

옥수수 전분 53.5 g

하이드록시프로필셀룰로즈 13.5 g

카복시메틸셀룰로즈 칼슘 11.0 g

마그네슘 스테아레이트 2.0 g

락토오스 165.5 g

총량 400.0 g

원료를 혼합하고 가압하여 200 ㎎의 정제를 2000개 얻었고, 각각은 실시예 1A의 화합물의 유리염기 50 ㎎ 당량을 함유하였다.

3B-100 ㎎ 질내 좌약

활성제로서 실시예 1A의 화합물 100 ㎎ 당량을 포함하는 질내 투여에 적합한 좌약을 다음과 같이 조제한다:

실시예 1A의 화합물(트리플루오로아세테이트 염) 154.5 g

옥수수 전분 210.0 g

콜로이드상 실리카 2.5 g

Povidone 30 49.0 g

마그네슘 스테아레이트 23.0 g

아디프산 57.0 g

중탄산나트륨 43.0 g

소듐 라우릴 설페이트 5.0 g

락토오스 456.0 g

총량 1000.0 g

원료를 혼합하고 가압하여 1 g의 정제를 1000개 얻었고, 각각은 실시예 1A의 화합물의 유리염기 100 ㎎ 당량을 함유하였다.

상기 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하는 것으로 어떠한 의미로도 한정하고자 하는 것은 아니다. 당업자에 의해 균등물로 고려되는 범주는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 특허청구의 범위는 본 발명의 범위를 더욱 한정하는 것이다.

하나 이상의 DP-Ⅳ 억제제가 본 발명의 특정 목적의 조성물 및 방법에 따라 단독 활성 성분으로 사용될 수 있다.

Claims

다이펩티딜 펩티다제 Ⅳ 억제제의 치료학적 유효량을 포함하는 불임 치료 또는 수태율 증진용 제약학적 조성물.
제1항에 있어서,

상기 불임이 다낭포성 난소증에 기인한 것인 제약학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 다이펩티딜 펩티다제 Ⅳ의 억제제가 아미노-아실 피롤리딘 니트릴을 포함하는 제약학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,

경구 투여용으로 제형화되는 제약학적 조성물.
제4항에 있어서,

정제 또는 캡슐 형태의 제약학적 조성물.
다이펩티딜 펩티다제 Ⅳ 억제제를 불임 치료 또는 수태율 증진용 치료학적 조성물의 제조에 사용하는 용도.
다이펩티딜 펩티다제 Ⅳ 억제제를 포함하는 제약학적 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 불임 치료 또는 인공수정 방법.