KR101781654B1 - 조혈 악성종양의 치료를 위한 포스포이노시티드 ３-키나제 억제제 화합물 및 화학요법제의 조합물 - Google Patents

조혈 악성종양의 치료를 위한 포스포이노시티드 ３-키나제 억제제 화합물 및 화학요법제의 조합물 Download PDF

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Abstract

하기 화학식 I을 갖는 PDK 억제제 화합물 및 화학요법제의 조합물 (이들의 입체이성질체, 기하 이성질체, 호변이성질체, 대사물 및 제약상 허용되는 염 포함)은 조혈 악성종양을 치료하는데 유용하다. 포유동물 세포에서 이러한 장애 또는 관련된 병리 상태를 시험관내, 계내 및 생체내에서 진단, 예방 또는 치료하기 위한 이러한 조합물의 사용 방법이 개시된다.
<화학식 I>
Figure 112011079192510-pct00086

Description

조혈 악성종양의 치료를 위한 포스포이노시티드 ３-키나제 억제제 화합물 및 화학요법제의 조합물{COMBINATIONS OF PHOSPHOINOSITIDE 3-KINASE INHIBITOR COMPOUNDS AND CHEMOTHERAPEUTIC AGENTS FOR THE TREATMENT OF HEMATOPOIETIC MALIGNANCIES}
<관련 출원에 대한 상호 참조>
37 CFR §1.53(b) 하에 출원된 본 비-가출원은 35 USC §119(e) 하에 2009년 3월 12일에 출원된 미국 가출원 제61/159,622호 (그의 전문이 본원에 참고로 도입됨)의 이점을 주장한다.
<발명의 분야>
본 발명은 일반적으로 조혈 악성종양에 대한 활성을 가지며, PI3 키나제 또는 mTOR 활성을 억제하는 화합물을 포함하는 화합물의 제약 조합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 포유동물 및 포유동물 세포의 시험관내, 계내 및 생체내 진단 또는 치료를 위해 상기 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
혈액의 세포 성분, 예컨대 백혈구, 림프구, 천연 킬러 세포, 형질 세포 및 골수성 세포, 예컨대 호중구 및 단핵구가 생성되는 과정인 조혈 과정 동안 생성된 세포와 연관된 암이 조혈 악성종양으로서 지칭된다. 혈액 및 림프 조직에서 발견될 수 있고, 면역 반응에 중요한 림프구는 각각 체액 및 세포 면역을 매개하는 두 가지 주요 클래스의 림프구인 B 림프구 (B 세포) 및 T 림프구 (T 세포)로 분류된다. B 세포는 (T 세포에 의해 좌우되는 세포-매개 면역 반응과는 다르게) 체액성 면역 반응에서 큰 역할을 하는 림프구이다. B 세포의 주요 기능은 항원에 대하여 항체를 만들고, 항원 제시 세포 (APC)의 역할을 수행하고, 결국 항원 상호작용에 의한 활성화 후에 기억 B 세포로 발전하는 것이다. B 세포는 후천성 면역계의 필수적인 성분이다. B 세포는 골수 내에서 성숙하고, 골수를 떠나 그의 세포 표면 상에서 항원-결합 항체를 발생시킨다. 나이브 B 세포가 그의 막-결합 항체가 특이적인 항원과 처음 마주칠 때, 세포는 빠르게 분열하기 시작하고, 그의 자손은 기억 B 세포 및 이펙터 세포 ("형질 세포"로 불림)로 분화한다. 기억 B 세포는 보다 긴 평균 수명을 가지고, 원래 모 세포와 동일한 특이성을 갖는 막-결합된 항체를 계속 발현한다. 형질 세포는 막-결합된 항체를 생산하지 않지만, 대신에 분비될 수 있는 형태의 항체를 생산한다. 분비된 항체는 체액 면역의 주요 이펙터 분자이다.
비호지킨 림프종은 호지킨 림프종이 아닌 임의의 림프종을 포함하는 조혈 악성종양의 다양한 군이다. 림프종은 일종의 백혈구인 림프구로부터 유래되는 일종의 암이다. 비호지킨 림프종의 다수의 아형이 기재되어 있으며; 이들은 일반적으로 이들의 공격성에 의해 분류된다. 보다 더 공격적인 비호지킨 림프종은 치료하지 않으면 빠르게 치명적일 수 있는 반면, 보다 덜 공격적인 비호지킨 림프종은 수년 동안 지속되는 만성 질환일 수 있다. 비호지킨 림프종은 화학요법, 모노클로날 항체, 면역요법, 방사선 및 조혈 줄기 세포 이식의 조합으로 치료된다.
림프종은 림프구 (척추동물 면역계의 일종의 백혈구) 및 림프절에서 기원하는 일종의 신생물이며, 림프절의 확대 (종양)로 나타난다. 림프종은 또한 림프구에서 기원하지만 고형 종양을 형성하지 않는 림프양 백혈병과 밀접하게 관련된다. 다수의 유형의 림프종이 존재하고, 다시 림프종은 혈액 신생물로 불리는 조혈 악성종양의 광범위한 그룹의 일부이다.
급성 골수양 백혈병 (AML)은 골수 계열 발생을 담당하는 조혈 줄기 세포의 악성 클론 장애의 다상군을 포함한다. 종종 증식 및 아폽토시스의 탈조절과 함께, 정상적인 조혈 분화가 차단된다. 이는 빈혈, 호중구감소증 및 혈소판감소증으로 이어지는 정상적인 조혈의 점진적 기능부전을 초래한다. AML은 모든 성인 백혈병의 약 80％를 차지하고, 그의 전체적인 발생율은 지난 15-20년 동안 안정하게 또는 서서히 증가하였다. AML의 예후는 전체적인 5년 생존율이 15-30％로 좋지 않은 상태로 남아 있는 한편, 골수이형성 증후군이 발생하거나 60세가 넘는 AML 환자는 5년에 10％ 미만의 생존율로 훨씬 더 좋지 않은 예후를 갖는다 (문헌 [Smith M. et al. (2004) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 50:197-222]). AML 환자에 대한 표준 치료적 접근법은 고용량 화학요법이고, 이는 주로 시타라빈 (Ara-C) 및 안트라시클린 항생제, 예컨대 다우노루비신 또는 이다루비신으로 구성된다. 보통, AML은 초기 화학요법에 반응하지만, 대부분의 환자에서 질환이 재발된다. AML 치료의 결과는 강화된 치료 전략을 견딜 수 있는 보다 젊은 환자에서는 개선되지만, 60세가 넘는 개체 중에서 결과의 변화는 제한적이었다. AML에 사용된 표준 화학요법 약물에 허용되는 독성의 한계에는 도달하였다. 따라서, 충족되지 않은 중요한 요구로는 AML에 대해 새로운, 합리적으로 설계된, 최소 독성의, 효과적인 요법이 남아있다 (문헌 [Fathi A.T. and Karp J.E. (2009) Curr. Oncol. Rep. 11:346-352]; [Stapnes et al. (2009) Expert Opin. Investig. Drugs 18:433-455]).
투약 요법에서 동시에 또는 순차적으로 투여되는 항암 제약 요법의 조합은 이제 암 치료에서 통상적인 것이다. 성공적인 조합 요법은 단일요법, 즉 하나의 약물로 제한된 제약 치료보다 개선되고, 심지어 상승작용적인 효과를 제공한다 (문헌 [Ouchi et al. (2006) Cancer Chemother. Pharmacol. 57:693-702]; [Higgins et al. (2004) Anti-Cancer Drugs 15:503-512]). 전임상 연구는 항암 제약 요법 조합물, 예컨대 유방암 치료를 위한 카페시타빈 및 탁산의 임상적 단계 상승작용을 위한 기반이다 (문헌 [Sawada et al. (1998) Clin. Cancer Res. 4:1013-1019]). 조합 요법의 특정 용량 및 계획은 효능을 손상시키지 않고 안전성을 개선시킬 수 있다 (문헌 [O'Shaughnessy et al. (2006) Clin. Breast Cancer Apr 7(1):42-50]). 시험관내 상승작용적 효과는 임상적 단계 상승작용과 서로 관련된다 (문헌 [Steinbach et al. (2003) Clin. Inf. Dis. Oct 1:37 Suppl 3:S188-224]).
포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K)는 림프종에 대한 중요한 생존 및 성장 신호를 위한 주요 신호전달 노드이고, 포스파타제 PTEN의 활성과 반대이다. PI3K 경로는 림프종의 공격적인 형태로 이상조절된다 (문헌 [Abubaker (2007) Leukemia 21:2368-2370]). DLBCL (미만성 거대 B-세포 림프종) 암의 8 퍼센트는 PI3CA (포스파티딜이노시톨-3 키나제 촉매 서브유닛 알파) 미스센스 돌연변이를 갖고, 37％는 면역조직화학 시험에 의해 PTEN 음성이다.
포스파티딜이노시톨은 세포막에서 발견되며, 세포내 신호 전달에 참여하는 수많은 인지질 중 하나이다. 3'-인산화 포스포이노시티드를 통한 세포 신호전달은 다양한 세포 과정, 예를 들어 악성 형질전환, 성장 인자 신호전달, 염증 및 면역과 연관되어 있다 (문헌 [Rameh et al. (1999) J. Biol Chem. 274:8347-8350]). 이들 인산화 신호전달 생성물의 생성을 담당하는 효소인 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI 3-키나제 또는 PI3K로도 지칭함)는 원래 바이러스성 종양단백질과 관련된 활성, 및 포스파티딜이노시톨 (PI)을 인산화시키는 성장 인자 수용체 티로신 키나제 및 그의 이노시톨 고리의 3'-히드록실에서의 인산화 유도체를 특징으로 한다 (문헌 [Panayotou et al. (1992) Trends Cell Biol 2:358-60]). 포스포이노시티드 3-키나제 (PI3K)는 이노시톨 고리의 3-히드록실 잔기에서 지질을 인산화시키는 지질 키나제이다 (문헌 [Whitman et al. (1988) Nature, 332:664]). PI3-키나제에 의해 생성된 3-인산화 인지질 (PIP3)은 지질 결합 도메인 (플렉스트린 상동성 (PH) 영역 포함)을 갖는 키나제, 예컨대 Akt 및 PDK1, 포스포이노시티드-의존성 키나제-1을 동원하는 2차 메신저로서 작용한다 (문헌 [Vivanco et al. (2002) Nature Rev. Cancer 2:489]; [Phillips et al. (1998) Cancer 83:41]).
PI3 키나제 패밀리는 구조적 상동성에 의해 하위-분류된 적어도 15가지의 상이한 효소를 포함하고, 서열 상동성 및 효소 촉매작용에 의해 형성된 생성물에 기초하여 3가지 클래스로 분류된다. 클래스 I PI3 키나제는 2가지 서브유닛으로 구성된다: 110 kd 촉매 서브유닛 및 85 kd 조절 서브유닛. 조절 서브유닛은 SH2 도메인을 함유하고, 티로신 키나제 활성을 갖는 성장 인자 수용체에 인산화된 티로신 잔기 또는 종양유전자 생성물에 결합하며, 이로 인해 그의 지질 기질을 인산화하는 p110 촉매 서브유닛의 PI3K 활성을 유도한다. 클래스 I PI3 키나제는 시토카인, 인테그린, 성장 인자 및 면역수용체 아래의 중요한 신호 전달 사건에 관련되며, 이는 상기 경로의 제어가 세포 증식 및 발암의 조절과 같은 중요한 치료 효과를 나타낼 수 있음을 시사한다. 클래스 I PI3K는 각각 포스파티딜이노시톨-3-포스페이트 (PIP), 포스파티딜이노시톨-3,4-비포스페이트 및 포스파티딜이노시톨-3,4,5-트리포스페이트를 생산하기 위해 포스파티딜이노시톨 (PI), 포스파티딜이노시톨-4-포스페이트 및 포스파티딜이노시톨-4,5-비포스페이트 (PIP2)를 인산화할 수 있다. 클래스 II PI3K는 PI 및 포스파티딜이노시톨-4-포스페이트를 인산화한다. 클래스 III PI3K는 오직 PI를 인산화할 수 있다. 암에서 중요 PI3-키나제 이소형은 클래스 I PI3-키나제, p110α (p110α에서의 재발성 종양원성 돌연변이에 의해 나타남)이다 (문헌 [Samuels et al. (2004) Science 304:554]). (US 5824492; US 5846824; US 6274327). 다른 이소형이 암에서 중요할 수 있으며, 또한 심혈관 및 면역-염증성 질환에 관련된다 (문헌 [Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32:393-396]; [Patel et al. (2004) Proc. Am. Assoc. of Cancer Res. (Abstract LB-247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA]; [Ahmadi K and Waterfield MD (2004) "Phosphoinositide 3-Kinase: Function and Mechanisms" Encyclopedia of Biological Chemistry (Lennarz W J, Lane M D eds) Elsevier/Academic Press]). p110 알파의 종양원성 돌연변이는 결장, 유방, 뇌, 간, 난소, 위, 폐 및 두경부 고형 종양에서 유의한 빈도수로 발견되었다. PTEN 이상은 교모세포종, 흑색종, 전립선, 자궁내막, 난소, 유방, 폐, 두경부, 간세포 및 갑상선 암에서 발견된다.
PI3 키나제는 p85 및 p110 서브유닛으로 구성되는 이종이량체이다 (문헌 [Otsu et al. (1991) Cell 65:91-104]; [Hiles et al. (1992) Cell 70:419-29]). PI3K α (알파), β (베타), δ (델타) 및 ω (감마)로 지정된 4가지 독특한 클래스 I PI3K가 확인되었고, 이들은 각각 독특한 110 kDa 촉매 서브유닛과 조절 서브유닛으로 구성된다. 촉매 서브유닛 중 3가지, 즉 p110 알파, p110 베타 및 p110 델타는 각각 동일한 조절 서브유닛, p85와 상호작용하는 반면; p110 감마는 독특한 조절 서브유닛, p101과 상호작용한다. 인간 세포 및 조직에서 이들 PI3K 각각의 발현 패턴은 독특하다. 각각의 PI3K 알파, 베타 및 델타 아형에서, p85 서브유닛은 표적 단백질에서 (적절한 서열 맥락에 존재하는) 인산화 티로신 잔기를 갖는 그의 SH2 도메인의 상호작용에 의해 원형질 막에 PI3 키나제를 국한시키는 작용을 한다 (문헌 [Rameh et al. (1995) Cell, 83:821-30]; [Volinia et al. (1992) Oncogene, 7:789-93]).
PI3 키나제/Akt/PTEN 경로는 이러한 작용제가 세포 증식을 억제하고, 암 세포의 생존 및 화학내성을 제공하는 기질 세포로부터의 신호를 억제하고, 아폽토시스의 억제를 역행시키고, 세포독성제에 대한 암 세포의 내인성 내성을 극복할 것으로 예상되므로, 암 약물 개발에 대한 매력적인 표적이다. PI3 키나제 억제제가 보고되어 있다 (문헌 [Yaguchi et al. (2006) Jour. of the Nat. Cancer Inst. 98(8):545-556]; US 7173029; US 7037915; US 6608056; US 6608053; US 6838457; US 6770641; US 6653320; US 6403588; WO 2006/046031; WO 2006/046035; WO 2006/046040; WO 2007/042806; WO 2007/042810; WO 2004/017950; US 2004/092561; WO 2004/007491; WO 2004/006916; WO 2003/037886; US 2003/149074; WO 2003/035618; WO 2003/034997; US 2003/158212; EP 1417976; US 2004/053946; JP 2001247477; JP 08175990; JP 08176070). 워트만닌(Wortmannin) 유사체는 포유동물에서 PI3 키나제 활성을 갖는다 (US 6703414; WO 97/15658).
화학식 I의 티에노피리미딘 화합물은 p110 알파 결합, PI3 키나제 억제 활성을 가지며, 암 세포의 성장을 억제한다 (US 2008/0207611; US 2008/0039459; US 2008/0076768; US 2008/0076758; US 2008/0242665; US 2008/0269210).
Figure 112011079192510-pct00001
예시적 화학식 I 화합물, GDC-0941 (CAS 등록 번호 957054-30-7, 제넨테크 인크.(Genentech Inc.))은 유망한 약동학 및 제약 특성을 갖는 PI3K의 선택적인 경구 생체이용가능한 억제제이다 (문헌 [Folkes et al. (2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532]; US 2008/0076768; [Belvin et al., American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 15, Abstract 4004]; [Folkes et al., American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-146]; [Friedman et al., American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-110]). 예시적 화학식 I 화합물, GDC-0941은 특정 화학요법제와 함께 고형 종양 세포주에 대해 상승작용적인 시험관내 및 생체내 활성을 나타낸다 (US 일련 번호 12/208,227, Belvin et al. "Combinations Of Phosphoinositide 3-Kinase Inhibitor Compounds And Chemotherapeutic Agents, And Methods Of Use" (2008년 9월 10일 출원)).
<발명의 개요>
본 발명은 일반적으로 조혈 악성종양의 성장을 억제하기 위해 모노클로날 항체 작용제 또는 화학요법제와 함께 투여되는, 항암 활성, 보다 구체적으로 PI3 키나제 또는 mTOR 억제 활성을 갖는 화학식 I의 티에노피리미딘 화합물에 관한 것이다. 화학요법제와 화학식 I의 화합물의 특정 조합은 시험관내 및 생체내에서 조혈 암 세포의 성장을 억제하는데 상승작용적 효과를 나타낸다. 본 발명의 조합물 및 방법은 조혈 악성종양의 치료에 유용할 수 있다. 조성물은 포유동물에서 종양 성장을 억제할 수 있고, 인간 암 환자를 치료하기에 유용할 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 치료 조합물을 포유동물에게 조합된 제제로 또는 교대로 투여하는 것을 포함하는 조혈 악성종양의 치료를 위한 방법을 포함하며, 여기서 치료 조합물은 치료 유효량의 화학식 I을 갖는 화합물, 및 치료 유효량의, 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈으로부터 선택된 화학요법제를 포함한다.
<화학식 I>
Figure 112011079192510-pct00002
본 발명은 또한 조혈 악성종양과 관련된 포유동물 세포, 유기체 또는 관련된 병리 상태의 시험관내, 계내 및 생체내 진단 또는 치료를 위한 치료 조합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 측면은 4-(2-(1H-인다졸-4-일)-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린 (US 2008/0076768; US 2008/0207611; 문헌 [Folkes et al. (2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532]) (또한 GDC-0941 (제넨테크, 인크.)로 알려져 있고 화학식 Ia를 가짐), 및 치료 유효량의, 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈으로부터 선택된 화학요법제를 포함하는 치료 조합물을 제공한다.
<화학식 Ia>
Figure 112011079192510-pct00003
본 발명의 측면은 화학식 Ib를 갖는 (S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온 (US 2008/0242665), 및 치료 유효량의, 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈으로부터 선택된 화학요법제를 포함하는 치료 조합물을 제공한다.
<화학식 Ib>
Figure 112011079192510-pct00004
화학식 I 화합물은 그의 모든 입체이성질체, 기하 이성질체, 호변이성질체, 대사물 및 제약상 허용되는 염을 포함한다. 특정 화학식 I 화합물은 약물-유사 물리화학적 및 약동학 특성을 갖는 PI3K의 강력한 억제제이다. 특정 화학식 I 화합물은 클래스 Ib보다 클래스 Ia PI3K, 특히 P110 알파 아형에 대해 선택성을 나타낸다. 화학식 Ia 및 Ib 화합물은 경구로 생체이용가능하고, 다중 인간 암 모델에서 단일 작용제 항종양 활성을 갖는다.
본 발명의 제약 조성물 및 치료 조합물은 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈으로부터 선택된 화학요법제를 포함한다.
본 발명의 제약 조성물은 추가로 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 PI3 키나제에 의해 조절되는 조혈 악성종양의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 화학식 I 화합물 및 화학요법제를 투여하는 것을 포함하는, PI3 키나제에 의해 조절되는 조혈 악성종양의 치료 방법을 제공한다. 화학식 I 화합물 및 화학요법제는 제약 조성물로서의 조합물로의 투여를 위해 함께 제제화될 수 있거나 또는 이들은 치료 조합물로서 교대로 (순차적으로, 연속적으로) 개별 투여될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 조혈 악성종양의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 화학식 I 화합물 및 화학요법제를 투여하는 것을 포함하는, 조혈 악성종양의 치료 방법을 제공한다.
추가의 측면에서, 본 발명은 포유동물에서 PI3 키나제에 의해 조절되는 조혈 악성종양 질환 또는 상태를 치료하기 위해 본 발명의 제약 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 측면은 포유동물에서 PI3 키나제에 의해 조절되는 조혈 악성종양 질환 또는 상태의 치료를 위한 의약의 제조에 있어 본 발명의 제약 조성물의 용도이다.
본 발명의 또 다른 측면은 화학식 I 화합물, 화학요법제, 용기, 및 임의로는 조혈 악성종양을 위한 치료를 지시하는 포장 삽입물 또는 라벨을 포함하는 제조품 또는 키트를 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 조혈 악성종양의 치료에서 별도의, 동시 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서의, 화학식 I 화합물, 및 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈으로부터 선택된 화학요법제를 포함하는 생성물이다.
본 발명의 또 다른 측면은 a) 하나 이상의 돌연변이를 갖는 시험관내 조혈 악성종양 세포주에게 화학식 I 화합물 및 화학요법제를 포함하는 치료 조합물을 투여하는 것, 및 b) 상승작용적 또는 비상승작용적 효과를 측정하는 것을 포함하는, 암의 치료를 위한 조합물에 사용될 화합물을 결정하는 방법을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 조혈 악성종양을 갖는 포유동물에게 치료 유효량의 치료 조합물을 투여하여, 조혈 악성종양, 예컨대 비호지킨 림프종, 미만성 거대 조혈 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, AML 및 MCL의 효과적인 치료적 처치를 나타내는 것을 포함하는, 조혈 악성종양을 갖는 포유동물을 치료적으로 처치하는 방법이다. 한 실시양태에서, 치료 조합물은 PI3K의 하나 이상의 이소형을 억제한다. 한 실시양태에서, 치료 조합물은 mTOR을 억제한다.
한 측면에서, 본 발명은 치료 조합물을 비호지킨 림프종을 갖는 환자에게 투여하여 림프종의 성장을 억제하는 것을 포함하는, 비호지킨 림프종의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
한 측면에서, 본 발명은 림프종 세포 또는 비호지킨 림프종 내에 존재하고/거나 인접하여 존재하는 세포에 치료 조합물을 투여하여 림프종의 성장을 억제하는 것을 포함하는, 비호지킨 림프종의 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 세포는 비호지킨 림프종 세포가 아니고 (예를 들어, 이는 T 또는 B 세포가 아님), 예를 들어 상기 세포는 기질 세포일 수 있다.
도 1은 화학식 Ia (GDC-0941) 처리 (우측 칼럼) 및 비처리 (좌측 칼럼) 세포, DoHH2, WSU-DLCL2, OPM2 및 U266으로 유동 세포측정법에 의해 측정된 약력학 (PD) 마커의 감소를 보여준다. 세포는 5 μM GDC-0941로 4시간 동안 시험관내에서 처리하였다.
도 2는 5 μM GDC-0941로 4시간 동안 시험관내에서 처리된 세포주에서 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 및 웨스턴 블롯팅에 의해 측정된, 세포 DoHH2, WSU-DLCL2, OPM2 및 U266에서의 약력학 (PD) 마커 p-AKT, p-S6RP, p-Bad 및 베타-액틴의 감소를 보여준다.
도 3은 B-NHL 세포주 DoHH2에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제, 화학식 Ia (GDC-0941), 및 그의 덱사메타손 (Dex) 및 독소루비신 (Dox)과의 조합의 효과를 보여준다. 시험관내 세포 생존 및 증식 검정 (셀-타이터 글로(Cell-Titer Glo), 프로메가(Promega))은 다양한 억제제 농도 (이전에 (대략적으로) 결정된 IC50의 10-5 내지 10 상대 단위, 화학식 Ia, 덱사메타손, 독소루비신, 및 화학식 Ia와 덱사메타손의 조합 및 화학식 Ia와 독소루비신의 조합)에 걸쳐 생존 세포를 측정하였다.
도 4는 다양한 농도 (10-5 내지 10 μM)의 화학식 Ia (GDC-0941), GDC-0464 및 LY294002에서 생존 세포를 측정하는 시험관내 세포 생존 및 증식 검정 (셀-타이터 글로?, 프로메가 코포레이션, 미국 위스콘신주 매디슨)에 의해 환자 NHL600-A876 세포로부터의 원발성 여포성 림프종 세포에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제의 효과를 보여준다.
도 5는 환자 NHL640-A055로부터의 원발성 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL) 세포에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제, 화학식 Ia (GDC-0941) 및 그의 독소루비신과의 조합의 효과를 보여준다. 세포 생존율은 다양한 농도 (10-5 내지 20 μM)의 화학식 Ia, 독소루비신 및 화학식 Ia와 독소루비신의 조합에서 시험관내 세포 생존 및 증식 검정 (셀-타이터 글로?)에 의해 측정하였다.
도 6은 다양한 농도 (10-5 내지 10 μM)의 화학식 Ia, 덱사메타손, 및 화학식 Ia와 덱사메타손의 조합에서 생존 세포를 측정하는 시험관내 세포 생존 및 증식 검정 (셀-타이터 글로?)에 의해 다발성 골수종 OPM2 세포에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제 화학식 Ia (GDC-0941) 및 그의 덱사메타손과의 조합의 효과를 보여준다.
도 7은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), 5 mg/kg 리툭시맙, CHOP, 및 화학식 Ia 73 mg/kg과 리툭시맙 5 mg/kg의 조합, 화학식 Ia 73 mg/kg과 CHOP의 조합을 투여한, WSU-DLCL2 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 20일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 CHOP를 제0일에서 시작하여 1회 투여하고, 리툭시맙을 제0일, 제7일 및 제14일에 투여하는 한편, 화학식 Ia를 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 요법: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5). 시클로포스파미드, 독소루비신 및 빈크리스틴을 제0일에 1회 투여하고, 프레드니손을 제0일, 제1일, 제2일, 제3일 및 제4일에 투여하였다.
도 8은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), 5 mg/kg 리툭시맙, CHOP, 및 화학식 Ia 73 mg/kg과 리툭시맙 5 mg/kg의 조합, 및 화학식 Ia 73 mg/kg과 CHOP의 조합을 투여한, DoHH-2 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 35일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 리툭시맙을 제0일, 제7일 및 제14일 (qwk x3)에 정맥내 투여하고, CHOP를 제1일에 출발하여 투여하는 한편, 화학식 Ia를 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 요법: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5). 시클로포스파미드, 독소루비신 및 빈크리스틴을 제0일에 1회 투여하고, 프레드니손을 제0일, 제1일, 제2일, 제3일 및 제4일에 투여하였다.
도 9는 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 75 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), CHOP, 및 화학식 Ia 75 mg/kg과 CHOP의 조합, 화학식 Ia 75 mg/kg과 시클로포스파미드 30 mg/kg의 조합, 화학식 Ia 75 mg/kg과 독소루비신 2.47 mg/kg의 조합, 화학식 Ia 75 mg/kg과 빈크리스틴 0.38 mg/kg의 조합, 및 화학식 Ia 75 mg/kg과 프레드니손 0.15 mg/kg의 조합을 투여한, DoHH2 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 27일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 CHOP를 제0일에 투여하고, 시클로포스파미드를 제0일에 투여하고, 독소루비신을 제0일에 투여하고, 빈크리스틴을 제0일에 투여하고, 프레드니손을 제0일 내지 제4일에 매일 투여하는 한편, 화학식 Ia를 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 성분 요법은 다음과 같다: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5).
도 10은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), CHOP, 및 화학식 Ia 73 mg/kg과 CHOP의 조합을 투여한, BJAB 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 25일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 CHOP를 제0일에 시작하여 1회 투여하는 한편, 화학식 Ia 및 비히클을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 요법: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5). 시클로포스파미드, 독소루비신 및 빈크리스틴을 제0일에 1회 투여하고, 프레드니손을 제0일, 제1일, 제2일, 제3일 및 제4일에 투여하였다.
도 11은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 75 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), 5 mg/kg 리툭시맙, 및 화학식 Ia 75 mg/kg과 5 mg/kg 리툭시맙의 조합을 투여한, BJAB 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 25일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 리툭시맙을 제0일, 제7일 및 제14일에 투여하는 한편, 화학식 Ia 및 비히클을 21일 동안 (경구, qd x21) 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다.
도 12는 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 및 단일 작용제 요법: 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941, 1 mg/kg 보르테조밉, 25 mg/kg 레날리도미드 및 10 mg/kg 덱사메타손을 투여한, NCI-H929 다발성 골수종 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 22일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 21일 동안 매일 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일, 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제7일, 제8일, 제9일 및 제10일에 경구 투여하였다.
도 13은 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 단일 작용제 요법: 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21); 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3); 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5일 온/2일 오프/5일 온/2일 오프/5일 온); 및 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5일 온/2일 오프/5일 온); 및 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3)의 조합; 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5/2/5/2/5)의 조합; 및 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5)의 조합을 투여한, 다발성 골수종 OPM-2 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 24일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 제0일 내지 제4일, 제7일 내지 제11일 및 제14일 내지 제18일에 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다.
도 14는 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 1 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x2.5), 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, qd x21), 및 10 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5일 온/2일 오프/5일 온)을 투여한, 다발성 골수종 MM1.s 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 27일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일 및 제14일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 21일 동안 매일 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다.
도 15는 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 단일 작용제 요법: 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3) 및 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5); 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3)의 조합; 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5)의 조합을 투여한, 다발성 골수종 MM1.s 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 40일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다.
도 16은 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 단일 작용제 요법: 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3), 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5/2/5/2/5) 및 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5); 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3)의 조합; 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5/2/5/2/5)의 조합; 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x14)과 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5)의 조합을 투여한, 다발성 골수종 H929 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 33일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941은 덱사메타손과 조합되었을 때 14일 동안 투여하는 것을 제외하고는 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 제0일 내지 제4일, 제7일 내지 제11일 및 제14일 내지 제18일에 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다.
도 17은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwk x3), 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 100 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 2.5 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x21), 4 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x21); 및 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwk x3)과 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)의 조합; 및 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwk x3)과 2.5 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x21)의 조합을 투여한, DoHH2 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 33일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941 및 화학식 1b를 각각 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 라파마이신을 제0일, 제7일 및 제14일에 정맥내 투여하였다.
도 18은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwk x3), 60 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 1 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x21); 및 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwk x3)과 60 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x18)의 조합; 및 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwk x3)과 1 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x18)의 조합을 투여한, WSU-DLCL2 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 21일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다.
정의
본 명세서와 특허청구범위 전반에 걸쳐 사용된 단어 "포함하다", "포함하는", "함유하다", "함유하는" 및 "함유"란, 언급된 특징, 정수, 성분 또는 단계의 존재를 명시하는 것이지만, 하나 이상의 다른 특징, 정수, 성분, 단계 또는 그의 그룹의 존재 또는 부가를 배제하지 않는다.
용어 "치료하다" 및 "치료"는 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치 둘다를 나타내고, 이것의 목적은 원치않는 생리적 변화 또는 장애, 예컨대 암의 성장, 발생 또는 확산을 방지하거나 지연시키는 것 (줄이는 것)이다. 치료가 필요한 대상체는 이미 장애를 갖는 대상체 및, 상기 장애에 걸리기 쉬운 대상체 또는 상기 장애를 예방해야 하는 대상체를 포함한다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 원하는 임상 결과는 검출가능하든 검출가능하지 않든 간에 증상의 호전, 질환 정도의 경감, 질환의 안정화된 상태 (즉, 악화되지 않음), 질환 진행의 지연 또는 저속화, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 차도 (부분적 또는 전반적)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "치료"는 또한 치료를 받지 않을 경우에 예상되는 생존과 비교하여 생존을 연장시키는 것을 의미할 수도 있다. 치료를 필요로 하는 대상체는 이미 해당 증상 또는 장애가 있는 대상체 및 이러한 증상 또는 장애를 갖기 쉬운 대상체 또는 이러한 증상 또는 장애를 예방할 대상체를 포함한다.
본 발명의 방법에 따른 치료량의 치료 조합물의 투여 후에 환자가 하기 중 하나 이상을 나타낸다면, 대상체 또는 포유동물은 조혈 악성종양, 예컨대 비호지킨 림프종에 대해 성공적으로 "치료"된다: (i) 암 세포의 수의 관찰가능하고/거나 측정가능한 감소 또는 암 세포의 부재; (ii) 종양 크기의 감소; 연조직 또는 뼈로의 암의 확산을 비롯한, 주위 기관으로의 암 세포 침윤의 억제 (즉, 어느 정도 지연시키며, 바람직하게는 중지시킴); (iii) 종양 전이의 억제 (즉, 어느 정도 지연시키며, 바람직하게는 중지시킴); (iv) 종양 성장의 어느 정도의 억제; 또는 (v) 감소된 이환률 및 사망률, 및 삶의 질의 개선을 비롯한, 특정 암과 관련된 증상 중 하나 이상의 어느 정도의 경감. 치료 조합물이 기존 암 세포의 성장을 예방하고/거나 기존 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도라면, 이것은 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 이러한 신호 또는 증상의 감소는 또한 환자에 의해 느껴질 수 있다. 질환의 성공적인 치료 및 호전을 평가하기 위한 상기 변수는 전문의에게 공지된 통상의 절차에 따라 쉽게 측정될 수 있다. 암 요법의 경우, 효능은 예를 들어 질환 진행까지의 시간 (TTP)을 평가하고/거나 반응 속도 (RR)를 결정하여 측정될 수 있다. 전이는 병기분류 시험 및 칼슘 수준 및 다른 효소에 대한 뼈 스캔 및 시험 (암의 뼈로의 확산을 결정하기 위함)으로 결정할 수 있다. CT 스캔을 수행하여 골반 및 림프절 영역에 퍼져있는지를 알아볼 수도 있다. 흉부 X-선 및 공지된 방법에 의한 간 효소 수준의 측정을 이용하여 폐 및 간 각각에 전이되었는지를 확인한다.
용어 "조혈 악성종양"은 세포, 예컨대 백혈구, 림프구, 천연 킬러 세포, 형질 세포, 및 골수성 세포, 예컨대 호중구 및 단핵구가 연관된 조혈 과정 동안 생성된 암 또는 과다증식성 장애를 나타낸다. 조혈 악성종양은 문헌 [Human Hematopoietic Malignancies; Tumors of Hematopoietic and Lymphoid Tissues (Jaffe E.S., Harris N.L., Stein H., Vardiman J.W. (Eds.) (2001): World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of Hematopoietic and Lymphoid Tissues. IARC Press: Lyon)]의 WHO 분류인 표 1에 열거된 질환을 포함한다 (질환의 국제적 분류의 형태학 코드 (ICD-O) 병기). 행동은 악성 종양의 경우 /3으로, 낮거나 불확실한 악성 잠재성의 병소의 경우 /1로 코드화된다.
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"B 세포"는 골수 내에서 성숙된 림프구이고, 나이브 B 세포, 기억 B 세포, 또는 이펙터 B 세포 (형질 세포)가 포함된다. 본원에서의 B 세포는 정상 또는 비악성 B 세포이다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 광범위한 의미로 사용되고, 구체적으로는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 2개 이상의 본래의 항체로부터 형성된 다중-특이적 항체 (예를 들어, 이중-특이적 항체), 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 항체 단편이 포함된다.
"치료 유효량"은 (i) 특정 질환, 상태 또는 장애를 치료하거나, (ii) 특정 질환, 상태 또는 장애의 하나 이상의 증상을 약화, 회복 또는 제거시키거나, 또는 (iii) 본원에 기재된 특정 질환, 상태 또는 장애의 하나 이상의 증상의 발병을 예방 또는 지연시키는 본 발명의 화합물의 양을 의미한다. 암의 경우, 치료 유효량의 약물은 암 세포의 수 감소, 종양 크기의 감소, 말초 장기로의 암 세포 침윤의 억제 (즉, 어느 정도 지연시키며, 바람직하게는 중지시킴), 종양 전이의 억제 (즉, 어느 정도 지연시키며, 바람직하게는 중지시킴), 종양 성장의 어느 정도의 억제, 및/또는 암과 관련이 있는 하나 이상의 증상의 어느 정도의 경감을 유도할 수 있다. TTP 및/또는 반응 속도 (RR)에 의해 측정시, 약물이 기존 암 세포의 성장을 예방하고/거나 기존 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도라면, 이것은 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다.
용어 "암" 및 "암성"은 조절되지 않는 세포 성장을 전형적인 특징으로 하는 포유동물에서의 생리적 상태를 지칭하거나 기재한다. "종양"은 하나 이상의 암성 세포를 포함한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프양 악성종양을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평 세포 암 (예를 들어, 상피 편평 세포 암), 폐암, 예를 들어 소세포 폐암, 비소세포 폐암 ("NSCLC"), 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포 암, 위암(gastric 또는 stomach cancer), 예를 들어 위장암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암(kidney 또는 renal cancer), 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종 및 두경부암을 포함한다.
"만성" 투여는 급성 방식과는 반대로 연장된 기간 동안 초기 치료 효과 (활성)를 유지하기 위해 연속 방식으로 작용제(들)을 투여하는 것을 나타낸다. "간헐적" 투여는 중지없이 연속하여 수행되지 않는 치료이지만, 성질상 주기적이다.
암 증상의 완화 치료를 위한 "포유동물"은 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물, 예를 들어 개, 고양이, 소, 말, 양, 돼지, 염소, 토끼 등을 포함하여 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 의미한다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다.
하나 이상의 추가의 치료제와의 "조합" 투여는 동시 (공동) 투여 및 임의의 순서의 연속 (교대) 투여를 포함한다.
"화학요법제"는 작용 메카니즘에 관계없이 암 치료에 유용한 생물학적 (거대 분자) 또는 화학적 (소분자) 화합물이다. 화학요법제의 클래스는 알킬화제, 항대사제, 방추체 독 식물 알카로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 단백질, 항체, 광증감제 및 키나제 억제제를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 화학요법제는 "표적화 요법" 및 비표적화, 통상적인 화학요법에 사용되는 화합물을 포함한다.
화학요법제의 예는 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈을 포함한다.
화학요법제의 예는 또한 에를로티닙 (타르세바(TARCEVA)?, 제넨테크/OSI 팜.(OSI Pharm.)), 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)?, 사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis)), 5-FU (플루오로우라실, 5-플루오로우라실, CAS 번호 51-21-8), 겜시타빈 (겜자르(GEMZAR)?, 릴리(Lilly)), PD-0325901 (CAS 번호 391210-10-9, 화이자(Pfizer)), 시스플라틴 (시스-디아민, 디클로로백금(II), CAS 번호 15663-27-1), 카르보플라틴 (CAS 번호 41575-94-4), 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)?, 브리스톨-마이어스 스퀴브 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology)), 테모졸로미드 (4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜타자비시클로[4.3.0]노나-2,7,9-트리엔-9-카르복스아미드, CAS 번호 85622-93-1, 테모다르(TEMODAR)?, 테모달(TEMODAL)?, 쉐링 플로(Schering Plough)), 타목시펜 ((Z)-2-[4-(1,2-디페닐부트-1-에닐)페녹시]-N,N-디메틸-에탄아민, 놀바덱스(NOLVADEX)?, 이스투발(ISTUBAL)?, 발로덱스(VALODEX)?), 독소루비신 (아드리아마이신(ADRIAMYCIN)?), Akti-1/2, HPPD, 라파마이신 및 라파니팁 (타이커브(TYKERB)?, 글락소 스미스클라인(Glaxo SmithKline))을 포함한다.
화학요법제의 추가의 예는 옥살리플라틴 (엘록사틴(ELOXATIN)?, 사노피), 보르테조밉 (벨케이드(VELCADE)?, 밀레니엄 팜.(Millennium Pharm.)), 수텐트 (수니티닙(SUNITINIB)?, SU11248, 화이자), 레트로졸 (페마라(FEMARA)?, 노파르티스(Novartis)), 이마티닙 메실레이트 (글리벡(GLEEVEC)?, 노파르티스), XL-518 (MEK 억제제, 엑셀릭시스, WO 2007/044515), ARRY-886 (MEK 억제제, AZD6244, 어레이 바이오파마(Array BioPharma), 아스트라 제네카(Astra Zeneca)), SF-1126 (PI3K 억제제, 세마포어 파마슈티칼즈(Semafore Pharmaceuticals)), BEZ-235 (PI3K 억제제, 노파르티스), XL-147 (PI3K 억제제, 엑셀릭시스), ABT-869 (VEGF 및 PDGF 패밀리 수용체 티로신 키나제의 다중-표적화 억제제, 애보트 래보러토리즈(Abbott Laboratories) 및 제넨테크), ABT-263 (Bcl-2/Bcl-xL 억제제, 애보트 래보러토리즈 및 제넨테크), PTK787/ZK 222584 (노파르티스), 풀베스트란트 (파슬로덱스(FASLODEX)?, 아스트라제네카), 류코보린 (폴린산), 로나파르닙 (사라사르(SARASAR)TM, SCH 66336, 쉐링 플로), 소라페닙 (넥사바르(NEXAVAR)?, BAY43-9006, 바이엘 랩스(Bayer Labs)), 게피티닙 (이레사(IRESSA)?, 아스트라제네카), 이리노테칸 (캄프토사르(CAMPTOSAR)?, CPT-11, 화이자), 티피파르닙 (자르네스트라(ZARNESTRA)TM, 존슨 앤드 존슨(Johnson ＆ Johnson)), 카페시타빈 (크셀로다(XELODA)?, 로쉐(Roche)), 아브락산(ABRAXANE)TM (크레모포르-무함유), 파클릭탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제제 (아메리칸 파마슈티칼 파트너즈(American Pharmaceutical Partners), 미국 일리노이주 샤움버그), 반데타닙 (rINN, ZD6474, 자크티마(ZACTIMA)?, 아스트라제네카), 클로란엠부실, AG1478, AG1571 (SU 5271, 수겐(Sugen)), 템시롤리무스 (토리셀(TORISEL)?, 와이어쓰(Wyeth)), 파조파닙 (글락소스미스클라인), 칸포스파미드 (텔시타(TELCYTA)?, 텔리크(Telik)), 티오테파 및 시클로스포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)?, 네오사르(NEOSAR)?); 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민; 아세토게닌 (특히, 불라탁신 및 불라탁시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (이것의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신 (특히, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마1I, 칼리케아미신 오메가I1, 다이네미신, 다이네미신 A; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 및 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자유리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스유리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤; 항부신 작용제(anti-adrenal), 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK? 다당류 복합체 (JHS 내추럴 프로덕츠(JHS Natural Products), 미국 오레곤주 유진); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈 (나벨빈(NAVELBINE)?); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 및 이들 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 및 유도체를 포함한다.
또한, "화학요법제"의 정의는 (i) 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정자 (SERM), 예를 들어 타목시펜 (놀바덱스(NOLVADEX)?; 타목시펜 시트레이트 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 파레스톤(FARESTON)? (토레미핀 시트레이트), (ii) 부신에서의 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가세(MEGASE)? (메게스트롤 아세테이트), 아로마신(AROMASIN)? (엑세메스탄; 화이자), 포르메스타니, 파드로졸, 리비조르(RIVISOR)? (보로졸), 페마라? (레트로졸; 노파르티스) 및 아리미덱스(ARIMIDEX)? (아나스트로졸, 아스트라제네카), (iii) 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린 및 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체), (iv) 단백질 키나제 억제제, 예컨대 MEK 억제제 (WO 2007/044515), (v) 지질 키나제 억제제, (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 이상(aberrant) 세포 증식과 관련이 있는 신호전달 경로에서의 유전자 발현을 억제하는 것, 예를 들어 PKC-알파, Raf 및 H-Ras, 예컨대 오블리메르센 (게나센스(GENASENSE)?, 겐타 인크.(Genta Inc.)), (vii) 리보자임, 예컨대 VEGF 발현 억제제 (예를 들어, 안지오자임(ANGIOZYME)?) 및 HER2 발현 억제제, (viii) 백신, 예컨대 유전자 요법 백신, 예를 들어 알로벡틴(ALLOVECTIN)?, 류벡틴(LEUVECTIN)? 및 박시드(VAXID)?; 프로류킨(PROLEUKIN)? rIL-2; 토포이소머라제 1 억제제, 예컨대 루르토테칸(LURTOTECAN)?; 아바렐릭스(ABARELIX)? rmRH, (ix) 항혈관신생제, 예컨대 베바시주맙 (아바스틴(AVASTIN)?, 제넨테크), 및 이들 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 및 유도체를 포함한다.
또한, "화학요법제"의 정의는 치료 항체, 예컨대 알렘투주맙 (캄패스), 베바시주맙 (아바스틴?, 제넨테크); 세툭시맙 (에르비툭스(ERBITUX)?, 임클론(Imclone)); 파니투무맙 (벡티빅스(VECTIBIX)?, 암젠(Amgen)), 리툭시맙 (리툭산(RITUXAN)?, 제넨테크/바이오겐 이덱(Biogen Idec)), 페르투주맙 (옴니타르그(OMNITARG)TM, rhuMab 2C4, 제넨테크), 트라스트주맙 (헤르셉틴(HERCEPTIN)?, 제넨테크), 토시투모맙 (벡사르, 코리크시아(Corixia)), 및 항체 약물 접합체, 겜투주맙 오조가미신 (밀로타르그(MYLOTARG)?, 와이어쓰)을 포함한다.
본 발명의 PI3K 억제제와 조합되어 화학요법제로서의 치료 잠재력을 갖는 인간화 모노클로날 항체는 알렘투주맙, 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피뉴주맙, 베바시주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시드투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 겜투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 페르투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 트라스투주맙, 투코투주맙 셀모류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 우르톡사주맙 및 비실리주맙을 포함한다.
용어 "포유동물"은 인간, 마우스, 래트, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 말, 소, 돼지 및 양, 및 가금류를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은 1개 내지 12개 탄소 원자의 포화 직쇄 또는 분지쇄의 1가 탄화수소 라디칼을 나타내고, 여기서 알킬 라디칼은 독립적으로 하기 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있다. 알킬 기의 예는 메틸 (Me, -CH3), 에틸 (Et, -CH2CH3), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸 (-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸 (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸 (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-헵틸, 1-옥틸 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "알케닐"은 하나 이상의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소, sp2 이중 결합을 갖는, 2개 내지 12개 탄소 원자의 직쇄 또는 분지쇄 1가 탄화수소 라디칼을 나타내고, 여기서 알케닐 라디칼은 독립적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있고, "시스" 및 "트랜스" 배위 또는 다르게는 "E" 및 "Z" 배위를 갖는 라디칼을 포함한다. 예는 에틸레닐 또는 비닐 (-CH=CH2), 알릴 (-CH2CH=CH2) 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "알키닐"은 하나 이상의 불포화 부위, 즉 탄소-탄소, sp 삼중 결합을 갖는, 2개 내지 12개 탄소 원자)의 선형 또는 분지형 1가 탄화수소 라디칼을 나타내고, 여기서 알키닐 라디칼은 독립적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있다. 예는 에티닐 (-C≡CH), 프로피닐 (프로파르길, -CH2C≡CH) 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "카르보사이클", "카르보시클릴", "카르보시클릭 고리" 및 "시클로알킬"은 모노시클릭 고리로서 3개 내지 12개 탄소 원자를 갖거나 비시클릭 고리로서 7개 내지 12개 탄소 원자를 갖는 1가의 비방향족 포화 또는 부분 불포화 고리를 나타낸다. 7개 내지 12개 원자를 갖는 비시클릭 카르보사이클은 예를 들어 비시클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열될 수 있고, 9개 또는 10개 고리 원자를 갖는 비시클릭 카르보사이클은 비시클로 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열되거나 비시클로[2.2.1]헵탄, 비시클로[2.2.2]옥탄 및 비시클로[3.2.2]노난과 같은 브릿지된 시스템으로 배열될 수 있다. 모노시클릭 카르보사이클의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 1-시클로펜트-1-에닐, 1-시클로펜트-2-에닐, 1-시클로펜트-3-에닐, 시클로헥실, 1-시클로헥스-1-에닐, 1-시클로헥스-2-에닐, 1-시클로헥스-3-에닐, 시클로헥사디에닐, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 시클로노닐, 시클로데실, 시클로운데실, 시클로도데실 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "헤테로사이클," "헤테로시클릴" 및 "헤테로시클릭 고리"는 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는 포화 또는 부분 불포화 (즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 결합 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카르보시클릭 라디칼을 나타내며, 이 때 하나 이상의 고리 원자는 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자는 C이고, 여기서 하나 이상의 고리 원자는 독립적으로 하기 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다. 헤테로사이클은 3개 내지 7개의 고리원 (2개 내지 6개의 탄소 원자, 및 N, O, P 및 S로부터 선택된 1개 내지 4개의 헤테로원자)을 갖는 모노사이클일 수도 있고, 또는 7개 내지 10개의 고리원 (4개 내지 9개의 탄소 원자, 및 N, O, P 및 S로부터 선택된 1개 내지 6개의 헤테로원자)을 갖는 비사이클, 예를 들어 비시클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템일 수도 있다. 헤테로사이클은 문헌 [Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968)] (특히, 제1장, 제3장, 제4장, 제6장, 제7장 및 제9장), ["The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present)] (특히, 제13권, 제14권, 제16권, 제19권 및 제28권) 및 [J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566])에 기재되어 있다. 용어 "헤테로사이클"은 헤테로시클로알콕시를 포함한다. "헤테로시클릴"은 또한 헤테로사이클 라디칼이 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족의 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리에 융합된 라디칼을 포함한다. 헤테로시클릭 고리의 예는 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 디히드로푸라닐, 테트라히드로티에닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 피페리디노, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 티옥사닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티올라닐, 디히드로피라닐, 디히드로티에닐, 디히드로푸라닐, 피라졸리디닐이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자비시클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자비시클로[4.1.0]헵타닐, 아자비시클로[2.2.2]헥사닐, 3H-인돌릴 퀴놀리지닐 및 N-피리딜 우레아를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 스피로 부분 역시 본 정의의 범위 내에 포함된다. 2개의 고리 탄소 원자가 옥소 (=O) 부분으로 치환된 헤테로시클릭기의 예는 피리미디노닐 및 1,1-디옥소-티오모르폴리닐이다. 본원에서의 헤테로사이클기는 독립적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
"아릴"은 모(parent) 방향족 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 1개의 수소 원자를 제거하여 유래되는, 6개 내지 20개 탄소 원자의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 아릴은 포화, 부분 불포화 고리 또는 방향족 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 비시클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴기는 벤젠 (페닐), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 비페닐, 인데닐, 인다닐, 1,2-디히드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라히드로나프틸 등에서 유래된 라디칼을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 아릴기는 독립적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
용어 "헤테로아릴"은 5원, 6원 또는 7원 고리의 1가 방향족 라디칼을 나타내고, 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5개 내지 20개 원자의 융합된 고리 시스템 (여기서 하나 이상이 방향족임)을 포함한다. 헤테로아릴기의 예는 피리디닐 (예를 들어, 2-히드록시피리디닐 포함), 이미다졸릴, 이미다조피리디닐, 피리미디닐 (예를 들어, 4-히드록시피리미디닐 포함), 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 푸릴, 티에닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 푸리닐, 옥사디아졸릴, 트리아졸릴, 티아디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐, 및 푸로피리디닐이다. 헤테로아릴기는 독립적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 가능한 곳에서 탄소 부착 (탄소-연결)되거나, 질소 부착 (질소-연결)되거나 또는 산소 부착 (산소-연결)될 수 있다. 제한되지 않는 예로서, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5 또는 6, 푸란, 테트라히드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라히드로피롤의 위치 2, 3, 4 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4 또는 5, 이속사졸, 피라졸 또는 이소티아졸의 위치 3, 4 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8, 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8에서 결합된다.
제한되지 않는 예로서, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌 또는 이소인돌린의 위치 2, 모르폴린의 위치 4, 및 카르바졸 또는 β-카르볼린의 위치 9에서 결합된다.
"탄소 연결된 모노시클릭 헤테로아릴"은 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1개, 2개, 3개 또는 4개의 고리 헤테로원자를 함유하는 5원 또는 6원 비치환 또는 치환된 모노시클릭 헤테로아릴 라디칼을 나타낸다. 탄소 연결된 모노시클릭 헤테로아릴은 모노시클릭 헤테로아릴 R3 기의 임의의 탄소 원자에서 화학식 I에 따른 피리미딘 고리의 C-2 위치에 부착된다. 탄소 연결된 모노시클릭 헤테로아릴 라디칼은 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴, 5-이속사졸릴, 2-이미다졸릴, 4-이미다졸릴, 3-피라졸릴, 4-피라졸릴, 2-피롤릴, 3-피롤릴, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 5-티아졸릴, 3-피리다지닐, 4-피리다지닐, 5-피리다지닐, 2-피리미디닐, 5-피리미디닐, 6-피리미디닐, 2-피라지닐, 2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴, 5-옥사졸릴, 2-푸라닐, 3-푸라닐, 2-티에닐, 3-티에닐, 3-트리아졸릴, 1-트리아졸릴, 5-테트라졸릴, 1-테트라졸릴 및 2-테트라졸릴을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 탄소 연결된 모노시클릭 헤테로아릴은 독립적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 "탄소 연결된 융합된 비시클릭 C3-C20 헤테로시클릴" 및 "탄소 연결된 융합된 비시클릭 C1-C20 헤테로아릴"은 그의 방향족 특성에 의해서만 상이하며, 서로 융합된 2개의 고리를 갖는다 (즉 공동의 결합을 공유한다). 탄소 연결된 융합된 비시클릭 헤테로시클릴 및 헤테로아릴 라디칼은 융합된 비시클릭 C3-C20 헤테로시클릴 또는 융합된 비시클릭 C1-C20 헤테로아릴 기 R3 기의 임의의 탄소 원자에서 화학식 I에 따른 피리미딘 고리의 C-2 위치에 부착된다. 탄소 연결된 융합된 비시클릭 헤테로시클릴 및 헤테로아릴 라디칼은 1H-인다졸, 1H-인돌, 인돌린-2-온, 1-(인돌린-1-일)에타논, 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸, 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘, 1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘, 1H-벤조[d]이미다졸, 1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-온, 1H-피라졸로[3,4-c]피리딘, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘, 3H-이미다조[4,5-c]피리딘, 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 7H-퓨린, 1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘, 5H-피롤로[3,2-d]피리미딘, 2-아미노-1H-퓨린-6(9H)-온, 퀴놀린, 퀴나졸린, 퀴녹살린, 이소퀴놀린, 이소퀴놀린-1(2H)-온, 3,4-디히드로이소퀴놀린-1(2H)-온, 3,4-디히드로퀴놀린-2(1H)-온, 퀴나졸린-2(1H)-온, 퀴녹살린-2(1H)-온, 1,8-나프티리딘, 피리도[3,4-d]피리미딘 및 피리도[3,2-b]피라진을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 융합된 비시클릭 헤테로사이클 및 융합된 비시클릭 헤테로아릴은 독립적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 융합된 비시클릭 C4-C20 헤테로시클릴 및 융합된 비시클릭 C1-C20 헤테로아릴이 임의로 치환되는 치환기는 F, Cl, Br, I, CN, CF3, -NO2, 옥소, R10, -C(=Y)R10, -C(=Y)OR10, -C(=Y)NR10R11, -(CR14R15)nNR10R11, -(CR14R15)nOR10, -NR10R11, -NR12C(=Y)R10, -NR12C(=Y)OR11, -NR12C(=Y)NR10R11, -NR12SO2R10, =NR12, OR10, -OC(=Y)R10, -OC(=Y)OR10, -OC(=Y)NR10R11, -OS(O)2(OR10), -OP(=Y)(OR10)(OR11), -OP(OR10)(OR11), SR10, -S(O)R10, -S(O)2R10, -S(O)2NR10R11, -S(O)(OR10), -S(O)2(OR10), -SC(=Y)R10, -SC(=Y)OR10, -SC(=Y)NR10R11, C1-C12 임의로 치환된 알킬, C2-C8 임의로 치환된 알케닐, C2-C8 임의로 치환된 알키닐, C3-C12 임의로 치환된 카르보시클릴, C2-C20 임의로 치환된 헤테로시클릴, C6-C20 임의로 치환된 아릴, C1-C20 임의로 치환된 헤테로아릴, -(CR14R15)t-NR12C(=O)(CR14R15)NR10R11, 및 (CR4R5)t-NR10R11을 포함한다.
"대사물"은 명시된 화합물 또는 그의 염의 신체내 대사를 통해 생성된 생성물이다. 화합물의 대사물은 당업계에 공지된 통상적인 기술을 이용하여 확인할 수 있고, 이것의 활성은 본원에 기재된 바와 같은 시험을 이용하여 결정될 수 있다. 이러한 생성물은 예를 들어 투여된 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 탈아미드화, 에스테르화, 탈에스테르화, 효소적 절단 등으로 생성될 수 있다. 따라서, 본 발명은, 본 발명의 화합물을 그의 대사 산물 생성에 충분한 시간 동안 포유동물과 접촉시키는 것을 포함하는 공정에 의해 생성된 화합물을 포함하는, 본 발명의 화합물의 대사물을 포함한다.
용어 "포장 삽입물"은 치료 제품의 시판되는 포장물 내에 통상적으로 포함되어 있으며 이러한 치료 제품의 사용에 관한 적응증, 사용법, 용량, 투여, 금기 사항 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 지침서를 나타내는데 사용된다.
본원에 사용된 어구 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 유기 또는 무기 염을 나타낸다. 예시적 염은 술페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 니트레이트, 비술페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 젠티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트 "메실레이트", 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 및 파모에이트 (즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-히드록시-3-나프토에이트)) 염을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 제약상 허용되는 염은 또 다른 분자, 예컨대 아세테이트 이온, 숙시네이트 이온 또는 다른 반대이온의 내포를 포함할 수 있다. 반대이온은 모 화합물의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 잔기일 수 있다. 추가로, 제약상 허용되는 염은 그의 구조 내에 1개 초과의 하전된 원자를 가질 수 있다. 여러 개의 하전된 원자가 제약상 허용되는 염의 일부인 경우에는 다수 개의 반대이온을 가질 수 있다. 따라서, 제약상 허용되는 염은 하나 이상의 하전된 원자 및/또는 하나 이상의 반대이온을 가질 수 있다.
본 발명의 화합물이 염기인 경우, 원하는 제약상 허용되는 염은 당업계에서 이용가능한 임의의 적합한 방법, 예를 들어 유리 염기를 무기 산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 메탄술폰산, 인산 등으로 처리하거나 또는 유기 산, 예를 들어 아세트산, 말레산, 숙신산, 만델산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 피라노시딜산, 예컨대 글루쿠론산 또는 갈락투론산, 알파 히드록시산, 예를 들어 시트르산 또는 타르타르산, 아미노산, 예를 들어 아스파르트산 또는 글루탐산, 방향족 산, 예컨대 벤조산 또는 신남산, 술폰산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산 또는 에탄술폰산 등으로 처리하여 제조될 수 있다. 염기성 제약 화합물로부터 제약상 유용하거나 허용되는 염을 형성시키는 데에 적합한 것으로 일반적으로 간주되는 산은, 예를 들어 문헌 [P. Stahl et al., Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH]; [S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1 19]; [P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 217]; [Anderson et al., The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton PA]; 및 [The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C.] (이들의 웹사이트)에 논의되어 있다. 이들 개시내용은 본원에 참고로 도입된다.
본 발명의 화합물이 산인 경우, 원하는 제약상 허용되는 염은 임의의 적합한 방법, 예를 들어 유리 산을 무기 또는 유기 염기, 예를 들어 아민 (1급, 2급 또는 3급), 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리성 토금속 수산화물 등으로 처리하여 제조될 수 있다. 적합한 염의 설명적 예는 아미노산, 예컨대 글리신 및 아르기닌, 암모니아, 1급, 2급 및 3급 아민, 및 시클릭 아민, 예컨대 피페리딘, 모르폴린 및 피페라진으로부터 유래된 유기 염; 및 나트륨, 칼슘, 칼륨, 마그네슘, 망간, 철, 구리, 아연, 알루미늄 및 리튬으로부터 유래된 무기 염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
어구 "제약상 허용되는"은, 해당 물질 또는 조성물이 제제에 포함된 다른 성분들 및/또는 이것으로 치료할 포유동물과 화학적 및/또는 독성학적으로 상용가능해야 한다는 것을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "상승작용적"은 둘 이상의 단일 작용제의 부가 효과 보다 더 유효한 치료적 조합을 나타낸다. 화학식 I 화합물 및 하나 이상의 화학요법제 사이의 상승작용적 상호작용의 결정은 본원에 기재된 검정들로부터 수득한 결과에 기초할 수 있다. 이들 검정 결과는 조합 지수를 수득하기 위하여 CalcuSyn 소프트웨어를 이용한 용량-효과 분석 및 슈(Chou) 및 탈라레이(Talalay) 조합 방법을 이용하여 분석한다 (문헌 [Chou and Talalay, Trends Pharmacol. Sci. 4:450-454]; [Chou, T.C. (2006) Pharmacological Reviews 68(3):621-681]; [Chou and Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55]). 본 발명에 의해 제공된 조합물은 몇 가지 검정 시스템에서 평가할 수 있었고, 그 데이터는 항암제들 간의 상승 효과, 부가 효과 및 길항 작용을 정량화하기 위한 표준 프로그램을 활용하여 분석할 수 있다. 활용되고 있는 예시 프로그램은 문헌 [Chou and Talalay, in "New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy," Academic Press, 1987, Chapter 2]에 기재되어 있다. 조합 지수 값이 0.8 미만이라는 것은 상승작용을 나타내고, 1.2 초과 값은 길항 작용을 나타내며, 0.8 내지 1.2 값은 부가성 효과를 나타낸다. 조합 요법은 "상승작용"을 제공하여 "상승작용적" 효과를 제공할 수 있으며, 즉 활성 성분들을 함께 사용할 경우 화합물을 별도로 사용하여 얻는 효과의 합보다 더 큰 효과를 달성하게 된다. 상승작용적 효과는 (1) 활성 성분들이 동시 제제화되어 투여되거나 조합된 단위 투여 제제 중에서 동시에 전달되는 경우, (2) 활성 성분들이 별도의 제제로서 교대로 전달되거나 병행하여 전달되는 경우, 또는 (3) 활성 성분들이 일부 다른 요법으로 전달되는 경우에 달성될 수 있다. 교대 요법으로 전달한 경우에는, 화합물을, 예를 들어 별도의 주사기로 상이한 주사제에 의해 순차적으로 투여 또는 전달한 경우에 상승적 효과를 수득할 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안에는 유효 투여량의 각각의 활성 성분이 순차적으로, 즉 연속적으로 투여되지만, 조합 요법에서는 유효 투여량의 2종 이상의 활성 성분이 함께 투여된다.
본원에 사용된 "담체"는 사용되는 투여량 및 농도에서 그에 노출되는 세포 또는 포유동물에게 비독성인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제를 포함한다. 종종, 생리학상 허용되는 담체는 수성 pH 완충 용액이다. 생리학상 허용되는 담체의 예는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산; 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이팅제, 예컨대 EDTA; 당 알콜, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈?, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 플루로닉스(PLURONICS)?를 포함한다.
용어 "치료 유효량"은 대상 또는 포유동물에서 질환 또는 장애를 "치료"하는데 효과적인 치료 조합물의 양을 나타낸다. 암의 경우, 치료 유효량의 길항제는 암 세포의 수 감소, 종양 크기의 감소, 말초 장기로의 암 세포 침윤의 억제 (즉, 어느 정도 지연시키며, 바람직하게는 중지시킴), 종양 전이의 억제 (즉, 어느 정도 지연시키며, 바람직하게는 중지시킴), 종양 성장의 어느 정도의 억제, 및/또는 암과 관련이 있는 하나 이상의 증상의 어느 정도의 경감을 유도할 수 있다. "치료"의 본원에서의 정의를 참조한다. 길항제가 기존 암 세포의 성장을 예방하고/거나 기존 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도라면, 이것은 세포증식 억제성 및/또는 세포독성일 수 있다.
치료 조합물의 "성장 억제량"은 시험관내 또는 생체내에서 세포, 특히 종양, 예를 들어 암 세포의 성장을 억제할 수 있는 양이다. 신생물성 세포 성장을 억제하기 위한 치료 조합물의 "성장 억제량"은 경험적으로 및 통상적 방식으로 결정될 수 있다.
치료 조합물의 "세포독성량"은 시험관내 또는 생체내에서 세포, 특히 종양 세포, 예를 들어, 암 세포의 파괴를 야기할 수 있는 양이다.
용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 세포 증식의 비정상적인 증가, 세포 사멸의 비정상적인 감소 또는 세포 증식 및 세포 사멸의 양의 불균형 때문일 수 있는, 세포 수 (일반적으로 본원에서 세포 성장으로 언급됨)의 조절되지 않은 증가를 특징으로 하는, 포유동물에서의 생리적 상태를 나타내거나 또는 기재한다. 암의 예는 조혈계 암 또는 혈액-관련 암, 예를 들어 림프종, 백혈병, 골수종 또는 림프양 악성종양, 및 비장암, 및 림프절의 암을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "과다증식성"은 어느 정도의 비정상적인 세포 증식과 관련된 장애를 나타낸다. 한 실시양태에서, 과다증식성 장애는 암이다.
본원에 사용된 "종양"은 모든 신생물성 세포 성장 및 증식 (악성 또는 양성 여부와 상관 없음), 및 모든 전-암성 및 암성 세포 및 조직을 나타낸다. 용어 "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에 언급된 바와 같이 상호 배타적이지 않다.
본원에 사용된 용어 "비호지킨 림프종" 또는 "NHL"은 호지킨 림프종 이외의 림프계 암을 나타낸다. 호지킨 림프종은 일반적으로, 리드-슈테른베르크 (Reed-Sternberg) 세포가 호지킨 림프종에는 존재하고 비호지킨 림프종에는 존재하지 않는 것으로써, 비호지킨 림프종과 구별될 수 있다. 본원에 사용되는 용어에 포함되는 비호지킨 림프종의 예는 문헌 [Color Atlas of Clinical Hematology, Third Edition; A. Victor Hoffbrand and John E. Pettit (eds.) (Harcourt Publishers Limited 2000)] (구체적으로, 도 11.57, 11.58 및/또는 11.59 참조)에 기재된 개정된 유럽-미국 림프종 (REAL) 분류법과 같은 당분야에 공지된 분류법에 따라 당업자 (예를 들어, 종양학자 또는 병리학자)에 의해 확인된 임의의 림프종을 포함한다. 보다 구체적인 예는 재발성 또는 불응성 NHL, 전선 저도 NHL, 제III/IV기 NHL, 화학요법 내성 NHL, 전구체 B 림프모세포성 백혈병 및/또는 림프종, 소림프구성 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병 및/또는 전림프구성 백혈병 및/또는 소림프구성 림프종, 조혈 전림프구성 림프종, 면역종 및/또는 림프형질세포성 림프종, 변연대 B 세포 림프종, 비장 변연대 림프종, 림프절외 변연대-MALT 림프종, 결절 변연대 림프종, 모발 세포 백혈병, 형질세포종 및/또는 형질 세포 골수종, 저도/여포성 림프종, 중등도/여포성 NHL, 외투 세포 림프종, 여포 중심 림프종 (여포성), 중등도 미만성 NHL, 미만성 거대 조혈 림프종, 침습 NHL (침습 전선 NHL 및 침습 재발성 NHL 포함), 자가 줄기 세포 이식후 재발하거나 또는 이에 대해 불응성인 NHL, 원발성 종격 거대 조혈 림프종, 원발성 삼출성 림프종, 고도 면역모세포성 NHL, 고도 림프모세포성 NHL, 고도 소형 비분할 세포 NHL, 거대 질환 NHL, 버킷 림프종, 전구체 (말초) T-세포 림프모세포성 백혈병 및/또는 림프종, 성인 T-세포 림프종 및/또는 백혈병, T 세포 만성 림프구성 백혈병 및/또는 전림프구성 백혈병, 거대 과립 림프구성 백혈병, 균상 식육종 및/또는 세자리 증후군, 림프절외 자연 살해세포/T-세포 (비형태) 림프종, 장병증형 T-세포 림프종, 간비장 T-세포 림프종, 피하 지방층염 유사 T-세포 림프종, 피부 (피부(cutaneous)) 림프종, 역형성 거대 세포 림프종, 혈관중심성 림프종, 장 T 세포 림프종, 말초 T-세포 (달리 특정되지 않음) 림프종 및 혈관면역모세포성 T-세포 림프종을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
따라서 비호지킨 림프종은 조혈 림프종, B 세포 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 소림프구성 림프종, 악성 림프종, 악성 T 세포 림프종, 역형성 거대 세포 림프종 및 점막 관련 림프양 조직 림프종을 포함한다.
화학식 I 화합물
본 발명은 하기 구조식을 갖는 화학식 I 화합물 또는 그의 입체이성질체, 기하 이성질체, 호변이성질체 또는 제약상 허용되는 염을 포함하는 치료 조합물을 포함한다.
<화학식 I>
Figure 112011079192510-pct00008
상기 식에서,
R1은 H, F, Cl, Br, I, CN, -(CR14R15)mNR10R11, -C(R14R15)nNR12C(=Y)R10, -(CR14R15)nNR12S(O)2R10, -(CR14R15)mOR10, -(CR14R15)nS(O)2R10, -(CR14R15)nS(O)2NR10R11, -C(OR10)R11R14, -C(=Y)R10, -C(=Y)OR10, -C(=Y)NR10R11, -C(=Y)NR12OR10, -C(=O)NR12S(O)2R10, -C(=O)NR12(CR14R15)mNR10R11, -NO2, -NR12C(=Y)R11, -NR12C(=Y)OR11, -NR12C(=Y)NR10R11, -NR12S(O)2R10, -NR12SO2NR10R11, -SR10, -S(O)2R10, -S(O)2NR10R11, -SC(=Y)R10, -SC(=Y)OR10, C1-C12 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C12 카르보시클릴, C2-C20 헤테로시클릴, C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로부터 선택되고;
R2는 H, F, Cl, Br, I, CN, CF3, -NO2, -C(=Y)R10, -C(=Y)OR10, -C(=Y)NR10R11, -(CR14R15)mNR10R11, -(CR14R15)nOR10, -(CR14R15)t-NR12C(=O)(CR14R15)NR10R11, -NR12C(=Y)R10, -NR12C(=Y)OR10, -NR12C(=Y)NR10R11, -NR12SO2R10, OR10, -OC(=Y)R10, -OC(=Y)OR10, -OC(=Y)NR10R11, -OS(O)2(OR10), -OP(=Y)(OR10)(OR11), -OP(OR10)(OR11), SR10, -S(O)R10, -S(O)2R10, -S(O)2NR10R11, -S(O)(OR10), -S(O)2(OR10), -SC(=Y)R10, -SC(=Y)OR10, -SC(=Y)NR10R11, C1-C12 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C12 카르보시클릴, C2-C20 헤테로시클릴, C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로부터 선택되고;
R3은 탄소 연결된 모노시클릭 헤테로아릴, 탄소 연결된 융합된 비시클릭 C3-C20 헤테로시클릴 또는 탄소 연결된 융합된 비시클릭 C1-C20 헤테로아릴이고, 여기서 모노시클릭 헤테로아릴, 융합된 비시클릭 C3-C20 헤테로시클릴, 및 융합된 비시클릭 C1-C20 헤테로아릴은 F, Cl, Br, I, -CN, -NR10R11, -OR10, -C(O)R10, -NR10C(O)R11, -N(C(O)R11)2, -NR10C(O)NR10R11, -NR12S(O)2R10, -C(=O)OR10, -C(=O)NR10R11, C1-C12 알킬 및 (C1-C12 알킬)-OR10으로부터 선택된 하나 이상의 기로 임의로 치환되고;
R10, R11 및 R12는 독립적으로 H, C1-C12 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C12 카르보시클릴, C2-C20 헤테로시클릴, C6-C20 아릴 또는 C1-C20 헤테로아릴이거나, 또는
R10 및 R11은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께, 옥소, (CH2)mOR12, NR12R12, CF3, F, Cl, Br, I, SO2R12, C(=O)R12, NR12C(=Y)R12, NR12S(O)2R12, C(=Y)NR12R12, C1-C12 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C12 카르보시클릴, C2-C20 헤테로시클릴, C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 임의로 치환된 C2-C20 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
R14 및 R15는 H, C1-C12 알킬 또는 -(CH2)n-아릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는
R14 및 R15는 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 C3-C12 카르보시클릭 고리를 형성하고;
여기서 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 F, Cl, Br, I, CN, CF3, -NO2, 옥소, R10, -C(=Y)R10, -C(=Y)OR10, -C(=Y)NR10R11, -(CR14R15)nNR10R11, -(CR14R15)nOR10, -NR10R11, -NR12C(=Y)R10, -NR12C(=Y)OR11, -NR12C(=Y)NR10R11, -(CR14R15)mNR12SO2R10, =NR12, OR10, -OC(=Y)R10, -OC(=Y)OR10, -OC(=Y)NR10R11, -OS(O)2(OR10), -OP(=Y)(OR10)(OR11), -OP(OR10)(OR11), -SR10, -S(O)R10, -S(O)2R10, -S(O)2NR10R11, -S(O)(OR10), -S(O)2(OR10), -SC(=Y)R10, -SC(=Y)OR10, -SC(=Y)NR10R11, C1-C12 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C12 카르보시클릴, C2-C20 헤테로시클릴, C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 임의로 치환되고;
Y는 O, S 또는 NR12이고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
n은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
화학식 I 화합물의 예시적 실시양태는 R1이 -(CR14R15)mNR10R11이고, 여기서 m은 1이고, R10 및 R11이 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 임의로 치환된 C3-C20 헤테로시클릭 고리를 형성하는 것을 포함한다. C3-C20 헤테로시클릭 고리는 NR10R11, CF3, F, Cl, Br, I, SO2R10, C(=O)R10, NR12C(=Y)R11, NR12S(O)2R11, C(=Y)NR10R11 및 C1-C12 알킬로부터 선택된 하나 이상의 기로 임의로 치환된 피페라지닐일 수 있다.
화학식 I 화합물의 예시적 실시양태는 R1이 H가 아닌 것을 포함한다.
화학식 I 화합물의 예시적 실시양태는 R2가 H, CH3, C3-C12 카르보시클릴, C2-C20 헤테로시클릴, C6-C20 아릴 또는 C1-C20 헤테로아릴인 것을 포함한다. C1-C20 헤테로아릴은 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴, 5-이속사졸릴, 2-이미다졸릴, 4-이미다졸릴, 3-피라졸릴, 4-피라졸릴, 2-피롤릴, 3-피롤릴, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 5-티아졸릴, 3-피리다지닐, 4-피리다지닐, 5-피리다지닐, 2-피리미디닐, 5-피리미디닐, 6-피리미디닐, 2-피라지닐, 2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴, 5-옥사졸릴, 2-푸라닐, 3-푸라닐, 2-티에닐, 3-티에닐, 3-트리아졸릴, 1-트리아졸릴, 5-테트라졸릴, 1-테트라졸릴 및 2-테트라졸릴로부터 선택된 모노시클릭 헤테로아릴 기일 수 있다.
화학식 I 화합물의 예시적 실시양태는 R3이 2-아미노피리미딘-5-일인 것을 포함한다.
화학식 I 화합물의 예시적 실시양태는 R3이 1H-인다졸, 1H-인돌, 인돌린-2-온, 1-(인돌린-1-일)에타논, 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸, 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘, 1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘, 1H-벤조[d]이미다졸, 1H-벤조[d]이미다졸-2(3H)-온, 1H-피라졸로[3,4-c]피리딘, 1H-피롤로[2,3-c]피리딘, 3H-이미다조[4,5-c]피리딘, 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘, 7H-퓨린, 1H-피라졸로[4,3-d]피리미딘, 5H-피롤로[3,2-d]피리미딘, 2-아미노-1H-퓨린-6(9H)-온, 퀴놀린, 퀴나졸린, 퀴녹살린, 이소퀴놀린, 이소퀴놀린-1(2H)-온, 3,4-디히드로이소퀴놀린-1(2H)-온, 3,4-디히드로퀴놀린-2(1H)-온, 퀴나졸린-2(1H)-온, 퀴녹살린-2(1H)-온, 1,8-나프티리딘, 피리도[3,4-d]피리미딘 및 피리도[3,2-b]피라진으로부터 선택된 비시클릭 헤테로아릴 기인 것을 포함한다.
화학식 I 화합물의 예시적 실시양태는 R3이 1H-인다졸-4-일인 것을 포함한다.
예시적 화학식 I 화합물은 4-(2-(1H-인다졸-4-일)-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린으로 명명되고; CAS 등록 번호 957054-30-7로 등록되어 있고; US 2008/0076768에서 기재 및 청구하고 있고; 문헌 [Folkes et al. (2008) Jour. of Med. Chem. 51(18):5522-5532]; [Belvin et al., American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 15, Abstract 4004]; [Folkes et al., American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-146]; [Friedman et al., American Association for Cancer Research Annual Meeting 2008, 99th:April 14, Abstract LB-110]에 개시되어 있고, 화학식 Ia를 갖는다.
<화학식 Ia>
Figure 112011079192510-pct00009
또 다른 예시적 화학식 I 화합물은 (S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온으로 명명되고; US 2008/0242665에서 개시 및 청구하고 있고; 화학식 Ib를 갖는다.
<화학식 Ib>
Figure 112011079192510-pct00010
화학식 I 화합물의 제조
화학식 I 화합물은 화학 분야에서 잘 알려진 것과 유사한 과정을 포함하는 합성 경로에 의해 합성될 수 있다. 출발 물질은 일반적으로 알드리치 케미칼스(Aldrich Chemicals; 미국 위스콘신주 밀워키)와 같은 상업적 공급원으로부터 이용가능하거나 또는 당업자에게 잘 알려진 방법을 이용하여 용이하게 제조된다 (예를 들어, 문헌 [Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, N.Y. (1967-1999 ed.)] 또는 [Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin] (보충물 포함) (또한 바일스타인(Beilstein) 온라인 데이터베이스를 통해 이용가능함)에 일반적으로 기재된 방법에 의해 제조됨).
화학식 I 화합물은 다른 티오펜 및 피리미딘 (US 6608053; US 6492383; US 6232320; US 6187777; US 3763156; US 3661908; US 3475429; US 5075305; US 2003/220365; GB 1393161; WO 93/13664); 및 다른 헤테로사이클 (문헌 [Comprehensive Heterocyclic Chemistry, Editors Katritzky and Rees, Pergamon Press, 1984]에 기재됨)을 제조하기 위한 절차를 이용하여 제조될 수 있다.
화학식 I 화합물은 제약상 허용되는 염으로 전환될 수 있고, 염은 통상적인 방법에 의해 유리 염기 화합물로 전환될 수 있다. 화학식 I 화합물은 바람직한 특성, 예컨대 용해도, 용해, 흡습성 및 약동학에 따라 유리 염기로서 또는 제약상 허용되는 염으로서 치료상 유효할 수 있다. 제약상 허용되는 염의 예는 무기 산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산 및 인산; 및 유기 산, 예컨대 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 에탄술폰산, 아스파르트산 및 글루탐산과의 염을 포함한다. 염은 메실레이트, 히드로클로라이드, 포스페이트, 벤젠술포네이트 또는 술페이트일 수 있다. 염은 모노-염 또는 비스-염일 수 있다. 예를 들어, 메실레이트 염은 모노-메실레이트 또는 비스-메실레이트일 수 있다.
화학식 I 화합물 및 염은 또한 수화물 또는 용매화물로 존재할 수 있다.
화학식 I 화합물의 제조에서 중간체의 관능기 (예를 들어, 1급 또는 2급 아민)를 보호할 필요가 있을 수 있다. 이러한 보호의 필요성은 멀리 있는 관능기의 성질 및 제조 방법의 조건에 따라 달라질 것이다. 적합한 아미노-보호기는 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카르보닐 (BOC), 벤질옥시카르보닐 (CBz) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카르보닐 (Fmoc)을 포함한다. 이러한 보호의 필요성은 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 보호기 및 그의 사용에 대한 일반적인 설명에 대해서는 문헌 [T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조한다.
예시의 목적으로, 반응식 1 내지 7은 본 발명의 화합물 및 주요 중간체를 제조하는 일반적인 방법을 도시한다. 개개의 반응 단계의 보다 상세한 설명에 대해서는 하기 실시예 섹션을 참조한다. 당업자는 다른 합성 경로를 이용하여 본 발명의 화합물을 합성할 수 있다는 것을 알 것이다. 구체적인 출발 물질 및 시약이 반응식에 도시되고 하기 논의되어 있지만, 다른 출발 물질 및 시약으로 쉽게 대체하여 각종 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수 있다. 추가로, 하기 방법으로 제조된 많은 화합물들이 당업자에게 공지된 통상적인 화학을 이용하여 본 개시내용에 비추어 추가로 변형될 수 있다.
<반응식 1>
Figure 112011079192510-pct00011
반응식 1은 2-카르복시에스테르, 3-아미노 티오펜 시약 51로부터 티에노피리미딘 중간체 53의 제조를 위한 일반적인 방법을 보여주며, 여기서 Hal은 Cl, Br 또는 I이고; R1, R2 및 R10은 화학식 I 화합물, 또는 그에 대한 전구체 또는 전구약물에 대해 정의된 바와 같다.
<반응식 2>
Figure 112011079192510-pct00012
반응식 2는 유기 용매 중에서 염기성 조건하에 비스-할로 티에노피리미딘 중간체 54로부터의 4-할라이드를 모르폴린으로 선택적으로 교체하여 2-할로, 4-모르폴리노 티에노피리미딘 화합물 55를 제조하기 위한 일반적인 방법을 보여주며, 여기서 Hal은 Cl, Br 또는 I이고; R1 및 R2는 화학식 I 화합물, 또는 그에 대한 전구체 또는 전구약물에 대해 정의된 바와 같다.
<반응식 3>
Figure 112011079192510-pct00013
반응식 3은 R1이 H인 2-할로, 4-모르폴리노, 6-수소 티에노피리미딘 화합물 56의 6-위치를 유도체화하기 위한 일반적인 방법을 보여준다. 리튬화 시약으로 화합물 56을 처리하여 6 위치 양성자를 제거한 후에 Z가 이탈기, 예컨대 할라이드, NHS 에스테르, 카르복실레이트 또는 디알킬아미노인 아실화 시약 R10C(O)Z를 첨가하여, 2-할로, 4-모르폴리노, 6-아실 티에노피리미딘 화합물 57을 수득하며, 여기서 Hal은 Cl, Br 또는 I이고, R2 및 R10은 화학식 I 화합물, 또는 그에 대한 전구체 또는 전구약물에 대해 정의된 바와 같다. 6-포르밀 화합물 (R10 = H)을 제조하기 위한 R10C(O)Z의 예는 N,N'-디메틸포름아미드 (DMF)이다.
<반응식 4>
Figure 112011079192510-pct00014
반응식 4는 2-할로 피리미딘 중간체 58을 모노시클릭 헤테로아릴, 융합된 비시클릭 헤테로시클릴 또는 융합된 비시클릭 헤테로아릴 보로네이트 산 (R15 = H) 또는 에스테르 (R15 = 알킬) 시약과 스즈끼-유형 커플링시켜 화학식 I의 2-치환된 (Hy), 4-모르폴리노 티에노피리미딘 화합물 59를 제조하기 위한 일반적인 방법을 보여주며, 여기서 Hal은 Cl, Br 또는 I이고; R1 및 R2는 화학식 I 화합물, 또는 그에 대한 전구체 또는 전구약물에 대해 정의된 바와 같다. 스즈끼 반응에 대한 검토를 위해 문헌 [Miyaura et al. (1995) Chem. Rev. 95:2457-2483]; [Suzuki, A. (1999) J. Organomet. Chem. 576:147-168]; [Suzuki, A. in Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions, Diederich, F., Stang, P.J., Eds., VCH, Weinheim, DE (1998), pp 49-97]을 참조한다. 팔라듐 촉매는 스즈끼-유형 교차-커플링에 통상적으로 사용되는 임의의 것, 예컨대 PdCl2(PPh3)2, Pd(PPh3)4, Pd(OAc)2, PdCl2(dppf)-DCM, Pd2(dba)3(Pt-Bu)3일 수 있다 (문헌 [Owens et al. (2003) Bioorganic & Med. Chem. Letters 13:4143-4145]; [Molander et al. (2002) Organic Letters 4(11):1867-1870]; US 6448433).
<반응식 5>
Figure 112011079192510-pct00015
반응식 5는 화합물 63의 알키닐화된 유도체를 제조하는데 사용될 수 있는, 알킨 61의 합성을 위한 일반적인 방법을 보여준다. 프로파르길 아민 61은 프로파르길 브로마이드 60을 적절한 염기 (Cs2CO3 등)의 존재하에 화학식 R10R11NH (여기서, R10 및 R11은 H, 알킬, 아릴 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R10 및 R11은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성함)의 아민과 반응시켜 제조할 수 있다. 알키닐 아민 및 관련 합성의 검토를 위해 문헌 [Booker-Milburn, K.I., Comprehensive Organic Functional Group Transformations (1995), 2:1039-1074]; 및 [Viehe, H.G., (1967) Angew. Chem., Int. Ed. Eng., 6(9):767-778]을 참조한다. 알킨 61은 이후에 소노가시라(Sonogashira) 커플링을 통해 중간체 62 (X2 = 브로모 또는 요오도)와 반응하여 화합물 63을 제공할 수 있으며, 여기서 R2 및 R3은 화학식 I 화합물, 또는 그에 대한 전구체 또는 전구약물에 대해 정의된 바와 같다.
<반응식 6>
Figure 112011079192510-pct00016
반응식 6은 화합물 66의 알키닐화된 유도체를 제조하는데 사용될 수 있는, 알킨 65의 합성을 위한 일반적인 방법을 보여준다. gem-디알킬 프로파르길 아민 65는 문헌 [Zaragoza et al. (2004) J. Med. Chem., 47:2833]에 기재된 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 반응식 6에 따라, gem-디알킬 클로라이드 64 (R14 및 R15는 독립적으로 메틸, 에틸 또는 다른 알킬 기임)는 CuCl 및 적절한 염기 (예를 들어, TEA 등)의 존재하에 화학식 R10R11NH (여기서, R10 및 R11은 H, 알킬, 아릴 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R10 및 R11은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성함)의 아민과 반응하여 알킨 65를 제공할 수 있다. 알킨 65는 중간체 62와 (소노가시라 커플링을 통해) 반응하여 화합물 66을 제공할 수 있으며, 여기서 R2 및 R3은 화학식 I 화합물, 또는 그에 대한 전구체 또는 전구약물에 대해 정의된 바와 같다.
<반응식 7>
Figure 112011079192510-pct00017
반응식 7은 화합물 69의 알키닐화된 유도체를 제조하는데 사용될 수 있는, 알킨 68의 합성을 위한 일반적인 반응식을 보여준다. but-3-인-1-아민 68 (여기서, R14 및 R15는 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 헤테로아릴이거나, 또는 R14 및 R15는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리를 형성함)은 문헌 [Olomucki M. et al. (1960) Ann. Chim. 5:845]에 기재된 프로토콜을 이용하여 알킨 67 (LG = 토실레이트 또는 다른 이탈기)을 화학식 R10R11NH (여기서, R10 및 R11은 H, 알킬, 아릴 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 R10 및 R11은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성함)의 아민과 반응시켜 제조될 수 있다. 알킨 68은 이후에 각각 반응식 5 및 6에서 제공된 설명에 따라 소노가시라 커플링을 통해 중간체 62와 반응하여 화합물 69를 제공할 있으며, 여기서 R2 및 R3은 화학식 I 화합물, 또는 그에 대한 전구체 또는 전구약물에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 I의 티에노피리미딘 화합물의 제약상 허용되는 염은 통상적인 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 전형적으로, 과정은 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 티에노피리미딘을 적합한 용매 중에서 적합한 산으로 처리하는 것을 포함한다.
상기에 정의된 바와 같은 본 발명의 과정에서, 아미노화 단계 및 Pd-매개 교차-커플링 단계 모두는 통상적인 조건하에 일어난다. 팔라듐 촉매는 스즈끼-유형 교차-커플링을 위해 전형적으로 사용되는 임의의 것, 예컨대 PdCl2(PPh3)2일 수 있다. 환원제는 전형적으로 보로히드라이드, 예컨대 NaBH(OAc)3, NaBH4 또는 NaCNBH4이다.
화학요법제
특정 화학요법제는 시험관내 및 생체내에서 세포 증식을 억제하는데 있어 화학식 I 화합물과 함께 놀랍고 예상하지 못한 특성을 입증하였다. 이러한 화학요법제는 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈을 포함한다.
덱사메타손은 소염 및 면역억제 활성을 갖는, 강력한 글루코코르티코이드 스테로이드 호르몬이다. 종양학에서, 덱사메타손은 그의 항종양 치료의 특정 부작용을 방해하기 위해, 화학요법을 받는 암 환자에게 제공된다. 덱사메타손은 온단세트론과 같이 5-HT3 수용체 길항제의 항구토제 효과를 증가시킬 수 있다. 덱사메타손은 또한 특정 혈액 악성종양, 특히 다발성 골수종의 치료에 사용되고, 여기서 덱사메타손은 단독으로 또는 탈리도미드와 함께 (thal-dex) 또는 아드리아마이신 (독소루비신)과 빈크리스틴의 조합 (VAD)과 함께 제공된다. 뇌 종양 (원발성 또는 전이성)에서, 덱사메타손은 결과적으로 다른 뇌 구조를 압박할 수 있는 부종의 발생을 방해하는데 사용된다. 덱사메타손은 (8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-플루오로-11,17-디히드록시-17-(2-히드록시아세틸)-10,13,16-트리메틸-6,7,8,11,12,14,15,16-옥타히드로시클로펜타[a]페난트렌-3-온 (CAS 등록 번호 50-02-2)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00018
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티오테파 (테스파, 티오포스포아미드, 테스파민, tspa, 티포실, 티오플렉스(THIOPLEX)?)는 유방암, 난소암 및 방광암을 치료하는데 사용되는 알킬화 화학요법제이다 (문헌 [Maanen et al. (2000) Cancer Treat Rev 26(4):257-68]; US 2670347). 이는 또한 골수 이식을 위한 검사로 사용된다. 티오테파는 N,N',N'-트리에틸렌티오포스포르아미드, 포스피노티오일리딘트리스아지리딘 또는 1,1',1"-포스포로티오일트리아지리딘 (CAS 등록 번호 52-24-4)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00019
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독소루비신 (아드리아마이신?, 히드록실다우노루비신)은 1960년대 이후로 화학요법에 널리 사용된 DNA-상호작용 약물이다. 이는 안트라시클린 항생제이고, 또한 DNA를 인터칼레이팅하는 다우노마이신과 구조적으로 관련된다. 독소루비신은 통상적으로 넓은 범위의 암의 치료에 사용된다. 독소루비신은 (8S,10S)-10-(4-아미노-5-히드록시-6-메틸-테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)-6,8,11-트리히드록시-8-(2-히드록시아세틸)-1-메톡시-7,8,9,10-테트라히드로테트라센-5,12-디온 (CAS 등록 번호 23214-92-8)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00020
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빈크리스틴 (22-옥소빈카류코블라스틴; 류로크리스틴, VCR, LCR 술페이트 형태: 빈크리스틴 술페이트, 키오크리스틴, 온코빈(ONCOVIN)? (릴리), 빈코시드, 빈크렉스)은 마다가스카르 페리윙클 카타란투스 로세우스 (Madagascar periwinkle Catharanthus roseus)로부터의 빈카 알칼로이드 (이전에 빈카 로지아)이다 (문헌 [Johnson et al. (1963) Cancer Res. 23:1390-1427]; [Neuss et al. (1964) J. Am. Chem. Soc. 86:1440]). 반합성 유도체, 빈데신 및 비노렐빈 (나벨빈?)과 함께, 빈크리스틴은 튜불린에 결합하고, 세포가 분열하는 염색체를 이동시키는데 필요한 스핀들을 세포가 만들지 못하도록 하여 중기에서 유사분열을 억제한다. 빈크리스틴은 백혈병, 림프종, 유방암 및 폐암을 비롯하여 일부 유형의 암을 위한 치료제로 제공된 화학요법 약물이다. 빈크리스틴 (류로크리스틴, VCR)은 소아 백혈병 및 비호지킨 림프종을 치료하는데 가장 효과적이고, 여기서 빈블라스틴 (빈카류코블라스틴, VLB)은 호지킨 질환을 치료하는데 사용된다. 빈크리스틴 (CAS 번호 57-22-7)은 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00021
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리툭시맙 (리툭산?, 제넨테크/바이오겐 이덱; 마브테라(MABTHERA)?, 로쉐, 레디툭스(REDITUX)?, CAS 등록 번호 174722-31-7)은 CD20 항원에 대항하여 지시된 유전자 조작된 키메라 뮤린/인간 모노클로날 항체이다. 리툭시맙은 US 5736137에서 "C2B8"로 불리는 항체이다. 리툭시맙은 재발성 또는 불응성 저도 또는 여포성, CD20-양성, B-세포 NHL을 갖는 환자의 치료를 위해 지시된다. 리툭시맙은 세포 표면 CD-20에 결합하고, B-세포 고갈을 초래한다 (문헌 [Cartron et al. (2002) Blood 99: 754-758]; [Idusogie et al. (2000) J. Immunol. 164: 4178-4184]; [Grillo-Lopez AJ, et al. (1999) Semin Oncol; 26:66-73]; US 5736137]). 리툭산 (US 5677180; US 5736137)은 조혈 악성종양에서 가장 널리 사용되는 모노클로날 항체이고, 광범위한 임상 실시에서 확립되었다. 리툭산은 재발성 또는 불응성, 저도 또는 여포성, CD20-양성, B-세포 비호지킨 림프종 (NHL)의 치료를 위해 1997년에 처음 FDA 승인을 받았다. 이는 또한 1998년 6월에 상표명 마브테라?로 유럽 연합의 승인을 받았다. 2006년 2월에, 리툭산은 또한 하나 이상의 TNF 길항제 요법에 부적절한 반응을 나타낸 중간-내지-중증-활성 류마티스 관절염을 갖는 성인 환자에서 징후 및 증상을 감소시키기 위해 메토트렉세이트와 함께 FDA 승인을 받았다. 리툭시맙 항체 (또한 C2B8로 명명됨)의 아미노산 서열 및 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 재조합 발현을 통한 그의 생산을 위한 예시적 방법은 미국 특허 제5736137호에 개시되어 있다.
시클로포스파미드 (시톡산, 네오사르, 레비뮨, 시클로포스판, B-518, 시클로블라스틴, 시클로스틴, 엔독산, 프로시톡스, 센독산, 시토포스판)는 여러 유형의 암 및 일부 자가면역 장애를 치료하는데 사용된 옥사조포린 그룹으로부터의 질소 머스타드 알킬화제이다 (문헌 ["A Review of Cyclophosphamide", D.L. Hill (1975) Charles C. Thomas, Springfield, 340pp]; [IARC Monographs (1975) 9:135-156]; [Fraiser et al. (1991) Drugs 42:781-795]; [Colvin, OmM. (1999) Curr. Pharmaceut. Design 5:555-560]). 시클로포스파미드는 화학요법 활성을 갖는 활성 형태로 간에서 전환되는 전구약물이다. 시클로포스파미드의 주요 용도는 림프종, 일부 형태의 백혈병, 및 일부 고형 종양의 치료에 다른 화학요법제와 함께 사용되는 것이다 (문헌 [Shanafelt et al. (2007) Cancer 109(11): 2291-8]; [Brock N (1996) Cancer 78(3):542-7]). 이는 세포 성장을 지연시키거나 또는 정지시키고, 다양한 질환에 대한 면역계 반응을 감소시킴으로써 작용하는 화학요법 약물이다.
시클로포스파미드는 N,N-비스(2-클로로에틸)-1,3,2-옥사조포스피난-2-아민 2-옥시드, N,N-비스(2-클로로에틸)테트라히드로-2H-1,3,2-옥사자포스포린-2-아민-2-옥시드; 1-비스(2-클로로에틸)아미노-1-옥소-2-아자-5-옥사포스포리딘 1수화물; 비스(2-클로로에틸)-포스파미드 시클릭 프로판올아미드 에스테르; 또는 N,N-비스(베타-클로로에틸)-N',O-프로필렌인산 에스테르 디아미드 (수화물 형태 포함) (CAS 번호 50-18-0)로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00022
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프레드니손 (메티코르텐, 스테라프레드, 스테라프레드 DS, 레트로코르틴, 콜리손, 코르탄실, 다코르틴, 데코르틴, 델타코르텐, 델타코르톤, 델타손, 델티손, 디-아드레손, 엔코르톤, 호스타코르틴, 메티코르텐, 오라손, 렉토델트, 손 또는 울타코르텐)은 합성 코르티코스테로이드 약물이다 (US 2897216; US 2837464; US 3134718; US 2579479). 프레드니손은 11-히드록실 유사체인 프레드니솔론 (CAS 등록 번호 50-24-8)으로 간에서 전환되는 전구약물이고, 주로 글루코코르티코이드 효과를 갖는다. 프레드니손은 경구 또는 주사에 의해 투여될 수 있다. 프레드니손은 면역억제제로서 특히 효과적이고, 자가면역 질환, 염증성 질환 (예컨대, 중증 천식, 알레르기, 포이즌 아이비, 피부염, 루푸스, 류마티스 관절염 및 크론병)을 치료하는데 사용되고, 기관 이식에서 거부반응을 예방 및 치료하는데 사용된다. 프레드니손은 급성 림프모구성 백혈병, 비호지킨 림프종 및 다발성 골수종을 비롯하여 암을 치료하는데 사용된다. 프레드니손은 17-히드록시-17-(2-히드록시아세틸)-10,13-디메틸-7,8,9,10,12,13,14,15,16,17-데카히드로-6H-시클로펜타[a]페난트렌-3,11-디온; 또는 17,21-디히드록시프레그나-1,4-디엔-3,11,20-트리온; 1,4-프레그나디엔-17알파,21-디올-3,11,20-트리온 (CAS 번호 53-03-2)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00023
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멜팔란 (L-페닐알라닌 머스타드; 알라닌 질소 머스타드; L-PAM; 멜파란; L-사르코리신; NSC-8806; CB-3025; 알케란(ALKERAN)? (글락소 스미스클라인); 사르코클로린)은 화학요법의 질소 머스타드 알킬화제 유형이다 (US 3032584; US 3032585). 멜팔란은 다발성 골수종, 난소암 및 흑색종을 치료하기 위해 주로 사용된다 (문헌 [IARC Monographs (1975) 9:167-180]; [Furner et al. (1980) Cancer Treat. Rep. 64:559-574]). 멜팔란은 2-아미노-3-[4-[비스(2-클로로에틸)아미노]페닐]-프로판산; 4-[비스(2-클로로에틸)아미노]-L-페닐알라닌; 또는 p-디(2-클로로에틸)아미노-L-페닐알라닌 (CAS 등록 번호 148-82-3)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00024
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레날리도미드 (레블리미드(REVLIMID)?, CC5013, 레비미드, 셀진 인크.(Celgene Inc.))는 탈리도미드의 유도체이고, 염증성 장애 및 암 모두를 치료하기 위해 2004년에 도입되었다 (US 5635517, US 6281230). 직접적인 항종양 효과, 종양 세포를 위한 미세환경 지원의 억제 및 면역조절 역할을 포함하는, 다양한 작용 메카니즘이 존재한다. 시험관내에서, 레날리도미드는 골수 기질 세포 지원의 억제에 의해, 항혈관신생 및 항파골세포형성 효과에 의해, 및 면역조절 활성에 의해 직접적으로 및 간접적으로 종양 세포 아폽토시스를 유도한다. 레날리도미드는 처음에 탈리도미드가 허용된 치료 양식인 다발성 골수종을 위한 치료제로 의도되었으나, 또한 골수이형성 증후군으로 알려진 혈액학적 장애의 클래스에서 효능을 나타내었다 (문헌 [Richardson et al. (2002) Blood 100:3063]; [Bartlett et al. (2004) Nature Rev. 4:314-322]; [Mitsiades et al. (2004) Curr. Opin. Invest. Drugs 5:635-647]; [Armoiry et al. (2008) J of Clin Pharmacy & Therapeutics 33:219-226]; [List et al. (2005) N. Engl. Jour. Med. 352:549-57]). 레날리도미드는 3-(4-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온; 3-(4-아미노-1,3-디히드로-1-옥소-2H-이소인돌-2-일)-2,6-피페리딘디온; 1-옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-아미노이소인돌린 (CAS 등록 번호 191732-72-6)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00025
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보르테조밉 (MG-341, PS-341, 벨케이드?, 밀레니엄 팜.)은 재발성 다발성 골수종 및 외투 세포 림프종을 치료하기 위해 US에서 승인을 받은 보론산 프로테아좀 억제제이다 (WO 96/13266; US 5780454; US 6083903; US 6297217; US 6617317; US 6713446; US 6747150; US 6958319; US 7119080). 보르테조밉의 붕소 원자는 26S 프로테아좀의 촉매 부위에 높은 친화도 및 특이성으로 결합한다. 정상 세포에서, 프로테아좀은 유비퀴티닐화 단백질의 변성에 의해 단백질 발현 및 기능을 조절하고, 또한 비정상적이거나 잘못 폴딩된 단백질의 세포를 제거한다 (문헌 [Adams et al. (2004) Cancer Invest 22(2):304-11]; [Bonvini (2007). Leukemia 21(4):838-42]). 보르테조밉은 [(1R)-3-메틸-1-({(2S)-3-페닐-2-[(피라진-2-일카르보닐)아미노]프로파노일}아미노)부틸]보론산; (R)-3-메틸-1-((S)-3-페닐-2-(피라진-2-카르복스아미도)프로판아미도)부틸보론산; 또는 [(1R)-3-메틸-1-[[(2S)-1-옥소-3-페닐-2-[(피라지닐카르보닐)아미노]프로필]아미노]부틸]-보론산 (CAS 등록 번호 179324-69-7)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00026
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라파마이신 (시롤리무스, 라파뮨(RAPAMUNE)?)은 기관 이식에서 거부반응을 예방하는데 사용되는 면역억제제 약물이고, 특히 신장 이식에 유용하다. 라파마이신은 이스터 아일랜드(Easter Island)로 더 많이 알려진 라파 누이(Rapa Nui)로 불리는 아일랜드로부터 수득한 토양 샘플에서 박테리아 스트렙토미세스 히그로스코피쿠스(Streptomyces hygroscopicus)에 의해 생성되는 마크롤리드 항생제이다 (문헌 [Pritchard DI (2005). Drug Discovery Today 10 (10): 688-691]). 라파마이신은 인터류킨-2 (IL-2)에 대한 반응을 억제하고, 이에 의해 T-의 활성화 및 조혈을 차단한다. 라파마이신의 작용 모드는 시토졸 단백질 FK-결합 단백질 12 (FKBP12)에 결합하는 것이다. 라파마이신-FKBP12 복합체는 직접적으로 mTOR 복합체1 (mTORC1)에 결합하는 것을 통해 라파마이신 (mTOR) 경로의 포유동물 표적을 억제한다. mTOR은 또한 FRAP (FKBP-라파마이신 관련 단백질) 또는 RAFT (라파마이신 및 FKBP 표적)로 불린다. 라파마이신 유사체 ("라파로그(Rapalog)")는 템시롤리무스 (CCI-779, 와이어쓰), 에베롤리무스 (RAD001, 노파르티스), 데포로리무스 (AP23573, MK-8669, 아리아드, 머크(Merck))를 포함한다. 라파마이신은 (3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-헥사데카히드로-9,27-디히드록시-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-히드록시-3-메톡시시클로헥실]-1-메틸에틸]-10,21-디메톡시-6,8,12,14,20,26-헥사메틸-23,27-에폭시-3H-피리도[2,1-c][1,4]-옥사아자시클로헨트리아콘틴-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-펜톤 (CAS 등록 번호 53123-88-9)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00027
.
시타라빈 (시토신 아라비노시드, Ara-C, 시토사르-U(CYTOSAR-U)?, 업존(Upjohn))은 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 NHL을 비롯하여 혈액 악성종양의 치료에서 주로 사용된다 (US 3116282; 문헌 [Shen et al. (1965) J. Org. Chem. 835]; [Capizzi, R.L. (1996) Invest. New Drugs 14:249-256]; [Grant S. (1998) Adv. Cancer Res. 72:197-233]). 시타라빈은 4-아미노-1-((2R,3S,4S,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)테트라히드로푸란-2-일)피리미딘-2(1H)-온; 4-아미노-1-베타-D-아라비노푸라노실-2(1H)-피리미디논; 1-베타-D-아라비노푸라노실시토신 (CAS 등록 번호 147-94-4)으로 명명되고, 하기 구조를 갖는다:
Figure 112011079192510-pct00028
.
CHOP는 시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니손/프레드니솔론을 포함하는, 비호지킨 림프종의 치료에 사용되는 화학요법 처방을 위한 두문자어이다 (문헌 [Fisher et al. (1993) N Engl J Med 328(14):1002-6]). CHOP는 통상적으로 4주의 주기로 투여된다. 통상적인 치료 요법은 적어도 6 주기 동안이다.
생물학적 평가
특정 화학식 I 화합물은 PI3 키나제 이소형에 특이적으로 결합하고, 종양 세포의 증식을 억제한다 (US 2008/0207611; US 2008/0039459; US 2008/0076768; US 2008/0076758; US 2008/0242665; US 2008/0269210). 특정 예시적 화학식 I 화합물은 10 nM 미만의 PI3K 결합 활성 IC50 값을 갖는다. 특정 화학식 I 화합물은 100 nM 미만의 종양 세포-기재 활성 EC50 값을 갖는다.
본원에 기재된 화학식 I 화합물 및 화학요법제의 특정 예시적 치료 조합물은 종양 세포에 대한 시험관내 활성에 대해 분석하였다 (실시예 15). 특정 화학식 I 화합물은 1 마이크로몰 미만의 IC50에서 p110α 이소형에 결합하고, 마우스 이종이식 모델에서 단일-작용제 생체내 종양 성장 억제를 나타낸다. 따라서, 화학식 I 화합물은 비정상적인 세포 성장, 기능 또는 행동으로부터 발생하는 질환 또는 장애를 단일 작용제로서 또는 하나 이상의 화학요법제와의 조합 요법으로 치료하는데 사용될 수 있다.
KRAS, NRAS, BRAF 및 PIK3CA에서의 돌연변이는 암 세포에서 증식 및 항아폽토시스 신호전달을 매개하는 주요 경로 중 2가지를 활성화시킨다. 이와 같이, 이들 유전자에서의 돌연변이는 돌연변이의 존재가 특정 종양에서 병적 활성화의 신호로 주어지고, 주어진 경로에 의존하기 때문에 이들 경로에서 중요 노드를 억제하는 표적화된 작용제에 대한 동반 진단 시험을 구성할 수 있다. 다양한 기원의 조직의 세포주의 거대 패널에서 이들 유전자 및 다른 유전자에 대한 돌연변이 상태는 MEK 및 PI3 키나제의 선택적인 억제제에 대한 반응과 서로 관련될 수 있다. 또한, 돌연변이 검출은 KRAS, NRAS, BRAF 및 PI3 키나제에서 가장 보편적인 치환에 대한 대립유전자 특이적 택맨 검정을 이용하여 분석될 수 있는 소량의 이종 고정된 종양 조직을 구성하는 임상 샘플에서 수행될 수 있다.
도 1은 화학식 Ia (GDC-0941) 처리 (우측 칼럼) 및 비처리 (좌측 칼럼) 세포, DoHH2 (림프종 세포), WSU-DLCL2 (림프종 세포), OPM2 (다발성 골수종 세포) 및 U266 (다발성 골수종 세포)으로 FACS 유동 세포측정법에 의해 측정된 약력학 (PD) 마커의 감소를 보여준다. 실시예 18은 GDC-0941 처리 후 포스포-AKT (p-Akt) 및 p-S6 리보좀 단백질 (p-S6RP)의 세포내 검출을 위한 FACS 프로토콜을 제공한다. 세포를 시험관내에서 4시간 동안 5 μM GDC-0941로 처리하였다. 세포주 중 3개는 p-AKT의 높은 수준에 의해 증명된 바와 같이 PI3K 경로 활성화의 증거를 보여주고, 4개 모두는 처리되지 않은 세포 (좌측 칼럼)에서 포스포-S6 리보좀 단백질 신호의 높은 수준에 의해 증명된 바와 같이 말단 경로 활성화의 증거를 보여준다. 우측 칼럼에서, GDC-0941로 처리된 세포는 파괴된 p-AKT 신호 및 감소된 p-S6RP 신호를 나타낸다. pS6rp에 대해 남아있는 신호는 PI3k 활성이 상기 인산화 사건을 부분적으로 담당하는 모델과 일치한다. 통합하여, 이들 데이터는 PI3k 경로가 이들 세포형에서 활성화되고, GDC-0941이 무손상 세포에서 PI3k 경로에 대한 강력한 억제 활성을 갖는다는 것을 나타낸다.
도 2는 시험관내에서 4시간 동안 5 μM GDC-0941로 처리된 세포주에서 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 및 웨스턴 블롯팅에 의해 측정된, 세포 DoHH2, WSU-DLCL2, OPM2 및 U266에서 약력학 (PD) 마커 p-AKT, p-S6RP, p-Bad의 감소를 보여준다. 실시예 17은 B 세포 및 골수종 세포주의 GDC-0941 처리 후 p-Akt, p-BAD 및 p-S6 리보좀 단백질의 웨스턴 블롯팅에 의한 검출을 위한 프로토콜을 제공한다. 세포를 지시된 바와 같이 처리하고, 용해물을 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다. 베타 액틴 블롯팅은 각각의 레인에서 용해물의 대략 동일한 로딩을 보여준다. 세포주 중 3개는 p-AKT의 높은 수준에 의해 증명된 바와 같이 PI3K 경로 활성화의 증거를 보여주고, 4개 모두는 처리되지 않은 세포에서 p-S6RP 신호의 높은 수준에 의해 증명된 바와 같이 말단 경로 활성화의 증거를 보여준다. p-AKT 및 p-S6RP 둘 모두에 대한 신호는 GDC-0941로의 처리에 의해 (존재하는 경우) 유의하게 감소하였으며, 이는 PI3K 경로가 이들 세포에서 활성화되고, GDC-0941이 무손상 세포에서 경로에 대해 유의한 억제 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 두 PD 마커의 수준은 동위 순서에 따르고, 도 1과 도 2 사이에 서로 잘 관련된다.
흡수, 분포, 대사 및 배출 (ADME)의 약력학 및 약동학 특성은 Caco-2 투과성, 간세포 제거율, 시토크롬 P450 억제, 시토크롬 P450 유도, 혈장 단백질 결합 및 hERG 채널 차단을 포함하여 검정에 의해 특정 예시 화합물에 대해 측정하였다.
본 발명은 a) 시험관내에서 종양 세포주에게 화학식 I을 갖는 화합물 및 화학요법제의 치료 조합물을 투여하는 것, 및 b) 상승작용적 또는 비상승작용적 효과를 측정하는 것을 포함하는, 암 치료를 위한 조합물에 사용될 화합물을 결정하는 방법을 포함한다.
시험관내 세포 증식 검정
예시적 화학식 I 화합물의 세포독성 또는 세포증식 억제 활성은 세포 배양 배지에서 증식하는 포유동물 종양 세포주를 확립하고, 화학식 I 화합물을 첨가하고, 약 6시간 내지 약 5일 동안 세포를 배양하고, 세포 생존율을 측정함으로써 측정하였다 (실시예 15). 세포-기재 시험관내 검정을 이용하여, 생존율, 즉 증식 (IC50), 세포독성 (EC50), 및 아폽토시스 유도 (카스파제 활성화)를 측정하였다.
화학식 I 화합물 및 화학요법제의 조합물의 시험관내 효능은 실시예 15의 세포 증식 검정인 셀타이터-글로? 발광 세포 생존율 검정 (프로메가 코포레이션 (미국 위스콘신주 매디슨)으로부터 상업적으로 이용가능함)에 의해 측정하였다. 이 균일 검정 방법은 딱정벌레목 (Coleoptera) 루시페라제의 재조합 발현을 기초로 하며 (US 5583024; US 5674713; US 5700670), 대사적으로 활성인 세포의 지표인 존재하는 ATP의 정량에 기초하여 배양물 중 생존 세포의 개수를 결정한다 (문헌 [Crouch et al. (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88]; US 6602677). 셀타이터-글로? 검정은 96 또는 384웰 포맷에서 수행하였으며, 이는 자동화 고-처리율 스크리닝 (HTS)에 적용될 수 있다 (문헌 [Cree et al. (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404]). 균일 검정 절차는 단일 시약 (셀타이터-글로? 시약)을 혈청이 보충된 배지 중에서 배양된 세포에 직접 첨가하는 것을 포함한다. 세포 세척, 배지 제거, 및 다중 피펫팅 단계는 필요하지 않다. 상기 시스템은 시약을 첨가하고 혼합한 후 10분 내에 384웰 포맷에서 겨우 15개 세포/웰에 불과한 것도 검출한다.
균일 "첨가-혼합-측정" 포맷은 세포 용해물에서 존재하는 ATP의 양에 비례하여 발광 신호를 발생시킨다. ATP의 양은 배양물에 존재하는 세포의 개수에 직접적으로 비례한다. 셀타이터-글로? 검정은 루시페라제 반응에 의해 생성되는 "백열광-유형"의 발광 신호를 발생시키며, 그의 반감기는 일반적으로 사용된 세포 유형 및 배지에 따라 5시간이 넘는다. 살아있는 세포는 상대적 발광 단위 (RLU)에 반영된다. 기질인 딱정벌레 루시페린은 ATP를 AMP로 전환시킴과 동시에 광자를 생성하는 재조합 개똥벌레 루시퍼라제에 의해 산화적으로 탈카르복실화된다. 반감기의 연장은 시약 주입기를 사용할 필요성을 없애고, 다중 플레이트의 연속식 또는 배치식 조작에 대한 융통성을 제공한다. 이러한 세포 증식 검정을 각종 다중웰 포맷, 예를 들어 96 또는 384웰 포맷과 함께 사용할 수 있다. 데이터는 광도계측기 또는 CCD 카메라 영상화 장치로 기록될 수 있다. 발광 출력량은 시간에 따라 측정된 상대적인 광 단위 (RLU)로 제시된다.
화학식 I 예시적 화합물 및 화학요법제와의 조합물의 항증식 효과를 도 3 내지 6에서 종양 세포주에 대한 셀타이터-글로? 검정 (실시예 15)에 의해 측정하였다. 시험 화합물 및 조합물에 대한 EC50 값을 확립하였다. 시험관내 세포 효능 활성의 범위는 약 100 nM 내지 약 10 μM이었다.
특정 세포에 대한 화학식 I 화합물 및 화학요법제의 개별 측정된 EC50 값을 조합 EC50 값과 비교하였다. 조합 지수 (CI) 스코어를 슈 및 탈라레이 방법에 의해 계산하였다 (문헌 [Chou, T. and Talalay, P. (1984) Adv. Enzyme Regul. 22:27-55]). 0.8 미만의 CI는 상승작용을 나타낸다. 0.8 내지 1.2의 CI는 부가성을 나타낸다. 1.2 초과의 CI는 길항작용을 나타낸다. 상승작용의 강도는 슈 및 탈라레이에 따라 평가한다. 도 4 내지 6에서 특정 치료 조합은 비호지킨 림프종 (NHL), 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL) 및 다발성 골수종을 포함하는 종양 유형 세포주를 사용한 시험관내 세포 증식 검정에서 놀랍고 예상하지 못한 상승작용 특성을 나타낸다. 다른 조합은 상승작용을 나타내지 않고; 단지 단순한 부가성 또는 길항작용을 나타낸다. 특정 조합은 하나 이상의 종양 유형과 상승작용적이고, 다른 것은 그렇지 않았다. 시험관내 세포 증식 검정에서 입증된 상승작용은 인간 환자에서 림프종 및 다발성 골수종 등을 비롯한 조혈 암을 치료하는데 있어 상응하는 상승작용을 예측할 기반을 제공한다.
도 3은 B-NHL 세포주 DoHH2에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제, 화학식 Ia (GDC-0941), 및 덱사메타손 (Dex) 및 독소루비신 (Dox)과의 조합의 효과를 보여준다. 시험관내 세포 생존 및 증식 검정 (셀-타이터 글로, 프로메가)은 다양한 억제제 농도 (이전에 (대략적으로) 결정된 IC50의 10-5 내지 10 상대 단위)의 화학식 Ia, 덱사메타손, 독소루비신, 및 화학식 Ia와 덱사메타손의 조합; 및 화학식 Ia와 독소루비신의 조합에 걸쳐 살아있는 세포를 측정하였다. 억제제의 최고 농도에서의 세포 사멸의 정도는 하나의 작용제로부터 다른 작용제로 달라진다는 것에 유의한다. 독소루비신의 경우, GDC-0941의 첨가는 용량-반응 곡선을 왼쪽으로 적절하게 이동시키고, 이는 조합 치료에 대한 세포의 증가된 감수성을 나타낸다. 이 조합에 대해 약 0.75의 조합 지수 (CI)가 계산되었으며, 이는 부가성 또는 상승작용을 나타낸다. 덱사메타손 단일 작용제의 상대적으로 약한 활성은 보다 높은 IC50 값 및 검정에서 보다 약한 신호 감소 정도로 반영되며, 이는 아마도 세포증식 억제 효과 또는 단지 약한 세포독성 활성을 가리킬 수 있다. 그러나, GDC-0941과의 조합에서, 용량-반응 곡선의 놀랍고 매우 유의한 좌측 방향 이동이 모든 농도에서 나타났다. IC50 점에서 계산된 CI 값은 약 0.3이었으며, 이는 시험 작용제 사이에서 드물게 관찰되는 예측되지 않고 예상하지 못한 강한 상승작용을 나타낸다.
화학식 Ia (GDC-0941)는 표 2에 따른 다수의 B 림프종 세포주에 대해 세포독성이며, 단일 작용제로서 강력한 아폽토시스를 유도한다.
Figure 112011079192510-pct00029
표 2의 데이터는 GDC-0941이 임상적으로 도달할 수 있는 용량에서 림프종 세포주에 대해 광범위하게 세포독성이고 효능이 있다는 것을 나타낸다.
도 2에서와 같은 실험은 추가적 세포주 및 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴 및 덱사메타손과 GDC-0941의 조합에 대해 확대되었다. 조합 지수 (CI) 스코어는 슈-탈라레이 방법에 의해 계산하였다 (표 3). 어떠한 경우에서도 본 발명자들은 조합으로 시험될 때 GDC-0941이 이들 다른 작용제에 길항한다는 것을 나타내는 CI 값 >1을 찾지 못하였다. 일반적으로, GDC-0941은 적어도 부가성을 나타내는 이들 다른 작용제와 잘 조합된다. 덱사메타손과의 조합의 경우, 대략 0.3 이하의 놀랍고 매우 유의한 CI 값을 시험된 모든 세포주에서 수득하였다.
Figure 112011079192510-pct00030
도 4는 다양한 농도 (10-5 내지 10 μM)의 화학식 Ia, GDC-0464 및 LY294002에 걸쳐 살아있는 세포를 측정하는 시험관내 세포 생존 및 증식 검정 (셀-타이터 글로?, 프로메가 코포레이션, 미국 위스콘신주 매디슨)에 의해 결정된, 환자 NHL600으로부터의 원발성 여포성 림프종 세포에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제의 효과를 보여준다. 세포주 세포독성 데이터는 보통 이들 화합물의 효력이 과대평가되도록 유지되므로, 이들 데이터는 화학식 Ia (GDC-0941)가 원발성 인간 암 세포에 대해 놀랍고 예상하지 못한 정도의 효력을 갖는다는 것을 나타낸다. GDC-0464 (제넨테크, 인크.)는 강력한 티에노피리미딘 PI3K 억제제이다 (US 2008/0076758). LY294002 (일라이 일리(Eli Lilly) & Co., CAS 등록 번호 154447-36-6)가 또한 PI3 키나제의 강력한 억제제이다 (WO 2003/035099).
도 5는 환자 NHL640-A055로부터의 원발성 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL) 세포에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제, 화학식 Ia (GDC-0941), 및 독소루비신과의 조합의 효과를 보여준다. 세포 생존율은 다양한 농도 (10-5 내지 20 μM)의 화학식 Ia, 독소루비신, 및 화학식 Ia와 독소루비신의 조합에 걸쳐 시험관내 세포 생존 및 증식 검정 (셀-타이터 글로?)에 의해 측정하였다. 안트라시클린은 대부분의 화학요법 처방의 골격이고, 이에 따라 매우 활성인 화합물로 여겨진다. 이들 결과는 시험관내에서 상기 원발성 종양 샘플의 경우에 GDC-0941이 독소루비신보다 유의하게 더 강력하고, 시험관내에서 세포주로 수득한 결과와 놀랍게 대조적으로 조합이 단일 작용제 GDC-0941보다 유의하게 더 양호하지 않다는 것을 나타낸다.
도 6은 다양한 약물 농도 (이들의 이전에 결정된 IC50 값의 함수로 표현됨, 즉, "1" = IC50 반응을 제공하는 [약물])의 화학식 Ia, 덱사메타손 (Dex), 및 화학식 Ia와 덱사메타손의 조합 (고정 비율)에 걸쳐 살아있는 세포를 측정하는 시험관내 세포 증식 검정 (셀-타이터 글로?)에 의해 다발성 골수종 OPM2 세포에 대한 PI3K 단일 작용제 억제제 화학식 Ia (GDC-0941), 및 덱사메타손과의 조합의 효과를 보여준다. 덱사메타손에 대해 상대적으로 약한 반응은 GDC-0941과의 조합에 의해 효능 및 반응의 정도 둘 모두가 크게 향상되었고, 0.45의 CI 값을 수득하였으며, 이는 두 작용제 사이의 강한 상승작용을 나타낸다. 표 4는 화학식 Ia 화합물 (GDC-0941)과 덱사메타손 (Dex), 독소루비신 (Dox), 멜팔란, 레날리도미드 및 보르테조밉으로부터 선택된 화학요법제의 치료 조합에 의한 다양한 다발성 골수종 세포주의 치료의 조합 지수 스코어 (슈 및 탈라레이 방법에 의해 계산됨)를 보여준다. 특정 조합은 상승작용 (CI < 0.8), 부가성 (0.8 내지 1.2) 또는 길항작용 (> 1.2)을 나타낸다. 이들 데이터는 GDC-0941이 모든 화학요법과 잘 동등하게 조합되지 않는다는 것을 나타낸다. GDC-0941 및 보르테조밉으로 수득한 CI는 일반적으로 0.8 이상의 범위인 반면, GDC-0941 + 덱사메타손으로 수득한 CI는 보다 낮았으며, 이는 시험된 세포주에 대한 상승작용 및 보다 우세한 반응 둘 모두를 나타낸다.
Figure 112011079192510-pct00031
Figure 112011079192510-pct00032
표 5는 화학식 Ia 화합물 GDC-0941 및 화학요법제 빈크리스틴의 치료 조합에 의한 상이한 림프종 세포주의 조합 지수 스코어 (슈 및 탈라레이의 방법에 의해 계산됨)를 보여준다. 특정 조합은 상승작용 (CI < 0.8), 부가성 (0.8 내지 1.2) 또는 길항작용 (> 1.2)을 나타낸다. 데이터는 GDC-0941이 특히 BJAB, WSU-DHL4 및 WSU-DLCL2에서 빈크리스틴과 매우 바람직하게 조합된다는 것을 나타낸다. 용량-반응 곡선 상의 3개의 상이한 점 (ED50, ED75 및 ED90)에서의 CI 값을 나타내었으며, 용량 반응 곡선 상의 이들 상이한 점에서 유사한 CI 값을 수득하였다는 사실은 데이터가 확고하고, 전체 반응 곡선이 작용제의 조합의 경우에 증가된 생물학적 반응을 나타내도록 이동되었다는 것을 나타낸다.
표 6은 화학식 Ia 화합물 (GDC-0941) 및 덱사메타손의 치료 조합에 의해 성장 인자 IL-6 및 IGF-1의 존재 또는 부재하에 다양한 조혈 악성종양 세포주의 치료의 조합 지수 스코어 (슈 및 탈라레이 방법에 의해 계산됨)를 보여준다. 특정 조합은 상승작용 (CI < 0.8), 부가성 (0.8 내지 1.2) 또는 길항작용 (> 1.2)을 나타낸다. 데이터는 GDC-0941이 덱사메타손과 매우 바람직하게 조합된다는 것을 나타낸다. 용량-반응 곡선 상의 3개의 상이한 점 (ED50, ED75 및 ED90)에서의 CI 값을 나타내었으며, 용량 반응 곡선 상의 이들 상이한 점에서 유사한 CI 값을 수득하였다는 사실은 데이터가 확고하고, 전체 반응 곡선이 작용제의 조합의 경우에 증가된 생물학적 반응을 나타내도록 이동되었다는 것을 나타낸다. MM1.s 세포는 덱사메타손에 대해 감수성인 것으로 알려져 있으며, GDC-0941과 조합되었을 때 명확한 상승작용을 나타내었다. 이 세포주의 MM1.r 변이체는 덱사메타손 내성인 것으로 알려져 있고, 이 특성과 일치하며, 전체적으로 보다 적은 CI 값이 관찰되었다. 시토카인 IL-6 및 IGF-1은 다발성 골수종의 골수 미세환경에서 주요 성장 인자이고, PI3K/AKT 신호전달 경로를 통한 신호를 매개하는데 관여한다. 성장 인자 IL-6 및 IGF-1은 일반적으로 화학요법내성을 제공하는 것으로 생각되고, 각각의 세포주에서 시토카인의 첨가는 조합 지수 값을 증가시켰다.
Figure 112011079192510-pct00033
표 7은 화학식 Ia 화합물 (GDC-0941) 및 레날리도미드의 치료 조합에 의해 성장 인자 IL-6 및 IGF-1의 존재 또는 부재하에 다양한 조혈 악성종양 세포주의 치료의 조합 지수 스코어 (슈 및 탈라레이 방법에 의해 계산됨)를 보여준다. 특정 조합은 상승작용 (CI < 0.8), 부가성 (0.8 내지 1.2) 또는 길항작용 (> 1.2)을 나타낸다. 데이터는 GDC-0941이 레날리도미드와 매우 바람직하게 조합된다는 것을 나타낸다. 용량-반응 곡선 상의 3개의 상이한 점 (ED50, ED75 및 ED90)에서의 CI 값을 나타내었으며, 용량 반응 곡선 상의 이들 상이한 점에서 유사한 CI 값을 수득하였다는 사실은 데이터가 확고하고, 전체 반응 곡선이 작용제의 조합의 경우에 증가된 생물학적 반응을 나타내도록 이동되었다는 것을 나타낸다. 성장 인자 IL-6 및 IGF-1은 일반적으로 화학요법내성을 제공하는 것으로 생각되고, 각각의 세포주에서 시토카인의 첨가는 조합 지수 값을 증가시켰다.
Figure 112011079192510-pct00034
다발성 골수종 및 AML 세포주 (OPM2 및 H929 포함)에서 단일 작용제 도 Ia 및 Ib 화합물, 및 (i) 도 Ia 화합물 (GDC-0941)과 라파마이신의 조합 및 (ii) 도 Ib 화합물과 라파마이신의 조합에 대한 아폽토시스 반응을 아넥신 V-FACS 분석에 의해 측정하였다. 절대 IC50을 측정하기 위한 스크리닝 조건은 다음을 포함한다: 제1일 - 10％ FBS를 포함하는 배지 중에서 384웰 플레이트 상에 10,000개 세포/웰로 세포를 플레이팅한다; 제2일 - 지정된 화합물 설정을 갖는 세포를 투여한다. 라파마이신을 도 Ia 또는 도 Ib 화합물과 함께 사용할 때 배지 중 라파마이신 농도는 0.1 μM이었다; 제5일 - 셀타이터-글로 검정. 측정된 아폽토시스 집단은 조합 (i) 및 (ii)로 상승작용을 입증하였다.
AML 환자로부터의 모세포에서, 도 Ia GDC-0941과 화학요법제 시타라빈 또는 다우노루비신의 조합은 단일 작용제 GDC-0941과 비교하여 향상된 항백혈병 활성 및 각각 단지 30％ 및 22％의 살아있는 세포가 남는 향상된 아팝토시스 효능을 나타내었다.
생체내 종양 이종이식편 효능
본 발명의 조합물의 효능은 암 세포의 동종이식편 또는 이종이식편을 설치류에 이식하고, 이 종양 보유 동물을 상기 조합물로 처리함으로써 생체 내에서 측정할 수 있다. 세포주, 종양 세포 내의 특정 돌연변이의 존재 또는 부재, 화학식 I 화합물 및 화학요법제의 투여 순서, 투여 요법 및 다른 요인들에 따라서 가변적인 결과가 예상되어야 한다. 대상 마우스를 약물(들) 또는 대조군 (비히클)로 처리하였고, 수 주 이상에 걸쳐 모니터링하여 종양이 배가되기까지의 시간, 로그 세포 사멸, 및 종양 억제를 측정하였다 (실시예 16).
도 7은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), 5 mg/kg 리툭시맙, CHOP, 및 화학식 Ia 73 mg/kg과 리툭시맙 5 mg/kg의 조합, 화학식 Ia 73 mg/kg과 CHOP의 조합을 투여한, WSU-DLCL2 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 20일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 제0일에 시작하여 CHOP를 투여하고, 리툭시맙을 제0일, 제7일 및 제14일에 투여하는 한편, 화학식 Ia를 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 요법: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5). 시클로포스파미드, 독소루비신 및 빈크리스틴을 제0일에 1회 투여하고, 프레드니손을 제0일, 제1일, 제2일, 제3일 및 제4일에 투여하였다. 이 모델에서, GDC-0941 및 CHOP-기재의 조합 화학요법은 단지 크지 않는 활성을 나타내었다. 리툭시맙 처리는 비히클 (대조군 던넷(Dunnett) t-시험에 의해 p<0.01)로부터 유의하게 더 상이하였다. 리툭시맙과 GDC-0941의 조합은 로그-랭크 분석에 의해 GDC-0941보다 유의하게 더 양호하였으나, 리툭시맙 단독과 상이하지 않았다. GDC-0941 및 CHOP의 조합은 이들 작용제 각각과 비교하여 효능이 유의하게 향상되었다.
도 8은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), 5 mg/kg 리툭시맙, CHOP, 및 화학식 Ia 73 mg/kg과 리툭시맙 5 mg/kg의 조합, 및 화학식 Ia 100 mg/kg과 CHOP의 조합을 투여한, DoHH-2 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 34일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 리툭시맙을 제0일, 제7일 및 제14일에 (qwk x3) 정맥내 투여하고, CHOP를 제1일에 출발하여 투여하는 한편, 화학식 Ia를 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 요법: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5). 시클로포스파미드, 독소루비신 및 빈크리스틴을 제0일에 1회 투여하고, 프레드니손을 제0일, 제1일, 제2일, 제3일 및 제4일에 투여하였다. CHOP 화학요법 또는 GDC-0941 단독요법 코호트는 비히클과 유의하게 상이하였다. 리툭시맙 단독요법은 처리 동안 2가지 부분 반응 및 4가지 완전한 반응을 유발하며 상대적으로 보다 효과적이었다. GDC-0941은 리툭시맙 활성에 유의하게 길항하지 않았으나, 이는 추가의 항종양 활성을 제공하지 않았다. 대조적으로, CHOP 화학요법과 GDC-0941의 조합은 단일 작용제의 활성 보다 이점이 매우 유의하게 증가하였고, 2가지 부분 반응 및 2가지 완전한 반응을 생성하였다.
도 9는 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 75 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), CHOP, 및 화학식 Ia 75 mg/kg과 CHOP의 조합, 화학식 Ia 75 mg/kg과 시클로포스파미드 30 mg/kg의 조합, 화학식 Ia 75 mg/kg과 독소루비신 2.47 mg/kg의 조합, 화학식 Ia 75 mg/kg과 빈크리스틴 0.38 mg/kg의 조합, 및 화학식 Ia 75 mg/kg과 프레드니손 0.15 mg/kg의 조합을 투여한, DoHH2 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 27일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 CHOP를 제0일에 투여하고, 시클로포스파미드를 제0일에 투여하고, 독소루비신을 제0일에 투여하고, 빈크리스틴을 제0일에 투여하고, 프레드니손을 제0일 내지 제4일에 매일 투여하는 한편, 화학식 Ia를 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 성분 요법은 다음과 같다: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5). 이 실험은 GDC-0941 및 CHOP가 각각 모델에서 유사하고 단지 적당한 활성을 갖는다는 것을 보여주는 도 8의 결과를 확인 및 확대한다. 이전과 같이, GDC-0941는 CHOP와 조합되어 항종양 활성을 매우 유의하게 증가시킨다. 놀랍게도, 이것은 시험관내 실험으로부터 예측되지 않았으므로, GDC-0941과 CHOP 사이에 언급된 본질적으로 모든 상승작용은 단지 GDC-0941 및 빈크리스틴의 조합이 원인이 될 수 있으나, GDC-0941과 쌍을 이루어 시험된 CHOP의 다른 3가지 성분은 증가된 효능을 나타내지 않았다.
도 10은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), CHOP, 및 화학식 Ia 73 mg/kg과 CHOP의 조합을 투여한, BJAB 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 25일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 제0일에 시작하여 CHOP를 1회 투여하는 한편, 화학식 Ia 및 비히클을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. CHOP 요법: 시클로포스파미드 (30 mg/kg, 정맥내, qd x1), 독소루비신 (2.475 mg/kg, 정맥내, qd x1), 빈크리스틴 (0.375 mg/kg, 정맥내, qd x1), 프레드니손 (0.15 mg/kg, 경구, qd x5). 시클로포스파미드, 독소루비신 및 빈크리스틴을 제0일에 1회 투여하고, 프레드니손을 제0일, 제1일, 제2일, 제3일 및 제4일에 투여하였다. 이들 데이터는 BJAB 림프종 모델에서 GDC-0941 또는 CHOP 화학요법이 단지 크지 않는 활성을 나타내며, 통계학적 유의성에 도달한 그룹이 없더라도 조합이 증가된 활성을 나타낸다는 것을 보여준다.
도 11은 제0일에 비히클 (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 75 mg/kg 화학식 Ia (GDC-0941), 5 mg/kg 리툭시맙, 및 화학식 Ia 75 mg/kg과 5 mg/kg 리툭시맙의 조합을 투여한, BJAB 림프종 종양 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 25일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 마우스에게 리툭시맙을 제0일, 제7일 및 제14일에 투여하는 한편, 화학식 Ia 및 비히클을 21일 동안 매일 (경구, qd x21) 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 도 10에서와 같이, 단일 작용제 GDC-0941은 이 BJAB 림프종 모델에서 단지 크지 않는 활성을 나타내었다. 리툭시맙의 활성은 단일 작용제 GDC-0941과 비교하여 크지 않았고, GDC-0941과의 조합에 의해 추가로 증가하지 않았다. 이 연구에서 모든 그룹은 로그-랭크 분석에 의해 비히클과 유의하게 상이하였다.
도 12는 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80) 및 단일 작용제 요법: 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 1 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3), 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, qd x21) 및 10 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5일 온/2일 오프/4일 온)을 투여한, NCI-H929 다발성 골수종 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 22일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 21일 동안 매일 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제10일에 경구 투여하였다. 이 실험은 보르테조밉의 효능을 초과하는 레날리도미드 또는 덱사메타손 단일 작용제 처리와 유사한 GDC-0941의 단일 작용제 활성을 확립하였다. 보르테조밉 단일 작용제 처리가 이 연구에서 3가지 부분 반응을 나타내었다.
도 13은 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 단일 작용제 요법: 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21); 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3); 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5일 온/2일 오프/5일 온/2일 오프/5일 온); 및 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5일 온/2일 오프/5일 온); 및 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3)의 조합; 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5/2/5/2/5)의 조합; 및 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5)의 조합을 투여한, 다발성 골수종 OPM-2 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 24일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 제0일 내지 제4일, 제7일 내지 제11일 및 제14일 내지 제18일에 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다. 이 실험에서 보르테조밉의 감소된 용량은 비히클과 상이하지 않은 임상 반응 아래 반응을 나타내었다. 덱사메타손에 대한 GDC-0941의 첨가가 상승된 항종양 활성을 향하는 경향이 있더라도, 단일 작용제 GDC-0941, 레날리도미드 또는 덱사메타손으로 처리된 코호트는 구별할 수 없고 적당한 종양 활성을 가졌다. 이 결과는 선행 시험관내 세포주 연구로부터 예측되었으나, 문헌에 공개된 선행 연구로부터는 예측할 수 없었다.
도 14는 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 73 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 1 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x2.5), 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, qd x21), 및 10 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5일 온/2일 오프/5일 온)을 투여한, 다발성 골수종 MM1.s 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 27일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일 및 제14일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 21일 동안 매일 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다. 이 실험은 레날리도미드, 보르테조밉 또는 덱사메타손 단일 작용제 처리와 유사한 것으로서 GDC-0941의 단일 작용제 활성을 확립하였다.
도 15는 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 단일 작용제 요법: 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3) 및 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5); 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3)의 조합; 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5)의 조합을 투여한, 다발성 골수종 MM1.s 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 40일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다. MM1.s 모델은 한 가지를 제외하고 이들 단일 작용제 및 조합 처리에 상대적으로 저항적이며; 시험관내 실험과 일치하게, GDC-0941과 덱사메타손의 조합은 단일 작용제 성분과 비교하여 우수한 활성을 가졌다. 놀랍고 예상하지 못하게, GDC-0941 + 덱사메타손 코호트가 조합 약물 처리 중에 있는 시간 동안, 종양은 7가지 부분 반응 생성을 퇴행시켰다. 이 연구에서 어떠한 다른 그룹도 목적하는 반응을 생성하지 않았다. 덱사메타손 처리를 제11일에 중지시켰을 때, 종양은 퇴행을 중지하고, 계속되고 있는 GDC-0941과 일치하는 속도로 성장하였다. 이들 데이터는 덱사메타손과 GDC-0941의 조합의 놀라운 효능을 명백하게 나타낸다.
도 16은 제0일에 비히클 (경구, qd x21) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80), 단일 작용제 요법: 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, 2x/wk x3), 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5/2/5/2/5) 및 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5); 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 0.5 mg/kg 보르테조밉 (정맥내, qd x3)의 조합; 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21)과 25 mg/kg 레날리도미드 (복강내, 5/2/5/2/5)의 조합; 및 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x14)과 3 mg/kg 덱사메타손 (경구, 5/2/5)의 조합을 투여한, 다발성 골수종 NCI-H929 세포 이종이식편을 갖는 10마리 마우스의 코호트에서 33일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 화학식 1a GDC-0941을 21일 동안 매일 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 보르테조밉을 제0일, 제3일, 제7일, 제10일, 제14일 및 제17일에 정맥내 투여하였다. 레날리도미드를 제0일 내지 제4일, 제7일 내지 제11일 및 제14일 내지 제18일에 복강내 주사에 의해 투여하였다. 덱사메타손을 제0일 내지 제4일 및 제7일 내지 제11일에 경구 투여하였다. H929 모델에서, 조합 그룹에서 GDC-0941의 첨가는 단일 작용제 보르테조밉, 레날리도미드 및 덱사메타손의 크지 않는 활성을 유의하게 증가시켰다.
도 17은 제0일에 비히클 (경구, qd x 20) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80); 단일 작용제 요법: 75 mg/kg 또는 100 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x20), 2.5 mg/kg 또는 4 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x20), 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwx3); 또는 조합 요법: 75 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x20) + 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwx3) 또는 2.5 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x20) + 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qwx3)을 투여한, 미리-확립된 DoHH2 인간 림프종 세포주 이종이식편을 보유하는 그룹 당 10마리 마우스의 실험 코호트에서 40일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 라파마이신은 종양 성장에 대해 거의 또는 전혀 유의한 효과를 나타내지 않는 반면, 단일 작용제 처리는 용량-관련 종양 성장 억제를 나타내는 한편 두 조합은 유의하게 향상된 종양 성장 저해를 나타낸다.
도 18은 제0일에 비히클 (경구, qd x 20) (탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80); 단일 작용제 요법: 60 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x21), 1 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x21), 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qdx21); 또는 조합 요법: 60 mg/kg 화학식 Ia GDC-0941 (경구, qd x18) + 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qd x18) 또는 1 mg/kg 화학식 Ib (경구, qd x18) + 6 mg/kg 라파마이신 (복강내, qd x18)을 투여한, 미리-확립된 WSU-DLCL2 인간 림프종 세포주 이종이식편을 보유하는 그룹 당 10마리 마우스의 실험 코호트에서 25일에 걸친 평균 종양 부피 변화를 보여준다. 단일 작용제 처리는 종양 성장에 대해 거의 효과를 나타내지 않는 반면, 조합은 유의하게 향상된 종양 성장 저해를 나타낸다.
제약 조성물
본 발명의 제약 조성물 또는 제제는 화학식 I 화합물, 화학요법제, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 활택제, 희석제 또는 부형제의 조합물을 포함한다.
본 발명의 화학식 I 화합물 및 화학요법제는 용해되지 않은 형태 및 제약상 허용되는 용매, 예를 들어 물, 에탄올 등과의 용매화된 형태로 존재할 수 있고, 본 발명은 용매화된 형태와 용매화되지 않은 형태 둘 다를 포괄하는 것으로 의도된다.
본 발명의 화학식 I 화합물 및 화학요법제는 상이한 호변이성질체 형태로 존재할 수도 있고, 이러한 모든 형태가 본 발명의 범위 내에 속한다. 용어 "호변이성질체" 또는 "호변이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환가능한 상이한 에너지의 구조 이성질체를 나타낸다. 예를 들어, 양성자 호변이성질체 (또한, 양성자성 호변이성질체라고도 공지되어 있음)는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예를 들어 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성질체화를 포함한다. 원자가 호변이성질체는 일부 결합 전자의 재구성에 의한 상호전환을 포함한다.
제약 조성물에는 화학식 I 화합물 및 본원에 기재된 부가 작용제 목록 중으로부터 선택된 화학요법제를 포함한 한 가지 초과 (예를 들어, 두 가지)의 제약상 활성 작용제가 임의의 제약상 불활성 부형제, 희석제, 담체 또는 활택제와 함께 구성된, 벌크 조성물와 개별 투여 단위 둘 다가 포괄된다. 이러한 벌크 조성물과 각각의 개별 투여 단위는 고정 량의 전술된 제약상 활성 작용제를 함유할 수 있다. 벌크 조성물은 아직까지 개별 투여 단위로 형성시키지 않았던 물질이다. 예시 투여 단위는 경구 투여 단위, 예를 들어 정제, 환제, 캡슐제 등이다. 유사하게, 제약 조성물을 투여함으로써 환자를 치료하는 방법은 또한, 벌크 조성물 및 개별 투여 단위를 투여하는 것을 포괄하는 것으로 의도된다.
제약 조성물은 또한, 하나 이상의 원자가 자연계에서 통상적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와는 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체되는 사실이 없다면, 본원에서 인용된 바와 동일한 본 발명의 동위원소-표지된 화합물을 포괄한다. 명시된 임의의 특정 원자 또는 원소의 모든 동위원소는 본 발명의 화합물 및 그의 용도의 범주 내로 고려된다. 본 발명의 화합물에 도입될 수 있는 예시적인 동위원소에는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소 및 요오드의 동위원소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 32P, 33P, 35S, 18F, 36Cl, 123I 및 125I가 포함된다. 본 발명의 동위원소 표지된 특정 화합물 (예를 들어, 3H 및 14C로 표지된 것)은 화합물 및/또는 기질 조직 분포 검정에 유용하다. 삼중수소 (3H) 및 탄소-14 (14C) 동위원소는 제조 및 검출 용이성의 측면에서 유용하다. 추가로, 보다 중량의 동위원소, 예를 들어 중수소 (2H)로 치환시키면, 대사 안정성이 보다 커짐에 따른 특정의 치료적 이점을 제공할 수 있으므로 (예를 들어, 생체내 반감기가 증가되거나 또는 요구되는 투여량이 감소됨), 몇몇 상황 하에서 바람직할 수 있다. 양전자 방출 동위원소, 예컨대 15O, 13N, 11C 및 18F는 기질 수용체 점유성을 조사하는 양전자 방출 단층촬영 (PET) 연구에 유용하다. 본 발명의 동위원소 표지된 화합물은 일반적으로 동위원소 표지되지 않은 시약을 동위원소 표지된 시약으로 치환시킴으로써 본원의 하기 반응식 및/또는 실시예에 개시된 것과 유사한 절차에 따라 제조될 수 있다.
화학식 I 화합물 및 화학요법제는 인간을 포함한 포유동물에서 과다증식성 장애를 치료적으로 처리 (예방적 처리 포함)하기 위한 치료 조합물에 사용하기 위한 표준 제약 실시에 따라서 제제화할 수 있다. 본 발명은 화학식 I 화합물을 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 활택제, 희석제 또는 부형제와 연합하여 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
적합한 담체, 희석제, 첨가제 및 부형제는 당업자에게 잘 공지되어 있고, 이것은 탄수화물, 왁스, 수용성 및/또는 수팽윤성 중합체, 친수성 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등과 같은 물질을 포함한다. 사용되는 특정 담체, 희석제 또는 부형제는 본 발명의 화합물이 적용되는 수단 및 목적에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 용매는 포유동물에 투여되기에 안전한 것으로 당업자에게 인식되는 (GRAS) 용매를 기초로 하여 선택된다. 일반적으로, 안전한 용매는 비독성 수성 용매, 예컨대 물, 및 물에 가용성이거나 혼화성인 다른 비독성 용매이다. 적합한 수성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, PEG 400, PEG 300), 디메틸술폭시드 (DMSO), 크레모포르 (예를 들어, 크레모포르 EL(CREMOPHOR EL)?, 바스프(BASF)), 및 이들의 혼합물을 포함한다. 제제는 또한 하나 이상의 완충제, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁화제, 보존제, 항산화제, 불투명화제, 활택제, 조작 보조제, 착색제, 감미제, 방향제, 향미제, 및 약물 (즉, 본 발명의 화합물 또는 그의 제약 조성물)을 모양 좋게 제공할 수 있거나 제약 제품 (즉, 의약)의 제조를 도울 수 있는 다른 공지의 첨가제를 포함할 수도 있다.
제제는 통상적인 용해 및 혼합 절차를 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 벌크 약물 물질 (즉, 본 발명의 화합물 또는 안정화된 형태의 화합물 (예를 들어, 시클로덱스트린 유도체 또는 다른 공지된 착화제와의 착체))을 상기 기재된 하나 이상의 부형제의 존재하에 적합한 용매에 용해시킨다. 전형적으로, 본 발명의 화합물을 제약 투여 형태로 제제화하여 쉽게 제어가능한 용량의 약물을 제공하고 환자가 처방된 투약법에 순응할 수 있게 한다.
적용될 제약 조성물 (또는 제제)은 약물 투여에 이용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 일반적으로, 분배를 위한 용품은 적절한 형태의 제약 제제가 안에 들어 있는 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당업자에게 널리 공지되어 있으며, 병 (플라스틱 및 유리), 사쉐, 앰플, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 물질이 이에 포함된다. 용기는 또한 포장 내용물에 부주의하게 접근하는 것을 방지하기 위해 임의의 변경이 불가능한 조립물을 포함할 수도 있다. 추가로, 용기에는 용기의 내용물을 기재한 라벨이 부착되어 있다. 라벨은 또한 적절한 경고문을 포함할 수도 있다.
본 발명의 화합물의 제약 제제는 다양한 투여 경로 및 유형을 위해 제조될 수 있다. 예를 들어, 목적하는 정도의 순도를 갖는 화학식 I 화합물을 동결건조된 제제, 분쇄된 분말 또는 수용액의 형태로 제약상 허용되는 희석제, 담체, 부형제 또는 안정화제 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1995) 18th edition, Mack Publ. Co., Easton, PA])와 임의로 혼합할 수 있다. 제제화는 주위 온도에서 적절한 pH에서 원하는 정도의 순도로 생리학상 허용되는 담체, 즉, 사용되는 용량 및 농도에서 수용자에게 비독성인 담체와의 혼합으로 수행될 수 있다. 제제의 pH는 주로 화합물의 특정 용도 및 농도에 따라 달라지지만, 약 3 내지 약 8의 범위일 수 있다.
제약 제제는 바람직하게 멸균성이다. 특히 생체내 투여를 위해 사용될 제제는 멸균상태이어야만 한다. 이러한 멸균은 멸균 여과 막을 통해 여과함으로써 용이하게 달성된다.
제약 제제는 통상적으로, 고형 조성물, 동결건조된 제제 또는 수성 용액으로서 보관할 수 있다.
본 발명의 제약 제제는 적정한 의료 행위에 일관된 방식으로, 즉 투여량, 투여 농도, 투여 스케줄, 투여 과정, 투여 비히클 및 투여 경로로 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자에는 치료할 특정 장애, 치료받을 특정 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 및 의료 전문인에게 공지된 다른 인자가 포함된다. 투여될 화합물의 "치료 유효량"은 이러한 고려 사항에 의해 좌우될 것이고, 이는 응고 인자 매개된 장애를 예방, 회복 또는 치료하는데 필요한 최소량이다. 이러한 양은 바람직하게, 숙주에게 독성이거나 숙주에게 훨씬 더 출혈이 일어나기 쉽게 하는 양 보다 적다.
용량 당 경구 또는 비경구 투여되는 화학식 I 화합물의 초기 제약 유효량은 약 0.01 내지 1000 mg/kg의 범위, 즉 하루에 환자 체중 1 kg 당 약 0.1 내지 20 mg의 범위일 것이며, 사용되는 화합물의 전형적인 초기 범위는 0.3 내지 15 mg/kg/일이었다. 화학식 I 화합물의 용량 및 투여될 화학요법제의 용량은 각각에 대해 단위 투여 형태 당 약 1 mg 내지 약 1000 mg, 또는 단위 투여 형태 당 약 10 mg 내지 약 100 mg의 범위일 수 있다. 화학식 I 화합물 및 화학요법제의 용량은 중량 기준으로 약 1:50 내지 약 50:1의 비율, 또는 중량 기준으로 약 1:10 내지 약 10:1의 비율로 투여될 수 있다.
허용되는 희석제, 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이팅제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 금속 착체 (예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈TM, 크레모포르 EL?, 플루로닉스TM 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다. 활성 제약 성분은 또한 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐)에, 또는 매크로에멀젼에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, (1995) Mack Publ. Co., Easton, PA]에 개시되어 있다.
화학식 I의 화합물의 서방형 제제가 제조될 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예에는 화학식 I의 화합물을 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함되며, 상기 매트릭스는 성형된 제품의 형태, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐 형태이다. 서방형 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (US 3773919), L-글루탐산 및 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 분해가능하지 않은 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해가능한 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 데포(LUPRON DEPOT)TM (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사가능한 미소구) 및 폴리-D(-)3-히드록시부티르산을 포함한다.
제약 제제에는 본원에 상세히 기재된 투여 경로에 적합한 것이 포함된다. 제제는 편리하게는 단위 투여 형태로 제공될 수 있으며 약학 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 기술 및 제제화는 일반적으로 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 18th Ed. (1995) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 기재되어 있다. 이러한 방법은 활성 성분을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제제는 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 다와 균일하고 치밀하게 회합시키고, 이어서 필요한 경우, 생성물을 성형함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 화학식 I의 화합물 및/또는 화합요법제의 제제는 별도의 단위, 예컨대 환제, 경질 또는 연질, 예를 들어 젤라틴 캡슐, 카쉐, 트로키, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산가능한 분말 또는 과립, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭시르 (각각 화학식 I의 화합물 및/또는 화학요법제의 미리 결정된 양을 함유함)로 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물의 양 및 화학요법제의 양은 조합 제제로서 환제, 캡슐, 용액 또는 현탁액으로 제제화될 수 있다. 다르게는, 화학식 I 화합물 및 화학요법제는 교대 투여를 위한 환제, 캡슐, 용액 또는 현탁액으로 개별적으로 제제화될 수 있다.
제제는 제약 조성물을 제조하는 분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조할 수 있고, 이러한 조성물은 맛 우수한 제제를 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제를 포함한 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 압착 정제는 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 표면 활성제 또는 분산제와 임의로 혼합된 분말 또는 과립과 같은 자유 유동 형태의 활성 성분을 적합한 기계에서 압착시켜 제조될 수 있다. 성형된 정제는 불활성 액상 희석제로 습윤화시킨 분말형 활성 성분의 혼합물을 적합한 기계에서 성형시켜 제조될 수 있다. 정제는 임의로 코팅 또는 스코어링될 수 있고, 이로부터의 활성 성분의 저속 또는 제어 방출이 제공되도록 임의로 제제화된다.
본 발명의 제약 제제의 정제 부형제에는 정제를 구성하는 분말형 약물의 벌크 용적을 증가시키기 위한 충전제 (또는 희석제); 정제를 섭취하였을 때, 이를 작은 단편, 이상적으로는 개별적 약물 입자로 와해시키는 것을 도와주어, 약물이 신속하게 용해 및 흡수되는 것을 증진시켜 주는 붕해제; 과립 및 정제를 요구되는 기계적 강도로 형성시켜, 이를 압축시킨 후에도 함께 정제를 보유하여, 포장, 선적 및 통상적인 취급 동안에 해당 정제가 그의 성분 분말로 와해되지 않도록 해줄 수 있는 결합제; 생성 과정 동안에 정제를 구성하는 분말의 유동성을 개선시켜 주는 활택제; 정제 제작 동안에 정제화 분말이 정제를 압착시키기 위해 사용된 장비에 부착되지 않도록 해주는 윤활제 (이들은 압착기를 통하여 분말 혼합물의 유동성을 개선시켜 주고, 조작 처리된 정제가 상기 장비로부터 사출됨에 따른 마찰과 파손을 최소화시킴); 정제를 구성하는 분말과, 제작 동안 정제의 외형을 펀칭하기 위해 사용되는 기계 간의 부착을 저하시키는, 활택제와 유사한 기능을 지닌 항부착제; 이에 보다 유쾌한 미각을 제공하거나 불유쾌한 미각을 은폐시키기 위해 정제 내로 혼입되는 향미제; 및 확인 및 환자 순응도를 도와주기 위한 착색제가 포함될 수 있다.
활성 성분을 정제 제조에 적합한 비독성의 제약상 허용되는 부형제와 혼합하여 함유하는 정제가 허용된다. 이러한 부형제는 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘 또는 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 정제는 코팅되지 않을 수도 있고, 또는 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시켜서 더 오랜 기간에 걸쳐 지속적으로 작용하도록 하는 미소피막화를 비롯한 공지의 기술로 코팅될 수도 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트를 단독으로 사용하거나 왁스와 함께 사용할 수 있다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 구강 및 피부를 치료하는 경우, 제제는 바람직하게는 활성 성분(들)을, 예를 들어 0.075 내지 20％ w/w의 양으로 함유하는 국소 연고 또는 크림으로서 도포된다. 연고제로 제제화되는 경우, 활성 성분은 파라핀계 또는 수혼화성 연고제 기제와 함께 사용될 수 있다. 다르게는, 활성 성분은 수중유 크림 기제를 함유하는 크림제로 제제화될 수 있다.
크림 기제의 수성 상은 다가 알콜, 즉 2개 이상의 히드록실기를 갖는 알콜, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-디올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, PEG 400) 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 국소 제제는 바람직하게는 활성 성분이 피부 또는 다른 환부를 통해 흡수 또는 침투되는 것을 증진시키는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 피부 침투 증진제의 예에는 디메틸 술폭시드 및 관련 유사체가 포함된다.
본 발명의 에멀젼의 오일 상은 공지된 방식으로 공지된 성분으로부터 구성될 수 있는데, 이에는 하나 이상의 유화제와 지방 또는 오일의 혼합물, 또는 하나 이상의 유화제와 지방 및 오일 둘 다의 혼합물이 포함된다. 바람직하게는, 친수성 유화제가 안정화제로서 작용하는 친유성 유화제와 함께 포함된다. 취합하면, 안정화제(들)을 수반하거나 수반하지 않는 유화제(들)이 유화성 왁스를 구성하고, 오일과 지방을 수반한 왁스는 크림 제제의 오일상 분산 상을 형성하는 유화성 연고 기제를 포함한다. 본 발명의 제제에 사용하기에 적합한 유화제 및 에멀젼 안정화제는 트윈? 60, 스팬(Span)? 80, 세토스테아릴 알콜, 벤질 알콜, 미리스틸 알콜, 모노-스테아레이트 글리세릴 및 나트륨 라우릴 술페이트를 포함한다.
본 발명의 제약 제제의 수성 현탁제는 활성 성분을, 수성 현탁제의 제조에 적합한 부형제와 혼합하여 함유한다. 이러한 부형제에는 현탁화제, 예컨대 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 크로스카르멜로스, 포비돈, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검, 및 분산제 또는 습윤제, 예컨대 자연 발생 포스파티드 (예를 들어, 레시틴), 알킬렌 옥시드와 지방산의 축합 생성물 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알콜의 축합 생성물 (예를 들어, 헵타데카에틸렌옥시세탄올), 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트)이 포함된다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-히드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린을 함유할 수 있다.
제약 조성물은 멸균성 주사용 제제, 예를 들어 멸균성 주사용 수성 또는 유지성 현탁제의 형태일 수 있다. 상기 현탁액은 상기 언급한 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 당업계에 공지된 바에 따라 제제화될 수 있다. 멸균성 주사용 제제는 비경구적으로 허용되는 무독성 희석제 또는 용매 중의 용제 또는 현탁제, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용제 또는 동결건조된 분말로부터 제조된 용제일 수 있다. 특히, 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이다. 추가로, 멸균 고정유가 용매 또는 현탁화 매질로서 통상적으로 사용될 수 있다. 상기 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 비롯한 임의의 배합 고정유가 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산을 주사가능한 제제에 마찬가지로 사용할 수 있다.
담체 물질과 배합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 치료할 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 인간에게 경구 투여하고자 하는 지속 방출 제제는, 전체 조성물의 약 5％ 내지 약 95％ (중량:중량)로 달라질 수 있는 적절하고도 편리한 양의 담체 물질과 함께 배합된 활성 물질을 대략 1 내지 1000 mg 함유할 수 있다. 제약 조성물은 투여를 위해 쉽게 측정가능한 양을 제공하도록 제조될 수 있다. 예를 들어, 정맥내 주입을 위해 의도된 수용액제는 약 30 mL/시간의 속도의 적합한 부피로 주입될 수 있도록 용액 1 mL 당 활성 성분 약 3 내지 500 ㎍을 함유할 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제제는 항산화제, 완충제, 정균제, 및 제제가 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액제, 및 현탁화제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액제를 포함한다.
안구에 대한 국소 투여에 적합한 제제는 또한 활성 성분이 적합한 담체, 특히 활성 성분용 수성 용매 중에 용해되거나 현탁된 점안제를 포함한다. 바람직하게는, 활성 성분은 약 0.5 내지 20％ w/w, 예를 들어 약 0.5 내지 10％ w/w, 예를 들어 약 1.5％ w/w의 농도로 이러한 제제에 존재한다.
구강으로의 국소 투여에 적합한 제제는 활성 성분을 향미 기제, 통상적으로는 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트 중에 포함하는 로젠지제; 활성 성분을 불활성 기제, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아 중에 포함하는 파스틸제; 및 활성 성분을 적합한 액체 담체 중에 포함하는 구강세척제를 포함한다.
직장 투여용 제제는 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 기제를 수반하는 좌제로서 제공될 수 있다.
폐내 또는 비측 투여에 적합한 제제는 예를 들어 0.1 내지 500 마이크로미터 범위의 입도 (0.5, 1, 30 마이크로미터, 35 마이크로미터 등의 마이크로미터 증가분의 0.1 내지 500 마이크로미터 범위의 입도 포함)를 가지며, 비측 통로를 통한 신속한 흡입에 의해 투여되거나, 또는 입을 통한 흡입에 의해 투여되어 폐포낭에 이르게 된다. 적합한 제제는 활성 성분의 수성 또는 유성 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 제제는 통상의 방법에 따라 제조될 수 있으며, 다른 치료제, 예컨대 하기 기재된 바와 같이 장애의 치료 또는 예방에 사용되는 화합물과 함께 전달될 수 있다.
질 투여에 적합한 제제는 활성 성분에 추가하여 당업계에 적절한 것으로 공지된 바와 같은 담체를 함유하는 질좌제, 탐폰제, 크림제, 겔제, 페이스트제, 발포제 또는 분무제로 제공될 수 있다.
제제는 단위-투여 또는 다중-투여 용기, 예를 들어 실링된 앰플 및 바이알에 포장될 수 있고, 사용 직전에 주사를 위한 멸균 액체 담체, 예를 들어 물을 첨가할 것만이 요구되는 냉동-건조 (동결건조) 상태로 보관될 수 있다. 즉시투여용 주사 용액 및 현탁액은 앞서 기재한 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다. 바람직한 단위 투여량 제제는 활성 성분을 본원에 상기 언급한 바와 같은 1일 용량 또는 단위 1일 분할-용량 또는 그의 적절한 분획으로 함유하는 것이다.
추가로, 본 발명은 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 활성 성분을 이를 위한 수의학적 담체와 함께 포함하는 수의학 조성물을 제공한다. 수의학적 담체는 조성물 투여 목적에 유용한 물질이고, 불활성이거나 수의학 분야에서 허용되는 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있고, 활성 성분과 상용가능하다. 이러한 수의학 조성물은 비경구, 경구 또는 임의의 다른 원하는 경로로 투여될 수 있다.
조합 요법
화학식 I 화합물은 전악성 및 비신생물성 또는 비악성 과다증식성 장애와 함께, 조혈 악성종양의 치료를 위한 특정 화학요법제와 함께 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 항과다증식 특성을 갖거나 조혈 악성종양의 치료에 유용한 화학요법제와의 조합 제제로, 제약 조합 제제 또는 투여 요법에서 조합된다. 제약 조합물 제제 또는 투여 요법의 화학요법제는 바람직하게는 화학식 I 화합물에 대한 상보적 활성을 가지며, 이에 따라 서로에게 불리한 영향을 미치지 않는다. 치료 조합물의 이러한 화합물은 의도된 목적에 유효한 양으로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 제약 제제는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I 화합물 및 화학요법제를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 치료 조합은 투여 요법에 의해 투여되며, 여기서 화학식 I 화합물의 치료 유효량은 매일 2회 내지 3주 마다 1회 (q3wk)의 범위로 투여되고, 화학요법제의 치료 유효량은 매일 2회 내지 3주 마다 1회의 범위로 교대로 개별적으로 투여된다.
본 발명의 치료 조합물은 과다증식성 장애의 치료에서 별도의, 동시 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서의, 화학식 I 화합물, 및 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈으로부터 선택된 화학요법제를 포함하는 생성물을 포함한다.
조합 요법은 동시 또는 순차적 방식으로 투여될 수 있다. 순차적으로 투여되는 경우, 조합물은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 조합 투여는 별도의 제제 또는 단일 제약 제제를 사용하는 공동 투여, 및 임의의 순서로의 연속 투여를 포함하고, 이때, 바람직하게는 둘 모두의 (또는 모든) 활성 작용제가 이들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 일정 기간이 존재한다.
상기한 공동 투여되는 작용제 중 임의의 것에 대한 적합한 투여량은 현재 이용되고 있는 것이며, 새로 확인된 작용제 및 다른 화학요법제 또는 치료제의 조합 작용 (상승작용)으로 인해 감소될 수 있으며, 이에 따라 치료 지수를 증가시키거나 또는 독성 또는 다른 부작용 또는 결과를 완화시킬 수 있다.
항암 요법의 특정 실시양태에서, 치료 조합물은 아주반트 요법으로서, 외과적 요법 및 방사선요법에 조합될 수 있다. 본 발명에 따른 조합 요법은 하나 이상의 화학식 I 화합물의 투여 및 하나 이상의 다른 암 치료 방법 또는 양식을 포함한다. 화학식 I 화합물(들) 및 화학요법제(들)의 양, 및 상대적인 투여 시점은 목적하는 조합 치료 효과를 달성하기 위해 선택될 것이다.
제약 조성물의 투여
본 발명의 치료 조합물을 치료하고자 하는 상태에 적절한 임의의 경로로 투여할 수 있다. 적합한 경로에는 경구, 비경구 (피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 흡입, 피내, 수막강내, 경막, 및 주입 기술 포함), 경피, 직장, 비내, 국소 (볼 및 설하 포함), 질, 복강내, 폐내 및 비내 투여가 포함된다. 국소 투여는 경피 패치 또는 이온삼투요법 장치와 같이 경피 투여를 이용하는 것을 포함할 수 있다. 약물의 제제화는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 논의되어 있다. 약물 제제화의 다른 예는 문헌 [Liberman, H. A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Vol 3, 2nd Ed., New York, NY]에서 찾아볼 수 있다. 국소 면역억제제 처리의 경우, 상기 화합물은 병변내 투여로 투여될 수 있는데, 이는 이식편을 이식 전에 해당 억제제로 관류시키거나 다른 방식으로 이와 접촉시키는 것을 포함한다. 바람직한 경로는 예를 들어 수용자의 상태에 따라 달라질 수 있음을 알 것이다. 화합물을 경구 투여하는 경우에는, 이를 제약상 허용되는 담체, 활택제 또는 부형제와 함께, 환제, 캡슐제, 정제 등으로서 제제화할 수 있다. 화합물을 비경구 투여하는 경우에는, 이를 제약상 허용되는 비경구 비히클 또는 희석제와 함께, 다음에 상세된 바와 같은 단위 투여 주사제 형태로 제제화할 수 있다.
인간 환자를 치료하기 위한 투여량은 화학식 I 화합물 약 10 mg 내지 약 1000 mg 범위, 예컨대 화합물의 약 100 mg 내지 약 300 mg 범위일 수 있다. 용량은 약력학 (PK) 및 약동학 (PD) 특성, 예를 들어 특정 화합물의 흡수, 분포, 대사 및 배출에 따라 1일 1회 (QD), 1일 2회 (BID) 또는 보다 빈번하게 투여될 수 있다. 또한, 독성 인자가 투여량 및 투약 요법 투여에 영향을 줄 수도 있다. 경구 투여되는 경우, 환제, 캡슐제 또는 정제를 명시된 기간 동안 매일 2회, 매일, 또는 덜 빈번하게, 예컨대 매주 또는 2주 또는 3주 마다 1회 섭취할 수 있다. 이러한 요법을 여러 요법 주기 동안 반복할 수 있다.
치료 방법
(1) 화학식 I 화합물과 (2) 화학요법제의 치료 조합물은 PI3 키나제 경로의 활성화를 특징으로 하는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 질환, 상태 및/또는 장애를 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 지질 키나제, 예컨대 PI3을 억제함으로써 치료될 수 있는 질환 또는 상태의 치료 방법을 포함한다. 한 실시양태에서, 조혈 악성종양의 치료를 위한 방법은 치료 조합물을 조합 제제로 또는 교대로 포유동물에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료 조합물은 치료 유효량의 화학식 I을 갖는 화합물, 및 치료 유효량의 덱사메타손, 티오테파, 독소루비신, 빈크리스틴, 리툭시맙, 시클로포스파미드, 프레드니손, 멜팔란, 레날리도미드, 보르테조밉, 라파마이신 및 시타라빈으로부터 선택된 하나 이상의 화학요법제를 포함한다. (1) 화학식 I 또는 II 화합물과 (2) 화학요법제의 치료 조합물은 종양, 암 및 신생물성 조직을 포함한 과다증식성 질환 또는 장애를, 전악성 및 비신생물성 또는 비악성 과다증식성 장애와 함께 치료하는데 사용할 수 있다. 한 실시양태에서는, 인간 환자를 치료 조합물 및 제약상 허용되는 담체, 보조제 또는 비히클을 사용하여 치료하며, 여기서 상기 치료 조합물의 화학식 I 화합물 또는 그의 대사물은 PI3 키나제 활성을 검출가능하게 억제하는 양으로 존재한다.
조혈 악성종양은 비호지킨 림프종, 미만성 거대 조혈 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, AML, MCL을 포함한다
본 발명의 또 다른 측면은 본원에 기재된 질환 또는 상태로 인해 고통받고 있는 포유동물 (예를 들어, 인간)에서 이러한 질환 또는 상태를 치료하는데 사용하기 위한 제약 조성물 또는 치료 조합물을 제공한다. 또한, 본원에 기재된 질환 및 상태로 인해 고통받고 있는 온혈 동물, 예를 들어 포유동물 (예를 들어, 인간)에서 이러한 장애를 치료하기 위한 의약을 제조하는데 있어서의, 제약 조성물의 용도를 제공한다.
화학식 I 화합물의 대사물
본원에 기재된 화학식 I 화합물의 생체내 대사 산물이 또한 본 발명의 범위에 속한다. 이러한 생성물은 예를 들어 투여된 화합물의 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 탈아미드화, 에스테르화, 탈에스테르화, 효소적 절단 등으로 생성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 화학식 I 화합물의 대사물, 예를 들어 본 발명의 화합물과 포유동물을 그의 대사 산물이 수득되기에 충분한 시간 동안 접촉시키는 것을 포함하는 과정에 의해 생성된 화합물을 포함한다.
전형적으로, 대사 산물은, 본 발명의 화합물의 방사선 표지된 (예를 들어, 14C 또는 3H) 동위원소를 제조하고, 이를 검출가능한 용량 (예를 들어, 약 0.5 mg/kg 초과)으로 래트, 마우스, 기니아 피그, 원숭이와 같은 동물 또는 인간에게 비경구 투여하고, 충분한 시간 동안 (전형적으로, 약 30초 내지 30시간) 대사가 일어나게 하고, 그의 전환 생성물을 뇨, 혈액 또는 다른 생물학적 샘플로부터 단리함으로써 확인한다. 이러한 생성물은 표지되었기 때문에 쉽게 단리된다 (다른 것들은 대사물 중에 유지되는 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 사용하여 단리됨). 대사물의 구조는 통상의 방식으로, 예를 들어 MS, LC/MS 또는 NMR 분석에 의해 측정한다. 일반적으로, 대사물의 분석은 당업자에게 널리 공지된 통상적인 약물 대사 연구와 동일한 방식으로 수행된다. 대사 산물은 생체내에서 달리 발견되지 않는 한, 본 발명의 화합물의 치료 투여량을 위한 진단학적 검정에 유용하다.
제조품
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 질환 및 장애의 치료에 유용한 화학식 I 화합물을 함유하는 제조품 또는 "키트"가 제공된다. 한 실시양태에서, 키트는 화학식 I 화합물을 포함하는 용기를 포함한다. 키트는 상기 용기와 연합되거나 그 위에 표지 또는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 용어 "포장 삽입물"은 치료 제품의 시판되는 포장물 내에 통상적으로 포함되어 있으며 이러한 치료 제품의 사용에 관한 적응증, 사용법, 용량, 투여, 금기 사항 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 지침서를 나타낸다. 적합한 용기에는 예를 들어 병, 바이알, 시린지, 블리스터 팩 등이 포함된다. 상기 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로 형성될 수 있다. 상기 용기는 증상의 치료에 효과적인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제제를 보유할 수 있으며, 멸균성 접근 용기를 가질 수 있다 (예를 들어, 상기 용기는 피하 주사용 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 상기 조성물 중 하나 이상의 활성 작용제는 화학식 I의 화합물이다. 라벨 또는 포장 삽입물은 해당 조성물이 선택된 상태, 예컨대 암의 치료에 사용된다는 것을 표시한다. 한 실시양태에서, 상기 라벨 또는 포장 삽입물은 화학식 I 화합물을 포함하는 조성물이 비정상적인 세포 성장으로 인한 장애의 치료를 위해 사용될 수 있음을 지시한다. 상기 라벨 또는 포장 삽입물은 또한 상기 조성물이 다른 장애를 치료하는데 사용될 수 있음을 표시할 수도 있다. 다르게는 또는 추가로, 제조품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 세균발육 저지용 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액이 포함된 제2 용기를 더 포함할 수 있다. 이것은 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질, 예를 들어 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 추가로 포함할 수 있다.
키트는 화학식 I의 화합물, 및 존재하는 경우 제2 제약 제제의 투여를 위한 설명서를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트가 화학식 I의 화합물을 포함하는 제1 조성물, 및 제2 제약 제제를 포함하는 경우, 키트는 제1 및 제2 제약 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 동시, 순차 또는 별도 투여하는 것에 대한 설명서를 더 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 키트는 화학식 I의 화합물의 경구용 고체 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐제의 전달에 적합하다. 바람직하게는, 이러한 키트는 수많은 단위 투여량을 포함한다. 이러한 키트는 의도된 사용 순서로 배향된 투여량을 갖는 카드를 포함할 수 있다. 이러한 키트의 예는 "블리스터 팩"이다. 블리스터 팩은 포장 산업에 널리 공지되어 있으며, 제약 단위 투여량 형태를 포장하기 위해 널리 이용된다. 바람직한 경우, 기억 보조품이 예를 들어 숫자, 문자 또는 다른 표기 형태로, 또는 투여량이 투여될 수 있는 치료 스케쥴에서 날짜가 지정되어 있는 달력 삽입물과 함께 제공될 수 있다.
한 실시양태에 따라, 키트는 (a) 화학식 I의 화합물이 함유된 제1 용기; 및 임의로 (b) 제2 제약 제제가 함유된 제2 용기를 포함할 수 있으며, 상기 제2 제약 제제는 항과다증식 활성을 갖는 제2 화합물을 포함한다. 다르게는 또는 추가로, 키트는 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 세균발육 저지용 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제3 용기를 더 포함할 수 있다. 이것은 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질, 예를 들어 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 추가로 포함할 수 있다.
키트가 화학식 I과 제2 치료제, 즉 화학요법제의 조성물을 포함하는 경우에는, 이러한 키트가 별도의 조성물을 함유하기 위한 용기, 예를 들어 분리된 병 또는 분리된 호일 패킷 (foil packet)을 포함할 수 있지만, 별도의 조성물은 분리되지 않은 단일 용기 내에 함유될 수도 있다. 전형적으로, 키트는 별도의 성분의 투여를 위한 설명서를 포함한다. 키트 형태는 별도의 성분을 바람직하게는 상이한 투여 형태 (예를 들어, 경구 및 비경구)로 투여하거나, 상이한 투여 간격으로 투여하거나, 또는 처방의가 조합물의 개별 성분의 적정이 바람직하다고 한 경우에 특히 유리하다.
일반적 제조 절차
일반적 절차 A-1
스즈끼 커플링:
Figure 112011079192510-pct00035
스즈끼-유형 커플링 반응은 피리미딘 고리의 2-위치에서 융합된 비시클릭 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 부착시키는데 유용하다 (반응식 4 참조). 일반적으로, 치환된 2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 5를 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)1H-인다졸 7 1.5 당량과 합하고, 물 및 동 부피의 아세토니트릴 중 1 몰 용액으로서 탄산나트륨 3 당량에 용해시킬 수 있다. 중간체 7은 US 2008/0039459; US 2008/0076768; US 2008/0076758; US 2008/0207611 (본원에 참고로 도입됨)의 방법에 따라 제조하였다. 촉매량 이상의 저가 팔라듐 시약, 예컨대 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드를 첨가한다. 지시된 인다졸 보론산 에스테르 대신에 다양한 보론산 또는 보론산 에스테르를 사용할 수 있다. 또한, 다르게는, 인다졸의 질소를 예를 들어 테트라히드로피라닐 기로 보호시킬 수 있다. 일부 경우, 수성층의 pH를 조정하기 위해 탄산나트륨 대신에 아세트산칼륨을 사용하였다. 이어서, 반응물을 바이오테이지 옵티마이저(Biotage Optimizer) 마이크로파 반응기 (바이오테이지, 인크.(Biotage, Inc.))에서 압력하에 10 내지 30분 동안 약 140 내지 150℃로 가열하였다. 내용물을 에틸 아세테이트 또는 또 다른 유기 용매로 추출하였다. 유기층을 증발시킨 후, 생성물 8을 실리카 상에서 또는 역상 HPLC에 의해 정제하였다.
일반적 절차 A-2
스즈끼 커플링:
Figure 112011079192510-pct00036
스즈끼-유형 커플링 반응은 피리미딘 고리의 2-위치에서 모노시클릭 헤테로아릴을 부착시키는데 유용하다 (반응식 4 참조). 일반적으로, 치환된 2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 5를 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리미딘-2-아민 7a 1.5 당량과 합하고, 물 및 동 부피의 아세토니트릴 중 1 몰 용액으로서 탄산나트륨 또는 탄산칼륨 3 당량에 용해시킨다. 중간체 7a는 US 2008/0269210; US 2008/0242665 (본원에 참고로 도입됨)의 방법에 따라 제조하였다. 촉매량 이상의 저가 팔라듐 시약, 예컨대 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드를 첨가한다. 지시된 피나콜 보론산 에스테르 대신에 다양한 보론산 또는 보론산 에스테르를 사용할 수 있다. 또한, 다르게는, 피리미딘-2-아민의 질소를 예를 들어 테트라히드로피라닐 기로 보호시킬 수 있다. 일부 경우, 수성층의 pH를 조정하기 위해 탄산나트륨 대신에 아세트산칼륨을 사용하였다. 이어서, 반응물을 예를 들어 바이오테이지 옵티마이저 마이크로파 반응기 (바이오테이지, 인크.)에서 압력하에 10 내지 30분 동안 약 100 내지 150℃로 가열하였다. 내용물을 에틸 아세테이트 또는 또 다른 유기 용매로 추출하였다. 유기층을 증발시킨 후, 생성물 8a를 실리카 상에서 또는 역상 HPLC에 의해 정제할 수 있다.
일반적 절차 B
아미드 커플링:
Figure 112011079192510-pct00037
2-(1H-인다졸-4-일)-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르복실산 13을 대략 0.1 M 농도로 DMF 중 HATU 1.5 eq, 알킬아민 3 eq 및 DIPEA 3 eq로 처리하였다. 반응이 완료될 때까지 교반하고, 에틸아세테이트 중에서 포화 중탄산염 용액으로 1회 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 여과하고 농축시켜, 조질의 중간체를 수득하였다. 이 중간체를 역상 HPLC를 통해 정제하여, 생성물 15를 수득하였다.
일반적 절차 B-1
아미드 커플링:
Figure 112011079192510-pct00038
4-모르폴리노-2-(피리딘-3-일)티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르복실산 13a를 대략 0.1 M 농도로 DMF 중 HATU 1.5 eq, 알킬아민 (R-NH2) 3 eq 및 DIPEA 3 eq로 처리하였다. 반응이 완료될 때까지 교반하고, 에틸아세테이트 중에서 포화 중탄산염 용액으로 1회 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 여과하고 농축시켜, 조질의 중간체를 수득하였다. 이 중간체를 역상 HPLC를 통해 정제하여, 생성물 15a를 수득하였다.
일반적 절차 B-2
아미드 커플링:
Figure 112011079192510-pct00039
2-클로로-4-모르폴리노-6-((피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘을 대략 0.1 M 농도로 DMF 중 커플링 시약, 예컨대 HATU 약 1.5 eq, 카르복실산 (RCO2H) 약 3 eq 및 과량의 아민 염기, 예컨대 DIPEA로 처리하였다. 반응이 완료될 때까지 교반하고, 에틸 아세테이트 중에서 포화 중탄산염 용액으로 1회 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 여과하고 농축시켜, 조질의 중간체를 수득하였다.
일반적 절차 B-3
환원성 아미노화:
Figure 112011079192510-pct00040
2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드를 디클로로에탄에 0.2 M 농도로 용해시켰다. 이 용액에 1급 또는 2급 아민 (R2NH) 1.5 내지 2.0 당량, 트리메틸오르토포르메이트 약 10 당량 및 아세트산 약 1 당량을 첨가하였다. 혼합물을 2 내지 6시간 동안 교반한 후, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 1.5 당량을 첨가하였다. 교반 12 내지 16시간 후에 반응물을 포화 중탄산나트륨에 붓고, 에틸 아세테이트로 수회 추출하여 환원성 아미노화 중간체를 수득하고, 이는 실리카 겔 상에서 정제하거나 또는 다음 반응에 조질의 형태로 사용하였다.
일반적 절차 C
술폰아미드 형성:
Figure 112011079192510-pct00041
2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-술포닐 클로라이드 17을 DCM에 현탁시킨 후에, 아민 (HNR2) 약 2 eq 및 아민 염기, 예컨대 DIPEA 약 3 eq를 첨가하였다. 반응을 완료될 때까지 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 조질의 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 염화암모늄으로 추출하고, 에틸 아세테이트로 1회 역추출하였다. 유기층을 합하고 농축 건조시켰다. 조질의 술폰아미드 중간체 18을 후속 스즈끼 커플링에 바로 사용하였다.
일반적 절차 D
알콜 합성:
Figure 112011079192510-pct00042
2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 4를 THF 중 0.2 몰 농도로 현탁시키고, 드라이 아이스/아세토니트릴 욕조에서 -50℃로 냉각시킨 후에 헥산 중 2.5 M n-BuLi 2 당량을 첨가하였다. 15분 후에 시클릭 또는 비시클릭 케톤 (R2C(=O)) 3.0 몰 당량을 용액에 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 -50℃에서 계속 교반하고, 이어서 대부분의 경우에 0℃로 되게 하였다. 반응이 TLC 또는 질량 분광분석기에 의해 완료되었을 때, 이를 포화 염화암모늄 용액에 켄칭하고, EtOAc로 2회 추출하였다. 유기층을 농축시키고, 조질의 혼합물로서 사용하거나, 실리카 상에서 정제하거나, 또는 생성물 12를 미량의 아세토니트릴에 용해하고, 여과하여, 남아있는 출발 물질 4를 제거할 수 있다.
일반적 절차 E
t-부톡실카르보닐 (BOC) 기의 제거:
Figure 112011079192510-pct00043
디옥산 중 10 당량 이상의 4 N HCl을 공용매로서 디클로로메탄의 존재 또는 부재하에 출발 물질에 첨가하였다 (일반적 반응식이 상기 도시되어 있지만, 유사한 스캐폴드를 또한 이용함). 때때로 수시간 동안 40℃로 가열하여 Boc 기를 제거할 필요가 있다. 반응물을 농축 건조시키고, 후속 반응에 조질의 생성물을 사용할 수 있다.
일반적 절차 F
하나의 용기에서의 스즈끼 커플링 반응:
Figure 112011079192510-pct00044
1 M Na2CO3 수용액 (3 eq) 및 아세토니트릴 (3 eq) 중 2-클로로-6-요오도-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 19 (1 eq), 페닐보론산 또는 헤테로사이클보론산 (R1-B(OH)2, 1.1 eq) 및 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (0.1 eq)를 10 내지 40분 동안 실링된 마이크로파 반응기에서 100℃로 가열하여 화합물 5를 수득하였다. 완료시, 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인다졸 7 (1.3 eq) 및 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (0.1 eq)를 동일한 용기에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실링된 마이크로파 반응기에서 10 내지 15분 동안 150℃로 가열하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 농축시켜 조질의 화합물 8을 수득하였다.
일반적 절차 G
아미드 커플링 반응:
Figure 112011079192510-pct00045
디클로로메탄 중 2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-아민 22 (1 eq), 산 클로라이드 (약 2 eq) 및 트리에틸아민 (2 eq)을 교반하였다. 반응을 완료될 때까지 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 혼합물을 증발시켜, 조질의 아미드 23을 수득하였고, 이를 정제하지 않고 다음 단계 반응에 바로 사용하였다.
일반적 절차 H
아세트아미드, 벤즈아미딘 및 술폰아미드의 제조:
Figure 112011079192510-pct00046
0℃로 냉각시킨 DCM 중 1-(2-클로로-4-모르폴리노티에노[2,3-d]피리미딘-6-일)-N-메틸메탄아민의 0.25 내지 0.40 M 용액에 1.5 eq의 TEA를 첨가한 후에, DCM에 희석된 1.0 내지 1.5 eq의 알킬 또는 아릴-산 클로라이드 또는 술포닐클로라이드를 적가하였다. 반응물을 주위 온도에서 교반하고, LC/MS에 의해 완료에 대해 모니터링하였다. 완료 후에, 반응 부피를 DCM으로 증가시키고, 묽은 수성 중탄산나트륨을 용액에 첨가하였다. 유기층 및 수성층을 분리하였다. 최종적으로, 유기층을 염수로 세척하고, 건조시켰다 (MgSO4). 건조된 유기 용액을 진공하에 농축시키고, 생성물을 필요한 경우에 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
일반적 절차 I
벤젠아민을 위한 아미드 커플링 반응:
Figure 112011079192510-pct00047
DMF 중 3-(2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)벤젠아민 24 (1 eq), 카르복실산 (1.5 eq), 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (0.2 eq), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-(N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 1.5 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.5 eq)을 실온에서 교반하였다. 반응을 완료될 때까지 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켜, 아미드 생성물 25를 수득하였다.
일반적 절차 J
6-요오도 교체 및 2-스즈끼 커플링:
Figure 112011079192510-pct00048
DMF (1.00 mL) 중 2-클로로-6-요오도-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 19 (0.05 g, 0.13 mmol)의 용액에 적절한 아닐린 (200 mol％), Cs2CO3 (50 mol％), Pd2(dba)3 (5 mol％) 및 크산트포스(XANTPHOS) (10 mol％)를 첨가하였다. 반응물을 압력하에 바이오테이지 옵티마이저 마이크로파 반응기에서 30분 동안 110℃로 가열하였다. 생성된 용액을 진공하에 농축시켜 화합물 26을 수득하였며, 후에 일반적 절차 A에 따른다.
일반적 절차 K
6-아미노알킬 아실화 및 2-스즈끼 커플링:
Figure 112011079192510-pct00049
CH2Cl2 (4 mL) 중 (2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메탄아민 27 (50 mg, 0.2 mmol)의 용액에 Et3N (84 ㎕, 0.6 mmol) 및 적절한 산 클로라이드 또는 그의 HCl 염 (0.3 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18 내지 48시간 동안 교반한 후, 물로 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공하에 농축시켰다. 2-클로로 조질의 생성물을 일반적 절차 A에 따라 보로네이트 시약 7 및 팔라듐 촉매와 커플링시켜 화합물 28을 수득하고, 이는 역상 HPLC 정제에 의해 정제하였다.
다르게는, DMF (5 mL) 중 (2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메탄아민 27 (111 mg, 0.39 mmol)의 용액에 2,6-루티딘 (48.2 ㎕, 0.41 mmol) 및 적절한 산 클로라이드 또는 그의 HCl 염 (0.39 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18 내지 72시간 동안 교반한 후, 물로 켄칭하였다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 진공하에 농축시켰다. 2-클로로 조질의 생성물을 일반적 절차 A에 따라 보로네이트 시약 7 및 팔라듐 촉매와 커플링시켜 화합물 28 20 mg을 수득하고, 이는 역상 HPLC 정제에 의해 정제하여였다.
일반적 절차 L
플루오로피리딘에 대한 아민 치환:
Figure 112011079192510-pct00050
N-메틸피롤리딘 (약 0.1 M) 중 2-클로로-6-(6-플루오로피리딘-3-일)-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘, 약 4 당량의 1급 또는 2급 아민 (R = H, C1-C12 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C12 카르보시클릴, C2-C20 헤테로시클릴, C6-C20 아릴, 또는 C1-C20 헤테로아릴), 및 약 2 당량의 디이소프로필에틸아민의 혼합물을 10 내지 40분 동안 실링된 마이크로파 반응기에서 약 130 내지 140℃로 가열한 후에 고진공하에 휘발성 물질을 제거하였다. 조질의 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 2-클로로-6-(6-아미노피리딘-3-일)-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘을 수득하였으며, 이는 일반적 절차 A에 따라 모노시클릭 헤테로아릴, 융합된 비시클릭 헤테로사이클 또는 헤테로아릴 보로네이트 시약과 스즈끼 커플링될 수 있다.
실시예
본 발명을 예시하기 위해, 하기 실시예가 포함된다. 그러나, 이러한 실시예는 본 발명을 제한하는 것이 아니고, 단지 본 발명의 실시 방법을 제안하는 것에 불과함을 이해해야 한다. 당업자는 기재된 화학 반응이 수많은 다른 본 발명의 PI3K 억제제의 제조를 위해 쉽게 채택될 수 있고, 본 발명의 화합물을 제조하는 다른 방법도 본 발명의 범위 내에 속한다는 것을 알 것이다. 예를 들어, 본 발명에 따른 예시되지 않은 화합물의 합성은 당업자에게 명백한 변형, 예를 들어 간섭기의 적절한 보호, 기재된 것 이외에 당업계 공지의 다른 적합한 시약의 사용, 및/또는 반응 조건의 통상적 변형을 통해 성공적으로 수행될 수 있다. 다르게는, 본원에 개시되거나 당업계에 공지된 다른 반응이 본 발명의 다른 화합물을 제조하기 위해 적용될 수 있는 것으로 인식될 것이다.
실시예 1
2,4-디클로로-티에노[3,2-d]피리미딘 3
Figure 112011079192510-pct00051
메틸 3-아미노-2-티오페네카르복실레이트 1 (13.48 g, 85.85 mmol) 및 우레아 (29.75 g, 5 eq)의 혼합물을 2시간 동안 190℃에서 가열하였다. 고온의 반응 혼합물을 수산화나트륨 용액에 붓고, 임의의 불용물을 여과에 의해 제거하였다. 이어서, 혼합물을 산성화시켜 (HCl, 2N), 1H-티에노[3,2-d]피리미딘-2,4-디온 2를 백색 침전물로서 수득하였고, 이를 여과에 의해 수집하고, 공기 건조하였다 (9.49 g, 66％).
Figure 112011079192510-pct00052
1H-티에노[3,2-d]피리미딘-2,4-디온 2 (9.49 g, 56.49 mmol) 및 옥시염화인 (150 mL)의 혼합물을 6시간 동안 환류 온도에서 가열하였다. 이어서, 반응 혼합물을 냉각시키고, 강력 교반하면서 얼음/물에 부어, 침전물을 수득하였다. 이어서, 혼합물을 여과하여, 2,4-디클로로-티에노[3,2-d]피리미딘 3 (8.68 g, 75％)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112011079192510-pct00053
실시예 2
2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘 4
Figure 112011079192510-pct00054
2,4-디클로로-티에노[3,2-d]피리미딘 3 (8.68 g, 42.34 mmol), 모르폴린 (8.11 mL, 2.2 eq) 및 MeOH (150 mL)의 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 여과하고, 물 및 MeOH로 세척하여, 2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘 4 (11.04 g, 100％)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112011079192510-pct00055
실시예 3
2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 10
Figure 112011079192510-pct00056
무수 THF (40 mL) 중 2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘 4 (1.75 g, 6.85 mmol)의 현탁액에 -78℃에서 헥산 (3.3 mL, 1.2 eq) 중 n-부틸리튬 (n-BuLi)의 2.5 M 용액을 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 무수 DMF (796 ㎕, 1.5 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 천천히 가온시켰다. 실온에서 2시간 더 지난 후, 반응 혼합물을 얼음/물에 부어, 황색 침전물을 수득하였다. 이를 여과에 의해 수집하고, 공기 건조시켜, 2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 10 (1.50 g, 77％)을 수득하였다.
Figure 112011079192510-pct00057
실시예 4
2-클로로-6-요오도-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 41
Figure 112011079192510-pct00058
THF (60 mL) 중 2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 39 (3.0 g, 11.1 mmol; 2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘의 합성을 위한 절차에 따르지만 3-아미노-4-메틸-티오펜-2-카르복실산 에틸 에스테르로 시작하여 제조됨)의 용액에 -78℃에서 n-BuLi (8.9 mL, Et2O 중 2.5 M)를 첨가하였다. 생성된 슬러리를 -40℃로 가온시키고, 50분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, THF (30 mL) 중 I2 (5.6 g, 22.2 mmol)의 용액을 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온시키고, 5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하여 반응을 켄칭하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기물을 포화 수성 Na2S2O3으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켜, 2-클로로-6-요오도-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘 41 (3.8 g, 84％ 수율)을 수득하였다.
실시예 5
4-(2-클로로-6-(피페라진-1-일메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린 30
Figure 112011079192510-pct00059
2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 10 (3.5 g), 1-BOC-피페라진 (2.76 g) 및 트리메틸오르토포르메이트 (4.05 mL)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 1,2-디클로로에탄 (300 mL) 중에서 교반하였다. 이에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (3.92 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 염수로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 추출하고, 건조시키고 (MgSO4), 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피를 이용하여 정제하여 4-(2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-일메틸)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (3.4 g)를 수득하였다. 디클로로메탄/메탄올 중 HCl로 처리하여 4-(2-클로로-6-(피페라진-1-일메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린 30을 수득하였다.
실시예 6
(2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)-N-메틸메탄아민 35
Figure 112011079192510-pct00060
2-클로로-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 10 (2.0 g)을 50 mL 톨루엔 및 50 mL THF에 용해시킨 후에 H2O 중 40％ 메틸아민 20 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 N2하에 실온에서 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 50 mL 메탄올 및 50 mL THF에 용해시키고, NaBH4를 부분적으로 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 24시간 동안 N2하에 실온에서 교반하고, 완전한 반응을 LC/MS에 의해 확인하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 조질의 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (EtOAc/EtOH)에 의해 정제하여 화합물 35 1.12 g (53％ 수율)을 수득하였다.
Figure 112011079192510-pct00061
실시예 7
(2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)-N-메틸메탄아민 37
Figure 112011079192510-pct00062
2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노-[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 36을 20 mL 톨루엔 및 20 mL THF에 용해시킨 후에, H2O 중 40％ 메틸아민 15 mL를 첨가하고, 반응물을 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고, 잔류물을 30 mL 메탄올 및 30 mL THF에 용해시킨 후에 NaBH4를 첨가하였다. 반응물을 24시간 이상 동안 실온에서 교반하고, 생성물 형성을 LC/MS에 의해 확인하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 조질의 생성물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 (2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)-N-메틸메탄아민 37 2.53 g (70％ 수율)을 수득하였다.
Figure 112011079192510-pct00063
.
실시예 8
4-(2-클로로-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린 31
Figure 112011079192510-pct00064
디클로로메탄 및 트리에틸아민 중 N-BOC-피페라진 및 메탄 술포닐 클로라이드 사이의 반응으로 4-메탄술포닐-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 수득하였다. 디클로로메탄 중 HCl (2 M)을 사용하는 BOC 보호기의 절단으로 1-메탄술포닐-피페라진 HCl 염을 수득하였다.
2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 10 (1.00 g), 1-메탄술포닐-피페라진 (750 mg) 및 트리메틸오르토포르메이트 (3.80 mL)의 혼합물을 실온에서 6시간 동안 1,2-디클로로에탄 (30 mL) 중에서 교반하였다. 이에 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (900 mg)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 염수로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 추출하고, 건조시키고 (MgSO4), 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 고온의 에틸 아세테이트로 분쇄하여 4-(2-클로로-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린 31을 백색 고체 (1.01 g)로 수득하였다.
실시예 9
4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1H-인다졸 7 - 경로 1
Figure 112011079192510-pct00065
중간체 7은 US 2008/0076768; US 2008/0076758; WO 2006/046031 (본원에 참고로 도입됨)의 방법에 따라 제조하였다.
실시예 10
1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인다졸 40
Figure 112011079192510-pct00066
중간체 40은 US 2008/0039459; US 2008/0076768; US 2008/0076758; US 2008/0207611 (본원에 참고로 도입됨)의 방법에 따라 제조하였다.
실시예 11
2-(1H-인다졸-4-일)-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 11
Figure 112011079192510-pct00067
2-클로로-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 10 (100 mg, 0.35 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1H-인다졸 (70) (95 mg, 0.39 mmol) 및 탄산나트륨 (112 mg)의 혼합물을 톨루엔 (2.5 mL), 에탄올 (1.5 mL) 및 물 (0.7 mL)에 현탁시켰다. 이에 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드 (13.5 mg)를 첨가하고, 반응 용기를 아르곤으로 플러슁하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 120℃에서 마이크로파로 가열하고, 이어서 DCM과 물 사이에 분배하고, 유기층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피를 이용하여 정제하여 2-(1H-인다졸-4-일)-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 11 (97 mg)을 수득하였다.
실시예 12
4-(2-(1H-인다졸-4-일)-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린 (화학식 Ia, GDC-0941):
<화학식 Ia>
Figure 112011079192510-pct00068
실시예 4로부터의 4-(2-클로로-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린 31 (2.00 g), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-1H-인다졸 7 (2.26 g), 톨루엔 (24 mL), 에탄올 (12 mL), 물 (6 mL), 탄산나트륨 (1.72 g) 및 PdCl2(PPh3)2 (325 mg)의 혼합물을 90분 동안 마이크로파에서 130℃로 가열하였다 (US 2008/0076768; WO 2006/046031 (본원에 참고로 도입됨)).
반응 혼합물을 냉각시키고, 클로로포름으로 희석하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (에틸 아세테이트, 이어서 5％ 에틸 아세테이트/메탄올)를 이용하여 정제한 후에 에테르로 분쇄하여 화학식 Ia 화합물, GDC-0941 (1.4 g)을 수득하였다.
Figure 112011079192510-pct00069
실시예 13
(S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온 (화학식 Ib):
<화학식 Ib>
Figure 112011079192510-pct00070
2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-카르브알데히드 36 (495 mg)을 일반적 절차 B-3을 통해 Boc-피페라진과 반응시켜 tert-부틸 4-((2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트를 수득하였다.
tert-부틸 4-((2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (777 mg)를 일반적 절차 E에 적용시켜 2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노-6-((피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘의 HCl 염을 수득하였다. 2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노-6-((피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘의 HCl 염 (590 mg)을 일반적 절차 B-2를 통해 락트산과 반응시켜 (S)-1-(4-((2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온을 수득하였다.
(S)-1-(4-((2-클로로-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온 (60 mg)을 일반적 절차 A-2를 통해 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리미딘-2-아민 50 mg과 반응시켜 화학식 Ib 10 mg을 수득하였다 (US 2008/0242665 (본원에 참고로 도입됨)).
Figure 112011079192510-pct00071
실시예 14
p110α (알파) PI3K 결합 검정
결합 검정: 초기 편광 실험은 애널리스트(Analyst) HT 96-384 (몰레큘라 디바이시즈 코포레이션(Molecular Devices Corp.), 미국 캘리포니아주 서니베일) 상에서 수행하였다. 형광 편광 친화도 측정을 위한 샘플은, 편광 완충제 (10 mM Tris pH 7.5, 50 mM NaCl, 4 mM MgCl2, 0.05％ Chaps, 및 1 mM DTT) 중 최종 농도 20 ㎍/mL에서 출발하는 p110알파 PI3K (업스테이트 셀 시그널링 솔루션즈(Upstate Cell Signaling Solutions), 미국 버지니아주 샤로츠빌)의 1:3 연속 희석액을 최종 농도 10 mM의 PIP2 (에켈론-인크.(Echelon-Inc.), 미국 유타주 솔트 레이크 시티)에 첨가함으로써 제조하였다. 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 후, GRP-1 및 PIP3-TAMRA 프로브 (에켈론-인크., 미국 유타주 솔트 레이크 시티)를 각각 100 nM 및 5 nM 최종 농도로 첨가하여 반응을 중지시켰다. 384웰 흑색 저-용적 프록시플레이트(Proxiplate, 퍼킨엘머(PerkinElmer), 미국 메사추세츠주 웰즐리)에서 로다민 형광체 (λex = 530 nm; λem = 590 nm)에 대하여 표준 차단 필터를 이용하여 판독하였다. 형광 편광 값을 단백질 농도의 함수로서 플롯팅하고, 데이터를 칼라이다그래프(KaleidaGraph) 소프트웨어 (시너지 소프트웨어(Synergy software), 미국 펜실베니아주 리딩)를 이용하는 4-변수 방정식에 대입하여 EC50 값을 수득하였다. 또한, 이 실험은 억제제를 이용하는 후속 경쟁 실험에 사용하기에 적절한 단백질 농도를 설정한다.
억제제 IC50 값을 편광 완충제 중 25 mM ATP (셀 시그널링 테크놀로지, 인크.(Cell Signaling Technology, Inc.), 미국 매사추세츠주 댄버스)의 최종 농도에서 길항제의 1:3 연속 희석물을 함유하는 웰에 PIP2 (10 mM 최종 농도)와 조합된 0.04 mg/mL p110알파 PI3K (최종 농도)를 첨가하여 결정하였다. 실온에서 30분의 인큐베이션한 시간 후에, GRP-1 및 PIP3-TAMRA 프로브 (에켈론-인크., 미국 유타주 솔트 레이크 시티)를 각각 100 nM 및 5 nM 최종 농도로 첨가하여 반응을 중지시켰다. 384웰 흑색 저-용적 프록시 플레이트(퍼킨엘머, 미국 메사추세츠주 웰즐리)에서 로다민 형광체 (λex = 530 nm; λem = 590 nm)에 대하여 표준 차단 필터를 이용하여 판독하였다. 형광 편광 값을 길항제 농도의 함수로서 플롯팅하고, 데이터를 검정 익스플로러(Explorer) 소프트웨어 (MDL, 미국 캘리포니아주 산 라몬)의 4-변수 방정식에 대입하여 IC50 값을 수득하였다.
다르게는, PI3K의 억제는 정제된 재조합 효소 및 ATP를 1 μM의 농도로 사용하는 방사성측정 검정으로 결정하였다. 화합물은 100％ DMSO에서 연속적으로 희석하였다. 키나제 반응물을 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하고, PBS를 첨가하여 반응을 종결시켰다. 이후에 IC50 값을 S자형 용량-반응 곡선 대입 (가변 경사)을 사용하여 결정하였다.
실시예 15
시험관내 세포 증식 검정
화학식 I 또는 II 화합물의 효능은 하기 프로토콜을 사용하는 세포 증식 검정에 의해 측정하였다 (문헌 [Mendoza et al. (2002) Cancer Res. 62:5485-5488]). 시약 및 프로토콜을 포함하여, 셀타이터-글로? 발광 세포 생존율 검정은 상업적으로 이용가능하다 (프로메가 코포레이션, 미국 위스콘신주 매디슨, 테크니칼 불레틴 TB288). 검정은 세포에 진입하여 세포 증식을 억제하는 화합물의 능력을 평가한다. 검정 원리는 셀-타이터 글로 시약의 첨가가 세포 용해 및 루시페라제 반응을 통한 발광 신호의 생성을 유발하는 동종 검정에서 존재하는 ATP를 정량하여 존재하는 생존 세포의 수의 결정에 기초한다. 발광 신호는 존재하는 ATP의 양에 비례한다.
절차:
제1일 - 세포 플레이트 (384웰 흑색, 투명 바닥, 마이크로클리어, 팔콘 #353962로부터의 뚜껑이 있는 TC 플레이트)를 시딩하고, 세포를 수확하고, 세포를 검정 3일 동안 384웰 세포 플레이트에 웰 당 54 ㎕ 당 1000개 세포로 시딩한다. 세포 배양 배지: RPMI 또는 DMEM 높은 글루코스, 10％ 태아 소 혈청, 2 mM L-글루타민, P/S. 37℃, 5％ CO2에서 밤새 인큐베이션한다.
제2일 - 세포, 화합물 희석물, DMSO 플레이트 (9개 점에 대해 연속 1:2)에 약물을 첨가하고, 10 mM의 화합물 20 ㎕를 96웰 플레이트의 제2 칼럼에 첨가한다. 정밀도를 사용하여 총 9개 점에 대해 플레이트 (10 ㎕ + 20 ㎕ 100％ DMSO)를 가로질러 연속 1:2 수행한다. 배지를 넌크(Nunc)로부터의 96웰 원추형 바닥 폴리프로필렌 플레이트 (cat.# 249946) (1:50 희석)에 플레이팅한다. 배지 147 ㎕를 모든 웰에 첨가한다. DMSO 플레이트의 각각의 웰로부터의 DMSO + 화합물 3 ㎕를 래피드플레이트를 사용하여 배지 플레이트 상의 각각의 상응하는 웰로 전달한다. 2가지 약물 콤보 연구를 위해, DMSO 플레이트의 각각의 웰로부터의 DMSO + 화합물의 한 가지 약물 1.5 ㎕를 래피드플레이트를 사용하여 배지 플레이트 상의 각각의 상응하는 웰로 전달한다. 이어서, 다른 약물 1.5 ㎕를 배지 플레이트로 전달한다.
세포, 세포 플레이트에 약물을 첨가하고 (1:10 희석), 배지 + 화합물 6 ㎕를 세포에 직접 첨가한다 (세포 상에 이미 배지 54 ㎕가 존재함). 자주 개봉되지는 않을 인큐베이터에서 37℃, 5％ CO2에서 3일 동안 인큐베이션한다.
제5일 - 플레이트를 전개하고, 셀 타이터 글로 완충제를 실온에서 해동시킨다. 세포 플레이트를 37℃로부터 꺼내어, 약 30분 동안 실온과 평형화시킨다. 셀 타이터 글로 완충제를 셀 타이터 글로 기질에 첨가한다 (병 대 병으로 첨가함). 셀 타이터 글로 시약 (프로메가 cat.# G7572) 30 ㎕를 세포의 각 웰에 첨가한다. 약 30분 동안 플레이트 진탕기 상에 놓아둔다. 애널리스트 HT 플레이트 판독기 (웰 당 절반 두번째) 상에서 발광을 판독한다.
세포 생존율 검정 및 조합 검정: 세포를 16시간 동안 384웰 플레이트에 웰 당 1000개 내지 2000개 세포로 시딩하였다. 제2일에, 96웰 플레이트 중의 DMSO에서 9개의 연속 1:2 화합물 희석물을 만들었다. 래피드플레이트 로보트 (자이마크 코포레이션(Zymark Corp.), 미국 매사추세츠주 홉킨톤)를 이용하여 상기 화합물을 성장 배지 내로 추가로 희석하였다. 이어서, 이와 같이 희숙시킨 화합물을 384웰 세포 플레이트 중의 4중 웰에 첨가하고, 37℃ 및 5％ CO2에서 인큐베이션하였다. 4일 후에, 제조업자의 지시에 따라서 셀-타이터 글로 (프로메가)를 사용하여 발광에 의해 생존 세포의 상대적 수를 측정하고, 발락 멀티라벨 (Wallac Multilabel) 판독기 (퍼킨엘머, 포스터 시티) 상에서 판독하였다. EC50 값을 프리즘 4.0 소프트웨어 (그래프패드(GraphPad), 샌 디에고)를 사용하여 계산하였다. 조합 검정에서는 약물을 4X EC50 농도에서 출발하여 투여하였다. 약물의 EC50이 >2.5 μM 인 경우라면, 사용되는 최고 농도는 10 μM였다. PI3K 억제제 및 화학요법제는 모든 검정에서 동시에 첨가하거나 또는 4시간 간격 (하나 첨가 후에 다른 것 첨가)으로 별도로 첨가하였다.
추가의 예시적 시험관내 세포 증식 검정은 다음 단계를 포함한다:
1. 배지 중에 약 104개 세포 (세포주 및 종양 유형에 관해서는 도 1A-C 참조)를 함유하는 세포 배양물 100 ㎕의 분취액을, 불투명 벽을 두른 384웰 플레이트의 각각의 웰에 침착시킨다.
2. 배지를 함유하고 세포는 함유하지 않는 대조군 웰을 제조한다.
3. 화합물을 실험 웰에 첨가하고, 3 내지 5일 동안 인큐베이션한다.
4. 플레이트를 대략 30분 동안 실온으로 평형화시킨다.
5. 각각의 웰에 존재하는 세포 배양 배지의 부피와 동일한 부피의 셀타이터-글로 시약을 첨가한다.
6. 내용물을 오비탈 진탕기 상에서 2분 동안 혼합하여 세포 용해를 유도한다.
7. 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨다.
8. 발광을 기록하고, RLU (= 상대적 발광 단위)로서 그래프로 보고한다.
9. 조합 지수를 얻기 위해 CalcuSyn 소프트웨어 (바이오소프트(Biosoft), 영국 캠브리지)로 슈 및 탈라레이 조합 방법 및 용량-효과 분석을 이용하여 분석한다.
다르게는, 세포를 최적 밀도로 96웰 플레이트에 시딩하고, 시험 화합물의 존재하에 4일 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 알라마 블루(Alamar Blue)TM를 검정 배지에 첨가하고, 세포를 6시간 동안 인큐베이션한 후, 544 nm 여기, 590 nm 방출에서 판독하였다. EC50 값은 S자형 용량-반응 곡선 대입을 이용하여 계산하였다.
다르게는, 증식/생존율을 셀 타이터 글로 시약 (프로메가 인크., 미국 위스콘신주 매디슨)을 사용하여 약물 처리 48시간 후에 분석하였다. DMSO 처리를 모든 생존율 검정에서 대조군으로 사용하였다. IC50 값을 XL 대입 소프트웨어 (IDBS, 미국 캘리포니아주 알라메다)를 사용하여 계산하였다.
AML 세포주 AP-1060, EOL-1, FKH-1, GF-D8, HEL, HL-60, HNT-34, 카수미(Kasumi)-1, KG-1, ME-1, ML-2, MOLM-13, MOLM-16, MV4-11, NOMO-1, OCI-AML2, OCI-AML3, OCI-AML5, OCI-M1, OCI-M2, PL-21, SET-2, SIG-M5, SKM-1, THP-1, UKE-1 및 UT-7을 ATCC 또는 DSMZ로부터 수득하였다. 세포를 10％ 열-불활성화 FBS (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 및 2 mol/L L-글루타민을 포함하는 RPMI 1640 배지에서 유지시켰다. 웨스턴 블롯팅을 위한 항체를 셀 시그널 테크놀로지(Cell Signal Technology)로부터 구입하였으며, 예외로 p110δ 항체는 에피토믹스(Epitomics)로부터 구하였다. 억제제 GDC-0941은 제넨테크에서 합성하였다. 라파마이신, Ara-C 및 다우노루비신은 시그마로부터 구입하였다. 모든 화합물을 DMSO 중 원액 용액으로 제조하고, 사용시 검정 완충제에서 희석하였다. 모세포를 피콜(Ficoll) 분리에 의해 AML 환자 말초혈 또는 골수 샘플로부터 단리하였다. PBS에서 세척한 후에, 단리된 세포를 10％ FBS 및 지시된 바와 같은 시토카인 칵테일 (IGF-1, SCF, GMCSF 및 IL-3, 각각 10 ng/ml)을 포함하는 RPMI 1640 배지에서 배양하였다.
인간 다발성 골수종 세포주는 모두 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC, 미국 버지니아주 매나사스)으로부터 수득되고, 또한 이전 연구 ()에서 언급되었다. 세포를 5％ CO2하에 37℃에서 10％ 태아 소 혈청, 100 단위/ml 페니실린, 2 mM L-글루타민 및 100 mg/ml 스트렙토마이신 (라이프 테크놀로지(Life Technology), 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드)이 보충된 RPMI 1640 배지에서 배양하였다.
실시예 16
생체내 마우스 종양 이종이식편 효능
마우스: 암컷 중증의 복합 면역결핍 마우스 (폭스 체이스(Fox Chase) SCID?, C.B-17/IcrHsd, 하를란(Harlan))는 8 내지 9주령이었으며, 연구 제0일에 15.1 내지 21.4 그램의 BW 범위를 가졌다. 동물에게 ad 리비툼 물 (역삼투, 1 ppm Cl), 및 18.0％ 조질의 단백질, 5.0％ 조질의 지방 및 5.0％ 조질의 섬유로 이루어진 NIH 31 변형 및 조사된 랩 다이어트(Lab Diet)?를 공급하였다. 마우스를 21 내지 22℃ (70 내지 72℉) 및 40 내지 60％ 습도에서 12시간 명주기 상의 정적 마이크로 격리기에서 조사된 알파-Dri? bed-o'cobs? 실험실 동물 베딩(Bedding)에 수용하였다. PRC는 특히 통제, 절약, 외과적 절차, 음식 및 유동식 조절, 및 수의학적 진료에 대한 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 안내의 제안에 따른다. PRC의 동물 관리 및 사용 프로그램은 실험실 동물의 관리 및 사용에 대해 허용된 표준을 준수하는 것을 보장하는, 국제 실험실 동물 관리 평가 인증 협회 (AAALAC)에 의해 승인된다.
종양 이식: 이종이식을 암 세포로 개시하였다. 세포를 10％ 태아 소 혈청, 2 mM 글루타민, 100 단위/mL 페니실린, 100 ㎍/mL 스트렙토마이신 술페이트 및 25 ㎍/mL 겐타미신이 보충된 RPMI 1640 배지에서 배양하였다. 세포를 지수 성장 동안 수확하고, 5 x 107개 세포/mL의 농도에서 인산염 완충 염수 (PBS)에 재현탁시켰다. 종양 이식 당일에, 각각의 시험 마우스에 1 x 107개 세포 (0.2 mL)를 제공하여 오른쪽 옆구리에 피하 이식하고, 종양 성장을 100 내지 150 mm3의 목적하는 범위에 접근한 평균 크기로 모니터링하였다. 연구 제0일로 지정된 종양 이식 21일 후에, 마우스를 각각 75 내지 172 mm3 범위의 개별 종양 부피 및 120 내지 121 mm3의 그룹 평균 종양 부피를 갖는 10마리 마우스로 구성된 4개의 그룹으로 배치하였다 (부록 A 참조). 부피는 하기 식을 이용하여 계산하였다:
Figure 112011079192510-pct00072
.
여기서, w = 종양의 폭 및 l = 종양의 길이 (mm)이다. 1 mg이 1 mm3의 종양 부피에 해당한다는 추측 하에서 종양 중량을 추정할 수도 있다.
치료제: 화학식 Ia 화합물 (GDC-0941, 제넨테크, 인크.)을 73％ 활성 작용제를 함유하는 염 형태의 건조 분말로 공급하고, 빛으로부터 보호된 실온에서 보관하였다. 약물 용량을 탈이온수 중 0.5％ 메틸셀룰로스:0.2％ 트윈 80 (MC/Tw80, "비히클")으로 매주 준비하고, 4℃에서 보관하였다. 73％ 활성 작용제를 함유하는 염 형태를 G-033829 용량의 제제에 사용하였다. 리툭시맙 (리툭산?, 주사용 10 mg/mL, 제넨테크, Lot #M79901)을 임상 약물로 구입하였다. 리툭시맙의 용량을 원액의 분취액을 멸균 염수 (0.9％ NaCl)로 희숙시켜 각각의 투여일에 준비하였다. 모든 용량은 체중 20 그램 당 0.2 mL의 부피 (10 mL/kg)에서 언급된 mg/kg 용량을 전달하도록 제제화하였다.
처리: 모든 용량은 개별 동물의 체중에 대해 등급화하고, 각각의 도에 나타낸 경로로 제공하였다.
종말점: 종양을 캘리퍼를 이용하여 각각의 주에 2회 측정하였다. 마우스를 개별적으로 모니터링하고, 각각의 동물을 그의 종양이 1500 mm3의 부피에 도달하였을 때 또는 제40일의 연구 종점에 (이 중 먼저 도달한 시점에) 안락사시켰다. 그러나, 대조군 종양의 자가-제한적 성장 때문에, 종말점을 분석을 위해 1000 mm3으로 감소시켰다. 각각의 마우스에 대한 시간 대 종말점 (TTE)을 하기 식으로부터 계산하였다:
Figure 112011079192510-pct00073
.
여기서, b는 절편이고, m은 로그-변환 종양 성장 데이터 세트의 선형 회귀에 의해 수득한 선의 기울기이다. 데이터 세트는 연구 종말점 부피를 초과하는 첫번째 관찰 및 종말점 부피의 달성 직전의 3회 연속적 관찰로 구성되었다. 종말점에 도달하지 않은 동물에게 연구 마지막 날과 동일한 TTE 값을 할당하였다. 우연한 (NTRa) 또는 알려지지 않은 원인 (NTRu)으로 인한 NTR (비-치료-관련) 사망으로 분류된 동물을 TTE 연산 (및 모든 추가의 분석)에서 제외하였다. TR (치료 연관) 사망 또는 NTRm (전이로 인한 비-치료-관련 사망)으로 분류된 동물에게 사망 당일과 동일한 TTE 값을 할당하였다. 처리 결과는 종양 성장 지연 (TGD)에 의해 평가하였으며, 이를 대조군과 비교하여 처리군에서 종말점에 대한 중간 시간 (TTE)의 증가로 규정하였다:
Figure 112011079192510-pct00074
.
일로 표현하거나, 또는 대조군의 중간 TTE의 백분율로 표현하였다:
Figure 112011079192510-pct00075
.
여기서, T = 처리군에 대한 중간 TTE, C = 대조군에 대한 중간 TTE (그룹 1). 처리는 동물에서 종양의 부분 퇴행(PR) 또는 완전 퇴행(CR)을 일으킬 수도 있다. PR 반응에서, 종양 부피는 연구 과정 동안에 3회 연속 측정에 대해 제1일 부피의 50％ 이하이고, 이들 3회 측정 중의 하나 이상에서 13.5 mm3 이상이다. CR 반응에서, 종양 부피는 연구 과정 동안에 3회 연속 측정에 대해 13.5 mm3 미만이다. 연구 종결시 CR 반응을 갖는 동물은 추가로 종양-비함유 생존자 (TFS)로 분류된다. 동물을 퇴행 반응에 대해 모니터링하였다.
독성: 연구의 처음 5일 동안 매일 동물의 체중을 재고 그 다음에는 매주 2회씩 체중을 재었다. 임의의 불리한 치료-관련 부작용의 명백한 징후에 대해 마우스를 빈번하게 관찰하고, 임상 독성 징후가 관찰될 때 이를 기록하였다. 허용되는 독성을, 연구 동안에 20％ 미만의 그룹 평균 체중(BW) 손실 및 10 마리의 처리된 동물 중에서 한 마리 이하의 치료-관련(TR) 사망으로서 정의하였다. 더욱 큰 독성을 가져오는 임의의 투약 요법은 최대 허용 용량(MTD)을 초과하는 것으로 간주된다. 사망은 임상 징후 및/또는 부검에 의해 입증될 때 치료 부작용에 기인한다면 TR로 분류되거나, 또는 투약 기간 동안에 또는 마지막 투여의 10일 이내에 알려지지 않은 원인에 기인한다면 또한 TR로 분류될 수 있다. 사망이 치료 부작용에 관련된다는 증거가 존재하지 않는다면 사망은 NTR로 분류된다.
실시예 17
B 세포 및 골수종 세포주의 GDC-0941 처리 후 p-Akt, p-BAD 및 p-S6 리보좀 단백질의 검출을 위한 웨스턴 블롯팅
물질: 전기영동 및 블롯팅 완충제 원액을 위한 모든 시약은 인비트로젠(Invitrogen)으로부터의 것이다.
B 세포주 (DoHH2 및 WSU-DLCL2) 및 골수종 세포주 (OPM2 및 U266)를 Pen/Strep 및 글루타민의 존재하에 RPMI-1640/10％ FBS에서 유지시켰다.
프로토콜:
1. 10 cm 페트리 디쉬 (각각의 세포주에 대해 2개의 접시)에서 10 mL 배양 배지 중에 각각의 세포주의 107개 세포를 시딩한다.
2. 최종 5 μM 약물을 위해 10 mL 배양물의 한 접시에 10 mM GDC-0941 원액 (DMSO 중) 5 ㎕를 첨가하고, 대조군으로 다른 접시에 DMSO 5 ㎕를 첨가한다.
3. 수확 전에 세포를 4시간 동안 37℃, 5％ CO2 인큐베이터에 넣어둔다.
4. 15 mL 원추형 튜브에 9 mL 배양물 (9 x 106개 세포에 해당됨)을 수확하고, 펠릿화하고, 1x SDS 샘플 완충제로 세포 용해물을 만든다. FACS를 위해 5 mL FACS 튜브 (BD)에 각각의 조건의 다른 1 mL (1 x 106개 세포에 해당됨)를 전달한다.
5. 세포를 차가운 PBS로 1회 세척한다.
6. 단백질 샘플의 OD를 측정하고, NuPAGE 전기영동 시스템 시약으로 샘플을 제조하여 각각의 20 ㎍를 로딩한다.
7. 전기영동을 위한 각각의 단백질 샘플을 적절한 양의 NuPAGE LDS 샘플 완충제 및 환원제와 혼합하고, 10분 동안 70℃ 열을 적용한다.
8. 시블루(SeeBlue) 플러스2 사전-염색된 표준물 10 ㎕ 및 각각의 샘플 20 ㎍를 4-12％ NuPAGE 노르벡스(Norvex) 비스-트리스 겔에 로딩하고, 항산화제 (엑스셀 슈어록(XCell SureLock) 미니-세포 장치에서 1시간 동안 135 볼트)의 존재하에 MES-SDS 완충제로 전개시킨다.
9. iBlot 장치를 이용하여 겔을 블롯팅 막으로 전달한다.
10. 1X TBST 완충제로 1회 세척한다.
11. 2시간 동안 20 mL 1x TBST 5％ 탈지유로 막을 차단한다.
12. 1X TBST 완충제로 3회 세척한다.
13. 10 mL 1X TBST 5％ BSA 및 1차 ab (p-Akt, 클론 193H12, p-BAD, 클론 185D10 및 p-S6RP, 클론 D57.2.2D, 베타-액틴, 클론 13E5, 셀 시그널링) 중에 4℃에서 밤새 적절한 희석 농도로 막을 인큐베이션한다. p-Akt 및 p-6SRP 및 베타-액틴 토끼 ab를 동일한 막에 첨가하고, 다른 것은 각각 별도의 막에 첨가한다 (초기에 다중 겔이 생성됨).
14. 1X TBST 완충제로 3회 세척한다.
15. 실온에서 2시간 동안 10 mL 1X TBST 완충제/5％ 탈지유 중에 적절한 희석 농도로 HRP-접합된 염소 항-토끼 ab와 막을 인큐베이션한다.
16. 1X TBST 완충제로 3회 세척한다.
17. 3분 동안 3 mL LumiGLO와 막을 인큐베이션하고, 잉여 용액을 배수시키고, x선 필름에 노출시킨다.
다르게는, 각각의 조건에 대해 10X106개 세포를 10 cm2 플레이트에 플레이팅하고, 세포를 GDC-0941, 덱사메타손 또는 레날리도미드 및/또는 이들의 조합을 사용하여 처리하였다. DMSO 처리를 대조군으로 사용하였다. 세포를 차가운 PBS로 1회 세척하고, 1X 세포 용해 완충제 (셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology), 미국 매사추세츠주 비벌리)를 이용하여 용해시켰다. 동일한 양의 단백질을 NuPAGE 비스-트리스 겔 (인비트로젠, 미국 캘리포니아주 칼스배드)을 사용하여 분할시켰다. 웨스턴 블롯 분석은 항-포스포-Akt (세린 473), 항-PTEN, 항-포스포-BAD (세린 136), 항-포스포-FoXO 1/3a, Bim, 절단된 카스파제 9, 절단된 카스파제 3, p27, 및 절단된 PARP 항체 (셀 시그널링 테크놀로지, 미국 매사추세츠주 비벌리)를 사용하여 수행하였다. 전체 AKT, 전체 BAD, 전체 Foxo3a 및 β-액틴 (시그마) 수준을 로딩 대조군으로 사용하였다.
실시예 18
GDC-0941 처리 후 p-Akt 및 p-S6 리보좀 단백질의 세포내 검출을 위한 FACS 프로토콜
B 세포주 (DoHH2 및 WSU-DLCL2) 및 골수종 세포주 (OPM2 및 U266)를 Pen/Strep 및 글루타민의 존재하에 RPMI-1640/10％ FBS에서 유지시켰다.
프로토콜:
1. 10 cm 페트리 디쉬 (각각의 세포주에 대해 2개의 접시)에서 10 mL 배양 배지 중에 각각의 세포주의 107개 세포를 시딩한다.
2. 최종 5 μM 약물을 위해 10 mL 배양물에 10 mM GDC-0941 원액 (DMSO 중) 5 ㎕를 첨가하고, 대조군으로 다른 접시에 DMSO 5 ㎕를 첨가한다.
3. 수확 전에 세포를 4시간 동안 37℃, 5％ CO2 인큐베이터에 넣어둔다.
4. 각각의 조건의 1 mL (106개 세포에 해당됨)를 5 mL FACS 튜브 (BD)로 전달하고, 고정 (웨스턴을 위해 15 mL 원추형 튜브에 다른 9 mL 배양물 (9 x 106개 세포)을 수확함) 전에 1200 rpm에서 5분 동안 회전시킨다.
5. 상청액을 흡인하고, 세포를 15분 동안 실온에서 픽스/펌(Fix/Perm) 배지 A (CAT# GAS001S-100)로 고정시킨다.
6. 세포를 PBS/2％ FBS 1x로 세척한다.
7. 상청액을 흡인하고, 세포를 15분 동안 실온에서 픽스/펌 배지 B (CAT# GAS002S-100)로 투과시킨다.
8. 세포를 PBS/2％ FBS 1x로 세척한다.
9. 세포를 300 ㎕ PBS/2％ BSA로 재현탁시키고, 세포를 각각 100 ㎕씩 3개의 튜브로 나눈다 (하나는 이소형-토끼 IgG 알렉사 플루오르-647을 위한 것이고, 하나는 p-Akt 알렉사 플루오르-647 클론 193H12를 위한 것이고, 하나는 p-S6RP 알렉사 플루오르-647 클론 D57.2.2E를 위한 것이고, 모든 토끼 ab는 셀 시그널링으로부터의 것임).
10. 상응하는 튜브에 각각의 Ab 50 ng을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 인큐베이션한다.
11. 세포를 PBS/2％ FBS 1x로 세척한다.
12. 세포를 300 ㎕ PBS/2％ BSA로 재현탁시키고, 셀퀘스트(CellQuest) 프로그램을 이용하여 FACSCalibur (BD) 상에서 데이터를 수득한다.
13. 플로우조(FlowJo) 프로그램을 사용하여 데이터를 분석하고, 데이터를 히스토그램으로 디스플레이한다.
실시예 19
GDC-0941 처리 후 아폽토시스 세포 및 생존 세포의 정량적 형광을 측정하기 위한 FACS 프로토콜
아폽토시스 세포 및 생존 세포를 약간 변형된 형광-활성화 세포 분류 (FACS) 검정을 이용하는 정량적 형광 분석에 의해 측정하였다 (문헌 [Munugalavadla et al. (2008) Mol. Cell Biol. 28(23):7182-7198]). 다양한 다발성 골수종 세포주 (1 X 106개)를 DMSO 또는 다양한 농도의 도 Ia GDC-0941로 24시간 동안 처리하고, 이어서 세포를 제조업자의 지시에 따라 아넥신(Annexin)-V-APC/PI 키트 (BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences), 미국 캘리포니아주 산 호세)를 사용하여 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 원발성 다발성 골수종 환자 샘플의 경우에, 2백만개의 유핵 BM 세포를 6웰 플레이트에서 2％ 열 불활성화된 소 성장 혈청 (하이클론(Hyclone), 미국 매사추세츠주 월섬) 및 2 ng/ml 재조합 IL-6 (알앤드디 시스템즈 인크.(R&D Systems Inc.), 미국 미네소타주 미니아폴리스)이 보충된 2 ml 개량-RPMI (인비트로젠, 미국 캘리포니아주 칼스배드) 중에 시딩하였다. 세포를 비히클 (DMSO), 1 μM 또는 10 μM GDC-0941로 72시간 동안 처리하고, 이어서 유동 세포측정법에 의해 분석하여 약물-유도된 아폽토시스를 평가하였다. 하기 시약이 사용되었다: CD45RA-FITC, CD38-APC 및 프로피듐 요오다이드 (모두 BD 파밍겐(BD Pharmingen, 미국 캘리포니아주 산 호세)으로부터의 것임). 데이터를 CyanADP 기기 (다코 사이토메이션(Dako Cytomation)) 상에서 수득하고, 플로우조 소프트웨어 (트리 스타(Tree Star))를 사용하여 분석하였다. 살아있는 형질 세포를 CD38hiCD45RA- 및 PI-로 확인하였다.
실시예 20
세포 주기 분석
제조업자의 지시에 따라 Click-iTTM Edu 혈구계산 검정 키트 (인비트로젠, 미국 캘리포니아주 칼스배드)를 이용하여 세포 주기 분석을 수행하였다. 형광을 BD LSR-II 상에서 측정하고, 데이터를 플로우조 소프트웨어 (벡톤 딕킨슨(Becton Dickinson))를 사용하여 분석하였다.
실시예 21
메조 스케일 디스커버리 (MSD) 검정을 이용하는 주요 MM 골수 단핵 세포에서의 pAKT 측정
MM 공여자로부터의 골수 단핵 세포 (BM-MNC)를 10％ FBS가 보충된 10 ml RPMI에서 밤새 배양하였다. 인큐베이션 후에, 세포를 성장 배지로 1회 세척하고, 배지 1 ml에 재현탁시켰다. 각각의 공여자에 대해, 세포를 500 mL 분취액으로 나누고, 1 mM의 DMSO 또는 GDC-0941로 1시간 동안 37℃에서 처리하였다. 처리 후에, 세포 펠릿을 5분 동안 1200 rpm에서 수집하고, 펠릿을 차가운 PBS로 1회 세척하였다. 세포 펠릿을 60 ml 1X 메조스케일 디스커버리 (MSD, 미국 메릴랜드주 개이터스버그) 용해 완충제로 재현탁시키고, 용해물을 4℃에서 10분 동안 14000 rpm에서 원심분리에 의해 정화하였다. 맑아진 세포 용해물은 제조업자의 지침에 따라 (약간 변형됨) MSD 키트를 사용하여 포스포-Akt (Ser473) 및 전체 Akt를 평가하는데 사용하였다.

Claims (47)

  1. 상승작용적 유효량의, 화학식 I을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 상승작용적 유효량의, 덱사메타손, 독소루비신, 리툭시맙, 프레드니손, 레날리도미드, 보르테조밉, 및 라파마이신으로부터 선택된 하나 이상의 화학요법제를 포함하는 치료 조합물이며,
    상기 조합물은 포유동물에게 조합된 제제로 또는 교대로 투여되고,
    상기 화학식 I 화합물은 하기 화학식 Ia를 갖는 4-(2-(1H-인다졸-4-일)-6-((4-(메틸술포닐)피페라진-1-일)메틸)티에노[3,2-d]피리미딘-4-일)모르폴린인,
    조혈 악성종양의 치료를 필요로 하는 포유동물에서 조혈 악성종양의 치료를 위한 치료 조합물.
    <화학식 Ia>
    Figure 112015021869477-pct00105
  2. 제1항에 있어서, 화학요법제가 덱사메타손인 치료 조합물.
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  4. 제1항에 있어서, 화학요법제가 독소루비신인 치료 조합물.
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서, 화학요법제가 리툭시맙인 치료 조합물.
  7. 삭제
  8. 제1항에 있어서, 화학요법제가 프레드니손인 치료 조합물.
  9. 삭제
  10. 제1항에 있어서, 화학요법제가 레날리도미드인 치료 조합물.
  11. 제1항에 있어서, 화학요법제가 보르테조밉인 치료 조합물.
  12. 제1항에 있어서, 화학요법제가 라파마이신인 치료 조합물.
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  25. 제1항에 있어서, 화학식 I 화합물의 제약상 허용되는 염이 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 질산, 인산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 에탄술폰산, 아스파르트산 및 글루탐산과 형성된 염으로부터 선택되는 것인 치료 조합물.
  26. 제1항에 있어서, 상승작용적 유효량의 화학식 I을 갖는 화합물 및 상승작용적 유효량의 화학요법제가 조합된 제제로 투여되는 것인 치료 조합물.
  27. 제1항에 있어서, 상승작용적 유효량의 화학식 I을 갖는 화합물 및 상승작용적 유효량의 화학요법제가 교대로 포유동물에게 투여되는 것인 치료 조합물.
  28. 제27항에 있어서, 포유동물에게 화학요법제가 투여된 후에 화학식 I 화합물이 투여되는 것인 치료 조합물.
  29. 제27항에 있어서, 상승작용적 유효량의 화학식 I을 갖는 화합물이 매일 2회 내지 3주 마다 1회의 범위로 투여되고, 상승작용적 유효량의 화학요법제가 매일 2회 내지 3주 마다 1회의 범위로 투여되는 것인 투약 요법에 의해 투여되는 치료 조합물.
  30. 제29항에 있어서, 투약 요법이 1회 이상 반복되는 것인 치료 조합물.
  31. 제1항에 있어서, 치료 조합물의 투여가 상승작용적 효과를 나타내는 것인 치료 조합물.
  32. 제1항에 있어서, 조혈 악성종양이 비-호지킨(Hodgkin) 림프종, 미만성 거대 조혈 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종 및 급성 골수양 백혈병(AML)으로부터 선택되는 것인 치료 조합물.
  33. 제1항에 있어서, 화학식 I 화합물 및 화학요법제가 각각 단위 투여 형태 당 1 mg 내지 1000 mg의 양으로 투여되는 것인 치료 조합물.
  34. 제1항에 있어서, 화학식 I 화합물 및 화학요법제가 중량 기준으로 1:50 내지 50:1의 비율로 투여되는 것인 치료 조합물.
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Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210131473A (ko) 2008-03-18 2021-11-02 제넨테크, 인크. 항-ｈｅｒ２ 항체-약물 접합체와 화학요법제의 병용물, 및 사용 방법
TWI558710B (zh) 2009-01-08 2016-11-21 古利斯股份有限公司 具有鋅連接部位的磷酸肌醇３－激酶抑制劑
CN102791715B (zh) 2009-12-31 2016-04-27 卡洛斯三世国家癌症研究中心基金会 用作激酶抑制剂的三环化合物
ES2627703T3 (es) 2010-01-22 2017-07-31 Fundación Centro Nacional De Investigaciones Oncológicas Carlos Iii Inhibidores de PI3·quinasa
WO2011121317A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Centro Nacional De Investigaciones Oncologicas (Cnio) Imidazo [2,1-b] [1,3,4] thiadiazoles as protein or lipid kinase inhibitors
WO2012052745A1 (en) 2010-10-21 2012-04-26 Centro Nacional De Investigaciones Oncológicas (Cnio) Combinations of pi3k inhibitors with a second anti -tumor agent
WO2012098387A1 (en) 2011-01-18 2012-07-26 Centro Nacional De Investigaciones Oncológicas (Cnio) 6, 7-ring-fused triazolo [4, 3 - b] pyridazine derivatives as pim inhibitors
US20140213630A1 (en) * 2011-03-08 2014-07-31 Thomas Diacovo Methods and pharmaceutical compositions for treating lymphoid malignancy
SG10201602569RA (en) 2011-04-01 2016-05-30 Curis Inc Phosphoinositide 3-kinase inhibitor with a zinc binding moiety
UY34044A (es) * 2011-04-29 2012-11-30 Sanofi Sa Metodo de tratamiento contra el linfoma con inhibidores de piridopirimidinona de p13k/mtor
BR112013029711B1 (pt) 2011-05-19 2020-05-12 Fundación Centro Nacional De Investigaciones Oncológicas Carlos Iii Compostos
EP2524918A1 (en) 2011-05-19 2012-11-21 Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO) Imidazopyrazines derivates as kinase inhibitors
JP2014515390A (ja) 2011-06-03 2014-06-30 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｉ３ｋ阻害剤化合物を用いた中皮腫の治療法
CN103957902A (zh) 2011-10-13 2014-07-30 基因泰克公司 药理学诱导的胃酸过少的治疗
JP6541350B2 (ja) 2011-11-09 2019-07-10 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｃｘｃｒ４抗体による血液悪性腫瘍の処置
AU2013235479A1 (en) * 2012-03-23 2014-10-02 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Potentiating antibody-induced complement-mediated cytotoxicity via PI3K inhibition
WO2013152717A1 (zh) * 2012-04-10 2013-10-17 上海昀怡健康管理咨询有限公司 稠合嘧啶类化合物，其制备方法，中间体，组合物和应用
BR112014028881A2 (pt) 2012-05-23 2017-06-27 Hoffmann La Roche populações de células, banco de células, métodos de obtenção de uma população de células, métodos de identificação de um fator, métodos de seleção, métodos de fornecimento de terapia, populações de hepatócitos e método de obtenção de células
SG10201706196XA (en) 2012-06-08 2017-08-30 Hoffmann La Roche Mutant selectivity and combinations of a phosphoinositide 3 kinase inhibitor compound and chemotherapeutic agents for the treatment of cancer
ES2594078T3 (es) * 2012-10-10 2016-12-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Proceso para preparar compuestos de tienopirimidina
JP6437441B2 (ja) * 2012-11-02 2018-12-12 ティージー セラピューティクス インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０抗体およびｐｉ３キナーゼ選択的阻害剤の組み合わせ
US20160022757A1 (en) * 2013-03-15 2016-01-28 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Therapeutic methods for treating solid tumors and related diagnostic methods
KR20170005419A (ko) 2014-05-21 2017-01-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pi3k 억제제 피크틸리시브로 pr-양성 내강 a형 유방암을 치료하는 방법
EP3598134A1 (en) 2015-06-29 2020-01-22 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treatment with taselisib
TW201825465A (zh) 2016-09-23 2018-07-16 美商基利科學股份有限公司 磷脂醯肌醇3-激酶抑制劑
TW201813963A (zh) 2016-09-23 2018-04-16 美商基利科學股份有限公司 磷脂醯肌醇3-激酶抑制劑
TW201815787A (zh) 2016-09-23 2018-05-01 美商基利科學股份有限公司 磷脂醯肌醇3-激酶抑制劑
CN113164466A (zh) 2018-09-11 2021-07-23 柯瑞斯公司 使用具有锌结合部分的磷酸肌醇3-激酶抑制剂的联合治疗
EP3908283A4 (en) * 2019-01-10 2022-10-12 Mirati Therapeutics, Inc. KRAS G12C INHIBITORS
US20220340568A1 (en) * 2019-09-11 2022-10-27 Ohio State Innovation Foundation Kinase inhibitors for the treatment of neurodegenerative diseases

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007127175A2 (en) 2006-04-26 2007-11-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compounds
WO2007129161A2 (en) * 2006-04-26 2007-11-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Thieno [3, 2-d] pyrimidine derivative useful as pi3k inhibitor
WO2009036082A2 (en) 2007-09-12 2009-03-19 Genentech, Inc. Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2009117277A2 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Genentech, Inc. Combinations of an anti-her2 antibody-drug conjugate and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2010012965A2 (fr) 2008-07-31 2010-02-04 Hospices Civils De Lyon Association d'un ligand de tlr3 et d'un agent de chimiotherapie agissant sur la voie intrinseque de "l'apoptose" dans le traitement d'un cancer

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2579479A (en) 1950-01-23 1951-12-25 Syntex Sa delta 1, 4-pregnadiene-17alpha-ol-3-ones
US2670347A (en) 1952-01-08 1954-02-23 American Cyanamid Co Thiophosphoric acid derivatives and method of preparing the same
GB750155A (en) 1953-03-17 1956-06-13 Nat Res Dev Substituted alanines
US2837464A (en) 1955-01-11 1958-06-03 Schering Corp Process for production of dienes by corynebacteria
US2897216A (en) 1954-11-01 1959-07-28 Schering Corp Process for the preparation of steroidal dienes and intermediates obtained thereby
US3032585A (en) 1954-12-03 1962-05-01 Nat Res Dev Process for the production of p-bis-(2-chloroethyl)-aminophenylalanine
US3116282A (en) 1960-04-27 1963-12-31 Upjohn Co Pyrimidine nucleosides and process
US3134718A (en) 1963-12-12 1964-05-26 Schering Corp Pregna-1,4-dienes and compositions containing same
DE1470356A1 (de) 1964-01-15 1970-04-30 Thomae Gmbh Dr K Neue Thieno[3,2-d]pyrimidine und Verfahren zu ihrer Herstellung
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
BE759493A (fr) 1969-11-26 1971-05-25 Thomae Gmbh Dr K Nouvelles 2-(5-nitro-2-furyl)-thieno(3,2-d) pyrimidines et procedes pour les fabriquer
US3763156A (en) 1970-01-28 1973-10-02 Boehringer Sohn Ingelheim 2-heterocyclic amino-4-morpholinothieno(3,2-d)pyrimidines
RO62428A (fr) 1971-05-04 1978-01-15 Thomae Gmbh Dr K Procede pour la preparation des thyeno-(3,2-d)-pyrimidines
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5075305A (en) 1991-03-18 1991-12-24 Warner-Lambert Company Compound, composition and use
WO1993013664A2 (en) 1992-01-11 1993-07-22 Schering Agrochemicals Limited Biheterocyclic fungicidal compounds
US5846824A (en) 1994-02-07 1998-12-08 Ludwig Institute For Cancer Research Polypeptides having kinase activity, their preparation and use
GB9208135D0 (en) 1992-04-13 1992-05-27 Ludwig Inst Cancer Res Polypeptides having kinase activity,their preparation and use
US6274327B1 (en) 1992-04-13 2001-08-14 Ludwig Institute For Cancer Research Polypeptides having kinase activity, their preparation and use
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US6083903A (en) 1994-10-28 2000-07-04 Leukosite, Inc. Boronic ester and acid compounds, synthesis and uses
JPH08175990A (ja) 1994-12-19 1996-07-09 Mitsubishi Chem Corp Ｐｉ３キナーゼ阻害剤とその製造法
JPH08176070A (ja) 1994-12-19 1996-07-09 Mitsubishi Chem Corp ジデプシド誘導体及びｐｉ３キナーゼ阻害剤
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
GB9521987D0 (en) 1995-10-26 1996-01-03 Ludwig Inst Cancer Res Phosphoinositide 3-kinase modulators
US5635517B1 (en) 1996-07-24 1999-06-29 Celgene Corp Method of reducing TNFalpha levels with amino substituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-YL)-1-oxo-and 1,3-dioxoisoindolines
US6281230B1 (en) 1996-07-24 2001-08-28 Celgene Corporation Isoindolines, method of use, and pharmaceutical compositions
AUPO903897A0 (en) 1997-09-08 1997-10-02 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Organic boronic acid derivatives
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
EA005889B1 (ru) 1997-11-11 2005-06-30 Пфайзер Продактс Инк. Производные тиенопиримидина и тиенопиридина, полезные в качестве противораковых агентов
US6187777B1 (en) 1998-02-06 2001-02-13 Amgen Inc. Compounds and methods which modulate feeding behavior and related diseases
US6232320B1 (en) 1998-06-04 2001-05-15 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory compounds
JP2001247477A (ja) 2000-03-03 2001-09-11 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd 抗腫瘍剤
CA2405632A1 (en) * 2000-04-25 2001-11-01 Idec Pharmaceutical Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
US6403588B1 (en) 2000-04-27 2002-06-11 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Imidazopyridine derivatives
US6608053B2 (en) 2000-04-27 2003-08-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Fused heteroaryl derivatives
EP1353693B1 (en) 2001-01-16 2005-03-16 Glaxo Group Limited Pharmaceutical combination containing a 4-quinazolineamine and paclitaxel, carboplatin or vinorelbine for the treatment of cancer
JP4162491B2 (ja) 2001-01-25 2008-10-08 アメリカ合衆国 ボロン酸化合物製剤
CA2454976C (en) 2001-07-26 2011-05-10 Santen Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for glaucoma comprising compound having pi3 kinase inhibitory action as active ingredient
US6703414B2 (en) 2001-09-14 2004-03-09 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Device and method for treating restenosis
CA2463803A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Eli Lilly And Company Biphasic mixtures of glp-1 and insulin
WO2003034997A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Iconix Pharmaceuticals, Inc. Modulators of phosphoinositide 3-kinase
AU2002349912A1 (en) 2001-10-24 2003-05-06 Iconix Pharmaceuticals, Inc. Modulators of phosphoinositide 3-kinase
MXPA04004064A (es) 2001-10-30 2004-09-06 Pharmacia Corp Derivados heteroaromaticos de carboxamida para el tratramiento de la inflamacion.
EP1531813A1 (en) 2002-07-10 2005-05-25 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Use of compounds for increasing spermatozoa motility
US20040092561A1 (en) 2002-11-07 2004-05-13 Thomas Ruckle Azolidinone-vinyl fused -benzene derivatives
BR0312650A (pt) 2002-07-10 2005-05-03 Applied Research Systems Derivados de benzeno fundido azolidinona-vinila
AU2003255845A1 (en) 2002-08-22 2004-03-11 Piramed Limited Phosphadidylinositol 3,5-biphosphate inhibitors as anti-viral agents
GB0423653D0 (en) 2004-10-25 2004-11-24 Piramed Ltd Pharmaceutical compounds
CN109053523B (zh) 2005-10-07 2022-03-25 埃克塞利希斯股份有限公司 作为用于治疗增生性疾病的mek抑制剂的吖丁啶
GB0520657D0 (en) 2005-10-11 2005-11-16 Ludwig Inst Cancer Res Pharmaceutical compounds
AR060632A1 (es) * 2006-04-26 2008-07-02 Genentech Inc Compuestos inhibidores de fosfoinositida 3- quinasa y metodos de uso
RU2470936C2 (ru) 2006-12-07 2012-12-27 Дженентек, Инк. Соединения-ингибиторы фосфоинозитид 3-киназы и способы применения
CA2671782C (en) * 2006-12-07 2017-01-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and methods of use
FR2920336B1 (fr) * 2007-09-05 2012-09-28 Eads Europ Aeronautic Defence Methode et dispositif d'analyse des procedes de fabrication de pieces en materiaux composites, par infusion ou injection, et de caracterisation de ces materiaux composites.

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007127175A2 (en) 2006-04-26 2007-11-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compounds
WO2007129161A2 (en) * 2006-04-26 2007-11-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Thieno [3, 2-d] pyrimidine derivative useful as pi3k inhibitor
JP2009534461A (ja) 2006-04-26 2009-09-24 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 医薬化合物
WO2009036082A2 (en) 2007-09-12 2009-03-19 Genentech, Inc. Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2009117277A2 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Genentech, Inc. Combinations of an anti-her2 antibody-drug conjugate and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2010012965A2 (fr) 2008-07-31 2010-02-04 Hospices Civils De Lyon Association d'un ligand de tlr3 et d'un agent de chimiotherapie agissant sur la voie intrinseque de "l'apoptose" dans le traitement d'un cancer

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