JPH0587811A - 固定化担体の製造方法 - Google Patents
固定化担体の製造方法Info
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- JPH0587811A JPH0587811A JP25238791A JP25238791A JPH0587811A JP H0587811 A JPH0587811 A JP H0587811A JP 25238791 A JP25238791 A JP 25238791A JP 25238791 A JP25238791 A JP 25238791A JP H0587811 A JPH0587811 A JP H0587811A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 流体試料中の特定成分を正確に、精度及び再
現性良く定量できる技術を提供することである。 【構成】 担体が抗体（又は抗原）溶液に浸される工程
と、担体が実質上ずれない程度の速度で前記抗体（又は
抗原）溶液が入れられている容器を動かせる作動工程と
を有する固定化担体の製造方法。
現性良く定量できる技術を提供することである。 【構成】 担体が抗体（又は抗原）溶液に浸される工程
と、担体が実質上ずれない程度の速度で前記抗体（又は
抗原）溶液が入れられている容器を動かせる作動工程と
を有する固定化担体の製造方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、流体試料中の微量成
分、特に生物学的流体試料中の特定微量成分を測定する
に際して用いられる固定化担体の製造方法に関するもの
である。
分、特に生物学的流体試料中の特定微量成分を測定する
に際して用いられる固定化担体の製造方法に関するもの
である。
【０００２】
【発明の背景】生物学的流体試料中に極微量含有される
物質を検出する方法として、各種の分析法が開発されて
来ている。この分析法の一つとして、免疫反応をその原
理とするものがある。そして、この原理を用いた測定法
として種々のものが開発され、精度の高いものとして知
られている。
物質を検出する方法として、各種の分析法が開発されて
来ている。この分析法の一つとして、免疫反応をその原
理とするものがある。そして、この原理を用いた測定法
として種々のものが開発され、精度の高いものとして知
られている。
【０００３】すなわち、１９５８年にＢｅｒｓｏｎとＹ
ａｌｌｏｗが、放射性同位元素Ｉで標識した牛インシュ
リンと糖尿病患者血清中の抗インシュリン抗体を用い
て、血清中のインシュリンを測定することに成功して以
来、ラジオアイソトープを用いた免疫測定法が広く用い
られて来た。そして、これ以後、標識物質として放射性
同位元素以外のものも種々開発されて来た。例えば、酵
素、酵素基質、補酵素、酵素阻害物質、バクテリオファ
ージ、循環反応体、金属及び有機金属の錯体、有機補欠
分子族、化学発光性反応体及び螢光性分子等が挙げられ
る。
ａｌｌｏｗが、放射性同位元素Ｉで標識した牛インシュ
リンと糖尿病患者血清中の抗インシュリン抗体を用い
て、血清中のインシュリンを測定することに成功して以
来、ラジオアイソトープを用いた免疫測定法が広く用い
られて来た。そして、これ以後、標識物質として放射性
同位元素以外のものも種々開発されて来た。例えば、酵
素、酵素基質、補酵素、酵素阻害物質、バクテリオファ
ージ、循環反応体、金属及び有機金属の錯体、有機補欠
分子族、化学発光性反応体及び螢光性分子等が挙げられ
る。
【０００４】ところで、免疫測定が行われるに際して
は、抗体（又は抗原）が固定化された担体が用いられ
る。この固定化担体は、抗体（又は抗原）溶液中に担体
を入れ、担体に抗体（又は抗原）を吸着させることで製
造されている。しかしながら、このようにして得られた
固定化担体を用いての免疫測定では、その測定値に変動
が大きく、再現性が低い問題点の有ることが判って来
た。
は、抗体（又は抗原）が固定化された担体が用いられ
る。この固定化担体は、抗体（又は抗原）溶液中に担体
を入れ、担体に抗体（又は抗原）を吸着させることで製
造されている。しかしながら、このようにして得られた
固定化担体を用いての免疫測定では、その測定値に変動
が大きく、再現性が低い問題点の有ることが判って来
た。
【０００５】
【発明の開示】本発明の目的は、流体試料中の特定成分
を正確に、精度及び再現性良く定量できる技術を提供す
ることである。この本発明の目的は、担体が抗体（又は
抗原）溶液に浸される工程と、担体が実質上ずれない程
度の速度で前記抗体（又は抗原）溶液が入れられている
容器を動かせる作動工程とを有することを特徴とする固
定化担体の製造方法によって達成される。
を正確に、精度及び再現性良く定量できる技術を提供す
ることである。この本発明の目的は、担体が抗体（又は
抗原）溶液に浸される工程と、担体が実質上ずれない程
度の速度で前記抗体（又は抗原）溶液が入れられている
容器を動かせる作動工程とを有することを特徴とする固
定化担体の製造方法によって達成される。
【０００６】又、バスケット内の担体が抗体（又は抗
原）溶液に浸される工程と、バスケット内の担体が実質
上ずれない程度の速度でバスケットを抗体（又は抗原）
溶液に対して相対的に動かせる作動工程とを有すること
を特徴とする固定化担体の製造方法によって達成され
る。抗体（又は抗原）が物理的及び／又は化学的に結合
される担体は多孔質なものであることが好ましく、この
ような担体の材料としてはケイ藻土、二酸化チタン、硫
酸バリウム、酸化亜鉛、酸化鉛、微結晶セルロース、ケ
イ砂、ガラス、シリカゲル、架橋デキストリン、架橋ポ
リアクリルアミド、アガロース、架橋アガロース、ポリ
スチレン等の各種の合成樹脂が挙げられる。そして、こ
のような素材の多孔質担体であれば、抗体（又は抗原）
が固定化される一次的な形状は粒子（ビーズ）状、棒状
あるいはプレート状のものであっても差し支えないが、
粒子（ビーズ）状のものが好ましい。
原）溶液に浸される工程と、バスケット内の担体が実質
上ずれない程度の速度でバスケットを抗体（又は抗原）
溶液に対して相対的に動かせる作動工程とを有すること
を特徴とする固定化担体の製造方法によって達成され
る。抗体（又は抗原）が物理的及び／又は化学的に結合
される担体は多孔質なものであることが好ましく、この
ような担体の材料としてはケイ藻土、二酸化チタン、硫
酸バリウム、酸化亜鉛、酸化鉛、微結晶セルロース、ケ
イ砂、ガラス、シリカゲル、架橋デキストリン、架橋ポ
リアクリルアミド、アガロース、架橋アガロース、ポリ
スチレン等の各種の合成樹脂が挙げられる。そして、こ
のような素材の多孔質担体であれば、抗体（又は抗原）
が固定化される一次的な形状は粒子（ビーズ）状、棒状
あるいはプレート状のものであっても差し支えないが、
粒子（ビーズ）状のものが好ましい。
【０００７】抗体又は抗原は、これら多孔質の不溶化担
体に、化学的及び／又は物理的に直接、あるいは間接的
に結合させることができる。例えば、ポリスチレンビー
ズのような担体を抗体（又は抗原）溶液が入れられた容
器中に浸け、その後担体がほとんど動かないような低速
度で容器を回転させることによって、又は、図１に示す
如く、メッシュ状のバスケット１内に入れられたポリス
チレンビーズ２を抗体または抗原の溶液が入れられた容
器３内に吊り下げて浸し、ポリスチレンビーズ２がずれ
ない程度の速度でバスケット１又は容器３を回転させる
ことにより、ポリスチレンビーズ２に均一に抗体（又は
抗原）を結合させることが出来る。尚、この時、ポリス
チレンビーズ２に変位力を作用させないで抗体（又は抗
原）溶液のみに流動力を付与させても良く、例えば攪拌
子による攪拌手段、噴流力の印加手段、熱による対流を
与えても良い。その他の点に関する結合技術について
は、１９７６年、講談社発行、千畑一郎ほか２名編「実
験と応用 アフィニティクロマトグラフィー」（第１
刷）、１９７５年、講談社発行、山崎 誠ほか２名編
「アフィニティクロマトグラフィー」（第１版）を参考
にできる。尚、結合反応後、標識抗体（又は抗原）の非
特異反応を排除する目的で、測定すべき特異的反応に関
与しない蛋白質を担持させることができる。それらの代
表的な例としては、哺乳動物及び鳥類の正常血清蛋白
質、アルブミン、スキムミルク、乳酸醗酵物、コラーゲ
ン及びそれらの分解物質等が挙げられる。
体に、化学的及び／又は物理的に直接、あるいは間接的
に結合させることができる。例えば、ポリスチレンビー
ズのような担体を抗体（又は抗原）溶液が入れられた容
器中に浸け、その後担体がほとんど動かないような低速
度で容器を回転させることによって、又は、図１に示す
如く、メッシュ状のバスケット１内に入れられたポリス
チレンビーズ２を抗体または抗原の溶液が入れられた容
器３内に吊り下げて浸し、ポリスチレンビーズ２がずれ
ない程度の速度でバスケット１又は容器３を回転させる
ことにより、ポリスチレンビーズ２に均一に抗体（又は
抗原）を結合させることが出来る。尚、この時、ポリス
チレンビーズ２に変位力を作用させないで抗体（又は抗
原）溶液のみに流動力を付与させても良く、例えば攪拌
子による攪拌手段、噴流力の印加手段、熱による対流を
与えても良い。その他の点に関する結合技術について
は、１９７６年、講談社発行、千畑一郎ほか２名編「実
験と応用 アフィニティクロマトグラフィー」（第１
刷）、１９７５年、講談社発行、山崎 誠ほか２名編
「アフィニティクロマトグラフィー」（第１版）を参考
にできる。尚、結合反応後、標識抗体（又は抗原）の非
特異反応を排除する目的で、測定すべき特異的反応に関
与しない蛋白質を担持させることができる。それらの代
表的な例としては、哺乳動物及び鳥類の正常血清蛋白
質、アルブミン、スキムミルク、乳酸醗酵物、コラーゲ
ン及びそれらの分解物質等が挙げられる。
【０００８】免疫測定においては、試料としてあらゆる
形態の溶液、コロイド溶液などが使用しうるが、好まし
くは生物由来の流体試料、例えば血液、血漿、血清、脳
脊髄液、唾液、羊水、乳、尿、汗、肉汁等が挙げられ
る。測定しうる流体試料中での特定成分は、その特定成
分に特異的に結合する物質が存在しうる物質（物質群）
である。すなわち、ポリペプチド、蛋白質、複合蛋白
質、多糖類、脂質、複合脂質、核酸、ホルモン類、ビタ
ミン類、薬剤、抗生物質、農薬等が挙げられる。具体的
には、特開昭６２−９０５３９号公報や特開昭６３−１
３１０６２号公報に記載の物質（物質群）を挙げること
ができるが、これらに限定されるものではない。
形態の溶液、コロイド溶液などが使用しうるが、好まし
くは生物由来の流体試料、例えば血液、血漿、血清、脳
脊髄液、唾液、羊水、乳、尿、汗、肉汁等が挙げられ
る。測定しうる流体試料中での特定成分は、その特定成
分に特異的に結合する物質が存在しうる物質（物質群）
である。すなわち、ポリペプチド、蛋白質、複合蛋白
質、多糖類、脂質、複合脂質、核酸、ホルモン類、ビタ
ミン類、薬剤、抗生物質、農薬等が挙げられる。具体的
には、特開昭６２−９０５３９号公報や特開昭６３−１
３１０６２号公報に記載の物質（物質群）を挙げること
ができるが、これらに限定されるものではない。
【０００９】免疫測定において用いられる標識物質とし
ては通常の免疫測定法で一般に使用できるものが使用で
き、例えば放射性物質、発光物質、蛍光物質などが挙げ
られ、又、酵素、酵素基質、酵素及び酵素前駆体の活性
を変化させる物質（酵素阻害物質、補欠分子族、補酵
素）、酵素前駆体、アポ酵素なども使用できる。具体的
な物質としては、特開昭６２−９０５３９号公報などに
記載のものが挙げられるが、好ましくは酵素、又は螢光
物質であり、さらに好ましくはβ−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ、アルカリホスフォダーゼ、ペルオキシダーゼ、グル
コースオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ、
アミラーゼなどの酵素である。これらの酵素を標識物質
とする場合、酵素反応系、発色系は公知のものを使用で
きる。具体的には、特開昭６１−２９２０６０号公報、
特開昭６２−９０５３９号公報、特開昭６３−１３１０
６２号公報、特開昭６３−４５５６２号公報、特願昭６
３−２１９８９３号明細書に記載の物質（物質群）が挙
げられるが、これらに限定されるものではない。そし
て、これら標識物質の抗体（抗原）への結合は、当業者
間で知られている公知の試薬と方法で行うことができ、
例えば石川 栄治、河合忠、宮井潔 編「酵素免疫測定
法（第３版）、医学書院、１９８７年」や日本臨床病理
学会編「臨床病理」臨時増刊特集第５３号「臨床検査の
為のイムノアッセイ−技術と応用−、臨床病理刊行会、
１９８３年」などに記載された方法を参考にすることが
できる。
ては通常の免疫測定法で一般に使用できるものが使用で
き、例えば放射性物質、発光物質、蛍光物質などが挙げ
られ、又、酵素、酵素基質、酵素及び酵素前駆体の活性
を変化させる物質（酵素阻害物質、補欠分子族、補酵
素）、酵素前駆体、アポ酵素なども使用できる。具体的
な物質としては、特開昭６２−９０５３９号公報などに
記載のものが挙げられるが、好ましくは酵素、又は螢光
物質であり、さらに好ましくはβ−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ、アルカリホスフォダーゼ、ペルオキシダーゼ、グル
コースオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ、
アミラーゼなどの酵素である。これらの酵素を標識物質
とする場合、酵素反応系、発色系は公知のものを使用で
きる。具体的には、特開昭６１−２９２０６０号公報、
特開昭６２−９０５３９号公報、特開昭６３−１３１０
６２号公報、特開昭６３−４５５６２号公報、特願昭６
３−２１９８９３号明細書に記載の物質（物質群）が挙
げられるが、これらに限定されるものではない。そし
て、これら標識物質の抗体（抗原）への結合は、当業者
間で知られている公知の試薬と方法で行うことができ、
例えば石川 栄治、河合忠、宮井潔 編「酵素免疫測定
法（第３版）、医学書院、１９８７年」や日本臨床病理
学会編「臨床病理」臨時増刊特集第５３号「臨床検査の
為のイムノアッセイ−技術と応用−、臨床病理刊行会、
１９８３年」などに記載された方法を参考にすることが
できる。
【００１０】本発明で使用される抗体は、その由来を特
に限定されるものではなく、哺乳動物等に抗原を投与、
免疫して得られる抗血清、腹水液をそのままか、あるい
は従来公知の方法である硫酸ナトリウム沈澱法、硫酸ア
ンモニウム沈澱法、セファデックスゲルによるゲル濾過
法、イオン交換セルロースクロマトグラフィ法、電気泳
動法等（右田俊介偏「免疫化学」中山書店ｐｐ７４〜８
８参照）で精製して用いることができる。あるいは、抗
原で感作した哺乳動物など（例えばマウス）の脾臓細胞
や骨髄腫細胞（ミエローマ）から雑種細胞（ハイブリド
ーマ）を得てモノクローナル抗体を作成し、これを特定
成分と特異的に結合しうる物質として使用すると特異性
が向上し、好ましい。又、これらの抗体はＩｇＧ、Ｉｇ
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ各分画を用いることがで
き、或いはこれらの抗体を酵素処理してＦａｂ、Ｆａ
ｂ’又はＦ（ａｂ’）2 といった活性抗体フラグメント
にして使用しても良い。さらに、これらの抗体は単一で
使用しても、複数の抗体を組み合わせて使用しても良
い。
に限定されるものではなく、哺乳動物等に抗原を投与、
免疫して得られる抗血清、腹水液をそのままか、あるい
は従来公知の方法である硫酸ナトリウム沈澱法、硫酸ア
ンモニウム沈澱法、セファデックスゲルによるゲル濾過
法、イオン交換セルロースクロマトグラフィ法、電気泳
動法等（右田俊介偏「免疫化学」中山書店ｐｐ７４〜８
８参照）で精製して用いることができる。あるいは、抗
原で感作した哺乳動物など（例えばマウス）の脾臓細胞
や骨髄腫細胞（ミエローマ）から雑種細胞（ハイブリド
ーマ）を得てモノクローナル抗体を作成し、これを特定
成分と特異的に結合しうる物質として使用すると特異性
が向上し、好ましい。又、これらの抗体はＩｇＧ、Ｉｇ
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ各分画を用いることがで
き、或いはこれらの抗体を酵素処理してＦａｂ、Ｆａ
ｂ’又はＦ（ａｂ’）2 といった活性抗体フラグメント
にして使用しても良い。さらに、これらの抗体は単一で
使用しても、複数の抗体を組み合わせて使用しても良
い。
【００１１】本発明で使用する抗原は特異抗体と反応す
るものであり、ハプテン及びその誘導体を含有する。免
疫測定方法による反応型式としては、競合法、２抗体
法、サンドイッチ法などが挙げられるが、特に限定はさ
れない。又、他の生物活性物質（例えば、ビオチン、ア
ビジン）を利用した免疫測定方法も適用できる。本明細
書においては、流体試料中の特定成分を測定するのに反
応型式として免疫反応を挙げているが、免疫反応に準ず
る生物活性を示す物質の特異反応（本明細書では、この
特異反応も免疫反応に包含）を利用することも可能であ
る。
るものであり、ハプテン及びその誘導体を含有する。免
疫測定方法による反応型式としては、競合法、２抗体
法、サンドイッチ法などが挙げられるが、特に限定はさ
れない。又、他の生物活性物質（例えば、ビオチン、ア
ビジン）を利用した免疫測定方法も適用できる。本明細
書においては、流体試料中の特定成分を測定するのに反
応型式として免疫反応を挙げているが、免疫反応に準ず
る生物活性を示す物質の特異反応（本明細書では、この
特異反応も免疫反応に包含）を利用することも可能であ
る。
【００１２】標識に起因した信号は、吸光度法（比色
法) 、螢光法、発光法または放射活性測定法で検出する
ことができ、測定法としては信号の経時的変化を測定す
るレート測定法または一定時間後の信号を測定するエン
ドポイント測定法で測定することができる。好ましくは
吸光度法であり、吸光度法（比色法) では紫外線、可視
光、近赤外光を利用することができる。
法) 、螢光法、発光法または放射活性測定法で検出する
ことができ、測定法としては信号の経時的変化を測定す
るレート測定法または一定時間後の信号を測定するエン
ドポイント測定法で測定することができる。好ましくは
吸光度法であり、吸光度法（比色法) では紫外線、可視
光、近赤外光を利用することができる。
【００１３】
〔バスケットを回転させての固定化ビーズの作製〕特願
平２−５４５６７号に記載された方法で作製された癌関
連ガラクトース転移酵素（ＧＡＴ）に対するモノクロー
ナル抗体を１ＭのＮａＣｌを溶解した０．１Ｍの炭酸バ
ッファー（ｐＨ９．５）に１０μｇ／ｍｌになるよう溶
解し、この抗体溶液１０００ｍｌを図１に示すようなプ
ラスチック容器３に入れた。
平２−５４５６７号に記載された方法で作製された癌関
連ガラクトース転移酵素（ＧＡＴ）に対するモノクロー
ナル抗体を１ＭのＮａＣｌを溶解した０．１Ｍの炭酸バ
ッファー（ｐＨ９．５）に１０μｇ／ｍｌになるよう溶
解し、この抗体溶液１０００ｍｌを図１に示すようなプ
ラスチック容器３に入れた。
【００１４】次に、メッシュ状のバスケット１にポリス
チレンビーズ（積水化学＃８０）２を入れ、このバスケ
ット１をプラスチック容器３内に吊り下げ、ポリスチレ
ンビーズ２を抗体溶液に浸した。そして、バスケット１
を、例えば３ｒｐｍで回転させ、４℃下において一昼夜
かけて抗体を固定化した。尚、この回転速度では、ポリ
スチレンビーズ２はバスケット１内で動くことはなく、
回転座標系では静止したものと見なせることができ、つ
まり回転座標系では抗体溶液のみが流動しているものと
見なせることができる。
チレンビーズ（積水化学＃８０）２を入れ、このバスケ
ット１をプラスチック容器３内に吊り下げ、ポリスチレ
ンビーズ２を抗体溶液に浸した。そして、バスケット１
を、例えば３ｒｐｍで回転させ、４℃下において一昼夜
かけて抗体を固定化した。尚、この回転速度では、ポリ
スチレンビーズ２はバスケット１内で動くことはなく、
回転座標系では静止したものと見なせることができ、つ
まり回転座標系では抗体溶液のみが流動しているものと
見なせることができる。
【００１５】この後、リン酸バッファー（ＰＢＳ）で洗
浄した後、０．００２％のｐ−ヒドロキシ安息香酸−ｎ
−ブチルを含有する１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液に浸し、３
７℃で２４時間攪拌しつつインキュベートし、その後−
４０℃で凍結し、凍結乾燥した。 〔実施例２〕 〔容器を低速回転させての固定化ビーズの作製〕癌関連
ガラクトース転移酵素（ＧＡＴ）に対するモノクローナ
ル抗体を１ＭのＮａＣｌを溶解した０．１Ｍの炭酸バッ
ファー（ｐＨ９．５）に１０μｇ／ｍｌになるよう溶解
し、この抗体溶液１０００ｍｌをプラスチック容器に入
れた。
浄した後、０．００２％のｐ−ヒドロキシ安息香酸−ｎ
−ブチルを含有する１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液に浸し、３
７℃で２４時間攪拌しつつインキュベートし、その後−
４０℃で凍結し、凍結乾燥した。 〔実施例２〕 〔容器を低速回転させての固定化ビーズの作製〕癌関連
ガラクトース転移酵素（ＧＡＴ）に対するモノクローナ
ル抗体を１ＭのＮａＣｌを溶解した０．１Ｍの炭酸バッ
ファー（ｐＨ９．５）に１０μｇ／ｍｌになるよう溶解
し、この抗体溶液１０００ｍｌをプラスチック容器に入
れた。
【００１６】又、ポリスチレンビーズ（積水化学＃８
０）もプラスチック容器に入れ、このプラスチック容器
を低速度で回転（０．０３〜０．５ｒｐｍ）させた。そ
して、４℃下において一昼夜かけて抗体を固定化した。
リン酸バッファー（ＰＢＳ）で洗浄した後、０．００２
％のｐ−ヒドロキシ安息香酸−ｎ−ブチルを含有する１
％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液に浸し、３７℃で２４時間攪拌し
つつインキュベートし、その後−４０℃で凍結し、凍結
乾燥した。
０）もプラスチック容器に入れ、このプラスチック容器
を低速度で回転（０．０３〜０．５ｒｐｍ）させた。そ
して、４℃下において一昼夜かけて抗体を固定化した。
リン酸バッファー（ＰＢＳ）で洗浄した後、０．００２
％のｐ−ヒドロキシ安息香酸−ｎ−ブチルを含有する１
％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液に浸し、３７℃で２４時間攪拌し
つつインキュベートし、その後−４０℃で凍結し、凍結
乾燥した。
【００１７】〔比較例１〕 〔静置による固定化ビーズの作製〕上記実施例１のよう
なことを行わず、すなわち静置し、抗体溶液及びＢＳＡ
溶液にポリスチレンビーズ（積水化学＃８０）を浸して
作製した。 〔比較例２〕 〔容器全体を高速回転させることによる固定化ビーズの
作製〕実施例２においての回転速度を１ｒｐｍとして同
様に行った。
なことを行わず、すなわち静置し、抗体溶液及びＢＳＡ
溶液にポリスチレンビーズ（積水化学＃８０）を浸して
作製した。 〔比較例２〕 〔容器全体を高速回転させることによる固定化ビーズの
作製〕実施例２においての回転速度を１ｒｐｍとして同
様に行った。
【００１８】〔免疫測定〕前記各例で作製した抗体固定
化ビーズを、１０Ｕ／ｍｌ、３０Ｕ／ｍｌ、９０Ｕ／ｍ
ｌのＧＡＴ標準液０．０５ｍｌと１Ｍの塩化ナトリウム
を溶解した５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）０．
２ｍｌとを混合した液の中に入れ、３７℃で２時間イン
キュベートした。
化ビーズを、１０Ｕ／ｍｌ、３０Ｕ／ｍｌ、９０Ｕ／ｍ
ｌのＧＡＴ標準液０．０５ｍｌと１Ｍの塩化ナトリウム
を溶解した５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）０．
２ｍｌとを混合した液の中に入れ、３７℃で２時間イン
キュベートした。
【００１９】ＰＢＳで洗浄後、固定化抗体とは異なる部
位を認識する抗ＧＡＴモノクローナル抗体を石川 栄
治、河合 忠、宮井潔 編「酵素免疫測定法（第３
版）、医学書院、１９８７年」ｐｐ１０８，１０９記載
の方法で標識したペルオキシダーゼ標識抗ＧＡＴモノク
ローナル抗体の１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液（０．５μｇ／
ｍｌ）を０．２５ｍｌ加え、室温で１時間インキュベー
トした。
位を認識する抗ＧＡＴモノクローナル抗体を石川 栄
治、河合 忠、宮井潔 編「酵素免疫測定法（第３
版）、医学書院、１９８７年」ｐｐ１０８，１０９記載
の方法で標識したペルオキシダーゼ標識抗ＧＡＴモノク
ローナル抗体の１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液（０．５μｇ／
ｍｌ）を０．２５ｍｌ加え、室温で１時間インキュベー
トした。
【００２０】ＰＢＳで洗浄後、３ｍｇ／ｍｌのｏ−フェ
ニレンジアミンを溶解したクエン酸−リン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５．０、０．０２％過酸化水素含有）０．３ｍｌを加
え、室温で３０分間発色させた。そして、１Ｎの硫酸１
ｍｌで発色反応を停止し、４９２ｎｍの吸光度を測定し
た。各々の濃度の標準液についてｎ＝５０で測定し、変
動係数ＣＶを求めたので、その結果を下記の表に示す。
ニレンジアミンを溶解したクエン酸−リン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５．０、０．０２％過酸化水素含有）０．３ｍｌを加
え、室温で３０分間発色させた。そして、１Ｎの硫酸１
ｍｌで発色反応を停止し、４９２ｎｍの吸光度を測定し
た。各々の濃度の標準液についてｎ＝５０で測定し、変
動係数ＣＶを求めたので、その結果を下記の表に示す。
【００２１】 表 １０Ｕ／ｍｌ ３０Ｕ／ｍｌ ９０Ｕ／ｍｌ 回転速度 実施例１ ３．１％ ２．２％ ２．１％ 実施例２ ４．３％ ３．１％ ２．８％ ０．５ｒｐｍ ３．６％ ３．３％ ３．３％ ０．２ｒｐｍ ３．３％ ３．５％ ２．５％ ０．１ｒｐｍ ４．４％ ３．３％ ３．６％ ０．０３ｒｐｍ 比較例１ １０．７％ ８．３％ ６．４％ 比較例２ ８．２％ ５．７％ ５．１％ １．０ｒｐｍ これによれば、本発明により得られる抗体（又は抗原）
が固定化された担体を用いての免疫測定法は、変動係数
が格段に小さく、流体試料中の特定成分を正確に、精度
及び再現性良く定量できることが判る。
が固定化された担体を用いての免疫測定法は、変動係数
が格段に小さく、流体試料中の特定成分を正確に、精度
及び再現性良く定量できることが判る。
【図１】本発明の固定化担体の製造方法に用いられる装
置の概略図である。
置の概略図である。
１ バスケット ２ ポリスチレンビーズ ３ 容器
Claims (2)
- 【請求項１】 担体が抗体（又は抗原）溶液に浸される
工程と、担体が実質上ずれない程度の速度で前記抗体
（又は抗原）溶液が入れられている容器を動かせる作動
工程とを有することを特徴とする固定化担体の製造方
法。 - 【請求項２】 バスケット内の担体が抗体（又は抗原）
溶液に浸される工程と、バスケット内の担体が実質上ず
れない程度の速度でバスケットを抗体（又は抗原）溶液
に対して相対的に動かせる作動工程とを有することを特
徴とする固定化担体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25238791A JPH0587811A (ja) | 1991-09-30 | 1991-09-30 | 固定化担体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25238791A JPH0587811A (ja) | 1991-09-30 | 1991-09-30 | 固定化担体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0587811A true JPH0587811A (ja) | 1993-04-06 |
Family
ID=17236618
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25238791A Pending JPH0587811A (ja) | 1991-09-30 | 1991-09-30 | 固定化担体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0587811A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000047236A1 (en) * | 1999-02-12 | 2000-08-17 | Biostream, Inc. | Matrices for drug delivery and methods for making and using the same |
| WO2015156329A1 (ja) * | 2014-04-09 | 2015-10-15 | 国立大学法人 群馬大学 | 熱帯熱マラリア原虫感染症の検査及び診断薬、並びに検査及び診断キット |
-
1991
- 1991-09-30 JP JP25238791A patent/JPH0587811A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000047236A1 (en) * | 1999-02-12 | 2000-08-17 | Biostream, Inc. | Matrices for drug delivery and methods for making and using the same |
| US6395299B1 (en) | 1999-02-12 | 2002-05-28 | Biostream, Inc. | Matrices for drug delivery and methods for making and using the same |
| US7052913B2 (en) | 1999-02-12 | 2006-05-30 | Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. | Matrices for drug delivery and methods for making and using the same |
| WO2015156329A1 (ja) * | 2014-04-09 | 2015-10-15 | 国立大学法人 群馬大学 | 熱帯熱マラリア原虫感染症の検査及び診断薬、並びに検査及び診断キット |
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