JPH07504902A - 炎症造影用のテクネチウム−９９ｍ標識ペプチド - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 炎症造影用のテクネチウム−９９ｍ標識ペプチド１、発明の分野 本発明は、放射線診断試薬およびかかる試薬の製造用試薬、ならびに放射性同位 体標識した放射線診断試薬の製法にも関する。詳細には、本発明はテクネチウム −９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）標識試薬、かかる試薬の製法および製造用キット、な らびにかかる試薬を用いて哺乳動物体内の感染部位および炎症部位を撮像する方 法に関する。

２、先行技術の記載 ・フＧａ、””Ｔｃ（Ｔｃ−９９ｍ）、ＩＩＩ　ｌ　ｎ、　＋０１、＋２５■、 　＋１・ＹｂまたはＩｌｌＨｅを含めた種々の放射線核種が放射線造影に有用で あることが知られている。放射性同位体標識ペプチドを用いた撮像法の感度は、 当該分野で公知の他の技術よりもはるかに高い。というのは、放射性同位体標識 ペプチドの特異的結合が目的の領域、例えば、炎症部位の領域にわたって放射性 シグナルを濃縮するからである。

病巣感染部位または局所感染部位の位置および／または範囲を評価できるという 臨床的な要望がある。（身体検査、Ｘ線、ＣＴおよび超音波検診のごとき）慣用 的な診断方法のかなり多くのケースにおいては、（例えば、膿瘍のような）かか る部位を同定するのに失敗している。ある種のケースにおいては、生検に頼るこ ともできるが、少なくとも明白にされた部分の膿瘍の原因となる病原菌を同定す ることが必要となるまでは避けるのが好ましい。かかる「目に見えない」感染部 位を同定することは重要である。これは、迅速に該問題点の位置を明白にするこ とが、効率的な治療の仲介に重要であるためである。

核医学の分野においては、ある種の病理学的疾患を位置付けてき、あるいはかか る疾患の範囲が病理学的部位に特異的に蓄積する放射性同位体標識トレーサー化 合物（すなわち、放射線トレーサーまたは放射線医薬）を投与して体内の分布を 撮像することによって評価できる。しかしながら、膿瘍は、可能性のある多くの 病原菌のいずれかにより引き起こされるので、特定の病原菌に特異的な放射性ト レーサーの範囲は限られる。一方、感染は、体の組織障害に対する一般的な反応 である炎症をほぼ常に伴う。従って、炎症部位に特異的な放射線トレーサーが、 いずれかの病原菌により引き起こされる感染部位を位置付けるのに有用であると 期待されている。

炎症に関連する１の主要な現象は、炎症部位における白血球、通常は単球および 好中球の局在化である。白血球に特異的な放射線トレーサーは、局所感染部位に おける白血球を検出するのに有用であろう。最近認可された感染部位を撮像する 核医学的方法は、インジウム−１１１標識白血球（”’Ｉｎ−ＷＢＣＸビーター ス（ｐｅｔｅｒｓ）、１９９２、ジャーナル・オブ・ニューキュラー・メディン ン（Ｊ。

Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、　）第３３巻：６５−６７頁参照）またはガリウム−６７ （６７Ｇａ）クエン酸（ブライト（Ｅｂｒｉｇｈｔ）ら、１９８２年、アーカイ ブス・インターナショナル・メディノン（Ａｒｃｈ、　Ｉ　ｎｔ、　Ｍｅｄ、　 ）第１４２巻＋２４６−２５４頁）を用いている。

ＩＩＩ　Ｔ　ｎ−標識ＷＢＣを用いる主な欠点は、放射性トレーサーの調製には 、自己血液を無菌的に取り出すこと、該血液から白血球を無菌的に単離すること 、（再接種した場合に損傷したＷＢＣが細網内皮系により取り込まれるため）白 血球を損傷しない条件を用いて該細胞を無菌的に標識すること、および（標識し た）該白血球を患者に（再接種して）戻すことを要することである。さらに最適 な撮像のためには、注射と撮像の間に１２ないし４８時間の遅延が必要となる。

Ｔｃ−９９ｍ標識白血球がこの遅延期間を短縮するために用いられる（ボーム（ Ｖｏｍｅ）ら、１９８とされている。好ましい放射線トレーサーは、自己血液成 分の取り出しおよび操作を要しないものである。

”Ｇ　ａ−クエン酸は静脈注射により投与できる。しかしながら、この化合物は 感染部位または炎症部位に特異的ではない。さらに注射と造影との間にしばしば ゛　７２時間までの遅延を要する。加えて、６７Ｇａのγ−（ガンマ）放出エネ ルギーは、通常のガンマ・カメラにはよく適しない。（単球、好中球、顆粒球お よびその他を含む）ヒト白血球に対して生起する放射性同位体標識モノクローナ ル抗体およびポリクローナル抗体が開発されている。Ｔｃ−９９ｍで標識した抗 顆粒球モノクローナル抗体（リント（Ｌｉｎｄ）ら、１９９０年、ジャーナル・ オブ・ニューキュラー・メディンン（Ｊ　、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、　）、第３ １巻、４１７−４７３頁）、および…Ｉｎｔｍ識非特異的ヒト・イムノグロブリ ン（ラムラグリア（ＬａＭｕｒａｇＨａ）ら、１９８９年、ジャーナル・オブ・ パスキュラー・サージエリ−（Ｊ　、　Ｖａｓｃ、　Ｓ　ｕｒｇ、　）第１０巻 ・２０−２８頁）が二次感染炎症を検出するために試験されている。

ＩＩＩ　ｉ　ｎ−標識１ｇＧは、注射と最適な撮像の間に２４−４８時間を要す る点で”’Ｉｎ−欅識ＷＢＣと欠点を共通にする。加えて、全ての放射性同位体 標識抗体は、調製するのが困難で、生物製剤として取締当局による長期間の認可 手続きに直面する。

小さく容易に合成できる分子が日常使用する放射線医薬に好ましい。患者に直接 注射でき、白血球が蓄積した部位を位置付けることによって感染部位および炎症 部位を撮像できる小さな合成分子に対して明らかな要望がある。

白血球に結合することが知られているある１のクラスの化合物は、ペプチド濃度 勾配を上ってまで白血球を動かす走化性ペプチドである（ウィルキンソン（Ｗ３ １ｋｉｎｓｏｎ）、１９８８年、メソッズ・インーエンザイモロノー（Ｍｅｔｈ 、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　）第１６２巻・１２７−１３２頁参照）。これらの化合 物は、非常に高い親和性で白血球表面上の受容体に結合する。これらのペプチド は、補体因子（ｃｏ＋＋ｐｌｅｍｅｎｔｆａｃｔｏｒ）、細菌、タフトシン（ｔ ｕｆｔｓｉｎ）、エラスチン、フィブリノペプチドＢ１フィブリノーゲンＢβ、 血小板第４因子およびその他を包含する多くの起源由来のものである。これらの 走化性化合物由来であって放射性同位体標識した小さな合成ペプチドは、生体内 （ｉｎ　ｖｉｖｏ）の炎症部位の撮像用の放射性トレーサーに大変有用である。

放射線標識ペプチドは、先行刊行物に報告されている。

米国特許第４．９８６．９７９号は、放射性同位体標識走化性ホルミルペプチド を用いた光親和性（ｐｈｏｔｏａｆｆｉｎｉｔｙ）標識を介して白血球を体外に て（ｅｘ−ｃｏｒｐｏ−ｒｅａｌｌｙ）標識することに関する。

ＥＰＣ９０１０８７３４，６は、走化性ホルミルペプチド−ＩＩＩ　ｌｎ−標￥ １ａＤＴＰΔ複合体に関する。

ＰＣＴ　Ｗ０９０／１０４６３号は、走化性ホルミルペプチドを用いて光親和性 櫟識を介して白血球を体外にて（ｅｘ−ｃｏｒｐａｒｅａｌｌｙ）標識すること に関する。

ゾービ（Ｚｏｇｈｂｉ）ら、１９８１年、ジャーナル・オブ・ニューキュラー・ メデイシン（Ｊ　、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、　）第２２巻、３２頁（アブストラ クツ）は、ＩＩＩ　ｌ　ｎ−標識トランスフェリンに結合させた細菌由来のホル ミルペプチド走化性因子を開示している。

ヤング（Ｊｉａｎｇ）う、１９８２年、ヌクレアルメデイツイン（Ｎｕｋｌｅａ ｒｍｅｄｉｚｉｎ）フィッンユマン（Ｆ　ｉｓｈｍａｎ）ら、１９９１年、ジャ ーナル・オブ・ニューキュラー・メディノン（Ｊ　、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、　 ）第３２巻：４８２−４９１頁は、走化性ホルミルペプチド−Ｉｌｌ　ｉ　ｎ− 標識ＤＴＰＡ複合体に関する。

ポリペプチドを標識するためのキレート剤の使用、ペプチドおよびポリペプチド をＴｃ−９９ｍで標識する方法は、先行刊行物で公知であり、出典明示して本明 細書の一部とみなす同時係属米国特許出願番号０７／６５３，０１２．０７／８ ０７．０６２．０７／８７１．２８２および０７／８９３．９８１に開示され本 発明は、Ｔｃ−９９ｍで放射性同位体標識したペプチド試薬であるシンチグラフ ィー造影剤を提供する。本発明のペプチド試薬は、Ｔｃ−９９ｍ放射性同位体標 識部位に共有結合した、白血球に結合する特異的結合ペプチドよりなる。

本発明の第１の懇様は、哺乳動物体内の炎症部位を撮像するためのシンチグラフ ィー造影剤製造用の試薬よりなり、該試薬は３ないし１００個のアミノ酸からな るアミノ酸配列を有する白血球結合ペプチドと、Ｔｃ−９９ｍ放射性同位体標識 結合部位とよりなる。

第２の態様において、本発明は［−１］の正味の電荷を有するＴｃ−９９ｍ錯体 を形成するＴｃ−９９ｍ放射性同位体標識結合部位よりなる。

さらにもう一つの態様において、本発明の放射性同位体標識ペプチド試薬は、白 血球に結合する特異的結合ペプチド、および式：％式％） ［式中、Ｃｐは保護システィン残基であって（ａ　ａ）はアミノ酸を表し、ここ で放射性同位体−結合部位は、特異的結合ペプチドに共有結合している］で示さ れるＴｃ−９９ｍ放射性同位体標識結合部位よりなる。好ましい具体例において は、該アミノ酸はグリシンである。もう一つの好ましい具体例において、該放射 性同位体標識結合部位は、１またはそれを超えるアミノ酸を介して該特異的ペプ チドに結合している。

さらにもう一つの態様において、本発明は、以下の構造式。

■。

Ａ−ＣＺ（Ｂ）−［Ｃ（ＲＩＲｌ）］、−Ｘ［式中、ＡはＨ，Ｈ００Ｃ％ｌｌ２ ＮＯＣ１（ペプチド）−ＮＨＯＣ，（ペプチド）−００ＣまたはＲ’：ＢはＨｌ ＳＨまたは−Ｎ　ＨＲ３、−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）またはＲ４゜ＺはＨまた はＲ’：ＸはＳＨまたは〜ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ”）−（ペプチド）またはＲ４゜ Ｒ−、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈあるいは直鎖または分岐鎖もしくは 環状の低級アルキル：ｎは０．１または２：および　（１）Ｂが−ＮＨＲ３また は−ＮＣＲ”）−（ペプチド）である場合、ＸはＳＨであってｎは１または２； （２）ここでＸが−ＮＨＲ’または−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）である場合、Ｂ はＳＨであってｎは１または２＋（３）ＢがＨまたはＲ４である場合、ＡはＨＯ ＯＣ，Ｈ２Ｎ０Ｃ。

（ペプチド）−ＮＨＯＣまたは（ペプチド）−００Ｃ，ＸはＳＨであってｎはＯ または１　；　（４）／Ｍ）＜ＨまたはＲ’Ｔ、ＢがＳＨである場合、ＸＩ；！ −ＮＨＲ３ｔたは−Ｎ（Ｒ”）−（ペプチド）であり、ＸがＳＨである場合、Ｂ は−ＮＨＲ３または−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）；（５）ＸがＨまたはＲ４であ る場合、ＡはＨＯＯＣ。

Ｈ，ＮＯＣ，（ペプチド）−ＮＨＯＣまたは（ペプチド）−００Ｃであって、Ｂ はＳＨ。

（６）Ｚがメチルである場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、）（２Ｎ　ＯＣ１（ ペプチド）−ＮＨＯＣまたは（ペプチド）−００Ｃであって、ＢはＳＨ，かつｎ はＯ；および （７）ＺがＳＨであってＸがＳＨである場合、ｎは０ではない：ここに、チオー ル基は還元型である］ を有するＴｃ−９９ｍ放射性同位体ｔ＊ｍ結合部位よりなるペプチド試薬を提供 する。

本発明のもう一つの態様は、哺乳動物体内の炎症部位の撮像用のシンチグラフィ ー造影剤製造用の試薬を提供し、該試薬は３ないし１００個のアミノ酸よりなる アミノ酸配列を有する白血球結合ペプチドと、電気化学的に中性のＴｃ−９９ｍ 錯体を形成するＴｃ−９９ｍ放射性同位体標識結合部位とよりなる。

さらなるーので様において、本発明は、以下の構造式：［本発明の目的のため、 この構造を有する放射性同位体標識結合部位を、ピコリン酸（Ｐ　１ｃ）−に基 づく部位と称する］：または ■ ［本発明の目的のため、この構造を有する放射性同位体標識結合部位を、ピコリ ルアミン（Ｐ　１ｃａ）−に基づく部位と称する］：［式中、ＸはＨまたは保護 基、（アミノ酸）はいずれかのアミノ酸、該Ｔｃ−９９ｍ放射性同位体標識結合 部位は、該ペプチドに共有結合しており、該放射性同位体標識結合部位およびＴ ｃ−９９ｍ錯体は電気化学的に中性である］を有するＴｃ−９９ｍ放射性同位体 標識結合部位に共有結合した白血球結合ペプチドよりなる試薬を提供する。好ま しい具体例において、該アミノ酸はグリシンで、Ｘはアセトアミドメチル保護基 である。さらなる好ましい具体例において、該ペプチドはアミノ酸、最も好まし くはグリシンを介して該Ｔｃ−９９ｍ放射性同位体標識結合部位に共有結合して いる。

本発明のさらなる一興体例において、哺乳動物体内部位撮像用のノンチグラフィ ー造影剤製造用の試薬を提供し、該試薬は、特異的結合ペプチドと、該ペプチド に結合したビスアミノビスチオールＴｃ−９９ｍ放射性同位体標識結合部位とか らなる。本発明のこの具体例におけるビスアミノビスチオールＴｃ−９９ｍ放射 性同位体標識結合部位は、： ■ ［式中、各々のＲ５は独立してＨ，ＣＨ３またはＣ，Ｈｓ；各々の（ｐｇｐ）’ は独立してチオール保護基またはＨ：ｍＳｎおよびｐは独立して２または３．Ａ は直鎖または環状の低級アルキル、アリール、複素環、その組合せまたは置換誘 導体：Ｘは■ ［式中、各々のＲ５は独立してＨｌｌないし６個の炭素原子を有する低級アルキ ル、フェニル、または低級アルキルまたは低級アルキルで置換されたフェニル、 ｍ１ｎおよびｐは独立して１または２；Ａは直鎖または環状の低級アルキル、ア リール、ヘテロサイクリル、その組合せまたは置換誘導誘導体、ＶはＨまたはＣ 〇−ペプチド；Ｒ６は、Ｈまたはペプチド：但し、Ｖ力用である場合、Ｒ６はペ プチドであり、Ｒ６がＨである場合、■はペプチドである］［本発明の目的のた めに、これらの構造を有する放射性同位体標識結合部位をｒＢＡＴＪ部位と称す る］よりなる群から選択される式を有する。好ましい一興体例において、該ペプ チドはアミノ酸、最も好ましくはグリシンを介してＴｃ−９９ｍ放射性同位体標 識結合部位に共有結合している。

また、本発明の特異的結合ペプチドは、多価結合部位に共有結合させることもで きる。本発明の多価結合部位は、特異的結合ペプチドまたはＴｃ−９９ｍ結合部 位に共有結合できる少な（とも２個の同一のリンカ−官能基よりなる。好ましい リンカ−官能基は、第１級アミンまたは第２級アミン、ヒドロキシル基、カルボ ン酸基またはチオール反応性基である。好ましい具体例において、該多価結合部 位は、ビスースクシンイミジルメチルエーテル（ＢＳＭＥ）、４−（２，２−ジ メチルアセチル）安息香酸（ＤＭＡＢ）およびトリス（スクシンイミジルエチル ）アミン（ＴＳＥＡ）よりなる。

本発明は、本発明の試薬とＴｃ−９９ｍとの間の錯体であるシンチグラフィー造 影剤、および本発明の試薬をＴｃ−９９ｍで放射性同位体ｍｍする方法よりなる 。本発明により提供される放射性同位体標識錯体は、本発明の試薬とＴｃ−９９ ｍとを還元剤の存在下で反応させて形成される。好ましい還元剤としては、亜ジ チオン酸イオン、第一スズイオンおよび第一鉄イオンを包含するが、これらに限 定されるものではない。また、本発明の錯体は、本明細書中にて提供する予め還 元されたＴｃ−９９ｍ複合体の配位子変換により、本発明の試薬をＴｃ−９９ｍ で標識することによっても形成される。

また、本発明はＴｃ−９９ｍで放射性同位体標識した本発明の試薬であるシンチ グラフィー造影剤製造用キットも提供する。本発明により提供される試薬をＴｃ −９９ｍで標識するキットは、所定量の本発明の試薬を含有する密閉バイアルと 、該試薬をＴｃ−９９ｍで標識するための十分量の還元剤とからなる。

本発明は、本発明のペプチド試薬を試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）化学合成によ り製造する方法を提供する。好ましい具体例において、ペプチドは固相ペプチド 合成法により合成する。

本発明は、生体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）ガンマ・シンチグラフィー撮像を得ること による、哺乳動物体内の炎症部位の撮像用のＴｃ−９９ｍ標識試薬であるシンチ グラフィー造影剤を用いる方法を提供する。これらの方法は、診断有効量の本発 明のＴｃ−９９ｍｍ識試薬を投与し、哺乳動物体内の炎症部位に局在したＴｃ− ９９ｍ標識により放出されるガンマ放射線を検出することよりなる。

本発明の特に好ましい具体例は、以下のある種の好ましい具体例のさらに詳細な 説明および請求の範囲から明らかになるであろう。

図の簡単な説明 図１は、実施例３に記載するごとく処理を行ったニューシーラント白ウサギ（Ｎ ｅｗ　Ｚｃａｌａｎｄ　ｗｈｉｔｅ　ｒａｂｂｉｔ）のガンマシンチフ１トを示 す。

発明の詳細な説明 本発明は、哺乳動物体内において標的部位を撮像するためのＴｃ−９９ｍ放射性 同位体標識ンンチグラフィー造影剤製造用の試薬を提供する。該試薬は、Ｔｃ− ９９ｍ放射性同位体標識錯体化部位に共有結合させた、白血球に結合する特異的 結合ペプチドよりなる。

本発明の該ペプチドは、白血球、好ましくは単球および好中球、最も好ましくは 好中球に結合する。本発明のこの目的のために、「白血球に結合する」なる語は 、本発明のペプチドが、ガンマンンチグラフィーにより感染部位または炎症部位 が十分に検出できるように哺乳動物体内のかかる部位に蓄積され得ることを意味 している。

Ｃｐ（ａａ）Ｃｐ−含有ペプチドにおいて、該Ｃｐは保護システィンで、ここで Ｓ−保護基は同一または異なり −ＣＨ２−アリール（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキルオ キシ置換フェニル）ニ −ＣＨ−（アリール）２、（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアル キルオキシ置換フェニル）ニ ーＣ−（アリール）３、（アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキ ルオキシ置換フェニル）； −ＣＨｒ（４−メトキンフェニル）ニ ーＣＨ（４−ピリジル）（フェニル）２ニーＣ（ＣＨ３）５ ＝９−フェニルフルオレニル。

−ＣＨ，ＮＨＣＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルもしくはアリール）ニーＣ Ｈ２−ＮＨＣＯＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルもしくはアリール）；−Ｃ ＯＮＨＲ（Ｒは非置換または置換アルキルもしくはアリール）；−ＣＨ，−８− ＣＨｔ−フェニル でもよいが、これらに限定されるものではない。

好ましい保護基は、式−ＣＨｔ−ＮＨＣＯＲ［式中、Ｒは工ないし８個の炭素原 子を有する低級アルキル、フェニルまたは低級アルキル、ヒドロキシル、低級ア ルコキシ、カルボキシもしくは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニル ］を有する。

この放射性同位体の原子核および放射性特性がＴｃ−９９ｍを理想的なシンチグ ラフィー造影剤とするため、Ｔｃ−９９ｍで標識することは本発明の利点である 。この放射性同位体は、１４０　ｋｅＶの単一のフォトン・エネルギーおよび、 約６時間の放射性半減期を有し、′・Ｍｏ−”″Ｔｃ発生器から容易に得られる 。先行技術で公知の他の放射性核種は、さらに長い有効半減期を有するか、（例 えば、１１１１ｎは６７．４時間の半減期を有する）、または毒性である（例え ば、＋２３７）かのどちらかである。

各々の特異的結合ペプチドを含有する本発明の具体例は、アミノ酸配列よりなる 。本発明のペプチドよりなる特別なアミノ酸は、Ｌ−またはＤ−アミノ酸、天然 に存在するものおよびその他のものであってもよい、Ｄ−アミノ酸は、下付き記 号りで示される。本発明により提供された試薬は、以下の化合物を包含するが、 それらに限定されるものではない。

本発明のペプチドは、試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）に化学合成できる。本発明 のペプチドは、一般的にアミノ酸シンセサイザーで有利に製造できる。本発明の ペプチドは、当業者によく知られた技術を用いて、該錯体化基（ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎｇ　ｇｒｏυｐ）が化学的試験管内合成の間は該ペプチドに共有結合してい る方法で合成できる。合成に際し錯体化基に共有結合したかかるペプチドは、そ の反応中に共有結合の特定部位を決定できるため有利である。

本発明の放射性同位体標識結合部位は、ペプチド合成の間に標的の特異的ペプチ ドに導入できる。ピコリン酸からなる具体例［（Ｐｉｅ−）　；例えば、Ｐｉｃ −Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（保護基）−］として、該放射性同位体標識結合部位１、合成 の最後の残基（すなわち、アミノ末端）として合成てきる。加えて、該ピコリン 酸を含有する放射性同位体標識結合部位は、リジンのε−アミノ基に共有結合さ せて、例えば、該ペプチド鎖中のいずれの位置にも導入できるａ　Ｎ（Ｆｓｏｃ ）−Ｌｙｓ−εＮ［Ｐｉｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（保護基）］を得ることができる。

この配列は、標的結合ペプチド中への容易な取り込みの態様を提供するため特に 有利である。

同様にして、該ピコリルアミン（Ｐｉｃａ）含有放射性同位体標識結合部位［− Ｃｙｓ（保護基）−Ｇ　ｌｙ−Ｐ　１ｃａｌは、該ペプチド鎖のカルボキシ末端 に配列［−Ｃｙｓ（保護基）−Ｇ　１ｙ−１を含有させることによりペプチド合 成の間に製造できる。樹脂からの該ペプチドの切断に続いて、該ペプチドのカル ボキシ末端が活性化され、ピコリルアミンに結合する。この合成工程は、反応性 側鎖官能基がマスクされたまま（保護された状態）であって、ピコリルアミンの 結合の間に反応しないことを要する。

Ｐｉｅ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−および−Ｃｙｓ−Ｇ　ｌｙ−Ｐ　ｉｃａキレート剤を 含有する小さな合成ペプチドの例を以下の実施例で提供する。本発明は、これら のキレート剤を、生体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）で白血球に特異的に結合することが できる実質的にいずれのペプチドへも導入でき、その結果、Ｔｃ−９９ｍを中性 錯体として保持する放射性同位体標識ペプチドを提供する。

また、本発明は、Ｔｃ−９９ｍで標識できるビスアミンビスチオ−ＩしくＢＡＴ またはＢＡＭ）キレート剤を組み入れた特異的に結合する小さな合成ペプチドも 提供する。本発明は、生体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）で白血球に特異的に結合できる 実質的にいずれのペプチドにも、これらのキレート剤を組み入れ、Ｔｃ−９９ｍ を中性錯体として保持する放射性同位体標識ペプチドを提供する。放射性同位体 結合部位としてのＢＡＴキレート剤を含有する小さな合成ペプチドの例は、後記 の実施例で提供する。

また、本発明の特異的結合ペプチドは、多価結合部位に共有結合させることもで きる。本発明により提供される多価結合部位は、直鎖状および環状のペプチドを 包含する、血小板特異的部分に共有結合できる少なくとも２個のリンカ−官能基 よりなる。かかる官能基は、第１級アミンおよび第２級アミン、ヒドロキシル基 、カルボン酸基およびチオール反応性基を包含するが、これらに限定されるもの ではない。多価結合部位は、好ましくは、直鎖状および環状のペプチドを包含す る、血小板特異的部位に共有結合できる少なくとも３個の官能基よりなる。好ま しい多価結合部位は、リジン、ホモリジン、オルニチン、アスパラギン酸および グルタミン酸のごときアミノ酸；直鎖状および環状のアミンおよびポリアミン、 ポリカルボン酸、活性化チオール：およびノーならびにトリーマレイミドのごと きチオール反応性試薬を包含する。また、多価結合部位が、共有結合して分岐し た多価結合部位を形成するための多数の多価結合部位よりなる具体例が好ましい 。

最も好ましい多価結合部位は、ビスースクシンイミジルメチルエーテル、トリス （スフノンイミジルエチル）アミン、４−（２，２−ジメチルアセチル）安息香 酸（ＤＭＡＢ）およびそれらの誘導体を包含する。

本発明の試薬と放射性テクネチウムとの錯体形成においては、テクネチウム錯体 、好ましくはＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸塩を、還元剤の存在下にて該試薬と 反応させる。好ましい還元剤としては、亜ジチオン酸塩、第一スズイオンおよび 第一鉄イオンを包含し、最も好ましい還元剤は、塩化スズ（ｎ）である。かかる 錯体を製造する手段は、標識すべき所定量の本発明の試薬と該試薬をＴｃ−９９ ｍで標識するのに十分な量の還元剤とを含有する密閉バイアルよりなるキット形 態にて都合よく提供される。別法として、該錯体は、本発明の試薬と予め形成さ せたテクネチウムのレービル錯体および移行配位子（ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｌｉｇ ａｎｄ）として公知のもう１つの化合物とを反応させることによっても形成しう る。このプロセスは、配位子変換法として知られており、当業者にもよく知られ ている。該レービル錯体は、例えば、タルトラード、シトラード、グルコナート またはマンニトールのごとき移行配位子を用いて形成しうる。本発明で有用なＴ ｃ−９９ｍ過テクネチウム酸塩には、ナトリウム塩のごときアルカリ金属塩また はアンモニウム塩もしくは低級アルキルアンモニウム塩が包含される。

本発明のペプチドと、Ｔｃ−ａテクネチウム酸塩または予め形成したＴｃ−９９ ｍレービル錯体との反応は、室温にて水性媒体中で行うことができる。［−１］ の電荷を有するアニオン錯体が水性媒体中で形成される場合は、ナトリウムカチ オン、アンモニウムカチオン、モノ、ノーまたはトリー低級アルキルアミンカチ オン等のごとき適当なカチオンとの塩の形態である。アニオン錯体と医薬上許容 されるカチオンとのいずれの慣用的な塩も本発明て用いることができる。

本発明の好ましい具体例において、テクネチウム標識ペプチド製造用キットを提 供する。本発明のペプチドは、当業者によく知られ、後記する方法および手段を 用いて化学合成することができる。かく製造されるペプチドは、３ないし１００ 個のアミノ酸残基よりなり、放射性同位体に結合した錯体化基である放射性同位 体錯体化基に共有結合している。適量の該ペプチドを、Ｔｃ−９９ｍを標識する のに十分な量のペプチド中、塩化スズ（ＩＩ）のごとき還元剤を含有するバイア ルに導入する。また、適量の（例えば、タルトラード、ンルトラート、グルコナ ートまたはマンニトールのごとき）前記した移行配位子を含有させることもでき る。

本発明のテクネチウム標識ペプチドは、適量のＴｃ−９９ｍまたはＴｃ−９９ｍ 錯体を該バイアルに添加し、後記の実施例２に記載する条件下で反応させること により製造できる。

適量の放射能を有する放射性同位体標識ペプチドが、本発明によって提供される 。Ｔｃ−９９ｍ放射性アニオン錯体の形成において、１ｍｌ当たり約０．０１ミ リキユリー（ｍＣｉ）ないし１００ｍＣ１の濃度の放射能を含む溶液中にて放射 性錯体を形成させるのが一般的に好ましい。

本発明により提供されるテクネチウム標識ペプチドは、膿瘍および「目に見えな い」感染部位を包含する炎症部位の視覚化に用いることができる。また、本発明 により提供されるＴｃ−９９ｍ標識ペプチドは、炎症性腸疾患および関節炎のご とき疾病を含有する組織性虚血により引き起こされる炎症部位の視覚化用にも用 いられる。本発明においては、該テクネチウム標識ペプチドまたはアニオン性錯 体のいずれかと医薬上許容されるカチオンとの錯体または塩を単一ユニット注射 投与量で投与する。本発明においては、標識後に種々の器官、腫瘍等を診断的に 撮像する注射可能な溶液を製造するために、滅菌セーライン溶液または血漿のご とき当業者に公知のいずれの一般的な担体を利用することができる。一般的に、 投与すべきユニット役用量は、約０．０１ｍＣ１ないし約１００ｍＣ１，好まし くは１ｍｃｉないし２０ｍＣ１の放射能を有する。ユニット投与量にて注射すべ き溶液は、約０．０１＋ｎ／ないし約１０ｍＩ！である。静脈内投与の後、生体 内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）の器官または腫瘍の撮像はおよそ数分以内に行うことがで きる。しかしながら、所望ならば、唐音に注射後数時間以内またはさらにその後 であっても撮像を行うことができる。はとんどの例では、投与した量のうち十分 な量が約１０分の１時間内に撮像すべき領域に蓄積してンンチフォトを採ること ができる。診断目的のシンチグラフィー撮像のいずれの慣用的な方法を本発明で 利用することもできる。

本発明により提供されるテクネチウム標識ペプチドおよび錯体は、水性セーライ ン媒質のごとき静脈注射用のいずれの慣用的な媒質または血漿媒質にて静脈投与 してもよい。また、かかる媒質は、例えば、浸透圧調整用の医薬上許容される塩 、緩衝液、保存剤等のごとき慣用的な医薬添加物を含有していてもよい。好まし い媒質には、ノーマル・セーラインおよび血漿がある。

これらの化合物の製法および標識方法は、以下の実施例でさらに詳細に説明する 。これらの実施例は、前記の方法および有利な結果のある種の態様を説明してい る。これらの実施例は、例示的なものであって、限定的なものではない。

実施例１ 固相ペプチド合成 固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、アプライド・バイオシステムズ（Ａ　ｐｐｌ 　１ｅｄＢ　ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ戸モデル４６１Ａ・ペプチド・シンセサイザー を用い、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＩＩ＋ｏｃ）アミノ末端 を用いて、ジクロ口ヘキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリアゾールま たは２−（ＩＨ−ベンゾ−トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラ メチルウロニウム　ヘキサフルオロホスフェート／ヒドロキシベンゾトリアゾー ル（ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ）をカップリングさせ、カルボキシル末端酸用のｐ−ヒ ドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン（ＨＭＰ）樹脂またはカルボキシ ル末端アミド用のＲｉｎｋアミド樹脂を用いて０．２５ミリモル・スケールで行 った。樹脂結合生成物は、１００：５：５：２．５：２の比で調製したトリフル オロ酢酸、水、チオアニソール、エタンジオールおよびトリエチルシランよりな る溶液を用い、室温にて１５〜３時間でルーチン的に切断した。適当な場合には 、樹脂に結合させたペプチドの遊離Ｎ−末端をジクロロメタン中の無水ギ酸で０ ℃にて２時間処理するか、あるいは切断、脱保護したペプチドを９８％ギ酸中の 無水酢酸で処理することによってＮ−α−ホルミル基を導入した。適当な場合に は、樹脂に結合させたペプチドの遊離Ｎ−末端アミノ基をＮＭＰ中の２０％（ｖ ／ｖ）の無水酢酸で３０分間処理することによりＮ−α−アセチル基を導入した 。適当な場合には、ジイソプロピルカルボジイミドおよびＮ−ヒドロキシスクシ ンイミドを用いて前駆体ペプチドにピコリルアミンを結合させることによりｒ　 Ｐ　１ｃａＪ基を導入した。適当な場合には、該ペプチドの遊離Ｎ末端アミノ基 を、Ｎａ、Ｎｅ−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）− ＮＬ（ｔ−ブトキンカルボニル）−６，９−ジアザノナン酸Ｎ−ヒドロキシスク シンイミドエステルで処理することによってＮ末端［ＢＡＴ］基を導入した。

適当な場合には、単一のチオールを含有するペプチド（５０ｍＭのリン酸ナトリ ウム緩Ｍ中の５ないし５０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ８）を、アセトニトリル中に溶解し た０、５モラー当量のＢ　ＭＭ　Ｅ　（ビス−マレイミドメチルエーテル）で室 温にて約１ないし約１８時間処理することによってＢＳＭＥ付加物を調製した。

該溶液を濃縮し生成物をＨＰＬＣにより精製した。

粗ペプチドを、ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）　・デルタ・バック（Ｄｅｌｔａ 　Ｐａｋ）Ｃ１８カラムおよびアセトニトリルで修飾した水中の０．１％のトリ フルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いたグラジェント溶出を用い、分取用高速液体クロ マトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって精製した。溶出画分からアセトニトリルを 留去し、次いで凍結乾燥した。各々の生成物の同定は、高速電子衝撃質量分析法 （ＦＡＢＭＳ）またはエレクトロスプレー（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ）質量分 析法（ＥＳＭＳ）により確認した。

実施例２ Ｔｃ−９９ｍで放射性同位体標識する一般的法実施例１で調製したペプチド０． １ｍｇを０．０５Ｍのリン駿カリウム緩衝液（ｐＨ７，４）０．１ｍＬに溶解し た。グリセブト酸Ｔｃ−９９ｍは、グルコスカン（Ｇｌｕｃｏｓｃａｎ）バイア ル（イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール社（Ｅ、Ｉ。

ＤｕＰｏｎｔ　ｄｅ　Ｎｅｍｏｕｒｓ、　Ｉ　ｎｃ、　）製）を２００ｍＣ１ま で含有するＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸ナトリウム１．０ｍＬで復元し、室温 にて１５分間放置することにより調製した。次いで、２５μｌのグリセブト酸Ｔ ｃ−９９ｍを該ペプチドに添加し、室温または１００℃にて１５ないし３０分間 反応を進行させ、次いで０．２μｍフィルターを通して濾別した。

ビダック（Ｖｙｄａｋ）２１８ＴＰ５４（ＲＰ−１８，５ミクロン、２２０Ｘ４ ．６ｍｍ）またはウォーターズ・デルタパック（ＲＰ−１８，５ミクロン、１５ ０×３．９ｍｍ）分析用カラムならびに表１の脚注に記載した溶出条件を用いた ＨＰＬＣによりＴｃ−９９ｍ標識ペプチドの純度を測定した。放射性成分は、積 算レコーダーにつなげた１ｎ−１ｉｎｅ放射分析計によって検出した。グリセブ ト酸Ｔｃ−９９ｍおよびＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸ナトリウムは、これらの 条件下で１ないし４分の間に溶出したが、Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドはさらにか なり時間が経つた後に溶出した。

以下の表は、本明細書に記載した方法を用いて実施例１に従って調製した、ペプ チドの首尾よく行われたＴｃ−９９ｍ標識条件を示している。該方法の具体的な 適用は以下の通りである。

（以下の表でＲｏの後の上付き文字で示されている）ＨＰＬＣ法方法１；ブラウ ンリー（Ｂ　ｒｏｖｎｌｅｅ）カラム　１０分間に１００％のＡから１００％の Ｂ７゜ 方法２：ビダック・カラム　１０分間に１００％のＡから１００％のＢ、。

方法３：ビダック・カラム　１０分間に１００％のＡから１００％のＢ、。

方法４：ウォーターズ・カラム　１ｏ分間に１００％のＡがら１００％のＢ・。

方法５：ウォーターズ・カラム　２０分間に１００％のＡがら１００％のＢ９゜ ココテ：　溶媒Ａ　＝０．１％（ＤＣＦｓＣＯＯＨ／Ｈ２０溶媒Ｂｖｅ＝０．１ ％のＣＦ、Ｃ０ＯＨ／７０％のＣＨｓ　ＣＮ　／　Ｈ２０溶媒Ｂ＠ｅ＝０．１％ （’）ＣＦｓＣＯＯＨ／９０％＋７）ＣＨｓＣＮ／ＨｚＯ溶媒流速＝１ｍＬ／分 ビダック・カラム　＝２１８Ｔ　Ｐ５４　ＲＰ−１８，５μ、２２ｈｓｘ４．６ ｍｍ　分析用カラムブラウンリー・カラム；スフエリ（Ｓ　ｐｈｅｒｉ）−５、 ＲＰ−１８，５μ、２２０Ｘ４．釦■カラムウォーターズ・カラム＝デルタバッ ク（ＤｅｌｔａＰａｋ）ＲＰ−１８，５μ、１５０＋ａ＋＋Ｘ３．ｈｓ分析用力 ラム 実施例３ Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドのシンチグラフィー撮像および生体内分布前記に提供 したＴｃ−９９ｍ標識ペプチド試薬の有効性を立証するために、ニューシーラン ト白ウサギの左側ふくらはぎを、病原性イー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）で筋肉内接 種した。２４時間後に、該動物をケタミン（ｋｅｔａｍｉｎｅ）およびキシラン ン（ｘｙｌａｚｉｎｅ）で筋肉内注射することにより鎮静させ、次いでＴｃ−９ ９ｍ標識ペプチド（＜１５０μｇ、２−１０２−１Ｏで静脈注射した。該動物を ガンマカメラ（ＬＥＡＰコリメーター／Ｔｃ−９９ｍ用のフォトピークに設定（ ｐｈｏｔｏｐｅａｋ））の視野にあお向けに固定し、注射後の最初の１時間にわ たり、次いで約１時間間隔で注射後の次の３時間にわたり撮像した。動物は、撮 像および麻酔の間で必要に応じて、回復させた。

最後の撮像が完了したら、各々の動物を致死量のフェノバルビタールで静脈注射 して殺し、解剖して血液および感染筋肉組織ならびに対照筋肉組織の試料を得た 。該組織試料を計量し、注射した標準投与量に則してガンマカウンターを用いて 計数し、組織内に残存しているパーセント注射投与量（組織ダラム当たり）をめ た。感染組織一対一非感染筋肉組織のダラム当たりの注射投与量のパーセントの 比を、各々のペプチドで計算した。これらの結果を後記の表に示す。

式： ％式％ を有する本発明のＴｃ−９９ｍ標識試薬を注射したウサギの前身および足の撮像 のンンチフォトを図１に示す。

これまでの開示が本発明の特殊な具体例を強調し、それらと同等な全ての修飾ま たは改変が添付した請求の範囲に記載された本発明の趣旨および範囲内にあるこ とは理解されるべきである。

上部胴体部 ９分　４時間 下脚部（左脚部に感染） ３０分　４時間 ＦｉＣｔ１１ｍ１ １□−ｓｏ　ＰＣＴ／ＬＩＳ　９３１０２３２０Ｉ−１，ＬＩｌ紳。す１々−Ｑ ｈｏｎ　Ｎｏ　ＰＣＴ／　ＵＳ９３　／　０２３２０フロントページの続き （７２）発明者　バットラム、スコツトアメリカ合衆国０３０３８ニユーハンプ シヤー州、プリー、ジェルベゼ・ドライブ１２番（７２）発明者　リスター−ジ ェイムズ、ジョンアメリカ合衆国０３１１０ニューハンプシャー州、ベッドフォ ード、オールド・ストーン・ウェイ２潜

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. １．テクネチウム−９９ｍ放射性同位体標識結合部位に共有結合した、白血球に 特異的に結合する特異的結合ペプチドよりなる哺乳動物体内の炎症部位を撮像す るシンチグラフィー造影剤の製造用の試薬。
2. ２．該テクネチウム−９９ｍ放射性同位体標識結合部位が、Ｉ． ＣＰ（ａａ）ＣＰ ［式中、Ｃｐは保護システインであって、（ａａ）はアミノ酸を意味する］：Ｉ Ｉ． Ａ−ＣＺ（Ｂ）−［Ｃ（Ｒ１Ｒ２）］ｎ−Ｘ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ２Ｎ ＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣ、（ペプチド）−ＯＯＣまたはＲ４； ＢはＨ、ＳＨ、−ＮＨＲ３、−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）またはＲ４；ＸはＨ、 ＳＨ、−ＮＨＲ３、−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）またはＲ４；ＺはＨまたはＲ４ ； Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈまたは低級の直鎖もしくは分岐鎖 または環式のアルキル； ｎは０、１または２； および Ｂが−ＮＨＲ３または−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）である場合、ＸはＳＨであっ て、ｎは１または２； Ｘが−ＮＨＲ３または−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）である場合、ＢはＳＨであっ て、ｎは１または２； ＢがＨまたはＲ４である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ２ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨ ＯＣまたは（ペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨであって、ｎは０または１；ＡがＨ またはＲ４、ＢがＳＨである場合、Ｘは−ＮＨＲ３または−Ｎ（Ｒ３）−（ペプ チド）、 ＸがＳＨである場合、Ｂは−ＮＨＲ３または−Ｎ（Ｒ３）−（ペプチド）；Ｘが ＨまたはＲ４である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ２ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣ または（ペプチド）−ＯＯＣであって、ＢはＳＨ；Ｚがメチルである場合、Ｘは メチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ２ＮＯＣ、（ペプチド）−ＮＨＯＣまたは（ペプチド ）−ＰＰＣ、ＢはＳＨであってｎは０；ＢがＳＨであってＸがＳＨである場合、 ｎは０ではない；ここで、チオール基は還元型］；およびＩＩＩ．▲数式、化学 式、表等があります▼ＩＶ．▲数式、化学式、表等があります▼［式中、Ｘ＝Ｈ または保護基； （アミノ酸）＝いずれかのアミノ酸］；Ｖ．▲数式、化学式、表等があります▼ ペプチド［式中、各々のＲ５は独立してＨ、ＣＨ３またはＣ２Ｈ５；各々の（ｐ ｇｐ）３は独立してチオール保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは独立して２また は３；Ａ＝直鎖または環式の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せ またはそれらの置換誘導体］： ＶＩ．▲数式、化学式、表等があります▼［式中、各々のＲ５は独立してＨ、１ ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、または低級アルキルま たは低級アルコキシで置換されたフェニル；ｍ、ｎおよびｐは独立して１または ２；Ａ＝直鎖または環式の低級アルキル、アリール、複素環、それらの組合せま たはそれらの置換誘導体； Ｖ＝Ｈまたは−ＣＯ−ペプチド； Ｒ６＝Ｈまたはペプチド； および、ここでＶ＝Ｈの場合、Ｒ６＝ペプチドであり、Ｒ６＝Ｈの場合、Ｖ＝− ＣＯ−ペプチド；および、式中の該放射性同位体標識結合部位は放射性同位体と 錯体を形成し、該錯体は電気的に中性である］よりなる群から選択される式を有 する請求項１記載の試薬。
3. ３．該特異的結合ペプチドおよび放射性同位体標識結合部位が、１またはそれを 超えるアミノ酸を介して共有結合している請求項１記載の試薬。
4. ４．式Ｉを有する該放射性同位体結合部位の保護システインが、式：−ＣＨ２− ＮＨ−ＣＯ−Ｒ ［式中、Ｒは１ないし６個の炭素原子を有する低級アルキル、２−、３−、４− ピリジル、フェニル、または低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カル ボキシまたは低段アルコキシカルボニルで置換されたフェニルを意味する］の保 護基を有する請求項２記載の試薬。
5. ５．式Ｃｐ（ａａ）Ｃｐの放射性同位元素標識結合部位が式：▲数式、化学式、 表等があります▼ を有する請求項２記載の試薬。
6. ６．テクネチウム−９９ｍで放射性同位体標識した請求項１記載の試薬よりなる シンチグラフィー造影剤。
7. ７．該特異的結合ペプチドが血小板第４因子またはその誘導体である請求項１記 載の試薬。
8. ８．アミノ酸配列、ホルミルＭＬＦまたはホルミル．Ｎｌｅ．ＬＦ．Ｎｌｅまた はその誘導体よりなる請求項１記載の試薬。
9. ９．該特異的結合ペプチドがエラスチン由来のものである請求項１記載の試薬。
10. １０．該特異的結合ペプチドがタフトシンまたはその誘導体である請求項１記載 の試薬。
11. １１．該特異的結合ペプチドがフィブリノペプチドＢ、フィブリノーゲンＢβ− 鎖またはそれらの誘導体である請求項１記載の試薬。
12. １２．該試薬が、 【配列があります】 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ よりなる群から選択される請求項７記載の試薬。
13. １３．該試薬が、： ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ よりなる群から選択される請求項８記載の試薬。
14. １４．該試薬が、 ▲数式、化学式、表等があります▼ よりなる群から選択される請求項９記載の試薬。
15. １５．該試薬が、： ▲数式、化学式、表等があります▼ よりなる群から選択される請求項１１記載の試薬。
16. １６．該試薬が、： ＣＡｃｍＧＣＡｃｍＴＫＰＲ である請求項１０記載の試薬。
17. １７．該試薬が、多重多価シンチグラフィー造影剤を形成するための、多数の特 異的結合ペプチドに共有結合し、かつ多数の放射性同位体標識結合部位にも共有 結合した多価結合部位よりなり、ここに該多数の多価試薬の分子量が約２０，０ ００ダルトン未満である請求項１記載の試薬。
18. １８．該多価結合部位がビス−スクシンイミジルメチルエーテル、４−（２，２ −ジメチルアセチル）安息香酸、トリス（スクシンイミジルエチル）アミンまた はそれらの誘導体である請求項１７記載の多重多価結合シンチグラフィー造影剤 。
19. １９．請求項１記載の試薬を還元剤の存在下にてテクネチウム−９９ｍと反応さ せることにより形成された錯体。
20. ２０．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンまたは第一鉄イオンよ りなる群から選択される請求項１９記載の錯体。
21. ２１．請求項１記載の試薬を、予め還元したテクネチウム−９９ｍ錯体の配位子 変換によってテクネチウム−９９ｍで標識することにより形成された錯体。
22. ２２．所定量の請求項１の試薬と、該試薬をテクネチウム−９９ｍで標識するの に十分な量の還元剤とを含有する密閉バイアルからなる放射性医薬調製物の製造 用キット。
23. ２３．テクネチウム−９９ｍで標識した請求項１の試薬の診断的有効量を投与し 、次いで、炎症部位に局在化したＴｃ−９９ｍを検出することを特徴とする哺乳 動物体内の炎症部位を撮像する方法。
24. ２４．該試薬を試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で化学合成する請求項１記載の試 薬の製法。
25. ２５．該特異的結合ペプチドを、固相ペプチド合成法によって合成する請求項２ ４記載の試薬の製法。
26. ２６．該放射性同位体結合部位が、試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）化学合成の間 に、該特異的結合ペプチドに共有結合している請求項１記載め試薬。
27. ２７．該放射性同位体結合部位か、固相ペプチド合成の間に、該特異的結合ペプ チドに共有結合している請求項２６記載の試薬。
28. ２８．該ペプチドを還元剤の存在下にてＴｃ−９９ｍと反応させることを特徴と する請求項１記載のペプチドを標識する方法。
29. ２９．該還元剤が、亜ジチオン酸イオン、第一スズイオンまたは第一鉄イオンよ りなる群から選択される請求項２８記載の方法。