JPH0587811A - Manufacture of carrier for fixing - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To enable accurate and reproduciable quantitative measurement of specific components in a fluid sample by providing a process in which carriers are immersed in antibody (or antigen) solution and an operation process in which a container where the antibody (or antigen) solution is contained is moved at an approximate rate where the carriers are not substantially be deviated. CONSTITUTION:For example, a specified antibody solution 1000ml is put in a plastic container 3. Next, polystyrene beads 2 are put in a mesh basket 1, and the basket 1 is suspended in the container 3 to immerse the polystyrene beads 2 in the antibody solution. Then the basket 1 is, for example, rotated at a rate of 3 rpm at a temperature of 4 deg.C or below for one full day to fix the antibody. After that, they are washed by phosphoric buffer, immersed in a specified solution, incubated while being agitated at 37 deg.C for 24 hours, freezed at -40 deg.C, and dried. In an immunity measurement method, in which a carrier on which the antibody (or antigen) thus obtained is fixed is used, specific components in a fluid sample can be quantified accurately.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、流体試料中の微量成
分、特に生物学的流体試料中の特定微量成分を測定する
に際して用いられる固定化担体の製造方法に関するもの
である。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for producing an immobilization carrier used for measuring a trace component in a fluid sample, particularly a specific trace component in a biological fluid sample.

【０００２】[0002]

【発明の背景】生物学的流体試料中に極微量含有される
物質を検出する方法として、各種の分析法が開発されて
来ている。この分析法の一つとして、免疫反応をその原
理とするものがある。そして、この原理を用いた測定法
として種々のものが開発され、精度の高いものとして知
られている。BACKGROUND OF THE INVENTION Various analytical methods have been developed as a method for detecting a substance contained in a trace amount in a biological fluid sample. As one of the analysis methods, there is one that uses an immune reaction as its principle. Various measuring methods using this principle have been developed and are known to be highly accurate.

【０００３】すなわち、１９５８年にＢｅｒｓｏｎとＹ
ａｌｌｏｗが、放射性同位元素Ｉで標識した牛インシュ
リンと糖尿病患者血清中の抗インシュリン抗体を用い
て、血清中のインシュリンを測定することに成功して以
来、ラジオアイソトープを用いた免疫測定法が広く用い
られて来た。そして、これ以後、標識物質として放射性
同位元素以外のものも種々開発されて来た。例えば、酵
素、酵素基質、補酵素、酵素阻害物質、バクテリオファ
ージ、循環反応体、金属及び有機金属の錯体、有機補欠
分子族、化学発光性反応体及び螢光性分子等が挙げられ
る。That is, Berson and Y in 1958
Since allow succeeded in measuring serum insulin using bovine insulin labeled with radioisotope I and anti-insulin antibody in serum of diabetic patients, immunoassays using radioisotopes have been widely used. I've been taken. Since then, various substances other than radioisotopes have been developed as labeling substances. Examples include enzymes, enzyme substrates, coenzymes, enzyme inhibitors, bacteriophages, circulating reactants, metal and organometallic complexes, organic prosthetic groups, chemiluminescent reactants and fluorescent molecules.

【０００４】ところで、免疫測定が行われるに際して
は、抗体（又は抗原）が固定化された担体が用いられ
る。この固定化担体は、抗体（又は抗原）溶液中に担体
を入れ、担体に抗体（又は抗原）を吸着させることで製
造されている。しかしながら、このようにして得られた
固定化担体を用いての免疫測定では、その測定値に変動
が大きく、再現性が低い問題点の有ることが判って来
た。By the way, when immunoassay is performed, a carrier on which an antibody (or an antigen) is immobilized is used. This immobilized carrier is produced by putting the carrier in an antibody (or antigen) solution and adsorbing the antibody (or antigen) on the carrier. However, in immunoassays using the thus obtained immobilized carrier, it has been found that there are problems in that the measured values vary greatly and reproducibility is low.

【０００５】[0005]

【発明の開示】本発明の目的は、流体試料中の特定成分
を正確に、精度及び再現性良く定量できる技術を提供す
ることである。この本発明の目的は、担体が抗体（又は
抗原）溶液に浸される工程と、担体が実質上ずれない程
度の速度で前記抗体（又は抗原）溶液が入れられている
容器を動かせる作動工程とを有することを特徴とする固
定化担体の製造方法によって達成される。DISCLOSURE OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a technique capable of accurately and precisely quantifying a specific component in a fluid sample. The object of the present invention is to immerse a carrier in an antibody (or antigen) solution, and to operate a container containing the antibody (or antigen) solution at a speed such that the carrier does not substantially shift. It is achieved by a method for producing an immobilization carrier, which comprises:

【０００６】又、バスケット内の担体が抗体（又は抗
原）溶液に浸される工程と、バスケット内の担体が実質
上ずれない程度の速度でバスケットを抗体（又は抗原）
溶液に対して相対的に動かせる作動工程とを有すること
を特徴とする固定化担体の製造方法によって達成され
る。抗体（又は抗原）が物理的及び／又は化学的に結合
される担体は多孔質なものであることが好ましく、この
ような担体の材料としてはケイ藻土、二酸化チタン、硫
酸バリウム、酸化亜鉛、酸化鉛、微結晶セルロース、ケ
イ砂、ガラス、シリカゲル、架橋デキストリン、架橋ポ
リアクリルアミド、アガロース、架橋アガロース、ポリ
スチレン等の各種の合成樹脂が挙げられる。そして、こ
のような素材の多孔質担体であれば、抗体（又は抗原）
が固定化される一次的な形状は粒子（ビーズ）状、棒状
あるいはプレート状のものであっても差し支えないが、
粒子（ビーズ）状のものが好ましい。[0006] Further, the step of immersing the carrier in the basket in the antibody (or antigen) solution and the step of immersing the basket in the basket at the speed at which the carrier in the basket does not substantially shift
And an actuating step that can be moved relative to the solution. The carrier to which the antibody (or antigen) is physically and / or chemically bound is preferably porous, and the material for such carrier is diatomaceous earth, titanium dioxide, barium sulfate, zinc oxide, Examples thereof include various synthetic resins such as lead oxide, microcrystalline cellulose, silica sand, glass, silica gel, crosslinked dextrin, crosslinked polyacrylamide, agarose, crosslinked agarose, and polystyrene. And if it is a porous carrier of such a material, an antibody (or an antigen)
The primary shape on which is immobilized may be particles (beads), rods, or plates,
Particles (beads) are preferable.

【０００７】抗体又は抗原は、これら多孔質の不溶化担
体に、化学的及び／又は物理的に直接、あるいは間接的
に結合させることができる。例えば、ポリスチレンビー
ズのような担体を抗体（又は抗原）溶液が入れられた容
器中に浸け、その後担体がほとんど動かないような低速
度で容器を回転させることによって、又は、図１に示す
如く、メッシュ状のバスケット１内に入れられたポリス
チレンビーズ２を抗体または抗原の溶液が入れられた容
器３内に吊り下げて浸し、ポリスチレンビーズ２がずれ
ない程度の速度でバスケット１又は容器３を回転させる
ことにより、ポリスチレンビーズ２に均一に抗体（又は
抗原）を結合させることが出来る。尚、この時、ポリス
チレンビーズ２に変位力を作用させないで抗体（又は抗
原）溶液のみに流動力を付与させても良く、例えば攪拌
子による攪拌手段、噴流力の印加手段、熱による対流を
与えても良い。その他の点に関する結合技術について
は、１９７６年、講談社発行、千畑一郎ほか２名編「実
験と応用 アフィニティクロマトグラフィー」（第１
刷）、１９７５年、講談社発行、山崎 誠ほか２名編
「アフィニティクロマトグラフィー」（第１版）を参考
にできる。尚、結合反応後、標識抗体（又は抗原）の非
特異反応を排除する目的で、測定すべき特異的反応に関
与しない蛋白質を担持させることができる。それらの代
表的な例としては、哺乳動物及び鳥類の正常血清蛋白
質、アルブミン、スキムミルク、乳酸醗酵物、コラーゲ
ン及びそれらの分解物質等が挙げられる。The antibody or antigen can be bound chemically or / and physically directly or indirectly to these porous insolubilized carriers. For example, by immersing a carrier such as polystyrene beads in a container containing an antibody (or antigen) solution, and then rotating the container at a low speed so that the carrier hardly moves, or as shown in FIG. The polystyrene beads 2 contained in the mesh basket 1 are suspended and dipped in the container 3 containing the antibody or antigen solution, and the basket 1 or container 3 is rotated at such a speed that the polystyrene beads 2 are not displaced. As a result, the antibody (or antigen) can be uniformly bound to the polystyrene beads 2. At this time, flow force may be applied only to the antibody (or antigen) solution without applying displacement force to the polystyrene beads 2, for example, stirring means by a stirrer, jet force applying means, convection by heat is applied. May be. Regarding the binding technology in other respects, 1976, published by Kodansha, Ichiro Senbata et al., "Experiment and Application Affinity Chromatography" (No. 1)
(Printed), published in 1975 by Kodansha, Makoto Yamazaki et al., "Affinity Chromatography" (1st edition), edited by 2 members. After the binding reaction, a protein that does not participate in the specific reaction to be measured can be loaded for the purpose of eliminating the nonspecific reaction of the labeled antibody (or antigen). Typical examples thereof include normal mammalian and avian serum proteins, albumin, skim milk, lactic acid fermentation products, collagen, and degradation products thereof.

【０００８】免疫測定においては、試料としてあらゆる
形態の溶液、コロイド溶液などが使用しうるが、好まし
くは生物由来の流体試料、例えば血液、血漿、血清、脳
脊髄液、唾液、羊水、乳、尿、汗、肉汁等が挙げられ
る。測定しうる流体試料中での特定成分は、その特定成
分に特異的に結合する物質が存在しうる物質（物質群）
である。すなわち、ポリペプチド、蛋白質、複合蛋白
質、多糖類、脂質、複合脂質、核酸、ホルモン類、ビタ
ミン類、薬剤、抗生物質、農薬等が挙げられる。具体的
には、特開昭６２−９０５３９号公報や特開昭６３−１
３１０６２号公報に記載の物質（物質群）を挙げること
ができるが、これらに限定されるものではない。In the immunoassay, any form of solution, colloidal solution and the like can be used as a sample, but preferably a biological fluid sample such as blood, plasma, serum, cerebrospinal fluid, saliva, amniotic fluid, milk, urine , Sweat, gravy, etc. A specific component in a measurable fluid sample is a substance (substance group) in which a substance that specifically binds to the specific component may exist.
Is. That is, examples thereof include polypeptides, proteins, complex proteins, polysaccharides, lipids, complex lipids, nucleic acids, hormones, vitamins, drugs, antibiotics, pesticides and the like. Specifically, JP-A-62-90539 and JP-A-63-1
The substances (substance groups) described in Japanese Patent No. 31062 can be mentioned, but the substances are not limited thereto.

【０００９】免疫測定において用いられる標識物質とし
ては通常の免疫測定法で一般に使用できるものが使用で
き、例えば放射性物質、発光物質、蛍光物質などが挙げ
られ、又、酵素、酵素基質、酵素及び酵素前駆体の活性
を変化させる物質（酵素阻害物質、補欠分子族、補酵
素）、酵素前駆体、アポ酵素なども使用できる。具体的
な物質としては、特開昭６２−９０５３９号公報などに
記載のものが挙げられるが、好ましくは酵素、又は螢光
物質であり、さらに好ましくはβ−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ、アルカリホスフォダーゼ、ペルオキシダーゼ、グル
コースオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ、
アミラーゼなどの酵素である。これらの酵素を標識物質
とする場合、酵素反応系、発色系は公知のものを使用で
きる。具体的には、特開昭６１−２９２０６０号公報、
特開昭６２−９０５３９号公報、特開昭６３−１３１０
６２号公報、特開昭６３−４５５６２号公報、特願昭６
３−２１９８９３号明細書に記載の物質（物質群）が挙
げられるが、これらに限定されるものではない。そし
て、これら標識物質の抗体（抗原）への結合は、当業者
間で知られている公知の試薬と方法で行うことができ、
例えば石川 栄治、河合忠、宮井潔 編「酵素免疫測定
法（第３版）、医学書院、１９８７年」や日本臨床病理
学会編「臨床病理」臨時増刊特集第５３号「臨床検査の
為のイムノアッセイ−技術と応用−、臨床病理刊行会、
１９８３年」などに記載された方法を参考にすることが
できる。As the labeling substance used in the immunoassay, those generally used in ordinary immunoassays can be used, and examples thereof include radioactive substances, luminescent substances and fluorescent substances, and also enzymes, enzyme substrates, enzymes and enzymes. Substances that change the activity of precursors (enzyme inhibitors, prosthetic groups, coenzymes), enzyme precursors, apoenzymes, etc. can also be used. Specific examples of the substance include those described in JP-A-62-90539, preferably an enzyme or a fluorescent substance, more preferably β-D-galactosidase, alkaline phosphatase, Peroxidase, glucose oxidase, glutamate dehydrogenase,
It is an enzyme such as amylase. When these enzymes are used as the labeling substance, known ones can be used for the enzyme reaction system and the color development system. Specifically, JP-A-61-292060,
JP-A-62-90539, JP-A-63-1310
62, JP-A-63-45562, Japanese Patent Application No. 6
The substances (substance groups) described in the specification of JP-A-3-219893 are included, but the present invention is not limited thereto. Then, the binding of these labeling substances to the antibody (antigen) can be performed by known reagents and methods known to those skilled in the art,
For example, Eiji Ishikawa, Tadashi Kawai, Kiyoshi Miyai, "Enzyme Immunoassay (3rd Edition), Medical Institute, 1987" and the Japanese Society for Clinical Pathology, "Clinical Pathology" Special Issue No. 53, "Immunoassays for clinical tests" -Technology and application-, Clinical Pathology Society,
The method described in “1983” can be referred to.

【００１０】本発明で使用される抗体は、その由来を特
に限定されるものではなく、哺乳動物等に抗原を投与、
免疫して得られる抗血清、腹水液をそのままか、あるい
は従来公知の方法である硫酸ナトリウム沈澱法、硫酸ア
ンモニウム沈澱法、セファデックスゲルによるゲル濾過
法、イオン交換セルロースクロマトグラフィ法、電気泳
動法等（右田俊介偏「免疫化学」中山書店ｐｐ７４〜８
８参照）で精製して用いることができる。あるいは、抗
原で感作した哺乳動物など（例えばマウス）の脾臓細胞
や骨髄腫細胞（ミエローマ）から雑種細胞（ハイブリド
ーマ）を得てモノクローナル抗体を作成し、これを特定
成分と特異的に結合しうる物質として使用すると特異性
が向上し、好ましい。又、これらの抗体はＩｇＧ、Ｉｇ
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ各分画を用いることがで
き、或いはこれらの抗体を酵素処理してＦａｂ、Ｆａ
ｂ’又はＦ（ａｂ’）₂ といった活性抗体フラグメント
にして使用しても良い。さらに、これらの抗体は単一で
使用しても、複数の抗体を組み合わせて使用しても良
い。The origin of the antibody used in the present invention is not particularly limited, and the antigen is administered to mammals,
The antiserum and ascites fluid obtained by immunization may be used as they are, or may be a conventionally known method such as sodium sulfate precipitation method, ammonium sulfate precipitation method, gel filtration method using Sephadex gel, ion exchange cellulose chromatography method, electrophoresis method, etc. Shunsuke Bipolar "Immunochemistry" Nakayama Shoten pp74-8
8) and can be used after purification. Alternatively, hybrid cells (hybridomas) can be obtained from spleen cells or myeloma cells (myeloma) of mammals (eg, mice) sensitized with an antigen to prepare monoclonal antibodies, which can specifically bind to specific components. Use as a substance is preferable because the specificity is improved. In addition, these antibodies are IgG, Ig
Fractions of M, IgA, IgD, and IgE can be used, or Fab and Fa can be obtained by treating these antibodies with an enzyme.
It may be used as an active antibody fragment such as b ′ or F (ab ′) ₂ . Furthermore, these antibodies may be used alone or in combination of a plurality of antibodies.

【００１１】本発明で使用する抗原は特異抗体と反応す
るものであり、ハプテン及びその誘導体を含有する。免
疫測定方法による反応型式としては、競合法、２抗体
法、サンドイッチ法などが挙げられるが、特に限定はさ
れない。又、他の生物活性物質（例えば、ビオチン、ア
ビジン）を利用した免疫測定方法も適用できる。本明細
書においては、流体試料中の特定成分を測定するのに反
応型式として免疫反応を挙げているが、免疫反応に準ず
る生物活性を示す物質の特異反応（本明細書では、この
特異反応も免疫反応に包含）を利用することも可能であ
る。The antigen used in the present invention reacts with a specific antibody and contains a hapten and its derivative. The reaction type by the immunoassay method includes, but is not particularly limited to, the competitive method, the antibody method, the sandwich method and the like. Further, an immunoassay method using another bioactive substance (for example, biotin, avidin) can also be applied. In the present specification, an immune reaction is mentioned as a reaction type for measuring a specific component in a fluid sample, but a specific reaction of a substance showing biological activity according to the immune reaction (this specific reaction is also referred to in the present specification). It is also possible to utilize (included in immune reaction).

【００１２】標識に起因した信号は、吸光度法（比色
法) 、螢光法、発光法または放射活性測定法で検出する
ことができ、測定法としては信号の経時的変化を測定す
るレート測定法または一定時間後の信号を測定するエン
ドポイント測定法で測定することができる。好ましくは
吸光度法であり、吸光度法（比色法) では紫外線、可視
光、近赤外光を利用することができる。The signal caused by the label can be detected by an absorbance method (colorimetric method), a fluorescence method, a luminescence method or a radioactivity measuring method. As a measuring method, a rate measurement for measuring a change with time of the signal is carried out. Method or an endpoint measurement method of measuring a signal after a certain period of time. The absorbance method is preferred, and the absorbance method (colorimetric method) can utilize ultraviolet light, visible light, and near infrared light.

【００１３】[0013]

〔実施例１〕[Example 1]

〔バスケットを回転させての固定化ビーズの作製〕特願
平２−５４５６７号に記載された方法で作製された癌関
連ガラクトース転移酵素（ＧＡＴ）に対するモノクロー
ナル抗体を１ＭのＮａＣｌを溶解した０．１Ｍの炭酸バ
ッファー（ｐＨ９．５）に１０μｇ／ｍｌになるよう溶
解し、この抗体溶液１０００ｍｌを図１に示すようなプ
ラスチック容器３に入れた。[Preparation of immobilized beads by rotating basket] Monoclonal antibody against cancer-associated galactosyltransferase (GAT) prepared by the method described in Japanese Patent Application No. 2-54567 was dissolved in 1M NaCl 0.1M. Was dissolved in the carbonate buffer (pH 9.5) of 10 μg / ml, and 1000 ml of this antibody solution was placed in a plastic container 3 as shown in FIG.

【００１４】次に、メッシュ状のバスケット１にポリス
チレンビーズ（積水化学＃８０）２を入れ、このバスケ
ット１をプラスチック容器３内に吊り下げ、ポリスチレ
ンビーズ２を抗体溶液に浸した。そして、バスケット１
を、例えば３ｒｐｍで回転させ、４℃下において一昼夜
かけて抗体を固定化した。尚、この回転速度では、ポリ
スチレンビーズ２はバスケット１内で動くことはなく、
回転座標系では静止したものと見なせることができ、つ
まり回転座標系では抗体溶液のみが流動しているものと
見なせることができる。Next, polystyrene beads (Sekisui Chemical # 80) 2 were placed in the mesh-shaped basket 1, the basket 1 was suspended in the plastic container 3, and the polystyrene beads 2 were dipped in the antibody solution. And basket 1
Was rotated at, for example, 3 rpm to immobilize the antibody at 4 ° C. overnight. At this rotation speed, the polystyrene beads 2 do not move in the basket 1,
In the rotating coordinate system, it can be regarded as stationary, that is, in the rotating coordinate system, only the antibody solution can be regarded as flowing.

【００１５】この後、リン酸バッファー（ＰＢＳ）で洗
浄した後、０．００２％のｐ−ヒドロキシ安息香酸−ｎ
−ブチルを含有する１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液に浸し、３
７℃で２４時間攪拌しつつインキュベートし、その後−
４０℃で凍結し、凍結乾燥した。 〔実施例２〕 〔容器を低速回転させての固定化ビーズの作製〕癌関連
ガラクトース転移酵素（ＧＡＴ）に対するモノクローナ
ル抗体を１ＭのＮａＣｌを溶解した０．１Ｍの炭酸バッ
ファー（ｐＨ９．５）に１０μｇ／ｍｌになるよう溶解
し、この抗体溶液１０００ｍｌをプラスチック容器に入
れた。Then, after washing with a phosphate buffer (PBS), 0.002% of p-hydroxybenzoic acid-n was added.
-Immerse in 1% BSA-PBS solution containing -butyl, 3
Incubate at 7 ° C for 24 hours with agitation, then-
It was frozen at 40 ° C. and freeze-dried. [Example 2] [Preparation of immobilized beads by rotating container at low speed] 10 µg of a monoclonal antibody against cancer-associated galactosyltransferase (GAT) in 0.1 M carbonate buffer (pH 9.5) in which 1 M NaCl was dissolved. / Ml, and 1000 ml of this antibody solution was placed in a plastic container.

【００１６】又、ポリスチレンビーズ（積水化学＃８
０）もプラスチック容器に入れ、このプラスチック容器
を低速度で回転（０．０３〜０．５ｒｐｍ）させた。そ
して、４℃下において一昼夜かけて抗体を固定化した。
リン酸バッファー（ＰＢＳ）で洗浄した後、０．００２
％のｐ−ヒドロキシ安息香酸−ｎ−ブチルを含有する１
％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液に浸し、３７℃で２４時間攪拌し
つつインキュベートし、その後−４０℃で凍結し、凍結
乾燥した。Polystyrene beads (Sekisui Chemical # 8
0) was also put in a plastic container, and this plastic container was rotated at low speed (0.03 to 0.5 rpm). The antibody was immobilized overnight at 4 ° C.
0.002 after washing with phosphate buffer (PBS)
% -N-butyl p-hydroxybenzoate 1
% BSA-PBS solution, incubated at 37 ° C. for 24 hours with stirring, then frozen at −40 ° C. and lyophilized.

【００１７】〔比較例１〕 〔静置による固定化ビーズの作製〕上記実施例１のよう
なことを行わず、すなわち静置し、抗体溶液及びＢＳＡ
溶液にポリスチレンビーズ（積水化学＃８０）を浸して
作製した。 〔比較例２〕 〔容器全体を高速回転させることによる固定化ビーズの
作製〕実施例２においての回転速度を１ｒｐｍとして同
様に行った。[Comparative Example 1] [Preparation of immobilized beads by standing] The above-mentioned Example 1 was not carried out, that is, standing was carried out, and the antibody solution and BSA were prepared.
It was prepared by dipping polystyrene beads (Sekisui Chemical # 80) in the solution. [Comparative Example 2] [Preparation of immobilized beads by rotating the entire container at high speed] The same procedure as in Example 2 was carried out at a rotation speed of 1 rpm.

【００１８】〔免疫測定〕前記各例で作製した抗体固定
化ビーズを、１０Ｕ／ｍｌ、３０Ｕ／ｍｌ、９０Ｕ／ｍ
ｌのＧＡＴ標準液０．０５ｍｌと１Ｍの塩化ナトリウム
を溶解した５０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）０．
２ｍｌとを混合した液の中に入れ、３７℃で２時間イン
キュベートした。[Immunoassay] The antibody-immobilized beads prepared in each of the above-mentioned examples were used in an amount of 10 U / ml, 30 U / ml, 90 U / m.
0.05 ml of GAT standard solution and 50 mM phosphate buffer solution (pH 6.5) in which 1 M sodium chloride was dissolved.
2 ml was put into a mixed solution and incubated at 37 ° C. for 2 hours.

【００１９】ＰＢＳで洗浄後、固定化抗体とは異なる部
位を認識する抗ＧＡＴモノクローナル抗体を石川 栄
治、河合 忠、宮井潔 編「酵素免疫測定法（第３
版）、医学書院、１９８７年」ｐｐ１０８，１０９記載
の方法で標識したペルオキシダーゼ標識抗ＧＡＴモノク
ローナル抗体の１％ＢＳＡ−ＰＢＳ溶液（０．５μｇ／
ｍｌ）を０．２５ｍｌ加え、室温で１時間インキュベー
トした。After washing with PBS, an anti-GAT monoclonal antibody that recognizes a site different from the immobilized antibody was analyzed by Eiji Ishikawa, Tadashi Kawai, Kiyoshi Miyai, “Enzyme Immunoassay (3rd
Ed.), Igakushoin, 1987 ”, 1% BSA-PBS solution of peroxidase-labeled anti-GAT monoclonal antibody labeled by the method described in pp 108, 109 (0.5 μg /
0.25 ml) was added and incubated at room temperature for 1 hour.

【００２０】ＰＢＳで洗浄後、３ｍｇ／ｍｌのｏ−フェ
ニレンジアミンを溶解したクエン酸−リン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５．０、０．０２％過酸化水素含有）０．３ｍｌを加
え、室温で３０分間発色させた。そして、１Ｎの硫酸１
ｍｌで発色反応を停止し、４９２ｎｍの吸光度を測定し
た。各々の濃度の標準液についてｎ＝５０で測定し、変
動係数ＣＶを求めたので、その結果を下記の表に示す。After washing with PBS, a citrate-phosphate buffer solution containing 3 mg / ml o-phenylenediamine dissolved therein (p
0.3 ml of H5.0, containing 0.02% hydrogen peroxide) was added, and color was developed for 30 minutes at room temperature. And 1N sulfuric acid 1
The color reaction was stopped with ml and the absorbance at 492 nm was measured. The standard solution of each concentration was measured at n = 50 and the coefficient of variation CV was determined. The results are shown in the table below.

【００２１】 表 １０Ｕ／ｍｌ ３０Ｕ／ｍｌ ９０Ｕ／ｍｌ 回転速度 実施例１ ３．１％ ２．２％ ２．１％ 実施例２ ４．３％ ３．１％ ２．８％ ０．５ｒｐｍ ３．６％ ３．３％ ３．３％ ０．２ｒｐｍ ３．３％ ３．５％ ２．５％ ０．１ｒｐｍ ４．４％ ３．３％ ３．６％ ０．０３ｒｐｍ 比較例１ １０．７％ ８．３％ ６．４％ 比較例２ ８．２％ ５．７％ ５．１％ １．０ｒｐｍ これによれば、本発明により得られる抗体（又は抗原）
が固定化された担体を用いての免疫測定法は、変動係数
が格段に小さく、流体試料中の特定成分を正確に、精度
及び再現性良く定量できることが判る。Table 10 U / ml 30 U / ml 90 U / ml Rotational speed Example 1 3.1% 2.2% 2.1% Example 2 4.3% 3.1% 2.8% 0.5 rpm 3. 6% 3.3% 3.3% 0.2 rpm 3.3% 3.5% 2.5% 0.1 rpm 4.4% 3.3% 3.6% 0.03 rpm Comparative Example 1 10.7% 8.3% 6.4% Comparative Example 2 8.2% 5.7% 5.1% 1.0 rpm According to this, the antibody (or antigen) obtained by the present invention
It can be seen that the immunoassay method using a carrier on which is immobilized has a remarkably small coefficient of variation, and a specific component in a fluid sample can be accurately, accurately and reproducibly quantified.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】本発明の固定化担体の製造方法に用いられる装
置の概略図である。FIG. 1 is a schematic view of an apparatus used in the method for producing an immobilization carrier of the present invention.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

１ バスケット ２ ポリスチレンビーズ ３ 容器 1 Basket 2 Polystyrene beads 3 Container

Claims (2)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 担体が抗体（又は抗原）溶液に浸される
工程と、担体が実質上ずれない程度の速度で前記抗体
（又は抗原）溶液が入れられている容器を動かせる作動
工程とを有することを特徴とする固定化担体の製造方
法。1. A step of immersing a carrier in an antibody (or antigen) solution, and an operation step of moving a container containing the antibody (or antigen) solution at a speed at which the carrier does not substantially shift. A method for producing an immobilization carrier, comprising: 【請求項２】 バスケット内の担体が抗体（又は抗原）
溶液に浸される工程と、バスケット内の担体が実質上ず
れない程度の速度でバスケットを抗体（又は抗原）溶液
に対して相対的に動かせる作動工程とを有することを特
徴とする固定化担体の製造方法。2. The carrier in the basket is an antibody (or antigen)
An immobilization carrier comprising: a step of immersing in a solution; and an operation step of moving the basket relative to the antibody (or antigen) solution at a speed at which the carrier in the basket does not substantially shift. Production method.