JPH03139292A - ヒトインタ―ロイキン―６に対するモノクロ―ナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ヒトインターロイキン−６（以下、ヒトＩ　
Ｌ−６と略す）に対する抗体、詳しくは、ヒトＩＬ−６
の生物活性に対して高い中和作用を持つモノクローナル
抗体およびそれを産出するハイブリドーマに関する二 ［従来の技術］ ヒトＩＬ−６は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、
内皮細胞など多くの細胞から産生され、Ｂ細胞の抗体産
生細胞への分化、肝細胞からの急性期蛋白の誘導、造血
系細胞の増殖分化、神経系細胞の分化など多様な生理活
性を示す物質である（Ａｎｎ、　　Ｒｅｖ、Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ、　　６．　　ｐ４８５　（１９８８）　など）。

本因子は各種疾患との関連性も注目されており、骨髄腫
のオートクライン増殖因子として働くこと（Ｎａｔｕｒ
ｅ、　　３３２．　　ｐ８３　（１９８８）　）　、心
房粘液腫の腫瘍細胞が多量のＩ　Ｌ−６を産出するこ一
１！：（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ　　＾ｃａｄ　　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　　８９
．　　ｐ２２８　（１９８７））、慢性関節リウマチ患
者の関節液中および血清中には高濃度（７）　Ｉ　Ｌ　
−６が存在すること（Ａｒｔｔ＋ｒｉｔｉｓ　ａｎｄＲ
ｈｅｕｍａｔｉｓｍ、　　３１．　　ｐ７８４　（１９
８８）、　　Ｅｕｒ、　　Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

１８、　　ｐ１７９７　（１９８８））　、腎移植患者
で拒絶反応が起きた際に、早期に血中および尿中のＩＬ
−６濃度が上昇すること（ＣＩｉｎ、　　Ｅｘｐ、　　
Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　７１．　　ｐ３１４（１９８８）
）などが知られている。

ヒトＩＬ−６に対するモノクローナル抗体を取得して体
液中の微量のＩＬ−６を定量することは、これら疾患の
研究および臨床上の診断に極めて有用と考えられる。さ
らに、取得した抗体がＩＬ６の活性を中和する゛ならば
、その抗体はこれら疾患の治療のための医薬品としても
使用され得る。

このような観点から、Ｉ　Ｌ−６に対するモノクローナ
ル抗体の取得が試みられているが、これまでに報告され
たものは少なく、１９８８年に松田らによって得られた
２種の抗体が知られているのみである（Ｅｕｒ、　　Ｊ
、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１８．　　ｐ９５１　（１
９８８））。

そのうちの１種には活性中和作用があることが報告され
ているが、該抗体の活性中和作用は弱いものであり、０
　、　１　ｎ　ｇのヒトＩＬ−６の生物活性（抗体産生
誘導活性）を５０％低下させるのに要する抗体濃度は６
ｎｇ以上である。また、ＩＬ−６依存性ハイブリドーマ
の増殖活性に対しては、２μｇの抗体を用いても０．２
ｎｇのＩ　Ｌ−６に有意な影響を与えない。

［発明が解決しようとする課題］ 本発明の目的は、上記のように多種の疾患の病因物質と
考えられるヒトＩ　Ｌ−６に対して、強い活性中和作用
を持つ抗ヒトＩＬ−６モノクローナル抗体を提供するこ
とにある。

［課題を解決するための手段］ 上記本発明の課題を解決するために、本発明は以下の構
成を有する。

すなわち本発明は、２００ｐｇのヒトインターロイキン
−６の生物活性を５０％低下させるのに要する抗体量が
４ｎｇ以下であることを特徴とするヒトインターロイキ
ン−６に対するモノクローナル抗体および該抗体を産出
するハイブリドーマである。

本発明抗体は、ヒトＴ　Ｌ−６で免疫された哺乳動物か
ら取り出した抗体産生細胞と哺乳動物の骨髄腫細胞（ミ
エローマ）とを融合し、目的抗体を産生ずる融合細胞を
クローン化して得られるハイブリドーマを培養して製造
される。

本発明のモノクローナル抗体は、２００ｐｇのヒトイン
ターロイキン−６の生物活性を５０％低下させるのに要
する抗体量が４ｎｇ以下であり、好ましくは２．５ｎｇ
以下である。

以下、本発明を工程に従って説明する。

（ａ）抗体産生細胞の調製 本発明のハイブリドーマを得るには、まず哺乳動物をヒ
トＩ　Ｌ−６で免疫感作する。用いるヒトＩＬ−６は、
ヒト由来の細胞から産生された天然型Ｉ　Ｌ−６、ある
いは組み換えＤＮＡ技術によって作成された遺伝子組み
換え型ＩＬ−６のいずれもが使用され得る。

免疫は一般的方法により、上記免疫抗原を哺乳動物に腹
腔内、皮下、皮内、静脈内注射などにより投与すること
により実施できる。

哺乳動物としては、マウス、ラット、ウサギ、モルモッ
トなど一般に用いられている動物が使用できる。接種は
哺乳動物としてマウスを用いる場合、１回あたり５〜５
０μｇ／マウス程度を通常のアジュバントと併用あるい
は単独で投与し、投与は１週間以上の間隔をおいて数回
繰り返す。最終免疫後３〜４日目に牌臓あるいはリンパ
節を摘出し、抗体産生細胞として使用する。

（ｂ）細胞融合 上記抗体産生細胞と骨髄腫細胞との融合反応は、公知の
方法、例えばＭｉｌｓｔｅｉｎらの方法Ｑｌｅｔｈｏｄ
　ＥｎＢｍｏｌ、　　７３．　　ｐ３　（１９８１）　
）などに準じて行なうことができる。

ここで使用する骨髄腫細胞（シエローマ）に特別の制限
はなく、公知・の種々のもの、例えばＰ３Ｘ６３−Ａｇ
８、Ｐ３−Ｘ５３−Ａｇ８−Ｕｌ、ＳＰ２Ｏ−Ａｇ１４
、Ｘ６３−Ａｇ８−６．５゜３などが用いられる。

抗体産生細胞と骨髄腫細胞は５：１〜１０：１程度の割
合で混合し、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、セン
ダイウィルス（ＨＶＪ）などの融合促進剤の存在下で融
合を行なう。

（Ｃ）ハイブリドーマのＨＡＴ選択 融合後の細胞を１５％牛脂児血清含有ＲＰＭ１１６４０
培地等、通常の細胞培養に用いられる培地に浮遊させ、
マイクロプレート（通常９６ウエルタイプ）に１０５〜
ｌ　０６　ｃｅｌｌ／　１００　ＡＩＤ、／ウェル程度
に植えつける。各ウェルにＨＡＴ選択培地を加え、７〜
１４日間培養を行なうことにより、ハイブリドーマのみ
を選択的に生育させ得る。

このＨＡＴ選択培養時には、ハイブリドーマの形成効率
および抗体産生誘導の出現率を高めるために、ヒトある
いはマウスのＩ　Ｌ−６を０．２〜Ｌｏｎｇ／ｍｌの濃
度で添加することが望ましい。

また、ハイブリドーマのなかには増殖にＩ　Ｌ−６を必
要とするものもあるため、目的抗体産生細胞が単一クロ
ーンとして確立され、増殖がＩ　Ｌ−６依存性でないこ
とが確認されるまでは、培地中に常にヒトまたはマウス
Ｔ　Ｌ　−６を添加することが望ましい。

（ｄ）スクリーニング 目的抗体産生細胞のスクリーニングは、各ウェルの培養
上清をサンプルとし、酵素免疫測定（ＥＬＩＳＡ）法な
ど一般に抗体の検出に用いられている種々の方法に従っ
て行なう。また、さらに厳密な反応特異性の確認には、
ウェスタン・プロット法などが用いられる。

（ｅ）クローニング スクリーニングの結果、陽性のウェルから細胞を単離し
、限界希釈法などによりクローニングを行なって最終的
に目的の抗体を産生じている単一クローンを得る。クロ
ーニング操作は２回以上繰り返して行なうことが望まし
い。このようにして得られるハイブリドーマは、通常の
培地で継代培養することができ、また液体窒素中で長期
間保存することができる。

（ｆ）モノクローナル抗体の取得 上記ハイブリドーマからのモノクローナル抗体の取得は
、常法に従ってハイブリドーマを培養して、その培養上
清から得る方法や、ハイブリドーマをこれと適合性のあ
る哺乳動物に投与して増殖させ、その腹水として得る方
法などが用いられる。

培養上清として得る場合には、精製を容易にするために
無血清培地（住友製薬社製、セルブロッカ−Ｈなど）を
用いることが望ましい。このようにして得られる抗体は
、塩析、ヒドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲルー過法な
ど通常の方法により精製することができる。

（ｇ）活性中和作用を有する抗体の選択上記方法で得ら
れたヒト１Ｌ−６に対するモノクローナル抗体のなかに
は、活性中和作用を有する抗体および活性中和作用を持
たない抗体の両者が含まれる。これら抗体をＩ　Ｌ−６
の生物活性測定系に添加してＩ　Ｌ−６活性に与える影
響を調べることにより、強い活性中和作用を有する抗体
を選択することができる。

ＩＬ−６の生物活性測定系としては、Ｂ細胞からの抗体
産生誘導を測定する方法（Ｐｒｏｃ、Ｎａ１Ａｃａｄ、
　Ｓｃｉ、、　８２．　ｐ５４９０　（１９８５））　
、Ｉ　Ｌ−６依存性増殖ハイブリドーマを用いる方法（
Ｊ、　　Ｅｘｐ、〜１ｅｄ、、’　１６５．　　ｐ６４
１　（１９８７））など公知の方法が用いられる。

［実　施　例］ 実施例１ 抗ヒトＩＬ−６モノクローナル抗体調製（ａ）動物の免
疫 ７〜９週令の雌ｂａｌｂ／ｃマウス１１匹の腹腔内に、
精製したヒ）ＩＬ−６（夜盗蛾細胞で発現させた遺伝子
組み換え型ＩＬ−６）５〜１５μｇ／マウスを投与した
。

免疫は１〜１０週間隔週間−４回行なった。初回免疫は
フロイント完全アジュバント中または百日咳死菌添加ア
ルミニウムアジュバント中で、２回目免疫はフロイント
不完全アジュバント中またはアルミニウムアジュバント
中で行ない、３回目以降の追加免疫はＰＢＳ（８ｍＭリ
ン酸水素２ナトリウム、１．５ｍＭリン酸２水素カリウ
ム、１３７ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウ
ム）溶液で行なった。

（ｂ）細胞融合とＨＡＴ選択 最Ｉ免疫の３日後にマウスより単離した牌細胞をマウス
ミエローマ細胞（Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕｌ）と１０
＝１の細胞数で混合し、５０％ポリエチレングリコール
１５００を用いて細胞融合を行なった。１５％牛脂児血
清含有ＲＰＭＬ　１６４０培地中に、牌細胞として２　
、　５　Ｘ　１０６／　ｍ１前後になるように懸濁し、
ＨＡＴおよびヒトＩＬ−６（最終濃度２ｎｇ／ｍｌ）を
添加した後、２００μＵ／ウエルで９６穴マイクロプレ
ートに分注した。１週間後には、はぼ全ウェルでノ＼イ
ブリドーマが増殖した。

（Ｃ）抗体産生細胞のスクリーニングとクローニング ヒトＩ　Ｌ−６を５０　ｍ　Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（
ｐＨ９，６）で０．３μｇ／ｍｌに調製したものを、９
６穴マイクロプレートに１００μαずつ分注した。４°
Ｃで一晩放置後、溶液を除去し、１％牛血清アルブミン
（ＢＳＡ）を含むＰＢＳ溶液でブロッキングを行なった
。次に０．０５％Ｔ　ｗ　ｅｅｎ２０含有ＰＢＳ　Ｃ略
称ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄後、前記ＨＡＴ選択培養上清（細
胞融合後８〜１２日目）１００μαを各ウェルに分注し
、室温で１時間反応させた。以下、ＰＢＳ−Ｔ洗浄、ビ
オチン標識ウサギ抗マウスＩｇＧ反応室温１時間、ＰＢ
Ｓ−Ｔ洗浄、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキ
シダーゼ反応室温０．５時間、ＰＢＳ−Ｔ洗浄、０．０
３１％過酸化水素、０．１％ＡＢＴＳ含有・０．１Ｍリ
ン酸クエン酸緩衝液（ｐ　Ｈ４゜０）反応室温１時間の
順に反応を行ない、１％シュウ酸１００μ０を添加して
反応を停止後、反応生成物の発色を４１４μｍの吸収で
測定した。強い抗体活性が認められたウェルについて、
限界希釈法でクローニングを行ない、上記スクリーニン
グ、クローニングの操作を２回繰り返して、単一クロー
ンとして１２個の抗体産生ハイブリドーマを確立した。

（ｄ）反応特異性の確認 上記ＥＬＩＳＡ法によるスクリーニングで得られた１２
個のハイブリドーマの培養上清を用いてウェスタンブロ
ッティングを行なった結果、３個のクローンがヒトＩ　
Ｌ−６と特異的に反応することが確認された。これらク
ローンの産生ずるモノクローナル抗体をそれぞれＩＣ６
７、ＩＦ１４、ｌＧ６１と命名した。ｌＧ６１を産生ず
るハイブリドーマは微工研菌寄第１０７１３号として微
生物工業技術研究所に寄託されている。

（ｅ）モノクローナル抗体の取得 上記のごと（得られた３種のハイブリドーマをそれぞれ
ｂａｌｂ／ｃマウス腹腔中で増殖させ、得られた腹水よ
り５０％硫安沈殿、ヒドロキシアパタイトカラムクロマ
トグラフィー、プロティンＡカラムクロマトグラフィー
の手法を用いて抗体を精製した。

実施例２ 抗体のサブクラスの決定 マウスモノクローナル抗体サブクラス固定キット（ｚｙ
ｍｅｄ社製）を用いて決定した結果、ＩＣ６７、ＩＦ１
４、ＩＣ６１抗体のサブクラスは、それぞれＩ　ｇＧｌ
、ＩｇＭ、ＩｇＧ１であった。

実施例３ 中和活性の測定 ＩＬ−６の生物活性は、ＩＬ−６依存性にＩｇＭを産生
するヒトＢ細胞株５ＫＷ６−Ｃ１−４（Ｐｒｏｃ、　Ｎ
ａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８２．　
ｐ５４９０　（１９８５））を用いて測定した。ＲＰＭ
１１６４０培地に浮遊させた５ＫＷ６−Ｃ１−４細胞（
４Ｘ１０４個／ｍｌ）を９６穴マイクロプレートに１０
０μＵずつ分注した。濃度２０μｇ　／　ｍｌのモノク
ローナル抗体５０μαと種々の濃度のヒｈＩＬ−６５０
μａを加えた。３日間培養後、上清１００μαをとり、
ＥＬ　Ｉ　ＳＡ法によりＩｇＭ濃度の測定を行なった。

第１図に結果を示す。得られた３種のモノクローナル抗
体のなかでＩＣ６１抗体が強い活性中和作用を示し、６
４μｇ／ｍｌのＩ　Ｌ−６の抗体産生誘導活性は、ｌｎ
ｇ／ｍｌ相当の活性に抑制された。

さらに、同量の５ＫＷ６−Ｃ１−４細胞に対して４μｇ
／ｍｌのヒトＩＬ−６５０μｆｌおよび種々の濃度のモ
ノクローナル抗体５０μａを添加して行なった同様の実
験の結果を第２図に示す。１ｎｇ／ｍｌのヒトＩ　Ｌ　
−６の活性を５０％低下させるのに要する本発明のモノ
クローナル抗体であるｌＧ６１抗体の濃度は、約１０ｎ
ｇ／ｍｉであった。

すなわち、２００ｐｇのヒトＩ　Ｌ−５の活性を５０％
低下させるのに要する抗体量は約２ｎｇであった。この
ｌＧ６１抗体の活性中和作用は、これまでに報告されて
いる抗Ｉ　Ｌ−６モノクロ一ナル抗体を比較してはるか
に強いものである。

実施例４ エピトープの解析 強い活性中和作用を有する本発明のモノクローナル抗体
であるクローンｌＧ６１についテ、ＩＬ−６分子上の認
識部位（エピトープ）の解析を行なった。

（１）抗体と反応するペプチド断片の単離・解析ｌＧ６
１抗体０．５ｍｇをアフィゲル１０（バイオラッド社製
）０．５ｍｌゲルと反応させ、抗体固定化ゲルを調製し
た。ヒトＩＬ−６１２μｇを４ｏｐｎの２０ｍＭ）リス
塩酸緩衝液（ｐ　Ｈ８゜０）中で１２０ｎｇのりジルエ
ンドペプチダーゼ（和光純薬社製）と反応させて、３７
°Ｃ，６時間ペプチド消化を行なった後、１　ｍｌに希
釈して上記ｌＧ６１抗体固定化ゲルに室温で３０分間吸
着させた。ペプチド吸着後のゲルを小型カラムに充填し
、５　ｍｌの０．１Ｍ　　トリス塩酸緩衝液（ｐ　Ｈ８
゜０）を流して未反応のペプチドを洗い流した後、０．
１Ｍグリシン塩酸（ｐＨ２，４）で吸着されたペプチド
の溶出を行なった。リジルエンドペプチダーゼ処理後抗
体固定化ゲルと反応前のサンプル、およびｐＨ２，４溶
出で０．５ｍｌ〜１．　０ｍｌに溶出されたサンプルを
Ｃ１８逆相ＨＰＬＣで分析した結果を、それぞれ第３図
Ａ、Ｂに示す。

Ｂで検出されたピーク（保持時間３９分）のアミノ酸配
列を解析した結果、ＩＬ−６分子のアミノ酸１５１番か
ら１７１番に相当する２１残基の配列、Ｌｅｕ−Ｇｌｎ
−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ａｓｎ−Ｇｉｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−
Ｇｉｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｉ　ｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−８ｅ　ｒ−Ｐｈｅ−
Ｌｙｓが見い出された。

（２）　　合成ペプチドによる抗原−抗体反応阻害効果
Ｉ　Ｌ　−６分子上で、上記ペプチドの配列を含み、さ
らにアミノ末端、カルボキシル末端両方向にそれぞれ２
残基分延長した領域に相当する２５残基のペプチドＩＬ
−６Ｔｈｒ１４９−Ｐｈｅ１７３　（Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔ
ｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｈ
ｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−８ｅｒ
−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ）を合成し、ＥＩＡ
系への影響を調べた。

９６穴マイクロプレートにヒトＩＬ−６を５０ｍＭ炭酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，６）で０゜３μｇ　／　ｍ
ｌに調製したものを１００μα／ウエルずつ分注し、４
℃で一晩放置して吸着させた後、１％ＢＳＡを含むＰＢ
Ｓ溶液でブロッキングを行なった。ＰＢＳ−Ｔで各ウェ
ルを洗浄後、上で合成したペプチドＩＬ−６Ｔｈｒ１４
９−Ｐｈｅ１７３、およびコントロールとして同様の方
法で合成したヒ）　Ｉ　Ｌ−６は無関係な配列を持つ１
゜残基のペプチド（Ｖａ　ｌ　−Ｇ　Ｉ　ｎ−Ａ　］　
ａ−Ａ　１ａ−Ｉ　１ｅ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ａ
ｓｎ　−Ｇ　Ｉ　Ｖ）を、それぞれ１　ｍｇ　／　ｍｌ
から０．　２５μｇ／　ｍｌの濃度で５０μａ１さらに
ビオチン標識ｌＧ６１抗体０．１ａｇ／ｍｌを５０μｆ
ｆ入れ、室温で１時間反応させた。以下、ＰＢＳ−Ｔ洗
浄、ストレプレアビジン・ＨＲＰ反応室温０．　５時間
、ＰＢＳ−Ｔ洗浄、０．０３１％過酸化水素、０．　１
％ＡＢＴＳ含有０．１Ｍリン酸クエン酸緩衝液（ｐＨ４
，０）反応室温２時間の順に反応を行ない、１％シュウ
酸１００μａ／ウェルを添加して反応を停止後、反応生
成物の発色を４１４ｎｍの吸収で測定した。陽性対照と
して合成ペプチドの代わりにヒトＩ　Ｌ−５を添加した
実験も行ない、阻害効果の比較を行なった。

第４図に結果を示すとおり、ペプチドＴｈｒ１４９−Ｐ
ｈｅ１７３では８μｇ／ｍ１以上の濃度で発色低下が認
められ、５ｏｏｌ１ｇ／ｍ１ではほぼ完全な反応阻害が
見られた。コントロールのペプチドには阻害効果は全く
見られなかった。

（３）合成ペプチドによる抗原−抗体反応阻害効果のよ
り詳細な検討 Ｉ　Ｌ−６分子上で、実施例４（１）で見出だされた２
１残基の配列（Ｌｅｕ１５１−Ｌｙｓ１７１）を含む領
域に対応する８種類のペプチド（ペプチド１〜ペプチド
８２表１参照）を合成し、実施例４（２）と同様のＥＩ
Ａ系に添加してその影響を調べた。

表１および第５図の結果に示す通り、ペプチド１　（Ｔ
ｈｒ１４９−Ｐｈｅ１７３）、ペプチド２（Ａ１ａ１５
３−Ｐｈｅ１７３）およびペプチド６　（Ａｌａ１５３
−Ｔｈｒ１６２）の３種のペプチドが用量依存的に阻害
効果を示し、これらのペプチドが共通して含む領域Ａｌ
ａ１５３−Ｔｈｒ１６２がｌＧ６１抗体のエピトープで
あると結論できる。

［発明の効果コ 本発明により、ヒトＴ　Ｌ−６に対して特異反応性を有
し、かつその生物活性を強く中和するモノクローナル抗
体が得られる。本発明抗体を利用すれば、ＩＬ−６の異
常産生を伴なう各種の疾患、例えば慢性関節リウマチな
どの自己免疫疾患、骨髄腫、心房粘液腫などにおいて、
その異常産生に基づく亢進されたＴ　Ｌ−６の生物活性
を抑制することが可能となり、かかる各種疾患の治療上
極めて価値ある医薬品への応用が期待できる。

また、同時にヒトＩ　Ｌ−６を特異的、高感度、かつ簡
便に測定可能な免疫測定法（イムノアッセイ法）、さら
に、例えばアフィニティークロマトグラフィーなどの手
法によるヒトＩ　Ｌ−６の特異的精製手段の提供が可能
となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は各種濃度のＩＬ−６に対する抗体の活性中和作
用の測定結果を、第２図は一定濃度の■Ｌ−６に対する
各種濃度の抗体の中和作用の測定結果を、第３図はｌＧ
６１抗体と反応するＩＬ−６ペプチド断片の分析結果を
、第４図は抗原抗体反応に対する合成ペプチドの阻害効
果を、さらに第５図は合成ペプチドによる阻害のペプチ
ド濃度依存性を示す。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）２００ｐｇのヒトインターロイキン−６の生物活
   性を５０％低下させるのに要する抗体量が４ｎｇ以下で
   あることを特徴とするヒトインターロイキン−６に対す
   るモノクローナル抗体。
2. （２）抗体のクラスがＩｇＧ＿１である請求項１記載の
   モノクローナル抗体。
3. （３）ヒトインターロイキン−６と１４９〜１７３番目
   のアミノ酸の間で結合する請求項１または２記載のモノ
   クローナル抗体。
4. （４）ヒトインターロイキン−６と１５３〜１６２番目
   のアミノ酸の間で結合する請求項１または２記載のモノ
   クローナル抗体。
5. （５）請求項１〜４記載のヒトインターロイキン−６に
   対するモノクローナル抗体を産出するハイブリドーマ。
6. （６）ハイブリドーマがマウス由来であることを特徴と
   する請求項５記載のハイブリドーマ。