DE3789612T2 - Analytisches Element für die Vermessung von enzymatischer Aktivität. - Google Patents

Analytisches Element für die Vermessung von enzymatischer Aktivität.

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Description

  • Die Erfindung betrifft ein analytisches Element des Trockentyps, das für die Messung der Lactatdehydrogenase-Aktivität einer flüssigen Probe, insbesondere einer biologischen Körperflüssigkeit geeignet ist.
  • Ein bekanntes analytisches Element des Trockentyps für die Messung der Lactatdehydrogenase (LDH) enthält Milchsäure oder ihr Salz und Nicotinamidadenindinucleotidcoenzym (NAD&spplus;) der oxidierten Form in seiner wasserpermeablen Schicht und Nicotinamidadenindinucleotidcoenzym der reduzierten Form (NADH) wird durch ein Farbreagens oder einen ähnlichen Stoff nachgewiesen. Ein solches analytisches Element für die LDH-Aktivitätsanalyse wird in dem japanischen Patent KOKAT 59-88097 usw. beschrieben, und es ist für die Messung der LDH-Aktivität einer flüssigen Probe geeignet. Bei solchen analytischen Elementen nimmt die Dichte des Hintergrunds manchmal während der Handhabung bei der Messung zu, und als Ergebnis kann die zuvor hergestellte Eichkurve nicht verwendet werden. Dieses Phänomen wurde beobachtet, wenn Polyvinylpyrrolidon, das als Stabilisator für NAD&spplus; (japanisches Patent KOKOKU 49-27717) zu der wasserpermeablen Schicht, welche NAD&spplus; enthält, als Bindemittel zugegeben wurde.
  • In der EP-A-0 264 079 wird ein mehrschichtiges analytisches Element nicht für Dehydrogenase, aber mit Dehydrogenase einschließlich Lactatdehydrogenase beschrieben. Das analytische Element enthält eine Ausbreitungsschicht und ein oxidiertes Nicotinamidcoenzym, wie NAD&spplus; in einer Reagensschicht, und es enthält ebenfalls in einer Reagensschicht ein hydrophiles Polymeres, welches Polyacrylamid sein kann. Das Polyacrylamid kann in die Ausbreitungsschicht eingearbeitet werden.
  • In der EP-A-0 239 990 wird ein mehrschichtiges analytisches Element beschrieben, bei dem die erste Reagensschicht, ein Bindemittel, wie Polyacrylamide, enthalten kann.
  • In der EP-A-0 162 302 wird ein mehrschichtiges analytisches Element beschrieben, das eine Wasserabsorptionsschicht ein hydrophiles Polymeres, welches Polyacrylamid sein kann, enthält.
  • Die genannten Erfinder haben die auftretenden Schwierigkeiten untersucht und gefunden, daß, wenn das analytische Element mit LDH-Aktivität das NAD&spplus; in einer wasserpermeablen Schicht enthält, während lange Zeit unter Licht, besonders einem fluoreszierenden Licht, stehengelassen wird, die Hintergrundsdichte zunimmt.
  • Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein analytisches Element, das für die Messung der LDH-Aktivität einer flüssigen Probe geeignet ist, mit einer oder mehreren wasserpermeablen Schichten, wobei mindestens eine der wasserpermeablen Schichten eine poröse Ausbreitungsschicht ist, und mindestens eine der wasserpermeablen Schichten Milchsäure oder ihr Salz und NAD&spplus; enthält, bei dem eine Erhöhung des Hintergrunds während der Handhabung minimal gehalten wird und mit dem daher ein genauer Meßwert leicht erhalten werden kann, zur Verfügung zu stellen.
  • Erfindungsgemäß soll ein analytisches Element, das für die Messung der nicht auf die LDH-Aktivität beschränkten Enzymaktivität einer flüssigen Probe, mit einer oder mehreren wasserpermeablen Schichten, wobei mindestens eine der wasserpermeablen Schichten ein Substrat für das Enzym und NAD&spplus; enthält, wobei die Erhöhung des Hintergrunds während der Handhabung minimal gehalten wird und dadurch ein genauer Meßwert leicht erhalten werden kann, geeignet ist, zur Verfügung gestellt werden.
  • Diese Aufgabe wurde gelöst, indem ein Polymeres, das Acrylamid, Methacrylamid oder von ihren Derivaten in die wasserpermeable Schicht des analytischen Elements eingearbeitet wird.
  • Gegenstand der Erfindung ist ein analytisches Element des Trockentyps für die Messung der Lactatdehydrogenase-Aktivität einer flüssigen Probe, das ein oder mehrere wasserpermeable Schichten aufweist, wobei mindestens eine der Schichten eine poröse Ausbreitungsschicht ist, welche NAD&spplus; und ein hydrophiles Polymeres der folgenden Monomerenkomponente, die in der allgemeinen Formel [I] dargestellt wird, oder ein Copolymeres dieser Monomerenkomponente und einer oder mehrerer anderer Monomerenkomponente(n) enthält.
  • Das hydrophile Polymere, das in dem erfindungsgemäßen analytischen Element verwendet werden kann, ist ein Polymeres der Monomerenkomponente, die in der allgemeinen Formel [I] dargestellt wird, oder ein Copolymeres dieser Monomerenkomponente und einer oder mehrerer anderer Monomerenkomponente(n).
  • In der Formel bedeutet R&sub1; ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe und R&sub2; und R&sub3; bedeuten ein Wasserstoffatom, eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe oder eine aromatische Kohlenwasserstoffgruppe. R&sub2; kann gleich oder unterschiedlich von R&sub3; sein. R&sub2; kann an R&sub3; unter Bildung eines Rings, wie eines Piperidin- oder Morpholinrings, gebunden sein.
  • Beispiele für R&sub2; und R&sub3;, ausgenommen Wasserstoffatom, umfassen die Methyl-, Ethyl-, Benzyl-, Hydroxyethylgruppe, Cyclohexylgruppe, Phenylgruppe, Piperidinogruppe und Morpholinogruppe.
  • Beispiele des Monomeren, das in der allgemeinen Formel [I] dargestellt wird, sind Acrylamid, N-Methylacrylamid, N- Ethylacrylamid, N-Isopropylacrylamid, N,N-Dimethylacrylamid, N-Acryloylpiperidin, Methacrylamid, N-Methylmethacrylamid, N-Ethylmethacrylamid, N-Isopropylmethacrylamid und N, N-Dimethylmethacrylamid.
  • Die anderen Monomerenkomponente umfaßt im Fall des Copolymeren Acrylsäure, Methacrylsäure, Maleinsäure, Methylacrylat, Ethylmethacrylat, Styrol und Ethylen. Zusätzlich sind die Monomeren und copolymerisierten Komponenten, die in der Beschreibung der japanischen Patentanmeldung Nr. 61- 143754 beschrieben werden, ebenfalls verwendbar. Das Copolymere kann aus zwei oder mehreren Arten der in der allgemeinen Formel [I] dargestellten Monomerenkomponente bestehen. Das Copolymere kann aus mehr als zwei Arten von Monomeren bestehen.
  • Das bei der vorliegenden Erfindung verwendete hydrophile Polymere ist wasserlöslich und sein Molekulargewicht beträgt etwa 5000 bis 2.000.000, bevorzugt 20.000 bis 500.000.
  • Das hydrophile Polymere wird in die wasserpermeable Schicht, welche NAD&spplus; enthält, und eine poröse Ausbreitungsschicht ist, eingearbeitet. Das hydrophile Polymere kann in zwei oder mehrere wasserpermeable Schichten eingearbeitet werden. Der geeignete Gehalt an hydrophilen Polymeren beträgt etwa 0,2 bis 10 mg/m², bevorzugt 0,5 bis 5 mg/m².
  • Das analytische erfindungsgemäße Element ist für die Messung der Lactatdehydrogenase-Aktivität geeignet, und es enthält NAD&spplus;. Ein solches analytisches Element enthält üblicherweise ein Substrat und Reagentien, die mit NADH unter Bildung einer nachweisbaren Änderung, wie einer Verfärbung, Entfärbung oder Emission von Fluoreszens, reagieren. Als solche Reagentien sind eine Kombination aus einem Elektronenträger und einer Formazan-Farbstoffvorstufe bevorzugt. Der Elektronenträger kann aus Diaphorase, N-Methylphenazoniummethosulfat und ähnlichen ausgewählt werden. Die am meisten bevorzugte Formazan-Farbstoffvorstufe ist Nitrotetrazolium-Blau (NTB oder NBT, 3,3'-(3,3'-Dimethoxy-4,4'-biphenylen)-bis-[2-(p-nitrophenyl)-5-phenyltetrazoliumchlorid]). Jedoch können auch andere Formazan-Farbstoffvorstufen, wie INT (2-(p-Iodphenyl)-3-(p-nitrophenyl)-5-phenyltetrazoliumchlorid), BT (3,3'-(3,3'-Dimethoxy-4,4'-biphenylen)-bis[2,5-diphenyltetrazoliumchlorid], 3,3'-(4,4'-Biphenylen)-bis-[2,5-diphenyltetrazoliumchlorid]) und ähnliche verwendet werden. Das Substrat wird entsprechend der Art des zu messenden Enzyms ausgewählt, und im Falle von LDH wird Milchsäure oder ihr Salz verwendet.
  • NAD&spplus; und das Substrat werden in die Reagensschicht, die Ausbreitungsschicht oder in eine oder mehrere andere wasserpermeable Schicht(en) eingearbeitet, wobei die wasserpermeable Schicht, welche NAD&spplus; enthält, die poröse Ausbreitungsschicht ist. Sie können in die gleiche Schicht eingearbeitet werden oder sie können getrennt in verschiedene Schichten eingearbeitet werden. Weiterhin kann jedes von ihnen in zwei oder mehrere Schichten, wie die Ausbreitungsschicht und die Reagensschicht, die Lichtblockierungsschicht und die Reagensschicht, die erste Reagensschicht und die zweite Reagensschicht oder in die Ausbreitungsschicht und die erste Reagensschicht eingearbeitet werden. In solchen Fällen kann der Gehalt in zwei oder mehreren Schichten unterschiedlich voneinander sein. Die poröse Ausbreitungsschicht ist die am meisten bevorzugte Schicht für die Einarbeitung von NAD&spplus; und dem Substrat. In jedem Fall wird das Substrat ebenfalls bevorzugt in die Schicht, welche das hydrophile Polymere enthält, eingearbeitet. Der Gehalt an NAD&spplus; und dem Substrat kann gleich sein, wie bei dem bekannten analytischen Element. Die Reagentien, die mit NADH reagieren können, werden ebenfalls in die Reagensschicht, die Ausbreitungsschicht oder in eine oder mehrere wasserpermeable Schicht(en) eingearbeitet. Sie können in die gleiche Schicht oder in unterschiedliche Schichten eingearbeitet werden, und jedes von ihnen kann in eine oder zwei oder mehrere Schichten eingearbeitet werden.
  • Die vorliegende Erfindung kann bei verschiedenen bekannten analytischen Elementen des Trockentyps verwendet werden. Das analytische Element kann ein mehrschichtiges Element sein, welches einen Träger und eine oder mehrere wasserpermeable Schicht(en), wie eine Registrierschicht, eine Lichtblockierungsschicht, eine Reagensschicht, eine poröse Ausbreitungsschicht (die im folgenden kurz als Ausbreitungsschicht bezeichnet wird), eine Klebstoffschicht, eine Filterschicht, eine Wasserabsorptionsschicht, eine Unterschicht und andere bekannte Schichten umfassen. Einige ihrer Ausführungsformen werden in der USP 3,992,158, USP 4,042,335 und dem japanischen Patent KOKAI 55-164 356 beschrieben.
  • Die folgenden Ausführungsformen sind praktisch für die erfindungsgemäßen analytischen Elemente, welche einen Träger enthalten, verwendbar.
  • (1) Eine Ausbreitungsschicht, die ebenfalls als Reagensschicht verwendet wird und die auf dem Träger vorhanden
  • ist. Eine Wasserabsorptionsschicht kann zwischen der Ausbreitungsschicht und dem Träger vorgesehen sein.
  • (2) Eine Ausbreitungsschicht, eine Reagensschicht und der Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet sind. Eine Wasserabsorptionsschicht kann zwischen der Reagensschicht und dem Träger vorhanden sein. Das hydrophile Polymere wird in entweder eine oder beide, nämlich die Ausbreitungsschicht und die Reagensschicht, eingearbeitet.
  • (3) Eine Ausbreitungsschicht, eine Reagensschicht, eine Registrierschicht und eine Trägerschicht, die in dieser Reihenfolge aufeinander angeordnet sind. Das hydrophile Polymere wird in entweder die Ausbreitungsschicht oder die Reagensschicht oder in beide eingearbeitet.
  • (4) Eine Ausbreitungsschicht, eine Lichtreflexionsschicht, eine Reagensschicht und eine Trägerschicht, die in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet sind. Das hydrophile Polymer ist in einer oder mehreren der folgenden Schichten, nämlich der Ausbreitungsschicht, der Lichtreflexionsschicht und der Reagensschicht, vorhanden.
  • (5) Eine Ausbreitungsschicht, die ebenfalls als Reagensschicht verwendet werden kann, eine Lichtreflexionsschicht, eine Registrierschicht und eine Trägerschicht, die in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet sind.
  • Die Ausbreitungsschicht enthält das hydrophile Polymere.
  • (6) Eine Ausbreitungsschicht, eine Lichtreflexionsschicht, eine Reagenschicht, eine Registrierschicht und ein Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet sind. Das hydrophile Polymere ist entweder in der Ausbreitungsschicht oder der Reagensschicht oder in beiden vorhanden.
  • (7) Eine Ausbreitungsschicht, eine Reagensschicht, eine Lichtreflexionsschicht, eine Registrierschicht und der Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet sind. Die Ausbreitungsschicht oder die Reagensschicht enthält mindestens das hydrophile Polymere.
  • (8) Eine Ausbreitungsschicht, eine erste Reagensschicht, eine Lichtreflexionsschicht, eine zweite Reagensschicht, eine Registrierschicht und der Träger, die in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet sind. Mindestens enthält die zweite Reagensschicht oder eine der Schichten, die an der Seite gegenüber dem Träger angeordnet sind, das hydrophile Polymere.
  • Bevorzugte erfindungsgemäße Ausführungsformen sind (2) und (4). Bei irgendeiner Ausführungsform (2) bis (8) kann eine Wasserabsorptionsschicht zwischen der Reagensschicht oder der Registrierschicht und dem Träger vorgesehen sein. Bei der Ausführungsform (2) oder (3) kann eine Filterschicht zwischen der Reagensschicht und der Registrierschicht oder der Ausbreitungsschicht oder zwischen mehreren Reagensschichten vorgesehen sein. Bei irgendwelchen Ausführungsformen (2) bis (8) kann eine Filterschicht zwischen der Lichtreflexionsschicht und der Ausbreitungsschicht, der Reagensschicht oder der Registrierschicht zwischen der Reagensschicht und der Registrierschicht, zwischen der Ausbreitungsschicht und der Reagensschicht oder zwischen der ersten Reagensschicht und der zweiten Reagensschicht vorgesehen sein.
  • Der wasserundurchlässige, lichtdurchlässige Träger umfaßt einen transparenten Film oder eine Folie, hergestellt aus Polyethlyenterephthalat, Polycarbonat, Polystyrol, Celluloseester, wie Cellulosetriacetat und Celluloseacetatpropionat, oder einem ähnlichen Material. Die Dicke des Trägers liegt üblicherweise im Bereich von etwa 50 um bis etwa 1 mm, bevorzugt von etwa 80 um bis etwa 300 um. Der Träger kann mit einer Unterschicht auf seiner Oberfläche versehen sein, um die Adhäsion der Schicht, die daran laminiert ist, wie der Registrierschicht, zu verbessern. Anstelle der Unterschicht kann die Oberfläche des Trägers durch physikalische Aktivierung, wie durch Glimmentladung oder Coronaentladung, oder durch chemische Aktivierung behandelt worden sein.
  • Die Registrierschicht oder die Wasserabsorptionsschicht, die auf dem Träger vorgesehen ist, besteht bevorzugt aus einem hydrophilen Bindemittel, d. h. einem hydrophilen Polymeren, welches Wasser zur Quellung absorbiert. Die Registrierschicht ist die Schicht, in der ein Farbstoff, welcher aus dem Indikator gebildet worden ist, diffundiert, und die Wasserabsorptionsschicht ist die Schicht, in der der Farbstoff im wesentlichen nicht diffundieren kann. Das hydrophile Polymere ist im allgemeinen ein natürliches oder synthetisches hydrophiles Polymeres mit einem Quellverhältnis im Bereich von etwa 1,5 bis 20, bevorzugt von etwa 2,5 bis etwa 15, bei einer Wasserabsorption bei 30ºC. Beispiele für das hydrophile Polymere sind Gelatinen, wie Alkali-behandelte Gelatine, mit säure-behandelte Gelatine und entionisierte Gelatine, Gelatinederivate, wie phthalisierte Gelatine, Agarose und Polyacrylamid. Die Dicke der Registrierschicht und der Wasserabsorptionsschicht liegen im allgemeinen im Bereich von etwa 1 um bis etwa 50 um, bevorzugt 3 um bis 30 um, in trockenem Zustand. Diese Schichten können ein grenzflächenaktives Mittel, wie ein kationisches grenzflächenaktives Mittel, ein anionisches grenzflächenaktives Mittel, ein ampholytisches grenzflächenaktives Mittel und ein nichtionisches grenzflächenaktives Mittel und einen pH-Puffer enthalten.
  • Eine Klebstoffschicht kann für die Laminierung einer Ausbreitungsschicht auf der Wasserabsorptionsschicht, der Registrierschicht, der Lichtreflexionsschicht, der Filterschicht, der Reagensschicht oder einer ähnlichen Schicht vorgesehen sein. Die Klebstoffschicht besteht bevorzugt aus einem hydrophilen Polymeren, das an der Ausbreitungsschicht haftet, wenn die Klebstoffschicht befeuchtet wird oder Wasser unter Quellung absorbiert. Ein solches hydrophiles Polymeres kann ausgewählt werden aus hydrophilen Polymeren, die für die Registrierschicht, wie oben beschrieben, geeignet sind. Bevorzugte hydrophile Polymere sind Gelatine, Gelatinederivate, Polyacrylamid und ähnliche. Die Dicke der Klebstoffschicht liegt im allgemeinen im Bereich von etwa 0,5 um bis etwa 20 um, bevorzugt etwa 1 um bis etwa 10 um, in trockenem Zustand. Die Klebstoffschicht kann für die Adhäsion der anderen Schichten vorgesehen sein. Die Klebstoffschicht wird gebildet, indem eine wäßrige Lösung eines hydrophilen Polymeren und, sofern erforderlich, einer anderen zugefügten Verbindung angewendet wird.
  • Die Reagensschicht des erfindungsgemäßen analytischen Elements kann ein hydrophiles Polymeres und einen pH-Puffer, sofern erforderlich, enthalten. Beispiele für das hydrophile Polymere umfassen Stärke, Cellulose, Agarose, Gelatine und ihre Derivate, wie phthalisierte Gelatine, Polyacrylamid, Copolymere aus Acrylamid und verschiedenen Vinylmonomeren, Polymethacrylamid und Copolymere aus Methacarylamid und verschiedenen Vinylmonomeren. Die pH-Puffer, die für die Reagensschicht geeignet sind, umfassen Carbonatpuffer, Boratpuffer, Phosphatpuffer und Good's-Puffer. Beispiele dieser Puffer werden in "Tanpakushitsu. Koso no Kiso-Jikken Ilo (Fundamental Experimental Method of Proteins, Enzyms)" (Horio et al., Nankodo, Japan, 1981) beschrieben.
  • Die Lichtreflexionsschicht blockiert die Farbe der Probe, die auf die Ausbreitungsschicht als Flecken aufgetragen wurde. Im Falle der Gesamtblutprobe ist dies auf das Hämoglobin zurückzuführen. Die Lichtblockierungswirkung findet zum Zeitpunkt der Messung der optisch nachweisbaren Änderung, wie der Farbänderung oder der Verfärbung, die in der Registrierschicht, der Reagensschicht oder einer oder mehrerer anderer Schichten auftritt, von der Seite des lichtdurchlässigen Trägers durch Reflexionsphotometrie statt. Diese Schicht funktioniert entweder als Lichtblockierungsschicht oder als Hintergrundsschicht. Die Lichtreflexionsschicht ist bevorzugt eine wasserpermeable Schicht, die aus einem hydrophilen Polymeren, wie einem Bindemittel, besteht, worin die lichtreflektierenden Teilchen, wie Titandioxid oder Bariumsulfat, dispergiert sind. Beispiele von hydrophilen Polymeren umfassen die zuvor erwähnten hydrophilen Polymeren, die für die Registrierschicht verwendbar sind, schwach hydrophile regenerierte Cellulose und Celluloseacetat. Bevorzugte hydrophile Polymere sind Gelatine, Gelatinederivate und Polyacrylamid. Ein bekanntes Härtungsmittel kann zu der Gelatine oder einem Gelatinederivat zugegeben werden. Die Lichtreflexionsschicht kann durch Aufbringen einer wäßrigen Lösung eines hydrophilen Polymeren, in dem Titandioxidteilchen oder ähnliche Materialien suspendiert sind, und anschließendes Trocknen gebildet werden. In das erfindungsgemäße analytische Element können Titandioxidteilchen oder ähnliche Materialien in die Ausbreitungsschicht, die Reagensschicht, die Registrierschicht oder eine ähnliche Schicht eingearbeitet werden.
  • Die Ausbreitungsschicht besitzt bevorzugt eine Meßwirkung. Die Meßwirkung ist so, daß eine Probe, die auf die Ausbreitungsschicht als Flecken aufgetragen wird, sich in einer gegebenen Menge pro Einheitsfläche ohne ungleichmäßige Verteilung von irgendeiner Komponente in der Probe in horizontalen Richtungen ausbreitet. Das Material, das die Matrix der Ausbreitungsfläche darstellt, kann ein Filterpapier, ein nichtgewebtes Flächengebilde bzw. Textilmaterial, gewebte bzw. gewirkte Flächengebilde bzw. Textilmaterialien, wie einfach gewebtes Material, gestricktes bzw. gewirktes Textilmaterial, wie Tricottextilmaterial, Glasfaser, Filterpapier, Membranfilter, das aus einem weißwerdenden Polymeren hergestellt worden ist und ein dreidimensionales Gitterstrukturmaterial, das aus Polymerenteilchen zusammengesetzt ist, usw. sein. Für die Ausbreitungsschicht sind bevorzugte Materialien faserförmige Materialien, wie gewebte bzw. gewirkte Flächengebilde bzw. Textilmaterialien und gestrickte bzw. gewirkte Flächengebilde bzw. Textilmaterialien. Diese werden in Einzelheiten in USP 4,292,272, GB 2,087,074A und EP 0,162,302A beschrieben. Diese gewebten bzw. gewirkten Flächengebilde bzw. Textilmaterialien werden bevorzugt, wie durch Waschen, entfettet.
  • Das erfindungsgemäße analytische Element des Trockentyps wird bevorzugt für die Verwendung in quadratische oder kreisförmige Stücke mit einer Seite oder einem Durchmesser von etwa 15 mm bis etwa 30 mm geschnitten und in einen Diarahmen, wie es in dem japanischen Patent KOKAI 57-63452, USP 4,169,751, USP 4,387,990, der PCT-Anmeldung WO 83/00391 etc. beschrieben wird, gegeben.
  • Die Messung erfolgt beispielsweise wie es in der Beschreibung der zuvor erwähnten Patentschriften beschrieben wird. Etwa 5 ul bis etwa 30 ul, bevorzugt etwa 8 ul bis etwa 15 41, einer wäßrigen Probe wird als Flecken auf die Ausbreitungsschicht aufgetragen, und bei einer genauen Temperatur im Bereich von etwa 20ºC bis etwa 45ºC während einer vorgegebenen Zeit, sofern erforderlich, inkubiert. Danach wird eine Farbänderung oder eine Farbe in dem analytischen Element von der Seite des Trägers durch Reflexionsphotometrie gemessen, und die entsprechende Komponente in der Probe wird entsprechend den Prinzipien der Colorimetrie bestimmt.
    • BEISPIELE Beispiel 1
  • Als Träger wird ein farbloser transparenter Polyethlyenterephthalat(PET)-Film mit einer Dicke von 180 um, der einen Gelatineüberzug aufweist, verwendet. Die folgende wäßrige Lösung wird auf einen Träger in einer Menge von 133 cc/m² aufgetragen und dann wird unter Bildung einer farbstoffbildenden Schicht mit einer Trockendicke von 10 um getrocknet.
  • Gelatine 190 g
  • Octylphenoxypolyethoxyethanol 30 g
  • Nitrotetrazolium-Blauφ 9,5 g
  • Wasser 1.350 g
  • Eingestellt auf pH 6,5 mit verdünnter NaOH-Lösung. * 3,3'-(3,3'-Dimethoxy-4,4'-biphenylen)-bis-[2-(p-nitrophenyl)-5-phenyltetrazoliumchlorid]
  • Die obige farbstoffbildende Schicht wurde mit 30 g/m² Wasser befeuchtet. Ein PET-Tricot-Textiltuch, das aus 50 deniers PET-gesponnenem Garn mit 36 gauges gestrickt bzw. gewirkt war, wurde leicht auf das Laminat als Ausbreitungsschicht aufgepreßt und anschließend wurde es getrocknet.
  • Danach wurde die folgende wäßrige Lösung einheitlich auf die Ausbreitungsschicht in einer Menge von 120 cc/m² aufgetragen und dann getrocknet, wobei ein integrales mehrschichtiges analytisches Element für die Messung der LDH- Aktivität erhalten wurde.
  • Nonylphenoxypolyethoxyethanol (n=40) 1 g
  • Octylphenoxypolyethoxyethanol (n=10) 1 g
  • Tris(hydroxymethyl)aminomethan 6 g
  • Lithiumlactat 3g
  • Polyacrylamid 25 g (Molekulargewicht: etwa 200.000)
  • β-NAD&spplus; 0,6 g
  • Diaphorase 150.000 U
  • Wasser 100 g
  • Eingestellt auf pH 8,5 mit verdünnter HCl-Lösung
  • Zum Vergleich wurde ein analytisches Element 1 auf gleiche Weise, wie bei dem obigen Beispiel beschrieben, hergestellt, ausgenommen, daß 25 g Polyvinylpyrrolidon anstelle von 25 g Polyacrylamid zugegeben wurden.
  • Diese analytischen Elemente wurden bei 25ºC mit weißem Fluoreszens-Licht ("NATIONAL FLUORESCENT LIGHT FLR/40S-W/M- X") in einer Beleuchtungsstärke von 1000 lux während der in Tabelle 1 angegebenen Zeiten belichtet. Nach der Bestrahlung wurde die optische Reflexionsdichte von jedem Element bei 540 nm von der Seite des Trägers aus gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefaßt. Tabelle 1 Optische Reflexionsdichte Bestrahlungszeit (min) Erfindungsgemäß Vergleich Unterschied zwischen 30 min und min
  • Aus Tabelle 1 folgt, daß das erfindungsgemäße analytische Element durch Fluoreszens-Licht, verglichen mit dem analytischen Vergleichselement 1 kaum beeinflußt wird.

Claims (8)

1. Analytisches Element des Trockentyps für die Messung der Lactatdehydrogenase-Aktivität einer flüssigen Probe, dadurch gekennzeichnet, daß es eine oder mehrere wasserpermeablen Schichten aufweist, wobei mindestens eine der Schichten eine poröse Ausspreitungsschicht ist, die NAD&spplus; und ein hydrophiles Polymer der folgenden Monomerenkomponente, die durch die allgeineine Formel [I] dargestellt wird, oder ein Copolymer dieser Monomerenkomponente und einer oder mehrerer anderer Monomerenkomponente(en) enthält,
wobei in der Formel R&sub1; ein Wasserstoffatom oder eine .Methylgruppe bedeutet und R&sub2; und R&sub3; ein Wasserstoffatom, eine aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe oder eine aromatische Kohlenwasserstoffgruppe bedeuten, wobei R&sub2; gleich oder unterschiedlich von R&sub3; sein kann und wobei R&sub2; mit R&sub3; unter Ringbildung verbunden sein kann.
2. Analytisches Element des Trockentyps nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die poröse Ausspreitungsschicht zusätzlich Milchsäure oder ihr Salz enthält.
3. Analytisches Element des Trockentyps nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens eine wasserpermeable Schicht NAD&spplus; und einen Elektronenträger enthält und die gleiche wasserpermeable Schicht oder mindestens eine der anderen wasserpermeablen Schichten eine Elektronen-annehmbare Farbstoffvorstufe enthält, wobei die permeable Schicht, die NAD&spplus; enthält, die poröse Ausspreitungsschicht ist.
4. Analytisches Element des Trockentyps nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die wasserpermeable Schicht, die NAD&spplus; und einen Elektronenträger enthält, weiter Milchsäure oder ihr Salz enthält.
5. Analytisches Element des Trockentyps nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R&sub1; eine Methylgruppe bedeutet und die aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe oder die aromatische Kohlenwasserstoffgruppe eine Verbindung ist, ausgewählt aus der Gruppe, die besteht aus einer Methylgruppe, Ethylgruppe, Benzylgruppe, Hydroxyethylgruppe, Cyclohexylgruppe, Phenylgruppe, Piperidinogruppe und Morpholinogruppe.
6. Analytisches Element des Trockentyps nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die durch die allgemeine Formel [I] dargestellte Monomerenkomponente eine Verbindung ist, ausgewählt aus der Gruppe, die besteht aus Acrylamid, N-Methylacrylamid, N-Ethylacrylamid, N-Isopropylacrylamid, N,N-Dimethylacrylamid, N-Acryloylpiperidin, Methacrylamid, N-Methylmethacrylamid, N-Ethylmethacrylamid, N-Isopropylmethacrylamid und N,N-Dimethylmethacrylamid.
7. Analytisches Element des Trockentyps nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das hydrophile Polymere ein Molekulargewicht von 5.000 bis 2.000.000 besitzt.
8. Analytisches Element des Trockentyps nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das hydrophile Polymere ein Molekulargewicht von 20.000 bis 500.000 besitzt.
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