JPS6388000A - 酸性ホスフアタ−ゼ活性分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の分訂］ 本発明はＦ２素活性、特に酸性ホスファターゼ（以下Ａ
ＣＰと略記）活性を潤定するための乾式多層分析要素お
よびその製造方法に開する。

［従来技術］ ＡＣＰはリン酸モノエステラーゼのｍ１で、リン酸モノ
ニスデルの加水分解を触媒する。ＡＣＰはすいぞう、■
臓、肝臓、胛、腎ス、骨、前立豚、赤血球、血小板など
生１本の全ての細胞に存在し、結成や尿中にも存在する
０組黛の豚上皮ｍｌ胞に特に多い。

ＡＣＰの活性測定法はβ−グリセリン′リン酸エステル
を用いるＢｏｃｉａｎｓｋｙ法［：Ｊ、　Ｄｉａｌ、　
ＣＩ＋ｅｕＡ、、１０１゜９３〜１０４（１９３３）］
　、フェニルリン酸エステルを用いるＫｉｎｄ法［Ｊ、
　Ｃｌ１ｎ、　Ｐａｔｈ、７．３２２〜３２６　（１９
５４）］、および］ｐ−二トロフェニルホスフェーＩを
用いる方法等があるが、どの方法も定時間品定であり、
かつ長時間を要する。速度法としてｒｌ立しているのは
α−ナフチルリン酸エステルを用いるＢａ１ｓ法［Ｃｌ
１ｎ、　Ｃｂｃａ＋、、　２２．２０２５〜２０２３　
（１９７６）］のみである、しかしいずれも操作が煩雑
である。

煩雑な：Ａ液作業を必要とせず迅速筒便な分析法として
屹弐分析１ｆｆ２が考案さ＋１−ており、１！ｔに分析
粘度の高い一体型多層分析要素として特公昭５３”−２
１６７７号、特記昭５５−１６４３５６号、特開昭５７
−６６３５９号等に記ｎされたものがある。

前記のＡＣＰ活性測定に用いられた反応系を、このよう
な一体型多層力−析要諾に；入すｉしば、前記のような
欠点を取り除き、かつ高い精度を得ることができるはず
である。

しかし前記のリン酸エステル；のような２ｇとジアゾニ
ウム塩とを−（本型乾式力・析要素の同一の層、開えば
試薬層内に含有すると、検出すべきＡＣＰが存在しなく
ても基質とジアゾニウム塩との反応がおこり、背：ｌ￥
　Ｗ度を形成するため、リン酸エステル顕とジアゾニウ
ム塩との題みきわせな、一体型多層分析要素に専大する
ことは困蓮であった。

本発明の目的は、煩雑な：Ａ液作業を二ｇ・要とせず迅
速節度な分析が可能で、かつ保存安定性のｆぐれたＡＣ
Ｐ活性瀾定のための屹弐分析嬰素、およびその製造方法
を提供することにある。

本発明の前記目的は、光透過性支持体の上に少なくとも
二つの水浸透性層を有し、該７ｔζ浸辺性層のうち少な
くとも一つに、酸性ホスファターゼに対する基質を含み
、前記基質を含む水浸透性層と前記支持体との間に設け
られた他の水ｉ］透性后にジアゾニウム塩含含むことを
特徴とする多ｊ乾式液１本力・析又素によって達成され
た。

本発明の前記目的は、前記多層乾式瀉１゛ド分析要素で
あって、基質３３む層にはジアゾニウムｊ；を実質的に
含まず、ジアゾニウム塩ミ含む層にはリン酸エステル基
質を含まないものによって、より好ましく達成された。

煩雑な調液作業を必要とせず迅速節堡な分析が可能で、
かつ保存安定性のすぐれたＡＣＰ活性測定乾式要素の製
造方法は、水浸透性層のうち少なくとも一つを、酸性ホ
スファターゼに対する基質とよむ塗布組成物を用いて形
成し、前記基質を含む塗布組成物より形成された水浸透
−１ｎ層と前記支持体との間に設けられた他の水浸透性
層を、ジアゾニウム塩を含む塗布■酸物を用いて形成す
ることを特徴とする多コ乾式液体分析要素の製造方法に
よって達成された。

本発明は公知の多層の鞄弐分ｔ７′ｒ嬰素に適用するこ
とが出来る。！ｌ）に自己ｇｒ４己１主１１基ス検液体
がいずれも透過し得る固体担体３３む要素に適用するこ
とが出来る。要素：二反定ｊＪ’ｌ：　Ａ層のほか支持
体、多孔ｉ主液よ展開層を有すること、う做Ｔよ−く、
さらに反射層、接着層、ろ退居、吸水２、下辿り店およ
び他の公知の店を有してもよい、かようなり・祈要素と
して、米国特許第３．９９２．１５８号、同４．０４２
，３３５号および特開昭５５−１６４３３６号各明細Ｗ
に開示されたらのがある。

支持体を用いる場合、本発明の乾式分析栗石の実用的に
探りうる揚成は （１）支持体上に試薬層、その上に液体展開層を有する
もの、この場合、試薬層にジアゾニウムＪ＝、液体展開
層にリン酸エステル基質を：ｊ；　ｔ＋・。

（２）支持体上に吸水ｒＪまたは検出石、試薬２、’ａ
木展開層をこの頭に有するもの、この場き、試薬層にジ
アゾニウム塩な、液体展開層にリン酸エステル基質を含
む。

（３）支持体上に第二試薬層、第一試薬層、液体展開層
をこの原に有する乙の、この賜ａ、第二試薬層にジアゾ
ニウム塩、第一試薬層に基質を含むか、第−試薬層にジ
アゾニウム塩、Ｗｉ、木展開２に基質を３乙・。

（４）支持１本上に吸水５または検出層、第二試薬層、
第−試２：ｍ、液体展開層をこの順に有する乙の、この
場合、第二試薬層にジアゾニウム塩、第−試薬層に基質
を３乞・。

本発明で好ましいのは上記（１）の層構成である。上記
（１）ないしく４）において試薬層と液体展開層の間、
検出層と試薬層の間、または第二試薬層と第−試薬層の
間に光遮荘層および／またはろ退居を設けてもよい。

本発明において基質は二つ以上の層に含有されてもよい
（ｒ９ｑえば第一試薬層と液体展開層）、この場合に、
基質は支持体から遠い層が支持体に近い層のいずれかに
、より多く分布させることもできる。

本発明においてジアゾニウム塩も二つ以上の層に３有さ
れてもよく（例えば２垣に別ｉした試薬層）、この場Ｕ
支持体から遠い層か支持体に近い層のいずれかにより多
く分布させることもて°きる。

本発明のＡＣＰ活性分析要素に使用される基質にはリン
酸モノフェノールニスフル、リン酸モノナフＩ・−ルエ
ステル等のリン酸モノアリールエステルが適している。

更にジアゾニウム塩との反応性を高める為に、ス生成染
料の吸収スベクＩ・ルを長波にシフトさせるために、芳
香環に各種の置換基を導入することができる。置換基と
しては、ハロゲン原子、アルキル基、アルコキシ基、ジ
置換アミン基等が遇ばれる。

ジアゾニウム塩としては、Ｂａ１ｓらの方法て使用され
るＦａｓＬ　ｎｅｄ　ＴＲ５ａｌｔ　（４−クロロ−ｏ
−トルイジンジアゾニウム塩）の様に低分子量のジアゾ
ニウム塩の他、例えば次に示す耐拡散性のジアリールジ
アゾニウム塩が使用される。

１．２−メトキシ−５−（テトラデシルオキシカルボニ
ル）ベンゼンジアゾニウム・ヘキサフルオロボレート ２．２−エトキシ−５−（ヘキサデシルオキシカルボニ
ル）ベンゼンジアゾニウム・デＩ・ラフル」ロボレー１
− ３．２−メトキシ−５−［β−（２′、４゛−ジー【−
アミルフエノキシ）エトキシ力ルボニルコベンゼンジア
ゾニウム・テトラフルオロボレート４．２−メｌ〜キシ
−５−（Ｎ−ヘキ→）゛デシルスルフッ・モイル）ベン
ゼンジアゾニウム・テトラフルオロボレート ５、４−ヘキサデシルオキシカルボニルベンゼンジアゾ
ニウム・テトラフルオロボレート６ゼンジアゾニウム・
テトラフルオロボレート７、２−メチル−５−テトラデ
シルカルボニルベンゼンジアゾニウム・テトラフルオロ
ボレート８、２−ブチル−５−デシルオキシカルボニル
ベンゼンジアゾニウム・デトラフルオロボレート本発明
の乾式分析要素に用いることがてさる先透過性・水不透
過性支持体の例としては、ポリエチレンテレフタレート
、ビスフェノールへのボリカルボネ−１・、セルロース
トリアセテ−１〜、セルロースアセテートプロピオネー
ト らなる厚さ約５０μｌから約５００μｍの範囲のフィル
ムもしくはシー１〜状の透明支持体を挙げることができ
る．これら支持体の表面には必要により下塗層を設けて
、支持体の上に設けられる層と支持体との接着を強固な
ものにすることがでさる。

支持体の表面に物理的（たとえばグロー放電）あるいは
化学的な活性を処理を施して接着力の向上を図ってもよ
い。

本発明の分析要素には、光透過性・水不透過性支持体の
上に（場６によっては下ｉｎ等を介して）吸水層または
検出層を設けてもよい．本発明の乾式分析要素に備えら
れる吸水層または検出層は水を吸収して膨潤する親水性
ポリマーを層形成成分とする層であることが好ましい．
吸水層は、被検成分の存在下で生成するｒ！！．素が実
質的に拡散しない層、検出層は被検成分の存在下で生成
するｒ！！．’ｊｔｉが拡散する２である。

吸水層に用いることができる親水性ポリマーは、・爪に
は水吸収１１５のＤ５潤率が３０′Ｃで約２．０カ・ら
１５の範囲の天然または合成親水性ポリマーである。そ
のような親水性ポリマーの例としては、ゼラチンくアル
カリ処理ゼラチン、酸処理ゼラチン、等）、ゼラチン誘
導体（例、フタル１ヒゼラチン）、アガロース、ポリア
クリルアミＦ、ポリビニルピロリドン等をあげることが
できる。

吸水層または検出層の乾タス時の厚さは約１μｌから約
１００μｌの範囲であることが好まし・く、より好まし
くは約３μｌから約３０μｌの範囲である。さらに検出
層には、必要に応じてＷ面活１１（カチオン性、両性、
アニオン性又は非イオン性）や桜街剤を含有させること
もできる。

液体展開層と反応試薬層、光道ｌ＼い層、ν退居、等の
層との間には、展開層を接着し積帰り−るための接着層
を設けてもよい、接着層は水で＝３潤したときに展開層
を接着することができるような親水性ポリマーからなる
ことが好ましい、接着層に用いることができる親水性ポ
リマーの例としては、吸水層に用いられると同様な親水
性ポリマーがあげられる。これらの″）Ｌノでは一ビン
ナシ、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が好まし
い、接着層の乾燥膜厚は一般に約０．５μ瀧から約２０
μ屑、好ましくは約１μｌから約１０μｌの範囲である
。

接着層は親水４１ポリマーと、必要によって加えられる
界面活性剤等分Ｌ４１　’ＩＪ水溶液を公知の方法で、
検出層や反応試薬等の上に塗布する方法などにより設け
ることができる。

本発明の乾式分析要素の反応試薬層には、親水性ポリマ
ー、Ｈｍ剤あるいは光３Ｉ！蔽４１（反射１１または吸
収性）微粒子等を必要に応じて含有さ−Ｕることができ
る。

本発明の乾式分析要素の反応試薬層に含有させることが
できる親水１１ポリマーの例としては、澱粉、セルロー
ス、アガロース、ゼラチンおよびこれらの誘導体＜ｒ！
Ａ、ヒドロキシメチル化およびヒドロキシプロピル「ヒ
等）、アクリルアミド１合体、アクリルアミドと各種ビ
ニル性モノマーとの共重合体、ポリビニルアルコール、
ビニルピロリドンと各種ビニル性モノマーとの共重合体
、アクリル酸重合木およびアクリル酸と各種ビニル性モ
ノマーとの共重合体等を挙げることができる。上記親水
性ポリマーのうちではゼラチンおよびこれらの誘導体（
例、ヒドロキシメチル化およびヒドロキシプロピル化等
）、ポリビニルアルコール、ビニルピロリドン重合体、
アクリルアミド重合体またはセルロース誘導体が好まし
い。

本発明の乾式分析要素の反応試薬層に３有ざＱ゛ること
がでさる桜田剤の例としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐Ｗ
１塩やグツ１〜（ＧＯＯ（１）の桜箇剤などを挙げるこ
とができる。これらの＃ｆＡ山剤はｒｊｌＴ白質・酵素
の基礎実験法ｊ　（堀尾武−１池著、南江堂、１９８１
）等の公知文献を参考にして２択し、使用することがで
きる。

本発明の乾式分析要素の反応試薬層にはさらに後述する
光反射性粒子を含有させることらてご・る。

光遮蔽層は、皮膜形成能を有する親水性ポリマーをバイ
ンダーとして、光反射性微粒子が分散されている水浸透
性の層であることが好ましい、光反射性微粒子は、検出
層に生じた検出可能な２１′ヒ（色変化、発色笠）を光
透過性を存する支Ｉ７（上側から反射副光する際に、展
開層に点前１！（給さｈた水性液体の色、１．７に試倉
が全血である場＆のｔ＼モグロビンの赤色等を遮蔽する
とと乙に光反射層または背景層としてもに能する。

光反射性を有する微粒子の例としては、皿↑４微７１了
−たとえば二酸ｆヒチタン′］ｆ立了（ルチルナターゼ
盟またはブルツカイト型の粒−ｉ−径がＱ’Ｊ　０　。

１μＸから約１．２μｌのはオ，＋へ−粒子）、硫酸バ
リウム微粒子等を挙げることができる。

皮膜形成能を有する親水性ポリマーバイングーの例とし
ては、前述の吸水層の製造に用いられる親水性ポリマー
のほか、弱ユ水性の再生セルロース、セルロースアセテ
−１・等を挙げることがてさ、二ノしらのうちではゼラ
チン、ゼラチン誘導（、（り、ポリアクリルアミド等が
好ましい．なお、ゼラチン、ゼラチン誘導体には公知の
硬膜剤と添加す°ることができる。

光遮蔽層は、光遮蔽性微粒子と親水性ポリマーとの水性
分散液を公知の方法により検出層、試薬層等の上に塗布
し乾燥することにより設けることができる。必要に応じ
展開層中にも上記のごとき光遮蔽性微粒子を含有させて
もよい。

展開層は、液体Ｊ１旦ｆＹ用を有す°る展開層であるこ
とが好ましい、！＋４７１量作用を有するとは、その表
面に点着供給された液体：ＩＣｉ’ｌを、その中に含有
している部分を実質的に偏在さ−することなく、横（水
平）方向に単位面損害りほぼ一定二の割合で広げるｆｌ
：用を存することである。

展開層のマトリックスを構成する材料としては、２紙、
不織布、繊物生地（例、ブロード、ボブリン等の平織）
、編物生地（例、トリコットラス綴紐−紙、プラッシュ
ポリマーより形成されるメンブランフィルタ−、あるい
は、１でり′ンーミクロビーズ等からなる二次元椙了状
福造！！！５等を用いることができる．これらのうちで
は、試薬類の保持性の点で、織物生地および編物生地に
代表される繊維貫層を用いることが好ましい．これらの
二重線については特開昭５５−１（７４３５Ｇ号、同５
７−６６３５９号および同６０−２２２７６９号をす照
す゛ればよい。

本発明の乾式分析要素に用いることができる織１勿生地
またはＷ＠物上生地水洗等の脱脂処理により少なくとも
糸、織物あるいは編物の製造時に１１着した油脂類が実
質的に除去されていることが好ましい。

本発明の分析要素の展開層として用いる繊物または繊物
生地には、１１開昭５７−６６３５９号に開示された物
理的活性化処理（グロー放電処理、コロナ放電処理等）
を生地の少なくとも片面に施すか、特開昭５５−１６４
３５６号、１！ｒ開昭５７−６６３５９号等に開示され
た親水（１ポリマー３浸処理、特開昭６０−２２２７７
０号に開示された方法笠の親水化処理を施して、分伍要
Ｘ］の他の２との接着力を強化することができる。

ｓａ物または織物生地からなる展開層を萌述の反応試薬
層、光遮蔽層または接着層などに接着、積層するには、
特開昭５５−１６４３５６号および特開昭５７−６６３
５９号等に開示の方法を用いることができる．すなわち
、吸水層または接着層の塗布後床乾燥のうちに、または
乾３二邑の層に水（界面活性剤を少工含んでもよい）を
実質的に均一に（７＜給して眉を膨潤さＱ・た７表、Ｑ
１勿または編１勿生地を膨潤している層の上に重ねて、
なるべく均一に軽く圧力をかけながら接着し、一体１ヒ
リーる。

展開層がブラシ・ユ；１でリマーまたはメンブランフ・
ｆルターからなる１：Ｊ６には特公昭５３−２１６７７
号等、ポリマーミクロビーズからなる三次元椙了状楕追
物である場合には特開昭５　５　−　９　０　８　５９
号等、１紙または不織布からなる場合には特開昭５７−
１４８２５０号等にそれぞれ記載の方法に従って設ける
ことができる。

試＝眉、先遮蔽居、（哀２層などの親水性ボリマーバ・
ｆンダーがゼラチンまたはぜフナン誘導本の場合には、
層の侘布凌ゼラチン等が末０２煙のタル状態の間に上記
展開層を構成する材ｖ１を接着、頂層し一体化する方法
を採用することができる。

展開層に反応試薬たとえば基質、ｉ１ｉ酵素、活１１化
剤等、また必要に応じて親水性ポリマー、ｆｚ街剤、界
面活性剤、光反射性微粒子等を含有させるだめには、こ
れらを３有す−る塗布；戊をｆｆｉ開層間層から公知の
方法により塗布Ｊ゛ることかできる。

展Ｕｒ１胚が織物、編物、ｒ舐、不ふス布等からなる場
合には、試薬と含有する溶液に展開層を浸漬したのち乾
燥する方法も用いることができる．上記のような展開層
をラミネー１〜により積層する場ごには、上記のように
浸漬したに間層を乾燥または半乾燥状態で他の層に積層
し一体化する方法を用いることもできる。

塗布により形成される層、たとえばプラッシュポリマー
等からなる層である場合には、この層の塗布液に試薬、
例えば基質、酵素等の溶液又は分散液を混きして塗布し
てもよい。

［実施例１］ 〈支持体および吸水層〉 下塗り済無色透明ＰＣ′ｌベース上に、Ｉ”１１５．０
に′ｉＡｎした０、ＩＭクエン酸緩街浸液３む７％ゼラ
チンｊ′８液を乾燥厚１５μ川になる様に塗布した。

（発色層） 下記組成の溶液を乾燥厚３μＨ１になる様に塗布、０２
灯させた。

Ｆａｓｔ　　Ｒｅｄ　　ＴＲ５ａｌＬ　　　　　　　　
　　　　　　　　２　０　ｍ　ｇメヂルービニルエテー
ル／無ホマしイン酸（モル比　１：１）共重合体＊ ５２Ｃ水溶液　　　　　　　　　２０　ｒｎ　１ニド１
％メチルエチルゲトン溶液２５℃における固有粘度［７
ノコ２．６−３．５ く接２暦〉 下記組成の液を乾燥厚３μＩ１１になる様に塗布したゼ
ラチン　　　　　　　　　　　４０ｇ水　　　　　　　
　　　　　　　　　５００ｇノニルフェノキシ ポリグリシドール　　　　　　４．３ｇく展Ｉ朋層〉 接Ｚ　ＥＪ　）上に約３０　ｕ＋ｆ／’ｍ　２ノＯ、−
Ｉ　Ｔｕ　／　二ＪＬ　７　、ｒ−ノキシボリグリシド
ール水溶１１を塗布し、次いで３６ゲージ５０Ｄポリエ
チレンデレフタレ−１・紡績糸よりなるトリコット した。

く基＝の含浸〉 下記塗布液を展開層に塗布し乾燥した。

αーナフグールホスフエート シクロヘキシルアミン塩　　　２５ｍｍｏｌｅポリビニ
ルピロリドン く下旬分子量　１０万＞　　　　　５ｇエタノール　　
　　　　　　　　　２０ｇアセトン　　　　　　　　　
　　２５ｇ［実施例２］ （支持体および吸水層） 下塗済ポリエチレンテレフタレー１’Ｊ明支持体（厚さ
１８０μｉｎ　）によＪ′下記組成の液３乾燥膜厚１０
μ口龜になる様塗布、乾燥した。

吸水層塗布；＾ニ アルカリ処理脱イオンゼラチン　１０ｇ水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００＋
００＋ロｒオクチルフエ ノキシＩーキシエタノール　　　　０．５ｇビスビニル
スルポン　　　　　　　０．１５ｇ（発色層） 次いで、ジアゾニウム塩を含有する溶液を下記のように
して７Ｉ製し、乾燥膜厚５μ口ｌになる様塗布した。

ジアゾニウム塩含有塗布ン夜の調製： ２−メｌー１ｒシー５−（テトラデシルオキシカルボニ
ル）ベンゼンジアゾニウム・テトラフルオロボレート３
７．５ｏｔｇをエタノール５０１１およびアセトン２Ｘ
１１１の混合液に；Ｓ角マし、これをメプールビニルエ
ーテル／無ホマレインｒＪｊｉ（モル比１：１）共重合
体（　１　：９，／メチルエチルヶ１〜ン溶液２５℃に
おける固有粘度［１ノコ２．６〜３．５）水溶液（　５
　ｉ’Ｍ　）Ｌｏｇに添加し均一に混合分散した．次い
で水３０＋＋＋１を添加し、均一・分散した。

（展開層及び展開層ｌ＼の基質の＞ｉ２）実施例１と同
様にした。

［実施例３］ 実施例２において呈色層塗布液のジアゾニウムＪ＝とし
てＦａｓｔ　　Ｒｅｄ　　Ｔｎ　　Ｓａｌｔの代わりに
２−メＩ−キシ−５−（Ｎ−へキナデシルスルファモイ
ル）ベンゼンジアゾニウムデＩ・フフルオロボレートを
用いた以外は全て実施例２と同様にｆに製した。

［実施例４］ 実施例２において基質としてα−・ノ°フナルホスフエ
−１・の代Ｊ〕りに３−スルホ−８−ア七チルアミノー
αーナフチルポスフエ−１・・１〜リス塩に＝さ換えた
以外は全て実施例２と同様にイ１１製した。

［測定例１コ 実施例１ないし４の分析要素に、各種の濃度のＡＣ　ｒ
’ｉを点心し３７℃でイン、■ユベーションして、点心
から２分後及び５分後．に干渉フィルターを用いて第１
表に記した波長で反射光学濃度を測定した．２分後と５
分後の光学濃度の差ＣＯＤ５’−０Ｄ２′”）を第１表
に示す。

第１表　　　　（ＯＤ５′−０Ｄ２′）［測定例２コ 実施例１，２，３．および４の分析要素を、３有水分２
００μｇ／’２２５　Ｉｌｌ”まで乾燻し、アルミニウ
ム／ポリエチレン重層防湿包装袋に入れて密；（シた。

４５Ｃて２週間、強制力（ヒ：Ａ験を行ったところ、性
能に変化が認められなかった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）光透過性支持体の上に少なくとも二つの水浸透性層
   を有し、該水浸透性層のうち少なくとも一つに、酸性ホ
   スファターゼに対する基質を含み、前記基質を含む水浸
   透性層と前記支持体との間に設けられた他の水浸透性層
   にジアゾニウム塩を含むことを特徴とする多層乾式液体
   分析要素 ２）前記基質が芳香族リン酸モノエステルである特許請
   求の範囲１）の分析要素。 ３）前記基質がリン酸フェノールモノエステルまたはリ
   ン酸ナフトールモノエステルである特許請求の範囲１）
   の分析要素。 ４）光透過性支持体の上に少なくとも二つの水浸透性層
   を有し、 該水浸透性層のうち少なくとも一つに酸性ホスファター
   ゼに対する基質を含み、前記基質を含む水浸透性層と前
   記支持体との間に設けられた他の水浸透性層にジアゾニ
   ウム塩を含む多層乾式液体分析要素の製造方法であって
   、 該水浸透性層のうち少なくとも一つを、酸性ホスファタ
   ーゼに対する基質を含む塗布組成物を用いて形成し、 前記基質を含む塗布組成物より形成された水浸透性層と
   前記支持体との間に設けられた他の水浸透性層を、ジア
   ゾニウム塩を含む塗布組成物を用いて形成することを特
   徴とする 多層乾式液体分析要素の製造方法。