KR101461767B1

KR101461767B1 - 만성 활성 ｂ-세포-수용체 신호전달이 있는 ｂ-세포 림프종의 치료를 위한 ｐｋｃ 억제제

Info

Publication number: KR101461767B1
Application number: KR1020127025582A
Authority: KR
Inventors: 발터 슐러; 프랭크 피. 스테그마이어; 마르쿠스 바르무스
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2010-03-30
Filing date: 2011-03-28
Publication date: 2014-11-13
Also published as: MX2012011341A; AU2011234644B2; KR20120133389A; RU2012146083A; US8748428B2; EP2552428A1; CA2795456A1; BR112012024585A2; WO2011120911A1; AU2011234644A1; JP2013523678A; US20110245256A1; KR20140107685A; AR080737A1; CN102821759A

Abstract

본 발명은 CD79A/B를 통한 만성 활성 BCR 신호전달이 하류 PKCb 키나제(kinase) 신호전달에 대한 강한 의존성을 부여한다는 것을 실연한다. 따라서, 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종의 성장을 억제하거나 또는 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장을 억제하는 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 PKC 억제제를 투여함으로써, 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종의 성장을 억제하거나 또는 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장을 억제하는 방법, 또는 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종의 성장을 억제하거나 또는 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장을 억제하기 위한 PKC 억제제의 용도가 본원에서 제공된다.

Description

만성 활성 Ｂ-세포-수용체 신호전달이 있는 Ｂ-세포 림프종의 치료를 위한 ＰＫＣ 억제제{PKC INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF B-CELL LYMPHOMA HAVING CHRONIC ACTIVE B-CELL-RECEPTOR SIGNALLING}

발명의 분야

본 발명은 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종, 특히 CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종의 성장을 억제하기 위한 PKC 억제제의 용도에 관한 것이다.

배경

미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL)은 악성 림프종의 가장 통상적인 형태이고, 매년 미국에서 20,000명을 초과하는 환자에서 진단된다. DLBCL은 형태학, 생물학 및 임상 표현과 관련하여 비균질적이다. 유전자 발현 프로파일링에 의해, DLBCL의 적어도 3가지의 분자 하위유형이 배 중심 B 세포 유사 (GC) DLBCL, 활성화된 B 세포 유사 (ABC) DLBCL, 및 1차 종격동 B-세포 림프종 (PMBL)으로 구별되어 명명될 수 있다. 문헌 [Alizadeh, A.A., et al., Nature 403(6769), 503-522 (2000)] 참조. 그러나, 이러한 분자성 DLBCL 하위유형들은 수천 개의 유전자의 발현과 관련하여 상이할 뿐만 아니라, 또한 전체 생존율이 유의하게 상이하다. GCB DLBCL 및 PMBL 환자는 통상적인 치료에 유리하게 응답한다. 반면에, ABC DLBCL은 치유가능성이 가장 작은 하위유형을 나타내고, 이때 항-CD20 항체인 리툭시맙(Rituximab)과 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 화학요법 (CHOP) 체계로의 조합 요법 (또는 R-CHOP) 후의 3년 전체 생존율은 불과 40％이다. 또한, 각각의 하위유형은 별개의 종양발생 경로의 탈조절을 특징으로 한다. 예를 들어, ABC DLBCL은 주로 CBM (CARD11/BCL10/MALT1) 신호전달 복합체 (세포 증식, 분화를 촉진하고 세포자멸사를 억제함)를 통한 구성적인 핵 인자-κB (NF-κB) 경로 활성화를 특징으로 한다. 문헌 [Davis, R.E., et al., J Exp Med, 194(12), 1861-1874 (2001)] 참조.

생리학적으로, B-세포 수용체 (BCR) 자극에 응답하여 B-세포 내의 CBM 복합체의 활성화가 발생한다. BCR에 항원이 결합하는 것은 수용체 올리고머화를 유도하고, 이는 B-세포 공동수용체인 CD79A 및 CD79B 내의 면역수용체 티로신-기재 활성화 모티프 (ITAM) 도메인의 Lyn-매개 인산화를 촉진한다. 인산화된 ITAM 도메인들이 형질 막에서 비장 티로신 키나제 (SYK)를 동원하여 활성화하고, 이러한 키나제는 브루톤(Bruton) 티로신 키나제 (BTK) 및 포스포리파제 C 감마 (PLCλ)를 통해 하류 신호전달을 개시시키며, 궁극적으로는 단백질 키나제 C (PKC)의 활성화에 이른다. PKCβ가 카스파제 동원 도메인-함유 단백질 11 (CARD11, CARMA1로 또한 공지됨)의 인산화를 통해 B-세포에서의 BCR-NF-κB 활성화를 매개하는 우세한 PKC 이소형(isoform)인 것으로 생각된다. CARD11 링커 도메인의 인산화는 CBM 복합체 어셈블리를 촉진하는 형상 변화에 이른다. 일단 형질 막에서 활성화되면, CBM 복합체는 IKK (I 카파 B 키나제) 복합체의 활성화를 용이하게 하고, 이는 IκBα를 인산화시켜 이를 파괴에 표적화함으로써, NF-κB 전사 인자가 핵에 진입하여 NF-κB 표적 유전자의 발현을 구동시키도록 한다. ABC DLBCL에서의 NF-κB 활성화가 단지 기원 종양 세포의 신호전달 상태를 반영하는지 여부가 오랫동안 불명확했지만, 이러한 하위유형에서의 종양발생성 CARD11 돌연변이의 확인은 이러한 경로의 유전학적 탈조절에 대한 최초의 증거를 제공하였다. 문헌 [Lenz, G., et al,, Science 319(5870), 1676-9 (2008)] 참조. 또한, 빈번한 음성 조절인자 A20에서의 기능 상실 돌연변이 및 CD79A 및 CD79B에서의 유전자 이상이 포함되는, 여러 NF-κB 경로 조절인자에서의 체세포적으로 획득된 종양 병변이 더욱 최근의 연구에서 밝혀졌다. 예를 들어, 문헌 [Compagno, M., et al., "Mutations of multiple genes cause deregulation of NF-κB in diffuse large B-cell lymphoma" Nature, 459 (7247), 717-722 (2009)]; [Davis, E.R., et al., "Chronic active B-cell-receptor signalling in diffuse large B-cell lymphoma" Nature, 463, 88-94 (2010)] 참조. 따라서, 전부는 아니더라도 대부분의 ABC DLBCL이 NF-κB 경로 신호전달을 구성적으로 활성화하는 유전학적 병변을 보유할 수 있을 것이다.

기존의 연구는 ABC DLBCL 세포주가 CARD11, BCL10, MALT1, 또는 IKKβ의 억제에 대해 민감성임을 나타내어, NF-κB 경로 신호전달에 대한 명백한 의존성을 실연하였다. 문헌 [Ngo, V.N., et al. Nature 441(7089):106-10 (2006)] 참조. 또한, 데이비스(Davis) 등은 야생형 CARD11이 있는 ABC DLBCL 세포주의 BCR 신호전달에 대한 의존성을 보고하였고, CD79A의 억제가 세포 사망을 초래하였음을 실연하였다. 문헌 [Davis et al., Nature, 463, 88-94 (2010)] 참조. 이러한 결과들은 리간드-비의존적 '장성(tonic)' BCR 신호전달이 B-세포 림프종의 더욱 일반적인 특색이고 이는 이러한 세포를 하류의 BCR 신호전달에 의존적이게 한다는 것을 제안한 최근의 연구와 대조적이다. 문헌 [Chen, L., et al. Blood 111(4):2230-7 (2008)] 참조.

개요

본 발명은 CD79A/B를 통한 만성 활성 BCR 신호전달이 하류 PKCβ 키나제 신호전달에 대한 강한 의존성을 부여한다는 것을 실연한다.

따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종, 특히 CD79A/B 돌연변이가 있는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하는 치료를 필요로 하는 환자에게 PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제)를 투여함으로써, 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종, 특히 CD79A/B 돌연변이가 있는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종, 특히 CD79A/B 돌연변이가 있는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하기 위한 PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제)의 용도가 제공된다.

본 발명의 또 다른 측면은 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종, 특히 CD79A/B 돌연변이가 있는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하는 치료를 필요로 하는 환자에게 PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제)를 추가적인 제약 작용제 (하기 기술된 바와 같음)와 조합하여 투여함으로써, 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종, 특히 CD79A/B 돌연변이가 있는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종, 특히 CD79A/B 돌연변이가 있는 암 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하기 위한, 추가적인 제약 작용제 (하기 기술된 바와 같음)와 조합된 PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제)의 용도가 제공된다.

상기 기술된 조합 요법은 (a) PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제), 하나 이상의 추가적인 제약 작용제, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 단일 제약 조성물; 또는 (b) (i) PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제) 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제1 조성물, 및 (ii) 하나 이상의 추가적인 제약 작용제 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제2 조성물을 포함하는 2개의 별도의 제약 조성물로서 투여될 수 있다. 제약 조성물은 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 바람직하게는, 추가적인 제약 작용제는 mTOR 억제제, PI3K 억제제, 또는 JAK 억제제이다. 한 실시양태에서, PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제)는 mTOR 억제제와 조합된다. 또 다른 실시양태에서, PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제)는 PI3K 억제제와 조합된다. 또 다른 실시양태에서, PKC 억제제 (바람직하게는, 선택적 PKC 알파/베타 억제제)는 JAK 억제제 (바람직하게는, 선택적 JAK2 억제제, 선택적 JAK1 및/또는 JAK2 억제제, 선택적 JAK1 및/또는 JAK3 억제제, 또는 선택적 JAK2 및/또는 TYK2 억제제)와 조합된다.

정의

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "PKC 억제제"는 팬(pan) 억제제 (다중-하위유형)일 수 있거나 또는 하나 이상의 PKC 이소자임(isozyme)에 대해 선택적일 수 있는 단백질 키나제 C 억제제를 지칭한다. 용어 PKC는 일반적으로 이소형들의 전체 패밀리를 지칭한다: 통상적인 이소형; 알파, 베타 (β1 및 β2) 및 감마, 신규 이소형; 델타, 엡실론, 에타, 및 세타, 및 비정형 이소형: 제타 및 타우/람다.

용어 "선택적 PKC 억제제"는 하나 이상의 PKC 이소형에 대해 다른 PKC 이소형과 비교하여 약 20배 이상의 선택성을 갖는 PKC 억제제를 지칭한다. 바람직하게는, 선택성이 약 100배 이상이고, 더욱 바람직하게는 약 500배 이상, 가장 바람직하게는 약 1,000배 이상 또는 약 2,000배 이상이다.

용어 "선택적 PKC 알파/베타 억제제", "선택적 PKC α/β 억제제" 또는 "선택적 PKCa/b 억제제"는 다른 이소형의 PKC보다 알파 및/또는 베타 PKC 이소형의 PKC에 대해 더욱 선택적인 단백질 키나제 C 억제제를 지칭한다. 예를 들어, 다른 PKC 이소형에 비해 약 20배 이상 (바람직하게는 약 100배 이상, 더욱 바람직하게는 약 500배 이상, 가장 바람직하게는 약 1,000배 이상 또는 약 2,000배 이상)의 PKC 알파 또는 PKC 알파 및 베타.

도면의 간단한 설명
도 1은 0.16 μM 내지 20μM의 농도 범위에 걸친 AEB071 (팬-PKC 억제제)의 성장 억제 효과를 도해하고, 이때 상대적인 세포 성장은 DMSO로 처리된 세포의 백분율로서 표현된다.
도 2A는 OCI-Ly3, HBL1, TMD8 및 OCI-Ly10 세포주에서의 PKC 억제제인 AEB071로의 24시간 처리 후의 용량-의존적 방식 (μM 단위)의 IL-6 mRNA 발현 감소를 도해하고, 이때 IL-6 mRNA 수준은 DMSO로 처리된 세포로부터의 IL-6 mRNA 수준의 백분율로서 표현된다.
도 2B는 TMD8 세포주에서의 PKC 억제제인 화합물 B 및 LY333531로의 24시간 처리 후의 용량-의존적 방식 (μM 단위)의 IL-6 mRNA 발현 감소를 도해하고, 이때 IL-6 mRNA 수준은 DMSO로 처리된 세포로부터의 IL-6 mRNA 수준의 백분율로서 표현된다.
도 2C는 0 내지 40 μM 농도 범위의 IKKb 억제제인 MLN120B로의 24시간 처리 후의 OCI-Ly3, HBL1, 및 TMD8 세포주에서의 IL-6 분비를 도해하고, 이때 IL-6 분비는 DMSO로 처리된 세포로부터의 IL-6 분비의 백분율로서 표현된다.
도 2D는 0 내지 10 μM 농도 범위의 PKC 억제제인 AEB071로의 24시간 처리 후의 OCI-Ly3, HBL1, 및 TMD8 세포주에서의 IL-6 분비를 도해하고, 이때 IL-6 분비는 DMSO로 처리된 세포로부터의 IL-6 분비의 백분율로서 표현된다.
도 3A 및 도 3B는 생체 내에서 PKC 억제제인 AEB071로 처리되었을 때의 TMD8 이종이식 마우스 모델에서의 종양 성장의 억제를 도해한다.
도 4는 시험관 내에서의 CD79 돌연변이체 ABC DLBCL 세포주 TMD8에서의 PKC 억제제인 AEB071과 mTOR 억제제인 RAD001 간의 상승작용을 도해한다.

상세한 설명

본 발명의 실행에서 유용한 PKC 억제제는 PKC의 여러 이소형을 억제할 수 있고, 특히 특정 PKC 이소형을 선택적으로 억제할 수 있다 (예를 들어, 선택적 PKC 억제제 또는 이소자임-선택적 PKC 억제제). 바람직하게는, PKC 억제제는 고전적인 PKC 이소형 (α, β1, β2, γ) 및 신규 PKC 이소형 (ε, η, δ, θ) 또는 비정형 이소형 (ζ, τ/λ)로부터 선택된 PKC 이소형, 더욱 바람직하게는 α, β (β1 및 β2 이소형) 및 θ PKC 이소형으로부터 선택된 PKC 이소형을 선택적으로 억제할 수 있다. 바람직한 PKC 억제제는 α 및 β 이소형을 선택적으로 억제할 수 있다. 적절한 PKC 억제제에는 말레이미드 유도체, 예컨대 미국 특허 번호 5,545,636; 5,668,152; 5,672,681; 5,698,578; 5,710,145; 6,645,970; 7,220,774; 7,235,555; 미국 공개 번호 2008/0318975; 유럽 특허 번호 0776895 B1; 0817627 B1; 1449529 B1; 1337527 B1; 및 PCT 공개 번호 WO03/082859; 및 WO07/006533에 기술된 화합물들이 포함된다. 상기 인용된 참고문헌 각각은 참고로 본원에 포함된다.

구체적인 관심 화합물에는 소트라스타우린 (AEB071로 또한 공지되고, 미국 특허 번호 6,645,970에 기술됨), 3-(1H-인돌-3-일)-4-[2-(피페라진-1-일)퀴나졸린-4-일]-1H-피롤-2,5-디온 (미국 특허 번호 6,645,970에 기술됨), 3-[2-클로로-7-[(디메틸아미노)메틸]-1-나프탈레닐]-4-[7-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]-1H-인돌-3-일]-1H-피롤-2,5-디온 (PCT 공개 번호 WO07/006533 및 미국 공개 번호 2008/0318975에 기술됨), 3-[3-(4,7-디아자-스피로[2,5]옥트-7-일)-이소퀴놀린-1-일]-4-(7-메틸-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온 (미국 특허 번호 7,235,555의 실시예 69에 기술됨); 루복시스타우린 ((9S)-9-[(디메틸아미노)메틸]-6,7,10,11-테트라히드로-9H,18H-5,21:12,17-디메테노디벤조-[e,k]피롤로[3,4-h][1,4,13]옥사디아자시클로헥사데신-18,20(19H)-디온 (LY-333531로 또한 공지되고, 미국 특허 번호 5,698,578에 기술됨)) 및 루복시스타우린의 메실레이트 염 (유럽 특허 번호 0776895 B1에 기술됨)이 포함된다. 상기 인용된 참고문헌 각각은 참고로 본원에 포함된다.

적절한 선택적 PKCα/β 억제제에는 3-[2-클로로-7-[(디메틸아미노)메틸]-1-나프탈레닐]-4-[7-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]-1H-인돌-3-일]-1H-피롤-2,5-디온 (CAS 번호 919992-85-1, PCT 공개 번호 WO07/006533 및 미국 공개 번호 2008/0318975에 기술됨); 하기의 구조를 갖고 PCT 공개 번호 WO 2002/038561 또는 미국 특허 번호 6,645,970의 실시예 70에 기술된 3-(1H-인돌-3-일)-4-[2-(피페라진-1-일)퀴나졸린-4-일]피롤-2,5-디온; (9S)-9-[(디메틸아미노)메틸]-6,7,10,11-테트라히드로-9H,18H-5,21:12,17-디메테노디벤조-[e,k]피롤로[3,4-h][1,4,13]옥사디아자시클로헥사데신-18,20(19H)-디온 (루복시스타우린 또는 LY-333531로 또한 지칭되고, 미국 특허 번호 5,698,578에 기술됨, CAS 번호 169939-94-0); 루복시스타우린 메실레이트 염 (미국 특허 번호 5,710,145 및 EP 특허 번호 776895 B1에 기술됨); 및 12-(2-시아노에틸)-6,7,12,13-테트라히드로-13-메틸-5-옥소-5H-인돌로(2,3-a)피롤로(3,4-c)-카르바졸 (CAS 번호 136194-77-9, 칼바이오켐(Calbiochem)®로부터 입수가능하고, 미국 특허 번호 5,489,608에 기술됨)이 포함된다.

PKC 활성을 억제하는 별법적인 방식은 핵산 전략, 예컨대 하나의 PKC 이소형 또는 다중 PKC 이소형에 대해 지시된 안티센스 또는 소형 간섭 RNA (siRNA) (예를 들어, PKC-α 안티센스 올리고뉴클레오티드인 아프리노카르센( aprinocarsen) (ISIS 3521/LY900003으로 또한 공지됨))의 사용을 통한 것이다.

하기의 화합물들이 하기 기술된 실험에서 사용되었고, 이들은 시판원 (예를 들어, 칼바이오켐®)으로부터 입수가능하거나, 또는 하기에서 본원에서 인용된 상응하는 참고문헌(들)에 기술된 제조를 사용하여 제조된다.

화합물 A (IKKb 억제제) - 대조군: 미국 특허 번호 7,615,562 (본원에 참고로 포함됨)에 기술된 N-[(2R,6R)-2,6-디메틸-4-피페리디닐]-4-(7-플루오로-1H-인돌-3-일)-2-피리미딘아민 (CAS 번호 778646-25-6).

MLN120B (IKKb 억제제) - 대조군: PCT 공개 번호 WO04/092167 및 미국 공개 번호 2004/0235839에 기술된 N-(6-클로로-7-메톡시-9H-β-카르볼린-8-일)-2-메틸니코틴아미드 (CAS 번호 783348-36-7).

소트라스타우린: 문헌 [Drugs of the Future, 34(8), pp 618-623 (2009)] 및 미국 특허 번호 6,645,970 (본원에 참고로 포함됨)에 기술된 3-(1H-인돌-3-일)-4-[2-(4-메틸피페라진-1-일)퀴나졸린-4-일]-1H-피롤-2,5-디온 (AEB-071, CAS 번호 425637-18-9).

화합물 B: PCT 공개 번호 WO07/006533 및 미국 공개 번호 2008/0318975 (본원에 참고로 포함됨)에 기술된 3-[2-클로로-7-[(디메틸아미노)메틸]-1-나프탈레닐]-4-[7-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]-1H-인돌-3-일]-1H-피롤-2,5-디온 (CAS 번호 919992-85-1).

화합물 C: 하기의 구조를 갖고 미국 특허 번호 7,235,555의 실시예 69에 기술된 3-[3-(4,7-디아자-스피로[2,5]옥트-7-일)-이소퀴놀린-1-일]-4-(7-메틸-1H-인돌-3-일)-피롤-2,5-디온.

화합물 D: 하기의 구조를 갖고 PCT 공개 번호 WO 2002/038561 또는 미국 특허 번호 6,645,970의 실시예 70에 기술된 3-(1H-인돌-3-일)-4-[2-(피페라진-1-일)퀴나졸린-4-일]피롤-2,5-디온.

루복시스타우린: 하기의 구조를 갖고 미국 특허 번호 5,698,578 (본원에 참고로 포함됨)에 기술된 (9S)-9-[(디메틸아미노)메틸]-6,7,10,11-테트라히드로-9H,18H-5,21:12,17-디메테노디벤조[e,k]피롤로[3,4-h][1,4,13]옥사디아자시클로헥사데신-18,20(19H)-디온 (LY-333531, CAS 번호 169939-94-0), 및 EP 특허 번호 776895 B1의 메실레이트 염.

PKC 억제제의 PKC 억제 활성을 동종이형 혼합 림프구 반응(Allogeneic Mixed Lymphocyte Reaction) (MLR) 검정법에서 결정할 수 있다. 당업자에게 공지된 방법, 예를 들어, 유럽 공개 번호 1337527 A1에 기술된 마우스 또는 인간 MLR 검정법에 따라 MLR 검정법을 수행할 수 있다.

바람직한 실시양태에서, PKC 억제제는 MLR 검정법에서 약 1 μM 미만, 바람직하게는 약 10 nM 미만의 IC₅₀ 값을 나타낸다.

데이비스 등은 BCR 신호전달의 만성 활성화에 이르는 BCR 공동-수용체 CD79A/B에서의 돌연변이를 확인하였다. 문헌 [Davis, R.E., "Chronic active B-cell-receptor signalling in diffuse large B-cell lymphoma" Nature, 463 (7277), 88-94 (2010)] 참조. B 세포 림프종을 치료하는 것에서의 PKC 억제제의 유용성에 대해 테스트하기 위해, PKC 억제제의 효과를 B 세포 림프종 세포주들의 패널에서 평가하였다. GC 및 ABC 하위유형의 DLBCL 세포주가 포함되었고, 3개의 ABC DLBCL 세포주 (OCI-Ly10, HBL1, 및 TMD8)가 CD79A/B의 ITAM 모티프 내에 돌연변이를 보유하는 것이 확증되었다. 문헌 [Davis, E.R., et al., "Chronic active B-cell-receptor signalling in diffuse large B-cell lymphoma" Nature, 463, 88-94 (2010))] 참조.

(i) 팬-PKC 억제제인 소트라스타우린 (AEB071로 또한 공지됨), 및 (ii) PKCa/b-선택적 화합물인 3-[2-클로로-7-[(디메틸아미노)메틸]-1-나프탈레닐]-4-[7-[2-(2-메톡시에톡시)에톡시]-1H-인돌-3-일]-1H-피롤-2,5-디온 (본원에서 "화합물 B"로 지칭됨)의 2개의 약리학적 PKC 억제제를 사용하여 여러 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL) 세포주의 증식을 평가하였다. IKKb-선택적 억제제인 N-(6-클로로-7-메톡시-9H-β-카르볼린-8-일)-2-메틸니코틴아미드 (본원에서 "MLN120B"로 지칭됨) 및 N-[(2R,6R)-2,6-디메틸-4-피페리디닐]-4-(7-플루오로-1H-인돌-3-일)-2-피리미딘아민 (본원에서 "화합물 A"로 지칭됨)을 대조군 화합물로 사용하였다. ABC DLBCL 세포주 (OCI-LY3, OCI-LY10, HBL1, U2932, TMD8, Su-DHL2) 및 GC DLBCL 세포주 (Su-DHL4, DB, K-422)를 5일 동안 PKC 억제제 (A) 소트라스타우린 (AEB071) 또는 (B) 화합물 B; IKKb 억제제 (C) MLN120B 또는 (D) 화합물 A로 처리하였다. 세포를 96웰 플레이트 (코닝(Corning), #3358)에 100 ㎕ 내에 5000개의 세포/웰로 플레이팅하고, DMSO 또는 160 nM 내지 20 μM (2배 희석물) 농도 범위의 억제제로 처리하였다. 5일 처리 후, 세포를 셀타이터-글로® 발광성 세포 생육성 검정법(CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay) 시약 (프로메가(Promega), G7573)으로 용해시키고, 용해물을 불투명 96웰 플레이트 (코닝, #3971)로 옮기고, 발광 신호를 인비젼(Envision)을 사용하여 판독하였다. DMSO 신호 중앙값에 대해 성장 백분율을 계산하였다.

GC 하위유형 세포는 일반적으로 IKK 및 PKC 억제제 양쪽 모두에 대해 불감성이었고, 이때 Su-DHL4 및 DB에서 최대 성장 절반 억제 농도 (IC₅₀)가 10 μM를 초과하였으며, 이는 이러한 하위유형에 탈조절된 NFkB 경로 활성화가 없다는 견해와 일치한다 (하기 표 1B). 모든 ABC DLBCL 세포주가 IKK 억제제에 대해 민감성이었던 반면에, PKC 억제제에 대한 이들의 응답은 강하게 다양하였다 (하기 표 1A). PKC 억제제에 대해 불감성인 세포주인 OCI-Ly3 및 Su-DHL2는 각각 CARD11 및 A20에서의 돌연변이가 보고되어 있다. 이러한 세포주들 양쪽 모두는 IKKβ 억제에 대해 민감성임에도 불구하고 PKC 억제제로의 성장 검정법에서 10 μM 초과의 IC₅₀ 값을 나타냈다 (도 1 및 하기 표 1A). 이러한 종양발생 병변들은 CBM-NFkB 신호전달에서 PKCβ의 하류에서 기능하는 것으로 생각된다는 사실이 이들의 불감성에 대한 분자적인 근거를 제공한다. PKC 억제제에 대한 중등도의 민감도 (하기 표 1A)를 나타낸 U2932 세포는 최근 TAK1 돌연변이를 보유하는 것으로 보고되었지만, 이의 종양발생 성질은 아직 실험적으로 확증되지 않았다. 문헌 [Compagno, M., et al., "Mutations of multiple genes cause deregulation of NF-κB in diffuse large B-cell lymphoma" Nature, 459 (7247), 717-722 (2009)] 참조. 대조적으로, CD79A/B 돌연변이가 있는 것으로 확증된 HBL1, TMD8, 및 OCI-Ly10 세포는 양쪽 PKC 억제제에 대해 매우 민감성이었고, 이때 IC₅₀ 값은 0.2-1.0 μM 범위였으며 (도 1A, B), 이는 이러한 세포주들이 CARD11 상류의 BCR 신호 전달에 의존적임을 가리킨다. 하기의 표 1A 및 1B는 지시된 세포주에서 지시된 화합물에 대한, ATP 농도를 측정하는 것 (셀 타이터 글로)에 의해 결정된 성장 억제 IC₅₀ 값을 나타낸다. IC₅₀ 값은 세포 성장의 50％ 감소에 이르는 화합물의 농도로서 결정되었다. AEB071에 대한 1차 데이터의 대표적인 곡선이 도 1에서 제시된다. ND는 이러한 화합물에 대해 IC₅₀ 값이 결정되지 않았음을 가리킨다.

[표 1A]

[표 1B]

본 발명은 CD79A/B를 통한 만성 활성 BCR 신호전달이 PKCβ의 촉매 활성에 에 대한 강한 의존성을 부여한다는 것을 실연하고, 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장을 억제하기 위한 팬-PKC 또는 PKCa/b 선택적 억제제의 유용성을 실연한다.

PKC 억제제로의 CD79 돌연변이체 세포에서의 NFkB 경로 신호전달의 감소:

NFkB 경로의 구성적 활성화는 ABC DLBCL 세포의 분자적 특질이고, 이의 증식 및 생존에 요구된다. 문헌 [Davis, R.E., et al., J Exp Med, 194(12), 1861-1874 (2001)] 참조. PKC 억제에 응답한 성장 억제 효과가 NFkB 경로 신호전달의 조정을 통해 매개된다는 것을 확증하기 위해, AEB071 처리에 응답하여 NFkB 경로 유전자의 발현을 모니터링하였다. NFkB-경로에 의해 유도된 사이토카인 IL-6을 PKC 억제제에 의한 NFkB 경로 조정을 연구하기 위한 마커로 사용하였다. 문헌 [Lam, L.T., et al., Blood 111(7):3701-13 (2008)] 참조. IL-6 mRNA 수준을 측정하기 위해, 세포를 6웰 플레이트에 2 M/㎖로 2 ㎖ 배지에 플레이팅한 후, DMSO 또는 10 nM 내지 10 uM (4배 희석물)의 억제제로 24시간 동안 처리하였다. 알엔이지(RNeasy) 키트 (퀴아젠(Qiagen), #74104)를 사용하여 전체 RNA를 수확하고, 제조사의 프로토콜에 따라 하이 캐퍼시티(High Capacity) cDNA 키트 (ABI, # 4368814)를 사용하여 1 ㎍ 전체 RNA로부터 cDNA를 제조하였다. 택맨(Taqman) 프로브 (ABI: IL-6, Hs00174131_m1)를 유전자 발현 마스터 믹스(Gene Expression Master Mix) (ABI, 4369510)와 함께 사용하여, 내인성 대조군 유전자 (ABI: TBP, 4326322E) 및 DMSO 대조군과 비교하여 IL-6에 대한 mRNA 발현량을 델타-델타 C_t 방법을 사용하여 결정하였다. AEB071 처리는 CD79 돌연변이체 세포주인 OCI-Ly10, HBL1 및 TMD8에서 IL-6 mRNA 발현의 용량-의존적 감소를 초래한 반면, 돌연변이체 CARD11 세포주 OCI-Ly3에서는 IL-6 mRNA 발현이 영향을 받지 않았다 (도 2A). 그 후, TMD8 세포를 2개의 추가적인 PKC 억제제 (화합물 B 및 LY333531)로 처리하였고, 이들 또한 용량-의존적 방식으로 IL-6 mRNA 발현을 감소시켰으며, 이는 IL-6 조정이 PKC 억제의 적중 효과임을 실연한다 (도 2B).

세포로부터 IL-6이 분비된다는 사실은 세포 상청액에서 IL-6 수준을 모니터링하는 것을 허용하였다. IL-6 분비를 처리된 세포로부터의 상청액을 사용하여 퀀티카인(Quantikine) ELISA에 의해 결정하였다. 세포를 세정하고, 둥근 바닥 96웰 플레이트 (코닝, #3358)에 100 ul의 신선한 배지 내에 100,000 개의 세포/웰로 플레이팅하였다. 그 후, 세포를 DMSO 또는 80 nM 내지 10 uM (2배 희석물) 농도 범위의 억제제로 처리하고, 37℃에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 컨디셔닝 배지를 v자 바닥 96웰 플레이트 (눈크(Nunc), #12565436)로 옮겼다. IL-6 분비 수준을 제조사의 설명서에 따라 R & D 시스템즈(R & D Systems)로부터의 퀀티카인 비색 ELISA 키트 (#D6050)에 의해 결정하였다. IL-6 ELISA를 위해, 컨디셔닝 배지를 신선한 배지로 1:2 희석하였다 (예외: HBL1 컨디셔닝 배지는 희석하지 않고, 1:1로 사용하였다). 도 2에서, 각각의 용량에 대한 IL-6 분비는 DMSO로 처리된 세포로부터의 IL-6 분비의 백분율로 표현된다. IKKb 억제제로의 처리는 테스트된 모든 ABC DLBCL 세포주에서 IL-6 분비를 강하게 감소시켰다 (도 2C). TMD8 및 HBL1 세포에서 PKC 억제제인 AEB071 및 화합물 B에 의해 IL-6 분비가 강하게 억제되었다 (IC₅₀ < 0.2 uM). 명백하게, 이러한 PKC 억제제들이 CARD11-돌연변이체 세포주 OCI-Ly3에서는 IL-6 (및 IL-10) 분비에 대한 효과가 없었고, 이는 성장 검정법에서의 PKC 억제제에 대한 이러한 세포의 불감성과 상호관련된다 (도 2D). 중요하게, 민감성 세포주에서 NFkB 신호전달 (IL-6 분비에 의해 측정되는 바와 같음)을 억제하는데 요구되는 농도가 성장 억제 검정법에서의 IC₅₀과 잘 상호관련되었고, 따라서 PKC 억제제의 성장 억제 효과가 NFkB 경로 억제에 의해 매개된다는 것을 실연한다.

OCI-LY10 및 OCI-LY3 세포주는 마크 마인든(Mark Minden) 박사의 실험실 (캐나다의 토론토 대학(University of Toronto))로부터 수득하였다. HBL1 및 TMD8 세포는 각각 마틴 다이어(Martin Dyer) 박사 (영국의 레스터 대학(University of Leicester)) 및 조지 렌즈(Georg Lenz) 박사 (독일의 카리테 베를린(Charite Berlin))로부터 수득하였다. DB 세포는 ATCC (미국)으로부터, U2392, K422, 및 SU-DHL4는 DSMZ (독일)로부터 수득하였다.

생체 내에서의 PKC 억제에 대한 CD79 돌연변이체 ABC DLBCL 의 민감성:

피하 TMD8 이종이식 모델을 사용함으로써, CD79 돌연변이체 ABC DLBCL이 생체내 환경에서의 PKC 억제에 대해 민감성인 것으로 또한 나타났다. 암컷 SCID-베이지색 마우스를 찰스 리버 랩(Charles River Labs) (매사추세츠주 윌밍턴)으로부터 구입하였고, 온도 및 습도가 제어되는 사육장에서 12시간 조명 주기로 거주시켰으며, 음식 및 물을 자유롭게 제공하였다. 50％ 매트리젤(matrigel) (BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences), #354234) 내의 10×10⁶개의 TMD8 세포를 마우스의 오른쪽 등쪽 겨드랑이 영역 내에 피하 이식하고, 종양 크기가 평균 ~160 ㎣일 때 (이식 21일 후), 동물을 처리 군으로 무작위화하였다. AEB071을 D5W 내의 20％ PEG400 및 4.5％ 0.1M HCl에서 제형하였다. 종양 부피를 2차원으로 캘리퍼에 의해 측정하고, (길이 × 폭²)/2로 계산하였다. 처리 동안 매일 2회 동물을 캘리퍼로 측정하여, 종양 성장에 대한 효과를 모니터링하였다. AEB071 (80 ㎎/㎏, 하루 3번)을 매일 경구 투약하는 것이 비히클로 처리된 동물과 비교하여 17％의 T/C, p <0.05로 유의한 종양 성장 억제를 초래하였다 (도 3A 참조). T/C 백분율은 처리된 동물의 종양 부피에서의 평균 변화를 비히클 동물의 종양 부피에서의 평균 변화로 나누고 100을 곱한 값으로 계산되었다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표현되고, 스튜던트 t-테스트에 의해 p < 0.05에서 차이가 유의한 것으로 간주된다.

PKC 억제에 응답한 성장 억제 효과가 NFkB 경로 신호전달의 조정을 통해 매개된다는 것을 확증하기 위해, 생체내 연구의 PD 부문에서 AEB071 처리에 응답하여 IL-10의 mRNA 발현을 모니터링하였다. 마우스에 상기 기술된 바와 같이 TMD8 세포를 이식하였고, 종양 부피가 ~160 ㎣에 도달했을 때, 단일 용량의 80 ㎎/㎏ AEB071을 투여하였다. 단일 용량의 AEB071 1시간 후 또는 8시간 후에, 종양 샘플을 수확하고 액체 질소에서 급속 동결시켰다. 조직 샘플을 균질화하고, RLT 완충제 (퀴아젠, #74104) + DX 시약 (퀴아젠, 19088)에서 티슈라이서(TissueLyser) II (퀴아젠, 85300)를 사용하여 용해시켰다. 전체 RNA를 알엔이지 키트 (퀴아젠, #74104)를 사용하여 수확하고, 제조사의 프로토콜에 따라 하이 캐퍼시티 cDNA 키트 (ABI, # 4368814)를 사용하여 1 ㎍ 전체 RNA로부터 cDNA를 제조하였다. IL-10 택맨 프로브 (ABI, Hs00174086_m1)를 유전자 발현 마스터 믹스 (ABI, 4369510)와 함께 사용하여, 내인성 대조군 유전자 (ABI: TBP, 4326322E) 및 DMSO 대조군과 비교하여 IL-10에 대한 mRNA 발현량을 델타-델타 C_t 방법을 사용하여 결정하였다. AEB071 처리는 8시간 처리 후 이종이식 종양 조직에서 IL-10 mRNA 발현의 감소를 초래하였다. AEB071에 의한 NFkB 표적 유전자 하향 조절의 시험관내 동역학과 일관되게, IL-10 mRNA 발현이 단지 1시간의 처리 후에는 영향을 받지 았다 (도 3A 참조).

PKC 억제제와 mTOR 억제제 사이의 상승작용

팬-PKC 억제제인 소트라스타우린 (AEB071로 또한 공지됨), 및 mTOR-선택적 억제제인 RAD001을 조합하여 사용하여, 시험관 내에서 CD79 돌연변이체 ABC DLBCL 세포주인 TMD8의 증식을 실연하였다. 세포를 96웰 플레이트 (코닝, #3358)에 100 ㎕ 내에 5000개의 세포/웰로 플레이팅하고, 6×6 행렬에서 각각 12 ㎕의 10× 농도의 DMSO 또는 억제제 (AEB071에 대해서는 63 nM 내지 1 μM, RAD001에 대해서는 3 nM 내지 50 nM의 최종 농도 범위; 2배 희석물)로 처리하였다. 5일 처리 후, 세포를 셀타이터-글로® 발광성 세포 생육성 검정법 시약 (프로메가, G7573)으로 용해시키고, 용해물을 불투명 96웰 플레이트 (코닝, #3971)로 옮기고, 발광 신호를 인비젼을 사용하여 판독하였다. 데이터를 찰리스(Chalice) 소프트웨어 (콤비나토Rx(CombinatoRx) 라이선스)를 사용하여 분석하였다. AEB071 및 RAD001의 6×6 행렬에 대한 백분율 억제값을 DMSO 신호에 비교하여 계산하였다. 조합물의 응답을 단일 작용제의 응답에 비교함으로써 상승작용이 결정되었다. "용량 부가성"으로 또한 칭해지는 뢰베(Loewe) 부가성은 용량 행렬의 양쪽 변이 동일한 화합물을 함유할 때의 2개의 작용제 간의 거래를 기술한다. AEB071 및 RAD001에 대한 용량 행렬의 부가 초과 억제(ADD Excess Inhibition) 플롯은 조합될 때 부가 효과가 있는 2개의 화합물에 대해 예상되는 것을 초과하는 억제를 나타냈다. 60％ 억제에 대한 대표적인 아이소볼로그램(isobologram)을 사용하여, 뢰베 부가성과 비교하여 조합된 AEB071과 RAD001의 상승작용을 그래프로 도해하였다. 이러한 아이소볼로그램은 실제 효과 윤곽선을 따르는 60％ 억제에 도달하는데 필요한 용량을 용량-부가성 모델을 기초로 하는 예상 윤곽선 (직선 대각선으로 표시됨)을 따르는 이러한 용량과 비교한다 (도 4 참조). 소정의 억제 수준을 달성하기 위해 조합물에서 요구되는 약물의 상응하는 단일 작용제 농도에 대한 총 비율로 정의되는 조합 지수 (CI)의 관점에서 상승작용이 측정될 수 있다. AEB071과 RAD001의 조합물은 TMD8 세포주에서 CI₆₀=0.459 (CI₅₀=0.704)으로 상승작용을 나타낸다. 이러한 발견은 CD79A/B가 돌연변이된 DLBCL가 포함되는 만성 BCR 경로 활성화의 환경에서의 PKC 억제제와 mTOR 선택적 억제제의 합리적인 조합을 지지한다.

제약 조성물

본 발명에서 사용하기 위해, 일반적으로 PKC 억제제는 투여 전에 제약 조성물로 제형된다. 따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 PKC 억제제 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 의약의 제조이다. 당업자에게 주지된 절차에 의해 이러한 제약 조성물이 제조된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "제약상 허용되는 담체"에는 당업자에게 공지되었을 바와 같은 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 계면활성제, 항산화제, 방부제 (예를 들어, 항균제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 방부제, 약물, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 염료 등 및 이들의 조합물이 포함된다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 임의의 통상적인 담체가 활성 성분과 비혼화성인 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 이의 사용이 구상된다.

PKC 억제제의 "치료 유효량"이라는 용어는 대상체의 생물학적 또는 의학적 응답, 예를 들어, 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제를 유발하거나, 또는 증상을 호전시키거나, 용태를 완화시키거나, 질환 진행을 저속화 또는 지연시키거나, 또는 질환을 예방하는 것 등을 일으킬 PKC 억제제의 양을 지칭한다. 한 비제한적인 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 대상체에게 투여되는 경우에, (1) 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종)의 성장 억제에 의해 조정되거나, 또는 (ii) 이같은 활성과 연관되거나, 또는 (iii) 이같은 억제의 활성 (정상적 또는 비정상적)을 특징으로 하는 용태 또는 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 완화시키고/시키거나, 억제하고/하거나, 예방하고/하거나 호전시키는데; 또는 (2) 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종)의 성장을 감소시키거나 억제하는데 효과적인 PKC 억제제의 양을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료 유효량"은 세포 또는 조직 또는 비-세포성 생물학적 물질 또는 배지에 투여되는 경우에 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종)의 성장을 적어도 부분적으로 감소시키거나 억제하는데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로, 동물은 포유동물이다. 대상체는, 예를 들어, 영장류 (예를 들어, 인간, 수컷 또는 암컷), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 또한 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 소정의 용태, 증상, 또는 장애, 또는 질환의 감소 또는 억압, 또는 생물학적 활성 또는 프로세스의 기준선 활성에서의 유의한 감소를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애에 대한 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는 (i) 질환 또는 장애를 호전시키는 것 (즉, 질환 또는 이의 임상 증상들 중 하나 이상의 발달을 저속화시키거나 정지시키거나 감소시키는 것); (ii) 환자가 인식할 수 없는 것들이 포함되는 하나 이상의 신체 파라미터를 완화시키거나 호전시키는 것; (iii) 신체적으로 (예를 들어, 인식할 수 있는 증상의 안정화), 생리학적으로 (예를 들어, 신체 파라미터의 안정화), 또는 신체적 및 생리학적 양쪽 모두로, 질환 또는 장애를 조정하는 것; 또는 (iv) 질환 또는 장애의 발병 또는 발달 또는 진행을 예방하거나 지연시키는 것을 지칭한다. 일반적으로, 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 질환, 용태 또는 장애에 대항하기 위한 목적의 환자 관리 및 케어(care)를 기술하고, 증상 또는 합병증의 발병을 예방하거나, 증상 또는 합병증을 완화시키거나, 또는 질환, 용태 또는 장애를 제거하기 위한 PKC 억제제 투여를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 치료가 대상체에게 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질 면에서 이롭다면 대상체가 이같은 치료를 "필요로 한다" (바람직하게는 인간).

본 발명의 또 다른 측면은 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종)의 성장의 억제 또는 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장의 억제를 특징으로 하는 대상체에서의 장애 또는 질환의 치료를 위한 의약의 제작에서의 PKC 억제제의 용도를 제공한다.

경구 투여, 비경구 투여 및 직장 투여 등과 같은 특정 투여 경로를 위해 제약 조성물이 제형될 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태 (캡슐, 정제, 환약, 과립, 분말 또는 좌약이 비제한적으로 포함됨), 또는 액체 형태 (용액, 현탁액 또는 에멀션이 비제한적으로 포함됨)로 제조될 수 있다. 제약 조성물은 통상적인 제약 공정 예컨대 무균화에 적용될 수 있고/있거나, 통상적인 불활성 희석제, 윤활제 또는 완충제, 뿐만 아니라 보조제, 예컨대 방부제, 안정화제, 습윤화제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다.

전형적으로, 제약 조성물은

a) 희석제, 예를 들어, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신;

b) 윤활제, 예를 들어, 실리카, 활석, 스테아르산, 이의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜;

정제의 경우의

c) 결합제, 예를 들어, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸 셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈;

원하는 경우의

d) 붕해제, 예를 들어, 전분, 한천, 알긴산 또는 이의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물; 및/또는

e) 흡수제, 착색제, 풍미제 및 감미제

와 함께 활성 성분을 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐이다.

정제는 당업계에 공지된 방법에 따라 필름 코팅되거나 장용 코팅될 수 있다.

경구 투여를 위한 적절한 조성물은 정제, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀션, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭서 형태의 유효량의 PKC 억제제를 포함한다. 경구 사용에 의도되는 조성물은 제약 조성물 제작을 위한 업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조되고, 이같은 조성물은 제약상 고상하고 맛이 좋은 제제를 제공하기 위해 감미제, 풍미제, 착색제 및 방부제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제는 정제 제작에 적절한 독성이 없는 제약상 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유할 수 있다. 이러한 부형제는, 예를 들어, 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘, 또는 인산나트륨; 과립화 및 붕해 작용제, 예를 들어, 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어, 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석이다. 정제는 코팅되지 않거나, 또는 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시킴으로써 더 긴 기간에 걸친 지속적인 작용을 제공하도록 공지된 방법에 의해 코팅된다. 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 시간 지연 물질을 사용할 수 있다. 경구 사용을 위한 제형은 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어, 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합되어 있는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어, 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합되어 있는 연질 젤라틴 캡슐로서 제시될 수 있다.

특정 주사 용액은 수성 등장성 용액 또는 현탁액이고, 좌약은 지방 에멀션 또는 현탁액으로부터 유리하게 제조된다. 상기 조성물들은 무균화될 수 있고/있거나 보조제, 예컨대 방부제, 안정화제, 습윤화제 또는 유화제, 용액 촉진제, 삼투압을 조절하기 위한 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 또한, 이들은 기타 치료적으로 유용한 물질도 함유할 수 있다. 상기 조성물들은 각각 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제조되고, 약 0.1-75％의 활성 성분을 함유하거나, 또는 약 1-50％의 활성 성분을 함유한다.

경피 적용을 위한 적절한 조성물은 유효량의 PKC 억제제와 적절한 담체를 포함한다. 경피 전달에 적절한 담체에는 숙주 피부 통과를 보조하는 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매가 포함된다. 예를 들어, 경피 장치는 후면 부재, 화합물을 임의적인 담체와 함께 함유하는 저장소, 장기간 동안 미리 정해진 제어 속도로 숙주 피부에 화합물을 전달하기 위한 임의적인 속도 제어 장벽, 및 장치를 피부에 고정하는 수단을 포함하는 붕대 형태이다.

예를 들어 피부 및 눈에 대한 국소 적용을 위한 적절한 조성물은 수성 용액, 현탁액, 연고, 크림, 겔, 또는 분사가능한 제형, 예를 들어, 에어로졸 등에 의한 전달을 위한 제형을 포함한다. 이같은 국소 전달 시스템은 특히 피부 적용에, 예를 들어, 피부 암의 치료를 위해, 예를 들어, 선 크림, 로션, 스프레이 등에서의 예방적 용도를 위해 적합할 것이다. 따라서 이들은 당업계에 주지된, 미용 제형이 포함되는 국소 제형에서의 사용에 특히 적절한다. 이같은 제형은 용해제, 안정화제, 장성 강화제, 완충제 및 방부제를 함유할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 국소 적용은 흡입 또는 비강내 적용에 또한 관련될 수 있다. 이는 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말 (단독으로, 혼합물, 예를 들어, 락토스와의 건식 블렌드로서, 또는 혼합 성분 입자 (예를 들어 인지질과의 혼합 성분 입자)로서)의 형태로, 또는 가압 용기, 펌프, 스프레이, 분무기(atomizer) 또는 네뷸라이저(nebuliser) (적절한 추진제를 사용하거나 또는 추진제를 사용하지 않음)로부터의 에어로졸 스프레이 외형물의 형태로 편리하게 전달될 수 있다.

본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 약 50-70 ㎏인 대상체에 대해 활성 성분(들) 약 1-1000 ㎎, 또는 활성 성분 약 1-500 ㎎ 또는 약 1-250 ㎎ 또는 약 1-150 ㎎ 또는 약 0.5-100 ㎎, 또는 약 1-50 ㎎의 단위 투여량일 수 있다. 화합물, 제약 조성물 또는 이들의 조합물의 치료적 유효 투여량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별적인 상태, 치료될 장애 또는 질환 또는 이의 중증도에 좌우된다. 통상적인 기술의 의사, 임상의 또는 수의사는 장애 또는 질환을 예방하거나, 치료하거나 또는 이의 진행을 억제하는데 필요한 각각의 활성 성분의 유효량을 쉽게 결정할 수 있다.

상기 언급된 투여량 성질은 포유동물, 예를 들어, 마우스, 래트, 개, 원숭이 또는 단리된 기관, 조직 및 이의 제제를 유리하게 사용하여 시험관내 및 생체내 테스트에서 실연가능하다. 본 발명의 화합물은 시험관 내에서 용액, 예를 들어, 수성 용액의 형태로, 그리고 생체 내에서 장 내로, 비경구적으로, 유리하게는 정맥 내로, 예를 들어, 현탁액으로서 또는 수성 용액에서 적용될 수 있다. 시험관내 투여량은 약 10^-3 M 내지 10^-9 M 농도 범위일 수 있다. 생체내 치료 유효량은 투여 경로에 따라 약 0.1-500 ㎎/㎏, 또는 약 1-100 ㎎/㎏ 범위일 수 있다.

특정 예에서, PKC 억제제를 화학요법에서 전형적으로 사용되는 추가적인 항암제 또는 부가 요법과 조합하여 투여하는 것이 유리할 수 있다. PKC 억제제는 하나 이상의 다른 치료제(들)과 동시에, 또는 이러한 치료제 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. PKC 억제제는 다른 작용제(들)과 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로에 의해 별도로, 또는 다른 작용제(들)과 동일한 제약 조성물 내에서 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 항-CD20 항체인 리툭시맙과 비-호지킨 림프종의 치료를 위한 화학요법으로의 조합 요법 (R-CHOP로 또한 지칭됨)이 포함되는 현재의 표준 케어에 PKC 억제제가 부가될 수 있다. 기타 적절한 추가적안 항암제는 mTOR 억제제, PI3K 억제제 및 JAK 억제제가 포함된다.

적절한 mTOR 억제제에는 템시롤리무스(Temsirolimus) (상표명 토리셀(Torisel)® 하에 화이자(Pfizer)에서 판매함), 리다포롤리무스(ridaforolimus) (종전에는 데페롤리무스(deferolimus)로 공지됨, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-디히드록시-19,30-디메톡시-15,17,21,23,29,35-헥사메틸-2,3,10,14,20-펜타옥소-11,36-디옥사-4-아자트리시클로[30.3.1.0^4,9]헥사트리아콘타-16,24,26,28-테트라엔-12-일]프로필]-2-메톡시시클로헥실 디메틸포스피네이트, AP23573 및 MK8669로 또한 공지되고, PCT 공개 번호 WO 03/064383에 기술됨), 에베롤리무스(everolimus) (상표명 아피니토(Afinitor)® 하에 노바티스(Novartis)에서 판매하고, "RAD001"로 또한 지칭됨), 라파마이신(Rapamycin) (시롤리무스(sirolimus)), OSI-027 (OSI 파마슈티칼즈(OSI Pharmaceuticals)), 및 WO 06/090167; WO 06/090169; WO 07/080382, WO 07/060404; 및 WO 08/023161에 기술된 화합물들이 포함된다. 특히 유용한 mTOR 억제제는 에베롤리무스 (RAD001)이다.

적절한 PI3K 억제제에는 워트마닌(wortmannin), WO 06/044453에 기술된 17-히드록시워트마닌 유사체, 4-[2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸술포닐)피페라진-1-일]메틸]티에노[3,2-d]피리미딘-4-일]모르폴린 (GDC 0941로 또한 공지되고, PCT 공개 번호 WO 09/036082 및 WO 09/055730에 기술됨), 2-메틸-2-[4-[3-메틸-2-옥소-8-(퀴놀린-3-일)-2,3-디히드로이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]페닐]프로피오니트릴 (BEZ 235 또는 NVP-BEZ 235로 또한 공지되고, PCT 공개 번호 WO 06/122806에 기술됨), (S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-히드록시프로판-1-온 (PCT 공개 번호 WO 2008/070740에 기술됨), LY294002 (액손 메드켐(Axon Medchem)으로부터 입수가능한 2-(4-모르폴리닐)-8-페닐-4H-1-벤조피란-4-온), PI 103 히드로클로라이드 (액손 메드켐으로부터 입수가능한 3-[4-(4-모르폴리닐피리도-[3',2':4,5]푸로[3,2-d]피리미딘-2-일]페놀 히드로클로라이드), PIK 75 (액손 메드켐으로부터 입수가능한 N'-[(1E)-(6-브로모이미다조[1,2-a]피리딘-3-일)메틸렌]-N,2-디메틸-5-니트로벤젠술포노-히드라지드 히드로클로라이드), PIK 90 (액손 메드켐으로부터 입수가능한 N-(7,8-디메톡시-2,3-디히드로-이미다조[1,2-c]퀴나졸린-5-일)-니코틴아미드), GDC-0941 비스메실레이트 (액손 메드켐으로부터 입수가능한 2-(1H-인다졸-4-일)-6-(4-메탄술포닐-피페라진-1일메틸)-4-모르폴린-4-일-티에노[3,2-d]피리미딘 비스메실레이트), AS-252424 (액손 메드켐으로부터 입수가능한 5-[1-[5-(4-플루오로-2-히드록시-페닐)-푸란-2-일]-메트-(Z)-일리덴]-티아졸리딘-2,4-디온), 및 TGX-221 (액손 메드켐으로부터 입수가능한 7-메틸-2-(4-모르폴리닐)-9-[1-(페닐아미노)에틸]-4H-피리도-[1,2-a]피리미딘-4-온), XL-765, 및 XL-147이 포함된다.

적절한 야누스(janus)-관련 키나제 (JAK) 억제제 (예를 들어, JAK1, JAK2 또는 JAK3 억제제)에는 (R)-3-(4-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-1H-피라졸-1-일)-3-시클로펜틸프로판니트릴 (INCB018424로 또한 지칭되고, 문헌 [Lin, Z., et al., Organic Letters, "Enantioselective Synthesis of Janus Kinase Inhibitor INCB018424 via an Organocatalytic Aza-Michael Reaction" 11(9), 1999-2002 (2009)]에 기술됨), 및 N-(1,1-디메틸에틸)-3-[[5-메틸-2-[[4-[2-(1-피롤리디닐)에톡시]페닐]아미노]-4-피리미디닐]아미노]-벤젠술폰아미드 (TG101348로 또한 지칭되고, PCT 공개 번호 WO 2007/053452에 기술됨), N-[4-[[4-(4-메틸피페라진-1-일)-6-(5-메틸-2H-피라졸-3-일아미노)피리미딘-2-일]술파닐]페닐]아미드 시클로프로판카르복실산 (MK 0457, 토자세르팁(Tozasertib) 및 VX 680으로 또한 공지됨), 2,3,9,10,11,12-헥사히드로-10-히드록시-10-(히드록시메틸)-9-메틸-[9S-(9α,10β,12α)]-9,12-에폭시-1H-디인돌로[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]피롤로[3,4-i][1,6]벤조디아조신-1-온 (CEP 701 및 레스타우르티닙(Lestaurtinib)으로 또한 공지됨), 3-((3R,4R)-4-메틸-3-(메틸(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴 (CP-690550으로 또한 공지됨), (N-(시아노메틸)-4-[2-[[4-(4-모르폴리닐)페닐]아미노]-4-피리미디닐]-벤즈아미드 (CYT387로 또한 지칭되고, 문헌 [Burns, C.J., et al., Bioorg Med Chem Lett 19, 5887-5892 (2009)]에 기술됨), XL-019 (CAS# 1123889-86-0), SB-1518 (CAS# 1138325-13-0), 및 PCT 공개 번호 WO 08/148867 및 WO 07/071393에 기술된 화합물들이 포함된다. 바람직하게는, JAK 억제제는 선택적 JAK2 억제제, 선택적 JAK1 및/또는 JAK2 억제제, 선택적 JAK1 및/또는 JAK3 억제제, 또는 선택적 JAK2 및/또는 TYK2 억제제이다.

본 발명의 또 다른 측면은 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하거나 또는 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장을 억제하기 위한 요법에서의 동시 사용, 개별적 사용 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 PKC 억제제 및 하나 이상의 다른 치료제 (또는 제약 작용제)를 포함하는 제품이다.

본 발명의 조합 요법에서, PKC 억제제 및 다른 치료제는 동일한 제조업자 또는 상이한 제조업자에 의해 제작 및/또는 제형될 수 있다. 또한, PKC 억제제 및 다른 치료제 (또는 제약 작용제)는 (i) 조합 제품을 의사에게 배포하기 전에 (예를 들어, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우); (ii) 의사 자신에 의해 (또는 의사의 지도 하에) 투여 직전에; (iii) 환자 자신 내에서, 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제의 순차적 투여 동안에, 조합 요법으로 함께 결집될 수 있다.

따라서, 본 발명은 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하는 것에 의해 조정되는 질환 또는 용태를 치료하기 위한 또는 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장을 억제하기 위한 PKC 억제제의 용도이고, 이때 의약이 또 다른 치료제와 함께 투여되는 것을 위해 제조되는 PKC 억제제의 용도를 제공한다. 본 발명은 만성 활성 B-세포-수용체 신호전달이 있는 B-세포 림프종 (바람직하게는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종 (예를 들어, 비-호지킨 림프종))의 성장을 억제하는 것에 의해 조정되는 질환 또는 용태를 치료하기 위한 또는 만성 활성 BCR 신호전달에 이르는 분자 병변이 있는 암의 성장을 억제하기 위한 또 다른 치료제의 용도이고, 이때 의약이 PKC 억제제와 함께 투여되는 또 다른 치료제의 용도를 또한 제공한다.

Claims

소트라스타우린을 포함하는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종의 치료를 위한 제약 조성물.
제1항에 있어서, 상기 B-세포 림프종이 비-호지킨 림프종인 제약 조성물.
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소트라스타우린 및 에베롤리무스(everolimus)를 포함하는, CD79 돌연변이체 미만성 거대 B-세포 림프종의 치료를 위한 제약 조성물.
제6항에 있어서, 상기 B-세포 림프종이 비-호지킨 림프종인 제약 조성물.
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