JPS63157998A - 酵素活性測定用分析要素 - Google Patents
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野]
本発明は液体、殊に生物体液中の、酵素活性の測定に適
する乾式液体分析要素に関する。
する乾式液体分析要素に関する。
[従来技術]
水浸透性層に乳酸またはその塩と酸化型ニコチンアミド
補酵素(NAD”)とを含み、生成する還元型ニコチン
アミド補酵素(NADH)を呈色試薬等により検出する
乾式液体分析要素は、液体中の乳酸脱水素酵素(以下L
DHと略記する)活性測定に適する。このようなLDH
活性分析要素は特開昭58−88097号等で知られて
いる。
補酵素(NAD”)とを含み、生成する還元型ニコチン
アミド補酵素(NADH)を呈色試薬等により検出する
乾式液体分析要素は、液体中の乳酸脱水素酵素(以下L
DHと略記する)活性測定に適する。このようなLDH
活性分析要素は特開昭58−88097号等で知られて
いる。
しかしこのような乾式液体分析要素の使用中に、背景濃
度が増大し、予め設定された検量線が利用できなくなる
ことがしばしば経験され、その原因が不明であった。
度が増大し、予め設定された検量線が利用できなくなる
ことがしばしば経験され、その原因が不明であった。
特にNAD”を含む水浸透性層に試薬の結合剤として、
NADに対する安定剤として特公昭4つ一27717号
の記載で知られるポリビニルピロリドンを用いると、こ
の現象が顕著であった。
NADに対する安定剤として特公昭4つ一27717号
の記載で知られるポリビニルピロリドンを用いると、こ
の現象が顕著であった。
[発明の目的]
本発明者らは上記の現象の原因を追及した結果、水浸透
性層にNAD”を含むLDH活性分析要素が、照明、特
に蛍光灯照明下に長い時間置かれたときに背景濃度が増
大することを見出した。
性層にNAD”を含むLDH活性分析要素が、照明、特
に蛍光灯照明下に長い時間置かれたときに背景濃度が増
大することを見出した。
本発明の目的の一つは、少なくとも一つの水浸透性層を
有し、その少なくとも一つは多孔性液体展開層であり、
水浸透性層の少なくとも一つに乳酸またはその塩とNA
D’を含む、液体中のLDH活性測定に適する乾式液体
分析要素の取り扱い中の背景濃度の増大を防止し、精度
の高い分析要素を得ることである。
有し、その少なくとも一つは多孔性液体展開層であり、
水浸透性層の少なくとも一つに乳酸またはその塩とNA
D’を含む、液体中のLDH活性測定に適する乾式液体
分析要素の取り扱い中の背景濃度の増大を防止し、精度
の高い分析要素を得ることである。
本発明の目的はさらに、LDH活性測定に適する乾式液
体分析要素のみならず、水浸透性層の少なくとも一つに
基質とNAD”を含む液体中の酵素活性測定に適する乾
式液体分析要素の、取り扱い中に生ずる背景濃度の増大
を防止し、精度の高い分析要素を得ることである。
体分析要素のみならず、水浸透性層の少なくとも一つに
基質とNAD”を含む液体中の酵素活性測定に適する乾
式液体分析要素の、取り扱い中に生ずる背景濃度の増大
を防止し、精度の高い分析要素を得ることである。
[発明の構成]
本発明の上記目的は、水浸透性層の少なくとも一つに基
質とNAD”″を含む、液体中の酵素活性測定に適する
乾式液体分析要素において、水浸透性層の少なくとも一
つに アクリルアミド重合体 アクリルアミドのN−置換体の重合体、アクリルアミド
またはアクリルアミドのN−置換体と他の単量体成分と
の共重合体、メタクリルアミドの重合体、 メタアクリルアミドのN−置換体の重合体、メタクリル
アミドまたはメタアクリルアミドのN−置換体と他の単
量体成分との共重合体から選ばれる親水性高分子を含む
ことを特徴とする乾式液体分析要素によって達成された
。
質とNAD”″を含む、液体中の酵素活性測定に適する
乾式液体分析要素において、水浸透性層の少なくとも一
つに アクリルアミド重合体 アクリルアミドのN−置換体の重合体、アクリルアミド
またはアクリルアミドのN−置換体と他の単量体成分と
の共重合体、メタクリルアミドの重合体、 メタアクリルアミドのN−置換体の重合体、メタクリル
アミドまたはメタアクリルアミドのN−置換体と他の単
量体成分との共重合体から選ばれる親水性高分子を含む
ことを特徴とする乾式液体分析要素によって達成された
。
本発明の上記目的は、前記乾式液体分析要素において基
質とNAD+を含む親水性層またはNAD4を含む層に
前記親水性高分子を含む乾式液体分析要素によって、好
ましく達成された。
質とNAD+を含む親水性層またはNAD4を含む層に
前記親水性高分子を含む乾式液体分析要素によって、好
ましく達成された。
前記親水性高分子を含む層は、多孔性展開層であること
が好ましいが、他の水浸透性層でもよい。
が好ましいが、他の水浸透性層でもよい。
本発明は公知の多種の乾式分析要素に適用することが出
来る。要素は反応試薬層のほか、支持体、検出層、光遮
蔽層、多孔性液体展開層、接着層、ろ過層、吸水層、下
塗り層および公知のその他の層を含む多重層であっても
よい。かような分析要素として、米国特許第3,992
,158号、同4゜042,335号および特開昭55
−164356号各明細書に開示されたものがある。
来る。要素は反応試薬層のほか、支持体、検出層、光遮
蔽層、多孔性液体展開層、接着層、ろ過層、吸水層、下
塗り層および公知のその他の層を含む多重層であっても
よい。かような分析要素として、米国特許第3,992
,158号、同4゜042,335号および特開昭55
−164356号各明細書に開示されたものがある。
支持体を用いる場合、本発明で製造される乾式分析要素
の実用的に採りうる構成は (1)支持体上に試薬層を兼ねる液体展開層を有するも
の。支持体と展開層との間に検出層または吸水層を設け
てもよい。
の実用的に採りうる構成は (1)支持体上に試薬層を兼ねる液体展開層を有するも
の。支持体と展開層との間に検出層または吸水層を設け
てもよい。
(2)支持体上に試薬層、その上に液体展開層を有する
もの。支持体と試薬層との間に吸水層を設けてもよい。
もの。支持体と試薬層との間に吸水層を設けてもよい。
試薬層または液体展開層に前記親水性高分子を含む。
(3)支持体上に検出層、試薬層、液体展開層をこの順
に有するもの。試薬層または液体展開層、あるいは両者
に前記親水性高分子を含む。
に有するもの。試薬層または液体展開層、あるいは両者
に前記親水性高分子を含む。
(4)支持体上に試薬層、光反射層、液体展開層をこの
順に有するもの。試薬層、液体展開層のいずれか1層以
上に前記親水性高分子を含む。
順に有するもの。試薬層、液体展開層のいずれか1層以
上に前記親水性高分子を含む。
(5)支持体上に検出層、光反射層、試薬層を兼ねる液
体展開層をこの順に有するもの。液体展開層に前記親水
性高分子を含む。
体展開層をこの順に有するもの。液体展開層に前記親水
性高分子を含む。
(6)支持体上に検出層、試薬層、光反射層、液体展開
層をこの順に有するもの。試薬層、液体展開層のうち少
なくとも1層に親水性高分子を含む。
層をこの順に有するもの。試薬層、液体展開層のうち少
なくとも1層に親水性高分子を含む。
(7)支持体上に検出層、光反射層、試薬層、液体展開
層をこの順に有するもの。少なくとも試薬層または液体
展開層に前記親水性高分子を含む。
層をこの順に有するもの。少なくとも試薬層または液体
展開層に前記親水性高分子を含む。
(8)支持体上に検出層、第二試薬層、光反射層、第一
試薬層、液体展開層をこの順に有するもの。
試薬層、液体展開層をこの順に有するもの。
第二試薬層またはそれより支持体から離れた層のうち、
少なくとも1つに前記親水性高分子を含む。
少なくとも1つに前記親水性高分子を含む。
上記(2)ないしく8)において、支持体と試薬層また
は検出層との間に、吸水層を設けてもよい。
は検出層との間に、吸水層を設けてもよい。
本発明で好ましいのは上記(2〉または(4)の層構成
である。上記(2)ないしく3〉において試薬層と検出
層または液体展開層の間、または複数の試薬層の間に、
ろ過層を設けてもよい。上記(4)ないしく8)におい
て光反射層と検出層、試薬層または液体展開層との間、
試薬層と検出層との間、試薬層と液体展開層の間、また
は第二試薬層と第−試薬層の間に、さらにろ過層を設け
てもよい。
である。上記(2)ないしく3〉において試薬層と検出
層または液体展開層の間、または複数の試薬層の間に、
ろ過層を設けてもよい。上記(4)ないしく8)におい
て光反射層と検出層、試薬層または液体展開層との間、
試薬層と検出層との間、試薬層と液体展開層の間、また
は第二試薬層と第−試薬層の間に、さらにろ過層を設け
てもよい。
本発明の分析要素に含まれる反応試薬系は、基質として
の乳酸またはその塩と NAD’ 、および NADHと反応して検出し得る変化、例えば発色、変色
、蛍光等を生ずる試薬 から成る。NADH検出試薬としては電子伝達剤とホル
マザン染料前駆体の組み合わせが好ましい。
の乳酸またはその塩と NAD’ 、および NADHと反応して検出し得る変化、例えば発色、変色
、蛍光等を生ずる試薬 から成る。NADH検出試薬としては電子伝達剤とホル
マザン染料前駆体の組み合わせが好ましい。
反応試薬系は多孔性担体層に含まれても、またそれ以外
の水浸透性層に含まれてもよい。試薬系の一部と残部と
が、異なる層に含まれてもよい。
の水浸透性層に含まれてもよい。試薬系の一部と残部と
が、異なる層に含まれてもよい。
電子伝達剤としては、ヂアホラーゼ、N−methyl
phenazoniu+n +neLhosulfat
e等を用いることができる。フォルマザン染料前駆体と
しては、INTすなわち2−(p−iodopheny
l)−3−(p−nitrophenyl>−5−ph
enyltetrazolium chloride、
BTすなわち3.3’ −(3,3’ −di+ne
thoxy−4,4’ −biphenylene)−
bis[2,5−diphenyltetrazoli
um chloridel、3.3’−(4,4’−b
iphenylene)−bis[2,5−diphe
nyltetraz。
phenazoniu+n +neLhosulfat
e等を用いることができる。フォルマザン染料前駆体と
しては、INTすなわち2−(p−iodopheny
l)−3−(p−nitrophenyl>−5−ph
enyltetrazolium chloride、
BTすなわち3.3’ −(3,3’ −di+ne
thoxy−4,4’ −biphenylene)−
bis[2,5−diphenyltetrazoli
um chloridel、3.3’−(4,4’−b
iphenylene)−bis[2,5−diphe
nyltetraz。
lium chloridel等を用いることもできる
が、ニ=8− トロテトラゾリウムブルー(NTBまたはNBT)すな
わち3.3’ −(3,3’ −dimethoxy−
4,4’ −biphenylene) −b i s
[2−(p−n i tropheny I )−5−
pheny I tetrazo I ium chl
oridel が好ましい。
が、ニ=8− トロテトラゾリウムブルー(NTBまたはNBT)すな
わち3.3’ −(3,3’ −dimethoxy−
4,4’ −biphenylene) −b i s
[2−(p−n i tropheny I )−5−
pheny I tetrazo I ium chl
oridel が好ましい。
本発明の乾式分析要素において基質は二つ以上の層(例
えば試薬層と液体展開層、試薬層と光遮蔽層、第二試薬
層と第一試薬層、第一試薬層と液体展開層)に含有され
てもよい。この場合に基質を、支持体から遠い層か支持
体に近い層のいずれかに、より多く分布させることもで
きる。
えば試薬層と液体展開層、試薬層と光遮蔽層、第二試薬
層と第一試薬層、第一試薬層と液体展開層)に含有され
てもよい。この場合に基質を、支持体から遠い層か支持
体に近い層のいずれかに、より多く分布させることもで
きる。
本発明においてNAD”も二つ以上の層に含有されても
よく(例えば試薬層と液体展開層、試薬層と光反射層)
、この場合支持体から遠い層か支持体に近い層のいずれ
かにより多く分布させることもできる。
よく(例えば試薬層と液体展開層、試薬層と光反射層)
、この場合支持体から遠い層か支持体に近い層のいずれ
かにより多く分布させることもできる。
本発明の乾式分析要素において用いる前記親水性高分子
のうち好ましいのは、下記一般式[I]で示される単量
体成分の重合体またはこれと共重合しうる他の単量体成
分との共重合体である。
のうち好ましいのは、下記一般式[I]で示される単量
体成分の重合体またはこれと共重合しうる他の単量体成
分との共重合体である。
[I]
R。
薯
−CH2−C−
CON R2
■
式中R1は水素原子または低級アルキル基を表す。R2
およびR3は各、水素原子、脂肪族炭化水素基または芳
香族炭化水素基を表す。R2およびR3は連結して環を
形成してもよい。
およびR3は各、水素原子、脂肪族炭化水素基または芳
香族炭化水素基を表す。R2およびR3は連結して環を
形成してもよい。
R1の水素原子以外の具体例はメチル基である。
R2およびR2の水素原子以外の具体例はメチル基、エ
チル基、ベンジル基、ヒドロキシエチル基、シクロヘキ
シル基、フェニル基、ピペリジノ基、モルフォリノ基で
ある。
チル基、ベンジル基、ヒドロキシエチル基、シクロヘキ
シル基、フェニル基、ピペリジノ基、モルフォリノ基で
ある。
一般式[I]で示される単量体の具体例はアクリルアミ
ド N−メチルアクリルアミド N−エチルアクリルアミド N−イソプロピルアクリルアミド N、N−ジメチルアクリルアミド N−アクリロイルピペリジン メタアクリルアミド N−メチルメタアクリルアミド N−エチルメタアクリルアミド N−イソプロピルメタアクリルアミド N、N−ジメチルアクリルアミド 一般式[I]で示される単量体成分の重合体またはこれ
と共重合しうる他の単量体成分は例えばアクリル酸、メ
タアクリル酸、マレイン酸、アクリル酸メチル、メタア
クリル酸エチル、スチレン、エチレン、 一般式[I]で示される他の単量体成分(例えばアクリ
ルアミドにメタアクリルアミド)である。その他特願昭
61−143754号に記載された単量体および共重合
成分を用いることができる。
ド N−メチルアクリルアミド N−エチルアクリルアミド N−イソプロピルアクリルアミド N、N−ジメチルアクリルアミド N−アクリロイルピペリジン メタアクリルアミド N−メチルメタアクリルアミド N−エチルメタアクリルアミド N−イソプロピルメタアクリルアミド N、N−ジメチルアクリルアミド 一般式[I]で示される単量体成分の重合体またはこれ
と共重合しうる他の単量体成分は例えばアクリル酸、メ
タアクリル酸、マレイン酸、アクリル酸メチル、メタア
クリル酸エチル、スチレン、エチレン、 一般式[I]で示される他の単量体成分(例えばアクリ
ルアミドにメタアクリルアミド)である。その他特願昭
61−143754号に記載された単量体および共重合
成分を用いることができる。
本発明の乾式分析要素に用いることができる光透過性・
水不透過性支持体の例としては、ポリエチレンテレフタ
レート、ポリカルボネート、ポリスチレン、セルロース
エステル(例、セルローストリアセテート、セルロース
アセテートプロピオネート等)等のポリマーからなる厚
さ約50μ肩から約1mm、好ましくは約80μ肩から
約300μ肩の範囲のフィルムもしくはシート状の透明
支持体を挙げることができる。これら支持体の表面には
必要により下塗層を設けて、支持体の上に設けられる検
出層あるいはその他の層と支持体との接着を強固なもの
にすることができる。また、下塗層の代りに、支持体の
表面に物理的(たとえばグロー放電、コロナ放電)ある
いは化学的な活性化処理を施して接着力の向上を図って
もよい。
水不透過性支持体の例としては、ポリエチレンテレフタ
レート、ポリカルボネート、ポリスチレン、セルロース
エステル(例、セルローストリアセテート、セルロース
アセテートプロピオネート等)等のポリマーからなる厚
さ約50μ肩から約1mm、好ましくは約80μ肩から
約300μ肩の範囲のフィルムもしくはシート状の透明
支持体を挙げることができる。これら支持体の表面には
必要により下塗層を設けて、支持体の上に設けられる検
出層あるいはその他の層と支持体との接着を強固なもの
にすることができる。また、下塗層の代りに、支持体の
表面に物理的(たとえばグロー放電、コロナ放電)ある
いは化学的な活性化処理を施して接着力の向上を図って
もよい。
本発明の一体型多層分析要素には、光透過性・水不透過
性支持体の上に(下塗層等の他の層を介してもよい)検
出層または吸水層を設けてもよい。
性支持体の上に(下塗層等の他の層を介してもよい)検
出層または吸水層を設けてもよい。
本発明の乾式分析要素に備えられる検出層は親水性結合
剤、すなわち水を吸収して膨潤する親水性ポリマーを層
形成成分とする層であることが好ま=12− しい。検出層は呈色指示薬から生じた包体が拡散し得る
層を言い、吸水層は包体が実質上拡散しえない層である
。
剤、すなわち水を吸収して膨潤する親水性ポリマーを層
形成成分とする層であることが好ま=12− しい。検出層は呈色指示薬から生じた包体が拡散し得る
層を言い、吸水層は包体が実質上拡散しえない層である
。
検出層または吸水層に用いることができる親水性ポリマ
ーは、一般には水吸収時の膨潤率が30℃で約1.5か
ら20、好ましくは約2.5から15の範囲の天然また
は合成親水性ポリマーである。そのような親水性ポリマ
ーの例としては、ゼラチン(例えばアルカリ処理ゼラチ
ン、酸処理ゼラチン、脱イオンゼラチン)、ゼラチン誘
導体(例えばフタル化ゼラチン)、アガロース、ポリア
クリルアミド、等をあげることができる。
ーは、一般には水吸収時の膨潤率が30℃で約1.5か
ら20、好ましくは約2.5から15の範囲の天然また
は合成親水性ポリマーである。そのような親水性ポリマ
ーの例としては、ゼラチン(例えばアルカリ処理ゼラチ
ン、酸処理ゼラチン、脱イオンゼラチン)、ゼラチン誘
導体(例えばフタル化ゼラチン)、アガロース、ポリア
クリルアミド、等をあげることができる。
検出層の乾燥時の厚さは約1μ肩から約50μlの範囲
であることが好ましく、より好ましくは約3μ肩から約
30μ夏の範囲である。さらに検出層には、必要に応じ
て界面活性(カチオン性、両性又は非イオン性)や緩衝
剤を含有させることもできる。
であることが好ましく、より好ましくは約3μ肩から約
30μ夏の範囲である。さらに検出層には、必要に応じ
て界面活性(カチオン性、両性又は非イオン性)や緩衝
剤を含有させることもできる。
吸水層、検出層、光道へい層、濾過層、試薬層等の層の
上には、展開層を接着し積層するための接着層を設けて
もよい。接着層は水で湿潤または水を含んで膨潤したと
きに展開層を接着することができるような親水性ポリマ
ーからなることが好ましい。接着層に用いることができ
る親水性ポリマーの例としては、検出層に用いられると
同様な親水性ポリマーがあげられる。これらのうちでは
ゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が好
ましい。接着層の乾燥膜厚は一般に約0.5μmから約
20μπ、好ましくは約1μ肩から約10μ肩の範囲で
ある。なお、接着層は検出層上以外にも、他の眉間の接
着力を向上させるため所望の層上に設けてもよい。接着
層は親水性ポリマーと、必要によって加えられる界面活
性剤等を含む水溶液を公知の方法て、検出層や試薬層等
の上に塗布する方法などにより設けることができる。
上には、展開層を接着し積層するための接着層を設けて
もよい。接着層は水で湿潤または水を含んで膨潤したと
きに展開層を接着することができるような親水性ポリマ
ーからなることが好ましい。接着層に用いることができ
る親水性ポリマーの例としては、検出層に用いられると
同様な親水性ポリマーがあげられる。これらのうちでは
ゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が好
ましい。接着層の乾燥膜厚は一般に約0.5μmから約
20μπ、好ましくは約1μ肩から約10μ肩の範囲で
ある。なお、接着層は検出層上以外にも、他の眉間の接
着力を向上させるため所望の層上に設けてもよい。接着
層は親水性ポリマーと、必要によって加えられる界面活
性剤等を含む水溶液を公知の方法て、検出層や試薬層等
の上に塗布する方法などにより設けることができる。
本発明の乾式分析要素の試薬層には、親水性ポリマー、
緩衝剤等を必要に応じて含有させることができる。
緩衝剤等を必要に応じて含有させることができる。
本発明の乾式分析要素の試薬層に含有させることができ
る親水性ポリマーの例としては、澱粉、セルロース、ア
ガロース、ゼラチンおよびこれらの誘導体(例えばフタ
ル化ゼラチン等)、アクリルアミド重合体、アクリルア
ミドと各種ビニル性モノマーとの共重合体、メタアクリ
ルアミド重合体、メタアクリルアミドと各種ビニル性モ
ノマーとの共重合体、等を挙げることができる。
る親水性ポリマーの例としては、澱粉、セルロース、ア
ガロース、ゼラチンおよびこれらの誘導体(例えばフタ
ル化ゼラチン等)、アクリルアミド重合体、アクリルア
ミドと各種ビニル性モノマーとの共重合体、メタアクリ
ルアミド重合体、メタアクリルアミドと各種ビニル性モ
ノマーとの共重合体、等を挙げることができる。
本発明の乾式分析要素の試薬層に含有させることができ
るM衝剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やグ
ツド(Good)の緩衝剤などを挙げることができる。
るM衝剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やグ
ツド(Good)の緩衝剤などを挙げることができる。
これらの緩衝剤は「蛋白質・酵素の基礎実験法j (堀
尾武−ほか著、南江堂、1981)等の公知文献を参考
にして選択し、使用することができる。
尾武−ほか著、南江堂、1981)等の公知文献を参考
にして選択し、使用することができる。
光遮蔽層は、検出層、試薬層等に生じた検出可能な変化
(色変化、発色等)を光透過性を有する支持体側から反
射測光する際に、展開層に点着供給された被検液の色、
特に試料が全血である場合のヘモグロビンの赤色等を遮
蔽するとともに光反射層または背景層として機能する。
(色変化、発色等)を光透過性を有する支持体側から反
射測光する際に、展開層に点着供給された被検液の色、
特に試料が全血である場合のヘモグロビンの赤色等を遮
蔽するとともに光反射層または背景層として機能する。
光遮蔽層は、皮膜形成能を有する親水性ポリマーをバイ
ンダーとして、酸化チタン、硫酸バリウム等の光反射性
微粒子が分散された水浸透性の層であることが好ましい
。
ンダーとして、酸化チタン、硫酸バリウム等の光反射性
微粒子が分散された水浸透性の層であることが好ましい
。
皮膜形成能を有する親水性ポリマーバインダーの例とし
ては、前述の検出層に用いられる親水性ポリマーのほか
、弱親水性の再生セルロース、セルロースアセテート等
を挙げることができ、これらのうちではゼラチン、ゼラ
チン誘導体、ポリアクリルアミド等が好ましい。ゼラチ
ン、あるいはゼラチン誘導体には公知の硬膜剤を添加す
ることができる。
ては、前述の検出層に用いられる親水性ポリマーのほか
、弱親水性の再生セルロース、セルロースアセテート等
を挙げることができ、これらのうちではゼラチン、ゼラ
チン誘導体、ポリアクリルアミド等が好ましい。ゼラチ
ン、あるいはゼラチン誘導体には公知の硬膜剤を添加す
ることができる。
光遮蔽層は、酸化チタン等と親水性ポリマーとの水性分
散液を公知の方法により検出層、試薬層等の上に塗布し
乾燥することにより設けることができる。分析要素には
、必要に応じ展開層、試薬層、検出層等に酸化チタン等
の粒子を含有させてもよい。
散液を公知の方法により検出層、試薬層等の上に塗布し
乾燥することにより設けることができる。分析要素には
、必要に応じ展開層、試薬層、検出層等に酸化チタン等
の粒子を含有させてもよい。
展開層は、液体計量作用を有する展開層であることが好
ましい。液体計量作用を有するとは、その表面に点着供
給された液体試料を、その中に含有している部分を実質
的に偏在させることなく、横(水平)方向に単位面積当
りほぼ一定量の割合で広げる作用を有することである。
ましい。液体計量作用を有するとは、その表面に点着供
給された液体試料を、その中に含有している部分を実質
的に偏在させることなく、横(水平)方向に単位面積当
りほぼ一定量の割合で広げる作用を有することである。
展開層のマトリックスを構成する材料としては、濾紙、
不織布、織物生地(例えば平織生地)、編物生地(例え
ば、トリコット編)、ガラス繊維濾紙、プラッシュポリ
マーより形成されるメンブランフィルタ−1あるいはポ
リマーミクロビーズ等からなる三次元格子状構造物等を
用いることができる。これらのうちでは、織物生地およ
び編物生地等の繊維質層を用いることが好ましい。これ
らの詳細については特開昭55−164356号、同5
7−66359号および同60−222769号を参照
すればよい。
不織布、織物生地(例えば平織生地)、編物生地(例え
ば、トリコット編)、ガラス繊維濾紙、プラッシュポリ
マーより形成されるメンブランフィルタ−1あるいはポ
リマーミクロビーズ等からなる三次元格子状構造物等を
用いることができる。これらのうちでは、織物生地およ
び編物生地等の繊維質層を用いることが好ましい。これ
らの詳細については特開昭55−164356号、同5
7−66359号および同60−222769号を参照
すればよい。
本発明の乾式分析要素に用いることができる織物生地ま
たは編物生地は水洗等の脱脂処理により少なくとも糸、
織物あるいは編物の製造時に付着した油脂類が実質的に
除去されていることが好ましい。
たは編物生地は水洗等の脱脂処理により少なくとも糸、
織物あるいは編物の製造時に付着した油脂類が実質的に
除去されていることが好ましい。
本発明の一体型多層分析要素は一辺約15Njlから約
30mmの正方形またはほぼ同サイズ円形等の小片に裁
断し、特開昭57−63452号、特開昭54−1.5
6079号、実開昭56−125424号、実開昭58
−32350号および特表昭58−501144号各公
報等に開示のスライド枠等に納めて分析スライドとして
用いるのが製造、包装、輸送、保存および測定操作等の
全ての観点で好ましい。
30mmの正方形またはほぼ同サイズ円形等の小片に裁
断し、特開昭57−63452号、特開昭54−1.5
6079号、実開昭56−125424号、実開昭58
−32350号および特表昭58−501144号各公
報等に開示のスライド枠等に納めて分析スライドとして
用いるのが製造、包装、輸送、保存および測定操作等の
全ての観点で好ましい。
以下に本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。
[実施例1]
ゼラチン下塗りされている厚さ180μmのポリエチレ
ンテレフタレート無色透明平滑フィルム上に下記の組成
(a)の水溶液を乾燥後の厚さが10μmになるように
塗布(133cc/m2) シ、乾燥したく発色層)。
ンテレフタレート無色透明平滑フィルム上に下記の組成
(a)の水溶液を乾燥後の厚さが10μmになるように
塗布(133cc/m2) シ、乾燥したく発色層)。
(a)
ゼラチン 150g水
1350gオクチルフェノキ
シ ポリエトキシエタノール 3gNTB*
9.5g(希N a OH溶
液でpHを6.5に調整する)*Nitrotetra
zolium blue =3.3’−(3,3’−
ジメトキシ−4,4′−ビフェニレン)−ビス[2−(
p−ニトロフェニル)−5−フェニルテトヲソ゛リウム
クロテイド]上記発色層を約30g/m2の水で湿らせ
た後、ポリエチレンテレフタシー1〜紡績糸(36ゲー
ジ、−19= 50D)からなるトリコット編物を圧着し、乾燥させて
展開層としな。
1350gオクチルフェノキ
シ ポリエトキシエタノール 3gNTB*
9.5g(希N a OH溶
液でpHを6.5に調整する)*Nitrotetra
zolium blue =3.3’−(3,3’−
ジメトキシ−4,4′−ビフェニレン)−ビス[2−(
p−ニトロフェニル)−5−フェニルテトヲソ゛リウム
クロテイド]上記発色層を約30g/m2の水で湿らせ
た後、ポリエチレンテレフタシー1〜紡績糸(36ゲー
ジ、−19= 50D)からなるトリコット編物を圧着し、乾燥させて
展開層としな。
上記展開層に下記の組成(b)の塗布液を120cc/
m2の割合で塗布、乾燥し、LDH活性測定用一体型多
層分析要素を作製した。
m2の割合で塗布、乾燥し、LDH活性測定用一体型多
層分析要素を作製した。
(b)
ノニルフェノキシポリ
エトキシエタノール(n=40> 1gオクチル
フェノキシポリ エトキシエタノール(n=10> 1gトリス(
ヒドロキシメチル) アミノメタン 6g乳酸リチウム
3gポリアクリルアミド (分子量 約20万) 25gβ−NAD′
″ 0.6gジアホラーゼ
1.5万単位水
100g(希NaOH溶液でpHを8.
5に調整する)[比較例1] 実施例1における展開層塗布液の組成(b)を下記組成
(bo)に変えた他は、実施例1と同様にしてLDH活
性測定用分析要素を作製した。
フェノキシポリ エトキシエタノール(n=10> 1gトリス(
ヒドロキシメチル) アミノメタン 6g乳酸リチウム
3gポリアクリルアミド (分子量 約20万) 25gβ−NAD′
″ 0.6gジアホラーゼ
1.5万単位水
100g(希NaOH溶液でpHを8.
5に調整する)[比較例1] 実施例1における展開層塗布液の組成(b)を下記組成
(bo)に変えた他は、実施例1と同様にしてLDH活
性測定用分析要素を作製した。
(bo)
ノニルフェノキシポリ
エトキシエタノール(n=40) 1 gオクチ
ルフェノキシポリ エトキシエタノール(n=10) 1gトリス(
ヒドロキシメチル) アミノメタン 6g乳酸リチウム
3gポリビニルピロリドン (分子量 ) 25gβ−NAD’
0.6gジアホラーゼ
1.5万単位水
100g(希NaOH溶液でpHを8
.5に調整する)[測定例1] 上記実施例1および比較例1の分析要素に、ナショナル
蛍光灯FLR/40S−W/M−Xを光源として用い、
100OLUXの照度の白色光を温度25℃で0.5,
10,15.、および30分間照射したときの、分析要
素の透明支持体の面からの反射光学濃度(波長540n
m)をそれぞれ測定した。その結果は第1表の通りであ
る。
ルフェノキシポリ エトキシエタノール(n=10) 1gトリス(
ヒドロキシメチル) アミノメタン 6g乳酸リチウム
3gポリビニルピロリドン (分子量 ) 25gβ−NAD’
0.6gジアホラーゼ
1.5万単位水
100g(希NaOH溶液でpHを8
.5に調整する)[測定例1] 上記実施例1および比較例1の分析要素に、ナショナル
蛍光灯FLR/40S−W/M−Xを光源として用い、
100OLUXの照度の白色光を温度25℃で0.5,
10,15.、および30分間照射したときの、分析要
素の透明支持体の面からの反射光学濃度(波長540n
m)をそれぞれ測定した。その結果は第1表の通りであ
る。
第1表
第1表から明らかなごとく、本発明の分析要素、は比較
例1の場合に比べて、蛍光灯による影響を受けにくい。
例1の場合に比べて、蛍光灯による影響を受けにくい。
本発明で用いられるアクリルアミドまたはメタクリルア
ミドの、重合体または共重合体の分子量は5千から20
0万の範囲、好ましくは2万から50万である。
ミドの、重合体または共重合体の分子量は5千から20
0万の範囲、好ましくは2万から50万である。
出願人 富士写真フィルム株式会社手続補正書
1.事件の表示 昭和61年特願第305886号2、
発明の名称 酵素活性測定用分析要素 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 神奈川県南足柄市中沼210番地富士写真フィ
ルム株式会社 東京本社 電話 03(406) 2537 4、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 5、補正の内容 1)明細書第4ページ第8行の「特開昭58」を「特開
昭59」と補正する。
発明の名称 酵素活性測定用分析要素 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 神奈川県南足柄市中沼210番地富士写真フィ
ルム株式会社 東京本社 電話 03(406) 2537 4、補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 5、補正の内容 1)明細書第4ページ第8行の「特開昭58」を「特開
昭59」と補正する。
2)明細書第4ページ第14行のrNADJをrNAD
” Jと補正する。
” Jと補正する。
3)明細書第21ページ末行のrNaOH,JをrH(
1!Jと補正する。
1!Jと補正する。
4)明細書第22ページ第18行のrNaOH」をrH
Cj!Jと補正する。
Cj!Jと補正する。
以上
Claims (11)
- (1)少なくとも一つの水浸透性層を有し、水浸透性層
のうち少なくとも一つは多孔性液体展開層であり、前記
水浸透性層の少なくとも一つにNAD^+を含み、液体
中の酵素活性測定に適する乾式液体分析要素であって、
前記少なくとも一つの水浸透性層の少なくとも一つに アクリルアミドまたはアクリルアミドのN−置換体の重
合体、 アクリルアミドまたはアクリルアミドのN−置換体と他
の単量体成分との共重合体、 メタクリルアミドまたはメタクリルアミドのN−置換体
の重合体、 およびメタクリルアミドまたはメタクリルアミドのN−
置換体と他の単量体成分との共重合体から選ばれる 親水性高分子を含むことを特徴とする乾式液体分析要素 - (2)NAD^+を含む水浸透性層に前記親水性高分子
を含む特許請求の範囲(1)の乾式液体分析要素。 - (3)少なくとも一つの水浸透性層にNAD^+と乳酸
またはその塩とを含む特許請求の範囲(1)の乾式液体
分析要素。 - (4)NAD^+と乳酸またはその塩を含む水浸透性層
に前記親水性高分子を含む特許請求の範囲(3)の乾式
液体分析要素。 - (5)多孔性展開層中に前記親水性高分子を含むことを
特徴とする特許請求の範囲(1)の乾式液体分析要素。 - (6)多孔性展開層中にNAD^+と前記親水性高分子
を含むことを特徴とする特許請求の範囲(1)の乾式液
体分析要素。 - (7)多孔性展開層中に乳酸またはその塩、NAD^+
および前記親水性高分子を含むことを特徴とする特許請
求の範囲(1)の乾式液体分析要素。 - (8)水浸透性層の少なくとも一つにNAD^+と電子
伝達剤を、該層と同じまたは異なる水浸透性層の少なく
とも一つに電子受容性染料前駆体を含む、特許請求の範
囲(1)の乾式液体分析要素。 - (9)少なくとも一つの水浸透性層に乳酸またはその塩
とNAD^+と電子伝達剤とを含む特許請求の範囲(8
)の乾式液体分析要素。 - (10)多孔性展開層中に乳酸またはその塩、NAD^
+および電子伝達剤を含む特許請求の範囲(8)の乾式
液体分析要素。 - (11)多孔性展開層中に乳酸またはその塩、NAD^
+および電子伝達剤を含み、電子受容性染料前駆体を主
としてそれ以外の層に含む、特許請求の範囲(8)の乾
式液体分析要素。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61305886A JPS63157998A (ja) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | 酵素活性測定用分析要素 |
DE3789612T DE3789612T2 (de) | 1986-12-22 | 1987-12-04 | Analytisches Element für die Vermessung von enzymatischer Aktivität. |
EP87117986A EP0272518B1 (en) | 1986-12-22 | 1987-12-04 | Analytical element for measuring enzyme activity |
US07/135,670 US5006458A (en) | 1986-12-22 | 1987-12-21 | Analytical element having a polyacrylamide or derivative to minimize background for assaying enzyme activity |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP61305886A JPS63157998A (ja) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | 酵素活性測定用分析要素 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63157998A true JPS63157998A (ja) | 1988-06-30 |
JPH0560360B2 JPH0560360B2 (ja) | 1993-09-02 |
Family
ID=17950496
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61305886A Granted JPS63157998A (ja) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | 酵素活性測定用分析要素 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5006458A (ja) |
EP (1) | EP0272518B1 (ja) |
JP (1) | JPS63157998A (ja) |
DE (1) | DE3789612T2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8999662B2 (en) | 2012-01-22 | 2015-04-07 | Arkray, Inc. | Method for producing dry reagent, dry reagent, and analysis tool using same |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5290514A (en) * | 1989-02-27 | 1994-03-01 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Dry analysis element having a constant blank value and process for preparing the same |
CA2270797A1 (en) * | 1998-07-27 | 2000-01-27 | Bayer Corporation | Transparent flow through membrane for dry reagent analytical devices |
JP3756007B2 (ja) * | 1999-01-28 | 2006-03-15 | 富士写真フイルム株式会社 | 乾式分析方法及び乾式分析要素 |
JP2000241425A (ja) * | 1999-02-24 | 2000-09-08 | Fuji Photo Film Co Ltd | 水溶性比色用指示薬を用いた乾式分析素子 |
US10000790B2 (en) * | 2015-06-28 | 2018-06-19 | The Florida International University Board Of Trustees | Materials and methods for rapid visualization of NAD(P)H |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US292272A (en) * | 1884-01-22 | Attachment for plows | ||
DE140239C (ja) * | ||||
US4283491A (en) * | 1977-09-06 | 1981-08-11 | Eastman Kodak Company | Analytical elements with improved reagent stability |
JPS5899752A (ja) * | 1981-11-04 | 1983-06-14 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | 多層分析素子 |
JPS60222769A (ja) * | 1984-04-19 | 1985-11-07 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層分析要素 |
US4803159A (en) * | 1985-06-03 | 1989-02-07 | Eastman Kodak Company | Analytical element and method for determination of total lacate dehydrogenase |
DE3540526A1 (de) * | 1985-11-15 | 1987-05-27 | Bayer Ag | Transparentes teststreifensystem |
US4937047A (en) * | 1986-04-01 | 1990-06-26 | Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. | Analytical element |
US4889797A (en) * | 1986-05-28 | 1989-12-26 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Dry analytical element having a spread control area for assaying enzyme activity |
DE3783851T2 (de) * | 1986-10-09 | 1993-06-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | Integrales, mehrschichtiges element fuer analyse. |
-
1986
- 1986-12-22 JP JP61305886A patent/JPS63157998A/ja active Granted
-
1987
- 1987-12-04 DE DE3789612T patent/DE3789612T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-12-04 EP EP87117986A patent/EP0272518B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-21 US US07/135,670 patent/US5006458A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8999662B2 (en) | 2012-01-22 | 2015-04-07 | Arkray, Inc. | Method for producing dry reagent, dry reagent, and analysis tool using same |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0272518B1 (en) | 1994-04-13 |
US5006458A (en) | 1991-04-09 |
EP0272518A3 (en) | 1990-07-25 |
EP0272518A2 (en) | 1988-06-29 |
DE3789612T2 (de) | 1994-08-25 |
DE3789612D1 (de) | 1994-05-19 |
JPH0560360B2 (ja) | 1993-09-02 |
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