KR101971887B1 - 선택적 jak3 및/또는 jak1 키나아제 억제제로서 사용되는 방향족 헤테로고리 화합물의 제조 방법 및 방향족 헤테로고리 화합물의 용도 - Google Patents

선택적 jak3 및/또는 jak1 키나아제 억제제로서 사용되는 방향족 헤테로고리 화합물의 제조 방법 및 방향족 헤테로고리 화합물의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 JAK3 및/또는 JAK1 키나아제로서 일반식 (I)을 갖는 화합물의 적용 및 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

선택적 JAK3 및/또는 JAK1 키나아제 억제제로서 사용되는 방향족 헤테로고리 화합물의 제조 방법 및 방향족 헤테로고리 화합물의 용도{PREPARATION METHOD FOR AROMATIC HETEROCYCLIC COMPOUND USED AS SELECTIVE JAK3 AND/OR JAK1 KINASE INHIBITOR AND APPLICATION OF AROMATIC HETEROCYCLIC COMPOUND}
본 발명은 의약 분야에 속하며, 야누스 키나아제 3(JAK3) 및/또는 야누스 키나아제 1(JAK1) 억제 활성을 갖는 방향족 헤테로고리 화합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 화합물의 제조 방법, 상기 화합물을 유효 성분으로서 포함하는 약학 조성물 및 이들의 약학 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 JAK3 및/또는 JAK1 키나아제의 억제제로서 사용할 수 있고, 자가 면역 질환, 염증성 질환, 암 및 기타 질환을 포함하는 이들 키나아제의 비정상적인 활성과 관련된 질환의 치료/예방과 같은 임상적 용도에 관한 것이다.
2002년에, Manning 등에 의해 인간 키노미(kinome)에서 518개의 단백질 키나아제 유전자 중 218개의 유전자가 인간 질환의 발생 및 발달과 밀접하게 관련되어 있는 것으로 밝혀졌다(Manning G., et al. 2002, Science, 298:1912-1934). 현재까지 수득된 약물에는 효소를 표적으로 하는 20%의 의약품이 존재하며, 특히, 단백질 키나아제를 표적으로 하는 약물은 임상적 용도에서 특별한 가치가 있다.
단백질 키나아제는 특정 단백질의 인산화를 촉매하고 타이로신 단백질 키나아제(JAK, Src, Abl, EGFR, FGFR, PDGFR 등), 세린/트레오닌 단백질 키나아제(PKC, MAPK, Rho 키나아제 등), 이중특이적 단백질 키나아제(MAPKK) 및 포스파티딜 이노시톨 키나아제(PI3K)를 주로 포함하는 신호전달 과정을 수행하는 세포내 메신저-의존 효소이다. 단백질 키나아제의 인산화/탈인산화 과정은 대사, 세포분화, 세포생존, 세포사멸, 기관형성, 혈관신생 및 면역 반응 등과 같은 다양한 세포에서 여러 생물학적 과정을 조절할 수 있다(Shchemelinin I., et al. 2006, Folia Biol ., 52: 81-100).
JAK 키나아제(JAK3, JAK1, TYK2 및 JAK2의 4개의 공지된 구성원을 포함하는 JAK라고 약칭하는 야누스 키나아제)는 세포질내 비-수용체 타이로신 단백질 키나아제 상과(superfamily)의 작은 계열이다. JAK3은 골수 및 림프계에 분포하는 반면에 JAK1, TYK2 및 JAK2는 다수의 조직 세포에 광범위하게 분포한다. JAK가 세포 표면의 사이토카인 수용체에 결합하면, 수용체-결합된 JAK가 활성화되고, 이에 따라 수용체가 인산화되어 세포질 신호 변환기 및 전사 활성제인 STAT 단백질(STAT1~4, STAT5a, STAT5b 및 STAT6)에 대한 동원(recruiting) 반응 부위 즉, JAK 인산화 STAT 단백질을 제공한다. 이량체화 후, JAK 인산화 STAT 단백질은 핵으로 전달되어 유전자 발현을 조절한다. 이 경로는 JAK/STAT 신호 전달 경로라고 불린다(O'Shea J. J., et al. 2013, N. Engl. J. Med., 368: 161-170).
JAK/STAT 신호 전달 경로는 복수의 사이토카인 및 성장 인자 수용체에 의해 자극되는 신호 전달 경로이다. 이들 인자는 인터루킨(IL-2~7, IL-9, IL-10, IL-15, 및 IL-21), 인터페론(IFN-α, IFN-β, 및 IFN-γ), 에리스로포이에틴(EPO), 과립구대식구집락자극인자(GM-CSF), 성장 호르몬(GH), 프로락틴(PRL), 트롬보포이에틴(TPO) 등을 포함하며, 이들은 면역 세포 및 조혈줄기세포의 증식에 관여하고, 면역조절 생물학적 과정에서 중요한 역할을 한다(Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol. Rev., 228: 273-287). JAK 키나아제의 다양한 아형은 다양한 수용체에 의해 활성화되어 뚜렷한 생물학적 기능을 달성할 수 있다.
JAK1은 gp130 계열의 IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-26, IL-28, IFN-α, IFN-γ, IL-6 및 기타 γc-함유 수용체에 결합할 수 있다(Rodig S J., et al. 1998, Cell, 93: 373-383). 마우스 모델에서 JAK1 유전자의 녹-오프(knock-off) 실험에서 이러한 효소가 전술한 많은 사이토카인 수용체의 생물학적 효과에 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다(Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24). JAK1은 면역-관련 질환, 염증 및 암 등과 같은 질환에 대한 신규한 표적이다. JAK1 억제제는 자가 면역 질환, 염증 및 종양(Hornakova T., et al. 2010, Blood, 115:3287-3295), 예컨대 백혈병, 림프종, 흑색종, 관절염, 건선, 크론병, 홍반선 루프스, 후천성 면역결집 증후군, 베체트병(Hou S., et al. 2013, Hum. Genet., 132:1049-1058) 등을 포함하는 질환의 치료/예방에 사용될 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
JAK2는 EPO, GH, PRL, IL-3, IFN-γ 등을 포함하는 다수의 수용체의 조절 과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다(Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24; Levy D. E., et al. 2002, Nat. Rev. Mol . Cell Biol ., 3: 651-662; O'Shea J. J., et al. 2002, Cell, 109(suppl.):S121-S131). 마우스 모델에서, JAK2 유전자 녹-오프는 빈혈 동물의 죽음을 초래할 수 있다(Schindler C. et al. 2007, J. Biol . Chem ., 282: 20059-20063); 반면 인간에서, JAK2 유전자의 염기 변이 JAK2V617F는 진성다혈구증(PV), 본태성혈소판혈증(ET), 특발성 골수 섬유증(IMF) 및 만성 골수성 백혈병(CML) 등을 포함하는 골수증식성 질환의 발병과 밀접한 연관이 있다(Ghoreschi K., et al. 2009, Immunol . Rev., 228: 273-287). 따라서, JAK2는 이러한 질환의 치료/예방을 위한 정확한 표적이 되어 왔다.
JAK3은 IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 및 IL-21과 같은 사이토카인-수용체 복합체에서 감마 공통 쇄(γc)에 결합하여 세포 신호를 조절한다. JAK3 또는 γc 중 어느 하나의 변이는 심각한 복합 면역결핍(SCID)을 유발할 수 있다(Villa A., et al. 1996, Blood, 88:817-823). JAK3의 비정상적인 활성은 면역계의 정상적인 생물학적 기능 등에 큰 영향을 미치는 T-세포 및 NK 세포의 유의한 감소 및 B-세포의 기능 손실로 나타난다. JAK3은 이의 기능적 특성 및 특정 조직 분포에 따라 면역계-관련 질환에 대한 유망한 약학 표적이 되어 왔으며, 따라서 이의 억제제는 류마티스 관절염(RA), 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, I형 당뇨병, 건선, 알레르기 질환, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 백혈병, 림프종, 장기 이식 및 기타 질환의 치료/예방에 큰 임상적 가치를 가질 것이다(Papageorgiou A. C., et al. 2004, Trends Pharm . Sci ., 2004, 25: 558-562).
TYK2는 JAK 계열의 첫 번째 구성원으로 다수의 수용체, 예컨대 인터페론(IFN), IL-10, IL-6, IL-12, IL-23 및 IL-27에 의해 활성화될 수 있다. 마우스에서, TYK2의 기능 상실은 많은 사이토카인 수용체의 신호 전달 경로의 결핍을 야기할 수 있으며, 이는 추가의 바이러스 감염을 일으키고, 항생제 면역 기능을 저하시켜, 폐 감염의 가능성을 증가시킬 수 있다(Kisseleva T., et al. 2002, Gene, 285: 1-24). 또한, Larner A.C.의 연구는 TYK2가 유방암의 성장과 전이를 저해하는데 도움이 된다는 것을 증명하였다(Zhang Q., et al. 2011, J. Interferon Cytokine Res., 31:671-677); 또한, 최근에 TYK2가 마우스와 인간의 갈색 지방 조직(BAT)의 분화에 의한 비만 조절을 촉진하여, 비만으로부터 유기체를 보호하거나 역전시킬 수 있다고 발표하였다(Derecka M., et al., 2012, Cell Metab ., 16:814-824). 이는 암으로 고통받는 비만 환자들에게 새로운 기회를 제공할 것이다.
2012년 11월에 Pfizer사의 pan-JAK 억제제 젤잔즈(토파시티닙)는 류마티스 관절염 치료를 위한 FDA의 승인을 받았다. 2013년 10월에, 건선 치료를 위한 젤잔즈의 제3상 임상 데이터가 회사에 의해 공개되었다. 엔브렐(에타넬셉트)의 이중-맹검 시험과 비교하여, 이 약은 비-열등성 시험의 요구 사항을 충족시켰다. 그러나, 젤잔즈는 몇 가지 부작용이 있다. 예를 들어, 적혈구 및 백혈구의 양이 감소되고 콜레스테롤 수치가 증가할 수 있다. 이는 높은 JAK2 억제 활성 및 낮은 선택성과 관련이 있을 수 있다(Zak M., et alㄹ . 2012, J. Med . Chem ., 55: 6176-6193). 따라서, 선택적 JAK 억제제의 연구 및 발견이 높게 요구되고 있다.
류마티스 관절염, 크론병, 건선 및 골수섬유증과 같은 면역계-관련 질환의 치료에 사용되는 여러 인상 단계에서 선택적 JAK3 억제제 VX-509, 선택적 JAK1 억제제 GLPG0634(Feist E., et al. 2013, Rheumatology, 52:1352-1357) 및 INCB39110(http://www.incyte.com/research/pipeline) 등을 포함하는 여러 선택적 JAK 억제제가 있다. 이외에도, 다른 구조 유형을 가진 선택적 억제제에 대한 일부 특허가 공개되었다: 1) 선택적 JAK3 억제제, 예컨대 피롤로[1,2-b]피리다진(WO2012125887), 피라졸로[3,4-d]피리미딘(WO2011048082, WO2011134861, WO2012022681), 디아미노피리미딘(WO2011029807, WO2012015972), 피롤로[2,3-b]피리딘(JP2012012332), 디아미노-피리디닐-3-포름아미드(WO2010061971, US20120108566), 피롤로[2,3-b]피라진(WO2011144584, WO2011144585); 2) 선택적 JAK1 억제제, 예컨대 삼환식 화합물(WO2011086053), 치환된 피라졸 및 피롤로(WO2010135650, WO2011112662), 이닐리노프탈아진(WO2012037132). 또한, 선택적 JAK2 억제제 및 선택적 TYK2 억제제 및 두 가지 아형(JAK3/1, JAK1/2)을 모두 갖는 억제제에 대한 특허가 공개되어 있으며, 이는 본원에서 더 이상 설명되지 않는다.
Emt 또는 Tsk로도 지칭되는 유도성 T-세포 키나아제(ITK)는 Tec 계열의 비-수용체 타이로신 키나아제 중 하나이다. ITK는 T-세포, NKR 세포 및 비만세포에서 발현된다. 이 키나아제는 T-세포 수용체(TCR), CD28, CD2, 케모카인 수용체 CXCR4 및 FcεR 등의 신호 전달 경로 조절에서 중요한 역할을 한다. Th2-형 사이토카인(IL-4, IL-5 및 IL-13 등을 포함) 등의 분비는 면역 염증 조절에 중요한 역할을 한다. ITK 결핍은 Th2 세포 반응에 영향을 미치고, 이로 인해 만성 또는 후기 염증 반응을 완화시킨다(Sahu N., et al. 2009, Curr . Top. Med . Chem ., 9: 690-703; Lin T. A., et al. 2004, Biochemistry, 43: 11056-11062). B-세포 림프구 키나아제(BLK)는 Src 계열의 비-수용체 타이로신 키나아제 중 하나이며, 이는 B 림프구에서 발현되고, B 림프구의 성장 및 분화와 관련이 있다. BLK 키나아제 또는 포스파타아제 및 상응하는 보조수용체 간의 긴밀한 결합은 B-세포 수용체(BCR)의 신호 전달 경로에 중요한 영향을 미치며, 예를 들어, 이러한 키나아제는 BCR의 세포사멸 및 형성 지연에 영향을 줄 수 있다(Texido G., et al. 2000, Mol . Cell Biol., 20: 1227-1233). 또한, BLK는 전-B-세포 수용체-매개 NF-κB 활성에 중요한 영향을 미친다(Saijo K., et al. 2003, Nat. Immunol ., 4:274-279). 최근 연구는 BLK가 류마티스 관절염, 전신 홍반성 루프스 및 많은 기타 자가 면역 질환의 발병 기전과 관련이 있다는 것을 입증하였다(Simpfendorfer KR., et al. 2012, Hum. Mol. Genet., 21: 3918-3925; Genin E., et al. 2013, PLoS One, 8: e61044).
NAK (NF-κB 활성 키나아제) 또는 T2K라고도 지칭되는 TANK-결합 키나아제 1(TBK1)은 IKK 계열의 Ser/Thr 단백질 키나아제의 일종이다. TBK1은 마우스의 위, 결장, 폐, 흉선 및 간에서 광범위하게 발현된다; 또한 비장, 뇌 및 신장 등을 포함하는 인간의 림프성 및 비림프성 기관에서 발현된다. 이 키나아제는 박테리아 및 바이러스에 대한 면역 반응의 조절 및 IL-6, TNF-α 및 TNF-β 등과 같은 염증-관련 인자의 발현에 영향을 미친다. 인슐린 신호 전달 경로에서, TBK1은 인슐린 수용체 및 지질 대사에서 Ser994의 인산화를 매개할 수 있다. 이러한 결과는 TBK1이 다양한 면역생물학 및 면역병리학 기전에 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다(Yu T., et al. 2012, Mediators Inflamm ., 2012: 979105-979112; Hammaker D., et al. 2012, Rheumatology, 51: 610-618).
VEGFR-1(Flt1), VEGFR-2(KDR/Flk1) 및 VEGFR-3(Flt4)의 3가지 구성원을 포함하는 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR) 계열은 면역글로불린-유사 구조, 멤브레인 영역 및 타이로신 키나아제 영역을 갖는 7개의 세포외 영역으로 구성되며, 타이로신 키나아제 활성은 수용체 및 리간드, 예컨대 VEGFs A-F 및 태반 성장 인자 간의 결합을 통해 활성화되며, 세포 내 다양한 생물학적 효과, 예컨대 세포의 성장 및 분화에 있어서 중요한 효과를 추가로 유도한다(Shibuya M., et al. 2010, Genes Cancer, 1:1119-1123). 다른 연구는 류마티스 관절염 환자의 내피세포, 단구세포 및 대식세포에서 VEGFR1이 발현된다는 것을 입증하였다. VEGFA은 VEGFR1을 활성화시켜, 내피세포 및 혈관형성의 증식을 야기할 수 있다. VEGFA 단백질은 류마티스 관절염 환자의 활액, 림프액, 혈청 및 활액 조직에서 높게 발현되며, VEGFA의 수치는 류마티스 관절염과 양성적인 상관관계가 있다. VEGFR2는 류마티스 관절염 환자의 활액 조직에서 발현된다. VEGF A, C, 및 D 는 VEGFR2 신호 전달을 활성화시키고, 혈관 투과성 및 혈관 형성을 향상시킬 수 있다. VEGFC는 류마티스 관절염 농축 활막 내층의 다양한 유형의 세포, 특히 혈관 주위 세포 및 평활근 세포에서 검출될 수 있다. VEGFR3은 단구세포, 대식세포, 일부 수지상 세포, 정상적인 유방 조직의 모세 혈관 및 신경 내분비 기관에서 발현될 수 있다. 일부 연구에서 VEGFR3이 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 궤양병 및 크론병 등과 같은 자가 면역 질환 및 림프관 종양-관련 종양의 발병에 기여한다는 사실이 밝혀졌다. 그러나, 관련 메커니즘은 완전히 이해되지 않고 있다(D' Aura Swanson C, et al. 2009, Nat. Rev. Rheumatol ., 5: 317-324; Aoki Y., et al. 2005, J. Natl. Cancer Inst., 97:2-3).
본원에 기술된 단백질 키나아제 억제제는 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 알레르기 질환, 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 백혈병 및 림프종 등을 포함하지만 이에 한정되지는 않는 면역계-관련 질환의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다. 동시에, 이들 화합물 또는 이 화합물을 유효 성분으로서 포함하는 약학 조성물은 안전한 치료 영역에서 이들 질환에 대해 최대의 임상 효능을 가질 것이다.
본 발명의 일 양태는 JAK3 및/또는 JAK1 억제 활성을 갖는 방향족 헤테로고리 화합물에 관한 것이며, 이들의 유도체, 예컨대 이들의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 입체이성질체 및 전구약물(pro-drug)을 포함한다.
본 발명의 다른 양태는 본원에 기술된 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 화합물을 유효 성분으로서 포함하는 약학 조성물, 및 JAK과 같은 키나아제의 비정상적인 활성과 관련된 질환의 치료/예방에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 약학 조성물의 임상적 용도에 관한 것이며, JAK과 같은 키나아제의 비정상적인 활성과 관련된 질환의 치료/예방에 사용되는 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 이들의 전구약물, 입체이성질체(stereoisomer), 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 일반식 (I)의 화합물을 제공하며,
Figure 112017035725598-pct00001
R1은 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
R2는 수소, 하이드록시, 시아노, 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, C1-C6 할로알킬, C1-C6 알킬카보닐 및 C1-C6 알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
R3은 수소 또는 할로겐이며;
R4는 수소 또는 C1-C4 알킬이며;
X는 NH, O 또는 S이며;
Y는 CO 또는 S(O)2이며;
Z는 공유결합, CH2 또는 (CH2)2이며;
n은 1 내지 4의 정수이며;
고리 A는 벤젠 고리, 피리딘 고리 또는 피페리딘 고리이다.
바람직한 일 양태에서, 본 발명은 이들의 전구약물, 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 일반식 (I)의 화합물을 제공하며,
R1은 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
R2는 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
R3은 수소 또는 할로겐이며;
R4는 수소 또는 메틸이며;
X는 NH 또는 O이며;
Y는 CO 또는 S(O)2이며;
Z는 공유결합, CH2 또는 (CH2)2이며;
n은 1 내지 4의 정수이며;
고리 A는 벤젠 고리, 피리딘 고리 또는 피페리딘 고리이다.
더욱 바람직한 일 양태에서, 본 발명은 이들의 전구약물, 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 일반식 (I)의 화합물을 제공하며,
R1은 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
R2는 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
R3은 수소 또는 플루오로이며;
R4는 메틸이며;
X는 NH이며;
Y는 CO이며;
Z는 공유결합이며;
n은 1 내지 4의 정수이며;
고리 A는 벤젠 고리, 피리딘 고리이다.
더욱 바람직한 일 양태에서, 본 발명은 이들의 전구약물, 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 일반식 (I)의 화합물을 제공하며,
R1은 클로로, 플루오로 또는 메틸이며;
R2는 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
R3은 수소 또는 플루오로이며;
R4는 메틸이며;
X는 NH이며;
Y는 CO이며;
Z는 공유결합이며;
n은 1 내지 4의 정수이며;
고리 A는 벤젠 고리이다.
더욱 바람직한 일 양태에서, 본 발명은 이들의 전구약물, 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 일반식 (I)의 화합물을 제공하며,
R1은 클로로이며;
R2는 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
R3은 수소 또는 플루오로이며;
R4가 메틸이며;
X는 NH이며;
Y는 CO이며;
Z는 공유결합이며;
n은 1 내지 4의 정수이며;
고리 A는 벤젠 고리이다.
특히 바람직한 일 양태에서, 본 발명은 이들의 전구약물, 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 일반식 (I)의 화합물을 제공하며,
R1은 클로로이며;
R2는 시아노, 플루오로 및 트리플루오로메틸로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
R3은 수소 또는 플루오로이며;
R4는 메틸이며;
X는 NH이며;
Y는 CO이며;
Z는 공유결합이며;
n은 1이며;
고리 A는 벤젠 고리이다.
특히 바람직한 일 양태에서, 본 발명은 이들의 전구약물, 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 일반식 (I)의 화합물을 제공하며,
R1은 클로로이며;
R2는 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
R3은 수소 또는 플루오로이며;
R4는 메틸이며;
X는 NH이며;
Y는 CO이며;
Z는 공유결합이며;
n은 1이며;
고리 A는 벤젠 고리이다.
본원에 기재된 "할로겐"은 플루오린, 클로린, 브로민 또는 아이오딘을 나타내며, 특히 플루오린, 클로린 또는 브로민이다.
본원에 기재된 "알킬"은 선형, 분지형 또는 고리형 알킬을 포함한다. 바람직하게는, 알킬은 C1-C8 알킬 또는 C1-C6 알킬이고; 특히 바람직하게는, 알킬은 C1-C4 알킬이며; 더욱 특히 바람직하게는, 알킬은 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필, n-부틸, 이소부틸 또는 t-부틸이다. 본 발명의 화합물에서 알킬은 임의적으로 치환되거나 비치환될 수 있으며, 치환체는 알킬, 할로겐, 알콕시, 하이드로카빌, 및 하이드록실 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 알킬의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, t-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, n-헥실, 이소헥실, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실 등을 포함한다.
본원에 기재된 "알콕시"는 자유롭게 결합을 형성할 수 있는 산소 원자에 상기 알킬이 산소 원자에 결합하여 형성되는 기를 나타내며, 예컨대 메톡실, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 펜톡시, 이소프로폭시, t-부톡시, 사이클로프로폭시 및 사이클로헬실옥시 등이 있다.
본원에 기재된 "알킬카보닐"은 상기 알킬이 결합하여 카보닐에 형성되는 기를 나타내며, 예컨대 아세틸, 프로피오닐, 이소프로피오닐, 부티릴, t-부티릴, 사이클로프로피오닐 및 사이클로헥사노일 등이 있다.
본원에 기재된 "알킬아미노"는 상기 알킬이 아미노기에 결합하여 형성되는 기를 나타내며, 예컨대 메틸아미노, 에틸아미노 및 4-디메틸아미노 등이 있다.
본원에 기재된 용어 "약학적으로" 또는 "약학적으로 허용되는"은 합당한 범위의 의학에서 인간 및 동물에서 사용하기 적합한 것으로 이해될 수 있으며, 독성, 알레르기, 자극, 합병증 등의 용인할 수 없는 부작용이 없는 것이다.
본 발명은 활성 성분으로서 이들의 전구약물, 입체이성질체, 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 포함하는 전술한 화학식 (I)의 화합물, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 보강제 또는 부형제 등을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 약학적으로 허용 가능한 담체, 보강제 또는 부형제는 제약 분야에서 사용될 수 있는 임의의 희석제, 보강제 및 담체를 나타내며, 예컨대 "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 8th ed, 2013에 기재된 물질이 있지만, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 기술된 화합물은 임의적으로 하나 이상의 활성 성분과 병용하여 사용할 수 있으며, 각 성분의 투여량 및 이들의 비율은 특정 질환, 환자의 특정 상태 및 임상적 요구 사항에 따라 당업자에 의해 결정될 수 있다.
본 발명에서 기술된 화합물 또는 약학 조성물은 제약 분야의 통상적인 부형제를 포함하는 임의의 제형으로 제조될 수 있으며, 예컨대 경구 제제(정제, 캡슐, 분말, 과립, 시럽, 알약 등), 주사, 국소 제형 등을 들 수 있지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 제제는 일반적으로 0.5 내지 70중량%의 활성 성분, 바람직하게는 1 내지 20중량%의 활성 성분을 함유한다.
본 발명에 기술된 화학식 (I)의 화합물은 임상 실험에서 경구 또는 주사 경로에 의해, 바람직하게는 경구 경로에 의해 포유류(인간 포함)에 투여될 수 있다. 투여량은 1일 당 0.0001 내지 200mg/kg 체중, 보다 바람직하게는 1일 당 0.01 내지 100mg/kg 체중이며, 가장 바람직하게는 1일 당 0.1 내지 50mg/kg 체중이다. 동시에, 최상의 투여량은 개개의 상태에 따라 결정되며, 일반적으로 보다 낮은 투여량에서 시작하여 점차적으로 보다 높은 투여량으로 증가된다.
본 발명의 실시예 및 제조예에서, 본원에 기술된 화합물 및 이들의 제조 방법이 추가로 기술 및 예시된다. 하기 제조예 및 실시예는 본 발명의 범위를 제한하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 화학식 (I)의 유도체의 제조 방법은 하기 합성 경로로 기술된다. 개략적인 합성 경로에 사용되는 원료, 시약, 촉매 및 용매 등은 유기 화학 분야의 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조되거나 시판될 수 있다. 본 발명의 모든 최종 유도체는 개략도 또는 다른 유사한 방법에 기술된 방법으로 제조될 수 있다. 이들 방법은 유기 화학 분야의 당업자에게 공지되어 있다. 이들 계략도에서 사용되는 모든 가변 인자는 하기 또는 청구항에 따라 정의된다.
제조 방법:
(a) 중간물 III(a)는 직접 구입할 수 있거나 하기 예시된 합성 방법에 따라 제조될 수 있다:
Figure 112017035725598-pct00002
화합물 VIII는 일방적으로 보호된 디아민 VI 및 화합물 VII 간의 축합에 의해 수득된다. 축합 반응에서, 촉매로서 펩타이드 축합제가 사용되며, 예컨대 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드(EDC), N,N'-디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 및 N,N'-카보닐디이미다졸(CDI) 등이 있다. 반응은 0 내지 60℃의 온도 범위에서 2 내지 72시간 동안 실시된다. 반응에 사용되는 용매는 통상적인 용매, 예컨대 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 디옥산, 디클로로메탄, 클로로포름, N,N'-디메틸포름아미드 등이 있다. 필요한 경우에, 소듐 하이드록사이드, 트리에틸아민 또는 피리딘 등과 같은 알칼리가 첨가될 수 있다.
화합물 III(a)는 산(바람직하게는, 트리플루오로아세트산)의 작용하에 생성 된 화합물 VIII로부터 Boc를 제거한 후에 수득된다. 반응은 0 내지 60℃의 온도 범위에서 0.5 내지 2시간 동안 실시된다. 반응에 사용되는 용매는 디클로로메탄, 테트라하이드로퓨란, N,N'-디메틸 포름아미드 등이 있다.
(b) 중간물 III(b)는 직접 구입할 수 있거나 하기 예시된 합성 방법에 따라 제조될 수 있다:
Figure 112017035725598-pct00003
화합물 X는 일방적으로 보호된 디아민 VI 및 화합물 VX 간의 축합에 의해 수득된다. 반응은 0 내지 60℃의 온도 범위에서 0.5 내지 2시간 동안 실시된다. 반응에 사용되는 용매는 통상적인 용매, 예컨대 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 디옥산, 디클로로메탄, 클로로포름, N,N'-디메틸포름아미드 등이 있다. 통상적으로, 트리에틸아민, 디오스프로필에틸아민 또는 피리딘이 산-결합제로서 사용된다; 임의적으로, 무기 염기, 예컨대 NaOH, Na2CO3, NaOAc 등이 첨가될 수 있다.
화합물 III(b)는 산(바람직하게는, 트리플루오로아세트산)의 작용하에 생성 된 화합물 X로부터 Boc를 제거한 후에 수득된다. 반응은 0 내지 60℃의 온도 범위에서 0.5 내지 2시간 동안 실시된다. 반응에 사용되는 용매는 디클로로메탄, 테트라하이드로퓨란, N,N'-디메틸포름아미 및 물 등이 있다. 사용되는 산은 트리플루오로아세트산, 염산 등일 수 있다.
(C) 중간물 V는 하기 예시된 합성 방법에 따라 제조될 수 있다:
Figure 112017035725598-pct00004
화합물 XII는 알칼리(바람직하게는, 디이소프로필에틸아민)의 존재하에 화합물 XI(시판 또는 제조) 및 아크릴로일 클로라이드 간의 축합에 의해 수득된다. 이어서, 생성된 화합물 XII의 니트로기가 철 분말에 의해 환원되어 표적 중간물 V가 수득된다. 사용되는 알칼리는 디이소프로필에틸아민 또는 트리에틸아민 등일 수 있다.
(D) 본원에 기술된 화학식 (I)의 화합물은 하기 예시된 합성 방법에 따라 제조될 수 있다:
Figure 112017035725598-pct00005
화합물 IV는 트리에틸아민의 존재하에 화합물 II 및 화합물 III의 치환 반응에 의해 수득되며, 화합물 II 및 III 모두 직접 구입할 수 있다. 반응 온도는 8 내지 16시간 동안 환류된다. 반응에 사용되는 용매는 에탄올, 메탄올 또는 n-부탄올 등이 있다. 사용되는 알칼리는 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민 등이 있다.
화합물 I은 화합물 IV 및 산(바람직하게는, 트리플루오로아세트산)에 의해 촉매되어 생성된 화합물 V의 치환 반응에 의해 수득된다. 반응 온도는 8 내지 16시간 동안 환류된다. 반응에 사용되는 용매는 이소프로판올 또는 n-부탄올 등이 있고; 반응에 사용되는 산은 트리플루오로아세트산 또는 염산 등이 있다.
화학식 I의 화합물은 통상적인 분리 방법, 예컨대 추출, 재결정 또는 컬럼 크로마토그래피 등으로 정제될 수 있다.
본 발명에 기술된 대표적인 화합물을 표 1에 나타내었다. 화합물의 수는 실시예 부분의 "실시예의 수"와 일치한다. 즉, 표 1의 화합물 1의 합성은 "실시예 1"에 기술되어 있고, 표 1의 화합물 30의 합성은 "실시예 30"에 기술되어 있다.
본 발명의 대표적인 화합물
실시예 구조식 화학명
7
Figure 112017035725598-pct00006
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노벤즈아미드
13
Figure 112017035725598-pct00007
 N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드
17
Figure 112017035725598-pct00008
 N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드
19
Figure 112017035725598-pct00009
 4-플루오로-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드
21
Figure 112017035725598-pct00010
 N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드
22
Figure 112017035725598-pct00011
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드
23
Figure 112017035725598-pct00012
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드
27
Figure 112017035725598-pct00013
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-N-메틸피페리디닐-4-포름아미드
28
Figure 112017035725598-pct00014
 N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노벤즈아미드
32
Figure 112017035725598-pct00015
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-N,N-디메틸아미노벤즈아미드
36
Figure 112017035725598-pct00016
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드
40
Figure 112017035725598-pct00017
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메톡실벤즈아미드
44
Figure 112017035725598-pct00018
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-6-시아노니코틴아미드
48
Figure 112017035725598-pct00019
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드
52
Figure 112017035725598-pct00020
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-2-플루오로벤즈아미드
56
Figure 112017035725598-pct00021
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-3-플루오로벤즈아미드
58
Figure 112017035725598-pct00022
 4-시아노-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드
60
Figure 112017035725598-pct00023
 4-시아노-N-(3-(5-플루오로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드
64
Figure 112017035725598-pct00024
 N-(5-(5-클로로-4-(3-(2-(4-시아노페닐)아세트아미노)프로필아미노)피리미디닐-2-아미노)-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드
68
Figure 112017035725598-pct00025
 N-(5-(5-클로로-4-(3-(4-시아노페닐설폰아미노)프로필아미노)피리미디닐-2-아미노)-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴로일
71
Figure 112017035725598-pct00026
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-옥소)프로필)-4-시아노벤즈아미드
75
Figure 112017035725598-pct00027
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-이소니코틴아미드
79
Figure 112017035725598-pct00028
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-에틸벤즈아미드
83
Figure 112017035725598-pct00029
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메틸벤즈아미드
87
Figure 112017035725598-pct00030
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드
91
Figure 112017035725598-pct00031
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드
95
Figure 112017035725598-pct00032
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-시아노벤즈아미드
103
Figure 112017035725598-pct00033
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드
107
Figure 112017035725598-pct00034
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드
111
Figure 112017035725598-pct00035
 4-아세틸-N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드
115
Figure 112017035725598-pct00036
 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드
123
Figure 112017035725598-pct00037
 N-(6-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)헥실)-4-시아노벤즈아미드
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 더욱 상세히 설명된다. 그러나, 본 발명의 범위는 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다. 본원에서 기술된 백분율은 달리 명시되지 않는 한 중량 백분율을 나타낸다. 명세서에 기술된 측정 단위, 반응 조건, 및 화합물의 물리적 상태 또는 백분율과 같은 모든 수치 범위는 명확한 참조를 위해 제공된다. 예상되는 결과는 당업자에 의해 특허가 온도, 농도, 양 및 탄소 원자 수 등이 범위를 벗어나거나 개별 값과 상이하게 실시될 때 또한 달성될 수 있다.
도 1은 Z'-LYTE 키나아제 활성 분석의 원리를 나타내는 개략도이며, 키나아제 및 이의 기질 간의 반응, 발색 반응 및 검출을 포함하는 시험에 관한 단계를 반영한다.
실시예 1
2-플루오로-N-메틸-5-나이트로아닐린의 제조
Figure 112017035725598-pct00038
황색 고체의 2-플루오로-N-메틸-5-나이트로아닐린(19.0g, 87.0%의 수득률)을 다음과 같이 제조하였다. 2-플루오로-5-나이트로아닐린(20.0g, 128.2mmol) 및 파라포름알데히드(16.0g, 533.3mmol)를 500ml 메탄올에 용해시키고, 실온에서 교반하엿다. 이어서, 메탄올 중 100ml 소듐 메톡사이드(3.4g, 63mmol) 용액을 적하하여 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 이등분하여 NaBH4(9.7g, 255.2mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 반응을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 후, 혼합물을 1M KOH 수용액에 부어 넣고 교반하여 고체를 침전시켰다. 여과하여 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 171(M+1)..
실시예 2
N-(2-플루오로-5-나이트로페닐)-N-메틸아크릴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00039
황색 오일의 N-(2-플루오로-5-나이트로페닐)-N-메틸아크릴아미드(12.0g, 83.0%의 수득률)를 다음과 같이 제조하였다. 2-플루오로-N-메틸-5-나이트로아닐린(11.0g, 64.7mmol) 및 DIPEA(23ml, 129.4mmol)를 100ml THF에 용해시키고, 실온에서 교반하엿다. 이어서, 아크릴로일 클로라이드(11ml, 129.4mmol)를 적하하여 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 대부분의 반응 용매를 증발시켜 제거하였다. 이어서, 용액에 100ml 에틸 아세테이트를 첨가하여 희석시키고, 포화 식염수로 세척하고, 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축하여 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 225(M+1).
실시예 3
N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00040
갈색 오일의 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(5.6g, 54.0%의 수득률)를 다음과 같이 제조하였다. 철 분말(20.0g, 357mmol) 및 NH4Cl(20.0g, 374mmol)를 200ml 물에 용해시키고, 80℃로 가열하고, 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 에틸 아세테이트 중 20ml 용액의 N-(2-플루오로-5-나이트로페닐)-N-메틸아크릴아미드(12.0g, 53.6mmol)를 첨가하였다. 80℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 NaHCO3 수용액으로 알칼리성 pH로 조정하였다. 철분 진흙을 여과하고, 여과액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 결합시키고, 감압하에서 농축하여 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 195(M+1).
실시예 4
N-(4-시아노-벤즈아미노)프로필아미노포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00041
백색 고체의 N-(4-시아노-벤즈아미노)프로필아미노포름산(850mg, 98.0%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 다음과 같이 제조하였다. 3-아미노프로필아미노포름산(500mg, 2.87mmol)의 t-부틸 에스테르를 20ml THF에 용해시키고, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드(1.0g, 5.24mmol), 1-하이드록시벤즈트리아졸(580mg, 4.30mmol), DIPEA(1ml, 5.63mmol) 및 4-시아노벤조산(425mg, 2.89mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 이어서, NaHCO3 수용액으로 혼합물의 pH 값을 8 내지 10으로 조정하였다. 이어서, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 결합시키고, 감압하에서 농축하여 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 304(M+1).
실시예 5
N-(3-아미노프로필)-4-시아노-벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00042
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-벤즈아미드(350mg, 62.0%의 수득률)를 다음과 같이 제조하였다. 3-(4-시아노-벤즈아미노)프로필아미노포름산(850mg, 2.8mmol)의 t-부틸 에스테르를 10ml 디클로로메탄에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(500㎕, 6.7mmol)을 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 반응 용액을 NaHCO3 수용액으로 알칼리성 pH로 조정하였다. 증발 건조시킨 후, 디클로로메탄/메탄올(10:1)의 혼합 용액을 첨가한 후, 초음파 처리하였다. 고체를 여과한 후, 여과액을 증발 건조시켜 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 204(M+1).
실시예 6
4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00043
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-벤즈아미드(3.5g, 78.0%의 수득률)를 다음과 같이 제조하였다. 2,4,5-트리클로로피리미딘(2.6g, 14.2mmol), N-(3-아미노프로필)-4-시아노-벤즈아미드(2.6g, 12.8mmol) 및 트리에틸아민(2ml, 14mmol)을 50ml 에탄올에 용해시켰다. 반응 용액을 70℃로 가열하고 4시간 동안 교반한 후, 반응을 종료시켰다. 용액을 증발 건조시킨 후, 디에틸 에테르로 세척하였다. 여과하여 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 351(M+1).
실시예 7
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N- 메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00044
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드(3.1g, 60.0%의 수득률)를 다음과 같이 제조하였다. N-(3-아미노프로필)-4-시아노-벤즈아미드(4.0g, 11.4mmol), N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(2.7g, 13.9mmol) 및 트리플루오로아세트산(1ml, 7mmol)을 60ml 이소프로판올에 용해시켰다. 반응 용액을 90℃로 가열하고 24시간 동안 교반한 후, 반응을 종료시켰다. 반응 용액을 NaHCO3 수용액에 부어 넣고 고체를 침전시켰다. 혼합물을 고정시킨 후 여과하였다. 미정제 생성물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 초음파 처리하였다. 여과한 후, 표적 화합물을 수득하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.80-1.83(m, 2H, CH2), 3.10-3.12(m, 2H, CH2), 3.32(s, 3H, CH3), 3.44-3.46(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.4Hz, 1H, CH), 6.02-6.08(m, 1H, CH), 6.18(d, J=16.0Hz, 1H, CH), 7.21-7.23(m, 1H, Ar-H), 7.26-7.27(m, 1H, Ar-H), 7.64(s, 1H, 피리미딘-NH), 7.91(s, 1H, Ar-H), 7.93(s, 1H, 피리미딘-H), 7.95-7.96(m, 2H, Ar-H), 7.97-7.98(m, 2H, Ar-H), 8.72(s, 1H, NH), 9.43(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 508(M+1).
실시예 8
N-(2-플루오로-5-나이트로페닐)아크릴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00045
황색 고체의 N-(2-플루오로-5-나이트로페닐)아크릴아미드(0.3g, 71.4%의 수득률)를 실시예 2에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2-플루오로-5-나이트로아닐린(0.3g, 2.0mmol) 및 아크릴로일 클로라이드(0.27g, 3mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 211(M+1).
실시예 9
N-(5-아미노-2-플루오로페닐)아크릴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00046
갈색 고체의 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)아크릴아미드(0.1g, 46.7%의 수득률)를 실시예 3에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(2-플루오로-5-나이트로페닐)아크릴아미드(0.125g, 4.7mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 181(M+1).
실시예 10
3-(4-트리플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00047
백색 고체의 3-(4-트리플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(0.22g, 90%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(0.4g, 2.4mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-트리플루오로메틸 벤조산(0.38g, 2mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 347(M+1).
실시예 11
N-(3-아미노프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00048
황색 액체의 N-(3-아미노프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(1.1g, 53%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-트리플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(2.8g, 8mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 247(M+1).
실시예 12
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00049
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(1.9g, 57%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(1.46g, 8mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(1.9g, 8mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 393(M+1).
실시예 13
N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00050
회색 고체의 N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(18mg, 33%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(39mg, 0.1mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)아크릴아미드(20mg, 0.11mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.85-1.88(m, 2H, CH2), 3.32-3.37(m, 2H, CH2), 3.55-3.58(m, 2H, CH2), 5.76-5.79(m, 1H, CH), 6.27-6.32(m, 1H, CH), 6.61-6.68(m, 1H, CH), 7.21(t, J=10.04Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.36-7.40(m, 1H, Ar-H), 7.82(d, J=8.16Hz, 2H, Ar-H), 8.02(d, J=8.1Hz, 2H, Ar-H), 8.16(s, 1H, 피리미딘-H), 8.28(s, 1H, Ar-H), 8.37-8.38(m, 1H, NH), 8.73-8.76(m, 1H, NH), 9.99(s, 1H, 벤젠 고리-NH), 10.28(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 537(M+1).
실시예 14
3-(4-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00051
백색 고체의 3-(4-플루오로벤즈아미노)프로필아미노포름산(800mg, 94.1%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(500mg, 2.87mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-플루오로벤조산(400mg, 2.86mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 297(M+1).
실시예 15
N-(3-아미노프로필)-4-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00052
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-플루오로벤즈아미드(400mg, 75.2%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(800mg, 2.70mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 197(M+1).
실시예 16
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00053
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(440mg, 63.2%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(400mg, 2.19mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-플루오로벤즈아미드(400mg, 2.03mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 343(M+1).
실시예 17
N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00054
백색 고체의 N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(8mg, 9.41%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(60mg, 0.17mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)아크릴아미드(40mg, 0.22mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.79-1.83(m, 2H, CH2), 3.31-3.33(m, 2H, CH2), 3.49-3.51(m, 2H, CH2), 5.75(d, J=11.2Hz, 1H, CH), 6.26(d, J=16.99Hz, 1H, CH), 6.55-6.62(m, 1H, CH), 7.11(t, J=9.92Hz, 1H, Ar-H), 7.22(t, J=5.66Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.28(t, J=8.73Hz, 2H, Ar-H), 7.47(t, J=4.93Hz, 1H, Ar-H), 7.88-7.93(m, 3H, Ar-H, 피리미딘-H), 8.31(d, J=5.12Hz, 1H, Ar-H), 8.50-8.52(m, 1H, NH), 9.26(s, 1H, 벤젠 고리-NH), 9.85(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 487(M+1).
실시예 18
N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00055
백색 고체의 N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(40mg, 52.3%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4-디클로로-5-메틸피리미딘(40mg, 0.25mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-플루오로벤즈아미드(40mg, 0.20mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 323(M+1).
실시예 19
4-플루오로-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00056
백색 고체의 4-플루오로-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(5mg, 8.68%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(40mg, 0.12mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(40mg, 0.21mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.80-1.83(m, 2H, CH2), 1.92(s, 3H, CH3), 3.19(s, 3H, CH3), 3.30-3.32(m, 2H, CH2), 3.42-3.44(m, 2H, CH2), 5.58-5.61(m, 1H, CH), 6.04-6.11(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 6.72(t, J=5.17Hz, 1H, Ar-H), 7.21(t, J= 9.44Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.28(t, J=8.8Hz, 2H, Ar-H), 7.66-7.68(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-H), 7.88-7.92(m, 2H, Ar-H), 7.98-7.99(m, 1H, Ar-H), 8.51(t, J=5.26Hz, 1H, NH), 9.09(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 481(M+1).
실시예 20
N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00057
백색 고체의 N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(0.26g, 72%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4-디클로로-5-메틸피리미딘(0.16g, 1mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(0.24g, 1mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 373(M+1).
실시예 21
N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00058
백색 고체의 N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5- 메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(0.26g, 72%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(75mg, 0.2mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(70mg, 0.3mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.81-1.87(m, 2H, CH2), 1.93(s, 3H, CH3), 3.19(s, 3H, CH3), 3.36-3.38(m, 2H, CH2), 3.44-3.46(m, 2H, CH2), 5.58-5.61(m, 1H, CH), 6.04-6.11(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 6.73(t, J=5.64Hz, 1H, Ar-H), 7.21(t, J=9.4Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.66-7.68(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-H), 7.84(d, J=8.3Hz, 2H, Ar-H), 7.98-8.00(m, 1H, Ar-H), 8.03(d, J=8.1Hz, 2H, Ar-H), 8.71-9.74(m, 1H, NH), 9.10(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 531(M+1).
실시예 22
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00059
회색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(0.23g, 42%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(0.39g, 1mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(0.28g, 1.5mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.81-1.84(m, 2H, CH2), 3.31-3.33(m, 2H, CH2), 3.45-3.47(m, 2H, CH2), 5.60(d, J=9.6Hz, 1H, CH), 6.02-6.08(m, 1H, CH), 6.18(d, J=15.1Hz, 1H, CH), 7.25-7.29(m, 1H, Ar-H), 7.61-7.67(m, 3H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.82-7.84(m, 3H, Ar-H, 피리미딘-H), 8.00-8.03(m, 3H, Ar-H, NH), 8.71(s, 1H, 벤젠 고리-NH), 9.71(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 551(M+1).
실시예 23
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00060
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(117mg, 40.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(200mg, 0.58mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(150mg, 0.77mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.78-1.81(m, 2H, CH2), 3.28-3.29(m, 2H, CH2), 3.32(s, 3H, CH3), 3.43-3.45(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.8Hz, 1H, CH), 6.05-6.09(m, 1H, CH), 6.15-6.20(m, 1H, CH), 7.22-7.30(m, 4H, Ar-H), 7.64-7.66(m, 1H, 피리미딘-NH), 7.87-7.91(m, 3H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.50(t, J=5.2Hz, 1H, NH), 9.43(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 501(M+1).
실시예 24
3-(1-메틸피페리디닐-4-포름아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00061
백색 고체의 3-(1-메틸피페리디닐-4-포름아미노)프로필아미노 포름산(220mg, 25.6%의 수득률)을 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(500mg, 2.87mmol)의 t-부틸 에스테르 및 1-메틸피페리디닐-4-카복실산(410mg, 2.87mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 300(M+1).
실시예 25
N-(3-아미노프로필)-N-메틸피페리디닐-4-포름아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00062
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드(130mg, 80.1%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(1-메틸피페리디닐-4-포름아미노)프로필아미노 포름산(220mg, 0.74mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 200(M+1).
실시예 26
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00063
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드(200mg, 79.6%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(130mg, 0.71mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드(130mg, 0.65mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 346(M+1).
실시예 27
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00064
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드(12mg, 11.6%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드(80mg, 0.23mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(40mg, 0.20mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.52-1.58(m, 4H, 2xCH2), 1.74-1.79(m, 2H, CH2), 1.96-1.99(m, 1H, CH), 2.11(s, 3H, CH3), 3.05-3.12(m, 4H, 2xCH2), 3.13-3.16(m, 4H, 2xCH2), 3.18(s, 3H, CH3), 5.60(d, J=9.7Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.15-6.21(m, 1H, CH), 7.25-7.30(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.64-7.69(m, 1H, Ar-H), 7.76(t, J=5.45Hz, 1H, NH), 7.84-7.88(m, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 9.43(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 504(M+1).
실시예 28
N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00065
흑색 고체의 N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드(20mg, 40%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(35mg, 0.1mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)아크릴아미드(22mg, 0.12mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.81-1.87(m, 2H, CH2), 3.30-3.34(m, 2H, CH2), 3.52-3.57(m, 2H, CH2), 5.75-5.78(m, 1H, CH), 6.25-6.30(m, 1H, CH), 6.59-6.66(m, 1H, CH), 7.19(t, J=10.48Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.36-7.40(m, 1H, Ar-H), 7.92-7.97(m, 4H, Ar-H), 8.11(s, 1H, 피리미딘-H), 8.34(d, J=4.6Hz, 1H, Ar-H), 8.73(t, J=5.44Hz, 1H, NH), 9.95(s, 1H, 벤젠 고리-NH), 10.05(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 494(M+1).
실시예 29
3-(4-디메틸아미노벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00066
백색 고체의 3-(4-디메틸아미노벤즈아미노)프로필아미노 포름산(840mg, 91.1%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(500mg, 2.87mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-디메틸아미노벤조산(475mg, 2.87mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 322(M+1).
실시예 30
N-(3-아미노프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00067
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드(500mg, 86.5%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-디메틸아미노벤즈아미노)프로필아미노 포름산(840mg, 2.62mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 222(M+1).
실시예 31
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00068
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드(700mg, 84.3%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(550mg, 3.00mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드(500mg, 2.26mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 368(M+1).
실시예 32
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00069
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드(49mg, 58.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드(50mg, 0.14mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(30mg, 0.15mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.74-1.78(m, 2H, CH2), 2.95(s, 6H, 2xCH3), 3.25-3.60(m, 2H, CH2), 3.32(s, 3H, CH3), 3.41-3.43(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.8Hz, 1H, CH), 6.02-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.20(m, 1H, CH), 6.68(d, J=9.8Hz, 2H, Ar-H), 7.22-7.27(m, 1H, Ar-H), 7.31-7.34(m, 1H, Ar-H), 7.64-7.67(m, 1H, 피리미딘-NH), 7.70(d, J=8.7Hz, 2H, Ar-H), 7.89-7.90(m, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.14(t, J=5.6Hz, 1H, NH), 9.43(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 526(M+1).
실시예 33
3-(2,4,6-트리플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00070
백색 고체의 3-(2,4,6-트리플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(200mg, 60.1%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(174mg, 1.0mmol)의 t-부틸 에스테르 및 2,4,6-트리플루오로벤조산(176mg, 1.0mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 333(M+1).
실시예 34
N-(3-아미노프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00071
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드(100mg, 43.1%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(2,4,6-트리플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(200mg, 0.6mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 233(M+1).
실시예 35
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00072
황색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드(120mg, 73.6%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(100mg, 0.55mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드(100mg, 0.43mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 379(M+1).
실시예 36
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00073
황색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드(80mg, 58.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드(120mg, 0.32mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(110mg, 0.56mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.75-1.82(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.25-3.31(m, 2H, CH2), 3.44-3.45(m, 2H, CH2), 5.61(d, J=9.5Hz, 1H, CH), 6.04-6.11(m, 1H, CH), 6.16-6.22(m, 1H, CH), 7.22-7.28(m, 4H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.67-7.69(m, 1H, Ar-H), 7.87(d, J=5.2Hz, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.71(t, J=5.4Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 537(M+1).
실시예 37
3-(4-메톡시벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00074
백색 고체의 3-(4-메톡시벤즈아미노)프로필아미노 포름산(800mg, 90.4%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(500mg, 2.87mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-메톡시벤조산(437mg, 2.87mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 309(M+1).
실시예 38
N-(3-아미노프로필)-4-메톡실벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00075
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-메톡실벤즈아미드(500mg, 92.6%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-메톡실벤즈아미노)프로필아미노 포름산(800mg, 2.60mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 209(M+1).
실시예 39
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메톡실벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00076
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메톡실벤즈아미드(600mg, 70.3%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(690mg, 3.74mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-메톡실벤즈아미드(500mg, 2.40mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 355(M+1).
실시예 40
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메톡실벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00077
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메톡실벤즈아미드(10mg, 13.9%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메톡실벤즈아미드(50mg, 0.14mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(30mg, 0.15mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.77-1.80(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.28-3.31(m, 2H, CH2), 3.43-3.45(m, 2H, CH2), 3.80(s, 3H, CH3), 5.59(d, J=9.5Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 6.97(d, J=8.7Hz, 2H, Ar-H), 7.21-7.27(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.65-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.81(d, J=8.7Hz, 2H, Ar-H), 7.89(d, J=6.4Hz, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.31(t, J=5.2Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 513(M+1).
실시예 41
3-(2-시아노-니코틴아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00078
백색 고체의 3-(2-시아노-니코틴아미노)프로필아미노 포름산(400mg, 91.3%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(250mg, 1.44mmol)의 t-부틸 에스테르 및 6-시아노-니코틴산(212mg, 1.44mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 305(M+1).
실시예 42
N-(3-아미노프로필)-6-시아노-니코틴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00079
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-6-시아노-니코틴아미드(240mg, 89.6%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(2-시아노-니코틴아미노)프로필아미노 포름산(400mg, 1.32mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 205(M+1).
실시예 43
6-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)니코틴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00080
백색 고체의 6-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)니코틴아미드(80mg, 19.3%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(280mg, 1.53mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-6-시아노-니코틴아미드(240mg, 1.18mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 351(M+1).
실시예 44
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-6-시아노니코틴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00081
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-6-시아노-니코틴아미드(15mg, 17.4의 수득률%)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 6-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)니코틴아미드(60mg, 0.17mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(46mg, 0.24mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.81-1.88(m, 2H, CH2), 3.21(s, 3H, CH3), 3.32-3.36(m, 2H, CH2), 3.46-3.51(m, 2H, CH2), 5.61(d, J=9.8Hz, 1H, CH), 6.04-6.1(m, 1H, CH), 6.17-6.22(m, 1H, CH), 7.29(t, J=9.3Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.61-7.62(m, 1H, Ar-H), 7.78(s, 1H, Ar-H), 7.83(d, J=5.3Hz, 1H, Ar-H), 8.06(s, 1H, 피리미딘-H), 8.17(d, J=7.4Hz, 1H, Ar-H), 8.36-8.41(m, 1H, Ar-H), 8.89(t, J=5.4Hz,1H, NH), 9.09(s, 1H, Ar-H), 9.85(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 509(M+1).
실시예 45
3-(4-하이드록시벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00082
백색 고체의 3-(4-하이드록시벤즈아미노)프로필아미노 포름산(600mg, 71.1%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필 t-부틸아미노 포름산(500mg, 2.87mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-하이드록시벤조산(440mg, 2.87mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 295(M+1).
실시예 46
N-(3-아미노프로필)-4-하이드록시벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00083
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-하이드록시벤즈아미드(300mg, 75.8%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-하이드록시벤즈아미노)프로필아미노 포름산(600mg, 2.04mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 195(M+1).
실시예 47
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00084
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드(200mg, 84.3%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(300mg, 1.64mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-하이드록시벤즈아미드(300mg, 1.54mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 341(M+1).
실시예 48
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00085
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드(3mg, 1.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드(200mg, 0.47mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(100mg, 0.52mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.75-1.81(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.27-3.29(m, 2H, CH2), 3.42-3.44(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.4Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.20(m, 1H, CH), 6.78(d, J=7.9Hz, 2H, Ar-H), 7.24-7.27(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.67-7.69(m, 1H, Ar-H), 7.70(d, J=8.1Hz, 2H, Ar-H), 7.88-7.90(m, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.20(s, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH), 9.89(s, 1H, OH). LC-MS(m/z) 499(M+1).
실시예 49
3-(4-시아노-2-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00086
백색 고체의 3-(4-시아노-2-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(450mg, 70.1%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(348mg, 2.0mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-시아노-2-플루오로벤조산(330mg, 2.0mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 322(M+1).
실시예 50
N-(3-아미노프로필)-4-시아노-2-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00087
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-2-플루오로벤즈아미드(278mg, 90.0%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-시아노-2-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(450mg, 1.4mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 222(M+1).
실시예 51
4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00088
백색 고체의 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(312mg, 67.4%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(238mg, 1.3mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-2-플루오로벤즈아미드(278mg, 1.26mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 368(M+1).
실시예 52
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-2-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00089
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-2-플루오로벤즈아미드(106mg, 49.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2-플루오로벤즈아미드(150mg, 0.41mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(87mg, 0.45mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.80-1.83(m, 2H, CH2), 3.20(s, 3H, CH3), 3.30-3.31(m, 2H, CH2), 3.45-3.47(m, 2H, CH2), 5.61(d, J=9.7Hz, 1H, CH), 6.04-6.10(m, 1H, CH), 6.15-6.21(m, 1H, CH), 7.20-7.25(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.62-7.65(m, 1H, Ar-H), 7.75-7.76(m, 2H, Ar-H), 7.88-7.94(m, 2H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.57(s, 1H, NH), 9.41(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 526(M+1).
실시예 53
3-(4-시아노-3-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00090
백색 고체의 3-(4-시아노-3-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(462mg, 71.9%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필 t-부틸아미노 포름산(348mg, 2.0mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-시아노-3-플루오로벤조산(330mg, 2.0mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 322(M+1).
실시예 54
N-(3-아미노프로필)-4-시아노-3-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00091
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-3-플루오로벤즈아미드(275mg, 86.5%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-시아노-3-플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(462mg, 1.44mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 222(M+1).
실시예 55
4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00092
백색 고체의 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드(340mg, 4.6%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(229mg, 1.25mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-3-플루오로벤즈아미드(275mg, 1.24mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 368(M+1).
실시예 56
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-3-플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00093
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-3-플루오로벤즈아미드(98mg, 45.6%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로벤즈아미드(150mg, 0.41mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(87mg, 0.45mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.81-1.84(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.33-3.35(m, 2H, CH2), 3.45-3.46(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.7Hz, 1H, CH), 6.02-6.09(m, 1H, CH), 6.21-6.20(m, 1H, CH), 7.21-7.25(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.63-7.65(m, 1H, Ar-H), 7.81-7.89(m, 2H, Ar-H), 7.95(s, 1H, 피리미딘-H), 8.04-8.12(m, 2H, Ar-H), 8.76(t, J=5.6Hz, 1H, NH), 9.45(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 526(M+1).
실시예 57
N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00094
황색 고체의 N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드(100mg, 60.6%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4-디클로로-5-메틸피리미딘(82mg, 0.5mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-벤즈아미드(100mg, 0.5mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 330(M+1).
실시예 58
4-시아노-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00095
흑색 고체의 4-시아노-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-벤즈아미드(10mg, 3.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2-클로로-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드(100mg, 0.61mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(128mg, 0.66mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.82-1.85(m, 2H, CH2), 1.92(s, 3H, CH3), 3.19(s, 3H, CH3), 3.35-3.37(m, 2H, CH2), 3.43-3.46(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.8Hz,1H, CH), 6.04-6.1(m, 1H, CH), 6.15-6.20(m, 1H, CH), 6.68(t, J=5.5Hz, 1H, Ar-H), 7.19(t, J=9.5Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.65-7.67(m, 2H, Ar-H), 7.93-7.99(m, 5H, Ar-H, 피리미딘-H), 8.69(t, J=5.5Hz, 1H, NH), 9.04(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 488(M+1).
실시예 59
N-(3-(2-클로로-5-플루오로-피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00096
황색 고체의 N-(3-(2-클로로-5-플루오로-피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드(100mg, 60.0%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4-디클로로-5-플루오로-피리미딘(83mg, 0.5mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-벤즈아미드(100mg, 0.5mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 334(M+1).
실시예 60
4-시아노-N-(3-(5-플루오로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00097
회색 고체의 4-시아노-N-(3-(5-플루오로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(49mg, 58.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2-클로로-5-플루오로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-벤즈아미드(100mg, 0.30mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(110mg, 0.56mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.84-1.85(m, 2H, CH2), 3.18(s, 3H, CH3), 3.33-3.35(m, 2H, CH2), 3.42-3.43(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=8.6Hz,1H, CH), 6.02-6.09(m, 1H, CH), 6.15-6.20(m, 1H, CH), 7.20(t, J=9.1Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.47-7.49(m, 1H, Ar-H), 7.63-7.64(m, 1H, Ar-H), 7.88-7.89(m, 2H, Ar-H), 7.92-7.96(m, 4H, 피리미딘-H, Ar-H), 8.68(s, 1H, NH), 9.23(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 492(M+1).
실시예 61
3-(2-(4-시아노페닐)아세트아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00098
백색 고체의 3-(2-(4-시아노페닐)아세트아미노)프로필아미노 포름산(511mg, 80.6%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(348mg, 2.0mmol)의 t-부틸 에스테르 및 2-(4-시아노-페닐)아세트산(322mg, 2.0mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 318(M+1).
실시예 62
N-(3-아미노프로필)-2-(4-시아노페닐)아세트아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00099
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-2-(4-시아노페닐)아세트아미드(312mg, 89.4%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(2-(4-시아노페닐)아세트아미노)프로필아미노 포름산(511mg, 1.61mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 218(M+1).
실시예 63
2-(4-시아노페닐)-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)아세트아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00100
백색 고체의 2-(4-시아노페닐)-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)아세트아미드(360mg, 68.9%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(265mg, 1.45mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-2-(4-시아노페닐)아세트아미드(312mg, 1.44mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 364(M+1).
실시예 64
N-(5-(5-클로로-4-(3-(2-(4-시아노페닐)아세트아미노)프로필아미노)피리미디닐-2-아미노)-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00101
백색 고체의 N-(5-(5-클로로-4-(3-(2-(4-시아노페닐)아세트아미노)프로필아미노)피리미디닐-2-아미노)-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(113mg, 53.1%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2-(4-시아노페닐)-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)아세트아미드(150mg, 0.41mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(87mg, 0.45mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.67-1.72(m, 2H, CH2), 3.08-3.11(m, 2H, CH2), 3.18(s, 3H, CH3), 3.37-3.38(m, 2H, CH2), 3.52(s, 2H, CH2), 5.60(d, J=10.2Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.19-7.22(m, 1H, Ar-H), 7.26(t, J=9.3Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.44(d, J=8.1Hz, 2H, Ar-H), 7.64-7.66(m, 1H, Ar-H), 7.74(d, J=8.2Hz, 2H, Ar-H), 7.88-7.89(m, 1H, Ar-H), 7.95(s, 1H, 피리미딘-H), 8.13(t, J=5.6Hz, 1H, NH), 9.39(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 522(M+1).
실시예 65
3-(4-시아노-페닐설폰아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00102
백색 고체의 3-(4-시아노-페닐설폰아미노)프로필아미노 포름산(0.25g, 73.7%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 다음과 같이 제조하였다. 4-시아노-벤젠 설포닐 클로라이드(0.2g, 1.0mmol) 및 N-Boc-1,3-프로판 디아민(0.18g, 1.03mmol)을 5ml THF에 용해시키고 실온에서 교반하였다. 이어서, DIPEA(0.26g, 2.0mmol)를 첨가하고 4시간 동안 반응시켰다. 반응을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 후, 포화 NaHCO3 수용액을 첨가하고, 혼합물을 교반하여 고체를 침전시켰다. 여과하여 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 340(M+1).
실시예 66
N-(3-아미노프로필)-4-시아노 페닐설폰아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00103
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-시아노-페닐설폰아미드(150mg, 85.2%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-시아노-페닐설폰아미노)프로필아미노 포름산(250mg, 0.74mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 240(M+1).
실시예 67
4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)페닐설폰아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00104
백색 고체의 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)페닐설폰아미드(150mg, 61.9%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(128mg, 0.7mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-시아노- 페닐설폰아미드(150mg, 0.63mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 386(M+1).
실시예 68
4-시아노-N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤젠설폰아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00105
백색 고체의 N-(5-(5-클로로-4-(3-(4-시아노-페닐설폰아미노)프로필아미노)피리미디닐-2-아미노)-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(35mg, 30.7%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)페닐설폰아미드(80mg, 0.21mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(43mg, 0.22mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.63-1.70(m, 2H, CH2), 2.80-2.85(m, 2H, CH2), 3.17(s, 3H, CH3), 3.34-3.35(m, 2H, CH2), 5.60(d, J=10.3Hz, 1H, CH), 6.02-6.09(m, 1H, CH), 6.15-6.20(m, 1H, CH), 7.13-7.16(m, 1H, Ar-H), 7.25(t, J=9.4Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.65-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.81-7.82(m, 1H, Ar-H), 7.88(t, J=5.9Hz, 1H, NH), 7.91(d, J=8.4Hz, 2H, Ar-H), 7.94(s, 1H, 피리미딘-H), 8.03(d, J=8.4Hz, 2H, Ar-H), 9.38(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 544(M+1).
실시예 69
4-시아노-N-(3-하이드록시프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00106
황색 액체의 4-시아노-N-(3-하이드록시프로필)벤즈아미드(400mg, 99%의 수득률)를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노-1-프로판올(150mg, 2mmol) 및 4-시아노벤조산(294mg, 2mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 205(M+1).
실시예 70
4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-옥소)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00107
황색 고체의 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-옥소)프로필)벤즈아미드(120mg, 17%의 수득률)를 다음과 같이 제조하였다. 4-시아노-N-(3-하이드록시프로필)벤즈아미드(408mg, 2mmol)를 3ml DMF에 용해시키고 빙욕에서 교반하였다. 10분 후, NaH(48mg, 2mmol)를 첨가하고, 혼합물을 계속 교반하였다. 10분 이후에, 2,4,5-트리클로로피리미딘(366mg, 2mmol)을 첨가하고, 혼합물을 빙욕에서 꺼내고 실온에서 반응시켰다. 반응을 LC-MS로 모니터링하였다. 반응 후, 혼합물을 200ml 브라인에 부어 넣어 황색 점성 물질을 침전시켰다. 이어서, 수층을 옮겨 담고, 200ml PE를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 초음파 처리하였다. 여과하여 표적 중간물을 수득하였다. LC-MS(m/z) 351(M+1).
실시예 71
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-옥소)프로필)-4-시아노-벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00108
갈색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-옥소)프로필)-4-시아노-벤즈아미드(20mg, 20.0%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 4-시아노-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-옥소)프로필)벤즈아미드(70mg, 0.2mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(50mg, 0.24mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.98-2.06(m, 2H, CH2), 3.18(s, 3H, CH3), 3.40-3.47(m, 2H, CH2), 4.45-4.51(m, 2H, CH2), 5.60(d, J=9.5Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.28(t, J=9.4Hz, 1H, 피리미딘-NH), 7.64-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.78-7.80(m, 1H, Ar-H), 7.93(d, J=8.3Hz, 2H, Ar-H), 7.98(d, J=8.3Hz, 2H, Ar-H), 8.32(s, 1H, 피리미딘-H), 8.77(t, J=5.3Hz, 1H, NH), 9.85(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 509(M+1).
실시예 72
3-(이소니코틴아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00109
백색 고체의 3-(이소니코틴아미노)프로필아미노 포름산(1.0g, 78.0%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(800mg, 4.60mmol)의 t-부틸 에스테르 및 이소니코티노일 클로라이드(900mg, 6.38mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 280(M+1).
실시예 73
N-(3-아미노프로필)-이소니코틴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00110
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-이소니코틴아미드(180mg, 28.1%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(이소니코틴아미노)프로필아미노 포름산(1.0g, 3.58mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 180(M+1).
실시예 74
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)이소니코틴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00111
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)이소니코틴아미드(120mg, 32.8%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(276mg, 1.51mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-이소니코틴아미드(180mg, 1.00mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 326(M+1).
실시예 75
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)이소니코틴아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00112
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)이소니코틴아미드(4.2mg, 2.3%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)이소니코틴아미드(120mg, 0.36mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(70mg, 0.36mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.80-1.84(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.26-3.33(m, 2H, CH2), 3.45-3.47(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=10.1Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.15-6.20(m, 1H, CH), 7.23-7.27(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.64-7.66(m, 1H, Ar-H), 7.72(d, J=5.6Hz, 2H, Ar-H), 7.89(d, J=5.2Hz, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 7.70(d, J=5.5Hz, 2H, Ar-H), 8.73(s, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 484(M+1).
실시예 76
3-(4-에틸페닐포름아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00113
백색 고체의 3-(4-에틸벤즈아미노)프로필 t-부틸 카바메이트(800mg, 91.1%의 수득률)를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필 t-부틸아미노 포름산(500mg, 2.87mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-에틸벤조일 클로라이드(530mg, 3.15mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 307(M+1).
실시예 77
N-(3-아미노프로필)-4-에틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00114
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-에틸벤즈아미드(300mg, 55.7%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-에틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(800mg, 2.61mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 207(M+1).
실시예 78
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-에틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00115
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-에틸벤즈아미드(500mg, 97.5%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(300mg, 1.64mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-에틸벤즈아미드(300mg, 1.46mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 353(M+1).
실시예 79
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-에틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00116
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-에틸벤즈아미드(86mg, 59.4%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드(100mg, 0.28mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(71mg, 0.37mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.19(t, J=7.6Hz, 3H, CH3), 1.78-1.81(m, 2H, CH2), 2.62-2.67(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.30-3.33(m, 2H, CH2), 3.44-3.45(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=10.1Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.22-7.29(m, 4H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.65-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.76(m, J=8.0Hz, 2H, Ar-H), 7.89(d, J=5.2Hz, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.37(t, J=5.5Hz, 1H, NH), 9.39(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 511(M+1).
실시예 80
3-(4-메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00117
백색 고체의 3-(4-메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(0.45g, 79%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 76에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(0.3g, 1.95mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-메틸벤조일 클로라이드(0.34g, 1.95mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 293(M+1).
실시예 81
N-(3-아미노프로필)-4-메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00118
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-메틸벤즈아미드(290mg, 99%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(450mg, 1.54mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 193(M+1).
실시예 82
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00119
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메틸벤즈아미드(400mg, 78.1%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(300mg, 1.64mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-메틸벤즈아미드(290mg, 1.51mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 339(M+1).
실시예 83
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00120
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메틸벤즈아미드(200mg, 34.2%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메틸벤즈아미드(400mg, 1.18mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(400mg, 2.06mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.76-1.83(m, 2H, CH2), 2.34(s, 3H, CH3), 3.19(s, 3H, CH3), 3.29-3.33(m, 2H, CH2), 3.44-3.45(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.7Hz, 1H, CH), 6.03-6.10(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.22-7.26(m, 4H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.65-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.74(d, J=8.0Hz, 2H, Ar-H), 7.89(d, J=5.2Hz, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.38(t, J=5.4Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 497(M+1).
실시예 84
3-벤즈아미노프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00121
백색 고체의 3-벤즈아미노프로필아미노 포름산(700mg, 88.3%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 76에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(400mg, 2.85mmol)의 t-부틸 에스테르 및 벤조일 클로라이드(500mg, 3.57mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 279(M+1).
실시예 85
N-(3-아미노프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00122
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)벤즈아미드(375mg, 80.4%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-벤즈아미노프로필아미노 포름산(700mg, 2.62mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 179(M+1).
실시예 86
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00123
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(556mg, 81.7%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(550mg, 3.00mmol) 및 N-(3-아미노프로필)벤즈아미드(375mg, 2.1mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 325(M+1).
실시예 87
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00124
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(245mg, 42.8%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)벤즈아미드(400mg, 1.23mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(280mg, 1.44mmol)로부터 제조하였다 . 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.79-1.83(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.31-3.34(m, 2H, CH2), 3.44-3.46(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.8Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.22-7.27(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.45(d, J=7.5Hz, 2H, Ar-H), 7.52(t, J=7.1Hz, 1H, Ar-H), 7.65-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.83(d, J=5.2Hz, 2H, Ar-H), 7.89(d, J=7.4Hz, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.46(t, J=5.2Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 483(M+1).
실시예 88
3-(3-트리플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00125
백색 고체의 3-(3-트리플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(640mg, 79.7%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 76에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(400mg, 2.32mmol)의 t-부틸 에스테르 및 3-트리플루오로메틸 벤조일 클로라이드(596mg, 2.87mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 347(M+1).
실시예 89
N-(3-아미노프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00126
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드(300mg, 66.0%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(3-트리플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(640mg, 1.84mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 247(M+1).
실시예 90
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00127
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드(480mg, 93.2%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(360mg, 2.21mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드(300mg, 1.47mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 393(M+1).
실시예 91
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00128
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드(240mg, 35.7%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드(480mg, 1.22mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(260mg, 1.34mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.80-1.87(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.32-3.37(m, 2H, CH2), 3.44-3.48(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.6Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.21-7.25(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.65-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.71(t, J=7.8Hz, 1H, Ar-H), 7.88-7.90(m, 2H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.14(d, J=7.9Hz, 1H, Ar-H), 8.16(s, 1H, Ar-H), 8.72(t, J=5.4Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 551(M+1).
실시예 92
3-(3-시아노-벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00129
백색 고체의 3-(3-시아노-벤즈아미노)프로필아미노 포름산(740mg, 80.6%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 76에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(600mg, 3.44mmol)의 t-부틸 에스테르 및 3-시아노-벤조일 클로라이드(500mg, 3.02mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 304(M+1).
실시예 93
N-(3-아미노프로필)-3-시아노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00130
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-3-시아노벤즈아미드(300mg, 86.5%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(3-시아노-벤즈아미노)프로필아미노 포름산(740mg, 2.62mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 204(M+1).
실시예 94
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-시아노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00131
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-시아노벤즈아미드(460mg, 89.4%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(360mg, 2.21mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-3-시아노벤즈아미드(300mg, 1.47mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 350(M+1).
실시예 95
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-시아노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00132
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-시아노벤즈아미드(210mg, 31.8%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-시아노벤즈아미드(460mg, 1.31mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(280mg, 1.44mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.80-1.86(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.31-3.35(m, 2H, CH2), 3.44-3.48(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=10.2Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.21-7.26(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.64-7.66(m, 1H, Ar-H), 7.68-7.70(m, 1H, Ar-H), 7.89-7.90(m, 1H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 7.98(d, J=7.7Hz, 1H, Ar-H), 8.13(d, J=7.9Hz, 1H, Ar-H), 8.24(s, 1H, Ar-H), 8.66(t, J=5.7Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 508(M+1).
실시예 100
3-(3-플루오로-4-트리플루오로메틸 벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00133
황색 고체의 3-(3-플루오로-4-트리플루오로메틸 벤즈아미노)프로필아미노 포름산(728mg, 100%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(348mg, 2mmol)의 t-부틸 에스테르 및 3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤조산(416mg, 2mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 365(M+1).
실시예 101
N-(3-아미노프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00134
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(264mg, 50%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(728mg, 2mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 265(M+1).
실시예 102
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00135
황색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(200mg, 49%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(183mg, 1.00mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(264mg, 1.00mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 411(M+1).
실시예 103
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00136
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(50mg, 20%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드(205mg, 0.5mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(110mg, 0.6mmol)로부터 제조하였다. 1H -NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.81-1.86(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.32-3.36(m, 2H, CH2), 3.45-3.47(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.4Hz, 1H, CH), 6.02-6.09(m, 1H, CH), 6.15-6.20(m, 1H, CH), 7.20-7.24(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.64-7.66(m, 1H, Ar-H), 7.83-7.92(m, 4H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.75(t, J=5.2Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 569(M+1).
실시예 104
3-(2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00137
백색 고체의 3-(2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(400mg, 57.1%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 76에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(348mg, 2.00mmol)의 t-부틸 에스테르 및 2,3,4,5-테트라플루오로벤조일 클로라이드(848mg, 4.00mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 351(M+1).
실시예 105
N-(3-아미노프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00138
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드(250mg, 100%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미노)프로필아미노 포름산(350mg, 1.00mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 251(M+1).
실시예 106
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00139
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드(200mg, 50%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(183mg, 1.00mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드(250mg, 1.00mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 397(M+1).
실시예 107
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00140
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드(50mg, 18%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드(200mg, 0.5mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(110mg, 0.6mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.79-1.82(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.28-3.30(m, 2H, CH2), 3.44-3.46(m, 2H, CH2), 5.60(d, J=9.8Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.21(m, 1H, CH), 7.23-7.27(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.56-7.61(m, 1H, Ar-H), 7.65-7.67(m, 1H, Ar-H), 7.88(d, J=5.4Hz, 1H, Ar-H), 7.95(s, 1H, 피리미딘-H), 8.52(s, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 555(M+1).
실시예 108
3-(4-아세틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00141
백색 고체의 3-(4-아세틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(385mg, 60.2%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(350mg, 2.01mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-아세틸벤조산(328mg, 2.00mmol)으로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 321(M+1).
실시예 109
4-아세틸-N-(3-아미노프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00142
백색 고체의 4-아세틸-N-(3-아미노프로필)벤즈아미드(200mg, 75.8%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-아세틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(385mg, 1.20mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 221(M+1).
실시예 110
4-아세틸-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00143
백색 고체의 4-아세틸-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(120mg, 36.1%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(180mg, 0.98mmol) 및 4-아세틸-N-(3-아미노프로필)벤즈아미드(200mg, 0.91mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 367(M+1).
실시예 111
4-아세틸-N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00144
백색 고체의 4-아세틸-N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(83mg, 47.9%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 4-아세틸-N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드(120mg, 0.33mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(70mg, 0.36mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.79-1.85(m, 2H, CH2), 2.61(s, 3H, CH3), 3.19(s, 3H, CH3), 3.32-3.36(m, 2H, CH2), 3.45-3.48(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.9Hz, 1H, CH), 6.02-6.09(m, 1H, CH), 6.15-6.20(m, 1H, CH), 7.21-7.28(m, 2H, 피리미딘-NH, Ar-H), 7.64-7.69(m, 1H, Ar-H), 7.88-7.89(m, 1H, Ar-H), 7.94(d, J=8.3Hz, 2H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.01(d, J=8.4Hz, 2H, Ar-H), 8.65(t, J=5.3Hz, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 525(M+1).
실시예 112
3-(4-디플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00145
백색 고체의 3-(4-디플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(780mg, 84.3%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 4에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-아미노프로필아미노 포름산(49mg, 2.82mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-디플루오로메틸벤조산(485mg, 2.82mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 329(M+1).
실시예 113
N-(3-아미노프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00146
백색 고체의 N-(3-아미노프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드(180mg, 33.2%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 3-(4-디플루오로메틸벤즈아미노)프로필아미노 포름산(780mg, 2.38mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 229(M+1).
실시예 114
N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00147
백색 고체의 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드(250mg, 84.5%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(180mg, 0.98mmol) 및 N-(3-아미노프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드(180mg, 0.79mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 375(M+1).
실시예 115
N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00148
백색 고체의 N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드(26mg, 23.2%의 수득률)를 실시예 7에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 N-(3-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드(80mg, 0.21mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(50mg, 0.26mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.81-1.84(m, 2H, CH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.32-3.40(m, 2H, CH2), 3.45-3.47(m, 2H, CH2), 5.59(d, J=9.4Hz, 1H, CH), 6.03-6.09(m, 1H, CH), 6.16-6.20(m, 1H, CH), 6.94(s, 0.4H, CHF2), 7.08(s, 0.6H, CHF2), 7.22-7.26(m, 2H, Ar-H, 피리미딘-NH), 7.64-7.66(m, 3H, Ar-H), 7.89-7.90(m, 1H, Ar-H), 7.95(d, J=7.3Hz, 2H, Ar-H), 7.96(s, 1H, 피리미딘-H), 8.59(s, 1H, NH), 9.40(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 533(M+1).
실시예 120
6-(4-시아노-벤즈아미노)헥실아미노 포름산의 t-부틸 에스테르의 제조
Figure 112017035725598-pct00149
백색 고체의 6-(4-시아노-벤즈아미노)헥실아미노 포름산(1300mg, 73.4%의 수득률)의 t-부틸 에스테르를 실시예 76에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 6-헥실아미노 포름산(1100mg, 5.09mmol)의 t-부틸 에스테르 및 4-시아노-벤조일 클로라이드(900mg, 5.45mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 346(M+1).
실시예 121
N-(6-아미노헥실)-4-시아노-벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00150
백색 고체의 N-(6-아미노헥실)-4-시아노-벤즈아미드(700mg, 75.6%의 수득률)를 실시예 5에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 6-(4-시아노-벤즈아미노)헥실아미노 포름산(1300mg, 3.76mmol)의 t-부틸 에스테르로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 246(M+1).
실시예 122
4-시아노-N-(6-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)헥실)벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00151
백색 고체의 4-시아노-N-(6-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)헥실)벤즈아미드(80mg, 49.7%의 수득률)를 실시예 6에 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 2,4,5-트리클로로피리미딘(120mg, 0.66mmol) and N-(6-아미노헥실)-4-시아노-벤즈아미드(100mg, 0.41mmol)로부터 제조하였다. LC-MS(m/z) 392(M+1).
실시예 123
N-(6-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)헥실)-4-시아노벤즈아미드의 제조
Figure 112017035725598-pct00152
백색 고체의 N-(6-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)헥실)-4-시아노-벤즈아미드(47mg, 50.3%의 수득률)를 실시예 7 따른 유사한 단계를 기반으로 하여 4-시아노-N-(6-(2,5-디클로로피리미디닐-4-아미노)헥실)벤즈아미드(68mg, 0.17mmol) 및 N-(5-아미노-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴아미드(46mg, 0.24mmol)로부터 제조하였다. 1H-NMR(DMSO-d 6 ) δ 1.30-1.32(m, 4H, 2xCH2), 1.52-1.56(m, 4H, 2xCH2), 3.19(s, 3H, CH3), 3.26-3.29(m, 2H, CH2), 3.36-3.37(m, 2H, CH2), 5.60(d, J=9.9Hz, 1H, CH), 6.03-6.10(m, 1H, CH), 6.17-6.21(m, 1H, CH), 7.22-7.27(m, 2H, 피리미딘-NH, Ar-H), 7.59-7.61(m, 1H, Ar-H), 7.93-7.98(m, 6H, 피리미딘-NH, Ar-H), 8.64(s, 1H, NH), 9.38(s, 1H, 벤젠 고리-NH). LC-MS(m/z) 550(M+1).
시험관내 생물학적 평가
이들 시험 방법을 본원에 기술된 화합물의 시험관내 효소 활성 분석, 세포 성장 활성 분석 및 세포내 활성 분석을 포함하는 시험관내 활성 평가에 사용하였다.
이러한 분석은 JAK, ITK, BLK 및 VEGFR 등과 같은 키나아제에 대한 다양한 화합물의 시험관내 효소 억제 활성의 특성, 아형 선택성의 특성 및 신호 전달 경로에 대한 세포 성장 활성 및 조절 활성을 포함하는 세포 모델의 생물학적 활성에 대한 영향을 종합적으로 평가하는 것을 목표로 한다.
실시예 A 효소 활성 검출
주요 원리
시험관내 효소 활성 분석의 기본 원리는 인산화 기질 및 비-인산화 기질로부터 상이한 파장(445nm 및 520nm)에서 생성되는 형광 신호의 강도 간의 차이에 기반하며, 특정 형광-표지 기질은 키나아제에 의해 인산화된다. 상이한 시험 화합물이 첨가되면, 키나아제 활성의 억제가 기질 인산화의 상이한 정도로서, 형광 신호의 상이한 강도로 나타나며, 이를 기반으로 키나아제에 대한 화합물의 억제 활성을 계산할 수 있다. 기본 검출 원리를 도 1에 나타내었다.
효소 억제 활성 검출에서, JAK1/PV4774, JAK2/PV4210, JAK3/PV3855, TYK2/PV4790 및 Tyr6(Z'-LYTE® 키나아제 분석 키트-타이로신 6 펩타이드, JAK1/PV4122), Tyr4(Z'-LYTE® 키나아제 분석 키트-타이로신 4 펩타이드, JAK2/PV3193), Tyr4(Z'-LYTE® 키나아제 분석 키트-타이로신 4 펩타이드, JAK3/PV3193), Tyr3(Z'-LYTE® 키나아제 분석 키트-타이로신 4 펩타이드, TYK2/PV3192)를 포함하는 이들의 상응하는 특정 기질을 포함하는 GST-표지 인간 재조합 JAK 키나아제가 사용된다. 모든 시험에서, 현상 시약(development reagent) A(PV3297)를 시험제(test agent)로 사용하였다. 전술한 모든 재료는 Invitrogen사에서 구입하였다.
주요 절차
시험을 제조사의 지침(Invitrogen)에 따라 실시한다. 구체적인 절차는 다음과 같다:
(1) 제조: 키나아제 반응 완충액(작업 용액)을 지침에 따라 제조한다; 시험 화합물의 농도 구배를 키나아제 반응 완충액을 사용하여 희석하여 제조한다(각각, JAK1, JAK2 및 TYK2 검출에 대한 최대 농도가 10μM, 및 JAK3 검출에 대한 최대 농도가 1μ이다).
(2) 2.5μL 시험 화합물, 5μL 키나아제 반응 완충액 및 2.5μL ATP 용액(키트에서 제공)을 포함하는 10㎕의 반응계를 혼합하고, 반응을 실온에서 1시간 동안 수행한다.
(3) 시험 화합물을 포함하지 않는 용매 대조군 및 ATP를 포함하지 않는 음성 대조군 및 인산화 기질을 포함하는 양성 대조군을 포함하는 대조군을 검출과 함께 시험한다. 모든 시험을 3회 실시한다.
(4) 효소 반응 후, 5μL 예비-조제된 현상 완충액(development buffer)을 첨가하고, 반응을 실온에서 1시간 동안 수행한다. 이어서, 5μL 정지 완충액을 첨가하여 반응을 종료시킨다.
(5) 각 웰의 형광 신호를 Ascent Fluoroskan FL 리더기(Thermo Labsystems)로 400nm의 여기 파장, 및 445nm 및 520nm의 방출 파장으로 검출한다. 기질 인산화의 비율은 형광 신호 강도 C445/F520을 참조하여 수득한다.
(6) 시험 화합물의 효소 억제율은 하기 식을 기반으로 계산할 수 있다: 억제율(%)=1-검출 웰 내 기질 인산화의 비율/용매 대조 웰 내 기질 인산화의 비율. 반-억제 농도(IC50)는 상이한 농도 구배에서 시험 화합물에 대한 인산화의 억제율을 기반으로 하는 IC50 계산기를 사용하여 계산할 수 있다.
상기 방법에 기반하여, 본원에 기술된 화합물은 양성 대조군으로서 젤잔즈(tofacitinib citrate)를 사용하여 JAK(시험 화합물의 농도는 JAK3 및 JAK2 시험에서 30nM, JAK1 시험에서 300nM이다)에 대하여 시험관내 효소적으로 평가된다. 데이터를 표 2에 요약하였다.
JAK 억제에 대한 본 발명에 대표적인 화합물의 효소적 데이터
실시예 JAK3 ( RV a )
% 억제율 @ 30nM 		JAK1 ( RV a )
% 억제율 @ 300nM 		JAK2 ( RV a )
% 억제율 @ 30nM
7 63(0.84) 56(0.58) 5(0.08)
13 79(0.96) 35(0.40) 0
17 84(0.97) 79(0.93) 1(0.03)
19 59(0.68) 39(0.46) 0
21 71(0.82) 59(0.69) 2(0.07)
22 75(0.82) 18(0.33) 0
23 81(0.88) 19(0.35) 0
27 35(0.59) 42(0.45) ND
28 81(0.85) 34(0.40) 2(0.03)
32 89(0.94) 49(0.57) 2(0.03)
36 104(0.53) 42(0.25) 0
40 89(0.46) 4(0.02) 0
44 113(0.58) 58(0.34) 0
48 109(0.56) 0 0
52 105(0.54) 14(0.08) 0
56 116(0.59) 9(0.05) 0
58 107(0.79) 1(0.01) 0
60 106(0.79) 0 0
64 105(0.78) 13(0.13) 0
68 103(0.76) 15(0.15) 0
71 95(0.70) 7(0.70) 1(0.01)
75 121(0.90) 14(0.14) 0
79 80(0.96) 19(0.22) 0
83 76(0.92) 36(0.42) 2(0.04)
87 82(0.99) 43(0.51) 0
91 82(0.99) 20(0.24) 0
95 84(1.01) 45(0.53) 0
103 86(1.04) 74(0.87) 0
107 84(1.01) 67(0.79) 0
111 82(0.99) 16(0.19) 0
115 81(0.98) 42(0.49) 0
123 79(0.95) 0 0
aRV=시험 화합물의 억제율과 젤잔즈의 억제율 간의 비율; ND(데어터 없음)
상기 표의 데이터에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물은 양성 대조군과 비교하여 선택적 JAK3 및/또는 JAK1 키나아제 억제 활성을 갖는다.
본 발명의 화합물의 일부를 Eurofins 사(http://www.eurofins.com)에 위탁하여 키나아제 프로파일 스크리닝(KinaseProfiler™) 및 효소 억제 활성(IC50Profiler™) 분석을 실시한다. JAK 계열의 키나아제 이외에도, 이들의 활성에 대해 스크리닝된 키나아제는 대부분의 3F군 및 4K군 키나아제(ITK, BLK, TBK1, VEGFR, ERBB 등) 및 혈액계 관련 키나아제(Zhang J. et al. 2009, Nat. Rev. Cancer., 9: 28-39)를 포함한다. 키나아제 프로파일 스크리닝을 위한 시험 화합물의 농도는 1μM이며, 9개의 반로그(semilog) 농도 구배의 기울기가 IC50을 측정하는데 사용된다. 검출을 Eurofins사의 표준 절차에 따라 실시한다. 즉, 상이한 키나아제 반응 요건에 따라, 0.2μL 시험 화합물(50μM, 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 용해)를 특정 키나아제를 함유하는 반응 완충액(사용되는 키나아제 유형에 기반하여 20mM MOPS, 1mM EDTA, 0.01% Brij-35, 5% 글리세롤, 0.1% β-머캅토에탄올, 1mg/mL BSA, 또는 50mM TRIS, 0.1mM EGTA, 0.1mM Na3VO4, 0.1% β-머캅토에탄올, 1mg/mL BSA를 함유하는 완충액 시스템)에 첨가한다. 이어서, 50μM의 최종 농도에서 키나아제 특정 기질(특정 키나아제에 사용되는 특정 기질), 10mM Mg아세테이트 및 동위원소-표지 γ-33P ATP(약 500cpm/pmol의 방사능 활성)를 순차적으로 반응계에 대해 10μL의 전체 부피로 첨가한다. 실온에서 40분 동안 배양한 후, 3% 인산 용액을 첨가하여 반응을 종료시킨다. 이어서, 혼합물을 필터형 저온 분무 건조기(P30 filtermat)로 옮기고, 75mM 인산 용액으로 3회, 메탄올로 1회 세척한다. 건조 후, 방사능을 검출한다. 구체적인 절차는 Eurofins사가 제공하는 표준 절차가 참조된다: http://www.eurofins.com/media/9724077/kinaseprofiler_assay_protocol_guide_eurofins_v64.pdf. 데이터를 하기 표(표 3)에 요약하였다.
JAK , ITK , BLK , TBK1 및 VEGFR(nM)에서의 억제에 대한 본 발명의 대표적인 화합물의 IC 50
실시예 IC 50 (nM)
JAK3 JAK1 JAK2 TYK2 ITK BLK TBK1 Flt1 Flt4
7 11 105 1404 >10,000 319 286 162 698 107
22 21 279 >10,000 >10,000 >10,000 1658 >10,000 >10,000 >10,000
23 11 173 1915 ND >10,000 855 664 1228 42
ND(데이터 없음)
상기 표의 데이터에 나타낸 바와 같이, (1) 본 발명의 일부 화합물은 선택적 JAK3 및/또는 JAK1 키나아제 억제 활성을 갖는다. (2) 본 발명의 일부 화합물은 ITK, BLK, TBK1 및 VEGFR 계열에서 키나아제의 일부에 대한 억제 활성을 갖는다.
실시예 B 세포 성장 활성 분석
전술한 바와 같이, JAK 키나아제의 발현은 특이적인 방식으로 분포되며, 면역계의 세포 외에도 다른 유형의 세포에서 또한 발현된다. JAK3는 주로 T 세포에서 발현되는 반면에 다른 아형은 광범위하게 분포된다. JAK 키나아제는 잠재적으로 다양한 사이토카인 신호를 매개함으로서 표적 세포의 성장 활성에 영향을 미친다. JAK 키나아제의 억제제는 JAK의 상이한 아형을 억제함으로서 모델 세포의 성장에 상이한 효과를 가질 수 있다.
MTS 분석은 세포 독성 검출을 위한 통상적인 방법이다. 기본 원리는 생세포의 미토콘드리아에 있는 탈수소효소가 신규한 황색 포르마잔 화합물 MTS를 포르마잔으로 환원시키는 능력에 기반하며, 490nm(OD)에서 흡광도를 검출함으로서 생세포의 양이 포르마잔 생성물의 양과 비례하며, 이로 인해 OD 값에 따른 생세포의 양을 추측하고, 시험 화합물의 능력이 세포 성장을 억제하거나 세포를 사멸시키는 것으로 이해된다.
이 실험에서, 세포 성장 활성에 대한 본 발명의 화합물의 효과는 여러 유형의 세포 모델을 사용하는 MTS 분석에 의해 평가되어 세포내 활성을 더 잘 이해하게 된다.
(1) CTLL-2 세포 모델
주요 원리
JAK의 활성은 면역 세포의 성장에 중요한 영향을 미친다. 활성화된 증식 T 세포에 대해서, 이들의 성장은 세포 성장 인자 수용체 IL-2 및 이의 다운스트림 키나아제 JAK1 및 JAK3의 활성에 의존한다.
본 실험에서, 마우스 T-세포주 CTLL-2를 사용하였다. 이 세포주의 증식과 성장은 IL-2에 강하게 의존하며, 일반적으로 외인성 IL-2의 활성 역가를 평가하는데 사용된다. 키나아제 JAK1/3의 활성을 억제함으로서, CTLL-2의 증식은 시험관내 배양하에서 억제될 수 있다. 또한, T-세포의 활성 및 증식은 다양한 면역 질환에 대한 중요한 병리학적 특징이다. 따라서, 이 모델은 또한 병리학적으로 관련되어 있다.
MTS 분석법을 이용하여 시험 화합물로 처리한 세포에서 생성된 흡광도의 변화를 비교함으로서, 모델 세포에서의 시험 화합물의 성장 억제 활성을 확인할 수 있으며, JAK1/3 경로에 대한 화합물의 잠재적 억제 활성을 평가할 수 있다.
주요 절차
MTS를 96-웰 플레이트에서 통상적인 절차에 따라 수행한다.
모델 세포를 적절한 농도(약 20,000세포/웰)로 96-웰 플레이트의 각 웰에 접종한다. 24시간 후, 시험 화합물을 상이한 농도 구배(10μM의 최고 농도)로 첨가한다. 용매 대조군(DMSO) 및 음성 대조군 또한 동시에 수행한다. 각 실험은 3회 반복한다. 24시간 배양한 후 세포를 검출한다.
CTLL-2는 현탁 세포이다. 배양 후, MTS 및 PMS(20:1의 비율로)로 예비-조제된 혼합물 20μL를 각 웰에 직접 첨가한다. 37℃에서 2시간 동안 배양한 후, 마이크로 플레이트 리더기(490nm)로 검출한다.
세포 증식에 대한 시험 화합물의 효과는 음성 대조군의 백그라운드를 감한 후에 시험 웰과 용매 대조군 웰 간의 OD 값의 변화를 비교하여 계산한다. 상이한 농도 구배에서 시험 화합물에 대해, 모델 세포의 성장 및 이들의 반-성장 억제 농도(GI50)에 대한 억제율을 각각 계산한다.
(2) HeLa 및 HUVEC 세포 모델
주요 원리
HeLa 세포는 인간 자궁경부암 세포주이며, 상피 종양 세포주에 속한다; HUVEC는 인간 제대 정맥 내피 세포이며, 일차 내피 세포에 속한다; 두 유형의 세포 모두 JAK3을 제외한 모든 아형을 발현한다.
JAK 키나아제 활성의 변화는 면역 세포를 제외한 다른 세포 유형에 유의한 영향을 미치지 않으며, 전술한 두 세포 모델은 모두 JAK 키나아제 이외의 임의의 다른 키나아제 표적의 존재 여부 또는 비선택적 세포 독성의 여부를 평가하는데 주로 사용된다.
이 실험에서, 배양된 세포 모델을 특정 기간 동안 상이한 농도로 시험 화합물과 배양한다. 세포 성장에 대한 시험 화합물에 의한 처리 효과를 MTS 분석을 사용하여 검출한다.
주요 절차
MTS를 96-웰 플레이트에서 통상적인 절차에 따라 수행한다.
모델 세포를 적절한 농도(약 5000세포/웰)로 96-웰 플레이트의 각 웰에 접종한다. 24시간 후, 시험 화합물을 상이한 농도 구배(최고 최종 농도는 40μM)로 첨가한다. 용매 대조군(DMSO) 및 음성 대조군 또한 동시에 수행한다. 각 실험은 3회 반복한다. 72시간 배양한 후 세포를 검출한다.
모든 배양 배지를 웰로부터 흡인한 후, 100μL의 새로운 배지 및 20μL의 예비-조제된 MTS 및 PMS(20:1의 비율로) 혼합물을 각 웰에 첨가한다. 37℃에서 2시간 동안 배양한 후, 마이크로 플레이트 리더기(490nm)로 검출한다.
시험 화합물의 세포 성장 억제율 및 GI50을 상기와 같이 계산한다.
상기 방법에 기반하여, 본원에 기술된 화합물에 대한 세포학적 평가를 수행한다(CTLL-2 세포의 검출을 위한 시험 화합물의 농도는 300nM이고; HeLa 및 HUVEC 세포의 검출을 위한 시험 화합물의 농도는 10nM이다). 데이터를 하기 표(표 4)에 요약하였다.
본 발명의 대표적인 화합물에 의해 처리된 상이한 세포주의 성장률
실시예 CTLL -2
% 성장률 @ 300nM 		HeLa
% 성장률 @ 10μM 		HUVEC
% 성장률 @ 10μM
7 10 98 94
13 63 1 ND
17 20 1 1
19 67 108 136
21 57 94 102
22 7 78 116
23 4 96 112
27 85 30 6
28 77 81 98
32 16 68 72
36 32 38 ND
40 39 82 ND
44 29 39 ND
48 50 90 ND
52 29 64 ND
56 30 60 ND
58 54 88 ND
60 79 94 ND
64 37 78 ND
68 69 110 ND
71 70 112 ND
75 49 102 ND
79 3 78 ND
83 4 70 ND
87 3 22 ND
91 2 40 ND
95 3 3 ND
103 3 55 ND
107 2 59 ND
111 3 67 ND
115 3 71 ND
123 5 5 ND
ND(데이터 없음)
상기 표의 데이터에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물의 일부는 CTLL-2 세포에 특이적인 억제 활성을 갖는다.
세포학적 실험 방법에 기반하여, 양성 대조군으로 젤잔즈를 사용하여 본 발명의 화합물을 상이한 세포주의 시험관내 효소적 IC50 분석 및 GI50 분석을 실시한다. 결과를 하기 표에 요약하였다(표 5).
상이한 세포주에서 본 발명의 대표적인 화합물의 GI 50 ( μM )
실시예 CTLL -2
GI 50 (nM) 		HeLa
GI 50 ( μM ) 		HUVEC
GI 50 ( μM )
7 116 >40 >40
22 249 >40 >40
23 140 ND >40
젤잔즈 67 >40 >40
ND(데이터 없음)
상기 표의 데이터에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물은 높은 선택적 JAK3 키나아제 억제 활성을 가지며, 이들 화합물은 또한 양성 대조군과 비교하여 CTLL-2 세포에 대해 최적의 특이적인 억제 활성을 갖는다.
실시예 C 세포내 활성 분석
사이토카인, JAK 키나아제 및 STAT 단백질 신호 전달 경로는 복잡한 네트워크를 구성한다. 특정 JAK 아형의 동종이량체 또는 상이한 아형의 이종이량체를 활성화시킴으로서, 상이한 사이토카인은 상이한 STAT 단백질 구성원의 인산화를 촉진시킨다. 상이한 세포 모델에서, 관련 JAK 아형에 특이적으로 관련된 다운스트림 STAT의 인산화에 대한 신호는 사이토카인의 특정 자극을 사용하여 검출할 수 있는 반면에, 경로의 활성은 관련 키나아제의 활성을 억제함으로서 JAK 억제제에 의해 저해되어, 상이한 JAK 아형에 대한 시험 화합물의 세포내 억제 활성을 평가할 수 있도록 한다.
이 실험에서, 웨스턴 블랏(WB) 및 유동세포계측법을 사용하여 U937, THP-1, CTLL-2, UT-7/EPO 및 활성화 인간 말초 혈액 세포(hPBC)를 포함하는 5개의 세포 모델에서 인산화 및 비-인산화 STAT의 신호의 상대적인 수치를 비교함으로서 시험 화합물의 세포내 활성을 평가한다. 이 실험에서 WB 혼성화에 사용된 일차 및 이차 항체는 Cell Signaling사(http://www.cellsignal.com)에서 구입한다. 유동세포계측법에 사용되는 형광-표지 항체는 eBiosciences사(http://www.ebioscience.com)에서 구입한다.
주요 원리
U937은 단핵구 세포주이다. 사이토카인 IFN γ는 JAK1/2의 이종이량체를 활성화시켜 다운스트림 STAT5a의 인산화를 유도하고, JAK1/2의 활성을 억제하여 STAT5a의 인산화를 억제한다. 이를 기초로, JAK1/2에 대한 시험 화합물의 세포내 억제 활성은 STAT5의 인산화 수치의 변화를 검출하여 평가할 수 있다.
THP-1은 단핵구 세포주이다. 사이토카인 IL-4는 JAK1/3의 이종이량체를 활성화시켜 다운스트림 STAT6의 인산화를 유도하고, JAK 억제제는 JAK1/3의 활성을 저해하여 STAT6의 인산화를 저해한다. JAK1/3에 대한 화합물의 세포내 억제 활성은 STAT6의 인산화 수치의 변화를 검출하여 평가할 수 있다.
CTLL-2는 T-세포주이며, 이의 증식 및 성장은 사이토카인 IL-2에 의존한다. 사이토카인 IL-2는 JAK1/3의 이종이량체를 활성화시켜 다운스트림 STAT5의 인산화를 유도하고, JAK 억제제는 JAK1/3의 활성을 저해하여 STAT5의 인산화를 저해한다. JAK1/3에 대한 화합물의 세포내 억제 활성은 STAT5의 인산화 수치의 변화를 검출하여 평가할 수 있다.
UT-7/EPO는 EPO 유도로 배양한 후 거대 세포 백혈병을 앓고 있는 환자의 골수에서 형성되는 세포주이며, 사이토카인 EPO에 대하여 명백한 반응을 갖는다. EPO에 대한 신호는 JAK2의 동종이량체를 통해 전달되며 다운스트림 STAT5의 인산화를 유도하는 반면, JAK 억제제는 JAK2의 활성을 저해하여 STAT5의 인산화를 저해한다. JAK2에 대한 화합물의 세포내 억제 활성은 STAT5의 인산화 수치의 변화를 검출하여 평가할 수 있다.
사이토카인 IL-2 의존성 증식은 인간 말초 혈액 세포(hPBC)와 CD3 항체의 동시-자극에 의해 활성화된 후에 형성된다. 성장 신호 전달 경로는 JAK1/3의 이종이량체에 의해 매개되며 다운스트림 STAT5의 인산화를 유도한다. JAK1/3에 대한 화합물의 세포내 억제 활성은 STAT5의 인산화 수치의 변화를 검출하여 평가할 수 있다.
주요 절차
웨스턴 블랏(WB)
(1) 화합물에 의한 처리: 실험을 6-웰 플레이트에서 실시한다. U937 및 THP-1 세포를 각각 적절한 밀도로 배양하여, 시험 화합물을 상이한 농도로 첨가한다. 하룻밤(16시간) 배양한 후. IFN γ 또는 IL-4(10ng/mL)를 상응하게 첨가한다. 30분 후에 원심 분리하여 세포를 수집한다.
(2) 단백질 추출 및 WB 검출: 추출 후, 단백질 함량을 측정한다. 단백질을 PAGE 전기영동 후 멤브레인으로 옮긴다. WB 검출을 표준 절차에 따라 수행한다. 혼성화에 사용되는 이차 항체는 STAT5(#9363), STAT6(#9362) 및 상응하는 인산화 STAT5(#9351), STAT6(#9361)을 포함한다. 검출은 항체 지침에서 권장하는 방법에 따라 수행한다.
(3) 신호 검출: 혼성화 신를는 X-선 영상화로 검출한다. 스캐닝에 의해 수득한 그레이 스케일 신호를 디지털 신호로 변환하고, 인산화 STAT 및 STAT 모두에 대한 신호 강도를 각각 계산하여 STAT에 대한 화합물의 인산화 억제 활성을 평가한다.
유동세포계측법(FCS)
(1) 화합물에 의한 처리: 실험을 6-웰 플레이트에서 실시한다. 지원자로부터 THP-1, CTLL-2, UT7/EPO 및 시험관내 활성화된 말초 혈액 세포(hPBC)를 각각 적절한 밀도로 배양하여, 시험 화합물을 상이한 농도로 첨가한다. 하룻밤(16시간) 동안 배양한 후, IFN γ, IL-4, IL-2 및 EPO(10ng/mL)를 상응하게 첨가한다. 30분 후에 원심 분리하여 세포를 수집한다.
(2) 세포 고정 및 형광 표지: 세포를 파라포름알데히드를 사용하여 고정시킨 후(30분), 멤브레인 투과성을 위해 냉각된 메탄올에서 처리한다(15분). PBS 완충액으로 세척한 후, 인산화-내성 STAT5 및 STAT6 항체(마우스 항-인간 p-STAT5(pY694)-Fluor®488에 세포를 현탁시킨다; 마우스 항-토끼 p-STAT6(pY641)-Fluor®488)을 100:1의 비율로 첨가하고, 어두운 곳에서 30분 동안 배양한다. PBS로 세척한 후, 세포를 로딩하기 위해 현탁액으로 제조한다.
(3) 유동세포계측법에 의한 검출: 검출을 Guava® easyCyte 유동세포계측기를 사용하여 지침에 따라 실시한다. 시료의 중간 형광 강도(MFI)를 적절한 세포 집단을 사용하여 검출한다. 이를 기초로, 상대적인 신호 강도를 실험에서 음성 대조군(인자 자극 없음) 및 양성 대조군(인자 자극 및 용매 제어 모두)의 신호를 참조하여 상이한 농도에서 화합물에 의해 처리된 인산화 STAT에 대해 계산하여, STAT 인산화에서의 억제 활성에 대한 화합물의 IC50을 평가할 수 있다.
상기 실험 방법에 기반하여, 본 발명의 화합물은 WB 및 유동 세포 계측법을 위해 선택되며, 특정 세포 모델에서 화합물의 일부가 STAT 인산화를 억제하며, IC50 값은 다음과 같다. 데이터를 하기 표(표 6)에 요약하였다.
인산화에 대한 본 발명의 화합물의 억제
실시예 IL-4/ JAK1 &
3/ STAT6
( THP -1)
IC 50 ( μM ) 		EPO/ JAK2 / STAT5a
(UT-7)
IC 50 ( μM ) 		IL-2/ JAK1 &
3/ STAT5
( CTLL -2)
IC 50 ( μM ) 		IL-2/ JAK1 &
3/ STAT5
( hPBC )
IC 50 ( μM )
7 1.69 >3 0.08 0.16
22 ND >3 ND 0.20
23 1.73 >3 0.13 0.24
ND(데이터 없음)
상기 표의 데이터에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물의 일부는 세포내 선택적 JAK3 및/또는 JAK1 억제 활성을 가지며, 이는 시험관내 효소적 평가에서 수득한 결과와 일치한다.
실시예 D 랫트의 콜라겐 유도성 관절염(CIA) 모델에서 시험 화합물의 효과
목적: 이 시험에서, 관절염은 위스타(Wistar) 랫트에서 치킨 콜라겐에 의해 유도된다. 실시예 7 및 실시예 22 화합물의 생체내 투여 후, 랫트에서의 관절염에 대한 질환 지수의 변화를 평가하여 랫트 관절염에 대한 시험 화합물의 치료 효과를 측정하였다.
실험 동물 : 실험 초기에 동물 실험 센터인 선얏-센 대학(Sun Yat-Sen University(Guangzhou))으로부터 180 내지 200g의 체중 범위를 갖는 36마리의 암컷 위스타 랫트를 구입하였다. 관절염 모델로 4개의 군(각 군 당 8마리)을 사용하였고, 기타 군(4마리)을 정상 대조군으로 사용하였다.
재료: 치킨 II형 콜라겐 및 완전프로인트항원보강제(Freund's complete adjuvant)를 Beijing Biolead Science and Technology Development Co., Ltd.로부터 구입하였다. 양성 대조군: 메토트렉트(MTX).
시험 화합물: 실시예 7 및 실시예 22의 화합물.
제조 방법: 목적하는 농도가 되도록 신선하게 제조된 멸균수 중 0.2% CMC-Na+0.1% Tween-80 용액에 첨가하고 초음파로 완전히 혼합하여 시험 화합물을 제조하였다.
실험 방법:
CIA 모델: 치킨 콜라겐을 동일한 부피의 완전프로인트항원보강제에서 완전히 유화시킨 후, 민감화를 위해 0일에 랫트의 꼬리 뿌리에 피하 주사하였다(250μL/랫트). 추가의 면역화(100μL/랫트)를 위해 7일에 꼬리 뿌리에서 다른 주사를 수행하였다. 관절염이 발생한 후(약 13일에), 랫트를 무작위로 각 군 당 8마리의 랫트로 4개의 군으로 나누었다. 첫 번째 면역화 후 14일에 투여를 시작하고 14일간 지속하였다. 랫트의 사지를 육안으로 검사하고, 관절염의 중증도를 1 내지 4의 범위에서 점수를 매겼다: 0=정상; 1=발목 또는 손목이 빨갛게 부어 오른 상태와 같은 징후가 있는 경미한 증상; 2=발목 또는 손목이 중간 정도로 빨갛게 부어 오른 상태; 3=발가락을 포함하여 심하게 빨갛게 부은 발; 4=기능 장애를 동반하는 심하게 부은 관절; 각 랫트의 최고 점수는 16이었다. 뒷발의 발가락 두께 및 발 부피를 동시에 측정하였다.
투약: 랫트에 실시예 7의 화합물을 40mg/kg의 농도로 1일 2회 i.g 투여하거나; 랫트에 실시예 22의 화합물을 40mg/kg의 농도로 1일 2회 i.g 투여하였다. 양성 대조군의 경우, 5mg/kg MTX를 일주일에 2회 복강내 주사하였다. 용매의 i.g. 투여를 음성 대조군으로 사용하였다. 투여 후 14일 및 투여 전의 데이터를 비교하였다. 결과를 하기 표(표 7)에 나타내었다.
랫트의 콜라겐 유도성 관절염(CIA) 모델에서 시험 화합물의 효과
화합물 관절염 점수에 대한 억제율 % 발가락 두께에 대한 억제율 % 발 부피에 대한 억제율 % 체중 증가율 %
용매 0.0 0.0 0.0 100.0
MTX 73.1 70.2 43.1 95.4
7 75.0 74.3 63.6 102.2
22 25.5 13.9 24.6 102.0
결과:
1. 실시예 7의 화합물(40mg/kg)이 i.g. 투여되는 경우, 용매 군에 비해서 랫트에서 관절염에 의해 유도된 팽윤도가 유의하게 억제되었으며, 모든 지표에 대한 억제율은 양성 대조군 메토트렉세이트에 의해 수득된 것보다 더 우수하였다; 또한, 실시예 22의 화합물(40mg/kg)이 i.g. 투여되는 경우, 랫트에서 관절염에 대한 일정한 억제 효과가 관찰되었다.
2. 용매 군에 비해서, 메토트렉세이트 군에서 랫트의 체중이 감소하였으며, 이는 메토트렉세이트가 랫트에 독성이 있다는 것을 시사한다. 실시예 7 및 22의 시험 화합물의 두 군 모두에서 랫트의 체중 증가가 용매 군보다 우수한 반면에 실시예 7 및 22의 화합물 모두 유의한 독성을 나타내지 않았다. 실시예 7의 화합물의 효과/안전성 지수는 양성 대조군 MTX보다 우수하다.

Claims (21)

  1. 일반식 (I)의 화합물,
    Figure 112018080120116-pct00153

    또는 이들의 입체이성질체(stereoisomer), 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물로서,
    R1이 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
    R2가 수소, 하이드록시, 시아노, 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, C1-C6 할로알킬, C1-C6 알킬카보닐 및 C1-C6 알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 할로겐이며;
    R4가 수소 또는 C1-C4 알킬이며;
    X가 NH, O 또는 S이며;
    Y가 CO 또는 S(O)2이며;
    Z가 공유결합, CH2 또는 (CH2)2이며;
    n이 1 내지 4의 정수이며;
    고리 A가 벤젠 고리, 피리딘 고리 또는 피페리딘 고리인, 일반식 (I)의 화합물
  2. 제1항에 있어서,
    R1이 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
    R2가 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 할로겐이며;
    R4가 수소 또는 메틸이며;
    X가 NH 또는 O이며;
    Y가 CO 또는 S(O)2이며;
    Z가 공유결합, CH2 또는 (CH2)2이며;
    n이 1 내지 4의 정수이며;
    고리 A가 벤젠 고리, 피리딘 고리 또는 피페리딘 고리인, 일반식 (I)의 화합물.
  3. 제1항에 있어서,
    R1이 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
    R2가 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 플루오로이며;
    R4가 메틸이며;
    X가 NH이며;
    Y가 CO이며;
    Z가 공유결합이며;
    n이 1 내지 4의 정수이며;
    고리 A가 벤젠 고리, 피리딘 고리인, 일반식 (I)의 화합물.
  4. 제1항에 있어서,
    R1이 클로로, 플루오로 또는 메틸이며;
    R2가 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 플루오로이며;
    R4가 메틸이며;
    X가 NH이며;
    Y가 CO이며;
    Z가 공유결합이며;
    n이 1 내지 4의 정수이며;
    고리 A가 벤젠 고리인, 일반식 (I)의 화합물.
  5. 제1항에 있어서,
    R1이 클로로이며;
    R2가 수소, 하이드록시, 시아노, 플루오로, 메틸, 에틸, 메톡실, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 아세틸 및 디메틸아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 플루오로이며;
    R4가 메틸이며;
    X가 NH이며;
    Y가 CO이며;
    Z가 공유결합이며;
    n이 1 내지 4의 정수이며;
    고리 A가 벤젠 고리인, 일반식 (I)의 화합물.
  6. 제1항에 있어서,
    R1이 클로로이며;
    R2가 시아노, 플루오로 및 트리플루오로메틸로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 플루오로이며;
    R4가 메틸이며;
    X가 NH이며;
    Y가 CO이며;
    Z가 공유결합이며;
    n이 1이며;
    고리 A가 벤젠 고리인, 일반식 (I)의 화합물.
  7. 제1항에 있어서,
    R1이 클로로이며;
    R2가 시아노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 플루오로이며;
    R4가 메틸이며;
    X가 NH이며;
    Y가 CO이며;
    Z가 공유결합이며;
    n이 1이며;
    고리 A가 벤젠 고리인, 일반식 (I)의 화합물.
  8. 제1항에 있어서,
    화합물이
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노벤즈아미드;
    N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드;
    N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로-페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드;
    4-플루오로-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드;
    N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-트리플루오로메틸벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-플루오로벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-1-메틸피페리디닐-4-포름아미드;
    N-(3-(2-(3-아크릴아미도-4-플루오로페닐아미노)-5-클로로피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디메틸아미노벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,4,6-트리플루오로벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메톡실벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-6-시아노니코틴아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-하이드록시벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-2-플루오로벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-시아노-3-플루오로벤즈아미드;
    4-시아노-N-(3-(2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)-5-메틸피리미디닐-4-아미노)프로필)-벤즈아미드;
    4-시아노-N-(3-(5-플루오로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드;
    N-(5-(5-클로로-4-(3-(2-(4-시아노페닐)아세트아미노)프로필아미노)피리미딜-2-아미노)-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴로일;
    N-(5-(5-클로로-4-(3-(4-시아노페닐설폰아미노)프로필아미노)피리미딜-2-아미노)-2-플루오로페닐)-N-메틸아크릴로일;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-옥소)프로필)-4-시아노벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-이소니코틴아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-에틸벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-메틸벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-트리플루오로메틸벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-시아노벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-3-플루오로-4-트리플루오로메틸벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-2,3,4,5-테트라플루오로벤즈아미드;
    4-아세틸-N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)벤즈아미드;
    N-(3-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)프로필)-4-디플루오로메틸벤즈아미드; 및
    N-(6-(5-클로로-2-(4-플루오로-3-(N-메틸아크릴아미도)페닐아미노)피리미디닐-4-아미노)헥실)-4-시아노벤즈아미드;
    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  9. 제1항에 따른 일반식 (I)의 화합물의 제조 방법:
    유기 용매 및 촉매하에서 일반식 (IV)의 화합물과
    Figure 112017035725598-pct00154

    일반식 (V)의 화합물을 반응시켜, 일반식 (I)의 화합물을 형성하는 단계를 포함하며,
    Figure 112017035725598-pct00155

    R1이 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
    R2가 수소, 하이드록시, 시아노, 할로, C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, C1-C6 할로알킬, C1-C6 알킬카보닐 및 C1-C6 알킬 아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    R3이 수소 또는 할로겐이며;
    R4가 수소 또는 C1-C4 알킬이며;
    X가 NH, O 또는 S이며;
    Y가 CO 또는 S(O)2이며;
    Z가 공유결합, CH2 또는 (CH2)2이며;
    n이 1 내지 4의 정수이며;
    고리 A가 벤젠 고리, 피리딘 고리 또는 피페리딘 고리이다.
  10. 제9항에 있어서,
    촉매가 트리플루오로아세트산, 염산 및 메탄설폰산으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  11. 제9항에 있어서,
    유기 용매가 이소프로판올 및 n-부탄올로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  12. 제9항에 있어서, 일반식 (IV)의 화합물은
    Figure 112019002370286-pct00156

    유기 용매 및 알칼리하에서 일반식 (III)의 화합물과
    Figure 112019002370286-pct00157

    일반식 (II)의 화합물을 반응시켜,
    Figure 112019002370286-pct00158

    일반식 (IV)의 화합물을 형성하여 제조하는, 제조방법:
    R1이 할로겐 또는 C1-C6 알킬이며;
    R2가 수소, 하이드록시, 시아노, 할로, C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, C1-C6 할로알킬, C1-C6 알킬카보닐 및 C1-C6 알킬 아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체이며;
    X가 NH 또는 O이며;
    Y가 CO 또는 S(O)2이며;
    Z가 공유결합, CH2 또는 (CH2)2이며;
    n이 1 내지 4의 정수이며;
    고리 A가 벤젠 고리, 피리딘 고리 또는 피페리딘 고리이다.
  13. 제12항에 있어서,
    알칼리가 트리에틸아민 및 디이소프로필에틸아민으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  14. 제9항에 있어서,
    유기 용매가 에탄올, 메탄올 및 n-부탄올로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  15. 유효 성분으로서 제1항에 따른 일반식 (I)의 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 보강제(adjuvant) 또는 희석제를 포함하는, JAK3 또는 JAK1 키나아제의 비정상적인 활성과 관련된 질환의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물로서,
    상기 JAK3 또는 JAK1 키나아제의 비정상적인 활성과 관련된 질환은 자가 면역 질환, 염증성 질환, 암, 골수증식성 질환, 골 재흡수 질환, 이식편대숙주병(graft-versus-host disease), 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, I형 당뇨병, 알레르기 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 천식, 백혈병 및 림프종으로 이루어진 군에서 선택되는 질환인, 약학 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    정제, 캡슐, 분말, 시럽, 액체, 현탁액, 주사 또는 연고의 형태인, 약학 조성물.
  17. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 자가 면역 질환, 염증성 질환, 암, 골수증식성 질환, 골 재흡수 질환 또는 이식편대숙주병(graft-versus-host disease)의 치료 또는 예방을 위한 용도인, 화합물.
  18. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 류마티스 관절염, 건선, 크론병, 전신 홍반성 루프스, 다발성 경화증, I형 당뇨병, 알레르기 질환, 만성 폐쇄성 폐질환, 천식, 백혈병 또는 림프종의 치료 또는 예방을 위한 용도인, 화합물.
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 제16항에 있어서,
    제제의 단위 투여량이 0.0001 내지 200mg의 범위인, 약학 조성물.
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