CZ20013410A3

CZ20013410A3 - Přípravky pro zlepąení plodnosti

Info

Publication number: CZ20013410A3
Application number: CZ20013410A
Authority: CZ
Inventors: Pierre Broqua
Original assignee: Ferring Bv
Priority date: 1999-03-23
Filing date: 2000-03-21
Publication date: 2002-04-17
Also published as: IL145569A0; PL195779B1; CA2366911A1; AU765912B2; EP1162969B1; DK1162969T3; NZ514449A; NO20014607D0; PL350797A1; MY135683A; GB9906714D0; AR023129A1; CN1196483C; HK1046647A1; UA77644C2; KR20010108388A; DE60028552T2; HK1046647B; RU2246944C2; TR200102647T2

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká činidel a přípravků pro zlepšení živočišné plodnosti, zvláště samic, obvykle žen.

Dosavadní stav techniky

Inhibitory DP-IV

Dipeptidylpeptidasa IV (DP-IV, také dipeptidylaminopeptidasa IV, DPP-IV, DAP-IV, EC 3.4.14.5) je serinová peptidasa, která z peptidů a bílkovin odštěpuje dipeptid s terminální aminoskupinou. Rozezná substráty, kde je na dusíkatém konci sekvence X-Pro nebo X-Ala. Inhibitory DP-IV byly navrženy jako terapeutická činidla pro léčbu zánětlivých onemocnění a AIDS. Známými inhibitory DP-IV jsou obecně analogy substrátu. Příklady inhibitorů DP-IV jsou popsány v pracech DD 296 075 A5 (Neubert et al., listopad 1991), WO 91/16 339 (Bachovchin et al., říjen 1991), WO 93/08 259 (Bachovchin et al., duben 1993), WO 95/15 309 (Jenkins et al., červen 1995), WO 98/19 998 (Villhauer, květen 1998), WO 99/46 272 (Scharpe et al., září 1999) a WO 99/61 431 (Demuth et al., prosinec 1999). Pro-léčiva některých těchto inhibitorů jsou také popsána v pracech WO 99/67 278 a WO 99/67 279 (obě Demuth et al., prosinec 1999).

Následující tabulka uvádí obecné typy sloučenin inhibitorů DP-IV a jejich konkrétní příklady, které jsou zvýhodněné pro použití v předloženém vynálezu a také uvádí patentové publikace, z nichž jsou vzaty širší rámec popsaných sloučenin těchto typů a příklady. Je třeba zdůraznit, že všechny inhibitory DP-IV popsané v citovaných DD a WO specifikacích lze v předloženém vynálezu použít a odkazy jsou konkrétně směrovány na tyto předchozí práce proto, aby byla podána úplná informace o obecných a konkrétnějších vzorcích a jednotlivých sloučeninách, o něž se jedná. Například v níže uvedené tabulce mohou být uvedené pyrrolidinové a thiazolidinové kruhy nahrazeny širokou paletou jiných heterocyklů s různými velikostmi kruhu a/nebo uvedené aminoacylové skupiny lze nahradit širokou paletou jiných skupin, jak je popsáno v uvedených publikacích, aby se získaly další inhibitory DP-IV pro použití v

« ·

Syndrom polycystických ování

Syndrom polycystických ovarií (PCOS, Steinův-Leventhalův syndrom) je stav charakterizovaný zvětšením ovariálního pouzdra a tvorbou vícečetných folikulámích váčků. To má za následek neplodnost a nedostavení se menstruace. Hladiny cirkulujících hormonů jsou narušené - hladiny luteinizačního hormonu (LH) a steroidů jsou zvýšené a hladina folikulostimulačního hormonu (FSH) je snížena. Ačkoliv se předpokládá, že toto je následkem abnormálního vylučování hormonu uvolňujícího gonadotropiny (GnRH) z hypothalamu, předmětem spekulace zůstává fyziologická porucha, která ve skutečnosti PCOS způsobuje. Použití léčebných režimů, které kontrolují hladiny LH a FSH, může vést k úspěšnému asistovanému oplodnění, avšak tyto režimy bývají složité a drahé. Nyní jsme zjistili, že v léčbě PCOS jsou užitečné inhibitory DP-IV.

Podstata vynálezu

Prvým aspektem předloženého vynálezu je farmaceutický přípravek pro léčbu neplodnosti, přičemž tento přípravek je charakterizován tím, že obsahuje inhibitor DP-IV. Druhým aspektem předloženého vynálezu je nové použití inhibitorů DP-IV, jmenovitě v léčbě neplodnosti a zvláště ženské neplodnosti způsobené PCOS. Třetím aspektem vynálezu je zlepšený postup pro asistované oplodnění u subjektů s PCOS, kde se subjektu podává přípravek obsahující inhibitor DP-IV.

O •9 9 ··*

9· ♦ • ·· •99«»»

Takovéto použití inhibitorů DP-IV přináší mnohé výhody oproti běžným léčebným režimům, které zahrnují agonisty GnRH, stejně jako FSH a LH. LH a FSH jsou velké peptidy, které se buď izolují z přírodních zdrojů (obvykle moči žen po menopauze) nebo se připraví kultivačně pomocí rekombinantních buněk. Izolace z moči vyžaduje, aby byla věnována pozornost riziku přenesení nemoci a přítomnosti antigenních bílkovinových nečistot. Rekombinantní hormony přenášejí lidské patogeny s menší pravděpodobností, ale stále jsou potenciálně kontaminované antigenní bílkovinou a jsou mnohem dražší, než bílkoviny z moči. Navíc rekombinantní peptidy obecně nemají zcela zlidštělý glykosylační charakter, což může vést k antigenitě a snížené účinnosti. Agonisté GnRH jsou obecně dekapeptidy, které vyžadují vícekrokovou syntézu. Oproti tomu jsou inhibitory DP-IV malé molekuly, které jsou snadno dostupné použitím standardních syntetických metod. Jsou neantigenní, snadno se čistí a jsou levné.

Další výhodou je, že inhibitory DP-IV jsou v mnoha případech biologicky aktivní po orálním podání. To je v protikladu k agonistům GnRH, FSH a LH, které musejí být všechny podávány injekcí. Použití inhibitorů DP-IV tak vede k méně invazivnímu postupu, který je pro pacientku méně stresující.

Farmaceutický přípravek předloženého vynálezu je zvláště účinný pro léčbu neplodnosti žen. S výhodou, když je neplodnost spojena se syndromem polycystických ovárií. Přípravek je charakterizován tím, že obsahuje inhibitor DP-IV. Přípravek může dále obsahovat takové farmaceuticky přijatelné excipienty, které jsou v oboru obecně známé, jako jsou zřeďovadla, nosiče, kypřící činidla, vázací činidla, disperzanty, stabilizátory a podobně.

V kontextu předloženého vynálezu je látka považovaná za inhibitor DP-IV, jestliže inhibuje účinek enzymu v koncentraci 1 μΜ. Tato látka s výhodou inhibuje účinek DP-IV v koncentracích pod 100 nM a neinhibuje jiné enzymy v koncentracích pod 1 μΜ. Následující tabulka uvádí na obecné typy

• · • •	··· • · ·	v ·· ♦ • · • ·	>· • • •	·· • · • · • · ·	• ·· • •
• ····	• · ·«	* · ···	• ♦ ·	• · ··	• ·*·

sloučenin inhibitoru DP-IV a jejich konkrétní příklady, které jsou zvýhodněné pro použití v předloženém vynálezu a také uvádí patentové publikace, z nichž je vzat širší rámec těchto typů popsaných sloučenin a příklady. Je třeba zdůraznit, že všechny inhibitory DP-IV popsané v citovaných DD a WO specifikacích lze v předloženém vynálezu použít a odkazy jsou konkrétně směrovány na tyto předchozí práce proto, aby byla podána úplná informace o obecných a konkrétnějších vzorcích a jednotlivých sloučeninách, o něž se jedná. Například v níže uvedené tabulce mohou být uvedené pyrrolidinové a thiazolidinové kruhy nahrazeny širokou paletou jiných heterocyklů s různými velikostmi kruhu a/nebo uvedené aminoacylové skupiny lze nahradit širokou paletou jiných skupin, jak je popsáno v uvedených publikacích, aby se získaly další inhibitory DP-IV pro použití v předloženém vynálezu.

Ve zvýhodněném provedení vynálezu je inhibitorem DP-IV aminoacylpyrrolidinnitril. Zvláště zvýhodněné jsou ty aminoacylpyrrolidinnitrily, které jsou popsané ve WO 95/15 309 a WO 98/19 998.

Přípravky podle předloženého vynálezu lze sestavit pro podání lidským subjektům jakoukoliv známou cestou, v to zahrnujíc orální podání, podání přes sliznici (jako bukální, podjazykové, nosní, vaginální a rektální podání), podání přes kůži nebo injekční (v to zahrnujíc nitrožilní, nitrosvalovou a podkožní injekci). Zvýhodněnou cestou podání je orální podání. V tomto případě je přípravek vhodně vytvořen jako tableta nebo kapsle.

Předložený vynález popisuje nové použití sloučenin, které jsou známé jako inhibitory DP-IV, jako terapeutických činidel pro léčbu neplodnosti a zvláště neplodnosti žen v důsledku syndromu polycystických ovárií.

Předložený vynález obsahuje zvýhodněný způsob léčby neplodnosti, zvláště neplodnosti žen v důsledku PCOS, kde se pacientce podává farmaceutický přípravek obsahující terapeuticky účinné množství inhibitoru DP-IV. Léčba může zahrnovat použití uvedeného přípravku samotného nebo ve spojení s dalšími činidly, jak je zde popsáno. Podání může být v jednotlivé dávce

nebo v rozdělených dávkách, které se berou například v intervalech 2 až 6 hodin. Průběh léčby může trvat jediný den nebo po periodu několika dnů nebo týdnů, dokud není dosaženo vhodného klinického ukončení. Příklady vhodných ukončení zahrnují početí (v případě neasistovaného oplodnění) a úspěšný odběr neoplodněného vajíčka nebo úspěšnou implantaci embrya (v případě asistovaného oplodnění). Podrobnosti dávkovacího režimu a trvání léčby určí odpovědný lékař.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava inhibitorů

Inhibitory DP-IV lze připravit způsoby popsanými v literatuře. Syntéza aminoacylpyrrolidinnitrilů je popsána ve WO 95/15 309 a WO 98/19 998. Následující způsob je pro tyto způsoby ilustrativní.

Příklad IA -Syntéza (2S)-N-isoleucylpyrrolidin-2-karbonitrilu, I

a) Terc. butoxykarbonyl-isoleucylprolinamid

K míchané suspenzi prolinamidhydrochloridu (225 mg, 1,50 mmol) ve vysušeném dichlormethanu (15 ml) byl přidán diisopropylethylamin za zisku čirého alkalického (pH 9) roztoku. Do něj se najednou přidal N-(terc.butoxykarbonyl-isoleucyloxy)sukcinímid (328 mg, 1,0 mmol) a směs se 16 hodin míchala při laboratorní teplotě v atmosféře dusíku. Za sníženého tlaku se odpařilo rozpouštědlo a odparek se rozdělil mezi ethylacetát a roztok 0,3 M hydrogensíranu draselného. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a solankou, vysušena nad síranem sodným a zákoneentrována za sníženého tlaku. Odparek byl přečištěn filtrací krátkým sloupečkem silikagelu elucí směsí hexan/ethylacetát (10 : 90), poté ethylacetátem. Zakoncentrování eluátu obsahujícího produkt poskytlo titulní sloučeninu jako bezbarvý pěnový amorfní materiál, 301 mg (92 %).

Ή NMR (CDC1₃): δ 6,90 (1H, široký s), 5,51 (1H, široký s), 5,18 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,62 (1H, dd, J = 2,6 a 7,0 Hz), 4,29 (1H, dd, J = 8,4 a 9,2 Hz), 3,79 až 3,58 (2H, m), 2,36 (1H, m), 2,09 až 1,57 (5H, m), 1,43 (9H, s), 1,17 (1H, m), 0,95 (3H, d, J = 6,6 Hz), 0,90 (3H, t, J = 7,3 Hz) ppm.

b) (2S)-N-(Terc.butoxykarbonyl-isoleucyl)pyrrolidin-2-karbonitril

K míchanému roztoku amidu z části a) (203 mg, 0,62 mmol) ve vysušeném pyridinu (10 ml) v atmosféře dusíku byl přidán imidazol (84 mg, 1,24 mmol). Směs byla ochlazena na -35 °C a poté se po kapkách přidal oxychlorid fosforečný (0,25 ml, 2,48 mmol). Směs byla míchána 1 hodinu, během kteréžto doby byla její teplota ponechána stoupnout na -20 °C a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Odparek byl přečištěn chromatografií na silikagelu za zisku titulní sloučeniny jako bezbarvého oleje, výtěžek 180 mg (94 %). ^]H NMR (CDC1₃): δ 5,14 (1H, d, J = 9,2 Hz), 4,80 (1H, dd, J = 2,6 a 7,1 Hz), 4,22 (1H, dd, J = 7,9 a 9,1 Hz), 3,81 (1H, m), 3,71 (1H, m), 2,30 až 2,12 (4H, • · · · ♦ · · • · ·· · · ··· ·♦

m), 1,75 (1H, m), 1,60 (lH,m), 1,42 (9H, s), 1,19 (lH,m), 0,97 (3H, d,J = 6,9

Hz), 0,91 (3H, t, J = 7,3 Hz) ppm.

^,3C NMR (CDClj): δ 171,7, 155,6, 118,0, 79,6, 56,0, 46,5,46,0,37,8, 29,6,

28,1,25,0, 24,2, 15,2, 10,9 ppm.

c) (2S)-N-(Isoleucyl)-pyrrolidin-2-karbonitriltrifluoracetát

Nitril z části b) se rozpustil v trifluoroctové kyselině a roztok byl míchán 1 hodinu za laboratorní teploty. Za sníženého tlaku se odpařilo rozpouštědlo a odparek byl rozpuštěn ve vodě. Roztok byl lyofílizován za zisku titulní sloučeniny jako bílé, načechrané pevné látky, výtěžek 60 mg.

FAB hmotnostní spektometrie: vypočtený m/e 209,3, nalezený 210,2 (M + H)⁺'H NMR (D₂O): δ 4,3 (1H, m), 3,64 (1H, d, J = 5,6 Hz), 3,16 (2H, m), 1,86 až

I, 48 (5H, m), 0,98 (1H, m), 0,68 (1H, m), 0,51 (3H, d, J = 6,9 Hz), 0,38 (3H, t, J = 7,3 Hz) ppm.

¹³C NMR (D₂O): δ 169,7, 119,7, 57,3, 48,6, 48,1, 36,9, 30,2, 25,8, 24,5, 15,4,

II, 5 ppm.

Příklad 1B - Syntéza (2S)-N-((2'S)-2'-amino-3',3'-dimethylbutanoyl)pyrrolidin-2-karbonitrilu, II

Tato sloučenina byla připravena způsobem příkladu 1A s nahrazením isoleucinového derivátu odpovídajícím derivátem terc.butylglycinu.

Ή NMR (CD₃OD): δ 4,86 až 4,81 (1H, m), 4,04 (1H, s), 3,77 až 3,71 (2H, m), 3,34 (2H, s), 2,34 až 2,08 (4H, m), 1,14 (9H, s) ppm.

¹³C NMR (CD₃OD): δ 167,40, 117,99, 58,78, 46,53, 34,21, 29,54, 25,22, 25,03 ppm.

Příklad 2

Neplodnost u lidí na modelu zvířat

Cukrovkou ztučnělé (ZDF) krysy jsou považovány za vhodný model pro demonstraci potenciální užitečnosti terapeutických činidel na neplodnost u lidí, zvláště neplodnost vyvolanou PCOS. Hormonální statut těchto zvířat se mění, jak se stávají obézními, což odpovídá onemocnění u lidí, kde se obezita dává do souvislosti s PCOS.

Zvířata

Obézní, cukrovkou ztučnělí krysí samci a samice, stejně jako plodní, hubení samci a samice, byli umístěni do jednotlivých klecí a krmeni přípravkem Purina 5008 (6,5 % tuku). V 6,5 týdnech života byly obézní krysy náhodně rozděleny do 3 skupin:

1. Kontrolní skupina - obézní ZDF krysy (n = 8), na které bylo působeno nosičem.

2. Skupina, na kterou se působilo jednou denně - obézní ZDF krysy (n = 8), kterým se orálně podávala sloučenina příkladu IB jednou denně (10 mg/kg/den).

3. Skupina, na kterou se působilo dvakrát denně - obézní ZDF krysy (n = 8), kterým se orálně podávala sloučenina příkladu IB dvakrát denně (10 mg/kg/den).

Způsoby

Na konci studie byla hubeným a obézním krysám odebrána krev a podvěsky mozkové. Koncentrace LH z podvěsku mozkového a testosteronu

plasmy byly měřeny radioimunoanalýzou. Cykličnost estru byla určována sledováním vaginálního výtěru.

2.1- LH podvěsku mozkového

Podvěsky mozkové obézních krys obsahovaly více LH, než u hubených krys (8,1 ± 0,6 pg/podvěsek mozkový vs. 6,3 ± 0,6 pg/podvěsek mozkový, v uvedeném pořadí pro obézní a hubené krysy, p < 0,05). Léčba obézních krys sloučeninou příkladu 1B znormalizovala obsah LH podvěsku mozkového na hodnoty hubených krys (8,1 ± 0,6 pg/podvěsek mozkový vs. 5,2 ± 0,4 pg/ podvěsek mozkový, v uvedeném pořadí pro kontrolní skupinu a léčené obézní krysy, p < 0,05).

2.2 - Plazmový testosteron

Hladiny plazmového testosteronu u obézních samců byly nižší, než u hubených samců (1145 ± 328 ng/ml vs. 2410 ± 239 ng/ml) v uvedeném pořadí pro obézní a hubené krysy, p < 0,05). Léčení obézních krys sloučeninou příkladu 1B znormalizovalo hladiny plazmového testosteronu na hodnoty hubených krys (2410 ± 239 ng/ml vs. 2392 ± 759 ng/ml, v uvedeném pořadí pro hubené a léčené obézní krysy, NS).

2.3 - Cykličnost

Obézní samice měly ve srovnání s hubenými krysami abnormální cykličnost estru. Léčba sloučeninou příkladu 1B znormalizovala cykličnost estru obézních krysích samic.

Získané výsledky ukazují, že inhibitory DP-IV jsou vhodné pro léčbu neplodnosti jak samičích, tak samčích subjektů a konkrétně pro léčbu PCOS.

Příklad 3

Farmaceutický přípravek

3A - 50mg tableta

Z následujících složek byly vyrobeny tablety obsahující ekvivalent 50 mg sloučeniny příkladu 1 A, jako aktivního činidla.

Sloučenina příkladu IA (jako trifluoracetátová sůl) 154,5g

Kukuřičný škrob 53,5g

Hydroxypropylcelulosa 13,5g

Karboxymethylcelulosa vápenatá 11,0 g

Stearát hořečnatý 2,0g

Laktosa___________________________________________ 165,5 g

Celkem 400,0 g

Materiály se smíchaly a poté vylisovaly za zisku 2000 tablet po 200 mg, přičemž každá tableta obsahovala ekvivalent 50 mg volné báze sloučeniny příkladu IA.

3B - lOOmg vaginální čípek

Z následujících složek byly vyrobeny čípky vhodné pro vaginální podání, které obsahovaly ekvivalent 100 mg sloučeniny příkladu 1 A, jako aktivního činidla.

Sloučenina příkladu IA (jako trifluoracetátová sůl) 154,5 g

Kukuřičný škrob 210,0 g

Koloidní oxid křemičitý 2,5g

Povidon 30 49,0g

Stearát hořečnatý 23,0g

Adipová kyselina 57,0g

Hydrogenuhličitan sodný 43,0g

Laurylsulfát sodný 5,0g

Laktosa______________________________________ 456,0g

Celkem 1000,0g

Materiály se smíchaly a poté vylisovaly za zisku 1000 čípků po 1 g, přičemž každý obsahoval ekvivalent 100 mg volné báze sloučeniny příkladu 1A.

V předchozím textu uvedené příklady jsou tak, jak byly popsány, pro vynález ilustrativní, ale nejsou zamýšleny jako vynález limitující. Taková rozšíření, jež by byla shledána odborníkem v oboru jako ekvivalentní, jsou zahrnuta v rámci vynálezu a nárocích, které dále definují tento rámec.

Pro uvedené účely přípravku a způsobu vynálezu lze použít jeden nebo více inhibitorů DP-IV, jakožto jediné aktivní složky.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY • 4 · ·

7/ Ιΰ01-(Μ

1. Farmaceutický přípravek pro léčbu neplodnosti nebo pro zvýšení plodnosti, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství inhibitoru dipeptidylpeptidasy IV.
2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1,vyznačující se tím, že neplodnost je způsobena syndromem polycystických ovárií.
3. Farmaceutický přípravek podle nároku 1 nebo nároku 2, vyznačující se tím, že inhibitorem dipeptidylpeptidasy IV je aminoacylpyrrolidinnitril.
4. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z předchozích nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že má formu pro orální podávání.
5. Farmaceutický přípravek podle předchozího nároku 4, vyznačující se t í m, že má formu tablety nebo kapsle.
6. Použití inhibitoru dipeptidylpeptidasy IV v přípravě terapeutického přípravku pro léčbu neplodnosti nebo pro zvýšení plodnosti.
7. Způsob léčby neplodnosti nebo asistovaného oplodnění, vyznačující se t i m, že pacientce se podá farmaceutický přípravek obsahující inhibitor dipeptidylpeptidasy IV.