MX2012011341A - Inhibidores de pkc para el tratamiento de linfoma de celulas-b que tenga señalizacion activa cronica de receptores de celulas-b. - Google Patents

Abstract

La presente invención demuestra que la señalización activa crónica del BCR a través de CD79A/B confiere una fuerte dependencia en la señalización de cinasa PKCb corriente abajo. Por consiguiente, en la presente se proporciona un método para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B, o para inhibir el crecimiento de los cánceres con lesiones moleculares que conducen a la señalización activa crónica del BCR, mediante la administración a un paciente que necesite dicho tratamiento, de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de PKC, o un uso de un inhibidor de PKC para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B, o para inhibir el crecimiento de los cánceres con lesiones moleculares que conducen a la señalización activa crónica del BCR.

Description

INHIBIDORES DE PKC PARA EL TRATAMIENTO DE LINFOMA DE CÉLULAS-B QUE TENGA SEÑALIZACIÓN ACTIVA CRÓNICA DE RECEPTORES DE CÉLULAS-B CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de los inhibidores de PKC para inhibir el crecimiento de linfomas de células-B que tengan señalización activa crónica de receptores de células-B, en particular linfomas de células-B grandes difusos de CD79 muíante.

ANTECEDENTES El linfoma de células-B grande difuso (DLBCL) es la forma más común de linfoma maligno y es diagnosticado en más de 20,000 pacientes cada año en los Estados Unidos. El DLBCL es heterogéneo con respecto a la morfología, biología, y presentación clínica. Mediante la perfilación de la expresión genética, se pueden distinguir cuando menos tres subtipos moleculares de DLBCL denominados como DLBCL de tipo células-B del centro germinal (GC), DLBCL de tipo células-B activadas (ABC), y linfoma de células-B mediastinal primario (PMBL). Véase Alizadeh, A. A. y colaboradores, Nature 403 (6769), 503-522 (2000). Sin embargo, los subtipos moleculares de DLBCL difieren no solamente con respecto a la expresión de miles de genes, sino que también tienen índices de sobrevivencia globales significativamente diferentes. Los pacientes con DLBCL GCB y PMBL responden favorablemente al tratamiento convencional. En contraste, el DLBCL ABC representa el subtipo menos curable con índices de sobrevivencia globales de 3 años de solamente el 40 por ciento siguiendo una terapia combinada con el anticuerpo anti-CD20 Rituximab y quimioterapia para el régimen de tratamiento de linfoma no de Hodgkin (CHOP) o (R-CHOP). En adición, cada subtipo se caracteriza por la desregulación de distintas sendas oncogénicas. El DLBCL ABC, por ejemplo, se caracteriza por la activación de la senda del factor nuclear-?? (NF-??) constitutivo predominantemente por medio del complejo de señalización CBM (CARD11/BCL10/ MALT1), que promueve la proliferación celular, la diferenciación, y suprime la apoptosis. Véase Davis, R.E. y colaboradores, J Exp Med, 194 (12), 1861-1874 (2001).

Fisiológicamente, la activación del complejo CBM en las células-B se presenta en respuesta a la estimulación del receptor de células-B (BCR). El enlace del antígeno al BCR induce la oligomerización del receptor, que promueve la fosforilación mediada por Lyn de los dominios de los motivos de activación basados en tirosina inmuno-receptora en los co-receptores de células-B CD79A y CD79B. Los dominios ITAM fosforilados recluían y activan la cinasa de tirosina del bazo (SYK) en la membrana de plasma, que inicia la señalización corriente abajo a través de la cinasa de tirosina de Bruton (BTK), y la fosfolipasa C gamma (PLCA), y por último conduce a la activación de cinasa C de proteína (PKC). Se piensa que la PKCB es la isoforma de PKC predominante que media la activación de BCR-NF-?? en las células-B a través de la fosforilación de la proteína que contiene dominio de reclutamiento de caspasa 11 (CARD11, también conocida como CARMA1). La fosforilación del dominio enlazador CARD11 conduce a un cambio de conformación que promueve el ensamble del complejo CBM. Una vez activado en la membrana de plasma, el complejo CBM facilita la activación de el complejo IKK (cinasa I kappa B), el cual fosforila la ???a dirigiéndose a la misma para su destrucción, y de esta manera permite que los factores de transcripción NF-?? entren al núcleo e impulsen la expresión de los genes objetivo de NF-??. Aunque durante mucho tiempo no estuvo claro si la activación de NF-?? en el DLBCL ABC meramente refleja el estado de señalización de la célula tumoral de origen, la identificación de las mutaciones oncogénicas de CARD11 en este subtipo proporcionó la primera evidencia para la desregulación genética de esta senda. Véase Lenz, G., y colaboradores, Science 319 (5870), 1676-9 (2008). En adición, los estudios más recientes han revelado lesiones tumorales somáticamente adquiridas en varios reguladores de la senda de NF-KB, incluyendo frecuentes mutaciones de pérdida de función en el regulador negativo A20 y anormalidades genéticas en CD79A y CD79B. Véase, por ejemplo, Compagno, M. y colaboradores, "Mutations of múltiple genes cause deregulation of NF-?? in diffuse large B-cell limphoma" Nature, 459 (7247), 717-722 (2009); Davis, E.R. y colaboradores, "Chronic active B-cell-receptor signalling in diffuse large B-cell limphoma'' Nature, 463, 88-94 (2010)). Por consiguiente, es probable que la mayor parte, si no es que todo, el DLBCL ABC puede alojar las lesiones genéticas que activan constitutivamente la señalización de la senda de NF-KB.

Los estudios anteriores mostraron que las líneas de DLBCL ABC son sensibles a la inhibición de CARD11, BCL10, MALT1, o IKKB, demostrando una clara dependencia en la señalización de la senda de NF-??. Véase Ngo, V.N. y colaboradores, Nature 441 (7089): 106-10 (2006). En adición, Davis y colaboradores, reportaron dependencia de las líneas celulares de DLBCL ABC con CARD11 de tipo silvestre en la señalización de BCR y demostraron que la inhibición de CD79A daba como resultado la muerte celular. Véase, Davis y colaboradores, Nature, 463, 88-94 (2010). Estos resultados contrastan con un estudio reciente que proponía que la señalización de BCR "tónica" independiente del ligando es una característica más general de los linfomas de células-B que hace que estas células sean dependientes de la señalización de BCR corriente abajo. Véase Chen, L. y colaboradores, Blood 111 (4): 2230-7 (2008).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención demuestra que la señalización activa crónica del BCR a través de CD79A/B confiere una fuerte dependencia en la señalización de cinasa ?? ß corriente abajo.

Por consiguiente, en una modalidad, la presente invención proporciona un método para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante, en particular cánceres con mutaciones CD79A/B (por ejemplo, linfoma no de Hodgkin)), mediante la administración a un paciente que necesite dicho tratamiento, de un inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta).

En otra modalidad, se proporciona el uso de un inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta) para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante, en particular cánceres con mutaciones CD79A/B (por ejemplo, linfoma no de Hodgkin)).

Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante, en particular cánceres con mutaciones CD79A/B (por ejemplo, linfoma no de Hodgkin)), mediante la administración a un paciente que necesite dicho tratamiento, de un inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta) en combinación con un agente farmacéutico adicional (como se describe en la presente más adelante). En una modalidad, se proporciona el uso de un inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta) en combinación con un agente farmacéutico adicional (descrito en la presente más adelante) para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante, en particular cánceres con mutaciones CD79A/B (por ejemplo, linfoma no de Hodgkin)).

Las terapias de combinación descritas anteriormente se pueden administrar como: (a) una sola composición farmacéutica que comprende un inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta), cuando menos un agente farmacéutico adicional, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; o (b) dos composiciones farmacéuticas separadas que comprenden: (i) una primera composición que comprende un inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta), y un vehículo farmacéuticamente aceptable, y (ii) una segunda composición, la cual comprende cuando menos un agente farmacéutico adicional, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar de una manera simultánea o en secuencia y en cualquier orden. De preferencia, el agente farmacéutico adicional es un inhibidor de mTOR, un inhibidor de PI3K, o un inhibidor de JAK. En una modalidad, el inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta) se combina con un inhibidor de mTOR. En otra modalidad, el inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta) se combina con un inhibidor de PI3K. En todavía otra modalidad, el inhibidor de PKC (de preferencia, un inhibidor selectivo de PKC alfa/beta) se combina con un inhibidor de JAK (de preferencia, un inhibidor selectivo de JAK2, un inhibidor selectivo de JAK1 y/o JAK2, un inhibidor selectivo de JAK1 y/o JAK3, o un inhibidor selectivo de JAK2 y/o TYK2,.

Definiciones Como se utiliza en la presente, el término "inhibidor de PKC" se refiere a un inhibidor de cinasa C de proteína que puede ser pan (múltiples subtipos) o selectivo para una o más isozimas de PKC. El término PKC se refiere en términos generales a la familia entera de isoformas: isoformas convencionales; alfa, beta (ß1 y ß2), y gamma, isoformas novedosas; delta, épsilon, eta, y theta, e isoformas atípicas; zeta, y tau/lambda.

El término "inhibidor selectivo de PKC" se refiere a un inhibidor de PKC que posee una selectividad de cuando menos aproximadamente 20 veces para una o más isoformas de PKC comparándose con las otras isoformas de PKC. De preferencia, la selectividad es de cuando menos aproximadamente 100 veces, más preferiblemente de cuando menos aproximadamente 500 veces, más preferiblemente de cuando menos aproximadamente 1,000 o de cuando menos aproximadamente 2,000 veces.

El término "inhibidor selectivo de PKC alfa/beta", "inhibidor selectivo de PKC a/ß" o "inhibidor selectivo de PKCa/b" se refiere a un inhibidor de cinasa C de proteína que es más selectivo para la isoforma de PKC alfa y/o beta que para las otras isoformas de PKC. Por ejemplo, PKC alfa o PKC alfa y beta, sobre las otras isoformas de PKC, de cuando menos aproximadamente 20 veces (de preferencia de cuando menos aproximadamente 100, más preferiblemente de cuando menos aproximadamente 500, más preferiblemente de cuando menos aproximadamente 1,000 o de cuando menos aproximadamente 2,000 veces).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 ilustra el efecto inhibidor del crecimiento de AEB071 (inhibidor de pan-PKC) sobre un intervalo de concentración de 0.16 µ? a 20 µ?, en donde el crecimiento celular relativo se expresa como un porcentaje de las células tratadas con sulfóxido de dimetilo (DMSO).

La Figura 2A ilustra la disminución de la expresión del ARNm de IL-6 de una manera dependiente de la dosis (en µ?) después de 24 horas de tratamiento con el inhibidor de PKC, AEB071, en las líneas celulares OCI-Ly3, HBL1, TMD8 y OCI-Ly10, en donde el nivel de ARNm de IL-6 se expresa como un porcentaje del nivel de ARNm de IL-6 a partir de las células tratadas con sulfóxido de dimetilo (DMSO).

La Figura 2B ilustra la disminución de la expresión del ARNm de IL-6 de una manera dependiente de la dosis (en µ?) después de 24 horas de tratamiento con los inhibidores de PKC, el compuesto B y LY333531 en la línea celular TMD8, en donde el nivel de ARNm de IL-6 se expresa como un porcentaje del nivel de ARNm de IL-6 a partir de las células tratadas con sulfóxido de dimetilo (DMSO)..

La Figura 2C ilustra la secreción de IL-6 en las líneas celulares OCI-Ly3, HBL1, y TMD8 después de 24 horas de tratamiento con el inhibidor de IKKb, MLN120B, en concentraciones en el intervalo de 0 a 40 µ?, en donde la secreción de IL-6 se expresa como un porcentaje de la secreción de IL-6 a partir de las células tratadas con sulfóxido de dimetilo (DMSO).

La Figura 2D ilustra la secreción de IL-6 en las líneas celulares OCI-Ly3, HBL1, y TMD8 después de 24 horas de tratamiento con el inhibidor de PKC, AEB071, en concentraciones en el intervalo de 0 a 10 µ?, en donde la secreción de IL-6 se expresa como un porcentaje de la secreción de IL-6 a partir de las células tratadas con sulfóxido de dimetilo (DMSO).

La Figura 3A y la Figura 3B ilustran la inhibición del crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto de TMD8 de ratón cuando se trata con el inhibidor de PKC, AEB071, in vivo.

La Figura 4 ilustra el sinergismo entre el inhibidor de PKC, AEB071, y el inhibidor de mTOR, RAD001, en la línea celular T D8 de DLBCL ABC de CD79 muíante in vitro.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los inhibidores de PKC útiles en la práctica de la presente invención pueden inhibir varias isoformas de la PKC, en particular pueden inhibir selectivamente las isoformas específicas de PKC (por ejemplo, inhibidores selectivos de PKC o inhibidores de PKC selectivos de isozimas). De preferencia, los inhibidores de PKC son capaces de inhibir selectivamente las isoformas de PKC, las cuales se seleccionan a partir de las isoformas clásicas de PKC (a, ß1, ß2, ?), y las isoformas novedosas de PKC (e, ?, d, ?) o las isoformas atípicas (?, t/?), más preferiblemente seleccionadas a partir de las isoformas a, (isoformas B1 y ß2), y T de PKC. Los inhibidores de PKC preferidos son capaces de inhibir selectivamente las isoformas a y ß. Los inhibidores de PKC adecuados incluyen derivados de maleimida, tales como los compuestos descritos en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 5,545,636; 5,668,152; 5,672,681; 5,698,578; 5,710,145; 6,645,970; 7,220,774; 7,235,555; la Publicación Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 2008/0318975; las Patentes Europeas Números 0776895 B1; 0817627 B1; 1449529 B1; 1337527 B1; y las Publicaciones Internacionales del TCP Números WO03/082859; y WO07/006533. Cada una de las referencias citadas anteriormente se incorporan a la presente como referencia.

Los compuestos específicos de interés incluyen sotrastaurina (también conocida como AEB071 y descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 6,645,970), 3-(1 H-lndol-3-il)-4-[2-(piperazin-1 - il)-quinazolin-4-il]-1 H-pirrol-2,5-diona (descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 6,645,970), 3-[2-cloro-7-[(dimetil-amino)-metil]-1-naftalenil]-4-[7-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-1 H-¡ ndol-3-il]- 1 H-pirrol-2,5-diona (descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO07/006533 y en la Publicación Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 2008/0318975), 3-[3-(4,7-diaza-espiro-[2,5]-oct-7-il)-isoquinolin-1 -il]-4-(7-metil-1 H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona (descrita en el Ejemplo 69 de la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 7,235,555); ruboxistaurina ((9S)-9-[(dimetil-amino)-metil]-6,7, 10, 11 -tetrahidro-9H,18H-5,21 : 12, 17-d¡meteno-d¡benzo-[e,k]-pirrolo-[3,4-h][1 ,4, 13]-oxa-diaza-ciclohexadecina-18,20(19H)-diona (también conocida como LY-333531 y descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,698,578)), y la sal de mesilato de ruboxistaurina (descrita en la Patente Europea Número 0776895 B1). Cada una de las referencias citadas anteriorménte se incorporan a la presente como referencia.

Los inhibidores de PKCa/ß selectivos adecuados incluyen 3-[2-cloro-7-[(dimetil-am¡no)-metil]-1 -naftalenil]-4-[7-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-1H-indol-3-il]-1H-pirrol-2,5-diona (CAS No. 919992-85-1 descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO07/006533 y en la Publicación Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 2008/0318975); 3-(1 H-lndol-3-il)-4-[2-(piperazin-1 -il)-quinazol¡n-4-il]-p¡rrol-2,5-diona que tiene la siguiente estructura y descrita en el Ejemplo 70 de la Publicación Internacional del TCP Número WO 2002/038561 ó en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 6,645,970; (9S)-9-[(dimetil-amino)-metilj-6,7,10,11 -tetra h id ro-9H , 18H-5.21 : 12, 17-d imeteno-dibenzo-[e,k]-pirrolo-[3,4-h][1 ,4,13]-oxa-diaza-ciclohexadecina-18,20(19H)-diona (también referida como ruboxistaurina o LY-333531, CAS No. 169939-94-0 descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,698,578); sal de mesilato de ruboxistaurina (descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,710,145 y en la Patente Europea Número EP 776895 B1); y 12-(2-ciano-etil)-6,7,12,13-tetrah¡dro-1 S-metil-S-oxo-SH-indolo-^.S-aJ-pirrolo-ÍS^-cJ-carbazol (CAS No. 136194-77-9, disponible en Calbiochem® y descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,489,608).

Las formas alternativas de inhibir la actividad de PKC son a través del uso de estrategias de ácidos nucleicos, tales como ARN interferentes anti-sentido o pequeños (siARNs) dirigidos ya sea hacia una o bien hacia múltiples isoformas de PKC (por ejemplo, el oligonucleótido anti-sentido de PKC-a, aprinocarsen (también conocido como ISIS 3521/LY900003)).

Los siguientes compuestos se utilizaron en los experimentos descritos más adelante y son cualquiera de aquéllos disponibles en las fuentes comerciales (por ejemplo, Calbiochem®) o se preparan utilizando la preparación descrita en las referencias correspondientes citadas en la presente a continuación.

El compuesto A (inhibidor de IKKb) - control: N-[(2R,6R)-2,6-dimetil-4-piperidinil]-4-(7-fluoro-1 H-indol-3-il)-2-pirimidinamina (CAS No. 778646-25-6) descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 7,615,562, incorporada a la presente como referencia.

Compuesto A MLN120B (inhibidor de IKKb) - control: N-(6-cloro-7-metoxi-9H- B-carbolin-8-il)-2-metil-nicotinamida (CAS No. 783348-36-7) descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO04/092167 y en la Publicación Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 2004/0235839.

MLN120B Sotrastaurina: 3-(1/--lndol-3-il)-4-[2-(4-metil-p¡perazin-1-¡l)- quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona (AEB-071, CAS No. 425637-18-9) descrita en Drugs of the Future, 34 (8), páginas 618-623 (2009), y en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 6,645,970, incorporada a la presente como referencia.

AEB-071 Compuesto B: 3-[2-cloro-7-[(dimetil-amino)-metil]-1 - naftalenil]-4-[7-[2-(2-metox¡-etoxi)-etoxi]-1H-indol-3-il]-1 H-p¡rrol-2,5-diona (CAS No. 919992-85-1) descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO07/006533 y en la Publicación Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 2008/0318975, incorporada a la presente como referencia.

(Compuesto B) Compuesto C: 3-[3-(4,7-diaza-espiro-[2,5]-oct-7-il)-isoquinolin-1 -il]-4-(7-metil-1 H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona que tiene la siguiente estructura y descrita en el Ejemplo 69 de la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 7,235,555.

(Compuesto C) El compuesto D: 3-(1 H-lndol-3-il)-4-[2-(piperazin-1-¡l)- qu¡nazolin-4-il]-pirrol-2,5-diona que tiene la siguiente estructura y descrita en el Ejemplo 70 de la Publicación Internacional del TCP Número WO 2002/038561 o en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 6,645,970.

Ruboxista urina: (9S)-9-[(dimetil-am¡no)-metil]-6,7,10,11 -tetra - hidro-9H,18H-5.21 :12,17-dimeteno-dibenzo-[e,k]-pirrolo-[3,4- h][1 ,4, 13]-oxa-diaz a-ciclo hexadecin a- 18,20(19H)-diona, (LY-333531 , CAS No. 169939-94-0) que tiene la siguiente estructura y descrita en la Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,698,578, incorporada a la presente como referencia, y la sal de mesilato en la Patente Europea Número EP 776895 B1.

LY-333531 La actividad de inhibición de PKC de los inhibidores de PKC se puede determinar en un ensayo de reacción de linfocitos mixtos (MLR) alogénica. El ensayo de MLR se puede hacer de acuerdo con los métodos conocidos por los expertos en este campo, por ejemplo, el ensayo de MLR de ratón o humano descrito en la Publicación de Patente Europea Número 1337527 A1.

En una modalidad preferida, los inhibidores de PKC muestran un valor de IC50 de menos de aproximadamente 1 µ?, de preferencia de menos de aproximadamente 10 nM en el ensayo de MLR.

Davis y colaboradores identificaron mutaciones en el co- receptor de BCR CD79A/B que conducen a la activación crónica de la señalización de BCR. Véase, Davis, R E., "Chronic active B-cell- receptor signalling in diffuse large B-cell limphoma" Nature, 463 (7277), 88-94 (2010). Para probar la utilidad de los inhibidores de PKC en el tratamiento de linfomas de células-B, se evaluaron los efectos de los inhibidores de PKC sobre un panel de líneas celulares de linfoma de células-B. Se incluyeron las líneas celulares de DLBCL de los subtipos GC y ABC y confirmaron que tres líneas celulares de DLBCL ABC (OCI-Ly10, HBL1, y TMD8) alojan mutaciones en el motivo ITAM de CD79A/B. Véase Davis, E.R. y colaboradores, "Chronic active B-cell-receptor signalling in diffuse large B-cell limphoma" Nature. 463, 88-94 (2010)).

Dos inhibidores farmacológicos de PKC: (i) el inhibidor de pan- PKC, Sotrastaurina, también conocida como AEB071, y (ii) el compuesto selectivo de PKCa/b, 3-[2-cloro-7-[(dimet¡l-amino)-met¡l]-1 -naftalenil]-4-[7-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-1 H-indol-3-il]-1 H-pirrol-2,5-diona (referida en la presente como "Compuesto B"), se utilizaron para evaluar la proliferación de varias líneas de linfoma de células-B grande difuso (DLBCL). Los inhibidores selectivos de IKKb N-(6-cloro-7-metoxi-9H-B-carbolin-8-il)-2-met¡l-nicotinamida (referida en la presente como "MLN120B"), y N-[(2R,6R)-2,6-dimetil-4-piperidinil]-4-(7-fluoro-1 H-indol-3-il)-2-pirimidinamina (referida en la presente como "Compuesto A") se utilizaron como compuestos de control. Las líneas celulares de DLBCL ABC (OCI-LY3, OCI-LY10, HBL1, U2932, TMD8, Su-DHL2), y las líneas celulares de DLBCL GC (Su-DHL4, DB, K-422) se trataron durante 5 días con los inhibidores de PKC (A) Sotrastaurina (AEB071) o (B) el Compuesto B; los inhibidores de IKKb (C) MLN120B o (D) el Compuesto A. Las células se emplacaron en placas de 96 pozos (Corning, #3358) a 5,000 células/pozo en 100 microlitros, y se trataron con sulfóxido de dimetilo o con los inhibidores en concentraciones en el intervalo de 160 nM a 20 µ? (diluciones dobles). En seguida de 5 días de tratamiento, las células se Usaron con el reactivo de ensayo de viabilidad celular luminiscente CelITiter-Glo® (Promega, G7573), los lisados se transfirieron a placas opacas de 96 pozos (Corning, #3971), y la señal de luminiscencia se leyó utilizando el Envision. El porcentaje de crecimiento se calculó en relación con la señal media del sulfóxido de dimetilo (DMSO).

Las células del subtipo GC fueron en general insensibles a tanto los inhibidores de IKK como a los inhibidores de PKC, con una concentración inhibidora del crecimiento media máxima (IC50) mayor de 10 µ en las células Su-DHL4 y DB, lo cual es consistente con la noción de que este subtipo no tiene la activación de la senda de NFkB desregulada (Tabla 1B más adelante). Aunque todas las líneas celulares de DLBCL ABC fueron sensibles a los inhibidores de IKK, su respuesta a los inhibidores de PKC varió mucho (Tabla 1A más adelante). La líneas celulares que son insensibles a los inhibidores de PKC, OCI-Ly3 y Su-DHL2, han reportado mutaciones en CARD11 y A20, respectivamente. Ambas de estas líneas celulares exhibieron valores IC50 mayores de 10 µ? en los ensayos de crecimiento con los inhibidores de PKC a pesar de que son sensibles a la inhibición de ???ß (Figura 1 y Tabla 1A más adelante). El hecho de que se piense que estas lesiones oncogénicas funcionan corriente abajo de PKCB en la señalización de CB -NFkB, proporciona un fundamento molecular para su insensibilidad. Recientemente se reportó que las células U2932, las cuales exhibieron una sensibilidad intermedia a los inhibidores de PKC (Tabla 1A más adelante) alojan mutaciones TAK1, aunque todavía no se ha confirmado experimentalmente su naturaleza oncogénica. Véase, Compagno, M. y colaboradores, "M utations of múltiple genes cause deregulation of NF-?? in diffuse large B-cell límphoma" Nature, 459 (7247), 717-722 (2009)). En contraste, las células HBL1, TMD8, y OCI-Ly10, que se confirmó que tienen mutaciones CD79A/B, fueron muy sensibles a ambos inhibidores de PKC, con valores IC50 en el intervalo de 0.2 a 1.0 µ? (Figuras 1A, 1B), indicando que estas líneas celulares son dependientes de la transduccion de señales de BCR corriente arriba de CARD11. Las Tablas 1A y 1B más adelante muestran los valores inhibidores del crecimiento IC50, los cuales se determinaron mediante la medición de la concentración de ATP (Cell Titer Glo), para los compuestos indicados en las líneas celulares indicadas. Los valores IC50 se determinaron como la concentración del compuesto que conduce al 50 por ciento de reducción del crecimiento celular. Las curvas representativas de los datos primarios para AEB071 se exhiben en la Figura 1. ND indica que no se determinó el valor IC50 para ese compuesto.

Tabla 1A Tabla 1B La presente invención demuestra que la señalización activa crónica del BCR a través de CD79A/B confiere una fuerte dependencia en la actividad catalítica de PKCB y demuestra la utilidad de los inhibidores selectivos de pan-PKC o PKCa/b para inhibir el crecimiento de los cánceres con lesiones moleculares que conducen a la señalización activa crónica del BCR.

Reducción de la señalización de la senda de NFkB en las células mutantes CD79 con los inhibidores de PKC: La activación constitutiva de la senda de NFkB es una referencia molecular de las células de DLBCL ABC y se requiere para su proliferación y sobrevivencia. Véase Davis, R.E. y colaboradores, J Exp Med. 194 (12), 1861-1874 (2001). Para confirmar que el efecto inhibidor del crecimiento en respuesta a la inhibición de PKC es mediado a través de la modulación de la señalización de la senda de NFkB, se monitoreó la expresión de los genes de la senda de NFkB en respuesta al tratamiento con AEB071. Se utilizó la citoquina IL-6 inducida por la senda de NFkB como un marcador con el fin de estudiar la modulación de la senda de NFkB mediante los inhibidores de PKC. Véase Lam, L.T. y colaboradores, Blood 111 (7): 3701-13 (2008). Para medir los niveles de ARNm de IL-6, las células se emplacaron en placas de 6 pozos en 2 mililitros del medio a 2M/mililitro, entonces se trataron con sulfóxido de dimetilo (DMSO) o con los inhibidores, de 10 nM a 10 µ? (diluciones cuádruples) durante 24 horas. El ARN total se cosechó utilizando el kit RNeasy (Qiagen, #74104), y el ADNc se hizo a partir de 1 microgramo del ARN total utilizando el kit High Capacity ADNc (ABI, # 4368814), de acuerdo con los protocolos del fabricante. Se utilizaron sondas Taqman (ABI: IL-6, Hs00174131_m1 ) con la Mezcla Maestra de Expresión Genética (Gene Expression Master Mix) (ABI, 4369510) para determinar la cantidad de expresión de ARNm para la IL-6 en relación con un gen de control endógeno (ABI: TBP, 4326322E), y el control de sulfóxido de dimetilo (DMSO) utilizando el método delta-delta C,. El tratamiento con AEB071 dio como resultado una disminución dependiente de la dosis en la expresión del ARNm de IL-6 en las líneas celulares de CD79 mutante OCI-Ly10, HBL1 y TMD8; mientras que, la expresión del ARNm de IL-6 no fue afectada en la línea celular de CARD11 mutante OCI-Ly3 (Figura 2A). Las células TMD8 se trataron entonces con dos inhibidores de PKC adicionales (Compuesto B y LY333531), lo cual también redujo la expresión del ARNm de IL-6 de una manera dependiente de la dosis, demostrando que la modulación de IL-6 es un efecto sobre el objetivo de la inhibición de PKC (Figura 2B).

El hecho de que la IL-6 sea secretada a partir de las células permitió monitorear los niveles de IL-6 en los sobrenadantes celulares. La secreción de IL-6 se determinó mediante un ELISA Quantikine utilizando el sobrenadante a partir de las células tratadas. Las células se lavaron y se emplacaron a 100,000 células/pozo en 100 microlitros de un medio fresco, en placas de 96 pozos de fondo redondo (Corning, #3358). Las células se trataron entonces con sulfóxido de dimetilo (DIVISO) o con los inhibidores, en concentraciones en el intervalo de 80 nM a 10 µ? (diluciones dobles), y se incubaron a 37°C durante 48 horas. Entonces el medio acondicionado se transfirió a placas de 96 pozos de fondo en V (Nunc, #12565436). El nivel de la secreción de IL-6 se determinó mediante el kit de ELISA colorimétrico Quantkine de (R & D Systems, #D6050), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para el ELISA de IL-6, el medio acondicionado se diluyó a 1:2 con el medio fresco (excepción: el medio acondicionado HBL1 no se diluyó, y se utilizó a 1:1). En la Figura 2, la secreción de IL-6 para cada dosis se expresa como un porcentaje de la secreción de IL-6 a partir de las células tratadas con sulfóxido de dimetilo (DMSO). El tratamiento con los inhibidores de IKKb redujo mucho la secreción de IL-6 en todas las líneas celulares de DLBCL ABC probadas (Figura 2C). La secreción de IL-6 fue fuertemente inhibida por los inhibidores de PKC AEB071 y el Compuesto B (IC50 < 0.2 µ?) en las células TMD8 y HBL1. Notoriamente, los inhibidores de PKC no tuvieron efecto alguno sobre la secreción de IL-6 (y de IL-10) en la línea celular de CARD11 mutante OCI-Ly3, lo cual se correlaciona con la insensibilidad de estas células a los inhibidores de PKC en los ensayos de crecimiento (Figura 2D). Es importante que las concentraciones requeridas para inhibir la señalización de NFkB (medida por la secreción de IL-6) en las líneas sensibles, se correlacionó bien con las IC50s en los ensayos de inhibición del crecimiento, demostrando, por consiguiente, que el efecto inhibidor del crecimiento de los inhibidores de PKC es mediado por la inhibición de la senda de NFkB.

Las líneas celulares OCI-LY10 y OCI-LY3 se obtuvieron en el laboratorio del Dr. Mark Minden (Universidad de Toronto, Canadá). Las células HBL1 y TMD8 se obtuvieron con el Dr. Martin Dyer (Universidad de Leicester, Reino Unido), y con el Dr. Georg Lenz (Chante Berlín, Alemania), respectivamente. Las células DB se obtuvieron en ATCC (EUA), y las U2392, K422, y SU-DHL4 en DSMZ (Alemania).

Sensibilidad de la CD79 mutante DLBCL ABC a la inhibición de PKC in vivo: También se demostró que la CD79 mutante DLBCL ABC era sensible a la inhibición de PKC en un establecimiento in vivo, utilizando un modelo de xeno-injerto TMD8 subcutáneo. Los ratones SCID beiges hembras se adquirieron en Charles River Labs (Wilmington A), y se alojaron en un vivero con control de temperatura y de humedad con un ciclo de luz de 12 horas, y se les proporcionó alimento y agua al gusto. A los ratones se les implantaron subcutáneamente 10x106 células TMD8 en Matrigel al 50 por ciento (BD Biosciences, #354234) en la región axilar dorsal derecha, y los animales se seleccionaron aleatoriamente para los grupos de tratamiento cuando los tamaños de los tumores tuvieron un promedio de aproximadamente 160 mm3 (21 días después de la implantación). El AEB071 se formuló en PEG400 al 20 por ciento y HCI 0.1M al 4.5 por ciento en D5W. El volumen tumoral se midió calibrando en 2 dimensiones, y se calculó como (Longitud x Anchura2)/2. Los animales se calibraron dos veces por semana durante el tratamiento para monitorear los efectos sobre el crecimiento tumoral. La dosificación oral diaria de AEB071 (80 miligramos/kilogramo, tres veces al día (tid)) dio como resultado una inhibición significativa del crecimiento tumoral, comparándose con los animales tratados con vehículo, con una T/C del 17 por ciento, p <0.05 (véase la Figura 3A). El porcentaje T/C se calculó como el cambio promedio en los volúmenes tumorales de los animales tratados, dividido entre el cambio promedio en los volúmenes tumorales de los animales con vehículo, y multiplicado por 100. Los datos se expresan como el promedio + SE , y las diferencias se consideran estadísticamente significativas en p < 0.05 mediante la prueba-t de Student.

Para confirmar que el efecto inhibidor del crecimiento en respuesta a la inhibición de PKC es mediado a través de la modulación de la señalización de la senda de NFkB, se monitoreó la expresión del ARNm de la IL-10 en respuesta al tratamiento con AEB071 en un grupo PD del estudio in vivo. Los ratones se implantaron con las células T D8 como se describe anteriormente, y cuando el volumen tumoral alcanzó aproximadamente 160 mm3, se administró una sola dosis de 80 miligramos/kilogramo de AEB071. Las muestras tumorales se cosecharon y se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido, a 1 hora o a las 8 horas en seguida de la dosis individual de AEB071. Las muestras de tejido se homogeneizaron y se lisaron en regulador RLT (Qiagen, #74104) con reactivo DX (Qiagen, 19088), utilizando el TissueLyser II (Qiagen, 85300). El ARN total se cosechó utilizando el kit RNeasy (Qiagen, #74104), y el ADNc se hizo a partir de 1 microgramo del ARN total utilizando el kit High Capacity ADNc (ABI, # 4368814), de acuerdo con los protocolos del fabricante. Se utilizó la sonda de IL-10 Taqman (ABI, Hs00174086_m1 ) con la Mezcla Maestra de Expresión Genética (Gene Expression Master Mix) (ABI, 4369510) para determinar la cantidad de expresión de ARNm para la IL-10 en relación con un gen de control endógeno (ABI: TBP, 4326322E), y el control de sulfóxido de dimetilo (DMSO) utilizando el método delta-delta Ct. El tratamiento con AEB071 dio como resultado una disminución en la expresión del ARNm de IL-10 en el tejido tumoral del xeno-injerto después de 8 horas de tratamiento. De una manera consistente con la cinética in vitro de la sub-regulación del gen objetivo NFkB mediante AEB071, la expresión del ARNm de IL-10 no fue afectada después de solamente 1 hora de tratamiento (véase la Figura 3A).

Sineraismo entre un inhibidor de PKC y un inhibidor de mTOR El inhibidor de pan-PKC, Sotrastaurina (también conocida como AEB071), y el inhibidor selectivo de mTOR, RAD001, se utilizaron en combinación para demostrar la proliferación de la línea TMD8 de DLBCL ABC de CD79 mutante in vitro. Las células se emplacaron en placas de 96 pozos (Corning, #3358) a 5,000 células/pozo en 100 microlitros, y se trataron en una matriz de 6 x 6 con 12 microlitros cada uno, de inhibidor o sulfóxido de dimetilo (DMSO), en una concentración 10x (las concentraciones finales están en el intervalo de 63 nM a 1 µ? para AEB071, y de 3 nM a 50 nM para RAD001; diluciones dobles). En seguida de 5 días de tratamiento, las células se Usaron con el reactivo de ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo® (Promega, G7573), los Usados se transfirieron a placas opacas de 96 pozos (Corning, #3971), y la señal de luminiscencia se leyó utilizando el Envision. Los datos se analizaron utilizando el software Chalice (licencia de CombinatoRx). Los valores de porcentaje de inhibición para la matriz de dosis de 6 x 6 de AEB071 y RAD001 se calcularon en relación con la señal de sulfóxido de dimetilo (DMSO)). El sinergismo se determinó comparando la respuesta a la combinación con aquéllas a los agentes individuales. La aditividad de Loewe, también denominada como la "aditividad de la dosis", describe la compensación entre dos agentes cuando ambos lados de una matriz de dosis contienen el mismo compuesto. La gráfica de Inhibición de Exceso de ADD de la matriz de dosis para AEB071 y RAD001 mostró la inhibición por encima de lo que se espera para dos compuestos que tengan un efecto aditivo cuando se combinen. Se utilizó un isobolograma representativo para la inhibición del 60 por ciento, con el fin de ilustrar gráficamente, el sinergismo de AEB071 y RAD001 en combinación, en relación con la aditividad de Loewe. El isobolograma compara las dosis necesarias para alcanzar el 60 por ciento de inhibición a lo largo de un contorno de igual efecto, con aquéllas a lo largo de un contorno predicho, basándose en un modelo de aditividad de dosis (representada por la línea diagonal recta) (véase la Figura 4). El sinergismo se puede medir en términos de un índice de combinación (Cl), el cual se define como la proporción total de fármaco requerida en combinación para alcanzar un nivel de inhibición dado sobre las concentraciones de un solo agente correspondientes. La combinación de AEB071 y RAD001 muestra sinergismo con un Cl60 = 0.459 (Cl50 = 0.704) en la línea celular TMD8. Este descubrimiento apoya la combinación racional de un inhibidor de PKC y un inhibidor selectivo de mTOR en establecimientos de activación crónica de la senda de BCR, incluyendo el DLBCL mutado CD79A/B.

Composiciones Farmacéuticas Para utilizarse en la presente invención, los inhibidores de PKC se formulan en términos generales en una composición farmacéutica antes de la administración. Por consiguiente, otro aspecto de la presente invención es la preparación de un medicamento que comprende un inhibidor de PKC y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Las composiciones farmacéuticas se preparan mediante los procedimientos bien conocidos por los expertos en este campo.

Como se utiliza en la presente, el término "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, tensoactivos, antioxidantes, conservadores (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes retardantes de absorción, sales, conservadores, fármacos, estabilizantes de fármacos, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegración, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, tintes, y similares, y combinaciones de los mismos, como serían conocidos por los expertos en este campo (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición, Mack Printing Company, 1990, páginas 1289-1329). Excepto hasta donde cualquier vehículo convencional sea incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapéuticas o farmacéuticas.

El término "una cantidad terapéuticamente efectiva" de un inhibidor de PKC se refiere a una cantidad del inhibidor de PKC que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad de una enzima o de una proteína, o mitigar los síntomas, aliviar las condiciones, hacer más lento o retardar el progreso de la enfermedad, o prevenir una enfermedad, etc. En una modalidad no limitante, el término "una cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de inhibidor de PKC, cuando se administra a un sujeto, que es efectiva para: (1) cuando menos aliviar parcialmente, inhibir, prevenir y/o mitigar una condición, o un trastorno o una enfermedad (i) mediada por la inhibición del crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante), o (ii) asociada con esa actividad, o (iii) caracterizada por una actividad (normal o anormal) de esa inhibición; o (2) reducir o inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante).

Como se utiliza en la presente, el término "una cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a una célula, o a un tejido, o a un material biológico no celular, o a un medio, es efectiva para reducir o inhibir cuando menos parcialmente, el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 muíante).

Como se utiliza en la presente, el término "sujeto" se refiere a un animal. Típicamente, el animal es un mamífero. Un sujeto también se refiere, por ejemplo, un primates (por ejemplo, seres humanos, masculinos o femeninos), reses, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, aves y similares. En ciertas modalidades, el sujeto es un primate. En todavía otras modalidades, el sujeto es un ser humano.

Como se utiliza en la presente, el término "inhibir", "inhibición" o "inhibiendo" se refiere a la reducción o supresión de una condición, síntoma, o trastorno o enfermedad dados, o a una disminución significativa en la actividad de la línea base de una actividad o proceso biológico.

Como se utiliza en la presente, el término "tratar", "tratando" o "tratamiento" de cualquiera enfermedad o trastorno, se refiere (i) a mitigar la enfermedad o el trastorno (es decir, hacer más lento o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o cuando menos uno de los síntomas clínicos de la misma; (ii) a aliviar o mitigar cuando menos un parámetro físico, incluyendo aquéllos que puedan no ser discernibles por el paciente; (iii) a modular la enfermedad o el trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo, la estabilización de un síntoma discernible), fisiológicamente, (por ejemplo, la estabilización de un parámetro físico), o ambas; o (iv) a prevenir o retardar el establecimiento o desarrollo o progreso de la enfermedad o del trastorno. En general, el término "tratar" o "tratamiento" describe el manejo y cuidado de un paciente para el propósito de combatir la enfermedad, la condición, o el trastorno, e incluye la administración de un inhibidor de PKC para prevenir el establecimiento de los síntomas o complicaciones, aliviar los síntomas o complicaciones, o eliminar la enfermedad, la condición, o el trastorno.

Como se utiliza en la presente, un sujeto está "en necesidad de" tratamiento si este sujeto se beneficiaría biológicamente, médicamente, o en su calidad de vida, a partir de dicho tratamiento (de preferencia un ser humano).

Otro aspecto de la presente invención proporciona el uso de un inhibidor de PKC, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o de una enfermedad en un sujeto, caracterizado por la inhibición del crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante) o por la inhibición del crecimiento de los cánceres con lesiones moleculares que conducen a la señalización activa crónica del BCR.

La composición farmacéutica se puede formular para vías de administración particulares, tales como administración oral, administración parenteral, y administración rectal, etc. En adición, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden configurar en una forma sólida (incluyendo, sin limitación, cápsulas, tabletas, pildoras, gránulos, polvos o supositorios), o en una forma líquida (incluyendo, sin limitación, soluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas se pueden someter a las operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización, y/o pueden contener diluyentes inertes, agentes lubricantes, o agentes reguladores convencionales, así como adyuvantes, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes y reguladores, etc.

Típicamente, las composiciones farmacéuticas son tabletas o cápsulas de gelatina que comprenden el ingrediente activo junto con: a) diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina; b) lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o de calcio y/o polietilenglicol; para tabletas también, c) aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metil-celulosa, carboxi-metil-celulosa de sodio y/o polivinil-pirrolidona; si se desea, d) desintegrantes, por ejemplo, almidones, agar, ácido algínico o su sal sódica, o mezclas efervescentes; y/o e) absorbentes, colorantes, saborizantes y edulcorantes. Las tabletas pueden tener recubrimiento de película o recubrimiento entérico de acuerdo con los métodos conocidos en este campo.

Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen una cantidad efectiva de un inhibidor de PKC en la forma de tabletas, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o granulos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elíxires. Las composiciones pretendidas para uso oral se preparan de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la elaboración de composiciones farmacéuticas, y estas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados a partir del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, y agentes conservadores, con el objeto de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y de buen sabor. Las tabletas pueden contener al ingrediente activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos que sean adecuados para la elaboración de tabletas. Estos excipientes son, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio, o fosfato de sodio; agentes de granulación o desintegrantes, por ejemplo almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidón, gelatina, o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico, o talco. Las tabletas no se recubren, o bien se recubren mediante técnicas conocidas para demorar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y de esta manera proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material de demora de tiempo tal como monestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral se pueden presentar como cápsulas de gelatina dura en donde se mezcla el ingrediente activo con un diluyente sólido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio, o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en donde se mezcla el ingrediente activo con agua o con un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuate, parafina líquida, o aceite de oliva.

Ciertas composiciones inyectables son soluciones o suspensiones isotónicas acuosas, y los supositorios se preparan convenientemente a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Estas composiciones se pueden esterilizar y/o pueden contener adyuvantes, tales como agentes conservadores, estabilizantes, humectantes, o emulsionantes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica, y/o reguladores del pH. En adición, también pueden contener otras sustancias terapéuticamente valiosas. Estas composiciones se preparan de acuerdo con los métodos convencionales de mezcla, granulación, o recubrimiento, respectivamente, y contienen de aproximadamente el 0.1 al 75 por ciento, o contienen de aproximadamente el 1 al 50 por ciento del ingrediente activo.

Las composiciones adecuadas para aplicación transdérmica incluyen una cantidad efectiva de un inhibidor de PKC con un vehículo adecuado. Los vehículos adecuados para suministro transdérmico incluyen los solventes farmacológicamente aceptables absorbibles para ayudar al paso a través de la piel del huésped. Por ejemplo, los dispositivos transdérmicos están en la forma de un parche, el cual comprende un miembro de respaldo, un depósito que contiene al compuesto opcionalmente con vehículos, opcionalmente una barrera de control de velocidad para suministrar el compuesto a la piel del huésped a una velocidad controlada y previamente determinada durante un período de tiempo prolongado, y elementos para asegurar el dispositivo a la piel.

Las composiciones adecuadas para aplicación tópica, por ejemplo a la piel y a los ojos, incluyen soluciones acuosas, suspensiones, ungüentos, cremas, geles, o formulaciones rociables, por ejemplo para suministrarse en aerosol o similar. Estos sistemas de suministro tópico serán apropiados en particular para aplicación dérmica, por ejemplo, para el tratamiento de cáncer de piel, por ejemplo, para su uso profiláctico en cremas solares, lociones, aerosoles, y similares. Por consiguiente, son adecuados en particular para utilizarse en formulaciones tópicas, incluyendo cosméticas, bien conocidas en este campo. Éstas pueden contener solubilizantes, estabilizantes, agentes mejoradores de la tonicidad, reguladores del pH, y conservadores.

Como se utiliza en la presente, una aplicación tópica también puede pertenecer a una inhalación o a una aplicación intranasal. De una manera conveniente se pueden suministrar en la forma de un polvo seco (ya sea solos, como una mezcla, por ejemplo una mezcla seca con lactosa, o bien como una partícula componente mezclada, por ejemplo con fosfolípidos) a partir de un inhalador de polvo seco o una presentación de aspersión en aerosol a partir de un recipiente presurizado, bomba, aspersor, atomizador o nebulizador, con o sin el uso de un propelente adecuado.

La composición o combinación farmacéutica de la presente invención puede estar en una dosificación unitaria de aproximadamente 1 a 1,000 miligramos de ingrediente(s) activo(s) para un sujeto de aproximadamente 50 a 70 kilogramos, o de aproximadamente 1 a 500 miligramos, o de aproximadamente 1 a 250 miligramos, o de aproximadamente 1 a 150 miligramos, o de aproximadamente 0.5 a 100 miligramos, o de aproximadamente 1 a 50 miligramos de ingredientes activos. La dosificación terapéuticamente efectiva de un compuesto, de la composición farmacéutica, o de las combinaciones de los mismos, depende de la especie del sujeto, del peso corporal, de la edad y condición individual, del trastorno o enfermedad que se esté tratando, o de la gravedad de la misma. Un médico, clínico, o veterinario de una experiencia ordinaria puede determinar fácilmente la cantidad efectiva de cada uno de los ingredientes activos necesaria para prevenir, tratar, o inhibir el progreso del trastorno o de la enfermedad.

Las propiedades de dosificación anteriormente citadas se pueden demostrar en pruebas in vitro e in vivo utilizando convenientemente mamíferos, por ejemplo, ratones, ratas, perros, monos, u órganos aislados, tejidos y preparaciones de los mismos. Los compuestos de la presente invención se pueden aplicar in vitro en la forma de soluciones, por ejemplo, soluciones acuosas, e in vivo ya sea enteralmente, parenteralmente, de una manera conveniente intravenosamente, por ejemplo, como una suspensión o en solución acuosa. La dosificación in vitro puede estar en el intervalo de concentraciones de entre aproximadamente 10"3 molar y 10"9 molar. Una cantidad terapéuticamente efectiva in vivo, dependiendo de la vía de administración, puede estar en el intervalo de entre aproximadamente 0.1 y 500 miligramos/kilogramo, o de entre aproximadamente 1 y 100 miligramos/kilogramo.

En ciertas instancias, puede ser conveniente administrar el inhibidor de PKC en combinación con un agente contra el cáncer adicional o una terapia adjunta típicamente empleada en quimioterapia. El inhibidor de PKC se puede administrar ya sea simultáneamente con, o antes o después de, uno o más agentes terapéuticos adicionales. El inhibidor de PKC se puede administrar por separado, por la misma o diferente vía de administración, o juntos en la misma composición farmacéutica que los otros agentes. Por ejemplo, el inhibidor de PKC se puede agregar al estándar de cuidado actual que incluye una terapia combinada con el anticuerpo anti-CD20 rituximab y quimioterapia para el tratamiento de linfoma no de Hodgkin (también referido como R-CHOP). Otros agentes contra el cáncer adicionales adecuados incluyen inhibidores de mTOR, inhibidores de PI3K e inhibidores de JAK.

Los inhibidores de mTOR adecuados incluyen Temsirolimus (vendido bajo el nombre comercial Torisel® por Pfizer), ridaforolimus (formalmente conocido como deferolimus, dimetil-fosfinato de (1R,2 ?,4S)-4-[(2R)-2-[(1R,9S,12S,15R,16E,18R, 9R,21R,23S,24E, 26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-dihidroxi-19,30-dimetoxi-15,17,21 ,23,29, 35-hexa metí 1-2,3, 10, 14,20-pentaoxo-11 ,36-dioxa-4-aza-triciclo-[30.3.1.04'9]-hexatr¡ aconta- 16, 24,26, 28-tetraen-12-i l]-propil]-2-metox¡-ciclohexilo, también conocido como AP23573 y MK8669, y descrito en la Publicación Internacional del TCP Número WO 03/064383), everolimus (vendido bajo el nombre comercial Afinitor® por Novartis y también referido como "RAD001"), Rapamicina (sirolimus), OSI-027(OSI Pharmaceuticals), y los compuestos descritos en las Publicaciones Internacionales Números WO 06/090167; WO 06/090169; WO 07/080382, WO 07/060404; y WO 08/023161. Un inhibidor de mTOR particularmente útil es everolimus (RAD001).

Los inhibidores de PI3K adecuados incluyen wortmannina, los análogos de 17-hidroxi-wortmannina descritos en la Publicación Internacional Número WO 06/044453, 4-[2-(1 H-indazol-4-il)-6-[[4-(metil-sulfonil)-piperazin-l -il]-metil]-tieno-[3,2-d]-pirimidin-4-il]-morfolina (también conocida como GDC 0941 y descrita en las Publicaciones Internacionales del TCP Números WO 09/036082 y WO 09/055730), 2-metil-2-[4-[3-metil-2-oxo-8-(quinolin-3-il)-2,3-dihidro-imidazo-[4,5-c]-quinolin-1 -il]-fenil]-propionitrilo (también conocido como BEZ 235 ó NVP-BEZ 235, y descrito en la Publicación Internacional del TCP Número WO 06/122806), (S)-1-(4-((2-(2-amino-pirimidin-5-il)-7-metil-4-morfolino-tieno-[3,2-d]-pirimidin-6-il)-metil)-piperazin-1 -il)-2-hidroxi-propan-1 -ona (descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO 2008/070740), LY294002 (2-(4-morfolinil)-8-fenil-4H-1 -benzopiran-4-ona disponible en Axon Medchem), clorhidrato de Pl 103 (clorhidrato de 3-[4-(4-morfolinil-pirido-[3',2':4,5]furo-[3,2-d]-pirimidin-2-il]-fenol disponible en Axon Medchem), PIK 75 (clorhidrato de N'-[(1 E)-(6-bromo-imidazo-[1 ,2-a]-piridin-3-il)-metilen]-N,2-dimetil-5-nitro-bencen-sulfono-hidrazida disponible en Axon Medchem), PIK 90 (N-(7,8-dimetoxi-2,3-dihidro-imidazo-[1 ,2-c]-quinazolin-5-il)-nicotinamida disponible en Axon Medchem), bismesilato de GDC-0941 (bismesilato de 2-(1 H-indazol-4-il)-6-(4-metan-sulfonil-piperazin-1 il-metil)-4-morfolin-4-il-tieno-[3,2-d]-pirimidina disponible en Axon Medchem), AS-252424 (5-[1-[5-(4-fluoro-2-hidroxi-fenil)-furan-2-il]-met-(Z)-iliden]-tiazolidina-2,4-diona disponible en Axon Medchem), y TGX-221 (7-metil-2-(4-morfolinil)-9-[1 - (fenil-amino)-etil]-4H-pirido-[1 ,2-a]-pirim¡d¡n-4-ona disponible en Axon Medchem), XL-765, y XL-147.

Los inhibidores de cinasa asociada con Janus (JAK) adecuados (por ejemplo, los inhibidores de JAK1, JAK2 o JAK3) incluyen (R)-3-(4-(7H-pirrofo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-ciclopentil-propano-nitrilo (también referido como INCB018424 y descrito por Lin, Z. y colaboradores, en Organic Letters "Enantioselective Synthesis of Janus Kinase Inhibitor INCB018424 via an Organocatalytic Aza-Michael Reaction" 11(9), 1999-2002 (2009)), y N-(1 ,1-dimetil-etil)-3-[[5-metil-2-[[4-[2-(1-pirrolidinil)-etoxi]-fenil]-amino]-4-pirimidinil]-amino]-bencen-sulfonamida (también referida como TG101348 y descrita en la Publicación Internacional del TCP Número WO 2007/053452), N-[4-[[4-(4-metil-piperazin-1 -il)-6-(5-metil-2H-pirazol-3-il-amino)-pirimidin-2-il]-sulfanil]-fenil]-amida de ácido ciclopropan-carboxílico (también conocida como MK 0457, Tozasertib y VX 680), 2,3,9, 10, 11 , 12-hexahidro-10-hidroxi-10-(hidroxi-metil)-9-metil-[9S-(9a,10B,12a)]-9,12-epoxi-1 H-di-indolo-[1 ,2,3-fg :3',2*, 1 '-kl]-pirrolo-[3,4-i][1 ,6]-benzo-diazocin-1 -ona (también conocida como CEP 701 y Lestaurtinib), 3-((3R ,4R)-4-metil-3-(metil-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-amino)-piperidin-1 -il)-3-oxo-propano-nitrilo (también conocido como CP-690550), (N-(ciano-metil)-4-[2-[[4-(4-morfolinil)-fenil]-amino]-4-pirimidinil]-benzamida (también referida como CYT387 y descrita en Burns, C.J. y colaboradores, Bioorq Med Chem Lett 19, 5887-5892 (2009)), XL-019 (CAS# 1123889-86-0), SB-1518 (CAS# 1138325-13-0), y los compuestos que se dan a conocer en las Publicaciones Internacionales del TCP Números WO 08/148867 y WO 07/071393. De preferencia, los inhibidores de JAK son inhibidores de JAK2 selectivos, inhibidores de JAK1 y/o JAK2 selectivos, inhibidores de JAK1 y/o JAK3 selectivos, o inhibidores de JAK2 y/o TYK2 selectivos.

Otro aspecto de la invención es un producto que comprende un inhibidor de PKC y cuando menos otro agente terapéutico (o agente farmacéutico) como una preparación combinada para su uso simultáneo, separado, o en secuencia, en terapia para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 muíante (por ejemplo, linfoma no de Hodgkin)), o para inhibir el crecimiento de los cánceres con lesiones moleculares que conducen a la señalización activa crónica del BCR.

En las terapias de combinación de la invención, el inhibidor de PKC y el otro agente terapéutico pueden ser elaborados y/o formulados por el mismo o por diferentes fabricantes. Más aún, el inhibidor de PKC y el otro agente terapéutico (o agente farmacéutico) se pueden reunir en una terapia de combinación: (i) antes de liberar el producto de combinación a los médicos (por ejemplo, en el caso de un kit que comprenda el compuesto de la invención y el otro agente terapéutico); (ii) por los médicos mismos (o bajo la guía del médico) poco antes de la administración; (iii) en los pacientes mismos, por ejemplo, durante la administración en secuencia del compuesto de la invención y el otro agente terapéutico.

De conformidad con lo anterior, la invención proporciona el uso de un inhibidor de PKC para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante (por ejemplo, linfoma no de Hodgkin)), o para inhibir el crecimiento de los cánceres con lesiones moleculares que conducen a la señalización activa crónica del BCR, en donde el medicamento se prepara para su administración con otro agente terapéutico. La invención también proporciona el uso de otro agente terapéutico para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B (de preferencia, un linfoma de células-B grande difuso de CD79 mutante (por ejemplo, linfoma no de Hodgkin)), o para inhibir el crecimiento de los cánceres con lesiones moleculares que conducen a la señalización activa crónica del BCR, en donde el medicamento se administra con un inhibidor de PKC.

Claims (32)

REIVINDICACIONES

1. Un método para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B, mediante la administración a un paciente que necesite dicho tratamiento, de un inhibidor de PKC.

2. El método de la reivindicación 1, en donde el linfoma de células-B que tiene señalización activa crónica de receptores de células-B, es un linfoma de células-B grande difuso de CD79 muíante.

3. El método de la reivindicación 1 ó 2, en donde el inhibidor de PKC mencionado se selecciona a partir del grupo que consiste en: sotrastaurina; 3-(1 /--lndol-3-il)-4-[2-(piperazin-1 - il)-quinazolin-4-il]-1 H-pirrol-2,5-diona; 3-[2-cloro-7-[(dimetil-amino)-metil]-1 -nafta lenil]-4-[7-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-1 H-indol-3-il]-1 H-pirrol-2,5-diona; 3-[3-(4,7-diaza-espiro-[2,5]-oct-7-il)-isoquinolin-1 -il]-4-(7-metil-1 H-indol-3-il)-pirrol-2,5-d¡ona; 3-[2-cloro-7-[(dimetil-amino)-metil]-1 -nafta len il]-4-[7-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-1 H-i ndol-3-il]- 1 H-pirrol-2,5-diona; y (9S)-9-[(dimetil-amino)-metil]-6,7,10, 11 -tetra h id ro-91-1,18H-5, 21 : 12,17-dimeteno-d¡benzo-[e,k]-pirrolo-[3,4-h][1 , 4,13]-oxa-diaza-ciclohexadecina-18,20( 9H)-diona; o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.

4. El método de la reivindicación 1 ó 2, en donde el inhibidor de PKC mencionado es un inhibidor de PKCa/b selectivo.

5. El método de la reivindicación 4, en donde el inhibidor de PKCa/b selectivo mencionado se selecciona a partir del grupo que consiste en: 3-[2-cloro-7-[(dimetil-amino)-metil]-1-naftalenil]-4-[7-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-1 H -i nd o l-3-il]- 1 H-pirrol-2,5-diona; y (9S)-9-[(dimetil-amino)-metil]-6,7,10, 11 -tetra h id ro-9H,18H-5,21 :12, 17-dimeteno-dibenzo-[e,k]-pirrolo-[3,4-h][1 ,4,13]-oxa-diaza-ciclohexadecina-18,20(19H)-diona; o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.

6. El uso de un inhibidor de PKC para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B.

7. El uso de la reivindicación 6, en donde el linfoma de células-B que tiene señalización activa crónica de receptores de células-B, es un linfoma de células-B grande difuso de CD79 muíante.

8. El uso de la reivindicación 6 ó 7, en donde el inhibidor de PKC mencionado se selecciona a partir del grupo que consiste en: sotrastaurina; 3-(1H-lndol-3-il)-4-[2-(piperazin-1-il)-quinazolin-4-il]-1H-pirrol-2,5-diona; 3-[2-cloro-7-[(dimetil-amino)-metil]-1-naftalenil]-4-[7-[2- (2-metox¡-etox¡)-etoxi]-1 H-indol-3-il]-1 H-p¡rrol-2,5-diona; 3-[3-(4,7-diaza-espiro-[2,5]-oct-7-il)-isoquinolin-1-il]-4-(7-metil-1 H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona; 3-[2-cloro-7-[(d¡metil-amino)-met¡l]-1-naftalenil]-4-[7-[2-(2-metox¡-etox¡)-etoxi]-1H-indol-3-il]-1H-pirrol-2,5-diona; y (9S)-9-[(dimetil-am¡no)-met¡l]-6,7, 10,11 -tetra h id ro-9H.18H-5.21 :12,17-dimeteno-dibenzo-[e,k]-pirrolo-[3,4-h][1 ,4,13]-oxa-diaza-ciclohexadecina-18,20(19H)-diona; o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.

9. El uso de la reivindicación 6 ó 7, en donde el inhibidor de PKC mencionado es un inhibidor de PKCa/b selectivo.

10. El uso de la reivindicación 9, en donde el inhibidor de PKCa/b selectivo mencionado se selecciona a partir del grupo que consiste en: 3-[2-cloro-7-[(dimetil-amino)-metil]-1-naftalenil]-4-[7-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-1 H-indol-3-il]-1 H-pirrol-2,5-diona; y (9S)-9-[(dimetil-amino)-metil]-6,7,10, 11 -tetra h id ro-9H,18H-5,21 : 12, 17-dimeteno-dibenzo-[e,k]-p¡rrolo-[3,4-h][1 ,4, 13]-oxa -d i aza-ciclohexadecina-18,20(19H)-diona; o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas.

11. Un método para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B, mediante la administración a un paciente que necesite dicho tratamiento, de: (i) un inhibidor de PKC; y (¡i) cuando menos un agente farmacéutico adicional.

12. El método de la reivindicación 11, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de mTOR, un inhibidor de PI3K, o un inhibidor de JAK.

13. El método de la reivindicación 12, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de mTOR.

14. El método de la reivindicación 12, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de PI3K.

15. El método de la reivindicación 12, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de JAK.

16. El método de la reivindicación 11, 12, 13, 14, ó 15, en donde el inhibidor de PKC mencionado y el agente farmacéutico adicional mencionado se administran de una manera simultánea.

17. El método de la reivindicación 11, 12, 13, 14, ó 15, en donde el inhibidor de PKC mencionado y el agente farmacéutico adicional mencionado se administran en secuencia.

18. El método de la reivindicación 16, en donde el inhibidor de PKC mencionado es un inhibidor de PKCa/b selectivo.

19. El método de la reivindicación 17, en donde el inhibidor de PKC mencionado es un inhibidor de PKCa/b selectivo.

20. Un método para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B, mediante la administración a un paciente que necesite dicho tratamiento, de: una composición farmacéutica, la cual comprende un inhibidor de PKC y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

21. El método de la reivindicación 20, en donde la composición mencionada comprende además cuando menos un agente farmacéutico adicional.

22. El método de la reivindicación 20 ó 21, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de mTOR, un inhibidor de PI3K, o un inhibidor de JAK.

23. El método de la reivindicación 22, en donde el inhibidor de PKC mencionado es un inhibidor de PKCa/b selectivo.

24. Un método para inhibir el crecimiento de linfoma de células-B que tenga señalización activa crónica de receptores de células-B, mediante la administración a un paciente que necesite dicho tratamiento, de: (i) una primera composición que comprende un inhibidor de PKC y un vehículo farmacéutico; y (ii) una segunda composición, la cual comprende cuando menos un agente farmacéutico adicional y un vehículo farmacéutico.

25. El método de la reivindicación 24, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de mTOR, un inhibidor de PI3K, o un inhibidor de JAK.

26. El método de la reivindicación 25, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de mTOR.

27. El método de la reivindicación 25, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de PI3K.

28. El método de la reivindicación 25, en donde el agente farmacéutico adicional mencionado es un inhibidor de JAK.

29. El método de la reivindicación 24, 25, 26, 27, ó 28, en donde el inhibidor de PKC mencionado y el agente farmacéutico adicional mencionado se administran de una manera simultánea.

30. El método de la reivindicación 24, 25, 26, 27, ó 28, en donde el inhibidor de PKC mencionado y el agente farmacéutico adicional mencionado se administran en secuencia.

31. El método de la reivindicación 29, en donde el inhibidor de PKC mencionado es un inhibidor de PKCa/b selectivo.

32. El método de la reivindicación 30, en donde el inhibidor de PKC mencionado es un inhibidor de PKCa/b selectivo.