KR102057755B1 - 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨쥬게이트 - Google Patents

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토마스 필로
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Abstract

화학식 (A)의 컨쥬게이트가 제공된다:
Figure 112015098431263-pct00134

상기 식에서,
R2는
Figure 112015098431263-pct00135
이고, 여기서 R36a 및 R36b는 독립적으로 H, F, C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐 중에서 선택되고, 상기 알킬 및 알케닐 그룹은 C1-4 알킬 아미도 및 C1-4 알킬 에스테르 중에서 선택되는 그룹에 의해 임의로 치환되거나; 또는 R36a 및 R36b 중 하나가 H인 경우, 다른 하나는 니트릴 및 C1-4 알킬 에스테르 중에서 선택되고;
R6 및 R9는 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로 중에서 선택되고;
R7은 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로 중에서 선택되고;
Y는 식 A1, A2, A3, A4, A5 및 A6 중에서 선택되고:
Figure 112015098431263-pct00136

Figure 112015098431263-pct00137

Figure 112015098431263-pct00138

L은 세포 결합제에 연결된 링커이고;
CBA는 세포 결합제이고;
n은 0 내지 48의 범위에서 선택되는 정수이고;
RA4는 C1-6 알킬렌 그룹이고;
(a) R10은 H이고, R11은 OH, ORA이며, 여기서 RA는 C1-4 알킬이거나; 또는
(b) R10 및 R11은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성하거나; 또는
(c) R10은 H이고, R11은 OSOzM이며, 여기서 z는 2 또는 3이고, M은 1가의 약학적으로 허용가능한 양이온이고;
R 및 R'는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬, C3-20　헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴 그룹 중에서 선택되고, 임의로 NRR' 그룹과 관련하여 R 및 R'는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성하고;
R16, R17, R19, R20, R21 및 R22는 각각 R6, R7, R9, R10, R11 및 R2에 대해 정의된 바와 같고;
Z는 CH 또는 N이고;
T 및 T'는 독립적으로 단일결합 또는 C1-9 알킬렌 중에서 선택되고, 여기서 쇄는 하나 이상의 헤테로 원자, 예를 들어 O, S, N(H), NMe에 의해 차단될 수 있으나, 단 X와 X' 사이 원자들의 최단쇄 내 원자수는 3 내지 12개의 원자이고;
X 및 X'는 독립적으로 O, S 및 N(H) 중에서 선택된다.

Description

피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨쥬게이트{PYRROLOBENZODIAZEPINES AND CONJUGATES THEREOF}
본 발명은 피롤로벤조디아제핀(PBD), 특히 세포 결합제에 연결된 링커 그룹을 가지는 피롤로벤조디아제핀에 관한 것이다.
피롤로벤조디아제핀
일부 피롤로벤조디아제핀 (PBD)은 DNA의 특정 서열을 인식하여 그에 결합하는 능력을 가지며; 바람직한 서열은 PuGPu이다. 최초의 PBD 항종양 항생제인 안트라마이신이 1965년에 발견되었다 [Lei㎎ruber, et al., J. Am. Chem . Soc ., 87, 5793-5795 (1965); Lei㎎ruber, et al., J. Am. Chem . Soc ., 87, 5791-5793 (1965)]. 그 이후로, 다수의 천연적으로 존재하는 PBD가 보고되었고, 다양한 유사체에 대해 10개 이상의 합성 경로가 개발되었다 [Thurston, et al., Chem . Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. and Thurston, D.E., Chem . Rev. 2011 111 (4), 2815-2864)]. 패밀리 구성원에는 아베이마이신 [Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)], 치카마이신 [Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)], DC-81 [일본 특허 58-180 487; Thurston, et al., Chem . Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)], 마제트라마이신 [Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)], 네오트라마이신 A 및 B [Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)], 포로트라마이신 [Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)], 프로트라카르신 [Shimizu, et al, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org . Chem ., 52, 91-97 (1987)], 시바노마이신 (DC-102) [Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)], 시비로마이신 [Leber, et al., J. Am. Chem . Soc ., 110, 2992-2993 (1988)] 및 토마마이신 [Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)]이 포함된다. PBD는 하기의 일반 구조를 갖는다:
Figure 112015098431263-pct00001
이들은 그 방향족 A 환과 피롤로 C 환 모두에 있어서 치환체의 수, 형태 및 위치와, C 환의 포화도가 상이하다. B 환에는, DNA의 알킬화에 관여하는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민 (N=C), 카비놀아민 (NH-CH(OH)) 또는 카비놀아민 메틸 에테르 (NH-CH(OMe))가 존재한다. 공지된 천연 산물은 모두 C 환으로부터 A 환쪽으로 볼 때 이들에 우선성 회전을 제공하는 키랄 C11a 위치에서의 (S)-입체배치를 갖는다. 이것은 이들에 B형 DNA의 부홈 (minor groove)과의 등나선성 (isohelicity)을 위한 적절한 3차원 형상을 제공하여, 결합 부위에서의 합치 (snug fit)가 가능하게 된다 [Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc . Chem . Res., 19, 230-237 (1986)]. 부홈에서 부가물을 형성할 수 있는 능력으로 인해 이들은 DNA 프로세싱을 방해할 수 있기 때문에, 항종양제로서의 사용이 가능하다.
특히 유리한 피롤로벤조디아제핀 화합물이 그렉슨 (Gregson) 등에 의해 (Chem. Commun . 1999, 797-798) 화합물 1로서, 그렉슨 (Gregson) 등에 의해 (J. Med . Chem. 2001, 44, 1161-1174) 화합물 4a로서 기술되었다. 이 화합물은 또한 SJG-136으로도 알려져 있으며 다음과 같이 나타내어진다:
Figure 112015098431263-pct00002
WO 2005/085251호에 C2 아릴 치환체를 가지는 것과 같은 다른 다이머성 PBD 화합물이 개시되었으며, 일례는 다음과 같다:
Figure 112015098431263-pct00003
이들 화합물은 매우 유용한 세포독성제인 것으로 나타났다.
항체-약물 컨쥬게이트
항체 요법은 암, 면역학적 및 혈관신생성 장애가 있는 환자의 표적화된 치료를 위해서 확립되었다 [Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343-357]. 세포독성제 또는 세포성장억제제(cytostatic agent), 즉 암의 치료 시에 종양 세포를 죽이거나 억제하는 약물의 국소 전달을 위한 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC), 즉 면역컨쥬게이트의 사용은 종양으로 약물 부위의 전달 및 그에서의 세포내 축적을 표적으로 하는데 반해, 이들 비컨쥬게이트된 약제의 전신 투여는 제거하고자 하는 종양 세포뿐만 아니라 정상 세포에 대해서도 허용할 수 없는 수준의 독성을 일으킬 수 있다 [Xie et al (2006) Expert. Opin . Biol . Ther . 6(3):281-291; Kovtun et al (2006) Cancer Res. 66(6):3214-3121; Law et al (2006) Cancer Res. 66(4):2328-2337; Wu et al (2005) Nature Biotech. 23(9):1137-1145; Lambert J. (2005) Current Opin . in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (2005) Expert Opin . Ther . Patents 15(9):1087-1103; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Trail et al (2003) Cancer Immunol. Immunother . 52:328-337; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614].
이 때문에 최소 독성으로 최대 효능이 모색되고 있다. ADC를 설계하고 정제하기 위한 노력은 모노클로날 항체 (mAb)의 선택성뿐만 아니라 약물의 작용 기전, 약물-연결, 약물/항체 비율 (부하), 및 약물-방출 특성에 초점을 맞추었다 [Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel. 19(7): 299-307; Doronina et al (2006) Bioconj. Chem. 17:114-124; Erickson et al (2006) Cancer Res. 66(8):1-8; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852; Jeffrey et al (2005) J. Med . Chem . 48:1344-1358; Hamblett et al (2004) Clin . Cancer Res. 10:7063-7070]. 약물 부위는 튜불린 결합, DNA 결합 또는 토포이소머라제 저해를 포함한 기전에 의해 그의 세포독성 및 세포성장 억제 효과를 부여할 수 있다. 일부의 세포독성 약물은 큰 항체 또는 단백질 수용체 리간드에 컨쥬게이트되는 경우 불활성으로 되거나 활성이 감소되는 경향이 있다.
ADC에서의 PBD
다이머 PBD가 약물 컨쥬게이트에서 약물로서 개시되었다. 예를 들어, WO 2011/130598호에 항체와 같은 세포 결합제에 연결하기 위한 링커 그룹을 갖는 다이머 PBD 화합물이 기술되었는데, 여기서 링커 그룹은 이용가능한 N10 위치 중 하나에 부착되고, 일반적으로 상기 링커 그룹에서 효소의 작용에 의해 분해된다.
이에 반해, WO 2011/130613호 및 WO 2011/130616호에는 링커 그룹이 C2 위치 중 하나에서 방향족 그룹을 통해 부착되고, 이것은 일반적으로 상기 링커 그룹에서 효소의 작용에 의해 분해되는, 항체와 같은 세포 결합제에 연결하기 위한 링커 그룹을 갖는 다이머 PBD 화합물이 기술되었다. 이러한 항체 약물 컨쥬게이트는 또한 문헌 [Flygare, J., et al, Chem . Biol . Drug Des. 81: 113-121 (2013)]에 기술되었으며 다른 타입의 항체 약물 컨쥬게이트도 기재되었다.
또 다른 접근방법이 WO 2007/085930호에 기재되었으며, 여기서는 토마마이신-유사 다이머가 항체와 같은 세포 결합제에 연결되는 링커 그룹을 가지며, 여기서 링커 그룹은 토마마이신 단위 사이의 테더(tether)에 부착되고, 일반적으로 상기 링커 그룹에서 효소의 작용에 의해 분해된다.
본 발명자들은 세포 결합제와 PBD 컨쥬게이트, 특히 PBD 항체 컨쥬게이트를 형성하는 새로운 접근 방법을 개발하였다.
발명의 개요
일반적인 측면에서, 본 발명은 세포 결합제에 연결하기 위한 링커를 가지는 PBD 다이머 화합물을 포함하는 컨쥬게이트를 제공하며, 여기서 링커는 두 PBD 모노머를 연결하는 브릿지중에 페닐렌 또는 피리딜렌에 부착된 트리아졸, 피페라진, 프로파길렌 또는 옥심 그룹을 가진다. 세포 결합제는 바람직하게는 항체이다.
제1 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 (A)의 신규 컨쥬게이트 화합물을 제공한다:
Figure 112015098431263-pct00004
상기 식에서,
R2는
Figure 112015098431263-pct00005
이고, 여기서 R36a 및 R36b는 독립적으로 H, F, C1-4 포화 알킬, C2-3 알케닐 중에서 선택되고, 상기 알킬 및 알케닐 그룹은 C1-4 알킬 아미도 및 C1-4 알킬 에스테르 중에서 선택되는 그룹에 의해 임의로 치환되거나; 또는 R36a 및 R36b 중 하나가 H인 경우, 다른 하나는 니트릴 및 C1-4 알킬 에스테르 중에서 선택되고;
R6 및 R9는 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로 중에서 선택되고;
R7은 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로 중에서 선택되고;
Y는 하기 식 A1, A2, A3, A4, A5 및 A6 중에서 선택되고:
Figure 112015098431263-pct00006
Figure 112015098431263-pct00007
Figure 112015098431263-pct00008
L은 세포 결합제에 연결된 링커이고;
CBA는 세포 결합제이고;
n은 0 내지 48의 범위에서 선택되는 정수이고;
RA4는 C1-6 알킬렌 그룹이고;
(a) R10은 H이고, R11은 OH, ORA이며, 여기서 RA는 C1-4 알킬이거나; 또는
(b) R10 및 R11은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성하거나; 또는
(c) R10은 H이고, R11은 OSOzM이며, 여기서 z는 2 또는 3이고, M은 1가의 약학적으로 허용가능한 양이온이고;
R 및 R'는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬, C3-20　헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴 그룹 중에서 선택되고, 임의로 NRR' 그룹과 관련하여 R 및 R'는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성하고;
R16, R17, R19, R20, R21 및 R22는 각각 R6, R7, R9, R10, R11 및 R2에 대해 정의된 바와 같고;
Z는 CH 또는 N이고;
T 및 T'는 독립적으로 단일결합 또는 C1-9 알킬렌 중에서 선택되고, 여기서 쇄는 하나 이상의 헤테로 원자, 예를 들어 O, S, N(H), NMe에 의해 차단될 수 있으나, 단 X와 X' 사이 원자들의 최단쇄 내 원자수는 3 내지 12개의 원자이고;
X 및 X'는 독립적으로 O, S 및 N(H) 중에서 선택된다.
따라서, 화학식 A는 Y에 따라 다음 화학식 A-I, A-II, A-III, A-IV, A-V 및 A-VI 중에서 선택된다:
Figure 112015098431263-pct00009
Figure 112015098431263-pct00010
Figure 112015098431263-pct00011
본 발명의 제2 측면은 화학식 (B)의 신규 약물-링커 화합물을 제공한다:
Figure 112015098431263-pct00012
상기 식에서,
모든 그룹은 본 발명의 제1 측면에 정의된 바와 같고;
YL은 식 B1, B2, B3, B4, B5 및 B6의 그룹 중에서 선택되고:
Figure 112015098431263-pct00013
Figure 112015098431263-pct00014
Figure 112015098431263-pct00015
여기서, G는 세포 결합제에 연결하기 위한 반응성 그룹이다.
본 발명의 제3 측면은 본 발명의 화합물 및 컨쥬게이트 화합물의 제조에 사용될 수 있는 화학식 (C)의 화합물을 제공한다:
Figure 112015098431263-pct00016
상기 식에서,
YC는 식 C1, C2, C3, C4 및 C5의 그룹 중에서 선택되고:
Figure 112015098431263-pct00017
(a) R30은 H이고, R31은 OH, ORA이며, 여기서 RA는 C1-4 알킬이거나; 또는
(b) R30 및 R31은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성하거나; 또는
(c) R30은 H이고, R31은 OSOzM이며, 여기서 z는 2 또는 3이고, M은 1가의 약학적으로 허용가능한 양이온이거나; 또는
(d) R30은 질소 보호 그룹이고, R31은 OProtO이며, 여기서 ProtO는 하이드록시 보호 그룹이고;
R40 및 R41은 각각 R30 및 R31에 대해 정의된 바와 같고;
나머지 모든 그룹은 본 발명의 제1 측면에 정의된 바와 같다.
본 발명의 제4 측면은 본 발명의 제2 및 제3 측면의 화합물의 제조에 사용될 수 있는 화학식 (D)의 화합물을 제공한다:
Figure 112015098431263-pct00018
상기 식에서,
YD는 식 D2, D3, D4 및 D6의 그룹 중에서 선택되고:
Figure 112015098431263-pct00019
나머지 모든 그룹은 본 발명의 제3 측면에 정의된 바와 같다.
본 발명의 제5 측면은 본 발명의 제2, 제3 및 제4 측면의 화합물의 제조에 사용될 수 있는 화학식 (E)의 화합물을 제공한다:
Figure 112015098431263-pct00020
상기 식에서,
YE는 식 E1, E2 및 E5의 그룹 중에서 선택되고:
Figure 112015098431263-pct00021
여기서,
RE1은 H 및 TMS 중에서 선택되고;
RE2는 Br, Cl 및 I 중에서 선택되고;
나머지 모든 그룹은 본 발명의 제3 측면에 정의된 바와 같다.
본 발명의 제6 측면은 의학적 치료 방법에 있어서 본 발명의 제1 측면의 화합물의 용도를 제공한다. 제4 측면은 또한 제1 측면의 화합물과 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 제7 측면은 증식성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 제1 측면의 화합물 또는 본 발명의 제4 측면의 약학 조성물을 제공한다. 제5 측면은 또한 제1 측면의 화합물 또는 제4 측면의 약학 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 증식성 질환 치료용 의약의 제조 방법에서의 제1 측면의 화합물의 용도, 및 증식성 질환에 걸린 포유동물의 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 제8 측면은 제2 측면의 약물-링커와 세포 결합제를 컨쥬게이트시키는 단계를 포함하는, 본 발명의 제1 측면의 화합물의 합성 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 제3, 제4 또는 제5 측면의 화합물을 적합한 시약과 반응시켜 제3, 제4 또는 제5 측면의 화합물부터 본 발명의 제2 측면의 화합물을 합성하는 방법을 제공한다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 특정화된 링커를 경유하여 다이머 브릿지화 부분을 통해 세포 결합제에 연결된 PBD 다이머를 포함하는 컨쥬게이트를 제공한다.
본 발명은 대상체의 바람직한 부위에 PBD 컨쥬게이트를 제공하는데 사용하기에 적합하다.
질소 보호 그룹
질소 보호 그룹은 당 업계에 주지되어 있다. 본 발명에 사용하기에 바람직한 질소 보호 그룹은 하기 일반식을 가지는 카바메이트 보호 그룹이다:
Figure 112015098431263-pct00022
상기 식에서, R'30은 임의로 치환된 알킬 (예를 들면, C1-20 알킬), 아릴 (예를 들면, C5-20 아릴) 또는 헤테로아릴 (예를 들면, C3-20 헤테로사이클릴) 그룹이다.
다수의 가능한 카바메이트 질소 보호 그룹이 본원에 참고로 원용되는 [Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition, John Wiley & Sons, Inc., 2007 (ISBN 978-0-471-69754-1)의 706-772 면]에 기술되었다.
특히 바람직한 보호 그룹은 Alloc, Troc, Teoc, BOC, TcBOC, Fmoc, 1-Adoc 및 2-Adoc를 포함한다.
하이드록실 보호 그룹
하이드록실 보호 그룹은 당 업계에 주지되어 있다. 다수의 적합한 그룹이 본원에 참고로 원용되는 [Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition, John Wiley & Sons, Inc., 2007 (ISBN 978-0-471-69754-1)의 24-298 면]에 기술되었다.
특히 관심의 대상이 되는 부류는 실릴 에테르, 메틸 에테르, 알킬 에테르, 벤질 에테르, 에스테르, 벤조에이트, 카보네이트, 및 설포네이트를 포함한다. 특히 바람직한 하이드록실 보호 그룹은 THP를 포함한다.
바람직한 예
다음의 바람직한 예는 상술한 바와 같은 본 발명의 모든 측면에 적용될 수 있거나, 또는 단일 측면과 관련될 수 있다. 바람직한 예는 어떤 조합으로도 함께 조합될 수 있다.
R 2
일부 실시양태에서, R36a 및 R36b는 모두 H이다.
다른 실시양태에서, R36a 및 R36b는 모두 메틸이다.
추가 실시양태에서, R36a 및 R36b 중 하나는 H이고, 다른 하나는 C1 -4 포화 알킬, C2-3 알케닐중에서 선택되며, 여기서 알킬 및 알케닐 그룹은 임의로 치환된다. 이들 추가 실시양태중 일부에서, H가 아닌 그룹은 메틸 및 에틸중에서 선택될 수 있다.
R 22
R2에 대한 상기 바람직한 예가 R22에도 동일하게 적용된다.
R 6
일 실시양태에서, R6은 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn- 및 할로 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, R6은 독립적으로 H, OH, OR, SH, NH2, NO2 및 할로 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, R6은 독립적으로 H 및 할로 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, R6은 독립적으로 H이다.
일 실시양태에서, R6 및 R7은 함께 그룹 -O-(CH2)p-O-를 형성하고, 여기서 p는 1 또는 2이다.
이들 실시양태는 또한 R16에도 적용된다.
R 7
R7은 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, R7은 독립적으로 OR이다.
일 실시양태에서, R7은 독립적으로 OR7A이고, 여기서 R7A는 독립적으로 임의로 치환된 C1-6　알킬이다.
일 실시양태에서, R7A는 독립적으로 임의로 치환된 포화 C1-6 알킬이다.
일 실시양태에서, R7A는 독립적으로 임의로 치환된 C2-4 알케닐이다.
일 실시양태에서, R7A는 독립적으로 Me이다.
일 실시양태에서, R7A는 독립적으로 CH2Ph이다.
일 실시양태에서, R7A는 독립적으로 알릴이다.
이들 실시양태는 또한 R17에도 적용된다.
R 9
일 실시양태에서, R9는 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn- 및 할로 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, R9는 독립적으로 H이다.
일 실시양태에서, R9는 독립적으로 R 또는 OR이다.
이들 실시양태는 또한 R19에도 적용된다.
N10-C11
일부 실시양태에서, R10은 H이고, R11은 OH, ORA이고, 여기서 RA는 C1-4 알킬이다. 이들 실시양태중 일부에서, R11은 OH이다. 그밖의 다른 이들 실시양태에서, R11은 ORA이고, 여기서 RA는 C1-4 알킬이다. 이들 실시양태중 일부에서, RA는 메틸이다.
일부 실시양태에서, R10 및 R11은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성한다.
일부 실시양태에서, R10은 H이고, R11은 OSOzM이고, 여기서 z는 2 또는 3이고, M은 1가의 약학적으로 허용가능한 양이온이다. 이들 실시양태중 일부에서, M은 1가의 약학적으로 허용가능한 양이온이고, Na+일 수 있다. 또한, 일부 실시양태에서 z는 3이다.
상기 바람직한 예는 R20 및 R21에 동일하게 적용된다.
일부 실시양태에서, R30은 H이고, R31은 OH, ORA이고, 여기서 RA는 C1-4 알킬이다. 이들 실시양태중 일부에서, R31은 OH이다. 그밖의 다른 이들 실시양태에서, R31은 ORA이고, 여기서 RA는 C1-4 알킬이다. 이들 실시양태중 일부에서, RA는 메틸이다.
일부 실시양태에서, R30 및 R31은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성한다.
일부 실시양태에서, R30은 H이고, R31은 OSOzM이고, 여기서 z는 2 또는 3이고, M은 1가의 약학적으로 허용가능한 양이온이다. 이들 실시양태중 일부에서, M은 1가의 약학적으로 허용가능한 양이온이고, Na+일 수 있다. 또한, 일부 실시양태에서 z는 3이다.
일부 실시양태에서, R30은 질소 보호 그룹이고, R31은 OProtO이고, 여기서 ProtO는 하이드록시 보호 그룹이다.
이들 실시양태중 일부에서, 질소 보호 그룹은 Alloc, Troc, Teoc, BOC, TcBOC, Fmoc, 1-Adoc 및 2-Adoc 중에서 선택될 수 있고, 더 바람직하게는 Boc이다.
이들 실시양태중 일부에서, 질소 보호 그룹은 THP일 수 있다.
화학식 D의 화합물의 경우, R30 및 R31은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성하는 것이 바람직할 수 있다.
화학식 E의 화합물의 경우, R30이 질소 보호 그룹이고, R31은 OProtO이며, 여기서 ProtO는 하이드록시 보호 그룹인 것이 바람직할 수 있다.
YC가 식 C2, C3 또는 C4인 화학식 C의 화합물의 경우, R30 및 R31은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성하는 것이 바람직할 수 있다.
YC가 식 C1 또는 C5인 화학식 C의 화합물의 경우, R30이 질소 보호 그룹이고, R31은 OProtO이고, 여기서 ProtO는 하이드록시 보호 그룹인 것이 바람직할 수 있다.
상기 바람직한 예는 R40 및 R41에 동일하게 적용된다.
T 및 T'
T 및 T'는 각각 독립적으로 단일결합 또는 C1-9 알킬렌 그룹 중에서 선택되며, 여기서 쇄는 하나 이상의 헤테로 원자, 예를 들어 O, S, N(H) 및/또는 NMe에 의해 차단될 수 있으나, 단 X와 X' 사이 원자들의 최단쇄 내 원자수는 3 내지 12개의 원자이다.
일 실시양태에서, T 및 T'의 각 알킬렌 그룹은 O, S, 및 NMe 중에서 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자에 의해 임의로 차단된다.
일 실시양태에서, T 및 T"는 각각 독립적으로 단일결합 및 C1-9 알킬렌 그룹 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, T는 단일결합, C1, C2, C3 및 C4 알킬렌 그룹 중에서 선택되고, T'는 단일결합, C1, C2, C3 및 C4 알킬렌 그룹 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, T는 단일결합, C1, 및 C2 알킬렌 그룹 중에서 선택되고, T'는 단일결합, C1, 및 C2 알킬렌 그룹 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, T는 단일결합 및 C1 알킬렌 그룹 중에서 선택되고, T'는 단일결합 및 C1 알킬렌 그룹 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, T는 단일결합이고 T'는 단일결합이다.
일 실시양태에서, T는 C1 알킬렌 그룹이고 T'는 C1 알킬렌 그룹이다.
일부 실시양태에서, T 및 T'는 동일하다.
상술된 알킬렌 그룹은 하나 이상의 헤테로 원자에 의해 임의로 차단될 수 있다.
상술된 알킬렌 그룹은 비치환된 선형 지방족 알킬렌 그룹일 수 있다.
X
일 실시양태에서, X는 O, S, 또는 N(H) 중에서 선택된다.
바람직하게는, X는 O이다.
다이머
일부 실시양태에서, 그룹 R22, R16, R17, R19, R20 및 R21은 각각 그룹 R2, R6, R9, R7, R10 및 R11과 동일하다. 이들 실시양태에서, PBD 모노머 단위는 동일한 치환체를 가진다.
본 발명의 제1 측면의 특히 바람직한 화합물은 하기 화학식 Ia의 것일 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00023
상기 식에서,
R10, R11, R20, R21 및 Y는 상기 정의된 바와 같고;
t1 및 t2는 독립적으로 0, 1 및 2 중에서 선택되고;
R7a 및 R17a는 독립적으로 메틸 및 페닐 중에서 선택된다.
본 발명의 제2 측면의 특히 바람직한 화합물은 하기 화학식 IIa의 것일 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00024
상기 식에서,
R10, R11, R20, R21 및 YL은 상기 정의된 바와 같고;
t1 및 t2는 독립적으로 0, 1 및 2 중에서 선택되고;
R7a 및 R17a는 독립적으로 메틸 및 페닐 중에서 선택된다.
본 발명의 제3 측면의 특히 바람직한 화합물은 하기 화학식 IIIa의 것일 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00025
상기 식에서,
R10, R11, R20, R21 및 YC는 상기 정의된 바와 같고;
t1 및 t2는 독립적으로 0, 1 및 2 중에서 선택되고;
R7a 및 R17a는 독립적으로 메틸 및 페닐 중에서 선택된다.
n (Y, Y L )
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 0 내지 24의 정수이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 0 내지 12의 정수이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 0 내지 8의 정수이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 0 내지 6의 정수이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 0이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 1이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 2이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 3이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 4이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 5이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 6이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 7이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 8이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 9이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 10이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 11이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 12이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 13이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 14이다.
일부 실시양태에서, n (Y 또는 YL에서)은 15이다.
일부 실시양태에서 Y는 A1, 또는 YL은 B1인 경우, n은 3 및 6 중에서 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서 Y는 A2, 또는 YL은 B2인 경우, n은 4 및 6중에서 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서 Y는 A3, 또는 YL은 B3인 경우, n은 4일 수 있다.
일부 실시양태에서 Y는 A4, 또는 YL은 B4인 경우, n은 4일 수 있다.
일부 실시양태에서 Y는 A5, 또는 YL은 B5인 경우, n은 11일 수 있다.
일부 실시양태에서 Y는 A6, 또는 YL은 B6인 경우, n은 2일 수 있다.
L 및 G
L은 컨쥬게이트 화합물에서 세포 결합제에 연결되는 링커이다. G는 PBD 다이머를 세포 결합제에 연결하여 컨쥬게이트 화합물을 형성하는 반응성 그룹이다.
바람직하게는, 링커/반응성 그룹은 세포 결합제 상에 친핵성 작용 그룹과의 반응을 위한 친전자성 작용 그룹을 함유한다. 항체 상의 친핵성 그룹은 (i) N-말단 아민 그룹, (ii) 측쇄 아민 그룹, 예를 들어 라이신, (iii) 측쇄 티올 그룹, 예를 들어 시스테인, 및 (iv) 항체가 글리코실화된 당 하이드록실 또는 아미노 그룹을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 아민, 티올, 및 하이드록실 그룹은 친핵성이며, (i) 말레이미드 그룹 (ii) 활성화 디설파이드, (iii) NHS (N-하이드록시석신이미드) 에스테르, HOBt (N-하이드록시벤조트리아졸) 에스테르, 할로포르메이트, 및 산 할라이드와 같은 활성 에스테르; (iv) 할로아세트아미드와 같은 알킬 및 벤질 할라이드; 및 (v) 알데히드, 케톤, 카복실을 비롯한 링커 부분 및 링커 시약 상의 친전자성 그룹과 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있으며, 그의 일부로서 다음과 같은 것들이 예시된다:
Figure 112015098431263-pct00026
특정의 항체는 환원가능한 쇄간 디설파이드, 즉 시스테인 브릿지를 갖는다. 항체는 DTT (디티오트레이톨)와 같은 환원제로 처리함으로써 링커 시약과의 컨쥬게이션에 대해 반응성으로 만들 수 있다. 따라서, 각각의 시스테인 브릿지는 이론상 2개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 추가의 친핵성 그룹은 아민의 티올로의 전환으로 이어지는 라이신과 2-이미노티올란 (트라우트 (Traut's) 시약)의 반응을 통해서 항체 내로 도입될 수 있다. 반응성 티올 그룹은 1, 2, 3, 4 또는 그 이상의 시스테인 잔기를 도입시킴으로써 (예를 들어, 하나 이상의 비-천연 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 돌연변이체 항체를 제조함으로써) 항체 (또는 그의 단편) 내로 도입될 수 있다. US 7521541호는 반응성 시스테인 아미노산의 도입에 의한 항체의 조작을 교시한다.
일부 실시양태에서, 링커는 항체 상에 존재하는 친전자성 그룹과 반응성인 반응성 친핵성 그룹을 가진다. 항체 상의 유용한 친전자성 그룹은 알데히드 및 케톤 카보닐 그룹을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 링커의 친핵성 그룹에 있는 헤테로 원자는 항체 상의 친전자성 그룹과 반응하여 항체 단위에 대해 공유 결합을 형성할 수 있다. 링커 상의 유용한 친핵성 그룹은 히드라지드, 옥심, 아미노, 하이드록실, 히드라진, 티오세미카바존, 히드라진 카복실레이트, 및 아릴히드라지드를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 항체 상의 친전자성 그룹은 링커에 대한 부착을 위한 용이한 부위를 제공한다.
일 실시양태에서, 그룹 L은 다음과 같다:
Figure 112015098431263-pct00027
상기 식에서, 별표는 그룹 Y의 나머지에 대한 부착점을 가리키고, 파선은 세포 결합제에 대한 부착점을 가리키며, m은 0 내지 6의 범위 중에서 선택되는 정수이다. 일 실시양태에서, m은 2, 3, 4 및 5 중에서 선택된다.
일 실시양태에서, 세포 결합제와 L 사이의 연결은 세포 결합제의 티올 잔기와 L의 말레이미드 그룹을 통해서 일어난다.
일 실시양태에서, 세포 결합제와 L 사이의 연결은 다음과 같다:
Figure 112015098431263-pct00028
상기 식에서, 별표는 L 그룹의 나머지 부분 또는 Y 그룹의 나머지 부분에 대한 부착점을 가리키고, 파선은 세포 결합제의 나머지 부분에 대한 부착점을 가리킨다. 이 실시양태에서, S 원자는 전형적으로 세포 결합제로부터 유래된다.
상기 각 실시양태에서, 대안적인 작용 그룹이 하기 나타낸 말레이미드-유래 그룹 대신 사용될 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00029
상기 식에서, 파선은 전술한 바와 같이 세포 결합제에 대한 부착점을 가리키고, 별표는 L 그룹의 나머지 부분 또는 Y 그룹의 나머지 부분에 대한 결합을 가리킨다.
일 실시양태에서, 말레이미드-유래 그룹은 다음의 그룹으로 대체된다:
Figure 112015098431263-pct00030
상기 식에서, 파선은 세포 결합제에 대한 부착점을 가리키고, 별표는 L 그룹의 나머지 부분 또는 Y 그룹의 나머지 부분에 대한 결합을 가리킨다.
일 실시양태에서, 말레이미드-유래 그룹은 임의로 세포 결합제와 함께, 다음 중에서 선택되는 그룹으로 대체된다:
-C(=O)NH-,
-C(=O)O-,
-NHC(=O)-,
-OC(=O)-,
-OC(=O)O-,
-NHC(=O)O-,
-OC(=O)NH-,
-NHC(=O)NH-,
-NHC(=O)NH,
-C(=O)NHC(=O)-,
-S-,
-S-S-,
-CH2C(=O)-
-C(=O)CH2-,
=N-NH-, 및
-NH-N=.
일 실시양태에서, 말레이미드-유래 그룹은 임의로 세포 결합제와 함께, 다음 중에서 선택되는 그룹으로 대체된다:
Figure 112015098431263-pct00031
상기 식에서, 파선은 세포 결합제에 대한 부착점, 또는 L 그룹의 나머지 부분 또는 Y 그룹의 나머지 부분에 대한 결합을 가리키고, 별표는 세포 결합제에 대한 다른 부착점, 또는 L 그룹의 나머지 부분 또는 Y 그룹의 나머지 부분에 대한 결합을 가리킨다.
세포 결합제에 Y 그룹의 나머지 부분을 연결하기 위해 L로서 사용될 수 있는 또 다른 그룹은 WO　2005/082023호에 기재되었다.
따라서, 본 발명의 실시양태에서 L은 하기 화학식의 것이다:
-LA-(CH2)m- (L1)
상기 식에서, m은 0 내지 6이고;
LA는 다음 중에서 선택되며:
Figure 112015098431263-pct00032
여기서, Ar은 C5-6 아릴렌 그룹, 예를 들어 페닐렌이다.
L이 L1인 일부 실시양태에서, m은 2, 3 또는 5일 수 있다.
L이 L1인 일부 실시양태에서, LA는 LA1-1일 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, L은 하기 화학식의 것이고:
-LA-(CH2)m-O- (L2)
여기서, m은 0 내지 6이고;
LA는 상기 그룹 중에서 선택된다.
이론에 구애됨이 없이, 상기 그룹은 항체로부터 분해되어 카바메이트 그룹이 말단 아민을 생성할 수 있다.
L이 L2인 일부 실시양태에서, LA는 LA3-2일 수 있다.
L이 L2인 일부 실시양태에서, m은 1일 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, L은 다음 화학식의 것이고:
-LA-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)p- (L3)
여기서, q는 1 내지 3이고,
p는 1 내지 3이며;
LA는 상기 그룹 중에서 선택된다.
이론에 구애됨이 없이, 상기 그룹은 항체로부터 분해되어 카바메이트 그룹이 H2N-(CH2)p- 그룹 (L3')를 생성할 수 있다.
L이 L3인 일부 실시양태에서, q는 1일 수 있고, p는 2일 수 있다.
L이 L3인 일부 실시양태에서, LA는 LA7, LA8-1 및 LA8-2 중에서 선택될 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, L은 다음 화학식의 것이고:
Figure 112015098431263-pct00033
여기서,
m은 0 내지 6이고;
X1 및 X2는 변형될 수 있는 천연 아미노산 중에서 선택될 수 있는 아미노산 그룹이고;
LA는 상기 그룹 중에서 선택된다.
천연 아미노산은 디펩타이드 그룹이 카텝신 불안정성을 갖도록(cathepsin labile) 선택될 수 있다.
일 실시양태에서, 그룹 -X1-X2-는 다음 중에서 선택되고:
-Phe-Lys-,
-Val-Ala-,
-Val-Lys-,
-Ala-Lys-,
-Val-Cit-,
-Phe-Cit-,
-Leu-Cit-,
-Ile-Cit-,
-Phe-Arg-,
-Trp-Cit-
여기서, Cit는 시트룰린이다.
바람직하게는, 그룹 -X1-X2-는 다음 중에서 선택된다:
-Phe-Lys-,
-Val-Ala-,
-Val-Lys-,
-Ala-Lys-,
-Val-Cit-.
가장 바람직하게는, 그룹 -X1-X2-는 -Phe-Lys- 또는 -Val-Ala-이다.
L이 L4인 일부 실시양태에서, m은 1일 수 있다.
본원에 참고로 원용되는 [Dubowchik et　al., Bioconjucate Chemistry, 2002, 13, 855-869]에 기술된 것을 비롯한 다른 디펩타이드 조합물이 사용될 수도 있다.
일 실시양태에서, 필요에 따라 아미노산 측쇄는 유도체화된다. 예를 들어, 아미노산 측쇄의 아미노 그룹 또는 카복시 그룹이 유도체화될 수 있다.
일 실시양태에서, 측쇄 아미노산, 예컨대 라이신의 아미노 그룹 NH2는 NHR 및 NRR'로 구성된 그룹 중에서 선택된 유도체화된 형태이다.
일 실시양태에서, 측쇄 아미노산, 예컨대 아스파르트산의 카복시 그룹 COOH는 COOR, CONH2, CONHR 및 CONRR'로 구성된 그룹 중에서 선택된 유도체화된 형태이다.
일 실시양태에서, 아미노산 측쇄는 필요에 따라 화학적으로 보호된다. 측쇄 보호 그룹은 그룹 RL과 관련하여 후술되는 그룹일 수 있다. 본 발명자들은 보호된 아미노산 서열이 효소에 의해 분해될 수 있음을 발견하였다. 예를 들어, Boc 측쇄-보호된 Lys 잔기를 포함하는 디펩타이드 서열이 카텝신에 의해 분해될 수 있음을 발견하였다.
아미노산의 측쇄에 대한 보호 그룹은 당 업계에 주지되어 있으며, 노바바이오캠(Novabiochem) 카탈로그에 기재되었다. 추가적인 보호 그룹 전략이 [Protective Groups in Organic Synthesis, Greene and Wuts]에서 개시되었다.
가능한 측쇄 보호 그룹을 반응성 측쇄 작용 그룹을 가지는 아미노산에 대해 하기 나타내었다:
Arg: Z, Mtr, Tos;
Asn: Trt, Xan;
Asp: Bzl, t-Bu;
Cys: Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt;
Glu: Bzl, t-Bu;
Gln: Trt, Xan;
His: Boc, Dnp, Tos, Trt;
Lys: Boc, Z-Cl, Fmoc, Z, Alloc;
Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS;
Thr: Bz;
Trp: Boc;
Tyr: Bzl, Z, Z-Br.
따라서, 본 발명의 실시양태에서, G는 하기 화학식의 것이다:
GA-(CH2)m- (G1)
상기 식에서,
m은 0 내지 6이고;
GA는 다음 중에서 선택되며:
Figure 112015098431263-pct00034
상기 식에서, Ar은 C5-6 아릴렌 그룹, 예를 들어 페닐렌을 나타낸다.
G가 G1인 일부 실시양태에서, m은 2, 3 또는 5일 수 있다.
G가 G1인 일부 실시양태에서, GA는 GA1-1일 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, G는 하기 화학식의 것이다:
GA-(CH2)m-O- (G2)
상기 식에서,
m은 0 내지 6이고;
GA는 상기 그룹 중에서 선택된다.
G가 G2인 일부 실시양태에서, GA는 GA3-2일 수 있다.
G가 G2인 일부 실시양태에서, m은 1일 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, G는 하기 화학식의 것이다:
GA-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)p- (G3)
상기 식에서,
q는 1 내지 3이고,
p는 1 내지 3이고;
GA는 상기 그룹 중에서 선택된다.
G가 G3인 일부 실시양태에서, q는 1일 수 있고, p는 2일 수 있다.
G가 G3인 일부 실시양태에서, GA는 GA7 및 GA8 중에서 선택될 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, G는 하기 화학식의 것이다:
Figure 112015098431263-pct00035
상기 식에서,
m은 0 내지 6이고;
X1 및 X2는 L4에 대해 상기 정의한 바와 같으며;
GA는 상기 그룹 중에서 선택된다.
R 및 R'
일 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬, C3-20　헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴 그룹 중에서 선택된다. 이들 그룹은 하기 치환체 섹션에서 각각 정의된다.
일 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬이다.
일 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C3-20　헤테로사이클릴이다.
일 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C5-20 아릴이다.
일 실시양태에서, R은 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬이다.
R에 대한 바람직한 예는 R'에도 적용된다
본 발명의 일부 실시양태에서 치환체 그룹 -NRR'를 가지는 화합물이 제공된다. 일 실시양태에서, R 및 R'는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성한다. 환은 추가의 헤테로 원자, 예를 들어 N, O 또는 S를 함유할 수 있다.
일 실시양태에서, 헤테로사이클릭 환 자체가 그룹 R로 치환된다. 추가의 N 헤테로 원자가 존재하는 경우, 치환체는 N 헤테로 원자 상에 위치할 수 있다.
R A4
일 실시양태에서, RA4는 C2-4 알킬렌 그룹이다.
일 실시양태에서, RA4는 C2 알킬렌 그룹이다.
일 실시양태에서, RA4는 C3 알킬렌 그룹이다.
일 실시양태에서, RA4는 비치환된 C1-6 알킬렌 그룹이다.
일 실시양태에서, RA4는 선형 C1-6 알킬렌 그룹이다.
일 실시양태에서, RA4는 -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- 및 -CH2CH2CH2CH2-로 구성된 그룹 중에서 선택된다.
세포 결합제
세포 결합제는 어떤 종류의 것이라도 될 수 있으며, 펩타이드 및 비-펩타이드를 포함한다. 이들은 적어도 하나의 결합 부위를 포함하는 항체 또는 항체의 단편, 림포킨, 호르몬, 성장 인자, 영양소-수송 (nutrient-transport) 분자, 또는 그 밖의 다른 세포 결합 분자 또는 물질을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로는 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다이머, 멀티머, 다중특이성 (multispecific) 항체 (예를 들어, 이중특이성 항체), 및 항체 단편을 포함한다 [Miller et al (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861]. 항체는 쥐, 인간, 인간화, 키메릭 항체이거나, 또는 다른 종으로부터 유래된 것일 수 있다. 항체는 특이적 항원을 인식하고, 그에 결합할 수 있는 면역 시스템에 의해서 생성된 단백질이다 [Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York]. 표적 항원은 일반적으로 다수의 항체 상의 CDR에 의해서 인식되는, 에피토프 (epitope)로도 불리는 다수의 결합 부위를 갖는다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각각의 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 하나의 항원은 복수의 대응 항체를 가질 수 있다. 항체는 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 즉 관심이 있는 표적의 항원 또는 그의 일부분을 면역특이적으로 결합시키는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함하며, 상기 표적은 자가면역 질환과 관련된 자가면역 항체를 생산하는 암세포 또는 세포들을 포함하나 이들로만 제한되지 않는다. 면역글로불린은 임의의 타입 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위 부류의 면역글로불린 분자일 수 있다. 면역글로불린은 인간, 쥐 또는 토끼 기원을 비롯한 임의의 종으로부터 유래될 수 있다.
"항체 단편"은 일반적으로 그의 항원 결합 또는 가변 영역인 전장 항체의 일부분을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디 (diabodies); 선형 항체; 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 Fab 발현 라이브러리에 의해서 생산된 단편, 항-이디오타입 (안티-Id) 항체, CDR (상보성 결정 영역), 및 상기한 임의 것의 에피토프-결합 단편, 단일-쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체가 포함된다.
본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 즉 소량으로 존재할 수 있는 자연발생적인 가능한 돌연변이를 제외하고는 동일한 집단을 포함하는 개별적인 항체를 나타낸다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 유도되는 것으로서 고도의 특이성을 가진다. 더구나, 상이한 결정인자 (에피토프)에 대해 유도되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 유도된다. 그들의 특이성 이외에도, 모노클로날 항체는 이들이 다른 항체에 의해서 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어구 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균일한 집단으로부터 수득된 것으로서의 항체의 특징을 나타내며, 어떤 특별한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지는 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 쾰러 (Kohler) 등에 의해서 최초로 기술된 하이브리도마 방법 [Kohler et al (1975) Nature 256:495]에 의해서 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법 (참조: US 4816567)에 의해서 제조될 수 있다. 또한, 모노클로날 항체는 문헌 [Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 개시된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다.
본 명세서에서 모노클로날 항체는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특별한 종으로부터 유래되거나 특별한 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 한편, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 "키메릭" 항체뿐만 아니라, 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한, 이러한 항체의 단편을 포함한다 [US 4816567; 및 Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855]. 키메릭 항체는 비-인간 영장류로부터 유래된 가변 도메인 항원-결합 서열 및 인간 불변 영역 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
본 명세서에서 "온전한 항체"는 VL 및 VH 도메인뿐만 아니라 경쇄 불변 도메인 (CL) 및 중쇄 불변 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 온전한 항체는 항체의 Fc 도메인 (천연 서열 Fc 도메인 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 도메인)에 기인할 수 있는 이들 생물학적 활성을 나타내는 하나 이상의 "효과기 기능"을 가질 수 있다. 항체 효과기 기능의 예로는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식작용; 및 B 세포 수용체 및 BCR과 같은 세포 표면 수용체의 하향 조절이 포함된다.
그들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 온전한 항체는 상이한 "부류"로 지정될 수 있다. 온전한 항체에는 5 가지의 주된 부류 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM가 있으며, 이들 중의 몇 가지는 "하위 부류" (이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 추가 분류될 수 있다. 항체의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다. 면역글로불린의 상이한 부류의 서브유니트 구조 및 삼차원 배열은 잘 알려져 있다.
세포 결합제의 예로는 본 명세서에 원용된 WO　2007/085930호에서 사용하도록 기술된 성분이 포함된다.
세포 결합제는 폴리펩타이드일 수 있거나, 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 폴리펩타이드는 사이클릭 폴리펩타이드일 수 있다. 세포 결합제는 항체일 수 있다. 따라서, 일 실시양태에서 본 발명은 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC)를 제공한다.
약물 부하
약물 부하는 항체 당 PBD 약물의 평균 개수이다. 약물 부하는 항체 (Ab)당 1 내지 8개의 약물 (D) 범위일 수 있으며, 즉 여기에서는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 및 8의 약물 부분이 항체에 공유적으로 부착된다. ADC의 조성물은 1 내지 8개 범위의 약물과 컨쥬게이트된 항체의 집합을 포함한다. 컨쥬게이션 반응으로부터의 ADC 제제에서 항체 당 약물의 평균 수는 질량 분광분석, ELISA 분석, 전기영동, 및 HPLC와 같은 통상적인 수단에 의해서 특성화될 수 있다. 또한 p의 측면에서 ADC의 정량적 분포가 결정될 수 있다. ELISA에 의해, ADC의 특정 제제에서의 p의 평균값이 결정될 수 있다 [Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852]. 그러나, p (약물) 값의 분포는 항체-항원 결합 및 ELISA의 검출 한계에 의해 식별가능하지 않다. 또한, 항체-약물 컨쥬게이트의 검출을 위한 ELISA 분석은 약물 부분이 중쇄 또는 경쇄 단편, 또는 특정 아미노산 잔기와 같은 항체에 부착되는 곳을 결정하지 못한다. 일부의 경우에, p가 다른 약물 부하를 갖는 ADC로부터의 특정한 값인 경우, 균질한 ADC의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해서 이룰 수 있다.
일부의 항체-약물 컨쥬게이트의 경우에, p는 항체 상의 부착 부위의 수에 의해서 제한될 수 있다. 예를 들어, 항체는 단 하나 또는 수 개의 시스테인 티올 그룹을 가질 수 있거나, 그를 통해 링커가 부착될 수 있는 단 하나 또는 수 개의 충분히 반응성인 티올 그룹을 가질 수 있다. 고 약물 부하, 예를 들어, p >5는 특정 항체-약물 컨쥬게이트의 응집, 불용성, 독성 또는 세포 투과성의 상실을 야기할 수 있다.
전형적으로, 약물 부분의 이론적 최대량보다 작은 수가 컨쥬게이션 반응 중에 항체에 컨쥬게이트된다. 항체는 예를 들어, 약물-링커 중간체 (D-L) 또는 링커 시약과 반응하지 않는 다수의 라이신 잔기를 함유할 수 있다. 최고의 반응성을 가진 라이신 그룹만이 아민-반응성 링커 시약과 반응할 수 있다. 또한, 최고의 반응성을 가진 시스테인 티올 그룹만이 티올-반응성 링커 시약과 반응할 수 있다. 일반적으로, 항체는 약물 부분에 연결될 수 있는 유리 및 반응성 시스테인 티올 그룹을, 존재하더라도, 많이는 함유하지 않는다. 화합물의 항체 내 대부분의 시스테인 티올 잔기는 디설파이드 브릿지로서 존재하며, 부분적 또는 완전한 환원 조건 하에서 디티오트레이톨 (DTT) 또는 TCEP와 같은 환원제에 의해서 환원되어야 한다. ADC의 부하량 (약물/항체 비)은 (i) 항체에 대해 몰과량의 약물-링커 중간체 (D-L) 또는 링커 시약의 제한, (ii) 컨쥬게이션 반응 시간 또는 온도의 제한, 및 (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 부분적이거나 제한적인 환원 조건을 포함한 몇 가지 상이한 방식으로 제어될 수 있다.
시스테인 아미노산은 항체 내의 반응성 부위에서 조작될 수 있고, 이것은 쇄내 또는 분자간 디설파이드 결합을 형성하지 않는다 [Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; Shen et al (2012) Nature Biotech., 30(2):184-191; Junutula et al (2008) Jour of Immun. Methods 332:41-52]. 조작된 시스테인 티올은 말레이미드 또는 알파-할로 아미드와 같은 티올-반응성 친전자성 그룹을 갖는 본 발명의 약물-링커 시약 또는 링커 시약과 반응하여 시스테인 조작된 항체 (ThioMabs)와 PBD 약물 부분을 갖는 ADC를 형성할 수 있다. 이렇게 하여 약물 부분의 위치가 설계, 조절 및 공지될 수 있다. 조작된 시스테인 티올 그룹은 전형적으로 고수율로 티올-반응성 링커 시약 또는 약물-링커 시약과 반응하기 때문에 약물 부하가 조절될 수 있다. IgG 항체의 조작으로 중쇄 또는 경쇄 상의 단일 부위에서의 치환에 의해 시스테인 아미노산을 도입하는 것은 대칭 항체 상에 2개의 새로운 시스테인을 제공한다. 2에 가까운 약물 부하가 달성되고, 컨쥬게이션 산물 ADC의 균질성에 접근할 수 있다.
항체의 복수 개의 친핵성 또는 친전자성 그룹이 약물-링커 중간체와 반응하거나, 링커 시약과 반응한 후 이어서 약물 부분 시약과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 예를 들어, 1, 2, 3개 등의 항체에 부착된 약물 부분의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물이다. 폴리머 역상 (PLRP) 및 소수성 상호작용 (HIC)과 같은 액체 크로마토그래피 방법은 약물 부하 값에 의해 혼합물에서 화합물을 분리시킬 수 있다. 단일 약물 부하 값 (p)을 갖는 ADC의 제제가 분리될 수 있지만, 약물 부분이 링커를 통해 항체 상의 상이한 부위에서 부착될 수 있기 때문에 이들 단일 부하 값의 ADC는 여전히 불균질한 혼합물일 수 있다.
따라서, 본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트 조성물은 항체가 하나 이상의 PBD 약물 부분을 갖고 약물 부분이 다양한 아미노산 잔기에서 항체에 부착될 수 있는 경우에 항체-약물 컨쥬게이트 화합물의 혼합물을 포함한다.
일 실시양태에서, 세포 결합제당 다이머 피롤로벤조디아제핀 그룹의 평균 수는 1 내지 20의 범위이다. 일부의 실시양태에서, 상기 범위는 1 내지 8, 2 내지 8, 2 내지 6, 2 내지 4, 및 4 내지 8로부터 선택된다.
일부의 실시양태에서는, 세포 결합제당 하나의 다이머 피롤로벤조디아제핀 그룹이 존재한다.
펩타이드
일 실시양태에서, 세포 결합제는 4 내지 20개, 바람직하게는 6 내지 20개의 인접 아미노산 잔기를 포함하는 선형 또는 사이클릭 펩타이드이다. 이 실시양태에서, 하나의 세포 결합제가 하나의 모노머 또는 다이머 피롤로벤조디아제핀 화합물에 연결되는 것이 바람직하다.
일 실시양태에서, 세포 결합제는 인테그린 αvβ6에 결합하는 펩타이드를 포함한다. 펩타이드는 XYS에 비해 αvβ6에 대해 선택적일 수 있다.
일 실시양태에서, 세포 결합제는 A20FMDV-Cys 폴리펩타이드를 포함한다. A20FMDV-Cys는 서열 NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC를 갖는다. 대안적으로, A20FMDV-Cys 서열의 변이체가 사용될 수 있으며, 여기에서는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 잔기가 또 다른 아미노산 잔기에 의해서 치환된다.
일 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체; 키메릭 항체; 인간화된 항체; 완전한 인간 항체; 또는 단일쇄 항체이다. 일 실시양태에서, 항체는 생물학적 활성을 갖는 이들 항체 중 하나의 단편이다. 이러한 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편이 포함된다.
이들 실시양태에서, 각각의 항체는 하나 또는 여러 개의 다이머 피롤로벤조디아제핀 그룹에 연결될 수 있다. 세포 결합제에 대한 피롤로벤조디아제핀의 바람직한 비는 상기에 제시된 바 있다.
항체는 도메인 항체 (domain antibody; DAB)일 수 있다.
일 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다.
본 발명에서 사용하기 위한 항체에는 본 명세서에 원용된 WO 2005/082023호에 기술된 항체가 포함된다. 특히 바람직한 것은 종양-관련 항원에 대한 항체이다. 본 기술분야에서 공지된 이들 항원의 예로는 WO 2005/082023호에 제시된 종양-관련 항원이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 예를 들어, 41-55 면을 참조한다.
본 발명의 컨쥬게이트는 그들의 세포 표면 항원을 통해서 종양 세포를 표적화하도록 설계된다. 항원들은 통상적으로 과발현되거나 비정상적인 시기에 발현되는 정상적인 세포 표면 항원이다. 이상적으로 표적 항원은 증식성 세포 (바람직하게는 종양 세포) 상에서만 발현되지만, 이것은 실제로 거의 관찰되지 않는다. 결과적으로, 표적 항원은 통상적으로 증식성 조직과 건강한 조직 사이의 차등 발현을 토대로 선택된다.
종양-관련 항원 (TAA)은 본 기술분야에서 공지되어 있으며, 본 기술분야에서 잘 알려진 방법 및 정보를 사용하여 항체를 생성시키는데 사용하기 위해 제조될 수 있다. 암 진단 및 치료법을 위한 효과적인 세포 표적을 발견하기 위한 시도에서, 연구자들은 하나 이상의 정상적인 비-암성 세포(들) 상에 비해 하나 이상의 특정 타입(들)의 암세포의 표면 상에서 특이적으로 발현되는 경막성 또는 종양-관련 폴리펩타이드를 동정하고자 하였다. 종종, 이러한 종양-관련 폴리펩타이드는 비-암성 세포의 표면 상에 비해 암세포의 표면 상에서 더 많이 발현된다. 이러한 종양-관련 세포 표면 항원 폴리펩타이드의 동정으로 항체-기반 치료법을 통해 파괴하기 위한 암세포를 특이적으로 표적화하는 능력이 생겼다.
TAA의 예로는 이하에 열거된 TAA (1)-(36)이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 편의상, 모두 본 기술분야에서 공지되어 있는 이들 항원에 관한 정보는 후술되며, NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 핵산 및 단백질 서열 식별 협약에 따른 명칭, 대체 명칭, 진뱅크 (Genbank) 수탁번호 및 주요 문헌(들)을 포함한다. TAA (1)-(36)에 상응하는 핵산 및 단백질 서열은 진뱅크와 같은 공용 데이터베이스에서 얻을 수 있다. 항체에 의해서 표적화된 종양-관련 항원은 인용된 문헌에서 확인된 서열에 대비하여 적어도 약 70%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 서열 동일성을 갖거나, 실질적으로 인용된 문헌에서 제공된 서열을 갖는 TAA와 동일한 생물학적 특성 또는 특징을 나타내는 모든 아미노산 서열 변이체 및 이소형태를 포함한다. 예를 들어, 변이체 서열을 갖는 TAA는 일반적으로, 열거된 상응하는 서열을 갖는 TAA에 특이적으로 결합하는 항체에 대해 특이적으로 결합할 수 있다. 본 발명에 구체적으로 열거된 문헌 상 서열 및 설명은 명백히게 참고로 원용된다.
종양-관련 항원 (1)-(36):
(1) BMPR1B (골형성 단백질 수용체-타입 IB, Genbank 수탁번호 NM_001203) ten Dijke,P., et al Science 264 (5155):101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997)); WO2004/063362 (Claim 2); WO2003/042661 (Claim 12); US2003/134790-A1 (Page 38-39); WO2002/102235 (Claim 13; Page 296); WO2003/055443 (Page 91-92); WO2002/99122 (Example 2; Page 528-530); WO2003/029421 (Claim 6); WO2003/024392 (Claim 2; Fig 112); WO2002/98358 (Claim 1; Page 183); WO2002/54940 (Page 100-101); WO2002/59377(Page 349-350); WO2002/30268 (Claim 27; Page 376); WO2001/48204 (Example; Fig 4); NP_001194 골형성 단백질 수용체, 타입 IB /pid=NP_001194.1. 상호 참조: MIM:603248; NP_001194.1; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5, Genbank 수탁번호 NM_003486) Biochem . Biophys . Res. Commun . 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., et al (1992) J. Biol . Chem . 267 (16):11267-11273); WO2004/048938 (Example 2); WO2004/032842 (Example IV); WO2003/042661 (Claim 12); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/78524 (Example 2); WO2002/99074 (Claim 19; Page 127-129); WO2002/86443 (Claim 27; Pages 222, 393); WO2003/003906 (Claim 10; Page 293); WO2002/64798 (Claim 33; Page 93-95); WO2000/14228 (Claim 5; Page 133-136); US2003/224454 (Fig 3); WO2003/025138 (Claim 12; Page 150); NP_003477 용질 담체 (solute carrier) 패밀리 7 (양이온성 아미노산 수송체, y+시스템), 멤버 5 /pid=NP_003477.3 - 호모 사피엔스 (Homo sapiens); 상호 참조: MIM:600182; NP_003477.3; NM_015923; NM_003486_1
(3) STEAP1 (전립선의 6개의 경막(transmembrane) 항원, Genbank 수탁번호 NM_012449); Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S., et al (1999) Proc . Natl . Acad. Sci . U.S.A . 96 (25):14523-14528); WO2004/065577 (Claim 6); WO2004/027049 (Fig 1L); EP1394274 (Example 11); WO2004/016225 (Claim 2); WO2003/042661 (Claim 12); US2003/157089 (Example 5); US2003/185830 (Example 5); US2003/064397 (Fig 2); WO2002/89747 (Example 5; Page 618-619); WO2003/022995 (Example 9; Fig 13A, Example 53; Page 173, Example 2; Fig 2A); NP_036581 전립선의 6개의 경막 상피 항원; 상호 참조: MIM:604415; NP_036581.1; NM_012449_1
(4) 0772P (CA125, MUC16, Genbank 수탁번호 AF361486); J. Biol . Chem . 276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004/045553 (Claim 14); WO2002/92836 (Claim 6; Fig 12); WO2002/83866 (Claim 15; Page 116-121); US2003/124140 (Example 16); 상호 참조: GI:34501467; AAK74120.3; AF361486_1
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 증강 인자, 메소텔린, Genbank 수탁번호 NM_005823) Yamaguchi, N., et al Biol . Chem . 269 (2), 805-808 (1994), Proc . Natl. Acad . Sci . U.S.A . 96 (20):11531-11536 (1999), Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 93 (1):136-140 (1996), J. Biol . Chem . 270 (37):21984-21990 (1995)); WO2003/101283 (Claim 14); (WO2002/102235 (Claim 13; Page 287-288); WO2002/101075 (Claim 4; Page 308-309); WO2002/71928 (Page 320-321); WO94/10312 (Page 52-57); 상호 참조: MIM:601051; NP_005814.2; NM_005823_1
(6) Napi3b (NAPI-3B, Napi2b, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (인산나트륨), 멤버 2, 타입 II 나트륨-의존성 포스페이트 수송체 3b, Genbank 수탁번호 NM_006424) J. Biol . Chem . 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., et al (1999) Biochem . Biophys . Res. Commun . 258 (3):578-582); WO2004/022778 (Claim 2); EP1394274 (Example 11); WO2002/102235 (Claim 13; Page 326); EP0875569 (Claim 1; Page 17-19); WO2001/57188 (Claim 20; Page 329); WO2004/032842 (Example IV); WO2001/75177 (Claim 24; Page 139-140); 상호 참조: MIM:604217; NP_006415.1; NM_006424_1. 특정 실시양태에서, 본 발명의 컨쥬게이트 화합물은 항-NaPi2B 항체를 포함한다. 본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 ADC의 항-NaPi2B 항체는 (a) 서열번호 1의 CDR L1; (b) 서열번호 2의 CDR L2; (c) 서열번호 3의 CDR L3; (d) 서열번호 4의 CDR H1; (e) 서열번호 5의 CDR H2; (f) 서열번호 6의 CDR H3을 포함한다. 일 실시양태에서, 항체는 서열번호 8 및 서열번호 7에 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일 실시양태에서, 항체는 서열번호 10 및 서열번호 9에 각각 중쇄 및 경쇄 서열(이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
Figure 112015098431263-pct00036
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 (Semaphorin) 5b Hlog, 세마 (sema) 도메인, 7개의 트롬보스폰딘 반복체 (타입 1 및 타입 1-유사), 경막 도메인 (TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B, Genbank 수탁번호 AB040878); Nagase T., et al (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); WO2004/000997 (Claim 1); WO2003/003984 (Claim 1); WO2002/06339 (Claim 1; Page 50); WO2001/88133 (Claim 1; Page 41-43, 48-58); WO2003/054152 (Claim 20); WO2003/101400 (Claim 11); Accession: Q9P283; EMBL; AB040878; BAA95969.1. Genew; HGNC:10737
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자, Genbank 수탁번호 AY358628); Ross et al (2002) Cancer Res. 62:2546-2553; US2003/129192 (Claim 2); US2004/044180 (Claim 12); US2004/044179 (Claim 11); US2003/096961 (Claim 11); US2003/232056 (Example 5); WO2003/105758 (Claim 12); US2003/206918 (Example 5); EP1347046 (Claim 1); WO2003/025148 (Claim 20); 상호 참조: GI:37182378; AAQ88991.1; AY358628_1
(9) ETBR (엔도텔린 타입 B 수용체, Genbank 수탁번호 AY275463); Nakamuta M., et al Biochem . Biophys . Res. Commun . 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., et al Biochem. Biophys . Res. Commun . 178, 248-255, 1991; Arai H., et al Jpn . Circ . J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H., et al J. Biol . Chem . 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., et al Biochem . Biophys . Res. Commun . 178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., et al J. Biol . Chem . 268, 3873-3879, 1993; Haendler B., et al J. Cardiovasc . Pharmacol . 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., et al Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., et al J. Clin . Endocrinol . Metab . 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., et al Biol . Chem . 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., et al Am. J. Med . Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., et al Eur . J. Hum. Genet. 5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G., et al Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., et al, Hum. Mol . Genet. 4, 2407-2409, 1995; Auricchio A., et al Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J., et al Hum. Mol . Genet. 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., et al Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J., et al Hum. Genet. 103, 145-148, 1998; Fuchs S., et al Mol . Med . 7, 115-124, 2001; Pingault V., et al (2002) Hum. Genet. 111, 198-206; WO2004/045516 (Claim 1); WO2004/048938 (Example 2); WO2004/040000 (Claim 151); WO2003/087768 (Claim 1); WO2003/016475 (Claim 1); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/61087 (Fig 1); WO2003/016494 (Fig 6); WO2003/025138 (Claim 12; Page 144); WO2001/98351 (Claim 1; Page 124-125); EP0522868 (Claim 8; Fig 2); WO2001/77172 (Claim 1; Page 297-299); US2003/109676; US6518404 (Fig 3); US5773223 (Claim 1a; Col 31-34); WO2004/001004
(10) MSG783 (RNF124, 가상 단백질 FLJ20315, Genbank 수탁번호 NM_017763); WO2003/104275 (Claim 1); WO2004/046342 (Example 2); WO2003/042661 (Claim 12); WO2003/083074 (Claim 14; Page 61); WO2003/018621 (Claim 1); WO2003/024392 (Claim 2; Fig 93); WO2001/66689 (Example 6); 상호 참조: LocusID:54894; NP_060233.2; NM_017763_1
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 관련 유전자 1, 전립선암 관련 단백질 1, 전립선의 6개의 경막 상피 항원 2, 6개의 경막 전립선 단백질, Genbank 수탁번호 AF455138); Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); WO2003/087306; US2003/064397 (Claim 1; Fig 1); WO2002/72596 (Claim 13; Page 54-55); WO2001/72962 (Claim 1; Fig 4B); WO2003/104270 (Claim 11); WO2003/104270 (Claim 16); US2004/005598 (Claim 22); WO2003/042661 (Claim 12); US2003/060612 (Claim 12; Fig 10); WO2002/26822 (Claim 23; Fig 2); WO2002/16429 (Claim 12; Fig 10); 상호 참조: GI:22655488; AAN04080.1; AF455138_1
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위차 양이온 채널, 서브패밀리 M, 멤버 4, Genbank 수탁번호 NM_017636); Xu, X.Z., et al Proc. Natl . Acad . Sci . U.S.A . 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol . Chem . 278 (33):30813-30820 (2003)); US2003/143557 (Claim 4); WO2000/40614 (Claim 14; Page 100-103); WO2002/10382 (Claim 1; Fig 9A); WO2003/042661 (Claim 12); WO2002/30268 (Claim 27; Page 391); US2003/219806 (Claim 4); WO2001/62794 (Claim 14; Fig 1A-D); 상호 참조: MIM:606936; NP_060106.2; NM_017636_1
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유래 성장인자, Genbank 수탁번호 NP_003203 또는 NM_003212); Ciccodicola, A., et al EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991)); US2003/224411 (Claim 1); WO2003/083041 (Example 1); WO2003/034984 (Claim 12); WO2002/88170 (Claim 2; Page 52-53); WO2003/024392 (Claim 2; Fig 58); WO2002/16413 (Claim 1; Page 94-95, 105); WO2002/22808 (Claim 2; Fig 1); US5854399 (Example 2; Col 17-18); US5792616 (Fig 2); 상호 참조: MIM:187395; NP_003203.1; NM_003212_1
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스타인 바 (Epstein Barr) 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792 Genbank 수탁번호 M26004); Fujisaku et al (1989) J. Biol . Chem . 264 (4):2118-2125); Weis J.J., et al J. Exp . Med . 167, 1047-1066, 1988; Moore M., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 84, 9194-9198, 1987; Barel M., et al Mol . Immunol . 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., et al Proc . Natl. Acad . Sci . U.S.A . 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., et al (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; WO2004/045520 (Example 4); US2004/005538 (Example 1); WO2003/062401 (Claim 9); WO2004/045520 (Example 4); WO91/02536 (Fig 9.1-9.9); WO2004/020595 (Claim 1); Accession: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로불린-관련 베타), B29, Genbank 수탁번호 NM_000626 또는 11038674); Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller et al (1992) Eur . J. Immunol. 22 (6):1621-1625); WO2004/016225 (claim 2, Fig 140); WO2003/087768, US2004/101874 (claim 1, page 102); WO2003/062401 (claim 9); WO2002/78524 (Example 2); US2002/150573 (claim 5, page 15); US5644033; WO2003/048202 (claim 1, pages 306 and 309); WO 99/58658, US6534482 (claim 13, Fig 17A/B); WO2000/55351 (claim 11, pages 1145-1146); 상호 참조: MIM:147245; NP_000617.1; NM_000626_1
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인을 포함하는 포스파타제 앵커 (anchor) 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C, Genbank 수탁번호 NM_030764, AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., et al (2001) Biochem . Biophys . Res. Commun . 280 (3):768-775; WO2004/016225 (Claim 2); WO2003/077836; WO2001/38490 (Claim 5; Fig 18D-1-18D-2); WO2003/097803 (Claim 12); WO2003/089624 (Claim 25); 상호 참조: MIM:606509; NP_110391.2; NM_030764_1
(17) HER2 (ErbB2, Genbank 수탁번호 M11730); Coussens L., et al Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., et al Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., et al J. Cell Biol . 165, 869-880, 2004; Kuhns J.J., et al J. Biol . Chem . 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., et al Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., et al (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004/048938 (Example 2); WO2004/027049 (Fig 1I); WO2004/009622; WO2003/081210; WO2003/089904 (Claim 9); WO2003/016475 (Claim 1); US2003/118592; WO2003/008537 (Claim 1); WO2003/055439 (Claim 29; Fig 1A-B); WO2003/025228 (Claim 37; Fig 5C); WO2002/22636 (Example 13; Page 95-107); WO2002/12341 (Claim 68; Fig 7); WO2002/13847 (Page 71-74); WO2002/14503 (Page 114-117); WO2001/53463 (Claim 2; Page 41-46); WO2001/41787 (Page 15); WO2000/44899 (Claim 52; Fig 7); WO2000/20579 (Claim 3; Fig 2); US5869445 (Claim 3; Col 31-38); WO9630514 (Claim 2; Page 56-61); EP1439393 (Claim 7); WO2004/043361 (Claim 7); WO2004/022709; WO2001/00244 (Example 3; Fig 4); Accession: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1. 특정 실시양태에서, 본 발명의 컨쥬게이트 화합물은 항-HER2 항체를 포함한다. 본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 ADC의 항-HER2 항체는 US 5821337호의 표 3에 기재된 인간화 항-HER2 항체, 예를 들어 huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 및 huMAb4D5-8을 포함한다. 이들 항체는 HER2에 결합하는 쥐 항체 (4D5)의 상보성 결정 영역을 가지는 인간 골격 영역을 포함한다. 인간화된 항체 huMAb4D5-8은 또한 트라스투주맙으로도 불리며, 이는 헤르셉틴 (HERCEPTIN)의 상표명으로서 상업적 구매가 가능하다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명의 ADC의 항-HER2 항체는 US 7862817호에 기재된 인간화 항-HER2 항체, 예를 들어 인간화 2C4를 포함한다. 예시적인 인간화 2C4 항체는 퍼투주맙으로도 불리며, 이는 퍼제타 (PERJETA)의 상표명으로서 상업적 구매가 가능하다.
(18) NCA (CEACAM6, Genbank 수탁번호 M18728); Barnett T., et al Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., et al Biochem . Biophys . Res. Commun . 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99:16899-16903, 2002; WO2004/063709; EP1439393 (Claim 7); WO2004/044178 (Example 4); WO2004/031238; WO2003/042661 (Claim 12); WO2002/78524 (Example 2); WO2002/86443 (Claim 27; Page 427); WO2002/60317 (Claim 2); Accession: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1. EMBL; M18728
(19) MDP (DPEP1, Genbank 수탁번호 BC017023); Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/64798 (Claim 33; Page 85-87); JP05003790 (Fig 6-8); WO99/46284 (Fig 9); 상호 참조: MIM:179780; AAH17023.1; BC017023_1
(20) IL20Rα (IL20Ra, ZCYTOR7, Genbank 수탁번호 AF184971); Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., et al Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., et al Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., et al J. Immunol . 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J., et al J. Biol . Chem . 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., et al (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., et al (2004) J. Immunol . 172, 2006-2010; EP1394274 (Example 11); US2004/005320 (Example 5); WO2003/029262 (Page 74-75); WO2003/002717 (Claim 2; Page 63); WO2002/22153 (Page 45-47); US2002/042366 (Page 20-21); WO2001/46261 (Page 57-59); WO2001/46232 (Page 63-65); WO98/37193 (Claim 1; Page 55-59); Accession: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) 브레비칸 (Brevican) (BCAN, BEHAB, Genbank 수탁번호 AF229053); Gary S.C., et al Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99, 16899-16903, 2002; US2003/186372 (Claim 11); US2003/186373 (Claim 11); US2003/119131 (Claim 1; Fig 52); US2003/119122 (Claim 1; Fig 52); US2003/119126 (Claim 1); US2003/119121 (Claim 1; Fig 52); US2003/119129 (Claim 1); US2003/119130 (Claim 1); US2003/119128 (Claim 1; Fig 52); US2003/119125 (Claim 1); WO2003/016475 (Claim 1); WO2002/02634 (Claim 1)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5, Genbank 수탁번호 NM_004442); Chan,J. and Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (Claim 12); WO200053216 (Claim 1; Page 41); WO2004065576 (Claim 1); WO2004020583 (Claim 9); WO2003004529 (Page 128-132); WO200053216 (Claim 1; Page 42); 상호 참조: MIM:600997; NP_004433.2; NM_004442_1
(23) ASLG659 (B7h, Genbank 수탁번호 AX092328); US2004/0101899 (Claim 2); WO2003104399 (Claim 11); WO2004000221 (Fig 3); US2003/165504 (Claim 1); US2003/124140 (Example 2); US2003/065143 (Fig 60); WO2002/102235 (Claim 13; Page 299); US2003/091580 (Example 2); WO2002/10187 (Claim 6; Fig 10); WO2001/94641 (Claim 12; Fig 7b); WO2002/02624 (Claim 13; Fig 1A-1B); US2002/034749 (Claim 54; Page 45-46); WO2002/06317 (Example 2; Page 320-321, Claim 34; Page 321-322); WO2002/71928 (Page 468-469); WO2002/02587 (Example 1; Fig 1); WO2001/40269 (Example 3; Pages 190-192); WO2000/36107 (Example 2; Page 205-207); WO2004/053079 (Claim 12); WO2003/004989 (Claim 1); WO2002/71928 (Page 233-234, 452-453); WO 01/16318
(24) PSCA (전립선 줄기세포 항원 전구체, Genbank 수탁번호 AJ297436); Reiter R.E., et al Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 95, 1735-1740, 1998; Gu Z., et al Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem . Biophys . Res. Commun . (2000) 275(3):783-788; WO2004/022709; EP1394274 (Example 11); US2004/018553 (Claim 17); WO2003/008537 (Claim 1); WO2002/81646 (Claim 1; Page 164); WO2003/003906 (Claim 10; Page 288); WO2001/40309 (Example 1; Fig 17); US2001/055751 (Example 1; Fig 1b); WO2000/32752 (Claim 18; Fig 1); WO98/51805 (Claim 17; Page 97); WO98/51824 (Claim 10; Page 94); WO98/40403 (Claim 2; Fig 1B); Accession: O43653; EMBL; AF043498; AAC39607.1
(25) GEDA (Genbank 수탁번호 AY260763); AAP14954 지방종 H㎎IC 융합-파트너-유사 단백질 /pid=AAP14954.1 - 호모 사피엔스 (인간); WO2003/054152 (Claim 20); WO2003/000842 (Claim 1); WO2003/023013 (Example 3, Claim 20); US2003/194704 (Claim 45); 상호 참조: GI:30102449; AAP14954.1; AY260763_1
(26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3, Genbank 수탁번호 AF116456); BAFF 수용체 /pid=NP_443177.1 - 호모 사피엔스: Thompson, J.S., et al Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (Example; Page 32-33); WO2003/014294 (Claim 35; Fig 6B); WO2003/035846 (Claim 70; Page 615-616); WO2002/94852 (Col 136-137); WO2002/38766 (Claim 3; Page 133); WO2002/24909 (Example 3; Fig 3); 상호 참조: MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형태, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814, Genbank 수탁번호 AK026467); Wilson et al (1991) J. Exp . Med . 173:137-146; WO2003/072036 (Claim 1; Fig 1); 상호 참조: MIM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1. 본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 컨쥬게이트 화합물은 항-CD22 항체를 포함한다. 본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 ADC의 항-CD22 항체는 US 8226945호에 따른 3개의 경쇄 고가변성 영역 (HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3) 및 3개의 중쇄 고가변성 영역 (HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3)을 포함한다:
HVR-L1 RSSQSIVHSVGNTFLE (서열번호 11)
HVR-L2 KVSNRFS (서열번호 12)
HVR-L3 FQGSQFPYT (서열번호 13)
HVR-H1 GYEFSRSWMN (서열번호 14)
HVR-H2 GRIYPGDGDTNYSGKFKG (서열번호 15)
HVR-H3 DGSSWDWYFDV (서열번호 16)
(28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로불린-관련 알파, Ig 베타 (CD79B)와 공유적으로 상호작용하고, Ig M 분자와 표면 상에서 복합체를 형성하며, B-세포 분화와 관련된 신호를 전달하는 B 세포-특이적 단백질), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2 [P] 유전자 염색체: 19q13.2, Genbank 수탁번호 NP_001774.10); WO2003/088808, US2003/0228319; WO2003/062401 (claim 9); US2002/150573 (claim 4, pages 13-14); WO99/58658 (claim 13, Fig 16); WO92/07574 (Fig 1); US5644033; Ha et al (1992) J. Immunol . 148(5):1526-1531; Muller et al (1992) Eur . J. Immunol.. 22:1621-1625; Hashimoto et al (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme et al (1992) Clin . Exp . Immunol . 90(1):141-146; Yu et al (1992) J. Immunol . 148(2) 633-637; Sakaguchi et al (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464
(29) CXCR5 (버킷 (Burkitt) 림프종 수용체 1, CXCL13 케모킨에 의해서 활성화되고, 림프구 이동 및 체액 방어 기능을 갖고 HIV-2 감염에 관여하며, 가능하기로는 AIDS, 림프종, 골수종 및 백혈병의 발생에 역할을 하는 G 단백질-커플링된 수용체); 372 aa, pI: 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P] 유전자 염색체: 11q23.3, Genbank 수탁번호 NP_001707.1); WO2004/040000; WO2004/015426; US2003/105292 (Example 2); US6555339 (Example 2); WO2002/61087 (Fig 1); WO2001/57188 (Claim 20, page 269); WO2001/72830 (pages 12-13); WO2000/22129 (Example 1, pages 152-153, Example 2, pages 254-256); WO99/28468 (claim 1, page 38); US5440021 (Example 2, col 49-52); WO94/28931 (pages 56-58); WO92/17497 (claim 7, Fig 5); Dobner et al (1992) Eur . J. Immunol. 22:2795-2799; Barella et al (1995) Biochem . J. 309:773-779
(30) HLA-DOB (펩타이드에 결합하고, 이들을 CD4+ T 림프구에 제공하는 MHC 부류 II 분자 (Ia 항원)의 베타 서브유니트); 273 aa, pI: 6.56, MW: 30820.TM: 1 [P] 유전자 염색체: 6p21.3, Genbank 수탁번호 NP_002111.1); Tonnelle et al (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson et al (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck et al (1992) J. Mol . Biol . 228:433-441; Strausberg et al (2002) Proc . Natl. Acad . Sci USA 99:16899-16903; Servenius et al (1987) J. Biol . Chem . 262:8759-8766; Beck et al (1996) J. Mol . Biol . 255:1-13; Naruse et al (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO99/58658 (claim 13, Fig 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara et al (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar et al (1985) J. Biol . Chem . 260(26):14111-14119
(31) P2X5 (세포외 ATP에 의해서 개폐되는 이온 채널인 퓨린성 수용체 P2X 리간드-개폐 이온 채널이 시냅스성 전달 및 신경발생에 관여될 수 있으며, 결핍은 특발성 배뇨근 불안정성의 병태생리학의 원인이 될 수 있다); 422 aa), pI: 7.63, MW: 47206 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 17p13.3, Genbank 수탁번호 NP_002552.2); Le et al (1997) FEBS Lett . 418(1-2):195-199; WO2004/047749; WO2003/072035 (claim 10); Touchman et al (2000) Genome Res. 10:165-173; WO2002/22660 (claim 20); WO2003/093444 (claim 1); WO2003/087768 (claim 1); WO2003/029277 (page 82)
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2); 359 aa, pI: 8.66, MW: 40225, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 9p13.3, Genbank 수탁번호 NP_001773.1); WO2004042346 (claim 65); WO2003/026493 (pages 51-52, 57-58); WO2000/75655 (pages 105-106); Von Hoegen et al (1990) J. Immunol . 144(12):4870-4877; Strausberg et al (2002) Proc. Natl . Acad . Sci USA 99:16899-16903.
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 타입 I 막단백질은 B-세포 활성화 및 세포자멸사를 조절하며, 기능의 상실은 전신성 홍반성 루푸스가 있는 환자에게서 질환 활성 증가와 연관된다); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 5q12, Genbank 수탁번호 NP_005573.1); US2002/193567; WO97/07198 (claim 11, pages 39-42); Miura et al (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura et al (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003/083047; WO97/44452 (claim 8, pages 57-61); WO2000/12130 (pages 24-26)
(34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1, C2 타입 Ig-유사 및 ITAM 도메인을 포함하며, B-림프구 분화에 역할을 할 수 있는 면역글로불린 Fc 도메인에 대한 추정상의 수용체); 429 aa, pI: 5.28, MW: 46925 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21-1q22, Genbank 수탁번호 NP_443170.1); WO2003/077836; WO2001/38490 (claim 6, Fig 18E-1-18-E-2); Davis et al (2001) Proc . Natl . Acad . Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003/089624 (claim 8); EP1347046 (claim 1); WO2003/089624 (claim 7)
(35) IRTA2 (면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌와 관련된 2, B 세포 발생 및 림프종 형성에 가능한 역할을 하는 추정상의 면역수용체; 전좌에 의한 유전자의 탈조절 (deregulation)이 일부 B 세포 악성종양에서 일어난다); 977 aa, pI: 6.88, MW: 106468, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21, Genbank 수탁번호 인간:AF343662, AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Mouse:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1; WO2003/024392 (claim 2, Fig 97); Nakayama et al (2000) Biochem . Biophys . Res. Commun . 277(1):124-127; WO2003/077836; WO2001/38490 (claim 3, Fig 18B-1-18B-2)
(36) TENB2 (TMEFF2, 토모레귤린 (tomoregulin), TPEF, HPP1, TR, 성장인자 및 폴리스타틴의 EGF/헤레귤린 (heregulin) 패밀리와 관련된 추정상의 경막 프로테오글리칸); 374 aa, NCBI Accession: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI 유전자: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; Genbank 수탁번호 AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO2004/074320; JP2004113151; WO2003/042661; WO2003/009814; EP1295944 (pages 69-70); WO2002/30268 (page 329); WO2001/90304; US2004/249130; US2004/022727; WO2004/063355; US2004/197325; US2003/232350; US2004/005563; US2003/124579; Horie et al (2000) Genomics 67:146-152; Uchida et al (1999) Biochem . Biophys . Res. Commun . 266:593-602; Liang et al (2000) Cancer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones et al (2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178-84.
(37) CD33 (CD33 분자, SIGLEC-3, SIGLEC3, p67; CD33　항원 (gp67); gp67; 골수세포 표면 항원　CD33; 시알산 결합 Ig-유사 렉틴 3; 시알산-결합 Ig-유사 렉틴); 뉴클레오타이드: Genbank 수탁번호 M_23197; Genbank 버전 번호 NM_23197.1 GI:180097; Genbank 기록 갱신일: 2010년 6월 23일 08:47 AM; 폴리펩타이드 : Genbank 수탁번호 AAA51948; Genbank 버전 번호 AAA51948.1 GI:188098; Genbank 기록 갱신일: 2010년 6월 23일 08:47 AM; Simmons D., et al J. Immunol . 141 (8), 2797-2800 (1988); 항체　: H195 (린투주맙 (Lintuzumab))- Raza A., et al Leuk Lymphoma. 2009 Aug;50(8):1336-44; US6,759,045 (Seattle Genetics/Immunomedics); mAb OKT9: Sutherland, D.R. et al. Proc Natl Acad Sci USA 78(7): 4515-4519 1981, Schneider,C., et al J Biol Chem 257, 8516-8522 (1982); mAb E6: Hoogenboom, H.R., et al J Immunol 144, 3211-3217 (1990); US6,590,088 (Human Genome Sciences) - 예를 들어, 서열번호: 1 및 2 및 ATCC 수탁번호 97521; US7,557,189 (Immunogen) - 예를 들어, 서열번호 1-3의 아미노산 서열을 가지는 3개의 CDR을 포함한 중쇄 가변 영역 및 서열번호 4-6의 아미노산 서열을 가지는 3개의 CDR을 포함한 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 단편.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열번호 24 및 23에 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 (a) 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열번호 32 및 서열번호 31에 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열번호 34 및 서열번호 33에 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열번호 36 및 서열번호 35에 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다. 일 실시양태에서, 일부 실시양태에서, 항-CD33 항체는 서열번호 38 및 서열번호 37에 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
Figure 112015098431263-pct00037
Figure 112015098431263-pct00038
Figure 112015098431263-pct00039
(38) LGR5/GPR49; 뉴클레오타이드: Genbank 수탁번호 NM_003667; Genbank 버전 번호 NM_003667.2 GI:24475886; 기록 갱신일: 2012년 7월 22일 03:38 PM; 폴리펩타이드: Genbank 수탁번호 NP_003658; Genbank 버전 번호 NP_003658.1 GI:4504379; Genbank 기록 갱신일: 2012년 7월 22일 03:38 PM.
일부 실시양태에서, 항-LGR5 항체는 (a) 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일 실시양태에서, 항체는 서열번호 40 및 서열번호 39에서 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-LGR5는 (a) 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열번호 51로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-LGR5 항체는 상기 제공된 구체예의 어느 하나에서와 같은 VH 및 상기 제공된 구체예의 어느 하나에서와 같은 VL을 포함한다. 일 실시양태에서, 항체는 서열번호 42 및 서열번호 41에서 각각 VH 및 VL 서열 (이들 서열의 번역후 변형 포함)을 포함한다.
Figure 112015098431263-pct00040
모 항체는 또한 알부민-결합 펩타이드 (ABP) 서열을 포함하는 융합 단백질일 수 있다 [Dennis et al. (2002) "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins" J Biol Chem . 277:35035-35043; WO 01/45746]. 본 발명의 항체는 (i) Dennis et al (2002) J Biol Chem . 277:35035-35043의 Tables III and IV, page 35038; (ii) US 2004/0001827호의 [0076]; 및 (iii) WO 01/45746호의 12-13 면 (이들은 모두 본 발명에 참고로 원용된다)에 의해서 교시된 ABP 서열을 갖는 융합 단백질을 포함한다.
일 실시양태에서, 항체는 종양 관련 항원 αvβ6을 특이적으로 표적화하도록 유도되었다.
세포 결합제는 예를 들어, 컨쥬게이트, 또는 컨쥬게이트의 일부분으로서 통합되기 전에 세포 결합제의 검출 또는 정제를 돕기 위해서 표지될 수 있다. 라벨은 비오틴 라벨일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 세포 결합제는 방사성 동위원소로 표지될 수 있다.
치환체
본 명세서에서 사용된 것으로서 문구 "임의로 치환된"은 비치환될 수 있거나 치환될 수 있는 모 그룹에 관한 것이다.
별도로 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "치환된"은 하나 이상의 치환체를 갖는 모 그룹에 관한 것이다. 용어 "치환체"는 본 명세서에서 통상적인 의미로 사용되며, 모 그룹에 공유적으로 부착되거나, 경우에 따라 모 그룹에 융합된 화학적 부분을 나타낸다. 광범한 종류의 치환체가 잘 알려져 있으며, 각종 모 그룹에 대한 이들의 형성 및 도입을 위한 방법도 또한 잘 알려져 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 명세서에 기술된 치환체 (임의의 치환체를 포함)는 세포 결합제에 대한 반응성이 없는 그룹으로 제한된다. 본 발명의 경우에 세포 결합제에 대한 연결은 세포 결합제에 대해 링커 그룹을 통해서 두 PBD 부분간의 브릿지로부터 형성된다. PBD 구조의 다른 부위에 위치하는 반응성 작용 그룹은 세포 결합제에 대한 추가의 결합을 형성할 수 있다 (이것은 교차결합으로 불릴 수 있다). 이들 추가의 결합은 컨쥬게이트의 수송 및 생물학적 활성을 변경시킬 수 있다. 따라서, 일부의 실시양태에서 추가의 치환체는 반응성 작용 그룹이 없는 것으로 제한된다.
일 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', NO2, 할로, CO2R, COR, CONH2, CONHR, 및 CONRR'로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
일 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', NO2, CO2R, COR, CONH2, CONHR, 및 CONRR'로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
일 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', NO2, 및 할로로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
일 실시양태에서, 치환체는 R, OR, SR, NRR', 및 NO2로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
상기 언급된 실시양태 중의 어떤 것도 본 발명에 기술된 치환체 모두에 적용될 수 있다. 대안적으로, 치환체는 이하에 열거된 그룹 중의 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.
치환체의 예가 이하에 좀 더 상세히 기술된다.
C1-12 알킬: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C1-12 알킬"은 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화 (예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)될 수 있는 것으로서, 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 일가 부분에 관한 것이다. 따라서, 용어 "알킬"은 이하에 거론된 하위 부류 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 등을 포함한다.
포화된 알킬 그룹의 예로는 메틸 (C1), 에틸 (C2), 프로필 (C3), 부틸 (C4), 펜틸 (C5), 헥실 (C6) 및 헵틸 (C7)이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
포화된 선형 알킬 그룹의 예로는 메틸 (C1), 에틸 (C2), n-프로필 (C3), n-부틸 (C4), n-펜틸 (아밀) (C5), n-헥실 (C6) 및 n-헵틸 (C7)이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
포화된 분지 알킬 그룹의 예로는 이소-프로필 (C3), 이소-부틸 (C4), sec-부틸 (C4), tert-부틸 (C4), 이소-펜틸 (C5), 및 네오-펜틸　(C5)이 포함된다.
알킬 그룹은 O, N(H) 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로 원자에 의해서 임의로 차단될 수 있다. 이러한 그룹은 "헤테로알킬"로 불릴 수 있다.
C2-12 헤테로알킬: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C2-12 헤테로알킬"은 2 내지 12개의 탄소 원자, 및 O, N(H) 및 S, 바람직하게는 O 및 S로부터 선택된 하나 이상의 헤테로 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 일가 부분에 관한 것이다.
헤테로알킬 그룹의 예로는 하나 이상의 타입 -(OCH2CH2)-의 에틸렌 글리콜 단위를 포함하는 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 헤테로알킬 그룹의 말단은 헤테로 원자의 일차 형태, 예를 들어, -OH, -SH 또는 -NH2일 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 말단은 -CH3이다.
C2-12 알케닐: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C2-12 알케닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬 그룹에 관한 것이다.
불포화된 알케닐 그룹의 예로는 에테닐 (비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐 (-CH=CH-CH3), 2-프로페닐 (알릴, -CH-CH=CH2), 이소프로페닐 (1-메틸비닐, -C(CH3)=CH2), 부테닐 (C4), 펜테닐 (C5), 및 헥세닐 (C6)이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
C2-12 알키닐: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C2-12 알키닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬 그룹에 관한 것이다.
불포화된 알키닐 그룹의 예로는 에티닐 (-C≡CH) 및 2-프로페닐 (프로파길, -CH2-C≡CH)이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
C3-12 사이클로알킬: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C3-12 사이클로알킬"은 또한 사이클릴 그룹인 알킬 그룹, 즉 사이클릭 탄화수소 (카보사이클릭) 화합물의 지환족 환 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 것으로 3 내지 7개의 환 원자를 포함하여 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 일가 부분에 관한 것이다.
사이클로알킬 그룹의 예로는 다음으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다:
포화된 모노사이클릭 탄화수소 화합물:
사이클로프로판 (C3), 사이클로부탄 (C4), 사이클로펜탄 (C5), 사이클로헥산 (C6), 사이클로헵탄 (C7), 메틸사이클로프로판 (C4), 디메틸사이클로프로판 (C5), 메틸사이클로부탄 (C5), 디메틸사이클로부탄　(C6), 메틸사이클로펜탄 (C6), 디메틸사이클로펜탄　(C7) 및 메틸사이클로헥산　(C7);
불포화된 모노사이클릭 탄화수소 화합물:
사이클로프로펜　(C3), 사이클로부텐　(C4), 사이클로펜텐　(C5), 사이클로헥센 (C6), 메틸사이클로프로펜　(C4), 디메틸사이클로프로펜 (C5), 메틸사이클로부텐 (C5), 디메틸사이클로부텐 (C6), 메틸사이클로펜텐 (C6), 디메틸사이클로펜텐　(C7) 및 메틸사이클로헥센 (C7); 및
포화된 폴리사이클릭 탄화수소 화합물:
노르카란 (C7), 노르피난 (C7), 노르보르난 (C7).
C3-20 헤테로사이클릴: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C3-20 헤테로사이클릴"은 헤테로사이클릭 화합물의 환 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 것으로서 3 내지 20개의 환 원자 (이 중에서 1 내지 10개는 환 헤테로 원자이다)를 갖는 일가 부분에 관한 것이다. 바람직하게는, 각각의 환은 3 내지 7개의 환 원자를 가지며, 이 중에서 1 내지 4개는 환 헤테로 원자이다.
이와 관련하여, 접두사 (예를 들어, C3-20, C3-7, C5-6 등)는 탄소 원자이든 헤테로 원자이든 환 원자의 수, 또는 환 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C5-6 헤테로사이클릴"은 5 또는 6개의 환 원자를 갖는 헤테로사이클릴 그룹에 관한 것이다.
모노사이클릭 헤테로사이클릴 그룹의 예로는 다음으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다:
N1: 아지리딘 (C3), 아제티딘 (C4), 피롤리딘 (테트라하이드로피롤) (C5), 피롤린 (예를 들어, 3-피롤린, 2,5-디하이드로피롤) (C5), 2H-피롤 또는 3H-피롤 (이소피롤, 이소아졸) (C5), 피페리딘 (C6), 디하이드로피리딘 (C6), 테트라하이드로피리딘 (C6), 아제핀　(C7);
O1: 옥시란 (C3), 옥세탄 (C4), 옥솔란 (테트라하이드로푸란) (C5), 옥솔 (디하이드로푸란) (C5), 옥산 (테트라하이드로피란) (C6), 디하이드로피란 (C6), 피란 (C6), 옥세핀 (C7);
S1: 티이란 (C3), 티에탄 (C4), 티올란 (테트라하이드로티오펜) (C5), 티안 (테트라하이드로티오피란) (C6), 티에판 (C7);
O2: 디옥솔란 (C5), 디옥산 (C6), 및 디옥세판 (C7);
O3: 트리옥산 (C6);
N2: 이미다졸리딘 (C5), 피라졸리딘 (디아졸리딘) (C5), 이미다졸린 (C5), 피라졸린 (디하이드로피라졸) (C5), 피페라진 (C6);
N1O1: 테트라하이드로옥사졸 (C5), 디하이드로옥사졸 (C5), 테트라하이드로이속사졸 (C5), 디하이드로이속사졸 (C5), 모르폴린 (C6), 테트라하이드로옥사진 (C6), 디하이드로옥사진 (C6), 옥사진 (C6);
N1S1: 티아졸린 (C5), 티아졸리딘 (C5), 티오모르폴린　(C6);
N2O1: 옥사디아진 (C6);
O1S1: 옥사티올 (C5) 및 옥사티안 (티옥산) (C6); 및
N1O1S1: 옥사티아진 (C6).
치환된 모노사이클릭 헤테로사이클릴 그룹의 예로는 사이클릭 형태의 사카라이드, 예를 들어, 아라비노푸라노즈, 릭소푸라노즈, 리보푸라노즈 및 크실로푸라노즈와 같은 푸라노즈 (C5), 및 알로피라노즈, 알트로피라노즈, 글루코피라노즈, 만노피라노즈, 굴로피라노즈, 이도피라노즈, 갈락토피라노즈, 및 탈로피라노즈와 같은 피라노즈 (C6)로부터 유도된 것이 포함된다.
C5-20 아릴: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C5-20 아릴"은 방향족 화합물의 방향족 환 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 것으로서 3 내지 20개의 환 원자를 갖는 일가 부분에 관한 것이다. 바람직하게는, 각각의 환은 5 내지 7개의 환 원자를 갖는다.
이와 관련하여, 접두사 (예를 들어, C3-20, C5-7, C5-6 등)는 탄소 원자이든 헤테로 원자이든 환 원자의 수, 또는 환 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C5-6 아릴"은 5 또는 6개의 환 원자를 갖는 아릴 그룹에 관한 것이다.
환 원자는 "카보아릴 그룹"에서와 같이 모두 탄소 원자일 수 있다. 카보아릴 그룹의 예로는 벤젠 (즉, 페닐) (C6), 나프탈렌 (C10), 아줄렌 (C10), 안트라센 (C14), 페난트렌 (C14), 나프타센 (C18), 및 피렌 (C16)으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
융합된 환 (이들 중의 적어도 하나는 방향족 환이다)을 포함하는 아릴 그룹의 예로는 인단 (예를 들어,　2,3-디하이드로-1H-인덴) (C9), 인덴 (C9), 이소인덴 (C9), 테트랄린 (1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌) (C10), 아세나프텐 (C12), 플루오렌 (C13), 페날렌 (C13), 아세페난트렌 (C15), 및 아세안트렌 (C16)으로부터 유도된 그룹이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
대안적으로, 환 원자는 "헤테로아릴 그룹"에서와 같이 하나 이상의 헤테로 원자를 포함할 수 있다. 모노사이클릭 헤테로아릴 그룹의 예로는 다음으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다:
N1: 피롤 (아졸) (C5), 피리딘 (아진) (C6);
O1: 푸란 (옥솔) (C5);
S1: 티오펜 (티올) (C5);
N1O1: 옥사졸 (C5), 이속사졸 (C5), 이속사진 (C6);
N2O1: 옥사디아졸 (푸라잔) (C5);
N3O1: 옥사트리아졸 (C5);
N1S1: 티아졸 (C5), 이소티아졸 (C5);
N2: 이미다졸 (1,3-디아졸) (C5), 피라졸 (1,2-디아졸)　(C5), 피리다진 (1,2-디아진) (C6), 피리미딘 (1,3-디아진) (C6) (예를 들어, 사이토신, 티민, 우라실), 피라진 (1,4-디아진) (C6);
N3: 트리아졸 (C5), 트리아진 (C6); 및
N4: 테트라졸 (C5).
융합된 환을 포함하는 헤테로아릴의 예로는 다음이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다:
벤조푸란 (O1), 이소벤조푸란 (O1), 인돌 (N1), 이소인돌　(N1), 인돌리진 (N1), 인돌린 (N1), 이소인돌린 (N1), 퓨린 (N4) (예를 들어, 아데닌, 구아닌), 벤즈이미다졸 (N2), 인다졸 (N2), 벤족사졸 (N1O1), 벤즈이속사졸 (N1O1), 벤조디옥솔 (O2), 벤조푸라잔 (N2O1), 벤조트리아졸 (N3), 벤조티오푸란 (S1), 벤조티아졸 (N1S1), 벤조티아디아졸　(N2S)로부터 유도된 C9 (2개의 융합된 환을 가짐);
크로멘 (O1), 이소크로멘 (O1), 크로만 (O1), 이소크로만 (O1), 벤조디옥산 (O2), 퀴놀린 (N1), 이소퀴놀린 (N1), 퀴놀리진 (N1), 벤족사진 (N1O1), 벤조디아진 (N2), 피리도피리딘 (N2), 퀴녹살린 (N2), 퀴나졸린 (N2), 신놀린 (N2), 프탈라진 (N2), 나프티리딘 (N2), 프테리딘 (N4)으로부터 유도된 C10 (2개의 융합된 환을 가짐);
벤조디아제핀 (N2)으로부터 유도된 C11 (2개의 융합된 환을 가짐);
카바졸 (N1), 디벤조푸란 (O1), 디벤조티오펜 (S1), 카볼린 (N2), 페리미딘 (N2), 피리도인돌 (N2)로부터 유도된 C13 (3개의 융합된 환을 가짐); 및
아크리딘 (N1), 크산텐 (O1), 티오크산텐 (S1), 옥산트렌 (O2), 페녹사티인 (O1S1), 페나진 (N2), 페녹사진 (N1O1), 페노티아진 (N1S1), 티안트렌 (S2), 페난트리딘 (N1), 페난트롤린 (N2), 페나진 (N2)으로부터 유도된 C14 (3개의 융합된 환을 가짐).
상기의 그룹은 단독으로든 또 다른 치환체의 일부이든 그들 자체가 이들 및 이하에 열거된 추가의 치환체로부터 선택된 하나 이상의 그룹에 의해서 임의로 치환될 수 있다.
할로: -F, -Cl, -Br, 및 -I.
하이드록시: -OH.
에테르: -OR (여기에서, R은 에테르 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹 (또한, 이하에 거론된 C1-7 알콕시 그룹으로 칭함), C3-20 헤테로사이클릴 그룹 (또한, C3-20 헤테로사이클릴옥시 그룹으로 칭함), 또는 C5-20 아릴 그룹 (또한, C5-20 아릴옥시 그룹으로 칭함), 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다).
알콕시: -OR (여기에서, R은 알킬 그룹, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹이다). C1-7 알콕시 그룹의 예로는 -OMe (메톡시), -OEt (에톡시), -O(nPr) (n-프로폭시), -O(iPr) (이소프로폭시), -O(nBu) (n-부톡시), -O(sBu) (sec-부톡시), -O(iBu) (이소부톡시), 및 -O(tBu) (tert-부톡시)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
아세탈: -CH(OR1)(OR2) (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아세탈 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이거나, "사이클릭" 아세탈 그룹의 경우에 R1 및 R2는 이들이 결합된 2개의 산소 원자, 및 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 4 내지 8개의 환 원자를 갖는 헤테로사이클릭 환을 형성한다). 아세탈 그룹의 예로는 -CH(OMe)2, -CH(OEt)2, 및 -CH(OMe)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
헤미아세탈: -CH(OH)(OR1) (여기에서, R1은 헤미아세탈 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 헤미아세탈 그룹의 예로는 -CH(OH)(OMe) 및 -CH(OH)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
케탈: -CR(OR1)(OR2) (여기에서, R1 및 R2는 아세탈에 대해서 정의된 바와 같으며, R은 수소 이외의 케탈 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 케탈 그룹의 예로는 -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2, 및 -C(Et)(OMe)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
헤미케탈: -CR(OH)(OR1) (여기에서, R1은 헤미아세탈에 대해서 정의된 바와 같으며, R은 수소 이외의 헤미케탈 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 헤미아세탈 그룹의 예로는 -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt), 및 -C(Et)(OH)(OEt)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
옥소 (케토, -온): =O.
티온 (티오케톤): =S.
이미노 (이민): =NR (여기에서, R은 이미노 치환체, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬 그룹이다). 에스테르 그룹의 예로는 =NH, =NMe, =NEt, 및 =NPh가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
포르밀 (카브알데히드, 카복스알데히드): -C(=O)H.
아실 (케토): -C(=O)R (여기에서, R은 아실 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹 (또한 C1 -7 알킬아실 또는 C1-7 알카노일로도 칭함), C3-20 헤테로사이클릴 그룹 (또한 C3 -20 헤테로사이클릴아실로도 칭함), 또는 C5-20 아릴 그룹 (또한, C5-20 아릴아실로도 칭함), 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 아실 그룹의 예로는 -C(=O)CH3 (아세틸), -C(=O)CH2CH3 (프로피오닐), -C(=O)C(CH3)3 (t-부티릴), 및 -C(=O)Ph (벤조일, 페논)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
카복시 (카복실산): -C(=O)OH.
티오카복시 (티오카복실산): -C(=S)SH.
티올로카복시 (티올로카복실산): -C(=O)SH.
티오노카복시 (티오노카복실산): -C(=S)OH.
이미드산: -C(=NH)OH.
하이드록삼산: -C(=NOH)OH.
에스테르 (카복실레이트, 카복실산 에스테르, 옥시카보닐): -C(=O)OR (여기에서, R은 에스테르 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 에스테르 그룹의 예로는 -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3, 및 -C(=O)OPh가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
아실옥시 (역 에스테르): -OC(=O)R (여기에서, R은 아실옥시 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 아실옥시 그룹의 예로는 -OC(=O)CH3 (아세톡시), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph, 및 -OC(=O)CH2Ph가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
옥시카보일옥시: -OC(=O)OR (여기에서, R은 에스테르 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 에스테르 그룹의 예로는 -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3, 및 -OC(=O)OPh가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
아미노: -NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 치환체, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬 그룹 (또한 C1 -7 알킬아미노 또는 디-C1-7 알킬아미노로도 칭함), C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬 그룹이거나, "사이클릭" 아미노 그룹의 경우에 R1 및 R2는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 4 내지 8개의 환 원자를 갖는 헤테로사이클릭 환을 형성한다). 아미노 그룹은 일차 (-NH2), 이차 (-NHR1), 또는 삼차 (-NHR1R2)일 수 있고, 양이온 형태로는 사차 (-+NR1R2R3)일 수 있다. 아미노 그룹의 예로는 -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, 및 -NHPh가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 사이클릭 아미노 그룹의 예로는 아지리디노, 아제티디노, 피롤리디노, 피페리디노, 피페라지노, 모르폴리노 및 티오모르폴리노가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
아미도 (카바모일, 카바밀, 아미노카보닐, 카복사미드): -C(=O)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 아미도 그룹의 예로는 -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3, 및 -C(=O)N(CH2CH3)2뿐만 아니라, R1 및 R2가 이들이 결합된 질소 원자와 함께 예를 들어, 피페리디노카보닐, 모르폴리노카보닐, 티오모르폴리노카보닐, 및 피페라지노카보닐에서와 같은 헤테로사이클릭 구조를 형성하는 아미도 그룹이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
티오아미도 (티오카바밀): -C(=S)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 아미도 그룹의 예로는 -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2, 및 -C(=S)NHCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
아실아미도 (아실아미노): -NR1C(=O)R2 (여기에서, R1은 아미드 치환체, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬 그룹이고, R2는 아실 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬 그룹이다). 아실아미드 그룹의 예로는 -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3, 및 -NHC(=O)Ph가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. R1　및 R2는 함께 예를 들어, 석신이미딜, 말레이미딜 및 프탈이미딜에서와 같이 사이클릭 구조를 형성할 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00041
아미노카보닐옥시: -OC(=O)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 아미노카보닐옥시 그룹의 예로는 -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2, 및 -OC(=O)NEt2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
우레이도: -N(R1)CONR2R3 (여기에서, R2 및 R3는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이며, R1은 우레이도 치환체, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬 그룹이다). 우레이도 그룹의 예로는 -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2, 및 -NMeCONEt2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
구아니디노: -NH-C(=NH)NH2.
테트라졸릴: 4개의 질소 원자 및 하나의 탄소 원자를 갖는 5-원 방향족 환
Figure 112015098431263-pct00042
이미노: =NR (여기에서, R은 이미노 치환체, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬 그룹이다). 이미노 그룹의 예로는 =NH, =NMe, 및 =NEt가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
아미딘 (아미디노): -C(=NR)NR2 (여기에서, 각각의 R은 아미딘 치환체, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬 그룹이다). 아미딘 그룹의 예로는 -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2, 및 -C(=NMe)NMe2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
니트로: -NO2.
니트로소: -NO.
아지도: -N3.
시아노 (니트릴, 카보니트릴): -CN.
이소시아노: -NC.
시아네이토: -OCN.
이소시아네이토: -NCO.
티오시아노 (티오시아네이토): -SCN.
이소티오시아노 (이소티오시아네이토): -NCS.
설프히드릴 (티올, 머캅토): -SH.
티오에테르 (설파이드): -SR (여기에서, R은 티오에테르 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹 (또한 C1 -7 알킬티오 그룹으로도 칭함), C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). C1-7 알킬티오 그룹의 예로는 -SCH3 및 -SCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
디설파이드: -SS-R (여기에서, R은 디설파이드 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹 (또한, 여기에서는 C1-7 알킬 디설파이드로도 칭함)이다). C1-7 알킬 디설파이드 그룹의 예로는 -SSCH3 및 -SSCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설핀 (설피닐, 설폭사이드): -S(=O)R (여기에서, R은 설핀 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설핀 그룹의 예로는 -S(=O)CH3 및 -S(=O)CH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설폰 (설포닐): -S(=O)2R (여기에서, R은 설폰 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 불소화되거나 과불소화된 C1-7 알킬 그룹을 포함한 C1-7 알킬 그룹이다). 설폰 그룹의 예로는 -S(=O)2CH3 (메탄설포닐, 메실), -S(=O)2CF3 (트리플릴), -S(=O)2CH2CH3 (에실), -S(=O)2C4F9 (노나플릴), -S(=O)2CH2CF3 (트레실), -S(=O)2CH2CH2NH2 (타우릴), -S(=O)2Ph (페닐설포닐, 베실), 4-메틸페닐설포닐 (토실), 4-클로로페닐설포닐 (클로실), 4-브로모페닐설포닐 (브로실), 4-니트로페닐 (노실), 2-나프탈렌설포네이트 (나프실), 및 5-디메틸아미노-나프탈렌-1-일설포네이트 (단실)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설핀산 (설피노): -S(=O)OH, -SO2H.
설폰산 (설포): -S(=O)2OH, -SO3H.
설피네이트 (설핀산 에스테르): -S(=O)OR (여기에서, R은 설피네이트 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설피네이트 그룹의 예로는 -S(=O)OCH3 (메톡시설피닐; 메틸 설피네이트) 및 -S(=O)OCH2CH3 (에톡시설피닐; 에틸 설피네이트)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설포네이트 (설폰산 에스테르): -S(=O)2OR (여기에서, R은 설포네이트 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설포네이트 그룹의 예로는 -S(=O)2OCH3 (메톡시설포닐; 메틸 설포네이트) 및 -S(=O)2OCH2CH3 (에톡시설포닐; 에틸 설포네이트)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설피닐옥시: -OS(=O)R (여기에서, R은 설피닐옥시 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설피닐옥시 그룹의 예로는 -OS(=O)CH3 및 -OS(=O)CH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설포닐옥시: -OS(=O)2R (여기에서, R은 설포닐옥시 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설포닐옥시 그룹의 예로는 -OS(=O)2CH3 (메실레이트) 및 -OS(=O)2CH2CH3 (에실레이트)가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설페이트: -OS(=O)2OR (여기에서, R은 설페이트 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설페이트 그룹의 예로는 -OS(=O)2OCH3 및 -SO(=O)2OCH2CH3가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설파밀 (설파모일; 설핀산 아미드; 설핀아미드): -S(=O)NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 설파밀 그룹의 예로는 -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2, 및 -S(=O)NHPh가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설폰아미도 (설피나모일; 설폰산 아미드; 설폰아미드): -S(=O)2NR1R2 (여기에서, R1 및 R2는 독립적으로 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 설폰아미도 그룹의 예로는 -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2, 및 -S(=O)2NHPh가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설파미노: -NR1S(=O)2OH (여기에서, R1은 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이다). 설파미노 그룹의 예로는 -NHS(=O)2OH 및 -N(CH3)S(=O)2OH가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설폰아미노: -NR1S(=O)2R (여기에서, R1은 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이며, R은 설폰아미노 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설폰아미노 그룹의 예로는 -NHS(=O)2CH3 및 -N(CH3)S(=O)2C6H5가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
설핀아미노: -NR1S(=O)R (여기에서, R1은 아미노 그룹에 대해서 정의된 바와 같은 아미노 치환체이며, R은 설핀아미노 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹이다). 설핀아미노 그룹의 예로는 -NHS(=O)CH3 및 -N(CH3)S(=O)C6H5가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
포스피노 (포스핀): -PR2 (여기에서, R은 포스피노 치환체, 예를 들어, -H, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스피노 그룹의 예로는 -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2, 및 -P(Ph)2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
포스포: -P(=O)2.
포스피닐 (포스핀 옥사이드): -P(=O)R2 (여기에서, R은 포스피닐 치환체, 예를 들어, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 C1-7 알킬 그룹 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스피닐 그룹의 예로는 -P(=O)(CH3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-Bu)2, 및 -P(=O)(Ph)2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
포스폰산 (포스포노): -P(=O)(OH)2.
포스포네이트 (포스포노 에스테르): -P(=O)(OR)2 (여기에서, R은 포스포네이트 치환체, 예를 들어, -H, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스포네이트 그룹의 예로는 -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2, 및 -P(=O)(OPh)2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
인산 (포스포노옥시): -OP(=O)(OH)2.
포스페이트 (포스포노옥시 에스테르): -OP(=O)(OR)2 (여기에서, R은 포스페이트 치환체, 예를 들어, -H, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스페이트 그룹의 예로는 -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2, 및 -OP(=O)(OPh)2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
아인산: -OP(OH)2.
포스파이트: -OP(OR)2 (여기에서, R은 포스파이트 치환체, 예를 들어, -H, C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스파이트 그룹의 예로는 -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2, 및 -OP(OPh)2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
포스포르아미다이트: -OP(OR1)-NR2 2 (여기에서, R1 및 R2는 포스포르아미다이트 치환체, 예를 들어, -H, (임의로 치환된) C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스포르아미다이트 그룹의 예로는 -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
포스포르아미데이트: -OP(=O)(OR1)-NR2 2 (여기에서, R1 및 R2는 포스포르아미데이트 치환체, 예를 들어, -H, (임의로 치환된) C1-7 알킬 그룹, C3-20 헤테로사이클릴 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬 그룹, 또는 C5-20 아릴 그룹이다). 포스포르아미데이트 그룹의 예로는 -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
알킬렌
C3-12 알킬렌: 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "C3-12 알킬렌"은 지방족 또는 지환족일 수 있으며, 포화, 부분 불포화, 또는 완전 불포화일 수 있는 탄소 원자수 3 내지 12 (달리 명시되지 않는 한)의 탄화수소 화합물에서 2개의 수소 원자가, 모두 동일한 탄소 원자로부터 또는 2개의 상이한 탄소 원자 각각으로부터 하나씩 제거되어 얻어진 2 자리 (bidenate) 부분에 관한 것이다. 따라서, 용어 "알킬렌"은 이하에 거론되는 하위 부류 알케닐렌, 알키닐렌, 사이클로알킬렌 등을 포함한다.
선형 포화 C3-12 알킬렌 그룹의 예로는 -(CH2)n- (여기에서, n은 3 내지 12의 정수이다), 예를 들어, -CH2CH2CH2- (프로필렌), -CH2CH2CH2CH2- (부틸렌), -CH2CH2CH2CH2CH2- (펜틸렌) 및 -CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2- (헵틸렌)이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
분지된 포화 C3-12 알킬렌 그룹의 예로는 -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2-, 및 -CH2CH(CH2CH3)CH2-가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
선형의 부분적으로 불포화된 C3-12 알킬렌 그룹 (C3-12 알케닐렌, 및 알키닐렌 그룹)의 예로는 -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-, 및 -CH2-C≡C-CH2-가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
분지된 부분 불포화 C3-12 알킬렌 그룹 (C3-12 알케닐렌 및 알키닐렌 그룹)의 예로는 -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- 및 -C≡C-CH(CH3)-가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
지환족 포화 C3-12 알킬렌 그룹 (C3-12 사이클로알킬렌)의 예로는 사이클로펜틸렌 (예를 들어, 사이클로펜트-1,3-일렌), 및 사이클로헥실렌 (예를 들어, 사이클로헥스-1,4-일렌)이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
지환족의 부분 불포화 C3-12 알킬렌 그룹 (C3-12 사이클로알킬렌)의 예로는 사이클로펜테닐렌 (예를 들어, 4-사이클로펜텐-1,3-일렌), 사이클로헥세닐렌 (예를 들어, 2-사이클로헥센-1,4-일렌; 3-사이클로헥센-1,2-일렌; 2,5-사이클로헥사디엔-1,4-일렌)이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
그 밖의 다른 형태 포함
달리 명시되지 않는 한, 상기한 것에는 이들 치환체의 잘 알려진 이온, 염, 용매화물, 및 보호된 형태가 포함된다. 예를 들어, 카복실산 (-COOH)에 대한 언급은 또한 음이온 (카복실레이트) 형태 (-COO-), 그의 염 또는 용매화물뿐만 아니라 통상적인 보호된 형태를 포함한다. 마찬가지로, 아미노 그룹에 대한 언급은 양자화된 형태 (-N+HR1R2), 아미노 그룹의 염 또는 용매화물, 예를 들어, 하이드로클로라이드 염뿐만 아니라 아미노 그룹의 통상적인 보호된 형태를 포함한다. 마찬가지로, 하이드록실 그룹에 대한 언급은 또한 음이온 형태 (-O-), 그의 염 또는 용매화물뿐만 아니라 통상적인 보호된 형태를 포함한다.
염
활성 화합물의 상응하는 염, 예를 들어, 약학적으로 허용되는 염을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 약학적으로 허용되는 염의 예는 문헌 [Berge, et al., J.　 Pharm . Sci ., 66, 1-19 (1977)]에 기술되어 있다.
예를 들어, 화합물이 음이온성이거나, 음이온성일 수 있는 작용 그룹을 갖는 경우에 (예를 들어, -COOH는 -COO-일 수 있다), 염은 적합한 양이온에 의해서 형성될 수 있다. 적합한 무기 양이온의 예로는 Na+ 및 K+와 같은 알칼리 금속 이온, Ca2 + 및 Mg2+와 같은 알칼리 토금속 양이온, 및 Al+3과 같은 그 밖의 다른 양이온이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 적합한 유기 양이온의 예로는 암모늄 이온 (즉 NH4 +) 및 치환된 암모늄 이온 (예를 들어, NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +)이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 일부의 적합한 치환된 암모늄 이온의 예는 에틸아민, 디에틸아민, 디사이클로헥실아민, 트리에틸아민, 부틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민, 및 트로메타민뿐만 아니라 라이신 및 아르기닌과 같은 아미노산으로부터 유도된 것이다. 통상적인 4급 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
화합물이 양이온성이거나 양이온성일 수 있는 작용 그룹을 갖는 경우에 (예를 들어, -NH2는 -NH3 +일 수 있다), 염은 적합한 음이온에 의해서 형성될 수 있다. 적합한 무기 음이온의 예로는 다음의 무기산으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다: 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 아황산, 질산, 아질산, 인산 및 아질산.
적합한 유기 음이온의 예로는 다음의 유기산으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다: 2-아세톡시벤조산, 아세트산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤조산, 캄포설폰산, 신남산, 시트르산, 에데트산, 에탄디설폰산, 에탄설폰산, 푸마르산, 글루켑톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 하이드록시말레산, 하이드록시나프탈렌 카복실산, 이세티온산, 락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 메탄설폰산, 무스산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 판토텐산, 페닐아세트산, 페닐설폰산, 프로피온산, 피루브산, 살리실산, 스테아르산, 석신산, 설파닐산, 타르타르산, 톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산 및 발레르산. 적합한 폴리머 유기 음이온의 예로는 다음의 폴리머산으로부터 유도된 것이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다: 탄닌산, 카복시메틸 셀룰로즈.
용매화물
활성 화합물의 상응하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"은 용질 (예를 들어, 활성 화합물, 활성 화합물의 염)과 용매의 복합체를 나타내기 위한 통상적인 의미로 본 명세서에서 사용된다. 용매가 물이면, 용매화물은 편리하게는 하이드레이트, 예를 들어, 모노-하이드레이트, 디-하이드레이트, 트리-하이드레이트 등으로 불릴 수 있다.
본 발명은 용매가 PBD 부분의 이민 결합을 통해 부가된 화합물을 포함하며, 이것은 이하에 예시되고, 여기에서 용매는 물 또는 알콜 (RAOH, 여기에서 RA는 C1-4 알킬이다)이다:
Figure 112015098431263-pct00043
이들 형태는 PBD의 카비놀아민 및 카비놀아민 에테르 형태 (상기 그룹 R10에 관한 항목에 기술된 바와 같음)로 불릴 수 있다. 이들 평형상태의 균형은 화합물이 존재하는 조건뿐만 아니라 그 부분 자체의 성질에 따라 좌우된다.
이들 특정 화합물은 예를 들어, 동결건조에 의해 고체 형태로 분리될 수 있다.
이성체
본 발명의 특정 화합물은 시스- 및 트랜스-형태; E- 및 Z-형태; c-, t-, 및 r-형태; 엔도- 및 엑소-형태; R-, S-, 및 메소-형태; D- 및 L-형태; d- 및 l-형태; (+) 및 (-) 형태; 케토-, 에놀-, 및 에놀레이트-형태; syn- 및 안티 (anti)-형태; 향사 (synclinal)- 및 배사 (anticlinal)-형태; α- 및 β-형태; 축 및 수평 방향 형태; 보트-, 체어-, 트위스트-, 엔벨로프 (envelope)-, 및 하프체어 (halfchair)-형태; 및 이들의 조합을 포함한 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 하나 이상의 특정 기하이성체, 광학이성체, 거울상이성체, 부분입체이성체, 에피머, 회전장애 (atropic) 이성체, 입체이성체, 호변이성체, 형태이성체 또는 아노머 (anomeric) 형태로 존재할 수 있으며, 이하에서는 총괄적으로 "이성체" (또는 "이성체 형태") 로 칭한다.
용어 "키랄"은 거울상 파트너의 비-중첩성 (non-superimposability) 특성을 갖는 분자를 나타내는 반면에, 용어 "아키랄 (achiral)"은 그들의 거울상 파트너 상에 중첩할 수 있는 분자를 나타낸다.
용어 "입체이성체"는 동일한 화학적 구성을 갖지만, 공간에서 원자 또는 그룹의 배열에 관해서는 상이한 화합물을 나타낸다.
"부분입체이성체"는 2개 또는 그 이상의 키랄 중심을 가지며, 그의 분자가 서로의 거울상이 아닌 입체이성체를 나타낸다. 부분입체이성체는 상이한 물리적 특성, 예를 들어, 융점, 비점, 분광 특성 및 반응성을 갖는다. 부분입체이성체의 혼합물은 전기영동 및 크로마토그래피와 같은 고분리 분석절차에 따라 분리할 수 있다.
"거울상이성체"는 서로의 비-중첩성 거울상인 화합물의 2개의 입체이성체를 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 입체화학적 정의 및 규약은 문헌 [S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 및 Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]에 따른다. 본 발명의 화합물은 비대칭 또는 키랄 중심을 함유할 수 있으며, 따라서 상이한 입체이성체 형태로 존재할 수 있다. 부분입체이성체, 거울상이성체 및 회전장애 이성체뿐만 아니라 라세미 혼합물과 같은 이들의 혼합물을 포함한 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 본 발명의 화합물의 모든 입체이성체 형태는 본 발명의 일부를 형성하는 것으로 한다. 다수의 유기 화합물은 광학적 활성 형태로 존재하며, 즉 이들은 평면-편광의 평면을 회전하는 능력을 갖는다. 광학적 활성 화합물을 기술하는 경우에, 접두어 D 및 L, 또는 R 및 S는 그의 키랄 중심(들)에 관한 분자의 절대배열을 나타내기 위해서 사용된다. 접두어 d 및 l 또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의한 평면-편광의 회전의 사인을 지정하기 위해서 사용되는데, 여기에서 (-) 또는 l은 화합물이 좌선성인 것을 나타낸다. (+) 또는 d가 접두어인 화합물은 우선성이다. 소정의 화학적 구조에 대해서 이들 입체이성체는 이들이 서로의 거울상인 것을 제외하고는 동일하다. 특정의 입체이성체는 또한 거울상이성체로 불릴 수 있으며, 이러한 이성체의 혼합물은 종종 거울상이성체 혼합물로 칭할 수 있다. 거울상이성체의 50:50 혼합물은 라세미 혼합물 또는 라세메이트로 불리며, 이것은 화학적 반응 또는 과정에서 입체선택성 또는 입체특이성이 없는 경우에 나타날 수 있다. 용어 "라세미 혼합물" 및 "라세메이트"는 광학적 활성이 없는 2개의 거울상이성체 종의 동몰 혼합물을 나타낸다.
호변이성체 형태에 대해서 이하에 거론된 것을 제외하고, 특히 본 명세서에서 사용된 용어 "이성체"로부터 구조 (또는 구성) 이성체 (즉, 단순히 공간에서의 원자의 위치에 의해서가 아니라 원자들 사이의 연결이 상이한 이성체)는 제외되는 것을 유의하여야 한다. 예를 들어, 메톡시 그룹 -OCH3에 대한 언급은 그의 구조 이성체인 하이드록시메틸 그룹 -CH2OH에 대한 언급으로 해석되지 않는다. 마찬가지로, 오르토-클로로페닐에 대한 언급은 그의 구조 이성체인 메타-클로로페닐에 대한 언급으로 해석되지 않는다. 그러나, 구조의 부류에 대한 언급은 그 부류 내에 속하는 구조적 이성체 형태를 역시 포함할 수 있다 (예를 들어, C1-7 알킬은 n-프로필 및 이소-프로필을 포함하고; 부틸은 n-, 이소-, sec-, 및 tert-부틸을 포함하며; 메톡시페닐은 오르토-, 메타-, 및 파라-메톡시페닐을 포함한다).
상기의 배제사항은 예를 들어, 다음의 호변이성체 쌍에서와 같은 호변이성체 형태, 예를 들어, 케토-, 에놀-, 및 에놀레이트-형태에 관한 것은 아니다: 케토/에놀 (이하에 예시됨), 이민/엔아민, 아미드/이미노 알콜, 아미딘/아미딘, 니트로소/옥심, 티오케톤/에네티올, N-니트로소/하이드록시아조, 및 니트로/아시-니트로.
Figure 112015098431263-pct00044
용어 "호변이성체" 또는 "호변이성체 형태"는 저에너지 장벽을 통해서 상호전환가능한 상이한 에너지의 구조 이성체를 나타낸다. 예를 들어, 양자 호변이성체 (또한 프로토트로픽 (prototropic) 호변이성체로 공지됨)는 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성체화와 같은 양자의 이동을 통한 상호전환을 포함한다. 원자가 호변이성체는 결합 전자 중의 일부의 개편에 의한 상호전환을 포함한다.
용어 "이성체"에는 특히 하나 이상의 동위원소 치환이 있는 화합물이 포함된다는 것을 유의하여야 한다. 예를 들어, H는 1H, 2H (D), 및 3H (T)를 포함한 어떤 동위원소 형태라도 될 수 있으며; C는 12C, 13C, 및 14C를 포함한 어떤 동위원소 형태라도 될 수 있고; O는 16O 및 18O을 포함한 어떤 동위원소 형태라도 될 수 있는 등이다.
본 발명의 화합물 내에 통합될 수 있는 동위원소의 예로는 2H (중수소, D), 3H (삼중수소), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl, 및 125I와 같은 (단 이들로 제한되지는 않는다) 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소가 포함된다. 본 발명의 다양한 동위원소 표지된 화합물은 예를 들어, 3H, 13C, 및 14C와 같은 방사성 동위원소가 통합된 것이다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 약물 또는 기질 조직 분포시험을 포함한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일-양자 방출 컴퓨터 촬영 (SPECT)과 같은 대사 연구, 반응속도 연구, 검출 또는 영상화 기술에서, 또는 환자의 방사성 치료에서 유용할 수 있다. 본 발명의 중수소 표지되거나 치환된 치료학적 화합물은 분포, 대사 및 배설 (ADME)에 관한 개선된 DMPK (약물 대사 및 약력학) 특성을 가질 수 있다. 중수소와 같은 더 중질의 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투약량 필요조건으로 인한 특정의 치료학적 이점을 제공할 수 있다. 18F 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 유용할 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지된 화합물 및 그의 프로드럭은 일반적으로 반응식에, 또는 비-동위원소 표지된 시약을 쉽게 이용할 수 있는 동위원소 표지된 시약으로 치환시켜 이하에 기술된 실시예 및 제조예에 기술된 절차를 수행함으로써 제조될 수 있다. 또한, 더 중질의 동위원소, 특히 중수소 (즉, 2H 또는 D)에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투약량 필요조건 또는 치료지수의 개선으로 인한 특정의 치료학적 이점을 제공할 수 있다. 이와 관련하여 중수소는 치환체로 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 더 중질의 동위원소, 특히 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수 (isotopic enrichment factor)에 의해서 정의될 수 있다. 본 발명의 화합물에서, 특정 동위원소로 구체적으로 지정되지 않은 어떤 원자는 그 원자의 모든 안정한 동위원소를 나타내는 것을 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 특정 화합물에 대한 언급은 (전체적으로 또는 부분적으로) 라세미 및 그 밖의 다른 이들의 혼합물을 포함한 이러한 이성체 형태 모두를 포함한다. 이러한 이성체 형태의 제조 (예를 들어, 비대칭 합성) 및 분리 (예를 들어, 분별 결정화 및 크로마토그래피 방법)를 위한 방법은 본 기술분야에서 공지되어 있거나, 본 명세서에 교시된 방법 또는 공지된 방법을 공지된 방식으로 개작함으로써 쉽게 수득된다.
생물학적 활성
시험관내 세포 증식 시험
일반적으로, 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC)의 세포독성 또는 세포증식 억제 활성은 수용체 단백질, 예를 들어, HER2를 갖는 포유동물 세포를 세포 배양 배지 내의 ADC의 항체에 노출시키고; 세포를 약 6 시간 내지 약 5 일의 기간 동안 배양하고; 세포 생존도를 측정함으로써 측정된다. 세포-기반 시험관내 시험을 이용하여 본 발명의 ADC의 생존도 (증식), 세포독성, 및 세포자멸사 (카스파제 활성화) 유도를 측정한다.
항체-약물 컨쥬게이트의 시험관내 효능은 세포 증식시험에 의해서 측정될 수 있다. 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo®) 발광 세포 생존도 시험은 콜레오프테라 (Coleoptera) 루시퍼라제의 재조합체 발현을 기초로 하는, 상업적으로 이용할 수 있는 (Promega Corp., Madison, WI) 균질한 시험방법이다 (미국 특허 제 5583024; 5674713 및 5700670호). 이 세포 증식 시험은 대사적으로 활성인 세포의 지표로서, 존재하는 ATP의 정량화에 기초하여 배양물 내 생존 세포의 수를 결정한다 [Crouch et al (1993) J. Immunol . Meth . 160:81-88; US 6602677]. 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo®) 시험은 자동화된 고속 대량처리 스크리닝 (HTS)으로 처리가능한 96 웰 포맷 (format)으로 수행된다 [Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404]. 균질 시험 절차는 단일 시약 (CellTiter-Glo® 시약)을 혈청-보충된 배지에서 배양된 세포에 직접 첨가하는 것을 포함한다. 세포 세척, 배지의 제거 및 다수의 피펫팅 (pipetting) 단계는 필요하지 않다. 이 시스템은 시약을 첨가하고 혼합한 후 10 분 이내에 384-웰 포맷에서 겨우 15 세포/웰만을 검출한다. 세포는 ADC로 연속적으로 처리할 수 있거나, 또는 이들은 처리하고 ADC로부터 분리시킬 수 있다. 일반적으로, 잠깐, 즉 3 시간 동안 처리된 세포는 연속적으로 처리된 세포와 동일한 효능 효과를 나타내었다.
균질한 "첨가-혼합-측정 (add-mix-measure)" 포맷은 세포 용해 및 존재하는 ATP의 양에 비례하는 발광 신호의 생성을 제공한다. ATP의 양은 배양물 내에 존재하는 세포의 수에 정비례한다. 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo®) 시험은 사용된 세포 타입 및 배지에 따라 일반적으로 5 시간보다 더 큰 반감기를 갖는 루시퍼라제 반응에 의해서 생산된 "글로-타입 (glow-type)" 발광 신호를 생성한다. 생존 세포는 상대적 발광 유니트 (relative luminescence units; RLU)에 반영된다. 기질인 비틀 (Beetle) 루시페린은 재조합체 개똥벌레 루시퍼라제에 의해서, ATP의 AMP로의 동시 전환 및 양자의 생성과 함께, 산화적으로 탈카복실화된다.
생체내 효능
본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC)의 생체내 효능은 마우스에서의 종양 이종이식 연구에 의해서 측정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항-HER2 ADC의 생체내 효능은 고발현 HER2 유전자이식 외식편(transgenic explant) 마우스 모델에 의해서 측정될 수 있다. 동종이식편을 헤르셉틴 (HERCEPTIN®) 치료법에 대해서 반응하지 않거나 저조하게 반응하는 Fo5 mmtv 유전자이식 마우스로부터 증식시킨다. 대상체를 특정의 용량 수준 (㎎/㎏) 및 PBD 약물 노출 (㎍/㎡)로 ADC, 및 위약 완충액 대조군 (비히클)에 의해서 1 회 처리하고, 2 주일 또는 그 이상에 걸쳐서 모니터링하여 종양 배가, 로그 세포 사멸, 및 종양 위축까지의 시간을 측정하였다.
용도
본 발명의 컨쥬게이트를 사용하여 표적 위치에 PBD 화합물을 제공할 수 있다.
표적 위치는 바람직하게는 증식성 세포 집단이다. 항체는 증식성 세포 집단에 존재하는 항원에 대한 항체이다.
일 실시양태에서, 항원은 증식성 세포 집단, 예를 들어, 종양 세포 집단에 존재하는 항원의 양에 비해 비-증식성 세포 집단에서는 존재하지 않거나 감소된 수준으로 존재한다.
표적 위치는 시험관내, 생체내 또는 생체외(ex vivo)일 수 있다.
본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC) 화합물은 항암 활성에 대해 유용성을 갖는 것을 포함한다. 특히, 화합물은 링커에 의해서 PBD 부분에 컨쥬게이트된, 즉 공유적으로 부착된 항체를 포함한다.
표적 위치에서 링커는 분해되지 않을 수 있다. 본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC) 화합물은 PBD 약물 부분을 방출하기 위한 링커의 분해없이 세포독성 효과를 가질 수 있다. 본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC) 화합물은 세포독성제를 종양 조직에 선택적으로 전달함으로써 더 큰 선택성, 즉 더 낮은 유효 용량을 이룰 수 있다.
따라서, 일 측면에서 본 발명은 치료법에 사용하기 위한, 본 발명에 기술된 바와 같은 컨쥬게이트 화합물을 제공한다.
추가의 측면에서는 또한, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 본 발명에 기술된 바와 같은 컨쥬게이트 화합물이 제공된다. 본 발명의 두 번째 측면은 증식성 질환 치료용 의약의 제조에 있어서의 컨쥬게이트 화합물의 용도를 제공한다.
본 기술분야의 당업자라면 후보 컨쥬게이트가 어떤 특정 세포 타입의 증식성 상태를 치료할 수 있는지를 쉽게 결정할 수 있다. 예를 들어, 특정 화합물에 의해서 제공되는 활성을 평가하기 위해서 편리하게 사용될 수 있는 시험방법이 이하의 실시예에 기술된다.
용어 "증식성 질환"은 시험관내이든지 생체내이든지에 상관없이, 신생물성 또는 과형성성 성장과 같이 바람직하지 않은 과도하거나 비정상적인 세포의 원치않거나 제어되지 않는 세포 증식과 관련된다.
증식성 상태의 예로는 신생물 및 종양 (예를 들어, 조직구종, 신경교종, 성상세포종, 골종), 암 (예를 들어, 폐암, 소세포 폐암, 위장암, 대장암, 결장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 (Kaposi) 육종, 흑색종), 백혈병, 건선, 골질환, (예를 들어, 결합조직의) 섬유증식성 장애 및 아테롬성경화증을 포함한 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 양성, 전-악성 및 악성 세포 증식이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 특히 관심이 있는 암은 백혈병 및 난소암을 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
폐, 위장 (예를 들어, 대장, 결장을 포함), 유방 (유선), 난소, 전립선, 간 (간성), 신장 (신성), 방광, 췌장, 뇌 및 피부를 포함하나, 이들로 제한되지 않는 어떤 타입의 세포도 치료될 수 있다.
일 실시양태에서, 치료는 췌장암의 치료이다.
일 실시양태에서, 치료는 세포의 표면 상에 αvβ6 인테그린을 갖는 종양의 치료이다.
본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC)는 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 질환 또는 장애를 치료하기 위해서 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 예시적인 상태 또는 과증식성 장애에는 양성 또는 악성 종양; 백혈병, 혈액학적 및 림프성 악성 종양이 포함된다. 그 밖의 다른 것에는 뉴론성, 신경교성, 성상세포성, 시상하부성, 선성, 대식세포성, 상피성, 기질성, 분할강성, 염증성, 혈관형성성, 및 자가면역을 포함한 면역학적 장애가 포함된다.
일반적으로, 치료될 질환 또는 장애는 암과 같은 과증식성 질환이다. 본 발명에서 치료될 암의 예로는 암종, 림프종, 아세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프성 악성종양이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 이러한 암의 더욱 특별한 예로는 편평세포암 (예를 들어, 상피 편평세포암), 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암, 및 폐의 편평세포 암종을 포함하는 폐암, 복막의 암, 간세포암, 위장암을 포함한 위 또는 위부의 암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 내피 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장 또는 신성 암, 전립선암, 외음암, 갑상선암, 간암종, 항문함종, 음경암종뿐만 아니라 두경부암이 포함된다.
치료에 ADC 화합물이 사용될 수 있는 자가면역 질환에는 류마티스성 장애 (예를 들어, 류마티스성 관절염, 쇼그렌 (Sjoegren) 증후군, 경피증, SLE 및 루푸스 신염과 같은 루푸스, 다발성근염/피부근염, 한랭글로불린혈증, 항-인지질 항체 증후군, 및 건선성 관절염), 골관절염, 자가면역 위장 및 간 장애 (예를 들어, 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병), 자가면역 위염 및 악성 빈혈, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 경화증, 원발성 경화성 담관염, 및 셀리악병), 맥관염 (예를 들어, 처그-스트라우스 (Churg-Strauss) 맥관염, 베게너 (Wegener) 육아종증 및 다발동맥염을 포함한 ANCA-관련 맥관염),　자가면역 신경학적 장애 (예를 들어, 다발성 경화증, 안진전-근간대 증후군, 중증 근무력증, 신경성 척수염, 파킨슨병, 알츠하이머병, 및 자가면역 다발신경병증), 신장 장애 (예를 들어, 사구체신염, 굿파스춰 (Goodpasture) 증후군, ? 버거 (Berger)병), 자가면역 피부과적 장애 (예를 들어, 건선, 담마진, 두드러기, 심상성 천포창, 수포성 유천포창, 및 피부 홍반성 루푸스), 혈액학적 장애 (예를 들어, 혈소판감소성 자반병, 혈전성 혈소판감소성 자반병, 수혈-후 자반병, 및 가자면역 용혈성 빈혈), 아테롬성경화증, 포도막염, 자가면역 청각 질환 (예를 들어, 내이 질환 및 청력 상실), 베체트 (Behcet)병, 레이노드 (Raynaud) 증후군, 기관 이식, 및 가자면역 내분비 장애 (예를 들어, 인슐린-의존성 진성 당뇨병 (IDDM)과 같은 당뇨병-관련 자가면역 질환, 애디슨 (Addison)병, 및 자가면역 갑상선 질환 (예를 들어, 그레이브스 (Graves)병 및 갑상선염))이 포함된다. 더욱 바람직한 이러한 질환에는 예를 들어, 류마티스성 관절염, 궤양성 대장염, ANCA-관련 맥관염, 루푸스, 다발성 경화증, 쇼그렌 증후군, 그레이브스병, IDDM, 악성 빈혈, 갑상선염, 및 사구체신염이 포함된다.
치료 방법
본 발명의 컨쥬게이트는 치료방법에 사용될 수 있다. 또한, 치료가 필요한 대상체에게 본 발명의 컨쥬게이트 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료방법이 제공된다. 용어 "치료적 유효량"은 환자에게 효과를 나타내는데 충분한 양이다. 이러한 효과는 적어도, 하나 이상의 증상의 개선일 수 있다. 투여되는 실제량, 및 투여의 속도 및 시간적 경과는 치료되는 것의 성질 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 치료의 처방, 예를 들어, 투약량에 대한 결정은 일반 개업의 및 기타 다른 의사의 책임 하에 있다.
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다른 치료와 함께, 치료될 상태에 따라 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 치료 및 치료법의 예로는 화학요법 (예를 들어, 화학요법제와 같은 약물을 포함하는 활성 약제의 투여); 수술; 및 방사선 요법이 포함되나 이들로 제한되지는 않는다.
"화학요법제"는 작용의 기전과는 관계 없이 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 부류에는 알킬화제, 항대사산물, 스핀들 독 (spindle poison) 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 항체, 감광제, 및 키나제 억제제가 포함되나 이들로 제한되지는 않는다. 화학요법제에는 "표적화 요법" 및 통상적인 화학요법에서 사용되는 화합물이 포함된다.
화학요법제의 예로는 다음이 포함된다: 에를로티닙 (erlotinib) (타르세바 (TARCEVA®), Genentech/OSI Pharm.), 도세탁셀 (탁소테레 (TAXOTERE®), Sanofi-Aventis), 5-FU (플루오로우라실, 5-플루오로우라실, CAS No. 51-21-8), 젬시타빈 (젬자르 (GEMZAR®), Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), 시스플라틴 (시스-디아민, 디클로로플라티늄(II), CAS No. 15663-27-1), 카보플라틴 (CAS No. 41575-94-4), 파클리탁셀 (탁솔 (TAXOL®), Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), 트라스투주맙 (trastuzumab) (헤르셉틴 (HERCEPTIN®), Genentech), 테모졸로미드 (4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜트아자비사이클로[4.3.0]노나-2,7,9-트리엔-9-카복사미드, CAS No. 85622-93-1, 테모다르 (TEMODAR®), 테모달 (TEMODAL®), Schering Plough), 타목시펜 ((Z)-2-[4-(1,2-디페닐부트-1-에닐)페녹시]-N,N-디메틸에탄아민, 놀바덱스 (NOLVADEX®), 이스투발 (ISTUBAL®), 발로덱스 (VALODEX®)), 및 독소루비신 (아드리아마이신 (ADRIAMYCIN®)), Akti-1/2, HPPD, 및 라파마이신.
화학요법제의 추가의 예로는 다음이 포함된다: 옥살리플라틴 (엘록사틴 (ELOXATIN®), Sanofi), 보르테조밉 (bortezomib) (벨케이드 (VELCADE®), Millennium Pharm.), 수텐트 (수니티닙 (SUNITINIB®), SU11248, Pfizer), 레트로졸 (페마라 (FEMARA®), Novartis), 이마티닙 메실레이트 (글리벡 (GLEEVEC®), Novartis), XL-518 (Mek 억제제, 엑셀릭시스 (Exelixis), WO 2007/044515), ARRY-886 (Mek 억제제, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (PI3K 억제제, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (PI3K 억제제, Novartis), XL-147 (PI3K 억제제, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), 풀베스트란트 (파슬로덱스 (FASLODEX®), AstraZeneca), 류코보린 (폴린산), 라파마이신 (시롤리무스, 라파뮨 (RAPAMUNE®), Wyeth), 라파티닙 (타이커브 (TYKERB®), GSK572016, Glaxo Smith Kline), 로나파르닙 (사라사르 (SARASAR®), SCH 66336, Schering Plough), 소라페닙 (넥사바르 (NEXAVAR®), BAY43-9006, Bayer Labs), 제피티닙 (이레사 (IRESSA®), AstraZeneca), 이리노테칸 (캄프토사르 (CAMPTOSAR®), CPT-11, Pfizer), 티피파르닙 (자르네스트라 (ZARNESTRA™), Johnson & Johnson), 아브락산 (ABRAXANE™) (무-크레모포 (Cremophor)), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제제 (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Il), 반데타닙 (rINN, ZD6474, 작티마 (ZACTIMA®), AstraZeneca), 클로람부실, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), 템시롤리무스 (토리셀 (TORISEL®), Wyeth), 파조파닙 (GlaxoSmithKline), 칸포스파미드 (텐사이타 (TELCYTA®), Telik), 티오테파 및 사이클로포스파미드 (사이톡산 (CYTOXAN®), 네오사르 (NEOSAR®)); 부설판, 임프로설판 및 피포설판과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카보쿠온, 메트유레도파 및 유레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민을 포함한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸을 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체를 포함); 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함); 엘류테로빈; 판크래티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜파란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드; 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴과 같은 니트로소우레아; 항생제, 예를 들어, 엔디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마1I, 칼리케아미신 오메가I1 [Angew Chem . Intl . Ed. Engl . (1994) 33:183-186]; 다이네미신, 다이네미신 A; 클로드로네이트와 같은 비포스포네이트; 에스페라미신뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련 크로모프로테인 에네디인 항생제 크로모포어), 아클라시노마이신, 액티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아자-5-옥소-L-노르류신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 네모루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 유베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU)과 같은 항-대사산물; 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자유리딘, 카르모푸어, 사이타라빈, 디데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스유리딘과 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테트이미드, 미토테인, 트릴로스테인과 같은 항-아드레날제 (anti-adrenals); 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트렉세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄신 및 안사미토신과 같은 메이탄시노이드; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카바진; PSK® 폴라사카라이드 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드 ("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈 (나벨빈 (NAVELBINE®)); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈 (젤로다 (XELODA®), Roche); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 및 상기한 임의 것의 약학적으로 허용되는 염, 산 및 유도체.
또한 "화학요법제"의 정의에는 다음이 포함된다: (i) 예를 들어, 타목시펜 (놀바덱스 (NOLVADEX®)를 포함; 타목시펜 시트레이트 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 파레스톤 (FARESTON®) (토레미핀 시트레이트)을 포함하는, 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 변조물질 (SERM)과 같이 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제; (ii) 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테트이미드, 메가세 (MEGASE®) (메게스트롤 아세테이트), 아로마신 (AROMASIN®) (엑세메스탄; Pfizer), 포르메스타니, 파드로졸, 리비소르 (RIVISOR®) (보로졸), 페마라 (FEMARA®) (레트로졸; Novartis), 및 아리미덱스 (ARIMIDEX®) (아나스트로졸; AstraZeneca)와 같은, 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제; (iii) 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오사이드 시토신 유사체)과 같은 항-안드로겐; (iv) MEK 억제제 (WO 2007/044515)와 같은 단백질 키나제 억제제; (v) 지질 키나제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 비정상적인 세포 증식과 관련된 시그날링(signaling) 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들어, 오블리머센 (제나센스 (GENASENSE®), Genta Inc.)와 같은 PKC-알파, Raf 및 H-Ras; (vii) VEGF 발현 억제제 (예를 들어, 안지오자임 (ANGIOZYME®)) 및 HER2 발현 억제제와 같은 리보자임; (viii) 유전자 요법 백신, 예를 들어, 알로벡틴 (ALLOVECTIN®), 류벡틴 (LEUVECTIN®) 및 백시드 (VAXID®); 프로류킨 (PROLEUKIN®) rIL-2과 같은 백신; 류르토테칸 (LURTOTECAN®); 아바렐릭스 (ABARELIX®) rmRH와 같은 토포이소머라제 1 억제제; (ix) 베바시주맙 (아바스틴 (AVASTIN®), Genentech)과 같은 항-혈관형성제; 및 상기한 임의 것의 약학적으로 허용되는 염, 산 및 유도체.
"화학요법제"의 정의에는 또한 알렘투주맙 (캄패스 (Campath)), 베바시주맙 (아바스틴 (AVASTIN®), Genentech); 세툭시맙 (에르비툭스 (ERBITUX®), Imclone); 파니투무맙 (벡티빅스 (VECTIBIX®), A㎎en), 리툭시맙 (리툭산 (RITUXAN®), Genentech/Biogen Idec), 퍼투주맙 (옴니타그 (OMNITARG®), 2C4, Genentech), 트라스투주맙 (헤르셉틴 (HERCEPTIN®), Genentech), 토시투모맙 (벡사르 (Bexxar), Corixia), 및 항체 약물 컨쥬게이트, 젬투주맙 오조가미신 (마일로타그 (MYLOTARG®), Wyeth)과 같은 치료학적 항체가 포함된다.
본 발명의 컨쥬게이트와 함께 화학요법제로서 치료적 잠재력을 갖는 인간화된 모노클로날 항체에는 다음이 포함된다: 알렘투주맙, 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피뉴주맙, 베바시주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 젬투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 퍼투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 트라스투주맙, 투코투주맙 셀모류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 유르톡사주맙, 및 비실리주맙.
본 발명에 따르며 본 발명에 따라서 사용하기 위한 약학적 조성물은 활성 성분, 즉 컨쥬게이트 화합물 이외에 본 기술분야의 당업자에게 잘 알려진 약학적으로 허용되는 부형제, 담체, 완충제, 안정화제 또는 그 밖의 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 비-독성이어야 하며, 활성 성분의 효능을 저해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 성질은 경구적이거나 주사, 예를 들어, 피부, 피하, 또는 정맥내 주사에 의한 것일 수 있는 투여의 경로에 따라 좌우될 것이다.
경구 투여를 위한 약학적 조성물은 정제, 캅셀제, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 고체 담체 또는 보조제를 포함할 수 있다. 액체 약학적 조성물은 일반적으로 물, 석유, 동물성 또는 식물성 오일, 광유 또는 합성유와 같은 액체 담체를 포함한다. 생리식염수 용액, 덱스트로즈 또는 그 밖의 다른 사카라이드 용액 또는 에틸렌 글리콜 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜이 포함될 수 있다. 캅셀제는 젤라틴과 같은 고체 담체를 포함할 수 있다.
정맥내, 피부 또는 피하 주사, 또는 질병 부위에서의 주사의 경우에, 활성 성분은 발열성 물질이 없고, 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용되는 수용액의 형태일 수 있다. 본 기술분야의 당업자는 예를 들어, 염화나트륨 주사, 링커 주사, 락테이트화 링거 주사와 같은 등장성 비히클을 사용하여 적합한 용액을 잘 제조할 수 있다. 보존제, 안정화제, 완충제, 항산화제 및/또는 다른 첨가제가 필요에 따라 포함될 수 있다.
제형
컨쥬게이트 화합물은 단독으로 사용될 (예를 들어, 투여될) 수 있지만, 이것은 종종 조성물 또는 제형으로 존재하는 것이 바람직하다.
일 실시양태에서, 조성물은 본 발명에 기술된 바와 같은 컨쥬게이트 화합물, 및 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물 (예를 들어, 제형, 제제, 의약)이다.
일 실시양태에서, 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제, 보조제, 충진제, 완충제, 보존제, 항산화제, 윤활제, 안정화제, 가용화제, 계면활성제 (예를 들어, 습윤제), 차폐제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 본 기술분야의 당업자에게 잘 알려진 하나 이상의 다른 약학적으로 허용되는 성분과 함께 본 발명에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 컨쥬게이트 화합물을 포함하는 약학적 조성물이다.
일 실시양태에서, 조성물은 추가로 다른 활성 약제, 예를 들어, 다른 치료적 또는 예방적 약제를 포함한다.
적합한 담체, 희석제, 부형제 등은 표준 약학 텍스트에서 확인할 수 있다 [참조: 예를 들어, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; 및 Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994].
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명에서 정의된 바와 같은 적어도 하나의 [11C]-방사성 표지된 컨쥬게이트 또는 컨쥬게이트-유사 화합물을 본 기술분야의 당업자에게 잘 알려진 하나 이상의 다른 약학적으로 허용되는 성분, 예를 들어, 담체, 희석제, 부형제 등과 함께 혼합시키는 것을 포함하여 약학적 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 분리된 단위 (예를 들어, 정제 등)로 제형화되는 경우에, 각각의 단위는 예정된 양 (투약량)의 활성 화합물을 함유한다.
본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "약학적으로 허용되는"은 정상적인 의학적 판단 범위 내에서, 합리적인 수혜/위험 비율(benefit/risk ratio)과 균형을 이루어 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 문제가 되는 대상체 (예를 들어, 인간)의 조직과 접촉시켜 사용하는데 적합한 화합물, 성분, 물질, 조성물, 투약형 등에 관한 것이다. 각각의 담체, 희석제, 부형제 등도 또한 제형의 다른 성분들과 상용적이라는 의미에서 반드시 "허용적이어야" 한다.
제형은 약학 분야에서 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 방법은 활성 화합물을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 화합물을 담체 (예를 들어, 액체 담체, 미분된 고체 담체 등)와 균일하고 긴밀하게 회합하도록 한 다음에, 필요한 경우에 생성물을 성형함으로써 제조된다.
제형은 급방출 또는 서방출; 즉시, 지연, 정기적 (timed) 또는 지속 방출; 또는 이들의 조합을 제공하도록 제조될 수 있다.
비경구 투여 (예를 들어, 주사에 의함)에 적합한 제형은 활성 화합물이 용해되거나, 현탁되거나, 또는 다른 식으로 제공된 (예를 들어, 리포좀 또는 다른 미립자 내에) 수성 또는 비수성이며, 등장성이고, 무-발열성 물질인 멸균 액체 (예를 들어, 용액, 현탁액)를 포함한다. 이러한 액체는 추가로 항산화제, 완충제, 보존제, 안정화제, 정균제, 현탁화제, 농조화제, 및 제형이 계획된 수용자의 혈액 (또는 다른 적절한 체액)과 등장성이 되도록 하는 용질과 같은 그 밖의 다른 약학적으로 허용되는 성분을 함유할 수 있다. 부형제의 예로는 예를 들어, 물, 알콜, 폴리올, 글리세롤, 식물유 등이 포함된다. 이러한 제형에서 사용하기에 적합한 등장성 담체의 예로는 염화나트륨 주사, 링거 용액, 또는 락테이트화 링거 주사가 포함된다. 전형적으로, 액체 내의 활성 성분의 농도는 약 1 ng/ml 내지 약 10 ㎍/ml, 예를 들어, 약 10 ng/ml 내지 약 1 ㎍/ml이다. 제형은 단위-용량 또는 다회-용량형 밀봉 용기, 예를 들어, 앰플 및 바이알 내에 제공될 수 있으며, 사용하기 직전에 단지 멸균 액체 담체, 예를 들어, 주사용수를 첨가하는 것만을 필요로 하는 동결-건조된 (동결건조) 조건에서 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
투약량
컨쥬게이트 화합물, 및 컨쥬게이트 화합물을 포함하는 조성물의 적절한 투약량이 환자에 따라서 달라질 수 있다는 것은 본 기술분야의 당업자에 의해서 인식될 수 있을 것이다. 최적의 투약량을 결정하는 것은 일반적으로, 치료학적 이익의 수준을 모든 위험 또는 유해한 부작용에 대해서 균형이 잡히게 하는 것을 포함한다. 선택된 투약량 수준은 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 투여 시기, 화합물의 배설률, 치료의 지속기간, 조합물 내의 그 밖의 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 상태의 중증도, 및 환자의 종, 성별, 연령, 체중, 상태, 일반적인 건강 및 이전 병력을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 다양한 인자에 따라 좌우될 수 있다. 화합물의 양 및 투여의 경로는 궁극적으로 의사, 수의사 또는 임상의의 판단에 의할 수 있지만, 투약량은 일반적으로, 작용 부위에서 실질적으로 위험하거나 해로운 부작용을 야기함이 없이 바람직한 효과를 달성하는 국소 농도를 이루도록 선택될 것이다.
투여는 치료의 과정 전체에 걸쳐서 단일 용량으로 연속적으로 또는 간헐적으로 (예를 들어, 적절한 간격으로 분할된 용량으로) 이루어질 수 있다. 가장 효과적인 투여의 수단 및 투약량을 결정하는 방법은 본 기술분야의 당업자에게 잘 알려져 있으며, 치료에 사용된 제형, 치료의 목적, 치료될 표적 세포(들), 및 치료될 대상체에 따라 달라질 것이다. 단일 또는 수회 투여는 치료하는 의사, 수의사 또는 임상의에 의해서 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다.
일반적으로, 활성 화합물의 적합한 용량은 1일에 대상체의 체중 킬로그램당 약 100　ng 내지 약 25 ㎎ (더욱 전형적으로 약 1 ㎍ 내지 약 10 ㎎)의 범위이다. 활성 화합물이 염, 에스테르, 아미드, 프로드럭 등인 경우에, 투여되는 양은 모화합물을 기준으로 계산되며, 따라서 사용되는 실중량은 비례해서 증가한다.
일 실시양태에서, 활성 화합물은 다음의 투약 계획에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 100 ㎎, 1일 3 회.
일 실시양태에서, 활성 화합물은 다음의 투약 계획에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 150 ㎎, 1일 2 회.
일 실시양태에서, 활성 화합물은 다음의 투약 계획에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 200 ㎎, 1일 2 회.
그러나, 일 실시양태에서 컨쥬게이트 화합물은 다음의 투약 계획에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 50 또는 약 75 ㎎, 1일 3 또는 4 회.
일 실시양태에서, 컨쥬게이트 화합물은 다음의 투약 계획에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 100 또는 약 125 ㎎, 1일 2 회.
상술한 투약량은 컨쥬게이트 (PBD 부분 및 항체에 대한 링커를 포함)에 대해서, 또는 제공된 PBD 화합물의 유효량, 예를 들어, 링커의 분해 후에 방출될 수 있는 화합물의 양에 대해서 적용할 수 있다.
질환의 예방 또는 치료를 위해서, 본 발명의 ADC의 적절한 투약량은 상기 정의된 바와 같은 치료될 질환의 타입, 질환의 중증도 및 과정, 분자가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 치료법, 항체에 대한 환자의 임상력 및 반응, 및 주치의의 판단에 따라 좌우될 것이다. 분자는 적합하게는 한꺼번에 또는 일련의 치료에 걸쳐서 환자에게 투여된다. 질환의 타입 및 중증도에 따라서 약 1 ㎍/㎏ 내지 15 ㎎/㎏ (예를 들어, 0.1-20 ㎎/㎏)의 분자가 예를 들어, 하나 이상의 별도의 투여에 의해서든, 또는 연속 주입에 의해서든, 환자에게 투여하기 위한 일차 후보 투약량이다. 전형적인 1일 투약량은 상기 언급된 인자들에 따라서 약 1 ㎍/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 또는 그 이상의 범위일 것이다. 환자에게 투여될 ADC의 예시적인 투약량은 환자의 체중 ㎏당 약 0.1 내지 약 10 ㎎/kg의 범위이다. 수 일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여의 경우에, 상태에 따라 치료는 질병 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 지속된다. 예시적인 투약 계획은 약 4 ㎎/㎏의 초기 부하 용량에 이어서 ADC를 1 주일, 2 주일 또는 3 주일마다 추가의 용량으로 투여하는 과정을 포함한다. 그 밖의 다른 투약 계획도 유용할 수 있다. 이러한 치료법의 진행은 통상적인 기술 및 시험방법에 의해서 쉽게 모니터링된다.
치료
상태를 치료하는 것과 관련하여 본 명세서에서 사용된 용어 "치료"는 일반적으로 인간 또는 동물 (예를 들어, 수의과 분야에서)의 치료 및 치료법에 관한 것이며, 여기에서 일부의 바람직한 치료학적 효과, 예를 들어, 상태의 진행의 억제가 달성되고, 진행 속도의 감소, 진행 속도의 중단, 상태의 복귀, 상태의 개선, 및 상태의 치유를 포함한다. 예방적 수단 (즉, 예방, 방지)으로서의 치료가 또한 포함된다.
본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "치료적 유효량"은 바람직한 치료 계획에 따라 투여되는 경우에 일부의 바람직한 치료학적 효과를 제공하는데 효과적이며, 합리적인 수혜/위험 비율에 따른 활성 화합물, 또는 활성 화합물을 포함하는 물질, 조성물 또는 투약형의 양에 관한 것이다.
마찬가지로, 본 명세서에서 사용된 것으로서 용어 "예방적 유효량"은 바람직한 치료 계획에 따라 투여되는 경우에 일부의 바람직한 예방 효과를 제공하는데 효과적이며, 합리적인 수혜/위험 비율에 따른 활성 화합물, 또는 활성 화합물을 포함하는 물질, 조성물 또는 투약형의 양에 관한 것이다.
항체 약물 컨쥬게이트의 제조
항체 약물 컨쥬게이트는 다음을 포함하여, 본 기술분야의 당업자에게 공지된 유기 화학, 반응, 조건 및 시약을 사용하는 다수의 경로에 의해서 제조될 수 있다: (1) 공유 결합을 통해서 항체-링커 중간체 Ab-L을 형성시키기 위한 항체의 친핵성 그룹과 2가 링커 시약의 반응에 이어서 활성화된 약물 부분 시약과의 반응; 및 (2) 공유 결합을 통해서 약물-링커 시약 D-L을 형성시키기 위한 약물 부분 시약과 링커 시약의 반응에 이어서 항체의 친핵성 그룹과의 반응. 컨쥬게이션 방법 (1) 및 (2)는 본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트를 제조하기 위한 다양한 항체 및 링커와 함께 사용될 수 있다.
항체 상의 친핵성 그룹에는 측쇄 티올 그룹, 예를 들어, 시스테인이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 티올 그룹은 친핵성이며, 본 발명의 경우와 같은 링커 부분 상의 친전자성 그룹들과의 공유결합을 형성하도록 반응할 수 있다. 특정 항체는 환원가능한 쇄간 디설파이드, 즉 시스테인 브릿지를 갖는다. 항체는 DTT (클리랜드 (Cleland) 시약, 디티오트레이톨) 또는 TCEP [트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드; Getz et al (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA]와 같은 환원제로 처리함으로써 링커 시약과의 컨쥬게이션에 대해서 반응성으로 만들 수 있다. 따라서, 각각의 시스테인 디설파이드 브릿지는 이론적으로 2개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 추가의 친핵성 그룹은 아민을 티올로 전환시키는 라이신과 2-이미노티올란 (트라우트 (Traut) 시약)과의 반응을 통해서 항체 내에 도입될 수 있다.
대상체/환자
대상체/환자는 동물, 포유동물, 태반 포유동물, 유대류 포유동물 (예를 들어, 캥거루, 웜뱃 (wombat)), 단공류 동물 (예를 들어, 오리너구리 (duckbilled platypus)), 설치류 (예를 들어, 기니아피그, 햄스터, 랫트, 마우스), 쥣과 동물 (예를 들어, 마우스), 토끼목 포유동물 (예를 들어, 토끼), 조류 (예를 들어, 새), 개과 동물 (예를 들어, 개), 고양이과 동물 (예를 들어, 고양이), 말류 (예를 들어, 말), 돼지류 (예를 들어, 돼지), 양류 (예를 들어, 양), 소류 (예를 들어, 소), 영장류, 유인원류 (예를 들어, 원숭이 또는 유인원), 원숭이 (예를 들어, 명주원숭이 (marmoset), 개코원숭이 (baboon)), 유인원류　(예를 들어, 고릴라, 침팬지, 오랑우탕, 긴팔원숭이 (gibbon)), 또는 인간일 수 있다.
또한, 대상체/환자는 발육 중인 그의 모든 형태, 예를 들어, 태아일 수 있다. 한가지 바람직한 실시양태에서, 대상체/환자는 인간이다.
일 실시양태에서, 환자는 각각의 환자가 세포의 표면 상에 αvβ6 인테그린을 갖는 종양이 있는 집단이다.
합성
화학식 IV의 다이머 중간체에 대한 한가지 가능한 합성 경로를 다음에 나타내었다:
Figure 112015098431263-pct00045
중간체 IV는 중간체 VII을 제조하는데 사용될 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00046
Figure 112015098431263-pct00047
중간체 IV는 중간체 IX를 제조하는데 사용될 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00048
Figure 112015098431263-pct00049
다른 한편으로, 중간체 IV를 중간체 X와 커플링하여 중간체 IX를 제조할 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00050
Figure 112015098431263-pct00051
중간체 IV는 중간체 XVI를 제조하는데 사용될 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00052
중간체 IV는 중간체 XIX를 제조하는데 사용될 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00053
화학식 XIV의 다이머 중간체에 대한 가능한 한가지 합성 경로를 하기에 나타내었다:
Figure 112015098431263-pct00054
Figure 112015098431263-pct00055
중간체 XXI는 중간체 XXVII을 제조하는데 사용될 수 있다:
Figure 112015098431263-pct00056
Figure 112015098431263-pct00057
상기 반응식에서, RN, RN' 및 RN"는 각각 독립적으로 질소 보호 그룹을 나타낸다. RC 및 RC '는 각각 독립적으로 OH 또는 OProtO를 나타내고, 여기서 ProtO는 하이드록시 보호 그룹이다. 보호 그룹은 당 업계에 주지되어 있다. RN, RN' 및 RN"는, 예를 들어, BOC일 수 있다. ProtO는 THP일 수 있다. N10-C11 이민 결합의 보호 그룹은 상기 나타낸 합성 방법에 있어서 사용된 화학에 따라, 상이한 단계에서 제거될 수 있다.
일반적으로, 화합물 및 컨쥬게이트는 먼저 2개의 PBD 모노머를 페닐렌 또는 피리딜렌 다이머 브릿지와 연결하여 중간체 IV 또는 XXI를 제공함으로써 제조될 수 있다. 이어 중간체 IV의 다이머 브릿지내 아릴 환 상의 할로겐 그룹을 사용하여 PBD 다이머를 세포 결합제에 연결하기 위한 테더 (링커 그룹 G 또는 L 포함)를 형성할 수 있다.
좀 더 상세히, 각 PBD 모노머의 C8 위치에 -XH 및 -X'H 그룹을 가지는 2개의 PBD 모노머 (각각 중간체 I 및 II)를 중간체 III 또는 중간체 XX 상의 -T-Hal 및 -T'-HaL 그룹과 반응시킬 수 있다. 이러한 합성 방법으로 상이한 PBD 모노머를 얻는 것이 가능하고 따라서 생성된 PBD 다이머는 비대칭적이다. 마찬가지로, PBD 모노머는 동일할 수 있다.
PBD 다이머 중간체 IV는 브릿지내 아릴 할로겐 그룹을 여러 방식으로 반응시켜 본 발명의 화합물 및 컨쥬게이트를 제공하는데 사용될 수 있다.
먼저, 중간체 IV를 소노기시라(Sonogishira) 교차 커플링 반응에 사용하여 다이머 브릿지의 아릴 그룹 상에 아세틸렌 그룹을 제공할 수 있다. 소노기시라 교차 커플링 반응은 말단 알킨을 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd(Ph3)4, 구리 촉매, 예컨대 CuI, 및 염기, 예컨대 디에틸아민의 존재 하에 아릴 할라이드와 커플링하기 위해 당 업계에 주지되어 있다.
아세틸렌이 말단 아세틸렌으로 사용되는 경우, PBD 다이머의 교차 결합을 막기 위해 아세틸렌 분자의 한쪽이 전형적으로 예를 들어, TMS로 보호된다. 소노기시라 반응이 완료되면, TMS 그룹을 분해하여 알킨 중간체 V를 제공할 수 있다.
중간체 V를 아지도 화합물과 반응시켜 아지드-알킨 휴이스겐(Huisgen) 사이클로부가로 트리아졸 유도체를 형성할 수 있다. 이 반응은 구리 촉매에 의해 촉매화될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 컨쥬게이트를 형성하기 위해, 아지드를 에틸렌 그룹 및 가변수의 PEG 그룹에 결합시킨다. 아지드는 추가 반응을 위해 아민 그룹으로 종결될 수 있다. 중간체 V와 아미노-아지드 화합물의 반응으로 중간체 VI가 제공될 것이다.
이어 중간체 VI의 자유 아민 그룹을 세포 결합 단위에 연결되는 링커 그룹의 카복실산 그룹과 반응시켜 링커 그룹 G 또는 L에 PBD 다이머를 연결하는 아미도 그룹을 형성함으로써 화합물 VII을 제공할 수 있다.
중간체 VII의 링커 그룹/반응성 그룹, G를 세포 결합제에 컨쥬게이트하여 본 발명의 컨쥬게이트를 제공할 수 있다.
대안적인 소노기시라 반응으로서, 중간체 IV를 팔라듐 및 구리 촉매 및 염기의 존재 하에 아세틸아민, 예컨대 프로파길아민과 커플링할 수 있다. 이 반응은 아클린 그룹이 보존되고 자유 말단 아민이 추가 반응에 이용가능한, PBD 다이머 브릿지에 부착된 테더의 일부를 제공한다. 예를 들어, 중간체 IV와 프로파길아민의 반응으로 중간체 VIII이 제공된다.
중간체 VIII의 말단 아민을, 예를 들어, (세포 결합제로의 연결을 위한) 링커/반응성 그룹 G에 부착된 카복실산 그룹과 반응시켜 중간체 IX를 제공할 수 있다.
중간체 IX의 대안적인 합성으로서, 중간체 XI의 카복실산 그룹을 프로파길아민과 반응시켜 중간체 XII를 형성할 수 있다. 소노고시라(Sonogoshira) 반응에 의한 중간체 IV와 중간체 XII의 반응으로 중간체 XIII이 제공된다.
보호된 아민 그룹 종결된 가변 PEG 쇄를 탈보호하고, 중간체 XIV의 카복실산 그룹과 반응시켜 PBD 다이머 상에 링커/반응성 그룹 G를 커플링하고 중간체 XIV를 형성할 수 있다.
중간체 IV는 또한 교차 커플링 아민화 반응, 예컨대 부쉬발트-하르트빅(Buchwald-Hartwig) 아민화에 사용될 수 있다. 탄소-질소 결합이 아민과 아릴 할라이드의 팔라듐-촉매화된 교차 커플링을 통해 형성된다. 이러한 교차 커플링 반응에 사용하기 위한 다수의 팔라듐 촉매가 공지되었으며, 예로서는 Pd(Ph3)4 또는 RuPhos/RuPhosPd를 들 수 있다.
중간체 IV와 보호된 프로판-1-아민으로 작용기화된 피페리진의 반응으로 중간체 XV가 제공된다. 중간체 XV의 보호된 아민을, 예를 들어, 세포 결합제로의 연결을 위한 링커/반응성 그룹, G에 부착된 카복실산 그룹과 추가 반응시켜 중간체 XVI를 제공한다.
중간체 IV와 부분적으로 보호된 피페라진의 교차 커플링 아민화 반응, 예컨대 부쉬발트-하르트빅 아민화에 이어 (예를 들어 트리플루오로아세트산으로의) 탈보호로 중간체 XVII을 제공한다.
중간체 XVII의 탈보호된 피페라진 아민 그룹을 중간체 XVIII 중의 카복실산 그룹과 반응시켜 중간체 XIX를 제공한다.
중간체 XXI를 사용하여 옥심 중간체 XXIV를 형성할 수 있다. 예를 들어, 부분적으로 보호된 PEG-디아민, 중간체 XXII를 중간체 XIV의 카복실산 그룹과 반응시킬 수 있다. 탈보호로 중간체 XIII을 제공한다.
중간체 XXI와 XXIII의 반응으로 옥심 중간체 XXIV가 제공된다. 제조용 HPLC를 사용하여 syn 및 anti 옥심을 분리할 수 있다.
중간체 XXI는 또한 아크릴아미드 중간체 XXVII를 형성하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 알데히드 중간체 XXI를 말론산과 크뇌베나겔 축합(Knoevenagel condensation)으로 반응시켜 아크리클산 중간체 XXV를 제공할 수 있다. 이를 부분적으로 보호된 PEG-디아민과 반응시켜 중간체 XXVI를 제공할 수 있다. 탈보호 및 중간체 XIV와의 커플링으로 아크릴아미드 중간체 XXVII가 제공된다.
2개의 이민 부분을 함유한 PBD 화합물의 합성이 본원에 참고로 원용되는 하기 문헌에 광범위하게 검토되었다:
a) WO 00/12508 (14-30 면);
b) WO 2005/023814 (3-10 면); 및
c) WO 2005/085259 (31-39 면).
실시예
일반적인 실험 방법
선광도 (optical rotation)는 ADP 220 편광계 (Bellingham Stanley Ltd.) 상에서 측정되었으며, 농도 (c)는 g/100 mL로 제공된다. 융점은 디지탈 융점 장치 (Electrothermal)를 사용하여 측정하였다. IR 스펙트럼은 퍼킨-엘머 스펙트럼 (Perkin-Elmer Spectrum) 1000 FT IR 분광계 상에 기록하였다. 1H 및 13C NMR 스펙트럼은 각각 400 및 100 MHz에서 브루커 어밴스 (Bruker Avance) NMR 분광계를 사용하여 300 K에서 획득하였다. 화학적 이동은 TMS (δ = 0.0 ppm)에 대하여 보고하며, 신호는 헤르츠 (Hz)로 제공된 커플링 상수와 함께 s (단일선), d (이중선), t (삼중선), dt (이중 삼중선), dd (이중선의 이중선), ddd (이중선의 이중 이중선) 또는 m (다중선)으로 표시된다. 질량 분광학 (MS) 데이터는 워터스 (Waters) 2996 PDA를 갖춘 워터스 (Waters) 2695 HPLC에 커플링된 워터스 마이크로매스 (Waters Micromass) ZQ 기기를 사용하여 수집하였다. 사용된 워터스 마이크로매스 ZQ 파라미터는 다음과 같았다: 모세관 (kV), 3.38; 콘 (Cone) (V), 35; 추출기 (Extractor) (V), 3.0; 공급 온도 (℃), 100; 탈용매화 (Desolvation) 온도 (℃), 200; 콘 유속 (L/h), 50; 탈용매화 유속 (L/h), 250. 고-해상도 (High-resolution) 질량 분광학 (HRMS) 데이터는 샘플을 기기 내로 도입시키기 위한 금속-코팅된 보로실리케이트 유리 팁 (glass tip)을 사용하여 포지티브 W-모드로 워터스 마이크로매스 QTOF 글로발 (Waters Micromass QTOF Global) 상에 기록하였다. 박층 크로마토그래피 (TLC)는 실리카겔 알루미늄 플레이트 (Merck 60, F254) 상에서 수행되었으며, 플래쉬 (flash) 크로마토그래피는 실리카겔 (Merck 60, 230-400 메쉬 ASTM)을 이용하였다. 모든 다른 화학물질 및 용매는 Sigma-Aldrich로부터 구입하였으며, 추가 정제하지 않고 공급된 채로 사용하였다.
일반적인 LC/MS 조건: HPLC (Waters Alliance 2695)는 물 (A) (포름산 0.1%) 및 아세토니트릴 (B) (포름산 0.1%)의 이동상을 사용하여 수행하였다. 구배: 초기 조성 - 1.0 분에 걸쳐서 5% B, 다음에 3 분 이내에 5% B에서 95% B. 조성은 0.5 분 동안 95% B에서 유지시켰으며, 그 다음에는 0.3 분 이내에 5% B로 복귀시켰다. 총 구배 주행시간은 5 분에 해당한다. 유속은 3.0 mL/분이며, 400 μL를 제로 사적 티피스 (zero dead volume tee piece)를 경유하여 분리시켜 이것을 질량 분광계 내로 통과시킨다. 파장 검출 범위: 220 내지 400 nm. 기능 타입: 다이오드 어레이 (535 scans). 칼럼: 페노메넥스 (Phenomenex®) 오닉스 모놀리틱 (Onyx Monolithic) C18 50 x 4.60 mm.
실시예 5 내지 11에 대한 분석용 LC/MS 조건: 포지티브 모드 전자분무 질량분석은 시마주 넥세라(Shimadzu Nexera®)/프로미넨스(Prominence®) LCMS-2020을 사용하여 수행하였다. 사용한 이동상은 용매 A (H2O + 0.1% 포름산) 및 용매 B (CH3CN + 0.1% 포름산)이었다. 구배: 초기 조성은 0.25 분에 걸쳐서 5% B를 유지하고, 이어 2 분의 기간에 걸쳐서 5% B에서 100% B로 증가시켰다. 조성은 0.50 분 동안 100% B에서 유지시켰으며, 그 다음에는 0.05 분 이내에 5% B로 복귀시키고, 여기서 0.05 분동안 유지하였다. 총 구배 주행 시간은 3.0 분이었다. 유속은 0.8 mL/분이었다. 검출은 214 및 254 nm에서 하였다. 칼럼: 50 ℃에서 워터스 액퀴티(Waters Acquity) UPLC® BEH 쉴드(Shield) RP18 1.7 ㎛ 2.1 x 50 mm.
실시예 5 내지 11에 대한 제조용 HPLC 조건은 다음과 같다: 역상 초고속 고성능 액체 크로마토그래피 (UFLC)는 하기 치수의 피노메넥스(Phenomenex®) 제미니(Gemini) NX 5μ C18 칼럼을 채용한 시마주 프로미넨스(Shimadzu Prominence®) 기기에서 수행하였다 (50 ℃에서): 분석에 대해 150 x 4.6 mm, 및 제조 작업에 대해 150 x 21.2 mm. 사용한 용리제는 용매 A (H2O + 0.1% 포름산) 및 용매 B (CH3CN + 0.1% 포름산)이었다. 모든 UFLC 실험은 다음의 구배 조건으로 수행되었다: 0에서 30 분으로, B의 조성을 0에서 100%로 증가시키고 2 분 더 100% B에서 유지하였다. B의 조성을 32.0 분에서 32.1 분까지 100%에서 0%로 감소시키고 35.0 분까지 0% B에서 유지하였다. 총 구배 주행 시간은 35.0 분이었다. 사용한 유속은 분석에 대해 1.0 mL/분, 제조용 HPLC에 대해 20.0 mL/분이었다. 검출은 254 및 280 nm에서 하였다.
실시예 1
(a) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-할로-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 2a , 2b , 2c )
Figure 112015098431263-pct00058
(i) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-요오도-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 2a )
1,3-비스(브로모메틸)-5-요오도벤젠 (2.00 g, 5.20 mmol)을 건조 DMF (60 mL) 중 Boc/THP-보호된 PBD 캡핑 단위 1 (4.75 g, 10.3 mmol), TBAI (190 mg, 0.52 mmol) 및 K2CO3 (1.42 g, 10.3 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60 ℃로 가열하고, 아르곤 분위기 하에 3 시간동안 교반하였으며, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 4.15 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1171 ([M+ Na]+., ~10% 상대 강도). 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, DMF를 진공 중에서 증발에 의해 제거하였다. 얻은 잔사를 물 (50 mL)과 EtOAc (50 mL)로 분배하고 수성상을 EtOAc로 추출하였다 (3 x 20 mL). 모아진 유기층을 물 (2 x 20 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 50:50 v/v EtOAc/헥산 - 80:20 v/v EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 비스-에테르 2a를 백색 폼으로서 수득하였다 (5.42 g, 91% 수율).
(ii) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-브로모-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 2b )
1-브로모-3,5-비스(브로모메틸)벤젠 (1.54 g, 4.53 mmol)을 건조 DMF (52 mL) 중 Boc/THP-보호된 PBD 캡핑 단위 1 (4.20 g, 9.06 mmol), TBAI (167 mg, 0.45 mmol) 및 K2CO3 (1.25 g, 9.06 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60 ℃로 가열하고, 아르곤 분위기 하에 5 시간동안 교반하였으며, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 4.10 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1101 ([M+ H]+., ~70% 상대 강도). 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, DMF를 진공 중에서 증발에 의해 제거하였다. 얻은 잔사를 물 (60 mL)과 EtOAc (60 mL)로 분배하고, 수성상을 EtOAc로 추출하였다 (3 x 25 mL). 모아진 유기층을 물 (30 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 50:50 v/v EtOAc/헥산 - 100% EtOAc)에 의해 정제하여 비스-에테르 2b를 백색 폼으로서 수득하였다 (3.37 g, 68% 수율).
(iii) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-클로로-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 2c )
1,3-비스(브로모메틸)-5-클로로벤젠 (1.42 g, 4.80 mmol)을 건조 DMF (55 mL) 중 Boc/THP-보호된 PBD 캡핑 단위 1 (4.42 g, 9.60 mmol), TBAI (177 mg, 0.48 mmol) 및 K2CO3 (1.33 g, 9.60 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60 ℃로 가열하고, 아르곤 분위기 하에 1.5 시간동안 교반하였으며, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 4.08 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1057 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도). 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, DMF를 진공 중에서 증발에 의해 제거하였다. 얻은 잔사를 물 (60 mL)과 EtOAc (60 mL)로 분배하고, 수성상을 EtOAc로 추출하였다 (3 x 20 mL). 모아진 유기층을 물 (20 mL), 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 50:50 v/v EtOAc/헥산 - 80:20 v/v EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 비스-에테르 2c를 백색 폼으로서 수득하였다 (5.10 g, 99% 수율).
(b) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-에티닐-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 4 )
Figure 112015098431263-pct00059
(i) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-((트리메틸실릴)에티닐)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 3 )
촉매량의 Pd(PPh3)4 (15.0 mg, 13.1 ㎛ol)를 오븐-건조된 밀봉형 베슬내의 건조 DMF (5.6 mL) 중 비스-에테르 2a (750 mg, 0.65 mmol), TMS-아세틸렌 (278 ㎕, 191 mg, 1.96 mmol), CuI (5.0 mg, 26.1 ㎛ol), 디에틸아민 (1.35 mL, 956 mg, 13.1 mmol) 및 오븐-건조한 후 4Å 분자체 펠렛의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, 아르곤으로 3회 플러싱한 후, 마이크로웨이브에서 30 분동안 100 ℃에서 가열하였으며, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 출발물질의 완전 소비 및 체류 시간 4.37 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1142 ([M+ Na]+., ~40% 상대 강도). LC/MS 조건 하에 TMS-절단에 해당하는 체류 시간 3.97 분에서의 피크가 관찰되었다 (ES+) m/z 1069 ([M+ Na]+., ~60% 상대 강도). 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 소결 유리를 통해 여과하여 체 (DMF로 세척됨)를 제거하였다. 여액을 진공 중에서 증발시키고, 얻은 잔사를 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 50:50 v/v EtOAc/헥산 - 80:20 v/v EtOAc/헥산)에 적용하여 TMS-아세틸렌 3을 황색 폼으로서 수득하였다 (691 mg, 95% 수율).
(ii) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-에티닐-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 4 )
고체 K2CO3 (383 mg, 2.77 mmol)를 MeOH (20 mL) 중 TMS-보호된 화합물 3 (1.55 g, 1.39 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 실온에서 3 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의해 반응이 완료된 것으로 판단되었다 [체류 시간 4.00 분에서의 목적 생성물 피크 (ES+) m/z 1047 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도)]. MeOH를 진공 중에서 증발에 의해 제거한 후, 얻은 잔사를 물 (60 mL)과 EtOAc (60 mL)로 분배하였다. 층을 분리한 다음, 수성상을 EtOAc로 추출하였다 (3 x 20 mL). 모아진 유기층을 물 (30 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 50:50 v/v EtOAc/헥산 - 80:20 v/v EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 아세틸렌 4를 오렌지색 폼으로서 수득하였다 (1.13 g, 78% 수율).
(c) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-(2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 5 )
Figure 112015098431263-pct00060
고체 CuSO4.5H2O (13.0 mg, 52.0 ㎛ol) 및 (+)-소듐 L-아스코르베이트 (41.0 mg, 0.21 mmol)를 실온에서 tert-BuOH (6 mL) 및 H2O (6 mL) 중 11-아지도-3,6,9-트리옥사운데칸-1-아민 (227 mg, 207 ㎕, 1.04 mmol) 및 알킨 4 (1.09 g, 1.04 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응이 진행함에 따라 황색에서 녹색으로의 변색이 관찰되었다. 16 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 3.12 분에서의 피크 (ES+) m/z 1265 ([M+ H]+., ~100% 상대 강도)에 해당하는 상당량의 목적 생성물이 형성되었음을 나타내었다. [참고: 어떤 경우에는 반응 진행이 교착상태였으나, 추가의 CuSO4.5H2O (0.05 당량) 및 (+)-소듐 L-아스코르베이트 (0.2 당량)의 첨가하게 되면 반응은 완결되었다]. 반응 혼합물을 (부가 깔때기의 진탕없이) 물 (50 mL)과 EtOAc (50 mL)로 분배하였다. 수성상을 EtOAc로 추출하고 (3 x 15 mL), 모아진 유기층을 물 (30 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물 5를 녹색 폼 (1.32 g, 100% 조 수율)으로서 수득하였다. 조 생성물은 다음 단계에 추가의 정제없이 사용되었다.
(d) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-(18-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-13-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자옥타데실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 6 )
Figure 112015098431263-pct00061
고체 6-말레이미도헥산산 N-하이드록시석신이미드 에스테르 (327 mg, 1.06 mmol)를 실온에서 건조 DCM (30 mL) 중 일차 아민 5 (1.28 g, 1.01 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 진행을 LC/MS에 의해 모니터링하고, 3 일간 교반 후 반응은 더 이상 진행되지 않았으며, 상당량의 목적 생성물이 체류 시간 3.65 분에서 관찰되었으며 (ES+) m/z 1458 ([M+ H]+., ~100% 상대 강도), 체류 시간 3.15 분에서 비반응 출발물질을 동반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔로 처리하고 용매를 진공 중에서 증발에 의해 제거하였다. 얻은 잔사를 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% DCM - 97:3 v/v DCM/MeOH)에 적용하여 말레이미드 6을 폼으로서 수득하였다 (658 mg, 45% 수율).
(e) N-(2-(2-(2-(2-(4-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 ( 7 )
Figure 112015098431263-pct00062
95:5 v/v TFA/H2O (5 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 6 (428 mg, 0.29 mmol)의 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 2.72 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1054 ([M+ H]+., ~70% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (100 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 30 mL), 모아진 유기층을 H2O (20 mL), 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 96:4 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 7을 오렌지색 폼으로서 수득하였다 (163 mg, 53% 수율).
실시예 2
(a) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-(3-아미노프로프-1-인-1-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 8 )
Figure 112015098431263-pct00063
촉매량의 Pd(PPh3)4 (5.0 mg, 4.2 ㎛ol)를 오븐-건조된 밀봉형 베슬내의 건조 DMF (1.8 mL) 중 비스-에테르 2a (242 mg, 0.21 mmol), 프로파길아민 (41 ㎕, 35 mg, 0.63 mmol), CuI (1.6 mg, 8.4 ㎛ol), 디에틸아민 (0.42 mL, 309 mg, 4.22 mmol) 및 오븐-건조한 4Å 분자체 펠렛의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, 아르곤으로 3회 플러싱한 후, 마이크로웨이브에서 3 분동안 100 ℃에서 가열하였으며, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 출발물질의 완전 소비 및 체류 시간 3.18 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1076 ([M+ H]+., ~60% 상대 강도). 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 소결 유리를 통해 여과하여 체 (DMF로 세척됨)를 제거하였다. 여액을 진공 중에서 증발하여 불안정한 조 생성물 8을 제공하였는데, 이는 정제 또는 분석없이 다음 단계에 즉시 사용되었다.
(b) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-3,19-디옥소-7,10,13,16-테트라옥사-4,20-디아자트리코스-22-인-23-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)- 카복실레이트 ) ( 9 )
Figure 112015098431263-pct00064
MAL-dPEG®4-산 (88 mg, 0.21 mmol)을 실온에서 건조 DCM (4 mL) 중 EDCI (41 mg, 0.21 mmol) 및 조 일차 아민 8의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 3 시간동안 교반하였으며, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 3.58 분에서 상당량의 목적 생성물을 나타내었으며 (ES+) m/z 1475 ([M+ H]+., ~10% 상대 강도), 1498 ([M+ Na]+., ~5% 상대 강도), 체류 시간 3.85 분에서 부산물을 동반하였다. 반응 혼합물을 DCM (30 mL)으로 희석하고, H2O (3 x 10 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% DCM - 96:4 v/v DCM/MeOH)에 의해 정제하여 말레이미드 9를 폼 (67 mg, 2 단계에 걸쳐 22% 수율)으로서 수득하였다.
(c) N-(3-(3,5- 비스 ((((S)-7- 메톡시 -2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a- 테트라하이드로 -1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)프로프-2-인-1-일)-1-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 ( 10 )
Figure 112015098431263-pct00065
95:5 v/v TFA/H2O (1 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 9 (67 mg, 45.5 ㎛ol)의 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1.5 시간동안 교반한 후, LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 2.67 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1070 ([M+ H]+., ~5% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (50 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 15 mL), 모아진 유기층을 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 96:4 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 10을 오렌지색 폼으로서 수득하였다 (12 mg, 24% 수율).
실시예 3
(a) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-(4-(3-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로필)피페라진-1-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 11 )
Figure 112015098431263-pct00066
비스-에테르 2c (250 mg, 0.24 mmol), NaOtBu (57 mg, 0.59 mmol), RuPhos (11 mg, 23.7 ㎛ol) 및 RuPhosPd (19 mg, 23.7 ㎛ol)의 샘플을 오븐-건조된 밀봉형 튜브에 첨가하였다 (데시케이터에서 냉각됨). 혼합물을 탈기하고, 아르곤으로 3회 플러싱한 후, 건조 THF (5 mL)를 첨가한 다음, 불활성 분위기 하에서 ~10 분동안 적색이 사라지지 않을 때까지 교반하였다. 건조 THF (1 mL) 중 3-(피페라진-1-일)프로판-1-아민 (58 mg, 0.26 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 다시 탈기한 후, 아르곤으로 3회 플러싱하였다. 반응 혼합물을 예열된 오일조에서 2.5 시간동안 80 ℃로 가열하였는데, 이때 LC/MS에 의한 분석은 다음의 3-성분 혼합물을 나타내었다: 체류 시간 3.35 분에서 목적 생성물 (ES+) m/z 1264 ([M+ H]+., ~60% 상대 강도), 체류 시간 3.95 분에서 주 부산물 (2c의 탈염소화 유사체) 및 쇼울더 4.13 분 (미량 출발 물질). 실온으로 식힌 후, 반응 혼합물을 물 (20 mL)과 EtOAc (20 mL)로 분배하였다. 수성상을 EtOAc로 추출하고 (3 x 15 mL), 모아진 유기층을 물 (30 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% DCM - 95:5 v/v DCM/MeOH)에 의해 정제하여 피페라진 11을 폼 (152 mg, 25% 수율)으로서 수득하였다.
(b) (11aS,11a'S)-8,8'-(((5-(4-(3-아미노프로필)피페라진-1-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-5(11aH)-온) ( 12 )
Figure 112015098431263-pct00067
95:5 v/v TFA/H2O (2 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 11 (142 mg, 0.11 mmol)의 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간동안 교반한 후, LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 2.23 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 778 ([M+ H2O]+., ~5% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (50 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 20 mL), 모아진 유기층을 염수 (15 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물 12를 왁스성 고체 (22.6 mg)로서 수득하였다. NaHCO3 중화 단계 동안 목적 생성물이 DCM에 부분적으로 용해되는 왁스성 고체로서 용액으로부터 석출된 것에 주목하였다. DCM-불용성 고체를 DMF에 용해한 후, 진공 중에서 증발하여 추가 생성물을 얻었다. 생성된 오일성 잔사를 디에틸에테르와 연마하여 고체를 얻고 진공 중에서 건조한 후 추가의 조 12 (54.4 mg, 총량 = 77 mg, 85% 수율)를 수득하였으며, 추가 정제 또는 분석없이 다음 단계에 이용하였다.
(c) N-(3-(4-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)피페라진-1-일)프로필)-1-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 ( 13 )
Figure 112015098431263-pct00068
MAL-dPEG®4-산 (42 mg, 0.10 mmol)을 실온에서 건조 DCM (4 mL) 중 EDCI (20 mg, 0.10 mmol) 및 조 일차 아민 12 (77 mg, 0.10 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 3 시간동안 교반하였으며, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 출발 물질의 완전 소비와, 체류 시간 2.42 분에서 상당량의 목적 생성물 (ES+) m/z 1176 ([M+ H2O]+., ~5% 상대 강도) 및 체류 시간 2.05 분에서 과량의 MAL-dPEG®4-산 (다이오드 어레이에서 약하지만 ES+/ES-에서 검출가능한 신호)을 나타내었다. 반응 혼합물을 DCM (30 mL)으로 희석하고, H2O (15 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 93:7 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 말레이미드 13을 폼 (46 mg, 55%)으로서 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피를 이용하여 과량의 MAL-dPEG®4-산 중 미량은 제거할 수 없는 것으로 나타났다.
실시예 4
(a) ( 11 S ,11a S ,11' S ,11a' S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-(4-(tert-부톡시카보닐)피페라진-1-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 14 )
Figure 112015098431263-pct00069
2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (18 mg, 38 ㎛ol, 0.2 eq), 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-바이페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-바이페닐)]팔라듐(II) (18 mg, 22 ㎛ol, 0.12 eq), 탄산세슘 (0.36 g,1.1 mmol, 5.0 eq) 및 요오도 유도체 (2a) (0.307 g, 0.27 mmol, 1.0 eq)를 배기하고 아르곤 (x 3)으로 플러싱한 마이크로웨이브 바이알에 투입하였다. 무수 THF (5 mL)에 이어 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (70 mg, 0.37 mmol, 1.1 eq)를 첨가하고, 얻은 혼합물을 85 ℃에서 4 시간, 이어 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 탄산수소나트륨으로 희석하고, 에틸아세테이트로 추출하였다 (3 x 100 mL). 모아진 에틸아세테이트 추출물을 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 감압 하에 증발시켰다. 생성물 14를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 [0.5% 증분으로 CHCl3/MeOH 0% - 1.5%]에 의해 정제하였다 (0.111 g, 51%)
분석 데이터: RT 4.12 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1207 ([M + 1]+., 30).
(b) (11a S ,11a' S )-8,8'-(((5-(피페라진-1-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-5(11aH)-온) ( 15 )
Figure 112015098431263-pct00070
95% 트리플루오로아세트산 (4 mL)의 냉각 용액을 화합물 (14) (0.2 g, 0.165 mmol, 1 eq.)에 첨가한 후, 빙조에서 냉각하였다. 용액을 0 ℃에서 30 분동안 교반한 다음, LCMS에 의해 반응이 완료된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 얼음 및 포화 중탄산나트륨 용액의 혼합물에 적가하여 트리플루오로아세트산을 중화하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (4 x 75 mL), 합한 추출물을 물 (100 mL) 및 포화 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 감압 하에 증발시켜 생성물 15를 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 사용하였다 (0.116 g, 100%)
분석 데이터: RT 2.33 분; MS ( ES + ) m/z (상대 강도) 703 ([M + 1]+., 100).
(c) N-(15-(4-(3,5-비스(((( S )-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)피페라진-1-일)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사펜타데실)-3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미드 ( 17 )
Figure 112015098431263-pct00071
N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (35 mg, 0.18 mmol, 1.1 eq)를 아르곤 하에 무수 DCM (5 mL) 중 화합물 (15) (116 mg, 0.165 mmol, 1.0 eq) 및 1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-3-옥소-7,10,13,16-테트라옥사-4-아자노나데칸-19-온산 (16) (69 mg, 0.165 mmol, 1.0 eq)의 용액에 첨가하였다. 얻은 용액을 실온에서 2 시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (50 mL)으로 희석하고, 물 (100 mL), 포화 탄산수소나트륨 용액 (100 mL), 물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 감압 하에 증발시켰다. 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 [1% 증분으로 CHCl3/MeOH 0% - 5%]에 의해 정제하여 생성물을 17을 황색 유리질 (0.058 g, 32%)로 수득하였다.
분석 데이터: [α]18 D = [+628°] (c = 0.25, CHCl3); RT 2.65 분; MS (ES+) m/z (상대 강도) 1101 ([M + 1]+., 40)
실시예 5
(a) tert -부틸 (42-(2,5- 디옥소 -2,5- 디하이드로 -1H-피롤-1-일)-37-옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-운데카옥사-36-아자도테트라콘틸)옥시카바메이트 ( 19 )
Figure 112015098431263-pct00072
6-말레이미도헥산산 (64 mg, 0.30 mmol)을 실온에서 건조 DCM (6 mL) 중 EDCI (64 mg, 0.33 mmol) 및 일차 아민 18 (200 mg, 0.30 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 16 시간동안 교반하였고, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.38 분에서 상당량의 목적 생성물을 나타내었고 {(ES+) m/z 854 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도), 877 ([M+ Na]+., ~100% 상대 강도)}, 체류 시간 1.07 분에서 비반응 18을 동반하였으며, 출발 물질과 생성물 모두 약한 UV 흡수 (214 및 254 nm)를 갖고 ES+ TIC 상에서 최고로 검출된 것으로 나타났다. 추가의 6-말레이미도헥산산 (32 mg, 0.15 mmol) 및 EDCI (32 mg, 0.17 mmol)를 출발 물질이 완전히 소비될 때까지 (LC/MS로 판단하였을 때) 교반 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL)으로 희석하고, H2O (3 x 30 mL), 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (1% 증분으로 구배 용출: 100% DCM - 96:4 v/v DCM/MeOH)에 의해 정제하여 아미드 19를 오일 (214 mg, 83% 수율)로서 수득하였다.
(b) N-(35-( 아미노옥시 )-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33- 운데카옥사펜타트리아콘틸 )-6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 ( 20 )
Figure 112015098431263-pct00073
95:5 v/v TFA/H2O (2 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 19 (214 mg, 0.25 mmol)의 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.06 분에서 목적 생성물 피크가 있었고 {(ES+) m/z 754 ([M+ H]+., ~100% 상대 강도)}, 출발 물질과 생성물 모두 약한 UV 흡수 (214 및 254 nm)를 갖고 ES+ TIC 상에서 최고로 검출된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (100 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 30 mL), 모아진 유기층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 옥시아민 20을 오일 (161 mg, 85% 수율)로서 수득한 후, 추가 정제없이 다음 단계에 이용하였다.
(c) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-포르밀-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 21 )
Figure 112015098431263-pct00074
3,5-비스(브로모메틸)벤즈알데히드 (260 mg, 0.90 mmol) [Enrique DIez-Barra et al J. Org. Chem. 2001, 66, 5664-5670]를 건조 DMF (12 mL) 중 Boc/THP-보호된 PBD 캡핑 단위 7 (826 mg, 1.79 mmol), TBAI (33 mg, 89.7 ㎛ol) 및 K2CO3 (247 mg, 1.79 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60 ℃로 가열하고, 아르곤 분위기 하에 2.5 시간동안 교반하였고, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.92 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 {(ES+) m/z 1051 ([M+ H]+., ~65% 상대 강도) 1073 ([M+ Na]+., ~25% 상대 강도)}. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, DMF를 진공 중에서 증발에 의해 제거하였다. 얻은 잔사를 물 (50 mL)과 EtOAc (50 mL)로 분배하고 수성상을 EtOAc로 추출하였다 (3 x 15 mL). 모아진 유기층을 물 (2 x 20 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (10% 증분으로 구배 용출: 50:50 v/v EtOAc/헥산 - 80:20 v/v EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 비스-에테르 21을 백색 폼 (717 mg, 76% 수율)으로서 수득하였다. 21은 THP 보호 그룹에 기인한 부분입체이성체의 혼합물로서 분리된 것으로 나타났다.
(d) ( 11S,11aS,11'S,11a'S )-디-tert-부틸 8,8'-(((5-((syn/anti)-45-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-40-옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카옥사-2,39-디아자펜타테트라콘트-1-엔-1-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 22 )
Figure 112015098431263-pct00075
PTSA (4.1 mg, 21.4 ㎛ol)를 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 건조 DCM (3 mL) 중 알데히드 21 (224 mg, 0.21 mmol) 및 옥시-아민 20 (161 mg, 0.21 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 아르곤 분위기 하에 교반하고 3 시간 더 교반하였고, 이때 LC/MS에 의한 분석은 옥시아민 20 (체류 시간 1.06 분)의 완전 소비와, 목적 생성물 {체류 시간 1.85 분 (ES+) m/z 1787 ([M+ H]+., ~25% 상대 강도) 1810 ([M+ Na]+., ~90% 상대 강도)} 및 비반응 알데히드 21 (체류 시간 1.91 분)의 존재를 나타내었다. 알데히드가 완전히 소비되지 않았더라도, (조기 시험 반응에서 관찰되는) 원치않는 THP 절단을 막기 위해 반응을 이 시점에서 중단하였다: 혼합물을 DCM (50 mL)으로 희석하고, NaHCO3 (3 x 15 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (1% 증분으로 구배 용출: 100% DCM - 96:4 v/v DCM/MeOH)에 의해 정제하여 syn/anti 옥심 22를 백색 폼 (215 mg, 56% 수율)으로서 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 중에 비반응 알데히드 21 (83 mg)을 회수하였다. 22는 THP 보호 그룹에 기인하여 부분입체이성체의 혼합물로서 분리된 것으로 나타났다.
(e) N-((syn/anti)-1-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카옥사-2-아자옥타트리아콘트-1-엔-38-일)-6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 ( 23 )
Figure 112015098431263-pct00076
95:5 v/v TFA/H2O (1 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 22 (204 mg, 0.11 mmol)의 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 30 분동안 교반한 후, LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.42 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 {(ES+) m/z 1383 ([M+ H]+., <5% 상대 강도)}. 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (50 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 15 mL), 모아진 유기층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (1% 증분으로 구배 용출: 100% CHCl3 - 96:4 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 탈보호된 syn /anti 옥심 23을 황색 박막 (85 mg, 54% 수율)으로 수득하였다. 역상 초고성능 액체 크로마토그래피 (조건에 대한 일반적인 정보 섹션 참조)에 의해 대부분 16.15 분 (syn 이성체, 소수 성분) 및 16.42 분 (anti 이성체, 주 성분)에서 2개의 피크가 나타났다.
(f) N-((anti)-1-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카옥사-2-아자옥타트리아콘트-1-엔-38-일)-6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 ( 24 )
Figure 112015098431263-pct00077
화합물 23을 제조용 HPLC (조건에 대한 일반적인 정보 섹션 참조)에 의해 정제하였다. 16.42 분의 체류 시간에서 용출되는 피크를 분리하고, 동결건조하여 anti-옥심 24 (9.9 mg)를 수득하였다: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 7.66 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 7.62-7.59 (m, 2H), 7.53-7.51 (m, 3H), 6.82 (s, 2H), 6.68 (s, 2H), 6.16 (br s, 2H), 5.25-5.14 (m, 8H), 4.33 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 4.28 (br s, 4H), 3.96 (s, 6H), 3.90-3.84 (m, 2H), 3.82-3.78 (m, 2H), 3.67-3.49 (m, 43H), 3.46-3.42 (m, 2H), 3.15-3.08 (m, 2H), 2.98-2.90 (m, 2H), 2.16 (t, 2H, J = 7.6 Hz), 1.70-1.54 (m, 4H), 1.36-1.24 (m, 2H).
(g) N-((syn)-1-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-도데카옥사-2-아자옥타트리아콘트-1-엔-38-일)-6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 ( 25 )
Figure 112015098431263-pct00078
화합물 23을 제조용 HPLC (조건에 대한 일반적인 정보 섹션 참조)에 의해 정제하였다. 16.15 분의 체류 시간에서 용출되는 피크를 분리하고, 동결건조하여 syn-옥심 25 (5.2 mg)를 수득하였다: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.93-7.91 (m, 2H), 7.66 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 7.57-7.55 (m, 1H), 7.52 (s, 2H), 7.32 (s, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.68 (s, 2H), 6.18 (br s, 2H), 5.26-5.14 (m, 8H), 4.35 (t, 2H, J = 5.1 Hz), 4.28 (br s, 4H), 3.96 (s, 6H), 3.90-3.84 (m, 2H), 3.81 (t, 2H, J = 5.1 Hz), 3.68-3.48 (m, 43H), 3.46-3.42 (m, 2H), 3.15-3.07 (m, 2H), 2.97-2.90 (m, 2H), 2.16 (t, 2H, J = 7.6 Hz), 1.70-1.54 (m, 4H), 1.36-1.24 (m, 2H).
실시예 6
(a) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-아미노-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데크-18-인-19-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)- 카복실레이트 ) ( 29 )
Figure 112015098431263-pct00079
(i) tert -부틸 (15-옥소-3,6,9,12- 테트라옥사 -16- 아자노나데크 -18-인-1-일) 카바메이트 (27)
EDCI (263 mg, 1.37 mmol)를 실온에서 건조 DCM (10 mL) 중 t-boc-N-아미도-dPEG®4-산 (26) (500 mg, 1.37 mmol, Stratech Scientific Limited) 및 프로파길아민 (88 ㎕, 76 mg, 1.37 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 16 시간동안 교반하였고, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.26 분에서 상당량의 목적 생성물을 나타내었으며 (ES+) m/z 403 ([M+ H]+., ~50% 상대 강도), 425 ([M+ Na]+., ~100% 상대 강도), 출발 물질 및 생성물 모두 약한 UV 흡수 (214 및 254 nm)를 갖고 ES+ TIC 상에서 최고로 검출된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL)으로 희석하고, H2O (30 mL), 염수 (40 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (1% 증분으로 구배 용출: 100% DCM - 98:2 v/v DCM/MeOH)에 의해 정제하여 아미드 27을 오일 (392 mg, 71% 수율)로서 수득하였다.
(ii) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-(2,2-디메틸-4,20-디옥소-3,8,11,14,17-펜타옥사-5,21-디아자테트라코스-23-인-24-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 28 )
촉매량의 Pd(PPh3)4 (23.0 mg, 19.5 ㎛ol)를 오븐-건조된 밀봉형 베슬내의 건조 DMF (9 mL) 중 요오도아릴 화합물 2a (1.02 g, 0.89 mmol), Boc-아세틸렌 27 (393 mg, 0.98 mmol), CuI (7.4 mg, 39.1 ㎛ol), 디에틸아민 (2.02 mL, 1.43 g, 19.5 mmol) 및 오븐-건조한 4Å 분자체 펠렛의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, 아르곤으로 3회 플러싱한 후, 마이크로웨이브에서 26 분동안 100 ℃에서 가열하였으며, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.89 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1446 ([M+ Na]+., ~100% 상대 강도, 1424 ([M+ H]+., ~15% 상대 강도). 반응 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 소결 유리를 통해 여과하여 체 (DMF로 세척됨)를 제거하였다. 여액을 진공 중에서 증발시키고, 얻은 잔사를 DCM (100 mL)에 용해시킨 뒤, H2O (20 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 얻었다. 플래쉬 크로마토그래피 (1% 증분으로 구배 용출: 100% DCM - 97:3 v/v DCM/MeOH)에 의해 정제하여 알킨 28을 황색 폼 (882 mg, 70% 수율)으로서 수득하였다.
(iii) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-아미노-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데크-18-인-19-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)- 카복실레이트 ) ( 29 )
TBDMSOTf (1.42 mL, 1.64 g, 6.2 mmol)를 실온에서 건조 DCM (15 mL) 중 트리-Boc 보호된 화합물 28 (882 mg, 0.62 mmol) 및 2,6-루티딘 (0.96 mL, 883 mg, 8.25 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 16 시간동안 교반하였으며, 이때 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 2.09 분에서 TBS 카바메이트의 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1504 ([M+ Na]+., ~100% 상대 강도). 반응 혼합물을 DCM (60 mL)으로 희석하고, 포화 NH4Cl (2 x 20 mL), H2O (20 mL), 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 TBS 카바메이트를 얻었다. 생성물을 THF (15 mL)에 재용해하고, 실온에서 TBAF (THF 중 1.0M 용액 744 ㎕, 0.744 mmol)의 용액으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 시간동안 교반하였으며, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.29 분에서 분해된 1 N10Boc/1 THP에 상응하는 생성물 (ES+) m/z 1121 ([M+ H]+., ~10% 상대 강도), 1138 ([M+ H2O]+., ~20% 상대 강도) 및 체류 시간 1.12 분에서 분해된 2 N10 Boc/2 THP에 상응하는 생성물 (ES+) m/z 919 ([M+ H]+., ~2.5% 상대 강도), 937 ([M+ H2O]+., ~3% 상대 강도), 955 ([M+ 2H2O]+., ~5% 상대 강도)과 함께 체류 시간 1.45 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1324 ([M+ H]+., ~60% 상대 강도). THF를 진공 중에서 증발에 의해 제거한 후, 얻은 잔사를 DCM (60 mL)에 재용해시키고, 포화 NH4Cl (2 x 20 mL), H2O (20 mL), 염수 (30 mL)로 세척한 다음, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 주요 아민 29를 핑크색을 띤 폼으로서 수득하였다.
(b) (R)-2-(피리딘-2- 일디설파닐 )프로필 (19-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데크-18-인-1-일)카바메이트 ( 33 )
Figure 112015098431263-pct00080
(i) (R)-2-(피리딘-2- 일디설파닐 )프로필 카보노클로리데이트 ( 31 )
트리포스겐 (9.36 mg, 31.5 ㎛ol)을 건조 DCM (1 mL) 중 (R)-2-(피리딘-2-일디설파닐)프로판-1-올 (30) (18 mg, 0.09 mmol) 및 피리딘 (6.7 ㎕, 6.6 mg, 0.08 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 30 분동안 교반한 후, 용매를 진공에서 증발에 의해 제거하여 조 클로로포르메이트 31을 백색 폼으로서 수득하였다. 참고: 생성물은 정제 또는 분석없이 다음 단계에 이용되었다.
(ii) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-((R)-5,21-디옥소-2-(피리딘-2-일디설파닐)-4,9,12,15,18-펜타옥사-6,22-디아자펜타코스-24-인-25-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 32 )
건조 DCM (1 mL) 중 31 (~23 mg, ~0.09 mmol)의 용액을 실온에서 건조 DCM (1 mL) 중 아민 29 (~116 mg, ~0.09 mmol) 및 피리딘 (7.8 ㎕, 7.7 mg, 0.1 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 3 시간동안 교반하였고, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석 (Kinetex® 칼럼)은 체류 시간 1.51 분에서 비반응 출발 물질 29의 존재와 함께 체류 시간 2.02 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 1550 ([M+ H]+., ~20% 상대 강도). 용매를 진공에서 증발에 의해 제거하여 조 카바메이트 32를 얻고 추가 정제 또는 분석없이 다음 단계에 이용하였다.
(iii) (R)-2-(피리딘-2- 일디설파닐 )프로필 (19-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데크-18-인-1-일)카바메이트 ( 33 )
95:5 v/v TFA/H2O (1 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 32 (~136 mg, 88 ㎛ol)의 조 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간동안 교반한 후 LC/MS (Kinetex® 칼럼)에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.42 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1146 ([M+ H]+., ~90% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (50 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 15 mL), 모아진 유기층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 95:5 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 33을 필름으로서 수득하였다 (10 mg, 7% 수율): LC/MS (15-분 주행), 체류 시간 5.79 분 (ES+) m/z 1146 ([M+ H]+., ~8% 상대 강도); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.44 (d, 1H, J = 4.8 Hz), 7.75-7.58 (m, 2H), 7.66 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 7.52 (s, 2H), 7.45-7.40 (m, 3H), 7.08-7.05 (m, 1H), 6.95-6.85 (m, 1H), 6.79 (s, 2H), 5.43-5.41 (m, 1H), 5.23-5.09 (m, 8H), 4.30-4.23 (m, 6H), 4.19-4.10 (m, 4H), 3.97-3.94 (m, 2H), 3.96 (s, 6H), 3.91-3.85 (m, 2H), 3.75 (t, 2H, J = 5.8 Hz), 3.66-3.58 (m, 8H), 3.52 (t, 2H, J = 5.1 Hz), 3.34-3.30 (m, 2H), 3.23-3.08 (m, 3H), 2.96-2.90 (m, 2H), 2.52 (t, 2H, J = 5.7 Hz), 1.31 (d, 3H, J = 7.0 Hz).
실시예 7
Figure 112015098431263-pct00081
(a) (±)-4-(피리딘-2- 일디설파닐 ) 펜탄산 ( 35 )
AldrithiolTM-2 (176 mg, 0.86 mmol)를 실온에서 EtOH (2 mL) 중 (±)-4-머캅토펜탄산 34 (107 mg, 0.80 mmol, Aurora Fine Chemicals LLC)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 16 시간동안 교반하였으며, 이 시전에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.32 분에서 상당한 생성물 형성을 나타내었다 (ES+) m/z 244 ([M+ H]+., ~95% 상대 강도). 용매를 진공 중에서 증발에 의해 제거한 후, 얻은 잔사를 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 90:10 v/v 헥산/EtOAc - 80:20 v/v 헥산/EtOAc)에 의해 정제하여 35를 백색 고체 (92 mg, 47% 수율)로서 수득하였다.
(b) (±)-디-tert-부틸 8,8'-(((5-(5,21-디옥소-24-(피리딘-2-일디설파닐)-8,11,14,17-테트라옥사-4,20-디아자펜타코스-1-인-1-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 36 )
EDCI (22 mg, 0.12 mmol)를 실온에서 건조 DCM (2 mL) 중 (±)-4-(피리딘-2-일디설파닐)펜탄산 (35) (26 mg, 0.10 mmol) 및 아민 29 (~139 mg, 0.1 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 20 시간동안 교반하였고, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.67 분에서 분해된 1 N10Boc/1 THP에 상응하는 생성물 (ES+) m/z 1346 ([M+ H]+., ~20% 상대 강도), 1138 ([M+ H2O]+., ~20% 상대 강도) 및 체류 시간 1.43 분에서 분해된 2 N10 Boc/2 THP에 상응하는 생성물 (ES+ M+ 관찰되지 않음)과 함께 체류 시간 1.88 분 (분열 피크)에서 상당량의 목적 생성물을 나타내었다 (ES+) m/z 1548 ([M+ H]+., ~40% 상대 강도). 반응 혼합물을 DCM (30 mL)으로 희석하고, H2O (15 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물 36을 폼으로서 수득하였다.
(c) (±)-N-(3-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)프로프-2-인-1-일)-1-(4-(피리딘-2-일디설파닐)펜탄아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 ( 37 )
95:5 v/v TFA/H2O (1 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 36 (~163 mg, 0.10 mmol)의 조 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.44 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1144 ([M+ H]+., ~3% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (60 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 30 mL), 모아진 유기층을 염수 (30 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 96:4 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 37을 오렌지색 폼으로서 수득하였다 (69 mg, 57% 수율): LC/MS (15-분 주행), 체류 시간 5.72 분 (ES+) m/z 1144 ([M+ H]+., ~3% 상대 강도); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (d, 1H, J = 4.3 Hz), 7.72-7.59 (m, 2H), 7.66 (d, 2H, J = 4.3 Hz), 7.52 (s, 2H), 7.45-7.40 (m, 3H), 7.09-7.04 (m, 1H), 6.98-6.94 (m, 1H), 6.80 (s, 2H), 6.40-6.35 (m, 1H), 5.23-5.09 (m, 8H), 4.30-4.23 (m, 6H), 4.19-4.10 (m, 4H), 3.96 (s, 6H), 3.91-3.85 (m, 2H), 3.75 (t, 2H, J = 5.7 Hz), 3.66-3.58 (m, 8H), 3.51 (t, 2H, J = 5.0 Hz), 3.42-3.39 (m, 2H), 3.23-3.08 (m, 2H), 2.96-2.90 (m, 3H), 2.52 (t, 2H, J = 5.6 Hz), 2.34 (t, 2H, J = 7.4 Hz), 1.94 (q, 2H, J = 7.4 Hz), 1.30 (d, 3H, J = 6.7 Hz).
실시예 8
Figure 112015098431263-pct00082
(a) 3-((( 프로프 -2-인-1- 일옥시 ) 카보닐 )아미노) 프로판온산 ( 39 )
톨루엔 (2 mL) 중 프로파길 클로로포르메이트 (315 ㎕, 383 mg, 3.23 mmol)의 용액을 실온에서 H2O (7 mL) 중 β-알라닌 (38) (250 mg, 2.81 mmol) 및 NaHCO3 (678 mg, 8.1 mmol)의 교반 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 16 시간동안 격렬히 교반한 후, 분배시켰다. 수성층을 H2O (20 mL)로 희석하고, Et2O (4 x 10 mL)로 세척한 후, 0-5 ℃ (얼음/아세톤)로 냉각한 뒤, 농 HCl을 사용하여 pH 2로 산성화하였다. 산성 용액을 EtOAc로 추출하고 (3 x 20 mL), 모아진 유기층을 H2O (10 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물 39를 오일로서 얻었으며, 추가 정제없이 다음 단계에 이용하였다.
(b) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-(5,9,25-트리옥소-4,13,16,19,22-펜타옥사-6,10,26-트리아자노나코사-1,28-디인-29-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 40 )
EDCI (24 mg, 0.13 mmol)를 실온에서 건조 DCM (3 mL) 중 3-(((프로프-2-인-1-일옥시)카보닐)아미노)프로판온산 (39) (18 mg, 0.10 mmol) 및 아민 29 (~139 mg, 0.10 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 1.5 시간동안 교반하였으며, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.60 분에서 분해된 1 N10Boc/1 THP에 상응하는 생성물 (ES+) m/z 1274 ([M+ H]+., ~10% 상대 강도) 및 체류 시간 1.47 분에서 비반응 5 (ES+) m/z 1324 ([M+ H]+., ~5% 상대 강도)와 함께 체류 시간 1.84 분에서 상당량의 목적 생성물을 나타내었다 (ES+) m/z 1477 ([M+ H]+., ~20% 상대 강도), 1499 ([M+ Na]+., ~22% 상대 강도). 반응 혼합물을 DCM (20 mL)으로 희석하고, H2O (2 x 10 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물 40을 폼으로서 수득하였다.
(c) 프로프 -2-인-1-일 (23-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-3,19-디옥소-7,10,13,16-테트라옥사-4,20-디아자트리코스-22-인-1-일)카바메이트 ( 41 )
95:5 v/v TFA/H2O (2 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 40 (~155 mg, 0.10 mmol)의 조 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1.5 시간동안 교반한 후, LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.41 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1073 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (60 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 20 mL), 모아진 유기층을 염수 (25 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 95:5 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 41을 황색 폼 (51 mg, 45% 수율)으로서 수득하였다: LC/MS (15-분 주행), 체류 시간 5.71 분 (ES+) m/z 1073 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.67 (d, 2H, J = 4.5 Hz), 7.52 (s, 2H), 7.46-7.43 (m, 3H), 7.07-7.02 (m, 1H), 6.80 (s, 2H), 6.64-6.57 (m, 1H), 5.78-5.72 (m, 1H), 5.21-5.09 (m, 8H), 4.64 (d, 2H, J = 2.2 Hz), 4.29-4.25 (m, 6H), 3.96 (s, 6H), 3.90-3.85 (m, 2H), 3.76 (t, 2H, J = 5.9 Hz), 3.65-3.35 (m, 18H), 3.16-3.07 (m, 2H), 2.93 (d, 2H, J = 16 Hz), 2.52 (t, 2H, J = 5.9 Hz), 2.48-2.45 (m, 1H), 2.40 (t, 2H, J = 5.9 Hz).
실시예 9
Figure 112015098431263-pct00083
(a) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)페닐)-3,19-디옥소-2,7,10,13,16-펜타옥사-4,20-디아자트리코스-22-인-23-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 43 )
DIPEA (44 ㎕, 32 mg, 0.25 mmol)를 실온에서 건조 DMF (3 mL) 중 주요 아민 29 (~155 mg, 0.11 mmol) 및 니트로페닐 카보네이트 42 (84 mg, 0.11 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 3 일동안 교반한 후, LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.61 분에서 분해된 1 N10Boc/1 THP에 상응하는 생성물(ES+) m/z 1720 ([M+ H]+., ~20% 상대 강도)과 함께 체류 시간 1.80 분에서 관찰된 목적 생성물을 나타내었다 (ES+) m/z 1922 ([M+ H]+., ~40% 상대 강도), 1944 ([M+ Na]+., ~20% 상대 강도). DMF를 진공 중에서 증발에 의해 제거하고, 생성된 생성물 43을 추가 정제 또는 분석없이 다음 단계에 이용하였다.
(b) 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5- 디옥소 -2,5- 디하이드로 -1H-피롤-1-일) 헥산아미도 )-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (19-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-15-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-16-아자노나데크-18-인-1-일)카바메이트 ( 44 )
95:5 v/v TFA/H2O (3 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 43 (~173 mg, 0.11 mmol)의 조 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1.5 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.42 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1518 ([M+ H]+., ~40% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (100 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 30 mL), 모아진 유기층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 80:20 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 조 생성물을 황색 폼 (72 mg, 42% 조 수율)으로서 수득하였다. 이 물질을 제조용 HPLC에 의해 추가 정제하여 순수한 44를 박막 (4.5 mg, 3% 수율)으로서 수득하였다: LC/MS (15-분 주행), 체류 시간 5.44 분 (ES+) m/z 1518 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도).
실시예 10
(a) 1-(3-아미노프로판아미도)-N-(3-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)프로프-2-인-1-일)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 ( 47 )
Figure 112015098431263-pct00084
(i) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-(9H-플루오렌-9-일)-3,7,23-트리옥소-2,11,14,17,20-펜타옥사-4,8,24-트리아자헵타코스-26-인-27-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트) ( 45 )
EDCI (49 mg, 0.25 mmol)를 실온에서 건조 DCM (5 mL) 중 Fmoc-β-알라닌 (66 mg, 0.21 mmol) 및 아민 29 (~279 mg, 0.21 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 3 시간동안 교반하였으며, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.56 분에서 분해된 1 N10Boc/1 THP에 상응하는 생성물 (ES+) m/z 1415 ([M+ H]+., ~10% 상대 강도)과 함께 체류 시간 1.76 분에서 상당량의 목적 생성물을 나타내었다 (ES+) m/z 1617 ([M+ H]+., ~10% 상대 강도), 1639 ([M+ Na]+., ~80% 상대 강도). 반응 혼합물을 DCM (30 mL)으로 희석하고, H2O (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물 45를 폼으로서 수득하였다.
(ii) (9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 (23-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)-3,19-디옥소-7,10,13,16-테트라옥사-4,20-디아자트리코스-22-인-1-일)카바메이트 ( 46 )
95:5 v/v TFA/H2O (4 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 45 (~341 mg, 0.21 mmol)의 조 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.44 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1212 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (80 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 20 mL), 모아진 유기층을 NaHCO3 (2 x 20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 95:5 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 순수한 생성물 46을 황색 폼 (179 mg, 70% 수율)으로서 수득하였다.
(iii) 1-(3-아미노프로판아미도)-N-(3-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)프로프-2-인-1-일)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 ( 47 )
디메틸아민 (THF 중 2.0M 용액 735 ㎕, 1.47 mmol)을 실온에서 THF (3 mL) 중 Fmoc 보호된 화합물 46 (89 mg, 73.5 ㎛ol)의 교반 용액에 첨가하였다. 실온에서 3 시간동안 교반한 후, LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.88 분에서 Fmoc 분해 부산물과 함께 체류 시간 1.14 분에서 목적 생성물 (ES+) m/z 990 ([M+ H]+., ~8% 상대 강도), 1008 ([M+ H2O]+., ~10% 상대 강도), 1026 ([M+ 2H2O]+., ~15% 상대 강도)을 나타내어 반응이 완료되었음을 나타내었다. 혼합물을 진공 중에서 증발시키고, 조 47을 추가 정제 또는 분석없이 다음 단계에 이용하였다.
(b) N-(3-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)프로프-2-인-1-일)-1-(3-(2-브로모아세트아미도)프로판아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 ( 48 )
Figure 112015098431263-pct00085
브로모아세트산 무수물 (23 mg, 88.2 ㎛ol)을 DCM (3 mL) 중 조 아민 47 (~73 mg, 73.5 ㎛ol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 실온에서 3 시간동안 교반하였고, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.34 분에서 관찰된 목적 생성물 (ES+) m/z 1112 ([M+ H]+., ~30% 상대 강도)과 함께 반응 완료를 나타내었다. 용매를 진공에서 증발에 의해 제거하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 93:7 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 생성물을 황색 폼 (38 mg, 46% 조 수율)으로서 수득하였다. 이 물질을 제조용 HPLC에 의해 추가 정제하여 순수한 48을 박막 (5 mg, 6% 수율)으로서 수득하였다: LC/MS (15-분 주행), 체류 시간 4.96 분 (ES+) m/z 1112 ([M+ H]+., ~10% 상대 강도); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.67 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 7.52 (s, 2H), 7.46-7.43 (m, 4H), 7.10-7.07 (m ,1H), 6.80 (s, 2H), 5.21-5.09 (m, 8H), 4.29-4.25 (m ,6H), 3.96 (s, 6H), 3.90-3.85 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.77 (t, 2H, J = 5.9 Hz), 3.65-3.40 (m ,18H), 3.16-3.07 (m, 2H), 2.94 (d, 2H, J = 16 Hz), 2.53 (t, 2H, J = 5.9 Hz), 2.43 (t, 2H, J = 5.9 Hz).
실시예 11 - 10의 대안적 합성
Figure 112015098431263-pct00086
(a) 디-tert-부틸 8,8'-(((5-(1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)-3,19-디옥소-7,10,13,16-테트라옥사-4,20-디아자트리코스-22-인-23-일)-1,3-페닐렌)비스(메틸렌))비스(옥시))(11S,11aS,11'S,11a'S)-비스(7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카복실레이트 ( 9 )
EDCI (61 mg, 0.32 mmol)를 실온에서 건조 DCM (6 mL) 중 N-말레오일-β-알라닌 (53 mg, 0.32 mmol) 및 아민 29 (~418 mg, 0.32 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 3 시간동안 교반하였으며, 이 시점에 LC/MS에 의한 분석은 체류 시간 1.56 분에서 분해된 1 N10Boc/1 THP에 상응하는 생성물 1272 ([M+ H]+., ~80% 상대 강도), 1295 ([M+ Na]+., ~45% 상대 강도) 및 체류 시간 1.31 분에서 분해된 2 N10 Boc/2 THP에 상응하는 생성물 (ES+ M+ 관찰되지 않음)과 함께 체류 시간 1.80 분에서 상당량의 목적 생성물을 나타내었다 (ES+) m/z 1474 ([M+ H]+., ~15% 상대 강도), 1497 ([M+ Na]+., ~100% 상대 강도). 반응 혼합물을 DCM (30 mL)으로 희석하고, H2O (15 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물 9를 폼으로서 수득하였다.
(b) N-(3-(3,5-비스((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라하이드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)메틸)페닐)프로프-2-인-1-일)-1-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-아미드 ( 10 )
95:5 v/v TFA/H2O (5 mL)의 용액을 0 ℃ (얼음/아세톤)에서 Boc/THP-보호된 화합물 9 (~466 mg, 0.32 mmol)의 조 샘플에 첨가하였다. 0 ℃에서 1 시간동안 교반한 후 LC/MS에 의해 판단한 바 반응이 완료된 것으로 생각되었으며, 체류 시간 1.32 분에서 목적 생성물 피크가 있었다 (ES+) m/z 1070 ([M+ H]+., ~100% 상대 강도). 반응 혼합물을 냉각 상태로 유지하고 NaHCO3 (120 mL)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 (3 x 40 mL), 모아진 유기층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조한 후 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공 중에서 증발하여 조 생성물을 수득하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (구배 용출: 100% CHCl3 - 96:4 v/v CHCl3/MeOH)에 의해 정제하여 10을 오렌지색 폼 (202 mg, 60% 수율)으로서 수득하였다: [α]21 D = +351°(c = 0.47, CHCl3); LC/MS (15-분 주행), 체류 시간 4.88 분 (ES+) m/z 1070 ([M+ H]+., ~100% 상대 강도); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.66 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 7.52 (s, 2H), 7.45-7.40 (m, 3H), 6.98-6.94 (m, 1H), 6.80 (s, 2H), 6.66 (s, 2H), 6.55-6.50 (m, 1H), 5.22-5.07 (m, 8H), 4.30-4.22 (m, 6H), 3.96 (s, 6H), 3.91-3.85 (m, 2H), 3.82 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.76 (t, 2H, J = 5.8 Hz), 3.65-3.43 (m, 16H), 3.16-3.08 (m, 2H), 2.94 (d, 2H, J = 15.7 Hz), 2.54-2.44 (m, 4H).
컨쥬게이션을 위한 ThioMab의 환원/산화
CHO 세포에서 발현시킨 전장, 시스테인 조작 모노클로날 항체 (ThioMabs - Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249, Shen et al (2012) Nature Biotech., 30(2):184-191; Junutula et al (2008) Jour of Immun. Methods 332:41-52)를 2 mM EDTA를 함유한 50 mM 트리스 (pH 7.5)에서 약 20-40 배 과량의 TCEP (트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드 또는 DTT (디티오트레이톨)에 의해 37 ℃에서 3 시간 또는 실온에서 밤새 환원시켰다. (Getz et al (1999) Anal. Biochem . Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA). 환원된 ThioMab을 10 mM 소듐 아세테이트 (pH 5)에서 희석하여 HiTrap S 칼럼에 로딩하고, 0.3M 염화나트륨을 함유하는 PBS로 용리하였다. 대안적으로는, 1/20 부피의 10% 아세트산을 첨가하여 항체를 산성화하고, 10 mM 석시네이트 (pH 5)로 희석한 뒤, 칼럼 상에 로딩하고, 10 칼럼 부피의 석시네이트 완충액으로 세척하였다. 칼럼을 50 mM 트리스 pH7.5, 2 mM EDTA로 용리하였다.
용리된 환원 ThioMab을 15 배 몰 과량의 DHAA (데하이드로아스코르브산) 또는 200 nM 수성 황산구리 (CuSO4)로 처리하였다. 쇄간 디설파이드 결합의 산화가 약 3 시간 또는 그 이상에서 완료되었다. 주변 공기 산화도 또한 효과적이다. 재산화된 항체를 20 mM 소듐 석시네이트 (pH 5), 150 mM NaCl, 2 mM EDTA로 투석하고, -20 ℃에서 동결 저장하였다.
항체-약물 컨쥬게이트를 제조하기 위한 Thio - Mab과 화합물의 컨쥬게이션
탈블록되고 재산화된 티오-항체 (ThioMab)를, 반응 혼합물의 LC-MS 분석에 의해 결정되어 반응이 완료될 때까지 (16-24 시간), 50 mM 트리스, pH 8 중에서 6-8 배 몰과량의 화합물 7, 10, 13, 17, 24, 25, 33, 37, 44, 48 (20 mM 농도의 DMSO 저장액으로부터)과 반응시켰다.
그 후, 조 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC)를 20 mM 소듐 석시네이트, pH 5로 희석한 후에 양이온 교환 칼럼에 적용하였다. 이 칼럼을 적어도 10 칼럼 부피의 20 mM 소듐 석시네이트, pH 5로 세척하고, 항체를 PBS로 용출시켰다. 항체-약물 컨쥬게이트를 겔여과 칼럼을 사용하여 240 mM 슈크로즈와 함께 20 mM His/아세테이트 pH 5에서 제형화하였다. 항체-약물 컨쥬게이트를 단백질 농도를 결정하기 위한 UV 분광법, 응집 분석을 위한 분석용 SEC (크기-배제 크로마토그래피), 및 라이신 C 엔도펩티다제로 처리하기 전과 후의 LC-MS에 의해서 특정화하였다.
크기 배제 크로마토그래피는 0.25 mM 염화칼륨 및 15% IPA를 함유하는 0.2 M 인산칼륨 pH 6.2 중에서 쇼덱스 (Shodex) KW802.5 칼럼을 사용하여 0.75 ml/분의 유속으로 수행하였다. 컨쥬게이트의 응집 상태는 280 ㎚에서 용출된 피크 면적 흡광도의 적분에 의해서 결정되었다.
LC-MS 분석은 애질런트 (Agilent) QTOF 6520 ESI 기기를 사용하여 수행하였다. 예로서, 이 화학을 사용하여 생성된 항체-약물 컨쥬게이트를 37 ℃에서 30 분 동안 트리스, pH 7.5 중의 1:500 w/w 엔도프로테이나제 Lys C (Promega)로 처리하였다. 생성된 분해 단편을 80 ℃로 가열된 1000 Å, 8 ㎛ PLRP-S 칼럼 상에 로딩하고, 5 분 동안 30% B 내지 40% B의 구배로 용출시켰다. 이동상 A는 0.05% TFA를 함유하는 H2O였고, 이동상 B는 0.04% TFA를 함유하는 아세토니트릴이었다. 유속은 0.5 ml/분이었다. 단백질 용출은 전기분무 이온화 (electrospray ionization) 및 MS 분석 전에 280 ㎚에서 UV 흡광도 검출에 의해서 모니터링하였다. 비컨쥬게이트된 Fc 단편, 잔류하는 비컨쥬게이트된 Fab 및 약물화된 (drugged) Fab의 크로마토그래피 분리가 통상적으로 달성되었다. 수득된 m/z 스펙트럼을 매스 헌터 (Mass Hunter™) 소프트웨어 (Agilent Technologies)를 사용해서 데컨볼루션 (deconvolution)하여 항체 단편의 질량을 계산하였다.
Figure 112015098431263-pct00087
Figure 112015098431263-pct00088
Figure 112015098431263-pct00089
Figure 112015098431263-pct00090
Figure 112015098431263-pct00091
Figure 112015098431263-pct00092
Figure 112015098431263-pct00093
Figure 112015098431263-pct00094
Figure 112015098431263-pct00095
Figure 112015098431263-pct00096
Figure 112015098431263-pct00097
이하의 시험관내 및 생체내 시험은 또한, 문헌 [Phillips et al (2008) Cancer Res. 68(22):9280-9290]에 기술되어 있다.
시험관내 세포 증식 시험
ADC의 효능은 다음의 프로토콜을 사용하는 세포 증식시험에 의해서 측정하였다 [CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay, Promega Corp. Technical Bulletin TB288; Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488]. 모든 세포주는 American Type Culture Collection으로부터 입수하였다:
1. 배지 내에 약 104 세포 (예를 들어, KPL-4, 인간 유방암 세포주 (Kurebayashi et al (1999) Brit. Jour. Cancer 79(5-6):707-717) 또는 SKBR-3)를 함유하는 세포 배양액의 100 ㎕ 분취액을 96-웰의 불투명 벽 플레이트의 각 웰에 분배하였다.
2. 대조 웰은 배지를 함유하고 세포 없이 준비하였다.
3. ADC를 실험 웰에 첨가하고, 3-5일 동안 인큐베이션하였다.
4. 플레이트를 약 30 분 동안 실온으로 평형화시켰다.
5. 각 웰에 존재하는 세포 배양 배지의 용적에 해당하는 용적의 셀타이터-글로 (CellTiter-Glo) 시약을 첨가하였다.
6. 내용물을 궤도 진탕기 (orbital shaker) 상에서 2 분동안 혼합하여 세포 용해를 유도하였다.
7. 플레이트를 실온에서 10 분동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시켰다.
8. 발광을 RLU = 상대 발광 유니트로서 기록하고 그래프로 보고하였다.
특정 세포를 96-웰 플레이트 내에 50 ㎕/웰 씩 1000-2000/웰 또는 2000-3000/웰로 접종하였다. 1 또는 2 일 후에, ADC를 9000, 3000, 1000, 333, 111, 37, 12.4, 4.1, 또는 1.4 ng/mL의 최종 농도까지 50 ㎕ 용적으로 첨가하며, "no ADC" 대조 웰은 배지만을 단독으로 수용한다. 조건은 이중 또는 삼중으로 한다. 3-5 일 후에, 100 ㎕/웰의 셀타이터 글로 (Cell TiterGlo) II를 첨가하고 (루시퍼라제-기반 시험; ATP 수준에 의해서 측정된 증식), 세포수를 발광측정기 (luminometer)를 사용하여 결정한다. 데이터는 표준편차 오차 막대 (error bar)와 함께 중복된 각각의 세트에 대한 발광의 평균으로 도시한다. 프로토콜은 셀타이터 글로 발광 세포 생존도 시험 (CellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega))의 변형이다:
1. 50 ㎕/웰의 FBS/글루타민 배지 내에 1000 세포/웰을 플레이팅한다. 세포를 밤새 부착되도록 한다.
2. ADC를 18 ㎍/㎖ (이것은 9 ㎍/㎖의 최종 농도를 제공한다)의 작업 농도에서 시작하여 배지 내에서 1:3으로 일련적으로 희석한다. 50 ㎕의 희석된 ADC를 웰 내에 이미 있는 50 ㎕의 세포 및 배지에 첨가한다.
3. 72-96 시간 동안 인큐베이션한다 (표준은 72 시간이지만, 0 ㎍/㎖ 농도를 관찰하여 세포가 85-95% 합류 (confluent)한 때에 시험을 중지시킨다).
4. 100 ㎕/웰의 프로메가 셀타이터 글로 (Promega Cell Titer Glo) 시약을 첨가하고, 3 분동안 진탕한 후, 발광측정기 상에서 판독한다.
결과
항체-약물 컨쥬게이트, 트라스투주맙-7 (110), 트라스투주맙-10 (120) 및 트라스투주맙-17 (130)을 SK-BR-3, KPL-4, 및 MCF-7 (Levenson et al (1997) Cancer Res. 57(15):3071-3078) 세포에 대해서 시험하여 5 일 연구에서의 시험관내 세포 생존도를 측정하였다. SK-BR-3에 대한 110에 관한 IC50 (㎍/㎖) 값은 22.90이었다. SK-BR-3에 대한 120에 관한 IC50 값은 11.14이었다. SK-BR-3에 대한 130에 관한 IC50 값은 16.8이었다. SK-BR-3 세포는 HER2+ 발현성이며, 트라스투주맙 민감성이다. 110, 120 및 130은 모두 HER2 비-발현성 인간 유방선암 세포주인 MCF-7에 대해서 실질적으로 불활성이다. 따라서, 컨쥬게이트 110, 120 및 130은 표적화된 세포 사멸 효력을 나타낸다.
종양 성장 억제, 고발현성 HER2 유전자이식 외식편(transgenic explant) 마우스에서의 생체내 효능
유전자이식 실험에 적합한 동물은 Taconic (Germantown, N.Y.)과 같은 표준 상업적 공급자로부터 입수할 수 있다. 많은 스트레인이 적합하지만, FVB 암컷 마우스가 그들의 종양 형성에 대한 더 큰 감수성으로 인하여 바람직하다. FVB 수컷을 교배를 위해서 사용하였으며, 정관절제수술을 한 CD.1 스터드 (studs)를 사용하여 가임신을 촉진하였다. 정관절제수술을 한 마우스는 어떤 상업적 공급자로부터라도 입수할 수 있다. 파운더 (founders)를 FVB 마우스 또는 129/BL6 x FVB p53 이형접합성 (heterozygous) 마우스와 교배하였다. p53 대립유전자에서 이형접합성을 갖는 마우스를 사용하여 종양 형성을 잠재적으로 증가시켰다. 그러나, 이것은 불필요한 것으로 판명되었다. 따라서, 일부의 F1 종양은 혼합 스트레인의 것이다. 파운더 종양은 FVB만이다. 동배자 (litter)를 갖지 않고 약간의 발육성 종양을 갖는 6 개의 파운더가 수득되었다.
종양 (Fo5 mmtv 유전자이식 마우스로부터 번식된 동종이식편)을 갖는 동물을 ADC의 IV 주사에 의해서 단일 또는 수회 용량으로 처리하였다. 종양 용적은 주사 후의 다양한 시점에 평가하였다.
종양은 HER2의 래트 동족체인 neu의 돌연변이적으로 활성화된 형태를 발현하는 유전자이식 마우스에서 쉽게 발생하지만, 인간 유방암에서 과발현되는 HER2는 돌연변이되지 않고, 종양 형성은 비돌연변이된 HER2를 과발현하는 유전자이식 마우스에서 훨씬 덜 왕성하다 [Webster et al (1994) Semin . Cancer Biol . 5:69-76].
비돌연변이된 HER2에 의한 종양 형성을 개선할 목적으로, 상류 ATG 개시 코돈에서의 해독 개시를 방지하기 위해 (그렇치 않으면 HER2의 진정한 하류 개시 코돈으로부터의 해독 개시 빈도를 감소시킬 수 있음) 상류 ATG가 결실된 HER2 cDNA 플라스미드를 사용하여 유전자이식 마우스를 생산하였다 [예를 들어, Child et al (1999) J. Biol . Chem . 274: 24335-24341 참조]. 추가로, 더 이전에 보고된 바와 같이 발현의 수준을 또한 증진시켜야 하는 키메릭 인트론 (chimeric intron)을 5' 말단에 첨가하였다 [Neuberger and Williams (1988) Nucleic Acids Res. 16:6713; Buchman and Berg (1988) Mol . Cell. Biol . 8:4395; Brinster et al (1988) Proc . Natl. Acad . Sci . USA 85:836]. 키메릭 인트론은 프로메가 (Promega) 벡터, Pci-neo 포유동물 발현 벡터 (bp 890-1022)로부터 유래되었다. cDNA 3'-말단은 인간 성장 호르몬 엑손 4 및 5, 및 폴리아데닐화 서열의 측면에 배치된다. 또한, FVB 마우스가 종양 발생에 더 감수성이 있기 때문에, 이 스트레인이 사용되었다. MMTV-LTR로부터의 프로모터를 사용하여 유선에서의 조직-특이적 HER2 발현을 보장하였다. 동물에게 종양 형성에 대한 감수성을 증가시키기 위해서 AIN 76A 식이를 공급하였다 [Rao et al (1997) Breast Cancer Res. and Treatment 45:149-158].
Fo5 쥐 유방 종양 모델
Fo5 모델은 쥐 유방 종양 바이러스 프로모터 (MMTV-HER2)의 전사조절 하에 인간 HER2 유전자가 유방 상피에서 과발현되는 유전자이식 마우스 모델이다. 상기의 과발현은 인간 HER2 수용체를 과발현하는 유방 종양의 자발적인 발생을 야기한다. 파운더 동물 중 하나 (파운더 #5 [Fo5])의 유방 종양을 종양 단편의 일련의 이식에 의해서 FVB 마우스의 후속 세대에 전파하였다. 생체내 효능시험에 사용하기 전에, MMTV-HER2 Fo5 유전자이식 유방 종양을 대략 2×2 ㎜ 치수의 단편으로 nu/nu 마우스 (Charles River Laboratories로부터)의 No. 2/3 유방 지방 패드 (mammary fat pad) 내로 수술에 의해 이식하였다. 종양이 바람직한 용적에 도달하면, 종양-보유 마우스를 무작위로 분류하고, ADC의 IV 주사에 의해 단일 용량을 제공하였다.
결과
도 1은 다음의 물질로 제0일에 단일 IV 투여한 후에, CRL nu/nu 마우스 내에 접종된 유방암-모델 MMTV-HER2 Fo5 유방 동종이식편 종양에서 시간 경과에 따른 생체내 평균 종양 용적 변화의 플롯을 나타낸다: (1) 비히클 20 mM 히스티딘 아세테이트, pH 5.5, 240 mM 슈크로즈, (2) 6 ㎎/㎏의 xCD22-7 (115), (3) 1 ㎎/㎏의 트라스투주맙-7 (110), (4) 3 ㎎/㎏의 트라스투주맙-7 (110), 및 (5) 6 ㎎/㎏의 트라스투주맙-7 (110). 도면에서 선은 다음의 심볼로 표시된다:
Figure 112015098431263-pct00098
도 2는 다음의 물질로 제0일에 단일 IV 투여한 후에, CRL nu/nu 마우스 내에 접종된 유방암-모델 MMTV-HER2 Fo5 유방 동종이식편 종양에서 시간 경과에 따른 생체내 평균 종양 용적 변화의 플롯을 나타낸다: (1) 비히클 20 mM 히스티딘 아세테이트, pH 5.5, 240 mM 슈크로즈, (2) 3 ㎎/㎏의 xCD22-10 (125), (3) 0.3 ㎎/㎏의 트라스투주맙-10 (120), (4) 1 ㎎/㎏의 트라스투주맙-10 (120), 및 (5) 3 ㎎/㎏의 트라스투주맙-10 (120). 도면에서 선은 다음의 심볼로 표시된다:
Figure 112015098431263-pct00099
도 3은 다음의 물질로 제0일에 단일 IV 투여한 후에, CRL nu/nu 마우스 내에 접종된 유방암-모델 MMTV-HER2 Fo5 유방 동종이식편 종양에서 시간 경과에 따른 생체내 평균 종양 용적 변화의 플롯을 나타낸다: (1) 비히클 20 mM 히스티딘 아세테이트, pH 5.5, 240 mM 슈크로즈, (2) 3 ㎎/㎏의 xCD22-17 (135), (3) 0.3 ㎎/㎏의 트라스투주맙-17 (130), (4) 1 ㎎/㎏의 트라스투주맙-17 (130), 및 (5) 3 ㎎/㎏의 트라스투주맙-17 (130). 도면에서 선은 다음의 심볼로 표시된다:
Figure 112015098431263-pct00100
약어
Ac 아세틸
Acm 아세트아미도메틸
Alloc 알릴옥시카보닐
Boc 디-tert-부틸 디카보네이트
t-Bu tert-부틸
Bzl 벤질 (Bzl-OMe는 메톡시벤질이고, Bzl-Me는 메틸벤젠임)
Cbz 또는 Z 벤질옥시-카보닐 (Z-Cl 및 Z-Br은 각각 클로로- 및 브로모벤질
옥시 카보닐임)
DMF N,N-디메틸포름아미드
Dnp 디니트로페닐
DTT 디티오트레이톨
Fmoc 9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐
imp N-10 이민 보호 그룹: 3-(2-메톡시에톡시)프로파노에이트-Val-
Ala-PAB
MC-OSu 말레이미도카프로일-O-N-석신이미드
Moc 메톡시카보닐
MP 말레이미도프로판아미드
Mtr 4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠설포닐
PAB 파라-아미노벤질옥시카보닐
PEG 에틸렌옥시
PNZ p-니트로벤질 카바메이트
Psec 2-(페닐설포닐)에톡시카보닐
TBDMS tert-부틸디메틸실릴
TBDPS tert-부틸디페닐실릴
Teoc 2-(트리메틸실릴)에톡시카보닐
Tos 토실
Troc 2,2,2-트리클로르에톡시카보닐 클로라이드
Trt 트리틸
Xan 크산틸
참고문헌
다음의 참고문헌들은 그 전체가 참고로 포함된다:
Figure 112015098431263-pct00101
Figure 112015098431263-pct00102
Figure 112015098431263-pct00103
Figure 112015098431263-pct00104
Figure 112015098431263-pct00105
Figure 112015098431263-pct00106
Figure 112015098431263-pct00107
Figure 112015098431263-pct00108
Figure 112015098431263-pct00109
Figure 112015098431263-pct00110
SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE LIMITED Genentech, Inc. <120> Pyrrolobenzodiazepines and Conjugates Thereof <130> IPA150864-GB <140> PCT/US2014/025564 <141> 2014-03-13 <150> US 61/778,771 <151> 2013-03-13 <160> 54 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate CDR L1 <400> 1 Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate CDR L2 <400> 2 Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate CDR L3 <400> 3 Phe Gln Gly Ser Phe Asn Pro Leu Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate CDR H1 <400> 4 Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe Ala Met Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 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Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser Phe Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 10 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate heavy chain <400> 10 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate light chain hypervariable region HVR-L1 <400> 11 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Val Gly Asn Thr Phe Leu Glu 1 5 10 15 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate light chain hypervariable region HVR-L2 <400> 12 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate light chain hypervariable region HVR-L3 <400> 13 Phe Gln Gly Ser Gln Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Antibody drug conjugate heavy chain hypervariable region HVR-H1 <400> 14 Gly Tyr Glu Phe Ser Arg Ser Trp Met Asn 1 5 10 <210> 15 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: 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110 <210> 24 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-CD33 antibody VH <400> 24 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ile Phe Ser Asn His 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Trp Ala Asp Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-CD33 antibody HVR-L1 <400> 25 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly 1 5 10 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-CD33 antibody HVR-L2 <400> 26 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 27 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Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 32 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-CD33 antibody VH <400> 32 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Ile Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Gly Asn 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Leu Ile Tyr Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Asn Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Arg Asp Gly Tyr Tyr Val Ser Asp Met Val Val Trp Gly Lys Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 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Val 35 40 45 Ala Glu Ile Tyr Pro Pro Gly Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Arg Leu Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 43 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-LGR5 antibody HVR-L1 <400> 43 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-LGR5 antibody HVR-L2 <400> 44 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-LGR5 antibody HVR-L3 <400> 45 Gln Gln Asn Tyr Glu Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-LGR5 antibody HVR-H1 <400> 46 Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr Trp Ile Glu 1 5 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Ile Ser 1 5 10 <210> 53 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-LGR5 antibody HVR-H2 <400> 53 Glu Ile Tyr Pro Pro Gly Gly Tyr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 54 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Anti-LGR5 antibody HVR-H3 <400> 54 Ala Arg Leu Phe Phe Asp Tyr 1 5

Claims (75)

  1. 화학식 (A)의 컨쥬게이트:
    Figure 112019098034716-pct00111

    상기 식에서,
    R2는
    Figure 112019098034716-pct00112
    이고, 여기서 R36a 및 R36b는 H이고;
    R6 및 R9는 H이고;
    R7은 OMe이고;
    Y는 하기 식 A1, A2, A3, A4, A5 및 A6 중에서 선택되고:
    Figure 112019098034716-pct00113

    Figure 112019098034716-pct00114

    Figure 112019098034716-pct00115

    L은 세포 결합제에 연결된 링커이며, 하기의 그룹으로부터 선택되는 화학식의 것이고;
    -LA-(CH2)m- (L1),
    -LA-(CH2)m-O- (L2),
    -LA-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)p- (L3), 및
    Figure 112019098034716-pct00142
    ;
    여기서 m은 0 내지 6이고;
    q는 1 내지 3이고;
    p는 1 내지 3이고;
    X1 및 X2는 변형될 수 있는 천연 아미노산 중에서 선택되는 아미노산 그룹이고;
    LA는 다음 중에서 선택되고:
    Figure 112019098034716-pct00143

    여기서, Ar은 C5-6 아릴렌 그룹을 나타내고;
    CBA는 세포 결합제이고, 여기서 세포 결합제는 종양-특이적 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고;
    n은 0 내지 48의 범위에서 선택되는 정수이고;
    RA4는 C1-6 알킬렌 그룹이고;
    R10 및 R11은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성하고;
    R16, R17, R19, R20, R21 및 R22는 각각 R6, R7, R9, R10, R11 및 R2에 대해 정의된 바와 같고;
    Z는 CH 또는 N이고;
    T 및 T'는 독립적으로 단일결합 또는 C1-9 알킬렌 중에서 선택되고, 여기서 쇄는 하나 이상의 헤테로 원자, O, S, N(H), 또는 NMe에 의해 차단될 수 있으나, 단 X와 X' 사이 원자들의 최단쇄 내 원자수는 3 내지 12개의 원자이고;
    X 및 X'는 독립적으로 O, S 및 N(H) 중에서 선택되고;
    종양-특이적 항체 또는 항원-결합 항체 단편이 다음의 (1) 내지 (38)로부터 선택되는 하나 이상의 종양-관련 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합하는 항체이다:
    (1) BMPR1B (골형성 단백질 수용체-타입 IB);
    (2) E16 (LAT1, SLC7A5 (용질 담체 패밀리 7 멤버 5));
    (3) STEAP1 (전립선의 6개의 경막 상피 항원);
    (4) 0772P (CA125 (암 항원 125), MUC16 (뮤신 16));
    (5) MPF (MPF (거핵구 증강 인자), MSLN (메소텔린), SMR (용해성 MPF 메소텔린 관련 단백질));
    (6) Napi3b (NAPI-3B, Napi2b, NPTIIb (타입 II 나트륨-의존성 포스페이트 수송체 3b), SLC34A2 (용질 담체 패밀리 34 (인산나트륨), 멤버 2));
    (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7개의 트롬보스폰딘 반복체 (타입 1 및 타입 1-유사), 경막 도메인 (TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B);
    (8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
    (9) ETBR (엔도텔린 타입 B 수용체);
    (10) MSG783 (RNF124 (링 핑거 단백질 124), 가상 단백질 FLJ20315);
    (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 관련 유전자 1, 전립선암 관련 단백질 1, 전립선의 6개의 경막 상피 항원 2, 6개의 경막 전립선 단백질);
    (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 잠재성 양이온 채널, 서브패밀리 M, 멤버 4);
    (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유래 성장인자);
    (14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스타인 바 바이러스 수용체) 또는 Hs 73792);
    (15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로불린-관련 베타), B29);
    (16) FcRH2 (Fc 수용체 동족체 2) (IFGP4, IRTA4 (면역글로불린 수용체 전좌-관련 단백질 4), SPAP1A (SH2 도메인을 포함하는 포스파타제 앵커 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C);
    (17) HER2 (인간 상피 성장 인자 수용체 2);
    (18) NCA (비특이 교차-반응 항원);
    (19) MDP (마이크로소말 디펩티다아제);
    (20) IL20Rα (인터류킨 20 수용체 알파);
    (21) 브레비칸 (Brevican);
    (22) EphB2R (에프린 수용체 B2);
    (23) ASLG659 (B7h, Genbank 수탁번호 AX092328);
    (24) PSCA (전립선 줄기세포 항원 전구체);
    (25) GEDA (Genbank 수탁번호 AY260763);
    (26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3);
    (27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형태);
    (28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로불린-관련 알파);
    (29) CXCR5 (케모킨 (C-X-C 모티프) 수용체 5) (버킷 림프종 수용체 1);
    (30) HLA-DOB (MHC 부류 II 분자의 베타 서브유니트 (Ia 항원));
    (31) P2X5 (퓨린작동성 수용체 P2X 리간드-개폐 이온 채널 5);
    (32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
    (33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 타입 I 막단백질);
    (34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
    (35) IRTA2 (면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 관련 2);
    (36) TENB2 (추정상의 경막 프로테오글리칸);
    (37) CD33 (CD33 분자, SIGLEC-3, SIGLEC3, p67; CD33 항원 (gp67); gp67; 골수세포 표면 항원 CD33; 시알산 결합 Ig-유사 렉틴 3; 시알산-결합 Ig-유사 렉틴); 및
    (38) LGR5/GPR49 (류신 풍부 반복체 G-단백질 커플링된 수용체 5/G-단백질 커플링된 수용체 49).
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, X가 O이고, T가 단일결합, C1, 및 C2 알킬렌 그룹 중에서 선택되는 컨쥬게이트.
  5. 제4항에 있어서, T가 C1 알킬렌 그룹인 컨쥬게이트.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 제1항에 있어서, R16, R17, R19, R20, R21, R22, X' 및 T'는 각각 R6, R7, R9, R10, R11, R2, X 및 T와 동일한 컨쥬게이트.
  9. 제1항에 있어서,
    (a) L이 화학식 L1의 것이고, LA가 LA1-1 및 LA3-2 중에서 선택되거나; 또는
    (b) L이 화학식 L2의 것이고, LA가 LA3-2이거나; 또는
    (c) L이 화학식 L3의 것이고, LA가 LA7, LA8-1 및 LA8-2 중에서 선택되는 컨쥬게이트.
  10. 제1항에 있어서, L이 화학식 L4의 것이고, 그룹 -X1-X2-가
    -Phe-Lys-,
    -Val-Ala-,
    -Val-Lys-,
    -Ala-Lys-,
    -Val-Cit-
    중에서 선택되는 컨쥬게이트.
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 제1항에 있어서, 컨쥬게이트가 다음 중에서 선택되는 컨쥬게이트:
    Figure 112019098034716-pct00144

    Figure 112019098034716-pct00145

    Figure 112019098034716-pct00146

    Figure 112019098034716-pct00147

    여기서, CBA는 종양-특이적 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 세포 결합제이다.
  14. 제1항, 제4항, 제5항, 제8항 내지 제10항 및 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 치료법에 사용하기 위한 컨쥬게이트.
  15. 제1항, 제4항, 제5항, 제8항 내지 제10항 및 제13항 중의 어느 한 항의 컨쥬게이트, 및 약학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물.
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 제15항에 있어서, 화학요법제를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
  20. 제1항, 제4항, 제5항, 제8항 내지 제10항 및 제13항 중의 어느 한 항의 컨쥬게이트를 포함하는 증식성 질환의 치료용 약학적 조성물.
  21. 화학식 (B)의 화합물:
    Figure 112019098034716-pct00118

    상기 식에서,
    R2, R6, R7, R9, R10, R11, R22, R16, R17, R19, R20, R21, Z, T, T', X 및 X'는 제1항, 제4항, 제5항 및 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고;
    YL은 식 B1, B2, B3, B4, B5 및 B6의 그룹 중에서 선택되고:
    Figure 112019098034716-pct00119

    Figure 112019098034716-pct00120

    Figure 112019098034716-pct00121

    여기서,
    G는 세포 결합제에 연결하기 위한 반응성 그룹이고, 여기서 세포 결합제는 종양-특이적 항체 또는 그의 항원-결합 단편이고;
    n 및 RA4는 제1항에 정의된 바와 같고, G는 하기의 그룹으로부터 선택되는 화학식의 것이고:
    GA-(CH2)m- (G1)
    GA-(CH2)m-O- (G2),
    GA-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)p- (G3), 및
    Figure 112019098034716-pct00148
    ;
    여기서 m은 0 내지 6이고;
    q는 1 내지 3이고;
    p는 1 내지 3이고;
    X1 및 X2는 변형될 수 있는 천연 아미노산 중에서 선택되는 아미노산 그룹이고;
    GA는 다음 중에서 선택되고:
    Figure 112019098034716-pct00149

    Figure 112019098034716-pct00150

    여기서, Ar은 C5-6 아릴렌 그룹을 나타낸다.
  22. 제21항에 있어서,
    (a) G가 화학식 G1의 것이고, GA가 GA1-1 및 GA3-3 중에서 선택되거나; 또는
    (b) G가 화학식 G2의 것이고, GA가 GA3-2 이거나; 또는
    (c) G가 화학식 G3의 것이고, GA가 GA7 및 GA8 중에서 선택되는 화합물.
  23. 화학식 (C)의 화합물:
    Figure 112019098034716-pct00125

    상기 식에서,
    R2, R6, R7, R9, R22, R16, R17, R19, Z, T, T', X 및 X'는 제1항, 제4항, 제5항 및 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고;
    YC는 식 C1, C2, C3, C4, C5 및 C6의 그룹 중에서 선택되고:
    Figure 112019098034716-pct00126

    Figure 112019098034716-pct00127

    Figure 112019098034716-pct00128

    여기서,
    n 및 RA4는 제1항에 정의된 바와 같고;
    R30 및 R31는 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중결합을 형성하거나; 또는 R30은 질소 보호 그룹이고, R31은 OProtO이며, 여기서 ProtO는 하이드록시 보호 그룹이고;
    R40 및 R41은 각각 R30 및 R31에 대해 정의된 바와 같다.
  24. 화학식 (D)의 화합물:
    Figure 112019098034716-pct00129

    상기 식에서,
    R2, R6, R7, R9, R22, R16, R17, R19, Z, T, T', X 및 X'는 제1항, 제4항, 제5항 및 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고;
    R30, R31, R40 및 R41은 제23항에 정의된 바와 같으며;
    YD는 식 D2, D3, D4 및 D6의 그룹 중에서 선택되고:
    Figure 112019098034716-pct00130

    Figure 112019098034716-pct00131

    여기서, RA4는 제1항에 정의된 바와 같다.
  25. 화학식 (E)의 화합물:
    Figure 112019098034716-pct00132

    상기 식에서,
    R2, R6, R7, R9, R22, R16, R17, R19, Z, T, T', X 및 X'는 제1항, 제4항, 제5항 및 제8항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고;
    R30, R31, R40 및 R41은 제23항에 정의된 바와 같으며;
    YE는 식 E1, E2 및 E5의 그룹 중에서 선택되고:
    Figure 112019098034716-pct00133

    여기서,
    RE1은 H 및 TMS 중에서 선택되고;
    RE2는 Br, Cl 및 I 중에서 선택된다.
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
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