JPH01254867A - 乾式全血分析要素 - Google Patents

乾式全血分析要素

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JPH01254867A
JPH01254867A JP63083679A JP8367988A JPH01254867A JP H01254867 A JPH01254867 A JP H01254867A JP 63083679 A JP63083679 A JP 63083679A JP 8367988 A JP8367988 A JP 8367988A JP H01254867 A JPH01254867 A JP H01254867A
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    • G01N33/52Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/525Multi-layer analytical elements
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 [産業上の利用分野] 本発明は、血液中の特定物質を定量分析するに用いる屹
式化学分析要素に関する。
[従来技術とその欠点] 体液中に存在する各種の代謝成分、例えばグルコース、
とリルビン、尿酸、コレステロール、乳酸脱水素酵素、
クレアチンキナーゼ、GOT、GPT等の定量分析は、
臨床医学上重要で、疾思の診断、治療経過の追跡、予後
の判定などに不可欠である。血液等を試料とする臨床化
学検査では、微量の液体試料で、精度の高い検査を行う
ことができることが望ましい、従来、溶液試薬を用いる
湿式法が広く用いられているが、迅速性に欠ける。
乾式化学分析、すなわち実質的に乾燥状態の分析要素、
例えば、試験片や多層分析要素中に、分析試薬系を導入
した臨床分析法が知られている。
乾式化学分析は湿式法による化学分析(即ち、溶液中に
試薬を用いる方法)より、例えば使用上の簡易性、経済
上の節約及び分析の迅速さなどの点で優れている。乾式
多層分析要素は、微量の液体試料で、精度の高い検査を
迅速に行うことができる分析手段として、開発された。
乾式多層分析要素は例えば、特公昭53−21877号
、特開昭55−164356号、特開昭80−2227
69号等で知られている。
乾式多層分析要素の一例を挙げれば、透明支持体、試薬
層、反射層、展開層から構成されている。透明支持体(
例えば下塗り処理を施した薄いプラスチックフィルム)
の上に塗布された試薬層には、液体試料中に含まれる被
検成分と反応し、その成分量に応じた光学濃度に発色す
る試薬が含まれる。
反射層は、試薬層に入射した光が展開層に達するた液体
試料の影響を受けないようにする役割を持つ、展開層は
、点着された液体試料を均一に、液の量にほぼ比例する
面積に広げる。このような乾式分析要素を用いて定量分
析するには、液体試料、例えば全血を展開層の表面に一
定量滴下する。展開層で展開された血液は、反射層を通
って試薬層に達し、ここで試薬と反応し、発色する0点
着後、化学分析スライドを適当な時間、一定温度に保っ
て発色反応を充分に進行させた後、透明支持体側から照
明光を試薬層に照射し、特定波長域で反射光量を測定し
て反射濃度を求め、予め求めておいた検呈線に基づいて
定量分析を行う。
従来、湿式法、乾式化学分析いずれにおいても、赤血球
を除去した血清または血漿を試料として分析が行なわれ
ることが多かった。しかし血液の他の成分から赤血球を
分離する操作には多くの労力と装置のコストを伴うので
、未希釈の全血で分析できることが望ましい。
全血を試料として乾式化学分析を行うには、血球(赤血
球及び白血球)及び全血の他の高分子量成分を、分析要
素中で何らかの手段で分離しなければならない、特公昭
53−21877号には、血球および全血の高分子量成
分を、分析要素中で分離するために、ろ通魔を設けるこ
とを開示している。
しかし、特開昭60−111960号に記載されている
ように、乾式分析要素に設けたろ通魔により血清または
血漿から血球成分を除去する場合には非常に時間がかか
り、また血漿または血清中の分析物質の一部がろ通魔中
で失われて、分析が不正確になるおそれがあった。
特公昭61〜61347号に記載された乾式分析要素は
、全血中の赤血球が分析要素の上面に設けられた繊維質
展開層中で血漿から分離除去され、しかも血漿中の被検
成分の試薬層への拡散が速やかに行なわれ、全血試料中
の特定成分の分析に適している。しかし、この多層分析
要素を用いて全血の分析を行うとき、血液のへマドクリ
ット値(血液中に占める血球の容積百分率)の大小によ
り、血漿中の成分金型が同じ血液でも分析結果にかなり
差が出ることが経験された。特に血液中の被検出成分(
アナライト)の濃度が高いとき、濃度の測定値が血漿中
の真の濃度に対し負の誤差を示すことが多かった。
[解決しようとする技術的課題] 本発明は、分析要素中で全血中の赤血球による妨害を回
避し、しかも血漿中の被検成分の試薬層への拡散が速や
かに行なわれ、全血試料中の特定成分を血液のへマドク
リット値に拘わらず高い精度で分析することができる乾
式分析要素の提供を、技術的課題とする。
特にヘマトクリット値の高い血液において被検出成分(
アナライト)の濃度が高いときに見られる、濃度測定値
の負の誤差を防ぐことを、技術的課題とする。
[技術的課題の解決手段] 本発明の前記課題は、赤血球が除去されてない血液中の
特定成分を定量分析するに際し、少なくとも2つの水浸
透性層を有し、水浸透性層は試薬層と多孔質展開層を包
含し、試薬層は多孔質展+7fl層の試↑゛1液体を受
容する面と反対側に設けら収ており、被検成分の存在下
に光学的に検出し得る物質を生成し得る試薬■I成物を
、前記水浸透性層の少なくとも1つに含む乾式分析要素
の、多孔質展開層にコール酸類またはデオキシコール酸
類を含有さぜることにより、解決された。
本発明の上記課題は、分析要素の多孔質展開層にデオキ
シコール酸のアルカリ金属塩を含むとき、好ましく達成
された。
前記乾式分析要素は支持体を有しなくてもよいが、前記
水浸透性層を水不浸透性透明支持体の上に有することが
好ましい、あるいは水浸透性層を水浸透性支持体の上に
有してもよい。
[発明の具体的構成の詳細] 本発明に用いる乾式分析要素は少なくとも、それぞれ水
浸透性である試薬層と多孔性展開層とを有する。これら
2層以外の水浸透性層を有してもよい、試薬層と多孔性
展開層との間に他の水浸透性層を有してもよい。
分析すべき液体試料を受容する多孔性展開層は、液体計
量作用を有する層であることが好ましい。
液体計量作用と′は、その表面に点着供給された液体試
料を、その中に含有している成分を実質的に偏在させる
ことなく、面の方向に単位面積当りほぼ一定量の割合で
広げる作用である。多孔性展開層は繊維質、非繊維質い
ずれでもよい。
試薬組成物は、被検成分の存在下に、例えば光学的に検
出し得る物質、例えば染料を生成し得る組成物である。
試薬組成物は少なくとも一部分を試薬層に含むことが好
ましい。
本発明において用いるコール酸類またはデオキシコール
酸類は、コール酸、リトコール酸、タウロコール酸、グ
リココール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール
酸、タウロデオキシコール酸、グリコデオキシコール酸
、またはそれらの塩(例えばナトリウム、カリウム等の
アルカリ金属の塩)から選ばれる少なくとも一つの化合
物である。デオキシコール酸のアルカリ金属塩、例えば
ナトリウム塩が、好ましい0本発明に用いる乾式分析要
素の多孔性展開層中に、0.5ないし6 g7a2の範
囲で含むようにするのが適当である。1ないし4g/糟
2含むのが好ましい。
本発明に用いる乾式分析要素は種々の構成を有すること
ができる1例えば、米国特許3,992,158号、特
開昭55−184356号、特願昭60−279859
号、同60−279860号、同60−279861号
の記載を参考にできる。光透過性支持体を用いる場合、
本発明に用いる乾式分析要素の実用的に採りうる構成は
、例えば (1)支持体上に試薬層、その上に液体展開層を有する
もの、 く2)支持体上に検出層、試薬層、液体展開層をこの順
に有するもの、 (3)支持体上に試薬層、光反射層、液体展開層をこの
順に有するもの、 (4)支持体上に検出層、試薬層、光反射層、液体展開
層をこのP1αに有するもの、 (5)支持体上に検出層、光反射層、試薬層、液体展開
層をこの順に有するもの、 (6)支持体上に第二試薬層、光反射層、第一試薬層、
展開層をこの順に有するもの、支持体と第二試薬層の間
に吸水層を有してもよい。
(7)支持体上に第二試薬層、第一試薬層、展開層をこ
の順に有するもの、支持体と第二試薬層の間に吸水層を
有してもよい。
が有用である(支持体は下塗り層を有していてもよい)
、検出層は一般に、被検成分の存在下で生成した色素等
が拡散し、光透過性支持体を通して光学的に検出され得
る層で、親水性ポリマーにより構成することができる。
媒染剤2例えばアニオン性色素に対してカチオン性ポリ
マーを、含んでもよい。
本発明で好ましいのは上記く3)の層構成である。
上記(1)、(2)または(7)において試薬層と展開
層または検出層の間に蛋白質阻止層を設けてもよい、上
記(3)ないしく6)において光反射層と検出層、試薬
層もしくは展開層との間、試薬層と検出層との間、また
は試薬層と展開層の間に、さらに蛋白質阻止層を設けて
もよい。
上記(1)、(3)または(7〉において、支持体と試
薬層との間に吸水I(を設けてもよい、吸水層は一般に
、被検成分の存在下で生成された色素が実質的に拡散し
ないような層を言い、膨潤しやすい親水性ポリマーによ
り構成することができる。
上記(6)ないしく7)において第一試薬層と展開層の
間、第二試薬層と第一試薬層の間、または光反射層と第
一もしくは第二試薬層の間に、蛋白質阻止層を設けても
よい。
水不浸透性透明支持体の材料として好ましいものは、ポ
リエチレンテレフタレートである。セルローストリアセ
テート等のセルロースエステル類でもよい、親水性層を
強固に接着させるため通常。
下塗り層を設けるか、親水化処理を施す。
試薬組成物には、被検成分の存在下に、光学的に検出し
得る物質、例えば染料を生成し得る組成物を含む、ロイ
コ色素の酸化によって染料を生成する組成f85(例と
して、米国特許4,089,747号、特開昭59−1
93352号等に記載されたようなアリールイミダゾー
ルロイコ色素)、ジアゾニウム塩、酸化されたときに他
の化合物とカップリングにより染料を生成する化合物を
含む組成物(例えば4−アミノアンチピリン類と、フェ
ノール類またはナフトール類)、還元型補酵素と電子伝
達剤の存在下で染料を生成することのできる化合物から
成るもの等を、用いることができる。また、酵素活性を
測定する分析要素の場合には、例えばρ−ニトロフェノ
ールのような有色物質を遊離しうる自己顕色性基質を、
試薬層や展ffFi層に含むことができる。
試薬組成物は、総てを一つの水浸透性層、例えば試薬層
に含んでもよく、別の層に分けて含有させてもよい0例
えば被検成分と試薬との反応により中間体を生成する組
成物を試薬層に、中間体と反応して染料等を生成し得る
組成*(指示薬)を試薬層と支持体との間にある第2の
試薬層に含んでもよい、中間体を生成する組成物を血球
ろ過7T1または光反射層に、指示薬を試薬層に含んで
もよい、第1の試薬層と第2の試薬層の間に、気体透過
層、妨害物除去層(例えば米国特許4,066.403
号=特公昭58−19062号のように)を設けてもよ
く、これらの層は必要なら水不浸透性であってもよい。
試薬組成物は、一部または全部を、親水性ポリマーを結
合剤とする実質的に均一な層に含ませてもよい、親水性
ポリマーとして例えば、ゼラチンおよびこれらの誘導体
(例えばフタル化ゼラチン)、セルロース誘導体(rI
Aえばヒドロキシエチルセルロース)、アガロース、ア
クリルアミド重合体、メタアクリルアミド重合体、アク
リルアミドまたはメタアクリルアミドと各種ビニル性モ
ノマーとの共重合体等が利用できる。
試薬組成物の一部または全部を、多孔性層に含んでもよ
い、試薬層として、ろ紙、不織布のような繊維質多孔性
層を用いてもよいが、非繊維多孔性層を用いることもで
きる。非繊維多孔性層としては、特公昭53−2167
7号、米国特許1.421,341号等に記載されたセ
ルロースエステル類、例えば、セルロースアセテート、
セルロースアセテート/ブチレート、鎖酸セルロースか
らなるプラッシュ・ポリマーの層は好ましい、特開昭6
2−27006号および特願昭63−10452号に記
載されたポリスルホンから成る微孔性膜も好適である。
その他、特公昭53−21677号、特開昭55−90
859号等に記載されたポリマー小粒子、ガラス粒子、
けい藻土等が親水性または非吸水性ポリマーで結合され
た連続空隙をもつ多孔性層も利用できる。
被検成分の存在下に発色を生ずる試薬組成物3多孔性層
に含有させるには、試薬組成物の適当な溶液または分散
液を予め含浸または塗布した多孔性展開層を、他の水浸
透性層、例えば試薬層の上に特開昭55−164358
号のような方法で接着させる方法も有用である。多孔性
層を、他の水浸透性層(例えば下塗り層、接着層、吸水
1tl)の上に前記特開昭55−164356号のよう
な方法で接着させたt&、試薬組成物の溶液または分子
I!、液を多孔性R4に塗布してもよい。
多孔性層に試薬組成物またはその一部分を含浸または塗
布するには公知の方法を利用できる。塗布には例えばデ
イツプ塗布、ドクター塗布、ホッパー塗布、カーテン塗
布等を適宜選択して用いる。
親水性ポリマーを結合剤とし試薬組成物を含む均−層を
塗布した後、試薬組成物を含まない多孔性層を特開昭5
5−164356号のような方法で接着させることによ
って、試薬組成物を多孔性層に実質的に含有させること
ができる。
試薬組成物には必要に応じ、活性化剤、緩衝剤、硬膜剤
、界面活性剤等を含有させることができる。
本発明の分析要素の試薬層に含有させることができる緩
衝剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やBio
cbenisLry誌 第5巻 第2号、467ページ
より477ページ(1966年)に記載されているグツ
ド(Good )の緩衝剤などを挙げることができる。
これらの緩衝剤は「蛋白質・酵素の基礎実験法J(堀I
と武−ほか著、南江堂、1981年)、前記11ioc
bemistry誌第5巻等の文献を参考にして選択す
ることができる。
前述の試薬組成物中の各成分又は試薬の量は測定される
分析物質に応じて広範囲に変化させることができる。こ
れらの量は当業者が容易に決定できる。
試薬4(1成物は酵素を含むものでもよく、特願昭60
−279859号明細書第18ページから第20ベージ
に記載されたものを用いることができる。試薬組成物は
、被検出成分の存在下に蛍光を生ずるが、蛍光が減少す
る成分を含んでもよい。
m相貫多孔性展開層を構成する材料としては、P紙、不
織布、織物生地(例えば平織生地)、m物生地(例えば
、トリコットII)、ガラス繊維r紙等を用いることが
できる。これらのうち織物、編物等が好ましい、織物等
は特開昭57−66359号に記載されたようなグロー
放電処理をしてもよい、展開層には展開面積、展開速度
等を調節するため、特開昭60−222770号、特願
昭61−122875号、61−122876号、61
−143754号に記載したような親水性高分子あるい
は界面活性剤を含有してもよい。
非繊維多孔性層を展開層として用いる場合、特公昭53
−21677号、米国特許1,421,341号等に記
載されたセルロースエステル類、例えば、セルロースア
セテート、セルロースアセテート/ブチレート、硝酸セ
ルロースからなるブラ、シュ・ポリマーの層は好ましい
、6−ナイロン、6,6−ナイロン等のポリアミド、ポ
リエチレン、ポリプロピレン等の微多孔性膜でもよい、
特開昭62−27006号に記載されたポリスルポンか
ら成る微孔性膜でもよい、その他、特公昭53−216
77号、特開昭55−90859号等に記載されたポリ
マー小粒子、ガラス粒子、けい藻土等が親水性または非
吸水性ポリマーで結合された連続空隙をもつ多孔性層も
利用できる。
多孔性層を接着し積層するための接着層を、支持体、下
塗り層、吸水層、検出層等の屑の上に設けてもよい、接
着層は水で膨潤したときに多孔性層を接着することがで
きるような親水性ポリマー例えば、ゼラチン、ゼラチン
誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からなることが好
ましい。
多孔性層を他の多孔性層または無孔性層の上に固定する
には、接着剤を用いることができるが、液体および被検
出成分の均一透過が実質的に妨げられないようにする必
要がある。そのためには、接着剤を部分的に配置し、接
着剤が存在しない部分に微少貫通部が形成されるように
する。その方法として特開昭62−138756号に記
載された方法が有用である。
光反射/遮蔽層は、検出層、試薬層等に生じた検出可能
な変化(色変化、発色′8)を光透過性の支持体側から
反射測光する際に、全血中の赤血球のヘモグロビンの赤
色を遮蔽するとともに、光反射層または背景層として機
能する。親水性ポリマーをバインダーとして分散された
酸化チタン、硫酸バリウム等の光反射性粒子を含有する
無孔層または多孔性層を用いることができる。バインダ
ーとしてはゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルア
ミド等が好ましい、光反射/3j!蔽層として特願昭6
3−9046号に記載された光反射粒子を含むマイクロ
カプセルも有用である。
本発明の分析要素を用いて赤血球を含む血液を分析する
には、前記乾式分析要素にほぼ一定量(例えば3μlか
ら30μ!)の試料液を点着後、適当な恒温槽中または
発色測定機中で一定温度の下に一定時間、インキュベー
ト(加温)した後に、またはその間一定時間間隔で、光
学測定する0分折力法は、検体中の特定成分と分析要素
中の試薬との反応の実質的終点付近における光学変化を
検出する形式でも、反応途上の発色等の速度から反応速
度をa[1定する形式でも、どちらでもよい。
分光反射濃度測定には公知の適当な装置、例えば 米国
特許4,488,810号、4.584,275号、特
H1l(61−294367号、同61−294368
号、同82−184335号、同62−184336号
、同62−198736号、同62−245141号か
ら245143号まで、特願昭61−25582号、同
61−25583号、同61−109402号、同61
−144258号、同61−185471号、同61−
185472号、同61−207044号から2070
49号まで等に記載された装置、 1富士ドライケムtoooハ1゛富士ドライゲム200
0.、[富士ドライゲム5000 、アナライザー(い
ずれも富士写真フィルム株式会社製)、 rEktachem 400J 、rEktachem
 700J、1’ E ktacbem DT−60J
アナライザー(いずれもイーストマンコダックカンパニ
ー製) 等を用いることができる。
本発明は、全血中のグルコース、尿素、尿酸、クレアチ
ニン等の低分子成分の定量は勿論、総蛋白、アルブミン
、各種酵素等の高分子成分、ビリルビン等の蛋白質と結
合した成分等の定置にも適用できる0本発明は、血球内
外の濃度が等しいか、血漿中の濃度が血球内の1/3な
いし3倍程度であるようなアナライトの定量に適する。
特に、グルコース等の糖類が高濃度で含まれる場合に有
用である。
多孔性層に抗原、抗体の少なくとも一方を含有させて、
免疫学的方法による抗原または抗体の定量に用いること
もできる。
[発明の効果] 本発明の分析要素は、全血を試料として、血液のへマド
クリット値が25%から70%の広い範囲にわたり、種
々の被検成分についてヘマトクリット値に比較的左右さ
れない分析値を得ることができる。特にヘマトクリット
値が25%から70%の広い範囲にある全血を試料とし
たときに、ヘマトクリット値が40%から50%の全血
の場合との差が実用的に無視できるような、測定値を得
ることができる。
「実施例1」 分析」J嘗慣せ腎 (1ン支持体、第2試薬層 ゼラチン下塗された厚さ180μ哨の無色透明ポリエチ
レンテレフタレート(PET)平滑フィルムの上に下記
組成物を水溶液として、下記破yf量になるよう塗布し
、乾燥した(第2試薬層)。
(第2試薬層塗布液) ゼラチン            8.0  g/攬2
1.7−シヒドロキシナフタレン   0.2211/
11”4−アミノ−2,3−ジメチル−1−フェニル−
13−ピラゾリン−5−オン      0.40 g
/鶴2〈2)第1試薬層 第2試薬層の上に下記組成物を水溶液として、下記被覆
量になるよう塗布他燥しf、−(第1試桑層)。
(第1試薬層塗布液) ゼラチン             8.9  &/1
12へ、レオキシy−セ23800 UNIT/m”ク
ルコースオキシターゼ   10100 UNIT/畑
”スチレン/p−t(1−メチル−1−ピペラジノ)メ
チル)スチレン/ジビニルベンゼン コポリマー2.4
  g/fi2 ポリオキシエチレン   (40Hジエチレン単位)ノ
ニルフェノール       0.60.7輸2(3)
光反射/遮蔽層 第1試薬層の上に下記組成物を水溶液として、下記波r
fl量になるように塗布、9!、燥し、光反射/遮蔽層
を構成した。
(光反射/遮蔽層塗布液) 二酸化チタン          8・2 g/m2ゼ
ラチン            0.81 g/躊2ポ
リオキシエチレンノニルフェノール (401キシ工チレン単位)            
  0.23 g/J(4)接着層 光遮蔽層の上に、下記組成物を水溶液として3下記被覆
量になるように塗布、乾燥し、接着層とした。
(接着層塗布液) ゼラチン            1.5  g/l1
12ポリオA−ジエチレン(401Nジエチレン?−位
)ノニルフェノール        0.221?/積
2酢酸カルシウム          0.52 gi
n2(5)展開層 次に接着層の全面に約30g7m’の割合で45℃の下
記組成物を与えて湿潤させた擾、ポリエステル糸よりな
るトリコット編物布を密着させ、ラミネートロールを通
し、乾燥した。
水                    97.8
 。
N−(ピロリジノクロロメチル)ピロリジニウム−β−
ナフタレンスルホン酸    2.0gポリオキシエチ
レン(40オキシ工チレン単位)ノニルフェノール  
     0.2gその後、編物布の上にデオキシコー
ル酸ナトリウムを7%水溶液として被覆量2 、1 g
7m”になるよう塗布、乾燥し、グルコース定量用分析
要素[1]を完成した。
比較のため、布への上記塗布を省いたものも作製し、分
析要素[2]とした。
全血  ルコース ヒトより採血した新鮮全血にグルコース濃度が540 
ay/J1になるようにグルコースを必要址添加し、室
温で30分放置後、一部を遠心分離して得た血球と血漿
を適宜混合して、ヘマトクリット値が15.25,40
,55.70%の全血を用意した。それらの正確なグル
コース景はグルコース電極法を用いて測定した。上で作
製した分析要素[1]および[2]の展開層上にそれぞ
れ4種の全血を各10μ!点着し、37℃で6分間イン
キュベーションした後、中心波長540nmの可視光で
支持体側から反射測光により、分析要素の反射光学濃度
を測定した。ヘマトクリット値40%の全血に種々の量
のグルコースを添加した基準血により各分析要素につい
て予め作成した検量線を用いて、4種の試料点のグルコ
ース濃度を測定した。
結果を第1表に示す。
第1表 第1表から明らかなように、本発明の実施例である分析
要素「1」は、比11!2用分析要素[2]に比しヘマ
トクリット値の影響が格段に少なく、ヘマトク1月ント
4025未満あるいは50%を越える全血についても、
ヘマトクリット40%の全血とほぼ同じか極めて近いグ
ルコース4度測定値を与える。

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)少なくとも2つの水浸透性層を有し、水浸透性層
    は試薬層と多孔質展開層を包含し、試薬層は多孔質展開
    層の液体を受容する面と反対側に設けられており、被検
    成分の存在下に光学的に検出し得る物質を生成し得る試
    薬組成物を、前記水浸透性層の少なくとも一つに含む、
    赤血球が含まれる血液中の特定成分を定量分析するため
    に用いる乾式分析要素であつて、 多孔質展開層にコール酸類またはデオキシコール酸類を
    含むことを特徴とする乾式分析要素。
  2. (2)多孔質展開層にデオキシコール酸のアルカリ金属
    塩を含む特許請求の範囲(1)の分析要素。
  3. (3)血液中の疎水性でない成分の定量に用いる特許請
    求の範囲(1)の分析要素。
  4. (4)血液中の糖類の定量に用いる特許請求の範囲(1
    )の分析要素。
  5. (5)血液中のグルコースの定量に用いる特許請求の範
    囲(1)の分析要素。
  6. (6)少なくとも2つの水浸透性層を水不浸透性透明支
    持体の上に有する特許請求の範囲(1)の分析要素。
  7. (7)少なくとも2つの水浸透性層を水浸透性支持体の
    上に有する特許請求の範囲(1)の分析要素。
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