EA027910B1 - Пирролобензодиазепины и их конъюгаты - Google Patents

Пирролобензодиазепины и их конъюгаты Download PDF

Info

Publication number
EA027910B1
EA027910B1 EA201591277A EA201591277A EA027910B1 EA 027910 B1 EA027910 B1 EA 027910B1 EA 201591277 A EA201591277 A EA 201591277A EA 201591277 A EA201591277 A EA 201591277A EA 027910 B1 EA027910 B1 EA 027910B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
sup
sub
group
antibody
groups
Prior art date
Application number
EA201591277A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201591277A1 (ru
Inventor
Филип Уилсон Ховард
Джон А. Флайгер
Томас Пиллоу
Биньцин Вэй
Original Assignee
Медимьюн Лимитед
Дженентек, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Медимьюн Лимитед, Дженентек, Инк. filed Critical Медимьюн Лимитед
Publication of EA201591277A1 publication Critical patent/EA201591277A1/ru
Publication of EA027910B1 publication Critical patent/EA027910B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/16—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Abstract

Конъюгированные соединения формулы (А)где Rпредставляет собой, причем Rи Rнезависимо выбраны из Н, F, Cнасыщенного алкила, Салкенила, причем указанные алкильная и алкенильная группы возможно замещены группой, Cалкиламидо и Cалкилового эфира; или, в случае когда один из Rи Rпредставляет собой Н, другой выбирают из нитрила и Cалкилового эфира; Rи Rнезависимо выбраны из H, R, OH, OR, SH, SR, NH, NHR, NRR', NO, MeSn и галогена; Rнезависимо выбран из H, R, OH, OR, SH, SR, NH, NHR, NRR', NO, MeSn и галогена; Y выбран из формул (А1)-(А6):L представляет собой линкер, присоединенный к связывающему с клетками агенту; СВА представляет собой связывающийся с клетками агент; n представляет собой целое число, выбранное из диапазона 0-48; Rпредставляет собой Cалкиленовую группу; или (a) Rпредставляет собой Н и Rпредставляет собой ОН, OR, где Rпредставляет собой Cалкил; или (b) Rи Rобразуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; или (c) Rпредставляет собой Н и Rпредставляет собой OSOM, где z равен 2 или 3 и М представляет собой моновалентный фармацевтически приемлемый катион; каждый из R и R' независимо выбран из необязательно замещенной Cалкильной, Сгетероциклильной и Сарильной групп, и необязательно в отношении группы NRR', R и R' вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенное 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо; R, R, R, R, Rи Rявляются такими, как определено для R, R, R, R, Rи Rсоответственно; Z представляет собой СН или N; Т и Т' независимо выбраны из простой связи или Cалкилена, в углеродную цепь которого могут быть включены один или более гетероатомов, например О, S, N(H), NMe, при условии, что число атомов в наиболее короткой цепи между X и X' составляет от 3 до 12 атомов; и X и X' независимо выбраны из О, S и N(H).

Description

<p>изобретение относится к пирролобензодиазепинам (PBDs), в частности пирролобензодиазепинам, содержащим линкерную группу, присоединенную к связывающемуся с клетками агенту.</p> <p>Уровень техники</p> <p>Пирролобензодиазепины.</p> <p>Некоторые пирролобензодиазепины (PBD) способны распознавать и связываться с конкретными последовательностями ДНК; предпочтительной последовательностью является PuGPu. Первый противоопухолевый антибиотик на основе PBD, антрамицин, был открыт в 1965 (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc, 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc, 87, 5791-5793 (1965)). С того времени было описано множество PBD, встречающихся в природе, а также было разработано более 10 способов синтеза различных их аналогов (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. and Thurston, D.E, Chem. Rev. 2011, 111 (4), 2815-2864). Представители указанного семейства включают эббимицин (abbeymycin) (Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), чикамицин (chicamycin) (Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (патент Японии 58-180 487; Thurston, et al., Chem. Brit, 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tempahedron, 48, 751-758 (1992)), мазетрамицин (mazethramycin) (Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), неотрамицины (neothramycin) А и В (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), поротрамицин (porothramycin) (Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), протракарцин (prothracarcin) (Shimizu, et al., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org. Chem, 52, 91-97 (1987)), сибаномицин (sibanomicin) (DC-102) (Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), сибиромицин (sibiromycin) (Leber, et al., J. Am. Chem. Soc, 110, 2992-2993 (1988)) и томамицин (tomamycin) (Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444</p> <p>(1972)). PBD представляют собой соединения следующей общей структурной формулы:</p> <p>Они отличаются числом, типом и положением заместителей как в ароматических кольцах A, так и в</p> <p>пиррольных кольцах C, и по степени насыщения C-кольца. В положении N10-C11 B-кольца, которое представляет собой электрофильный центр, ответственный за алкилирование ДНК, находится либо имин (N=C), либо карбиноламин (NH-CH(OH)), либо метиловый эфир карбиноламина (NH-CH(OMe)). Все известные соединения, встречающиеся в природе, имеют (З)-конфигурацию хирального центра С11д, что обеспечивает правозакрученную &quot;твист&quot;-форму если смотреть со стороны C-кольца в направлении А-кольца. Это придает им подходящую трехмерную форму для изоспиральности с малой бороздкой В-формы ДНК, что приводит к плотному прилеганию к сайту связывания (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, p. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res, 19, 230-237 (1986)). Их способность образовывать аддукт в малой бороздке ДНК позволяет им препятствовать процессингу ДНК, обеспечивая возможность их применения в качестве противоопухолевых агентов.</p> <p>Пирролобензодиазепиновое соединение, обладающее особыми преимуществами, описано в Gregson et al., Chem. Commun. 1999, 797-798, как соединение 1, и в Gregson et al., J. Med. Chem. 2001, 44, 11611174, как соединение 4а. Указанное соединение, также известное как SJG-136, представлено ниже:</p> <p>В источнике WO 2005/085251 были раскрыты и другие димерные PBD соединения, такие как соединения, несущие С2 арильные заместители, представляющие собой, например:</p> <p>Было показано, что указанные соединения являются в значительной степени подходящими для применения в качестве цитотоксических агентов.</p> <p>Конъюгаты антитело-лекарственное средство.</p> <p>Общеизвестно, что терапия с использованием антител применяется для направленного лечения пациентов, страдающих раковым заболеванием, иммунологическими и ангиогенными нарушениями (Carter, P. (2006), Nature, Reviews Immunology 6:343-357). Применение конъюгатов антителолекарственное средство (ADC), т.е. иммуноконъюгатов, для местной доставки цитотоксических или цитостатических агентов, т.е. лекарственных средств, предназначенных для уничтожения или ингибирования опухолевых клеток при лечении рака, обеспечивает направленную доставку фрагмента лекарствен- 1 027910</p> <p>ного средства к опухоли и внутриклеточное их накопление в ней, тогда как системное введение указанных неконъюгированных лекарственных агентов может приводить к неприемлемым уровням токсичности по отношению к здоровым клеткам, а также обнаруженными элиминированными опухолевыми клетками (Xie et al. (2006), Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291; Kovtun et al. (2006), Canser Res. 66(6):32143121; Law et al. (2006), Canser Res. 66(4):2328-2337; Wu et al. (2005), Nature, Biotech. 23(9):1137-1145; Lambert J. (2005), Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (2005), Expert Opin. Ther. Patents 15(9):1087-1103; Payne, G. (2003), Canser Cell 3:207-212; Trail et al. (2003), Canser Immunol. Immunother. 52:328-337; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer research, 19:605-614).</p> <p>Таким образом, необходимы препараты с максимальной эффективностью при их минимальной токсичности. Попытки разработки и очистки ADC были сосредоточены на селективности моноклональных антител (mAb), а также на механизме действия лекарственного средства, свойствах связывания с лекарственным средством, соотношении лекарственное средство/антитело (нагрузка) и высвобождения лекарственного средства (Junutula, et al., 2008b Nature, Biotech, 26(8):925-932; Dornan et al. (2009), Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO 2009/052249; McDonagh (2006), Protein Eng. Design &amp; Sel. 19(7): 299-307; Doronina et al. (2006), Bioconj. Chem. 17:114-124; Erickson et al. (2006), Cancer res. 66(8):1-8; Sanderson et al. (2005), Clin. Cancer res. 11:843-852; Jeffrey et al. (2005), J. Med. Chem. 48:13441358; Hamblett et al. (2004), Clin. Cancer res. 10:7063-7070). Фрагменты лекарственных средств могут оказывать цитотоксическое и цитостатическое действие с помощью механизмов, включающих связывание тубулина, связывание ДНК, ингибирование топоизомеразы. Некоторые цитотоксические лекарственные средства склонны быть неактивными или становиться менее активными при конъюгировании с большими антителами или белковыми рецепторными лигандами.</p> <p>Пирролобензодиазепины (PBD) в конъюгатах антитело-лекарственное средство (ADC).</p> <p>Димерные PBD были описаны в качестве лекарственных средств в конъюгатах лекарственных средств. Например, в публикации WO 2011/130598 описаны такие димерные PBD соединения, содержащие линкерные группы для присоединения к связывающему клетки агенту, такому как антитело, в которых линкерная группа присоединена по одному из доступных положений N10, причем указанные соединения, как правило, расщепляются под действием фермента на линкерную группу.</p> <p>Напротив, в публикациях WO 2011/130613 и WO 2011/130616, были описаны такие димерные PBD соединения, содержащие линкерные группы для присоединения к связывающему клетки агенту, такому как антитело, в которых линкерная группа присоединена через ароматическую группу по одному из С2 положений, причем указанные соединения, как правило, расщепляются под действием фермента на линкерную группу. Такие конъюгаты антитело-лекарственное средство также описаны в Flygare, J, et al., Chem. Biol. Drug Des. 81:113-121 (2013), где также описаны другие типы конъюгатов антителолекарственное средство.</p> <p>Дополнительные подходы раскрыты в WO 2007/085930, где описано, что томамицин-подобные димеры содержат линкерную группу для присоединения к связывающемуся с клетками агенту, такому как антитело, причем указанная линкерная группа присоединена к связи между группами томамицина и, как правило, отщепляется при воздействии на линкерную группу фермента.</p> <p>Авторы настоящего изобретения разработали новый способ получения PBD конъюгатов со связывающимися с клетками агентами, в частности, конъюгаты PBD-антитело.</p> <p>Краткое описание изобретения</p> <p>В общем аспекте настоящего изобретения предложен конъюгат, содержащий димерное соединение PBD с линкером для присоединения к связывающемуся с клетками агенту, причем указанный линкер содержит группу триазола, пиперазина, пропаргилена или оксима, присоединенные к фенилену или пиридилену мостика, соединяющего два мономера PBD. Указанный связывающийся с клетками агент предпочтительно представляет собой антитело.</p> <p>В первом аспекте настоящего изобретения предложены новые конъюгированные соединения формулы (А)</p> <p>алкила, С<sub>2-3</sub>алкенила, причем указанные алкильная и алкенильная группы необязательно замещены группой, выбранной из О<sub>1-4</sub>алкил амидо и Cl<sub>-</sub>4алкилового сложного эфира; или, в случае когда один из R<sup>36a</sup> и R<sup>36b</sup> представляет собой H, другой выбран из нитрила и О<sub>1-4</sub>алкилового сложного эфира;</p> <p>- 2 027910</p> <p>R<sup>6</sup> и R<sup>9</sup> независимо выбраны из H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn и галогена;</p> <p>R<sup>7</sup> независимо выбран из H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn и галогена;</p> <p>Y выбран из структурных формул (А1)-(А6):</p> <p>L представляет собой линкер, присоединенный к связывающему клетки агенту;</p> <p>СВА представляет собой связывающий клетки агент;</p> <p>N представляет собой целое число, выбранное из диапазона 0-48;</p> <p>R<sup>A4</sup> представляет собой С1-6алкиленовую группу; и/или</p> <p>(a) R<sup>10</sup> представляет собой H и R<sup>11</sup> представляет собой OH, OR<sup>A</sup>, где R<sup>A</sup> представляет собой</p> <p>С^алкил; или</p> <p>(b) R<sup>10</sup> и R<sup>11</sup> образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; или</p> <p>(c) R<sup>10</sup> представляет собой H и R<sup>11</sup> представляет собой OSO<sub>z</sub>M, где z равняется 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион.</p> <p>Каждый из R и R' независимо выбран из необязательно замещенных С1-12алкильной, С<sub>3-20</sub>гетероциклильной и С<sub>5-20</sub>арильной групп, и необязательно в отношении группы NRR', R и R' вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенное 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо;</p> <p>при этом R<sup>16</sup>, R<sup>17</sup>, R<sup>19</sup>, R<sup>20</sup>, R<sup>21</sup> и R<sup>22</sup> являются такими, как описано для R<sup>6</sup>, R<sup>7</sup>, R<sup>9</sup>, R<sup>10</sup>, R<sup>11</sup> и R<sup>2</sup> соответственно;</p> <p>при этом Z представляет собой CH или N;</p> <p>при этом T и Т'' независимо выбраны из простой связи или С1-9алкилена, углеродная цепь которого может быть прервана одним или более гетератомов, например О, S, N(H), NMe, при условии что число атомов в более короткой цепи между X и X' составляет от 3 до 12 атомов; и</p> <p>X и X' независимо выбраны из O, S и N(H).</p> <p>- 3 027910</p> <p>- 4 027910</p> <p>Во втором аспекте настоящего изобретения предложены новые соединения, представляющие собой</p> <p>лекарственное средство-линкер формулы (В):</p> <p>- 5 027910</p> <p>где все группы являются такими, как описано в первом аспекте изобретения; и</p> <p>Y<sup>L</sup> выбран из группы формул (В1)-(В6):</p> <p>где G представляет собой реактивную группу для присоединения к связывающему клетки агенту.</p> <p>В третьем аспекте настоящего изобретения предложены соединения формулы (С), которые могут</p> <p>применяться для приготовления соединений и конъюгированных соединений согласно настоящему изобретению:</p> <p>где Y<sup>C</sup> выбран из группы формул (С1)-(С5):</p> <p>- 6 027910</p> <p>и/или</p> <p>(a) R<sup>30</sup> представляет собой H и R<sup>31</sup> представляет собой OH, OR<sup>A</sup>, где R<sup>A</sup> представляет собой</p> <p>С<sub>1-4</sub>алкил; или</p> <p>(b) R<sup>30</sup> и R<sup>31</sup> образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; или</p> <p>(c) R<sup>30</sup> представляет собой H и R<sup>31</sup> представляет собой OSO<sub>z</sub>M, где z равняется 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион; или</p> <p>(d) R<sup>30</sup> представляет собой защитную группу азота и R<sup>31</sup> представляет собой OProt<sup>O</sup>, где Prot<sup>O</sup> представляет собой защитную группу гидрокси; и</p> <p>40 41 30 31</p> <p>R и R являются такими, как определено для R и R соответственно; и</p> <p>все остальные группы являются такими, как описано в первом аспекте настоящего изобретения.</p> <p>В четвертом аспекте настоящего изобретения предложены соединения формулы (D), которые могут</p> <p>применяться для приготовления соединений согласно второму и третьему аспектам настоящего изобретения:</p> <p>Y<sup>D</sup> выбран из группы формул (D2)-(D4) и (D6):</p> <p>- 7 027910</p> <p>а все остальные группы являются такими, как описано в третьем аспекте настоящего изобретения.</p> <p>В пятом аспекте настоящего изобретения предложены соединения формулы (Е), которые могут</p> <p>применяться для приготовления соединений согласно второму, третьему и четвертому аспектам настоящего изобретения:</p> <p>Y<sup>E</sup> выбран из группы формул (El), (Е2) и (Е5):</p> <p>E1</p> <p>где R<sup>E1</sup> выбран из H и TMS;</p> <p>R<sup>E2</sup> выбран из Br, Cl и I; и</p> <p>все остальные группы являются такими, как описано в третьем аспекте настоящего изобретения.</p> <p>В шестом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения согласно первому аспекту изобретения в способе терапевтического лечения. В четвертом аспекте также предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно первому аспекту и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.</p> <p>В седьмом аспекте настоящего изобретения предложено соединение согласно первому аспекту настоящего изобретения или фармацевтическая композиция согласно четвертому аспекту настоящего изобретения для применения в способе лечения пролиферативного заболевания. В пятом аспекте настоящего изобретения также предложено применение соединения согласно первому аспекту в способе приготовления лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания, а также способ лечения млекопитающего, страдающего от пролиферативного заболевания, включающий введение эффективного количества соединения согласно первому аспекту или фармацевтической композиции согласно четвертому аспекту.</p> <p>В восьмом аспекте настоящего изобретения предложен способ синтеза соединения согласно первому аспекту настоящего изобретения, включающий этап конъюгирования лекарственного средствалинкера согласно второму аспекту со связывающимся с клетками агентом.</p> <p>В настоящем изобретении также предложен синтез соединений согласно второму аспекту настоящего изобретения из соединений согласно третьему, четвертому или пятому аспектам настоящего изобретения путем проведения реакции указанных соединений с подходящими реагентами.</p> <p>- 8 027910</p><p>Подробное описание изобретения</p> <p>В настоящем изобретении предложен конъюгат, содержащий PBD димер, присоединенный через связующий фрагмент посредством специфичного линкера к связывающемуся с клетками агенту.</p> <p>Настоящее изобретение подходит для применения для доставки PBD конъюгата к предпочтительному участку организма субъекта.</p> <p>Защитные группы азота.</p> <p>Защитные группы азота хорошо известны в данной области техники. Предпочтительными защитными группами азота для применения согласно настоящему изобретению являются карбаматные защитные группы общей формулы</p> <p>где R'<sup>30</sup> представляет собой необязательно замещенные алкильную (например, С1_<sub>2</sub>оалкильную), арильную (например, С5-20арильную) или гетероарильную (например, С3-20гетероциклильную) группы.</p> <p>Многие подходящие карбаматные защитные группы азота перечислены на с. 706-772 в документе Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4<sup>th</sup> Edition, John Wiley &amp; Sons, Inc, 2007 (ISBN 978-0-47169754-1), полностью включенном в настоящее описание посредством ссылки.</p> <p>В частности, предпочтительные защитные группы включают Alloc, Troc, Teoc, BOC, ТсВОС, Fmoc, 1-Adoc и 2-Adoc.</p> <p>Защитные группы гидроксила.</p> <p>Защитные группы гидроксила хорошо известны в данной области техники. Многие подходящие группы описаны на с. 24-298 в документе Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4<sup>th</sup> Edition, John Wiley &amp; Sons, Inc, 2007 (ISBN 978-0-471-69754-1), полностью включенном в настоящее описание посредством ссылки.</p> <p>Особый интерес представляют классы, включающие силиловые эфиры, метиловые эфиры, алкиловые эфиры, бензиловые эфиры, сложные эфиры, бензоаты, карбонаты, и сульфонаты. В частности, предпочтительные защитные группы гидроксила включают ТНР.</p> <p>Предпочтительные варианты</p> <p>Следующие предпочтительные варианты применимы ко всем аспектам настоящего изобретения, описанным выше, или могут относиться только к одному аспекту. Указанные предпочтительные варианты могут быть объединены в любой комбинации.</p> <p><sub>R</sub><sup>2<sub></sup>.</sub></p> <p>В некоторых вариантах реализации R<sup>36a</sup> и R<sup>36b</sup>,, оба, представляют собой H.</p> <p>В других вариантах реализации R<sup>36a</sup> и R<sup>36b</sup>, оба, представляют собой метил.</p> <p>В дополнительных вариантах реализации один из R<sup>36a</sup> и R<sup>36b</sup> представляет собой H, а другой выбран из C<sub>1</sub>_4насыщенного алкила, С<sub>2-3</sub>алкенила, причем указанные алкильная и алкенильная группы необязательно являются замещенными. В некоторых из таких дополнительных вариантов реализации группа, которая не является Н, может быть выбрана из метила и этила.</p> <p><sub>R</sub><sup>22<sub></sup>.</sub></p> <p>Приведенные выше предпочтительные варианты для R<sup>2</sup> равно применимы к R<sup>22</sup>.</p> <p><sub>R</sub><sup>6<sub></sup>.</sub></p> <p>В одном варианте реализации R<sup>6</sup> независимо выбран из H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn- и галогена.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>6</sup> независимо выбран из H, OH, OR, SH, NH2, NO2 и галогена.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>6</sup> независимо выбран из H и галогена.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>6</sup> независимо представляет собой H.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>6</sup> и R<sup>7</sup> вместе образуют группу -O-(CH2)p-O-, где p равняется 1 или 2.</p> <p>Указанные варианты реализации также применимы к R<sup>16</sup>.</p> <p><sub>R</sub><sup>7<sub></sup>.</sub></p> <p>R<sup>7</sup> независимо выбран из H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn и галогена.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>7</sup> независимо представляет собой OR.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>7</sup> независимо представляет собой OR<sup>7A</sup>, где R<sup>7A</sup> независимо представляет собой необязательно замещенный C<sub>1-</sub>6алкил.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>7A</sup> независимо представляет собой необязательно замещенный насыщенный ^балкил.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>7A</sup> независимо представляет собой необязательно замещенный С2-4алкенил.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>7A</sup> независимо представляет собой Me.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>7A</sup> независимо представляет собой CH<sub>2</sub>Ph.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>7A</sup> независимо представляет собой аллил.</p> <p>Указанные варианты реализации также применимы к R<sup>17</sup>.</p> <p>- 9 027910</p> <p><sub>R</sub><sup>9<sub></sup>.</sub></p> <p>В одном варианте реализации R<sup>9</sup> независимо выбран из H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn- и галогена.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>9</sup> независимо представляет собой H.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>9</sup> независимо представляет собой R или OR.</p> <p>Указанные варианты реализации также применимы к R<sup>19</sup>.</p> <p><sub>R</sub><sup>10<sub></sup>-R</sub><sup>11<sub></sup>.</sub></p> <p>В некоторых вариантах реализации R<sup>10</sup> представляет собой H и R<sup>11</sup> представляет собой OH, OR<sup>A</sup>,</p> <p>где R<sup>a</sup> представляет собой С^алкил. В некоторых из указанных вариантов реализации R<sup>11</sup> представляет собой OH. В других из указанных вариантов реализации R<sup>11</sup> представляет собой OR<sup>A</sup>, где R<sup>A</sup> представляет собой С1-4алкил. В некоторых из указанных вариантов реализации R<sup>A</sup> представляет собой метил.</p> <p>В некоторых вариантах реализации R<sup>10</sup> и R<sup>11</sup> образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены.</p> <p>В некоторых вариантах реализации R<sup>10</sup> представляет собой H и R<sup>11</sup> представляет собой OSOzM, где z равняется 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион. В некоторых из указанных вариантов реализации М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион и может представлять собой Na<sup>+</sup>. Дополнительно в некоторых вариантах реализации z равняется 3.</p> <p>Указанные выше предпочтительные варианты реализации равно применимы к R<sup>20</sup> и R<sup>21</sup>.</p> <p>В некоторых вариантах реализации R<sup>30</sup> представляет собой H, и R<sup>31</sup> представляет собой OH, OR<sup>A</sup>, где R<sup>A</sup> представляет собой С1-4алкил. В некоторых из указанных вариантов реализации R<sup>31</sup> представляет собой OH. В других из указанных вариантов реализации R<sup>31</sup> представляет собой OR<sup>A</sup>, где R<sup>A</sup> представляет собой С1-4алкил. В некоторых из указанных вариантов реализации R<sup>A</sup> представляет собой метил.</p> <p>В некоторых вариантов реализации R<sup>30</sup> и R<sup>31</sup> образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены.</p> <p>В некоторых вариантах реализации R<sup>30</sup> представляет собой H и R<sup>31</sup> представляет собой OSO<sub>z</sub>M, где z равняется 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион. В некоторых из указанных вариантов реализации М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион и может представлять собой Na<sup>+</sup>. Дополнительно в некоторых вариантах реализации z равняется 3.</p> <p>В некоторых вариантах реализации R<sup>30</sup> представляет собой защитную группу азота и R<sup>31</sup> представляет собой OProt<sup>O</sup>, где Prot<sup>O</sup> представляет собой защитную гидрокси группу.</p> <p>В некоторых из указанных вариантов реализации защитная группа азота может быть выбрана из Allc, Troc, Teoc, BOC, TcBOC, Fmoc, 1-Adoc и 2-Adoc и более предпочтительно может представлять собой Boc.</p> <p>В некоторых из указанных вариантов реализации защитная группа азота может представлять собой</p> <p>ТНР.</p> <p>Для соединений формулы D, предпочтительным может являться, чтобы R<sup>30</sup> и R<sup>31</sup> образовывали азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены.</p> <p>Для соединений формулы Е предпочтительным может являться, чтобы R<sup>30</sup> представлял собой защитную группу азота и R<sup>31</sup> представлял собой OProt<sup>O</sup>, где Prot<sup>O</sup> представляет собой защитную гидрокси группу.</p> <p>Для соединений формулы С, где Y<sup>C</sup> выбирают из С2, С3 или С4, предпочтительным может являться, чтобы R<sup>30</sup> и R<sup>31</sup> образовывали азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены.</p> <p>Для соединений формулы С, где Y<sup>C</sup> выбирают из С1 или С5, предпочтительным может являться, чтобы R<sup>30</sup> представлял собой защитную группу азота и R<sup>31</sup> представлял собой OProt<sup>O</sup>, где Prot<sup>O</sup> представляет собой защитную гидрокси группу.</p> <p>Указанные выше предпочтительные варианты равно применимы к R<sup>40</sup> и R<sup>41</sup>.</p> <p>Т и T'.</p> <p>Каждый из T и Т'' независимо выбран из простой связи или ^^алкиленовой группы, углеродная цепь которой может быть прервана одним или более гетероатомами, например О, S, N(H) и/или NMe, при условии, что число атомов в наиболее короткой цепи атомов между X и X' составляет от 3 до 12 атомов.</p> <p>В одном варианте реализации каждая алкиленовая группа T и Т'' необязательно прерывается одним или более гетероатомами, выбранными из O, S, и NMe.</p> <p>В одном варианте реализации каждый из T и Т&quot; независимо выбран из простой связи и ^^алкиленовой группы.</p> <p>В одном варианте реализации T выбран из простой связи, С1, С2, С3 и С4 алкиленовой группы и T' выбран из простой связи, С1, С2, С3 и С4 алкиленовой группы.</p> <p>В одном варианте реализации T выбран из простой связи, C<sub>1</sub>, и С<sub>2</sub> алкиленовой группы и T' выбран из простой связи, С<sub>1</sub>, и С<sub>2</sub> алкиленовой группы.</p> <p>- 10 027910</p> <p>В одном варианте реализации T выбран из простой связи и C1 алкиленовой группы и T' выбран из простой связи и C1 алкиленовой группы.</p> <p>В одном варианте реализации T представляет собой простую связь и T' представляет собой простую связь.</p> <p>В одном варианте реализации T представляет собой C1 алкиленовую группу и T' представляет собой C1 алкиленовую группу.</p> <p>В одном варианте реализации T и Т'' являются одинаковыми.</p> <p>Алкиленовые группы, представленные выше, могут необязательно включать один или более гетероатомов.</p> <p>Алкиленовые группы, представленные выше, могут представлять собой незамещенные линейные алифатические алкиленовые группы.</p> <p>X.</p> <p>В одном варианте реализации X выбирают из O, S, или N(H). Предпочтительно X представляет собой О.</p> <p>Димеры.</p> <p>22 16 17 19 20 21 2 6 7 В некоторых вариантах реализации группы R , R , R , R , R и R идентичны группам R , R , R ,</p> <p>R<sup>9</sup>, R<sup>10</sup> и R<sup>11</sup> соответственно. В других вариантах реализации изобретения PBD мономерные группы содержат те же заместители.</p> <p>В частности, предпочтительные соединения согласно первому аспекту изобретения могут представ-</p> <p>t1 и t2 независимо выбраны из 0, 1 и 2;</p> <p>R<sup>7a</sup> и R<sup>17a</sup> независимо выбраны из метила и фенила.</p> <p>В частности, предпочтительные соединения согласно второму аспекту изобретения могут представлять собой соединения формулы Па</p> <p>где R<sup>10</sup>, R<sup>11</sup>, R<sup>20</sup>, R<sup>21</sup> и Y<sup>L</sup> являются такими, как описано выше; t1 и t2 независимо выбраны из 0, 1 и 2;</p> <p>R<sup>7a</sup> и R<sup>17a</sup> независимо выбраны из метила и фенила.</p> <p>В частности, предпочтительные соединения согласно третьему аспекту изобретения могут пред-</p> <p>t1 и t2 независимо выбраны из 0, 1 и 2;</p> <p>R<sup>7a</sup> и R<sup>17a</sup> независимо выбраны из метила и фенила.</p> <p>n (Y, Y<sup>L</sup>).</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) представляет собой целое число от 0 до 24. В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) представляет собой целое число от 0 до 12. В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) представляет собой целое число от 0 до 8.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) представляет собой целое число от 0 до 6.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 0.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 1.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 2.</p> <p>- 11 027910</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 3.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 4.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 5.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 6.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 7.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 8.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 9.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 10.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 11.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 12.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 13.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 14.</p> <p>В некоторых вариантах реализации n (в Y или Y<sup>L</sup>) равен 15.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда Y представляет собой A1 или Y<sup>L</sup> представляет собой B1, n может быть выбран из 3 и 6.</p> <p>В некоторых вариантах реализации, когда Y представляет собой A2 или Y<sup>L</sup> представляет собой B2, n может быть выбран из 4 и 6.</p> <p>В некоторых вариантах реализации, когда Y представляет собой A3 или Y<sup>L</sup> представляет собой B3, n может быть равен 4.</p> <p>В некоторых вариантах реализации, когда Y представляет собой A4 или Y<sup>L</sup> представляет собой B4, n может быть равен 4.</p> <p>В некоторых вариантах реализации, когда Y представляет собой A5 или Y<sup>L</sup> представляет собой B5, n может быть равен 11.</p> <p>В некоторых вариантах реализации, когда Y представляет собой A6 или Y<sup>L</sup> представляет собой B6, n может быть равен 2.</p> <p>L и G.</p> <p>L представляет собой линкер, присоединенный к связывающемуся с клетками агенту в соединении, представляющем собой конъюгат. G представляет собой реакционноспособную группу для присоединения PBD димера к связывающемуся с клетками агенту с образованием соединения, представляющего собой конъюгат.</p> <p>Предпочтительно линкер/реактивная группа содержит электрофильную функциональную группу для реакции с нуклеофильной функциональной группой связывающегося с клетками агента. Нуклеофильные группы антител включают, но не ограничиваются указанными, (i) N-концевые аминные группы, (ii) аминные группы боковых цепей, например лизин, (iii) тиольные группы боковых цепей, например цистеин, и (iv) гидроксил сахара или аминогруппы, причем антитело является гликозилированным. Аминная, тиольная, и гидроксильная группы являются нуклеофильными и способны вступать в реакцию с образованием ковалентных связей с электрофильными группами на линкерных фрагментах и реагентах, включая (i) малеимидные группы; (ii) активированные дисульфиды; (iii) активные сложные эфиры, такие как сложные эфиры NHS (N-гидроксисукцинимида), сложные эфиры HOBt (N-гидроксибензотриазола), галогенформиатов и галогенангидридов; (iv) алкил и бензилгалогенидов, таких как галогенацетамиды; и (у) альдегидов, кетонов, карбоксила, некоторые из которых для примера представлены ниже:</p> <p>Определенные антитела содержат восстанавливаемые межцепочечные дисульфиды, т.е. цистеиновые мостики. Химическая реактивность антител может быть активирована для конъюгирования с линкерными реагентами путем обработки восстанавливающим агентом, таким как DTT (дитиотреитол). Таким образом, теоретически каждый цистеиновый мостик образует два реакционноспособных тиольных нуклеофила. Также в антитела могут быть введены дополнительные нуклеофильные группы посредством реакции лизинов с 2-иминотиоланом (реагент Траута), в результате чего амин превращается в тиол. Реакционноспособные тиольные группы могут быть введены в антитело (или его фрагмент) путем введения одного, двух, трех, четырех или более цистеиновых остатков (например, получение мутантных антител, содержащих один или более неприродный остаток аминокислоты цистеина). В документе US 7521541</p> <p>- 12 027910</p> <p>описаны антитела, сконструированные путем введения реакционноспособных цистеиновых аминокислот.</p> <p>В некоторых вариантах реализации линкер содержит реакционноспособную нуклеофильную группу, способную вступать в реакцию с электрофильной группой, присутствующей на поверхности антитела. Подходящие электрофильные группы на поверхности антитела включают, но не ограничиваются указанными, альдегидную и кетонную карбонильную группы. Гетероатом нуклеофильной группы линкера может вступать в реакцию с электрофильной группой на поверхности антитела и образовывать ковалентную связь с указанной группой антитела. Подходящие нуклеофильные группы линкера включают, но не ограничиваются указанными, гидразид, оксим, амино, гидроксил, гидразин, тиосемикарбазон, гидразин карбоксилат и арилгидразид. Электрофильная группа на поверхности антитела обеспечивает подходящий участок для присоединения линкера.</p> <p>В одном варианте реализации группа L представляет собой</p> <p>где звездочка обозначает точку присоединения к остатку группы Y;</p> <p>волнистая линия означает точку присоединения к связывающемуся с клетками агенту;</p> <p>m является целым числом, выбранным из диапазона 0-6.</p> <p>В одном варианте реализации m выбирают из 2, 3, 4 и 5.</p> <p>В одном варианте реализации связь между связывающим клетки агентом и L осуществляется с помощью тиолового остатка связывающегося с клетками агента и малеимидной группы L.</p> <p>В одном варианте реализации связь между связывающимся с клетками агентом и L представляет</p> <p>собой:</p> <p>где звездочка обозначает место присоединения оставшегося фрагмента группы L или оставшегося фрагмента группы Y;</p> <p>волнистая линия обозначает место присоединения к оставшемуся фрагменту связывающегося с клетками агента.</p> <p>В указанном варианте реализации атом S обычно получают из связывающегося с клетками агента.</p> <p>В каждом из представленных выше вариантов реализации вместо групп, полученных из малеимида,</p> <p>представленных ниже, могут быть использованы другие функциональные группы:</p> <p>о</p> <p>где, как указано ранее, волнистая линия обозначает место присоединения к оставшемуся фрагменту связывающегося с клетками агента;</p> <p>звездочка указывает связь с оставшейся частью группы L или группы Y.</p> <p>В одном варианте реализации группа, полученная из малеимида, заменена группой:</p> <p>где волнистая линия обозначает место присоединения к связывающемуся с клетками агенту; звездочка указывает связь с оставшейся частью группы L или группы Y.</p> <p>В одном варианте реализации группа, полученная из малеимида, заменена группой, необязательно</p> <p>вместе со связывающимся с клетками агентом, выбранной из:</p> <p>- 13 027910</p> <p>-Ο(=Ο)ΝΗ-,</p> <p>-0(=0)0-,</p> <p>-NHC(=0)-,</p> <p>-00(=0)-,</p> <p>-00(=0)0-,</p> <p>-NHC(=0)0-,</p> <p>-0C(=0)NH-,</p> <p>-NHC(=0)NH-,</p> <p>-NHC(=0)NH,</p> <p>-C(=0)NHC(=0)-,</p> <p>-S-,</p> <p>-S-S-,</p> <p>-CH<sub>2</sub>C(=0)-C(=0)CH<sub>2</sub>-,</p> <p>=N-NH-, и -NH-N=.</p> <p>В одном варианте реализации группа, полученная из малеимида, заменена группой, необязательно</p> <p>вместе co связывающимся с клетками агентом, выбранной из:</p> <p>где волнистая линия обозначает либо место присоединения к связывающемуся с клетками агенту, либо связь с оставшейся частью группы L или с оставшейся частью группы Y;</p> <p>звездочка обозначает другое место присоединения к связывающемуся с клетками агенту или связь с оставшейся частью группы L или с оставшейся частью группы Y.</p> <p>В качестве L для осуществления связи оставшейся части группы Y со связывающимся с клетками агентом могут быть использованы и другим группы, описанные в публикации WO 2005/082023.</p> <p>Таким образом, согласно вариантам реализации настоящего изобретения L представляет собой соединение формулы:</p> <p>-L<sup>A</sup>-(CH2)m-, (L1)</p> <p>где m составляет от 0 до 6;</p> <p>L<sup>a</sup> выбран из:</p> <table border="1"> <tr><td> (L&quot;T</td><td> 0 CBA^ / Ич 0</td><td> </td><td> p <sup>CBA</sup>j //</td></tr> <tr><td> (<sub>L</sub><sup>A1</sup>-<sup>2</sup>)</td><td> 0 сва|_^Хы-<sup>АГ</sup>У</td><td> (L<sup>A/</sup>)</td><td> CBA&lt;_ A</td></tr> <tr><td> (L<sup>a</sup>^)</td><td> 0 -кУУ' 0</td><td> (LAh-1)</td><td> CBA 4</td></tr> <tr><td> (|_<sup>А3</sup>-<sup>1</sup>)</td><td> CBM r<sup>s</sup></td><td> (I?<sup>82</sup>)</td><td> N ,CBA 'nA</td></tr> </table> <p>- 14 027910</p> <table border="1"> <tr><td> (<sub>L</sub><sup>a</sup>3-2)</td><td> </td><td> Г’)</td><td> CBA</td></tr> <tr><td> (L<sup>A4</sup>)</td><td> CBAi_ 0 &gt;</td><td> <sub>(l</sub>».<sub>2)</sub></td><td> Я •Г CBA</td></tr> <tr><td> (L<sup>Ab</sup>)</td><td> ,o <sup>CBA</sup>j //</td><td colspan="2"> </td></tr> </table> <p>где Ar представляет собой С5-6ариленовую группу, например фенилен.</p> <p>В некоторых вариантах реализации, когда L представляет собой L1, m может быть равен 2, 3 или 5. В некоторых вариантах реализации, когда L представляет собой L1, L<sup>A</sup> может представлять собой</p> <p><sub>L</sub>A1-1<sub>.</sub></p> <p>Согласно вариантам реализации настоящего изобретения L представляет собой соединение формулы:</p> <p>-L<sup>A</sup>-(CH2)m-O-, (L2)</p> <p>где m равен от 0 до 6;</p> <p>L<sup>A</sup> выбран из групп, представленных выше.</p> <p>Не желая быть связанными какой-либо теорией, такие группы могут отщепляться от антитела таким образом, что карбаматная группа высвобождает концевой амин.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда L представляет собой L2, L<sup>A</sup> может представлять собой L<sup>A3-2</sup>.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда L представляет собой L2, m может быть равен 1. Согласно вариантам реализации настоящего изобретения L представляет собой соединение формулы</p> <p>-L<sup>A</sup>-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)p-, (L3)</p> <p>где q равен от 1 до 3; р равен от 1 до 3;</p> <p>L<sup>A</sup> выбран из групп, представленных выше.</p> <p>Не желая быть связанными какой-либо теорией, такие группы могут отщепляться от антитела таким образом, что карбаматная группа высвобождает группу:</p> <p>H2N-(CH2)p-, (L3').</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда L представляет собой L3, q может быть равен 1, и р может быть равен 2.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда L представляет собой L3, L<sup>A</sup> может быть выбран <sub>из L</sub><sup>A7<sub></sup>, L</sub><sup>A8-1</sup> <sub>и L</sub><sup>A8-2<sub></sup>.</sub></p> <p>Согласно вариантам реализации настоящего изобретения L представляет собой соединение формулы</p> <p>где m равен от 0 до 6;</p> <p>X<sup>1</sup> и X<sup>2</sup> являются аминокислотными группами, выбранными из природных аминокислот, которые могут быть изменены;</p> <p>L<sup>A</sup> выбран из групп, представленных выше.</p> <p>Указанные природные аминокислоты могут быть выбраны таким образом, что дипептидная группа лабильна к действию катепсина.</p> <p>В одном варианте реализации группа -Χι-Χ<sub>2</sub>- выбрана из:</p> <p>-Phe-Lys-,</p> <p>-Val-Ala-,</p> <p>-Val-Lys-,</p> <p>-Ala-Lys-,</p> <p>-Val-Cit-,</p> <p>-Phe-Cit-,</p> <p>-Leu-Cit-,</p> <p>- 15 027910</p> <p>-Ile-Cit-,</p> <p>-Phe-Arg</p> <p>-Trp-Citгде Cit представляет собой цитруллин.</p> <p>Предпочтительно группа -Xi-X<sub>2</sub>- выбрана из:</p> <p>-Phe-Lys-Val-Ala-,</p> <p>-Val-Lys-,</p> <p>-Ala-Lys-,</p> <p>-Val-Cit-.</p> <p>Наиболее предпочтительно группа -Х1-Х2- представляет собой -Phe-Lys- или -Val-Ala-.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда L представляет собой L4, m может быть равен 1.</p> <p>Также могут быть использованы другие дипептидные комбинации, включая комбинации, описанные в документе Dubowchik et al., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869, полностью включенным в настоящее описание посредством ссылки.</p> <p>В одном варианте реализации в случае необходимости боковая цепь аминокислоты может быть модифицирована. Например, может быть модифицирована аминогруппа или карбоксильная группа боковой цепи аминокислоты.</p> <p>В одном варианте реализации аминогруппа NH2 боковой цепи аминокислоты, такой как лизин, представляет собой модифицированную форму, выбранную из группы, состоящей из NHR и NRR'.</p> <p>В одном варианте реализации карбоксильная группа COOH боковой цепи аминокислоты, такой как аспарагиновая кислота, представляет собой модифицированную форму, выбранную из группы, состоящей из COOR, CONH2, CONHR и CONRR'.</p> <p>В одном варианте реализации в случае необходимости боковая цепь аминокислоты является химически защищенной. Защитная группа боковой цепи может представлять собой группу, описанную ниже в отношении группы R<sup>L</sup>. Авторы настоящего изобретения установили, что последовательности защищенных аминокислот способны расщепляться под действием ферментов. Например, было установлено, что последовательность аминокислот в дипептиде, содержащем остаток Lys с Вос-защищенной боковой цепью, способна расщепляться под действием катепсина.</p> <p>Защитные группы боковых цепей аминокислот хорошо известны в данной области техники и описаны в каталоге Novabiochem. Дополнительные принципы введения защитных групп представлены в книге Protective Groups in Organic Synthesis, за авторством Greene и Wuts.</p> <p>Ниже представлены возможные защитные группы боковых цепей для аминокислот, содержащих реакционноспособные функциональные группы боковых цепей:</p> <p>Arg: Z, Mtr, Tos;</p> <p>Asn: Trt, Xan;</p> <p>Asp: Bzl, t-Bu;</p> <p>Cys: Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt;</p> <p>Glu: Bzl, t-Bu;</p> <p>Gin: Trt, Xan;</p> <p>His: Boc, Dnp, Tos, Trt;</p> <p>Lys: Boc, Z-CI, Fmoc, Z, Alloc;</p> <p>Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS;</p> <p>Thr: Bz;</p> <p>Trp: Boc;</p> <p>Tyr: Bzl, Z, Z-Br.</p> <p>Таким образом, согласно вариантам реализации настоящего изобретения G представляет собой соединение формулы:</p> <p>G<sup>A</sup>-(CH2)m-, (G1)</p> <p>где m составляет от 0 до 6;</p> <p>- 16 027910</p> <p>G<sup>a</sup> выбран из:</p> <table border="1"> <tr><td> (G<sup>A1</sup>-<sup>1</sup>)</td><td> c·</td><td> (G<sup>A4</sup>)</td><td colspan="2"> Hal нН где Hal = 1, Br, Cl</td></tr> <tr><td> (G<sup>AV2</sup>)</td><td> </td><td> (Q“)</td><td> 0 Hal— 4</td><td rowspan="6"> </td></tr> <tr><td> (G<sup>A2</sup>)</td><td> 0</td><td> (G<sup>A6</sup>)</td><td> 0</td></tr> <tr><td> (G<sup>A3</sup>0</td><td> s-s^ 0 (N0<sub>2</sub>) где N0<sub>2</sub> группа является необязательной</td><td> (G<sup>a/</sup>)</td><td> <sup>ΒΓ</sup>Ώ^</td></tr> <tr><td> (G<sup>A3</sup>’<sup>2</sup>)</td><td> s-s* 0 (NO<sub>2</sub>) где NO<sub>2</sub> группа является необязательной</td><td> &quot;(G”)</td><td> V</td></tr> <tr><td> (G<sup>A3</sup>’<sup>3</sup>)</td><td> s-s^ Μгде ΝΟ<sub>2</sub> группа является необязательной</td><td> iG<sup>15</sup>)</td><td> N<sub>3</sub></td></tr> <tr><td> (Q<sup>a3</sup>-4)</td><td> ο<sub>2</sub>ν-\=/ где ΝΟ<sub>2</sub> группа является необязательной</td><td> </td><td> </td></tr> </table> <p>где Ar представляет собой С5-6ариленовую группу, например фенилен.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда G представляет собой G1, m может быть равен</p> <p>2, 3 или 5.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда G представляет собой G1, G<sup>A</sup> может представлять собой G<sup>A1-1</sup>.</p> <p>Согласно вариантам реализации настоящего изобретения G представляет собой соединение формулы</p> <p>G<sup>A</sup>-(CH2)m-O-, (G2)</p> <p>где m равен от 0 до 6;</p> <p>G<sup>A</sup> выбран из групп, представленных выше.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда G представляет собой G2, G<sup>A</sup> может представлять собой G<sup>A3-2</sup>.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда G представляет собой G2, m может быть равен 1.</p> <p>- 17 027910</p> <p>Согласно вариантам реализации настоящего изобретения G представляет собой соединение формулы</p> <p>G<sup>A</sup>-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)p-, (G3) где q равен от 1 до 3, и р равен от 1 до 3;</p> <p>G<sup>A</sup> выбран из групп, представленных выше.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда G представляет собой G3, q может быть равен 1, и р может быть равен 2.</p> <p>В некоторых вариантах реализации в случае, когда G представляет собой G3, G<sup>A</sup> может быть выA7 A8</p> <p>бран из G и G .</p> <p>Согласно вариантам реализации настоящего изобретения G представляет собой соединение формулы</p> <p>где m равен от 0 до 6;</p> <p>X<sup>1</sup> и X<sup>2</sup> являются такими, как определено для L4; G<sup>A</sup> выбран из групп, представленных выше.</p> <p>R и R'.</p> <p>В одном варианте реализации R независимо выбран из необязательно замещенной Смгалкильной, С<sub>3-20</sub>гетероциклильной и С<sub>5-20</sub>арильной групп. Каждая из указанных групп описана ниже в разделе, посвященном заместителям.</p> <table border="1"> <tr><td> В одном</td><td> варианте</td><td> реализации</td><td> R</td><td> независимо</td><td> представляет</td><td> собой</td><td> необязательно</td><td> замещенный</td></tr> <tr><td> (Аралкил. В одном</td><td> варианте</td><td> реализации</td><td> R</td><td> независимо</td><td> представляет</td><td> собой</td><td> необязательно</td><td> замещенный</td></tr> <tr><td colspan="2"> С3-20гетероциклил. В одном варианте</td><td> реализации</td><td> R</td><td> независимо</td><td> представляет</td><td> собой</td><td> необязательно</td><td> замещенный</td></tr> <tr><td> С5-20арил. В одном</td><td> варианте</td><td> реализации</td><td> R</td><td> независимо</td><td> представляет</td><td> собой</td><td> необязательно</td><td> замещенный</td></tr> </table> <p>С1-12алкил.</p> <p>Предпочтительные значения R также применимы к R'.</p> <p>В некоторых вариантах реализации изобретения предложено соединение, содержащее замещающую группу -NRR'. В одном варианте реализации R и R' совместно с атомом азота, с которым они соединены, образуют необязательно замещенное 4-, 5-, 6- или 7-членное гетероциклическое кольцо. Указанное кольцо может дополнительно содержать гетероатом, например, N, O или S. В одном варианте реализации указанное гетероциклическое кольцо само по себе является замещенным группой R. В случае, если присутствует дополнительный гетероатом N, указанный заместитель может быть присоединен к N гетероатому.</p> <p><sub>R</sub><sup>A4<sub></sup>.</sub></p> <p>В одном варианте реализации R<sup>A4</sup> представляет собой С<sub>2-4</sub>алкиленовую группу. В одном варианте реализации R<sup>A4</sup> представляет собой С2 алкиленовую группу.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>A4</sup> представляет собой С3 алкиленовую группу.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>A4</sup> представляет собой незамещенную С1-6алкиленовую группу.</p> <p>В одном варианте реализации R<sup>A4</sup> представляет собой линейную С<sub>1-6</sub>алкиленовую группу.</p> <p>В одном варианте реализации RA<sup>4</sup> выбран из группы, состоящей из -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- и -CH2CH2CH2CH2-.</p> <p>Cell Binding Agent.</p> <p>Связывающийся с клетками агент может быть любого типа и включает пептиды и непептиды. Они могут включать антитела или фрагмент антитела, который содержит по меньшей мере один сайт связывания, лимфокины, гормоны, факторы роста, молекулы переноса биогенных веществ или любые другие связывающиеся с клетками молекулы или вещества.</p> <p>Термин &quot;антитело&quot; в настоящем описании используется в самом широком смысле и, в частности, включает моноклональные антитела, поликлональные антитела, димеры, мультимеры, мультиспецифичные антитела (например, биспецифичные антитела) и фрагменты антител при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность (Miller et al. (2003), Jour. of Immunology, 170:4854-4861). Антитела могут быть мышиными, человеческими, гуманизированными, химерными или произошедшими из других видов. Антитело представляет собой белок, продуцируемый клетками иммунной системы, способный распознавать и связываться со специфическим антигеном. (Janeway, С, Travers, P, Walport, M, Shlomchik (2001), Immuno Biology, 5<sup>th</sup> Ed, Garland Publishing, New York). Целевой антиген в целом имеет многочисленные сайты связывания, также называемые эпитопами, распознаваемые участками CDR множества антител. Каждое антитело, которое специфически связывается с отдельным эпитопом, имеет от- 18 027910</p> <p>личную структуру. Таким образом, один антиген может иметь более одного соответствующего ему антитела. Антитело включает полноразмерную молекулу иммуноглобулина или иммунологически активную часть полноразмерной молекулы иммуноглобулина, т.е. молекулу, которая содержит антигенсвязывающий сайт, иммуноспецифически связывающийся с антигеном интересующей мишени или его частью, при этом указанные мишени включают, но не ограничиваются ими, клетки рака или клетки, продуцирующие аутоиммунные антитела, ассоциированные с аутоиммунным заболеванием. Иммуноглобулин может относиться к любому типу (например, IgG, IgE, IgM, IgD и IgA), классу (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или подклассу молекул иммуноглобулинов. Иммуноглобулины могут иметь различное происхождение, включая иммуноглобулины человека, мыши или кролика.</p> <p>&quot;Фрагменты антител&quot; включают часть полноразмерного антитела, как правило, его антигенсвязывающую или вариабельную область. Примеры фрагментов антител включают Fab, Fab', F(ab')2 и</p> <p>Fv-фрагменты; диатела; линейные антитела; фрагменты, полученные из Fab-экспрессионной библиотеки, антиидиотипические (анти-Id) антитела, CDR (определяющую комплементарность область) и связывающиеся с эпитопом фрагменты любого из указанных выше фрагментов, которые иммуноспецифично связываются с антигенами клеток рака, вирусными антигенами или микробными антигенами, молекулы одноцепочечных антител и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. Используемый в настоящем описании термин &quot;моноклональное антитело&quot; относится к антителу, полученному из популяции, по существу, гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, содержащие указанную популяцию, являются идентичными за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высоко специфичными, направленными против одного антигенного сайта. Более того, в отличие от составов поликлональных антител, которые содержат различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. В дополнение к специфичности преимуществом моноклональных антител является также возможность их синтеза без примесей других антител. Определение &quot;моноклональное&quot; характеризует антитело как полученное, по существу, из гомогенной популяции антител, но не требует получения антител каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для применения согласно настоящему изобретению могут быть получены с помощью гибридомных способов, впервые описанных в Kohler et al. (1975), Nature, 256:495, или технологий рекомбинантных ДНК (см. US 4816567). Моноклональные антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек антител с использованием методик, описанных в Clackson et al. (1991), Nature, 352:624-628; Marks et al. (1991), J. Mol. Biol, 222:581-597.</p> <p>Моноклональные антитела согласно настоящему изобретению включают, в частности, &quot;химерные антитела&quot;, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям антител, полученных из конкретных видов или принадлежащих конкретным классам и подклассам антител, тогда как остальная часть цепи (цепей) является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям антител, произошедших из другого вида или принадлежащих другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность (US 4816567 и Morrison et al. (1984), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855). Химерные антитела включают &quot;приматизированные&quot; антитела, содержащие вариабельные доменные антиген-связывающие последовательности, произошедшие из последовательностей константной области примата, не представляющего собой человека (например, мартышковых или человекообразных обезьян), и человека.</p> <p>В настоящем описании &quot;интактное антитело&quot; представляет собой антитело, содержащее домены VL и VH, а также константный домен легкой цепи (CL) и константные домены тяжелой цепи CH1, CH2 и CH3. Константные домены могут представлять собой константные домены нативных последовательностей (например, константные домены нативной последовательности человека) или вариантных аминокислотных последовательностей. Интактное антитело может иметь одну или более &quot;эффекторных функций&quot;, которые относятся к биологическим активностям, свойственным Fc-области (нативной последовательности Fc-области или вариантной аминокислотной последовательностью Fc области) антитела. Примеры эффекторных функций антител включают dq-связывание; комплемент-зависимую цитотоксичность; Fc-рецепторное связывание; антитело-зависимую опосредованную клетками цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз и понижающую регуляция рецепторов клеточной поверхности, таких как B-клеточный рецептор и BCR.</p> <p>В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелых цепей интактные антитела могут быть отнесены к различным &quot;классам&quot;. Существует пять основных классов интактных антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из указанных классов могут быть дополнительно разделены на &quot;подклассы&quot; (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, соответствующие различным классам антител, называют α, δ, ε, γ и μ соответственно. Субъединичные структуры и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны.</p> <p>Примеры связывающих клетки агентов включают связывающие клетки агенты, применение которых описано в публикации WO 2007/085930, включенной в настоящее описание.</p> <p>- 19 027910</p> <p>Связывающийся с клетками агент может представлять собой полипептид или может содержать полипептид. Указанный полипептид может представлять собой циклический полипептид. Связывающийся с клетками агент может представлять собой антитело. Таким образом, в одном варианте реализации в настоящем изобретении предложен конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC).</p> <p>Нагрузка лекарственного средства.</p> <p>Нагрузка лекарственного средства представляет собой среднее количество PBD лекарственного средства на антитело. Нагрузка лекарственного средства может варьироваться от 1 до 8 фрагментов лекарственного средства (D) на антитело (Ab), т.е. при этом 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8 фрагментов лекарственного средства ковалентно связаны с антителом. Композиции ADC включают совокупность антител, конъюгированных с фрагментами лекарственных средств в количестве от 1 до 8. Среднее число лекарственных средств на антитело в композициях ADC, полученных в результате реакций конъюгации, может быть определено традиционными способами, таким как масс-спектрометрия, ИФА-анализ (ELISA) и электрофорез и ВЭЖХ. Также можно определить количественное распределение ADC в единицах р. Среднее значение р в конкретной композиции ADC можно определить с помощью анализа ELISA (Hamblett et al. (2004), Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson et al. (2005), Clin. Cancer Res. 11:843-852). Однако распределение значений p (лекарственного средства) невозможно определить вследствие связывания антитело-антиген и предела обнаружения ELISA. Также используя ELISA для выявления конъюгата антитело-лекарственное средство нельзя определить, в каких сайтах фрагменты лекарственного средства присоединены к антителу, например, к фрагментам тяжелых цепей или легких цепей или определенным аминокислотным остаткам. В некоторых примерах разделение, очистка и характеристика однородных ADC, где p принимает определенное значение из конъюгатов ADC с другой нагрузкой лекарственного средства, может достигаться такими способами, как обращенно-фазовая ВЭЖХ или электрофорез.</p> <p>Для некоторых конъюгатов антитело-лекарственное средство p может ограничиваться числом сайтов присоединения на антителе. Например, антитело может содержать одну или несколько тиоловых групп цистеина или может содержать только одну или несколько достаточно реакционноспособных тиоловых групп, через которые может присоединяться линкер. Более высокая нагрузка лекарственного средства, например р&gt;5, может вызывать агрегацию, нерастворимость, токсичность или потерю проницаемости в клетки определенных конъюгатов антитело-лекарственное средство.</p> <p>Как правило, во время реакции конъюгации с антителом связывается число фрагментов лекарственного средства меньше теоретического максимума. Антитело может содержать, например, много остатков лизина, которые не взаимодействуют с промежуточным соединением лекарственное средстволинкер (D-L) или линкерным реагентом. Только наиболее реакционноспособные группы лизина могут реагировать с реакционноспособным по отношению к аминам линкерным реагентом. Кроме того, только наиболее реакционноспособные тиоловые группы цистеина могут реагировать с реакционноспособным по отношению к тиоловым группам линкерным реагентом. В целом, антитела не содержат или содержат немного свободных и реакционноспособных тиоловых групп цистеина, которые могут связываться с фрагментом лекарственного средства. Большинство тиоловых групп остатков цистеина в антителах в указанных соединениях существуют в виде дисульфидных мостиков и должны восстанавливаться с помощью восстановителей, таких как дитиотреитол (ДТТ) или ТСЕР, в частично или полностью восстановительных условиях. Нагрузка (отношение лекарственное средство/антитело) в ADC может контролироваться несколькими различными способами, включая (i) ограничение молярного избытка промежуточного соединения лекарственное средство-линкер (D-L) или линкерного реагента по отношению к антителу,</p> <p>(ii) ограничение времени или температуры реакции конъюгации и (iii) частичные или ограничивающие восстановительные условия для модификации тиоловых групп цистеина.</p> <p>В реакционноспособных сайтах антитела могут быть сконструированы цистеиновые аминокислоты, которые не образуют межцепьевые или межмолекулярные дисульфидные связи (Junutula, et al., 2008b Nature, Biotech, 26(8):925-932; Dornan et al. (2009), Blood, 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO 2009/052249). Сконструированные тиоловые группы цистеинов могут взаимодействовать с линкерными реагентами или соединениями лекарственное средство-линкерный реагент согласно настоящему изобретению, содержащими реакционноспособные по отношению к тиольным группам электрофильные группы, такие как малеимидная или альфа-галогенамиды, с образованием ADC со сконструированными на основе цистеина антителами (ThioMabs) и фрагментами PBD лекарственного средства. Положение фрагмента лекарственного средства, таким образом, может планироваться, контролироваться и быть известным. Нагрузку лекарственного средства можно контролировать, так как сконструированные тиоловые группы цистеина, как правило, взаимодействуют с реакционноспособными по отношению к тиоловым группам линкерными реагентами или соединениями лекарственное средство-линкерный реагент с высокой эффективностью. Конструирование антитела IgG с введением аминокислоты цистеина путем замещения одного сайта в тяжелой или легкой цепи приводит к появлению двух новых цистеинов в симметричном антителе. Можно достичь нагрузку лекарственного средства со значением около 2 и относительную однородность продукта конъюгации ADC.</p> <p>Когда более одной нуклеофильной или электрофильной группы антитела реагирует с промежуточным соединением лекарственное средство-линкер или линкерным реагентом с последующим взаимодей- 20 027910</p> <p>ствием с фрагментом лекарственного средства, полученный продукт представляет собой смесь ADC соединений с распределением фрагментов лекарственного средства, присоединенных к антителу, например 1, 2, 3 и т.д. С помощью методов жидкостной хроматографии, таких как полимерная обращенно-фазовая хроматография (PLRP) и хроматография гидрофобного взаимодействия (HIC), можно разделять соединения в смеси в соответствии с нагрузкой лекарственного средства. Могут быть выделены композиции ADC с одним значением нагрузки лекарственного средства (p), однако указанные композиции ADC с одним значением нагрузки могут все еще представлять собой гетерогенные смеси, так как фрагменты лекарственного средства могут присоединяться с помощью линкера к различным сайтам антитела.</p> <p>Таким образом, композиции конъюгатов антитело-лекарственное средство согласно изобретению включают смеси соединений конъюгатов антитело-лекарственное средство, где указанное антитело содержит один или более фрагментов PBD лекарственного средства и где фрагменты лекарственного средства могут быть присоединены к антителу на различных аминокислотных остатках.</p> <p>Согласно одному из вариантов реализации среднее количество групп пирролобензодиазепинового димера на связывающийся с клетками агент составляет от 1 до 20. Согласно некоторым вариантам реализации диапазон выбран из 1-8, 2-8, 2-6, 2-4 и 4-8.</p> <p>Согласно некоторым вариантам реализации это количество составляет: одна группа пирролобензодиазепинового димера на связывающийся с клетками агент.</p> <p>Пептиды.</p> <p>В одном варианте реализации связывающийся с клетками агент представляет собой линейный или циклический пептид, содержащий 4-20, предпочтительно 6-20 непрерывно расположенных аминокислотных остатков. Согласно указанному варианту реализации один связывающийся с клетками агент предпочтительно связан с одним мономерным или димерным пирролобензодиазепиновым соединением.</p> <p>В одном варианте реализации связывающийся с клетками агент содержит пептид, связывающий интегрин α<sub>ν</sub>β<sub>6</sub>. Указанный пептид может являться селективным в отношении α<sub>ν</sub>β<sub>6</sub> по сравнению с XYS.</p> <p>В одном варианте реализации связывающийся с клетками агент содержит полипептид A20FMDV-Cys. Указанный полипептид A20FMDV-Cys имеет последовательность: NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC. Альтернативно, можно использовать вариант последовательности A20FMDV-Cys, где один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять аминокислотных остатков заменены другим аминокислотным остатком.</p> <p>В одном варианте реализации антитело представляет собой моноклональное антитело; химерное антитело; гуманизированное антитело; полностью человеческое антитело или одноцепочечное антитело. В одном варианте реализации антитело представляет собой фрагмент одного из указанных антител, обладающий биологической активностью. Примеры таких фрагментов включают фрагменты Fab, Fab', F(ab')<sub>2</sub> и Fv.</p> <p>В указанных вариантах реализации каждое антитело может быть связано с одним или несколькими димерными пирролобензодиазепиновыми группами. Предпочтительные соотношения пирролобензодиазепина к связывающемуся с клетками агенту приведены выше.</p> <p>Антитело может представлять собой доменное антитело (DAB).</p> <p>В одном варианте реализации антитело представляет собой моноклональное антитело.</p> <p>Антитела для применения согласно настоящему изобретению включают антитела, описанные в публикации WO 2005/082023, включенной в настоящее описание. В частности, предпочтительными являются антитела к опухолеассоциированным антигенам. Примеры таких антигенов, известных в данной области техники, включают, но не ограничиваются указанными, опухолеассоциированные антигены, представленные в публикации WO 2005/082023. См, например, с. 41-55.</p> <p>Конъюгаты согласно настоящему изобретению разработаны для нацеливания на опухолевые клетки посредством антигенов поверхности клетки. Указанные антигены, как правило, представляют собой обычные антигены клеточной поверхности, которые являются либо сверхэкспрессируемыми, либо экспрессируемыми в нехарактерные периоды времени. В идеальном варианте целевой антиген экспрессируется только на пролиферативных клетках (предпочтительно клетках опухоли), однако, на практике такое случается редко. В результате целевые антигены обычно выбирают на основании дифференциальной экспрессии между пролиферативной и здоровой тканью.</p> <p>Опухолеассоциированные антигены (ТАА) известны в данной области техники и могут быть получены для применения в получении антител с помощью способов, хорошо известных в данной области техники. В попытках обнаружить эффективные клеточные мишени для диагностики и терапии раковых заболеваний исследователи искали трансмембранные или другим опухолеассоциированные полипептиды, которые бы специфически экспрессировались на поверхности одной или более раковых клеток определенного типа по сравнению с одной или более здоровых (нераковых) клеток. Часто такие опухолеассоциированные полипептиды экспрессируются на поверхности раковых клеток в большем количестве по сравнению с экспрессией на поверхности нераковых клеток. Обнаружение таких опухолеассоциированных полипептидов антигенов клеточной поверхности привело к возможности специфично нацеливаться на раковые клетки для их разрушения с помощью терапии с применением антител.</p> <p>- 21 027910</p> <p>Примеры ТАА включают, но не ограничиваются указанными, ТАА (1)-(36), перечисленные ниже. Для большего удобства информация, относящаяся к указанным антигенам, все из которых являются хорошо известными в области техники, также приведена ниже, включая названия, альтернативные названия, номера доступа Genebank, и основную ссылку, а также обозначения последовательности нуклеиновой кислоты и белка согласно общепринятой номенклатуре Национального центра биотехнологической информации (NCBI). Последовательности нуклеиновой кислоты и белка, соответствующие ТАА (1)-(36) доступны в открытых базах данных, таких как GenBank. Опухолеассоциированные антигены, на которые нацелены антитела, включают все варианты и изоформы аминоксилотных последовательностей, обладающие по меньшей мере 70, 80, 85, 90 или 95% идентичностью последовательностей по отношению к последовательностям, определенным в цитируемых источниках. Например, ТАА, имеющий альтернативную последовательность, способен специфически связываться с антителом, которое специфически связывается с ТАА, имеющим последовательность, соответствующую указанной последовательности. Последовательности и информация, раскрытая в источниках, включены в настоящее описание посредством ссылки.</p> <p>Опухолеассоциированные антигены (1)-(38):</p> <p>(1) BMPR1B (рецептор костного морфогенетического белка, тип IB, номер доступа Genbank NM 001203) ten Dijke. P., et al. Science, 264 (5155):101-104 (1994), Oncogene, 14 (11):1377-1382 (1997)); WO 2004/063362 (п.2 формулы изобретения); WO 2003/042661 (п.12 формулы изобретения); US2003/134790-A1 (страницы 38-39); WO 2002/102235 (п.13 формулы изобретения; с. 296); WO 2003/055443 (с.91-92); WO 2002/99122 (пример 2; с. 528-530); WO 2003/029421 (п.6 формулы изобретения); WO 2003/024392 (п.2 формулы изобретения; фиг. 112); WO 2002/98358 (п.1 формулы изобретения; с. 183); WO 2002/54940 (страницы 100-101); WO 2002/59377(страницы 349-350); WO 2002/30268 (п.27 формулы изобретения; с. 376); WO 2001/48204 (пример; фиг. 4); NP 001194 рецептор костного морфогенетического белка, тип IB/pid=NP 001194.1. Перекрестные ссылки: MIM: 603248; NP 001194.1; AY065994;</p> <p>(2) Е16 (LAT1, SLC7A5, номер доступа Genbank NM 003486), Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature, 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W, et al. (1992), J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273); WO 2004/048938 (пример 2); WO 2004/032842 (пример IV); WO 2003/042661 (п.12 формулы изобретения); WO 2003/016475 (п.1 формулы изобретения); WO 2002/78524 (пример 2); WO 2002/99074 (п.19 формулы изобретения; с. 127-129); WO 2002/86443 (п.27 формулы изобретения; с. 222, 393); WO 2003/003906 (п.10 формулы изобретения; с. 293); WO 2002/64798 (п.33 формулы изобретения; с. 93-95); WO 2000/14228 (п.5 формулы изобретения; с. 133-136); US2003/224454 (фиг. 3); WO 2003/025138 (п.12 формулы изобретения; с. 150); NP 003477 семейство носителей растворенных агентов 7 (транспортер катионных аминокислот, у+система), член 5/pid=NP 003477.3 - Homo sapiens; перекрестные ссылки: MIM:600182; NP 003477.3; NM 015923; NM 003486.1;</p> <p>(3) STEAP1 (эпителиальный антиген предстательной железы с шестью трансмембранными сегментами, номер доступа Genbank NM 012449); Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S, et al. (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); WO 2004/065577 (п.6 формулы изобретения); WO 2004/027049 (фиг. 1L); ЕР1394274 (пример 11); WO 2004/016225 (п.2 формулы изобретения); WO 2003/042661 (п.12 формулы изобретения); US2003/157089 (пример 5); US2003/185830 (пример 5); US2003/064397 (фиг. 2); WO 2002/89747 (пример 5; с. 618-619); WO 2003/022995 (пример 9; фиг. 13А, Пример 53; с. 173, Пример 2; фиг. 2А); NP036581 эпителиальный антиген предстательной железы с шестью трансмембранными сегментами; перекрестные ссылки: MIM: 604415; NP036581.1; NM 012449.1;</p> <p>(4) 0772Р (СА125, MUC16, номер доступа Genbank AF361486); J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)); WO 2004/045553 (п.14 формулы изобретения); WO 2002/92836 (п.6 формулы изобретения; фиг. 12); WO 2002/83866 (п.15 формулы изобретения; с. 116-121); US2003/124140 (пример 16); перекрестные ссылки: GI: 34501467; AAK74120.3; AF361486.1;</p> <p>(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, мегакариоцит-потенцирующий фактор, мезотелин, номер доступа Genbank NM 005823) Yamaguchi, N, et al. Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (1):136-140 (1996), J. Biol. Chem. 270 (37):21984-21990 (1995)); WO 2003/101283 (п.14 формулы изобретения); (WO 2002/102235 (п.13 формулы изобретения; с. 287-288); WO 2002/101075 (п.4 формулы изобретения; с. 308-309); WO 2002/71928 (с. 320-321); WO 94/10312 (с. 52-57); перекрестные ссылки: MIM:601051; NP 005814.2; NM 005823.1;</p> <p>(6), Napi3b (NAPI-3B, NaPi2B, NPTIIb, SLC34A2, семейство носителей растворимых агентов 34 (фосфат натрия), член 2, натрий-зависимый фосфатный транспортер 3b, номер доступа Genbank NM 006424), J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics, 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A, et al. (1999), Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); WO 2004/022778 (п.2 формулы изобретения); ЕР1394274 (пример 11); WO 2002/102235 (п.13 формулы изобретения; с. 326); ЕР0875569 (п.1 формулы изобретения; с. 17-19); WO 2001/57188 (п.20 формулы изобретения; с. 329); WO 2004/032842 (пример IV); WO 2001/75177 (п.24 формулы изобретения; с. 139-140); перекрестные ссылки: MIM: 604217; NP 006415.1; NM 006424 1. В определенных вариантах реализации соединения, представляющие собой конъюгаты, согласно настоящему изобретению содержат aHTH-NaPi2B антитела. В одном варианте реа- 22 027910</p> <p>лизации изобретения aHTu-NaPi2B антитело конъюгата ADC согласно изобретению содержит (a) CDR L1, представленную в SEQ ID NO:1; (b) CDR L2, представленную в SEQ ID NO:2; (с) CDR L3, представленную в SEQ ID NO:3; (d) CDR H1, представленную в SEQ ID NO:4; (e) CDR H2, представленную в SEQ ID NO:5; (f) CDR H3, представленную в SEQ ID NO:6. В одном варианте реализации указанное антитело содержит последовательности V<sub>H</sub> и V<sub>L</sub>, представленные в SEQ ID NO:8 и SEQ ID NO:7 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В одном варианте реализации указанное антитело содержит последовательности тяжелой и легкой цепей, представленные в SEQ ID NO:10 и SEQ ID NO:9 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей.</p> <table border="1"> <tr><td> SEQ ID N0:1</td><td> RSSETLVHSSGNTYLE</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:2</td><td> RVSNRFS</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:3</td><td> FQGSFNPLT</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:4</td><td> GFSFSDFAMS</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:5</td><td> ATIGRVAFHTYYPDSMKG</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:6</td><td> ARHRGFDVGHFDF</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:7</td><td> DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSETLVHSSGNTYLEWYQQ KPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPED FATYYCFQGSFNPLTFGQGTKVEIKR</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:8</td><td> EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSDFAMSWVRQAP GKGLEWVATIGRVAFHTYYPDSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMN SLRAEDTAVYYCARHRGFDVGHFDFWGQGTLVTVSS</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:9</td><td> DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSETLVHSSGNTYLEWYQQ KPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPED FATYYCFQGSFNPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLK SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDS KDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR</td></tr> <tr><td> </td><td> GEC</td></tr> <tr><td> SEQ ID N0:10</td><td> EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSDFAMSWVRQAP GKGLEWVATIGRVAFHTYYPDSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMN SLRAEDTAVYYCARHRGFDVGHFDFWGQGTLVTVSSCSTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTK VDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK</td></tr> </table> <p>(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, семафорин 5b Hlog, сема-домен, семь повторов тромбоспондина (1 типа и подобного 1 типу), трансмембранный домен (ТМ) и короткий цитоплазматический домен, (семафорин) 5В, номер доступа Genbank AB040878); Nagase T., et al. (2000), DNA Res. 7 (2):143-150); WO 2004/000997 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/003984 (п.1 формулы изобретения); WO 2002/06339 (п.1 формулы изобретения; с. 50); WO 2001/88133 (п.1 формулы изобретения; с. 41-43, 48-58); WO 2003/054152 (п.20 формулы изобретения); WO 2003/101400 (п.11 формулы изобретения); доступ: Q9P283; EMBL; AB040878; ВАА95969.1. Genew; HGNC: 10737;</p> <p>(8) , PSCA hIg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN кДНК 2700050С12, RIKEN кДНК 2700050C12 ген, номер доступа Genbank AY358628); Ross et al. (2002), Cancer Res. 62:2546-2553; US2003/129192 (п.2 формулы изобретения); US2004/044180 (п.12 формулы изобретения); US2004/044179 (п.11 формулы изобретения); US2003/096961 (п.11 формулы изобретения); US2003/232056 (пример 5); WO 2003/105758 (п.12 формулы изобретения); US2003/206918 (пример 5); ЕР1347046 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/025148 (п.20 формулы изобретения); перекрестные ссылки: GI: 37182378; AAQ88991.1; AY358628.1;</p> <p>(9) ETBR (рецептор эндотелина типа В, номер доступа Genbank AY275463); Nakamuta M., et al.</p> <p>Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991; Arai H., et al. Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H, et al. J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 656-663, 1991; Elshourbagy</p> <p>- 23 027910</p> <p>N.A., et al. J. Biol. Chem. 268, 3873-3879, 1993; Haendler В., et al. J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., et al. Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 1689916903, 2002; Bourgeois C., et al. J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., et al. Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., et al. Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., et al. Eur. J. Hum. Genet. 5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G., et al. Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie Т., et al., Hum. Mol. Genet. 4, 2407-2409, 1995; Auricchio A., et al. Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J., et al. Hum. Mol. Genet. 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., et al. Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J, et al. Hum. Genet. 103, 145-148, 1998; Fuchs S., et al. Mol. Med. 7, 115-124, 2001; Pingault V., et al. (2002), Hum. Genet. 111, 198-206; WO 2004/045516 (п.1 формулы изобретения); WO 2004/048938 (пример 2); WO 2004/040000 (п.151 формулы изобретения); WO 2003/087768 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/016475 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/016475 (п.1 формулы изобретения); WO 2002/61087 (фиг. 1); WO 2003/016494 (фиг. 6); WO 2003/025138 (п.12 формулы изобретения; с. 144); WO 2001/98351 (п.1 формулы изобретения; с. 124-125); ЕР0522868 (п.8 формулы изобретения; фиг. 2); WO 2001/77172 (п.1 формулы изобретения; с. 297-299); US2003/109676; US6518404 (фиг. 3); US5773223 (п.1а формулы изобретения; колонки 31-34); WO 2004/001004;</p> <p>(10) MSG783 (RNF124, гипотетический белок FLJ20315, номер доступа Genbank NM 017763); WO 2003/104275 (п.1 формулы изобретения); WO 2004/046342 (пример 2); WO 2003/042661 (п.12 формулы изобретения); WO 2003/083074 (п.14 формулы изобретения; с. 61); WO 2003/018621 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/024392 (п.2 формулы изобретения; фиг. 93); WO 2001/66689 (пример 6); перекрестные ссылки: LocusID:54894; NP060233.2; NM 017763.1;</p> <p>(11) STEAP2 (HGNC 8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, ассоциированный с раком предстательной железы ген 1, ассоциированный с раком предстательной железы белок 1, антиген эпительных клеток предстательной железы с шестью трансмембранными сегментами 2, белок предстательной железы с шестью трансмембранными сегментами, номер доступа Genbank AF455138); Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); WO 2003/087306; US2003/064397 (п.1 формулы изобретения; фиг. 1); WO 2002/72596 (п.13 формулы изобретения; с. 54-55); WO 2001/72962 (п.1 формулы изобретения; фиг. 4В); WO 2003/104270 (п.11 формулы изобретения); WO 2003/104270 (п.16 формулы изобретения); US2004/005598 (п.22 формулы изобретения); WO 2003/042661 (п.12 формулы изобретения); US2003/060612 (п.12 формулы изобретения; фиг. 10); WO 2002/26822 (п.23 формулы изобретения; фиг. 2); WO 2002/16429 (п.12 формулы изобретения; фиг. 10); перекрестные ссылки: GI: 22655488; AAN04080.1; AF455138.1;</p> <p>(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, катионный канал транзиторного рецепторного потенциала, подсемейство М, член 4, номер доступа Genbank NM 017636); Xu, X.Z., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem. 278 (33):3081330820 (2003)); US2003/143557 (п.4 формулы изобретения); WO 2000/40614 (п.14 формулы изобретения; с. 100-103); WO 2002/10382 (п.1 формулы изобретения; фиг. 9А); WO 2003/042661 (п.12 формулы изобретения); WO 2002/30268 (п.27 формулы изобретения; с. 391); US2003/219806 (п.4 формулы изобретения); WO 2001/62794 (п.14 формулы изобретения; фиг. 1A-D); перекрестные ссылки: MIM: 606936; NP060106.2; NM 017636.1;</p> <p>(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, фактор роста тератокарциномного происхождения, номер доступа Genbank NP003203 или NM003212); Ciccodicola, A., et al. EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991)); US2003/224411 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/083041 (пример 1); WO 2003/034984 (п.12 формулы изобретения); WO 2002/88170 (п.2 формулы изобретения; Page 52-53); WO 2003/024392 (п.2 формулы изобретения; фиг. 58); WO 2002/16413 (п.1 формулы изобретения; с. 94-95, 105); WO 2002/22808 (п.2 формулы изобретения; фиг. 1); US5854399 (пример 2; колонки 17-18); US5792616 (фиг. 2); перекрестные ссылки: MIM: 187395; NP 003203.1; NM 003212.1;</p> <p>(14) CD21 (CR2 (рецептор комплемента 2) или C3DR (С3б/рецептор к вирусу Эпштейна-Барра) или Hs.73792 Номер доступа Genbank M26004); Fujisaku et al. (1989), J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J., et al. J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 91949198, 1987; Barel M., et al. Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., et al. (1993), J. Immunol. 150, 5311-5320; WO 2004/045520 (пример 4); US2004/005538 (пример 1); WO 2003/062401 (п.9 формулы изобретения); WO 2004/045520 (пример 4); WO 91/02536 (фиг. 9.1-9.9); WO 2004/020595 (п.1 формулы изобретения); доступ: Р20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; ААА35786.1;</p> <p>(15) CD79b (CD79B, CD793, IGb (иммуноглобулин-ассоциированный бета), В29, номер доступа Genbank NM 000626 или 11038674); Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002), 100 (9):3068-3076, Muller et al. (1992), Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625); WO 2004/016225 (п.2 формулы изобретения, фиг. 140); WO 2003/087768, US2004/101874 (п.1 формулы изобретения, с. 102); WO 2003/062401 (п.9 формулы изобретения); WO 2002/78524 (пример 2); US2002/150573 (п.5 формулы изобретения, с. 15); US5644033; WO 2003/048202 (п.1 формулы изобретения, с. 306 и 309); WO 99/58658, US6534482 (п.13 формулы изобретения, фиг. 17А/В); WO 2000/55351 (п.11, с. 1145-1146); перекрестные ссылки: MIM: 147245; NP 000617.1; NM 000626.1;</p> <p>- 24 027910</p> <p>(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (содержащий SH2-jo\ich фосфатазный якорный белок 1а), SPAP1 В, SPAP1C, номер доступа Genbank NM 030764, AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98</p> <p>(17):9772-9777 (2001), Xu, M.J, et al. (2001), Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775; WO</p> <p>2004/016225 (п.2 формулы изобретения); WO 2003/077836; WO 2001/38490 (п.5 формулы изобретения; фиг. 18D-1-18D-2); WO 2003/097803 (п.12 формулы изобретения); WO 2003/089624 (п.25 формулы изобретения); перекрестные ссылки: MIM: 606509; NP 110391.2; NM 030764.1;</p> <p>(17) Her2 (ErbB2, номер доступа Genbank M11730); Coussens L, et al. Science, (1985), 230(4730):1132-1139); Yamamoto Т., et al. Nature, 319, 230-234, 1986; Semba K., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., et al. J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004; Kuhns J.J., et al. J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., et al. Nature, 421, 756-760, 2003; Ehsani A., et al. (1993), Genomics 15, 426-429; WO 2004/048938 (пример 2); WO 2004/027049 (фиг. 11); WO 2004/009622; WO 2003/081210; WO 2003/089904 (п.9 формулы изобретения); WO 2003/016475 (п.1 формулы изобретения); US2003/118592; WO 2003/008537 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/055439 (п.29 формулы изобретения; фиг. 1А-В); WO 2003/025228 (п.37 формулы изобретения; фиг. 5С); WO 2002/22636 (пример 13; с. 95-107); WO 2002/12341 (п.68 формулы изобретения; фиг. 7); WO 2002/13847 (с. 71-74); WO 2002/14503 (с. 114-117); WO 2001/53463 (п.2 формулы изобретения; с. 41-46); WO 2001/41787 (с. 15); WO 2000/44899 (п.52 формулы изобретения; фиг. 7); WO 2000/20579 (п.3 формулы изобретения; фиг. 2); US5869445 (п.3; колонки 31-38); WO 9630514 (п.2 формулы изобретения; с. 56-61); ЕР1439393 (п.7 формулы изобретения); WO 2004/043361 (п.7 формулы изобретения); WO 2004/022709; WO 2001/00244 (пример 3; фиг. 4); доступ: Р04626; EMBL; M11767; ААА35808.1. EMBL; M11761; ААА35808.1. В определенных вариантах реализации соединения, представляющие собой конъюгаты, согласно настоящему изобретению содержат анти-Her2 антитела. В одном варианте реализации настоящего изобретения антиHer2 антитело конъюгата ADC согласно изобретению содержит гуманизированное анти-Her2 антитело, например, huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 и huMAb4D5-8, как показано в табл. 3 документа US 5821337. Указанные антитела содержат каркасные области человека, содержащие определяющие комплементарность области мышиного антитела (4D5), связывающегося с Her2. Гуманизированное антитело huMAb4D5-8, также называемое трастузумабом, коммерчески доступно под торговым названием ГЕРЦЕПТИН (HERCEPTIN). В другом варианте реализации настоящего изобретения анти-Her2 антитело конъюгата ADC согласно настоящему изобретению содержит гуманизированное анти-Her2 антитело, например, гуманизированное 2С4, описанное в патенте US7862817. Типичное гуманизированное 2С4 антитело представляет собой пертузумаб, коммерчески доступный под торговым названием ПЕРЬЕТА (PERJETA);</p> <p>(18) NCA (CEACAM6, номер доступа Genbank M18728); Barnett Т., et al. Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903, 2002; WO 2004/063709; EP1439393 (п.7 формулы изобретения); WO 2004/044178 (пример 4); WO 2004/031238; WO 2003/042661 (п.12 формулы изобретения); WO 2002/78524 (пример 2); WO 2002/86443 (п.27 формулы изобретения; с. 427); WO 2002/60317 (п.2 формулы изобретения); доступ: Р40199; Q14920; EMBL; M29541; ААА59915.1. EMBL; M18728;</p> <p>(19) MDP (DPEP1, номер доступа Genbank BC017023); Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):1689916903 (2002)); WO 2003/016475 (п.1 формулы изобретения); WO 2002/64798 (п.33 формулы изобретения; с. 85-87); JP05003790 (фиг. 6-8); WO 99/46284 (фиг. 9); перекрестные ссылки: MIM:179780; ААН17023.1; ВС017023.1;</p> <p>(20) IL20Ra (IL20Ra, ZCYTOR7, номер доступа Genbank AF184971); Clark H.F., et al. Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., et al. Nature, 425, 805-811, 2003; Blumberg H., et al. Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., et al. J. Immunol. 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J , et al. J. Biol. Chem. 277, 4751747523, 2002; Pletnev S., et al. (2003), Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., et al. (2004), J. Immunol. 172, 2006-2010; EP1394274 (пример 11); US2004/005320 (пример 5); WO 2003/029262 (с. 74-75); WO 2003/002717 (п.2 формулы изобретения; с. 63); WO 2002/22153 (с. 45-47); US2002/042366 (с. 20-21); WO 2001/46261 (с. 57-59); WO 2001/46232 (с. 63-65); WO 98/37193 (п.1 формулы изобретения; с. 55-59); доступ: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1;</p> <p>(21) Brevican (BCAN, ВЕНАВ, номер доступа Genbank AF229053); Gary S.C., et al. Gene 256, 139147, 2000; Clark H.F., et al. Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; US2003/186372 (п.11 формулы изобретения); US2003/186373 (п.11 формулы изобретения); US2003/119131 (п.1 формулы изобретения; фиг. 52); US2003/119122 (п.1 формулы изобретения; фиг. 52); US2003/119126 (п.1 формулы изобретения); US2003/119121 (п.1 формулы изобретения; фиг. 52); US2003/119129 (п.1 формулы изобретения); US2003/119130 (п.1 формулы изобретения); US2003/119128 (п.1 формулы изобретения; фиг. 52); US2003/119125 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/016475 (п.1 формулы изобретения); WO 2002/02634 (п.1 формулы изобретения);</p> <p>(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, ЕРНТ3, Tyro5, номер доступа Genbank NM 004442); Chan, J. and Watt, V.M., Oncogene, 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene, 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO 2003042661 (п.12 формулы изобретения);</p> <p>- 25 027910</p> <p>WO 200053216 (п.1 формулы изобретения; с. 41); WO 2004065576 (п.1 формулы изобретения); WO 2004020583 (п.9 формулы изобретения); WO 2003004529 (с. 128-132); WO 200053216 (п.1 формулы изобретения; с. 42); перекрестные ссылки: MIM: 600997; NP 004433.2; NM 004442.1;</p> <p>(23) ASLG659 (B7h, номер доступа Genbank AX092328); US2004/0101899 (п.2 формулы изобретения); WO 2003104399 (п.11 формулы изобретения); WO 2004000221 (фиг. 3); US2003/165504 (п.1 формулы изобретения); US2003/124140 (пример 2); US2003/065143 (фиг. 60); WO 2002/102235 (п.13 формулы изобретения; с. 299); US2003/091580 (пример 2); WO 2002/10187 (п.6 формулы изобретения; фиг. 10); WO 2001/94641 (п.1 формулы изобретения; фиг. 7b); WO 2002/02624 (п.13 формулы изобретения; фиг. 1А-1В); US2002/034749 (п.54 формулы изобретения; с. 45-46); WO 2002/06317 (пример 2; с. 320-321, пункт 34 формулы изобретения; с. 321-322); WO 2002/71928 (с. 468-469); WO 2002/02587 (пример 1; фиг. 1); WO 2001/40269 (пример 3; с. 190-192); WO 2000/36107 (пример 2; с. 205-207); WO 2004/053079 (п.12 формулы изобретения); WO 2003/004989 (п.1 формулы изобретения); WO 2002/71928 (с. 233-234, 452-453); WO 01/16318;</p> <p>(24), PSCA (предшественник антигена стволовых клеток предстательной железы, номер доступа Genbank AJ297436); Reiter R.E., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998; Gu Z., et al. Oncogene, 19, 1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000), 275(3)783-788; WO 2004/022709; EP1394274 (пример 11); US2004/018553 (п.17 формулы изобретения); WO 2003/008537 (п.1 формулы изобретения); WO 2002/81646 (п.1 формулы изобретения; с. 164); WO 2003/003906 (п.10 формулы изобретения; с. 288); WO 2001/40309 (пример 1; фиг. 17); US2001/055751 (пример 1; фиг. 1b); WO 2000/32752 (п.18 формулы изобретения; фиг. 1); WO 98/51805 (п.17 формулы изобретения; с. 97); WO 98/51824 (п.10 формулы изобретения; с. 94); WO 98/40403 (п.2 формулы изобретения; фиг. 1В); доступ: O43653; EMBL; AF043498; ААС39607.1;</p> <p>(25) GEDA (Номер доступа Genbank AY260763); ААР14954 белок подобный партнеру по слиянию</p> <p>липомы/р10=ЛАР14954.1 - Homo sapiens (человек); WO 2003/054152 (п.20 формулы изобретения); WO 2003/000842 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/023013 (пример 3, п.20 формулы изобретения); US2003/194704 (п.45 формулы изобретения); перекрестные ссылки: GI: 30102449; ЛЛР14954.1; AY260763.1;</p> <p>(26) BAFF-R (рецептор фактора активации B-клеток, BLyS рецептор 3, BR3, номер доступа Genbank AF116456); BAFF рецептор/pid=NP 443177.1 - Homo sapiens: Thompson, J.S., et al. Science, 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO 2004/058309; WO 2004/011611; WO 2003/045422 (пример; с. 32-33); WO 2003/014294 (п.35 формулы изобретения; фиг. 6В); WO 2003/035846 (п.70 формулы изобретения; с. 615-616); WO 2002/94852 (колонка 136-137); WO 2002/38766 (п.3 формулы изобретения; с. 133); WO 2002/24909 (пример 3; фиг. 3); перекрестные ссылки: MIM: 606269; NP 443177.1; NM 052945.1; AF132600;</p> <p>(27) CD22 (B-клеточный рецептор, изоформа CD22-B, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814, номер доступа Genbank AK026467); Wilson et al. (1991), J. Exp. Med. 173:137-146; WO 2003/072036 (п.1 формулы изобретения; фиг. 1); перекрестные ссылки: MIM: 107266; NP 001762.1; NM 001771 1. В определенных вариантах реализации соединения, представляющие собой конъюгаты, согласно изобретению содержат анти-CD22 антитело конъюгата ADC согласно изобретению, содержащее три гипервариабельные области легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3) и три гипервариабельные области тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3), согласно US 8226945:</p> <table border="1"> <tr><td> HVR-L1</td><td> RSSQSIVHSVGNTFLE</td><td> (SEQ ID N0:11)</td></tr> <tr><td> HVR-L2</td><td> KVSNRFS</td><td> (SEQ ID N0:12)</td></tr> <tr><td> HVR-L3</td><td> FQGSQFPYT</td><td> (SEQ ID N0:13)</td></tr> <tr><td> HVR-H1</td><td> GYEFSRSWMN</td><td> (SEQ ID N0:14)</td></tr> <tr><td> HVR-H2</td><td> GRIYPGDGDTNYSGKFKG</td><td> (SEQ ID N0:15)</td></tr> <tr><td> HVR-H3</td><td> DGSSWDWYFDV</td><td> (SEQ ID N0:16)</td></tr> </table> <p>(28) CD79a (CD79A, CD79a, иммуноглобулин-ассоциированный альфа, специфичный B-клеточный белок, который ковалентно взаимодействует с Ig-бета (CD79B) и образует комплекс на поверхности с 35 молекулами Ig M, передает сигнал, вовлеченный в дифференцировку B-клеток), pI: 4.84, MW: 25028 ТМ: 2 [Р] расположение гена в хромосоме: 19q13.2, номер доступа Genbank NP 001774.10); WO 2003/088808, US2003/0228319; WO 2003/062401 (п.9 формулы изобретения); US2002/150573 (п.4 формулы изобретения, с. 13-14); WO 99/58658 (п.13 формулы изобретения, фиг. 16); WO 92/07574 (фиг. 1); US5644033; На et al. (1992), J. Immunol. 148(5):1526-1531; Muller et al. (1992), Eur. J. Immunol., 22:1621-1625; Hashimoto et al. (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme et al. (1992), Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146; Yu et al. (1992), J. Immunol. 148(2) 633-637; Sakaguchi et al. (1988), EMBO J. 7(11):3457-3464;</p> <p>(29) CXCR5 (Рецептор лимфомы Беркитта 1, связанный с G-белком рецептор, который активируется хемокином CXCL13, функционирует при миграции лимфоцитов и в гуморальных реакциях иммунитета, играет роль в инфекции HIV-2 и, возможно, развитии СПИДа, лимфомы, миеломы и лейкоза); 372 аа, pI: 8.54 MW: 41959 ТМ: 7 [Р] расположение гена в хромосоме: 11q23.3, номер доступа Genbank</p> <p>- 26 027910</p> <p>NP 001707.1); WO 2004/040000; WO 2004/015426; US2003/105292 (пример 2); US6555339 (пример 2); WO 2002/61087 (фиг. 1); WO 2001/57188 (п.20 формулы изобретения, с. 269); WO 2001/72830 (с. 12-13); WO 2000/22129 (пример 1, с. 152-153, пример 2, с. 254-256); WO 99/28468 (п.1 формулы изобретения, с. 38); US5440021 (пример 2, колонки 49-52); WO 94/28931 (с. 56-58); WO 92/17497 (п.7 формулы изобретения, фиг. 5); Dobner et al. (1992), Eur. J. Immunol. 22:2795-2799; Barella et al. (1995), Biochem. J. 309:773779;</p> <p>(30) HLA-DOB (бета-субъединица молекулы МНС класса II (la антиген), которая связывает пептиды и представляет их CD4<sup>+</sup> Т-лимфоцитам); 273 аа, pI: 6.56, MW: 30820.ТМ: 1 [Р] расположение гена в хромосоме: 6р21.3, номер доступа Genbank NP 002111.1); Tonnelle et al. (1985), EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson et al. (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck et al. (1992), J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg et al. (2002), Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius et al. (1987), J. Biol. Chem. 262:87598766; Beck et al. (1996), J. Mol. Biol. 255:1-13; Naruse et al. (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO 99/58658 (п.13 формулы изобретения, фиг. 15); US6153408 (колонки 35-38); US5976551 (колонки 168-170); US6011146 (колонки 145-146); Kasahara et al. (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar et al. (1985), J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119;</p> <p>(31) P2X5 (пуринергический рецепторный Р2Х лиганд-активируемый ионный канал 5, ионный канал, зависимый от внеклеточного АТФ, может быть вовлечен в синаптическую передачу и нейрогенез, недостаточность может вносить вклад в патофизиологию идипатической нестабильности детрузора); 422 аа), pI: 7.63, MW: 47206 ТМ: 1 [Р] расположение гена в хромосоме: 17р13.3, номер доступа Genbank NP 002552.2); Le et al. (1997) FEBS Lett. 418(1-2):195-199; WO 2004/047749; WO 2003/072035 (п.10 формулы изобретения); Touchman et al. (2000) Genome Res. 10:165-173; WO 2002/22660 (п.20 формулы изобретения); WO 2003/093444 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/087768 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/029277 (с. 82);</p> <p>(32) CD72 (антиген B-клеточной дифференцировки CD72, Lyb-2); 359 аа, pI: 8.66, MW: 40225, ТМ: 1 [Р] расположение гена в хромосоме: 9р13.3, номер доступа Genbank NP 001773.1); WO 2004042346 (п.65 формулы изобретения); WO 2003/026493 (с. 51-52, 57-58); WO 2000/75655 (с. 105-106); Von Hoegen et al. (1990), J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg et al. (2002), Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:1689916903;</p> <p>(33) LY64 (антиген лимфоцитов 64 (RP105), мембранный белок I типа семейства лейцин-богатых повторов (LRR), регулирует активацию B-клеток и апоптоз, потеря функции связана с повышенной активностью заболевания у пациентов, страдающих системной красной волчанкой); 661 аа, pI: 6.20, MW: 74147 ТМ: 1 [Р] расположение гена в хромосоме: 5q12, номер доступа Genbank NP005573.1); US2002/193567; WO 97/07198 (п.11 формулы изобретения, с. 39-42); Miura et al. (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura et al. (1998), Blood 92:2815-2822; WO 2003/083047; WO 97/44452 (п.8 формулы изобретения, с. 57-61); WO 2000/12130 (с. 24-26);</p> <p>(34) FcRH1 (белок, подобный Fc-рецептору 1, предполагаемый рецептор для Fc-домена иммуноглобулина, который содержит Ig-подобный домен типа С2 и ITAM-домен, может принимать участие в дифференцировке В-лимфоцитов); 429 аа, pI: 5.28, MW: 46925 ТМ: 1 [Р] расположение гена в хромосоме: 1q21-1q22, номер доступа Genbank NP 443170.1); WO 2003/077836; WO 2001/38490 (п.6 формулы изобретения, фиг. 18Е-1-18-Е-2); Davis et al. (2001), Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO 2003/089624 (п.8 формулы изобретения); ЕР1347046 (п.1 формулы изобретения); WO 2003/089624 (п.7 формулы изобретения);</p> <p>(35) IRTA2 (рецептор иммуноглобулинового надсемейства, асоццированный с транслокацией, 2,</p> <p>предполагаемый иммунорецептор, принимающий возможное участие в развитии B-клеток и лимфомагенезе; при некоторых злокачественных B-клеточных заболеваниях наблюдается дерегуляция гена транслокацией); 977 аа, pI: 6.88, MW: 106468, ТМ: 1 [Р] расположение гена в хромосоме: 1q21, номер доступа Genbank Human:AF343662, AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Mouse:AK089756, AY158090, AY506558; NP 112571.1;</p> <p>WO 2003/024392 (п.2 формулы изобретения, фиг. 97); Nakayama et al. (2000), Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; WO 2003/077836; WO 2001/38490 (п.3 формулы изобретения, фиг. 18В-1-18В-2)</p> <p>(36) TENB2 (TMEFF2, томорегулин, TPEF, HPP1, TR, предполагаемый трансмембранный протеогликан, относящийся к семейству факторов роста EGF/херегулин и фоллистатина); 374 аа, NCBI Accession: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP 057276; NCBI Gene: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; Номер доступа Genbank AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO 2004/074320; JP2004113151; WO 2003/042661; WO 2003/009814; EP1295944 (с. 69-70); WO 2002/30268 (с. 329); WO 2001/90304; US2004/249130; US2004/022727; WO 2004/063355; US2004/197325; US2003/232350; US2004/005563; US2003/124579; Horie et al. (2000) Genomics 67:146-152; Uchida et al. (1999), Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602; Liang et al. (2000), Cancer Res. 60:490712; Glynne-Jones et al. (2001), Int. J. Cancer. Oct 15; 94(2):178-84;</p> <p>(37) CD33 (молекула CD33, SIGLEC-3, SIGLEC3, p67; CD33 антиген (gp67); gp67; миелоидный антиген клеточной поверхности CD33; связывающий сиаловую кислоту Ig-подобный лектин 3; связывающий сиаловую кислоту Ig-подобный лектин); Нуклеотид: номер доступа Genbank M 23197; номер версии</p> <p>- 27 027910</p> <p>Genbank NM 23197.1 GI: 180097; дата обновления записи Genbank: Jun 23, 2010 08:47 AM; Полипептид: Номер доступа Genbank AAA51948; номер версии Genbank AAA51948.1 GI: 188098; дата обновления записи Genbank: Jun 23, 201008:47 AM; Simmons D/, et al. J. Immunol. 141 (8), 2797-2800 (1988); Antibodies: H195 (Lintuzumab), Raza A/, et al. Leuk Lymphoma. 2009 Aug; 50(8):1336-44; US 6759045 (Seattle Genetics/Immunomedics); mAb OKT9: Sutherland, D.R. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78(7): 45154519, 1981, Schneider, C/, et al. J. Biol. Chem. 257, 8516-8522 (1982); mAb E6: Hoogenboom, H.R/, et al. J. Immunol. 144, 3211-3217 (1990); US 6,590,088 (Human Genome Sciences) - например, SEQ ID NOs:1 и 2 и номер доступа АТСС № 97521; US 7557189 (иммуноген) - Например, антитело или его фрагмент, содержащий вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит три CDR, имеющую аминокислотные последовательности SEQ ID NOs:1-3 и вариабельную область легкой цепи, которая содержит три CDR, имеющую аминокислотные последовательности SEQ ID NOs:4-6.</p> <p>В некоторых вариантах реализации aHTu-CD33 антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:20; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:21; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:22; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:17; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:18; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:19.</p> <p>В некоторых вариантах реализации aнти-CD33 антитело содержит последовательности V<sub>H</sub> и V<sub>L</sub>, представленные в SEQ ID NO:24 и SEQ ID NO:23 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей.</p> <p>В некоторых вариантах реализации aнти-CD33 антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:28; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:29; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:30; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:25; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:26; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:27.</p> <p>В некоторых вариантах реализации aнти-CD33 антитело содержит последовательности V<sub>H</sub> и V<sub>L</sub>, представленные в SEQ ID NO:32 и SEQ ID NO:31 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации aнти-CD33 антитело содержит последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:34 и SEQ ID NO:33 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В некоторых вариантах реализации aнти-CD33 антитело содержит последовательности V<sub>H</sub> и V<sub>L</sub>, представленные в SEQ ID NO:36 и SEQ ID NO:35 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей. В одном варианте реализации aнти-CD33 антитело содержит последовательности V<sub>H</sub> и V<sub>L</sub>, представленные в SEQ ID NO:38 и SEQ ID NO:37 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей.</p> <table border="1"> <tr><td> 15G15.33 HVR-L1</td><td> RSSQSLLHSNGYNYLD</td><td> SEQ ID N0:17</td></tr> <tr><td> 15G15.33 HVR-L2</td><td> LGVNSVS</td><td> SEQ ID N0:18</td></tr> <tr><td> 15G15.33 HVR-L3</td><td> MQALQTPWT</td><td> SEQ ID N0:19</td></tr> <tr><td> 15G15.33 HVR-H1</td><td> NHAIS</td><td> SEQ ID N0:20</td></tr> <tr><td> 15G15.33 HVR-H2</td><td> GIIPIFGTANYAQKFQG</td><td> SEQ ID N0:21</td></tr> <tr><td> 15G15.33 HVR-H3</td><td> EWADVFD</td><td> SEQ ID N0:22</td></tr> <tr><td> 15G15.33</td><td> EIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYL</td><td> SEQ ID N0:23</td></tr> </table> <p>- 28 027910</p> <table border="1"> <tr><td> VL</td><td> DWYLQKPGQSPQLLIYLGVNSVSGVPDRFSGSGSGT DFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPWTFGQGTKVEI К</td><td> </td></tr> <tr><td> 15G15.33 VH</td><td> QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGIFSNHAISWV RQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADES TSTAFMELSSLRSEDTAVYYCAREWADVFDIWGQGT MVTVSS</td><td> SEQ ID N0:24</td></tr> <tr><td> 9C3-HVR L1</td><td> RASQGIRNDLG</td><td> SEQ ID N0:25</td></tr> <tr><td> 9C3-HVR L2</td><td> AASSLQS</td><td> SEQ ID N0:26</td></tr> <tr><td> 9C3-HVR L3</td><td> LQHNSYPWT</td><td> SEQ ID N0:27</td></tr> <tr><td> 9C3-HVR Н1</td><td> GNYMS</td><td> SEQ ID N0:28</td></tr> <tr><td> 9C3-HVR Н2</td><td> LIYSGDSTYYADSVKG</td><td> SEQ ID N0:29</td></tr> <tr><td> 9C3-HVR НЗ</td><td> DGYYVSDMVV</td><td> SEQ ID N0:30</td></tr> <tr><td> 9СЗ VL</td><td> DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQ QKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKLEIK</td><td> SEQ ID N0:31</td></tr> <tr><td> 9СЗ VH</td><td> EVQLVESGGALIQPGGSLRLSCVASGFTISGNYMSWV RQAPGKGLEWVSLIYSGDSTYYADSVKGRFNISRDISK NTVYLQMNSLRVEDTAVYYCVRDGYYVSDMVVWGKG TTVTVSS</td><td> SEQ ID N0:32</td></tr> <tr><td> 9С3.2 VL</td><td> DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQ QKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKLEIK</td><td> SEQ ID N0:33</td></tr> <tr><td> 9С3.2 VH</td><td> EVQLVESGGALIQPGGSLRLSCVASGFTISGNYMSWV RQAPGKGLEWVSLIYSGDSTYYADSVKGRFTISRDISK NTVYLQMNSLRVEDTAVYYCVRDGYYVSDMVVWGKG TTVTVSS</td><td> SEQ ID N0:34</td></tr> <tr><td> 9СЗ.З VL</td><td> DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQ QKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKLEIK</td><td> SEQ ID N0:35</td></tr> <tr><td> 9СЗ.З VH</td><td> EVQLVESGGALIQPGGSLRLSCVASGFTISGNYMSWV RQAPGKGLEWVSLIYSGDSTYYADSVKGRFSISRDISK NTVYLQMNSLRVEDTAVYYCVRDGYYVSDMVVWGKG TTVTVSS</td><td> SEQ ID N0:36</td></tr> <tr><td> 9С3.4 VL</td><td> DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQ</td><td> SEQ ID N0:37</td></tr> <tr><td> </td><td> QKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKLEIK</td><td> </td></tr> <tr><td> 9С3.4 VH</td><td> EVQLVESGGALIQPGGSLRLSCVASGFTISGNYMSWV RQAPGKGLEWVSLIYSGDSTYYADSVKGRFAISRDISK NTVYLQMNSLRVEDTAVYYCVRDGYYVSDMVVWGKG TTVTVSS</td><td> SEQ ID N0:38</td></tr> </table> <p>(38) LGR5/GPR49; Нуклеотид: номер доступа Genbank NM 003667; номер версии Genbank NM 003667.2 GI: 24475886; дата обновления записи Genbank: 22 июля, 2012, 03:38 РМ; Полипептид: номер доступа Genbank NP003658; номер версии Genbank NP 003658.1 GI: 4504379; дата обновления записи Genbank: 22 июля, 2012, 03:38 РМ.</p> <p>В некоторых вариантах реализации анти-LGRS антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 46;</p> <p>(b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 47;</p> <p>(c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 48;</p> <p>(d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 43;</p> <p>(e) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 44; и</p> <p>(f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 45.</p> <p>В одном варианте реализации антитело содержит VH и VL последовательности, представленные в SEQ ID NO: 40 и SEQ ID NO: 39 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей.</p> <p>В некоторых вариантах реализации анти-LGRS содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 52; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 53; (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную по- 29 027910</p> <p>следовательность, представленную в SEQ ID NO: 54; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 49; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 50; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 51.</p> <p>В некоторых вариантах реализации aHTu-IgR5 антитело содержит V<sub>H</sub> согласно любому из вариантов реализации, описанных выше, и VL согласно любому из вариантов реализации, описанных выше. В одном варианте реализации указанное антитело содержит последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO:42 и SEQ ID NO:41 соответственно, включая посттрансляционные модификации указанных последовательностей.</p> <table border="1"> <tr><td> 8Е11 VL</td><td> DIVMTQSPDS NYGNSFMHWY GVPDRFSGSG YCQQNYEDPFTF</td><td> LAVS LG E RAT QQKPGQPPKL SGTDFTLTIS GQGTKVEI KR</td><td> INCRASESVD LIYLASNLES SLQAEDVAVY</td><td> SEQ ID N0:39</td></tr> <tr><td> 8Е11 VH</td><td> EVQLVQSGAE</td><td> VKKPGASVKV</td><td> SCKASGYTFS</td><td> SEQ ID N0:40</td></tr> <tr><td> </td><td> AYWIEWVRQA</td><td> PGQGLEWIGE</td><td> ILPGSDSTDY</td><td> </td></tr> <tr><td> </td><td> NEKFKVRATF</td><td> TSDTSTSTVY</td><td> LELSSLRSED</td><td> </td></tr> <tr><td> </td><td colspan="3"> TAVYYCARGG HYGSLDYWGQ GTLVTVSS</td><td> </td></tr> <tr><td> YW353 VL</td><td> DIQMTQSPSS</td><td> LSASVGDRVT</td><td> ITCRASQDVS</td><td> SEQ ID N0:41</td></tr> <tr><td> </td><td> TAVAWYQQKP</td><td> GKAPKLLIYS</td><td> ASFLYSGVPS</td><td> </td></tr> <tr><td> </td><td> RFSGSGSGTD</td><td> FTLTISSLQP</td><td> EDFATYYCQQ</td><td> </td></tr> <tr><td> </td><td colspan="2"> SYTTPPTFGQ GTKVEIKR</td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> YW353 VH</td><td> EVQLVESGGG</td><td> LVQPGGSLRL</td><td> SCAASGFTFT</td><td> SEQ ID N0:42</td></tr> <tr><td> </td><td> SYSISWVRQA</td><td> PGKGLEWVAE</td><td> IYPPGGYTDY</td><td> </td></tr> <tr><td> </td><td> ADSVKGRFTI</td><td> SADTSKNTAY</td><td> LQMNSLRAED</td><td> </td></tr> <tr><td> </td><td colspan="2"> TAVYYCAKAR LFFDYWGQGT LVTVSS</td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> 8E11-HVR L1</td><td colspan="3"> RASESVDNYG NSFMH</td><td> SEQ ID N0:43</td></tr> <tr><td> 8Е11- HVR L2</td><td colspan="3"> LASNLES</td><td> SEQ ID N0:44</td></tr> <tr><td> 8E11- HVR L3</td><td colspan="3"> QQNYEDPFT</td><td> SEQ ID N0:45</td></tr> <tr><td> 8E11-HVR H1</td><td colspan="3"> GYTFSAYWIE</td><td> SEQ ID N0:46</td></tr> <tr><td> 8E11-HVR H2</td><td colspan="3"> EILPGSDSTD YNEKFKV</td><td> SEQ ID N0:47</td></tr> <tr><td> 8E11-HVR H3</td><td colspan="3"> GGHYGSLDY</td><td> SEQ ID N0:48</td></tr> <tr><td> YW353 HVR L1</td><td colspan="3"> RASQDVSTAV A</td><td> SEQ ID N0:49</td></tr> <tr><td> YW353 HVR L2</td><td colspan="3"> SASFLYS</td><td> SEQ ID N0:50</td></tr> <tr><td> YW353 HVR L3</td><td colspan="3"> QQSYTTPPT</td><td> SEQ ID N0:51</td></tr> <tr><td> YW353 HVR H1</td><td colspan="3"> GFTFTSYSIS</td><td> SEQ ID N0:52</td></tr> <tr><td> YW353 HVR H2</td><td colspan="3"> EIYPPGGYTD YADSVKG</td><td> SEQ ID N0:53</td></tr> <tr><td> YW353 HVR H3</td><td colspan="3"> ARLFFDY</td><td> SEQ ID N0:54</td></tr> </table> <p>Родительское антитело также может представлять собой гибридный белок, содержащий последовательность альбумин-связывающего пептида (АВР) (Dennis et al. (2002) &quot;Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins&quot;, J. Biol. Chem. 277:35035-35043; WO 01/45746). Антитела согласно изобретению включают гибридные белки, содержащие последовательности АВР, описанные в документах: (i) Dennis et al. (2002), J. Biol. Chem. 277:35035-35043 в табл. III и IV, с. 35038; (ii) US 2004/0001827 в [0076] и (iii) WO 01/45746 на с. 12, 13, полностью включенных в настоящее описание посредством ссылки.</p> <p>В одном варианте реализации указанное антитело сконструировано для специфического нацеливания на опухолеассоциированный антиген α<sub>γ</sub>β<sub>6</sub>.</p> <p>Связывающийся с клетками агент может быть меченым, например, для облегчения обнаружения или очистки агента либо до его встраивания в конъюгат, либо в часть конъюгата. Метка может представлять собой биотиновую метку. Согласно другому варианту реализации связывающийся с клетками агент может быть меченным радиоактивным изотопом.</p> <p>Заместители.</p> <p>Используемая в настоящем описании фраза &quot;необязательно замещенный&quot;, относится к исходной группе, которая может быть незамещенной или замещенной.</p> <p>Если не указано иное, используемый в настоящем описании термин &quot;замещенный&quot; относится к исходной группе, содержащей один или более заместителей. Используемый в настоящем описании термин &quot;заместитель&quot; имеет общепринятое значение и относится к химической функциональной группе, ковалентно присоединенной или, при необходимости, сконъюгированной с исходной группой. Известен широкий ряд заместителей, а также способов их получения и введения в исходные группы.</p> <p>- 30 027910</p> <p>В предпочтительном варианте реализации заместители, описанные в настоящем документе (включая необязательные заместители), ограничены группами, не способными вступать в реакцию со связывающимся с клетками агентом. Связь со связывающимся с клетками агентом в данном случае образуется из мостика между двумя PBD группами через линкерную группу, присоединенную к связывающемуся с клетками агенту. Реакционноспособные функциональные группы, расположенные в других частях структуры PBD, способны образовывать дополнительные связи со связывающимся с клетками агентом (что также называют образованием поперечных связей). Указанные дополнительные связи могут изменять транспортную и биологическую активность конъюгата. Таким образом, в некоторых вариантах реализации дополнительные заместители ограничены заместителями, не вступающими в реакцию.</p> <p>В одном варианте реализации заместители выбраны из группы, состоящей из R, OR, SR, NRR', NO2, галогена, CO2R, COR, CONH2, CONHR и CONRR'.</p> <p>В одном варианте реализации заместители выбраны из группы, состоящей из R, OR, SR, NRR', NO2, CO2R, COR, CONH2, CONHR и CONRR'.</p> <p>В одном варианте реализации заместители выбраны из группы, состоящей из R, OR, SR, NRR', NO2, и галогена.</p> <p>В одном варианте реализации заместители выбраны из группы, состоящей из R, OR, SR, NRR' и</p> <p>NO2.</p> <p>Любой из представленных выше вариантов реализации применим к любому из описанных в настоящем документе заместителей. В качестве альтернативы заместители могут быть выбраны из одной или более перечисленных ниже групп.</p> <p>Более подробно примеры заместителей представлены ниже.</p> <p>СыгАлкил: используемый в настоящем описании термин &quot;Сыгалкил&quot; относится к одновалентной группе, полученной удалением атома водорода от атома углерода в углеводородном соединении, содержащем от 1 до 1г атомов углерода, который может быть алифатическим или алициклическим, и который может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным). Таким образом, термин &quot;алкил&quot; включает подклассы: алкенил, алкинил, циклоалки и т.д., описанные ниже.</p> <p>Примеры насыщенных алкильных групп включают, но не ограничиваются указанными, метил (С<sub>1</sub>), этил (Сг), пропил (С3), бутил (С4), пентил (С5), гексил (С6) и гептил (С7).</p> <p>Примеры насыщенных линейных алкильных групп включают, но не ограничиваются указанными, метил (С1), этил (Сг), н-пропил (С3), н-бутил (С4), н-пентил (амил) (С5), н-гексил (С6) и н-гептил (С7).</p> <p>Примеры насыщенных разветвленных алкильных групп включают изопропил (С3), изобутил (С4), втор-бутил (С4), трет-бутил (С4), изопентил (С5), и неопентил (С5).</p> <p>В алкильную группу необязательно могут быть включены один или более гетероатомов, выбранных из O, N(H) и S. Такие группы могут быть обозначены как &quot;гетероалкил&quot;.</p> <p>Сг-1ггетероалкил: используемый в настоящем описании термин &quot;Сг-1ггетероалкил&quot; относится к одновалентной группе, полученной удалением атома водорода от атома углерода в углеводородном соединении, содержащем от г до 1г атомов углерода и один или более гетероатомов, выбранных из O, N(H) и S, предпочтительно O и S.</p> <p>Примеры гетероалкильных групп включают, но не ограничиваются группами, содержащими одну или более групп этиленгликоля типа -(ОСН<sub>2</sub>СН<sub>2</sub>)-. Концевым фрагментом гетероарильной группы может быть основная форма гетероатома, например -ОН, -SH или -NH<sub>2</sub>. В предпочтительном варианте реализации концевой фрагмент представляет собой -СН3.</p> <p>С2-12Алкенил: используемый в настоящем описании термин &quot;С2-12алкенил&quot; относится к алкильной группе, содержащей одну или более углерод-углеродную двойную связь.</p> <p>Примеры ненасыщенных алкенильных групп включают, но не ограничены указанными, этенил (винил, -СН=СН2), 1-пропенил (-СН=СН-СН3), 2-пропенил (аллил, -СН-СН=СН2), изопропенил (1-метилвинил, -С(СН3)=СН2), бутенил (С4), пентенил (С5), и гексенил (С6).</p> <p>С<sub>2-12</sub>Алкинил: используемый в настоящем описании термин &quot;С<sub>2-12</sub>алкинил&quot; относится к алкильной группе, содержащей одну или более углерод-углеродную тройную связь.</p> <p>Примеры ненасыщенных алкинильных групп включают, но не ограничены указанными, этинил (-С'=СН) и 2-пропинил (пропаргил, -СН<sub>2</sub>-С=СН).</p> <p>С<sub>3-12</sub>Циклоалкил: используемый в настоящем описании термин &quot;С<sub>3-12</sub>циклоалкил&quot; относится к алкильной группе, которая также является циклильной группой; т.е. к одновалентной группе, полученной удалением атома водорода от атома алициклического кольца в циклическом углеводородном (карбоциклическом) соединении, причем указанная группа содержит от 3 до 7 атомов углерода, включая от 3 до 7 кольцевых атомов.</p> <p>Примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются указанными, группы, полученные из</p> <p>насыщенных моноциклических гидрокарбоновых соединений циклопропана (С3), циклобутана (С4), цклопентана (С5), циклогексана (С6), циклогептана (С7), метилциклопропана (С4), диметилциклопропана (С<sub>5</sub>), метилциклобутана (С<sub>5</sub>), диметилциклобутана (С<sub>6</sub>), метилциклопентана (С<sub>6</sub>), диметилциклопентана</p> <p>- 31 027910</p> <p>(С7) и метилциклогексана (С7);</p> <p>ненасыщенных моноциклических гидрокарбоновых соединений циклопропена (С3), циклобутена (С4), циклопентена (С5), циклогексена (С6), метилциклопропена (С4), диметилциклопропена (С5), метилциклобутена (С<sub>5</sub>), диметилциклобутена (С<sub>6</sub>), метилциклопентена (С<sub>6</sub>), диметилциклопентена (С<sub>7</sub>) и метилциклогексена (С7);</p> <p>насыщенных полициклических гидрокарбоновых соединений: норкаран (С<sub>7</sub>), норпинан (С<sub>7</sub>), норборнан (С7).</p> <p>С<sub>3-20</sub>Гетероциклил: используемый в настоящем описании термин &quot;С<sub>3-20</sub>гетероциклил&quot; относится к одновалентной группе, полученной удалением атома водорода от атома кольца в гетероциклическом соединении, причем указанная группа содержит от 3 до 20 атомов в кольце, включая от 1 до 10 кольцевых гетероатомов. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 3 до 7 атомов в кольце, от 1 до 4 из которых являются гетероатомами.</p> <p>В данном контексте префиксы (например, С3-20, С3-7, С5-6 и т.д.) означают число атомов в кольце, или диапазон количества атомов в кольце, независимо от того, являются ли они атомами углерода или гетероатомами. Например, используемый в настоящем описании термин &quot;С<sub>5-6</sub>гетероциклил&quot; относится к гетероциклильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.</p> <p>Примеры моноциклических гетероциклильных групп включают, но не ограничены группами, полученными из следующих:</p> <p>N1: азиридин (С3), азетидин (С4), пирролидин (тетрагидропиррол) (С5), пирролин (например, 3-пирролин, 2,5-дигидропиррол) (С5), 2Н-пиррол или 3Н-пиррол (изопиррол, изоазол) (С5), пиперидин (С6), дигидропиридин (С6), тетрагидропиридин (С6), азепин (С7);</p> <p>O1: оксиран (С3), оксетан (С4), оксолан (тетрагидрофуран) (С5), оксол (дигидрофуран) (С5), оксан (терагидропиран) (С6), дигидропиран (С6), пиран (С6), оксепин (С7);</p> <p>S1: тииран (C3), тиэтан (С4), тиолан (тетрагидротиофен) (С5), тиан (тетрагидротиопиран) (С6), тиепан</p> <p>(С7);</p> <p>О2: диоксалан (С5), диоксан (С6), и диоксепан (С7);</p> <p>О3:триоксан (С6);</p> <p>N2: имидазолил (С5), пиразолидин (диазолидин) (С5), имидазолин (С5), пиразолин (дигидропиразол) (С5), пиперазин (С6);</p> <p>N1O1: тетрагидрооксазол (С5), дигидрооксазол (С5), тетрагидроизоксазол (С5), дигидроизоксазол (С5), морфолин (С6), тетрагидрооксазин (С6), дигидрооксазин (С6), оксазин (С6);</p> <p>N1S1: тиазолин (С5), тиазолидин (С5), тиоморфолин (С6);</p> <p>N2O1: оксадиазин (С6);</p> <p>O1S1: оксатиол (С5) и оксатиан (тиоксан) (С6);</p> <p>N1O1S1: оксатиазин (С6).</p> <p>Примеры замещенных моноциклических гетероциклильных групп включают группы, полученные из сахаридов, в циклической форме, например фураноз (С5), таких как арабинофураноза, ликсофураноза, рибофураноза, и ксилофураназа, и пираноз (С6), таких как аллопираноза, алтропираноза, глюкопираноза, маннопираноза, гулопираноза, идопираноза, галактопираноза, и талопираноза.</p> <p>С<sub>5-20</sub>Арил: используемый в настоящем описании термин &quot;С<sub>5-20</sub>арил&quot; относится к одновалентной группе, полученной удалением атома водорода от атома ароматического кольца в ароматическом соединении, причем указанная группа содержит от 3 до 20 атомов в кольце. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 5 до 7 атомов в кольце.</p> <p>В данном контексте префиксы (например, С3-20, C3-7, С5-6 и т.д.) означают число атомов в кольце, или диапазон количества атомов в кольце, независимо от того, являются ли они атомами углерода или гетероатомами. Например, используемый в настоящем описании термин &quot;С5-6арил&quot; относится к арильной группе, содержащей 5 или 6 атомов в кольце.</p> <p>Атомы в кольце могут представлять собой атомы углерода, как и для термина &quot;карбоарильные группы&quot;.</p> <p>Примеры карбоарильных групп включают, но не ограничиваются группами, полученными из бензола (т.е. фенил) (С6), нафталина (С10), азулена (С10), антрацена (C14), фенантрена (C14), нафтацена (C18) и пирена (C16).</p> <p>Примеры арильных групп, содержащих сконденсированные кольца, по меньшей мере одно из которых является ароматическим кольцом, включают, но не ограничиваются группами, полученными из индана (например, 2,3-дигидро-1Н-инден) (С9), индена (С9), изоиндена (С9), тетралина (1,2,3,4тетрагидронафталена (С10), аценафтена (С12), флуорена (С13), феналена (С13), ацефенантрена (С15) и ацеантрена (С16).</p> <p>В качестве альтернативы атомы кольца могут включать один или более гетероатомов, как определено для &quot;гетероарильных групп&quot;. Примеры моноциклических гетероарильных групп включают, но не ограничиваются группами, полученными из следующих:</p> <p>N1: пиррол (азол) (С5), пиридин (азин) (С6);</p> <p>O1: фуран (оксол) (С5);</p> <p>- 32 027910</p> <p>S1: тиофен (тиол) (С5);</p> <p>N1O1: оксазол (С5), изоксазол (С5), изоксазин (С6);</p> <p>N2O1: оксадиазол (фуразан) (С5);</p> <p>N3O1: оксатриазол (С5);</p> <p>N1S1: тиазол (С5), изотриазол (С5);</p> <p>N2: имидазол (1,3-диазол) (С5), пиразол (1,2-диазол) (С5), пиридазин (1,2-диазин) (С6), пиримидин (1,3-диазин) (С6) (например, цитозин, тимин, урацил), пиразин (1,4-диазин) (С6);</p> <p>N3: триазол (С5), триазин (С6); и, N4: тетразол (С5).</p> <p>Примеры гетероарилов, содержащих сконденсированные кольца, включают, но не ограничены следующими:</p> <p>С9 (с двумя сконденсированными кольцами), полученный из бензофурана (O1), изобензофурана (O1), индола (N1), изоиндола (N1), индолизина (N1), индолина (N1), изоиндолина (N1), пурина (N4) (например, аденина, гуанина), бензимидазола (N2), индазола (N2), бензоксазола (N1O1), бензизоксазола (N1O1), бензодиоксола (О2), бензофуразана (N2O1), бензотриазола (N3), бензотиофурана (S1), бензотиазола (N1S1), бензотиадиазепина (N2S);</p> <p>C<sub>10</sub> (с двумя сконденсированными кольцами), полученный из хромена (d), изохромена (O<sub>1</sub>), хромана (d), изохромана (d), бензодиоксана (О2), хинолина (N1), изохинолина (N1), хинолизина (N1), бензоксазина (N1O1), бнзодиазина (N2), пиридопиридина (N2), хиноксалина (N2), хиназолина (N2), циннолина (N2), фталазина (N2), нафтиридина (N2), птеридина (N4);</p> <p>C<sub>11</sub> (с двумя сконденсированными кольцами), полученный из бензодиазепина (N<sub>2</sub>);</p> <p>С13 (с тремя сконденсированными кольцами), полученный из карбазола (N1), дибензофурана (d), дибензотиофена (S1), карболина (N2), пиримидина (N2), пиридоиндола (N2); и</p> <p>С14 (с тремя сконденсированными кольцами), полученный из акридина (N1), ксантена (O1), тиоксантена (S1), оксантрена (О2), феноксатиина (O1S1), феназина (N2), феноксазина (N1O1), фенотиазина (N1S1), тиантрена (S2), фенантридина (N1), фенантролина (N2), феназина (N2).</p> <p>Приведенные выше группы, отдельно или как часть другого заместителя, могут сами необязательно быть замещены одной или более группами, выбранными из указанных групп и дополнительных заместителей, приведенных ниже.</p> <p>Галоген: -F, -Cl, -Br и -I. гидрокси: -OH.</p> <p>Эфир: -OR, где R представляет собой эфирный заместитель, например С^алкильную группу (также называется Cl<sub>-</sub>7алкокси группой, как описано ниже), С<sub>3-2</sub>огетероциклильную группу (также называется С3-20гетероциклилокси группой), или С5-20арильную группу (также называется С5-20арилокси группой), предпочтительно С1-7алкильную группу.</p> <p>Алкокси: -OR, где R представляет собой алкильную группу, например С1-7алкильную группу. Примеры C'V-алкокси групп включают, но не ограничены указанными, -ОМе (метокси), -OEt (этокси), -О(иРг) (н-пропокси), -O(iPr) (изопропокси), -O(nBu) (н-бутокси), -O(sBu) (втор-бутокси), -O(iBu) (изобутокси) и -O(tBu) (трет-бутокси).</p> <p>Ацеталь: -CH(OR<sup>1</sup>)(OR<sup>2</sup>), где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> независимо представляют собой ацетальные заместители, например С<sub>1-7</sub>алкильную группу, С<sub>3-2о</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-2о</sub>арильную группу, предпочтительно С<sub>1-7</sub>алкильную группу, или в случае &quot;циклической&quot; ацетальной группы R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> совместно с двумя атомами кислорода, к которым они присоединены, и атом углерода, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Примеры ацетальных групп включают, но не ограничены указанными, -СН(ОМе)<sub>2</sub>, -CH(OEt)<sub>2</sub> и -CH(OMe)(OEt).</p> <p>Полуацеталь: -CH(OH)(OR<sup>1</sup>), где R<sup>1</sup> представляет собой полуацетальный заместитель, например, С1-7алкильную группу, С3-2огетероциклильную группу, или С5-2оарильную группу, предпочтительно С1-7алкильную группу. Примеры полуацетальных групп включают, но не ограничиваются указанными, -СН^НХОМе) и -CH(OH)(OEt).</p> <p>Кеталь: -CR(OR<sup>1</sup>)(OR<sup>2</sup>), где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> являются такими как определены для ацеталей, и R представляет собой кетальный заместитель, отличный от водорода, например, С<sub>1-7</sub>алкильную группу, С<sub>3-2о</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-2о</sub>арильную группу, предпочтительно С<sub>1-7</sub>алкильную группу. Примеры кетальных групп включают, но не ограничиваются указанными, -C(Me)(OMe)<sub>2</sub>, -C(Me)(OEt)<sub>2</sub>, -C(Me)(OMe)(OEt), C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2 и -C(Et)(OMe)(OEt).</p> <p>Полукеталь: -CR(OH)(OR<sup>1</sup>), где R<sup>1</sup> является таким, как определено для полуацеталей, и R представляет собой полукетальный заместитель, отличный от водорода, например С<sub>1-7</sub>алкильную группу, С3-2огетероциклильную группу или С5-2оарильную группу, предпочтительно С1-7алкильную группу. Примеры полукетальных групп включают, но не ограничиваются указанными, -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt), и -C(Et)(OH)(OEt).</p> <p>Оксо (кето, -он): =O.</p> <p>Тион (тиокетон): =S.</p> <p>Имино (имин): =NR, где R представляет собой иминный заместитель, например водород, C<sub>1-7</sub>алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно водород или ильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ука- 33 027910</p> <p>занными, =NH, =NMe, =NEt, n=NPh.</p> <p>Формил (карбальдегид, карбоксальдегид): -C(=O)H.</p> <p>Ацил (кето): -C(=O)R, где R представляет собой ацильный заместитель, например С^алкильную группу (также называется ^^алк^лац^и или ^^алкано^л), С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу (также называется С3-20гетероциклилацил) или С5-20арильную группу (также называется С5-20арилацил), предпочтительно С^алкильную группу. Примеры ацильных групп включают, но не ограничиваются указанными, -C(=O)CH<sub>3</sub> (ацетил), -C(=O)CH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> (пропионил), -C(=O)C(CH<sub>3</sub>)<sub>3</sub> (т-бутирил) и -C(=O)Ph (бензоил, фенон).</p> <p>Карбокси (карбоновая кислота): -C(=O)OH.</p> <p>Тиокарбокси (тиокарбоновая кислота): -C(=S)SH.</p> <p>Тиолокарбокси (тиолокарбоновая кислота): -C(=O)SH.</p> <p>Тионокарбокси (тионокарбоновая кислота): -C(=S)OH.</p> <p>Имидокислота: -C(=NH)OH.</p> <p>Гидроксамовая кислота: -C(=NOH)OH.</p> <p>Сложный эфир (карбоксилат, сложный эфир карбоновой кислоты, оксикарбонил): -C(=O)OR, где R представляет собой сложноэфирный заместитель, например Cl_7алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу, или С<sub>5</sub>_<sub>20</sub>арильную группу, предпочтительно Cl_7алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются указанными, -C(=O)OCH<sub>3</sub>, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3 и -C(=O)OPh.</p> <p>Ацилокси (обратный сложный эфир): -OC(=O)R, где R представляет собой заместитель алкокси, например Cl_7алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно Cl_7алкильную группу. Примеры алкокси групп включают, но не ограничиваются указанными, -OC(=O)CH3 (ацетокси), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)QCH3b, -OC(=O)Ph и -OC(=O)CH2Ph.</p> <p>Оксикарбоилокси: -OC(=O)OR, где R представляет собой сложноэфирный заместитель, например Cl_7алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу, или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно Cl_7алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничены указанными, -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC^O^QC^X и -OC(=O)OPh.</p> <p>Амино: -NR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> независимо представляют собой аминные заместители, например, водород, С<sub>1-7</sub>алкильную группу (также называется С^алкиламино или ди-Cl_7алкиламино), С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно Н или С<sub>1-7</sub>алкильную группу, или в случае &quot;циклической&quot; аминогруппы R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 атомов в кольце. Аминогруппы могут быть первичными (-NH<sub>2</sub>), вторичными (-NHR<sup>1</sup>) или третичными (-NHR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>) и могут находиться в катионной форме, могут быть четвертичными (-<sup>+</sup>NR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>R<sup>3</sup>). Примеры аминогрупп включают, но не ограничиваются указанными, -NH<sub>2</sub>, -NHCH<sub>3</sub>, -NHC(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -N(CH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, и -NHPh. Примеры циклических аминогрупп включают, но не ограничиваются указанными, азиридино, азетидино, пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, и тиоморфолино.</p> <p>Амидо (карбамоил, карбамил, аминокарбонил, карбоксамид): -C(=O)NR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> независимо представляют собой аминные заместители, описанные для аминогрупп. Примеры амидных групп включают, но не ограничены указанными, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3 и -C(=O)N(CH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, а также амидные группы, в которых R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup>, совместно с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическую структуру, как, например, пиперидинокарбонил, морфолинокарбонил, тиоморфолинокарбонил, и пиперазинокарбонил.</p> <p>Тиоамидо (тиокарбамил): -C(=S)NR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> независимо представляют собой заместители аминогрупп, как определено для аминогрупп. Примеры амидных групп включают, но не ограничиваются указанными, -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2 и -C(=S)NHCH2CH3.</p> <p>Ациламидо (ациламино): -NR<sup>1</sup>C(=O)R<sup>2</sup>, где R<sup>1</sup> представляет собой заместитель амидной группы, например водород, C<sub>1</sub>_7алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно водород или С<sub>1-7</sub>алкильную группу, и R<sup>2</sup> представляет собой заместитель ацильной группы, например C<sub>1</sub>_7алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно водород или C<sub>1</sub>_7алкильную группу. Примеры ациламидных групп включают, но не ограничиваются указанными, -NHC(=O)CH<sub>3</sub>, -NHC(=O)CH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>, и -NHC(=O)Ph. R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> вместе могут образовывать циклическую структуру, как, например, в сукцинимидиле, малеимидиле и фталимидиле:</p> <p>Аминокарбонилокси: -OC(=O)NR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> независимо представляют собой заместители аминогруппы, как определено для аминогруппы. Примеры аминокарбонилокси групп включают, но не огра- 34 027910</p> <p>ничиваются указанными, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2 и -OC(=O)NEt2.</p> <p>Уреидо: -N(R<sup>1</sup>)CONR<sup>2</sup>R<sup>3</sup>, где R<sup>2</sup> и R<sup>3</sup> независимо представляют собой заместители аминогруппы,</p> <p>как определено для аминогруппы, и R<sup>1</sup> представляет собой заместитель уреидогруппы, например водород, С1_<sub>7</sub>алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно водород или CV-алкильную группу. Примеры уреидогрупп включают, но не ограничиваются указанными, -NHCONH<sub>2</sub>, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe<sub>2</sub>, -NHCONEt<sub>2</sub>, -NMeCONH<sub>2</sub>, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2 и -NMeCONEt2.</p> <p>Гуанидино: -NH-C(=NH)NH<sub>2</sub>.</p> <p>Тетразолил: 5-членное ароматическое кольцо, содержащее четыре атома азота и один атом углерода:</p> <p>Имино: =NR, где R представляет собой заместитель иминогруппы, например водород, ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно Н или С1-7алкильную группу. Примеры иминогрупп включают, но не ограничиваются указанными, =NH, =NMe и =NEt.</p> <p>Амидин (амидино): -C(=NR)NR<sup>2</sup>, где каждый R представляет собой заместитель амидиновой группы, например водород, С1-7алкильную группу, С3-20гетероциклильную группу или С5-20арильную группу, предпочтительно Н или С<sub>1-7</sub>алкильную группу. Примеры амидиновых групп включают, но не ограничиваются ими, -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2 и -C(=NMe)NMe2.</p> <p>Нитро: -NO<sub>2</sub>.</p> <p>Нитрозо: -NO.</p> <p>Азидо: -N3.</p> <p>Циано (нитрил, карбонитрил): -CN.</p> <p>Изоциано: -NC.</p> <p>Цианато: -OCN.</p> <p>Изоцианато: -NCO.</p> <p>Тиоциано (тиоцианато): -SCN.</p> <p>Изотиоциано (изотиоцианато): -NCS.</p> <p>Сульфгидрил (тиол, меркапто): -SH.</p> <p>Тиоэфир (сульфид): -SR, где R представляет собой заместитель тиоэфирной группы, например C<sub>1-7</sub>алкильную группу (которая также называется С<sub>1-7</sub>алкилтиогруппой), С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно С<sub>1-7</sub>алкильную группу. Примеры C<sub>1-7</sub>алкилтиогрупп включают, но не ограничиваются указанными, -SCH3 и -SCH2CH3.</p> <p>Дисульфид: -SS-R, где R представляет собой заместитель дисульфидной группы, например CV-алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно CV-алкильную группу (которая также называется в настоящем описании CV-алкилдисульфидом). Примеры ^^алкилдисульфидных групп включают, но не ограничиваются указанными, -SSCH<sub>3</sub> и -SSCH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>.</p> <p>Сульфин (сульфинил, сульфоксид): -S(=O)R, где R представляет собой заместитель сульфиновой группы, например ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно ^щлкильную группу. Примеры сульфиновых групп включают, но не ограничиваются указанными, -S(=O)CH3 и -S(=O)CH2CH3.</p> <p>Сульфон (сульфонил): -S(=O)2R, где R представляет собой заместитель сульфоновой группы, например C<sub>1-7</sub>алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно CV-алкильную группу, включая, например, фторированную или перфторированную CV-алкильную группу. Примеры сульфоновых групп включают, но не ограничиваются указанными, -S(=O)2CH3 (метансульфонил, мезил), -S(=O)2CF3 (трифлил), -S(=O)2CH2CH3 (езил), -S(=O)2C4F9 (нонафлил), -S(=O)2CH2CF3 (трезил), -S(=O)2CH2CH2NH2 (таурил), -S(=O)2Ph (фенилсульфонил, безил), 4-метилфенилсульфонил (тозил), 4-хлорфенилсульфонил (клозил), 4-бромфенилсульфонил (брозил), 4-нитрофенил (нозил), 2-нафталинсульфонат (напзил) и 5-диметиламинонафталин-1-илсульфонат (данзил).</p> <p>Сульфиновая кислота (сульфино): -S(=O)OH, -SO2H.</p> <p>Сульфоновая кислота (сульфо): -S(=O)2OH, -SO3H.</p> <p>Сульфинат (сложный эфир сульфиновой кислоты): -S(=O)OR; где R представляет собой заместитель сульфинатной группы, например CV-алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно C<sub>1-7</sub>алкильную группу. Примеры сульфинатных групп включают, но не ограничиваются указанными, -S(=O)OCH3 (метоксисульфинил; метилсульфинат) и -S(=O)OCH2CH3 (этоксисульфинил; этилсульфинат).</p> <p>Сульфонат (сложный эфир сульфоновой кислоты): -S(=O)2OR, где R представляет собой заместитель сульфонатной группы, например CV-алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно CV-алкильную группу. Примеры сульфонатных групп включа- 35 027910</p> <p>ют, но не ограничиваются указанными, -S(=O)2OCH3 (метоксисульфонил; метилсульфонат) и -S(=O)2OCH2CH3 (этоксисульфонил; этилсульфонат).</p> <p>Сульфинилокси: -OS(=O)R, где R представляет собой заместитель сульфинилокси группы, например С^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно С1_<sub>7</sub>алкильную группу. Примеры сульфинилокси групп включают, но не ограничиваются указанными, -OS(=O)CH3 и -OS(=O)CH2CH3.</p> <p>Сульфонилокси: -OS(=O)<sub>2</sub>R, где R представляет собой заместитель сульфонилокси группы, например ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно ^^алкильную группу. Примеры сульфонилокси групп включают, но не ограничиваются указанными, -OS(=O)2CH3 (мезилат) и -OS(=O)2CH2CH3 (езилат).</p> <p>Сульфат: -OS(=O)2OR; где R представляет собой заместитель сульфатной группы, например ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно ^^алкильную группу. Примеры сульфатных групп включают, но не ограничиваются указанными, -OS(=O)2OCH3 и -SO(=O)2OCH2CH3.</p> <p>Сульфамил (сульфамоил; амид сульфиновой кислоты; сульфинамид): -S(=O)NR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> независимо представляют собой заместители для аминогрупп, как определено для аминогрупп. Примеры сульфамильных групп включают, но не ограничиваются указанными, -S(=O)NH<sub>2</sub>, -S(=O)NH(CH<sub>3</sub>), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2 и -S(=O)NHPh.</p> <p>Сульфонамидо (сульфинамоил; амид сульфоновой кислоты; сульфонамид): -S(=O)<sub>2</sub>NR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> независимо представляют собой заместители для аминогрупп, как определено для аминогрупп. Примеры сульфонамидных групп включают, но не ограничиваются указанными, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2 и -S(=O)2NHPh.</p> <p>Сульфамино: -NR<sup>1</sup>S(=O)2OH, где R<sup>1</sup> представляет собой заместитель аминогруппы, как определено для аминогрупп. Примеры сульфаминогрупп включают, но не ограничиваются указанными, -NHS(=O)2OH и -N(CH3)S(=O)2OH.</p> <p>Сульфонамино: -NR<sup>1</sup>S(=O)<sub>2</sub>R, где R<sup>1</sup> представляет собой заместитель аминогруппы, как определено для аминогрупп, и R представляет собой заместитель сульфонаминогруппы, например, C<sub>1-7</sub>алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно ^^алкильную группу. Примеры сульфонаминогрупп включают, но не ограничиваются указанными, -NHS(=O)<sub>2</sub>CH<sub>3</sub> и -N(CH3)S(=O)2C6H5.</p> <p>Сульфинамино: -NR<sup>1</sup>S(=O)R, где R<sup>1</sup> представляет собой заместитель аминогруппы, как определено для аминогрупп, и R представляет собой заместитель сульфинаминогруппы, например ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно ^^алкильную группу. Примеры сульфинаминогрупп включают, но не ограничиваются указанными, -NHS(=O)CH3 и -N(CH3)S(=O)C6H55.</p> <p>Фосфино (фосфин): -PR2, где R представляет собой заместитель фосфиногруппы, например, -H, ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно -H, C<sub>1-7</sub>алкильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу. Примеры фосфиногрупп включают, но не ограничиваются указанными, -PH<sub>2</sub>, -P(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -P(CH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -P(m-Bu)<sub>2</sub> и -P(Ph)<sub>2</sub>.</p> <p>Фосфо: -P(=O)<sub>2</sub>.</p> <p>Фосфинил (фосфиноксид): -P(=O)R<sub>2</sub>, где R представляет собой заместитель фосфинильной группы, например, ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно ^^алкильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу. Примеры фосфинильных групп включают, но не ограничиваются указанными, -P(=О)(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -P(=O)(CH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -P(=O)(m-Bu)<sub>2</sub> и -P(=O)(Ph)<sub>2</sub>.</p> <p>Фосфоновая кислота (фосфоно): -P(=O)(OH)<sub>2</sub>.</p> <p>Фосфонат (сложный эфир фосфоногруппы): -P(=O)(OR)2, где R представляет собой заместитель фосфонатной группы, например -H, С<sub>1-7</sub>алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно -H, С<sub>1-7</sub>алкильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу. Примеры фосфонатных групп включают, но не ограничиваются ими, -P(=O)(OCH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -P(=O)(OCH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -P(=O)(O-t-Bu)2 и -P(=O)(OPh)2.</p> <p>Фосфорная кислота (фосфоноокси): -OP(=O)(OH)2.</p> <p>Фосфат (сложный эфир фосфоноокси группы): -OP(=O)(OR)2, где R представляет собой заместитель фосфатной группы, например -H, C<sub>1-7</sub>алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно -H, C<sub>1-7</sub>алкильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу. Примеры фосфатных групп включают, но не ограничиваются указанными, -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2 и -OP(=O)(OPh)2.</p> <p>Фосфористая кислота: -OP(OH)2.</p> <p>Фосфит: -OP(OR)2, где R представляет собой заместитель фосфитной группы, например -H, ^^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно -H, ^^алкильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу. Примеры фосфитных групп включают, но не ограничиваются указанными, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2 и -OP(OPh)2.</p> <p>- 36 027910</p> <p>Фосфорамидит: -OP(OR<sup>1</sup>)-NR<sup>2</sup>2, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> представляют собой заместители фосфорамидитной</p> <p>группы, например -H, (необязательно замещенную) С^алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно -H, Cl<sub>-</sub>7алкильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу. Примеры фосфорамидитных групп включают, но не ограничиваются ими, -OP(OCH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>)-N(CH<sub>3</sub>)<sub>2</sub>, -OP(OCH<sub>2</sub>CH<sub>3</sub>)-N(i-Pr)<sub>2</sub> и -OP(OCH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CN)-N(i-Pr)<sub>2</sub>.</p> <p>Фосфорамидат: -OP(=O)(OR<sup>1</sup>)-NR<sup>2</sup>2, где R<sup>1</sup> и R<sup>2</sup> представляют собой заместители фосфорамидатной группы, например, -H, (необязательно замещенную) Cl<sub>-</sub>7алкильную группу, С<sub>3-20</sub>гетероциклильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу, предпочтительно -H, Cl<sub>-</sub>7алкильную группу или С<sub>5-20</sub>арильную группу. Примеры фосфорамидатных групп включают, но не ограничиваются ими, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2 и -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.</p> <p>Алкилен.</p> <p>С3-12Алкилен: используемый в настоящем описании термин &quot;С3-12алкилен&quot; относится к бидентатной группе, полученной путем удаления двух атомов водорода либо от одного и того же атома углерода, либо по одному от каждого из двух разных атомов углерода углеводородного соединения, содержащего от 3 до 12 атомов углерода (если не указано иное), который может являться алифатическим или алициклическим, и который может быть насыщенным, частично ненасыщенным или полностью ненасыщенным. Таким образом, термин &quot;алкилен&quot; включает подклассы алкенилен, алкинилен, циклоалкилен и т.д., описанные ниже.</p> <p>Примеры линейных насыщенных С<sub>3-12</sub>алкиленовых групп включают, но не ограничиваются ими, -(CH2)n-, где n равен целому числу от 3 до 12, например -CH2CH2CH2- (пропилен), -CH2CH2CH2CH2- (бутилен), -CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>- (пентилен) и -CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>-(гептилен).</p> <p>Примеры разветвленных насыщенных С3-12алкиленовых групп включают, но не ограничиваются указанными, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2- и -CH2CH(CH2CH3)CH2-.</p> <p>Примеры линейных частично ненасыщенных С3-12алкиленовых групп (С3-12алкениленовых и алкиниленовых групп) включают, но не ограничиваются указанными, -CH=CH-CH<sub>2</sub>-, -CH<sub>2</sub>-CH=CH<sub>2</sub>-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-,</p> <p>-CH=CH-CH=CH-CH<sub>2</sub>-CH<sub>2</sub>-, -CH=CH-CH<sub>2</sub>-CH=CH-, -CH=CH-CH<sub>2</sub>-CH<sub>2</sub>-CH=CH- и -CH<sub>2</sub>-C C-CH<sub>2</sub>-.</p> <p>Примеры разветвленных частично ненасыщенных ^^алкиленовых групп (^^алкениленовых и алкиниленовых групп) включают, но не ограничиваются указанными, -C(CH<sub>3</sub>)=CH-, -QCH^CH-CH^-, -CH=CH-CH(CH<sub>3</sub>)- и -С С-CI KCH.3)-.</p> <p>Примеры алициклических насыщенных ^^алкиленовых групп (C<sub>3-</sub>l<sub>2</sub>циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются указанными, циклопентилен (например, циклопент-1,3-илен) и циклогексилен (например, циклогекс-1,4-илен).</p> <p>Примеры алициклических частично ненасыщенных ^^алкиленовых групп (C<sub>3-</sub>l<sub>2</sub>циклоалкиленов) включают, но не ограничиваются указанными, циклопентенилен (например, 4-циклопентен-1,3-илен), циклогексенилен (например, 2-циклогексен-1,4-илен; 3-циклогексен-1,2-илен; 2,5-циклогексадиен-1,4илен).</p> <p>Включает другие формы.</p> <p>Если не указано иное, представленные выше формы включают хорошо известные ионные формы, соли, сольваты и защищенные формы указанных заместителей. Например, указание на карбоновую кислоту (-COOH) также включает анионную (карбоксилатную) форму (-COO), ее соль или сольват, а также традиционные защищенные формы. Аналогично, указание на аминогруппу включает протонированную форму (-N<sup>+</sup>HR<sup>1</sup>R<sup>2</sup>), соль или сольват аминогруппы, например, хлористоводородную соль, а также традиционные защищенные формы аминогруппы. Аналогично, указание на гидроксильную группу включает также анионную форму (-O<sup>-</sup>), ее соль или сольват, а также традиционные защищенные формы.</p> <p>Соли.</p> <p>Может быть удобным или желательным получать, очищать и/или обрабатывать соответствующую соль активного соединения, например, фармацевтически приемлемую соль. Примеры фармацевтически приемлемых солей описаны в документе Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).</p> <p>Например, если соединение является анионным или содержит функциональную группу, которая может быть анионной (например, -COOH может представлять собой -COO<sup>-</sup>), то может происходить образование соли с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают, но не ограничиваются указанными, ионы щелочных металлов, такие как Na<sup>+</sup> и K<sup>+</sup>, катионы щелочноземельных металлов, такие как Ca<sup>2+</sup> и Mg<sup>2+</sup>, и другие катионы, такие как Al<sup>+3</sup>. Примеры подходящих органических катионов включают, но не ограничиваются указанными, ион аммония (т.е. NH<sub>4</sub><sup>+</sup>) и замещенные ионы аммония (например, NH<sub>3</sub>R<sup>+</sup>, NH<sub>2</sub>R<sup>2+</sup>, NHR<sup>3+</sup>, NR<sup>4+</sup>). Примеры некоторых подходящих замещенных ионов аммония представляют собой ионы, полученные из: этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислот, таких как лизин и аргинин. Пример обычного иона четвертичного аммония представляет собой N(CH3)4<sup>+</sup>.</p> <p>- 37 027910</p> <p>Если соединение является катионным или содержит функциональную группу, которая может быть катионной (например, -NH<sub>2</sub> может представлять собой -NH<sub>3</sub><sup>+</sup>), то может происходить образование соли с подходящим анионом. Примеры подходящих неорганических анионов включают, но не ограничиваются указанными, анионы, полученные из следующих неорганических кислот: соляной, бромоводородной, йодоводородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой.</p> <p>Примеры подходящих органических анионов включают, но не ограничиваются указанными, анионы, полученные из следующих органических кислот: 2-ацетилоксибензойной, уксусной, аскорбиновой, аспарагиновой, бензойной, камфоросульфоновой, коричной, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этандисульфоновой, этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гидроксималеиновой, гидроксинафталинкарбоновой, изэтионовой, молочной, лактобионовой, лауриновой, малеиновой, яблочной, метансульфоновой, муциновой, олеиновой, щавелевой, пальмитиновой, памоевой, пантотеновой, фенилуксусной, фенилсульфоновой, пропионовой, пировиноградной, салициловой, стеариновой, сукциновой, сульфаниловой, винной, толуолсульфоновой, трифторуксусной кислоты и валериановой. Примеры подходящих полимерных органических анионов включают, но не ограничиваются указанными, анионы, полученные из следующих полимерных кислот: таннина, карбоксиметилцеллюлозы.</p> <p>Сольваты.</p> <p>Может быть удобным или желательным получать, очищать и/или обрабатывать соответствующий сольват активного соединения. Используемый в настоящем описании термин &quot;сольват&quot; употреблен в общепринятом смысле для указания на комплекс растворенного вещества (например, активного соединения, соли активного соединения) и растворителя. Если растворитель представляет собой воду, сольват может в общепринятом смысле называться гидратом, например, моногидратом, дигидратом, тригидратом и т.д.</p> <p>Настоящее изобретение включает соединения, в которых растворитель присоединяется через иминную связь PBD фрагмента, что показано ниже, где растворитель представляет собой воду или спирт</p> <p>(R<sup>a</sup>OH, где R<sup>a</sup> представляет собой С^алкил):</p> <p>Указанные формы могут называться карбиноламинными и карбиноламинэфирными формами PBD (как описано в разделе, относящемся к R<sup>10</sup>, как указано выше). Равновесие указанного обратимого процесса зависит от состояний, в которых указанные соединения выявлены, а также природы самого фрагмента.</p> <p>Указанные конкретные соединения могут быть выделены в твердом виде, например, путем лиофилизации.</p> <p>Изомеры.</p> <p>Конкретные соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в одной или более определенных геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных, эпимерных, атроповых, стереоизомерных, таутомерных, конформационных или аномерных формах, включая, но не ограничиваясь указанными, цис- и транс-формы; Е- и Z-формы; с-, t-, и г- формы; эндо- и экзо-формы; R-, S-, и мезоформы; D- и L-формы; d- и I-формы; (+) и (-) формы; кето-, енол- и енолят-формы; син- и антиформы; синклинальные и антиклинальные формы; α- и β-формы; аксиальные и экваториальные формы; форму ванны, кресла, твист-форму, форму конверта и полукресла, и их комбинации, которые в настоящем описании вместе называются &quot;изомерами&quot; (или &quot;изомерными формами&quot;).</p> <p>Термин &quot;хиральный&quot; относится к молекулам, которые имеют свойство не совпадать при наложении зеркальных отображений партнеров, тогда как термин &quot;ахиральный&quot; относится к молекулам, которые совпадают при наложении зеркальных отображений партнеров.</p> <p>Термин &quot;стереоизомеры&quot; относится к соединениям, которые имеют идентичную химическую структуру, но различаются с точки зрения организации атомов или групп в пространстве.</p> <p>Термин &quot;диастереомер&quot; относится к стереоизомеру с двумя или более центрами хиральности, молекулы которого не являются зеркальными отображениями друг друга. Диастереомеры имеют разные физические свойства, например температуру плавления, температуру кипения, спектральные свойства и реакционную способность. Смеси диастереомеров можно разделить с помощью аналитических методик с высоким разрешением, таких как электрофорез и хроматография.</p> <p>Термин &quot;энантиомеры&quot; относится к двум стереоизомерам соединения, которые не совпадают при наложении зеркальных отображений друг друга.</p> <p>Определения и обозначения стереохимических структур, используемые в настоящей заявке, в целом приведены в соответствии с S.P. Parker, Ed, McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984), McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., &quot;Stereochemistry of Organic</p> <p>- 38 027910</p> <p>Compaunds&quot;, John Wiley &amp; Sons, Inc, New York, 1994. Соединения согласно настоящему изобретению могут содержать асимметричные или хиральные центры, и поэтому существовать в различных стереоизомерных формах. Предполагается, что все стереоизомерные формы соединений согласно настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь указанными, диастереомеры, энантиомеры и атропоизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, являются частью настоящего изобретения. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. способны вращать плоскость плоско-поляризованного света. При описании оптически активных соединений префиксы D и L или R и S используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального центра(ов). Префиксы d и I или (+) и (-) используются для обозначения знака направления вращения плоскости плоско-поляризованного света соединением, при этом (-) или I означает, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или d является правовращающим. С точки зрения данной химической структуры указанные стереоизомеры являются идентичными, за исключением того, что они являются зеркальными отображениями друг друга. Определенный стереоизомер может также называться энантиомером, а смесь таких изомеров часто называется энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров 50:50 называется рацемической смесью или рацематом, который может образовываться при отсутствии стереоселекции или стереоспецифичности в химической реакции или процессе. Термины &quot;рацемическая смесь&quot; и &quot;рацемат&quot; относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных форм, лишенной оптической активности.</p> <p>Необходимо отметить, что, за исключением описанного ниже для таутомерных форм, специально исключенных из термина &quot;изомеры&quot;, в настоящем описании представлены структурные (или конституциальные) изомеры (т.е. изомеры, которые различаются по связям между атомами, а не просто по положению атомов в пространстве). Например, указание на метокси группу -OCH<sub>3</sub> не следует рассматривать как указание на ее структурный изомер, гидроксиметильную группу -CH2OH. Аналогично, указание на орто-хлорфенил не следует рассматривать как указание на его структурный изомер мета-хлорфенил. Однако указание на класс структур может включать структурные изомерные формы, входящие в указанный класс (например, С1.<sub>7</sub>алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втор- и трет-бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и параметоксифенил).</p> <p>Приведенные выше исключения не относятся к таутомерным формам, например, кето-, енол- и енолят-формам, как, например, в следующих таутомерных парах: кето/енол (показанных ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/енетиол, N-нитрозо/гидроксиазо и нитро/аци-нитро.</p> <p>—с-с</p> <p>I \</p> <p>\ °<sup>н </sup>z<sup>c=c</sup>\</p> <p>н<sup>+</sup></p> <p>н<sup>+</sup></p> <p>\ _</p> <p>z<sup>c с</sup>\</p> <p>енолят</p> <p>Термин &quot;таутомер&quot; или &quot;таутомерная форма&quot; относится к структурным изомерам с разной энергией, которые являются взаимопревращающимися при прохождении через низкоэнергетический барьер. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) подвергаются взаимопревращениям, опосредованным миграцией протона, таким как кето-енольная и имин-енаминная изомеризация. Валентные таутомеры подвергаются взаимопревращениям за счет перераспределения некоторых из связывающих электронов.</p> <p>Необходимо отметить, что в термин &quot;изомер&quot; специально включены соединения с одним или более</p> <p>изотопными заместителями. Например, Н может быть представлен любой изотопной формой, включая 1 2 3 12 13 14 <sup>1</sup>Н, <sup>2</sup>Н (D) и <sup>3</sup>Н (Т); С может быть представлен любой изотопной формой, включая <sup>12</sup>С, <sup>13</sup>С и <sup>14</sup>С; O может быть представлен любой изотопной формой, включая <sup>16</sup>О и <sup>18</sup>О и т.п.</p> <p>Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения согласно настоящему изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, включая, но не ограничиваясь указанными, <sup>2</sup>Н (дейтерий, D), <sup>3</sup>Н (тритий), <sup>11</sup>С, <sup>13</sup>С, <sup>14</sup>С, <sup>15</sup>N, <sup>18</sup>F, <sup>31</sup>P, <sup>32</sup>P, <sup>35</sup>S, <sup>36</sup>Cl и <sup>125</sup>I. Различные меченные изотопом соединения включены в настоящее изобретение, например соединения, в которые введены радиоактивные изотопы, такие как <sup>3</sup>Н, <sup>13</sup>С и <sup>14</sup>С. Такие изотопно меченые соединения могут применяться в метаболических исследованиях, исследованиях кинетики реакций, методах определения или визуализации, таких как позитронно-эмиссионная томография (PET) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (SPECT), включая анализ распределения в ткани лекарственного средства или субстрата, или лечении пациентов радиоактивными соединениями. Меченные или замещенные дейтерием терапевтические соединения согласно настоящему изобретению могут иметь улучшенные свойства DMPK (метаболизма и фармакокинетики лекарственного средства), относящиеся к распределению, метаболизму и выведению (ADME). Замещение тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, может предоставлять определенные терапевтические преимущества, проявляющиеся в большей метаболической стабильности, например, повышение периода полувыведения in vivo или снижение необходимой дозы. Меченное <sup>18</sup>F соединение может быть подходящим для применения в PET или SPECT исследованиях. Меченные изотопами соединения согласно настоящему изобретению и их пролекарства</p> <p>- 39 027910</p> <p>могут в целом быть получены путем осуществления процедур, описанных ниже схемами или в примерах и составах, путем введения заместителя легко доступным меченным изотопом реагентом в не меченного изотопом реагента. Кроме того, замещение тяжелыми изотопам, в частности дейтерием (т.е. <sup>2</sup>Н или D), может предоставлять определенные терапевтические преимущества, проявляющиеся в большей метаболической стабильности, например, повышение периода полувыведения in vivo или снижение необходимой дозы или улучшение терапевтического индекса. Очевидно, что дейтерий в указанном контексте рассматривается как заместитель. Концентрация такого тяжелого изотопа, в частности дейтерия, может быть определена с помощью коэффициента обогащения изотопом. Подразумевается, что в соединениях согласно настоящему изобретению любой атом, специально не обозначенный как конкретный изотоп, обозначает любой стабильный изотоп указанного атома.</p> <p>Если не указано иное, указание на определенное соединение включает все такие изомерные формы, в том числе (полностью или частично) рацемические и другие их смеси. Способы получения (например, асимметрический синтез) и разделения (например, фракционная кристаллизация и хроматографические способы) указанных изомерных форм либо известны в данной области техники, либо с легкостью могут быть известным образом получены путем адаптации способов, описанных в настоящей заявке, или известных способов.</p> <p>Биологическая активность.</p> <p>Анализы клеточной пролиферации in vitro.</p> <p>В целом, цитотоксическую или цитостатическую активность конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) определяют путем: воздействия на клетки млекопитающих, имеющие рецепторные белки, например, Her2, антитела ADC в культуральной среде; культивирования клеток в течение периода от примерно 6 ч до примерно 5 дней; и измерения клеточной жизнеспособности. Клеточные анализы in vitro используют для определения жизнеспособности (пролиферации), цитотоксичности и индукции апоптоза (активации каспаз) ADC согласно настоящему изобретению.</p> <p>Активность конъюгатов антитело-лекарственное средство in vitro можно измерить с помощью анализа клеточной пролиферации. Люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo® представляет собой коммерчески доступный (Promega Corp, Мэдисон, Висконсин, США) метод гомогенного анализа, основанный на экспрессии рекомбинантной люциферазы светляка Coleoptera (патенты США № 5583024; 5674713 и 5700670). Указанный анализ клеточной пролиферации определяет число жизнеспособных клеток в культуре на основе количественной оценки присутствующей АТФ, как индикатора метаболически активных клеток (Crouch et al. (1993), J. Immunol. Meth. 160:81-88; US 6602677). Анализ CellTiter-Glo® проводили в 96-луночных планшетах с возможностью автоматизированного высокопроизводительного скрининга (HTS) (Cree et al. (1995), AntiCancer Drugs 6:398-404). Процедура гомогенного анализа включает добавление только одного реагента (CellTiter-Glo®) непосредственно в клетки, культивируемые в среде с добавлением сыворотки. Этапы промывки клеток, удаления среды и многократного пипетирования не требуются. Система выявляет до 15 клеток/лунку в 384-луночных планшетах через 10 мин после добавления реагента и перемешивания. Клетки можно непрерывно обрабатывать ADC, или удалять ADC после обработки. В целом, клетки, которые обрабатывали в течение короткого времени, т.е. в течение 3 ч, показали такую же эффективную активность, как и клетки, которые обрабатывали непрерывно.</p> <p>Гомогенный анализ &quot;добавление-смешивание-измерение&quot; приводил к лизису клеток и образованию люминесцентного сигнала, пропорционального количеству присутствующего АТФ. Количество АТФ прямо пропорционально количеству клеток, присутствующих в культуре. В ходе анализа CellTiter-Glo® образуется люминесцентный сигнал &quot;накаливания&quot; в результате реакции люциферазы, период полужизни которой в целом составляет более 5 ч, в зависимости от используемого типа клеток и среды. Количество жизнеспособных клеток выражают в относительных единицах люминесценции (RLU). Субстрат, люциферин жука, подвергается окислительному декарбоксилированию рекомбинантной люциферазой светляка с сопутствующим превращением АТФ в АМФ и образованием фотонов.</p> <p>Эффективность в условиях in vivo.</p> <p>Эффективность конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) в условиях in vivo согласно настоящему изобретению можно определить с помощью исследований ксенотрансплантата опухоли у мышей. Например, in vivo эффективность πκΓΉ-№ώ ADC согласно настоящему изобретению можно определить с использованием модели трансгенных мышей, содержащих эксплантат, с повышенной экспрессией Her2. Аллогенный трансплантат получали из трансгенной мыши Fo5 mmtv, которая не отвечает, или слабо отвечает на терапию с использованием герцептина (HERCEPTIN®). Субъектам однократно вводили ADC в определенных дозах (мг/кг) и с определенной степенью воздействия PBD лекарственного средства (мкг/м<sup>2</sup>); и контрольным буфером-плацебо (Разбавитель), и наблюдали мышей в течение двух недель или более с целью определения времени увеличения опухоли в два раза, десятичного логарифма клеточной гибели и уменьшения размера опухоли.</p> <p>- 40 027910</p><p>Применение</p> <p>Конъюгаты согласно настоящему изобретению могут применяться для получения PBD конъюгатов в области-мишени.</p> <p>Область-мишень предпочтительно представляет собой популяцию пролиферативных клеток. Антитело представляет собой антитело к антигену, присутствующему в популяции пролиферирующих клеток.</p> <p>Согласно одному варианту реализации антиген отсутствует или присутствует на пониженном уровне в непролиферирующей клеточной популяции по сравнению с количеством антигена, присутствующим в популяции пролиферативных клеток, например популяции опухолевых клеток.</p> <p>Область-мишень может представляет собой область in vitro, in vivo или ex vivo.</p> <p>Соединения, представляющие собой конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) согласно настоящему изобретению, включают соединения, оказывающие противораковое действие. В частности, соединения включают антитело, конъюгированное, т.е. ковалентно связанное посредством линкера, с фрагментом PBD.</p> <p>Линкер может не расщепляться в области-мишени. Соединения, представляющие собой конъюгат антитело-лекарственное средство (ADC) согласно настоящему изобретению, могут обладать цитотоксическим действием без расщепления линкера для высвобождения фрагмента PBD лекарственного средства. Конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) согласно настоящему изобретению селективно доставляют цитотоксические агенты к тканям опухоли, в результате чего может достигаться большая селективность, т.е. более низкая эффективная доза.</p> <p>В дополнительном аспекте также предложено соединение, представляющее собой конъюгат, как описано в настоящем документе, для применения для лечения пролиферативного заболевания. Согласно второму аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения, представляющего собой конъюгат, для приготовления лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания.</p> <p>Средний специалист в данной области техники с легкостью определит, способен ли предполагаемый конъюгат лечить пролиферативное состояние для любого конкретного типа клеток. Например, испытания, подходящие для оценки активности, обеспечиваемой определенным соединением, описаны в представленных ниже примерах.</p> <p>Термин &quot;пролиферативное заболевание&quot; относится к нежелательной или неконтролируемой пролиферации избыточных или аномальных клеток, которая является нежелательной, такой как неопластический или гиперпластический рост, как в условиях in vitro, так и в условиях in vivo.</p> <p>Примеры пролиферативных состояний включают, но не ограничиваются указанными, доброкачественную, предраковую и злокачественную пролиферацию клеток, включая, но не ограничиваясь указанными, неоплазмы и опухоли (например, гистоцитома, глиому, астроцитома, остеома), раковые заболевания (например, рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак желудочно-кишечного тракта, колоректальный рак, рак толстой кишки, карцинома молочной железы, карцинома яичников, рак предстательный железы, рак яичек, рак печени, рак почки, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак мозга, саркома, остеосракома, саркома Капоши, меланома), лейкозы, псориаз, заболевания костей, фибропролиферативные нарушения (например, соединительных тканей) и атеросклероз. Раковые заболевания, представляющие особый интерес, включают, но не ограничиваются указанными, лейкозы и рак яичников.</p> <p>Можно лечить клетки любого типа, включая, но не ограничиваясь указанными, клетки легкого, желудочно-кишечного тракта (включая, например, клетки кишечника, клетки толстой кишки), молочной железы (маммарные), яичников, предстательной железы, печени (печеночные), почки (почечные), мочевого пузыря, поджелудочной железы, мозга и кожи.</p> <p>Согласно одному варианту реализации лечение представляет собой лечение рака поджелудочной железы.</p> <p>Согласно одному варианту реализации лечение представляет собой лечение опухоли, на поверхности клеток которой содержится α<sub>ν</sub>β<sub>6</sub> интегрин.</p> <p>Полагают, что конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) согласно настоящему изобретению могут применяться для лечения различных заболеваний или нарушений, которые, например, характеризуются гиперэкспрессией опухолевого антигена. Примеры состояний или гиперпролиферативных заболеваний включают доброкачественные или злокачественные опухоли; лейкоз, гематологические и лимфоидные злокачественные новообразования. Другие примеры включают нейрональные, глиальные, астроцитарные, гипаталамические, эндокринные, макрофагальные, эпителиальные, стромальные, бластоцельные, воспалительные, ангиогенные и иммунологические, включая аутоимунные, нарушения.</p> <p>В целом, заболевание или нарушение, подвергаемое лечению, представляет собой гиперпролиферативное заболевание, такое как раковое заболевание. Примеры рака, подвергаемого лечению, описанные в настоящем документе, включают, но не ограничиваются указанными, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфоидные опухоли. Более конкретные примеры указанных раковых заболеваний включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, аденокарциному легких и плоскоклеточную карциному легких, рак брюшины, гепатоклеточный рак, гастральный рак или рак желудка, включая рак</p> <p>- 41 027910</p> <p>желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, цервикальный рак, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнной железы, рак почки или ренальный рак, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, гепатокарциному, карциному заднего прохода, пениальную карциному, а также рак головы и шеи.</p> <p>Аутоиммунные заболевания, для лечения которых могут применяться ADC соединения, включают ревматологические нарушения (такие как, например, ревматоидный артрит, синдром Шегрена, склеродермию, волчанку, такую как системная красная волчанка (SLE) и волчаночный нефрит, полимиозит/дерматомиозит, криоглобулинемия, синдром антифосфолипидных антител и псориатический артрит), остеоартрит, аутоиммунные нарушения желудочно-кишечного тракта и печени (такие как, например, воспалительные заболевания кишечника (например, язвенный колит и болезнь Крона), аутоиммунный гастрит и пернициозная анемия, аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит и целиакия), васкулит (такой как, например, ANCA (антинейтрофильные цитоплазматические антитела)-ассоциированный васкулит, включая васкулит Черджа-Строса, гранулематоз Вегенера и полиартериит), аутоиммунные неврологические нарушения (такие как, например, рассеянный склероз, синдром опсоклонус-миоклонус, миастения гравис, оптиконейромиелит, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера и аутоиммунные полиневропатии), почечные нарушения (такие как, например, гломерулонефрит, синдром Гудпасчера и болезнь Бергера), аутоиммунные дерматологические нарушения (такие как, например, псориаз, крапивница, аллергическая сыпь, обыкновенная пузырчатка, буллезный пемфигоид и кожная красная волчанка), гематологические нарушения (такие как, например, тромбоцитопеническая пурпура, тромботическая тромбоцитопеническая пурпура, посттрансфузионная пурпура и аутоиммунная гемолитическая анемия), атеросклероз, увеит, аутоиммунные нарушения слуха (такие как, например, заболевания внутреннего уха и потеря слуха), синдром Бехчета, синдром Рейно, трансплантация органов и аутоиммунные эндокринные нарушения (такие как, например, связанные с диабетом аутоиммунные заболевания, такие как инсулинозависимый сахарный диабет (IDDM), болезнь Аддисона, и аутоиммунные заболевания щитовидной железы (например, Болезнь Гравеса и тиреоидит)). Более предпочтительно указанные заболевания включают, например, ревматоидный артрит, язвенный колит, ANCA-ассоциированный васкулит, волчанку, рассеянный склероз, синдром Шегрена, болезнь Гравеса, IDDM, пернициозную анемию, тиреоидит и гломерулонефрит.</p> <p>Способы лечения.</p> <p>Конъюгаты согласно настоящему изобретению могут применяться в способах лечения. Также предложен способ лечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в указанном лечении, терапевтически эффективного количества соединения, представляющего собой конъюгат, согласно настоящему изобретению. Термин &quot;терапевтически эффективное количество&quot; обозначает количество, достаточное для оказания благоприятного эффекта на организм пациента. Такой благоприятный эффект может представлять собой по меньшей мере облегчение по меньшей мере одного симптома. Вводимое в действительности количество и скорость и временная схема введения будут зависеть от природы и тяжести подвергаемого лечению состояния. Предписание лечения, например определение дозы, находится в компетенции врачей общей практики и других врачей.</p> <p>Соединение согласно настоящему изобретению может быть введено индивидуально или в комбинации с другими схемами лечения, одновременно или последовательно, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению. Примеры схем лечения и терапий включают, но не ограничиваются указанными, химиотерапию (введение активных агентов, включая, например лекарственные средства, такие как химиотерапевтические агенты); хирургию и лучевую терапию.</p> <p>&quot;Химиотерапевтический агент&quot; представляет собой химическое соединение, подходящее для лечения рака, независимо от механизма действия. Классы химиотерапевтических агентов включают, но не ограничиваются указанными, алкилирующие агенты, антиметаболиты, растительные алкалоиды, представляющие собой веретенный яд, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топоизомеразы, антитела, фотосенсибилизаторы и ингибиторы киназ.</p> <p>Химиотерапевтические агенты включают соединения, применяемые в &quot;направленной терапии&quot; и традиционной химиотерапии.</p> <p>Примеры химиотерапевтических агентов включают эрлотиниб (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), доцетаксел (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU (фторурацил, 5-фторурацил, CAS NO 51-21-8), гемцитабин (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), цисплатин (цис-диамин дихлорплатина(П), CAS No. 15663-27-1), карбоплатин (CAS No. 41575-94-4), паклитаксел (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), темозоломид (4-метил-5-оксо-2,3,4,6,8-пентазабицикло[4,3.0]нона-2,7,9-триен-9-карбоксамид, CAS No. 85622-931, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), тамоксифен (^)-2-[4-(1,2-дифенилбут-1-енил)фенокси|N.N-диметилэтанамин. NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) и доксорубицин (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD и рапамицин.</p> <p>- 42 027910</p> <p>Дополнительные примеры химиотерапевтических агентов включают оксалиплатин (ELOXATIN®, Sanofi), бортезомиб (VELCADE®, Millennium Pharm.), сутент (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), летрозол (FEMARA®, Novartis), иматиниб мезилат (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (ингибитор Mek, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886 (ингибитор Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (ингибитор PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (ингибитор PI3K, Novartis), XL-147 (ингибитор PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), фулвестрант (FASLODEX®, AstraZeneca), лейковорин (фолиновая кислота), рапамицин (сиролимус, RAPAMUNE®, Wyeth), лапатиниб (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), лонафарниб (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), сорафениб (NEXAVAR®, BAY439006, Bayer Labs), гефитиниб (IRESSA®, AstraZeneca), иринотекан (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), типифарниб (ZARNESTRA™, Johnson &amp; Johnson), ABRAXANE™ (без кремофора), лекарственные формы паклитаксела в виде связанных с альбумином наночастиц (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), вандетаниб (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), хлорамбуцил, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), темсиролимус (TORISEL®, Wyeth), пазопаниб (GlaxoSmithKline), канфосфамид (TELCYTA®, Telik), тиотепа и циклофосфамид (CYTOXAN®, NEOSAR®); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметиломеламин; ацетогенины (в частности, буллатацин и буллацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги KW-2189 и СВ1-ТМ1); элеотеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; азотистые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, мехлоретамин оксид гидрохлорид, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевина, такая как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимустин; антибиотики, такие как ендииновые антибиотики (например, калихеамицин, калихеамицин гамма 1I, калихеамицин омега I1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994), 33:183-186); динемицин, динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; есперамицин; а также неокарциностатиновый хромофор и родственные хромпротеиновые енедииновые хромофорные антибиотики), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Е-норлейцин, морфолинодоксорубицин, цианоморфолинодоксорубицин, 2-пирролинодоксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, неморубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; анти-метаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, еноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, меритиостан, тестолактон; антитела к гормонам надпочечников, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; заместители фолиевой кислоты, такие как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамид гликозид; аминолевуленовая кислота; енилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазихон; элфорнитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; маитанзиноиды, такие как маитанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраерин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс PSK® (JHS Natural Products, Юджин, Орегон, США); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазихон; 2,2',2&quot;-трихлортриэтиламин; трихотецены (в частности, Т-2 токсин, веррацурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (&quot;Ara-С&quot;); циклофосфамид; тиотепа; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; платиновые аналоги, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин (NAVELBINE®); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; капецитабин (XELODA®, Roche); ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любых из указанных выше соединений.</p> <p>Определение &quot;химиотерапевтический агент&quot; также включает (i) антигормональные агенты, регулирующие или ингибирующие действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогенов (SERM), включая, например, тамоксифен (включая NOLVADEX®; тамоксифен цитрат), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и FARESTON® (торемифин цитрат); (ii) ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, регулирующий продукцию эстрогенов в надпочечниках, такие как, например,</p> <p>- 43 027910</p> <p>4(5)-имидазолы, аминоглютетимид, MEGASE® (мегестрол ацетат), AROMASIN® (экземестан; Pfizer), форместан, фадрозол, RIVISOR® (ворозол), FEMARA® (летрозол; Novartis) и ARIMIDEX® (анастрозол; AstraZeneca); (iii) анти-андрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и госерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолановый аналог цитозинового нуклеозида); (iv) ингибиторы протеинкиназы, такие как ингибиторы MEK (WO 2007/044515); (v) ингибиторы липидкиназ; (vi) антисмысловые олигонуклеотиды, в частности, олигонуклеотиды, которые подавляют экспрессию генов в сигнальных путях, вовлеченных в нарушенную пролиферацию клеток, например, РКС-альфа, Raf и Н-Ras, такие как облимерсен (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) рибозимы, такие как ингибиторы экспрессии VEGF (например, ANGIOZYME®) и ингибиторы экспрессии Her2; (viii) вакцины, такие как генотерапевтические вакцины, например, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN®, и VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) антиангиогенные агенты, такие как бевацизумаб (AVASTIN®, Genentech); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любых из вышеуказанных соединений.</p> <p>Определение &quot;химиотерапевтический агент&quot; также включает терапевтические антитела, такие как алемтузумаб (Campath), бевацизумаб (AVASTIN®, Genentech); цетуксимаб (ERBITUX®, Imclone); панитумумаб (VECTIBIX®, Amgen), ритуксимаб (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), пертузумаб (PERJETA™, OMNITARG™, 2C4, Genentech), трастузумаб (HERCEPTIN®, Genentech), тозитумомаб (Bexxar, Corixia), и конъюгат антитело-лекарственное средство, гемтузумаб озогамицин (MYLOTARG®, Wyeth).</p> <p>Гуманизированные моноклональные антитела, имеющие терапевтическую активность для применения в качестве химиотерапевтических агентов в комбинации с конъюгатами согласно настоящему изобретению включают: алемтузумаб, аполизумаб, азелизумаб, атлизумаб, бапинейзумаб, бевацизумаб, биватузумаб мертанзин, кантузумаб мертанзин, цеделизумаб, цетролизумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклизумаб, экулизумаб, эфализумаб, эпратузумаб, эрлизумаб, фелвизумаб, фонотолизумаб, гемтузумаб озогамицин, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, лабетузумаб, линтузумаб, матузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, мотовизумаб, натализумаб, нимотузумаб, ноловизумаб, нумавизумаб, окрелизумаб, омализумаб, паливизумаб, пасколизумаб, пекфузитузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселизумаб, раливизумаб, ранибизумаб, ресливизумаб, реслизумаб, ресивизумаб, ровелизумаб, руплизумаб, сибротузумаб, сиплизумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, тализумаб, тефибазумаб, тоцилизумаб, торализумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкин, тукуситузумаб, умавизумаб, уртоксазумаб и визилизумаб.</p> <p>Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению и для применения в соответствии с настоящим изобретением в дополнение к активному ингредиенту, т.е. соединению, представляющему собой конъюгат, могут содержать фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель, буфер, стабилизатор или другие вещества, хорошо известные специалистам в данной области техники. Указанные вещества должны быть нетоксичными и не должны влиять на эффективность активного ингредиента. Конкретная природа носителя или другого вещества зависит от способа введения, который может быть пероральным или инъекционным, например, кожной, подкожной или внутривенной инъекцией.</p> <p>Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть представлены в виде таблетки, капсулы, порошка или жидкости. Таблетка может содержать твердый носитель или вспомогательное вещество. Жидкие фармацевтические композиции обычно содержат жидкий носитель, такой как вода, вазелин, животные или растительные масла, минеральное масло или синтетическое масло. Может быть включен физиологический солевой раствор, декстроза или раствор другого сахарида, или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Капсула может содержать твердый носитель, такой как желатин.</p> <p>Для внутривенной, кожной или подкожной инъекции или инъекции, вводимой в место поражения, активный ингредиент может быть представлен в форме подходящего для парентерального введения водного раствора, который является апирогенным и имеет подходящее значение рН, является изотоническим и стабильным. Специалисты в данной области техники могут получить подходящие растворы с использованием, например, изотонических разбавителей, таких как раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, лактированный раствор Рингера для инъекций. При необходимости могут быть включены консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки.</p> <p>Лекарственные формы.</p> <p>Несмотря на то что соединение, представляющее собой конъюгат, возможно применять (например, вводить) само по себе, часто предпочтительным является его применение в виде композиции или лекарственной формы.</p> <p>Согласно одному варианту реализации композиция представляет собой фармацевтическую композицию (например, лекарственную форму, препарат, лекарственное средство), содержащую соединение, представляющее собой конъюгат, описанное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.</p> <p>- 44 027910</p> <p>Согласно одному варианту реализации композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение, представляющее собой конъюгат, описанное в настоящем документе, вместе с одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь указанными, фармацевтически приемлемые носители, разбавители, наполнители, вспомогательные вещества, основы, буферы, консерванты, антиоксиданты, смазывающие вещества, стабилизаторы, солюбилизаторы, поверхностно-активные вещества (например, смачивающие агенты), маскирующие агенты, красители, ароматизаторы и подсластители.</p> <p>Согласно одному варианту реализации композиция дополнительно содержит другие активные агенты, например другие терапевтические или профилактические агенты.</p> <p>Подходящие носители, разбавители, наполнители и т.д. могут быть найдены в стандартных фармацевтических текстах. См, например, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2<sup>nd</sup> Edition (под ред. М. Ash и I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc, Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20<sup>th</sup> edition, изд. Lippincott, Williams &amp; Wilkins, 2000 и Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2<sup>nd </sup>edition, 1994.</p> <p>Другой аспект настоящего изобретения относится к способам получения фармацевтической композиции, включающим смешивание по меньшей мере одного [<sup>11</sup>С]-радиоактивно меченого конъюгата или подобного конъюгату соединения, описанного в настоящем документе, вместе с одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, например носителями, разбавителями, наполнителями и т.д. Если указанная композиция представлена в виде дискретных единиц (например, таблеток и т.д.), каждая указанная единица содержит предопределенное количество (дозу) активного соединения.</p> <p>Используемый в настоящем описании термин &quot;фармацевтически приемлемый&quot; относится к соединениям, ингредиентам, веществам, композициям, лекарственным формам и т.д, которые по результатам тщательной медицинский проверки являются подходящими для применения в контакте с тканями интересующего субъекта (например, человека) и не проявляют чрезмерной токсичности, не вызывают раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений в соответствии с разумным отношением польза/риск. Каждый носитель, разбавитель, наполнитель и т.д. также должен являться &quot;приемлемым&quot; с точки зрения совместимости с другими ингредиентами лекарственной формы.</p> <p>Лекарственные формы могут быть получены способами, хорошо известными в области фармации. Указанные способы включают этап приведения во взаимодействие активного соединения с носителем, который включает один или более дополнительных ингредиентов. В целом, лекарственные формы получают путем равномерного и тщательного распределения активного соединения в носителях (например, в жидких носителях, мелкодисперсных твердых носителях и т.д.), а затем, при необходимости, придания формы продукту.</p> <p>Лекарственная форма может быть приготовлена в форме с быстрым или медленным высвобождением; немедленным, отсроченным, регулируемым или замедленным высвобождением или с их комбинацией.</p> <p>Лекарственные формы, подходящие для парентерального введения (например, путем инъекции), включают водные или неводные, изотонические, апирогенные, стерильные жидкости (например, растворы, суспензии), в которых активный ингредиент растворен, суспендирован или включен другим образом (например, в липосоме или другой микрочастице). Указанные жидкости могут дополнительно содержать другие фармацевтически приемлемые ингредиенты, такие как антиоксиданты, буферы, консерванты, стабилизаторы, бактериостатики, суспендирующие агенты, загустители и растворы, которые делают лекарственную форму изотоничной по отношению к крови (или другой соответствующей жидкости тела) предполагаемого реципиента. Примеры наполнителей включают, например, воду, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.п. Примеры подходящих изотонических носителей для применения в указанных лекарственных формах включают раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера или лактированный раствор Рингера для инъекций. Как правило, концентрация активного ингредиента в жидкости составляет от примерно 1 нг/мл до примерно 10 мкг/мл, например от примерно 10 нг/мл до примерно 1 мкг/мл. Лекарственные формы могут быть представлены в однодозовых или многодозовых герметичных контейнерах, например ампулах и флаконах, и могут храниться в виде высушенного сублимацией (лиофилизированного) продукта, к которому необходимо лишь добавить стерильный жидкий носитель, например, воду для инъекций, непосредственно перед применением. Растворы и суспензии для немедленного применения могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.</p> <p>Дозировка.</p> <p>Специалистам в данной области техники будет понятно, что соответствующие дозы соединения, представляющего собой конъюгат, и композиций, содержащих соединение, представляющее собой конъюгат, могут варьироваться в зависимости от конкретного пациента. Определение оптимальной дозы в целом включает взвешивание отношения терапевтической пользы и риска неблагоприятных побочных эффектов. Выбранная доза зависит от разных факторов, включая, но не ограничиваясь указанными, активность конкретного соединения, способ введения, время введения, скорость выведения соединения,</p> <p>- 45 027910</p> <p>продолжительность лечения, другие лекарственные средства, соединения и/или вещества, используемые в комбинированном лечении, тяжесть состояния и вид, пол, возраст, масса тела, состояние, общее состояние здоровья и история болезни пациента. Количество соединения и способ введения в конечном итоге определяется врачом, ветеринаром или клиницистом, несмотря на то, что обычно доза выбирается с целью достижения таких локальных концентраций в месте воздействия, обеспечивающих достижение желаемого эффекта без существенных вредных или неблагоприятных побочных эффектов.</p> <p>Можно осуществлять непрерывное или прерывистое (например, в дробных дозах с соответствующими интервалами) введение однократной дозы в течение курса лечения. Способы определения наиболее эффективных способов и дозы введения хорошо известны специалистам в данной области техники и варьируются в зависимости от применяемой для лечения лекарственной формы, цели применения терапии, клетки-мишени (клеток-мишеней), подвергаемой лечению, и субъекта, подвергаемого лечению. Можно осуществлять однократное или многократное введение, при этом объем дозы и схема введения выбираются лечащим врачом, ветеринаром или клиницистом.</p> <p>В целом, подходящая доза активного соединения составляет от примерно 100 нг до примерно 25 мг (как правило, от примерно 1 мкг до примерно 10 мг) на 1 кг массы тела субъекта в сутки. Если активное соединение представляет собой соль, сложный эфир, амид, пролекарство или т.п,. вводимое количество рассчитывают на основе исходного соединения, поэтому фактическая масса пропорционально увеличивается.</p> <p>Согласно одному варианту реализации активное соединение вводят пациенту, представляющему собой человека, в соответствии со следующей схемой дозировки: примерно 100 мг, 3 раза в сутки.</p> <p>Согласно одному варианту реализации активное соединение вводят пациенту, представляющему собой человека, в соответствии со следующей схемой дозировки: примерно 150 мг, 2 раза в сутки.</p> <p>Согласно одному варианту реализации активное соединение вводят пациенту, представляющему собой человека, в соответствии со следующей схемой дозировки: примерно 200 мг, 2 раза в сутки.</p> <p>Однако согласно одному варианту реализации соединение, представляющее собой конъюгат, вводят пациенту, представляющему собой человека, в соответствии со следующей схемой дозировки: примерно 50 или примерно 75 мг, 3 или 4 раза в сутки.</p> <p>Согласно одному варианту реализации соединение, представляющее собой конъюгат, вводят пациенту, представляющему собой человека, в соответствии со следующей схемой дозировки: примерно 100 или примерно 125 мг, 2 раза в сутки.</p> <p>Размер дозы, описанный выше, применим к конъюгату (включая конъюгат PBD фрагмента и линкера, присоединенного к антителу) или к эффективному количеству предложенного PBD соединения, например количеству соединения, которое может высвобождаться после отщепления линкера.</p> <p>Соответствующая дозировка ADC согласно настоящему изобретению для профилактики или лечения заболевания зависит от типа заболевания, подвергаемого лечению, как определено выше, тяжести и течения заболевания, введения молекулы в целях профилактики или в терапевтических целях, предшествующего терапевтического лечения, истории болезни пациента и ответа на антитело и решения лечащего врача. Молекулу подходящим образом вводят пациенту однократно или в течение нескольких этапов лечения. В зависимости от типа и тяжести заболевания от примерно 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, 0,120 мг/кг) молекулы является начальной предполагаемой дозой для введения пациенту, например путем одного или более отдельных введений или путем непрерывной инфузии. Обычно суточная доза может варьироваться от примерно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более, в зависимости от факторов, перечисленных выше. Пример дозы ADC для введения пациенту составляет от примерно 0,1 до примерно 10 мг/кг массы тела пациента. В случае повторных введений в течение нескольких дней или более в зависимости от состояния лечение поддерживается до достижения желаемого подавления симптомов заболевания. Пример схемы дозировки включает курс введения начальной нагрузочной дозы, составляющей примерно 4 мг/кг, с последующим введением дополнительных доз ADC каждую неделю, две недели или три недели. Можно применять другие схемы дозировки. Изменения эффекта указанной терапии легко наблюдать с помощью традиционных методик и исследований.</p> <p>Лечение.</p> <p>Используемый в настоящем описании термин &quot;лечение&quot; в контексте лечения состояния в целом относится к лечению и терапии человека или животного (например, при применении в ветеринарной медицине), при которой достигается некоторый желаемый терапевтический эффект, например подавление прогрессирования указанного состояния, и включает снижение скорости прогрессирования, прекращение прогрессирования, регрессию состояния, облегчение состояния и излечение состояния. Термин &quot;лечение&quot; также включает лечение в качестве профилактического средства (т.е. профилактики, предупреждения).</p> <p>Используемый в настоящем описании термин &quot;терапевтически эффективное количество&quot; относится к такому количеству активного соединения или вещества, композиции или дозированной формы, содержащей активное соединение, которое является эффективным для достижения некоторого желаемого терапевтического эффекта, соразмерного разумному отношению польза/риск, при введении в соответствии с желаемой схемой лечения.</p> <p>- 46 027910</p> <p>Аналогично, используемый в настоящем описании термин &quot;профилактически эффективное количество&quot; относится к такому количеству активного соединения или вещества, композиции или дозированной формы, содержащей активное соединение, которое является эффективным для достижения некоторого желаемого профилактического эффекта, соизмеримого с разумным отношением польза/риск, при введении в соответствии с желаемой схемой лечения.</p> <p>Получение конъюгата лекарственного средства.</p> <p>Конъюгаты антитело-лекарственное средство могут быть получены несколькими способами с использованием реакций органического химического синтеза, условий и реагентов, известных специалистам в данной области техники, включающими (1) взаимодействие нуклеофильной группы антитела с бивалентным линкерным реагентом с образованием промежуточного соединения антитело-линкер Ab-L посредством ковалентной связи и последующее взаимодействие с актированным фрагментом лекарственного средства и (2) взаимодействие фрагмента лекарственного средства с линкерным реагентом с образованием реагента лекарственное средство-линкер D-L посредством ковалентной связи и последующее взаимодействие с нуклеофильной группой антитела. Способы конъюгирования (1) и (2) можно использовать с различными антителами и линкерами с получением конъюгатов антитело-лекарственное средство согласно настоящему изобретению.</p> <p>Нуклеофильные группы антител включают, но не ограничиваются указанными, тиоловые группы боковых цепей, например цистеина. Тиоловые группы являются нуклеофильными и способны взаимодействовать с образованием ковалентных связей с электрофильными группами линкерных фрагментов, таких как линкерные фрагменты согласно настоящему изобретению. Определенные антитела содержат восстанавливаемые межцепьевые дисульфидные группы, т.е. цистеиновые мостики. Для конъюгации с линкерными реагентами антитела можно активировать путем обработки восстановителем, таким как ДТТ (реагент Клеланда, дитиотреитол) или ТСЕР (гидрохлорид трис-(2-карбоксиэтил)фосфина; Getz et al. (1999), Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Беверли, Массачусетс). Теоретически, в результате указанной обработки каждый цистеиновый дисульфидный мостик образует две реакционноспособных тиоловых нуклеофильных группы. Дополнительные нуклеофильные группы можно вводить в антитела при взаимодействии лизинов с 2-иминотиоланом (реагентом Траута), что приводит к превращению аминогруппы в тиоловую.</p> <p>Субъект/пациент.</p> <p>Субъект/пациент может представлять собой животное, млекопитающее, плацентарное млекопитающее, сумчатое (например, кенгуру, вомбата), однопроходное (например, утконос), грызуна (например, морскую свинку, хомяка, крысу, мышь), мышиных (например, мышь), зайцеобразных (например, кролика), птиц (например, птицу), псовых (например, собаку), кошачьих (например, кошку), лошадиных (например, лошадь), свиньих (например, свинью), овечьих (например, овцу), бычьих (например, корову), примата, обезьяноподобных (например, обезьяну или мартышку), мартышку (например, игрунку, павиана), человекообразную обезьяну (например, гориллу, шимпанзе, орангутанга, гиббона) или человека.</p> <p>Более того, субъект/пациент может находиться на любой стадии развития, например на стадии эмбриона. Согласно одному предпочтительному варианту реализации субъект/пациент представляет собой человека.</p> <p>Согласно одному варианту реализации пациенты представляют собой популяцию, в которой каждый пациент страдает от опухоли, на поверхности клеток которой содержится α<sub>ν</sub>β<sub>6</sub>.</p> <p>- 47 027910</p> <p>Синтез.</p> <p>Один из возможных путей синтеза с получением димерного промежуточного соединения формулы</p> <p>IV представлен ниже:</p> <p>Промежуточное соединение формулы IV может быть использовано для получения промежуточного соединения формулы VII</p> <p>- 48 027910</p> <p>- 49 027910</p> <p>Промежуточное соединение формулы IV может быть использовано для получения промежуточного</p> <p>соединения формулы IX:</p> <p>В качестве альтернативы промежуточное соединение формулы IV может быть сконъюгировано с</p> <p>промежуточным соединением X с получением промежуточного соединения IX:</p> <p>- 50 027910</p> <p>Промежуточное соединение формулы IV может быть использовано для получения промежуточного соединения формулы XVI</p> <p>- 51 027910</p> <p>Промежуточное соединение формулы IV может быть использовано для получения промежуточного соединения формулы XIX</p> <p>- 52 027910</p> <p>Один из возможных путей синтеза димерного промежуточного соединения формулы XIV представлен ниже:</p> <p>- 53 027910</p> <p>Промежуточное соединение формулы XXI может быть использовано для получения промежуточного соединения формулы XXVII:</p> <p>- 54 027910</p> <p>В приведенных выше схемах реакций каждый из R<sup>N</sup>, R<sup>N'</sup> и R<sup>N''</sup> независимо представляет собой защитную группу азота. Каждый из R<sup>C</sup> и R<sup>C'</sup> независимо представляет собой OH или OProt<sup>O</sup>, где Prot<sup>O </sup>представляет собой защитную группу гидрокси. Защитные группы хорошо известны в данной области техники. R<sup>N</sup>, R<sup>N'</sup> и R<sup>N''</sup> могут представлять собой, например, ВОС. Prot<sup>O</sup> может представлять собой THP. Защита иминных связей N10-C11 может быть снята на различных стадиях способов синтеза, показанных выше, в зависимости от используемых химических реагентов.</p> <p>В целом, соединения и конъюгаты могут быть получены путем, во-первых, соединения двух PBD мономеров посредством фениленового или пиридиленового димерного мостика с получением промежу- 55 027910</p> <p>точного соединения IV или XXI. Галогеновая группа в арильном кольце димерного мостика промежуточного соединения IV затем может быть использована для образования связи (включая линкерную группу G или L) для присоединения PBD димера к связывающему клетки агенту.</p> <p>Более подробно, два PBD мономера, содержащих группы -XH и -X'H в положении С8 каждого из PBD мономеров (промежуточные соединения I и II соответственно), могут вступать в реакцию с группами -T-Hal и -T'-Hal промежуточного соединения III или промежуточного соединения XX. Такой способ позволяет получать различные PBD мономеры, в результате чего можно получить ассиметричные PBD димеры. Таким же образом, мономеры PBD могут быть одинаковыми.</p> <p>PBD димерное промежуточное соединение IV может быть использовано для получения соединений и конъюгатов согласно настоящему изобретению путем проведения реакции с участием арил галогеновой группы в мостике множеством способов.</p> <p>Сначала, промежуточное соединение IV может быть использовано в реакции перекрестного сочетания Соногашира с получением ацетиленовой группы в арильной группе димерного мостика. Реакции перекрестного сочетания Соногашира хорошо известны в данной области техники и применяются для сочетания концевого алкилена с арилгалогенидом в присутствии палладиевого катализатора, такого как Pd(Ph<sub>3</sub>)<sub>4</sub>, медного катализатора, такого как CuI, и основания, такого как диэтиламин.</p> <p>В случае, когда ацетилен применяется в качестве концевого ацетилена, одна сторона молекулы ацетилена обычно защищена, например, TMS для предотвращения перекрестного связывания с PBD димерами. По завершении реакции Соногашира группа TMS может быть отщеплена с получением алкиленового промежуточного соединения V.</p> <p>Промежуточное соединение V может реагировать с соединением азидо с образованием производного триазола в азид-алкин реакции циклоприсоединения Хьюсгена. Такая реакция может быть катализирована медным катализатором. Для получения соединений и конъюгатов согласно настоящему изобретению азид связывается с этиленовой группой и различным количеством групп PEG. Для дальнейшего реагирования к азиду может быть присоединена аминогруппа. В результате реакции промежуточного вещества V с аминоазидным соединением получают промежуточное соединение VI.</p> <p>Свободная аминогруппа промежуточного соединения VI может вступать в реакцию с группой карбоновой кислоты линкерной группы для присоединения к связывающейся с клетками группе с образованием амидогруппы, соединяющей PBD димер и линкерную группу G или L с получением соединения VII.</p> <p>Линкерная/реакционноспособная группа G промежуточного соединения VII может быть сконъюгирована со связывающимся с клетками агентом с получением конъюгатов согласно настоящему изобретению.</p> <p>В качестве альтернативной реакции Соногашира промежуточное соединение IV может быть сконъюгировано с ацетиламином, таким как пропаргиламин, в присутствии палладиевого и медного катализаторов и основания. Такая реакция обеспечивает получение части связи, присоединенной к PBD димерному мостику, причем ацильная группа защищена, а свободный концевой амин доступен для дальнейшего реагирования. Например, реакция промежуточного соединения IV с пропаргиламином обеспечивает получение промежуточного соединения VIII.</p> <p>Концевой амин промежуточного соединения VIII может вступать в реакцию, например, с группой карбоновой кислоты, присоединенной к линкерной/реакционноспособной группе G (для присоединения к связывающемуся с клетками агенту) с получением промежуточного соединения IX.</p> <p>В качестве альтернативного пути синтеза промежуточного соединения IX, группа карбоновой кислоты промежуточного соединения XI может вступать в реакцию с пропаргиламином с образованием промежуточного соединения XII. Реакция промежуточного соединения IV с промежуточным соединением XII в реакции Соногаширы приводит к образованию промежуточного соединения XIII.</p> <p>С защищенной аминогруппы, нагруженной PEG с различной длиной цепи, может быть снята защита, и указанная группа может вступать в реакцию с группой карбоновой кислоты промежуточного соединения XIV для соединения с линкерной/реакционноспособной группой G PBD димера с получением промежуточного соединения XIV.</p> <p>Промежуточное соединение IV может быть также использовано в реакции перекрестносочетающего аминирования, такого как аминирование Бухвальда-Хартвинга. Углерод-азотная связь образуется за счет реакции перекрестного сочетания амина и арилгалогенида, катализируемой палладием. Для использования в таких реакциях перекрестного сочетания известны разные катализаторы, такие как Pd(Ph3)4 или RuPhos/RuPhosPd.</p> <p>В результате реакции промежуточного соединения IV с пиперазином, замещенным защищенным пропан-1-амином, получают промежуточное соединение XV. Защищенный амин промежуточного соединения XV может далее вступать в реакцию, например, с группой карбоновой кислоты, присоединенной к линкерной/реакционноспособной группе G, для присоединения к соединяющемуся с клетками агенту с получением промежуточного соединения XVI.</p> <p>В результате реакции перекрестно-сочетающего аминирования, такой как аминирование БухвальдаХартвинга, промежуточного соединения IV с частично защищенным пиперазином с последующим сня- 56 027910</p> <p>тием защиты (например, с использованием трифторуксусной кислоты) получают промежуточное соединение XVII.</p> <p>Аминогруппа пиперазина промежуточного соединения XVII после снятия защиты может вступать в реакцию с группой карбоновой кислоты промежуточного соединения XVIII с получением промежуточного соединения XIX.</p> <p>Промежуточное соединение XXI может быть использовано для получения оксимового промежуточного соединения XXIV. Например, частично защищенный PEG-диамин, промежуточное соединение XXII, может вступать в реакцию с группой карбоновой кислоты промежуточного соединения XIV. В результате снятия защиты получают промежуточное соединение XIII.</p> <p>В результате реакции между промежуточными соединениями XXI и XXIII получают оксимовое промежуточное соединение XXIV. Син- и анти- могут быть проанализированы методом препаративной ВЭЖХ.</p> <p>Промежуточное соединение XXI может также применяться для получения акриламидного промежуточного соединения XXVII. Например, альдегидное промежуточное соединение XXI может вступать в реакцию конденсации Кнеденагеля с малоновой кислотой с образованием промежуточного соединения акриловой кислоты XXV. Оно может вступать в реакцию с частично защищенным PEG-диамином с получением промежуточного соединения XXVI. Снятие защиты и соединение с промежуточным соединением XIV с получением акриламидного промежуточного соединения XXVII.</p> <p>Синтез соединений PBD, содержащих два иминных фрагмента, подробно описан в следующих источниках, полностью включенных в настоящее описание посредством ссылки:</p> <p>a) WO 00/12508 (с. 14-30);</p> <p>b) WO 2005/023814 (с. 3-10);</p> <p>c) WO 2005/085259 (с. 31-39).</p> <p>Примеры</p> <p>Общие экспериментальные методики</p> <p>Оптическое вращение измеряли на поляриметре ADP 220 (Bellingham Stanley Ltd.), концентрации</p> <p>(с) представлены в виде г/100 мл. Температуру плавления измеряли при помощи цифрового измерителя температуры плавления (Electrothermal). ИК-спектры записывали на ИК-спектрометре Perkin-Elmer Spectrum 1000 FT. Спектры <sup>1</sup>Н- и <sup>13</sup>С ЯМР получали при 300 К с использованием ЯМР спектрометра Bruker Advance при 400 и 100 МГц соответственно. Химические сдвиги представлены относительно TMS (δ = 0,0 ppm), сигналы обозначены как с (синглет), д (дублет), т (триплет), дт (двойной триплет), дд (дублет дублетов), ддд (двойной дублет дублетов) или м (мультиплет), причем константы спин-спинового взаимодействия представлены в герцах (Гц). Данные масс-спектрометрического анализа (МС) получали с использованием оборудования Waters Micromass ZQ, соединенного с ВЭЖХ хроматографом Waters 2695 и детектором Waters 2996 PDA. Использовались следующие параметры системы Waters Micromass ZQ: капилляр (кВ), 3,38; конус (В), 35; экстрактор (В), 3,0; температура источника (°C), 100; температура десольватации (°C), 200; скорость потока подвижной фазы (л/ч), 50; расход десольватированного потока (л/ч), 250. Масс-спектрометрию высокого разрешения (HRMS) проводили в системе Waters Micromass QTOF Global в положительном W-режиме с использованием наконечников из борсиликатного стекла с металлическим покрытием для введения образцов в устройство. Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на алюминиевых пластинах с силикагелем (Merck 60, F<sub>254</sub>), а для флэш-хроматографии использовали силикагель (Merck 60, 230-400 меш ASTM). Все химические реактивы и растворители приобретали в Sigma-Aldrich, и их применяли в поставляемом виде без дополнительной очистки.</p> <p>Общие условия ЖХ/МС: ВЭЖХ (Waters Alliance 2695) проводили с использованием воды (А) (муравьиная кислота 0,1%) и ацетонитрила (В) (муравьиная кислота 0,1%) в качестве подвижной фазы. Градиент: исходный состав: 5% В в течение 1,0 мин, затем от 5% В до 95% В в течение 3 мин. Композицию выдерживали в течение 0,5 мин при 95% В, а затем возвращали к 5% В в течение 0,3 мин. Общее время градиентного анализа составляло 5 мин. Скорость потока 3,0 мл/мин, в масс-спектрометр вводили 400 мкл с помощью тройника с нулевым мертвым объемом. Диапазон длин волн детектирования: 220400 нм. Тип детектора: диодная матрица (535 сканирований). Колонка: Phenomenex® Onyx Monolithic C18, 50x4,60 мм.</p> <p>Для примеров 5 и 11 использовали следующие условия анализа ЖХ/МС: масс-спектрометрию в режиме положительного иона с использованием электрораспыления выполняли с использованием аппарата Shimadzu Nexera®/Prominence® ЖХМС-2020. Используемые подвижные фазы: растворитель A (H<sub>2</sub>O с 0,1% муравьиной кислотой) и растворитель В (CH<sub>3</sub>CN с 0,1% муравьиной кислотой). Градиент: исходный состав 5% В выдерживали в течение 0,25 мин, затем повышали от 5% В до 100% В в течение 2 мин. Состав выдерживали в течение 0,50 мин при 100% В, а затем возвращали к 5% В в течение 0,05 мин и выдерживали в течение 0,05 мин. Общее время градиентного анализа составляло 3,0 мин. Скорость потока составляла 0,8 мл/мин. Детектирование проводили при длине волны 214 и 254 нм. Колонка: Waters Acquity UPLC® ВЕН Shield RP18 1 мкм, 2,1x50 мм при 50°C.</p> <p>- 57 027910</p> <p>Для примеров 5 и 11 использовали следующие условия анализа препаративной ВЭЖХ: обращеннофазовую сверхбыструю высокоэффективную жидкостную хроматографию (UFLC) выполняли с использованием аппарата Shimadzu Prominence® с использованием колонок Phenomenex® Gemini NX 5 мкм С18 (при 50°C) при следующих параметрах: 150x4,6 мм для анализа, и 150x21,2 мм для препаративной работы. Использовали следующие элюенты: растворитель А (Н<sub>2</sub>О с 0,1% муравьиной кислотой) и растворитель В (CH<sub>3</sub>CN с 0,1% муравьиной кислотой). Все исследования UFLC проводили в условиях градиента: от 0 до 30 мин композицию В повышали от 0 до 100% и выдерживали при 100% В в течение 2 дополнительных минут. Композицию В снижали от 100 до 0% в течение от 32,0 до 32,1 мин и выдерживали при 0% В до 35,0 мин. Общее время градиентного анализа составляло 35,0 мин. Скорости потоков составляли 1,0 мл/мин для аналитической, и 20,0 мл/мин для препаративной ВЭЖХ. Детектирование проводили при длине волны 254 и 280 нм.</p> <p>Пример 1.</p> <p>(a) (11S,11aS,11'S,11a'S)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-галоген-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))бис-(7-метокси-2-метилео-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]рензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (2а, 2Ь, 2с)</p> <p>(i) (11S,11aS,11'S,11а'S)-ди-трет-бутил 8,8'-(((5-йод-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис-(7метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (2а).</p> <p>1.3- бис-(Бромметил)-5-йодбензол (2,00 г, 5,20 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору Вос/ТНР-защищенной PBD кэппирующей группы 1 (4,75 г, 10,3 ммоль), TBAI (190 мг, 0,52 ммоль) и K2CO3 (1,42 г, 10,3 ммоль) в сухом DMF (60 мл). Реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в атмосфере аргона в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 4,15 мин (ES+) m/z 1171 ([М+Na]', ~10% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и удаляли DMF с помощью выпаривания под вакуумом. Получившийся в результате остаток разделяли между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл) и водную фазу экстрагировали с помощью EtOAc (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2x20 мл), солевым раствором (50 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: 50:50 об./об. EtOAc/гексан до 80:20 об./об. EtOAc/гексан), в результате чего получали бис-эфир 2а в виде белой пены (5.42 г, выход 91%).</p> <p>(ii) (11S,11aS,11'S,11a'S)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-бром-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Ипирроло[2,1-с][1,4]бензодиалепин-10(5Н)-карбоксилат) (2b).</p> <p>1-Бром-3,5-бис-(бромметил)бензол (1,54 г, 4,53 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору Вос/ТНР-защищенной PBD кэппирующей группы 1 (4,20 г, 9,06 ммоль), TBAI (167 мг, 0,45 ммоль) и K2CO3 (1,25 г, 9,06 ммоль) в сухом DMF (52 мл). Реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в атмосфере аргона в течение 5 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 4,10 мин (ES+) m/z 1101 ([М+Н]<sup>+</sup> ~70% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и удаляли DMF с помощью выпаривания под вакуумом. Получившийся в результате остаток разделяли между водой (60 мл) и EtOAc (60 мл) и водную фазу экстрагировали с помощью EtOAc (3x25 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2x30 мл), солевым раствором (50 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэшхроматографии (градиентное элюирование: 50:50 об./об. EtOAc/гексан до 100% EtOAc), в результате чего получали бис-эфир 2b в виде белой пены (3,37 г, выход 68%).</p> <p>(iii) (11S,11aS,11'S,11а' S)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5 -хлор- 1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (2с).</p> <p>1.3- бис-(Бромметил)-5-хлорбензил (1,42 г, 4,80 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору Вос/ТНР-защищенной PBD кэппирующей группы 1 (4,42 г, 9,60 ммоль), TBAI (177 мг, 0,48 ммоль) и K<sub>2</sub>CO<sub>3</sub> (1,33 г, 9,60 ммоль) в атмосфере сухого DMF (55 мл). Реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в атмосфере аргона в течение 1,5 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 4,08 мин (ES+) m/z 1057 ([М+Н]<sup>+</sup> ~30% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и</p> <p>- 58 027910</p> <p>удаляли DMF с помощью выпаривания под вакуумом. Получившийся в результате остаток разделяли</p> <p>между водой (60 мл) и EtOAc (60 мл) и водную фазу экстрагировали с помощью EtOAc (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали водой (20 мл), солевым раствором (40 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: 50:50 об./об. EtOAc/гексан до 80:20 об./об. EtOAc/гексан), в результате чего получали бис-эфир 2с в виде белой пены (5,10 г, выход 99%).</p> <p>(b) (ИЗЛЫЗДЕЗДЫ^-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-этинил-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (4)</p> <p>(i) (11 S,11aS, 11'S, 11а'З)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-((триметилсилил)этинил)-1,3-фенилен)-бис(метилен))-бис-(окси))-бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (3).</p> <p>Каталитическое количество Pd(PPh<sub>3</sub>)<sub>4</sub> (15,0 мг, 13,1 мкмоль) добавляли к смеси бис-эфира 2а (750 мг, 0,65 ммоль), TMS-ацетилена (278 мкл, 191 мг, 1,96 ммоль), CuI (5,0 мг, 26,1 мкмоль), диэтиламина (1,35 мл, 956 мг, 13,1 ммоль) и абсолютно сухих гранул молекулярного сита 4 А в сухом DMF (5,6 мл) в абсолютно сухом герметичном сосуде. Смесь дегазировали и трижды продували аргоном, затем нагревали с помощью микроволнового излучения при 100°C в течение 30 мин, после чего анализ ЖХ/МС выявил полное израсходование исходного вещества и образование значительного количества продукта при времени удержания 4,37 мин (ES+) m/z 1142 ([М+Н]<sup>+</sup> ~40% относительной интенсивности). При времени удерживания 3,97 мин (ES+) m/z 1069 ([M+Na]+, ~60% относительной интенсивности) наблюдался пик, соответствующий TMS-отщеплению в условиях ЖХ/МС. Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и затем фильтровали через спекшийся шлак для удаления сит (промывка DMF). Фильтрат выпаривали под вакуумом и получившийся в результате остаток подвергали флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 50:50 об./об. EtOAc/гексан до 80:20 об./об. EtOAc/гексан) с получением TMS-ацетилена 3 в виде желтой пены (691 мг, выход 95%).</p> <p>(ii) (11S,11aS, 11'S, 1 Ы^-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-этинил-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (4).</p> <p>Твердый K<sub>2</sub>CO<sub>3</sub> (383 мг, 2,77 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору TMS-защищенного соединения 3 (1,55 г, 1,39 ммоль) в MeOH (20 мл). После 3 ч перемешивания при комнатной температуре реакцию считали завершенной в соответствии с ЖХ/МС [пик желаемого продукта при времени удерживания 4,00 мин (ES+) m/z 1047 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~30% относительной интенсивности)]. MeOH удаляли выпариванием под вакуумом и получившийся в результате остаток разделяли между водой (60 мл) и EtOAc (60 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали EtOAc (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали водой (30 мл), солевым раствором (30 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэшхроматографии (градиентное элюирование: от 50:50 об./об. EtOAc/гексан до 80:20 об./об. EtOAc/гексан), в результате чего получали ацетилен 4 в виде оранжевой пены (1,13 г, выход 78%).</p> <p>(с) (11 S,11aS, 11'S, 1 Ы^-ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(1-(2-(2-(2-(2-аминэтокси)этокси)этокси)этил)-1Н1,2,3-триазол-4-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11((терагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)карбоксилат) (5)</p> <p>Твердый CuSO<sub>4</sub>-5H<sub>2</sub>O (13,0 мг, 52,0 мкмоль) и (+)-натрия L-аскорбат (41,0 мг, 0,21 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 11-азидо-3,6,9-триоксаундекан-1-амина (227 мг, 207 мкл, 1,04 ммоль) и алкина 4 (1,09 г, 1,04 ммоль) в трет-BuOH (6 мл) и Н<sub>2</sub>О (6 мл) при комнатной температуре. В процессе</p> <p>- 59 027910</p> <p>реакции наблюдали изменение цвета от желтого до зеленого. После перемешивания в течение 16 ч анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества желательного продукта, соответствующего пику при времени удержания 3,12 мин (ES+) m/z 1265 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~100% относительной интенсивности). [Прим.: в некоторых случаях реакцию останавливали, однако доводили до конца после добавления дополнительного CuSO<sub>4</sub>-5H<sub>2</sub>O (0,05 эквивалента) и (+)-натрия L-аскорбата (0,2 эквивалента)]. Реакционную смесь разделяли (не встряхивая делительную воронку) между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали водой (30 мл), солевым раствором (50 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта 5 в виде зеленой пены (1,32 г, выход неочищенного продукта 100%). Неочищенный продукт переносили на следующий этап без дополнительной очистки.</p> <p>(d) (11 S,11aS,11'S,11а'S)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(1-(18-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-Ш-пиррол-1-ил)-13оксо-3,6,9-триокса-12-азаоктадецил)- 1H-1,2,3-триазол-4-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11 -((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11 а-тетрагидро-1Hпирроло[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (6)</p> <p>Твердый N-гидроксисукцинимидный сложный эфир 6-малеимидогексановой кислоты (327 мг, 1,06 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору первичного амина 5 (1,28 г, 1,01 ммоль) в атмосфере сухого DCM (30 мл) при комнатной температуре. Протекание реакции отслеживали с помощью ЖХ/МС и через 3 дня перемешивания реакцию останавливали, анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества желательного продукта, соответствующего пику при времени удержания 3,65 мин (ES+) m/z 1458 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~100% относительной интенсивности) в сопровождении непрореагировавшего исходного соединения при времени удержания 3,15 мин. Реакционную смесь обрабатывали силикагелеми удаляли растворитель путем выпаривания под вакуумом. Полученный в результате остаток подвергали флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% DCM до 97:3 об./об. DCM/MeOH) с получением малеимида 6 в виде пены (658 мг, выход 45%).</p> <p>(e) ^(2-(2-(2-(2-(4-(3,5-бис-(((^)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-1Н-1,2,3-триазол-1ил)этокси)этокси)этокси)этил)-6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамид (7)</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (5 мл) добавляли к порции Вос/ТНР-защищенного соединения 6 (428 мг, 0,29 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0 °C в течение 1 ч реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС, пик желаемого продукта при времени удержания 2,72 мин (ES+) m/z 1054 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~70% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO<sub>3</sub> (100 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x30 мл) и объединенные органические слои промывали Н<sub>2</sub>О (20 мл), солевым раствором (40 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl<sub>3</sub> до 96:4 об./об. CHCl<sub>3</sub>/MeOH), в результате чего получали 7 в виде оранжевой пены (163 мг, выход 53%).</p> <p>- 60 027910</p> <p>Пример 2.</p> <p>(а) (11S,11aS,11'S,11 а'8)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(3-аминопроп-1 -ин-1 -ил)-1,3-фенилен)-бис(метилен))-бис-(окси))-бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)2,3,11,11 а-тетрагидро-1 Н-пирроло[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (8)</p> <p>Каталитическое количество Pd(PPh<sub>3</sub>)<sub>4</sub> (5,0 мг, 4,2 мкмоль) добавляли к смеси бис-эфира 2а (242 мг, 0,21 ммоль), пропаргиламина (41 мкл, 35 мг, 0,63 ммоль), CuI (1,6 мг, 8,4 мкмоль), диэтиламина (0,42 мл, 309 мг, 4,22 ммоль) и абсолютно сухих гранул молекулярного сита 4 А в сухом DMF (1,8 мл) в абсолютно сухом герметичном сосуде. Смесь дегазировали и трижды продували аргоном, затем нагревали с помощью микроволнового излучения при 100°C в течение 30 мин, после чего анализ ЖХ/МС выявил полное израсходование исходного вещества и образование значительного количества продукта при времени удержания 3,18 мин (ES+) m/z 1076 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~60% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и затем фильтровали через спекшийся шлак для удаления сит (промывка DMF). Фильтрат выпаривали под вакуумом с получением нестабильного неочищенного продукта 8, который незамедлительно использовали на следующем этапе без очистки и анализа.</p> <p>(b) (11S,11aS,11'S,11a'S)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(1-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-3,19диоксо-7,10,13,16-тетраокса-4,20-диазатрикоз-22-ин-23-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (9)</p> <p>MAL-dPEG®<sub>4</sub>-кислоту (88 мг, 0,21 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору EDCI (41 мг, 0,21 ммоль) и неочищенного первичного амина 8 в атмосфере сухого DCM (4 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 3,58 мин (ES+) m/z 1475 ([М+Н]<sup>+</sup> ~10% относительной интенсивности), 1498 ([М+Н]<sup>+</sup> ~5% относительной интенсивности), а также побочного продукта при времени удержания 3,85 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM (30 мл) и промывали Н<sub>2</sub>О (3x10 мл), солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэшхроматографии (градиентное элюирование: от 100% DCM до 96:4 об./об. DCM/MeOH) с получением малеимида 9 в виде пены (67 мг, выход 2 стадий 22%).</p> <p>(с) ^-(3-(3,5-бис-(((^)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)проп-2-ин-1-ил)-1-(3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1ил)пропанамидо)-3,6,9,12-тетраоксапентадекан-15-амид (10)</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (1 мл) добавляли к образцу Вос/ТНР-защищенного соединения 9 (67 мг, 45,5 мкмоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0 °C в течение 1,5 ч, реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС, пик желаемого продукта при времени удержания 2,67 мин (ES+) m/z 1070 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~5% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO<sub>3</sub> (50 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (40 мл), высушивали</p> <p>- 61 027910</p> <p>(MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl3 до 96:4 об./об. CHCl<sub>3</sub>/MeOH) с получением 10 в виде оранжевой пены (12 мг, выход 24%).</p> <p>Пример 3.</p> <p>(а) (11S,11aS,11'S,11a'S)-71i 1-трет-бут1 и ι 8,8'-(((5-(4-(3-((третбутоксикарбонил)амино)пропил)пиперазин-1-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис-(7метокси-2-метилен-5-оксо-11 -((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3, 11,11 а-тетрагидро-l Н-пирроло [2,1-</p> <p>Порцию бис-эфира 2с (250 мг, 0,24 ммоль), NaO<sup>t</sup>Bu (57 мг, 0,59 ммоль), RuPhos (11 мг, 23.7 мкмоль) и RuPhosPd (l9 мг, 23,7 мкмоль) добавляли в абсолютно сухую герметичную пробирку (которую оставляли для охлаждения в десикторе). Смесь дегазировали и трижды продували аргоном перед добавлением сухого THF (5 мл) и затем оставляли для перемешивания в инертной атмосфере в течение ~l0 мин до выделения красного цвета. Добавляли раствор 3-(пиперазин-1-ил)пропан-1-амина (58 мг, 0,26 ммоль) в сухом THF (l мл) и смесь снова дегазировали и трижды продували аргоном. Реакционную смесь нагревали при 80°C в предварительно разогретой масляной бане в течение 2,5 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил трехкомпонентную смесь: желаемый продукт при времени удержания 3,35 мин (ES+) m/z l264 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~60% относительной интенсивности), основной побочный продукт при времени удержания 3,95 мин (дехлорированный аналог 2с) и плечо при 4,l3 мин (следовые количества исходного вещества). После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разделяли между водой (20 мл) и EtOAc (20 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали водой (30 мл), солевым раствором (50 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% DCM до 95:5 об./об. DCM/MeOH) с получением пиперазина 11 в виде пены (152 мг, выход 25%).</p> <p>(b) (11aS,11а'S)-8,8'-(((5-(4-(3-Аминопропил)пиперазин-1-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис(окси))-бис-(7-метокси-2-метилен-2,3-дигидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-5(11аН)-он) (12)</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (2 мл) добавляли к порции Вос/ТНР-защищенного соединения 11 (142 мг, 0,11 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0 °C в течение 1 ч реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС, пик желаемого продукта при времени удержания 2,23 мин (ES+) m/z 118 ([М+Н2О]<sup>+</sup>, ~5% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO<sub>3</sub> (50 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x20 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (15 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта 12 в виде воскоподобного твердого вещества (22,6 мг). Следует заметить, что в процессе этапа нейтрализации NaHCO3 в осадок в виде воскоподобного твердого вещества из раствора выпадает желаемое соединение, которое было лишь частично растворимо в DCM. Дополнительный продукт получали путем растворения DCM-нерастворимых твердых веществ в DMF с последующим выпариванием под вакуумом. Получившийся в результате маслянистый остаток растирали в порошок с диэтилэфиром с получением твердого вещества, которое высушивали под вакуумом с получением дополнительного неочищенного соединения 12 (54,4 мг, общее количество = 77 мг, выход 85%) который переносили на следующий этап без дополнительной очистки и анализа.</p> <p>- 62 027910</p> <p>(с) ^(3-(4-(3,5-бис-((((8)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)пиперазин-1-ил)пропил)-1-(3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Нпиррол-1-ил)пропанамид)-3,6,9,12-тетраоксапентадекан-15-амид (13).</p> <p>MAL-dPEG®<sub>4</sub>-кислоту (42 мг, 0,10 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору EDCI (20 мг, 0,10 ммоль) и неочищенного первичного амина 12 (77 мг, 0,10 ммоль) в сухом DCM (4 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил полное израсходование исходного соединения и образование существенного количества желаемого продукта при времени удержания 2,42 мин (ES+) m/z 1176 ([М+Н2О]<sup>+</sup>, ~5% относительной интенсивности) и избыток MAL-dPEG®<sub>4</sub>-кислоты при времени удержания 2,05 мин (слабый сигнал на диодной матрице, обнаруживаемый на ES+/ES-). Реакционную смесь разбавляли DCM (30 мл) и промывали Н2О (15 мл), слевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl<sub>3</sub> до 93:7 об./об. CHCl<sub>3</sub>/MeOH) с получением малеимида 13 в виде пены (46 мг, 55%). Следует отметить, что следовые количества избыточной MAL-dPEG®<sub>4</sub>-кислоты нельзя удалить с использованием флэш-хроматографии.</p> <p>Пример 4.</p> <p>(a) (ПЗЛ^ЗЛЕЗЛ^^-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)-1,3фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (14)</p> <p>дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропокси-1,1'-бифенил)[2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладий(Н) (18 мг, 22 мкмоль, 0,12 экв.), карбонат цезия (0,36 г, 1,1 ммоль, 5,0 экв.) и производной йода (2а) (0,307 г, 0,27 ммоль, 1,0 экв.) помещали в микроволновой сосуд, который вакуумировали и промывали аргоном (x3). Безводный THF (5 мл) добавляли следом за трет-бутил пиперазин-1-карбоксилатом (70 мг, 0,37 ммоль, 1,1 экв.) и полученную в результате смесь нагревали при 85°C в течение 4 ч, а затем выдерживали в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли насыщенным гидрокарбонатом натрия и экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенные экстракты этилацетата промывали солевым раствором (100 мл), высушивали (MgSO4) и выпаривали при при пониженном давлении. Продукт 14 очищали при помощи флэш-хроматографии [CHCl3/MeOH 0 до 1,5% в 0,5% увеличением шага] (0,111 г, 51%)</p> <p>Аналитические данные: КТ 4,12 мин; MS (ES<sup>+</sup>) m/z (относительная интенсивность) 1207 ([М+1]<sup>+</sup>, 30).</p> <p>(b) (11aS,11a'S)-8,8'-(((5-(пиперазин-1-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис-(7-метокси2-метилен-2,3-дигидро- 1Н-пирроло[2,1 -с] [ 1,4]бензодиазепин-5(11 аН)-он) (15)</p> <p>Холодный (ледяная баня) раствор 95% трифторуксусной кислоты (4 мл) добавляли к соединению (14) (0,2 г, 0,165 ммоль, 1 экв.) охлажденному на ледяной бане. Раствор перемешивали при 0°C в течение 30 мин, после чего согласно ЖХ/МС реакцию считали завершенной. Реакционную смесь добавляли по</p> <p>- 63 027910</p> <p>каплям к смеси льда и насыщенного раствора бикарбоната натрия для нейтрализации трифторуксусной</p> <p>кислоты. Смесь экстрагировали DCM (4x75 мл) и объединенные экстракты промывали водой (100 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>) и выпаривал при пониженном давлении с получением продукта 15 в виде твердого вещества желтого цвета, используемого далее без дополнительной очистки (0,116 г, 100%)</p> <p>Аналитические данные: КТ 2,33 мин; MS (ES<sup>+</sup>) m/z (относительная интенсивность) 703 ([М+1]<sup>+</sup>,</p> <p>100).</p> <p>(с) N-(15 -(4-(3,5-бис-(((^)-7-метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11 а-тетрагидро-1 Н-пирроло[2,1 с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)пиперазин-1-ил)-15-оксо-3,6,9,12-тетраоксапентадецил)-3(2,5 -диоксо-2,5 -дигидро-1 Н-пиррол-1 -ил)пропанамид (17)</p> <p>^(3-Диметиламинопропил)-№-этилкарбодиимид гидрохлорид (35 мг, 0,18 ммоль, 1,1 экв.) добавляли к раствору соединения (15) (116 мг, 0,165 ммоль, 1,0 экв.) и 1-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1ил)-3-оксо-7,10,13,16-тетраокса-4-азанонадекан-19-овая кислота (16) (69 мг, 0,165 ммоль, 1,0 экв.) в безводном DCM (5 мл) в атмосфере аргона. Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли DCM (50 мл), промывали водой (100 мл), насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл), водой (100 мл), солевым раствором (100 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>) и выпаривали при пониженном давлении. Очистку проводили путем колоночной флэшхроматографии [CHCl3/MeOH 0 до 5% с 1% увеличением шага] с получением продукта 17 прозрачного вещества желтого цвета (0,058 г, 32%)</p> <p>Данные анализа: [a]<sup>18<sub></sup>D</sub> = [+628°] (с=0,25, CHCl<sub>3</sub>); RT 2,65 мин; MS (ES+) m/z (относительная интенсивность) 1101 ([M+1]<sup>+</sup>, 40).</p> <p>Пример 5.</p> <p>(а) трет-Бутил (42-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-37-оксо-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33ундекаокса-36-азадотетраконтил)оксикарбамат (19)</p> <p>6-Малеимидо-капроновую кислоту (64 мг, 0,30 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору EDCI (64 мг, 0,33 ммоль) и первичного амина 18 (200 мг, 0,30 ммоль) в сухом DCM (6 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 16 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование существенного количества желаемого продукта при времени удержания 1,38 мин {(ES+) m/z 854 ([М+Н]+, ~30% относительной интенсивности), 877 (|М+№|', ~100% относительной интенсивности)} а также непрореагировавшего соединения 18 при времени удержания 1,07 мин, с учетом того, что и исходное соединение, и продукт слабо поглощают УФ (214 и 254 нм) и лучше всего обнаруживаются на ES<sup>+</sup> TIC. Дополнительную 6-малеимидо-капроновую кислоту (32 мг, 0,15 ммоль) и EDCI (32 мг, 0,17 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси до полного израсходования исходного соединения (согласно ЖХ/МС). Реакционную смесь разбавляли DCM (100 мл) и промывали Н2О (3x30 мл), солевым раствором (40 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование с увеличением шага на 1%: от 100% DCM до 96:4 об./об. DCM/MeOH) с получением соединения 19 в виде масла (214 мг, выход 83%).</p> <p>- 64 027910</p> <p>(b) ^(35-(Аминоокси)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-ундекаоксапентатриаконтил)-6-(2,5-диоксо-2,5дигидро- 1Н-пиррол-1 -ил)гексанамид (20)</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (2 мл) добавляли к порции Вос/ТНР-защищенного соединения 19 (214 мг, 0,25 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 1 ч реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС, пик желаемого продукта при времени удержания 1,06 мин {(ES<sup>+</sup>) m/z 754 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~100% относительной интенсивности)}, следует отметить, что как исходное соединение, так и продукт слабо поглощают УФ (214 и 254 нм) и лучше всего обнаруживаются на ES<sup>+</sup> TIC. Реакционную смесь сохраняли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO<sub>3</sub> (100 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x30 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением оксиамина 20 в виде масла (161 мг, выход 85%), который переносили на следующий этап без дополнительной очистки.</p> <p>(с) (1^,1^.11^.11а^)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-формил-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с] [1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (21)</p> <p>3,5-бис-(Бромметил)бензальдегид (260 мг, 0,90 ммоль) [Enrique Di'ez-Barra et al. J. Org. Chem. 2001, 66, 5664-5670] добавляли к перемешиваемому раствору Вос/ТНР-защищенного PBD копирующего соединения 7 (826 мг, 1,79 ммоль), TBAI (33 мг, 89,7 мкмоль) и K<sub>2</sub>CO<sub>3</sub> (247 мг, 1,79 ммоль) в сухом DMF (12 мл). Реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в атмосфере аргона в течение 2,5 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 1,92 мин {(ES+) m/z 1051 ([М+Н]+, ~65% относительной интенсивности) 1073 (|M+Na|'. ~25% относительной интенсивности)}. Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и DMF удаляли выпариванием под вакуумом. Получившийся остаток разделяли между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл) и водную фазу экстрагировали EtOAc (3x15 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2x20 мл), солевым раствором (30 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэшхроматографии (градиентное элюирование с увеличением шага 10%: от 50:50 об./об. EtOAc/гексан до 80:20 об./об. EtOAc/гексан) с получением бис-эфира 21 в виде белой пены (717 мг. выход 76%). Следует заметить, что соединение 21 было выделено как смесь диастереоизомеров, обусловленных защитной группой ТНР.</p> <p>- 65 027910</p> <p>(d) (118,11а8,11'8,11а'8)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-((син/анти)-45-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол1-ил)-40-оксо-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-додекакса-2,39-диазапентатетракон-1-ен-1-ил)-1,3фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))-бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (22)</p> <p>PTSA (4,1 мг, 21,4 мкмоль) добавляли к перемешиваемому раствору альдегида 21 (224 мг, 0,21 ммоль) и оксиамина 20 (161 мг, 0,21 ммоль) в сухом DCM (3 мл) при 0°C (лед/ацетон). Реакционную смесь оставляли для перемешивания при 0°C в атмосфере аргона и после перемешивания в течение 3 ч анализ ЖХ/МС выявил полное израсходование оксиамина 20 (время удержания 1,06 мин), присутствие желаемого продукта {время удержания 1,85 мин (ES<sup>+</sup>) m/z 1787 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~25% относительной интенсивности) 1810 ([М+Na]', ~90% относительной интенсивности)} и непрореагировавшего альдегида 21 (время удержания 1,91 мин). Для предотвращения нежелательного отщепления ТНР (наблюдаемого в ранее проводимых аналитических реакциях), реакцию в этой точке гасили, несмотря на не полностью израсходованный альдегид: смесь разбавляли DCM (50 мл) и промывали NaHCO<sub>3</sub> (3x15 мл), солевым раствором (30 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование с увеличением шага 1%: от 100% DCM до 96:4 об./об. DCM/MeOH) с получением син/анти оксимов 22 в виде белой пены (215 мг, выход 56%). Непрореагировавший альдегид 21 (83 мг) выделяли во время флэшхроматографии. Следует отметить, что соединение 22 было выделено как смесь диастереоизомеров, обусловленных защитной группой ТНР.</p> <p>(е) N-((син/анти)-1-(3,5-бис-((((S)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Hпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-додекаокса-2азаоктатриаконт-1 -ен-3 8-ил)-6-(2,5 -диоксо-2,5 -дигидро-1 Н-пиррол-1 -ил)гексанамид (23)</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (1 мл) добавляли к порции Вос/ТНР-защищенного соединения 22 (204 мг, 0,11 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 30 мин, реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС, пик желаемого продукта при времени удержания 1,42 мин {(ES+) m/z 1383 ([M+НД, &lt;5% относительной интенсивности)}. Реакционную смесь сохраняли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO<sub>3</sub> (50 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование с увеличением шага 1%: от 100% CHCl<sub>3</sub> до 96:4 об./об. CHCl<sub>3</sub>/MeOH) с получением незащищенных син/анти оксимов 23 в</p> <p>- 66 027910</p> <p>виде тонкой желтой пленки (85 мг, выход 54%). Анализ методом обращенно-фазовой сверхбыстрой высокоэффективной жидкостной хроматографии (подробные условия анализа см. в разделе общей информации) выявил преимущественно два пика при 16,15 мин (син-изомер, второстепенный компонент) и 16,42 мин (анти-изомер, основной компонент).</p> <p>(f) К-((анти)-1-(3,5-бис-((((8)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-додекаокса-2азаоктатриаконт-1 -ен-3 8-ил)-6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1 Н-пиррол-1 -ил)гексанамид (24)</p> <p>Соединение 23 очищали посредством препаративной ВЭЖХ (подробные условия анализа см. в разделе общей информации). Соединение, соответствующее пику элюирования при времени удержания 16,42 мин, выделяли и лиофилизировали с получением анти-оксима 24 (9,9 мг).</p> <p><sup>1</sup>Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,12 (с, 1Н), 7,66 (д, 2Н, J=4,4 Гц), 7,62-7,59 (м, 2Н), 7,53-7,51 (м, 3Н), 6,82 (с, 2Н), 6,68 (с, 2Н), 6,16 (br с, 2Н), 5,25-5,14 (м, 8Н), 4,33 (т, 2Н, J=4,8 Гц), 4,28 (br с, 4Н), 3,96 (с, 6Н), 3,90-3,84 (м, 2Н), 3,82-3,78 (м, 2Н), 3,67-3,49 (м, 43Н), 3,46-3,42 (м, 2Н), 3,15-3,08 (м, 2Н), 2,98-2,90 (м, 2Н), 2,16 (т, 2Н, J=7,6 Гц), 1,70-1,54 (м, 4Н), 1,36-1,24 (м, 2Н).</p> <p>(g) К-((син)-1-(3,5-бис-((((8)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-додекаокса-2азаоктатриаконт-1 -ен-3 8-ил)-6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1 Н-пиррол-1 -ил)гексанамид (25)</p> <p>Соединение 23 очищали посредством препаративной ВЭЖХ (подробные условия анализа см. в разделе общей информации). Соединение, соответствующее пику элюирования при времени удержания 16,15 мин, выделяли и лиофилизировали с получением син-оксима 25 (5,2 мг).</p> <p><sup>1</sup>Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,93-7,91 (м, 2Н), 7,66 (д, 2Н, J=4,4 Гц), 7,57-7,55 (м, 1Н), 7,52 (с, 2Н), 7,32 (с, 1Н), 6,82 (с, 2Н), 6,68 (с, 2Н), 6,18 (br с, 2Н), 5,26-5,14 (м, 8Н), 4,35 (т, 2Н, J=5,1 Гц), 4,28 (br с, 4Н), 3,96 (s, 6Н), 3,90-3,84 (м, 2Н), 3,81 (т, 2Н, J=5,1 Гц), 3,68-3,48 (м, 43Н), 3,46-3,42 (м, 2Н), 3,15-3,07 (м, 2Н), 2,97-2,90 (м, 2Н), 2,16 (т, 2Н, J=7,6 Гц), 1,70-1,54 (м, 4Н), 1,36-1,24 (м, 2Н).</p> <p>- 67 027910</p> <p>Пример 6.</p> <p>(а) Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(1-амино-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азанонадец-18-ин-19-ил)-1,3фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(118,11а8,11'8,11а'8)-бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-</p> <p>(i) трет-Бутил (15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азанонадец-18-ин-1-ил)карбамат (27) EDCI (263 мг, 1,37 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 1-Ьос-М-амидо-&lt;1РЕО@4-кислоты (26) (500 мг, 1,37 ммоль, Stratech Scientific Limited) и пропаргиламина (88 мкл, 76 мг, 1,37 ммоль) в сухом DCM (10 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 16 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества желаемого продукта при времени удержания 1,26 мин (ES+) m/z 403 ([М+Н]+, ~50% относительной интенсивности), 425 ([M+Na]+, ~100% относительной интенсивности), следует отметить, что как исходное соединение, так и продукт слабо поглощают УФ (214 и 254 нм) и лучше всего обнаруживаются на ES<sup>+</sup> TIC. Реакционную смесь разбавляли DCM (100 мл) и промывали Н2О (30 мл), солевым раствором (40 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование с увеличением шага 1%: от 100% DCM до 98:2 об./об. DCM/MeOH) с получением амида 27 в виде масла (392 мг, выход 71%).</p> <p>(ii) Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(2,2-диметил-4,20-диоксо-3,8,11,14,17-пентаокса-5,21-диазатетракоз-23ин-24-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(1^,11aS,11^,11аЪ)-бис-(7-метокси-2-метилен-5оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин10(5Н)-карбоксилат) (28).</p> <p>Каталитическое количество Pd(PPh<sub>3</sub>)<sub>4</sub> (23,0 мг, 19,5 мкмоль) добавляли к смеси йодоарильного соединения 2а (1,02 г, 0,89 ммоль), Вос-ацетилена 27 (393 мг, 0,98 ммоль), CuI (7,4 мг, 39,1 мкмоль), диэтиламина (2,02 мл, 1,43 г, 19,5 ммоль) и абсолютно сухих гранул молекулярного сита 4А в сухом DMF (9 мл) в абсолютно сухом герметичном сосуде. Смесь дегазировали и трижды продували аргоном, затем нагревали с помощью микроволнового излучения при 100°C в течение 26 мин, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 1,89 мин (ES+) m/z 1446 ([M+Na]+, ~100% относительной интенсивности, 1424 ([М+Н]+, ~15% относительной интенсивности). Реакционную смесь оставляли для охлаждения до комнатной температуры и затем фильтровали через спекшийся шлак для удаления сит (промывка DMF). Фильтрат выпаривали под вакуумом и получившийся в результате остаток растворяли в DCM (100 мл) и промывали Н<sub>2</sub>О (20 мл), солевым раствором (30 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование с увеличением шага 1%: от 100% DCM до 97:3 об./об. DCM/MeOH) с получением алкина 28 в виде желтой пены (882 мг, выход 70%).</p> <p>- 68 027910</p> <p>(iii) Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(1-амино-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азанонадец-18-ин-19-ил)-1,3фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(118,11а8,11'8,11а'8)-бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)карбоксилат) (29).</p> <p>TBDMSOTf (1,42 мл, 1,64 г, 6,2 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору три-Вос защищенного соединения 28 (882 мг, 0,62 ммоль) и 2,6-лутидин (0,96 мл, 883 мг, 8,25 ммоль) в сухом DCM (15 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли для перемешивания в атмосфере аргона в течение 16 ч, в течение которых анализ LC/MS выявил образование TBS карбамата при времени удержания 2,09 мин (ES+) m/z 1504 ([M+Na]+, ~100% относительной интенсивности). Реакционную смесь разбавляли DCM (60 мл) и промывали насыщенным NH<sub>4</sub>Cl (2x20 мл), Н<sub>2</sub>О (20 мл), солевым раствором (30 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного TBS карбамата. Продукт повторно растворяли в THF (15 мл) и обрабатывали раствором TBAF (744 мкл 1,0 M раствора в THF, 0,744 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 1,45 мин (ES+) m/z 1324 ([М+Н] , ~60% относительной интенсивности), а также продукта, соответствующего расщеплению 1 N10Boc/1 THP при времени удержания 1,29 мин (ES+) m/z 1121 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~10% относительной интенсивности), 1138 ([М+Н2О]<sup>+</sup>, ~20% относительной интенсивности) и продукта, соответствующего 2 расщеплению И10Вос/2 ТНР при времени удержания 1,12 мин (ES+) m/z 919 ([М+Н]+, ~2.5% относительной интенсивности), 937 ([М+Н2О]<sup>+</sup>, ~3% относительной интенсивности), 955 ([М+2Н2О]<sup>+</sup>, ~5% относительной интенсивности). THF удаляли выпариванием под вакуумом и полученный в результате остаток повторно растворяли в DCM (60 мл) и промывали насыщенным NH<sub>4</sub>Cl (2x20 мл), Н<sub>2</sub>О (20 мл), солевым раствором (30 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением основного 29 в виде розоватой пены.</p> <p>(b) (Я)-2-(Пиридин-2-илдисульфанил)пропил (19-(3,5-бис-(((^)-7-метокси-2-метилен-5-оксо2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-15-оксо-3,6,9,12-</p> <p>(i) (Я)-2-(Пиридин-2-илдисульфанил)пропил карбонохлоридат (31).</p> <p>Трифосген (9,36 мг, 31,5 мкмоль) добавляли к перемешиваемому раствору (Я)-2-(пиридин-2илсульфанил)пропан-1-ола (30) (18 мг, 0,09 ммоль) и пиридина (6,7 мкл, 6,6 мг, 0,08 ммоль) в сухом DCM (1 мл). Реакционную смесь оставляли для перемешивания в атмосфере аргона в течение 30 мин, после чего растворитель удаляли выпариванием под вакуумом с получением неочищенного хлорформиата 31 в виде белой пены. Следует заметить: продукт переносили на следующий этап без очистки и анализа.</p> <p>- 69 027910</p> <p>(ii) Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-((К)-5,21-диоксо-2-(пиридин-2-илсульфанил)-4,9,12,15,18-пентаокса6,22-диазапентакоз-24-ин-25-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(11S,11aS,11'S,11 аЪ)-бис-(7метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (32).</p> <p>Раствор соединения 31 (~23 мг, ~0,09 ммоль) в сухом DCM (1 мл) по каплям добавляли к перемешиваемому раствору амина 29 (~116 мг, ~0,09 ммоль) и пиридина (7,8 мкл, 7,7 мг, 0,1 ммоль) в сухом DCM (1 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли для перемешивания в атмосфере аргона в течение 3 ч, после чего анализ LC/MS (колонка Kinetex®) ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 2,02 мин (ES+) m/z 1550 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~20% относительной интенсивности) наряду с сохранением непрореагировавшего исходного вещества 29 при времени удерживания 1,51 мин. Растворитель удаляли выпариванием под вакуумом с получением неочищенного карбамата 32, который переносили на следующий этап без дополнительной очистки или анализа.</p> <p>(iii) (К)-2-(Пиридин-2-илсульфанил)пропил (19-(3,5-бис-(((^)-7-метокси-2-метилен-5-оксо2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-15-оксо-3,6,9,12тетраокса-16-азанонадец-18-ин-1-ил)карбамат (33).</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (1 мл) добавляли к порции неочищенного Вос/ТНР-защищенного соединения 32 (~136 мг, 88 мкмоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 1 ч реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС (колонка Kinetex®), пик желаемого продукта при времени удержания 1,42 мин (ES+) m/z 1146 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~90% относительной интенсивности). Реакционную смесь сохраняли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO3 (50 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl<sub>3</sub> до 95:5 об./об. CHCl<sub>3</sub>/MeOH) с получением соединения 33 в виде пленки (10 мг, выход 7%): ЖХ/МС (15-минутный анализ), время удержания 5,79 мин (ES+) m/z 1146 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~8% относительной интенсивности).</p> <p><sup>1</sup>Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,44 (д, 1Н, J=4,8 Гц), 7,75-7,58 (м, 2Н), 7,66 (д, 2Н, J=4,4 Гц), 7,52 (с, 2Н), 7,45-7,40 (м, 3Н), 7,08-7,05 (м, 1Н), 6,95-6,85 (м, 1Н), 6,79 (с, 2Н), 5,43-5,41 (м, 1Н), 5,23-5,09 (м, 8Н), 4,30-4,23 (м, 6Н), 4,19-4,10 (м, 4Н), 3,97-3,94 (м, 2Н), 3,96 (с, 6Н), 3,91-3,85 (м, 2Н), 3,75 (т, 2Н, J=5,8 Гц), 3,66-3,58 (м, 8Н), 3,52 (т, 2Н, J=5,1 Гц), 3,34-3,30 (м, 2Н), 3,23-3,08 (м, 3Н), 2,96-2,90 (м, 2Н), 2,52 (т, 2Н, J=5,7 Гц), 1,31 (д, 3Н, J=7,0 Гц).</p> <p>- 70 027910</p> <p>(a) (±)-4-(Пиридин-2-илдисульфанил)пентановая кислота (35).</p> <p>Aldrithiol™-2 (176 мг, 0,86 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору (±)-4-меркаптопентановой кислоты 34 (107 мг, 0,80 ммоль, Aurora Fine Chemicals LLC) в EtOH (2 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли для перемешивания в течение 16 ч в атмосфере аргона, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 1,32 мин (ES+) m/z 244 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~95% относительной интенсивности). Растворитель удаляли выпариванием под вакуумом и полученный в результате остаток очищали с помощью флэшхроматографии (градиентное элюирование: от 90:10 об./об. гексан/EtOAc до 80:20 об./об. гексан/EtOAc) с получением соединения 35 в виде твердого вещества белого цвета (92 мг, выход 47%).</p> <p>(b) (±)-Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(5,21-диоксо-24-(пиридин-2-илсульфанил)-8,11,14,17-тетраокса-4,20диазапентакоз-1-ин-1-л)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(118,11aS, 11'S,11аЪ)-бис-(7-метокси-2метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (36).</p> <p>EDCI (22 мг, 0,12 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору (±)-4-(пиридин-2илдисульфанил)пентановой кислоты (35) (26 мг, 0,10 ммоль) и амина 29 (~139 мг, 0,1 ммоль) в сухом DCM (2 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 20 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества желаемого продукта (раздвоенный пик) при времени удержания 1,88 мин (ES+) m/z 1548 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~40% относительной интенсивности) а также продукта, соответствующего расщеплению 1 N10Boc/1 THP при времени удержания 1,67 мин (ES+) m/z 1346 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~20% относительной интенсивности), 1138 ([М+Н2О]<sup>+</sup>, ~20% относительной интенсивности) и продукта, соответствующего расщеплению 2 Ы10Вос/2 ТНР при времени удержания 1,43 мин (ES+М+ не наблюдалось). Реакционную смесь разбавляли DCM (30 мл) и промывали Н<sub>2</sub>О (15 мл), солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта 36 в виде пены.</p> <p>(c) (±)-Ы-(3-(3,5-бис-(((^)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)проп-2-ин-1-ил)-1-(4-(пиридин-2илдисульфанил)пентанамидо)-3,6,9,12-тетраоксапентадекан-15-амид (37).</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (1 мл) добавляли к порции неочищенного Вос/ТНР-защищенного соединения 36 (~163 мг, 0,10 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 1 ч реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС, пик желаемого продукта при времени удержания 1,44 мин (ES+) m/z 1144 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~3% относительной интенсивности). Реакционную смесь сохраняли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO3 (60 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x30 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл)), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl3 до 96:4 об./об. CHCl3/MeOH) с получением соединения 37 в виде оранжевой пены (69 мг, выход 57%): ЖХ/МС (15-минутный анализ), время удержания 5,72 мин (ES+) m/z 1144 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~3% относительной интенсивности).</p> <p><sup>1</sup>Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,42 (д, 1Н, J=4,3 Гц), 7,72-7,59 (м, 2Н), 7,66 (д, 2Н, J=4,3 Гц), 7,52 (с, 2Н), 7,45-7,40 (м, 3Н), 7,09-7,04 (м, 1Н), 6,98-6,94 (м, 1Н), 6,80 (с, 2Н), 6,40-6,35 (м, 1Н), 5,23-5,09 (м, 8Н), 4,30-4,23 (м, 6Н), 4,19-4,10 (м, 4Н), 3,96 (с, 6Н), 3,91-3,85 (м, 2Н), 3,75 (т, 2Н, J=5,7 Гц), 3,66-3,58 (м, 8Н), 3,51 (т, 2Н, J=5,0 Гц), 3,42-3,39 (м, 2Н), 3,23-3,08 (м, 2Н), 2,96-2,90 (м, 3Н), 2,52 (т, 2Н, J=5,6 Гц), 2,34 (t, 2Н, J=7,4 Гц), 1,94 (кв, 2Н, J=7,4 Гц), 1,30 (д, 3Н, J=6,7 Гц).</p> <p>- 71 027910</p> <p>(a) 3-(((Проп-2-ин-1-илокси)карбонил)амино)пропионовая кислота (39).</p> <p>Раствор пропаргил хлорформиата (315 мкл, 383 мг, 3,23 ммоль) в толуоле (2 мл) по каплям добавляли к перемешиваемой смеси β -аланина (38) (250 мг, 2,81 ммоль) и NaHCO<sub>3</sub> (678 мг, 8,1 ммоль) в Н<sub>2</sub>О (7 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли для энергичного перемешивания в течение 16 ч, после чего смесь разделяли. Водный слой разбавляли Н<sub>2</sub>О (20 мл), промывали Et<sub>2</sub>O (4x10 мл), охлаждали до 0-5°C (лед/ацетон) и подкисляли до рН 2 концентрированной HCl. Кислотный раствор экстрагировали EtOAc (3x20 мл) и объединенные органические слои промывали Н<sub>2</sub>О (10 мл), солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта 39 в виде масла, которое переносили на следующий этап без дополнительной очистки.</p> <p>(b) Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(5,9,25-триоксо-4,13,16,19,22-пентаокса-6,10,26-триазанонакоза-1,28диин-29-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(11S,11aS,11'S,11 а'8)-бис-(7-метокси-2-метилен-5оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин10(5Н)-карбоксилат) (40).</p> <p>EDCI (24 мг, 0,13 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору 3-(((проп-2-ин-1илокси)карбонил)амино)пропановой кислоты (39) (18 мг, 0,10 ммоль) и амина 29 (~139 мг, 0,10 ммоль) в сухом DCM (3 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 1,5 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества желаемого продукта при времени удержания 1,84 мин (ES+) m/z 1477 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~20% относительной интенсивности), 1499 ([М+Na]', ~22% относительной интенсивности) а также продукта, соответствующего расщеплению 1 N10Boc/1 THP при времени удержания 1,60 мин (ES+) m/z 1274 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~10% относительной интенсивности) и непрореагировавшего соединения 5 при времени удержания 1,47 мин (ES+) m/z 1324 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~5% относительной интенсивности). Реакционную смесь разбавляли DCM (20 мл) и промывали Н<sub>2</sub>О (2x10 мл), солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта 40 в виде пены.</p> <p>(c) Проп-2-ин-1-ил (23-(3,5-бис-(((^)-7-метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-3,19-диоксо-7,10,13,16-тетраокса-4,20диазатрикоз-22-ин-1-ил)карбамат (41).</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (2 мл) добавляли к порции неочищенного Вос/ТНР-защищенного соединения 40 (~155 мг, 0,10 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 1,5 мин реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС, пик желаемого продукта при времени удержания 1,41 мин (ES+) m/z 1073 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~30% относительной интенсивности). Реакционную смесь сохраняли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO3 (60 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x20 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (25 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100%</p> <p>- 72 027910</p> <p>CHCl3 до 95:5 об./об. CHCl3/MeOH) с получением соединения 41 в виде желтой пены (51 мг, выход 45%): ЖХ/МС (15-минутный анализ), время удержания 5,71 мин (ES+) m/z 1073 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~30% относительной интенсивности).</p> <p><sup>1</sup>Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,67 (д, 2Н, J=4,5 Гц), 7,52 (с, 2Н), 7,46-7,43 (м, 3Н), 7,07-7,02 (м, 1Н),</p> <p>6,80 (с, 2Н), 6,64-6,57 (м, 1Н), 5,78-5,72 (м, 1Н), 5,21-5,09 (м, 8Н), 4,64 (д, 2Н, J=2,2 Гц), 4,29-4,25 (м, 6Н), 3,96 (с, 6Н), 3,90-3,85 (м, 2Н), 3,76 (т, 2Н, J=5,9 Гц), 3,65-3,35 (м, 18Н), 3,16-3,07 (м, 2Н), 2,93 (д, 2Н, J=16 Гц), 2,52 (т, 2Н, J=5,9 Гц), 2,48-2,45 (м, 1Н), 2,40 (t, 2H, J=5,9 Гц).</p> <p>ил)гексанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)фенил)-3,19-диоксо-2,7,10,13,16-пентаокса4,20-диазатрикоз-22-ин-23-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(118,11а8,11'8,11а'8)-бис-(7метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидр-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (43).</p> <p>DIPEA (44 мкл, 32 мг, 0,25 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору основного амина 29 (~155 мг, 0,11 ммоль) и нитрофенил карбоната 42 (84 мг, 0,11 ммоль) в атмосфере сухого DMF (3 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в атмосфере аргона в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 1,80 мин (ES+) m/z 1922 ([М+Н]+ ~40% относительной интенсивности), 1944 ([М+Na]*, ~20% относительной интенсивности) одновременно с продуктом, соответствующим 1 N10Boc/1 THP отщепляемым при времени удержания 1,61 мин (ES+) m/z 1720 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~20% относительной интенсивности). DMF удаляли при помощи выпаривания под вакуумом и получившийся в результате продукт 43 переносили на следующий этап без дополнительной очистки или анализа.</p> <p>(b) 4-(^)-2-(^)-2-(6-(2,5-Диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1'-ил)гексанамидо)-3-метилбутанамидо)-5уреидопентанамидо)бензил (19-(3,5-бис-(((^)-7-метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-15-оксо-3,6,9,12-тетраокса-16-азаноданец-18ин-1-ил)карбамат (44).</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H2O (3 мл) добавляли к порции неочищенного Вос/ТНР-защищенного соединения 43 (~173 мг, 0,11 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 1,5 ч реакцию считали завершенной исходя из результатов ЖХ/МС анализа, пик желаемого продукта при времени удержания 1,42 мин (ES+) m/z 1518 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~40% относительной интенсивности). Реакционную смесь сохраняли холодной и по каплям добавляли к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO<sub>3</sub> (100 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x30 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получени- 73 027910</p> <p>ем неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl3 до 80:20 об./об. CHCl3/MeOH) с получением неочищенного продукта в виде желтой пены (72 мг, выход неочищенного продукта 42%). Далее вещество очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением очищенного соединения 44 в виде тонкой пленки (4,5 мг, выход 3%): ЖХ/МС (15минутный анализ), время удержания 5,44 мин (ES+) m/z 1518 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~30% относительной интенсивности).</p> <p>Пример 10.</p> <p>(а) 1-(3-Аминпропанамидо)-^(3-(3,5-бис-((((8)-7-метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)проп-2-ин-1-ил)-3,6,9,12тетраоксапентадекан-15-амид (47)</p> <p>0 0 0 0</p> <p>(i) Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(1-(9Н-флорен-9-ил)-3,7,23-триоксо-2,11,14,17,20-пентаокса-4,8,24триазагептакоз-26-ин-27-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(11S,11aS,11'S,11а'S)-бис-(7метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат) (45).</p> <p>EDCI (49 мг, 0,25 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору Fmoc-β-аланина (66 мг, 0,21 ммоль) и амина 29 (~279 мг, 0,21 ммоль) в атмосфере сухого DCM (5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 1,76 мин (ES+) m/z 1617 ([М+Н]+ ~10% относительной интенсивности), 1639 (|M+Na|', ~80% относительной интенсивности) одновременно с продуктом, соответствующим 1 N10Boc/1 THP отщепляемым при времени удержания 1,56 мин (ES+) m/z 1415 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~10% относительной интенсивности). Реакционную смесь разбавляли DCM (30 мл) и промывали Н<sub>2</sub>О (20 мл), солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта 45 в виде пены.</p> <p>(ii) (9Н-Флуорен-9-ил)метил (23-(3,5-бис-((((8)-7-метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)-3,19-диоксо-7,10,13,16-тетраокса-4,20диазатрикоз-22-ин-1-ил)карбамат (46).</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H2O (4 мл) добавляли к порции неочищенного Вос/ТНР-защищенного соединения 45 (~341 мг, 0,21 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 1 ч реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС анализу, пик желаемого продукта при времени удержания 1,44 мин (ES+) m/z 1212 ([M+H]<sup>+</sup>, ~30% относительной интенсивности). Реакционную смесь сохраняли холодной и добавляли по каплям к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO3 (80 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x20 мл) и объединенные органические слои промывали NaHCO<sub>3 </sub>(2x20 мл), солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO<sub>4</sub>), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl3 до 95:5 об./об. CHCl3/MeOH) с получением очищенного продукта 46 в виде желтой пены (179 мг, выход 70%).</p> <p>(iii) 1-(3-Аминопропанамидо)^-(3-(3,5-бис-(((^)-7-метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро1Н-пирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)проп-2-ин-1-ил)-3,6,9,12тетраоксапентадекан-15-амид (47).</p> <p>Диметиламин (735 мкл 2,0 М раствор в THF, 1,47 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору Fmoc защищенного соединения 46 (89 мг, 73,5 мкмоль) в THF (3 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 3 ч при комнатной температуре анализ ЖХ/МС выявил завершение реакции с желаемым продуктом при времени удержания 1,14 мин (ES+) m/z 990 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~8% относительной ин- 74 027910</p> <p>тенсивности), 1008 ([М+Н<sub>2</sub>О]<sup>+</sup>, ~10% относительной интенсивности), 1026 ([М+2Н<sub>2</sub>О]<sup>+</sup>, ~15% относительной интенсивности), а также побочный продукт отщепления Fmoc при времени удержания 1,88 мин. Смесь выпаривали под вакуумом и неочищенный продукт 47 переносили на следующий этап без дополнительной очистки и анализа.</p> <p>(b) К-(3-(3,5-бис-((((8)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)проп-2-ин-1-ил)-1-(3-(2-бромацетамидо)пропанамидо)3,6,9,12-тетраоксапентадекан-15-амид (48)</p> <p>Бромуксусный ангидрид (23 мг, 88,2 мкмоль) добавляли к перемешиваемому раствору неочищенного амина 47 (~73 мг, 73,5 мкмоль) в DCM (3 мл). Реакционную смесь оставляли для перемешивания в атмосфере аргона при комнатной температуре в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил завершение реакции с желаемым продуктом, наблюдаемым при времени удержания 1,34 мин (ES+) m/z 1112 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~30% относительной интенсивности). Растворитель удаляли выпариванием под вакуумом с образованием неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl<sub>3</sub> до 93:7 об./об. CHCl<sub>3</sub>/MeOH) с получением продукта в виде желтой пены (38 мг, выход неочищенного продукта 46%). Далее вещество очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением очищенного продукта 48 в виде тонкой пленки (5 мг, выход 6%): ЖХ/МС (15-минутный анализ), время удержания 4,96 мин (ES+) m/z 1112 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~10% относительной интенсивности).</p> <p><sup>1</sup>Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,67 (д, 2Н, J=4,4 Гц), 7,52 (с, 2Н), 7,46-7,43 (м, 4Н), 7,10-7,07 (м, 1Н),</p> <p>6,80 (с, 2Н), 5,21-5,09 (м, 8Н), 4,29-4,25 (м, 6Н), 3,96 (с, 6Н), 3,90-3,85 (м, 2Н), 3,82 (с, 2Н), 3,77 (т, 2Н, J=5,9 Гц), 3,65-3,40 (м, 18Н), 3,16-3,07 (м, 2Н), 2,94 (д, 2Н, J=16 Гц), 2,53 (т, 2Н, J=5,9 Гц), 2,43 (т, 2Н, J=5,9 Гц).</p> <p>- 75 027910</p> <p>(а) Ди-трет-бутил 8,8'-(((5-(1-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)-3,19-диоксо-7,10,13,16тетраокса-4,20-диазатрикоз-22-ин-23-ил)-1,3-фенилен)-бис-(метилен))-бис-(окси))(1^,1^,11^,11аЪ)бис-(7-метокси-2-метилен-5-оксо-11-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-2,3,11,11а-тетрагидро-1Нпирроло[2,1-с][1,4]бензодиазепин-10(5Н)-карбоксилат (9).</p> <p>EDCI (61 мг, 0,32 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору N-малеоил-в-аланина (53 мг, 0,32 ммоль) и амина 29 (~418 мг, 0,32 ммоль) в сухом DCM (6 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 3 ч, после чего анализ ЖХ/МС выявил образование значительного количества продукта при времени удержания 1,80 мин (ES+) m/z 1474 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~15% относительной интенсивности), 1497 (|М+№)|'. ~100% относительной интенсивности), а также продукта, соответствующего расщепленному 1 N10Boc/1 THP при времени удержания 1,56 мин 1272 ([М+Н]+, ~80% относительной интенсивности), 1295 ([M+Na]+, ~45% относительной интенсивности) и продукта, соответствующего расщепленному 2 Ш0Вос/2 ТНР при времени удержания 1,31 мин (ES+ М+ не наблюдалось). Реакционную смесь разбавляли DCM (30 мл) и промывали Н2О (15 мл), солевым раствором (20 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта 9 в виде пены.</p> <p>(b) ^(3-(3,5-бис-(((^)-7-Метокси-2-метилен-5-оксо-2,3,5,11а-тетрагидро-1Н-пирроло[2,1с][1,4]бензодиазепин-8-ил)окси)метил)фенил)проп-2-ин-1-ил)-1-(3-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1ил)пропанамидо)-3,6,9,12-тетраоксапентадекан-15-амид (10).</p> <p>Раствор 95:5 об./об. TFA/H<sub>2</sub>O (5 мл) добавляли к порции неочищенного Вос/ТНР-защищенного соединения 9 (~466 мг, 0,32 ммоль) при 0°C (лед/ацетон). После перемешивания при 0°C в течение 1 ч реакцию считали завершенной согласно ЖХ/МС анализу, пик желаемого продукта при времени удержания 1,32 мин (ES+) m/z 1070 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~100% относительной интенсивности). Реакционную смесь сохраняли холодной и добавляли по каплям к охлажденному насыщенному водному раствору NaHCO<sub>3</sub> (120 мл). Смесь экстрагировали DCM (3x40 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Очистку проводили с помощью флэш-хроматографии (градиентное элюирование: от 100% CHCl3 до 96:4 об./об. CHCl3/MeOH) с получением соединения 10 в виде оранжевой пены (202 мг, выход 60%): [a]<sup>21<sub></sup>D</sub> = +351° (с=0,47, CHCl<sub>3</sub>); ЖХ/МС (15-минутный анализ), время удержания 4,88 мин (ES+) m/z 1070 ([М+Н]<sup>+</sup>, ~100% относительной интенсивности).</p> <p><sup>1</sup>Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 7,66 (d, 2H, J=4,4 Гц), 7,52 (с, 2Н), 7,45-7,40 (м, 3Н), 6,98-6,94 (м, 1Н),</p> <p>6,80 (с, 2Н), 6,66 (с, 2Н), 6,55-6,50 (м, 1Н), 5,22-5,07 (м, 8Н), 4,30-4,22 (м, 6Н), 3,96 (с, 6Н), 3,91-3,85 (м, 2Н), 3,82 (т, 2Н, J=7,2 Гц), 3,76 (т, 2Н, J=5,8 Гц), 3,65-3,43 (м, 16Н), 3,16-3,08 (м, 2Н), 2,94 (д, 2Н, J=15,7 Гц), 2,54-2,44 (м, 4Н).</p> <p>Восстановление/окисление ThioMabs для конъюгирования.</p> <p>Полноразмерные сконструированные на основе цистеина моноклональные антитела (ThioMabs Junutula, et al., 2008b Nature, Biotech, 26(8):925-932; Dornan et al. (2009), Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO 2009/052249, Shen et al. (2012), Nature, Biotech, 30(2):184-191; Junutula et al. (2008) Jour of Immun. Methods 332:41-52), экспрессируемые в клетках CHO, восстанавливали приблизительно 20-40-кратным избытком ТСЕР (трис-(2-карбоксиэтил)фосфин гидрохлорида или DTT (дитиотреитол) в 50 мМ Tris pH 7,5 с 2 мМ EDTA в течение 3 ч при 37°C или в течение ночи при комнатной температуре (Getz et al. (1999), Anal. Biochem. Vol. 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA). Восстановленное ThioMab разбавляли и вносили в колонку HiTrap S в 10 мМ ацетат натрия, рН 5, и элюировали PBS, содержащим 0,3 М хлорид натрия. В качестве альтернативы антитело подкисляли добавлением 1/20 объема 10% уксусной кислоты, разбавленной 10 мМ сукцината рН 5, загружали в колонку и затем промывали сукцинатным буфером в объеме, эквивалентном 10 объемам колонки. Колонку элюировали 50 мМ Tris pH 7,5, 2 мМ EDTA.</p> <p>Элюированное восстановленное антитело ThioMab обрабатывали 15-кратным молярным избытком DHAA (дегидроаскорбиновой кислоты) или 200 нМ водного сульфата меди (CuSO<sub>4</sub>). Окисление межцепьевых дисульфидных связей было завершено в течение 3 ч или более. Окисление воздухом окружающей среды также было эффективным. Повторно окисленное антитело подвергали диализу в 20 мМ сукцинате натрия рН 5, 150 мМ NaCl, 2 мМ EDTA и сохраняли замороженным при -20°C.</p> <p>Конъюгирование Thio-Mabs с соединениями с получением конъюгатов антитело-лекарственное средство.</p> <p>Деблокированные повторно окисленные тиоантитела (ThioMab) вступали в реакцию с 6-8-кратным морлярным избытком соединений 7, 10, 13, 17, 24, 25, 33, 37, 44, 48 (исходный раствор DMSO в концентрации 20 мМ) в 50 мМ Tris, рН 8, до завершения реакции (16-24 ч), определенного согласно анализу ЖХ/МС реакционной смеси.</p> <p>Неочищенные конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) затем вносили в катионообменную колонку после разбавления 20 мМ сукцинатом натрия, рН 5. Колонку промывали 20 мМ сукцинатом натрия в объеме, по меньшей мере в 10 раз превышающем объем колонки, рН 5, и элюировали антитело PBS. Конъюгаты антитело-лекарственное средство в составе 20 мМ His/ацетата, рН 5, с 240 мМ</p> <p>- 76 027910</p> <p>сахарозой с использованием колонок гель-фильтрации. Конъюгаты антитело-лекарственное средство характеризовались УФ-спектроскопией для определения концентрации белка, аналитической SEC (гельхроматографией) для анализа агрегации и ЖХ/МС до и после обработки лизин С эндопептидазой.</p> <p>Гель-фильтрационную хроматографию проводили с использованием колонки Shodex KW802.5 в 0,2 М фосфате калия рН 6,2 с 0,25 мМ хлоридом калия и 15% IPA (изофталевой кислотой) при скорости потока 0,75 мл/мин. Степень агрегированности конъюгата определяли путем интегрирования площади элюированного пика поглощения при 280 нм.</p> <p>Анализ ЖХ/МС выполняли с использованием прибора Agilent QTOF 6520 ESI. В качестве примера конъюгат антитело-лекарственное средство, образованный с использованием указанных реагентов, обрабатывали 1:500 мас./мас. эндопротеазой Lys С (Promega) в Tris, pH 7,5, в течение 30 мин при 37°C. Полученные в результате расщепления фрагменты загружали в колонку 1000А, 8 мкм PLRP-S, нагревали до 80°C и элюировали с градиентом от 30% В до 40% В в течение 5 мин. Подвижная фаза А представляла собой H<sub>2</sub>O с 0,05% TFA, а подвижная фаза В представляла собой ацетонитрил с 0,04% TFA. Скорость потока составляла 0,5 мл/мин. Элюирование белка наблюдали путем определения поглощения УФ при 280 нм перед ионизацией посредством электрораспыления и анализа методом масс-спектроскопии. Обычно достигалось хроматографическое разрешение несконъюгированного фрагмента Fc, остаточного несконъюгированного Fab и соединенного с лекарственным средством Fab. Полученный спектр m/z деконволюировали с использованием программного обеспечения Mass Hunter™ (Agilent Technologies) для вычисления массы фрагментов антитела.</p> <table border="1"> <tr><td> </td><td colspan="2"> ADC тиоконъюгать</td><td colspan="2"> I с соединением 7</td></tr> <tr><td> Ab</td><td> ADC</td><td> DAR</td><td> (соотношение</td><td> ЖХМС</td></tr> <tr><td> </td><td> </td><td colspan="2"> лекарственного</td><td> результаты</td></tr> <tr><td> </td><td> </td><td colspan="2"> средства к антителу)</td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 110</td><td> 1,8</td><td> </td><td> 23439,82</td></tr> <tr><td> Her2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51681,86</td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 111</td><td> 1,9</td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 115</td><td> 1,8</td><td> </td><td> 24034,96</td></tr> <tr><td> CD22</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51727,97</td></tr> <tr><td> 10F4v3</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td colspan="2"> </td><td> </td></tr> </table> <p>- 77 027910</p> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 10</p> <table border="1"> <tr><td> Ab</td><td> ADC</td><td> DAR лекарст средств</td><td> (соотношение венного а к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 120</td><td> 1,9</td><td> </td><td> 23440,18</td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51697,51</td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 121</td><td> 1,9</td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> Тио анти-</td><td> 125</td><td> 1,7</td><td> </td><td> 24035,14</td></tr> <tr><td> CD22</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51744,95</td></tr> <tr><td> 10F4v3</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 201</td><td> 1,8</td><td> </td><td> 23440,16</td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51697,07</td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 202</td><td> 1,7</td><td> </td><td> 51698,55</td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> </table> <p>- 78 027910</p> <table border="1"> <tr><td> цепь A118С</td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио антиCD33 человека GM15.33 тяжелая цепь А118С</td><td> 203</td><td> 1,6</td><td> 23932,47 легкая цепь 51116,61 тяжелая цепь</td></tr> <tr><td> тио антиLGR5 человека 8E11.V2 тяжелая цепь А118С</td><td> 204</td><td> 1,6</td><td> 23956,85 легкая цепь 51432,43 тяжелая цепь</td></tr> <tr><td> тио антиNapi3b человека 10Н1.11.4В тяжелая цепь А118С</td><td> 205</td><td> 1,4</td><td> </td></tr> <tr><td> тио антиCD22 человеа 10F4v3 тяжелая цепь А118С</td><td> 206</td><td> 1,9</td><td> </td></tr> <tr><td> тио антиНег2 человека 4D5-8 тяжелая цепь А118С</td><td> 207</td><td> 2,0</td><td> 48502 Fab</td></tr> </table> <p>- 79 027910</p> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 13</p> <table border="1"> <tr><td> Ab</td><td> ADC</td><td> DAR (соотношение лекарственного средства к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио антиHer2 человека 4D5-8 тяжелая цепь А118С</td><td> 211</td><td> 1,7</td><td> </td></tr> <tr><td> тио антиCD22 человека 10F4v3 тяжелая цепь А118С</td><td> 212</td><td> 1,7</td><td> </td></tr> <tr><td> тио антиCD33 человека GM15.33 тяжелая цепь А118С</td><td> 213</td><td> 1,5</td><td> 23934,64 легкая цепь 51210,40 тяжелая цепь</td></tr> <tr><td> тио антиMUC16 человека ЗА5 тяжелая цепь А118С</td><td> 214</td><td> 1,8</td><td> 146970 ADC</td></tr> <tr><td> тио антиCD33 человека GM15.33 тяжелая цепь А118С</td><td> 215</td><td> 1,6</td><td> 147407 ADC</td></tr> </table> <p>- 80 027910</p> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 17</p> <table border="1"> <tr><td> Ab</td><td> ADC</td><td> DAR лекарст средств</td><td> (соотношение венного а к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 130</td><td> 1,8</td><td> </td><td> 23440,15</td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> челвека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51728,25</td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 131</td><td> 1,9</td><td> </td><td> 51727,48</td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 135</td><td> 1,8</td><td> </td><td> 23440,15</td></tr> <tr><td> CD22</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51728,25</td></tr> <tr><td> 10F4v3</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 221</td><td> 1,9</td><td> </td><td> 24035,11</td></tr> <tr><td> CD22</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51774,92</td></tr> <tr><td> 10F4v3</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 222</td><td> 1,7</td><td> </td><td> 23932,93</td></tr> <tr><td> CD33</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51148,14</td></tr> <tr><td> GM15.33</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 223</td><td> 2,0</td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> 224</td><td> 0,9</td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> Нег2</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> 4D5-8</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> </table> <p>- 81 027910</p> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 24</p> <table border="1"> <tr><td> АЬ</td><td> ADC</td><td> DAR лекарст средств</td><td> (соотношение венного а к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> </td><td> 1,3</td><td> </td><td> 23932,14</td></tr> <tr><td> CD33</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51428,37</td></tr> <tr><td> GM15.33</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> <tr><td> тио анти-</td><td> </td><td> 0,8</td><td> </td><td> 23479,80</td></tr> <tr><td> MUC16</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> легкая цепь</td></tr> <tr><td> человека</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> 51645,56</td></tr> <tr><td> ЗА5</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> тяжелая</td></tr> <tr><td> тяжелая</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> цепь</td></tr> <tr><td> цепь А118С</td><td> </td><td> </td><td> </td><td> </td></tr> </table> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 25</p> <table border="1"> <tr><td> АЬ</td><td> ADC</td><td> DAR (соотношение лекарственного средства к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио антиCD33 человека GM15.33 тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,7</td><td> 23933 легкая цепь 51431 тяжелая цепь</td></tr> <tr><td> тио антиMUC16 человека ЗА5 тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,7</td><td> </td></tr> </table> <p>- 82 027910</p> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 33</p> <table border="1"> <tr><td> Ab</td><td> ADC</td><td> DAR (соотношение лекарственного средства к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио антиCD33 человека GM15.33 тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,5</td><td> </td></tr> <tr><td> тио антиNapi3b человека 10Н1.11.4В тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,4</td><td> </td></tr> </table> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 37</p> <table border="1"> <tr><td> АЬ</td><td> ADC</td><td> DAR (соотношение лекарственного средства к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио антиCD33 человека GM15.33 тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,4</td><td> </td></tr> <tr><td> тио антиNapi3b человека 10Н1.11.4В тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,6</td><td> </td></tr> </table> <p>- 83 027910</p> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 44</p> <table border="1"> <tr><td> Ab</td><td> ADC</td><td> DAR (соотношение лекарственного средства к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио антиCD22 человека 10F4v3 тяжелая цепь A118C</td><td> </td><td> 1,6</td><td> </td></tr> <tr><td> тио аниCD33 человека 15G15.3 тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,6</td><td> </td></tr> </table> <p>ADC тиоконъюгаты с соединением 48</p> <table border="1"> <tr><td> АЬ</td><td> ADC</td><td> DAR (соотношение лекарственного средства к антителу)</td><td> ЖХМС результаты</td></tr> <tr><td> тио антиНег2 человнка 4D5-8 тяжелая цепь А118С тио антиCD22 человека 10F4v3 тяжелая цепь А118С</td><td> </td><td> 1,9 1,7</td><td> 147329 ADC</td></tr> </table> <p>Приведенные ниже исследования в условиях in vitro и in vivo твкже описаны в источнике Phillips et al. (2008), Cancer Res. 68(22):9280-9290.</p> <p>Исследование клеточной пролиферации в условиях in vitro.</p> <p>Эффективность конъюгатов ADC определяли при помощи исследования клеточной пролиферации с использванием следующего протокола исследования (Люминисцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo®, Promega Corp. Technical Bulletin TB288; Mendoza et al. (2002), Cancer Res. 62:54855488). Все клеточные линии были получены из Американской коллекции клеточных культур (American Type Culture Collection):</p> <p>1. Аликвоту 100 мкл клеточной культуры, содержащей приблизительно 10<sup>4</sup> клеток (например, KPL-4, линия клеток рака груди человека, Kurebayashi et al. (1999), Brit. Jour. Cancer 79(5-6):707-717), или SKBR-3) в среде помещали в каждую лунку 96-луночного планшета с непрозрачными стенками.</p> <p>2. Также были приготовлены контрольные лунки, содержащие среду и не содержащие клеток.</p> <p>3. ADC добавляли в экспериментальные лунки и инкубировали в течение 3-5 дней.</p> <p>4. Планшеты приводили к комнатной температуре в течение приблизительно 30 мин.</p> <p>5. Добавляли реагент CellTiter-Glo в объеме, эквивалентном объему среды клеточной культуры, присутствующему в каждой лунке.</p> <p>6. Содержимое перемешивали в течение 2 мин на круговой качалке для индуцирования клеточного лизиса.</p> <p>- 84 027910</p> <p>7. Планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин для стабилизации люминесцентного сигнала.</p> <p>8. Люминесценцию регистрировали и отмечали на графиках в виде RLU = относительных единиц люминесценции.</p> <p>Определенные клетки высевали в концентрации 1000-2000/лунка или 2000-3000/лунка в 96-луночный планшет, 50 мкл/лунка. По прошествии одного или двух дней добавляли ADC в объеме 50 мкл к конечной концентрации 9000, 3000, 1000, 333, 111, 37, 12,4, 4,1 или 1,4 нг/мл, причем в контрольные лунки &quot;без ADC&quot; вносили только среду. Условия в двух или трех параллельных анализах: через 3-5 дней добавляли 100 мкл/лунку Cell TiterGlo II (анализ с использованием люциферазы; пролиферацию измеряли по уровням АТФ) и определяли число клеток с использованием люминометра. Данные приведены в виде среднего значения люминесценции для каждого набора репликантов с учетом планки погрешности среднеквадратического отклонения.</p> <p>Протокол исследования представляет собой модификацию люминесцентного анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo® (Promega):</p> <p>1. Высевают 1000 клеток/ лунку в 50 мкл/лунку среды FBS/глутамин. Оставляли клетки для фиксации в течение ночи.</p> <p>2. ADC серийно разбавляли 1:3 в среде, начиная с рабочей концентрации 18 мкг/мл (результаты представлены в окончательной концентрации 9 мкг/мл). 50 мкл разбавленного ADC добавляют к 50 мкл клеток и среды, уже находящихся в лунке.</p> <p>3. Инкубируют 72-96 ч (обычно 72 ч, однако отслеживают концентрацию 0 мкг/мл, для того чтобы остановить реакцию в момент, когда конфлюентность клеток составляет 85-95%).</p> <p>4. Добавляют 100 мкл/лунку реагента Promega Cell Titer Glo, встряхивают в течение 3 мин. И считывают показания люминометра</p> <p>Результаты.</p> <p>Исследовали действие конъюгатов антитело-лекарственное средство, трастузумаб-7 (110) трастузумаб-10 (120) и трастузумаб-17 (130) против клеток SK-BR-3, KPL-4 и MCF-7 (Levenson et al. (1997), Cancer Res. 57(15):3071-3078) для определения жизнеспособности клеток в условиях in vitro в течение пяти дней. Значение IC<sub>50</sub> (нг/мл) для конъюгата 110 против SK-BR-3 составляло 22,90. Значение IC<sub>50</sub> для конъюгата 120 против SK-BR-3 составляло 11,14. Значение IC<sub>50</sub> для конъюгата 130 против SK-BR-3 составляло 16,8. Клетки SK-BR-3 представляют собой Her2+, экспрессирующие, чувствительные к трастузумабу клетки. Конъюгаты 110, 120 и 130 фактически не проявляли активности против MCF-7, которая представляет собой линию клеток аденокарциномы груди человека, не экспрессирующую Her2. Таким образом, конъюгаты 110, 120 и 130 демонстрируют эффективность в направленном киллинге клеток.</p> <p>Ингибирование роста опухоли, эффективность в условиях интенсивно экспрессирующих Her2 трансгенных эксплентных мышей.</p> <p>Животные, подходящие для трансгенных экспериментов, могут быть получены из общеизвестных коммерческих источников, таких как Taconic (Germantown, N.Y.). Подходящими являются множество штаммов, но FVB самки мышей являются предпочтительными из-за высокой предрасположенности к образованию опухолей. FVB самцов использовали для спаривания, после чего вазоэктомизированных CD.1 производителей использовали для стимулирования ложной беременности. Вазоэктомизированные мыши могут быть получены от любого коммерческого поставщика. Первые особи (основатели) были выведены либо из FVB мышей, либо из 129/BL6xFVB р53 гетерозиготных мышей. Мышей, обладающих гетерозиготностью в р53 аллеле, использовали для возможного увеличения образования опухолей. Однако это оказалось ненужным. Таким образом, некоторые опухоли F1 представляют собой опухоли смешанных штаммов. Опухоли первых особей представляли собой только FVB. Шесть первых полученных особей имели некоторые развивающиеся опухоли, но не имели пометов.</p> <p>Животных, имеющих опухоли (аллогенный трансплантат, полученный из Fo5 mmtv трансгенной мыши), обрабатывали однократной или многократной дозой ADC посредством внутривенной инъекции. Размер опухоли оценивали в различные моменты времени после инъекции.</p> <p>Опухоли довольно быстро образуются у трансгенных мышей, экспрессирующих мутагенно активированную форму neu, гомолога Her2 у крыс, но Her2, сверхэкспрессируемый при раке груди человека, немутирован и образование опухолей у трансгенных мышей, сверхэкспрессирующих немутированный Her2, является гораздо менее устойчивым (Webster et al. (1994), Semin. Cancer Biol. 5:69-76).</p> <p>Для усиления образования опухолей с помощью немутированного Her2 получали трансгенных мышей с использованием Her2 кДНК плазмиды, в которой ATG в направлении 3'-5' удален с целью предотвращения инициации трансляции в кодонах ATG в направлении 3'-5', что в противном случае снижает инициацию трансляции с подлинного инициирующего кодона Her2 в направлении 5'-3' (например, см. Child et al. (1999), J. Biol. Chem. 274: 24335-24341). Кроме того, к 5'-концу добавляли химерный интрон, который также должен был усилить уровень экспрессии, как описано ранее (Neuberger and Williams (1988), Nucleic Acids Res. 16:6713; Buchman and Berg (1988), Mol. Cell. Biol. 8:4395; Brinster et al. (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:836). Химерный интрон получали из вектора Promega, Pci-neo вектора экспрессии млекопитающего (bp 890-1022). К 3'-концу кДНК примыкает человеческий гормон роста экзонов</p> <p>- 85 027910</p> <p>4 и 5, и последовательности полиаденилирования. Более того, FVB мышей использовали, поскольку этот штамм наиболее предрасположен к развитию опухолей. Промотор MMTV-LTR использовали для обеспечения тканеспецифичной экспрессии Her2 в молочной железе. Животных кормили в соответствии с рационом AIN 76A с целью усиления предрасположенности к образованию опухолей (Rao et al. (1997), Breast Cancer Res. and Treatment 45:149-158).</p> <p>Fo5 мышиная модель опухоли молочной железы.</p> <p>Fo5 модель представляет собой модель трансгенной мыши, в которой человеческий ген Her2 в условиях регуляции транскрипции промотора вируса рака молочной железы мыши (MMTV-Her2), сверхэкспрессируется эпителием молочной железы. Указанная сверхэкспрессия вызывает спонтанное развитие опухолей молочной железы, в которых сверхэкспрессируется рецептор Her2 человека. Опухоль молочной железы одного из животных, полученных первыми (основатель #5 [Fo5]) передавалась по наследству последующим поколениям мышей FVB с помощью серийной трансплантации фрагментов опухоли. Перед использованием в исследовании эффективности в условиях in vivo трансгенная опухоль молочной железы MMTV-Her2 была трансплантирована хирургическим путем в жировую ткань молочной железы мышей nu/nu (полученных из Charles River Laboratories) в виде фрагментов, размер которых составлял приблизительно 2x2 мм. Когда опухоли достигали желаемого размера, мышей, несущих опухоли, распределяли по группам в случайном порядке и вводили посредством внутривенной инъекции однократную дозу ADC.</p> <p>Результаты.</p> <p>На фиг. 1 представлен график среднего изменения размера опухоли в условиях in vivo с течением времени на модели рака молочной железы MMTV-Her2. Алогенный трансплантат опухоли молочной железы Fo5 инокулировали в CRL мышей nu/nu после однократного внутривенного дозирования в день 0: (1) наполнителя 20 мМ ацетата гистидина, рН 5,5, 240 мМ сахарозы, (2) XCD22-7 (115) при концентрации 6 мг/кг, (3) трастузумаба-7 (110) при концентрации 1 мг/кг, (4) трастузумаба-7 (110) при концентрации 3 мг/кг и (5) трастузумаба-7 (110) при концентрации 6 мг/кг.</p> <p>На фиг. 2 представлен график среднего изменения размера опухоли в условиях in vivo с течением времени на модели рака молочной железы MMTV-Her2. Алогенный трансплантат опухоли молочной железы Fo5 инокулировали в CRL мышей nu/nu после однократного внутривенного дозирования в день 0: (1) наполнителя 20 мМ ацетата гистидина, рН 5,5, 240 мМ сахарозы, (2) XCD22-10 (125) при концентрации 3 мг/кг, (3) трастузумаба-10 (120) при концентрации 0,3 мг/кг, (4) трастузумаба-10 (120) при концентрации 1 мг/кг и (5) трастузумаба-10 (120) при концентрации 3 мг/кг.</p> <p>На фиг. 3 представлен график среднего изменения размера опухоли в условиях in vivo с течением времени на модели рака молочной железы MMTV-Her2. Алогенный трансплантат опухоли молочной железы Fo5 инокулировали в CRL мышей nu/nu после однократного внутривенного дозирования в день 0: (1) наполнителя 20 мМ ацетата гистидина, рН 5,5, 240 мМ сахарозы, (2) xCD22-17 (135) при концентрации 3 мг/кг, (3) трастузумаба-17 (130) при концентрации 0,3 мг/кг, (4) трастузумаба-17 (130) при концентрации 1 мг/кг и (5) трастузумаба-17 (130) при концентрации 3 мг/кг.</p> <p>Перечень сокращений</p> <p>Ас ацетил</p> <p>Аст ацетамидометил</p> <p>Alloc аллилоксикарбонил</p> <p>Вое ди-трет-бутилдикарбонат</p> <p>t-Bu трет-бутил</p> <p>Bzl бензил, где Bzl-OMe представляет собой метоксибензил и Bzl-Me</p> <p>представляет собой метилбензол</p> <p>Cbz или Z Бензилоксикарбонил, где Z-CI и Z-Br представляют собой хлор- и бромбензилоксикарбонил, соответственно DMF Л/,Л/-диметилформамид</p> <p>Dnp динитрофенил</p> <p>DTT дитиотреитол</p> <p>Fmoc 9/-/-флуорен-9-илметоксикарбонил</p> <p>imp Λ/-10 защитная группа имина: 3-(2-метоксиэтокси)пропаноат-\/а1-А1а-РАВ</p> <p>MC-OSu малеимидокапроил-О-н-сукцинимид</p> <p>Мое метоксикарбонил</p> <p>МР малеимидопропанамид</p> <p>Mtr 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонил</p> <p>- 86 027910</p> <table border="1"> <tr><td> РАВ</td><td> пара-аминобензилоксикарбонил</td></tr> <tr><td> PEG</td><td> этиленокси</td></tr> <tr><td> PNZ</td><td> л-нитробензил карбамат</td></tr> <tr><td> Psec</td><td> 2-(фенилсульфонил)этоксикарбонил</td></tr> <tr><td> TBDMS</td><td> трет-бутилдиметилсилил</td></tr> <tr><td> TBDPS</td><td> трет-бутилдифенидсилил</td></tr> <tr><td> Теос</td><td> 2-(триметилсилил)этоксикарбонил</td></tr> <tr><td> Tos</td><td> тозил</td></tr> <tr><td> Troc</td><td> 2,2,2-трихлорэтоксикарбонилхлорид</td></tr> <tr><td> Trt</td><td> тритил</td></tr> <tr><td> Xan</td><td> ксантил</td></tr> </table><p>Ссылки</p> <p>Следующие ссылки полностью включены в настоящее описание посредством ссылок:</p> <p>ЕР 0522868 ЕР 0875569 ЕР 1295944 ЕР 1347046 ЕР 1394274 ЕР 1394274 ЕР 1439393 JP 05003790 JP 2004113151 JP 58180487 US 2001/055751 US 2002/034749 US 2002/042366 US 2002/150573 US 2002/193567 US 2003/0228319 US 2003/060612 US 2003/064397 US 2003/065143 US 2003/091580 US 2003/096961</p> <p>- 87 027910</p> <p>US 2003/105292 US 2003/109676 US 2003/118592 US 2003/119121 US 2003/119122 US 2003/119125 US 2003/119126 US 2003/119128 US 2003/119129 US 2003/119130 US 2003/119131 US 2003/124140 US 2003/124579 US 2003/129192 US 2003/134790-A1 US 2003/143557 US 2003/157089 US 2003/165504 US 2003/185830 US 2003/186372 US 2003/186373 US 2003/194704 US 2003/206918 US 2003/219806 US 2003/224411 US 2003/224454 US 2003/232056 US 2003/232350 US 20030096743 US 20030130189 US 2003096743 US 2003130189 US 2004/0001827 US 2004/005320 US 2004/005538</p> <p>- 88 027910</p> <p>US 2004/005563 US 2004/005598 US 2004/0101899 US 2004/018553 US 2004/022727 US 2004/044179 US 2004/044180 US 2004/101874 US 2004/197325 US 2004/249130 US 20040018194 US 20040052793 US 20040052793 US 20040121940 US 2005/271615 US 2006/116422 US 4816567 US 5362852 US 5440021 US 5583024 US 5621002 US 5644033 US 5674713 US 5700670 US 5773223 US 5792616 US 5854399 US 5869445 US 5976551 US 6011146 US 6153408 US 6214345 US 6218519 US 6268488 US 6518404</p> <p>- 89 027910</p> <p>US 6534482 US 6555339 US 6602677 US 6677435 US 6759509 US 6835807 US 7223837 US 7375078 US 7521541 US 7723485 WO 00/012508 WO 00/12507 WO 00/12508 WO01/16318 WO 01/45746 WO 02/088172 WO 03/026577 WO 03/043583 WO 04/032828 WO 2000/12130 WO 2000/14228 WO 2000/20579 WO 2000/22129 WO 2000/32752 WO 2000/36107 WO 2000/40614 WO 2000/44899 WO 2000/55351 WO 2000/75655 WO 200053216 WO 2001/00244 WO 2001/38490 WO 2001/40269 WO 2001/40309 WO 2001/41787</p> <p>- 90 027910</p> <p>WO 2001/46232 WO 2001/46261 WO 2001/48204 WO 2001/53463 WO 2001/57188 WO 2001/62794 WO 2001/66689 WO 2001/72830 WO 2001/72962 WO 2001/75177 WO 2001/77172 WO 2001/88133 WO 2001/90304 WO 2001/94641 WO 2001/98351 WO 2002/02587 WO 2002/02624 WO 2002/06317 WO 2002/06339 WO 2002/101075 WO 2002/10187 WO 2002/102235 WO 2002/10382 WO 2002/12341 WO 2002/13847 WO 2002/14503 WO 2002/16413 WO 2002/16429 WO 2002/22153 WO 2002/22636 WO 2002/22660 WO 2002/22808 WO 2002/24909 WO 2002/26822 WO 2002/30268</p> <p>- 91 027910</p> <p>WO 2002/38766 WO 2002/54940 WO 2002/59377 WO 2002/60317 WO 2002/61087; WO 2002/64798 WO 2002/71928 WO 2002/72596 WO 2002/78524 WO 2002/81646 WO 2002/83866 WO 2002/86443 WO 2002/88170 WO 2002/89747 WO 2002/92836 WO 2002/94852 WO 2002/98358 WO 2002/99074 WO 2002/99122 WO 2003/000842 WO 2003/002717 WO 2003/003906 WO 2003/003984 WO 2003/004989 WO 2003/008537 WO 2003/009814 WO 2003/014294 WO 2003/016475 WO 2003/016494 WO 2003/018621 WO 2003/022995 WO 2003/023013 WO 2003/024392 WO 2003/025138 WO 2003/025148</p> <p>- 92 027910</p> <p>WO 2003/025228 WO 2003/026493 WO 2003/029262 WO 2003/029277 WO 2003/029421 WO 2003/034984 WO 2003/035846 WO 2003/042661 WO 2003/045422 WO 2003/048202 WO 2003/054152 WO 2003/055439 WO 2003/055443 WO 2003/062401 WO 2003/062401 WO 2003/072035 WO 2003/072036 WO 2003/077836 WO 2003/081210 WO 2003/083041 WO 2003/083047 WO 2003/083074 WO 2003/087306 WO 2003/087768 WO 2003/088808 WO 2003/089624 WO 2003/089904 WO 2003/093444 WO 2003/097803 WO 2003/101283 WO 2003/101400 WO 2003/104270 WO 2003/104275 WO 2003/105758 WO 2003004529</p> <p>- 93 027910</p> <p>WO 2003042661 WO 2003104399 WO 2004/000997 WO 2004/001004 WO 2004/009622 WO 2004/011611 WO 2004/015426 WO 2004/016225 WO 2004/020595 WO 2004/022709 WO 2004/022778 WO 2004/027049 WO 2004/031238 WO 2004/032828 WO 2004/032842 WO 2004/040000 WO 2004/043361 WO 2004/043963 WO 2004/044178 WO 2004/045516 WO 2004/045520 WO 2004/045553 WO 2004/046342 WO 2004/047749 WO 2004/048938 WO 2004/053079 WO 2004/063355 WO 2004/063362 WO 2004/063709 WO 2004/065577 WO 2004/074320 WO 2004000221 WO 2004020583 WO 2004042346 WO 2004065576</p> <p>- 94 027910</p> <p>WO 2005/023814</p> <p>WO 2005/082023</p> <p>WO 2005/085251</p> <p>WO 2006/111759</p> <p>WO 2007/044515</p> <p>WO 2007/085930</p> <p>WO 2009/052249</p> <p>WO 2010/091150</p> <p>WO 91/02536</p> <p>WO 92/07574</p> <p>WO 92/17497</p> <p>WO 94/10312</p> <p>WO 94/28931</p> <p>WO 9630514</p> <p>WO 97/07198</p> <p>WO 97/44452</p> <p>WO 98/13059</p> <p>WO 98/37193</p> <p>WO 98/40403</p> <p>WO 98/51805</p> <p>WO 98/51824</p> <p>WO 99/28468</p> <p>WO 99/46284</p> <p>WO 99/58658</p> <p>Am. J. Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991)</p> <p>Amiel J., et al Hum. Mol. Genet. 5, 355-357, 1996 Amir et al (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499 Amsberry, et al (1990) J. Org. Chem. 55:5867 Angew Chem. Inti. Ed. Engl. (1994) 33:183-186 Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998)</p> <p>Arai H., et al J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993 Arai H., et al Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992 Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)</p> <p>Attie T., et al, Hum. Mol. Genet. 4, 2407-2409, 1995</p> <p>- 95 027910</p> <p>Auricchio A., et al Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996</p> <p>Barel M., et al Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998</p> <p>Barella et al (1995) Biochem. J. 309:773-779</p> <p>Barnett T., et al Genomics 3, 59-66, 1988</p> <p>Beck et al (1992) J. Mol. Biol. 228:433-441</p> <p>Beck et al (1996) J. Mol. Biol. 255:1 -13</p> <p>Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)</p> <p>Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788</p> <p>Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999)</p> <p>Blood (2002) 100 (9):3068-3076</p> <p>Blood 99 (8):2662-2669 (2002)</p> <p>Blumberg H., et al Cell 104, 9-19, 2001</p> <p>Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)</p> <p>Bourgeois C., et al J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997</p> <p>Brinster et al (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:836</p> <p>Buchman and Berg (1988) Mol. Cell. Biol. 8:4395</p> <p>Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001)</p> <p>Carl et al (1981) J. Med. Chem. 24:479-480</p> <p>Carlsson et al (1978) Biochem. J. 173:723-737</p> <p>Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343-357</p> <p>Cell 109 (3):397-407 (2002)</p> <p>CellTiter Gio Luminescent Cell Viability Assay, Promega Corp. Technical Bulletin TB288</p> <p>Chakravarty et al (1983) J. Med. Chem. 26:638-644</p> <p>Chan,J. and Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991)</p> <p>Child et al (1999) J. Biol. Chem. 274: 24335-24341</p> <p>Cho H.-S., et al Nature 421,756-760, 2003</p> <p>Ciccodicola, A., et al EMBO J. 8(7):1987-1991 (1989)</p> <p>Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628</p> <p>Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003</p> <p>Corey E, Quinn JE, Buhler KR, et al. LuCap35: a new model of prostate cancer progression to androgen independence. The Prostate 2003;55:239-46 Coussens L., et al Science (1985) 230(4730):1132-1139 Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404</p> <p>Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88</p> <p>- 96 027910</p> <p>Davis et al (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777</p> <p>de Groot et al (2001) J. Org. Chem. 66:8815-8830</p> <p>de Groot et al (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4490-4494</p> <p>Dennis et al. (2002) &quot;Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins&quot; J Biol Chem. 277:35035-35043 Dobner et al (1992) Eur. J. Immunol. 22:2795-2799 Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729</p> <p>Doronina et al (2006) Bioconj. Chem. 17:114-124</p> <p>Dubowchik et al. Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869</p> <p>Dubowchik, et al. (1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60</p> <p>Dumoutier L., et al J. Immunol. 167, 3545-3549, 2001</p> <p>E. Schroder and K. LObke, The Peptides, volume 1, pp 76-136 (1965) Academic Press Ehsani A., et al (1993) Genomics 15, 426-429</p> <p>Eliel, E. and Wilen, S., &quot;Stereochemistry of Organic Compounds&quot;, John Wiley &amp; Sons, Inc., New York, 1994</p> <p>Elshourbagy N.A., et al J. Biol. Chem. 268, 3873-3879, 1993</p> <p>Erickson et al (2006) Cancer Res. 66(8):1-8</p> <p>Feild, J.A., et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582 Fields, G. and Noble, R. (1990) &quot;Solid phase peptide synthesis utilizing 9fluoroenylmethoxycarbonyl amino acids&quot;, Int. J. Peptide Protein Res. 35:161-214 Fuchs S., et al Mol. Med. 7, 115-124, 2001</p> <p>Fujisaku et al (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125)</p> <p>Gary S.C., et al Gene 256, 139-147, 2000</p> <p>Gaugitsch, H.W., et al (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273)</p> <p>Geiser et al &quot;Automation of solid-phase peptide synthesis&quot; in Macromolecular Sequencing and Synthesis, Alan R. Liss, Inc., 1988, pp. 199-218 Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003)</p> <p>Genomics 62 (2):281-284 (1999)</p> <p>Geoghegan &amp; Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146</p> <p>Getz et al (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80</p> <p>Glynne-Jones et al (2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178-84</p> <p>Gregson et al., Chem. Commun. 1999, 797-798</p> <p>Gregson et al., J. Med. Chem. 2001,44, 1161 -1174</p> <p>Gu Z., et al Oncogene 19, 1288-1296, 2000</p> <p>Ha et al (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531</p> <p>- 97 027910</p> <p>Haendler В., et al J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992</p> <p>Hamann P. (2005) Expert Opin. Ther. Patents 15(9):1087-1103</p> <p>Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070</p> <p>Handbook of Pharmaceutical Additives, 2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA)</p> <p>Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994 Hara, et al., J. Antibiotics, 41,702-704 (1988)</p> <p>Hashimoto et al (1994) Immunogenetics 40(4):287-295</p> <p>Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237</p> <p>Herdwijn, P. et al., Canadian Journal of Chemistry. 1982, 60, 2903-7</p> <p>Hermanson, G.T. (1996) Bioconjugate Techniques; Academic Press: New York, p 234242</p> <p>Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)</p> <p>Hofstra R.M.W., et al Eur. J. Hum. Genet. 5, 180-185, 1997</p> <p>Hofstra R.M.W., et al Nat. Genet. 12, 445-447, 1996</p> <p>Horie et al (2000) Genomics 67:146-152</p> <p>Hubert, R.S., et al (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528)</p> <p>Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986) Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002)</p> <p>Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)</p> <p>Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)</p> <p>J. Biol. Chem. 270 (37):21984-21990 (1995)</p> <p>J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)</p> <p>J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002)</p> <p>J. Biol. Chem. 278 (33):30813-30820 (2003)</p> <p>Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed.,</p> <p>Garland Publishing, New York</p> <p>Jeffrey et al (2005) J. Med. Chem. 48:1344-1358</p> <p>Jonsson et al (1989) Immunogenetics 29(6):411-413</p> <p>Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932</p> <p>Kang, G-D., et al., Chem. Commun., 2003, 1680-1689</p> <p>Kasahara et al (1989) Immunogenetics 30(1):66-68</p> <p>King et al (2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990</p> <p>Kingsbury et al (1984) J. Med. Chem. 27:1447</p> <p>Kohler et al (1975) Nature 256:495</p> <p>- 98 027910</p> <p>Kohn, in Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975). Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)</p> <p>Kovtun et al (2006) Cancer Res. 66(6):3214-3121 Kuhns J.J., et al J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999 Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)</p> <p>Kurebayashi et al (1999) Brit. Jour. Cancer 79(5-6):707-717 Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)</p> <p>Lambert J. (2005) Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549 Langley and Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)</p> <p>Larhammar et al (1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119</p> <p>Law et al (2006) Cancer Res. 66(4):2328-2337</p> <p>Le et al (1997) FEBS Lett. 418(1 -2):195-199</p> <p>Leber, et al., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)</p> <p>Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)</p> <p>Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965)</p> <p>Levenson et al (1997) Cancer Res. 57(15):3071-3078</p> <p>Liang et al (2000) Cancer Res. 60:4907-12</p> <p>Manfre, F. et al., J. Org. Chem. 1992, 57, 2060-2065</p> <p>Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597</p> <p>McDonagh (2006) Protein Eng. Design &amp; Sel., 19(7): 299-307</p> <p>Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488</p> <p>Miller et al (2003) Jour, of Immunology 170:4854-4861</p> <p>Miura et al (1996) Genomics 38(3):299-304</p> <p>Miura et al (1998) Blood 92:2815-2822</p> <p>Moore M., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987 Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 Muller et al (1992) Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625 Mungall A.J., et al Nature 425, 805-811,2003</p> <p>Nagase T., et al (2000) DNA Res. 7 (2):143-150)</p> <p>Nakamuta M., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991 Nakayama et al (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127 Naruse et al (2002) Tissue Antigens 59:512-519</p> <p>Nature 395 (6699):288-291 (1998)</p> <p>Neuberger and Williams (1988) Nucleic Acids Res. 16:6713</p> <p>Novabiochem Catalog 2006/2007</p> <p>- 99 027910</p> <p>Ogawa Y., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991</p> <p>Okamoto Y., et al Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997</p> <p>Oncogene 10 (5):897-905 (1995)</p> <p>Oncogene 14(11):1377-1382 (1997))</p> <p>Parrish-Novak J., et al J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002</p> <p>Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212</p> <p>Phillips et al (2008) Cancer Res. 68(22):9280-9290</p> <p>Pingault V., et al (2002) Hum. Genet. 111,198-206</p> <p>Pletnev S., et al (2003) Biochemistry 42:12617-12624</p> <p>Preud'homme et al (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146</p> <p>Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131</p> <p>Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (1):136-140 (1996)</p> <p>Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001)</p> <p>Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)</p> <p>Proc.Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999)</p> <p>Protective Groups in Organic Synthesis, Greene and Wuts, 3<sup>rd</sup> Edition, 1999, John Wiley &amp; Sons Inc.</p> <p>Puffenberger E.G., et al Cell 79, 1257-1266, 1994</p> <p>Rao et al (1997) Breast Cancer Res. and Treatment 45:149-158</p> <p>Reiter R.E., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998</p> <p>Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippincott, Williams &amp; Wilkins, 2000</p> <p>Rodrigues et al (1995) Chemistry Biology 2:223</p> <p>Ross et al (2002) Cancer Res. 62:2546-2553</p> <p>S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York</p> <p>Sakaguchi et al (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464</p> <p>Sakamoto A., Yanagisawa M., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 656-663, 1991</p> <p>Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852</p> <p>Semba K., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985</p> <p>Servenius et al (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766</p> <p>Shamis et al (2004) J. Am. Chem. Soc. 126:1726-1731</p> <p>Sheikh F., et al (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010</p> <p>Shimizu, et al, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982)</p> <p>- 100 027910</p> <p>Sinha S.K., et al (1993) J. Immunol. 150, 5311 -5320</p> <p>Storm et al (1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815</p> <p>Strausberg et al (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903</p> <p>Sun et al (2002) Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215</p> <p>Sun et al (2003) Bioorganic &amp; Medicinal Chemistry 11:1761 -1768</p> <p>Svensson P.J., et al Hum. Genet. 103, 145-148, 1998</p> <p>Swiercz J.M., et al J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004</p> <p>Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614</p> <p>Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)</p> <p>Tawaragi Y., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988</p> <p>ten Dijke,P., et al Science 264 (5155):101-104 (1994)</p> <p>Thompson, J.S., et al Science 293 (5537), 2108-2111 (2001) WO 2004/058309 Thurston, et al., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990)</p> <p>Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994)</p> <p>Toki et al (2002) J. Org. Chem. 67:1866-1872</p> <p>Tonnelle et al (1985) EMBO J. 4(11 ):2839-2847</p> <p>Touchman et al (2000) Genome Res. 10:165-173</p> <p>Trail et al (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337</p> <p>Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)</p> <p>Tsutsumi M., et al Gene 228, 43-49, 1999</p> <p>Uchida et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602</p> <p>Verheij J.B., et al Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002</p> <p>Von Hoegen et al (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877</p> <p>Webster et al (1994) Semin. Cancer Biol. 5:69-76</p> <p>Weis J.J., et al J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988</p> <p>Weis J.J., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986</p> <p>Wilson et al (1991) J. Exp. Med. 173:137-146</p> <p>Wu et al (2005) Nature Biotech. 23(9):1137-1145</p> <p>Xie et al (2006) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291</p> <p>Xu, M.J., et al (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775 WO 2004/016225</p> <p>Xu, X.Z., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001)</p> <p>Yamaguchi, N., et al Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994)</p> <p>Yamamoto T., et al Nature 319, 230-234, 1986</p> <p>Yu et al (1992) J. Immunol. 148(2) 633-637</p> <p>- 101 027910</p>

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Конъюгат формулы (А)
    где Y выбран из формул (А1)-(А6):
    (А5) (А6)
    L имеет формулу
    (a)-l_A-(CH2)m- (L1)
    где m составляет от 0 до 6;
    LA выбран из:
    - 102 027910
    (LA1-1) О CBA? (LA6) Ο CBAj // (LA1-2) о сва|_^Хм-АГУ (Ι_Α CBAi_ (LA2) О о (LA8-1) CBA A (LA3-1) (|_Α8-2) N ΑΒΑ A (LA3-2) CBA|_S)^7 (|_Α9-1) CBA (LM) Ί-Д н Αν ο > (|_Α9-2) /Ν ъ я СВА (LA5) ,ο ΊΑ , Η
    причем Аг представляет собой С5.6ариленовую группу;
    где m составляет от 0 до 6;
    (c) -LA-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)p-, (L3)
    где q равняется от 1 до 3 и р равняется от 1 до 3; или
    где m составляет от 0 до 6;
    X1 и X2 представляют собой аминокислотные группы, выбранные из природных аминокислот, которые могут быть модифицированы;
    СВА представляет собой антитело или его активный фрагмент; n представляет собой целое число, выбранное из диапазона 0-48;
    RA4 представляет собой С^алкиленовую группу; и/или
    (a) R10 представляет собой H и R11 представляет собой OH, ORA, где RA представляет собой С1-4алкил; или
    (b) R10 и R11 образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; или
    (c) R10 представляет собой H и R11 представляет собой OSOzM, где z равен 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион,
    при этом R20 и R21 являются такими, как определено для R10 и R11 соответственно.
    2. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что R10 и R11 образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены.
    20 21 10
    3. Конъюгат по любому из пп.1 или 2, отличающийся тем, что R20 и R21 являются такими же, как R10 и R11 соответственно.
    4. Конъюгат по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что группа -Х1-Х2- выбрана из -Phe-Lys-, -Val-Ala-, -Val-Lys-, -Ala-Lys-, -Val-Cit-.
    5. Конъюгат по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что антитело или фрагмент антитела представляет собой антитело, которое связывается с одним или более опухолеассоциированными антигенами или рецепторами клеточной поверхности, выбранными из (1)-(6):
    (1) 0772Р (СА125, MUC16);
    (2) Napi3b (NAPI-3B, Napi2b, NPTIIb, SLC34A2, семейство носителей растворимых агентов 34
    - 103 027910
    (фосфат натрия), член 2, натрий-зависимый фосфатный транспортер 3b II типа);
    (3) Her2;
    (4) CD22 (B-клеточный рецептор, изоформа CD22-B);
    (5) CD33 (молекула CD33, SIGLEC-3, SIGLEC3, р67; антиген CD33 (gp67); gp67; миелоидный антиген клеточной поверхности CD33; связывающий сиаловую кислоту Ig-подобный лектин 3; связывающий сиаловую кислоту Ig-подобный лектин);
    (6) LGR5/GPR49.
    6. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по любому из пп.1-5, фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или вспомогательное вещество.
    7. Применение конъюгата по любому из пп.1-5 для лечения пролиферативного заболевания у субъекта.
    8. Применение фармацевтической композиции по п.6 для лечения пролиферативного заболевания у субъекта.
    9. Применение соединения по любому из пп.1-5 в способе получения лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания.
    10. Соединение формулы (В)
    где R10, R11, R20 и R21 являются такими, как определено в любом из пп.1-3;
    G представляет собой соединение формулы
    (a) G^(CH2)m- (G1)
    - 104 027910
    где m составляет от 0 до 6;
    Ga выбран из:
    (GA1-1) ξ1 (GA4) О Hal H—» где Hal = 1, Br, Cl (GA1-2) (GA5) О “Лч (GA2) GV о (GA6) О ,°Ч υν (GA3_1) s-s* 0 (NO2) где группа NO2 является необязательной (G«) (GA3-2) G (NO2) где группа NO2 является необязательной (GA3) V (GA3-3) А/ где группа NO2 является необязательной (GA9) Ν3 (GA3’4) V ο2νΛ=/ где группа ΝΟ2 является необязательной
    причем Ar представляет собой С5_бариленовую группу;
    (b) GA-(CH2)m-O- (G2)
    где m составляет от 0 до 6;
    (с) GA-(CH2)q-O-C(=O)-NH-(CH2)P- (G3)
    где q составляет от 1 до 3 и р составляет от 1 до 3;
    - 105 027910
    где m равен от 0 до 6;
    X1 и X2 представляют собой аминокислотные группы, выбранные из природных аминокислот, которые могут быть модифицированы.
    11. Соединение формулы (С)
    где Yc выбран из группы формул (С1)-(С6):
    где n и RA4 являются такими, как определено в п.1; и/или (a) R30 представляет собой H и R31 представляет собой OH, ORA, где RA представляет собой С1-4алкил; или
    (b) R30 и R31 образуют азот-углеродную двойную связь между атомами азота и углерода, к которым они присоединены; или
    (c) R30 представляет собой H и R31 представляет собой OSOzM, где z равен 2 или 3 и М представляет собой одновалентный фармацевтически приемлемый катион; или
    (d) R30 представляет собой защитную группу азота и R31 представляет собой OProtO, где ProtO представляет собой защитную гидрокси группу; и
    R40 и R41 являются такими, как определено для R30 и R31 соответственно.
    12. Соединение формулы (D)
    - 106 027910
    где R30, R31, R40 и R41 являются такими, как описано в п.11;
    YD выбран из группы формул (D2)-(D4) и (D6):
    где RA4 является таким, как описано в п.1.
    13. Соединение формулы (Е)
    где R30, R31, R40 и R41 являются такими, как описано в п.11;
    YE выбран из группы формул (El), (Е2) и (Е5):
    (Е5)
    где RE1 выбран из H и TMS;
    RE2 выбран из Br, Cl и I.
    - 107 027910
EA201591277A 2013-03-13 2014-03-13 Пирролобензодиазепины и их конъюгаты EA027910B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361778771P 2013-03-13 2013-03-13
PCT/US2014/025564 WO2014159981A2 (en) 2013-03-13 2014-03-13 Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201591277A1 EA201591277A1 (ru) 2016-02-29
EA027910B1 true EA027910B1 (ru) 2017-09-29

Family

ID=51493013

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201591277A EA027910B1 (ru) 2013-03-13 2014-03-13 Пирролобензодиазепины и их конъюгаты

Country Status (18)

Country Link
US (2) US9821074B2 (ru)
EP (1) EP2968596B1 (ru)
JP (2) JP6445519B2 (ru)
KR (1) KR102057755B1 (ru)
CN (1) CN105307685B (ru)
AR (1) AR096287A1 (ru)
AU (1) AU2014244245C1 (ru)
BR (1) BR112015023070B1 (ru)
CA (1) CA2901941C (ru)
EA (1) EA027910B1 (ru)
HK (1) HK1219658A1 (ru)
IL (1) IL241532B (ru)
MX (1) MX363787B (ru)
NZ (1) NZ710745A (ru)
SG (1) SG11201507214SA (ru)
TW (1) TWI680766B (ru)
WO (1) WO2014159981A2 (ru)
ZA (1) ZA201505754B (ru)

Families Citing this family (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
CN107019804A (zh) 2010-04-15 2017-08-08 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
CN103987718A (zh) 2011-09-20 2014-08-13 斯皮罗根有限公司 作为非对称二聚体pbd化合物用于内含在靶向结合物中的吡咯并苯并二氮杂卓
WO2013053873A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
KR101961976B1 (ko) 2011-10-14 2019-03-25 시애틀 지네틱스, 인크. 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체
CN103987384A (zh) 2011-10-14 2014-08-13 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
US9388187B2 (en) 2011-10-14 2016-07-12 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
RU2015106673A (ru) 2012-08-02 2016-09-20 Дженентек, Инк. Антитела к рецептору эндотелина типа в (etbr) и иммуноконъюгаты
CN105102004B (zh) 2012-10-12 2019-01-25 Adc疗法责任有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓-抗cd22抗体结合物
EP2906253B9 (en) 2012-10-12 2019-04-10 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PT2906296T (pt) 2012-10-12 2018-06-01 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo
ES2703151T3 (es) 2012-10-12 2019-03-07 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos de pirrolobenzodiazepinas
AU2013328673B2 (en) 2012-10-12 2017-07-13 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
ME03486B (me) 2012-10-12 2020-01-20 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
KR20200003278A (ko) 2012-10-12 2020-01-08 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
BR112015014669B1 (pt) 2012-12-21 2023-09-26 Medimmune Limited Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados compreendendo os mesmos e uso destes para tratar uma doença proliferativa
CN105246894A (zh) 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
BR112015021965B1 (pt) 2013-03-13 2022-05-03 Medimmune Limited Conjugados e compostos de pirrolobenzodiazepinas, composição farmacêutica, uso dos mesmos para o tratamento de uma doença proliferativa e método de síntese dos ditos compostos
EP2968596B1 (en) 2013-03-13 2019-03-06 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2015089344A1 (en) * 2013-12-13 2015-06-18 Genentech, Inc. Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
KR102337414B1 (ko) 2013-12-16 2021-12-10 제넨테크, 인크. 펩타이드 모방체 화합물 및 이의 항체-약물 컨쥬게이트
ES2785551T3 (es) 2014-06-30 2020-10-07 Glykos Finland Oy Derivado de sacárido de una carga útil tóxica y sus conjugados con anticuerpos
EP3193940A1 (en) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201416112D0 (en) * 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2016040868A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
CA2957148A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
BR112017011111A2 (pt) 2014-11-25 2017-12-26 Adc Therapeutics Sa conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo
JP6676058B2 (ja) 2015-01-14 2020-04-08 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ヘテロアリーレン架橋したベンゾジアゼピン二量体、そのコンジュゲート、ならびに製造および使用方法
US9527871B2 (en) 2015-01-14 2016-12-27 Bristol-Myers Squibb Company Benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using
JP6863900B2 (ja) * 2015-03-09 2021-04-21 ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 新規アマトキシン−抗体コンジュゲート
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
JP6996983B2 (ja) 2015-06-16 2022-02-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｌｌ－１抗体及び使用方法
CA2990030A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Bristol-Myers Squibb Company Macrocyclic benzodiazepine dimers, conjugates thereof, preparation and uses
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
CA2949032A1 (en) 2015-11-30 2017-05-30 Pfizer Inc. Site specific her2 antibody drug conjugates
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
MX2019006448A (es) 2016-12-01 2020-02-05 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-pd-l1 radiomarcados para imagenes de inmuno-pet.
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
UA125198C2 (uk) 2017-02-08 2022-01-26 Ейдісі Терапьютікс Са Кон'югати піролобензодіазепін-антитіло
ES2926144T3 (es) 2017-04-18 2022-10-24 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina
JP7408396B2 (ja) 2017-04-20 2024-01-05 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム 併用療法
WO2018229222A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc
HRP20220311T1 (hr) 2017-08-18 2022-05-13 Medimmune Limited Konjugati pirolobenzodiazepina
CN109180681B (zh) * 2017-08-18 2021-08-20 四川百利药业有限责任公司 一种dna毒性二聚体化合物
BR112020004126A2 (pt) 2017-09-29 2020-09-08 Daiichi Sankyo Company, Limited conjugado anticorpo-derivado de pirrolbenzodiazepina
CA3083345A1 (en) 2017-11-27 2019-05-31 Purdue Pharma L.P. Humanized antibodies targeting human tissue factor
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) * 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN113227119A (zh) 2018-12-10 2021-08-06 基因泰克公司 用于与含Fc的蛋白质进行位点特异性缀合的光交联肽
AU2019406199A1 (en) 2018-12-21 2021-07-29 Avidity Biosciences, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
KR20200084802A (ko) * 2019-01-03 2020-07-13 주식회사 레고켐 바이오사이언스 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도
US20220096641A1 (en) * 2019-01-03 2022-03-31 Legochem Biosciences, Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer compound with improved safety and use thereof
CN113711036A (zh) 2019-01-30 2021-11-26 真和制药有限公司 抗gal3抗体及其用途
EP4045511A1 (en) * 2019-10-16 2022-08-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Visual detection of pbd induced dna crosslinks
WO2021080608A1 (en) 2019-10-25 2021-04-29 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
EP4121063A1 (en) 2020-03-19 2023-01-25 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
KR20220161378A (ko) 2020-03-27 2022-12-06 어비디티 바이오사이언시스 인크. 근이영양증의 치료용 조성물 및 방법
GB202102396D0 (en) 2021-02-19 2021-04-07 Adc Therapeutics Sa Molecular adjuvant
AU2022345098A1 (en) 2021-09-16 2024-04-04 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011023883A1 (fr) * 2009-08-25 2011-03-03 Sanofi-Aventis Conjugues de dimeres de pyrrolo [1, 4 ] benzodiazepine en tant qu' anticancereux
WO2012014147A1 (en) * 2010-07-26 2012-02-02 Sanofi Anticancer derivatives, preparation thereof and therapeutic use thereof
WO2012112708A1 (en) * 2011-02-15 2012-08-23 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and methods of preparation

Family Cites Families (348)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
CA2023779A1 (en) 1989-08-23 1991-02-24 Margaret D. Moore Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
WO1992007574A1 (en) 1990-10-25 1992-05-14 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
WO1992017497A1 (en) 1991-03-29 1992-10-15 Genentech, Inc. Human pf4a receptors and their use
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US5976551A (en) 1991-11-15 1999-11-02 Institut Pasteur And Institut Nationale De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and method of using the determinant
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
EP0647450A1 (en) 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
US6218519B1 (en) 1996-04-12 2001-04-17 Pro-Neuron, Inc. Compounds and methods for the selective treatment of cancer and bacterial infections
SK157498A3 (en) 1996-05-17 1999-10-08 Schering Corp Isolated and recombinant nucleic acid, bas-1 protein or peptide thereof, and agent, antibody, expression vector, host cell and method of their use
US6590088B1 (en) 1996-07-19 2003-07-08 Human Genome Sciences, Inc. CD33-like protein
CA2264227A1 (en) 1996-09-27 1998-04-02 Raymond A. Firestone Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
JP4404381B2 (ja) 1997-03-10 2010-01-27 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア Ｐｓｃａ：前立腺幹細胞抗原
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
US6890749B2 (en) 1997-05-15 2005-05-10 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
WO1999046284A2 (en) 1998-03-13 1999-09-16 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
AU4078599A (en) 1998-05-13 1999-11-29 Epimmune, Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
AU3733399A (en) 1998-05-22 1999-12-13 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Drug composites
GB9818732D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collection of compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
GB9818730D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collections of compounds
EP1413582B1 (en) 1998-08-27 2006-03-15 Spirogen Limited Dimeric pyrrolobenzodiazepines
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
AU5963699A (en) 1998-10-02 2000-04-26 Mcmaster University Spliced form of (erb)b-2/neu oncogene
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030190669A1 (en) 1998-12-30 2003-10-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
JP2002536966A (ja) 1998-12-30 2002-11-05 ベス・イスラエル・ディーコニス・メディカル・センター・インコーポレーテッド カルシウムチャネルファミリーの特徴付け
EP1147190B1 (en) 1999-01-29 2010-07-14 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7312303B2 (en) 1999-05-11 2007-12-25 Genentech, Inc. Anti-PRO4980 antibodies
US6268488B1 (en) 1999-05-25 2001-07-31 Barbas, Iii Carlos F. Prodrug activation using catalytic antibodies
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
BRPI0017590B8 (pt) 1999-06-25 2021-05-25 Genentech Inc conjugado de maitansinoide - anticorpo anti-erbb, e formulação farmacêutica
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
US6909006B1 (en) 1999-08-27 2005-06-21 Spirogen Limited Cyclopropylindole derivatives
AU7573000A (en) 1999-09-01 2001-03-26 Genentech Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6750054B2 (en) 2000-05-18 2004-06-15 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
CA2387108A1 (en) 1999-10-29 2001-06-07 Genentech, Inc. Anti-prostate stem cell antigen (psca) antibody compositions and methods of use
ES2586850T3 (es) 1999-11-29 2016-10-19 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Aislamiento de cinco genes novedosos que codifican nuevos melanomas de tipo receptor de Fc implicados en la patogénesis del linfoma/melanoma
EP1248800A2 (en) 1999-11-30 2002-10-16 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
AU2087401A (en) 1999-12-10 2001-06-18 Epimmune, Inc. Inducing cellular immune responses to her2/neu using peptide and nucleic acid compositions
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
JP2003535037A (ja) 1999-12-23 2003-11-25 ザイモジェネティクス，インコーポレイティド 炎症を治療する方法
DK1246846T3 (da) 1999-12-23 2008-12-08 Zymogenetics Inc Oplöselig interleukin-20-receptor
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
ATE422369T1 (de) 1999-12-24 2009-02-15 Genentech Inc Verfahren und zusammensetzungen zur verlängerung der entsorgungshalbwertszeit von biowirksamen verbindungen
US7294695B2 (en) 2000-01-20 2007-11-13 Genentech, Inc. PRO10268 polypeptides
EP1252294A2 (en) 2000-01-21 2002-10-30 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
US20020142377A1 (en) 2000-02-22 2002-10-03 Glucksmann Maria Alexandra 18607, a novel human calcium channel
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US20040052793A1 (en) 2001-02-22 2004-03-18 Carter Paul J. Caspase activivated prodrugs therapy
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
AU2001245280A1 (en) 2000-03-07 2001-09-17 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AU4941101A (en) 2000-03-24 2001-10-08 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides,and diagnostic and therapeutic methods
JP2003530325A (ja) 2000-03-31 2003-10-14 イーペーエフ ファルマシューティカルス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 好ましくは特異的ケモカインレセプター分析、及びケモカインレセプター／リガンド相互作用の助けによる、腫瘍及び炎症細胞の細胞表面プロテオームの調査、並びに腫瘍疾患及び炎症性疾患の治療のための診断薬及び薬剤
WO2004043361A2 (en) 2002-11-08 2004-05-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of natural killer cell related diseases
WO2001075177A2 (en) 2000-04-03 2001-10-11 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Tumor markers in ovarian cancer
JP2003532057A (ja) 2000-04-07 2003-10-28 アリーナ・フアーマシユーチカルズ・インコーポレーテツド 非内因性の、構成的に活性化される既知ｇタンパク質−共役受容体
WO2001078524A2 (en) 2000-04-14 2001-10-25 Novo Nordisk Biotech, Inc. Enzymatic treatment of potato products
US20030119115A1 (en) 2000-05-17 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001090304A2 (en) 2000-05-19 2001-11-29 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001094641A2 (en) 2000-06-09 2001-12-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
EP1297130A2 (en) 2000-06-16 2003-04-02 Incyte Genomics, Inc. G-protein coupled receptors
AU2001273151A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Incyte Genomics, Inc. Human extracellular matrix and cell adhesion polypeptides
CA2413262A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
EP1301524A1 (en) 2000-06-30 2003-04-16 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
AU2002214531A1 (en) 2000-07-03 2002-01-30 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2001283507A1 (en) 2000-07-27 2002-02-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
ATE396266T1 (de) 2000-07-28 2008-06-15 Ulrich Wissenbach Trp8 krebsmarker
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
AU7921701A (en) 2000-08-08 2002-02-18 Immunomedics Inc Immunotherapy for chronic myelocytic leukemia
EP1366153A2 (en) 2000-08-14 2003-12-03 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of her-2/neu-associated malignancies
WO2002013847A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP1311674A2 (en) 2000-08-24 2003-05-21 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1346040A2 (en) 2000-09-11 2003-09-24 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
DE60121808T2 (de) 2000-09-15 2007-03-29 Zymogenetics, Inc., Seattle Verwendung eines polypeptids, welches die extrazelluläre domäne von il-20ra und il-20rb enthält, zur behandlung von entzündungen
US20030119121A1 (en) 2000-09-15 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
UA83458C2 (ru) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Выделенный полипептид baff-r (рецептор фактора активации в-клеток семейства tnf)
JP2004524810A (ja) 2000-09-18 2004-08-19 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド Ｃｒｉｐｔｏ変異体およびその使用
JP5010089B2 (ja) 2000-09-19 2012-08-29 スピロジェン リミテッド Ｃｃ−１０６５およびデュオカルマイシンのアキラルアナログの組成物およびその使用方法
CA2425569A1 (en) 2000-10-13 2002-04-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of prostate cancer, compositions and methods of screening for modulators of prostate cancer
DK1407017T3 (en) 2000-11-07 2009-09-21 Zymogenetics Inc Human receptor for tumor nekrose faktor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
US20020159986A1 (en) 2001-01-12 2002-10-31 John Langenfeld Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119126A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119125A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
JP2005503760A (ja) 2001-01-24 2005-02-10 プロテイン デザイン ラブス， インコーポレイテッド 乳癌の診断方法、組成物および乳癌のモジュレーターのスクリーニング方法
US20030073144A1 (en) 2001-01-30 2003-04-17 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
US20040170994A1 (en) 2001-02-12 2004-09-02 Callen David Frederick DNA sequences for human tumour suppressor genes
WO2002071928A2 (en) 2001-03-14 2002-09-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
WO2002078524A2 (en) 2001-03-28 2002-10-10 Zycos Inc. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
WO2002083866A2 (en) 2001-04-17 2002-10-24 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Repeat sequences of the ca125 gene and their use for diagnostic and therapeutic interventions
WO2002086443A2 (en) 2001-04-18 2002-10-31 Protein Design Labs, Inc Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
AU2002334799B2 (en) 2001-04-26 2009-05-07 Biogen Ma Inc. Cripto-specific antibodies
SI1390389T1 (sl) 2001-04-26 2009-06-30 Biogen Idec Inc Protitelesa, ki blokirajo cripto in uporabe le-teh
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP1515982A4 (en) 2001-05-09 2005-10-26 Corixa Corp METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF PROSTATE CANCER
WO2002092836A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
KR20040030628A (ko) 2001-05-24 2004-04-09 지모제넥틱스, 인코포레이티드 Ｔａｃｉ-면역글로불린 융합 단백질
US7157558B2 (en) 2001-06-01 2007-01-02 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a polynucleotide overexpresses in tumors
WO2002098358A2 (en) 2001-06-04 2002-12-12 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
JP2005518185A (ja) 2001-06-04 2005-06-23 キュラジェン コーポレイション 新規タンパク質およびそれをコード化する核酸
AU2002320264B2 (en) 2001-06-05 2008-05-01 Exelixis, Inc. GFATs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
AU2002310256A1 (en) 2001-06-05 2002-12-16 Exelixis Inc. Ppp2cs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
EP1517998A2 (en) 2001-06-18 2005-03-30 EOS Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7705120B2 (en) 2001-06-21 2010-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
WO2003002717A2 (en) 2001-06-28 2003-01-09 Schering Corporation Biological activity of ak155
WO2003004529A2 (en) 2001-07-02 2003-01-16 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
TW565846B (en) 2001-07-06 2003-12-11 Halo Lsi Inc Twin MONOS array metal bit organization and single cell operation
WO2003055439A2 (en) 2001-07-18 2003-07-10 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
AU2002337657A1 (en) 2001-07-25 2003-02-17 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of prostate cancer
EA200601861A1 (ru) 2001-08-03 2007-02-27 Дженентек, Инк. ПОЛИПЕПТИДЫ TACIs И BR3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
US20070015145A1 (en) 2001-08-14 2007-01-18 Clifford Woolf Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
AU2002313559A1 (en) 2001-08-23 2003-03-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
AU2002357643A1 (en) 2001-08-29 2003-04-14 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
AU2002336446B2 (en) 2001-09-06 2008-03-06 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled STEAP-1 useful in treatment and detection of cancer
JP2005518782A (ja) 2001-09-17 2005-06-30 プロテイン デザイン ラブス， インコーポレイテッド ガンの診断方法、ガンのモジュレータのスクリーニング組成物及び方法
IL160933A0 (en) 2001-09-18 2004-08-31 Proteologics Inc Methods and compositions for treating ?cap associated diseases
EP1487877B1 (en) 2001-09-18 2010-10-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis of tumors
CA2460621A1 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US20030077644A1 (en) 2001-09-28 2003-04-24 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in CD72
WO2003029277A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
US20040249144A1 (en) 2001-10-03 2004-12-09 Zairen Sun Regulated breast cancer genes
US20030228319A1 (en) 2002-04-16 2003-12-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
AU2002351505B2 (en) 2001-10-19 2008-04-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
US7825089B2 (en) 2001-10-24 2010-11-02 National Jewish Health Three-dimensional structures of TALL-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
MXPA04003697A (es) 2001-10-31 2005-04-08 Alcon Inc Proteinas morfogenicas de hueso (bmp), receptores de bmp y proteinas de enlace de bmp y su uso en el diagnostico y tratamiento de glaucoma.
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
EP1482972A4 (en) 2001-11-20 2005-11-23 Seattle Genetics Inc TREATMENT OF IMMUNOLOGICAL DISORDERS USING ANTI-CD30 ANTIBODIES
WO2003045422A1 (en) 2001-11-29 2003-06-05 Genset S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
AU2002349784A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
WO2003054152A2 (en) 2001-12-10 2003-07-03 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
EP1485130A4 (en) 2002-02-21 2006-11-22 Univ Duke REAGENTS AND TREATMENT PROCEDURES FOR AUTOIMMUNE DISEASES
CA2476518A1 (en) 2002-02-22 2003-09-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
AU2003224638A1 (en) 2002-03-01 2003-09-16 Exelixis, Inc. PDPK1s AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
WO2003097803A2 (en) 2002-05-15 2003-11-27 Avalon Pharmaceuticals Cancer-linked gene as target for chemotherapy
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
JP2005534286A (ja) 2002-03-21 2005-11-17 サネシス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド キナーゼインヒビターの同定
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
EP1490085A2 (en) 2002-03-25 2004-12-29 Uab Research Foundation Fc receptor homolog, reagents, and uses thereof
WO2003083074A2 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
BR0308953A (pt) 2002-04-05 2006-03-14 Agensys Inc composições, proteìna, polinucleotìdeo, método de geração de uma resposta imune, método de detecção, composição farmacêutica, anticorpo ou seu fragmento, animal transgênico, hibridoma, método de fornecimento de um agente citotóxico ou agente de diagnóstico e método de inibição do crescimento de células cancerosas
WO2003087768A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
US20030224467A1 (en) 2002-04-17 2003-12-04 Osborne C. Kent AIB1 as a prognostic marker and predictor of resistance to endocrine therapy
AU2003228869A1 (en) 2002-05-03 2003-11-17 Incyte Corporation Transporters and ion channels
AU2003232453A1 (en) 2002-05-30 2003-12-19 David K. Bol Human solute carrier family 7 member 11 (hslc7a11)
EP1575492A4 (en) 2002-06-04 2007-05-09 Avalon Pharmaceuticals GENERAL ASSOCIATED WITH CANCER AS TARGET FOR CHEMOTHERAPY
AU2003240495A1 (en) 2002-06-04 2003-12-19 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
AU2003242633A1 (en) 2002-06-06 2003-12-22 Molecular Engines Laboratories Dudulin genes, non-human animal model: uses in human hematological disease
CA2488404C (en) 2002-06-06 2012-11-27 Oncotherapy Science, Inc. Genes and polypeptides relating to human colon cancers
AU2003249691A1 (en) 2002-06-07 2003-12-22 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
AU2003245441A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
CA2487809A1 (en) 2002-06-18 2003-12-24 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
AU2003245615A1 (en) 2002-06-20 2004-01-06 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modulating lymphocyte activity
EP1534331B1 (en) 2002-06-21 2014-10-29 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
AU2003281515A1 (en) 2002-07-19 2004-02-09 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
BR0313033A (pt) 2002-07-25 2007-07-10 Genentech Inc anticorpos, anticorpos monoclonais, linhagens de células de hibridoma, anticorpos receptores de anti-taci isolados, anticorpos anti -taci, métodos de modulação da atividade biológica
CA2494104A1 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
AU2003251471A1 (en) 2002-08-06 2004-02-25 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
CA2495389A1 (en) 2002-08-19 2004-02-26 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
JP2006515742A (ja) 2002-08-27 2006-06-08 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー 乳癌細胞でのプロテインチロシンキナーゼおよび／またはプロテインチロシンキナーゼ経路と相互作用および／またはモデュレートする化合物の活性を予測するためのポリヌクレオチドの同定
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
US20050271615A1 (en) 2002-08-30 2005-12-08 Doron Shabat Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
JP2005537800A (ja) 2002-09-06 2005-12-15 マンカインド コーポレイション エピトープ配列
US20060134109A1 (en) 2002-09-09 2006-06-22 Nura Inc. G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
AU2003278002A1 (en) 2002-10-03 2004-04-23 Mcgill Univeristy Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
CA2501131A1 (en) 2002-10-04 2004-04-22 Van Andel Research Institute Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
DK1578446T3 (en) 2002-11-07 2015-06-29 Immunogen Inc ANTI-CD33 ANTIBODIES AND PROCEDURES FOR TREATING ACUTE MYELOID LEUKEMIA BY USING IT
WO2004044178A2 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
CA2506080A1 (en) 2002-11-14 2004-05-27 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
WO2004045553A2 (en) 2002-11-15 2004-06-03 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Ca125 gene and its use for diagnostic and therapeutic interventions
CA2505601C (en) 2002-11-15 2014-10-28 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
AU2003297300A1 (en) 2002-11-20 2004-06-15 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
EP2410332A1 (en) 2002-11-21 2012-01-25 The University Of Utah Method for identifying purinergic modulators of the olfactory system
WO2004048938A2 (en) 2002-11-26 2004-06-10 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
WO2004053079A2 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
JP2004198419A (ja) 2002-12-13 2004-07-15 Bayer Healthcare Llc Ｔｉｍｐ１を用いた検出方法
CA2510315C (en) 2002-12-20 2014-01-28 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
US20050249671A9 (en) 2002-12-23 2005-11-10 David Parmelee Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
JP2007520995A (ja) 2003-01-08 2007-08-02 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー 上皮増殖因子受容体モデュレーターに対する感受性を決定するためのバイオマーカーおよび方法
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
WO2004063355A2 (en) 2003-01-10 2004-07-29 Protein Design Labs, Inc. Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of matastatic cancer
EP1583820A4 (en) 2003-01-14 2007-07-18 Bristol Myers Squibb Co ASSOCIATED POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES ASSOCIATED WITH THE NF-KB WAY
WO2004065576A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of urological disorder using differential expressed polypeptides
EP1594893A2 (en) 2003-02-14 2005-11-16 Sagres Discovery, Inc. Therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
GB0416511D0 (en) 2003-10-22 2004-08-25 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
AU2005216251B2 (en) 2004-02-23 2011-03-10 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
EP1720881B9 (en) 2004-03-01 2013-04-17 Spirogen Sàrl 11-hydroxy-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one derivatives as key intermediates for the preparation of c2 substituted pyrrolobenzodiazepins
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404574D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Amino acids
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
JP5166861B2 (ja) 2004-03-09 2013-03-21 スピロゲン リミティッド ピロロベンゾジアゼピン
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
WO2005110276A1 (en) 2004-05-11 2005-11-24 The General Hospital Corporation Dba Massachusetts General Hospital Methods for making oxidation resistant polymeric material
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
WO2006097320A2 (de) * 2005-03-17 2006-09-21 Genovoxx Gmbh Makromolekulare nukleotidverbindungen und methoden zu deren anwendung
AU2006238686B2 (en) 2005-04-21 2011-10-06 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
US8637664B2 (en) 2005-10-05 2014-01-28 Spirogen Sarl Alkyl 4- [4- (5-oxo-2,3,5, 11a-tetrahydo-5H-pyrrolo [2, 1-c] [1,4] benzodiazepine-8-yloxy)-butyrylamino]-1H-pyrrole-2-carboxylate derivatives and related compounds for the treatment of a proliferative disease
US20070154906A1 (en) 2005-10-05 2007-07-05 Spirogen Ltd. Methods to identify therapeutic candidates
JP5129143B2 (ja) 2005-10-07 2013-01-23 エグゼリクシス， インコーポレイテッド Ｍｅｋインヒビターおよびその使用方法
EP1813614B1 (en) * 2006-01-25 2011-10-05 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
DK1994139T3 (en) 2006-03-10 2016-10-24 Pasteur Institut Live, attenuated Bordetella strain as a single dose vaccine against whooping cough.
ES2567402T3 (es) 2006-05-30 2016-04-22 Genentech, Inc. Anticuerpos anti CD22, sus inmunoconjugados y usos de los mismos
KR101528939B1 (ko) 2006-07-18 2015-06-15 사노피 암 치료를 위한 ｅｐｈａ2에 대한 길항제 항체
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
WO2008050140A2 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Spirogen Limited Compounds for treatment of parasitic infection
CN101687037B (zh) 2007-05-08 2013-07-10 健泰科生物技术公司 半胱氨酸改造的抗muc16抗体和抗体药物偶联物
PT2019104E (pt) * 2007-07-19 2013-12-03 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina e sua utilização terapêutica
ES2450755T3 (es) 2007-10-19 2014-03-25 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-TENB2 modificados por ingeniería genética con cisteína, y conjugados de anticuerpo y fármaco
GB0722087D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Polyamides
GB0722088D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
CN104524592B (zh) 2008-04-30 2018-06-05 伊缪诺金公司 交联剂和它们的用途
RS54428B1 (en) * 2008-05-13 2016-04-28 Yale University CHIMERIC SMALL MOLECULES FOR THE REGULATION OF ANTIBODY ANTIBODIES
MX2010013833A (es) 2008-06-16 2011-02-15 Immunogen Inc Nuevos efectos sinergisticos.
GB0813432D0 (en) 2008-07-22 2008-08-27 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
SG2014009138A (en) 2009-02-05 2014-03-28 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
WO2011100398A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Immunogen, Inc. Cd20 antibodies and uses thereof
AU2011215900A1 (en) 2010-02-10 2012-07-26 Immunogen, Inc. CD20 antibodies and uses thereof
AU2011239525B2 (en) 2010-04-15 2015-04-09 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
CA2793890C (en) 2010-04-15 2017-08-15 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201006340D0 (en) 2010-04-15 2010-06-02 Spirogen Ltd Synthesis method and intermediates
CN107019804A (zh) 2010-04-15 2017-08-08 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
CA2956934C (en) * 2010-04-21 2019-07-09 Syntarga B.V. Novel conjugates of cc-1065 analogs and bifunctional linkers
US9135118B2 (en) 2011-03-07 2015-09-15 Aptare, Inc. System to catalog and search point-in-time instances of a file system
CN103987718A (zh) 2011-09-20 2014-08-13 斯皮罗根有限公司 作为非对称二聚体pbd化合物用于内含在靶向结合物中的吡咯并苯并二氮杂卓
US9388187B2 (en) 2011-10-14 2016-07-12 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
CN103987384A (zh) 2011-10-14 2014-08-13 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
WO2013053873A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
EP2750713B1 (en) 2011-10-14 2015-09-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN104011018B (zh) 2011-10-14 2016-12-14 麦迪穆有限责任公司 可用于制备吡咯并苯并二氮杂卓的合成方法和中间体
KR101961976B1 (ko) 2011-10-14 2019-03-25 시애틀 지네틱스, 인크. 피롤로벤조디아제핀 및 표적 접합체
JP2013194140A (ja) 2012-03-19 2013-09-30 Fuji Xerox Co Ltd トナー用ポリエステル樹脂、静電荷像現像用トナー、静電荷像現像剤、トナーカートリッジ、プロセスカートリッジ、画像形成装置及び画像形成方法
IN2014MN02175A (ru) 2012-04-30 2015-08-28 Ucl Business Plc
IN2014MN02092A (ru) 2012-04-30 2015-09-04 Spirogen Sarl
US9062577B2 (en) 2012-05-14 2015-06-23 Southwest Research Institute Diesel engine operation for fast transient response and low emissions
AR091700A1 (es) 2012-07-09 2015-02-25 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd79b
BR112015000441A2 (pt) 2012-07-09 2017-12-19 Genentech Inc imunoconjugados, formulação farmacêutica e método de tratamento e método para inbir a proliferação de uma célula positiva para cd22
RU2015106673A (ru) 2012-08-02 2016-09-20 Дженентек, Инк. Антитела к рецептору эндотелина типа в (etbr) и иммуноконъюгаты
CN105102004B (zh) 2012-10-12 2019-01-25 Adc疗法责任有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓-抗cd22抗体结合物
ME03486B (me) 2012-10-12 2020-01-20 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
ES2703151T3 (es) 2012-10-12 2019-03-07 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos de pirrolobenzodiazepinas
KR20150083856A (ko) 2012-10-12 2015-07-20 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이알엘 피롤로벤조디아제핀-항-her2 항체 컨주게이트
EP2906253B9 (en) 2012-10-12 2019-04-10 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
PT2906296T (pt) 2012-10-12 2018-06-01 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
EP2906297B1 (en) 2012-10-12 2017-12-06 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
KR20200003278A (ko) 2012-10-12 2020-01-08 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
AU2013328673B2 (en) 2012-10-12 2017-07-13 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
BR112015014669B1 (pt) 2012-12-21 2023-09-26 Medimmune Limited Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados compreendendo os mesmos e uso destes para tratar uma doença proliferativa
CN105246894A (zh) 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
JP6462591B2 (ja) 2013-02-22 2019-01-30 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 新規抗体コンジュゲートおよびその使用
US20160031887A1 (en) 2013-03-13 2016-02-04 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2968596B1 (en) 2013-03-13 2019-03-06 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
BR112015021965B1 (pt) 2013-03-13 2022-05-03 Medimmune Limited Conjugados e compostos de pirrolobenzodiazepinas, composição farmacêutica, uso dos mesmos para o tratamento de uma doença proliferativa e método de síntese dos ditos compostos
US20160106861A1 (en) 2013-04-26 2016-04-21 Spirogen Sarl Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054986B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054984A1 (en) 2013-10-11 2016-08-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
KR102337414B1 (ko) 2013-12-16 2021-12-10 제넨테크, 인크. 펩타이드 모방체 화합물 및 이의 항체-약물 컨쥬게이트
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011023883A1 (fr) * 2009-08-25 2011-03-03 Sanofi-Aventis Conjugues de dimeres de pyrrolo [1, 4 ] benzodiazepine en tant qu' anticancereux
WO2012014147A1 (en) * 2010-07-26 2012-02-02 Sanofi Anticancer derivatives, preparation thereof and therapeutic use thereof
WO2012112708A1 (en) * 2011-02-15 2012-08-23 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives and methods of preparation

Also Published As

Publication number Publication date
CA2901941A1 (en) 2014-10-02
MX363787B (es) 2019-04-03
MX2015012277A (es) 2016-05-18
HK1219658A1 (zh) 2017-04-13
NZ751432A (en) 2021-01-29
US20180125997A1 (en) 2018-05-10
EA201591277A1 (ru) 2016-02-29
CA2901941C (en) 2020-04-07
AR096287A1 (es) 2015-12-23
JP2016514149A (ja) 2016-05-19
US9821074B2 (en) 2017-11-21
AU2014244245B2 (en) 2017-12-07
TWI680766B (zh) 2020-01-01
WO2014159981A2 (en) 2014-10-02
BR112015023070A2 (pt) 2017-11-21
CN105307685A (zh) 2016-02-03
JP6944433B2 (ja) 2021-10-06
KR20150131203A (ko) 2015-11-24
WO2014159981A3 (en) 2015-04-09
JP6445519B2 (ja) 2018-12-26
CN105307685B (zh) 2019-03-08
JP2019069947A (ja) 2019-05-09
EP2968596B1 (en) 2019-03-06
AU2014244245A1 (en) 2015-10-08
NZ710745A (en) 2019-03-29
ZA201505754B (en) 2019-12-18
IL241532B (en) 2019-11-28
BR112015023070B1 (pt) 2022-06-07
US20140294868A1 (en) 2014-10-02
US10576164B2 (en) 2020-03-03
SG11201507214SA (en) 2015-10-29
AU2014244245C1 (en) 2018-04-19
TW201532615A (zh) 2015-09-01
KR102057755B1 (ko) 2019-12-19
EP2968596A2 (en) 2016-01-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10576164B2 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
ES2731779T3 (es) Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas
AU2014230735B2 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2750713B1 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2528625B1 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3235820A1 (en) Pyrrolobenzodiazepines and antibody disulfide conjugates thereof
WO2016037644A1 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
BR112012026213B1 (pt) Compostos de pirrolobenzodiazepinas, conjugado das mesmas, composição farmacêutica compreendendo o conjugado e uso do mesmo para o tratamento de uma doença proliferativa
NZ623209B2 (en) Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof