JPH07506592A

JPH07506592A - 造影用のテクネチウム‐９９ｍ標識ペプチド

Info

Publication number: JPH07506592A
Application number: JP6501622A
Authority: JP
Inventors: ディーン，リチャード・ティ; リスター−ジェイムズ，ジョン
Original assignee: ダイアテク，インコーポレイテッド
Priority date: 1992-06-05
Filing date: 1993-06-04
Publication date: 1995-07-20
Anticipated expiration: 2014-09-27
Also published as: EP0644778A1; JP2954354B2; US6667389B1; EP0644778B1; CA2137009A1; DE69310733T2; US5508020A; US6113878A; US5976494A; DK0644778T3; ATE152918T1; HK1007685A1; ES2105292T3; DE69310733D1; AU688264B2; WO1993025244A1; CA2137009C; AU4528793A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】造影用のテクネチウム−９９ｍｅ！ｌ識ペプチド本発明は、放Ｑ＋ｌｌ！診断試薬およびペプチド、ならびに標ｍ放射線診断剤の製法に関する。さらに詳しくは、本発明は、テクネチウム−９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）と錯体を形成する放射ｔｌｆｆ識結合部位を介してＴｃ−９９ｍで標識した特異的結合ペプチドよりなる、哺乳動物体内の部位を造影するためのンンチグラフィー造影剤に関する。特に、本発明の該ペプチド試薬は、多価リンカ一部位に具有結合し、その結果、該多価リンカ一部位が、複数の特異的結合ペプチドに共有結合し、該Ｔｃ−９９ｍ結合部位が、複数の特異的結合ペプチド、多価リンカ一部位、あるいは該特異的結合ペプチドおよび該多価リンカ一部位の両方に共有結合する。かかる試薬の製造方法および製造用キット、ならびにかかる試薬の１史川方法も掃０（咳ｔｉ削の分野では、（放射線トレーサーまたは放射線医薬製剤と呼ばれている）体内投与した少量の放射性椰識トレーサー化合物の分布を検出することにより、ある欅の病理疾患の位置を決定し、またはその程度を計価する。これらの放射線医薬製剤を検出する方法は、一般的に、造影法または放射線造影法として知られている。

放射線造影において、該放射線標識はガンマ線放射放射性核種であって、ガンマ呻検出カメラを用いて放射性トレーサーの位置が決定される（しばしば、このプロセスはガンマ・ノンヂグラフィーと呼ばれている）。該放射性トレーサーが病理部位（陽性コントラストという）に局在するか、または別法として、該放射性トレーサーがかかる病理部位に特に局在しないか（陰性コントラストとい・））のいずれかにより該放射性トレーサーが選抜されるので、造影部位が検出できる。

放射線造影に有用な種々の放射線核種が知られており、”Ｇ　ａ、”Ｔｃ（Ｔｃ −９９ｍ）、Ｉｌｌ　ｌ　ｏ、１■■、１２５１、＋６＠Ｙｂまたは＋１１Ｒｅを包含する。ヒトにおける最適な放射線造影には、数多くの要因を考慮しなければならない。検出効率を最大化するためには、１００ないし２００ｋｅＶの範囲のガンマ線エネルギーを放出する放射線核種が好ましい。患者への吸収放射線量を最小限にとどめるため、該放射ｍ核種の物理的半減期は該造影工程が許容する限り短くすべきである。いつ何時でも検査が行えるよう、臨床サイトで常に利用できる放射線核種源を有しておくのが有利である。１４０ｋｅＶのガンマ線を放射し、６時間の物理的半減期を有し、モリブデン−９９７テクネチウム一９９ｍ発生機を容易に該部位に１１１用できるため、′Ｉ’ｃ−９９ｍが好ましい放射線核種である。

特異的結合ペプチド部位の特異的結合特性が所望の範囲にわたっての放射能シグナルを濃縮するため、放射性標識ペプチドを用いる造影方法の感度は、当該分野で公知の他の放射線医薬製剤よりもはるかに高い。所望の標的に特異的に結合する小さな合成ペプチドを、放射性トレーサーの基本として有利に用いることができる。これは・１．（それらを、バクテリアまたは哺乳動物細胞のごとき生物系て産生させること、あるいはタンパク質断片のごとき生物由来物質から単離することを要するのに対して）それらは化学的に合成でき：２．それらが小さいため、標的に結合しなかった放射性トレーサーが身体から迅速に除去され、それによりバックグラウンド（非標的）放射能が減少し、標的が良好に見分けられる；ならびに、３小さなペプチドは、容易に化学的に操作して、特定の結合部位へのそれらの親和性を最適化できるためである。

ルーチン的に用いる放射線医薬製剤には、小さく容易に合成される標識ペプチド分子が好ましい。患者に直接注射でき、かつかかる部位に局在することにより病理部位を造影できる小さな合成標識ペプチドの要望が明らかにある。造影用の放射線核種としてのＴｃ−９９ｍ特性、ならびに放射性トレーサー分子としての特異的結合生合成ペプチドの有用性により、Ｔｃ−９９ｍ標識小合成ペプチドは、ガンマンンチグラフィー用の放射性トレーサーとして明らかな利点を提供する。

放射ＩＩ欅識蛋白および放射線標識ペプチドは、先行技術にて報告されている。

エン（Ｅｇｅ）ら、米国特許第４．８３２．９４０号は、局在したＴ−リンパ球を造影するための放射線標識ペプチドを教示している。

オレキサ（Ｏ１ｅｘａ）ら、１９８２年、欧州特許出願第８２３０１７００９号は、架橋フィブリンから単離したフラグメントＥ１、架橋フィブリンから単離したフラグメントＥ、ならびにフラグメントＥｌおよびＥｌの間のアミノ酸配列媒介を有するペプチドから選択される医薬上許容される放射線標識ペプチドを開示している。

ランビー（Ｒａｎｂｙ）ら、１９８８年、ＰＣＴ／ＵＳ８８１０２２７６号は、放射線簿識化合物をフィビリンに共有結合させることを特徴とする、動物に沈着したフィブリンを検出する方法を開示している。

ハトリー（Ｉｌａｄｌｅｙ）ら、１９８８年、ＰＣＴ／ＵＳ８８１０３３１８号は、（ａ）Ｐａ識し弱毒化した血栓性蛋白を磨者に投与し、ここに、該欅識物がフィブリン結合ドメイン以外の血栓蛋白部位に結合し：（ｂ）患者中の該標識血栓性蛋白の分布パターンを検出する、段階よりなるフィブリン−血小板塊をイン・ビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）で検出する方法を教示している。

リース（Ｌｅｅｓ）ら、１９８９年、ｐＣＴ／ＵＳ８９１０１８５４′Ｆ３は、動脈造影用の放射線標識ペプチドを教唆している。

ソベル（Ｓｏｂｅｌ）、１９８９年、ＰＣＴ／ＵＳ８９１０２６５６号は、放射線標識し酵素的に不活性化させた組織プラスミノーゲン活性化因子を用いて動物中の１またはそれを超える血栓位置を決定する方法を開示している。

スタントル（ＳＬｕｔｔｌｅ）、１９９０年、ＰＣＴ／ＧＢ９０１００９３３号は、配列アルギニンーグリシンーアスパラギン酸（ＲＧＤ）よりなり、イン・ビボでＲＧＤ結合部位に結合できる、３ないし１０個のアミノ酸を含有する放射性標識したペプチドを開示している。

マラガノア（Ｍａｒａｇａｎｏｒｅ）ら、１９９１年、ＰＣＴ／ＵＳ９０１０４６４２号は、（ａ）阻害部位：（ｂ）リンカ一部位、および（Ｃ）アニオン結合部位よりなる放射線標識血栓阻害剤を開示している。

ロッドウェル（Ｒｏｄｗｅｌｌ）ら、１９９１年、ＰＣＴ／ＵＳ　９１１０３１１６号は、「分子認識単位」と［エフェクタードメイン」との結合物を開示している。

ツビス（Ｔｕｂｉｓ）ら、１９６８年、インターナショナル・ジャーナル・オン・アプライド・ラディエーシチンズ・アンド・アイソトープス（１ｎＬ、　Ｊ　、　Ａｐｐｌ、　Ｒａｄ。

Ｉ　ｓｏｔ、　）第１９巻：８３５−８４０頁は、ペプチドをテクネチウム−９９ｍで標識することを記載している。

サンドレハーゲン（Ｓｕｎｄｒｃｈａｇｃｎ）、１９８３年、インターナショナル癩ジャーナル・オン・アプライド・ラディエーシチンズ・アンド・アイソトープス（Ｉ　ｎｔ。

Ｊ　、　Ａｐｐｌ、　Ｒａｄ、　Ｉ　ｓｏｔ、　）第３４巻：１０００頁は、ポリペプチドをテクネチウム−９９ｍで標識することを記載している。

放射線造影には最適であるが、Ｔｃ−９９ｍの化学は、他の化学要素として徹底的には研究されておらず、このような理由によりテクネチウム−９９ｍで放射線標識する方法は豊富ではない。Ｔｃ−９９ｍは、普通、Ｔｃ−９９ｍ過テクネチウム酸（ＴｃＯｓ−；＋７酸化状態でのテクネチウム）として、通常、モリブデン−９９ｍ１テクネチウム−９９ｍ発生機から得る。しかしながら、過テクネチウム酸は他の化合物に良好に結合しない。しかるに、ペプチドを放射線標識するため、１’ｃ−９９ｍ過テクネチウム酸をもう１つの形態に転化しなければならない。テクネチウムは、水溶液中にて安定なイオンを形成しないため、Ｔｃ−９９ｍが分解して、不溶性の二酸化テクネチウムに転化するか、過テクネチウム酸に戻るのを阻害するに十分な動力学的および熱力学的な安定性を有する配位鎖体の形態でかかる溶液中にて保持しなければならない。

放射線標識の目的には、テクネチウムイオンを囲む全ての供与体基が単一のキレート配位子として供されるキレートとして、Ｔｃ−９９ｍ錯体が形成されるのが特に有利である。これは、該キレータ−と該ペプチドとの間の単一のリンカ−を通してキレート化Ｔｃ−９９ｍがペプチドに共有結合するのを可能にする。

これらの配位子は、時々、キレート部位と結合する部位を有する二官能性キレート剤といわれている。かかる化合物は、先行技術で公知である。

ビルネ（Ｂ　ｙｒｎｅ）ら、米国特許第４，４３４，１５１号は、造影する器官または組織に局在できる末端アミノ含有化合物に放射線核種をカップリングさせるホモシスティンチオラクトン由来の二官能性キレート剤を記載している。

フリツノバーブ（Ｆ　ｒｉｚｂｅｒｇ）、米国特許第４．４４４，６９０号は、２．３−ビス（メルカプトアセトアミド）プロパノエートに基づく一連のテクネチウム−キレート剤を記載している。

ビルネ（Ｂｙｒｎｅ）ら、米国特許第４．５７１．４３０号は、造影する器官または組織に局在できる末端アミノ含有化合物に放射線核種をカップリングできる、放射ＩＩ核秤キレート用の新規なホモシスティンチオラクトン三官能性キレート剤を記載している。

ビルネ（口ｙｒｎｅ）ら、米国特許第４．５７５，５５６号は、造影する器官または組織に局在できる末端アミノ含有化合物に放射線核種をカップリングできる、放射Ｉ！咳種キレート川用新規なホモシスティンチオラクトン三官能性キレート剤を記載している。

デビソン（Ｄａｖｉｓｏｎ）ら、米国特許第４．６７３．５６２号は、主に腎機能モニター剤として用いる、ビスアミド−ビスチオ−配位子およびその塩の錯体をキレートするテクネチウムを記載している。

二：ｌ１０．７テイ（ＮｉｃｏｌｎＬＬｉ）ら、米国特許第４．８６１．８６９号は、抗体のごときｒｌ物分子と１９合体を形成させるのに（Ｔ川な二官能性カップリング剤を記載している。

フリノッパーグ（Ｆ　ｒｉｚｂｅｒｇ）ら、米国特許第４，９６５．３９２号は、蛋白標識用のＳ−保護メルカプトアセチルグリシルグリジンに基づく種々のキレータ−をε己載している。

フリツノバーブ（Ｆ　ｒｉｚｂｅｒｇ）ら、欧州特許出願第８６１００３６０．６号は、テクネチウム標識造影剤の製造に有用なジチオール、ジアミノ、もしくはジアミドカルボン酸またはアミン錯体を記載している。

ディー　ン（Ｄｅａｎ）ら、１９８９年、Ｉ’ＣＴ／ＵＳ８９１０２６３４号は、蛋白およびペプチドを放射線標識するための二官能性カップリング剤を記載している。

フラナガン（Ｆ　ｒａｎａｇａｎ）ら、軟州特許出願第９０３０６４２８．５号は、−セットの有機キレート分子を介しての合成ペプチド断片のＴｃ−９９ｍ１ｌｌｌ識を開示している。

アルバート（Ａｌｂｅｒｔ）ら、欧州特許出願Ｗ０９１１０１１４４号は、成長因子、ホルモン、インターフェロンおよびサイトカインに関連し、放射線核種キレート基に共有結合した特異的認識ペプチドよりなる、放射線標識ペプチドを用いた放射線造影を開示している。

ディージ（＋）ｃａｎ）、（出典明示して本明細書の一部とみなす）同時係属米国特許出願第０７７６５３．０１２号は、イン・ビポ放射線造影用の特異的結合ペプチドに共有結合したＴｃ−９９ｍキレート基よりなる、ペプチドを製造するための試薬および方法を教示している。

バイト（Ｂａｊｄｏｏ）およびリーバ−（Ｌｅｖｅｒ）、１９９０年、バイオコンジュゲート・ケミストリー（Ｉ３ｉｏｃｏｎｊｕｇａＬｅ　Ｃｈｅｍ、）ｉｌＲ１＠：　１３２−１３７頁は、カチオン性テクネチウム錯体を供するビスアミンビスチオール基を用いて生体分子を標識する方法を記載している。

ンスティンまたはメルカプト酢酸のごときチオール含有基を単に付加することによりペプチドを８３［射ＩＩＷＡ識することができる。かがる工程は先行技術にすでに記載されている。

ツユチャツト（Ｓ　ｃｈｏｃｈａｔ）ら、米国特許第５．０６１．６４１号は、少なくともｌの「垂れ下がった（ｐｅｎｄｅｎｔ月スルヒドリル基よりトリ蛋白を直接に放射線標識することを開示している。

ディージ（Ｄｅａｎ）ら、（出典明示して本明細書の一部とみなす）同時係属米国特許出願第０７／８０７．０６２号は、遊離チオールを含有する結合基を介して蛋白を放射線標識することを教示している。

ゴードマンス（Ｇｏｅｄｅｍａｎｓ）ら、ＰＣＴ出願番号ｗｏ　８９１０７４５６号は、環状チオール化合物、特に２−イミノチオランおよび誘導体を用いて蛋白を放射１１ｍ識することを記載している。

トーンパック（Ｔ　ｈｏｒｎｂａｃｋ　）ら、ＥＰＣ出願番号第９０４０２２０６．８号は、チオール含有化合物、特に２−イミノチオランを用いた、放射線標識蛋白またはペプチドの製造および使用を記載している。

スタントル（Ｓ　ｔｕｔｔｌｅ）、ＰＣＴ出願番号Ｗ０９０／１５８１８号は、ＲＧＤ−含有オリゴペプチドのＴｃ−９９ｍｅｌｌ識を記載している。

特異的結合ペプチドをＴｃ−９９ｍで標識することは可能であるにもかかわらず、いくつかのかかるペプチドは低い結合部位親和性を示し、それにより、十分なラジオアイソトープが標的部位に局在して放射線造影を形成するには不十分な標的部位へのペプチド結合の強さとなる。この問題を解決する努力において、特異的結合ペプチド繰り返し単位の線状配列よりなるペプチドが先行技術に記載されている。

ロノドウｘ　ル（Ｒｏｄｗｅｌｌ）ら、１９９１年、ｒ’ｃＴ／ＵＳ９１１０３１１６号は、線状配列のペプチド配列ＲＧ　Ｉ）を開示している。

しかしながら、特異的結合ペプチド単位の別の配列が好ましいであろう。

本発明は、族１１４１造影剤の製造に有用な試薬を提供する。本発明は、シンチグラフィー検出可能な造影を形成するのに十分なイン・ビボの標的部位への親和性を口する、複数の特異的結合ペプチド部位よりなる試薬を提供する。複数の特異的結合ペプチド部位を本発明の試薬に取り込むことにより、個々の結合親和性がイン・ヒポのノンチグラフィー検出可能な造影を形成するのに十分でない特異的結合ペプチドを使用できるようにしている。他の場合においては、ある種の特異的結合ペプチドにより形成される別の方法で許容されるシンチグラフィー造影の改良が、本発明の試薬を用いて達成される。

本発明は、多価リンカ一部位に共有結合した複数の特異的結合ペプチド部位よりなるンノチグラフィー造影剤を製造するための試薬を提供し、ここに、テクネチウム−９９ｍ結合部位は、該特異的結合ペプチド、該多価リンカ一部位、または該特異的結合ペプチドおよび該多価リンカ一部位の両方に共有結合している。

また、本発明は、かかるペプチド試薬より製造するＴｃ−９９ｎＪ！識シンチグラフイー造影剤も提供する。本発明の該特異的結合ペプチドは、イン・ビボで標的に特異的に結合するペプチドよりなる。

本発明の第一の嬰様において、本発明は、多価結合部位に共有結合した、各々３ −１００個のアミノ酸を有する、多数の特異的結合ペプチドよりなり、さらに、複数の該特異的結合ペプチド、該多価リンカ一部位、またはその両方に共有結合しているＴｃ−９９ｍ結合部位よりなる、吐乳動物体内部位を造影するためのＴｃ−９９ｍ１ｌｌ識されつる試薬をｔｌｉ供する。本発明の好ましい具体例は、線状および環状の特異的結合ペプチドよりなる。

第二の聾様において、本発明は、多価結合部位に共有結合した、３−１００個のアミノ酸配列を有する多数の特異的結合ペプチドよりなり、さらに、複数の該特異的結合ペプチド、該多価結合部位、またはその両方に共有結合しているＴｃ− ９９ｍ結合部位よりなる、吐乳動物体内部位を造影するためのＴｃ−９９ｍ標識されうる試薬を提供し、ここに、該Ｔｃ−９９ｍ結合部位は、式：％式％））［式中、Ｃ（ｐｇｐ）’は保護されたンスティンであって、（ａａ）はアミノ酸である］を有する。好ましい具体例において、該アミノ酸はグリシンである。好ましい具体例において、該ペプチドは、３ないし３０Ｍのアミノ酸よりなる。本発明の好ましい具体例は、線状および環状の特異的結合ペプチドよりなる。

第三の＠様において、本発明は、多価結合部位に共有結合した、３−１００個のアミノ酸配列を有する多数の特異的結合ペプチドよりなり、さらに、複数の該特異的結合ペプチド、多価リンカ一部位、またはその両方に共有結合しているＴｃ −９９ｍ結合部位よりなる、哺乳動物体内部位を造影するためのＴｃ−９９ｍ標識されつる試薬を提供し、ここに、該Ｔｃ−９９ｍ結合部位は、式。

ＡＩ−ＣＺ’（Ｂ’）−［Ｃ（ＲＩＲす］、−ｘｌ［式中、Ａ１は■１、Ｉ（ＯＯＣ，ＨｔＮＯＣまたは−ＮＨＯＣ。

Ｂ１はＳ１１またはＮＨＲ”。

ＸｌはＨ１メチル、ＳＨまたはＮＨＲｌ。

Ｚ宜は）Ｉまたはメチル；Ｒ１およびＲ２は、独立して、■］または低級アルキル；Ｒ３はＨ１低級アルキルまたは−Ｃ＝Ｏ。

ｎは０、■または２゜ＢｌがＮｌｌＲ３である場合、Ｘ−はＳｌｌ、　Ｚ’はＩＩであってｎは１または２；ＸｌがＮ１１Ｒ’である場合、＋３’は３１１、Ｚ１１旧Ｉてあってｎｆ、ｔＯまたは２：Ｉ３’＃用であル場合、Ａ’ｌ；１１１００ｃ、Ｉｌ、ＮＯＣ，または−Ｎ１１０ＣＳＸ’１ｉＳＩＩ、ＺＩｆｔｌ＋テあってｎ１１０または１．Ｚｌがメチルである場合、ｘｌはメチル、八１はｌ１００ｃ。

１１、ＮＯＣまたは−Ｎ１１０Ｃ，＋３１は３＋１であってｎは０；：こに、チオール基は１１ひνである］を有する。

−Ｔましい具体例において、該ペプチドは、３ないし３０個のアミノ酸よりなる。

本発明のｅｒましいＩＡ体例は、線状および環状の特異的結合ペプチドよりなる。

もう１つの具体例において、本発明は、多価結合部位に共有結合した、３−１００個のアミノ酸を有する多数の特異的ペプチドよりなり、さらに、複数の該特巽的結合ペプチド、該多価リンカ一部位、またはその両方に共有結合しているＴ　Ｃ−９９ｍ　Ｌ’＋　６部位よりなる、吐乳動物体内部位を造影するためのｉ’ ｃ−９９ｍＩ！Ｆ識されうるペプチド試薬を（Ｒ供し、ここに、該’ｌ’ｃ−９９ｍｊ八へ部位は、式＝［本発明の目的には、この構造を有する放射線ＷＩＡ識結全結合部位ピコリン酸（Ｐｉｃ）に基づく部位をいうであろう］または［式中、Ｘは１］または保護用基であって、（ａＩＩＩｉｎｏ　ａｃｉｄ）はいずれかのアミノ酸をａ味する］を有する。本発明の目的には、この構造を有する力ｋｌｌｌ標線結合部位は、ピコリルアミン（＋’１ｃａ）に基づく部位をいうであろう。好ましい具体例において、該アミノ酸はグリシンであって、Ｘはアセトアミドメチル保護用基である。

さらなる好ましい具体例において、該ペプチドは３ないし３０個のアミノ酸よりｌｊろう本発明の好ましい具体例は、線状および環状の特異的結合ペプチドよりなる６さらにもう１つの本発明の具体例は、多＆！ｈ結合部位に共有結合した、３−１００個のアミノ酸を有する多数の特異的結合ペプチドよりなり、さらに、該特異的結合ペプチド、該多価リンカ一部位、またはその両方に共有結合する゛ｌ’ｃ −９９ｍ結合部位より／ｊる、１乳動物体内部位を造影するためのＴＴｃ−０Ｄて標識されうるペプチド試薬を提１１（シ、ここに、該Ｔｃ−９９ｍ結合部もγ は、式：１式中、古１（は、独立して、１１、Ｃ１１，またはＣ，１１，でもよく；各（ｐｇｐ）’は、ＵいＬして、ヂオールｆ￥護用／Ｉｉまたは１１でもよにｍ、＋１およびｐは、独立して、２または３．Ａ２は線状もしくは環状の低級アルキル、アリール、１隻素環、それらの組ｐ４Ｊまたｌ：！誘”Ｆ体であって：Ｘはペプチドである１；および！■、（式中、３Ｒは、独立して、１！、ＣＩ＋３またはＣ，Ｉｌ、　：　＋ｎ、　ｎおよびｐは、独立して、２または３：△は線状もしくは環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは誘導体、■は１１またはＣＯ−ペプチド：Ｒ４は１１またはペプチド、（ｕし、Ｖ力士である場合、Ｒ′はペプチドで、Ｒ４力用である場合、■はペプチド［本発明の目的のため、これらの構造を有するｂｋ躬線探識結合部位は、「１３ＡＴ」部位と呼ばれるであろうＪ本発明の好ましい具体例は、線状および環状の結合ペプチドよりなる。）を口する。

本発明の試薬は、該特異的結合ペプチドもしくは１１！ｂｋＱ’ｌ線押識結合部位またはその両方が多価結合部位に共有結合しているものとして＋７！　＋１４される。本発明の多価＃、ｌｉ合部位は、特異的結合ペプチドまたはＴｃ−９９ｍ結合部位に共有結合できる′にｔ４くとも２つの同一リンカ−官能基よりなる。好ましいリンカ−官能基は、第−級または第二級アミン、ヒドロキシル基、カルボン酸基またはチオール反応性基である。好ましい具体例において、該多価結合部位は、共有結合して分岐多価結合部位を形成する多数の多価結合部分よりなる。好ましい具体例において、該多価結合部分はリジン、ビスーサクシンイミジルメチルエーテル（１３３ＭＥ）、４−（２，２−ジメチルアセチル）安息香酸（ＤＭＡ口）、トリス（サクシンイミジルエチル）アミン（ＴＳＥΔ）、Ｎ−［２−（Ｎ’、　Ｎ’−ビス（２−サクシンイミドエチル）アミノエチル）］−Ｎ ’、Ｎ”−ビス（２−メチル−２−メルカプトプロピル）−６，９−ジアザノナンアミド（ｎへＴ−ＢＳ）、４−（０−ＣＩＩ＊ＣＯ−Ｇ　Ｉｙ−Ｇ　Ｉｙ、　ａｓｉｄｅ）アセトフェノン（ＥＴＡＣ）およびビスーサクシンイミドヘキサン（ＢＳＩＩ）よりなる。

また、本発明は、本発明の試薬と’ｒｃ−９９ｍとの錯体であるシンチグラフィー造影剤および本発明の試薬をＴｃ−９９ｍで放射線標識する方法からもなる。

本発明により提供される放射ＩＩ揮識錯体は、還元剤の荏在下に本発明の試薬とＴｃ−９９ｍとを反応させることにより形成される。好ましい還元剤は、限定しないが、亜ノチオン酸イオン、第一スズイオン、および第一鉄イオンを包含する。

また、本発明の錯体は、本明細書で提供した予め還元したＴｃ−９９ｍ錯体のリガンド交換により、本発明の試薬をＴｃ−９９ｍで標識することによっても形成される。

また、本発明は、Ｔｃ−９９ｍで放射線標識した本発明の試薬であるシンチグラフィー造影剤を製造するためのキットも提供する。本発明の試薬をＴｃ−９９ｍで標識するためのキットは、予め定めた量の本発明の試薬またはその混合物および該試薬をＴｃ−９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤を含有する密閉バイアルよりなる。

本発明は、イン・ビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で化学合成することにより本発明の試薬を製造する方法を提供する。好ましい具体例において、ペプチドは、固相ペプチド合成法により合成する。

本発明は、イン・ビボ・ガンマンンチグラフイー造影を得ることにより、哺乳動物体内部位を造影するＴｃ−９９ｍ標識試薬であるシンチグラフィー造影剤を用いる方法を提供する。これらの方法は、有効診断量の本発明のＴｃ−９９ｍ放射線標識試薬を投与し、哺乳動物体内部位に局在したＴｃ−９９ｍにより放出されるガンマ線を検出することよりなる。

本発明の特に好ましい具体例は、以下のある種の好ましい具体例および請求の範囲のさらに詳細な説明から明らかとなるであろう。

図面の簡単な説明Ｆｉｇ、ｌは、実施例５に記載する本発明のＴｃ−９９ｍ１ｌｌｌ識シンチグラフイー造影剤を用いた、雑種大体内の深静脈血栓造影のガンマシフチフォトを図示する。

発明の詳細な説明本発明は、多価結合部位に共有結合した、３−１００個のアミノ酸配列を有する多数の特異的結合ペプチドよりなり、さらに、該特異的結合ペプチド、該多価リンカ一部分またはその両方に共有結合したＴｃ−９９ｍ結合部位よりなる、哺乳動物体内の標的部位を造影するＴｃ−９９ｍＦ！識シンチグラフィー造影剤を製造するためのペプチド試薬を包含する試薬を提供する。

このＴｃ−９９ｍの核特性および放射性特性が理想的なシンチグラフィー造影剤とするため、このアイソトープで標識することは本発明の利点である。このアイソトープは、１４０ｋｅＶの単一光子エネルギーおよび約６時間の放射性半減期を有し、１・Ｍｏ−””Ｔｃ発生機から容易に入手できる。先行技術で公知の他の放射線核種は、さらに長期の有効半減期を有するか（例えば、６７．４時間の半減期を有するｌＩＩ菖ｎ）または毒性である（例えば、ＩＩｌｌ）。

放射線標識結合部位と、本発明により提供されるチオール保運用基［（ｐ　ｇ　ｐ）’］に共有結合したチオールを包含するような部位に共有結合したペプチドとにおいて、該チオール保護用基は、同一または異なっていてもよくニーＣＨ！ −アリール、（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）ニ −ＣＨ−（アリール）１、（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）ニーＣ−（アリール）３、（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）ニーｃｌｌｔ−（４−メトキシフェニル）；−Ｃ１１−（４−ピリジル）（フェニル）！ニーＣ（Ｃ１ｌｘ）。

−９−フェニルフルオレニル； −Ｃ１１２ＮｌＩＣＯＲ（Ｒは非ｒＲ換または置換アルキルもしくはアリール）；−ＣＩＩｒＮＩＩＣＯＯＲ（ＲはジＩｒＲ換または置換アルキルもしくはアリール）ニーＣ０ＮＩ１１？（Ｒは非置換または置換アルキルもしくはアリール）。

−Ｃ１ｌｚ−８−ＣＩｌｚ−フェニルであるが、これらに限定されるものでない。

−Ｔましい保護用基は、式−ＣＩＩ　２−Ｎ　ＩＩ　ＣＯＲを有し、ここに、ｌくは１ないし８個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、あるいは低級アルキル、ヒドロキシル、低級アルコキン、カルボキン、または低級アルコキンカルボニルで置換されたフェニルである。最も好ましい保護用基は、アセトアミドメチル基である。

本発明の各特異的結合ペプチドを含有する具体例は、アミノ酸配列よりなる。

本発明で用いるアミノ酸なる語は、天然に生じるものおよびその他の全てのし− ならびにＤ−アミノ酸を包含させることを意図する。本発明により提供される特異的結合ペプチドよりなる試薬は、限定しないが、以下のものを包含する（以下（アミノ酸の単−略字は、ジー・ツバイ（Ｇ、　Ｚｕｂａｙ）、バイオケミストリー（１３ｉｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ）、（第２版）、１９８８年（マクミラン・パブリッシング・ニュー・ヨーク（ＭａｃＭｉｌｌｃｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　：　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）３３頁）：他の略字は表ｉの脚注に見い出すことができる）。本発明により提供される試薬のこのリストは例示的なものであって、限定またはは排除を意味するものではなく、本明細書中に開示されるペプチドの組合せまたはその同等物よりなる該試薬が本発明のいずれのキレート部位に共有結合してもよいこと、ならびに、本明細書中に開示したごとき結合基よりなるかかるペプチドおよびキレート基の組合せを包含することは本発明の範囲内であることをは当業者に容易に理解されるであろう。

多価結合部位は、本発明の該特異的ペプチド、該Ｔｃ−０９ｍ結合部位、またはその両方に共有結合している。本発明によりｔｍ供される多価結合部位は、特異的結合ペプチドまたはＴｃ−９９ｍ結合部位に共有結合しうる少なくとも２つのリンカ−官能基よりなる。かかる官能基は、限定しないが、第一級および第二級アミン、ヒドロキシル基、カルボン酸基およびチオール反応基を包含する。多価結合部位は、好ましくは、特異的結合ペプチドまたはテクネチウム−９９ｍ結合部位に共有結合しうる少な（とも３つの官能基よりなる。好ましい多価結合部位は、リジン、ホモリジン、オルニチン、アスパラギン酸およびグルタミン酸のごときアミノ酸、線状および環状のアミンおよびポリアミン：ポリカルボン酸：ならびにジーおよびトリマレイミドのごとき活性化さえたチオールを包含する。

また、その中で、該多価結合部位が、共有結合して分岐した多価結合部位を形成する多数の多価結合部位よりなる具体例が好ましい。本発明の目的には、「分岐した」多価結合部位なる語は、限定しないが、式：を有する多価結合部位を包含させることを意図する。

本発明の特異的結合ペプチドは、イン・ビトロで化学的に合成できる。かかるペプチドは、一般的にアミノ酸シンセサイザー上で有利に製造できる。本発明のペプチドは、当業者によく知られた技術を用いて、イン・ビトロの化学合成の間に、該放射線標識結合部位をペプチドに共有結合させておいて合成できる。共有結合の特異的部位が決定できるため、合成の開には該放射線標識部位に共有結合させたかかるペプチドが有利である。

本発明の放射ｎ標識結合部位は、ペプチド合成の間に標的特異的ペプチドに導入することもできる。ピクリン酸（Ｐ　１ｃ−）よりなる具体例［例えば、Ｐ　１ｃ−Ｇ　１ｙ−Ｃｙｓ（保護用基）−］については、該放射１−識結合部位を、合成において最後の（すなわち、アミノ−末端）残基として合成できる。加えて、ピコリン酸を含有する放射ｍｓ識結合部位を、リジンのε−アミノ基に共有結合させて、例えば、該ペプチド鎖のいずれの位置にも導入しうるαＮ（Ｆｍｏｃ）−Ｌｙｓ−εＮ　［Ｐ　１ｃ−Ｇ　１ｙ−Ｃｙｓ（保護用基）］を供してもよい。標的結合ペプチドへの導入の簡単な様式を提供するため、この配列は特に有利である。

同様にして、該ピコリルアミン（ｒ’１ｃａ）を含有する放射線標識結合部位［ −Ｃｙｓ（保護用基）−Ｇ　Ｉｙ−Ｐ　ｔｅａ］も、ペプチド合成の間に、配列［−Ｃｙｓ（保護用基）−Ｇｌｙ−］を該ペプチド鎖のカルボキシル末端に包含させることにより製造できる。該樹脂からの該ペプチドの切断の後、該ペプチドのカルボキシル末端を活性化し、ピコリルアミンにカップリングさせる。この合成経路は、反応性の側鎖官能基がマスクされた（保護された）ままであって、該ピコリルアミンの結合の間に反応しないことを要する。

該Ｐｉｃ−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−キレータ−を含有する小合成ペプチドの例を以下の実施例に提供する。本発明は、これらのキレータ−を実質的にいずれかのペプチドに導入して、中性錯体としてＴｃ−９９ｍを保持する放射線標識ペプチドを得ることをｔｕｂする。

また、本発明は、中性錯体としてＴｃ−９９ｍを保持した放射線標識ペプチドを供する、Ｔｃ−９９ｍで標識しうるビスアミンビスチオール（ＢＡＴ）キレータ −を導入する特異的結合手合成ペプチドも提供する。

放射性標識テクネチウムと本発明の試薬との錯体形成においては、テクネチウム体、好ましくはＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸の塩を、還元剤の存在下に本発明の試薬と反応させる。好ましい還元剤としては、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンが挙げられ：Ｍも好ましい還元剤は塩化第一スズである。さらなる好ましい具体例において、該還元剤は同相還元剤（ｓｏｌ　ｉｄ− ｐｈａｓｅｒｃｄｕｃｔｎｇ　ａｇｅｎｔ）である。便宜には、錯体およびがかる錯体を製造する手段は、予め定めた隈の標識すべき本発明の試薬と、該試薬を１’ｃ−９９ｍで標識するのに１分な隋の還元剤とを含有する密閉バイアルよりなるキ月・形管で提供される。別法として、本発明の試薬と、子島形成させたテクネチウムのラービル錯体およびトランスファーリガンドとして公知の他の化合物とを反応させることによって該錯体を形成してもよい。このプロセスは、リガント交換として公知であって、当業古によく知られている。該ラービル錯体は、例えば、酒石酸、クエン酸、グルコネートおよびマンニトールのごときトランスファーリガンドを用いて形成しつる。本発明で１川なＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸塩中には、ナトリウム塩のごときアルカリ金礪塩、またはアンモニウム塩もしくは低級アルキルアンモニウム塩が包含される。

本発明の好ましい具体例において、テクネチウム−９９ｍ−識試薬を製造するためのキットが提供される。適量の試薬を、き該試薬をＴｃ−９９ｍで標識するのに十分な量の塩化第一スズまたは固相還元剤のごと還元剤を含有するバイアルに導入する。適量の（例えば、酒石酸、クエン酸、グルコネートまたはマンニトールのごとき）前記したトランスファーリガンドも含有できる。本発明に関するテクネチウム−９９ｍｆｉ識シンチグシフィー造影剤は、適量のＴｃ−９９ｍまたはＴｃ−９９ｍ錯体を該バイアルに導入し、以下の実施例４に記載の条件下にて反応させることにより製造できる。また、該キットは、例えば、浸透圧を調整するための医薬上許容される塩、緩衝液、保存料等のごとき通常の医薬調整物質も含ず１てきる。該キットの成分は、液状、凍結または乾燥形管でもよい。好ましい具体例において、キット成分は凍結乾燥形管にて提供される。本発明に関する放射ｅｉ＋ｗ識ソンチグラフィー造影試薬は、以下の実施例３紀載の条件下に反応させることにより製造してもよい。

本発明により提供される放射線標識試薬は、適当な放射能を有して提供される。

Ｔｃ−９９ｍ１＋に耐性錯体の形成においては、ｍＬ当たり約０．Ｏｌミリキューリー（ｍｃｉ）ないし１００ｍｃｉの濃度の放射能を含有する溶液中の放射性鎖体を形成するのが一般的に好ましい。

本発明により提供されるテクネチウム−９９ｍ［識シンチグラフィー造影剤は、哺乳動物体内部位を視覚化するのに用いることができる。本発明によると、該テクネチウムー９９ｍｆｆ１識シンチグラフイー造影剤は、単一ユニット注射用量にて投−リする。本発明によると、放射線標識の鐘に、滅ｍセーライン溶液または血漿のごとき当業者に公知のいずれの通常の担体を利用しても、種々の器官、腫瘍等を診断的に造影する注射溶液を製造することができる。一般的に、投与すべき該ユニット用量は、約０．０１　ｍＣｉないし約１００ｍ（ｊ、好ましくは、１ｍＣ１ないし２０ｍＣ１のＳｔ射能を有する。ユニット投与量で注射すべき溶液は、約００１ｍＬないし約１０ｍＬである。静脈内投与した後に、数分以内に該器官または腫瘍のイン・ビポ造影が起こりつる。しかしながら、所望により、該放射線標識試薬を磨者に投与した後、数時間またはさらに長（においてさえ造影が起こりうる。

はとんどの場合において、投与した用量のうち十分な量が、約０．１時間以内に造影すべき領域に蓄積して、ノンチフォトをとるのを可能とするであろう。診断目的のノンチグラフィー造影のいずれの常法も、本発明により利用することができる。

本発明により提供される該テクネチウムー９９ｍ標識試薬および錯体は、セーライン水性媒質のごとき静脈内注射用のいずれの通常の媒質、または血液血漿媒質中にて静脈内投与してもよい。また、かかる媒質は、例えば、浸透圧を調整するための医薬上許容される塩、緩衝液、保存料等のごとき通常の医薬調整物質も含有してもよい。好ましい媒質は、ノーマル・セーラインおよび血漿である。

これらの化合物を製造し標識する方法は、以下の実施例にさらに十分に説明されている。これらの実施例は、前記した方法のある種の態様および有利な結果を説明している。これらの実施例は、例示的に示されており、限定するものではない。

実ＪＩＮＩ無水’Ｉ’１ｌＦ（２Ｌ）に溶解したトリフェニルメチルメルカプタン（３６２，９４ｇ。

１．３１ｓｏｌ、１００＠０１％）を、アルゴン下に水浴中で冷却した。水素化ナトリウム（油中（７）６０％；５４．３９ｇ、１．３５ｓｏｌ、１０４ｎｏｌ％）を、少量ず−）２０分間にわたり添加した。次いで、２−ブロモ−２−メチルプロパナール（２０Ｇ、　０６ｇ、１．３６＋ｔｏ＋、１０４　ｓｏ１％、スチーブンス（Ｓ　Ｌｅｖｅｎｓ）とギリス（Ｇｉｌｌｉｓ）、１９５７年、ジャーナル・オン・アメリカン・ケミカル・ソサイエティ−（Ｊ。

Δｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓ　ｏｃ、　）、ｆｆ１７９＠：３４４８−５１頁）を、２０分間にわたり徐々に添加した。該反応混合物を室温まで温度上昇させ、１２時間撹拌した。該反応を水（ＩＬ）でクエンチし、ジエチルエーテル（３Ｘ　Ｉ　Ｌ）で抽出した。該エーテル抽出物を合わせ、飽和ＮａＣ１溶！（５００ｍＬ）ｔ’洗浄し、Ｎａ１Ｓ０４．、Ｉ：で乾燥し、濾過した。該溶媒を減圧下に留去して、濃厚な橙色の油を得た。該粗油をトルエン（２００ｍＬ）に溶解し、熱ヘキサンで２Ｌに希釈した。その混合物を焼結ガラス漏斗を通して濾過し、 −５″に１２時間冷却した。生成した白色の結晶性固形物を濾過により回収して、２６６．３６ｇの標題化合物（収率５９％）を得た。得られた化合物の融点は、８３−８５℃と測定された。核磁気共鳴特徴付は実験により以下の分子特性を得た： ’ＨＮＭＲ（３００ＭＩＩ　ｚ、　ＣＤＣＩ　ｓ）　：δ１．２４（ｓ、６１１．２ＣＩＩｓ）、７．２−７、３５（ｍ、　９１１）、　７．５９−７．６２（ｍ、　６）菖）、　８．６９（ｓ、１１．−ＣＯＨ）”ＣＮＭＲ（７５ＭＩＩｚ、ＣＤＣｌ、）：δ２２．８６．５５．６６．６７．４８゜１２６．８５．１２７．７５．１２９．７２，１４４．７９．１９７．３１エチレンジアミン（ｌ、３ｍＬ、０．０１９４ｍｏｌ、１００■ｏ１％）を、メタノ−１しく４０ｍ１）および無水ＴｌｌＦ（４０ｍＬ）に溶解した２−メチル−２−（トリフェニルメチルチオ）プロパナール（１３，８６ｇ、領０４０１ｍｏｌ、２０５ｓｏ１％）にアルゴン下にて添加し、酢酸を滴下することにより該ｐＨをｐＨ５に調整した。その溶液を２０℃にて２０分間撹拌した。シアノホウ水素化ナトリウム（１，２２ｇ１０、０１９４ｍｏｌ、１００■ｏ１％）を添加し、その反応物を室温にて３時間撹拌した。

シアノホウ水素化ナトリウム（１，０８ｇ）をさらに添加し、その反応物を２０ ℃にて１７時間撹拌した。シアノホウ水素化ナトリウムの最後封部（１，０２ｇ）を添加し、その反応物をアルゴン下にて６時間加熱還流した。その反応を０．５ＭのＩＩｃ　Ｉ　（１００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（２Ｘ１００ｍＬ）Ｔ抽出した。

その有機抽出物を合わせ、順次、２ＭのＮａＯＨ（６０ｍｌ）、飽和ＮａＣｌ溶液（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＮａｘＳＯｓ）Ｌ、濾過した。その溶媒を減圧下に留去して、１６．６７　ｇの粗生成物が得られ、これをトルエン／ヘキサンから結晶化させて１０．２０ｇ（収率７３％）の標題化合物の白色結晶を得た。

得られた化合物の融点は、８３−８６℃と測定された。７２０Ｍｌ１＋）のｍ／ｚをＦＡＩ３ＭＳ分析て得た。核磁気共鳴特徴付は実験により以下の分子特性を得た：’ＩＩ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ５）：δ１．　Ｉ　２（ｓ、　１２［１，４Ｃ１１ｓ）、　１．６４（ｓ、　４　Ｈ，Ｎ−ＣＨｔ−Ｃ（Ｍｅ）ｔ−８）、　２．５２（ｓ、　４　Ｉｆ　Ｎ−ＣＨｔ−ＣＨｔ−Ｎ）。

５、３１（８，２１１，２−Ｎ１１）、　７．１２−７．３０（ｍ、１８１１．Ａｒ）、７．６２−７．６５（ｍ、　１２Ｈ，Ａ　ｒ）ｃ、Ｎ−（５−カルボエトキシペンチル）−Ｎ、　Ｎ’−ビス（２−メチル−２ −トリフェニルメチルチオプロピル）エチレンジアミンの合成に、Ｃｏｎ（１，９２ｇ、１３．９ｓｓｏｌ、　１００■ｏ１％）、続いて５−ブロモバレリン酸エチル（３，３０ｍＬ、　２０８１ｎｏｌ、１５０ｍ０１％）を、ＣＨｓ　ＣＮ　（６０ｍ　Ｌ　）中のＮ、Ｎ−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）エチレンジアミン（１０，０３ｇ、１３．９ｓｍｏｌ）に添加した。その反応物（３，３０ｍＬ、２０．８ｍ５ｏｌ、１５０■ｏ１％）をアルゴン下に一晩加熱還流した。次いで、その溶液を濃縮してペーストとし、０．２５ＭのＫｏｊｉ（１００ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍ１．）の間に分配させた。その水層を酢酸エチル（１ｘ５０ｍいで抽出し、合わせた酢酸エチル胴を５０ｍＬの水およびＮａＣｌ溶液（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ＝Ｓ（）、て乾燥し、櫂色の油に濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３００ｇのフラッシュシリカ、１００％のＣｌ１ｃ１ｓがう５９ｆｉ１７）ＭｅＯＩＩ／ＣｌＩＣｌ５）ｌ：より精製して、純粋なＩＩＩＩＩＮ化合物（７，７５ｇ、収率６６％）を得た。（化合物Ｃｓ５１１＠＋Ｎ＊０ｚＳ２の計算分子Ｊｔ８４９．２４に比して）８４９の（ＭＨ＋）をＦＡＢＭＳ分析で得た。

１ＭのＫＯＨ（２５ｍＬ、　２５．０１１＋ＩＯ１，２７４ｍｏ１％）、続いて水（２５０ｍＬ）を、ジオキサン（２００ｍＬ）巾のＮ−（５−カルボエトキンベンチｌり−Ｎ、Ｎ’−ビＮクー−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）エチレンジアミン（７，７５ｇ。

９　］３市ｎｌ）に添加した。次いで、均一な溶液が得られるまで撹拌しつつ、ジオキサンを滴下した。その反応物を、−晩徐々に加熱還流した。ロータリーエバポレーターによりほとんどのジオキサンを留去し、ＩＭのＫＨ，ＰＯ４および飽和Ｎａ１ｌＣＯｓで溶液のｐＨを〜７〜８に調整した。次いで、該溶液を酢酸エチル（３ｘ７５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＮａＣｌ溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２５Ｏ＜で乾燥し、濃縮して、泡伏物／固形物（６，３５ｇ、収率８５％）を得た。

上記反応カラノ粗精製物に、（ＢＯＣ）２０（３，３５ｇ、　１５．４＋ｕ＋ｏｌ、　２００Ｉｌｏ１％）、ＣＨｓＣＮ（５０ｍＬ）および塩化メチレン（５０ｍＬ）、続いてトリエチルアミン（１，０ｍＬ、７．２＋ｎｏｌ、９３＋ｏ１％）を添加した。その反応物を、７Ａｔゴン下に室温にて一晩撹拌した。次いで、その反応溶液を濃縮して、水（１００ｍＬ）および酢酸エチル（５０ｍＬ）の間に分配させた。その水層を酢酸エチル（ＩＸ５０ｍＬ）で抽出し、合わせた酢酸エチル層を、５％クエン酸およびＮａＣｌ溶液（各々５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、乾燥（Ｎａ２ｓＯ４）して橙色油に濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２００ｇのフラッシュシリカ、１００％のＣＤＣｌ、から５％のメタノール／クロロポルム）により精製して、純粋な標題化合物Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ’−（５〜カルボキシペンチル）−Ｎ、　Ｎ’−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）エチレンジアミン（２，５８ｇ、収率３６％）を得た。

（化合物Ｃｓ５１１ｓ＊ＮｔＯｎＳ＊の計算１９２１．３１に比して）９２１の（ＭＩＩ＋）をＦΔＢＭＳ分析により得た。

ａ、Ｎ、Ｎ−ビス−［２−（４−メトキシベンジルチオ）−２−メチルプロピルＪ−エチレンジアミンの合成メタノール（５００ｍＬ）中のＮ、　Ｎ’−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）エチレンジアミン（１１，２３ｇ、４７．５ｓｗｏ１；ディジオ（ＤｉＺｉｏ）ら、１９９１年、バイオコンジュゲート・ケミストリー（［３ｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｃｈｅｗ、　）ｌ　２　拳：　３５３頁およびコルビン（Ｃｏｒｂｉｎ）ら、１９７６年、ジャーナル・オン・オーガニック・ケミストリー（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｃｓ、）％４　ＩＩ：　４８９頁参照）の溶液を、氷／水浴中にて冷却し、次いで、気体アンモニアで４５分間にわたり飽和させた。これに、塩化４−メトキシベンジル（１７，０ｍＬ、１２５龍ｏ１．２６４ｓ＋ｏ１％）を添加した。

この反応物を、アルゴン下で撹拌しつつ一晩放置して室温に温めた。この溶液を濃縮してペーストととし、次いで、ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）および０．５ＭのＫＯＨ（２００ｍＬ）の間に分配させた。さらに、その水層をジエチルエーテル（２Ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、ＮａＣｌ溶液で洗浄し、清澄無色な油性物に濃縮した。該油性物をジエチルエーテル（２００ｍＬ）に溶解し、次いで、さらなる沈澱が見当たらなくなるまでジオキサン中の４．０ＭのＨＣＩで酸性化した。濾過によりその白色沈澱物を収集し、ジエチルエーテルで洗浄した。該白色固形物をｐｎ〜２にて熱水から再結晶させた。濾過によりその生成物を収集し、２９．９４ｇのモノ−およびジーＨＣＩ塩の混合物を得た。

該ＨＣＩ塩を、ＩＭのＫＯＨ（１００ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）の間に分配させた。

その水層を酢酸エチル（２ｘ３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＮａＣ１溶液で洗浄し、Ｎａ２ｓＯ４で乾燥し、濃縮して淡黄色部の遊離塩基として純粋な生成物を得た（１８．５３ｇ、収率８２％）。核磁気共鳴特徴付は実験により以下の分子特性を得た・ ’ＨＮＭＲ（３００ＭＩＩｚｌ、ＣＤＣＬｓ）：δ７．２５（ｄ、　４　ＩＩ、　Ｊ　＝９）、　６．８３（６，４１１，Ｊ　＝９）、３．７８（ｓ、６１１）、３．６７（ｓ、４ＩＩ）、２．６３（ｓ、４１１）。

２．５６（ｓ、ｉｌ）、Ｌ３４（ｓ、１２１＋）ｂ、Ｎ−（５−カルボエトキシペンチル）−Ｎ、　Ｎ’−ビス−［２−（／ｌ−メトキシベンジルチオ）−２− メチルプロピル］エチレンンアミンの合成ＣＨｓＣＮ（５０ｍＬ）中のＮ、Ｎ− ビス−［２−（４−メトキンベンジルチオ）−２−メチルプロピル（１．２１ｇ、８．７５關０１、ｌ　Ｑ　ｌ　ｓｏ１％）、続いて５−ブロモ吉草酸エチル（２．８０ｍｌ、１７，７１１１１０１、２０４■ｏ１％）を添加した。その反応物を還流温度にて一晩攪拌し、次いで、真空中にてペーストに濃縮した。その残渣を、酢酸エチル（ｌｏＯｍｌ）および（）　５ＭのＫＯＩＩ（ｌｏＯｍＬ）の間に分配した。その水層を酢酸エチル（１．Ｘ５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＮａＣｌ溶液（５０ｍＬ）でａ浄し、Ｎ　ａ　２　Ｓ　０　４で乾燥し、黄色部（〜６ｇ）に濃縮した。純相分取用ＩＴＰＬＣ（２５分間にわたり、１００％のＣＩＩＣＩｓから５％のメタノール／クロロホルム）により精製して、純粋な標題化合物（１．７５９ｇ、収率３４％）を得た。

（Ｃ３３１１□Ｎ　２　０　ｓ　Ｓ　２の計算値６０４．９０に比して）６０５の（ＭＩｌ＋）をＦＡＩ３ＭＳ分析により得た。核磁気共鳴特徴付は実験により以下の分子特性を得た：盲ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌｓ）：６７．２５（ｄ．４Ｈ．Ｊ＝８．５）。

６、　８　３（ｄ．　４比Ｊ＝８．５）、４．１３（ｑ．２Ｈ，Ｊ＝７）、３．７９３（ｓ，３Ｈ）。

３、　７８９（ｓ．　３Ｈ）、　３．　７　４（ｓ．２［１）、　３．　６　７（ｓ，　２１１）、　２．　６（ｍ．　１　０＋Ｉ）。

２、３Ｈｔ．２１＋．Ｊ＝７）、１．６（ｍ．２＋（）、１．５（ｍ，　２］１）、　１．、　３　４（ｓ．　１　２Ｈ）。

１、２８（ｔ．３１１．Ｊ＝７）ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のＮ−（５−カルボエトキノペンチル）−Ｎ．Ｎ’−ビス −［２−（１１−メトキノベンジルチオ）−２−メチルプロピル］エチレンジアミン（５８６ｍｇ。

０、　９　６　９ｓｓｏＬ）ｌ：、水（３０ｍＬ）およびＩＭのＫＯＨ（２．　５ｍＬ，　２．　５１１＠０１、２６０＋ｎｏ１％）を添加した。その均一な溶液をゆっくりぢと一晩加熱還流した。

次いで、その溶液を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターにてＴＩＩＦを留去した。その残渣を、＋１２０で５０ｍＬに希釈し、該ｐＨをＩＭのＩＩＣＩで〜２〜３に調整した。その溶液を酢酸エチル（３Ｘ３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＮａＣ　Ｉ溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ！ＳＯ４で乾燥し、濃縮して未精製酸（４２２ｍｇ、収率７５％）をＩりた。

前記反応からの該粗生成物に、ＣＩＩｓＣＮ（４０ｍＬ）および（１３０Ｃ）＊０（２４０ｍｇ、１．　１　０＋ｎｏ１、１５Ｑ曽ｏ１％）、続いてトリエチ！レアミン（０．２００ｍＬ、１．４３＋＋＊ｇｌ、１　９　６■ｏ１％）を添加した。その均一な溶液を、アルゴン下に室温にて一晩撹拌した。次いで、その溶液をペーストに濃縮し、酢酸エチル（２５ｍｌ）およびＩＭのに１１２１’Ｏ＜（２５ｍｌ、）の間に分配させた。その有機層を５９１のクエン酸（２Ｘ２５ｍＬ）およびＮａＣＩ溶ａ（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎ　ａ　２　Ｓ　Ｏ　ａて乾燥し、黄色油性物にＷＡ縮した。フラッシュクロマトグラフィー（５０ｍｌ、のフラノンコノリカゲル、１００％のクロロホルムから１５％のメタノール／クロロホルム）により精製して、純粋な障題化合物Ｎ−１３ｏｃ−Ｎ”−（５−カルボキノベンチ、ル）−Ｎ．　Ｎ’−ビス−［２−（４−メトキンベンジルチオ）− ２−メチルプロピル］エチレンジアミン（３４４ｍｇ、収率７０％）を得た。（ＣｓｓｌｌｓｓＮｔＯｓＳｔもｊｌＮ．Ｉ！！６　７　６．　９　７に比して）６７７の（Ｍ１１＋）をＦＡ１３ＭＳ分析により得た。

咳磁気共鳴特＠付は実験により以下の分子特性を得た’ｌＩ　ＮＭＲ（３００ＭＩ（ｚ，ＣＤＣＩｓ）：６７．　２　０（ｄ．　４　Ｈ．　Ｊ　＝７）、　６．　７　９（ｄ．、ＩＩ＋．）＝７）、　３．　７　５（５．　３１１）、　３．　７　／ｌ（３．　３１１）、　３．　６　８（Ｍ，旧■）。

３、　３　５（Ｍ．　４１１）、　２．　６　５（Ｍ．　２１１）、　２．　５３（Ｍ．　４１１）、　２．　３　０Ｍ，　２１１）。

１、　５　９（Ｍ．　２１１）、　１．４　３（８．　１　１　ＩＩ）、　１．　３０（３．　６１り．　１．　２６（３．　６１１）Ｃ．１３ＡＴ−ＢＭ（Ｎ −［２−（Ｎ’．Ｎ−ビス（２−マレイミドエチル）アミノエチル月−ＢＡＴ− ＢＭは以下のごと（製造した。ＢＡＴ酸（Ｎ’−（Ｌ−ブトキシカルボニル）− Ｎａ．Ｎ’−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−６．９−ジアザノナン酸）（１　０．　０　３　ｇ，　１　０．　８　９ｓｓｏＬ）および７５ｍＬの乾燥塩化メチレン（ＣＩｌ．Ｃ　Ｉ　２）を、磁性攪拌機およびアルゴン・バルーンを装備した２５０ｍｌの丸底フラスコに添加した。この溶液に、ジイソプロピルカルボジイミド（３　４０ｍｌ、２１　７關ｏ１、１９９ ■ｏ１％）、続いてＮ−ヒドロキシースクシンイミド（３．１２ｇ、２７　１關ｏ１、２４９ｍ０１％）を添加した。この溶液は、１時間以内に濁り始めることが観察され、さらに室温にて合計４時間攪拌しつつインキュベートした。次いて、３ＱｍＬの塩化メチレン中のトリス（２−アミノエチル）アミン（３　０　ｍ　ｌ−、２００ｍｍｏ１、１８４０ｍｏ１％）の溶液を添加し、撹拌を一晩続けた。

次いで、その反応混合物を減圧下に濃縮し、その残渣を酢酸エチル（１５０ｍＬ）および領５Ｍの炭酸カリウム（ＫｚＣＯｓ：　１５０ｍｌ、）の間に分配させた。有機−を分離し、ブラインで洗浄し、濃縮して粗生成物Ｎ−［２−（Ｎ’．Ｎ−ビス（２−アミノエチル）アミノエチル）］−Ｎ’−（Ｌ−ブトキンカルボニル）−Ｎａ．Ｎ’−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−６．　９−ジアザノナンアミドを泡状物／浦として得た。

この粗生成物を、磁性撹拌気体を装備し、３００ｍＬのＴＩＴＦを含有した１、０００ｍＬの丸底フラスコに添加し、次いで、３０ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム（ＮａｌｌＣＯ３）、ｌｏＯｍＬの水およびＮ−メトキンカルボニルマレイミド（６．　１　３　ｇ、３　９．　５１！ＩＩｏｌ、３６３■ｏ１％）を添加した。この均一な混合物を室温にて一晩撹拌した。ロータリー・エバポレーターにより該混合物からＴＨＦを留去し、その水性残渣を酢酸エチル（２Ｘ７５ｍＬ）で２回抽出した。これら抽出物の合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、媒質濾過器を通して濾過し、約１２ｇの粗生成物に濃縮した。液体クロマトグラフィー（２５０ｇの二酸化ケイ素／クロロホルム→クロロホルム中の２％メタノールのグラジェントにて溶出）によりｔｉＩＩ製して、５　３ｇの純粋な精製物（Ｎ−［　２　−（Ｎ’　、　Ｎ’　−ビス（２−マレイミドエチル）アミノエチル）］）−Ｎ”−（ｔ−ブトキンカルボニル）−Ｎ６．Ｎａ−ヒス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−６．９−ジアザノナンアミド（収率４０％に相当）、あわせて、再精製により純粋な生成物が得られる粗生成物的５ｇも得た。精製した生成物の化学分析は、以下のごと＜ＢＡＴ−１１Ｍとしてのそれを同定した ’ＩＩ　ＮＭＲ（２　０　０ＭＩＩ　ｚ，　ＣＩ）Ｃ　Ｉ　３）・６０．９１（１２１１，ｓ）、１．３８（９比ｓ）、　１．　２−　１．　６（４　１１．ｍ）、　２．　０６（２１１．　ｓ）、　２．　１　８（２１１，　Ｌ，　Ｊ　＝７）。

２３１（４比ｍ）、２．５５（２１１．　Ｌ．Ｊ＝５）、２．６０４［１．　ｔ．Ｊ＝６）、２．９９（２　Ｈ．　ｓ　）、　３．　０−３．　３（旧！訓）、　３．　４　６（４１１，　ｔ．　Ｊ　＝６）、　６．　４　９（−ＮＨ，　ｔ。

Ｊ＝４）、６．６４（４　比　ｓ）、７．　１−７．３（１　８　菖１．ｍ）、７．６（１　２１１，　ｔ，　Ｊ　＝ｒ）、［ＢΔＴ］−結合（εＮ）Ｌｙｓ（ αＮε−Ｆ＠ｏｃ）［Ｎ−ε−（Ｎ書−ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎａ．Ｎｌ ′−ビス［２−メチル−２−（トリフェニルメチルチオ）プロピル］ー６．９− ／アザノナノイル）−Ｎ−αーＦｓｒｘニー１ｙｓｉｎｅの合成撹拌機およびアルゴン・バルーンを装備した１００ｍ１．の−首丸底フラスコを、５ＱｍＬのＣＩｌ．ＣＬ中のＮ’−（ｔ−ブトキノカルボニル）−Ｎａ，Ｎａ−ビス［２−メチル−２（トリフェニルメチルチオ）プロピル］−６．　９−ジアザノナン酸（ＢＡＴ酸：３、　２　９　ｇ，　３．　５　７＋＋＋＊ｏｌ）で室温にて満たした。これに、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＴＣ＋５８０μし、３，　７　Ｑ＋ａｓｏｌ、１０４■ｏ１％）、直後に続いてＮ−ヒト′ロキ／スクシンイミド（ｌＩＯｓｕ；４　３　２ｍｇ，　３．　７　５ｓｓｏＬ，　１０　５■ｏ１％）を添加した。その反応物を室温にて一晩撹拌し、その間に白色沈殿物が発生した。

その混合物を濾過し、その濾液を固形泡状物に濃縮した。ｌｏＯｍＬの丸底フラスコ中のその粗泡状物を、７５ｍＬのジメトキシエタンおよび水の２：１混合物に溶解した。コノ均一の溶液に、Ｎ−ａ−Ｆｍｏｃ−塩酸リジン（１．５２ｇ，３．７５ｍｍｏ１、　１０５■ｏ１％）、　続いてＫｘＣＯｓ（５　１　７ｍｇ，　３．７　４ｓｓｏＬ　１０　５■ｏ１％）を添加し、その黄色溶液を室温にて一晩撹拌した。次いで、その溶液を、ｌｏＯｍＬの酢酸エチルおよびｌｏＯｍＬの水を含有する２５０ｍＬのエルレンマイヤー・フラスコ（ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ　ｆｌａｓｋ）に注いだ。その有機層を分離し、水層をさらに５ＱｍＬの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブライン（ｌｏＯｍＬ）で１回洗浄し、Ｎ　ａ　ｔ　Ｓ　Ｏ　Ｊ上で乾燥し、黄色固形物に濃縮した。この粗生成物を低圧液体クロマトグラフィー（１５０ｇのＳｉＯｌ、ＣＨＣＩ，中のＣＨＣＩｇ− ＞１０％メタノールで溶出）により精製した。このように、３．１２ｇの命名した化合物を製造した（収率６９％）。該精製生成物の化学分析により、以下のごとくその同定が確認された： ’ＩＩ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ５）：６０．８８（１２１−１，ｓ、ｂｒｏａｄ）、１．０５−１．４５（１９１１，ｍ）、１．８−２．Ｈ４比ｍ）、１．８−２．４７（４１１，ｍ）、２．７５−３、２（６ＩＩ、　ｍ）、　３．９−４．３（４１１９ｍ）、　７．２（２２１１，ｍ）、７．６（１６１１，ｓ。

Ｉ）ｏｕｎｄ）ＦＡＢＭＳのＭＴＩ’により１２７０．６と予想され、１２７２であることが見い出された。

スタークー・バー、還流コンデンサーおよびアルゴン・バルーンを付した２５０ｍ１、の−口丸底フラスコを、５０比ｔのＣ夏１３ＣＮおよび３ＱｍＬのジオキサン中のＮ＋、Ｎ＋−ビス［２−メチル−２−（トリフェニルメチルチオ）プロピル］−エチレンジアミン（８八Ｔ−１：　ＩＯ，Ｏｇ、１’１．０１ｍｏｌ）で満たした。これに、Ｎ−（５−ブロモペンチル）−フタルイミド（８，０４ｇ、２７．１■■ｏｌ、１９４醜ｏ１％）、続いてに、Ｃ０３（２，９５ｇ、２１　、３ｓｍｏｌ、　ｌ　５２ｍｏ１％）を添加した。その混合物をアルゴン下にて２日間加熱還流した。次いで、その反応混合物を濃縮し、その残渣を１５０比ｔの水および１５０比ｔの酢酸エチルの間に分配させた。その有機層を分離して、（約ｐＨｌＯの）水層を５０比ｔの酢酸エチルでさらに抽出した。合わせた有機層をブライン（７５比ｔ）で１回洗浄し、Ｎ８□５０４上で乾燥し、油性物に濃縮した。低圧液体クロマトグラフィー（３００ｇのＳｉｎ、、ｃ＋ｔｃ＋ｓ中のＣＩＩ　ＣＩ　ｓ−＞　２％のメタノールで溶出）により精製し、９．２０ｇの９−フタルイミド−Ｎ’、Ｎ’−ビス［２−メチル−２−（トリフェニルメチルチオ）プロピル］−１゜・１−ジアザノナンを黄色泡状物（収率７０％）として得た。この中間体の精製した生成物の化学分析により、以下のごとくその同定が確認された：’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、　ＣＤＣＩｓ）：δ１．０１（６１１，ｓ）、１．０３（６Ｈ，ｓ）。

１、１５−１．４（２１１，Ｌ）、　１．９８（２１１，ｓ）、　２．１０（２Ｈ，ｓ）、　２．２８（２Ｈ。

ｍ）、　２．４５（３１１，ｍ）、　３．６８（２１１，ｔ）、　７．１５−７．３５（１８１Ｃｍ）、　７．６２（１２比ｔ）、　７．７２（２１Ｃｍ）、　７．８５（２１（、ｍ）ＦＡＢＭＳのＭｎ２により９３５．４と予想され、９３６であることが見い出されｔこ。

スタークー・バーを付した５００比ｔの一首丸底フラスコを、７５比ｔのＣＨｓＣＮおよび２０比ｔのｃｎｔｃ　Ｉ、中の９−フタルイミド−Ｎ１．Ｎ４−ビス［２−メチル−２−（トリフェニルメチルチオ）プロピル］−１，４−ジアザノナン（８，８３ｇ。

９、４３ｓｍｏｌ）で満たした。これに、ＫｔＣＯｓ（１，３０ｇ、９．４１＋５ｓｏｌ、１００ｍｏ１％）、続いて、重炭酸ジー【Ｃ「【−ブチル（２，１５ｇ、９．８５龍ｏｆ、　１０４ｗｏ１％）を添加し、その反応物を室温にて一晩撹拌した。次いで、その反応混合物を濃縮し、古々１００ｍＬの水および酢酸エチルの間に分配させた。その有機層を分離し、水層を５０比ｔの酢酸エチルでさらに抽出した。合わせた有機層をブライン（７５比ｔ、）で１回洗浄し、Ｎ　ａ　ｔ　Ｓ　Ｏｓ上で乾燥し、濃縮して９．６９ｇの未精製９−フタルイミド−Ｎ ’−（ｔ−ブトキンカルボニル）−Ｎ’、Ｎ’−ビス［２−メチル−２−（トリフェニルメチルチオ）プロピル］−１゜４−ジアザノナンを黄色泡状物（９９％粗収率）として得た。さらに精製することな（この粗生成物を用いた。

スタークー・バーおよび還流コンデンサーを付した２５０比ｔの一首丸底フラスコを、２５比ｔのＴｌＩＦ中の９−フタルイミド−Ｎ’−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１．Ｎ４−ビス［２−メチル−２−（トリフェニルメチルチオ）プロピル］−１，４−ジアザノナン（５，５０ｇ、５．３１９．４３ｓｓｏｌ）で満たした。これに、１００比ｔのエタノールおよび５ｍＬの水を添加した。水の添加は、出発物質の溶液からの析出を引き起こした。ヒドラジン水和物（１，２ｍＬ、　２４．７ｗｏｌ、４６６＠ｏ１％）を添加し、その反応物を２日間加熱還流した。その反応混合物を濃縮し、各々１００ｍＬの水および０．２５ＭのＫ２ＣＯ２の間に分配させた。その有機層を分離し、ブライン（７５比ｔ）で１回洗浄し、Ｎ　ａ　１　Ｓ　０４上に乾燥し、固形泡状物に濃縮した。その粗生成物を、低圧液体クロマトグラフィー（１００ｇのＳｉｎ、、ＣｌＩＣＩｎ−＞ＣＨＣｌ３中の５％メタノール、ＣｌＣｌ、中の２００比ｔの２％トリエチレナミンで予め処理したカラム）により精製し、３．２７ｇの純粋なＮ’−（ｔ−ブトキンカルボニルル］−１．　４．　１０−トリアザデカンを黄色泡状物として得た（収率６８％）。

精製生成物の化学分析により以下のごとく同定が確認された：’＋ｌ　ＮＭＲ（３００ＭＩＩｚ，　ＣＤＣ　Ｉｓ）　：δ０．　９（１２＋１，　ｓ）、　１．　２（６比ｓ）。

１、３６（９１１，ｓ）、２、０５（４［１，ｍ）、　２．　２４（２１１，　Ｌ）、　２．　３　１（２１１．　ｔ）。

２、　６　２（３　Ｉｆ．　ｔ　）、　３．　０（２１１．　ｓ．ｂｒｏａｄ）、　３．　１（２１１．　ｓ．ｂｒｏａｄ）、　７．　２（P８　Ｈ。

ｍ）、　７．　６（　１　２１１，　Ｌ　）ＦＡＢＭＳのＭｌｌｏにより！３０５．５と予魁！され、９０６。

５であることが見い出された。

実施例２５０比ｔの飽和重炭酸ナトリウム水溶液に溶解し、水浴中にて冷却したトリス（２−アミノエチル）アミン（１．４９比ｔ、ｌＯｍｓｏｌ）を、Ｎ−カルボメトキシマレイミド＜４．　８　０　８　ｇ、３１−順【）で処理した。その混合物を氷」二にて３０分間撹拌し、次いて、室温にてさらに３０分間撹拌した。次いで、その混合物をジクロロメタンおよび水の間に分配させ、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、蒸発させて３．４４２ｇの生成物を得た。逆相薄層クロマトグラフィー（ＲＰ−ＴＬＣ）に付して、実質的に１スポツト（アセトニトリル＋　０．５Ｍの塩化ナトリウム１：１にてＲ，＝０．　６　３）を得た。この生成物３．　９　４ｓｓｏｌ（１．　８　１　７　ｇ）を２０比ｔのテトラヒドロフランおよび２　０　ｍ　Ｌの飽和重炭酸ナトリウムに溶解し、２時間混合した。

次いで、その反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配させた。その有機層を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥し、濾過した。その酢酸エチル溶液をヘキサンで希釈し冷却した。濾過により固形ＴＭＥＡを収集し、乾燥して８３２ｍｇを得た。該生成物の化学分析より、以下のごとくＴＭＥＡの同定を確認した：１■Ｉ　ＮＭＲ（ＣＤＣ　］　ｓ）：２．　６　５（　ｔ　ｒ．　２１１）、　３．　４　５（　ｔ　ｒ．　２Ｎ）、　６．　６４（ｓ。

２　ＩＩ）１３Ｃ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）、３５．５．５１．５．１３３．９．１７０．４２、ＴＭＥＢ（４−［１−（２−トリルスルホニルメチル）エチニルカルボニル］安息香ローソン（Ｌａｗｓｏｎ）および共同研究者の方法（１９９０年、バイオコンジュゲート・ケミストリー（［３　ｉｏｃｏｎｊｕｇａＬｅ　ＣｈｅｓｉｓＬｒｙ）！ｌ’ｌ　ｌ　ＩＪ　：　３　６頁）を用いて、２−チオクレゾールから４−（ビス−（２−トルエンチオメチル）アセチル）安息香酸を製造した。

得られた化合物の同定は、以下のごとく化学分析により確立した：ＦＡＢＭＳ　：ＭＨ’＝４３６ ’ＩＩ　ＮＭＲ（ＣＤＣ　Ｉ　３）＝２．　６　２（ｓ．　６１１）、　３．　２−３．　４（ｍ，　４１１）、　３．　９　４（ｄ　ｔ　ｒ．　Ｉ　ＩＩ）、　７．　Ｉ　Ｏ−７．　２６（ｍ．　８１１）、　７．　６　４（ｄ．　２１１）、　８．　０７（ｄ，　２P１） ”Ｃ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２０．２．３４．９，４５．４，　１２６．５．１２６．８。

１２８、１．１２９．９．１３０．３，１３０．４，１３２．９，１３３．９，１３８．９。

１　４　０、　５５（）％のメタノール／水（１２．５ｍＬ）中の４−（ビス−（２−トルエンチオメチル）アセチル）安い，香酸（１．８６５ｇ、４．　２　７ｓｓｏｌ）に、酢酸（２．６９比ｔ）、続いて３０９６の過酸化水素（２．６１比ｔ、）およびタングステン酸二ナトリウムニ水和物（０．　１　８　７　ｇ，　０．　５　６＋ｓｓｏｌ）を添加した。その混合物を一晩撹拌し、粗生成物を濾別した。メタノール／水から再結晶させ、逆相１１ＰＬＣ（０．１％ＣＦｓＣＯＯ）ｌ／アセトニトリル／水）にけして、ＴＭＥＢ（１７８ｍｇ）を得た。得られた化合物の同定は、以下のごとき化学分析によって確立した：’ＩＩ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ− ｄ　６）　：　２．　６　８（ｓ．　３１１）、　４．　５　６（ｓ．　２１１）、　５．　９　５（ｓ。

ＩＨ）、６．２７（ｓ．１１１）、７．３７−８．０５（ｍ，８１１）実施例３固相ペプチド合成法固相ペプチド合成法（Ｓ　Ｐ　Ｐ　Ｓ）は、ジシクロへキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは２−（１０−ベンゾ−トリアゾール−１− イル）−１．１。

３、３−テトラメチルクロニウムヘキサフルオロホスフェート／ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＩＩＢＴＵ／ＩＩＯＢＴ）でカップリングした９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏυアミノ末端保護と、カルボキシル末端酸にはｐ−ヒドロキノメチルフェノキンメチルポリスチレン（ＨＭＰ）樹脂、あるいはカルボキシル末端アミドにはリンク（Ｒｉｎｋ）アミド樹脂とを用いて、アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐＨｃｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅ簡Ｓ）・モデル４３１Δベブチドンンセサイザーを用いた０、２５ミリモルスケールで行った。樹脂結合生成物は、トリフルオロ酢酸、所望により１００・５：５：２．５：２の比の水、チオアニソール、エタンジチオール、およびトリエチルシランよりなる溶液を用いて室温にて１５ないし３時間ルーチン的に切断した。

適当には、樹脂に結合したＭＭＮ−末端アミノペプチドをＮＭｒ’（Ｎ−メチルピロリジノン）中の２０％ｖ／ｖ無水醋酸で：３０分間処理することにより、Ｎ −末端アセチル基を導入した。適当には、適当な２−ハロー酢酸をＳ　ｌ’　Ｐ　Ｓのｒｌ用二カップリングさせるべきＮｉ＆の残基として用いるか、樹脂に結合したＮ−末端遊離アミノペプチドを、ＮＭＩ）中の２−ハロー酢酸／ジイソプロピルカルボノイミド／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはＮＭＩ’中の２− ハロー無水酢酸／ジイソプロピルエチルアミンの一方で処理するかのいずれかにより、２−クロロアセチルおよび２−ブロモアセチル基を導入した。適当には、０．５−１．０ｍＭのＥＤＴ八を含有するリン酸またはｍ炭酸緩ｔｌｉ液（ｐＨ８）中の０．１−１．Ｏｍｇ／ｍＬ溶液を撹拌し、続いて酢酸で酸性化し、凍結乾燥してＨＰ　Ｌ　Ｃ精製することにより２−ハロアセチル化ペプチドを環化させた。適当には、Ｃｙｓ−Ｃｙｓノスルフィド結合の環化は、０００６〜１のＫ　ｓ　Ｆ　ｅ　（ＣＮ　）ｓのアリコート含有するｐ１１７の緩衝液中の０．１ｍｇ／ｍＬの前駆！４ｗ＃ンステインチオールペプチドで、安定な黄色が消えなくなるまで処理することによりＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合の環化を行った。過剰量のオキシダントを過剰量の７ステインで還元し、その混合物を凍結乾燥し、次いでＨＰ　Ｌ　Ｃにより精製した。

適当には、ペプチド合成の最後における残基としてピコリン酸を用いることによりｒｒ’ｉｃＪ基を導入した。適当には、ジイソプロピルカルボジイミドおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミドを用いて、ピコリルアミンを前駆体ペプチドに結合させることによりｒＰｉｃａＪ基を導入した。適当には、５ＰＰＳの間にカップリングさせるべき最後の残基として適当な１３ＡＴ酸を用いるか、該樹脂に結合したＮ−末端ＪｌｌｌアミノペプチドをＮＭＰ中のＢへＴ酸／ンイソプロビル力ルポンイミドＩＮ−ヒドロキシスクシンイミドで処理するかのいずれかによりＢＡＴリガンドを導入した。適当には、ＤＭＦ、ＮＭｒ’もしくはＣｌｌＩＣＩ　２中のジイソプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドのｌ！？合物または＋＋１３ＴＵ／ＩＴ　ＯＢ　Ｌの混合物でベブチドカルポキル−トを７１　？ＪＪに活性化させ、続いてジイソプロピルエチルアミンの存在下にカップリングさせることにより［ＢへＭ］を該ペプチドに結合させ二カップリングさせた浚に、該結合物をｎ；１記のごとく脱保護化した。

適当には、「１％−のチオール含ｆｆペプチド（５０ｍＭリン酸ナトリウム緩術液中の５ないし５０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ８）を、予めアセトニトリルに溶解した０、５モル当量の１３ＭＭ＋：、（ビス−マレイミドメチルエーテル）と室温にて約１−１８時間反応させることによりｎ　Ｓ　Ｍ　Ｉ’、　ｆ’を加物を製造した。その溶液を濃縮し、その生成物をＩＩ　Ｉ’　Ｌ　Ｃにより精製した。適当には、＋３ＭＭＥの代わりにビス−マレイミドヘキサンを用いてＢ５１１付加物を製造した。

適当には、（１）ＭＦ中の１０ないし１００ｍｇ／ｍ１．のベプチＦｙＩ！度、あるいは５（１ｍＭのリン酸ナトリウム１ｔｌｉ７＋ｋ（ｐ　Ｉｔ　８　）／アセｌ−二ｌ−リルまたはＴＩＩＦ中の５ｐｊいし５０ｒｎｇ／ｍ１．のベプチＦａ度の）＋１１−のチオール含ＩＴペプチドを、予めアセトニトリルまたはＩ）ＭＦに溶解した０、３３モル当ｍのｒＭＥΔ（トリス（２−マレイミドメチル）アミン、（出典明示して本明細書の一部とみなす）同時係属出願米国特許出願第０７／９５５．４６６号参照）と、１モル当量のトリエタノールアミンの存在または不存在下、室温にて約１−１８時間反応さぜることにより＋３５　ｈｌ　Ｅ付加物を製造した。（１加物を含有するかかる反応混合物をＩＩ４縮し、次いで、該付加物をＩＩＩ”’ＬＣを用いて精製した。

適当には、（５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ８）／アセトニトリルまたはＴＩＩＦ中の２ないし５０ｍｇ／ｍＬペプチドの濃度の）単一のヂオール念有ペプチドを、予めアセトニトリルまたはＴ１１Ｆ＋、：ｉ’８解した０、５モル当量の１３ＡＴ−ＢＭ（Ｎ−［２−（Ｎ’、Ｎ−ビス（２−マレイミドエチル）アミノエチル）］−Ｎ豐−（トブトキ７カルボニル）−Ｎ・Ｎ＠−ビス（２−メチル −２−トリフェニルメチルチオンロビル）−６，９−ジアザノナンアミド；（（出典明示して本明細書の一部とみなす）同時係属出願米国特許出願第０８１０４４．８２５号参照）と室温にて約１−１８時間反応させることにより製造した。

次いで、その溶液を蒸発乾固させ、１０ｍＬのＴＦΔおよび０．２ｍＬのトリエチルシランで１時間処理することにより［ＢΔＴ−１３Ｓ］−ペブヂト結合物を脱保護した。その溶液を濃縮し、エーテルでその生成付加物をｔＬｊｆｆさせ、次いてＩＩＩ’ｌＣにより精製した。

適当には、（＋）ＭＦ中の１０ないし１．００ｍｇ／ｍＬの）単一のチオール含有ベブチＦを、０５モル当量の１’　Ｍ　ＩＥ　＋１　（実施例２に記＠）および１モル当量のトリエタノールアミンと室温にて約１２−１８時間反応させることによりＤＭ八へ付加物を製造した。次いて、ｌ）ＭＦを真空中にて留去し、その生成物をＩｌｒ’ｌ、Ｃにより精製した。

？（紀の表Ｉの脚注に記載した条「１下にお（ｌる分取用高圧液体クロマ）−グラフィー（ＩＮ）Ｉ−Ｃ）により粗ペプチドをｔ＾製した。次いで、溶出画分を凍結乾燥し、古生成物の同定を高速原子語撃質攪分析（ＦΔ１３Ｍ５）または電子スプレー質量分ｔｒｉ（ＥＳＭＳ）ｌニーＪ：’）ｆＩＬ＆、Ｌ／：。

実施例４Ｔｃ−９９＋ｎで故１１．１Ｍｌ識する一般的法実施例３の、ごとく製造した０、１．ｍｇのペプチド試薬を、０１ｍ１、の水、もしくは５（１：５０のエタノール、水、あるいはリン酸１り術セーライン（ＩＩＩＩＳ）または’、）　Ｏｍ　Ｎ！のリン酸カリウム０［１Ｇ（ｐＩＩ＝５．６または７　／Ｉ）に溶解した。２００ｍｃｉまてＧ１’＋するＴｃ−９９ｍ！！Ａテクネチウム酸−Ｆ１−リウム１．ＯｍＬでグルコスカン・バイアル（Ｇ　Ｉｕｃｏｓｃａｎ　ｖｉａｌＸイー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール社（Ｅ、　Ｉ　、　１）ｕｌ’ｏｒ＋Ｌ　ｄｅ　Ｎｅｙｌａｕｒｓ、　ｌ　ｎｃ、　）製）を復元することによりＴｃ− ９９ｍグリセブテートを製造し、室温にて１５分間放置した。次いで、２５μｍのＴｃ−９９ｍグリセブテートを該試薬に添加し、室温または１００℃にて１５ −３０分間反応を進行させ、次いで０２μｍのフィルターを通して濾過した。

該Ｔｃ−９９ｍｆｆ１識ペプチド試薬の純度は、表■の脚注に記載した条件を用いたＩＩＩ’ＬＣにより測定した。放射性成分は、積算レコーダーにつなげた＋ｊｋＬｔｌ！検出機により検出した。これらの条件下にては、Ｔｃ−９９ｍグリセブテートおよびＴｃ−９９ｍＮテクネチウム酸ナトリウムが１ないし４分の間に溶出する一方、Ｔ　ｃ　−９９ｍａｔｈペプチドははるかに濃の時間に溶出する。

以上の表は、本明細書に記載した方法を用いて実施例３に従（１首尾よ＜Ｔｃ− ９９ｍ　ｌ！識したペプチドを製造できたものを説明している。

章ネ（１？＋の後の４−付き文字で示される）ＩＩ　Ｉ’　１．　Ｃ方法：ノ％ｊｌ；ｉ媒Ａ＝０．Ｉ％Ｃ７Ｃ００Ｉｌ／ｌＩ＊０溶ｋｘｎｔ。＝０．１％ＣＦ、Ｃ００１１／９０％Ｃｌｌ５ＣＮ／ｌ１ｚＯ溶媒流速＝１ｍＬ／分ビダソク・カラム（Ｖｙｄａｋ　ｃｏｌｕｍｎ）＝ガードカラムト１きのビダソク（Ｖｙｄａｋ）２１８ＴＰ５／ｌ　ＲＰ−１８，５μＸ２２０ｍｍＸ４．６ｍｍ分析カラムウォーターズ・プＪラム（Ｗａｔｅｒｓ　ｃｏｌｕ−ロ）＝ウォーターズ・デルタバ・ンク（Ｗａｔｅｒｓ　ＤｅｌＬａｒ’ａｋ）Ｃ１８，５ＩｚＸ１５０ｍｍＸ３．９ｍｍカラム条ｆ１．１．１０分間に１　（１０％の八から１００％の１３．。、ウォーターズ・カラム２．２０５）間にＩ　００９１Ｆの八から１００％のＴ３・。、ウォーターズ・カラム３１０分間に１００％の八から１００％の口９１、ビダック・カラムアミノ酸の雫−略語は、ジー・ツベイ（Ｇ、　Ｚｕｂａｙ）、バイオケミストリー（Ｔ１１ｏｃｈｅ餉１ｓｔｒｙ）、（第２版）、１９８８年（マクミラン・パブリッンング：ニュー・ヨーク（ＭａｃＭＨＩｃｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　：　Ｎ（！Ｗ　Ｙｏｒｋ）、３３頁に見い出すことができる。下線は、誘導基の結合したアミノ酸間でのヂオール架嬌の形成を示す、ペプチドは、かかる各ペプチド中のＪｌｉＮ護ンステンスティン残基の遊離チオール基を介して、１３ＳＩＩ、ＤＭ八へ、１３３ＭＥ、ＴＳＩシ八まへは［口八Ｔ−１３５］リンカ−に結合している。ＰｉＣはピコリノイル（ピリジン−２−カルボニル）；ΔｃＩ＋はアセトアミドメチル；ＡｐｃはＬ−［５− （３−アミノプロピル）ソステイン二ＦゎはＤ−フェニルアラニン、ＹｏはＤ− チロシン：　Ｋ（Ｎ、−Ｉ３ＡＴ）は側鎖のと一アミノ基を介して１３ＡＴ基に共有結合したリジン、ｍａは２−メルカプト酢酸：ＢへＴはＮＩ、ＮＩ−ヒス（２−メＪレカブトー２−メチルプロピル）−６，９−ジアザノナン酸：０八Ｔ− １３５はＮ−［２−Ｎ’、Ｎ−ビス（２−スクシンイミドエチル）アミノエヂル］−Ｎ１．Ｎ”−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）−６，９−ジアザノナンアミド：　ＢＳＭＥはビスースクシンイミドメチルエーテル：ＴＳＥＡはトリス−（２−スクシンイミドエチノリアミン：ＢＳＩＩは１，６−ビス−スクシンイミドヘキサンであって：ＤＭ八Ｂへ４−Ｃ２，２−ジメチルアセチル）安息香酸である。本発明の試薬の化学構造は以下の通りである。

（ＣＰＲＰＣ，、ＧＣＡ、Ｃａｍ１ｄｅ）、−ＴＳＥＡ（Ｐｒｃ、５ＣＡ−５ＹＮＲＧＤＳＴＣａｍｉｄｅ）、−ＴＳ　ＥＡ（ＲＡＬＶＤＴＬＫＧＧＣＡ、、、ＧＣＡｌ、Ｃａｍ１ｄｅ）、−ＴＳＥＡ（ＧＲＧＤＦＣＡ、ＯＣＡ、Ｃａｆｎｉｄｅ）、−ＴＳＥＡ（ａｃｃｒｙ／、５ＹＮＲＧＤＴＣＡ、ＧＣ＝Ｃａｍ＋ｄｅ）、−ＤＭＡＢ（Ｐｉｃ、ＧＣＡ、ＲＡＬＶＤＴＬＫＦＶＴＱＡＥＧＡＫＣａｍｉｄｅ）、−ＴＳＥＡ（ＣＣＡ、ＧＣ，ｖ、ＧＧＲＧＤＳ）、−ＴＳＥＡ（ｆｏｒｍｙｌ、ＭＬＦＫ（Ｎ、−ＢにＤＧＧＣ，、ＧＣ，、、ＧＧＣ，ａｍｉｄｅ）、−ＢＳＭＥ（ｉｚｃｉｒｙ／、ＣＣＡ、ＯＣＡ、ＧＯＰＬＹににＸ！ににＬＬＥＳ）、−ＢＳＭＥ（ＧＰＲＰＰＰＧＧＣ−ＧＣＡ、ＧＧＣａｍｉｄｅ）、−ＴＳＥＡ（ＣＭ、ＣＯ，Ｙｏ、＾ｐｃ、ＯＤｃにＣＣＡ、、ＧＣ−ＧＧＣａｍｉｄｅ）、−（Ｂ＾Ｔ−ＢＳにｒ−一（ａｃｃｒｙＪ、ｃｃ−ＱＣ，、ＰＬＹににＩＩＫＫＬＬＥＳ）、−ＢＳＭＥ実施［ＦＩＩ５イヌ・モデルにおけるＴｃ−９９ｍ標識ペプチドを用いた深静脈血栓症のイン・ビボ造影ｔｌ１Ｍ犬（２５−３５１ｂ、−晩絶食させた）にケタミノおよびアセプロザミンの組合せを筋肉内注射して鎮静させ、次いで、ペンタバルビクールナトリウムを静脈１’）？ｌＩ：４１　Ｌ、て麻酔した。凸動物において、右大腿静脈の半末端に１８ゲージのアンギオカト（ａｎｇｉｏｃａｔｈ）を挿入し、８ｍｍのダクロン＠（Ｄａｃｒｏｎ”）を巻いたステンレス・スヂール塞症コイル（タック・コーポレイソチン社（Ｃｏｏｋ　Ｃｏ、）、ブルーミノ）・ン、インディアナ州（Ｂｌｏｏ勇ｉｎｇＬｔｏｎ　Ｉ　Ｎ））を大腿のおよそ中間部の大腿静脈に入れたつ該カテーテルを取り出し、傷を縫合し、該コイルの位置をＸ線によって調べた。次いで、該動物を一晩で回復させた。

コイルを設置して１日後に、各々の動物を百度ＩＴ酔し、品々の前脚にセーラインを静脈内ａ＊Ｌ、、膀胱カテーテルを挿入して尿を採取した。低エネルギー、全目的コリメーターを製綱し、Ｔｃ−９９ｍにフォトビークを合わせたガンマカメラの下に該動物、を仰向けに固定した。

Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチド［１８５−３７０ｍ１３ｑｌ８５−３７０ｍ１３ｑ（５−１０をその挿入部位の１のｎ；１脚静脈ラインに連続して注射した。第２のラインは、血液採取のため残した。

ガンマカメラ造影を注射と同時に開始した。最初の１０分間にわたり心臓上の０１１側造影を動的試験で得（１０秒の造影を得た）、次いで、注射後１．２．３および４特間に静的造影を得た。脚部にわたる前側造影を５００．０００カウント、または２０分間（いずれにせよ短い）、注射後１．２．３および４時間後に得た。

鉛シールドを膀胱上方に覆って１２置して脚ＦＩＢｉｔｌ影を採取した。

ｉ＋後の造影の漫に各々の動物をベンドパルビタールで深く麻酔した。２つの血液状ｔ４をヘパリン処理したンリンジを用いて心臓穿刺上に採取し、続いて安楽死させる亀の塩化カリウム溶液を心臓内または静脈内ホーラス注射で投与した。

血栓を自重する大腿静脈、反対の（対照の）脚の同様な部位の静脈、血栓に隣接するｌＩ？脈部位およびり筋肉の試ｔ４を注意深く切り取った。血栓、コイルおよびコイル・ダクロン繊維（ｃｏｉｌ　Ｄａｃｒｏｎ　ｆｉｂｒｅ）を血管から切り取った。血栓、セーラインで洗浄した血管試料、コイル（ｃｏｉｌ）およびコイル・ダクロン繊維を分離し、各々の試料を予め重量を測定した試験管に入れた。その試料の重量を測定し、注射川面の既知画分と平行して、Ｔｃ−９９ｍチャンネルのガンマカウンターウェル巾にて石側した。

新鮮な血栓重敞、血栓中の％注射用−＠（％ＩＤ）／ｇおよび麻酔の直前に得た血液ならびに血栓／血液ならびに血栓／筋肉比を測定した。コンピューターに保存した造影から、ｄｎ栓および隣接筋肉を掃引する、注目する領域（ＲＯＩ）において測定したカウント／ピクセルの分析によって、血栓７バツクグラウンド比を測定した。

これらの実験からの組織データは以下の表に示す。Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドを用いてイン・ビボ検出した静脈血栓の位置を示すシンチグラフィー画像を図１に示す。

これらの結果は、本発明のＴｃ−９９ｍ標識試薬を用いると、イン・ビボにて深静脈血栓を容易かつ効率的に位置決定できることを示す。位置決定は注射１＆１時間以内に明らかに確立されるものであって、コントラストおよび焦点の鮮明度が増大したままで、注射１麦４特開近くにわたって持続する。

これまでの開示は本発明のある特別の具体例を強調したものであって、全ての修飾またはそれに同等の変法は、請求の範囲に記載するごとき本発明の精神および範囲の中に入ることに注意すべきである。

ｂ φ。

Claims

【特許請求の範囲】

１．各特異的結合ペプチドが３ないし１００個のアミノ酸のアミノ酸配列を有し、多価結合部位に共有結合した多数の特異的結合ペプチド部位、および複数の該特異的結合ペプチド、該多価リンカー部位、またはその両方に共有結合したテクネチウム−９９ｍ結合部位よりなる哺乳動物体内の部位を造影するシンチグラフィー造影剤を製造するための試薬。
２．テクネチウム−９９ｍで放射線標識された請求項１記載の試薬。
３．該テクネチウム−９９ｍ結合部位が：Ｉ．▲数式、化学式、表等があります ▼［式中、Ｃ（ｐｇｐ）３は、保護されたチオール基を有するシステインであって、（ａａ）はアミノ酸である］；ＩＩ．▲数式、化学式、表等があります▼［式中、Ａ１はＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ２ＮＯＣまたは−ＮＨＯＣ；Ｂ１はＳＨまたはＮＨＲ３；Ｘ１はＨ、メチル、ＳＨまたはＮＨＲ３；Ｚ１はＨまたはメチル；Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈまたは低級アルキル；Ｒ３はＨ、低級アルキルまたは−Ｃ＝Ｏ；ｎは０、１または２；Ｂ１がＮＨＲ３である場合、Ｘ１はＳＨ、Ｚ１はＨであってｎは１または２；Ｘ１がＮＨＲ３である場合、Ｂ１はＳＨ、Ｚ１はＨであってｎは１または２；Ｂ１がＨである場合、Ａ１はＨＯＯＣ、Ｈ２ＮＯＣまたは−ＮＨＯＣ、Ｘ１はＳＨ、Ｚ１はＨであってｎは０または１；Ｚ１がメチルである場合、Ｘ１はメチル、Ａ１はＨＯＯＣ、Ｈ２ＮＯＣまたは− ＮＨＯＣ、Ｂ１はＳＨであってｎは０；ここに、チオール基は還元型である］；ＩＩＩ．▲数式、化学式、表等があります▼ＩＶ．▲数式、化学式、表等があります▼［式中、Ｘ２＝ＩＩまたは保護用基；（ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ）＝いずれかのアミノ酸］；Ｖ．▲数式、化学式、表等があります▼［式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ３またはＣ２Ｈ５：各（ｐｇｐ）５は、独立して、チオール保護用基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは、独立して、２または３；Ａ２＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体］；およびＶＩ．▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ３またはＣ２Ｈ５；ｍ、ｎおよびｐは、独立して、２または３；Ａ３＝線状または環状の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せまたは置換誘導体；Ｖ＝ＩＩまたは−ＣＯ−ペプチド；Ｒ４＝ＩＩまたはペプチド；Ｖ＝ＩＩの場合、Ｒ４＝ペプチドであって、Ｒ４＝ＩＩの場合、Ｖ＝−ＣＯ−ペプチドである；ここに、各Ｒは、独立して、Ｈ、１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、または低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニルであって、ここに各ｎは、独立して１または２〕よりなる群から選択される請求項１記載の試薬。
４．該保護されたシステインが式： −ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ［式中、Ｒは１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、２−、３−、４− ピリジル、フェニル、または低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシもしくは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニル］の保護用基を有する請求項１記載の試薬。
５．Ｃ（ＰｇＰ）５−（ａａ）−Ｃ（ＰｇＰ）５が式：【配列があります】を有する請求項１記載の試薬。
６．該多価結合部位が、特異的結合ペプチドまたはテクネチウム−９９ｍ結合部位に共有結合できる少なくとも２つのリンカー官能基よりなり、少なくとも２つの該リンカー官能基が同一である請求項１記載の試薬。
７．該多価結合部位のリンカー官能基が、第一級または第二級アミン、ヒドロキシル基、カルボン酸基またはチオール反応性基であって、該チオールー反応性基が、マレイミド基およびクロロアセチル、ブロモアセチルおよびヨードアセチル基よりなる群から選択される請求項６記載の試薬。
８．該チオール反応性基が、マレイミド基およびクロロアセチル、ブロモアセチルならびにヨードアセチル基よりなる群から選択される請求項７記載の試薬。
９．該多価結合部位が、共有結合して分岐した多価結合部位を形成する多数の多価結合部位よりなる請求項６記載の試薬。
１０．還元剤の存在下に請求項１の試薬とテクネチウム−９９ｍとを反応させることにより形成した錯体。
１１．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項１０記載の錯体。
１２．予め還元したテクネチウム−９９ｍ錯体のリガンド交換により、請求項１の試薬をテクネチウム−９９ｍで標識することにより形成した錯体。
１３．放射線医薬製剤調製物を製造するためのキットであって、予め定めた量の請求項１の試薬と該試薬をテクネチウム−９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤とを含有する密閉バイアルよりなる該キット。
１４．還元剤の存在下に該試薬とテクネチウム−９９ｍとを反応させることを特徴とする請求項１記載の試薬の標識方法。
１５．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンよりなる群から選択される請求項１４記載の方法。
１６．有効診断量の請求項２の試薬を投与し、次いで哺乳動物体内部位に局在したテクネチウム−９９ｍからの放射性シグナルを検出することを特徴とする哺乳動物体内部位を造影する方法。
１７．該特異的結合ペプチドが、イン・ビトロで化学的に合成させた請求項１記載の試薬。
１８．該特異的結合ペプチドが、固相ペプチド合成法によって合成させた請求項１７記載の試薬。
１９．該放射線標識結合部位が、イン・ビトロの化学合成の間に該特異的結合ペプチドに共有結合させた請求項１７記載の試薬。
２０．該放射線標識結合部位が、固相ペプチド合成の間に該特異的結合ペプチドに共有結合させた請求項１９記載の試薬。
２１． ▲数式、化学式、表等があります▼ よりなる群から選択される請求項１記載の試薬よりなる組成物。
２２．該特異的結合ペプチドが、線状または環状のペプチドよりなる請求項１記載の試薬。
２３．哺乳動物体内の造影部位が血栓部位である請求項１記載の試薬。
２４．哺乳動物体内の造影部位が感染部位である請求項１記載の試薬。
２５． ▲数式、化学式、表等があります▼ よりなる群から選択される式を有する試薬よりなる組成物。
２６．テクネチウム−９９ｍで放射線標識した請求項２５記載の組成物。
２７．予め定めた量の請求項２５の組成物と、該組成物をテクネチウム−９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤とを含有する密閉バイアルよりなる製品。
２８．該多価結合部位が、ビス−スクシンイミジルメチルエーテル、４−（２，２−ジメチルアセチル）安息香酸、Ｎ−［２−（Ｎ′，Ｎ′−ビス（２−スクシンイミドエチル）アミノエチル）］−Ｎ６，Ｎ９−ビス（２−メチル−２−メルカプトプロピル）−６，９−ジアザノナンアミド、４−（２，２−ジメチルアセチル）安息香酸、トリス（スクシンイミジルエチル）アミン、ビス−スクシンイミドヘキサン、４−（Ｏ−ＣＨ２ＣＯ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ．ａｍｉｄｅ）アセトフェノンまたはそれらの誘導体である請求項１の試薬。